BRPI0709731A2

BRPI0709731A2 - terapia de combinaÇço de (2r,z)-2-amino-2-cicloexil-n-(5-(1-metil-1h-pirazol-4-il)-1- oxo-2,6-diidro-1h-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acet amida

Info

Publication number: BRPI0709731A2
Application number: BRPI0709731-0A
Authority: BR
Inventors: Kenna Lynn Anderes; Alessandra Blasina
Original assignee: Pfizer Prod Inc
Priority date: 2006-04-04
Filing date: 2007-03-26
Publication date: 2011-07-26
Also published as: EP2007375A1; RU2008139406A; CN101415417A; JP2007277240A; RU2409361C2; CA2648371A1; KR20080100838A; TW200806301A; IL194340A0; MX2008012791A; WO2007113671A1; US20090312280A1; AU2007232279B2; AU2007232279A1; AR060284A1

Abstract

TERAPIA DE COMBINAÇçO DE (2R,Z)-2-AM 1 NO-2-CICLOEXIL-N-(5-(1 -METIL-1 H-PIRAZOL-4-IL)-1 -OXO-2,6-DI 1 DRO-1 H-[1 ,2]DIAZEPINO[4,5,6-CD]INDOL-8-I L)ACETAMIDA A presente invenção se refere às novas terapias de combinação de (2R,Z)-2-amino- 2-cicioexil-N-(5-( 1 -metil-1 H-pirazoi-4-iI)-1 -oxo-2,6-diidro-1 H-[1 ,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8- iI)acetamida (composto 1), um sal farmaceuticamente aceitável ou soivatos deste, ou uma mistura deste, em combinação com agente anti-câncer ou radioterapia.

Description

"TERAPIA DE COMBINAÇÃO DE (2R,Z)-2-AMINO-2-CICLOEXIL-N-{5-(1-METIL-1H-PIRAZOL-4-IL-1-OXO-2,6-DlIDRO-IH-[1,2]DIAZEPINO[4,5,6-CD]INDOL-8-IL)ACETAMIDA"

Campo da Invenção

A presente invenção é direcionada a métodos de utilizar (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamidaou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em combinação com agente anti-câncer ouradioterapia para tratar câncer em um mamífero.

Antecedente da Invenção

O composto (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida (da mesma forma chamado "Composto 1"),

<formula>formula see original document page 2</formula>

bem como sais farmaceuticamente aceitáveis destes, é descrito na Patente U.S.No. 6.967.198, emitida em 22 de novembro de 2005, a descrição da qual está aqui incorpo-rada através de referência.

Muitos agentes anticâncer, bem como radioterapia, causam dano ao DNA às célu-las, especialmente células de câncer. Inibição de CHK1 realça o efeito anti-câncer destesagentes anti-câncer ou radioterapia anulando-se a interrupção de S e G2 destas células da-nificadas de DNA e desse modo levando à catástrofe mitótica e morte celular destas células.(2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida é um inibidor de CHK1 proteína cinase potente.

Uso de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H[1,2]diazepino [4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida, um sal farmaceuticamente aceitável ou sol-vato deste, ou uma mistura destes, em combinação com um agente anti-câncer ou radiote-rapia realçará grandemente o efeito anti-câncer do agente anti-câncer ou radioterapia.

Sumário da Invenção

Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratar um distúrbio hiper-proliferativo em um mamífero compreendendo administrar ao mamífero uma quantidadeterapeuticamente eficaz de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida, um sal farmaceuticamente aceitá-vel ou solvato deste, ou uma mistura deste, em combinação com uma quantidade terapeuti-camente eficaz de um tratamento anti-hiperproliferativo selecionado a partir do agente anti-hiperproliferativo e radioterapia.

Em um aspecto particular desta modalidade, o agente anti-hiperproliferativo é sele-cionado a partir de inibidores da enzima farnesil proteína transferase e inibidores de PDGFrde tirosina cinase de receptor. Preferivelmente, o agente anti-hiperproliferativo é um com-posto descrito e reivindicado no seguinte: Patente U.S. 6.080.769; Patente U.S. 6.194.438;Patente U.S. 6.258.824; Patente U.S. 6.586.447; Patente U.S. 6.071.935; Patente U.S.6.495.564; e Patente U.S. 6.150.377; Patente U.S. 6.596.735; Patente U.S. 6.479.513; WO01/40217; U.S. 2003-0166675. Cada uma das patentes anteriores e pedidos de patente estáaqui incorporada através de referência em sua totalidade.

Em um aspecto particular desta modalidade, o agente anti-hiperproliferativo é um i-nibidor de PDGRr. O inibidor de PDGRr inclui, porém, não está limitado àqueles descritos napublicação de pedido de patente internacional números W001/40217 e W02004/020431, osconteúdos dos quais estão incorporados em sua totalidade para todos os propósitos. Inibi-dores de PDGFr preferidos incluem CP-673.451 e CP-868.596 de Pfizer e seus sais.

Em outra modalidade, a invenção fornece um método de tratar câncer um mamíferocompreendendo administrar ao mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz de(2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1 H-í1,2]diazepino[4,5,6-cd]Índol-8-il)acetamida, um sal farmaceuticamente aceitável ou solvatodeste, ou uma mistura deste, em combinação com uma quantidade terapeuticamente eficazde um tratamento anti-câncer selecionado a partir do agente anti-câncer e radioterapia.

Em um aspecto particular desta modalidade, e em combinação com qualquer outroaspecto particular não incompatível, o método realça o efeito terapêutico do tratamento anti-câncer.

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação com qualquer ou-tro aspecto particular não incompatível, o método mostra um efeito terapêutico sinergísticode (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida, um sal farmaceuticamente aceitável ou solvatodeste, ou uma mistura deste, e o tratamento anti-câncer.

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação com qualquer ou-tro aspecto particular não incompatível, o câncer é selecionado a partir de câncer de cólon,câncer de próstata, câncer de mama e leucemia. Ainda mais preferivelmente, o câncer écâncer de cólon.

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação com quaisqueroutros aspectos particulares não incompatíveis, o tratamento anti-câncer é um agente anti-câncer. Preferivelmente, o agente anti-câncer é uma substância química ou biológica que éclinicamente mostrado para tratar câncer. Mais preferivelmente, o agente anti-câncer é sele-cionado a partir do grupo que consiste em actinomicina D, adriamicina, ansacrina, ara-C, 9-(3-D-arabinosil-2-fluoroadenina, BCNU, bleomicina, camptotecina, carboplatina, 2-cloro-2-desoxiadenosina, CPT-11, ciclofosfamida, docetaxel, doxorrubicina, edotecarina, etoposí-deo, fludarabina, 5-fluorouracila (5-FU), gencitabina, HU-Gemzar1 Irinotecana1 metotrexato,6-Mpurina, mitomicina-C, paclitaxel, cis-platina, SN-38, taxol, tiotepa, 6-tioguanina, trimetre-xato vimblastina, vincristina e VP-16. Ainda mais preferivelmente, o agente anti-câncer éselecionado a partir do grupo que consiste em gencitabina, Irinotecana1 docetaxel, SN-38,carboplatina, doxorrubicina e mitomicina C. Ainda mais preferivelmente, o agente anti-câncer é gencitabina. Ainda mais preferivelmente, o agente anti-câncer é irinotecana. Aindamais preferivelmente, o agente anti-câncer é docetaxel.

