BRPI0717169A2 - análogos de grelina substituìda no n-terminal - Google Patents

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Abstract

ANáLOGOS DE GRELINA SUBSTITUìDA NO N-TERMINAL. A presente invenção refere-se a análogos de peptídil com atividade de grelina tendo maior estabilidade, os quais são ativos no receptor de GHS de acordo com a fórmula descrita abaixo: (R2)-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A1 6-A17-A18-A19-A20-A21-A23-A24-A25-A26-A27-A28-R1 em que as definições de A1 a A28, R1 e R2 são fornecidas na especificação, com a exceção de que o aminoácido N-terminal precisa ser selecionado a partir do grupo que consiste em Inp, 1-Apc e 4-Apc, os sais farmaceuticamente aceitáveis desse e as composições farmacêuticas que compreendem uma quantidade eficaz do dito composto junto com usos terapêuticos e não terapêuticos desse.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANÁLOGOS DE GRELINA SUBSTITUÍDA NO N-TERMINAL".
Campo da Invenção
A presente invenção refere-se aos análogos de peptidil com ati- vidade de grelina e seu uso terapêutico. Descrição da Técnica Anterior
A Grelina, um hormônio orexigênico descoberto recentemente, é produzida como um pré-pró-hormônio que é processado proteoliticamente para produzir um peptídeo da seguinte seqüência: H-Gly-Ser-Ser-Phe-Leu- Ser-Pro-Glu-His-Gln-Arg-Val-Gln-Gln-Arg-Lys-Glu-Ser-Lys-Lys-Pro-Pro-Ala- Lys-Leu-GIn-Pro-Arg-NH2 (Kojima, M. e outros, Nature, (1999), .402(6762):656 a 660). A Grelina é produzida por células epiteliais que forram o fundo do estômago e funciona para estimular o apetite; seus níveis aumen- tam antes de uma refeição e diminuem na seqüência.
As estruturas nativas da grelina de várias espécies de mamífe- ros e não mamíferos são conhecidas (Kaiya, H. e outros, J. Biol. Chem., (2001), 276(44):40441-8; e Pedido de Patente Internacional PCT/JP00/04907 [WO 01/07475]). Uma região central presente na grelina é responsável pela atividade observada no receptor GHS que compreende os quatro aminoácidos N-terminal em que a serina na terceira posição é nor- malmente modificada com o ácido n-octanóico. Em adição à acilação por ácido n-octanóico, a grelina nativa pode também ser acilada com o ácido n- decanóico (Kaiya, H. e outros, J. Biol. Chem., (2001), 276(44):40441-8).
Os níveis de grelina no plasma de indivíduos obesos são mais baixos do que em indivíduos mais magros e os níveis de grelina aumentam durante o período do dia a partir da meia-noite ao amanhecer em indivíduos mais magros sugerindo uma falha no sistema circulatório de indivíduos obe- sos (Yildiz, B. O. e outros, Proc. Natl. Acad. Usa, (2004), 101 (28):10434-9). Concluiu-se que indivíduos que sofrem do distúrbio alimentar de anorexia nervosa e pacientes que têm caquexia induzida por câncer têm níveis plas- máticos de grelina mais elevados (Garcia, J. M. e outros, J. Clin. Endocrin. Metab., (2005), 90(5):2920-6). Em ambos animais e humanos, a grelina estimula de forma pode- rosa a secreção de hormônio de crescimento (GH) a partir da glândula pituitá- ria anterior, principalmente no nível do hipotálamo, através de sua interação com o receptor de secretagogo (GHS) do GH (GHS-R) (Ukkola, O. e outros, Ann. Med. (2002), 34(2):102-8; e kojima, M. e outros, Nature, (1999), 402(6762):656-60). A atividade de liberação de GH da grelina é mediada pela ativação de receptores de GHS na glândula pituitária e principalmente no nível de hipotálamo (kojima, M. e outros, Nature, (1999), 402(6762):656-60).
Antes da descoberta de que a grelina é um Iigante nativo para o receptor de GHS, sabia-se que a liberação pulsátil de GH a partir dos soma- totrópicos pituitários era regulada por dois neuropeptídeos do hipotálamo: O hormônio de liberação de GH (GHRH) e a somatostatina. O GHRH esti- mula a liberação de GH1 enquanto a somatostatina inibe a secreção de GH (Frohman, L. A. e outros, Endocr. Rev., (1986), 7(3):223-53; e Strobl, J. S. e outros, Pharmacology Review (1994) 46:1-34). A grelina intensifica igual- mente a atividade de neurônios de secreção de GHRH enquanto age de forma concomitante como um antagonista de somatostatina funcional (Ghi- go, E. e outros, Eur. J. Endocri., (1997), 136(5): 445-60).
A liberação de GH a partir dos somatotrópicos pituitários pode ser também controlada por peptídeos de liberação de GH (GHRP). O hexa- peptídeo His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-amida (GHRP-6) descobriu-se liberar o GH a partir dos somatotrópicos de uma forma dependente de dose em vá- rias espécies, incluindo o homem (Bowers, C. Y. e outros, Endrocrinology, (1984), 114(5): 1537-45. Os estudos químicos subsequentes sobre GHRP-6 levaram à identificação de outros potentes secretagogos de GH sintéticos tais como os GHRP-1, GHRP-2 e hexarelina (Cheng, K. e outros, Endocrino- logy, (1989), 124(6): 2791-8; Bowers, C. Y., Novel GH-ReIeasing Peptides, Molecular and Clinicai Advances in Pituitary Disorders, Ed: Melmed, S., En- docrine Research and Education, Inc., Los Angeles, CA, USA, (1993), 153-7; e Deghenghi, R. e outros, Life Sci., (1994), 54(18): 1321-8). As estruturas desses três compostos são:
GHRP-1 Ala-His-D-(2')-Nal-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2; GHRP-2 D-Ala-D-(2')-Nal-Ala-Trp-D-Nal-Lys-NH2; e
Hexarelina His-D-2-MeTrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2.
Um GHS pode estimular a secreção de GH por um mecanismo diferente do de GHRH (Bowers, C. Y. e outros, Endrocrinology, (1984), .114(5): 1537-45; (Cheng, K. e outros, Endocrinology, (1989), 124(6):2791-8; Bowers, C. Y., Novel GH-ReIeasing Peptides, Molecularand Clinicai Advan- ces in Pituitary Disorders, Ed: Melmed, S., Endocrine Research and Educati- on, Inc., Los Angeles, CA, USA, (1993), 153-7; e Deghenghi1 R. e outros, Life Sci., (1994), 54(18):1321-8).
Uma baixa biodisponibilidade oral (<1%) de um GHS de peptidil encorajou a pesquisa por compostos não peptídicos que imitam a ação de GHRP-6 na pituitária. Vários benzolactamas e espiroindanos foram registra- dos como estimulando a liberação de GH em várias espécies animais, inclu- indo humanos (Smith, R. G. e outros, Science, (1993), 260(5114): 1640-3, Patchett, A. A. e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, (1995), 92(15): 7001-5; Chen, M.-H e outros, Bioorg. Mod. Chem. Letts., (1996), 6(18):2163-8). Um exemplo específico de um pequeno espiroindano é o MK-0677 (Patchett, A. A. e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, (1995), 92(15):7001-5): <formula>formula see original document page 4</formula>
As ações de um GHS (ambos peptídeo e não peptídeo) parecem ser mediadas por um receptor de GHS específico (GHSR, Howard, A. D. e outros, Science, (1996), 273(5277): 974-7; e Pong. S. S. e outros, Mol. En- docri., (1996), 10(1): 57-61).O receptor de GHS está presente na pituitária e no hipotálamo de várias espécies de mamíferos (GHSRIa) e é diferente do receptor de hormônio de liberação de GH. O receptor de GHS foi também detectado em outras áreas do sistema nervoso central e nos tecidos periféri- cos, por exemplo, adrenal, tiroidal, cardíaco, pulmonar, renal e muscular (Chen, M.-H e outros, Bioorg. Mod. Chem. Letts., (1996), 6(18): 2163-9); Howard, A. D. e outros, Science, (1996), 273(5277): 974-7; Pong. S. S. e outros, Mol. Endocri., (1996), 10(1): 57-61); Guan, X.-M. e outros, Mol. Brain Res., (1997), 48(1): 23-9; e McKee1 Κ. K. e outros, Genomics, (1997), 46(3): 426-34). Uma versão truncada de GHSRIa foi registrada (Howard, A. D. e outros, Science, (1996), 273(5277): 974-7).
O receptor de GHS é um receptor acoplado à proteína G. Os efeitos da ativação do receptor de GHS incluem a despolarização e a inibi- ção de canais de potássio, um aumento nas concentrações intercelulares de trifosfato de inositol (IP3) e um aumento de transiente nas concentrações de cálcio intracelular (Pong. S. S. e outros, Mol. Endocri., (1996), 10(1): 57-61; Guan, X.-M. e outros, Mol. Brain Res., (1997), 48(1): 23-9 e McKee, Κ. K. e outros, Genomics, (1997), 46(3): 426-34).
As moléculas de GHS tal como a grelina e seus análogos têm uma variedade de diferentes usos terapêuticos (Patente U.S. N0 6.566.337; lnui, A., FASEB J., (2004), 18(3): 439-56; Muller1 Ε. E. e outros, Neurobiol. Aging, (2002), 23(5): 907-19; Casanueva, F. F. e outros, Trends Endocrinol. Metab., (1999), 10(1): 30-8; e Ankerson, M. e outros, Drug Discovery Today, (1999), 4: 497-506) e usos diagnósticos. Os compostos que exibem efeitos agonistas no receptor de GHS são indicados para aperfeiçoar um estado defi- ciente de GH (Patente U.S. Nos 6.861.409 e 6.967.237; e Casanueva, F. F. e outros, Trends Endocrinol. Metab., (1999), 10(1): 30-8); aumentar a massa muscular (Patente U.S. Nos 6.861.409 e 6.967.237) e/ou resistência física (An- kerson, M. e outros, Drug Discovery Today, (1999), 4:497-506), melhorar a densidade óssea (Patentes U.S. Nos 6.861.409, 6.967.237 e 6.251.902; e Sibi- lia, V. e outros, Growth Horm. IGF Res., (1999), 9(4):219-27), tratar osteopo- rose (Pedido de Patente Internacional Nos PCT/IB96/01353 [WO 97/24369] e PCT/IB98/00873 [WO 98/58947]; e Casanueva, F. F. e outros, Trends Endo- crinol. Metab., (1999), 10(1):30-8), superar a disfunção sexual (Patente U.S. N0 6.967.237; e Casanueva, F. F. e outros, Trends Endocrinol. Metab., (1999), 10(1):30-8), tratar doença cardiovascular (Pedido de Patente Internacional Nos PCT/IB96/01353 [WO 97/24369] e PCT/IB98/00873 [WO 98/58947]; (Patente U.S. N0 6.251.902; De Gennaro Colonna, V. e outros, Eur. J. Pharmacol., (1997), 334(2-3):201-7, e Casanueva, F. F. e outros, Trends Endocrinol. Me- tab., (1999), 10(1 ):30-8), aliviar a dor de artrite (Granado, M., Am. J. Endo. Metab., (2005), 288:486-92), prevenir ou aliviar o início de doença de Alzhei- mer (Patente U.S. Nos 6.686.359 e 6.566.337) e/ou tratar lúpus eritematoso sistêmico ou doença inflamatória de intestino, por exemplo, doença do Crohn ou colite ulcerativa (Publicação de Patente U.S. N0 2002/0013320).
Os análogos agonísticos de grelina podem facilitar um ganho de peso corporal (Patente U.S. N0 6.967.237; Tschop, M. e outros, Nature, (2000), 407(6806):908-13; e Tschop, M. e outros, Endocrinology, (2002), 143(2):558-68) que, por sua vez, podem ser usados para manter um peso corporal desejado (Patentes U.S. Nos 6.861.409 e 6.967.237) e/ou para re- cuperar a função física (Patentes U.S. Nos 6.967.237 e 6.251.902; e Pedido de Patente Internacional Nos PCT/IB96/01353 [WO 97/24369]).
A grelina também aumenta o apetite (Patente U.S. N0 6.967.237; e Okada, K. e outros, Endocrinology, (1996), 137(11):5155-8). Como tal, a grelina é freqüentemente usada para tratar pacientes que sofrem de certas doenças ou distúrbios ou que passam por regimes medicinais obrigatórios que são tradicionalmente acompanhados com uma perda de peso indesejá- vel tais como: anorexia (Patente U.S. N0 6.967.237; e Tschop, M. e outros, Endocrinology, (2002), 143(2):558-68), bulimia (Patente U.S. N0 6.967.237), caquexia (Patentes U.S. Nos 6.967.237; e 6.251.902), particularmente ca- quexia induzida por câncer (Patente U.S. N0 6.967.237; Pedido de Patente Internacional N0 PCT/DK2004/000529 [WO 05/014032]; e Tschop, M. e ou- tros, Endocrinology, (2002), 143(2):558-68), AIDS (Patentes U.S. Nos 6.861.409 e 6.967.237; e Tschop, M. e outros, Endocrinology, (2002), 143(2):558-68), síndrome consumptiva em indivíduos frágeis e/ou idosos (Patentes U.S. Nos 6.861.409 e 6.967.237; Pedido de Patente Internacional N0 PCT/IB96/01353 [WO 97/24369]; e Ankerson, M. e outros, Drug Disco- very Today, (1999), 4:497-506) e insuficiência renal crônica (Casanueva, F. F. e outros, Trends Endocri. Metab., (1999), 10(1):30-8). Tratamentos médi- cos tradicionalmente acompanhados por uma perda de peso incluem quimio- terapia, radioterapia, imobilização temporária ou permanente e/ou diálise (Patentes U.S. Nos 6.967.237 e 6.251.902).
A obesidade é o principal fator de risco para diabetes e uma grande fração de pacientes com diabetes mellitus não dependente de insuli- na (de outra forma referido como "NIDDM") são obesos. Ambas as condi- ções são caracterizadas por níveis de insulina circulantes elevados e níveis de GH suprimidos. O tratamento de GH de adultos deficientes de GH (Jor- gensen, J. O. e outros, Lancet, (1989), 1(8649):1221-5), mulheres obesas (Ri- chelsen, B. e outros, Am. J. Physiol., (1994), 266(2 Pt 1):E211-6) e homens idosos (Rudman, D. e outros, Horm. Res., (1991), 36 (Suppl 1):73-81) foi mos- trado como produzindo aumentos de corpo magro, massa muscular e hepáti- ca enquanto diminuindo a massa gorda. Consequentemente, a administração de um agonista de grelina é uma terapia atrativa para a obesidade exceto pa- ra os efeitos diabetogênicos de GH (Patente U.S. N0 6.251.902; Ankerson, M. e outros, Drug Discovery Today, (1999), 4:497-506; e Casanueva, F. F. e ou- tros, Trends Endocri. Metab., (1999), 10(1):30-8). As complicações de diabe- tes, tal como retinopatia e/ou para tratar os distúrbios cardiovasculares (Pa- tente U.S. N0 6.967.237; e Publicação de Pedido de Patente U.S. N0 .2003/0211967) podem ser tratadas indiretamente por grelina também.
Peptídeos que afetam a liberação de hormônio de crescimento (GH), tais como GHRP-1, GHRP-2 e grelina, exibem efeitos "pró-cinéticos" ou gastrocinéticos (Patente U.S. N0 6.548.501; Peeters, T. L., J. Physiol. Pharmacol., (2003), 54 (supp 4):95-103 e referências nesta; Trudel, L. e ou- tros, J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., (2002), 282:G948-52).Como tal, os análogos de secretagogos de GH também foram empregados para pro- mover a motilidade gastrointestinal, particularmente em pacientes que so- frem de motilidade gastrointestinal diminuída resultante de obstrução total do intestino pós-operatória ou de gastroparesia incidental ao início de diabetes ou um estado diabético crônico (Patente U.S. N0 6.548.501).
A motilidade gastrointestinal (GI) é um processo neuromuscular coordenado que transporta nutrientes através do sistema digestivo (Scarpig- nato, C., Dig. Dis.,(1997), 15:112), uma falha na qual pode resultar em uma variedade de indisposições incluindo doença de refluxo gastroesofageal (GERD), gastroparesia (por exemplo, diabética e pós-cirúrgica), síndrome do intestino irritável (IBS), constipação (por exemplo, esta associada com a fase de hipomotilidade de IBS), êmese (por exemplo, esta causada por agentes de quimioterapia de câncer), obstrução total do intestino e pseudo-obstrução colônica (Patente U.S. N0 6.548.501; Pedido de Patente U.S. N02004/0266989). Essas várias complicações de motilidade de Gl interrompida contribuem significativamente para a sobrecarga no sistema de saúde de nações industrializadas (Patente U.S. N0 6.548.501; Feighner, S. D. e outros, (1999), 284:2184-8).
Obstrução total do intestino" refere-se à obstrução do intestino
ou estômago, especialmente o cólon (vide, por exemplo, Dorland's Illustrated Medicai Dictionary, p. 816, 27a ed. (W.B. Saunders Company, Filadélfia,1988)). Geralmente, qualquer trauma no intestino resultante na liberação de mediadores inflamatórios que levam à ativação de reflexos neurais inibitórios resultará no início da obstrução total do intestino. A obstrução total do intes- tino pode ser diagnosticada pela interrupção dos movimentos coordenados normais do intestino, que resulta na falha da propulsão dos conteúdos intes- tinais (Resnick, J., Am. J. of Gastroentero., (1997), 92:751; Resnick, J., Am. J. of Gastroentero., (1997), 92:934). A obstrução total do intestino deveria ser distinguida da constipação, que se refere à dificuldade ou infrequência em evacuar as fezes (vide, por exemplo, Dorland's Illustrated Medicai Dictio- nary, p. 375, 27a ed. (W.B. Saunders Company, Filadélfia, 1988)).
A obstrução total do intestino pode ser gerada por uma varieda- de de causas tal como a parturição, isquemia intestinal, hematoma retroperi- toneal, sepse intra-abdominal, inflamação intraperironeal, por exemplo, a- pendicite aguda, colecistite, pancreatite, fraturas na espinha dorsal, cólica uretérica, lesões torácicas, pneumonia basal, fraturas na costela, infarto no miocárdio, e distúrbios metabólicos. A interrupção total do intestino pós-parto é um problema comum em mulheres no período que segue o nascimento e crê-se ser causada por flutuações em níveis de opióide natural como um resultado do estresse do nascimento. Os pacientes que passaram por pro- cedimentos tal como cirurgia abdominal incluindo Iaparotomia para abscesso abdominal ou transplante do intestino delgado (SITx), cirurgia ortopédica, pélvica ou torácica, sofrem freqüentemente de um período de falha temporá- ria da função do intestino chamada de obstrução total do intestino pós- operatória ou pós-cirúrgica (referido a seguir como POI).
POI ocorre geralmente por 24 a 72 horas após a cirurgia. Em al- guns casos, a disfunção intestinal pode se tornar muito grave, durando mais de uma semana e afetando mais de uma parte do trato de Gl (Livingston, E. H. e outros, Digest. Dis and Sci., (1990), 35:121). A dismotilidade gastrointes- tinal associada com POI é geralmente mais grave no cólon. POI é caracteri- zado por náusea abdominal, distensão, vômito, obstipação, incapacidade de comer e convulsões. POI não somente atrasa o reinicio normal da ingestão de comida após a cirurgia e prolonga a hospitalização, mas também estimula as complicações pós-cirúrgicas, especialmente pneumonia por aspiração.
A administração de analgésicos opióides a um paciente após a ci- rurgia pode freqüentemente contribuir para e/ou exacerbar a disfunção do in- testino existente, desse modo atrasando a recuperação da função intestinal normal. Como virtualmente todos os pacientes recebem analgésicos opióides, tal como morfina ou outros narcóticos para aliviar a dor após a cirurgia, parti- cularmente cirurgia maior, o tratamento atual da dor pós-cirurgia pode real- mente retardar a recuperação da função intestinal normal, resultando em um atraso na descarga hospitalar e aumentando o custo com assistência médica.
Os agentes que agem para afetar a motilidade gastrointestinal podem também conferir efeitos benéficos a pacientes que sofrem de êmese. A êmese, ou vômito, é freqüentemente precedida por ânsia de vômito e pode ser acompanhada por tosses secas. A êmese pode ser causada por dese- quilíbrios no trato digestivo, tal como a obstrução total do intestino, dispepsi- a, ou inflamação da parede gástrica, ou por desequilíbrios no sistema senso- rial ou cérebro, tal como doenças motoras, enxaqueca ou tumores. A êmese pode ser autoinduzida tal como em anorexia ou bulimia, e pode também o- correr em resposta à dor severa, respostas emocionais (por exemplo, sinais ou odores desagradáveis), ou gravidez. A êmese é uma complicação comum seguindo a administração de muitas medicações, particularmente tratamen- tos anticâncer, tal como a quimioterapia. Os episódios prolongados ou ême- se repetitiva podem resultar em uma variedade de lesões ao organismo, in- cluindo desidratação e desequilíbrios eletrolíticos (Quigley, Ε. M. e outros, Gastroentero., (2001), 120:263-86).
