BRPI0809473A2 - Planta de girassol, métodos para produzir uma planta de girassol híbrida, para controlar ervas daninhas na vizinhança de uma planta de girassol, para combater vegetação indesejada, para controlar orobanca que cresce sobre uma planta de girassol, e para genotipar acetoidroxiácido sintase grande de girassol, semente de girassol, e, kit para genotipar acetoidroxiácido sintase grande de girassol. - Google Patents
Planta de girassol, métodos para produzir uma planta de girassol híbrida, para controlar ervas daninhas na vizinhança de uma planta de girassol, para combater vegetação indesejada, para controlar orobanca que cresce sobre uma planta de girassol, e para genotipar acetoidroxiácido sintase grande de girassol, semente de girassol, e, kit para genotipar acetoidroxiácido sintase grande de girassol. Download PDFInfo
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Description
“PLANTA DE GIRASSOL, MÉTODOS PARA PRODUZIR UMA PLANTA DE GIRASSOL HÍBRIDA, PARA CONTROLAR ERVAS DANINHAS NA VIZINHANÇA DE UMA PLANTA DE GIRASSOL, PARA COMBATER VEGETAÇÃO INDESEJADA, PARA CONTROLAR OROBANCA QUE CRESCE SOBRE UMA PLANTA DE GIRASSOL, E PARA GENOTIPAR ACETOIDROXIÁCIDO SINTASE GRANDE DE GIRASSOL, SEMENTE DE GIRASSOL, E, KIT PARA GENOTIPAR ACETOIDROXIÁCIDO SINTASE GRANDE DE GIRASSOL”
CAMPO DA INVENÇÃO
Esta invenção diz respeito ao campo da agricultura, particularmente às plantas de girassol resistentes a herbicida que compreendem dois alelos resistentes a herbicida diferentes do gene da subunidade 1 grande da acetohidroxiácido sintase de girassol (AHASL1). FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
A acetohidroxiácido sintase (AHAS; EC 4.1.3.18, também conhecida como acetolactato sintase ou ALS), é a primeira enzima que catalisa a síntese bioquímica dos aminoácidos de cadeia ramificada valina, leucina e isoleucina (Singh (1999) “Biosynthesis of valine, leucine e isoleucine,” em Plant Amino Acids, Singh, B. K., ed., Marcel Dekker Inc. Nova Iorque, Nova Iorque, pp. 227-247). AHAS é o sítio de ação de quatro famílias de herbicida estrutural e quimicamente diversas incluindo as sulfoniluréias (Tan et al. (2005) Pest Manag. Sei. 61: 246-57; Mallory-Smith e Retzinger (2003) Weed Technology 17: 620-626; LaRossa e Falco (1984) Trends Biotechnol. 2: 158-161), as imidazolinonas (Shaner et al. (1984) Plant Physiol. 76: 545-546), as triazolopirimidinas (Subramanian e Gerwick (1989) “Inhibition of acetolactate synthase by triazolopirimidines,” em Biocatalysis in Agricultural Biotechnology, Whitaker, J. R. e Sonnet, P. E. eds., ACS Symposium Series, American Chemical Society, Washington, D. C., pp. 277- 288) e os pirimidiniloxibenzoatos (Subramanian et al. (1990) Plant Physiol. 94: 239-244). Os herbicidas de imidazolinona e sulfoniluréias são amplamente usados na agricultura moderna devido à sua eficácia em taxas de aplicação muito baixas e não toxicidade relativa em animais. Por inibir a atividade de AHAS, estas famílias de herbicidas previnem o crescimento e 5 desenvolvimento adicional de plantas suscetíveis incluindo muitas espécies de ervas daninhas. Diversos exemplos de herbicidas de imidazolinonas comercialmente disponíveis são PURSUIT® (imazetapir), SCEPTER® (imazaquin) e ARSENAL® (imazapir). Os exemplos de herbicidas de sulfoniluréia são clorsulfiiron, metsulfuron metila, sulfometuron metila, 10 clorimuron etila, tifensulfuron metila, tribenuron metila, bensulfuron metila, nicosulfuron, etametsulfuron metila, rinsulfuron, triflusulfuron metila, triasulfuron, primisulfuron metila, cinosulfuron, amidosulfiuon, fluzasulfuron, imazosulfuron, pirazosulfuron etila e halosulfuron.
