BRPI0714945A2

BRPI0714945A2 - formas cristalinas de anÁlogos de rapamicinas

Info

Publication number: BRPI0714945A2
Application number: BRPI0714945-0A
Authority: BR
Inventors: Shekhar Viswanath; Larry Bartelt; Robert Leanna; Michael Rasmussen; Madhup Dhaon; Rodger Henry; Thomas Borchardt; Shuang Chen; Geoff Zhang
Original assignee: Abbott Lab
Priority date: 2006-07-25
Filing date: 2007-07-24
Publication date: 2013-05-21
Also published as: BRPI0714945B8; CA2658896A1; MX2009001067A; EP2051984A1; JP2010500286A; NZ574654A; EP2407471A2; KR20090035716A; IL196706A0; AU2007276837B2; AU2007276837A1; WO2008014222A1; EP2407471A3; BRPI0714945B1

Abstract

FORMAS CRISTALINAS DE ANÁLOGOS DE RAPAMICINAS. Uma composição de análogo de rapamicina inclui uma forma cristalina de um análogo de rapamicina. O cristal pode ser um hidrato, deididrato, solvato, ou dessolvado. O análogo de rapamicina pode possuir uma estrutura de Fórmula 1, a quql é opicionalmente um pró-fármaco, sal, derivado, ou combinação dos mesmos.

Description

"FORMAS CRISTALINAS DE ANÁLOGOS DE RAPAMICINAS" REFERÊNCIA REMISSIVA A PEDIDOS RELACIONADOS

O presente pedido reivindica o benefício do Pedido de Patente Provisório U.S. No. de Série 60/820.317, depositado em 25 de Julho de 2006, intitulado "CRYSTALLINE FORMS OF RAPAMYCIN ANALOGS" e Pedido de Patente U.S. No. 11/781.804, depositado em 23 de Julho de 2007, intitulado CRYSTALLINE FORMS OF RAPAMYCIN ANALOGS", bem como Pedido de Patente U.S. No. 11/781.807, depositado em 23 de Julho de 2007, intitulado "METHODS OF MANUFACTURING CRYSTALLINE FORMS OF RAPAMYCIN 10 ANALOGS", com Shekhar Viswanath, Larry Bartelt, Robert Leanna, Michael Rasmussen, Madhup Dhaon, Rodger Henry, Thomas Borchardt, Shuang Chen e Geoff Zhang como in- ventores e os conteúdos dos quais são incorporados aqui por referência específica.

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção se refere à formas cristalinas de análogos de rapamicina, bem como composições, usos e métodos para fabricação das mesmas. Mais particularmente, a presente invenção se refere à formas cristalinas do análogo de rapamicina zotarolimus (isto é, ABT-578).

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Em produtos farmacêuticos existem, tipicamente, conflitos entre a solubilidade do fármaco, estabilidade, absorção e biodisponibilidade, os quais podem ser modulados pela forma do fármaco. Algumas formas de compostos ativos sofrem de solubilidade muito baixa ou insolubilidade em água e sofrem metabolismo de primeiro passe hepático extensivo. Al- gumas formas de compostos ativos sofrem de pobre absorção em virtude de sua baixa so- lubilidade em água. As propriedades de uma forma sólida de um composto ativo, tais como sua estrutura de cristal e morfologia, podem afetar significativamente suas propriedades. Como tal, a seleção de uma forma de um componente ativo pode, portanto, alterar significa- tivamente o desempenho de produtos farmacêuticos e outros produtos químicos. Tradicio- nalmente, a rapamicina e análogos de rapamicina têm sido preparados em formas amorfas dentro de composições farmacêuticas.

A despeito do desenvolvimento e pesquisa de métodos de cristalização, o controle da cristalização baseado em compreensão estrutural e na capacidade de criar cristais e ou- tras formar sólidas ainda é limitado. O controle sobre a nucleação, dissolução e morfologia de cristais moleculares permanece primariamente uma questão de "mistura e tentativa" (Weissbuch, I., Lahav, M. e Leiserowitz, L., Molecular Modeling Applications in Crystallizati- on, 166, 1999). Em virtude do fato de que muitas variáveis influenciam a cristalização, preci- pitação, desvio de fase e as formas sólidas produzidas a partir das mesmas e em virtude do fato de que muitos reagentes e variáveis de processo estão disponíveis, a testagem de for- mação de sólido individual e modificação da estrutura de cristal são um processo extrema- mente entediante. A despeito da importância da estrutura de cristal na indústria farmacêuti- ca, estruturas de cristal ótimas ou sólidos amorfos ótimos não são vigorosa ou sistematica- mente buscados. Assim, a seleção de uma forma de um análogo de rapamicina, tal como uma forma cristalina, pode alterar significativamente seu desempenho em uma aplicação específica e tais formas continuam a ser buscadas.

Portanto, seria benéfico ter uma forma cristalina de um análogo de rapamicina que pode ser usada em tratamentos terapêuticos, adicionalmente, seria benéfico ter composi- ções, métodos de uso e métodos de fabricação da forma cristalina do análogo de rapamici- na.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A invenção se refere à composições, usos e métodos para a fabricação de formas cristalinas de análogos de rapamicina e, mais especificamente, formas cristalinas de zotaro- Iimus (isto é, ABT-578).

Em uma modalidade, a presente invenção inclui uma forma cristalina de um análo- go de rapamicina. As formas cristalinas do análogo de rapamicina podem ser preparadas através de vários métodos, os quais são descritos aqui. Tais formas cristalinas podem ser preparadas de modo que uma forma cristalina pode ser identificada para um uso particular. O análogo de rapamicina pode ter uma estrutura de Fórmula 1, Fórmula 2 ou Fórmula 3, conforme ilustrado abaixo. Também, o análogo de rapamicina cristalino pode ser um pró- fármaco, sal, derivado ou combinação dos mesmos. Ν—N CH3 CH3 OCH3

FORMULA 1

FORMULA 2

CR-, OChh

FÓRMULA 3 Em uma modalidade, o cristal é um solvato. Como tal, o cristal pode incluir um sol- vente orgânico incluído no mesmo, onde o solvente é usado para preparar o cristal. O sol- vente orgânico pode ser selecionado do grupo consistindo de solventes que podem ser usa- dos no preparo do análogo de rapamicina, incluindo acetona, acetato de etila, metanol, eta- nol, n-propanol, isopropanol, isobutanol, terc-butanol, 2-butanol, acetonitrilo, tetrahidrofura- no, acetato de isobutila, acetato de n-butila, formato de etila, acetato de n-propila, acetato de isopropila, metiletil cetona, tolueno, N1N dimetil formamida, anisola, metil isopropil cetona, nitrometano, propionitrilo, 2-butanona (isto é, metil etil cetona ou MEK), tetrahidrofurano, 1,2- dimetóxietano, acetato de isopropila, qualquer combinação dos mesmos e semelhantes. Em uma modalidade, o cristal é um desolvato. Como tal, o cristal pode ser selecio-

nado do grupo consistindo de um desolvato de acetona, desolvato de tolueno, desolvato de acetonitrilo, desolvato de formato de etila, desolvato de acetato de isobutila, N1N dimetil for- mamida e qualquer combinação dos mesmos.

Em uma modalidade, a presente invenção inclui um processo para preparo de uma forma cristalina de um análogo de rapamicina. Tal processo compreende o seguinte: combi- nação do análogo de rapamicina com pelo menos um meio orgânico para formar uma mistu- ra; incubação da mistura até que o análogo de rapamicina cristalize; e recuperação do aná- logo de rapamicina cristalino do meio orgânico.

Em uma modalidade, o meio orgânico pode ser compreendido de pelo menos um solvente para formar a mistura. Como tal, o processo para preparo da forma cristalina do análogo de rapamicina inclui fazer com que o análogo de rapamicina dissolva no solvente e incubação do solvente até que o análogo de rapamicina cristalize.

Em uma modalidade, o processo inclui formação de uma pasta de análogo de ra- pamicina cristalino na solução. Em uma modalidade, o processo inclui agitação da mistura de análogo de rapamicina até que o análogo de rapamicina cristalize. Em uma modalidade, o processo inclui saturação da solução de análogo de rapamicina. Isso pode incluir forma- ção de uma solução super-saturada de análogo de rapamicina.

Em uma modalidade, o processo inclui o uso de um anti-solvente para auxiliar na formação do análogo de rapamicina cristalino. Tal método inclui combinação de pelo menos um anti-solvente com o análogo de rapamicina e o solvente para formar uma mistura bifási- ca e incubação da mistura bifásica para causar uma divisão de fase líquido-líquido com uma maioria do análogo de rapamicina estando no solvente e uma minoria do análogo de rapa- micina estando no anti-solvente. Opcionalmente, o solvente pode ser separado do anti- solvente antes que os cristais sejam separados. Deve ser entendido que a descrição geral precedente e a descrição detalhada a

seguir são exemplificativas e explicativas apenas e não devem ser encaradas como sendo restritivas da presente invenção, conforme reivindicado. Outras vantagens da presente in- venção serão evidentes após uma revisão da descrição detalhada a seguir das modalidades divulgadas, as quais são ilustradas esquematicamente nos desenhos em anexo e nas rei- vindicações em anexo.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Para esclarecer adicionalmente as vantagens e características acima e outras da presente invenção, uma descrição mais particular da invenção será feita através de referên- cia à modalidades específicas da mesma, as quais são ilustradas nos desenhos em anexo. Será apreciado que esses desenhos representam apenas modalidades típicas da invenção e, portanto, não devem ser considerados como limitando seu escopo. A invenção será des- crita e explicada com especificidade e detalhes adicionais através do uso dos desenhos em anexo, nos quais:

A Figura 1 mostra uma representação esquemática de uma modalidade de um mé- todo de preparo de um análogo de rapamicina.

A Figura 2A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de acetona de análogo de rapamici- na.

A Figura 2B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de acetona de análogo de rapamici- na.

A Figura 3A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um desolvato de acetona de análogo de rapa- micina.

A Figura 3B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um desolvato de acetona de análogo de rapa- micina.

A Figura 4A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de tolueno de análogo de rapamici- na.

A Figura 4B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de tolueno de análogo de rapamici- na.

A Figura 4C é um diagrama esquemático de uma modalidade de uma única estrutu- ra de cristal por raios X para o solvato de tolueno de análogo de rapamicina da Figura 4B.

A Figura 4D é um diagrama esquemático de uma modalidade de uma estrutura de cristal mostrando canais de solvente ao longo do eixo "b" para o solvato de tolueno de aná- logo de rapamicina da Figura 4B.

A Figura 4E é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um desolvato de tolueno de análogo de rapami- cina.

A Figura 4F é um gráfico mostrando a alteração nos padrões de difração de pó por raios X durante a desolvatação do solvato de tolueno de análogo de rapamicina da Figura 4B.

A Figura 5A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de acetonitrilo de análogo de rapa- micina.

A Figura 5B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de acetonitrilo de análogo de rapa- micina.

A Figura 6A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um desolvato de acetonitrilo de análogo de ra- pamicina.

A Figura 6B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de

uma modalidade de uma forma cristalina de um desolvato de acetonitrilo de análogo de ra- pamicina.

A Figura 6C é um gráfico ilustrando uma análise termogravimétrica de uma modali- dade de uma forma cristalina de um desolvato de acetonitrilo de análogo de rapamicina. A Figura 7A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de

uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de formato de etila de análogo de rapamicina.

A Figura 7B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de formato de etila de análogo de rapamicina.

A Figura 7C é um gráfico ilustrando uma análise termogravimétrica de uma modali- dade de uma forma cristalina de um solvato de formato de etila de análogo de rapamicina.

A Figura 8 é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um desolvato de formato de etila de análogo de ra- pamicina.

A Figura 9A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de acetato de isobutila de análogo de rapamicina.

A Figura 9B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de acetato de isobutila de análogo de rapamicina.

A Figura 9C é um gráfico ilustrando uma análise termogravimétrica de uma modali- dade de uma forma cristalina de um solvato de acetato de isobutila de análogo de rapamici- na.

A Figura 10A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de N1N dimetil formamida de análo- go de rapamicina.

A Figura 10B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de N1N dimetil formamida de análo- go de rapamicina.

A Figura 10C é um gráfico ilustrando uma análise termogravimétrica de uma moda- Iidade de uma forma cristalina de um solvato de N1N dimetil formamida de análogo de rapa- micina.

A Figura 11A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de anisola de análogo de rapamici- na.

A Figura 11B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de

uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de anisola de análogo de rapamici- na.

A Figura 11C é um gráfico ilustrando uma análise termogravimétrica de uma moda- lidade de uma forma cristalina de um solvato de anisola de análogo de rapamicina. A Figura 12A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de

uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de etanol de análogo de rapamicina.

A Figura 12B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um desolvato de etanol de análogo de rapami- cina.

A Figura 13A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de

uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de metanol de análogo de rapamici- na.

A Figura 13B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um desolvato de metanol de análogo de rapa- micina.

A Figura 14A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de acetato de etila de análogo de rapamicina.

A Figura 14B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um desolvato de acetato de etila de análogo de rapamicina.

A Figura 15A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de metil isopropil cetona de análogo de rapamicina.

A Figura 15B um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um desolvato de metil isopropil cetona de análogo de rapamicina.

A Figura 16 é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de nitrometano de análogo de rapamici- na.

A Figura 17A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de acetato de isopropila de análogo de rapamicina.

A Figura 17B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um desolvato de acetato de isopropila de aná- logo de rapamicina.

A Figura 18A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de propionitrilo de análogo de rapa- micina.

A Figura 18B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um desolvato de propionitrilo de análogo de rapamicina.

A Figura 19A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de metil etil cetona de análogo de rapamicina.

A Figura 19B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um desolvato de metil etil cetona de análogo de rapamicina.

A Figura 20A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de tetrahidrofurano de análogo de rapamicina.

A Figura 20B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um desolvato de tetrahidrofurano de análogo de rapamicina.

A Figura 21A é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um solvato de 1,2-dimetóxietano de análogo de rapamicina.

A Figura 21B é um gráfico ilustrando um padrão de difração de pó por raios X de uma modalidade de uma forma cristalina de um desolvato de 1,2-dimetóxietano de análogo de rapamicina.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES PREFERIDAS

De modo geral, a presente invenção se refere à estruturas de cristal, composições, usos e métodos para fabricação de formas de cristal de análogos de rapamicina, tal como o análogo de rapamicina zotarolimus (isto é, ABT-578). As formas cristalinas do análogo de rapamicina podem ser preparadas através de vários métodos, os quais são descritos aqui. Tais formas cristalinas podem ser preparadas de modo que uma forma cristalina adequada possa ser identificada para um uso particular.

I. Análogos de rapamicina cristalinos Em uma modalidade, o análogo de rapamicina pode ter a estrutura da Fórmula 1,

Fórmula 2, Fórmula 3 ou uma combinação dos mesmos.

N

CH3 CH3 OCH3

O

o H3OO/,, .o

Ο-

ΠΟ H3C

FORMULA 1

çr-í? Oi3 OCr-I3

CHi

FORMULA 2

FORMULA 3

O análogo de rapamicina para a rapamicina 2 pode ser referido como zotarolimus ou ABT-578. Adicionalmente, o fármaco pode ser qualquer sal ou pró-fármaco farmaceuti- camente aceitável do análogo de rapamicina. O preparo de sais e/ou pró-fármacos farma- ceuticamente aceitáveis de agentes bioativos, tal como zotarolimus, é bem conhecido na técnica.

Adicionalmente, os análogos de rapamicina de Fórmulas 1-3 podem existir em equi- líbrio em s oxigênio com outro análogo, conforme mostrado na Fórmula 4. O análogo de rapamicina de Fórmula 4 pode também ser os análogos correspondentes de Fórmulas 2-3.

Como tal, o análogo de rapamicina de Fórmula 4 (e os equivalentes às Fórmulas 2-3) po- dem também formar cristais ou ser incorporados nos cristais dos análogos de rapamicina de Fórmulas 1-3. Ν—N

O H3QVjt

IIO

vCII;.

H3C

FÓRMULA 4

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina pode ser um derivado dos análogos mostrados nas Fórmulas 1-4. Um derivado pode ser preparado através de substituições mí- nimas, tais como hidroxilação, metilação, etilação ou, de outro modo, alterando manualmen- te um substituinte.

Em alguns casos, o análogo de rapamicina pode ser formado em sais, se possível, compreendendo ânions farmacologicamente aceitáveis, incluindo acetato, benzeno- sulfonato, benzoato, bicarbonato, bitartrato, brometo, edetado de cálcio, camsilato, carbona- to, cloreto, brometo, iodeto, citrato, dihidrocloreto, edetato, edisilato, estolato, esilato, fuma- rato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexil-resorcinato, hidrabramina, hi- dróxinaftoato, isetionato, lactato, lactobionato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metil- sulfato, muscato, napsilato, nitrato, pantotienato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicila- to, estearato, succinato, sulfato, tanato, tartrato, teoclato, trietiodeto e pamoato (isto é, 1,1'- metileno-bis-(2-hidróxi-3-naftoato)).

A. Formas Cristalinas

Os vários análogos de rapamicina cristalinos da presente invenção podem ter dife- rentes propriedades. Isto é, os cristais podem ter diferentes características estruturais, físi- cas, farmacológicas ou químicas. Propriedades estruturais incluem, mas não estão limita- das, a forma polimórfica cristalina e uma descrição da estrutura de cristal. Propriedades es- truturais também incluem a composição, tal como se a forma sólida é um hidrato, dehidrato, solvato, desolvato, sal, combinação dos mesmos e semelhantes.

Também, o estado físico de um análogo de rapamicina cristalino pode ser ainda di- vidido em: (1) se a matriz de cristal inclui um co-aduto; (2) morfologia (por exemplo, estrutu- ra de cristal); e (3) estrutura interna (por exemplo, polimorfismo). Em um co-aduto, a matriz de cristal pode incluir uma quantidade estequiométrica ou não estequiométrica do aduto, por exemplo, um solvente de cristalização ou água (por exemplo, um solvato ou um hidrato). Solvatos e hidratos não estequiométricos incluem inclusões ou clatratos, isto é, onde o sol- vente ou água está encerrada em intervalos aleatórios dentro da matriz da látice de cristal. Um solvente ou hidrato estequiométrico é onde uma matriz de cristal inclui um solvente ou água em locais específicos em uma proporção definida. Isto é, a molécula de solvente ou água pode ser parte da matriz de cristal em uma disposição definida. Adicionalmente, o es- tado de uma matriz de cristal pode alterar através de remoção de um co-aduto, originalmen- te presente na matriz de cristal. Por exemplo, se um solvente ou água é removida de um solvato ou um hidrato, um furo é formado dentro da matriz de cristal, desse modo, formando um novo estado físico. Tais estados físicos são referidos aqui como hidratos desidratados (isto é, dehidratos) ou solvatos desolvatados (isto é, desolvatos).

A estrutura de cristal é a descrição da aparência externa de um cristal individual. Por exemplo, um cristal pode ter um formato cúbico, tetragonal, orto-rômbico, monoclínico, triclínico, rombóide ou hexagonal.

A estrutura interna de um cristal se refere à forma cristalina ou polimorfismo. Um determinado composto, tal como um análogo de rapamicina, pode existir como diferentes polimorfos, isto é, espécies cristalinas distintas. Em geral, diferentes polimorfos de um de- terminado composto podem ser tão diferentes quanto à estrutura e propriedades quanto os cristais de dois compostos diferentes. A solubilidade, ponto de fusão, densidade, dureza, formato de cristal, propriedades ópticas e elétricas, pressão de vapor, estabilidade e seme- lhantes podem variar com a forma polimórfica.

A estrutura cristalina de um composto, tal como um análogo de rapamicina, exerce um papel importante na determinação das propriedades que afetam a biodisponibilidade e eficácia como um produto farmacêutico. As propriedades de muitos compostos podem ser modificadas através de alterações estruturais. Por exemplo, diferentes polimorfos ou cristais do mesmo composto farmacêutico podem ter diferentes atividades terapêuticas. Compreen- são das relações estrutura-propriedade pode ser importante em esforços para maximizar as propriedades desejáveis de análogos de rapamicina, tal como a eficácia farmacêutica de um produto farmacêutico.

B. Cristalização

O processo de cristalização é um de ordenação do análogo de rapamicina em uma estrutura de látice sólida. Durante esse processo, moléculas aleatoriamente organizadas em uma solução, um fundido ou a fase gasosa tomam posições regulares na estrutura de látice. A organização regular da látice é responsável por muitas das propriedades únicas dos cris- tais, incluindo a difração de raios X, ponto de fusão definido e faces agudas, bem como de cristal definidas. Embora precipitação usualmente se refira à formação de substâncias amor- fas que não têm simetria ou ordenação e não podem ser definidas pelas estruturas ou como polimorfos, ela também pode se referir ao processo de formação de cristais através de pre- cipitação. Cristalização e precipitação resultam da incapacidade de uma solução de dissol- ver completamente o análogo de rapamicina e podem ser induzidas através de alteração do estado (por exemplo, variação de parâmetros) da composição de alguma forma.