Os agentes que agem para afetar a motilidade gastrointestinal podem também conferir efeitos benéficos em pacientes que sofrem de gas- troparesia. A gastroparesia, também chamada de esvaziamento gástrico a- trasado, é umo distúrbio na qual os nervos até o estômago são danificados ou param de trabalhar e o estômago leva muito tempo para esvaziar seu conteúdo. Por exemplo, o seguinte dano ao nervo pneumogástrico, que con- trola o movimento do alimento através do trato digestivo, os músculos do estômago e intestinos não trabalham normalmente e o movimento do ali- mento é diminuído ou parado. A alta glicose no sangue causa mudanças químicas em nervos e danifica os vasos sangüíneos que carregam oxigênio e nutrientes aos nervos. Se os níveis de glicose no sangue permanecem altos por um longo período de tempo, como é freqüentemente o caso na dia- betes, o nervo pneumogástrico pode ser danificado; a gastroparesia ocorre freqüentemente em pessoas com diabetes tipo 1 ou diabetes tipo 2 (Murray, C. D. e outros, Gut, (2005), 54:1693-8).
As terapias tradicionais para motilidade de Gl prejudicada, tal como da obstrução total do intestino, gastroparesia e êmese, são considera- das ineficazes. As terapias atuais para tratar a obstrução total do intestino incluem o estímulo funcional do trato intestinal, amaciantes de fezes, laxan- tes tal como Dulcolax®, lubrificantes, hidratação intravenosa, sucção naso- gástrica, agentes pró-cinéticos, alimentação enteral precoce, e descompres- são nasogástrica. A intubação nasogástrica para descomprimir o estômago também foi usada tradicionalmente para tratar a obstrução total do intestino.
Os farmacêuticos tradicionais usados para tratar a motilidade de Gl prejudicada, tal como o de obstrução total do intestino, incluem fármacos que agem para aumentar a motilidade colônica, tal como o Leu13-motilina e prostaglandina F2 alfa, e agentes pró-cinéticos, tal como Cisapride®. O PRO- PULSID®, que contém o monohidrato de Cisapride®, é um agente gastrointes- tinal oral (Patente U.S. N0 4.962.115) indicado para o tratamento sintomático de pacientes adultos com azia noturna devido à doença de refluxo gastroeso- fageal. Outros agentes pró-cinéticos incluem, por exemplo, metoclopramida, domperidona, ondansentrona, tropisetrona, mosaprida e itoprida. Outros tra- tamentos incluem a administração de compostos de pirazolopiridina antagoni- zando adenosina (Patente U.S. N0 6.214.843); agonista de receptor de peptí- deo de ativação de pituitária adenilato ciclase (PACAP) em combinação com o antagonista do receptor de peptídeo intestinal vasoativo (VIP) (Patente U.S. N0 6.911.430); fedotozina (Patente U.S. N0 5.362.756), neuropeptídeos (Pa- tente U.S. N0 5.929.035); e antagonistas de receptor 2 ativados por proteinase (Patente U.S. N0 5.929.035). Em casos extremos, a obstrução total do intesti- no foi tratada com intervenção cirúrgica para desobstruir o cólon.
Estes regimes terapêuticos, entretanto, sofrem de inúmeros pro- blemas. Por exemplo, o PROPULSID® foi recentemente removido do merca- do devido ao seu potencial de induzir arritmias cardíacas (Patente U.S. N06.548.501). A Adolor Corporation está presente na fase Ill de exames clíni- cos para uma terapia para tratar a obstrução total do intestino pós-operatória usando o Alvimopan (Entereg®). A terapia da Adolor, entretanto, utiliza os antagonistas de receptor de opióide que meramente bloqueia os efeitos cola- terais dos analgésicos de opiato, ao invés de aliviar realmente a condição de obstrução total do intestino. Os exames de fase Ill demonstram a eficácia marginal e a aplicabilidade mínima para o tratamento da obstrução total do intestino, particularmente a obstrução total do intestino pós-operatória.
Ademais, estes métodos da técnica anterior para tratamento da especificidade de carência de motilidade Gl de prejudicada para diferentes tipos de danos, por exemplo, obstrução total do intestino pós-operatória e obstrução total do intestino pós-parto. Também, esses métodos da técnica anterior não oferecem meios para a prevenção de motilidade de Gl prejudi- cada, tal como a de obstrução total do intestino, gastroparesia e êmese. Se a motilidade de Gl prejudicada, tal como a de obstrução total do intestino, gastroparesia e êmese, pudesse ser prevenida ou tratada de forma mais eficaz, as esperas em hospital, tempos de recuperação, e custos médicos seriam diminuídos significativamente com o benefício adicional de minimizar o desconforto do paciente.
Os fármacos que seletivamente estão voltados para a motilidade do estômago para corrigir a disfunção gastrointestinal causada pela obstru- ção total do intestino pós-operatória seriam os candidatos ideais para preve- nir e/ou tratar a obstrução total do intestino pós-operatória e pós-parto. Tais fármacos também seriam excelentes candidatos para o tratamento de gas- troparesia e/ou êmese, particularmente a êmese associada com quimiotera- pias ou outros fármacos induziu a disfunção gastrointestinal. Desses, os fármacos que não interferem nos efeitos dos analgésicos opióides seriam de benefício especial já que eles podem ser administrados simultaneamente com fármacos para gerenciamento da dor com efeitos colaterais limitados.
Um número de recentes estudos demonstrou o uso potencial de GHSs tal como a grelina, GHRP-6 e outros para estimular a atividade motora no trato intestinal e para tratar as condições tais como obstrução total do intestino e êmese. Por exemplo, a grelina e o GHRP-6 têm sido mostrados como acelerando o esvaziamento gástrico em ratos e camundongos (Pee- ters, T. L., J Physiol. Pharmacol., (2003), 54 (supp 4):95-103). Em ratos, a grelina tem sido mostrada como revertendo o atraso do esvaziamento gástri- co em um modelo de obstrução total do intestino pós-operatória (Peeters, T. L., J Physiol. Pharmacol., (2003), 54 (supp 4):95-103); Trudel, L. e outros, Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., (2002), 282(6):G948-52) e em cachorros laparotomizados, a grelina foi mostrada como aperfeiçoando o POI nos ani- mais tratados (Trudel, L. e outros, Peptides, (2003), 24:531-4). Em camun- dongos sépticos, a grelina e o GHRP-6 aceleraram o esvaziamento gástrico, embora tivessem pouco efeito no aumento do trânsito no intestino delgado (De Winter, Β. Y. e outros, Neurogastroenterol. Motil., (2004), 16:439-46).
Em experimentos projetados para simular as condições de hos- pitalização para um paciente humano que sofre de POI, os ratos laparotomi- zados foram expostos a opiatos bem como ao análogo de grelina RC-1139 (Poitras, P. e outros, Peptides, (2005), 26:1598-601). Em um ensaio que mede o esvaziamento gástrico, o RC-1139 foi mostrado como revertendo o POI nos ratos Iaparotomizados e de controle na presença de morfina. Acre- dita-se que a grelína exibe os efeitos gastrocinéticos sem interferir na ativi- dade de opiato.
Ferrets expostos ao agente anticâncer citotóxico cisplatina exibi- ram ocorrências significativamente reduzidas de ânsia de vômito e vômito seguindo a administração intracérebroventricular de grelina (Rudd, J. A. e outros, Neurosci. Lett., (2006), 392:79-83) assim confirmando a capacidade da grelina de reduzir a êmese de uma forma consistente com a sua função de modular as funções gastrointestinais. Crê-se que a função da grelina na modulação da motilidade gástrica é independente da ativação secretória de GH e pode ser mediada pelas reações químicas muscarínicas do nervo pneumogástrico-colinérgico (Pedido de Patente U.S. N0 2006/0025566).
A grelina também tem sido mostrada como aumentando o esva- ziamento gástrico em pacientes com gastroparesia diabética (Murray, C. D. e outros, Gut, (2005), 54:1693-8).
É interessante notar que nos estudos referidos acima, a grelina ou análogo de grelina foi administrada usando injeção intraperitoneal (ip), intravenosa (iv) ou intracerebroventricular (icv). Outras descrições (Patente U.S. N0 6.548.501; Pedido de Patente U.S. N0 2002/0042419; Pedido de Pa- tente U.S. N0 2005/0187237; Pedido de Patente U.S. N0 2006/0025566) rela- tam a administração oral de GHSs como um dispositivo para tratar a motili- dade gastrointestinal prejudicada.
Pouquíssimos compostos são conhecidos na técnica como sen- do úteis para tratar a motilidade de Gl prejudicada e mais compostos que afetam a motilidade gastrointestinal, por exemplo, estímulo da motilidade, seriam altamente desejáveis. Os compostos que afetam a cinética gastroin- testinal são úteis no tratamento de interrupções em funções de Gl normais, tal como a obstrução total do intestino e a êmese.
Paradoxalmente, os antagonistas de grelina podem ser também usados para aplicar um efeito benéfico em um paciente (Publicação de Pa- tentes U.S. Nos 2002/187938, 2003/0211967 e 2004/0157227; e Patente U.S. N0 6.967.237). Por exemplo, os compostos que exibem efeitos antago- nistas no receptor de GHS para promover a supressão da secreção de GH1 por exemplo, os análogos antagonistas de grelina, são indicados para rever- ter a secreção excessiva de GH (Publicação do Pedido de Patente U.S. N0 2002/0187938), para facilitar a perda de peso em não obesos (Patente U.S. N0 6.967.237), para manter um peso ideal e/ou para diminuir o apetite (Pa- tente U.S. N0 6.967.237). Os antagonistas de grelina podem também ser usados para facilitar a perda de peso em um indivíduo obeso em que a dita obesidade não é devido ao início de NIDDM (Patente U.S. N0 6.967.237; e Publicação de Pedido de Patente U.S. N0 2003/0211967).
O peso excessivo é um fator que contribui para muitas doenças ou condições tais como a hipertensão, dislipidemia e doença cardiovascular (Publicação de Pedido de Patente U.S. N0 2003/0211967; e Patente U.S. N0 6.967.237) bem como pedras na vesícula, osteoartrites (Patente U.S. N0 6.967.237), certas cânceres (Publicação de Pedido de Patente U.S. Nos 2003/0211967 e 2004/0157227; e Patente U.S. N0 6.967.237) e síndrome de Prader-Willi (Patente U.S. N0 6.950.707; Pedido de Patente Internacional N0 PCT/US2004/008385 [WO 04/084943]; Haqq, A. M. e outros, J. Clin. Endo- cri. Metab., (2003), 88(1 ):174-8; e Cummings, D. E. e outros, Nat. Med., (2002), 8(7):643-4). Os antagonistas de grelina que facilitam a perda de pe- so, portanto, reduziriam a probabilidade de tais doenças ou condições e/ou compreendem ao menos parte de um tratamento para tais doenças ou con- dições. Os antagonistas de moléculas de GHS têm também sido descritos para exibir a ligação ao tecido tumoral para resultar em uma doença no nú- mero de células tumorais nos tecidos alvo, por exemplo, tumores no pulmão, glândulas mamárias, tireóide ou pâncreas (Pedido de Patente Internacional N0 PCT/EP99/08662 [WO 00/29011].
A grelina nativa, entretanto, tem uma meia-vida relativamente curta que limita as vias de administração disponíveis e dose exigidas como tendo um efeito observável na redução de peso e/ou ingestão de alimento. A meia-vida aparente da grelina exógena em ratos é definida como sendo 30 minutos (Tolle, V. e outros, Endocrin., (2002), 143:1353-61) e em humanos de somente 10 minutos (Nagaya, N. e outros, Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol., (2001), 280:R1483-R1487). Dada a ampla variedade de efeitos benéficos que os GHSs têm a oferecer, há uma necessidade na téc- nica por moléculas análogas de grelina biologicamente estáveis e eficazes. Sumário da Invenção
Os análogos de grelina descritos aqui são ativos no receptor de GHS. Os análogos podem se ligar ao receptor e estimular ou inibir a ativida- de do receptor de GHS. Os análogos de grelina têm uma variedade de dife- rentes usos incluindo, mas não-limitados a serem empregados como uma ferramenta de pesquisa ou como um agente terapêutico.
Concluiu-se que os análogos de grelina substituídos com amino-
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ácidos sintéticos ácido isonipecótico (Inp) ou ° (1-Apc ou 4-Apc) no N-terminal exibiram melhor resistência à proteólise comparada à grelina nativa bem como a atividade aumentada no receptor de GHS.
O aspecto da presente invenção descreve os análogos de greli- na em que o primeiro aminoácido listado nas definições de A1 a A28 é o ami- noácido encontrado na posição correspondente na seqüência de grelina na- tiva, isto é, H-Gly-Ser-Ser-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu-His-Gln-Arg-Val-Gln-Gln- Arg-Lys-Glu-Ser-Lys-Lys-Pro-Pro-AIa-Lys-Leu-GIn-Pro-Arg-NH2, com a ex- ceção do primeiro aminoácido na seqüência, isto é, o resíduo do N-terminal, tendo a fórmula(l):
(R2)-A1 -A2-A3-A4-A5-A6-A 7-A8-A9-A1 A11 - A12-A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20- A21-A22- A23-A24-A25-A26-A27-A28-R1 (I) em que:
A1 é Inp, 1-Apc ou 4-Apc;
A2 é Ser, Abu, Acc, Act, Aib, Ala, Ava, Thr ou Vai;
A3 é Ser, Asp(NH-R3)1 Asp(O-R4)1 Cys(S-R5)1 Dab(S(O)2-R6)1 Dap(S(O)2-R7)1 GIu(NH-R8)1 GIu(O-R9)1 Ser(C(O)-R10)l Thr(C(0)-R11) ou HN- CH((CH2)n-N(R12R13))-C(O);
A4 é Phe, Acc1 Aic1 Cha1 2-Fua, 1-NaI1 2-Nal, 2-Pal, 3-Pal, 4-Pal, hPhe, (X1lX2lX3lX4lX5)Phe, Taz1 2-Thi, 3-Thi, Trp ou Tyr;
A5 é Leu1 Abu1 Acc, Aib1 Ala1 Cha1 Ile1 hLeu, Nle1 Nva1 Phe1 Tle
ou Vai;
A6 é Ser1 Abu1 Acc1 Act1 Aib1 Ala1 Gly1 Thr ou Vai; A7 é Pro1 Dhp1 Dmt, 3-Hyp, 4-Hyp, Inc1 Ktp, Oic1 Pip1 Thz ou Tic; A8 é Glu1 Aee1 Aib1 Arg1 Asn1 Asp, Dab1 Dap1 Gln1 Lys1 Orn ou HN-CH((CH2)n-N(R12R13))-C(O);
A9 é His1 Aee1 Ape1 Aib1 2-Fua, 2-Pal, 3-Pal, 4-Pal, (X11 X21 X31 X41 X5-)Phe, Taz1 2-Thi ou 3-Thi;
A10 é Gln1 Aee1 Aib1 Asn1 Asp ou Glu;
A" é Arg1 Ape1 hArg, Dab1 Dap1 Lys1 Orn ou HN-CH((CH2)n- N(R12R13))-C(0);
A12 é Val1 Abu1 Aec1 Aib1 Ala1 Cha1 Gly1 Ile1 Leu1 Nle1 Nva ou Tle; A13 é Gln1 Aee1 Aib1 Asn1 Asp ou Glu; A14 é Gln1 Aee1 Aib1 Asn1 Asp ou Glu; A15 é Arg1 Aee1 Aib1 Ape1 hArg, Dab1 Dap1 Lys ou Orn; A16 é Lys, Aee, Aib1 Ape1 Arg1 hArg, Dab, Dap1 Orn ou deletado; A17 é Glu, Arg, Asn, Asp, Dab, Dap, Gln, Lys, Orn, Asp(NH-R3)1 Asp(O-R4)1 Cys(S-R5)1 Dab(S(O)2-R6)1 Dap(S(O)2-R7)1 GIu(NH-R8)1 GIu(O-R9)1 Ser(C(O)-R10)l Thr(C(O)-Rll)1 HN-CH((CH2)n-N(R12R13))-C(O) ou deletado; A18 é Ser1 Abu1 Aec1 Aet1 Aib1 Ala1 Thr1 Val ou deletado; A19 é Lys, Acc, Aib, Apc, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn ou deletado; A20 é Lys, Ace, Aib, Ape, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn ou deletado; A21 é Pro1 Dhp1 Dmt, 3-Hyp, 4-Hyp, Inc, Ktp, Oic, Pip, Thz1 Tie ou
deletado;
A22 é Pro1 Dhp, Dmt1 3-Hyp, 4-Hyp, Inc, Ktp, Oie1 Pip, Thz, Tic ou
deletado;
A23 é Ala, Abu1 Aee1 Act1 Aib1 Apc1 Gly1 Nva1 Val ou deletado; A24 é Lys1 Aec1 Aib, Apc, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn, HN- CH((CH2)n-N(R12R13))-C(O) ou deletado;
A25 é Leu, Abu, Acc1 Aib1 Ala1 Cha1 Ile1 hLeu, Nle, Nva, Phe, Tle1 Val ou deletado; A26 é Gln1 Aib1 Asn, Asp1 Glu ou deletado;
A27 é Pro1 Dhp1 Dmt1 3-Hyp, 4-Hyp, lnc, Ktp, Oic1 Pip1 Thz, Tic ou
deletado;
A28 é Arg1 Acc1 Aib1 Apc1 hArg, Dab, Dap1 Lys1 Orn1 HN- CH((CH2)n-N(R12R13))-C(O) ou deletado;
R1 é -OH1 -NH2, -(CrC3o)alcóxi ou NH-X6-CH2-Z01 em que X6 é uma (Cr Ci2)alquila ou (C2-Ci2)alquenila e Z0 é -H, -OH, -CO2H ou -C(O)-NH2;
R2 é H, (C|-C3o)alquila, (CrC3o)heteroalquila, (CrC3o)acila, (C2-C30)alquenila, (C2-C30)alquinila, ariKCrC^alquila, aril(Ci-C30)acila, (Ci-C30)alquila substituída, (C1-C3O)IieteroaIquiIa substituída, (C2-C30)acila substituída, (C2-C30)alqueníla substituída, aril(CrC3o)alquila substituída, (C2-C30)alquinila substituída ou aril(Ci-C30)acila substituída;
Cada um dentre R31 R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 e R11 é, indepen- dentemente para cada ocorrência desses, selecionado a partir do grupo que consiste em (Ci-C40)alquila, (C2-C4o)alquenila, (CrC^alquila substituída, (C2-C40)alquenila substituída, alquilarila, alquilarila substituída, arila e arila substituída;
Cada um dentre R12 e R13 é, independentemente para cada ocorrência desses, selecionado a partir do grupo que consiste em H, (CrC40)alquila, (CrC4o)heteroalquila, (CrC40)acila, (C2-C40)alquenila, (C2-C40)- alquinila, aril(CrC40)alquila, aril(CrC40)acila, (CrC40)alquila substituída, (CrC40)heteroalquila substituída, (C1-C40)acila substituída, (C2-C40)alquenila substituída, (C2-C40)alquinila substituída, aril(CrC40)alquila substituída, aril(Cr C40)acila substituída, (CrC40)alquilsulfonila ou -C(NH)-NH2;
η é, independentemente para cada ocorrência desse, 1, 2, 3, 4
ou 5;
cada um dentre X1, X2, X3, X4 e X5 é, independentemente para cada ocorrência desses, selecionado a partir do grupo que consiste em H, F, Cl, Br, I, (Ci-io)alquila, (CM0)alquila substituída, arila, arila substituída, OH, NH2, NO2 e CN;
uma vez que:
quando R12 é (CrC40)acila, aril(Ci-C40)acila, (C1-C40)acila substi- tuída, aril(C1-C40)acila substituída, (C1-C40)alquilsulfonila, ou -C(NH)-NH2, então R13 é H ou (C1-C40)alquila, (C1-C40)heteroalquila, (C2-C40)alquenila, (C2-C40)alquinila, aril(C1-C40)alquila, (C1-C40)alquila substituída, (C1- C40)heteroalquila substituída, (C2-C40)alquenila substituída, (C2-C40)alquinila substituída, ou aril(C1-C40)alquila substituída; ou um sal farmaceuticamente aceitável desses.
