Verfahren zur Herstellung von Polyamiden
Das Hauptpatent betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Amiden durch Umsatz von Carbonsäureestern, die in d'er Alkoholkomponente einen Elektronen anziehenden Substituenten aufweisen, mit Aminen. Es wurde nun gefunden, dass sich dieses Verfahren besonders für die Herstellung von Poly- amiden, wie z. B. von linearen oder cyclischen Polypeptiden eignet.
Es ist bekannt, dass a-Aminocarbonsäuren in Form ihrer N-Carboxyanhydride zu Polypeptiden kondensiert werden können (vgl. E. Katchalski, Advances in Protein Chemistry 6,123 [1951]). Für die Polykondensation von Peptiden und von Aminocarbonsäuren, in denen die Aminogruppe durch mehr als 1 Kohlenstoffatom von der Carbonylgruppe getrennt ist, lässt sich diese Methode nicht verwenden, und es sind an ihrer Stelle verschiedene Verfahren vorgeschlagen worden, die von funktionellen Carbonsäurederivaten ausgehen, so z. B. von einfachen Estern (vgl. E. Katchalski, loc. cit.), Säurechloriden (M.
Frankel und Mitarbeiter, Journal of the American Chemical Society 76,2814 [1954]), Säure- aziden (z. B. M. Z. Magee und K. Hofmann, J. Am.
Chem. Soc. 71, 1515 [1949] ; J. C. Sheehan und W. C. Richardson, ibid. 76,6392 [1954]) und gemischten Anhydriden ( (R. A. Boissons und J. Schumann, Helv. Chim. Acta 35, 2229 [1952]). Diese Methoden weisen-jedoch verschiedene Nachteile auf, z. B. dass die Ausgangsstoffe nicht isolierbar (Azide, gemischte Anhydride) oder leicht zersetzlich sind (Säurechltoride), oder dass sie reaktionsträge Verbindungen darstellen (Ester) ; dementsprechend sind die Ausbeuten an Polyamid oft unbefriedigend, besonders wenn makrocyclische Peptide, das heisst cyclische Peptide, die aus mehr als 2-Amino-säureestem bestehen, hergestellt werden sollen.
Gegenstand der Erfindung ist nun ein Verfahren zur Herstellung von Polyamiden, das darin besteht, dass man Salze von Aminocarbonsäureestern mit einer freien Aminogruppe, in denen diese Gruppe mindestens durch 2 Kohlenstoffatome von der Ester carbonyligruppe getrennt ist, und die in der Alkohol- komponente einen Elektronen anziehenden Substi- tuenten aufweisen, durch Behandlung mit basischen Mitteln mit sich selbst kondensiert.
Das neue Verfahren zur Herstellung von Polyamiden zeigt folgende wesentliche Vorteile gegenüber bekannten Verfahren : a) Die Ausgangsstoffe sind in reiner und meist kristalliner Form erhältlich und sind stabile Verbindungen. b) Der Elektronen anziehende Substituent in der Esterkomponente der Ausgangsstoffe übt einen akti- vierenden Einfluss auf die Esterbindung aus, und damit wird die Bildung von Polypeptiden stark be schleunigt. So findet z.
B. unter Bedingungen, unter denen Salze von Aminocarbonsäuremethylestern keine Polypeptide bilden, bei der verfahrensgemässen Umsetzung von Triglycin-cyanmethylester-hydro- chlorid eine rasche Polykondensation statt. c) Das Verfahren ergibt gute Ausbeuten bei der Herstellung von bekannten und neuen Polyamiden, besonders von linearen oder cyclischen Polypeptiden, und ist dementsprechend auf verschiedensten Gebieten von grosser praktischer Bedeutung.
So ist es möglich, nach diesem Verfahren das Antibiotikum Gramicidin S, das bisher nur auf biologischem Wege erhältlich war, synthetisch zu gewinnen, wobei man von einem Salz des L-Valyl'Nd-tosyl-L-ornithyl-L- leucyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-L-valyl-N6-tosyll-L- ornithyl-L-leucylD-phenylalanyl-L-prolin-p-nitro- phenylesters ausgeht.
Der Aminocarbonsäurerest der als Ausgangs- material verwendeten Ester kann der aliphatischen, aromatischen, araliphatischen oder heterocyclischen Reihe angehören. Die freie Aminogruppe ist vorteilhaft durch eine Kette von 2-5 Kohlenstoffatomen oder durch einen oder mehrere Acylaminoreste von der Estercarbonylgruppe getrennt. Weitere in den als Ausgangsstoffe verwendeten Estern vorhandene Aminogruppen sind vorteilhafterweise geschützt, so z. B. durch den Tosylrest. Nach der verfahrensgemässen Bildung des Polyamides können diese schützenden Gruppen, wenn erwünscht, wieder abgespalten werden, z. B. die Tosylgruppe, durch Verseifung.
Die Alkoholkomponente der als Ausgangsmate- rial verwend'eten Ester kann irgendein organischer Rest sein, der einen oder mehrere Elektronenanziehende Substituenten aufweist, wie z. B. Cyano-, freie oder veresterte Carboxyl-, Carbamyl-, Oxo-, quaternäre Amino-, Nitro-, Sulfo-oder verätherte Oxygruppen oder Halogenatome, die vorzugsweise durch eine Kohlenstoffkette von 1-5 C-Atomen vom Estersauerstoff getrennt sind. Beispiele solcher Alkoholkomponenten sind z. B. der Rest des Cyanmethylalkohols oder des p-Nitrophenols.
Die als Ausgangsmaterial verwendeten Salze von Aminocarbonsäureestem, die in der Alkohol- komponente einen Elektronen anziehenden Substi tuenten aufweisen, lassen sich gemäss den Angaben in der Hauptpatentschrift herstellen, beispiel'sweise durch Umsatz einer N-Triphenylmethyl-aminocarbon- säure mit einem Halogenwasserstoffester des entsprechenden Alkohols in Gegenwart einer tertiären organischen Base und anschliessender Abspaltung des Triphenylmethylrestes durch Behandlung mit verdünnter Saure, oder durch katalytische Hydrierung eines entsprechenden Esters eines N-Carbobenzoxypeptids in Gegenwart einer Säure.
Als zur erfindungsgemässen Umsetzung geeignete Salze von solchen Aminocarbonsäureestem sind insbesondere diejenigen der Halogenwasserstoffsäuren, wie der Salzsäure, oder von halogenierten Fettsäuren, wie der Triflüoressigsäure, zu nennen.
