BRPI0808653A2 - Composições e métodos referindo-se a novos compostos e alvos dos mesmos. - Google Patents

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BRPI0808653A2
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Description

“NOVOS COMPOSTOS E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA CONTENDO OS MESMOS, BEM COMO USOS”
PEDIDO RELACIONADO
Este pedido reivindica prioridade ao U.S.S.N. 60/906.016, depositado em 9 de Março de 2007, os conteúdos do mesmo são incorporados por meio deste relatório como referência.
CAMPO DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se a novos compostos químicos, métodos para sua descoberta e seu uso terapêutico. Em particular, a presente invenção fornece compostos de 10 benzodiazepina, e compostos estrutural e funcionalmente relacionados, e métodos de usar tais compostos como agentes terapêuticos para tratar várias condições associadas à regulação defeituosa dos processos de morte celular programada, autoimunidade, inflamação, hiperproliferação, anormalidades vasculares e semelhantes.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO Organismos multicelulares exercem controle preciso sobre o número celular. Um
equilíbrio entre a proliferação celular e a morte celular obtém esta homeostase. A morte celular ocorre em quase todos os tipos de células de vertebrados por intermédio de necrose ou através de uma forma suicida de morte celular, conhecida como apoptose. A apoptose é ativada por uma variedade de sinais extra e intracelulares que empregam um mecanismo de morte geneticamente programada e comum.
Os organismos multicelulares usam a apoptose para orientar as células danificadas ou desnecessárias a se autodestruírem para o bem-estar do organismo. Portanto, o controle do processo apoptótico é muito importante para normalizar o desenvolvimento, por exemplo,
o desenvolvimento fetal dos dedos das mãos e dos pés exige a remoção controlada, por 25 apoptose, do excesso de tecidos interconectados, assim como a formação de sinapses neurais dentro do cérebro. Similarmente, a apoptose controlada é responsável pela eliminação da membrana mucosa da parece uterina (o endométrio) no início da menstruação. Embora a apoptose desempenhe um papel importante na modelação do tecido e na manutenção celular normal, também é a defesa primária contra células e 30 invasores (por exemplo, vírus) que ameaçam o bem-estar do organismo.
De maneira não surpreendente, muitas doenças estão associadas à desregulação do processo de morte celular. Modelos experimentais estabeleceram um relacionamento causa-efeito entre a regulação apoptótica anormal e a patogenicidade de várias doenças neoplásicas, autoimunes e virais. Por exemplo, na resposta imune mediada por células, 35 células efetoras (por exemplo, linfócitos T citotóxicos “CTLs”) destroem células infectadas por vírus induzindo a apoptose em células infectadas. Subsequentemente, o organismo conta com o processo apoptótico para destruir as células efetoras quando elas deixam de ser necessárias. A autoimunidade normalmente é prevenida pela apoptose induzida por CTLs e ainda por si só. Defeitos neste processo estão associados a uma variedade de doenças autoimunes, tais como lúpus eritematoso e artrite reumatóide.
Os organismos multicelulares também usam a apoptose para orientar células com 5 ácidos nucléicos danificados (por exemplo, DNA) à autodestruição antes de se tornarem cancerosas. Alguns vírus que causam câncer superam esta proteção reprogramando-se células infectadas (transformadas) para abortar o processo apoptótico normal. Por exemplo, vários papilomavírus humanos (HPVs) foram implicados em causar câncer cervical suprimindo-se a remoção apoptótica de células transformadas pela produção de uma 10 proteína (E6) que inativa o promotor da apoptose p53. Similarmente, o vírus Epstein-Barr (EBV)1 o agente causador de mononucleose e Iinfoma de Burkitt, reprograma as células infectadas para produzir proteínas que previnem a remoção apoptótica normal das células anormais, assim permitindo que células cancerosas se proliferem e se propaguem por todo
o organismo.
Ainda outros vírus destrutivamente manipulam um mecanismo apoptótico das
células sem resultar diretamente no desenvolvimento de um câncer. Por exemplo, a destruição do sistema imune em indivíduos infectados com o vírus da imunodeficiência humana (HIV) é considerada progredir através de células T CD4+ infectadas (cerca de 1 em 100.000) instruindo células irmãs não infectadas a sofrer apoptose.
Alguns cânceres que surgem por meios não virais também desenvolveram
mecanismos de escapar da destruição por apoptose. Células de melanoma, por exemplo, evitam a apoptose inibindo-se a expressão do gene que codifica Apaf-1. Outras células cancerosas, especialmente células do câncer de pulmão e cólon, secretam níveis altos de moléculas de proteção solúveis que inibem a iniciação de liberação mediada por CTL de 25 células anormais. A regulação defeituosa do mecanismo apoptótico também foi implicada em várias condições degenerativas e doenças vasculares.
É evidente que a regulação controlada do processo apoptótico e seu mecanismo celular é vital para a sobrevivência de organismos multicelulares. Tipicamente, as mudanças bioquímicas que ocorrem em uma célula instruída a sofrer apoptose acontecem em uma progressão ordenada. Entretanto, conforme mostrado acima, a regulação defeituosa da apoptose pode causar sérios efeitos deletérios no organismo.
Várias tentativas foram feitas para controlar e restaurar a regulação do mecanismo apoptótico em células anormais (por exemplo, células cancerosas). Por exemplo, muito trabalho foi feito para desenvolver agentes citotóxicos para destruir células anormais antes 35 de sua proliferação. Como tal, agentes citotóxicos têm utilidade predominante tanto na saúde humana quanto animal e representam a primeira linha de tratamento para quase todas as formas de câncer e distúrbios autoimunes hiperproliferativos, tais como lúpus eritematoso e artrite reumatóide.
Muitos agentes citotóxicos no uso clínico exercem seu efeito danificando-se o DNA (por exemplo, DNA de reticulações de cis-diaminodicroplatanima(ll), ao passo que a bleomicina induz a clivagem do filamento). O resultado deste dano nuclear, se reconhecido por fatores celulares tipo o sistema p53, é iniciar uma cascata apoptótica levando à morte da célula danificada.
Entretanto, agentes quimioterápicos citotóxicos existentes têm sérias desvantagens. Por exemplo, muitos agentes citotóxicos conhecidos mostram pouca discriminação entre células saudáveis e doentes. Esta falta de especificidade 10 frequentemente resulta em efeitos colaterais severos que podem limitar a eficácia e/ou resultam em mortalidade precoce. Além disso, a administração prolongada de muitos agentes citotóxicos existentes resulta na expressão de genes resistentes (por exemplo, família bcl-2 ou proteínas resistentes a multifármacos (MDR)) o que torna a dosagem ainda menos eficaz ou inútil. Alguns agentes citotóxicos induzem as mutações em p53 e proteínas 15 relacionadas. Com base nestas considerações, fármacos citotóxicos ideais devem apenas matar células doentes e não suscetíveis à quimiorresistência.
Uma estratégia para matar seletivamente células doentes ou bloquear seu crescimento é desenvolver fármacos que reconhecem seletivamente moléculas expressadas em células doentes. Assim, agentes quimioterápicos citotóxicos eficazes, reconheceriam as 20 moléculas indicativas da doença e induziriam (por exemplo, direta ou indiretamente) a morte da célula doente. Embora marcadores em alguns tipos de células cancerosas sejam identificados e alvejados com anticorpos terapêuticos e moléculas pequenas, traços únicos para o diagnóstico e exploração terapêutica não são conhecidos para a maioria dos cânceres. Além disso, para doenças tipo lúpus, alvos moleculares específicos para o 25 desenvolvimento do fármaco não foram identificados.
São necessários composições e métodos aperfeiçoados para regular os processos apoptóticos em pacientes afligidos com doenças e condições caracterizadas pela regulação defeituosa destes processos (por exemplo, infecções virais, distúrbios autoimunes hiperproliferativos, condições inflamatórias crônicas e cânceres).
SUMÁRIO
A presente invenção fornece novos compostos que encontram uso no tratamento de várias doenças e condições em seres humanos e animais e que encontram uso em pesquisa, triagem do composto e aplicações de diagnóstico. Além disso, a presente invenção também fornece usos destes novos compostos, assim como o uso de compostos 35 conhecidos, que evocam respostas biológicas particulares (por exemplo, compostos que se ligam a moléculas alvo particulares e/ou causam eventos celulares particulares). Tais compostos e usos são descritos por todo o presente pedido e representam uma coleção diversa de composições e aplicações.
Certas composições e usos preferidos são descritos abaixo. A presente invenção não é limitada a estas composições e usos particulares. A presente invenção fornece várias composições úteis, conforme descritas por todo o presente pedido.
Em certas modalidades, a presente invenção fornece compostos descritos pelas fórmulas seguintes:
vVt>
HN NH R5HN. .μ
Il p I
, o , e o ,
incluindo sais, ésteres, e pró-fármacos dos mesmos; e incluindo as formas enantioméricas ReSe misturas racêmicas dos mesmos;
em que
X é halogênio (por exemplo, Br, Cl, F), alquila (por exemplo, metila, etila, propila (por exemplo, isopropila), butila (por exemplo, isobutila, sec-butila, terc-butila), pentila, isoamila, neopentila, 1-etilpropila, 3-metilpentila, 2,2-dimetilbutila, heptila, hexila, octila, 3- etilbutila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila), ou alquila substituído;
R2 é hidrogênio ou um alquila linear ou ramificado (por exemplo, metila, etila,
propila (por exemplo, isopropila), butila (por exemplo, isobutila, sec-butila, terc-butila), pentila, isoamila, neopentila, 1-etilpropila, 3-metilpentila, 2,2-dimetilbutila, heptila, hexila, octila, 3-etilbutila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila); e
R5 é alquila (por exemplo, metila, etila, propila (por exemplo, isopropila), butila (por 20 exemplo, isobutila, sec-butila, terc-butila), pentila, isoamila, neopentila, 1-etilpropila, 3- metilpentila, 2,2-dimetilbutila, heptila, hexila, octila, 3-etilbutila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila) ou alquila substituído.
Em certas modalidades, a presente invenção fornece os compostos seguintes: OH OH
OH
OH NH O
Λ
HN
.OaN Em certas modalidades, o composto é selecionado do grupo que consiste de (Z)-1- (4-(3-(2-bromobenzil)-7-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenil)-3- isopropilureia; (Z)-1 -(4-(7-cloro-2-oxo-3-(2-(trifluorometil)benzil)-2,3-diidro-1 H
benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenil)-3-isopropilureia; (Z)-1-(4-(7-cloro-3-(2-fluorobenzil)-2-oxo2,3-diidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenil)-3-isopropilureia; (Z)-1-(4-(7-cloro-3-(2-
clorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenil)-3-isopropilureia; (Z)-1-(4-(7- cloro-3-(2-clorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenil)-3-metilureia; (Z)1 -(4-(7-cloro-3-(2-clorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenil)-3-(2- (dimetilamino)etil)ureia; (Z)-1 -(4-(7-cloro-3-(2-clorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro-1 H
benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenil)-3-(2,2,2-trifluoroetil)ureia; (Z)-1-(4-(7-cloro-3-(2-clorobenzil)
2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenil)-3-ciclopropilureia; (Z)-1 -(4-(7-cloro-3-(2- clorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenil)-3-(2-metoxietil)ureia; (Z)-1 (4-(7-cloro-3-(2-clorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenil)-3-(2- etoxietil)ureia; (Z)-1-(4-(3-(2-bromobenzil)-7-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin5-il)fenil)-3-metilureia; (Z)-1-(4-(3-(2-bromobenzil)-7-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1 H
benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenil)-3-(2-(dimetilamino)etil)ureia; (Z)-1-(4-(3-(2-bromobenzil)-7- cloro-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenil)-3-(2,2,2-trifluoroetil)ureia; (Z)-1-(4- (3-(2-bromobenzil)-7-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenil)-3- ciclopropilureia; (Z)-1 -(4-(3-(2-bromobenzil)-7-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1 H
benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenil)-3-(2-metoxietil)ureia; (Z)-1-(4-(3-(2-bromobenzil)-7-cloro-2- oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenil)-3-(2-etoxietil)ureia; (Z)-7-cloro-5-(4-
hidroxifenil)-3-(2-metilbenzil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-
hidroxifenil)-1 -metil-3-(2-metilbenzil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4- hidroxifenil)-3-(3-metilbenzil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-
hidroxifenil)-1 -metil-3-(3-metilbenzil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4- hidroxifenil)-3-(4-metilbenzil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-
hidroxifenil)-1 -metil-3-(4-metilbenzil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-3-(2- etilbenzil)-5-(4-hidroxifenil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-3-(2-etilbenzil)-5- (4-hidroxifenil)-1 -metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-3-(3-etilbenzil)-5-(4- hidroxifenil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-3-(3-etilbenzil)-5-(4-hidroxifenil)
1 -metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-3-(4-etilbenzil)-5-(4-hidroxifenil)-1 metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-3-(4-etilbenzil)-5-(4-hidroxifenil)-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3-(3-isopropilbenzil)-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3-(3-isopropilbenzil)-1-metil35 1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3-(4-isopropilbenzil)-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3-(4-isopropilbenzil)-1-metil
1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1 -metil-3-(2- g (trifluorometil)benzil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-3-(2-bromobenzil)-7-cloro-5- (4-hidroxifenil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-3-(2-clorobenzil)-5-(4-
hidroxifenil)-1 -metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-3-(2-bromobenzil)-7-cloro-1 metil-5-(2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)5 7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1 -metil-3-(4-(trifluorometil)benzil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona; (Z)-3-(3-bromobenzil)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1 -metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona; (Z)-3-(4-bromobenzil)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1 -metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona; (Z)-7-cloro-3-(3-clorobenzil)-5-(4-hidroxifenil)-1 -metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona; (Z)-7-cloro-3-(2-clorobenzil)-5-(4-hidroxifenil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)10 7-cloro-3-(2-clorobenzil)-5-(2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)-1 H
benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; e (Z)-7-cloro-5-(2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)
3-(2-(trifluorometil)benzil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-1-metil-5-(2-oxo2,3-diidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)-3-(2-(trifluorometil)benzil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin2(3H)-ona; e (Z)-7-cloro-3-(2-clorobenzil)-1-metil-5-(2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[d]imidazol-5- il)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; e sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.
Em certas modalidades, a presente invenção fornece métodos para tratar células, compreendendo a) fornecer i) células alvo; e ii) pelo menos um dos compostos exemplares da presente invenção (veja, por exemplo, Seção Ill- Compostos Exemplares). Em algumas modalidades, o tratamento compreende induzir o impedimento do crescimento celular nas 20 células alvo, induzir a morte celular nas células alvo e induzir a apoptose celular nas células alvo. Em algumas modalidades, as células alvo estão em um paciente tendo, por exemplo, um distúrbio imune (por exemplo, um distúrbio autoimune), um distúrbio hiperproliferativo, um distúrbio de hiperplasia epidérmica, um distúrbio de pigmentação, um distúrbio cardiovascular, e/ou um distúrbio viral. Em algumas modalidades, as células alvo estão em 25 células in vitro, células in vivo, ou células ex vivo. Em outras modalidades preferidas, as células alvo são células cancerosas. Ainda em outras modalidades preferidas, as células alvo são células B, células T ou granulócitos.
A presente invenção fornece ainda métodos de tratar um distúrbio imune compreendendo administrar a um paciente uma quantidade eficaz de pelo menos um dos 30 compostos exemplares da presente invenção (veja, por exemplo, Seção Ill - Compostos Exemplares). Em algumas modalidades, o distúrbio imune inclui, mas não é limitado a, uma anemia hemolítica autoimune, hepatite autoimune, doença de Berger ou nefropatia por IgA, Doença Celíaca, síndrome da fadiga crônica, doença de Crohn, dermatomiosite, fibromialgia, doença enxerto contra hospedeiro, doença de Graves, tireoidite de Hashimoto, 35 púrpura trombocitopênica idiopática, líquen plano, esclerose múltipla, miastenia gravis, psoríase, febre reumática, artrite reumática, esclerodermia, síndrome de Sjõrgren, lúpus eritematoso sistêmico, diabetes tipo 1, colite ulcerativa, vitiligo, e púrpura trombótica trombocitopênica idiopática.
A presente invenção fornece ainda métodos de tratar câncer e/ou um distúrbio relacionado ao câncer compreendendo administrar a um paciente uma quantidade eficaz de pelo menos um dos compostos exemplares da presente invenção (veja, por exemplo, Seção 5 Ill- Compostos Exemplares). A presente invenção não é limitada a um tipo particular de câncer (por exemplo, tumor, um neoplasma, um linfoma, ou uma leucemia). Em algumas modalidades, a composição compreende ainda um agente anticâncer.
Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método para regular a morte celular compreendendo fornecer células alvo tendo proteína(s) que conferem 10 sensibilidade à oligomicina e a subunidade F1 de uma F1F10-ATPase mitocondrial; uma composição compreendendo pelo menos um dos compostos exemplares da presente invenção (veja, por exemplo, Seção Ill - Compostos Exemplares); e expor as células à composição sob condições tais que a composição se liga à(s) proteína(s) que conferem sensibilidade à oligomicina de modo a aumentar os níveis de superóxido ou alterar níveis de 15 ATP celular nas células. Em algumas modalidades, as células alvo são células in vitro, células in vivo, e/ou células ex vivo. Em algumas modalidades, as células alvo são células cancerosas. Em algumas modalidades, as células alvo compreendem células B, células T, e granulócitos. Em algumas modalidades, a etapa de exposição resulta em um aumento na morte celular das células alvo.
Em certas modalidades, a presente invenção fornece uma composição
compreendendo um stent com eluição de fármacos; em que o stent com eluição de fármacos compreende uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um dos compostos exemplares da presente invenção (veja, por exemplo, Seção Ill - Compostos Exemplares). Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método para tratar 25 um vaso compreendendo expor um vaso de um paciente à composição. Em algumas modalidades, o vaso é um vaso ocluído e/ou um vaso cardíaco.
Em certas modalidades, a presente invenção fornece um método de regular a hiperproliferação de células epiteliais, compreendendo fornecer uma amostra com hiperproliferação de células epiteliais, e uma composição compreendendo pelo menos um 30 dos compostos exemplares da presente invenção (veja, por exemplo, Seção Ill - Compostos Exemplares); e aplicar a composição à amostra. Em algumas modalidades, a aplicação da composição à amostra diminui a ativação de Erk/1/4 dentro da amostra. Em algumas modalidades, a aplicação da composição à amostra inibe a proliferação de queratinócito dentro da amostra. Em algumas modalidades, a composição compreende ainda um 35 corticosteróide tópico (por exemplo, acetonido de triancinolona 0,1 % creme e dipropionato de betametasona 0,05 % creme). Em algumas modalidades, a composição compreende ainda alcatrão de hulha 2 a 10 %. Em algumas modalidades, a composição compreende ainda um análogo da vitamina D-3 (por exemplo, calcipotrieno). Em algumas modalidades, a composição compreende ainda um agente queratolítico (por exemplo, antralina 0,1 a 1 %). Em algumas modalidades, a composição compreende ainda um retinóide tópico (por exemplo, tretinoína, e tazaroteno). Em algumas modalidades, a amostra é um paciente vivo.
Em algumas modalidades, o paciente vivo é um ser humano sofrendo de hiperplasia epidérmica. Em algumas modalidades, o paciente vivo tem psoríase.
Em certas modalidades, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um dos compostos exemplares da presente invenção (veja, por exemplo, Seção Ill - Compostos Exemplares) e um diluente ou portador farmaceuticamente aceitável. Em certas modalidades, a composição farmacêutica compreende ainda um outro agente terapêutico.
Em certas modalidades, os compostos exemplares da presente invenção (veja, por exemplo, Seção Ill - Compostos Exemplares) são úteis no tratamento de distúrbios associados à F1F10-ATP hidrolase. Exemplos de distúrbios associados à F1F10-ATP hidrolase incluem, mas não são limitados a, infarto do miocárdio, hipertrofia ventricular, doença arterial coronariana, Ml com onda não Q, insuficiência cardíaca congestiva, arritmias cardíacas, angina instável, angina estável crônica, angina de Prinzmetal, pressão sanguínea alta, claudicação intermitente, doença arterial oclusiva periférica, sintomas trombóticos ou tromboembólicos de acidente vascular cerebral tromboembólico, trombose venosa, trombose arterial, embolia pulmonar, embolia cerebral, trombofilia, coagulação intravascular disseminada, restenose, fibrilação atrial, aumento ventricular, doença vascular aterosclerótica, ruptura da placa aterosclerótica, formação da placa aterosclerótica, aterosclerose após transplante, remodelação vascular, aterosclerose, câncer, cirurgia, inflamação, infecção sistemática, superfícies artificiais, cardiologia intervencional, imobilidade, gestação e perda fetal, e complicações diabéticas compreendendo retinopatia, nefropatia e neuropatia.
Em certas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratar um distúrbios associados à F1F10-ATP hidrolase em um paciente compreendendo administrar ao paciente em necessidade de tal tratamento uma quantidade eficaz de pelo menos um SO composto exemplar da presente invenção (veja, por exemplo, Seção Ill - Compostos Exemplares). Em algumas modalidades, o distúrbio associado à F1F10-ATP hidrolase mitocondrial inclui, mas não é limitado a, infarto do miocárdio, hipertrofia ventricular, doença arterial coronariana, Ml com onda não Q, insuficiência cardíaca congestiva, arritmias cardíacas, angina instável, angina estável crônica, angina de Prinzmetal, pressão sanguínea 55 alta, claudicação intermitente, doença arterial oclusiva periférica, sintomas trombóticos ou tromboembólicos de acidente vascular cerebral tromboembólico, trombose venosa, trombose arterial, trombose cerebral, embolia pulmonar, embolia cerebral, trombofilia, coagulação intravascular disseminada, restenose, fibrilação atrial, aumento ventricular, doença vascular aterosclerótica, ruptura da placa aterosclerótica, formação da placa aterosclerótica, aterosclerose após transplante, remodelação vascular aterosclerose, câncer, cirurgia, inflamação, infecção sistemática, superfícies artificiais, cardiologia intervencional, j imobilidade, gestação e perda fetal, e complicações diabéticas compreendendo retinopatia, nefropatia e neuropatia.
Em certas modalidades, a presente invenção fornece métodos de tratar distúrbios compreendendo inibir a atividade de complexos da ATP sintase em células afetadas pelo distúrbio através da exposição das células afetadas a uma composição capaz de se ligar à ) proteína que confere sensibilidade à oligomicina dos complexos da ATP sintase, em que o distúrbio compreende uma infecção bacteriana, uma infecção viral, uma infecção fúngica, uma infecção parasítica, um distúrbio causado por príon, um distúrbio envolvendo angiogênese anormal, um distúrbio envolvendo regulação da pressão sanguínea anormal, e um distúrbio envolvendo regulação de HDL/LDL anormal. Em algumas modalidades, os 5 complexos da ATP sintase são complexos de F1F10-ATPase mitocondrial.
Em certas modalidades, a presente invenção fornece um método de identificar composições terapêuticas, compreendendo a) fornecer uma amostra compreendendo F1F10- ATPase mitocondrial, e software de modelagem molecular; b) identificar um inibidor de FiF10-ATPase candidato com o software de modelagem molecular; c) contatar o inibidor com D a amostra; d) mensurar a kcat/Km da F1F10-ATPase mitocondrial; e e) selecionar as composições que se ligam predominantemente a um complexo de F1F10-ATPase-SubStrato e que não alteram a razão da kcat/Km da F1F10-ATPase mitocondrial sob ligação da F1F10- ATPase mitocondrial como composições terapêuticas. Em algumas modalidades, o método compreende ainda a etapa de f) testar as composições selecionadas em um animal para 5 identificar baixa toxicidade e capacidade para tratar um distúrbio imune (por exemplo, um distúrbio autoimune). Em algumas modalidades, a amostra compreende ainda mitocôndria. Em algumas modalidades, a F1F10-ATPase é uma enzima pura. Em algumas modalidades, a FiF10-ATPase está localizada em uma partícula submitocondrial. Em algumas modalidades, a razão da kcat/Km é mensurada determinando-se a taxa da hidrólise ou síntese de ATP D como uma função da concentração de ATP e concentração inibidora. Em outras modalidades preferidas, a razão da kcat/Km é calculada a partir da Km Vmax, e da concentração da enzima.
Em certas modalidades, os compostos da presente invenção podem ser usados para tratar um distúrbio administrando-se uma quantidade eficaz do composto, usualmente em uma formulação farmacêutica compreendendo o composto da invenção e um portador farmaceuticamente aceitável, a um paciente, por exemplo, um ser humano, em necessidade dos mesmos. O composto deve ser administrado para melhorar pelo menos um sintoma do distúrbio. Distúrbios exemplares tratáveis por um ou mais compostos da invenção, incluem, sem limitação, distúrbios imunes, distúrbios hiperproliferativos e doença inflamatória crônica. Com respeito aos distúrbios imunes, os compostos podem ser usados para tratar a doença enxerto contra hospedeiro, artrite reumatóide e lúpus eritematoso sistêmico. Além disso, os compostos podem ser usados para reduzir ou eliminar rejeição de tecido ou órgão após um procedimento de transplante. Com respeito aos distúrbios hiperproliferativos, os compostos da invenção podem ser usados para tratar câncer, o qual pode ser maligno ou benigno. Cânceres exemplares que podem ser tratados incluem, por exemplo, adenomas, adenocarcinomas, carcinomas, leucemias, linfomas, melanomas, mielomas, sarcomas e teratomas. Além disso, considera-se que os compostos da invenção podem ser usados para tratar cânceres da bexiga e do sistema renal, do cérebro, de mama, de cérvix, de cólon, de pulmão, dos ovários, de próstata, do reto. Com respeito à doença inflamatória crônica, os compostos da invenção podem ser usados para tratar asma, psoríase, e doença inflamatória intestinal.
DEFINIÇÕES
Para facilitar o entendimento da presente invenção, vários termos e frases são definidos abaixo.
Conforme usado neste relatório, o termo “alifático substituído” refere-se a um alcano possuindo menos do que 10 carbonos onde pelo menos um dos átomos de hidrogênio alifáticos foi substituído por um halogênio, um amino, um hidróxi, um alcóxi, um nitro, um tio, uma cetona, um aldeído, um éster, uma amida, um alifático inferior, um alifático inferior substituído, ou um anel (arila, arila substituído, cicloalifático, ou cicloalifático substituído, etc.). Exemplos de tais incluem, mas não são limitados a, 1-cloroetila e semelhantes.
Conforme usado neste relatório, o termo “arila substituído” refere-se a um sistema de anel aromático ou anel aromático fundido que consiste de não mais do que três anéis fundidos pelo menos um dos quais é aromático, e onde pelo menos um dos átomos de hidrogênio em um carbono do anel foi substituído por um halogênio, um amino, um hidróxi, um alcóxi, um nitro, um tio, uma cetona, um aldeído, um éster, uma amida, um alifático inferior, um alifático inferior substituído, ou um anel (arila, arila substituído, cicloalifático, ou cicloalifático substituído). Exemplos de tais incluem, mas não são limitados a, hidroxifenila e semelhantes.
Conforme usado neste relatório, o termo “cicloalifático” refere-se a um cicloalcano possuindo menos do que 8 carbonos ou um sistema de anel fundido que consiste de não mais do que três anéis cicloalifáticos fundidos. Exemplos de tais incluem, mas não são limitados a, decalina e semelhantes.
Conforme usado neste relatório, o termo “cicloalifático substituído” refere-se a um cicloalcano possuindo menos do que 10 carbonos ou um sistema de anel fundido que consiste de não mais do que três anéis fundidos, e onde pelo menos um dos átomos de hidrogênio alifáticos foi substituído por um halogênio, um nitro, um tio, um amino, um hidróxi, um alcóxi, uma cetona, um aldeído, um éster, uma amida, um alifático inferior, um alifático 5 inferior substituído, ou um anel (arila, arila substituído, cicloalifático, ou cicloalifático substituído). Exemplos de tais incluem, mas não são limitados a, 1-clorodecalila, bicicloheptanos, octanos, e nonanos (por exemplo, nonrbornila) e semelhantes.
Conforme usado neste relatório, o termo “heterocíclico” refere-se a um cicloalcano e/ou um sistema de anel arila, possuindo menos do que 8 carbonos, ou um sistema de anel fundido que consiste de não mais do que três anéis fundidos, onde pelo menos um dos átomos de carbono do anel é substituído por oxigênio, nitrogênio ou enxofre. Exemplos de tais incluem, mas não são limitados a, morfolino e semelhantes.
Conforme usado neste relatório, o termo “heterocíclico substituído” refere-se a um cicloalcano e/ou um sistema de anel arila, possuindo menos do que 8 carbonos, ou um 15 sistema de anel fundido que consiste de não mais do que três anéis fundidos, onde pelo menos um dos átomos de carbono do anel é substituído por oxigênio, nitrogênio ou enxofre, e onde pelo menos um dos átomos de hidrogênio alifáticos foi substituído por um halogênio, hidróxi, um tio, nitro, um amino, uma cetona, um aldeído, um éster, uma amida, um alifático inferior, um alifático inferior substituído, ou um anel (arila, arila substituído, cicloalifático, ou 20 cicloalifático substituído). Exemplos de tais incluem, mas não são limitados a 2-cloropiranila.
O termo “alquila” é reconhecido na técnica e refere-se a grupos alifáticos saturados, incluindo grupos alquila de cadeia reta, grupos alquila de cadeia ramificada, grupos cicloalquila (alicíclicos), grupos cicloalquila substituídos em alquila e grupos alquila substituídos em cicloalquila. Em certas modalidades, um alquila de cadeia reta ou cadeia 25 ramificada tem cerca de 8 ou menos átomos de carbono em sua cadeia principal (por exemplo, C1-C8 para cadeia reta, C3-C8 para cadeia ramificada), e alternativamente, cerca de 4 ou menos.
O termo “alquila substituído” é reconhecido na técnica e refere-se a uma porção alquila tendo um substituinte substituindo um átomo de hidrogênio em um ou mais átomos 30 de carbono da cadeia principal de hidrocarbonetos. Tais substituintes podem incluir, por exemplo, alquenila, alquinila, halogênio, hidroxila, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcoxicarbonilóxi, ariloxicarbonilóxi, carboxilato, alquilcarbonila, arilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alquilaminocarbonila, dialquilaminocarbonila, alquiltiocarbonila, alcoxila, fosfato, fosfonato, fosfinato, ciano, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, 35 diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoila e ureido), amidino, imino, sulfidrila, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinila, sulfonato, sulfamoila, sulfonamido, nitro, trifluorometila, ciano, azido, heterociclila, alquilarila ou uma porção aromática ou heteroaromática. Em uma modalidade preferida, o alquila substituído é uma porção alquila tendo um átomo de flúor substituindo um átomo de hidrogênio em um ou mais átomos de carbono da cadeia principal de hidrocarbonetos, por exemplo, -CH2F1 -CHF2l -CF3 e semelhantes.
O termo “derivado” de um composto, conforme usado neste relatório, refere-se a
um composto quimicamente modificado em que a modificação química ocorre em um grupo funcional do composto ou no anel aromático.
O termo “hiperplasia epidérmica”, conforme usado neste relatório, refere-se a uma multiplicação anormal ou aumento no número de células normais no arranjo normal no IO tecido epidérmico. A hiperplasia epidérmica é uma característica de numerosos distúrbios, incluindo, mas não limitados à psoríase.
O termo “queratinócito” conforme usado neste relatório, refere-se a uma célula da pele da camada queratinizada da epiderme.
O termo “fibroblasto” conforme usado neste relatório, refere-se a células residentes mesodermicamente derivadas do tecido conjuntivo que secretam pró-colágeno fibrilar, fibronectina e colagenase.
O termo “distúrbio de pigmentação” conforme usado neste relatório, refere-se a distúrbios envolvendo a pigmentação da pele (por exemplo, melanina). Exemplos de distúrbios de pigmentação incluem, mas não são limitados a, todas as formas de albinismo, !0 melasma, perda de pigmento depois de dano à pele e vitiligo.
O termo “stent” ou “stent com eluição de fármacos”, conforme usado neste relatório, refere-se a qualquer dispositivo que quando colocado em contato com um sítio na parede de um lúmen a ser tratado, também incluirá colocar fibrina na parede do lúmen e reter a mesma na parede do lúmen. Isto pode incluir especialmente dispositivos liberados percutaneamente 5 para tratar oclusões da artéria coronária e para vedar dissecações ou aneurismas de vasos esplênicos, carotídeos, ilíacos e poplíteos. O stent também pode ter elementos estruturais poliméricos ou metálicos adjacentes sobre os quais a fibrina é aplicada ou o stent pode ser um compósito de fibrina misturado com um polímero. Por exemplo, um stent de fio metálico deformável, tal como aquele divulgado na Pat. U.S. N2 4.886.062, neste relatório 0 incorporada como referência, pode ser revestido com fibrina, conforme apresentado acima em um ou mais revestimentos (isto é, polimerização de fibrina na estrutura metálica através de aplicação de uma solução de fibrinogênio e uma solução de uma proteína de coagulação por fibrinogênio) ou fornecido com uma preforma de fibrina fixada, tal como uma película envolvente de fibrina. O stent e a fibrina depois podem ser colocados no balão em uma 5 extremidade distai de um cateter-balão e liberados por meios percutâneos convencionais (por exemplo, como em um procedimento de angioplastia) ao sítio da restrição ou fechamento a ser tratado onde ele depois seria expandido em contato com o lúmen do corpo inflando-se o balão. O cateter depois pode ser removido, deixando o stent-fibrina da presente invenção no lugar no sítio de tratamento. Portanto, o stent pode fornecer uma estrutura de suporte para o lúmen no sítio de tratamento e também uma estrutura suportando a colocação segura da fibrina na parede do lúmen. Geralmente, um stent com 5 eluição de fármacos possibilita uma liberação ativa de um fármaco particular no sítio de implementação do stent.
Conforme usado neste relatório, o termo “cateter” geralmente refere-se a um tubo usado para se obter acesso a uma cavidade corpórea ou vaso sanguíneo.
Conforme usado neste relatório, o termo “válvula” ou “vaso” refere-se a qualquer IO lúmen dentro de um mamífero.
Exemplos incluem, mas não são limitados a, artérias, veias, vasos capilares e lúmen biológico.
Conforme usado neste relatório, o termo “restenose” refere-se a qualquer válvula que é estreita. Exemplos incluem, mas não são limitados ao refechamento de uma artéria periférica ou coronária após trauma nesta artéria causado por esforços em abrir uma porção submetida à estenose da artéria, tal como, por exemplo, através de dilatação por balão, ablação, aterectomia ou tratamento a laser da artéria.
