BRPI0708186A2 - método para tratar celulite - Google Patents

Abstract

TODO PARA TRATAR CELULITE. A invenção se refere à verificação de que injeções de colagenase são eficazes para dissolver e usar a rede de septo de colagenase na pele que compreende celulite. Para tanto, a invenção se refere a métodos de tratamento de celulite em paciente que necessita de tal tratamento compreendendo a injeção ou, de outro modo, à liberação de quantidade eficaz de colagenase purificada à rede de septo de colagenase de celulite na pele. A invenção também se refere ao uso de colagenase na fabricação de um medicamento para tratar celulite da pele.

Description

MÉTODO PARA TRATAR CELULITE

Esse pedido reivindica prioridade do pedido de númerode série 60/775.690, que foi depositado junto ao Escritóriode Marcas e Patentes dos Estados Unidos em 22 de fevereirode 2006.

A invenção foi apoiada, em parte, por uma concessãoM01RR10710 do Instituto Nacional da Saúde. O governo dosEstados Unidos tem direitos seguros sobre a invenção.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

A ondulação da pele ou o "fenômeno colchão" das coxase nádegas é comumente reportado como celulite. Essacondição é comum e aparece de modo diferente em indivíduos'saudáveis atormentando muito mais freqüentemente mulheresque homens. Terapias tópicas vendidas sem receita médicapara a eliminação de celulite existem em abundância. Estesprodutos e outras aplicações tópicas vendidas sem receitamédica provaram ser inúteis, dispendiosos e, de fato, nuncapassaram por testes clínicos placebo-controladopropriamente. Testes placebo-controlado recentes,aleatórios, de retinol tópico e retinol contendo cafeína eruscogenina também não mostraram mérito para a eliminaçãode celulite.

Se o tratamento de celulite é para ser bem sucedido,então a patofisiologia básica da condição requer definiçãoclara. Foi apenas em 1999 que Rosenbaum e colaboradoresrealizaram uma investigação da morfologia e da bioquímicada celulite (Rosenbaum, M. Pietro, V., Hellmer, J.,Boschmann, M., Krueger, J., Leibel, R. L., Ship, A. G., AnExploratory Investigation of the Morphology andBiochemistry of Cellulite, Plastic & Reconst Surg 101(7):1934-9, 1998). Sete sujeitos adultos saudáveis, cincomulheres e dois homens, quatro afetados, três não afetados,realizaram sonografia da coxa, medição de metabolismos detecido adiposo subcutâneo regional in vivo e biopsia emcunha de espessura completa da coxa sob anestesia local. Apresença de celulite foi definida como evidência deondulações da pele da coxa póstero-lateral. Qualquer áreacontinua da pela com pelo menos 3 cm de diâmetro na qualnenhuma ondulação foi evidente foi designada como nãoafetada. Todos os estudos de indivíduos afetados foramrealizados para incluir tanto áreas afetadas como nãoafetadas da coxa. 0 exame microscópico de biópsias em cunhae o exame sonográfico in vivo da coxa mostraram um padrãodifuso de saliência do tecido adiposo subjacente e para aderme reticular em sujeitos afetados, mas não para os nãoafetados. 0 estudo também demonstrou que as mulherestiveram um padrão difuso de tecido conectivo descontínuo eirregular imediatamente abaixo da derme, mas a mesma camadade tecido conectivo era lisa e contínua em homens. Essacamada de tecido conectivo foi mais irregular e descontínuaem indivíduos afetados do que em não afetados. Nenhumadiferença significante foi observada na morfologia dotecido adiposo subcutâneo, responsividade lipolítica oufluxo sangüíneo regional entre locais afetados e nãoafetados em indivíduos. Este estudo demonstrou que existeum dimorfismo sexual nas características estruturais dotecido conectivo cutâneo que predispõe mulheres adesenvolverem saliência irregular do tecido adiposo daderme que caracteriza celulite. Este estudo concluiu quenão houve evidência de qualquer papel primário para afisiologia do tecido adiposo, fluxo sangüíneo ou bioquímicado tecido adiposo na etiologia da celulite, mas que otecido conectivo de nádegas e coxas femininas é estruturadopara acentuar diferenças em pequenos depósitos de tecidoadiposo subcutâneos.

