BRPI0809622A2

BRPI0809622A2 - Probióticos para aperfeiçoamento de microbiota de intestino

Info

Publication number: BRPI0809622A2
Application number: BRPI0809622-8A
Authority: BR
Inventors: Karl-Josef Huber-Haag; Marie-Claire Fichot; Florence Rochat; Norbert Sprenger
Original assignee: Nestec Sa
Priority date: 2007-03-28
Filing date: 2008-03-27
Publication date: 2014-09-16
Also published as: WO2008116907A1; CA2680093A1; WO2008116904A1; WO2008116892A1; US20100150874A1; AU2008231763A1; EP2131859B1; EP2131859A1; BRPI0809626A2; ES2434566T3; MY151137A; RU2009139658A; AU2008231775A1; EP2129393A1; PL2131680T3; EP2131680A1; MX337667B; CN101646453A; EP2489280A3; CA2679081A1

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "PROBIÓTICOS PARA APERFEIÇOAMENTO DE MICROBIOTA DE INTESTINO".

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se à administração a crianças nascidas por seção cesariana de uma específica linhagem bacteriana probiotica capaz de prover uma microbiota de intestino bifidogênica inicial. Antecedentes da Invenção

Imediatamente antes de nascimento, o trato gastrointestinal de um neném é pensado ser estéril. Durante o processo normal de nascimento, ele encontra bactérias do trato digestivo, pele e ambiente da mãe e começa a ser colonizado. A microbiota fecal de uma criança amamentada no peito, nascida por parto normal, saudável, de idade de 2 a 4 semanas que pode ser tomada como a microbiota ótima para este grupo de idade é dominada por espécies Bifidobacteria com algumas espécies Lactobacillus e menores quantidades de Bacteroides como espécies Bacteriodes fragilis, para a exclusão de potenciais patógenos como Clostridia. Após o término de desmame em cerca de 2 anos de idade, um padrão de microbiota de intestino que se parece com padrão adulto torna-se estabelecido.

Deve ser notado que, na criança alimentada no peito, nascida por parto normal, saudável, Bifidobacteria forma a base da microbiota totalizando 60-90% de bactérias totais no intestino de criança. Alimentação no peito também promove desenvolvimento de barreira intestina que, junto com dominação de Bifidobacteria conduz a aperfeiçoada absorção e por isso utilização de nutrição ingerida.

Grõnlund et al. estudaram microbiota fecal de crianças saudáveis nascidas por seção cesariana e compararam a mesma àquela de um grupo comparável de crianças nascidas através de parto normal. Eles concluíram que a flora intestinal de crianças nascidas por parto de cesariana pode ser perturbada por até seis meses após o nascimento. Especificamente, eles notaram que as taxas de colonização por Bifidobaeteria e Lactobacilli no grupo de cesariana atingiram as taxas de colonização no grupo parido de parto normal somente após um mês e dez dias respectivamente (Grõnlund et al., "Fecal Microflora in Healthy Infants Born by Different Methods of Delivery: Permanent Changes in Intestinal Flora After Cesarean Delivery", Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, 28:19-25).

Outros trabalhos sugeriram que esta colonização retardada/aberrante pode ter conseqüências específicas em termos do subsequente desenvolvimento da criança e ligaram estas conseqüências às diferenças em flora intestinal. Por exemplo, Laubereau et al. verificaram que crianças nascidas por seção cesariana têm um maior risco de diarréia que crianças paridas vaginalmente (Laubereau et al., Caesarean Section and gastrointestinal symptoms, atopic dermatitis e sensitisation during the first year of life", Arch Dis Child 2004; 89:993-997). Negele et al. verificaram que parto por cesareana pode ser um fator de risco adicional para respiração dificultada e sensibilização alérgica para alérgenos de alimentos até a idade de dois anos (Negele et al. "Mode of delivery and development of atopic disease during the first 2 years of life" Pediatr Allergy Immunol 2004:15:48 - 54). Também foi sugerido que inflamação sistêmica de baixo grau e uma microbiota de intestino sub-ótima também podem estar implicadas no desenvolvimento de obesidade (Fantuzzi G. "Adipose tissue, adipokines, and inflammation" J Allergy Clin Immunol. 2005;115:911-919, Bàckhed F., Ding H, Wang T., et al. "The gut microbiota as an environmental factor that regulates fat storage" Proc. Natl. Acad Sci USA. 2004; 101:15718-15723).

Leite materno é recomendado para todas as crianças. Entretanto, em alguns casos alimentação no peito é inadequada ou mal-sucedida por razões médicas ou a mãe escolhe não amamentar. Fórmulas infantis foram desenvolvidas para estas situações.

No passado recente, certas linhagens de bactérias atraíram considerável atenção porque elas foram verificadas exibirem valiosas propriedades para o homem se ingeridas. Em particular, específicas linhagens dos gêneros Lactobacilli e Bifidobaeteria foram verificadas serem capazes de 30 colonizar o intestino, para reduzir a capacidade de bactérias patogênicas aderirem ao epitélio intestinal, para terem efeitos imunomoduladores e para auxiliarem na manutenção de bem - estar. Tais bactérias são algumas vezes chamadas probióticos e já foi proposto adicionar apropriadas bactérias probióticas a fórmulas de bebês.

Extensos estudos foram realizados para identificar novas linhagens probióticas. Por exemplo, EP O 199 535, EP O 768 375, WO 97/00078, 5 EP 0 577 903 e WO 00/53200 descrevem específicas linhagens de Laetobacilli e Bifidobacteria e seus efeitos benéficos.

Mais recentemente, alguns conceitos foram expressos sobre a adição de bactérias probióticas à fórmula infantil que é pretendida como a única fonte de nutrição para crianças nos primeiros seis meses de vida. Es10 tes conceitos foram resumidos na publicação de posição médica do ESPGHAN Committee on Nutrition intitulado "Probiotic Bactéria in Dietetic Products for Infants" (Journal of Paediatric Gastroenterology and Nutrition, 38:365-374).

A microbiota intestinal desempenha um importante papel na hi15 drólise de oligossacarídeos e polissacarídeos não-digeríveis a monossacarídeos absorvíveis e ativação de lipoproteína lípase através de ação direta sobre o epitélio viloso. Ainda, foi recentemente demonstrado que leite humano contem não somente oligossacarídeos, mas também Bifidobacteria. Ao mesmo tempo, estudos genômicos mostraram convincentemente que Bifido20 bactéria presentes no intestino de crianças alimentados no peito, tais como Bifidobaeteria longum, são especialmente equipadas para utilizar oligossacarídeos de leite de peito como nutrientes. Bifidobacterium longum é também adaptada às condições no intestino grosso onde coleta de energia a partir de carboidratos lentamente absorvíveis ocorre.

