Procédé de préparation de dérivés du prégnane 6 p-hydroxylés La présente invention a pour objet un procédé de préparation de dérivés du prégnane 6(3-hydroxylés.
L'introduction d'un groupe 6(3-hydroxyle dans une molécule de stéroïde est décrite dans la litté rature. Peterson et coll., J. Amer. Chem. Soc.,<I>75,</I> 412 (1953) ont isolé 1e dérivé 6(3-hydroxylé de la substance S de Reichstein à partir de la réaction fer- mentative entre ce composé (4-prégnène-17a-21-diol- 3,20-dione)
et un micro-organisme de l'espèce Rhizo- pus arrhizus. Dans un travail antérieur (J. Amer. Soc., 74, 5933 (1952)), Peterson et coll. ont montré que la réaction entre l'organisme précité avec la progestérone donne lieu à un mélange de produits comprenant de la 11(x-hydroxy-progestérone conjoin tement avec un pourcentage faible de 6(3,
-I-lla-di- hydroxy-progestérone. L'emploi<I>d'Aspergillus</I> nidu- lans a été rapporté par Fried et coll., Recent progress Hormone Research, Vol. 11, p.
149 (1955) pour effectuer l'introduction d'un groupe 6(3-hydroxyle dans la substance S de Reichstein et la 16a-hydroxy- progestérone conjointement avec des hydroxylations en d'autres portions de la molécule. En outre,
il a été rapporté que la moisissure Gliocladium catenula- tum dans son action sur le progestérone donne nais sance à une faible quantité de 6(3-hydroxy-androstè- nedione. D'autres publications décrivent des métho des d'introduction d'un groupe 6(3-hydroxyle. Cepen dant, toutes les méthodes décrites pour effectuer une 6(3-hydroxylation paraissent avoir l'inconvénient d'aboutir à un mélange de produits ou, si on obtient un seul produit, d'engendrer alors ce dernier avec un faible rendement.
Un mélange de produits de polarité similaire, comme celui qui se forme en hydroxylant des stéroïdes, est par nature difficile à séparer et requiert de longues et fastidieuses extractions et techniques opératoires en vue d'obtenir des substan ces pures.
On a découvert que l'on obtient, en rendement sensiblement quantitatif, un dérivé du prégnane 6(3-hydroxylé de forme générale
EMI0001.0053
dans laquelle la liaison 1,2 est simple ou double, X représente HZ (H,OH) ou O, Y représente H ou OR, R représentant H ou un radical acyle, et Z re présente H ou OH, en soumettant un dérivé du pré- gnane de formule générale
EMI0001.0059
dans laquelle la liaison 1,2 est simple ou double;
à l'action d'une culture d'une espèce de micro-orga nisme du genre Chaetomium ou d'enzymes d'une telle culture, et en isolant le dérivé ainsi formé. Ce micro-organisme a en effet un comportement unique en ce sens qu'une position seulement du noyau stéroïde est attaquée, et que la transformation du composé de départ en l'analogue correspondant 6a-hydroxylé est pratiquement complète. Comme c'est généralement le cas dans les transformations microbiologiques, certaines espèces d'un genre, pour une raison ou l'autre, se prêtent mieux à une réaction particulière.
Pour le genre Chaetomium, .on a trouvé que les espèces <I>C.</I> funicolum (QM 33C), C. cochli- odes, <I>C.</I> mollipilium, et C.
succineum sont approxi mativement égales entre elles dans leur activité et, en groupe, elles sont supérieures à certaines autres es pèces du genre Chaetomium. Ainsi, en cultivant et en mettant incuber une des espèces précitées de Chaetomium et en mettant l'organisme en développe ment au contact de la matière de départ, on obtient après 24 à 72 heures essentiellement une transfor mation à<B>100</B> 9/o, et l'on isole avec facilité le produit 6(3-hydroxylé correspondant. Par exemple, en met tant du 21-acétate de 1,4-prégnadiène-ll(3,17a,
21- triol-3,20-dione en contact avec une espèce de Chae- tomium comme le C. funicolum (QM 33C) ou un extrait enzymatique de celle-ci, conformément à des procédés analogues décrits dans la littérature, on obtient de la 1,4-prégnadiène-6(3,ll(3,17a,21-tétrol- 3,20-dione.
