BRPI0621016A2 - adesivo biológico sem trombina e seu uso como medicamento - Google Patents

Abstract

ADESIVO BIOLóGICO SEM TROMBINA E SEU USO COMO MEDICAMENTO. A invenção se relaciona a um adesivo biológico sem trombina, com base em fibrinogênio, para uso terapêutico, o qual inclui o Fator Vila e uma fonte de íons de cálcio. A invenção também se relaciona ao uso do adesivo biológico como medicamento, em particular como curativo para tecidos biológicos, ferimentos ou biomateriais.

Description

ADESIVO BIOLÓGICO SEM TROMBINA E SEU USO COMO MEDICAMENTO

A presente invenção se relaciona a um adesivo biológico com fator ativado VII e uma fonte de íons de cálcio.

Por "adesivo biológico" se entende um componente capaz de unir elementos de tecidos (pele, osso, órgãos diversos) e ao mesmo tempo proporcionar a hemostasia dos tecidos danificados, o que pode assim reforçar ou completar a junção desses tecidos por sutura.

A coagulação do sangue é obtida de acordo com as etapas em cascata envolvendo diferentes pró-enzimas e pró-cofatores presentes no sangue, os quais são convertidos para sua forma ativada via enzimas proteolíticas. Esta sucessão de etapas de coagulação ou cascata é executada de acordo com dois sistemas de coagulação, chamados via de coagulação extrínseca e via de coagulação intrínseca, levando à transformação da protrombina em trombina.

A via extrínseca envolve a intervenção do fator Vll presente no sangue. No entanto, a última requer ativação (fator Vila) para iniciar essa coagulação em cascata. O fator VII a tem baixa atividade enzimática até que seja misturado com fatores tissulares de natureza fosfolipídica liberados após dano tissular. O fator Vlla assim misturado transforma o fator X (FX) no Fator Xa (FXa) na presença de íons de cálcio. O fator Xa, por sua fez, transforma a protrombina em trombina, que ativa o fator V (fator Va). A trombina também ativa o fator Xlll (fator Xllla). A trombina, na presença de cálcio, fatores tissulares, fator Va, age no fibrinogênio transformando-o em fibrina. A presença do fator Xllla permite a formação de um coágulo de fibrina com uma rede entrelaçada sólida e aderente que é lenta e gradualmente reabsorvida com a preparação do tecido de cicatrização de consolidação, no qual a rede é usada como suporte. Essa fibrina de ligação cruzada é insolúvel e não pode ser atacada por enzimas fibrinolíticas, pelo menos durante o tempo de preparação do tecido de cicatrização.

A via de coagulação intrínseca também envolve o fator Vlla (FVIIa). Essa via inclui uma série de reações em cascata resultando na ativação da trombina através do fator XII (FXII). O último ativa o fator XI (fator Xla-FXIa), o qual ativa o fator IX (fator IXa-FIXa) na presença de fatores tissulares fosfolipídicos (FT). O fator IXa participa na ativação do fator X em fator Xa na presença do fator Vllla, de fatores tissulares e de íons de cálcio. Isso então leva à transformação da protrombina em trombina. Deve-se observar que a presença do fator Xa ou trombina permite a ativação do fator VII (fator Vila).

Assim, parece que o fator XIIa desempenha um papel importante nos mecanismos de coagulação intrínseca, resultando na formação de um coágulo sangüíneo. É usado no tratamento da hemofilia A contendo um inibidor circulante, isto é, um anticorpo específico que limita ou impede a ativação do fator VIII (FVIII). O fator VIIa tem a vantagem de conseguir atuar localmente na presença de fatores tissulares liberados após lesões de tecidos que causem hemorragias, mesmo na ausência do fator VIII ou IX.

No entanto, no caso de lesões tissulares hemorrágicas causadas por ferimentos, lesões ou operações cirúrgicas externas, a reparação do tecido por sutura é uma exigência, notadamente para conter a hemorragia pela formação de um coágulo de fibrina, de acordo com os mecanismos explicados anteriormente. Pode ser necessário promover a hemostasia dos tecidos lesados, notadamente no caso de operações cirúrgicas severas.

Como exemplo, pode ser citada a Inscrição de Patente WO 93/06855, a qual descreve uma composição hemostática sem trombina e sem fatores de coagulação, contendo o fator Vlla incorporado em um veículo biologicamente compatível, o todo sendo aplicado em uma lesão hemorrágica para promover a hemostasia e formação de um coágulo de fibrina.

No entanto, exceto pela hemostasia de tecidos lesados, o processo natural para cicatrizar tecido, suturado ou não, relacionado à junção de tecidos para evitar que fiquem prejudicados e acelerar o processo, também deve ser acelerado, reforçado ou mesmo concluído. Isso é notadamente possível pela aplicação local de um adesivo biológico.

