PL212106B1

PL212106B1 - Analogi greliny, ich zastosowanie oraz sposób identyfikacji związku zdolnego do wiązania się z receptorem GHS

Info

Publication number: PL212106B1
Application number: PL377075A
Authority: PL
Inventors: Zheng Xin Dong; Yeelana Shen
Original assignee: Sod Conseils Rech Applic
Priority date: 2002-07-23
Filing date: 2003-07-23
Publication date: 2012-08-31
Also published as: KR101065471B1; MXPA05000908A; US7589058B2; US20140135260A1; AU2003254119B2; JP2009161546A; AU2003254119A1; CA2491946A1; WO2004009616A2; JP2006515271A; PT1578778E; RU2005104841A; TW200403253A; US20050272648A1; CA2491946C; DE60335913D1; NO334857B1; US8633151B2; AR040955A1; EP1578778A4

Description

Wynalazek dotyczy peptydylowych analogów greliny, wykazujących działanie agonistyczne lub antagonistyczne względem greliny. Ponadto, wynalazek dotyczy zastosowań terapeutycznych tych związków oraz sposobu identyfikacji związku zdolnego do wiązania się z receptorem GHS.

Pulsacyjne uwalnianie hormonu wzrostu z przysadkowych komórek wydzielających hormon wzrostu jest regulowane przez dwa podwzgórzowe neuropeptydy: hormon uwalniający hormon wzrostu i somatostatynę. Hormon uwalniający hormon wzrostu stymuluje uwalnianie hormonu wzrostu, podczas gdy somatostatyna hamuje wydzielanie hormonu wzrostu (Frohman i wsp., Endocronol. Rev. 1986, 7, 223-253, i Strobi i wsp., Pharmacol. Rev. 1994, 46, 1-34).

Uwalnianie hormonu wzrostu z przysadkowych komórek wydzielających hormon wzrostu może być również kontrolowane przez peptydy uwalniające hormon wzrostu. Stwierdzono, że u kilku gatunków, w tym u człowieka, heksapeptyd, His-d-Trp-Ala-Trp- -D-Phe-Lys-amid (GHRP-6), uwalnia hormon wzrostu z komórek wydzielających hormon wzrostu w sposób zależny od dawki (Bowers i wsp., Endocrinology 1984, 114, 1537-1545). Kolejne badania chemiczne dotyczące GHRP-6 prowadziły do identyfikacji innych skutecznych środków pobudzających wydzielanie hormonu wzrostu takich jak GHRP-I, GHRP-2 i heksarelina (Cheng i wsp., Endocrinology 1989, 124, 2791-2798, Bowers, C. Y. Novel GH-Releasing Peptides, w Molecular and Clinical Advances in Pituitary Disorders, Ed: Melmed, S.; Endocrine Research and Education, Inc., Los Angeles, CA, USA 1993, 153-157, i Deghenghi i wsp., Life Sci. 1994, 54, 1321-1328):

GHRP-I Ala-His-d-(2')-Nal-Ala-Trp-d-Phe-Lys-NH2,

GHRP-2 D-Ala-d-(2')-Nal-Ala-Trp-d-Nal-Lys-NH2, heksarelina His-d-2-MeTrp-Ala-Trp-d-Phe-Lys-NH2.

GHRP-I, GHRP-2, GHRP-6, i heksarelina są syntetycznymi środkami pobudzającymi wydzielanie hormonu wzrostu. Środki pobudzające wydzielanie hormonu wzrostu stymulują wydzielanie hormonu wzrostu, który przez mechanizm różni się od mechanizmu właściwego dla hormonu uwalniającego hormon wzrostu (Bowers i wsp., Endocrinology 1984, 114, 1537-1545, Cheng i wsp., Endocrinology 1989, 124, 2791-2798, Bowers, C. Y. Novel GH-Releasing Peptides w Molecular and Clinical Advances in Pituitary Disorders. Ed: Melmed, S.; Endocrine Research and Education, Inc., Los Angeles, CA, USA 1993, 153-157, i Deghenghi i wsp., Life Sci. 1994, 54, 1321-1328).

Niska doustna dostępność biologiczna (<1%) peptydylowych środków pobudzających wydzielanie hormonu wzrostu stymulowała poszukiwanie związków innych niż peptydy naśladujące w przysadce działanie GHRP-6. Opisano kilka benzolaktamów i spiroindanów, które stymulują uwalnianie hormonu wzrostu u różnych gatunków zwierząt i u człowieka. (Smith i wsp., Science 1993, 260, 1640 -1643, Patchett i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1995, 92, 7001-7005, i Chen i wsp., Bioorg. Med. Chem. Lett. 1996, 6, 2163-2169). Szczegółowym przykładem małego spiroindanu jest MK-0677 (Patchett i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1995, 92, 7001-7005):

Wydaje się, że w działaniu wymienionych powyżej środków pobudzających wydzielanie hormonu wzrostu (zarówno peptydowych, jak i niepeptydowych) pośredniczy specyficzny receptor pobudzający wydzielanie hormonu wzrostu (receptor GHS) (Howard i wsp., Science 1996, 273, 974-977, i Pong i wsp., Molecular Endocrinology 1996, 10, 57-61). Receptor ten jest obecny w przysadce i podwzgórzu różnych gatunków ssaków (GHSR1a) i jest różny od receptora hormonu uwalniającego hormon wzrostu. Receptor GHS również wykryto w innych obszarach nerwowego układu ośrodkowego i w tkankach obwodowych, na przykład w tarczycy i nadnerczu, sercu, płucach, nerkach i mięśniach szkieletowych (Chen i wsp., Bioorg. Med. Chem. Lett. 1996, 6, 2163-2169, Howard i wsp., Science 1996, 273, 974-977, Pong i wsp., Molecular Endocrinology 1996, 10, 57-61, Guan i wsp., Mol.

PL 212 106 B1

Brain Res. 1997, 48, 23-29, i McKee i wsp., Genomics 1997, 46, 426-434). Opisano skróconą odmianę GHSR1a (Howard i wsp., Science 1996, 273, 974-977).

Receptor GHS jest receptorem związanym z białkiem G. Skutkiem aktywacji receptora GHS jest depolaryzacja i hamowanie kanałów potasowych, zwiększenie wewnątrzkomórkowych stężeń trifosforanu inozytolu (IP3) i przejściowego wzrostu stężeń wewnątrzkomórkowego wapnia (Pong i wsp., Molecular Endocrinology 1996, 10, 57-61, Guan i wsp., Mol. Brain Res. 1997, 48, 23-29, i McKee i wsp., Genomics 1997, 46,426-434).

Przedmiotem niniejszego wynalazku są analogi greliny aktywne względem receptora GHS. Grelina jest naturalnie występującym peptydem, który jak się uważa, jest endogennym ligandem receptora GHS (Kojima i wsp., Nature 1999, 402, 656-660). Analogi według wynalazku mogą wiązać się z receptorem GHS oraz, korzystnie, spowodować przekazywanie sygnałów. Analogi greliny mają różne terapeutyczne zastosowania jak i zastosowania jako narzędzia badawcze.

Znane są występujące naturalnie struktury grelin z kilku gatunków ssaków lub gatunków innych zwierząt niż ssaki. (Kaiya i wsp., J. Biol. Chem. 2001, 276, 40441-40448; Międzynarodowe zgłoszenie patentowe PCT/JP00/04907 (WO 01/07475)). Obserwowano, że oprócz acylacji przez kwas n-oktanowy, naturalnie występująca grelina również jest acylowana kwasem n-dekanowym (Kaiya i wsp., J. Biol. Chem. 2001, 276, 40441-40448).

Stwierdzono, że region rdzeniowy obecny w grelinie zapewnia aktywność względem receptora GHS. Region rdzeniowy obejmuje cztery N-końcowe aminokwasy, w których reszta seryny w pozycji 3 jest zmodyfikowana przez kwas n-oktanowy.

Przedmiotem niniejszego wynalazku jest analog greliny o wzorze (I):

(R²R³)-A¹-A²-A³-A⁴-A⁵-A⁶-A⁷-A⁸-A⁹-A¹⁰-A¹¹-A¹²-A¹³-A¹⁴-A¹⁵-A¹⁶-A¹⁷-A¹⁸-A¹⁹-A²⁰-A²¹-A²²-A²³-A²⁴A²⁵-A²⁶-A²⁷-A²⁸-R¹ (I), lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól, w którym:

A¹ oznacza Gly, Aib, Ala, β-Ala, lub Acc;

A² oznacza Aib, Act, lub Acc;

A³ oznacza Ser, Ser(C(O)-R⁴), Asp(O-R⁸), Asp(NH-R⁹), Cys(S-R¹⁴), Dap(S(O)2-R¹⁰), Dab(S(O)2-R¹¹), Glu(O-R⁶), Glu(NH-R⁷), Thr, Thr(C(O)-R⁵), lub HN-CH((CH2)n-N(R¹²R¹³))-C(O);

A⁴ oznacza Phe, Acc, Aic, Cha, 2Fua, 1Nal, 2Nal, 2Pal, 3Pal, 4Pal, hPhe, (X¹,X²,X³,X⁴,X⁵)Phe, Taz, 2Thi, 3Thi, Trp, lub Tyr;

A⁵ oznacza Leu, Abu, Acc, Aib, Ala, Cha, Ile, hLeu, Nie, Nva, Phe, Tle, lub Val;

A⁶ oznacza Ser, Abu, Acc, Act, Aib, Ala, Gly, Thr, lub Val;

A⁷ oznacza Pro, Dhp, Dmt, 3Hyp, 4Hyp, Inc, Ktp, Oic, Pip, Thz, Tic, lub jest usunięty;

A⁸ oznacza Glu, Acc, Aib, Arg, Asn, Asp, Dab, Dap, Gln, Lys, Orn, HN-CH((CH2)n-N(R¹²R¹³))C(O), lub jest usunięty;

A⁹ oznacza His, Apc, Aib, Acc, 2Fua, 2Pal, 3Pal, 4Pal, Taz, 2Thi, 3Thi, (X¹,X²,X³,X⁴,X⁵-)Phe lub jest usunięty;

A¹⁰ oznacza Gln, Acc, Aib, Asn, Asp, Glu, lub jest usunięty;

A¹¹ oznacza Arg, Apc, hArg, Dab, Dap, Lys, Orn, HN-CH((CH2)n-N(R¹²R¹³))-C(O), lub jest usunięty;

A¹² oznacza Val, Abu, Acc, Aib, Ala, Cha, Nva, Gly, Ile, Leu, Nle, Tle, Cha, lub jest usunięty;

A¹³ oznacza Gln, Acc, Aib, Asn, Asp, Glu, lub jest usunięty;

A¹⁴ oznacza Gln, Acc, Aib, Asn, Asp, Glu, lub jest usunięty;

A¹⁵ oznacza Arg, hArg, Acc, Aib, Apc, Dab, Dap, Lys, Orn, HN-CH((CH2)n-N(R¹²R¹³))-C(O), lub jest usunięty;

A¹⁶ oznacza Lys, Acc, Aib, Apc, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn, HN-CH((CH2)n-N(R¹²R¹³))-C(O), lub jest usunięty;

A¹⁷ oznacza Glu, Arg, Asn, Asp, Dab, Dap, Gln, Lys, Orn, HN-CH((CH2)n-N(R¹²R¹³))-C(O), lub jest usunięty;

A¹⁸ oznacza Ser, Abu, Acc, Act, Aib, Ala, Thr, Val, lub jest usunięty;

A¹⁹ oznacza Lys, Acc, Aib, Apc, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn, HN-CH((CH2)n-N(R¹²R¹³))-C(O), lub jest usunięty;

A²⁰ oznacza Lys, Acc, Aib, Apc, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn, HN-CH((CH2)n-N(R¹²R¹³))-C(O), lub jest usunięty;

A²¹ oznacza Pro, Dhp, Dmt, Inc, 3Hyp, 4Hyp, Ktp, Oic, Pip, Thz, Tic, lub jest usunięty;

A²² oznacza Pro, Dhp, Dmt, 3Hyp, 4Hyp, Inc, Ktp, Oic, Pip, Thz, Tic, lub jest usunięty;

A²³ oznacza Abu, Acc, Act, Aib, Ala, Apc, Gly, Nva, Val, lub jest usunięty;

PL 212 106 B1

A²⁴ oznacza Lys, Acc, Aib, Apc, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn, HN-CH((CH2)n-N(R¹²R¹³))-C(O), lub jest usunięty;

A²⁵ oznacza Leu, Abu, Acc, Aib, Ala, Cha, Ile, hLeu, Nle, Nva, Phe, Tle, Val, lub jest usunięty;

A²⁶ oznacza Gln, Aib, Asn, Asp, Glu, lub jest usunięty;

A²⁷ oznacza Pro, Dhp, Dmt, 3Hyp, 4Hyp, Inc, Ktp, Oic, Pip, Thz, Tic, lub jest usunięty;

A²⁸ oznacza Acc, Aib, Apc, Arg, hArg, Dab, Dap, Lys, Orn, HN-CH((CH2)n-N(R¹²R¹³))-C(O), lub jest usunięty;

R¹ oznacza -OH, -NH2, -(C1-C30)alkoksy, lub NH-X⁶-CH2-Z⁰, gdzie X⁶ oznacza (C1-C12)alkil, (C2-C12)alkenyl, i Z⁰ oznacza -H, -OH, -CO2H lub -C(O)-NH2;

R² i R³ każdy oznacza, niezależnie od siebie, H, (C1-C20)alkil lub (C1-C20)acyl;

R⁴, R⁵,

R⁶, R⁷, R⁸, R⁹, R¹⁰, R¹¹ i R¹⁴ każdy oznacza, niezależnie od siebie, (C₁-C₄₀)alkil, (C2-C40)alkenyl, podstawiony (C1-C40)alkil, podstawiony (C2-C40)alkenyl, alkiloaryl, podstawiony alkiloaryl, aryl lub podstawiony aryl;

_R ¹² _i

R¹³ każdy oznacza, niezależnie od siebie, H, (C1-C40)alkil, (C1-C40)acyl, (C1-C30)alkilosulfonyl, lub -C(NH)-NH2, gdzie, gdy R¹² oznacza (C1-C40)acyl, (C1-C30)alkilosulfonyl, lub -C(NH)-NH2, to R¹³ oznacza H lub (C1-C40)alkil; n oznacza, niezależnie od siebie, 1, 2, 3, 4, lub 5;

X¹, X², X³, X⁴, i X⁵ każdy oznacza, niezależnie od siebie, H, F, Cl, Br, I, (C1-10)alkil, podstawiony (C1-10)alkil, aryl, podstawiony aryl, OH, NH2, NO2, lub CN;

Korzystnie analog greliny według wynalazku charakteryzuje się tym, że we wzorze (I):

₁

A¹ oznacza Gly lub Aib;

₂

A² oznacza Aib, A5c lub Act;

A³ oznacza Ser(C(O)-R⁴), Glu(O-R⁶), Glu(NH-R⁷), Dap(S(O)2-R¹⁰), lub Dab(S(O)2-Rn);

A⁴ oznacza Phe;

₅

A⁵ oznacza Leu, Acc, Aib, Cha, lub hLeu;

A⁶ oznacza Ser, Abu, Act, Aib, lub Thr;

A⁷ oznacza Pro, Dhp, Dmt, 4Hyp, Ktp, Pip, Tic, lub Thz;

A⁸ oznacza Glu lub Aib;

A⁹ oznacza His, Aib, Apc, 2Fua, 2Pal, 3Pal, 4Pal, Taz, lub 2Thi;

A¹⁰ oznacza Gln lub Aib;

A¹¹ oznacza Arg;

A¹² oznacza Aib, Val lub Acc;

A¹³ oznacza Gln;

A¹⁴ oznacza Gln;

A¹⁵ oznacza Arg lub Orn;

A¹⁶ oznacza Lys lub Apc;

A¹⁷ oznacza Glu;

A¹⁸ oznacza Ser;

A¹⁹ oznacza Lys;

A²⁰ oznacza Lys;

A²¹ oznacza Pro;

A²² oznacza Pro;

A²³ oznacza Ala;

A²⁴ oznacza Lys;

A²⁵ oznacza Leu;

A²⁶ oznacza Gln;

A²⁷ oznacza Pro oraz A²⁸ oznacza Arg, lub jego farmaceutycznie akceptowalna sól.

