BRPI1012077B1 - Composição nutricional compreendendo uma combinação de uma fonte de leucina e uma fonte de ácido graxo poli-insaturado o-3, carboidratos digeríveis e fibra dietética solúvel - Google Patents

Abstract

combinação de uma fonte de leucina e uma fonte de ácido graxo, e, composição nutricional, uma composição farmacêutica ou uma composição nutracêutica a invenção se relaciona a uma combinação de uma fonte de leucina e pelo menos uma fonte de ácido graxo insaturado para tratamento terapêutico ou profilático de hipercaucemia. a invenção ainda se relaciona a uma combinação de uma fonte de leucina e pelo menos uma fonte de ácido graxo insaturado para reduzir ou evitar a redução da densidade mineral óssea ou para regulação in vivo da homeostase de cálcio no plasma do sangue.

Description

[0001] A invenção é direcionada a uma combinação específica de pelo menos dois componentes para tratamento da hipercalcemia, para reduzir ou evitar uma redução na densidade mineral óssea em um paciente, ou para a regulação in vivo da homeostasia de cálcio no plasma do sangue.

[0002] O cálcio desempenha um papel vital em muitas diferentes funções fisiológicas, especialmente na translação dos estímulos de excitação dos tecidos neuromusculares. Além disso, o cálcio é envolvido nas vias de transdução de sinal que, por exemplo, possam resultar em mudanças nos equilíbrios hormonais (por exemplo, no equilíbrio da colecistocinina). Em indivíduos saudáveis, a concentração da homeostasia de cálcio no plasma é firmemente regulada e mantida dentro de limites reduzidos (entre 8,4 e 10,2 mg/dl ou 2,1 e 2,6 mM) pelo hormônio paratiróideo, vitamina D e calcitonina [ver “Strassman et al. (1993). Mechanisms of paraneoplastic syndromes of colon-26: involvement of interleukin 6 in hipercalcaemia. Cytokine, 5, 463-468”].

[0003] A hipercalcemia é definida nos níveis de cálcio do plasma acima de 2,8 mmol/l nos homens, ou acima de 2,5 mmol/l nas mulheres (Bradley & Hoskin, 2006, Hypercalcaemia in head and neck squamous cell carcinoma. Curr Opin Otolaryngol Head Neck Surg., 14, 51-54).

[0004] Os sintomas observados nos pacientes hipercalcêmicos são relacionados à função fisiológica e neuro/muscular do cálcio, e incluem: fadiga, náusea, vômito, constipação, declínio mental, insuficiência renal, coma, cefaléia e sensório alterado. A hipercalcemia o mais comumente ocorre em associação com distúrbios malignos ou hiperparatireoidismo primário. Um percentual considerável de pacientes com neoplasma, por exemplo câncer pulmonar, câncer de mama, câncer renal, leucemia linfoblástica, câncer de mieloma múltiplo ou câncer da cabeça e do pescoço desenvolvem a hipercalcemia.

[0005] Existem pelo menos duas formas diferentes de malignidade associadas à hipercalcemia. Uma é associada com a dissolução óssea por metástase de invasão (Berenson, J. R., Rajdev, L. & Broder, M. (2006). Managing boné complications of solid tumours. Cancer Biol. Ther., 5, 1086-1089. Epub 20 de setembro de 2006). A outra forma tem sido associada com vários mecanismos diferentes levando à decomposição óssea aumentada. Um destes mecanismos inclui a secreção de hormônio relacionado a PTH (PTHrH) pelo tumor, o que pode levar à desmineralização óssea aumentada e/ou à reabsorção renal aumentada do cálcio, devido à reação cruzada de PTHrH com o receptor de PTH. Porém, as citocinas inflamatórias também foram relatadas como sendo envolvidas na indução da hipercalcemia (Mitnick, M., Isales, C., Paliwal, I. e Insogna, K. (1992). Parathyroid hormone-related protein stimulates prostaglandin E2 release from human osteoblast-like cells: modulating effect of peptide length. J. Bone Miner Res., 7, 887-896).

[0006] Os níveis de cálcio no sangue têm sido relatados como sendo um preditor independente da qualidade de vida nos pacientes de múltiplos mielomas. Além disso, uma correlação entre as contagens dos níveis de cálcio e do funcionamento físico destes pacientes foi relatada. Além da fadiga, outra qualidade dos parâmetros de vida tem sido relatada como sendo correlacionada aos níveis de cálcio. Um relacionamento significativo entre o cálcio e a perda de apetite no diagnóstico foi relatado. Além disso, o cálcio sérico foi relacionado às náuseas e aos vômitos. Foi mencionado como um preditor da dor, e uma relação com a função cognitiva foi sugerida.

[0007] O cálcio sérico é um preditor independente da qualidade de vida no mieloma múltiplo (Eur. J. Haematol., 78, 29-34. Epub 13 de outubro de 2006). O nível de cálcio no sangue é um preditor independente da qualidade de vida no mieloma múltiplo. Neste estudo, 32 % dos 686 pacientes eram hipercalcêmicos. Além disso, foi relatado que havia um componente linear na correlação do cálcio com as contagens da qualidade de vida, fadiga e funcionamento físico. Estas averiguações indicam que também as elevações moderadas dos níveis de cálcio dentro de níveis que sejam aceitos como variações normais, podem contribuir para a fadiga relacionada ao câncer e reduções no desempenho físico relacionadas ao câncer.

[0008] Foi observado que, mesmo dentro das faixas normais de cálcio, o cálcio sérico foi associado com a resistência à insulina e que pequenas elevações dentro da faixa normal do nível de cálcio podem contribuir para o desenvolvimento do diabete. A resistência à insulina é um problema principal nas diferentes espécies de doenças crônicas como COPD, HIV, Alzheimer, câncer, insuficiência renal, insuficiência cardíaca, e um estado de doença caracterizado por um elevado nível de plasma e/ou de soro das citocinas pró-inflamatórias.

[0009] Além disso, o tratamento de pacientes que sofram de um distúrbio diferente da hipercalcemia, por meio de medicamentos, pode causar ou piorar a fadiga, a disfunção física ou disfunção mental. Por exemplo, as antraciclinas são amplamente usadas para tratar de tumores sólidos e malignidades hematológicas. Os pacientes que sofram deste tipo de câncer se acham também em risco de desenvolver hipercalcemia (Higdon, M. L. & Higdon, J. A. (2006). Tratment of oncologic emergencies. Am Fam Physician., 74, 1873-1880). Efeitos diretos da doxorrubicina de antraciclina sobre a homeostasia do cálcio no músculo esquelético pode contribuir para a fadiga induzida pela quimioterapia (van Norren, K. et al. (2009), “Direct effects of doxorubicin on skeletal muscle contribute to fatigue” BR J Cancer, 100, 311-314. Portanto, o grupo de pacientes sofrendo de tumores sólidos e malignidades hematológicas e tratados com antraciclinas ou outra forma de quimioterapia, pode mesmo ser mais suscetível à exaustão prolongada como um resultado da função muscular prejudicada por causa dos elevados níveis de cálcio. A irradiação pode também aumentar ou iniciar a decomposição óssea.

[00010] A WO 01/60355 diz respeito do uso de compostos que são um ativador ou um ligando aos receptores ativados pelo proliferador do peroxissomo para o tratamento ou profilaxia da doença óssea, por exemplo, um câncer que resulte na hipercalcemia. Entre referidos compostos vários aminoácidos insaturados são mencionados, os quais aparentemente podem contribuir para a atividade anabólica óssea. No entanto, nenhum resultado experimental é mostrado especificamente direto ao tratamento dos pacientes sofrendo de hipercalcemia. Em particular, nenhum efeito dos aminoácidos insaturados sobre os níveis de cálcio do plasma é mostrado ou sugerido.

[00011] Os inventores observaram que o uso do aminoácido insaturado (em um óleo vegetal, um óleo de peixe ou uma mistura destes) isolado pode ser insuficiente para ter um efeito significativo sobre os níveis de cálcio do plasma em camundongos portadores de tumores; ver os exemplos abaixo. Além disso, nenhum efeito significativo do ácido graxo insaturado (em um óleo vegetal, um óleo de peixe ou uma mistura destes) sozinho sobre uma redução do catabolismo ósseo (resultando em uma densidade óssea aumentada) foi observado nos camundongos.

[00012] É um objetivo da invenção prover um novo meio para tratar da hipercalcemia; em particular um meio que possibilite a redução do nível de cálcio do plasma em um paciente que esteja sofrendo de hipercalcemia, ou a manutenção do nível de plasma do sangue em um nível normal, em um paciente que esteja em risco de desenvolver hipercalcemia e/ou que deva possibilitar que se evite ou reduza a perda de densidade óssea associada com a hipercalcemia e/ou que alivie um ou mais outros sintomas associados com a hipercalcemia, por exemplo a fadiga, a função muscular reduzida.

