RU2409361C2

RU2409361C2 - КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ (2R,Z)-2-АМИНО-2-ЦИКЛОГЕКСИЛ-N-(5-(1-МЕТИЛ-1Н-ПИРАЗОЛ-4-ИЛ)-1-ОКСО-2,6-ДИГИДРО-1Н-[1,2]ДИАЗЕПИНО[4,5,6-cd]ИНДОЛ-8-ИЛ)АЦЕТАМИДОМ

Info

Publication number: RU2409361C2
Application number: RU2008139406/15A
Authority: RU
Inventors: Кенна Линн ЭНДЕРЕС (US); Кенна Линн ЭНДЕРЕС; Алессандра БЛАЗИНА (US); Алессандра БЛАЗИНА
Original assignee: Пфайзер Продактс Инк.
Priority date: 2006-04-04
Filing date: 2007-03-26
Publication date: 2011-01-20
Also published as: AU2007232279B2; AR060284A1; CN101415417A; CA2648371A1; WO2007113671A1; JP2007277240A; US20090312280A1; AU2007232279A1; EP2007375A1; BRPI0709731A2; TW200806301A; IL194340A0; KR20080100838A; RU2008139406A; MX2008012791A

Abstract

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении рака. Способы и применения по изобретению включают введение (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-сd]индол-8-ил)ацетамида (соединения 1) для лечения рака, выбранного из рака толстой кишки, рака предстательной железы и рака молочной железы, в сочетании с терапевтически эффективным количеством противоракового средства, выбранного из гемцитабина, иринотекана, доцетаксела и митомицина С. Использование изобретения позволяет повысить эффективность лечения рака толстой кишки, рака предстательной железы и рака молочной железы за счет повышения цитотоксичности гемцитабина, иринотекана, доксорубицина и митомицина С под действием соединения 1. 6 н. и 27 з.п. ф-лы, 5 табл.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение направлено на способы использования (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида или его фармацевтически приемлемой соли в сочетании с противораковым средством или лучевой терапией для лечения рака у млекопитающих.

Уровень техники

Соединение(2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид (также обозначенное как «Соединение 1»),

так же, как и его фармацевтически приемлемые соли, описаны в Патенте США № 6 967 198, выданном 22 ноября 2005, раскрытие которого внесено в данный документ посредством ссылки.

Многие противораковые средства, так же как и лучевая терапия, вызывают повреждение клеточной ДНК, особенно раковых клеток. Ингибирование CHK1 повышает противораковый эффект указанных противораковых средств или лучевой терапии путем ликвидации остановки в S и G₂ указанных клеток с поврежденной ДНК, таким образом, приводя к нарушению митоза и гибели данных клеток. (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид представляет собой мощный ингибитор протеинкиназы CHK1. Использование (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида, его фармацевтически приемлемой соли или сольвата или их смеси в сочетании с противораковым средством или лучевой терапией сильно увеличит противоопухолевый эффект противоракового средства или лучевой терапии.

Краткое описание изобретения

В одном варианте осуществления изобретение предоставляет способ лечения гиперпролиферативного заболевания у млекопитающего, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида, его фармацевтически приемлемой соли или сольвата или их смеси в сочетании с терапевтически эффективным количеством антигиперпролиферативного лекарственного средства и лучевой терапией.

В одном частном аспекте указанного варианта осуществления антигиперпролиферативное лекарственное средство выбрано из ингибиторов фермента фарнезилтрансферазы и ингибиторов тирозинкиназы PDGFr. Предпочтительно, антипролиферативное средство представляет собой соединение, раскрытое и заявленное в нижеперечисленных документах: Патент США 6 080 769; Патент США 6 194 438; Патент США 6 258 824; Патент США 6 586 447; Патент США 6 071 935; Патент США 6 495 564; Патент США 6 150 377; Патент США 6 596 735; Патент США 6 479 513; Международная публикация 01/40217; заявка на Патент США 2003-0166675. Каждый из вышеуказанных патентов и патентных заявок внесен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

В одном частном аспекте указанного варианта осуществления антигиперпролиферативное средство представляет собой PDGRr ингибитор. PDGRr ингибитор включает, но без ограничения, соединения, раскрытые в международных патентных публикациях WO 01/40217 и WO 2004/020431, содержание которых внесено в данный документ во всей своей полноте. Предпочтительные PDGFr ингибиторы включают СР-673 451 и СР-868 596, производимые Pfizer, и их соли.

В другом варианте осуществления изобретение предоставляет способ лечения рака у млекопитающего, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида, его фармацевтически приемлемой соли или сольвата или их смеси в сочетании с терапевтически эффективным количеством противоракового лекарственного средства и лучевой терапией.