Alguns dos processos importantes em cristalização são nucleação, cinética de crescimento, fenômenos interfaciais, aglomeração e ruptura. Nucleação resulta quando a barreira de energia de transição de fase é superada, desse modo, permitindo que uma partí- cula se forme a partir de uma solução super-saturada. O crescimento de cristal é o alarga- mento das partículas de cristal causado pelo depósito do análogo de rapamicina sobre uma superfície existente do cristal. A taxa relativa de nucleação e crescimento determina a distri- buição de tamanho dos cristais que são formados. A força de acionamento termodinâmica para nucleação e crescimento é a super-saturação, a qual é definida como o desvio do equi- líbrio termodinâmico. A aglomeração é a formação de partículas maiores (por exemplo, cris- tais) aderidas juntas e formando uma estrutura cristalina maior.

Análogos de rapamicina podem assumir muitas formas de cristal e tamanhos dife- rentes, dependendo do protocolo e condições para formação da forma cristalina. Ênfase particular deve ser colocada sobre as características de cristal na indústria farmacêutica (por exemplo, forma polimórfica, tamanho de cristal, estrutura de cristal e distribuição de tama- nho de cristal) porque a estrutura de cristal e o tamanho podem afetar a fabricação, formula- ção e farmacocinética, incluindo biodisponibilidade. Existem quatro classes amplas pelas quais cristais de um determinado composto podem diferir: composição; estrutura; forma po- limórfica; e tamanho de cristal.

A composição de cristal descreve, tipicamente, se a forma sólida é um composto simples, tal como análogo de rapamicina puro, ou é uma mistura de compostos. Por exem- plo, formas sólidas podem estar presentes em sua forma neutra, tal como a base livre de um composto tendo um nitrogênio básico ou como um sal (por exemplo, o sal de hidrocloreto de um composto contendo nitrogênio básico). Uma composição de cristal também pode des- crever cristais contendo moléculas de aduto. Durante cristalização ou precipitação, uma mo- lécula de aduto (por exemplo, um solvente ou água) pode ser incorporada na matriz de látice cristalina, adsorvida sobre a superfície ou encerrada dentro da látice do cristal. Tais compo- sições são referidas como inclusões, tais como hidratos (por exemplo, molécula de água incorporada na látice) e solvatos (por exemplo, solvente encerrado dentro de uma látice). Se um cristal se forma como uma inclusão pode ter um efeito profundo sobre as propriedades, tais como a biodisponibilidade ou facilidade de processamento ou fabricação do análogo de rapamicina. Por exemplo, inclusões podem dissolver mais ou menos prontamente ou ter propriedades mecânicas ou resistências diferentes das estruturas de cristal de não-inclusão correspondentes do mesmo composto.

Conseqüentemente, o análogo de rapamicina pode cristalizar em diferentes forma- tos externos, dependendo, dentre outros, da composição e temperatura do meio de cristali- zação. Os formatos de face de cristal são descritos como a estrutura de cristal. Tal informa- ção é importante porque a estrutura de cristal tem uma grande influência sobre a proporção de superfície-para-volume do cristal. Embora diferentes estruturas de cristal possam ter a mesma estrutura interna e padrões de cristal único idênticos, elas ainda podem exibir dife- rentes propriedades farmacêuticas (Haleblian 1975, J. Pharm. Sci., 64: 1269). A estrutura de cristal pode influenciar várias características farmacêuticas, por exemplo, fatores mecânicos, tais como capacidade de fluxo em uma seringa, comportamento de formação de tablete, filtração, secagem e mistura com outras substâncias (por exemplo, excipientes) e fatores não mecânicos, tal como taxa de dissolução.

Adicionalmente, o mesmo análogo de rapamicina pode cristalizar como mais de uma espécie cristalina distinta (por exemplo, tendo uma estrutura de látice interna diferente) ou desviar de uma espécie cristalina para outra. Esse fenômeno é conhecido como polimor- fismo e as espécies distintas são conhecidas como polimorfos. Polimorfos podem exibir dife- rentes propriedades ópticas, pontos de fusão, solubilidades, reatividades químicas, taxas de dissolução e diferentes biodisponibilidades. É bem sabido que diferentes polimorfos do mesmo composto farmacêutico podem ter diferentes farmacocinéticas. Por exemplo, um polimorfo pode ser absorvido mais prontamente do que sua contra-parte. No extremo, ape- nas uma forma polimórfica de um determinado produto farmacêutico pode ser adequada para tratamento de doença. Contudo, é provável que os diferentes polimorfos tenham pro- priedades diferentes que podem ser utilizadas juntas ou separadamente. Por exemplo, poli- morfos tendo diferentes propriedades de solubilidade podem ser usados juntos de forma a padronizar a liberação ou perfis de eluição ou podem ser usados em diferentes formulações ou terapias. Assim, a descoberta e desenvolvimento de polimorfos de análogo de rapamici- na novos ou benéficos é extremamente importante, especialmente na área farmacêutica.

Sólidos amorfos, tais como rapamicina tradicional e análogos de rapamicina, não têm formato de cristal e não podem ser caracterizados de acordo com a estrutura ou forma polimórfica. Um sólido amorfo comum é o vidro, no qual os átomos e moléculas existem em uma série não uniforme. Sólidos amorfos são, usualmente, o resultado de solidificação rápi- da e podem ser convenientemente identificados através de difração de pó por raios X, uma vez que esses sólidos proporcionam linhas muito difusas e nenhum padrão de difração de cristal. Embora sólidos amorfos possam, freqüentemente, ter propriedades farmacêuticas desejáveis, tais como taxas de dissolução rápidas, eles usualmente não são preferidos em virtude de sua instabilidade física e/ou química. Um sólido amorfo está em um estado estru- tural de alta energia com relação à sua forma cristalina e, assim, pode cristalizar durante armazenamento ou transporte. Também, um sólido amorfo pode ser mais sensível à oxida- ção (Pikal e colaboradores, 1997, J. Pharm. Sei. 66: 1312). Sólidos amorfos podem ser obti- dos através de solidificação de uma forma tal de modo a evitar o processo de cristalização termodinamicamente preferido. Eles também podem ser preparados através de ruptura de uma estrutura de cristal existente.

A cristalização e precipitação são alterações de fase que resultam na formação de um sólido cristalino ou um sólido amorfo de uma solução. Cristalização também inclui desvio polimórfico de uma espécie cristalina para outra. O tipo mais comum de cristalização é cris- talização a partir de uma solução na qual uma substância é dissolvida em uma temperatura apropriada em um solvente, então, o sistema é processado para obter super-saturação, se- guido por nucleação e crescimento de cristal.

C. Componentes de cristalização Conforme estabelecido acima, solventes influenciam a cristalização e os cristais de

análogo de rapamicina resultantes. Em geral, a maioria das composições de cristalização contém um solvente como um dos componentes. Solventes podem influenciar e direcionar a formação de cristais através da polaridade, viscosidade, ponto de ebulição, volatilidade, dis- tribuição de carga e formato molecular. A identidade e concentração do solvente são uma forma de controlar a saturação. Na verdade, se pode cristalizar sob condições isotérmicas simplesmente adicionando um não-solvente (isto é, anti-solvente) a uma solução inicialmen- te sub-saturada. Também, uma solução do análogo de rapamicina na qual quantidades vari- adas de não-solvente são adicionadas pode mudar a cristalização e o cristal resultante por- que a solubilidade do análogo de rapamicina é excedida quando alguma quantidade crítica de não-solvente é adicionada. Adição extra do não-solvente aumenta a super-saturação da solução e, portanto, a taxa de crescimento dos cristais de análogo de rapamicina que são crescidos.

Solventes misturados também adicionam a flexibilidade de alteração da atividade termodinâmica de um dos solventes independente de temperatura. Assim, um hidrato ou solvato pode ser produzido em uma determinada temperatura simplesmente realizando cris- talização sobre uma faixa de composições de solvente. Por exemplo, cristalização a partir de uma solução de metanol-água que é muito rica em metanol pode favorecer hidratos de cristal com menos água incorporada no sólido (por exemplo, dihidrato vs. hemihidrato), en- quanto que uma solução rica em água favorecerá hidratos com mais água incorporada no sólido. Os limites precisos para produção dos respectivos hidratos são encontrados exami- nando os elementos do conjunto quando a concentração do componente solvente é a variá- vel. Em uma modalidade, solventes que são geralmente aceitos dentro da indústria far- macêutica para uso na fabricação de produtos farmacêuticos são usados na cristalização do análogo de rapamicina. Várias misturas desses solventes também podem ser usadas. As solubilidades do análogo de rapamicina são altas em alguns solventes e baixas em outros.

Soluções podem ser misturadas, nas quais o solvente de alta solubilidade é misturado com o solvente de baixa solubilidade até que a formação de cristal seja induzida. Solventes in- cluem, mas não estão limitados a, solventes aquosos, tais como água ou ácidos aquosos, bases, sais, tampões ou misturas dos mesmos e solventes orgânicos, tais como solventes práticos, apróticos, polares ou não polares. Aplicações específicas do composto de cristalização podem criar requisitos adicio-

nais. Por exemplo, no caso de produtos farmacêuticos, tal como um análogo de rapamicina, solventes são selecionados baseado em sua biocompatibilidade, bem como na solubilidade. Por exemplo, a facilidade com a qual um análogo de rapamicina é dissolvido no solvente e a falta de efeitos prejudiciais do solvente sobre o análogo são fatores a considerar na seleção do solvente. Solventes orgânicos preferidos são voláteis ou têm um ponto de ebulição relati- vamente baixo ou podem ser removidos sob vácuo e que são aceitáveis para administração a serem humanos em quantidades vestigiais, tal como cloreto de metileno. Outros solventes, tais como acetato de etila, etanol, metanol, dimetilformamida, acetona, acetonitrilo, tetrahi- drofurano, ácido acético, sulfóxido de dimetila e clorofórmio e misturas dos mesmos, tam- bém podem ser usados. Solventes preferidos são aqueles classificados como solventes re- siduais da classe 3 pela Food and Drug Administration, conforme publicado no Federal Re- gister vol. 62, número 85, páginas 24301-24309 (Maio de 1997). Solventes para análogos de rapamicina que são administrados parenteralmente ou como uma solução ou suspensão podem ser, mais tipicamente, água destilada, solução salina tamponada, Ringer Lactada ou algum outro veículo farmaceuticamente aceitável.

Exemplos específicos de solventes que podem ser usados no preparo do análogo de rapamicina incluem acetona, acetato de etila, metanol, n-propanol, isopropanol, isobuta- nol, terc-butanol, 2-butanol, acetonitrilo, tetrahidrofurano, acetato de isobutila, acetato de n- butila, formato de etila, acetato de n-propila, acetato de isopropila, metil etil cetona, tolueno, N,N dimetil formamida, anisola, metil isopropil cetona, nitrometano, propionitrilo, 2-butanona (isto é, metil etil cetona ou MEK), tetrahidrofurano, 1,2-dimetóxietano, acetato de isopropila, qualquer combinação dos mesmos e semelhantes.

Exemplos específicos de anti-solventes que podem ser usados no preparo do aná- logo de rapamicina incluem ciclohexano, heptano, hexano, n-octano, iso-octano, metilciclo- hexano, qualquer combinação dos mesmos e semelhantes.

Um exemplo específico de um sistema de solvente/anti-solvente que pode ser usa- do no preparo do análogo de rapamicina inclui acetona/heptano. Outras substâncias também podem ser adicionadas às reações de cristalização que influenciam a geração de uma forma cristalina. Esses aditivos de cristalização podem ser subprodutos de reação, moléculas relacionadas, compostos aleatoriamente selecionados (tais como aqueles presentes em bibliotecas de pequena molécula) ou qualquer um de vá- rios outros aditivos encontrados em composições farmacêuticas. Eles podem ser usados para promover ou controlar a nucleação, direcionar o crescimento ou taxa de crescimento de um cristal específico ou conjunto de cristais e qualquer outro parâmetro que afeta a cristali- zação. A influência dos aditivos de cristalização pode depender de suas concentrações rela- tivas e, assim, a invenção proporciona métodos para avaliar uma faixa de aditivos de crista- lização e concentrações. Exemplos de aditivos de cristalização incluem, mas não estão limi- tados a, aditivos que promovem e/ou controlam a nucleação, aditivos que afetam a estrutura de cristal e aditivos que afetam a forma polimórfica.

Exemplos específicos de aditivos de cristalização que podem ser usados no prepa- ro do análogo de rapamicina incluem um solvato de rapamicina, um desolvato de rapamici- na, um hidrato de rapamicina e um dehidrato de rapamicina.

Em ainda outra modalidade, outras substâncias podem ser usadas, incluindo com- postos GRAS em fase sólida ou, alternativamente, bibliotecas de pequenas moléculas (por exemplo, em fase sólida).

A presença de moléculas semelhantes a tensoativo no vaso de cristalização pode influenciar a nucleação de cristal e acionar seletivamente o crescimento de formas polimórfi- cas distintas. Assim, moléculas semelhantes a tensoativo podem ser introduzidas no vaso de cristalização através de pré-tratamento ou através de adição direta ao meio de cristaliza- ção. Moléculas de tensoativo podem ser especificamente selecionadas ou aleatoriamente selecionadas com relação à sua influência ao direcionar a cristalização. Além disso, o efeito da molécula de tensoativo é dependente de sua concentração no vaso de cristalização e, assim, a concentração das moléculas de tensoativo deverá ser cuidadosamente controlada.

Em alguns casos, a cultura direta de reações de cristalização resultará em uma di- versidade aumentada de formas de cristal sendo produzidas. Em uma modalidade, as partí- culas são adicionadas às reações de cristalização. Em outra, cristais com tamanho de na- nômetro (por exemplo, nanopartículas) são adicionados às reações de cristalização. Essas partículas podem ser com tamanho de nanômetro ou maiores.

II. Análogos de rapamicina cristalinos

Em uma modalidade, a presente invenção inclui uma forma cristalina de um análo- go de rapamicina. As formas cristalinas do análogo de rapamicina podem ser preparadas através de vários métodos, os quais são descritos aqui. Tais formas cristalinas podem ser preparadas de modo que uma forma cristalina adequada pode ser identificada para um uso particular. O análogo de rapamicina pode ter uma estrutura de Fórmula 1, Fórmula 2 ou Fórmula 3 conforme ilustrado acima. Também, o análogo de rapamicina pode ser um pró- fármaco, sal, derivado ou combinação dos mesmos.

Em uma modalidade, o cristal é um solvato. Como tal, o cristal pode incluir um sol- vente orgânico incluído no mesmo. O solvente orgânico pode ser selecionado do grupo con- sistindo de acetona, acetato de etila, metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, isobutanol, terc-butanol, 2-butanol, acetonitrilo, tetrahidrofurano, acetato de isobutila, acetato de n- butila, formato de etila, acetato de n-propila, acetato de isopropila, metil etil cetona, tolueno, N1N dimetil formamida, anisola e qualquer combinação dos mesmos.

Em uma modalidade, o cristal é um desolvato. Como tal, o cristal pode ser selecio- nado do grupo consistindo de um desolvato de acetona, um desolvato de tolueno, um desol- vato de acetonitrilo, um desolvato de formato de etila, um desolvato de acetato de isobutila, N1N dimetil formamida e qualquer combinação dos mesmos.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,2, 9,1 e/ou 13,2, Também, o padrão de difra- ção de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 2A.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,3, 10,2, 10,6, 13,3 e/ou 16,0. Também, o pa- drão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 2B.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,3, 10,2, 10,5 e/ou 13,3. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 3A.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 6,3 e/ou 12,6. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 3B. Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração

de pó por raios X com um pico em torno de 5,4, 5,9, 9,9, 13,8 e/ou 15,5, Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figuras 4A e/ou 4B.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,9, 6,2, 9,1, 9,8, 12,5, 13,6, 16,4, 17,7, 17,9 e/ou 21,8. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 4E.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,2, 5,6, 6,0, 7,3, 10,0 e/ou 21,5. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 5A. Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração

de pó por raios X com um pico em torno de 5,3, 10,6, 12,8, 13,3, 15,9, 16,7, 21,3 e/ou 21,9. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 5B.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 3,9, 8,7, 9,5, 13,8, 15,7 e/ou 16,9. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 6A.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração

de pó por raios X com um pico em torno de 6,2, 10,4, 11,9, 12,5, 15,4, 18,5 e/ou 21,5. Tam- bém, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Fi- gura 6B.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,9, 7,7, 9,1, 10,0 e/ou 10,5. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 7A.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,3, 5,5, 10,6, 15,9, 16,5 e/ou 19,2. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 7B. Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração

de pó por raios X com um pico em torno de 6,2, 12,5 e/ou 15,4, Também, o padrão de difra- ção de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 8.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,0, 7,0, 9,1, 10,1 15,4 e 16,0. Também, um pa- drão de difração de pó por raios X substancialmente conforme mostrado na Figuras 9A e/ou 9B.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,1, 7,2, 9,0, 9,2, 10,3, 11,5, 15,7 e 16,3. Tam- bém, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Fi- gura 10A e/ou 10B.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 6,1, 8,9, 9,4, 10,0, 10,2 e 12,2. Também, o pa- drão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figuras 11A e/ou 1 IB.

de pó por raios X com um pico em torno de 5,3, 7,2, 10,5, 15,8, 16,6, 19,1 e/ou 21,2. Tam- bém, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Fi- gura 12A.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 6,3, 9,2, 12,7, 13,8 e/ou 16,1. Também, o pa- drão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 12B.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,4, 6,0, 8,8, 10,0, 12,1, 14,1, 17,6, 18,4 e/ou 19,0. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mos- trado na Figura 13 A.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 6,2, 9,1, 10,5, 12,5, 14,3, 16,5, 18,0, 20,1, 21,8 e/ou 22,2. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 13B.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,4, 10,8, 11,8, 16,9 e/ou 17,9. Também, o pa-

drão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 16.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,8, 9,6, 11,7, 13,6, 15,9, 17,4, 20,6 e/ou 23,5. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 18 A.

de pó por raios X com um pico em torno de 6,4, 6,8, 9,3, 13,8 e/ou 16,8. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 18B.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,2, 10,5, 13,3, 15,8, 16,5 e/ou 19,1. Também, o

padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 14A.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 6,6, 7,1, 8,6, 9,1, 12,6, 14,5 e/ou 15,0. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 14B.

de pó por raios X com um pico em torno de 5,2, 10,5, 10,8, 15,7, 16,5 e/ou 19,0. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 17A.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,5, 6,1, 8,0, 10,5, 12,6, 13,6, 16,6 e/ou 19,5.

Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 17B.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,3, 10,5, 13,3, 15,8 e/ou 16,6. Também, o pa- drão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 19A.

de pó por raios X com um pico em torno de 6,3, 8,1, 12,7 e/ou 16,5. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 19B. Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,1, 10,2, 16,3, 17,1, 19,2, 20,1 e/ou 20,5. Tam- bém, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Fi- gura 15 A.

20Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difra-

ção de pó por raios X com um pico em torno de 5,1, 6,2, 10,2, 12,4, 16,4 e/ou 17,2. Tam- bém, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Fi- gura 15B.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 4,6, 5,2, 9,3, 16,5, 17,0 e/ou 18,6. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 20A.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 3,8, 6,0, 9,2, 9,9, 11,8, 12,4 e/ou 13,7. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 20B.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó por raios X com um pico em torno de 5,3, 10,1, 10,5, 15,8, 16,5, 19,1, 19,6 e/ou 21,1. Também, o padrão de difração de pó por raios X é substancialmente conforme mostrado na Figura 21 A.

de pó por raios X com um pico em torno de 6,6, 7,1, 9,2, 14,6 e/ou 15,2. Também, o padrão de difração de pó por raios X substancialmente conforme mostrado na Figura 21B.

Conforme com todos os tipos de instrumentação, o tipo de equipamento e condi- ções de operação podem afetar os dados. Como tal, os dados de padrão de difração de pó por raios X podem ser ligeiramente alterados, dependendo do equipamento e das condi- ções. Conseqüentemente, os dados de padrão de difração de pó por raios X podem ser pre- cisos dentro de 0,5, mais preferivelmente 0,2 e, ainda mais preferivelmente, cerca de 0,1. Também, a caracterização das estruturas de cristal pode incluir pelo menos 2 picos, 3 picos, 4 picos, 5 picos, 6 picos, 7 picos, 8 picos, 9 picos e/ou 10 picos, dependendo do padrão de difração de pó por raios X.

Também, os padrões de difração de pó por raios X foram medidos usando radiação de cobre-K alfa-um (Cu Ka1) em torno de 1,54056 Â. Também, os padrões de difração de pó por raios X podem ser medidos. Também, a radiação Cu Κα1 e Cu Ka2 podem ser usa- das com um comprimento de onda de 1,54178 A, o qual é para não decomposto. Unidades de cristal únicas podem ser medidas com um Monochromator de grafite,

mas sem um filtro de folha. O comprimento de onda pode ser 0,71073 Â para um único cris- tal. Também, 0,71073 Λ pode ser usado para radiação Mo não decomposta ou 0,71073 Â exclusivamente para Κα1.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino está presente em uma quantidade terapeuticamente eficaz.