Devido à sua alta eficácia e baixa toxicidade, os herbicidas de imidazolinona são favorecidos para a aplicação por pulverização sobre o topo de uma ampla área de vegetação. A capacidade para pulverizar um herbicida sobre o topo de uma ampla faixa de vegetação diminui os custos associados com o estabelecimento e manutenção da planta e diminui a necessidade quanto à preparação do local antes do uso de tais produtos químicos. A pulverização sobre o topo de uma espécie tolerante desejada também resulta na capacidade para se obter potencial de rendimento máximo da espécie desejada devido à ausência de espécies competitivas. Entretanto, a capacidade para usar tais técnicas de pulverizar sobre é dependente da presença de espécies resistentes à imidazolinona da vegetação desejada na área pulverizada sobre.
Entre a maioria das safras agrícolas, algumas espécies leguminosas tais como a soja são naturalmente resistentes aos herbicidas de imidazolinona devido à sua capacidade para metabolizar rapidamente os compostos herbicidas (Shaner e Robinson (1985) Weed Sei. 33: 469-471). Outras safras tais como o milho (Newhouse et al. (1992) Plant Physiol. 100: 882-886) e o arroz (Barrett et al. (1989) Crop Safeners for Herbicides, Academic Press, Nova Iorque, pp. 195-220) são um tanto suscetíveis aos herbicidas de imidazolinona. A sensibilidade diferencial aos herbicidas de 5 imidazolinona é dependente da natureza química do herbicida particular e metabolismo diferencial do composto de uma forma tóxica a uma não tóxica em cada planta (Shaner et al. (1984) Plant Physiol. 76: 545-546; Brown et al., (1987) Pestic. Biochem. Physiol. 27: 24-29). Outras diferenças fisiológicas de planta tais como absorção e translocação também desempenham um papel 10 importante na sensibilidade (Shaner e Robinson (1985) Weed Sei. 33: 469- 471).
As plantas resistentes às imidazolinonas, sulfoniluréias, triazolopirimidinas e pirimidiniloxibenzoatos foram produzidas com êxito usando semente, microesporo, pólen e mutagênese de calo em Zea mays, 15 Arabidopsis thaliana, Brassica napus (isto é, canola) Glicina max, Nieotiana tabaeum, beterraba açucareira (Beta vulgaris) e Oryza sativa (Sebastian et al. (1989) Crop Sei. 29: 1403-1408; Swanson et al., 1989 Theor. Appl. Genet. 78: 525-530; Newhouse et al. (1991) Theor. Appl. Genet. 83: 65-70; Sathasivan et al. (1991) Plant Physiol. 97: 1044-1050; Mourand et al. (1993) 20 J. Heredity 84: 91-96; Wright e Penner (1998) Theor. Appl. Genet. 96: 612- 620; Patente U.S. N- 5.545.822). Em todos os casos, um único, gene nuclear parcialmente dominante conferiu resistência. Quatro plantas de trigo resistentes à imidazolinona foram também anteriormente isoladas a seguir da mutagênese de semente de Triticum aestivum L. cv. Fidel (Newhouse et al. 25 (1992) Plant Physiol. 100: 882-886). Estudos de hereditariedade confirmaram que um único, gene parcialmente dominante conferiu resistência. Com base em estudos alélicos, os autores concluíram que as mutações nas quatro linhagens identificadas foram localizadas no mesmo local. Um dos genes de resistência do cultivar Fidel foi designado FS-4 (Newhouse et al. (1992) Plant Physiol. 100: 882-886).