Os adesivos biológicos consistem de uma mistura de fatores circulantes de coagulação do sangue, notadamente de proteínas de plasma fibrinogênico e do fator XIII. Eles requerem ainda um suprimento de trombina exógena, uma enzima necessária para transformar o fibrinogênio em fibrina insolúvel, que pode sofrer ligação cruzada com o fator XIII. São necessários componentes adicionais para realizar a coagulação do fibrinogênio, notadamente o íon de cálcio, como CaCl2, e possivelmente aprotinina, adicionada por suas propriedades antifibrinolíticas.

Tais adesivos biológicos foram descritos em particular em diferentes publicações e patentes, tais como EP 0 305 243, FR 2 448 900 e FR 2 448 901, bem como suas aplicações em situações clínicas diversas ("Fibrinkleber", Proceedings of the Heidelberg Congress, 1976, Ed. Schattauer).

Os adesivos biológicos também podem ser usados para unir biomateriais de natureza diversa (colágeno, alginato e ácido poliláctico) a tecidos biológicos para reforçar suas propriedades mecânicas enquanto se espera pela consolidação pelo novo crescimento natural das células do organismo, por exemplo, pele artificial.

Adesivos biológicos comercialmente disponíveis na verdade aparecem como kits contendo pelo menos os quatro componentes acima mencionados em forma seca, em que as proteínas que podem ser coaguladas pela trombina, fibrinogênio e o fator Xlll devem ser isolados da trombina, pois sua associação causa solidificação na fibrina num curto espaço de tempo, na ordem de alguns segundos após a reconstituição em um líquido e mistura. É por esse motivo que os kits de adesivo biológico são fornecidos com pelo menos dois componentes, ou seja, contendo um lote bom base em fibrinogênio e em fator Xlll de um lado e um lote com base em trombina do outro lado. O adesivo biológico cumpre suas funções acima indicada pela reconstituição e mistura de ambos os lotes, por exemplo, com seringas e agulhas, e depois pela aplicação no tecido a ser suturado.

No entanto, tais reconstituições e misturas são relativamente complexas e fonte de possíveis erros, notadamente no caso de emergência, considerando o fato que, assim que o fibrinogênio entra em contato com a trombina como líquido, na presença de outros componentes, a fibrina se forma quase instantaneamente. Assim a mistura de fibrinogênio e trombina somente pode ser realizada logo antes da aplicação na ferida ou área de operação. Além disso, quando for usado um único dispositivo para aplicar o adesivo biológico, existe o risco real de solidificação da fibrina no próprio dispositivo, o que pode levar a um bloqueio do sistema de aplicação.

A Patente EP 0 850 650 B1 notadamente descreve um adesivo pré-ativado de dois componentes contendo fibrinogênio e pelo menos um fator ativado de coagulação cuja ativação não depende de íons de cálcio, selecionado do Fator Xlla, o Fator Xla, o Fator Vlla e calicreína e coagula pelo simples acréscimo de íons de cálcio, formando fibrina. Esse adesivo é obtido pelo fracionamento ou concentração de plasma de sangue ativado de um único doador, para concentrar o fibrinogênio enquanto se retêm os fatores ativados de coagulação necessários para permitir a coagulação sob a ação dos íons de cálcio. Tal adesivo tem as desvantagens dos adesivos de dois componentes acima mencionados e de formar o coágulo de fibrina de forma quase instantânea na mistura.

A Inscrição de Patente WO 02/055102 A1 descreve uma composição contento FVIIa e fibrinogênio útil para limitar ou estancar o sangramento causado por hemorragias ou lesões internas ou externas. Essas composições se destinam a ser injetadas de forma intravenosa no paciente e atuam na hemorragia ou lesão onde estão presentes todos os fatores e os íons de cálcio. A desvantagem relacionada ao uso de tal composição reside no fato de que o último interage com os FTs que teriam se espalhado a partir da lesão ou hemorragia, através da corrente sangüínea, por exemplo, e pode vir a causar, com os íons de cálcio naturalmente presentes no sangue, uma coagulação com os diferentes fatores presentes no sangue, causando coágulos na área hemorrágica, com risco de trombose.

Assim, as mencionadas desvantagens apresentam problemas, em particular dentro do escopo de operações cirúrgicas e/ou situações de emergência, onde a rapidez da intervenção cirúrgica é muitas vezes uma necessidade. Observa-se que tais desvantagens são capazes de gerar uma junção não homogênea dos tecidos pela formação de agrupamentos de fibrina antes a adesão do tecido, o que pode ser intensificado pela retração do coágulo, finalmente levando a uma cicatrização irregular, favorável à deiscência (desunião de ambos os lados de uma cicatriz) e sangramentos secundários pós-operatórios.

Para sanar essas desvantagens, o Solicitante buscou desenvolver um adesivo biológico que atendesse a um objetivo duplamente relacionado. O primeiro objetivo é proporcionar um adesivo biológico sem trombina incluindo fatores de coagulação de plasma sem o risco de formar fibrina antes da aplicação no tecido biológico. O segundo objetivo atende à necessidade de disponibilizar tal adesivo, também tendo maior capacidade de hemostasia de tecidos danificados por um lado e de união de tecidos levando a uma melhor cicatrização por outro lado.