Um grupo preferencial de compostos de acordo com a fórmula (I) acima, chamados compostos do Grupo 1, em que: A2 é Ser ou Aib; A3 é SerouGIu(NH-Re); A4 é Phe; A5 é Leu; A6 é Ser; A7 é Pro; A8 é Glu ou Aib; A9 é His; A10 é Gln ou Aib; A11 é Arg; A12 é Vai; A13 é Gln; A14 é Gln; A15 é Arg; A16 é Lys;
A17 é Glu ou Ser(C(C))-R10);
A18 é Ser;
A19 é Lys;
A20 é Lys;
A21 é Pro;
A22 é Pro;
A23 é Ala;
A24 é Lys;
A25 é Leu; A26 é Gln; A27 é Pro; e A28 é Arg;
ou um sal farmaceuticamente aceitável desses.
Outro grupo preferencial de compostos da fórmula acima, cha- mados compostos do Grupo 2, em que: R1 é NH2; R2 é H ou acila; R8 é hexila; e R10 é octanila; ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses.
Um grupo ainda mais preferencial de compostos do grupo de compostos imediato anterior, identificados como compostos do Grupo 3, são compostos em que: A2 é Aib; A3 é Glu(NH-hexila); A8 é Aib; A10 é Aib; e A17 é Ser(n-octanoil); ou um sal farmaceuticamente aceitável desses.
Outro grupo preferencial de compostos de acordo com a fórmula (I) descrita acima, referidos como compostos do Grupo 4, consiste em com- postos de acordo com a fórmula:
(lnp1)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ Nº: 2) (Inp1, Aib2)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ Nº: 2) (Inp1, Aib2, Glu(NH-hexil)3)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ Nº: 3) (Inp1, Aib2,10)hGrelina(1 -28)-NH2; (ID SEQ Nº: 4) (Inp1, Aib2'8)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ Nº: 5) (Inp1, Aib2)Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2;(ID SEQ Nº: 6) (Inp1, Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2;(ID SEQ Nº: 6) e (Inp1, Aib2,8,Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2;(ID SEQ Nº: 7) ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses. Em um aspecto, o composto preferencial dos anteriores é (lnp1)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 2) ou um sal farmaceuticamente acei- tável desse. Em outro aspecto, o composto preferencial dos anteriores é (Inp1, Aib2, Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 6) ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.
Em um aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade eficaz de um composto da fórmula acima, mais preferencialmente um composto de acordo com um ou mais dentre o Grupo 1, Grupo 2, Grupo 3, Grupo 4, (lnp1)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 2) e/ou (Inp1, Aib2, Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 6), como definido aqui acima, ou um sal farmaceuticamente aceitá- vel desse e um carreador ou diluente farmaceuticamente aceitável.
As aplicações da ferramenta de pesquisa envolvem geralmente o uso de um análogo de grelina e a presença de um receptor de GHS ou fragmento desse. O receptor de GHS pode estar presente em diferentes ambientes tais como um indivíduo mamífero, uma célula inteira ou um frag- mento de membrana. Exemplos de aplicações de ferramenta de pesquisa incluem, mas não estão limitados a, triar compostos ativos no receptor de GHS, determinar a presença do receptor de GHS em uma amostra ou prepa- ração e triar a função ou efeito da grelina.
Os análogos de grelina podem ser usados para triar ambos os agonistas de grelina e antagonistas de grelina. A triagem de agonistas de grelina pode ser executada, por exemplo, usando o análogo de grelina em um experimento de competição com compostos teste. A triagem de antago- nistas de grelina pode ser executada, por exemplo, usando o análogo de grelina para produzir a atividade do receptor de GHS e então medir a capa- cidade de um composto de alterar a atividade do receptor de GHS.
Outro aspecto da presente invenção caracteriza um método de triagem de um composto capaz de ligar-se a um receptor de GHS. O método compreende a etapa de medir a capacidade de um composto afetar a liga- ção de um análogo de grelina ao receptor, um fragmento do receptor que compreende um sítio de ligação de grelina, um polipeptídeo que compreen- de o fragmento ou um derivado do polipeptídeo. Compostos úteis para a tri- agem incluem os compostos de fórmula acima, mais preferencialmente compostos de acordo com um ou mais dentre o Grupo 1, Grupo 2, Grupo 3, Grupo 4, (lnp1)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 2), e/ou (Inp1, Aib21 Ser(n- octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 6), como definido aqui acima, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse e um carreador ou diluente far- maceuticamente aceitável.
Em outro aspecto, a invenção fornece um método de extrair uma resposta de um receptor de grelina em um indivíduo em necessidade desse que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina de acordo com o Grupo 1, Grupo .2, Grupo 3, Grupo 4, (lnp1)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N°: 2), e/ou (Inp1, Aib21 Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 6), como definido a- qui acima, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses e um carreador ou diluente farmaceuticamente aceitável.
Outro aspecto da invenção caracteriza um método para alcançar um efeito benéfico em um indivíduo que compreende administrar ao dito in- divíduo uma quantidade eficaz de um ou mais compostos de acordo com a fórmula acima, mais preferencialmente compostos de acordo com um ou mais dentre o Grupo 1, Grupo 2, Grupo 3, Grupo 4, (lnp1)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 2), e/ou (Inp1l Aib21 Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 6), como definido aqui acima, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses, ou uma composição desses como definido aqui, em que a dita quan- tidade eficaz é eficaz para produzir um efeito benéfico no auxílio a tratar (por exemplo, curar ou reduzir a gravidade) ou prevenir (por exemplo, reduzir a probabilidade de início ou gravidade) de uma doença ou distúrbio.
A grelina induz a liberação de GH a partir de células pituitárias de cultura primária em uma forma dependente de dose sem estimular a libe- ração de outros hormônios pituitários. Injetada intravenosamente em ratos anestesiados, a grelina estimulou a liberação pulsátil de GH (Kojima, Μ. E outros, Nature, (1999), 402(6762):656-60), assim outro aspecto da presente invenção caracteriza um método para estimular a secreção de GH em um indivíduo em necessidade desse, que compreende administrar uma quanti- dade eficaz de um ou mais compostos agonistas de acordo com a fórmula (I), mais preferencialmente um composto agonista de acordo com um ou mais dentre o Grupo 1, Grupo 2, Grupo 3, Grupo 4, (lnp1)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 2), e/ou (Inp1, Aib2, Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N°: 6), como definido aqui acima, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses, ou uma composição desses como definido aqui, em que a dita quan- tidade eficaz é ao menos uma quantidade suficiente para produzir um au- mento detectável de secreção de GH e, preferencialmente, é uma quantida- de suficiente para alcançar um efeito benéfico em um paciente.
Um método preferencial do método imediatamente anterior em que o dito estímulo de secreção de GH é indicado para tratar um estado de- ficiente de GH, aumentar a massa muscular e/ou densidade óssea, superar a disfunção sexual, ganhar peso corporal e/ou manter um peso corporal ide- al, manter e/ou recuperar a função física e/ou aumentar o apetite.
Um método preferencial do método imediatamente anterior em que o dito ganho de peso ou manutenção desse ou aumento de apetite é indicado em um paciente que tem uma doença ou distúrbio ou que passa por um tratamento acompanhado por perda de peso.
Um método preferencial do método imediatamente anterior em que a dita doença acompanhada por perda de peso está associada com ca- quexia a qual inclui, mas não está limitada a anorexia, bulimia, câncer, AIDS e doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD). Outro aspecto do método imediatamente anterior em que a dita perda de peso é devido ao início da síndrome consumptiva, particularmente em indivíduos frágeis e idosos. Um método preferencial adicional do método anterior é facilitar o ganho de peso após uma perda de peso não explicada em um paciente idoso saudável ou prevenir, tratar ou aliviar o início do doença de Alzheimer. Ainda em outro método preferencial do dito método imediatamente anterior em que os ditos tratamentos acompanhados pela perda de peso incluem a quimioterapia, radioterapia, imobilização temporária, imobilização permanente e diálise.
Outro método preferencial do método imediatamente anterior em que o dito ganho de peso ou manutenção do mesmo e/ou aumento de apeti- te é indicado em um paciente, de outra forma, saudável que não sofre de uma doença ou distúrbio particular ou passa por um dos tratamentos anteri- ormente mencionados.
Em outro aspecto, a invenção caracteriza um método de tratar doença pulmonar obstrutiva crônica em um indivíduo em necessidade desse que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos de acordo com a fórmula (I), mais preferencialmente um composto de acordo com um ou mais dentre o Grupo 1, Grupo 2, Grupo 3, Grupo 4, (lnp1)hGrelina(1 -28)-NH2 (ID SEQ N0: 2), e/ou (Inp1, Aib21 Ser(n- octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 6), como definido aqui acima, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses, ou uma composição desses co- mo definido aqui.
A presente invenção refere-se a um método de estimular a moti- Iidade gastrointestinal em um paciente (por exemplo, um mamífero tal como um humano). O método inclui a etapa de administrar uma quantidade tera- peuticamente eficaz de um ou mais compostos, de acordo com a fórmula acima, mais preferencialmente compostos de acordo com um ou mais dentre o Grupo 1, Grupo 2, Grupo 3, Grupo 4, (lnp1)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: .2), e/ou (Inp1, Aib2, Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 6), co- mo definido aqui acima, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses, ou uma composição desses como definida aqui, ao dito paciente que sofre de dismotilidade gastrointestinal ou está em risco de adquiri-la.
Em um aspecto, a presente invenção fornece um método de tra- tar condições de dismotilidade gastrointestinal administrando uma quantida- de terapeuticamente eficaz de um análogo de peptidil com atividade de gre- Iina ou pró-fármaco desse adequado para atenuar tais condições gastroin- testinais, em que o análogo ou pró-fármaco compreende um ou mais com- postos, de acordo com a fórmula acima, mais preferencialmente compostos de acordo com um ou mais dentre o Grupo 1, Grupo 2, Grupo 3, Grupo 4, (lnp1)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 2), e/ou (Inp1, Aib2, Ser(n- octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 6), como definido aqui acima, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses, ou uma composição desses co- mo definido aqui. O método da invenção é útil na promoção da motilidade gastrointestinal e gástrica em um paciente (por exemplo, um mamífero tal como um humano) e como tal, é útil no tratamento de condições que se be- neficiam da motilidade gastrointestinal e gástrica melhorada tais como a do- ença de refluxo gastroesofageal (GERD), síndrome do intestino irritável (IBS), constipação, obstrução total do intestino, êmese, gastroparesia, pseu- do-obstrução colônica, e seus similares.
Em outro aspecto, a invenção fornece um método útil para pro- mover motilidade gastrointestinal e gástrica em um paciente (por exemplo, um mamífero, tal como um humano) administrando a quantidade terapeuti- camente eficaz de um ou mais compostos, de acordo com a fórmula acima, mais preferencialmente compostos de acordo com um ou mais dentre o Grupo 1, Grupo 2, Grupo 3, Grupo 4, (lnp1)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: .2), e/ou (Inp1, Aib2, Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 6), co- mo descrito aqui acima, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses, ou uma composição desses como definido aqui, em que a dismotilidade gástri- ca ou obstrução total do intestino está associada com a administração de um opiato, tal como, mas não-limitado a, morfina.
Em outro aspecto, a invenção fornece um método de tratar a obstrução total do intestino, gastroparesia ou êmese administrando uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos, de acordo com a fórmula acima, mais preferencialmente compostos de acordo com um ou mais dentro o Grupo 1, Grupo 2, Grupo 3, Grupo 4, (lnp1)hGrelina(1-28)- NH2 (ID SEQ N0: 2), e/ou (Inp1, Aib2, Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 6), como descrito aqui acima, ou sais farmaceuticamente acei- táveis desses, ou uma composição desses como definido aqui, adequado para atenuar a obstrução total do intestino, êmese, ou gastroparesia. Em ainda outro aspecto, a condição tratada pelo método da invenção é a obstru- ção total do intestino, tal como a obstrução total do intestino pós-operatória e a operação pode ser um cirurgia gastrointestinal, tal como a cirurgia abdomi- nal. A obstrução total do intestino pós-operatória pode ocorrer em qualquer parte do trato intestinal, por exemplo, o estômago, intestino delgado ou intes- tino grosso. A obstrução total do intestino pós-operatória pode ser acompa- nhada pela presença de morfina. Em outro aspecto, a obstrução total do in- testino é causada por um fator além da cirurgia gastrointestinal, e pode ocor- rer em qualquer parte do trato intestinal, por exemplo, o estômago, intestino delgado e intestino grosso. Em Ainda outro aspecto da invenção, a condição tratada pelo método da invenção é a êmese, tal como a êmese associada ou provocada pela administração de um agente quimioterápico anticâncer, gra- videz, bulimia, ou anorexia. Em ainda outro aspecto, a condição tratada pelo método da invenção é a gastroparesia, tal como a gastroparesia diabética. O diabetes pode ser tipo I ou diabetes tipo II.
Em outro aspecto, a invenção fornece um método de executar cirurgia em um paciente que compreende administrar ao dito paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um mais compostos, de acordo com a fórmula acima, mais preferencialmente compostos de acordo com um ou mais dentre o Grupo 1, Grupo 2, Grupo 3, Grupo 4, (lnp1)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 2), e/ou (Inp1, Aib2, Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 6), como descrito aqui acima, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses, ou uma composição desses como definido aqui. Em uma modalida- de do imediatamente anterior, o método para executar cirurgia compreende identificar um paciente em necessidade da dita cirurgia.
Em uma modalidade do método de executar cirurgia, a cirurgia pode manipular direta ou indiretamente o trato gastrointestinal. Os tipos de cirurgias que podem se beneficiar do método da invenção incluem, mas não são limitados a laparotomia, cirurgia de transplante, cirurgia no sistema uro- genital, cirurgia no sistema linfático, cirurgia no sistema respiratório, e cirurgia para tratar câncer de qualquer órgão ou tecido dentro do abdômen. Os com- postos úteis para praticar o método de executar cirurgia de acordo com um ou mais dentre o Grupo 1, Grupo 2, Grupo 3, Grupo 4, (lnp1)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 2), e/ou (Inp1, Aib21 Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 6), como descrito aqui acima, ou sais farmaceuticamente aceitáveis des- ses, ou uma composição desses como definido aqui podem ser administrados antes, durante ou após a cirurgia, ou qualquer combinação desses.
Em outro aspecto, a invenção fornece um método de prevenir a obstrução total do intestino pós-operatória em um paciente em necessidade desse que compreende administrar ao dito paciente, antes, durante ou após a cirurgia, ou qualquer combinação desses, uma quantidade terapeutica- mente eficaz de um ou mais compostos, de acordo com a fórmula acima, mais preferencialmente compostos de acordo com uma ou mais dentre o Grupo 1, Grupo 2, Grupo 3, Grupo 4, (lnp1)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0:2), e/ou (Inp1, Aib2, Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 6), co- mo descrito aqui acima, ou sais farmaceutícamente aceitáveis desses, ou uma composição desses como definido aqui.
Em outro aspecto, a invenção fornece um método de prevenir doença de refluxo, êmese, gastroparesia, síndrome do intestino irritável, constipação, pseudo-obstrução colônica em um paciente em necessidade desse que compreende administrar ao dito paciente, uma quantidade tera- peuticamente eficaz de um ou mais compostos, de acordo com a fórmula acima, mais preferencialmente compostos de acordo com uma ou mais den- tre o Grupo 1, Grupo 2, Grupo 3, Grupo 4, (lnp1)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 2), e/ou (Inp1, Aib2, Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0: 6), como descrito aqui acima, ou sais farmaceutícamente aceitáveis desses, ou uma composição desses como definido aqui. A êmese pode estar associada ao tratamento com agente quimioterápico anticâncer, gravidez, bulimia, ou anorexia. A gastroparesia pode ser associada a diabetes; o diabetes pode ser tipo I ou diabetes tipo II.
Um segundo grupo mais preferencial de compostos de acordo com a fórmula (I) descrita acima, referidos como os compostos do Grupo 5, consiste em compostos de acordo com a fórmula:
(Inp1, Aib2'10, Glu(NH-hexil)3)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0: 1) (1-Apc1, Aib2'10, Glu(NH-hexil)3)-hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0: 1) (Ac-lnp1, Aib2'10, Glu(NH-hexil)3)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0: 8) (Ac-1- Apc1, Aib2'10, Glu(NH-hexil)3)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ
N0: 8) ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses. Em um aspecto, o composto preferencial é o (Inp1, Aib2,10, Glu(NH-hexil)3)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0: 1) ou um sal farmaceutica- mente aceitável desse. Em outro aspecto, o composto preferencial é o (1- Apc1, Aib2'20, Glu(NH-hexil)3)-hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0: 1) ou um sal farmaceuticamente aceitável desse. Em outro aspecto, o composto prefe- rencial é o (Ac-Inp1, Aib2'10, Glu(NH-hexil)3)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0: .8) ou um sal farmaceuticamente aceitável desse. Em outro aspecto, o com- posto preferencial é o (Ac-1-Apc1, Aib2'10, Glu(NH-hexila3)hGrelina(1-28)- NH2; (ID SEQ N0: 8) ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.
Em outro aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade eficaz de um composto da fórmula acima, mais preferencialmente um composto de acordo com o Gru- po 5, como definido aqui acima, ou um sal farmaceuticamente aceitável des- se e um carreador ou diluente farmaceuticamente aceitável.
Em um aspecto, a invenção fornece um método de triagem de um composto capaz de ligar-se a um receptor de GHS que compreende me- dir a capacidade de um composto afetar a ligação de um composto de acor- do com o Grupo 5, como definido aqui acima, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desse, com o receptor, com um fragmento do receptor, com um polipeptídeo que compreende o fragmento do receptor ou com a um deriva- do do polipeptídeo.
Em outro aspecto, a invenção fornece um método de extrair uma resposta de um receptor de grelina em um indivíduo em necessidade desse que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo antagonista de grelina de acordo com o Grupo 5, como definido aqui acima, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desse, ou uma composição desse como definido aqui.
Em outro aspecto, a invenção fornece um método de alcançar um efeito benéfico em um indivíduo que compreende administrar ao indiví- duo uma quantidade eficaz de um composto análogo de grelina de acordo com o Grupo 5, como definido aqui acima, ou sais farmaceuticamente acei- táveis desse, ou uma composição desse como definido aqui, em que a quan- tidade eficaz é eficaz para produzir um efeito benéfico no auxílio à cura ou redução da gravidade ou redução da probabilidade de início ou gravidade de uma doença ou distúrbio. Em um aspecto, o efeito benéfico auxilia na cura ou redução da gravidade ou reduz a probabilidade de início ou gravidade de uma doença ou distúrbio.
Uma superabundância de secreção de GH foi clinicamente atri- buída a um número de doenças e ou condições. Outro aspecto da presente invenção caracteriza um método para suprimir a secreção de GH em um indivíduo em necessidade desse, que compreende administrar uma quanti- dade eficaz de um ou mais compostos, de acordo com o Grupo 5, como de- finido aqui acima, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desse, ou uma composição desse como definido aqui, em que a dita quantidade eficaz é ao menos uma quantidade suficiente para produzir uma redução detectável na secreção de GH e, preferencialmente, é uma quantidade suficiente para al- cançar um efeito benéfico em um paciente.
Os compostos antagonistas de grelina de acordo com o Grupo 5, como definido aqui acima, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses, ou uma composição desses como definido aqui, podem também ser usados para alcançar um efeito benéfico em um paciente. Um método preferencial do método imediatamente anterior em que a dita supressão de secreção de GH é indicada para facilitar a perda de peso e/ou a diminuição de apetite, para manter o peso corporal, reverter a obesidade, tratar o diabetes e sua complicações, tal como a retinopatia e/ou aperfeiçoar os distúrbios cardio- vasculares. O peso excessivo é um fator que contribui em diferentes doen- ças incluindo, mas não-limitado a, hipertensão, diabetes, dislipidemia, doen- ça cardiovascular, formação de pedra na vesícula, osteoartrite, síndrome de Prader-Willi e/ou certas formas de câncer. A perda de peso tem sido com- provada na redução da probabilidade de tais doenças quando faz parte do tratamento prescrito para tais doenças.
Em outro aspecto, a invenção fornece um método para suprimir a secreção de hormônio de crescimento em um indivíduo em necessidade de tal supressão, que compreende a etapa de administrar a um indivíduo uma quantidade eficaz de um composto análogo de grelina de acordo com o Grupo 5, como definido aqui acima, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desse, ou uma composição desse como definido aqui, em que a quantidade eficaz é ao menos uma quantidade suficiente para produzir uma redução detectável na secreção de hormônio do crescimento.