Esta conclusão foi substanciada pelo trabalho dePierard, e colaboradores que examinou 39 espécimes deautópsia microscopicamente (Pierard-Franchimont, C.,Pierard G. E., Henry F. Vroome, V. & Cauwenbergh, G. ARandomized, Placebo-Controlled Trial of Topical Retinol inthe Treatment of Cellulite, Amer. J. Clin. Dermatology,1(6):369-74, 2000). Seu grupo de controle consistiu dequatro mulheres adultas e onze homens adultos mostrandonenhuma evidência de celulite. Eles constataram que oaspecto granuloso da interface hipodérmica cutânea pareceurepresentar uma característica ligada ao gênero (feminino)das coxas e nádegas. A celulite foi identificadamicroscopicamente por esse "fenômeno colchão" e seapresentou como filamentos fibroescleróticos aumentados deforma focai dividindo a subcutis. Eles consideraram queestas estruturas podem representar um processo reativo paraa pressão hipodérmica sustentada causada pelo acúmulo degordura.

Em um estudo mais recente de Querleux e colaboradores,a anatomia e fisiologia do tecido adiposo subcutâneo foramestudadas em relação ao sexo por imagem de ressonânciamagnética in vivo e espectroscopia e a presença de celulite(Querleux, B., Cornillon, C., Jolivet, 0., Bittoun, J.,Anatomy and Physiology of Subcutaneous Adipose Tissue by invivo Magnetic Resonance Imaging and Spectroscopy:Relationship with Sex and Presenee of Cellulitey SkinResearch and Teeh 8(2):118-124, maio de 2002). Estesautores concluíram que a reconstrução 3D da rede de septofibrosa mostrou uma porcentagem mais elevada de septo nadireção perpendicular a superfície da pele em mulheres comcelulites.

Não resta nenhum tratamento eficaz para celulite atéhoje. É o objetivo da invenção fornecer tais métodos para otratamento de celulite.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A invenção se refere à verificação de que injeções decolagenase são eficazes na Iise da rede de septo decolágeno de celulite em humanos para tratar a celulite erestaurar a aparência lisa da pele. A invenção se refere amétodos para tratar celulite em um sujeito que necessita detal tratamento, o qual envolve a injeção de uma quantidadeeficaz de colagenase purificada na fabricação de ummedicamento para tratar celulite. A colagenase épreferencialmente purificada e substancialmente livre deoutras enzimas, tais como proteases e/ou hialuronidase.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A invenção se refere à verificação de que injeções decolagenase são eficazes na Iise da rede de septo decolágeno de celulite em humanos para tratar a celulite erestaurar a aparência lisa da pele. A invenção se refere amétodos para tratar celulite em um sujeito que necessita detal tratamento, o qual envolve a injeção de uma quantidadeeficaz de colagenase à coxa e/ou nádegas. A invenção tambémse refere ao uso da colagenase na fabricação de ummedicamento para tratar celulite.

Injeções de colagenase foram propostas para otratamento de doenças, tais como a doença de Dupuytren,capsulite adesiva e doença de Peyronie. Estas doenças estãotodas associadas com placas ou cordões de colágeno (Wegman,Thomas, L. U.S. Pat. No. 5.589.171 de 31 de dezembro de1996, U.S. Pat. No. 6.086.872 de 11 de julho de 2000, U.S.Pat. No. 6.022.539 de 8 de fevereiro de 2000, AdhesiveCapsulitis - Patente pendente, todas as quais sãoincorporadas aqui a titulo de referência em sua totalidade.