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação com quaisqueroutros aspectos particulares não incompatíveis, o agente anti-câncer é um agente de danoao DNA. Preferivelmente, o "agente de dano ao DNA" é uma substância química ou biológi-ca que é clinicamente mostrada para tratar câncer. Mais preferivelmente, o agente de danoao DNA é selecionado a partir do grupo que consiste em agentes de alquilação, antimetabó-litos, antibióticos antitumor, análogos de platina, inibidores de topoisomerase I e inibidoresde topoisomerase II.

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação com quaisqueroutros aspectos particulares não incompatíveis, o agente anti-câncer é um agente de alqui-lação. Preferivelmente, o agente de alquilação é selecionado a partir do grupo que consisteem apaziquona, altretamina, brostalicina, bendamustina, bussulfano, carboquona, carmusti-na, clorambucila, clormetina, ciclofosfamida, estramustina, fotemustina, glufosfamida, ifos-famida, lomustina, mafosfamida, óxido de mecloretamina, mecilinam, melfalana, mitobroni-tol, mitolactol, nimustina, N-óxido de mostarda nitrogenada, pipobromam, ranimustina, temo-zolomida, tiotepa, treossulfano, e trofosframida. Ainda mais preferivelmente, o agente alqui-lante é ciclofosfamida.

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação com qualquer ou-tro aspecto particular não incompatível, o agente anti-câncer é um antimétabólito. Preferi-velmente, o antimétabólito é selecionado a partir do grupo que consiste em Alimta, Ara-C, 5-azacitidina, capecitabina, carmofur, cladribina, clofarabina, citarabina, citosina arabinosídeo,decitabina, premetrexede dissódico, doxifluridina, eflornitina, enocitabina, etinilcitidina, floxu-ridina, fludarabina, 5-fluorouracila (5-FU), gencitabina, hidroxiuréia, leucovorina, melfalana,6-mercaptopurina, metotrexato, mitoxantrona, 6-Mpurina, pentostatina, pelitrexol, raltitrexe-de, ribosídeo, metotrexato, mercaptopurina, nelarabina, nolatrexede, ocfosfato, tegafur, 6-tioguanina (6-TG), tioguanina, triapina, trimetrexato, vidarabina, vincristina, vinorelbina eUFT. Mais preferivelmente, o antimétabólito é selecionado a partir de 5-fluorouracila e gen-citabina. Ainda mais preferivelmente, o antimétabólito é gencitabina.Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação com quaisqueroutros aspectos particulares não incompatíveis, o agente anti-câncer é um antibiótico anti-tumor. Preferivelmente, o antibiótico antitumor é selecionado a partir do grupo que consisteem aclarrubicina, actinomicina D, anrubicina, anamicina, adriamicina, bleomicina, dactinomi-cina, daunorrubicina, doxorrubicina, elsamitrucina, epirrubicina, galarrubicina, idarrubicina,mitomicina C, ácido micofenólico, nemorrubicina, neocarzinostatina, pentostatina, peplomici-na, pirarrubicina, rebecamicina, estimalâmero, estreptozocina, valrubicina e zinostatina. Maispreferivelmente, o antibiótico é selecionado a partir do grupo que consiste em actinomicinaD, bleomicina, doxorrubicina e mitomicina-C. Ainda mais preferivelmente, o antibiótico anti-tumor é selecionado a partir de mitomicina-C e doxorrubicina.

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação com qualquer ou-tro aspecto particular não incompatível, o agente anti-câncer é um análogo de platina. Prefe-rivelmente, o análogo de platina é selecionado a partir do grupo que consiste em carboplati-na (Paraplatina), cisplatina, Eloxatina (oxaliplatina, Sanofi) eptaplatina, lobaplatina, nedapla-tina e satrplatina. Mais preferivelmente, o análogo de platina é selecionado a partir de cispla-tina, carboplatina e Eloxatina (oxaliplatina). Ainda mais preferivelmente, o análogo de platinaé carboplatina.

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação com qualquer ou-tro aspecto particular não incompatível, o agente anti-câncer é um inibidor de topoisomeraseI. Preferivelmente, o inibidor de topoisomerase I é selecionado a partir do grupo que consisteem BN-80915 (Roche), camptotecina, CPT-11, edotecarina, exatecana, Irinotecana, orateci-na (Supergen), SN-38, e topotecana. Mais preferivelmente, o inibidor de topoisomerase I éselecionado a partir de Irinotecana, SN-38 e topotecana. Ainda mais preferivelmente, o inibi-dor de topoisomerase I é Irinotecana.

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação com qualquer ou-tro aspecto particular não incompatível, o agente anti-câncer é um inibidor de topoisomeraseII. Preferivelmente, o inibidor de topoisomerase II é selecionado a partir de ansacrina, etopo-sídeo, fosfato de etoposídeo e epirrubicina (Ellence).