On a constaté qu'au cas où la matière de départ possède un groupe 21-ester, il se produit parfois une saponification. Toutefois, le 21-ol libre est aisément séparé de son ester par des différences de solubilité. Lorsqu'on désire un ester, il s'avère commode de réestérifier tout 21-hydroxyle libre pouvant être pré sent.
En plus des 1,4-prégnadiènes mentionnés dans les exemples qui suivent, le présent procédé micro biologique est applicable à d'autres stéroïdes corres pondant à la formule générale qui précède. Par exemple, en partant de cortisone, d'hydrocortisone, de la substance S de Reichstein, ou de progestérone, on obtient respectivement la 6(3-hydroxy-cortisone, la 6S-hydroxy-hydrocortisone, la 4-prégnène-6(3-17a,21- triol-3,20-dione, la 6p-hydroxy-progestérone, etc. On prépare également ces produits avec un rendement essentiellement quantitatif et on les sépare aisément du mélange de réaction.
Les composés obtenus par le procédé selon l'in vention sont utiles comme composés intermédiaires pour la transformation en des corticoïdes physiologi quement actifs, dont des exemples sont les 1,4,6-pré- natriènes. Par exemple, on peut traiter un composé tel que le 21-acétate de 1,4-prégnadiène-6(3,17a,21- triol-3,11,20-trione par un agent sulfonant comme le chlorure de p-toluène-sulfonyle, ce qui donne le 6(i-p-toluènesulfonate correspondant.
Lorsqu'on traite cet ester par une base à point d'ébullition élevé, la diéthylaniline, par exemple, on obtient une substance thérapeutiquement active, qui. est le 21-acétate de 1,4,6-prégnatriène-17a,21-diol-,11,20-trione. Les composés obtenus par le présent procédé, qui sont dépourvus d'une fonction oxygène en C-11 ou en C-21, sont aisément convertis en l'analogue oxy géné en introduisant la fonction oxygénée suivant l'une quelconque des méthodes décrites dans la litté rature.
Par exemple, on peut introduire une fonction oxygénée sur l'atome C-11 par un micro-organisme du genre Curvularia ou Rhizopus, etc., tandis que la fonction oxygénée sur l'atome C-21 peut être intro duite microbiologiquement en moyen de l'espèce Ophiobolus herbotrichus, ou chimiquement par halo- génation, acyloxylation et, si on le désire, par sapo nification.
En plus de leur utilité comme composés intermé diaires pour la préparation de corticoïdes thérapeu- tiquement actifs, les composés obtenus par mise en oeuvre du procédé selon l'invention sont thérapeuti- quement utiles comme tels. Ces composés agissent comme inhibiteurs de l'hypophyse et sont générale ment utilisables en thérapie corticoïde dans le traite ment de certaines maladies inflammatoires. Ils peu vent être administrés par voie orale sous forme de comprimés, de gélules, etc., ou par voie parentérale en solution ou en suspension dans des véhicules non toxiques.
EMI0002.0073
<I>Exemple <SEP> 1</I>
<tb> <I>!,4-prég <SEP> nadiène-6(3,17a,21-triol-3,11,20-trione</I>
<tb> Dans <SEP> chacun <SEP> de <SEP> 10 <SEP> flacons <SEP> Erlenmeyer <SEP> de
<tb> 300 <SEP> ce <SEP> on <SEP> place <SEP> 100 <SEP> ce <SEP> d'un <SEP> milieu <SEP> de <SEP> culture
<tb> ayant <SEP> la <SEP> composition <SEP> suivante
<tb> Extrait <SEP> de <SEP> levure <SEP> <SEP> Difco <SEP> <SEP> <B>.... <SEP> ...</B> <SEP> 3 <SEP> à <SEP> l0 <SEP> g
<tb> Liqueur <SEP> de <SEP> macération <SEP> du <SEP> maïs <SEP> . <SEP> . <SEP> 1 <SEP> g
<tb> Dextrose <SEP> <B>...</B> <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> <B>...</B> <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> 10 <SEP> g
<tb> Eau <SEP> distillée <SEP> ou <SEP> eau <SEP> de <SEP> distribution
<tb> pour <SEP> faire <SEP> . <SEP> .
<SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> 1 <SEP> litre Chaque flacon est inoculé avec des spores d'un milieu de culture d'agar de Chaetomium f u- nicolum (QM No 33C) ou avec 1 à 101)/o d'ino- culum submergé qui a été cultivé pendant 24 à 48 heures.
On met incuber le mélange en secou ant les flacons sur un appareil rotatif à secousses, pendant 24 à 48 heures à 281) C, à raison d'envi ron 250 tours à la minute. A chacun des flacons (qui montrent alors une croissance prolifique) on ajoute aseptiquement 50 mg de 1,4-prégna- diène-17a,21-diol-3,11,20-trione dans 2<I>ce</I> d'éthanol. On met alors incuber le mélange de fermentation et on le secoue pendant 24 à 72 heures à 280 C, temps au bout duquel il se pro duit une conversion complète.
On extrait à fond le mélange avec du chloroforme et la faible frac tion du produit qui est retenue dans le mycelium est extraite en faisant bouillir le mycelium dans du chloroforme pendant quelques minutes. On combine les extraits chloroformiques et on les évapore en un résidu donnant approximativement 5 mg de matière brute. On triture le résidu avec du méthanol, ce qui donne un solide cristallin que l'on purifie par cristallisation à partir d'acé tone, obtenant ainsi la 1,4-prégnadiène-6(3,17a, 21-triol-3,11,20-trione.
Le produit de cet exemple peut être estérifié comme suit <I>la)</I> 21-acétate <I>de</I> 1,4-prégnadiène-6(3,17a,21- triol-3,11,20-trione On verse une solution de 25 mg du composé de l'exemple 1, se trouvant dans 2 cm3 de pyri- dine anhydre, sur 6 mg d'anhydride acétique dans une atmosphère anhydre. On agite le mélange pendant 30 minutes et on le verse ensuite dans de l'acide sulfurique dilué et de la glace. Le pré cipité résultant est séparé par filtration, puis sé ché et cristallisé à partir de méthanol, donnant ainsi le 21-acétate susmentionné.
<I>lb)</I> 60,21-diacétate <I>de 1,4</I> prégnadiène-6f),17a,21- triol-3,11,20-trione En portant la quantité d'anhydride acétique à 100 mg dans l'estérification décrite ci-dessus, on obtient le diacétate que l'on purifie par cris tallisation à partir d'un mélange acétone-hexane.
De plus, le 21-acétate de 1,4-prégnadiène- 6(3,17a,21-triol-3,11,20-trione peut encore être estérifié en 6(3-benzoate-21-acétate de 1,4-pré- gnadiène-6(1,17a,21-triol-3,11,20-trione, au moy en de chlorure de benzoyle en présence de pyri- dine anhydre, et ce dernier composé peut four nir le 21-acétate de 1,4,6-prégnatriène-17a,21- diol-3,11,20-trione par chauffage en présence de diéthylaniline.
<I>Exemple 2</I> 1,4-prégnadiène-6(3,11(3,17a,21-tétrol-3,20-dione On suit essentiellement le mode opératoire de l'exemple 1 et on utilise comme matière de dé part la 1,4-prégnadiène-11(3,17a,21-triol-3,20- dione. On développe une culture de Chaetomium cochliodes (QM 624) comme décrit dans l'exem ple 1, dans un milieu ayant la composition sui vante
EMI0003.0036
<SEP> Edamine <SEP> .................... <SEP> 20 <SEP> g
<tb> Liqueur <SEP> de <SEP> macération <SEP> du <SEP> maïs <SEP> <B>......</B> <SEP> 3 <SEP> g
<tb> Dextrose <SEP> (ou <SEP> cerelose) <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> .