A invenção se relaciona a um adesivo biológico estável, sem trombina, com base em fibrinogênio, de composto único, para uso terapêutico, incluindo o Fator VIIa e uma fonte de íons de cálcio.

O Solicitante constatou que é impossível disponibilizar um novo medicamento (um adesivo biológico de composto único): um adjuvante de hemostasia, curativo, adjuvante curativo ou agente de vedação pela formação de êmbolos para tecidos biológicos, ferimentos ou biomateriais, incluindo ambos os fatores de plasma de interesse e uma fonte de íons de cálcio.

Por "composto único" se entende um uso conjunto dos três componentes de interesse, que constituem o adesivo, assim formando um composto líquido único, em oposição a adesivos de dois componentes de modelos anteriormente conhecidos.

Assim, esses três componentes são compatíveis um com o outro como líquido, isto é, sua combinação, formando um sistema de composto único, não causa a formação quase instantânea de fibrina. Esse adesivo líquido de composto único é estável porque esses componentes podem estar na presença um do outro em um meio líquido para o uso funcional do último até mesmo no mínimo 24 horas antes do uso, sem risco de desencadear prematuramente o processo de coagulação. A estabilidade do adesivo se verifica na medida em que não se observa formação de fibrina durante 24 horas de incubação a 37°C.

O adesivo biológico da invenção cumpre sua função de reparação de tecidos uma vez aplicado na ferida ou tecido cruento porque a trombina se forma in loco pelo contato do adesivo biológico na ferida ou tecido cruento. Com efeito, essa formação de trombina in loco é proporcionada pelo Fator Vila, que assim é colocado em contato com todos os componentes de plasma, permitindo o desencadeamento e avanço da via de coagulação extrínseca ou intrínseca. Como explicado antes, sua atividade biológica depende da interação com os fatores tissulares endógenos de natureza fosfolipídica. O complexo ativado de fatores tissulares de Fator Vll na presença de íons de cálcio transforma o Fator X presente no plasma em Fator X ativado, que transforma a protrombina em trombina, uma enzima responsável pela formação do coágulo pela geração de fibrina na presença de fibrinogênio.

Então ocorre a formação da fibrina e, por conseqüência, é reforçada a aderência do adesivo biológico obtido, pois a fibrina então se forma diretamente na ferida ou tecido a ser reparado por cirurgia, onde os componentes de célula fosfolipídica estão expostos.

Embora o fibrinogênio e os íons de cálcio já estejam naturalmente presentes no sangue, com sua contribuição, é possível reforçar e acelerar ainda mais a junção dos tecidos e o processo de hemostasia pelo adesivo biológico da invenção e isso mesmo quando comparado com os adesivos de modelos anteriormente conhecidos. Isso é uma vantagem decisiva do presente adesivo.

O adesivo biológico da invenção possui muitas outras vantagens. Sua disponibilidade evita desvantagens no manuseio e preparo de adesivos biológicos de modelos anteriores, notadamente no caso de situações de emergência, o que melhora sua capacidade de ligação adesiva de tecidos em termos de deiscência e ausência de sangramentos secundários na cicatriz em formação. Tipicamente, o processo de junção pode ser obtido de forma eficaz em menos de um minuto, por exemplo, em 30 segundos. Como exemplo, o adesivo da invenção evita a formação de "caroços" ou aglomerados visíveis de fibrina em um ferimento, o que seria explicado pelo endurecimento não homogêneo do adesivo, provavelmente por causa da fibrina formada antes da adesão, com a cicatriz formada tendo uma linha limpa, em comparação com a ligação adesiva de igual duração obtida, por exemplo, usando um adesivo biológico de dois componentes com base em uma mistura de fibrinogênio e contendo o Fator XIII, de um lado, e uma mistura de trombina de cálcio por outro lado, no qual não se observam os efeitos acima.

É simples de preparar e tem maior estabilidade de tempo, na medida em que não se observa formação de fibrina por 24 horas de incubação a 37°C. Como exemplo, ele é assim estável como líquido por pelo menos 24 horas a temperatura ambiente, em particular em 48 horas.

Dentro do escopo da invenção, qualquer fibrinogênio e FVIIa de modelos anteriormente conhecidos, de preferência plasmático, é adequado para fazer o adesivo, contanto que seja compatível com os íons de cálcio do adesivo assim obtido como líquido, ou seja, que o seu contato não cause coagulação do fibrinogênio em fibrina, notadamente 24 horas antes do uso. Com efeito, os dois ingredientes ativos, fibrinogênio e FVIIa, devem estar ausentes, além de ausência de trombina residual (Fila), em fatores de coagulação de forma que, na presença de íons de cálcio, seja desencadeada a coagulação em cascata intrínseca ou extrínseca. Tais fatores de coagulação representam o Fator Il (FII) e FX e de preferência os fatores protrombínicos (fatores II, VII, IX e X).

Como exemplo, um teor máximo aceitável de Fll e FX no fibrinogênio é de cerca de 0,1 lU/g de fibrinogênio para cada um deles.