Em resumo, mais e mais evidência está surgindo que sugere

que o estabelecimento de uma apropriada microbiota intestinal inicial em vida pode ser significante em subsequente desenvolvimento saudável. Ao mesmo tempo a proporção de cesarianas continua a aumentar, atingindo tanto quanto 70% de todos os nascimentos de alguns países. Por isso é cla30 ro que há uma necessidade de provimento de um meio para promover o rápido estabelecimento de uma apropriada microbiota intestinal em crianças onde ela não ocorre naturalmente. Esta necessidade é particularmente aguda dada a prática atual de administração rotineira de doses profilácticas de antibióticos a mulheres grávidas que sofrem cesariana eletiva.

Sumário da Invenção

Como notado acima, na criança alimentada no peito, de parto 5 normal, saudável, Bifidobacteria formam as bases da microbiota totalizando 60-90% de bactérias totais no intestino de criança. As espécies de Bifidobaeteria que são predominantemente encontradas em tais crianças são Bifidobaeteria breve, Bifidobaeteria infantis e Bifidobaeteria longum. Os presentes inventores surpreendentemente verificaram que administração de uma es10 pecífica linhagem de uma diferente espécie de Bifidobaeteria, por exemplo, Bifidobaeteria Iaetis CNCM I-3446 promove o desenvolvimento de uma inicial microbiota intestinal bifidogênica em crianças nascidas por seção cesariana.

Da mesma maneira, a presente invenção provê o uso de Bifidobctéria Iaetis CNCM I-3446 na fabricação de um medicamento ou composição nutricional terapêutica para promoção de desenvolvimento de uma microbiota intestinal bifidogênica inicial em crianças paridas por seção cesariana.

A invenção ainda provê o uso de Bifidobaeteria Iaetis CNCM I3446 na fabricação de um medicamento ou composição nutricional terapêutica para redução de risco de subsequente desenvolvimento de alergia em crianças paridas por seção cesariana.

Ainda em um aspecto, a invenção provê o uso de Bifidobaeteria Iaetis CNCM I-3446 na fabricação de um medicamento ou composição nutricional terapêutica para prevenção ou tratamento de diarréia em crianças paridas por seção cesariana.

A invenção estende-se a um processo de promoção de desenvolvimento de uma microbiota intestinal bifidogênica inicial em crianças paridas por seção cesariana compreendendo provimento de uma quantidade terapêutica de Bifidobaeteria Laetis CNCM I-3446 a uma criança nascida por seção cesariana e em necessidade da mesma.

A invenção ainda se estende a um processo de redução de risco de que uma criança parida por seção cesariana subsequentemente desenvolva alergia compreendendo provimento de uma quantidade terapêutica de Bifidobacteria Iactis CNCM 1-3446 para uma criança nascida por seção cesariana e em necessidade da mesma.

A invenção também se estende a um processo de prevenção ou tratamento de diarréia em uma criança parida por seção cesariana compreendendo provimento de uma quantidade terapêutica de Bifidobaeteria Iaetis CNCM 1-3446 a uma criança nascida por seção cesariana e em necessidade da mesma.

Sem desejar estar preso à teoria, os presentes inventores acre10 ditam que administração de Bifidobaeteria Iaetis CNCM I-3446 a uma criança nascida através de seção cesariana, de alguma maneira como ainda não entendida completamente, prepara o trato gastrointestinal da criança para favorecer subsequente colonização por aquelas espécies de Bifidobaeteria que são comumente encontradas nos tratos de crianças paridas por parto 15 normal, saudáveis. É pensado que esta benéfica colonização reduz o risco de episódios de diarréia como foram mostrados afligirem crianças paridas por seção cesariana. É ainda pensado que a benéfica colonização reduz o risco de subsequente desenvolvimento de alergia como manifestada por respiração ruidosa e/ou sensibilização para alérgenos de alimentos.

Deve ser notado que não é o objetivo nem o efeito de tal trata

mento promover colonização por Bifidobaeteria Iaetis CNCM I-3446 por si própria, mas antes promover colonização com outras espécies de modo a obter uma microbioata intestinal bifidogênica inicial comparável àquela encontrada em crianças paridas por parto normal, alimentadas no peito, saudáveis.

Breve Descrição dos Desenhos

A Figura 1 mostra as contagens de B. breve e B. longum em amostras de conteúdo fecal e jejunal no dia 14 de tratamento em camundongos gnotobióticos que sofreram gavagem com uma microbiota de neném humano; e

A Figura 2 mostra contagens de C. perfringens em conteúdo jejunal e amostras fecais no dia 14 de tratamento em camundongos gnotobióticos que sofreram gavagem com microbiota de neném humano.

Descrição Detalhada da Invenção

Neste relatório descritivo, os seguintes termos têm os seguintes significados:

"microbiota intestinal bifidogênica inicial" significa para um bebê

de até 12 meses de idade uma microbiota intestinal que é dominada por Bifidobacteria como Bifidobacterium breve, Bifidobacterium infantis, e Bifidobacterium longum para a exclusão de apreciáveis populações de tais espécies como Clostridia e Streptococci e que é genericamente comparável àquela 10 encontrada em um bebê alimentado no peito, parido por parto normal da mesma idade.

"bebê" significa uma criança abaixo da idade de 12 meses, "pré-biótico" significa um ingrediente alimentício não-digerível que afeta beneficialmente o hospedeiro através de estimulação seletiva de 15 crescimento e/ou atividade de uma ou um limitado número de bactérias no cólon e assim aperfeiçoa saúde de hospedeiro (Gibson and Roberfroid "Dietary Modulation of the Human Colonic Microbiota: Introduzinc the Concept of Prebiotics" J. Nutr 125:1401-1412).

"probiótico" significa preparações de células microbianas ou componentes de células microbianas com um efeito benéfico sobre a saúde ou bem-estar do hospedeiro. (Salminen S, Ouwehand A. Benno Y. et al. "Probiotics: how should they be defined" Trends Food Sei. Technol. 1999:10 107-10).

Todas as referências a porcentagens são em peso, a menos que de outro modo estabelecido.

Bifidobaeterium Iaetis CNCM I-3446 é comercializada inter alia por Christian Hansen company de Dinamarca sob a marca registrada Bb12. Uma dose diária apropriada é de 10e5 a 10e11 unidades de formação de colônia (cfu), mais preferivelmente de 10e7 a 10e10 cfu.