В одном частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами способ повышает терапевтический эффект противоракового лекарственного средства.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами способ демонстрирует синергичное терапевтическое действие (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида, его фармацевтически приемлемой соли или сольвата или их смеси и противоракового лекарственного средства.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами рак выбран из рака ободочной кишки, рака предстательной железы, рака молочной железы и лейкемии. Еще более предпочтительно, рак представляет собой рак ободочной кишки.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковая терапия представляет собой противораковое средство. Предпочтительно, противораковое средство представляет собой химическое или биологическое вещество, которое клинически проявляет способность лечить раковое заболевание. Более предпочтительно, противораковое средство выбрано из группы, состоящей из актиномицина D, адриамицина, амсакрина, ара-С, 9-(3-D-арабинозил-2-фтороаденина, BCNU, блеомицина, камптотецина, 2-хлоро-2-деоксиаденозина, СРТ-11, циклофосфамида, доцетаксела, доксорубицина, эдотекарина, эдопозида, флударабина, 5-фторурацила (5-FU), гемцитабина, HU-Gemzar, иринотекана, метотрексата, 6-Mпурина, митомицина-С, паклитаксела, цис-платины, SN-38, таксола, тиотепа, 6-тиогуанина, триметрексата винбластина, винкристина и VP-16. Еще более предпочтительно, противораковое средство выбрано из группы, состоящей из гемцитабина, иринотекана, доцетаксела, SN-38, карбоплатины, доксорубицина и митомицина С. Еще более предпочтительно, противораковое средство представляет собой гемцитабин. Еще более предпочтительно, противораковое средство представляет собой иринотекан. Еще более предпочтительно, противораковое средство представляет собой доцетаксел.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство представляет собой вещество, повреждающее ДНК. Предпочтительно, «вещество, повреждающее ДНК» представляет собой химическое или биологическое вещество, которое клинически проявляет способность лечить рак. Более предпочтительно, вещество, повреждающее ДНК, выбрано из группы, состоящей из алкилирующих веществ, антиметаболитов, противоопухолевых антибиотиков, аналогов платины, ингибиторов топоизомеразы I и ингибиторов топоизомеразы II.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство представляет собой алкилирующее вещество. Предпочтительно, алкилирующее вещество выбрано из группы, состоящей из апазиквона, альтретамина, бросталлицина, бендамустина, бусульфана, карбоквона, кармустина, хлорамбуцила, хлорметина, циклофосфамида, эстрамустина, фотемустина, глуфосфамида, ифосфамида, ломустина, мафосфамида, мехлоретамина оксида, мециллинама, митобронитола, митолактола, нимустина, N-оксида азотистого иприта, пипобромана, ранимустина, темозоломида, тиотепа, треосульфана и трофосфамида. Еще более предпочтительно, алкилирующим веществом является циклофосфамид.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство представляет собой антиметаболит. Предпочтительно, антиметаболит выбран из группы, состоящей из Alimta, Ara-C, 5-азацитидина, капецитабина, кармофура, кладрибина, клофарабина, цитарабина, цитозина арабинозида, децитабина, динатриевого преметрекседа, доксифлюридина, эфлорнитина, эноцитабина, этинилцитидина, флоксуридина, флударабина, 5-фторурацила (5-FU), гемцитабина, гидроксимочевины, лейковорина, мельфалана, 6-меркаптопурина, метотрексата, митоксантрона, 6-Мпурина, пентостатина, пелитрексола, ратитрекседа, рибозида, метотрексата, меркаптопурина, неларабина, нолатрекседа, окфосфата, тегафура, 6-тиогуанина (6-TG), тиогуанина, триапина, триметрексата, видарабина, винкристина, винорелбина и UFT. Более предпочтительно, антиметаболит выбран из 5-фторурацила и гемцитабина. Еще более предпочтительно, метаболит представляет собой гемцитабин.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство представляет собой противоопухолевый антибиотик. Предпочтительно, противоопухолевый антибиотик выбран из группы, состоящей из акларубицина, актиномицина D, амрубицина, аннамицина, адриамицина, блеомицина, дактиномицина, даунорубицина, доксорубицина, элсамитруцина, эпирубицина, галарубицина, идарубицина, митомицина С, микофеноловой кислоты, неморубицина, неокарзиностатина, пентостатина, пепломицина, пирарубицина, ребеккамицина, стималамера, стрептозоцина, валрубицина и зиностатина. Более предпочтительно, антибиотик выбран из группы, состоящей из актиномицина D, блеомицина, доксорубицина и митомицина-С. Еще более предпочтительно, противоопухолевый антибиотик выбран из митомицина-С и доксорубицина.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство представляет собой аналог платины. Предпочтительно, аналог платины выбран из группы, состоящей из карбоплатины (параплатина), цисплатины, Eloxatin (оксалиплатина, Sanofi), эптаплатины, лобаплатины, недаплатины и сатрплатины. Более предпочтительно, аналог платины выбран из цисплатины, карбоплатины и Eloxatin (оксалиплатина). Еще более предпочтительно, аналог платины представляет собой карбоплатину.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство представляет собой ингибитор топоизомеразы I. Предпочтительно, ингибитор топоизомеразы I выбран из группы, состоящей из BN-80915 (Roche), камптотецина, СРТ-11, эдотекарина, иринотекана, оратекина (Supergen), SN-38 и топотекана. Более предпочтительно, ингибитор топоизомераза выбран из иринотекана, SN-38 и топотекана. Еще более предпочтительно, ингибитор топоизомеразы I представляет собой иринотекан.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство представляет собой ингибитор топоизомеразы II. Предпочтительно, ингибитор топоизомеразы II выбран из амсакрина, этопозида, фосфата этопозида и эпирубицина (Ellence).

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство представляет собой одно или более средств, выбранных из группы, состоящей из акларубицина, амонафида, камптотекина, 10-гидроксикамптотекина, 9-аминокамптотекина, дифломотекана, иринотекана HCl (Camptosar), эдотекарина, эпирубицина (Ellence), этопозида, эксатекана, гиматекана, луртотекана, митоксантрона, пирарубицина, пиксантрона, рубитекана, собузоксана, тафлупозида, топотекана. Предпочтительно, противораковое средство включает одно или более средств, выбранных их группы, состоящей из камптотекина, 10-гидроксикамптотекина, 9-аминокамптотекина, иринотекана HCl (Camptosar), эдотекарина, эпирубицина (Ellence), этопозида, SN-38, топотекана и их сочетаний.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство представляет собой ингибитор митоза. Предпочтительно, ингибитор митоза выбран из группы, состоящей из доцетаксела (Taxotere), эстрамистина, паклитаксела, разоксана, таксола, тенипозида, винбластина, винкристина, виндезина и винорелбина. Более предпочтительно, ингибитор митоза выбран из доцетаксела, винбластина, винкристина и таксола. Еще более предпочтительно, ингибитор митоза представляет собой доцетаксел.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковая терапия представляет собой лучевую терапию.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами по меньшей мере одна доза, предпочтительно, по меньшей мере 20% всех доз, более предпочтительно, по меньшей мере 50% всех доз, еще более предпочтительно, по меньшей мере 90% всех доз, еще более предпочтительно, каждую дозу (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида, его фармацевтически приемлемой соли или сольвата или их смеси вводят в интервале от 1 до 48 часов, более предпочтительно, в интервале от 2 до 40 часов, более предпочтительно, в интервале от 4 до 32 часов, более предпочтительно, в интервале от 8 до 28 часов, еще более предпочтительно, в интервале от 16 до 26 часов, еще более предпочтительно, в интервале от 23 до 25 часов, еще более предпочтительно, приблизительно через 24 часа после введения дозы противоракового средства.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами по меньшей мере одна доза, предпочтительно, по меньшей мере 20% всех доз, более предпочтительно, по меньшей мере 50% всех доз, еще более предпочтительно, по меньшей мере 90% всех доз, еще более предпочтительно, каждую дозу (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида, его фармацевтически приемлемой соли или сольвата или их смеси вводят одновременно с дозой противораковой терапии. «Одновременно», использованное в данном документе, означает в пределах 4 часов, предпочтительно, в пределах 2 часов, предпочтительно, в пределах 1 часа, еще более предпочтительно, в пределах 30 минут, 15 минут или 5 минут до или после введения дозы противоракового средства.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами способ избирательно направлен на р53-дефектные клетки, в то же время имеет минимальные цитотоксические влияния на нормальные (р53-компетентные) клетки.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство представляет собой средство против новообразования сосудов. Предпочтительно, средство против новообразования сосудов выбрано из группы ингибиторов EGF, ингибиторов EGFR, ингибиторов WEGFR, ингибиторов TIE2, ингибиторов IGF1, ингибиторов COX-II (циклооксигеназа II), ингибиторов MMP-2 (матрикс-металлопротеиназа 2) и ингибиторов MMP-9 (матрикс-металлопротеиназа 9).