[00013] Um ou outros objetivos mais subjacentes à presente descrição serão evidentes da descrição abaixo.

[00014] Foi observado agora que uma combinação de um ácido graxo insaturado específico com um outro componente específico é útil para tratar profilaticamente ou terapeuticamente da hipercalcemia.

[00015] Consequentemente, a presente invenção diz respeito a uma combinação de uma fonte de leucina e pelo menos um ácido graxo poli- insaturado w-3, para o tratamento profilático ou terapêutico da hipercalcemia.

[00016] Além disso, a invenção diz respeito a uma combinação de uma fonte de leucina e pelo menos um ácido graxo poli-insaturado w-3, para reduzir uma perda na densidade mineral óssea ou evitar uma redução na densidade mineral óssea em um paciente.

[00017] Além disso, a invenção diz respeito a uma combinação de uma fonte de leucina e pelo menos um ácido graxo poli-insaturado w-3, para regulagem in vivo da homeostasia cálcica do plasma sanguíneo.

[00018] Além disso, a invenção diz respeito a uma combinação de uma fonte de leucina e pelo menos uma fonte de ácido graxo poli-insaturado w-3 para melhorar o apetite e/ou para aumentar a ingestão total voluntária de alimentos por dia e/ou para reduzir náuseas e/ou para reduzir os estímulos aos vômitos. A perda do apetite, as náuseas e os estímulos aos vômitos são sintomas que podem estar associados com os níveis de cálcio anormais do plasma sanguíneo.

[00019] Ademais, a invenção diz respeito a uma composição nutritiva, a uma composição farmacêutica ou a uma composição nutracêutica compreendendo uma combinação de leucina e pelo menos um ácido graxo poli-insaturado w-3 para tratamento profilático ou terapêutico da hipercalcemia, para reduzir uma perda na densidade mineral óssea ou impedir uma redução na densidade mineral óssea em um paciente, para regulagem in vivo da homeostasia cálcica do plasma sanguíneo, para melhorar o apetite, para reduzir náusea ou reduzir os estímulos aos vômitos.

[00020] Em uma forma de realização específica, a combinação ou composição da invenção é para tratamento profilático ou terapêutico da excessiva liberação de cálcio do osso e/ou do músculo esquelético; e/ou do acúmulo excessivo de cálcio devido à insuficiência renal ou ao hiperparatireoidismo. Este acúmulo ou liberação excessiva pode estar associada com fadiga, cansaço, perda de iniciativa, perda da função muscular, arritmia cardíaca, osteopenia, osteoporoses, doenças dos ossos, náuseas, vômitos ou perda do apetite, e pode resultar em poliúria, oligúria e dano dos rins.

[00021] Foi observado que uma combinação de uma fonte de leucina e um ácido graxo poli-insaturado w tem um efeito benéfico sobre a densidade mineral óssea e/ou sobre níveis de cálcio no plasma sanguíneo em pacientes que estejam sofrendo de hipercalcemia. Observa-se que em um tratamento com uma combinação de uma fonte de leucina e uma fonte de ácido graxo poli-insaturado w-3 de acordo com a invenção, o nível de cálcio no plasma sanguíneo não tem de levar a uma redução até um nível de cálcio normal, em todas as circunstâncias. Por exemplo, o nível de cálcio pode ser levado ou mantido em um nível normal ou nível levemente elevado (até cerca de 2,8 mM em seres humanos), por meio do que a ocorrência de uma emergência médica devida a hipercalcemia severa (nível de cálcio no plasma sanguíneo excedendo a 3,75 mM), que pode resultar em coma ou parada cardíaca, pode ser evitada.

[00022] Além disso, também no caso em que, durante ou após o tratamento, o nível de cálcio não seja completamente normalizado pelo tratamento com uma combinação ou composição de acordo com a invenção, o paciente pode beneficiar-se de um ou mais efeitos vantajosos, tais como a função muscular melhorada (por exemplo, força máxima mais elevada), menos fadiga, atividade física aumentada, caquexia reduzida, e/ou tratar de um ou mais dos sintomas como náusea, vômito, constipação, declínio mental, insuficiência renal, cefaléia, sensório alterado, perda do apetite.

[00023] LEGENDA DAS FIGURAS:

[00024] A Figura 1 mostra o efeito da leucina, do ácido graxo poli- insaturado w-3 (do óleo de peixe) ou a combinação destes, sobre a densidade mineral óssea e os níveis de cálcio do plasma. C = controle, TB = dieta de controle de recepção dos camundongos transportando o tumor, leu = leucina, fo = óleo de peixe.

[00025] A Figura 2 mostra o efeito da combinação específica total da leucina (parte ligada na proteína, parte na forma livre), ácido graxo poli- insaturado w-3 (de óleo de peixe) e oligossacarídeos, sobre os níveis de cálcio do plasma. CON = camundongos recebendo dieta de controle B, TB-CON = dieta B de controle do recebimento de camundongos transportando o tumor, TB-SNC = camundongos transportando o tumor recebendo a combinação nutritiva específica.

[00026] A Figura 3 mostra correlações dos parâmetros da função muscular com os níveis de cálcio. Os rótulos de dados representam um fator R da correlação de Pearson com p < 0,05. Um ponto de dados representado como um rótulo aberto (velocidade de relaxamento/mg, 83 Hz) tinha um vapor p de 0,057. Contr2*relaxamento/mg = a raiz quadrada do tempo de contração corrigido para a massa muscular vezes a velocidade de relaxamento máxima corrigida para a massa muscular.

[00027] A Figura 4 apresenta exemplos representativos das curvas de força individuais (a curva dos animais com dados de força máxima melhor se ajustando à curva da média). CON = camundongos recebendo a dieta B de controle, TB-CON = camundongos transportando o tumor recebendo a dieta de controle B, TB-SNC = camundongos transportando o tumor recebendo a combinação nutritiva específica.

[00028] A Figura 5 mostra a medição do estímulo repetitivo durante a fadiga, um exercício imitando o modelo. Os dados apresentados são: perda cumulativa por 10 repetições na força muscular máxima corrigida dividida pela força máxima corrigida da massa muscular na repetição 1.

[00029] A Figura 6 mostra a distribuição da perda relativa em força máxima durante o estímulo repetitivo, um modelo imitando o exercício Os dados apresentados são: força muscular máxima corrigida na repetição do tempo x - força máxima na repetição 1. CON = camundongos recebendo a dieta de controle B, TB-CON = camundongos transportando tumor recebendo a dieta de controle B, TB-SNC = transportando tumor.

[00030] A Figura 7 mostra as correlações dos parâmetros da função muscular durante o exercício com níveis de cálcio. Os rótulos de dados representam um fator R de correlação de Pearson com p < 0,05. Dois pontos de dados representados como rótulos abertos (velocidade de relaxamento/mg e ftr ambos em 83 Hz) tiveram um valor de p de 0,077 e 0,074, respectivamente.

[00031] A Figura 8 mostra a atividade diária por camundongo quando comparada com a atividade por camundongo no dia 2. CON = camundongo recebendo a dieta de controle B, TB-CON = camundongo transportando tumor recebendo a dieta de controle B, TB-SNC = camundongo transportando tumor recebendo a combinação nutritiva específica.

[00032] O termo “ou”, como aqui usado, significa “e/ou”, a menos que de outra forma especificado.

[00033] O termo “um” ou “uma”, como aqui usado, significa “pelo menos um/uma”, a menos que de outra forma especificado.

[00034] Quando da referência a um “nome” (por exemplo, um composto, um aditivo etc.) no singular, o plural é entendido estar incluído, a menos que de outra forma especificado.

[00035] Quando da referência a “uma combinação de uma fonte de leucina e uma fonte de ácido graxo poli-insaturado w-3” para um fim específico, é denotado que tanto a leucina (fornecida por essa fonte de leucina) quanto o ácido graxo poli-insaturado w-3 (fornecido por essa fonte de ácido graxo poli-insaturado w-3) se pretende sejam usados para essa finalidade na combinação. A fonte de leucina e a fonte de ácido graxo poli- insaturado w-3 podem ser administradas juntas em uma única formulação (tal como um alimento, uma composição nutracêutica ou uma composição farmacêutica), administradas simultaneamente em formulações separadas ou subsequentemente em formulações separadas. Se administradas subsequentemente, as formulações são usualmente administradas uma logo após a outra, isto é, no caso de administração oral/enteral a última formulação administrada é então usualmente administrada antes que a formulação administrada mais cedo tenha sido absorvida pelo corpo.