Preferivelmente a Bifidobaeterium Iaetis CNCM I-3446 é coadmi

nistrada com um pré-biótico. Apropriados pré-bióticos incluem certos oligossacarídeos, tais como fruto oligossacarídeos (FOS) e galacto oligossacarídeos (GOS). Uma combinação de pré-bióticos pode ser usada, tal como 90% GOS com 10% de fruto oligossacarídeos de cadeia curta tal como o produto comercializado sob a marca registrada Beneo® P95 ou inulina a 10%, tal como o produto comercializado sob a marca registrada Beneo® HP1 5 STouHSI.

Um pré-biótico particularmente preferido é uma mistura de oligossacarídeos que compreende 5-70% em peso de pelo menos um oligossacarídeo N-acetilado selecionado do grupo compreendendo GalNAcaI,3Gaipi,4Glc e Gaipi,6GalNAca1,3Galp1,4Glc, 20-90 % de pelo me10 nos um oligossacarídeo neutro selecionado do grupo compreendendo Gaipi,6Gal, Galp1,6Galp1,4Glc Gaipi,6Gaipi,6Glc, Gaipi,3Galp1,3Glc, Galpl ,3Gaipi ,4Glc, Galpl ,6Galp1,6Galp1,4Glc, Galpl ,6Galp1,3Gaipi ,4Glc Gaipi ,3Galp1,6Gaipi,4Glc e Galpl ,3Galp1,3Gaipi,4Glc e 5-50% em peso de pelo menos um oligossacarídeo sialilado selecionado do grupo compre15 endendo NeuAca2,3Gaipi,4Glc e NeuAca2,6Gaipi,4Glc. Uma tal mistura de oligossacarídeos é descrita em mais detalhes em W02007/090894, os conteúdos do qual são aqui incorporados por referência e é referida daqui por diante como "a mistura de oligossacarídeos descrita acima".

Preferivelmente a mistura de oligossacarídeos descrita acima 20 compreende 10-70% em peso do oligossacarídeo(s) N-acetilado especificado, 20-80% em peso do oligossacarídeo(s) neutro especificado e 10-50% em peso do oligossacarídeo(s) sialilado especificado. Mais preferivelmente a mistura compreende 15-40% em peso do oligossacarídeo(s) N-acetilado, 40- 60% em peso do outro oligossacarídeo(s) neutro e 15-30% em peso do oli25 gossacarídeo(s) sialilado. Uma mistura particularmente preferida é 30% em peso do oligossacarídeo(s) N-acetilado, 50% em peso do oligossacarídeo(s) neutro e 20% em peso do oligossacarídeo(s) sialilado.

Alternativamente, a mistura de oligossacarídeos descrita acima pode convenientemente compreender 5-20% em peso do oligossacarídeo(s) N-acetilado especificado, 60-90% em peso do oligossacarídeo(s) neutro especificado e 5-30% em peso do oligossacarídeo(s) sialilado especificado.

A mistura de oligossacarídeos descrita acima pode ser preparada a partir de um ou mais leites de animais. O leite pode ser obtido a partir de qualquer mamífero, em particular de vacas, cabras, búfalas, cavalos, elefantes, camelos ou ovelhas.

Alternativamente, a mistura de oligossacarídeos descrita acima 5 pode ser preparada adquirindo-se e misturando os componentes individuais. Por exemplo, galacto oligossacarídeos sintetizados tais como Gaipi,6Gaipi,4Glc Galp1,6Galp1,6Glc, Galpl ,3Galp1,4Glc,

Gaipi,6Galp1,6Galp1,4Glc, Gaipi,6Galp1,3Galp1,4Glc e

Gaipi,3Galp1,6Galp1,4Glc e suas misturas são comercialmente disponíveis 10 sob as marcas registradas Vivinal® e Elix'or®. Outros fornecedores de oligossacarídeos são Dextra Laboratories, Sigma - Aldrich Chemie GmbH e Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Alternativamente, específicas glicosil transferases, como galactosil transferases podem ser usadas para produção de oligossacarídeos neutros.

Os oligossacarídeos N-acetilados podem ser preparados através

da ação de glicosaminidase e/ou galactosaminidase sobre N-acetil glicose e/ou N-acetil galactose. Igualmente,N-acetil galactosil transferases e/ou Nacetil glicosil transferases podem ser usadas para este propósito. Os oligossacarídeos N-acetilados também podem ser produzidos através de tecnologia de fermentação usando respectivas enzimas (recombinantes ou naturais) e/ou fermentação microbiana. No último caso os micróbios tanto podem expressar suas enzimas e substratos naturais como podem ser engenheirados para produção de respectivos substratos e enzimas. Culturas microbianas simples ou culturas mistas podem ser usadas. Formação de oligossacarídeo N-acetilado pode ser iniciada por substratos receptores partindo de qualquer grau de polimerização (DP) a partir de DP = 1 por diante. Uma outra opção é a conversão química de ceto hexoses (por exemplo, frutose) tanto livre como ligada a um oligossacarídeo (por exemplo, lactulose) em N-acetil hexosamina ou uma N-acetil hexosamina contendo oligossacarídeo como descrito em Wrodnigg, T. M.; Stutz, A.E. (1999) Angew. Chem. Int. Ed. 38:827-828.

Os oligossacarídeos sialilados 3'-sialil Iactose e 6'-sialil lactose podem ser isolados através de tecnologia cromatográfica ou de filtração a partir de uma fonte natural como leites de animais. Alternativamente, eles também podem ser produzidos através de biotecnologia usando específicas sialil transferases tanto através de tecnologia de fermentação baseada em enzima (enzimas recombinantes ou naturais) como através de tecnologia de 5 fermentação microbiana. No último caso micróbios podem tanto expressar suas enzimas e substratos naturais como podem ser engenheirados para produção de respectivos substratos e enzimas. Culturas microbianas simples ou culturas mistas podem ser usadas. Formação de sialil - oligossacarídeo pode ser iniciada por substratos receptores partindo de qualquer grau de 10 polimerização (DP) a partir de DP = 1 em diante.

Outras bactérias probióticas podem ser administradas com a Bifidobacterium Iactis CNCM I-3446. Quaisquer bactérias ácidas lácticas ou Bifidobaeteria com estabelecidas características probióticas podem ser usadas. Apropriadas bactérias ácidas lácticas probióticas incluem Lactobacillus 15 rhamnosus ATCC 53103 obtenível inter alia de Valio Ou of Finland sob a marca registrada LGG, Lactobacillus rhamnosus CGMCC 1.3724, LactobacilIus reuteri ATCC 55730 obtenível de Biogaia ou Lactobacillus paracasei CNCM 1-2116.