Conforme usado neste relatório, “angioplastia” ou “terapia com balão” ou “angioplastia com balão” ou “angioplastia coronariana transluminal percutânea” refere-se a !0 um método de tratar distúrbios de vasos sanguíneos que envolvem o uso de um cateterbalão para alargar o vaso sanguíneo e, desse modo, melhora o fluxo sanguíneo.
Conforme usado neste relatório, “cateterismo cardíaco” ou “angiograma coronariano” refere-se a um teste usado para diagnosticar doença arterial coronariana usando um procedimento de cateterismo. Um tal procedimento pode envolver, por exemplo, :5 a injeção de um pigmento de contraste nas artérias coronárias por intermédio de um cateter, permitindo a visualização de uma artéria estreita ou bloqueada.
Conforme usado neste relatório, o termo “paciente” refere-se a organismos que serão tratados pelos métodos da presente invenção. Preferivelmente, tais organismos incluem, mas não são limitados a, mamíferos (por exemplo, murinos, símios, eqüinos, 0 bovinos, porcinos, caninos, felinos e semelhantes), e mais preferivelmente incluem seres humanos. No contexto da invenção, o termo “paciente” geralmente refere-se a um indivíduo que receberá ou já esta recebendo tratamento (por exemplo, administração de um composto da presente invenção e opcionalmente um ou mais outros agentes) para uma condição caracterizada pela desregulação de processos apoptóticos.
Conforme usado neste relatório, os termos “agente anticâncer”, ou “agente
anticâncer convencional” referem-se a quaisquer compostos quimioterapêuticos, terapias de radiação ou intervenções cirúrgicas usados no tratamento de câncer. Conforme usado neste relatório, o termo “célula hospedeira” refere-se a qualquer célula eucariótica ou procariótica (por exemplo, células de mamíferos, células de aves, células de anfíbios, células de plantas, células de peixes e células de insetos), quer localizadas in vitro ou in vivo.
Conforme usado neste relatório, o termo “cultura celular” refere-se a qualquer
cultura in vitro de células. Incluídas dentro deste termo estão as linhagens celulares contínuas (por exemplo, com um fenótipo imortal), culturas celulares primárias, linhagens celulares finitas (por exemplo, células não transformadas), e qualquer outra população celular mantida in vitro, incluindo oócitos e embriões.
Em algumas modalidades, as “células alvo” das composições e métodos da
presente invenção incluem, referem-se, mas não são limitadas a, células linfóides ou células cancerosas. Células linfóides incluem células B, células T e granulócitos. Granulócitos incluem eosinófilos e macrófagos. Em algumas modalidades, as células alvo são continuamente células cultivadas ou células não cultivadas obtidas de biópsias de pacientes.
Células cancerosas incluem células de tumor, células neoplásicas, células
malignas, células metastáticas e células hiperplásicas. Células neoplásicas podem ser benignas ou malignas. Células neoplásicas são benignas se elas não invadem ou sofrem metástase. Uma célula maligna é aquela que é capaz de invadir e/ou sofrer metástase. A hiperplasia é um acúmulo patológico de células em um tecido ou órgão, sem alteração
significante na estrutura ou função.
Em uma modalidade específica, as células alvo exibem crescimento ou proliferação patológico. Conforme usado neste relatório, o termo “células que se proliferam ou crescem patologicamente” refere-se a uma população localizada de células proliferativas em um animal que é não governada pelas limitações usuais de crescimento normal.
>5 Conforme usado neste relatório, o termo “célula alvo não ativada” refere-se a uma
célula que está na fase G0 ou aquela em que um estímulo não foi aplicado.
Conforme usado neste relatório, o termo “célula linfóide alvo ativada” refere-se a uma célula linfóide que foi ativada com um estímulo apropriado causando uma cascata de transdução de sinal, ou alternativamente, uma célula linfóide que não está na fase G0.
!0 Células linfóides ativadas podem proliferar, sofrer morte celular induzida pela ativação ou produzir uma ou mais citotoxinas, citocinas, e outras características de proteínas associadas à membrana relacionadas do tipo celular (por exemplo, CD8+ ou CD4+). Elas também são capazes de reconhecimento e ligação a qualquer célula alvo que apresenta um antígeno particular em sua superfície, e subsequentemente liberação de suas moléculas efetoras.
Conforme usado neste relatório, o termo “célula cancerosa ativada” refere-se a uma
célula cancerosa que foi ativada com um estímulo apropriado causando uma transdução de sinal. Uma célula cancerosa ativada pode ou não estar na fase G0. Um agente de ativação é um estímulo que sob interação com um célula alvo resulta em uma cascata de transdução de sinal. Exemplos de estímulos de ativação incluem, mas não são limitados a, moléculas pequenas, energia radiante, e moléculas que se ligam aos receptores de superfície celular de ativação celular. As respostas induzidas por estímulos de ativação podem ser caracterizadas por mudanças, entre outros, nos níveis de Ca2+ intracelular, superóxido, ou radical hidroxila; na atividade de enzimas do tipo quinases ou fosfatases; ou no estado de energia da célula. Para células cancerosas, os agentes de ativação também incluem transformar oncogenes.
Em um aspecto, o agente de ativação é qualquer agente que se liga a um receptor de ativação de superfície celular. Este pode ser selecionado do grupo que consiste de um Iigante do receptor de célula T, um fator de ativação de célula B (“BAFF”), um TNF1 um Iigante Fas (FasL), um Iigante CD40, um Iigante indutor da proliferação (“APRIL”), uma citocina, uma quimiocina, um hormônio, um aminoácido (por exemplo, glutamato), um esteróide, um Iigante do receptor de célula B, irradiação gama, irradiação UV, um agente ou condição que realça o estresse celular, ou um anticorpo que reconhece e se liga especificamente a um receptor de ativação de superfície celular (por exemplo, anti-CD4, anti-CD8, anti-CD20, anti-TACI, anti-BCMA, receptor anti-TNF, anti-CD40, anti-CD3, antiCD28, anti-B220, anti-CD38, e anti-CD19, e anti-CD21). BCMA é receptor do antígeno de maturação de célula B e TACI é ativadora da transmembrana e interagente do CAML. (Gross, A. et al. (2000); Laabi, Y. et al. (1992) e Madry, C. et al. (1998)). Anticorpos incluem anticorpos monoclonais ou policlonais ou uma mistura dos mesmos.
Exemplos de um Iigante de células T incluem, mas não são limitados a um peptídeo que se liga a uma molécula do MHC, um complexo peptídeo-MHC, ou um anticorpo que reconhece os componentes do receptor de células T.
Exemplos de um Iigante de células B incluem, mas não são limitados a uma molécula ou anticorpo que se liga a ou reconhece os componentes do receptor de células B.
Exemplos de reagentes que se ligam a um receptor de ativação de superfície celular incluem, mas não são limitados aos Iigantes naturais destes receptores ou anticorpos formados contra eles (por exemplo, anti-CD20). RITUXIN (Genentech, Inc., São Francisco, CA) é um anticorpo monoclonal quimérico anti-CD 20 comercialmente disponível.
Exemplos de agentes ou condições que realçam o estresse celular incluem calor, radiação, estresse oxidativo, ou retirada do fator de crescimento e semelhantes. Exemplos de fatores de crescimento incluem, mas não são limitados ao soro, IL-2, fator de crescimento derivado de plaquetas (“PDGF”) e semelhantes.
Conforme usado neste relatório, o termo “quantidade eficaz” refere-se à quantidade de um composto (por exemplo, um composto da presente invenção) suficiente para efetuar resultados benéficos ou desejados. Uma quantidade eficaz pode ser administrada em uma ou mais administrações, aplicações ou dosagens e não é limitada ou intencionada a ser limitada a uma formulação ou via de administração particular.
Conforme usado neste relatório, o termo “desregulação do processo de morte celular” refere-se a qualquer anormalidade na capacidade (por exemplo, predisposição) de uma célula sofrer morte celular por intermédio de necrose ou apoptose. A desregulação da morte celular está associada com ou induzida por uma variedade de condições, incluindo, por exemplo, distúrbios imunes (por exemplo, distúrbios autoimunes) (por exemplo, lúpus eritematoso sistêmico, artrite reumatóide, doença enxerto contra hospedeiro, miastenia gravis, Síndrome de Sjõgren, etc.), condições inflamatórias crônicas (por exemplo, psoríase, asma e doença de Crohn), distúrbios hiperproliferativos (por exemplo, tumores, Iinfomas de células B, Iinfomas de células T, etc.), infecções virais (por exemplo, herpes, papiloma, HIV), e outras condições, tais como osteoartrite e aterosclerose.
Deve ser observado que quando a desregulação é induzida por ou associada com uma infecção viral, a infecção viral pode ou não ser detectável no tempo em que a desregulação ocorre ou é observada. Isto é, a desregulação induzida por vírus pode ocorrer mesmo depois do desaparecimento dos sintomas de infecção viral.
Um “distúrbio hiperproliferativo”, conforme usado neste relatório, refere-se a qualquer condição em que uma população localizada de células proliferativas em um animal não é governada pelas limitações usuais de crescimento normal. Exemplos de distúrbios hiperproliferativos incluem tumores, neoplasmas, Iinfomas e semelhantes. Um neoplasma é o dito a ser benigno se não sofrer invasão ou metástase e maligno se passar por estes processos. Uma célula ou tecido metastático significa que a célula pode invadir e destruir estruturas orgânicas vizinhas. A hiperplasía é uma forma de proliferação celular envolvendo um aumento no número celular em um tecido ou órgão, sem alteração significante na estrutura ou função. A metaplasia é uma forma de crescimento celular controlado em que um tipo de célula completamente diferenciada é substituída por um outro tipo de célula diferenciada. A metaplasia pode ocorrer em células do tecido epitelial ou conjuntivo. Uma metaplasia típica envolve um epitélio até certo grau desordenado metaplásico. O distúrbio hiperproliferativo inclui cânceres, tais como, mieloma, câncer de bexiga e câncer renal.
O crescimento patológico de células linfóides ativadas frequentemente resulta em um distúrbio imune (por exemplo, distúrbio autoimune) ou uma condição inflamatória crônica. Conforme usado neste relatório, o termo “distúrbio autoimune” refere-se a qualquer condição em que um organismo produz anticorpos ou células imunes que reconhecem as moléculas, células ou tecidos do próprio organismo. Exemplos não Iimitantes de distúrbios autoimunes incluem anemia hemolítica autoimune, hepatite autoimune, doença de Berger ou nefropatia por IgA, Doença Celíaca, síndrome da fadiga crônica, doença de Crohn, dermatomiosite, fibromialgia, doença de Graves, tireoidite de Hashimoto, púrpura trombocitopênica idiopática, líquen plano, esclerose múltipla, miastenia gravis, psoríase, febre reumática, artrite reumática, esclerodermía, síndrome de Sjõrgren, lúpus eritematoso sistêmico, diabetes tipo 1, colite ulcerativa, vitiligo e semelhantes. A doença enxerto contra hospedeiro pode resultar de uma resposta imune aos tecidos e órgãos transplantados e semelhantes (por exemplo, medula óssea, órgão sólido, pele, etc.).
Conforme usado neste relatório, o termo “condição inflamatória crônica” refere-se a uma condição em que as células imunes do organismo são ativadas. Tal condição é caracterizada por uma resposta inflamatória persistente com seqüelas patológicas. Este estado é caracterizado pela infiltração de células mononucleares, proliferação de IO fibroblastos e vasos sanguíneos pequenos, tecido conjuntivo aumentado e destruição de tecido. Exemplos de doenças inflamatórias crônicas incluem, mas não são limitados a, doença de Crohn, psoríase, doença pulmonar obstrutiva crônica, doença inflamatória intestinal, esclerose múltipla e asma. Doenças imunes, tais como artrite reumatóide e lúpus eritematoso sistêmico também podem resultar em um estado inflamatório crônico.
Conforme usado neste relatório, o termo “coadministração” refere-se à
administração de pelo menos dois agente(s) (por exemplo, um composto da presente invenção) ou terapias a um paciente. Em algumas modalidades, a coadministração de dois ou mais agentes/terapias é concorrente. Em outras modalidades, um primeiro agente/terapia é administrado antes de um segundo agente/terapia. Aqueles de habilidade na técnica Ϊ0 entendem que as formulações e/ou vias de administração dos vários agentes/terapias usados podem variar. A dosagem apropriada para a coadministração pode ser prontamente determinada por uma pessoa habilitada na técnica. Em algumas modalidades, quando agentes/terapias são coadministrados, os agentes/terapias respectivos são administrados em dosagens menores em relação à dosagem apropriada quando administrados sozinhos. !5 Assim, a coadministração é especialmente desejável em modalidades onde a coadministração dos agentes/terapias diminui a dosagem necessária de um agente(s) potencialmente nocivo(s) (por exemplo, tóxico(s)) conhecido(s).
Conforme usado neste relatório, o termo “tóxico” refere-se a quaisquer efeitos prejudiciais ou nocivos em uma célula ou tecido em comparação à mesma célula ou tecido IO antes da administração do tóxico.
Conforme usado neste relatório, o termo “composição farmacêutica” refere-se à combinação de um agente ativo com um portador, inerte ou ativo, tornando a composição especialmente adequada para o uso diagnóstico ou terapêutico in vivo ou ex vivo.
Conforme usado neste relatório, o termo “portador farmaceuticamente aceitável” >5 refere-se a qualquer um dos portadores farmacêuticos padrão, tais como uma solução salina tamponada com fosfato, água, emulsões (por exemplo, tais como emulsões óleo/água ou água/óleo), e vários tipos de agentes umectantes. As composições também podem incluir estabilizadores e preservantes. Para exemplos de portadores, estabilizadores e adjuvantes. (Veja, por exemplo, Martin, RemingtorVs Pharmaceutical Sciences, 15â Ed., Mack Publ. Co., Easton, PA [1975]).
Conforme usado neste relatório, o termo “sal farmaceuticamente aceitável” referese a qualquer sal farmaceuticamente aceitável (por exemplo, ácido ou base) de um composto da presente invenção que, sob administração a um paciente, é capaz de fornecer um composto desta invenção ou um metabólito ativo ou resíduo do mesmo. Como é conhecido àqueles de habilidade na técnica, “sais” dos compostos da presente invenção podem ser derivados de ácidos e bases inorgânicos ou orgânicos. Exemplos de ácidos O incluem, mas não são limitados a, ácido clorídrico, bromídrico, sulfúrico, nítrico, perclórico, fumárico, maléico, fosfórico, glicólico, láctico, salicílico, succínico, tolueno-p-sulfônico, tartárico, acético, cítrico, metanossulfônico, etanossulfônico, fórmico, benzóico, malônico, naftaleno-2-sulfônico, benzenossulfônico, e semelhantes. Outros ácidos, tais como oxálicos, embora não sejam por si só farmaceuticamente aceitáveis, podem ser utilizados na preparação de sais úteis como intermediários na obtenção dos compostos da invenção e seus sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis.
Exemplos de bases incluem, mas não são limitados a, hidróxidos de metais alcalinos (por exemplo, sódio), hidróxidos de metais alcalinos terrosos (por exemplo, magnésio), amônia, e compostos da fórmula NW4+, em que W é alquila C1-4 e semelhantes.
O Exemplos de sais incluem, mas não são limitados a: acetato, adipato, alginato,
aspartato, benzoato, benzenossulfonato, bissulfato, butirato, citrato, canforato, canforsulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, fumarato, flucoeptanoato, glicerofosfato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, cloridrato, bromidrato, iodidrato, 2-hidroxietanossulfonato, lactato, maleato, metanossulfonato, 2- 5 naftalenossulfonato, nicotinato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato, undecanoato e semelhantes. Outros exemplos de sais incluem ânions dos compostos da presente invenção compostos com um cátion adequado, tal como Na+, NH4+ e NW4+ (em que W é um grupo alquila C1-4) e semelhantes.
O Para uso terapêutico, sais dos compostos da presente invenção são considerados
como sendo farmaceuticamente aceitáveis. Entretanto, sais de ácidos e bases que não são farmaceuticamente aceitáveis também podem encontrar uso, por exemplo, na preparação ou purificação de um composto farmaceuticamente aceitável.
Certos compostos descritos neste relatório podem existir nas formas geométricas ou estereoisoméricas particulares. A presente invenção contempla todos os tais compostos, incluindo isômeros cis e trans, enantiômeros R e S, diastereômeros, (D)-isômeros, (L)isômeros, as misturas racêmicas dos mesmos, e outras misturas dos mesmos, como caindo dentro do escopo da invenção. Átomos de carbono assimétricos adicionais podem estar presentes em um substituinte, tal como um grupo alquila. Todos os tais isômeros, assim como misturas dos mesmos, estão incluídos nesta invenção. Em particular, as estruturas químicas genéricas apresentadas neste relatório podem conter átomos de carbono 5 assimétricos, e/ou um substituinte nas estruturas químicas genéricas podem conter átomos de carbono assimétricos. As estruturas químicas genéricas incluem compostos de todas as formas estereoisoméricas, incluindo enantiômeros, diastereômeros e misturas racêmicas.
Se, por exemplo, um enantiômero particular de um composto da presente invenção é desejado, ele pode ser preparado por síntese assimétrica, ou por derivação com um 10 auxiliar quiral, onde a mistura diastereomérica resultante é separada e o grupo auxiliar é clivado para fornecer o enantiômero puro desejado. Alternativamente, onde a molécula contém um grupo funcional básico, tal como amino, ou um grupo funcional ácido, tal como carboxila, sais diastereoméricos podem ser formados com um ácido ou base opticamente ativo apropriado, seguido por resolução dos diastereômeros assim formados por meios 15 cromatográficos ou de cristalização fracionada bem conhecidos na técnica, e recuperação subsequente dos enantiômeros puros.
Conforme usado neste relatório, os termos “suportes de fase sólida” ou “suportes sólidos”, são usados em seu sentido mais amplo para se referirem a vários suportes que estão disponíveis e são conhecidos àqueles de habilidade comum na técnica. Suportes de fase sólida incluem, mas não são limitados a, géis de sílica, resinas, películas plásticas derivatizadas, pérolas de vidro, algodão, pérolas de plástico, géis de alumina e semelhantes. Conforme usado neste relatório, “suportes sólidos” também incluem matrizes apresentadoras de antígeno sintéticas, células, Iipossomas e semelhantes. Um suporte de fase sólida adequado pode ser selecionado com base no uso final desejado e adequação para vários protocolos. Por exemplo, para síntese de peptídeo, suportes de fase sólida podem se referir a resinas, tais como poliestireno (por exemplo, PAM-resina obtida da Bachem1 Inc., Peninsula Laboratories, etc.), resina POLYHIPE (obtida da Aminotech, Canadá), resina de poliamida (obtida da Peninsula Laboratories), resina de poliestireno enxertada com polietilenoglicol (TENTAGEL, Rapp Polymere, Tubingen, Alemanha) ou resina de polidimetilacrilamida (obtida da Milligen/Biosearch, Califórnia).
Conforme usado neste relatório, o termo “patógeno” refere-se a um agente biológico que causa um estado de doença (por exemplo, infecção, câncer, etc.) em um hospedeiro. “Patógenos” incluem, mas não são limitados a, vírus, bactérias, archaea, fungos, protozoários, micoplasmas, príons e organismos parasíticos.
Os termos “bactérias” e “bactéria” referem-se a todos os organismos procarióticos,
incluindo aqueles dentro de todos os filos do Reino Procaryotae. É intencionado que o termo abrange todos os microorganismos considerados como bactérias, incluindo Mycoplasma, Chlamydia1 Actinomyces, Streptomyces e Rickettsia. Todas as formas de bactérias estão incluídas dentro desta definição incluindo cocos, bacilos, espiroquetas, esferoplastos, protoplastos, etc. Também incluídos dentro deste termo estão os organismos procarióticos que são gram negativos ou gram positivos. “Gram negativo” e “gram positivo” referem-se a padrões de coloração com o processo de coloração Gram que é bem conhecido na técnica. (Veja por exemplo, Finegold e Martin, Diagnostic Microbiology, 6â Ed., CV Mosby St. Louis, páginas 13-15 [1982]). “Bactérias Gram positivas” são bactérias que retêm o pigmento primário usado na coloração Gram, fazendo com que as células pigmentadas apareçam azul escuro a roxo sob o microscópio. “Bactérias Gram negativas” não retêm o pigmento primário usado na coloração Gram, mas são pigmentadas pela coloração de fundo. Assim, bactérias gram negativas aparecem vermelhas.
Conforme usado neste relatório, o termo “microorganismo” refere-se a qualquer espécie ou tipo de microorganismo, incluindo mas não limitado a, bactérias, archaea, fungos, protozoários, micoplasmas e organismos parasíticos. A presente invenção considera que vários microorganismos abrangidos aqui também serão patogênicos a um paciente. Conforme usado neste relatório, o termo “fungos” é usado em referência a organismos eucarióticos, tais como os mofos e leveduras, incluindo fungos dimórficos.
Conforme usado neste relatório, o termo “vírus” refere-se a pequenos agentes infecciosos, que com certas exceções, não são observáveis por microscopia óptica, são desprovidos de metabolismo independente, e são capazes de replicar apenas dentro de uma célula hospedeira viva. As partículas individuais (isto é, vírions) tipicamente consistem de ácido nucléico e um invólucro ou revestimento de proteína; alguns vírions também têm uma membrana contendo lipídeo. O termo “vírus” abrange todos os tipos de vírus, incluindo animais, plantas, fagos e outros vírus.
O termo “amostra”, conforme usado neste relatório, é usado em seu sentido mais amplo. Uma amostra suspeita de indicar uma condição caracterizada pela desregulação da função apoptótica pode compreender uma célula, tecido, ou fluidos, cromossomos isolados de uma célula (por exemplo, uma propagação de cromossomos metafásicos), DNA genômico (em solução ou ligado a um suporte sólido, tal como para análise Southern blot), RNA (em solução ou ligado a um suporte sólido, tal como para análise Northern blot), cDNA (em solução ou ligado a um suporte sólido) e semelhantes. Uma amostra suspeita de conter uma proteína pode compreender uma célula, uma porção de um tecido, um extrato contendo uma ou mais proteínas e semelhantes.
Conforme usado neste relatório, os termos “purificado” ou “para purificar” referemse à remoção de componentes indesejados de uma amostra. Conforme usado neste relatório, o termo “substancialmente purificado” refere-se a moléculas que são pelo menos 60 % livres, preferivelmente 75 % livres, e mais preferivelmente 90 %, ou mais, livres de outros componentes com os quais elas são usualmente associadas.
Conforme usado neste relatório, o termo “proteína de ligação ao antígeno” refere-se a proteínas que se ligam a um antígeno específico. “Proteínas de ligação ao antígeno” incluem, mas não são limitadas a, imunoglobulinas, incluindo anticorpos policlonaís, 5 monoclonais, quiméricos, de cadeia única, e humanizados, fragmentos Fab1 fragmentos F(ab’)2, e bibliotecas de expressão de Fab. Vários procedimentos conhecidos na técnica são usados para a produção de anticorpos policlonaís. Para a produção de anticorpos, vários animais hospedeiros podem ser imunizados por injeção com o peptídeo correspondente ao epítopo desejado, incluindo mas não limitados a coelhos, camundongos, 10 ratos, ovelhas, cabras, etc. Em uma modalidade preferida, o peptídeo é conjugado a um portador imunogênico (por exemplo, toxóide da difteria, albumina de soro bovino (BSA), ou hemocianina de lapa [KLH]). Vários adjuvantes são usados para aumentar a resposta imunológica, dependendo da espécie do hospedeiro, incluindo mas não limitados a Freund (completo e incompleto), géis minerais, tais como hidróxido de alumínio, substâncias ativas 15 de superfície, tais como lisolecitina, polióis plurônicos, poliânions, peptídeos, emulsões em óleo, hemocianinas de lapa, dinitrofenol, e adjuvantes humanos potencialmente úteis, tais como BCG (Bacilo de Calmette-Guérin) e Corynebacterium parvum.
Para preparação de anticorpos monoclonais, qualquer técnica que inclui a produção de moléculas de anticorpos por linhagens celulares contínuas em cultura pode ser usada 20 (Veja, por exemplo, Harlow e Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY). Estas incluem, mas não são limitados à técnica de hibridoma originalmente desenvolvida por Kõhler e Milstein (Kõhler e Milstein, Nature, 256:495-497 [1975]), assim como a técnica de trioma, a técnica de hibridoma de células B humanas (Veja por exemplo, Kozbor et ai, Immunol. Today, 4:72 [1983]), e a técnica de 25 EBV-hibridoma para produzir anticorpos monoclonais humanos (Cole et ai, em Monoclonal Antibodies and CancerTherapy, Alan R. Liss, Inc., páginas 77-96 [1985]).
De acordo com a invenção, técnicas descritas para a produção de anticorpos de cadeia única (U.S. 4.946.778; neste relatório incorporada como referência) podem ser adaptadas para produzir anticorpos de cadeia única específicos, conforme desejado. Uma 30 modalidade adicional da invenção utiliza as técnicas conhecidas no ramo para a construção de bibliotecas de expressão de Fab (Huse et ai, Science, 246:1275-1281 [1989]) para possibilitar identificação rápida e fácil de fragmentos Fab monoclonais com a especificidade desejada.
Conforme usado neste relatório, os termos “ligação não específica” e “ligação implícita” quando usados em referência à interação de um anticorpo e uma proteína ou peptídeo referem-se a uma interação que não é dependente da presença de uma estrutura particular (isto é, no geral o anticorpo é ligado a proteínas ao invés de uma estrutura particular, tal como um epítopo).
Conforme usado neste relatório, o termo “modular” refere-se à atividade de um composto (por exemplo, um composto da presente invenção) afetar (por exemplo, promover ou retardar) um aspecto da função celular, incluindo, mas não limitada ao crescimento, proliferação, apoptose das células e semelhantes.
O termo “composto de teste” refere-se a qualquer entidade química, produto farmacêutico, fármaco e semelhantes, que podem ser usados para tratar ou prevenir uma doença, enfermidade, indisposição, ou distúrbio da função corpórea, ou de outro modo, alterar o estado fisiológico ou celular de uma amostra (por exemplo, o nível de desregulação 10 de apoptose em uma célula ou tecido). Compostos de teste compreendem compostos conhecidos e terapêuticos potenciais. Um composto de teste pode ser determinado como terapêutico usando-se os métodos de triagem da presente invenção. Um “composto terapêutico conhecido” refere-se a um composto terapêutico que foi mostrado (por exemplo, através de experimentos com animais ou experiência anterior com administração a seres 15 humanos) ser eficaz em tal tratamento ou prevenção. Em algumas modalidades, “compostos de teste” são agentes que modulam a apoptose em células.
DESCRICÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
A presente invenção fornece novos compostos químicos, métodos para sua descoberta, e seu uso terapêutico, pesquisa e diagnóstico. Em particular, a presente 20 invenção fornece compostos de benzodiazepina, e métodos de usar derivados de benzodiazepina e compostos relacionados como agentes terapêuticos para tratar várias condições associadas à regulação defeituosa dos processos de morte celular programada, autoimunidade, inflamação, e hiperproliferação, e semelhantes.
Composições e métodos exemplares da presente invenção são descritos em mais detalhes nas seções seguintes: I. Moduladores de Morte Celular; II. Moduladores de Crescimento e Proliferação de Células; III. Compostos Exemplares; IV. Composições Farmacêuticas, Formulações, e Vias de Administração Exemplares e Considerações de Dosagem; V. Triagens de Fármacos; e VI. Aplicações Terapêuticas.
A prática da presente invenção utiliza, a menos que de outro modo indicado, 30 técnicas convencionais de química orgânica, farmacologia, biologia molecular (incluindo técnicas recombinantes), biologia celular, bioquímica e imunologia, que estão dentro da habilidade da técnica. Tais técnicas são explicadas completamente na literatura, tal como, “Molecular cloning: a Iaboratory manual” Segunda Edição (Sambrook et ai, 1989); “Oligonucleotide synthesis” (MJ. Gait, ed., 1984); “Animal cell culture” (R.l. Freshney, ed., 35 1987); a série “Methods in enzymology” (Academic Press, Inc.); “Handbook of experimental immunology” (D.M. Weir & CC. Blackwell, eds.); “Gene transfer vectors for mammalian cells” (J.M. Miller & M.P. Calos, eds., 1987); “Current protocols in molecular biology” (F.M. Ausubel et ai, eds., 1987, e atualizações periódicas); “PCR: the polymerase chain reaction” (Mullis et ai, eds., 1994); e “Current protocols in immunology" (J.E. Coligan et ai, eds., 1991), cada um dos quais é integralmente incorporado como referência neste relatório.
I. Moduladores de Morte Celular Em algumas modalidades, considera-se que a presente invenção regula a apoptose
através da exposição de células aos compostos. O efeito dos compostos pode ser mensurado detectando-se qualquer número de mudanças celulares. A morte celular pode ser avaliada, conforme descrito neste relatório e na técnica. Em algumas modalidades, as linhagens celulares são mantidas sob condições de cultura celular apropriadas (por IO exemplo, gás (CO2), temperatura e meio) durante um período de tempo apropriado para atingir a proliferação exponencial sem restrições dependentes de densidade. O número celular e ou viabilidade são mensurados usando técnicas padrão, tais como exclusão pelo azul de tripan/hemocitometria, ou ensaio de conversão com pigmento MTT. Alternativamente, a célula pode ser analisada quanto à expressão de genes ou produtos de 15 gene associada com anormalidades na apoptose ou necrose.
Em algumas modalidades, considera-se que expor a presente invenção a uma célula induz a apoptose. Em algumas modalidades, considera-se que a presente invenção causa um aumento inicial nos níveis de ROS celular (por exemplo, O2'). Em modalidades adicionais, considera-se que exposição dos compostos da presente invenção a uma célula 20 causa um aumento nos níveis de O2' celular. Ainda em modalidades adicionais, considerase que o aumento nos níveis de O2' celular resultantes dos compostos da presente invenção é detectável com um agente sensível a redox que reage especificamente com O2' (por exemplo, diidroetídio (DHE)).
Em outras modalidades, considera-se que os níveis de O2' celular aumentados resultantes de compostos da presente invenção diminuem depois de um período de tempo (por exemplo, 10 minutos). Em outras modalidades, considera-se que os níveis de O2' celular aumentados resultantes dos compostos da presente invenção diminuem depois de um período de tempo e aumentam novamente em um período mais tarde (por exemplo, 10 horas). Em modalidades adicionais, considera-se que os níveis de O2' celular aumentados resultantes de compostos da presente invenção diminuem em 1 hora e aumentam novamente depois de 4 horas. Em algumas modalidades, considera-se que um aumento precoce nos níveis de O2" celular, seguido por uma diminuição nos níveis de O2" celular, seguido por um outro aumento nos níveis de O2' celular resultantes dos compostos da presente invenção é devido a processos celulares diferentes (por exemplo, mecanismos celulares bimodais).
Em algumas modalidades, considera-se que a presente invenção causa um colapso de um ΔΨ,η mitocondrial da célula. Em algumas modalidades, considera-se que um colapso de um AHjm mitocondrial da célula resultante da presente invenção é detectável com uma sonda potenciométrica seletiva para mitocôndria (por exemplo, DiOC6). Em modalidades adicionais, considera-se que um colapso de um AHjm mitocondrial da célula resultante da presente invenção ocorre depois de um aumento inicial nos níveis de O2' celular.
Em algumas modalidades, considera-se que a presente invenção permite a
ativação da caspase. Em outras modalidades, considera-se que a presente invenção causa a liberação do citocromo c a partir da mitocôndria. Em modalidades adicionais, considera-se que a presente invenção altera os níveis do citocromo c citosólico. Ainda em outras modalidades, considera-se que os níveis do citocromo c citosólico alterados resultantes da 10 presente invenção são detectáveis por frações citosólicas de immunoblotting. Em algumas modalidades, considera-se que os níveis do citocromo c citosólico diminuídos resultantes da presente invenção são detectáveis depois de um período de tempo (por exemplo, 10 horas). Em modalidades preferidas adicionais, considera-se que os níveis do citocromo c citosólico diminuídos resultantes da presente invenção são detectáveis depois de 5 horas.
Em outras modalidades, considera-se que a presente invenção causa a abertura do
poro de PT mitocondrial. Em algumas modalidades, considera-se que a liberação celular do citocromo c resultante da presente invenção é compatível com um colapso do AMjm mitocondrial. Ainda em modalidades preferidas adicionais, considera-se que a presente invenção causa um aumento nos níveis de O2' celular depois de um colapso do AMjm 20 mitocondrial e uma liberação do citocromo c. Em modalidades preferidas adicionais, considera-se que uma elevação nos níveis de O2" celular é causada por um colapso do AHjm mitocondrial e liberação do citocromo c resultante da presente invenção.
Em outras modalidades, considera-se que a presente invenção causa a ativação da caspase celular. Em algumas modalidades, considera-se que a ativação da caspase 25 resultante da presente invenção é mensurável com um substrato fluorescente sensível à mistura-caspase (por exemplo, FAM-VAD-fmk). Ainda em modalidades adicionais, considera-se que a ativação da caspase resultante da presente invenção monitora um colapso do AHjm mitocondrial. Em outras modalidades, considera-se que a presente invenção causa um aparecimento de DNA hipodiplóide. Em algumas modalidades, BO considera-se que um aparecimento de DNA hipodiplóide resultante da presente invenção é levemente retardado com respeito à ativação da caspase.
Em algumas modalidades, considera-se que o alvo molecular para a presente invenção é encontrado dentro da mitocôndria. Em modalidades adicionais, considera-se que o alvo molecular da presente invenção envolve a ATPase mitocondrial. As fontes primárias 35 de ROS celular incluem enzimas redox e a cadeia respiratória mitocondrial (em seguida MRC). Em algumas modalidades, considera-se que inibidores de citocromo c oxidase (complexo IV da MRC) (por exemplo, NaN3) impedem um aumento dependente da presente invenção nos níveis de ROS celular. Em outras modalidades preferidas, considera-se que o componente ubiquinol-citocromo c redutase dos inibidores do complexo IN da MRC (por exemplo, FK506) impede um aumento dependente da presente invenção nos níveis de ROS.
Em algumas modalidades, considera-se que um aumento nos níveis de ROS
celular resulta da ligação dos compostos da presente invenção a um alvo dentro da mitocôndria. Em algumas modalidades, considera-se que os compostos da presente invenção oxidam diacetato de 2’,7’-diclorodiidrofluoresceína (em seguida DCF) a DCF. DCF é uma espécie redox ativa capaz de gerar ROS. Em modalidades adicionais, considera-se 10 que a taxa da produção de DCF resultante da presente invenção aumenta depois de um período de atraso.
Antimicina A gera O2" inibindo-se ubiquinol-citocromo c redutase. Em algumas modalidades, considera-se que a presente invenção aumenta a taxa da produção de ROS em uma maneira equivalente à antimicina A. Em modalidades adicionais, considera-se que 15 a presente invenção aumenta a taxa da produção de ROS em uma maneira equivalente à antimicina A sob condições aeróbicas sustentando o estado 3 da respiração. Em modalidades adicionais, considera-se que os compostos da presente invenção não alvejam diretamente o poro de MPT.
