CH709970A1 - Procédé pour alimenter en gaz un environnement affecté à la culture cellulaire artificielle et dispositif pour la mise en œuvre de ce procédé. - Google Patents

Abstract

Le dispositif (10) pour alimenter en gaz un environnement affecté à la culture cellulaire artificielle comporte au moins une boîte de Pétri (11) ou similaire, se composant d’un récipient (12), habituellement de forme circulaire, carrée ou rectangulaire, pourvue de préférence d’un couvercle (13) et d’un fond (14). Le couvercle (13) est agencé pour s’emboîter sur le dessus du récipient (12) pour le fermer. Le fond (14) est constitué d’une membrane semi-perméable (15) qui a comme caractéristique de laisser passer les gaz et d’arrêter les liquides. La membrane semi-perméable (15) constitue une interface d’échange entre les cellules d’une culture cellulaire et le gaz traversant la membrane. Le récipient (12) contient un liquide biologique (16) et la culture cellulaire qui est fixée sur la surface intérieure de la membrane semi-perméable (15) constituant le fond du récipient (12).

Description

Domaine technique

[0001] La présente invention concerne un procédé pour alimenter en gaz un environnement affecté à la culture cellulaire, comportant au moins une boîte de Pétri ou similaire, contenant un liquide physiologique et mise en contact avec une composition gazeuse prédéterminée contenant par exemple de l’oxygène ou un autre gaz, ou mélange de gaz ou similaire, dont le taux est ajusté séquentiellement, ladite au moins une boîte de Pétri comportant un fond réalisé en un matériau semi-perméable laissant passer les gaz et étanche aux liquides.

[0002] Elle concerne également un dispositif pour alimenter en gaz un environnement affecté à la culture cellulaire artificielle, comportant au moins une boîte de Pétri ou similaire, contenant un liquide physiologique et placé dans une enceinte dans laquelle circule une composition gazeuse prédéterminée contenant par exemple de l’oxygène ou un autre gaz, ou mélange de gaz ou similaire, dont le taux doit être ajusté séquentiellement, ladite au moins une boîte de Pétri comportant un fond réalisé en un matériau semi-perméable laissant passer les gaz et étant étanche aux liquides, pour la mise en œuvre du procédé.

[0003] Les cultures cellulaires de laboratoire sont de plus en plus pratiquées notamment comme substitut à l’expérimentation animale. Elles sont généralement effectuées dans une boite de Pétri contenant un liquide physiologique, qui est placée dans une étuve à 37° pour respecter les conditions naturelles de température et d’humidité. Pour reproduire les conditions d’oxygénation, les boites de Pétri sont placées dans des étuves à atmosphère contrôlée. Mais en conditions réelles, les cellules sont souvent soumises à des variations rapides d’oxygénation, parfois importantes. Pour soumettre ces cellules, baignant dans ledit liquide physiologique, à des variations rapides du taux d’oxygène, des boites de Pétri spéciales, comportant un fond semi perméable ont été développées pour favoriser les échanges gazeux. Le fond de la boîte de Pétri est constitué d’une matière semi-perméable qui laisse passer les gaz mais retient les liquides. Ces boîtes de Pétri offrent aux cellules en culture, qui sont toujours fixées contre la surface du fond, l’avantage d’être soumises très rapidement aux mêmes pressions partielles des gaz que l’atmosphère régnant dans l’environnement immédiat des boites. Étant donné que pour faire varier les pressions partielles auxquelles les cellules doivent être soumises, on fait varier l’atmosphère régnant autour des boites de Pétri, il est essentiel que les variations de l’environnement immédiat des boîtes de culture puissent être transmises le plus rapidement possible aux cellules en culture dans lesdites boîtes de Pétri.