Ainda outras linhagens de Bifidobaeteria probióticas apropriadas 20 incluem Bifidobacterium longum ATCC BAA-999 comercializada por Morinaga Milk Industry Co. Ltd. Of Japan sob a marca registrada BB536, a linhagem de Bifidobaeterium breve comercializada por Danisco sob a marca registrada Bb-03, a linhagem de Bifidobacterium breve comercializada por Morinaga sob a marca registrada M-16V e a linhagem de Bifídobaeterium breve 25 comercializada por Institut Roseli (LaIIemand) sob a marca registrada R0070. Uma mistura de bactérias de ácido láctico e Bifidobaeteria pode ser usada.

A Bifídobaeterium Iaetis CNCM I-3446 opcionalmente com a mistura de oligossacarídeo descrita acima é administrada ao bebê imediatamente após parto e a seguir por pelo menos os primeiros dois meses da vida do bebê. Mais preferivelmente, administração continua até o bebê atingir seis meses de idade.

A Bifídobaeterium Iaetis CNCM I-3446 pode ser administrada diretamente ao bebê ou, se a mãe estiver amamentando, através da mãe. Se a administração for através da mãe, esta poderá ser como um suplemento na forma de comprimidos, cápsulas, pastilhas, goma de mascar ou um líquido, por exemplo. O suplemento preferivelmente também contem a mistu5 ra de oligossacarídeo descrita acima em uma quantidade de 0,2 a 10 g/dia. O suplemento ainda pode conter hidrocoloides protetores (como gomas, proteínas, amidos modificados), ligantes, agentes formadores de filme, agentes/materiais encapsulantes, materiais de parede/invólucro, compostos matrizes, revestimentos, emulsificantes, agentes tensoativos, agentes solubili10 zantes (óleos, gorduras, ceras, lecitinas, etc.), adsorventes, carreadores, materiais de enchimento, cocompostos, agentes dispersantes, agentes umectantes, auxiliares de processamento (solventes), agentes de escoamento, agentes de mascaramento de aroma, agentes de peso, agente gelificantes, agentes de formação de gel, antioxidantes e antimicrobianos. O suple15 mento também pode conter convencionais aditivos e adjuvantes, excipientes e diluentes farmacêuticos, incluindo, mas não limitado a, água, gelatina de qualquer origem, gomas vegetais, sulfonato de lignina, talco, açúcares, amido, goma arábica, óleos vegetais, polialquileno glicóis, agentes aromatizantes, preservativos, estabilizadores, agentes emulsificantes, tampões, Iubrifi20 cantes, corantes, agentes umectantes, materiais de enchimento, e similares. Em todos os casos, tais ainda componentes serão selecionados com relação à sua adequação ao receptor pretendido.

Alternativamente, a Bifidobcterium Iactis CNCM I-3446 pode ser administrada à mãe na forma de uma composição nutricional terapêutica. A composição pode ser uma fórmula nutricionalmente completa.

Uma fórmula nutricionalmente completa para administração a mulheres Iactantes de acordo com a invenção pode compreender uma fonte de proteína. Qualquer proteína de dieta apropriada pode ser usada, por exemplo, proteínas animais (tais como proteínas de leite, proteínas de carne e 30 proteínas de ovo); proteínas vegetais (tais como proteína de soja, proteína de trigo, proteína de arroz e proteína de ervilha); misturas de aminoácidos livres; ou suas combinações. Proteínas de leite como caseína e soro de leite coalhado, e proteínas de soja são particularmente preferidas. A composição também pode conter uma fonte de carboidratos e uma fonte de gordura.

Se a fórmula incluir uma fonte de gordura em adição ao DHA, a fonte de gordura preferivelmente provê 5% a 40% da energia da fórmula; por 5 exemplo, 20% a 30% da energia. Um apropriado perfil de gordura pode ser obtido usando uma combinação de óleo de canola, óleo de milho e óleo de girassol de alto teor de ácido oleico.

Uma fonte de carboidratos pode ser adicionada à fórmula. Ela preferivelmente provê 40% a 80% da energia da fórmula. Qualquer carboidrato apropriado pode ser usado, por exemplo, sucrose, lactose, glicose, frutose, sólidos de xarope de milho, maltodextrinas, e suas misturas. Fibra de dieta também pode ser adicionada se desejado. Fibra de dieta passa através de intestino delgado não-digerida por enzimas e funciona como um agente de volume natural e laxativo. Fibra de dieta pode ser solúvel ou insolúvel e em geral uma combinação dos dois tipos é preferida. Apropriadas fontes de fibra de dieta incluem soja, ervilha, aveia, pectina, goma guar, goma guar parcialmente hidrolisada, goma Arábica, fruto oligossacarídeos e galacto oligossacarídeos. Preferivelmente, se fibra está presente, o teor de fibra está entre 2 e 40 g/L da fórmula como consumida, mais preferivelmente entre 4 e 10 g/L. Em adição, a fórmula também contem preferivelmente a mistura de oligossacarídeos descrita acima em uma quantidade de 0,2 a 5 gramas por litro de fórmula reconstituída, preferivelmente 1 a 2 g/L.

A fórmula também pode conter minerais e micronutrientes tais como elementos em traços e vitaminas de acordo com as recomendações 25 dos órgãos de Governo como USRDA. Por exemplo, a fórmula pode conter por dose diária um ou mais dos seguintes micronutrientes nas faixas dadas: 300 a 500 mg cálcio, 50 a 100 mg magnésio, 150 a 250 mg fósforo, 5 a 20 mg ferro, 1 a 7 mg zinco, 0,1 a 0,3 mg cobre, 50 a 200 pg iodo, 5 a 15 pg selênio, 1000 a 3000 pg beta caroteno, 10 a 80 mg Vitamina C, 1 a 2 mg 30 Vitamina B1, 0,5 a 1,5 mg Vitamina B6, 0,5 a 2 mg Vitamina B2, 5 a 18 mg niacina, 0,5 a 2,0 pg Vitamina B12, 100 a 800 pg ácido fólico, 30 a 70 pg biotina, 1 a 5pg Vitamina D, 3 a 10 IU Vitamina E. Um ou mais emulsificantes grau alimento podem ser incorporados na fórmula se desejado; por exemplo, ésteres de ácido diacetil tartárico de mono- e di-glicerídeos, Iecitina e mono- e di-glicerídeos. Similarmente, apropriados sais e estabilizadores podem ser incluídos.

5 A fórmula é preferivelmente administrável enteralmente; por e

xemplo, na forma de um pulverizado para reconstituição com leite ou água.

Alternativamente, ou no caso de bebês que não são alimentados no peito, a Bifidobacterium Iactis CNCM I-3446 pode ser administrada ao bebê como um suplemento, por exemplo, como uma dose diária de 10e10 cfu dissolvida em água e administrada com uma colher.