Em modalidades adicionais, considera-se que os compostos da presente invenção não geram ROS substancial na fração S15 subcelular (por exemplo, citosol; microssomos). Ainda em modalidades adicionais, considera-se que os compostos da presente invenção não estimulam ROS se as mitocôndrias estão no estado 4 da respiração.
Complexos I a Ill da MRC são as fontes primárias de ROS dentro da mitocôndria. Em algumas modalidades, considera-se que a fonte primária de um aumento nos níveis de 25 ROS celular resultante da invenção dependente emana destes complexos como um resultado da inibição da F1F10-ATPase mitocondrial. De fato, ainda em modalidades adicionais, considera-se que a presente invenção inibe a atividade da ATPase mitocondrial de partículas submitocondriais de bovino (em seguida SMPs). Em modalidades particularmente preferidas, considera-se que os compostos da presente invenção se ligam 30 ao componente OSCP da F1Fi0-ATPase mitocondrial.
A oligomicina é um produto natural de macrolídeos que se liga à F1Fi0-ATPase mitocondrial, induz uma transição do estado 3 para 4, e como um resultado, gera ROS (por exemplo, O2"). Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção se ligam ao componente OSCP da F1F10-ATPase mitocondrial. Em algumas modalidades, os compostos 35 da presente invenção se ligam à junção entre a OSCP e a subunidade F1 da F1Fi0-ATPase mitocondrial. Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção se ligam à subunidade F1. Em certas modalidades, os ensaios de triagem da presente invenção permitem a detecção de pares de ligação da OSCP, F1, ou junção de OSCP/Fi. A OSCP é uma proteína intrinsecamente fluorescente. Em certas modalidades, titular uma solução de compostos de teste da presente invenção em uma amostra de E. Coli superexpressando OSCP resulta na extinção da fluorescência de OSCP intrínseca. Em outras modalidades, 5 compostos de teste fluorescentes ou radioativos podem ser usados em ensaios de ligação direta. Em outras modalidades, experimentos de ligação e competição podem ser conduzidos. Neste tipo de ensaio, compostos de teste são avaliados quanto a sua capacidade de competir com Bz-423 para ligação, por exemplo, à OSCP. Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção causam um aumento reduzido nos níveis
de ROS celular e apoptose reduzida em células através da regulação do gene de OSCP (por exemplo, alterando a expressão do gene de OSCP). Em modalidades adicionais, a presente invenção funciona alterando-se os movimentos moleculares da rotação da ATPase.
II. Moduladores de Proliferação e Crescimento de Células
Em algumas modalidades, considera-se que os compostos e métodos da presente
invenção causam proliferação celular diminuída. Em outras modalidades, considera-se que os compostos e métodos da presente invenção causam proliferação celular diminuída e apoptose.
III. Compostos Exemplares
Compostos exemplares da presente invenção são fornecidos abaixo.
Em certas modalidades, a presente invenção fornece compostos descrito pelas fórmulas seguintes:
incluindo sais, ésteres e pró-fármacos dos mesmos; e incluindo as formas enantioméricas ReSe misturas racêmicas dos mesmos;
em que
X é halogênio (por exemplo, Br, Cl, F), alquila (por exemplo, metila, etila, propila (por exemplo, isopropila), butila (por exemplo, isobutila, sec-butila, terc-butila), pentila, isoamila, neopentila, 1-etilpropila, 3-metilpentila, 2,2-dimetilbutila, heptila, hexila, octila, 3- etilbutila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila) ou alquila substituído;
R2 é hidrogênio ou um alquila linear ou ramificado (por exemplo, metila, etila, propila (por exemplo, isopropila), butila (por exemplo, isobutila, sec-butila, terc-butila), pentila, isoamila, neopentila, 1-etilpropila, 3-metilpentila, 2,2-dimetilbutila, heptila, hexila, octila, 3-etilbutila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila); e
R5 é alquila (por exemplo, metila, etila, propila (por exemplo, isopropila), butila (por exemplo, isobutila, sec-butila, terc-butila), pentila, isoamila, neopentila, 1-etilpropila, 3- metilpentila, 2,2-dimetilbutila, heptila, hexila, octila, 3-etilbutila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila) ou alquila substituído.
Em certas modalidades, R5 é alquila substituído por um ou mais entre halogênio, alcóxi, -NH2, -N(H)(alquila C1-C4), ou -N(alquila Ci-C4)2. Em certas modalidades, R5 é (CH2)nN(R6)2, -(CH2)nCF3 ou -(CH2)nO(R6)2, em que n é 1, 2, 3 ou 4.
Em certas modalidades, os compostos são conforme descritos nas tabelas seguintes.
Tabela 1
Composto N2 Ri R2 R3 1 H halogênio halogênio ou alquila 2 alquila halogênio halogênio ou alquila 3 H Cl Cl 4 H Cl Br H Cl F 6 H Cl alquila 7 H Cl -CH3 8 H Cl -CH2CH3 9 H Cl -(CH2)2CH3 H Cl -CH(CH3)2 11 H Cl -(CH2)3CH3 12 H Cl -CH2CH(CH3)2 13 H Cl -C(CH3)3 14 H Cl fluoroalquila H Cl I , cO U. 0 I 1 16 CO Cl Cl I O I Composto N2 Ri R2 R3 17 -CH3 Cl Br 18 -CH3 Cl F 19 -CH3 Cl alquila -CH3 Cl CO X O I 21 -CH3 Cl -CH2CH3 22 -CH3 Cl -(CH2)2CH3 23 -CH3 Cl -CH(CH3)2 24 CO Cl -(CH2)3CH3 I , O I I Cl -CH2CH(CH3)2 0 1 CO I 26 CO Cl -C(CH3)3 I I 27 I Cl fluoroalquila 0 1 CO 28 CO Cl CO I LL O 0 I 1 Tabela 2
Composto N2 R1 R2 R3 R4 1 H halogênio OH halogênio ou alquila 2 alquila halogênio OH halogênio ou alquila 3 H halogênio alcóxi halogênio ou alquila 4 alquila halogênio alcóxi halogênio ou alquila H Cl OH Cl 6 H Cl OH Br 7 H Cl OH F 8 H Cl OH alquila 9 H Cl OH CO I O I H Cl OH -CH2CH3 11 H Cl OH -(CH2)2CH3 12 H Cl OH -CH(CH3)2 13 H Cl OH -(CH2)3CH3 14 H Cl OH -CH2CH(CH3)2 Composto N2 Ri R2 R3 R4 H Cl OH -C(CH3)3 16 H Cl OH fluoroalquila 17 H Cl OH -CF3 18 i Cl OH Cl CO X O I 19 CO Cl OH Br X O I I Cl OH F O X CO 21 -CH3 Cl OH alquila 22 CO Cl OH CO X X O O I I 23 CO Cl OH -CH2CH3 X O I 24 -CH3 Cl OH -(CH2)2CH3 CO Cl OH -CH(CH3)2 X O I 26 I Cl OH -(CH2)3CH3 O X CO 27 -CH3 Cl OH -CH2CH(CH3)2 28 CO Cl OH -C(CH3)3 X O I 29 CO Cl OH fluoroalquila X O I -CH3 Cl OH CO . LL 0 1 Tabela 3
Composto Ri R2 R3 R4 N2 1 H halogênio -N(H)C(0)N(H)alquila halogênio ou alquila 2 alquila halogênio -N(H)C(0)N(H)alquila halogênio ou alquila 3 H halogênio -N(H)C(O)N(H)CH3 halogênio 4 H halogênio -N(H)C(O)N(H)CH2CH3 halogênio H halogênio -N(H)C(O)N(H)(CH2)2CH3 halogênio 6 H halogênio -N(H)C(O)N(H)CH(CH3)2 halogênio 7 H halogênio -N(H)C(O)N(H)(CH2)3CH3 halogênio 8 H halogênio -N(H)C(O)N(H)CH2CH(CH3)2 halogênio 9 H halogênio -N(H)C(O)N(H)C(CH3)3 halogênio Composto Ri R2 R3 R4 N2 alquila halogênio -N(H)C(O)N(H)CH3 halogênio 11 alquila halogênio -N(H)C(O)N(H)CH2CH3 halogênio 12 alquila halogênio -N(H)C(O)N(H)(CH2)2CH3 halogênio 13 alquila halogênio -N(H)C(O)N(H)CH(CH3)2 halogênio 14 alquila halogênio -N(H)C(O)N(H)(CH2)3CH3 halogênio alquila halogênio -N(H)C(O)N(H)CH2CH(CH3)2 halogênio 16 alquila halogênio -N(H)C(O)N(H)C(CH3)3 halogênio 17 H halogênio -N(H)C(O)N(H)CH3 alquila 18 H halogênio -N(H)C(O)N(H)CH2CH3 alquila 19 H halogênio -N(H)C(O)N(H)(CH2)2CH3 alquila H halogênio -N(H)C(O)N(H)CH(CH3)2 alquila 21 H halogênio -N(H)C(O)N(H)(CH2)3CH3 alquila 22 H halogênio -N(H)C(O)N(H)CH2CH(CH3)2 alquila 23 H halogênio -N(H)C(O)N(H)C(CH3)3 alquila 24 alquila halogênio -N(H)C(O)N(H)CH3 alquila alquila halogênio -N(H)C(O)N(H)CH2CH3 alquila 26 alquila halogênio -N(H)C(O)N(H)(CH2)2CH3 alquila 27 alquila halogênio -N(H)C(O)N(H)CH(CH3)2 alquila 28 alquila halogênio -N(H)C(O)N(H)(CH2)3CH3 alquila 29 alquila halogênio -N(H)C(O)N(H)CH2CH(CH3)2 alquila alquila halogênio -N(H)C(O)N(H)C(CH3)3 alquila 31 H Cl -N(H)C(0)N(H)alquila Cl 32 H Cl -N(H)C(0)N(H)alquila Br 33 H Cl -N(H)C(0)N(H)alquila F 34 H Cl -N(H)C(0)N(H)alquila alquila H Cl -N(H)C(0)N(H)alquila CO X O I 36 H Cl -N(H)C(0)N(H)alquila -CH2CH3 37 H Cl -N(H)C(0)N(H)alquila -(CH2)2CH3 38 H Cl -N(H)C(0)N(H)alquila -CH(CH3)2 39 H Cl -N(H)C(0)N(H)alquila -(CH2)3CH3 40 H Cl -N(H)C(0)N(H)alquila -CH2CH(CH3)2 41 H Cl -N(H)C(0)N(H)alquila -C(CH3)3 42 H Cl -N(H)C(0)N(H)alquila fluoroalquila 43 H Cl -N(H)C(0)N(H)alquila -Cf3 Composto Ri R2 R3 R4 N2 44 CO Cl -N(H)C(0)N(H)alquila Cl X O I 45 CO Cl -N(H)C(0)N(H)alquila Br I ü I 46 CO Cl -N(H)C(0)N(H)alquila F X O I 47 CO Cl -N(H)C(0)N(H)alquila alquila X O I 48 CO Cl -N(H)C(0)N(H)alquila CO X X O O I I 49 CO Cl -N(H)C(0)N(H)alquila -CH2CH3 X O I 50 CO Cl -N(H)C(0)N(H)alquila -(CH2)2CH3 X O I 51 CO Cl -N(H)C(0)N(H)alquila -CH(CH3)2 X O I 52 -CH3 Cl -N(H)C(0)N(H)alquila -(CH2)3CH3 53 I Cl -N(H)C(0)N(H)alquila -CH2CH(CH3)2 O X CO 54 I Cl -N(H)C(0)N(H)alquila -C(CH3)3 O X CO 55 CO Cl -N(H)C(0)N(H)alquila fluoroalquila X ü I 56 CO Cl -N(H)C(0)N(H)alquila CO X LL O ü I I Mais especificamente, em certas modalidades, a presente invenção fornece os compostos seguintes:
OO O F3Cv^ Nk >ΙΗ O
"TC'
Cl HM'
^NH
Ύ , e
TT
Além disso, é bem conhecido que muitas benzodiazepinas existem como isômeros ópticos devido à quiralidade introduzida no anel heterocíclico na posição C3. Ocasionalmente, os isômeros ópticos são descritos como isômeros L ou D na literatura. Alternativamente, os isômeros também são referidos como enantiomorfos R e S. Por razões de simplicidade, estes isômeros são referidos como enantiomorfos ou enantiômeros. Os compostos de benzodiazepina (e compostos relacionados) descritos neste relatório incluem suas formas enantioméricas, assim como misturas racêmicas. Assim, a utilização do termo “benzodiazepina ou seus enantiômeros” ou termos similares neste relatório refere-se à benzodiazepina (e/ou compostos relacionados) conforme descrita ou representada, incluindo todos os seus enantiomorfos assim como suas misturas racêmicas.
Qualquer um ou mais dos compostos podem ser usados para tratar uma variedade de distúrbios desregulatórios relacionados à morte celular, conforme descrito neste relatório. Adicionalmente, qualquer um ou mais destes compostos podem ser usados para inibir a hidrólise de ATP embora não afetando a síntese celular ou viabilidade celular. Adicionalmente, qualquer um ou mais destes compostos podem ser usados em combinação com pelo menos um outro agente terapêutico (por exemplo, abridores do canal de potássio, bloqueadores do canal de cálcio, inibidores do trocador sódio hidrogênio, agentes antiarrítmicos, agentes antiateroscleróticos, anticoagulantes, agentes antitrombóticos, agentes pró-trombolíticos, antagonistas de fibrinogênio, diuréticos, agentes antihipertensivos, inibidores de ATPase, antagonistas do receptor mineralocorticóide, inibidores de fosfodiesterase, agentes antidiabéticos, agentes anti-inflamatórios, antioxidantes, moduladores de angiogênese, agentes antiosteoporose, terapias de reposição hormonal, moduladores do receptor hormonal, contraceptivos orais, agentes antiobesidade, antidepressivos, agentes antiansiedade, agentes antipsicóticos, agentes antiproliferativos, agentes antitumor, agentes antiúlcera e da doença do refluxo gastroesofágico, agentes do hormônio de crescimento e/ou secretagogos do hormônio de crescimento, miméticos da -0 tireóide, agentes anti-infecciosos, agentes antivirais, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos, agentes que diminuem colesterol/lipídeo e terapias do perfil lipídico, e agentes que imitam pré-condicionamento isquêmico e/ou miocárdio atordoado, agentes antiateroscleróticos, anticoagulantes, agentes antitrombóticos, agentes anti-hipertensivos, agentes antidiabéticos, e agentes anti-hipertensivos selecionados de inibidores de ACE, '5 antagonistas do receptor AT-1, antagonistas do receptor ET, antagonistas do receptor ET/AII duplo, e inibidores de vasopepsidase, ou um agente antiplaquetas selecionado de bloqueadores GPIIb/llla, antagonistas de P2Y1 e P2Y12, antagonistas do receptor de tromboxano, e aspirina) em conjunto com um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável em uma composição farmacêutica. Adicionalmente, qualquer um ou mais destes 0 compostos podem ser usados para tratar um distúrbio associado à F1F10-ATP hidrolase mitocondrial (por exemplo, infarto do miocárdio, hipertrofia ventricular, doença arterial coronariana, Ml com onda não Q, insuficiência cardíaca congestiva, arritmias cardíacas, angina instável, angina estável crônica, angina de Prinzmetal, pressão sanguínea alta, claudicação intermitente, doença arterial oclusiva periférica, sintomas trombóticos ou > tromboembólicos de acidente vascular cerebral tromboembólico, trombose venosa, trombose arterial, trombose cerebral, embolia pulmonar, embolia cerebral, trombofilia, coagulação intravascular disseminada, restenose, fibrilação atrial, aumento ventricular, doença vascular aterosclerótica, ruptura da placa aterosclerótica, formação da placa aterosclerótica, aterosclerose após transplante, remodelação vascular, aterosclerose, câncer, cirurgia, inflamação, infecção sistemática, superfícies artificiais, cardiologia intervencional, imobilidade, medicação, gestação e perda fetal, e complicações diabéticas compreendendo retinopatia, nefropatia e neuropatia) em um paciente. Os compostos descritos acima também podem ser usados em ensaios de triagem de fármacos e outros métodos de diagnóstico e pesquisa.
Em certas modalidades, um ou mais dos compostos exemplares podem ser usados em combinação com um agente terapêutico selecionado do grupo que consiste de abridores do canal de potássio, bloqueadores do canal de cálcio, inibidores do trocador sódio hidrogênio, agentes antiarrítmicos (por exemplo, sotalol, dofetilida, amiodarona, azimilida, ibutilida, ditiazem, verapamil), agentes antiateroscleróticos, anticoagulantes, agentes antitrombóticos, agentes pró-trombolíticos, antagonistas de fibrinogênio, diuréticos, agentes anti-hipertensivos (por exemplo, captopril, lisinopril, zofenopril, ramipril, fosinopril, enalapril, ceranopril, cilazopril, delapril, pentopril, quinapril, omapatrilato, gemopatrilato, losartana, irbesartana, valsartana, sitaxsentana, atrasentana), inibidores de ATPase1 antagonistas do receptor mineralocorticóide, inibidores de fosfodiesterase, agentes antidiabéticos, agentes anti-inflamatórios, antioxidantes, moduladores de angiogênese, agentes antiosteoporose, terapias de reposição hormonal, moduladores do receptor hormonal, contraceptivos orais, agentes antiobesidade, antidepressivos, agentes antiansiedade, agentes antipsicóticos, agentes antiproliferativos, agentes antitumor, agentes antiúlcera e da doença do refluxo gastroesofágico, agentes do hormônio de crescimento e/ou secretagogos do hormônio de crescimento, miméticos da tireóide, agentes anti-infecciosos, agentes antivirais, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos, agentes que diminuem colesterol/lipídeo e terapias do perfil lipídico, e agentes que imitam o pré-condicionamento isquêmico e/ou miocárdio atordoado, agentes antiateroscleróticos, anticoagulantes, agentes antitrombóticos, agentes anti-hipertensivos, agentes antidiabéticos, e agentes anti-hipertensivos incluindo, mas não limitados a, inibidores de ACE, antagonistas do receptor AT-1, antagonistas do receptor ET, antagonistas do receptor ET/AII duplo, e inibidores de vasopepsidase, ou um agente antiplaquetas (inibidor de plaquetas) compreendendo bloqueadores GPIIb/llla, antagonistas de P2Yi e P2Y12, antagonistas do receptor de tromboxano, abciximabe, eptifibatida, tirofibana, clopidogrel, toclopidina, CS-747, ifetrobana, e aspirina. Em certos exemplos, o agente terapêutico é propafenona, propranolol; sotalol, dofetilida, amiodarona, azimilida, ibutilida, ditiazem, verapamil, captopril, lisinopril, zofenopril, ramipril, fosinopril, enalapril, eranopril, cilazopril, delapril, pentopril, quinapril, omapatrilate, gemopatrilate, losartana, irbesartana, valsartana, sitaxsentana, atrasentana; verapamil, nifedipina, diltiazem, anlodipino e mibefradil, digitalis, ouabaína, clorotiazida, hidroclorotiazida, flumetiazida, hidroflumetiazida, bendroflumetiazida, metilclorotiazida, triclorometiazida, politiazida, benztiazida, ácido etacrínico, tricrinafeno, clortalidona, furosemida, musolimina, bumetanida, triantreneno, amilorida, espironolatona, aplirinona, dipiridamol, cilostazol, sildenafila, ifetrobana, picotamida, cetanserina, clopidogrel, picotamida, rosuvastaitina, atavastatina, 5 visastatina, questran, CP-529414, lovenox, enoxaparaina, dalteparinnadolol, carvedilol, albuterol, terbutalina, formoterol, salmeterol, bitolterol, pilbuterol, fenoterol, brometo de ipratrópio, metformina, acarbose, repaglinida, glimpepirida, gliburida, gliburida, glipizida, glucovance, troglitazona, rosiglitazona, pioglitazona, GLP-1, nefazodona, sertralina, diazepam, lorazepam, buspirona, pamoato de hidroxizina, acarbose, endostatina, probucol, IO BO-653, Vitamina A, Vitamina E, AGI 1067, alendronato, raloxifeno, orlistato, ciclosperina A, paclitaxel, FK506, adriamicina, famotidina, rapitidina, ompeprazol, estrogênio, estradiol, dipiridamol, cilostazol, sildenafila, cetanserina, taxol, cisplatina, paclitaxel, adriamicina, epotilonas, carboplatina, cromolina, nedocromila, teofilina, zileutona, zafirlucaste, monteleucaste e, pranleucaste, beclometasona, triancinolona, budesonida, fluticasona,
flunisolidem, prednisona; dexametasona, etanercepte, aspirina, indometacina, pravastatina, sinvastatina, atorvastatina, fluvastatina, cerivastatina, AZ4522, itavastatina, ZD-4522, rosuvastatina, atavastatina, visastatina, abciximabe, eptifibatida, tirofibana, clopidogrel, ticlopidina, CS-747, ifetrobana, aspirina; cariporida, estreptoquinase, reteplase, activase, lanoteplase, uroquinase, prouroquinase, tenecteplase, lanoteplase, anistreplase, eminase, !0 lepirudina, argatrobana, XR-330, T686, anticorpo anti-a-2-antiplasmina, ou doesdipiridanmol.
Métodos para preparar os compostos de benzodiazepina descritos neste relatório são ilustrados nos esquemas sintéticos seguintes. Os esquemas seguintes são fornecidos para o propósito de ilustrar a invenção, mas não para limitar o escopo ou espírito da invenção.
!5 O núcleo da benzodiazepina pode ser construído usando as vias sintéticas
ilustradas nos Esquemas 1 e 2. O material de partida, anidrido 5-cloroisatóico (A), por estas vias é comercialmente disponível. A via sintética ilustrada no Esquema 1 inicia instalando-se um grupo de proteção (por exemplo, p-metoxibenzila (PMB)) no átomo de nitrogênio da amida, ou, alternativamente, alquilando o átomo de nitrogênio para instalar o substituinte 0 desejado nesta posição do produto final de benzodiazepina. A alquilação de A para fornecer o intermediário B pode ser realizada tratando-se A com uma base inorgânica, tal como carbonato de sódio ou hidreto de sódio, e um haleto de alquila ou benzila. Um grande número de haletos de alquila e haletos de benzila é conhecido na técnica e considerado ser acessível à via sintética.
A segunda etapa ilustrada no Esquema 1 envolve combinar anidrido isatóico B e
um aminoácido, tal como glicina, em um solvente orgânico, tal como ácido acético ou N1Ndimetilformamida, e aquecer a mistura até uma temperatura na faixa de cerca de 60 a 130 0C durante 12 a 36 horas. Alternativamente, a reação de condensação pode ser realizada em duas etapas. A primeiro etapa envolve combinar um aminoácido, tal como um derivado de fenilalanina, e anidrido isatóico B em um solvente, tal como piridina ou acetonitrila, com ou sem água, contendo trietilamina em uma temperatura na faixa de cerca de 20 a 100 0C 5 durante aproximadamente 12 a 18 horas seguido por remoção dos solventes a vácuo. A segunda etapa envolve a adição de um solvente orgânico, tal como ácido acético ou N1Ndimetilformamida, e aquecimento da mistura até uma temperatura na faixa de cerca de 80 a 130 0C durante cerca de 12 a 24 horas.
núcleo de benzodiazepina e instalar a funcionalidade C3. A reação envolve combinar um aminoácido, tal como glicina, e um anidrido isatóico, tal como A, em um solvente orgânico, tal como ácido acético ou Ν,Ν-dimetilformamida, e aquecer a mistura até uma temperatura na faixa de cerca de 60 a 130 0C durante cerca de 12 a 36 horas. Alternativamente, a 15 reação de condensação pode ser realizada em duas etapas. A primeira etapa envolve combinar um aminoácido, tal como um derivado de fenilalanina, e um anidrido isatóico, em um solvente, tal como piridina ou acetonitrila, com ou sem água, contendo trietilamina em uma temperatura na faixa de cerca de 20 a 100 0C durante aproximadamente 12 a 18 horas seguido por remoção dos solventes a vácuo. A segunda etapa envolve adicionar um 20 solvente orgânico, tal como ácido acético ou Ν,Ν-dimetilformamida, e aquecer a mistura até uma temperatura na faixa de cerca de 80 a 130 0C durante cerca de 12 a 24 horas para fornecer o intermediário H. Notavelmente, um grupo de proteção pode ser instalado na posição N1 reagindo-se o intermediário H com uma base suave e cloreto de pmetoxibenzila.
Esquema 2
Esquema 1
H
RX, base
p OIIUII Id
o AcOH. Δ
Glicina
Cl
^Y0
O
A
Cl
O
C
R = PMB ou alquila, por exemplo, Me, X = halogênio
10
A via sintética no Esquema 2 ilustra um processo de etapa única para construir o
H
2. calor, AcOH
1. aminoácido, EtaN, CH3CN
Cl
R"
O
O
A
H
R” = H, halogênio, alquila, etc. A fase seguinte da síntese envolve instalar os grupos funcionais C3 e/ou C5, conforme ilustrado no Esquema 3. O tratamento do composto C com um agente de cloração, tal como cloreto de fosforila em tolueno tamponado com N,N-dimetilanilina, fornece cloreto de imidoila D. Esta reação geralmente é realizada na temperatura elevada 5 (por exemplo, 90 °C) durante vários horas (por exemplo, 4 a 18 horas). Outros agentes de cloração são conhecidos na técnica e são considerados acessíveis à via sintética.
Os composto G podem ser preparados a partir do composto D usando qualquer uma das duas estratégias sintéticas mostradas no Esquema 3. No primeiro método, o composto D é tratado com uma base forte, por exemplo, terc-butóxido de potássio, e depois 10 um haleto de benzila, para fornecer o intermediário F. O cloreto de imidoila F pode ser convertido ao composto G usando condições de acoplamento cruzado de Suzuki utilizando um ácido borônico ou par de ligação de éster de boronato na presença de um catalisador de paládio apropriado. Um grande número de reagentes contendo boro para o uso no acoplamento cruzado de Suzuki é conhecido na técnica e considerado acessível à via 15 sintética. Entretanto, reagentes contendo boro que não são comercialmente disponíveis podem ser preparados a partir do haleto de arila necessário (por exemplo, iodeto ou brometo) sob condições padrão, por exemplo, por tratamento com bis(pinacolato)diboro em 1,4-dioxano quente contendo uma quantidade catalítica de um catalisador de paládio.
No segundo método, o composto D é combinado com um ácido borônico ou par de ligação de éster de boroato sob condições de acoplamento cruzado de Suzuki para formar o intermediário E. Este protocolo trabalha particularmente bem com ésteres do ácido aril borônico que não contêm prótons ácidos na cadeia lateral Ar1. Em seguida, o intermediário E é alquilado na posição C3 para introduzir um grupo aralquila C3. A etapa de alquilação é realizada tratando-se o intermediário E com uma base forte, por exemplo, terc-butóxido de potássio, na temperatura reduzida, por exemplo, -78 0C a -20 °C, seguido por adição de um haleto de benzila. Um grande número de haletos de benzila é conhecido na técnica e considerado acessível à via sintética. Entretanto, haletos de benzila que não são comercialmente disponíveis podem ser preparados por uma das várias vias que serão familiares a uma pessoa habilitada na técnica de síntese orgânica: por exemplo, redução de um ácido carboxílico comercialmente disponível (por exemplo, redução usando hidreto de lítio e alumínio), formilação de um composto aromático apropriado seguido por redução e conversão do álcool resultante a um haleto em uma etapa ou duas etapas, tal como por intermédio de um éster de sulfonato.
Esauema 3 F
A extensão dos compostos que podem ser preparados pelos procedimentos descritos acima pode ser ainda expandida modificando-se os grupos funcionais ligados ao grupo aralquila C3 do composto G. Por exemplo, conforme ilustrado no Esquema 4, considera-se que um átomo de halogênio ligado ao grupo aralquila pode ser convertido a um 5 grupo alquila usando um reagente de Grignard de alquila na presença de um catalisador de ferro. Procedimentos para realizar reações deste tipo são conhecidos na técnica.
Esquema 4
alquila -R = alquila ou PMB X é Brou I
Em situações onde o composto G contém um ou mais grupos de proteção, os O grupos de proteção podem ser removidos usando procedimentos de desproteção padrão conhecidos na técnica. Veja, por exemplo, Greene, T.W.; Wuts, P. G. M. Protective Groups in Synthesis Organic, 2- ed.; Wiley: Nova Iorque, 1991. Por exemplo, a remoção de um grupo de proteção nitrogênio, tal como um grupo p-metoxibenzila (PMB) na posição /V1 pode ser realizada usando AICI3 ou nitrato de cério e amônio (CAN). Similarmente, a desmetilação 5 ou desbenzilação de um éter fenólico no grupo Ar1 pode ser realizada usando usando BBr3, EtSH ou AICI3 para fornecer fenóis. Procedimentos de desproteção representativos são ilustrados no Esquema 5.
Esouema 5 ι η 44
Et
CAN
Et
BBr,
H3CO
Compostos tendo uma arilureia no grupo Ar1 podem ser preparados pelas vias ilustradas nos Esquemas 6 e 7. A síntese em ambos os esquemas inicia usando o composto D, que pode ser preparado conforme descrito acima. No Esquema 6, o cloreto de imidoila D é tratado com uma base forte, por exemplo, terc-butóxido de potássio, na temperatura reduzida, por exemplo, -78 0C a -20 °C, seguido por adição de um haleto de benzila. Depois, o intermediário F é tratado com um éster boroato de arila ou ácido borônico sob condições de acoplamento cruzado de Suzuki para fornecer o intermediário J. Em situações onde o grupo R é um grupo de proteção (por exemplo, preparação de compostos N1-H), o grupo de proteção é removido, desse modo fornecendo o composto K. Finalmente, o grupo de proteção boc é removido e o grupo p-aminofenila é convertido ao grupo p-ureiafenila por reação com trifosgênio e uma alquilamina. Também, conforme indicado no Esquema 6, o grupo ureia pode ser instalado no éster boroato de arila ou ácido borônico usado na etapa de acoplamento de Suzuki, desse modo fornecendo uma via mais direta a partir do cloreto de imidoila F ao produto final L. Estes métodos incluem diversificação conveniente do grupo R5 após a síntese.
Esquema 6 KO4Bu
ArCH2Br
(R é alquila ou PMB)
HOx /=V
HO
/
MHBoc
N Ar2 Pd(PPh3)4
2M Na2CO3 Cl DME
1. Pd(PPh3)4l 2M Kfe2CO3, DME
A /=y
'B~\ ^-NHCONHr5 2. (Remover PMB se R for PMB)
1. TFA
2. Trifos· R5NH2
Remove PMB if R is PMB
(Rs é alquila ou alquila substituído)
No Esquema 7, que apresenta uma estratégia alternativa para preparar o intermediário J, cloreto de imidoila D é tratado com um éster boroato de arila ou ácido borônico sob condições de acoplamento cruz(R5 é alquila ou alquila substituído)ado de Suzuki para fornecer o intermediário I. Depois, o intermediário I é tratado com uma base forte, por exemplo, terc-butóxido de potássio, na temperatura reduzida, por exemplo, -78 0C a -20 0C, seguido por adição de um haleto de benzila para fornecer o composto J.
Esauema 7
KtfBu
ArCH2Br
(R é alquila ou PMB)
BocHN
Um grande número de haletos de benzila é conhecido na técnica e considerado acessível à via sintética. Entretanto, haletos de benzila que não são comercialmente disponíveis podem ser preparados por uma das várias vias que serão familiares a uma pessoa habilitada na técnica de síntese orgânica: por exemplo, redução de um ácido carboxílico comercialmente disponível (por exemplo, redução usando hidreto de lítio e alumínio), formilação de um composto aromático apropriado seguido por redução e conversão do álcool resultante a um haleto em uma etapa ou duas etapas, tal como por intermédio de um éster de sulfonato. Similarmente, um grande número de reagentes contendo boro para o uso no acoplamento cruzado de Suzuki é conhecido na técnica e considerado acessível à via sintética. Entretanto, reagentes contendo boro que não são comercialmente disponíveis podem ser preparados a partir do haleto de arila necessário (por exemplo, iodeto ou brometo) sob condições padrão, por exemplo, por tratamento com bis(pinacolato)diboro em 1,4-dioxano quente contendo uma quantidade catalítica de um catalisador de paládio.
Compostos de benzodiazepina tendo um grupo C5-benzo[d]imidazolila podem ser preparados usando condições de ligação de paládio, conforme ilustrado no Esquema 8. Em situações onde o grupo R é um grupo de proteção, o composto M pode ser tratado com um agente de desproteção. Por exemplo, quando R é PMB, o composto M pode ser tratado com AICI3 para fornecer a amida correspondente.
IV. Composições Farmacêuticas. Formulações, e Vias de Administração Exemplares e Considerações de Dosagem
Modalidades exemplares de vários medicamentos e composições farmacêuticas considerados são fornecidos abaixo.
A. Preparação de Medicamentos
Considera-se que os compostos da presente invenção são úteis na preparação de medicamentos para tratar uma variedade de condições associadas à desregulação da morte celular, crescimento e hiperproliferação de células anormais.
Além disso, considera-se que os compostos também são úteis na preparação de medicamentos para tratar outros distúrbios em que a efetividade dos compostos é conhecida ou prognosticada. Tais distúrbios incluem, mas não são limitados a, distúrbios neurológicos (por exemplo, epilepsia) ou neuromusculares. Os métodos e técnicas para preparar medicamentos de um composto da presente invenção são bem conhecidos na técnica. Formulações farmacêuticas exemplares e vias de liberação são descritas abaixo.
Uma pessoa de habilidade na técnica avaliará que qualquer um ou mais dos compostos descritos neste relatório, incluindo a várias modalidade específicas, são
Esquema 8
R = alquila ou um grupo de proteção, por exemplo, PMB
O
M preparados aplicando-se procedimentos de preparação farmacêutica padrão. Tais medicamentos pode ser liberados ao paciente usando-se métodos de liberação que são bem conhecidos nas técnicas farmacêuticas.
B. Composições Farmacêuticas e Formulação Exemplares 5 Em algumas modalidades da presente invenção, as composições são
administradas sozinhas, enquanto que em outras modalidades, as composições são preferivelmente apresentadas em uma formulação farmacêutica compreendendo pelo menos um ingrediente/agente ativo, conforme definido acima, junto a um suporte sólido ou alternativamente, junto a um ou mais portadores farmaceuticamente aceitáveis e 10 opcionalmente outros agentes terapêuticos. Cada portador deve ser “aceitável” no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não prejudicial ao paciente.