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação com qualquer ou-tro aspecto particular não incompatível, o agente anti-câncer inclui um ou mais agentes se-lecionados a partir do grupo que consiste em aclarrubicina, amonafida, belotecana, canpto-tecina, 10-hidroxicanptotecina, 9-aminocamptotecina, diflomotecana, HCl de Irinotecana(Camptosar), edotecarina, epirrubicina (Ellence), etoposídeo, exatecana, gimatecana, Iurto-tecana, mitoxantrona, pirarrubicina, pixantrona, rubitecana, sobuzoxano, SN-38, tafluposí-deo, topotecana. Preferivelmente, o agente anti-câncer inclui um ou mais agentes selecio-nados a partir do grupo que consiste em camptotecina, 10-hidroxicamptotecina, 9-aminocamptotecina, HCI de Irinotecana (Camptosar), edotecarina, epirrubicina (Ellence),etoposídeo, SN-38, topotecana, e combinações destes.Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação com qualquer ou-tro aspecto particular não incompatível, o agente anti-câncer é um inibidor mitótico. Preferi-velmente, o inibidor mitótico é selecionado a partir do grupo que consiste em docetaxel (Ta-xotero), estramustina, paclitaxel, razoxano, taxol, teniposídeo, vimblastina, vincristina, vinde-sina e vinorrelbina. Mais preferivelmente, o inibidor mitótico é selecionado a partir de doce-taxel, vincristina, vimblastina e taxol. Ainda mais preferivelmente, o inibidor mitótico é doce-taxel.Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação com qualquer ou-tro aspecto particular não incompatível, o tratamento anti-câncer é radioterapia.Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação com qualquer ou-tro aspecto particular não incompatível, pelo menos uma dose, preferivelmente pelo menos20% de todas as doses, mais preferivelmente pelo menos 50% de todas as doses, aindamais preferivelmente pelo menos 90% de todas as doses, ainda mais preferivelmente cadaúnica dose, de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida, um sal farmaceuticamente aceitável ou solvatodeste ou uma mistura deste, é administrada 1 a 48 horas, mais preferivelmente 2 a 40 ho-ras, mais preferivelmente 4 a 32 horas, mais preferivelmente 8 a 28 horas, ainda mais prefe-rivelmente 16 a 26 horas, ainda mais preferivelmente 23 a 25 horas, ainda mais preferivel-mente, aproximadamente 24 horas depois que uma dose do tratamento anti-câncer é admi-nistrada.Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação com qualquer ou-tro aspecto particular não incompatível, pelo menos uma dose, preferivelmente pelo menos20% de todas as doses, mais preferivelmente pelo menos 50% de todas as doses, aindamais preferivelmente pelo menos 90% de todas as doses, ainda mais preferivelmente cadaúnica dose, de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida, um sal farmaceuticamente aceitável ou solvatodeste, ou uma mistura deste, é administrada simultaneamente com uma dose do tratamentoanti-câncer. "Simultaneamente" utilizado aqui refere-se a dentro de 4 horas, preferivelmentedentro de 2 horas, preferivelmente dentro de 1 hora, ainda mais preferivelmente dentro de30 minutos, 15 minutos ou 5 minutos, antes ou depois.Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação de quaisquer ou-tros aspectos particulares não incompatíveis, o método seletivamente alveja células p53defeituosas enquanto tendo efeitos citotóxicos mínimos em células normais (p53 competen-tes).Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação de quaisquer ou-tros aspectos particulares não incompatíveis, o agente anti-câncer é um agente anti-angiogênese. Preferivelmente1 o agente anti-angiogênese é selecionado a partir de inibido-res de EGF, inibidores de EGFR1 inibidores de VEGF, inibidores de VEGFR1 inibidores deTIE2, inibidores de IGF1R, inibidores de COX-II (ciclooxigenase II), inibidores de MMP-2(metaloprotienase matriz 2), e inibidores de MMP-9 (metaloproteinase matriz 9).

Inibidores de VEGF preferidos, incluem por exemplo, Avastina (bevacizumabe), umanticorpo monoclonal anti-VEGF de Genentech, Inc. de South San Francisco, Califórnia.Inibidores de VEGF adicionais incluem CP-547.632 (Pfizer Inc., NY, USA), AG13736 (PfizerInc.), ZD-6474 (AstraZeneca), AEE788 (Novartis), AZD-2171, VEGF Trap (Regene-ron/Aventis), Vatalanibe (da mesma forma conhecido como PTK-787, ZK-222584: Novartis &Schering AG), Macugen (pegaptanibe octassódico, NX-1838, EYE-001, PfizerInc./Gilead/Eyetech), IM862 (Cytran Inc. de Kirkland, Washington, USA); e angiozima, umaribozima sintética de Ribozyme (Boulder, Colorado) e Chiron (Emeryville, Califórnia) e com-binações destes. Inibidores de VEGF úteis na prática da presente invenção são descritos naPatente U.S. No. 6.534.524 e 6.235.764 ambas das quais estão incorporadas em sua totali-dade para todos os propósitos. Inibidores de VEGF adicionais são descritos em, por exem-plo em WO 99/24440, em WO 95/21613, WO 99/61422, Patente U.S. 5.834.504, WO98/50356, Patente U.S. 5.883.113, Patente 5.886.020, Patente U.S. 5.792.783, Patente U.S.6.653.308, WO 99/10349, WO 97/32856, WO 97/22596, WO 98/54093, WO 98/02438, WO99/16755, e WO 98/02437 todas das quais estão aqui incorporadas através de referênciaem sua totalidade.

Inibidores de EGRF preferidos incluem, porém não são limitados por Iressa (gefitini-be, AstraZeneca), Tarceva (erlotinibe ou OSI-774, OSI Pharmaceuticals Inc.), Erbitux (cetuxi-mabe, Imclone Pharmaceuticals, Inc.), EMD-7200 (Merck AG), ABX-EGF (Amgen Inc. e Ab-genix Inc.), HR3 (Cuban Government), anticorpos de IgA (University of Erlangen-Nuremberg),TP-38 (IVAX), proteína de fusão de EGFR1 vacina de EGF, imunolipossomas anti-EGFr (Her-mes Biosciences Inc.) e combinações destes. Ainda mais preferivelmente, o inibidor de EGFRé selecionado de Iressa1 Erbitux1 Tarceva e combinações destes.

Outro agente anti-angiogênico inclui acitretina, fenretinida, talidomida, ácido zole-drônico, angiostatina, aplidina, cilengtida, combretastatina A-4, endostatina, halofuginona,rebimastato, removabe, Revlimide, esqualamina, ucraína, Vitaxina e combinações destes.

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação de qualquer outroaspecto particular não incompatível, o agente anti-câncer é um inibidor de pan cinase. Inibi-dores de pan cinase preferidos incluem Sutent™ (sunitinibe), descrito na Patente U.S. No.6.573.293 (Pfizer, Inc, NY, USA).Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação de quaisquer ou-

tros aspectos particulares não incompatíveis, o agente anti-câncer é selecionado a partir deinibidores de receptor de pan Erb ou inibidores de receptor de ErbB2, tais como CP-724,714(Pfizer, Inc.), CI-1033 (canertinibe, Pfizer, Inc.), Herceptina (trastuzumabe, Genentech Inc.),Omitarg (2C4, pertuzumabe, Genentech Inc.), TAK-165 (Takeda), GW-572016 (lonafarnibe,GIaxoSmithKline), GW-282974 (GIaxoSmithKIine), EKB-569 (Wyeth), PKI-166 (Novartis),dHER2 (Vacina de HER2, Corixa e GIaxoSmithKIine), APC8024 (Vacina de HER2, Dendre-on), anticorpo biespecífico anti-HER2/neu (Decof Câncer Center), B7.her2.lgG3 (Agensis),AS HER2 (Research Institute for Rad Biology 7 Medicine), anticorpos biespecíficos trifuncio-nais (University of Munich) e mAB AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Inc) e mAB 2B-1 (Chi-ron) e combinações destes.