Em um aspecto do aspecto imediatamente anterior, a supressão de secreção do hormônio de crescimento é indicada no tratamento de uma doença ou condição caracterizada pela secreção excessiva de hormônio de crescimento, para facilitar a perda de peso corporal excessivo, para facilitar a diminuição de apetite, para facilitar a manutenção de peso, para tratar a obesidade, para tratar diabetes, para tratar as complicações do diabetes in- cluindo a retinopatia, ou para tratar distúrbios cardiovasculares. Em outro aspecto, o peso excessivo é um fator que contribui para uma doença ou dis- túrbio incluindo hipertensão, diabetes, dislipidemia, doença cardiovascular, pedras na vesícula, osteoartrite e cânceres. Observa-se que a facilidade de perda de peso reduz a probabilidade de tais doenças ou condições. Obser- va-se que a facilidade de perda de peso corporal compreende ao menos par- te de um tratamento para tais doenças ou condições. Em outro aspecto, o peso excessivo é devido à síndrome de Prader-Willi. Em ainda outro aspec- to, a obesidade é tratada.
A quantidade eficaz de um ou mais compostos análogos de gre- lina e composições dessa de acordo e adequado para o uso na prática de qualquer aspecto da presente inveríção, pode ser administrada ao indivíduo em necessidade dessa por qualquer dispositivo médico aceitável, incluindo, mas não-limitado a, métodos orais, subcutâneos ou intravenosos, ou implan- tação de uma formulação de liberação sustentada.
Outras características e vantagens da presente invenção são aparentes a partir das descrições adicionais fornecidas aqui, incluindo os diferentes exemplos. Os exemplos fornecidos ilustram os diferentes compo- nentes e metodologias úteis na prática da presente invenção. Os exemplos não limitam a invenção reivindicada. Com base na presente descrição, os versados na técnica podem identificar e empregar outros componentes e metodologias úteis na prática da presente invenção. Descrição Detalhada da Invenção
A presente invenção caracteriza os análogos de grelina que são resistentes à proteólise ainda ou promovem, isto é, um agonista, ou supri- mem, isto é, um antagonista, a atividade de grelina no receptor de GHS. Como detalhado acima, os análogos da invenção são úteis para o tratamen- to de uma ampla variedade de alimentos em um indivíduo.
Um "indivíduo", como usado neste documento, refere-se a um animal mamífero ou não mamífero incluindo, por exemplo, e sem limitação, um humano, um rato, um camundongo ou um animal de fazenda. A referên- cia a um indivíduo não necessariamente indica a presença de uma doença ou distúrbio. O termo "indivíduo" inclui, por exemplo, um animal mamífero ou animal não mamífero sendo dosado com um análogo de grelina como parte de um experimento, um animal mamífero ou não mamífero sendo tratado para aliviar uma doença ou distúrbio, e um animal mamífero ou não mamífe- ro sendo tratado profilaticamente para retardar ou prevenir o início de uma doença ou distúrbio.
Uma "quantidade terapeuticamente aceitável" de um composto ou composição da invenção, sem considerar a formulação ou via de adminis- tração, é aquela quantidade que produz uma resposta biológica desejada em um indivíduo. O efeito biológico da quantidade terapêutica pode ocorrer e ser medido em muitos níveis em um organismo. Por exemplo, o efeito biológico da quantidade terapêutica pode ocorrer e ser medido no nível celular medin- do-se a resposta em um receptor que se liga à grelina e/ou análogo de greli- na, ou o efeito biológico da quantidade terapêutica pode ocorrer e ser medi- do no nível do sistema, tal como afetando um aumento/diminuição nos níveis de circulação do hormônio de crescimento. O efeito biológico da quantidade terapêutica pode ocorrer e ser medido no nível do organismo, tal como o alívio de um sintoma(s) ou progressão de uma doença ou condição em um indivíduo. Uma quantidade terapeuticamente aceitável de um composto ou composição da invenção, sem considerar a formulação ou via de administra- ção, pode resultar em uma ou mais respostas biológicas em um indivíduo. NO evento em que o composto ou composição da invenção é submetido a teste em um sistema in vitro, uma quantidade terapeuticamente aceitável do composto ou composição pode ser vista como a quantidade que fornece uma resposta mensurável no sistema in vitro de escolha.
Os agonistas e antagonistas de grelina descritos aqui, tal como os do Grupo 1, 2, 3, 4 e/ou 5, são úteis para aumentar, diminuir, e/ou manter o peso corporal em um indivíduo em necessidade desses. O peso corporal é freqüentemente medido e usado para determinar o índice de Massa Corporal ("IMC"). O valor de IMC para um indivíduo é determinado calculando-se o peso em quilogramas dividido pelo quadrado da altura em metros. A faixa "normal" de IMC, que é bem conhecida na técnica, é 19 a 22. Os indivíduos cujo índice de massa corporal cai abaixo da faixa "normal" são mais suscetí- veis a doenças e certos tratamentos médicos benéficos tal como quimiotera- pia, são menos eficazes em indivíduos tendo um IMC abaixo do normal.
Como usado aqui, um indivíduo ou mamífero obeso é caracteri- zado como tendo um peso corporal aproximadamente 20%, aproximada- mente 25%, aproximadamente 30%, ou mais do que o peso corporal normal para o dito indivíduo. O peso corporal normal pode ser determinado por uma comparação do peso do indivíduo em um ponto no tempo anterior, tal como quando os níveis de grelina foram normais, ou por uma comparação dos ní- veis de grelina do indivíduo se comparado às médias de outros indivíduos de uma idade e/ou condição similar.
Como usado aqui, um indivíduo ou mamífero com sobrepeso é caracterizado como tendo um peso aproximadamente 5% maior a aproxima- damente 20% maior do que o peso corporal normal para o dito indivíduo. O peso corporal normal pode ser determinado por uma comparação do peso do indivíduo em um ponto no tempo anterior, tal como quando os níveis de grelina foram normais, ou por uma comparação dos níveis de grelina do indi- víduo se comparado às médias de outros indivíduos de uma idade e/ou condi- ção similar.
Como usado aqui, um indivíduo ou mamífero normal é caracteri- zado como tendo um peso corporal aproximadamente 5% maior a aproxima- damente 5% menor do que o peso corporal para o dito indivíduo. O peso corporal normal pode ser determinado por uma comparação do peso do indi- víduo em um ponto no tempo anterior, tal como quando os níveis de grelina foram normais, ou por uma comparação dos níveis de grelina do indivíduo se comparado às médias de outros indivíduos de uma idade e/ou condição si- milar. Um indivíduo com peso normal pode ter um IMC na faixa de aproxi- madamente 19 a 22.
Como usado aqui, um indivíduo ou mamífero magro é caracteri- zado como tendo um peso corporal aproximadamente 5% a 30% ou até 50% menor do que o peso corporal para o dito indivíduo. O peso corporal normal pode ser determinado por uma comparação do peso do indivíduo em um ponto no tempo anterior, tal como quando os níveis de grelina foram nor- mais, ou por uma comparação dos níveis de grelina do indivíduo se compa- rado às médias de outros indivíduos de uma idade e/ou condição similar.
Como usado aqui, os termos "tratar", "tratando" e "tratamento" incluem tratamento paliativo, curativo e profilático.
Como usado aqui, "mensurável" significa que o efeito biológico é ambos reproduzível e significativamente diferente da variabilidade da linha de base do ensaio.
"Proteólise" como usado aqui se refere à degradação direta, isto é, clivagem, de um peptídeo pela hidrólise de uma ligação de peptídeo por uma enzima celular proteolítica referida como uma protease.
A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm o mesmo significado se geralmente entendidos por um versado na técnica a qual essa invenção pertence. Também, todas as publicações, pedidos de patente, patentes, e outras referências mencio- nadas aqui são incorporadas a título de referência.
Certos aminoácidos presentes em compostos da invenção po- dem ser e são representados aqui como segue: Nomenclatura e Abreviações:
Símbolo Significado
Abu ácido a-aminobutírico
Acc ácido 1-amino-1-ciclo(C3-C9)alquil carboxílico
A3c ácido 1-amino-1-ciclopropano carboxílico
A4c ácido 1-amino-1-ciclobutano carboxílico
A5c ácido 1-amino-1-ciclopentano carboxílico
A6c ácido 1-amino-1-ciclohexano carboxílico
Act denota a estrutura o
Aib ácido α-amino isobutírico
Aic ácido 2-aminoindan-2-carboxílico
Ala ou A alanina
β-Ala beta-alanina
H
Λ d ^
Apc denota a estrutura °
Arg ou R arginina
hArg homoarginina
Asn ou N asparagina
Asp ou D ácido aspártico
Ava ácido 5-amino-n-valérico
Cha β-ciclo hexilalanina
Cys ou C cisteína
hCys L-homocisteína
Dab ácido 2,4-diamino butírico
Dap ácido 2,3-diamino propiônico
Dhp 3,4-dehidroprolina
Dmt ácido 5,5-dimetiltiazolidina-4-carboxílico
2-Fua p-(2-furil)-alanina GIn ou Q glutamina
Glu ou E ácido glutâmico
GIyouG glicina
His ou H histidina
.3-Hyp trans-3-hidróxi-L-prolina, isto é, ácido (2S,3S)-3 hidroxipirrolidina-2-carboxílico
.4-Hyp 4-hidroxiprolina, isto é, ácido (2S,4R)-4-hidroxipirrolidina-2 carboxílico
Ile ou I isoleucina
Inc ácido indolina-2-carboxílico
Inp ácido isonipecótico
Ktp 4-cetoprolina
Leu ou L Ieucina
hLeu homoleucina
Lys ou K Iisina
Met ou M metionina
.1-Nal β-(1 -naftil)-L-alanina
.2-Nal 3-(2-naftil)-L-alanina Nle norleucina
Nva norvalina
Oic ácido octahidroindol-2-carboxilico
Orn ornitina
.2-Pal 3-(2-piridinil)-alanina
.3-Pal p-(3-piridinil)-alanina
.4-Pal p-(4-piridinil)-alanina Phe ou F fenilalanina
hPhe homofenilalanina
Pip ácido pipecólico
Pro ou P prolina
Ser ou S serina <formula>formula see original document page 35</formula>
Taz p-(4-tiazolil)alanina, isto é,
.2-Thi p-(2-tienil)alanina
.3-Thi p-(3-tienil)alanina
Thp 4-amino-4-carboxitetrahidropirano
Thr ou T treonina
Thz ácido tiazolidina-4-carboxílico
Tic ácido 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-3-carboxílico
Tle ter-leucina
Trp ou W triptofano
Tyr ou Y tirosina
Val ou V valina
Quando o aminoácido tem formas isoméricas, ele é a forma L do aminoácido que é representado, a menos que de outra forma explicitamente indicado.
A nomenclatura usada para definir os peptídeos é o tipicamente usado na técnica em que o grupo aminoácido no N-terminal aparece à es- querda e o grupo carboxila no C-terminal aparece à direita, isto é, representa a estrutura de -NH-CI(R')-CO-, em que R e R', cada um é, independente- mente, hidrogênio ou a cadeia lateral de um aminoácido (por exemplo, R = CH3 e R' = H para Ala), ou R e R' podem ser unidos para formar um sistema em anel. Para o aminoácido de N-terminal, a abreviação representa a estru-
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tura de: 0
ou quando o aminoácido de N-terminal é ácido isonipecótico (Inp), a
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abreviação para a estrutura de: Um peptídeo dessa invenção é também denotado aqui por outro formato, por exemplo, (Aib2)hGrelina(1-28)-NH2, com o aminoácido(s) substi- tuído a partir da seqüência natural localizada entre o primeiro conjunto de pa- rênteses (por exemplo, Aib2 para Ser2 em hGrelina). Os números entre o se- gundo conjunto de parênteses referem-se ao número de aminoácidos presen- tes no peptídeo (por exemplo, hGrelina(1-18) refere-se a aminoácidos de 1 a .18 da seqüência de peptídeo para Grelina humana). A designação "NH2" em, por exemplo, (Aib2)hGrelina(1-28)-NH2, indica que o terminal C do peptídeo é amidado. (Aib2)hGrelina(1-28), ou, alternativamente, (Aib2)hGrelina(1-28)-OH indica que o C-terminal é o ácido livre. Uma letra minúscula é inserida antes de "Grelina" para indicar sua fonte ou origem, isto é, "h" indica que a grelina é um homólogo da forma de grelina encontrada em homo sapiens.
A menos que de outra forma determinado, aqueles aminoácidos com um centro quiral são fornecidos no L-enantiômero. Referência a um "de- rivado desse" refere-se a um aminoácido modificado tal como o D-amino- ácido correspondente, N-alquil-aminoácido, β-aminoácido ou aminoácido rotulado.
Como usado aqui, Acc abrange um aminoácido selecionado a partir do grupo de ácido 1-amino-1-ciclopropano carboxílico (A3c), ácido .1-amino-1-ciclobutano carboxílico (A4c), ácido 1-amino-1-ciclopentano car- boxílico (A5c), ácido 1-amino-1-ciclohexano carboxílico (A6c), ácido .1-amino-1-cicloheptano carboxílico (A7c), ácido 1-amino-1-ciclooctano car- boxílico (A8c), e ácido 1-amino-1-ciclononano carboxílico (A9c).
"Acila" refere-se a R"-C(O)-, em que R" é H, alquila, alquila subs- tituída, heteroalquila, heteroalquila substituída, alquenila, aquenila substituí- da, arila, alquilarila ou alquilarila substituída.
"Alquila" refere-se a um grupo hidrocarboneto contendo um ou mais átomos de carbono, em que múltiplos átomos de carbono, se estiverem presentes, são unidos por ligações simples. O grupo hidrocarboneto alquila pode ser de cadeia linear ou pode conter uma ou mais ramificações ou gru- po cíclicos.
"Alquila substituída" refere-se a uma alquila em que um ou mais átomos de hidrogênio do grupo hidrocarboneto são substituídos com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio (isto é, flúor, cloro, bromo e iodo), -OH1-CN1-SH, -NH2, -NHCH3, -NO2, -C^20 alquila substituída com 1 a 6 halogênios, -CF3, -OCH3, -OCF3 e -(CH2)o-2o- COOH. Em diferentes modalidades, 1, 2, 3 ou 4 substituintes estão presen- tes. A presença de -(CH2)o-2o-COOH resulta na produção de um ácido alqui- la. Exemplos de ácidos alquila contendo, ou consistindo em -(CH2)o-2o- COOH incluem, mas não estão limitados a, ácido 2-norbornano, ácido ter- butírico e ácido 3-ciclopentil propiônico.
"Heteroalquila" refere-se a uma alquila em que um ou mais dos átomos de carbono no grupo hidrocarboneto é substituída com um ou mais seguintes grupos: amino, amido, -O-, -S-, ou carbonila. Em diferentes moda- lidades, 1 ou 2 heteroátomos estão presentes.
"Heteroalquila substituída" refere-se a uma heteroalquila em que um ou mais átomos de hidrogênio do grupo hidrocarboneto são substituídos com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio (isto é, flúor, cloro, bromo e iodo), -OH, -CN, -SH, -NH2, -NHCH3, -NO2, -C-i-20 alquila substituída com 1 a 6 halogênios, -CF3, -OCH3, -OCF3, e -(CH2)o-2o-COOH. Em diferentes modalidades, 1, 2, 3 ou 4 substitu- intes estão presentes.
"Alquenila" refere-se a um grupo hidrocarboneto feito de dois ou mais carbonos em que uma ou mais ligações duplas carbono-carbono estão presentes. O grupo hidrocarboneto alquenila pode ser de cadeia linear ou conter uma ou mais ramificações ou grupos cíclicos.
"Alquenila substituída" refere-se a uma alquenila em que um ou mais hidrogênios são substituídos por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halogênios (isto é, flúor, cloro, bromo e iodo), -OH, -CN1 -SH1 -NH2, -NHCH3, -NO2l -C^20 alquila substituída com 1 a .6 halogênios, -CF3l -OCH3l -OCF3, e -(CH2)0-20-COOH. Em diferentes moda- lidades, 1, 2, 3 ou 4 substituintes estão presentes.
"Arila" refere-se a um grupo aromático opcionalmente substituído com ao menos um anel tendo um sistema de π-elétron conjugado, contendo até dois sistemas de anel conjugados ou fundidos. Arila inclui, mas não está limitada a grupos arila carboxílica, arila heterocíclica, e biarila. Preferencial- mente, a arila é um anel de 5 ou 6 membros. Os átomos preferenciais para uma arila heterocíclica são um ou mais de enxofre, oxigênio e/ou nitrogênio. Exemplos de arila incluem, mas não estão limitados a, fenila, 1-naftila, 2-naftila, indol, quinolina, 2-imidazol e 9-antraceno. Os substituintes de arila são selecionados a partir do grupo que consiste em -C1-20 alquila, -C1-20 alcóxi, halogênio (isto é, flúor, cloro, bromo e iodo), -OH, -CN, -SH1-NH2, -NO2, -C-i-20 alquila substituída com 1 a 5 halogênios, -CF3, -OCF3, e —(CH2)o-2o- COOH. Em diferentes modalidades, a arila contém O, 1, 2, 3 ou 4 substituintes.
O termo "halo" abrange flúor, cloro, bromo e iodo.
O termo "porção (C1-C12)hidrocarboneto" abrange alquila, alque- nila e alquinila e no caso de alquenila e alquinila há C2-C12.
"Alquilarila" refere-se a uma "alquila" unida a uma "arila".
O que se entende por Glu(NH-hexila) é
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O que se entende por Ser(n-octanoila) ou Ser(C(0)-heptila) é
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Os aminoácidos de N-terminal Inp e Apc têm as estruturas de:
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A presente invenção inclui diastereômeros bem como suas for- mas puras racêmicas e enantiomericamente resolvidas. Os análogos de gre- Iina podem conter D-aminoácidos, L-aminoácidos ou qualquer combinação desses. Preferencialmente, os aminoácidos presentes em um análogo de grelina são os L-enantiômeros.
Os derivados preferenciais de análogos da invenção compreen- dem D-aminoácidos, N-alquil-aminoácidos, β-aminoácidos e/ou um ou mais aminoácidos rotulados (incluindo uma versão rotulada de um D-aminoácidos, N-alquil-aminoácidos, ou um β-aminoácido). Um derivado rotulado indica a alteração de um aminoácido ou derivado de aminoácido com um rótulo de- tectável. Exemplos de rótulos detectáveis incluem rótulos luminescentes, enzimáticos e radioativos. Ambos o tipo de rótulo e a posição do rótulo po- dem afetar a atividade análoga. Os rótulos deveriam ser selecionados e po- sicionados tal como para não alterar substancialmente a atividade do análo- go de grelina no receptor de GHS. O efeito de um rótulo e posição particular na atividade de grelina pode ser determinado usando ensaios que medem a atividade e/ou ligação de grelina.
Um grupo de proteção covalentemente ligado ao grupo carbóxi de C-terminal reduz a reatividade do terminal carbóxi sob condições in vivo. O grupo de proteção de terminal carbóxi é preferencialmente ligado ao grupo α-carbonila do último aminoácido. Os grupos de proteção de terminal carbóxi preferenciais incluem amida, metilamida e etilamida.
Certas outras abreviações usadas aqui são definidas como segue: Nomenclatura e Abreviações Símbolo Significado
Boc: ter-butilóxi carbonila
BSA: albumina de soro bovino
Bzl: benzila
DCM: diclorometano DIC: Ν,Ν-diisopropil carbodiimida
DIEA: diisopropiletil amina
Dmab: 4-[N-(1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexilideno)-3-metilbutii)-amino]benzil
DMAP: 4-(dimetilamino)piridina
DMF: dimetiiformamida
DNP: 2,4-dinitrofenila
EDTA: ácido etiienodiamino tetracético
Fmoc: fluorenilmetiloxicarboniia
HBTU: 2-(1 H-benzotriazol-1 -il)-1,1,3,3-tetrametilurônio hexafluorfosfato
cHex: ciclohexiia
HOAT: 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilurônio hexafluorfosfato
HOBt: 1-hidróxi-benzotriazol
HPLC: cromatografia líquida de alto desempenho
MBHA: 4-metilbenzidrilamina
Mmt: 4-metoxitritil
NMP: N-metilpirrolidona
Pbf: 2,2,4,6,7-pentametildihidrobenzofuran-5-sulfonila
PhiPr: γ-2-fenilisopropil éster
PyAOP: 7-azabenzotriazol-1-iloxitris(pirrolidino)fosfônio-hexafluorfosfato
tBu: ter-butila
TIS: triisopropilsilano
TOS: tosila
TRT: tritila
TFA: ácido trifluoracético
TFFH: tetrametilfluorforamidinio hexafluorfosfato
Z: benzilóxi carbonila Método Sintético
Os compostos da invenção podem ser produzidos usando as técnicas descritas nos exemplos aqui bem como técnicas que são bem co- nhecidas na técnica. Por exemplo, uma região de polipeptídeo de um análo- go de grelina pode ser química ou bioquimicamente sintetizada e modificada. Exemplos de técnicas para síntese bioquímica envolvendo a introdução de um ácido nucleico em uma célula e de expressão de ácidos nucleicos são fornecidos em Ausubel, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley, 1987 a 1998, e Sambrook e outros, em Molecular Cloning, A Laboratory Ma- nual, 2a Edição, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989. Técnicas para síntese química de polipeptídeos são também bem conhecidas na área (Vin- cent em Peptide and Protein Drug Delivery, Nova Iorque, N.I., Dekker, 1990). Por exemplo, os peptídeos desta invenção podem ser preparados por sínte- se de peptídeo de fase sólida padrão (Stewart, J.M, e outros, Solid Phase Synthesis, Pierce Chemical Co., 2a Ed. 1984).
