BRPI0708776A2 - produto de Ácido hialurânico acrilado, e, processo para preparaÇço e mÉtodo para polimerizaÇço/reticulaÇço do mesmo - Google Patents

produto de Ácido hialurânico acrilado, e, processo para preparaÇço e mÉtodo para polimerizaÇço/reticulaÇço do mesmo Download PDF

Info

Publication number
BRPI0708776A2
BRPI0708776A2 BRPI0708776-4A BRPI0708776A BRPI0708776A2 BR PI0708776 A2 BRPI0708776 A2 BR PI0708776A2 BR PI0708776 A BRPI0708776 A BR PI0708776A BR PI0708776 A2 BRPI0708776 A2 BR PI0708776A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
process according
maintained
hyaluronic acid
naoh
enzyme
Prior art date
Application number
BRPI0708776-4A
Other languages
English (en)
Inventor
Richard A Gross
Vineet Kumar
Original Assignee
Novozymes Biopolymer As
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novozymes Biopolymer As filed Critical Novozymes Biopolymer As
Publication of BRPI0708776A2 publication Critical patent/BRPI0708776A2/pt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
    • C08J3/24—Crosslinking, e.g. vulcanising, of macromolecules
    • C08J3/246—Intercrosslinking of at least two polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2305/00—Characterised by the use of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08J2301/00 or C08J2303/00
    • C08J2305/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof

Abstract

PRODUTO DE ÁCIDO HIALURâNICO ACRILADO, E, PROCESSO PARA PREPARAÇçO E MÉTODO PARA POLIMERIZAÇçO/RETICULAÇAO DO MESMO. A presente invenção refere-se a um produto de ácido hialurônico acrilado com a estrutura: e a processos para a produção do mesmo.