<SEP> . <SEP> . <SEP> <B><I>10-509</I></B>
<tb> Eau <SEP> pour <SEP> compléter <SEP> à <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> 1 <SEP> litre Après achèvement de la fermentation on extrait le mélange avec du chlorure de méthylène et on évapore la couche organique jusqu'à obtention d'un résidu.
On fait digérer le résidu avec un peu de méthanol et on le fait cristalliser à partir d'un mélange chlorure de méthylène-hexane, ce qui donne la 1,4-prégnadiène-6(3,11(3,17a,21-tétrol- 3,20-dione. Le produit de cet exemple peut être estérifié comme suit <I>2a)</I> 21-acétate <I>de</I> 1,4-prégnadiène-6(3,11,(317a,21- tétrol-3,20-dione On traite une solution de 50 mg du produit de l'exemple 2 dans 3-4 cm3 de pyridine anhydre avec 11-12 mg d'anhydride acétique, et on opère comme sous la).
Le 21-acétate ainsi obtenu est purifié par cristallisation à partir d'acétone.
<I>2b)</I> 6(3,21-diacétate <I>de</I> 1,4-prégnadiène- 6(3,11(3,17a,21-tétrol-3,20-dione En portant la quantité d'anhydride acétique à<B>100</B> mg dans l'estérification décrite ci-dessus, on obtient le diacétate que l'on purifie par cris- tallisation à partir d'un mélange chlorure de mé- thylène-hexane.
De plus, le 21-acétate de 1,4-prégnadiène- 6(3,11(3,17a,21-tétrol-3,20-dione peut encore être estérifié en 6-p-toluène sulfonate-21-acétate de 1,4-prégnadiène-6(3,1 l p,17a,21-tétrol-3,20-dione, au moyen de chlorure de p-toluène sulfonyle en présence de pyridine, et ce dernier composé peut fournir le 21-acétate de 1,4,6-prégnatriène- 11(3,17a,21-triol-3,
20-dione par chauffage en pré sence de 2,4,6-collidine.
<I>Exemple 3</I> 1,4-prégnadiène-6(3,17a,21-triol-3,20-dione En suivant le mode opératoire de l'exemple 1 et en utilisant de la 1,4-prégnadiène-17a,21-diol- 3,20-dione comme matière de départ, on obtient le composé de cet exemple que l'on purifie par cristallisation à partir d'acétone.
<I>Exemple 4</I> 1,4-prégnadièné-6(3,l7a-diol-3,20-dione En substituant gramme pour gramme de la 1,4-prégnadiène-17a-ol-3,20-dione dans le mode opératoire de l'exemple 1, on obtient la 1,4-pré- gnadiène-6(3,17a-diol-3,20-dione.
Comme variante, on peut employer du Chae- tomium succineum (QM 1044) comme culture.
Process for the Preparation of P-Hydroxylated Pregnane 6 Derivatives The present invention relates to a process for the preparation of Pregnane 6 (3-hydroxylated) derivatives.
The introduction of a 6 (3-hydroxyl group into a steroid molecule is described in the literature. Peterson et al., J. Amer. Chem. Soc., <I> 75, </I> 412 (1953 ) isolated Reichstein's derivative 6 (3-hydroxylated substance S from the fermentative reaction between this compound (4-pregnene-17a-21-diol-3,20-dione)
and a microorganism of the species Rhizopus arrhizus. In previous work (J. Amer. Soc., 74, 5933 (1952)), Peterson et al. have shown that the reaction between the aforementioned organism with progesterone gives rise to a mixture of products comprising 11 (x-hydroxy-progesterone together with a low percentage of 6 (3,
-I-lla-di-hydroxy-progesterone. The use of <I> Aspergillus </I> nidulans has been reported by Fried et al., Recent progress Hormone Research, Vol. 11, p.