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação de quaisquer ou-tros aspectos particulares não incompatíveis, o agente anti-câncer é selecionado a partir doinibidor de MEK1/2 de Pfizer PD325901, inibidor de MEK de Array Biopharm ARRY-142886,inibidor de CDK2 de Bristol Miers BMS-387,032, inibidor de CDK de Pfizer PD0332991 eAXD-5438 de AstraZeneca, e combinações destes.

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação de quaisquer ou-tros aspectos particulares não incompatíveis, o agente anti-câncer é selecionado a partir decelecoxibe (Patente U.S. No. 5.466.823), valdecoxibe (Patente U.S. No. 5.633.272), pareco-xibe (Patente U.S. No. 5.932.598), deracoxibe (Patente U.S. No. 5.521.207), SD-8381 (Pa-tente U.S. No. 6.034.256, exemplo 175), ABT-963 (WO 2002/24719), rofecoxibe (CAS No.162011-90-7), MK-663 (ou etoricoxibe) como descrito em WO 1998/03484, COX-189 (Lumi-racoxib) como descrito em WO 1999/11605, BMS-347070 (Patente U.S. 6.180.651), NS-398(CAS 123653-11-2), RS 57067 (CAS 17932-91-3), 4-metil-2-(3,4-dimethilphenil)-1-(4-sulfamoil-fenil)-1 H-pirrol, 2-(4-Etoxifenil)-4-metil-1-(4-sulfamoilfenil)-1 H-pirrol, e meloxicam.

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação de qualquer outroaspecto particular não incompatível, o agente anti-câncer é selecionado a partir de Gena-sense (augmerosen, Genta), Panitumumab (Abgenix/Amgen), Zevalin (Schering), Bexxar(Corixa/GlaxoSmithKline), Abarelix, Alimta, EPO 906 (Novartis), discodermolida (XAA-296),ABT-510 (Abbott), Neovastat (Aeterna), enzastaurina (Eli Lilli), Combrestatin A4P (Oxigene),ZD-6126 (AstraZeneca)1 flavopiridol (Aventis), CYC-202 (Cyclacel), AVE-8062 (Aventis)1DMXAA (Roche/Antisoma), Thymitaq (Exímias), Temodar (temozolomida, Schering Plough)e Revilimd (CeIegene) e combinações destes.

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação de quaisquer ou-tros aspectos particulares não incompatíveis, o agente anti-câncer é selecionado a partir deCyPat (acetato de ciproterona), Histerelin (acetato de histrelina), Plenaixis (depósito de aba-relix), Atrasentana (ABT-627), Satraplatina (JM-216), talomida (Thalidomide), Theratope,Temilifene (DPPE), ABI-007 (paclitaxel), Evista (raloxifene), Atamestane (Biomed-777), Xio-tax (paclitaxel de poliglutamato), Targetin (bexarotina) e combinações destes.

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação de qualquer outroaspecto particular não incompatível, o agente anti-câncer é selecionado a partir de Trizaone(tirapazamina), Aposin (exisulinde), Nevastat (AE-941), Ceplene (dicloridrato de histamina),Orathecin (rubitecana), Virulizin1 Gastrimmune (G17DT), DX-8951Í (mesilate de exatecana),Onconase (ranpirnase), BEC2 (mitumoabe), Xcytrin (motexafin gadolínio) e combinaçõesdestes.

Em outro aspecto particular desta modalidade, e em combinação de qualquer outroaspecto particular não incompatível, o agente anti-câncer é selecionado a partir de CeaVac(CEA), NeuTrexin (glicuronato de trimetresato) e combinações destes. Os agentes anti-tumoradicionais podem ser selecionados a partir dos seguintes agentes, OvaRex (oregovomabe),Osidem (IDM-1), e combinações destes. Os agentes anti-tumor adicionais podem ser selecio-nados dos seguintes agentes, Advexin (ING 201), Tirazone (tirapazamina), e combinaçõesdestes. Os agentes anti-tumor adicionais podem ser selecionados a partir dos agentes seguin-tes, RSR13 (efaproxiral), Cotara (1311 chTNT 1/b), NBI-3001 (IL-4) e combinações destes. Osagentes anti-tumor adicionais podem ser selecionados dos seguintes agentes, Canvaxin, va-cina de GMK, PEG Interon A, Taxoprexin (DHA/paciltaxel), e combinações destes.

Os termos "agentes alquilantes", "antimetabólitos", "antibióticos antitumor", "análo-gos de platina", inibidor de topoisomerase I", "inibidores de topoisomerase II" e "inibidoresmitóticos" utilizados aqui, referem-se às classes de agente anti-câncer clinicamente utiliza-do, químico ou biológico. Cada um destes termos incluem quaisquer dos agentes anti-câncer clinicamente utilizados que incluem-se na classe particular, bem como qualquer a-gente anti-câncer clínico futuro ainda não inventado, porém, incluirá na classe particular.Para exemplos de cada destas classes de agente anti-câncer, veja Physician's CâncerChemoterapy Drug Manual, 2006, ISBN 0-7637-4019-5. Para listas mais compreensivas decada destas classes de agente anti-câncer, veja Martindale's Complete Drug Reference, 34aEdição.

O termo "tratamento anti-câncer" refere-se a um "agente anti-câncer" ou "radiotera-pia", como definido aqui.

O termo "agente anti-câncer" refere-se a quaisquer substâncias, químicas ou bioló-gicas, que podem ser utilizadas para tratar câncer.

O termo "agente de dano ao DNA" se refere a qualquer agente anti-câncer, químico

ou biológico que diretamente ou indiretamente impede a replicação normal ou função normalde DNA em um mamífero. Exemplos de "agente de dano ao DNA" inclui, porém não sãolimitados a agentes alquilantes, antimetabólito, antibióticos anti-câncer, análogos de platina,inibidor de topoisomerase I e inibidores de topoisomerase II, como definidos aqui.

O termo "em combinação com" refere-se à temporização relativa da administraçãode um tratamento terapêutico, tal como (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida, um sal farmaceuticamen-te aceitável ou solvato deste, ou uma mistura deste, a um mamífero em necessidade deste,àquele de outro tratamento terapêutico, tal como um agente anti-câncer ou radioterapia, atemporização relativa sendo aqueles normalmente utilizados no campo da medicina paraterapia de combinação. Em particular, temporização relativa pode ser seqüencial ou simul-tânea. Uma modalidade preferível de administração seqüencial está administrando o agenteanti-câncer ou radioterapia primeiro seguido pela administração de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-meti 1-1 H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida, um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato deste, ou uma mistura deste,dentro de 24 horas.

