CH649531A5

CH649531A5 - 1-((2-mercaptocycloalkyl)carbonyl)-l-prolines, leur procede de synthese et compositions pharmaceutiques les contenant.

Info

Publication number: CH649531A5
Application number: CH1418/81A
Authority: CH
Inventors: Romeo Ciabatti; Giovanna Padova
Original assignee: Lepetit Spa
Priority date: 1980-03-07
Filing date: 1981-03-03
Publication date: 1985-05-31
Also published as: US4496743A; SE8101447L; JPS56139456A; AR231126A1; AT375641B; MA19086A1; AU542211B2; AU6736681A; ES8204718A1; DE3108543A1; ES500158A0; IT1169217B; ES502338A0; PT72633A; BE887825A; ATA104981A; NL8101086A; PH15896A; IE810483L; YU58781A

Description

Cette invention concerne de nouvelles l-[(2-mercaptocycloalkyl)-55 carbonyl]-L-prolines, leur procédé de synthèse et les compositions pharmaceutiques les contenant. Il existe un besoin constant en de nouveaux agents hypotenseurs du fait que, même si des progrès significatifs ont été réalisés récemment dans le domaine du traitement de l'hypertension, on ne dispose pas encore d'un agent hypotenseur 60 idéal. La L-proline et les dérivés de l'acide thia(oxa)zolidinecarboxy-lique, utilisables comme inhibiteurs de l'enzyme transformant l'an-giotensine, ont été décrits récemment dans les publications scientifiques et dans des brevets (voir par exemple M. A. Ondetti et al., «Science», 196,441-444 (1977), le brevet allemand N" 2932021, le 65 brevet belge N° 879158 et le brevet japonais N° 9060/80).

Ces composés ont un groupe mercaptoacyle ou un groupe mercaptosubstitué-acyle sur l'atome d'azote de la partie hétéro-cyclique. Les nouveaux composés, qui sont le premier objet de cette

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invention, sont des l-[(2-mercaptocycloalkyl)carbonyl]-L-prolines de composés de formule I peuvent donc exister sous quatre formes dia-

formule générale I suivante: stéréo-isomères: deux diastéréo-isomères eis et deux diastéréo-

j isomères trans ou eis et trans se rapportent à la position mutuelle

~ des groupes mercapto et carbonyle par rapport au plan du groupe-

5 ment eycloalkyle.

En particulier, les isomères trans sont les isomères dans lesquels

Ic/Id les groupes -<jj-

O

io et — SH sont en position trans l'un par rapport à l'autre dans ledit plan, alors que les isomères eis sont ceux dans lesquels les deux groupes mentionnés ci-dessus sont en position eis l'un par rapport à dans laquelle R, R1 et R2 représentent, chacun de manière indépen- l'autre dans ledit plan. On comprend donc, lorsque l'on se réfère à la dante, un atome d'hydrogène ou un radical alkyle en Q-C4, n repré- l-[(2-mercaptocycloalkyl)carbonyl)]-L-proline de formule I, soit les sente un nombre entier qui vaut 1,2, 3,4 ou 5 et, dans chacun des n is seuls diastéréo-isomères purs, soit n'importe quel mélange de ceux groupes (C—R'2), R' représente un atome d'hydrogène ou un qui sont inclus dans le présent brevet.

groupe alkyle en Q-C*. Ces nouveaux corps de l'invention présentée ici sont utiles dans

Les composés de formule I possèdent trois centres asymétriques le traitement de l'hypertension.

qui sont indiqués par un astérisque dans la formule ci-dessus; cepen- Un deuxième objet de cette invention est le procédé de préparadant, en considérant que la partie proline a une configuration 20 tion de ces nouveaux corps de formule I, procédé qui est décrit sché-absolue fixe (la configuration L selon la convention de Fischer), les matiquement dans la figure suivante.

Figure I

+ SOCI2 étape A ►

CR'2>n

étape C

étape B

(CR',).

R"-C-S 0

/ \ « >^c u

étape D

0 OOOt-butyl IV

étape F

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GCOH

la

R,

r"-ç-s'

Ib

étape E

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k œoR2

étape H

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n

-V

ô coor2

Ic/Id

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Dans l'étape A, on fait réagir un corps de formule II dans laquelle R, R', R1 et n sont définis comme auparavant et R" est soit un groupe méthyle, soit un groupe phényle, avec du chlorure de thionyle dans des conditions qui sont normalement utilisées en chimie organique pour former des chlorures d'acide. Ainsi, on ajoute un léger excès de chlorure de thionyle à basse température, celle-ci étant habituellement comprise entre 0 et 5°C, au corps de formule II et, une fois que la réaction est achevée, on élimine l'excès de chlorure de thionyle. Le chlorure d'acide III est alors isolé par distillation sous pression réduite et on l'utilise dans l'étape suivante — l'étape B — qui comprend la réaction avec le sel de sodium de la L-proline. Cette réaction est effectuée en milieu aqueux, à basse température et elle nécessite la présence d'un accepteur de protons. Comme accepteur de protons, on peut utiliser de façon appropriée les bases minérales ou les bases organiques azotées tertiaires comme le carbonate ou l'hydroxyde de sodium ou de potassium, la trimé-thylamine ou la triéthylamine, la pyridine, la picoline, et d'autres produits similaires; cependant, on obtient les meilleurs résultats en utilisant une quantité supplémentaire de sel de sodium de L-proline qui agit comme accepteur de l'acide chlorhydrique. Ainsi, selon le mode d'exécution préféré, le chlorure d'acide III est ajouté graduellement à une solution contenant au moins une quantité molaire double de L-proline dissoute dans une quantité stœchiométrique de NaOH IN. On maintient entre 0 et 5°C le mélange réactionnel pendant le temps nécessaire à l'addition, puis on laisse la température s'élever jusqu'à la température ambiante. Lorsque la réaction est terminée, on suit son évolution par Chromatographie sur couche mince, on isole le corps la du mélange réactionnel par des méthodes usuelles qui incluent l'acidification avec un acide minéral fort, tel que de l'acide chlorhydrique ou sulfurique, et on extrait au moyen d'un solvant organique inerte qui est de préférence de l'éther diéthy-lique. Le produit ainsi obtenu peut être purifié selon des méthodes habituelles comme la cristallisation dans un solvant approprié, la Chromatographie sur colonne ou les deux. D'une autre manière, selon l'étape C, on fait réagir directement l'acide de départ de formule II avec de l'ester t-butylique de L-proline en présence d'un agent de couplage pour obtenir l'amide IV.

On peut utiliser divers agents de couplage dans cette étape, par exemple le dicyclohexylcarbodiimide, le N,N'-carbonyldiimidazole, la N-éthoxycarbonyl-2-éthoxy-l,2-dihydroquinoline ou d'autres corps similaires; cependant, on emploiera de préférence du dicyclohexylcarbodiimide. La réaction est effectuée en présence d'un solvant organique inerte tel que du benzène, du chlorobenzène, du toluène, des hydrocarbures inférieurs chlorés ou d'autres produits similaires et on prendra de préférence du chlorure de méthylène, cela à une température comprise entre environ 0°C et la température ambiante et de préférence aux environs de 0°C. Une fois que la réaction est achevée, on obtient, par un traitement traditionnel du mélange réactionnel, l'ester IV qui est transformé en le produit intermédiaire la par scission de l'ester t-butylique au moyen de CF3COOH.

Finalement, par élimination de la protection du thiolester la, on obtient le corps correspondant à la formule I dans lequel R2 est un atome d'hydrogène. L'élimination du groupe protecteur dépend de la nature de R" et elle est effectuée selon les connaissances des gens du métier. En particulier, lorsque R" est un groupe méthyle, on obtient les meilleurs résultats par une alcoolyse, catalysée par une base, du thiolester la en utilisant un alcool aliphatique inférieur comme du méthanol ou de l'éthanol avec un catalyseur basique comme de l'hydroxyde ou du carbonate de sodium ou de potassium alors que, quand R" est un groupe phényle, on préfère utiliser un traitement à l'ammoniac aqueux. Lorsqu'on désire des corps de formule I dans lesquels R2 est un groupe alkyle inférieur, ils peuvent être synthétisés à partir du thiolester la au moyen des méthodes d'es-térification habituelles, puis par l'élimination de la protection dans le produit intermédiaire Ib par transestérification au moyen de k2co3/r2oh.

De la même manière que pour les composés finals de formule I, ces produits intermédiaires la et Ib peuvent aussi exister sous quatre formes diastéréo-isomères; les formules la et Ib de ci-dessus peuvent donc représenter soit les diastéréo-isomères seuls, soit des mélanges de ceux-ci. Si l'on désire les produits eis ou trans de formule I ou les seuls isomères, il est préférable d'effectuer le procédé décrit dans la fig. 1 ci-dessus en partant d'un seul couple d'énantiomorphes (eis ou trans) de formule II. Dans ce cas, en partant d'un seul couple d'énantiomorphes (eis ou trans) de formule II, et du fait de la réaction avec la base optiquement active, la L-proline, on obtient les produits intermédiaires IV et la de même que le produit final I sous la forme de mélange des deux diastéréo-isomères eis ou trans qui, si on le désire, peuvent être séparés en leurs composants élémentaires. En considérant que ces diastéréo-isomères possèdent des propriétés physico-chimiques différentes, on peut facilement réaliser cette séparation au moyen des procédés connus de séparation comme la cristallisation fractionnée dans un solvant approprié ou la Chromatographie sur colonne. D'une autre manière, si on désire uniquement les diastéréo-isomères de formule I, il peut être pratique, une fois que l'acide de départ de formule II a été séparé en deux couples d'énantiomorphes, de faire réagir chaque couple séparément avec une base optiquement active puis de séparer les diastéréo-isomères qui se sont formés et de régénérer l'acide libre chacun de son côté et de poursuivre la réaction comme cela est indiqué dans la fig. 1.

