BRPI0721045A2 - Compostos de aminopirimidina de imidazolidinonila para o tratamento do câncer - Google Patents

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSTOS DE AMINOPIRIMIDINA DE IMIDAZOLIDINONILA PARA O TRATAMENTO DO CÂNCER".

Antecedentes da Invenção 5 A presente invenção refere-se a Plkl pertence a uma pequena

família de proteína cinase caracterizada por um domínio de ligação de fosfoserina/treonina conhecido como domínio de caixa polo. Plkl desempenha um papel central na regulação do ciclo celular. Entre outras funções, a Plkl é suposta regular a iniciação, progressão, e saída de mitóse, o estágio 10 quando as células de câncer dividem-se. Consequentemente, o bloqueio de Plkl em células de câncer previne sua divisão ou mitóse.

Foram identificados potentes agentes anticâncer que interferem com mitose tais como os alcalóides vinca (NAVELBINE®), taxoides (TAXOTERE®) e inibidores de topoisomerase Il (ADRIAMYCIN®). VELCADE® é 15 um agente antineoplásico que inibe a proteossoma 26S. Entretanto, estes fármacos causam consideráveis efeitos colaterais em células que não se dividem, normais. Os inibidores de Plk especificamente alvejam células em divisão e podem ser capazes de evitar as toxicidades indesejáveis.

Inibidores de Plkl são conhecidos na técnica. Vejam por exem20 pio, WO 06/066172. Adicionalmente, o WO 06/021548 descreve certos análogos de di-hidropteridinona (por exemplo, BI-2536) como inibidores de Plkl. Atualmente, BI-2536 está em experiências clinicas de fase Il porém tem alta depuração (CL >1000 mL/min) e é limitado pela dose por mielosupressão no homem. Existe ainda uma necessidade de outros compostos que inibam a 25 Plkl que possui potência ou propriedades farmacocinéticas melhoradas. Seria também vantajoso ter um inibidor de Plkl que pudesse ser oralmente dosado.

A presente invenção fornece novos compostos de aminopirimidina de imidazolidinonila acreditados terem uso clínico para o tratamento de câncer através da inibição de Plkl. Certos dos mesmos compostos são acreditados ter potência melhorada sobre os compostos descritos no WO 06/066172. Adicionalmente, certos dos mesmos compostos são acreditados ter propriedades farmacocinéticas melhoradas sobre BI-2536. Além disso, devido à biodisponibilidade oral dos compostos da presente invenção que foram testados, acredita-se que certos dos mesmos compostos poderiam ser oralmente dosados.

Breve Sumário da Invenção

A presente invenção fornece compostos de Fórmula I:

o

cionado do grupo que consiste em cânceres de pulmão de célula nãopequena, orofaríngeos, esofagianos, gástricos, melanomas, carcinomas epidermoides da pele, mamários, ovarianos, endometriais, colorretais, neurogliomas, glioblastomas, carcinomas de tireoide, cervicais, pancreáticos, da 20 próstata, hepatoblastomas e Iinfomas de não-hodgkin em um mamífero compreendendo administrar um mamífero em necessidade de tal tratamento, uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

10

R2 é hidrogênio, halo, ou ciano; R3 é hidrogênio ou halo;

15

contanto que pelo menos um de R1, R2, e R3 seja hidrogênio; e R4 é hidrogênio, halo, ou metila; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

A presente invenção fornece um método de tratar câncer sele

A presente invenção também fornece uma composição farmacêutíca compreendendo um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com um excipiente, veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.

5 um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso da preparação do medicamento. Adicionalmente, esta invenção fornece um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso da preparação do medicamento para o tratamento de câncer em mamíferos, selecionado do grupo que consiste em cânceres de pulmão de célula não-pequena, 10 orofaríngeos, esofagianos, gástricos, melanomas, carcinomas epidermoides da pele, mamários, ovarianos, endometriais, colorretais, neurogliomas, glioblastomas, carcinoma de tireoide, cervical, pancreáticos, da próstata, hepatoblastoma e Iinfoma de cânceres não-hodgkin. Além disso, esta invenção fornece uma composição farmacêutica adaptada para o tratamento de cân15 cer selecionado do grupo consiste em cânceres de pulmão de célula nãopequena, orofaríngeos, esofágicos, gástricos, melanomas, carcinomas epidermoides da pele, mamários, ovarianos, endometriais, colorretais, neurogliomas, glioblastomas, carcinomas de tireoide, cervicais, pancreáticos, de próstata, hepatoblastomas e Iinfomas não-hodgkin compreendendo um 20 composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em combinação que um ou mais excipientes, veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.

Esta invenção também fornece um composto de Fórmula I ou

A presente invenção também fornece compostos da Fórmula:

o

em que:

25

R1 hidrogênio, hidróxi, halo, metila, CrC2 alcóxi, amino, ou metilamino;

R2 é hidrogênio, halo, ou ciano;

R3 é hidrogênio ou halo;

R4 é hidrogênio, halo, ou metila;

contanto que pelo menos dois de R1, R2, R3, e R4 sejam hidrogênio;

R5 é hidrogênio, halo, ou metila; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Descrição Detalhada da Invenção

Os termos químicos gerais usados nas fórmulas acima têm seus significados usuais. Por exemplo, o termo "(CrC2)alcóxi" significa metóxi e etóxi. O termo "halo" significa flúor, cloro, bromo, e iodo.

Será entendido pelo leitor experiente que a maioria ou todos os compostos da presente invenção são capazes de formar sais. Os compostos da presente invenção são aminas, e consequentemente reagem com qual15 quer dos diversos ácidos inorgânicos e orgânicos para formar sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis. Tais sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis e metodologia comum para preparar os mesmos são bem-conhecidos na técnica. Veja, por exemplo, P. Stahl, e outros, HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION E 20 USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2002); S.M. Berge, e outro, "Pharmaceutical Salts, " Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 66, n° 1, Janeiro de 1977.

São preferidos os compostos de Fórmula I em que:

a) R1 é hidrogênio ou metila;

b) R2 é hidrogênio ou halo;

c) R3 é hidrogênio ou halo;

d) R4 é halo;

e) R4 é metila;

f) R4 é hidrogênio;

g) R1 é hidrogênio, R2 é cloro, R3 é hidrogênio, e R4 é hidrogênio;

h) R1 é metila, R2 é hidrogênio, R3 é flúor, e R4 e flúor; e

i) R1 é metila, R2 é hidrogênio, R3 é flúor, e R4 é metila;

Esquemas 10

15

20

25

O versado na técnica apreciará que nem todos os substituientes nos compostos da presente invenção tolerem certas condições de reação empregadas para sintetizar os compostos. Estas porções podem ser introduzidas em um ponto conveniente na síntese, ou podem ser protegidas, e em seguida desprotegidas, quando necessário ou desejado. O versado na técnica apreciará que os grupos de proteção possam ser removidos em qualquer ponto conveniente na síntese dos compostos da presente invenção. São bem-conhecidos na técnica métodos para introduzir e remover grupos de proteção de nitrogênio e oxigênio; veja, por exemplo, Greene e Wuts, Protective Groups in Organic Svnthesis. 3a Ed., John Wiley e Sons, Nova Iorque, Capítulo 7 (1999). Além disso, o versado na técnica apreciará que em muitas circunstâncias, as ordens em que as porções são introduzidas não é crítica. A ordem particular de etapas requerida para produzir os compostos da presente invenção pode depender do composto particular que está sendo sintetizado, o composto de partida, e a Iabilidade relativa das porções substituídas.

Os compostos da presente invenção podem ser preparados realizando-se pelo menos duas variantes descritas abaixo. Nos esquemas abaixo todos os substituintes, a menos que de outro modo indicado, são como previamente definidos e reagentes adquados são bem-conhecidos e apreciados na técnica. No esquema 2, Y é halo e Z é ácido borônico.

Esquema 1 o.

H1N

K„

‘VJ

(D

(2)

Knh

'VJ

Um composto da fórmula (1) é reagido com 2-(amino-etil)-1,3-dihidro-imidazol-ona (2) para fornecer um composto de Fórmula (5) por meio de uma reação de deslocamento nucleofílico. Tais reações são realizadas em solvente adequado, tais como n-butanol, dioxano, A/-metilpirolidin-2-ona (NMP), e similares. Geralmente, as reações são realizadas em temperaturas a cerca de 120 0C a 150 0C usando um banho de óleo ou um reator de micro-ondas. Estequiometria típica para esta reação é baseada no composto de Fórmula (3) e cerca de 2 equivalentes de 2-(amino-etil)-1,3-di-hidroimidazol-ona são usados. Bases de amina, tais como trietil amina, diisopropiIetil amina, e similares, podem ser empregadas.

Esquema 2

o

(3)

(4)

K„

VJ

Um composto da fórmula (3) é reagido com um composto de Fórmula (4) em uma reação Suzuki usando um catalisador de paládio adequado, tal como tetracis(trifenilfosfina)paládio(0), [1,1’10 bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(ll), e similares na presença de uma base, tal como carbonato de sódio, carbonato de potássio, e similares. Tais reações são realizadas em solvente adequado, tal como THF, dioxano, água, e similares. Geralmente, as reações são realizadas em temperatura de cerca de 100 0C a 150 0C usando um banho óleo ou um reator de micro15 ondas.

Em uma etapa opcional, um sal farmaceuticamente aceitável de um composto da presente invenção é formado. A formação de tais sais é bem-conhecida e apreciada na técnica.

Como será facilmente apreciado, compostos de Fórmulas (1) e 20 (3) podem facilmente ser preparado por métodos similares àqueles descritos aqui por procedimentos que são bem-conhecidos e estabelecidos na técnica. Por exemplo, compostos de Fórmula (1) são preparados acoplando-se a um composto de piridinila opcionalmente substituída com um composto de benzotiofenila opcionalmente substituída por método de acoplamento Suzuki, 25 como descrito acima. O adulto Suzuki resultante é boronilado por métodos bem-conhecidos na técnica e e também acoplado a um haleto de pirimidina opcionalmente substituída por meio de métodos de acoplamento Suzuki, como descrito acima. Compostos de Fórmula (3) são preparados por boronilação de um composto de benzotiofenila opcionalmente substituída por métodos bem-conhecidos na técnica seguido pela adição de 2-(amino-etil)-1,3- 5 di-hidro-imidazol-ona (2) ao éster/ácido borônico resultante por meio de substituição aromática nucleofílica. Além disso, é reconhecido que as etapas requeridas para preparar um composto de Fórmula (1) ou (3) podem ser realizadas em qualquer ordem incluindo a reação de um composto parcial de Fórmula (1) ou (3) com um composto de Fórmula (2) e/ou Fórmula (4), tal 10 que a última formação de ligação carbono-carbono realizada, reação de acoplamento, etc, forneça um composto da presente invenção.