III. Preparo de análogos de rapamicina cristalinos Análogos de rapamicina cristalinos podem ser preparados através dos métodos

descritos aqui. Como tal, vários parâmetros comuns podem ser controlados para promover a cristalização. Tais parâmetros de processamento comuns incluem, mas não estão limitados a ajuste da temperatura; ajuste do tempo; ajuste do pH; ajuste da quantidade ou concentra- ção do composto de interesse; ajuste da quantidade ou da concentração de um componen- te; identidade de um componente (por exemplo, adição de um ou mais componentes adicio- nais); ajuste da taxa de remoção de solvente; introdução de um evento de nucleação; intro- dução de um evento de precipitação; controle de evaporação do solvente (por exemplo, a - juste de um valor de pressão ou ajuste da área de superfície evaporativa); e ajuste da com- posição do solvente. Outros métodos de cristalização incluem sublimação, difusão de vapor, desolvatação de solvatos cristalinos e trituração (Guillory, J. K., Polymorphism in Pharma- ceutical Solids, 186, 1999).

Em uma modalidade, a cristalização do análogo de rapamicina pode ser conduzida através de modulação da temperatura ou ciclização da temperatura para induzir à cristaliza- ção. Como tal, o processo de cristalização inclui dissolução do análogo de rapamicina em um ou mais solventes que podem ou não incluir um ou mais anti-solventes. A solubilidade é, comumente, controlada pela composição (por exemplo, identidade dos componentes) e/ou pela temperatura. Controle de temperatura é mais comum em cristalizadores industriais on- de uma solução de uma substância é esfriada de um estado no qual ela é livremente solúvel para um onde a solubilidade é excedida, desse modo, sendo super-saturada. Por exemplo, os análogos de rapamicina cristalinos podem ser preparados através de aquecimento para uma temperatura (T1), de preferência para uma temperatura na qual todos os sólidos são completamente dissolvidos em solução. A composição é, então, esfriada para uma tempera- tura menor (T2). A presença de sólidos pode, então, ser determinada. Um sensor de tempe- ratura pode ser usado para registrar a temperatura quando o primeiro cristal ou precipitado é detectado.

Em uma modalidade, um grande número ou série de composições de análogo de rapamicina pode ser processada individualmente ao mesmo tempo com relação à tempera- tura e pequenos aquecedores, espirais de resfriamento e sensores de temperatura para ca- da amostra são fornecidos e controlados. Essa abordagem é útil se cada amostra tem a mesma composição e o experimento é criado para amostragem de um grande número de perfis de temperatura para descobrir aqueles perfis que produzem formas sólidas desejadas. Em uma modalidade, a composição de cada amostra é controlada e a série toda de compo- sições é aquecida e esfriada como uma unidade.

Tipicamente, várias temperaturas e/ou perfis de temperatura distintos são testados durante as fases de nucleação e crescimento de cristal. A temperatura pode ser controlada de uma maneira estática ou dinâmica, temperatura estática significa que uma temperatura de incubação ajustada é usada por toda a cristalização. Alternativamente, um gradiente de temperatura pode ser usado. Por exemplo, a temperatura pode ser diminuída em uma de- terminada taxa por toda a cristalização. Além disso, a temperatura pode ser controlada de forma a ter componentes estáticos e dinâmicos. Por exemplo, uma temperatura constante (por exemplo, 60 graus Celsius) é mantida durante a mistura dos reagentes de cristalização. Após mistura dos reagentes estar completa, declínio controlado de temperatura é iniciado (por exemplo, 60 graus Celsius a cerca de 25 graus Celsius durante minutos).

Em uma modalidade, a cristalização do análogo de rapamicina pode ser conduzida através de modulação do tempo de incubação da composição para induzir à cristalização. Conseqüentemente, diferentes composições de análogo de rapamicina podem ser incuba- das durante vários períodos de tempo (por exemplo, 5 minutos, 60 minutos, 48 horas, etc.) para induzir e completar a cristalização. Uma vez que alterações de fase podem ser tempo- dependentes, pode ser vantajoso monitorar a cristalização do análogo de rapamicina como uma função do tempo.

Em muitos casos, o controle do tempo é muito importante, por exemplo, a primeira forma sólida a cristalizar pode não ser a mais estável, mas antes uma forma metastável a qual pode, então, se converter a uma forma estável durante um período de tempo. Esse processo é denominado "envelhecimento". O envelhecimento também pode estar associado à alterações no tamanho e/ou estrutura de cristal. Esse tipo de fenômeno de envelhecimento é denominado amadurecimento de Ostwald. Assim, incubação da composição de cristaliza- ção durante diferentes períodos de tempo pode ser usada para induzir à cristalização, bem como promover a cristalização no produto de cristal desejado.

Em uma modalidade, a cristalização do análogo de rapamicina pode ser conduzida através de modulação do pH da composição para induzir ou promover a cristalização. O pH da composição de análogo de rapamicina pode determinar o estado físico e propriedades do cristal que é gerado. O pH pode ser controlado através da adição de ácidos e bases inorgâ- nicas e orgânicas, tais como tampões bem conhecidos que são padrões na técnica. O pH das amostras pode ser monitorado com medidores de pH padrões modificados de acordo com o volume da amostra.

Em uma modalidade, a cristalização do análogo de rapamicina pode ser conduzida através de modulação da concentração do análogo de rapamicina na composição para in- duzir ou promover a cristalização. Super-saturação é a força de acionamento termodinâmica para nucleação e crescimento de cristal e, assim, é uma variável chave no preparo de aná- Iogos de rapamicina cristalinos. A super-saturação é o desvio do equilíbrio de solubilidade termodinâmica, de modo que mais soluto (por exemplo, análogo de rapamicina) está sus- penso na solução. Assim, o grau de saturação pode ser controlado pela temperatura e as quantidades ou concentrações do análogo de rapamicina e outros componentes, tais como adutos. Em geral, o grau de saturação pode ser controlado na região metastável e, quando o limite metastável foi atingido, a nucleação será induzida.

A quantidade ou concentração do análogo de rapamicina e/ou outros componentes pode afetar grandemente o estado físico e propriedades da forma sólida resultante. Como tal, para uma dada temperatura, nucleação e crescimento ocorrerão em quantidades varia- das de super-saturação, dependendo da composição da solução inicial. A taxa de nucleação e crescimento aumenta com o aumento da saturação, o que pode afetar a estrutura de cris- tal. Por exemplo, crescimento rápido deve acomodar a liberação do calor de cristalização. Esse efeito do calor é responsável pela formação de dendritos durante a cristalização. O formato macroscópico do cristal é profundamente afetado pela presença de dendritos e mesmo dendritos secundários.

O segundo efeito que as quantidades relativas de análogo de rapamicina e solvente tem é a composição química da forma sólida resultante. Por exemplo, o primeiro cristal a ser formado a partir de uma solução concentrada é formado em uma temperatura maior do que aquela de um formado a partir de uma solução diluída. A fase sólida em equilíbrio pode pri- meiro formar cristais do hemihidrato quando precipitada a partir de uma solução aquosa em alta temperatura. O dihidrato pode, contudo, ser o primeiro a se formar quando começando com uma solução diluída. Nesse caso, o diagrama de fase de análogo de rapamici- na/solvente é um no qual o dihidrato se decompõe em hemihidrato em uma alta temperatu- ra. Esse é normalmente o caso e usualmente se mantém para os solvatos comumente ob- servados.

Em uma modalidade, a cristalização do análogo de rapamicina pode ser conduzida através de modulação da identidade dos componentes na composição, tais como solventes e/ou adutos, para induzir ou promover a cristalização. A identidade dos componentes na composição pode ter um efeito profundo sobre quase todos os aspectos de cristalização. A identidade do componente pode promover ou inibir a nucleação e crescimento de cristal, bem como o estado físico e propriedades dos cristais resultantes. Assim, um componente pode ser uma substância cujo efeito pretendido é induzir, inibir, prevenir ou reverter a forma- ção de formas cristalinas do análogo de rapamicina.

Um componente pode direcionar a formação de cristais, sólidos amorfos, hidratos, solvatos ou outras formas de sal do análogo de rapamicina. Componentes também podem afetar a estrutura interna e externa dos cristais formados, tal como a forma polimórfica e a estrutura de cristal. Exemplos de componentes incluem, mas não estão limitados a, excipi- entes, solventes, sais, ácidos, bases, gases; pequenas moléculas, tais como hormônios, esteróides, nucleotídeos, nucleosídeos e aminoácidos; grandes moléculas, tais como oligo- nucleotídeos, polinucleotídeos, conjugados de oligonucleotídeo e polinucleotídeo, proteínas, peptídeos, peptidomiméticos e polissacarídeos; outros produtos farmacêuticos; aditivos de cristalização, tais como aditivos que promovem e/ou controlam a nucleação, aditivos que afetam a estrutura de cristal e aditivos que afetam a forma polimórfica; aditivos que afetam o tamanho de partícula ou cristal; aditivos que estabilizam estruturalmente formas sólidas cris- talinas ou amorfas; aditivos que dissolvem formas sólidas; aditivos que inibem a cristaliza- ção ou formação de sólido; solventes opticamente ativos; reagentes opticamente ativos; e catalisadores opticamente ativos.

Em uma modalidade, a cristalização do análogo de rapamicina pode ser conduzida através de modulação da taxa de remoção de solvente e/ou taxa de remoção de anti- solvente para induzir ou promover a cristalização. Controle de remoção de solvente está interconectada com o controle de saturação. À medida que o solvente é removido, a concen- tração do análogo de rapamicina e componentes menos voláteis se torna maior. Dependen- do da composição restante, o grau de saturação mudará dependendo de fatores tais como a polaridade e viscosidade da composição restante. Por exemplo, à medida que o solvente é removido, a concentração do análogo de rapamicina pode se elevar até que o limite metas- tável seja atingido e nucleação e crescimento de cristal ocorrem.

A taxa de remoção de solvente pode ser controlada pela temperatura e pressão e a área de superfície sob a qual evaporação pode ocorrer. Por exemplo, solvente pode ser re- movido através de destílação em uma temperatura e pressão pré-definidas ou o solvente pode ser removido simplesmente permitindo que o solvente evapore em temperatura ambi- ente. Em alguns casos, absorventes de solvente podem ser usados.

Em uma modalidade, a cristalização do análogo de rapamicina pode ser conduzida através de introdução de um evento de nucleação ou precipitação. Em geral, isso envolve sujeição de uma solução de análogo de rapamicina super-saturada a alguma forma de e- nergia, tal como estimulação ultra-sônica ou mecânica ou através de indução de super- saturação através de adição de componentes extra.

A nucleação de cristal é a formação de uma fase sólida de cristal a partir de um lí- quido, uma fase amorfa, um gás ou de uma fase sólida de cristal diferente. A nucleação a- justa o caráter do processo de cristalização e, portanto, é um dos componentes mais críticos ao projetar processos de cristalização comerciais (The Encyclopedia of Chemical Techno- logy, Kirk-Othomer (4a ed. em 692)(1993)).

Nucleação primária pode ocorrer através de mecanismos homogêneos ou hetero- gêneos, ambos os quais envolvem a formação de cristal através de combinação seqüencial de constituintes de cristal. A nucleação primária não envolve os cristais existentes do análo- go de rapamicina, mas resulta de formação espontânea de cristais. A nucleação primária pode ser induzida através de aumento da saturação além do limite metastável ou, quando o grau de saturação está abaixo do limite metastável, através de nucleação. Eventos de nu- cleação incluem estimulação mecânica, tal como contato do meio de cristalização com o rotor de agitação do cristalizador e exposição à fontes de energia, tais como energia acústi- ca (ultra-som), elétrica ou laser (Garetz e colaboradores, 1996 Physical Review Letters 77: 3475). A nucleação primária também pode ser induzida através da adição de promotores de nucleação primária, tais como outras substâncias que não uma forma sólida do análogo de rapamicina.

Aditivos que diminuem a energia de superfície do análogo de rapamicina podem in- duzir à nucleação. Uma diminuição da energia de superfície favorece a nucleação, uma vez que a barreira à nucleação é causada por aumento de energia quando de formação da su- perfície sólido-líquido. Assim, a nucleação pode ser controlada através de ajuste da tensão interfacial do meio de cristalização por meio de introdução de moléculas semelhantes a ten- soativo através de pré-tratamento da câmara de cristalização ou através de adição direta. O efeito de nucleação das moléculas de tensoativo é dependente de sua concentração e, as- sim, esse parâmetro deverá ser cuidadosamente controlado. Tais aditivos para ajuste de tensão não estão limitados a tensoativos. Muitos compostos que são relacionados ao análo- go de rapamicina podem ter atividade de superfície significativa. Outros aditivos heterogê- neos que induzem à nucleação incluem partículas sólidas de várias substâncias, tais como excipientes em fase sólida ou mesmo impurezas deixadas para trás durante síntese ou pro- cessamento do análogo de rapamicina.

A nucleação secundária envolve tratamento do meio de cristalização com um pro- motor de nucleação secundário que é uma forma sólida, de preferência um cristal tendo ca- racterísticas que são desejadas para o análogo de rapamicina cristalino. Uma pequena for- ma de cristal desejada do análogo de rapamicina pode ser usada como um promotor de nu- cleação secundário. Cultura direta com uma pluralidade de sementes de nucleação do aná- logo de rapamicina em vários estados físicos proporciona um meio para induzir à formação de diferentes formas de cristal em diferentes composições. Em uma modalidade, outras par- tículas que não o análogo de rapamicina podem ser adicionadas às composições de cristali- zação. Em outra modalidade, cristais com tamanho de nanômetro (por exemplo, nanopartí- culas) do análogo de rapamicina são adicionados às amostras.

Formas cristalinas de um análogo de rapamicina, tal como ABT-578 (isto é, zotaro- limus), foram descobertas em solventes orgânicos que incluem acetona, tolueno, acetonitri- lo, formato de etila, acetato de isopropila, acetato de isobutíla, etanol, N,N dimetil formamida e anisola. O solvente de acetonitrilo pode ser usado para cristalizar o solvato de acetonitrilo de rapamicina o qual, então, forma um desolvato cristalino (isto é, solvato desolvatado de acetonitrilo) quando de secagem (por exemplo, condições de secagem apropriadas como pressão, temperatura e ambiente de vapor), de modo a remover o acetonitrilo do cristal.

O solvato desolvatado de acetonitrilo cristalino pode possuir propriedades de esta- bilidade química que permitem a eliminação de adição de BHT como um antioxidante ao ABT-578 amorfo, conforme é praticado atualmente. Além disso, o perfil de impureza do ABT-578 pode ser aperfeiçoado significativamente através de incorporação de uma etapa de cristalização no processo de fabricação, conforme descrito aqui. Em alguns dos padrões de difração de pó por raios X (PXRD) mostrados nas figuras, dois picos a ~ 38 e 44 são do prendedor de raios X.

Existem vários métodos de preparo de um análogo de rapamicina cristalino. Em

uma modalidade, um método de preparo de uma substância de fármaco de análogo de ra- pamicina cristalino inclui cristalização do análogo de rapamicina a partir de um solvente ou mistura de solventes farmaceuticamente aceitável. Em outras modalidades, um método de preparo de uma substância de fármaco de análogo de rapamicina cristalino inclui cristaliza- ção do análogo de rapamicina a partir de um solvente orgânico ou mistura de solventes. Naturalmente, aqueles habilitados na técnica serão capazes de apreciar todos os solventes que podem ser utilizados com as modalidades da invenção e não estão limitados aos sol- ventes listados aqui.

Em uma modalidade, a presente invenção inclui um processo para o preparo de uma forma cristalina de um análogo de rapamicina. Tal processo compreende o seguinte: combinação do análogo de rapamicina com pelo menos um meio orgânico para formar uma mistura; incubação da mistura até que o análogo de rapamicina cristalize; e recuperação do análogo de rapamicina cristalino do meio orgânico.

Em uma modalidade, o processo inclui formação de uma paste de análogo de ra- pamicina cristalino na solução. Em uma modalidade, o processo inclui agitação da mistura de análogo de rapamicina até que o análogo de rapamicina cristalize. Em uma modalidade, o processo inclui saturação da solução de análogo de rapamicina. Isso pode incluir a forma- ção de uma solução de análogo de rapamicina super-saturada.

Em uma modalidade, o processo inclui o uso de um anti-solvente para auxiliar na formação do análogo de rapamicina cristalino. Tal método inclui combinação de pelo menos um anti-solvente com o análogo de rapamicina e o solvente para formar uma mistura bifási- ca e incubação da mistura bifásica para causar uma divisão de fase líquido-líquido, com uma maioria do análogo de rapamicina estando no solvente e uma minoria do análogo de rapamicina estando no anti-solvente. Opcionalmente, o solvente pode ser separado do anti- solvente antes que os cristais sejam separados.

Em uma modalidade, o meio orgânico é tolueno, acetonitrilo, etanol, acetato de iso- butila, formato de etila, acetato de isopropila, etanol, N1N1 dimetil formamida e combinações dos mesmos.

Em uma modalidade, o solvente é um solvente orgânico. Como tal, o solvente or- gânico pode ser um solvente orgânico polar. Exemplos de solventes orgânicos polares in- cluem acetona, acetato de etila, metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, isobutanol, terc- butanol, 2-butanol, acetonitrilo, tetrahidrofurano, acetato de isobutila, acetato de n-butila, formato de etila, acetato de n-propila, acetato de isopropila, metil etil cetona ou qualquer combinação dos mesmos. De preferência, o solvente orgânico polar é acetona. Exemplos do anti-solvente incluem ciclohexano, heptano, hexano, n-octano, iso-octano, metilciclohexano ou qualquer combinação dos mesmos. De preferência, o anti-solvente é heptano. De prefe- rência, o meio orgânico é farmaceuticamente aceitável para fazer um preparado farmacêuti- co. Por exemplo, o meio orgânico pode ser um solvente farmaceuticamente aceitável que é aceitável para o preparo de uma composição de grau farmacêutico.

Em uma modalidade, a solução de análogo de rapamicina (por exemplo, mistura, bifásica, etc.) é formada, incubada, misturada, transformada em pasta, saturada e/ou crista- lizada em uma temperatura de cerca de -20 graus Celsius a cerca de 20 graus Celsius, mais preferivelmente de cerca de -10 graus Celsius a cerca de 10 graus Celsius, ainda mais pre- ferivelmente a cerca de -5 graus Celsius a cerca de 5 graus Celsius e, ainda mais preferi- velmente, a cerca de 0 graus Celsius.

Em uma modalidade, a solução de análogo de rapamicina (por exemplo, mistura, bifásica, etc.) é formada, incubada, misturada, transformada em pasta, saturada e/ou crista- Iizada em uma temperatura de cerca de 10 graus Celsius a cerca de 40 graus Celsius, mais preferivelmente de cerca de 12 graus Celsius a cerca de 32 graus Celsius, ainda mais prefe- rivelmente a cerca de 20 graus Celsius a cerca de 25 graus Celsius e, ainda mais preferi- velmente, a cerca de 22 graus Celsius.

Em uma modalidade, a solução de análogo de rapamicina (por exemplo, mistura, bifásica, etc.) é formada, incubada, agitada, misturada, transformada em pasta, saturada e/ou cristalizada durante cerca de 0,1 a cerca de 35 horas, mais preferivelmente de cerca de 1 a cerca de 30 horas, ainda mais preferivelmente de cerca de 5 a cerca de 25 horas, ainda mais preferivelmente de cerca de 10 a cerca de 20 horas e, ainda mais preferivelmente, du- rante cerca de 15 horas.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina combinado com o meio orgânico é

uma forma cristalina. Por exemplo, a forma cristalina do análogo de rapamicina pode ser um solvato de acetonitrilo, solvato desolvatado de acetonitrilo (isto é, desolvato de acetonitrilo). Alternativamente, o análogo de rapamicina pode estar em um estado amorfo.

Em uma modalidade, a mistura de rapamicina no meio orgânico é combinada com um segundo meio orgânico e em que a mistura que é ainda processada (por exemplo, incu- bada, agitada, misturada, transformada em pasta, saturada e/ou cristalizada) inclui o segun- do meio orgânico. Por exemplo, o primeiro meio orgânico pode ser acetonitrilo, tolueno, eta- nol, acetato de isobutila, anisola ou combinações dos mesmos. Exemplos do segundo meio orgânico podem ser formato de etila, acetato de isopropila, etano, N,N dimetil formamida, anisola e combinações dos mesmos.

Em uma modalidade, um análogo de rapamicina cristalino na forma de um solvato de acetonitrilo pode ser preparado através de incubação de uma mistura bifásica de análogo de rapamicina dissolvido, acetona e heptano a cerca de 0 graus Celsius. Conseqüentemen- te, o análogo de rapamicina pode ser adicionado a um frasco contendo acetona e heptano de modo a saturar a fase líquida. Uma fase líquido-líquido ocorre à medida que o análogo de rapamicina é dissolvido em solução, resultando em uma fase inferior rica em análogo de rapamicina-acetona e uma fase superior rica em heptano. Por exemplo, a mistura bifásica pode ser incubada a cerca de 0 graus Celsius durante cerca de 0,1 a cerca de 10 dias ou mais, até que cristais possam ser observados no fundo do frasco. Os cristais podem, então, ser analisados através de difração de pó por raios X, o qual é mostrado pela Figura 2A. Os cristais podem ser equilibrados em temperatura ambiente, seguido por secagem adicional a cerca de 30 graus Celsius sob vácuo (aproximadamente 3 polegadas de mercúrio). Os cris- tais secos podem ser analisados através de difração de pó por raios X, o qual é mostrado na Figura 3 A.