W innym korzystnym wariancie analog greliny według wynalazku charakteryzuje się tym, że we wzorze (I):

R² i R³ każdy oznacza, niezależnie, H, acyl, n-butyryl, izobutyryl, lub n-oktanoil;

R⁴ oznacza oktyl;

R⁶ oznacza heksyl;

R⁷ oznacza heksyl;

R¹⁰ oznacza oktyl; oraz

PL 212 106 B1

R¹¹ oznacza oktyl, gdzie

Acc oznacza, niezależnie od siebie, A5c lub A6c, lub jego farmaceutycznie akceptowalna sól. W jeszcze innym korzystnym wariancie analog greliny według wynalazku jest wybrany z grupy obejmującej następujące związki:

(Aib², A6c⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², A5c¹²)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Act⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dmt⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thz⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(A5c²)hGrelina(1-28)-NH2;

(Act²)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², A5c⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², A6c⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,5)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², hLeu⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Cha⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib²,Act⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Abu⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 4Hyp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib²,Thz⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Pip⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dhp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ktp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,8)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 2Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 4Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Taz⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 2Thi⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 2Fua⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Apc⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,9)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,10)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Tic⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), A6c⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, Dap³(Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), A5c¹²)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), A5c¹²,Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH₂;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), A5c¹²,Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH₂;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Act⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Dmt⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Thz⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(A5c², Dap³(Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Act², Dap³(Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), A5c⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,5, Dap³(Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), hLeu⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Cha⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, Dap³(Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2;

PL 212 106 B1 (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Thr⁶)hGrelina(1-28)-NH₂;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Abu⁶)hGrelina(1-28)-NH₂;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonyio), 4Hyp⁷)hGrelina(1-28)-NH₂;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Pip⁷)hGrelina(1-28)-NH₂;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Dhp⁷)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Ktp⁷)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,8, Dap³(Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib2, Dap3(Oktanosulfonylo), 2Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), 4Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Taz⁹)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), 2Thi⁹)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), 2Fua⁹)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Apc⁹)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,9, Dap³(Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,10, Dap³ (Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH₂;

(Aib², A6c⁵, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Act⁶, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 3Pal⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dmt⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib2, Thz⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², A5c⁵, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,5, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², hLeu⁵, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Cha⁵, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr⁶, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Abu⁶, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 4Hyp⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Pip⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dhp⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ktp⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,8, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 2Pal⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 3Pal⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 4Pal⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Taz⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 2Thi⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 2Fua⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Apc⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,9, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,10, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH₂;

(Aib², A6c⁵, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Act⁶, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 3Pal⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dmt⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thz⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², A5c^5'12, Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,5, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², hLeu⁵, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Cha⁵, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr⁶, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Abu⁶, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

PL 212 106 B1 (Aib², 4Hyp⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Pip⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dhp⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ktp⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; 2,8 12 16 (Aib² (Aib² (Aib² (Aib² (Aib² (Aib² (Aib² (Aib²

A5c¹9

Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; 2Pal⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2 3Pal⁹

4Pal⁹

Taz⁹, A5c¹², Apc¹9

A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

2Thi⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; 2Fua⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; Apc⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,9, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,10, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH₂;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), A6c⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,6, Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Act⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Dmt⁷)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Thz⁷)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), A5c⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,5, Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), hLeu⁵)hGrelina(1-28)-NH2 (Aib², Cha⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

2,6 3 (Aib²(Aib²(Aib²(Aib²(Aib²(Aib²(Aib² (Aib^2,8, Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 4Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Taz⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Thi⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Fua⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Apc⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,9, Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,10, Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), A6c⁵, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2 2,6 3 12 15 , Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

Glu³(NH-Heksylo), Thr⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

Glu³(NH-Heksylo), Abu⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

Glu³(NH-Heksylo), 4Hyp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

Glu³(NH-Heksylo), Pip⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

Glu³(NH-Heksylo), Dhp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

Glu³(NH-Heksylo), Ktp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH (Aib

2;

A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH

Glu³(NH-Heksylo), Act (Aib², Glu³(NH-Heksylo), 3Pal⁹ (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Dmt⁷, A5c¹² (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Thz⁷, A5c¹², (Aib², Glu³(NH-Heksylo), A5c⁵, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,5, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹²,Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², hLeu⁵, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Cha⁵, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2 2,6 3 12 15

2;

A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH

Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH

2;

(Aib² (Aib² (Aib² (Aib² (Aib²

Glu³(NH-Heksylo), A5c¹Glu³(NH-Heksylo), Thr⁶, A5c¹Glu³(NH-Heksylo), Abu⁶, A5c¹

Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

Glu³(NH-Heksylo), 4Hyp⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGreiina(1-28)-NH2 Glu³(NH-Heksylo), Pip⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

PL 212 106 B1 (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Dhp⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Ktp⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,8, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Pal⁹, A5c¹², Orn15)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 3Pal⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 4Pal⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Taz⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Thi⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Fua⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Apc⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,9, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,12,Glu³(NH-Heksylo),4Pal⁹,Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,10, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), A6c⁵, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Act⁶, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 3Pal⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Dmt⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Thz⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), A5c^5,12, Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,5, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), hLeu⁵, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Cha⁵, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Thr⁶, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Abu⁶, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 4Hyp⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Pip⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Dhp⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Ktp⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,8, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Pal⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 3Pal⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 4Pal⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Taz⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Thi⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Fua⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Apc⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,9, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,10, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib²)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(O-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib2, Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(1-Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib²)hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-6)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-7)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Glu³(NH-Heksylo), Arg⁸)hGrelina(1-8)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Glu³(NH-Heksylo), Lys⁸)hGrelina(1-8)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib^2,10, Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

oraz (n-Butyrylo-Gly¹, Aib², Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2 lub jego farmaceutycznie akcepowalna sól.

W kolejnym korzystnym przypadku analog greliny według wynalazku jest wybrany z grupy złożonej z następujących związków:

(Aib², Ser³)hGrelina(1-28)-NH2;

PL 212 106 B1 (Aib^2,6, Ser³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, Thz⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, Cha⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, Abu⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, 4Hyp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, Taz⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,4, Ser³, 4Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, Dhp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,8, Ser³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, Pip⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib^2,10, Ser³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,10, Ser³)hGrelina(1-28)-NH2;

(n-Butyrylo-Gly¹, Aib², Ser³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Ser³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, Tic⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Ser³, Arg⁸)hGrelina(1-8)-NH2;

(Aib², Ser³, 2Thi⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, Tic⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, Thr³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, Thz⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, Cha⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, Abu⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, 4Hyp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, Taz⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,4, Thr³, 4Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, Dhp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,8, Thr³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, Pip⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib^2,10, Thr³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,10, Thr³)hGrelina(1-28)-NH2;

(n-Butyrylo-Gly¹, Aib², Thr³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Thr³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, Tic⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Thr³, Arg⁸)hGrelina(1-8)-NH2;

(Aib², Thr³, 2Thi⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, Tic⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Tic⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

lub jego farmaceutycznie akceptowalna sól.

W szczególnie korzystnym przypadku analogiem greliny według wynalazku jest (Aib², Glu³)(NH-heksylo))hGrelina(1-28)-NH2 lub jego farmaceutycznie akceptowalna sól.

Ponadto, przedmiotem wynalazku jest sposób identyfikacji związku zdolnego do wiązania się z receptorem GHS, obejmujący etap pomiaru zdolności tego związku do wpływania na wiązanie analogu greliny według wynalazku z tym receptorem, z fragmentem tego receptora, z polipeptydem zawierającym fragment tego receptora, lub z pochodną tego polipeptydu.

Przedmiotem wynalazku jest również zastosowanie skutecznej ilości analogu greliny według wynalazku lub jego farmaceutycznie dopuszczalnej soli, gdzie ten związek jest agonistą receptora greliny, do wytwarzania leku do stymulowania wydzielania hormonu wzrostu u osobnika, który potrzebuje takiego stymulowania, przy czym skuteczna ilość jest ilością wystarczającą do wytwarzania wykrywalnego podwyższenia wydzielania hormonu wzrostu i/lub ilością wystarczającą do osiągnięcia korzystnego działania u tego osobnika.

W korzystnym przypadku wskazanego powyżej zastosowania stymulacja wydzielania hormonu wzrostu jest wskazana do leczenia stanu braku hormonu wzrostu u tego osobnika, do zwiększenia masy mięśniowej u tego osobnika, do zwiększenia gęstości kości u tego osobnika, do leczenia zaburzeń

PL 212 106 B1 seksualnych u tego osobnika, do ułatwienia przyrostu masy ciała u tego osobnika, do ułatwienia utrzymania masy ciała u tego osobnika, do ułatwienia utrzymania sprawności fizycznej u tego osobnika, do ułatwienia odzyskania sprawności fizycznej u tego osobnika, i/lub do ułatwienia zwiększenia apetytu u tego osobnika.

W innym korzystnym przypadku wskazanego powyżej zastosowania osobnik cierpi na chorobę lub zaburzenie, lub jest poddany leczeniu, któremu towarzyszy utrata masy ciała tego osobnika i gdzie wskazana jest stymulacja wydzielania hormonu wzrostu prowadząca do ułatwienia przyrostu masy ciała u tego osobnika, ułatwienia utrzymania masy ciała u tego osobnika, lub ułatwienia zwiększenia apetytu u tego osobnika.

W jeszcze innym korzystnym przypadku wskazanego powyżej zastosowania choroba lub zaburzenie, któremu towarzyszy utrata masy ciała, obejmuje anoreksję, bulimię, wyniszczenie rakowe, AIDS, wyniszczenie, kacheksję lub wyniszczenie u słabych osób starszych.

W kolejnym korzystnym przypadku wskazanego powyżej zastosowania leczenie, któremu towarzyszy utrata masy ciała, obejmuje chemioterapię, terapię radiologiczną, czasowe lub stałe unieruchomienie, lub dializę.

Przedmiotem wynalazku jest również zastosowanie skutecznej ilości analogu greliny według wynalazku lub jego farmaceutycznie akceptowalnej soli, do wytwarzania leku do obniżania wydzielania hormonu wzrostu u osobnika, który potrzebuje takiego obniżenia, i gdzie skuteczna ilość jest ilością wystarczającą do wytwarzania wykrywalnego obniżenia wydzielania hormonu wzrostu i/lub oznacza ilość wystarczającą, aby osiągnąć korzystne działania u tego osobnika.

Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie skutecznej ilości analogu greliny według wynalazku lub jego farmaceutycznie akceptowalnej soli, gdzie związkiem tym jest antagonista receptora greliny, do wytwarzania leku do obniżania wydzielania hormonu wzrostu u osobnika, który potrzebuje takiego obniżenia, i do wytwarzania leku do obniżania wydzielania hormonu wzrostu u osobnika, który potrzebuje takiego obniżenia, i gdzie skuteczna ilość jest ilością wystarczającą do wytwarzania wykrywalnego obniżenia wydzielania hormonu wzrostu wzrostu i/lub oznacza ilość wystarczającą, aby osiągnąć korzystne działania u tego osobnika.

W korzystnym przypadku wkazanego powyżej zastosowania obniżanie wydzielania hormonu wzrostu jest wskazane do leczenia choroby lub stanu charakteryzującego się nadmiernym wydzielaniem u osobnika hormonu wzrostu, do ułatwienia utraty masy ciała osobnika, do ułatwienia osłabienia apetytu u osobnika, do ułatwienia utrzymania masy ciała osobnika, do leczenia otyłości u osobnika, do leczenia cukrzycy u osobnika, do leczenia powikłań cukrzycowych obejmujących retinopatię u osobnika, i/lub do leczenia zaburzenia sercowo-naczyniowego u osobnika.

W innym korzystnym przypadku wskazanego powyżej zastosowania nadmierna masa ciała jest czynnikiem przyczyniającym się do choroby lub stanu obejmującego nadciśnienie, cukrzycę, dyslipidemię, chorobę sercowo-naczyniową, kamienie żółciowe, zapalenie kości i stawów, lub raka.

W jeszcze innym korzystnym przypadku wskazanego powyżej zastosowania ułatwienie utraty masy ciała obniża prawdopodobieństwo choroby lub stanu obejmującego nadciśnienie, cukrzycę, dyslipidemię, chorobę sercowo-naczyniową, kamienie żółciowe, zapalenie kości i stawów, lub raka.

W kolejnym korzystnym przypadku wskazanego powyżej zastosowania ułatwienie utraty masy ciała obejmuje przynajmniej część leczenia choroby lub stanu obejmującego nadciśnienie, cukrzycę, dyslipidemię, chorobę sercowo-naczyniową, kamienie żółciowe, zapalenie kości i stawów, lub raka.

Przedmiotem wynalazku jest również zastosowanie skutecznej ilości analogu greliny według wynalazku lub jego farmaceutycznie akceptowalnej soli, do wytwarzania leku do leczenia zaburzenia sercowo-naczyniowego u osobnika, który potrzebuje takiego leczenia, i gdzie skuteczna ilość jest ilością wystarczającą aby osiągnąć korzystne działanie u tego osobnika.

W korzystnym przypadku wspomnianego powyżej zastosowania analog greliny jest agonistą receptora grenaliny.

W innym korzystnym przypadku wspomnianego powyżej zastosowania zaburzenie sercowonaczyniowe jest ciężką chroniczną niewydolnością serca.

W jeszcze innym korzystnym przypadku wspomnianego powyżej zastosowania analog greliny hamuje apoptozę komórek mięśniowych serca i/lub komórek śródbłonka.

Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie skutecznej ilości analogu greliny według wynalazku lub jego farmaceutycznie akceptowalnej soli, gdzie ten związek stanowi agonistę receptora greliny, do wytwarzania leku do wywoływania działania, w którym pośredniczy agonistyczna aktywność

PL 212 106 B1 receptora grenaliny u osobnika, przy czym ilość ta jest wystarczająca do wywoływania działania u tego osobnika.