[00036] Em princípio, uma combinação ou composição de acordo com a invenção pode ser usada para tratamento de qualquer vertebrado, em particular qualquer mamífero, mais em particular qualquer ser humano. O paciente pode ser macho ou fêmea. O paciente pode ser uma criança, um adolescente ou um adulto. A hipercalcemia pode ser diagnosticada de uma maneira por si conhecida, pela determinação do nível de cálcio do plasma sanguíneo. Como indicado acima, um macho humano é considerado como sendo hipercalcêmico nos níveis de cálcio do plasma acima de 2,8 mmol/l, uma fêmea humana é considerada como sendo hipercalcêmica nos níveis de cálcio do plasma acima de 2,5 mmol/l.

[00037] Em uma forma de realização específica, a combinação ou composição é para o tratamento de uma pessoa idosa. A este respeito, é sugerido que, no contexto desta aplicação, uma pessoa idosa seja um ser humano da idade de 50 ou mais, em particular da idade de 55 ou mais, mais em particular da idade de 60, mais em particular da idade de 65 ou mais. Esta bem ampla definição leva em conta o fato de que a idade média varia entre as diferentes populações, em diferentes continentes, etc. Os países mais desenvolvidos do mundo têm aceito a idade cronológica de 65 anos como uma definição da pessoa ‘idosa’ ou mais velha (associada com a idade na qual se pode começar a receber os benefícios de pensão), mas, a vista dos conceitos muito ocidentalizados, isto não se adapta bem, por exemplo, à situação na África. No momento, não existe nenhum critério numérico padrão nas Nações Unidas (UN), mas as UN concordam com que a interrupção seja de mais de 60 anos para referir-se à população mais idosa no mundo ocidental. As definições africanas mais tradicionais de um idoso ou uma pessoa ‘idosa’ se correlacionam com as idades cronológicas de 50 a 65 anos, dependendo do ambiente, da região e do país.

[00038] Em princípio, qualquer forma de hipercalcemia pode ser tratada de acordo com a invenção, em particular a hipercalcemia pelo menos parcialmente causada pela excessiva liberação de cálcio esquelético e/ou pela excreção de cálcio renal reduzida.

[00039] O paciente a ser tratado com uma combinação da composição de acordo com a invenção pode sofrer de hipercalcemia (em cujo caso o tratamento pode ser referido como ‘terapêutico’), ou o paciente pode ser tratado de modo a evitar o desenvolvimento de um estado hipercalcêmico ou pelo menos reduzir um ou mais sintomas resultantes da hipercalcemia, devendo a hipercalcemia desenvolver-se após tudo. Um tratamento profilático pode, em particular, ser útil para qualquer paciente que esteja correndo um sério risco de desenvolver a hipercalcemia. Um sério risco existe para os pacientes que estejam sofrendo de um distúrbio ou condição, em que a hipercalcemia seja (estatisticamente) conhecida para desenvolvimento em casos consideráveis.

[00040] Em particular, o paciente a ser tratado profilaticamente ou terapeuticamente pode ser selecionado do grupo de pacientes que sofram de um câncer. Considera-se, em particular, que pacientes também tratados com quimioterapia ou radioterapia, por exemplo com uma antraciclina, podem também beneficiar-se de um tratamento com uma combinação da composição da invenção.

[00041] O câncer pode, em particular, ser selecionado do grupo de neoplasmas. Mais em particular, o câncer pode ser selecionado dentre câncer pulmonar, câncer de mama, câncer renal, câncer de mieloma múltiplo, e câncer da cabeça e do pescoço. Além disso, em particular, os pacientes que sofram de uma malignidade hematológica (mieloma múltiplo, linfoma, leucemia), distúrbios relacionados à vitamina D que possam resultar em hipercalcemia (hipervitaminose D), distúrbios/condições relacionados aos altos índices de modificação óssea (hipertireoidismo, imobilização prolongada, doença de Paget óssea), insuficiência renal, intoxicação com substâncias específicas que possam resultar em hipercalcemia (por exemplo, intoxicação de alumínio, intoxicação de vitamina A) podem beneficiar-se de um tratamento profilático ou terapêutico de acordo com a invenção.

[00042] Em princípio qualquer lipídeo ou mistura de lipídeos de graduação alimentar, contendo ácido graxo poli-insaturado w-3 livre ou derivado de ácido graxo (incluindo tri-, di- e monoglicerídeos e fosfolipídeos) pode servir como fonte de ácido graxo poli-insaturado w-3. Quando da referência neste relatório descritivo a ácidos graxos, isto intenta incluir os resíduos de ácido graxo correspondentes em seus derivados que forneçam o ácido graxo quando digeridos, tais como triglicerídeos, diglicerídeos, monoglicerídeos e fosfolipídeos dos referidos ácidos graxos.

[00043] O ácido graxo poli-insaturado w-3 para um tratamento de acordo com a invenção é usualmente selecionado do grupo de ácidos graxos poli-insaturados w-3 de cadeia longa. A expressão “cadeia longa” é aqui usada para ácidos graxos poli-insaturados w-3 que tenham pelo menos 18 átomos de carbono, em particular para ácidos graxos poli-insaturados w-3 C18-C26.

[00044] Ácidos graxos poli-insaturados w-3 preferidos, em particular, incluem o ácido eicosapentaenóico (EPA), o ácido docosaexaenóico (DHA), o ácido eicosatetraenóico (ETA) e o ácido docosapentaenóico (DPA). Destes, em particular bons resultados têm sido obtidos com uma mistura contendo EPA e DHA. Outros exemplos de ácido graxo poli-insaturado w-3, para uso de acordo com a invenção, incluem o ácido alfa-linolênico e o ácido estearidônico.

[00045] O conteúdo de ácido graxo poli-insaturado w-3, em particular o ácido graxo poli-insaturado w-3 de cadeia longa, em uma composição da invenção, preferivelmente tem pelo menos 15 g/kg, em particular pelo menos 20 g/kg, com base no peso total dos macronutrientes da composição. O conteúdo de ácido graxo poli-insaturado w-3, em particular o ácido graxo poli-insaturado w-3 de cadeia longa, é usualmente de 50 g/kg ou menos, em particular 40 g/kg ou menos, com base no peso total dos macronutrientes da composição. Quando referido neste relatório descritivo ao “peso total dos macronutrientes”, denota-se o conteúdo total da matéria protéica, lipídeos, carboidrato mais fibras dietéticas.

[00046] Uma composição de acordo com a invenção pode ainda compreender um ou mais outros ácidos graxos além do ácido graxo poli- insaturado w-3, os quais podem ser saturados ou insaturados.

[00047] Usualmente, a composição compreende 300 g/kg ou menos de ácidos graxos totais, em particular 200 g/kg ou menos, mais em particular 180 g/kg ou menos, com base no peso total dos macronutrientes da composição.

[00048] O conteúdo total dos ácidos graxos de uma composição de acordo com a invenção pode, em particular, ser de pelo menos 50 g/kg, com base no peso total dos macronutrientes da composição, mais em particular pelo menos 100 g/kg com base no peso total dos macronutrientes da composição.

[00049] O conteúdo total do ácido graxo poli-insaturado w-3, em particular o ácido graxo poli-insaturado w-3 de cadeia longa, usualmente é de pelo menos 12 % em peso, preferivelmente de pelo menos 15 % em peso, em particular de pelo menos 20 % em peso, mais em particular de pelo menos 24 % em peso, com base no total de ácidos graxos. Na prática, o conteúdo de ácido graxo poli-insaturado w-3, em particular o ácido graxo poli-insaturado w-3 de cadeia longa, é usualmente de 75 % em peso ou menos, em particular de 50 % em peso ou menos, mais em particular de 40 % em peso ou menos, com base nos ácidos graxos totais.

[00050] Em particular, bons resultados têm sido alcançados com uma combinação de leucina e uma mistura de PUFA’s, mistura esta que compreende DHA e EPA, o DHA e EPA preferivelmente provendo pelo menos 5 % em peso, em particular pelo menos 14 % em peso dos ácidos graxos totais. A relação de peso para peso do DHA para EPA, pode em particular situar-se na faixa de 1:9 a 9:1, mais particularmente na faixa de 2:8 a 8:2, ou na faixa de 3:7 a 1:1.

[00051] A relação de peso para peso do DPA para EPA, pode em particular situar-se na faixa de 1:20 a 1:4, mais em particular na faixa de 1:15 a 1:8.

[00052] Como fontes para o(s) ácido(s) graxo(s), vários óleos acham-se comercialmente disponíveis, por exemplo, vários óleos de cereais e outras plantas. Os óleos marinhos tais como o óleo de peixe, o óleo de plâncton ou o óleo de algas, são particularmente adequados como uma fonte para os ácidos graxos poli-insaturados w-3. Em uma forma de realização específica pelo menos 70 % em peso do conteúdo de ácidos graxos poli-insaturados w-3 se originam do óleo marinho, em particular do óleo de peixe ou do óleo de algas.