149 (1955) to effect the introduction of a 6 (3-hydroxyl group into Reichstein's substance S and 16α-hydroxy-progesterone together with hydroxylations in other portions of the molecule.
it has been reported that the mold Gliocladium catenula- tum in its action on progesterone gives rise to a small amount of 6 (3-hydroxy-androstenedione. Other publications describe methods of introducing a group 6 (3-hydroxyl. However, all the methods described for carrying out a 6 (3-hydroxylation appear to have the drawback of leading to a mixture of products or, if a single product is obtained, then of generating the latter with low yield.
A mixture of products of similar polarity, such as that formed by hydroxylating steroids, is inherently difficult to separate and requires long and tedious extractions and processing techniques in order to obtain pure substances.
It was discovered that one obtains, in substantially quantitative yield, a derivative of pregnane 6 (3-hydroxylated in general form
EMI0001.0053
in which the 1,2 bond is single or double, X represents HZ (H, OH) or O, Y represents H or OR, R represents H or an acyl radical, and Z represents H or OH, by subjecting a derivative of pregnane of general formula
EMI0001.0059
wherein the 1,2 bond is single or double;
the action of a culture of a species of microorganism of the genus Chaetomium or enzymes of such a culture, and isolating the derivative thus formed. This microorganism indeed has a unique behavior in that only one position of the steroid nucleus is attacked, and that the transformation of the starting compound into the corresponding 6α-hydroxy analog is practically complete. As is usually the case with microbiological transformations, certain species of a genus, for one reason or another, lend themselves better to a particular reaction.
For the genus Chaetomium, it was found that the species <I> C. </I> funicolum (QM 33C), C. cochli- odes, <I> C. </I> mollipilium, and C.
succineum are approximately equal to each other in activity and, as a group, are superior to certain other species of the genus Chaetomium. Thus, by cultivating and incubating one of the aforementioned species of Chaetomium and by bringing the developing organism into contact with the starting material, one obtains after 24 to 72 hours essentially a transformation at <B> 100 </ B > 9 / o, and the corresponding product 6 (3-hydroxylated) is easily isolated. For example, there is also 1,4-pregnadiene-11-21-acetate (3,17a,
21-triol-3,20-dione in contact with a species of Chaetomium such as C. funicolum (QM 33C) or an enzymatic extract thereof, according to analogous methods described in the literature, one obtains 1,4-Pregnadiene-6 (3,11 (3,17a, 21-tetrol-3,20-dione.
It has been found that in case the starting material has a 21-ester group, sometimes saponification occurs. However, the free 21-ol is easily separated from its ester by differences in solubility. When an ester is desired, it is convenient to re-esterify any free 21-hydroxyl that may be present.
In addition to the 1,4-pregnadienes mentioned in the examples which follow, the present microbiological process is applicable to other steroids corresponding to the general formula which precedes. For example, starting with cortisone, hydrocortisone, Reichstein's substance S, or progesterone, we obtain respectively 6 (3-hydroxy-cortisone, 6S-hydroxy-hydrocortisone, 4-pregnene-6 (3 -17a, 21-triol-3,20-dione, 6p-hydroxy-progesterone, etc. These products are also prepared in essentially quantitative yield and readily separated from the reaction mixture.
The compounds obtained by the process according to the invention are useful as intermediate compounds for the transformation into physiologically active corticosteroids, examples of which are 1,4,6-prenatrienes. For example, a compound such as 1,4-pregnadiene-6 (3,17a, 21-triol-3,11,20-trione 21-acetate) can be treated with a sulfonating agent such as p-toluene-chloride. sulfonyl, resulting in the corresponding 6 (ip-toluenesulfonate.