As populações de planta que ocorrem naturalmente que foram descobertas serem resistentes aos herbicidas de imidazolinona e/ou sulfoniluréia também foram usados para desenvolver linhagens de cruzamento de girassol resistentes a herbicida. Recentemente, duas linhagens de girassol que são resistentes a um herbicida de sulfoniluréia foram desenvolvidos usando plasma germinativo que se origina de uma população selvagem de girassol comum (.Helianthus annuus) como a fonte do traço de resistência a herbicida (Miller e Al-Khatib (2004) Crop Sei. 44: 1037-1038). Anteriormente, White et al. ((2002) Weed Sei. 50: 432-437) relataram que indivíduos de uma população selvagem de girassol comum de South Dakota, U.S.A. foram resistente cruzado a um herbicida de imidazolinona e um de sulfoniluréia. A análise de uma porção da região codificadora dos genes da subunidade grande da acetohidroxiácido sintase (AHASL) de indivíduos desta população revelou uma mutação pontual que resultou em uma substituição de aminoácido de Ala para Val na proteína AHASL de girassol que corresponde a Ala2Os na proteína AHASL de Arabidopsis thaliana do tipo selvagem (White et al. (2003) Weed Sei. 51: 845-853). Antes, Al-Khatib e Miller ((2000) Crop Sei. 40: 869) relataram a produção de quatro linhagens de cruzamento de girassol resistentes à imidazolinona.
A modelagem com base em computador das três conformações dimensionais do complexo AHAS-inibidor prognostica diversos aminoácidos na bolsa de ligação do inibidor proposto como sítios onde mutações induzidas provavelmente confeririam resistência seletiva às imidazolinonas (Oft et al. 25 (1996) J. Mol. Biol. 263: 359-368). As plantas de tabaco produzidas com algumas destas mutações racionalmente planejadas nos sítios de ligação propostos da enzima AHAS de fato exibiram resistência específica a uma única classe de herbicidas (Ott et al. (1996) J. Mol. Biol. 263: 359-368).
A resistência de planta aos herbicidas de imidazolinona também foi relatada em várias patentes. As Patentes U.S. N— 4.761.373, 5.331.107, 5.304.732, 6.211.438, 6.211.439 e 6.222.100 no geral descrevem o uso de um gene de AHAS alterado para evocar resistência a herbicida em plantas e especificamente divulga certas linhagens de milho resistentes à 5 imidazolinona. A Patente U.S. N° 5.013.659 divulga plantas exibindo resistência a herbicida devido às mutações em pelo menos um aminoácido em uma ou mais regiões conservadas. As mutações descritas nesse ponto codificam a resistência cruzada para imidazolinonas e sulfoniluréias ou resistência específica à sulfoniluréia, mas a resistência específica à 10 imidazolinona não está descrita. A Patente U.S. Ns 5.731.180 e a Patente U.S. Ns 5.767.361 debatem um gene isolado tendo uma única substituição de aminoácido em uma seqüência de aminoácido de AHAS monocot do tipo selvagem que resulta em resistência específica à imidazolinona. Além disso, plantas de arroz que são resistentes aos herbicidas que interferem com AHAS 15 foram desenvolvidas pela procriação mutacional e também pela seleção de plantas resistentes a herbicida de um grupo de plantas de arroz produzidas pela cultura de antera. Ver, as Patentes U.S. N— 5.545.822, 5.736.629, 5.773.703, 5.773.704, 5.952.553 e 6.274.796.
Em plantas, como em todos os outros organismos examinados, 20 a enzima AHAS é compreendida de duas subunidades: uma subunidade grande (papel catalítico) e uma subunidade pequena (papel regulador) (Duggleby e Pang (2000) J. Biochem. Mol. Biol. 33: 1-36). A subunidade de AHAS grande (também aludida aqui como AHASL) pode ser codificada por um único gene como no caso de Arabidopsis e da beterraba açucareira ou por 25 membros da família de gene múltiplos como no milho, canola e algodão. As substituições específicas, de nucleotídeo único na subunidade grande confere na enzima um grau de insensibilidade a uma ou mais classes de herbicidas (Chang e Duggleby (1998) Biochem J 333: 765-777).
Por exemplo, o trigo de pão, Triticum aestivum Lcontém três genes da subunidade grande da acetohidroxiácido sintase homóloga. Cada um dos genes exibem expressão significante com base na resposta ao herbicida e dados bioquímicos de mutantes em cada um dos três genes (Ascenzi et al. (2003) International Society of Plant Molecular Biologists Congress, 5 Barcelona, Espanha, Ref. N- S10-17). As seqüências codificadoras de todos os três genes compartilham homologia extensiva ao nível do nucleotídeo (WO 03/014357). Através do sequenciamento dos genes AHASL de diversas variedades de Triticum aestivum, a base molecular da tolerância a herbicida na maioria das linhagens tolerantes à IMI (tolerantes à imidazolinona) foi 10 encontrada ser a mutação S653(At)N, indicando uma substituição de serina para asparagina em uma posição equivalente à serina no aminoácido 653 em Arabidopsis thaliana (WO 03/01436; WO 03/014357). Esta mutação é devido a um polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) na seqüência de DNA que codifica a proteína AHASL.