Description

"PRODUTO DE ÁCIDO HIALURÔNICO ACRILADO, E, PROCESSO PARAPREPARAÇÃO E MÉTODO PARA POLIMERIZAÇÃO/RETICULAÇÃO DOMESMO"
CAMPO DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se a um processo para produção deum ácido hialurônico acrilado (HA), seus produtos e seu uso.FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
Ácido Hialurônico (HA) é um polímero de carboidrato linear,natural pertencente à classe de glicosaminoglicanos (ou glucosaminoglicanos)não sulfatados. É composto de unidades de dissacarídeos beta-l,3-7V-acetilglucosamina e ácido beta-1,4-glucurônico com peso molecular (MW) de até 6MDa. Hialuronano está presente na cartilagem hialina, fluido sinovial dejuntas, e tecido da pele, tanto derme como epiderme. HA poder ser extraídode tecidos naturais incluindo o tecido conectivo de vertebrados, do cordãoumbilical humano e de cristas de gaios. Entretanto, é preferível hoje prepará-lo por métodos microbiológicos para minimizar o risco potencial de transferiragentes infecciosos, e para aumentar a uniformidade, qualidade edisponibilidade do produto. (Patente U.S. No. 6 951 743; WO 03/0175902).
Numerosos papéis de HA no corpo foram identificados. Eledesempenha um importante papel em organismos biológicos como um suportemecânico para células de muitos tecidos, como a pele, tendões, músculos ecartilagem. HA está envolvido em processos biológicos chave, como ahidratação de tecidos, e lubrificação. Suspeita-se também que tenha um papel emnumerosas funções fisiológicas, como adesão, desenvolvimento, motilidadecelular, câncer, angiogênese, e cicatrização de feridas. Devido às propriedadesfísicas e biológicas únicas de HA (incluindo viscoelasticidade,biocompatibilidade, biodegradabilidade) HA é empregado em uma grande faixade aplicações correntes e de desenvolvimento em cosmética, oftalmologia,reumatologia, transferência de fármacos e genes, cicatrização de feridas eengenharia tecidual. O uso de HA em algumas destas aplicações é limitado pelofato de que HA é solúvel em água a temperatura ambiente, isto é cerca de 20°C,é rapidamente degradado por hialuronidase no corpo, e é difícil de processá-loem biomateriais. Reticulação de HA foi, assim, introduzida para melhorar aspropriedades físicas e mecânicas de HA e seu tempo de residência in vivo.
HA acrilado pode ser usado para realizar reticulação mediadapor enzima e produzir materiais na forma de hidrogéis. HA reticulado podeser usado em aplicações cosméticas, biomédicas e farmacêuticas. Porreticulação de HA é possível projetar um composto com propriedadesespecíficas para aplicações específicas. HA acrilado provê grupos reativosfuncionalizados que podem ser adicionalmente modificados por uma adiçãodo tipo Michael para introduzir peptídeos bioativos para diferentes aplicações.
Grupos acrilados em HA foram introduzidos por síntese deconjugados metacrilato de glicidila - HA (GMHA). Derivados de GMHA sãoúteis para preparar hidrogéis biomiméticos de HA para promover reparo detecido e cicatrização de feridas. Foi também verificado que montantesaumentados de grupos metacrilato conjugados correspondem a densidadesaumentadas de reticulados e taxas de degradação reduzidas, e possuem um efeitoinsignificante em citocompatibilidade e proliferação de células endoteliaisaórticas humanas. Derivados de GMHA foram preparados tratando uma soluçãoa 1% p/v de HA derivado de fermentação (-2X106 de peso molecular) em águadestilada com um excesso molar de 6, 10 e 20 vezes de metacrilato de glicidilana presença de excesso de trimetil amina e brometo de tetrabutil amônio de umdia para o outro em temperatura ambiente, seguido por 1 h de incubação a 60°C.
Por exemplo GMHA com excesso molar de seis vezes de GM foi preparado pordissolução de 1,0 g de HA em 100 ml de água destilada. À solução foramadicionados 2,2 ml de trietil amina, 2,2 ml de metacrilato de glicidila e 2,2 g debrometo de tetrabutil amônio sendo a mistura agitada de um dia para o outroseguido por incubação a 60°C por uma hora. Por este processo foi alcançado 5%de metacrilação. Usando excesso molar de 10 e 20 vezes foi obtido 7 e 11% deacrilação (Leach and Schmidt5 2005, Biomaterials 26, 125-135; Yonese et a/.,2002, Chem. Pharm. Buli 50, 1341-1348; Schmidt et al, 2003, BiotechnologyandBioengineering 82(5), 578-589).
Conjugados de GMHA foram também preparados pordissolução de HA em tampão de carbonato a pH 11,0. Metacrilato de glicidilafoi acrescentado à solução acima e a mistura agitada a temperatura ambientepor 7 dias. O pH da solução resultante foi ajustado a 7,0 com HCI. Ela foifiltrada e seca por congelamento (Yonese, 2001, Journal of ControlledRelease 73, 173-181). O conjugado de GMHA foi adicionalmente reticuladocom acrilato de hidroxietila para preparar um hidrogel.
Grupos acrilato no HA foram também introduzidos por síntesede conjugados de TV-3-aminopropil metacrilarnida-HA por modificação dosgrupos carboxila presentes no HA. Os dois HAs, natural e enzimaticamentedegradado, foram subseqüentemente usados para modificação química. Osdois HAs foram modificados usando 7V-(3-aminopropil) metacrilamida comoum agente acrilante. O grupo aminopropila reagiu com um grupo carboxila deHA na presença de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (EDCI)como agente de acoplamento resultando na formação de ligação amida comgrupos acrila pendentes na outra extremidade. Em uma reação típica, HA foidissolvido em água destilada. À solução foi adicionado EDCI seguido por N-3-aminopropil metacrilamida. A mistura de reação foi incubada a pH 6,5 porduas horas seguida por adição subseqüente de EDCI e iV-3-aminopropilmetacrilamida e adicionalmente incubada por 2 horas a temperatura ambiente.
A solução foi filtrada, dialisada contra NaCl seguida por água e finalmenteliofilizada para fornecer HA metacrilado. O grau de acrilação obtido foi deaproximadamente 10% (Tirelli et al, 2003, Biomaterials, 24, 893-900; Kimand Park 2002, Journal of Controlled Release, 80, 69-77).
Ácido hialurônico metacrilado (HAMA) foi sintetizado poradição de anidrido metacrílico (~20 vezes) a uma solução de 1 % de HA emágua deionizada ajustada a pH 8 com NaOH e reagida em gelo por 24 horas.O polissacarídeo modificado foi precipitado e lavado com etanol pararemover anidrido metacrílico. No processo pôde ser obtida metacrilação deaté 17%. A baixa percentagem de metacrilação (17%) obtida foi devida abaixa reatividade de anidrido metacrílico com hidroxilas de HA (Smeds eGrinstaff 2001, Journal of Biomedical Materials Research, 54, 115-121;Langer et al, 2005, Biomacromolecules, 6, 386-391).
Métodos conhecidos para acrilação de HA são complicados econsomem muito tempo, e há necessidade na técnica de um processo maissimples para acrilação de HA. É um objetivo da presente invenção prover umprocesso simples para acrilação de ácido hialurônico.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se a métodos de produção de umácido hialurônico acrilado, o referido método incluindo as etapas de:
(a) preparar um líquido aquoso com um pH de 7 a 11 contendoácido hialurônico;
(b) preparar um líquido orgânico contendo cloreto de acrila ecloreto de metileno /dietil éter; e
(c) misturar o líquido orgânico de (b) com o líquido aquoso de
(a), sendo o pH mantido entre 7 e 11.