Als alkalische Mittel für die erfindungsgemässe Umsetzung werden z. B. anorganische Basen, wie Alkalihydtoxyde oder-carbonate, oder organische Basen, vorzugsweise tertiäre Amine, verwendet.
Das Verfahren wird vorteilhaft in Gegenwart von organischen Lösungsmitteln, wie Dimethylformamid, Acetohitril, Dioxan, Tetrahydrofuran oder deren Gemischen, gegebenenfalls auch in Anwesenheit von Wasser, durchgeführt. Bei hohen Konzentrationen an Ausgangsmaterial wird die Bildung von linearen Polypeptiden und bei niederen Konzentrationen diejenige von cyclischen Polypeptiden begünstigt. Die Ausbeute an Amid kann durch Zusatz von sauren Katalysatoren, beispielsweise Eisessig oder Schwefelsäure, in vielen Fällen weiter gesteigert werden.
Beispiel 1
70 mg Triglycin-cyanmethylester-hydrochlorid werden in 1,5 ml Dimethylformamid gelöst, mit 1 Tropfen Eisessig und 15 Tropfen Triäthylamin versetzt. Nach 5 Minuten erscheint neben den Kristallen von Triäthylamin-hydrochlorid ein amorpher Niederschlag. Nach 2 Stunden wird dieser abzentrifugiert und gründlich mit Wasser gewaschen. 45 mg (Polytriglycin)-cyanmethylester. Biuretprobe positiv.
Beispiel 2
100 mg Triglycin-cyanmethylester-hydrochlorid in Dimethylformamid und 3 Tropfen Eisessig (Volumen insgesamt 4,0 ml) gelöst, werden langsam (0,2 ml pro 15 Minuten) in ein Gemisch von 20 ml Pyridin und 0, 5 ml Eisessig bei 70 eingetropft. Nach Beendigung der Reaktion wird der farblose, kristalline Niederschlag abgenutscht, mit Pyridin, Aceton und Ather gewaschen und aus Wasser umkristalli- siert. Man erhält 35 mg (= 51/o) Cyclo-hexagiycyl.
Ein gleicher Versuch mit Triglycin-methylesterhydrochlorid mit Pyridin und mit Pyridin-Piperidin- Gemisch liefert kein Cyclo-hexaglycyl.
Beispiel 3
390 mg des trifluoressigsauren-Salzes von L-Valyl-N8-tosyl-L-ornithyl-L-leucyl-D-phenylalanyl- L-prolyl-L-valyl-Nd-tosyl-L-ornithyl-L-leucyl-D- phenylalanyl-L-prolin-p-nitrophenylester werden zusammen mit 3 Tropfen Eisessig in 10 ml Dimethylformamid gelöst und während 3 Stunden unter Rühren in 75 ml Pyridin (bei 95 ) eingetropft und die Lösung (schwach braun gefärbt) noch 1 Stunde bei dieser Temperatur gehalten. Das Lösungsmittel wird im Vakuum verdampft und der Rückstand im Hochvakuum über konz. Schwefelsäure getrocknet.
Das Reaktionsprodukt wird mit siedendem Ather extrahiert. Der unlösliche Rückstand wird in einem Gemisch von Isopropanol-Methanol-Wasser (1 : 1 : 1) gelöst und durch zwei Säulen von Ionenaustau schern Merzk I und IIIny (mit dem gleichen Lö sungsmittel gequollen) filtriert. Der Durchlauf wird bei 45 mit Wasser versetzt und im Vakuum von den organischen Lösungsmitteln befreit. Das pulvrige Reaktionsprodukt wird abgenutscht und im Hochvakuum über Atznatron getrocknet. 170 mg fast farblose, Ninhydrin-negative Substanz.
Zur weiteren Reinigung werden die Neutral- teile in Benzol-Chloroform (9 : 1) an eine Säule von 12 g Aluminiumoxyd (nach Brockmann) ad- sorbiert und mit demselben Lösungsmittelgemisch gewaschen. Die Elütion erfolgt mit Chloroform und Essigester. Die Operation wird mit 3 g Aluminium- oxyd wiederholt. Der Rückstand der Chloroform- und Essigester-Fraktionen wird getrocknet, worauf er in Essigester relativ schwerlöslich ist. Aus 65proz.
Athanol werden 91, 1 mg einer farblosen, in Stäbchen kristallisierenden Verbindung erhalten. Schmelzpunkt nach mehrmaligem Umkristallisieren aus 65prozentigem Athanol 319-320 unter Zersetzung (Braunfärbung ab 305 , Sintern bei 316 ). Dieses Produkt stellt das Cyclo-L-valyI-N-tosyl-L-omithyl- Lleucyl zD-phenylalanyl-L-prolyl-L-vaXyl-No-tosyl, L-ornithyl-L-leucyl-D-phenylalanyl-L-prolin in der Form seines Dihydrates dar. Es ist ferner charakterisiert durch sein Infrarotspektrum, welches Banden aufweist bei 3,08 ; 3,28 ; 6,10 ; 6,53 ; 6,68 ; 7,54 ; 7,76 ; 7,97 ; 8,10 ; 8,43 ; 8,69 ; 9,17 ; 12,26 und
14,25 u.
Es kann wie folgt in das Antibiotikum Gramicidin S verwandelt werden :
60 mg dieses Dihydrates werden in 20 ml flüssigem Ammoniak gelöst und mit 100 mg Natrium (in kleinen Stücken) versetzt. Nach vollstän- diger Lösung des Natriums bleibt die Lösung blau.
Nach Zugabe von wenig Ammoniumchlorid wird der Ammoniak verdunstet und der Rückstand im Hochvakuum von entstandenem Merkaptan befreit. Das Reaktionsprodukt wird mit absolutem Äthanol, dem einige Tropfen einer Lösung von Salzsäure in Essigester beigefügt sind, aufgenommen. Das Lösungs- mittel wird nach der Filtration verdampft. Der Rückstand wie ! in wenigen Tropfen 65proz. Athanol gelöst und bei 50 so lange mit Wasser versetzt, bis eine deutliche Trübung entstanden ist. Darauf kristallisiert das Dihydrochlorid des Antibiotikums Gramicidin S in Form feiner Nadeln.