[00053] Em termos de uma dosagem diária (para um paciente adulto, por exemplo pesando 70 kg, em particular um ser humano adulto) a combinação ou composição é usualmente administrada para prover uma dosagem diária de ácido graxo poli-insaturado w-3, em particular uma dosagem de ácido graxo poli- insaturado w-3 de cadeia longa, de pelo menos 3,5 g/dia. O limite superior pode ser determinado com base em uma dosagem diária máxima recomendada, de acordo com princípios dietéticos gerais. Em particular, referida dosagem pode ser de 25 g/dia ou menos, ou de 20 g/dia ou menos.

[00054] Em particular para uma combinação ou composição que seja para administração oral, por exemplo, uma composição nutritiva líquida, tal como uma alimentação em pequenos goles (isto é, um produto alimentício líquido que possa ser ingerido bebendo-se), referida dosagem diária de ácido graxo poli-insaturado w-3 sendo preferivelmente na faixa de 3,5 a 6 g/dia.

[00055] Em particular, para uma combinação ou composição que seja para tubo de alimentação, a referida dosagem diária de ácido graxo poli- insaturado w-3 situa-se preferivelmente na faixa de 10 a 20 g/dia.

[00056] A leucina geralmente faz parte de um grupo de moléculas que podem ser aqui referidas como ‘matéria proteinácea’. A matéria proteinácea é formada por componentes formados de aminoácidos. O termo aminoácidos, como aqui usado, inclui resíduos de aminoácidos (por exemplo, em peptídeos). Em particular a expressão ‘matéria proteinácea’ inclui aminoácidos livres, sais de aminoácidos, ésteres de aminoácidos, os resíduos de aminoácidos ligados a moléculas conjugadas e peptídeos, incluindo proteínas. Da mesma forma, quando referência é feita a um aminoácido específico, por exemplo, leucina, isto inclui o aminoácido específico (resíduos) presente como um sal, em uma forma ligada, bem como o aminoácido específico livre.

[00057] Assim, como aqui usado, a expressão “fonte de leucina” é usada para qualquer composto que forneça leucina quando apropriadamente administrado ao corpo, em particular que forneça leucina, quando da digestão da fonte. A fonte de leucina pode, em particular, compreender pelo menos um dos seguintes compostos: leucina na forma de um ácido livre (incluindo seu estado zwitteriônico); sais de leucina; peptídeos compreendendo um ou mais resíduos de leucina; proteínas compreendendo um ou mais resíduos de leucina; e conjugados de leucina com um composto conjugado outro que não um aminoácido, uma proteína ou um peptídeo, conjugado este que seja capaz de ser dividido em aminoácido livre (ou seu sal), preferivelmente no intestino ou no estômago ou após a absorção nos enterócitos ou no fígado. Em princípio, a leucina pode estar presente como um isômero D ou um isômero L; preferivelmente a leucina é leucina L. Daqui em diante, a menos que de outra forma especificado, quando referência seja feita à leucina, esta é a leucina em qualquer forma, isto é, incluindo não apenas o aminoácido livre (ácido/sal), mas também a leucina em qualquer forma ligada.

[00058] Com um peptídeo é denotada uma combinação de dois ou mais aminoácidos, conectada através de uma ou mais ligações peptídicas. Quando incorporados em um peptídeo, os aminoácidos são denominados resíduos de aminoácidos. Os peptídeos incluem oligopeptídeos e polipeptídeos, incluindo proteínas.

[00059] Com um polipeptídeo denota-se uma cadeia de peptídeos compreendendo 14 ou mais resíduos de aminoácidos. Com um oligopeptídeo denota-se uma cadeia de peptídeos compreendendo 2 a 13 resíduos de aminoácidos.

[00060] Aminoácidos quirais presentes em uma combinação ou composição da invenção podem ser na forma L ou na forma D, usualmente na forma L.

[00061] A matéria proteinácea pode compreender uma ou mais proteínas, a(s) qual(is), ou parte destas, podem ter sido modificadas, em particular por hidrólise (parcial), usualmente na extensão em que até 20 % da proteína seja hidrolisada em aminoácidos livres, preferivelmente na extensão em que até 10 % da proteína seja hidrolisada em aminoácidos livres. Uma vantagem da proteína hidrolisada (parcialmente) é um procedimento vantajoso de liberação do aminoácido quando enteralmente administrado.

[00062] O conteúdo de peptídeo (oligopeptídeo, polipeptídeo, proteína) com base na matéria proteinácea é usualmente de pelo menos 50 % em peso, pelo menos 60 % em peso, ou pelo menos 75. O percentual em peso do peptídeo, com base na matéria proteinácea, é usualmente de 99,5 % em peso ou menos, preferivelmente acima de 94 % em peso ou menos. Uma vantagem de uma composição em que o conteúdo de peptídeo seja elevado (> 50 % em peso), é que o sabor, ou outra propriedade organoléptica da composição, usualmente é mais bem apreciada quando consumida (oralmente). Além disso, a absorção dos aminoácidos pelo corpo pode ser mais gradual.

[00063] A matéria proteinácea preferivelmente compreende pelo menos uma proteína tendo pelo menos 9 g de leucina por 100 g de aminoácidos. A matéria proteinácea (que fornece leucina) de preferência compreende pelo menos uma proteína selecionada do grupo de proteínas do soro do leite, caseína, caseinato, quaisquer proteínas e proteínas do trigo, preferivelmente do grupo de proteínas do soro do leite e caseína.

[00064] Com as proteínas do soro do leite são denotadas proteínas globulares que podem ser isoladas do soro do leite. Em particular, as proteínas globulares do soro do leite podem ser selecionadas da beta-lactoglobulina, alfa-lactalbumina e albumina sérica, incluindo misturas destas. Exemplos de misturas que compreendem proteínas do soro do leite são isolados do soro do leite e concentrados do soro do leite.

[00065] Em uma forma de realização, a matéria proteinácea compreende proteína do soro do leite, em particular pelo menos 10 % em peso com base na matéria proteinácea, preferivelmente pelo menos 15 % em peso com base na matéria proteinácea. Usualmente, a fração de proteína do soro do leite é de 50 % em peso ou menos, com base na matéria proteinácea, em particular de 40 % em peso ou menos, com base na matéria proteinácea.

[00066] Em particular no caso de uma composição líquida, a concentração de proteína do soro do leite desnaturado preferivelmente não excede os 35 % em peso com base na matéria proteinácea. Isto é vantajoso em relação a evitar-se o risco de congelamento durante a armazenagem.

[00067] A presença de uma proteína de soro do leite pode oferecer várias vantagens. O soro de leite apresenta um comportamento vantajoso de liberação tanto em termos de índice de liberação dos aminoácidos quanto a tendência de tornar os aminoácidos disponíveis para absorção pelo corpo, essencialmente ao mesmo tempo.

[00068] Vantajosamente, parte da proteína do soro do leite é (parcialmente) hidrolisada, em particular até 50 % em peso da proteína de soro do leite podem ser (levemente) hidrolisados, em particular 10 a 50 % em peso.

[00069] Como a fonte para as proteínas do soro do leite, preferivelmente uma fração de soro do leite é escolhida contendo menos do que 20 % em peso de glicomacropeptídeo de caseína (GMP), mais preferível menos do que 10 % em peso.

[00070] O conteúdo de beta-lactoglobulina preferivelmente é maior do que 40 % em peso, mais preferível 46 a 80 % em peso. Isto é vantajoso porque a beta- lactoglobulina tem um conteúdo de leucina relativamente elevado.

[00071] Quando usada como proteína intacta, a caseína preferivelmente compreende uma elevada concentração de beta-caseína, em particular mais do que 36 g/100 g de caseína, mais em particular 38 a 70 g/100 g de caseína.

[00072] Em uma forma de realização toda ou parte da leucina se acha presente na forma de aminoácidos livres, um sal destes ou como um conjugado com uma molécula de conjugação outra que não uma proteína ou peptídeo, cujo conjugado é capaz de ser fragmentado no aminoácido livre (ou sal deste) e no composto conjugado sob a influência de um constituinte da bile e/ou uma excreção do pâncreas no duodeno e/ou no íleo. Preferivelmente, a quantidade de leucina em tal forma, em particular na forma de um sal ou na forma livre, é de pelo menos 1 % em peso, em particular de pelo menos 10 % em peso, mais particularmente de pelo menos 25 % em peso, com base na leucina total. Preferivelmente a quantidade de leucina em tal forma, em particular na forma de um sal ou na forma livre, é até 90 % em peso, em particular até 75 % em peso, mais particularmente até 60 % em peso.

[00073] Uma composição de acordo com a invenção usualmente compreende 15 g/kg de leucina ou mais, preferivelmente pelo menos 25 g/kg de leucina, em particular de 30 a 70 g/kg de leucina, mais em particular de 40 a 60 g/kg de leucina (incluindo a leucina ligada) com base no peso total dos macronutrientes da composição.