A presente invenção também se refere a um produto de ácidohialurônico acrilado com a seguinte estrutura:
<formula>formula see original document page 5</formula>
Os processos da presente invenção são muito rápidos devido àreatividade muito alta do reagente de acrilação usado, reduzindo, assim, ostempos de reação convencionais. A percentagem de acrilação alcançada émuito superior usando os processos da presente invenção. Usando o processorápido e simples pode ser alcançada acrilação superior a 90% em um tempode reação muito menor (1-2 horas) em comparação com os 17% reportadosaté agora usando processos complexos. Esta é a percentagem de acrilaçãomais alta alcançada sem usar qualquer agente de acoplamento. Além disso, aquantidade de subprodutos obtidos nos processos da presente invenção émuito menor e estes podem ser facilmente removidos quando comparadoscom os protocolos reportados.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se a processos de produção de umácido hialurônico acrilado incluindo as seguintes etapas: (a) preparar umlíquido aquoso contendo ácido hialurônico em que o pH é mantido entre 7 e11; (b) preparar um líquido orgânico contendo cloreto de acriloíla e umsolvente orgânico; e (c) misturar o líquido orgânico de (b) com o líquidoaquoso de (a), sendo o pH mantido entre 7 e 11.
Com os métodos da presente invenção, HA pode sercontrolavelmente acrilado e reticulado para formar hidrogéis altamentehidratados e degradáveis com uma faixa larga de propriedades para diferentesaplicações em cicatrização de feridas, estrutura em engenharia tecidual e umagrande faixa de outras aplicações biomédicas.
A fórmula estrutural do sal de sódio de HA é mostrada abaixo:
<formula>formula see original document page 6</formula>
"Ácido hialurônico" é definido aqui como umglicosaminoglicano composto de unidades repetitivas de dissacarídeos de N-acetilglucosamina (GlcNAc) e ácido glucurônico (GlcUA) ligados porligações glieosídieas alternadas beta-1,4 e beta-1,3, que ocorrem naturalmenteem superfícies de células, nas substâncias extracelulares básicas do tecidoconectivo de vertebrados, no fluido sinovial das juntas, no fluido endobulbar
do olho, no tecido do cordão umbilical humano e em cristas de gaios. Acidohialurônico é também conhecido como hialuronano, hialuronato, ou HA. Ostermos hialuronano e ácido hialurônico são usados aqui intercambiavelmente.
É entendido aqui que o termo "ácido hialurônico" abrange umgrupo de polissacarídeos de 7V-acetil-D-glucosamina e ácido D-glucurônicocom pesos moleculares variados ou mesmo frações degradadas dos mesmos.
A presente invenção descreve um processo simples deacrilação de HA que evita o uso de catalisadores de transferência de fases eagentes de acoplamento. Um problema a ser resolvido pela presente invençãoé como preparar intermediários de ácido hialurônico acrilado, para fabricaçãode hidrogéis baseados em HÁ reticulados em um processo simples e rápido.
O HA usado na presente invenção pode ser qualquer HAdisponível, incluindo HA derivado de tecidos naturais incluindo o tecidoconectivo de vertebrados, do cordão umbilical humano e de cristas de galo.Em uma modalidade particular o ácido hialurônico ou sal do mesmo érecombinantemente produzido, preferivelmente por uma bactéria ou célulahospedeira Gram-positiva, mais preferivelmente por uma bactéria do gêneroBacillus. Em outra modalidade, o HA é obtido de uma célula deStreptococcus.
A célula hospedeira pode ser qualquer célula de Bacillusadequada para produção recombinante de ácido hialurônico. A célulahospedeira de Bacillus pode ser do tipo selvagem ou um mutante da mesma.Células de Bacillus úteis na prática da presente invenção incluem, mas não selimitam a, células de Bacillus agaraderhens, Bacillus alkalophilus, Bacillusamyloliquefaciens, Bacillus brevis, Bacillus circulans, Bacillus clausii,Bacillus coagulam, Bacillus firmus, Bacillus lautus, Bacillus lentus, Bacilluslieheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus pumilus, Bacillusstearothermophilus, Bacillus subtilis, e Bacillus thuringiensis. Célulasmutantes de Bacillus subtilis particularmente adaptadas para expressãorecombinante são descritas em WO 98/22598. Células de Bacillus nãoencapsulantes são particularmente úteis na presente invenção.
Em uma modalidade preferida, a célula hospedeira de Bacillusé uma célula de Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus elausii, Bacillus lentus,Bacillus lieheniformis, Bacillus stearothermophilus ou Bacillus subtilis. Emuma modalidade mais preferida, a célula de Bacillus é uma célula de Bacillusamyloliquefaeiens. Em outra modalidade mais preferida, a célula de Bacillus éuma célula de Bacillus elausii. Em outra modalidade mais preferida, a célulade Bacillus é uma célula de Bacillus lentus. Em outra modalidade maispreferida, a célula de Bacillus é uma célula de Bacillus lieheniformis. Emoutra modalidade mais preferida, a célula de Bacillus é uma célula de Bacillussubtilis. Na modalidade mais preferida, a célula hospedeira de Bacillus é deBacillus subtilis A 164Δ5 (ver Patente U.S. No. 5 891 701) ou Bacillussubtilis 168Δ4.
O peso molecular médio do ácido hialurônico pode serdeterminado usando métodos padrões da técnica, como os descritos por Uenoet al., 1988, Chem. Pharm. Buli. 36, 4971-4975; Wyatt, 1993, Anal. Chim.Aeta 272: 1-40; e Wyatt Technologies, 1999, "Light Scattering UniversityDAWN Course Manual" (Manual do curso de DAWN da Light ScatteringUniversity) e "DAWN EOS Manual" (Manual de DAWN EOS) WyattTechnology Corporation, Santa Bárbara, Califórnia.
Em uma modalidade preferida, o ácido hialurônico, ou sal domesmo, da presente invenção possui um peso molecular de cerca de 10.000 acerca de 10.000.000 Da. Em uma modalidade mais preferida, tem um pesomolecular de cerca de 25.000 a cerca de 5.000.000 Da. Na modalidade maispreferida, o ácido hialurônico possui um peso molecular de cerca de 50.000 acerca de 3.000.000 Da.
Nos processos da presente invenção, o cloreto de acriloílausado pode ser qualquer cloreto de acriloíla disponível.
Cloreto de acriloíla tem a seguinte estrutura:
<formula>formula see original document page 9</formula>
em que, em uma modalidade particular, Ri é selecionado no grupo queconsiste de hidrogênio, metila, cloreto e COC1, R2 é selecionado no grupo queconsiste de hidrogênio, metila, fenila, cloreto, 2-cloro fenila, COCl eCH2COCl e R3 é selecionado no grupo que consiste de hidrogênio, metila,cloreto, 4-nitro fenila, 3-trifluorometilfenila e estirila.
Cloreto de acriloíla, também conhecido como cloreto de 2-propenoíla ou cloreto de ácido acrílico é um líquido claro, amarelo claro,inflamável com um odor acre; pertence ao grupo dos cloretos de ácido e é,portanto, derivado de ácido acrílico. Este composto terá as reações comuns decloretos de ácido: reagirá violentamente com água produzindo ácido acrílico.Reações com álcoois resultarão na formação de ésteres e reações com aminasgerarão amidas. Cloreto de acriloíla é mais comumente empregado emsínteses orgânicas para a introdução de porções acrílicas em outroscompostos. É também usado extensivamente na preparação de monômeros epolímeros acrilato.