Smp. 268 bis 270 unter Zersetzung (Einführung des Smp.-Röhr- chens bei 250 ). Probe auf Chlorionen nach Auskochen mit 2n Salpetersäure positiv ; la] D =-295 (70proz. Äthanol). Gramicidin S ist Cyclo-L-valyl
Diese Verbindung hat die Formel : L-ornithyl-. L-leucyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-L-valyl- L-ornithyl-L-leucyl-D-phenylalanyl-L-prolin.
Das als Ausgangsstoff verwendete trifluoressigsaure Salz des L-Valyl-N6-tosyl-L-ornithy1 L-leucyl- D-phenylalanyl-L-prolyl-L-valyl-N6-tosyl-L-ornithyl- L-leucyl-D-phenylalanyl-L-prolin-p-nitrophenylesters kann wie folgt erhalten werden :
100 mg L-Valyl-Na-tosylLL-ornithyl-L-leucyl-D- phenylalanyl-L-prolin-methylester-hydrochlorid werden in 1,5 ml Chloroform gelöst, mit 100 mg Triphenyl-chlormethan und 5 Tropfen Triäthylamin versetzt und 10 Stunden bei Zimmertemperatur aufbewahrt.
Darauf wird das Lösungsmittel im Vakuum entfernt und der Rückstand ! durch Verreiben mit einem Gemisch von Petroläther und Ather (1 : 1) von überschüssigem Chlorid und Carbinol befreit.
Der feste Rückstand wird in Essigester gelöst und mit Weinsäurelösung und Wasser gewaschen. Die getrocknete Lösung hinterlässt nach d'em Verdampfen : 122 mg (98 /o) eines fast farblosen, glasigen Rück- standes. Durch Umfällen aus Benzol mittels Petrol- äther wird der Trityl-L-valylNs-tosyb-L,-arnithyl-L- leucyl-D-phenylalanyl-L-prolin-methylester als eine feste, mikrokristalline Verbindung erhalten, Smp.
123,5-125,5 . In Trifluoressigsäure entsteht die für Tritylverbindungen charakteristische gelbe Farbe.
Zur Analyse wird 2 Stunden bei 90 und 10-3 mm Hg getrocknet : C57117008N6S (999,3) ber. : N 8,41 S 3,21 / gef. : N 8,35 S 2,96ego
EMI3.1
200 mg des obigen Methylesters werden in 7,5 ml Dioxan gelöst und von einer geringen Trü- bung durch Filtration mit Celit (Diatomeenerde) befreit. Nach Zusatz einer Mischung von 1,5 ml ln Natronlauge, 1,5 ml Wasser und 0,5 ml Methanol wird die klare Lösung zur Verseifung auf 37 erwärmt. Von Zeit zu Zeit werden 3 Tropfen dieser Lösung mit 1 ml Wasser verdünnt. Nach 45 Minuten entsteht dabei keine Trübung mehr. Der Ansatz wird in 200 ml Wasser von 5 eingegossen und mit etwa 2 ml Essigsäure (2n) angesäuert.
Nach 1 Stunde bei 5 wird die freie Säure abgenutscht, mit Wasser gewaschen und getrocknet : 110 mg (56 /o). Ausziehen der Mutterlauge mit Essigester und übliche Aufarbeitung ergibt weitere 70 mg (35'V). Verseifung einer Probe mit Trifluoressigsäure und Chromatographie auf Whatman-No. 1-Papier mit n-Butanol-Eisessig- Wasser (4 : 1 :
1) ergibt einen NinhydEin-positiven Flecken mit Rf = 0,90. Zeisel-Bestimmungen ergeben höchstens Spuren von Methoxyl. 580 mg der so erhaltenen freien Säure werden zusammen mit 475 mg L-Valyl-Na-tosyl-L-ornithyl-L-leucyl-D-phenylalanyl- L-prolin-methylester und 155 mg Cycohexyl- (mor- pholinyl-äthyl)-carbodiimid in Essigester gelöst und 5 Stunden bei Zimmertemperatur aufbewahrt. Der Ansatz wird hierauf mit Essigester verdünnt und bei 0 mit In Salzsäure, verdünntem Ammoniak, Wasser und gesättigter Kochsalzlösung gewaschen.
Die getrocknete Lösung hinterlässt nach dem Verdampfen und Trocknen im Hochvakuum 1,04 g (100"/o) eines farblosen Glases, das langsam durchkristallisiert. Umfällen aus Benzol-Petroläther und Trocknen bei 80 und 0,001 mm Hg ergibt Trityl-L-valyl-No-tosyl-L-ornithyl-L-leucyl-D-phenyl- alanyl-L-prolyl-L-valyl-Na-tosyl-L-ornithyl-L-leucyl- D-phenylalanyl-L-prolin-methylester vom Smp. 106 bis 107 .
Zur Verseifung wird 1 g dieses Methylesters in 30 ml Dioxan mit 11 ml 0, 5n Natronlauge und 5 ml Methanol wie für die oben beschriebene Verseifung des Trityl-pentapeptid-methylesters behandelt und aufgearbeitet. Die Verseifung ist schon nach 1/2 Stunde praktisch beendet. Durch Fällen der mit 900 ml kaItem Wasser verdünnten Lösung mit etwa 10 ml 2n Essigsäure werden 600 mg farbloser, fester Substanz erhalten. Die so erhaltene freie Säure schmilzt bei 133-134 und enthält nur noch Spuren von Methoxylgruppen.
540 mg dieser freien Säure und 500 mg Di- (p- Nitrophenyl)-sulfit werden in 5 ml Pyridin gelöst und 5 Stunden bei Zimmertemperatur aufbewahrt.
Darauf wird das Pyridin im Vakuum verdampft, der Rückstand in Essigester aufgenommen und mit Weinsäurelösung und Wasser gewaschen. Nach Verdampfen des Essigesters wird überschüssiges Nitrophenol mit einem Gemisch von Ather-Petroläther (1 : 1) entfernt. Nach dieser Behandlung färbt sich der farblose, feste Rückstand beim Eintragen in verdünnten Ammoniak nicht mehr gelb [weder freies Nitrophenol noch Di- (p-Nitrophenyl)-sulfit vorhanden].
Die Reinheit des erhaltenen Nitrophenylesters des Trityl-L-valyl-Na-tosyl-L-ornithyl-L-leucyl-D- phenylalanyl-L-prolyl-L-valyl-N8-tosyli-L-ornithyl-L- leucyl-D-phenylalanyl-L-prolins wurde spektroskopisch anhand einer Lösung in 0, 5n wässrig-alkohon- scher Natronlauge (1 : 1 ; v : v) zu 92/o bestimmt.