Em uma modalidade, um análogo de rapamicina cristalino na forma de solvato de acetona pode ser preparado através de dissolução do análogo de rapamicina amorfo em acetona em temperatura ambiente e incubação da solução resultante a cerca de 5 graus Celsius, até que sólidos cristalinos sejam observados. Os cristais podem ser analisados a- través de difração de pó por raios X, o qual é mostrado na Figura 2B. Os cristais podem ser equilibrados em temperatura ambiente, seguido por secagem adicional a cerca de 30 graus Celsius sob vácuo (aproximadamente 3 polegadas de mercúrio). Os cristais secos podem ser analisados através de difração de pó por raios X, o qual é mostrado na Figura 3B.

Em uma modalidade, um análogo de rapamicina cristalino na forma de um solvato de tolueno pode ser preparado. Como tal, cristais do solvato de tolueno de análogo de ra- pamicina podem ser preparados através de dissolução do análogo de rapamicina amorfo em tolueno para formar uma solução. A solução pode ser agitada a cerca de 22 graus Celsius durante cerca de 15 horas ou até que uma pasta espessa de sólidos cristalinos possa ser observada. Também, cristais podem ser preparados usando um análogo de rapamicina cris- talino, tal como um solvato de acetonitrilo, para cultivar a composição e induzir à cristaliza- ção. Os cristais podem, então, ser analisados através de difração de pó por raios X, o qual é mostrado pela Figura 4A.

Em uma modalidade, um análogo de rapamicina cristalino na forma de outro solvato de acetonitrilo pode ser preparado. Como tal, cristais de um solvato de acetonitrilo podem ser gerados através de saturação de acetonitrilo com análogo de rapamicina amorfo a cerca de 22 graus Celsius e incubação em cerca de 0 graus Celsius durante cerca de 2 horas ou até que cristais se formassem. Os cristais podem, então, ser analisados através de difração de pó por raios X, o qual é mostrado pela Figura 5A. A Figura 6A mostra os dados de análi- se de padrão de difração de pó por raios X para o desolvato de acetonitrilo de análogo de rapamicina, o qual pode ser obtido através de secagem do solvato de acetonitrilo.

Em uma modalidade, um análogo de rapamicina cristalino na forma de um solvato de formato de etila podem ser preparados. Como tal, cristais do solvato de formato de etila do análogo de rapamicina podem ser gerados transformando em pasta um bolo úmido do solvato de acetonitrilo em formato de etila a cerca de 0 graus Celsius. Os cristais podem, então, ser analisados através de difração de pó por raios X, o qual é mostrado pela Figura 7A.

Em uma modalidade, um análogo de rapamicina cristalino na forma de um solvato de acetato de isopropila pode ser preparado. Como tal, cristais do solvato de acetato de iso- propila de análogo de rapamicina podem ser gerados transformando em pasta um bolo úmi- do de solvato de acetonitrilo em acetato de isopropila a cerca de 0 graus Celsius.

Em uma modalidade, o análogo de rapamicina cristalino na forma de um solvato de acetato de isobutila pode ser preparado. Como tal, cristais do acetato de isobutila de análo- go de rapamicina podem ser preparados através de adição do análogo de rapamicina amor- fo a um frasco e carregamento de acetato de isobutila no frasco para permitir dissolução. A solução pode, então, ser incubada a cerca de 0 graus Celsius durante cerca de 16 horas ou até que uma pasta cristalina seja obtida. Os cristais podem, então, ser analisados através de difração de pó de raios X, o qual é mostrado na Figura 9A.

Em uma modalidade, um análogo de rapamicina cristalino na forma de um solvato de etanol pode ser preparado. Como tal, cristais do solvato de etanol do análogo de rapami- cina podem ser preparados através de adição do análogo de rapamicina amorfo a um frasco e carregando etanol (200 proof) no frasco para permitir dissolução. A solução pode ser culti- vada após cerca de 15 horas com um desolvato de acetonitrilo e, então, incubada em torno de 0 graus Celsius durante mais cerca de 16 horas até que uma pasta cristalina seja obtida.

Em uma modalidade, um análogo de rapamicina cristalino na forma de um solvato de N,N dimetil formamida pode ser preparado. Como tal, cristais do solvato de N,N dimetil formamida de análogo de rapamicina podem ser gerados através de transformação em pas- ta de um bolo úmido do solvato acetonitrilo em N,N dimetil formamida em cerca de 0 graus Celsius. Os cristais podem, então, ser analisados através de difração de pó de raios X, o qual é mostrado na Figura 10A.

Em uma modalidade, um análogo de rapamicina cristalino na forma de um solvato de anisola pode ser preparado. Como tal, cristais do solvato de anisola do análogo de rapa- micina podem ser gerados através de transformação em pasta de um bolo úmido do solvato acetonitrilo em anisola a cerca de 0 graus Celsius. Os cristais podem, então, ser analisados através de difração de pó de raios X, o qual é mostrado na Figura 11 A.

IV. Composições de análogo de rapamicina cristalino

O análogo de rapamicina cristalino da presente invenção pode ser preparado em qualquer composição farmacêutica, tal como as composições comumente empregadas com análogos de rapamicina amorfos. Conseqüentemente, o análogo de rapamicina cristalino pode ser formulado em uma composição polimérica, tal como um revestimento de stent ou semelhante. A composição polimérica pode incluir polímeros que são hidrofílicos, hidrofóbi- cos, biodegradáveis, não biodegradáveis e qualquer combinação dos mesmos. O polímero pode ser selecionado do grupo consistindo de poliacrilatos, polimetacrilatos, ácidos policar- boxílicos, polímeros de celulose, gelatina, polivinilpirrolidona, polímeros de anidrido maleico, poliamidas, álcoois polivinílicos, óxidos de polietileno, glicosaminoglicanas, polissacarídeos, poliésteres, poliuretanos, silicones, poliortoésteres, polianidridos, policarbonatos, polipropi- lenos, ácidos polilácticos, ácidos poliglicólicos, policaprolactonas, polihidróxibutirato valera- tos, poliacrilamidas, poliéteres e misturas e copolímeros dos precedentes. Também, disper- sões poliméricas, tais como dispersões de poliuretano (BAYHYDROL, etc.) e dispersões de látex/ácido acrílico também podem ser usadas.

Polímeros biodegradáveis que podem ser usados incluem ácido (poli)L-láctico, áci- do (poli)DL-láctico, policaprolactona, (poli)hidróxi butirato, poliglicolídeo, (poli)diaxanona, (poli)hidróxi valerato, poliortoéster, copolímeros de (poli)lactídeo-co-glicolídeo, (poli)hidróxi butirato-co-valerato, poliglicolídeo-co-trimetileno carbonato, polianidridos, polifosfoéster, poli- fosfoéster-uretano, poli aminoácidos, policianoacrilatos, biomoléculas, fibrina, fibrinogênio, celulose, amido, colágeno, ácido hialurônico e qualquer combinação dos mesmos. Políme- ros biestáveis também podem ser usados, tais como poliuretano, silicones, poliésteres, poli- olefinas, poliamidas, policaprolactame, poliimida, cloreto de polivinila, polivinil metil éter, ál- cool polivinílico, polímeros e copolímeros acrílicos, poliacrilonitrilo, copolímeros de poliesti- reno de monômeros de vinila com olefinas (tais como copolímeros de estireno-acrilonitrilo, copolímeros de etileno-metil metacrilato, acetato de vinila-etileno), poliéteres, rayons, celuló- sicos (tais como acetato de celulose, nitrato de celulose, propionato de celulose, etc.), pari- Ieno e derivados dos mesmos e qualquer combinação dos mesmos.

Outros polímeros que podem ser usados incluem uma subunidade de MPC, incluin- do (poli)(MPCw:LAMx:HPMAy:TSMAz) onde w, x, y e ζ representam as proporções molares de monômeros usados para o preparo do polímero e MPC representa a unidade 2- metacriloilóxi etil fosforil colina, LMA representa a unidade Iauril metacrilato, HPMA repre- senta a unidade 2-hidróxipropil metacrilato e TSMA representa a unidade 3-trimetóxi- sililpropiE metacrilato.

Adicionalmente, os análogo de rapamicina cristalinos podem ser preparados em qualquer composição farmacêutica adequada. Tais composições farmacêuticas podem in- cluir um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, o qual pode ser administrado oralmente, retalmente, parenteralmente, intracisternalmente, intravaginalmente, intraperito- nealmente, topicamente (como através de pós, pomadas, gotas ou emplastro transdérmico), bucalmente, como um spray oral ou nasal ou localmente, tal como em um stent colocado dentro da vasculatura. A frase "veículo farmaceuticamente aceitável" se refere a um enche- dor, diluente, material de encapsulação ou auxiliar de formulação sólido, semi-sólido ou lí- quido não tóxico de qualquer tipo. O termo "parenteral" se refere a modos de administração os quais incluem injeção, infusão e colocação intravenosa, intra-arterial, intramuscular, in- traperitoneal, intra-esternal, subcutânea e intra-articular tal como, por exemplo, na vascula- tura.

As composições farmacêuticas podem incluir soluções, dispersões, suspensões ou emulsões aquosas ou não aquosas estéreis farmaceuticamente aceitáveis, bem como pós estéreis para reconstituição em soluções ou dispersões estéreis injetáveis exatamente antes de uso. Exemplos de veículos, diluentes, solventes ou carreadores aquosos e não aquosos adequados incluem água, etanol, polióis (por exemplo, glicerol, propileno glicol, polietileno glicol e semelhantes), carbóxi metil celulose e misturas adequadas dos mesmos, óleos ve- getais (tal como óleo de oliva) e ésteres orgânicos injetáveis, tal como lecitina, através da manutenção do tamanho de partícula requerido no caso de dispersões e através do uso de tensoativos.

As composições farmacêuticas podem também conter adjuvantes, tais como con- servantes, agentes de umedecimento, agentes de emulsificação e agentes de dispersão. Prevenção da ação de microorganismos pode ser assegurada através da inclusão de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabeno, clorobutanol, ácido sórbico, fenol e semelhantes. Pode também ser desejável incluir agente isotônicos, tais como açúca- res, cloreto de sódio e semelhantes. Absorção prolongada da forma farmacêutica injetável pode ser obtida através da inclusão de agentes que retardam a absorção, tais como mono- estearato de alumínio e gelatina.

Em alguns casos, de forma a prolongar o efeito do análogo de rapamicina cristalino, é desejável diminuir a absorção do análogo de rapamicina cristalino a partir de injeção sub- cutânea ou intramuscular. Isso pode ser obtido através do uso de uma suspensão líquida de material cristalino ou amorfo com pobre solubilidade em água. A taxa de absorção do análo- go de rapamicina cristalino, então, depende de sua taxa de dissolução a qual, por sua vez, pode depender do tamanho de cristal e forma cristalina. Alternativamente, absorção retarda- da de uma forma de fármaco parenteralmente administrado é obtida através de dissolução ou suspensão do fármaco em um veículo oleoso.

Formas de depósito injetáveis são feitas através de formação de matrizes de micro-

cápsula do fármaco em polímeros biodegradáveis, tal como polilactídeo-poliglicolídeo. De- pendendo da proporção de fármaco para polímero e da natureza do polímero empregado em particular, a taxa de liberação de fármaco pode ser controlada. Exemplos de outros po- límeros biodegradáveis incluem (poli)ortoésteres e (poli)anidridos. Formulações injetáveis em depósito também são preparadas encerrando o fármaco em Iipossomas ou microemul- sões, os quais são compatíveis com tecidos corporais.

As formulações injetáveis podem ser esterilizadas, por exemplo, por meio de filtra- ção através de um filtro de retenção de bactérias ou através de incorporação de agentes de esterilização na forma de composições sólidas estéreis as quais podem ser dissolvidas ou dispersas em água estéril ou outro meio injetável estéril exatamente antes de uso.

Formas de dosagem sólidas para administração oral incluem cápsulas, tabletes, pí- lulas, pós e grânulos. Em tais formas de dosagem sólida, o análogo de rapamicina cristalino é misturado com pelo menos um excipiente ou veículo inerte farmaceuticamente aceitável, tal como citrato de sódio ou fosfato de dicálcio e/ou (a) enchedores ou extensores, tais como amidos, lactose, sacarose, glicose, manitol e ácido silícico, (b) aglutinantes tais como, por exemplo, carbóximetil celulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarose e acácia, (c) umectantes, tal como glicerol, (d) agentes de desintegração, tais como Agar-agar, carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido algínico, determinados silicatos e carbonato de sódio, (e) agentes de retardo de solução, tal como parafina, (f) aceleradores de absorção, tais como compostos de amônio quaternário, (g) agentes de umedecimento tais como, por exemplo, álcool cetílico e monoestearato de glicerila, (h) absorventes, tais como caulim e argila bentonita e (i) lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magné- sio, polietileno glicóis sólidos, Iauril sulfato de sódio e misturas dos mesmos. No caso de cápsulas, tabletes e pílulas, a forma de dosagem pode também compreender agentes de tamponamento.

Composições sólidas de um tipo similar também podem ser empregadas como en- chedores em cápsulas de gelatina moles, semi-sólidas e duras cheias ou cápsulas cheias de líquido usando excipientes tais como lactose ou açúcar de leite, bem como polietileno glicóis de elevado peso molecular e semelhantes. As formas de dosagem sólidas de tabletes, drágeas, cápsulas, pílulas e grânulos

podem ser preparadas com revestimentos e envoltórios, tais como revestimentos entéricos e outros revestimentos bem conhecidos na técnica de formulação farmacêutica. Eles podem, opcionalmente, conter agentes de opacificação e também podem ser de uma composição de modo que eles liberam o(s) ingrediente(s) ativo(s) apenas ou, de preferência, em uma determinada parte do trato intestinal, opcionalmente de uma maneira retardada. Exemplos de composições de incrustação que podem ser usadas incluem substâncias poliméricas e ceras. Aquelas composições de incrustação contendo um fármaco podem ser colocadas sobre dispositivos médicos, tais como stents, enxertos, cateteres e balões. O análogo de rapamicina cristalino também pode estar na forma micro-encapsulada, se apropriado, com um ou mais dos excedentes mencionados acima.

Formas de dosagem líquida para administração oral incluem emulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis. Além do análogo de rapami- cina cristalino, as formas de dosagem líquidas podem conter diluentes inertes comumente usados na técnica tais como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes de solubiliza- ção e emulsificantes, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etila, acetato de etila, álcool benzílico, benzoato de benzila, propileno glicol, 1,3-butileno glicol, dimetil formamida, óleos (em particular óleos de semente de algodão, amendoim, milho, germe, oliva, mamona e gergelim), glicerol, álcool tetrahidrofurfurílico, polietileno glicóis e ésteres de ácido graxo de sorbitan e misturas dos mesmos. Além de diluentes inertes, as composições orais também podem incluir adjuvantes, tais como agentes de umedecimento, agentes de emulsificação e suspensão, agentes adoçantes, de flavorização e aromáticos. Suspensões, além dos compostos ativos, podem conter agentes de suspensão tais

como, por exemplo, álcoois isoestearílico etoxilados, polioxietileno sorbitol e sorbitan éste- res, celulose microcristalina, metahidróxido de alumínio, bentonita, Agar-agar e tragacanto e misturas dos mesmos.

Administração tópica inclui administração à pele ou mucosa, incluindo superfícies dos pulmões e olhos. Composições para administração tópica, incluindo aquelas para inala- ção, podem ser preparadas como um pó seco o qual pode ser pressurizado ou não pressu- rizado. Em composições em pó não pressurizadas, o ingrediente ativo na forma finalmente dividida pode ser usado em mistura com um veículo inerte farmaceuticamente aceitável de maior tamanho compreendendo partículas tendo um tamanho, por exemplo, de até 100 mi- crometros de diâmetro. Veículos inertes adequados incluem açúcares, tal como lactose. De- sejavelmente, pelo menos 95% em peso das partículas do ingrediente ativo têm um tama- nho de partícula eficaz na faixa de cerca de 0,01 a cerca de 10 micrometros. Composições para uso tópico sobre a pele também incluem pomadas, cremes, loções e géis.

Alternativamente, a composição pode ser pressurizada e conter um gás comprimi- do, tal como nitrogênio ou um propelente de gás liqüefeito. O meio propelente liqüefeito e, na verdade, a composição total são tais, de preferência, que o ingrediente ativo não dissolve no mesmo em qualquer grau substancial. A composição pressurizada pode também conter um agente superfície ativo. O agente superfície ativo pode ser um agente superfície ativo líquido ou sólido não-iônico ou pode ser um agente superfície ativo sólido aniônico. É prefe- rido usar o agente superfície ativo sólido aniônico na forma de um sal de sódio.

Uma outra forma de administração tópica é aos olhos, conforme para o tratamento de condições imune-mediadas dos olhos, tais como doenças autoimunes, condições alérgi- cas ou inflamatórias e transplantes de córnea. O análogo de rapamicina cristalino é distribu- ído em um veículo oftálmico farmaceuticamente aceitável, de modo que o composto é man- tido em contato com a superfície ocular durante um período de tempo suficiente para permi- tir que o composto penetre nas regiões corneal e interna dos olhos como, por exemplo, a câmara anterior, câmara posterior, corpo vítreo, humor aquoso, humor vítreo, córnea, í- ris/cílios, lentes, coróide/retina e esclera. O veículo oftálmico farmaceuticamente aceitável pode ser, por exemplo, uma pomada, óleo vegetal ou um material de encapsulação.

Composições para administração retal ou vaginal são, de preferência, supositórios ou enemas de retenção os quais podem ser preparados através de mistura do análogo de rapamicina cristalino com excipientes ou veículos não irritativos adequados, tais como man- teiga de cacau, polietileno glicol ou uma cera para supositório, os quais são líquidos em temperatura ambiente, mas líquidos na temperatura corporal e, portanto, fundirão no reto ou cavidade vaginal e liberarão o composto ativo.

O análogo de rapamicina cristalino também pode ser administrado na forma de Ii- possomas. Conforme é conhecido na técnica, Iipossomas são geralmente derivados de fos- folipídios ou outras substâncias lipídicas. Lipossomas são formados por cristais líquidos hi- dratados mono- ou multi-lamelares que são dispersos em um meio aquoso. Qualquer lipídio não tóxico, fisiologicamente aceitável e metabolizável capaz de formação de Iipossomas pode ser usado. As presentes composições na forma de Iipossoma podem conter, além do composto da presente invenção, estabilizantes, conservantes, excipientes e semelhantes. Os lipídios preferidos são os fosfolipídios e as fosfatidil colinas (lecitinas), naturais e sintéti- cos. Métodos para formar Iipossomas são conhecidos na técnica (veja Prescott, Ed., Me- thods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y. (1976), página 33 em diante).

O análogo de rapamicina cristalino pode ser aplicado a stents que tenham sido re- vestidos com um composto polimérico. Incorporação do composto ou fármaco no revesti- mento polimérico do stent pode ser realizada através de imersão do stent revestido com polímero em uma solução contendo o composto ou fármaco durante um período de tempo suficiente (tal como, por exemplo, cinco minutos) e, então, secagem do stent revestido.de preferência por meio de secagem a ar durante um período de tempo suficiente (tal como, por exemplo, 30 minutos). O stent revestido de polímero contendo o composto ou fármaco pode, então, ser distribuído ao vaso coronariano através de implante a partir de um cateter com balão. Além de stents, outros dispositivos que podem ser usados para introduzir os fármacos da presente invenção na vasculatura incluem, mas não estão limitados a, enxer- tos, cateteres e balões. Além disso, outros compostos ou fármacos que podem ser usados em lugar dos fármacos da presente invenção incluem, mas não estão limitados a, A-94507 e SDZ RAD (a.k.a. Everolimus).

O análogo de rapamicina cristalino pode ser usado em combinação com outros a- gentes farmacológicos. Os agentes farmacológicos que podem ser eficazes na prevenção de restenose podem ser classificados em categorias de agentes anti-proliferativos, agentes antí-plaqueta, agentes anti-inflamatórios, agentes anti-trombóticos e agentes trombolíticos. Essas classes podem ser ainda sub-divididas. Por exemplo, agentes anti-proliferativos po- dem ser anti-mitóticos. Agentes anti-mitóticos inibem ou afetam a divisão celular, pelo que processos normalmente envolvidos em divisão celular não ocorrem. Uma sub-classe de a- gentes anti-mitóticos inclui vinca alcalóides. Exemplos representativos de vinca alcalóides incluem, mas não estão limitados a, vincristina, paclitaxel, etoposídeo, nocodazola, indirubi- na e derivados de antraciclina tais como, por exemplo, daunorubicina, daunomicina e plica- micina. Outras sub-classes de agentes anti-mitóticos incluem agentes de alquilação anti- mitóticos tais como, por exemplo, tauromustina, bofumustina e fotemustina e metabólitos anti-mitóticos tais como, por exemplo, metotrexato, fluorouracila, 5-bromodeóxiuridina, 6- azacitidina e citarabina. Agentes de alquilação anti-mitóticos afetam a divisão celular através de modificação covalente de DNA, RNA ou proteínas, desse modo, inibindo a replicação de DNA, transcrição de RNA, tradução de RNA, síntese de proteína ou combinações dos pre- cedentes.

