BRPI0620467A2 - preparação de aminoácidos gama tendo afinidade com a proteìna alfa-2-delta - Google Patents

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Abstract

PREPARAçãO DE AMINOáCIDOS GAMA TENDO AFINIDADE COM A PROTEìNA ALFA-2-DELTA. São revelados materiais e métodos para preparar a- minoácidos y oticamente ativos da fórmula (I), que se ligam à subunidade alfa-2-delta (<244>2<sym>) de um canal de cálcio.

Description

"PREPARAÇÃO DE AMINOÁCIDOS GAMA TENDO AFINIDADE COM A PROTEÍNA ALFA-2-DELTA"
Esta invenção diz respeito a materiais e métodos para preparar aminoácidos γ oticamente ativos que se ligam à subunidade alfa-2-delta (α2δ) de um canal de cálcio. Estes compostos, incluindo seus sais solvatos e hidratos farmaceu- ticamente aceitáveis, são usados para tratar sintomas vaso- motores (ondas de calor e transpirações noturnas), sindrome das pernas inquietas, fibromialgia, epilepsia, dor, e uma variedade de desordens neurodegenerativas, psquiátricas e do sono.
WO-A-2000/076958 é Patente U.S 6.642.398 descrevem aminoácidos y da fórmula:
<formula>formula see original document page 2</formula>
ou um sal farmaceuticamente aceitável destes em que:
R1 é hidrogênio, alquila reta ou ramificada de 1 a 6 átomos de carbono ou fenila;
R2 é alquila reto ou ramificado de I a 8 átomos de carbono, alquenila reto ou ramificado de 2 a 8 átomos de carbono, cicloalquila de 3 a 7 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, alquilcicloalquila, alquilalcóxi, alquila OH, alquilfenila, alquilfenóxi, fenila ou fenila substituído;
e R1 é alquila reto ou ramificado de 1 a 6 átomos de carbono ou fenila quando R2 for metila. Estes compostos, junto com seus sais, solvatos, e hidratos farmaceuticamente aceitáveis, ligam à subunidade α2δ de um canal de cálcio e podem ser usados para tratar inúmeras desordens, condições médicas, e doenças, incluindo, entre outras, epilepsia; dor (por exemplo, dor aguda e crô- nica, dor neuropática, e dor psicogênica); desordens neuro- degenerativas (por exemplo, lesão cerebral aguda que surge de acidente vascular cerebral, trauma da cabeça, e asfixia); desordens psquiátrica (por exemplo, ansiedade e depressão); e desordens do sono (por exemplo, insônia, poucas horas de sono associado a medicamento, sono demasiadamente longo, narcolepsia, apnéia do sono, e parasonias). WO-A- 2004/054566 descreve o uso destes compostos em um método para tratar uma desordem selecionada de desordem compulsiva obsessiva (OCD), fobias, desordem da tensão pós-traumática (PTSD), sindrome das pernas inquietas, desordem disfórica pré-menstrual, ondas de calor, e fibromialgia.
Muitos dos aminoácidos γ descritos em WO-A- 2000/076958 são oticamente ativos. Alguns dos compostos a seguir, possuem dois ou mais centros esterogênicos (quiral), que torna sua preparação desafiante. Embora W0-A-2000/076958 descreva métodos usados para preparar aminoácidos γ otica- mente ativos, alguns dos métodos podem ser problemáticos para produção piloto ou em grande escala em virtude da efi- ciência ou problemas de custo. Assim, seriam desejados méto- dos melhorados para preparar aminoácidos γ oticamente ati- vos .
A presente invenção fornece métodos melhorados para preparar compostos da Fórmula 1,
<formula>formula see original document page 4</formula>
ou um sal solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável destes, em que:
R1 e R2 são cada qual independentemente seleciona- dos de hidrogênio e alquila C1-3, desde que, quando R1 for hidrogênio, R2 não seja hidrogênio;
R3 é selecionado de alquila C1-6, alquenila C2-6, ci- cloalquila C3-6, cicloalquila C3-6 -alquila C1-6, alcóxi C1-6, arila, e aril-alquila C1-3, em que cada fração arila é opcio- nalmente substituída com um a três substituintes independen- temente selecionados de alquila C1-3, alcóxi C1-3, amino, al- quilaminõ C1-3, e halogênio; e
em que cada uma das frações alquila, alquenila, cicloalquila, e alcóxi supramencionadas é opcionalmente substituída com um a três átomos de flúor.
Os processos fornecidos pela presente invenção po- dem ser de custo mais efetivo ou eficiente do que processos conhecidos e exigem volumes mais baixos de solventes.
Um aspecto da invenção fornece, como a Modalidade A, um processo para preparar um composto da Fórmula 10, ou um sal deste, e um composto da Fórmula 11, ou um sal deste: <formula>formula see original document page 5</formula>
compreendendo
(a) colocar um composto da Fórmula 7,
<formula>formula see original document page 5</formula>
em contato com uma enzima, em que a enzima hidro- lisa diastereo-seletivamente o composto da Fórmula 7 no com- posto da Fórmula 10 ou um sal deste, ou com um composto da Fórmula 11 ou um sal deste;
(b) isolar o composto da Fórmula 10, um diastereô- mero deste, ou um sal deste; e
(c) hidrolisar opcionalmente o composto da Fórmula 10 ou 11 para dar o ácido carboxilico livre; em que
R1 e R2 são cada qual independentemente seleciona- dos de hidrogênio e alquila C1-3, desde que R1 e R2 não sejam
ambos hidrogênio;
R3 é selecionado de alquila C1-6, alquenila C2-6, cicloalquila C3-6, cicloalquila C36 -alquila C1-6, alcóxi C1-6, arila, e aril-alquila C1-3, em que cada fração arila é opcio- nalmente substituída com um a três substituintes independen- temente selecionados de alquila C1-3, alcóxi C1-3, amino, al- quilamino C1-3, e halogênio; e
em que cada uma das frações alquila, alquenila, cicloalquila, e alcóxi supramencionadas é opcionalmente substituída com um a três átomos de flúor;
R6 na Fórmula 7 é selecionado de alquila C1-6, al- quenila C2-6, alquinila C2-6, cicloalquila C3-7, cicloalquenila C3-7, halo-alquila C1-6, halo-alquenila C2-6, halo-alquinila C2-6, aril-alquila C1-6, aril-alquenila C2-6, e arila alquinila C2-e; e
R6 e R9 na Fórmula 10 e 11 são cada qual indepen- dentemente selecionados de hidrogênio, alquila Ci_6, alqueni- la C2-6, alquinila C2-6, C3-7 cicloalquila, cicloalquenila C3- 7, halo-alquila C1-6, halo-alquenila C2-6, halo-alquinila C2-6, aril-alquila C1-6, aril-alquenila C2-6, e aril-alquinila C2-6, desde que R8 e R9 não sejam ambos hidrogênio; e
em que cada uma das frações arila supramencionadas pode ser opcionalmente substituída com um a três substituin- tes independentemente selecionados de alquila C1-3, alcóxi C1-3, amino, alquilamino C1-3, e halogênio.
Como a Modalidade Al, a invenção fornece um pro- cesso para preparar um composto da Fórmula 10 ou um sal des- te:
em que R1 e R2 são cada qual independentemente se- lecionados de hidrogênio e alquila C1-3, desde que, quando R1 for hidrogênio, R2 não seja hidrogênio;
R3 é selecionado de alquila C1-6, alquenila C2-6, cicloalquila C3-6, cicloalquila C3-6 -alquila C1-6, alcóxi C1-6, arila, e aril-alquila C1-3, em que cada fração arila é opcio- nalmente substituída com um a três substituintes independen- temente selecionados de alquila C1-3, alcóxi C1-3, amino, al- quilamino C1-3, e halogênio, e em que cada uma das frações alquila, alquenila, cicloalquila, e alcóxi supramencionadas é opcionalmente substituída com um a três átomos de flúor; e
R8 é selecionado de alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, C3-7 cicloalquila, cicloalquenila C3-7, halo-alquila C1-6, halo-alquenila C2-6, halo-alquinila C2-6, aril-alquila C1-6, aril-alquenila C2-6, e aril-alquinila C2-6, e em que cada uma das frações arila supramencionadas pode ser opcionalmente substituída com um a três substituintes independentemente selecionados de alquila C1-3, alcóxi C1-3, amino, alquilamino C1-3, e halogênio:
e em que o dito processo compreende: (a) colocar um composto da Fórmula 7 em contato com uma enzima, em que a enzima hidrolisa diastereo- seletivamente o composto da Fórmula 7 no composto da Fórmula 11a;
<formula>formula see original document page 7</formula>
em que R1, R2 e R3 são da maneira definida por um composto da Formula 10; e
R6 na Fórmula 7 é selecionado de alquila C1-6, al- quenila C2-6, alquinila C2-6, cicloalquila C3-7, cicloalquenila C3-7, halo-alquila C1-6, halo-alquenila C2-6, halo-alquinila C2-6, aril-alquila C1-6, aril-alquenila C2-6, e aril-alquinila C2-6, e em que cada uma das frações arila supramencionadas pode ser opcionalmente substituída com um a três substituin- tes independentemente selecionados de alquila C1-3, alcóxi Ci_ 3, amino, alquilamino C1-3, e halogênio: e
(b) isolar o composto da Fórmula 10.
Como a Modalidade A2, a invenção fornece um pro- cesso da maneira definida na Modalidade A, em que R9 é hi- drogênio.
Como a Modalidade A3, a invenção fornece um pro- cesso da maneira definida na Modalidade A, A1 ou A2, em que R6 e R8 são independentemente selecionado de alquila C1-6; preferivelmente metila, etila, n-propila e i-propila; mais preferivelmente metila e etila.
Como a Modalidade A4, a invenção fornece um pro- cesso da maneira definida na Modalidade A, A1, A2 ou A3, em que R1 e R2 são cada qual independentemente hidrogênio ou me- tila, desde que R1 e R2 não sejam ambos hidrogênio, e R3 seja alquila C1-6; preferivelmente R1 é hidrogênio, R2 é metila, e R3 é metila, etila, .n-propila ou i-propila; mais preferivel- mente R1 é hidrogênio, R2 é metila, e R3 é etila.
Como a Modalidade A5, a invenção fornece um pro- cesso da maneira definida na Modalidade A, A1, A2, A3 ou A4, em que a enzima na etapa (a) é uma lipase; preferivelmente a enzima é uma lipase do microorganismo Burkholderia cepacia ou do microorganismo Thermomyces lanuginosus.
Como a Modalidade A6, a invenção fornece um pro- cesso da maneira definida na Modalidade Al, A2, A3, A4, ou A5, em que o processo compreende adicionalmente a etapa:
(c) converter opcionalmente o composto da Fórmula 10 em um sal deste; preferivelmente em um sal de metal alca- lino deste; mais preferivelmente em um sal de sódio deste.
Um aspecto adicional da invenção fornece, como a Modalidade A7, um processo para preparar um composto da Fór- mula 10a, ou um sal deste:
<formula>formula see original document page 9</formula>
em que R1, R2, e R3 são da maneira definida em Mo- dalidades A ou A3. 0 processo compreende as etapas de:
(a) colocar um composto da Fórmula 7,
<formula>formula see original document page 9</formula>
em contato com uma enzima para render o composto da Fórmula 10, ou um sal deste, e um composto da Fórmula 11, ou um sal deste, <formula>formula see original document page 10</formula>
em que a enzima hidrolisa diastereo-seletivamente o composto da Fórmula 7 no composto da Fórmula 10 ou um sal deste, ou com um composto da Fórmula 11 ou um sal deste;
(b) isolar o composto da Fórmula 10, ou um sal deste; e
(c )hidrolisar opcionalmente o composto da Fórmula 10, para dar o composto da Fórmula 10a, em que:
R1, R2, e R3 na Fórmula 7, Fórmula 10, e Fórmula 11 são da maneira definida anteriormente para Fórmula 1;
R6 na Fórmula 7 é selecionado de alquila C1-6, C2-6 alquenila, alquinila 3-7cicloalquila C3-7, cicloalquenila C3-7, halo-alquila C1-6, halo-alquenila C2-6, halo-alquinila C2-6, aril-alquila C1-6, aril-alquenila C2-6, e aril-C2-6 alquinila; e
R8 e R9 na Fórmula 10 e 11 são cada qual indepen- dentemente selecionados de hidrogênio, alquila C1-6, alqueni- la C2-6, alquinila C2-6, cicloalquila 03-7, cicloalquenila C3-7, halo-alquila C1-6, halo-alquenila C2-6, halo-alquinila C2-6, aril-alquila C1-6, aril-alquenila C2-6, e aril-alquinila C2-6;
em que cada uma das frações arila supramencionadas
pode ser opcionalmente substituída com um a três substituin- tes independentemente selecionados de alquila C1-3, alcóxi C1-3, amino, alquilamino C1-3, e halogênio.
A invenção fornece adicionalmente, como a Modali- dade Β, um composto da Fórmula 7, da maneira definida ante- riormente na Modalidade A, A1 ou A4; pref erivelmente R6 é alquila C1-6; mais preferivelmente R6 é metila, etila, n- propila ou i-propila.
Na Modalidade B1, a invenção fornece um composto da Fórmula 7 selecionado de:
éster dietilico do ácido (2'R) -2-ciano-2-(2'- metil-butil)-succínico;
éster dietilico do ácido (2'R)-2-ciano-2-(2'- metil-pentil)-succínico;
éster dietilico do ácido (2'R)-2-ciano-2-(2'- metil-hexil)-succínico;
éster dietilico do ácido (2'R)-2-ciano-2-(2', 4'- dimetil-pentil)-succínico;
éster etílico do ácido (5R)-3-ciano-5-metil- heptanóico;
éster etílico do ácido (5R)-3-ciano-5-metil- octanóico;
éster etílico do ácido (5R)-3-ciano-5-metil- nonanóico;
éster etílico do ácido (5R)-3-ciano-5,7-dimetil- octanóico;
ácido (5R)-3-ciano-5-metil-heptanóico;
ácido (5R)-3-ciano-5-metil-octanóico;
ácido (5R)-3-ciano-5-metil-nonanóico;
ácido (5R)-3-ciano-5,7-dimetil-octanóico;
ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-heptanóico;
ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico; ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-nonanóico;
ácido (3S,5R)-3-ciano-5,7-dimetil-octanóico;
éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- heptanóico;
éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- octanóico;
éster metilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- octanóico;
éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- nonanóico;
éster etilico do ácido {3S,5R)-3-ciano-5,7- dimetil-octanóico;
ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil-heptanóico;
ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico;
ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil-nonanóico;
ácido (3R,5R)-3-ciano-5,7-dimetil-octanóico;
éster etilico do ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil- heptanóico;
éster etilico do ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil- octanóico;
éster etilico do ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil- nonanóico;
éster etilico do ácido {3R,5R)-3-ciano-5,7- dimetil-octanóico; e
diastereômeros e enantiômeros opostos dos compos- tos supramencionados, e sais dos compostos supramencionados, seus diastereômeros e enantiômeros opostos.
Como a Modalidade B2, a invenção fornece um com- posto da Fórmula 10 selecionado de:
ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-heptanóico; ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico; ácido (3S,5R) -3-ciano-5-metil-nonanóico; ácido {3S,5R)-3-ciano-5,7-dimetil-octanóico;
éster etílico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- heptanóico;
éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- octanóico;
éster metilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- octanóico;
éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- nonanóico;
éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5,7- dimetil-octanóico;
e o sais e ésteres destes.
Como a Modalidade B3, a invenção fornece o compos- to ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico ou um sal ou és- ter deste (compostos da Fórmula 10b):
<formula>formula see original document page 13</formula>
em que R8b é selecionado de hidrogênio, alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6r cicloalquila C3-7, ci- cloalquenila C3-7 , halo-C2-6 alquila, halo-alquenila C2-6, halo-alquinila C2-6, aril-C1-6 alquila, aril-alquenila C2-6, e aril-alquinila C2-6 e em que cada uma das frações arila su- pramencionadas pode ser opcionalmente substituída com um a três substituintes independentemente selecionados de al- quila C1-3, alcóxi C1-3, amino, alquilamino C1-3, e halogê- nio; e sais destes. Preferivelmente o éster destes é um composto da Fórmula 10b em que R8b é alquila C1-6; mais pre- ferivelmente R8b é metila ou etila. Preferivelmente o sal deste é um sal de metal alcalino do ácido (3S,5R)-3-ciano-5- metil-octanóico; mais preferivelmente o sal de sódio destes.
A invenção fornece adicionalmente, como a Modali- dade C, um processo para preparar um composto da Fórmula 7, ou um sal deste:
<formula>formula see original document page 14</formula>
em que R1, R2, R3 são da maneira definida na Modali- dade B;
e R6 é alquila C1-6:
e em que o dito processo compreende:
<formula>formula see original document page 14</formula>
(a) reagir um composto da Fórmula 19 com um composto ortoéster da Fórmula 20 na presença de uma base
<formula>formula see original document page 14</formula>
em que R1, R2, R3 e R6 são da maneira definida para um composto da Fórmula 7; e
X2 é halogênio:
e (b) hidrolisar o produto intermediário de ortoéster resultante para fornecer o éster carboxilico da Fórmula 7.
A invenção fornece adicionalmente, como a Modalida- de D, um processo para a preparação de um composto da Fórmula 1, da maneira definida anteriormente, um diastereômero des- tes, ou complexo, sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável destes, etapas compreendendo (a) a (c) do processo da maneira definida na Modalidade A, A6 ou A7 e compreende adicionalmente as etapas:
(d) reduzir a fração de ciano de um composto da em que R1, R2, e R3 na Fórmula 10 são da maneira definida para um composto da Fórmula 1 e R6 é da maneira definida na Modalidade A;
e
(e) opcionalmente converter adicionalmente o com- posto da Fórmula 1 ou um sal deste em sal solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável destes.
Como a Modalidade Dl, a invenção fornece um pro- cesso para a preparação de um composto da Fórmula 1, da ma- neira definida anteriormente, ou um sal solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável destes, etapas compreendendo (a) a (c) do processo da maneira definida na Modalidade A6, e compreende adicionalmente as etapas: (d) reduzir a fração de ciano de um sal do compos- to da Fórmula 10 para dar um sal do composto da Fórmula 1; e
(e) opcionalmente converter adicionalmente o sal resultante do composto da Fórmula 1, ou em um sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável destes.
Como a Modalidade D2, a.invenção fornece um pro- cesso da maneira definida na Modalidade Dl, em que na etapa (c) o composto da Fórmula 10 é convertido em um sal de metal alcalino; mais preferivelmente o sal de sódio.
Como a Modalidade D3, a invenção fornece um pro- cesso da maneira definida na Modalidade D, em que na etapa (e), o sal resultante é convertido no ácido livre da Fórmula 1.
A invenção adicionalmente diz respeito a um pro- cesso para preparar um composto da Fórmula 1, da maneira de- finida anteriormente, incluindo um diastereômero destes, ou um sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável des- tes, compreendendo etapas (a) a (c) do processo da maneira definida na Modalidade A, e compreende adicionalmente as etapas:
(d) reduzir uma fração de ciano de um composto da Fórmula 8,
<formula>formula see original document page 16</formula>
ou um sal deste para dar um composto da Formula 9, <formula>formula see original document page 17</formula>
ou um sal deste, em que R1, R2, e R3 na Fórmula 8 e Fórmula 9 são da maneira definida para Fórmula 1;
(b) tratar opcionalmente um sal do composto da Fórmula 9 com um ácido;
(c) resolver o composto da Fórmula 9 ou um sal
deste; e
(d) converter opcionalmente o composto da Fórmula 1 ou um sal deste em um farmaceuticamente aceitável comple- xo, sal, solvato ou hidrato deste.
Um aspecto adicional da invenção fornece um com- posto da Fórmula 19,
<formula>formula see original document page 17</formula>
incluindo sais destes, em que R1, R2, e R3 são da maneira definida para Fórmula 1 anteriormente;
R6 é selecionado de hidrogênio, alquila C1-6, al- quenila C2-6, alquinila C2-6, cicloalquila C3-7 , cicloalque- nila C3-7, halo-alquila C1-6, halo-alquenila C2-6, halo- alquinila C2-6, aril-alquila C1-6, aril-alquenila C2-6, e aril- alquinila C2-6;
R12 é hidrogênio ou -C(O)OR7; e R7 é selecionado de alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, cicloalquila C3-7, cicloalquenila C3-7, halo-alquila C1-6, halo-alquenila C2-6, halo-alquinila C2-6, aril-alquila C1-6, aril-alquenila C2-6, e aril-alquinila C2-6/" em que cada uma das frações arila supramencionadas é opcio- nalmente substituída com um a três substituintes independen- temente selecionados de alquila C1-3, alcóxi C1-3, amino, alquilamino C1-3, e halogênio; e
em que cada uma das frações alquila, alquenila, cicloalquila, e alcóxi supramencionadas é opcionalmente substituída com um a três átomos de flúor.
Um aspecto adicional da invenção fornece compostos da Fórmula 7, Fórmula 8, Fórmula 10, Fórmula 11, e Fórmula 10a, anteriores, selecionado de:
éster dietílico do ácido (2'R)-2-ciano-2-(2 ' - metil-butil)-succínico;
éster dietílico do ácido (2'R)-2-ciano-2-(2 1 - metil-pentil)-succínico;
éster dietílico do ácido (21R)-2-ciano-2-(2 ' - metil-hexil)-succínico;
éster dietílico do ácido (2'R)-2-ciano-2-(2', 4'- dimetil-pentil)-succínico;
éster etílico do ácido (5R) -3-ciano-5-metil- heptanóico;
éster etílico do ácido (5R) -3-ciano-5-metil- octanóico;
éster etílico do ácido (5R) -3-ciano-5-metil- nonanóico; éster etílico do ácido (5R)-3-ciano-5,7-dimetil- octanóico;
ácido (5R)-3-ciano-5-metil-heptanóico;
ácido (5R)-3-ciano-5-metil-octanóico;
ácido (5R)-3-ciano-5-metil-nonanóico;
ácido (5R)-3-ciano-5,7-dimetil-octanóico;
ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-heptanóico;
ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico;
ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-nonanóico;
ácido (3S,5R)-3-ciano-5,7-dimetil-octanóico;
éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- heptanóico;
éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- octanóico;
éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- nonanóico;
éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5,7-dimetil- octanóico;
ácido {3R,5R)-3-ciano-5-metil-heptanóico;
ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico;
ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil-nonanóico;
ácido (3R,5R)-3-ciano-5,7-dimetil-octanóico;
éster etilico do ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil- heptanóico;
éster etilico do ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil- octanóico;
éster etilico do ácido(3R,5R)-3-ciano-5-metil- nonanóico; éster etilico do ácido (3R,5R)-3-ciano-5,7- dimetil-octanóico; e o sais destes.