A presente invenção é também ilustrada pelos seguintes exemplos e preparações. Estes exemplos e preparações são ilustrativos apenas, e não se destinam a limitar a invenção de modo algum. Os termos usados 15 nos exemplos e preparações têm seus significados normais a menos que de outro modo designado. Os compostos exemplo abaixo foram denominados usando ChemDraw®, Versão 10.

Preparação 1

2-Benzo[ò]tiofen-7-il-4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolano.

Combinar 7-bromo-benzo[b]tiofeno (426 mg, 2 mmols),

bis(pinacolato)diboro (756 mg, 3 mmols), [1,1’bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(ll), complexar com diclorometano (1:1) (81 mg, 0,1 mmol), acetato de potássio (294 mg, 3 mmols) em sulfóxido de dimetila (DMSO) (10 ml_) em um frasco. Borbulhar nitrogênio através da 25 mistura durante 5 minutos. Selar o frasco e aquecer em um banho de óleo a 100 °C, durante 4 horas. Diluira mistura com clorofórmio/isopropanol (3/1). Lavar a solução com cloreto de sódio aquoso saturado. Secar a solução sobre sulfato de sódio. Concentrar a solução a vácuo para um resíduo escuro. Purificar por cromatografia de coluna (hexano para 20 % de acetato de etila 30 em hexano) para fornecer o composto do título (342 mg, 66 %) como um sólido incolor. MS (ES) m/z 261 [M+1]+.

Preparação 2 Ácido benzo[ò]tiofeno-7-borónico.

Combinar 7-bromobenzo[jfc>]tiofeno (300 g, 1,41 mmol) e tri-isopropilborato (403,6 g, 2,15 mmols) em tetra-hidrofurano anidroso (THF) (4000 ml_) em um frasco Morton de 12 L equipado com um agitador mecânico e resfriado sob 5 nitrogênio em um banho de gelo seco/acetona para -70 0C. Adicionar n-butil lítio (1,6 M em hexano, 714 g, 1,68 mmol) gota a gota em uma tal taxa como para manter a temperatura interna menor do que -67,5 0C. Após a adição ser completada, deixar a mistura reacional agitar nesta temperatura durante 1 hora. Remover o banho de resfriamento e lentamente adicionar 4 L de água. 10 Adicionar HCI concentrado (75 ml_) até o pH da solução ficar em torno de pH=2. Deixar a suspensão agitar durante 1 hora. Adicionar NaOH aquoso a 5 N suficiente para ajustar o pH da mistura para cerca de pH=12. Separar as camadas e proteger a camada aquosa. Diluir a camada orgânica com 4 L de éter de metil-terc-butila e extrair com 1 L de NaOH aquoso a 5 N. Separar as 15 camadas. Combinar a camada aquosa com extrato aquoso anterior. Lavar a camada aquosa com adicional éter de metil-terc-butila (4 L). Separar as camadas e transferir as camada aquosas para um frasco de base redonda de 3 gargalos de 12 L equipado com um agitador mecânico. Resfriar a solução para +5 0C com um banho de água gelada. Adicionar HCI concentrado Ien20 tamente até o pH da solução ficar em torno de pH=2. Agitar a mistura durante 30 minutos e filtrar o sólido resultante. Enxaguar o sólido no funil duas vezes com 2 L de água e deixar secar ao ar durante 30 minutos. Colocar o sólido em um forno a vácuo a 50 0C e secar sob vácuo durante a noite. Remover a cor amarela suspendendo-se o sólido secado com 2 L de n-heptano 25 durante 30 minutos. Novamente filtrar o sólido, secar ao ar durante 30 minutos, e secar a vácuo a 40 0C durante a noite para fornecer o composto do título (188,8 g, 75 %) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,86 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,49-7,57 (m, 2H), 7,30 - 7,39 (m, 2H).

Preparação 3

Éster ferc-butílico de ácido (6-flúor-piridin-3-il)-carbânico

Equipar um frasco de base redonda de 3 gargalos de 100 mL com: um agitador magnético, uma manta de aquecimento controlado por termoelemento, um condensador, e uma atmosfera de nitrogênio. Carregar

5-amino-2-flúor-piridina (5 g, 44,6 mmols), THF (50 ml_), 4- dimetilaminopiridina (549 mg, 4,5 mmols, 10 mol %), e diterc-butil-dicarbonato (10,7 g, 49 mmols). Aquecer a mistura para 50 0C durante 4 ho5 ras. Resfriar e concentrar a vácuo. Dissolver o resíduo em diclorometano/água e filtrar. Tranferir o filtrado para um funil separador e separar a camada de diclorometano. Secar o diclorometano sobre sulfato de sódio, filtrar e concentrar em vácuo. Cromatografar em sílica eluindo com uma mistura isocrática de 10% de isopropanol/90 % de diclorometano para fornecer o 10 composto do título (1,64 g, 17 %) como um óleo transparente castanho, que se solidifica em secagem a vácuo. MS (EI) m/z 261 M+.

Preparação 4

Éster terc-butílico de ácido (2-flúor-piridin-3-il)-carbânico

Preparar o composto do título essencialmente de acordo com a preparação de éster terc-butílico de ácido (6-flúor-piridin-3-il)-carbânico usando o material de partida apropriado. GCMS (EI) m/z 212 M+.

Preparação 5

A/-(4-lodo-piridin-3-il)-2,2-dimetil-propionamida.

Equipar um frasco de base redonda de 3 gargalos de 250 mL com um agitador magnético, um termoelemento, um banho de gelo seco/acetona, uma atmosfera de nitrogênio, e um funil de adição. Carregar 2,2- dimetil-A/-piridin-3-il-propionamida (3,0 g, 16,8 mmols), éter dietílico (67 mL), tetrametileno de diamina (4,68 g, 6,08 mL, 40,3 mmols). Resfriar a reação a 78°C. Adicionar lentamente por meio de uma seringa de vidro π-butil lítio (2,5 M de solução em hexano, 16,2 mL, 40,3 mmols) durante 10 minutos. Deixar a reação aquecer para -13 0C durante 2 horas. Resfriar a reação para -78°C. Adicionar uma solução de iodo (8,5 g, 33,6 mmols em 20 mL THF) à reação por meio de um funil de adição e misturar 2,5 horas a -68°C. Finalizar a reação pela adição de solução aquosa saturada de NH4CI (40 mL). Extrair com acetato de etila (100 mL) e descartar a fase aquosa. Lavar a camada orgânica com uma solução de tiossulfato de sódio aquosa saturada (100 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado. Secar a fase orgânica sobre sulfato de sódio e filtrar. Concentrar a vácuo para fornecer óleo marrom. Cromatografar em sílica (80 g) eluindo com um gradiente de 100 % de diclorometano para 70 % de acetato de etila /30 % de diclorometano para fornecer o composto do título (1,19 g, 23 %). MS (ES) m/z 305 [M+1]+ .

Preparar os seguintes compostos essencialmente de acordo com a preparação de A/-(4-iodo-piridin-3-il)-2,2-dimetil-propionamida usando o material de partida apropriado.__

Prep. Nome do Composto Dados Físicos 6 Éster terc-butílico de ácido (6-flúor-4-iodo- MS (ES) m/z 339 piridin-3-il)-carbânico ΓΜ+1Γ 7 Éster terc-butílico de ácido (2-flúor-4-iodo- GC-MS (EI) m/z piridin-3-il)-carbânico 338 M+ Preparação 8

3-metoximetóxi-piridina Dissolver 3-hidroxipiridina (7 g, 74 mmols) em THF (20,6 mL) e

dimetilformamida (34,4 mL) e resfriar para -15 °C. Adicionar terc-butóxido de potássio (8,3 g, 74 mmols) e agitar a -15 0C durante 30 minutos. Tratar a mistura com éter clorometilmetílico (5,81 mL, 77 mmols) gota a gota durante 40 minutos. Após a adição ser completada, agitar a mistura a -15°C durante 15 mais uma hora. Remover o banho de gelo e deixar a mistura aquecer lentamente para 15°C. Verter a mistura em cloreto de sódio aquoso saturado e agitar vigorosamente durante 10 minutos. Extrair a solução resultante com três porções de acetato de etila. Combinar os extratos orgânicos e lavar com cloreto de sódio aquoso saturado, secar sob sulfato de sódio, filtrar, e con20 centrar em vácuo. Usar o produto resultante sem outra purificação. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 8,42 (d, J = 3 Hz, 1H), 8,28 (d, J = 5 Hz, 1H), 7,37 - 7,42 (m, 1H), 7,21 - 7,27 (m, 1H), 5,20 (s, 2H), 3,49 (s, 3H).

Preparação 9

2-Cloro-5-metoximetóxi-piridina.

Suspender hidreto de sódio (3,7 g, 93 mmols) em DMF (50 mL)

e adicionar uma solução de 2-cloro-5-hidroxipiridina (10 g, 77 mmols) em DMF (20 mL) gota a gota durante 45 minutos. Agitar a solução resultante em temperatura ambiente durante 1,5 horas. Adicionar éter clorometilmetílico (6,6 mL, 86 mmols) gota a gota durante 45 minutos. Agitar a mistura resultante em temperatura ambiente durante 12 horas. Diluir a mistura com acetato de etila, água, e cloreto de sódio aquoso saturado. Isolar a solução 5 orgânica e lavar com três porções de água, uma porção de cloreto de sódio aquoso saturado, secar sobre sulfato de sódio, filtrar, e concentrar em vácuo. Purificar o produto bruto por cromatografia de coluna sobre 330 g de sílica-gel eluindo com um gradiente de hexano para 30 % de acetato de etila em hexano durante 20 minutos e em seguida manter a 30 % de acetato de 10 etila em hexano durante 30 minutos para fornecer o composto do título (10,8 g, 81 %) como um óleo claro. MS (ES) m/z 174,0 [M+1]+.