Technique antérieure

[0004] Selon la pratique actuelle, on utilise des étuves climatiques dans lesquelles on peut faire varier la composition des gaz, dans le but de modifier l’environnement de culture, d’abord autour des boîtes de Pétri et ensuite, au niveau des cultures cellulaires elles-mêmes à travers le fond semi-perméable des boîtes. Mais le processus connu a de nombreux inconvénients. Il est tout d’abord relativement lent puisqu’il dure plusieurs minutes, il nécessite un remplissage complet de l’étuve par la composition gazeuse prédéterminée, cette étuve ayant un volume important, ce qui implique d’une part une très forte consommation de ladite composition gazeuse et ralentit considérablement l’absorption d’une nouvelle composition gazeuse si celle-ci est modifiée. Plus le cycle est court plus la difficulté augmente et il devient impossible de reproduire, par cultures cellulaires, ce qui se passe lors de tels cycles courts, comme par exemple pour le cas lors d’apnées du sommeil.

Exposé de l’invention:

[0005] La présente invention vise à pallier ces inconvénients en réduisant de manière conséquente la durée de la transmission aux cellules en culture, des modifications de la composition gazeuse prédéterminée qui les alimente, plus particulièrement la durée des variations du taux d’oxygène présent dans ladite composition prédéterminée, en diminuant de manière importante le volume de ladite composition utilisée pour alimenter les cellules en culture et en augmentant la vitesse à laquelle ladite composition gazeuse prédéterminée peut être modifiée selon les besoins.

[0006] Dans ce but, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que l’on fait circuler ladite composition gazeuse prédéterminée dans un canal de circulation adjacent audit fond de ladite au moins une boîte de Pétri, ledit canal de circulation ayant une paroi supérieure agencée pour communiquer avec ledit fond de ladite au moins une boîte de Pétri, de telle manière que ladite composition gazeuse prédéterminée qui est véhiculée dans ledit canal de circulation communique avec le contenu de ladite au moins une boîte de Pétri à travers ladite paroi supérieure dudit canal et ledit fond de la boîte, qui sont au moins partiellement communs, en ce que l’on injecte ladite composition gazeuse prédéterminée à une extrémité d’entrée dudit canal de circulation et en ce que l’on évacue ladite composition gazeuse prédéterminée à une extrémité de sortie dudit canal de circulation, opposée à ladite extrémité d’entrée.

[0007] D’une manière préférentielle, l’on injecte ladite composition gazeuse prédéterminée à une extrémité dudit canal disposée en amont de ladite au moins une boîte de Pétri et que l’on évacue ladite composition gazeuse prédéterminée à une extrémité dudit canal disposée en aval de ladite au moins une boîte de Pétri.

[0008] Selon un mode de mise en œuvre avantageux du procédé, l’on utilise un canal de circulation disposé sous une pluralité de boîtes de Pétri, chacune desdites boîtes comportant un fond semi-perméable au moins partiellement commun avec la paroi supérieure dudit canal de circulation, dans lequel on injecte ladite composition gazeuse prédéterminée en amont de ladite pluralité de boîtes de Pétri et que l’on évacue ladite composition gazeuse prédéterminée à une extrémité dudit canal de circulation disposée en aval de ladite au moins une boîte de Pétri.

[0009] Selon un premier mode de réalisation, pour ajuster la pression partielle d’un gaz sélectionné de ladite composition gazeuse prédéterminée, à un taux fixe défini appelé taux de consigne, on injecte dans ledit canal, une composition gazeuse prédéterminée dans laquelle la pression partielle dudit gaz sélectionné est égale à un taux de consigne, pour que la pression partielle dudit gaz sélectionné dans la zone de contact avec le liquide biologique atteigne localement ladite valeur de consigne pendant un temps défini pour transmettre à la culture cellulaire ledit gaz sélectionné.

[0010] Selon un deuxième mode de réalisation, pour ajuster la pression partielle d’un gaz sélectionné de ladite composition gazeuse prédéterminée à un taux fixe défini appelé taux de consigne, on injecte avantageusement dans ledit canal, une composition gazeuse prédéterminée dans laquelle la pression partielle dudit gaz sélectionné a une valeur supérieure audit taux de consigne, l’on maintient cette valeur supérieure audit taux de consigne pendant un temps prédéterminé et l’on abaisse ladite valeur à celle dudit taux de consigne après ledit temps prédéterminé, pour que la pression partielle dudit gaz sélectionné dans le liquide biologique atteigne plus rapidement ladite valeur de consigne.