A invenção fornece adicionalmente, como a Modali- dade E, Forma A ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico essencialmente puro, cristalino, que é caracterizado por um padrão de difração de raios-X (PXRD) obtido pela irradiação com radiação CuKa que inclui picos a 7,7, 15,8, 20,8 e 23,1 graus de dois ângulos teta ± 0,2 grau.
Como a Modalidade E1, a invenção fornece Forma A do ácido (3S, 5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico essencial- mente puro, cristalino, que é caracterizado por um termogra- ma de calorimetria diferencial de varredura (DSC) mostrando um único pico endotérmico acentuado máximo a 194°C ± 2°C.
Como a Modalidade E2, a invenção fornece Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico essencial- mente puro, cristalino, que é caracterizado por um espectro de infravermelho com Transformada de Fourier (FT-IR) que in- clui bandas de absorção a 1006 e 894 cm-1.
Como a Modalidade E3, a invenção fornece Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico essencial- mente puro, cristalino, que é caracterizado por um espectro de Raman com Transformada de (FT-Raman) que inclui bandas de absorção a 1550, 595 e 386 cm-1.
A expressão 'essencialmente puro1 quando aqui usa- da significa pelo menos 95 % em peso de pureza. Mais prefe- rivelmente, 'essencialmente puro' significa pelo menos 98 % em peso de pureza e mais preferivelmente significa pelo me- nos 99 % em peso de pureza. Como a Modalidade E4, a invenção fornece Forma A do ácido (3S,5R)~3-aminometil-5-metil-octanóico para o uso como um medicamento.
Como a Modalidade E5, a invenção fornece Forma A do ácido (3S, 5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico para o uso no tratamento de uma doença ou desordem para a qual um Ii- gante receptor alfa-2-delta é indicado, particularmente para o tratamento de uma doença ou desordem selecionada de epi- lepsia; dor (por exemplo, dor aguda e crônica, dor neuropá- tica, e dor psicogênica); desordens neurodegenerativas (por exemplo, lesão cerebral aguda que surge de acidente vascular cerebral, trauma da cabeça, e asfixia); desordens psquiátri- ca (por exemplo, ansiedade e depressão); desordens do sono (por exemplo, insônia, poucas horas de sono associado a me- dicamento, sono demasiadamente longo, narcolepsia, apnéia do sono, e parasonias); desordem compulsiva obsessiva (OCD); fobias; desordem da tensão pós-traumática (PTSD) ; sindrome das pernas inquietas; desordem disfórica pré-menstrual; sin- tomas vasomotores (ondas de calor e transpirações noturnas); e fibromialgia.
Como a Modalidade E6, a invenção fornece o uso de Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico na fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou desordem para a qual um ligante receptor alfa-2-delta é indicado, particularmente para o tratamento de uma doença ou desordem selecionada de epilepsia; dor (por exemplo, dor aguda e crônica, dor neuropática, e dor psicogênica); desor- dens neurodegenerativas (por exemplo, lesão cerebral aguda que surge de acidente vascular cerebral, trauma da cabeça, e asfixia); desordens psquiátrica (por exemplo, ansiedade e depressão); desordens do sono (por exemplo, insônia, poucas horas de sono associado a medicamento, sono demasiadamente longo, narcolepsia, apnéia do sono, e parasonias); desordem compulsiva obsessiva (OCD); fobias; desordem da tensão pós- traumática (PTSD); sindrome das pernas inquietas; desordem disfórica pré-menstrual; sintomas vasomotores (ondas de ca- lor e transpirações noturnas); e fibromialgia.
Como a Modalidade E7, a invenção fornece um método para tratar uma doença ou desordem para a qual um alfa-2- delta ligante receptor é indicado em um mamífero, particu- larmente uma doença ou desordem selecionada de epilepsia; dor (por exemplo, dor aguda e crônica, dor neuropática, e dor psicogênica); desordens neurodegenerativas (por exemplo, lesão cerebral aguda que surge de acidente vascular cere- bral, trauma da cabeça, e asfixia); desordens psquiátrica (por exemplo, ansiedade e depressão); desordens do sono (por exemplo, insônia, poucas horas de sono associado a medica- mento, sono demasiadamente longo, narcolepsia, apnéia do sono, e parasonias); desordem compulsiva obsessiva (OCD); fobias; desordem da tensão pós-traumática (PTSD); sindrome das pernas inquietas; desordem disfórica pré-menstrual; sin- tomas vasomotores (ondas de calor e transpirações noturnas); e fibromialgia, compreendendo administrar a um mamífero que necessita de tal trataménto Forma A do ácido (3S,5R)-3- aminometí1-5-metil-octanóico.
O tratamento de sintomas vasomotores (ondas de ca- lor e transpirações noturnas) é um uso preferido.
Como a Modalidade E8, a invenção fornece uma com- posição farmacêutica incluindo Forma A do ácido (3S,5R)-3- aminometil-5-metil-octanóico e um ou mais excipientes farma- ceuticamente aceitáveis.
Como a Modalidade E9, a invenção fornece um pro- cesso para preparar Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5- metiloctanóico por recristalização de uma solução de ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metiloctanóico bruto em uma mistura de etanol e água ou álcool isopropilico (IPA) e água; mais preferivelmente de uma solução de ácido {3S,5R)~3- aminometil-5-metil-octanóico bruto em uma mistura de 1:1 por volume de etanol: água ou uma mistura de 1:1 por volume de IPA:água; mais preferivelmente de uma solução de ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico bruto em um mistura de 1:1 por volume de etanol:água.
A presente invenção inclui todos os complexos e sais, quer farraaceuticamente aceitável ou não, solvatos, hi- dratos, e formas polimórficas dos compostos revelados. Cer- tos compostos podem conter um grupo alquenila ou cíclico, de forma que estereoisômeros cis/trans (ou Z/E) sejam possí- veis, ou possam conter um grupo ceto ou oxima, de forma que tautomerismo possa ocorrer. Em tais casos, a presente inven- ção geralmente inclui todos os isômeros Z/E e formas tau- toméricas, quer eles sejam puros, substancialmente puros, ou misturas.
A menos que de outra forma indicado, esta revela- ção usa definições fornecidas a seguir. Algumas das defini- ções e fórmulas podem incluir um traço ("-") para indicar uma ligação entre átomos ou um ponto de anexação para um átomo nomeado ou não nomeado ou grupo de átomos. Outras de- finições e fórmulas podem incluir um sinal de igualdade ("=") ou um símbolo de identidade ("=") para indicar uma li- gação dupla ou uma ligação tripla, respectivamente. Certas fórmulas podem também incluir um ou mais asteriscos ("*") para indicar centros estereogênicos (assimétrico ou quiral), embora a ausência de um asterisco não indique que o composto falta um estereocentro. Tais fórmulas podem referir-se ao racemato ou aos enantiômeros individuais ou a diastereômeros individuais, que podem ou não ser puros ou substancialmente puros. Outras fórmulas podem incluir uma ou mais ligações onduladas ("~~~~"). Quando anexadas a um centro estereogê- nico, as ligações instáveis referem-se a ambos estereoisôme- ros, tanto individualmente quanto como misturas. Similarmen- te, quando anexadas a uma ligação dupla, as ligações instá- veis indicam um isômero Z, um isômero E, ou uma mistura de isômeros ZeE. Algumas fórmulas podem incluir uma ligação tracejada "=====" para indicar uma ligação única ou uma dupla.
Grupos "Substituídos" são aqueles em que um ou mais átomos de hidrogênio foram substituídos com um ou mais átomos de não hidrogênio ou grupos, desde que exigências de valência sejam satisfeitas e que um composto quimicamente estável resulte da substituição.
"Cerca de" ou "aproximadamente", quando usados com relação a uma variável numérica mensurável, referem-se ao valor indicado da variável e a todos os valores da variável que estão dentro erro experimental do valor indicado (por exemplo, no intervalo de confidência de 95 % para a média) ou em ± 10 porcento do valor indicado, o que for maior.
"Alquila" refere-se a grupos hidrocarbonetos satu- rados de cadeia reta e ramificada, geralmente tendo um núme- ro especifico de átomos de carbono (isto é, alquila C1-3 re- fere-se a um grupo alquila tendo 1, 2 ou 3 átomos de carbono e alquila C1-6 refere-se a um grupo alquila tendo 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono). Exemplos de grupos alquila in- cluem metila, etila, n-propila, i-propila, n-butila, s- butila, i-butila, t-butila, pent-l-ila, pent-2-ila, pent-3- ila, 3-metilbut-1-ila, 3-metilbut-2-ila, 2-metilbut-2-ila, 2,2,2-trimetilet-1-ila, n-hexila, e similares.
"Alquenila" refere-se a grupos hidrocarbonetos de cadeia reta e ramificada tendo uma ou mais ligações carbo- no-carbono insaturadas, e geralmente tendo um número especi- fico de átomos de carbono. Exemplos de grupos alquenila in- cluem etenila, 1-propen-l-ila, l-propen-2-ila, 2-propen-1- ila, 1-buten-1-ila, 1-buten-2-ila, 3-buten-1-ila, 3-buten- 2-ila, 2-buten-l-ila, 2-buten-2-ila, 2-metil-1-propen-l- ila, 2-metil-2-propen-l-ila, 1,3-butadien-1-ila, 1,3- butadien-2-ila, e similares.
"Alquinila" refere-se grupos hidrocarbonetos a cadeia de reta ou ramificada tendo uma ou mais ligações carbono-carbono triplas, e geralmente tendo um número espe- cifico de átomos de carbono. Exemplos de grupos alquinila incluem etinila, 1-propin-1-ila, 2-propin-1-ila, 1-butin-1- ila, 3-butin-1-ila,. 3-butin-2-ila, 2-butin-1-ila, e simila- res .
"Alcóxi" refere-se a alquil-O-, alquenil-O, e al- quinil-O, onde alquila, alquenila, e alquinila são definidos anteriormente. Exemplos de grupos alcóxi incluem metóxi, etóxi, n-propóxi, i-propóxi, n-butóxi, s- butóxi, t-butóxi, n-pentóxi, s-pentóxi, e similares.
"Halo", "halogênio" e "halógeno" podem ser usados indiferentemente, e referem-se a flúor, cloro, bromo, e iodo.
"Haloalquila", "haloalquenila", "haloalquinila", e "haloalcóxi", referem-se, respectivamente, a grupos alquila, alquenila, alquinila, e alcóxi, substituídos com um ou mais átomos de halogênio, onde alquila, alquenila, alquinila, e alcóxi são definidos anteriormente. Exemplos'de grupos ha- loalquila incluem trifluormetila, triclorometila, pentaflu- oretila, pentacloroetila, e similares.
"Cicloalquila" refere-se a anéis hidrocarbonetos monocíclicos e bicíclicos saturados, geralmente tendo um número específico de átomos de carbono que compreendem o anel (isto é, cicloalquila C3-7 refere-se a um grupo cicloal- quila tendo 3, 4, 5, 6 ou 7 átomos de carbono como membros do anel). O cicloalquila pode ser anexado a um grupo pai ou a um substrato em qualquer átomo do anel, a menos que tal anexação venha a violar exigências de valência. Similarmen- te, os grupos cicloalquila podem incluir um ou mais substi- tuintes não hidrogênio a menos que tal substituição venha a violar as exigências de valência. Substituintes usados in- cluem alquila, alquenila, alquinila, haloalquila, haloalque- nila, haloalquinila, alcóxi, alcoxicarbonila, alcanoíla, e halo, da maneira definida anteriormente, e hidróxi, mercap- to, nitro, e amino.
Exemplos de grupos cicloalquila monociclicos in- cluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila, e similares. Exemplos de grupos cicloalquila biciclicos in- cluem biciclo[1.1.0]butila, biciclo[1.1.1]pentila, bici- cio[2.1.0]pentila, biciclo[2.1.1]hexila, bici- cio[3,1.0]hexila, biciclo[2.2.1]heptila, bici- cio[3.2.0]heptila, biciclo[3,1.1]heptila, bici- cio[4.1.0]heptila, biciclo[2.2.2]octila, bici- cio[3.2.1]octila, biciclo[4.1.1]octila, bici- cio[3.3.0]octila, biciclo[4.2.0]octila, bici- cio[3.3,1]nonila, biciclo[4.2.1]nonila, bici- cio[4.3.0]nonila, biciclo[3.3.2]decila, bici- cio[4.2.2]decila, biciclo[4.3,1]decila, bici- cio [4.4.0]decila, biciclo[3.3.3]undecila, bici- clo[4.3.2]undecila, biciclo[4.3.3]dodecila, e similares.
"Cicloalquenila" refere-se aos anéis hidrocarbo- netos monociclicos e biciclicos tendo uma ou mais ligações carbono-carbono insaturadas e geralmente tendo um número es- pecifico de átomos de carbono que compreendem o anel (isto é, cicloalquenila C3-7 refere-se a um grupo cicloalquenila tendo 3, 4, 5, 6 ou 7 átomos de carbono como membros do anel). O cicloalquenila pode ser anexado a um grupo pai ou a um substrato em qualquer átomo do anel, a menos que tal anexação venha a violar exigências de valência. Similarmen- te, os grupos cicloalquenila podem incluir um ou mais subs- tituintes não hidrogênio a menos que tal substituição venha a violar exigências de valêncra. Substituintes usados in- cluem alquila, alquenila, alquinila, haloalquila, haloalque- nila, haloalquinila, alcóxi, alcoxicarbonila, alcanoila, e halo, da maneira definida anteriormente, e hidróxi, mercap- to, nitro, e amino.
"Arila" e "arileno" referem-se a grupos aromáticos monovalentes e divalentes, respectivamente, incluindo grupos aromáticos monociclicos de 5 a 6 membros que contêm 0 a 4 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre. Exemplos de grupos arila monociclicos incluem fenila, pirrolila, furanila, tiofenila, tiazolila, isotiazolila, imidazolila, triazolila, tetrazolila, pirazo- lila, oxazolila, isooxazolila, piridinila, pirazinila, pi- ridazinila, pirimidinila, e similares. Grupos arila e ari- leno incluem também grupos biciclicos, grupos triciclicos, etc., incluindo anéis de 5 a 6 membros fundidos descritos anteriormente. Exemplos de grupos arila multicíclicos in- cluem naftila, bifenila, antracenila, pirenila, carbazoli- la, benzoxazolila, benzodioxazolila, benzotiazofila, ben- zoimidazolila, benzotiofeneila, quinolinila, isoquinolini- la, indolila, benzofuranila, purinila, indolizinila, e simi- lares. Estes grupos arila e arileno podem ser anexados a um grupo pai ou a um substrato em qualquer átomo do anel, a me- nos que tal anexação vènha a violar exigências de valência. Similarmente, grupos arila e arileno podem incluir um ou mais substituintes não hidrogênio a menos que tal substi- tuição venha a violar exigências de valência. Substituintes usados incluem alquila, alquenila, alquinila, haloalquila, haloalquenila, haloalquinila, cicloalquila, cicloalquenila, alcóxi, cicloalcóxi, alcanoíla, cicloalcanoíla, cicloalque- noila, alcoxicarbonila, cicloalcoxicarbonila, e halo, da ma- neira definida anteriormente, e hidróxi, mercapto, nitro, amino, e alquilamino.
"Arilalquila" refere-se a aril-alquila onde arila e alquila são definidos anteriormente. Exemplos incluem ben- zila, fluorenilmetila, e similares.
"Grupo abandonador" refere-se a qualquer grupo que abandona uma molécula durante um processo de fragmenta- ção, incluindo reações de substituição, reações de elimina- ção, e reações eliminação-eliminação. Grupos abandonadores podem ser nucleofugais, em que o grupo abandona com um par de elétrons que anteriormente serviu como a ligação entre o grupo abandonador e a molécula, ou pode ser eletrofugal, em que o grupo abandona sem o par de elétrons. A capacidade de um grupo abandonador nucleofugal abandonar depende de sua concentração de base, com as bases mais fortes sendo o gru- pos abandonadores mais fracos. Grupos abandonadores nucleo- fugais comuns incluem nitrogênio (por exemplo, de sais de diazônio); sulfonatos, incluindo alquilsulfonatos (por exem- plo, mesilato), fluoralquilsulfonatos (por exemplo, trifla- to, hexaflato, nonaflato, e tresilato) , e arilsulfonatos (por exemplo, tosilato, brosilato, closilato, e nosilato). Outros incluem carbonatos, ions de haleto, ânions de carbo- xilato, ions de fenolato, e alcóxidos. Algumas bases mais fortes, tais como NH2 e OH" podem se tornar grupos abandona- dores melhores por tratamento com um ácido. Grupos abandona- dores eletrofugal comuns incluem o próton, CO2, e metais.
"Excesso enantiomérico" ou "ee" é uma medida, para uma dada amostra do excesso de um enantiômero em uma amostra racêmica de um composto quiral e é expresso como uma porcen- tagem. Excesso enantiomérico é definido como 100 χ (er -1) / (er + 1) , onde "er" é a razão do enantiômero mais abundante para o enantiômero menos abundante.
"Excesso diastereomérico" ou "de" é uma medida, para uma dada amostra, do excesso de um diastereômero em uma amostra tendo quantidades iguais de diastereômeros e é ex- presso como uma porcentagem.
Excesso diastereomérico é definido como 100 χ (dr - 1) / (dr + 1), onde "dr" é a razão de um diastereômero mais abundante para um diastereômero menos abundante.
"Estereo-seletivo", "enantio-seletivo", "diaeste- ro-seletivo", e variantes destes, referem-se to um dado pro- cesso (por exemplo, hidrogenação) que rende mais de um este- reoisômero, enantiômero, ou diastereoisômero do que de um outro, respectivamente.
"Nível alto de estereo-seletividade", "nível alto de enantio-seletividade", "nível alto de diaestereo- seletividade", e variantes destes, referem-se a um dado pro- cesso de forma que rende produtos tendo um excesso de um es- tereoisômero, enantiômero, ou diastereoisômero, que compre- ende pelo menos cerca de 90 % dos produtos. Para um par de enantiômeros ou diastereômeros, um nível alto de enantio- seletividade ou diaestereo-seletividade corresponderá a um ee ou de de pelo menos cerca de 80 %.
"Enriquecido estereoisomericamente", "enriquecido enantiomericamente", "enriquecido diastereomericamente", e variantes destes, referem-se, respectivamente, a uma amostra de um composto que tem mais de um estereoisômero, enantiôme- ro ou diastereômero do que um outro. O grau de enriquecimen- to pode ser medido por % de produto total, ou por um par de enantiômeros ou diastereômeros, por ee ou de.
"Estereoisômeros" de um composto especificado re- ferem-se ao enantiômero oposto do composto e a qualquer dia- estereoisômero ou isômeros geométricos (Z/E) do composto.
Por exemplo, se o composto especificado tem configuração es- tereoquimica S,R,Z, seus estereoisômeros incluirão seu enan- tiômero oposto tendo configuração RfSfZr seus diastereôme- ros tendo configuração S,S,Z e configuração RfRfZr e seus isômeros geométricos tendo configuração S,R,E, configuração RfSfEr configuração SfSfEr e configuração R,R,E. "Estere- oisômero substancialmente puro", "enantiômero substancial- mente puro", "diastereômero substancialmente puro", e vari- antes destes, referem-se, respectivamente, a uma amostra contendo um estereoisômero, enantiômero, ou diastereômero, que compreende pelo menos cerca de 95 % da amostra. Para pa- res de enantiômeros e diastereômeros, um enantiômero ou di- astereômero substancialmente puro corresponderá a amostras tendo um ee ou de de cerca de 90 % ou mais. Um "estereoisô- mero puro", "enantiômero puro", "diastereômero puro", e va- riantes destes, referem-se, respectivamente, a uma amostra contendo um estereoisômero, enantiômero, ou diastereômero, que compreende pelo menos cerca de 99,5 % da amostra. Para pares de enantiômeros e diastereômeros, um "enantiômero puro ou diastereômero puro" corresponderá a amostras tendo um ee ou de de cerca de 99 % ou mais.
"Enantiômero oposto" refere-se a uma molécula que é uma imagem especular não superposta de uma molécula de re- ferência, que pode ser obtida invertendo todos os centros esterogênicos da molécula de referência. For exemplo, se a molécula de referência tem configuração estereoquimica abso- luta S, então o enantiômero oposto tem configuração estereo- quimica absoluta R. Similarmente, se a molécula de referên- cia tem configuração estereoquimica absoluta S,S, então o enantiômero oposto tem configuração estereoquimica R,R, e assim por diante.
"Valor de enantio-seletividade" ou "E" refere-se a razão de constantes de especificidade para cada enantiômero (ou para cada estereoisômero de um par de diastereômeros) de um composto que passa por reação ou conversão química e pode ser calculado (para o S-enantiômero) da expressão,
<formula>formula see original document page 32</formula>
onde KS e KR são as constantes de primeira ordem para a conversão dos enantiômeros SeR, respectivamente; KSM e KRM são as constantes de Michaelis para os enantiôme- ros SeR, respectivamente; χ é a conversão fracional do substrato; eep e èes são o excesso enantiomérico do produto e substrato (reagente), respectivamente. "Unidade de Lipase" ou "LU" refere-se à quantidade de enzima (em g) que libera 1 μmol de ácido butirico titulá- vel/min quando em contato com tributirina e um emulsificador (goma arábica) a 30°C e pH 7.
"Solvato" refere-se a um complexo molecular com- preendendo um composto revelado ou reivindicado e uma quan- tidade estequiométrica ou não estequiométrica de uma ou mais moléculas do solvente (por exemplo, etanol).
"Hidrato" refere-se a um solvato compreendendo um composto revelado ou reivindicado e uma quantidade estequio- métrica ou não estequiométrica de água.
"Complexos, sais, solvatos, ou hidratos farraaceu- ticamente aceitáveis" referem-se a complexos, ácido ou sais de adição de base, solvatos ou hidratos de compostos reivin- dicados e revelados, que estão no escopo de julgamento médi- co sólido, adequado para o uso em contato com os tecidos de pacientes sem toxicidade, irritação, resposta alérgica inde- vida, e similares, proporcionado com uma razão razoável be- neficio/risco, e efetivo para seu uso pretendido.
"Pré-catalisador" ou "precursor de catalisador" refere-se a um composto ou conjunto de compostos que são convertidos em um catalisador antes do uso.
"Tratar" refere-se a reverter, aliviar, inibir o progresso de, ou prevenir uma desordem ou condição na qual tal termo se aplica, ou pra prevenir um ou mais sintomas de tal desordem ou condição. "Tratamento" refere-se a o ato de "tratar", da maneira definida imediatamente anterior.
A Tabela 1 lista as abreviações usadas por toda a especificação.