Para bebês que não são alimentados no peito, a Bifidobaeterium Iaetis CNCM I-3446 pode ser convenientemente administrada em uma fórmula de bebê.

Uma fórmula de bebê para uso de acordo com a presente invenção pode conter uma fonte de proteína em uma quantidade de não mais que 2,0 g/100 kcal, preferivelmente 1,8 a 2,0 g/100 kcal. O tipo de proteína não é acreditado ser crítico para a presente invenção contanto que os requisitos mínimos para teor de aminoácido essencial sejam satisfeitos e crescimento satisfatório seja assegurado embora seja preferido que acima de 50% em peso da fonte de proteína seja soro de leite coalhado. Assim, fontes de proteína baseadas em soro de leite coalhado, caseína e suas misturas podem ser usadas assim como fontes de proteínas baseadas em soja. Tanto quanto proteínas de soro de leite coalhado estejam relacionadas, a fonte de proteína pode ser baseada em soro de leite coalhado ácido ou soro de leite coaIhado doce ou suas misturas e pode incluir alfa Iactalbumina e beta Iactoglobulina em quaisquer proporções que sejam desejadas.

As proteínas podem ser intactas ou hidrolisadas ou uma mistura de proteínas intactas e hidrolisadas. Pode ser desejável suprir proteínas parcialmente hidrolisadas (grau de hidrólise entre 2 e 20%), por exemplo, para 30 bebês acreditados estarem em risco de desenvolvimento de alergia a leite de vaca. Se proteínas hidrolisadas são requeridas, o processo de hidrólise pode ser realizado como desejado e como é conhecido na técnica. Por exemplo, um hidrolisado de proteína de soro de leite coalhado pode ser preparado através de hidrólise enzimática de fração de soro de leito coalhado em uma ou mais etapas. Se a fração de soro de leite coalhado usada como

o material de partida é substancialmente livre de lactose, é verificado que a 5 proteína sofre muito menos bloqueio de Iisina durante o processo de hidrólise. Isto permite a extensão de bloqueio de Iisina ser reduzida de cerca de 15% em peso da Iisina total para menos que cerca de 10% em peso de Iisina; por exemplo, cerca de 7% em peso de lísina o que aperfeiçoa grandemente a qualidade nutricional da fonte de proteína.

A fórmula de bebê pode conter uma fonte de carboidrato. Qual

quer fonte de carboidrato encontrada convencionalmente encontrada em fórmulas de bebês como lactose, sacarose, maltodextrina, amido e suas misturas pode ser usada embora a fonte preferida de carboidratos seja lactose. Preferivelmente as fontes de carboidratos contribuem entre 35 e 65% da energia total da fórmula.

A fórmula de bebê pode conter uma fonte de lipídeos. A fonte de lipídeos pode ser qualquer lipídeo ou gordura que seja apropriada para uso em fórmulas de bebês. Fontes de gorduras preferidas incluem oleína de palma, e óleo de girassol de lato teor oleico e óleo de açafrão de alto teor 20 oleico. Os ácidos graxos essenciais ácido Iinoleico e alfa-linolênico também podem ser adicionados como podem pequenas quantidades de óleos contendo altas quantidades de ácido araquidônico pré-formado e ácido docosa hexaenoico como óleos de peixe ou óleos microbianos. No total, o teor de gordura é preferivelmente tal de modo a contribuir entre 30 a 55% da energia 25 total da fórmula. A fonte de gordura preferivelmente tem uma razão de ácidos graxos n-6 a n-3 de cerca de 5:1 a cerca de 15:1; por exemplo, cerca de 8:1 a cerca de 10:1.

A fórmula de bebê também pode conter todas as vitaminas e minerais entendidos serem essenciais na dieta diária e em quantidades nutricionalmente significantes. Requisitos mínimos foram estabelecidos para certas vitaminas e minerais. Exemplos de minerais, vitaminas e outros nutrientes opcionalmente presentes na fórmula de bebê incluem vitamina A, vitamina Β1, vitamina B2, vitamina B6, vitamina B12, vitamina E, vitamina K, vitamina C, vitamina D, ácido fólico, inositol, niacina, biotina, ácido pantotênico, colina, cálcio, fosforoso, iodo, ferro, magnésio, cobre, zinco, manganês, cloreto, potássio, sódio, selênio, cromo, molibdênio, taurina, e L-carnitina.

5 Minerais são usualmente adicionados em forma de sal. A presença e quantidades de específicos minerais e outras vitaminas variarão dependendo da população de bebês pretendida.

Se necessário, a fórmula de bebê pode conter emulsificantes e estabilizadores tais como Iecitina de soja, ésteres de ácido cítrico de monoe di-glicerídeos, e similares.

Preferivelmente, a fórmula de bebê conterá a mistura de oligossacarídeos descrita acima em uma qantidade de 0,2 a 5 gramas por litro de fórmula reconstituída, preferivelmente 1 a 2 g/L.

A fórmula de bebê opcionalmente pode conter outras substâncias que podem ter um efeito benéfico tais como lactoferrina, nucleotídeos, nucleosídeos, e similares.

Ambas, a formula de bebê e a fórmula nutricional descritas acima podem ser preparadas em qualquer maneira apropriada. Por exemplo, elas podem ser preparadas através de combinação de proteína, a fonte de carboidrato, e a fonte de gordura em apropriadas proporções. Se usados, emulsificantes podem ser incluídos neste ponto. As vitaminas e minerais podem ser adicionados neste ponto mas são usualmente adicionados depois para evitar degradação térmica. Quaisquer vitaminas lipofílicas, emulsificantes e similares podem ser dissolvidos na fonte de gordura antes de combinação. Água, preferivelmente água que foi submetida a osmose reversa, então pode ser misturada para formação de uma mistura líquida. A temperatura da água é convenientemente cerca de 50°C a cerca de 80°C para auxiliar dispersão dos ingredientes. Agentes de liquefação comercialmente disponíveis podem ser usados para formação de mistura líquida. A mistura líquida é então homogeneizada; por exemplo em dois estágios.

A mistura líquida então pode ser termicamente tratada para reduzir cargas bacterianas, através de rápido aquecimento de mistura líquida para uma temperatura na faixa de cerca de 80°C a cerca de 150°C por cerca de 5 segundos a cerca de 5 minutos, por exemplo. Isto pode ser realizado através de injeção de vapor, autoclave ou através de trocador de calor, por exemplo, um trocador de calor de placas.