Les produits de départ de formule II peuvent être préparés selon divers procédés qui dépendent de la nature de R1, de R et de n. En particulier, lorsque n vaut 2, 3,4 ou 5 et que R1 est un atome d'hydrogène, l'acide de départ de formule II est préparé en faisant réagir l'acide 1-cycloalcène-l-carboxylique correspondant ou l'acide 2-(Ci-C4)alkyl-1-cycloalcène-l-carboxylique avec un excès d'acide thio-acétique ou thiobenzoïque (R"=méthyle ou phényle respectivement) qui s'ajoute sur la double liaison et donne un corps II dans lequel R1 est un atome d'hydrogène, n est un nombre entier qui vaut 2,3,4 ou 5, R est un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Ci-C4 et R" est un méthyle ou un phényle. La réaction peut être effectuée en l'absence ou en présence d'un solvant. Dans ce dernier cas, on doit utiliser un solvant organique aprotique, polaire ou non polaire qui n'interfère pas avec la réaction d'addition. Des exemples représentatifs de solvants appropriés incluent le diméthylsulfoxyde, le diméthylformamide, le chlorobenzène, les hydrocarbures inférieurs chlorés, le benzène et d'autres.

Cette réaction est réalisée de préférence à une température comprise entre la température ambiante et la température de reflux du mélange réactionnel. La vitesse de réaction augmente avec la température et en général entre environ 1 et environ 10 h sont suffisantes pour effectuer complètement la réaction. Dans certains cas particuliers cependant, une température inférieure pourrait être utilisée avec avantage à condition que l'on augmente le temps de réaction. Une fois que la réaction est terminée, le solvant, s'il y en a, et l'excès de thioacide sont éliminés par évaporation et on purifie le résidu par Chromatographie.

En général, l'addition de thioacide à la double liaison entraîne la formation de deux couples diastéréo-isomères d'énantiomorphes parmi lesquels deux sont désignés comme étant des isomères trans du fait que les groupes — COOH et — SCOR" sont en position trans l'un par rapport à l'autre, et deux sont désignés comme étant des isomères eis du fait que les groupes mentionnés ci-dessus sont en position eis l'un par rapport à l'autre. Le rapport entre les isomères eis et trans qui découlent de l'addition ne peut être prédit et il dépend de la structure de l'acide 1-cycloalcène-l-carboxylique de départ, du thioacide et des conditions particulières choisies pour la réaction. On a trouvé en général que l'addition n'est pas stéréospécifique du fait que l'on obtient les deux isomères, mais elle conduit de manière prédominante à la formation des isomères trans. Cependant, en modifiant les conditions de la réaction qui sont décrites ci-dessus, par exemple en utilisant une température plus basse, un temps de réaction plus long ou un solvant particulier, etc., on peut fortement modifier ce dit rapport.

Si l'on désire obtenir un seul couple d'énantiomorphes (eis ou trans) de formule I, on peut fractionner le mélange des deux couples

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diastéréo-isomères des énantiomorphes ainsi obtenu en leurs isomères trans et eis au moyen des techniques habituelles vues ci-dessus.

Lorsque l'on utilise la cristallisation fractionnée, on obtient de meilleurs résultats en transformant le mélange des acides eis et trans de formule II en un mélange cis-trans de leurs sels avec des bases encombrantes telles que, par exemple, la dicyclohexylamine, puis en séparant les sels cis-trans et en restaurant ensuite l'acide libre.

En soumettant séparément les isomères eis et trans à la réaction des étapes A et B ou C et D, on obtient respectivement les isomères eis et trans de formule V qui, après séparation du groupe R"CO—, donnent les corps eis et trans de formule I. A leur tour, les acides 1-cycloalcène-l-carboxyliques de départ peuvent être préparés à partir des cycloalcanones correspondantes par un procédé en plusieurs étapes qui implique une réaction avec un cyanure de métal alcalin, une déshydratation de la cyanohydrine ainsi obtenue avec du POCl3 dans de la pyridine, suivie d'une hydrolyse acide du groupe cyano en groupe carboxyle. Une autre méthode comprend la réduction d'un ester alkylé d'un acide 2-oxocycloalkylcarboxylique en ester alkylé d'acide 2-hydroxycycloalkylcarboxylique au moyen d'un réducteur approprié tel que du borohydrure de sodium, puis on réalise une déshydratation au moyen de POCl3 dans de la pyridine et finalement on effectue une hydrolyse alcaline pour transformer le groupe carb-alcoxyle en groupe carboxyle.

Lorsque R représente un groupe alkyle en C,-C4, on peut utiliser avantageusement une modification de cette dernière méthode pour préparer les acides 2-(C1-C4.)alkyl-l-cycloalcène-l-carboxyliques. En particulier, on fait réagir l'ester alkylé de l'acide 2-oxocycloalkylcarboxylique de départ avec du PC15 pour obtenir un ester alkylé d'acide 2-chloro-l-cycloalcène-l-carboxylique, qui est alors transformé en ester alkylé d'acide 2-(Ct-C4)alkyl-1 -cycloalcène-1 -carboxylique correspondant au moyen de cuprate de lithiumdi-fXVC,)-alkyle et finalement, par une hydrolyse alcaline, on transforme le groupe carbalkoxyle pour obtenir l'acide 2-(C1-C4)alkyl-l-cyclo-alcène-1 -carboxylique.

Ces méthodes sont connues ou elles sont semblables aux méthodes de la littérature (voir par exemple «J. Organic Chem.», 43, 3974 (1978) et les références citées).

Les corps de formule II dans lesquels n vaut 2, 3,4 ou 5 et R1 est uan groupe alkyle en Q-C4 peuvent être préparés à partir des acides

1-(Ci-C4)alkyl-2-hydroxycycloalcanecarboxyliques par réaction avec du chlorure de thionyle pour donner les chlorures des acides 1-(Cj-C4)alky 1-1 -chlorocycloalcanecarboxyliques, puis par alcoolyse de ces chlorures d'acide au moyen d'alcool t-butylique, par réaction des esters t-butyliques de l'acide l-(C1-C4)alkyl-2-chlorocycloalcane-carboxylique avec de l'acide thioacétique ou thiobenzoïque suivie de la séparation du groupe t-butylester.

Les acides l-(C1-C4)alkyl-2-hydroxycycloalcanecarboxyliques peuvent être préparés à partir d'esters d'alkyles inférieurs des acides

2-oxocycloalcanecarboxyliques par alkylation avec du RU/NaH, suivie d'une réduction sélective du groupe cétone en hydroxyle, puis d'une hydrolyse alcaline douce qui transforme le groupe ester en acide.

Finalement, les corps de formule II dans lesquels n vaut 1 sont préparés à partir d'acide propionique par addition de phényl-méthanethiol suvie d'une estérification du groupe acide par de l'alcool t-butylique et de la formation d'un groupe cyclopropane avec du CH2I/Zn-Cu selon la réaction de Simmons-Smith, puis on scinde le groupe benzyle au moyen d'ammoniaque liquide et de sodium, selon la réduction de Birch, puis on fait réagir ce produit avec du chlorure de benzoyle ou d'acétyle dans de la pyridine et finalement on scinde l'ester t-butylique avec du CF3COOH.

Alternativement, les corps de formule II dans lesquels n vaut 1 peuvent être préparés à partir de l'ester t-butylique de l'acide acrylique, CR'2 = CR1COO—t-butyle, où R' et R1 sont définis comme auparavant, par cyclopropanation photochimique avec du CHI3, suivie de la réaction de l'ester t-butylique de l'acide 2-iodocyclo-propanecarboxylique obtenu avec de l'acide thioacétique ou de l'acide thiobenzoïque et séparation de l'ester t-butylique. D'une autre manière, lorsque la séparation des diastéréo-isomères dans les composés finals n'est pas requise, les produits intermédiaires de formule IV dans laquelle n vaut 2, 3, 4 ou 5 peuvent être préparés à partir des esters d'alkyles inférieurs des acides 2-oxo-l-(C1-C4)-alkylcycloalcanecarboxyliques par réduction sélective du groupe cé-tonique en hydroxyle, puis par saponification du groupe ester en carboxyle, par acétylation de l'hydroxyle avec de l'anhydride acétique dans de la pyridine, suivie d'une condensation avec l'ester t-butylique de la L-proline et d'une réaction avec le thioacide choisi, en milieu alcalin.

Comme on l'a dit auparavant, un autre objet spécifique de cette invention concerne l'utilisation des nouveaux corps de formule I comme agents hypotenseurs, où le terme utilisation comprend tous les aspects d'une application industrielle, y compris l'inclusion des corps décrits ici dans des préparations pharmaceutiques.