TABELA 1. Lista de Abreviações
Abreviação Descrição
Ac acetila
ACN acetonitrila
AC2O anidrido acético
aq aquoso
(R,R)-BDPP
(2R,4R)-( + )-2,4-bis (difenilfosfino)pentano BES ácido NN-bis(2-hidroxietil)-2-aminoetanossulfônico (R)-BICHEP
(R) -(-)-2,2'-bis(dicicloexifosfino)-6,6'-dimetil-1 ,1'-bifenil BICINE N,N-bis(2-hidroxietil)glicina (S, S)-BICP (2S,21S)-bis(difenilfosfino)-(1 S,1'S)-biciclopentano BIFUP
2,2'-bis(difenilfosfino)-4,41,6,61-tetraquis(trifl uormetil)-i,11
bifenil
(R)-Tol-BINAP (R) -( + )-2,2'-bis(di-p-tolilfosfino)-1,
1'-binaftil (S)-Tol-BINAP (S) -(+) 2,2'-bis(di- p-tolilfosfino)-1,1'- binaftil (R)-BINAP
(R)-2,2'-bis(difenilfosfino)-1'1-binaftil (S)-BINAP (S)-2,2'-bis(difenilfosfino)-1'1- binaf- til
BIPHEP 2,2'-bis(difenilfosfino)-1, Ι'-bifenil
(R)-MeO-BIPHEP (R) -(6,6'-dimetoxibifenil-2,2'-diil)- bis(difenilfosfina)
(R)-Cl-MeO-BIPHEP (R)-( + )-5,5'-dicloro-6,6'-dimetóxi-2, 2 ' - bis(difenilfosfino)
1,1'-bifenil
(S)-Cl-MeO-BIPHEP (S)-(+)-5,5'-dicloro-6,6'-dimetóxi-2, 2 ' - bis(difenilfosfino)-1,1'-bifenil
BisP* (S,S)-1,2-bis (t-butilmetilfosfino)etano
( + )-tetraMeBITIANP (S) -( + )-2,2'-bis(difenilfosfino)- 4 , 4 ' , 6, 61-tetrametil-3,3'-bibenzo[b]tiofeno
Bn benzila
BnBr, BnCl brometo de benzila, cloreto de benzila
HPLC cromatografia liquida de alto desempenho
IAcOEt iodoacetato de etila
IPA isopropanol
i-PrOAc acetato de isopropila
(R) - (R)-JOSIPHOS (R) -(-)-1[ (R)-2
(difenilfosfino)ferrocenil]etildicicloexilfosfina (S)-(S)-JOSIPHOS (S) - (-)-1- [ (S)-2
(difenilfosfino)ferrocenil]etildicicloexifosfina (R) - (S)-JOSIPHOS (R)-(-)-1-[ (S)-2
(difenilfosfino)ferrocenil]etildicicloexilfosfina KHMDS hexametildisilazano de potássio
KF Karl Fischer
BOc t-butoxicarbonila
BOP hexafluorfosfato de benzotriazol-9- ilóxi-tris-(dimetilamino)-fosfônio (R) - (S)-BPPFA (-)- (R)-N,N-dimetil-1-((S)-1',2
bis(difenilfosfino)ferrocenil)etilamina R,R)-Et-BPE(+)—1,2 —bis((2R, 5R)-2,5-
dietilfosfolano)etano (R, M-Me-BPE (+)-1,2-bis((2R, 5R)-2,5-
dimetilfosfolano)etano (S, S) BPPM (-)-(2S, 4S)-2-dif enilf osf-inometil-4 -
difenilfosfino-1-t
butoxicarbonilpirrolidina
Bs brosila or p-bromo-benzenossulfonila Bu butila n-BULi n-butil litio t-Bu butila terciária Bu4N+Br- brometo de tetrabutil-amônio t-Buok butóxido terciário de potássio t-BuOli butóxido terciário de litio y-BuoMe butil metil éter terciário t-BuONa butil óxido de sódio terciário (+)-CAMP (R) -( + )-cicloexil(2-anisil)metilfosfina; a monofisfina CARBOPHOS metil-a-D-glucopiranosídeo-2, 6- dibenzoato-3,4-di(bis(3,5 dimetilfenil)fosfinito) Cbz benziloxicarbonila CDI N,N-carbonildiimidazol χ conversão fracional CnTunaPHOS 2,2'-bis-difenilfosfanil-bifenil tendo um grupo -O- (CH2)n-O
ligando os átomos de carbono 6,6' da bifenila (por exemplo, (R)-1,14
bis-difenilfosfanil-6,7,8,9-tetraidro-5,10-dioxa
dibenzo[a,c]cicloodeceno para η =4). COD 1,5-ciclooctadieno (R)-CYCPHOS (R)-1,2-bis(difenilfosfino)-1- cicloexiletano
DABCO 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano
DEAD azodicarboxilato de di-t-butila
DBN 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno
DBU 1,8-diazabiciclo(5.4.0)undec-7-eno Ks, Ks constante de razão de primeira ordem para enantiômero S- ou R-
<table>table see original document page 37</column></row><table> MeOH álcool metílico
MeONa metóxido de sódio
MES ácido 2-morfolinoetanossulfônico
(R,R)-t-butil-miniPHOS (RR)-1,2-bis(di-t-butilmetilfosfino)metano
(S,S)MandyPhos (SS)-(-)-2,2'-bis [ (R)-(N,N-dimetilamino) (fe- nil)metil]-1,1'-bis(difeniIfosfino)ferroceno (R)-MonoPhos (R) -(-)-[4,N,N-dimetilamino]dinafto[2,1- d:11,2'-f][1,3,2]dioxafosfpin
(R)-MOP (R)-(+)-2-(difenilfosfino)-2'-metóxi- 1,1'-binaftil
MOPS ácido 3-(N-morfolino)propanossulfônico
MPa megaPascal
mp ponto de fusão
Ms mesila ou metanossulfonila
MTBE éter metil butil terciário
NMP N-metilpirrolidona
Ns nosila ou nitrobenzeno sulfonila
(R, R)-NORPHOS (2R,3R)-(-)-2,3-
bis(difenilfosfino)biciclo[2.2.1]hept-5-eno
OTf- triflato (ânion do ácido triflúor- metanossuIfônico)
PdCl2(dppf)2 dicloro[1,1'-bis(difenilfosfino) ferro- cenojpaládio (II) diclorometano aduto
(R,SR,S)-Me-PENNPHOS (IR, 2S,4R,5S)-2,5-dimetil-7- fosfadiciclo[2.2.1]heptano
Ph fenila
Ph3P trifenilfosfina Ph3As trifenilarsina
(R)-PHANEPHOS (R) -(-)-4,12-bis(difeniIfosfino)-[2.2]- paraciclofano
(S)-PHANEPHOS (S) -(-)-4,12-bis(difeniIfosfino)-[2.2]- paraciclofano
(R)-PNNP N,N'-bis[(R) -( + )-α-metilbenzil]-Ν,Ν' bis(difenilfosfino)etileno diamina
PPH2-PhOx-Ph (R) -(-)-2-[2-(difeniIfosfino)fenil]-4- fenil-2-oxazolina
PIPES piperazina-1,4-bis(ácido etanossulfônico)
Pr propila
i-Pr isopropil
(R)-PROPHOS (R) -( + )-1,2-bis(difenilfosfino)propano
PyBOP hexafluorfosfato de benzotriazol-1-il- óxi-tris-pirrolidino-fosfônio
(R)-QUINAP (R) -( + )-1-(2-difenilfosfino-1- naftil)isoquinolina
<table>table see original document page 39</column></row><table>
spiro[4.4]nonano-1,6-diil-difenilfosfinous, um ligante fos- finito espirocíclico
(R,R,S,S) TangPhos (R,R,S,S)1,1'-di-t-butil-[2,2'] bifosfo- lanil
TAPS ácido N-[tris(hidroximetil)metil]-3-
aminopropanossulfônico
TATU tetrafluorborato de O-(7- azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurônio (R)-eTCFP (R)-2-i[(di-t-butil-fosfanil)-etil]- metil-fosfanil)-2-metil-propano (S)-eTCFP (S)-2-{[(di-t-butil-fosfanil)-etil]- metil-fosfanil)-2-metil-propano (R)-mTCFP (R)-2-{[(di-t-butil-fosfanil)-metil]- metil-fosfanil}-2-metil-propano,
(S)-mTCFP (S)-2-([(di-t-butil-fosfanil)-metil}- metil-fosfanil}-2-metil-propano TEA trietanolamina TES ácido N-[tris(hidroximetil)metil] 2- aminoetanossulfônico
Tf triflila ou trifluormetilsulfonila
TFA ácido trifluoracético
TNF tetraidrofurano
TLC cromatografia de camada delgada
TMEDA Ν,Ν,N',N'-tetrametil-1,2-etilenediamina
TMS trimetilsilila
Tr tritila ou trifenilmetila
TRICINE N-[tris(hidroximetil)metil]glicina
Tris buffer tampão de tris(hidroximetil)aminometano
TRITON B hidróxido de benziltrimetilamônio
TRIZMA® 2-amino-2-(hidroximetil)-1,3-propanediol
Ts tosila ou p-toluenossulfonila p-TSA ácido para-tolueno sulfônico
v/v porcentagem de volume
w/w porcentagem em peso (massa)
Alguns dos esquemas e exemplos a seguir podem omi- tir detalhes de reações comuns, incluindo oxidações, redu- ções, e assim por diante, técnicas de separação, e procedi- mentos analíticos, que são conhecidos pelos versados na tec- nologia de substâncias químicas orgânicas. Os detalhes de tais reações e técnicas podem ser encontrados em inúmeras pesquisas, incluindo Richard Larock, Comprehensive Organic Transformations (1999), e na série multi-volumes editada por Michael B. Smith e outros, Compendium of Organic Synthe- tic Methods (1974-2005). Em muitos casos, materiais de par- tida e reagentes podem ser obtidos de fontes comerciais ou podem ser preparado usando métodos de literatura. Algumas dos esquemas de reação podem omitir produtos secundários re- sultantes de transformações químicas (por exemplo, um álcool da hidrólise de um éster, C02 da descarboxilação de um diá- cido, etc.). Além disso, em alguns casos, intermediários da reação podem ser usados em etapas subseqüentes sem isolação ou purificação (isto é, in situ).
Em alguns dos esquemas de reação e exemplos a se- guir, certos compostos podem ser preparados usando grupos de proteção, que previnem reação química indesejável em sítios reativos de outra forma reativos. Grupos de proteção podem também ser usados para aumentar a solubilidade ou de outra forma modificar propriedades físicas de um composto. Para uma discussão de estratégias de grupo protetor, uma descri- ção de materiais e métodos para instalar e remover grupos de proteção, e uma compilação de grupos de proteção usados para grupos funcionais comuns, incluindo aminas, ácidos carboxí- licos, álcoois, cetonas, aldeidos, e similares, ver T. W. Greene and P. G. Wuts, Protecting Groups in organic chemical (1999) e P. Kocienski, Protective Groups (2000), que estão aqui incorporados pela referência na sua integra com todos os propósitos.
Geralmente, as transformações químicas descritas por toda a especificação podem ser realizadas usando quanti- dades substancialmente estequiométricas de reagentes, apesar de que certas reações podem se beneficiar do uso de um ex- cesso de um ou mais dos reagentes. Adicionalmente, muitas das reações reveladas por toda a especificação podem ser re- alizadas a cerca dà temperatura ambiente e pressão ambiente, mas, dependendo da cinéticas da reação, rendimento, e simi- lares, algumas reações podem correr em altas pressões ou em- pregar altas temperaturas (por exemplo, condições de reflu- xo) ou baixas (por exemplo, -70°C a 0°C). Muitas das transformações químicas podem também empregar um ou mais solventes compatíveis, que podem influenciar s taxa e rendi- mento da reação. Dependendo da natureza dos reagentes, o um ou mais solventes podem ser solventes próticos polares (in- cluindo água), solventes apróticos polares, solventes não polares, ou alguma combinação. Qualquer referência na reve- lação de uma faixa estequiométrica, uma faixa de temperatu- ra, um faixa de pH, etc., quer ou não usando expressamente a palavra "faixa", também inclui os pontos finais indicados. Geralmente, e a menos que de outra forma declarada, quando um identificador substituinte particular (R1, R2, R3, etc.) é definido para o primeiro tempo com relação a uma fórmula, o mesmo identificador de substituinte, quando usado em uma fórmula subseqüente, terá a mesma definição como na fórmula anterior. Assim, por exemplo, se R30 em uma primeira Fórmula 1 é hidrogênio, halogênio, ou alquila C1-6, então a menos que diferentemente declarado ou de outra forma clara do contexto do texto, R30 em uma segunda Fórmula 1 é também hidrogênio, halogênio, ou alquila C1-6. Esta revelação diz respeito a ma- teriais e métodos para preparar aminoácidos γ oticamente ativos da Fórmula 1, anterior, bem como seus estereoisômeros (por exemplo, diastereômeros e enantiômeros opostos) e seus complexos, sais, solvatos e hidratos farmaceuticamente acei- táveis. Os métodos reivindicados e revelados fornecem com- postos da Fórmula 1 (ou seus estereoisômeros) que são enri- quecido estereoisomericamente, e que em muitos casos, são estereoisômeros puros ou substancialmente puros. Por questão de clareza, a especificação descreve métodos e materiais para preparar intermediários e produtos finais tendo confi- gurações estereoquimicas especificas. Entretanto, usando ma- teriais de partida, agentes de resolução, catalisadores qui- rais, enzimas, e similares, tendo configurações estereoqui- micas diferentes, os métodos podem ser usados para preparar o diastereômeros e enantiômeros opostos correspondentes dos produtos e intermediários revelados.
Os compostos da Fórmula 1 têm pelo menos dois cen- tros esterogênicos, denotado por ligações em cunha, e inclu- em substituintes R1, R2, e R3, que são definidos anteriormen- te. Compostos da Fórmula 1 incluem aqueles em que R1 e R2 são cada qual independentemente hidrogênio ou metila, desde que R1 e R2 não sejam ambos hidrogênio, e aqueles em que R3 é al- quila C1-6, incluindo metila, etila, n-propila ou i-propila. Compostos representativos da Fórmula 1 também incluem aqueles em que R1 é hidrogênio, R2 é metila, e R3 é metila, etila, n- propila, ou i-propila, isto é, ácido (3S,5R)-3-aminometil-5- metil-heptanóico, Ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil- octanóico, ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-nonanóico, ou ácido (3S,5R)-3-aminometil-5,7-dimetil-octanóico. Diastereô- meros representativos dos últimos compostos são ácido (3R,5R)- ou (3S, 5S)-3-aminometil-5-metil-heptanóico, ácido (3R,5R) ou (3S,5S)-3-aminometil-5-metil-octanóico, (3R,5R) ou ácido (3S, 5S)-3-aminometil-5-metil-nonanóico, e ácido (3R,5R) ou (3S, 5S)-3-aminometil-5,7-dimetil-octanóico; enan- tiômeros representativos opostos são ácido (3R,5S)-3- aminometil-5-metil-heptanóico, ácido (3R,5S)-3-aminometil-5- metil-octanóico, ácido (3R,5S)-3-aminometil-5-metil- nonanóico, e ácido (3R,5S)-3-aminometil-5,7-dimetil- octanóico .
O esquema I mostra dois métodos para preparar com- postos da Fórmula 1. Os métodos incluem reagir um álcool quiral (Fórmula 2) com um agente de ativação (Fórmula 3). 0 álcool ativado resultante (Fórmula 4) reage com um diéster do ácido 2-ciano succinico (Fórmula 5) para fornecer um di- éster do ácido 2-alquil-2-ciano succinico (Fórmula 6) tendo um segundo centro estereogênico, que é representado pelas ligações instáveis. A fração de éster que é diretamente ane- xada ao segundo átomo de carbono assimétrico (ver Fórmula 6) é subseqüentemente clivado para dar um éster do ácido 3- ciano carboxilico (Fórmula 7), que é convertido no produto final desejado (Fórmula 1) através de contato tanto com um agente de resolução quanto com uma enzima. No método anteri- or, o éster (Fórmula 7) é hidrolisado para dar um ácido 3- ciano carboxilico (Fórmula 8) ou sal. Redução da fração de ciano (ver Fórmula 8) deu, mediante acidificação (se neces- sário), um γ-aminoácido (Fórmula 9) que é resolvido por meio de contato com um agente de resolução (por exemplo, um ácido quiral), seguido por separação do sal diastereomérico ou aminoácido livre desejado (Fórmula 1). Alternativamente, um diastereômero do monoéster (Fórmula 7) é diastereo- seletivamente hidrolisado através de contato com uma enzima, que resulta em uma mistura enriquecida em um ácido 3-ciano carboxilico ou éster tendo a configuração estereoquimica re- querida em C-3 (Fórmula 10). 0 éster ou ácido (Fórmula 10) é separado do diastereômero indesejável (Fórmula 11) e é hi- drolisado (se necessário) para dar um diastereômero de ácido 3-ciano carboxilico puro. ou substancialmente puro, (Fórmula 10a), ou é alternativamente convertido em um sal. Redução da fração de ciano deu, mediante desenvolvimento da reação do ácido (se necessário), o composto da Fosmula 1. <formula>formula see original document page 46</formula>
Esquema 1
Substituintes R1, R2, e R3 na Fórmula 2, 4, e 6-12 são da maneira definida anteriormente pela Fórmula 1, subs- tituinte R4 na Fórmula 3 é selecionado de tosila, mesila, brosila, closila (p-cloro-benzenossulfonil), nosila, e tri- flila; substituinte R5 na Fórmula 4 é um grupo abandonador (por exemplo, R4O-); e substituinte X1 na Fórmula 3 é halo- gênio (por exemplo, Cl) ou R4O-. Substituintes R6 e R7 na Fórmula 5-7 são cada qual independentemente selecionados de alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, cicloalquila C3-7, cicloalquenila C3-7, halo-alquila C1-6, halo-alquenila C2-6, halo-alquinila C2-6, aril-alquila C1-6, aril-alquenila C2-6, e aril-alquinila C2-6, Substituintes R8 e R9 na Fórmula 10 e 11 são cada qual independentemente selecionados de hidrogênio, alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, cicloalquila C3-7, cicloalquenila C3-7, halo-alquila C3-6, halo-alquenila C2-6 r halo-alquinila C2-6, aril-alquila C1-6, aril-alquenila C2-6, e aril-alquinila C2-6, Cada uma das frações arila supramencio- nadas pode ser opcionalmente substituída com um a três subs- tituintes independentemente selecionados de alquila C1-3, al- cóxi C1-3, amino, alquilamino C1-3, e halogênio.
X é um contraíon adequado; preferivelmente um me- tal alcalino; mais preferivelmente sódio.
O álcool quiral (Fórmula 2) mostra no Esquema I ter um centro estereogênico em C-2, denotado pelas ligações em cunha, e inclui substituintes R1, R2, e R3, que são da ma- neira definida anteriormente. Compostos da Fórmula 2 incluem aqueles em que R1 e R2 são cada qual independentemente hi- drogênio ou metila, desde que R1 e R2 não sejam ambos hidro- gênio, e aqueles em que R3 é alquila C1-6, incluindo metila, etila, n-propila ou i-propila. Compostos representativos da Fórmula 2 também incluem aqueles em que R1 é hidrogênio, R2 é metila, e R3 é metila, etila, n-propila, ou i-propila, isto é, (R)-2-metil-butan-l-ol, (R)-2-metil-pentan-l-ol, (R)-2-metil-hexan-l-ol, ou (R)-2,4-dimetil-pentan-l-ol. Enantiômeros representativos opostos dos últimos compostos são (S)-2-metil-butan-l-ol, (S)-2-metil-pentan-1-ol, (S)-2- metil-hexa.n-1-ol, e (S)-2,4-dimetil-pentan-1-ol.
Como mostrado no Esquema-I, a fração de hidróxi do álcool quiral (Fórmula 2) é ativada por meio de reação com um composto da Fórmula 3. A reação é tipicamente realizada com excesso (por exemplo, cerca de 1,05 eq a cerca de 1,1 eq) agente de ativação (Fórmula 3) em uma temperatura de cerca de -25°C a cerca de temperatura ambiente. Agentes de ativação usados incluem agentes de sulfonilação, tais como TsCl, MsClf BsCl, NsClf TfCl, e similares, e seus anidridos correspondentes (por exemplo, anidrido de ácido p- toluenossulfônico). Assim, for exemplo, compostos da Fórmula 2 podem reagir com TsCl na presença de piridina e um solven- te aprótico, tais como Et-OAcf MeCl2, ACN, THFf e similares, para dar éster 2-metil-butíIico do ácido (R)-tolueno-4- sulfônico, éster 2-metil-pentíIico do ácido (R)-tolueno-4- sulfônico, éster 2-metil-hexíIico do ácido (R)-tolueno-4- sulfônico, e éster 2,4-dimetil-pentílico do ácido (R)- tolueno-4-sulfônico. Similarmente, compostos da Fórmula 2 podem reagir com MsCl na presença de um solvente aprótico, tais como MTBE, tolueno, ou MeCl2, e um base fraca, tal como Et3N, para dar éster 2-metil-butíIico do ácido (R) - metanossulfônico, (R)-metanossulfônico éster 2-metil- pentílico do ácido, éster 2-metil-hexíIico do ácido (R)- metanossulfônico, e éster 2,4-dimetil-pentílico do ácido (R)-metanossulfônico.
Mediante ativação da fração de hidróxi, o interme- diário resultante (Fórmula 4) reage com um diéster do ácido 2-ciano succinico (Fórmula 5) na presença de uma base e um ou mais solventes para dar um diéster do ácido 2-alquil-2- ciano succinico (Fórmula 6). Compostos representativos da Fórmula 5 incluem éster dietilico do ácido 2-ciano- succinico. Similarmente, compostos representativos da Fórmu- la 6 incluem éster dietilico do ácido (2'R)-2-ciano-2-(2' - metil-butil)-succinico, éster dietilico do ácido (2'R)-2- ciano-2-(2'-metil-pentil)-succinico, éster dietilico do áci- do (2'R)-2-ciano-2-(2'-metil-hexil)-succinico, e éster die- tilico do ácido (2'R)-2-ciano-2-(2',4'-dimetil-pentil)- succinico.