[00074] Em uma forma de realização específica, a composição compreende pelo menos 15 g/kg de leucina livre, com base no peso total da matéria proteinácea, gordura, carboidratos mais fibras dietéticas, da composição, em particular de 22 a 35 g/kg de leucina livre, mais em particular 30 a 35 g/kg de leucina livre.

[00075] Em termos de uma dosagem diária (para um paciente adulto, por exemplo, com o peso de 70 kg, em particular um ser humano adulto), a leucina deve usualmente ser administrada em uma dosagem de pelo menos 5 g/dia, preferivelmente pelo menos 7 g/dia. A dosagem pode, em particular, ser até 50 g/dia, mais particularmente até 35 g/dia.

[00076] Usualmente, a quantidade de leucina, como um percentual da matéria proteinácea total, é de pelo menos 12 % em peso. Vantajosamente, a quantidade de leucina como um percentual da matéria proteinácea total é de pelo menos 15 % em peso, em particular pelo menos 18 % em peso, mais em particular pelo menos 19 % em peso. Referida quantidade é usualmente de 30 % em peso ou menos, em particular de 25 % em peso ou menos.

[00077] A combinação ou composição podem ainda compreender um ou mais ingredientes adicionais, em particular um ou mais ingredientes selecionados do grupo de carboidratos digeríveis, carboidratos indigeríveis, e outras fibras dietéticas, elementos de traço, minerais, vitaminas, matérias proteináceas outras que não matéria proteinácea que forneça leucina (tal como um ou mais aminoácidos livres outros que não a leucina), outros lipídeos que não o ácido graxo (poli)insaturado, para tratamento de acordo com a invenção, e outros aditivos típicos para composições nutricionais, composições nutracêuticas, ou composições farmacêuticas (tais como agentes antioxidantes, aromatizantes, de estabilização, ou - no caso de um produto farmacêutico: um portador farmaceuticamente aceitável). Exemplos de ingredientes adicionais são, por exemplo, descritos na WO 2003/041701 (N. V. Nutricia) e na WO 2007/073178 (N. V. Nutricia). Exemplos de ingredientes adicionais dos quais um ou mais podem estar presentes em uma composição para uso de acordo com a invenção, em particular para uma composição nutricional, em particular incluem o sódio, potássio, cloreto, fluoreto, iodeto, fósforo, magnésio, vitamina A, vitamina D3, vitamina E, vitamina K, vitamina B1, vitamina B2, vitamina B3, vitamina B5, vitamina B6, ácido fólico, vitamina B12, biotina, vitamina C, ácido lipóico, zinco, ferro, cobre, manganês, molibdênio, selênio e cromo. Tais componentes podem estar presentes em uma concentração até a dose diária recomendada por dia de atendimento.

[00078] Em particular, bons resultados têm sido obtidos com uma composição adicionalmente compreendendo carboidrato indigerível. Existem indicações de que a presença de carboidrato indigerível em combinação com ácido graxo poli-insaturado w-3, em particular DHA e/ou EPA, e leucina, pode ter um efeito vantajoso adicional sobre o nível de cálcio no plasma, através de uma redução dos níveis de citocina inflamatória sistêmica. Além disso, como ilustrado pelos exemplos, a presença de carboidrato indigerível, em particular oligossacarídeo indigerível, pode ser benéfica em relação à função imune. Em particular, um ou mais oligossacarídeos indigeríveis podem estar presentes, tal como um ou mais oligossacarídeos selecionados do grupo de galacto- oligossacarídeo (GOS) e fruto-oligossacarídeos (FOS). Com um oligossacarídeo denota-se uma cadeia compreendendo 2 a 25 resíduos de sacarídeo. Se presente, o conteúdo de carboidrato indigerível pode, em particular, ser de cerca de 20 a 70 g/kg, mais em particular de 40 a 60 g/kg, com base do peso dos macronutrientes. Uma dosagem diária (para um adulto, por exemplo, de cerca de 70 kg) pode, em particular, ser selecionada na faixa de 2,5 a 15 g/dia.

[00079] Considera-se que a intervenção dietética com uma dieta debaixo índice glicêmico seja vantajosa em relação ao tratamento da hipercalcemia, reduzindo a perda de mineral ósseo ou evitando uma redução na densidade mineral óssea em um paciente, ou a regulação in vivo da homeostasia cálcica do plasma sanguíneo. Sem que se fique ligados pela teoria, a invenção considera que uma dieta de baixo índice glicêmico pode afetar os níveis de cálcio do soro de uma maneira positiva porque a intervenção dietética com uma dieta de baixo índice glicêmico pode ter um efeito positivo sobre os níveis de cálcio do soro, cujo efeito pode estar associado à sensibilidade melhorada à insulina, como um resultado da intervenção com a dieta de baixo índice glicêmico.

[00080] Consequentemente, em uma forma de realização específica, a composição é uma composição nutricional com um baixo índice glicêmico. Em particular, uma composição com um índice glicêmico abaixo de 55, preferivelmente abaixo de 45. Na prática, o índice glicêmico será sempre acima de zero, e usualmente será de pelo menos 1, em particular de pelo menos 5. Detalhes sobre como determinar o índice glicêmico de uma composição são fornecidos nos Exemplos, mais abaixo.

[00081] A pessoa versada será capaz de formular uma composição com um índice glicêmico relativamente baixo, com base na informação aqui apresentada e no conhecimento geral comum. Em particular, pelo aumento do percentual do carboidrato que é digerido mais lentamente do que a glicose, ou pelo aumento dos carboidratos que fornecem menos componentes de glicose em peso do que glicose, o índice glicêmico de uma composição (sob as mesmas condições) é reduzido. Exemplos preferidos de carboidratos que são digeridos mais lentamente do que a glicose são a isomaltose, frutose, galactose, lactose, trealose. Em seguida àquela adição de gordura e fibra pode haver o esvaziamento gástrico lento. Além disso, as fibras podem formar uma barreira física no intestino, reduzindo o índice de absorção. Os aminoácidos da proteína pode aumentar a liberação da insulina (especialmente leucina), e por esse meio aumentar a absorção da glicose pelas células. Todos estes mecanismos podem contribuir para uma redução no índice glicêmico.

[00082] Em uma forma de realização específica, a composição é uma composição nutricional. Com uma composição nutricional denota-se uma composição que compreenda componentes de ocorrência natural, preferivelmente encontrados no suprimento alimentar, que podem ser vendidos através do balcão, como suplementos, alimentos funcionais ou ingredientes alimentícios, isto é, sem um uma prescrição médica ou veterinária. Uma composição nutricional pode também ser um alimento medicinal, destinado ao controle dietético de uma doença ou condição para mamíferos sob a supervisão de um médico ou veterinário.

[00083] Uma composição nutricional de acordo com a invenção pode ser na forma de um líquido, por exemplo uma bebida, na forma de um semilíquido, por exemplo um iogurte ou um manjar, na forma de um gel, por exemplo bolo de geléia, ou na forma de um sólido, por exemplo uma barra de confeito ou um sorvete.

[00084] Em uma forma de realização específica, a composição da invenção é uma alimentação em pequenos goles. Em uma forma de realização mais específica, a alimentação em pequenos goles compreende 1,5 a 2,5 g/100 ml de leucina total, e 0,8 a 2 g/100 ml de ácido graxo poli-insaturado w-3.

[00085] Em uma forma de realização específica, a composição da invenção é uma alimentação tubular. Em uma forma de realização mais específica, a alimentação tubular compreende 0,4 a 0,9 g/100 ml de leucina total e 0,4 a 1 g/100 ml de ácido graxo poli-insaturado w-3.

[00086] Em uma forma de realização, uma composição líquida é preparada de um concentrado, por exemplo de um líquido (por exemplo, com uma viscosidade de menos do que cerca de 80 mPa.s), um semi-líquido (por exemplo, com uma viscosidade de mais do que cerca de 80 mPa.s e menos do que cerca de 400 mPa.s), um gel ou um sólido. Para tal preparação, água pode ser usada para diluir o concentrado. Em particular, tal preparação ocorre logo antes da administração da composição, por exemplo, em uma forma imediata.

[00087] Uma forma de realização específica da invenção é uma composição nutritiva que contenha matéria proteinácea, um líquido, e um carboidrato digerível, em que:a) o conteúdo de matéria proteinácea provê 18 a 60 % en, preferivelmente 20 a 40 % en, mais preferível 22 a 32 % en da composição total;b) o conteúdo lipídico provê 10 a 50 % en, preferivelmente 20 a 40 % en, mais preferível 25 a 35 % en da composição total;c) o conteúdo de carboidrato digerível provê 20 a 70 % en, preferivelmente 30 a 60 % en, mais preferível 38 a 48 % en da composição total.