O termo "distúrbio hiperproliferativo" refere-se ao crescimento celular anormal que éindependente de mecanismos reguladores normais (por exemplo, perda de inibição de con-tato), incluindo o crescimento anormal de células normais e o crescimento de células anor-mais. Isto inclui, porém não está limitado ao crescimento anormal de células de tumor (tu-mores), benigno e maligno. Exemplos de tais doenças proliferativas benignas são psoríase,hipertrofia prostática benigna, vírus do papiloma humano (HPV), e reestenose.

O termo "câncer" inclui, porém não está limitado a, câncer pulmonar, câncer óssea,câncer pancreático, câncer de pele, câncer da cabeça ou pescoço, melanoma cutâneo ouintra-ocular, câncer uterino, câncer ovariano, câncer retal, câncer da região anal, câncer deestômago, câncer de cóion, câncer de mama, câncer uterino, carcinoma das trompas defalópio, carcinoma do endométrio, carcinoma da cerviz, carcinoma da vagina, carcinoma davulva, Doença de Hodgkin, câncer do esôfago, câncer do intestino delgado, câncer do sis-tema endócrino, câncer da glândula tireóide, câncer da glândula paratireóide, câncer daglândula adrenal, sarcoma de tecido mole, câncer da uretra, câncer do pênis, câncer prostá-tico, leucemia crônica ou aguda, Iinfomas linfocíticos, câncer da bexiga, câncer renal ou doureter, carcinoma de célula renal, carcinoma da pélvis renal, cânceres do sistema nervosocentral (CNS), Iinfoma de CNS primário, tumores de eixo espinhal, glioma do tronco cere-bral, adenoma pituitário, ou uma combinação de um ou mais dos cânceres anteriores. Emoutra modalidade do referido método, o referido crescimento de célula anormal é uma doen-ça proliferativa benigna, incluindo, porém não limitada a, psoríase, hipertrofia prostática be-nigna ou reestenose.

O termo "mediado por atividade de CHK1 proteína cinase" refere-se a processosbiológicos ou moleculares que são regulados, modulados, ou inibidos por atividade de CHK1proteína cinase atividade.

O termo "sal(sais) farmaceuticamente aceitável(éis)", refere-se a sais de grupos á-cidos ou básicos que podem estar presentes em um composto. Compostos que são básicosna natureza são capazes de formar uma ampla variedade de sais com vários ácidos inorgâni-cos e orgânicos. Os ácidos que podem ser utilizados para preparar sais de adição de ácidofarmaceuticamente aceitáveis de tais compostos básicos são aqueles que formam sais deadição de ácido não tóxicos, isto é, sais que contêm ânions farmacologicamente aceitáveis,tais como acetato, benzenossulfonato, benzoato, bicarbonato, bissulfato, bitartarato, borato,brometo, edetato de cálcio, cansilato, carbonato, cloreto, clavulanato, citrato, dicloridrato, ede-tato, edisilato, estolato, esilato, etilsucinato, fumarato, gluceptato, gliconato, glutamato, glicoli-larsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromidrato, cloridrato, iodeto, isotionato, lactato,lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilsulfato, mucato, napsilato,nitrato, oleato, oxalato, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato, poliga-lacturonato, salicilato, estearato, subacetato, sucinato, tanato, tartarato, teoclato, tosilato, trie-tiodeto, e sais de valerato. Sais preferivelmente preferidos incluem fosfato e sais de gliconato.

O termo "composição farmacêutica" refere-se a uma mistura de um ou mais doscompostos descritos aqui, ou sais fisiologicamente/farmaceuticamente aceitáveis ou solva-tos destes, com outros componentes químicos, tais como portadores fisiologicamen-te/farmaceuticamente aceitáveis e excipientes. O propósito de uma composição farmacêuti-ca é facilitar a administração de um composto a um organismo.

O termo "radioterapia" refere-se ao uso médico de radiação para controlar célulasmalignas.

O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" geralmente refere-se a uma quanti-dade de um composto, um sai farmaceuticamente aceitável ou solvato deste, ou uma mistu-ra deste, a ser administrado o qual aliviará até certo ponto um ou mais dos sintomas do dis-túrbio a ser tratado. Em particular, quando o termo é utilizado na descrição de uma terapiade combinação, "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se à quantidade de um tera-pêutico particular que 1) realçará o efeito terapêutico de outro terapêutico tal como agenteanti-câncer ou radioterapia, ou 2) em combinação com o outro terapêutico, aliviará um atécerto ponto um ou mais dos sintomas do distúrbio a ser tratado. Em referência ao tratamentode câncer, aliviar sintomas da doença a ser tratada inclui a) reduzir o tamanho do tumor; b)inibir (isto é, reduzir até certo ponto, preferivelmente interromper) metástase de tumor; e c)inibir até certo ponto (isto é, reduzir até certo ponto, preferivelmente interromper) o cresci-mento de tumor.

O termo "tratando", quando aqui utilizado, a menos que de outra maneira indicado,significa reverter, aliviar, inibir o progresso de, ou impedir o distúrbio ou condição a qual taltermo aplica-se, ou um ou mais sintomas de tal distúrbio ou condição. O termo "tratamento",quando utilizado aqui, a menos que de outra maneira indicado, refere-se ao ato do tratar vistoque "tratando" é definido imediatamente acima.

Descrição Detalhada da Invenção

Quando utilizado nesta seção apenas, o termo"composto 1" se refere a (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-ccl]indol-8-il)acetamida, um sal farmaceuticamenteaceitável ou solvato deste, ou uma mistura deste"; MTD" refere-se à dose máxima tolerada;Q3d x4 se refere a um horário de dosagem de tratamento de uma vez a cada 3 dias para 4;Q1w χ 3 refere-se a um horário de dosagem de tratamento de uma vez por semana para 3.(2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida foi estudado em uma variedade de sistemasin vitro e in vivo para determinar a potência contra seu alvo molecular, seletividade de cina-se, mecanismo de ação, relação de PK/PD, e quimiopotencialização de eficácia antitumor.I. Seletividade de cinase(2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida é um inibidor competitivo de ATP, potente deCHK1. O valor de Ki de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida contra domínio catalítico de CHK1 (1-289) foi de 0,49 + 0,29 nM.Seletividade de cinase de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida relativo a Chkl foi avaliada emensaios de avaliação de cinase bioquímica contra um painel de mais de 100 proteína cina-ses. Oito cinases mostraram uma relação de IC50 ou Ki da cinase sendo avaliada sobre o K1do domínio catalítico de CHK1, menor ou cerca de 100 vezes. Estas oito cinases são Auro-ra-A, FGFR3, Flt3, Fms (CSF1R), Ret, VEGFR2, Yes e CHK2. (Tabela 1) Cinases que sãoas mais farmacologicamente relevantes para um inibidor de CHK1 para considerações deseletividade são aqueles para as quais a inibição intermitente transitória influenciaria o pro-gresso do ciclo celular (por exemplo, CDK's, cinases mitóticas), controle do ponto de checa-gem (por exemplo, CHK2, ATM, ATR), ou agiria sobre as séries de reações apoptóticas (porexemplo, AKT, p38). Com base nisto, VEGFR2, Fms/CSF1R, FGFR2, Flt3, e Ret não sãoconsiderados ser relevantes porque a inibição sustentada é requerida para evocar a farma-cologia observável destas RTK's. Semelhantemente, nenhum efeito é esperado a partir dainibição passageira de Yes cinase, quando o camundongo nocaute de Yes não exibe fenóti-po significante. Aurora-A é uma cinase relevante, porém foi constatado que o ensaio de en-zima não se correlaciona bem com a atividade celular. Em um ensaio funcional com baseem célula, (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida mostrou seletividade de mais de 100 vezes con-tra Aurora cinase. Finalmente, a relação de seletividade sobre CHK2 é essencialmente iguala 100 vezes, e não observamos evidência que a atividade de CHK2 é modulada por (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-( 1 -metil-1 H-pirazol-4-il)-1 -oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida em ensaios ex vivo ou com base em célula. Tabela 1 mostra o valorde IC50 ou Ki de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)-1 -oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida contra cinases selecionadas e a relação entre oIC50 ou Ki da cinase selecionada sobre o Ki de CHK1.