Preparar os seguintes intermediários com métodos similares àqueles usados

para 2-c oro-5-metoximetóxi-piridina. Prep Nome do Composto RMN 2-flúor-5-metoximetóxi-piridina 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 3,48 (s, 3H), 5,15 (s, 2H), 6,85 (dd, J = 3,6 Hz, J = 8,8 Hz, 1H), 7,47 (m, 1 H), 7,96 (m, 1H) Preparação 11

2-Cloro-4-iodo-5-metoximetóxi-piridina.

Adicionar terc-butil lítio (1,7 M em pentano, 72 mL, 123 mmols) a uma solução de 2-cloro-5-metoximetóxi-piridina (10,8 g, 62 mmols) em THF (300 mL) a -70 0C gota a gota durante 10 minutos. Agitar a solução resultante a -70 0C durante 30 minutos. Adicionar uma solução de iodo (23 g, 92 20 mmols) em THF (150 mL) gota a gota durante 30 minutos. Agitar a solução resultante a -70 0C durante 1 hora. Remover o banho de gelo e deixar a reação aquecer para a temperatura ambiente. Diluir a mistura com acetato de etila e água e isolar a fase. Extrair a fase aquosa com duas porções de acetato de etila. Combinar o extrato orgânico e lavar com duas porções de tios25 sulfato de sódio aquoso, uma porção de água, uma porção de cloreto de sódio aquoso saturado, secar sob sulfato de sódio, filtrar e concentrar em vácuo. Triturar o sólido resultante com hexano. Coletar o sólido por filtração a vácuo e Iavaro sólido com hexano. Secaro sólido sob vácuo para fornecer o composto do título (10,8 g, 58 %) como um sólido marrom. 1H RMN (400 MHz, DMSO-Gi6) δ 8,08 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 5,43 (s, 2H), 3,40 (s, 3H).

Preparar o seguinte intermediário usando essencialmente o procedimento

para 2-c oro-4-iodo-5-metoximetóxi-piridina. Prep Nome do Composto RMN 12 2-flúor-4-iodo-5-metoximetóxi- 1H RMN (400 MHz, CDCI3) piridina δ 3,53 (s, 3H), 5,23 (s, 2H), 7,39 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 7,96 (d, J= 1,6 Hz, 1H) Preparação 13

6-Cloro-4-iodo-piridin-3-ol.

Tratar uma solução de 2-cloro-4-iodo-5-metoximetóxi-piridina 10 (8,1 g, 27 mmols) em THF (40 mL) com 3 N HCI (61 mL). Aquecer a mistura resultante para 60 0C durante 3 horas. Resfriar a mistura para temperatura ambiente e ajustar o pH para 7 pela adição lenta de solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada. Extrair a mistura com três porções de acetato de etila. Combinar o extrato orgânico e secar sob sulfato de sódio, filtrar, e con15 centrar em vácuo para fornecer o composto do título (6,8 g, 98 %) como um sólido marrom usado sem outra purificação. 1H RMN (400 MHz, DMSO- c/6) δ

11,04 (s, 1H), 7,81-7,87 (m, 2H).

Preparar o seguinte intermediário usando essencialmente o procedimento para 6-cloro-4-iodo-piridin-3-ol.__

Prep. Nome do Composto MS (ES) [M+1f 14 6-flúor-4-iodo-piridin-3-ol 240 Preparação 15

2-Cloro-5-etóxi-4-iodo-piridina.

Tratar uma solução de 6-cloro-4-iodo-piridin-3-ol (4,9 g, 19 mmols) e carbonato de potássio (8,0 g, 58 mmols) em dimetilformamida (50 mL) com iodeto de etila (4,7 mL, 58 mmols). Aquecer a 60 0C durante 3 horas. Resfriar a mistura para a temperatura ambiente e filtrar. Diluir a mistura com acetato de etila e lavar com uma solução de ácido cítrico aquoso a 10%. Combinar as soluções aquosas e extrair com duas porções adicionais de acetato de etila. Combinaro extrato orgânico e Iavarcom três porções de 5 água, uma porção de cloreto de sódio aquoso saturado, secar sobre sulfato de sódio, filtrar, e concentrar em vácuo para fornecer o composto do título (5,1 g, 93 %) como um sólido marrom usado sem outra purificação. 1H RMN (400 MHz, DMSO- cfe) δ 8,00 (s, 1H), 7,93 (s, 1H), 4,18 (q, J = 7 Hz, 2H), 1,35 (t, J = 7 Hz, 3H).

Preparação 16

4-Benzorb1tiofen-7-il-2-cloro-piridina.

Em um frasco, combinar 7-bromo-benzo[b]tiofeno (1,7 g, 12 mmols), 2-cloro-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridina (1,6 g, 7 mmols), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(ll), complexar com 15 diclorometano (1:1) (285 mg, 0,3 mmol), 2-(diferc-butilfosfino)bifenila (63 mg, 0,2 mmol), carbonato de sódio (2 M, 8 mL, 16 mmols) e THF (20 mL). Aquecer a mistura a 100°C durante 3 horas. Diluir a mistura com clorofórmio/isopropanol (3/1). Lavar a solução com cloreto de sódio aquoso saturado. Secar sobre sulfato de sódio. Concentrar a solução em vácuo para um 20 resíduo escuro. Purificar por cromatografia de coluna (diclorometano para 20 %de THF em diclorometano) para fornecer o composto do título (1,14 g, 66 %) como um sólido amarelo. MS (ES) m/z 246 [M+1]+.

Preparar o seguinte composto por métodos similares àqueles usados para 4-

Denzo[ò tiofen-7-il-2-cloro-piridina usando DMSO. Prep Nome do Composto MS (ES) Comentários [M+1]+ 17 4-Benzo[/b]tiofen-7-il-piridina 212 Aquecer a 100 0C catalisador Pd(PPh3)4 Preparação 18

4-Benzo[jb1tiofen-7-il-2-flúor-5-metil-piridina.

Em um frasco, combinar 2-flúor-4-iodo-5-metil-piridina (355 mg, 1,5 mmol), 2-benzo[jfc>]tiofen-7-il-4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolano (282 mg, 1,8 mmol), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(ll), complexar com diclorometano (1:1) (61 mg, 0,07 mmol), 2-(diterc-butilfosfino)bifenila (13 mg, 0,04 mmol), carbonato de sódio (2 M, 1,5 mL, 3 mmols) e THF (10 5 mL). Aquecer a mistura a 100°C durante 3 horas em um banho de óleo. Diluir a mistura com clorofórmio/isopropanol (3/1). Lavar a solução com cloreto de sódio aquoso saturado. Secar sob sulfato de sódio. Concentrar em vácuo para um resíduo escuro. Purificar por cromatografia de coluna (20 % de acetato de etila em hexano) para fornecer o composto do título (300 mg, 82 %) 10 como óleo amarelo. MS (ES) m/z 244 [M+1]+.

Preparar os seguintes intermediários essencialmente de acordo com a preparação para 4-benzo[ò]tiofen-7-il-2-flúor-5-metil-piridina usando o material

de partid a apropriado. Prep Nome do Composto Dados ComentᬠFísicos rios MS (ES) m/z [M+1]+ 19 Éster terc-butílico de ácido (4- 345 N2 atmos¬ Benzo[b]tiofen-7-il-6-flúor-piridin-3-il)- fera carbânico 4-Benzo[£>]tiofen-7-il-2-flúor-piridin-3- 345 N2 atmos¬ ilamina fera 21 4-Benzo[<b]tiofen-7-il-2-cloro-5-etóxi- 290 N2 atmos¬ piridina fera 22 Éster terc-butílico de ácido (4- 345 DesoxigeBenzo[jb]tiofen-7-il-6-flúor-piridin-3-il)- nado (N2) carbânico 23 Éster terc-butílico de ácido (4- 325 DesoxigeBenzo[b]tiofen-7-il-piridin-3-il)-metil- nado (N2) carbânico Preparação 24 4-Benzoíib1tiofen-7-il-3-metoximetóxi-pihdina·

Solução A: Tratar uma solução de 3-metoximetóxi-piridina (2,5 g, 18 mmols) em éter dietílico (90 mL) a -70 0C com terc-butil lítio (1,7 M em pentano, 10 mL, 18 mmols) gota a gota durante 10 minutos. Agitar a mistura a -70 0C durante 40 minutos e adicionar uma solução de borato de triisopropila (5 mL, 22 mmols) em THF (10 mL) gota a gota durante 5 minutos. Agitar a mistura a -70 0C durante uma hora e em seguida remover o banho de gelo 5 e deixar a mistura aquecer lentamente para a temperatura ambiente.

Solução B: Trataruma solução de 7-bromo-benzo[/?]tiofeno (3,8 g, 18 mmols), 2-(diterc-butilfosfino)bifenila (268 mg, 0,90 mmol), [1,1’bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(ll), complexar com diclorometano (1:1) (732 mg, 0,90 mmol) em 1,4-dioxano (30 mL) com 2 M de carbonato de 10 sódio aquoso (72 mL, 36 mmols). Assim que a solução A atingir a temperatura ambiente, aquecer a solução para 80 °C.

Tratar a solução B com solução A, gota a gota durante 10 minutos. Aquecer a solução combinada para 85 0C durante 5 horas. Resfriar a mistura para a temperatura ambiente e diluir com acetato de etila e água. 15 Lavar a fase orgânica com água e cloreto de sódio aquoso saturado, secar sob sulfato de sódio, filtrar, e concentrar em vácuo. Purificar o produto bruto por cromatografia de coluna em 120 g de sílica-gel eluindo com um gradiente de diclorometano para acetato de etila para fornecer o composto do título (3,8 g) contendo algum 3-metoximetóxi-piridina de partida. Usar o produto 20 sem outra purificação. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 8,68 (s, 1H), 8,42 (d, J =

4 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,33 - 7,50 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 3,36 (s, 3H).