Em uma modalidade particular da presente invenção o cloretode acriloíla é selecionado no grupo que consiste de cloreto de acriloíla, cloretode metacriloíla, cloreto de crotonila, cloreto de cinamoíla, cloreto de fumarila,cloreto de itaconila, cloreto de 3,3-dimetilacriloíla, cloreto de tricloroacriloíla,cloreto de 2-clorocinamoíla, cloreto de trans-4-nitrocinamoíla,cloreto detrans-3-(trifluorometil)cinamoíla, cloreto de trans-3-(trifiuorometil)cinamoílae cloreto de cinamilidenomalonila.
Nos métodos da presente invenção, HA é reagido com umcloreto de acriloíla de acordo com a reação apresentada abaixo:
<formula>formula see original document page 10</formula>
em que Ri é selecionado no grupo que consiste de hidrogênio, metila, cloretoe COC1, R2 inclui uma estrutura selecionada no grupo que consiste dehidrogênio, metila, fenila, cloreto, 2-cloro fenila, COCl e CH2COCl e R3 éselecionado no grupo que consiste de hidrogênio, metila, cloreto, 4-nitrofenila, 3-trifluorometilfenila e estirila.
Em uma modalidade particular da presente invenção o líquidoaquoso de a) é preparado da seguinte maneira: HA é dissolvido em água, emparticular em água deionizada para formar um líquido aquoso contendo HA.
Hidróxido de sódio é adicionado em gotas ao líquido aquoso contendo HA. Eimportante que os grupos hidróxido de HA sejam desprotonados. O líquidoaquoso é deixado por um período de tempo em baixas temperaturas paraassegurar a conversão de hidroxila em íons hidróxido.Em uma modalidade particular da presente invenção atemperatura do líquido aquoso é abaixada para cerca de 0°C a 5 0C apósdissolução do HA, sendo mantida entre 0°C e 15°C durante a reação. Em umamodalidade mais particular da presente invenção a temperatura do líquidoaquoso é mantida a 0°C e 5 0C durante a reação.
Em uma modalidade particular da presente invenção o pH émantido entre 7 e 11 durante esta primeira etapa do processo. Em umamodalidade mais particular da presente invenção o pH é mantido entre 8 e 10.Na modalidade mais particular da presente invenção o pH é mantido entre 8,5e 9,5. O pH é mantido por tampão e/ou por adição de hidróxido de sódiodiluído.
O líquido orgânico é preparado misturando cloreto de acriloílacom um solvente imiscível de baixo ponto de ebulição. O solvente imiscívelde baixo ponto de ebulição pode ser selecionado no grupo que consiste dedietil éter e diclorometano.
Acrilação é principalmente dependente do pH da solução. Emuma modalidade particular o cloreto de acriloíla é adicionado em gotas àsolução de HA. Algum ácido acrílico se formará fazendo com que o pHabaixe, sendo assim necessário adicionar uma base para aumentar o pH. Emuma modalidade particular o pH é mantido entre 7 e 11 usando tampões e/oupor adição de NaOH, preferivelmente NaOH IN - 5N. Em uma modalidadeparticular da presente invenção o pH é mantido entre 7,5 e 10 durante areação. Em uma modalidade mais particular da presente invenção o pH émantido entre 7,5 e 9,5 durante a reação. Na invenção mais particular o pH émantido entre 8 e 9.
O pH ótimo para a presente reação fica entre 8 e 9,5. Pode serdifícil manter o pH estável durante a adição de cloreto de acriloíla já que asalterações de pH são muito rápidas devido à reação relativamente rápida decloreto de acriloíla com água para formar ácido acrílico.Para ser capaz de manter o pH entre 8 e 9,5 durante a reaçãode HA com cloreto de acriloíla foi verificado que o uso de uma bomba deseringa para adicionar cloreto de acriloíla poderia resolver o problema emanter a adição de cloreto de acriloíla em 500-1000 uL/hora. Com o uso deuma bomba de seringa é adicionada uma quantidade menor de cloreto deacriloíla e assim o pH pode ser facilmente mantido. Assim em umamodalidade particular é usada uma bomba de seringa para manter o pHestável.
A razão de HA para cloreto de acriloíla em uma base molarfica preferivelmente entre 1:10a 1:60. Em uma modalidade preferida, 50 mgde HA (0,125 mmol) em 25 ml de água deionizada foi tratada com 120microlitros de cloreto de acriloíla (1,48 mmol) em uma razão deaproximadamente 1:12, resultando em 17% acrilação de HA. Em outramodalidade preferida, a mesma concentração de HA (0,125 mmol) foi tratadacom uma quantidade maior de cloreto de acriloíla (250 microlitros, 3,07mmol) em uma razão de aproximadamente 1:25, resultando em 34% deacrilação de HA. Em uma modalidade mais preferida, 0,125 mmol de HAforam tratados com 500 microlitros de cloreto de acriloíla (6,15 mmol) emuma razão de aproximadamente 1:50, resultando em 90% de acrilação de HA.
Após adição completa do cloreto de acriloíla a mistura líquidade reação é agitada para assegurar reação completa.
Após término da reação, o produto de HA acrilado éprecipitado por adição de excesso de um solvente orgânico como etanol,acetona, metanol ou álcool isopropílico. Para purificação do produto derivado,este é centrifugado, e lavado com um solvente como etanol, metanol ouacetona. O produto pode ser dialisado para prover um produto de HA acriladosubstancialmente puro.
O HA acrilado pode ser formulado em um pó seco, porexemplo, por liofilização ou secagem por pulverização.A presente invenção também se refere a HA acrilado tendo aseguinte estrutura:
<formula>formula see original document page 13</formula>
em que R1 é selecionado no grupo que consiste de hidrogênio, metila, cloretoe COCl5 R2 inclui uma estrutura selecionado no grupo que consiste dehidrogênio, metila, fenila, cloreto, 2-cloro fenila, COCl e CH2COCl e R3 éselecionado no grupo que consiste de hidrogênio, metila, cloreto, 4-nitrofenila, 3-trifluorometilfenila e estirila.
Em uma modalidade particular, a presente invenção divulgaum HA acrilado com a seguinte estrutura:
<formula>formula see original document page 13</formula>
Os produtos de HA acrilado podem ser caracterizados porRMN de próton. A percentagem de acrilação é determinada a partir dosvalores de integração do próton de acrilato 5,66 ppm (1 H) aos prótons de N-acetila de ácido hialurônico (-NHCOCH3, 3H, 2,0 ppm).
HA acrilado pode ser usado para realizar reticulação mediadapor enzima e produzir materiais na forma de hidrogéis.
Exemplos de reticulação/polimerização mediadas por enzima:
<formula>formula see original document page 13</formula>
Peroxidase de raiz forte foi usada como enzima catalisadorapara mediar a polimerização /reticulação dos grupos funcionais acrilaintramoleculares ou intermoleculares.
As classes enzimáticas de peroxidases e lacases são capazes decatalisar as reações de reticulação acima mencionadas de HA acrilato deglicidila e HA-acrilato.
A reação enzimática de reticulação do polímero de HAquimicamente modificado é branda e favorável ao meio ambiente quandocomparada com métodos químicos alternativos.
Anteriormente, a peroxidase de raiz forte (HRP) foi reportadacomo mediadora da polimerização de radical livre de metacrilato de metila(Kalra, B.; Gross, R.A.; Green Chemistry, 2002, 4. 174-178). A reação podeser realizada em água em temperaturas ambientes. Como um exemplo, apolimerização mediada por HRP de acrilato de sódio realizada em meioaquoso forneceu poli(acrilato de sódio) em rendimentos de até 88% em 24 hcom peso molecular de aproximadamente 119 KDa.
Em uma modalidade particular a enzima é uma entre
peroxidase de raiz forte, peroxidase de soja e peroxidase de lignina.
Em uma modalidade particular a enzima é uma enzima
recombinante.
Em uma modalidade particular a enzima é uma enzima
termofílica.
Em uma modalidade particular a enzima é uma enzima