Предпочтительные ингибиторы VEGF включают, например, Avastin (бевацизумаб), анти-VEGF моноклональные антитела Genentech, Inc., Южный Сан-Франциско, Калифорния. Дополнительно ингибиторы VEGF включают СР-547 632 (Pfizer Inc., NY, США), AG 13736 (Pfizer Inc.), ZD-6474 (AstraZeneca), AEE 788(Novartis), AZD-2171, VEGF Trap (Regeneron/Aventis), Vatalanib (также известный как РТК-787, ZK-222584: Novartis&Schering AG), Macugen (октанатриевый пегаптаниб, NX-1838, EYE-001, Pfizer Inc./Gilead/Eyetech), IM 862 (Cytran Inc. of Kirkland, Вашингтон, США) и ангиозим, синтетический рибозим из Ribozyme (Boulder, Колорадо) и Chiron (Emeryville, Калифорния) и их сочетания. VEGF ингибиторы, успешные в практическом применении настоящего изобретения, раскрыты в Патентах США № 6 534 524 и 6 235 764, оба внесены в данный документ во всей своей полноте. Дополнительно VEGF ингибиторы описаны, например, в Международной публикации 99/24440, Международной публикации 95/21613, Международной публикации 99/61422, в Патенте США 5 834 504, Международной публикации 98/50356, в Патенте США 5 883 113, в Патенте США 5 886 020, в Патенте США 5 792 783, в Патенте США 6 653 308, Международной публикации 99/10349, Международной публикации 97/22596, Международной публикации 98/54093, Международной публикации 98/02438, Международной публикации 99/16755 и Международной публикации 98/02437, все внесены в данный документ посредством ссылок во всей своей полноте.

Предпочтительные ингибиторы VEGF включают, но не ограничиваясь перечисленным, Iressa (гефетиниб, AstraZeneca), Tarceva (эрлотилиб или OSI-774, OSI Pharmaceuticals Inc.), Erbitux (цетуксимаб, Imclon Pharmaceuticals, Inc.), EMD-7 200(Merck AG), ABX-EGF (Amgen Inc. и Abgenix Inc.), HR3 (Сuban Government), IgA антитела (Университет Эрлангена-Нюрнберга), TP-38 (IVAX), EGFR гибридный белок, EGF-вакцина, анти-EGFr иммунолипосомы (Hermes Biosciences Inc.) и их сочетания. Еще более предпочтительны ингибиторы VEGF, выбранные из Iressa, Erbitux, Tarceva, и их сочетания.

Другие средства против новообразования сосудов включают ацитретин, фенретинид, золедроновую кислоту, ангиостатин, аплидин, циленгтид, комбретастатин А-4, эндостатин, галофухинон, ребимастат, ремоваб, Revlimid, скваламин, украин, Vitaxin и их сочетания.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство представляет собой ингибитор панкиназы. Предпочтительные ингибиторы панкиназы включают Sutent^тм (сунитиниб), описанный в Патенте США № 6 573 293 (Pfizer Inc., NY, США).

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство выбрано из ингибиторов пан-Erb рецепторов или ингибиторов ErbВ2 рецепторов, таких как СР-724,714 (Pfizer Inc.), CI-1033 (карнертиниб, Pfizer Inc.), Herceptin (трастузумаб, Genentech Inc.), Omitarg (2C4, пертузумаб, Genentech Inc.), TAK-165 (Takeda), GW-572016 (Ionafarnib, GlaxoSmithKline), GW-282974 (GlaxoSmithKline), EKB-569 (Wyeth), PKI-166 (Novartis), dHER2 (HER2 вакцина, Corixa и GlaxoSmithKline), АPC8024 (HER2 вакцина, Dendreon), анти-HER2/neu-биспецифические антитела (Decof Cancer Center), В7.her2.IgG3 (Agensys), AS HER2 (Research Institute for Rad Biology & Medicine), трифункциональные биспецифические антитела (Университет Мюнхена), mAB AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Inc.), mAB 2B-1 (Chiron) и их сочетания.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство выбрано из производимого Pfizer ингибитора MEK 1/2 PD 325901, производимого Arry Biopharm ингибитора MEK ARRY-142886, производимого Bristol Myer ингибитора CDK2 BMS-387,032, производимого Pfizer ингибитора CDK PD0332991, производимого AstraZeneca AXD-5438 и их сочетаний.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство выбрано из целекоксиба (Патент США № 5 466 823), валдекоксиба (Патент США № 5 633 272), парекоксиба (Патент США № 5 932 598), деракоксиба (Патент США № 5 521 207), SD-8381 (Патент США № 6 034 256, пример 175), АВТ-963 (Международная публикация 2002/24719), рофекоксиба (CAS № 162011-90-7), МК-663 (или этококсиба), как раскрыто в Международной публикации 1998/03484, COX-189 (Lumiracoxib), как раскрыто в Международной публикации 1999/11605, BMS-347070 (Патент США 6 180 651), NS-398 (СAS 123653-11-2), RS 57067 (CAS 17932-91-3), 4-метил-2-(3,4)-диметилфенил)-1-(4-сульфамоил-фенил)-1Н-пиррола, 2-(4-этоксифенил)-4-метил-1-(4-сульфамоилфенил)-1Н-пиррола и мелоксикама.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство выбрано из Genasense (аугмерозен, Genta), Panitumumab (Abgenix/Amgen), Zevalin (Schering), Bexxar (Corixa/GlaxoSmithKline), Abarelix, Alimta, EPO 906 (Novartis), дискодермолида (XАA-296), ABT-510 (Abbott), Neovastat (Aeterna), энзастаурина (Eli Lilly), Combrestatin A4P (Oxigene), ZD-6126 (AstraZeneca), флавопиридола (Aventis), СYC-202 (Сyclacel), AVE-8062 (Aventis), DMXAA (Roche/Antisoma), Thymitaq (Eximias), Temodar (темозоломид, Schering Plough), Revilimd (Celegene) и их сочетаний.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство выбрано из CyPat (ципротеронацетата), Нisterelin (гистрелина ацетата), Plenaixis (абареликса депо), Atrasentan (ABT-627), Satraplatin (JM-216), таломида (Thalidomide), Theratope, Temilifene (DPPE), ABI-007 (паклитаксела), Evista (ралоксифена), Atamestane (Biomed-777), Xyotax (полиглютамата паклитаксела), Targetin (бексаротин) и их сочетаний.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство выбрано из Trizaone (тирапазамина), Aposyn (экзисулинда), Nevastat (AE-941), Сeplene (гистамина дигидрохлорида), Orathecin (рубитекана), Virulizin, Gastrimmune (G17DT), DX-8951f (эксатекана мезилата), Onconase (ранпирназы), ВЕС2 (митумоаба), Xcytrin (мотексафина гадолиния) и их сочетаний.

