CH656883A5

CH656883A5 - Composes a effet therapeutique et leur procede de preparation.

Info

Publication number: CH656883A5
Application number: CH4582/82A
Authority: CH
Inventors: Hideji Itokawa
Original assignee: Tobishi Pharmaceutical Co
Priority date: 1981-07-28
Filing date: 1982-07-28
Publication date: 1986-07-31
Also published as: DE3228006C2; CA1240668A; JPH0329800B2; US4476299A; FR2510577B1; GB2141718B; FR2510577A1; JPS5821655A; GB2102812B; GB2141718A; DE3228006A1; GB2102812A; GB8417307D0

Description

L'invention se rapporte à de nouveaux composés à effet théra-et qu'on réduit le produit ainsi obtenu. peutique, ainsi qu'à un procédé de préparation de ces composés.

11. Procédé selon les revendications 9 et 10, caractérisé en ce Certains de ces nouveaux composés sont des ingrédients rencontrés qu'on utilise un agent de nitration à réaction douce, tel que le nitrate dans des plantes appartenant au Genus Rubia plus particulièrement de cuivre. 40 Rubia akane et Rubia cordifolia, cependant que d'autres sont des

12. Procédé de préparation d'un composé ayant la formule géné- dérivés de ces ingrédients.

raie suivante:

I "3 II

CH - C

li - CH - CH

!! - CH.

CH

I

CH,

K - C - CK

I I

ro o dans laquelle Rs représente un groupe alkyle, cycloalkyle, carboxyalkyle ou un ester de ceux-ci, ou un groupe hétérocyelique, au

De nombreuses tentatives ont été entreprises jusqu'à présent en vue d'obtenir des extraits antinéoplasiques à partir des plantes. Parmi ces extraits, on connaît déjà des produits tels qu'une matière 45 renfermant des alcaloïdes, extraite d'une plante de Colchicum au-tumnale (J. Chem. Soc., 1940, 194) ou de Vinca rosea (J. Am. Chem. Soc., 1964, 86, 1440), une sorte de lignane provenant du Podophyl-lum peltatum (J. Am. Chem. Soc., 1953, 75,235), et un produit an-- j—v thamacrolidique de structure moléculaire similaire à la rifamycine,

rm2~\y>/oc"3 50 qui est extrait d'une plante de la famille des célastracées. En outre, parmi les matières extraites des plantes inférieures ou des champignons, une substance à base de protéine-polysaccharide, extraite du Coriolus versicolore est, par exemple, bien connue, et a déjà été commercialisée (Gan to ICagakuryoho, 1974, 1, 251). Toutefois,

moins l'un des Rs étant un groupe méthyle et les restes étant des hy- 55 quelques-uns seulement de ces extraits ont pratiquement été utilisés drogènes, caractérisé en ce qu'on fait réagir un composé ayant la formule suivante:

/—\ " r5°-<0/-ch2 - cç ~ c

KH - CH

KH - CH - CH

CH — KH — C — CH

avec un agent de méthvlation.

comme médicaments.

Par ailleurs, de nombreux chercheurs se sont efforcés d'obtenir un produit unique, extrait de plantes, présentant une excellente action pharmacologique, mais quelques-uns seulement ont réussi 60 dans leurs tentatives.

D'autre part, de nombreuses études ont été entreprises en vue d'obtenir, par synthèse chimique, un tel type de médicament, mais la . plupart de ces études furent abandonnées sans qu'on parvienne à

3 1—\ obtenir des résultats satisfaisants, ceci en raison du fait que ces mé-

=2"\2/ °C'"'3 65 dicaments synthétiques se révélèrent présenter eux-mêmes de sérieux effets secondaires.

Dans ces conditions, l'inventeur a orienté ses recherches sur les plantes médicinales et a procédé à des études minutieuses, dans un

656 883

cadre bien déterminé, en vue d'obtenir des ingrédients utiles à partir de ces plantes. Les plantes médicinales ont été utilisées pendant longtemps, et même encore actuellement, comme médicaments ou remèdes populaires, en raison de leur faible toxicité et de leur action pharmacologique modérée: même en médecine moderne, les effets obtenus par les plantes médicinales ont été reconsidérés. C'est ainsi qu'on a trouvé que l'extrait brut de garance (Rubia akane et Rubia cordifolia) présentait d'excellents effets thérapeutiques, et qu'un produit unique ayant une action antinéoplasique prononcée pouvait être obtenu en purifiant ledit extrait brut, ce qui a conduit l'inventeur à mettie au point la présente invention.

L'invention a principalement pour but de fournir de nouveaux composés à effet thérapeutique.

Un autre but de l'invention est de fournir un procédé de préparation desdits nouveaux composés.

D'autres buts, objets et caractéristiques de l'invention ressorti-ront de la description qui suit.

Les nouveaux composés selon l'invention sont représentés par la formule générale ci-après (I ) :

rc-.,

Ri0-\0V- CK, - CH

r * !

c ch- - k

\

C"2 " CS

dans laquelle Ri est un atome d'hydrogène, un groupe acyle, un groupe alkyle, cycloalkyle éventuellement substitué, carboxyalkyle ou un ester de ceux-ci, un groupe hétérocyelique ou un reste formant une fraction sucre, R2 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur, et R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe contenant de l'azote.

Les nouveaux composés de formule générale (I ) préférés sont ceux dans laquelle Rj représente un groupe acyle de —COA (A étant un groupe alkyle en C,-C20 substitué ou linéaire, saturé ou non saturé; un groupe phényle ou un phényle substitué par un atome d'halogène, un groupe alkyle inférieur, nitro ou amino: un groupe benzyle ou styryle non substitué ou substitué par un atome d'halogène, un groupe alkyle inférieur, un groupe nitro ou amino): un groupe alkyle en Ci-C20 linéaire ou ramifié; un groupe cycloalkyle en C3-C6 non substitué ou substitué par un alkyle inférieur, un groupe amino, nitro ou un atome d'halogène; un groupe carboxyalkyle en C,-C5 ou un ester de ce composé avec un alcool en C]-Cs; un groupe hétérocyelique; un résidu saccharide; un groupe — S02CH3 ou un atome d'hydrogène, R, représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur, et R3 est un atome d'hydrogène ou un groupe contenant de l'azote, tel qu'un groupe amino ou nitro.