Preparação 25

2-Cloro-4-f7-(2-cloro-piridin-4-il)-benzo[ib1tiofen-2-il1-pirimidina·

Em um frasco de base redonda de 500 mL, resfriar uma solução

de 4-benzo[ò]tiofen-7-il-2-cloro-piridina (13 g, 53,1 mmols) e triisopropilborato (20 g, 106 mmols) em THF (150 mL) para -70 ° sob nitrogênio. À solução resfriada, adicionar diisopropilamida de lítio (2 M em THF, 53 mL, 106 mmols) gradualmente durante um período de 30 minutos. Agitar a mistura 30 continuamente durante mais uma hora no banho de resfriamento. Gradualmente transferir a mistura para uma solução de refluxo de 2,4-dicloropirimidina (12 g, 106 mmols), [1,1 ’-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(ll), complexar com diclorometano (1:1) (2,2 g, 53 mmols) e carbonato de sódio (35 mL, 3 M1 106 mmols) em THF (150 mL) durante um período de 30 minutos. Refluxar durante mais uma hora. Resfriar a mistura para temperatura ambiente e diluir com 500 mL de cloro5 fórmio/isopropanol (3/1) e 200 mL de água. Coletar o sólido resultante por filtração e reservar a mistura de clorofórmio/isopropanol/água. Lavar o sólido com diclorometano e secá-lo sob vácuo. Separar as camadas da mistura de clorofórmio/isopropanol/água. Lavar a fase orgânica com água e cloreto de sódio aquoso saturado, secar sobre sulfato de sódio e concentrar em vácuo 10 para fornecer um resíduo marrom. Purificar o resíduo por cromatografia de coluna instantânea (10 % de metanol em diclorometano) para fornecer o produto adicional. Combinar as duas porções para fornecer o composto do título (13 g, 68 %) MS (ES) m/z 358 [M+1]+.

Preparar os seguintes intermediários essencialmente de acordo com a preparação para 2-cloro-4-[7-(2-cloro-piridin-4-il)-benzo[b]tiofen-2-il]-pirimidina usando o material de partida apropriado.___

Prep. Nome do Composto Dados ComentᬠFísicos rios MS (ES) m/z [M+1]+ 26 2-Cloro-5-flúor-4-(7-piridin-4-il- 342 benzo[b]tiofen-2-il)-pirimidina 27 2-Cloro-5-metil-4-(7-piridin-4-il- 338 benzo[ò]tiofen-2-il)-pirimidina 28 2-Cloro-5-flúor-4-[7-(2-flúor-5-metil- 374 piridin-4-il)-benzo[/b]tiofen-2-il]-pirimidina 29 2-Cloro-4-[7-(2-flúor-5-metil-piridin-4-il)- 370 benzo[ò]tiofen-2-il]-5-metil-pirimidina 2-Cloro-4-[7-(2-flúor-5-metil-piridin-4-il)- 356 Aditivo: 2- benzo[b]tiofen-2-il]-pirimidina (d\-tercbuti Ifosfino)bifenila Continuação...

Prep. Nome do Composto Dados ComentᬠFísicos rios MS (ES) m/z [M+1]+ 31 2-Cloro-5-flúor-4-[7-(3-metoximetóxi- 402 piridin-4-il)-benzo[ò]tiofen-2-il]-pirimidina 32 2-Cloro-4-[7-(2-cloro-5-etóxi-piridin-4-il)- 420 benzo[ò]tiofen-2-il]-5-flúor-pirimidina 33 Éster terc-butílico de ácido {4-[2-(2- 457 Cloro-pirimidin-4-il)-benzo[ifc»]tiofen-7-il]-6- flúor-piridin-3-il}-carbânico 34 4-(7-Bromo-benzo[ò]tiofen-2-il)-2-cloro-5- 343 flúor-pirimidina 2,5-Dicloro-4-[7-(2-flúor-5-metil-piridin-4- 390 Aditivo: 2- il)-benzo[6]tiofen-2-il]-pirimidina (di-tercbutilfosfino)bifenila 36 4-(7-Bromo-benzo[ô]tiofen-2-il)-2-cloro-5- 361 cloro-pirimidina 37 4-(7-Bromo-benzo[ò]tiofen-2-il)-2-cloro-5- 340 GCMS (EI) metil-pirimidina M+ 38 4-(7-Bromo-benzo[ô]tiofen-2-il)-2-cloro- 327 pirimidina Preparação 39

4-f2-(2-Cloro-5-flúor-pirimidin-4-i[)-benzoíib1tiofen-7-in-pirídin-3-ol·

Tratar uma solução de 2-cloro-5-flúor-4-[7-(3-metoximetóxi5 piridin-4-il)-benzo[ò]tiofen-2-il]-pirimidina (4 g, 10 mmols) em THF (10 mL) com 5 N de HCI (3 mL). Agitar a mistura em temperatura ambiente durante 6 horas. Concentrar a reação em vácuo e diluir com bicarboneto de sódio aquoso saturado e diclorometano. Separar as camadas e filtrar cada camada. Lavar o sólido da fase orgânica com diclorometano para fornecer o composto do título (300 mg) como um sólido castanho. Lavar o sólido da camada aquosa com água e secar para fornecer o composto do título (300 mg) como um sólido castanho. Combinar os sólidos para fornecer o composto do título (600 mg, 17 %) como um sólido castanho. MS (ES) m/z 358 [M+1]+.

Preparação 40

2-Cloro-4-í7-(3-etóxi-piridin-4-in-benzoíb1tiofen-2-il1-5-flúor-pirimidina.

Tratar uma solução de 4-[2-(2-cloro-5-flúor-pirimidin-4-il)benzo[b]tiofen-7-il]-piridin-3-ol (100 mg, 0,28 mmol) e carbonato de césio (100 mg, 0,28 mmol) em dimetilformamida (1 mL) com iodeto de etila (44 10 mg, 0,28 mmol). Agitar a mistura em temperatura ambiente durante 12 horas. Diluir a mistura com acetato de etila e lavar a solução com três porções de água, uma porção de cloreto de sódio aquoso saturado, secar sob sulfato de sódio, filtrar, e concentrar em vácuo. Purificar o produto bruto por cromatografia de coluna em 12 g de sílica-gel eluindo com um gradiente de diclo15 rometano para acetato de etila para fornecer o composto do título (48 mg, 45 %) como um sólido marrom. MS (ES) m/z 386 [M+1]+.

Preparação 41

2-Cloro-5-flúor-4-f7-(3-metóxi-piridin-4-il)-benzoífc1tiofen-2-il1-pirimidina.

Preparar o composto do título essencialmente de acordo com a preparação de 2-cloro-4-[7-(3-etóxi-piridin-4-il)-benzo[ib]tiofen-2-il]-5-flúorpirimidina usando o material de partida apropriado. MS (ES) m/z 372 [M+1]+ Preparação 42

1-{2-f4-(7-Bromo-benzoíò1tiofen-2-il)-5-flúor-pirimidin-2-ilamino1-etil)

imidazolidin-2-ona.

Combinar 1-(2-aminoetil)-2-imidazolona (100 g, 774 mmols) com

4-(7-bromo-benzo[jb]tiofen-2-il)-2-cloro-5-flúor-pirimidina (90 g, 262 mmols) em 1,4-dioxano (650 mL) e aquecer para 90 0C com agitador sob nitrogênio durante 3 horas. Resfriar a reação para a temperatura ambiente. Filtrar e lavar o sólido com água (3 x 500 mL) e éter dietílico (500 mL). Secar em vá30 cuo a 50°C para fornecer o composto do título (59,2 g, 52 %) como um sólido amarelo. MS (ES) m/z 436 [M+1]+.

Preparar os seguintes intermediários essencialmente de acordo com a preparação de 1-{2-[4-(7-bromo-benzo[ib]tiofen-2-il)-5-flúor-pirimidin-2-

ilamino]-etil}-imidazolidin-2-ona usando o material de partida apropriado.

Prep. Nome do Composto Dados Fí¬ sicos MS (ES) m/z [M+1]+ 43 1-{2-[4-(7-Bromo-benzo[ifc>]tiofen-2-il)-5-cloro- 454 pirimidin-2-ilamino]-etil}-imidazolidin-2-ona 44 1-{2-[4-(7-Bromo-benzo[ò]tiofen-2-il)-5-metil- 432 pirimídin-2-ilaminol-etil}-imidazolidin-2-ona 45 1-{2-[4-(7-Bromo-benzo[/b]tiofen-2-il)-pirimidin-2- 420 ilamino]-etil}-imidazolidin-2-ona Preparação 46

5-Bromometil-2-flúor-4-iodo-piridina.

Em um frasco, combinar 2-flúor-4-iodo-picolina (10,0 g, 42,19

mmols), A/-bromosucinimida (9,76 g, 54,85 mmols), 2, 2’azobisisobutironitrila (3,46 g, 21,10 mmols) e secar CCI4 (100 mL). Aquecer a 70°C sob nitrogênio durante 16 horas. Resfriar para temperatura ambiente. Diluir com diclorometano e lavar com água e cloreto de sódio aquoso satu10 rado. Separar as camadas e secar a camada orgânica sobre sulfato de magnésio. Concentrar em vácuo para fornecer produto bruto. Purificar por cromatografia de coluna (1 % a 15 % de acetato de etila em hexano) para fornecer o composto do título (8,27 g, 62 %). MS (EI) m/z 315 M+.

Preparação 47

1-(2-(5-flúor-4-f7-(4.4.5.5-tetrametil-H.3.21dioxaborolan-2-il)-benzof£>1tiofen-2- in-pirimidin-2-ilamino)-eti0-imidazolidin-2-ona.

Combinar 1-{2-[4-(7-bromo-benzo[b]tiofen-2-il)-5-flúor-pirimidin2-ilamino]-etil}-imidazolidin-2-ona (5,5 g, 12,6 mmols), bis(pinacolato)diboro (3,84 g, 15,3 mmols), (1,1’-bis(difenilfosfino)-ferroceno)dicloropaládio(ll) (1,0 g, 1,3 mmols), acetato de potássio (2,5 g, 25 mmols) em DMSO (80 mL) em um frasco. Borbulhar nitrogênio através da mistura durante 10 minutos. Selar o frasco e e colocá-lo em um banho de óleo para aquecer a 85°C durante a noite. Diluir a mistura com clorofórmio/álcool isopropílico (3/1). Lavar a solução com cloreto de sódio aquoso saturado. Secá-lo sob sulfato de sódio. Concentrar a solução em vácuo para um resíduo escuro. Purificar o resíduo 5 por cromatografia de coluna (hexano 20 % de acetato de etila em hexano -» 10 % de metanol em diclorometano) para fornecer o produto como um sólido marrom (5 g, 82 %). MS (ES) m/z 484 [M+1]+.