В другом частном аспекте указанного варианта осуществления и в сочетании с какими-либо другими не противоречащими частными аспектами противораковое средство выбрано из CeaVac (СEA), NeuTrexin (триметрезата глюкуроната) и их сочетаний. Дополнительные противоопухолевые средства могут быть выбраны из следующих средств: OvaRex (ореговомаб), Osidem (IDM-1) и их сочетаний. Дополнительные противоопухолевые средства могут быть также выбраны из следующих средств: Advexin (ING201), Tirazone (тирапазамин) и их сочетаний. Дополнительные противоопухолевые средства могут быть выбраны из следующих средств: RSR13 (эфапроксирал), Cotara (131I chTNT 1/b), NBI-3001 (IL-4) и их сочетаний. Дополнительные противоопухолевые средства могут быть выбраны из следующих средств: Canvaxin, GMK вакцины, PEG Interon A, Taxoprexin (DHA/пацилтаксел) и их сочетаний.

Термины «алкилирующие вещества», «антибетаболиты», «противоопухолевые антибиотики», «аналоги платины», «ингибиторы топоизомеразы I», «ингибиторы топоизомеразы II» и ингибиторы митоза, использованные в данном документе, означают классы клинически используемых противораковых средств, химические или биологические. Каждый из указанных терминов включает какие-либо из современных клинически используемых противораковых средств, которые укладываются в отдельный класс, так же как и какое-либо средство, которое может клинически использоваться в будущем, еще не изобретенное, но которое будет укладываться в отдельный класс. Примеры каждого из указанных классов противораковых средств смотрите в Physician's Cancer Chemotherapy Drug Manual, 2006, ISBN 0-7637-4019-5. Для более полных перечней каждого из указанных классов противораковых средств смотрите Martindale's Complete Drug Reference, 34^th Edition.

Термин «противораковая терапия» означает «противораковое средство» или «лучевая терапия», как указано выше.

Термин «противораковое средство» означает какие-либо вещества, которые могут быть использованы для лечения рака.

Термин «повреждающее ДНК средство» означает какое-либо противораковое средство, химическое или биологическое, которое непосредственно или опосредованно предотвращает нормальную репликацию или нормальную функцию ДНК млекопитающего. Примеры «повреждающего ДНК средства» включают, но не ограничены перечисленным, алкилирующие средства, антиметаболиты, противораковые антибиотики, аналоги платины, ингибиторы топоизомеразы I и ингибиторы топоизомеразы II, как указано выше.

Термин «в сочетании с» означает относительно согласованное по времени введение терапевтического лечебного средства, такого как (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид, его фармацевтически приемлемая соль или сольват или их смесь, млекопитающему, которое нуждается в этом, с другим терапевтическим лечением, таким как противораковое средство или лучевая терапия, относительно согласованное по времени введение обычно используют в области медицины для комбинированной терапии. В частности, относительно согласованное по времени введение может быть последовательным или одновременным. Предпочтительный вариант осуществления последовательного введения представляет собой введение противоракового средства или лучевой терапии в первую очередь в пределах 24 часов после введения (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида, его фармацевтически приемлемой соли или сольвата или их смеси.

Термин «гиперпролиферативное заболевание» означает патологический рост клеток, который не зависит от нормальных регуляторных механизмов (например, утрата контактного ингибирования), включая патологический рост нормальных клеток и рост патологических клеток. Указанное включает, но не ограничено, патологический рост опухолевых клеток (опухоли), и доброкачественных, и злокачественных. Примеры таких доброкачественных гиперпролиферативных заболеваний представляют собой псориаз, доброкачественную гипертрофию предстательной железы, вирус человеческой папилломы (HPV) и рестиноз.

Термин «рак» включает, но не ограничен перечисленным, рак легких, рак костей, рак поджелудочной железы, рак кожи, рак головы или шеи, кожную или интраокулярную меланому, рак яичников, рак прямой кишки, рак области анального отверстия, рак желудка, рак ободочной кишки, рак молочных желез, рак матки, карциному фаллопиевых труб, карциному эндометрия, карциному шейки матки, карциному влагалища, карциному вульвы, Болезнь Ходжкина, рак пищевода, рак тонкой кишки, рак эндокринной системы, рак щитовидной железы, рак паращитовидных желез, рак надпочечника, карциному мягких тканей, рак уретры, рак полового члена, рак предстательной железы, хроническую или острую лейкемию, лимфоцитарную лимфому, рак мочевого пузыря, рак почки или мочеточника, почечноклеточную карциному, карциному лоханки почки, рак центральной нервной системы (CNS), в первую очередь CNS лимфому, опухоли спинного мозга, глиому ствола мозга, аденому гипофиза или сочетание одного или более из вышеперечисленных раковых заболеваний. В другом варианте осуществления указанного способа описанный патологический рост клеток представляет собой доброкачественное гиперпролиферативное заболевание, включая, но не ограничиваясь перечисленным, псориаз, доброкачественную гипертрофию предстательной железы, вирус человеческой папилломы (HPV) и рестиноз.