When this ester is treated with a base having a high boiling point, diethylaniline, for example, a therapeutically active substance is obtained which. is 1,4,6-Pregnatriene-17a, 21-diol-, 11,20-trione 21-acetate. The compounds obtained by the present process, which lack an oxygen function at C-11 or C-21, are easily converted into the oxy-gen analog by introducing the oxygen function according to any one of the methods described in literature.
For example, one can introduce an oxygen function on the C-11 atom by a microorganism of the genus Curvularia or Rhizopus, etc., while the oxygen function on the C-21 atom can be microbiologically introduced by means of the species Ophiobolus herbotrichus, or chemically by halogenation, acyloxylation and, if desired, by saponification.
In addition to their utility as intermediate compounds for the preparation of therapeutically active corticosteroids, the compounds obtained by carrying out the process according to the invention are therapeutically useful as such. These compounds act as inhibitors of the pituitary gland and are generally useful in corticosteroid therapy in the treatment of certain inflammatory diseases. They can be administered orally in the form of tablets, capsules, etc., or parenterally in solution or suspension in non-toxic vehicles.
EMI0002.0073
<I> Example <SEP> 1 </I>
<tb> <I>!, 4-prég <SEP> nadiene-6 (3,17a, 21-triol-3,11,20-trione </I>
<tb> In <SEP> each <SEP> of <SEP> 10 <SEP> flasks <SEP> Erlenmeyer <SEP> of
<tb> 300 <SEP> this <SEP> on <SEP> places <SEP> 100 <SEP> this <SEP> of a <SEP> medium <SEP> of <SEP> culture
<tb> having <SEP> the following <SEP> composition <SEP>
<tb> Extract <SEP> of <SEP> yeast <SEP> <SEP> Difco <SEP> <SEP> <B> .... <SEP> ... </B> <SEP> 3 <SEP> to <SEP> l0 <SEP> g
<tb> Liquor <SEP> of <SEP> maceration <SEP> of <SEP> corn <SEP>. <SEP>. <SEP> 1 <SEP> g
<tb> Dextrose <SEP> <B> ... </B> <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP> <B> ... </B> <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP> 10 <SEP> g
<tb> Distilled <SEP> water <SEP> or <SEP> <SEP> water from <SEP> distribution
<tb> for <SEP> do <SEP>. <SEP>.
<SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP> 1 <SEP> liter Each vial is inoculated with spores of an agar culture medium of Chaetomium funicolum (QM No 33C) or with 1 to 101) / o of submerged inucum which was cultured for 24 to 48 hours.
The mixture is incubated by shaking the flasks on a rotary shaker, for 24 to 48 hours at 281 ° C, at a rate of approximately 250 rpm. To each of the flasks (which then show prolific growth) 50 mg of 1,4-pregnadiene-17a, 21-diol-3,11,20-trione in 2 <I> ce </I> d are aseptically added. ethanol. The fermentation mixture is then incubated and shaken for 24 to 72 hours at 280 ° C., after which time a complete conversion takes place.
The mixture is extracted thoroughly with chloroform and the small fraction of the product which is retained in the mycelium is extracted by boiling the mycelium in chloroform for a few minutes. The chloroform extracts are combined and evaporated to a residue yielding approximately 5 mg of crude material. The residue is triturated with methanol to give a crystalline solid which is purified by crystallization from acetone, thus obtaining 1,4-pregnadiene-6 (3,17a, 21-triol-3,11 , 20-trione.
The product of this example can be esterified as follows <I> la) </I> 21-acetate <I> de </I> 1,4-pregnadiene-6 (3,17a, 21-triol-3,11, 20-trione A solution of 25 mg of the compound of Example 1, in 2 cm3 of dry pyridine, is poured onto 6 mg of acetic anhydride in an anhydrous atmosphere, the mixture is stirred for 30 minutes and the mixture is stirred. It is then poured into dilute sulfuric acid and ice, The resulting precipitate is filtered off, then dried and crystallized from methanol, thereby giving the aforementioned 21-acetate.