Preparação 48

(6-flúor-4-iodo-piridin-3-il)-metanol Combinar 5-bromometil-2-flúor-4-iodo-piridina (0,9 g, 2,85

mmols), nitrometano (15 mL, 278 mmols), tetrafluoroborato de prata (721 mg, 3,7 mmols), e dimetilformamida (5 mL) em um frasco de base redonda. Agitar a mistura durante a noite em temperatura ambiente. Adicionar carbonato de sódio (1,81 g, 17,1 mmols) e metanol (10 mL) na mistura. Agitar a 15 temperatura ambiente durante mais 4 horas. Diluir a mistura reacional com clorofórmio, e lavar com água e cloreto de sódio aquoso saturado. Separar a camada orgânica da camada aquosa e secar sobre MgSO4. Após filtragem, evaporar o solvente orgânico em vácuo para fornecer o produto bruto. Purificar o bruto com cromatografia de coluna instantânea (eluído com 10 % de 20 metanol em diclorometano) para fornecer o desejado produto (0,6 g, 83 %). MS (ES) m/z 254 [M+1]\

Preparação 49

2-flúor-5-fluorometil-4-iodo-piridina.

Adicionar trifluoreto de dietilaminossúlfur (892 mg, 4 mmols) gota 25 a gota para um solução de (6-flúor-4-iodo-piridin-3-il)-metanol em diclorometano (25 mL) em um frasco de base redonda sob nitrogênio, e em seguida etanol (0,3 mL) a 0 a 5°C. Agitar a mistura durante 3 horas. Verter a mistura reacional em solução de bicarbonato de sódio saturado. Abstrair o produto into clorofórmio, e lavar com água e cloreto de sódio aquoso saturado. Sepa30 rar a camada orgânica da camada aquosa e secar sobre MgSO4. Após filtragem, evaporar o solvente orgânico em vácuo para fornecer a produto bruto. Purificar o bruto com cromatografia de coluna instantânea (10 % de metanol em diclorometano) para fornecer o composto do título (0,32 g, 53 %). MS (ES) m/z 256 [M+1]+.

Exemplos Exemplo 1

1-(2-í~4-f7-(2-Cloro-piridin-4-il)-benzofò1tiofen-2-illpirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona.

Combinar 2-cloro-4-[7-(2-cloro-piridin-4-il)-benzo[b]tiofen-2-il]-pirimidina (9 g, 25,1 mmols) e 2-(amino-etil)-1,3-di-hidro-imidazol-ona (6,4 g, 50,2 mmols) em n-butanol (200 mL) em um vaso de pressão. Aquecer a mistura em um 10 banho de óleo a 120°C durante 5 horas. Diluir a mistura com clorofórmio/isopropanol (3/1). Lavar a solução com cloreto de sódio aquoso saturado. Secá-lo sobre sulfato de sódio. Concentrar a solução em vácuo para um resíduo escuro. Purificar por cromatografia de coluna (diclorometano para 10 % de metanol em diclorometano) para fornecer o composto do título (9 g, 93 15 %) como um sólido amarelo. MS (ES) m/z 451 [M+1]+.

Preparar os seguintes exemplos essencialmente de acordo com a preparação de 1 -(2-{4-[7-(2-cloro-piridin-4-il)-benzo[b]tiofen-2-il]pirimidin-2-ilamino}etil)-imidazolidin-2-ona usando o material de partida apropriado.

o

N

Cl Ex Nome do Com¬ Estrutura Dados Comentários posto Físicos MS (ES) m/z [M+1]+ 2 1-(2-{5-flúor-4-[7- O 467 Microonda, (2-flúor-5- H.c^J\ F 1,4-dioxanometilpiridin-4-il)- XN F NMP benzo[b]tiofen-2- 120 0C il]-pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidi n-2-ona 3 1-(2-{4-[7-(2- O 463 Microonda, flúor-5- OCK5 1,4-dioxanometilpiridin-4-il)- H}CJ. h^c NMP benzo[ô]tiofen-2- N^^F 120 0C il]-5- metilpirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidi n-2-ona 4 1-(2-{4-[7-(2- O 449 Aditivo: Trieflúor-5- H til amina - 3 metilpiridin-4-il)- equivalentes benzo[ò]tiofen-2- il]pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin2-ona 1-{2-[5-Metil-4- O 431 Microonda, (7-piridin-4-il- rrv7-< NMP benzo[ô]tiofen-2- IJsyV" 120 0C il)pirimidin-2- I H?C ilamino]etil}imidazolidin2-ona Ex Nome do Com¬ Estrutura Dados Comentários posto Físicos MS (ES) m/z [M+1]+ 6 1 -(2-{5-Cloro-4- O 483 Aditivo: Trie[7-(2-f I úor-5- JJ til amina - 3 metilpiridin-4- N equivalentes il)benzo[ò]tiofen- C1 2-il]-pirimidin-2- XN F ilamino}etil)imidazolidi n-2-ona 7 1-{2-[5-flúor-4-(7- O 435 Micro¬ piridin-4-il- JJ ondas, benzo[ò]tiofen-2- Λα,·=! NMP il)pirimidin-2- IXXXn 120 0C ilamino]- XN etil}imidazolidin2-ona 8 1 -(2-{4-[7-(3- 0 479 Etóxipiridin-4-il)- ti) ' benzo[£>]tiofen-2- il]-5- fluoropirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidi n-2-ona 9 1-(2-(5-flúor-4-(7- 0 451 (3-hidroxipiridin- H° 1 F 4- il)benzo[b]tiofen2-il)pirimidin-2- ilamino)etil)imidazolidi n-2-ona Ex Nome do Com¬ Estrutura Dados Comentários posto Físicos MS (ES) m/z [M+1]+ 1-(2-{4-[7-(2- O 513 Cloro-5- F etóxipiridin-4-il)benzo[jfc>]tiofen-2- il]-5- fluoropirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin2-ona 11 1-(2-{5-flúor-4-[7- H X- 465 (3-metóxipiridin- KVA /N=^ 4-il)- I /---\\ //N benzo[b]tiofen-2- H3Cs y s / il]pirimidin-2- O I F ilamino}etil)imidazolidin2-ona Exemplo 12

1-(2-(5-Cloro-4-(7-(piridÍn-4-il)benzoíib1tiofen-2-il)pirimidin-2-

ilamíno)etiDimidazolidin-2-ona.

Combinar 1-{2-[4-(7-bromo-benzo[ò]tiofen-2-il)-5-cloro-pirimidin

2-ilamino]-etil}-imidazolidin-2-ona (81,6 mg, 0,18 mmol), ácido piridina-4- borônico (36,8 mg, 0,3 mmol), e bicarbonato de sódio (18,1 mg, 0,2 mmol) em um mistura de água (1 mL) e DMSO (1 mL). Adicionar tetracis(trifenilfosfina)paládio(0) (10,4 mg, 0,009 mmol). Irradiar a mistura a 150°C durante 15 minutos com agitação magnética. Verter uma mistura reacional crua sobre uma coluna de permuta de cátion forte (SCX) (10g). Eluir o produto desejado com 2 N de amônia em metanol (40 mL) e concentrar sob pressão reduzida. Purificar por cromatografia de fase reversa (30 a 90 % de 5 gradiente a 80 mL/minutos durante 11 minutos em uma coluna de 30 x 100 mm, 5 mm, C18 MS Xterra®, Solvente A: água com 0,01 M bicarbonato de amônio, Solvente B: acetonitrila) para fornecer o composto do título (20,4 mg, 25,1 %). MS (ES) m/z 451 [M+1]+.

Exemplo 13

1-(2-{5-Cloro-4-f7-(5-cloro-2-fluoropiridin-4-il)-benzo[fo1tiofen-2-il1pirimidin-2- ilamino)etil)imidazolidin-2-ona.

Em um frasconete de micro-ondas, combinar 1-{2-[4-(7-bromobenzo[i»]tiofen-2-il)-5-cloro-pirimidin-2-ilamino]-etil}-imidazolidin-2-ona (500 mg, 1,1 mmol), ácido 5-cloro-2-fluoropiridina-4-borônico (578 mg, 3,3 mmols), [1,1 ’-bis(difenilfosfino) ferroceno]dicloropaládio(ll), complexar com diclorometano (1:1) (90 mg, 0,11 mmol), 2-(di-terc-butilfosfino)bifenila (20 mg, 0,066 mmol) e carbonato de sódio (350 mg, 3,3 mmols) em THF (3 mL) e água (1,5 mL). Borbulhar nitrogênio através da mistura durante 5 minutos. Aquecer a mistura para 100°C durante 10 min. Concentrar a camada orgânica até a secura em vácuo. Suspender o sólido resultante em diclorometano/metanol e purificar por cromatografia de coluna (1 % de 2 N de solução de amônia/metanol em diclorometano para 10 % de 2 N de solução de amônia/metanol em diclorometano) para fornecer o composto do título. Para outra purificação, dissolver o produto em DMSO e purificar por cromatografia de coluna de fase reversa (50 % de acetonitrila em água (com 0,03 % de

o

Cl HCI) para 95 % de acetonitrila em água (com 0,03 % de HCI) para fornecer o composto do título (146 mg, 26 %). MS (ES) m/z 503 [M+1]+.

Preparar os seguintes exemplos essencialmente de acordo com a preparação de 1 -(2-{5-cloro-4-[7-(5-cloro-2-fluoropiridin-4-il)benzo[jb]tiofen-2-il]

pirimidin-2-ilamino}etil)imidazolidin-2-ona usando o material de partida apro

priado.