Термин «опосредованный активностью CHK1 протеинкиназы» означает биологические или молекулярные процессы, которые регулируются, модулируются или ингибируются активностью CHK1 протеинкиназы.

Термин «фармацевтически приемлемая соль(соли)» означает соли кислотных или основных групп, которые могут быть представлены в соединении. Соединения, которые представляют собой основные по своей сущности, способны образовывать широкий спектр солей с различными органическими и неорганическими кислотами. Кислоты, которые могут быть использованы для получения фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты таких основных соединений, образуют нетоксичные соли присоединения кислоты, т.е. соли, содержащие фармацевтически приемлемые анионы, такие как ацетат, бензолсульфонат, бензоат, бикарбонат, бисульфат, битартрат, борат, бромид, эдетат кальция, камсилат, карбонат, хлорид, клавулонат, цитрат, дигидрохлорид, эдетат, эдислиат, эстолат, эсилат, этилсукцинат, фумарат, глюцептат, глюконат, глутамат, гликолиларсанилат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, йодид, изотионат, лактат, лактобионат, лаурат, малат, малеат, манделат, мезилат, метилсульфат, мукат, напсилат, нитрат, олеат, оксалат, памоат (эмбонат), пальмитат, пантотенат, фосфат/дифосфат, полигалактуронат, салицилат, стеарат, субацетат, сукцинат, таннат, тартрат, теоклат, тосилат, триэтиодод и валерат. Предпочтительные соли включают фосфат и глюконат.

Термин «фармацевтическая композиция» означает смесь одного или более соединений, описанных в данном документе, или их физиологически/фармацевтически приемлемых солей или сольватов с другими химическими компонентами, такими как физиологически/фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты. Предназначением фармацевтической композиции является облегчить введение соединения в организм.

Термин «лучевая терапия» означает медицинское использование радиации для контролирования злокачественных клеток.

Термин «терапевтически эффективное количество» в общем случае означает количество соединения, его фармацевтически приемлемой соли или сольвата или их смеси, которое при введении будет смягчать выраженность одного или более симптомов расстройства, которое лечат. В частности, если термин используют в описании комбинированной терапии, «терапевтически эффективное количество» означает количество отдельного терапевтического средства, которое будет 1) повышать терапевтический эффект другого терапевтического средства, такого как противораковое средство или лучевая терапия, или 2) в сочетании с другим терапевтическим средством смягчать выраженность одного или более симптомов заболевания, которое лечат. В отношении лечения рака смягчение симптомов заболевания, которое лечат, включает а) уменьшение размера опухоли; b) подавление (что означает замедление, предпочтительно прекращение) метастазирования опухоли и с) подавление (что означает замедление, предпочтительно прекращение) роста опухоли.

Термин «лечение», использованный в данном документе, если не указано иначе, означает реверсию, улучшение тяжести состояния, подавление прогрессирования или предупреждение расстройства или состояния, к которому применяют данный термин, или одного или более симптомов такого расстройства или состояния. Термин «терапия», использованный в данном документе, если не указано иначе, означает действие лечения, так же как «лечение», обозначенное непосредственно выше.

Подробное описание изобретения

Использованный только в данной части термин «соединение 1» означает (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид, фармацевтически приемлемую соль или сольват или их смесь; «MTD» означает максимальную переносимую дозу; Q3dх4 означает схему приема однократно каждые 3 дня в 4 курса; Q1wх3 означает схему приема однократно каждую неделю в 3 курса.

(2R,Z)-2-Амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид был изучен в различных in vitro и in vivo системах для определения эффективности против их молекулярной мишени, избирательности в отношении киназ, механизма действия, PK/PD отношения и хемопотенцирования противоопухолевой эффективности.

I Избирательность в отношении киназ

(2R,Z)-2-Амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид представляет собой мощный ATP-компетентный ингибитор CHK1. Значение Ki для (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида против каталитического домена CHK1 (1-289) составило 0,49±0,29 нМ.

Избирательность в отношении киназ (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида относительно Chk1 была измерена в биохимическом скрининговом анализе киназ на панели для свыше 100 протеинкиназ. Восемь киназ демонстрировали соотношение IC₅₀ или Ki для изучаемой киназы свыше Ki для каталитического домена CHK1, меньшее или приблизительно кратное 100. Указанные восемь киназ представляют собой Aurora-A, FGFR3, Flt3, Fms(CSF1R), Ret, VEGFR2, Yes и CHK2. Киназы (таблица 1), которые наиболее фармакологически важны для ингибитора CHK1 из соображений избирательности представляют собой те, для которых транзиентное интермиттентное ингибирование будет влиять на прогрессию клеточного цикла (например, CDK's, митотические киназы), реперную точку (например, CHK2, ATM, ATR) или действовать на пути апоптоза (например, AKT, р38). Основываясь на указанном, VEGFR2, Fms/CSF1R, FGFR2, Flt3 и Ret не являются значимыми, так как длительное ингибирование необходимо для вызова заметного фармакологического действия посредством описанной RTK. Схожим образом, отсутствие эффекта ожидаемо при транзиентном ингибировании Yes киназы, так как нокаутные по Yes мыши проявляют рецессивный фенотип. Aurora-A представляет собой релевантную киназу, но было обнаружено, что ферментный анализ не точно коррелирует с клеточной активностью. В функциональном клеточном анализе (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид показывает избирательность в отношении киназы Aurora свыше 100-кратной. Наконец, соотношение избирательности свыше, чем для СНK2, в основном равно 100-кратной, и авторы изобретения не обладают данными, что активность СНK2 модулируется (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамидом в клеточном и ex vivo анализах. Таблица 1 показывает значения IC₅₀ и Ki для (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида в отношении отдельных киназ и соотношение между IC₅₀ и Ki отдельных киназ свыше Ki для СНK1.