[0011] Selon un troisième mode de réalisation, pour ajuster la pression partielle d’un gaz sélectionné de ladite composition gazeuse prédéterminée à un taux fixe défini appelé taux de consigne, on peut injecter dans ledit canal, une composition gazeuse prédéterminée dans laquelle la pression partielle dudit gaz sélectionné a une valeur supérieure au taux de consigne, on peut diminuer progressivement cette valeur supérieure au taux de consigne pendant un temps prédéterminé et on peut maintenir ladite valeur à celle dudit taux de consigne après ledit temps prédéterminé, pour que la pression partielle dudit gaz sélectionné dans le liquide biologique atteigne plus rapidement ladite valeur de consigne.

[0012] Selon un quatrième mode de réalisation, pour ajuster la pression partielle d’un gaz sélectionné de ladite composition gazeuse prédéterminée à un taux fixe défini appelé taux de consigne, on peut injecter dans ledit canal, une composition gazeuse prédéterminée dans laquelle la pression partielle dudit gaz sélectionné a une valeur inférieure au taux de consigne, on peut augmenter ensuite cette valeur inférieure au taux de consigne pendant un temps prédéterminé et on peut maintenir ladite valeur à celle dudit taux de consigne après ledit temps prédéterminé, pour que la pression partielle dudit gaz sélectionné dans le liquide biologique atteigne ladite valeur de consigne.

[0013] Dans ce but également le dispositif selon l’invention est caractérisé en ce qu’il comporte un canal de circulation adjacent audit fond de ladite boîte de Pétri, ledit canal de circulation ayant une paroi supérieure constituée par ledit fond de ladite au moins une boîte de Pétri, de telle manière que ladite composition gazeuse prédéterminée qui est véhiculée dans ledit canal de circulation communique avec le contenu de ladite au moins une boîte de Pétri à travers ladite paroi supérieure du canal de circulation et ledit fond de la boîte, qui sont au moins partiellement communs, des moyens pour injecter ladite composition gazeuse prédéterminée à une extrémité d’entrée dudit canal de circulation et des moyens pour récupérer ladite composition gazeuse prédéterminée à une extrémité de sortie dudit canal de circulation, opposée à ladite extrémité d’entrée.

[0014] De façon préférentielle, lesdits moyens pour injecter ladite composition gazeuse prédéterminée à une extrémité dudit canal de circulation sont disposés en amont de ladite au moins une boîte de Pétri et en ce que lesdits moyens pour récupérer ladite composition gazeuse prédéterminée à l’autre extrémité dudit canal de circulation sont disposés en aval de ladite au moins une boîte de Pétri.

[0015] Selon une forme de réalisation avantageuse, le dispositif comporte un canal de circulation unique disposé sous une pluralité de boîtes de Pétri, chacune desdites boîtes comportant un fond semi-perméable qui coïncide avec des fenêtres ménagées dans la paroi supérieure dudit canal de circulation unique, pourvu de moyens pour injecter ladite composition gazeuse prédéterminée en amont de ladite pluralité de boîtes de Pétri et de moyens pour récupérer ladite composition gazeuse prédéterminée en aval de ladite pluralité de boîtes de Pétri.

[0016] Pour un dispositif dans lequel le gaz de ladite composition gazeuse dont le taux est ajusté de manière séquentielle est l’oxygène et /ou l’anhydride carbonique, on prévoit de préférence des moyens de contrôle agencés pour définir à la fois la valeur de la pression partielle de l’oxygène dans le liquide physiologique et la durée de l’injection de ladite composition gazeuse dans ledit canal de circulation.

Description sommaire des dessins

[0017] La présente invention et ses avantages apparaîtront mieux dans la description suivante de modes de réalisation donnés à titre d’exemples non limitatifs, en référence aux dessins annexés, dans lesquels: <tb>la fig. 1<SEP>représente une vue en coupe longitudinale d’un dispositif de culture cellulaire selon l’invention, <tb>la fig. 2<SEP>représente une vue de dessus du dispositif de culture cellulaire de la fig. 1 , <tb>la fig. 3<SEP>représente une vue en perspective du dispositif de culture cellulaire de la fig. 1 , <tb>les fig. 4A , 4B , 4C et 4D<SEP>sont des vues qui illustrent l’évolution de la pression partielle d’oxygène (PO2) dans le liquide biologique se trouvant au-dessus de la membrane semi-perméable.