A alquilação pode ser realizada em temperaturas que variam de cerca de temperatura ambiente até refluxo, de cerca de 70°C a 110°C, ou de cerca de 90°C a cerca de 100 °C, usando estequiométrica ou excesso quantidades (por exem- plo, cerca de 1 eq a cerca de 1,5 eq) da base e do diéster (Fórmula 5). Bases representativas incluem carbonatos de me- tal do Grupo 1 (por exemplo, Cs2CO3 e K2CO3), fosfatos (por exemplo, K3PO4), e alcóxidos (por exemplo, NaOEt 21 % em EtOH,), bem como bases não nucleofilicas impedidas, tais como Et3N, t-BuOK, DBN, DBU, e similares. A mistura da rea- ção pode compreender uma fase orgânica única ou pode compre- ender uma fase aquosa, uma fase orgânica, e um catalisador de transferência de fase (por exemplo, um sal tetraalquila- mônio tal como Bu4N+Br). Solventes orgânicos representativos incluem solventes próticos polares, tais como MeOH, EtOH, i- PrOH, e outros álcoois; apróticos solventes polares, tais como EtOAc, i-PrOAc, THF, McCl2, e ACN; e solventes não po- lares aromáticos e alifáticos, tais como tolueno, heptano, e similares.
Depois da alquilação, a fração de éster que é di- retamente anexada ao segundo átomo de carbono assimétrico (ver Fórmula 6) é clivado para dar um éster do ácido 3-ciano carboxilico (Fórmula 7), tais como éster etilico do ácido (5R)-3-ciano-5-metil-heptanóico, éster etilico do ácido (5R)-3-ciano-5-metil-octanóico, éster etilico do ácido (5R)- 3-ciano-5-metil-nonanóico, e éster etilico do ácido {5R)~3- ciano-5,7-dimetil-octanóico. 0 éster pode ser removido rea- gindo o diéster (Fórmula 6) com um sal de cloreto (por exem- plo, LiCl, NaCl, etc.) em um solvente aprótico polar, tais como DMSO, NMP aquosos, e similares, em uma temperatura de cerca de 135 0C ou mais (isto é, condições de Krapcho). Tem- peraturas mais altas (por exemplo, 150 0C, 160 °C, ou mais) ou um catalisador de transferência de fase (por exemplo, Bu4N+Br) pode ser usado para reduzir os tempos de reação para 24 horas ou menos. Tipicamente, a reação emprega ex- cesso de sal de cloreto (por exemplo, de cerca de 1,1 eq a cerca de 4 eq ou de cerca de 1,5 eq a cerca de 3,5 eq).
Como mostrado no Esquema I e notado anteriormente, o éster do ácido 3-ciano carboxilico (Fórmula 7) pode ser convertido no produto desejado (Fórmula 1) através de conta- to com um agente de resolução. Neste método, o éster (Fórmu- la 7) é hidrolisado por meio de contato com um ácido ou base aquosa para dar um ácido 3-ciano carboxilico (Fórmula 8) ou sal. Por exemplo, o composto da Fórmula 7 pode ser tratado com HCl, H2SO4, e similares, e com excesso de H2O para dar o ácido carboxilico da Fórmula 8. Alternativamente, o com- posto da Fórmula 7 pode ser tratado com uma base inorgânica aquosa, tais como LiOH, KOH, NaOH, CsOH, Na2CO3, K2CO3, Cs2CO3, e similares, em um solvente polar opcional (por exemplo, THF, MeOH, EtOH, acetona, ACN, etc.) para dar um sal de adição de base, que pode ser tratado com um ácido para gerar o ácido 3-ciano carboxilico (Fórmula 8) . Compos- tos representativos da Fórmula 8 incluem ácido (5R)-3-ciano- 5-metil-heptanóico, ácido (5R)-3-ciano-5-metil-octanóico, ácido (5R)-3-ciano-5-metilnonanóico, e ácido (5R)-3- ciano- 5,7-dimetil-octanóico, e seus sais.
A fração de ciano do ácido carboxilico (Fórmula 8), ou de seu sal correspondente, é subseqüentemente reduzi- do para dar, mediante desenvolvimento da reação do ácido se necessário, um γ-aminoácido (Fórmula 9). 0 penúltimo ácido livre pode ser obtido tratando um sal do γ-aminoácido com um ácido fraco, tal como HOAc aquoso. Compostos representativos da Fórmula 9 incluem ácido (5R)-3-aminometil-5-metil- heptanóico, ácido (5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico, ácido (5R)-3-aminometil-5-metil-nonanóico, e ácido (5R)-3- aminometil-5,7-dimetil-octanóico, e seus sais.
A fração de ciano pode ser reduzida por meio de reação com H2 na presença de um catalisador ou através da reação com um agente de redução, tais como LiAlH4, BH3-Me2S, e similares. Além de níquel Raney e outros catalisadores Es- ponja Metal, catalisadores potencialmente usados incluem ca- talisadores heterogêneos contendo de cerca de 0,1 % a cerca de 20 %, ou de cerca de 1 % a cerca de 5 %, em peso, de me- tais de transição tais como Ni, Pd, Pt, Rh, Re, Ru, e Ir, incluindo óxidos e combinações destes, que são tipicamente suportados em vários materiais, incluindo AI2O3, C, CaCO3, SrCO3, BaSO4, MgO, SiO2, TiO2, ZrO2, e similares. Muitos des- ses metais, incluindo Pd, podem ser dopados com um amina, sulfeto, ou um segundo metal, tais como Pb, Cu, ou Zn. Cata- lisadores exemplares incluem assim, catalisadores de paládio tais como Pd/C, Pd/SrC03, PdMl2O3, Pd/MgO, Pd/CaC03, Pd/BaSO/j, PdO, Pd negro, PdCl2, e similares, contendo cerca de 1 % a cerca de 5 % Pd, baseado no peso. Outros catalisa- dores incluem Rh/C, Ru/C, Re/C, Pt02, Rh/C, RuO2, e similares.
A redução catalitica da fração de ciano é tipica- mente realizada na presença de um ou mais solventes polares, incluindo sem limitação, água, álcoois, éteres, ésteres e ácidos, tais como MeOH, EtOH, IPA, THF, EtOAc, e HOAc. A re- ação pode ser realizada em temperaturas variando de cerca de 5°C a cerça de 100°C, embora reações em temperatura ambi- ente sejam comuns. Geralmente, o razão substrato para cata- lisador pode variar de cerca de 1:1 a cerca de 1000:1, base- ado no peso, e a pressão de H2 pode variar cerca de pressão atmosférica, 0 psig (0 MPa), a cerca de 1.500 psig (10,3 MPa). Mais tipicamente, as razões substrato para catalisador variam cerca de 4:1 a cerca de 20:1, e as pressões de H2 va- riam de cerca de 25 psig (0,17 MPa) a cerca de 150 psig (1,03 MPa).
Como mostrado no Esquema-I, o penúltimo γ- aminoácido (Fórmula 9) é resolvido para dar o estereoisômero desejado (Fórmula 1) . 0 aminoácido (Fórmula 9) pode ser re- solvido através de contato com um agente de resolução, tal como um ácido ou base enantiomericamente puro ou substanci- almente puro (por exemplo, ácido S-mandélico, ácido S- tartárico, e similares) para render um par de diaestereoisô- meros (por exemplo, sais tendo solubilidades diferentes), que são separados por meio de, por exemplo, recristalização ou cromatografia. O y-aminoácido tendo a configuração este- reoquimica desejada (Fórmula 1) é subseqüentemente regenera- do do diastereômero apropriado por meio de, por exemplo, contato com uma base ou ácido ou pela divisão de solvente (por exemplo, contato com EtOH, THF, e similares) . O estere- oisômero desejado pode ser enriquecido adicionalmente atra- vés de recristalizações múltiplas em um solvente adequado.
Além do uso de um agente de resolução descrito an- teriormente, o éster do ácido 3-ciano carboxilico (Fórmula 7) pode ser convertido no produto desejado (Fórmula 1) atra- vés de contato com uma enzima. Como mostrado no Esquema I e da maneira discutida anteriormente, um diastereômero do mo- noéster (Fórmula 7) é diastereo-seletivamente hidrolisado através de contato com uma enzima, que resulta em uma mistu- ra contendo um ácido 3-ciano carboxilico (ou éster) tendo a configuração estereoquimica requerida em C-3 (Fórmula 10) e um éster 3-ciano carboxilico (ou ácido) tendo a (não deseja- da) configuração estereoquimica oposta em C-3 (Fórmula 11). Compostos representativos da Fórmula 10 incluem ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-heptanóico, (ácido 3S,5R)-3-ciano-5- metil-octanóico, ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metilnonanóico, e ácido {3S,5R)-3-ciano-5,7-dimetil-octanóico, e sais destes, bem como ésteres alquila C1-6 dos compostos supramencionados, incluindo éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- heptanóico, éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- octanóico, éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- nonanóico, e éster etilico do ácido (35,5R)-3-ciano-5,7- dimetil-octanóico. Compostos exemplares da Fórmula 11 inclu- em ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil-heptanóÍco, ácido (3R,5R)- 3-ciano-5-metil-octanóico, ácido (3R,5R) -3-ciano-5-metil- nonanóico, e ácido (3R,5R)-3-ciano-5,7-dimetil-octanóico, e sais destes, bem como ésteres alquila C1-6 dos compostos su- pramencionados, incluindo éster etilico do ácido (3R,5R)-3-
ciano-5-metil-heptanóico, éster etilico do ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico, éster etilico do ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil-nonanóico, e éster etilico do ácido (3R,5R)-3-ciano-5,7-dimetil-octanóico.
A escolha de enzima (biocatalisador) usada para resolver o diastereômero desejado (Fórmula 10) depende da estrutura do substrato (Fórmula 7) e do produto de biocon- versão (Fórmula 10 ou Fórmula 11). O substrato (Fórmula 7) compreende dois diaestereoisômeros (Fórmula 13 e Fórmula 14) tendo configuração estereoquimica oposta em C-3,
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Na Fórmula 13 e Fórmula 14, substituintes R1, R2, e R6 são da maneira definida pela Fórmula 1 e Fórmula 5 ante- riores. A enzima hidrolisa estéreo-seletivamente um dos dois diaestereoisômeros (Fórmula 13 ou Fórmula 14). Assim, a en- zima pode ser qualquer proteína que, embora tendo pouco ou nenhum efeito no composto da Fórmula 13, catalisa a hidróli- se do composto da Fórmula 14 para dar um ácido 3-ciano car- boxílico (ou sal) da Fórmula 11. Alternativamente, a enzima pode ser qualquer proteína que, embora tendo pouco ou nenhum efeito no composto da Fórmula 14, catalisa a hidrólise do composto da Fórmula 13 para dar um ácido 3-ciano carboxílico (ou sal) da Fórmula 10. Usado enzimas para hidrolisar dias- tereo-seletivamente os compostos da Fórmula 13 ou Fórmula 14 com compostos da Fórmula 10 ou Fórmula 11, respectivamente, pode assim incluir hidrolases, incluindo lipases, certas proteases, e outras esterases estereo-seletivas. Tais enzi- mas podem ser obtidas de uma variedade de fontes naturais, incluindo órgãos animais e microorganismos. Ver, por exem- plo, Tabela 2 para uma lista não limitante de hidrolases co- mercialmente disponíveis.
Tabela 2. Hidrolases comercialmente disponíveis
Enzima Nome comercial
Lipase Pancreática de porco Altus 03 CAL A, liofilizado Altus 11 Lipase Candida lipolyfica Altus 12 CAL-B, liofilizado Altus 13 Lipase Geotdchurn candidurn Altus 2$ Lipase Pseudomonas aroginosa Altus 50 Esterase Psaudornonas sp. Amano Cholesterol Esterase 2 Protease Aspergillus niger Amano Protease AS
Protease BurkhoIderia cepacia Amano Protease AH
Protease Pseudomonas fluorescens Amano Protease AK 20
Protease Candida rugosa Amano Protease AYS
Protease Rhizopus delemar Amano Protease
Protease Rhizopus oryzae Amano Protease F -AP 15
Protease Penicilllum camemberfii Amano Upase G 50
Protease Mucor javanicus Amano Protease M 10
Protease Burkholderia cepacia Amano Protease PS
Protease Burkholderia cepacia Amano Protease PS-SD
Protease Burkholderia cepacia Amano Protease PS-C I
Protease Burkholdeda cepacia Amano Protease PS-C II
Protease Burkholderfa cepacia Amano Protease PS-D I
Protease Penicilllum roqueforfi Amano Protease R
Protease Burkholderia cepacia Amano Protease S
Protease Aspergillus sp. Biocatalytics 101
Protease Pseudomonas sp. BioCatalytics 103
Protease Fungai Biocatalytics 105
Protease Microbiana liofilizado BioCatalytics 108
CAL-B, liofilizado Biocatalytics 110
Candida sp., liofilizado BioCatalytics 111
CAL-Ar Liofilizado BioCatalytics 112
Protease Thermomyces sp. Biocatalytics 115
Protease Alcallgines sp., liofilizado BioCatalytics 117
Lipase Chromobacterium viscosum Altus 26
CAL-B, L2 Sol Chriazyme L2 Sol
Lipase Candida cylindracea Fluka 62302
Lipase Cândida utilis Fluka 6 Enzima Nome comercial
Protease Rhizopus niveus Sigma L8 Protease Pancreática Porcina Sigma L12 Protease Pseudomonas sp. Lipoprotein Sigma L13 Protease Thermomuces lanuginosus Sigma L9 Lipolase Protease Thermomuces lanuginosus Sigma LlO Novo871 Protease Rhizomucor miehei Sigma L6 Palatase Protease Pseudomonas species Sigma L14 Type XIII Protease de germe de trigo Sigma Lll Protease Rhizopus arrhizus Sigma L7 Type XI Protease Pancreática 250 Valley Research Vl Protease Trypsin Altus 33 Protease Chymopapain Altus 38 Protease Bromelain Altus 40 Protease Aspergillus niger Altus 41 Protease Aspergillus oryzae Altus 42 Protease Penicillfum sp. Altus 43 Protease Aspergillus sp. Altus 45 Protease Renin Calf Stomach Sigma P24 Protease Subtilisin Carlsberg Altus 10 Protease Baeillus lenfus Anus 53 protease Fungai Genencor Fungai Protease 500,000 Protease Fungai Genencor Fungai Protease Concentrate Protease Bacteriana Genencor Protex 6L Protease Genencor Protease 899 protease Bacteriana Genencor Multifect P3000 protease Bacteriana Genencor Primatan protease Bacteriana Genencor Purafect (4000L) protease Bacteriana Genencor Multifect Neutral Protease Aspergillus niger Amano Ácido Protease Protease Rhizopus niveus Amano Ácido Protease Protease Rhizopus niveus Amanr) Newiase F Protease Rhizopus oryzae Amano Peptidase R Protease Bacillus subtilis Amano Proleather FGF Protease Aspergillus oryzae Amano Protease A Protease Aspergillus oryzae Amano Protease M Protease Baeillus subtilis Amano Protease N Protease Aspergillus melleus Amano Protease P 10
Enzima Nome comercial
Protease Bacillus stearothermophilus Amano Protease SG Esterase de fígado de porco, liofilizado BioCat Chi- razyme E1
Esterase de fígado de porco, liofilizado BioCat Chi- razyme E2
Proteases Sireptomyces sp. BioCatalytics 118 Protease Tritirachium álbum Fluka P6 Proteinase K Protease de pâncreas bovino Sigma P18 alpha chymotrypsin I Protease Streptomyces griseus Sigma P16 Bacterial Protease de pâncreas bovino Sigma P21 Beta chymotrypsin Protease Clostridium histolyticum Sigma P13 Clostri- pain
Protease de intestino bovino Sigma P17 Enteropeptidase Protease de intestino de porco Sigma P25 Entero- peptidase Protease Bacillus sp. Sigma PS Esperase
Protease Aspergillus oryzae Sigma Pl Flavourzyme
Protease Bacillus amyloliguefaciens Sigma P5 Neutrase
Protease Carica papaya Sigma P12 Papain
Bacillus thennoprnteolydcus rokko Sigma PlO Protease
Protease Pyrococcus furiosis Sigma P14 Protease S
Protease Baeillus sp. Sigma P9 Savinase
Protease pâncreas bovino Sigma P18 Type 1 (crude)
Protease Baeillus polymyxa Sigma P7 Type IX
Protease Baeillus lieherrfformis Sigma P6 Type VIII
Protease Aspergillus saitoi Sigma P3 Type XIII
Protease Aspergillus sojae Sigma P4 Type XIX
Protease Aspergillus oryzae Sigma P2 Type XXIII
Protease Bacteriana Sigma Pll Type XXIV
15 Rhizopus sp. Newlase Sigma 15 Newlase
Protease Aspergillus oryzae Validase FP Concentrate
Pineappfe [Arianas eomosus & Ananas Bromelian Concentrate
braeteatus (L) ]
Aeilase Aspergillus sp. Amano Amt
Aeilase Porcina kidney Sigma A-S2 Acilase I
Aeilase de penicilina G Altus 06
Esterase de Mueormeihei Fluka E5
Esterase Candida rugosa Altus 31
Elastase panereátiea de porco Altus 35
Colinesterase, acetila Sigma ES8
Esterase de Colesterol BioCatalyties E3
Sulfato de amônio PLE BioCatalytics 123 Enzima Nome comercial
Esterase Rabbit River Sigma ES2
Esterase de Colesterol Pseudomonas sp. Sigma ES4
Como mostrado na seção de Exemplo, enzimas usadas para a conversão diaestereo-seletiva do éster substituído por ciano (Fórmula 13 ou Fórmula 14) no ácido carboxílico (ou sal) da Fórmula 10 ou Fórmula 11 incluem Proteases. Par- ticularmente Proteases usadas para conversão do éster subs- tituído por ciano da Fórmula 14 em um ácido carboxílico (ou sal) da Fórmula 11 incluem enzimas derivadas do microorga- nismo Burkholderia cepacia (anteriormente Pseudomonas cepa- cia), tais como aqueles disponíveis pela Amano Enzima Inc. com os nomes comerciais PS, PS-SD, PS-C-1, PS-C II, PS-D-1, e S. Estas enzimas são disponíveis como um pó de fácil esco- amento (PS) ou como pó liofilizado (S) ou pode ser imobili- zadas em partículas cerâmicas (PS-C I e PS-C II) ou terra diatomácea (PS-D I). Elas têm atividade lipolítica que pode variar de cerca de 30 KLu/g (PS) a cerca de 2.200 KLu/g (S). Protease PS-SD de Amano Enzima Inc. é uma enzima preferida para o uso no processo da invenção.
Particularmente Proteases usadas para a conversão do éster substituída por ciano da Fórmula 13 em um ácido carboxílico (ou sal) da Fórmula 10 incluem enzimas derivadas do microorganismo Thermomyces lanuginosus, tais como aqueles disponíveis por Novo-Nordisk NS com o nome comercial LIPOLASE®. LIPOLASE® enzimas são obtidas por fermentação submergida de um microorganismo Aspergillus oryzae genetica- mente modificado com DNA de Thermomyces lanuginosus DSM 4109 que codifica a seqüência de aminoácido da Protease. LIPOLASE® IOOL e LIPOLASE® IOOT são disponíveis como uma so- lução liquida e um sólido granular, respectivamente, cada qual tendo uma atividade nominal de 100 kLU/g. Outras formas de LIPOLASE® incluem LIPOLASE® 50 L, que tem metade da ati- vidade de LIPOLASE® 100L, e LIPOZYME® 100L, que tem a mesma atividade de LIPOLASE® 100L, mas é grau alimentício. Várias técnicas de classificação podem ser usadas para identificar enzimas adequadas. Por exemplo, grandes números de enzimas comercialmente disponíveis podem ser classificadas usando técnicas de alta produção de classificação descritas na de seção Exemplo a seguir. Outras enzimas (ou fontes microbia- nas de enzimas) podem ser classificadas usando técnicas de isolação de enriquecimento. Tais técnicas tipicamente envol- vem o uso de meio limitado por carbono ou limitado por ni- trogênio suplementado com um substrato de enriquecimento, que pode ser o substrato (Fórmula 7) ou um composto estrutu- ralmente similar. Microorganismos Potencialmente usados são selecionados por investigação adicional baseado na sua capa- cidade de crescer em meio contendo o substrato de enriqueci- mento. Estes microorganismos são subseqüentemente avaliados por sua capacidade de catalisar estereo-seletivamente hidró- lise de éster fazendo suspensões de contato das células mi- crobianas com o substrato não resolvido e testando a presen- ça do diastereoisômero desejado (Fórmula 10) usando métodos analíticos tais como HPLC de quiral, cromatograf ia gaso- sa/líquida, LC/MS, e similares.
Uma vez que um microorganismo tendo a atividade hidrolitica exigida tenha sido isolado, enzima produzida por engenharia pode ser empregada para melhorar as propriedades da enzima que ela produz. Por exemplo, e sem limitação, en- zima produzida por engenharia pode ser usada para aumentar o rendimento e a diaestereo-seletividade da hidrólise do és- ter, para ampliar as bandas de operação da temperatura e pH da enzima, e para melhorar a tolerância da enzima a solven- tes orgânicos. Técnicas de produção de enzima por engenharia usadas incluem métodos de projeto racional, tais como técni- cas de evolução de mutagênese direcionada ao sitio e direci- onada in vitro que utilizam rodadas sucessivas de mutagênese aleatória, expressão do gene, e classificação de alta produ- ção para otimizar as propriedades desejadas. Ver, por exem- plo, Κ. M. Koeller & C.-H. Wong, "Enzymes for chemical syn- thesis", Nature 409:232-240 (11 Jan. 2001), e referências aqui citadas, o revelação completa das quais estão aqui in- corporadas pela referência.
A enzima pode ser na forma de células microbianas totais, células microbianas impermeabilizadas, extratos de células microbianas, enzimas parcialmente purificadas, enzi- mas purificadas, e similares. A enzima pode compreender uma dispersão de partículas tendo uma média de tamanho de partí- cula, baseado no volume, de menos que cerca de 0,1 mm (dis- persão fina) ou de cerca de 0,1 mm ou mais (dispersão gros- sa). Dispersões de enzima grossa oferecem vantagens de pro- cessamento potencial em dispersões finas. Por exemplo, par- tículas de enzima grossa podem ser usadas repetidamente em processos em lotes, ou em processos semicontínuos ou contí- nuos, e podem normalmente ser separadas (por exemplo, por filtração) de outros componentes da bioconversão mais facil- mente do que dispersões finas de enzimas.
Dispersões de enzima grossa usadas incluem cris- tais de enzima reticulada (CLECs) e enzima reticulada agre- gada (CLEAs), que compreendem basicamente a enzima. Outras dispersões grossas podem incluir enzimas imobilizadas em ou dentro de um suporte insolúvel. Suportes sólidos usados in- cluem matrizes de polímero compreendido de alginato de cál- cio, poliacrilamida, EUPERGIT®, e outros materiais poliméri- cos, bem como matrizes inorgânicas, tais como CELITE®. Para uma descrição geral de CLECs e outras técnicas imobilização de enzima, ver U.S. Patente No. 5.618.710 para M. A. Navia & N. L. St. Clair. Para uma discussão geral de CLEAs, incluin- do sua preparação e uso, ver U.S. Patent Application No. 2003/0149172 a L. Cao & J. Elzinga et al. Ver também A. M. Anderson, Biocat. Biotransformr 16:181 (1998) e P. Lopez- Serrano et al., BiotechnoL Lett. 24:1379-83 (2002) Para uma discussão da aplicação de tecnologia de CLEC e CLEA para uma Protease. A revelação completa das referências supramencio- nadas que estão aqui incorporadas pela referência com todos os propósitos.