On a trouvé que les composés de l'invention présentent une activité antinéoplasique et ont un effet thérapeutique, en particulier, émétique, anorexigénique, psychotropique, vasoconstricteur, papa-vérinique, antiparkinsonien et'ou une action antidiurétique.

Les figures 1 à 3 des dessins annexés illustrent les résultats des spectres IR observés pour les composés obtenus, respectivement, dans l'exemple 1, c'est-à-dire le composé TPC—A correspondant au composé de formule I dans laquelle R3 et R, représentent tous deux un atome d'hydrogène, son dérivé méthyléther et, dans l'exemple 22, le dérivé acétylé de TPC—A.

Le Rubia akane utilisé comme produit de départ, d'où les composés TPC—A et leurs dérivés méthyléthers sont isolés, est une plante vivace du genre sarment qui se développe spontanément dans les champs et les montagnes du globe. La racine rouge-jaune de cette plante a été utilisée comme désinfectant sanguin, emménagogue et hémostatique, en médecine traditionnelle chinoise, et comme remède populaire pour le traitement cardiopathique a froid, et des contusions. sous fonile décoction.

II est connu que l'espece Rubia renferme des anthraquinones. né-pétalactones. triterpénoïdes. saponines. alcaloïdes: toutefois, aucun 5 composant actif individuel n'a jamais été extrait ou isolé.

Le composé TPC —A ayant un groupe hydroxyle, pouvant être extrait et isolé du Rubia akane et Rubia cordifolia. présente de lui-même un effet antinéoplasique et est considéré comme ayant des effets analogues a d'autres ingrédients pharmacologiquement actifs, io En outre, il est utilisé comme produit intermédiaire pour la préparation de dérivés qui peuvent être obtenus en modifiant chimiquement le groupe libre hydroxyle et ou le groupe imino.

Le composé TPC—A peut être extrait de la racine de Rubia akane et Rubia cordifolia. en soumettant le Rubia akane et le Rubia is cordifolia séchés a l'extraction au solvant, par exemple méthanol, éthanol, chloroforme et acétate d'êthyle, en concentrant l'extrait, puis en isolant et en purifiant par Chromatographie l'extrait concentré brut.

Le dérivé méthyléther de TPC—A peut également être extrait du 20 Rubia akane et du Rubia cordifolia. sous la forme d'une fraction différente de celle du TPC—A, suivant le même processus. En outre, ce composé peut également être préparé par méthylation du composé TPC —A au niveau du groupe hydroxyle libre, dans un solvant approprié. Ce composé peut également être utilisé comme 25 produit de départ d'autres dérivés.

Dans la réaction de méthylation, un alcool, un êther ou un solvant aqueux peut être utilisé comme solvant approprié, suivant l'agent méthylant employé. En outre, on peut utiliser un agent mé-thylant connu, tel qu'un halogénure de méthyle, le diazométhane ou 30 le sulfate de diméthyle, la méthylation du composé TPC —A

pouvant être effectuée conformément à une réaction conventionnelle de méthylation.

Durant le processus d'extraction, si l'extraction est effectuée par Chromatographie sur colonne, sur charbon actif, comme éluant, i! 35 peut être préférable d'utiliser un solvant moins polaire que l'extrait, tel que le benzène. le chloroforme, l'acétate d'éthyle. le méthanol ou un mélange de ce.-- produits. Lorsque la séparation est effectuée par Chromatographie en phase liquide, il est préférable d'utiliser une colonne ehromatographique a phase inversée, telle que C— 18 (fabri-cation Waters Associâtes Inc.!. RP — 8 ou RP—18 (vendue par Merck & Co.. Inc.). ainsi qu'une colonne de Silieagel traitée à

roDs.

D'autres dérivés du TPC—A ou un méthyléther de celui-ci peuvent être préparés selon les processus ci-après.

■m Parmi les nouveaux composés de l'invention, les composés dans lesquels Rj est un groupe alkyle. cycloalkyle ou carboxyalkyle ou un ester de ces produits ou un groupe hétérocyelique, peuvent être facilement préparés en faisant réagir le composé TPC—A, isolé de la garance, avec un agent alkylant tel qu'un halogénure d'alkyle, un so agent méthylant, des halogénures de cycloalkyle ou des halogénures de carboxyalkyle ou des esters de ces produits. On peut mentionner, comme agent alkylant, des halogénures d'alkyle en Ct à C20, par exemple des bromures, des halogénures de cycloalkyle en C3 à Cö, par exemple des bromures, des halogénures de carboxyalkyle en Ct S5 à C5, tels que des bromures, ou un ester alkyle inférieur de ces produits.

L'alkylation du groupe OH sur un noyau phényle est bien connue et, dans la présente invention, l'alkylation du composé TPC—A est effectuée selon une méthode conventionnelle. 60 Les composés dans lesquels R, est un groupe acyle peuvent être préparés en faisant réagir le composé TPC—A avec un agent acylant, selon une méthode d'acylation conventionnelle. Comme agent acylant, on peut utiliser, dans la présente invention, des halogénures d'acyle ou des anhydrides d'acide tels que l'anhydride acéti-65 que, l'anhydride propionique, l'anhydride butyrique ou isobutyrique, l'anhydride crotonique, l'anhydride valérique, l'anhydride ca-proïque. l'anhydride énanthique. l'anhydride caprylique, l'anhydride caprique, l'anhydride stéarique. l'anhydride benzoïque, l'anhydride

5

656 883

O-, m-, p-chlorobenzoïque, l'anhydride m-, p-nitrobenzoïque. l'anhydride cinnamique. l'anhydride phénylacétique et les chlorures ou les bromures de ces acides.

Lorsqu'un halogénure d'acide méthane-sulfonique est utilisé à la place de l'agent acylant. l'ester de l'acide méthane-sulfonique du TPC — A peut être préparé de la même manière.