Zur Abspaltung des Tritylrestes werden 500 mg des Nitrophenylesters in 10 ml Trifluoressigsäure gelöst und unter Kühlung auf-5 mit 2 ml Wasser in kleinen Portionen versetzt. Die Lösung wird 15 Minuten bei Zimmertemperatur aufbewahrt, wobei sich viel Triphenylcarbinol ausscheidet. Das Lösungsmittel wird d'arauf bei 10-2 mm Hg gegen eine Kühlfalle (-80 ) verdampft (Badtemperatur 30 ).
Der Rückstand wird gründlich mit Ather gewaschen und dann bei 10-3 mm Hg getrocknet. Er stellt das trifluoressigsaure Salz des p-Nitrophenylesters von L-Valyl-No-tosyl-L-ornithyl-L-Ieucyl-D-phenylalanyl- L-prolyl-L-valyl-Na-tosyl-L-ornithyl-L-leucyl-D- phenylalanyl-L-prolin dar.
Beispiel 4
420 mg Glycyl-DL-phenylalanyl-glycin-cyan- methylester-hydrochorid werden in 10 ml Dimethylformamid gelöst, mit 5 Tropfen Eisessig versetzt und in 5 Stunden unter Rühren bei 95 in 100 ml Pyridin und 2,5 ml Eisessig eingetropft. Anschliessend wird noch 21/2 Stunden bei 95 gerührt. Das Gemisch wird dann im Vakuum vollständig zur Trockene verdampft, der Rückstand in 100 ml Methanol Wasser (1 : 1) heiss gelöst, durch je eine Säule von stark saurem und stark basischem Ionenaustauscher aMerckp filtriert und gut mit Methanol-Wasser ( : 1) ausgewaschen. Das Filtrat wird erneut zur Trockene verdampft, der Rückstand mit Aceton verrieben und die Fällung genutscht.
Man erhält 70 mg Cycloglycyl-DL-phenylalanyl-glycyl. Das Produkt kann aus viel Methanol Wasser unkristallisiert werden.
Es kristallisiert in weissen Plättchen ; sie schmelzen bei 312 unter Zersetzung, wobei Braunfärbung bei 300 eintritt ; Ausbeute : 70 mg = 20"A,.
Beispiel S
400 mg Glycyl-DL-phenylalanyl-glycin-p-nitro- phenylester-hydrobromid, gelöst in 8, 5 ml Dimethylformamid, und 4 Tropfen Eisessig werden innerhalb 5 Stunden bei 95 zu 85 ml Pyridin und 2 ml Eisessig getropft. Die Aufarbeitung geschieht wie in Beispiel 4. Man erhält so 63 mg Cyclo-glycyl-DL- phenylalanyl-glycyl, was einer Ausbeute von 29 /o entspricht.
Wird bei der obigen Umsetzung bei 55 gearbeitet, so erhält man das Cyclo-glycyl-DL-phenyl- alanyl-glycyl in einer Ausbeute von 38 /o.
Beispiel 6
425 mg Glycyl-DL-phenylalanyl-glycin-p-methan- sulfonyl-phenylester-hydrochlorid, gelöst in 8 ml Dimethylformamid, und 4-Tropfen Eisessig werden während 5 Stunden bei 95 zu 85 ml Pyridin und 2 ml Eisessig getropft. Die Aufarbeitung erfolgt wie in d'en vorhergehenden Beispielen. Man erhält so in einer Ausbeute von 45 /o 107 mg Cyclo-glycyl-DLphenylalanyl-glycyl.
Wird das obige Hydrochlorid bei 55 in das Pyridin eingetropft, so sinkt die Ausbeute auf 30 /o.
Beispiel 7
410 mg Glycyl-glycyl-DL-phenylalanin-p-methan- sulfonyl-phenylester-hydrochlorid, gelöst in 8 ml Di methylformamid, und 4 Tropfen Eisessig werden bei 95 in 80 ml Pyridin und 2 mE Eisessig eingetropft.
Nach üblicher Aufarbeitung erhält man 57 mg Cyclo glycyl-glycyl-DL-phenylalanin ; Ausbeute 25 /o.
Beispiel 8
105 mg Glycyl-glycyl-DL-phenylalanin-p-methan- sulfonyl-phenylester-hydrochlorid werden in 0,1 ml Dimethylformamid gelöst, mit 6 Tropfen Triäthyl- amin versetzt und sofort gekühlt. Es bildet sich rasch eine Fällung von Triäthylamin-hydrochlorid.
Die Mischung wird 3 Tage bei Zimmertemperatur stehengelassen, dann noch 1 Stunde auf 70 erwärmt.
Das Dimethylformamid wird im Vakuum verdampft und der Rückstand mit Wasser verrieben. Man erhält 35,8 mg eines schwerlöslichen Produktes. Es sintert bei 230 ; bei weiterem Erhitzen tritt langsam Schwarzfärbung ein und bei 268 Zersetzung ; es ist unlöslich in In Salzsäure und In Natronlauge, sehr schwach löslich in siedendem Methanol und Wasser und in einem Gemisch der beiden Lösungsmittel.
Aus einer Trifluoressigsäurelösung fällt das Produkt mit Wasser amorph aus, im Gegensatz zum cyclischen Tripeptid, welches in winzigen Nadelbüscheln kristallisiert. 16,3 mg des Rohproduktes werden in n viel Dimethylformamid-Methanol-Wasser (1 : 1 : 1) heiss gelöst und durch je eine Säule mit stark saurem und basischem Ionenaustauscher eMerok : > filtriert.
Das Filtrat wird im Vakuum zur Trockene verdampft. Es bleiben 9,8 mg eines Produktes zurück, das aus einer Trifluoressigsäurelösung nach Zusatz von Wasser auch nur amorph ausfällt.
Zur Herstellung der in den obigen Beispielen 1, 2 und 4-8 verwendeten Ausgangsmaterialien werden gemäss dem Verfahren des Hauptpatentes die entsprechenden N-Trityl-oder N-Carbobenzoxy- aminocarbonsäureester hergestellt. Aus diesen wird die Tritylgruppe durch Behandlung mit Trifluoressig- säure oder mittels einer verdünnten anorganischen Säure, wieSalzsäure, abgespalten. Die Carbobenzoxygruppe lässt sich mit einer starken Säure, wie Eisessig, oder katalytisch, wie z. B. durch Behandlung mit Wasserstoff in Gegenwart von Palladiumkohle und In Salzsäure, entfemen.