A mistura da reação pode compreender uma fase úni- ca ou pode compreender fases múltiplas (por exemplo, um sis- tema da fase dois ou um três) . Assim, por exemplo, a hidró- lise diaestero-seletivo mostrada no Esquema I pode ocorrer em uma fase única aquosa, que contém a enzima, o substrato (Fórmula 7), o diastereômero desejado (Fórmula 10), e o di- astereômero não desejado (Fórmula 11). Alternativamente, a mistura da reação pode compreender um sistema multifase que inclui uma fase aquosa em contato com uma fase sólida (por exemplo, enzima ou produto), uma fase aquosa em contato com uma fase orgânica, ou uma fase aquosa em contato com uma fase orgânica e uma fase sólida. Por exemplo, a hidrólise diaestereo-seletiva pode ser realizada em um sistema da fase dois compreendido de uma fase sólida, que contém a enzima, e uma fase aquosa, que contém o substrato (Fórmula 7), o dias- tereômero desejado (Fórmula 10), e o diastereômero não dese- jado (Fórmula 11).
Alternativamente, a hidrólise diastereo-seletiva pode ser realizada em um sistema trifásico compreendido de uma fase sólida, contendo a enzima, uma fase orgânica, con- tendo o substrato (Fórmula 7), e uma fase aquosa que inici- almente contém uma pequena fração do substrato. Em alguns casos o diastereômero desejado (Fórmula 10) é um ácido car- boxilico que tem um pKa mais baixo do que o éster não reagi- do (Fórmula 14). Em virtude de o ácido carboxilico apresen- tar maior solubilidade aquosa, a fase orgânica torna-se en- riquecida no éster não reagido (Fórmula 14), ao passo que a fase aquosa torna-se enriquecida no ácido carboxilico dese- jado (ou sal). Em outros casos, o diastereômero não desejado (Fórmula 11) é um ácido carboxilico, de forma que a fase or- gânica torna-se enriquecida no éster não reagido desejado (Fórmula 13), ao passo que a fase aquosa torna-se enriqueci- da no ácido carboxilico não desejado (ou sal). Preferivel- mente, o diastereômero não desejado (Fórmula 11) é seletiva- mente hidrolisado com o ácido carboxílico, que é solúvel na fase aquosa, ao passo que o diastereômero desejado (éster da Fórmula 10) é não reagido e permanece na fase orgânica.
As quantidades do substrato (Fórmula 7) e o bioca- talisador usado na hidrólise estereo-seletiva dependerá, en- tre outras coisas, das propriedades do éster substituído por ciano particular e da enzima. Geralmente, entretanto, a rea- ção pode empregar um substrato tendo uma concentração inici- al de cerca de 0,1 M a cerca de 5,0 M, e em muitos casos, tendo uma concentração inicial de cerca de 0,1 M a cerca de 1,0 M. Adicionalmente, a reação pode geralmente empregar um carregamento de enzima de cerca de 1 % a cerca de 20 %, e em muitos casos, pode empregar um carregamento de enzima de cerca de 5 % a cerca de 15 % (w/w).
A hidrólise estereo-seletiva pode ser realizada em uma faixa de temperatura e pH. Por exemplo, a reação pode ser realizada em temperaturas de cerca de 10°C a cerca de 60°C, mas é tipicamente realizada em temperaturas de cerca de RT a cerca de 45°C. Tais temperaturas geralmente permi- tem substancialmente conversão total (por exemplo, cerca de 42 % a cerca de 50 %) do substrato (Fórmula 7) com um de (3S,5R diastereômero) de cerca de 80 % ou mais (por exemplo, 98 %) em uma quantidade razoável de tempo (por exemplo, cer- ca de 1 hora ao cerca de 48 horas, ou cerca de 1 hora a cer- ca de 24 horas) sem desativar a enzima. Adicionalmente, a hidrólise estereo-seletiva pode ser realizada a um pH de cerca de 5 a um pH de cerca de 11, mais tipicamente a um pH de cerca de 6 a um pH de cerca de 9, e freqüentemente a um pH de cerca de 6,5 a um pH de cerca de 7,5. Na ausência de controle de pH, a mistura da reação pH diminuirá a medida que a hidrólise do substrato (Fórmula 7) ocorre em virtude da formação de um ácido carboxilico (Fórmula 10 ou Fórmula 11). Para compensar esta mudança, a reação da hidrólise pode correr com controle interno de pH (isto é, na presença de um tampão adequado) ou pode correr com controle externo de pH através da adição de uma base.
Tampões adequados incluem hidrogeno carbonato de sódio, fosfato de potássio, fosfato de sódio, acetato de só- dio, acetato de amônio, acetato de cálcio, BES, BICINE, HEPES, MES, MOPS, PIPES, TAPS, TES, TRICINE, Tris, TRIZMA®, ou outros tampões tendo um pKa de cerca de 6 a um pKa de cerca de 9. A concentração de tampão geralmente varia de cerca de 5 mM a cerca de 1 mM, e tipicamente varia de cerca de 50 mM a cerca de 200 mM. Bases adequadas incluem soluções aquosas compreendidas de KOH, NaOH, NH4OH, etc., tendo con- centrações variando de cerca de 0,5 M a cerca de 15 M, ou mais tipicamente, variando cerca de 5 M a cerca de 10 M. Ou- tros aditivos inorgânicos tal como acetato de cálcio podem também ser usados.
Após ou durante a conversão enzimática do substra- to (Fórmula 7), o diastereômero desejado (Fórmula 10) é iso- lado da mistura do produto usando técnicas padrões. Por exemplo, no caso de uma reação em lotes da fase única (aquo- sa) , a mistura do produto pode ser extraída uma ou mais ve- zes com um solvente orgânico, tais como hexano, heptano, MeCl2, tolueno, MTBE, THF, etc., que separa o ácido (éster) tendo a configuração estereoquimica requerida em C-3 (Fórmu- la 10) do éster indesejável (ácido) (Fórmula 11) nas fases aquosas (orgânico) e orgânico (aquosa), respectivamente. Al- ternativamente, no caso de uma reação multifase empregando fases aquosas e orgânicas enriquecida no ácido ou éster, os dois diastereômeros (Fórmula 10 e Fórmula 11) podem ser se- parados em lotes depois da reação, ou podem ser separados semicontinuamente ou continuamente durante a hidrólise este- reo-seletiva.
Como mostrado no Esquema-I, uma vez que o diaste- reômero desejado (Fórmula 10) é isolado da mistura do produ- to, ele é opcionalmente hidrolisado usando condições e rea- gentes associados com a hidrólise do éster do composto da Fórmula 7, anteriormente. A fração de ciano do ácido carbo- xílico resultante (Fórmula 10a), ou seu sal correspondente, é subseqüentemente reduzido para dar, mediante desenvolvi- mento da reação do ácido se necessário, o y-aminoácido dese- jado (Fórmula 1) . A redução pode empregar as mesmas condi- ções e reagentes descritos anteriormente para redução da fração de ciano do composto da Fórmula 8 e pode ser realiza- do sem isolar o ácido de ciano da Fórmula 10a. Compostos re- presentativos da Fórmula 10a incluem ácido (3S,5R)-3-ciano- 5-metil-heptanóico, ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico, ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-nonanóico, e (ácido 3S,5R)-3- ciano-5,7-dimetil-octanóico, e seus sais.
Como mostrado no Esquema 1, o diastereômero dese- jado (Fórmula 10) pode ser convertido em um sal adequado, preferivelmente um sal de metal alcalino. A fração de ciano do sal resultante é subseqüentemente reduzida para dar o sal do 7-aminoácido (Fórmula 1) desejado. A redução pode empre- gar as mesmas condições e reagentes descritos anteriormente para redução da fração de ciano do composto da Fórmula 8. O sal resultante do composto da Fórmula 1 pode em seguida ser adicionalmente convertido no ácido livre, ou em um sal, sol- vato ou hidrato farmaceuticamente aceitável destes. Um sal preferido de um composto da Fórmula IOa é o sal de sódio do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico.
O álcool quiral (Fórmula 2) mostrado no Esquema I pode ser preparado usando vários métodos. Por exemplo, o ál- cool quiral pode ser preparado por hidrólise mediada por en- zima estereo-seletiva de um éster racêmico usando condições e reagentes descritos anteriormente com relação à resolução enzimática do composto da Fórmula 7. Por exemplo, éster 2- metil pentil do ácido n-decanóico pode ser hidrolisado na presença de uma hidrolase (por exemplo, Protease) e água para dar um álcool quiral puro (ou substancialmente puro), (R)-2-metil-pentan-1-ol, que pode ser separado do ácido não quiral e o éster quiral não reagido (ácido n-decanóico e és- ter 2-metil-pentil do ácido (S)-pentanóico) por destilação fracional. O substrato do éster pode ser preparado do álcool racêmico correspondente (por exemplo, 2-metil-pentan-1-ol) e cloreto do ácido (por exemplo, cloreto do ácido n-decanóico) ou anidrido usando os métodos conhecidos na tecnologia.
Alternativamente, o álcool quiral (Fórmula 2) pode ser preparado por síntese assimétrica de um ácido 2- alquenóico apropriadamente substituído. Por exemplo, ácido 2-metil-pent-2-enóico (ou seu sal) pode ser hidrogenado na presença de um catalisador quiral para dar ácido (R)-2- metil-pentanóico ou um sal deste, que pode ser reduzido di- retamente com LAH para dar (R)-2-metil-pentan-l-ol ou con- vertido no anidrido ou cloreto do ácido misturados e em se- guida reduzido com NaBH4 para dar o álcool quiral. Catalisa- dores quirais potencialmente usados incluem ligantes de fos- fina quiral cíclicos ou acíclicos, (por exemplo, monofosfi- nas, bisfosfinas, bisfosfolanos, etc.) ou ligantes fosfinito ligados a metais de transição, tais como rutênio, ródio, irídio ou paládio. Ru-, Rh-, Ir- ou Pd-fosfina, fosfinito ou complexos de oxazolina fosfino são oticamente ativos em vir- tude de eles possuírem um átomo de fósforo quiral ou um gru- po quiral conectado a um átomo de fósforo, ou em virtude de no caso de BINAP e ligantes atropisoméricos similares, eles possuírem quiralidade axial.
Ligantes quirais exemplares incluem BisP*; (R)- BINAPINE; (S)-Me-ferroceno-Ketalphos, (RfR)-DIOP; (R,R)- DIPAMP; (R)-(S)-BPPFA; (S,S)-BPPM; (+)-CAMP; (S,S)- CHIRAPHOS; (R)-PROPHOS; (R,R)-N0RPH0S; (R)-BINAP; (R)- CYCPHOS; (R,R)-BDPP; (R,R)-DEGUPHOS; (R,R)-Me-DUPHOS; (RfR)- Et-DUPHOS; (R, R)-i-Pr-DUPHOS; (R,R)-Me-BPE; (RfR)-Et-BPE (R)-PNNP; (R)-BICHEP; (RfSfRfS)-Me-PENNPHOS; (SfS)-BICP; (RfR)-Et-FerroTANE; (R, R)-t-butil-miniPHOS; (R)-Tol-BINAP; (R)-MOP; (R)-QUINAP; CARBOPHOS; (R) -(S)-JOSIPHOS; (R)- PHANEPHOS; BIFEP; (R)-CI-MeO-BIFEP; (R)-MeO-BIFEP; (R)- MonoPhos; BIFUP; (R)-SpirOP; (+)-TMBTP; (+)-tetraMeBITIANP; (Rf RfSfS) TANGPhos; (R)-PPH2-PhOx-Ph; (S, S) MandyPhos; (R)-eTCFP; (R)-mTCFP; e (R)-CnTunaPHOS, onde η é um número inteiro de 1 a 6.
Outros ligantes quirais incluem:
(R)-(-)-14(S)-2-(di(3,5-bistrifluormetilfenil) fosfino)ferrocenil]etildicicloexil-fosfina;
(R)-(-)-1-[(S)-2-(di(3,5-bistrifluormetilfenil) fosfino)ferrocen-il]etildi(3,5-imetilfenil)fosfina;
(R)-(-)-1-[(S)-2-(dit-butilfosfino)ferro- cenil] etildi(3,5-dimetilfenil)fosfina;
(R)-(-)-1-[(S)-2-(dicicloexilfosfi- no)ferrocenil]etildi-t-butilfosfina;
(R)-(-)-1-[(S)-2-(dicicloexilfosfino)fer- rocenil] etildicicloexiIfosfina;
(R)-(-) -1-[(S)-2-(dicicloexi(fosfino)ferro- cenil] etildifenilafosfina;
(R)-(-)-1-[(S)-2-(di(3,5-dimetil-4-metoxfen- il) fosfino)ferrocenil]etildicicloexilfosfina;
(R)-(-)-l-[(S)-2- (difenilfosfino)ferrocenil]etildi-t-butilfosfina;
(R)-N-[2-(N,N-dimetilamino)etil]-N-metil-1-[ (S) - 11,2-bis(difenilfosfino)ferrocenil]etilamina;
(R)-(+)-2-[2-(difenilfosfino)fenila]-4-(1- metiletil)-4,5-diidrooxazol;
{1-[((R,R) -2-benzil-fosfolanil) -fen-2-il] - (R*,R*)-fosfolan-2-il}-fenil-metano; e
{1-[((R,R)-2-benzil-fosfolanil)-etil]-(R*,)- fosfolan-2-il}-fenil-metano.
Ligantes usados podem também incluir estereoisôme- ros (enantiômeros e diaestereoisômeros) dos ligantes quirais descritos nos parágrafos anteriores, que podem ser obtidos invertendo todos ou alguns dos centros estereogênicos de um dado ligante ou invertendo os eixos estereogênicos de um Ii- gante atropoisomérico. Assim, por exemplo, ligantes quirais usados podem também incluir (S)-Cl-MeO-BIFEP; (S) -PHANEPHOS; (S,S)-Me-DUPHOS; (S,S)-Et-DUPHOS; (S)-BINAP; (S)-Tol-BINAP; (R) - (R)-J0SIPH0S; (S) - (S)-J0SIPH0S; (S)-eTCFP; (S)-mTCFP e assim por diante.
Muitos dos catalisadores quirais, precursores do catalisador, ou ligantes quirais podem ser obtidos de fontes comerciais ou podem ser preparados usando métodos conheci- dos. Um precursor do catalisador ou pré-catalisador é um composto ou conjunto de compostos, que são convertidos no catalisador quiral antes do uso. Precursores do catalisador tipicamente compreendem Ru, Rh, Ir ou Pd complexados com o ligante fosfina e tanto um dieno (por exemplo, norboradieno, C0D, (2-metilalil)2, etc.) quanto um haleto (CI ou Br) ou um dieno e um haleto, na presença de um contraion, Xˉ, tais como OTfˉ PF6ˉ, BF4ˉ, SbF6ˉ, ClO4ˉ, etc. Assim, por exemplo, um precursor do catalisador compreendido do complexo, [ (ligante bisfosfina)Rh (COD)]+X" pode ser convertido em um catalisador quiral hidrogenando o dieno (COD) em MeOH para render [ (li- gante bisfosfina)Rh (MeOH)2]+Xˉ. MeOH é subseqüentemente reve- lado pelo enamida (Fórmula 2) ou enamina (Fórmula 4), que passa por hidrogenação enantio-seletiva para o composto qui- ral desejado (Fórmula 3). Exemplos de catalisadores quirais ou precursores do catalisador incluem complexo de acetona (+)-TMBTP-cloreto de rutênio(II); complexo de (S)-C1-MeO- BIFEP-cloreto de rutênio(II) Et3N; complexo (S)-BINAP- rutênio(II) Br2; complexo de (S)-tol-BINAP-rutênio(II) Br2; complexo de [((3R,4R)-3,4-bis(difenilfosfino)-1- metilpirrolidina)-ródio-(1,5-ciclooctadieno)]- tetrafluorborato; complexo de [((R,R,S,S)-TANGPhos) - ródio(1)-bis(1,5-ciclooctadieno)]-trifluorometano sulfonato; complexo de [(R)-BINAPINE-ródio-(1,5-ciclooctaideno)]- tetrafluorborato; complexo de [(S)-eTCFP-(1,5- ciclooctadieno)-ródio(1)]-tetrafluorborato; e complexo de [(S) -mTCFP-(1,5-ciclooctadieno)-ródio (I)]-tetrafluorborato.
Para um dado catalisador quiral e substrato de hi- drogenação, a razão molar do substrato e catalisador (sic) pode depender, entre outras coisas, pressão de H2, tempera- tura da reação, e solvente (caso haja). Normalmente, a razão substrato para catalisador excede cerca de 100:1 ou 200:1, e razões substrato para catalisador de cerca de 1.000:1 ou 2.000:1 são comuns. Embora o catalisador quiral possa ser reciclado, razões substrato para catalisador maiores são mais usadas. Por exemplo, razões substrato para catalisador de cerca de 1.000:1, 10.000:1, e 20.000:1, ou mais, serão usadas. A hidrogenação assimétrica é tipicamente realizada a cerca de temperatura ambiente ou acima, e em cerca de 10 kPa (0,1 atm) ou mais de H2. A temperatura da mistura da reação pode variar de cerca de 20°C a cerca de 80°C, e a pressão de H2 pode variar de cerca de 10 kPa a cerca de 5.000 kPa ou mais, mas mais tipicamente, varia de cerca de 10 kPa a cerca de 100 kPa. A combinação de temperatura, pressão de H2, e razão substrato para catalisador é geralmente selecionada para fornecer substancialmente conversão completa (isto é, cerca de 95 % em peso) do substrato (Fórmula 2 ou 4) em cer- ca de 24 horas. Com muitos dos catalisadores quirais, a di- minuição da pressão de H2 aumenta a enantio-seletividade.
Uma variedade de solventes pode ser usada na hi- drogenação assimétrica, incluindo solventes próticos, tais como água, MeOH, EtOH, e i-PrOH. Outros solventes usados in- cluem solvente polares apróticos, tais como THF, acetato de etila, e acetona. A hidrogenação estereo-seletiva pode em- pregar um solvente único ou pode empregar uma mistura de solventes, tais como THF e MeOH, THF e água, EtOH e água, MeOH e água, e similares. O composto da Fórmula 1, ou seus diaestereoisômeros, pode ser enriquecido adicionalmente através de, por exemplo, recristalização fracional ou croma- tografia ou por recristalização em um solvente adequado.
Alternativamente, um composto da Fórmula 10 ou 11 pode ser preparado como ilustrado pelo Esquema 2.
<formula>formula see original document page 73</formula> Esquema 2
em que R1, R2, R3, R8 e R9 são da maneira definida anteriormente;
R4 é selecionado de tosila, mesila, brosila, clo- sila (p-cloro-benzenossulfonil) , nosila e triflila, prefe- rivelmente mesila;
R5 é um grupo abandonador adequado tal como R4O-, preferivelmente mesil-0-;
R6 é alquila Ci-6, preferivelmente metila;
X1 é halógeno, preferivelmente cloro ou bromo;
R*-X2 é um haleto de metal alcalino, preferivel- mente brometo de sódio; e
X2 é halógeno, preferivelmente bromo.
Um composto da Fórmula 4 pode ser preparado de um composto da Fórmula 3 pelo processo descrito anteriormente para o Esquema I .
Um composto da Fórmula 19 pode ser preparado a partir de um composto da Fórmula 4 e um composto da Fórmula 18, reagindo uma quantidade estequiométrica ou em excesso de um composto da Fórmula 18 com um composto da Fórmula 4 du- rante 2 a 6 horas, em uma faixa de temperatura de 45 0C a 90 °C. A mistura da reação pode compreender de uma fase aquosa, uma fase orgânica e um catalisador de transferência de fase (por exemplo, um sal tetralquilamônio tal como Bu4N+Br-) . Solventes orgânicos representativos incluem solvente polares apróticos tais como TMBE, THF, EtOAc, iPrOAc e solventes aromáticos não polares tal como tolueno.
Um composto da Fórmula 7 pode ser preparado a par- tir de um composto da Fórmula 19 e um composto ortoéster da Fórmula 20. A alquilação pode ser realizada em temperaturas que variam de -5 °C a 5 °C, usando um quantidade estequiomé- trica ou em excesso (por exemplo, 1 a 1,5 equivalentes) do composto da Fórmula durante 2 a 12 horas. Bases representa- tivas incluem KOtBu, LDA , nBuLi e LiHMDS usando um excesso da base (por exemplo 1,2-3 equivalentes). A mistura da rea- ção compreende um solvente orgânico único (por exemplo, THF, TBME ou Tolueno). 0 produto de ortoéster intermediário é hi- drolisado durante o desenvolvimento da reação em condições acidicas, por exemplo, HCl, H2SO4 e similares com água em excesso para dar o éster carboxilico da fórmula 7.
Um composto da Fórmula 10 ou 11 pode ser preparado a partir de um composto da Fórmula 7 através de hidrolisação diaestero-seletivo com uma enzima adequada, como descrito anteriormente pelo Esquema 1. Preferivelmente a enzima é uma Protease do microorganismo Burkholderia cepacia ou do micro- organismo Thermomyces lanuginosus. Mais preferivelmente a enzima é um Protease Burkholderia cepacia comercialmente disponível por Amano Enzima Inc; mais preferivelmente Prote- ase PS-SD.
Da maneira descrita por toda a especificação, mui- tos dos compostos revelados têm estereoisômeros. Alguns des- tes compostos podem existir como enantiômeros únicos (com- postos enantiopuros) ou misturas de enantiômeros (amostras enriquecidas e racêmicas), que, dependendo do excesso rela- tivo de um enantiômero em um outro em uma amostra, pode exi- bir atividade ótica. Tais estereoisômeros, que são imagens especulares não sobrepostas, possuem um eixo estereogênico ou um ou mais centros estereogênicos (isto é, quiralidade) . Outros compostos revelados podem ser estereoisômeros que não são imagens especulares. Tais estereoisômeros, que são co- nhecidos como diaestereoisômeros, podem ser quiral ou aqui- ral (não contém centros estereogênicos). Eles incluem molé- culas contendo um grupo alquenila ou cíclico, de forma que cis/trans (ou Z/E) estereoisômeros sejam possíveis, ou mo- léculas contendo dois ou mais centros estereogênicos, em que inversão de um centro estereogênico único gera um diastere- oisômero correspondente. A menos que estabelecido ou de ou- tra forma clara (por.exemplo, através de uso de estereoliga- ções, descritores estereocentros, etc.) o escopo da presente invenção geralmente inclui o composto de referência e seus estereoisômeros, quer eles sejam cada qual puro (por exem- plo, enantiopuro) ou misturas (por exemplo, enantiomerica- mente enriquecido ou racêmico). Alguns dos compostos podem também conter um grupo ceto ou oxima, de forma que tautome- rismo possa ocorrer. Em tais casos, a presente invenção ge- ralmente inclui formas tautoméricas, quer elas sejam cada qual puras ou misturas.
Sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da Fórmula 1 incluem os sais e base de adição ácida destes.
Sais de adição ácida adequados são formados de ácidos que formam sais não tóxicos. Exemplos incluem os sais de acetato, adipato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbo- nato/carbonato, bissulfato/sulfato, borato, camsilato, ci- trato. ciclamato, edisilato. esilato, formato, fumarato. gluceptato, gluconato, glucuronato, hexafluorfosfato, hiben- zato, cloridrato/cloreto, bromoidrato/brometo, iodidra- to/iodeto, isetionato, lactato, malato, maleato, malonato, mesilato, metilsulfato, naftilato, 2-napsilato, nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfa- to/fosfato de hidrogênio /fosfato de diidrogênio, pirogluta- mato, sacarato, estearato, succinato, tanato, tartrato, to- silato, trifluoracetato e xinofoato.
Sais de base adequados são formados a partir de bases que formam sais não tóxicos. Exemplos incluem os sais alumínio, arginina, benzatina, cálcio, colina, dietilamina, diolamina, glicina, lisina, magnésio, meglumina, olamina, potássio, sódio, trometamina e zinco.
Hemissais de ácidos e bases podem também ser for- mados, por exemplo, sais de hemissulfato e hemicálcio.
For uma revisão em sais adequados, ver Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, 2002).
Sais farmaceuticamente aceitáveis de compostos da Fórmula 1 podem ser preparados por um ou mais de três méto- dos :
(i) pela reação do composto da Fórmula 1 com o ácido ou base desejado;
(ii) pela remoção de um grupo protetor de ácido ou base lábil a partir de um precursor adequado do composto da
Fórmula 1 ou por abertura de anel de um precursor cíclico adéquado, por exemplo, um lactona ou lactam, usando o ácido ou base desejado; ou (iii) pela conversão de um sal do composto da Fór- mula 1 em um outro pela reação com um ácido ou base apropri- ado ou por meio de uma coluna de troca iônica adequada.
Todas as três reações são tipicamente realizadas em solução. O sal resultante pode precipitar e ser coletado por filtração ou pode ser recuperado por evaporação do sol- vente. O grau de ionização no sal resultante pode variar de completamente ionizado a quase não ionizado.
Os compostos da invenção podem existir em um con- tinuo de estados sólido variando de totalmente amorfo a to- talmente cristalino. O termo 'amorfo' refere-se a um estado em que o material não tem ordem de longo alcance no nivel molecular e, dependendo mediante temperatura, pode exibir as propriedades físicas de um sólido ou um líquido. Tipicamente tais materiais não dão padrões de difração de raios-X dis- tintivos e, enquanto exibem as propriedades de um sólido, são mais formalmente descritos como um líquido. Mediante aquecimento, ocorre, uma mudança das propriedades sólidas para líquidas que é caracterizada por uma mudança de estado, tipicamente de segunda ordem (transição vítrea1). O termo 'cristalino' refere-se a uma fase sólida em. que o material tem uma estrutura interna ordenada regular no nível molecu- lar e dá um padrão de difração de raios-X distintiva com pi- cos definidos. Tais materiais quando aquecidos suficiente- mente também apresentarão as propriedades de um líquido, mas a mudança de sólido para líquido é caracterizada por uma mu- dança de fase, tipicamente de primeira ordem ('ponto de fu- são'). Os compostos da invenção podem também existir em formas não solvatadas e solvatadas. 0 termo 'solvato' é aqui usado para descrever um complexo molecular compreendendo o composto da invenção e um ou mais moléculas de solvente far- maceuticamente aceitáveis, por exemplo, etanol. 0 termo 'hi- drato' é empregado quando o dito solvente é água.
Um sistema classificação atualmente aceita para hidratos orgânicos é um que define sitio isolado, canal, ou hidratos coordenados com ion de metal - ver Polymorphism in Pharmaceutical Solids by K. R. Morris (Ed. H. G. Brittain, Mareei Dekker, 1995). Hidratos de sítios isolados são aque- les nos quais as moléculas de água são isoladas do contato direto umas com as outras moléculas orgânicas interferentes. Em hidratos do canal, as moléculas de água ficam em canais reticulados onde elas são próximas a outras moléculas de água. Em hidratos coordenados por ion de metal, as moléculas de água são ligadas ao ion de metal.
Quando o solvente ou água é firmemente ligado, o complexo terá uma estequiometria bem definida independente de umidade. Quando, entretanto, o solvente ou água é fraca- mente ligado, como em solvatos do canal e compostos higros- cópicos, o teor de água/solvente dependerá da umidade e con- dições de secagem. Em tais casos, não estoiquiometria será a norma.
Também incluído de acordo com o escopo da invenção estão complexos multicomponentes (sem ser sais e solvatos) em que o medicamento e pelo menos um outro componente estão presentes em quantidades estequiométricas ou não estequiomé- tricas. Complexos deste tipo incluem clatratos (complexos de inclusão do hospedeiro do medicamento) e co-cristais. Os úl- timos são tipicamente definidos como complexos cristalinos de constituintes moleculares neutros que são ligados juntos através de interações não covalentes, mas podem também ser um complexo de uma molécula neutra com um sal. Co-cristais podem ser preparados por cristalização do liquido, por re- cristalização dos solventes, ou triturando fisicamente os componentes juntos - ver Chem Commun, 17, 1889-1896, by 0. Almarsson and M. J. Zaworotko (2004). Para uma revisão geral de complexos multicomponentes, ver J Pharm Sei, 64 (8), 1269-1288, de Haleblian (August 1975).
Os compostos da invenção podem também existir em um estado mesomórfico (mesofase ou cristal liquido) quando submetido a condições adequadas. O estado mesomórfico é in- termediário entre o estado cristalino exato e o estado li- quido exato (tanto de fusão quanto de solução). Mesomorfismo que surge como o resultado de uma mudança na temperatura é descrito como 'termotrópico1 e que resultante da adição de um segundo componente, tais como água ou um outro solvente, é descrito como 1 liotrópico1. Compostos que têm o potencial para formar mesofases liotrópicas são descritos como 'anfi- fílicos, e consistem de moléculas que possuem um grupo de cabeça polar iônico (tais como -C00"Na+, -C00"W, ou -SO3 Na+) ou não iônico (tal como - N"N+(CH3)3). Para mais informação, ver Crystals and the Polarizing Microscope by Ν. H. Harts- horne and A. Stuart, 4th Edition (Edward Arnold, 1970).
Doravante todas as referências a compostos da Fór- mula I incluem referências aos sais, solvatos, complexos multicomponentes e cristais líquidos destes e a solvatos, complexos multicomponentes e cristais líquido de sais des- tes; e incluem todos polimorfos e hábitos cristalinos des- tes, promedicamentos e isômeros destes (incluindo isômeros óticos, geométricos e tautoméricos) da maneira definida a seguir e compostos da Fórmula 1 isotopicamente marcados.
Os compostos da Fórmula I podem ser avaliados por suas propriedades biofarmacêuticas, tais como solubilidade e estabilidade da solução (através do pH), permeabilidade, etc., a fim de selecionar a forma de dosagem mais apropriada e via de administração para tratamento da indicação propos- ta.
Compostos da Fórmula 1 destinados ao uso farmacêu- tico podem ser administrados como produtos cristalinos ou amorfos. Eles podem ser obtidos, por exemplo, como tampões sólidos, pós, ou filmes por métodos tais como precipitação, cristalização, Iiofilização, secagem por aspersão, ou seca- gem evaporativa. Secagem por freqüência de microondas ou rá- dio pode ser usada com este propósito.
Eles podem ser administrados sozinhos ou em combi- nação com um ou mais outros compostos da invenção ou em com- binação com um ou mais outros medicamentos (ou como qualquer combinação destes}. Geralmente, eles serão administrados como uma formulação em associação com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. 0 termo 'excipiente' é aqui usado para descrever qualquer ingrediente sem ser o compos- to (s) da invenção. A escolha de excipiente dependerá de vá- rios fatores tais como o modo de administração particular, o efeito do excipiente na solubilidade e estabilidade, e a na- tureza da forma de dosagem.
Composições farmacêuticas adequadas para a distri- buição de compostos da Fórmula 1 e métodos para sua prepara- ção ficarão facilmente aparentes aos versados na tecnologia. Tais composições e métodos para sua preparação podem ser en- contrados, por exemplo, em Remington1S Pharmaceutical Scien- ces, 19th Edition (Mack Publishing Company, 1995). ADMINISTRAÇÃO ORAL
Os compostos da Fórmula 1, em particular Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico, podem ser administrados oralmente. Administração oral pode envolver deglutição, de forma que o composto entre no trato gastrin- testinal, e/ou administração bucal, lingual, ou sublingual pelo qual o composto entre na corrente sangüínea diretamente pela boca.
Formulações adequadas para administração oral in- cluem sistemas sólidos, semi-sólidos e líquidos tais como comprimidos; cápsulas macias ou duras contendo multi- ou na- no-particulatos, líquidos, ou pós; pastilhas em forma de lo- sangos (incluindo cheias de líquido); gomas de mascar; géis; formas de dosagens de dispersão rápida; filmes; óvulos; as- persões; e adesivos bucal/mucoadesiva.
Formulações líquidas incluem suspensões, soluções, xaropes e elixires. Tais formulações podem ser empregadas como cargas em cápsulas macias ou duras (feitas, por exem- plo, de gelatina ou hidroxipropilmetilcelulose) e tipicamen- te compreendem um carreador, por exemplo, água, etanol, po- lietileno glicol, propileno glicol, metilcelulose, ou um óleo adequado, e um ou mais agentes emulsif icantes e/ou agentes de suspensão. Formulações líquidas podem também ser preparadas pela reconstituição de um sólido, por exemplo, a parir de um sachê.
Os compostos da Fórmula 1, em particular Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico, podem tam- bém ser usados em formas de dosagens de dissolução rápida, desintegração rápida tais como aquelas descritas em Expert Opinion in Therapeutic Patents, 11 (6), 981-986, by Liang and Chen (2001).
Para formas de dosagens em comprimido, dependendo da dose, o medicamento pode constituir de 1 % em peso a 80 % em peso da forma de dosagem, mais tipicamente de 5 % em peso a 60 % em peso da forma de dosagem. Além do medicamento, comprimidos geralmente contêm um desintegrante. Exemplos de desintegrantes incluem amido glicolato de sódio, carboxime- til celulose de sódio, carboximetil celulose de cálcio, croscarmelose de sódio, crospovidona, polivinilpirrolidona, metil celulose, celulose microcristalina, hidroxipropil ce- lulose substituído por alquila inferior, amido, alginato de amido e sódio pré-gelatinizado. Geralmente, o desintegrante compreenderá de 1 % em peso a 25 % em peso, preferivelmente de 5 % em peso a 20 % em peso da forma de dosagem. Ligantes são geralmente usados para partilhar qualidades coesivas a uma formulação de comprimido. Ligantes adequados incluem ce- lulose microcristalina, gelatina, açúcares, polietileno gli- col, gomas naturais e sintéticas, polivinilpirrolidona, ami- do pré-gelatinizado, hidroxipropil celulose e hidroxipropil metilcelulose. Comprimidos podem também conter diluentes, tais como lactose (monoidrato, monoidrato seco por aspersão, anidro e similares), manitol, xilitol, dextrose, sacarose, sorbitol, celulose microcristalina, amido e diidrato de fos- fato cálcio dibásico.
Comprimidos podem também opcionalmente compreender agentes de superfície ativa, tais como lauril sulfato de só- dio e polissorbato 80, e deslizantes tais como dióxido silí- cio e talco. Quando presente, agentes de superfície ativa podem compreender de 0,2 % em peso a 5 % em peso do compri- mido, e deslizantes podem compreender de 0,2 % em peso a 1 % em peso do comprimido.
Comprimidos também geralmente contêm lubrificantes tais como estearato de magnésio, estearato de cálcio, estea- rato de zinco, estearil fumarato de sódio, e misturas de es- tearato de magnésio com lauril sulfato de sódio.
Lubrificantes geralmente compreendem de 0,25 % em peso a 10 % em peso, preferivelmente de 0,5 % em peso a 3 % em peso do comprimido.
Outros ingredientes possíveis incluem antioxidan- tes, colorantes, agentes flavorizantes, conservantes e agen- tes de mascaramento de sabor.
Comprimidos exemplares contêm até cerca de 80 % de medicamento, cerca de 10 % em peso a cerca de 90 % em peso de ligante, cerca de 0 % em peso a cerca de 85 % em peso de diluente, de cerca de 2 % em peso a cerca de 10 % em peso desintegrante, e de cerca de 0,25 % em peso a cerca de 10 % em peso de lubrificante.
Misturas de comprimido podem ser compactadas dire- tamente ou por rolo para formar comprimidos. Misturas de comprimido ou porções de misturas podem alternativamente ser granuladas molhadas, a seco ou fundidas, fundida e congelada ou extrudada antes da prensagem. A formulação final pode compreender uma ou mais camadas e pode ser revestida ou não revestida; ela pode ainda ser encapsulada.
A formulação de comprimidos é discutida em Pharma- ceutical Dosage Forms: Drugs, Vol. 1, by H. Lieberman and L. Lachman (Mareei Dekker, New York, 1980).
Filmes orais consumíveis para uso humano ou vete- rinário são formas de dosagens de filme delgado solúvel em água ou intumescido em água tipicamente flexível gue podem ser rapidamente dissolvidas ou mucoadesivas e tipicamente compreendem um composto da Fórmula 1, um polímero formador de filme, um ligante, um solvente, um umectante, um plasti- ficante, um estabilizador ou emulsificador, um agente de mo- dificação de viscosidade e um solvente. Alguns componentes da formulação podem realizar mais do que uma função.
O composto da Fórmula 1 pode ser solúvel em água ou insolúvel. Um composto solúvel em água tipicamente com- preende 1 % em peso a 80 % em peso, mais tipicamente de 20 % em peso a 50 % em peso, dos solutos. Compostos menos solú- veis podem compreender uma maior proporção da composição, tipicamente até 88 % em peso dos solutos. Alternativamente, o composto da Fórmula 1 pode ser na forma de contas multi- particuladas.
O polímero formador de filme pode ser selecionado de polissacarideos naturais, proteínas, ou hidrocolóides sintéticos e esta tipicamente presente na faixa de 0,01 a 99 % em peso, mais tipicamente na faixa 30 a 80 % em peso.
Outros ingredientes possíveis incluem antioxidan- tes, colorantes, flavorizantes e melhoradores de sabor, con- servantes, agentes estimulantes salivares, agentes de res- friamento, co-solventes (incluindo óleos), emolientes, agen- tes massificantes, agentes antiespumantes, agentes tensoati- vos e de mascaramento de sabor.
Filmes de acordo com a invenção, são tipicamente preparados para secagem evaporativa de filmes aguosos delga- dos revestidos em um suporte ou papel de forro desprendível. Isto pode ser feito em um forno ou túnel de secagem, tipica- mente um revestidor secador combinado, ou por liofilização ou aplicação de vácuo.
Formulações sólidas para administração oral podem ser formuladas para ter liberação imediata e/ou modificada. Formulações de liberação modificadas incluem liberação atra- sada, sustentada, pulsada, controlada, alvejada e programa- da .
Formulações de liberação modificadas adequadas com o propósito da invenção são descritas em Patente US 6.106.864. Detalhes de outras tecnologias de liberação ade- quada tais como dispersões de alta energia e partículas os- móticas e revestidas são encontradas em Pharmaceutical Te- chnology Ori-Iine, 25(2), 1-14, de Verma et al (2001). O uso de goma de mascar par obter liberação controlada é descrito em WO 00/35298.
ADMINISTRAÇÃO PARENTERAL
Os compostos da Fórmula 1, em particular Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico, podem tam- bém ser administrados diretamente na corrente sangüínea, no músculo, ou em um órgão interno. Meios adequados para admi- nistração parenteral incluem intravenoso, intraarterial, in- traperitoneal, intratecal, intraventricular, intrauretral, intrasternal, intracraniano, intramuscular, intrassinovial e subcutânea. Dispositivos adequados para administração paren- teral incluem agulha (incluindo injetores de microagulha, injetores sem agulha e técnicas de infusão.
ADMINISTRAÇÃO TÓPICA
Os compostos da Fórmula 1, em particular Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico, podem tam- bém ser administrados topicamente, (intra)dermicamente, ou transdermicamente na pele ou mucosa. Formulações típicas com este propósito incluem géis, hidrogéis, loções, soluções, cremes, ungüentos, pós de sujeira, curativos, espumas, fil- mes, adesivos da pele, cristais semicondutores, implantes, esponjas, fibras, bandagens e microemulsões. Lipossomos po- dem também ser usados. Carreadores típicos incluem álcool, água, óleo mineral, petróleo líquido, petróleo branco, gli- cerina, polietileno glicol e propileno glicol. Melhoradores de penetração podem ser incorporados - ver, por exemplo, J Pharm Sei, 88 (10), 955-958, por Finnin e Morgan (October 1999). Outros meios de administração tópica incluem distri- buição por injeção de eletroporação, iontoforese, fonofore- se, sonoforese e microagulha ou sem agulha (por exemplo, Powderject , Bioject , etc.)·
ADMINISTRAÇÃO INALADA/INTRANASAL
Os compostos da Fórmula 1, em particular Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico, podem tam- bém ser administrados intranasalmente ou por inalação, tipi- camente na forma de um pó seco (tanto sozinho, como uma mis- tura, por exemplo, em uma mistura seca com lactose, ou como uma partícula do componente misturado, por exemplo, mistura- dos com fosfolipidios, tais como fosfatidilcolina) de um inalador de pó seco, como uma aspersão em aerossol de um re- cipiente pressurizado, bomba, aspersão, atomizador (preferi- velmente um atomizador usando eletroidrodinâmicas para pro- duzir uma névoa fina), ou nebulizador com ou sem o uso de um propelente adequado, tal como 1,1,1,2-tetrafluoretano ou 1,1,1,2,3,3,3-heptafluorpropano, ou como gotas nasais. Para uso intranasal, o pó pode compreender um agente bioadesivo, por exemplo, chitosano ou ciclodextrina.
ADMINISTRAÇÃO RETAL/INTRAVAGINAL
Os compostos da Fórmula 1, em particular Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico, podem ser administrados retal ou vaginalmente, por exemplo, na forma de um supositório, pessário, ou enema. Manteiga de cacau é uma base de supositório tradicional, mas várias alternativas podem ser usadas da maneira apropriada.
ADMINISTRAÇÃO OCULAR/AURAL
Os compostos da Fórmula 1, em particular Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico, podem tam- bém ser administrados diretamente no olho ou ouvido, tipica- mente na forma de gotas de uma suspensão ou solução microni- zada em isotônico, pH-ajustado, salina estéril. Outras for- mulações adequadas para administração ocular e aural incluem ungüentos, géis, biodegradáveis (por exemplo, esponjas de gel absorvivel, colágeno) e não biodegradáveis (por exemplo, silicone) implantes, cristais semicondutores, lentes e sis- temas particulados ou vesiculares, tais como niossomos ou lipossomos.
OUTRAS TECNOLOGIAS
Os compostos da Fórmula 1, em particular Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico, podem ser combinados com solúvel entidades macromoleculares, tais como ciclodextrina e derivados adequado deste ou polímeros con- tendo polietileno glicol, a fim de melhorar sua solubilida- de, taxa de dissolução, mascaramento de sabor, biodisponibi- lidade e/ou estabilidade para o uso em qualquer dos modos de administração supramencionados.
Complexos de medicamento-ciclodextrina, por exem- plo, devem ser geralmente usados para a maioria das formas de dosagens e vias de administração. Tanto inclusão quanto complexos de não inclusão podem ser usado. Como uma alterna- tiva para dirigir complexação com o medicamento, a ciclodex- trina pode ser usada como um aditivo auxiliar, isto é, como um carreador, diluente, ou solubilizante. Mais comumente usado com estes propósitos são ciclodextrinas alfa-, beta- e gamma-, exemplos dos quais podem ser encontrados nos pedidos de patente internacional WO 91/11172, WO 94/02518 e WO 98/55148.
ESTOJO DE PARTES
Visto que pode-se desejar administrar uma combina- ção de compostos ativos, por exemplo, com o propósito de tratar uma doença ou condição particular, está no escopo da presente invenção que duas ou mais composições farmacêuti- cas, pelo menos uma das quais contém um composto da Fórmula 1, podem ser convenientemente combinadas na forma de um es- tojo adequado para co-administração das composições.
Assim o estojo da invenção compreende duas ou mais composições farmacêuticas separadas, pelo menos uma das quais contém um composto da Fórmula 1, em particular Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metiloctanóico, e meios para reter separadamente as ditas composições, tais como um reci- piente, garrafa dividida, ou pacote de película dividido. Um exemplo de um esto j o como esse é a familiar embalagem tipo ampola usada para a embalagem de comprimidos, cápsulas e si- milares.
O estojo da invenção é particularmente adequado para administrar diferentes formas de dosagens, por exemplo, oral e parenteral, para administrar as composições separadas em diferentes intervalos de dosagem, ou para titular as com- posições separadas umas contra as outras. Para ajudar na conformidade, o estojo tipicamente compreende direções para administração e pode ser fornecido com um assim chamado aju- da de memória.
DOSAGEM For administração a pacientes humanos, a dose diá- ria total dos compostos da Fórmula 1 é tipicamente na faixa de 0,1 mg a 1.000 mg dependendo, é claro, do modo de admi- nistração. A dose diária total pode ser administrada em do- ses únicas ou divididas e, a critério do médico, podem ficar fora da faixa típica dada aqui. A faixa de dose diária pre- ferida para Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil- octanóico é na faixa de 1 mg a 250 mg; mais preferivelmente a faixa de dose diária é ns faixa de 1 mg a 125 mg. Estas dosagens são baseadas em um sujeito humano tendo uma média de peso de cerca de 60 kg a 70 kg. O médico poderá facilmen- te determinar doses para sujeitos cujo peso cai na fora des- ta faixa, tais como crianças e os idosos.
Para evitar suspeita, referências aqui a "trata- mento" incluem referências a tratamento curativo, paliativo e profilático.