mesofílica.
Em uma modalidade particular da presente invenção ummétodo para polimerização/reticulação do produto ácido hialurônico acriladoda presente invenção inclui a combinação de:
a) o produto ácido hialurônico acrilado de acordo com areivindicação 1;
b) uma fonte de peroxidase;
c) um iniciador;d) uma enzima, e
e) um solvente.
Uma fonte de peróxido útil no presente método pode serqualquer composto tendo uma ligação oxigênio-oxigênio, como peróxido debenzoíla, peróxidos de metais alcalinos e metais alcalino terrosos, mono- edialquilperóxidos, peróxido de hidrogênio bis-éter TMS, perácidos orgânicose inorgânicos, ou peróxido de hidrogênio. Reagentes que geram um compostotendo uma ligação oxigênio-oxigênio em condições de reação são tambémfontes de peróxido segundo o termo aqui utilizado. Peróxido de hidrogênio épreferido porque gera somente água como subproduto.
Em uma modalidade particular da presente invenção a fonte deperóxido pode ser peróxido de hidrogênio ou peróxido de alquila.
Em uma modalidade particular da presente invenção o produtode ácido hialurônico acrilado é um entre ésteres metacrilato, ésteres acrilato,acrilamida, estireno, e ácido acrílico e sais dos mesmos.
Em uma modalidade particular da presente invenção oiniciador é um composto beta-dicarbonila ou beta-dicetona.
Em uma modalidade particular o solvente é água ou umsolvente orgânico, ou misturas dos mesmos.
Em uma modalidade particular a polimerização/reticulação érealizada em atmosfera inerte.EXEMPLOSExemplo 1
Ácido hialurônico de alto peso molecular (700.000-1.000.000Dalton, 50 mg) foi dissolvido em água deionizada (25 ml). A temperatura foireduzida a 0°C.
À solução acima foi adicionada uma gota de NaOH 0,33 Ν. OpH mudou de 5,4 para 9,5. A solução foi agitada neste pH por 30 minutos.Uma mistura de quantidades iguais de cloreto de acriloíla (100-500 uL) ediclorometano (100-500 ml) foi preparada. Esta foi adicionada gota a gotadurante 1 hora à mistura de reação de ácido hialurônico. Durante a adição decloreto de acriloíla, em gotas, o pH foi mantido entre 8-9 por adição em gotasde NaOH 1 N- 5 N.
Após adição completa de cloreto de acriloíla, a solução foideixada em agitação por mais uma hora. Durante a reação foi mantidatemperatura baixa (0-5°C), seguindo-se filtração. O filtrado foi precipitadousando um grande excesso de etanol frio (500 ml- 1000 ml) e este lavado cometanol. O produto foi centrifugado, dialisado e liofilizado.
Exemplo 2
Ácido hialurônico de alto peso molecular (700.000-1.000.000Dalton, 50 mg) foi dissolvido em tampão de fosfato 0,25 - 2,0 M (25 ml)tendo pH 8,0. A temperatura foi reduzida a 0°C. A solução foi agitada nestepH por 30 minutos. Uma mistura de quantidades iguais de cloreto de acriloíla(100-500 uL) e diclorometano (100-500 ml) foi adicionada gota a gotadurante 1 hora à mistura de reação de ácido hialurônico. Após adiçãocompleta de cloreto de acriloíla, a solução foi deixada em agitação por maisuma hora. Durante a reação foi mantida temperatura baixa (0-5°C), seguindo-se filtração do produto resultante. O filtrado foi precipitado usando um grandeexcesso de etanol frio (500 ml- 1000 ml) e este lavado com etanol. O produtofoi centrifugado, dialisado e liofilizado.
Exemplo 3
Ácido hialurônico de alto peso molecular (700.000-1.000.000Dalton, 50 mg) foi dissolvido em água deionizada (25 ml). A temperatura foireduzida a 0°C.
À solução acima foi adicionada uma gota de NaOH 0,33 Ν. OpH mudou de 5,4 para 9,5. A solução foi agitada neste pH por 30 minutos.Cloreto de acriloíla (100-500 uL) (100-500 ml) foi adicionado em gotasusando uma bomba de seringa. A taxa de adição de cloreto de acriloíla foi de500 - 2000 ul/h. O pH foi mantido entre 8 - 9 por adição em gotas de NaOH1N-5N.
Após adição completa de cloreto de acriloíla, a solução foideixada em agitação por uma hora. Durante a reação foi mantida temperaturabaixa (0-5°C). A mistura de reação foi filtrada. O filtrado foi precipitadousando um grande excesso de etanol frio (500 ml- 1000 ml) e este lavado cometanol. O produto foi centrifugado, dialisado e liofilizado.
Usando o processo acima diferentes derivados de ácidohialurônico acrilado com percentagem variada de acrilação foram obtidos portratamento com montantes variados de cloreto de acriloíla usados paraacrilação. A percentagem de acrilação foi calculada comparando o sinal a2,02 (3H, -NHCOCH3) e 5,6 (1H, próton de HA da porção acrila introduzidacomo mostrado abaixo):
<formula>formula see original document page 17</formula>
Como exemplo, 50 mg de HA (0,125 nmol) em 25 ml de águadeionizada com tratamento com 120 microlitros de cloreto de acriloíla (1,48mmol) resultaram em 17% de acrilação. Usando a mesma concentração deHA (0,125 mmol) e tratamento com montante maior de cloreto de acriloíla(250 microlitros, 3,07 mmol) foi obtido 34% de acrilação. Para alcançaracrilação maior, HA (0,125 mmol) foi tratado com 500 microlitros de cloretode acriloíla (6,15 mmol) que resultou em 90% de acrilação de ácidohialurônico. Esta é a maior % de acrilação alcançada sem usar qualqueragente de acoplamento. Percentagem de acrilação mais alta é alcançadadevido a alta reatividade de cloreto de acriloíla com hidroxilas primárias deHA. Os rendimentos dos produtos modificados são superiores a 90%.
Exemplo 4
1H RMN (Varian-300) foi usado para determinar afuncionalidade final e pureza do ácido hialurônico acrilado (em D2O). Asamostras estavam em 2H20 com o pico 2HOH a 4,79 ppm usado como linhade referência. Próton-RMN do ácido hialurônico acrilado revelou picos deacrila distintos a (5,66 ppm, 1 H e 6,04 ppm, 2H). O pico a 5,66 ppm aparececomo um dupleto de dupleto (11 Hz e 2 Hz). Devido ao acoplamento eis deHA através da dupla ligação ao próton Hx vizinho ao grupo carbonila, umaconstante de acoplamento de (11 Hz) é obtida. Ele também se acoplageminalmente ao próton Hm e uma constante de acoplamento de 2 Hz éobservada. Prótons Hm e Hx aparecem a 6,04 ppm. Uma constante deacoplamento de 17 Hz e 13 Hz é observada devido ao acoplamento de Hx aHm (trans-) através da dupla ligação e acoplamento de Hx a HA (eis-) atravésda dupla ligação. Similarmente próton Hm se acopla (trans-) através da duplaligação ao próton Hx sendo observada uma constante de acoplamento de 17Hz. Como prótons Hm e Hx aparecem na mesma região (6,04 ppm) e devido abaixa razão Δν/J, não é possível resolver todas as constantes de acoplamento.O grau de modificação foi determinado a partir das integrações relativas dospróton de acrilato a N-acetila de ácido hialurônico (-NHCOCH3, 3H, 2,0ppm).
A invenção descrita e reivindicada aqui não deve ser limitadaem escopo pelos aspectos específicos aqui divulgados, já que estes aspectospretendem ser ilustrações de vários aspectos da invenção. Quaisquer aspectosequivalentes pretendem ser incluídos no escopo desta invenção. Na realidade,várias modificações da invenção, além daquelas mostradas e descritas aquificarão aparentes para os especialistas da técnica a partir da descrição anterior.Tais modificações também pretendem ficar dentro do escopo dasreivindicações anexas. No caso de conflito, a presente divulgação incluindo asdefinições será usada como controle.
Várias referências são citadas aqui, sendo suas divulgaçõescompletas incorporadas por referência.