Au moins partiellement, le mécanisme par lequel les nouveaux corps de formule I agissent comme hypotenseurs consiste en l'inhibition de l'enzyme de transformation de l'angiotensine.

En d'autres termes, on a montré qu'ils inhibent l'enzyme qui transforme l'angiotensine I en sa forme biologiquement active, l'angiotensine II, qui est le vasoconstricteur majeur du système rénal de la pression.

On sait d'après la littérature que l'angiotensine II agit directement sur de fins vaisseaux sanguins, ce qui provoque la contraction du tissu aortique. En plus de cette action de vasoconstriction directe qui peut être attribuée à un effet direct sur le muscle lisse ou à un effet indirect transmis par la libération de norépinéphrine par les extrémités des nerfs sympathiques, on sait aussi que l'angiotensine, par la stimulation des glandes surrénales, augmente la concentration dans le sang du puissant minéralocorticoïde qu'est l'aldostérone.

Cependant, indépendamment des mécanismes par lesquels l'angiotensine II participe à l'élévation de la pression sanguine, la prévention de la formation d'angiotensine II est de première utilité dans le traitement de certaines hypertensions. L'activité des corps de cette invention de même que celle des produits intermédiaires de formule V comme inhibiteurs de l'enzyme de transformation ont été prouvées in vitro et in vivo.

L'activité in vitro a été déterminée par radio-immuno-essai effectué en utilisant la méthode décrite par K. Poulsen dans « J. Lab.

Clin. Med.», 78 (2) pp. 309-315 (1971). En particulier, cette activité in vitro a été évaluée quantitativement par la procédure décrite ci-dessous.

Dans un tube, on incube à 37° C pendant 30 min 50 ni de plasma de rat contenant de l'angiotensinogène, de la rénine et de l'enzyme de conversion en quantités physiologiques, ce plasma ne contenant ni angiotensine I ni angiotensine II endogène, et 10 ni d'anticorps de l'angiotensine II dilués selon un rapport 1:120.

Pendant cette incubation enzymatique en l'absence d'inhibiteurs de l'enzyme de conversion, l'angiotensine I qui se forme est transformée en angiotensine II par l'action de l'enzyme de conversion et l'anticorps de l'angiotensine II qui est présent dans le milieu la capture et la retient, l'empêchant ainsi d'être dégradée par l'angio-tensinase du plasma.

On termine l'incubation en plaçant le tube à 0°C et l'angiotensine II qui s'est formée et qui a été capturée par l'anticorps est mesurée par radio-immuno-essai [voir K. Poulsen et J. Jörgensen, «J. Clin. Endocrinol. Metab.», 39, 816-825 (1974)].

On effectue le même test que ci-dessus, à l'exception du fait que l'on incube du plasma de rat non seulement en présence d'anticorps, mais aussi en présence de différentes concentrations des corps à tester, de façon à évaluer l'activité inhibitrice des corps testés sur l'enzyme de conversion.

Ces essais, qui incluent aussi un essai de contrôle, c'est-à-dire un essai effectué sans les corps à tester, sont menés simultanément de façon à avoir des conditions expérimentales identiques, ce qui permet de faire une comparaison correcte entre les différents résultats. Comme on l'a dit ci-dessus, l'angiotensine II piégée est mesurée par radio-immuno-essai. Plus précisément, cette détermination est

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réalisée en ajoutant 1 ml d'une solution d'angiotensine II marquée (environ 100 pg/ml) à 4°C à tous les tubes, puis on incube à 4°C pendant au moins 18 h, ce qui est le temps minimal pour obtenir un équilibre entre l'angiotensine II marquée et la non marquée et l'anticorps. L'angiotensine II libre et celle qui est liée à l'anticorps sont alors séparées avec 200 jo.1 de charbon actif recouvert de dextrane. Ce charbon, qui avait été mis auparavant dans les bouchons des tubes, est mélangé simultanément dans tous les tubes lorsque l'on renverse le support plusieurs fois pendant 30 s. Après une centrifugation à 3000 x g pendant 30 min, le liquide surnageant, qui contient l'angiotensine II liée à l'anticorps, est transvasé dans des tubes de comptage et on effectue la mesure.

Pour calculer la quantité d'angiotensine II qui s'est formée, d'après la quantité d'angiotensine II marquée liée à l'anticorps, on construit une courbe de référence pour l'angiotensine II en utilisant 50 |ig d'angiotensine II standard (contenant entre 0 et 7,5 pg d'angiotensine II) et 10 |il d'anticorps de l'angiotensine II dilué (1:120). On effectue le même test que ci-dessus, depuis l'incubation à 37° C pendant 30 min jusqu'au comptage de l'angiotensine II marquée liée à l'anticorps, de préférence en même temps que les autres essais. En reportant les quantités d'angiotensine II marquée liée à l'anticorps en fonction des quantités initiales connues d'angiotensine II, on peut construire une courbe d'étalonnage qui permet d'effectuer une corrélation directe entre la quantité d'angiotensine II marquée liée à l'anticorps, qui est déterminée dans chaque tube, et la quantité d'angiotensine II qui s'est formée. Par des opérations simples on peut calculer le pourcentage d'inhibition de la formation d'angiotensine II pour différentes concentrations de corps testé, cela par rapport à l'essai de contrôle, et on peut en déduire une valeur IC50 (c'est-à-dire la concentration à laquelle se produit une inhibition de 50% de la formation d'angiotensine II par rapport à l'essai de contrôle). Dans des expériences représentatives qui ont été effectuées selon la procédure décrite ci-dessus, les corps des exemples 2, 5B et 6A présentent une valeur ICS0 de 0,57,0,23 et 0,21 |ig/ml respectivement.

De manière à vérifier que le mécanisme d'action des corps présentés ici concerne réellement la transformation de l'angiotensine I en angiotensine II et qu'il n'affecte pas la formation d'angiotensine I, on a effectué la même expérience en utilisant 10 jj.1 d'anticorps de l'angiotensine I diluée (1:60) à la place de l'anticorps de l'angiotensine II. Cette expérience est effectuée en même temps que l'essai ci-dessus et dans les mêmes conditions. Le comptage final de l'angiotensine I marquée liée à l'anticorps, qui n'a pas été affectée par la présence des corps testés, démontre la spécificité de l'action des corps présentés ici.

L'activité in vitro des nouveaux corps en tant qu'agents de blocage de l'enzyme de conversion de l'angiotensine a aussi été confirmée in vivo par une expérience effectuée sur des rats ayant une tension normale, selon les conditions suivantes: on anesthésie les animaux, des groupes de trois rats, avec du nembutal et on leur place deux canules, l'une qui est introduite dans la carotide et qui est reliée à une sonde pour enregistrer là pression sanguine artérielle et l'autre qui est introduite dans la veine jugulaire pour effectuer l'injection intraveineuse des corps testés et de l'agent causal.

La pression basale de chaque rat est relevée, puis on injecte dans la veine jugulaire des doses de 0,1 ng/kg de poids corporel d'angiotensine I. Ces doses provoquent une augmentation immédiate et notable de la pression sanguine et on relève le maximum de pression qui est atteint. A partir de ces valeurs et des valeurs basales, on calcule l'augmentation de la pression provoquée par l'angiotensine I chez chaque rat.

On administre alors les corps à tester, selon différentes doses, aux différents groupes de rats et après un temps suffisant pour laisser agir le produit, en général 15 min, on répète les injections d'angiotensine I et on note les pressions sanguines. Les pourcentages d'inhibition de l'augmentation de la pression induite par l'angiotensine I résultant de l'action des différentes doses des corps testés sont facilement calculés et pour chaque dose on extrait une valeur unique qui est la moyenne des valeurs obtenues dans le groupe des trois rats. En reportant les concentrations des corps testés sur une échelle logarithmique en fonction du pourcentage d'inhibition, on observe une corrélation linéaire qui permet la détermination de la valeur ED50, c'est-à-dire la dose de corps testé qui inhibe de 50% l'augmentation de la pression induite par l'angiotensine I. Pour les corps des exemples 2 et 6B, les valeurs ED50 calculées comme on l'a décrit ci-dessus étaient de 2,3 et de 1,8 mg/kg respectivement.

D'autres expériences in vivo ont été effectuées de façon à mieux évaluer l'activité hypotensive des corps de cette invention. En particulier, ces expériences ont été effectuées sur des chiens présentant une hypertension d'origine rénale.

La méthode utilisée pour provoquer ce type d'hypertension chez le chien est décrite par H. Goldblatt et al. dans «J. Exp. Med.», 59, 347 (1934); elle consiste en un pincement de l'artère rénale.

Les corps à tester sont introduits par voie orale chez les animaux hypertendus conscients, selon des doses efficaces, pendant 7 d consécutifs. La pression artérielle systolique est mesurée par une méthode indirecte sur la queue, avant et 1,3, 5 et 7 h après le traitement. Les résultats de ces expériences montrent que ces corps sont efficaces pour faire baisser la pression sanguine. L'abaissement de la pression systolique est compris entre 10 et 25% de la valeur basale, cela suivant le corps spécifique testé et suivant l'heure à laquelle on a mesuré la pression sanguine. En outre, avec les corps de l'invention présentée ici, la chute maximale de pression est obtenue selon une décroissance progressive qui dépend de la dose et du corps spécifique testé et qui peut prendre 2,3 ou même 6 d.