Les composés dans lesquels R3 est un groupe contenant de l'azote peuvent être préparés, par exemple par nitration du TPC—A et, si nécessaire, par réduction du groupe nitro, suivant une méthode conventionnelle de nitration ou de réduction.

Les composés dans lesquels au moins l'un des est un groupe méthyle peuvent être préparés par méthylation des dérivés méthylé-thers du TPC—A, avec un agent méthylant connu tel que le diazométhane, des halogénures de méthyle, en particulier des iodures, du sulfate de diméthyle, en présence d'un hydroxyde alcalin, d'un carbonate alcalin ou de fluorure de potassium.

Les composés dans lesquels R, est un résidu saccharide peuvent être préparés par réaction entre le TPC —A et un saccharide activé et protégé, en présence d'un catalyseur tel que Fhydrure de sodium, l'oxyde d'argent, le perhydrochlorure d'argent, un sel d'argent. L'ac-tivation du saccharide peut être effectuée suivant un processus conventionnel et le groupe protecteur peut être, par exemple, un groupe acétyle, benzoyle. benzyle et d'autres groupes acyles qui peuvent être éliminés dans des conditions douces.

Les fragments de saccharide utilisés dans l'invention peuvent être le glucose, le galactose, le rhamnose, le fructose ou le xylose.

L'invention sera maintenant décrite plus en détail en se référant aux exemples non limitatifs ci-après.

Exemple 1:

fi) Extraction

A 500 g du produit de départ séché (racine de Rubia cordifolia), on ajoute 1 1 de méthanol et l'on poursuit l'extraction au bain d'eau chaude pendant 3 heures, tout en chauffant, puis on sépare l'extrait du résidu par filtration. On répète l'extraction par rapport au résidu, en ajoutant 1 1 de méthanol frais. Après avoir répété cette extraction, les extraits obtenus sont rassemblés et concentrés sous vide, ce qui fournit 27 g d'extrait brut.

On dissout 25 g dudit extrait brut dans 200 ml de méthanol et on introduit la solution dans une colonne garnie de 250 g de charbon activé pour Chromatographie (fabriqué et vendu par Wako Inc.). Après lavage de la colonne au méthanol. on effectue l'élution au chloroforme-méthanol et les fractions éluées résultantes sont rassemblées, puis concentrées sous vide, ce qui donne 10 g d'un produit huileux, de coloration brun rougeâtre.

9 g dudit produit huileux sont dissous dans une petite quantité de chloroforme et la solution est adsorbée sur une colonne garnie de 400 g de gel de silice. On lave ensuite la colonne en utilisant, dans l'ordre, du chloroforme, un solvant mixte chloroforme-acétate d'éthyle et de l'acétate d'éthyle, avant d'effectuer l'élution avec un mélange chloroforme-méthanol. L'éluat résultant est rassemblé et concentré sous vide, ce qui donne 1,4 g d'un produit huileux.

Par ailleurs, 1,3 g dudit produit huileux est dissous dans une petite quantité de chloroforme, puis la solution est adsorbée sur une colonne remplie de 150 g de gel de silice; on lave ensuite la colonne avec un mélange de chloroforme et de chloroforme-méthanol (100:1), puis on procède à l'élution avec un mélange de chlorofor-me-méthanol (100:3). Les fractions éluées sont rassemblées et combinées, puis concentrées sous vide, ce qui fournit 250 mg d'un produit solide.

On dissout le produit solide obtenu dans une petite quantité d'un mélange chloroforme-méthanol et, après développement de la solution sur une plaque TLC, type 7544 (Merck & Co., Inc.) à l'aide de solvant mixte chloroforme-méthanol (100:15), les bandes résultantes ayant une coloration bleu foncé par irradiation aux rayons ultraviolets (254 nm), ce qui correspond à des valeurs Rr, respectivement, de 0,60 à 0,71 et de 0,50 à 0,59. sont chargées dans des colonnes distinctes; chaque colonne est éluée avec un mélange chloroforme-méthanol. puis, après évaporation à sec sous vide, on obtient, à partir de chaque fraction de valeur R, faible ou élevée, respectivement, 56 mg et 24 mg d'un produit solide brun clair.

La solution renfermant 40 mg dudit produit solide (faible Rf) dans l'acétonitrile aqueux a 45°o est soumise à un HPLC de préparation en utilisant urie colonne micro Bondapack C —18 (Waters Associates Inc.) et une solution aqueuse d'acétonitrile à 45% comme solvant de développement, l'absorbance à 254 nm étant utilisée comme indication, et l'éluat est évaporé a sec, sous vide, ce qui donne 24 mg d'une poudre blanche (TPC —A). La méthode HPLC de préparation peut être éventuellement répétée pour purifier davantage le produit.

On répète le même processus avec la solution renfermant 20 mg de l'autre produit solide (valeur Rf élevée) dans l'acétonitrile aqueux à 45" o. ce qui donne 12 mg d'une poudre blanche (dérivé méthyléther du TPC—A). On recristallise la poudre blanche par le méthanol et l'on obtient 10 mg de cristaux se présentant sous forme d'aiguilles incolores.

(ii) En utilisant 100 g de Rubia akane sec, on répète les opérations précitées (i), ce qui fournit 7,3 mg de TPC —A et 4,9 mg de son dérivé méthyléther.

(iii) Préparation du méthyléther du composé TPC —A

Dans une petite quantité de méthanol, on dissout 10 mg du composé TPC —A, solution à laquelle on ajoute 5 ml de diazométhane dans l'éther. Après avoir laissé reposer la solution, tout en refroidissant par l'eau glacée, pendant 1 heure, on évapore la solution à sec, sous vide, et l'on recristallise par le méthanol la poudre blanche résultante, ce qui donne 8 mg de cristaux se présentant sous forme d'aiguilles incolores.

Le produit résultant est identifié comme étant le dérivé méthyléther du TPC—A, sur la base des résultats des mesures NMR et IR.

Les propriétés physiques et chimiques de ces composés, du TPC —A et du méthyléther de ces produits, dérivés de la garance, sont représentées au tableau 1 ci-après. En outre, les diagrammes des spectres IR sont représentés aux figures Ì et 2.