Illustrations de l’invention et différentes manières de la réaliser

[0018] En référence aux fig. 1 à 3 , le dispositif 10 pour alimenter en gaz un environnement affecté à la culture cellulaire artificielle, comporte au moins une boîte de Pétri 11 ou similaire se composant d’un récipient 12, habituellement de forme circulaire, carrée ou rectangulaire, pourvue de préférence d’un couvercle 13 et d’un fond 14. Le couvercle 13 est agencé pour s’emboîter sur le dessus du récipient 12 pour le fermer. Le fond 14 est constitué d’une membrane semi-perméable 15 qui a comme caractéristique de laisser passer les gaz et d’arrêter les liquides. La membrane semi-perméable 15 constitue une interface d’échange entre les cellules d’une culture cellulaire 16 et le gaz traversant la membrane. Le récipient 12 contient un liquide biologique et la culture cellulaire 16 fixée sur la surface intérieure de la membrane semi-perméable 15 constituant le fond du récipient 12.

[0019] Une boite de Pétri affectée à une culture cellulaire doit être alimentée avec une composition gazeuse contenant de l’oxygène ou de l’oxygène et de l’anhydride carbonique, cette composition devant être régulièrement ajustée pour permettre d’étudier le comportement des cellules dans un milieu où les pressions partielles de l’oxygène et/ou du C02 sont modifiées. Afin d’assurer une réactivité rapide du système et afin de pouvoir modifier rapidement le taux de gaz, notamment de l’oxygène au niveau de l’interface avec les cellules de la culture, le dispositif de l’invention comporte un canal 20 de circulation de la composition gazeuse, ce canal de circulation étant disposé en-dessous dudit récipient 12. Il comprend une base 21, des parois latérales 22, une extrémité d’entrée 23 et une extrémité de sortie 24, cet ensemble étant obturé sur le dessus, par une plaque de couverture 25. Dans cette plaque de couverture est ménagée au moins une fenêtre 26, ou une pluralité de fenêtres 26, correspondant au fond 14 du récipient 12, lorsque le dispositif ne comporte qu’un seul récipient 12 ou aux fonds respectifs des différents récipients 12, dans le cas où le dispositif comporte une pluralité de récipients du type boites de Pétri, par exemple. La ou les fenêtres 26 ont une forme et des dimensions telles qu’elle peut ou qu’elles peuvent recevoir et loger le ou les fonds 14 de récipients 12. Pour éviter ou minimiser les fuites entre ledit canal de circulation et l’extérieur des récipients 12, un joint d’étanchéité 27 est avantageusement fixé sur le pourtour à la base du récipient 12.

[0020] Pour amener la composition gazeuse prédéterminée dans le canal de circulation 20, la plaque de fermeture 25 est équipée de moyens 27 positionnés en amont de ladite ou des boites de Pétri 11 et de moyens 28 peuvent être positionnés en aval pour évacuer la composition gazeuse prédéterminée hors dudit canal 20.

[0021] Par ce moyen, le contact entre le liquide biologique et la composition gazeuse prédéterminée est très direct. Le volume de composition gazeuse prédéterminée à injecter pour faire varier l’environnement des cellules est réduit, puisqu’il n’excède pas le volume du canal de circulation 20, ce qui permet d’effectuer des transitions rapides et en outre, de réaliser des économies considérables de gaz. Un rinçage du canal 20 par la composition gazeuse peut être effectué rapidement et à moindre coût.

[0022] Les fig. 4A , 4B et 4C montrent l’évolution de la pression partielle d’oxygène PO2dans le liquide biologique 16 à la surface de la membrane semi-perméable 15 sur laquelle est fixée la culture cellulaire 17. On rappelle que la pression partielle d’un gaz dans un volume donné d’un mélange gazeux est égale à la pression qu’aurait ce gaz s’il était tout seul dans ledit volume donné. Par exemple si la pression barométrique est de 760 mm Hg et que la fraction d’oxygène dans le mélange gazeux est de 5% la pression partielle d’oxygène est de 760x0,05 soit 38mmHg. La pression partielle de l’oxygène ou éventuellement d’un autre gaz ou mélange de gaz dans le canal est désigné par a, et la pression partielle correspondante dans le liquide qui contient ou irrigue les cellules est désigné par b.