Agentes anti-plaqueta são entidades terapêuticas que atuam através de (1) inibição de adesão de plaquetas a uma superfície, tipicamente uma superfície trombogênica, (2) ini- bição de agregação de plaquetas, (3) inibição de ativação de plaquetas ou (4) combinações dos precedentes. A ativação de plaquetas é um processo pelo qual as plaquetas são con- vertidas de um estado quiescente, em repouso para um no qual as plaquetas sofrem uma série de alterações morfologias induzidas por contato com uma superfície trombogênica. Essas alterações incluem alterações no formato das plaquetas, acompanhadas da formação de pseusopods, ligação a receptores na membrana e secreção de pequenas moléculas e proteínas tais como, por exemplo, ADP e fator plaquetário 4. Agentes anti-plaqueta que atu- am como inibidores de adesão de plaquetas incluem, mas não estão limitados a, eptifibatida, tirofiban, RGD (peptídeo baseados em (Arg-GIy-Asp) que inibem a ligação a gpllbllla ou avp3, anticorpos que bloqueiam a ligação a gpllbllla ou avp3, anticorpos anti-p-selectina, anticorpos anti-E-selectina, compostos que bloqueiam a ligação de β-selectina ou E- selectina a seus respectivos ligantes, saratina e anticorpos anti-fator de von Willebrand. A- gentes que inibem a agregação plaquetária ADP-mediada incluem, mas não estão limitados a, disagregina e cilostazol. Agentes anti-inflamatórios podem também ser usados. Exemplos dos mesmos in- cluem, mas não estão limitados a, prednisona, dexametasona, hidrocortisona, estradiol, flu- ticasona, clobetasol e anti-inflamatórios não esteroidais tais como, por exemplo, acetamino- feno, ibuprofeno, naproxeno e sulindac. Outros exemplos desses agentes incluem aqueles que inibem a ligação de citocinas ou quimiocinas aos receptores cognatos para inibir sinais pró-inflamatórios transduzidos pelas citocinas ou as quimiocinas. Exemplos representativos desses agentes incluem, mas não estão limitados a, anticorpos anti-IL1, anti-IL2, anti-IL3, anti-IL4, anti-IL8, anti-IL15, anti-IL18, anti-GM-CSF e anti-TNF.

Agentes anti-trombóticos incluem entidades químicas e biológicas que podem inter- vir em qualquer estágio na via de coagulação. Exemplos de entidades específicas incluem, mas não estão limitados a, pequenas moléculas que inibem a atividade do fator Xa. Além disso, agentes do tipo heparinóide que podem inibir FXa e trombina, quer direta ou indireta- mente, tais como, por exemplo, heparina, sulfato de heparina, heparinas de baixo peso mo- lecular tal como, por exemplo, o composto tendo a marca comercial Clivarin® e oligossaca- rídeos sintéticos tal como, por exemplo, o composto tendo a marca comercial Arixtra®. Também incluídos são inibidores diretos de trombina tais como, por exemplo, melagatran, ximelagatran, argatroban, inogatran e peptidomiméticos do sítio de ligação do substrato de fibrinogênio Phe-Pro-Arg para trombina. Outra classe de agentes anti-trombóticos que po- dem ser distribuídos são inibidores de fator VH/Vlla tais como, por exemplo, anticorpos anti- fator VH/Vlla, rNAPc2 e inibidor da via de fator tecidual (TFPI).

Agentes trombolíticos, os quais podem ser definidos como agentes que ajudam a degradar trombos (coágulos), podem também ser usados como agentes adjuntos, porque a ação de Iise de um coágulo ajuda a dispersar as plaquetas encerradas dentro da matriz de fibrina de um trombo. Exemplos representativos de agentes trombolíticos incluem, mas não estão limitados a, uroquínase ou uroquínase recombinante, pró-uroquínase ou pró- uroquínase recombinante, ativador de plasminogênio tecidual ou sua forma recombinante e estreptoquínase.

Outros fármacos que podem ser usados em combinação com o análogo de rapami- cina cristalino são fármacos citotóxicos tais como, por exemplo, indutores de apoptose, tal como TGF e inibidores de topoisomerase, tais como 10-hidróxicamptotecina, irinotecan e doxorubicina. Outras classes de fármacos que podem ser usados em combinação com o análogo de rapamicina cristalino são fármacos que inibem a de-diferenciação celular e fár- macos citostáticos. Outros agentes que podem ser usados com o análogo de rapamicina cristalino incluem fenofibrato, batimistat, antagonistas do receptor de endotelina-A tal como, por exemplo, darusentan e antagonistas do receptor de integrina avp3.

O análogo de rapamicina cristalino pode também ser co-administrado com um ou mais agentes imunossupressores. Os agentes imunossupressores dentro do escopo da pre- sente invenção incluem, mas não estão limitado a, IMURAN® azatioprina sódica, brequinar sódico, SANIDIN® trihidrocloreto de gusperimus (também conhecido como deóxisperguali- na), mizoribina (também conhecida como bredinina), CELLCEPT® micofenolato mofetil, NEORAL® Ciclosporina A (também comercializado como formulação de Ciclosporina A sob a marca comercial SANDIMMUNE®), PROGRAF® tacrolimus (também conhecido como FK- 506), sirolimus e RAPAMUNE®, Ieflunomida (também conhecida como HWA-486), glicocor- ticóides, tal como prednisolona e seus derivados, terapias com anticorpo, tais como ortoclo- na (0KT3) e Zenapax®, e globulinas anti-miócitos, tais como timoglobulinas.

V. Tratamentos com análogo de rapamicina cristalino

Os análogos de rapamicina cristalinos possuem atividade imunomodulatória em mamíferos (especialmente seres humanos). Como imunossupressores, os análogos de ra- pamicina cristalinos são úteis para o tratamento e prevenção de doenças imune-mediadas, tais como a resistência através de transplante de órgãos ou tecidos, tais como coração, rim, fígado, medula óssea, pele, córnea, pulmão, pâncreas, intestino, membros, músculo, ner- vos, duodeno, intestino delgado, célula da ilhota pancreática e semelhantes; doenças enxer- to versus hospedeiro quando de transplante de medula óssea; doenças autoimunes, tais como artrite reumatóide, Iupus eritematoso sistêmico, tiroidite de Hashimoto, esclerose múl- tipla, miastenia gravis, diabetes do Tipo I, uveíte, encefalomielite alérgica, glomerulonefrite e semelhantes. Outros usos incluem o tratamento e profilaxia de doenças inflamatórias e hi- perproliferativas da pele e manifestações cutâneas de enfermidades imunologicamente me- diadas, tais como psoríase, dermatite atópica, dermatite de contato e outras dermatites ec- zematosas, dermatite seborreica, Iichen planus, pênfigo, pênfigo bolhoso, epidermólise bo- Ihosa, urticária, angioedemas, vasculitides, eritemas, eosinofilias cutâneas, Iupus eritemato- so, acne e alopecia areata; várias doenças dos olhos (autoimunes e outras), tais como que- ratoconjuntivite, conjuntivite vernal, uveíte associada à doença de Behcet, queratite, querati- te herpética, córnea cônica, distrofia do epitélio da córnea, Ieucoma corneal e pênfigo ocular. Além disso, doença obstrutiva reversível das vias aéreas, as quais incluem condições tais como asma (por exemplo, asma brônquica, asma alérgica, asma intrínseca, asma extrínse- ca e asma por poeira), particularmente asma crônica ou inveterada (por exemplo, asma tar- dia e hiper-responsividade das vias aéreas), bronquite, rinite alergia e semelhantes são ob- jetivadas pelos análogos de rapamicina cristalinos. Inflamação da mucosa e vasos sangüí- neos, tais como úlceras gástricas, dano vascular causado por doenças isquêmicas e trom- bose. Além disso, doenças vasculares hiperproliferativas, tais como hiperplasia de células do músculo liso do íntimo, restenose e oclusão vascular, particularmente após lesão vascu- lar biológica ou mecanicamente mediada, poderiam ser tratadas ou prevenidas pelos análo- gos de rapamicina cristalinos. Outras condições tratáveis incluem, mas não estão limitadas a, doenças isquêmicas do intestino, doenças inflamatórias do intestino, enterocolite necrosante, inflama- ções/alergias intestinais, tais como doença celíaca, proctite, gastroenterite eosinofílica, mas- tocitose, doença de Crohn e colite ulcerativa; doenças nervosas, tais como miosite múltipla, síndrome de Guillain-Barre, doença de Meniere, polineurite, neurite múltipla, mononeurite e radiculopatia; doenças endócrinas, tais como hipertiroidismo e doença de Basedow; doen- ças hemáticas, tais como aplasia pura de células vermelhas, anemia aplástica, anemia hi- poplástica, trombocitopenia púrpura idiopática, anemia hemolítica autoimune, agranulocito- se, anemia perniciosa, anemia megaloblástica e aneritroplasia; doenças ósseas, tal como osteoporose; doenças respiratórias, tais como sarcoidose, pulmão fibróide e pneumonia in- tersticial idiopática; doenças da pele, tais como dermatomiosite, Ieucoderma vulgaris, ictiose vulgaris, sensibilidade foto-alérgica e Iinfoma de células T cutâneas; doenças circulatórias, tais como arteriosclerose, aterosclerose, síndrome aórtica, poliarterite nodosa e miocardose; doenças de colágeno, tais como escleroderma, granuloma de Wegener e síndrome de Sjo- gren; adipose; fasciíte eosinofílica; doença periodontal, tal como lesões da gengiva, perio- dôntio, osso alveolar e substantia óssea dentis; síndrome nefrótica, tal como glomerulonefri- te; alopecia de padrão masculino e crescimento de cabelos; distrofia muscular; síndrome de Sezary e pioderma; doença de Addison; doenças mediadas por oxigênio ativo tais como, por exemplo, lesões de órgãos, tais como lesão por reperfusão-isquemia de órgãos (tais como coração, fígado, rim e trato digestivo) as quais ocorrem quando de preservação, transplante ou doença isquêmica (por exemplo, trombose e enfarte cardíaco); doenças intestinais, tais como choque por endotoxina, colite pseudomembranosa e colite causada por fármaco ou radiação; doenças renais, tais como insuficiência renal aguda isquêmica e insuficiência renal crônica; doenças pulmonares, tais como toxinose causada por pulmão-oxigênio ou fármaco (por exemplo, paracort e bleomicinas), câncer de pulmão e enfisema pulmonar; doenças osculares, tais como catarata, siderose, retinite pigmentosa, degeneração macular senil, cicatrização vitreal e queimadura corneal por álcali; dermatites, tais como eritema multifor- me, dermatite bolhosa linear por IgA e dermatite por cimento; e outras, tais como gengivite, periodontite, sepsia, pancreatite, doenças causadas por poluição ambiental (por exemplo, poluição do ar), envelhecimento, carcinogênese, metástase de carcinoma e hipobaropatia; doenças causadas por histamina ou liberação de leucotrieno-C4; doença de Behcet, tal co- mo doença de Behcet intestinal, vásculo- ou neuro- e também Behcet a qual afeta a cavida- de oral, pele, olhos, vulva, articulação, epidídimo, pulmão, rim e assim por diante.

Além disso, os análogos de rapamicina cristalinos são úteis para o tratamento e prevenção de doença hepática, tais como doenças imunogênicas (por exemplo, doenças hepáticas autoimunes crônicas, tais como hepatite autoimune, cirrose biliar primária e co- Iangite esclerosante), ressecção parcial do fígado, necrose hepática aguda (por exemplo, necrose causada por toxina, hepatite viral, choque ou anoxia), hepatite pelo vírus B, hepatite não-A/não-B, cirrose (tal como cirrose alcoólica) e insuficiência hepática, tal como insufici- ência hepática fulminante, insuficiência hepática de início tardio e insuficiência hepática "a- guda-sobre-crônica" (insuficiência hepática aguda sobre doenças hepáticas crônicas) e, a- lém disso, são úteis para várias doenças em virtude de sua atividade útil, tais como aumento de efeito quimioterapêutico, infecção por citomegalovírus, particularmente infecção pelo HCMV, atividade anti-inflamatória, doenças esclerosantes e fibróticas, tais como nefrose, escleroderma, fibrose pulmonar, arteriosclerose, insuficiência cardíaca congestiva, hipertro- fia ventricular, adesões pós-cirúrgicas e cicatrizes, derrame, enfarte do miocárdio e lesão associada à isquemia e reperfusão e semelhantes.

Adicionalmente, análogos de rapamicina cristalinos possuem propriedades antago- nísticas de FK-506. Os análogos de rapamicina cristalinos podem, assim, ser usados no tratamento de imunodepressão ou um distúrbio envolvendo imunodepressão. Exemplos de distúrbios envolvendo imunodepressão incluem AIDS, câncer, infecções fúngicas, demência senil, trauma (incluindo cicatrização de ferimentos, cirurgia e choque), infecção bacteriana crônica e determinados distúrbios do sistema nervoso central. A imunodepressão a ser tra- tada pode ser causada por uma overdose de um composto macrocíclico imunossupressor, por exemplo, derivados de 12-(2-ciclohexil-1-metilvinil)-13,19,21,27-tetrametil-11,28-dioxa-4- azatriciclo[22,3,1,4,9] octacos-18-eno, tal como FK-506 ou rapamicina. A overdose de tais medicamentos pelo paciente é muito comum quando eles esquecem que tomaram o medi- camento no horário prescrito e pode levar a graves efeitos colaterais.

A capacidade dos análogos de rapamicina cristalinos de tratar doenças proliferati- vas pode ser demonstrada de acordo com métodos descritos em Bunchman ET e CA Bro- okshire, Transplantation Proceed. 23 967-968 (1991); Yamagishi, e colaboradores, Biochem. Biophys. Res. Comm. 191 840-846 (1993); e Shichiri, e colaboradores, J. Clin. Invest. 87 1867-1871 (1991). Doenças proliferativas incluem proliferação de músculo liso, esclerose sistêmica, cirrose do fígado, síndrome de dificuldade respiratória em adultos, cardiomiopatia idiopática, Iupus eritematoso, retinopatia diabética ou outras retinopatias, psoríase, esclero- derma, hiperplasia prostática, hiperplasia cardíaca, restenose após lesão arterial ou outra estenose patológica dos vasos sangüíneos. Além disso, os análogos de rapamicina cristali- nos antagonizam respostas celulares a vários fatores de crescimento e, portanto, possuem propriedades anti-angiogênicas, tornando os mesmos agentes úteis para controlar ou rever- ter o crescimento de determinados tumores, bem como doenças fibróticas dos pulmões, fígado e rim.

Composições líquidas aquosas são particularmente úteis para o tratamento e pre- venção de várias doenças dos olhos, tais como doenças autoimunes (incluindo, por exem- pio, córnea cônica, queratite, distrofia epitelial corneal, leucoma, úlcera de Mooren, esclevite e oftalmopatia de Graves) e rejeição a transplante de córnea. Quando usados nos tratamen- tos acima ou outros, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um dos análogos de rapa- micina cristalinos pode ser empregada na forma pura ou, onde tais formas existem, em uma forma de sal, éster ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável. Alternativamente, os aná- logos de rapamicina cristalinos podem ser administrados como uma composição farmacêuti- ca contendo o composto de interesse em combinação com um ou mais excipientes farma- ceuticamente aceitáveis. A frase "quantidade terapeuticamente eficaz" do análogo de rapa- micina cristalino significa uma quantidade suficiente do composto para tratar distúrbios, em uma proporção beneficio/risco razoável aplicável a qualquer tratamento médico. Deve ser entendido, contudo, que o uso diário total dos compostos e composições da presente inven- ção será decidido pelo médico que faz o atendimento, dentro do escopo do julgamento mé- dico. O nível de dose terapeuticamente eficaz específico para qualquer paciente em particu- lar dependerá de uma variedade de fatores, incluindo o distúrbio que está sendo tratado e a gravidade do distúrbio; atividade do composto específico empregado; a composição especí- fica empregada; a idade, peso corporal, saúde geral, sexo e dieta do paciente; o tempo de administração, via de administração e taxa de excreção do composto específico empregado; a duração do tratamento; fármacos usados em combinação ou coincidentes com o compos- to específico empregado; e fatores bem conhecidos na técnica médica. Por exemplo, está bem dentro da capacidade da técnica começar as doses do composto em níveis menores do que o requerido para obter o efeito terapêutico desejado e aumentar gradualmente a dosa- gem até que o efeito desejado seja obtido.

A dose diária total do análogo de rapamicina cristalino administrado a um ser hu- mano ou animal inferior pode oscilar de cerca de 0,01 a cerca de 10 mg/kg/dia. Para fins de administração oral, doses mais preferíveis podem estar na faixa de cerca de 0,001 a cerca de 3 mg/kg/dia. Para fins de distribuição local a partir de um stent, a dose diária que um pa- ciente receberá depende da extensão do stent. Por exemplo, um stent coronariano de 15 mm pode conter um fármaco em uma quantidade oscilando de cerca de 1 a cerca de 120 microgramas e pode distribuir esse fármaco durante um período de tempo oscilando de vá- rias horas a várias semanas. Se desejado, a dose diária eficaz pode ser dividida em múlti- plas doses para fins de administração; conseqüentemente, composições com uma única dose podem conter tais quantidades ou submúltiplos das mesmas para compor a dose diá- ria. Administração tópica pode envolver doses oscilando de cerca de 0,001 a cerca de 3 mg/kg/dia, dependendo do local de aplicação.

EXEMPLOS

Exemplo 1

Os análogos de rapamicina e processos da presente invenção serão melhor com- preendidos em conjunto com os esquemas sintéticos a seguir e métodos de produção de análogos de rapamicina e produção de formas cristalizadas dos análogos de rapamicina, os quais ilustram os métodos pelos quais os análogos de rapamicina cristalinos da presente invenção podem ser preparados.

Os análogos de rapamicina da presente invenção podem ser preparados através de uma variedade de vias sintéticas. Um procedimento exemplificativo é mostrado na Figura 1. Conforme mostrado na Figura 1, conversão da C-42 hidroxila de rapamicina a um grupo de condução trifluorometano-sulfonato ou fluoro-sulfonato proporcionou a Estrutura A. Deslo- camento do grupo de condução com tetrazola na presença de uma base não nucleofílica impedida, tal como 2,6-lutidina ou, de preferência, diisopropil etil amina, proporcionou a Fórmula 2 e Fórmula 3, as quais foram separadas e purificadas através de cromatografia rápida em coluna.

O precedente pode ser melhor compreendido através de referência aos exemplos a seguir, os quais ilustram os métodos pelos quais os compostos da invenção podem ser pre- parados e não se destinam a limitar o escopo da invenção, conforme definido nas reivindi- cações em anexo.

Exemplo 1A

Rapamicina (7,5 g) foi dissolvida em DCM (30 g). 2,6-Lutidina (1,76 g) foi adiciona- da. A solução foi esfriada para -30C em um banho de acetonitrilo-gelo seco e anidrido tríflico (2,89 g) foi lentamente adicionado em 10 minutos. A mistura de reação foi agitada durante minutos e, então, ensaiada com relação à presença de rapamicina para determinar o consumo na reação. 1-H-tetrazola (1,44 g), seguido por DIEA (5,29 g) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada durante 6 horas em temperatura ambiente e, então, diretamen- te carregada sobre uma coluna de gel de sílica (270 g) preparada em THF:n-heptano a 1:1 (v/v). A mistura de reação bruta foi purificada com THF:n-heptano a 1:1. As frações conten- do produto que eluem depois (isômero N-2 elui primeiro, seguido pelo isômero N-1) foram coletadas e concentradas. Os sólidos concentrados foram dissolvidos em um mínimo de DCM e carregados sobre uma coluna de gel de sílica (135 g) empacotada em n- heptano:acetona a 70:30. A coluna foi eluída com n-heptano:acetona a 70:30 e frações con- tendo produto puro, conforme identificado através de cromatografia em camada fina (TLC), foram concentradas.

O produto purificado foi dissolvido em t-BME (9 g) e adicionado lentamente a n- heptano (36 g) com agitação vigorosa a 10 +/-10 °C. Os sólidos precipitados foram agitados a 5-10 0C durante 1 hora, filtrados, lavados com n-heptano e secos sobre o funil com nitro- gênio. BHT (0,006 g) foi adicionado aos sólidos. Os sólidos foram dissolvidos em acetona (20 g), passados através de um filtro e concentrados. O resíduo foi tratado com acetona du- as vezes (20 g cada) e concentrados a cada vez até secagem. O produto foi seco sob vácuo durante não mais do que 18 horas em não mais do que 50 cC para proporcionar 2,5 g de zotarolimus.