Il est clair que l'on peut utiliser des doses différentes de celles qui sont dans l'intervalle donné ci-dessus, cela dépendant des conditions particulières du sujet traité.

Les exemples suivants qui décrivent certains des corps de cette invention et leur procédé de préparation illustreront mieux l'invention présentée ici, mais ils ne constituent pas une limitation de sa portée.

Exemple 1: l-[(2-Acétylthiocyclopentyl)carbonyl]-L-proline

On dissout 19,5 g d'acide 2-acétylthiocyclopentanecarboxylique dans 8 ml de chlorure de thionyle (12 g) en maintenant la température à 0°C. Une fois que cette addition est terminée, on laisse reposer la solution à température ambiante pendant 20 h. Par distillation sous pression réduite, on recueille 18,5 g (91%) de chlorure de (2-acétylthio)cyclopentylcarbonyle. P.E. 130-135° C/4-2,8 mmHg.

On ajoute goutte à goutte 16 g (0,0774 mol) du chlorure d'acide obtenu ci-dessus à une solution de 18 g (0,156 mol) de L-proline dissous dans 156,5 ml (0,156 mol) deNaOH IN. Pendant cette addition ainsi que pour les 2 h qui suivent, la température du mélange est maintenue aux environs de 5°C.

Après avoir laissé reposer une nuit à température ambiante, on refroidit à nouveau le mélange et on l'acidifie avec de l'acide chlorhydrique concentré jusqu'à un pH d'environ 1.

Par extraction avec de l'éther diéthylique puis par évaporation du solvant, on recueille 21 g de l-[(2-acétylthiocyclopentyl)-carbonyl]-L-proline.

Préparation de l'acide (2-acètylthio)cyclopentanecarboxylique de départ:

Première méthode: On ajoute 10 g de borohydrure de sodium à 62,4 g (0,4 mol) d'ester éthylique de l'acide 2-oxocyclopentyl-carboxylique dissous dans 200 ml de méthanol, cela à une température de 0°C. Lorsque la réaction est terminée, elle est suivie par une analyse par Chromatographie sur couche mince; on verse le mélange avec précaution dans une solution aqueuse saturée de NaH2P04. Par extraction avec de l'éther diéthylique, puis par évaporation du solvant, on obtient un résidu qui est purifié par distillation sous vide, ce qui donne 44 g d'ester éthylique de l'acide 2-hydroxycyclopentyl-carboxylique (P.E. 87°C/0,3 mmHg).

On dissout 3,2 g (0,02 mol) de ce produit dans 21 ml de pyridine et à cette solution, refroidie à 5°C, on ajoute peu à peu 3 ml de POCl3. Après 45 min, on verse le mélange réactionnel dans un

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mélange eau/glace et on acidifie avec de l'acide chlorhydrique. Par extraction avec de l'éther diéthylique, puis par évaporation du solvant, on recueille 2,3 g (82%) d'ester éthylique de l'acide 1-cyclo-pentène-1 -carboxylique.

On chauffe à reflux pendant environ 20 min une solution composée de 2,3 g (0,0164 mol) d'ester éthylique de l'acide 1-cyclo-pentène-1-carboxylique, de 1,3 g (0,032 mol) de NaOH, de 50 ml d'eau et de 80 ml de méthanol, puis on élimine le méthanol sous vide et on acidifie la solution aqueuse avec de l'acide chlorhydrique concentré. En refroidissant la solution, 1,03 g d'acide 1-cyclopentène-carboxylique précipite. P.F. 120-121°C.

On ajoute ensuite 6 ml d'acide thioacétique à 2,24 g (0,02 mol) d'acide 1-cyclopentène-l-carboxylique. On chauffe à reflux ce mélange réactionnel pendant environ 1 h, puis on le laisse reposer une nuit à température ambiante. L'excès d'acide thioacétique est éliminé par évaporation sous vide et on purifie le résidu par Chromatographie sur colonne en utilisant une colonne contenant du gel de silice qui a été préalablement lavé avec de l'acide chlorhydrique et on élue avec de l'éther de pétrole contenant des quantités croissantes d'éther diéthylique. On recueille ainsi 2,5 g (66%) d'acide (2-acétyl-thio)cyclopentanecarboxylique. En effectuant la même réaction,

mais en prolongeant le temps de chauffage jusqu'à 8 h, le produit final est obtenu avec un rendement de 81 %.

Deuxième méthode: On ajoute goutte à goutte une solution de 69 g (0,363 mol) de pyrosulfite de sodium dans 180 ml d'eau à un mélange de 30 g (0,357 mol) de cyclopentanone, de 48 g (0,738 mol) de cyanure de potassium et 150 ml d'eau refroidie à —10 à — 15°C au moyen d'un mélange glace/chlorure de sodium et on brasse vigoureusement. On laisse ensuite la température remonter jusqu'à la température ambiante et on brasse encore le mélange réactionnel pendant 4 h supplémentaires. Par extraction au moyen d'éther éthylique, puis par évaporation du solvant, on obtient 39 g (0,35 mol) de cyanohydrine.

On ajoute goutte à goutte un mélange de 90 ml de POCl3 et de 90 ml de pyridine à une solution de la cyanohydrine obtenue ci-dessus dissoute dans 75 ml de benzène et 75 ml de pyridine. Lorsque l'addition est achevée, on chauffe à reflux le mélange pendant 30 min, puis on le refroidit et on le verse dans un mélange eau/glace. Ce mélange est extrait avec de l'éther éthylique et les extraits organiques sont lavés avec de l'acide chlorhydrique à 10% puis avec de l'eau. On élimine le solvant organique et on récupère 31,7 g de produit brut qui, par distillation sous pression réduite, donnent 25 g de 1-cyano-l-cyclopentène.

On chauffe à reflux pendant 6 h 18 g de ce produit en compagnie de 60 ml de H3P04 à 85%. On refroidit le mélange réactionnel, on le dilue avec 60 ml d'eau et on le sature en NaCl. Ce mélange aqueux est extrait au moyen d'éther diéthylique, les extraits organiques sont rassemblés et on les lave avec une solution aqueuse saturée de NaCl. Par évaporation du solvant et par recristallisation du résidu obtenu dans du pentane, on obtient 4,7 g d'acide 1-cyclopentène-l-carboxy-lique (P.F. 120-12rC).

On procède ensuite à l'addition d'acide thioacétique à cet acide 1-cyclopentène-l-carboxylique obtenu ci-dessus, comme on l'a décrit dans la première méthode.

Exemple 2: l-[(2-Mercaptocyclopentyl)carbonyl]-L-proline

On ajoute goutte à goutte un mélange de 100 ml de méthanol anhydre et de 100 ml d'ammoniaque saturée de méthanol anhydre à une solution de 24,5 g (0,086 mol) de l-[(2-acéthylthiocyclopentyl)-carbonyl]-L-proline dissous dans 50 ml de méthanol, qui est refroidie et maintenue à 0°C pendant l'addition qui s'effectue en brassant et sous atmosphère d'azote. Une fois que cette addition est achevée, on brasse le mélange réactionnel à température ambiante sous azote pendant 4 h supplémentaires, puis le solvant est évaporé et le résidu est purifié par Chromatographie sur colonne sur du Dowex 50® (une résine de polystyrène sulfoné) en éluant avec de l'eau distillée.

Rendement: 18,5 g (88%) de l-[(2-mercaptocyclopentyl)-carbonyl]-L-proline ayant les caractéristiques suivantes: a"= -139,3° (c = 1 % dans CHC13).

Exemple 3: l-[(2-Acétylthiocyclohexyl)carbonyl]-L-proline

En opérant essentiellement de la même manière que dans l'exemple 1, mais en partant d'acide (2-acétylthio)cyclohexanecarboxyli-que, on obtient de la l-[(2-acétylthiocyclohexyl)carbonyl]-L-proline sous la forme d'un mélange de quatre diastéréo-isomères. L'acide (2-acétylthio)cyclohexanecarboxylique de départ est préparé à partir de cyclohexanone en suivant la deuxième méthode de l'exemple 1.

Exemple 4: l-[ (2-Mercaptocyclohexyl)carbonyl]-L-proline

En suivant essentiellement la même méthode que dans l'exemple 2, mais en prenant le corps de l'exemple précédent comme produit de départ, on obtient la l-[(2-mercaptocyclohexyl)carbonyl]-L-pro-line sous la forme d'un mélange de quatre diastéréo-isomères dont les caractéristiques sont les suivantes : a" = — 114° (c = 1 % dans CHC13).

Exemple 5: l-[(2-Benzoylthiocyclopentyl)carbonyl]-L-proline (dia-stèrêo-isomères trans)

A) On dissout en agitant 6,85 g d'ester t-butylique de L-proline et 8,25 g de dicyclohexylcarbodiimide dans 55 ml de chlorure de méthylène anhydre. Cette solution est refroidie à 0e C et on y ajoute

10 g d'acide trans-(2-benzoylthio)cyclopentanecarboxylique. On brasse le mélange réactionnel pendant une nuit à température ambiante, puis on le filtre sur un Büchner. On évapore le solvant et le résidu est repris dans une petite quantité de chlorure de méthylène et on le sèche avec un peu de sulfate de magnésium. Ce résidu brut (18,28 g), obtenu après l'évaporation du solvant, consiste en un mélange de deux diastéréo-isomères trans de l'ester t-butylique de la l-[(2-benzoylthiocyclopentyl)carbonyl]-L-proline et on le sépare en ses composants individuels par Chromatographie liquide préparative (Waters) en éluant avec un mélange acétate d'éthyle :hexane 1:3.