Ex Nome do Com¬ Estrutura Dados Comentários posto Físicos MS (ES) m/z [M+1]+ 14 1-(2-{4-[7-(2- O 469 Cloro-piridin-4- U il)- N benzo[b]tiofen-2- ifVW=< il]-5- IXsvVn fluoropirimidin-2- N^Tl ilamino}etil)imidazolid in-2-ona 1 -(2-{5-Cloro-4- O 486 [7-(2-cloro- JJ piridin-4- ,N il)benzo[ò]tiofen- C1 2-il]pirimidin-2- N Cl ilamino}etil)imidazolid in-2-ona 16 1 -(2-{4- [7-(5- O 487 Purificar por Cloro-2-flúor- JJ fase reversa, piridin-4-il)- CC/M CH3CN e água benzo[<b]tiofen-2- il]-5- fluoropirimidin-2- ilamino}etil)imidazolid in-2-ona Tl Ex Nome do Com¬ Estrutura Dados Comentários posto Físicos MS (ES) m/z [M+1]+ 17 1-(2-{4-[7-(2- O 487 Purificar por Cloro-5- Jl fase reversa, fluoropiridin-4-il)- fWV“< CH3CN e água benzo[ò]tiofen-2- IXvV il]-5- XN Cl fluoropirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin2-ona 18 1-(2-{4-[7-(3- O 469 Purificar por Cloro-piridin-4- ü fase reversa, il)- 8^^* N CH3CN e água benzo[ô]tiofen-2- rvW-< il]-5- °Ύι) F fluoropirimidin-2- ilamino}etil)imidazolid in-2-ona 19 1 -(2-{5-flúor-4- O 449 Purificar em [7-(3-metilpiridin- \Q~yj' fase reversa, 4-il)- h,c*Jv F CH3CN e água benzo[b]tiofen-2- il]pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolid in-2-ona 1-(2-{4-[7-(5- 0 483 Purificar em Cloro-2- 1 fase reversa, fluoropiridin-4-il)- γ CH3CN e água benzo[jb]tiofen-2- fVvK il]-5- CXv-V* metilpirimidin-2- ciKiV H,c ilamino}etil)imidazolid in-2-ona Ex Nome do Com¬ Estrutura Dados Comentários posto Físicos MS (ES) m/z [M+1]+ 21 1-(2-{4-[7-(2,5- O 503 Dicloropiridin-4- ιΛγ^ν=< il)- TM Cl benzo[ò]tiofen-2- il]-5- fluoropirimidin-2- ilamino}etil)imidazolid in-2-ona 22 1 -(2-{5-flúor-4- I 453 [7-(2- ,N fluoropiridin-4-il)- rw7“< benzo[6]tiofen-2- Af^T il]pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolid in-2-ona 23 1 -(2-{4-[7-(5- O 469 Cloro-2-flúor- JJ piridin-4-il)- N benzo[b]tiofen-2- Ai F il]pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolid in-2-ona Exemplo 24

4-(2-(2-(2-(2-Oxoimidazolidin-1-il)etilamino)pirimidin-4-il)benzoffc1tiofen-7-

iPpicolinonitrila.

A

Combinar 1-(2-{4-[7-(2-cloro-piridin-4-il)-benzo[ô]tiofen-2-il]pirimidin-2-ilamino}-etil)-imidazolidin-2-ona (100 mg, 0,22 mmol), cianeto de zinco (51 mg, 0,44 mmol), tris(dibenzilideneacetona)dipaládio(0) (10 mg,

0,01 mmol), 1,1’-bis(difenilfosfino)-ferroceno (6 mg, 0,01 mmol) em DMSO (6 mL). Aquecer a mistura a 100 0C durante 4 horas. Resfriar a mistura para 5 temperatura ambiente e carregar sobre a coluna de sílíca. Eluir a coluna com 10 % de metanol em diclorometano para fornecer o composto do título (0,7 g, 72 %) como óleo amarelo. MS (ES) m/z 442 [M+1]+.

Exemplo 25

1-(2-(4-r7-(3-Amino-piridin-4-il)benzoíib1tiofen-2-in-5-fluoropirimidin-2- ilamino)etil)imidazolidin-2-ona.

Combinar A/-{4-[2-(2-cloro-5-flúor-pirimidin-4-il)-benzo[ò]tiofen-7- il]-piridin-3-il}-2,2-dimetil-propionamida (330 mg, 0,75 mmol), 2-(amino-etil)1,3-di-hidro-imidazolona (386 mg, 3,0 mmols), e 1,4-dioxano (6 mL) em um frasconete tampado e aquecer a 85 0C durante 4 horas. Concentrar em vá15 cuo. Diluir a mistura com diclorometano e água. Lavar a solução orgânica com água. Secar a solução orgânica sob sulfato de sódio. Filtrar e concentrar a solução em vácuo para um resíduo escuro. Purificar por cromatografia de coluna (diclorometano para 7 % de metanol em diclorometano) para fonecer A/-[4-(2-{5-flúor-2-[2-(2-oxo-imidazolidin-1-il)-etilamino]-pirimidin-4-il}20 benzo[b]tiofen-7-il)-piridin-3-il]-2,2-dimetil-propionamida.

Transferir o intermediário de amida para um frasconete de 40 mL, tampado por septo. Adicionar uma barra de agitação magnética e carregar água (20 mL) e H2SO4 concentrado (5 mL) ao frasconete. Aquecer o frasconete para 90°C em um banho de óleo durante 5 horas. Resfriar a reação para temperatura ambiente e passar através de uma coluna de SCX (10 g). Eluir com água/metanol 1:1, em seguida 100 % de metanol, em seguida 1:1 diclorometano/metanol, e finalmente eluir o produto com 10 % de 2 M de amônia em metanol/90 % de diclorometano. Concentrar em vácuo. Cromatografar em sílica (80 g) eluindo com gradiente de 0% para 10% de 2 M de 5 solução amônia/metanol em diclorometano. Secar em forno a vácuo a 42°C durante 2 horas para fornecer o composto do título (192,6 mg, 48 %) como um sólido ouro. MS (ES) m/z 450 [M+1]+.

Preparar os seguintes exemplos essencialmente de acordo com a preparação de 1-(2-{4-[7-(3-amino-piridin-4-il)benzo[jfc>]tiofen-2-il]-5- fluoropirimidin-2-ilamino}-etil)imidazolidin-2-ona usando o material de partida apropriado._

Ex Nome do Composto Estrutura Dados Físicos MS (ES) m/z [Μ+1Γ 26 1-(2-{4-[7-(3- O 446 Metilamino-piridin-4- JJ il)benzo[6]tiofen-2- N il]pirimidin-2- rrvv”=< ilami- ÇC/W· no}etil)imidazolidin-2- H ona \i 27 1 -(2-{4-[7-(3-Amíno- O 446 piridin-4- Β-νΛ il)benzo[ib]tiofen-2-il]- UCz-Vi 5-metilpirimidin-2- H-'C ilamino}etil)imidazolidin-2- ona 1 -(2-{4-[7-(3-Aminopiridin-4-

il)benzo[b]tiofen-2-il]

O

A,

'N

■N

VJ

28 pirimidin-2-

432

'N'

ilami

no}etil)imidazolidin-2-

__ona___

Exemplo 29

1-(2-(4-í7-(5-Amino-2-fluoropiridin-4-il)benzorbltiofen-2-il1pirimidin-2-

ilamino)etil)imidazolidin-2-ona.

benzo[ò]tiofen-7-il]-6-flúor-piridin-3-il}-carbâmico (813 mg, 1,77 mmol), 2- (amino-etil)-1,3-di-hidro-imidazol-ona (919 mg, 7,11 mmols), e 1,4-dioxano (22 mL) em um frasconete tampado e aquecer a 70°C durante 15 horas. Concentrar em vácuo. Diluir a mistura com diclorometano e água. Lavar a solução orgânica com água. Secar a solução orgânica sob sulfato de sódio.

Filtrar e concentrar a solução em vácuo para um resíduo escuro. Purificar por cromatografia de coluna (diclorometano para acetato etila) para fonecer éster terc-butílico de ácido [6-flúor-4-(2-{2-[2-(2-oxo-imidazolidin-1-il)etilamino]-pirimidin-4-il}-benzo[ò]tiofen-7-il)-piridin-3-il]-carbânico.

imidazolidin-1 -il)-etilamino]-pirimidin-4-il}-benzo[ò]tiofen-7-il)-piridin-3-il]

carbânico em diclorometano e adsorver sobre sílica-gel (10 g) por meio de concentração em vácuo. Secar sob vácuo elevado durante 24 horas. Colocar sílica-gel em um frasco de base redonda e aquecer em um banho de óleo de

o

H,N

Combinar éster terc-butílico de ácido {4-[2-(2-cloro-pirimidin-4-il)

Dissolver o éster terc-butílico de ácido [6-flúor-4-(2-{2-[2-(2-oxotemperatura controlada para 98 a 99 °C, ao mesmo tempo que sob vácuo elevado durante 2 horas. Resfriar para temperatura ambiente. Extrair produto de sílica-gel com 10 % de 7 N de amônia em metanol/ 90 % diclorometano. Concentrar em vácuo. Cromatografar em sílica eluindo com um gradiente 5 de 100 % de diclorometano para 7 % de 2 N de amônia em metanol/93 % de diclorometano para fornecer o composto do título (65,2 mg, 8,2 %). MS (ES) m/z 450 [M+1]+.

Exemplo 30

1-(2-(4-f7-(3-Amino-2-fluoropiridin-4-il)benzo[ib1tiofen-2-inpirimidin-2- ilamino)etil)imidazolidin-2-ona.

preparação de 1 -(2-{4-[7-(5-amino-2-flúor-piridin-4-il)-benzo[jb]tiofen-2-il]pirimidin-2-ilamino}-etil)-imidazolidin-2-ona usando o material de partida apropriado. MS (ES) m/z 450 [M+1]+.

Exemplo 31

1-(2-(5-flúor-4-f7-(2-flúor-5-hidroximetil-piridin-4-iDbenzo[fc>1tiofen-2-

il1pirimidin-2-ilamino)etil)imidazolidin-2-ona.

o

H

F

N

Preparar o composto do título essencialmente de acordo com a

o

HO

Combinar

1-(2-{5-flúor-4-[7-(4,4,5,5-tetrametil[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzo[b]tiofen-2-il]-pirimidin-2-ilamino}-etil)imidazolidin-2-ona (120 mg , 0,25 mmol), (6-flúor-4-iodo-piridin-3-il)-metanol (100 mg; 0,32 mmol), cloreto (1,1'-bis(di-fenilfosfino)ferroceno)paládio(ll) (10,14 mg; 0,01 mmol), 2-(diterc-butilfosfino)bifenila (2 mg, 0,01 mmol) e 5 carbonato de sódio (2 M, 0,2 mL, 0,4 mmol) em 5 mL de dioxano em um tubo de pressão. Aquecer a mistura a 100 0C durante a noite em banho de óleo. Resfriar a mistura até a temperatura ambiente, diluí-la com clorofórmioálcool isopropílico (3/1). Lavara fase orgânica com cloreto de sódio aquoso saturado, secá-la sob sulfato de sódio e concentrá-la para um resíduo oleo10 so. Purificar o bruto por cromatografia de coluna instantânea (10 % de metanol em diclorometano) para fornecer o composto do título (25 mg, 21 %). MS (ES) m/z 483 [M+1]+.

Exemplo 32

1-(2-(5-flúor-4-r7-(2-flúor-5-(fluorometiDpiridin-4-il)benzorfrltiofen-2- illPirimidin-2-ilamino)etil)imidazolidin-2-ona.