Exemplo 1B

Uma solução do Exemplo 1A em acetato de isopropila (0,3 ml_) foi tratada seqüen- cialmente com diisopropiletilamina (87 μΙ_, 0,5 mmoles) e 1H-tetrazola (35 mg, 0,5 mmoles) e, após o que, agitada durante 18 horas. Essa mistura foi dividida entre água (10 mL) e éter (10 mL). Os orgânicos foram lavados com salmoura (10 mL) e secos (Na2S04). Concentra- ção dos orgânicos proporcionou um sólido amarelo viscoso, o qual foi purificado através de cromatografia sobre gel de sílica (3,5 g, 70-230 mesh) eluindo com hexano (10 mL), hexa- no:éter (4:1 (10 mL), 3:1 (10 mL), 2:1 (10 mL), 1:1 (10 mL)), éter (30 mL), hexano: acetona (1:1 (30 mL)). Um dos isômeros foi coletado nas frações de éter (MS (ESI) m/e 966 (M)+; 42-(2-tetrazolil)-rapamicina (isômero menos polar) correspondendo à Fórmula 3 da Figura 1)·

Exemplo 1C

Coleta da menor banda móvel da coluna de cromatografia usando a fase móvel de

hexano:acetona (1:1) no Exemplo 1C proporcionou o composto designado (MS (ESI) m/e 966 (M)+; 42-(1-tetrazolil)-rapamicina (isômero mais polar) correspondendo à Fórmula 2 da Figura 1).

Exemplo 2

A atividade imunossupressora dos análogos de rapamícina obtidos do Exemplo 1B

e Exemplo 1C foi comparada com a rapamicina e dois análogos de rapamicina: 40-epi-N-[2'- piridonaj-rapamicina e 40-epi-N-[4'-piridona]-rapamicina, ambos divulgados na Patente U.S. No. 5.527.907. A atividade foi determinada usando o ensaio de reação com linfócitos huma- nos misturados (MLR) descrito por Kino, T. e colaboradores em Transplantation Procee- dings, XIX(5): 36-39, Supl. 6 (1987). Os resultados do ensaio demonstram que os compos- tos da invenção são imunomoduladores eficazes em concentrações nanomolares, conforme mostrado na Tabela 1.

Exemplo MLR humano IC50 ± S.E.M.(nM) Rapamicina 0,91 ± 0,36 2-piridona 12,39 ±5,3 4-piridona 0,43 ± 0,20 Exemplo 1B 1,70 ±0,48 Exemplo 1C 0,66 ±0,19

Os comportamentos farmacocinéticos dos análogos de rapamicina do Exemplo 1B e Exemplo 1C foram caracterizados após uma única dose intravenosa de 2,5 mg/kg em ma- cacos cynomolgus (n = 3 por grupo). Cada composto foi preparado como uma solução a 2,5 mg/mL em etanol a 20%:propileno glicol a 30%:Cremophor EL a 2%:dextrose a 48% em veículo de água. A dose intravenosa de 1 mL/kg foi administrada como um bolo lento (~1-2 minutos) em uma veia safenosa dos macacos. Amostras de sangue foram obtidas de uma artéria ou veia femoral de cada animal antes de dosagem e 0,1 (IV apenas), 0,25, 0,5, 1, 1,5, 2, 4, 6, 9, 12, 24 e 30 horas após dosagem. As amostras preservadas em EDTA foram totalmente misturadas e extraídas para subseqüente análise.

Uma alíquota de sangue (1,0 ml_) foi submetida à hemólise com metanol a 20% em água (0,5 ml) contendo um padrão interno. As amostras submetidas à hemólise foram extra- ídas com uma mistura de acetato de etila e hexano (1:1 (v/v), 6,0 mL). A camada orgânica foi evaporada até secagem com uma corrente de nitrogênio em temperatura ambiente. As amostras foram reconstituídas em metanokágua (1:1, 150 uL). Os compostos do título (inje- ção de 50 μΙ_) foram separados dos contaminantes usando HPLC de fase reversa com de- tecção de UV. As amostras foram mantidas frias (4 graus Celsius) por toda a operação. To- das as amostras de cada estudo foram analisadas como um único lote sobre a HPLC. Medições da área sob a curva (AUC) dos análogos de rapamicina do Exemplo 1B,

Exemplo 1C e do padrão interno foram determinadas usando o software Sciex MacQuan™. Curvas de calibração foram derivadas da proporção de área de pico (fármaco precur- sor/padrão interno) de padrões de sangue usando regressão linear dos mínimos quadrados da proporção versus a concentração teórica. Os métodos foram lineares para ambos os compostos sobre a faixa da curva padrão (correlação > 0,99) com um limite de quantificação estimado de 0,1 ng/mL. A concentração máxima no sangue (CMAX) e o tempo para atingir a concentração máxima no sangue (TMAX) foram lidos diretamente a partir dos dados de concentração no sangue-tempo observados. Os dados de concentração no sangue foram submetidos à adaptação de curva multi-exponencial usando CSTRIP para obter estimativas de parâmetros farmacocinéticos. Os parâmetros estimados foram ainda definidos usando NONLIN84. A área sob a curva de concentração no sangue-tempo de 0 a t horas (último ponto de tempo mensurável de concentração no sangue) após dosagem (AUC0.t) foi calcu- lada usando a regra trapezoidal linear para os perfis de tempo-sangue. A área residual ex- trapolada até a infinidade, determinada como a concentração de sangue final medida (Ct) dividido pela constante da taxa de eliminação terminal (β) e adicionada à AUC0.t para produ- zir a área total sob a curva (AUC0-t).

Tabela 2

Composto AUC t1/2 mg/h/m L (hora) Rapamicina 6,87 16,7 2-piridona 2,55 2,8 4-piridona 5,59 13,3 Exemplo 1 2,35 5,0 Exemplo 2 2,38 6,9

Exemplo 3

A finalidade desse exemplo foi determinar os efeitos de um análogo de rapamicina sobre a formação de neoíntimo em artérias coronárias de suínos contendo stents. Esse e- xemplo ilustra que o análogo de rapamicina A-179578 (por exemplo, ABT-578; correspon- dendo à Fórmula 2 da Figura 1), quando composto e distribuído a partir do stent Biocompa- tibles BiodiviYsio PC Coronary, afeta favoravelmente a hiperplasia do neoíntimo e tamanho de lúmen em artérias coronárias de suíno. Essa descoberta sugere que tal combinação po- de ser de benefício clínico substancial se apropriadamente aplicada em seres humanos a- través de limitação de hiperplasia do neoíntimo. O estudo apresentado nesse exemplo foi criado para avaliar a capacidade do aná-

logo de rapamicina A-179578 de reduzir a hiperplasia do neoíntimo em um modelo de stent coronariano suíno. A eficácia de A-179578 nesse modelo sugeriria seu potencial clínico para a limitação e tratamento de restenose coronariana em stents após revascularização percu- tânea. O suíno doméstico foi usado porque esse modelo parece proporcionar resultados comparáveis com outras investigações buscando limitar a hiperplasia do neoíntimo em seres humanos.

O A-179578 exemplificativo testado eluiu de stents coronarianos colocados em por- cos de fazenda jovens e esses resultados comparados com stents de controle. Os stents de controle são revestidos com polímero sem fármaco. Isso é importante, porque o polímero em si não deve estimular hiperplasia do neoíntimo em um grau substancial. À medida que o fármaco eluído desaparece, uma resposta inflamatória ao polímero poderia resultar, conce- bivelmente, em um "fenômeno de catch-up" tardio, onde o processo de restenose não é cessado, mas antes, reduzido. Esse fenômeno resultaria em restenose em datas posteriores em seres humanos.

Stents foram implantados em dois vasos sangüíneos em cada porco. Porcos usa-

dos nesse modelo tinham, em geral, 2-4 meses de idade e pesavam 30-40 kg. Dois stents coronários foram, assim, implantados em cada porco através de avaliação visual em uma proporção de artérias com stent "normal" de 1,1-1,2.

Começando a partir do dia do procedimento, aos porcos foi fornecida aspirina ora! (325 mg ao dia) e continuada durante o restante de seu curso. Anestesia geral foi obtida por meio de injeção intramuscular, seguido por cetamina intravenosa (30 10 mg/kg) e xilazina (3 mg/kg). Medicação adicional no momento de indução incluía atropina (1 mg) e flocilina (1 g) administradas intramuscularmente. Durante o procedimento de colocação de stent, um bolo intra- arterial de 10.000 unidades de heparina foi administrado. Acesso arterial foi obtido através de corte sobre a carótida externa direita e coloca- ção de um protetor 8F. Após o procedimento, os animais foram mantidos sob uma dieta normal sem colesterol ou outra suplementação especial.

O stente BiodivYsio foi usado, com um tamanho alvo de vaso normal de 3,0 mm. Duas artérias coronárias por porco foram atribuídas aleatoriamente ao implante dos stents.

O stent era um stent eluindo fármaco (stent com polímero mais fármaco) ou um stent reves- tido com um polímero apenas (stent com polímero apenas). Os stents foram distribuídos por meio de cateteres e fios guia padrões. Os balões dos stents foram inflados até os tamanhos apropriados durante menos de 30 segundos.

Cada porco tinha um stent com polímero apenas e um stent com polímero mais fármaco colocado em artérias coronárias distintas, de modo que cada porco teria um stent para fármaco e um para controle. Um tamanho de amostra de 20 porcos no total foi escolhi- do para detectar uma diferença projetada na espessura do neoíntimo de 0,2 mm com um desvio padrão de 0,15 mm, em um poder de 0,95 e beta 0,02.

Os animais foram sacrificados a 28 dias para exame histopatológico e quantifica- ção. Após remoção do coração do sistema de bomba de perfusão, o apêndice atrial esquer- do foi removido para acesso às artérias coronárias proximais. Segmentos de artéria coroná- ria com lesões foram dissecados do epicárdio. Segmentos contendo lesões foram isolados, desse modo, permitindo tecido suficiente para conter vaso sangüíneo não envolvido em sua extremidade. Os segmentos precedentes, cada um de aproximadamente 2,5 cm de compri- mento, foram incrustados e processados por meio de técnicas de incrustação em plástico padrões. Os tecidos foram subseqüentemente processados e corados com hematoxilina- eosina e técnicas elásticas de van Gieson.

Microscopia com baixo e alto poder de iluminação foi usada para fazer medições de comprimento no plano de vista microscópico por meio de um retículo calibrado e um sistema de microscopia digital conectado a um computador empregando um software de análise ca- librado.

A gravidade de lesão do vaso e a resposta do neoíntimo foram medidas através de microscopia digital calibrada. A importância da integridade da lâmina elástica interna é bem conhecida por aqueles habilitados na técnica. Um escore de lesão histopatológica nos vasos sangüíneos com stent foi validado como estando intimamente relacionado à espessura do neoíntimo. Esse escore está relacionada à profundidade de lesão e é como segue: 0 é a lâmina elástica interna intacta; endotélio tipicamente desnudo, meio comprimido mas não lacerado; 1 é a lâmina elástica interna lacerada; meio tipicamente comprimido, mas não Ia- cerado; 2 é a lâmina elástica interna lacerada; meio visivelmente lacerado; lâmina elástica externa intacta, mas comprimida; e 3 é a lâmina elástica externa lacerada; tipicamente gran- des lacerações do meio se estendendo através da lâmina elástica externa; fios em espiral algumas vezes residindo no adventício. Essa medição quantitativa de lesão foi avaliada para todos os arames de stent de cada seção de stent. A imagem digital calibrada foi também usada para medir, em cada lo- cal do fio de stent, a espessura do neoíntimo. A área do lúmen, área contida com a lâmina elástica interna e área dentro da lâmina elástica externa foram também medidas. A espessu- ra do neoíntimo foi medida para cada stent em uma determinada seção ao invés da média para determinar a espessura do neoíntimo para a seção. O segmento mediano do stent foi usado para medição, análise e comparação. Os dados também foram registrados (e incluí- dos na seção dados desse relatório) para os segmentos proximal e distai. Os métodos de análise de dados para esse estudo não precisam levar em conta lesão arterial variável atra- vés dos grupos de tratamento/controle, porque lesão branda a moderada é sensível o bas- tante para detectar diferenças de tratamento. T-testagem emparelhada foi realizada para comparar variáveis através dos stents com polímero apenas (grupo de controle) e stents com polímero mais fármaco (grupo de tratamento). Nenhum animal morreu nesse estudo antes dos pontos de tempo esquematizados. A Tabela 3 mostra os porcos e artérias usados. Na Tabela 3, LCX significa o ramo

circunflexo da artéria coronária esquerda, LAD significa a artéria coronária descendente an- terior esquerda e RCA significa a artéria coronária direita.

Tabela 3

Indivíduo Artérias usadas 1 2000-G-693 RCA - Controle LCX - Teste 2 2000-G-698 RCA - Teste LAD - Controle 3 2000-G-702 RCA - Teste LAD - Controle 4 2000-G-709 RCA - Controle LAD - Teste 2000-G-306 RCA - Controle LAD - Teste LCX - Teste 6 2000-G-672 RCA - Teste LAD - Controle 7 2000-G-712 RCA - Controle LCX - Teste 8 2000-G-735 RCA - Control LAD - Teste 9 2000-G-736 RCA - Controle LCX - Teste 2000-G-740 RCA - Teste LAD - Controle 11 2000-G-742 LAD - Teste OM ( LCX) - Controle 12 2000-G-744 RCA - Teste LAD - Control 13 2000-G-748 RCA - Teste LAD - Control 14 2000-G-749 RCA - Control LCX - Test 2000-G-753 RCA - Controle LAD - Teste 16 2000-G-754 RCA - Teste LCX -Controle 17 2000-G-755 RCA - Controle LAD - Teste 18 2000-G-756 RCA - Teste LAD - Controle 19 2000-G-757 LAD - Controle LCX - Teste 2000-G-760 LAD - Teste LCX -Controle

A Tabela 4 mostra os resultados resumidos para todos os dados para lesão média e espessura do neoíntimo para cada stent, incluindo segmentos proximal, mediano e distai. A Tabela 4 também mostra o tamanho do lúmen, estenose percentual e tamanho da artéria, conforme medido pela lâmina elástica interna (IEL) e lâmina elástica externa (EEL).

Tabela 4. Sumário: todas as medidas (Distai, Mediana, Proximal)

Ref. Prox. Ref. Dist. lúmen IEL EEL Média lesão % este- nose Area neo- íntima NIT Contro- le Distai Média 4,46 3,96 4,88 7,66 9,00 0,22 36,10 2,79 0,41 SD 1,20 1,16 1,30 1,15 1,10 0,26 15,41 1,29 0,17 10

Contro- le Mediano Média 4,46 3,96 4,94 7,71 9,08 0,08 36,23 2,77 0,38 SD 1,20 1,16 1,44 1,07 1,15 0,14 14,93 1,20 0,16 Contro- le Proximal Média 4,46 3,96 5,11 7,89 9,30 0,15 35,35 2,78 0,38 SD 1,20 1,16 1,38 1,33 1,42 0,22 11,94 1,04 0,12 Teste Distai Média 4,26 3,41 6,04 7,70 9,01 0,26 22,35 1,66 0,25 SD 1,26 0,96 1,55 1,49 1,47 0,43 8,58 0,58 0,06 Teste Mediano Média 4,26 3,41 6,35 7,75 8,98 0,04 18,71 1,41 0,22 SD 1,26 0,96 1,29 1,18 1,31 0,07 5,68 0,33 0,05 Teste Proximal Média 2,56 2,15 3,31 4,06 4,66 0,19 16,79 1,29 0,18 SD 1,66 1,37 2,39 3,48 4,15 0,13 9,97 0,80 0,12

15

Não houve diferença estatisticamente significativa para a área neoíntima ou a es- pessura através de segmentos proximal, mediano ou distai dentro do grupo de teste (stents com polímero mais fármaco) ou grupos de controle (stents com polímero apenas). Essa ob- servação é muito consistente com estudos anteriores e, assim, permite o uso apenas do segmento mediano para comparação estatística de dispositivos de teste (stents com políme- ro mais fármaco) vs. dispositivos de controle (stents com polímero apenas).

A Tabela 5 mostra as comparações de t-teste estatísticas através dos grupos de teste e grupos de controle. Havia uma diferença estatisticamente significativa na espessura do neoíntimo, área do neoíntimo, tamanho do lúmen e estenose percentual do lúmen, o stent com fármaco sendo claramente favorecido. Inversamente, não existiam diferenças es- tatisticamente significativas entre o grupo de teste (stents com polímero mais fármaco) e o grupo de controle (stents com polímero apenas) para o escore de lesão média, áreas da lâmina elástica externa ou lâmina elástica interna.

Tabela 5: Comparação estatística de parâmetros de teste vs. controle: dados de se- ção mediana Estatística do t-teste Parâmetro Diferença t- teste D F Desvio padrão Abaixo de 95% Acima de 95% P Lúmen -1,17 2,28 38 0,52 -2,21 -0,13 0,029 IEL 0,03 0,08 8 38 0,36 -0,71 0,78 0,93 EEL 0,2 0,49 9 38 0,39 -0,599 0,99 0,62 Espessura do Nl 0,18 5,15 3 38 0,034 0,106 0,244 <0,00 1 Area do Nl 1,21 3,62 38 0,33 0,53 1,88 0,000 8 Lesão mé- dia 0,038 1,13 7 38 0,033 -0,02 0,106 0,26 % estenose 14,54 2,97 38 4,9 4,61 24,47 0,005

As artérias de referência proximal e distai aos segmentos com stent foram observa- das e quantificadas. Esses vasos pareciam normais em todos os casos, sem lesão no grupo de controle (stents com polímero apenas) e no grupo de teste (stents com polímero mais fármaco). Os dados na tabela 6 mostram que não existiam diferenças estatisticamente signi- ficativas no tamanho entre os stents no grupo de controle e os stents no grupo de teste.

Tabela 6

Referência Proximal Diâmetro (mm)

Referência Distai Diâmetro (mm)

Controle (média + SD) Teste

(média + SD)

4,46 ± 1,20 4,26 ± 1,26

3,96 ± 1,16 3,41 + 0,96

Os dados sugerem que existem diferenças estatisticamente significativas e essas diferenças favorecem o stent que elui A-I 79578. O stent da presente invenção resulta em menor área do neoíntimo, menor espessura do neoíntimo e maior área do lúmen. Não exis- tiam diferenças significativas dentro do grupo de teste (stents com polímero mais fármaco) e o grupo de controle (stents com polímero apenas) para os parâmetros do neoíntimo ou le- sões. Não existiam diferenças significativas nos tamanhos das artérias (incluindo o stent) para o grupo de controle comparado com o grupo de teste. Essas últimas descobertas não sugerem diferença significativa nas características de remodelamento arterial do revestimen- to polimérico contendo o fármaco.

No máximo, inflamação branda foi encontrada sobre o stent com polímero mais fármaco e o stent com polímero apenas. Essa descoberta sugere que o polímero exibe bio- compatibilidade satisfatória, mesmo sem carregamento de fármaco. Outros estudos mostram que, quando o fármaco saiu completamente do polímero, o polímero em si cria inflamação suficiente para causar neoíntimo. Esse fenômeno pode ser responsável pelo fenômeno de "catch-up" tardio de restenose clínica tardia. Em virtude do fato de o polímero nesse exem- plo não causar inflamação nas artérias coronárias, problemas tardios relacionados ao polí- mero após o fármaco ter se esgotado são improváveis. Em conclusão, um stent contendo o composto A-179578 com um polímero mostrou

uma redução na hiperplasia do neoíntimo no modelo suíno quando colocado em uma artéria coronária.

Exemplo 4

A finalidade desse exemplo é determinar a taxa de liberação de fármaco A-179578 (ABT-578) de Cupons 316L Electropolished Stainless Steel revestidos com um polímero biocompatível contendo grupos laterais de fosfarilcolina.

Septos de borracha de tampas de frascos de HPLC foram removidos dos frascos e colocados em frascos de vidro, de modo que o lado com "Teflon" estivesse para cima. Esses septos serviam como suportes para as amostras de teste. As amostras de teste eram cu- pons de aço inoxidável 316L que tinham sido previamente revestidos com um polímero bio- compatível contendo grupos laterais de fosfarilcolina (polímero de PC). Stents coronarianos são feitos, comumente, de aço inoxidável 316L e podem ser revestidos com o polímero de PC para proporcionar um local de depósito para carregamento de fármacos. Os cupons re- vestidos, os quais servem para simular stents, foram colocados sobre os septos. Usando uma seringa de Hamilton, uma solução de A-179578 e etanol (10 μΙ) foi aplicada sobre a superfície de cada cupom. A solução continha A-179578 (30,6 mg) dissolvido em etanol a 100% (3,0 ml). A seringa foi limpa com etanol entre cada aplicação. A tampa do frasco de vidro foi colocada sobre o frasco frouxamente, desse modo, assegurando ventilação apro- priada. O cupom foi deixado secar durante um mínimo de 1,5 horas. Doze (12) cupons fo- ram carregados dessa forma, seis sendo usados para determinar a quantidade média de fármaco carregado ao dispositivo e seis sendo usados para medir o tempo necessário para liberar o fármaco dos dispositivos. Para determinar a quantidade total de ABT-578 carregada sobre um cupom, um cu- pom foi removido do frasco e colocado em tampão de acetonitrilo/fosfato a 0,01 M a 50/50 (pH de 6,0, 5,0 ml). O cupom foi colocado sobre um aparelho de ultra-som 5210 Branson durante uma hora. O cupom foi, então, removido da solução e a solução foi ensaiada através de HPLC.