Então, a mistura líquida pode ser resfriada para cerca de 60°C a

cerca de 85°C; por exemplo, através de resfriamento instantâneo. A mistura líquida pode ser então novamente homogeneizada; por exemplo, em dois estágios em cerca de 10 mPa a cerca de 30 MPa no primeiro estágio e cerca de 2 MPa a cerca de 10 MPa no segundo estágio. A mistura homogeneizada 10 pode ser então ainda resfriada para adicionar quaisquer componentes sensíveis a calor; tais como vitaminas e minerais. O pH e teor de sólidos da mistura homogeneizada são convenientemente ajustados neste ponto.

A mistura homogeneizada é transferida para uma apropriada aparelhagem de secagem tal como um secador de espargimento ou secador de congelamento e convertida em um pulverizado. O pulverizado deve ter um teor de umidade de menos que cerca de 5% em peso.

A Bifidobacterium Iactis CNCM I-3446 pode ser cultivada de acordo com qualquer processo apropriado e preparada para adição à fórmula nutricional ou de bebê através de secagem de congelamento ou secagem de 20 espargimento, por exemplo. Alternativamente, Bifidobaeterium Iaetis CNCM I-3446 pode ser adquirida de Christian Hansen sob a marca registrada Bb12 já prpeparada em uma forma apropriada para adição a produtos alimentícios tais como fórmulas nutricionais e de bebês. A Bifidobaeterium Iaetis CNCM I3446 pode ser adicionada à fórmula em uma quantidade entre 10e3 e 10e12 25 cfu/g de pulverizado, mais preferivelmente entre 10e7 e 10e12 cfu/g pulverizado.

A invenção será agora ainda ilustrada através de referência aos exemplos que se seguem:

Exemplo 1

Um exemplo da composição de uma apropriada fórmula de bebê

para ser usada na presente invenção é dado abaixo. Nutriente por 10OkcaI por litro Energia (kcal) 100 670 Proteína(g) 1,83 12,3 Gordura (g) 5,3 35,7 Ácido Iinoleico (g) 0,79 5,3 Ácido α-linolênico (mg) 101 675 Lactose (g) 11,2 74,7 Minerais (g) 0,37 2,5 Na (mg) 23 150 K (mg) 89 590 Cl (mg) 64 430 Ca (mg) 62 410 P (mg) 31 210 Mg (mg) 7 50 Mn (Hg) 8 50 Se (ng) 2 13 Vitamina A (Hg RE) 105 700 Vitamina D (ng) 1,5 10 Vitamina E (mg TE) 0,8 5,4 Vitamina K1 (ng) 8 54 Vitamina C (mg) 10 67 Vitamina B1 (mg) 0,07 0,47 Vitamina B2 (mg) 0,15 1,0 Niacina (mg) 1 6,7 Vitamina B6 (mg) 0,075 0,50 Ácido fólico (ng) 9 60 Ácido pantotênico (mg) 0,45 3 Vitamina B12 (ng) 0,3 2 Biotina (ng) 2,2 15 Colina (mg) 10 67 Fe (mg) 1,2 8 I (μ9) 15 100 Cu (mg) 0,06 0,4 Zn (mg) 0,75 5 Nutriente por 10OkcaI por litro Bifidobaeterium Iaetis 2,107 cfu/g de bactérias vivas, pulverizadas CNCM I-3446 Exemplo 2

Este exemplo compara o efeito de Bifidobacterium Iactis CNCM

I-3446 com e sem a adição de um ingrediente oligossacarídeo incluindo oligossacarídeos N-acetilados, oligossacarídeos neutros, e oligossacarídeos 5 sialilados (referidos daqui por diante como CMOS-GOS) sobre o estabelecimento de uma microbiota intestinal bifidogênica inicial em um modelo de camundongo gnotobiótico de parto de cesariana com o efeito de uma outra linhagem de Bifidobaeteria e com um controle. Este modelo é um modelo animal apropriado de nascimento de bebês através de parto de cesariana e 10 tendo uma microbiota intestinal subótima em termos de população de Bifidobaeteria. Em adição à observação do tamanho de população de Bifidobaeteria, este modelo é também apropriado para seguir o efeito benéfico das Bifidobaeteria como uma barreira contra bactérias potencialmente patogênicas como Clostridium perfringens.

Materiais e Processos

Camundongos fêmeas e machos C3H livres de germes foram adquiridos de Charles River Laboratories, France e expedidos para o Nestlé Research Center em isoladores de transporte. Animais foram transferidos para isoladores de criação após controle de status livre de germe. Descen20 dência fêmea desta população de criação foi usada para este estudo. Após desmame animais foram randomicamente assinalados para um dos 4 grupos de estudo: A, dieta controlada e bebida controlada; B, dieta controlada e bebida probiótica B. Iaetis CNCM I-3446; C, dieta pré-biótica CMOS-GOS e bebida probiótica B. Iaetis CNCM I-3446; D, dieta controlada e bebida probió25 tica B. Iongum ATCC BAA-999.

Animais foram mantidos em diferentes isoladores em gaiolas de 5 animais cada. O Grupo A foi mantido em um isolador, Grupos BeC foram mantidos em um segundo isolador e Grupo D foi mantido em um terceiro isolador. Status livre de germe foi monitorado semanalmente em fezes coletadas recentemente de um animal por gaiola. Durante este período, os animais foram alimentados com a dieta AIN-93 basal (vide Tabela 1 abaixo).

Na idade de 7 a 8 semanas 2 animais por gaiola foram novamente controlados para status livre de germe e cada animal recebeu a seguir através de gavagem uma dose simples de 200 pL de coquetel de microbiota de neném humano (HBF) como descrito na Tabela 2 abaixo. Após gavagem todos os animais permaneceram sobre a dieta basal por 2 semanas para permitir estabelecimento da HBF no intestino. Então a dieta sólida foi alterada para a mistura-AIN (Tabela 1) (para grupos A, B e D) ou para a AINCMOS-GOS (para o Grupo C). Água de beber foi trocada para água de beber salina contendo 0,5% (v/v) de MRS (Man Rogosa Sharpe) (para Grupo A) ou água potável salina contendo bactérias probióticas e 0,5% (v/v) MRS (para grupos B, C e D). As concentrações finais de probióticos foram 2,5 x 10e7 cfu/mL de B. Iactis CNCM I-3446 (para grupos B e C) e 2,2x10e7 cfu/mL para B. Iongum ATCC BAA-999 (para grupo D).