Formulações consideradas incluem aquela administração oral, retal, nasal, tópica (incluindo transdérmica, bucal e sublingual), vaginal, parenteral (incluindo subcutânea, intramuscular, intravenosa e intradérmica) e pulmonar adequada. Em algumas modalidades, 15 as formulações são convenientemente apresentadas em forma de dosagem unitária e são preparadas por qualquer método conhecido na técnica de farmácia. Tais métodos incluem a etapa de associar o ingrediente ativo ao portador que constitui um ou mais ingredientes acessórios. No geral, as formulações são preparadas associando-se uniforme e intimamente (por exemplo, misturando-se) o ingrediente ativo aos portadores líquidos ou portadores 20 sólidos finamente divididos ou ambos, e depois, se necessário, moldando o produto.
Formulações da presente invenção adequadas para administração oral podem ser apresentadas como unidades distintas, tais como cápsulas, hóstias ou tabletes, em que cada uma contém preferivelmente uma quantidade pré-determinada do ingrediente ativo; como um pó ou grânulos; como uma solução ou suspensão em um líquido aquoso ou não 25 aquoso; ou como uma emulsão líquida óleo-em-água ou uma emulsão líquida água-emóleo. Em outras modalidades, o ingrediente ativo é apresentado como um bolo, eletuário ou pasta, etc.
Em algumas modalidades, os tabletes compreendem pelo menos um ingrediente ativo e opcionalmente um ou mais agentes/portadores acessórios são preparados por 30 compressão ou moldagem dos agentes respectivos. Em algumas modalidades, tabletes comprimidos são preparados por compressão do ingrediente ativo em uma máquina adequada em uma forma de fluxo livre, tal como um pó ou grânulos, opcionalmente misturados com um aglutinante (por exemplo, povidona, gelatina, hidroxipropilmetilcelulose), lubrificante, diluente inerte, preservante, desintegrante (por exemplo, amido glicolato de 35 sódio, povidona reticulada, carboximetilcelulose sódica reticulada), agente ativo de superfície ou dispersante. Tabletes moldados são preparados por moldagem de uma mistura do composto em pó em uma máquina adequada (por exemplo, ingrediente ativo) umedecida com um diluente líquido inerte. Opcionalmente, os tabletes podem ser revestidos ou marcados e podem ser formulados, de modo a fornecer liberação lenta ou controlada do ingrediente ativo usando, por exemplo, hidroxipropilmetilcelulose em proporções variadas para fornecer o perfil de liberação desejado. Opcionalmente, os tabletes podem ser 5 fornecidos com um revestimento entérico para fornecer liberação em partes do intestino, exceto no estômago.
Formulações adequadas para administração tópica na boca incluem pastilhas expectorantes compreendendo o ingrediente ativo em uma base flavorizada, usualmente sacarose e acácia ou tragacanto; pastilhas compreendendo o ingrediente ativo em uma IO base inerte, tal como gelatina e glicerina, ou sacarose e acácia; e colutórios compreendendo o ingrediente ativo em um portador líquido adequado.
Composições farmacêuticas para administração tópica, de acordo com a presente invenção, são opcionalmente formuladas como unguentos, cremes, suspensões, loções, pós, soluções, pastas, géis, pulverizadores, aerossóis ou óleos. Em modalidades 15 alternativas, formulações tópicas compreendem emplastros ou curativos, tais como uma bandagem ou emplastros adesivos impregnados com ingrediente(s) ativo(s), e opcionalmente um ou mais excipientes ou diluentes. Em algumas modalidades, as formulações tópicas incluem um composto(s) que realça a absorção ou penetração do(s) agente(s) ativo(s) através da pele ou outras áreas afetadas. Exemplos de tais realçadores !0 de penetração dérmica incluem dimetilsulfóxido (DMSO) e análogos relacionados.
Se desejado, a fase aquosa de uma base em creme inclui, por exemplo, pelo menos cerca de 30 % p/p de um álcool poli-hídrico, isto é, um álcool tendo dois ou mais grupos hidroxila, tal como propilenogilcol, butano-1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol e polietilenoglicol e misturas dos mesmos.
Em algumas modalidades, emulsões de fase oleosa desta invenção são
constituídas de ingredientes conhecidos em uma maneira conhecida. Tipicamente, esta fase compreende um emulsificador sozinho (de outro modo conhecido como um emulgente). Também é desejável em algumas modalidades que esta fase compreenda ainda uma mistura de pelo menos um emulsificador com uma gordura ou um óleo ou com ambos.
0 Preferivelmente, um emulsificador hidrofílico é incluído junto a um emulsificador
lipofílico, de modo a agir como um estabilizador. Em algumas modalidades também é preferível incluir tanto um óleo quanto uma gordura. Juntos, o(s) emulsificador(s) com ou sem estabilizador(s) forma(m) a assim chamada cera emulsificante, e a cera junto ao óleo e/ou gordura forma a assim chamada base de unguento emulsificante que forma a fase dispersa oleosa das formulações em creme.
Estabilizadores de emulgentes e emulsão adequados para o uso na formulação da presente invenção incluem Tween 60, Span 80, álcool cetoestearílico, álcool miristílico, monoestearato de glicerila e Iauril sulfato de sódio.
A escolha de óleos ou gorduras adequados para a formulação é fundamentada na obtenção das propriedades desejadas (por exemplo, propriedades cosméticas), visto que a solubilidade do composto/agente ativo na maioria óleos provavelmente usados nas formulações de emulsão farmacêuticas é muito baixa. Assim, cremes preferivelmente devem ser um produtos não graxo, não colorido e lavável com consistência adequada para evitar vazamento dos tubos ou outros recipientes. Ésteres alquílicos, mono ou dibásicos, de cadeia reta ou ramificada, tais como di-isoadipato, estearato de isocetila, diéster de propilenogilcol de ácidos graxos de coco, miristato de isopropila, oleato de decila, palmitato de isopropila, estearato de butila, palmitato de 2-etilexila ou uma combinação de ésteres de cadeia ramificada conhecidos como Crodamol CAP podem ser usados, os três últimos sendo ésteres preferidos. Estes podem ser usados sozinhos ou em combinação dependendo das propriedades necessárias. Alternativamente, lipídeos com ponto de fusão alto, tais como parafina branca mole e/ou parafina líquida ou outros óleos minerais podem ser usados.
Formulações adequadas para administração tópica nos olhos também incluem gotas oculares em que o ingrediente ativo é dissolvido ou colocado em suspensão em um portador adequado, especialmente um solvente aquoso para o agente.
Formulações para administração retal podem ser apresentadas como um >0 supositório com base adequada compreendendo, por exemplo, manteiga de cacau ou um salicilato.
Formulações adequadas para administração vaginal podem ser apresentadas como pessários, cremes, géis, pastas, espumas ou formulações por pulverização contendo além do agente, tais portadores apropriado, conforme são conhecidos na técnica.
!5 Formulações adequadas para administração nasal, em que o portador é um sólido,
incluem pós grossos tendo um tamanho de partícula, por exemplo, na faixa de cerca de 20 a cerca de 500 mícrons que são administrados na maneira em que a aspiração é feita, isto é, por inalação rápida (por exemplo, forçada) através da passagem nasal a partir de um recipiente do pó mantido fechado até o nariz. Outras formulações adequadas em que o 0 portador é um líquido para administração incluem, mas não são limitadas a, pulverizadores nasais, gotas ou aerossóis por nebulizador, e incluem soluções aquosas ou oleosas dos agentes.
Formulações adequadas para administração parenteral incluem soluções para injeção estéreis isotônicas aquosas e não aquosas que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostatos e solutos que tornam a formulação isotônica com o sangue do recipiente intencionado; e suspensões estéreis aquosas e não aquosas que podem incluir agentes de suspensão e agentes espessantes, e Iipossomas ou outros sistemas microparticulados que são designados para alvejar o composto nos componentes sanguíneos ou um ou mais órgãos. Em algumas modalidades, as formulações são apresentadas/formuladas em recipientes vedados de dosagem única ou dosagens múltiplas, por exemplo, ampolas e frascos, e podem ser armazenadas em uma condição seca a frio 5 (IiofiIizada) exigindo apenas a adição do portador líquido estéril, por exemplo, água para injeções, imediatamente antes do uso. Soluções e suspensões para injeção extemporâneas podem ser preparadas a partir de pós estéreis, grânulos e tabletes do tipo previamente descrito.
Formulações de dosagem unitária preferidas são aquelas contendo uma dosagem IO ou unidade diária, subdose diária, conforme relatado acima neste relatório, ou uma fração apropriada de um agente da mesma.
Deve ser entendido que além dos ingredientes particularmente mencionados acima, as formulações desta invenção podem incluir outros agentes convencionais na técnica com respeito ao tipo de formulação em questão, por exemplo, aquelas adequadas para 15 administração oral podem incluir tais agentes adicionais como adoçantes, espessantes e agentes flavorizantes. Também é intencionado que os agentes, composições e métodos desta invenção sejam combinados com outras composições e terapias adequadas. Outras formulações opcionalmente incluem aditivos alimentares (adoçantes, flavorizantes, corantes adequados, etc.), fitonutrientes (por exemplo, óleo de semente de linho), minerais (por !0 exemplo, Ca, Fe, K, etc.), vitaminas, e outras composições aceitáveis (por exemplo, ácido linoléico conjugado), expansores e estabilizadores, etc.
Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção são fornecidos na forma não solvatada ou estão em soluções não aquosas (por exemplo, etanol). Os compostos podem ser gerados para possibilitar tais formulações através da produção de polimorfos cristalinos específicos compatíveis com as formulações.
Em certas modalidades, a presente invenção fornece instruções para administrar o dito composto a um paciente. Em certas modalidades, a presente invenção fornece instruções para usar as composições contidas em um kit para o tratamento de condições caracterizadas pela desregulação de processos apoptóticos em uma célula ou tecido (por 0 exemplo, fornecendo dosagem, via de administração, árvores de decisão para o tratamento fornecidos pelos médicos para correlacionar características específicas do paciente com cursos terapêuticos de ação). Em certas modalidades, a presente invenção fornece instruções para usar as composições contidas no kit para tratar distúrbios imunes (por exemplo, lúpus eritematoso sistêmico, artrite reumatóide, doença enxerto contra hospedeiro, 5 miastenia gravis, Síndrome de Sjõgren, etc.), condições inflamatórias crônicas (por exemplo, psoríase, asma e doença de Crohn), distúrbios hiperproliferativos (por exemplo, tumores, Iinfomas de células B, Iinfomas de células T, etc.), infecções virais (por exemplo, vírus da herpes, papilomavírus, HIV), e outras condições, tais como osteoartrite e aterosclerose e semelhantes.
C. Vias de Administração Exemplares e Considerações de Dosaaem
Vários sistemas de liberação são conhecidos e podem ser usados para administrar 5 agentes terapêuticos (por exemplo, compostos exemplares, conforme descritos na Seção Ill acima) da presente invenção, por exemplo, encapsulamento em lipossomas, micropartículas, microcápsulas, endocitose mediada pelo receptor e semelhantes. Métodos de liberação incluem, mas não são limitados a, vias intra-arteriais, intramusculares, intravenosas, intranasais e orais. Em modalidade específicas, pode ser desejável 10 administrar as composições farmacêuticas da invenção localmente na área em necessidade de tratamento; isto pode ser obtido, por exemplo, e não por via de limitação, por infusão local durante a cirurgia, injeção, ou por meio de um cateter.
Considera-se que os agentes identificados podem ser administrados a pacientes ou indivíduos suscetíveis ou em risco de desenvolvimento de crescimento patológico de células 15 alvo e condições correlacionadas. Quando o agente é administrado a um paciente, tal como um camundongo, um rato ou um paciente humano, o agente pode ser adicionado a um portador farmaceuticamente aceitável e sistêmica ou topicamente administrado ao paciente. Para determinar pacientes que podem ser beneficamente tratados, uma amostra de tecido é removida do paciente e as células são avaliadas quanto à sensibilidade ao agente.
Quantidades terapêuticas são empiricamente determinadas e variam com a
patologia sendo tratada, o paciente sendo tratado e a eficácia e toxicidade do agente. Quando liberado a um animal, o método é útil para confirmar ainda a eficácia do agente. Um exemplo de um modelo animal é MLR/MpJ-/pr//pr (“MLR-Ipt1') (disponível da Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine). Camundongos MLR-/pr desenvolvem doença autoimune 25 sistêmica. Alternativamente, outros modelos animais podem ser desenvolvidos induzindo-se o crescimento de tumor, por exemplo, inoculando-se subcutaneamente camundongos carecas com cerca de 105 a cerca de 109 células cancerosas hiperproliferativas ou alvo, conforme definido neste relatório. Quando o tumor é estabelecido, os compostos descritos neste relatório são administrados, por exemplo, por injeção subcutânea em torno do tumor. 30 Medições do tumor para determinar a redução do tamanho do tumor são preparadas em duas dimensões usando calibradores venier duas vezes por semana. Outros modelos animais também podem ser utilizados, conforme apropriado. Tais modelos animais para as doenças e condições descritas acima são bem conhecidos na técnica.
Em algumas modalidades, a administração in vivo é efetuada em uma dose, contínua ou intermitentemente por todo o curso do tratamento. Métodos de determinar os meios e dosagem de administração mais eficazes são bem conhecidos àqueles de habilidade na técnica e variam com a composição usada para a terapia, o propósito da terapia, a célula alvo sendo tratada, e o paciente sendo tratado. Administrações únicas ou múltiplas são realizadas com o nível e padrão de dosagem sendo selecionado pelo tratamento do médico. Formulações de dosagem adequadas e métodos de administrar os agentes são prontamente determinados por aqueles de habilidade na técnica.
Preferivelmente, os compostos são administrados a cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 200 mg/kg, mais preferivelmente a cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 100 mg/kg, ainda mais preferivelmente a cerca de 0,5 mg/kg a cerca de 50 mg/kg. Quando os compostos descritos neste relatório são coadministrados com um outro agente (por exemplo, como agentes de sensibilização), a quantidade eficaz pode ser menor do que quando o agente é usado 10 sozinho.
As composições farmacêuticas podem ser administradas oral, intranasal, parenteralmente ou por terapia de inalação, e podem tomar a forma de tabletes, pastilhas expectorantes, grânulos, cápsulas, pílulas, ampolas, supositórios ou forma de aerossol. Elas também podem tomar a forma de suspensões, soluções e emulsões do ingrediente ativo em 15 diluentes aquosos ou não aquosos, xaropes, granulados ou pós. Além de um agente da presente invenção, as composições farmacêuticas também podem conter outros compostos farmaceuticamente ativos ou uma pluralidade de compostos da invenção.
Mais particularmente, um agente da presente invenção também referido neste relatório como o ingrediente ativo, pode ser administrado para terapia por qualquer via >0 adequada incluindo, mas não limitada a, oral, retal, nasal, tópica (incluindo, mas não limitada a, transdérmica, aerossol, bucal e sublingual), vaginal, parental (incluindo, mas não limitada a, subcutânea, intramuscular, intravenosa e intradérmica) e pulmonar. Também é avaliado que a via preferida varia com a condição e idade do recipiente, e a doença sendo tratada.
Idealmente, o agente deve ser administrado para obter concentrações de pico do !5 composto ativo nos sítios da doença. Isto pode ser obtido, por exemplo, pela injeção intravenosa do agente, opcionalmente em solução salina, ou oralmente administrado, por exemplo, como um tablete, cápsula ou xarope contendo o ingrediente ativo.
Níveis sanguíneos desejáveis do agente podem ser mantidos por uma infusão contínua para fornecer uma quantidade terapêutica do ingrediente ativo dentro do tecido >0 doente. O uso de combinações operativas é considerado para fornecer combinações terapêuticas exigindo uma dosagem total mais baixa de cada agente antiviral componente do que pode ser necessário quando cada composto terapêutico individual ou fármaco é usado sozinho, desse modo reduzindo efeitos adversos.
D. Vias de Coadministração Exemplares e Considerações de Dosagem A presente invenção também inclui métodos envolvendo a coadministração dos
compostos descritos neste relatório com um ou mais agentes ativos adicionais. De fato, é um aspecto adicional desta invenção fornecer métodos para realçar terapias da técnica e/ou composições farmacêuticas anteriores coadministrando-se um composto desta invenção. Em procedimentos de coadministração, os agentes podem ser administrados concorrente ou seqüencialmente. Em uma modalidade, os compostos descritos neste relatório são administrados antes do(s) outro(s) agente(s) ativo(s). As formulações farmacêuticas e 5 modos de administração podem ser quaisquer daqueles descritos acima. Além disso, os dois ou mais agentes químicos coadministrados, agente biológicos ou radiação podem ser administrados usando modos diferentes ou formulações diferentes.
O agente ou agentes coadministrados dependem do tipo de condição sendo tratada. Por exemplo, quando a condição sendo tratada é câncer, o agente adicional pode O ser um agente quimioterapêutico ou radiação. Quando a condição sendo tratada é um distúrbio imune, o agente adicional pode ser um imunossupressor ou um agente antiinflamatório. Quando a condição sendo tratada é inflamação crônica, o agente adicional pode ser um agente anti-inflamatório. Os agentes adicionais coadministrados, tais como anticâncer, imunossupressores e anti-inflamatórios podem ser qualquer um dos agentes 5 bem conhecidos na técnica, incluindo, mas não limitados àqueles que estão correntemente em uso clínico. A determinação do tipo e dosagem apropriados do tratamento de radiação também está dentro da habilidade na técnica ou pode ser determinada com relativa facilidade.
O tratamento das várias condições associadas à apoptose anormal geralmente é :0 limitado pelos dois principais fatores seguintes: (1) o desenvolvimento da resistência ao fármaco e (2) a toxicidade de agentes terapêuticos conhecidos. Em certos cânceres, por exemplo, a resistência aos produtos químicos e terapia de radiação foi mostrada estar associada à inibição de apoptose. Alguns agentes terapêuticos têm efeitos colaterais deletérios, incluindo Iinfotoxicidade não específica e toxicidade renal e da medula óssea.
Os métodos descritos neste relatório abrangem estes problemas. Considera-se que
a resistência ao fármaco, onde dosagens aumentadas são necessárias para obter benefício terapêutico, é superada coadministrando-se os compostos descritos neste relatório com o agente conhecido. Considera-se que os compostos descritos neste relatório sensibilizam as células alvo aos agente conhecidos (e vice versa) e, consequentemente, quantidades O menores destes agentes são necessárias para obter um benefício terapêutico.
Considera-se que a função de sensibilização dos compostos reivindicados também abrange os problemas associados aos efeitos tóxicos dos produtos terapêuticos conhecidos. Em exemplos onde o agente conhecido é tóxico, é desejável limitar as dosagens administradas em todos os casos, e particularmente nestes casos a resistência ao fármaco 5 aumentou a dosagem necessária. Considera-se que quando os compostos reivindicados são coadministrados com o agente conhecido, eles reduzem a dosagem necessária que, por sua vez, reduz os efeitos deletérios. Além disso, porque os compostos reivindicados são considerados eficazes e não tóxicos em doses maiores, proporcionalmente a coadministração de mais destes compostos do que produtos terapêuticos tóxicos conhecidos obterá os efeitos desejados enquanto minimiza os efeitos tóxicos.
V. Triaaens de Fármacos Em algumas modalidades da presente invenção, os compostos da presente
invenção e outros compostos potencialmente úteis, são triados quanto a sua afinidade de ligação à porção da proteína que confere sensibilidade à oligomicina (OSCP) do complexo de ATP sintase mitocondrial. Em modalidades particularmente preferidas, os compostos são selecionados para o uso em os métodos da presente invenção medindo-se sua afinidade de 10 ligação à proteína OSCP recombinante. Várias triagens adequadas para medir a afinidade de ligação de fármacos e outras moléculas pequenas aos receptores são conhecidas na técnica. Em algumas modalidades, as triagens de afinidade de ligação são conduzidas em sistemas in vitro. Em outras modalidades, estas triagens são conduzidas em sistemas in vivo ou ex vivo. Embora em algumas modalidades a quantificação do nível intracelular de 15 ATP após a administração dos compostos da presente invenção forneça uma indicação da eficácia dos métodos, as modalidades preferidas da presente invenção não exigem quantificação do nível de ATP intracelular ou pH.
Modalidades adicionais são dirigidas para mensurar os níveis (por exemplo, intracelular) de superóxido em células e/ou tecidos e a efetividade de métodos e compostos IO considerados particulares da presente invenção. A este respeito, aqueles habilitados na técnica avaliarão e serão capazes de fornecer vários ensaios e métodos úteis para medir os níveis de superóxido em células e/ou tecidos.
Em algumas modalidades, metodologias de triagem virtual com base na estrutura são consideradas para prognosticar a afinidade de ligação de compostos da presente invenção com OSCP. Em algumas modalidades, estruturas do composto são prognosticadas a partir de um software de modelagem molecular (por exemplo, Macro Model).
Qualquer ensaio adequado que inclui uma medição da taxa de ligação ou a afinidade de um composto exemplar da presente invenção à OSCP pode ser utilizado. 30 Exemplos incluem, mas não são limitados a, ensaios de ligação por competição usando um composto exemplar, ressonância de plasma de superfície (SPR) e radioimunoprecipitação (Lowman et ai, J. Biol.Chem. 266: 10982 [1991]). Técnicas de Ressonância Superficial com Plasmon envolvem uma superfície revestida com uma película fina de um metal condutor, tal como ouro, prata, cromo ou alumínio, em que as ondas eletromagnéticas, chamadas 35 Plasmons de Superfície, podem ser induzidas por um feixe de Iuz incidente na interface do vidro metálico em um ângulo específico chamado de ângulo de Ressonância Superficial com Plasmon. A modulação do índice refrativo da região interfacial entre a superfície da solução e do metal após a ligação das macromoléculas capturadas causa uma mudança no ângulo de SPR que pode ser mensurado diretamente ou que causa a quantidade de Iuz refletida da face inferior da superfície metálica submetida à mudança. Tais mudanças podem estar diretamente relacionadas à massa e outras propriedades ópticas da ligação das moléculas á 5 superfície do dispositivo de SPR. Vários sistemas biossensores com base em tais princípios foram divulgados (Veja por exemplo, WO 90/05305). Também existem vários biossensores de SPR comercialmente disponíveis (por exemplo, BiaCore, Uppsala, Suécia).
Em algumas modalidades, compostos são triados em cultura celular ou in vivo (por exemplo, mamíferos não humanos ou humanos) quanto à capacidade de modular a 10 atividade da ATP sintase mitocondrial. Qualquer ensaio adequado pode ser utilizado, incluindo, mas não limitados a, ensaios de proliferação celular (Comercialmente disponíveis, por exemplo, da Promega, Madison, Wl e Stratagene, La Jolla, CA) e ensaios de dimerização com base celular. (Veja por exemplo, Fuh et a/., Science, 256:1677 [1992]; Colosi et ai, J. Biol. Chem., 268:12617 [1993]). Formatos de ensaio adicionais que 15 encontram uso com a presente invenção incluem, mas não são limitados a, ensaios para medir os níveis de ATP celular e níveis de superóxido celular.
A presente invenção também fornece métodos de modificar e derivatizar as composições da presente invenção para aumentar propriedades desejáveis (por exemplo, afinidade de ligação, atividade, e semelhantes), ou minimizar as propriedades indesejáveis 20 (por exemplo, reatividade não específica, toxicidade, e semelhantes). Os princípios da derivatização química são bem entendidos. Em algumas modalidades, o projeto iterativo e métodos de síntese química são usados para produzir uma biblioteca de compostos secundários derivatizados a partir de um composto precursor. Em outras modalidades, métodos de projeto racional são usados para prognosticar e modelar interações do receptor 25 ao Iigante in silico antes de confirmar resultados pela experimentação de rotina.
VI. Aplicações Terapêuticas
Em certas modalidades, a presente invenção fornece métodos (por exemplo, aplicações terapêuticas) para regular a morte celular compreendendo: a) fornecer: i. células alvo tendo mitocôndria; e ii. uma composição (por exemplo, compostos exemplares 30 conforme descritos na Seção Ill acima); e b) expor as células alvo à composição sob condições tal que a exposição resulta na morte celular. Em algumas modalidades, a composição se liga à mitocôndria de modo a aumentar os níveis de superóxido ou alterar níveis de ATP celular nas células alvo. Métodos da presente invenção não são limitados à células alvo particulares. Em algumas modalidades, as células alvo são selecionadas do 35 grupo que consiste de células in vitro, células in vivo, células ex vivo, células cancerosas, células B, células T e granulócitos. A presente invenção não é limitada a uma aplicação terapêutica particular. Exemplos não Iimitantes de aplicações terapêuticas para a presente invenção são descritos nas subseções seguintes.
A. Aplicações Terapêuticas Gerais
Em modalidades particularmente preferidas, as composições da presente invenção são consideradas para fornecer benefícios terapêuticos a pacientes sofrendo de uma ou 5 mais de várias condições (por exemplo, doenças caracterizadas pela desregulação de necrose e/ou processos de apoptose em uma célula ou tecido, doença caracterizada pelo crescimento e/ou hiperproliferação de células anormal, etc.) modulando-se (por exemplo, inibindo ou promovendo) a atividade de complexos da ATP sintase mitocondrial (referida como F1Fio-ATPase mitocondrial) em células ou tecidos afetados. Em modalidades 10 preferidas adicionais, considera-se que as composições da presente invenção são usadas para tratar condições imunes/inflamatórias crônicas (por exemplo, psoríase). Ainda em modalidades adicionais, considera-se que as composições da presente invenção são usadas em combinação com terapia contra estenose para tratar vasos comprometidos (por exemplo, ocluídos).
Em modalidades particularmente preferidas, considera-se que as composições da
presente invenção inibem a atividade do complexo da ATP sintase mitocondrial ligando-se a uma subunidade específica deste complexo de proteínas de multisubunidades. Embora a presente invenção não seja limitada a qualquer mecanismo particular, nem a qualquer entendimento da ação dos agentes sendo administrados, em algumas modalidades, 20 considera-se que as composições da presente invenção se ligam à porção da proteína que confere sensibilidade à oligomicina (OSCP) do complexo da ATP sintase mitocondrial, à junção OSCP/F1, ou à subunidade F1. Do mesmo modo, ainda é considerado que quando as composições da presente invenção se ligam à OSCP, o efeito inicial é a inibição global do complexo da ATP sintase mitocondrial, e que a conseqüência a jusante da ligação é uma 25 mudança no nível de ATP ou pH e a produção de espécie reativa de oxigênio (por exemplo, O2'). Ainda em outras modalidades preferidas, embora a presente invenção não seja limitada a qualquer mecanismo particular, nem a qualquer entendimento da ação dos agentes sendo administrados, considera-se que a geração de radicais livres basicamente resulta na morte celular. Ainda em outras modalidades, embora a presente invenção não seja limitada a 30 qualquer mecanismo particular, nem a qualquer entendimento da ação dos agentes sendo administrados, considera-se que a inibição do complexo da ATP sintase mitocondrial usando as composições e métodos da presente invenção fornece inibição terapeuticamente útil da proliferação celular.
Consequentemente, considera-se que métodos preferidos incorporados na presente invenção, forneçam benefícios terapêuticos a pacientes fornecendo-se compostos da presente invenção que modulam (por exemplo, inibem ou promovem) a atividade dos complexos da ATP sintase mitocondrial em células ou tecidos afetados por intermédio da ligação à porção da proteína que confere sensibilidade à oligomicina (OSCP) do complexo da ATP sintase mitocondrial. Com importância, por si só a OSCP, a junção OSCP/F1, ou a subunidade F1 não tem atividade biológica.
Assim, em um sentido amplo, considera-se que as modalidades preferidas da 5 presente invenção são dirigidas à descoberta de que muitas doenças caracterizadas pela desregulação de necrose e/ou processos de apoptose em uma célula ou tecido, ou doenças caracterizadas pelo crescimento e/ou hiperproliferação de células anormal, etc., podem ser tratadas modulando-se a atividade do complexo da ATP sintase mitocondrial ligando-se ao componente da proteína que confere sensibilidade à oligomicina (OSCP). A presente 10 invenção não é intencionado a ser limitada, entretanto, à prática das composições e métodos explicitamente descritos neste relatório. De fato, aqueles habilitados na técnica avaliarão que vários compostos adicionais não especificamente relatados neste relatório são adequados para o uso nos métodos divulgados neste relatório de modular a atividade da ATP sintase mitocondrial.
Assim, a presente invenção especificamente considera que qualquer número de
compostos adequados presentemente conhecidos na técnica, ou desenvolvidos mais tarde, podem opcionalmente encontrar uso nos métodos da presente invenção. Por exemplo, compostos incluindo, mas não limitados a, oligomicina, ossamicina, citovaricina, apoptolidina, bafilomixcina, resveratrol, piceatanol, e dicicloexilcarbodiimida (DCCD), e 20 semelhantes, encontram uso nos métodos da presente invenção. A presente invenção não é intencionado, entretanto, a ser limitada aos métodos ou compostos especificados acima. Em uma modalidade, aqueles compostos potencialmente úteis nos métodos da presente invenção podem ser selecionados a partir daqueles adequados, conforme descrito na literatura científica. (Veja por exemplo, K.B. Wallace e A.A. Starkov, Annu. Rev. Pharmacol. 25 Toxicol., 40:353-388 [2000]; A.R. Solomon et ai, Proc. Nat. Acad. Sei. U.S.A., 97(26): 14766-14771 [2000]; e L. Galluzzi, N. Larochette, N. Zamzami e G. Kroemer, Oncogene 25: 4812-4830 [2006]).
Em algumas modalidades, compostos potencialmente úteis nos métodos da presente invenção são triados contra as linhagens de células cancerosas do National 30 Cancer lnstitute’s (NCI-60) para verificar a eficácia. (Veja por exemplo, A. Monks et ai, J. Natl. Cancer Inst., 83:757-766 [1991]; e K.D. Paull et ai, J. Natl. Cancer Inst., 81: 1088-1092 [1989]). Triagens adicionais adequadas (por exemplo, modelos de doença de autoimunidade, etc.) estão dentro da habilidade na técnica.
Em outras modalidades preferidas, considera-se que as composições da presente 55 invenção são usadas para tratar tuberculose micobacteriana sensível ao fármaco e/ou resistente ao fármaco.
Em outras modalidades preferidas, considera-se que as composições da presente invenção são usadas no tratamento de angiogênese.
Em outras modalidades preferidas, considera-se que as composições da presente invenção são usadas no tratamento de doença cardiovascular.
Em outras modalidades preferidas, considera-se que as composições da presente invenção são usadas em combinação com terapia contra estenose para tratar vasos comprometidos (por exemplo, ocluídos). Em modalidades adicionais, considera-se que as composições da presente invenção são usadas em combinação com terapia contra estenose para tratar vasos cardíacos comprometidos.
A estenose é uma condição que se desenvolve quando um vaso (por exemplo, 10 válvula aórtica) se torna estreito. Por exemplo, estenose da válvula aórtica é uma condição cardíaca que se desenvolve quando a válvula entre a câmara esquerda inferior (ventrículo esquerdo) do coração e o vaso sanguíneo principal chamado aorta se torna estreita. Este estreitamento (por exemplo, estenose) cria um espaço muito pequeno para o sangue fluir no corpo. Normalmente, o ventrículo esquerdo bombeia sangue rico em oxigênio ao corpo 15 através da aorta, que ramifica em um sistema de artérias por todo o corpo. Quando o coração bombeia, as 3 pontas, ou cúspides, da válvula aórtica abrem um caminho para possibilitar que sangue flua a partir do ventrículo na aorta. Entre os batimentos cardíacos, as pontas formam uma vedação para que o sangue não retorne através da válvula. Se a válvula aórtica é danificada, ela pode se tornar estreita (submetida à estenose) e o fluxo 20 sanguíneo pode ser reduzido aos órgãos no corpo, incluindo no próprio coração. As perspectivas a longo prazo para pessoas com estenose da válvula aórtica é deficiente uma vez que os sintomas se desenvolvem. Pessoas com a estenose da válvula aórtica não tratada que desenvolvem sintomas de insuficiência cardíaca usualmente têm uma expectativa de vida de 3 anos ou menos.
'5 Existem vários tipos de tratamento para tratar válvulas comprometidas (por
exemplo, dilatação por balão, ablação, aterectomia ou tratamento a laser). Um tipo de tratamento para válvulas cardíacas comprometidas é a angioplastia. A angioplastia envolve inserir uma guia revestida por um balão, ou cateter, em uma artéria estreita ou bloqueada em uma tentativa de abrí-la. Através da insuflação e esvaziamento do balão várias vezes, os iO médicos usualmente são capazes de alargar a artéria.
Uma limitação comum dos procedimentos de angioplastia ou expansão da válvula é a restenose. A restenose é o refechamento de uma artéria periférica ou coronária após trauma àquela artéria causado por esforços em abrir uma porção submetida à estenose da artéria, tal como, por exemplo, por dilatação por balão, ablação, aterectomia ou tratamento a >5 laser da artéria. Através destes procedimentos de angioplastia, a restenose ocorre em uma taxa de cerca de 20 a 50 % dependendo da definição, posição do vaso, tamanho da lesão e outras variáveis morfológicas e clínicas. Acredita-se que a restenose seja uma reação de cura natural da lesão da parede arterial que é causada por procedimentos de angioplastia. A reação de cura inicia com o mecanismo trombótico no sítio da lesão. O resultado final das etapas complexas do processo de cura pode ser hiperplasia da íntima, a migração e proliferação não controladas de células musculares lisas mediais, combinadas com sua 5 produção de matriz extracelular, até que a artéria seja novamente submetida à estenose ou ocluída.
Em uma tentativa de prevenir a restenose, stents intravasculares metálicos foram permanentemente implantados em vasos coronários ou periféricos. O stent é tipicamente inserido por cateter em um lúmen vascular expandido em contato com a porção doente da 10 parede arterial, desse modo fornecendo suporte mecânico para o lúmen. Entretanto, foi descoberto que a restenose pode ainda ocorrer com tais stents no lugar. Também, o stent por si só pode causar trombose local indesejável. Para abranger o problema de trombose, pessoas que recebem stents também recebem tratamento sistêmico extensivo com fármacos anticoagulantes e antiplaquetas.
Para abranger o problema de restenose, foi proposto fornecer stents que são
semeados com células endoteliais (Dichek, D. A. et a/.; Circulation 1989; 80: 1347-1353). Neste experimento, células endoteliais de ovelhas que sofreram transferência de genes mediada por retrovírus para beta-galactosidase bacteriana ou ativador tecidual do plasminogênio humano foram semeadas em stents de aço inoxidável e cultivadas até que os 20 stents estivessem cobertos. Portanto, as células foram capazes de ser liberadas na parede vascular onde elas podem fornecer proteínas terapêuticas. Outros métodos de fornecer substâncias terapêuticas à parede vascular por meio de stents também foram propostos (veja, por exemplo, Pedidos de Patente Internacionais WO 91/12779 e WO 90/13332; cada um incorporado integralmente como referência neste relatório). Nestas aplicações, é 15 sugerido que os agentes antiplaquetas, agentes anticoagulantes, agentes antimicrobianos, agentes anti-inflamatórios, agentes antimetabólicos e outros fármacos possam ser fornecidos em stents para reduzir a incidência de restenose. Além disso, outros agentes vasorreativos, tais como óxido nítrico que liberam agentes também podem ser usados.