O substituinte R2 da fórmula genérica acima pode se ligado à amina livre do aminoácido de N-terminal por métodos padrão conhecidos na técnica. Por exemplo, grupos alquila, por exemplo, (C1-C30)alquila, podem ser ligados usando alquilação redutiva. Os grupos hidroxialquila, por exem- pio, (C1-C30)hidroxialquila, podem ser também ligados usando alquilação redutiva em que o grupo hidróxi livre é protegido com um t-butil éster. Os grupos acila, por exemplo, COE1, podem ser ligados acoplando o ácido livre, por exemplo, E1COOH, à amina livre do aminoácido de N-terminal misturan- do a resina completa com 3 equivalentes molares de ambos ácido livre e diisopropilcarbodiimida em cloreto de metileno por uma hora. Se o ácido livre contém um grupo hidróxi livre, por exemplo, ácido p-hidroxifenil propiônico, então o acoplamento deveria ser executado com 3 equivalentes molares adicionais de HOBT.
Quando R1 é NH-X2-CH2-CONH2, (isto é, Z0 = CONH2), a síntese do peptídeo começa com Fmoc-HN-X2-CH2-COOH acoplado com uma resi- na Amido-MBHA Rink (amido-4-metilbenzilhidril amina obtida a partir de No- vabiochem®, San Diego, CA). Se R1 é NH-X2-CH2-COOH (isto é, Z0-COOH), a síntese do peptídeo começa com Fmoc-HN-X2-CH2-COOH que é acoplado à resina Wang.
Na síntese de um análogo de grelina dessa invenção contendo A5c, A6c, e/ou Aib, o tempo de acoplamento é duas horas para esses resí- duos e o resíduo imediatamente seguinte.
Exemplos são fornecidos abaixo para ademais ilustrar diferentes características da presente invenção. Os exemplos também ilustram a meto- dologia útil para praticar a invenção. Esses exemplos não limitam a invenção reivindicada.
Exemplo 2: (Ac-1 -Apc1, Aib2,10, Glu(NH-hexil)3)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ Nº 8)
Fmoc-(Aib2,10, Glu3)hGrelina(2-28)-resina Rink Amida-MBHA foi sintetizado em um sintetizador de peptídeo 433A (obtido a partir da Appli- ed Biosystems®, Foster City, CA, U.S.A) usando química de fluorenilmetiloxi- carbonila (Fmoc). Uma resina Amida-4-metilbenzilhidrilamina (MBHA) Rink (obtida a partir de Novabiochem®, San Diego, CA, U.S.A) com substituição de 0,64 mmol/g foi usada. Os aminoácidos Fmoc (obtidos a partir da AnaS- pec®, San Jose, CA, U.S.A) usados foram Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Aib-OH, Fmoc-GIn(Trt)-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc- Ser(tBu)-OH, e Fmoc-Val-OH. Em adição, Fmoc-Glu(0-2-PhiPr)-OH (obtido a partir de Novabiochem®, San Diego, CA, USA) foi usado em A3. A síntese foi executada em uma escala de 0,1 mmol. Os grupos Fmoc foram removi- dos por tratamento com 20% de piperidina em N-metilpirrolidona (NMP) por .30 minutos. Em cada etapa de acoplamento, o aminoácido FmoC (3 eq., 0,3 mmol) foi primeiro pré-ativado em uma solução de 2 mL de 0,45M de 2-(1-H- benzotriazol-1-il)-1,1,2,3-tetrametilurônio hexafluorfosfato/1-hidróxi-benzotriazol (HBTU/HOBT) em NMP. Ao éster de aminoácido ativado, 1 mL de diisopropi- Ietilamina (DIEA) e 1 mL de NMP foram adicionados. O sintetizador de pep- tídeo 433A ABI foi programado para executar o seguinte:
(1) lavagem com NMP;
(2) remoção do grupo de proteção Fmoc com 20% de piperidina em NMP por 30 minutos;
(3) lavagem com NMP; e
(4) acoplamento com aminoácido Fmoc pré-ativado por uma a
três horas.
A resina foi acoplada sucessivamente de acordo com a seqüência do peptídeo título. Após a cadeia de peptídeo ser montada, a resina foi lavada completamente usando Ν,Ν-dimetilformamida (DMF) e diclorometano (DCM).
No fim da montagem da cadeia de peptídeo no 433A, a resina- peptídeo foi transferida para um recipiente de reação em um agitador e o Fmoc foi removido usando 25% de Pip/DMF por 30 minutos. A resina foi la- vada com DMF. Fmoc-Apc-OH (0,4 mmol) foi acoplado usando TFFH (te- trametilfluorformamidinio hexafluorfosfato) (obtido a partir de Perceptive Bi- osystems®, Warrington, Reino Unido) (0,4 mmol), HOAt (0,4 mmol), DMAP (dimetilaminopiridina) (0,1 g) e DIEA (1,2 mmol) uma vez por um ciclo de quatro horas e então novamente de um dia para o outro.
O grupo Fmoc foi removido como acima e o peptídeo foi tampa- do usando Ac2 (anidrido acético) (5 mmols) e DIEA (5 mmols) em DMF por 30 minutos. Os grupos PhiPrforam removidos de Glu3 usando 2 χ TFA a 3% em DCM por um ciclo de 10 minutos. O Boc que foi parcialmente removido da cadeia lateral de Lys foi substituído usando Boc20 (0,8 mmol) e DIEA (0,8 mmol) em DCM de um dia para o outro. A resina foi então tratada com PyAOP (7-azabenzotriazol-1-iloxitris(pirrolidino)fosfônio-hexafluorfosfato) (obtido a partir de Applied Biosystems®, Foster City, CA, USA) (0,6 mmol), HOAt (0,6 mmol), DMAP (0,1 g) e DIEA (1,8 mmol) por um ciclo de 10 minu- tos após o qual hexil-NH2, isto é, hexilamina (obtida a partir de Sigma-Aldrich Chemicals®, St. Louis, MO1 USA) (2,0 mmols) foi adicionada e a resina resul- tante foi continuamente agitada de um dia para o outro.
Para clivar o peptídeo título, a resina foi tratada com uma mistu- ra de TFA, H2O e triisopropilsilano (TIS) (9,5 ml/0,85 ml/0,8 ml) por quatro horas. A resina foi removida por seleção e o filtrado foi derramado em 200 ml de éter. O precipitado foi coletado por centrifugação. O produto bruto foi dis- solvido em uma mistura de acetonitrilo e água e purificado em um sistema HPLC preparativo de fase reversa com uma coluna (4 χ 43 cm) de Ci8 DY- NAMAX-100 A0 (obtido a partir de Varian®, Walnut Creek, CA, USA). A colu- na foi eluída durante aproximadamente 1 hora usando um gradiente linear de 92% de A : 8% de B a 72% de A : 28% de B, em que A foi TFA a 0,1% em água e B foi TFA a 0,1% en, acetonitrilo. As frações foram verificadas por HPLC analítico e aquelas contendo o produto bruto foram acumuladas e Iiofi- Iizadas à secura para obter 1,5 mg de rendimento (0,5%) de um sólido bran- co. A pureza foi ensaiada usando HPLC e revelada como sendo aproxima- damente 97,5%. A análise de espectrometria de massa de ionização por ele- troaspersão (ESI-MS) forneceu o peso molecular em 3435,1 (de acordo com o peso molecular calculado de 3434,5).
Exemplo 4: (1-Apc1, Aib2'10, Glu(NH-hexil)3)-hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N0 1)
Fmoc-(Aib2'10, Glu3)hGrelina(2-28)-resina Rink amida-MBHA pro- tegida por cadeia lateral foi sintetizado em um sintetizador de peptídeo 433A (obtido a partir de Applied Biosystems®, Foster City, CA, USA) usando quí- mica de Fluorenilmetiloxicarbonila (Fmoc). Uma resina Rink Amida-4- metilbenzilhidrilamina (MBHA) (obtida a partir de Novabiochem®, San Diego, CA, USA) com substituição de 0,64 mmol/g foi usada. Os aminoácidos Fmoc (obtidos a partir de AnaSpec®, San Jose, CA, USA) usados foram Fmoc-Ala- OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Aib-OH, Fmoc-GIn(Trt)-OH, Fmoc-Glu(tBu)- OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, e Fmoc-Val-OH. Em adição, Fmoc- Glu(0-2-PhiPr)-0H (obtido a partir de Novabiochem®, San Diego, CA) foi usado em A3. A síntese foi executada em uma escala de 0,1 mmol. Os gru- pos Fmoc foram removidos por tratamento com 20% de pipedidina em N-metilpirrolidina (NMP) por um ciclo de 30 minutos. Em cada etapa de aco- plamento, o aminoácido Fmoc (3 eq. 0,3 mmol) foi primeiro pré-ativado em uma solução de 2 mL de 0,45M de 2-(1-H-benzotriazol-1-il)-1,1,2,3-tetrame- tilurônio hexafluorfosfato/1-hidróxi-benzotriazol (HBTU/HOBT) em NMP. Ao éster de aminoácido ativado, 1 mL de diisopropiletilamina (DIEA) e 1 mL de NMP foram adicionados à resina. O sintetizador de peptídeo 433A ABI foi programado para executar a seguinte reação: (1) lavagem com NMP;
(2) remoção do grupo de proteção Fmoc com 20% de piperidina em NMP por 30 minutos;
(3) lavagem com NMP; e
(4) acoplamento com aminoácido Fmoc pré-ativado por uma a quatro horas.
A resina foi acoplada sucessivamente de acordo com a seqüência do peptídeo título. Após a cadeia de peptídeo ser montada, a resina foi lavada completamente usando Ν,Ν-dimetilformamida (DMF) e diclorometano (DCM).
No fim da montagem da cadeia de peptídeo no 433A, a resina- peptídeo foi transferida para um recipiente de reação em um agitador e o Fmoc foi removido usando uma solução de 25% de Pip/DMF por aproxima- damente 30 minutos. A resina foi então lavada com DMF. Fmoc-Apc-OH (0,4 mmol) foi acoplado usando TFFH (tetrametilfluorformamidinio hexafluorfosfa- to) (obtido a partir de Perceptive Biosystems®, Warrington, Reino Unido) (0,4 mmol), HOAt (0,4 mmol), DMAP (dimetilaminopiridina) (0,1 g) e DIEA (1,2 mmol por um ciclo de quatro horas e então novamente de um dia para o outro.
O grupo Fmoc foi removido como acima. Os grupos PhiPr foram removidos de Glu3 usando 2 ciclos de TFA a 3% em DCM por um período de minutos por ciclo. O Boc que foi parcialmente removido da cadeia lateral de Lys durante o processo foi substituído usando Boc20 (0,8 mmol) e DIEA (0,8 mmol) em DCM de um dia para o outro. A resina foi tratada com PyAOP (7-azabenzotriazol-1 -iloxitris(pirrolidino)fosfônio-hexafluorfosfato) (obtido a partir de Applied Biosystems®, Foster City, CA, USA) (0,6 mmol), HOAt (0,6 mmol), DMAP (0,1 g) e DIEA (1,8 mmol) por 10 minutos após os quais hexil- NH2, isto é, hexilamina (obtida a partir de Sigma-Aldrich Chemicals®, St. Louis, MO, USA) (2,0 mmols) foi adicionada e a resina de resina foi agitada de um dia para o outro.
O peptídeo título foi clivado a partir da resina tratando-o com uma mistura de TFA, H2O e tríisopropilsilano (TIS) (9,5 ml/0,85 ml/0,8 ml) por um período de aproximadamente quatro horas. A resina foi removida por seleção e o filtrado foi derramado em 200 ml de éter. O precipitado foi coletado por centri- fugação. O produto bruto foi dissolvido em uma mistura de acetonitrilo e água e purificado em um sistema HPLC preparativo de fase reversa com uma coluna (4 χ 43 cm) de C18 DYNAMAX-100 A0 (obtido a partir de Varian®, Walnut Creek1 CA1 USA). A coluna foi eluída durante aproximadamente 1 hora usando um gradiente linear de 92% de A : 8% de B a 72% de A : 28% de B1 em que A foi TFA a 0,1% em água e B foi TFA a 0,1% em acetonitrilo. As frações foram veri- ficadas por HPLC analítico e aquelas contendo o produto bruto foram acumula- das e Iiofilizadas à secura para obter 4,6 mg de rendimento (1,4%) de um sólido branco. A pureza foi ensaiada usando HPLC e revelada como sendo aproxima- damente 99,8%. A análise de espectrometria de massa de ionização por eletro- aspersão (ESI-MS) forneceu o peso molecular em 3393,5 (de acordo com o peso molecular calculado de 3393,1).
<formula>formula see original document page 46</formula> Fmoc-(Ser17)hGrelina(2-28)-resina Rink amida-MBHA protegida por cadeia lateral foi sintetizado em um sintetizador de peptídeo modelo 433A (obti- do a partir de Applied Biosystems®, Foster City, CA, USA) usando química de Fluorenilmetiloxicarbonila (Fmoc). Uma resina Rink Amida-4-metilbenzilhi- drilamina (MBHA) (obtida a partir de Novabiochem®, San Diego, CA, USA) com substituição de 0,64 mmol/g foi usada. Os aminoácidos Fmoc (obtidos a partir de AnaSpec®, San Jose, CA, USA) usados foram Fmoc-Ala-OH, Fmoc- Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Aib-OH, Fmoc-GIn(Trt)-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc- His(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, e Fmoc-Val-OH. Em adição, Fmoc-Ser(Trt)-OH (obtido a partir de AnaSpec®, San Jose, CA, USA) foi usado em A3 e A17. A síntese foi executada em uma escala de 0,2 mmol. Os grupos Fmoc foram removidos por tratamento com 20% de piperidina em N-metilpirrolídina (NMP) por 30 minutos. Em cada etapa de acoplamento, o aminoácido Fmoc (3 eq. 0,3 mmol) foi pri- meiro pré-ativado em uma solução de 2 mL de 0,45M de 2-(1-H-benzotriazol-1- il)-1,1,2,3-tetrametilurônio hexafluorfosfato/1-hidróxi-benzotriazol (HBTU/HOBT) em NMP. Ao ésterde aminoácido ativado, 1 mL de diisopropiletilamina (DIEA) e 1 mL de NMP foram adicionados. O sintetizador de peptídeo 433A ABI foi pro- gramado para executar o seguinte: (1) lavagem com NMP;
(2) remoção do grupo de proteção Fmoc com 20% de piperidina em NMP por 30 minutos;
(3) lavagem com NMP; e
(4) acoplamento com aminoácido Fmoc pré-ativado por uma ou duas horas.
A resina foi acoplada sucessivamente de acordo com a seqüên- cia do peptídeo título. Após a cadeia de peptídeo ser montada, a resina foi lavada completamente usando Ν,Ν-dimetilformamida (DMF) e diclorometano (DCM).
No fim da montagem da cadeia de peptídeo no 433A, a resina- peptídeo foi transferida para um recipiente de reação em um agitador e o Fmoc foi removido usando 25% de Pip/DMF por um ciclo de 30 minutos. A resina foi então lavada com DMF. Fmoc-Inp-OH (1,0 mmol) foi acoplado usando TFFH (tetrametilfluorformamidinio hexafluorfosfato) (obtido a partir de Perceptive Biosystems®, Warrington, Reino Unido) (1,0 mmol), HOAt (1,0 mmol), DMAP (dimetilaminopiridina) (0,1 g) e DIEA (3,0 mmols) uma vez de um dia para o outro.
Os grupos Trt foram removidos de Ser3 e Ser17 usando 2 ciclos de TFA a 3% em DCM, cada ciclo durando aproximadamente 10 minutos. O Boc que foi parcialmente removido da cadeia lateral de Lys como indicado acima, foi substituído usando Boc20 (0,8 mmol) e DIEA (0,8 mmol) em DCM de um dia para o outro. Ácido octanóico (10 mmols) foi acoplado às cadeias laterais Ser3 e Ser17 usando DIC (5 mmols), DMAP (0,2 mg) e DIEA (5 mmols) em DCM de um dia para o outro.
O terminal Fmoc foi removido por imersão em 25% de Pip/DMF por 30 minutos. A resina foi então lavada com DMF. O peptídeo título foi cli- vado a partir da resina usando uma mistura de TFA, H2O e triisopropilsilano (TIS) (9,5 ml/0,85 ml/0,8 ml) por aproximadamente 4 horas. A resina foi re- movida por seleção e o filtrado foi derramado em 200 ml de éter. O precipi- tado foi coletado por centrifugação. O produto bruto foi dissolvido em uma mistura de acetonitrilo e água e purificado em um sistema HPLC preparativo de fase reversa com uma coluna (4 χ 43 cm) de C18 DYNAMAX-100 A0 (obti- do a partir de Varian®, Walnut Creek, CA, USA). A coluna foi eluída durante aproximadamente uma hora usando um gradiente linear de 85% de A : 15% de B a 55% de A : 45% de B, em que A foi TFA a 0,1 % em água e B foi TFA a 0,1% em acetonitrilo. As frações foram verificadas por HPLC analítico e aquelas contendo o produto bruto foram acumuladas e Iiofilizadas à secura para obter 41,7 mg de rendimento (5,9%) de um sólido branco. A pureza foi ensaiada usando HPLC e descrita como sendo aproximadamente 96,6%. A análise de espectrometria de massa de ionização por eletroaspersão (ESI- MS) forneceu o peso molecular em 3507,4 (de acordo com o peso molecular calculado de 3508,16).
Os seguintes peptídeos da invenção podem ser preparados por uma pessoa versada na técnica usando procedimentos sintéticos análogos aos descritos geralmente aqui acima:
Exemplo 1: (Ac-lnp1, Aib2'10, Glu(NH-hexil)3)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0 8)
Exemplo 2: (Ac-1-lpc1, Aib2'10, Glu(NH-hexil)3)hGrelina(1-28)- NH2; (ID SEQ N0 8)
Exemplo 3: (Inp1, Aib2'10, Glu(NH-hexil)3)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0 1)
Exemplo 4: (1-lpc1, Aib2'10, Glu(NH-hexil)3)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0 1)
Exemplo 5: (lnp1)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0 2) Exemplo 6: (Inp1, Aib2)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0 2) Exemplo 7: (Inp1, Aib2, Glu(NH-hexil)3)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0 3)
Exemplo 8: (Inp1, Aib2'10)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0 4) Exemplo 9: (Inp1, Aib2'8)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0 5) Exemplo 10: (Inp1, Aib2, Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0 6)
Exemplo 11: (Inp1, Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0 6) <formula>formula see original document page 49</formula> Uma seleção das modalidades preferenciais listadas acima foi analisada por espectrowetria de massa de ionização por eletroaspersão (ESI-MS) para determirar o peso molecular. A Tabela 1 apresentada abaixo relata os dados compilafos durante esse teste. A pureza de cada um dos compostos selecionado^ ensaiados usando HPLC, é também fornecida. TABELA 1: Peso Molecifer e Pureza de Compostos Selecionados
<table>table see original document page 49</column></row><table> Uma seleção das modalidades preferenciais listadas acima foi analisada para determinar a estabilidade, isto é, a meia-vida em plasma em um modelo de rato usando técnicas conhecidas pelos versados na técnica. A Tabela 2 apresentada abaixo relata os dados compilados durante tal teste. TABELA 2 - Meia-Vida em Plasma de Ratos de Compostos Selecionados
<table>table see original document page 50</column></row><table>
Determinação da Atividade Biológica
São descritos aqui métodos que podem ser e foram usados para caracterizar os compostos da invenção. O versado na técnica conheceria e apreciaria as variações nesses ensaios que gerariam resultados compará- veis. O versado na técnica também conheceria e apreciaria que outros en- saios podem ser empregados para gerar os resultados e discernir as carac- terísticas descritas aqui. Ensaio de Determinação de Ligação com Receptor de GHS
A atividade dos compostos da invenção no receptor de GHS po- de ser e foi determinada usando técnicas tais como aquelas descritas nos exemplos fornecidos abaixo. Com relação a IC50, maior se refere à potência e assim indica que uma menor quantidade é necessária para alcançar a ini- bição de ligação.