Таблица 1
IC₅₀ в отношении отдельных киназ
Киназа	IC₅₀ (нм)	Кратность селективности
EGFR2	8(K_i)	16
Yes	14^a	29
Fms	10	20
Aurora-A	23	47
FGFR3	23	47
Flt3	25	51
Ret	39^a	80
Chk2	47(K_i)	96
p70S6K	61	124
Rsk1	98	200
Ax1	117	239
Fgr	153	312
Rsk3	171	349
Bmx	233	476
Lyn	266	543
PAR-1Ba	350	714
Blk (m)	365	745
Lck	396	808
PDKl	439	896
cSRC	442	902
Rsk2	621	1267
Ab1 (m)	929	1896
Fyn	953	1945
TrkA	1270	2592
PRK2	1980	4041
PDGFRa	2810	5735
PKBa	9200	18776
EphB4	>10000	>20000

II Эффект повышения цитотоксичности в Клеточном функциональном анализе

Опосредованная реперной точкой остановка клеточного цикла представляет типичный ответ на повреждение ДНК, вызываемое химиотерапевтическими средствами или радиацией. В сочетании с общепринятыми используемыми химиотерапевтическими средствами, такими как гемцитабин, иринотекан и доксорубицин, (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид ликвидирует S и G₂ реперные точки, вызываемые средствами, повреждающими ДНК, и повышает цитотоксичность. Указанная активность в отношении ликвидации реперной точки и повышение цитотоксичности демонстрирует избирательность для клеток раковой р53-дефектной линии выше, чем для р53-компетентных нормальных клеток. Ликвидация реперной точки характеризуется дефосфорилированием треонина-14 и тирозина-15 и активацией митотической протеинкиназы CDK1, преждевременным митозом, нарушением митоза и в конечном счете апоптической клеточной гибелью. Была проведена серия экспериментов для: 1) демонстрации повреждения ДНК, вызванного реперной точкой клеточного цикла; 2) оценки активности (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида, усиливающей химиотерапевтическое действие в сочетании с некоторыми химиотерапевтическими препаратами; и 3) демонстрации избирательности в отношении р53-дефектных раковых клеток.

Активность, ликвидирующая реперную точку. Анализ фосфорилирования Histone Н3 определяет вхождение клеток в митоз и представляет в первую очередь in vitro клеточный анализ, используемый для измерения клеточной эффективности (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида в ликвидации G₂ реперной точки, вызванной камптотекином. Величина ЕС₅₀ составила 45 нМ, что измеряется повышением фосфорилирования Histone Н3 на Ser10, маркера вхождения в митоз. При отсутствии повреждения ДНК (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид не обладал влиянием на клеточный цикл. При сочетании с гемцитабином, проточная цитометрия выявила ликвидацию индуцированной гемцитабином остановки в S-фазе (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамидом. Зависимое от времени уменьшение клеток в S-фазе, вызванное (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамидом, соответствует возрастанию популяций клеток в G₂-М и G₀-G₁, демонстрирующих вхождение клеток в митоз и попытку повторно запустить клеточный цикл. Проточный цитометрический анализ подтверждает значительное повышение апоптических клеток при применении комбинированной терапии гемцитабина и (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида по сравнению с терапией только гемцитабином.

Хемопотенцирование. Исследования выживания клеток и МТТ (анализ с использованием 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолит бромида) были выполнены на панели р53-дефектных человеческих клеток раковой линии для определения активности (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида в повышении цитотоксического воздействия гемцитабина, иринотекана, карбоплатины, доксорубицина и митомицина С. (2R,Z)-2-Амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид сам по себе не оказывает значительного влияния на жизнеспособность клеток по сравнению с контрольными (не подвергшимися воздействию) клетками. В сочетании с гемцитабином (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид вызывает значительное усиление (89%) цитотоксичности гемцитабина по сравнению с цитотоксичностью только одного гемцитабина. (2R,Z)-2-Амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид вызывает выраженное и постоянное потенцирование большинства средств с некоторой вариабельностью, наблюдаемой между клеточными линиями (таблица 2). В таблице 2 гемцитабин использовали в концентрации, которая не вызывает или имеет минимальную токсичность (< 10%) в отсутствие (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида: 5нМ (клетки Colo205), 10 нМ (клетки MDA-МВ-231, НТ29 и K562) или 20 нМ (клетки РС-3).

Избирательность в отношении р53-дефектных клеток. (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид в сочетании с направленной на ДНК химиотерапией предполагает мишенью р53-дефектные клетки, в то же время обладает минимальными цитотоксичными влияниями на нормальные (р53-компетентные) клетки. Для оценки цитотоксического влияния (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида в сочетании с химиотерапевтическими средствами на нормальные клетки, исследование клеточной жизнеспособности выполнили в клетках HUVEC. (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид использовали или с гемцитабином, или с камптотекином, и тот, и другой использовали в фиксированной концентрации, которая вызывала минимальную клеточную токсичность (<10%). Более высокая концентрация (12×ЕС₅₀, 540 нМ) (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида в сочетании вызывает 31,2% или 21,7% повышение клеточной гибели по сравнению с только гемцитабином соответственно. Цитотоксический эффект, вызванный воздействием сочетания на клетки HUVEC, ничтожен по сравнению с цитотоксичностью, вызываемой таким же воздействием в клетках опухоли. Минимальная токсичность, вызываемая (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамидом в р53-компетентных неопухолевых клетках в сочетании с химиотерапией, обеспечивает доказательства для поддержания его избирательности для р53-дефектных раковых клеток и потенциально обладает минимальными неблагоприятными эффектами в нормальных клетках. Исследование жизнеспособности клеток выполнили также в клетках НТС116 (карцинома толстой кишки человека), которые были транзиентно трансфицированы с плазмидом, содержащим или р53 некультивированный тип, или мутантный. В мутантных по р53 клетках НСТ116 сочетание (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида и гемцитабина вызывает 44% подавления клеточного роста по сравнению с только гемцитабином, тогда как у дикого типа р53 клеток НСТ116 подобное комбинированное воздействие вызывает только 15% подавления клеточного роста по сравнению с только гемцитабином. Полученные результаты подтверждают, что р53-дефектные раковые клетки более уязвимы для ингибирования Сhk1, чем их р53-компетентные аналоги.

III Хемопотенцирующий эффект в in vivo исследованиях

Исследование сочетания (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида с цитотоксическим средством выполнили в ксенотрансплантатах НТ29 и Colo205 карциномы толстой кишки человека. Эксперименты с 1 по 39 провели в мышиных ксенотрансплантатах. Эксперименты 40-42 провели в крысиных ксенотрансплантатах. Конкретно, исследования сочетаний с иринотеканом провели в НТ29 и Colo205. Исследования сочетаний с гемцитабином провели в Colo205. Исследования сочетаний с доцетакселом провели в Colo205. Хемопотенцирование (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида продемонстрировали во всех указанных выше исследованиях сочетаний.