Uma causa adicional de restenose é a superproliferação do tecido tratado. Em iO algumas modalidades, considera-se que as propriedades antiproliferativas da presente invenção inibem a restenose. Stents com eluição de fármacos são bem conhecidos na técnica (veja, por exemplo, Patente U.S. N2: 5.697.967; Patente U.S. N2: 5.599.352; e Patente U.S. N2: 5.591.227; cada uma incorporada integralmente como referência neste relatório). Em algumas modalidades, as composições da presente invenção são eluídas a 15 partir dos stents com eluição de fármacos no tratamento de vasos comprometidos (por exemplo, ocluídos). Em modalidades adicionais, as composições da presente invenção são eluídas a partir de stents com eluição de fármacos no tratamento de vasos cardíacos comprometidos.
Aqueles habilitados na técnica de preparar compostos e formulações farmacêuticos avaliarão que quando selecionam compostos opcionais para o uso nos métodos divulgados neste relatório, estas considerações de adequação incluem, mas não são limitadas à toxicidade, segurança, eficácia, disponibilidade e custo dos compostos particulares.
Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas compreendem compostos da invenção e, por exemplo, agentes terapêuticos (por exemplo, agentes antiateroscleróticos, anticoagulantes, agentes antitrombóticos, agentes anti-hipertensivos, abridores do canal de potássio, bloqueadores do canal de cálcio, inibidores, do trocador sódio hidrogênio, agentes antiarrítmicos, agentes pró-trombolíticos, antagonistas de fibrinogênio, diuréticos, inibidores de ATPase, antagonistas do receptor mineralocorticóide, inibidores de fosfodiesterase, agentes anti-inflamatórios, antioxidantes, moduladores de angiogênese, agentes antiosteoporose, terapias de reposição hormonal, moduladores do receptor hormonal, contraceptivos orais, agentes antiobesidade, antidepressivos, agentes antiansiedade, agentes antipsicóticos, agentes antiproliferativos, agentes antitumor, agentes antiúlcera e da doença do refluxo gastroesofágico, agentes do hormônio de crescimento e/ou secretagogos do hormônio de crescimento, miméticos da tireóide, agentes antiinfecciosos, agentes antivirais, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos, agentes que diminuem colesterol/lipídeo e terapias do perfil lipídico, e agentes que imitam o précondicionamento isquêmico e/ou miocárdio atordoado, e agentes antidiabéticos). Agentes anti-hipertensivos incluem, mas não são limitados a, inibidores de ACE, antagonistas do receptor AT-1, antagonistas do receptor ET, antagonistas do receptor ET/AII duplo e inibidores de vasopepsidase, ou um agente antiplaquetas selecionado de bloqueadores GPIIb/llla, antagonistas de P2Y, e P2Y12, antagonistas do receptor de tromboxano e aspirina.
Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção são úteis no tratamento de um distúrbio associado à F1F10-ATP hidrolase mitocondrial (por exemplo, infarto do miocárdio, hipertrofia ventricular, doença arterial coronariana, Ml com onda não Q, insuficiência cardíaca congestiva, arritmias cardíacas, angina instável, angina estável 30 crônica, angina de Prinzmetal, pressão sanguínea alta, claudicação intermitente, doença arterial oclusiva periférica, sintomas trombóticos ou tromboembólicos de acidente vascular cerebral tromboembólico, trombose venosa, trombose arterial, trombose cerebral, embolia pulmonar, embolia cerebral, trombofilia, coagulação intravascular disseminada, restenose, fibrilação atrial, aumento ventricular, doença vascular aterosclerótica, ruptura da placa 35 aterosclerótica, formação da placa aterosclerótica, aterosclerose após transplante, remodelação vascular, aterosclerose, câncer, cirurgia, inflamação, infecção sistemática, superfícies artificiais, cardiologia intervencional, imobilidade, medicação, gestação e perda fetal, e complicações diabéticas compreendendo retinopatia, nefropatia e neuropatia) em um paciente.
B. Distúrbio Imune. Distúrbio Autoimune e Aplicação Terapêutica para Distúrbio Inflamatório Crônico
Distúrbios imunes e distúrbios inflamatórios crônicos frequentemente resultam da
regulação da proliferação celular e/ou regulação da apoptose celular deficientes. A mitocôndria realiza um papel principal no controle e execução da apoptose celular. O poro de transição de permeabilidade mitocondrial (MPTP) é um poro que atravessa as membranas mitocondriais internas e externas e funciona na regulação de partículas pró10 apoptóticas. A abertura do MPTP transitória resulta na liberação de citocromo c e o fator de indução à apoptose a partir do espaço intermembranar mitocondrial, resultando em apoptose celular.
A proteína que confere sensibilidade à oligomicina (OSCP) é uma subunidade da F1F10-ATP sintase mitocondrial/ATPase e funciona na ligação de um gradiente de prótons 15 através do setor F0 da enzima na membrana mitocondrial. Em algumas modalidades, considera-se que compostos da presente invenção se ligam à OSCP, à junção OSCPZF1, ou à subunidade F1, aumentam níveis de superóxido e citocromo c, aumentam a apoptose celular, e inibem a proliferação celular. A adenina nucleotídeo translocase (ANT) é uma proteína de 30 kDa que atravessa a membrana mitocondrial interna e é central ao poro de 20 transição de permeabilidade mitocondrial (MPTP). Agentes oxidantes ou alquilantes tiol são ativadores potentes do MPTP que agem modificando-se uma ou mais de três cisteínas não pareadas no lado da matriz da ANT. 4-(N-(S-glutationilacetil)amino) fenilarsenóxido, inibe a ANT.
Em certas modalidades, a presente invenção fornece um método para tratar um distúrbio imune (por exemplo, doença enxerto contra hospedeiro, artrite reumatóide, ou lúpus eritematoso sistêmico), um distúrbio hiperproliferativo (por exemplo, câncer), ou uma doença inflamatória crônica (por exemplo, asma ou psoríase). Em certas modalidades, o câncer é mieloma, câncer de bexiga ou câncer renal.
C. Tratamento de Hiperplasia Epidérmica
50 A hiperplasia epidérmica (por exemplo, proliferação excessiva de queratinócitos)
levando a um espessamento significante da epiderme em associação com mudança da epiderme espessa, é um característica de doenças tais como psoríase (veja, por exemplo, Krueger GC, et ai., (1984) J. Am. Acad. Dermatol. 11: 937-947; Fry L. (1988), Brit. J. Dermatol. 119:445-461; incorporado integralmente neste relatório como referência) e também ocorre sob condições fisiológicas (por exemplo, durante a cura do ferimento).
O tratamento tópico da pele com ácido all-trans retinóico (RA) ou seu precursor, alltrans retinol (ROL) também resulta em hiperplasia epidérmica (veja, por exemplo, Varani J, et al., (2001) J. Invest. Dermatol, 117: 1335-1341; incorporado integralmente neste relatório como referência). Embora as etiologias fundamentais sejam diferentes, todas estas hiperplasias têm em comum a ativação do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGF) na proliferação de queratinócitos (veja, por exemplo, Varani J, et ai, (2001) J. Invest. Dermatol 117: 1335-1341; Baker BS, et ai, (1992) Brit. J. Dermatol. 126:105-110; Gottlieb AB, et ai, (1988) J. Exp. Med. 167:670-675; Elder JT, et ai, (1989) Science 243:811-814; Piepkorn M, et ai, (1998) J Invest Dermatol 111 :715-721; Piepkorn M, et al., (2003) Arch Dermatol Res 27:27; Cook PW, et al., (1992) Câncer Res 52:3224-3227; incorporados integralmente neste relatório como referência). O crescimento epidérmico normal não IO aparece como dependente da função do receptor do EGF como o crescimento hiperplásico (veja, por exemplo, Varani J, et al., (2001) J. Invest. Dermatol 117:1335-1341; Varani J, et al., (1998) Pathobiology 66:253-259; incorporados integralmente neste relatório como referência). Do mesmo modo, a função da derme na pele intacta não depende da função do receptor do EGF (veja, por exemplo, Varani J, et al., (2001) J. Invest. Dermatol 117: 1335- 1341; incorporado integralmente neste relatório como referência).
O papel central do receptor EGF na regulação do crescimento epitelial hiperplásico torna a tirosina quinase do receptor EGF um alvo para agentes antiproliferativos. Do mesmo modo, a série de sinalizar as moléculas encaixadas a jusante deste receptor são pontos adicionais nos quais o crescimento de queratinócitos pode ser interrompido. A cascata da !0 proteína quinase ativada por mitógeno (MAPK) é ativada pelo receptor EGF (veja, por exemplo, Marques, S. A., et al., (2002) J Pharmacol Exp Ther 300, 1026-1035; incorporado integralmente neste relatório como referência). Na epiderme hiperproliferativa, mas não na epiderme normal, as quinases reguladas pelo sinal extracelular 1/2 (Erk 1/2) são ativadas nos queratinócitos basais e suprabasais e contribuem para a hiperproliferação epidérmica !5 (veja, por exemplo, Haase, L, et al., (2001) J Clin Invest 108, 527-536; Takahashi, H., et al., (2002) J Dermatol Sci 30, 94-99; incorporados integralmente neste relatório como referência). Em modelos de cultura, a regulação do crescimento de queratinócitos através do receptor EGF resulta na atividade de MAPK aumentada. Nos queratinócitos, a atividade de MAPK estimulada pelo fator crescimento também é dependente do ajuste de integrina e 0 as moléculas da matriz extracelular que se ligam às integrinas são capazes de ativar independentemente MAPKs e aumentar a proliferação de queratinócitos (veja, por exemplo, Haase, L, et al., (2001) J Clin Invest 108, 527-536; incorporado integralmente neste relatório como referência). A proliferação de outras células da pele, incluindo fibroblastos, é menos dependente da atividade de Erk 1/2, tornando a inibição de Erk uma característica 5 potencialmente útil para avaliar compostos derivados quanto à utilidade potencial contra a hiperplasia epidérmica.
Em algumas modalidades, considera-se que os compostos da presente invenção são úteis para tratar hiperplasias epidérmicas.
Em algumas modalidades, considera-se que os compostos da presente invenção são úteis no tratamento de psoríase. A psoríase é uma hiperplasia epidérmica comum e crônica. A psoríase em placas é o tipo mais comum de psoríase e é caracterizada pela pele 5 vermelha coberta com lesões descamativas e inflamação. Manchas com placas vermelhas na forma circular a oval que coçam ou queimam são típicas da psoríase em placas. As manchas são usualmente encontradas nos braços, pernas, tronco, ou couro cabeludo, mas podem ser encontradas em qualquer parte da pele. As áreas mais típicas são os joelhos e cotovelos. A psoríase não é contagiosa e pode ser hereditária. Fatores ambientais, tais 0 como o tabagismo, exposição ao sol, alcoolismo, e infecção por HIV, podem afetar a forma como a psoríase frequentemente ocorre e quanto tempo a mesma irá durar.
O tratamento de psoríase inclui esteróides tópicos, alcatrão de hulha, agentes queratolíticos, análogos da vitamina D-3, e retinóides tópicos. Esteróides tópicos são agentes usados para reduzir a formação de placas. Agentes esteróides tópicos têm efeitos anti-inflamatórios e podem causar atividades metabólicas profundas e variadas. Além disso, agentes esteróides tópicos modificam a resposta imune do corpo para diversos estímulos. Exemplos de esteróides tópicos incluem, mas não são limitados a, acetonido de triancinolona (Artistocort, Kenalog) 0,1 % creme, e diproprionato de betametasona (Diprolene, Diprosone) 0,05 % creme. Alcatrão de hulha é um tratamento barato, disponível 0 sem receita médica, na forma de xampus ou loções para o uso em áreas de envolvimento espalhadas. Alcatrão de hulha é particularmente útil em áreas “hair-bearing”. Um exemplo de alcatrão de hulha é alcatrão de hulha 2 a 10 % (Alcatrão DHS, Doctar, Theraplex T) antiprurítico. Os agentes queratolíticos são usados para remover escamas, alisar a pele, e tratar hiperqueratose. Um exemplo de um agente queratolítico é antralina 0,1 a 1 % (Drithocreme, Anthra-Derm). Análogos da vitamina D-3 são usados em pacientes com lesões resistentes à terapia anterior ou com lesões na face ou áreas expostas onde as partes mais finas da pele apresentariam problemas cosméticos. Um exemplo de um análogo da vitamina D-3 é calcipotrieno (Dovonex). Retinóide tópicos são agentes que diminuem a aderência de células epiteliais foliculares e estimulam a atividade mitótica, resultando em um D aumento na modificação de células epiteliais foliculares. Exemplos de retinóide tópicos incluem, mas não são limitados a, tretinoína (Retin-A, Avita), e tazaroteno (Tazorac).
Aproximadamente 1 a 2 % de pessoas nos Estados Unidos, ou cerca de 5,5 milhões, têm psoríase em placas. Até 30 % de pessoas com psoríase em placas também têm artrite psoriática. Indivíduos com artrite psoriática têm inflamação em suas articulações 5 e podem ter outros sintomas de artrite. Algumas vezes, a psoríase em placas pode se desenvolver em doença mais severa, tal como psoríase pustular ou psoríase eritrodérmica. Na psoríase pustular, as áreas vermelhas na pele contêm bolhas com pus. Na psoríase eritrodérmica, uma área ampla de pele vermelha e escamosa é típica, e ela pode ser pruriente e dolorosa. A presente invenção é útil no tratamento de tipos adicionais de psoríase, incluindo mas não limitados a, psoríase gutata, psoríase de unhas, psoríase inversa, e psoríase no couro cabeludo.
Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção são úteis no
tratamento de distúrbios de pigmentação (por exemplo, albinismo, melasma e vitiligo). A presente invenção não é limitada a um mecanismo particular para tratar distúrbios de pigmentação. Em algumas modalidades, distúrbios de pigmentação são tratados através do alvejamento da F1F10-ATPase pelos compostos da presente invenção. Em modalidades 10 adicionais, distúrbios de pigmentação são tratados através do redirecionamento da tirosinase pelos compostos da presente invenção. Em modalidades adicionais, distúrbios de pigmentação são tratados através do alvejamento de proibitina pelos compostos da presente invenção.
D. Terapia contra Estenose Em algumas modalidades, as composições da presente invenção são usadas em
combinação com terapia contra estenose para tratar vasos comprometidos (por exemplo, ocluídos). Em modalidades adicionais, as composições da presente invenção são usadas em combinação com terapia contra estenose para tratar vasos cardíacos comprometidos.
A estenose é uma condição que se desenvolve quando um vaso (por exemplo, 20 válvula aórtica) se torna estreito. Por exemplo, a estenose da válvula aórtica é uma condição cardíaca que se desenvolve quando a válvula entre a câmara esquerda inferior (ventrículo esquerdo) do coração e o vaso sanguíneo principal chamado aorta se torna estreita. Este estreitamento (por exemplo, estenose) cria um espaço muito pequeno para o sangue fluir no corpo. Normalmente, o ventrículo esquerdo bombeia sangue rico em oxigênio ao corpo 25 através da aorta, que ramifica em um sistema de artérias por todo o corpo. Quando o coração bombeia, as 3 pontas, ou cúspides, da válvula aórtica abrem um caminho para possibilitar que sangue flua a partir do ventrículo na aorta. Entre os batimentos cardíacos, as pontas formam uma vedação para que o sangue não retorne através da válvula. Se a válvula aórtica é danificada, ela pode se tomar estreita (submetida à estenose) e o fluxo 30 sanguíneo pode ser reduzido aos órgãos no corpo, incluindo no próprio coração. As perspectivas a longo prazo para pessoas com estenose da válvula aórtica é deficiente uma vez que os sintomas se desenvolvem. Pessoas com a estenose da válvula aórtica não tratada que desenvolvem sintomas de insuficiência cardíaca usualmente têm uma expectativa de vida de 3 anos ou menos.
Existem vários tipos de tratamento para tratar válvulas comprometidas (por
exemplo, dilatação por balão, ablação, aterectomia ou tratamento a laser). Um tipo de tratamento para válvulas cardíacas comprometidas é a angioplastia. A angioplastia envolve inserir uma guia revestida por um balão, ou cateter, em uma artéria estreita ou bloqueada em uma tentativa de abrí-la. Através da insuflação e esvaziamento do balão várias vezes, os médicos usualmente são capazes de alargar a artéria.
Uma limitação comum dos procedimentos de angioplastia ou expansão da válvula é a restenose. A restenose é o refechamento de uma artéria periférica ou coronária após trauma àquela artéria causado por esforços em abrir uma porção submetida à estenose da artéria, tal como, por exemplo, por dilatação por balão, ablação, aterectomia ou tratamento a laser da artéria. Através destes procedimentos de angioplastia, a restenose ocorre em uma taxa de cerca de 20 a 50 % dependendo da definição, posição do vaso, tamanho da lesão e outras variáveis morfológicas e clínicas. Acredita-se que a restenose seja uma reação de cura natural da lesão da parede arterial que é causada por procedimentos de angioplastia. A reação de cura inicia com o mecanismo trombótico no sítio da lesão. O resultado final das etapas complexas do processo de cura pode ser hiperplasia da íntima, a migração e proliferação não controladas de células musculares lisas mediais, combinadas com sua produção de matriz extracelular, até que a artéria seja novamente submetida à estenose ou ocluída.
Em uma tentativa de prevenir a restenose, stents intravasculares metálicos foram permanentemente implantados em vasos coronários ou periféricos. O stent é tipicamente inserido por cateter em um lúmen vascular expandido em contato com a porção doente da 20 parede arterial, desse modo fornecendo suporte mecânico para o lúmen. Entretanto, foi descoberto que a restenose pode ainda ocorrer com tais stents no lugar. Também, o stent por si só pode causar trombose local indesejável. Para abranger o problema de trombose, pessoas que recebem stents também recebem tratamento sistêmico extensivo com fármacos anticoagulantes e antiplaquetas.
Para abranger o problema de restenose, foi proposto fornecer stents que são
semeados com células endoteliais (Dichek, D. A. et al.\ Circulation 1989; 80: 1347-1353). Neste experimento, células endoteliais de ovelhas que sofreram transferência de genes mediada por retrovírus para beta-galactosidase bacteriana ou ativador tecidual do plasminogênio humano foram semeadas em stents de aço inoxidável e cultivadas até que os 30 stents estivessem cobertos. Portanto, as células foram capazes de ser liberadas na parede vascular onde elas podem fornecer proteínas terapêuticas. Outros métodos de fornecer substâncias terapêuticas à parede vascular por meio de stents também foram propostos (veja, por exemplo, Pedidos de Patente Internacionais WO 91/12779 e WO 90/13332; cada um incorporado integralmente como referência neste relatório). Nestas aplicações, é 35 sugerido que os agentes antiplaquetas, agentes anticoagulantes, agentes antimicrobianos, agentes anti-inflamatórios, agentes antimetabólicos e outros fármacos possam ser fornecidos em stents para reduzir a incidência de restenose. Além disso, outros agentes vasorreativos, tais como óxido nítrico que liberam agentes também podem ser usados.
Uma causa adicional de restenose é a superproliferação do tecido tratado. Em algumas modalidades, considera-se que as propriedades antiproliferativas da presente invenção inibem a restenose. Stents com eluição de fármacos são bem conhecidos na 5 técnica (veja, por exemplo, Patente U.S. Na: 5.697.967; Patente U.S. Ns: 5.599.352; e Patente U.S. N°: 5.591.227; cada uma incorporada integralmente como referência neste relatório). Em algumas modalidades, as composições da presente invenção são eluídas a partir dos stents com eluição de fármacos no tratamento de vasos comprometidos (por exemplo, ocluídos). Em modalidades adicionais, as composições da presente invenção são 10 eluídas a partir de stents com eluição de fármacos no tratamento de vasos cardíacos comprometidos.
E. Tratamento de Infecções Bacterianas
Em algumas modalidades, compostos de benzodiazepina e compostos relacionados (veja, por exemplo, Seção Ill - Compostos Exemplares) são usados para tratar um paciente sofrendo de uma infecção bacteriana. Em algumas modalidades, mais do que um dos compostos da presente invenção são usados para tratar um paciente sofrendo de uma infecção bacteriana. Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção tratam infecções bacterianas através da modulação (por exemplo, inibição ou promoção) da atividade de complexos da ATP sintase (por exemplo, complexos da ATP sintase mitocondrial ou homólogos em organismos que não têm mitocôndria) em células ou tecidos afetados por intermédio da ligação à porção da proteína que confere sensibilidade à oligomicina (OSCP)/complexo F1 da ATP sintase (por exemplo, complexo da ATP sintase mitocondrial). A presente invenção não é limitada aos tipos particulares de infecções bacterianas. Exemplos de infecções bacterianas incluem, mas não são limitados a, Antrax, Meningite Bacteriana, Brucelose, Campilobacteriose, Doença da Arranhadura do Gato, Cólera, Difteria, Tifo Epidêmico, Gonorreia, Impetigo, Legionelose, Lepra (Doença de Hansen), Leptospirose, Listeriose, Doença de Lyme, Melioidose, infecção por MRSA, Nocardiose, Coqueluche (Tosse Convulsa), Peste, Pneumonia Pneumocócica, Psitacose, febre Q, Febre Maculosa das Montanhas Rochosas (RMSF)1 Salmonelose, Febre Escarlate, Shigelose, Sífilis, Tétano, Tracoma1 Tuberculose, Tularemia, Febre Tifóide, Tifo; e Infecções do Trato Urinário. Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção são coadministrados com pelo menos um agente adicional para propósitos de tratar infecções bacterianas. Exemplos de agentes de adição para propósitos de tratar infecções bacterianas incluem, mas não são limitados a, Cefalosporinas, Macrolídeos, Penicilinas, Quinolonas, Sulfonamidas e Compostos Relacionados, e Tetraciclinas.
F. Tratamento de Infecções Virais
Em algumas modalidades, os compostos de benzodiazepina e compostos relacionados (veja, por exemplo, Seção Ill - Compostos Exemplares) são usados para tratar um paciente sofrendo de uma infecção viral. Em algumas modalidades, mais do que um dos compostos da presente invenção são usados para tratar um paciente sofrendo de uma infecção viral. Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção tratam 5 infecções virais através da modulação (por exemplo, inibição ou promoção) da atividade de complexos da ATP sintase (por exemplo, complexos da ATP sintase mitocondrial ou homólogos em organismos que não têm mitocôndria) em células ou tecidos afetados por intermédio da ligação à porção da proteína que confere sensibilidade à oligomicina (OSCP)/complexo F1 da ATP sintase (por exemplo, complexo da ATP sintase mitocondrial). 10 A presente invenção não é limitada a tipos particulares de infecções virais. Exemplos de infecções virais incluem, mas não são limitados a, AIDS, Complexo Relacionado à AIDS, Varicela, Resfriado Comum, Infecção por Citomegalovírus, febre por carrapatos do Colorado, febre da Dengue, febre hemorrágica do Ébola, Parotite Epidêmica, Hand, febre aftosa, Hepatite, Herpes simples, Herpes zóster, HPV, Influenza (Gripe), febre de Lassa, 15 Sarampo, febre hemorrágica de Marburg, Mononucleose Infecciosa, Caxumba, Poliomielite, Leucoencefalopatia Multifocal Progressiva, Raiva, Rubéola, SARS, Varíola, Encefalite Viral, Gastroenterite Viral, Meningite Viral, Pneumonia Viral, doença do Nilo Ocidental e Febre Amarela. Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção são coadministrados com pelo menos um agente adicional para propósitos de tratar infecções 20 virais. Exemplos de agentes adicionais para propósitos de tratar infecções virais incluem, mas não são limitados a, Ganciclovir, lnterferon-alfa-2b, Aciclovir, Fanciclovir e Valaciclovir.
G. Tratamento de Infecções Fúnqicas
Em algumas modalidades, os compostos de benzodiazepina e compostos relacionados (veja, por exemplo, Seção Ill - Compostos Exemplares) são usados para tratar um paciente sofrendo de uma infecção fúngica. Em algumas modalidades, mais do que um dos compostos da presente invenção são usados para tratar um paciente sofrendo de uma infecção fúngica. Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção tratam infecções fúngicas através da modulação (por exemplo, inibição ou promoção) da atividade de complexos da ATP sintase (por exemplo, complexos da ATP sintase mitocondrial ou homólogos em organismos que não têm mitocôndria) em células ou tecidos afetados por intermédio da ligação à porção da proteína que confere sensibilidade à oligomicina (OSCP)/complexo F1 da ATP sintase (por exemplo, complexo da ATP sintase mitocondrial). A presente invenção não é limitada a tipos particulares de infecções fúngicas. Exemplos de infecções fúngicas incluem, mas não são limitados a, Aspergilose, Blastomicose, Candidíase, Coccidioidomicose, Criptococose, Histoplasmose, Pé de Atleta. Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção são coadministrados com pelo menos um agente adicional para propósitos de tratar infecções fúngicas. Exemplos de agentes adicionais para propósitos de tratar infecções fúngicas incluem, mas não são limitados a, betametasona, butenafina, ciclopirox, clioquinol, hidrocortisona, clotrimazol, econazol, flucitosina, griseofulvina, haloprogina, itraconazol, cetoconazol, miconazol, naftifina, nistatina, triancinolona, oxiconazol, sulcanazol, terbinafina, terconazol, tolnaftato, e voriconazol.
H. Tratamento de Infeccões Parasíticas
Em algumas modalidades, os compostos de benzodiazepina e compostos relacionados (veja, por exemplo, Seção Ill - Compostos Exemplares) são usados para tratar um paciente sofrendo de uma infecção parasítica. Em algumas modalidades, mais do que um dos compostos da presente invenção são usados para tratar um paciente sofrendo de uma infecção parasítica. Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção tratam infecções parasíticas através da modulação (por exemplo, inibição ou promoção) da atividade de complexos da ATP sintase (por exemplo, complexos da ATP sintase mitocondrial ou homólogos em organismos que não têm mitocôndria) em células ou tecidos afetados por intermédio da ligação à porção da proteína que confere sensibilidade à oligomicina (OSCP)/complexo F1 da ATP sintase (por exemplo, complexo da ATP sintase mitocondrial). A presente invenção não é limitada a tipos particulares de infecções parasíticas. Exemplos de infecções parasíticas incluem, mas não são limitados a, Tripanossomíase Africana, Amebíase, Ascaríase, Babesiose, Doença de Chagas, Clonorquiase1 Criptosporidiose, Cisticercose, Difilobotríase, Dracunculíase, Equinococose, Enterobíase, Fasciolíase, Fasciolopsíase, Filariose, Infecção Amébica de Vida Livre, Giardíase, Gnatostomíase, Himenolepíase, Isosporíase, Calazar, Leishmaníase, Malária, Metagonimíase, Miíase, Oncocercose, Pediculose, Infecção por Lombriga, Escabiose, Esquistossomose, Teníase, Toxocaríase, Toxoplasmose, Triquinelose, Triquinose, Tricuríase e Tripanossomíase. Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção são coadministrados com pelo menos um agente adicional para propósitos de tratar infecções parasíticas. Exemplos de agentes adicionais para propósitos de tratar infecções parasíticas incluem, mas não são limitados a, agentes anti-helmínticos (por exemplo, albendazol (Albenza), mebendazol (Vermox), niclosamida (Niclocide), oxamniquina (Vansil), praziquantel (Biltricide), pirantel (Antiminth)1 pamoato de pirantel (Antiminth), tiabendazol (MintezoI)1 bitional, ivermectina e citrato de dietilcarbamazepina.
I. Tratamento de Doenças Infecciosas por Príon
Em algumas modalidades, compostos de benzodiazepina e compostos relacionados (veja, por exemplo, Seção Ill - Compostos Exemplares) são usados para tratar um paciente sofrendo de uma doença infecciosa por príon. Em algumas modalidades, mais do que um dos compostos da presente invenção são usados para tratar um paciente sofrendo de uma doença infecciosa por príon. Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção tratam doenças infecciosas por príons através da modulação (por exemplo, inibição ou promoção) da atividade de complexos da ATP sintase (por exemplo, complexos da ATP sintase mitocondrial ou homólogos em organismos que não têm mitocôndria) em células ou tecidos afetados por intermédio da ligação à porção da proteína 5 que confere sensibilidade à oligomicina (OSCP)/complexo F1 da ATP sintase (por exemplo, complexo da ATP sintase mitocondrial). A presente invenção não é limitada a tipos particulares de doenças infecciosas por príons. Exemplos de doenças infecciosas parasíticas incluem, mas não são limitados a, encefalopatia espongiforme transmissível, encefalopatia espongiforme bovina, doença de Creutzfeldt-Jakob e Kuru. Em algumas 10 modalidades, os compostos da presente invenção são coadministrados com pelo menos um agente adicional para propósitos de tratar doenças infecciosas por príons. Exemplos de agentes adicionais para propósitos de tratar doenças infecciosas por príons incluem, mas não são limitados a, vermelho do Congo e seus análogos, antraciclinas, anfotericina B e seus análogos, poliânions sulfatados e tetrapirróis.
J. Tratamento de Doenças Envolvendo Anqioqênese Anormal
Em algumas modalidades, os compostos de benzodiazepina e compostos relacionados (veja, por exemplo, Seção Ill- Compostos Exemplares) são usados para tratar um paciente sofrendo de uma doença envolvendo angiogênese anormal. Em algumas modalidades, mais do que um dos compostos da presente invenção são usados para tratar 20 doenças envolvendo angiogênese anormal através da modulação (por exemplo, inibição ou promoção) da atividade de complexos da ATP sintase (por exemplo, complexos da ATP sintase mitocondrial) em células ou tecidos afetados que sofrem angiogênese anormal por intermédio da ligação à porção da proteína que confere sensibilidade à oligomicina (OSCP)/complexo F1 da ATP sintase (por exemplo, complexo da ATP sintase mitocondrial). 25 A presente invenção não é limitada a tipos particulares de doenças envolvendo a angiogênese anormal. Exemplos de doenças envolvendo a angiogênese anormal incluem, mas não são limitados a, cânceres (por exemplo, cânceres envolvendo tumores sólidos), psoríase, retinopatia diabética, degeneração macular, aterosclerose e artrite reumatóide.