Ensaios de ligação podem ser executados usando polipeptídeos de receptor de GHS produzidos de forma recombinante presentes em dife- rentes ambientes. Tais ambientes incluem, por exemplo, extratos de células e extratos de células purificados contendo o polipeptídeo de receptor de GHS expresso a partir de ácido nucleico recombinante ou ácido nucleico naturalmente ocorrendo; e também incluem, por exemplo, o uso de um poli- peptídeo de receptor de GHS purificado produzido por meio recombinante ou a partir de ácido nucleico ocorrendo naturalmente que é introduzido em um ambiente diferente.
Triagem para Compostos Ativos de Receptor de GHS
A triagem para compostos ativos de receptor de GHS é facilitada usando um receptor expresso de forma recombinante. Um receptor de GHS expresso de forma recombinante oferece várias vantagens tal como a capa- cidade de expressar o receptor em um sistema celular definido tal que uma resposta a um composto no receptor de GHS possa ser mais prontamente diferenciada de respostas em outros receptores. Por exemplo, o receptor de GHS pode ser expresso em uma linhagem celular como HEK 293, COS 7 e CHO não expressando normalmente o receptor por um vetor de expressão em que a mesma linhagem celular sem o vetor de expressão pode agir como um controle.
A triagem por compostos que reduzem a atividade do receptor de GHS é facilitada usando um análogo de grelina no ensaio que fornece atividade de receptor de GHS. O efeito de compostos teste em tal atividade pode ser medido para identificar, por exemplo, moduladores alostéricos e antagonistas.
A atividade do receptor de GHS pode ser medida usando dife- rentes técnicas tal como detectar uma mudança na conformação intracelular do receptor de GHS, nas atividades acopladas por proteína G e/ou nos men- sageiros intracelulares. Preferencialmente, a atividade do receptor de GHS é medida usando técnicas tais como aquelas que medem Ca2+ intracelular. Exemplos de técnicas bem conhecidas na arte que podem ser empregados para medir Ca2+ incluem o uso de corantes tais como Fura-2 e o uso de pro- teínas repórteres sensíveis à bioluminescência de Ca2+ tais como aequorina. Um exemplo de uma linhagem celular empregando aequorina para medir a atividade de proteína G é HEK293/aeq 17 (Button, D e outros, Cell Calcium (1993), 14(9):663 a 671; e Feighner, S. D e outros, Science, (1999), .284(5423): 2184 a 2188).
Os receptores quiméricos contendo uma região de ligação com grelina funcionalmente acoplada a uma proteína G diferente podem também ser usados para medir atividade de receptor de GHS. Um receptor de GHS quimérico contém um domínio extracelular de N-terminal, um domínio trans- membrana feito de regiões transmembrana, regiões de cicloextracelular e regiões de ciclointracelular e um término carbóxi intracelular. As técnicas para produzir receptores quiméricos e medir respostas acopladas à proteína G são fornecidas, por exemplo, no Pedido de Patente Internacional N0 PCT/US96/12336 [WO 97/05252] e Patente U.S. N0 5.264.565 incorporados aqui a título de referência.
Estímulo de Atividade de Receptor de GHS
Os análogos de grelina podem ser usados para estimular a ativi- dade de receptor de GHS que podem ser usados, por exemplo, para estudar os efeitos da modulação de receptor de GHS e/ou secreção de GH, para identificar os antagonistas de grelina e/ou para beneficiar um indivíduo que sofre de uma doença ou condição tal como um estado deficiente de GH, di- minuição de massa muscular e/ou densidade óssea, disfunção sexual, peso corporal não saudável, perda de funções motoras e/ou funcionamento físico e/ou uma ausência de apetite normal.
O aumento do peso ou apetite é crucial para manter o peso cor- poral saudável ideal em um indivíduo suscetível à perda de peso, tal como o doente ou idoso. A perda de peso ou apetite em um indivíduo abaixo do pe- so pode levar a sérios problemas de saúde. Em um paciente que sofre de uma doença ou está passando por um tratamento médico que causa perda de peso e/ou ausência de apetite normal, a eficácia do tratamento da dita doença ou condição é contingente mediante a capacidade do paciente em manter um peso consistente.
De forma oposta, os antagonistas de grelina são úteis nos trata- mentos para facilitar a perda de peso naqueles indivíduos para os quais a perda de peso é necessária.
Ensaios Biológicos - Exemplos
Ensaio de Ligação de Receptor
1A. Preparação de células CHO-K1 expressando o receptor de GHS recombinante humano
O cDNA para receptor de secretagogo de GH humano (hCHS-R ou receptor de grelina) foi clonado usando técnicas de Reação de Cadeia de Polimerase (PCR) bem conhecidas aos versados na técnica em que o RNA do cérebro humano foi empregado como um modelo (obtido a partir de Clon- tech®, Palo Alto, CA, USA), iniciadores específicos de gene flanqueando a seqüência de codificação de comprimento completo de hGHS-R (S: 5' - A T GTGGAACGCGACGCCCAGCGAAGAG-3'e AS: 5'- T C A T GTATTAATACTAGATTCTGTCCA-3')e Kit® PCR Advantage 2 (disponível a partir de Clontech®, Palo Alto, CA, USA). O produto de PCR foi clonado no vetor pCR2.1 usando o Kit® de Clonagem TA Original (obtido a partir de Invitrogen®, Carlsbad, CA1 USA). O GHS-R humano de compri- mento completo foi subclonado no pcDNA do vetor de expressão de mamífe- ro 3.1 (disponível a partir de Invitrogen®, Carlsbad, CA, USA). O plasmídeo foi transfectado na linhagem celular de ovário de hamster Chinês, CHO-K1 (fornecido por American Type Culture Collection®, Rockville, MD, USA) u- sando métodos de fosfato de cálcio conhecidos como descrito em Wigler, M. e outros, Cell (1977), 11(1): 223 a 232. Únicos clones de célula estavelmente expressando o hGHS-R foram obtidos selecionando-se as células transfec- tadas cultivadas em anéis de clonagem em meios RPMI 1640 suplementa- dos com 10% de soro bovino fetal e 1 mM de piruvato de sódio contendo 0,8 mg/ml de G418 (adquirido a partir de Gibco®, Grand Island, NY1 USA). 1B. Ensaio de Ligação de GHS-R:
Membranas para estudos de ligação de radioligantes podem ser e foram preparadas por homogeneização das células CHO-K1 anteriores expressando o receptor de GHS recombinante humano em aproximadamen- te 20 ml de 50 mM de Tris-HCI gelado com um Brinkman Polytron® (Brink- man®, Westbury, NY, USA) no ambiente 6 por aproximadamente 15 segun- dos. Os homogenatos foram lavados duas vezes por centrifugação (39.000 g/10 minutos) e os péletes finais foram ressuspensos em aproximadamente .50 mM de Tris-HCI contendo 2,5 mM de MgCI2 e 0,1% de albumina de soro bovino (BSA). Para o ensaio selecionado, alíquotas de aproximadamente 0,4 ml foram incubadas com 0,05 nM (125l)grelina (-2000 Ci/mmol; Perkin Elmer Life Sciences®, Boston, MA, USA) com e sem 0,05 ml de peptídeo de teste competindo não rotulado. Após aproximadamente 60 minutos a 4o C, a liga- ção (125l)grelina foi separada da grelina livre por rápida filtração através de filtros GF/C (disponíveis a partir de Brandel®, Gaithersburg, MD, USA) que foram pré-remolhados em polietilenoimina a 0,5%/BSA a 0,1%. Os filtros foram então lavados 3 vezes com alíquotas de 5 ml de Tris-HCI a 50 mM gelado e BSA a 0,1%. A radioatividade ligada capturada nos filtros foi conta- da por espectrometria gama (usando um espectrômetro da Wallace LKB®, Gaithersburg, MD, USA). A ligação específica foi determinada subtraindo-se ligação de (125l)grelina na presença de 1000 nM de grelina (disponível a par- tir da Bachem®, Torrence, CA, USA) a partir da ligação total de (125l)grelina.
Uma seleção das modalidades preferenciais foi testada usando o ensaio de ligação de receptor discutido acima e os resultados para aqueles compostos são relatados na Tabela 3 apresentada abaixo. TABELA 3: Valores Ki de Ligação de Receptor para Compostos Selecionados
<table>table see original document page 55</column></row><table>
.1. Ensaios de Atividade Funcional de GHS-R
.2A. Mobilização de iCa2+ Intracelular Mediada por Receptorde GSH In Vitro
As células CHO-K1 anteriores expressando o receptor de GSH
humano foram colhidas incubando-se em uma solução salina tamponada
com fosfato/EDTA a 0,3% a 25°C; as células foram então lavadas duas ve-
zes por centrifugação. As células lavadas foram ressuspensas em solução
salina tamponada de Hank (HBSS) para carregamento do indicador de Ca2+
fluorescente Fura-2AM. As suspensões celulares de aproximadamente 106
células/ml foram incubadas com 2 μΜ de Fura-2AM por aproximadamente
.30 minutos em aproximadamente 25°C. Fura-2AM não carregado foi removi-
do por centrifugação duas vezes em HBSS e as suspensões finais foram
transferidas para um espectrofluorômetro (modelo Hitachi F-2000®, Tóquio, Japão) equipado com um mecanismo de agitação magnético e um fixador de cadinho regulado por temperatura. Após o equilíbrio a 37°C, os análogos de grelina foram adicionados para medição de mobilização de Ca intracelular. Os comprimentos de onda de excitação e emissão foram 340 e 510 nm, res- pectivamente. Um aumento na quantidade de Ca2+ medido foi indicativo de atividade de agonista de um peptídeo testado enquanto uma diminuição na quantidade (ou ausência de) Ca2+ medida foi indicativa de atividade de anta- gonista de um peptídeo testado.
Usando esse método de análise, compostos dos Exemplos 1, 2, .3 e 4 descobriu-se exibindo atividade antagonística no receptor de grelina. .2B. Liberação/Supressão de GH In Vivo
Como é bem conhecido na técnica, os compostos podem ter sua capacidade testada de estimular ou suprimir a liberação de GH in vivo (De- ghenghi, R. e outros, Life Sciences, (1994), 54(18): 1321 a 1328; e Pedido de Patente Internacional N0 PCT/EP01/07929 [WO 02/08250], De modo a verificar a capacidade do composto de estimular a liberação de GH in vivo, um composto selecionado em uma dosagem de aproximadamente 300 mg/kg é injetado de forma subcutânea em ratos de 10 dias de idade. O GH circulante é medido aproximadamente 15 minutos após a injeção comparado aos níveis de GH em ratos injetados com um controle solvente.
Similarmente, os compostos selecionados podem ter sua capa- cidade testada de antagonizar a secreção de GH induzida por grelina in vivo. Uma dose de 300 mg/kg de um composto do pedido é injetada de forma subcutânea em ratos de 10 dias de idade junto com grelina. O GH circulante é então medido aproximadamente 15 minutos após a injeção e comparado aos níveis de GH em ratos injetados com grelina sozinha. .2C. Efeito mediante motilidade gastrointestinal
A grelina foi mostrada como aumentando a motilidade gástrica e aperfeiçoando o esvaziamento gástrico em indivíduos que sofrem de gastro- paresia. Os compostos da invenção podem ser testados para determinar o efeito dos compostos mediante esvaziamento gástrico e trânsito intestinal usando ensaios descritos abaixo. .2C(i). Estudo in vivo de grelina no trânsito intestinal
O efeito de grelina nativa e um análogo de peptídeo com ativida- de de grelina de acordo com a invenção no trânsito intestinal pode ser con- duzido. Em tal estudo, grupos de oito ratos são submetidos a jejum por a- proximadamente 24 horas com acesso livre à água. A grelina nativa, um análogo selecionado, ou um controle tal como atropina, é administrada em indivíduos de teste anestesiados. Aproximadamente cinco minutos após a administração inicial de grelina, o análogo selecionado ou controle, 2 ml de farelo de carvão vegetal são administrados aos indivíduos deteste por en- gorda esofageal. Após aproximadamente mais 25 minutos, os indivíduos de teste são sacrificados por ruptura cervical e os intestinos delgados removi- dos. A distância de carvão vegetal viajada é medida a partir do piloro.
.2C(ii). Estudo in vivo de grelina η esvaziamento gástrico
Os compostos da invenção podem ser testados para determinar o efeito dos compostos mediante esvaziamento gástrico. Em tal estudo, gru- pos de oito ratos machos Sprague Dawley (pesando 200 a 250 gramas) são submetidos a jejum por aproximadamente 24 horas com acesso livre à água. A grelina nativa, um análogo de grelina selecionado e composto controle tal como metoclopramida são administrados de forma intravenosa a indivíduos de teste anestesiados. Aproximadamente cinco minutos após a administração inicial de grelina nativa, o análogo de grelina selecionado ou o composto con- trole, uma refeição de 1,5 ml marcado com vermelho de fenol (0,5 mg/ml de vermelho de fenol e 1,5% de metil celulose em leite integral) é administrado em cada indivíduo de teste por engorda esofageal. Após aproximadamente mais 20 minutos, os indivíduos de teste são sacrificados por ruptura cervical e os estômagos removidos e individualmente pulverizados. O vermelho de fenol residual no estômago dos indivíduos de teste é extraído e medido de forma espectrofotometricamente em um comprimento de onda de 560 nm.
Em outros experimentos, grupos de oito ratos Sprague Dawley machos (pesando 200 a 250 gramas) são submetidos a jejum por aproxima- damente 24 horas com livre acesso à água. Os animais são injetados de forma subcutânea com ou veículo ou doses variáveis de grelina nativa ou análogos de grelina selecionados. Após aproximadamente 15 minutos, 1,5 ml de uma refeição de nutriente marcado com vermelho de fenol (0,5 mg/ml de vermelho de fenol & 1,5% de metil celulose em leite integral) é adminis- trado oralmente aos ratos. Após aproximadamente mais 15 minutos, os indi- víduos são sacrificados por ruptura cervical e, após fixação do piloro & cár- dia, o estômago é removido. O vermelho de fenol residual no estomago é extraído e medido por métodos espectrofotométricos em um comprimento de onda de 560 nm. .2C(iii). Efeito em POI em ratos
Uma Iaparotomia de 3 centímetros é usada para induzir a obs- trução total gástrica em ratos Sprague Dawley machos (pesando 200 a 250 gramas) sob anestesia de isoflurano. Os músculos abdominais e a pele são fechados com sutura e os animais são permitidos a recuperar por aproxima- damente duas horas e quarenta e cinco minutos. Nessa hora, o veículo ou análogos de grelina selecionados são administrados de forma subcutânea aos animais laparotomizados. Aproximadamente, 15 minutos após a admi- nistração dos compostos ou veículo, uma refeição marcada com vermelho de fenol (vide acima) é introduzida nos animais. Após aproximadamente mais 15 minutos, os indivíduos são sacrificados por ruptura cervical e o es- vaziamento gástrico é medido como descrito acima. .2C(iv). Efeito em PQI em ratos na presença de morfina
Uma Iaparotomia de 3 centímetros é usada para induzir obstru- ção gástrica em ratos Sprague Dawley machos (pesando 200 a 250 gramas) sob anestesia de isoflurano. Os músculos abdominais e a pele são fechados com sutura e os animais são permitindo a se recuperarem por aproximada- mente 2,5 horas, tempo no qual os animais laparotomizados recebem uma administração subcutânea de 4 mg/kg de morfina. Aproximadamente 15 mi- nutos após receber a morfina, o veículo ou os análogos de grelina selecio- nados são administrados subcutaneamente aos animais laparotomizados. Aproximadamente 15 minutos após a administração dos compostos ou veí- culo, a refeição marcada com vermelho de fenol (vide acima) é introduzida nos animais. Após aproximadamente mais 15 minutos, os indivíduos são sacrificados por ruptura cervical e o esvaziamento gástrico é medido como descrito acima.
2C(v). Efeito na motilidade gástrica em ratos na presença de morfina.
Ratos Sprague Dawley machos (pesando 200 a 250 gramas) recebem uma administração subcutânea de 4 mg/kg de morfina. Aproxima- damente 15 minutos depois de receber a morfina, o veículo ou análogos de grelina selecionados são administrados subcutaneamente aos animais. A- proximadamente 15 minutos após a administração dos compostos ou veícu- lo, uma refeição marcada com vermelho de fenol (vide acima) é introduzida nos animais. Após aproximadamente mais 15 minutos, os indivíduos são sacrificados por ruptura cervical e o esvaziamento gástrico foi medido como descrito acima. .2D. Efeito mediante o peso
Os Iigantes para receptores de melanocortina da presente in- venção podem ser testados para um efeito mediante a ingestão de alimento e/ou peso corporal de acordo com os seguintes procedimentos. Um versado na técnica conhece que procedimentos similares aos descritos aqui podem ser usados para ensaiar o efeito dos compostos da invenção mediante a in- gestão de alimento e/ou peso corporal. .2D(i). Experimentos de Alimentação Aguda (jejum)
Os ratos Sprague Dawley machos (250 g) são alojados em gaio- las individuais e mantidos sob condições de luz:escuro de 12:12 horas. Os ratos são submetidos a jejum por 18 horas antes do início do experimento com água disponível à vontade. No tempo 0, os ratos são injetados subcuta- neamente (sc) com compostos selecionados em doses selecionadas, por exemplo, 500 a 100 nmol/kg, ou com veículo, e são fornecidos com alimento. O consumo de alimento individual é medido em aproximadamente 1, 2, 3, 4,5 e 6 horas após a injeção.
.2D(ii). Experimentos de alimentação aguda (sem jejum)
Ratos Sprague Dawley machos (250 g) são alojados em gaiolas individuais e mantidos sob condições de luz:escuro de 12:12 horas. Água e alimento estão disponíveis à vontade durante todo o experimento. No tempo O, os ratos são injetados subcutaneamente (sc) com composto em doses de 8 pmol/kg, ou com veículo. O consumo de alimento individual é medido em aproximadamente 0,5, 1, 1,5, 2, 3, e 4 horas após a injeção. 2D(iii). Experimentos de alimentação crônica
Ratos Sprague Dawley machos (250 g) são alojados em gaiolas individuais e mantidos sob condições de luz:escuro de 12:12 horas com á- gua e alimento disponíveis à vontade. Os ratos são injetados 3 vezes ao dia (08:00, 12:00 e 16:00), subcutaneamente (sc), com composto em várias do- ses ou com veículo por 7 dias. O peso corporal individual e o consumo de alimento são medidos diariamente.
Administração
Os análogos de grelina podem ser formulados e administrados a um indivíduo usando a diretriz fornecida aqui junto com técnicas bem conhe- cidas na arte. A via de administração preferencial assegura que uma quanti- dade eficaz de composto alcança o alvo. As diretrizes para a administração farmacêutica em geral são fornecidas, por exemplo, em Remington's Phar- maceutical Sciences, 18a Edição, Ed. Gennaro1 Mack Publishing, 1990, e Modem Pharmaceutics, 2a Edição, Eds. Banker e Rhodes, Mareei Dekker, Inc., 1990, ambos os quais são aqui incorporados a título de referência.
Os análogos de grelina podem ser preparados como sais ácidos ou básicos. Sais farmaceuticamente aceitáveis (na forma de produtos solú- veis ou dispersíveis em água ou óleo) incluem sais não tóxicos convencio- nais ou os sais de amônio quaternário formados a partir de ácidos ou bases inorgânicos ou orgânicos. Exemplos de tais sais incluem, mas não estão li- mitados a, sais com adição de ácido tal como acetato, adipato, alginato, as- partato, benzoato, benzenossulfonato, bissulfato, butirato, citrato, canforato, canforsuIfonato, ciclopentano propionato, digluconato, dodecil sulfato, etano sulfonato, fumarato, glicoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, cloridrato, bromidrato, iodrato, 2-hidroxietanossulfonato, lactato, maleato, metanossulfonato, 2-naftalenossulfonato, nicotinato, oxalato, pa- moato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartarato, tiocianato, tosilato, e undecanoato; e sais básicos tais como sais de amônio, sais de metal alcalino tais como sais de sódio e de potássio, sais de metal alcalino terroso tal como sais de cálcio e magnésio, sais com bases orgânicas tal como sais diciclohexilamina, N-metil-D- glucamina e sais com aminoácidos tais como arginina e lisina.