Claims (40)

1. Produto de ácido hialurônico acrilado, caracterizado pelofato de ter a seguinte estrutura:<formula>formula see original document page 19</formula>
2. Produto de ácido hialurônico acrilado de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato que Ri é selecionado no grupo queconsiste de hidrogênio, metila, cloreto e COC1, R2 é selecionado no grupo queconsiste de hidrogênio, metila, fenila, cloreto, 2-cloro fenila, COCl eCH2COCl e R3 é selecionado no grupo que consiste de hidrogênio, metila,cloreto, 4-nitro fenila, 3-trifluorometilfenila e estirila.
3. Processo para preparação de um produto de ácidohialurônico acrilado, caracterizado pelo fato de compreender as seguintesetapas:a) preparar um líquido aquoso incluindo ácido hialurônicosendo o pH mantido em um valor adequadob) preparar um líquido orgânico contendo cloreto de acriloílae um solvente orgânico; ec) misturar o líquido orgânico de (b) com o líquido aquoso de(a), sendo o pH mantido em um valor adequado.
4. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a mistura da etapa c) é obtida por agitação.
5. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a etapa a) é mantida em um pH entre 7 e 11.
6. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que o líquido aquoso da etapa a) inclui um tampão fosfato.
7. Processo de acordo com a reivindicação 6, caracterizadopelo fato que o tampão fosfato está presente em um montante entre 0,1 molare 1 molar.
8. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a etapa c) é mantida em um pH entre 7 e 11.
9. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a etapa c) é mantida em um pH entre 7 e 11 por um tampão.
10. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a etapa c) é mantida em um pH entre 7 e 11 pela adição emgotas de NaOH.
11. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a etapa c) é mantida em um pH entre 7 e 11 pelo uso de umtampão e /ou adição em gotas de NaOH diluído.
12. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a etapa c) é mantida em um pH de 7,5 a 10.
13. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a etapa c) é mantida em um pH de 7,5 a 10 por um tampão.
14. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a etapa c) é mantida em um pH de 7,5 a 10 pela adição em gotasde NaOH.
15. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a etapa c) é mantida em um pH de 7,5 a 10 pelo uso de umtampão e/ou por adição em gotas de NaoH diluído.
16. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a etapa c) é mantida em um pH de 8 a 9.
17. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a etapa c) é mantida em um pH de 8 a 9 por um tampão.
18. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a etapa c) é mantida em um pH de 8 a 9 pela adição em gotas deNaOH.
19. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a etapa c) é mantida em um pH de 8 a 9 pelo uso de um tampãoe/ou adição em gotas de NaOH diluído.
20. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a temperatura é mantida entre 0°C e 15°C durante a etapa a).
21. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a temperatura é mantida entre 0°C e 5°C durante a etapa c).
22. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que o pH do líquido aquoso da etapa a) é ajustado por adição emgotas de NaOH.
23. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que o pH do líquido aquoso da etapa a) é ajustado por um tampãoe/ou por adição em gotas de NaOH.
24. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que o pH da etapa c) é ajustado pela adição em gotas de NaOH.
25. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que o pH da etapa c) é ajustado por um tampão e/ou por adição emgotas de NaOH.
26. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato que a adição de cloreto de acriloíla na etapa c) é conseguida usandouma bomba de seringa.
27. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato de conter adicionalmente uma etapa de recuperação.
28. Processo de acordo com a reivindicação 27, caracterizadopelo fato que a etapa de recuperação inclui uma etapa de precipitação.
29. Processo de acordo com a reivindicação 27, caracterizadopelo fato que a etapa de recuperação inclui adicionalmente uma etapa defiltração da mistura de reação e precipitação do filtrado.
30. Processo de acordo com a reivindicação 3 caracterizadopelo fato que o solvente orgânico é selecionado no grupo que consiste dediclorometano e dietil éter.
31. Método para polimerização/reticulação do produto deácido hialurônico acrilado como definido na reivindicação 1, caracterizadopelo fato de compreender a combinação de:a) produto de ácido hialurônico acrilado como definido nareivindicação 1;b) uma fonte de peróxido;c) um iniciador;d) uma enzima ee) um solvente.
32. Método de acordo com a reivindicação 31, caracterizadopelo fato que a fonte de peróxido é peróxido de hidrogênio ou peróxido dealquila.
33. Método de acordo com a reivindicação 31, caracterizadopelo fato que a enzima é selecionada no grupo que consiste de peroxidase deraiz forte, peroxidase de soja, e peroxidase de lignina.
34. Método de acordo com a reivindicação 31, caracterizadopelo fato que o produto de ácido hialurônico acrilado é um entre ésteresmetacrilato, ésteres acrilato, acrilamida, estireno, e ácido acrílico e sais dosmesmos.
35. Método de acordo com a reivindicação 31, caracterizadopelo fato que a enzima é uma enzima recombinante.
36. Método de acordo com a reivindicação 31, caracterizadopelo fato que a enzima é uma enzima termofílica.
37. Método de acordo com a reivindicação 31, caracterizadopelo fato que a enzima é uma enzima mesofílica.
38. Método de acordo com a reivindicação 31, caracterizadopelo fato que o iniciador é um composto beta-dicarbonila ou beta-dicetona.
39. Método de acordo com a reivindicação 31, caracterizadopelo fato que o solvente é água ou um solvente orgânico ou misturas dosmesmos.
40. Método de acordo com a reivindicação 31, caracterizadopelo fato de a combinação ser realizada em atmosfera inerte.
BRPI0708776-4A 2006-03-14 2007-03-09 produto de Ácido hialurânico acrilado, e, processo para preparaÇço e mÉtodo para polimerizaÇço/reticulaÇço do mesmo BRPI0708776A2 (pt)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US78258106P 2006-03-14 2006-03-14
US60/782581 2006-03-14
PCT/US2007/063671 WO2007106738A2 (en) 2006-03-14 2007-03-09 Acrylated hyaluronic acid