Le diastéréo-isomère trans qui est élué le premier (8,0 g), appelé ici ester t-butylique de l-[(2-benzoylthiocyclopentyl)carbonyl]-L-proline TUS (trans upper spot), fond à 73,5° C (à partir d'hexane) et

11 est caractérisé par un a™ = —107,5° (c= 1,03% dans CHC13) alors que l'autre diastéréo-isomère trans, appelé ester t-butylique de l-[(2-benzoylthiocyclopentyl)carbonyl]-L-proline TLS (trans lower spot), fond à 67° C (à partir d'hexane) et il est caractérisé par un äff= +4,8° (C=0,98% dans CHC13). Une forme cristalline différente, obtenue par broyage de la forme ci-dessus dans un mortier, fond à 79° C.

B) On ajoute une solution de méthoxybenzène (53 ml) et d'acide trifluoroacétique (77 ml) à l'ester t-butylique de l-[(2-benzoylthio-cyclopentyl)carbonyl]-L-proline TUS et on laisse reposer le mélange réactionnel à température ambiante pendant 2 h environ, puis on amène à sec el mélange en chauffant à environ 35° C sous vide.

Le résidu est dissous dans de l'acétate d'éthyle et on l'extrait avec une solution saturée de bicarbonate de sodium. La phase aqueuse est acidifiée avec du HCl à 10%, elle est salée du NaCl et on l'extrait à l'acétate d'éthyle. Cet acétate d'éthyle est éliminé par évaporation et on dissout le résidu obtenu dans du mélange benzène/chlorure de méthylène et on le sèche à nouveau. Cette opération est répétée plusieurs fois de façon à éliminer les traces d'acide trifluoroacétique encore présentes, puis le résidu est recristallisé dans de l'acétate d'éthyle, ce qui donne l'un des deux diastéréo-isomères trans de !-[(2-benzoylthiocyclopentyl)carbonyl]-L-proline (7 g) sous la forme d'un produit séparé ayant les caractéristiques suivantes: P.F. 105-106°C; ctD = -119,9° (c=0,99% dans CHC13).

Spectre RMN enregistré à 270 MHz dans du CDC13 (unités S) 1,7-2,6 (m, 10H, CH2-CH2); 3,08 (m, IH, CHCO); 3,54 (m, 2H, CH2N); 4,26 (d.t., 1H, JCH-ch=7>5, Jch-ch2=6.5, CHS); 4,73 (m, IH, COCH-N); 7,4-8,0 (m, 5H, CO-0); 10,0-5,6 (b, 1H, COOH); m=multiplet, d.t.=doublet ou triplet, b=broad (large).

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C) En suivant la même méthode que celle décrite sous B, mais en prenant l'ester t-butylique de l-[(2-benzoylthiocyclopentyl)-carbonyl]-L-proline TLS, on obtient l'autre diastéréo-isomère trans de l-[(2-benzoylthiocyclopentyl)carbonyl]-L-proline sous la forme d'un produit séparé pur, dont les caractéristiques sont les suivantes: P.F. 88°C; <ïd= -81,8°.

Spectre RMN enregistré à 270 MHz dans du CDC13 (unités S): 1,7-2,6 (m, 10H, CH2-CH2); 3,12 (d.t., 1H, Jch-ch=7>5>

JCH-ch2 = 5,5, CH0O); 3,4-3,8 (m, 2H, CH2N); 4,23 (d.t, 1H, Jch-ch^ = 7,5, CH-S); 4,64 (m, IH, CO-CH-N); 7,4-8,0 (m, 5H, CO0); 11,0-6,5 (b, IH, COOH).

Préparation de l'acide trans-(2-benzoylthio)cyclopentanecarboxylique de départ

On chauffe à 120° C sur un bain d'huile un mélange de 21 g d'acide 1-cyclopentène-l-carboxylique, préparé selon la méthode de la seconde partie de l'exemple 1, et de 105 ml d'acide thiomercapto-benzoïque, cela sous atmosphère d'azote et pendant 7 h. Après avoir reposé une nuit à température ambiante, on purifie le résidu par Chromatographie sur colonne en utilisant une colonne contenant du gel de silice qui a été préalablement lavé avec de l'acide chlorhydrique et on élue avec de l'éther de pétrole contenant des quantités croissantes d'éther diéthylique. On obtient ainsi 26,5 g d'un mélange eis:trans 3:7 d'acide (2-benzoylthio)cyclopentanecarboxylique qui, après recristallisation fractionnée dans de l'éther éthylique, donne 13,45 g d'acide trans-(2-benzoylthio)cyclopentanecarboxylique pur; P.F. 100°C.

Exemple 6: l-[(2-Mercaptocyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères trans)

A) On brasse un mélange de 24,7 ml d'eau et de 16,2 ml de nh4.OH à 32% dans une fiole de 250 ml, puis on ajoute 9 g du diastéréo-isomère trans de la l-[(2-benzoylthiocyclopentyl)carbonyl]-L-proline ayant un P.F. de 105-106°C et un a™ = 119,9°, cela étant effectué sous une atmosphère d'argon.

Lorsque l'addition est terminée, on poursuit l'agitation à température ambiante pendant 2 h supplémentaires, puis on ajoute 100 ml d'une solution aqueuse de NaCl saturée et le benzamide qui se forme pendant la réaction est éliminé par filtration. Le filtrat est lavé avec de l'acétate d'éthyle, acidifié avec du HCl à 10% et extrait à l'acétate d'éthyle. Le solvant organique est évaporé à sec et le résidu est re-cristallisé dans de l'éther éthylique, rendement: 4,35 g de l'un des deux diastéréo-isomères trans de l-[(2-mercaptocyclopentyl)-carbonyl]-L-proline, caractérisé par: P.F. 117-118°C; a™ = —237,4° (c = 1% dans CHC13).

Spectre RMN enregistré à 270 MHz dans du CDC13 (unités 8): 1,5-2,4(m, 10H, CH2-CH2); 1,79 (d, IH, Jch-sh=8. SH); 2,8 (d.t, Jch—ch=8, Jch-ch2 = 8> CHCO); 3,4-3,8 (m, 3H, CH2—N+CHS); 4,62 (m, 1H, CO-CH-N); 8,38 (b.s, 1H, COOH).

B) En effectuant pratiquement les mêmes opérations que dans la partie A ci-dessus, mais en prenant comme produit de départ le dia-stéréo-isomère trans de la l-[(2-benzoylthiocyclopentyl)carbonyl]-L-proline caractérisé par un P.E. de 88°C et par un a$= —81,8°, on obtient l'autre des deux diastéréo-isomères trans de l-[(2-mercapto-cyclopentyl)carbonyl]-L-proline. Ce corps, qui est un composé unique, est révélé par calorimetrie différentielle à balayage et il fond à 107-109°C. Il est caractérisé par un cto = —62,2° (c=l,02% dans CHC13) et le spectre RMN enregistré à 270 MHz dans du CDC13 (unités 5) donne: 1,5-2,5 (m, 10H, ZH2—CH2); 1,94 (d, 1H,

^ch—sh~ 8, SH); 2,85 (d.t, 1H, Jch-ch = 8, Jch-ch2 = 8>

CHCO); 3,52 (d.d.t, 1H, Jch-ch2 = 8> CHS); 3,5-4,0 (m, 2H, CH2N); 4,60 (m, 1H, CO-CH-N); 8,6-6,8 (b, 1H, COOH).

Exemple 7: l-[(2-Benzoylthiocyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères eis)

A) En opérant essentiellement de la même manière que dans l'exemple 5 A) mais en prenant comme produit de départ l'acide cis-

(2-benzoylthio)cyclopentanecarboxylique, on obtient les deux diastéréo-isomères eis de l'ester t-butylique de la l-[(2-benzoylthiocyclo-pentyl)carbonyl]-L-proline.

Le premier produit élué, appelé ici ester butylique de l-[(2-benzoylthiocyclopentyl)carbonyl]-L-proline CTS (eis tache supérieure), fond à 80° C (recristallisé dans l'hexane) et il est caractérisé par un a™ = —153,5° (C=l% dans CHC13); alors que l'autre diastéréo-isomère eis, appelé ester t-butylique de l-[(2-benzoylthio-cyclopentyl)carbonyl]-L-proline CTI (eis tache inférieure), fond entre 68 et 70° C (recristallisé dans l'hexane) et il est caractérisé par un old = -2,7° (c=l% dans CHC13).

B) En suivant la méthode décrite dans l'exemple 5, partie B,

mais en prenant comme produit de départ l'ester t-butylique de la 1-[(2-benzoylthiocyclopentyl)carbonyl]-L-proline CTS (P.F. 80° C,

oto = —153,5°), on obtient l'un des deux diastéréo-isomères eis de 1-[(2-benzoylthiocycIopentyl)carbonyl]-L-proline sous la forme d'un-produit unique pur dont les caractéristiques sont les suivantes: P.F. 152°C; a$= -183,4° (C= 1,05% dans CHC13).