Os estudos de liberação com o tempo foram realizados através de imersão e remoção de cupons individuais de alíquotas frescas (10,0 ml) de tampão de fosfato a 0,01 M em um pH de 6,0 em cada um dos seguintes intervalos de tempo: 5, 15, 30 e 60 minutos. Para os pon- tos de tempo restantes de 120, 180, 240, 300, 360 minutos, volumes de 5,0 ml de tampão foram usados. Para facilitar a mistura durante a fase de liberação de fármaco, as amostras foram colocadas sobre um agitador Eberbach ajustado em baixa velocidade. Todas as alí- quotas de solução foram ensaiadas através de HPLC após a testagem da última amostra ter sido terminada.

A análise por HPLC foi realizada com um instrumento Hewlett Packard série 1100 tendo os seguintes ajustes: volume de injeção é de 100 μΙ; tempo de aquisição é de 40 mi- nutos; taxa de fluxo é de 1,0 ml/min; temperatura da coluna é de 40 graus Celsius; compri- mento de onda é de 278 nm; fase móvel é Acetonitrilo a 65%/H20 a 35%; e coluna é YMC ODS-A S, 5 μίτι, 4,6 χ 250 mm (Parte No. A12052546WT).

Tabela 7

Tempo (min.) Liberação percentual Desvio padrão 0,00 0,00 0,00 5,00 1,87 1,12 15,00 2,97 1,47 30,00 3,24 1,28 60,00 3,29 1,29 120,00 3,92 1,28 180,00 4,36 1,33 240,00 4,37 1,35 300,00 6,34 2,07 360,00 7,88 1,01

Exemplo 5

A finalidade desse exemplo foi determinar o carregamento e liberação de ABT-578 de stents de distribuição de fármaco BiodivYsio de 15 mm. Para carregar os stents com fár- maco, uma solução de ABT-578 em etanol em uma concentração de 50 mg/ml foi preparada e distribuída em doze frascos. Doze stents revestidos de polímero individuais foram coloca- dos sobre suportes criados para sustentar o stent em uma posição vertical e os stents foram imersos verticalmente na solução de fármaco durante cinco minutos. Os stents e suportes foram removidos dos frascos e a solução de fármaco em excesso foi seca através de contato dos stents com um material absorvente. Os stents foram, então, deixados secar ao ar duran- te 30 minutos em uma posição vertical invertida.

Os stents foram removidos dos suportes e cada stent foi colocado em tampão de acetonitrilo/fosfato a 50/50 (pH de 5,1, 2,0 ml) e submetido a ultra-som durante uma hora. Os stents foram removidos da solução e as soluções foram ensaiadas com relação à con- centração de fármaco, permitindo cálculo da quantidade de fármaco originalmente sobre os stents. Esse método mostrou, independentemente, remover pelo menos 95% do fármaco do revestimento do stent. Em média, os stents continham 60 microgramas de fármaco ± 20 mi- crogramas.

Os stents revestidos com fármaco foram colocados sobre os suportes e colocados em tampão de fosfato a 0,01 M (pH = 6,0, 1,9 ml) em frascos individuais. Essas amostras foram colocadas sobre um agitador de Eberbach ajustado em baixa velocidade para propor- cionar agitação para frente e para trás. Para evitar aproximação da saturação de fármaco no tampão, os stents foram transferidos periodicamente para frascos com tampão fresco nos seguintes pontos de tempo: 15, 30, 45, 60, 120, 135, 150, 165, 180, 240, 390 minutos. Os frascos com tampão de dissolução foram ensaiados através de HPLC com relação à con- centração de fármaco no final do período de liberação de fármaco estudado. Os dados, re- presentados como liberação cumulativa % de fármaco como uma função do tempo, são mostrados na tabela abaixo:

Tabela 8

Tempo (min) Liberação cumulativa % de fármaco 0,3 1,1 45 2,1 60 3,2 120 4,3 135 5,9 150 6,3 165 6,8 180 7,4 240 10,8 390 13,2

Exemplo 6

A finalidade desse exemplo foi avaliar a segurança e eficácia de diferentes dosa- gens de fármaco sobre a formação de neoíntimo. Fármaco foi distribuído a partir do stent BiodivYsio OC (15 mm) revestido com ABT-578. A formação de neoíntimo no stent foi medi- da em quatro intervalos de tempo: 3 dias, 1 mês e 3 meses nas artérias coronárias de suí- nos miniatura adultos. Quarenta (40) animais foram estudados em cada intervalo de tempo (10 animais por dose). Cada animal recebeu um stent revestido de fármaco e um stent de controle. O stent de controle não continha fármaco. A Tabela 9 mostra o esquema de dosa- gem para estudo de eficácia em suínos.

Tabela 9

Grupo de do- se 1 (jig) Grupo de dose 2 ^g) Grupo de dose 3 ^g) Grupo de dose 4 ^g) ABT-578 por stent 15 45 150 400 ABT-578 por mm de stent 1 3 10 27

A toxicidade tecid

empo

uai local potencial foi avaliada em todos os intervalos de examinando alterações histopatológicas na região com stent, segmentos coronários adja- centes, tecido perivascular e miocárdio subjacente. A mortalidade, implante angiográfico e dados de estudo, dados de histomorfometria e histopatologia do local com stent foram estu- dados.

O stent revestido com ABT-578 reduziu a formação de neoíntimo em artérias coro- nárias de suíno e forneceu evidência clara de um efeito biológico do fármaco (trombo não reabsorvido/depósitos de fibrina no neoíntimo) em um mês. Houve uma fraca tendência de que o stent revestido com ABT-578 mostrasse um efeito inibitório persistente em um interva- lo de tempo a longo prazo de três meses. Não houve toxicidade local para a parede da arte- rial coronária na forma de necrose ou mal posicionamento do stent associada a qualquer grupo de dose, incluindo a maior dose de aproximadamente 27 g/mm de comprimento do stent em qualquer intervalo de tempo examinado. Todos os stents foram bem incorporados no tecido e não houve evidência de respostas de cicatrização estável na forma de incorpo- ração de neoíntimo fibrocelular e cobertura endotelial no intervalo de um mês e no intervalo de três meses. A tendência a um efeito inibitório sustentado em três meses após o stent ter sido implantado nesse animal é surpreendente e fornece evidência de efeitos potencialmen- te persistentes na prevenção de restenose clínica resultante de stents implantados.

Exemplo 7

Cristais de análogo de rapamicina foram preparados através de cristalização do análogo em uma mistura bifásica. Resumidamente, ABT-578 foi adicionado a um frasco contendo 0,23 g de acetona e 0,82 g de heptano e incubados a 0 graus Celsius de modo a saturar a fase líquida. A mistura foi incubada até que um desvio de fase líquido-líquido ocorresse, à medi- da que o ABT-578 dissolvia na solução de acetona, resultando em uma fase inferior rica em ABT-578-acetona e uma fase superior rica em heptano. A mistura bifásica foi incubada a 0 graus Celsius durante 10 dias, tempo no qual cristais de análogo de rapamicina foram ob- servados no fundo do frasco. A Figura 2A mostra o padrão de difração de pó por raios X (PXRD).

O solvato de acetona foi analisado com relação à informação cristalográfica perti- nente, a qual é incluída na Tabela 10. Foi determinado que as moléculas de solvente ao lon- go do eixo c separam as moléculas de ABT-578. As moléculas de solvente estavam razoa- velmente desordenadas, mas elas aparecem como se existissem quatro moléculas de ace- tona e duas moléculas de água por ABT-578. As moléculas de ABT-578 interagem via intera- ções de Van der Waal ao longo dos eixos a e b.

Tabela 10: Informação cristalográfica do solvato de acetona

Parâmetro ABT-578 Sistema de cristal Orto-rômbico Grupo espacial P2Í2I2; a, Â 12,245 b,Â 17,401 c, A 33,356 Volume, (A3) 7107 Pcalc (g/Cm"3) 1,120

Exemplo 8

Cristais de solvato de tolueno de ABT-578 foram gerados através do seguinte pro- cedimento. Uma solução clara foi preparada através de dissolução de 100 mg de ABT-578 amorfo em 300 mg de tolueno. A solução foi agitada a 22 graus Celsius durante 15 horas, quando do que uma pasta espessa de sólidos cristalinos foi observada. A Figura 4A mostra o difração de pó de raios X de cristais de solvato de tolueno preparados usando sólidos do preparo acima como sementes.

Exemplo 9

Cristais de solvato desolvatado de acetonitrilo de ABT-578 foram gerados através de saturação de acetonitrilo com ABT-578 amorfo a 22 graus Celsius e, então, incubação da solução saturada a 0 graus Celsius durante 2 horas. A Figura 5A mostra o padrão de difra- ção de pó por raios X dos cristais. Os cristais podem, então, ser secos para formar um de- solvato de acetonitrilo e a Figura 6C mostra os dados de análise termogravimétrica para o desolvato. Exemplo 10

Cristais de solvato de formato de etila de ABT-578 foram gerados transformando em pasta um bolo úmido de solvato de acetonitrilo em formato de etila a 0 graus Celsius. As Figuras 7A e 7C mostram o padrão de difração de pó por raios e análise termogravimétrica dos cristais, respectivamente. Exemplo 11

Cristais de solvato de acetato de isopropila de ABT-578 foram gerados transfor- mando em pasta um bolo úmido de solvato de acetonitrilo em acetato de isopropila a 0 graus Celsius.

Exemplo 12

Cristais de ABT-578 foram preparados através de adição de 380 mg de ABT-578 amorfo a um frasco e carregando 870 mg de acetato de isobutila ao mesmo para permitir dissolução. Esse foi incubado a 0 graus Celsius durante 16 horas, quando do que uma pasta cristalina foi obtida. As Figuras 9A e 9C mostram o padrão de difração de pó por raios X e análise termogravimétrica dos cristais, respectivamente.

Exemplo 13

Cristais de solvato de etanol de ABT-578 foram preparados através de adição de 417 mg de ABT-578 amorfo a um frasco e carregando 315 mg de etanol (200 proof) ao mesmo para permitir dissolução. Esse foi cultivado após 15 horas com o solvato desolvata- do de acetonitrilo e incubado a 0 graus Celsius durante mais 16 horas, quando do que uma pasta cristalina foi obtida.

Exemplo 14

Cristais de solvato de N1N dimetil formamida de ABT-578 gerados através de trans- formação em pasta de um bolo úmido de solvato de acetonitrilo em N1N dimetil formamida a graus Celsius. As Figuras 10A e 10B mostram o padrão de difração de pó por raios X e aná- lise termogravimétrica dos cristais, respectivamente.

Exemplo 15

Cristais de solvato de anisola de ABT-578 foram gerados transformando em pasta um bolo úmido de solvato de acetonitrilo em anisola a 0 graus Celsius. As Figuras 11A e 11C mostram o padrão de difração de pó por raios X e análise termogravimétrica dos cris- tais, respectivamente.

Exemplo 16

Um análogo de rapamicina cristalino na forma de solvato de acetona foi preparado através de dissolução de aproximadamente 120 mg de análogo de rapamicina amorfo em 200 uL de acetona em temperatura ambiente e incubação da solução resultante a 5 graus Celsius durante 14 horas ou até que cristais cristalinos fossem observados em uma pasta cristalina. Os cristais foram analisados através de difração de pó por raios X, o qual é mos- trado na Figura 2B. Os cristais foram equilibrados em temperatura ambiente, seguido por secagem adicional a 30 graus Celsius sob vácuo (aproximadamente 3 polegadas de mercú- rio). Os cristais secos foram, então, analisados através de difração de pó por raios X, o qual é mostrado na Figura 3B.

Exemplo 17 Um análogo de rapamicina cristalino na forma de um solvato de tolueno foi prepa- rado através de dissolução de aproximadamente 220 mg de análogo de rapamicina amorfo em aproximadamente 400 uL de tolueno a 45 graus Celsius para formar uma solução. A solução foi incubada a 5 graus Celsius durante cerca de 1 hora ou até que sólidos cristalinos pudessem ser observados. A Figura 4B é o padrão de difração do solvato de tolueno. Um padrão de difração de um solvato de tolueno desolvatado é mostrado na Figura 4E. Os cris- tais desolvatados foram obtidos permitindo que os cristais de solvato equilibrassem em tem- peratura ambiente, seguido por secagem adicional a 30 graus Celsius sob vácuo (aproxima- damente 3 polegadas de mercúrio). A perda de tolueno quando de aquecimento pode ser descrita em 3 estágios. No

primeiro estágio, a perda de tolueno é em uma temperatura abaixo de 90 graus Celsius. O segundo estágio é em temperaturas de 90 graus Celsius a 130 graus Celsius e o último es- tágio é após fusão, > 150 graus Celsius. Portanto, o solvato de tolueno desolvatado cristali- no obtido através de secagem é um produto parcialmente desolvatado. A estrutura de um único cristal de solvato de tolueno por raios X foi determinada. A informação cristalográfica é listada na Tabela 11.

Tabela 11: Informação cristalográfica do solvato de tolueno de ABT-578

Solvato de tolueno de ABT-578 τ/κ 293 Grupo espacial P2i Sistema de cristal monoclínico a/A 17,649(5) b/A 12,299(3) c/A 17,785(4) βΤ 113,518(4) V/A3 3539,83 Z 2 Pcaic (g/cm 3) 1,138

O toluenato de ABT-578 cristaliza no espaço quiral P2, e existem duas moléculas de ABT-578 em cada célula unitária. A Figura 4C mostra a estrutura de um único cristal por raios X do solvato de tolueno de ABT-578, o qual foi obtido usando radiação alfa k- molibdênio (0,070930). Conforme pode ser observado a partir da estrutura, em cada unida- de assimétrica do cristal, existem três moléculas de tolueno e uma molécula de Zotarolimus. Assim, o solvato de tolueno é um tri tri-toluenato. Dentre as três moléculas de tolueno (Ta, Tb e Tc), Ta e Tb têm contatos curtos com a molécula de ABT-578 (isto é, interações C-H...π e C=O...H-C=C). Tc interage com as moléculas circundantes apenas via uma força de Van der Waal fraca. De modo interessante, na estrutura de cristal do solvato de tolueno, existem canais de solvente ao longo do eixo b, conforme mostrado na Figura 4D. As moléculas de tolueno Ta e Tc estão mais expostas no canal e espera-se que sejam removidas de modo relativamente mais fácil dos cristais. Por outro lado, a molécula de tolueno Tb está semi- encerrada em uma cavidade circundada por moléculas de ABT-578. Portanto, para essas três moléculas de tolueno diferente, Tb se liga hermeticamente, Ta se liga moderadamente e Tc se liga frouxamente às moléculas de ABT-578. Isso explica o fato de que o solvato de tolueno mostra perda gradual de tolueno quando de secagem/aquecimento e que remoção completa de tolueno dos cristais é difícil de obter. Isso também explica a retração da látice de cristal ao longo do eixo a quando de secagem, conforme evidenciado pela alteração no padrão de PXRD de desolvatação do solvato de tolueno, conforme mostrado na Figura 4F.

Exemplo 18

Um análogo de rapamicina cristalino na forma de um solvato de acetonitrilo foi pre- parado através de dissolução de aproximadamente 100 mg de análogo de rapamicina amor- fo em 200 uL de acetonitrilo a 45 graus Celsius e incubação em cerca de -12 graus Celsius durante cerca de 30 horas, após o que a solução foi cultivada com uma quantidade vestigial de cristais de solvato de tolueno. Sólidos cristalinos se formaram após cultura através de incubação adicional a -12 graus Celsius. Os cristais podem, então, ser analisados através de difração de pó por raios X, o qual é mostrado pela Figura 5B. Os cristais foram equilibra- dos em temperatura ambiente, seguido por secagem adicional a 30 graus Celsius sob vácuo (aproximadamente 3 polegadas de mercúrio). Os cristais secos podem ser analisados atra- vés de difração de pó por raios X, o qual é mostrado na Figura 6B.

Exemplo 19

Um análogo de rapamicina cristalino na forma de um solvato de formato de etila foi preparado através de dissolução de aproximadamente 100 mg de análogo de rapamicina amorfo em 200 uL de formato de etila a 45 graus Celsius e incubação em cerca de 5 graus Celsius durante cerca de 14 horas ou até que cristais se formassem. Figura 7B é o padrão de difração do solvato de formato de etila. O padrão de difração do desolvato de formato de etila é mostrado pela Figura 8. Os cristais desolvatados foram obtidos permitindo que os cristais de solvato equilibrassem em temperatura ambiente, seguido por secagem adicional a 30 graus Celsius sob vácuo (aproximadamente 3 polegadas de mercúrio).

Exemplo 20

Um análogo de rapamicina cristalino na forma de um solvato de acetato de isopropi- Ia foi preparado através de dissolução de aproximadamente 100 mg de análogo de rapami- cina amorfo em aproximadamente 200 uL de acetato de isopropila em temperatura ambien- te. A solução foi incubada a 5 graus Celsius durante 14 horas ou até que sólidos cristalinos fossem observados. O padrão de difração do solvato de acetato de isopropila é mostrado pela Figura 17A. Os cristais desolvatados foram obtidos permitindo que os cristais de solva- to equilibrassem em temperatura ambiente, seguido por secagem adicional a 30 graus Cel- sius sob vácuo (aproximadamente 3 polegadas de mercúrio). A Figura 17B mostra os pa- drões de difração de pó por raios X do solvato desolvatado.

Exemplo 21

Um análogo de rapamicina cristalino na forma de um solvato de acetato de isobutila foi preparado através da adição de aproximadamente 400 mg de análogo de rapamicina amorfo a um frasco e carregando aproximadamente 870 mg de acetato de isobutila no fras- co para permitir dissolução em temperatura ambiente. A solução foi, então, incubada a cerca de 20 graus Celsius durante cerca de 16 horas ou até que uma pasta cristalina fosse obtida. Os cristais foram, então, analisados através de difração de pó por raios X, o qual é mostrado pela Figura 9B.

Exemplo 22

Um análogo de rapamicina cristalino na forma de solvato de etanol foi preparado a- través de dissolução de aproximadamente 100 mg de análogo de rapamicina amorfo em 400 uL de etanol (200 proof) a 45 graus Celsius e incubação a aproximadamente 5 graus Celsius durante 14 horas ou até que cristais se formassem. A Figura 12A é o padrão de difração do solvato. Os cristais desolvatados foram obtidos permitindo que os cristais de solvato equili- brassem em temperatura ambiente, seguido por secagem adicional a 30 graus Celsius 30 sob vácuo (aproximadamente 3 polegadas de mercúrio). A Figura 12B mostra os padrões de difração de pó por raios X do solvato desolvatado.

Exemplo 23

Cristais de solvato de metanol de ABT-578foram preparados através de dissolução de 93 mg de ABT-578 amorfo em 200 uL de metanol em temperatura ambiente e armaze- namento a -12 graus Celsius durante 30 horas antes de cultivados com uma quantidade vestigial de cristais de solvato de tolueno. Sólidos cristalinos se formaram após cultura atra- vés de incubação adicional a -12 graus Celsius. A Figura 13A e 13B mostram os padrões de difração de pó por raios X dos cristais de solvato e o solvato desolvatado, respectivamente. Os cristais desolvatados foram obtidos permitindo que os cristais de solvato equilibrassem em temperatura ambiente, seguido por secagem adicional a 30 graus Celsius sob vácuo (aproximadamente 3 polegadas de mercúrio).

Exemplo 24

Cristais de solvato de acetato de etila de ABT-578foram preparados através de dis- solução de 103 mg de ABT-578 amorfo em 200 uL de acetato de etila em temperatura am- biente e armazenamento a -12 graus Celsius durante 30 horas antes de cultivados com uma quantidade vestigial de cristais de solvato de tolueno. Sólidos cristalinos se formaram após cultura através de incubação adicional a -12 graus Celsius. As Figuras 14A e 14B mostram os padrões de difração de pó por raios X dos cristais de solvato e o solvato desolvatado cor- respondente, respectivamente. Os cristais desolvatados foram obtidos permitindo que os cristais de solvato equilibrassem em temperatura ambiente, seguido por secagem adicional a 30 graus Celsius sob vácuo (aproximadamente 3 polegadas de mercúrio).

Exemplo 25

Cristais de solvato de metil isopropil cetona de ABT-578foram preparados através

de dissolução de 96 mg de ABT-578 amorfo em 200 uL de metil isopropil cetona em tempe- ratura ambiente e armazenamento a -12 graus Celsius durante 30 horas antes de cultivados com uma quantidade vestigial de cristais de solvato de tolueno. Sólidos cristalinos se forma- ram após cultura através de incubação adicional a -12 graus Celsius. As Figuras 15A e 15B mostram o padrão de difração de pó por raios X dos cristais de solvato e o solvato desolva- tado correspondente, respectivamente. Os cristais desolvatados foram obtidos permitindo que os cristais de solvato equilibrassem em temperatura ambiente, seguido por secagem adicional a 30 graus Celsius sob vácuo (aproximadamente 3 polegadas de mercúrio).