EXEMPLOS
Os exemplos seguintes devem ser ilustrativos, e não limitantes, e representam modalidades específicas da presente invenção. Classificação de enzima foi realizada usando uma placa de 96 poços, que é descrita em D. Yazbeck et al., Synth. Cata/. 345:524-32 (2003), a revelação com- pleta da qual está aqui incorporada pela referência com to- dos os propósitos. Todas as enzimas usadas na placa de clas- sificação (ver Tabela 2) foram obtidas de fornecedores enzi- ma comerciais incluindo Amano Enzima Inc. (Nagoya, Japão), Roche (Basel, Suíça), Novo Nordisk (Bagsvaerd, Dinamarca), Altus Biologics Inc. (Cambridge, MA), Biocatalytics (Pasa- dena, CA), Toyobo (Osaka, Japan), Sigma-Aldrich (St. Louis, MO), Fluka (Buchs, Suiça), Genencor International, Inc. (Rochester, NY) , and Valley Research (South Bend, IN) . As reações de classificação foram realizadas em um Eppendorf Thermomixer-R (VINR). Resoluções enzimáticas em grande esca- la subseqüentes empregaram LIPOLASE® 100L EX, que está dis- ponível pela Novo-Nordisk A/S (CAS no. 9001-62-1), bem como Protease PS, PS-C-1, PS-C II, e PS-D-1, que estão disponí- veis pela Amano Enzima Inc.
EXEMPLO 1. Preparação de éster 2-metil-pentílico do ácido (R)-metanossulfônico
Um reator de 4.000 L foi carregado com (R)-2- metil-pentan-l-ol (260 kg, 2500 mol), éter metil butil ter- ciário (2.000 L) , e resfriado de -10 ºC a 0 °C. Cloreto de metanossulfonila (310 kg, 2600 mol) foi carregado, e em se- guida Et3N (310 kg, 3.100 mol) foi adicionado enquanto man- tinha a temperatura interna a 0 ºC a 10 °C. Após a adição ser completada, a mistura da reação foi aquecida ao morno de 15 ºC a 25 ºC e agitada nesta temperatura por pelo menos 1 hora até ser completada por análise de cromatografia gasosa. Uma solução de HCl aquoso (88 kg de HCl em 700 L de água) foi em seguida adicionada à mistura da reação. A mistura re- sultante agitada por pelo menos 15 minutos, sedimentada por pelo menos 15 minutos, e em seguida a fase aquosa inferior foi removida. A fase orgânica superior foi lavada com água (790 L) e bicarbonato de sódio aquoso (67 kg de bicarbonato de sódio em 840 L de água). A solução foi em seguida concen- trada à vácuo para remover o éter metil butil terciário para disponibilizar o composto titulado na forma de um óleo (472 kg, 95 % de rendimento). 1H NMR (400MHz, CDCl3) 4,07-3,93 ppm (m, 2H), 2,97 (s, 3H), 1,91-1,80 (m, 1H), 1, 42-1, 09 (m, 4H), 0,94 (d, J= 6, 57 Hz, 3H), 0,87 (t, J=6,56Hz, 3H); 13C NMR (CDCl3) 74,73, 37,01, 34,81, 32,65, 19,71, 16,29, 14,04.
EXEMPLO 2. Preparação de éster dietilico do ácido (2'R)-2-ciano-2-(2'-metil-pentil)-succinico
Um reator de 4.000 L foi carregado com éster 2- metil-pentílico do ácido (R)-metanossulfônico (245 kg, 1359 mol), éster dietilico do ácido 2-ciano-succínico (298 kg, 1495 mol), e etanol anidro (1300 kg). Etóxido de sódio (506 kg, 21 % em peso em etanol) foi adicionado. A solução resul- tante foi aquecida de 70°C a 75°C, e a mistura agitada nesta temperatura por pelo menos 18 horas até ser completa por análise de cromatografia gasosa. Após a reação ser com- pletada, uma solução de HCl aquoso (32 kg de HCl em 280 L de água) foi em seguida adicionada à mistura da reação até o pH ser < 2. Mais água (400 L) foi adicionada, e a mistura da reação foi em seguida concentrada à vácuo para remover o etanol, éter metil butil terciário (1.000 kg) foi adiciona- do, e a mistura foi agitada por pelo menos 15 minutos, sedi- mentada por pelo menos 15 minutos, e em seguida a camada aquosa inferior foi extraída de volta com éter metil butil terciário (900 kg). As fases orgânicas combinadas foram con- centradas à vácuo para disponibilizar o composto titulado na forma de um óleo escuro (294 kg, 79 % de rendimento corrigi- do pela pureza). 1H NMR (400MHz, CDCl3) 4,29 ppm (q, J=7,07Hz, 2H), 4,18 (q, J=7,07Hz, 2H), 3,03 (dd, J=6, 6, 7,1Hz, 2Η), 1,93-1,61 (m, 3Η), 1,40-1,20 (m, 10Η), 0,95-0,82 (m, 6H); 13C NMR (CDCl3) 168, 91, 168, 67, 168, 59, 168, 57, 119,08, 118,82, 62,95, 62,90, 44,32, 44,19, 42,21, 42,02, 39,77, 39,64, 30,05, 29,91, 20,37, 19,91, 19,66, 13,99.
EXEMPLO 3. Preparação de (éster etilico do ácido
5R)-3-ciano-5-metil-octanóico (Método A)
Um reator de 4.000 L foi carregado com NaCl (175 kg, 3.003 mol), brometo de tetrabutilamônio (33,1 kg, 103 mol) , água (87 L), e dimetilsulfóxido (1.000 kg), éster die- tilico do ácido (2'R)-2-ciano-2-(21-metil-pentil)-succinico (243 kg, 858 mol) foi carregado e a mistura foi aquecida de 135°C a 138°C e agitada nesta temperatura por pelo menos 48 horas, até ser completa por análise de cromatografia ga- sosa. Após a reação ser resfriado de 25°C a 35°C, heptano (590 kg) foi adicionado, e a mistura agitada por pelo menos 15 minutos, sedimentada por pelo menos 15 minutos, e em se- guida a fase aquosa inferior foi removida. A fase orgânica superior foi lavada com água (800 L). A solução de heptano contendo o produto foi descolorida com carbono, e concentra- da à vácuo para disponibilizar o composto titulado na forma de um óleo laranja (133,9 kg, 74 % de rendimento corrigido pela pureza). 1H NMR (400MHz, CDCl3) 4,20 ppm (q, J=7,07Hz, 2H) , 3,13-3,01 (m, 1H) , 2, 75-2, 49 (m, 2H) , 1, 80-1, 06 (m, 10H) , 0, 98-0, 86 (m, 6H) ; 13C NMR (CDCl3) 169, 69, 169, 65, 121, 28, 120, 99, 61, 14, 39, 38, 39, 15, 38, 98, 37, 67, 37,23, 36,95, 30,54, 30,47, 25,67, 25,45, 19,78, 19,61, 19,53, 18,56, 14,13, 14,05. EXEMPLO 4. Preparação de éster etílico do ácido (5R)-3-ciano-5-metil-octanóico (Método B)
Um frasco de 250 mL foi carregado com LiCl (3,89 g, 0,0918 mol), água (7 mL), e dimetilsulfóxido (72 mL) . és- ter dietilico do ácido (21R)-2-ciano-2-(2'-metil-pentil)- succinico (25,4 g, 0,0706 mol, 78,74 % por cromatografia ga- sosa) foi carregado e a mistura foi aquecida de 135°C a 138 °C e agitada nesta temperatura por pelo menos 24 horas, até ser completa por análise de cromatografia gasosa. Após a re- ação ser resfriada de 25°C a 35°C, heptano (72 mL) , NaCl saturado (72 mL) e água (72 mL) foram adicionados e a mistu- ra agitada por pelo menos 15 minutos, sedimentada por pelo menos 15 minutos, e em seguida a fase aquosa inferior foi lavada com heptano (100 mL) . As fases orgânicas combinadas foram concentradas à vácuo para disponibilizar o composto titulado na forma de um óleo laranja (13,0 g, 84 % de rendi- mento corrigido pela pureza).
EXEMPLO 5. Preparação de (5R)-3-ciano-5-metil- octanóico ácido sal de sódio
Um reator de 4.000 L foi carregado com éster etí- lico do ácido (5R)-3-ciano-5-metil-octanóico (250 kg, 1183 mol) e tetraidrofurano (450 kg). Uma solução aquosa de NaOH foi preparada (190 kg de NaOH 50 % em 350 L de água) e em seguida adicionada à solução de tetraidrofurano. A solução resultante foi agitada de 20°C a 30°C por pelo menos 2 ho- ras, até a reação ser completa por análise de cromatografia gasosa. Após este tempo, tetraidrofurano foi removido por destilação a vácuo para disponibilizar uma solução aquosa do composto titulado, que foi usado imediatamente etapa seguin- te.
EXEMPLO 6. Preparação de sal de sódio do ácido (5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico
Uma autoclave de 120 L foi carregada com esponja níquel catalisador (3,2 kg, Johnson & Mathey A7000) seguido por uma solução aquosa de sal de sódio do ácido (5R)~3- ciano-5-metil-octanóico (15 kg em 60 L de água) e a mistura resultante foi hidrogenada sob 50 psig (0,34 MPa) de hidro- gênio de 30 0C a 35 0C por pelo menos 18 horas, ou até a captação de hidrogênio cessar. A reação foi em seguida res- friada de 20 0C a 30 °C, e o catalisador usado foi removido por filtração por meio de um filtro de 0,2 μ. A torta do filtro foi lavada com água (2 χ 22 L) , e a solução aquosa resultante do composto titulado foi usada diretamente na etapa seguinte.
EXEMPLO 7. Preparação de ácido (5R)-3-aminometil- 5-metil-octanóico
Um reator de 4.000 L foi carregado com uma solução aquosa de ácido (5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico (-150 kg em -1000 L de água) e resfriado a 0 °C a 5 °C. Ácido acético glacial foi adicionado até o pH ser 6,3 a 6,8. Ã mistura foi adicionado etanol anidro (40 kg) . O lama resultante foi aquecida de 65 °C a 70 °C por menos que 20 minutos e foi resfriada a 0 °C a 5 °C durante 3 horas. O produto foi cole- tado por filtração para disponibilizar o composto titulado na forma de uma torta molhada com água (76 kg, 97 % de ren- dimento corrigido pela pureza, água 10 % por análise Karl Fischer), que foi usado na etapa seguinte. 1H NMR (400MHz, D3COD) 181,10, 181,07, 46,65, 45,86, 44,25, 43,15, 42,16, 41,64, 41,35, 33,45, 31,25, 31,20, 21,45, 21,41, 20,52, 20,12, 15,15, 15,12.
EXEMPLO 8. Preparação de ácido (3S,5R)~3- aminometil-5-metil-octanóico por meio de contato com um agente de resolução
Um reator de 4.000 L foi carregado com ácido (5R)- 3-aminometil-5-metil-octanóico (76 kg, 365 mol) com molhado com água (10 %), ácido (S)-mandélico (34,8 kg, 229 mol), etanol anidro (1.780 kg), e água (115 L) . A mistura resul- tante foi aquecida de 65°C a 70°C e agitada até os sólidos serem dissolvidos. A solução foi em seguida resfriada a 0°C a 5°C durante 2 horas e agitada nesta temperatura por mais 1 hora. O produto foi coletado por filtração, e a torta foi lavada com etanol -20°C (3 χ 60 kg). O produto bruto (18 kg em 48 % de rendimento) e etanol (167 kg) foram carregados para um reator. A mistura foi resfriada a 0°C a 5°C e agi- tada nesta temperatura por 1,5 hora. O produto foi em segui- da coletado por filtração, e a torta foi lavada com etanol - 20°C (3 χ 183 kg) para disponibilizar o composto titulado (17 kg, 94 % de rendimento) . O ion quasimolecular (MH+) do composto titulado foi observado a 188.1653 amu e é de acordo com o valor teórico de 188.1650; o valor medido estabelece a fórmula molecular como C10H21NO2 com nenhuma entidade química razoável alternada contendo apenas C, Η, N, e 0 pode existir com um ion molecular dentro de um erro experimental de 5 ppm (0,9 mDa) do valor medido; IR (KBr) 2955, 8 cm-1' 22,12,1, 1643, 8, 1551, 7, 1389, 9; 1H NMR (400MHz, D3COD) 4,91 ppm, (bs, 2Η) , 3,01-2,73 (m, 2Η) , 2, 45-2,22 (m, 2Η) , 1,60-1,48 (m, 1Η) , 1, 45-1, 04 (m, 6Η) , 0, 98-0, 86 (m, 6Η) ; 13cC NMR (D3COD) 181,04, 45,91, 44,30, 42,13, 40,65, 33,42, 31,24, ,39, 20,49, 15,11.
EXEMPLO 9. Classificação enzimática por meio de hidrólise enzimática de éster etilico do ácido (5R)-3-ciano- 5-metil-octanóico (Fórmula 15) para render sal de sódio do ácido (3S, 5R)-3-ciano-5-metil-octanóico (Fórmula 16, R10=Na+) e éster etilico do ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico (Fórmula 17, R11=Et) ou éster etilico do ácido (3S,5R)-3- ciano-5-metil-octanóico (Fórmula 16, R10=Et) e sal de sódio do ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico (Fórmula 17, R11=Na+) .
Classificação enzimática foi realizada usando um estojo de classificação compreendido de enzimas individuais depositadas em poços separados de uma placa de 96 poços, que foi preparada de antemão de acordo com um método descrito em D. Yazbeck et al., Synth. Catai. 345:524-32 (2003). Cada um dos poços tem um volume vazio de 0,3 mL (placa de poço raso) . Um poço de placa de 96 poços contém apenas tampão de fosfato (10 pL, 0,1 M, pH 7,2). Com poucas exceções, cada um dos poços restantes contém uma alíquota de enzima (10 pL, 83 mg/mL), a maioria das quais estão listadas na Tabela 2, aci- ma. Antes do uso, o estojo de classificação é removido do armazenamento a -80 0C e as enzimas são degeladas natural- mente à temperatura ambiente por cerca de 5 minutos. Tampão de fosfato de potássio (85 pL, 0,1 M, pH 7,2) é dispensado em cada um dos poços usando uma pipeta multicanal. Substrato concentrado (Fórmula 15, 5 pL) é subseqüentemente adicionado a cada poço por meio de uma pipeta multicanal e as 96 mistu- ras da reação são incubadas a 30 0C e 750 rpm. As reações são finalizadas e amostras são tiradas após 24 horas para transferir cada uma das misturas da reação em poços separa- dos de uma segunda placa de 96 poços. Cada um dos poços tem um volume vazio de 2 mL (placa de poço profundo) e contém acetato de etila (1 mL) e HCl (1 N, 100 pL). Os componentes de cada poço são misturados extraindo os conteúdos do poço com uma pipeta. A segunda placa é centrifugada e 100 pL do sobrenadante orgânico são transferidos de poço em poços e separados de uma terceira placa de 96 poços (placa rasa). Os poços da terceira placa são subseqüentemente selados usando um tampão de almofada penetrável.
Uma vez que os poços são selados, a terceira placa é transferida para um sistema GC para determinação de diaes- tereo-seletividade (de).
Tabela 3 lista enzima, nome comercial, valor Er Xr e seletividade para algumas das enzimas que foram classifi- cadas. Para uma dada enzima, o valor E pode ser interpretado como a reatividade relativa de um par de diastereômeros (substratos). Os valores E listados na Tabela 3 foram calcu- lados a partir de dados de GC/derivatização (conversão fra- cional, Xr e de) usando um programa de computador chamado Ee2, que está disponível pela University of Graz. N Tabela 3, seletividade corresponde ao diastereômero do éster etíli- co do ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico ou éster etí- lico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico que passa pela hidrólise máxima para uma dada enzima.
Tabela 3. Resultado das reações de classificação do Exemplo 1
<table>table see original document page 100</column></row><table> Lipase Burkholderia cepacia Amano Lipase PS 200
45 (3R,SR)
Lipase Pseudomonas sp. BioCatalytics 103 4 7
(3S,5R)
Lipase microbiana, liofilizada BioCatalytics 108
17 45 (3R,SR)
CAL-B, liofilizado BioCatalybcs 110 1,2 98
(3S,5R)
Candida sp., liofilizada BioCatalyties 111 1,2 8
, (3RSR)
CAL-A, liofilizado BioCatalyties 112 1,6 5
(3R,5R)
Lipase Thermomyces sp. BioCatalyties 115 7
50 (3S,SR)
Lipase Alcaligines sp., liofilizada BioCatalyties 117
15 31 (3R,5R)
CAL-B, L2 Sol Chriazyme L2 Sol 1,3
31 (3R,5R)
Lipase Thermomuces lanuginosus Sigma 1,9 Lipolase
15 50 (3S,5R)
Lipase Thermomuces lanuginosus Sigma LlO Novo871
10 68 (3S,5R)
Lipase Rhizomucor miehei Sigma L6 Palatase 5.3
90 (3S,SR)
protease Fungai concentrada Genencor 10 10
(3R,5R)
Protease de pâncreas bovino Pancreas Sigma P18
α-ehymotrypsin I 10 10 (3R,5R) Pineapple [Ananas comosus & Ananas Bromelian Concentrate braeteatus (L)) 10 10 (3R,5R)
Acilase de figado de porco Sigma A-S2 Acylase I 2
60 (3S,5R)
Esterase de Mucormeihei Fluka E5 5 79
(3R,5R)
Colinesterase, acetila Sigma ES8 1, 1
(3S,5R)
Esterase de Colesterol BioCatalytics E3 1,1
54 (3S,5R)
Sulfato de amônio PLE BioCatalytics 123 1,3
71 (3S,5R)
EXEMPLO 10. Preparação de sal de amônio terc- butilieo do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico por meio de resolução enzimática
A um reator de 50 mL equipado com um eletrodo de pH, um agitador em cima e uma linha adição de base, foi adi- cionado éster etilico do ácido (5R)-3-ciano-5-metil- octanóico (8 g, 37,85 mmol), seguido por solução de acetato de cálcio (8 mL), água deionizada (3,8 mL), e LIPOLASECDIOOL EX (0,2 mL). A suspensão resultante foi agitada à temperatu- ra ambiente por 24 horas. O pH da solução foi mantido a 7,0 adicionando NaOH 4 M. O curso da reação foi supervisionado por cromatografia gasosa (conversão e % do produto e materi- al de partida), e foi interrompida após 45 % do material de partida serem consumidos (« 4,3 mL de NaOH foi adicionado). Após a reação completa, tolueno (20 mL) foi adicionado, e a mistura agitada por 1 minuto. O pH foi abaixado para 3,0 adicionando HCl aquoso concentrado e a solução foi agitada por 5 minutos e em seguida transferida para um fu- nil/extrator separatório. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa extraída uma vez com 10 mL de tolueno. As ca- madas orgânicas foram agrupadas e tolueno evaporado até a secura. O produto bruto (sal de sódio do ácido (3S,5R)-3- ciano-5-metil-octanóico, 75 % de excesso diastereomérico por cromatografia gasosa) foi suspensa novamente em éter metil butil terciário (40 mL) . Terc-butilamina (1,52 g, 1,1 equi- valentes) foi adicionado gota a gota à mistura com agitação durante um período de 5 minutos. Cristais precipitarams ime- diatamente após a adição ser finalizada e eles foram coleta- dos em um funil Buchner. 0 sólido foi lavado com éter metil butil terciário (2 χ 20 mL). 0 resíduo foi em seguida seco à vácuo para disponibilizar o composto titulado (2,58 g, 96 % de diastereomérico em excesso por cromatografia gasosa).
EXEMPLO 11. Resolução de éster etílico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico por meio de hidrólise en- zimática de éster etílico do ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil- octanóico com sal de sódio do ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil- octanóico
A um vaso contendo monoidrato de fosfato de sódio (monobásico) (4,7 kg) e água (1650 L) em uma . temperatura de 20°C a 25°C é adicionado NaOH aquoso 50 % (2,0 kg). Após agitação por 15 minutos, o pH da mistura é checado para as- segurar que ele seja na faixa de 6,0 a 8,0. Protease Amano PS (17 kg) é adicionada e a mistura é agitada por 30 a 60 minutos de 20°C a 25°C. A mistura é filtrada para remover sólidos e o filtrado é combinado com bicarbonato de sódio (51 kg), éster etilico do ácido (5R)-3-ciano-5-metil- octanóico (154 kg), e água (10 L). A mistura reage natural- mente a cerca de 50°C por 24 a 48 horas. O curso da hidró- lise enzimática é monitorado por cromatografia gasosa e é considerado completo quando a razão de éster etilico do áci- do (3R,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico para sal de sódio do ácido (3R, 5R) -3-ciano-5-metil-octanóico é maior do que 99:1 baseado na análise de cromatografia gasosa. Depois que a re- ação é completa, a mistura é adicionada a um vaso carregado com NaCl (510 kg), e os teores do vaso são agitados de 20°C a 25°C. A mistura é extraída com éter metil butil terciário (680 L) e as fases aquosas e orgânicas são separadas. A fase aquosa é descartada e a fase orgânica é lavada com NaCl (26 kg), bicarbonato de sódio (2 kg), e água (85 L). Após os só- lidos serem dissolvidos, a mistura é novamente extraída com MTBE (680 L) , as fases aquosas e orgânicas separadas, e a fase orgânica é novamente lavada com NaCl (26 kg) , bicarbo- nato de sódio (2 kg) , e água (85 L) . Após a separação das fases aquosas e orgânicas, a fase orgânica é destilada a 70 °C e pressão atmosférica para dar éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico na forma de um óleo (48,9 kg, 88 % de rendimento). 1H NMR (400MHz, CDCl3) 4,17 ppm (q, J= 7, 83Hz, 2H) , 3,13-3,06 (m, 1H) , 2,71-2,58 (m, 2H) , 1,75- 1,64 (m, 10H) , 0,95 (d, J=6, 34 3H) , 0,92 (t, J=6,83, 3H, 13C NMR (CDCl3 170,4, 121,8, 61,1, 39,6, 38,6, 37,0, 31,0, 25,9, 20,0 18,5, 13,9. EXEMPLO 12. Preparação de ácido {3S,5R)-3- aminometil-5-metil-octanóico a partir de éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico
Uma solução (700 kg) contendo éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico (30 %) em éter metil butil terciário é tratada com solução de hipoclorito de só- dio aquosa (35 kg, 12 %) e água (35 L). Após agitação por 2 horas à temperatura ambiente, a mistura é sedimentada natu- ralmente por 3 horas, e as fases aquosas e orgânicas são se- paradas. A fase orgânica é lavada com água (150 L) à tempe- ratura ambiente e a mistura é separada naturalmente nas fa- ses aquosas e orgânicas. A fase orgânica é separada e reage subseqüentemente com NaOH aquoso (134 kg, 50 %) e água (560 L). A mistura da reação é agitada por 2,5 a 3,5 horas à tem- peratura ambiente e a mistura é sedimentada naturalmente por 2 horas. A fase aquosa resultante, que contém sal de sódio do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico, é alimentada em um autoclave que foi carregada com esponja níquel A-7063 (43 kg) e purgada com nitrogênio. A autoclave é aquecida de 28 20°C a 32°C e é pressurizada com hidrogênio a 50 psig (0,34 MPa). A pressão é mantida a 50 psig (0,34 MPa) por 18 a 24 horas. A autoclave é subseqüentemente resfriada de 20°C a 30°C e a pressão é reduzida de 20 a 30 psig (0,14 a 0,21 MPa) para amostragem. A reação é completa quando a conversão fracional de sal de sódio do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- octanóico é 99 % ou mais. A mistura da reação é filtrada e o filtrado é combinado com uma solução ácida cítrica aquosa (64 kg em 136 kg de água) em uma temperatura de 20°C a 30 °C. Etanol (310 L) é adicionado e a mistura é aquecida de 55 °C a 60 °C. A mistura é mantida por 1 hora e em seguida res- friada em uma taxa de cerca de -15 °C/hora até a mistura atingir a temperatura de cerca de 2°C a 8 °C. A mistura é agitada nesta temperatura por cerca de 1,5 horas e filtrada. A torta do filtro resultante é rinsada com água (150 L) de 2 °C a 8 °C e em seguida seca à temperatura ambiente com um varredura de nitrogênio até o conteúdo de água ser menos que 1 % por análise Karl Fischer, dando assim ácido {3S,5R)-3- aminometil-5-metiloctanóico bruto.