Exemplos de agentes adicionais para tratar doenças envolvendo angiogênese 30 anormal incluem, mas não são limitados a, Dalteparina, ABT-510, CNGRC peptídeo TNF alfa conjugado (NGR-TNF), Fosfato de Combretastatina A4, Ácido Dimetilxantenona Acético, Lenalidomida, LY317615, PPI-2458, Isoflavona de Soja (Genisteína; Proteína Isolada de Soja), Citrato de Tamoxifeno, Talidomida, ADH-1, AG-013736, AMG-706, Anticorpo Anti-VEGF, AZD2171, Bay 43-9006, GW786034, CHIR-265, PI-88, PTK787/ZK 35 222584, RAD001, Suramina, SU11248, XL184, ZD6474, ATN-161, EMD 121974, e Celecoxibe. Agentes adicionais para tratar doenças envolvendo angiogênese anormal incluem fármacos anti-câncer (por exemplo, Acivicina; Aclarrubicina; Cloridrato de Acodazol; Acronina; Adozelesina; Adriamicina; Aldesleucina; Alitretinoina; Alopurinol Sódico; Altretamina; Ambomicina; Acetato de Ametantrona; Aminoglutetimida; Ansacrina; Anastrozol; Acetogeninas de Anonáceas; Antramicina; Asimicina; Asparaginase; Asperlina; Azacitidina; Azetepa; Azotomicina; Batimastate; Benzodepa; Bexaroteno; Bicalutamida; 5 Cloridrato de Bisantreno; Dimesilato de Bisnafida; Bizelesina; Sulfato de Bleomicina; Brequinar Sódico; Bropirimina; Bulatacina; Bussulfano; Cabergolina; Cactinomicina; Calusterona; Caracemida; Carbetimer; Carboplatina; Carmustina; Cloridrato de Carrubicina; Carzelesina; Cedefingol; Celecoxibe; Clorambucila; Cirolemicina; Cisplatina; Cladribina; Mesilato de Crisnatol; Ciclofosfamida; Citarabina; Dacarbazina; DACA (N-[2-(Dimetil0 amino)etil]acridino-4-carboxamida); Dactinomicina; Cloridrato de Daunorrubicina; Daunomicina; Decitabina; Denileucina Diftitox; Dexormaplatina; Dezaguanina; Mesilato de Dezaguanina; Diaziquona; Docetaxel; Doxorrubicina; Cloridrato de Doxorrubicina; Droloxifeno; Citrato de Droloxifeno; Propionato de Dromostanolona; Duazomicina; Edatrexato; Cloridrato de Eflornitina; Elsamitrucina; Enloplatina; Empromato; Epipropidina; 15 Cloridrato de Epirrubicina; Erbulozol; Cloridrato de Esorrubicina; Estramustina; Fosfato Sódico de Estramustina; Etanidazol; Óleo Etiodado (131I); Etoposídeo; Fosfato de Etoposídeo; Etoprina; Cloridrato de Fadrozol; Fazarabina; Fenretinida; Floxuridina; Fosfato de Fludarabina; Fluorouracil; 5-FdUMP; Flurocitabina; Fosquidona; Fostriecina Sódico; FK317; FK-973; FR-66979; FR-900482; Gencitabina; Cloridrato de Gencitabina; Gentuzumabe >0 Ozogamicina; Ouro (198Au); Acetato de Goserelina; Guanacona; Hidroxiureia; Cloridrato de Idarrubicina; Ifosfamida; llmofosina; Alfainterferona 2a; Alfainterferona 2b; Alfainterferona n1; Alfainterferona n3; Betainterferona 1a; Gamainterferona 1b; lproplatina; Cloridrato de Irinotecano; Acetato de Lanreotida; Letrozol; Acetato de Leuprolida; Cloridrato de Liarozol; Lometrexol Sódico; Lomustina; Cloridrato de Losoxantrona; Masoprocol; Maitansina; 25 Cloridrato de Mecloretamina; Acetato de Megestrol; Acetato de Melengestrol; Melfalana; Menogarila; Mercaptopurina; Metotrexato; Metotrexato Sódico; Metoxisaleno; Metoprina; Meturedepa; Mitindomida; Mitocarcina; Mitocromina; Mitogilina; Mitomalcina; Mitomicina; Mitomicina C; Mitosper; Mitotano; Cloridrato de Mitoxantrona; Ácido Micofenólico; Nocodazol; Nogalamicina; Oprelvecina; Ormaplatina; Oxisurana; Paclitaxel; Pamidronato BO Dissódico; Pegaspargase; Peliomicina; Pentamustina; Sulfato de Peplomicina; Perfosfamida; Pipobromana; Pipossulfana; Cloridrato de Piroxantrona; Plicamicina; Plomestano; Porfimer Sódico; Porfiromicina; Prednimustina; Cloridrato de Procarbazina; Puromicina; Cloridrato de Puromicina; Pirazofurina; Riboprina; Rituximabe; Rogletimida; Roliniastatina; Safingol; Cloridrato de Safingol; Samário/Lexidronam; Semustina; Simtrazeno; Esparfosato Sódico; 35 Esparsomicina; Cloridrato de Espirogermânio; Espiromustina; Espiroplatina; Esquamocina; Esquamotacina; Estreptonigrina; Estreptozocina; Cloreto de Estrôncio Sr 89; Sulofenur; Talisomícina; Taxana; Taxóide; Tecogalano Sódico; Tegafur; Cloridrato de Teloxantrona; Temoporfina; Teniposídeo; Teroxirona; Testolactona; Tiamiprina; Tioguanina; Tiotepa; Timitaq; Tiazofurina; Tirapazamina; Tomudex; TOP-53; Cloridrato de Topotecana; Citrato de Toremifeno; Trastuzumabe; Acetato de Trestolona; Fosfato de Triciribina; Trimetrexato; Glucuronato de Trimetrexato; Triptorelina; Cloridrato de Tubulozol; Mostarda de Uracila; 5 Uredepa; Valrubicina; Vapreotida; Verteporfina; Vimblastina; Sulfato de Vimblastina; Vincristina; Sulfato de Vincristina; Vindesina; Sulfato de Vindesina; Sulfato de Vinepidina; Sulfato de Vinglicinato; Sulfato de Vinleurosina; Tartarato de Vinorelbina; Sulfato de Vinrosidina; Sulfato de Vinzolidina; Vorozol; Zeniplatina; Zinostatina; Cloridrato de Zorubicina; 2-Clorodesoxiadenosina; 2’-Desoxiformicina; 9-aminocamptotecina; raltitrexede; O Ácido N-propargil-5,8-didesazafólico; 2-cloro-2’-arabino-fluoro-2’-desoxiadenosina; 2-cloro2’-desoxiadenosina; anisomicina; tricostatina A; hPRL-G129R; CEP-751; linomida; mostarda de enxofre; mostarda de nitrogênio (mecloretamina); ciclofosfamida; melfalana; clorambucila; ifosfamida; bussulfana; N-metil-N-nitrosoureia (MNU); N,N’-Bis(2-cloroetil)-Nnitrosoureia (BCNU); N-(2-cloroetil)-N’-cicloex-il-N-nitrosoureia (CCNU); N-(2-cloroetil)-N’5 (trans-4-metilcicloexil-N-nitrosoureia (MeCCNU); N-(2-cloroetil)-N’-(dietil)etilfosfonato-Nnitrosoureia (fotemustina); estreptozotocina; diacarbazina (DTIC); mitozolomida; temozolomida; tiotepa; mitomicina C; AZQ; adozelesina; Cisplatina; Carboplatina; Ormaplatina; Oxaliplatina; C1-973; DWA 2114R; JM216; JM335; Bis (platina); tomudex; azacitidina; citarabina; gencitabina; 6-Mercaptopurina; 6-Tioguanina; Hipoxantina; O teniposídeo; 9-amino camptotecina; Topotecana; CPT-11; Doxorrubicina; Daunomicina; Epirrubicina; darrubicina; mitoxantrona; losoxantrona; Dactinomicina (Actinomicina D); ansacrina; pirazoloacridina; all-trans retinol; 14-hidróxi-retro-retinol; ácido all-trans retinóico; N-(4-Hidroxifenil) retinamida; ácido 13-cis retinóico; 3-Metil TTNEB; ácido 9-cis retinóico; fludarabina (2-F-ara-AMP); e 2-clorodesoxiadenosina (2-Cda). Outros agentes anticâncer 5 incluem, mas não são limitados a, agentes antiproliferativos (por exemplo, Isetionato de Piritrexim), agente hipertrófico antiprostático (por exemplo, Sitoglusídeo), Agentes para terapia contra hiperplasia prostática benigna (por exemplo, Cloridrato de Tamsulosina), agentes inibidores do crescimento da próstata (por exemplo, Pentomona), e agentes radioativos: Fibrinogênio (125I); Fludesoxiglucose (18F); Fluorodopa (18F); Insulina (125I); O Insulina (131I); Iobenguano (123I); Iodipamida Sódica (131I); Iodoantipirina (131I); Iodocolesterol (131I); Iodoipurato de Sódio (123I); Iodoipurato de Sódio (125I); Iodoipurato de Sódio (131I); Iodopiraceto (125I); Iodopiraceto (131I); Cloridrato de Iofetamina (123I); Iometina (125I); Iometina (131I); Iotalamato de Sódio (125I); Iotalamato de Sódio (131I); Iotirosina (131I); Liotironina (125I); Liotironina (131I); Acetato de Merisoprol (197Hg); Acetato de Merisoprol (203Hg); Merisoprol >5 (197Hg); Selenometionina (75Se); Tecnécio Colóide de Trissulfeto de Antimônio (99mTc); Bicisato de Tecnécio (99mTc); Tecnécio Disofenina (99mTc); Etidronato de Tecnécio (99mTc); Tecnécio Exametazima (99mTc); Tecnécio Furifosmina (99mTc); Gluceptato de Tecnécio (99mTc); Tecnécio Lidofenina (99mTc); Tecnécio Mebrofenina (99mTc); Medronato de Tecnécio (99mTc); Medronato de Tecnécio Dissódico (99mTe); Tecnécio Mertiatida (99mTc); Oxidronato de Tecnécio (99mTc); Pentetato de Tecnécio (99mTc); Pentetato de Tecnécio de Cálcio Trissódico (99mTc); Tecnécio Sestamibi (99mTc); Tecnécio Siboroxima (99mTc); Tecnécio 5 Succímer (99mTc); Tecnécio Colóide de enxofre (99mTc); Tecnécio Teboroxima (99mTe); Tecnécio Tetrofosmina (99mTc); Tecnécio Tiatida (99mTc); Tiroxina (125I); Tiroxina (131I); Tolpovidona (131I); Trioleína (125I); Trioleína (131I).
Agentes anticâncer adicionais incluem, mas não são limitados a Agentes de Potenciação Suplementar Anti-câncer: fármacos antidepressivos tricíclicos (por exemplo, O imipramina, desipramina, amitriptilina, clomipramina, trimipramina, doxepina, nortriptilina, protriptilina, amoxapina e maprotilina); fármacos antidepressivos não tricíclicos (por exemplo, sertralina, trazodona e citalopram); antagonistas de Ca++ (por exemplo, verapamila, nifedipina, nitrendipina e caroverina); inibidores de Calmodulina (por exemplo, prenilamina, trifluoroperazina e clomipramina); Anfotericina B; análogos de Triparanol (por exemplo, tamoxifeno); fármacos antiarrítmicos (por exemplo, quinidina); fármacos antihipertensivos (por exemplo, reserpina); depletores de Tiol (por exemplo, butionina e sulfoximina) e agentes redutores de resistência a múltiplos fármacos, tais como Cremafor EL. Ainda outros agentes anticâncer são aqueles selecionados do grupo que consiste de: acetogeninas anonáceas; asimicina; roliniastatina; guanacona, esquamocina, bulatacina; !O esquamotacina; taxanos; paclitaxel; gencitabina; metotrexato FR-900482; FK-973; FR66979; FK-317; 5-FU; FUDR; FdUMP; Hidroxiureia; Docetaxel; discodermolida; epotilonas; vincristina; vinblastina; vinorelbina; meta-pac; irinotecano; SN-38; campto IO-OH; topotecano; etoposídeo; adriamicina; fiavopiridol; Cis-Pt; carbo-Pt; bleomicina; mitomicina C; mitramicina; capecitabina; citarabina; 2-C1-2’desoxiadenosina; FIudarabina-PO^ !5 mitoxantrona; mitozolomida; Pentostatina; e Tomudex. Uma classe particularmente preferida de agentes anticâncer são taxanos (por exemplo, paclitaxel e docetaxel). Uma outra categoria importante de agentes anticâncer é acetogenina anonácea.
K. Regulação da Pressão Sanguínea
Em algumas modalidades, compostos de benzodiazepina e compostos iO relacionados (veja, por exemplo, Seção Ill - Compostos Exemplares) são usados para regular uma pressão sanguínea do paciente. Em algumas modalidades, mais do que um dos compostos da presente invenção são usados para regular uma pressão sanguínea do paciente (por exemplo, manter uma pressão sanguínea do paciente dentro de uma faixa desejada). Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção regulam a 55 pressão sanguínea através da modulação (por exemplo, inibição ou promoção) da atividade de complexos da ATP sintase (por exemplo, complexos da ATP sintase mitocondrial) em células ou tecidos afetados por intermédio da ligação à porção da proteína que confere sensibilidade à oligomicina (OSCP)/complexo F1 da ATP sintase (por exemplo, complexo da ATP sintase mitocondrial). Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção são coadministrados com pelo menos um agente adicional para propósitos de regular uma pressão sanguínea do paciente. Exemplos de agentes adicionais para propósitos de regular 5 uma pressão sanguínea do paciente incluem, mas não são limitados a, tiazidas e diuréticos relacionados (por exemplo, hidroclorotiazida, clortalidona), agentes bloqueadores alfa/betaadrenérgicos (por exemplo, carvedilol), agentes beta-adrenérgicos (por exemplo, bisoprolol, atenolol, metoprolol), inibidores da enzima conversora da angiotensina (por exemplo, captopril, fosinopril, benazepril, quinapril, ramipril), antagonistas do receptor de angiotensina 10 Il (por exemplo, losartana, valsartana, candesartana, irbesartana, eprosartana e olmesartana), bloqueadores do canal de cálcio - não diidropiridinas (por exemplo, diltiazem e verapamil), bloqueadores do canal de cálcio -diidropiridinas (por exemplo, Anlodipina, nifedipina, felodipina), vasodilatadores - periféricos (por exemplo, hidralazina), antagonistas de aldosterona (por exemplo, espironolactona).
L. Regulação de HDL/LDL
Em algumas modalidades, compostos de benzodiazepina e compostos relacionados (veja, por exemplo, Seção Ill - Compostos Exemplares) são usados para regular níveis de HDL/LDL do paciente. Em algumas modalidades, mais do que um dos compostos da presente invenção são usados para regular níveis de HDL/LDL do paciente 20 (por exemplo, diminuir níveis de LDL do paciente, elevar níveis de HDL do paciente). Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção regulam níveis de HDL/LDL através da modulação (por exemplo, inibição ou promoção) da atividade de complexos da ATP sintase (por exemplo, complexos da ATP sintase mitocondrial) em células ou tecidos afetados por intermédio da ligação à porção da proteína que confere sensibilidade à 25 oligomicina (OSCP)/complexo F1 da ATP sintase (por exemplo, complexo da ATP sintase mitocondrial). Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção são coadministrados com pelo menos um agente adicional para propósitos de regular níveis de HDL/LDL do paciente. Exemplos de agentes adicionais para propósitos de regular níveis de HDL/LDL do paciente incluem, mas não são limitados a, agentes antilipêmicos (por exemplo, 30 niacina, ácido nicotínico, genfibrozila, fenofibrato), e inibidores da HMG-CoA redutase (por exemplo, atorvastatina, sinvastatina, pravastatina, lovastatina, fluvastatina e rosuvastatina).
EXEMPLOS
No geral, a invenção presentemente descrita, será mais facilmente entendida com referência aos exemplos seguintes, que são meramente incluídos para propósitos de ilustração de certos aspectos e modalidades da presente invenção, e não são intencionados a limitar a invenção.
Exemplo 1 Procedimentos Gerais Representativos para Síntese do Núcleo da Benzodiazepina.
Parte I:
H
CH3
Cl
"f^° NaH '° CH3I
,O
O
O
6-Cloro-1-metil-1H-benzofdin.31oxazino-2.4-diona (Composto B onde R = CHVI. Em um RBF de 3 pescoços e 3 L equipado com agitador mecânico, funil de adição, termopar e 5 entrada de N2, NaH (30,4 g) foi colocado em suspensão em THF anidro (400 ml_). Durante a agitação na temperatura ambiente, uma suspensão de anidrido 5-cloroisotônico em THF (400 ml_) foi adicionada às porções durante 45 min. A mistura de reação foi agitada durante 50 min (temperatura de reação subiu de 18 a 28 °C). A esta foi adicionado CH3I (285 g, 125 mL) durante 15 min. A mistura depois foi agitada a 42 0C durante 16 h. Como a TLC mostrou 10 que algum material de partida não reagido ainda estava presente na mistura de reação, um adicional de 30 mL de CH3I foi adicionado e a mistura de reação agitada a 42 0C durante um adicional de 3 h. A mistura de reação foi esfriada (temperatura ambiente) e extinta pela adição lenta (40 min) de AcOH (55 mL). A mistura de reação foi concentrada para fornecer 275 g do produto xaroposo denso, que foi usado sem qualquer purificação adicional. RMN
6-Cloro-1-metil-1H-benzordin.3loxazino-2.4-diona (Composto B onde R = CHO. 6- Cloro-1Hbenzo[d][1,3]oxazino-2,4-diona (22,88 g, 116 mmols) foi dissolvido em dimetilformamida (150 mL), e carbonato de sódio (14,73 g, 139 mmols) foi adicionado. Iodeto de metila (10,86 mL, 174 mmols) depois foi adicionado às gotas. A reação foi agitada
foi agitada durante 1 hora. O sólido foi coletado por filtração. O sólido impuro foi sonicado em éter metil-terc-butílico durante vários minutos, e depois coletado por filtração produzindo o produto como um sólido branco (19,38 g, 79 %). RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) δ 3,45
de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 3,35 (s, 3 H), 7,54 (d, 1 H), 7,85 (d, 1 H), 7,90 (s, 1 H).
H
CH3
O
O
na temperatura ambiente durante a noite. Água (150 mL) depois foi adicionada, e a mistura
(s, 3 H), 7,47 (d, 1 H), 7,89 (dd, 1 H), 7,94 (d, 1 H).
o
6-Cloro-1-(4-metoxibenziO-1H-benzoíd1í1.31oxazino-2.4-diona (Composto B onde R = PMB). Em um RBF de 3 pescoços e 3 L equipado com agitador mecânico, termopar e entrada de N2, 90 g (0,455 mol) de anidrido 5-cloroisotônico foram colocados em suspensão em THF anidro (0,9 L). Sob N2, cloreto de 4-metoxibenzila (75 g, 0,48 mol) foi adicionado seguido pela adição de iodeto de tetrabutilamônio (84 g, 0,23 mol). A mistura de reação foi agitada durante 5 min na temperatura ambiente e depois 20 g (0,5 mol) de NaH foram 5 adicionados às porções durante 20 min (temperatura de reação aumentada a 29 0C devido a uma exoterma e portanto a mistura de reação foi colocada em banho de água para manter a temperatura abaixo de 30 °C). A reação foi agitada durante 16 h (temperatura ambiente). No dia seguinte, a HPLC mostrou cerca de 26 % de anidrido 5-cloroisotônico não reagido. NaH adicional (1 g) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida a 32 0C e agitada durante 10 um adicional de 5 h. A RMN mostrou que todo o material de partida foi consumido. A reação foi extinta adicionando-se 10 g de ácido acético glacial lentamente seguido por agitação durante 30 min. A mistura de reação foi filtrada através de celite e a torta do filtro foi lavada com THF. O filtrado foi concentrado para fornecer 280 g do produto bruto (sólido âmbar), que foi usado sem nenhuma purificação adicional. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,8 (s,
7-Cloro-1-metil-3.4-diidro-1H-benzofe1f1.41diazepino-2.5-diona (Composto C onde R = Mel Em um RBF de 2 L equipado com agitador mecânico, condensador e entrada de N2, glicina (38 g, 0,506 mol) foi adicionada a 6-cloro-1-metil-1H-benzo[d][1,3]oxazino-2,4-diona 20 bruto (107 g, 0,506 mol) seguido pela adição de AcOH (500 mL). O frasco de reação foi aquecido em um banho de óleo a 130 0C durante 7 h. O solvente foi evaporado sob sucção com aquecimento (50 a 60 °C). Ao produto bruto xaroposo denso foi adicionado 1 L de EtOAc seguido pela adição lenta de NaHCO3 aquoso (saturado) para ajustar o pH a ~7. Depois 10 mL de NaOH 2 M foram adicionados para ajustar o pH de ~9 a 10. A mistura 25 forneceu um sólido junto às camadas orgânicas e aquosas. O sólido foi filtrado para fornecer o produto contendo alguma impureza. O sólido foi particionado entre 400 mL de DCM e 200 mL de NaHCO3 e a pasta fluida foi agitada durante 20 min, depois filtrada para remover a impureza insolúvel. A camada de DCM foi separada e lavada com NaHCO3 3 % e depois salmoura (200 mL). A camada de DCM foi seca (MgSO4), filtrada e concentrada para 30 fornecer 50 g do produto puro. A camada de EtOAc foi concentrada para fornecer 67 g do produto sólido com alguma impureza. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 400 mL). Os orgânicos combinados foram secos em Na2SO4, filtrados e concentrados para fornecer um adicional de 6,7 g do produto bruto. Um total de 123,4 g do produto foi obtido, 50 g do qual foi muito puro. RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 3,2 (s, 3 H), 3,5 (m, 1 H), 3,8 (m,
3 H), 5,25 (s, 2 H), 6,8 (d, 2 H), 7,2 (m, 3 H), 7,75 (d, 1 H), 7,9 (d, 1 H). Parte II:
O
o 1 Η), 7,35 (d, 1 Η), 7,6 (m, 2 Η), 8,8 (t, 1 Η).
'Os
Glicina
AcOH
7-Cloro-1 -(4-metoxibenzi0-3.4-diidro-1 H-benzofelH .41diazepino-2.5-diona (Composto C onde R = PMB). Em um RBF de 2 L equipado com agitador mecânico, condensador e entrada de N2, glicina (34 g, 0,45 mol) foi adicionada a 6-cloro-1-(4- 5 metoxibenzil)-1H-benzo[d][1,3]oxazino-2,4-diona (280 g) seguido pela adição de AcOH (500 mL). O frasco de reação foi aquecido em um banho de óleo a 130 0C durante 8 h. O solvente foi removido no evaporador rotatório de 50 a 60 °C. Ao produto bruto xaroposo denso foram adicionados heptano (1 L) e H2O (1 L) seguido pela adição de NaHCO3 para ajustar o pH de ~8 a 9. A mistura forneceu um sólido junto às camadas orgânicas e 10 aquosas. As camadas orgânicas e aquosas foram decantadas e o sólido foi empastado com 500 mL de solução de NaHCO3 5 %. A camada de NaHCO3 foi decantada e sólido pegajoso foi colocado em suspensão em 700 mL de EtOAc e 300 mL de diclorometano (DCM). A mistura foi agitada durante 20 min, filtrada e a torta do filtro foi lavada com 1 L de DCM. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi passado através de 330 g de tampão de gel de sílica 15 usando EtOAC/heptano 25/75 a 75/25 (total de 8 L). As frações puras foram combinadas para fornecer 58 g do produto puro. Um adicional de 13 g do produto puro ~70 % foi obtido a partir de frações menos puras. O rendimento foi de 47 % em duas etapas. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,45 (m, 1 H), 3,6 (s, 3 H), 3,8 (m, 1 H), 4,8 (d, 1 H), 5,3 (d, 1 H), 6,8 (d, 2 H), 7,1 (d, 2 H), 7,7 - 7,5 (m, 3 H), 8,9 (t, 1 H).
Exemplo 2
Procedimento Geral Representativo para Síntese Simultânea do Núcleo da Benzodiazepina e Instalação da Funcionalidade C3.
H I
o
O
o
7-Cloro-3-(2-clorobenzi0-3.4-diidro-1H-benzoreiri.41diazepino-2.5-diona. Cloridrato do ácido 2-amino-3-(2-clorofenil)propanóico (3,0 g, 12,7 mmols) foi colocado em suspensão 25 em acetonitrila (50 mL) e água (5 mL), trietilamina (3,57 mL, 25,4 mmols) foi adicionada fazendo com que um precipitado se formasse e agitação se tornasse ineficiente. Água (10 mL) foi adicionada até que todos os sólidos foram dissolvidos. Anidrido 5-cloroisatóico (2,51 g, 12,7 mmols) foi adicionado em porções, aguardando até que cada porção fosse dissolvida antes da adição da próxima porção. As porções sucessivas exigiram períodos de tempo mais longos, até 15 minutos para as últimas porções. Depois que a última porção foi adicionada, a suspensão foi sonicada durante vários minutos e depois agitada na temperatura ambiente durante a noite. A solução clara foi concentrada a vácuo e depois submetida à azeotropia duas vezes com acetona. O resíduo foi redissolvido em ácido acético (30 mL) e aquecido a 130 0C durante 6 horas. A mistura foi concentrada a vácuo a um óleo, diluída com acetato de etila (150 mL), lavada com água (3 x 50 mL) e depois salmoura, seca com sulfato de sódio, filtrada e concentrada a um sólido marrom. Este sólido foi recolocado em suspensão em acetato de etila (20 mL) e hexanos (10 mL) e depois empastado na temperatura ambiente durante 30 minutos. A filtração forneceu 7-cloro-3-(2- clorobenzil)-3,4-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepino-2,5-diona (2,4 g, 56 %). RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 2,97 (m, 1 H), 3,23 (m, 1 H), 4,00 (m, 1 H), 7,12 (d, 1 H, J = 8,79 Hz), 7,27 (m, 2 H), 7,40 (m, 2 H), 7,58 (dd, 1 H, J1 = 8,79 Hz, J2 = 2,64 Hz), 7,67 (d, 1 H, J = 2,64 Hz), 8,73 (d, 1 H, J = 6,15 Hz), 10,59 (s, 1 H); ESI m/z 335,0, 337,0.
H O I
°'Cr7y * '"'cH
O
7-Cloro-3-(2-clorobenziO-1-(4-metoxibenzin-3.4-diidro-1H-benzore1H.41diazepino
2.5-diona. 7-Cloro-3-(2-clorobenzil)-3,4-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepino-2,5-diona (0,8 g, 2,39 mmols), carbonato de potássio em pó (0,495 g, 3,58 mmols) e cloreto de 4- metoxibenzila (0,39 mL, 2,86 mmols) foram colocados em suspensão em N,Ndimetilformamida (20 mL) e agitados na temperatura ambiente durante a noite. A solução foi 20 vertida em água (100 mL) e acetato de etila (150 mL). As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com água (2 x 100 mL) e depois salmoura, e seca com sulfato de sódio, decantada e concentrada na presença de gel de sílica. O produto foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com um gradiente de 0 a 50 % de acetato de etila em hexanos para produzir 7-cloro-3-(2-clorobenzil)-1-(4-metoxibenzil)-3,4-diidro-1H25 benzo[e][1,4]diazepino-2,5-diona (0,65 g, 60 %). RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,06 (m,
1 H), 3,30 (m, 2 H), 3,66 (s, 3 H), 4,13 (m, 1 H), 4,82 (d, 1 H), 5,34 (d, 1 H), 6,76 (d, 2 H, J =
8,79 Hz), 6,96 (d, 2 H, J = 8,79 Hz), 7,21 - 29 (m, 2 H), 7,36 - 45 (m, 2 H), 7,54 - 7,61 (m, 3 H), 8,97 (d, 1 H, J = 5,86 Hz); ESI m/z 455,1.
Exemplo 3
Procedimentos Gerais Representativos para Síntese do Intermediário (E)5,7-
Dicloro-benzodiazepin-2(3H)-ona. (E)-5.7-Dicloro-3-(2-clorobenzin-1-(4-metoxibenzil)-1H-benzoíelf1.41diazepin-2(3H)ona. 7-Cloro-3-(2-clorobenzil)-1 -(4-metoxibenzil)-3,4-diidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepino-2,5- diona (0,65 g, 1,43 mmol) foi colocado em suspensão em tolueno anidro (10 mL) sob uma atmosfera de nitrogênio. N1N-DimetiIaniIina (0,36 mL, 2,9 mmols) foi adicionada seguido por 5 oxicloreto de fósforo (0,20 mL, 2,1 mmols) e a mistura foi aquecida a 90 0C durante 4 horas. Depois de esfriar até a temperatura ambiente, a mistura foi diluída com 40 mL de acetato de etila:hexanos (1:2), lavada com água gelada (10 mL), cloreto de hidrogênio 1 M frio em gelo (2x10 mL), e salmoura, depois seca com sulfato de sódio, decantada e concentrada a vácuo. O resíduo foi redissolvido em uma quantidade pequena de acetato de etila e depois 10 vertido em um tampão de sílica. O produto foi eluído com 100 mL de acetato de etila:hexanos (1:2) para produzir (E)-5,7-dicloro-3-(2-clorobenzil)-1-(4-metoxibenzil)-1Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (680 mg, 100 %) que foi usado sem purificação adicional.
(E)-5.7-Dicloro-1-metil-1H-benzorein.41diazepin-2(3l-0-ona (Composto D onde R = Me). Em um RBF de 2 pescoços e 1 L equipado com agitador mecânico, condensador e entrada de N2, 7-cloro-1-metil-3,4-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepino-2,5-diona (42,5 g, 0,189 mol) foi colocado em suspensão em 400 mL de tolueno. A este foi adicionada N1Ndimetilanalina (45,5 g, 0,375 mol) seguido pela adição de POCI3 (29 g, 0,189 mol) e a mistura de reação agitada durante 3 min (temperatura ambiente). O frasco de reação foi colocado em um banho de óleo a 90 0C e a mistura de reação agitada/aquecida durante 7 h e depois na temperatura ambiente durante 9 h. A reação foi extinta adicionando-se 500 mL de água gelada e agitada durante 15 min. A camada orgânica foi separada e lavada rapidamente com HCI 0,5 M frio (300 mL), água fria (300 mL), e depois NaHCO3 saturado frio (300 mL). A camada orgânica foi seca (MgSO4)1 filtrada e concentrada em um evaporador rotatório para fornecer 40 g de sólido amarelo. Rendimento de 87,5 %. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,25 (s, 3 H), 3,8 - 3,9 (s, 1 H, br), 4,3 - 4,4 (s, 1 H, br), 7,4 (d, 1 H), 7,7 - 7,8 (m, 2 H). (EV5.7-Dicloro-1-(4-metoxibenzi0-1H-benzoíe1H.41diazepin-2(3l-0-ona· Em um RBF de 3 pescoços e 1 L equipado com barra agitadora magnética, condensador e entrada de N2, 7-cloro-1-(4-metoxibenzil)-3,4-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepino-2,5-diona (45 g, 0,136 mol) foi colocado em suspensão em 400 mL de tolueno. A este foi adicionada N1Ndimetilanalina (33 g, 0,272 mol) seguido pela adição de POCI3 (23 g) e a reação agitada durante 3 min (temperatura ambiente). O frasco de reação foi colocado em um banho de óleo a 90 °C e a mistura de reação foi aquecida durante 5 h e depois esfriada. A reação foi extinta adicionando-se 450 mL de água gelada e agitada durante 15 min. A camada orgânica foi separada e lavada rapidamente com água fria (2 x 250 mL) e salmoura (300 mL). Então, a camada orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada em um evaporador rotatório para fornecer 57 g do produto bruto preto. O produto bruto foi usado para a etapa seguinte sem nenhuma purificação adicional. Rendimento de 87,5 %.
Procedimento Geral Representativo para Instalação dos Substituintes C3 nos Intermediários (E)-5,7-Dicloro-benzodiazepin-2(3H)-ona.
(E)-3-(2-bromobenzil)-5.7-dicloro-1-metil-1H-benzore1f1.41diazepin-2(3H)-ona. (E)5,7-Dicloro-1-metil-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (400 mg, 1,65 mmol) foi dissolvido em tetraidrofurano anidro (5 mL) sob uma atmosfera de nitrogênio, esfriado a -78 °C, depois uma solução 1 M de terc-butóxido de potássio em tetraidrofurano (1,7 mL, 1,7 mmol) foi adicionada às gotas. A mistura de reação foi agitada durante 10 minutos antes que uma solução de brometo de 2-bromobenzila (411 mg, 1,65 mmol) em tetraidrofurano (2 mL) fosse adicionada às gotas. A mistura foi agitada a -78 0C durante 20 minutos, depois o banho frio removido e a mistura foi deixada aquecer até a temperatura ambiente e agitada na temperatura ambiente durante 18 horas. Piperazina (283 mg, 3,29 mmols) foi adicionada para remover o excesso de brometo de 2-bromobenzila e a mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 30 minutos, diluída com acetato de etila, e lavada com cloreto de hidrogênio aquoso 1 M frio (2 x 40 mL). As camadas orgânicas foram secas com sulfato de sódio, decantadas e concentradas a vácuo a aproximadamente 20 mL de um líquido
Exemplo 4 vermelho. O produto foi purificado em uma almofada curta de gel de sílica eluindo com 100 mL de acetato de etila:hexanos (1:2) para produzir (E)-3-(2-bromobenzil)-5,7-dicloro-1-metil1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (0,44 g, 65 %). RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) S 3,40 (s,
3 H) 3,75 (m, 2 H), 4,15 (m, 1 H), 7,05 - 7,55 (m, 7 H).
Exemplo 5
Procedimento Geral Representativo para Síntese dos Compostos de Arilureia C5 a partir dos Intermediários (E)-5,7- Dicloro-benzodiazepin-2(3H)-ona.
Método A:
Parte I: Instalação do Substituinte Arila C-5.
B(OH)2
NHBoc
Pd(PPh3)4 DME/Na2C03
IO (Z)-terc-Butila-4-(7-cloro-1-(4-metoxibenzil)-2-oxo-2.3-diidro-1H
benzofeiri.41diazepin-5-infenilcarbamato. Cloreto de imidoila (5,5 g, 15,7 mmols) foi tratado com ácido (4-terc-butoxicarbonilaminofenil)borônico (3,72 g, 18,84 mmols), Pd(PPh3)4 (0,362 g, 0,314 mmol), Na2CO3 aquoso 2 N (23,5 mL), e DME (2,5 mL), desgaseificado com nitrogênio e aquecido a 80 0C durante 3 h. A mistura de reação foi esfriada, diluída com 15 EtOAc (200 mL) e vertida em água (200 mL). As camadas foram separadas e o aquoso foi extraído com EtOAc (100 mL). Os extratos combinados foram lavados com salmoura (200 mL), secos em MgSO4, e evaporados à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea em coluna (eluído com 20 % de EtOAc em Hexano) para fornecer 4-(7-cloro-1 -(4-metoxibenzil)-2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenilcarbamato >0 de (Z)-terc-butila (3,4 g, 42,8 %) como um sólido claro. RMN de 1H (400 MHz, CDCI3) δ 1,55 (s, 9 H), 3,73 (s, 3 H), 3,83 (d, 1 H), 4,63 (d, 1 H), 4,86 (d, 1 H), 5,59 (d, 1 H), 6,63 (d, 2 H), 6,66 (d, 2 H), 6,93 (d, 2 H), 7,17 (s, 1 H), 7,28 (s, 2 H), 7,32 - 7,41 (m, 6 H). MS m/z 507,3 [M+1]
Parte II: Instalação do Substituinte C3. Cl
NHBoc
NHBoc
LEGENDA DA FIGURA ACIMA - KO-t-Butila
7-Cloro-3-(2-clorobenzil)-1-f4-metoxibenzin-1H-benzore1H.41diazepin-5- iOfenilcarbamato de (ZHerc-butila. A uma solução de 4-(7-cloro-1-(4-metoxibenzil)-2-oxo
2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenilcarbamato de (Z)-terc-butila (2 g, 3,95 mmols), foi adicionada a -78 0C sob uma atmosfera de N2, uma solução de terc-butóxido de potássio (1 M em THF, 7,9 mL, 7,9 mmols). Depois da conclusão da adição, a mistura de reação foi agitada durante 1/2 h a -78 0C e uma solução de brometo de 2-clorobenzila (0,570 mL, 4,34 mmols) em THF (10 mL) foi adicionada a -78 0C às gotas durante 15 minutos. A mistura de reação foi agitada a -78 0C durante mais 2 horas e depois a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente. A mistura de reação foi deixada na temperatura ambiente durante a noite sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi extinta com água (50 mL) e extraída com EtOAc (3 x 50 mL). Os extratos combinados foram lavados com salmoura (100 mL), secos (MgSO4) e evaporados a vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea em coluna (eluído com 20 % de EtOAc em Hexano) para fornecer 7-cloro-3-(2- clorobenzil)-1 -(4-metoxibenzil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenilcarbamato de (Z)-terc-butila (0,78 g, 31,3 %) como um sólido creme claro. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,49 (s, 9
4-(3-(2-Bromobenzil)-7-cloro-2-oxo-2.3-diidro-1H-benzoíe1í1.41diazepin-5- iDfenilcarbamato de (ZHerc-butila. A uma solução de 7-cloro-3-(2-bromobenzil)-1-(4-
H), 3,32 (s, 3 H), 3,55 (d, 2 H), 3,59 (s, 3 H) 3,90 (t, 1 H), 4,78 (d, 1 H), 5,47 (d, 1 H), 6,64 (d, 2 H), 6,82 (d, 2 H), 7,06 (d, 2 H), 7,10 (s, 1 H), 7,21 - 7,30 (m, 3 H), 7,32 - 7,62 (m, 3 H), 7,64 (d, 1 H), 7,75 (d, 1 H), 9,61 (s, 1 H). MS m/z 631,36 [M+1],
20
Parte III: Remoção do grupo o-Metoxibenzila.
NHBoc
NHBoc metoxibenzil)-1H-benzo[e][1,4]diazepín-5-il)fenilcarbamato de (Z)-terc-butila (7,07 g, 10,47 mmols) em uma mistura de CH3CN/H20 (250/83 mL) foi adicionado Nitrato de Amônio e Cério (IV) (45,9 g, 83,76 mmols) às porções a -15 °C. A mistura de reação foi agitada a -15 0C durante 1 h, a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente e a mistura deixada 5 na temperatura ambiente durante 2 h. A mistura de reação depois foi diluída com água (200 ml) e EtOAc (200 mL). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 200 mL). Os extratos combinados foram lavados com salmoura (100 mL), secos (MgSO4) e evaporados a vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea em coluna (eluído com 40 % de EtOAc em Hexano) para fornecer 4-(3-(2-bromobenzil)-7- 10 cloro-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenilcarbamato de (Z)-terc-butila (3,3 g, 56,8 %) como um sólido claro. MS m/z 555,25 [M+1],
Parte IV: Remoção do Grupo de Proteção Boc.