De preferência, o fibrinogênio e FVIIa do adesivo não se originam do plasma pré-ativado.

O fibrinogênio, de preferência viralmente seguro, pode ser isolado do plasma por qualquer método desenvolvido nos modelos anteriores. Pode ser o método descrito em EP 0 305 243 ou mesmo o desenvolvido pelo Solicitante na Inscrição de Patente FR 05 06640 de acordo com o qual pode ser obtido um concentrado de fibrinogênio. Também pode ser implementado fibrinogênio transgênico.

O Fator XIII, de preferência viralmente seguro, pode ser isolado do plasma por qualquer método desenvolvido em modelos anteriormente conhecidos e pode formar com vantagem a proteína que acompanha o fibrinogênio durante o fracionamento do plasma. Neste caso, é preferível a aplicação do método descrito na Inscrição de Patente FR 05 06640. Também pode ser implementado o Fator Xlll transgênico.

Também é conhecida a preparação do Fator Vila, notadamente, como concentrado, de preferência viralmente segura. Como exemplo, pode ser mencionada a Patente EP 346 241. Também pode ser usado um recombinante (da Novo) ou fator Vlla transgênico.

No entanto, esses ingredientes ativos devem atender a determinados critérios de pureza, como citado antes, notadamente em relação à presença de outros determinados fatores de plasma.

De preferência, o adesivo da invenção inclui ainda o Fator XIII. Um suprimento exógeno de Fator Xlll promove a ligação cruzada da rede de fibrina e, por conseqüência, seu poder de coagulação de potencial de cura.

O Fator XIII, em particular como concentrado, de preferência viralmente seguro, pode ser isolado do plasma por qualquer método desenvolvido em modelos anteriormente conhecidos e pode formar com vantagem a proteína que acompanha o fibrinogênio durante o fracionamento do plasma. Neste caso, é preferível a aplicação do método descrito na Inscrição de Patente FR 05 06640. Também pode ser implementado o Fator Xlll transgênico.

O adesivo da invenção pode ser feito em escala industrial disponibilizando dois ingredientes ativos, fibrinogênio e FVIIa, e íons de cálcio.

De preferência, o adesivo consiste na mistura exclusiva de fibrinogênio, FVIIa e íons de cálcio. Um adesivo consistindo unicamente desses três componentes tem a vantagem de necessitar apenas de dois ingredientes biologicamente ativos, o que notadamente limita os custos de preparo do adesivo em escala industrial pela presença de um número mínimo mas eficaz de componentes ativos.

Os componentes constitutivos do adesivo estão presentes em quantidades eficazes de forma que o adesivo possa atender aos objetivos terapêuticos a que se visa.

No entanto, o Solicitante observou que os melhores resultados em relação aos objetivos perseguidos podem ser obtidos quando os teores tanto de ingredientes ativos quanto de íons de cálcio são especificamente selecionados.

Assim, o adesivo biológico inclui fibrinogênio com vantagem em um teor entre 60 e 120 mg/mL, de preferência entre 80 e 100 mg/ml. Esse teor de fibrinogênio no adesivo proporciona pelo menos uma ligação adesiva também eficaz, de tecidos lesados, por exemplo, o que é notadamente expresso por uma resistência à laceração da ligação adesiva pelo menos tão satisfatória quanto os adesivos de dois componentes de modelos anteriores, tal como igual ou maior do que 125 g/cm2.

Ele contém em particular de 50 a 500 IU/mL, de preferência de 70 a 300 IU/mL, especialmente entre 80 e 120 IU/mL de Fator Vlla e entre 4 e 30 pmol/mL, de preferência entre 8 e 20 pmol/mL da fonte de íon de cálcio. Em particular, o Fator Xlll está presente em quantidade de 30 lU/mL a 700 lU/mL, de preferência de 100 lU/mL a 400 lU/mL.

As concentrações e atividades são por milímetro da solução final de adesivo biológico líquido. Tal solução pode notadamente ser obtida pela reconstituição de componentes congelados a vácuo. Como indicado acima, esses fatores de plasma preferencialmente presentes em tais concentrações fornecem as funcionalidades desejadas para o adesivo biológico atual.

Fontes de íons de cálcio representam componentes solúveis em água compatíveis com uso clínico; de preferência esses componentes são sais inorgânicos, tais como cloreto de cálcio (CaCI2) ou gluconato de cálcio.

Como indicado acima, o adesivo biológico da invenção está pronto para uso e inclui uma mistura homogênea de todos os componentes em forma líquida. Também pode aparecer na forma congelada, o que o torna adequado para armazenamento prolongado nesta forma por pelo menos 2 anos sem qualquer risco de formação de fibrina, o que pode ser observado após o descongelamento. A simples restauração à temperatura ambiente é suficiente para que o adesivo possa ser usado.