W korzystnym przypadku wskazanego powyżej zastosowania analog greliny wiąże się z jednym lub większą liczbą receptorów pobudzających wydzielanie hormonu wzrostu.

₃

W innym korzystnym przypadku wskazanego powyżej zastosowania w analogu greliny A³ oznacza Ser.

W jeszcze innym korzystnym przypadku wskazanego powyżej zastosowania działanie to stanowi jeden lub większą liczbę czynników wybranych z grupy obejmującej: zwiększoną masę mięśniową, zwiększoną gęstość kości, poprawioną sprawność seksualną, przyrost masy ciała, utrzymanie masy ciała, utrzymanie sprawności fizycznej, odzyskanie sprawności fizycznej, przyśpieszenie gojenia ran i zwiększenie apetytu.

Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie skutecznej ilości analogu greliny według wynalazku lub jego farmaceutycznie akceptowalnej soli, przy czym analog greliny stanowi antagonista receptora greliny, do wytwarzania leku do wywoływania działania, w którym pośredniczy aktywność antagonistyczna względem receptora greliny, gdzie ilość ta jest wystarczająca do wywoływania działania u tego osobnika.

W jednym z korzystnych przypadków wspomnianego powyżej zastosowania analog greliny wiąże się z jednym lub większą liczbą receptorów pobudzających wydzielanie hormonów wzrostu.

₃

W innym korzystnym przypadku wspomnianego powyżej zastosowania w analogu greliny A³oznacza Ser.

W jeszcze innym korzystnym wariancie opisanego powyżej zastosowania działanie to stanowi jeden lub większą liczbę czynników wybranych z grupy obejmującej: utratę masy ciała, osłabienie apetytu i utrzymanie masy ciała.

Przedmiotem wynalazku jest także analog greliny według wynalazku lub jego farmaceutycznie akceptowalna sól do zastosowania jako lek.

Analogi grenaliny według wynalazku są aktywne względem jednego lub większej liczby receptorów GHS. Związki tę mogą się wiązać z receptorem, a korzystnie stymulują aktywność receptora. Analogi greliny mają wiele różnych zastosowań obejmujących stosowanie jako narzędzie badawcze i zastosowanie terapeutyczne.

Zastosowanie jako narzędzie badawcze ogólnie wymaga zastosowania analogu greliny i obecności receptora GHS lub jego fragmentu. Receptor GHS może być obecny w różnych ośrodkach, takich jak organizm ssaka, cała komórka, lub fragment błony. Przykłady zastosowań jako narzędzie badawcze obejmują: przeszukiwanie pod kątem związków aktywnych względem receptora GHS, oznaczanie obecności receptora GHS w próbce lub otrzymywanie i badanie roli lub wpływu greliny.

Analogi greliny mogą być stosowane do przeszukiwania zarówno pod kątem agonistów greliny, jak i antagonistów greliny. Przeszukiwanie pod kątem agonistów greliny może być przeprowadzane, na przykład, stosując analog greliny w doświadczeniu kompetycyjnym z badanymi związkami. Przeszukiwanie pod kątem antagonistów greliny może być przeprowadzane, na przykład, stosując analog greliny do wytwarzania aktywności receptora GHS a następnie pomiar zdolności związku do zmieniania aktywności receptora GHS.

Niniejszy wynalazek znajduje również zastosowanie w sposobach przeszukiwania związków pod kątem związku zdolnego do wiązania się z receptorem GHS. Sposób ten obejmuje etap pomiaru zdolności związku do wpływania na wiązanie analogu greliny zarówno z receptorem, fragmentem receptora zawierającym miejsce wiążące grelinę, polipeptydem zawierającym fragment, lub pochodną polipeptydu.

Niniejszy wynalazek może być także wykorzystany w sposobie uzyskiwania korzystnego działania u osobnika, który to sposób obejmuje etap podawania osobnikowi skutecznej ilości jednego lub więcej niż jednego związku o wzorze (I), lub jego farmaceutycznie dopuszczalnej soli, gdzie podawana ilość jest skuteczna w wytwarzaniu korzystnego działania w leczeniu (np., leczenie lub zmniejszanie dotkliwości) lub zapobieganiu (np., zmniejszaniu prawdopodobieństwa zapoczątkowania lub dotkliwości choroby) chorobom lub zaburzeniom.

Grelina indukuje uwalnianie hormonu wzrostu z pierwotnej hodowli komórek z przysadki w sposób zależny od dawki, bez stymulowania uwalniania innych przysadkowych hormonów. Podana przez wstrzykiwanie dożylne uśpionym szczurom, grelina stymulowała pulsacyjne uwalnianie hormonu wzrostu (Kojima i wsp., Nature 1999, 402, 656-660.)

PL 212 106 B1

Analogi greliny odpisane tutaj mogą również antagonizować działanie greliny in vitro i in vivo. Niniejszy wynalazek może być ponadto wykorzystywany w sposobie wywoływania działania u osobnika, w którym pośredniczy agonizm receptora greliny (np. leczenie lub zapobieganie łamliwości mięśniowo-szkieletowej, leczenie lub zapobieganie cukrzycy, leczenie lub zapobieganie zastoinowej niewydolności serca, leczenie lub zapobieganie otyłości, leczenie lub zapobieganie łamliwości związanej ze starzeniem lub łamliwości związanej z otyłością, leczenie oporności na insulinę, przyśpieszanie zrastania złamania kości, osłabianie działania białkowej odpowiedzi katabolicznej po dużych zabiegach chirurgicznych, zmniejszanie wyniszczenia i utraty białek spowodowanych chronicznymi chorobami, przyśpieszanie gojenia ran, przyśpieszanie gojenia oparzeń u pacjentów lub gojenia u pacjentów, którzy przeszli większe zabiegi chirurgiczne, poprawienie siły mięśni lub ruchliwości, poprawienie utrzymywania grubości skóry, utrzymywanie homeostazy metabolicznej, lub utrzymywanie homeostazy nerkowej), w którym związek wiąże się z jednym lub więcej receptorami pobudzającymi wydzielanie hormonu wzrostu. Sposób obejmuje etap podawania osobnikowi skutecznej ilości jednego lub więcej niż jednego związku, lub jego farmaceutycznie dopuszczalnej soli, i najkorzystniej związku, w którym ₃

A³ oznacza Ser, Glu, Dap, lub Dab, gdzie związek jest agonistą receptora(ów) i jest podawany w ilości dostatecznej do wywoływania działania.

Ponadto, niniejszy wynalazek znajduje zastosowanie w sposobie wywoływania działania u osobnika, w którym pośredniczy agonizm receptora greliny np., obniżanie apetytu, utraty masy ciała, lub obniżanie metabolizmu), w którym związek wiąże się z jednym lub więcej receptorami hormonu wzrostu pobudzającymi wydzielanie. Sposób obejmuje etap podawania osobnikowi skutecznej ilości jednego lub więcej niż jednego związku, lub jego farmaceutycznie dopuszczalnej soli, i najkorzystniej ₃ związku w którym A³ oznacza Ser, Glu, Dap, lub Dab, gdzie związek jest antagonistą receptora(ów) i jest podawany w ilości dostatecznej do wywoływania działania.

Analogi greliny mogą być podawane osobnikowi. Termin osobnik odnosi się do ssaków i zwierząt innych niż ssaki, obejmując na przykład i nie ograniczając zakresu, człowieka, szczura, mysz, lub zwierzęta hodowlane. Odniesienie do osobnika nie koniecznie wskazuje na obecność choroby lub zaburzenia. Określenie osobnik obejmuje, na przykład, ssaka i zwierzę inne niż ssak, które otrzymuje dawki analogu greliny jako część doświadczenia, ssaka i zwierzę inne niż ssak leczone, aby pomóc w złagodzeniu choroby lub zaburzenia oraz ssaka i zwierzę inne niż ssak, któremu środek podaje się profilaktycznie, aby opóźnić lub zapobiegać zapoczątkowaniu choroby lub zaburzenia.

Agoniści greliny można stosować w celu osiągnięcia korzystnego działania u osobnika takiego jak działanie lub więcej działań wybranych z poniższej grupy: leczenie stanu braku hormonu wzrostu, zwiększanie masy mięśniowej, zwiększanie gęstości kości, leczenie zaburzeń seksualnych u osobników obu płci, ułatwienie przyrostu masy ciała, ułatwienie utrzymania masy ciała, ułatwienie utrzymania sprawności fizycznej, ułatwienie odzyskania sprawności fizycznej, i/lub ułatwienie zwiększenia apetytu. Ułatwienie przyrostu masy ciała, utrzymanie masy ciała, lub zwiększenie apetytu jest szczególnie użyteczne u pacjenta cierpiącego na choroby lub zaburzenia, lub przechodzącego leczenie, któremu towarzyszy utrata masy ciała. Przykłady chorób lub zaburzeń, którym towarzyszy utrata masy ciała obejmują anoreksję, bulimię, wyniszczenie rakowe, AIDS, zanik, wyniszczenie, i zanik u słabych osób starszych. Przykłady metod leczenia, którym towarzyszy utrata masy ciała obejmują chemoterapię, terapię radiologiczną, czasowe lub stałe unieruchomienie i dializę.

Aby osiągnąć korzystne działania u pacjenta mogą być stosowane również związki antagonistyczne greliny. Na przykład, związki antagonistyczne greliny mogą być stosowane do ułatwiania utraty masy ciała, ułatwiania osłabienia apetytu, ułatwiania utrzymania masy ciała, leczenia otyłości, leczenia cukrzycy, leczenia komplikacji cukrzycy, obejmujących retinopatię, i/lub leczenia zaburzeń sercowo-naczyniowych. Nadmierna masa ciała jest czynnikiem przyczyniającym się powstawania różnych chorób obejmujących nadciśnienie, cukrzyce, dyslipidemię, chorobę sercowo-naczyniową, kamienie żółciowe, zapalenie kości i stawów, i pewne postacie raka. Spowodowanie utraty masy ciała może być stosowane, na przykład, do obniżenia prawdopodobieństwa wystąpienia takich chorób i jako część leczenia takich chorób.

Inne właściwości i korzyści niniejszego wynalazku jasno wynikają z przedstawionego tu dodatkowego opisu obejmującego różne przykłady. Przedstawione przykłady ilustrują różne składniki i metodykę użyteczne w realizacji niniejszego wynalazku. Przykłady nie ograniczają zastrzeganego wynalazku. W oparciu o niniejsze ujawnienie osoba biegła w dziedzinie będzie umiała zidentyfikować i zastosować inne składniki oraz metodykę użyteczne w realizacji niniejszego wynalazku.

PL 212 106 B1

Jeśli nie stwierdzono inaczej, te aminokwasy z centrami chiralnym stanowią enancjomery L. W odniesieniu do terminu ich/jego pochodna dotyczy on zmodyfikowanego aminokwasu takiego jak odpowiedni D-aminokwas, N-alkilo-aminokwas, β-aminokwas, lub znakowany aminokwas.

Jak wskazano powyżej niniejszy wynalazek dotyczy analogów greliny aktywnych względem receptora GHS. Ludzka grelina jest zmodyfikowanym peptydem o 28 aminokwasach, gdzie hydroksylowa grupa seryny jest estryfikowana przez kwas n-oktanowy (Kojima i wsp., Naturę 1999, 402, 656 -660, i Kojima, Abstrakt w Third International Symposium on Growth Hormone Secretagogues, Keystone, Colorado, USA 2000, luty 17-19).

Pewne aminokwasy przedstawione w związkach według wynalazku mogą być i są przedstawione tutaj w następujący sposób:

Abu oznacza kwas a-aminomasłowy,

Aic oznacza kwas 2-aminoindano-2-karboksylowy,

Acc oznacza kwas 1-amino-1-cyklo(C3-C9)alkilo karboksylowy,

A3c oznacza kwas 1-amino-1-cyklopropanokarboksylowy,

A4c oznacza kwas 1-amino-1-cyklobutanokarboksylowy,

A5c oznacza kwas 1-amino-1-cyklopentanokarboksylowy,

A6c oznacza kwas 1-amino-1-cykloheksanokarboksylowy,

Act oznacza kwas 4-amino-4-karboksytetrahydropiran, który ma strukturę:

Aib oznacza kwas a-aminoizomasłowy,

Ala lub A oznacza alaninę, β-Ala oznacza beta-alaninę,

Apc oznacza strukturę:

Arg lub R oznacza argininę, hArg oznacza homoargininę,

Asn lub N oznacza asparaginę,

Asp lub D oznacza kwas asparaginowy,

Cha oznacza β-cykloheksyloalaninę,

Cys lub C oznacza cysteinę

Dab oznacza kwas 2,4-diaminomasłowy,

Dap oznacza kwas 2,3-diaminopropionowy,

Dhp oznacza 3,4-dehydroprolinę,

Dmt oznacza kwas 5,5-dimetylotiazolidyno-4-karboksylowy,

2Fua oznacza β-(2-furylo)-alaninę

Gln lub Q oznacza glutaminę

Glu lub E oznacza kwas glutaminowy,

Gly lub G oznacza glicynę His lub H oznacza histydynę

3Hyp oznacza trans-3-hydroksy-L-prolinę, to jest kwas (2S, 3S)-3-hydroksypirolidyno-2-karboksylowy,

4Hyp oznacza 4-hydroksyprolinę, to jest kwas (2S, 4R)-4-hydroksypirolidyno-2-karboksylowy,

PL 212 106 B1

Ile lub I oznacza izoleucynę

Inc oznacza kwas indolino-2-karboksylowy,

Inp oznacza kwas izonipekotynowy,

Ktp oznacza 4-ketoprolinę,

Leu lub L oznacza leucynę, hLeu oznacza homoleucinę,

Lys lub K oznacza lizynę,

Met lub M oznacza metioninę,

Nle oznacza norleucinę,

Nva oznacza nor walinę,

Oic oznacza kwas oktahydroindolo-2-karboksylowy, Orn oznacza ornitynę

2Pal oznacza f-(2-pirydynylo)alaninę

3Pal oznacza f-(3-pirydynylo)alaninę

4Pal oznacza f-(4-pirydynylo)alaninę

Phe lub F oznacza fenyloalaninę hPhe oznacza homofenyloalaninę

Pip oznacza kwas pipekolowy,

Pro lub P oznacza prolinę,

Ser lub S oznacza serynę

Taz oznacza f-(4-tiazolylo)alaninę, który ma strukturę:

2Thi oznacza f-(2-tienylo)alaninę

3Thi oznacza f-(3-tienylo)alaninę

Thr lub T oznacza treoninę

Thz oznacza kwas tiazolidyno-4-karboksylowy,

Tic oznacza kwas 1,2,3,4-tetrahydroizochinolino-3-karboksylowy,

Tle oznacza tert-leucynę Trp lub W oznacza tryptofan,

Tyr lub Y oznacza tyrozynę oraz Val lub V oznacza walinę.