<I> lb) </I> 60,21-diacetate <I> 1,4 </I> pregnadiene-6f), 17a, 21-triol-3,11,20-trione By increasing the amount of anhydride acetic 100 mg in the esterification described above, the diacetate is obtained which is purified by crystallization from an acetone-hexane mixture.
In addition, 1,4-Pregnadiene-6 (3,17a, 21-triol-3,11,20-trione 21-acetate can be further esterified at 6 (1,4- 3-benzoate-21-acetate). pregnadiene-6 (1,17a, 21-triol-3,11,20-trione, using benzoyl chloride in the presence of anhydrous pyridine, and the latter compound can provide the 21-acetate of 1 , 4,6-pregnatriene-17a, 21-diol-3,11,20-trione by heating in the presence of diethylaniline.
<I> Example 2 </I> 1,4-Pregnadiene-6 (3,11 (3,17a, 21-tetrol-3,20-dione The procedure of example 1 is essentially followed and used as material starting from 1,4-pregnadiene-11 (3,17a, 21-triol-3,20-dione. A culture of Chaetomium cochliodes (QM 624) is developed as described in Example 1, in a medium having the following composition
EMI0003.0036
<SEP> Edamine <SEP> .................... <SEP> 20 <SEP> g
<tb> Liqueur <SEP> of <SEP> maceration <SEP> of <SEP> corn <SEP> <B> ...... </B> <SEP> 3 <SEP> g
<tb> Dextrose <SEP> (or <SEP> cerelose) <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>.
<SEP>. <SEP>. <SEP> <B><I>10-509</I> </B>
<tb> Water <SEP> for <SEP> complete <SEP> to <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP> 1 <SEP> liter After completion of the fermentation, the mixture is extracted with methylene chloride and the organic layer is evaporated until a residue is obtained.
The residue is digested with a little methanol and crystallized from a mixture of methylene chloride-hexane, to give 1,4-pregnadiene-6 (3,11 (3,17a, 21-tetrol - 3,20-dione. The product of this example can be esterified as follows <I> 2a) </I> 21-acetate </I> 1,4-Pregnadiene-6 (3,11, ( 317a, 21-tetrol-3,20-dione A solution of 50 mg of the product of Example 2 in 3-4 cm3 of anhydrous pyridine is treated with 11-12 mg of acetic anhydride, and the procedure is carried out as under) .
The 21-acetate thus obtained is purified by crystallization from acetone.
<I> 2b) </I> 6 (3,21-diacetate <I> de </I> 1,4-pregnadiene- 6 (3,11 (3,17a, 21-tetrol-3,20-dione En bringing the amount of acetic anhydride to <B> 100 </B> mg in the esterification described above, the diacetate is obtained which is purified by crystallization from a mixture of methylene chloride -hexane.
In addition, 1,4-Pregnadiene-6 (3,11 (3,17a, 21-tetrol-3,20-dione 21-acetate) can be further esterified to 6-p-toluene sulfonate-21-acetate 1 , 4-pregnadiene-6 (3,1 lp, 17a, 21-tetrol-3,20-dione, by means of p-toluene sulfonyl chloride in the presence of pyridine, and the latter compound can provide the 21-acetate of 1 , 4,6-pregnatriene- 11 (3,17a, 21-triol-3,
20-dione by heating in the presence of 2,4,6-collidine.
<I> Example 3 </I> 1,4-Pregnadiene-6 (3,17a, 21-triol-3,20-dione Following the procedure of Example 1 and using 1,4-pregnadiene As a starting material -17a, 21-diol-3,20-dione, the compound of this example is obtained which is purified by crystallization from acetone.
<I> Example 4 </I> 1,4-Pregnadiene-6 (3, 17a-diol-3,20-dione Substituting gram for gram of 1,4-pregnadiene-17a-ol-3,20-dione in the procedure of Example 1, 1,4-pregnadiene-6 (3,17a-diol-3,20-dione is obtained.
As an alternative, Chaetomium succineum (QM 1044) can be used as the culture.