[00088] O valor energético de um composto (% en) baseia-se na energia fornecida pela parte digerível (em particular em um ser humano) do composto. Em particular, o valor energético baseia-se na contribuição de matéria proteinácea, lipídeos e carboidratos digeríveis, com o uso dos seguintes fatores de cálculo: 4 kcal/g para carboidratos digeríveis e matéria proteinácea, e 9 kcal/g para lipídeos.

[00089] O valor energético total de uma composição líquida de acordo com a invenção pode ser escolhido dentro de amplos limites, por exemplo de 0,2 a 4 kcal/ml. Usualmente, o valor energético total é de pelo menos 0,3 kcal/ml, em particular de pelo menos 0,8 kcal/ml, mais em particular de pelo menos 1,2 kcal/ml. Usualmente, o valor energético total é de 3,0 kcal/ml ou menos, em particular 2,6 kcal/ml ou menos, mais em particular 2,4 kcal/ml ou menos.

[00090] Em uma forma de realização específica, uma composição líquida de acordo com a invenção tem um valor energético na faixa de 0,3 a 3,0 kcal/ml, preferivelmente de 0,8 a 2,6 kcal/ml, mais preferível de 1,2 a 2,4 kcal/ml.

[00091] Em uma outra forma de realização específica, a composição líquida de acordo com a invenção tem um valor energético na faixa de 0,2 a 1,0 kcal/ml, preferivelmente de 0,4 a 0,9 kcal/ml. Tal composição pode ser, em particular, para uso por pessoas mais idosas.

[00092] Fatores que desempenham um papel em determinar um valor energético desejável incluem a facilidade de se obter um % en mais elevado de matéria proteinácea por um lado, e um esvaziamento rápido do estômago (aumentando a resposta anabólica) por outro lado.

[00093] A combinação ou composição da invenção podem ser administradas sob a supervisão de um especialista médico, ou podem ser auto- adminhistradas.

[00094] A composição ou combinação podem ser administradas enteralmente (por alimentação tubular) ou oralmente.

[00095] A invenção será agora ilustrada com base nos seguintes exemplos.ExemplosExemplo 1: De Formulação De Alimentação Aos GolesTabela 1Composição nutricional de alimentação aos goles

Exemplo 2 Exemplo De Formulação De Alimentação Tubária Tabela 2: Composição nutricional de alimentação

Exemplo 3, Resultados Do Teste

Materiais E MétodosAnimais

[00096] Camundongos CD2F1 machos com 6 a 7 semanas de idade (BALB/c x DBA/2, Harlan / Charles River, Países Baixos) foram individualmente alojados em um ambiente controlado quanto ao clima (ciclo de escuro-luz de 12:12 com uma temperatura ambiente constante de 21 ± 1 °C. Após a aclimatação por uma semana, os camundongos foram divididos em grupos combinados no peso: (1) controle recebendo comida de controle, (2) carregando tumor recebendo comida de controle, e (3) carregando tumor recebendo dietas experimentais. Os dados mostrados são derivados da combinação de vários desenvolvimentos experimentais com características animais e procedimentos experimentais idênticos (a menos que de outra forma estabelecido) e diferem apenas nas dietas experimentais usadas. Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Animal Ethical Committee (consultar DEC, Bilthoven, Países Baixos) e concordaram com os princípios dos bons cuidados de animais de laboratório.Dietas experimentais (experiências das categorias A e B)

[00097] As experiências são divididas em: (A) experiências designadas para testar o efeito de componentes isolados ou combinações de componentes nutricionais [adição de leucina livre (leu), ácido graxo poli-insaturado w-3 [de óleo de peixe (fo)], ou a combinação destes, adicionados à dieta fundamental [AIN93-M com alto teor de proteína (151 g de caseína/kg)] e supridos como pelotas; (B) experiências designadas para testar o efeito de uma combinação nutricional complexa que se assemelha à composição de uma atualização de FortiCare (Nutrícia Advanced Medical Nutrition, NL) e compreende todos os componentes individuais testados em (A), e diferindo na composição macronutriente de AIN-93 para obter uma dieta mais humanizada do tipo Ocidental, suprido como uma pasta por razões técnicas do produto.

[00098] A dieta de controle com alto teor de proteína AIN93-M nas experiências nas quais o efeito de ingredientes únicos foi testado, continha por kg de alimento: 151 g de proteína (100 % de caseína), 702 g de carboidratos e 40 g de gordura (100 % de óleo de soja) (Research Diet Services, Wijk bij Duurstede, Países Baixos. As dietas experimentais nesta categoria foram ajustadas para dietas de controle pela substituição parcial dos carboidratos e/ou óleo de soja por leucina (151 g de caseína/kg e 16 g de leucina/kg de alimento; leu), óleo de peixe (151 g de caseína/kg e 22 g de óleo de peixe de alimento; fo), ou leucina e óleo de peixe (151 g de caseína/kg, 16 g de leucina/kg e 22 g de óleo de peixe/kg de alimento; leu+fo). Os 22 g de óleo de peixe continham 6,9 g de EPA e 3,1 g de DHA, resultando em uma relação de EPA:DHA de 2,2:1.

[00099] Na experiência em que a combinação total de alta proteína, leucina, ácido graxo poli-insaturado w-3 (do óleo de peixe) e oligossacarídeos foi testada, a dieta de controle continha por kg de alimentação 126 g de proteína (caseína), 53 g de gordura (óleo de milho), e 699 g de carboidratos. A dieta experimental iso-calórica (ainda referida como Composição Nutricional Específica, SNC) continha, poro kg de alimento: 210 g de proteína (189 g de proteína intacta da qual 68 % de caseína e 32 % de soro do leite e 21 g de leucina livre), 53 g de gordura (20,1 g de óleo de milho, 10,2 g de óleo de canola, e 22,2 g de óleo de peixe), 561 g de carboidratos, 18 g de galacto-oligossacarídeos e 2 g de fruto-oligossacarídeos. Modelo tumoral

[000100] Células de adenocarcinoma C-26 de murinos foram cultivadas in vitro com RPMI 1640 suplementado com 5 % de soro fetal de bezerro e 1 % de penicilina-estreptomicina (31). As células tumorais foram tripsinizadas em um estado subconfluente e, após lavagem, colocadas em suspensão em solução salina equilibrada de Hanks (HBSS) em uma concentração de 2,5 x 106 células ml-1. Sob anestesia geral (isoflurano/N2O/O2), células tumorais (5 x 105 células em 0,2 ml) foram inoculadas via subcutânea no flanco inguinal direito dos camundongos. Os animais de controle (C) receberam uma injeção de simulação com 0,2 ml de HBSS.Protocolo experimental

[000101] Em seguida à inoculação das células tumorais ou HBSS, a massa corporal, a ingestão de alimentos e o tamanho tumoral (comprimento e largura) foram medidos por três vezes por semana. Apenas na experiência de categoria B, a atividade diária no viveiro foi monitorada. Em todas as experiências, os animais foram anestesiados e pesados no 20o dia após a inoculação tumoral. Os músculos esqueléticos [por exemplo, m. Tibialis Anterior (mTA), m. Gastrocnêmio (mG), m. Extensor dos Dedos (mEDL) e Músculo Sóleo (MS)], o tumor, o baço, os rins, o fígado, a gordura epididimal, o timo, os pulmões e o coração foram dissecados e pesados. A massa da carcaça foi calculada subtraindo-se a massa tumoral da massa corporal. Além disso, a função muscular foi testada ex vivo na experiência da categoria B.Avaliação da atividade diária

[000102] A atividade física foi monitorada continuamente (24 horas) durante o período de estudo de 20 dias, com início no dia 2, usando-se sensores de atividade (detector dual de tecnologia DUO 240, Visonic; adaptado por R. Visser, NIN, Amsterdam, Países Baixos) que traduziram mudanças individuais no padrão infravermelho causadas pelos movimentos dos animais nas contagens da atividade arbitrárias. Os sensores foram montados acima dos viveiros e foram conectados através de portas de entrada e conexão a um computador equipado com o software MED-PC IV para coleta de dados (MED Associates, St. Albans, VT). A atividade foi expressa em contagens por hora [tanto para o período total de 24 horas, o período escuro (período ativo, os camundongos sendo animais noturnos), quanto para o período de luz (período inativo)]. A atividade foi calculada para cada camundongo separadamente, e foi expressa em relação à sua própria atividade total no 2o dia, para corrigir quanto às diferenças na sensibilidade individual dos sensores. As atividades dos dois dias subsequentes foram obtidas em média, para abafar a variabilidade do dia a dia. De modo a determinar mudanças completamente no padrão de atividade da experiência, as atividades horárias e de escuro-luz foram expressas como percentual da atividade diária total e traduzidos em um actograma.Avaliação da funcionalidade muscular