Tabela 1. IC50 Contra Cinases Selecionadas

<table>table see original document page 13</column></row><table>

II. Efeito de Realce de Citotoxicidade em Ensaios Funcionais com Base em Célula.

Interrupção do ciclo celular mediado por ponto de checagem é uma resposta típicaao dano ao DNA induzido por agentes de quimioterapia ou radiação. Em combinação comagentes de quimioterapia geralmente utilizados como gencitabina, Irinotecana1 e doxorrubi-cina, (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida anula os pontos de checagem de S e G2 induzi-dos por agentes de dano ao DNA e realça a citotoxicidade. Esta atividade de anulação deponto de checagem e atividade citotóxica realçada mostram seletividade para linhagens ce-lulares cancerígenas p53 defeituosas sobre células normais competentes de p53. A anula-ção do ponto de checagem é caracterizada por desfosforilação de treonina-14 e tirosina-15e ativação de proteína cinase CDK1 mitótica, mitose prematura, catástrofe mitótica, e final-mente morte celular apoptótica. Uma série de experiências foi realizada para 1) demonstrara anulação do ponto de checagem de ciclo celular induzido por dano ao DNA; 2) avaliar aatividade de quimiopotencialização de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida em combinação com al-guns agentes quimioterapêuticos; e 3) demonstrar a seletividade para células cancerígenasdeficientes de p53.

Atividade de Anulação de Ponto de Checagem: O ensaio de fosforilação de Histo-ne H3 detecta células que entram em mitose e representa o ensaio com base em célulain vitro primária utilizado para medir a potência celular de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)-1 -oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida anu-lando-se o ponto de checagem G2 induzido por camptotecina. O valor de EC50 foi 45 nM,como medido por um aumento na fosforilação de Histona H3 em SerIO1 um marcador deentrada em mitose. Na ausência do dano ao DNA, (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida não não teveefeito sobre o ciclo celular. Na combinação com gencitabina, análise de citometria de fluxomostra anulação de interrupção Fase S induzida por gencitabina com (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida. A diminuição dependente de tempo nas células de fase S induzidas por (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida correspondeu a um aumento nas populações celulares de G2-M eG0-G1, demonstrando que células estão entrando em mitose e estão tentando reentrar nociclo celular. Análise de citometria de fluxo confirmou um aumento significante em célulasapoptóticas no tratamento de combinação com gencitabina e (2R1Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(õ-íl-metil-IH-pirazol^-iO-l-oxo^.G-diidro-IH-fl^ldiazepino^.õ.e-cdlindol-e-iOacetamidacomparada com o tratamento de gencitabina apenas.

Quimiopotencialização: Sobrevivência celular e ensaio de MTT (ensaio de brometode 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio) foram realizados ensaios em um painel delinhagens celulares cancerígenas humanas defeituosa de p53 para caracterizar a atividadede (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida realçando-se o efeito citotóxico de gencitabina,Irinotecana1 carboplatina, doxorubicina, e mitomicina C. (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)-1 -oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida sozinhonão causou efeito significante em viabilidade celular comparado com células de controle(não tratadas). Em combinação com gencitabina, ((2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil- 1 H-pirazol-4-il)-1 -oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida induziu po-tenciação significante (89%) de citotoxicidade de gencitabina comparada com gencitabinaapenas. (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-

[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida induziu potenciação robusta e consistente com amaior parte dos agentes, com alguma variabilidade observada entre linhagens celulares (Tabela 2). Na Tabela 2, Gencitabina foi utilizada em uma concentração que induz nenhu-ma ou mínima toxicidade (< 10%) na ausência de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida: 5 nM (célu-las Colo205), 10 nM (células MDA-MB-231, HT29, e K562) ou 20 nM (células PC-3).

Tabela 2. Citotoxicidade de Combinação In Vitro em Linhagens Celulares Selecionadas

<table>table see original document page 15</column></row><table>

a (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)-1 -oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida foi utilizado na ausência de outro agente citotó-xico.

b OTSI (índice de Seletividade no alvo) foi calculado como IC50 de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8- il)acetamida) sobre IC50 a partir de tratamento de combinação.

c PF50 (Factor de Potenciação 50) foi calculado como IC50,(agente citotóxico apenas) IIC50,(tratamento de combinação)· (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida foi utilizado em 8* EC50 (360 nM) emtodas as linhagens celulares, com exceção de células K-562 onde foi utilizado em 4x EC50(180 nM).d não determinado; nestes ensaios o perfil das curvas não permitiu cálculo de umPF50 preciso.