W niniejszym opisie zastosowano pewne inne skróty, które zdefiniowano następująco:

Boc oznacza tert-butyloksykarbonyl,

Bzl oznacza benzyl,

DCM oznacza dichlorometan,

DIC oznacza N,N-diizopropylokarbodiimid,

DIEA oznacza diizopropyloetylo aminę,

Dmab oznacza 4-{N-(1-(4,4-dimetylo-2,6-dioksocykloheksylideno)-3-metylobutylo)-amino}benzyl,

DMAP oznacza 4-(dimetyloamino)pirydynę DMF oznacza dimetyloformamid,

DNP oznacza 2,4-dinitrofenyl,

Fmoc oznacza fluorenylometyloksykarbonyl,

HBTU oznacza heksafluorofosforan 2-(1H-benzotriazolo-1-ylo)-1,1,3,3-tetrametylouronium, cHeks oznacza cykloheksyl,

HOAt oznacza heksafluorofosforan O-(7-azabenzotriazol-1-ylo)-1,1,3,3-tetrametylouronium, HOBt oznacza 1-hydroksy-benzotriazol,

Mmt oznacza 4-metoksytrytyl,

PL 212 106 B1

NM oznacza N-metylopirolidon,

Pbf oznacza 2,2,4,6,7-pentametylodihydrobenzofurano-5-sulfonyl, tBu oznacza tert-butyl,

TIS oznacza triizopropylosilan,

TOS oznacza tosyl, trt oznacza trityl,

TFA oznacza kwas trifluorooctowy,

TFFH oznacza heksafluorofosforan tetrametylofluoroforamidinium oraz

Z oznacza benzyloksykarbonyl.

Z wyjątkiem N-końcowego aminokwasu, wszystkie skróty (np. Ala) aminokwasów w tym ujawnieniu oznaczają strukturę -NH-C(R)(R')-CO-, gdzie R i R' każdy oznacza, niezależnie, wodór lub łańcuch boczny aminokwasu (np., R = CH3 i R' = H dla Ala), lub R i R' mogą być połączone, tworząc układ pierścieniowy. Dla N-końcowego aminokwasu, skrót oznacza strukturę (R²R³)-N-C(R)(R')-CO-, 23 gdzie R² i R³ są takie jak zdefiniowano we wzorze (I).

₂

Peptyd według wynalazku również oznaczono tutaj w innym formacie, np., (Aib²)hGrelina(1-28)-NH2, z podstawionym(i) aminokwasem(ami) z naturalnej sekwencji, umieszczonym(i) w pierwszej parze nawiasów (np., Aib² dla Ser² w hGrelinie). Liczby w drugiej parze nawiasów odnoszą się do ilości aminokwasów obecnych w peptydzie (np., hGrelina(1-18) odnosi się do aminokwasów od 1 do ₂ sekwencji peptydu ludzkiej Greliny). Oznaczenie NH2 w np., (Aib²)hGrelina(1-28)-NH2, wskazuje, 22 że C-koniec peptydu jest amidowany. (Aib²)hGrelina(1-28), lub w innym rozwiązaniu (Aib²)hGrelina-(1-28)-OH, wskazuje, że C-koniec jest wolnym kwasem.

Alkil oznacza grupę węglowodorową, zawierającą jeden lub więcej atomów węgla, gdzie wiele atomów węgla, jeśli są obecne, są połączone pojedynczymi wiązaniami. Alkilowa grupa węglowodorowa może mieć prosty łańcuch lub zawierać jeden lub więcej łańcuchów bocznych lub grup pierścieniowych.

Podstawiony alkil odnosi się do grupy alkilowej, w której jeden lub więcej atomów wodoru z grupy węglowodorowej zastąpiono jednym lub więcej podstawnikami wybranymi z grupy zawierającej halogen, (to jest fluor, chlor, brom i jod), -OH, -CN, -SH, -NH2, -NHCH3, -NO2, -C1-2 alkil podstawiony 1 do 6 atomami halogenu, -CF3, -OCH3, -OCF3, i -(CH2)0-4-COOH. W różnych rozwiązaniach obecnych jest 1, 2, 3 lub 4 podstawników. Obecność -(CH2)0-4-COOH prowadzi do utworzenia alkilo kwasu. Przykłady alkilo kwasów zawierają lub składają się z -(CH2)0-4-COOH obejmując kwas 2-norborano octowy, kwas tert-masłowy i kwas 3-cyklopentylo propionowy.

Heteroalkil odnosi się do grupy alkilowej gdzie jeden lub więcej atomów węgla z grupy węglowodorowej zastąpiono jednym lub więcej poniższymi grupami: amino, amido, -O-, lub karbonylo. W różnych rozwiązaniach obecnych jest 1 lub 2 heteroatomów.

Podstawiony heteroalkil odnosi się grupy heteroalkilowej, gdzie jeden lub więcej atomów wodoru z grupy węglowodorowej zastąpiono jednym lub więcej podstawnikami wybranymi z grupy zawierającej halogen, (to jest fluor, chlor, brom i jod), -OH, -CN, -SH, -NH2, -NHCH3, -NO2, -C1-2 alkil podstawiony 1 do 6 atomami halogenu, -CF3, -OCH3, -OCF3, i -(CH2)0-4-COOH. W różnych rozwiązaniach obecnych jest 1, 2, 3 lub 4 podstawników.

Alkenyl odnosi się do grupy węglowodorowej złożonej z dwóch lub więcej atomów węgla, gdzie obecne jest jedno lub więcej podwójnych wiązań węgiel-węgiel. Alkenylowa grupa węglowodorowa może mieć prosty łańcuch lub zawierać jeden lub więcej łańcuchów bocznych lub grup pierścieniowych.

Podstawiony alkenyl odnosi się do grupy alkenylowej, w której jeden lub więcej atomów wodoru zastąpiono jednym lub więcej podstawnikami wybranymi z grupy zawierającej halogen (to jest fluor, chlor, brom i jod), -OH, -CN, -SH, -NH2, -NHCH3, -NO2, -C1-2 alkil podstawiony 1 do 6 atomami halogenu, -CF3, -OCH3, -OCF3, i -(CH2)0-4-COOH. W różnych rozwiązaniach obecnych jest 1, 2, 3 lub 4 podstawników.

Aryl odnosi się do ewentualnie podstawionej grupy aromatycznej z przynajmniej jednym pierścieniem mającym sprzężony układ elektronowy pi, zawierający do dwóch sprzężonych lub skondensowanych układów pierścieniowych. Aryl obejmuje karbocykliczną grupę arylową, heterocykliczną grupę arylową i grupy biarylowe. Korzystnie, aryl oznacza 5- lub 6-członowy pierścień. Korzystne atomy w układzie heterocyklicznego arylu obejmują jeden lub więcej atomy siarki, tlenu i/lub azotu. Przykłady grup arylowych obejmują fenyl, 1-naftyl, 2-naftyl, indol, chinolinę, 2-imidazol i 9-antracen. Arylowe podstawniki wybrano z grupy zawierającej -C_1-4 alkil, -C_1-4 alkoksy, halogen (to jest fluor, chlor,

PL 212 106 B1 brom i jod), -OH, -CN, -SH, -NH2, -NO2, -C1-2 alkil podstawiony 1 do 5 atomami halogenu, -CF3, -OCF3, i -(CH2)0-4-COOH. W różnych rozwiązaniach aryl zawiera 0, 1,2, 3, lub 4 podstawników.

Alkiloaryl odnosi się do alkilu połączonego z arylem.

To, co oznaczono jako Glu(O-Heksylo) oznacza

To, co oznaczono jako Glu(NH-Heksylo) oznacza

To, co oznaczono jako Dap(1-Oktanosulfonylo) oznacza

To, co oznaczono jako Cys(S-Heptylo) oznacza

PL 212 106 B1

To, co oznaczono jako Dap(Oktanoil) oznacza

Niniejszy wynalazek obejmuje diastereomery jak i ich racemiczne i rozdzielone enancjomerycznie czyste formy. Analogi greliny mogą zawierać D-aminokwasy, L-aminokwasy lub ich połączenie. Korzystnie, aminokwasy obecne w analogu greliny są enancjomerami L.

Korzystne pochodne analogów według wynalazku obejmują D-aminokwasy, N-alkilo-aminokwasy, β-aminokwasy, i/lub jeden lub więcej znakowanych aminokwasów (obejmujących znakowaną odmianę D-aminokwasu, N-alkilo-aminokwasów, lub β-aminokwasu). Termin znakowane pochodne oznacza zmianę aminokwasu lub pochodnej aminokwasu przez wprowadzenie wykrywanego znacznika. Przykłady wykrywanych znaczników obejmują znaczniki luminescencyjne, enzymatyczne i radioaktywne. Zarówno typ znacznika jak i jego umiejscowienie może wpływać na aktywność analogu. Znaczniki powinny być wybrane i zlokalizowane tak, aby zasadniczo nie wpływały na aktywność analogu greliny względem receptora GHS. Wpływ danego znacznika i jego umiejscowienia na aktywność greliny może być wyznaczony stosując testy mierzące aktywność greliny i/lub jej wiązanie zreceptorem.

Grupa zabezpieczająca, kowalencyjnie połączona z grupą karboksylową na końcu C, obniża reaktywność końca karboksylowego w warunkach in vivo. Grupa zabezpieczająca koniec karboksylowy jest korzystnie przyłączona do grupy α-karbonylowej ostatniego aminokwasu. Korzystne grupy zabezpieczające koniec karboksylowy obejmują amid, metyloamid i etyloamid.

Przykłady

Przykłady przedstawiono poniżej, aby bardziej szczegółowo przedstawić właściwości niniejszego wynalazku. Przykłady również ilustrują użyteczną metodykę realizacji wynalazku. Przykłady te nie ograniczają zastrzeganego wynalazku.

Synteza

Związki według wynalazku mogą być wytwarzane stosując techniki ujawnione w przykładach, w niniejszym opisie, jak i techniki, które są dobrze znane w tej dziedzinie. Na przykład, polipeptydowy region analogu greliny może być chemicznie lub biochemicznie zsyntetyzowany i zmodyfikowany. Przykłady technik do biochemicznej syntezy^Aobejmujące wprowadzenie kwasu nukleinowego do komórki i ekspresję kwasów nukleinowych przedstawiono w podręcznikach z dziedziny biologii molekularnej Ausubel, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley, 1987-1998, i Sambrook i wsp., w Molecular Cloning, A Laboratory Manual, drugie wydanie, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989. Techniki chemicznej syntezy polipeptydów są również dobrze znane w tej dziedzinie (Patrz np., Vincent w Peptide and Protein Drug Delivery, New York, N.Y., Dekker, 1990). Na przykład, peptydy według wynalazku mogą być wytwarzane stosując standardową syntezę chemiczną peptydów w fazie stałej (Patrz np., Stewart, J.M., i wsp., Solid Phase Synthesis (Pierce Chemical Co., 2. wyd. 1984)).

Podstawniki R² i R³ według powyższego wzoru ogólnego mogą być przyłączane do wolnej aminy N-końcowego aminokwasu standardowymi metodami znanymi w tej dziedzinie. Na przykład, grupy alkilowe, np., (C1-C30)alkilowa, mogą być przyłączane stosując alkilowanie redukcyjne. Grupy hydroksyalkilowe, np., (C1-C30)hydroksyalkilowa, mogą być przyłączane stosując alkilowanie redukcyjne, gdzie wolna grupa hydroksylowa jest zabezpieczona estrem t-butylowym. Grupy acylowe, np., COE¹, mogą być przyłączane przez sprzęganie wolnego kwasu, np., E¹COOH, z wolną aminą N-końcowego aminokwasu przez zmieszanie obsadzonej żywicy z 3 molowymi równoważnikami zarówno wolnego kwasu jak i diizopropylokarbodiimidu w chlorku metylenu przez godzinę. Jeśli wolny kwas zawiera wolną grupę hydroksylową, np., kwas p-hydroksyfenylopropionowy, to sprzęganie należy przeprowadzić z dodatkowymi 3 molowymi równoważnikami HOBt.

2 0

Gdy R¹ oznacza NH-X²-CH2-CONH2, (to jest Z⁰=CONH2), synteza peptydu rozpoczyna się od

BocHN-X²-CH2-COOH, który jest sprzęgany z żywicą MBHA. Jeśli R¹ oznacza NH-X²-CH2-COOH (to jest Z⁰=COOH), synteza peptydu rozpoczyna się od Boc-HN-X²-CH2-COOH, który jest sprzęgany

PL 212 106 B1 ₂ z żywicą PAM. W tym szczególnym etapie zastosowano 4 molowe równoważniki Boc-HN-X²-COOH, HBTU i HOBt, i 10 molowych równoważników DIEA. Czas sprzęgania wynosi około 8 godzin.

Zabezpieczony aminokwas, kwas 1-(N-tert-butoksykarbonyl-amino)-1-cykloheksano-karboksylowy (Boc-A6c-OH) zsyntetyzowano następująco: 19,1 g (0,133 mola) kwasu 1-amino-1-cykloheksanokarboksylowego (Acros Organics, Fisher Scientific, Pittsburgh, PA) rozpuszczono w 200 ml dioksanu i 100 ml wody. Do tego dodano 67 ml 2N NaOH. Roztwór schłodzono w łaźni lodowo-wodnej i do tego roztworu dodano 32,0 g (0,147 mol) di-tert-butylo-dwuwęglanu. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc w temperaturze pokojowej. Dioksan następnie usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i 200 ml octanu etylu dodano do pozostałego roztworu wodnego. Mieszaninę schłodzono w łaźni lodowo-wodnej. Wartość pH warstwy wodnej dostosowano do około 3 dodając 4N HCI. Warstwę organiczną oddzielono. Warstwę wodną ekstrahowano oktanom etylu (1 x 100 ml). Dwie warstwy organiczne połączono i przemyto wodą (2 x 150 ml), wysuszono w obecności bezwodnego MgSO4, przesączono i zatężono do suchości pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość ponownie krystalizowano w octanie etylu/heksanach i 9,2 g czystego produktu otrzymywano, przy 29% wydajności.

Boc-A5c-OH zsyntetyzowano w analogiczny sposób jak Boc-A6c-OH. Inne zabezpieczone aminokwasy Acc mogą być wytwarzane w analogiczny sposób przez osobę o typowej wiedzy w tej dziedziniepak umożliwiono dzięki zamieszczonym tu wskazówkom.

W syntezie analogów greliny według wynalazku zawierających A5c, A6c i/lub Aib, czas sprzęgania wynosi 2 godzin dla tych reszt i pozostałych tuż za nimi.