Bifidobaeterium Iaetis CNCM 13446 foi preparada a partir de coleção de cultura de Nestlé. Em resumo, linhagens foram reativadas e crescidas em meio MRS para cerca de 1,5x10e9 cfu/mL. A seguir, a linhagem foi concentrada por centrifugação em seu meio MRS usado e diluída para 4,9x10e9 cfu/mL com meio MRS novo. Ela foi então dividida em alíquotas de

1 mL que foram congeladas a -80°C até usadas. Cada dia uma alíquota de 1 ml_ recentemente descongelada de Bifidobacterium CNCM 13446 em MRS (para grupos B e C) ou 1 mL de MRS (para Grupo A) foi introduzida nos isoladores, dissolvida em 200 mL de solução salina e igualmente dividida entre 25 garrafas de bebida. Com um consumo médio de 5 mL/dia cada animal dos grupos com B. Iaetis recebeu cerca de 10e8 cfu B. Iaetis por dia.

Bifidobacterium Iongum ATCC BAA-999 foi preparada a partir de coleção de culturas de Nestlé. Em resumo, linhagens foram reativadas e crescidas em meio MRS para cerca de 1x10e9 cfu/mL. A seguir a linhagem 30 foi concentrada por centrifugação e diluída para 4,4x10e9 cfu/mL com meio MRS novo. Ela foi então dividida em alíquotas de 1 mL que foram congeladas a -80°C até usadas. Cada dia uma alíquota de 1 mL recentemente descongelada de Bifidobacterium IongumATCC BAA-999 em MRS (para grupo D) foi introduzida nos isoladores, dissolvida em 200 mL de solução salina e igualmente dividida para garrafas de beber. Com um consumo médio de 5 mL/dia e camundongo cada animal do grupo com B Iongum recebeu cerca 5 de 10e8 cfu B Iongum por dia.

O ingrediente oligossacarídeo CMOS-GOS foi preparado partindo de um permeado de soro de leite coalhado desproteinizado e desmineraIizado industrial (Lactosérum France, France). Em resumo, um permeado de soro de leite coalhado de leite de vaca de ultrafiltração foi desmineralizado 10 em uma linha industrial de desmineralização equipada com módu Ios de eletrodiálise e, trocadores de anions e cátions (Lactosérum, France). O permeado de soro de leite coalhado desmineralizado foi então submetido a 2 ciclos seqüenciais industriais de cristalização de lactose e foi subsequentemente secado por espargimento (Lactosérum, France). O resultante licor mãe modi15 ficado pulverizado foi hidratado em uma atmosfera com elevada umidade relativa (aproximadamente 43%) estabelecida através deuma solução saturada de K2CO3 em um recipiente fechado. Isto permitiu a formação de lactose cristalina. Água fria foi adicionada para reidratar o pulverizado (cerca de

2-3 litros por kg de pulverizado reidratado) e centrifugado em 10 000 x g por 20 minutos. O sobrenadante foi coletado e a pélete novamente suspensa com água fria e centrifugada como antes. O segundo sobrenadante foi reunido com o primeiro e ambos foram liofilizados. Este ingrediente oligossacarídeo de leite de vaca reduzido em lactose (CMOS) foi analisado através de sistema de cromatografia de troca de anions de alta performance equipado com detecção amperométrica pulsada (HPAEC-PAD; ICS3000, Dionex, Sunnyvale, CA) usando uma coluna analítica CarboPac PA200 (Dionex) equipada com uma guarda de coluna de sifão amino CarboPac (Dionex). A preparação CMOS conteve os oligossacarídeos originais e cerca de 3% (peso/peso) de glicose, 46% (peso/peso) lactose, 0,84% (peso/peso) sialil Iactose. Galaetosil oligossacarídeos (Vivinal GOS 259) foram adquiridos de FriesIand Foods DOMO. O ingrediente é vendido como xarope composto por aproximadamente 75% matéria seca (DM) da qual 23% são lactose (em DM), 22% glicose (em DM), 59% galactosil oligossacarídeos (em DM) e foram misturados com a preparação CMOS para obter um ingrediente CMOS-GOS contendo cerca de 9% em peso de oligossacarídeos N-acetilados, cerca de 82% em peso de oligossacarídeos neutros e cerca de 9% em peso de oli5 gossacarídeos sialilados.

Camundongos foram exclusivamente alimentados com uma dieta AIN-93 semissintética e suas modificações (Tabela 1). A partir de dia 15 após parto em diante os camundongos foram alimentados com dieta basal AIN-93. No começo da intervenção ao redor de 8 semanas de idade os ca10 mundongos foram alimentados por 14 dias com 'mistura - AIN' (grupos A, B e D) ou 'AlN-CMOS-GOS' (grupo C).

Tabela 1. Composição das dietas AIN usadas em α/100 α de dieta

AIN-93 basal Mistura AIN AIN-CMOSGOS Amido de milho 51,5 49,8 21,5 Celulose 5 5 5 Sucrose 10 10 10 Glicose - 1,45 1,45 Lactose - 12,3 12,3 CMOS GOS 2 - - 2,3 Caseína 20 20 20 Oleo de soja 7 7 7 Mistura mineral A- 3,5 3,5 3,5 IN93G Mistura de vitaminas 2,5 2,5 2,5 AIN93 1 Bitartarato de colina 0,25 0,25 0,25 L-cistina 0,3 0,3 0,3 Tert-butil hidroquinona 0,0014 0,0014 0,0014 1Mistura de vitaminas foi suplementada com vitamina B1 (tiamina-HCI) em 330 mg/kg de mistura de vitaminas para atingir os níveis requeridos de 600

mg/kg.

2IncIuindo SL em 0,2 g/100g. Tabela 2 - Composição de Microbiota

Linhagem Fenótipo de colônia Concentração adminis¬ sobre placa trada log(cfu/ml) Bifidobaeterium breve Branca, grande 8,85 NCC452 (viv4) Bifidobaeterium Ion- Cinza, pequena 8,19 gum NCC572 (viv5) Staphyloeoeeus aureus 8,48 FSM124 (viv3) Staphyloeoeeus epi- 8,48 dermidis FS M115 (viv2) Eseheriehia eoli 8,48 FSM325 (vivi) Baeteroides distasonis 8,48 FSM24 (viv20) Clostridium perfringens 6,0 FSM-C14 (viv19) Verificação de status livre de germe foi feita usando fezes recentemente coletadas 1 a 2 por gaiola. Em resumo, uma pélete fecal recentemente coletada foi homogeneizada em 0,5 mL de solução de Ringer (Oxoid, 5 UK) suplementada com 0,05 % (peso/volume) L-cisteína (HCI) e 2 vezes 100 pLdo mesmo sobre 2 placas TSS ("Trypcase soy agar" com sangue de cabra 5%; BioMerieux, France). Uma placa foi incubada aeróbica por 24 horas a 37°C e a segunda placa foi incubada anaeróbica por 48 horas a 37°C

Amostras fecais foram coletadas e analisadas no dia 14. Em re10 sumo, para cada camundongo uma pélete fecal foi homogenenizada em 0,5 mL de solução Ringer (Oxoid) suplementada com L-cisteína (HCI) 0,05% e diluição diferente da solução bacteriana foi revestida sobre meios seletivos e semisseletivos para a enumeração de microorganismos específicos: Bifidobacteria sobre meio Eugom Tomato, Lactobacillus sobre meio MRS suple15 mentado com antibióticos (fosfomicina, sulfametoxazol e trimetoprima), C. perfringens sobre meio NN-agar, Enterobacteriaeeae sobre meio Drigalski medium e Baeteroides sobre meio Shaedler Neo Vanco. Placas foram incubadas a 37°C sob condições aeróbicas por 24 horas para a contagem de Enterobacteriaceae, e sob condições anaeróbicas durante 48 horas para Bifidobaeteria, Laetobaeillus, Baeteroides e C. perfringens.