Seletividade para Células Defeituosas de p53: (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)-1 -oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida emcombinação com quimioterapia direcionada ao DNA é esperada para seletivamente alvejarcélulas cancerígenas p53 defeituosas enquanto tendo efeitos citotóxicos mínimos em célu-las normais (p53-competente). Para avaliar o efeito citotóxico de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamidaem combinação com agentes de quimioterapia em células normais, um ensaio de sobrevi-vência celular foi realizado em células de HUVEC. (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)-1 -oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida foi utilizadoem combinação com gencitabina ou camptotecina, ambos utilizados em uma concentraçãofixa que induz toxicidade celular mínima (< 10%). A concentração mais alta (12xEC50,540 nM) de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida em combinação causa aumento de 31,2% ou21,7 na morte celular comparado com gencitabina ou camptotecina sozinho, respectiva-mente. O efeito citotóxico induzido pelo tratamento de combinação em células HUVEC édesprezível comparado com a citotoxicidade induzida pelo mesmo tratamento em células detumor. A toxicidade mínima induzida por (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida em células de não tu-mor p53-competentes em combinação com quimioterapia fornece evidência para suportarsua seletividade para células de câncer p53 defeituosas e potencial para ter efeitos adver-sos mínimos em células normais. Um ensaio de sobrevivência celular foi da mesma formarealizado em células HTC116 (carcinoma de cólon humano) que foram transitoriamentetransfectadas com um plasmídeo que contém qualquer p53 tipo selvagem ou mutante. Nascélulas HCT116 de p53 mutantes, a combinação de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)-1 -oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida e gencitabinainduziu 44% de inibição de crescimento celular comparada com apenas gencitabina, consi-derando que nas células HCT116 de p53 tipo selvagem, o mesmo tratamento de combina-ção induziu apenas 15% de inibição de crescimento celular comparada apenas com genci-tabina. Estes resultados confirmam que células de câncer p53-defeituosas são mais vulne-ráveis à inibição de Chkl que as suas contrapartes de p53-competentes.

III. Quimiopotencialização Em Estudos In Vivo

Estudo de combinação de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida com um agente citotóxico foirealizado em xenoenxertos de carcinoma de cólon humano de HT29 e Colo205. Experiên-cias 1 a 39 foram conduzidas em xenoenxertos de camundongos. Experiências 40-42 foramconduzidas em xenoenxertos de rato. Especificamente, estudos de combinação com Irino-tecana foram conduzidos em HT29 e Colo205. Estudos de combinação com gencitabinaforam conduzidos em Colo205. Estudos de combinação com docetaxel foram conduzidosem Colo205. A quimiopotencialização de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida foi demonstrada emtodos os estudos de combinação anteriores.

Gencitabina e Irinotecana são os citotóxicos direcionados ao DNA conhecidos parainduzir ativação do ponto de checagem e interrupção de fase S/G2M subseqüente. (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida foi geralmente administrado 24 horas depois da dose prévia de Gen-citabina ou Irinotecana. Docetaxel é um antimitótico onde descobertas recentes descrevemuma nova função para CHK1 no ponto de checagem mitótico. (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-( 1 -metil-1 H-pirazol-4-il)-1 -oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida foiadministrado simultaneamente com Docetaxel. Em cada um destes estudos, (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)-1 -oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida foi administrado em acetato de sódio e 4% de solução de dextro-se/água em 5 mL/kg. Os resultados são resumidos na Tabela 3.

Tabela 3: Quimiopotencialização In Vivo de Atividade Antitumor

<table>table see original document page 17</column></row><table><table>table see original document page 18</column></row><table>

Utilizado na Tabela 3, "Exp No." refere-se a Exemplo No; "Amt A" refere-se à quan-tidade do agente citotóxico que é administrado ao xenoenxerto por dose; "Amt B" refere-se àquantidade de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida a ser administrada ao xenoenxerto por dose; %de TGI (inibição de crescimento de tumor) foi calculado como 100x[1-(TVrTVj)Tratado/(TVrTVi)Veículo], onde TVf e Tvi são a dose final + 2 dias e volume de tumor médio inicial de umgrupo respectivamente; % de TGI Potencializado foi calculado como 100x[1-(TVrTVi)Combinação/(TVrTvi)apenas Citotóxico], onde TVf e Tv= são a dose final + 2 dais e vo-lume de tumor médio inicial de um grupo respectivamente; atraso de crescimento foi calcu-lado como Tratamento-Veiculo (T-C) durante dias medianos para alcançar 2 duplicações(800 mm3); % de TTP ER (relação de realce de progressão para tempo) foi calculado comoAtraso [(combinação) / Atraso (apenas citotóxico) χ 100 - 100)].

No Exp No. 1 a 17, Irinotecana ou gencitabina, onde aplicável, foi administrada in-traperitonealmente (IP) de acordo com Q3d χ 4, (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H- pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida foi administradoIP de acordo com Q3d χ 4 começando 24 horas depois de Irinotecana ou gencitabina.

No Exp Não. 18 a 25, Docetaxel e (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1 -oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida foi administradointraperitoneal administrado (o IP) simultaneamente de acordo com um horário de Q1w x3.No Exp. 25, (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida foi administrado durante dois ciclos para umadose total de 120 mg/kg.

No Exp No. 26 a 35, Irinotecana foi administrada intraperitonealmente (IP) de acor-do com Q3d χ 4, e (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro- 1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida foi administrado IP de acordo com Q3d χ 4começando 24 horas depois de Irinotecana ou gencitabina.

No Exp No. 36-39, Irinotecana foi administrada IP Q1w χ 3, e (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida foi administrado duas vezes semanalmente ÍP, 24 e 72 horas depois da admi- nistração de Irinotecana, durante três semanas.

No Exp No. 40 a 42, Irinotecana foi administrada IP de acordo com Q3d χ 4, e(2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida foi administrada por infusão IV duas horas deacordo com Q3dx4 começando 24 horas depois da administração de Irinotecana. MTD de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida foi decidido ser 40mg/kg Q3d x4 ou 60mg/kgQ1w χ 3 avaliado pela ocorrência da perda de peso corporal médio de 10% a 20%.

IV. Estudos In vivo do Efeito de Radiossensibilizacão do Composto 1

Camundongos nus Balb/c fêmeas (6 semanas de idade) foram inoculados membro traseito direito com 3 χ 106 de células A431 em PBS e permitidos o tumor crescer em umvolume de tumor médio -100 mm3. Os camundongos foram aleatorizados em grupos de 10animais cada grupo.

Os camundongos não anestesiados foram submetidos à radiação. A radiação foi li-berada utilizando um feixe de elétrons de taxa de dose alta de 6 MeV de um Acelerador Li- near Varian 2100 (Paio Alto, CA). A taxa de dose utilizada foi 20 Gy/min. As característicasde dose-profundidade do feixe de elétrons foram tal que a uniformidade de dose dentro de ±5% foi obtida em uma profundidade de 10 mm de tecido. Isto foi suficiente para cobrir todo otumor irradiado. O tumor foi irradiado através de um corte de colimador de 25 mm quadradode folha de chumbo de 3 mm de espessura ligada a uma folha Perspex de 6 mm. A separa-ção entre o tumor e o lado inferior (Perspex) do colimador de superfície foi aproximadamen-te 25 mm. O aparato foi suportado em uma placa aquecida a 37°C para reduzir os efeitos daperda de calor nos camundongos. Doses de radiação foram calculadas e liberadas por umfísico de radiação sênior. Radioterapia foi determinada como descrito acima nos Dias 0-4como 2, 3 ou 4 frações diárias de Gy.