P r z y k ł a d 1:

(Glu³ (O-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2

Tytułowy peptyd zsyntetyzowano stosując syntetyzator peptydów (Foster City, CA) model 433A. Stosowano żywicę 4-(2',4'-dimetoksyfenylo-Fmoc-aminometylo)-fenoksyacetamidonorleucylo-MBHA (żywica Rink Amid MBHA, Novabiochem, San Diego, CA) z podstawieniem 0,72 mmol/g. Stosowano aminokwasy Fmoc (AnaSpec, San Jose, CA) z poniżej wymienionymi zabezpieczeniami łańcuchów bocznych: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-GIn-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Phe-OH, i Fmoc-Asp(OtBu)-OH. Boc-Gly-OH (Midwest Bio-Tech, Fishers, IN) stosowano w pozycji 1. y-4-{N-(1-(4,4-dimetylo-2,6-dioxocykloheksylideno)-3-metylobutylo)-amino} benzylo ester kwasu N-a-Fmoc-L-glutaminowego (Fmoc-Glu(ODmab)-OH) (Chem-Inpex International, Wood Dale, IL) stosowano w pozycji 3. Syntezę przeprowadzono w 0,25 mmolowej skali. Grupy Fmoc usunięto traktując 20% piperydyna w N-metylopirolidonie (NMP) przez 30 min. W każdym etapie sprzęgania, aminokwas Fmoc (1 mmol) był wstępnie aktywowany HBTU (0,9 mmola) i HOBt (0,9 mmola) w DMF, a następnie dodany do żywicy. Syntetyzator peptydów ABI 433A zaprogramowano tak, aby wykonywał poniższy cykl reakcji: (1) przemywanie NMP, (2) usuwanie grupę zabezpieczającą Fmoc stosując 20% piperydynę w NMP przez 30 min, (3) przemywanie NMP, (4) sprzęganie ze wstępnie aktywowanym aminokwasem Fmoc przez godzinę.

Na koniec składania łańcucha peptydowego stosując syntetyzator peptydów Applied Biosystems (ABI) 433A, żywicę przenoszono do naczynia reakcyjnego w wytrząsarce do syntezy ręcznej. Grupę zabezpieczającą Dmab w łańcuchu bocznym reszty Glu usunięto roztworem 2% hydrazyny w DMF przez 2 godziny. Po przemywaniu DMF, żywicę traktowano 2,5 mmoli heksafluorofosforan u tetrametylofluoroformamidinium (TFFH) (Perseptive Biosystems, Warrington, UK) w dichlorometanie (DCM) przez 25 min aby przekształcić grupę funkcyjną wolnego kwasu karboksylowego w łańcuchu bocznym reszty Glu z kwasowym fluorkiem. Do mieszaniny dodano 5,0 mmoli heksanolu, 2,5 mmoli heksafluorofosforanu O-(7-azabenzotriazol-1-ylo)-1,1,3,3-tetrametylouronium (HOAT) (Anaspec, San

Jose, CA), 5,0 mmoli diizopropyloetylo aminy (DIEA)(Aldrich, Milwaukee, WI) i katalityczną ilość 4-(dimetyloamino)pirydyny (DMAP)(Aldrich, Milwaukee, WI). Mieszaninę wytrząsano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Żywicę przemyto DMF i DCM, i traktowano przez noc 2,5 mmoli N,N-diizopropylokarbodiimidu (DIC)(Chem-Impex International, Wood Dale, IL), 2,5 mmoli 1-heksanolu,

2,5 mmoli HOBt, i 0,025 mmola DMAP. Po przemyciu i wysuszeniu, peptyd odcięto od żywicy stosując mieszaninę TFA (9,5 ml), H2O (0,85 ml) i triizopropylosilan (TIS) (0,85 ml) przez 2 godziny. Żywicę odsączono i filtrat przelano do 70 ml eteru. Utworzony osad odsączono i przemyto obficie eterem. Ten surowy produkt rozpuszczono w 5% kwasie octowym i oczyszczano w preparatywnej kolumnie o odwróconej fazie HPLC stosując kolumnę (4 x 43 cm) C18 DYNAMAX-100A⁰ (Varian, Walnut Creek, CA). Kolumnę wymywano liniowym gradientem od 75% A i 25% B do 55% A i 45% B w ciągu godziny, gdzie A był 0,1% TFA w wodzie i B był 0,1% TFA w acetonitrylu. Frakcje sprawdzono stosując analityczną

PL 212 106 B1

HPLC. Frakcje zawierające czysty produkt połączono i liofilizowano do suchości. Czystość związku wynosiła 92,8%. Wydajność wynosiła 8,6%. Stosując analizę spektrometrią mas z jonizacją przez rozpylanie w polu elektrycznym (ESI MS) otrzymano masę cząsteczkową produktu 3369,4 (co jest zgodne z obliczoną masą cząsteczkową 3369,9).

P r z y k ł a d 2:

(Aib²)hGrelina(1-28)-NH2

Tytułowy peptyd zsyntetyzowano zgodnie z procedurą opisaną w przykładzie 1 dla syntezy ₃ (Glu³(O-Heksylo))hGreliny(1-28)-NH2, z następującym wyjątkiem: Fmoc-Ser-OH stosowano w pozycji 3, Fmoc-Aib-OH stosowano w pozycji 2 i Boc-Gly-OH stosowano w pozycji 1. Po złożeniu łańcucha peptydowego, peptyd-żywicę traktowano 25% piperydyna w DMF przez 3 x 2 godziny. Żywicę przemyto DMF i traktowano kwasem oktanowym (2,5 mmoli, 10 krotny nadmiar), HBTU (2,2 mmoli), HOBt (2,2 mmoli) i DIEA (7,5 mmoli) w DMF przez 2 godziny. Żywicę przemyto DMF, a następnie traktowano kwasem oktanowym (2,5 mmoli), DIC (2,5 mmoli), HOBt (2,5 mmoli) i DMAP (0,025 mmola) w DMF przez 2 godziny. Końcowe procedury odcinania i oczyszczania były takie same jak te w przykładzie 1. Stwierdzono, że produkt był homogenny stosując analityczną HPLC, przy czystości 99% i przy 18,5% wydajności. Stosując analizę spektrometrią mas z jonizacją przez rozpylanie w polu elektrycznym (ESI MS) otrzymano masę cząsteczkową dla produktu 3367,6 (co jest zgodne z obliczoną masą cząsteczkową 3367,0).

P r z y k ł a d 3:

(Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2

Tytułowy peptyd zsyntetyzowano stosując syntetyzator peptydów (Foster City, CA) model 430A, który zmodyfikowano do przyśpieszonej chemicznej syntezy Boc peptydów w fazie stałej. Patrz Schnolzer, i wsp., Int. J. peptyd Protein Res., 40:180 (1992). Stosowano żywicę 4-metylobenzhydrylaminową (MBHA) (Peninsula, Belmont, CA), z podstawieniem 0,91 mmol/g. Stosowano aminokwasy Boc (Midwest Bio-Tech, Fishers, IN; Novabiochem., San Diego, CA) z poniżej wymienionymi zabezpieczeniami łańcuchów bocznych: Boc-Ala-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-His(DNP)-OH, Boc-Val-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gly-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Glu(OcHeks)-OH i Boc-Pro-OH. Fmoc-Glu(OtBu)-OH (Novabiochem., San Diego, CA) dla reszty w pozycji 3 w sekwencji. Syntezę przeprowadzono w 0,25 mmolowej skali. Grupy Boc usunięto traktując 100% TFA przez 2 x 1 min. Aminokwasy Boc (2,5 mmoli) wstępnie aktywowano HBTU (2,0 mmola) i DIEA (1,0 ml) w 4 ml DMF i sprzęgano bez wstępnego zobojętniania soli TFA peptyd-żywica. Czas sprzęgania wynosił 5 min.

Na koniec składania pierwszych 25 reszt w syntetyzatorze peptydów ABI 430A i przed sprzęganiem Fmoc-Glu(OtBu)-OH, zabezpieczony układ peptyd-żywica przenoszono do naczynia reakcyjnego w wytrząsarce do syntezy ręcznej. Po usunięciu grup zabezpieczających Boc stosując 100% 2 x 1 min i przemywanie DMF, żywicę zmieszano z Fmoc-Glu(OtBu)-OH (2,5 mmoli), który wstępnie aktywowano HBTU (2,0 mmola), HOBt (2,0 mmola) i DIEA (1,0 ml) w 4 ml DMF. Mieszaninę wytrząsano przez 2 godziny. Ten etap sprzęgania powtórzono. Po przemywaniu DMF, żywicę traktowano roztworem TFA zawierającym 5% wody i 5% TIS przez 2 godziny, aby usunąć grupę zabezpieczającą tBu w łańcuchu bocznym reszty Glu. Żywicę zobojętniono 10% DIEA w DMF i przemyto DMF i DCM. Żywicę następnie traktowano heksyloaminą (2,0 mmoli), DIC (2,0 mmoli), HOBt (2,0 mmoli) w 5 ml DCM 2 x 2 godziny. Żywicę przemyto DMF i traktowano 25% piperydyna w DMF przez 30 minut aby usunąć grupę zabezpieczającą Fmoc. Po przemywaniu DMF i DCM, żywicę przenoszono do naczynia reakcyjnego w syntetyzatorze peptydów ABI 430A do złożenia pozostałych dwóch reszt.

Na koniec składania całego łańcucha peptydowego, żywicę traktowano roztworem 20% merkaptoetanol/10% DIEA w DMF 2 x 30 min aby usunąć grupę DNP w łańcuchu bocznym His. Grupę Boc na końcu N następnie usunięto traktując 100% TFA 2 x 2 min. Peptyd-żywicę przemyto DMF i DCM i wysuszono pod zmniejszonym ciśnieniem. Końcowe cięcie wykonano mieszając peptyd-żywicę w 10 ml HF zawierającym 1 ml anizolu i ditiotreitolu (50 mg) w temp. 0°C przez 75 min. HF usunięto przez przepuszczanie azotu. Pozostałość przemyto eterem (6 x 10 ml) i ekstrahowano 4N HOAc (6 x 10 ml). Ten surowy produkt oczyszczano stosując preparatywną HPLC o odwróconej fazie, stosując kolumnę (4 x 43 cm) C18 DYNAMAX-100A⁰ (Varian, Walnut Creek, CA). Kolumnę wymywano stosując gradient liniowy od 75% A i 25% B do 55% A i 45% B przy szybkości przepływu 10 ml/min w ciągu godziny, gdzie A było 0,1% TFA w wodzie i B było 0,1% TFA w acetonitrylu. Frakcje zebrano i sprawdzono stosując analityczną HPLC. Te frakcje zawierające czysty produkt połączono i liofilizowano do suchości. 31,8 mg białego ciała stałego otrzymano. Czystość wynosiła 89% w oparciu

PL 212 106 B1 o analityczną analizę HPLC. Stosując analizę spektrometrią mas z jonizacją przez rozpylanie w polu elektrycznym (ESI MS) otrzymano masę cząsteczkową 3368,4 (co jest zgodne z obliczoną masą cząsteczkową 3368,9).

P r z y k ł a d 4:

(Cys³(S-decylo))hGrelina(1-28)-NH2 (i) Tytułowy peptyd zsyntetyzowano zgodnie z procedurą opisane w przykładzie 3 dla syntezy ₃ (Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2 z poniższymi modyfikacjami: Po złożeniu pierwszych 25 reszt stosując chemię Boc, ostatnie 3 reszty złożono stosując chemię Fmoc. Zastosowano następujące aminokwasy Fmoc: N-a-Fmoc-S-(p-metoksytrytylo)-L-cysteinę (Fmoc-Cys(Mmt)-OH), Fmoc-Ser(Bzl)-OH i Fmoc-Gly-OH, które zakupiono z Novabiochem (San Diego, CA). Aminokwas Fmoc (1 mmol) był wstępnie aktywowany HBTU (0,9 mmola) i HOBt (0,9 mmola) w DMF przed sprzęganiem z peptydem-żywicą. Cykl syntezy dla aminokwasu Fmoc obejmował: (1) przemywanie NMP, (2) usuwanie grupy zabezpieczającej Fmoc 20% piperydyna w NMP przez 30 min, (3) przemywanie NMP, i (4) sprzęganie ze wstępnie aktywowanym aminokwasem Fmoc przez godzinę.

(ii) Na koniec składania całego łańcucha peptydowego, zabezpieczony peptyd-żywicę traktowano roztworem 20% merkaptoetanolu i 10% DIEA w DMF 2 x 30 min, aby usunąć grupę DNP w łańcuchu bocznym reszty His. Grupę zabezpieczającą Mmt w łańcuchu bocznym reszty Cys następnie usunięto stosując roztwór 1% TFA i 5% TIS w DCM przez 30 minut i peptyd-żywicę przemyto DMF.

(iii) 1-(2-pirydyloditio)dekan uzyskano mieszając 2,2'-dipirydylo disulfid (1,06 g, 4,8 mmoli), 1-dekanotiol (0,83 ml, 4 mmoli) i trietylaminę (2 ml) w propanolu i acetonitrylu (1/9, obj./obj.) w temperaturze pokojowej przez około 3 godziny (Patrz Carlsson i wsp., Biochem. 1,1978, 173, 723-737). Oczyszczanie surowego 1-(2-pirydyloditio)dekanu wykonywano stosując chromatografię błyskawiczną (flash), wymywając układem mieszanych rozpuszczalników DCM/MeOH (10:0,4).

(iv) Peptyd-żywicę z etapu (ii) traktowano 1-(2-pirydyloditio) dekanem z etapu (iii) i DIEA (3 równ., 0,75 mmola) przez noc w układzie mieszanych rozpuszczalników DMF/1-propanol (7:3). Żywicę następnie przemyto DMF i grupę zabezpieczającą Fmoc na końcu N usunięto traktując 25% piperydyna w DMF przez 30 min. Peptyd-żywicę następnie przemyto DMF i DCM i wysuszono pod zmniejszonym ciśnieniem.

(v) Ostateczne cięcie wykonywano mieszając peptyd-żywicę w 10 ml HF zawierającym 1 ml anizolu w temp. około 0°C przez około 70 min. Procedura oczyszczania była taka sama jak ta opisana w przykładzie 3. Docelowy produkt (wydajność 10,2%), jak sprawdzono analityczną HPLC, miał czystość 99,9%. Stosując analizę spektrometrią mas z jonizacją przez rozpylanie w polu elektrycznym (ESI-MS) otrzymano masę cząsteczkową 3432,1 (co jest zgodne z obliczoną masą cząsteczkową 3432,1).

Inne peptydy według wynalazku mogą być wytwarzane przez osobę o typowej wiedzy w tej dziedzinie, stosując procedury syntezy analogiczne do tych ujawnionych zasadniczo tutaj powyżej i/lub do tych ujawnionych specyficznie w poniższych przykładach, tak jak związki przedstawione w tabeli 1.