Injeções de colagenase também foram propostas para otratamento de celulite quando combinada com hialuronidase,um produto de enzima solúvel preparado a partir de testesem mamíferos (vide Pinelle, Sheldon R. U.S. Pat. No.4.645.668 de 27 de março de 1987). A patente revelou umexemplo funcional para celulite com uma dose baixa decolagenase (100 unidades) em combinação com hialuronidase(150 unidades) apenas para pacientes do sexo feminino.Nenhum detalhe adicional no melhoramento da celulite apósas injeções foi apresentado.

O uso de injeção intralesional de colagenaseClostridial purificada demonstrou ser clinicamente segura eeficaz em testes clínicos para a doença de Dupuytren nacorreção da deformação de contratura em flexão da(s)mão(s). Adicionalmente, o uso de injeção extracapsular decolagenase Clostridial purificada demonstrou serclinicamente seguro e eficaz no tratamento de capsuliteadesiva (ombro congelado) em testes clínicos e a injeção derestauração também foi usada por outros em testes clínicospara a doença de Peyronie, uma deformidade por contraturado pênis.

0 trabalho publicado do inventor, Dr. Badalamente,sobre a doença de Dupuytren forma o racional para ainvenção proposta (Starkweather, K., Lattuga, S., Hurst,L.C., Badalamente, Μ. A., Guilak, F., Sampson, S.P., Dowd,A., Wisch, D. Collagenase in the Treatment of Dupuytrenr sDisease: An in vitro Study, J. Hand Surg. 21A:490-95, 1996;Badalamente, M.A., Hurst, L.C., Enzyme Injection as a Non-operative Treatment for DupuytrenrS Disease, J. Drug-Delivery 3(1):35-40, 1996; Hurst L.C., Badalamente, M. A.(autor convidado) Non-operative Treatment of Dupuytrenr sDisease, Hand Clinics, G.M. Rayan (ed). W.B. Saunders15(1), 97-107, 1999; Hurst L.C., Badalamente, M.A. (autor &editor convidados), DupuytrenrS Disease, R. Tubinana, R.Tubiana, C. Leclercq, L.C. Hurst, M.A. Badalamente (eds),Martin Dunitz Publisher, London (2000); Badalamente, M.A.,Hurst L.C., Enzyme Injection as a Non-operative Treatmentof DupuytrenrS Disease, J. Hands Surg. 25A(4);629-36, 2000;Badalamente, M.A., Hurst L.C., Hentz, V.R. CoIlagen as aClinicai Target: Non-operative Treatment of DupuytrenrSDisease, J. Hand Surg. 27A(5):788-98, 2002). Na doença deDupuytren, o cordão fibroso patognomônico é freqüentementeintercalado com um arranjo na forma de septo de tecidoadiposo.Estes se apresentam clinicamente como "protuberâncias"tipo colchão de vários tamanhos e na doença de Dupuytren,são denominados nódulos. Foi uma verificação clinicaconsistente nos testes das fases 2 e 3 para a doença deDupuytren que após a injeção de colagenase Clostridialpurificada, o cordão de colagenase não apenas se dissolve erompe quando submetido a pressão em grande escala, mas osnódulos fibrogordurosos, também se decompõem, e sãoreabsorvidos de forma inofensiva. Portanto, a colagenaseinjetada subcutaneamente na área de celulite foi postuladocomo sendo um tratamento seguro e eficaz para esta condiçãona restauração de uma aparência lisa da pele das coxas e/ounádegas.

A colagenase é uma enzima que possui habilidadeespecifica para digerir colágeno. Uma forma preferida deuma colagenase é derivada da fermentação do Clostridiumhistoliticum e é purificada por uma técnica cromatográfica,tal como aquela revelada no pedido Norte Americano No. desérie 60/763.470 depositado em 20 de janeiro de 2006(número de registro do procurador 4024.3001US), o qual éincorporado aqui a titulo de referência. A colagenaseproduzida naturalmente por Clostridium histoliticumpurificada uma vez exibirá dois picos distintos quandorodada em eletroforese em gel SDS. São estes dois picosdistintos que são referidos como colagenase I e colagenaseII.