A invenção também se relaciona a um adesivo biológico sem trombina, com base em fibrinogênio, para uso terapêutico, incluindo o Fator Vlla e uma fonte de íons de cálcio, como definido anteriormente, aparecendo em forma congelada a vácuo, adequada para armazenamento prolongado. Também pode ser obtida aplicando-se técnicas conhecidas de congelamento a vácuo para o adesivo em forma líquida. A disponibilidade de tal apresentação do adesivo tem a vantagem decisiva de necessitar apenas de simples reconstituição do produto congelado a vácuo incluindo tanto ingredientes ativos quanto a fonte de íons de cálcio em um solvente biologicamente compatível ou meio aquoso para obter o adesivo líquido estável, sendo que esta preparação é executada com antecedência, prevendo seu uso. Ademais, tal adesivo congelado a vácuo pode ser facilmente armazenado a temperatura ambiente por pelo menos 2 anos sem qualquer risco de formação de fibrina, o que pode ser observado após a reconstituição. Pode ser facilmente transportado até o local onde um paciente necessite do uso desse adesivo.

A invenção também se relaciona a um kit para preparação do adesivo biológico de acordo com a invenção contendo meios de embalagem incluindo um lote de fator plasmático de fibrinogênio congelado a vácuo, um lote de fator plasmático FVIIa congelado a vácuo, um lote de fonte de íons de cálcio como pó e um solvente aquoso.

Tal kit notadamente inclui três lotes diferentes em forma seca, cada um em particular incluindo um dos componentes constitutivos do adesivo da invenção, e na verdade é um produto intermediário do qual serão então fácil fundir e dissolver os lotes em um solvente biologicamente compatível ou meio aquoso, tais como água purificada injetável (PPI) para obter o adesivo biológico líquido estável da invenção, se necessário, concentrado, o qual pode então ser congelado. A vantagem de disponibilizar tal kit é a possibilidade de armazenamento prolongado dos três lotes de diferentes componentes por pelo menos 2 anos a temperatura, sem observar a formação da fibrina no momento da reconstituição e obtendo o adesivo biológico estável e líquido pela simples dissolução.

Na verdade, os meios de embalagem formam meios com os quais os componentes do adesivo podem ser particularmente embalados e preparados e o adesivo pode ser liberado antes do uso. Eles incluem ainda, com vantagem, pelo menos um recipiente para pelo menos três dos diferentes componentes do adesivo, incluindo, de preferência, pelo menos um para cada componente. Cada recipiente se destina a receber um dos componentes, o qual é então dissolvido em solvente aquoso. Os recipientes podem ser frascos de vários tipos de vidro e de polímeros biologicamente compatíveis.

De preferência, o meio de embalagem pode, com vantagem, ser um único recipiente contendo pelo menos três componentes. Tal embalagem tem a vantagem de que uma simples dissolução do todo diretamente fornece o adesivo líquido pronto para uso.

Com vantagem, o kit também inclui um dispositivo para liberar o adesivo líquido assim que esteja preparado pela dissolução dos lotes acima com o solvente aquoso. Tal dispositivo, por exemplo, representa uma seringa de volume adequado, dependendo da dose de adesivo a ser administrada, incluindo uma agulha fina, tipicamente de diâmetro menor do que 2 mm, em particular menor do que 1 mm, ou então um cateter convencional.

De preferência, o kit acima inclui um lote de dois componentes de uma mistura dos lotes dos citados fatores de plasma congelados a vácuo, e o lote de fonte de íon de cálcio como pó. Assim, o kit inclui um lote de mistura congelada a vácuo de fibrinogênio e fatores plasmáticos FVIIa da invenção de um lado, e um lote de fonte de íon de cálcio como pó do outro lado, capaz de estar também na forma de um produto congelado a vácuo, para o qual será apenas suficiente fundi-los e misturá-los com um meio aquoso tal como água PPI antes do uso. Alternativamente, o kit poderá incluir um lote de mistura congelada a vácuo dos fatores plasmáticos e um lote de fonte de íon de cálcio como solução aquosa por outro lado..

De preferência, o kit da invenção se caracteriza pelo fato de que cada fibrinogênio congelado a vácuo ou lote de fator de plasma FVIIa ou o lote de dois componentes da mistura dos citados lotes de fatores de plasma congelados a vácuo inclui componentes de formulação estabilizante de congelamento a vácuo farmaceuticamente aceitável. O mesmo se aplica ao adesivo biológico congelado a vácuo.

Com efeito, os diferentes produtos congelados a vácuo dos fatores plasmáticos são obtidos por concentrados líquidos de congelamento a vácuo ou soluções dos fatores plasmáticos ou cada um desses fatores, de acordo com técnicas convencionalmente aplicadas, incluindo com vantagem, para esse fim, uma formulação estabilizante de congelamento a vácuo como descrito na Inscrição de Patente FR 04 02001 encaminhada pelo Solicitante. Nesse caso, a formulação estabilizante representa com vantagem uma mistura de arginina, pelo menos um aminoácido hidrofóbico e citrato trissódico e pode ser acrescida ainda de glicina e/ou lisina. Com vantagem, a concentração de cada um dos aditivos por litro de concentrado de proteína é a seguinte:

arginina de 25 a 50 g/L e de preferência de 35 a 45 g/L (com referência à Patente US 5.399.670);

citrato trissódico, de 0,5 a cerca de 12 g/L;

leucina, isoleucina ou suas misturas de 5 a 15 g/L e de preferência de 9 a 11 g/L; e

glicina e/ou lisina, cada uma de 1 a 5 g/L e de preferência cada uma de 1,5 a 2,5 g/L.