Os análogos de grelina podem ser administrados usando dife- rentes vias incluindo ingestão oral e nasal ou por injeção transdérmica e transmucosal. Os ingredientes ativos administrados oralmente como uma suspensão podem ser preparados de acordo com técnicas bem conhecidas na técnica de formulação farmacêutica e podem conter celulose microcrista- Iina para conferir volume, ácido algínico ou alginato de sódio como um agen- te de suspensão, metil celulose como um intensificador de viscosidade e agentes flavorizantes/adoçantes. Como tabletes de liberação imediata, as formulações farmacêuticas podem conter celulose microcristalina, fosfato dicálcio, amido, estearato de magnésio e Iactose e/ou outros excipientes, ligantes, extensores, desintegrantes, diluentes, e lubrificantes.
Administradas por aerossol nasal ou inalação, as formulações podem ser preparadas, por exemplo, como soluções em solução salina, em- pregando benzil álcool ou outros conservantes adequados, promotores de absorção para intensificar a biodisponibilidade, empregando fluorcarbonetos e/ou empregando outros agentes solubilizantes ou dispersantes.
Os análogos de grelina podem também ser administrados de for- ma intravenosa (ambos bolus e infusão), intraperitoneal, subcutânea, tópica, com ou sem oclusão, ou intramuscular. Quando administrada por injeção, a solução ou suspensão injetável pode ser formulada usando diluentes ou sol- ventes parenteralmente aceitáveis não tóxicos, tal como solução de Ringer ou solução de cloreto de sódio isotônica, ou agentes de suspensão e de molha- gem ou dispersão adequados, tal como óleos fixos, estéreis, suaves, incluindo mono- ou diglicerídeos sintéticos e ácidos graxos, incluindo ácido oléico.
Os regimes de dosagem adequados são preferencialmente de- terminados levando em conta fatores bem conhecidos na técnica incluindo o tipo de indivíduo sendo dosado, idade, peso, sexo e condição médica do indivíduo, a via de administração, a função renal e hepática do indivíduo, o efeito desejado, e o composto particular empregado.
A precisão ótima em alcançar as concentrações de fármaco den- tro da faixa que produz eficácia sem toxicidade exige um regime baseado na cinética da disponibilidade do fármaco a sítios alvo. Isso envolve uma consi- deração da distribuição, equilíbrio, e eliminação de um fármaco. A dose diá- ria para um indivíduo é esperada como sendo entre 0,01 a 1.000 mg por in- divíduo por dia.
Os análogos de grelina podem ser fornecidos em um kit. Tal kit tipicamente contém um composto ativo em formas de dosagem para admi- nistração. Uma forma de dosagem contém uma quantidade suficiente de composto ativo tal que um efeito desejável pode ser obtido quando adminis- trado a um indivíduo durante intervalos regulares, tal como de 1 a 6 vezes por dia, durante o curso de 1 ou mais dias. Preferencialmente, um kit contém instruções indicando o uso da forma de dosagem para alcançar um efeito desejável e a quantidade de forma de dosagem a ser tomada por um perío- do de tempo especificado.
A invenção foi descrita de uma maneira ilustrativa, e entende-se que a terminologia que foi usada pretende ser na natureza de palavras de des- crição, ao invés de limitação. Obviamente, muitas modificações e variações da presente invenção são possíveis em luz dos ensinamentos acima. Entende-se, portanto, que dentro do escopo das reivindicações em anexo, a invenção pode ser praticada de outra forma do que foi especificamente descrito.
A patente e a literatura científica referidas aqui representam o conhecimento que está disponível aos versados na técnica. Todas as paten- tes, publicações de patente, e outras publicações citadas aqui são incorpo- radas neste documento por referência em sua totalidade. LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA <110> BIOMEASURE, INC.
<120> Análogos de grelina substituída no N-terminal <130> 169Ρ Yankwich ΒΙΟ-169
<14 0> PCT/US2Ü07/XXXXXX <141> 2007-09-27
<150> US 60/847423 <15 X > 2006-09-27
<160> 8
<170> Versão de Patente 3.3
<210> 1
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223>
<220> <221> <222>
<223>
<220> <221 > <222>
<223>
<220> <221> <222 >
<223>
<220> <221> <222>
<223>
<220> <221> <222>
<223>
<400> 1
Xaa Xaa Glu Phe Leu Ser Pro Glu His Xaa Arq Val Gln Gln Arg Lys 1 5 10 IS
Glu Ser Lys Lys Pro Pro Ala Lys Leu Glrs Pro Arg 20 25
<210> 2 <211> 28 <212> FRT
<213> Artificial <220>
Análogo de peptidil grelina
MISC FEATURE
(1) .Τα)
Xaa = ácido isonipecótico (Inp) ou 1-Apc
MISC FEATURE
(2).7(2)
Xaa = ácido alfa-aminoisobutírico (Aib)
MODJRES
(3)·-(3)
Modificado com NH-hexila
MXSC_FÊATUR£ (10) . .(10)
Xaa = ácido alfa-aminoisobutírico (Aib)
M0D_R£S (28).. (26)
Amidação
<223>
Análogo de peptidil grelina <22Q>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(!)
<223> Xaa = ácido isonipecótico (Inp) <220>
<221 > MISCFEATURE
<222> (2) ..(2)
<223> Xaa = Ser ou ácido alfa-aminoisobutírico (Aib) <220>
<221 > MOD_RES
<222> (28) ..(28)
<223> Amidação
<400> 2
Xaa Xaa Ser Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys
1 5 10 15 Glu Ser Lys Lys Pro Pro Ala Lys Leu Gln Pro Arg
20 25
<210> 3
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Análogo de peptidil grelina <220>
<221 > MISCFEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa = ácido isonipecótico (Inp) <220>
<221 > MISCFEATURE
<222> (2) ..(2)
<223> Xaa = ácido alfa-aminoisobutírico (Aib) <220>
<221 > MOD_RES
<222> (3) ..(3)
<223> Modificado com NH-hexila <220>
<221 > MOD RES <222> (28) ..(28) <223> Amidação
<400> 3
Xaa Xaa Glu Phe Leu Ser Pro Giu K.i$ Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys 1 5 10 15
Glu Ser Lys Lys Pro Pro Ala lys Leu Gln Pro Arg 20 25
<210> A <211> 28 <212> PBT < 213 > Artificial
<220>
<223> Análogo de peptidil grelina <220>
<221 > MISCFEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa = ácido isonipecótico (Inp) <220>
<221> MISCFEATURE
<222> (2) ..(2)
<223> Xaa = ácido alfa-aminoisobutírico (Aib) <220>
<221 > MISCFEATURE
<222> (10) ..(10)
<223> Xaa = ácido alfa-aminoisobutírico (Aib) <220>
<221 > MOD_RES
<222> (28) ..(28)
<223> Amidação
<-9Ü0> 4
Xaa Xaa Ser Phe Leu Ser Pro Glu His Xaa Arg vai Gln Gln Arg Lys 1 5 10 15
Glu Ser Lys Lys Pro Pro Ala Lya Leu Gln Pro Arg 20 2 5
<210> 5 <211> 2 6 <212> PRT <213> Artificial
<220>
<223>
Análogo de peptidil grelina <formula>formula see original document page 66</formula> <221> MOD_RES
<222> (17) ..(17)
<223> Modificado com n-octanoila <220>
<221 > MOD_RES
<222> (28) ..(28)
<223> Amidação
< 4 0 0> 6
Xaa Xaa Ser Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys
1 5 10 15
Ser Ser Lys Lys Pro Pro Ala Lys Leu Gln Pro Arg
20 25
<210> 7
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Análogo de peptidil grelina <220>
<221 > MISCFEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa = ácido isonipecótico (Inp) <220>
<221 > MISCFEATURE
<222> (2) ..(2)
<223> Xaa = ácido alfa-aminoisobutírico (Aib) <220>
<221 > MISCFEATURE
<222> (8) ..(8)
<223> Xaa = ácido alfa-aminoisobutírico (Aib <220>
<221 > MOD_RES
<222> (17) ..(17)
<223> Modificado com n-octanoila <220>
<221 > MOD RES <222> (28) ..(28)
<223> Amidação
<4 00> 7
Xaa Xaa Ser Phe Leu Ser Pro Xaa His Gln Arg Val Gln Glti Arg Lys
1 5 10 15
Ser Ser Lys Lys Pro Pro Ala Lys Leu Gln Pro Arg
20 25
<210> 8
<211> 26
<21Ζ> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Análogo de peptidil grelina <220>
<221 > MISCFEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa = ácido isonipecótico (Inp) ou 1-Apc1 ambos modificados com acila (Ac)
<220>
<221 > MISCFEATURE
<222> (2) ..(2)
<223> Xaa = ácido alfa-amínoisobutírico (Aib) <220>
<221 > MOD_RES
<222> (3) ..(3)
<223> Modificado com NH-hexila <220>
<221 > MISCFEATURE
<222> (10) ..(10)
<223> Xaa = ácido alfa-aminoisobutírico (Aib) <220>
<221 > MOD_RES
<222> (28) ..(28)
<223> Amidação <400> 8
Xaa Xaa Glu Phe Leis Ser Pro Glu 1 5
Glu Ser Lys Lys Pro Pro Ala Lys 20
His Xaa Arg Val Gln Gln Arg Lys
10 15
Leu Gln Pro Arq 25

Claims (172)

1. Composto análogo de grelina caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (I): (r2).A1.A2_A3.a4_a5.a6.a7.a8_a9_a10_a11_a12.a13_a14.a15.a16_a17_a18_a19_a20_ A21-A22- A23-A24-A25-A26-A27-A28-R1 (I) em que: A1 é Inp1 1-Apc ou 4-Apc; A2 é Ser, Abu1 Acc, Act1 Aib, Ala, Ava1 Thr ou Vai; N é Ser1 Asp(NH-R3)1 Asp(O-R4)1 Cys(S-R5)1 Dab(S(O)2-R6)1 Dap(S(O)2-R7)1 GIu(NH-R8)1 GIu(O-R9)1 Ser(C(O)-R10)l Thr(C(0)-R11) ou HN- CH((CH2)n-N(R12R13))-C(O); A4 é Phe, Acc1 Aic1 Cha1 2-Fua, I-Nal1 2-Nal, 2-Pal, 3-Pal, 4-Pal, hPhe, (X1lX2lX3lX4lX5)Phe, Taz1 2-Thi, 3-Thi, Trp ou Tyr; A5 é Leu1 Abu1 Ace1 Aib1 Ala1 Cha1 lie, hLeu, Nle1 Nva1 Phe1 Tle ou Vai; A6 é Ser1 Abu1 Acc1 Act1 Aib1 Ala1 Gly, Thr ou Vai; A7 é Pro1 Dhp1 Dmt1 3-Hyp, 4-Hyp, lnc, Ktp, Oic, Pip, Thz ou Tic; A8 é Glu, Acc, Aib, Arg, Asn, Asp, Dab, Dap, Gln, Lys, Orn ou HN-CH((CH2)n-N(R12R13))-C(O); A9 é His1 Acc1 Apc1 Aib1 2-Fua, 2-Pal, 3-Pal, 4-Pal, (X11 X21 X31 X41 X5-) Phe, Taz, 2-Thi ou 3-Thi; A10 é Gln1 Acc, Aib, Asn1 Asp ou Glu; A" é Arg1 Apc1 hArg, Dab1 Dap1 Lys1 Orn ou HN-CH((CH2)n- N(R12R13))-C(0); A12 é Vai, Abu, Acc, Aib, Ala1 Cha1 Gly1 Ile1 Leu1 Nle1 Nva ou Tle; A13 é Gln1 Acc1 Aib, Asn, Asp ou Glu; A14 é Gln1 Acc1 Aib, Asn1 Asp ou Glu; A15 é Arg1 Acc1 Aib1 Apc1 hArg, Dab, Dap, Lys ou Orn; A16 é Lys, Acc, Aib, Apc, Arg, hArg, Dab, Dap1 Orn ou deletado; A17 é Glu, Arg1 Asn1 Asp, Dab, Dap, Gln, Lys1 Orn1 Asp(NH-R3)1 Asp(O-R4)1 Cys(S-R5)1 Dab(S(O)2-R6)1 Dap(S(O)2-R7)1 GIu(NH-R8)1 GIu(O-R9)1 Ser(C(O)-R10)l Thr(C(O)-Rll)1 HN-CH((CH2)n-N(R12R13))-C(O) ou deletado; η é, independentemente para cada ocorrência desse, 1, 2, 3, 4 ou 5; cada um dentre X1, X21 X3, X4 e X5 é, independentemente para cada ocorrência desses, selecionado a partir do grupo que consiste em H, F, Cl, Br, I, (Ci.-io)alquila, (C|.i0)alquila substituída, arila, arila substituída, OH, NH2, NO2 e CN; uma vez que: quando R12 é (Ci-C4o)acila, aril(Ci-C4o)acila, (CrC4o)acila subs- tituída, aril(CrC4o)acila substituída, (C-|-C4o)alquilsulfonila, ou -C(NH)-NH2, então R13 é H ou (Ci-C40)alquila, (CrC40)heteroalquila, (C2-C40)alquenila, (C2-C4o)alquinila, aril(Ci-C40)alquila, (CrC4o)alquila substituída, (C1- C40)heteroalquila substituída, (C2-C4o)alquenila substituída, (C2-C40)alquinila substituída, ou aril(CrC4o)alquila substituída; ou um sal farmaceuticamente aceitável desses.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: A2 é Serou Aib; A3 é Ser ou Glu(NH-R8); A4 é Phe; A5 é Leu; A6 é Ser; A7 é Pro; A8 é Glu ou Aib; A9 é His; A10 é Gln ou Aib; A11 é Arg; A12 é Vai; A18 é Ser, Abu1 Acc, Act1 Aib1 Ala, Thr1 Val ou deletado; A19 é Lys, Acc, Aib, Apc, Arg, hArg, Dab1 Dap, Orn ou deletado; A20 é Lys, Ace, Aib, Ape, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn ou deletado; A21 é Pro, Dhp, Dmt, 3-Hyp, 4-Hyp, lnc, Ktp, Oic, Pip1 Thz, Tic ou deletado; A22 é Pro, Dhp, Dmt, 3-Hyp, 4-Hyp, lnc, Ktp, Oic, Pip, Thz, Tic ou deletado; A23 é Ala, Abu1 Acc, Act, Aib, Apc, Gly, Nva, Val ou deletado; A24 é Lys, Acc, Aib, Apc, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn1 HN- CH((CH2)n-N(R12R13))-C(O) ou deletado; A25 é Leu, Abu, Acc, Aib, Ala, Cha, lie, hLeu, Nle, Nva, Phe, Tle, Val ou deletado; A26 é Gln, Aib, Asn, Asp, Glu ou deletado; A27 é Pro, Dhp, Dmt, 3-Hyp, 4-Hyp, Inc, Ktp, Oic, Pip, Thz, Tic ou deletado; A28 é Arg, Acc, Aib, Apc, hArg, Dab, Dap, Lys, Orn, HN- CH((CH2)n-N(R12R13))-C(O) ou deletado; R1 é -OH, -NH2, -(Ci-C3o)alcóxi ou NH-X6-CH2-Z0, em que X6 é uma (Ci-Ci2)alquila ou (C2-Ci2)alquenila e Z0 é -H, -OH, -CO2H ou -C(O)-NH2; R2 é H, (C1-C30)alquila, (C1-C30)heteroalquila, (C1-C30)acila, (C2-C30)alquenila, (C2-C30)alquinila, aril(CrC3o)alquila, aril(Ci-C30)acila, -1-C3o)alquila substituída, (C1-C30)heteroalquila substituída, (C2-C30)acila substituída, (C2-C30)alquenila substituída, aril(C1-C30)alquila substituída, (C2-C30)alquinila substituída ou aril(C1-C30)acila substituída; Cada um dentre R31 R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 e R11 é, indepen- dentemente para cada ocorrência desses, selecionado a partir do grupo que consiste em (C1-C40)alquila, (C2-C40)alquenila, (C1-C40)alquila substituída, (C2-C40)alquenila substituída, alquilarila, alquilarila substituída, arila e arila substituída; Cada um dentre R12 e R13 são, independentemente para cada ocorrência desses, selecionado a partir do grupo que consiste em H, (CrC4o)alquila, (C-i-C4o)heteroalquila, (CrC4o)acila, (C2-C40)alquenila, (C2- C4o)alquinila, aril(CrC4o)alquila, aril(CrC4o)acila, (CrC4o)alquila substituída, (CrC40)heteroalquila substituída, (Ci-C40)acila substituída, (C2-C40)alquenila substituída, (C2-C4o)alquinila substituída, aril(CrC4o)alquila substituída, aril(CrC4o)acila substituída, (CrC4o)alquilsulfonila ou -C(NH)-NH2 A13 é Gln A14 é Gln A15 é Arg A16 é Lys A17 é Glu ou Ser(C(O)-R10) A18 é Ser; A19 é Lys; A20 é Lys; A21 é Pro; A22 é Pro; A23 é Ala; A24 é Lys; A25 é Leu; A26 é Gln; A27 é Pro; e A28 é Arg; ou um sal farmaceuticamente aceitável desses.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que: R1 é NH2; R2 é H ou acila; R8 é hexila; e R10 é octanila; ou um sal farmaceuticamente aceitável desses.
4. Composto, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que: A2 é Aib; A3 é Glu(NH-hexila); A8 é Aib; A10 é Aib; e A17 é Ser(n-octanoil); ou um sal farmaceuticamente aceitável desses.
5. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o dito composto é selecionado a partir do grupo que consis- te em: <formula>formula see original document page 74</formula>
6. Composto, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o dito composto é o (lnp1)hGrelina(1-28)-NH2 (ID SEQ N: 2) ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.
7. Composto, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o dito composto é (Inp1, Aib2)Ser(n-octanoil)17)hGrelina(1-28) -NH2 (ID SEQ N0: 6) ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.
8. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade eficaz de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, ou um sal farmaceuticamente aceitá- vel desse, e um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
9. Processo de seleção para um composto capaz de ligar-se a um receptor de GHS, caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de medir a capacidade de um composto afetar a ligação de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7 com o dito receptor, a um fragmento do dito receptor, a um polipeptídeo compreendendo o dito frag- mento do dito receptor, ou a um derivado do dito polipeptídeo.
10. Uso de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuti- camente aceitável desse como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farma- cêutica para extrair uma resposta de um receptor de grelina em um indivíduo em necessidade desse.
11. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica para alcançar um efeito benéfico em um indivíduo em necessidade desse, em que a dita quan- tidade terapeuticamente eficaz é eficaz para auxiliar na cura ou redução da gravidade ou na redução da probabilidade do início ou gravidade de uma doença ou distúrbio.
12. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica para estimular a se- creção do hormônio do crescimento em um indivíduo em necessidade de tal estímulo, em que a dita quantidade eficaz é uma quantidade mínima sufici- ente para produzir um aumento detectável na secreção do hormônio do crescimento.
13. Uso, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o dito estímulo de secreção do hormônio do crescimento é indi- cado para tratar um estado deficiente de hormônio de crescimento, para au- mentar a massa muscular, para aumentar a densidade óssea, para tratar a disfunção sexual masculina ou feminina, para facilitar o ganho de peso, para facilitar a manutenção do peso, para facilitar a manutenção de condiciona- mento físico, para facilitar a recuperação da função física, ou para facilitar o aumento de apetite.
14. Uso, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que facilitar o ganho de peso, facilitar a manutenção do peso, ou faci- litar o aumento de apetite é indicado em um indivíduo que tem uma doença ou distúrbio ou que passa por um tratamento acompanhado por perda de peso.
15. Uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a dita perda de peso é devido à caquexia.
16. Uso, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que a dita caquexia é incidental ao dito indivíduo que sofre de anore- xia, bulimia, câncer, AIDS, ou doença pulmonar obstrutiva crônica.
17. Uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a dita perda de peso é devida ao início de síndrome consumpti- va.
18. Uso, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o dito indivíduo em necessidade desse sofrendo de síndrome consumptiva, é frágil e idoso.
19. Uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a dita perda de peso não é explicada e em que o dito indivíduo é um idoso saudável.
20. Uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a dita perda de peso é um precursor ao início de doença de Al- zheimer.
21. Uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o dito tratamento acompanhado por perda de peso é selecionado a partir do grupo que consiste em quimioterapia, radioterapia, !mobilização temporária, imobilização permanente e diálise.
22. Uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o dito indivíduo em necessidade desse nem está sofrendo de uma doença ou distúrbio nem está passando por um tratamento acompa- nhado por perda de peso e está, de outra forma, saudável.
23. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica para tratar doença pulmonar obstrutiva crônica em um indivíduo em necessidade desse.
24. Uso, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o dito estímulo de secreção de hormônio de crescimento é indi- cado para tratar um estado deficiente de hormônio de crescimento, para au- mentar a massa muscular, para aumentar a densidade óssea, para tratar a disfunção sexual masculina ou feminina, para facilitar o ganho de peso, para facilitar a manutenção do peso, para facilitar a manutenção do condiciona- mento físico, para facilitar a recuperação da função física, ou para facilitar o aumento de apetite.