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BRPI0708776A2 true BRPI0708776A2 (pt) 2011-06-14

Family

ID=37054621

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BRPI0708776-4A BRPI0708776A2 (pt) 2006-03-14 2007-03-09 produto de Ácido hialurânico acrilado, e, processo para preparaÇço e mÉtodo para polimerizaÇço/reticulaÇço do mesmo

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20090118423A1 (pt)
EP (1) EP1999160B1 (pt)
JP (1) JP5123285B2 (pt)
CN (1) CN101405303B (pt)
AT (1) ATE453670T1 (pt)
AU (1) AU2007226690B2 (pt)
BR (1) BRPI0708776A2 (pt)
CA (1) CA2647481A1 (pt)
DE (1) DE602007004086D1 (pt)
DK (1) DK1999160T3 (pt)
ES (1) ES2339181T3 (pt)
PL (1) PL1999160T3 (pt)
WO (1) WO2007106738A2 (pt)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101100803B1 (ko) * 2009-04-24 2011-12-29 서울과학기술대학교 산학협력단 리포아마이드가 결합된 고분자화합물과 이의 제조방법
CN103562229A (zh) * 2011-05-30 2014-02-05 诺维信生物制药丹麦公司 高分子量透明质酸的喷雾干燥
JP5714456B2 (ja) * 2011-09-07 2015-05-07 株式会社シード 重合性ヒアルロン酸誘導体、ならびにその重合体を含むヒアルロン酸ヒドロゲルおよびコンタクトレンズ
US9492484B2 (en) * 2012-09-27 2016-11-15 The Regents Of The University Of California Cardiosphere derived cell population and methods of use
CN104224688B (zh) * 2013-06-09 2017-10-10 北京化工大学 负载纳米药物的丙烯酸酯化透明质酸水凝胶及其制备方法
US10335515B2 (en) * 2013-09-25 2019-07-02 The University Of Kansas Hydrogel precursors having nanoparticles
EP2899214A1 (en) * 2014-01-27 2015-07-29 Basf Se Ethylenically unsaturated polysaccharides, method for their production and their use
FR3021537B1 (fr) 2014-05-28 2016-05-27 Oreal Procede cosmetique pour attenuer les rides
FR3021541B1 (fr) * 2014-05-28 2017-10-27 Oreal Procede cosmetique pour attenuer les rides
FR3026299B1 (fr) * 2014-09-30 2016-11-25 Oreal Procede cosmetique pour attenuer les rides
FR3026300B1 (fr) * 2014-09-30 2020-01-10 L'oreal Procede cosmetique pour attenuer les rides
FR3026298B1 (fr) * 2014-09-30 2017-12-01 Oreal Procede cosmetique pour attenuer les rides
CN106967202B (zh) * 2017-03-06 2020-05-22 深圳大学 纳米凝胶酶及其制备和应用
JP2018153296A (ja) * 2017-03-16 2018-10-04 Jsr株式会社 不飽和化合物を含有する組成物
WO2018187184A1 (en) * 2017-04-04 2018-10-11 The Regents Of The University Of California Injectable therapeutic angiogenic material for brain repair
KR101974744B1 (ko) * 2017-10-12 2019-09-06 서울과학기술대학교 산학협력단 히알루론산 그라프트 공중합체의 가교물을 포함하는 하이드로젤 및 이의 제조방법
KR101974745B1 (ko) * 2017-10-18 2019-09-06 서울과학기술대학교 산학협력단 그라프트 공중합체와 젤라틴 가교물을 포함하는 히알루론산 하이드로젤 및 이의 제조방법
KR102103180B1 (ko) * 2017-12-22 2020-04-22 케이비바이오메드 주식회사 히알루론산유도체, 플루란 및 카르복시메틸 셀룰로오스를 포함하는 유착방지용 조성물 및 이의 제조방법
CN111359011A (zh) * 2020-03-31 2020-07-03 东华大学 一种提升酰胺化反应用于制备蛋白质生物墨水的方法
CN113943382B (zh) * 2020-07-16 2023-03-10 孛朗孚(杭州)生物科技有限公司 一种丙烯酸酯类修饰的透明质酸（钠）及其合成方法和应用
AU2021411950A1 (en) * 2020-12-30 2023-07-06 Convatec Technologies Inc. Surface treatment system and method for subcutaneous device