< Tableau en tête de la pati e suivante I

Exemples 2 à 17:

A un solvant mixte de tétrahydrofuranne (4 ml), de méthanol (8 ml) et d'eau (2 rni), on ajoute 100 mg de TPC —A et 20 mg de n-hexylbromure. puis une quantité en excès de carbonate de potassium anhydre; on chauffe ensuite le mélange au reflux, sur bain d'huile, à 100 C. Après achèvement de la réaction et après avoir interrompu le chauffage, on ajoute de l'eau à la solution réactionnelle, on extrait la solution à l'acétate d'éthyle et on lave l'extrait avec une solution saturée de chlorure de sodium. L'extrait lavé est séché sur du sulfate de magnésium anhydre, le solvant est séparé par distillation sous vide, et le résidu obtenu est lavé au n-hexane et purifié par P —TLC. Le produit ainsi obtenu est recristallisé par le méthanol, ce qui fournit 63 mg de n-hexyléther du composé TPC—A, se présentant sous forme de cristaux incolores.

Suivant la même méthode, mais en utilisant un n-alkylbromure représenté au tableau 1, à la place de n-hexylbromure, on obtient les dérivés n-alkyléther correspondants.

Les propriétés physiques de ces produits sont indiquées au tableau 2.

(Tableau en page suivante)

Exemple 18:

i) Les opérations de l'exemple 2 sont répétées, excepté qu'on utilise le bromoacétate de méthyle à la place de n-hexylbromure, ce qui permet d'obtenir de l'hydroxycarbonylméthyléther (1) de TPC—A, sous forme de cristaux incolores.

(ii) Le produit (1) obtenu en i) est traité au diazométhane et re-cristailisé par le méthanol pour obtenir un méthylester (2) dudit produit (1 ). sous forme de cristaux incolores. Les propriétés physiques sont indiquées au tableau 3.

5

io

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

POOR QUALITY

656 §83

6

Tableau I

Propriétés

TPC-A

Méthyléther du TPC-A

Poids moléculaire*

756

770

Aspect poudre blanche aiguilles incolores

Point de fusion (M.P.)

environ 235 C, produit devenant

> 2B0 C (pas de point net de

progressivement brunâtre (pas de point décomposition)

net de décomposition)

Pouvoir rotatoire spécifique

Mo

-220 (CHClj, C = 0,1)

-224 (CHCl,. C = 0.25)

UV, /. EtOH max

276 nm: e = 3800

276 nm: s = 3800

282 nm: s = 3300

282 nm; s = 3300

NMR, (0 ppinr"'

2,70 (3H.sj. 2,86 (3H,s)

2,70 f3H.sj, 2.86 (3H,s)

3.10 (3H.s). 3,77 (3H,s)

3,12 (3H.s), 3,78 (3H,s)

3,92 (3H.s)

IR

Figure 1

Figure 2

* Le poids moléculaire est déterminé par FD-MS.

** La mesure proton NMR est effectuée en utilisant CDC13 comme solvant et Si (CH3)4 comme étalon interne, à 100 MHz. *** Les résultats IR sont obtenus selon la méthode au KBr.

Tableau 2

Tableau 3

Exemple r,

m.p. ( C) (décomp.)

md (CHCl,)

T

( C)

-)

(ch2)5ch3

261-268

-178

26

3

ch2ch3

219-225

-194

25

4

(ch2)2ch3

212-217

-193

25

5

ch(ch3)2

213-220

-194

26

6

(CH2)3CH3

210-216

-192

25

7

(CH2UCH3

214-221

-191

25

8

<ch2)6ch3

245-250

-189

26

9

(CH2)-CH3

243-249

-178

27

Ì0

(CH2)8CH3

245-248

-169

26

11

(CH2)QCH3

242-247

-198

26

12

(CH2),nCH,

228-235

-179

26

13

(CH2).,CH3

240-242

-189

26

14

(CH,)I2CH3

238-242

-186

26

15

(CH,>,-.CH,

228-235

-153

26

16

-0

215-2^2

-171

25

17

u

229-233

-155

26

Exemple

R,

m.p. 1 Ci ' décomp. 1

["■In : CHCL}

r f C:

18(1)

ch2cooh

211-215

-141

25

18(2)

ch2cooch3

201-207

-161

24

19(1)

(ch2hcooh

-140

24

19(2)

(ch2)3cooch2ch3

181-186

-188

24

19(3)

<ch2)3cooch3

178-184

-171

25

Exemple 19:

i) En utilisant l'éthylbromobutyrate à la place de bromoaeétate de méthyle. la phase i) dans l'exemple 18 est répétée pour préparer i'hydroxycarbonylpropyléther ( 1 ) et l'éthoxycarbonylpropyléther (2) de TPC—A.

ii) Le produit (1) est traité au diazométhane, puis recristallisé par le méthanol pour obtenir du méthoxycarbonylpropyléther de TPC—A, sous forme de cristaux incolores. Les propriétés physiques de ces composés sont indiquées au tableau 3. —»

Exemple 20:

Dans 4 ml d'un solvant mixte renfermant de l'acétate d'éthyle anhydre (!9 ml) et de l'acide chlorhydrique anhydre à 5°o contenant de l'acétate d'éthyle (1 ml), on dissout 100 mg du composé TPC—A. puis on ajoute 0,4 ml de 2,3-dihydropy ranne et. après avoir scellé le récipient réactionnel, on laisse le mélange reposer pendant une nuit à

5 C. Une fois la réaction achevée, on ajoute de l'acétate d'éthyle et la solution est lavée avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium, puis séehée sur du sulfate de magnésium anhydre. On sépare le solvant par distillation sous vide et on lave le résidu au n-•m hexane, après quoi on purifie par le P—TLC. Les cristaux résultants sont recristallisés par le méthanol et l'on obtient 55 mg de tétrahy-dropyrannyléther de TPC—A. sous forme de cristaux incolores, de point de fusion de 286 à 289 C (avec décomposition), [a]o — 157' (CHClj).