(Z)-5-(4-Aminofenil)-3-(2-bromobenzil)-7-cloro-1H-benzore1f1.41diazepiii-2(3H)-ona. A uma solução de 4-(3-(2-bromobenzil)-7-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenilcarbamato de (Z)-terc-butila (3,3 g, 5,94 mmols) em diclorometano (45 mL) foi adicionado ácido trifluoroacético (15 mL) às gotas a 0 °C. Depois da conclusão da adição, a mistura de reação foi agitada a 0 °C durante 1 h, depois a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente e mantida na temperatura ambiente durante 4 h. A mistura de reação foi resfriada a 0 0C e tratada com uma solução de NaOH 10 % em água até que um pH >10 foi obtido. As duas camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com diclorometano (2 x 50 mL). Os extratos combinados foram lavados com salmoura (100 mL), secos (MgSO4) e evaporados a vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea em coluna (eluído com 40 % de EtOAc em Hexano) para fornecer (Z)-5-(4- aminofenil)-3-(2-bromobenzil)-7-cloro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (2,35 g, 87 %) como um sólido amarelo claro. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 3,45 (d, 2 H), 3,71 (t, 1 H), 5,62 (s, 2 H), 6,53 (d, 2 H), 7,10 - 7,17 (m, 3 H), 7,22 - 7,25 (m, 2 H), 7,33 (t, 1 H), 7,46
7,61 (m, 3 H), 10,64 (s, 1 H). MS, m/z 455,19 [M+1],
Parte V: Instalação de Ureia a partir do Intermediário Aminoarila C5. Cl
H ,0 Ν—&
β ^ 1) Trisfosgênio, DIPEA, DCE Cl
Br
2) R5NH2, DIPEA DCE 60 °C, o/n
v^NH
R5HN
Br
H2N
A uma solução de trisfosgênio (0,023 mg, 0,078 mmol) em 1,2-dicloroetano (1 mL) foi adicionada uma solução de (Z)-5-(4-aminofenil)-3-(2-bromobenzil)-7-cloro-1Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (0,08 g, 0,195 mmol), diisopropiletilamina (0,051 mL, 0,2925 mmol) em dicloroetano (1 mL). A mistura de reação foi agitada na temperatura 5 ambiente em um frasco de vidro tampado de 7 mL durante 10 minutos e depois tratada com uma solução de amina (R5NH2, 0,468 mmol), diisopropiletilamina (0,051 mL, 0,2925 mmol) em 1,2-dicloroetano (1 mL). A mistura de reação depois foi aquecida a 60 0C durante 12 h. A mistura de reação depois foi evaporada à secura e amostras individuais foram purificadas por cromatografia líquida de alto desempenho automatizada.
Método B:
(E)-3-(2-Bromobenzil)-5.7-dicloro-1-(4-metoxibenzil)-1H-benzorb1azepin-2(3H)-ona. A uma solução de (E)-5,7-dicloro-1-(4-metoxibenzil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (0,45 g, 1,28 mmol) em THF anidro (20 mL), foi adicionada a -78 0C sob uma atmosfera de N2, uma solução de terc-butóxido de potássio (1 M em THF, 1,54 mL, 1,54 mmol). Depois da
brometo de 2-bromobenzila (0,386 mL, 1,54 mmol) em THF (5 mL) foi adicionada a -78 0C às gotas durante 15 minutos. A mistura de reação foi agitada a - 78 0C durante mais 2 horas e depois a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente. A mistura de reação foi 20 deixada na temperatura ambiente durante a noite sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi extinta com NH4CI saturado (50 mL) e extraída com EtOAc (3 x 50 mL). Os extratos combinados foram lavados com salmoura (100 mL), secos (MgSO4) e evaporados a vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea em coluna (eluído com 20 % de EtOAc em Hexano) para fornecer (E)-3-(2-bromobenzil)-5,7-dicloro-1-(4- 15 metoxibenzil)-1H-benzo[b]azepin-2(3H)-ona (0,49 g, 74 %) como um sólido claro. RMN de
Parte I:
conclusão da adição a mistura de reação foi agitada durante V2 h a -78 0C e uma solução de 1H (400 MHz1 DMSO-de) δ 3,65 (s, 3 Η), 4,06 - 4,10 (m, 2 Η), 4,86 (d, 1 Η), 5,39 (d, 1 Η),
4,79 (d, 2 Η), 6,92 (d, 2 Η), 7,12 - 7,39 (m, 3 Η), 7,54 - 7,56 (m, 1 Η), 7,67 - 7,82 (m, 3 Η). MS m/z 519,20 [M+1],
Parte II:
Considera-se que um éster de arilboronato ureia pode ser ligado a um 5,7-diclorobenzo[b]azepin-2(3H)-ona usando uma reação de ligação de paládio, conforme ilustrado abaixo.
[Pd]
HN^N-R5
Y
O
R' é H, cloreto, ou alquila R5 é alquila opcionalmente substituído
Uma variedade de ésteres de arilboronato ureia pode ser preparado usando os procedimentos ilustrados abaixo.
trifosgênio
DIPEA
R5NH2
Rk = mfitila ou isonronila
Procedimento Geral para a Síntese de Ureias. Trisfosgênio (0,3 eq) foi dissolvido em diclorometano anidro (20 % v/v) em um frasco seco sob nitrogênio. O éster de aminoboronato (1 eq) foi dissolvido em diclorometano (20 % v/v) e a este foi adicionada diisopropiletilamina (1 eq). Esta mistura foi adicionada às gotas durante um período de 1 h à solução de trisfosgênio agitada. Depois de agitar durante um adicional de 5 minutos, a amina primária (1 eq, R5NH2) foi adicionada em uma porção, imediatamente seguido por diisopropiletilamina (1 eq). A mistura depois foi agitada durante a noite. Água (20 % v/v) foi adicionada e a mistura foi agitada durante 5 minutos. A camada aquosa foi removida e mais água foi adicionada. A purificação do produtos individuais envolveu precipitação de água, ou uma extração em solvente orgânico. Em alguns casos, a purificação adicional por cromatografia foi necessária. Rendimentos foram tipicamente de 70 a 80 %.
Exemplo 6
Procedimento Geral Representativo para Síntese dos Compostos de Alcoxiarila C5 a partir dos Intermediários de (E)5,7-Dicloro-benzodiazepin-2(3H)-ona. Cl
Cl
\ ,0
+
OCH3
B(OH)2
Pd(PPh3)4
Cl
,O
H3CO
(Z)-7-Cloro-5-(4-metoxifenin-1-metil-1H-benzoreiri.41diazepin-2(3l-n-ona· Em um RBF de 3 pescoços e 1 L equipado com barra agitadora magnética, condensador, termopar, e entrada de N2, (E)-5,7-dicloro-1-metil-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona bruto (30 g, 0,124 mol) foi dissolvido em 300 mL de DME. A este foi adicionada uma solução de Na2CO3 (21 g, 0,2 mol em 200 mL de H2O) seguido pela adição de ácido 4-metoxifenil borônico (22 g, 0,145 mol) e Pd(PPh3)4 (1,2 g, 8,3 mmols). A mistura de reação foi aquecida em um banho de óleo a 85 °C, sob N2, durante 2 h e depois esfriada até a temperatura ambiente. A esta foi adicionada 200 mL de EtOAc e a mistura agitada durante 5 min. A camada orgânica foi separada e lavada com H2O (200 mL) e salmoura (200 mL). A camada orgânica foi seca em MgSO4 e depois concentrada à secura para fornecer 53 g do produto bruto. Este foi submetido à cromatografia de sílica usando 210 g de gel de sílica e EtOAc/hepateno (12:88 a 30:70 a 50:50 a 70:30; um total de 8 L de fase móvel). As frações contendo produto puro foram combinadas e concentradas à secura para fornecer 42,7 g do produto puro (quantitativo). RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 3,38 (s, 3 H), 3,73 (d, 1 H), 3,85 (s, 3 H), 4,75
(Z)-7-Cloro-1-(4-metoxibenzin-5-f4-metoxifenil)-1H-benzoreU1.41diazepin-2(3H)-ona. Em um RBF de 3 pescoços e 1 L equipado com barra agitadora magnética, condensador, termopar, e entrada de N2, (E)-5,7-dicloro-1-(4-metoxibenzil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin2(3H)-ona bruto (54 g) foi dissolvido em 360 mL de DME. A este foi adicionada uma solução de Na2CO3 (23 g, 0,15 mol, em 250 mL de H2O) seguido pela adição de ácido 4-metoxifenil borônico (22,7 g, 0,15 mol) e Pd(PPh3)4 (1,4 g, 1,2 mmol). A mistura de reação foi aquecida em um banho de óleo a 85 0C durante 2 h e depois esfriada (temperatura ambiente). A esta foi adicionada 200 mL de EtOAc e a mistura agitada durante 5 min. A camada orgânica foi separada e lavada com 200 mL de H2O e depois salmoura. A camada orgânica foi
(d, 1 H), 6,9 (m, 2 H), 7,31 (m, 2 H), 7,48 - 7,58 (m, 3 H).
H3CO concentrada à secura para fornecer 68 g do produto bruto. Este foi submetido à cromatografia em coluna usando 550 g de gel de sílica e EtOAc/heptano 25/75 a 60/40. As frações contendo produto puro foram combinadas para fornecer 21 g do produto puro e outras frações contendo uma quantidade pequena de impureza (por TLC) forneceu um 5 adicional de 20 g do produto, embora menos puro. Entretanto, a RMN de ambos os lotes foi idêntica. Um total de 41 g do produto foi obtido. Rendimento de 72 % em duas etapas. RMN
LEGENDA DA FIGURA ACIMA - KO-t-Butila
(Z)-7-Cloro-5-(4-metoxifenil)-1-metil-3-(2-metilbenzih-1 H-benzofe1í1.41diazepin2(3H)-ona. A uma solução agitada e esfriada (banho de gelo seco/acetona) de (Z)-7-cloro-5- 5 (4- metoxifenil)-1-metil-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (0,50 g, 1,59 mmol) em THF (8 mL) foi lentamente adicionado KOiBu 1 M (2,4 mL, 2,4 mmols, 1,5 eq). A mistura vermelha escura resultante foi agitada em banho de gelo seco/acetona durante -10 min seguido pela adição lenta de uma solução de brometo de 2-metilbenzila (0,46 g, 2,5 mmols, 1,5 eq) em THF (2 mL). Depois de agitar durante um adicional de ~35 min a -78 °C, a mistura de reação 0 foi extinta com água e diluída com EtOAc. A camada orgânica foi seca (Na2SO4), filtrada e evaporada (rotovap, depois alto vácuo). A cromatografia em gel de sílica usando 20 a 40 % de EtOAc/heptano forneceu 0,56 g (rendimento de 84 %) do produto do título [Nota: quando
o uso de cloretos de benzila como agentes alquilantes, iodeto de tetrabutil amônio foi adicionada junto ao agente alquilante na temperatura baixa]. RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ
de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 3,7 (s, 3 H), 3,80 (d, 1 H), 3,85 (s, 3 H), 4,57 (d, 1 H), 4,85 (d, 1 H), 5,57 (d, 1 H), 6,63 (d, 2 H), 6,85 - 6,95 (m, 4 H), 7,16 (d, 1 H), 7,3 - 7,44 (m, 4 H).
Exemplo 7
IO
Procedimentos Gerais Representativos para Instalação de um Substituinte C3 em C5-Aril-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-onas.
H3CO
H3CO
2,38 (s, 3 H), 3,41 (s, 3 H), 3,5 - 3,65 (m, 2 H), 3,74 (dd, 1 H), 3,84 (s, 3 H), 6,89 (dt, 2 H),
7,05 - 7,15 (m, 3 H), 7,25 - 7,35 (m, 3 H), 7,45 - 7,5 (m, 3 H). 10
15
20
25
(Z)-7-Cloro-3-(2-clorobenzil)-5-(4-metoxifenin-1-metil-1H-benzore1í1.41diazepin2(3H)-ona. (Z)-7-Cloro-5-(4-metoxifenil)-1-metil-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (0,2 g, 0,635 mmol) foi dissolvido em THF seco (5 mL) sob nitrogênio e esfriado a -78 °C. Tercbutóxido de potássio (86 mg, 0,762 mmol) foi adicionado como um sólido em duas porções com agitação rápida. A mistura apresentou-se instantaneamente colorida e rapidamente tornou-se vermelha escura. Depois de 5 min, brometo de 2-clorobenzila (107 μΐ, 0,836 mmol) foi adicionado às gotas por seringa. A mistura foi deixada agitar a -78 0C durante 1 h sob nitrogênio. Ela tornou-se uma cor marrom clara. A TLC (hexanos:acetato de etila 1:1) indicou que nenhum material de partida permaneceu com um produto menos polar principal e um produto mais polar secundário mais algum brometo de 2-clorobenzila residual. A reação foi extinta a frio adicionando-se ~2 mL de metanokágua 1:1. Um precipitado amarelo foi formado. O banho frio foi removido e a mistura foi deixada aquecer até a temperatura ambiente. Água e acetato de etila foram adicionados. A camada orgânica foi separada e lavada uma vez com salmoura, depois seca em sulfato de magnésio, filtrada e o solvente evaporado. A cromatografia em 10 g de gel de sílica eluindo com um gradiente de 30 a 50 % de acetato de etila em hexanos forneceu (Z)-7-cloro-3-(2-clorobenzíl)-5-(4-metoxifenil)-1- metil-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona como um óleo amarelo (232 mg, 0,528 mmol, 83 %). RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 3,37 (s, 3 H), 3,6 - 3,75 (m, 2 H), 3,79 - 3,86 (m, 1 H), 3,81 (s, 3 H), 6,85 (d, J = 9 Hz, 2 H), 7,1 - 7,6 (m, 9 H); ESI m/z 439,6 [M+H+].
Br
Br
30
(Z)-3-(3-BromobenziD-1-(4-metoxibenzil)-7-cloro-5-(4-metoxifenil)-1H-benzoreiri.41- diazepin-2(3H)-ona. A uma solução agitada e esfriada (banho de gelo seco/acetona) de (Z)
7-cloro-1-(4-metoxibenzil)-5-(4-metoxifenil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (6,00 g, 14,2 mmols) em THF (80 mL) foi lentamente adicionado KOiBu 1 M (21 mL, 21 mmols, 1,5 eq). A mistura vermelha escura resultante foi agitada em banho de gelo seco/acetona durante -10 min seguido pela adição lenta de uma solução de brometo de 3-bromobenzila (5,10 g, 21,4 mmols, 1,5 eq) em THF (15 mL). Depois de agitar durante um adicional de -45 min a -78 0C, a mistura de reação foi extinta com salmoura saturada e diluída com EtOAc. A camada orgânica foi seco (Na2SO4)1 filtrada e evaporada (rotovap, depois alto vácuo). A cromatografia em gel de sílica usando 10 a 30 % de EtOAc/heptano forneceu 7,08 g (rendimento de 84 %) do produto do título. [Nota: quando o uso de cloretos de benzila como agentes alquilantes, iodeto tetrabutil amônio foi adicionado junto ao agente alquilante na temperatura baixa], RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) <5 3,57 (d, 2 H), 3,70 (s, 3 H), 3,73 (t, 1 H), 3,83 (s, 3 H), 4,59 (d, 1 H), 5,62 (d, 1 H), 6,61 (d, 2 H), 6,8 - 6,9 (m, 4 H), 7,2 - 7,45 (m, 8 H),
7,63 (fino d, 1 H).
βη-ΛΟ'
/=\ KO-t-Butila
Vi —~
(Z>7-Cloro-3-(2-clorobenzil)-1-(4-metoxibenzin-5-(4-metoxifenin-1H
benzore1í1.41diazepin-2(3H)-ona. (Z)-7-Cloro-1 -(4-metoxibenzil)-5-(4-metoxifenil)-1 H
benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (0,344 g, 0,817 mmol) foi dissolvido em THF seco (8 mL) e esfriado a -78 0C sob nitrogênio. Terc-butóxido de potássio (0,119 g, 1,063 mmol) foi adicionado em uma porção. A mistura de reação foi agitada durante 5 min tornando-se 10 vermelha escura. Brometo de 2-clorobenzila (0,128 mL, 0,981 mmol) foi adicionado por seringa. A mistura foi agitada a -78 0C durante 1,5 h e depois o banho frio foi removido. Depois de 1 h, a reação foi extinta com metanol e diluída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água (2 x), depois salmoura e seca (MgSO4). A cromatografia em gel de sílica eluindo com 25 a 30 % de acetato de etila em hexanos forneceu (Z)-7-cloro-3- 15 (2-clorobenzil)-1 -(4-metoxibenzil)-5-(4-metoxifenil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (128 mg, 29 %). RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) 6 3,6 - 3,8 (m, 2 H) 3,7 (s, 3 H), 3,8 (s, 3 H), 3,9 4,0 (m, 1 H), 4,55 (d, 1 H), 5,7 (d, 1 H), 6,6 (d, 2 H), 6,8 - 6,9 (m, 4 H), 7,1 - 7,4 (m, 8 H), 7,6 (dd, 1 H); ESI m/z.
Os compostos seguintes foram preparados com base nos procedimentos acima:
(ZV7-Cloro-5-(4-metoxifeni0-3-(3-bromobenzi0-1-metil-1H-benzore1H.41diazepin
2(3HVona. RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 3,40 (s, 3 H), 3,45 - 3,55 (m, 2 H), 3,67 (dd, 1 H), 3,86 (s, 3 H), 6,91 (d, 2 H), 7,14 (t, 1 H), 7,25 - 7,3 (m, 3 H), 7,33 (ddd, 1 H), 7,45 - 7,55 (m,
4 H).
(Z)-7-Cloro-5-(4-metoxifenin-3-(3-metilbenzil)-1-metil-1H-benzoreiri.41diazepin2(3m-ona. RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 2,31 (s, 3 H), 3,38 (s, 3 H), 3,5 - 3,6 (m, 2 H), 3,68 (dd, 1 H), 3,82 (s, 3 H), 6,88 (d, 2 H), 6,99 (m, 1 H), 7,1 - 7,2 (m, 3 H), 7,2 - 7,3 (m, 3 H + CHCI3), 7,4 - 7,53 (m, 3 H).
(Z)-7-Cloro-3-(3-isopropilbenzin-5-(4-metoxifenil)-1-metil-1H-benzorein.41diazepin2(3HVona. RMN de 1H (300 MHZ, CDCI3) δ 1,24/1,25 (2 dubletos sobrepostos, 6 H), 2,88 50 (hepteto, 1 H), 3,38 (s, 3 H), 3,5 - 3,6 (m, 2 H), 3,69 (t, 1 H), 3,84 (s, 3 H), 6,89 (d, 2 H), 7,07 (dt, 1 H), 7,13 (dt, 1 H), 7,15 - 7,3 (m, 4 H; inclui singleto de CHCI3), 7,47 (dd, 1 H), 7,52 (d, 2 10
15
20
15
50 Η).
(ZKIS-M-lsopropilbenzilW-cloro-S-^-metoxifeniO-l-metil-IH-benzoreiri^ldiazepin2(3H)-ona. RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 1,23 (d, 6 H), 2,84 (septeto, 1 H), 3,39 (s, 3 H), 3,51 (m, 2 H), 3,69 (dd, 1 H), 3,85 (s, 1 H), 6,89 (m, 2 H), 7,12 (m, 2 H), 7,26 (m, 4 H), 7,44-
7,54 (m, 3 H).
(Z)-3-(4-lsopropilbenzil)-7-cloro-1-(4-metoxibenzin-5-(4-hidroxifeni0-1Hbenzofeiri,41diazepin-2(3HVona. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,15 (d, 6 H), 2,85 (septeto, 1 H), 3,25 - 3,45 (m, 3 H), 3,65 (s, 3 H), 3,75 - 3,85 (m, 4 H), 4,80 (d, 1 H), 5,45 (d,
1 H), 6,60 (m, 2 H), 6,85 (m, 2 H), 6,95 (m, 2 H), 7,0 - 7,3 (m, 6 H), 7,63 (dd, 1 H), 7,74 (d, 1 H).
Exemplo 8
Procedimento Geral Representativo para Síntese de Compostos de C3- Alquilaralquila a partir de Compostos de C3-Haloaralquila.
ZnEt2
PdCI2(Cippf)
(Z)-7-Cloro-3-(3-etilbenzin-5-(4-metoxifenil)-1 -metil-1 H-benzofelH .41diazepin-2(3HV ona. A uma solução agitada e esfriada (banho de gelo seco-acetona) de (Z)-3-(3- bromobenzil)-7-cloro-5-(4-metoxifenil)-1-metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (1,21 g,
2,5 mmols) e PdCI2(dppf) [0,22 g] em THF seco (10 mL) foi adicionada Et2Zn 1 M (9,3 mL, mmols, 4 eq). Depois de aquecer até a temperatura ambiente, a mistura de reação foi agitada a 50 0C até que a HPLC indicou que a reação foi concluída. Depois do processamento aquoso, a cromatografia forneceu 0,95 g (rendimento de 88 %) do produto do título. RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 1,22 (t, 3 H), 2,62 (q, 2 H), 3,55 (d, 2 H), 3,70 (t, 1 H), 3,84 (s, 3 H), 6,89 (d, 2 H), 7,03 (m, 1 H), 7,1 - 7,3 (m, 5 H), 7,4 - 7,55 (m, 3 H).
O composto seguinte foi preparado com base no procedimento acima:
(Z)-7-Cloro-3-(3-etilbenzi0-1-(4-metoxibenzi0-5-(4-metoxifenin-1Hbenzofein .41diazepin-2(3m-ona. RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 1,23 (t, 3 H), 2,63 (q, 2 H),
3,55 - 3,65 (m, 2 H), 3,68 (s, 3 H), 3,80 (dd, 1 H), 3,83 (s, 3 H), 4,59 (d, 1 H), 5,63 (d, 1 H),
6,61 (d, 2 H), 6,85 (d, 2 H), 6,88 (d, 2 H), 7,04 (dt, 1 H), 7,10 (fino d, 1 H), 7,13 - 7,26 (m, 5 H), 7,30 (d, 1 H), 7,37 (dd, 1 H).
Exemplo 9
Procedimentos Gerais Representativos para Desproteção de Átomo de Nitrogênio
Amida.
Método A: Et
H3CO
H3CO
(ZV3-(3-Etilbenzil)-7-cloro-5-(4-metoxifenilV1H-benzofein,41diazepin-2(3HVona. A uma solução de benzodiazepinona protegida por PMB (1 g) em MeCN (17 mL) e H2O (3 mL) foi adicionado nitrato de amônio e cério (IV) (CAN) (7 g). A mistura resultante foi agitada até que a TLC mostrou que a reação foi concluída e depois foi diluída com água, EtOAc e 5 heptano. A camada orgânica foi seca (Na2SO4), filtrada e evaporada a um sólido bruto. A cromatografia usando quantidades aumentadas de DCM/EtOAc (1:1) em heptano (até DCM/EtOAc/heptano 25:25:50) forneceu 0,55 g (rendimento de 57 %) do produto do título.
7,71 (dd, 1 H), 10,9 (br s, 1 H).
O composto seguinte foi preparado com base no procedimento acima: (Z)-3-(4-lsopropilbenzil)-7-cloro-5-(4-metoxifenil)-1H-benzofein.41diazepin-2(3H)ona. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) 6 1,15 (d, 6 H), 2,85 (septeto, 1 H), 3,25 - 3,38 (m, 2
(ZV7-Cloro-3-(2-clorobenzil)-5-(4-metoxifenilV1H-benzoíe1í1.41diazepin-2(3H)-ona. (Z)-7-Cloro-3-(2-clorobenzil)-5-(4-metoxifenil)-1-(4-metoxibenzil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin2(3H)-ona (128 mg, 0,235 mmol) foi dissolvido em anisol (1 mL) sob nitrogênio e AICI3 (125 mg, 0,939 mmol) foi adicionado em uma porção. A solução laranja resultante foi aquecida a 20 85 0C durante 2 h. Depois que a mistura foi esfriada até a temperatura ambiente, gelo e acetato de etila foram adicionados e a mistura foi agitada durante 30 min. As camadas foram particionadas e a camada orgânica foi lavada com água, depois salmoura. A camadas aquosas combinadas foram extraídas novamente com acetato de etila e as camadas orgânicas combinadas foram secas (MgSO4), filtradas e evaporadas. O resíduo foi
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,19 (t, 3 H), 2,57 (q, 2 H), 3,2 - 3,4 (m, 2 H), 3,7 - 3,8 (m, 4 H; contém OMe singleto a 3,79), 7,0 - 7,1 (m, 3 H), 7,1 - 7,35 (m, 5 H), 7,39 (d, 2 H),
H), 3,8 (br s, 4 H), 6,95 - 7,50 (m, 10 H), 7,73 (dd, 1 H), 10,9 (s, 1 H).
15
Método B: submetido à cromatografia em gel de sílica, eluindo com 5 %, depois 30 % de acetato de etila em hexanos para fornecer (Z)-7-cloro-3-(2-clorobenzil)-5-(4-metoxifenil)-1Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona como um sólido branco (99 mg, 99 %). RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 3,60 - 3,77 (m, 2 H), 3,84 (s, 3 H), 3,84 - 3,86 (m, 1 H), 6,88 (dd, J = 7, 2 Hz, 2 H), 7,08 (d, J = 9 Hz, 1 H), 7,15 - 7,33 (m, 3 H), 7,38 (dd, J = 7, 2 Hz, 2 H), 7,45 (dd, J = 9,
2 Hz, 1 H), 7,60 (dd, J = 8, 2 Hz, 1 H), 8,59 (s, 1 H); ESI m/z 425,1.
Exemplo 10
Procedimentos Gerais Representativos para Remoção de um Grupo de Proteção
Metóxi.
Método A:
(Z)-7-Cloro-5-(4-hidroxifenil)-3-(2-metilbenzin-1H-benzoreiri.41diazepin-2(3H)-ona.
A uma solução do precursor de (Z)-7-cloro-5-(4-metoxifenil)-3-(2-metilbenzil)-1Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (0,6 g, 1,4 mmol) em CH2Br2 (20 mL) foi adicionado EtSH (7 mL) e depois AIBr3 (1,7 g, 6,3 mmols, 4,5 eq). A mistura resultante foi agitada durante a noite e depois tratada com gelo (20 g) e filtrada depois de uma hora. O sólido resultante foi triturado com 50 % de DCM/heptano e depois seco a vácuo para fornecer 445 mg (rendimento de 80 %) de (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3-(2-metilbenzil)-1Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona como um sólido amarelo claro. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 2,31 (s, 3 H), 3,25 - 3,45 (m, 2 H), 3,73 (dd, 1 H), 6,80 (d, 2 H), 7,02 - 7,18 (m, 3 H), 7,2 - 7,3 (m, 5 H), 7,64 (dd, 1 H), 10,0 (br s, 1 H), 10,7 (br s, 1 H). MS, m/z 391,7 [M+1], Os compostos seguintes foram preparados com base no procedimento acima: (Z)-7-Cloro-5-(4-hidroxifenil)-3-(2-metilbenzi0-1 -metil-1 H-benzoíein.41diazepin2(3H)-ona. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 2,32 (s, 3 H), 3,3 - 3,5 (m, 5 H; contém singleto para NMe a 3,36), 3,90 (t, 1 H), 6,87 (d, 2 H), 7,05 - 7,15 (m, 3 H), 7,20 (m, 1 H), 7,29 (fino d, 1 H), 7,35 (d, 2 H), 7,65 (d, 1 H), 7,78 (dd, 1 H), 9 -11 (br s, 1 H). MS, m/z 405,3 [M+1],
(Z)-7-Cloro-5-(4-hidroxifenin-3-(3-metilbenzin-1H-benzofelf1.41diazepin-2(3H)-ona. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 2,28 (s, 3 H), 3,2 - 3,4 (m, 2 H; contém sinal de água),
3,63 (t, 1 H), 6,79 (d, 2 H), 7,00 (d, 1 H), 7,05 - 7,15 (m, 3 H), 7,20 (m, 1 H), 7,29 (fino d, 1 H), 7,31 (d, 2 H), 7,62 (dd, 1 H), 9,95 (s, 1 H), 10,61 (s, 1 H). MS, m/z 391,7 [M+1],
(Z)-7-Cloro-5-(4-hidroxifenin-3-(3-metilbenzin-1-metil-1 H-benzorein.41diazepin2(3m-ona. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 2,25 (s, 3 H), 3,25 - 3,45 (m, 5 H; contém singleto para NMe a 3,35), 3,83 (t, 1 H), 6,87 (d, 2 H), 6,99 (d, 1 H), 7,05 - 7,2 (m, 3 H), 7,28 (fino d, 1 H), 7,38 (d, 2 H), 7,63 (d, 1 H), 7,77 (dd, 1 H), 10,2 (br s, 1 H). MS1 m/z 405,3 [M+1],
(Z)-7-Cloro-5-(4-hidroxifenin-3-(4-metilbenzin-1H-benzoreiri.41diazepin-2(3H)-ona.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 2,23 (s, 3 H), 3,2 - 3,4 (m, 3 H), 3,80 (m, 1 H), 6,86 (d, 2 H), 7,09 (d, 2 H), 7,23 (d, 2 H), 7,25 - 7,35 (m, 4 H), 7,71 (dd, 1 H), 10,3 (br s, 1 H), 10,9 (br s, 1 H). MS, m/z 391,8 [M+1],
(Z)-7-Cloro-5-('4-hidroxifenin-3-('4-metilbenzil)-1 -metil-1 H-benzofelH .41diazepin2(3m-ona. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) 6 2,24 (s, 3 H), 3,25 - 3,4 (m, 5 H; contém singleto para NMe a 3,34), 3,82 (t, 1 H), 6,87 (d, 2 H), 7,07 (d, 2 H), 7,19 (d, 2 H), 7,28 (fino d, 1 H), 7,37 (d, 2 H), 7,63 (d, 1 H), 7,76 (dd, 1 H), 9,5 - 11 (br s, 1 H). MS, m/z 405,3 [M+1].
(Z)-7-Cloro-3-(2-etilbenzil>5-(4-hidroxifenih-1 H-benzofelH .41diazepin-2(3H)-ona. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) *1,14 (t, 3 H), 2,72 (q, 2 H), 3,30 - 3,40 (m, 2 H), 3,66 (m,
1 H), 6,77 (m, 2 H), 7,08 - 7,26 (m, 8 H), 7,60 (d, 1 H), 9,93 (s, 1 H), 10,66 (s, 1 H). MS, m/z 405,6 [M+1],
(Z)-7-Cloro-3-(2-etilbenzil)-5-(4-hidroxifeniD-1 -metil-1 H-benzofelH .41diazepin-2(3HV ona. RMN de 1H (300 MHz, DMSOd6) 1,11 (t, 3 H), 2,69 (q, 2 H), 3,34 (m, 2 H), 3,74 (m, 1 H), 6,78 (m, 2 H), 7,08 - 7,32 (m, 7 H), 7,58 (d, 1 H), 7,67 (dd, 1 H), 9,98 (s, 1 H). MS1 m/z
419.3 [M+1],
('Z)-3-(3-Etilbenzil)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1H-benzore1H.41diazepin-2(3H)-ona.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,16 (t, 3 H), 2,57 (q, 2 H), 3,2 - 3,35 (m, contém sinais para prótons benzílicos e H2O), 3,60 (t, 1 H), 6,79 (d, 2 H), 7,02 (dt, 1 H), 7,07 - 7,31 (m, 7 H), 7,61 (dd, 1 H), 9,94 (s, 1 H), 10,62 (s, 1 H). MS1 m/z 405,2 [M+1].
(Z)-3-(3-Etilbenzil)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1-metil-1 H-benzore1í1.41diazepin-2(3H)Onai RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,17 (t, 3 H), 2,57 (q, 2 H), 3,3 - 3,4 (m, contém sinais para prótons benzílicos e NMe1 5 H), 3,81 (t, 1 H), 6,86 (d, 2 H), 7,02 (dt, 1 H), 7,08 7,20 (m, 3 H), 7,27 (fino d, 1 H), 7,38 (d, 2 H), 7,63 (d, 1 H), 7,73 (dd, 1 H), 9,5-11 (br s). MS, m/z 419,2 [M+1].
(Z)-3-(4-Etilbenzil)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1-metil-1 H-benzorein.41diazepin-2(3H)Ona1 RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,14 (t, 3 H), 2,58 (q, 2 H), 3,36 - 3,41 (m, 5 H), 3,95 (m, 1 H), 6,90 (m, 2 H), 7,10 - 7,42 (m, 7 H), 7,66 (d, 1 H), 7,83 (dd, 1 H), -10,0 (br s, 1 H). MS, m/z 419,3 [M+1],
(Z)-3-(4-EtilbenzilV7-cloro-5-(4-hidroxifenin-1H-benzoreiri.41diazepin-2(3H)-ona. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,14 (t, 3 H), 2,55 (q, 2 H), 3,21 - 3,68 (m, 2 H), 3,60 (m, 1 H), 6,79 (m, 2 H), 7,07 - 7,29 (m, 8 H), 7,60 (dd, 1 H), 9,94 (s, 1 H), 10,61 (s, 1 H). MS1 m/z
405.3 [M+1].