Beispiel 9
710 mg e-Amino-n-capronsäure-p-methansulfonyl- phenylester-hydrochlorid werden in 14 ml Dimethylformamid unter Zusatz von 8 Tropfen Eisessig gelöst und unter Rühren in 4% Stunden bei 95 in
140 ml Pyridin und 4 ml Eisessig getropft. Anschliessend wird noch 3 Stunden bei derselben Temperatur gerührt, dann das Pyridin im Vakuum verdampft, der Rückstand in Wasser gelöst und durch einen stark sauren und einen stark basischen Ionenaustauscher filtriert. Das Filtrat wird im Va kuum zur Trockene verdampft, der Rückstand im Kugelrohr im Wasserstrahlpumpenvakuum destilliert.
Das destillierte Caprolactam wird zur weiteren Reinigung in Äther auf eine A1203-Sdule aufgezogen und mit Essigester und Essigester-Methanol 1 : 1 das e-n-Caprolactam herausgewaschen. Dieses kri stallisiert momentan beim Impfen.
Die als Ausgangsstoff verwendete Verbindung lässt sich wie folgt herstellen : l. s- (Carbobenzoxy-amino)-n-capronsäure.
10,37 g e-Amino-capronsäure werden in 1 Mol
In Natronlauge gelöst und unter Eiskühlung und guter Rührung mit 1,5 Mol CarbobenzoxycMorid in
Ather und gleichzeitig mit 2 Mol 4n Natronlauge versetzt. Anschliessend wird noch 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt, dann die alkalische Lösung ausgeäthert und unter Eiskühlung angesäuert.
Die e-Carbobenzoxyamino-n-capronsäure fällt als Öl aus, welches bald erstarrt. Sie wird genutscht, gewa- schen und getrocknet. Ausbeute : 20 g = 95 /o d. Th.
Zur Analyse wird das Produkt aus Tetrachlor- kohlenstoff umkristallisiert und bildet dann feine, weisse Nädelchen vom F. = 54-55 .
2. e-(Carbobenzoxy-amino)-n-capronsäure-p- methansulfonyNphenylester.
1,7 g Carbobenzoxy-amino-capronsäure wird yin 10 ml ! Pyridin mit 3,35 g Di- (p-methansulfonyl phenyl)-sulfit versetzt und 17 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Das Pyridin wird, dann im Vakuum stark eingeengt, der Rückstand in Benzol gelöst und mit 2n Salzsäure, eiskalter Sodalösung und Wasser ausgeschüttelt. Nach dem Trocknen und Verdampfen des Benzols wird der Rückstand aus Methanol unter Zusatz von wenig Wasser kristalli- siert. Ausbeute 99 /o d !. Th. Die Verbindung bildet weisse Nädelchen vom F. = 83,5-84 .
3. E-Amino-n-capronsäure-p-methansulfonyl- phenylester-hydrochlorid.
2,48 g der obigen Verbindung werden in 50 ml Methanol und 6,5 ml In Salzsäure gelöst und unter Zusatz von 300 mg 1013/o Palladium-Kohle hydriert, wobei gleichzeitig das gebildete CO2 in Natronlauge absorbiert wird. Die Wasserstoffaufnahme beträgt 148 ml. Der Katalysator wird abgenutscht, das Filtrat zur Trockene verdampft und der Rückstand aus abs.
Athanol umkristallisiert. Das Produkt schmilzt bei 157-158 .
Process for the production of polyamides
The main patent relates to a process for the preparation of amides by reacting carboxylic acid esters, which have an electron-attracting substituent in the alcohol component, with amines. It has now been found that this process is particularly suitable for the production of polyamides, such as. B. of linear or cyclic polypeptides is suitable.
It is known that α-aminocarboxylic acids can be condensed to polypeptides in the form of their N-carboxyanhydrides (cf. E. Katchalski, Advances in Protein Chemistry 6,123 [1951]). For the polycondensation of peptides and of aminocarboxylic acids in which the amino group is separated from the carbonyl group by more than 1 carbon atom, this method cannot be used, and various processes have been proposed in its place that start from functional carboxylic acid derivatives, e.g. . B. of simple esters (cf. E. Katchalski, loc. Cit.), Acid chlorides (M.
Frankel and coworkers, Journal of the American Chemical Society 76, 2814 [1954]), acid azides (e.g. M. Z. Magee and K. Hofmann, J. Am.
Chem. Soc. 71, 1515 [1949]; J. C. Sheehan and W. C. Richardson, ibid. 76,6392 [1954]) and mixed anhydrides ((RA Boissons and J. Schumann, Helv. Chim. Acta 35, 2229 [1952]). However, these methods have various disadvantages, for example that the starting materials cannot be isolated (Azides, mixed anhydrides) or are easily decomposable (acid chlorides), or that they are inert compounds (esters); accordingly, the yields of polyamide are often unsatisfactory, especially when macrocyclic peptides, i.e. cyclic peptides consisting of more than 2-amino acid esters are to be produced.
The invention now relates to a process for the production of polyamides which consists in adding salts of aminocarboxylic acid esters with a free amino group in which this group is separated from the ester carbonyl group by at least 2 carbon atoms, and the one electron in the alcohol component have attractive substituents, condensed with themselves by treatment with basic agents.
The new process for the production of polyamides has the following significant advantages over known processes: a) The starting materials are available in pure and mostly crystalline form and are stable compounds. b) The electron-attracting substituent in the ester component of the starting materials has an activating influence on the ester bond, and thus the formation of polypeptides is greatly accelerated. So z.
B. under conditions under which salts of aminocarboxylic acid methyl esters do not form polypeptides, a rapid polycondensation takes place in the process according to the implementation of triglycine cyanomethyl ester hydrochloride. c) The process gives good yields in the preparation of known and new polyamides, especially linear or cyclic polypeptides, and is accordingly of great practical importance in a wide variety of fields.
So it is possible to synthetically obtain the antibiotic gramicidin S, which was previously only available biologically, using a salt of L-valyl'Nd-tosyl-L-ornithyl-L-leucyl-D- phenylalanyl-L-prolyl-L-valyl-N6-tosyl-L-ornithyl-L-leucylD-phenylalanyl-L-proline-p-nitro-phenyl ester.