No dia 14 animais foram sacrificados. Em resumo, 2 gaiolas por 5 isolador foram simultaneamente removidas de um dado isolador, enquanto mantendo o isolador livre de germe até todos os animais serem removidos. Cada animal foi pesado. Imediatamente a seguir o animal sofreu eutanásia por decapitação e exaustivo sangramento. Sangue foi coletado e animais foram dissecados para coleta de uma amostra de jejuno (cerca de 6-7 cm 10 diretamente após duodeno) para análise de microbiota.

Resultados

A Figura 1 mostra as contagens das duas Bifidobacteria residentes de microbiota de bebê humano - B. breve e B. Iongum - no intestino delgado (jejuno) e fezes após duas semanas de tratamento. No jejuno, conta15 gens de B. breve foram promovidas em grupos B e C. Em fezes, contagens aumentadas foram verificadas em grupos BeD. Nenhuma mudança significante de contagens de B. Iongum foi verificada entre os grupos.

Contagens de C. perfringes no intestino delgado (jejuno) e fezes após duas semanas de tratamento são mostradas na Figura 2. No jejuno, reduzidos níveis de contagens de C. perfringens são vistos para Grupos B e C com B. Iactis mas não para grupos AeD sem B. laetis. Este efeito é mesmo mais marcado para as amostras de fezes.

Níveis de B. Iaetis acima de limite (10e5 cfu/g de fezes) foram recuperados a partir de cerca de 50% de grupos BeC após 1 semana, mas 25 a partir de nenhum dos mesmos após 2 semanas. Como pode ser visto a partir da Tabela 3, à despeito de dose diária relativamente alta administrada, B. Iaetis não competiu com a Bifidobacteria residente e permaneceu um constituinte menor da microbiota. Tabela 3. Contagens de B. Iactis em conteúdo de fezes e ieiuno sobre o tempo de tratamento

Grupo > 105 cfu/g fezes > 102 cfu/g jejuno Semana 1 Semana 2 Semana 2 (jejuno) B 5/9 0/9 3/9 C 3/9 0/9 6/9

Claims

1. Uso de Bifidobacteria Iactis CNCM I-3446 na fabricação de um medicamento ou composição nutricional terapêutica para promoção de desenvolvimento de uma microbiota intestinal bifidogênica inicial em bebês que tiveram parto por seção cesariana.

2. Uso de Bifidobacterium Iaetis CNCM I-3446 na fabricação de um medicamento ou composição nutricional terapêutica para redução de risco de um subsequente desenvolvimento de alergia de bebês nascidos por seção cesariana.

3. Uso de Bifidobaeterium Iaetis CNCM I-3446 na fabricação de um medicamento ou composição nutricional terapêutica para prevenção ou tratamento de diarréia em bebês paridos por seção cesariana.

4. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que o medicamento ou composição nutricional terapêutica ainda compreende uma mistura de oligossacarídeos que compreende 5-70% em peso de pelo menos um oligossacarídeo N-acetilado selecionado do grupo compreendendo GaINAcaI,3Gaipi,4Glc e Gaipi,6GalNAca1,3Gaipi,4Glc, 20- 90 % em peso de pelo menos um oligossacarídeo selecionado do grupo compreendendo Gaipi ,6Gal, Gaipi,6Gaipi,4Glc Gaipi ,6Gaipi,6Glc, Galpl ,3Gaipi,3Glc, Galp1,3Gaipi ,4Glc, Galpl ,6Galp1.6Gaipi.4Glc, Gaipi,6Galp1,3Galp1,4Glc Galpl ,3Galp1,6Gaipi,4Glc e Gaipi,3Gaipi,3Gaipi,4Glc e 5-50 % em peso de pelo menos um oligossacarídeo sialilado selecionado do grupo compreendendo NeuAca2,3Gaipi,4Glc e NeuAca2.6Galp1.4Glc.

5. Uso de acordo com a reivindicação 4. em que a mistura de oligossacarídeos compreende 10-70% em peso dos oligossacarídeos Nacetilados, 20-80% em peso dos oligossacarídeos neutros e 10-50% em peso dos oligossacarídeos sialilados.

6. Uso de acordo com a reivindicação 4 ou 5, em que a mistura de oligossacarídeos compreende 15-40% em peso dos oligossacarídeos Nacetilados, 40-60% em peso dos oligossacarídeos neutros e 15-30% em peso dos oligossacarídeos sialilados.

7. Uso de acordo com a reivindicação 4 ou 5, em que a mistura de oligossacarídeos compreende 5-20% em peso dos oligossacarídeos Nacetilados, 60-90% em peso dos oligossacarídeos neutros e 5-30% em peso dos oligossacarídeos sialilados.

8. Uso de acordo com qualquer reivindicação precedente, em que o medicamento ou composição nutricional terapêutica é administrada ao bebê imediatamente após parto e a seguir por pelo menos 2 meses.

9. Uso de acordo com qualquer reivindicação precedente, em que o medicamento ou composição nutricional terapêutica é administrada ao bebê por pelo menos 6 meses após parto.

10. Uso de acordo com qualquer reivindicação precedente, em que a Bifidobacterium iactis CNCM I-3446 é administrada ao bebê através da alimentação no seio materno.

11. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, em que a composição nutricional terapêutica é uma fórmula para bebê.

12. Uso de acordo com qualquer reivindicação precedente, em que o medicamento compreende entre 10e5 e 10e11 cfu de Bifidobacterium Iactis CNCM I-3446 por dose diária.

13. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, em que a composição nutricional terapêutica compreende entre 10e3 e 10e12 cfu de Bifidobacterium Iactis CNCM I-3446 por grama de composição (peso seco).