(Z)-3-('3-lsopropilbenzil)-7-cloro-5-('4-hidroxifenin-1-metil-1H-benzofe1f1.4ldiazepin2(3H)-ona. RMN de 1H (300 MHz1 DMSO-d6) δ 1,18 e 1,21 (dois d, 6 H), 2,84 (hepteto, 1 H),
3,3 - 3,4 (m, 5 H; contém singleto para NMe a 3,34), 3,82 (t, 1 H), 6,85 (d, 2 H), 7,0 - 7,3 (m, 5 H), 7,38 (d, 2 H), 7,64 (d, 1 H), 7,77 (dd, 1 H), 9 -11 (br s, 1 H). MS, m/z 433,2 [M+1],
(Z)-3-(4-lsopropilbenzil)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1 H-benzofelH .41diazepin-2(3H)Onai RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) 6 1,15 (d, 6 H), 2,82 (septeto, 1 H), 3,24 - 3,38 (m, 2 H), 3,63 (m, 1 H), 6,79 (m, 2 H), 7,10 - 7,30 (m, 8 H), 7,59 (dd, 1 H), 9,45 (s, 1 H), 10,61 (s, 1 H). MS, m/z 419,3 [M+1],
(Z)-3-(4-lsopropilbenzil)-7-cloro-5-(4-hidroxifeni0-1-metil-1 H-benzofelH .41diazepin2f3m-ona. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,15 (d, 6 H), 2,84 (septeto, 1 H), 3,26 - 3,41 0 (m, 5 H), 3,77 (m, 1 H), 6,84 (m, 2 H), 7,10 - 7,40 (m, 7 H), 7,63 (d, 1 H), 7,73 (dd, 1 H), 10,2 (br s, 1 H). MS, m/z 433,3 [M+1],
Método B:
(Z)-7-Cloro-3-(2-clorobenzilV5-(4-hidroxifeniP-1 -metil-1 H-benzoíelH .41diazepin2(3H)-ona. (Z)-7-Cloro-3-(2-clorobenzil)-5-(4-metoxifenil)-1-metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin2(3H)-ona (230 mg, 0,524 mmol) foi dissolvido em cloreto de metileno (5 mL) e esfriado a 78 0C sob nitrogênio. Tribrometo de boro (54 μ\_ 0,576 mmol) foi adicionado às gotas. A mistura tornou-se laranja. Ela foi mantida a -78 0C durante 2 h e depois deixada aquecer até a temperatura ambiente. Tlc indicou nenhuma reação depois de 6 h. Um equivalente adicional de tribrometo de boro foi adicionado. A mistura foi deixada agitar durante a noite 0 na temperatura ambiente. Água foi cuidadosamente adicionada (2 mL) e depois salmoura (2 mL). A camada aquosa foi extraída duas vezes com cloreto de metileno. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de magnésio, depois filtradas e o solvente evaporado. O resíduo foi submetido à cromatografia em gel de sílica eluindo com 30 a 50 % de acetato de etila em hexanos para fornecer (Z)-7-cloro-3-(2-clorobenzil)-5-(4-hidroxifenil)1-metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona como um sólido amarelo (18 mg). RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 3,4 (s, 3 H), 3,6 - 3,8 (m, 2 H), 3,8 - 3,9 (m, 1 H), 6,8 (d, 2 H), 7,1 - 7,6 (m, 9 H); ESI m/z medido 425,0828 [M+H+], calculado 425,0824. (Z)-7-Cloro-3-í2-clorobenzil)-5-(4-hidroxifenin-1H-benzoreiri.41diazepin-2(3H)-ona. (Z)-7-Cloro-3-(2-clorobenzil)-5-(4-metoxifenil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (74 mg,
0,174 mmol) foi dissolvido em dicloroetano (1 mL) sob nitrogênio e BBr3 (1 M em diclorometano, 0,348 mL, 0,348 mmol) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente (houve uma mudança de cor imediata de incolor para laranja). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante aproximadamente 5 horas. Mais dois equivalentes de BBr3 em diclorometano foram adicionados (0,348 mL, 0,348 mmol) e a mistura foi deixada agitar durante um adicional de aproximadamente 18 horas. A reação foi cuidadosamente extinta com metanol (exotérmica), depois diluída com diclorometano e IO lavada duas vezes com água, depois uma vez com salmoura (a última lavagem em gel com algum metanol foi adicionada para separar as camadas). A camada orgânica foi seca (MgSO4). A cromatografia eluindo com 20 a 40 % de acetato de etila em hexanos forneceu algum material de partida mais (Z)-7-cloro-3-(2-clorobenzil)-5-(4-hidroxifenil)-1Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona como um sólido amarelo (40 mg, 56 %). RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) 6 3,59 - 3,89 (m, 3 H), 6,30 (br s, 1 H), 6,71 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7,09 - 7,32 (m, 4 H), 7,44 (dd, J = 9, 2 Hz, 1 H), 7,58 (d, J = 7 Hz, 1 H), 9,13 (s, 1 H); ESI m/z 411,0.
Exemplo 11
Procedimentos Gerais Representativos para Síntese de Benzodiazepinas Substituídas em Hidroxifenila C5 por intermédio de Ligação de Paládio de um Grupo Bromo!0 4-(alcoxiaralquilóxi)arila e um 5-Clorobenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona.
Parte I:
* ci^Qa
1-Bromo-4-(4-metoxibenzilóxi)benzeno. 4-Bromofenol (25,00 g, 145 mmols), cloreto de para-metoxibenzila (24,89 g, 159 mmols), iodeto de potássio (2,17 g, 14,45 mmols), e carbonato de potássio (39,9 g, 289 mmols) em acetona (600 mL) foram aquecidos em !5 refluxo durante 18 h. A mistura de reação bruta depois foi esfriada até a temperatura ambiente e filtrada através de um funil de vidro sinterizado. O filtrado foi concentrado a vácuo, e o sólido branco foi recristalizado a partir de etanol produzindo o produto como um sólido branco (33,44 g, 79 %). RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 3,80 (s, 3 H), 4,95 (s, 2 H), 6,85 (d, 2 H), 6,92 (d, 2 H), 7,32 - 7,40 (m, 4 H).
0 Parte II:
2-(4-(4-Metoxibenzilóxi)feniP-4.4.5.5-tetrametil-1.3.2-dioxaborolano. 1 -Bromo-4-(4-
metoxibenzilóxi)benzeno (10,00 g, 34,1 mmols) foi dissolvido em dioxano (250 mL), e bis(pinacolato)diborano (11,26 g, 44,3 mmols), e acetato de potássio (10,04 g, 102 mmols) foram adicionados. A mistura foi submetida a vácuo até que a borbulhagem ocorreu, e depois gás nitrogênio foi introduzido. O procedimento de desgaseificação foi repetido duas vezes, e depois tetracis(trifenilfosfino)paládio(0) (512 mg, 0,44 mmol) foi adicionado, e a
até a temperatura ambiente, e depois diluída com acetato de etila, e a solução orgânica foi lavada com água, depois salmoura, depois seca em sulfato de sódio, e concentrada. O resíduo bruto foi filtrado através de um tampão de sílica eluindo com acetato de etila:hexanos 6:4. O filtrado depois foi concentrado, e lavado com álcool isopropílico (30 mL), e o produto sólido foi coletado por filtração produzindo o produto como um sólido 10 amarelo escuro (9,85 g, 85 %). RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 1,34 (s, 12 H), 3,81 (s, 3 H),
(ZV7-Cloro-5-(4-(4-metoxibenzilóxiMrenilV1-metil-1 H-benzofe1[1.41diazepin-2(3H)ona. (E)-5,7-Dicloro-1-metil-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (5,00 g, 20,57 mmols), 15 hidróxido de césio (6,91 g, 41,1 mmols), e 2-(4-(4-metoxibenzilóxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil1,3,2-dioxaborolano (9,10 g, 26,7 mmols) foram dissolvidos em dioxano/água (100 mL/30 mL), e a mistura foi submetida a vácuo seguido por gás nitrogênio. A desgaseificação foi repetida duas vezes, e depois tetracis(trifenilfosfino)paládio(0) (475 mg, 0,41 mmol) foi adicionado. A reação depois foi aquecida a 90 0C durante 18 horas, e depois esfriada até a 20 temperatura ambiente. A mistura bruta foi diluída com acetato de etila, e a solução orgânica foi lavada com água, depois salmoura, e depois seca em sulfato de sódio, e concentrada. O produto bruto foi puxado a vácuo através de um tampão de sílica eluindo com acetato de etila:hexanos 6:4. O filtrado foi concentrado e depois lavado com éter metil-terc-butílico. O produto foi coletado como um sólido amarelo claro por filtração (5,13 g, 59 %). RMN de 1H
reação foi aquecida a 90 0C durante 3 horas. A mistura de reação bruta depois foi esfriada
5,02 (s, 2 H), 6,91 (d, 2 H), 6,96 (d, 2 H), 7,36 (d, 2 H), 7,74 (d, 2 H). Parte III:
(300 MHz, CDCI3) δ 3,36 (s, 3 H), 3,73 (d, 1 H), 3,81 (s, 3 H), 4,77 (d, 1 H), 5,03 (s, 2 H), 6,91 (d, 2 H), 6,98 (d, 2 H), 7,27 (d, 1 H), 7,32 (d, 1 H), 7,36 (d, 2 H), 7,49 (dd, 1 H), 7,55 (d,
2 H). (Z)-7-Cloro-5-(4-(4-metoxibenzilóxhfenin-1-metil-3-(4-(trifluorometinbenzil)-1Hbenzoreiri^ldiazepin^OHVona. (Z)-7-Cloro-5-(4-(4-metoxibenzilóxi)fenil)-1 -metil-1 H
benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (75 mg, 0,18 mmol) foi dissolvido em tetraidrofurano (4 mL), e a solução foi esfriada a -78 0C sob uma atmosfera de nitrogênio. Uma solução 1 M de terc5 butóxido de potássio em tetraidrofurano (267 //L, 0,267 mmol) foi adicionada às gotas, e a solução foi agitada durante 10 minutos. Brometo 4-(trifluorometil)benzila (64 mg, 0,267 mmol, solução em 1 mL de tetraidrofurano) depois foi adicionado às gotas, e o banho frio depois foi removido. A reação foi agitada na temperatura ambiente durante 2 horas, e depois foi extinta com água, e a mistura foi repartida entre água e acetato de etila. A porção aquosa 10 foi extraída novamente em acetato de etila, e os extratos orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio, e depois concentrados, e purificados por cromatografia (gradiente; hexanosracetato de etila 9:1 para hexanos:acetato de etila 6:4, depois isocrático) produzindo o produto como um resíduo claro (50 mg, 49 %).
(Z)-3-(3-Bromobenzil)-7-cloro-5-(4-(4-metoxibenzilóxi)fenil)-1 -metil-1 Hbenzofein.41diazepin-2(3H)-ona. Seguindo o procedimento descrito acima, (Z)-3-(3- bromobenzil)-7-cloro-5-(4-(4-metoxibenzilóxi)fenil)-1 -metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona foi obtido a partir de brometo de 3-bromobenzila como um sólido incolor (47 mg, 45 %).
O,
\
(Z)-3-(4-Bromobenzi0-7-cloro-5-f4-f4-metoxibenzilóxi)feniD-1 -metil-1 H
benzofein.41diazepin-2(3H)-ona. Seguindo o procedimento descrito acima, (Z)-3-(4- bromobenzil)-7-cloro-5-(4-(4-metoxibenzilóxi)fenil)-1 -metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona foi obtido a partir de brometo de 4-bromobenzila como um sólido incolor (22 mg, 21 %).
(Z)-7-Cloro-3-(3-clorobenzin-5-(,4-(4-metoxibenzilóxi)fenilV1-metil-1Hbenzofeiri.41diazepin-2(3HVona. Seguindo o procedimento descrito acima, (Z)-7-cloro-3-(3- clorobenzil)-5-(4-(4-metoxibenzilóxi)fenil)-1 -metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona foi obtido a partir de brometo de 3-clorobenzila como um sólido incolor (24 mg, 25 %).
Parte IV:
(trifluorometil)benzil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (50 mg, 0,086 mmol) foi dissolvido em HCI 4 N em dioxano (3 mL) e agitado durante 3 h. A solução depois foi concentrada, e sonicada em 5 mL de éter dietílico. O produto foi coletado por filtração como um sólido amarelo claro (24,2 mg, 61 %). RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,30 (s, 3 H), 3,32 - 3,43
O,
\
(Z)-7-Cloro-5-(4-hidroxifenil)-1-metil-3-(4-(trifluorometihbenzil)-1Hbenzoíeiri.41diazepin-2(3HVona· (Z)-7-cloro-5-(4-(4-metoxibenzilóxi)fenil)-1 -metil-3-(4-
(m, 3 H), 6,80 (d, 2 H), 7,22 (d, 1 H), 7,30 - 7,40 (m, 2 H), 7,50 - 7,78 (m, 6 H); ESI m/z medido 459,1078 [M+H+], calculado 459,1087.
Os compostos seguintes foram preparados com base nos procedimentos acima:
HO
(ZV3-(3-Bromobenzil)-7-cloro-5-(4-hidroxifeni0-1-metil-1 H-benzorein.41diazepinIO
15
2(3H)-ona. O produto foi obtido como um sólido amarelo (28,2 mg, 75 %). RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) δ 3,30 - 3,35 (m, 5 H), 3,82 (t, 1 H), 4,30 - 4,80 (bs, 5 H), 6,82 (d, 2 H), 7,18 - 7,26 (m, 2 H), 7,30 - 7,39 (m, 4 H), 7,55 - 7,63 (m, 2 H), 7,72 (dd, 1 H); ESI m/z medido 469,0314 [M+H+], calculado 469,0318.
(Z)-3-(4-BromobenzilV7-cloro-5-(4-hidroxifenil1-1-metil-1 H-benzofein.41diazepin2(3H)-ona. O produto foi obtido como um sólido amarelo (7 mg, 40 %). RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,27 - 3,38 (m, 5 H), 6,80 (d, 2 H), 7,21 - 7,36 (m, 5 H), 7,42 (d, 2 H), 7,58 (d, 1 H), 7,70 (dd, 1 H); ESI m/z medido 469,0318 [M+H+], calculado 469,0318.
(Z)-7-Cloro-3-(3-clorobenzil)-5-(4-hidroxifenil)-1-metil-1 H-benzore1í1.41diazepin2(3H)-ona. O produto foi obtido como um sólido amarelo (4,5 mg, 24 %). RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,30 - 3,40 (m, 5 H), 4,70 (q, 2 H), 4,85 (s, 1 H), 6,82 (d, 2 H), 7,10 - 7,22 (m, 2 H), 7,29 - 7,50 (m, 5 H), 7,60 (d, 1 H), 7,70 - 7,80 (m, 2 H). ESI m/z medido 425,1062 [M+H+], calculado 425,0824.
Exemplo 12
Procedimentos Gerais Representativos para Síntese de Benzimidazolonas.
Parte I:
[Pd]
On „0
20
™Ίί
O
(Z)-3-(2-Bromobenzin-7-cloro-1-metil-5-(2-oxo-2.3-diidro-1H-benzofd1imidazol-5-il)1H-benzoreiri.41diazepin-2(3H)-ona. (E)-3-(2-Bromobenzil)-5,7-dicloro-1 -metil-1 H
benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (150 mg, 0,364 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-ona (95 mg, 0,364 mmol) e cloreto de lítio (46 mg, 1,09 mmol) foram adicionados a 1,4-dioxano (3 mL). Nitrogênio foi borbulhado na solução à medida que os reagentes foram adicionados. Tetracis(trifenilfosfino)paládio(0) (42 mg, 0,036 mmol) foi adicionado seguido por hidróxido de césio monoidratado (183 mg, 1,09 mmol) e água (1 mL). Depois de borbulhar o nitrogênio através da mistura durante 5 5 minutos, a mistura de reação foi aquecida a 100 0C sob uma atmosfera de nitrogênio. Depois de aquecer durante 1 hora, a mistura foi esfriada até a temperatura ambiente, diluída com acetato de etila (25 mL), lavada com água (2 x 20 mL), depois salmoura (20 mL), seca com sulfato de sódio, decantada e depois concentrada na presença de sílica. O resíduo aderido à sílica seco foi carregado a seco em uma coluna de gel de sílica e eluído com um 10 gradiente de 60 a 100 % de acetato de etila em hexanos, depois um gradiente de 0 a 25 % de metanol em acetato de etila para produzir (Z)-3-(2-bromobenzil)-7-cloro-1-metil-5-(2-oxo
2,3-diidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il)-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (35 mg, 19 %). RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) 6 3,32 (s, 3 H) 3,49 (m, 2 H), 3,82 (t, 1 H), 6,89 - 7,17 (m, 3 H), 7,28 - 7,71 (m, 7 H), 10,70 (s, 1 H), 10,87 (s, 1 H); ESI m/z medido 509,0359 [M+H]\ calculado 509,0380.
(Z)-7-Cloro-3-(2-clorobenzil)-1-(4-metoxibenzi0-5-(2-oxo-2,3-diidro-1Hbenzord1imidazol-5-i0-1 H-benzofelfl .41diazepin-2(3HVona. (E)-5,7-Dicloro-3-(2-clorobenzil)
1-(4-metoxibenzil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (0,68 g, 1,44 mmol), éster de pinacol do ácido 2-oxo-2,3-diidro-1H-benzoimidazol-5-borônico (0,37 g, 1,44 mmol) e cloreto de lítio (0,183 g, 4,31 mmols) foram adicionados a 1,4-dioxano (12 mL). Nitrogênio foi borbulhado na solução à medida que os reagentes foram adicionados. Tetracis(trifenilfosfino)paládio(0) (166 mg, 0,144 mmol) foi adicionado seguido por hidróxido de césio monoidratado (723 mg, 4,31 mmols) e água (1 mL). Depois de borbulhar o nitrogênio através da mistura durante 5 minutos, ela foi aquecida a 100 0C sob uma atmosfera de nitrogênio. Seguindo o aquecimento durante 2 horas, a mistura foi esfriada até a temperatura ambiente, diluída com acetato de etila (50 mL), lavada com água (2 x 40 mL), depois salmoura (40 mL), seca com sulfato de sódio, decantada, depois concentrada na presença de sílica. O produto bruto aderido ao gel de sílica resultante foi carregado em uma coluna de gel de sílica e eluído com um gradiente de 0 a 100 % de acetato de etila em hexanos para produzir (Z)-7-cloro-3-(2- clorobenzil)-1 -(4-metoxibenzil)-5-(2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona como uma mistura 2:1 de produto.éster de pinacol do ácido
2-oxo-2,3-diidro-1H-benzoimidazol-5-borônico (200 mg, 24 %). ESI m/z 571,1, 573,1.
Parte II:
(Z)-7-Cloro-3-(2-clorobenzil)-5-(2-oxo-2.3-diidro-1H-benzoíd1imidazol-5-il)-1H
benzoreiri.41diazeDin-2(3HVona. (Z)-7-Cloro-3-(2-clorobenzil)-1-(4-metoxibenzil)-5-(2-oxo
2,3-diidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il)-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (200 mg, 0,35 mmol) foi dissolvido em anisol anidro (4 mL) sob uma atmosfera de nitrogênio, cloreto de alumínio (280 mg, 2,1 mmols) foi adicionado e a mistura foi aquecida a 85 0C durante 1 hora. A solução foi esfriada até a temperatura ambiente, vertida em gelo, enxaguando o 10 frasco com acetato de etila e água. A mistura foi empastada durante 10 minutos. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas com sulfato de sódio, decantadas e concentradas na presença de gel de sílica. O resíduo foi submetido à cromatografia em gel de sílica eluindo com 70 a 100 % de acetato de etila em hexanos 15 trocando por um gradiente de 0 a 10 % de metanol em acetato de etila para fornecer (Z)-7- cloro-3-(2-clorobenzil)-5-(2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il)-1Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (70 mg, 44 %). RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,46 (d,
2 H) 3,76 (t, 1 H), 6,90 (m, 2 H), 7,01 (s, 1 H) 7,21 - 7,64 (m, 7 H), 10,70 (s, 1 H), 10,74 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H); ESI m/z medido 451,0736 [M+H+], calculado 451,0729.
Exemplo 13
Os compostos listados na Tabela 4 foram testados quanto à atividade contra F1F0- ATPase e citotoxicidade em células Ramos. A inibição da síntese e hidrólise de ATP pela F1F0-ATPase foi medida conforme descrito em Κ. M. Johnson et ai, Chemistry & Biology 2005, 12, 485-496. A citotoxicidade em células Ramos foi medida conforme descrito em K. 25 M. Johnson et ai, Chemistry & Biology 2005, 12, 485-496, ou usando o Ensaio alamarBIueTM com detecção de fluorescência (Patente U.S. N2 5.501.959) conforme fornecido e descrito pela Invitrogen (Carlsbad, CA).
Tabela 4 N2 Nome do Composto Estrutura do Composto ATPase EC50 da IC50 Célula Ramos 1 (Z)-1 -(4-(3-(2-bromobenzil)-7- v o \ ++ +++ cloro-2-oxo-2,3-diidro-1 H- rir ^ benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-isopropilureia 2 (Z)-1 -(4-(7-cloro-2-oxo-3-(2- ++ +++ (trifluorometil)benzil)-2,3- diidro-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-isopropilureia 3 (Z)-1-(4-(7-cloro-3-(2- H0 ++ ++ fluorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro- SsA 1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5- 1 il)fenil)-3-isopropilureia O 4 (Z)-1-(4-(7-cloro-3-(2- ++ +++ clorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-isopropilureia (Z)-1-(4-(7-cloro-3-(2- Ci ° H ++ ++ clorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-metilureia 6 (Z)-1-(4-(7-cloro-3-(2- „sí p _ ,ÍÍ'TD + +++ clo robe nzi I )-2-oxo-2,3-diidro- H /""A 1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5- Gf il)fenil)-3-(2- (dimetilamino)etil)ureia 7 (Z)-1-(4-(7-cloro-3-(2- O ciV +++ +++ clorobenzi l)-2-oxo-2,3-diid ro1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-(2,2,2- trifluoroetil)ureia N2 Nome do Composto Estrutura do Composto ATPase EC50 da IC50 Célula Ramos 8 (Z)-1 -(4-(7-cloro-3-(2- ^ C ++ +++ clorobenzil )-2-oxo-2,3-diidro1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-ciclopropilureia 9 (Z)-1-(4-(7-cloro-3-(2- l_^^H ++ +++ clorobenzil )-2-oxo-2,3-d iidro- Λ.Λ" à 1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5- £j H il)fenil)-3-(2-metoxietil)ureia (Z)-1-(4-(7-cloro-3-(2- μ L" ++ +++ clorobenzil)-2-oxo-2,3-diid ro- H 1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-(2-etoxietil)ureia 11 (Z)-1 -(4-(3-(2-bromobenzil)-7- Br u H ++ +++ cloro-2-oxo-2,3-diidro-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-metilureia 12 (Z)-1-(4-(3-(2-bromobenzil)-7- Β>Ύ^] ++ +++ cloro-2-oxo-2,3-diidro-1 H- Ct benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-(2- (dimetilamino)etil)ureia 13 (Z)-1-(4-(3-(2-bromobenzil)-7- O Br\ +++ +++ cloro-2-oxo-2,3-diidro-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-(2,2,2- trifluoroetil)ureia Ns Nome do Composto Estrutura do Composto ATPase EC50 da IC50 Célula Ramos 14 (Z)-1-(4-(3-(2-bromobenzil)-7- H c *. ++ +++ cloro-2-oxo-2,3-diidro-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-ciclopropilureia (Z)-1-(4-(3-(2-bromobenzil)-7- tf ++ +++ cloro-2-oxo-2,3-diidro-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-(2-metoxietil)ureia 16 (Z)-1 -(4-(3-(2-bromobenzil)-7- Br-0 ++ +++ cloro-2-oxo-2,3-diidro-1 H- μ NH benzo[e][1,4]diazepin-5- O NS, il)fenil)-3-(2-etoxietil)ureia 17 (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3- HO ++ ++ (2-metilbenzil)-1H- C-3 ;Ps(: benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona 18 (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1- HU + + metil-3-(2-metilbenzil)-1 H- Q :N; benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona 19 (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3- xoç^. ++ ++ (3-metilbenzil)-1Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona N2 Nome do Composto Estrutura do Composto ATPase EC5O da IC50 Célula Ramos (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1- ΎΥΎΗ\Ζ + + metil-3-(3-metilbenzil)-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona 21 (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3- ++ ++ (4-metilbenzil)-1Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona 22 (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1- + + metil-3-(4-metilbenzil)-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona 23 (Z)-7-cloro-3-(2-etilbenzil)-5- HO ++ ++ (4-hidroxifenil)-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona 24 (Z)-7-cloro-3-(2-etilbenzil)-5- ++ + (4-hidroxifenil)-1 -metil-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona (Z)-7-cloro-3-(3-etilbenzil)-5- ^xxr ++ ++ (4-hidroxifenil)-1Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona 26 (Z)-7-cloro-3-(3-etilbenzil)-5- J^Xcr- ++ ++ (4-hidroxifenil)-1 -metil-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona Ns Nome do Composto Estrutura do Composto ATPase EC50 da IC50 Célula Ramos 27 (Z)-7-cloro-3-(4-etilbenzil)-5- X ++ ++ (4-hidroxifenil)-1 -metil-1 H- O benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)- JZS ona 28 (Z)-7-cloro-3-(4-etilbenzil)-5- X ++ ++ (4-hidroxifenil)-1H- O benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona 29 (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3- -v ++ ++ (4-isopropilbenzil)-1-metil-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3- ++ ++ (4-isopropilbenzil)-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona 31 (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3- ++ ++ (4-isopropilbenzil)-1 -metil-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona 32 (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1- O ++ ++ metil-3-(2- X (trifluorometil)benzil)-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona 33 (Z)-3-(2-bromobenzil)-7-cloro- ++ +++ 5-(4-hidroxifenil)-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona N2 Nome do Composto Estrutura do Composto ATPase EC50 da IC50 Célula Ramos 34 (Z)-7-cloro-3-(2-clorobenzil)-5- QH +++ ++ (4-hidroxifenil)-1 -metil-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona (Z)-3-(2-bromobenzil)-7-cloro- HN j NA ++ 1 -metil-5-(2-oxo-2,3-diidro-1 Hbenzo[d]imidazol-5-il)-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona 36 (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1- \SSSOr p +++ ++ metil-3-(4- (trifluorometil)benzil)-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona 37 (Z)-3-(3-bromobenzil)-7-cloro- +++ ++ 5-(4-hidroxifenil)-1-metil-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona 38 (Z)-3-(4-bromobenzil)-7-cloro- +++ ++ 5-(4-hidroxifenil)-1-metil-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)o na 39 (Z)-7-cloro-3-(3-clorobenzil)-5- + + (4-hidroxifenil)-1 -metil-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona 40 (Z)-7-cloro-3-(2-clorobenzil)-5- o-t +++ ++ (4-hidroxifenil)-1Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona N2 Nome do Composto Estrutura do Composto ATPase EC50 da IC50 Célula Ramos 41 (Z)-7-cloro-3-(2-clorobenzil)-5- J-NH Vsa-/ +++ +++ (2-oxo-2,3-diidro-1 H- O Cf benzo[d]imidazol-5-il)-1 Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona +++ corresponde a <5 μΜ, ++ corresponde de 5 a 10 μΜ, + corresponde a >10 μΜ, NA significa que nenhum dado foi disponível.
INCORPORAÇÃO COMO REFERÊNCIA
A divulgação integral de cada um dos documentos de patente e artigos científicos referidos neste relatório é incorporada como referência para todos os propósitos.
EQUIVALENTES
A invenção pode ser incorporada em outras formas específicas sem divergir do espírito ou características essenciais da mesma. As modalidades precedentes são, portanto, consideradas em todos os respeitos ilustrativas ao invés de limitar a invenção descrita neste relatório. Assim, o escopo da invenção é indicado pelas reivindicações anexas ao invés da descrição precedente, e todas as mudanças que estão dentro do significado e faixa de equivalência das reivindicações destinam-se a ser adotadas neste.

Claims (46)

1. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de que é representado pela fórmula seguinte: <formula>formula see original document page 109</formula> incluindo sais, ésteres e pró-fármacos do mesmo; e incluindo formas enantioméricas ReSe misturas racêmicas do mesmo; em que X é selecionado do grupo que consiste de halogênio, alquila, e alquila substituída; e em que R2 é selecionado do grupo que consiste de hidrogênio e uma alquila linear ou ramificada.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 109</formula>
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 109</formula>
4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 110</formula>
5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 110</formula>
6. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 110</formula>
7. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é: <formula>formula see original document page 110</formula> <formula>formula see original document page 111</formula>
8. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de que é representado pela fórmula seguinte: <formula>formula see original document page 111</formula> incluindo sais, ésteres e pró-fármacos do mesmo; e incluindo formas enantioméricas ReSe misturas racêmicas do mesmo; em que X é selecionado do grupo que consiste de halogênio, alquila e alquila substituída; em que R2 é selecionado do grupo que consiste de hidrogênio e uma alquila linear ou ramificada; e em que R5 é alquila ou alquila substituída.
9. Composto, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que R5 é alquila substituída por um ou mais de halogênio, alcóxi, -NH2, -N(H)(alquila C1-C4), ou N(alquila CrC4)2.
10. Composto, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 111</formula>
11. Composto, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 112</formula>
12. Composto, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 112</formula>
13. Composto, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 112</formula>
14. Composto, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 112</formula>
15. Composto, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 113</formula>
16. Composto, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 113</formula>
17. Composto, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado pof: <formula>formula see original document page 113</formula>
18. Composto, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 113</formula>
19. Composto, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 114</formula>
20. Composto, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é: <formula>formula see original document page 114</formula>
21. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de que é representado pela fórmula seguinte: <formula>formula see original document page 114</formula> incluindo sais, ésteres e pró-fármacos do mesmo; e incluindo formas enantioméricas ReSe misturas racêmicas do mesmo; em que X é selecionado do grupo que consiste de halogênio, alquila e alquila substituída; e em que R2 é selecionado do grupo que consiste de hidrogênio e uma alquila linear ou ramificada.
22. Composto, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 115</formula>
23. Composto, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 115</formula>
24. Composto, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 115</formula>
25. Composto, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 115</formula>
26. Composto, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 115</formula>
27. Composto, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 116</formula>
28. Composto, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o djto composto é representado por: <formula>formula see original document page 116</formula>
29. Composto, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é representado por: <formula>formula see original document page 116</formula>
30. Composto, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto é: <formula>formula see original document page 116</formula> <formula>formula see original document page 117</formula>
31. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste de: (Z)-1 -(4-(3-(2-bromobenzil)-7-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fènil)-3-isopropilureia; benzo[e][1,4]diazepin-5-il)fenil)-3-isopropilureia; (Z)-1-(4-(7-cloro-3-(2-fluorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-isopropilureia; (Z)-1 -(4-(7-cloro-3-(2-clorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-isopropilureia; (Z)-1 -(4-(7-cloro-3-(2-clorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-metilureia; (Z)-1-(4-(7-cloro-3-(2-clorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-(2-(dimetilamino)etil)ureia; (Z)-1-(4-(7-cloro-3-(2-clorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-(2,2,2 -trifluoroetil)ureia; (Z)-1 -(4-(7-cloro-3-(2-clorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-ciclopropilureia; il)fenil)-3-(2-metoxietil)ureia; (Z)-1-(4-(7-cloro-3-(2-clorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-(2-etoxietil)ureia; (Z)-1-(4-(3-(2-bromobenzil)-7-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-metilureia; (Z)-1-(4-(7-cloro-2-oxo-3-(2-(trifluorometil)benzil)-2,3-diidro-1H(Z)-1-(4-(7-cloro-3-(2-clorobenzil)-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5- (Z)-1-(4-(3-(2-bromobenzil)-7-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-(2-(dimetilamino)etil)ureia; (Z)-1-(4-(3-(2-bromobenzil)-7-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-(2,2,2 -trifluoroetil)ureia; (Z)-1-(4-(3-(2-bromobenzil)-7-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-ciclopropilureia; (Z)-1 -(4-(3-(2-bromobenzil)-7-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-(2-metoxietil)ureia; (Z)-1 -(4-(3-(2-bromobenzil)-7-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-5- il)fenil)-3-(2-etoxietil)ureia; (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3-(2-metilbenzil)-1H-benzo[e]ít,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1-metil-3-(2-metilbenzil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3-(3-metilbenzil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1-metil-3-(3-metilbenzil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3-(4-metilbenzil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1-metil-3-(4-metilbenzil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-3-(2-etilbenzil)-5-(4-hidroxifenil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-3-(2--etilbenzil)-5-(4-hidroxifenil)-1-metil-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)(Z)-7-cloro-3-(3-etilbenzil)-5-(4-hidroxifenil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-3-(3-etilbenzil)-5-(4-hidroxifenil)-1 -metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin2(3H)(Z)-7-cloro-3-(4-etilbenzil)-5-(4-hidroxifenil)-1 -metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin2(3H)(Z)-7-cloro-3-(4-etilbenzil)-5-(4-hidroxifenil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3-(3-isopropilbenzil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)(Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3-(3-isopropilbenzil)-1 -metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin- 2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3-(4-isopropilbenzil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)ona; (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-3-(4-isopropilbenzil)-1 -metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin- 2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1-metil3-(2-(trifluorometil)benzil)-1Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-3-(2-bromobenzil)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-3-(2-clorobenzil)-5-(4-hidroxifenil)-1 -metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin2(3H)-ona; (Z)-3-(2-bromobenzil)-7-cloro-1 -metil-5-(2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1-metil-3-(4-(trifluorometil)benzil)-1Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-3-(3-bromobenzil)-7-cloro-5-(4-hidroxifenil)-1 -metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin2(3H)-ona; (Z)-3-(4-bromobenzil)-7-cloro-5-(4-hidroxlfenil)-1 ^metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-3-(3-clorobenzil)-5-(4-hidroxifenil)-1 -metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-3-(2-clorobenzil)-5-(4-hidroxifenil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-3-(2-clorobenzil)-5-(2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il)-1Hbenzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-5-(2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il)-3-(2-(trifluorometil)benzil)1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; (Z)-7-cloro-1 -metil-5-(2-oxo-2,3-diidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)-3-(2- (trifluorometil)benzil)-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; e (Z)-7-cloro-3-(2-clorobenzil)-1-metil-5-(2-oxo-2,3-diidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il)1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona; e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
32. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende um composto conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 31 e um portador farmaceuticamente aceitável.
33. Uso da composição farmacêutica conforme definida na reivindicação 32, CARACTERIZADO pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio.
34. Uso, de acordo com a reivindicação 33, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito distúrbio é um distúrbio imune.
35. Uso, de acordo com a reivindicação 34, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito distúrbio imune é doença enxerto contra hospedeiro, artrite reumatóide, lúpus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla, doença de Crohn, Doença Celíaca, ou púrpura trombótica trombocitopênica idiopática.
36. Uso, de acordo com a reivindicação 33, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito distúrbio é um distúrbio hiperproliferativo.
37. Uso, de acordo com a reivindicação 36, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito distúrbio hiperproliferativo é um câncer.
38. Uso, de acordo com a reivindicação 37, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito câncer é um tumor, um neoplasma, um Iinfoma ou uma leucemia.
39. Uso, de acordo com a reivindicação 33, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito distúrbio é uma doença inflamatória crônica.
40. Uso, de acordo com a reivindicação 39, CARACTERIZADO pelo fato de que a dita doença inflamatória crônica é asma ou doença inflamatória intestinal.
41. Uso, de acordo com a reivindicação 33, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito distúrbio é psoríase.
42. Uso, de acordo com a reivindicação 34, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda administrar um agente adicional para tratar o dito distúrbio imune.
43. Uso, de acordo com a reivindicação 36, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda administrar um agente adicional para tratar o dito distúrbio hiperproliferativo.
44. Uso, de acordo com a reivindicação 39, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda administrar um agente adicional para tratar a dita doença inflamatória crônica.
45. Uso, de acordo com a reivindicação 41, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda administrar um agente adicional para tratar a dita psoríase.
46. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 33 a 45, CARACTERIZADO pelo fato de que o paciente é um ser humano.
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