O pó de colagenase liofilizado e esterilizado écomercialmente disponível possuindo um ensaio mínimo de 50unidades por mg. 0 ensaio pode variar consideravelmentemediante ao de lote a lote, mas é levado em consideraçãona determinação do peso do pó a ser usado como um veiculofarmaceuticamente aceitável, por exemplo, salina normal, naconcentração de uma concentração desejada para otratamento.

A colagenase é aplicada em um veiculo liquido que éfarmaceuticamente aceitável, incluindo a inatividade dianteda colagenase. Exemplos são salina normal, aquosa, tampãode NaCl/CaCl2, solução aquosa de dextrana, solução aquosade hidroxietila de amido.

Uma forma de colagenase purificada usada para injeção,compreende duas colagenases microbianas, referidas como"colagenase ABC I" e "colagenase ABC II". Ambas ascolagenases são isoladas e purificadas a partir dafermentação da bactéria Clostridium histoliticum epertencem a mesma metaloprotease.

A colagenase ABC I é uma cadeia de polipeptideo únicaconsistindo de aproximadamente 1000 aminoácidos deseqüência conhecida. Esta possui um peso molecularobservado de 115 quilo Daltons (kD), um ponto isoelétrico(pi) entre 5, 63 - 5, 68 e um coeficiente de extinção de1, 480. A partir de seu modo de atividade voltado parasubstrato sintético, foi determinado na literatura que acolagenase ABC I é a colagenase de Clostridium histoliticumde classe I.

A colagenase ABC II também é uma cadeia depolipeptideo única consistindo de aproximadamente 1000aminoácidos de seqüência deduzida. Este possui um pesomolecular observado de 110 kD, um ponto isoelétrico entre5,46 - 5,57 e um coeficiente de extinção de 1,576. Acolagenase ABC II pertence funcionalmente a colagenase deClostridium histoliticum de classe II na literatura.

A substância de droga pode ter uma razão em massa de 1para 1 para as colagenases ABC I e ABC II com umcoeficiente de extinção de 1,528. Ambas as colagenasesrequerem zinco ligado fortemente e cálcio ligado fracamentepara suas atividades. A colagenase ABC Iea colagenase ABCII não são imunologicamente reagidas de forma cruzada("crossreactive") e possuem uma reatividade de hidrólisemuito ampla voltada para todos os tipos de colágeno. Aindaque cada colagenase mostre especificidade diferente, juntaselas apresentam atividade sinergistica voltada para ocolágeno.

O colágeno liofilizado para injeção é a colagenaseclostridial purificada preparada como formulaçãoliofilizada e pode conter aproximadamente 0,1 mg demonohidrato de galactose USP por 1.000 unidades ABC deatividade de colagenase.

A composição preferida de colagenase compreende umamistura de colagenase I e colagenase II em uma razão emmassa de 1 para 1 e possui atividade especifica a partir deaproximadamente 500 unidades SRC/mg a aproximadamente15.000 unidades SRC/mg, preferencialmente de pelo menosaproximadamente 700 unidades SRC/mg, mais preferencialmentede pelo menos aproximadamente 1000 unidades SRC/mg, aindamais preferencialmente pelo menos aproximadamente 1500unidades SRC/mg. Uma unidade SRC solubilizará o colágeno dacauda de rato em material de reação de nihidrinaequivalente a 1 nanomol de leucina por minuto, a 25°C, pH7,4. A colagenase foi descrita em unidades ABCpropriamente. O ensaio de potência de colagenase é baseadona digestão do colágeno não desnaturado (do tendãobovino) a pH 7,2 e 37°C por 20-24 horas. O número deligações peptidicas clivadas são medidas por reação comnihidrina. Os grupos aminos liberados por um controle dedigestão de solubilização foram retirados. Uma malha deunidade ABC da colagenase solubilizará o material reativode nihidrina equivalente a 1,09 nanomoles de leucina porminuto. Uma unidade SRC eqüivale a aproximadamente 6,3unidades ABC.