Os genes AHASL múltiplos também são conhecidos ocorrer
em espécies de plantas dicotiledôneas. Recentemente, Kolkman et al. ((2004) Theor. Appl. Genet. 109: 1147-1159) relatou a identificação, clonagem e sequenciamento para três genes AHASL (AHASL 1, AHASL2 e AHASL3) de genótipos resistentes a herbicida e do tipo selvagem de girassol (.Helianthus 20 annuus L.). Kolkman et al. relataram que a resistência a herbicida foi devido à substituição Prol97Leu (usando a nomenclatura de posição de aminoácido AHASL de Arabidopsis) ou a substituição Ala205Val na proteína AHASLl e que cada uma destas substituições forneceu resistência tanto aos herbicidas de imidazolinona quanto aos de sulfoniluréia.
Dada a sua alta eficácia e baixa toxicidade, os herbicidas de
imidazolinona são favorecidos para o uso agrícola. Entretanto, a capacidade de usar herbicidas de imidazolinona em um sistema de produção de safra particular depende da disponibilidade das variedades resistentes à imidazolinona da planta de safra de interesse. Para produzir tais variedades resistentes à imidazolinona, os reprodutores de planta necessitam desenvolver linhagens de procriação com o traço de resistência à imidazolinona. Assim, linhagens de procriação e variedades resistentes à imidazolinona adicionais de plantas de safra, assim como métodos e composições para a produção e uso de 5 linhagens de procriação e variedades resistentes à imidazolinona, são necessários.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
A presente invenção fornece novas plantas de girassol resistentes a herbicida que compreendem dois alelos resistentes a herbicida 10 diferentes do gene da subunidade 1 grande da acetohidroxiácido sintase (AHASLl) de girassol. Em particular, as plantas de girassol da invenção têm resistência aumentada aos herbicidas que inibem a acetohidroxiácido sintase (AHAS), quando comparado a uma planta de girassol do tipo selvagem. As plantas de girassol resistentes a herbicida da invenção compreendem um 15 primeiro alelo de AHASLl e um segundo alelo de AHASL 1, em que o primeiro e o segundo alelos de AHASLl codificam uma primeira e segunda proteínas de AHASLl de girassol resistente a herbicida, respectivamente. O primeiro alelo AHASLl codifica uma proteína AHASLl de girassol que compreende a substituição de aminoácido A122T. o segundo alelo AHASLl 20 codifica uma proteína AHASLl de girassol que compreende a substituição de aminoácido A205V ou a substituição de aminoácido P197L. Também são fornecidas partes, tecidos, células e sementes da planta de girassol que compreendem o primeiro e segundo alelos AHASL 1.
A presente invenção fornece ainda um método para produzir 25 uma planta de girassol híbrida que compreende a resistência a pelo menos um herbicida que inibe AHAS. O método envolve a polinização cruzada de uma primeira planta de girassol com uma segunda planta de girassol de modo a produzir sementes de girassol híbridas que podem ser semeadas e deixadas crescer em uma planta de girassol híbrida, particularmente uma planta de girassol híbrida FI. A primeira planta de girassol compreende no seu genoma pelo menos uma cópia de um primeiro alelo de um gene de AHASLl e a segunda planta de girassol compreende no seu genoma pelo menos uma cópia de um segundo alelo de um gene de AHASL 1. Preferivelmente, a primeira 5 planta de girassol é homozigota para o primeiro alelo e a segunda planta de girassol é homozigota para o segunda alelo. O primeiro alelo codifica uma proteína AHASLl de girassol que compreende a substituição de aminoácido A122T. o segundo alelo codifica uma proteína AHASLl de girassol que compreende a substituição de aminoácido A205V ou a substituição de 10 aminoácido Pl 97L.