45

Exemples 21 à 39:

Dans 5 ml de pyridine anhydre, on dissout 50 mg de TPC—A et on ajoute, goutte à goutte, tout en agitant. 15 ml d'anhydride de ca-proyle. On laisse la solution reposer pendant une nuit, à température so ambiante, puis on ajoute du toluène anhydre à la solution réaction-nelle et l'on sépare le solvant par distillation sous vide. Le résidu résultant est lavé au n-hexane et le précipité obtenu est recristallisé par le méthanol. ce qui donne 38 rng de caproate de TPC — A se présentant sous forme de cristaux incolores.

55 Les mêmes opérations sont répétées, mais en utilisant d'autres acides (y compris des anhydrides d'acide ou du chlorure de méthane-sulî'onyle) correspondant aux restes dont la liste est indiquée au tabieau 4 ci-après, à la piace d'anhydride de caproyle: les produits correspondants indiqués au tableau 4 sont obtenus sous forme de 10 cristaux incolores. Les propriétés physiques de ces produits sont spécifiées au tableau 4.

( Tableau en tête Je la colonne suivante )

65 Exemples 40 à 43:

Dans une fiole du type ■■ aubergine», on introduit 40 mg d'éthoxyde de thallium et l'on ajoute 2 mg d'éthanol anhydre, puis on agite la solution. On ajoute ensuite ! ID mg de TPC —A et i ml de

Tableau 4

7

Tableau 5

656 883

Exemple m

23

24

25

26

27

28

29

30

31

32

33

34

35

36

37

38

39

R,

co(ch,);ch, COCH3

coc,h5

co(ch,)2ch3 coch(ch3)2 coch-cucii., co(ch2)3ch3 co(ch2),ch3 co(ch2)6ch3 co(ch,)8ch3 co(ch2)16ch3

co-

CI V.

co-

co

COCO-

-CI

.NO,

co-

-no,

coch = ch — s02ch3

m.p. ( C)

MD

T

(décomp.)

(CHCl,)

( C)

205-210

-178

19

228-241

-190

18

-171

21

196-201

-165

21

-140

")"■>

215-223

-88

")T

203-208

-178

21

195-200

-182

19

190-195

-173

19

174-180

-174

19

105-110

-131

19

240-245

-188

22

219-224

-171

23

221-226

-160

23

225-231

-155

23

224-230

-135

26

197-202

-140

26

330-335

-150

23

218-225

-172

26

Exemple

R,

m.p. ( Ci ( décomp.)

[a]n

(CHCl,)

T

(C)

40

CO(CH2)2CH(CH3),

285-292

-181

19

41

C0(CH2)»/ 0 S

205-212

-179

19

42

43

44

45

COCH2CH(CH3)CH,CH3 C0CH(CH3)(CH2)2CH3 C0CH = CH(CH,)2CH3 COCH2CH = CHC2Hs

193-198 195-201 268-274 198-203

-164 -178 -164 -183

19

20 20

tétrahvdrofuranne anhydre, on agite à temperature ambiante pendant 3 heures, puis la solution est soumise à une distillation sous vide, pour éliminer le solvant; le sel de thallium de TPC—A résultant est mis en suspension dans 2 ml de tétrahydrofuranne anhydre et on ajoute, goutte à goutte, tout en agitant, une solution de chlorure de 4-méthyle valéryle (20 mg) dans 1 ml de tétrahydrofuranne anhydre. On continue l'agitation pendant 2 heures, on filtre la solution réactionnelle pour éliminer la matière solide; le filtrat est soumis à la distillation sous vide et le résidu résultant est lavé au n-hexane, après quoi on purifie par le P—TLC. On soumet le produit à la recristallisation par le méthanol et l'on obtient 75 mg de 4-méthyle va-lérate, sous forme de cristaux incolores.

On répète les mêmes opérations en utilisant d'autres chlorures d'acide qui correspondent aux restes indiqués au tableau 5, à la place de l'acide 4-méthyle valérique et l'on prépare les produits correspondants ayant un substituant figurant dans la liste du tableau 5. Les propriétés physiques des produits sont également indiquées au tableau 5. —»

Exemple 46:

i) Dans 3 ml d'acide acétique, on dissout 100 mg de TPC—A et on ajoute, tout en agitant, une solution de nitrate de cuivre (40 mg) dans 3 ml d'acide acétique. Lorsque la solution réactionnelle passe du bleu au vert, tout en continuant l'agitation, on ajoute de l'eau pour faire cesser la réaction et l'on extrait le produit à l'acétate d'éthyle. On lave l'extrait avec une solution saturée de chlorure de sodium et l'on sèche cet extrait sur du sulfate de magnésium anhydre, après quoi l'extrait est soumis à une distillation sous vide pour éliminer le solvant et l'on recristallise le produit par le métha-20 noi, ce qui donne un composé nitré de TPC—A en position a-phénolique de celui-ci (108 mg), sous forme de cristaux en aiguilles jaunes, d'un point de fusion de 244-250 (avec décomposition) et d'une valeur [a]È,2 de — 232 (CHC13).

ii) Le produit réactionnel de l'étape i) est traité par le diazomé-25 thane et l'on recristallise le produit par le méthanol, de manière à former un composé nitré du dérivé méthyléther de TPC—A, se présentant sous la forme de cristaux incolores, d'un point de fusion de 225-232 C (avec décomposition) et d'une valeur [a]o de —187 (CHClj).

30

Exemple 47:

i) A 7,5 ml d'eau, on ajoute 90 mg de borohydrure de sodium, puis, sous agitation, une petite quantité de Pd/C à 5%; on ajoute ensuite, goutte à goutte 130 mg du produit (exemple 46 i)) dans

35 15 ml de méthanol. Une fois la réaction terminée, on ajoute de l'eau et le produit réactionnel est extrait à l'acétate d'éthyle. L'extrait est lavé avec une solution saturée de chlorure de sodium, séché sur du sulfate de magnésium anhydre, puis le solvant est séparé par distillation sous vide, après quoi on purifie par P—TLC pour former le 40 composé aminé de TPC —A en position a-phénolique de celui-ci (64 mg), de point de fusion 238-243 C (décomposition) et de valeur [ajo de — 199 (CHC13).

ii) Le produit obtenu dans l'exemple 46 ii) est traité selon les opérations précitées (i) et le produit résultant est soumis à une re-

45 cristallisation au méthanol, ce qui donne une composé aminé du dérivé méthyléther de TPC —A, de point de fusion 225 à 231 C (décomposition), avec [ol]d —198 (CHC13).