A formulação estabilizante também pode, se necessário, incluir adjuvantes estabilizantes anteriormente conhecidos.

Por conseqüência, a invenção também se relaciona ao uso do kit de acordo com a invenção para preparar um adesivo biológico líquido mas possivelmente congelado pela reconstituição dos três lotes do citado kit em um solvente aquoso biologicamente compatível, se necessário seguido de congelamento.

A invenção também se relaciona a um adesivo biológico como descrito anteriormente para uso como medicamento. No caso em que o adesivo é armazenado de forma congelada, será suficiente descongelá-lo antes do uso. No caso de adesivo congelado a vácuo, a reconstituição em solvente aquoso biologicamente compatível permite que seja usado para os efeitos desejados.

Assim, o adesivo biológico da invenção é usado para preparar um medicamento destinado à hemostasia e/ou cura dos tecidos biológicos lesados, tais como a pele ou qualquer órgão capaz de ser cirurgicamente operado (baço, fígado, pulmões, intestinos, etc.), o que, como explicado anteriormente, pode representar tecidos cruentos ou feridas hemorrágicas, cujo sangramento pode mesmo ser bem baixo contanto que todos os fatores necessários para a coagulação em cascata estejam presentes. O adesivo pode ser usado na presença de plasma para preparar um medicamento destinado a tratar tecidos lesados, por exemplo, para unir esses tecidos, selecionados do grupo formado por cartilagem, colágeno, osso e pó de osso.

Ainda, na presença de plasma, é também usado para preparar um medicamento destinado a fundir biomateriais selecionados do grupo formados por alginatos e ácido poliláctico. A presença de plasma é, em conseqüência, necessária em certos casos para o suprimento exógeno de fatores de plasma para iniciar a coagulação em cascata, e de preferência é plasma compatível ou autólogo. Esse suprimento pode notadamente ser realizado dentro do escopo das operações cirúrgicas convencionais em estomatologia ou odontologia.

O tecido biológico também pode se originar de células-tronco cultivadas e diferenciadas. Embora o adesivo da invenção seja um medicamento, em particular um curativo de aplicação local, isto é, para uso externo em um ferimento ou outra lesão como descrito acima, não fica excluído que o medicamento também pode ser uma cápsula de gelatina adequada, gastro-resistente ou não, na qual o adesivo biológico se encontra em forma seca, e ingerido para tratamento de sangramento digestivo.

A estabilidade de pelo menos 24 horas do adesivo da invenção permite que permaneça fluido e dessa forma possa ser usado para preparar um medicamento destinado a embolizar os vasos sangüíneos nutritivos de um alvo tumoral. Isso pode ser obtido com vantagem por uma via de injeção que usa um cateter convencional até os alvos tumorais de forma a "secar" o tumor.

Como o adesivo, a hemostasia pode ser fornecida através de um sistema endoscópico usado em microcirurgia (amostras, biópsias, excisão de pólipos, etc.).

A fluidez do presente adesivo, notadamente relacionada à sua estabilidade, possibilita através de uma fina agulha, tipicamente de um diâmetro menor do que 1 mm, em particular menor do que 0,5 mm, a aplicação em cirurgia sob um microscópio, por exemplo em uma aplicação oftálmica.

O seguinte exemplo ilustra a invenção, porém sem limitar seu escopo.

Exemplo

2 mL de uma amostra de adesivo biológico da invenção (amostra A) é preparada, incluindo fibrinogênio a uma concentração de 80 mg/mL, 100 lU/mL do Fator Vlla e 5 pmol/mL de cloreto de cálcio, os quais são introduzidos em uma única seringa.

Uma amostra B de adesivo biológico padrão da modelos anteriormente conhecidos é também preparada, incluindo uma mistura B1 consistindo de fibrinogênio a uma concentração de 80 mg/mL e contendo 100 IU/mL do Fator Xlll por um lado e uma mistura B2 consistindo de trombina de cálcio a 500 lU/mL por outro lado. As respectivas misturas B1 e B2 são introduzidas em duas seringas distintas, cujas extremidades são dispostas de forma a incluir uma única agulha, desta forma permitindo a fusão das misturas B1 e B2.

Um coelho anestesiado é submetido à laparotomia. O fígado é exposto e uma primeira incisão é feita no órgão para causar sangramento desta seção. Após enxugar o excesso de sangue com uma compressa, a amostra B de adesivo biológico é imediatamente aplicada na seção incisada pela expulsão simultânea do conteúdo de ambas as seringas pela agulha única que permite que se prepare uma mistura homogênea de B1 e B2. As bordas da ferida são mantidas juntas por 30 segundos para permitir que o adesivo biológico endureça.