A presente invenção adicionalmente fornece métodos para controlar ervas daninhas ou vegetação indesejada na vizinhança de uma planta de girassol da invenção. Um método compreende aplicar uma quantidade eficaz de herbicida que inibe AHAS, particularmente um herbicida de 15 imidazolinona ou sulfoniluréia, às ervas daninhas e à planta de girassol. Um outro método compreende contatar uma semente de girassol da presente invenção antes de semear e/ou depois da pré-germinação com uma quantidade eficaz de um herbicida que inibe AHAS, particularmente um herbicida de imidazolinona ou sulfoniluréia. A presente invenção fornece ainda as 20 sementes de girassol da presente invenção tratada com uma quantidade eficaz de um herbicida que inibe AHAS. As plantas e sementes de girassol para o uso nestes métodos compreendem em seus genomas um primeiro alelo AHASLl e um segundo alelo AHASL I. O primeiro alelo AHASLl codifica uma proteína AHASLl de girassol que compreende a substituição de 25 aminoácido A122T. O segundo alelo AHASLl codifica uma proteína AHASLl de girassol que compreende a substituição de aminoácido A205V ou a substituição de aminoácido P197L.
A presente invenção fornece ainda métodos para controlar as ervas parasíticas Orobanche cumana e Orobanche cernua, também conhecida como orobanca, nas plantas de girassol infectadas. O método compreende aplicar uma quantidade eficaz de um herbicida de imidazolinona às ervas daninhas e à planta de girassol resistente a herbicida da presente invenção, particularmente uma planta de girassol que compreende dois alelos A122T ou 5 uma planta de girassol que compreende um alelo AHASLl A122T e um alelo AHASLl A205V.
A presente invenção fornece métodos de diagnóstico para identificar os alelos do gene AHASLl em girassol individual. Tais métodos de diagnóstico envolvem a amplificação pela reação da cadeia da polimerase 10 (PCR) de regiões específicas do gene de AHASLl do girassol usando iniciadores planejados para anelar aos sítios específicos dentro do gene do girassol de AHASLl tal como, por exemplo, sítios nas ou na vizinhança de mutações no gene de AHASLl. São adicionalmente fornecidos os iniciadores usados nestes métodos e kits para a realização dos métodos.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DOS DESENHOS
A Figura 1 é uma representação gráfica do efeito da aplicação foliar de imazapir sobre o topo da planta 14 dias depois do tratamento para materiais homozigoto para os eventos de mutação A122T e A205V e genótipos heterozigotos A205 + A122T. As alturas médias (% de plotagens 20 não tratadas) são representadas pelos símbolos e as barras de erro representam o desvio padrão da média.
A Figura 2 é uma representação gráfica do efeito da aplicação foliar de imazapir sobre o índice de Fitotoxicidade (PI) 14 dias depois do tratamento com materiais homozigotos para os eventos de mutação A122T e 25 A205V e genótipos heterozigotos A205 + A122T. Os PI médios são representados pelos símbolos e as barras de erro representam o desvio padrão da média.
A Figura 3 é uma representação gráfica do efeito da aplicação foliar de imazapir sobre o acúmulo de biomassa 14 dias depois do tratamento
Claims (38)
1. Planta de girassol resistente a herbicida, caracterizada pelo fato de que compreende no seu genoma um primeiro alelo de um gene da subunidade da acetoidroxiácido sintase grande (AHASLl) e um segundo alelo do dito gene de AHASL 1, em que o dito primeiro alelo codifica uma proteína AHASLl que compreende a substituição do aminoácido A122T e o dito segundo alelo codifica uma proteína AHASLl que compreende uma substituição de aminoácido selecionada do grupo que consiste da substituição de aminoácido A205V e da substituição de aminoácido P197L.
2. Planta de girassol de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a dita planta de girassol resistente a herbicida é resistente a pelo menos um herbicida que inibe AHAS.
3. Planta de girassol de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o dito herbicida que inibe AHAS é selecionado do grupo que consiste de herbicidas de imidazolinona, herbicidas de sulfoniluréia, herbicidas de triazolopirimidina, herbicidas de pirimidiniloxibenzoato e herbicidas de sulfonilaminocarbonil-triazolinona.
4. Planta de girassol de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a dita planta de girassol é uma semente.
5. Planta de girassol de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a dita planta de girassol produz sementes que compreendem um óleo de semente extraível que compreende pelo menos 85 % de ácido oléico.