Spectre RMN enregistré à 270 MHz dans du CDC13 (unités S): 1,6-2,5 (m, 10H, CH2-CH2); 3,44 (d.t, 1H, Jch-ch=8> Jch-ch2=7.5, CHCO); 3,59 (m, 2H, CH2N); 4,27 (d.t, 1H, jCH-CH2 = 8, CHS); 4,49 (m, IH, COCHN); 7,4-8,0 (m, 5H, CO-O)2; 9,5-5,5 (b, 1H, COOH).

C) En opérant essentiellement de la même manière que dans l'exemple 5, partie B, mais en prenant comme produit de départ l'ester t-butylique de la l-[(2-benzoylthiocyclopentyl)carbonyl]-L-proline CTI (P.F. 68-70° C, a" = —2,7°), on obtient l'autre des deux diastéréo-isomères eis de la l-[(2-benzoylthiocyclopentyl)-carbonyl]-L-proline sous la forme d'un produit huileux qui a les caractéristiques suivantes: ag1 = —59,7° (c= 1,03% dans du CHC13).

Spectre RMN enregistré à 270 MHz dans du CDC13 (unités 8): 1,6-2,6 (m, 10H, CH2-CH2); 3,4-3,7 (m, 3H, CH2N+CHCO); 4,25 (d.t„ 1H, Jch-ch=8, JCh2-CH=8> CHS); 4,6 (m, 1H, CO-CH-N); 7,4-8,0 (m, 5H, CO-O); 8,6-5,1 (b, 1H, COOH).

Préparation de l'acide cis-(2-benzoylthio)cyclopentanecarboxylique de départ

La réaction entre l'acide 1-cyclopentène-l-carboxylique et l'acide thiobenzoïque est effectuée comme cela est décrit dans le paragraphe intitulé: Préparation de l'acide trans-(2-benzoylthio)cyclopentane-carboxylique de départ, de l'exemple 5.

Une fois que le produit trans a été séparé par cristallisation fractionnée, on évapore à sec les liqueurs mères restantes et on ajoute un léger excès de dicyclohexylamine dissoute dans de l'acétate d'éthyle au résidu obtenu.

La salification, qui est effectuée en agitant à basse température, donne presque un rendement quantitatif. Le sel obtenu est récupéré et on le recristallise dans de l'acétate d'éthyle (100 ml d'acétate d'éthyle par gramme de sel), ce qui donne 8,8 g de sel de dicyclohexylamine de l'acide cis-(2-benzoylthio)cyclopentanecarboxylique (P.F. 175,5°Q.

En mettant en suspension le sel ci-dessus dans 150 ml d'acétate d'éthyle, puis en ajoutant à cette suspension 70 ml de solution de NaHS04 à 5%, on obtient 3,7 g de l'acide libre correspondant (P.F. 93,5° C).

Exemple 8: l-[(2-Mercaptocyclopentyl)carbonyl]-L-proline (dia-stéréo-isomères eis)

A) En opérant essentiellement de la même manière que dans l'exemple 6, partie A, mais en prenant comme produit de départ le diastéréo-isomère eis de la l-[(2-benzoylthiocyclopentyl)carbonyl]-L-proline ayant un P.F. de 152°CetunctD= —183,4°, on obtient l'un des deux diastéréo-isomères eis de la l-[(2-mercaptocyclo-pentyl)carbonyl]-L-proline sous la forme d'un produit unique pur qui est caractérisé par: P.F. 89°C; a§= —149,6° (c= 1,04% dans du CHC13).

Spectre RMN enregistré à 270 MHz dans du CDC13 (unités S): 1,5-2,6 (m, 10H, CH2CH2); 1,65 (d, 1H, Jch-sh= 10, SH); 3,1-3,4

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(m, 2H, CHCO+CHS); 3,62 (t, 2H, Jch2-ch2=7> CH2N); 4,67 (m, 1H, CO-CH-N); 8,8-5,7 (b, 1H, COOH),

B) En suivant la méthode décrite dans l'exemple 6, partie A, et en prenant comme produit de départ le diastéréo-isomère eis de la 1-[(2-benzoylthiocyclopentyl)carbonyl]-L-proline ayant un aD = —69,7°, on obtient l'autre des deux diastéréo-isomères eis de la 1-[(2-mercaptocyclopentyl)carbonyl]-L-proline sous la forme d'un produit unique pur dont les caractéristiques sont les suivantes: P.F. 97°C; aj?= -181,7°.

Spectre RMN enregistré à 270 MHz dans du CDC13 (unités 5): 1,5-2,5 (m, 10H, CH2-CH2); 1,82 (d, 1H, Jch-sh=9, SH); 3,18 (d.t., 1H, Jch-ch=7> Jch—ch2=7> CHCO); 3,36 (d.d.t., 1H, JCH. ch2 = 8, CHS); 3,4-3,9 (m, 2H, CH2N); 4,61 (n, IH, CO-CHN); 9,00 (b.s, 1H, COOH).

Exemple 9: l-[(2-Benzoylthio-3,3-diméthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères trans)

A) On ajoute de l'acide trans-2-benzoylthio-3,3-diméthylcyclo-pentylcarboxylique (3,55 g) à une solution composée de 2,20 g d'ester t-butylique de L-proline et de 2,63 g de dicyclohexylcarbodi-imide dissous dans 18 ml de chlorure de méthylène anhydre, refroidie à 0°C. Après un brassage de 6 h à 0°C puis de 15 h à température ambiante, on filtre le mélange pour éliminer la dicyclohexylurée qui s'est formée au cours de la réaction et on concentre jusqu'à sec le filtrat.

Le résidu qui est ainsi obtenu est séparé en ses composants élémentaires trans en utilisant la Chromatographie liquide préparative en éluant avec un mélange hexane:acétate d'éthyle 7:3. Rendement: 1,62 g d'ester tert.-butylique de la l-[(2-benzoylthio-3,3-diméthylcy-clopentyl)carbonyl]-L-proline TUS caractérisée par un P.F. de 170°C et par un ag= -82,5° (C= 1,035% dans du CHC13) et 0,90 g d'ester t-butylique de l-[(2-benzoylthio-3,3-diméthylcyclopentyl)-carbonyl]-L-proline TLS caractérisé par un P.F. de 126°C (recristallisé dans l'éther éthylique) et par un cto = — 34,6° (c = 1,01 % dans du CHC13).

B) On ajoute à température ambiante 40 ml d'anisole et 65 ml d'acide trifluoroacétique à 9,5 g d'ester t-butylique de la l-[(2-benzoylthio-3,3-diméthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline TUS.

Après un repos de 2 h à température ambiante, on concentre à sec le mélange réactionnel sous vide à 35° C. On reprend le résidu dans de l'éther diéthylique et on réévapore à sec, ce qui donne 8,3 g d'un solide blanc qui est recristallisé dans de l'acétate d'éthyle pour donner l'un des deux diastéréo-isomères trans de la l-[(2-benzoyl-thio-3,3-diméthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline sous la forme d'un produit séparé pur, P.F. 187°C, a" = — 90,5° C (c= 1,16% dans du CHC13).

C) On ajoute 40 ml d'anisole et 65 ml d'acide trifluoroacétique à 12,1 g d'ester t-butylique de l-[(2-benzoylthio-3,3-diméthylcyclo-pentyl)carbonyl]-L-proline TLS. Après avoir reposé pendant 2,5 h à température ambiante, le mélange réactionnel est évaporé à sec sous vide à 35° C. Le résidu ainsi obtenu est dissous dans de l'acétate d'éthyle et on l'extrait avec une solution aqueuse de NaHC03. Cette solution aqueuse alcaline est acidifiée par du HCl à 10%, on la sale avec du NaCl et on extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée sur du MgS04 et on la concentre jusqu'à sec et le résidu est recristallisé dans de l'éther diéthylique, ce qui donne 7,75 g de l'autre des deux diastéréo-isomères trans de la l-[(2-benzoylthio-3,3-diméthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline caractérisé par un P.F. de 153°C et par un a™ = —141,2° (c= 1,08% dans du CHC13).

Préparation de l'acide trans 2-benzoylthio-3,3-diméthylcyclopentyl-carboxylique

A) Une fiole est remplie avec 33,6 g de 2,2-diméthylcyclopen-tanone et avec quelques millilitres de carbonate de diméthyle, et on la maintient sous atmosphère d'azote. On ajoute alors lentement une solution de 15,73 g d'hydrure de sodium à 65% dissous dans 390 ml de carbonate de diméthyle et on chauffe le mélange réactionnel à 80-82° C pendant 5 h.

Ce mélange réactionnel est ensuite refroidi à 0°C et on y ajoute 15 ml de méthanol et 28 g d'acide acétique. Après avoir reposé une nuit à température ambiante, on y ajoute 2000 ml d'eau et on extrait le mélange réactionnel avec du chloroforme (3 x 120 ml). Cette phase de chloroforme est séchée sur du MgS04 et on élimine le chloroforme par évaporation, ce qui donne un résidu huileux d'ester mé-thylique de l'acide 2-oxo-3,3-diméthylcyclopentylcarboxylique qui est purifié par distillation. P.E. 15 mmHg= 105-108°C.