Гемцитабин и иринотекан представляют собой прямые цитотоксины, общепризнанные для вызова активации реперной точки и последующей остановки S/G₂М-фазы. (2R,Z)-2-Амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид в общем случае ввели спустя 24 часа после предварительного введенного гемцитабина и иринотекана. Доксацел предствляет собой антимитотики, для которых недавние открытия описывают новое действие для CHK1 в митотической реперной точке. (2R,Z)-2-Амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид вводили одновременно с доцетакселом. В каждом из указанных исследований (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид вводили в растворе ацетата натрия и 4% декстроза/вода растворе 5 мл/кг. Результаты суммированы в таблице 3.

Использованное в таблице 3 «Прим. №» означает номер примера; «Amt A» означает количество цитотоксического средства, вводимого в ксенотрансплантат на дозу; «Amt В» означает количество (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида, вводимого в ксенотрансплантат на дозу; % TGI (подавление роста опухоли) вычислили как 100×(TV_f-TV_i)_{подвергнутые воздействию}/(TV_f-TV_i)_{носитель}, где TV_f и TV_i представляют собой конечную дозу + 2 дня и начальный средний объем опухоли в группах соответственно; % усиленного ТGI вычислили как 100×[1-(TV_f-TV_i)_{сочетание}/(TV_f-TV_i)_{только цитостатик}], где TV_f и TV_i представляют собой конечную дозу + 2 дня и начальный средний объем опухоли в группах соответственно; задержку роста вычислили как Лечение-Носитель (Т-С) для среднего значения дней до 2 удвоений (800 мм³); % ТТР ЕR (время для прогрессивного увеличения соотношения) вычислили как Задержка [(сочетание)/задержка (только цитостатик)×100-100)].

В примерах с 1 по 17 иринотекан и гемцитабин, где уместно, вводили интраперитонеально (IP) в соответствии с Q3d×4, (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид вводили IP в соответствии с Q3d×4 спустя 24 часа после введения иринотекана и гемцитабина.

В примерах с 18 до 25 доцетаксел и (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид вводили одновременно интраперитонеально (IP) в соответствии со схемой Q3d×4. В примере 25 (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид вводили в течение 2 циклов для достижения общей дозы 120 мг/кг.

В примерах с 26 по 35 иринотекан вводили интраперитонеально (IP) в соответствии с Q3d×4, и (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид вводили IP в соответствии с Q3d×4 спустя 24 часа после введения иринотекана или гемцитабина.

В примерах с 36 по 39 иринотекан вводили IP в соответствии с Q1w×3, и (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид вводили IP дважды в неделю спустя 24 и 72 часа после введения иринотекана в течение трех недель.

В примерах с 40 по 42 иринотекан вводили IP в соответствии с Q3d×4, и (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамид вводили через два часа IV инфузии в соответствии с Q3d×4 спустя 24 часа после введения иринотекана.

МТD (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида приняли 40 мг/кг при Q3d×4 или 60 мг/кг при Q1w×3, определенную имеющейся потерей средней массы тела от 10% до 20%.

IV In vivo исследования влияния соединения 1 на повышение чувствительности к радиации

Самкам голых мышей Balb/с (шестинедельного возраста) привили на правую заднюю конечность 3×10⁶ клеток А431 в PBS и допустили рост опухоли до среднего объема ~100 мм³. Мышей разделили на группы по 10 животных в каждой группе.

Анестезированных мышей затем подвергли действию радиации. Радиоактивное излучение получали, используя 6 МэВ пучок электронов высокой скорости из линейного ускорителя Varian 2100 (Palo Alto, CA). Интенсивность использованной дозы составила 20 Гр/мин. Характерными свойствами дозы электронного пучка для глубоких тканей являлись такие, как равномерность дозы в пределах ±5%, полученная в глубине ткани свыше 10 мм. Указанное являлось важным для облучения всей опухоли. Опухоль облучали через срез коллиматора 3 мм толщины площадью 25 мм², соединенный со слоем Perspex толщиной 6 мм. Разделение между опухолью и нижней стороной поверхности коллиматора (Perspex) составляло приблизительно 25 мм. Аппарат закрепили на пластине, нагретой до 37°С для уменьшения влияния потери тепла у мышей. Дозы радиоактивного излучения были рассчитаны и применены старшим лучевым терапевтом. Лучевую терапию проводили, как описано выше, по 2, 3 или 4 Гр ежедневно на 0-4 дни.

(2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-сd]индол-8-ил)ацетамид (соединение 1) получили в виде буферированного водного раствора. Раствор приготовили непосредственно перед дозированием и (15 мг/кг) ввели интраперитониальной инъекцией 15 мг/кг на дни 0-4 немедленно после лучевой терапии. Вышеуказанный раствор, который не содержит соединение 1, рассматривается как «носитель лекарственного средства» или «носитель». Носитель лекарственного средства вводили 0,1 мл/10 г массы тела по той же схеме.

Каждую группу мышей подвергли воздействию только соединения 1, только лучевой терапии или сочетанию соединения 1 и радиации. Животных умертвили, когда коэффициент объема опухоли (TVR) достиг или превысил 4, или если мышь потеряла более чем 15% исходной (в день 0) массы тела. Коэффициент объема опухоли определили как отношение между объемом опухолей в определенное время и исходным объемом опухоли, который представляет собой объем опухоли в день 0.

Объем опухоли измеряли три раза в неделю в период от 0 до 11 дня и еще дополнительно на 23 день. Объем опухоли измерили, используя электронный кронциркуль, и вычислили как длина/2×ширина². Средний объем опухоли вычисляли для каждой группы мышей. Таблица 4 показывает средний объем опухоли каждой группы мышей, которых не лечили, лечили носителем лекарственного средства, соединением 1, лучевой терапией и сочетанием соединения 1 и лучевой терапии.

Таблица 5 демонстрирует задержку опухолевого роста и увеличение коэффициента исходя из данных объема опухоли, приведенных в таблице 4. Задержка роста опухоли определена как среднее время в днях для опухолей, достигших TVR, равного 4, минус время для опухолей, контролированных носителем, достигших такого же размера. Стандартизированная задержка роста опухоли определена как время в днях для опухолей у мышей, подвергнутых комбинированной терапии, достигших TVR, равного 4, минус время для опухолей, достигших такого же размера у мышей, подвергнутых только терапии лекарственным средством.