[000103] As características contráteis do músculo EDL direito foram avaliadas ex vivo, como descrito anteriormente [van Norren, K., Kegler, D., Argiles, J. M., Luiking, Y., Gorselink, M., Laviano, A., Arts, K., Faber, J., Jansen, H., van der Beek, E. M. e van Helvoort, A. (2009); Dietary supplementation with a specific combination of high protein, leucine, and fish oil improves muscle function and daily activity in tumour-bearing cachectic mice. Br J Cancer., 100, 713-722). Resumidamente, os músculos foram deixados se estabilizarem no banho do órgão por 30 minutos, após o que estimulações ótimas corrente e intensa foram determinadas. Depois as características de frequência de força (10 a 167 Hz, 250 ms) foram determinadas, e após reabastecer o tampão do órgão e um período de repouso de 5 minutos, os músculos foram submetidos a um protocolo de exercícios (83 Hz, 250 ms cada 1000 ms). Este protocolo representa uma carga moderada, comparável com a atividade diária normal. Na frequência usada, o tétano completo do músculo é alcançado. Os sinais de força isométrica da curva de força-frequência foram analisados quanto à força máxima e total e quanto à contração máxima e à velocidade de relaxação.Estatísticas

[000104] Todos os dados são expressos como média ± SEM. As análises estatísticas foram realizadas com o uso de SPSS 15,0 (SPSS Benelux, Gorinchem, Países Baixos). Na experiência A, diferentes grupos de animais foram usados, portanto, para todos os parâmetros, foi definido que a combinação dos dados seria permitida se nenhuma interação entre os grupos e as experiências estivesse presentes. Os dados de composição corporal, as massas dos tumores e dos órgãos no 20o dia foram comparados entre grupos com análise da variância (ANOVA) e LSD post-hoc. As diferenças foram consideradas significativas em um valor de p abaixo α/k, em que α = 10 % e k = quantidade de comparações. Para a experiência A o valor de p tinha de ser abaixo de 0,02; Para a experiência B o valor de p tinha de ser abaixo de 0,05. Os dados sobre a ingestão de alimentos, peso corporal, atividade diária e função muscular que foram monitorados durante os 20 dias após a inoculação foram analisados pelas medições repetidas ANOVA. Para ainda discriminar as diferenças entre grupos, as diferenças ou deltas da primeira medição na faixa foram calculados. Estes deltas foram comparados entre grupos com o uso de ANOVA, com LSD post-hoc para comparação aos pares entre grupos. Quanto à função do músculo esquelético, os dados da primeira medição no 20o dia não foram similares entre os grupos, portanto outra discriminação foi realizada em uma análise por ponto ANOVA. As diferenças foram consideradas significativas em um ajuste de duas dimensões de p < 0,05.

Resultados

[000105] A densidade mineral óssea foi reduzida nos camundongos que carregavam tumor (TB) em comparação com os camundongos de controle (C) (Figura 1A). A adição ou da leucina ou do ácido graxo poli-insaturado w-3 (do óleo de peixe) não resultou em mudanças significativas em comparação com os TB. Entretanto, a combinação do ácido graxo poli-insaturado w-3 com a leucina resultou em um aumento significativo da densidade mineral óssea em comparação com os TB. A presença de um tumor induziu a um aumento nos níveis de cálcio do plasma de cerca de 75% (Figura 1B). A suplementação com ingredientes únicos (TB-leu ou TB-fo) não teve nenhum efeito sobre os níveis de cálcio dos animais transportando tumores. A combinação da leucina com o ácido graxo poli-insaturado w-3, entretanto, resultou em uma redução significativa dos níveis de cálcio do plasma. Reduções similares nos níveis do plasma foram observadas em animais suplementados com uma combinação nutricional completa de óleo de peixe, leucina e oligossacarídeos (Experiência B) (Figura 2).

[000106] Os músculos dos animais de controle apresentaram uma força máxima mais elevada, velocidade de contração máxima e velocidade de relaxamento máxima em comparação com os camundongos de controle TB. A combinação nutricional específica de um ácido graxo poli-insaturado w-3, leucinas (parte da leucina livre, parte ligada na proteína) e oligossacarídeos corrigidos isto em parte tanto quanto à massa muscular dependente quanto à massa muscular de diferenças independentes. A mesma experiência foi usada para estudar em mais detalhes a correlação dos níveis de cálcio com os parâmetros de desempenho muscular. Para todas as frequências em que o tétano pôde ser obtido (> 83 Hz), os parâmetros de função muscular (força máxima, velocidade de contração máxima e velocidade de relaxamento máxima) correlacionados negativamente com os níveis de cálcio (R abaixo de -0,7 e p < 0,05) Figura 3). Quando os parâmetros de função muscular, força máxima, velocidade de contração máxima e velocidade de relaxamento máxima, foram corrigidos quanto à massa muscular, as correlações negativas permaneceram (R entre -0,4 e -0,7) (Figura 3).

[000107] As estimulações repetitivas em 83 Hz, imitando um exercício moderado, induziram perda de força máxima em todos os três grupos. A perda na força foi mais grave no grupo TB-CON em comparação com o grupo CON. A combinação nutricional especializada parcialmente normalizou isto. Na Figura 4, exemplos representativos (a curva mais próxima à curva média) das curvas completas de força obtidas durante o exercício, são apresentados. Para todas as curvas, o padrão dos picos muda nas primeiras 5 repetições. O ponto do tempo em que a força máxima é obtida muda para a extremidade do pulso em comparação com a primeira repetição.

[000108] Para se obter um melhor critério na resistência do músculo à fadiga, mudanças relativas na força máxima foram calculadas. Se os dados tiverem sido apresentados em relação à força máxima no início do exercício (corrigidos quanto à massa muscular), as primeiras 20 repetições terão sido apresentadas relativamente à força máxima no início do exercício (corrigido quanto à massa muscular), as primeiras 20 repetições terão resultado em uma perda cumulativa semelhante de força máxima, e também nas 80 repetições a perda relativa cumulativa da força máxima terá sido a mesma (Figura 5). Os camundongos de controle, entretanto, apresentaram menos perda cumulativa da força máxima entre 20 e 50 repetições do que os camundongos que carregavam tumor. Os camundongos TB-SNC apresentaram uma tendência a uma perda intermediária da força máxima relativa. Esta diferença no padrão de distribuição das forças máximas relativas torna-se mais proeminente quando expressa como perda relativa por 10 repetições (Figura 6). Tanto as curvas de CON quanto as de TB-SNC foram significativamente diferentes da TB-CON das repetições 30 a 70. Os dados também apresentaram menos perda relativa da força máxima nas primeiras 40 repetições.

[000109] Para ainda elucidar a relação entre a função muscular durante estimulação repetitiva e o cálcio, foi determinado que o parâmetro da função muscular se correlacionasse melhor com os níveis de cálcio na totalidade da estimulação repetitiva completa. Na Figura 7, os parâmetros da função muscular são apresentados, os quais mostram um fator de correlação de menos do que -0,35 e p < 0,05 para pelo menos 50 repetições. Quanto às primeiras 40 repetições, a velocidade de relaxação corrigida da massa muscular mostrou a correlação negativa mais estringente com os níveis de cálcio. De 40 a 80 repetições, a massa muscular melhor a força máxima correlacionada negativamente com os níveis de cálcio. Quando um conjunto quadrático de dados de cálcio foi usado, os fatores de correlação da massa muscular foram semelhantes.

[000110] A atividade diária declinou no grupo TB-CON, o que foi parcialmente normalizado no grupo TB-SNC em comparação com CON (Figura 8). CON e TB-SNC foram significativamente diferentes do TB-CON. Atividade diária total negativamente correlacionada com os níveis de cálcio (Tabela 3B). A atividade no período escuro (ativa) se correlacionou ainda melhor com as concentrações de cálcio. Não houve nenhuma correlação entre os níveis de cálcio e a atividade no período de luz (latente). Os níveis de cálcio quadráticos se correlacionaram levemente menos com os parâmetros da atividade.

Exame

[000111] Os resultados indicam que uma normalização parcial dos níveis de cálcio foi apenas alcançada quando a leucina e o ácido graxo poli- insaturado w-3 (de óleo de peixe) foram combinados.

[000112] Além disso, esta combinação foi adequada para normalizar parcialmente a distribuição da perda na força máxima relativa.

[000113] Em particular, um melhoramento na atividade diária (noturna nos animais de teste) foi observado em comparação com um grupo de controle. Além disso, as concentrações de cálcio correlacionadas com a atividade diária, e especialmente com a atividade no período de escuro (ativo), novamente, sugerindo que a incidência da fadiga pode ser reduzida de acordo com a invenção.

[000114] Tanto os dados da estimulação repetitiva, imitando um exercício, quanto os dados das estimulações isoladas em diferentes frequências, sugerem que os níveis de cálcio de correlacionam em uma maneira quase linear ao desempenho muscular. Portanto, a prevenção ou o tratamento da elevação dos níveis de cálcio com intervenções nutricionais podem ser uma opção para pacientes com, ou em risco de, hipercalcemia, para contribuir com a manutenção da qualidade de vida do paciente.