The aminocarboxylic acid residue of the esters used as starting material can belong to the aliphatic, aromatic, araliphatic or heterocyclic series. The free amino group is advantageously separated from the ester carbonyl group by a chain of 2-5 carbon atoms or by one or more acylamino radicals. Other amino groups present in the esters used as starting materials are advantageously protected, e.g. B. by the tosyl radical. After the polyamide has been formed according to the process, these protective groups can, if desired, be split off again, e.g. B. the tosyl group, by saponification.
The alcohol component of the ester used as starting material can be any organic radical which has one or more electron-withdrawing substituents, such as B. cyano, free or esterified carboxyl, carbamyl, oxo, quaternary amino, nitro, sulfo or etherified oxy groups or halogen atoms, which are preferably separated from the ester oxygen by a carbon chain of 1-5 C atoms. Examples of such alcohol components are e.g. B. the remainder of the cyanomethyl alcohol or the p-nitrophenol.
The salts of aminocarboxylic acid esters used as starting material, which have an electron-attracting substituent in the alcohol component, can be prepared according to the information in the main patent specification, for example by reacting an N-triphenylmethyl-aminocarboxylic acid with a hydrogen halide ester of the corresponding alcohol in the presence of a tertiary organic base and subsequent cleavage of the triphenylmethyl radical by treatment with dilute acid, or by catalytic hydrogenation of a corresponding ester of an N-carbobenzoxypeptide in the presence of an acid.
Salts of such aminocarboxylic acid esters which are suitable for the reaction according to the invention are in particular those of hydrohalic acids, such as hydrochloric acid, or of halogenated fatty acids, such as trifluoroacetic acid.
As an alkaline agent for the inventive implementation z. B. inorganic bases, such as alkali metal hydroxides or carbonates, or organic bases, preferably tertiary amines, are used.
The process is advantageously carried out in the presence of organic solvents such as dimethylformamide, acetohitrile, dioxane, tetrahydrofuran or mixtures thereof, optionally also in the presence of water. At high concentrations of starting material the formation of linear polypeptides and at low concentrations that of cyclic polypeptides is favored. The yield of amide can in many cases be increased further by adding acidic catalysts, for example glacial acetic acid or sulfuric acid.
example 1
70 mg of triglycine cyanomethyl ester hydrochloride are dissolved in 1.5 ml of dimethylformamide, and 1 drop of glacial acetic acid and 15 drops of triethylamine are added. After 5 minutes an amorphous precipitate appears next to the crystals of triethylamine hydrochloride. After 2 hours this is centrifuged off and washed thoroughly with water. 45 mg (polytriglycine) cyanomethyl ester. Biuret sample positive.
Example 2
100 mg of triglycine cyanomethyl ester hydrochloride dissolved in dimethylformamide and 3 drops of glacial acetic acid (total volume 4.0 ml) are slowly added dropwise (0.2 ml per 15 minutes) to a mixture of 20 ml of pyridine and 0.5 ml of glacial acetic acid at 70 . After the reaction has ended, the colorless, crystalline precipitate is filtered off with suction, washed with pyridine, acetone and ether and recrystallized from water. 35 mg (= 51 / o) cyclohexagiycyl are obtained.
A similar experiment with triglycine methyl ester hydrochloride with pyridine and with a pyridine-piperidine mixture does not yield any cyclohexaglycyl.
Example 3
390 mg of the trifluoroacetic acid salt of L-valyl-N8-tosyl-L-ornithyl-L-leucyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-L-valyl-Nd-tosyl-L-ornithyl-L-leucyl-D-phenylalanyl -L-proline-p-nitrophenyl ester are dissolved together with 3 drops of glacial acetic acid in 10 ml of dimethylformamide and added dropwise to 75 ml of pyridine (at 95) over 3 hours with stirring and the solution (pale brown) is kept at this temperature for 1 hour. The solvent is evaporated in vacuo and the residue in a high vacuum over conc. Sulfuric acid dried.
The reaction product is extracted with boiling ether. The insoluble residue is dissolved in a mixture of isopropanol-methanol-water (1: 1: 1) and filtered through two columns of ion exchangers Merzk I and IIIny (swollen with the same solvent). Water is added to the run-through at 45 and the organic solvents are removed in vacuo. The powdery reaction product is suction filtered and dried over caustic soda in a high vacuum. 170 mg almost colorless, ninhydrin-negative substance.
For further purification, the neutral parts are adsorbed in benzene-chloroform (9: 1) on a column of 12 g aluminum oxide (according to Brockmann) and washed with the same solvent mixture. Elution takes place with chloroform and ethyl acetate. The operation is repeated with 3 g of aluminum oxide. The residue of the chloroform and ethyl acetate fractions is dried, whereupon it is relatively sparingly soluble in ethyl acetate. From 65%
Ethanol 91.1 mg of a colorless compound which crystallizes in rods are obtained. Melting point after repeated recrystallization from 65 percent ethanol 319-320 with decomposition (brown color from 305, sintering at 316). This product represents the cyclo-L-valyI-N-tosyl-L-omithyl-Lleucyl zD-phenylalanyl-L-prolyl-L-vaXyl-No-tosyl, L-ornithyl-L-leucyl-D-phenylalanyl-L-proline in the form of its dihydrate. It is further characterized by its infrared spectrum, which has bands at 3.08; 3.28; 6.10; 6.53; 6.68; 7.54; 7.76; 7.97; 8.10; 8.43; 8.69; 9.17; 12.26 and
14.25 u.
It can be turned into the antibiotic gramicidin S as follows:
60 mg of this dihydrate are dissolved in 20 ml of liquid ammonia and mixed with 100 mg of sodium (in small pieces). After the sodium has completely dissolved, the solution remains blue.
After adding a little ammonium chloride, the ammonia is evaporated and the residue is freed from the mercaptan formed in a high vacuum. The reaction product is taken up with absolute ethanol to which a few drops of a solution of hydrochloric acid in ethyl acetate are added. The solvent is evaporated after filtration. The residue like! in a few drops 65 per cent. Dissolved ethanol and mixed with water at 50 until a clear cloudiness has arisen. The dihydrochloride of the antibiotic gramicidin S then crystallizes in the form of fine needles.
M.p. 268 to 270 with decomposition (introduction of the m.p. tube at 250). Sample positive for chlorine ions after boiling with 2N nitric acid; la] D = -295 (70% ethanol). Gramicidin S is cyclo-L-valyl
This compound has the formula: L-ornithyl-. L-leucyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-L-valyl-L-ornithyl-L-leucyl-D-phenylalanyl-L-proline.