A colagenase é preferencialmente administrada por meiode injeção em veiculo liquido que é farmaceuticamenteaceitável. Preferencialmente, o veiculo não interage oudesativa a colagenase. Exemplos são a salina normal, tampãode NaCl/CaCl2 aquoso (contendo NaCl a 0,9% e CaCl2 2mM) . Porexemplo, a formulação liofilizada pode conter 0,1 mg demonohidrato de lactose por 1.000 unidades ABC. Cada frascode vidro usado abaixo continha 5.150 unidades ABC decolagenase.

De acordo com a invenção, a colagenase em um veiculoliquido é injetada em uma área de celulite na coxa póstero-lateral do sujeito. A quantidade e concentração decolagenase usada é eficaz para lisar e dissolver a rede desepto de colágeno da celulite.

A injeção é estéril e não excede 1,0 mL. A dosagemtotal é injetada em cinco pontos diferentes da coxapóstero-lateral onde as covas de celulite da coxa são maisevidentes. O objetivo é assegurar a boa distribuição dacolagenase. Os pacientes preferencialmente descansam nacoxa contralateral, na cama, por aproximadamente uma,preferencialmente, duas horas ou mais.

Em outra modalidade, a colagenase pode seradministrada localmente ou topicamente, tal como, um cremetópico ou etiqueta transdérmica ou ungüento tópico na áreade celulite ou pode ser administrada por meio de umimplante, tal como, microesferas ou microcápsulas, queliberam colagenase durante um tempo.

Em uma modalidade, o paciente é caracterizado comopossuindo uma área de pelo menos 10 X 10 cm de celulite nacoxa póstero-lateral. A invenção também pode alcançarmelhoramentos na restauração da aparência da pele lisa ounormal na área póstero-lateral de 10 X 10 cm de celulite.

Em uma outra modalidade da presente invenção, acolagenase pode ser administrada localmente ou topicamente,tal como, um creme tópico ou etiqueta transdérmica ouungüento tópico na área de celulite ou pode seradministrada por meio de um implante, tal como,microesferas ou microcápsulas, que liberam colagenasedurante um tempo e é administrada na ausência detriancinolona ou outro corticosteróide.

Nos casos onde os resultados de um tratamento únicosão considerados inadequados, o mesmo procedimento,quantidade total de colagenase e concentração, pode serrepetido em intervalos de 4-6 semanas. As ares de celulite,diferentes daquela da coxa póstero-lateral também podemrequerer tratamento, ou tratamento repetido em intervalosde 4-6 semanas. Por exemplo, a frente da coxa e nádegaspodem conter áreas de celulite.

PARTE EXPERIMENTAL

Métodos

Os pacientes entraram no protocolo de estudo, todos dosexo feminino, idade média 41 = 10 anos. 0 índice de massacorporal médio (BMI) foi 28.

A área mínima de celulite da coxa póstero-lateralnecessária para inclusão foi 10 X 10 cm. Todas as pacientestinham áreas de celulite da coxa póstero-lateral queexcediam a área mínima de 10 X 10 cm. Fotografias digitaisde linha de base da área de tratamento foram feitas. De umamaneira estéril, 10.000 unidades ABC (0,58 mg) foraminjetadas em cinco pontos na área alvo de celulite de 10 X10 cm. O volume total de fluido de injeção foi 1,0 mL. Otampão usado foi NaCl a 0,9% estéril e CaCl2 2mM. Todos ospacientes foram movimentadas após a injeção, em um dia, umasemana, um, três, e seis meses. Fotografias do tratamentoposterior foram feitas em série.

As pacientes tinham a opção de escolher pela injeçãode colagenase similar no lado oposto, para simetriacosmética, quando elas atingiam o intervalo de tempo de 4-6semanas após a primeira injeção de colagenase. Aqualificação da redução/eliminação de celulite da área alvoda coxa foi feita por inspeção visual e documentaçãofotográfica.