Exemplo 26

Cristais de solvato de nitrometano de ABT-578 foram preparados através de disso-

lução de 100 mg de ABT-578 amorfo em 200 uL de nitrometano em temperatura ambiente e armazenamento a -12 graus Celsius durante 30 horas antes de cultivados com uma quanti- dade vestigial de cristais de solvato de tolueno. Sólidos cristalinos se formaram após cultura através de incubação adicional a -12 graus Celsius. Solvato de nitrometano de ABT-578 desolvataram facilmente em temperatura ambiente e apareceram como uma fase semi- cristalina na análise do padrão de difração de pó por raios X (Figura 16).

Exemplo 27

Cristais de solvato de propionitrilo de ABT-578foram preparados através de dissolu- ção de 108 mg de ABT-578 amorfo em 200 uL de propionitrilo a 45 graus Celsius e armaze- namento a -12 graus Celsius durante 30 horas antes de cultivados com uma quantidade vestigial de cristais de solvato de tolueno. Sólidos cristalinos se formaram após cultura atra- vés de incubação adicional a -12 graus Celsius. A Figura 18A mostra os padrões de difração de pó por raios X dos cristais de solvato e desolvatação dos cristais proporcionou uma fase semi-cristalina. Os cristais desolvatados foram obtidos permitindo que os cristais de solvato equilibrassem em temperatura ambiente, seguido por secagem adicional a 30 graus Celsius sob vácuo (aproximadamente 3 polegadas de mercúrio). A Figura 18B mostra os padrões de difração de pó por raios X do solvato desolvatado.

Exemplo 28

Cristais de solvato de metil etil cetona de ABT-578foram preparados através de dis- solução de 94 mg de ABT-578 amorfo em 200 uL de metil etil cetona em temperatura ambi- ente e armazenamento a -12 graus Celsius durante 30 horas antes de cultivados com uma quantidade vestigial de cristais de solvato de tolueno. Sólidos cristalinos se formaram após cultura através de incubação adicional a -12 graus Celsius. A Figura 19A mostra o padrão de difração de pó por raios X dos cristais de solvato e desolvatação dos cristais proporcio- nou uma fase semi-cristalina. Os cristais desolvatados foram obtidos permitindo que os cris- tais de solvato equilibrassem em temperatura ambiente, seguido por secagem adicional a 30 graus Celsius sob vácuo (aproximadamente 3 polegadas de mercúrio). A Figura 19B mostra os padrões de difração de pó por raios X do solvato desolvatado.

Exemplo 29

Cristais de solvato de tetrahidrofurano de ABT-578 foram preparados através de dissolução de 107 mg de ABT-578 amorfo em 200 uL de tetrahidrofurano em temperatura ambiente e armazenamento a -12 graus Celsius durante 30 horas antes de cultivados com uma quantidade vestigial de cristais de solvato de tolueno. Sólidos cristalinos se formaram após cultura através de incubação adicional a -12 graus Celsius. A Figura 20A mostra o pa- drão de difração de pó por raios X dos cristais e desolvatação dos cristais proporcionou uma fase semi-cristalina. Os cristais desolvatados foram obtidos permitindo que os cristais de solvato equilibrassem em temperatura ambiente, seguido por secagem adicional a 30 graus Celsius sob vácuo (aproximadamente 3 polegadas de mercúrio). A Figura 20B mostra os padrões de difração de pó por raios do solvato desolvatado.

Exemplo 30

Cristais de solvato de 1,2-dimetóxietano de ABT-578 foram preparados através de dissolução de 110 mg de ABT-578 amorfo em 200 uL de 1,2-dimetóxietano em temperatura ambiente e armazenamento a -12 graus Celsius durante 30 horas antes de cultivados com uma quantidade vestigial de cristais de solvato de tolueno. Sólidos cristalinos se formaram após cultura através de incubação adicional a -12 graus Celsius. A Figura 21A mostra o pa- drão de difração de pó por raios X dos cristais de solvato e desolvatação dos cristais propor- cionou uma fase semi-cristalina. Os cristais desolvatados foram obtidos permitindo que os cristais de solvato equilibrassem em temperatura ambiente, seguido por secagem adicional a 30 graus Celsius sob vácuo (aproximadamente 3 polegadas de mercúrio). A Figura 21B mostra os padrões de difração de pó por raios X do solvato desolvatado.

Embora a invenção tenha sido descrita, divulgada e ilustrada e mostrada em vários termos de determinadas modalidades ou modificações as quais ela tem assumido na práti- ca, o escopo da invenção não se destina a ser, nem deve ser considerado como estando limitado pelas mesmas e essas outras modificações e modalidades, conforme possa ser sugerido pelos ensinamentos aqui, são particularmente reservadas, especialmente uma vez que elas caem dentro do espírito e escopo das reivindicações aqui em anexo. Adicionalmen- te, todas as publicações citadas aqui são aqui incorporadas por referência.

Claims

1. Composição de análogo de rapamicina, CARACTERIZADA pelo fato de compre- ender uma forma cristalina de um análogo de rapamicina.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina tem uma estrutura de Fórmula 1, que é opcionalmente um fármaco, sal, derivado, ou combinação deste; <formula>formula see original document page 63</formula>

3. Composição, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina tem uma estrutura de Fórmula 2:

4. Composição, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina tem uma estrutura de Fórmula 3: <formula>formula see original document page 64</formula>

5. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o cristal é um solvato.

6. Composição, de acordo com a reivindicação 5, CARACTERIZADA pelo fato de que o solvato de análogo de rapamicina é selecionado do grupo consistindo de acetona, acetato de etila, metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, isobutanol, tertbutanol, 2-butanol, acetonitrila, tetrahidrofurano, acetato de isobutila, acetato de n-butila, formato de etila, aceta- to de n-propila, acetato de isopropila, metiletil cetona, tolueno, Ν,Ν-dimetil formamida, anisol, metil isopropil cetona, nitrometano, propionitrila, 2-butanona (isto é, metil etil cetona ou MEK), tetrahidrofurano, 1,2-dimetóxietano, acetato de isopropila, e qualquer combinação destes.

7. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o cristal é um dessolvato.

8. Composição, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADA pelo fato de que o cristal é um dessolvato de um solvente orgânico selecionado do grupo consistindo de acetona, acetato de etila, metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, isobutanol, tertbutanol, 2- butanol, acetonitrila, tetrahidrofurano, acetato de isobutila, acetato de n-butila, formato de etila, acetato de n-propila, acetato de isopropila, metiletil cetona, tolueno, Ν,Ν-dimetil for- mamida, anisol, metil isopropil cetona, nitrometano, propionitrila, 2-butanona (isto é, metil etil cetona ou MEK), tetrahidrofurano, 1,2-dimetóxietano, acetato de isopropila, e qualquer com- binação destes.

9. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,2, 9,1, e/ou 13,2.

10. Composição, de acordo com a reivindicação 9, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 2A.

11. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,3, 5,5, 10,6, 13,3 e/ou 16,0.

12. Composição, de acordo com a reivindicação 11, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 2B.

13. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,3, 10,2, 10,5 e/ou 13,3.

14. Composição, de acordo com a reivindicação 13, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 3A.

15. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,3, e/ou 12,6.

16. Composição, de acordo com a reivindicação 15, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 3A.

17. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,4, 5,9, 9,9, 13,8 e/ou 15,5.

18. Composição, de acordo com a reivindicação 17, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 4A ou Fi- gura 4B.

19. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,2, 5,6, 6,0 ,7,3, 10,0, e/ou 21,5.

20. Composição, de acordo com a reivindicação 19, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 5A.

21. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,3, 10,6, 12,8, 13,3, 15,9, 16,7, 21,3 e/ou 21,9.

22. Composição, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 5B.

23. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 3,9, 8,7, 9,5, 13,8, 15,7, e/ou 16,9.

24. Composição, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 6A.

25. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,2, 10,4, 11,9, 12,5, 15,4, 18,5, e/ou 21,5.

26. Composição, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 6B.

27. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,9, 7,7, 9,1, 10,0 e/ou 10,5.

28. Composição, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 7A.

29. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,3, 5,5, 10,6, 15,9, 16,5, e/ou 19,2.

30. Composição, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 7B.

31. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,0, 7,0, 9,1, 10,1, 15,4, e 16,0.

32. Composição, de acordo com a reivindicação 31, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 9A ou Fi- gura 9B.

33. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,1, 7,2, 9,0, 9,2, 10,3, 11,5, 15,7, e 16,3.

34. Composição, de acordo com a reivindicação 33, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 10A ou Figura 10B.

35. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,1, 8,9, 9,4, 10,0, 10,2, e 12,2.

36. Composição, de acordo com a reivindicação 35, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 11A ou Figura 11B.

37. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,4, 6,0, 8,8, 10,0, 12,1, 14,1, 17,6, 18,4, e/ou 19,0.

38. Composição, de acordo com a reivindicação 37, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 13A.

39. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,2, 10,5, 13,3, 15,8, 16,5, e/ou 19,1.

40. Composição, de acordo com a reivindicação 39, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 14A.

41. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,4, 10,8, 11,8, 16,9, e/ou 17,9.

42. Composição, de acordo com a reivindicação 41, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 16.

43. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,1, 10,2, 16,3, 17,1, 19,2, 20,1, e/ou 20,5.

44. Composição, de acordo com a reivindicação 43, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 15A.

45. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,3, 7,2, 10,5, 15,8, 16,6, 19,1, e/ou 21,2.

46. Composição, de acordo com a reivindicação 45, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 12A.

47. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,2, 10,5, 10,8, 15,7, 16,5, e/ou 19,0.

48. Composição, de acordo com a reivindicação 47, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 17A.

49. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,8, 9,6, 11,7, 13,6, 15,9, 17,4, 20,6, e/ou 23,5.

50. Composição, de acordo com a reivindicação 49, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 18A.

51. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,3, 10,5, 13,3, 15,8, e/ou 16,6.

52. Composição, de acordo com a reivindicação 51, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 19A.

53. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 4,6, 5,2, 9,3, 16,5, 17,0, e/ou 18,6.

54. Composição, de acordo com a reivindicação 53, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 20A.

55. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,3, 10,1, 10,5, 15,8, 16,5, 19,1, 19,6, e/ou 21,1.

56. Composição, de acordo com a reivindicação 55, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 21 A.

57. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,9, 6,2, 9,1, 9,8, 12,5, 13,6, 16,4, 17,7, 17,9, e/ou 21,8.

58. Composição, de acordo com a reivindicação 57, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 4E.

59. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,2, 9,1, 10,5, 12,5, 14,3, 16,5, 18,0, 20,1, 21,8, e/ou 22,2.

60. Composição, de acordo com a reivindicação 59, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 13B.

61. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,6, 7,1, 8,6, 9,1, 12,6, 14,5, e/ou 15,0.

62. Composição, de acordo com a reivindicação 61, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 14B.

63. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,1, 6,2, 10,2, 12,4, 16,4, e/ou 17,2.

64. Composição, de acordo com a reivindicação 63, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 15B.

65. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,2, 12,5, e/ou 15,4.

66. Composição, de acordo com a reivindicação 65, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 8.

67. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,3, 9,2, 12,7, 13,8, e/ou 16,1.

68. Composição, de acordo com a reivindicação 67, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 12B.

69. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,5, 6,1, 8,0, 10,5, 12,6, 13,6, 16,6, e/ou 19,5.

70. Composição, de acordo com a reivindicação 69, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 17B.

71. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,4, 6,8, 9,3, 13,8, e/ou 16,8.

72. Composição, de acordo com a reivindicação 71, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 18B.

73. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,3, 8,1, 12,7, e/ou 16,5.

74. Composição, de acordo com a reivindicação 73 CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 19B.

75. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 3,8, 6,0, 9,2, 9,9, 11,8, 12,4, e/ou 13,7.

76. Composição, de acordo com a reivindicação 75, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 20B.

77. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o análogo de rapamicina cristalino tem um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,6, 7,1, 9,2, 14,6, e/ou 15,2.

78. Composição, de acordo com a reivindicação 77, CARACTERIZADA pelo fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente como na Figura 21B.

79. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que análogo de rapamicina cristalino está presente em uma quantidade terapeuticamente eficaz.

80. Processo de preparação de um análogo de rapamicina na forma cristalina, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: combinar o análogo de rapamicina com pelo menos um meio orgânico para formar uma mistura; incubar a mistura até que o análogo de rapamicina cristalize; e recuperar o análogo de rapamicina cristalino do meio orgânico.

81. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO pelo fato de que o meio orgânico é compreendido de pelo menos um solvente orgânico para formar a mistura; fazendo o análogo de rapamicina dissolver no solvente orgânico; e incubando o solvente até que o análogo de rapamicina cristalize.

82. Processo, de acordo com a reivindicação 81, CARACTERIZADO pelo fato de que ainda compreende: combinar pelo menos um antisolvente com o análogo de rapamicina e o solvente para formar uma mistura bifásica; e incubar a mistura bifásica para causar uma separação de fase líquido-líquido com a maior parte do análogo de rapamicina estando no solvente e a menor parte do análogo ra- pamicina estando no antisolvente.

83. Processo, de acordo com a reivindicação 82, CARACTERIZADO pelo fato de que ainda compreende separar o solvente orgânico do antisolvente.

84. Processo, de acordo com a reivindicação 81, CARACTERIZADO pelo fato de que o solvente orgânico é um solvente orgânico polar.

85. Processo, de acordo com a reivindicação 81, CARACTERIZADO pelo fato de que o solvente orgânico compreende pelo menos um de acetona, acetato de etila, metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, isobutanol, tertbutanol, 2-butanol, acetonitrila, tetrahidrofu- rano, acetato de isobutila, acetato de n-butila, formato de etila, acetato de n-propila, acetato de isopropila, metiletil cetona, tolueno, Ν,Ν-dimetil formamida, anisol, metil isopropil cetona, nitrometano, propionitrila, 2-butanona, metil etil cetona, tetrahidrofurano, 1,2-dimetóxietano, ou qualquer combinação destes.

86. Processo, de acordo com a reivindicação 82, CARACTERIZADO fato de que o antisolvente compreende pelo menos um de ciclohexano, heptano, n-octano, isso-octano, metilciclohexano, ou qualquer combinação dos mesmos.

87. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que a incubação é conduzida a temperatura de cerca de -10°C a cerca de 10°C.

88. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a formação de uma pasta fluida de análogo de rapamicina cris- talina.

89. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente ativar a referida mistura antes que o análogo de rapamicina cristalize.

90. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a saturação da mistura.

91. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que o análogo de rapamicina combinado com meio orgânico está em uma forma cristalina.

92. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente uma combinação entre a mistura e um segundo meio orgânico, e onde a mistura está incubada inclui um segundo meio orgânico.

93. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que o análogo de rapamicina combinado com meio orgânico está em uma forma amorfa.

94. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que o meio orgânico é um solvente farmaceuticamente aceitável que é aceitável para a prepara- ção de uma composição de grade farmacêutica.

95. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,2, 9,1 e/ou 13,2.

96. Processo, de acordo com a reivindicação 95, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 2A.

97. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,3, 5,5, 10,6, 13,3 e/ou 16.

98. Processo, de acordo com a reivindicação 97, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 2B.

99. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,3, 10,2, 10,53,3 e/ou 13,3.

100. Processo, de acordo com a reivindicação 99, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 3A.

101. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,3 e/ou 12,6.

102. Processo, de acordo com a reivindicação 102, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 3B.

103. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,4, 5,9, 9,9, 13,8 e/ou 15,5.

104. Processo, de acordo com a reivindicação 103, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 4A ou figu- ra 4B.

105. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,2, 5,6, 6,0, 7,3, 10,0 e/ou 21,5.

106. Processo, de acordo com a reivindicação 105, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 5A.

107. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,3, 10,6, 12,8, 13,3, 15,9, 16,7, 21,3 e/ou 21,9.

108. Processo, de acordo com a reivindicação 107, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 5B.

109. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 3,9, 8,7, 9,5, 13,8, 15,7 e/ou 16,9.

110. Processo, de acordo com a reivindicação 109, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 6A.

111. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,2, 10,4, 11,9,12,5,15,4, 18,5 e/ou 21,5.

112. Processo, de acordo com a reivindicação 111, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 6B.

113. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,9, 7,7, 9,1, 10,0 e/ou 10,5.

114. Processo, de acordo com a reivindicação 113, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 7A.

115. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de5,3, 5,5, 10,6, 15,9, 16,5 e/ou 19,2.

116. Processo, de acordo com a reivindicação 115, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 7B.

117. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,0, 7,0, 9,1, 10,1, 15,4 e 16,0.

118. Processo, de acordo com a reivindicação 117, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 9A ou figu- ra 9B.

119. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,1, 7,2, 9,0, 9,2, 10,3, 11,5, 15,7 e 16,3.

120. Processo, de acordo com a reivindicação 119, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 10A ou figura 10B.

121. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,1, 8,9, 9,4, 10,0, 10,2 e 12,2.

122. Processo, de acordo com a reivindicação 121, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 11A ou figura 11B.

123. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,4, 6,0, 8,8, 10,0, 12,1, 14,1, 17,6, 18,4 e/ou 19,0.

124. Processo, de acordo com a reivindicação 123, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 13A.

125. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,2, 10,5, 13,3, 15,8, 16,5 e/ou 19,1.

126. Processo, de acordo com a reivindicação 125, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 14A.

127. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,4, 10,8, 11,8, 16,9, e/ou 17,9.

128. Processo, de acordo com a reivindicação 127, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 16.

129. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,1, 10,2, 16,3, 17,1, 19,2, 20,1 e/ou 20,5.

130. Processo, de acordo com a reivindicação 129, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 15A.

131. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,3, 7,2, 10,5, 15,8, 16,6, 19,1, e/ou 21,2.

132. Processo, de acordo com a reivindicação 131, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 12A.

133. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,2, 10,5, 10,8, 15,7, 16,5, e/ou 19,0.

134. Processo, de acordo com a reivindicação 133, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 17A.

135. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,8, 9,6, 11,7, 13,6, 15,9, 17,4, 20,6, e/ou 23,5.

136. Processo, de acordo com a reivindicação 135, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 18A.

137. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,3, 10,5, 13,3, 15,8 e/ou 16,6.

138. Processo, de acordo com a reivindicação 137, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 19A.

139. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 4,6, 5,2, 9,3, 16,5, 17,0, e/ou 18,6.

140. Processo, de acordo com a reivindicação 139, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 20A.

141. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,3, 10,1, 10,5, 15,8, -16,5, 19,1, 19,6, e/ou 21,1.

142. Processo, de acordo com a reivindicação 141, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 21 A.

143. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,9, 6,2, 9,1, 9,8, -12.5, 13,6, 16,4, 17,7 17,9, e/ou 21,8.

144. Processo, de acordo com a reivindicação 143, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 4E.

145. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,2, 9,1, 10,5, 12,5, -14,3, 16,5, 18,0, 20,1, 21,8, e/ou 22,2.

146. Processo, de acordo com a reivindicação 145, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 13B.

147. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,6, 7,1, 8,6, 9,1, 12.6, 14,5, e/ou 15,0.

148. Processo, de acordo com a reivindicação 147, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 14B.

149. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,3, 10,1, 10,5, 15,8, -16,5, 19,1, 19,6, e/ou 21,1.

150. Processo, de acordo com a reivindicação 149, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 15B.

151. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,2,12,5 e/ou 15,4.

152. Processo, de acordo com a reivindicação 151, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 8.

153. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,3, 9,2, 12,7, 13,8, e/ou 16,1.

154. Processo, de acordo com a reivindicação 153, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 12B.

155. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 5,5, 6,1, 8,0, 10,5, -12,6, 13,6, 16,6, e/ou 19,5.

156. Processo, de acordo com a reivindicação 155, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 17B.

157. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,4, 6,8, 9,3, 13,8, e/ou 16,8.

158. Processo, de acordo com a reivindicação 157, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 18B.

159. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,3, 8,1, 12,7, e/ou 16,5.

160. Processo, de acordo com a reivindicação 159, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 19B.

161. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 3,8, 6,0, 9,2, 9,9, 11,8, 12,4, e/ou 13,7.

162. Processo, de acordo com a reivindicação 161, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 20B.

163. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que compreende adicionalmente a caracterização do análogo de rapamicina cristalino para pos- suir um padrão de difração de pó em raio-X com um pico em cerca de 6,6, 7,1, 9,2, 14,6, e/ou 15,2.

164. Processo, de acordo com a reivindicação 163, CARACTERIZADO fato de que o padrão de difração de pó em raio-X é substancialmente de acordo com a figura 21B.

165. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que o análogo de rapamicina possui a estrutura de Fórmula I: <formula>formula see original document page 77</formula>

166. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que análogo de rapamicina possui a estrutura de Fórmula 2: <formula>formula see original document page 77</formula>

167. Processo, de acordo com a reivindicação 80, CARACTERIZADO fato de que análogo de rapamicina possui a estrutura de Fórmula 3: <formula>formula see original document page 77</formula>