6. Método para produzir uma planta de girassol híbrida, o dito método caracterizado pelo fato de que compreende cruzar uma primeira planta de girassol com uma segunda planta de girassol, em que a dita primeira planta de girassol compreende no seu genoma pelo menos uma cópia de um primeiro alelo de um gene de AHASLl e a dita segunda planta de girassol compreende no seu genoma pelo menos uma cópia de um segundo alelo de um gene de AHASLl e em que o dito primeiro alelo codifica uma proteína de AHASLl que compreende a substituição de aminoácido A122T e o dito segundo alelo codifica uma proteína de AHASLl que compreende uma substituição de aminoácido selecionada do grupo que consiste da substituição de aminoácido A205V e a substituição de aminoácido P197L.
7. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que compreende ainda colher uma semente resultante do dito cruzamento.
8. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o dito primeiro girassol é homozigoto para o dito primeiro alelo e a dita segunda planta de girassol é homozigota para o dito segundo alelo.
9. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que compreende ainda selecionar pelo menos uma planta de girassol descendente do dito cruzamento que compreende no seu genoma o dito primeiro e o dito segundo alelos.
10. Método para controlar ervas daninhas na vizinhança de uma planta de girassol, o dito método caracterizado pelo fato de que compreende aplicar uma quantidade eficaz de um herbicida que inibe AHAS às ervas daninhas e à planta de girassol, em que a dita planta de girassol é selecionada do grupo que consiste de: (a) uma planta de girassol que compreende no seu genoma um primeiro alelo de um gene de AHASLl e um segundo alelo do dito gene de AHASL 1, em que o dito primeiro alelo codifica uma proteína de AHASLl que compreende a substituição de aminoácido A122T e o dito segundo alelo codifica uma proteína de AHASLl que compreende a substituição de aminoácido A205V; e (b) uma planta de girassol que compreende no seu genoma um primeiro alelo de um gene de AHASLl e um segundo alelo do dito gene de AHASL 1, em que o dito primeiro alelo codifica uma proteína de AHASLl que compreende a substituição de aminoácido A122T e o dito segundo alelo codifica uma proteína de AHASLl que compreende a substituição de aminoácido P197L.
11. Método de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o dito herbicida que inibe AHAS é selecionado do grupo que consiste de: um herbicida de imidazolinona, um herbicida de sulfoniluréia, um herbicida de triazolopirimidina, um herbicida de pirimidiniloxibenzoato, um herbicida sulfonilamino-carboniltriazolinona ou mistura destes.
12. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o dito herbicida de imidazolinona é selecionado do grupo que consiste de: ácido [2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-] imidiazolin-2-il)nicotínico, ácido 2-(4-isopropil)-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-3- quinolinocarboxílico, ácido [5-etil-2-(4-isopropil-4-metil-] 5-oxo-2- imidazolin-2-il)-nicotínico, ácido 2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-5-(metoximetil)-nicotínico, ácido 2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2- imidazolin-2-il)-5-metilnicotínico e uma mistura de 6-(4-isopropil-4-metil-5- oxo-2-imidazolin-2-il)-m-toluato de metila, [2-(4-] isopropil-4-metil-5-oxo-2- imidazolin-2-il)-p-toluato de metila e mistura destes.
13. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o dito herbicida de sulfoniluréia é selecionado do grupo que consiste de: clorsulfuron, metsulfuron metila, sulfometuron metila, clorimuron etila, tifensulfuron metila, tribenuron metila, bensulfuron metila, nicosulfuron, etametsulfuron metila, rimsulfuron, triflusulfuron metila, triasulfuron, primisulfuron metila, cinosulfuron, amidosulfiuon, fluzasulfuron, imazosulfuron, pirazosulfuron etila, halosulfuron e misturas destes.
14. Semente de girassol, caracterizada pelo fato de que compreende no seu genoma um primeiro alelo de um gene de AHASLl e um segundo alelo do dito gene de AHASL 1, em que o dito primeiro alelo codifica uma proteína de AHASLl que compreende a substituição de aminoácido Α122Τ e o dito segundo alelo codifica uma proteína de AHASLl que compreende uma substituição de aminoácido selecionada do grupo que consiste da substituição de aminoácido A205V e a substituição de aminoácido P197L e em que a dita semente é tratada com um herbicida que inibe AHAS.