A área alvo de celulite tratada foi dividida emquatro quadrantes equivalentes na área alvo de tratamentode 10 X 10 cm. A redução/eliminação de celulite na áreaalvo de tratamento foi quantificada pela inspeção visualpor quadrante, por exemplo, 4/4 = nenhum quadranterespondeu ao tratamento, 3/4 = três quadrantes responderamao tratamento, 2/4 = dois quadrantes responderam aotratamento, 1/4 = um quadrante respondeu ao tratamento, 0/4= todos os quadrantes responderam ao tratamento. A áreareal em cm de qualquer celulite remanescente da área alvopóstero-lateral da celulite também foi medida. Fotografiastambém foram usadas para documentação.

Resultados

Todos as pacientes experimentaram uma reduçãode celulite da coxa alvo após injeção de colagenase.A tabela 1 mostra os resultados de redução de celulitenos quadrantes das coxas das pacientes tratadas. Houveredução significativa na aparência de celulite da áreainjetada. A celulite foi reduzida de 77% no dia 1 emcomparação com a linha de base. Este resultado foisustentado em um período maior. Em comparação com a linhade base, a área de celulite foi reduzida de 74% em 1semana, de 89% em 1 mês, de 86% em 3 meses e de 76% em 6meses.

Efeitos colaterais incluíram sensibilidade na área deinjeção, equimose e edema brando que foram bem resolvidosna média de 10, 18 e 6 dias respectivamente.

Tabela 1:<table>table see original document page 15</column></row><table><table>table see original document page 16</column></row><table><table>table see original document page 17</column></row><table>

Melhoramentos significativos na redução de celulite dacoxa póstero-lateral foram observados em pacientes quereceberam injeção(ões) de colagenase. Este estudo mostrouque a injeção de colagenase em áreas de celulite é ummétodo eficaz e seguro.

Embora a presente invenção tenha sido mostrada edescrita particularmente com referência as modalidadespreferidas da mesma, deve ser entendido pelos versados natécnica que várias alterações na forma e detalhes podem serfeitas na mesma sem se afastar do escopo da invençãorepresentada pelas reivindicações anexas.

Claims (16)

1. Método para tratar celulite em um sujeitoque necessita de tal tratamento, caracterizado pelo fato deque o método compreende a liberação de uma quantidadeeficaz de colagenase purificada à rede de septo colagenosade celulite.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que a colagenase(Clostridiopeptidase A) é derivada a partir da bactériaClostridium hisolyticum.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que a colagenase purificada éadministrada individualmente.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que a colagenase purificada éadministrada na ausência de triancinolona ou outroscorticosteróides.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que a colagenase purificada éinjetada em uma dose que compreende pelo menosaproximadamente 700 unidades SRC, aplicada em uma ou maisinjeções.

6. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que a colagenase purificada éinjetada em uma dose que compreende pelo menosaproximadamente 1000 unidades SRC, aplicada em uma ou maisinjeções.

7. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que a colagenase purificada éinjetada em uma dose que compreende pelo menosaproximadamente 1500 unidades SRC, aplicada em uma ou maisinjeções.

8. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que a colagenase purificada éinjetada em uma dose que compreende pelo menosaproximadamente 10000 unidades ABC, aplicada em uma ou maisinjeções.

9. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que a colagenase purificada éinjetada em um volume de aproximadamente 1,0 mL.

10. Método, de acordo 'com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que a colagenase purificada éinjetada em locais múltiplos.

11. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que a colagenase purificadacompreende colagenase I e colagenase II.

12. Método, de acordo com a reivindicação 9,caracterizado pelo fato de que a injeção é liberada em umaárea de celulite, determinada por ondulações na pele.

13. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o sujeito é um pacientehumano.

14. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o tratamento é repetido apósaproximadamente quatro a seis semanas.

15. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que após um mês recebendo pelomenos uma administração de colagenase, o paciente alcançauma redução visual significativa na aparência de celulite.

16. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que a colagenase purificada éinjetada em uma dose que compreende aproximadamente 500unidades SRC/mg a aproximadamente 15.000 unidades SRC/mg,aplicada em uma ou mais injeções.