T a b e l a 1

Związek (%)	czystość	Masa (ESI-MS)	Masa (obliczona)
1	2	3	4
(Asp³(NH-heksylo))hGrelina(1-28)-NH2	99	3368,1	3368,92
(Glu³(NH-heksylo))hGrelina(1-28)-NH2	89	3368,52	3368,92
(Aib¹)hGrelina(1-28)-NH2	98	3397,78	3397,96
(Aib²)hGrelina(1-28)-NH2	99	3367,92	3367,94
(Glu³(O-heksylo))hGrelina(1-28)-NH2	92,8	3369,17	3369,91
(Asp³(O-heksylo))hGrelina(1-28)-NH2	88,6	3369,92	3369,91
(Cys³(S(CH2)9CH3)hGrelina(1-28)-NH2	100	3431,9	3432,11
(Aib², Glu³(NH-heksylo))hGrelina(1-28)-NH2	97	3367,24	3366,95
(Aib^2,6)hGrelina(1-28)-NH2	95	3365,84	3365,96

PL 212 106 B1 ciąg dalszy Tabeli 1

1	2	3	4
(Aib², Act⁶)hGrelina(1-28)-NH2	95	3408,1	3408,00
(A5c²)hGrelina(1-28)-NH2	98	3393,47	3393,97
(Act²)hGrelina(1-28)-NH2	96	3409,14	3409,97
(Aib², A6c⁵)hGrelina(1-28)-NH2	99	3379,76	3379,95
(A6c⁵)hGrelina(1-28)-NH2	98,6	3381,72	3381,92
(Aib², 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2	96,5	3378,3	3378,96
(Dap³(1-oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2	99	3418,7	3419,01
(Aib², Thz⁷)hGrelina(1-28)-NH2	97	3385,28	3385,98
(Aib², Cha⁵)hGrelina(1-28)-NH2	90	3408,8	3408,00
(Aib², Abu⁶)hGrelina(1-28)-NH₂	90	3365,92	3365,96
(Aib², 4Hyp⁷)hGrelina(1-28)-NH2	90	3383,7	3383,94
(Aib², Taz⁹)Grelina(1-28)-NH2	95	3385,8	3384,99
(Aib², 4Pal⁹)Grelina(1-28)-NH2	95	3380,1	3378,96
(Aib², Dhp⁷)Grelina(1-28)-NH2	95	3366,2	3365,92
(Aib^2,8)Grelina(1-28)-NH2	95	3324,0	3323,93
(Aib², Pip⁷)Grelina(1-28)-NH2	99,9	3382,5	3381,96
(Aib²,Glu³(NH-heksylo),4Hyp⁷)Grelina(1-28)-NH2	95	3382,7	3382,95
(Aib^2,8, Glu³(NH-heksylo))Grelina(1-28)-NH2	95	3323,1	3322,94
(Aib^2,12,Glu³(NH-heksylo),4Pal⁹,Orn¹⁵)Grelina(1-28)-NH2	95	3321,9	3321,91
(Aib², Glu³(NH-heksylo),4Pal⁹)Grelina(1-28)-NH2	98,1	3378,4	3377,98
(Aib², Glu³(NH-heksylo),3Pal⁹)Grelina(1-28)-NH2	98,9	3378,2	3377,98
(Aib^2,10)Grelina(1-28)-NH2	99,0	3325,03	3324,91
(Aib^2,10, Glu³(NH-heksylo))Grelina(1-28)-NH2	95,7	3324,05	3323,93
(n-oktanoilo-Gly¹)hGrelina(1-28)-NH₂	95		3496,11

Test biologiczny

Aktywność związków według wynalazku względem receptora GHS może być i została wyznaczona stosując techniki takie jak te opisane w przykładach dostarczonych poniżej. W różnych rozwiązaniach analog greliny ma przynajmniej około 50%, przynajmniej około 60%, przynajmniej około 70%, przynajmniej około 80%, lub przynajmniej około 90%, aktywności funkcjonalnej względem greliny jak wyznaczono stosując jeden lub więcej testów oznaczania aktywności funkcjonalnej opisanych poniżej; i/lub ma wartość IC50 większą niż około 1,000 nM, większą niż około 100 nM, lub większą niż około 50 nM, stosując test wiązania z receptorem opisany poniżej. W odniesieniu do IC50, większy odnosi się mocy, a zatem wskazuje na mniejszą ilość potrzebną, aby osiągnąć hamowanie wiązania.

Testy mierzące zdolności związku do wiązania z receptorem GHS wykorzystują receptor GHS, fragment receptora zawierający miejsce wiążące grelinę, polipeptyd zawierający taki fragment, lub pochodną polipeptydu. Korzystnie, w teście zastosowano receptor GHS lub jego fragment.

Polipeptyd zawierający fragment receptora GHS, który wiąże się z grelina może również zawierać jeden lub więcej regiony polipeptydu nie stwierdzone w receptorze GHS. Pochodna takiego polipeptydu obejmującego fragment receptora GHS, który wiąże się z grelina, wraz z jednym lub więcej niepeptydowymi składnikami.

Sekwencja aminokwasowa receptora GHS biorąca udział w wiązaniu greliny może być z łatwością zidentyfikowana stosując znakowaną grelinę lub analogi grenaliny i różne fragmenty receptora. Różne strategie mogą być zastosowane, aby wybrać fragmenty, które mają być zbadane aby zawęzić

PL 212 106 B1 region wiążący. Przykłady takich strategii obejmują testowanie sąsiadujących fragmentów o długości około 15 aminokwasów, wychodząc od N-końca, i testowanie fragmentów dłuższych. Jeśli dłuższe fragmenty są badane, fragment wiążący grelinę może być dodatkowo podzielny aby lepiej zlokalizować region wiążący grelinę. Fragmenty stosowania do badań wiązania mogą być wytworzone stosując techniki rekombinacji kwasów nukleinowych.

Badania wiązania mogą być przeprowadzane stosując poszczególne związki lub otrzymywanie zawierające różne liczby związków. Otrzymane zawierające różne liczby związków mających zdolności do wiązania się z receptorem GHS mogą być podzielone na mniejsze grupy związków, które mogą być badane aby zidentyfikować związek(ki) wiążące się z receptorem GHS. W rozwiązaniu według niniejszego wynalazku test, w którym otrzymano przynajmniej 10 związków jest stosowany w teście wiązania.

Testy wiązana mogą być przeprowadzane stosując polipeptydy receptora GHS otrzymane techniką rekombinacji, obecne w różnych środowiskach. Takie środowiska obejmują, na przykład, ekstrakty komórkowe i oczyszczane ekstrakty komórkowe zawierające polipeptyd receptora GHS, otrzymany w wyniku ekspresji ze zrekombinowanego kwasu nukleinowego lub naturalnie występującego kwasu nukleinowego; jak i również obejmują, na przykład, zastosowanie oczyszczanego polipeptydu receptora GHS wytworzonego techniką rekombinacji lub z naturalnie występującego kwasu nukleinowego, który jest wprowadzony do innego środowiska.

Przeszukiwanie pod kątem związków aktwynych względem receptora GHS

Przeszukiwanie pod kątem związków aktywnych względem receptora GHS jest ułatwione dzięki zastosowaniu receptora, który ulega ekspresji w wyniku rekombinacji. Stosując receptor, który ulega ekspresji w wyniku rekombinacji GHS daje kilka korzyści takich jak zdolność do ekspresji receptora w określonym układzie komórek tak, że odpowiedź na związek receptora GHS może być z łatwością odróżniona od odpowiedzi na inne receptory. Na przykład, receptor GHS może ulegać ekspresji w linii komórkowej takiej jak HEK 293, COS 7, i CHO, w których normalnie nie zachodzi ekspresja receptora, dzięki ekspresji wektora, gdzie ta sama linia komórkowa, w której nie zachodzi ekspresja wektora może służyć jako kontrola.

Przeszukiwanie pod kątem związków obniżających aktywność receptora GHS jest ułatwione dzięki zastosowaniu w teście analogu greliny. Zastosowanie analogu greliny w teście przeszukiwania ustala aktywność receptora GHS. Wpływ badanych związków na taką aktywność może być mierzony, aby zidentyfikować, na przykład, allosteryczne modulatory i związki antagonistyczne.

Aktywność receptora GHS może być mierzona stosując różne techniki takie jak wykrywanie zmiany wewnątrzkomórkowej konformacji receptora GHS, w aktywności sprzężonej z białkiem G, i/lub wewnątrzkomórkowych przekaźników informacji. Korzystnie, aktywność receptora GHS jest mierzona stosując techniki takie jak te mierzące wewnątrzkomórkowy Ca²⁺. Przykłady technik dobrze znanych w tej dziedzinie, które mogą być zastosowane do pomiaru poziomu Ca²⁺ obejmują zastosowania barwników takich jak Fura-2 i zastosowania bioluminescencyjnych białek reporterowych Ca²⁺ takich jak ekworyna. Przykładem linii komórkowej, w której zastosowano ekworynę do pomiaru aktywności białka G jest HEK293/aeq17 (Button i wsp., Cell Calcium,1993. 14, 663-671, i Feighner i wsp., Science, 1999, 284, 2184-2188).

Chimeryczne receptory zawierające wiążący grelinę region funkcjonalnie sprzężony z różnym białkiem G mogą być również stosowane do pomiaru aktywności receptora GHS. Chimeryczny receptor GHS zawiera N-końcową zewnątrzkomórkową domenę; transmembranową domenę złożoną z regionów transmembranowych, regionów zewnątrzkomórkowych pętli i regionów wewnątrzkomórkowych pętli; i wewnątrzkomórkowy koniec karboksylowy. Techniki wytwarzania chimerycznych receptorów i mierzenia odpowiedzi sprzężonych z białkami G przedstawiono na przykład w międzynarodowym zgłoszeniu patentowym nr WO 97/05252, i Patentem U. S. Nr 5,264,565, z których oba są niniejszym włączone tutaj jako odnośnik.

Stymulacja aktywności receptora GHS

Analogi grenaliny mogą być stosowane do stymulacji aktywności receptora GHS. Taka stymulacja może być stosowana, na przykład, do badania wpływu modulacji receptora GHS, do badania wpływu wydzielania hormonu wzrostu, do przeszukiwania lub badania związków antagonistycznych greliny, lub aby osiągnąć korzystne działania u osobnika. Korzystne działania, które można osiągnąć obejmują jeden lub więcej objawów wybranych z poniższej grupy: leczenie stanu braku hormonu wzrostu, zwiększanie masy mięśniowej, zwiększanie gęstości kości, leczenie zaburzeń seksualnych

PL 212 106 B1 u obu płci, ułatwienie przyrostu masy ciała, ułatwienie utrzymania masy ciała, ułatwienie utrzymania sprawności fizycznej, ułatwienie odzyskania sprawności fizycznej, i/lub ułatwienie zwiększenia apetytu.

Zwiększanie masy ciała lub apetytu może być użyteczne w utrzymywaniu masy ciała lub uzyskiwaniu przybrania masy ciała lub zwiększenia apetytu u osób o zbyt niskiej masie ciała, lub u pacjentów cierpiących na chorobę lub poddanych leczeniu, które wpływa na masę ciała lub apetyt. Ponadto, na przykład, zwierzęta hodowlane takie jak świnie, krowy i kurczaki mogą otrzymywać związek według wynalazku, aby nabrać masę ciała.

Osoby o zbyt niskiej masie ciała obejmują te osoby, które mają masę ciała około o 10% lub mniej, 20% lub mniej, lub 30% lub mniej, niż niższa granica zakresu prawidłowej masy ciała lub współczynnika masy ciała (Body Mas Index BMI). Zakres prawidłowej masy ciała jest dobrze znany w tej dziedzinie i bierze pod uwagę takie czynniki jak wiek pacjenta, jego wzrost i typ budowy ciała.

BMI mierzy stosunek wzrostu osoby/masy ciała. Jest on wyznaczany przez obliczenie masy ciała w kilogramach podzielonych przez wzrost w metrach do kwadratu. Prawidłowy zakres współczynnika BMI wynosi 19-22.

P r z y k ł a d 5:

Test wiązania z receptorem

A. Otrzymywanie komórek CHO-K1 eksprymujących ludzki rekombinowany receptor GHS cDNA receptora pobudzającego wydzielanie ludzkiego hormonu wzrostu (hGHS-R1a, lub receptor greliny) klonowano stosując reakcję łańcuchową polimerazy (PCR) stosując jako matrycę RNA z ludzkiego mózgu (Clontech, Pało Alto, CA), specyficzne dla genu startery flankujące pełnej długości sekwencję kodującą hGHS-R, (S: 5'-ATGTGGAACGCGACGCCCAGCGAAGAG-3' i

AS: 5'-TCATGTATTAATACTAGATTCTGTCCA-3'), i zestaw do PCR Advantage 2 PCR (Clontech). Product PCR wklonowano do wektora pCR2.1 stosując zestaw do klonowania Original TA Cloning Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA). Pełnej długości ludzki GHS-R wklonowano do ssaczego wektora ekspresyjnego pcDNA 3,1 (Invitrogen). Plazmidem transfekowano komórki z linii komórkowej jajnika chomika syryjskiego, CHO-K1 (American Type Culture Collection, Rockville, MD), metodą fosforanu wapnia (Wigier, M i wsp., Cell 11, 223, 1977). Jednokomórkowe klony stabilnie eksprymujących hGHS-R otrzymano przez wybór transfekowanych komórek hodowanych w pierścieniach do klonowania w pożywce RPMI 1640 uzupełnionej 10% płodową surowicą bydlęcą i 1 mM pirogronianem sodu, zawierającym 0,8 mg/ml G418 (Gibco, Grand Island, NY).

B. Test wiązania GHS-R:

Błony do badań wiązania radioligandu mogą być i były uzyskiwane przez powyżej wymienionych komórek CHO-K1 eksprymujących ludzki rekombinowany receptor GHS w 20 ml schłodzonego lodem 50 mM Tris-HCI używając politronu Brinkman (Westbury, NY) (ustawienie 6, 15 sec). Homogenaty przemyto dwukrotnie z wirowaniem (39 000 g/10 min), i ostateczne osad ponownie zawieszono w 50 mM Tris-HCI, zawierającym 2,5 mM MgCI2, i 0,1% BSA. Do testu, równe ilości próbki (0,4 ml) 125 inkubowano z 0,05 nM (¹²⁵I)greliną (~2000 Ci/mmol, Perkin Elmer Life Sciences, Boston, MA), z i bez 0,05 ml nieznakowanych peptydów w teście kompetycji. Po 60 min inkubacji (4°C), związaną (125I)grelinę oddzielono od wolnej przez szybkie sączenie przez filtry GF/C (Brandel, Gaithersburg, MD), które wcześniej moczono w 0,5% polietylenoiminie/0,1% BSA. Filtery następnie przemyto trzy razy stosując 5-ml odmierzone równe ilości schłodzonego lodem 50 mM Tris-HCI i 0,1% albuminę z surowicy bydlęcej, i związaną radioaktywność wychwyconą na filtrach zliczano stosując spektrometr gamma (Wallac LKB, Gaithersburg, MD). Wyznaczone specyficzne wiązanie zdefinowano jako całkowitą

125 ilość związanej (¹²⁵I)greliny minus, ilość związaną w obecności 1000 nM greliny (Bachem, Torrence, CA).