Após a cicatrização, observa-se que a cicatriz obtida tem irregularidades e "caroços" de fibrina visível. Essas aglomerações resultam de um secamento não homogêneo, provavelmente em razão da fibrina formada antes da aderência.

Uma segunda incisão é realizada em outro local do fígado, o qual é cirurgicamente tratado da mesma forma que antes. A amostra A de adesivo biológico de acordo com a invenção, contida em uma única seringa, é aplicada na seção incisada e as bordas da ferida são mantidas juntas por 35 segundos para deixar o adesivo biológico endurecer.

Após a cicatrização, observa-se que a cicatriz obtida tem uma linha limpa e resiste a qualquer tentativa de deiscência. Nenhum vestígio de excesso de fibrina é visível, o que mostra que o excesso de adesivo não coagulou na ausência de um ferimento de operação, desta forma sem a presença dos fatores tissulares.

Claims (29)

1. "ADESIVO BIOLÓGICO ESTÁVEL, SEM TROMBINA, COM BASE EM FIBRINOGÊNIO, DE COMPOSTO ÚNICO, PARA USO TERAPÊUTICO", caracterizado por incluir o Fator Vlla e uma fonte de íons de cálcio.

2. "ADESIVO BIOLÓGICO ESTÁVEL, SEM TROMBINA, COM BASE EM FIBRINOGÊNIO, DE COMPOSTO ÚNICO, PARA USO TERAPÊUTICO", de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por consistir unicamente da mistura de fibrinogênio, FVIIa e íons de cálcio.

3. "ADESIVO BIOLÓGICO ESTÁVEL, SEM TROMBINA, COM BASE EM FIBRINOGÊNIO, DE COMPOSTO ÚNICO, PARA USO TERAPÊUTICO", de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado por incluir um teor de fibrinogênio entre -60 e 120 mg/mL da solução final de adesivo biológico líquido.

4. "ADESIVO BIOLÓGICO ESTÁVEL, SEM TROMBINA, COM BASE EM FIBRINOGÊNIO, DE COMPOSTO ÚNICO, PARA USO TERAPÊUTICO", de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo teor de fibrinogênio ser de 80 a 100 mg/mL da solução final de adesivo biológico líquido.

5. "ADESIVO BIOLÓGICO ESTÁVEL, SEM TROMBINA, COM BASE EM FIBRINOGÊNIO, DE COMPOSTO ÚNICO, PARA USO TERAPÊUTICO", de acordo com quaisquer das reivindicações 1 a 4, caracterizado por incluir de 50 a 500 IU de fator ativado VII por milímetro da solução final de adesivo biológico líquido (50-500 lU/mL).

6. "ADESIVO BIOLÓGICO ESTÁVEL, SEM TROMBINA, COM BASE EM FIBRINOGÊNIO, DE COMPOSTO ÚNICO, PARA USO TERAPÊUTICO", de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por incluir de 70 a 300 IU/mL de fator ativado VII em particular de 80 a 120 IU/mL.

7. "ADESIVO BIOLÓGICO ESTÁVEL, SEM TROMBINA, COM BASE EM FIBRINOGÊNIO, DE COMPOSTO ÚNICO, PARA USO TERAPÊUTICO", de acordo com quaisquer das reivindicações de 1 a 6, caracterizado pela fonte de íons de cálcio está em uma concentração entre 4 e 30 pmols/mL da solução final de adesivo biológico líquido.

8. "ADESIVO BIOLÓGICO ESTÁVEL, SEM TROMBINA, COM BASE EM FIBRINOGÊNIO, DE COMPOSTO ÚNICO, PARA USO TERAPÊUTICO", de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pela fonte de íons de cálcio está em uma concentração entre 8 e 20 pmols/mL.

9. "ADESIVO BIOLÓGICO ESTÁVEL, SEM TROMBINA, COM BASE EM FIBRINOGÊNIO, DE COMPOSTO ÚNICO, PARA USO TERAPÊUTICO", de acordo com qualquer das reivindicações de 1 a 8, caracterizado por incluir ainda o Fator XIII.

10. "ADESIVO BIOLÓGICO ESTÁVEL, SEM TROMBINA, COM BASE EM FIBRINOGÊNIO, DE COMPOSTO ÚNICO, PARA USO TERAPÊUTICO", de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo Fator Xlll está presente em uma quantidade de 100 IU por milímetro de solução final de adesivo biológico líquido (100 IU/mL-400 lU/mL).

11. "ADESIVO BIOLÓGICO ESTÁVEL, SEM TROMBINA, COM BASE EM FIBRINOGÊNIO, DE COMPOSTO ÚNICO, PARA USO TERAPÊUTICO", de acordo com qualquer das reivindicações de 1 a 10, caracterizado por aparecer em forma congelada, adequado para armazenamento prolongado.