The trifluoroacetic acid salt of L-valyl-N6-tosyl-L-ornithy1 L-leucyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-L-valyl-N6-tosyl-L-ornithyl- L-leucyl-D-phenylalanyl- L-proline p-nitrophenyl ester can be obtained as follows:
100 mg L-valyl-Na-tosylLL-ornithyl-L-leucyl-D-phenylalanyl-L-proline methyl ester hydrochloride are dissolved in 1.5 ml chloroform, 100 mg triphenylchloromethane and 5 drops triethylamine are added and 10 hours stored at room temperature.
The solvent is then removed in vacuo and the residue! freed from excess chloride and carbinol by trituration with a mixture of petroleum ether and ether (1: 1).
The solid residue is dissolved in ethyl acetate and washed with tartaric acid solution and water. After evaporation, the dried solution leaves behind: 122 mg (98 / o) of an almost colorless, glassy residue. By reprecipitating from benzene using petroleum ether, the trityl-L-valylNs-tosyb-L, -arnithyl-L-leucyl-D-phenylalanyl-L-proline methyl ester is obtained as a solid, microcrystalline compound, m.p.
123.5-125.5. In trifluoroacetic acid, the yellow color that is characteristic of trityl compounds develops.
For analysis, drying is carried out for 2 hours at 90 and 10-3 mm Hg: C57117008N6S (999.3) calc.: N 8.41 S 3.21 / found. : N 8.35 S 2.96ego
EMI3.1
200 mg of the above methyl ester are dissolved in 7.5 ml of dioxane and the slight cloudiness is removed by filtration with Celite (diatomaceous earth). After adding a mixture of 1.5 ml of 1N sodium hydroxide solution, 1.5 ml of water and 0.5 ml of methanol, the clear solution is warmed to 37 for saponification. From time to time 3 drops of this solution are diluted with 1 ml of water. After 45 minutes, there is no longer any turbidity. The batch is poured into 200 ml of water from 5 and acidified with about 2 ml of acetic acid (2N).
After 1 hour at 5, the free acid is filtered off with suction, washed with water and dried: 110 mg (56 / o). Extraction of the mother liquor with ethyl acetate and customary work-up gives a further 70 mg (35'V). Saponification of a sample with trifluoroacetic acid and chromatography on Whatman-No. 1 paper with n-butanol-glacial acetic acid-water (4: 1:
1) gives a NinhydEin-positive spot with Rf = 0.90. Zeisel determinations show at most traces of methoxyl. 580 mg of the free acid thus obtained are combined with 475 mg of L-valyl-Na-tosyl-L-ornithyl-L-leucyl-D-phenylalanyl-L-proline methyl ester and 155 mg of cycohexyl (morpholinyl-ethyl) - carbodiimide dissolved in ethyl acetate and stored for 5 hours at room temperature. The batch is then diluted with ethyl acetate and washed at 0 with 1N hydrochloric acid, dilute ammonia, water and saturated sodium chloride solution.
After evaporation and drying in a high vacuum, the dried solution leaves 1.04 g (100 "/ o) of a colorless glass, which slowly crystallizes. Reprecipitation from benzene petroleum ether and drying at 80 and 0.001 mm Hg gives trityl-L-valyl-No -tosyl-L-ornithyl-L-leucyl-D-phenyl-alanyl-L-prolyl-L-valyl-Na-tosyl-L-ornithyl-L-leucyl-D-phenylalanyl-L-proline methyl ester of m.p. 106 to 107.
For saponification, 1 g of this methyl ester in 30 ml of dioxane is treated and worked up with 11 ml of 0.5N sodium hydroxide solution and 5 ml of methanol as for the saponification of the trityl pentapeptide methyl ester described above. The saponification is practically over after half an hour. By precipitating the solution diluted with 900 ml of cold water with about 10 ml of 2N acetic acid, 600 mg of colorless, solid substance are obtained. The free acid thus obtained melts at 133-134 and only contains traces of methoxyl groups.
540 mg of this free acid and 500 mg of di- (p-nitrophenyl) sulfite are dissolved in 5 ml of pyridine and stored for 5 hours at room temperature.
The pyridine is then evaporated in vacuo, the residue is taken up in ethyl acetate and washed with tartaric acid solution and water. After evaporation of the ethyl acetate, excess nitrophenol is removed with a mixture of ether and petroleum ether (1: 1). After this treatment, the colorless, solid residue no longer turns yellow when added to dilute ammonia [neither free nitrophenol nor di- (p-nitrophenyl) sulfite present].
The purity of the obtained nitrophenyl ester of trityl-L-valyl-Na-tosyl-L-ornithyl-L-leucyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-L-valyl-N8-tosyli-L-ornithyl-L-leucyl-D- phenylalanyl-L-proline was determined spectroscopically to be 92 / o using a solution in 0.5N aqueous-alcoholic sodium hydroxide solution (1: 1; v: v).
To split off the trityl residue, 500 mg of the nitrophenyl ester are dissolved in 10 ml of trifluoroacetic acid, and 2 ml of water are added in small portions while cooling to -5. The solution is kept for 15 minutes at room temperature, a lot of triphenylcarbinol separating out. The solvent is then evaporated at 10-2 mm Hg against a cold trap (-80) (bath temperature 30).
The residue is washed thoroughly with ether and then dried at 10-3 mm Hg. It represents the trifluoroacetic acid salt of the p-nitrophenyl ester of L-Valyl-No-tosyl-L-ornithyl-L-Ieucyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-L-valyl-Na-tosyl-L-ornithyl-L-leucyl- D-phenylalanyl-L-proline.
Example 4
420 mg of glycyl-DL-phenylalanyl-glycine cyanomethyl ester hydrochloride are dissolved in 10 ml of dimethylformamide, 5 drops of glacial acetic acid are added and added dropwise to 100 ml of pyridine and 2.5 ml of glacial acetic acid over 5 hours while stirring at 95 ° C. The mixture is then stirred at 95 for a further 21/2 hours. The mixture is then completely evaporated to dryness in vacuo, the residue dissolved in 100 ml of hot methanol / water (1: 1), filtered through a column of strongly acidic and strongly basic ion exchanger aMerckp and washed well with methanol-water (: 1) . The filtrate is again evaporated to dryness, the residue is triturated with acetone and the precipitate is suction filtered.