Exemple 48:

50 Dans 10 ml de 1,2-diméthoxyéthane anhydre, on dissout 100 mg du dérivé méthyléther de TPC—A et l'on ajoute 240 mg d'alumine-fluorure de potassium et une quantité en excès d'iodure de méthyle, et le mélange est protégé de la lumière, tout en continuant l'agitation pendant une nuit, à température ambiante. Une fois la réaction ter-55 minée, la solution est filtrée, le filtrat est soumis à une distillation sous vide pour éliminer le solvant, et le résidu obtenu est purifié par P—TLC, après quoi on recristallise par le méthanol, ce qui donne un dérivé N-méthylé du méthyléther de TPC —A (98 mg), sous forme de cristaux incolores ayant un point de fusion de 285 à 292e C 60 (avec décomposition) et une valeur [a]5 de — 166 (CHC13).

Exemple 49:

Dans 5 ml de DM F anhydre, on dissout 225 mg de TPC—A et on ajoute 11 mg d'hydrure de sodium, en refroidissant par de la 65 glace et tout en agitant. Selon une méthode conventionnelle, on ajoute à la solution 187 mg de bromure d'acétyle D-glucose dérivé de l'acétyle D-glucose. puis on continue l'agitation pendant 20 heures à température ambiante. Une fois la réaction terminée, on ajoute

656 §83

50 ml d'acétate d'éthyle et on lave la solution deux ibis avec de l'eau glacée (20 ml à chaque fois), et deux fois avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium (20 ml à chaque fois), la solution étant ensuite séchée sur du sulfate de magnésium anhydre et soumise a une distillation sous vide pour éliminer le solvant, ce qui permet d'obtenir environ 300 mg de produit, sous la forme d'une substance blanche ou jaune clair très huileuse. A la matière huileuse ainsi obtenue, on ajoute SO ml d'une solution aqueuse de carbonate de potassium à 5% et 10 ml de méthanol; le mélange est chauffé au reflux pendant 1 heure, sous agitation, après quoi on ajoute 30 ml d'eau glacee et l'on extrait trois fois avec 30 ml d'acétate d'éthyle. L'extrait combiné est ensuite lavé avec 50 ml d'une solution aqueuse de chlorure de sodium, séché ensuite sur du sulfate de magnésium anhydre et soumis à une distillation sous vide pour séparer le solvant, ce qui donne environ 200 mg d'un produit solide blanc. Le produit est soumis à une Chromatographie sur colonne de gel de silice et élué avec un solvant mixte chloroforme-méthanol (10:0,5) pour éliminer la partie soluble. puis élué avec le même solvant mixte (10:2). et les fractions éluées sont rassemblées. On obtient ainsi 53 mg de composé glucoside de TPC—A, ayant un point de fusion de 210 à 216 C (avec décomposition) et une valeur [a]g de —203 ŒtOH).

Essais sur les animaux

Au cours de ces essais sur les animaux, l'action antinéoplasique à rencontre d'une tumeur implantée a été examinée, in vivo, en ce qui concerne les composés selon l'invention, en utilisant des souris CDFÎ.

Dans la cavité péritonéale des souris de chaque groupe comprenant six souris CDFI par groupe, 106 0.1 ml de cellules P-38S ou 105 0.1 mi de cellules L-1210 furent implantés. Durant 24 heures à 5 jours après implantation des cellules, la quantité désirée des composés de l'invention a été administrée par voie intrapéritonéale, à raison de 0,05, 0,5, 2, 4 ou 10 mg kg. En ce qui concerne les groupes témoins de souris CDFI, les cellules P-388 et L-1210 furent implantées de la même manière et se développèrent sans administration des composés. La différence des taux d'apothanasie entre eux fut observée et les résultats sont indiqués au tableau 6. —->

En ce qui concerne les essais de protection visant à confirmer le caractère antinéoplasique de certains composés, on sait qu'il existe dans la technique, deux types d'essai, l'un étant un essai «in vitro», dans lequel on utilise des cellules de carcinome en propagation dans un tube à essai, l'autre étant un essai «in vivo», dans lequel on utilise des animaux auxquels on a implanté des cellules de carcinome. Au Japon, l'essai «in vivo» est habituellement effectué en utilisant la tumeur d'Ehrlich, les cellules L-1210, les cellules 180 du sarcome, le sarcome Yoshida ou la tumeur ascite du foie, en tant que tumeur ascite, et le carcinome immobilisé, mentionné ici sous l'appellation de carcinome fixé. Récemment, on a mis au point une nouvelle méthode de confirmation du caractère antinéoplasique, méthode dans laquelle on utilise des cellules de leucémie lymphocytes P-388. Il est connu que les P-388 ont une sensibilité plus marquée que les L-1210. Comme carcinome fixé, on peut mentionner, par exemple, le cancer du poumon de Lewis, le mélanome B — 16, les MM2, MOPC 104E, Colon 26, MH 134, C-1498 et analogue.