P r z y k ł a d 6:

Testy aktywności funkcjonalnej GHS-R

A. Mobilizacja in vitro wewnątrzkomórkowego iCa²⁺, w którym pośredniczy receptor GSH Wymienione powyżej komórki CHO-K1eksprymujących ludzki receptor GsH zebrano przez inkubację w 0,3% EDTA/buforowanym fosforanem roztworem soli (25°C) i przemyto dwukrotnie przez wirowanie. Przemyte komórki ponownie zawieszono w buforowanym roztworze soli Hanka (HBSS) w celu wprowadzenia Fura-2AM, fluorescencyjnego wskaźnika Ca²⁺. Zawiesiny komórek o około 10⁶ komórek/ml inkubowano z 2 μΜ Fura-2AM przez 30 min w temp. około 25°C. Nie wprowadzony Fura-2AM usunięto przez wirowanie dwukrotne w HBBS i końcową zawiesiny przenoszono do spektrofluorymetru (Hitachi F-2000) wyposażonego w mechanizm mieszadła magnetycznego i w oprawie kuwet z regulowaną temperaturą. Po wyrównaniu temperatury do 37^oC, analogi greliny dodano w celu

PL 212 106 B1 pomiaru mobilizacji wewnątrzkomórkowego Ca²⁺. Długości fal wzbudzenia i emisji wynosiły odpowiednio 340 i 510 nm.

B. Uwalnianie/obniżanie GH in vivo

Jak jest to dobrze znane w tej dziedzinie, związki mogą być testowane pod kątem ich zdolności do stymulowania lub obniżania uwalniania hormonu wzrostu (GH) in vivo (patrz np., Deghenghi, R., i wsp., Life Sciences, 1994, 54, 1321-1328; Międzynarodowe zgłoszenie nr WO 02/08250). Zatem, na przykład, w celu stwierdzenia zdolności związku do stymulowania uwalniania GH in vivo, związek może być podany przez wstrzykiwanie podskórne u 10-dniowych szczurów w dawce np. 300 mg/kg. Poziom krążącego GH może wyznaczony po np. 15 minutach po iniekcji i porównany z poziomami GH u szczurów, którym wstrzyknięto tylko kontrolny rozpuszczalnik.

Podobnie, związki mogą być testowane pod kątem ich zdolności antagonizowania indukowanego przez grelinę wydzielania in vivo GH. Zatem związek może byc podany przez wstrzykiwanie podskórne u 10-dniowych szczurów w dawce np. 300 mg/kg, samego lub z grelina. Ponownie, poziom krążącego GH może wyznaczony po np. 15 minutach po iniekcji i porównany z poziomami GH u szczurów, którym wstrzyknięto tylko grelinę.

Podawanie

Analogi greliny mogą być przygotowane w postaci preparatu i podawane osobnikowi stosując wskazówki przedstawione tutaj wraz z technikami dobrze znanymi w tej dziedzinie. Korzystne tryby podawania zapewniają, że skuteczne ilości związku dosięgną miejsca przeznaczenia. Wskazówki do farmaceutycznego podawania ogólnie są przedstawione na przykład w Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20' wydanie Edition, Ed. Gennaro, Lippincott, Williams & Wilkins Publishing, 2000, i Modem Pharmaceutics 2. wydanie, Eds. Banker i Rhodes, Marcel Dekker, Inc., 1990, z których oba są niniejszym włączone tutaj jako odnośniki.

Analogi greliny mogą być wytwarzane jako kwasowe lub zasadowe sole. Farmaceutycznie dopuszczalne sole (w postaci rozpuszczonych lub zawieszonych w wodzie lub oleju produktów) obejmują tradycyjne nietoksyczne sole lub czwartorzędowe sole amonowe, które są utworzone, np., z nieorganicznych lub organicznych kwasów lub zasad. Przykłady takich soli obejmują kwasowe sole addycyjne takie jak octan, adypinian, alginian, asparaginian, benzoesan, benzenosulfonian, wodorosiarczan, maślan, cytrynian, kamforan, kamforosulfonian, cyklopentanopropionian, diglukonian, dodecylosiarczan, etanosulfonian, fumaran, glukoheptanian, glycerofosforan, hemisiarczan, heptanian, heksanian, chlorowodorek, bromowodorek, jodowodorek, 2-hydroksyetanosulfonian, mleczan, maleinian, metanosulfonian, 2-naftalenosulfonian, nikotynian, szczawian, pamonian (pamoate), pektynian, persiarczan, 3-fenylopropionian, pikrynian, piwalan, propionian, burszytnian, winian, tiocyjanian, tosylan i undekanonian; i sole zasad takie jak sole amonowe, sole metalu alkalicznego, takie jak sole sodu i potasu, sole metalu ziem alkalicznych takie jak wapnia i magnezu, sole z organicznymi zasadami takie jak sole as dicykloheksylaminy, N-metylo-d-glukaminy i sole z aminokwasami takimi jak arginina i lizyna.

Analogi greliny mogą być podawane stosując różne drogi obejmujące podawanie doustne, donosowe, przez iniekcje, przezskórne i przezśluzówkowe. Składniki aktywne, które będą podawane doustnie jako zawiesina mogą być wytwarzane zgodnie z technikami dobrze znanymi w dziedzinie preparatów farmaceutycznych i mogą zawierać mikrokrystaliczną celulozę aby nadać masy, kwas alginowy lub alginian sodu jako środek zawieszający, metylocelulozę jako środek zwiększający lepkość i słodziki/środki smakowe. Jako tabletki o natychmiastowym uwalnianiu, kompozycje te mogą zawierać mikrokrystaliczną celulozę, fosforan diwapnia, skrobię, stearynian magnezu i laktozę i/lub inne zarobki, środki wiążące, wypełniacze, środki rozdrabniające, rozcieńczalniki i środki smarujące.

Preparaty podawane w aerozolu donosowym lub preparaty do inhalacji, mogą być wytwarzane na przykład, jako roztwory w roztworze soli, stosując alkohol benzylowy lub inne odpowiednie środki konserwujące, zwiększające absorpcję, aby zwiększyć dostępność biologiczną, stosując fluoropochodne węglowodorów, i/lub stosując inne środki zwiększające rozpuszczalność lub ułatwiające zawieszanie.

Analogi greliny mogą również być podawane w postaci dożylnej (jako jednorazowa duża dawka i wlew), śródotrzewnowo, podskórnie, miejscowo z lub bez okluzji, lub do mięśniowej. Gdy środek podawany jest przez iniekcję, roztwór lub zawiesina do iniekcji może być przygotowany z użyciem odpowiednich nietoksycznych, dopuszczalnych do podawania pozajelitowego rozcieńczalników lub rozpuszczalników, takich jak roztwór Ringera lub izotoniczny roztwór chlorku sodu, lub odpowiednich środków rozpraszających lub zwilżających i środków zawieszających, takich jak sterylne, nie drażniące,

PL 212 106 B1 stałe oleje, obejmujące syntetyczne mono- lub diglicerydy i kwasy tłuszczowe, obejmujące kwas oleinowy.

Odpowiednie tryby dawkowania są korzystnie wyznaczone z uwzględnieniem czynników dobrze znanych w tej dziedzinie, obejmujących typ osoby która otrzymuje dawki; jej wieku, masy ciała, płci i stanu medycznego pacjenta; tryb podawania; funkcjonowanie nerek i wątroby pacjenta; żądanego działania i danego zastosowanego związku.

Optymalna precyzja w osiąganiu stężeń leku w zakresie, jaki zapewnia skuteczność, bez działań toksycznych wymaga aby oprzeć tryb podawania na kinetyce dostępności miejsc docelowych dla leku . Obejmuje to wzięcie pod uwagę rozmieszczenia, równowagi i uwalnia leku. Dzienna dawka dla osoby powinna być pomiędzy 0,01 i 1,000 mg na osobę na dzień.

Analogi grenaliny mogą być dostarczone jako zestaw. Taki zestawy typowo zawiera związek aktywny w postaci dawkowania odpowiedniej do podawania. Postać dawkowania zawiera dostateczną ilość związku aktywnego, taką aby otrzymać żądane działanie, gdy jest on podawany osobnikowi w czasie regularnych przedziałów, to jest 1 do 6 razy w ciągu dnia, w czasie 1 lub więcej dni. Korzystnie, zestaw zawiera instrukcję wskazującą zastosowania postaci do dawkowania, aby osiągnąć żądany wpływ i ilość postaci do dawkowania, którą należy pobrać w określonym okresie.

Wynalazek opisano w sposób przykładowy i zrozumiałe jest, że terminologia, którą użyto ma przedstawiać określone słownictwo, a nie stanowić ograniczenia. Oczywiście, możliwych jest wiele modyfikacji i odmian niniejszego wynalazku w świetle powyższych wyjaśnień. Dlatego jest zrozumiałe, że w zakresie załączonych zastrzeżeń wynalazek może być wykonywany inaczej niż jak tutaj opisano szczegółowo.

Patentowa i naukowa literatura, do której się tutaj odwoływano przedstawia wiedzę, która jest dostępna specjalistom w tej dziedzinie. Wszystkie patenty, publikacje patentowe i inne publikacje cytowane tutaj, są niniejszym załączone jako odnośniki w całości.

Claims

1. Analog greliny o wzorze (I):

(R²R³)-A¹-A²-A³-A⁴-A⁵-A⁶-A⁷-A⁸-A⁹-A¹⁰-A¹¹-A¹²-A¹³-A¹⁴-A¹⁵-A¹⁶-A¹⁷-A¹⁸-A¹⁹-A²⁰-A²¹-A²²-A²³-A²⁴-A²⁵-A²⁶-A²⁷-A²⁸-R¹ (I), lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól, w którym:

A¹ oznacza Gly, Aib, Ala, B-Ala, lub Acc;

₂

A² oznacza Aib, Act, lub Acc;

A⁵ oznacza Leu, Abu, Acc, Aib, Ala, Cha, Ile, hLeu, Nle, Nva, Phe, Tle, lub Val;

A⁶ oznacza Ser, Abu, Acc, Act, Aib, Ala, Gly, Thr, lub Val;

A¹⁰ oznacza Gln, Acc, Aib, Asn, Asp, Glu, lub jest usunięty;

A¹³ oznacza Gln, Acc, Aib, Asn, Asp, Glu, lub jest usunięty;

A¹⁴ oznacza Gln, Acc, Aib, Asn, Asp, Glu, lub jest usunięty;

A¹⁵ oznacza Arg, hArg, Acc, Aib, Apc, Dab, Dap, Lys, Orn, HN-CH((CH2)n-N(R¹²R¹³))-C(O), lub jest usunięty; _A ¹⁶ _ozn jest usunięty; _A ¹⁷ _ozn jest usunięty;

A¹⁶ oznacza Lys, Acc, Aib, Apc, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn, HN-CH((CH2)n-N(R¹²R¹³))-C(O), lub nię

A¹⁷ oznacza Glu, Arg, Asn, Asp, Dab, Dap, Gln, Lys, Orn, HN-CH((CH2)n-N(R¹²R¹³))-C(O), lub

PL 212 106 B1

A¹⁸ oznacza Ser, Abu, Acc, Act, Aib, Ala, Thr, Val, lub jest usunięty;

A²³ oznacza Abu, Acc, Act, Aib, Ala, Apc, Gly, Nva, Val, lub jest usunięty;

A²⁶ oznacza Gln, Aib, Asn, Asp, Glu, lub jest usunięty;

R¹ oznacza -OH, -NH2, -(C1-C30)alkoksy, lub NH-X⁶-CH2Z⁰, gdzie X⁶ oznacza (C1-C12)alkil, (C2-C12)alkenyl, i Z⁰ oznacza -H, -OH, -CO2H lub -C(O)-NH2;

R⁴, R⁵,

R⁶, R⁷, R⁸, R⁹, R¹⁰, R¹¹ i R¹⁴ każdy oznacza, niezależnie od siebie, (C₁-C₄₀)alkil, (C2-C40)alkenyl, podstawiony (C2-C40)alkil, podstawiony (C2-C40)alkenyl, alkiloaryl, podstawiony alkiloaryl, aryl lub podstawiony aryl;

_R ¹² _i

R¹³ każdy oznacza, niezależnie od siebie, H, (C1-C40)alkil, (C1-C40)acyl, (C1-C30)alkilosulfonyl, lub -C(NH)-NH2, gdzie, gdy R¹² oznacza (C1-C40)acyl, (C1-C30)alkilosulfonyl, lub -C(NH)-NH2, to R¹³ oznacza H lub (C1-C40)alkil;

n oznacza, niezależnie od siebie, 1, 2, 3, 4, lub 5;

X¹, X², X³, X⁴, i X⁵ każdy oznacza, niezależnie od siebie, H, F, Cl, Br, I, (C1-C40)alkil, podstawiony (C1-10)alkil, aryl, podstawiony aryl, OH, NH2, NO2, lub CN;

2. Analog greliny według zastrzeżenia 1, znamienny tym, że:

A¹ oznacza Gly lub Aib;

₂

A² oznacza Aib, A5c lub Act;

A³ oznacza Ser(C(O)-R⁴), Glu(O-R⁶), Glu(NH-R⁷), Dap(S(O)2A⁴ oznacza Phe;

₅

A⁵ oznacza Leu, Acc, Aib, Cha, lub hLeu;

A⁶ oznacza Ser, Abu, Act, Aib, lub Thr;

A⁷ oznacza Pro, Dhp, Dmt, 4Hyp, Ktp, Pip, Tic, lub Thz;

A⁸ oznacza Glu lub Aib;

A⁹ oznacza His, Aib, Apc, 2Fua, 2Pal, 3Pal, 4Pal, Taz, lub 2Thi; A¹⁰ oznacza Gln lub Aib;

A¹¹ oznacza Arg;

A¹² oznacza Aib, Val lub Acc;

R¹⁰), lub Dab(S(O)2-R¹¹);

A¹³ oznacza Gln;

A¹⁴ oznacza Gln;

A¹⁵ oznacza Arg lub Orn;

A¹⁶ oznacza Lys lub Apc;

A¹⁷ oznacza Glu;

A¹⁸ oznacza Ser;

A¹⁹ oznacza Lys;

A²⁰ oznacza Lys;

A²¹ oznacza Pro;

A²² oznacza Pro;

A²³ oznacza Ala;

A²⁴ oznacza Lys;

A²⁵ oznacza Leu;

A²⁶ oznacza Gln;

A²⁷ oznacza Pro oraz A²⁸ oznacza Arg,

PL 212 106 B1 lub jego farmaceutycznie akceptowalna sól.

3. Analog greliny według zastrzeżenia 2, znamienny tym, że:

R⁴ oznacza oktyl;

R⁶ oznacza heksyl;

R⁷ oznacza heksyl;

R¹⁰ oznacza oktyl; oraz R¹¹ oznacza oktyl, gdzie

Acc oznacza, niezależnie od siebie, A5c lub A6c, lub jego farmaceutycznie akceptowalna sól.