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993009176A2 (en) * 1991-10-29 1993-05-13 Clover Consolidated, Limited Crosslinkable polysaccharides, polycations and lipids useful for encapsulation and drug release
US6951743B2 (en) * 1997-10-31 2005-10-04 University Of Oklahoma Board Of Regents Hyaluronan synthase genes and expression thereof in bacillus hosts
US6007833A (en) * 1998-03-19 1999-12-28 Surmodics, Inc. Crosslinkable macromers bearing initiator groups
ATE386075T1 (de) * 1999-04-12 2008-03-15 Cornell Res Foundation Inc Hydrogel-formendes system mit hydrophoben und hydrophilen komponenten
US6716445B2 (en) * 1999-04-12 2004-04-06 Cornell Research Foundation, Inc. Hydrogel entrapping therapeutic agent and stent with coating comprising this
WO2000078988A1 (en) * 1999-06-22 2000-12-28 Trustees Of Tufts College Enzyme-mediated polymerization methods and products
AU2002258490A1 (en) * 2001-03-12 2003-06-17 Clemson University Polysaccharide-based polmerizable hydrogels
US6673919B2 (en) * 2001-03-30 2004-01-06 Chisso Cororation Chemically modified hyaluronic acid or salts thereof, and a process for producing thereof
KR100885163B1 (ko) * 2001-12-21 2009-02-23 노보자임스 바이오폴리머 에이/에스 재조합체 숙주 세포에서 히알루로난의 제조 방법
US7311879B2 (en) * 2003-08-14 2007-12-25 Hodson Steve J Syringe pump
US8293890B2 (en) * 2004-04-30 2012-10-23 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Hyaluronic acid based copolymers

Also Published As

Publication number Publication date
CA2647481A1 (en) 2007-09-20
CN101405303A (zh) 2009-04-08
WO2007106738A3 (en) 2008-09-25
PL1999160T3 (pl) 2010-06-30
ATE453670T1 (de) 2010-01-15
JP5123285B2 (ja) 2013-01-23
AU2007226690A1 (en) 2007-09-20
EP1999160A2 (en) 2008-12-10
DE602007004086D1 (de) 2010-02-11
US20090118423A1 (en) 2009-05-07
EP1999160B1 (en) 2009-12-30
CN101405303B (zh) 2011-11-23
ES2339181T3 (es) 2010-05-17
JP2009530445A (ja) 2009-08-27
DK1999160T3 (da) 2010-04-26
WO2007106738A2 (en) 2007-09-20
AU2007226690B2 (en) 2012-04-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BRPI0708776A2 (pt) produto de Ácido hialurânico acrilado, e, processo para preparaÇço e mÉtodo para polimerizaÇço/reticulaÇço do mesmo
US11939433B2 (en) Method for preparing acylated crosslinked glycosaminoglycans
CA2621899C (en) Aryl/alkyl succinic anhydride hyaluronan derivatives
Hintze et al. Chemical modification of hyaluronan and their biomedical applications
CZ302856B6 (cs) Zpusob prípravy derivátu polysacharidu
CA2643714C (en) Aryl/alkyl vinyl sulfone hyaluronic acid derivatives
JP2009516765A (ja) 新規ヒアルロン酸誘導体、その製造方法及びその使用
BR122020015465B1 (pt) Ácido hialurônico modificado, ácidos hialurônicos reticulados, método para reticulação de ácidos hialurônicos, e, composição de polímero
Schuurmans et al. Hydrolytic (in) stability of methacrylate esters in covalently cross-linked hydrogels based on chondroitin sulfate and hyaluronic acid methacrylate
JP2010516867A (ja) ヒアルロン酸のメチルエステル
CN113943382B (zh) 一种丙烯酸酯类修饰的透明质酸（钠）及其合成方法和应用
Borzacchiello et al. Physical and chemical hyaluronic acid hydrogels and their biomedical applications

Legal Events

Date Code Title Description
B25A Requested transfer of rights approved

Owner name: NOVOZYMES BIOPHARMA DK A/S (DK)

Free format text: TRANSFERIDO POR INCORPORACAO DE:NOVOZYMES BIOPOLYMER A/S

B08F Application dismissed because of non-payment of annual fees [chapter 8.6 patent gazette]

Free format text: REFERENTE A 9A ANUIDADE.

B08K Patent lapsed as no evidence of payment of the annual fee has been furnished to inpi [chapter 8.11 patent gazette]

Free format text: EM VIRTUDE DO ARQUIVAMENTO PUBLICADO NA RPI 2368 DE 24-05-2016 E CONSIDERANDO AUSENCIA DE MANIFESTACAO DENTRO DOS PRAZOS LEGAIS, INFORMO QUE CABE SER MANTIDO O ARQUIVAMENTO DO PEDIDO DE PATENTE, CONFORME O DISPOSTO NO ARTIGO 12, DA RESOLUCAO 113/2013.