Les nouveaux composés de l'invention se sont révélés efficaces vis-à-vis des cellules P-388, au vu des résultats des essais de protection qui viennent d'être décrits. En outre, on a trouvé que les dérivés éthérés et les dérivés estêrifiés de TPC—A étaient efficaces vis-à-vis de la tumeur ascite autre que P-388: en particulier les dérivés acéty-lester, ester de l'acide caprique et n-hexyléther de TPC —A se sont également révélés efficaces vis-à-vis du mélanome B — 16, du MM2

(voir tableau 7). , _ ,, - . ,

( Tableau en tete de la paye suivante )

Essais de toxicité

Pour les composés de l'invention, la dose létale a été déterminée comme suit.

io 'hi, ai, /\

P3J'<

T C<%)

Composé I

dose i ma ksi

Témoin TPC-A Méthvléther de TPC-A (dose, 0.01 i Ex. 2 Ex. 3 Ex. 5 Ex. 7 Ex. y Ex. 9 Ex. 10 Ex. 16 Ex. 19 (2) Ex. 20 Ex. 21 Ex. :

Ex.:

Ex. :

Ex.: Ex. 26 Ex. 2" Ex. 2" Ex. 29 Ex. Ex. 32 Ex. 40 Ex. 41

Ex. 43 Ex. 44 Ex. 45

<>JO

n

23

. 23

100

130.1

110.3 i 37.3

142.4 122.2 115.8 136.1

112.5 126.5 113.8 138. 133, 133. 129.

ii. 5

00

156.7

124. 124.1 i 17.9 113.6

i 26.7 i 22,'.i

117. i 14.

137. 165. 175.

142.

144. 146. 141, 162.

139. 164.

143. 155.

145.

144. 150.

148.

149. 144.

140.

146. 185. i 33.

i-r.

i 40.

ï J-"1

150.

0 I

100

164.2

153,5 162.2 105.4 165.4 150. 162.

150. 164. 141. 121.

151. 168. 164. 155. 155. 162.

100

IO

100 187.4

,1 9 ,1

164.3

73.6

173.0

164.0 152.2 155.4

153.1

150.

16^:

151.'

i /iv'

152.

197,2 194,7 175,0 170,0

183.5

186.6 171.6

168.9 150,6

En utilisant des souris mâles CD — î (!CR j de 4 semaines, comprenant 5 à 10 souris par groupe, lu quantité désirée de chaque « composé de l'invention fut mise en suspension dans une solution CMC à 0,5°'o, et la suspension obtenue fut administrée à chaque souris par voie intrapéritonéale ou par voie intraveineuse. En observant l'état des souris ("vie ou mort), ainsi que le symptôme général pendant 7 jours après administration des composés, la valeur LDS0 50 pour chaque composé fut estimée à partir de la population létale observée en se basant sur la méthode Litchfield-Wilcoxon. Les résultats sont indiqués au tableau 8.

Tableau 8

LD;n et limite de confiance à 95" o ! mg! kg)

Mode d'administration Intrapéritonéale Intraveineuse

TPC-A

16,0(13,3-19,3) 34,0 (28,1-41.2)

Méthyléther de TPC-A 10,0 ( 7,0-14,3) 16,5(12,6-21,5)

Acétylester de TPC-A 18,4(16,9-20,0) 20,0 (15,2-26,3)

Comme cela ressort des résultats indiqués au tableau 8, les 65 valeurs LD50 des composés précités sont plus faibles dans le cas de l'administration par voie intrapéritonéale que par voie intraveineuse. La tendance est entièrement différente de celle des médicaments habituels.

9

Tableau 7

656 883

P388

L1210

B16

MM2

Composé

Dose kg

(i.P. - i.P.)

(i.P.-i.P.)

(i.P. - i.P.)

T C l°oj

T C (%)

T. C (% )

0.01

130,1

105.6

Méthyléther

0.5

156,7

118.6

133,8 (p.25 mg, kg)

103,1 (0,2 mg/kg)

de

1

159.9 <TR = 400)

120.7

135,3

103,1

TPC-A

*)

164,2

129,3

139,1

118,4

4

173.6

137,3 (5 mg, kg)

143,0

90,8 (5 mg/kg)

0.05

133,3

100.9

0.5

155,6

110.0

116,9

102,5

Ex. 22

T

168.9 (TR = 278)

114,4

128,5

109,2

5

175,8

120,0

147,8 (4 mg, kg)

117,8

10

194,7

128,9

141,1 (8 mg/kg)

120,9

0.05

130,4

0,5

143,5

115.6

130,5

110,3

Ex. 2

2

150,0 (TR= 100)

126,6

158,2

129,3 (3/6 60< )

4

—

130.9

136,2

161,8(1/7 60<)

5

176,1

—

0.01

133.7

—

0,1

135,9

—

Ex. 21

0.5

— (TR = 200)

115,6

143,5

112,1

2

152.2

126,6

152.0

127,3 (2/6 60 < )

5

—

67,3 (10 mg, kg)

165,5

93,9 (10 mg/kg)

Essais concernant d'autres effets pharmacologiques

On a trouvé que chaque composé de l'invention présentait un effet antinéoplasique, au vu des résultats des essais sur les animaux précédemment décrits.

Lors de ces essais, on a étudié d'autres effets pharmacologiques pouvant être obtenus à l'aide de ces composés.

Chaque composé de l'invention fut administré par voie intrapéritonéale à des souris CD — 1 (IRC) de 4 semaines (Nippon Charles Liver K.K.) à une dose de 1 à 20 mg/kg, en utilisant des groupes comprenant 3 souris par groupe. Le symptôme de la souris fut observé toutes les 30 minutes après administration du composé, pendant 180 minutes. L'observation fut faite suivant la méthode d'Arwin modifié et de Smith, c'est-à-dire suivant une méthode d'observation neuropharmacologique multidimensionnelle.

Par comparaison entre le symptôme observé et les modèles d'action pharmacologique résultant des médicaments connus, on a 35 trouvé que chaque composé de l'invention présentait les effets pharmacologiques suivants.

Tableau 9

40

45

Composé

Effet pharmacologique observé

TPC-A

Méthyléther de TPC-A Ester d'acide acétique de TPC-A

Action émétique, action anorexigénique. action psychotropique, action vasoconstric-trice, action papavérinique, action antipar-kinsonienne.

Action émétique, action anorexigénique.

Action émétique, action psychotropique, action antidiurétique.

R

3 feuilles dessins

Claims

656 883

REVENDICATIONS

1. Composé ayant la formule générale suivante:
5. Procédé pour la préparation d'un composé ayant la formule générale suivante:
ch. o

1 J I!

(Il 5 Rs°-(0)

o ch. o

» I " il

CK - c - kh - ch - c - KH - ck - ck,

li - CK - CK.