15. Semente de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que o dito herbicida que inibe AHAS é selecionado do grupo que consiste de um herbicida de imidazolinona, um herbicida de sulfoniluréia, um herbicida de triazolopirimidina, um herbicida de pirimidiniloxibenzoato e um herbicida sulfonilamino-carboniltriazolinona ou mistura destes.
16. Método para combater vegetação indesejada, caracterizado pelo fato de que compreende contatar uma semente de girassol antes da semeadura e/ou depois da pré-germinação com uma quantidade eficaz de herbicida que inibe AHAS, em que a dita semente de girassol compreende no seu genoma um primeiro alelo de um gene de AHASLl e um segundo alelo do dito gene de AHASLl, em que o dito primeiro alelo codifica uma proteína de AHASLl que compreende a substituição de aminoácido A122T e o dito segundo alelo codifica uma proteína de AHASLl que compreende uma substituição de aminoácido selecionada do grupo que consiste da substituição do aminoácido A205V e a substituição do aminoácido P197L.
17. Método de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o dito herbicida que inibe AHAS é selecionado do grupo que consiste de um herbicida de imidazolinona, um herbicida de sulfoniluréia, um herbicida de triazolopirimidina, um herbicida de pirimidiniloxibenzoato e um herbicida sulfonilaminocarbonil-triazolinona ou mistura destes.
18. Método para controlar orobanca que cresce sobre uma planta de girassol, o dito método caracterizado pelo fato de que compreende aplicar uma quantidade eficaz de um herbicida de imidazolinona à orobanca e à planta de girassol, em que a dita planta de girassol é selecionada do grupo que consiste de: (a) uma planta de girassol que compreende no seu genoma dois alelos AHASLl A122T; e (b) uma planta de girassol que compreende no seu genoma um alelo AHASL I A122T e um alelo AHASL 1 A205V.
19. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a dita orobanca é selecionada do grupo que consiste de: Orobanche eumana e Orobanehe eernua.
20. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o dito herbicida de imidazolinona é selecionado do grupo que consiste de: ácido [2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-] imidiazolin-2-il)nicotínico, ácido 2-(4-isopropil)-4-metil-5-oxo-2- imidazolin-2-il)-3- quinolinocarboxílico, ácido [5-etil-2-(4-isopropil-4-metil-] 5-oxo-2- imidazolin-2-il)-nicotínico, ácido 2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-5-(metoximetil)-nicotínico, ácido 2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2- imidazolin-2-il)-5-metilnicotínico e uma mistura de 6-(4-isopropil-4-metil-5- oxo-2-imidazolin-2-il)-m-toluato de metila, [2-(4-] isopropil-4-metil-5-oxo-2- imidazolin-2-il)-p-toluato de metila e mistura destes.
21. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o dito herbicida de imidazolinona é imazapir.
22. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o dito herbicida de imidazolinona é aplicado no estágio de crescimento Rl.
23. Semente de girassol, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos uma cópia do alelo AHASLl A122T e um óleo de semente extraível que compreende pelo menos cerca de 85 % de ácido oléico.
24. Semente de girassol de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que a dita semente é um descendente de uma planta de girassol da linhagem de girassol GM40, a semente representativa da dita linhagem tendo sido depositada sob o Número de Designação de Depósito de Patente na ATCC PTA-6716.
25. Semente de girassol de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que a dita semente é um descendente de uma planta de girassol da linhagem de girassol GMl 606, a semente representativa da dita linhagem tendo sido depositada sob o Número de Designação de Depósito de Patente na ATCC PTA-7606.
26. Planta de girassol, caracterizada pelo fato de que é produzida pelo cultivo da semente como definido na reivindicação 23.
27. Método para controlar ervas daninhas na vizinhança de uma planta de girassol, o método caracterizado pelo fato de que compreende aplicar uma quantidade eficaz de um herbicida de imidazolinona às ervas daninhas e à planta, em que a planta de girassol é produzida pelo cultivo da semente como definida na reivindicação 23.