[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzo[ò]tiofen-2-il]-pirimidin-2-ilamino}-etil)imidazolidin-2-ona (120 mg, 248,26 pmol), 2-flúor-5-fluorometil-4-iodopiridina (100 mg, 392,15 μιτιοΙ) tris(dibenzili-deneacetona)dipaládio (0) (11,37 20 mg, 12,41 Mmol) triciclo-hexilfosfina (2,09 mg, 7,45 pmol), fosfato de potássio (105,39 mg, 496,51 pmol) em 5 mL de dioxano em um tubo de pressão selado. Aquecer a mistura a 100°C durante 3 horas no banho de óleo. LC-MS mostra um pico a 485. Resfriar a mistura reacional até a temperatura ambiente e diluí-la com clorofórmio-álcool isopropílico (3/1). Lavar a solução or25 gânica com cloreto de sódio aquoso saturado, secar a mesma sob sulfato de

o

F

Combinar

1-(2-{5-flúor-4-[7-(4,4,5,5-tetrametilsódio e concentrá-la para bruto. Purificar o bruto por cromatografia instantânea (10 % de metanol em diclorometano) para fornecer o produto-alvo (70 mg, 58,2 %). MS (ES) m/z 485 [M+1]+.

Ensaios

5 Plkl foi mostrada ser superexpressa em muitos tumores huma

nos, tais como cânceres de pulmão de célula não-pequena, orofaríngeos, esofágicos, gástricos, melanomas, mamários, ovarianos, endometriais, colorretais, glioblastomas, papilares, pancreáticos, da próstata, hepatoblastomas e Iinfomas de não-hodgkin. Além disso, a expressão de Plkl tem siginifica10 ção prognostica em cânceres de pulmão de célula não-pequena, orofaríngeos, esofágicos, melanomas, colorretais, hepatoblastomas e Iinfomas de não-hodgkin (Strebhardt, K. e A. Ullrich (2006). Nature Reviews câncer 6(4): 321-30). Os substratos fosforilados de Plkl regulam a progressão de mitose coordenando a maturação da centrossoma, entrada em mitose, separação 15 de cromátide-irmã e citocinese (Eckerdt e Strebhardt 2006; Strebhardt e Ullrich 2006; van de Weerdt, B. C. e R. H. Medema (2006). Cellular Cvcle 5(8): 853-64). A inibição da funcão de Plkl usando injeção de anticorpo, expressão de uma Plkl negativa dominante, e redução de mRNA de antissenso produz fusos de monopolo e interrupção de anáfase induzindo à morte celu20 Iar mitótica em linhagens de célula de tumor porém interrupção de G2 reversível em linhagens de célula primária não-transformada normal. Adicionalmente, foi reportado que a Plk pode ser útil no tratamento de tumores rabdoides, (Morozov A., e outros, Clinicai câncer Research. 13(16):4721-30, (Aug 15, 2007).

BI-2536 demonstrou atividade em modelos preclínicos usando

xenoenxertos de murino HCT116, A549 e NCIH460 (Baum, A., P. GarinChesa, e outro. (2006). A atividade em vivo de n°C191 de BI 2536, um inibidor potente e seletivo da cinase mitótica PLK1. em uma faixa de xenoenxerto de câncer. AACR-NCI-EORTC International Conference em "Molecular Targets e câncer Therapeutics", Filadélfia, PA).

Os resultados dos seguintes ensaios demonstram evidência de que os compostos da presente invenção são úteis como agentes anticâncer. Expressão e purificação de Plkl.

cDNA de Plkl humana, que pode ser obtido de diversas fontes, tal como Incyte (número de acesso: NM 005030), pode ser diretamente ligado a uma de suas terminais com uma seqüência de polinucleotídeo ex5 pressando um rótulo His6, tal como o rótulo FLAG-His6 de terminal-C, e inserido em um vetor de expressão apropriado, tal como um vetor pFastBac® (Invitrogen) e transfectado em um sistema apropriado, tais como baculovírus similar ao que foi reportado por Yue-Wei Qian, e outros, Science 282, 1701 (1998) para xPlkkl. Se um sistema de expressão viral for usado, então o 10 vírus (por exemplo, baculovírus transportando uma construção de polinucleotídeo de rótulo Plkl-Flag-His6 ) será infectado em uma cultura de uma célula-hospedeira adequada, tal como células Sf9. Quando quantidades suficientes da proteína de fussão de rótulo Plkl-Flag-His6 foram expressas, por exemplo, em torno de 46 horas após infecção, a cultura deve ser tratada 15 como ácido ocadáico (0,1 μΜ) durante um período de tempo suficiente (por exemplo, 3 horas). A fusão do rótulo Plkl-Flag-His6 é purificada de péletes celulares usando uma resina de afinidade de metal, tal como TALON® (Clontech, Catálogo n° 635503) usando métodos bem conhecidos na técnica. A fussão de rótulo Plkl-Flag-His6 purificado é armazenada em um meio ade20 quado, tal como 10 mM de HEPES, 150 mM de NaCI, 0,01% de TRITON® X-100, 1 mM de ditiotreitol (DTT), 10 % de glicerol, pH 7,5, a -80 0C em pequenas alíquotas até o uso. A identidade da proteína de fusão de rótulo Plkl-Flag-His6 purificada é confirmada por MALDI (Matrix-Assisted Laser Desorption/lonization).

Expressão e purificação de GST-Cdc25C( 1-206).

cDNA de Cdc25C humano, que pode ser obtido de qualquer fonte apropriada, tal como Incyte (número de acesso: AY497474), pode ser expresso em qualquer sistema de expressão conveniente, após o que a purificação é realizada por métodos bem-conhecidos similares aquele descrito 30 por Bin Ouyang e outro, Oncogene, 18, 6029 - 6036 (1999). Um sistema conveniente envolve cultura durante a noite a 18 0C de E.coli BL21 tranformado com o vetor pGEX-2T (Amersham) no qual o cDNA para Cds25C humano foi instruído para expressão induzida usando 1 mM de isopropil-betaD-tiogalactopiranosida. O GST-Cdc25C(1-206) expresso, o substrato para Plkl, pode ser purificado por GLUTATIONE SEPHAROSE® 4B e armazenado em uma solução apropriada, tal como 10 mM de HEPES, 100 mM de 5 NaCI, pH 7,5 em pequenas alíquotas a -80°C.

Ensaio de Inibição de Plkl

As reações de Plkl cinase contêm enzima de fusão de rótulo Plkl-Flag-His6 (0,2 ng/pL) em um tampão contendo 50 mM de HEPES, pH 7,3, 1,0 mM de ditiotreitol, 5,0 μΜ de ATP, 10 mM de MgCI2, 0,01% de TRI10 ΤΟΝ® X-100, 0,4 pCi 33P-ATP, e 0,06 pg/pL de peptídeo GST-Cdc25c (1- 206). Os compostos são fornecidos como 10 mM de matérias-primas em DMSO. Os compostos são serialmente diluídos 1:3 em 20 % de DMSO para criar uma curva de resposta de concentração de 10 pontos e subsequentemente são diluídos 1:5 (20 μΜ para 0,001 μΜ final em 4 % concentração de 15 DMSO final) na mistura reacional para determinar atividade do composto. A reação é realizada em temperatura ambiente durante 60 minutos e em seguida saciada pela adição de 60 pL de 10,0 % de H3PO4. A mistura reacional (85 μΙ_) é transferida para uma placa filtrante de fosfocelulose de 96 cavidades pré-umidecida com 30 pL de 10,0 % de H3PO4, incubada em temperatu20 ra ambiente durante 20 a 30 minutos e em seguida lavada 3X com 0,5 % de H3PO4. As cavidades são secadas antes da adição de 40 pL de MicroScintTM20 (Packard) e em seguida contadas em uma Wallac MICROBETA ® Jet. Os valores de inibição percentual dos dados de resposta de concentração de 10 pontos são subsequentemente analisados, por exemplo, usando 25 software ACTIVITY BASE® (IDBS)1 usando uma equação logística de parâmetro 4. Os valores de IC50 absoluto são calculados a partir do ajuste de curva resultante. Todos os compostos exemplificados têm uma IC50 menor do que 100 nM com uma relação mínima significante (MSR) de 3,6. Por exemplo, o exemplo 13 tem uma IC5o de cerca de 23 nM.

Ensaios de teor de pHH3(S10). células mitóticas, e DNA

Células HeLa da American Type Culture Collection (ATCC) são semeadas a 200 células/cavidade em placas de 96 cavidades Beckman Dickinson BIOCOAT®, e são incubadas em MEM (Meio Essencial Mínimo, por exemplo, GIBCO, catálogo N0 11095) com 10% de FBS (Soro Bovino Fetal) em 37°C, 5 % de CO2 durante 24 horas. As células são tratadas adicionando-se o composto (em 0,25 % de DMSO) ao meio, dosando em 10 pontos 5 na faixa de 0,5 μΜ a 0,0098 μΜ. Após 23 horas de exposição aos compostos, as células são fixadas, por exemplo, com o fixador PREFER® [Anatech LTD., Catálogo N°414] durante 30 minutos, em seguida são permeabilizadas com 0,1% de TRITON® X100 em solução de salina tamponado por fosfato (PBS) durante 15 minutos. As células são lavadas 3 vezes com PBS, em 10 seguida digeridas com 50 μg/mL de RNAse. O anticorpo primário, fosforristona H3 (Upstate Cat N°06-570), é adicionado a 1:500 em PBS com 1 % de albumina de soro bovino (BSA) às células durante a noite a 4°C. Após 3 lavagens com PBS, as células são incubadas com anticorpo secundário rotulado por Alexa488 (Invitrogen cat N0 A11008) durante 1 hora em temperatura 15 ambiente. Novamente elas são lavadas 3 vezes com PBS, e em seguida 15 μΜ de iodeto de propídio (Molecular Probes cat N0 P3566) são adicionados durante 30 minutos para manchar os núcleos. As placas de florescência são escaneadas com ACUMEN EXPLORER® [Citômetro de microplaca de fluorescência de varredura a laser (compreendendo de 488 nm de excitação a 20 laser de íon de argônio e detecção de tubo fotomultiplicador múltiplo), fabricado por TTP LABTECH LTD] para medir fosforristona H3, teor de DNA e células mitóticas como medido por condensação de DNA. Análises de imagem são baseadas nos sinais fluorescentes celulares para identificar as células em diferentes subpopulações. As células positivas de pHH3(S10) são 25 identificadas por intensidade média a 500 a 530 nm acima do limite. A intensidade total a 655-705 nm de iodeto de propídeo/DNA é usada para identificar células individuais (células com teor de DNA de 2N a 4N) e subpopulação em ciclo celular (células de 2N, células de 4N). A intensidade máxima a 575 a 640 nm é usada para identificar a condensação de DNA que é usada 30 como o marcador para identificar células mitóticas entre células de 4N. As produções de ensaio são percentagem de cada identificação de subpopulação, %pHH3, % 2N, % 4N, % de mitótica e número celular total. A EC5O é determinada por ajuste de curva para um logístico de parâmetro quatro para cada produção usando ACTIVITY BASE®. As EC50S resultantes para PHH3(s10), teor de DNA1 e mitótica tem um MSR de 2,6, 2,4 e 2,5, respectivamente. Por exemplo, o exemplo 13 tem um pHH3(s10) EC50 = 42 nM 5 (n=2), teor de DNA EC5O = 40 nM (n=2) e mitótica EC5O = 45 nM (n=1).