[0023] Le graphique de la fig. 4A représente la courbe 41 illustrant l’évolution de la pression partielle d’oxygène PO2qui passe brusquement d’un état 1, où sa valeur est par exemple de 38 mm Hg à un état 2 où sa valeur est par exemple de 121 mm Hg, ce qui correspond respectivement à des taux de 5% et de 16% dans la composition gazeuse. Un temps t1est nécessaire pour atteindre l’équilibre dans le liquide au niveau de la culture cellulaire, soit de l’autre côté de la membrane semi-perméable par rapport audit canal de circulation.

[0024] Le graphique de la fig. 4B représente la courbe 42 qui illustre l’évolution de la pression partielle d’oxygène PO2. La pression partielle d’oxygène PO2du gaz est dans un premier temps plus élevée que la valeur finale souhaitée après l’équilibre. On fait circuler une composition gazeuse dans le canal pendant une durée déterminée tb, dont le taux est supérieur à la valeur de consigne puis on revient à ladite valeur de consigne. On constate que le processus est fortement accéléré, l’équilibre est atteint plus rapidement et le transfert d’oxygène s’effectue dans un temps t2plus court que le temps t1dans l’exemple de la fig. 4A .

[0025] Le graphique de la fig. 4C représente la courbe 43 qui illustre l’évolution de la pression partielle d’oxygène PO2. Il y a aussi un dépassement de la pression partielle d’oxygène PO2qui est ensuite asymptotiquement ramenée à la valeur de consigne pendant un temps tc. Le temps nécessaire pour atteindre l’équilibre est atteint au temps t3, qui est inférieur au temps t2précédent, mais l’avantage est une stabilité plus grande du système. Le risque de dépassement de la valeur consigne, comme le montre la courbe 42, est moindre.

[0026] Le graphique de la fig. 4D représente la courbe 44 qui illustre l’évolution de la pression partielle d’oxygène PO2. A la place d’un dépassement, tel que le montre la fig. 4C , de la pression partielle d’oxygène PO2, on prévoit une injection réduite et on augmente ensuite cette pression partielle à la valeur de consigne pendant un temps td. Le temps nécessaire pour atteindre l’équilibre est atteint au temps t4, qui est raccourci par rapport au temps t1évoqué précédemment. Le risque de dépassement de la valeur consigne, comme le montre la courbe 42, est moindre.

[0027] Les essais ont montré que dans le cas de la fig. 4A le temps taest d’environ 3 minutes, le temps tbet tcnécessaire pour atteindre l’équilibre dans le cas des fig. 2 et 3 étant réduit à environ 40 secondes. Comparés aux 10 minutes requises lorsque les cultures sont disposées dans des étuves, et que le traitement s’effectue selon l’art antérieur connu, le gain de temps est colossal sans oublier la diminution de la consommation de gaz qui est de l’ordre d’un facteur 100.

[0028] On évoque principalement la pression partielle d’oxygène PO2, mais il est bien entendu qu’il pourrait également s’agir d’autres gaz ou de mélange de gaz, tels que par exemple l’anhydride carbonique, l’azote, un gaz médicament ou un aérosol, en fonction des besoins spécifiques dans un contexte de mise en culture de cellules. En effet, il y a toujours plusieurs gaz dans le mélange gazeux qui se compose principalement d’oxygène, d’azote et d’anhydride carbonique (CO2). Actuellement le CO2 est maintenu constant à 5% ou 10%, et le taux d’oxygène et d’azote sont interdépendants, à savoir que si le taux d’oxygène baisse, celui de l’azote monte et réciproquement.

[0029] Le dispositif est avantageusement associé à des moyens de gestion des flux de gaz. Au moment d’un changement de consigne, il peut y avoir un intérêt à augmenter les débits, puis de les baisser. Le dépassement temporaire de la valeur de consigne peut être accompagné temporairement d’une augmentation des débits afin d’améliorer les échanges.