4. Analog greliny według zastrzeżenia 3, znamienny tym, że jest wybrany z grupy obejmującej związki:

(Aib², A6c⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², A5c¹²)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Act⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dmt⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thz⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(A5c²)hGrelina(1-28)-NH2;

(Act²)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², A5c⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², A6c⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,5)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², hLeu⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Cha⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Act⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Abu⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 4Hyp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib²,Thz⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Pip⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dhp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ktp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,8)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 2Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 4Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Taz⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 2Thi⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 2Fua⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Apc⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,9)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,10)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Tic7)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), A6c⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, Dap³(Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), A5c¹²)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH₂;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), A5c¹²,Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH₂;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Act⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Dmt⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Thz⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

PL 212 106 B1 (A5c², Dap³(Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), A5c⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,5, Dap³(Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), hLeu⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Cha⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,6, Dap³(Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Thr⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Abu⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), 4Hyp⁷)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Pip⁷)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Dhp⁷)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Ktp⁷)hGreiina(1-28)-NH2; (Aib^2,8, Dap³(Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), 2Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), 4Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Taz⁹)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), 2Thi⁹)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), 2Fua⁹)hGrelina(1-28)-NH2 (Aib², Dap³(Oktanosulfonylo), Apc⁹)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,9, Dap³(Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,10, Dap³(Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH₂;

(Aib², A6c⁵, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Act⁶, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 3Pal⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dmt⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thz⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², A5c⁵, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,5, A5c¹²,Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², hLeu⁵, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Cha⁵, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr⁶, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Abu⁶, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 4Hyp⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Pip⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dhp⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ktp7, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,8, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 2Pal⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 3Pal⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 4Pal⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Taz⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 2Thi⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 2Fua⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Apc⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,9, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,10, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH₂;

(Aib², A6c5, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Act⁶, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², 3Pal⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dmt⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thz⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

PL 212 106 B1

Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH ₂;

(Aib², A5c^5,12, (Aib^2,5, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH₂;

(Aib², hLeu⁵, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Cha⁵, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; ^2,6, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

Thr⁶, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; Abu⁶, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; 4Hyp⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; Pip⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; Dhp⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; Ktp⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

2Pal⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2 3Pal⁹4Pal⁹

Taz⁹, A5c¹², Apc¹9 (Aib² (Aib² (Aib² (Aib² (Aib² (Aib² (Aib² (Aib (Aib² (Aib² (Aib² (Aib² (Aib² (Aib² (Aib² (Aib² (Aib

2,8

A5c¹², Apc¹⁶)hGreiina(1-28)-NH2; A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; )hGrelina(1-28)-NH2; 2Thi⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; 2Fua⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; Apc9, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

⁰, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), A6c⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Act⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2 (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Dmt⁷)hGrelina(1-28)-NH2 (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Thz⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), A5c⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,5, Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

2,6 3 , Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

Glu³(NH-Heksylo), Thr⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

Glu³(NH-Heksylo), Abu⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

Glu³(NH-Heksylo), 4Hyp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

Glu³(NH-Heksylo), Pip⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

Glu³(NH-Heksylo), Dhp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

Glu³(NH-Heksylo), Ktp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib²(Aib²(Aib²(Aib²(Aib²(Aib²(Aib² (Aib^2,8, Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 4Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Taz⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Thi⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Fua⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Apc9)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,9, Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,10, Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), A6c⁵, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2 2,6 3 12 15 (Aib^2,6, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH

2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Act⁶, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), 3Pal⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2 (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Dmt⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2 (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Thz⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), A5c⁵, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,5, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹²,Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

PL 212 106 B1 (Aib², hLeu⁵, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Cha⁵, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Thr⁶, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Abu⁶, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), 4Hyp⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2 (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Pip⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Dhp⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Ktp⁷, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,8, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Pal⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), 3Pal⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), 4Pal⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Taz⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Thi⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Fua⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Apc⁹, A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,9, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,12,Glu³(NH-Heksylo),4Pal⁹,Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,10, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Orn¹⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), A6c⁵, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,6, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Act⁶, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), 3Pal⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Dmt⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Thz⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), A5c^5,12, Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,5, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), hLeu⁵, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Cha⁵, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,6, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), Thr⁶, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Abu⁶, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), 4Hyp⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Pip⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Dhp⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Ktp⁷, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,8, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Pal⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), 3Pal⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), 4Pal9, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Taz⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Thi⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), 2Fua⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib², Glu³(NH-Heksylo), Apc⁹, A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,9, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib^2,10, Glu³(NH-Heksylo), A5c¹², Apc¹⁶)hGrelina(1-28)-NH2; (Aib²)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(O-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Dap³(1-Oktanosulfonylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib²)hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-6)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-7)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Glu³(NH-Heksylo), Arg⁸)hGrelina(1-8)-NH2;

PL 212 106 B1 (Ac-Gly¹, Aib², Glu³(NH-Heksylo), Lys⁸)hGrelina(1-8)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib^2,10, Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)-NH2;

oraz (n-Butyrylo-Gly¹, Aib², Glu³(NH-Heksylo))hGrelina(1-28)- NH2 lub jego farmaceutycznie akcepowalna sól.

5. Analog greliny według zastrzeżenia 1, znamienny tym, że jest wybrany z grupy obejmującej związki:

(Aib², Ser³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, Ser³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, Thz⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, Cha⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, Abu⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, 4Hyp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, Taz⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,4, Ser³, 4Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, Dhp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,8, Ser³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, Pip⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib^2,10, Ser³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,10, Ser³)hGrelina(1-28)-NH2;

(n-Butyrylo-Gly¹, Aib², Ser³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Ser³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, Tic⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Ser³, Arg⁸)hGrelina(1-8)-NH2;

(Aib², Ser³, 2Thi⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Ser³, Tic⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,6, Thr³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, 3Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, Thz⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, Cha⁵)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, Abu⁶)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, 4Hyp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, Taz⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,4, Thr³, 4Pal⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, Dhp⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,8, Thr³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, Pip⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib^2,10, Thr³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib^2,10, Thr³)hGrelina(1-28)-NH2;

(n-Butyrylo-Gly¹, Aib², Thr³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Thr³)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, Tic⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Ac-Gly¹, Aib², Thr³, Arg⁸)hGrelina(1-8)-NH2;

(Aib², Thr³, 2Thi⁹)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Thr³, Tic⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

(Aib², Tic⁷)hGrelina(1-28)-NH2;

lub jego farmaceutycznie akceptowalna sól.

₂

6. Analog greliny według zastrzeżenia 1, znamienny tym, że związek ten stanowi (Aib², ₃

Glu³)(NH-heksylo))hGrelina(1-28)-NH2 lub jego farmaceutycznie akceptowalna sól.

7. Sposób identyfikacji związku zdolnego do wiązania się z receptorem GHS, obejmujący etap pomiaru zdolności tego związku do wpływania na wiązanie związku określonego w jednym z zastrzeżeń od 1 do 6 z tym receptorem, z fragmentem tego receptora, z polipeptydem zawierającym fragment tego receptora, lub z pochodną tego polipeptydu.

8. Zastosowanie skutecznej ilości związku lub jego farmaceutycznie dopuszczalnej soli, określonych w jednym z zastrzeżeń od 1 do 6, gdzie ten związek jest agonistą receptora greliny, do wytwarzania

PL 212 106 B1 leku do stymulowania wydzielania hormonu wzrostu u osobnika, który potrzebuje takiego stymulowania, przy czym skuteczna ilość jest ilością wystarczającą do wytwarzania wykrywalnego podwyższenia wydzielania hormonu wzrostu i/lub ilością wystarczającą do osiągnięcia korzystnego działania u tego osobnika.

9. Zastosowanie według zastrzeżenia 8, znamienne tym, że stymulacja wydzielania hormonu wzrostu jest wskazana do leczenia stanu braku hormonu wzrostu u tego osobnika, do zwiększenia masy mięśniowej u tego osobnika, do zwiększenia gęstości kości u tego osobnika, do leczenia zaburzeń seksualnych u tego osobnika, do ułatwienia przyrostu masy ciała u tego osobnika, do ułatwienia utrzymania masy ciała u tego osobnika, do ułatwienia utrzymania sprawności fizycznej u tego osobnika, do ułatwienia odzyskania sprawności fizycznej u tego osobnika, i/lub do ułatwienia zwiększenia apetytu u tego osobnika.

10. Zastosowanie według zastrzeżenia 9, znamienne tym, że osobnik cierpi na chorobę lub zaburzenie, lub jest poddany leczeniu, któremu towarzyszy utrata masy ciała tego osobnika i gdzie wskazana jest stymulacja wydzielania hormonu wzrostu prowadząca do ułatwienia przyrostu masy ciała u tego osobnika, ułatwienia utrzymania masy ciała u tego osobnika, lub ułatwienia zwiększenia apetytu u tego osobnika.

11. Zastosowanie według zastrzeżenia 10, znamienne tym, że choroba lub zaburzenie, któremu towarzyszy utrata masy ciała, obejmuje anoreksję, bulimię, wyniszczenie rakowe, AIDS, wyniszczenie, kacheksję lub wyniszczenie u słabych osób starszych.

12. Zastosowanie według zastrzeżenia 11, znamienne tym, że leczenie, któremu towarzyszy utrata masy ciała, obejmuje chemioterapię, terapię radiologiczną, czasowe lub stałe unieruchomienie, lub dializę.

13. Zastosowanie skutecznej ilości związku lub jego farmaceutycznie akceptowalnej soli, określonych w jednym z zastrzeżeń od 1 do 6, do wytwarzania leku do obniżania wydzielania hormonu wzrostu u osobnika, który potrzebuje takiego obniżenia, i gdzie skuteczna ilość jest ilością wystarczającą do wytwarzania wykrywalnego obniżenia wydzielania hormonu wzrostu i/lub oznacza ilość wystarczającą, aby osiągnąć korzystne działania u tego osobnika.

14. Zastosowanie skutecznej ilości związku lub jego farmaceutycznie akceptowalnej soli, określonych w jednym z zastrzeżeń od 1 do 6, gdzie związkiem tym jest antagonista receptora greliny, do wytwarzania leku do obniżania wydzielania hormonu wzrostu u osobnika, który potrzebuje takiego obniżenia, i do wytwarzania leku do obniżania wydzielania hormonu wzrostu u osobnika, który potrzebuje takiego obniżenia, i gdzie skuteczna ilość jest ilością wystarczającą do wytwarzania wykrywalnego obniżenia wydzielania hormonu wzrostu wzrostu i/lub oznacza ilość wystarczającą, aby osiągnąć korzystne działania u tego osobnika.

15. Zastosowanie według zastrzeżenia 14, znamienne tym, że obniżanie wydzielania hormonu wzrostu jest wskazane do leczenia choroby lub stanu charakteryzującego się nadmiernym wydzielaniem u osobnika hormonu wzrostu, do ułatwienia utraty masy ciała osobnika, do ułatwienia osłabienia apetytu u osobnika, do ułatwienia utrzymania masy ciała osobnika, do leczenia otyłości u osobnika, do leczenia cukrzycy u osobnika, do leczenia powikłań cukrzycowych obejmujących retinopatię u osobnika, i/lub do leczenia zaburzenia sercowo-naczyniowego u osobnika.

16. Zastosowanie według zastrzeżenia 15, znamienne tym, że nadmierna masa ciała jest czynnikiem przyczyniającym się do choroby lub stanu obejmującego nadciśnienie, cukrzycę, dyslipidemię, chorobę sercowo-naczyniową, kamienie żółciowe, zapalenie kości i stawów, lub raka.

17. Zastosowanie według zastrzeżenia 15, znamienne tym, że ułatwienie utraty masy ciała obniża prawdopodobieństwo choroby lub stanu obejmującego nadciśnienie, cukrzycę, dyslipidemię, chorobę sercowo-naczyniową, kamienie żółciowe, zapalenie kości i stawów, lub raka.

18. Zastosowanie według zastrzeżenia 15, znamienne tym, że ułatwienie utraty masy ciała obejmuje przynajmniej część leczenia choroby lub stanu obejmującego nadciśnienie, cukrzycę, dyslipidemię, chorobę sercowo-naczyniową, kamienie żółciowe, zapalenie kości i stawów, lub raka.

19. Zastosowanie skutecznej ilości związku, lub jego farmaceutycznie akceptowalnej soli, określonych w jednym z zastrzeżeń od 1 do 6, do wytwarzania leku do leczenia zaburzenia sercowonaczyniowego u osobnika, który potrzebuje takiego leczenia , i gdzie skuteczna ilość jest ilością wystarczającą aby osiągnąć korzystne działanie u tego osobnika.

20. Zastosowanie według zastrzeżenia 19, znamienne tym, że wspomniany związek jest agonistą receptora grenaliny.

PL 212 106 B1

21. Zastosowanie według zastrzeżenia 19, znamienne tym, że zaburzenie sercowonaczyniowe jest ciężką chroniczną niewydolnością serca.

22. Zastosowanie według zastrzeżenia 19, znamienne tym, że związek hamuje apoptozę komórek mięśniowych serca i/lub komórek śródbłonka.

23. Zastosowanie skutecznej ilości związku, lub jego farmaceutycznie akceptowalnej soli, określonego w jednym z zastrzeżeń od 1 do 6, gdzie ten związek stanowi agonistę receptora greliny, do wytwarzania leku do wywoływania działania, w którym pośredniczy agonistyczna aktywność receptora grenaliny u osobnika, przy czym ilość ta jest wystarczająca do wywoływania działania u tego osobnika.

24. Zastosowanie według zastrzeżenia 23, znamienne tym, że ten związek wiąże się z jednym lub większą liczbą receptorów pobudzających wydzielanie hormonu wzrostu.

₃

25. Zastosowanie według zastrzeżenia 23, znamienne tym, że we wspomnianym związku A³ oznacza Ser.

26. Zastosowanie według zastrzeżenia 23, znamienne tym, że działanie to stanowi jeden lub większą liczbę czynników wybranych z grupy obejmującej: zwiększoną masę mięśniową, zwiększoną gęstość kości, poprawioną sprawność seksualną, przyrost masy ciała, utrzymanie masy ciała, utrzymanie sprawności fizycznej, odzyskanie sprawności fizycznej, przyśpieszenie gojenia ran i zwiększenie apetytu.

27. Zastosowanie skutecznej ilości związku lub jego farmaceutycznie akceptowalnej soli, określonych w jednym z zastrzeżeń od 1 do 6, przy czym związek stanowi antagonista receptora greliny, do wytwarzania leku do wywoływania działania, w którym pośredniczy aktywność antagonistyczna względem receptora greliny, gdzie ilość ta jest wystarczająca do wywoływania działania u tego osobnika.

28. Zastosowanie według zastrzeżenia 27, znamienne tym, że ten związek wiąże się z jednym lub większą liczbą receptorów pobudzających wydzielanie hormonów wzrostu.

₃

29. Zastosowanie według zastrzeżenia 28, znamienne tym, że A³ w tym związku oznacza

30. Zastosowanie według zastrzeżenia 28, znamienne tym, że działanie to stanowi jeden lub większą liczbę czynników wybranych z grupy obejmującej: utratę masy ciała, osłabienie apetytu i utrzymanie masy ciała.

31. Analog greliny według jednego z zastrzeżeń od 1 do 6 lub jego farmaceutycznie akceptowalna sól do zastosowania jako lek.