70 mg of cycloglycyl-DL-phenylalanyl-glycyl are obtained. The product can be recrystallized from a large amount of methanol and water.
It crystallizes in white platelets; they melt at 312 with decomposition, turning brown at 300; Yield: 70 mg = 20 "A ,.
Example p
400 mg of glycyl-DL-phenylalanyl-glycine-p-nitro-phenylester-hydrobromide, dissolved in 8.5 ml of dimethylformamide, and 4 drops of glacial acetic acid are added dropwise at 95 to 85 ml of pyridine and 2 ml of glacial acetic acid over a period of 5 hours. The work-up is carried out as in Example 4. 63 mg of cyclo-glycyl-DL-phenylalanyl-glycyl are obtained, which corresponds to a yield of 29%.
If the above reaction is carried out at 55, the cyclo-glycyl-DL-phenyl-alanyl-glycyl is obtained in a yield of 38%.
Example 6
425 mg of glycyl-DL-phenylalanyl-glycine-p-methanesulfonyl-phenyl ester hydrochloride, dissolved in 8 ml of dimethylformamide, and 4 drops of glacial acetic acid are added dropwise to 85 ml of pyridine and 2 ml of glacial acetic acid over 5 hours at 95. Working up is carried out as in the preceding examples. 107 mg of cyclo-glycyl-DLphenylalanyl-glycyl are thus obtained in a yield of 45%.
If the above hydrochloride is added dropwise to the pyridine at 55, the yield drops to 30%.
Example 7
410 mg of glycyl-glycyl-DL-phenylalanine-p-methanesulfonyl-phenyl ester hydrochloride, dissolved in 8 ml of dimethylformamide, and 4 drops of glacial acetic acid are added dropwise at 95 ml to 80 ml of pyridine and 2 ME of glacial acetic acid.
Customary work-up gives 57 mg of cyclo glycyl-glycyl-DL-phenylalanine; Yield 25 / o.
Example 8
105 mg of glycyl-glycyl-DL-phenylalanine-p-methanesulfonyl-phenyl ester hydrochloride are dissolved in 0.1 ml of dimethylformamide, 6 drops of triethylamine are added and the mixture is immediately cooled. A precipitate of triethylamine hydrochloride quickly forms.
The mixture is left to stand for 3 days at room temperature, then heated to 70 for a further hour.
The dimethylformamide is evaporated in vacuo and the residue is triturated with water. 35.8 mg of a sparingly soluble product are obtained. It sinters at 230; on further heating the color slowly turns black, and on decomposition; it is insoluble in hydrochloric acid and in sodium hydroxide solution, very slightly soluble in boiling methanol and water and in a mixture of the two solvents.
From a trifluoroacetic acid solution, the product precipitates amorphously with water, in contrast to the cyclic tripeptide, which crystallizes in tiny tufts of needles. 16.3 mg of the crude product are dissolved in plenty of hot dimethylformamide-methanol-water (1: 1: 1) and filtered through a column each with a strongly acidic and basic ion exchanger eMerok:>.
The filtrate is evaporated to dryness in vacuo. There remain 9.8 mg of a product which also only precipitates amorphously from a trifluoroacetic acid solution after the addition of water.
To prepare the starting materials used in the above Examples 1, 2 and 4-8, the corresponding N-trityl- or N-carbobenzoxyaminocarboxylic acid esters are prepared according to the process of the main patent. The trityl group is split off from these by treatment with trifluoroacetic acid or by means of a dilute inorganic acid such as hydrochloric acid. The carbobenzoxy group can be with a strong acid, such as glacial acetic acid, or catalytically, such as. B. by treatment with hydrogen in the presence of palladium carbon and in hydrochloric acid.
Example 9
710 mg of e-amino-n-caproic acid-p-methanesulfonylphenyl ester hydrochloride are dissolved in 14 ml of dimethylformamide with the addition of 8 drops of glacial acetic acid and, with stirring, for 4% hours at 95 in
140 ml of pyridine and 4 ml of glacial acetic acid were added dropwise. The mixture is then stirred for a further 3 hours at the same temperature, then the pyridine is evaporated in vacuo, the residue is dissolved in water and filtered through a strongly acidic and a strongly basic ion exchanger. The filtrate is evaporated to dryness in a vacuum, and the residue is distilled in a bulb tube in a water jet pump vacuum.
For further purification, the distilled caprolactam is drawn up in ether on an A1203 column and the e-n-caprolactam is washed out with ethyl acetate and ethyl acetate-methanol 1: 1. This crystallizes momentarily during vaccination.
The compound used as the starting material can be produced as follows: l. s- (carbobenzoxy-amino) -n-caproic acid.
10.37 g of e-amino-caproic acid are in 1 mol
Dissolved in sodium hydroxide solution and stirred with 1.5 mol of CarbobenzoxycMorid in
Ether and at the same time mixed with 2 mol of 4N sodium hydroxide solution. The mixture is then stirred for a further 1 hour at room temperature, then the alkaline solution is extracted with ether and acidified while cooling with ice.
The e-carbobenzoxyamino-n-caproic acid precipitates as an oil, which soon solidifies. It is sucked, washed and dried. Yield: 20 g = 95 / o d. Th.
For analysis, the product is recrystallized from carbon tetrachloride and then forms fine, white needles of F. = 54-55.
2. e- (Carbobenzoxy-amino) -n-caproic acid-p-methanesulfonyl-phenyl ester.
1.7 g carbobenzoxy-amino-caproic acid is 10 ml! 3.35 g of di (p-methanesulfonyl phenyl) sulfite are added to pyridine and the mixture is left to stand at room temperature for 17 hours. The pyridine is then strongly concentrated in vacuo, the residue is dissolved in benzene and extracted with 2N hydrochloric acid, ice-cold soda solution and water. After the benzene has been dried and evaporated, the residue is crystallized from methanol with the addition of a little water. Yield 99 / o d! Th. The connection forms white needles from F. = 83.5-84.
3. E-amino-n-caproic acid p-methanesulfonyl-phenyl ester hydrochloride.
2.48 g of the above compound are dissolved in 50 ml of methanol and 6.5 ml in hydrochloric acid and hydrogenated with the addition of 300 mg of 1013 / o palladium-carbon, the CO2 formed being simultaneously absorbed in sodium hydroxide solution. The hydrogen uptake is 148 ml. The catalyst is filtered off with suction, the filtrate is evaporated to dryness and the residue from abs.
Ethanol recrystallized. The product melts at 157-158.