Exemplo 4: Determinação Do Índice GlicêmicoDefinição

[000115] O índice glicêmico (GI) de um carboidrato fornece uma medição da sua capacidade de elevar as concentrações de glicose pós- prandial. Os alimentos de elevado GI fornecem níveis de glicose sanguínea pós-prandial mais elevados do que aqueles com um baixo GI. O GI de um carboidrato também prediz a resposta insulínica àquele alimento.

[000116] O GI de um carboidrato é calculado pela avaliação de uma resposta de duas horas de 25 g com aquela de uma glicose padrão de carboidrato de 25 g subsequente:

[000117] GI é igual à ‘Área incremental sob a curva de resposta da glicose do sangue para um alimento de teste contendo 25 g de carboidrato’ dividida pela ‘Área correspondente após a porção equivalente de carboidrato da glicose’

Metodologia do Índice Glicêmico

[000118] O carboidrato disponível é definido para fins de teste do GI como: Carboidrato total menos os carboidratos indigeríveis (solúveis e insolúveis) que sejam fibras dietéticas de um ponto fisiológico (por exemplo, inulina, FOS, amido resistente tipo 3).

[000119] As amostras providas devem ser representativas do produto conforme disponível ao consumidor na praça do mercado.

[000120] Todos os alimentos submetidos a teste são testados in vivo, isto é, em 10 seres humanos consumindo quantidades contendo o equivalente a 25 g disponíveis de carboidrato. Eles são indivíduos saudáveis sem nenhuma doença crônica, diabete ou redução de glicose. Os indivíduos têm um BMI entre 18,5 a 27 kg/m2.

[000121] Alimento de referência: O alimento de referência é 25 g de pó de glicose dissolvidos em 250 ml de água. Cada pessoa testa o alimento de referência pelo menos duas vezes.

[000122] Alimentos de teste: Os alimentos de teste são preparados de acordo com instruções do fabricante, representando o alimento conforme normalmente consumido. Os alimentos de teste são consumidos uma vez apenas em ocasiões separadas como uma porção que forneça 25 g de carboidrato disponível, definido como acima.

[000123] Indivíduos do Protocolo: Os indivíduos são testados na manhã após uma abstinência noturna. Duas amostras de sangue em jejum são colhidas (-5 e 0)-5 minutos separadamente, após o que os indivíduos consomem o alimento de teste ou alimento de referência em um índice uniforme durante 15 minutos. Outras amostras de alimento são tomadas em 15, 30, 45, 60, 90 e 120 minutos após o começo da refeição. A refeição de teste e o alimento de referência devem ser consumidos com uma bebida de água de 250 ml. Isto permanece constante para cada um dos testes na série.

[000124] 24 horas antes do teste do GI: No dia anterior a cada sessão, osindivíduos se abstêm de beber álcool e evitam níveis não usuais de exercício e ingestão de alimentos. Os indivíduos devem fazer uma refeição ao anoitecer com base em um alimento rico em carboidrato, tal como arroz, pasta, pão, batatas e sem muita gordura. Este alimento não deve incluir feijões, grãos de leguminosa ou legumes (para evitar um segundo efeito da alimentação na manhã seguinte). É importante que eles jantem e não se abstenham por mais do que 18 horas. Os indivíduos são solicitados a que estejam em um estado semelhante a cada vez que eles venham a uma sessão. Após eles terem comido sua alimentação ao anoitecer, os indivíduos se abstêm por pelo menos 10 horas durante a noite antes do início de sua sessão de teste na manhã seguinte. Eles podem beber apenas água durante o período de abstenção.

[000125] Amostragem de sangue: O sangue será obtido por punctura do dedo.

[000126] O sangue é colhido sem inibidores de coagulação (heparina, EDTA).

[000127] Ensaio de glicose: Sangue capilar completo ou é medido por um analisador de glicose automático. Neste caso, analisadores de glicose Hemocue são usados.

[000128] Análise dos dados. A área incremental sob a curva de resposta da glicose do sangue (iAUC), ignorando a área abaixo do valor básico, é calculada geometricamente como segue:

[000129] Para os tempos t0, t1,..., tn as concentrações da glicose do sangue são G0, G1,... Gn, respectivamente: x=1iAUC = ∑ Axnem que Ax = o AUC para o xo intervalo de tempo (isto é, entre tx-1 e tx).

[000130] Para o primeiro intervalo de tempo (isto é, x=1): se G1 > G0, A1 = (G1-G0)x(t1-t0)/2, de outra forma A1 = 0.

[000131] Para os outros intervalos de tempo (isto é, x>1)se Gx>G0 e Gx-1>G0, Ax = {[(Gx-G0)/2]+(Gx-1-G0/2}x(tx-tx-1)se Gx>G0 e Gx-1<G0, Ax = [(Gx-G0)2/+(Gx-Gx-1)]x(tx-tx-1)/2se Gx<G0 e Gx-1>G0, Ax = [(Gx-1-G0)2/(Gx-1-Gx)]x(tx-tx-1)/2se Gx<G0 e Gx-1<G0, Ax = 0Cálculo de GI: Em pacientes individuais, o valor de GI é a iAUC para cada alimentação expressa como um percentual da iAUC média dos dois alimentos de referência (glicose). O GI do alimento de teste é o GI médio ± SEM dos 10 indivíduos.

[000132] Até dois valores de exceção (um valor de exceção é um indivíduo cujo GI difere da média em mais do que dois SD) podem ser excluídos dos dados estabelecidos. SEM deve situar-se dentro dos 20 % da média.

Claims (14)

1. Composição nutricional, compreendendo uma combinaçãode uma fonte de leucina e uma fonte de ácido graxo poli-insaturado w-3,carboidratos digeríveis e fibra dietética solúvel, caracterizada pelo fato de que a dita fonte de leucina compreende uma proteína selecionada do grupo de proteína do soro do leite e caseína; a composição possui um conteúdo de gordura insaturada de 2-6 g/100 mL; a fonte de graxo poli-insaturado w-3 fornece ácido eicosapentaenoico e ácido docosaexaenoico; e a composição nutricional é uma composição nutricional de alimentação aos goles, em que o conteúdo dematéria proteinácea é: 9-12 g/100 ml- contendo leucina total- da qual é leucina livre carboidratos digeríveis éGordura é- da qual, insaturada- da qual, PUFA-o-3fibra dietética solúvel é 1,5-2,5 g/100 ml 0,9-1,5 g/100 ml 10-25 g/100 ml2-6 g/100 ml2-6 g/100 ml 0,8-2 g/100 ml 1-4 g/100 ml, ou uma composição nutricional de alimentação tubária, em que o conteúdodematéria proteinácea é- contendo leucina total- da qual é leucina livre carboidratos digeríveis é Gordura é- da qual, insaturada- da qual, PUFA-W3 fibra dietética solúvel é

2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a composição compreende proteína de soro do leite.

3. Composição de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que a composição compreende pelo menos um oligossacarídeo selecionado do grupo de galacto-oligosacarídeos e fruto- oligossacarídeos.

4. Composição de acordo com a reivindicação 1, 2 ou 3 caracterizada pelo fato de que a composição compreende pelo menos 15 g/kg de leucina total, com base no peso total de matéria proteinácea, gordura, carboidratos mais fibras dietéticas, da composição, em particular, 30 a 70 g/kg de leucina, mais em particular 40 a 60 g/kg de leucina.

5. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a composição compreende pelo menos 15 g/kg de leucina livre, com base no peso total de matéria proteinácea, gordura, carboidratos mais fibras dietéticas, da composição, em particular 22 a35 g/kg de leucina, mais em particular 30 a 35 g/kg de leucina.

6. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a composição tem um teor de ácido graxo poli-insaturado o-3, com base em lipídios totais, de 18% em peso ou mais.

7. Composição nutricional, composição farmacêutica ou composição nutracêutica em de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a composição compreende um óleo marinho ou uma fração do mesmo, cujo óleo de marinho ou fração do mesmo fornece pelo menos 70 % em peso do total de ácidos graxos poli-insaturados 0-3 na composição.

8. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que a composição é uma composição nutricional tendo um índice glicêmico menor que 55, em particular, de menos do que 45.

9. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que DHA e EPA fornecem pelo menos 14% dos ácidos graxos totais em peso.

10. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de que a razão peso:peso de DHA para EPA está na faixa de 2:8 a 8:2.

11. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que o conteúdo total de ácidos graxos poli-insaturados w-3 é pelo menos 24%, com base em ácidos graxos totais.

12. Composição de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 11, caracterizada pelo fato de compreende manganês.

13. Composição de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que a composição é a dita composição nutricional de alimentação aos goles.

14. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que a composição é a dita composição nutricional de alimentação tubária.

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