Ensaio Antiproliferativo

Os efeitos de compostos sobre a proliferação celular podem ser determinados usando células e os métodos de proliferação celular bemconhecidos na técnica (Robert C. Squatrito e outros, Gynecological Oncology, 58, 101-105, (1995)). Por exemplo, as células HCT116, que podem ser obtidas da American Type Culture Collection, podem ser semeadas a ~2000 células/cavidade em placas de 96 cavidades e deixadas fixar durante a noite em uma incubadora de CO2 umidificada a 37 °C. Seguindo a incubação de a 24 horas, compostos serialmente diluídos meio Iog são adicionados e as placas são retornadas para a incubadora. Após um período apropriado de exposição (por exemplo, 72 horas), a proliferação celular é estimada usando métodos bem conhecidos. Em um método, 10 μΙ_ de um sal de tetrazólio, tal como Alamar Blue® são adicionados às placas celulares. Após uma exposição apropriada ao corante, a fluorescência (530 nm de excitação, 580 nm emissão) é determinada. A IC50 resultante tem uma MSR de 3,1. Por exemplo, o exemplo 13 tem uma IC5o de 11 nM (n=3).

Os compostos da presente invenção são preferivelmente formulados como composições farmacêuticas administradas por variedade de rotinas. Mais preferivelmente, tais composições são de administração oral. Tais 25 composições farmacêuticas e processos para a preparação das mesmas são bem conhecidos na técnica. Veja, por exemplo, REMINGTON: THE SCIENCE E PRACTICE OF PHARMACY (A. Gennaro, e outros, eds., 19a ed., Mack Publishing Co., 1995).

Os compostos de fórmula I são geralmente eficazes durante uma ampla faixa de dosagem. Por exemplo, as dosagens por dia normalmente incluem-se na faixa de cerca de 0,01 a cerca de 20 mg/kg de peso corporal, mais preferivelmente 0,1 a 20 mg/kg de peso corporal. Em alguns casos os níveis de dosagem abaixo do limite inferior da faixa acima mencionada podem ser mais do que adequados, enquanto em outros casos, doses ainda maiores podem ser empregadas sem causar qualquer efeito colateral nocivo e, portanto, a faixa de dosagem acima não se destina a limitar o es5 copo da invenção de modo algum. Será entendido que a quantidade do composto, realmente administrada, será determinada por um médico, incluindo as circunstância relevantes, incluindo a condição a ser tratada, a rotina de administração escolhida, o composto ou compostos reais administrados, a idade, peso, e resposta do paciente individual, e a severidade dos sinto10 mas dos pacientes.

Claims (8)

1. Composto da Fórmula: <formula>formula see original document page 41</formula> em que: R1 hidrogênio, hidróxi, hidroximetila, halo, metila, fluorometila, 5 C1-C2 alcóxi, amino, ou metilamino; R2 é hidrogênio, halo, ou ciano; R3 é hidrogênio ou halo; contanto que pelo menos um de R1, R2, e R3 seja hidrogênio; e R4 é hidrogênio, halo, ou metila; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

2. Composto de reivindicação 1, em que: R1 hidrogênio, hidróxi, hidroximetila, cloro, flúor, metila, fluorometila, C1-C2 alcóxi, amino, ou metilamino; R2 é hidrogênio, flúor, ou ciano; R3 é hidrogênio, cloro, ou flúor, contanto que pelo menos um de R1, R2, e R3 seja hidrogênio; e R4 é hidrogênio, cloro, flúor, ou metila; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

3. Composto de reivindicação 1, em que: R1 hidrogênio ou metila, fluorometila; R2 é hidrogênio ou flúor, R3 é hidrogênio, cloro, ou flúor, contanto que pelo menos um de R1, R2, e R3 seja hidrogênio; e R4 é hidrogênio, cloro, flúor, ou metila; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

4. Composto de reivindicação 1, em que R1 é halo, R2 é hidrogênio, R3 é halo, e R4 é halo ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

5. Composto selecionado do grupo que consiste em: 1-(2-{4-[7-(2-Cloro-piridin-4-il)-benzo[ò]tiofen-2-il]pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona, 1-(2-{5-flúor-4-[7-(2-flúor-5-metilpiridin-4-il)-benzo[ò]tiofen-2-il]-pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona,1-(2-{4-[7-(2-flúor-5-metilpiridin-4-il)-benzo[ò]tiofen-2-il]-5-metilpirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona, 1-(2-{4-[7-(2-flúor-5-metilpiridin-4-il)-benzo[jb]tiofen-2-il]pirimidin-2-ilamino}etil)imidazolidin-2-ona, 1-{2-[5-Metil-4-(7-piridin-4-il-benzo[ò]tiofen-2-il)pirimidin-2-ilamino]etil}imidazolidin-2-ona, 1 -(2-{5-Cloro-4-[7-(2-flúor-5-metilpiridin-4-il)benzo[/b]tiofen-2-il]-pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona, 1-{2-[5-flúor-4-(7-piridin-4-il-benzo[ò]tiofen-2-il)pirimidin-2-ilamino]etil}imidazolidin-2-ona, 1-(2-{4-[7-(3-Etoxipiridin-4-il)-benzo[ò]tiofen-2-il]-5-fluoropirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona, 1-(2-(5-flúor-4-(7-(3-hidroxipiridin-4-il)benzo[b]tiofen-2-il)pirimidin-2- ilamino)etil)imidazolidin-2-ona, 1-(2-{4-[7-(2-Cloro-5-etoxipiridin-4-il)-benzo[/b]tiofen-2-il]-5-fluoropirimidin-2- ilamino}-etil)imidazolidin-2-ona, 1-(2-{5-flúor-4-[7-(3-metoxipiridin-4-il)-benzo[6]tiofen-2-il]pirimidin-2-ilamino}etil)imidazolidin-2-ona, 1-(2-(5-Cloro-4-(7-(piridin-4-il)benzo[ò]tiofen-2-il)pirimidin-2- ilamino)etil)imidazolidin-2-ona, 1-(2-{5-Cloro-4-[7-(5-cloro-2-fluoropiridin-4-il)-benzo[b]tiofen-2-il]pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona, 1-(2-{4-[7-(2-Cloro-piridin-4-il)-benzo[ò]tiofen-2-il]-5-fluoropirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona, .1-(2-{5-Cloro-4-[7-(2-cloro-piridin-4-il)benzo[ib]tiofen-2-il]pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona,1-(2-{4-[7-(5-Cloro-2-flúor-piridín-4-il)-benzo[ò]tiofen-2-il]5-fluoropirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona,1-(2-{4-[7-(2-Cloro-5-fluoropiridin-4-il)-benzo[ò]tiofen-2-il]-5-fluoropirimidin-2- ilamino}-etil)imidazolidin-2-ona,1-(2-{4-[7-(3-Cloro-piridin-4-il)-benzo[b]tiofen-2-il]-5-fluoropirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona,1-(2-{5-flúor-4-[7-(3-metilpiridin-4-il)-benzo[ib]tiofen-2-il]pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona,1-(2-{4-[7-(5-Cloro-2-fluoropiridin-4-il)-benzo[ô]tiofen-2-il]5-metilpirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona,1-(2-{4-[7-(2,5-Dicloropiridin-4-il)-benzo[ò]tiofen-2-il]-5-fluoropirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona,1 -(2-{5-flúor-4-[7-(2-fluoropiridin-4-il)-benzo[ò]tiofen-2-il]pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona,1-(2-{4-[7-(5-Cloro-2-flúor-piridin-4-il)-benzo[ib]tiofen-2-il]pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona,4-(2-(2-(2-(2-Oxoimidazolidin1-il)etilamino)pirimidin-4-il)benzo[ò]tiofen-7- il)picolinonitrila,1-(2-{4-[7-(3-Amino-piridin-4-il)benzo[ò]tiofen-2-il]5-fluoropirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona,1-(2-{4-[7-(3-Metilamino-piridin4-il)benzo[b]tiofen-2-il]pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona,1-(2-{4-[7-(3-Amino-piridin4-il)benzo[ò]tiofen-2-il]-5-metilpirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona,1-(2-{4-[7-(3-Amino-piridin4-il)benzo[ò]tiofen-2-il]-pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona 1-(2-{4-[7-(5-Amino-2-fluoropiridin4-il)benzo[ò]tiofen-2-il]pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona,1-(2-{4-[7-(3-Amino-2-fluoropiridin4-il)benzo[ô]tiofen-2-il]pirimidin-2- ilamino}etil)imidazolidin-2-ona, .1-(2-{5-flúor-4-[7-(2-flúor-5-hidroximetil-piridin-4-il)benzo[ò]tiofen-2- il]pirimidin-2-ilamino}etil)imidazolidin-2-ona, e1-(2-{5-flúor-4-[7-(2-flúor5-(fluorometil)piridin-4-il)benzo[jfc>]tiofen-2- il]pirimidin-2-ilamino}etil)imidazolidin-2-ona; ou um sal farmaceuticamente aceitável.

6. Composição farmacêutica compreendendo um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, em combinação com um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso na preparação de um medicamento.

8. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para a preparação de um medicamento para o tratamento de um câncer selecionado do grupo consistindo em cânceres de pulmão de célula não-pequena, orofaríngeos, esofágicos, gástricos, melanomas, carcinomas epidermoides da pele, mamários, ovarianos, endometriais, colorretais, neurogliomas, glioblastomas, carcinomas de tireoide, cervicais, pancreáticos, da próstata, hepatoblastoma e Iinfoma de não-hodgkin em um mamífero.