Увеличение коэффициента определили как стандартизированная задержка роста опухоли у мышей, леченных лекарственным средством и лучевой терапией, деленная на задержку роста опухоли у мышей, леченных только лучевой терапией.

Таблица 5
In vivo исследование коэффициента сенсибилизирующего влияния соединения 1 у опухолевого ксенотрансплантата А431
	Среднее время до TVR=4 (дни)	Задержка опухолевого роста (дни)	Стандартизированная задержка опухолевого роста (дни)	Увеличение коэффициента
Только соединение 1	7,35	-1,05
Радиация (2 Гр соответственно × 5)	10,7	2,3
Радиация (3 Гр соответственно × 5)	11,3	2,9
Радиация (4 Гр соответственно × 5)	11,9	3,5
Соединение 1 плюс радиация (2 Гр соответственно × 5)	11,1	2,7	3,75	1,6
Соединение 1 плюс радиация (3 Гр соответственно × 5)	15,1	6,7	7,75	2,7
Соединение 1 плюс радиация (4 Гр соответственно × 5)	13	4,6	5,65	1,6

Claims

1. Применение (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-сd]индол-8-ил)ацетамида (Соединение 1), имеющего следующую структуру:

или его фармацевтически приемлемой соли, для лечения рака у млекопитающего, где рак выбран из рака толстой кишки, рака предстательной железы и рака молочной железы, где терапевтически эффективное количество Соединения 1 или его соли вводят в комбинации с терапевтически эффективным количеством гемцитабина.

2. Применение по п.1, где рак млекопитающего представляет собой рак толстой кишки.

3. Применение по п,1, где рак млекопитающего представляет собой рак предстательной железы.

4. Применение по п.1, где рак млекопитающего представляет собой рак молочной железы.

5. Применение по любому из пп.1-4, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 1 до 48 ч после предшествующего введения дозы гемцитабина.

6. Применение по любому из пп.1-4, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 2 до 40 ч после предшествующего введения дозы гемцитабина.

7. Применение по любому из пп.1-4, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 4 до 32 ч после предшествующего введения дозы гемцитабина.

8. Применение по любому из пп.1-4, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 8 до 28 ч после предшествующего введения дозы гемцитабина.

9. Применение по любому из пп.1-4, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 16 до 26 ч после предшествующего введения дозы гемцитабина.

10. Применение по любому из пп.1-4, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 23 до 25 ч после предшествующего введения дозы гемцитабина.

11. Применение (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1 -метил- lH-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-cd]индол-8-ил)ацетамида (Соединение 1), имеющего следующую структуру:

или его фармацевтически приемлемой соли, для лечения рака у млекопитающего, где рак выбран из рака толстой кишки, рака предстательной железы и рака молочной железы, где терапевтически эффективное количество Соединения 1 или его соли вводят в комбинации с терапевтически эффективным количеством митомицина С.

12. Применение по п.11, где рак млекопитающего представляет собой рак толстой кишки.

13. Применение по п.11, где рак млекопитающего представляет собой рак предстательной железы.

14. Применение по п.11, где рак млекопитающего представляет собой рак молочной железы.

15. Применение по любому из пп.11-14, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 1 до 48 ч после предшествующего введения дозы митомицина С.

16. Применение по любому из пп.11-14, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 2 до 40 ч после предшествующего введения дозы митомицина С.

17. Применение по любому из пп.11-14, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 4 до 32 ч после предшествующего введения дозы митомицина С.

18. Применение по любому из пп.11-14, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 8 до 28 ч после предшествующего введения дозы митомицина С.

19. Применение по любому из пп.11-14, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 16 до 26 ч после предшествующего введения дозы митомицина С.

20. Применение по любому из пп.11-14, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 23 до 25 ч после предшествующего введения дозы митомицина С.

21. Применение (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-сd]индол-8-ил)ацетамида (Соединение 1), имеющего следующую структуру:

или его фармацевтически приемлемой соли, для лечения у млекопитающего рака толстой кишки, где терапевтически эффективное количество Соединения 1 или его соли вводят в комбинации с терапевтически эффективным количеством противоракового средства, выбранного из гемцитабина, иринотекана и доцетаксела.

22. Применение по п.21, где противораковое средство представляет собой гемцитабин.

23. Применение по п.21, где противораковое средство представляет собой иринотекан.

24. Применение по п.21, где противораковое средство представляет собой доцетаксел.

25. Применение по любому из пп.21-24, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 1 до 48 ч после предшествующего введения дозы противоракового средства.

26. Применение по любому из пп.21-24, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 2 до 40 ч после предшествующего введения дозы противоракового средства.

27. Применение по любому из пп.21-24, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 4 до 32 ч после предшествующего введения дозы противоракового средства.

28. Применение по любому из пп.21-24, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 8 до 28 ч после предшествующего введения дозы противоракового средства.

29. Применение по любому из пп.21-24, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 16 до 26 ч после предшествующего введения дозы противоракового средства.

30. Применение по любому из пп.21-24, где каждую дозу Соединения 1 или его соли вводят в период от 23 до 25 ч после предшествующего введения дозы противоракового средства.

31. Способ лечения рака у млекопитающего, где рак выбран из рака толстой кишки, рака предстательной железы и рака молочной железы, включающий введение эффективного количества (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-сd]индол-8-ил)ацетамида, имеющего следующую структуру:

или его фармацевтически приемлемой соли в комбинации с терапевтически эффективным количеством гемцитабина.

32. Способ лечения рака у млекопитающего, где рак выбран из рака толстой кишки, рака предстательной железы и рака молочной железы, включающий введение эффективного количества (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино[4,5,6-сd]индол-8-ил)ацетамида, имеющего следующую структуру:

или его фармацевтически приемлемой соли в комбинации с терапевтически эффективным количеством митомицина С.

33. Способ лечения рака толстой кишки у млекопитающего, включающий введение эффективного количества (2R,Z)-2-амино-2-циклогексил-N-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-оксо-2,6-дигидро-1Н-[1,2]диазепино [4,5,6-сd]индол-8-ил)ацетамида, имеющего следующую структуру:

или его фармацевтически приемлемой соли в комбинации с терапевтически эффективным количеством противоракового средства, выбранного из гемцитабина, иринотекана и доцетаксела.