28. Método para genotipar acetoidroxiácido sintase grande (AHASLl) de girassol, o dito método caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: (a) obter DNA genômico de uma planta de girassol; (b) usar o dito DNA como um padrão para uma primeira amplificação pela reação da cadeia da polimerase (PCR) que compreende dito DNA, polimerase, trifosfatos de desoxirribonucleotídeo, um iniciador de AHASLl direto e um iniciador de AHASLl do tipo selvagem reverso, em que o dito iniciador de AHASLl do tipo selvagem reverso anela a uma seqüência de nucleotídeo que compreende a seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO: 13, em que o nucleotídeo que está no nucleotídeo da extremidade 3’ do dito iniciador de AHASLl do tipo selvagem reverso é o complemento do nucleotídeo que está na posição 1 da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO: 13; (c) usar o dito DNA como um padrão para uma segunda amplificação pela PCR que compreende o dito DNA, polimerase, trifosfatos de desoxirribonucleotídeo, o dito iniciador de AHASLl direto e um iniciador de AHASLl reverso mutante, em que o dito iniciador de AHASLl reverso mutante anela a uma seqüência de nucleotídeo que compreende a seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQID NO: 14, em que o nucleotídeo que está no nucleotídeo da extremidade 3’ do dito iniciador de AHASLl reverso mutante é o complemento do nucleotídeo que está na posição 1 da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO: 14; e (d) detectar os produtos do dito primeiro e da dita segunda amplificações pela PCR; em que o dito iniciador de AHASLl direto compreende uma seqüência de nucleotídeo que corresponde a uma região do gene de AHASLl do girassol que está a 5 ’ da região (ACC)n.
29. Método de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que o dito iniciador de AHASLl do tipo selvagem reverso compreende a seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO: 4.
30. Método de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que o dito iniciador de AHASLl reverso mutante compreende a seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO: 5.
31. Método de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que o dito iniciador de AHASLl direto anela a uma seqüência de nucleotídeo que compreende o complemento da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO: 12.
32. Método de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que o dito iniciador AHASL direto compreende a seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO: 3.
33. Kit para genotipar acetoidroxiácido sintase grande (AHASLl) de girassol, o dito kit caracterizado pelo fato de que compreende: (a) um iniciador de AHASLl direto que compreende uma seqüência de nucleotídeo que corresponde a uma região do gene de AHASLI de girassol que está a 5’ da região (ACC)n; (b) um iniciador de AHASLl do tipo selvagem reverso, em que o dito iniciador de AHASLl do tipo selvagem reverso anela a uma seqüência de nucleotídeo que compreende a seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQID NO: 13, em que o nucleotídeo que está no nucleotídeo da extremidade 3’ do dito iniciador de AHASLl do tipo selvagem reverso é o complemento do nucleotídeo que está na posição 1 da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO: 13; e (c) um iniciador de AHASLl mutante reverso, em que o dito iniciador de AHASLl mutante reverso anela a uma seqüência de nucleotídeo que compreende a seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO: 14 em que o nucleotídeo que está no nucleotídeo da extremidade 3’ do dito iniciador de AHASLl mutante reverso é o complemento do nucleotídeo que está na posição 1 da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQID NO: 14.
34. Kit de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que compreende ainda uma enzima da polimerase capaz de catalisar a amplificação pela PCR de um primeiro fragmento de um gene AHASL de girassol e um segundo fragmento de um gene AHASL de girassol, em que o primeiro fragmento está entre o dito sítio de anelamento do dito iniciador de AHASLl direto e o dito sítio de anelamento do dito iniciador de AHASLl do tipo selvagem reverso em um gene AHASLl de girassol e o segundo fragmento está entre o dito sítio de anelamento do dito iniciador de AHASLl direto e o dito sítio de anelamento do dito iniciador de AHASLl mutante reverso em um gene AHASLl de girassol.
35. Kit de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que o dito iniciador de AHASLl direto anela a uma seqüência de nucleotídeo que compreende o complemento da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO: 12.
36. Kit de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que o dito iniciador AHASL direto compreende a seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO: 3.
37. Kit de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que o dito iniciador de AHASLl do tipo selvagem reverso compreende a seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQID NO: 4.
38. Kit de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que o dito iniciador de AHASLl mutante reverso compreende a seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO: 5.
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