[0030] La présente invention n’est pas limitée aux formes de réalisation décrites, mais peut s’étendre à diverses variantes évidentes pour l’homme du métier et qui découlent de la présente description sans qu’un effort inventif ne soit nécessaire. A titre d’exemple, les boites rectangulaires ou carrées dite multi-puits permettant d’effectuer plusieurs cultures simultanément et dans des conditions identiques donnent d’excellents résultats. Les moyens d’évacuation des gaz peuvent être remplacés par des moyens de gestion des fuites entre le canal de circulation de la composition gazeuse et les récipients 12.

Claims (11)

1. Procédé pour alimenter en gaz un environnement affecté à la mise en culture de cellules, comportant au moins une boîte de Pétri ou similaire, contenant un liquide physiologique et mise en contact avec une composition gazeuse prédéterminée contenant par exemple de l’oxygène ou un autre gaz, ou mélange de gaz ou similaire, dont le taux est ajusté séquentiellement, ladite au moins une boîte de Pétri comportant un fond réalisé en un matériau semi-perméable laissant passer les gaz et étanche aux liquides, caractérisé en ce que l’on fait circuler ladite composition gazeuse prédéterminée dans un canal de circulation adjacent audit fond de ladite au moins une boîte de Pétri, ledit canal de circulation ayant une paroi supérieure agencée pour communiquer avec ledit fond de ladite au moins une boîte de Pétri, de telle manière que ladite composition gazeuse prédéterminée qui est véhiculée dans ledit canal de circulation communique avec le contenu de ladite au moins une boîte de Pétri à travers ladite paroi supérieure dudit canal et ledit fond de la boîte, qui sont au moins partiellement communs, en ce que l’on injecte ladite composition gazeuse prédéterminée à une extrémité d’entrée dudit canal de circulation et en ce que l’on évacue ladite composition gazeuse prédéterminée à une extrémité de sortie dudit canal de circulation, opposée à ladite extrémité d’entrée.

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l’on injecte ladite composition gazeuse prédéterminée à une extrémité dudit canal disposée en amont de ladite au moins une boîte de Pétri et que l’on évacue ladite composition gazeuse prédéterminée à une extrémité dudit canal disposée en amont de ladite au moins une boîte de Pétri.

3. Procédé selon l’une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que l’on utilise un canal de circulation disposé sous une pluralité de boîtes de Pétri, chacune desdites boîtes comportant un fond semi-perméable au moins partiellement commun avec la paroi supérieure dudit canal de circulation, dans lequel on injecte ladite composition gazeuse prédéterminée en amont de ladite pluralité de boîtes de Pétri et que l’on évacue ladite composition gazeuse prédéterminée à une extrémité dudit canal de circulation disposée en aval de ladite au moins une boîte de Pétri.

4. Procédé selon l’une des revendications 2 ou 3, caractérisé en ce que pour ajuster la pression partielle d’un gaz sélectionné de ladite composition gazeuse prédéterminée, à un taux fixe défini appelé taux de consigne, on injecte dans ledit canal, une composition gazeuse prédéterminée dans laquelle la pression partielle dudit gaz sélectionné est égale à un taux de consigne, pour que la pression partielle dudit gaz sélectionné dans la zone de contact avec le liquide biologique atteigne localement ladite valeur de consigne pendant un temps défini pour transmettre à la culture cellulaire ledit gaz sélectionné.

5. Procédé selon l’une des revendications 2 ou 3, caractérisé en ce que pour ajuster la pression partielle d’un gaz sélectionné de ladite composition gazeuse prédéterminée à un taux fixe défini appelé taux de consigne, on injecte avantageusement dans ledit canal, une composition gazeuse prédéterminée dans laquelle la pression partielle dudit gaz sélectionné a une valeur supérieure audit taux de consigne, l’on maintient cette valeur supérieure audit taux de consigne pendant un temps prédéterminé et l’on abaisse ladite valeur à celle dudit taux de consigne après ledit temps prédéterminé, pour que la pression partielle dudit gaz sélectionné dans le liquide biologique atteigne plus rapidement ladite valeur de consigne.

6. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que pour ajuster la pression partielle d’un gaz sélectionné de ladite composition gazeuse prédéterminée à un taux fixe défini appelé taux de consigne, on peut injecter dans ledit canal, une composition gazeuse prédéterminée dans laquelle la pression partielle dudit gaz sélectionné a une valeur supérieure au taux de consigne, on peut diminuer progressivement cette valeur supérieure au taux de consigne pendant un temps prédéterminé et on peut maintenir ladite valeur à celle dudit taux de consigne après ledit temps prédéterminé, pour que la pression partielle dudit gaz sélectionné dans le liquide biologique atteigne plus rapidement ladite valeur de consigne.

7. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que pour ajuster la pression partielle d’un gaz sélectionné de ladite composition gazeuse prédéterminée à un taux fixe défini appelé taux de consigne, on peut injecter dans ledit canal, une composition gazeuse prédéterminée dans laquelle la pression partielle dudit gaz sélectionné a une valeur inférieure au taux de consigne, on peut augmenter ensuite cette valeur au taux de consigne pendant un temps prédéterminé et on peut maintenir ladite valeur à celle dudit taux de consigne après ledit temps prédéterminé, pour que la pression partielle dudit gaz sélectionné dans le liquide biologique atteigne ladite valeur de consigne.

8. Dispositif pour alimenter en gaz un environnement affecté à la culture cellulaire artificielle, comportant au moins une boîte de Pétri ou similaire, contenant un liquide physiologique et placé dans une enceinte dans laquelle circule une composition gazeuse prédéterminée contenant de l’oxygène ou un autre gaz, ou mélange de gaz ou similaire, dont le taux doit être ajusté séquentiellement, ladite au moins une boîte de Pétri comportant un fond réalisé en un matériau semi-perméable laissant passer les gaz et étant étanche aux liquides, pour la mise en œuvre du procédé, caractérisé en ce qu’il comporte un canal de circulation adjacent audit fond de ladite boîte de Pétri, ledit canal de circulation ayant une paroi supérieure constituée par ledit fond de ladite au moins une boîte de Pétri, de telle manière que ladite composition gazeuse prédéterminée qui est véhiculée dans ledit canal de circulation communique avec le contenu de ladite au moins une boîte de Pétri à travers ladite paroi supérieure du canal de circulation et ledit fond de la boîte, qui sont au moins partiellement communs, des moyens pour injecter ladite composition gazeuse prédéterminée à une extrémité d’entrée dudit canal de circulation et des moyens pour évacuer ladite composition gazeuse prédéterminée à une extrémité de sortie dudit canal de circulation, opposée à ladite extrémité d’entrée.

9. Dispositif, selon la revendication 8, caractérisé en ce lesdits moyens pour injecter ladite composition gazeuse prédéterminée à une extrémité dudit canal de circulation sont disposés en amont de ladite au moins une boîte de Pétri et en ce que lesdits moyens pour évacuer ladite composition gazeuse prédéterminée à l’autre extrémité dudit canal de circulation sont disposés en aval de ladite au moins une boîte de Pétri.

10. Dispositif, selon la revendication 8, caractérisé en ce qu’il comporte un canal de circulation unique disposé sous une pluralité de boîtes de Pétri, chacune desdites boîtes comportant un fond semi-perméable au moins partiellement commun avec la paroi supérieure dudit canal de circulation, pourvu de moyens pour injecter ladite composition gazeuse prédéterminée en amont de ladite pluralité de boîtes de Pétri et de moyens pour évacuer ladite composition gazeuse prédéterminée en aval de ladite pluralité de boîtes de Pétri.

11. Dispositif, selon l’une au moins des revendications 8 à 10, dans lequel le gaz de ladite composition gazeuse dont le taux est ajusté de manière séquentielle est l’oxygène et/ou l’anhydride carbonique, ou un autre gaz, ou mélange de gaz ou similaire, caractérisé en ce que l’on prévoit de préférence des moyens de contrôle agencés pour définir à la fois la valeur de la pression partielle de l’oxygène dans le liquide physiologique et la durée de l’injection de ladite composition gazeuse dans ledit canal de circulation.