25. Uso, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que facilitar o ganho de peso, facilitar a manutenção de peso, ou faci- litar o aumento de apetite é indicado em um indivíduo que tem uma doença ou distúrbio ou passa por um tratamento acompanhado por perda de peso.
26. Uso, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que a dita perda de peso é devida à caquexia.
27. Uso, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que a dita caquexia é incidental ao dito indivíduo que sofre de anore- xia, bulimia, câncer, AIDS, ou doença pulmonar obstrutiva crônica.
28. Uso, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que a dita perda de peso é devido ao início de síndrome consumpti- va.
29. Uso, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que o dito indivíduo em necessidade desse sofrendo de síndrome consumptiva é frágil e idoso.
30. Uso, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que a dita perda de peso não é explicada e em que o dito indivíduo é um idoso saudável.
31. Uso, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que a dita perda de peso é um precursor ao início de doença de Al- zheimer.
32. Uso, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que o dito tratamento acompanhado por perda de peso é selecionado a partir do grupo que consiste em quimioterapia, radioterapia, imobilização temporária, imobilização permanente e diálise.
33. Uso, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o dito indivíduo em necessidade desse nem está sofrendo de uma doença ou distúrbio nem está passando por um tratamento acompa- nhado por perda de peso e está, de outra forma, saudável.
34. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica para tratar doença pulmonar obstrutiva crônica em um indivíduo em necessidade desse.
35. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica para estimular a mo- bilidade gastrointestinal em um indivíduo em necessidade desse.
36. Uso, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que o dito paciente é um humano.
37. Uso, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que o dito paciente em necessidade de estímulo gastrointestinal está sofrendo de doença de refluxo gastroinestinal, obstrução total do intestino, êmese, gastroparesia, IBS, constipação, ou pseudo-obstrução colônica.
38. Uso, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de que o dito paciente está sofrendo de obstrução total do intestino, êmese, gastroparesia.
39. Uso, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de que o dito paciente está sofrendo de obstrução total do intestino.
40. Uso, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o dito paciente está sofrendo de obstrução total do intestino as- sociada com a administração de um opiato.
41. Uso, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que o opiato é morfina.
42. Uso, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que a dita obstrução total do intestino é a obstrução total do intestino pós-operatória.
43. Uso, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de que a dita obstrução total do intestino pós-operatória é acompanhada pela presença de morfina.
44. Uso, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de que a dita obstrução total do intestino segue a cirurgia abdominal.
45. Uso, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a dita obstrução total do intestino ocorre no estômago, no intesti- no delgado e no intestino grosso.
46. Uso, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que a dita obstrução total do intestino é causada por um fator além da cirurgia abdominal.
47. Uso, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo fato de que a dita obstrução total do intestino ocorre no estômago, no intesti- no delgado e no intestino grosso.
48. Uso, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que o dito paciente está sofrendo de êmese.
49. Uso, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que o dito paciente está sofrendo de êmese associada ao tratamento com um agente quimioterápico anticâncer, gravidez, bulimia, ou anorexia.
50. Uso, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada com o tratamento com um agente quimioterápico anticâncer.
51. Uso, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada com gravidez.
52. Uso, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada com bulimia.
53. Uso, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada com anorexia.
54. Uso, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que o dito paciente está sofrendo de gastroparesia.
55. Uso, de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que a dita gastroparesia está associada com diabetes.
56. Uso, de acordo com a reivindicação 55, caracterizado pelo fato de que a dita diabetes é diabetes tipo I.
57. Uso, de acordo com a reivindicação 55, caracterizado pelo fato de que a diabetes é diabetes tipo II.
58. Uso, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que a dita quantidade terapeuticamente eficaz do dito composto ou composição análoga à grelina é administrada de forma intravenosa, subcu- tânea, oral, ou pela implantação de uma formulação de liberação sustentada.
59. Uso, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado de forma intravenosa.
60. Uso, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado de forma subcutânea.
61. Uso, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado de forma oral.
62. Uso, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é implantado como uma formulação de liberação sustentada.
63. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica para estimular a mo- bilidade gastrointestinal em um indivíduo em necessidade desse.
64. Uso, de acordo com a reivindicação 63, caracterizado pelo fato de que o dito paciente é um humano.
65. Uso, de acordo com a reivindicação 63, caracterizado pelo fato de que o dito paciente em necessidade de estímulo gastrointestinal está sofrendo de doença de refluxo gastroinestinal, obstrução total do intestino, êmese, gastroparesia, IBS, constipação, ou pseudo-obstrução colônica.
66. Uso, de acordo com a reivindicação 65, caracterizado pelo fato de que o dito paciente está sofrendo de obstrução total do intestino, ê- mese ou gastroparesia.
67. Uso, de acordo com a reivindicação 66, caracterizado pelo fato de que o dito paciente está sofrendo de obstrução total do intestino.
68. Uso, de acordo com a reivindicação 67, caracterizado pelo fato de que o dito paciente está sofrendo de obstrução total do intestino as- sociada à administração de um opiato.
69. Uso, de acordo com a reivindicação 68, caracterizado pelo fato de que o opiato é morfina.
70. Uso, de acordo com a reivindicação 67, caracterizado pelo fato de que a dita obstrução total do intestino é obstrução total do intestino pós-operatória.
71. Uso, de acordo com a reivindicação 70, caracterizado pelo fato de que a dita obstrução total do intestino pós-operatória é acompanhada pela presença de morfina.
72. Uso, de acordo com a reivindicação 70, caracterizado pelo fato de que a dita obstrução total do intestino pós-operatória segue a cirurgia abdominal.
73. Uso, de acordo com a reivindicação 72, caracterizado pelo .5 fato de que a dita obstrução total do intestino ocorre no estômago, no intesti- no delgado e no intestino grosso.
74. Uso, de acordo com a reivindicação 67, caracterizado pelo fato de que a dita obstrução total do intestino é causada por um fator além da cirurgia abdominal.
75. Uso, de acordo com a reivindicação 74, caracterizado pelo fato de que a dita obstrução total do intestino ocorre no estômago, no intesti- no delgado e no intestino grosso.
76. Uso, de acordo com a reivindicação 66, caracterizado pelo fato de que o dito paciente está sofrendo de êmese.
77. Uso, de acordo com a reivindicação 76, caracterizado pelo fato de que o dito paciente está sofrendo de êmese associada ao tratamento com um agente quimioterápico anticâncer, gravidez, bulimia, ou anorexia.
78. Uso, de acordo com a reivindicação 77, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada ao tratamento com um agente qui- mioterápico anticâncer.
79. Uso, de acordo com a reivindicação 77, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada com gravidez.
80. Uso, de acordo com a reivindicação 77, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada com bulimia.
81. Uso, de acordo com a reivindicação 77, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada com anorexia.
82. Uso, de acordo com a reivindicação 66, caracterizado pelo fato de que o dito paciente está sofrendo de gastroparesia.
83. Uso, de acordo com a reivindicação 82, caracterizado pelo fato de que a dita gastroparesia está associada com diabetes.
84. Uso, de acordo com a reivindicação 83, caracterizado pelo fato de que a diabetes é diabetes do tipo I.
85. Uso, de acordo com a reivindicação 83, caracterizado pelo fato de que a diabetes é diabetes do tipo II.
86. Uso, de acordo com a reivindicação 63, caracterizado pelo fato de que a dita quantidade terapeuticamente eficaz do dito composto ou composição análoga à grelina é administrada de forma intravenosa, subcu- tânea, oral, ou pela implantação de uma formulação de liberação sustentada.
87. Uso, de acordo com a reivindicação 86, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado de forma intravenosa.
88. Uso, de acordo com a reivindicação 86, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado de forma subcutânea.
89. Uso, de acordo com a reivindicação 85, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado de forma oral.
90. Uso, de acordo com a reivindicação 86, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é implantado como uma formulação de liberação sustentada.
91. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica para executar cirur- gia em um paciente.
92. Uso, de acordo com a reivindicação 91, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente identificar um paciente em necessi- dade da dita cirurgia.
93. Uso, de acordo com a reivindicação 91, caracterizado pelo fato de que a dita cirurgia é selecionada a partir do grupo que consiste em manipulação direta do trato gastrointestinal, manipulação indireta do trato gastrointestinal, laparotomia, cirurgia de transplante, cirurgia do sistema uro- genital, cirurgia do sistema linfático, cirurgia do sistema respiratório, e cirur- gia para tratar câncer de qualquer órgão ou tecido dentro do abdômen.
94. Uso, de acordo com a reivindicação 91, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado antes, durante ou após a dita cirurgia, ou qualquer combinação desses.
95. Uso, de acordo com a reivindicação 94, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado antes da dita cirurgia.
96. Uso, de acordo com a reivindicação 94, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado durante a dita cirurgia.
97. Uso, de acordo com a reivindicação 94, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado após a dita cirurgia.
98. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um com- posto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica utilizável antes, durante ou após uma cirurgia, ou qualquer combinação destes, para prevenção de obstrução total do intestino pós-operatória em um paciente em necessidade desse.
99. Uso, de acordo com a reivindicação 98, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado antes da dita cirurgia.
100. Uso, de acordo com a reivindicação 98, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado durante a dita cirurgia.
101. Uso, de acordo com a reivindicação 98, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado após a dita cirurgia.
102. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica para utilização em cirurgia em um paciente.
103. Uso, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente identificar um paciente em necessi- dade da dita cirurgia.
104. Uso, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que a dita cirurgia é selecionada a partir do grupo que consiste em manipulação direta do trato gastrointestinal, manipulação indireta do trato gastrointestinal, laparotomia, cirurgia de transplante, cirurgia do sistema uro- genital, cirurgia do sistema linfático, cirurgia do sistema respiratório, e cirur- gia para tratar câncer de qualquer órgão ou tecido dentro do abdômen.
105. Uso, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado antes, durante ou após a dita cirurgia, ou qualquer combinação desses.
106. Uso, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado antes da dita cirurgia.
107. Uso, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado durante a dita cirurgia.
108. Uso, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado após a dita cirurgia.
109. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica utilizável antes, du- rante ou após uma cirurgia, ou qualquer combinação desses, para prevenir a obstrução total do intestino pós-operatória em um paciente em necessidade desse.
110. Uso, de acordo com a reivindicação 109, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado antes da dita cirurgia.
111. Uso, de acordo com a reivindicação 109, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado durante a dita cirurgia.
112. Uso, de acordo com a reivindicação 109, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado após a dita cirurgia.
113. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica para prevenir doença de refluxo gastroesofageal, êmese, gastroparesia, síndrome do intestino irri- tável, constipação, pseudo-obstrução colônica em um paciente em necessi- dade desse.
114. Uso1 de acordo com a reivindicação 113, caracterizado pelo fato de que a doença de refluxo gastroesofageal é prevenida.
115. Uso, de acordo com a reivindicação 114, caracterizado pelo fato de que a síndrome do intestino irritável é prevenida.
116. Uso, de acordo com a reivindicação 113, caracterizado pelo fato de que a constipação é prevenida.
117. Uso, de acordo com a reivindicação 113, caracterizado pelo fato de que a pseudo-obstrução colônica é prevenida.
118. Uso, de acordo com a reivindicação 113, caracterizado pelo fato de que a êmese é prevenida.
119. Uso, de acordo com a reivindicação 118, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada ao tratamento com agente quimio- terápico anticâncer, gravidez, bulimia, ou anorexia.
120. Uso, de acordo com a reivindicação 119, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada ao tratamento com agente quimio- terápico anticâncer.
121. Uso, de acordo com a reivindicação 119, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada com gravidez.
122. Uso, de acordo com a reivindicação 121, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada com bulimia.
123. Uso, de acordo com a reivindicação 119, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada com anorexia.
124. Uso, de acordo com a reivindicação 113, caracterizado pelo fato de que a gastroparesia está associada com diabetes.
125. Uso, de acordo com a reivindicação 124, caracterizado pelo fato de que a dita diabetes é diabetes tipo I.
126. Uso, de acordo com a reivindicação 123, caracterizado pelo fato de que a dita diabetes é diabetes tipo II.
127. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica para prevenir doença de refluxo gastroesofageal, êmese, gastroparesia, síndrome do intestino irri- távei, constipação, ou pseudo-obstrução colônica em um paciente em ne- cessidade desse.
128. Uso, de acordo com a reivindicação 127, caracterizado pelo fato de que a doença de refluxo gastroesofageal é prevenida.
129. Uso, de acordo com a reivindicação 127, caracterizado pelo fato de que a síndrome do intestino irritável é prevenida.
130. Uso, de acordo com a reivindicação 127, caracterizado pelo fato de que a constipação é prevenida.
131. Uso, de acordo com a reivindicação 127, caracterizado pelo fato de que a pseudo-obstrução colônica é prevenida.
132. Uso, de acordo com a reivindicação 127, caracterizado pelo fato de que a êmese é prevenida.
133. Uso, de acordo com a reivindicação 132, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada ao tratamento com um agente qui- mioterápico anticâncer, gravidez, bulimia, ou anorexia.
134. Uso, de acordo com a reivindicação 133, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada ao tratamento com agente quimio- terápico anticâncer.
135. Uso, de acordo com a reivindicação 133 caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada com gravidez.
136. Uso, de acordo com a reivindicação 133, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada com bulimia.
137. Uso, de acordo com a reivindicação 133, caracterizado pelo fato de que a dita êmese está associada com anorexia.
138. Uso, de acordo com a reivindicação 127, caracterizado pelo fato de que a gastroparesia está associada com diabetes.
139. Uso, de acordo com a reivindicação 138, caracterizado pelo fato de que a dita diabetes é diabetes tipo I.
140. Uso, de acordo com a reivindicação 138, caracterizado pelo fato de que a dita diabetes é diabetes tipo II.
141. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica utilizável por via in- travenosa, subcutânea, oral, ou por implantação de uma formulação de libe- ração sustentada, para prevenir obstrução total do intestino pós-operatória, doença de refluxo gastroesofageal, êmese, gastroparesia, IBS, constipação, pseudo-obstrução colônica em um paciente em necessidade desse.
142. Uso, de acordo com a reivindicação 141, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado de forma intravenosa.
143. Uso, de acordo com a reivindicação 141, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado de forma subcutânea.
144. Uso, de acordo com a reivindicação 141, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado de forma oral.
145. Uso, de acordo com a reivindicação 141, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é implantado como uma formulação de liberação sustentada.
146. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica utilizável por via in- travenosa, subcutânea, oral, ou por implantação de uma formulação de libe- ração sustentada, para prevenir obstrução total do intestino pós-operatória, doença de refluxo gastroesofageal, êmese, gastroparesia, IBS, constipação, pseudo-obstrução colônica em um paciente em necessidade desse.
147. Uso, de acordo com a reivindicação 146, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado de forma intravenosa.
148. Uso, de acordo com a reivindicação 146, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado de forma subcutânea.
149. Uso, de acordo com a reivindicação 146, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é administrado de forma oral.
150. Uso, de acordo com a reivindicação 146, caracterizado pelo fato de que o dito análogo de grelina é implantado como uma formulação de liberação sustentada.
151. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito composto é selecionado a partir do grupo que consis- te em: (Ac-lnp1, Aib2'10, Glu(NH-hexila)3)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ Nº: 8) (Ac-1- Apc1, Aib2'10, Glu(NH-hexila)3)-hGrelina(1-28)NH2; (ID SEQ Nº: 8) (Inp1, Aib2'10, Glu(NH-hexila)3)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ Nº: .1)e (1-Apc1, Aib2'20, Glu(NH-hexila)3)-hGrelina(1-28)NH2; (ID SEQ Nº: 1) ou um sal farmaceuticamente aceitável desses.
152. Composto, de acordo com a reivindicação 151, caracteriza- do pelo fato de que o dito composto é (Ac-lnp1, Aib2'10, Glu(NH- hexila)3)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ N0: 8) ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.
153. Composto, de acordo com a reivindicação 151, caracteriza- do pelo fato de que o dito composto é (Ac-1- Apc1, Aib2'10, Glu(NH-hexila)3)- hGreiina(1-28)NH2; (ID SEQ N0: 8) ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.
154. Composto, de acordo com a reivindicação 151, caracteriza- do pelo fato de que o dito composto é (Inp1, Aib2,10, Glu(NH- hexila)3)hGrelina(1-28)-NH2; (ID SEQ Nº: 1) ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.
155. Composto, de acordo com a reivindicação 151, caracteriza- do pelo fato de que o dito composto é (1-Apc1, Aib2201 Glu(NH-hexila)3)- hGrelina(1-28)NH2; (ID SEQ N0: 1) ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.
156. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade eficaz de um composto de acordo com qual- quer uma das reivindicações 151 a 155, ou um sal farmaceuticamente acei- tável desse, e um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
157. Processo de seleção de um composto capaz de ligar-se a um receptor de GHS, caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de medir a capacidade de um composto de afetar a ligação de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 153 a 157 com o dito receptor, a um fragmento do dito receptor, a um polipeptídeo que compreende o dito fragmento do dito receptor, ou a um derivado do dito polipeptídeo.
158. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 151 a 155, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica para extrair uma resposta de uma receptor de grelina em um indivíduo em necessidade des- se.
159. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 151 a 155, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica para alcançar um efeito benéfico em um indivíduo em necessidade desse, em que a dita quantidade eficaz é eficaz para produzir um efeito benéfico para auxiliar na cura ou redução da gravidade ou na redução da probabilidade do início ou gravidade de uma doença ou distúrbio.
160. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto análogo de grelina ou sal farmaceuticamente aceitável desse co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 151 a 155, caracterizado pelo fato de ser para fabricar uma composição farmacêutica para suprimir a secreção de hormônio do crescimento em um indivíduo em necessidade de tal supressão, em que dita quantidade eficaz é ao menos uma quantidade suficiente para produzir uma diminuição detectável na secreção de hormônio do crescimento.
161. Uso de acordo com a reivindicação 160, caracterizado pelo fato de que a dita supressão de secreção de hormônio de crescimento é in- dicada para tratamento de uma doença ou condição que compreende a se- creção excessiva de hormônio do crescimento, para facilitar a perda de peso corporal excessivo, para facilitar a diminuição de apetite, para facilitar a ma- nutenção de peso, para tratar a obesidade, para tratar diabetes, para tratar as complicações de diabetes que inclui retinopatia, ou para tratar distúrbios cardiovasculares.
162. Uso, de acordo com a reivindicação 161, caracterizado pelo fato de que o dito peso excessivo é um fator que contribui para uma doença ou condição, a qual inclui hipertensão, diabetes, dislipidemia, doença cardio- vascular, pedras na vesícula, osteoartrites e cânceres.
163. Uso, de acordo com a reivindicação 161, caracterizado pelo fato de que a dita facilidade de perda de peso corporal reduz a probabilidade de tais doenças ou condições.
164. Uso, de acordo com a reivindicação 161, caracterizado pelo fato de que a dita facilidade de perda de peso corporal compreende ao me- nos parte de um tratamento para tais doenças ou condições.
165. Uso, de acordo com a reivindicação 161, caracterizado pelo fato de que o dito peso excessivo é devido à síndrome de Prader-Willi.
166. Uso, de acordo com a reivindicação 161, caracterizado pelo fato de que a dita obesidade é tratada.
167. Uso, de acordo com a reivindicação 160, caracterizado pelo fato de que a dita supressão de secreção de hormônio de crescimento é in- dicada para tratamento de uma doença ou condição que compreende a se- creção excessiva de hormônio de crescimento, para facilitar a perda de peso corporal excessivo, para facilitar a diminuição de apetite, para facilitar a ma- nutenção de peso, para tratar a obesidade, para tratar diabetes, para tratar as complicações do diabetes que inclui retinopatia, ou para tratar distúrbios cardiovasculares.
168. Uso, de acordo com a reivindicação 167, caracterizado pelo fato de que o dito peso excessivo é um fator que contribui para uma doença ou condição, a qual inclui a hipertensão, diabetes, dislipidemia, doença car- diovascular, pedras na vesícula, osteoartrites e cânceres.
169. Uso, de acordo com a reivindicação 167, caracterizado pelo fato de que a dita facilidade de perda de peso corporal reduz a probabilidade de tais doenças ou condições.
170. Uso, de acordo com a reivindicação 167, caracterizado pelo fato de que a dita facilidade de perda de peso corporal compreende ao me- nos parte de um tratamento para tais doenças ou condições.
171. Uso, de acordo com a reivindicação 167, caracterizado pelo fato de que o dito peso excessivo é devido à síndrome de Prader-Willi.
172. Uso, de acordo com a reivindicação 167, caracterizado pelo fato de que a dita obesidade é tratada.
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