On verse une solution de 47,6 g d'ester méthylique de l'acide 2-oxo-3,3-diméthylcyclopentylcarboxylique dissous dans 150 ml de méthanol, à une solution d'acide citrique (27,0 g) et de NaOH (5,5 g) dans de l'eau (300 ml). A ce mélange résultant, on ajoute graduellement du NaBH4 (19,6 g) et de l'acide citrique (24 g) et on maintient la température de la réaction entre 18 et 23° C, alors que le pH est maintenu entre 5 et 6,5.

Lorsque la réaction est terminée, on évapore sous vide le méthanol et on extrait le mélange réactionnel au moyen de chlorure de méthylène. La phase de chlorure de méthylène est séchée sur du Na2S04, puis on la filtre et on la concentre sous vide, ce qui donne un résidu huileux d'ester méthylique de l'acide 2-hydroxy-3,3-dimé-thylcyclopentylcarboxylique qui est purifié par distillation (P.E. 0,8/65°C). L'ester ainsi obtenu (33 g) est versé dans un ballon de 1 1 contenant 330 g de KOH. Après 2 h de macération, on chauffe le mélange sur un bain d'huile jusqu'à 180° C, cela pendant 2,5 h, puis on le refroidit lentement jusqu'à 0°C. On ajoute alors 700 ml d'eau et on refroidit la solution résultante entre 0 et 10° C, puis on l'acidifie avec de l'acide chlorhydrique concentré.

En filtrant à 0-10°C, puis en lavant le résidu sur le filtre avec 200 ml d'eau froide, on obtient 2,5 g d'acide 3,3-diméthyl-l-cyclo-pentènecarboxylique; celui-ci fond entre 67 et 69° C (recristallisé dans de l'eau).

On chauffe à 120°C sous courant d'argon et pendant 14 h un mélange de 2 g d'acide 3,3-diméthyl-1-cyclopentène-l-carboxylique et 2,37 g d'acide thiobenzoïque. On refroidit ensuite ce mélange réactionnel, on le reprend dans une petite quantité de cyclohexane et on filtre, ce qui donne 2,05 g d'acide trans-2-benzoylthio-3,3-diméthylcyclopentylcarboxylique, P.F. 131°C (recristallisé dans l'hexane).

Dans les liqueurs mères, on récupère un mélange cis/trans d'acide 2-benzoylthio-3,3-diméthylcyclopentylcarboxylique qui est partagé en ses énantiomorphes par Chromatographie sur colonne.

Exemple 10: l-[(2-Mercapto-3,3-diméthylcyclopentyl)carbonylJ-L-proline (diastéréo-isomères trans)

A) On ajoute en brassant 81 ml d'eau et 54 ml d'une solution à 32% de NH4OH à 5,25 g du diastéréo-isomère trans de la l-[(2-benzoylthio-3,3-diméthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline, caractérisée par un P.F. de 187°C, maintenue sous une atmosphère d'argon, et on laisse reposer le mélange pendant 2 h à température ambiante.

Lorsque la réaction est achevée, on suit son évolution au moyen de la Chromatographie sur couche mince, on extrait le mélange résultant avec du chlorure de méthylène, on acidifie avec de l'acide chlorhydrique concentré, on sale avec du CaCl et on extrait avec de l'acétate d'éthyle. On élimine le solvant organique par évaporation et on redissout le résidu dans de l'acétate d'éthyle et on extrait avec une solution aqueuse de NaHC03. La phase aqueuse alcaline est salée, puis on l'extrait avec de l'acétate d'éthyle jusqu'à ce que le benz-amide qui s'est formé pendant la réaction soit complètement éliminé. La phase aqueuse est alors acidifiée avec de l'acide chlorhydrique et on l'extrait à l'acétate d'éthyle. En éliminant le solvant organique par évaporation, on obtient un résidu qui est recristallisé dans de l'éther éthylique, ce qui donne 2,5 g d'un des deux dia-stéréo-isomè-res trans de l-[(2-mercapto-3,3-diméthylcyclopentyl)-carbonyl]-L-proline sous la forme d'un produit pur unique caractérisé par un P.F. de 139°C et par un a'o = —132,8° (c= 1,01% dans CHC13).

B) On ajoute 27 ml d'eau et 18 ml d'une solution à 32% de NH4OH à 5,25 g du diastéréo-isomère trans de la l-[(2-benzoyl-

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

649 531

10

thio-3,3-diméthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline, caractérisé par un P.F. de 153°C, qui est maintenu sous atmosphère d'argon. On brasse ce mélange réactionnel pendant 2,5 h à température ambiante, puis on ajoute 45 ml d'une solution aqueuse saturée de (NH4)2S04 et on brasse le mélange à une température comprise entre 0 et 5°C. Après 30 min, on filtre sous vide le mélange réactionnel et on lave le filtrat avec de l'acétate d'éthyle. La solution aqueuse est acidifiée avec du HCl à 10% et on extrait avec de l'acétate d'éthyle. Le solvant organique est éliminé par évaporation et le résidu est recristallisé dans de l'éther éthylique, ce qui donne 3,05 g de l'autre diastéréo-isomère trans de la l-[(2-mercapto-3,3-diméthyl-cyclopentyl)carbonyl]-L-proline qui a les caractéristiques suivantes: P.F. 147°C; a™ = -63,7° (c= 1,055% dans du CHC13).

Exemple 11: l-[(2-Benzoylthio-3,3-diméthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères eis)

En opérant essentiellement de la même manière que dans l'exemple 9, mais en prenant comme produit de départ l'acide cis-2-ben-zoylthio-3,3-diméthylcyclopentyl)carboxylique, on obtient les deux diastéréo-isomères eis de la l-[(2-benzoylthio-3,3-diméthylcyclo-pentyl)carbonyl]-L-proline.

Exemple 12: l-[(2-Mercapto-3,3-diméthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères eis)

En suivant la méthode décrite dans l'exemple 10, mais en prenant comme produit de départ les diastéréo-isomères eis de la 1-[(2-benzoylthio-3,3-diméthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline, on obtient les diastéréo-isomères eis de la l-[(2-mercapto-3,3-diméthyl-cyclopentyl)carbonyl]-L-proline.

Exemple 13: l-[(2-Benzoylthiocyclobutyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères trans)

A) En opérant essentiellement de la même manière que celle décrite dans l'exemple 5 A, mais en prenant comme produit de départ l'acide trans-(2-benzoylthio)cyclobutanecarboxylique, on obtient les seuls diastéréo-isomères trans de l'ester t-butylique de la l-[(2-benzoylthiocyclobutyl)carbonyl]-L-proline; le diastéréo-iso-mère trans qui est élué le premier est appelé ici ester t-butylique de la l-[(2-benzoylthiocyclobutyl)carbonyl]-L-proline TUS, il fond à 102-103°C et il est caractérisé par un a^= —130,8° (c= 1% dans du CHC13 lors que l'autre diastéréo-isomère trans, appelé ester t-butylique de la l-[(2-benzoylthiocyclobutyl)carbonyl]-L-proline TLS, fond à 112-113°C et est caractérisé par un äff = +12,7° (c= 1,01 % dans du chci3).

B) En suivant la méthode décrite dans l'exemple 5 B, mais en prenant comme produit de départ l'ester t-butylique TUS de la l-[(2-benzoylthiocyclobutyl)carbonyl]-L-proline, on obtient un des deux diastéréoisomères trans de la l-[(2-benzoylthiocyclobutyl)carbonyl]-L-proline qui est caractérisé par un P.F. de 106-107°C et par un a2D°= -119,6° (c= 1,005% dans du CHC13).

C) En prenant comme produit de départ l'ester t-butylique TLS de la l-[(2-benzoylthiocyclobutyl)carbonyl]-L-proline (voir A ci-dessus) et en suivant la méthode de l'exemple 5 C, on obtient l'autre des deux diastéréo-isomères trans de la l-[(2-benzoylthiocyclo-butyl)carbonyl]-L-proline qui a les caractéristiques suivantes:

P.F. 123-124°C et <$= -86,33° (c=0,995% dans du CHC13).

Préparation de l'acide trans-(2-benzoylthio)cyclobutanecarboxylique de départ

On chauffe à 120° C sous un courant d'argon un mélange de 2,8 g d'acide 1-cyclobutène-l-carboxylique et de 5,6 ml d'acide thiobenzoïque. Après 6 h, on refroidit le mélange réactionnel, on le reprend dans une petite quantité de cyclohexane et on filtre. On concentre le filtrat à sec et le résidu obtenu est purifié sur une colonne de Chromatographie contenant du gel de silice et on élue avec de l'éther de pétrole contenant 15% d'éther éthylique. Rendement: 1,05 g d'acide trans (2-benzoylthio)cyclobutanecarboxylique pur. P.F. 106-107°C (recristallisé dans de l'éther éthylique).

En utilisant un système d'éluant contenant un faible pourcentage d'éther éthylique, on récupère l'acide cis-(2-benzoylthio)cyclo-butanecarboxylique.