(2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1 H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il) acetamida (Composto 1) foi preparado como uma soluçãoaquosa buttered de pH. A solução foi imediatamente preparada antes da dosagem e (15mg/kg) foi administrada através de injeção intraperitoneal em 15mg / kg nos Dias 0-4 imedia-tamente depois da radioterapia. A solução anterior que não contém o Composto 1 é consi-derado como o "veículo de fármaco" ou "veículo". Veículo de fármaco foi administrado em0,1 ml /10 g de peso corporal no mesmo horário.

Cada grupo de camundongos foi tratado apenas com o Composto 1, apenas radia-ção, ou a combinação do Composto 1 e radiação. Os animais foram sacrificados quando aRelação de Volume de Tumor (TVR) alcançou ou excedeu 4 ou se o camundongo perdeumais que 15% de seu peso corporal padrão no Dia 0. A Relação de Volume de tumor é defi-nida como a relação entre o volume de tumores em um tempo particular e o volume de tu-mor padrão, que é o volume de tumor no Dia 0.

Volume de tumor foi medido três vezes por semana a partir do dia 0 ao dia 11 e a-inda também do dia 23. Volume de tumor foi medido utilizando calibradores eletrônicos ecalculado como comprimento/2 χ largura2. O volume de tumor médio foi calculado para cadagrupo de camundongos. Tabela 4 mostra o volume de tumor médio de cada grupo de ca-mundongos que não foram tratados, tratados com veículo de fármaco, Composto 1, radia-ção ou a combinação do Composto 1 e radiação.

Tabela 4. Eficácia Antitumor da Radioterapia em Combinação com Composto 1 emXenoenxertos de Camundongos A431

<table>table see original document page 20</column></row><table><table>table see original document page 21</column></row><table>

Tabela 5 mostra o Atraso de Crescimento de Tumor e a relação de Realce, combase nos dados de volume de tumor mostrados na Tabela 4. Demora de crescimento detumor é definida como o tempo mediano em dias para os tumores alcançarem uma TVR de4 menos tempo por tumores de controle de veículo alcançarem o mesmo tamanho. Demorade crescimento normalizada é definida como o tempo em dias para tumores em camundon-gos tratados com combinação alcançarem a TVR de 4 menos tempo em dias para tumoresem camundongos tratados apenas com fármaco alcançarem o mesmo tamanho. Relação derealce é definida como a demora de crescimento de tumor normalizada em camundongostratados com fármaco e radiação dividida por demora de crescimento de tumor em camun-dongos tratados apenas com radiação.

Tabela 5: Estudo In vivo do Efeito de Radiossensibilização de Composto 1 em Xe-noenxertos de Tumor de A431

<table>table see original document page 21</column></row><table>

Claims

1. Método de tratar um câncer mamífero, CARACTERIZADO pelo fato de compre-ender administrar a um mamífero em necessidade uma quantidade terapeuticamente eficazde (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida, um sal farmaceuticamente aceitável ou solvatodeste, ou uma mistura deste, em combinação com a quantidade terapeuticamente eficaz deum tratamento anti-câncer selecionado do agente anti-câncer e uma radioterapia.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato da admi-nistração de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1 H- [1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida, um sal farmaceuticamente aceitável ou solvatodeste, ou uma mistura deste, realça o efeito terapêutico do tratamento anti-câncer.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato do méto-do mostrar um efeito terapêutico sinergístico de administrar separadamente (2R,Z)-2-amino--2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8- il)acetamida, um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato deste, ou uma mistura deste, eo tratamento anti-câncer.

4. Método, de acordo com quaisquer das reivindicações 1 a 3, CARACTERIZADOpelo fato do câncer ser selecionado de câncer de cólon, câncer prostático, câncer de mamae leucemia.

5. Método, de acordo com a reivindicação 4, CARACTERIZADO pelo fato do cân-cer ser câncer de cólon.

6. Método, de acordo com quaisquer das reivindicações 1-5, CARACTERIZADOpelo fato do tratamento anti-câncer ser uma quantidade terapeuticamente eficaz de um a-gente anti-câncer.

7. Método, de acordo com a reivindicação 6, CARACTERIZADO pelo fato do agen-te anti-câncer ser selecionado do grupo que consiste em actinomicina D, adriamicina, ansa-crina, ara-C, 9-(3-D-arabinosil-2-fluoroadenina, BCNU, bleomicina, camptotecina, carboplati-na, 2-cloro-2-deoxiadenosina, CPT-11, ciclofosfamida, Docetaxel, doxorrubicina, edotecari-na, etoposídeo, fludarabina, 5-fluorouracila (5-FU), gencitabina, HU-Gemzar, Irinotecana, metotrexato, 6-Mpurina, mitomicina-C, paclitaxel, cis-platina, SN-38, taxol, tiotepa, 6-tioguanina, trimetrexato, vimblastina, vincristina, e VP-16.

8. Método, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato do agen-te anti-câncer ser selecionado do grupo que consiste em gencitabina, Irinotecana, docetaxel,SN-38, carboplatina, doxorrubicina e mitomicina C.

9. Método, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato do agen-te anti-câncer ser gencitabina.

10. Método, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato do a-gente anti-câncer ser Irinotecana.

11. Método, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato do a-gente anti-câncer ser docetaxel.

12. Método, de acordo com quaisquer das reivindicações 1-5, CARACTERIZADOpelo fato do agente anti-câncer ser um agente de dano ao DNA.

13. Método, de acordo com a reivindicação 12, CARACTERIZADO pelo fato do a-gente de dano ao DNA ser selecionado a partir de agentes alquilantes, antimetabólitos, anti-bióticos antitumor, análogos de platina, inibidores de topoisomerase I e inibidores de topoi-somerase II.

14. Método, de acordo com quaisquer dentre as reivindicações 1-5,CARACTERIZADO pelo fato do agente anti-câncer ser um inibidor mitótico.

15. Método, de acordo com quaisquer das reivindicações 1-5, CARACTERIZADOpelo fato de pelo menos uma dose de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida, um sal farmaceuticamen-te aceitável ou solvato deste, ou uma mistura deste, ser administrada 1 a 48 horas depoisque a dose prévia de tratamento anti-câncer é administrada.

16. Método, de acordo com quaisquer das reivindicações 1-5, CARACTERIZADOpelo fato de pelo menos uma dose de (2R,Z)-2-amino-2-cicloexil-N-(5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-2,6-diidro-1H-[1,2]diazepino[4,5,6-cd]indol-8-il)acetamida, um sal farmaceuticamen-te aceitável ou solvato deste, ou uma mistura deste, ser administrada simultaneamente comuma dose do tratamento anti-câncer.