12. "ADESIVO BIOLÓGICO SEM TROMBINA, COM BASE EM FIBRINOGÊNIO, PARA USO TERAPÊUTICO", incluindo o Fator Vlla e uma fonte de íons de cálcio, como definido de acordo com qualquer das reivindicações de 1 a 11, caracterizado por aparecer em forma congelada a vácuo, adequada para armazenamento prolongado.

13. "ADESIVO BIOLÓGICO SEM TROMBINA, COM BASE EM FIBRINOGÊNIO, PARA USO TERAPÊUTICO", de acordo com a reivindicação 12, caracterizado por incluir componentes de formulação estabilizante de congelamento a vácuo farmaceuticamente aceitáveis, de preferência representando uma mistura de arginina, pelo menos um aminoácido hidrofóbico e citrato trissódico.

14. "KIT PARA PREPARAÇÃO DO ADESIVO BIOLÓGICO", de acordo com qualquer das reivindicações de 1 a 11, caracterizado por conter meios de embalagem incluindo um lote de fator plasmático de fibrinogênio congelado a vácuo, um lote de fator plasmático FVIIa congelado a vácuo, um lote de fonte de íons de cálcio como pó e um solvente aquoso.

15. "KIT PARA PREPARAÇÃO DO ADESIVO BIOLÓGICO", de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelos meios de embalagem incluem ainda pelo menos um recipiente para pelo menos três componentes diferentes do adesivo.

16. "KIT PARA PREPARAÇÃO DO ADESIVO BIOLÓGICO", de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizado pelos meios de embalagem são um único recipiente contendo pelo menos os três componentes.

17. "KIT PARA PREPARAÇÃO DO ADESIVO BIOLÓGICO", de acordo com qualquer das reivindicações 14 a 16, caracterizado por também incluir um dispositivo para liberar o adesivo líquido assim que seja preparado pela dissolução dos citados lotes com o solvente aquoso.

18. "KIT PARA PREPARAÇÃO DO ADESIVO BIOLÓGICO", de acordo com qualquer das reivindicações 14 a 17, caracterizado por incluir um lote de dois componentes de uma mistura dos lotes dos citados fatores de plasma congelados a vácuo, e o lote de fonte de íon de cálcio como pó.

19. "KIT PARA PREPARAÇÃO DO ADESIVO BIOLÓGICO", de acordo com qualquer das reivindicações 14 a 18, caracterizado por cada lote de fibrinogênio congelado a vácuo ou lote de fator de plasma FVIIa ou o lote de dois componentes da mistura dos citados lotes de fatores de plasma congelados a vácuo incluir componentes de formulação estabilizante de congelamento a vácuo farmaceuticamente aceitáveis.

20. "KIT PARA PREPARAÇÃO DO ADESIVO BIOLÓGICO", de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelos componentes da formulação estabilizante representam uma mistura de arginina, pelo menos um aminoácido hidrofóbico e citrato trissódico.

21. "USO DE UM KIT", de acordo com qualquer das reivindicações 14 a 20, caracterizado por preparar um adesivo biológico como definido de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 12 pela reconstituição dos três lotes do citado kit em um solvente aquoso biologicamente compatível se necessário seguido de congelamento.

22. "ADESIVO BIOLÓGICO ESTÁVEL, SEM TROMBINA, COM BASE EM FIBRINOGÊNIO, DE COMPOSTO ÚNICO, PARA USO TERAPÊUTICO", de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo uso como medicamento.

23. "USO DE ADESIVO BIOLÓGICO", de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 13, caracterizado por preparar um medicamento destinado à hemostasia e/ou cicatrização de tecidos biológicos lesados.

24. "USO DE ADESIVO BIOLÓGICO", de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelos tecidos lesados serem tecidos cruentos ou ferimentos hemorrágicos.

25. "USO DE ADESIVO BIOLÓGICO", de acordo com a reivindicação 23 ou 24, caracterizado pelos tecidos lesados serem pele ou qualquer outro órgão capaz de ser cirurgicamente operado.

26. "USO DE ADESIVO BIOLÓGICO", de acordo com qualquer das reivindicações -23 a 25, caracterizado pelo tal medicamento ser um curativo de aplicação local ou cápsula de gelatina em que o citado adesivo biológico está em forma seca.

27. "USO DE ADESIVO BIOLÓGICO", de acordo com qualquer das reivindicações de 1 a 13 e de plasma, caracterizado por preparar um medicamento destinado a tratar tecidos lesados selecionados do grupo formado por cartilagem, colágeno, osso e pó de osso.

28. "USO DE ADESIVO BIOLÓGICO", de acordo com qualquer das reivindicações de 1 a 13 e de plasma, caracterizado por preparar um medicamento destinado fundir biomateriais selecionados do grupo formado por alginatos e ácido poliláctico.

29. "USO DE ADESIVO BIOLÓGICO", de acordo com qualquer das reivindicações de 1 a 13, caracterizado por preparar um medicamento destinado a embolizar vasos sangüíneos nutritivos de um alvo tumoral.