Exemple 14: l-[(2-Mercaptocyclobutyl)carbonyl]-L-proline (dia-5 stéréoisomères trans)

A) En suivant la méthode décrite dans l'exemple 6A et en prenant comme produit de départ le corps de l'exemple 13B, on obtient l'un des deux diastéréo-isomères trans de la l-[(2-mercapto-

10 cyclobutyl)carbonyl]-L-proline qui a les caractéristiques suivantes: P.F. 145-146°C eto£°= -192,3° (c= 1,065% dans CHC13).

B) En opérant de la même manière que dans l'exemple 6A, mais en prenant comme produit de départ le corps de l'exemple 13C, on obtient l'autre des deux diastéréo-isomères trans de la l-[(2-mercap-toeyclobutyl)carbonyl]-L-proline qui est caractérisé par P.F. 137-138°C et a%= -44,16° (c=0,985% dans CHQ13).

Exemple 15: l-[(2-Benzoylthiocyclobutyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères eis)

En opérant comme cela est décrit dans l'exemple 5, mais en 20 prenant comme produit de départ l'acide cis-(2-benzoylthio)cyclo-butanecarboxylique, on obtient les deux diastéréo-isomères eis différents de la l-[(2-benzoylthiocyclobutyl)carbonyl]-L-proline.

Exemple 16: l-[ (2-Mercaptocyclobutyl)carbonyl]-L-proline (dia-25 stéréo-isomères eis)

En suivant la méthode décrite dans l'exemple 6, mais en prenant comme produit de départ les deux diastéréo-isomères eis de la l-[(2-benzoylthiocyclobutyl)carbonyl]-L-proline, on obtient les deux diastéréo-isomères eis de la l-[(2-mercaptocyclobutyl)carbonyl]-L-30 proline.

En suivant essentiellement la même méthode que celle qui est décrite dans les exemples précédents, on obtient les composés suivants:

l-[(2-mercapto-2-méthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline 35 (diastéréo-isomères trans)

l-[(2-mercapto-2-méthyIcyclopentyl)carbonyl]-L-prolme

(diastéréo-isomères eis) l-[(2-benzoylthio-2-méthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères trans) 40 1 -[(2-benzoylthio-2-méthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères eis) l-[(2-benzoylthio-3,3-diéthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline

(diastéréo-isomères trans) l-[(2-benzoylthio-3,3-diméthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline 45 (diastéréo-isomères eis)

l-[(3,3-diéthyl-2-mercaptocyclopentyl)carbonyl]-L-proline

(diastéréo-isomères trans) l-[(3,3-diéthyl-2-mercaptocyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères eis) so l-[(2-benzoylthio-3,3-dibutylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères trans) l-[(2-benzoylthio-3,3-dibutylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline

(diastéréo-isomères eis) l-[(3,3-diéthyl-2-mercaptocyclopentyl)carbonyl]-L-proline 55 (diastéréo-isomères trans)

l-[(3,3-diéthyl-2-mercaptocyclopentyl)carbonyl]-L-proline

(diastéréo-isomères eis) l-[(2-benzoylthio-3,3-dipropylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères trans) 60 l-[(2-benzoylthio-3,3-dipropyl(diastéréo-isomères eis) l-[(2-mercapto-3,3-dipropylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline

(diastéréo-isomères trans) l-[(2-mercapto-3,3-dipropylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères eis) 65 l-[(2-benzoylthio-3,3-diméthylcyclopropyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères trans) l-[(2-benzoylthio-3,3-diméthylcyclopropyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères eis)

11

649531

l-[(2-mereapto-3,3-diméthylcyclopropyl)carbonyl]-L-proline

(diastéréo-isomères trans) l-[(2-mercapto-3,3-diméthylcyclopropyl)carbonyl]-L-proline

(diastéréo-isomères eis) l-[(2-benzoylthiocyclopropyl)carbonyl]-L-proline

(diastéréo-isomères trans) l-[(2-benzoylthiocyclopropyl)carbonyl]-L-proline

(diastéréo-isomères eis) l-[(2-mercaptoeyclopropyl)carbonyl]-L-proline

(diastéréo-isomères trans) l-[(2-mercaptocyclopropyl)carbonyl]-L-proline

(diastéréo-isomères eis) l-[(2-mercapto-l-méthylcyelopentyl)earbonyl]-L-proline

(diastéréo-isomères trans)

1 -[(2-mercapto-1 -méthyley clopentyl)carbonyl]-L-proline

(diastéréo-isomères eis)

1 -[(2-benzoylthio-1 -méthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères trans)

1 -[(2-benzoylthio-1 -méthy lcyclopenty l)carbony lj-L-proline

(diastéréo-isomères eis) l-[(2-benzoylthio-l-éthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères trans) 5 l-[(2-benzoylthio-l-éthylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères eis) 1 -[( 1 -éthyl-2-mercaptocyclopentyl)carbonyl]-L-proline

(diastéréo-isomères trans) 1 -[( 1 -éthyl-2-mercaptocyclopentyl)carbonyl]-L-proline io (diastéréo-isomères eis)

l-[(l-isopropyl-2-mercaptocyelopentyl)carbonyl]-L-proline

(diastéréo-isomères trans) l-[(l-isopropyl-2-mercaptocyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères eis)

i s 1 -[(2-benzoylthio-1 -isopropylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères trans)

1 -[(2-benzoylthio-1 -isopropylcyclopentyl)carbonyl]-L-proline (diastéréo-isomères eis)

R

Claims

649531

2

REVENDICATIONS

1. Composé de formule:

(CR'

l n dans laquelle R, R1, R' et n sont définis comme à la revendication 1, R" représente méthyle ou phényle et R2 un radical alkyle en Cj-C^ caractérisé en ce qu'on prépare un composé de formule la au moyen du procédé de la revendication 5 et qu'on transforme ledit composé en son ester alkylé en Q-Q.
8. Procédé pour la préparation d'un composé de formule:

(CRVn le

00R

dans laquelle lé symbole Z représente un atome d'hydrogène ou un groupement R"—C(0)— dans lequel R" est méthyle ou phényle, R, R1 et R2 représentent chacun, de manière indépendante, un atome d'hydrogène ou un radical alkyle en C, à C4, n est le nombre entier 1,2, 3,4 ou 5 et, dans chacun des n groupes (C—R'2), R' représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C^C*.
2. Composé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que les groupes carbonyle et mercapto sont situés en position trans l'un par rapport à l'autre dans le plan du groupement cycloalkyle.
3. A titre de composé selon la revendication 1, la l-[(2-mercap-tocyclopentyl)carbonyl]-L-proline.
4. A titre de composé selon la revendication 1, la l-[(2-benzoyl-thiocyclopentyl)carbonyl]-L-proline.
5. Composé selon l'une des revendications 1 ou 4, comme agent pour le traitement de l'hypertension.
6. Procédé pour la préparation d'un composé de formule:

<C*Vn la

COOH

dans laquelle R, R1, R' et n sont définis comme à la revendication 1 et R" représente méthyle ou phényle, caractérisé en ce qu'on effectue la condensation d'un acide 2-acylthiocycloalkylçarboxylique de formule:

<CH'2)n

20

II

dans laquelle R, R1, n et R' sont définis comme ci-dessus et R" est un groupe méthyle ou phényle, avec un dérivé de L-proline, soit en faisant réagir directement l'acide II avec l'ester t-butylique de la L-proline en présence d'un agent de couplage, puis en scindant le groupement t-butyle, soit en transformant l'acide II en son chlorure d'acide correspondant et en réalisant la condensation de ce chlorure d'acide avec du sel de sodium de la L-proline.
7. Procédé pour la préparation d'un composé de formule:

COOR.

dans laquelle R, R1, R' et n sont définis comme à la revendication 1 et R2 représente un atome d'hydrogène, caractérisé en ce qu'on prépare un composé de formule la au moyen du procédé selon la revendication 5 et qu'on élimine ensuite le groupe protecteur R"—(C(0)—.
9. Procédé pour la préparation d'un composé de formule:

(ŒVn

Id

COOR.

30 dans laquelle R, R1, R' et n sont définis comme à la revendication 1 et R2 représente un radical alkyle en C!-C4, caractérisé en ce qu'on prépare un composé de formule Ib au moyen du procédé de la revendication 6 et que l'on élimine ensuite le groupe protecteur R"—C(0)—.

35 10. Procédé selon l'une des revendications 5 à 8, caractérisé d'autre part par le fait que l'on utilise un seul couple d'énantiomor-phes eis ou trans de l'acide II comme produit de départ.
11. Procédé selon la revendication 9, caractérisé par le fait que le mélange des deux diastéréo-isomères eis ou trans, obtenu par la con-

40 densation de l'acide II avec la L-proline optiquement active, est séparé en ses composants élémentaires.
12. Procédé selon l'une des revendications 5 à 8, caractérisé par le fait que l'on utilise un seul énantiomorphe de formule II comme produit de départ.

45 13. Composition pharmaceutique utilisable dans le traitement de l'hypertension, contenant de 100 à 1000 mg d'un composé selon l'une des revendications 1 ou 4 comme ingrédient actif, mélangé à un support acceptable du point de vue pharmaceutique.

50

Ib

COOR