I

!î - CK,

- ch - x — c — ck - cy.t~(q )-ozh^

III! ? ' "

C = 0

i

H C_3 c - ch - ck

II

O

U>"0

dans laquelle Rç est un groupe alkyle, cycloalkyle, carboxyalkyle ou dans laquelle R, est un atome d'hydrogène, un groupe acvle, un ester de ceux-ci, ou un groupe hétérocyelique. et R3 est un groupe groupe alkyle, cycloalkyle éventuellement substitué par un alkyle in- 15 amino, caractérisé en ce qu'on fait réagir un composé ayant la férieur, un groupe amino, nitro ou un atome d'halogène, earboxyal- formule suivante:

kyle ou un ester de ceux-ci, un groupe hétérocyelique ou un reste formant une fraction sucre, R, représente un atome d'hydrogène ou *^ 0 es. o un groupe alkyle inférieur, et R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe contenant de l'azote.
2. Procédé de préparation d'un composé ayant la formule générale suivante:

o

/—\ "

r^o—(o)— ch2 - ch - c - kh -

:;o—\Or

20 J'

o \
ch. o

! J I!

ch - c - kh - ch - ch,

te o c

ç = 0 ch.

Il I II

ch - c - nk - ch - c - kh - ch - ch.

o = c

I
ch. - ch - s - c - ch - kh

1 I! I

ch, o cs3

I /v i — c — ch - ch.—( q^>- oc

0 = "j | " c=3 dans laquelle R10 est un groupe nitro, avec un agent alkylant et en c:-:, - c:-: - s - c - c:-: - KH - c - en - c:-:2—(ov och3 ce qu'on réduit le produit ainsi obtenu.

es, ö en ô 30 6. Procédé selon les revendications 4 et 5. caractérisé en ce que ledit agent alkylant est le diazométhane. le dihydropyranne, un halo génure alkylé ou du sulfate de diméthyle.
7. Procédé de préparation d'un composé ayant la formule générale suivante:

dans laquelle R4 représente un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, caractérisé en ce qu'il consiste à extraire les plantes de l'espèce Rubia akane ou Rubia cordifolia par un solvant, à concentrer l'extrait et soumettre à la Chromatographie l'extrait brut obtenu, 35 afin d'isoler et de purifier les ingrédients extraits de Rubia akane ou Rubia cordifolia.
3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que ledit solvant utilisé pour l'extraction est le méthanol, l'éthanol, le chloroforme ou l'acétate d'éthyle. «
4. Procédé de préparation d'un composé ayant la formule générale suivante:

o II

C - Kiï
CH.

I J c::

c - kh - ch - ck,

c = 0

c - ch - kh — c

II I II

O

I ~

ch - ch,—(cy-0

R.0

o ch. o

I! I J II

ch, - ch - c - kh - ch - c - kh - ch k c =

dans laquelle Rö est un groupe acyle. caractérisé en ce qu'on fait 45 réagir un composé ayant la formule suivante:

so—{q'
CH. O

II

ch-, - ch - c - kh - ch - c - kh - ch - ch,
CH.

I I /^\ 50
ch. - ck - k - c - ch - kh - c - ch - ch.—(q >"och*

^ I f{ ! il 2 \—/ 3

ch, o ch.

<o;

dans laquelle R5 est un groupe alkyle, cycloalkyle, carboxyalkyle ou ester de ceux-ci, ou un groupe hétérocyelique, et R3 est un hydrogène ou un groupe nitro, caractérisé en ce qu'on fait réagir un composé ayant la formule suivante:

o ch. o

I J II

O = Ç ch h- - ch - k - c - ch - kh - c - ck - ck,—(ovoc ! Il I f! " /

10

«o—^Ô)—

O

Ci: - C - KH

kh - ch - ch,

55 avec un agent acylant.
8. Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que ledit agent acylant est un chlorure d'acyle ou un anhydride d'acide.
9. Procédé de préparation d'un composé ayant la formule générale suivante:

60

P)
CH. -O = C

1

"CH. - CK

kh - ch - ch,

. n - c - ch - iïh

I il 1

ch, o ch.

-c - ch - ch^-oc^

dans laquelle R10 est un atome d'hydrogène ou un groupe nitro, avec un agent alkviant.

3

656 883

dans laquelle R, représente un groupe nitro, caractérisé en ce qu'on soumet à une nitration un composé ayant la formule suivante:

o CH.

11 . I "

Cr:-, — Cr. — C — KH — CH •

I
CH. - K

C - K3 - CH - CH,
13. Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que l'agent de méthylation est le diazométhane, le sulfate de diméthyle ou un halogénure de méthyle.
14. Procédé de préparation d'un composé ayant la formule géné-s raie suivante:

CH, - CH - S - C - CH - KH - C -

I "3

CH - CF.

OV-OCH,
10. Procédé de préparation d'un composé ayant la formule générale suivante:

I J 11

CH - C - KH - CH

CH,

CH,

CK,

ch - ck2-(q>-ocb3

CH - C - KH

O

II

C - KH

15 dans laquelle R9 est un reste formant une fraction sucre, caractérisé en ce qu'on fait réagir un composé ayant la formule suivante:
CH. o I II

Nfl - CH - C - KH - CH - CH,

! I _y^\
2. - CH - K - C - CH - KH - C - CH - CH.—<(_)}-OCH. I il i il 2 N—'

i
CH.

dans laquelle R7 représente un groupe amino, caractérisé en ce 25 qu'on soumet à une nitration un composé ayant la formule suivante:

c = 0

h - ch,

C - CH - H3 - C - CH - CH.—{0V0CH,

If I II 2 \—/ 3

0 c

» i *

C - KH - CH

KH - CK - CH,

C = 0

avec une fraction sucre activée protégée et en ce qu'on élimine le groupe protecteur.
15. Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que la 30 fraction sucre est le glucose, le galactose, le rhamnose, le fructose ou le xylose.

■ N - C - CH - KH - c -

I II. I II

CH - CH2-@-OC33