O produto bruto (129 kg) é carregado em um vaso. Água (774 kg) e etanol anidro (774 kg) são adicionados ao o vaso e a mistura resultante é aquecida a refluxo (cerca de 80 °C) até a solução clarear. A solução é passada através de um filtro de polimento (10 e é novamente aquecida a refluxo até a solução clarear. A solução é resfriada naturalmente em uma taxa de cerca de -20 °C/hora até ela atingir uma tempe- ratura de cerca de 5 °C, durante o qual um precipitado for- mou-se. A lama resultante é mantida de 0 °C a 5 °C por cerca de 90 minutos para completar o processo de cristalização. A lama é filtrada para isolar o composto titulado, que é rin- sado com etanol anidro (305 kg) e seco em uma varredura de nitrogênio em a temperatura de 40 °C a cerca de 45 °C até o teor de água. (por Karl Fischer análise) e o teor de etanol (por análise de cromatografia gasosa) serem cada qual menos que 0,5 % em peso. Rendimento representativo do composto ti- tulado a partir de éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5- metil-octanóico é cerca de 76 %. EXEMPLO 13. Preparação de éster metilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico
Éster 2-metil-pentílico do ácido metano sulfônico
O vaso de reação foi carregado com tolueno (170 mL, 8,5 ml/g baseado no peso de 2-metil-pentan-l-ol) , 2- metil-pentan-l-ol (20,00 g, 0,20 mols, em uma porção) e tri- etilamina (21,78 g, 0,22 mols, em uma porção). A mistura da reação foi resfriada até uma temperatura de -10°C a -5°C e cloreto de metanossulfonila (22,42 g, 0,2 mols) foi adicio- nado gota a gota, mantendo a temperatura de -10°C a -5°C.
A reação foi agitada por uma hora em uma temperatura de -10 °C a -5 °C. A reação foi finalizada com HCl aguoso 1,0 M (60 mL, 3 mL/g baseado no peso de 2-metil-pentan-l-ol) e agitada por 30 minutos. A mistura da reação foi aquecida ao morno naturalmente a 25°C e as fases separadas. A fase orgânica foi lavada com NaHCO3 aquosa IM (60 mL, 3 mL/g baseado no peso de 2-metil-pentan-1-ol) e as fases separadas. A solução de tolueno resultante do éster 2-metil-pentilico do ácido metano sulfônico foi usado diretamente na etapa seguinte.
1-Bromo-2-metil-pentano
O vaso de reação foi carregado com éster 2-metil- pentílico do ácido metano sulfônico (35,29 g, 0,2 mols, so- lução de tolueno), H2O (14 mL, 0,4 mL/g baseado no peso de éster 2-metil-pentílico do ácido metano sulfônico) , NaBr (20,14 g, 0,2 mols) e brometo de tetrabutilamônio (12,61 g, 0,04 mols). A mistura da reação foi aquecida a 90°C e agi- tada nesta temperatura por 3 horas. H2O (600 mL, 3 mL/g ba- seado no peso de éster 2-metil-pentílico do ácido metano sulfônico) foi carregado e as fases separadas. A solução de tolueno resultante de 1-bromo-2-metil-pentano foi usada di- retamente na etapa seguinte.
Éster metilico do ácido (5R)-3-ciano-5-metil octa- nóico
O vaso de reação foi carregado com tolueno (152 mL, 4,7 mL/g baseado no peso de 1-bromo-2-metil-pentano) , seguido por terc-butóxido de potássio (76, 87g, 0,69 mols) em uma porção com agitação. A mistura da reação foi resfriada até uma temperatura de -10 °C a -5 °C. 4,4,4- trimetoxibutironitrila (37,39 g, 0,23 mols) foi carregado na solução de tolueno de 1-bromo-2-metil-pentano a partir da etapa anterior e a solução resultante adicionado gota a gota para a reação, enquanto mantinha a temperatura a -5 °C. A mistura da reação foi agitada por 18 horas em uma temperatu- ra de -10 °C a - 5 °C. A reação foi finalizada com H2O (323 mL, 10 mL/g baseado no peso de l-bromo-2-metilpentano) , HCl concentrado (48,5 mL) adicionado gota a gota até uma faixa de pH de 1-2, e a mistura da reação agitada a 25 °C por 1 hora. As fases foram separadas, a fase orgânica lavada com H2O (323 mL, 10 mL/g baseado no peso de 1-bromo-2-metil- pentano), e as fases separadas. Tolueno foi destilado a par- tir da fase orgânica para deixar um volume de 65 mL. A solu- ção de tolueno resultante de éster metilico do ácido (5R)-3- ciano-5-metil octanóico foi usada diretamente na etapa se- guinte.
Éster metilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- octanóico NaHCO3 (47,4 g, 0,75 equivalentes), KH2PO4 (4,4 g, 0,042 equivalentes) e NaOH (0,84 g, 0,031 equivalentes) fo- ram carregados no H2O (1.500 mL) e agitados à temperatura ambiente até uma solução ser formada. A enzima Protease PS- SD (30 g, comercialmente disponíveis por Amano Enzima Inc.) foi carregado na reação e a suspensão agitada à temperatura ambiente até uma solução ser formada. A mistura da reação foi aquecida até 45 °C enquanto uma solução de tolueno de éster metílico do ácido (5R)-3-ciano-5-metil octanóico (150 g, 0,76 Mol, 1 equivalente) foi adicionado em uma porção por um período de cinco minutos. 0 óleo resultante em suspensão aquosa foi agitado vigorosamente por 48 horas a 45 0C. Ao completar a reação, o produto foi extraído com éter terc- butil metílico (600 mL) e as fases orgânicas foram combina- das e lavadas com salmoura (300 mL) . 0 composto título foi mantido como uma solução de éter terc-butil metílico para uso adicional na preparação de ácido (3S,5R)-3-aminometil-5- metil-octanóico.
EXEMPLO 14. Forma A do ácido (3S,5R)-3-Aminometil- 5-metil-octanóico
Método A
Etanol (25 mL) e água (25 mL) foram carregados no vaso e agitados vigorosamente para assegurar a mistura. Áci- do (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico bruto (2,5 g) foi carregado e a suspensão aquecida até a temperatura de reflu- xo (80 °C) até uma solução ser formada. A reação foi agitada a 80 0C por 1 hora para assegurar dissolução total. A solu- ção foi filtrada através de um filtro em linha e transferida para um vaso sem mancha. A solução foi resfriada naturalmen- te a uma taxa de 0,5 °C/minuto até ela atingir 67 ºC e foi semeada com semente micronizada 0,5 % (2,5-10 pm) em um lama a 67 °C. A suspensão foi resfriada até 0 ºC a uma taxa de 0,5 °C/minuto e agitada a 0 ºC por 12 horas. O produto foi coletado por filtração e a torta lavada com água sem mancha (2,5 mL) seguido por etanol sem mancha (2,5 mL). O produto foi seco em bandeja à vácuo a 40 ºC por 24 horas ou até o teor e água ser < 0,5 % em peso.
Método B
Ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico bruto (25 mg/mL) em etanol e água (50:50 por volume) é carregado no reator e a agitação é mantida a uma velocidade moderada- mente rápida por todo o processo. O reator é aquecido até uma temperatura de 55 ºC a uma taxa de aquecimento de 0,5 °C/minuto e a temperatura mantida a 55 ºC por uma hora para assegurar a dissolução completa. A solução é resfriada até 51 ºC a uma taxa de 0,5 °C/minuto e mantida nesta temperatu- ra por 15 minutos. A solução é semeada com micronizada se- mente 5 % (2-25 pm) em uma lama (75 mg/mL em etanol) . A lama da semente etanol é agitada antes da semeadura quebrar a aglomeração. A temperatura é mantida a 51 ºC por mais 20 mi- nutos após a semeadura. A lama resultante é resfriada até 0 ºC a uma taxa de 0,5 °C/minuto e mantida nesta temperatura por 2 horas. Os sólidos são filtrados à vácuo e lavados com etanol frio. Os sólidos filtrados são secos em forno a vácuo a 50 °C.
Método C Ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico bruto (50 mg/mL) em etanol e água (50:50 por volume) é carregado no reator e a agitação é mantida a uma velocidade moderada- mente alta por todo o processo. O reator é aquecido até 80 °C (temperatura de refluxo) a uma taxa de aquecimento de 0,5 °C/minuto. A temperatura é mantida a 80°C por uma hora para assegurar a dissolução completa. A solução é resfriada até 0 °C a uma taxa de 0,5 °C/minuto e mantida a 0°C por 2 horas. Os sólidos são filtrados à vácuo e lavados com etanol frio. Os sólidos filtrados são secos em forno a vácuo a 50 °C.
Caracterização de Forma A do ácido (3S,5R)-3- aminometil-5-metil-octanóico
Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil- octanóico foi caracterizada usando as técnicas seguintes:
1. Difração de raios-X de pó (PXRD)
2. Calorimetria diferencial de varredura(DSC)
3. Espectroscopia de infravermelho com Transforma- da de Fourier (FT-IR)
4. Espectroscopia de Raman com Transformada de Fourier (FT-Raman)
As condições experimentais seguintes foram usadas.
Difração de raios-X de pó (PXRD)
O padrão de difração de raios-X de pó foi determi- nado usando um difratômetro de raios-X- pó Bruker AXS Ltd. D4 equipado com um dispositivo de troca de amostra automáti- co, um goniômetro teta-teta, fenda de divergência de feixe automática, e um detector PSD Vantec-I. A amostra foi prepa- rada para análise colocando em uma montagem de corpo de pro- va de pastilha de silício de fundo baixo. 0 corpo de prova foi rotacionado sendo ao mesmo tempo irradiado com raios-X de cobre K-alfai (comprimento de onda= 1,5406 Angstroms) com o tubo de raios-X operando a 40kV/30mA. As análises foram realizadas com o goniômetro trabalhando em modo contínuo ajustado para contagem de 0,2 segundo para degraus de 0,018° em uma faixa de dois teta de 2° a 55°.
Conforme versados na técnica percebem, as intensi- dades relativas de vários picos nas Tabelas 1 e 2 dadas a seguir podem variar por causa de inúmeros fatores, tais como, por exemplo, efeitos de orientação de cristais nas fendas de raios-X ou na pureza do material que está sendo analisado, ou o grau de cristalinidade da amostra. As posi- ções de pico podem também deslocar por causa das variações na altura da amostra, mas as posições do pico permanecerão substancialmente da maneira definida dada nas Tabelas.
Versados na técnica também perceberão que medições usando um diferente comprimento de onda resultarão em dife- rentes deslocamentos de acordo com a equação Bragg - ηλ = 2d sin 0.
Tais padrões PXRD adicionais gerados por uso de comprimentos de onda alternativos são considerados represen- tações alternativas dos padrões PXRD do material cristalino da presente invenção e, como tal, estão no escopo da presen- te invenção.
A estrutura cristalina da Forma A foi determinada por análise de difração de raios-X de único cristal. Além do mais, ângulos 2-teta, espaçamentos d e intensidades relati- vas foram calculados a partir da estrutura do único cristal usando o módulo "Reflex Powder Diffraction" of Accelrys Mate- riais Studiom [version 2.2]. Parâmetros de simulação perti- nentes foram em cada caso:
Comprimento de onda= 1,540562 A (Cu Ka)
Fator de Polarização =0,5
Perfil Pseudo-Voigt (ü = 0,01, V = -0,001, W = 0,002)
Calorimetria Diferencial de Varredura DSC)
DSC foi realizada usando um Perkin Elmer Piris 1 DSC em recipientes de alumínio ventilados de 50 uL com tam- pas de alumínio. Aproximadamente 3 mg da amostra foram aque- cidos a 10°C por minuto em um faixa de 10 a 215°C com uma purga de gás nitrogênio.
FT-IR
O espectro IR foi adquirido usando um espectrôme- tro ThermoNicolet Avatar FT-IR equipado com um acessório ATR de uma única reflexão 'Golden Gate™' (placa de topo de dia- mante e lentes de selenito de zinco) e detector DTGS KBr. O espectro foi coletado a uma resolução de 2 cm-1 e uma co- adição de 256 varreduras. Foi usado apodização Happ-Genzel. Em virtude de o espectro FT-IR ter sido registrado usando ATR de reflexão única, não foi exigida nenhuma preparação da amostra. O uso de FT-IR de ATR fará com que as intensidades relativas de bandas infravermelhas difiram daquelas vistas em um espectro FT-IR de transmissão usando disco KBr ou pre- parações de amostra de nujol mull. Por causa da natureza de ATR FT-IR, as bandas de comprimento de onda inferior são mais intensas do que aquelas em comprimento de onda superi- or. O erro experimental, a menos que de outra forma notado, foi ± 2 cm"1.
FT-Raman
O espectro Raman foi coletado usando um espectrô- metro ThermoNicolet 960 FT-Raman equipado com um laser NdYAG 1064 nm e detector de Germânio. O espectro foi coletado usando potência laser 320 mW na amostra e 5140 varreduras co-adicionadas a resolução de 2 cm"1, apodização Happ-Genzel foi usado. Cada amostra (aproximadamente 5 mg) foi colocada em um frasco de vidro e exposta a radiação de laser. Os da- dos são apresentados como intensidade Raman em função do deslocamento Raman. O erro experimental, a menos que de ou- tra forma notado, foi ± 2 cm-1
Dados
O padrão PXRD medido está mostrado na Figura 1. Os picos característicos principais, com uma intensidade rela- tiva maior do que 5 %, são listados na Tabela 1. O padrão PXRD calculado está mostrado na Figura 2. Os picos caracte- rísticos principais, com uma intensidade relativa maior do que 5 %, são listados na Tabela 2. Os picos característicos principais para Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5- metil-octanóico são a 7,7, 15,8, 20,8 e 23,1 graus de dois ângulos teta + 0,2 grau. O termograma DSC para Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico está mostrado na Figura 3 e isto mostra um pico endotérmico único acentua- do máximo a 194 °C ± 2 °C. Este evento representa a fusão de Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico. O espectro FT-IR para Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5- metil-octanóico é revelado nas Figuras 4 e 5. Os picos ca- racterísticos principais para Forma A do ácido (3S,5R)~3- aminometil-5-metil-octanóico são listados na Tabela 3. 0 es- pectro FT-Raman para Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil- 5-metil-octanóico é revelado nas Figuras 6 e 7. 0 picos ca- racterísticos principais para Forma A do ácido {3S,5R)~3- aminometil-5-metil-octanóico são listados na Tabela 4.
Tabela 1 Picos PXRD característicos de padrão me- dido para Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil- octanóico
<table>table see original document page 115</column></row><table>
Tabela 2. Picos PXRD característicos de padrão Calculado para Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5- metiloctanóico <table>table see original document page 116</column></row><table>
Tabela 3 Lista de pico para dados FT-IR da Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico
Freqüências de faixa de absorção principais são listada na Tabela a seguir (w: fraco, m: médio, s: forte).
As atribuições de intensidade são relativas para a faixa principal no espectro e não são baseadas nos valores absolu- tos medidos a partir da linha de base.
<table>table see original document page 116</column></row><table> <table>table see original document page 117</column></row><table>
Tabela 4 Lista de pico para dados FT-Raman da Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico
Tabela de pico de bandas FT-Raman de intensidade relativa bem definidas. As atribuições de intensidade são relativas à banda principal no espectro e não são baseadas nos valores absolutos medidos a partir da linha de base (w: fraco, m: médio, s: forte, vs: muito forte) <table>table see original document page 118</column></row><table>
FIGURAS
A Figura 1 mostra o padrão PXRD medido para Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico
A Figura 2 mostra o padrão PXRD calculado para Forma A do ácido (3S, 5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico
A Figura 3 mostra o termograma DSC para Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico
A Figura 4 mostra o espectro FT-IR para Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico
A Figura 5 mostra a região de impressão digital do espectro FT-1R para Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5- metiloctanóico
A Figura 6 mostra o espectro FT-Raman para Forma A do ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico
A Figura 7 mostra a região de impressão digital do espectro FT-Raman para Forma A do ácido {3S,5R)~3- aminometil-5-metiloctanóico
Deve-se notar que, da maneira usada nesta especi- ficação e as reivindicações anexas, artigos singulares tais como "um", "uma", "a" e "o" podem referir-se a um objetivo único ou a uma pluralidade de objetivos a menos que o con- texto indique claramente de outra forma. Assim, por exemplo, referência a uma composição contendo "um composto" pode in- cluir um composto único ou dois ou mais compostos. Deve-se entender que ave descrição anterior deve ser ilustrativa e não restritiva. Muitas modalidades ficarão aparentes aos versados na tecnologia mediante leitura da descrição anteri- or. Portanto, o escopo da invenção será determinado com re- ferências às reivindicações anexas e incluirá o escopo total de equivalentes das quais tais reivindicações são intitula- das. As revelações de todos artigos e referências, incluindo patentes, pedidos e publicações de patente, que estão aqui incorporados pela referência na sua integra e com todos os propósitos.

Claims (30)

1. Processo para preparar um composto de Fórmula -10 ou um sal deste, e um composto de Fórmula 11, ou um sal deste: <formula>formula see original document page 120</formula> CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: em contato com uma enzima, em que a enzima hidrolisa diastereo-seletivamente o composto de Fórmula 7 no composto da Fórmula 10, ou um sal do mesmo, em que R8 é H, ou no composto de Fórmula 11, ou um sal do mesmo, em que R9 é H; (b) isolar o composto da Fórmula 10, ou um sal do mesmo; e (c) opcionalmente hidrolisar o composto de fórmula -10 ou 11 em que R8 ou R9, respectivamente, é diferente de H para gerar o ácido carboxilico livre, ou sal do mesmo, em que R8 ou R9, respectivamente, é H. em que R1 e R2 são cada qual independentemente selecionados de hidrogênio e alquila C1-3, desde que R1 e R2 não sejam ambos hidrogênio; R3 é selecionado de alquila C1-6 e alquenila C2-6; R6 na Fórmula 7 é selecionado de alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, cicloalquila C3-7, cicloalquenila C3-7, halo-alquila C1-6, halo-alquenila C2-6, halo-alquinila C2-6, aril-alquila C1-6, aril-alquenila C2-6 e aril-alquinila C2-6; e R8 e R9 na Fórmula 10 e 11 são cada um independentemente selecionados de hidrogênio, alquila C1- -6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, cicloalquila C3-7, cicloalquenila C3-7, halo-alquila C1-6, halo-alquenila C2-6, halo-alquinila C2-6, aril-alquila C1-6, aril-alquenila C2-6 e aril-alquinila C2-6, desde que um, mas não ambos R8 e R9 sejam hidrogênio; e em que cada uma das frações arila supramencionadas pode ser opcionalmente substituída com de um a três substituintes independentemente selecionados de alquila C1-3, alcóxi C1-3, amino, alquilamino C1-3 e halogênio.
2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, para preparar um composto de Fórmula 10, ou um sal do mesmo: <formula>formula see original document page 121</formula> em que R1 e R2 são cada qual independentemente selecionados de hidrogênio e alquila C1-3, desde que R1 e R2 não sejam ambos hidrogênio; R3 é selecionado de alquila C1-6 e alquenila C2-6; e R8 é selecionado de alquila C1-6, alquenila C2- -6, alquinila C2-6, cicloalquila C3-7, cicloalquenila C3-7, halo-alquila C1-6, halo-alquenila C216, halo-alquinila C2-6, aril-alquila C1-6, aril-alquenila C2-6 e aril-alquinila C2-6, e em que cada uma das frações arila supramencionadas pode ser opcionalmente substituída com de um a três substituintes independentemente selecionados de alquila C1-3, alcóxi C1-3, amino, alquilamino C1-3 e halogênio; CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: (a) colocar um composto de Fórmula 7 em contato com uma enzima, em que a enzima hidrolisa diastereo- seletivamente o composto de Fórmula 7 no composto da Fórmula 11a, <formula>formula see original document page 122</formula> em que R1, R2 e R3 são conforme definidos para o composto de Fórmula 10; e R6 na Fórmula 7 é conforme definido para R8 e (b) isolar o composto da Fórmula 10, ou um sal do mesmo.
3. Processo, de acordo com a reivindicação 1, para preparar um composto de Fórmula 10a, ou um sal do mesmo: <formula>formula see original document page 122</formula> em que R1 e R2 são cada um independentemente selecionados de hidrogênio e alquila C1-3 , desde que R1 e R2 não sejam ambos hidrogênio; R3 é selecionado de alquila C1-6 e alquenila C2-6 ; CARACTERIZADO pelo fato de compreender as etapas de: (a) colocar um composto de Fórmula 7, <formula>formula see original document page 123</formula> em contato com uma enzima para fornecer o composto de Fórmula 10, ou um sal do mesmo, e um composto de Fórmula 11, ou um sal do mesmo, <formula>formula see original document page 123</formula> em que a enzima hidrolisa diastereo-seletivamente o composto de Fórmula 7 no composto da Fórmula 10, ou um sal do mesmo, em que R8 é H, ou no composto de Fórmula 11, ou um sal do mesmo, em que R9 é H; (b) isolar o composto da Fórmula 10, ou um sal do me smo; e (c) opcionalmente hidrolisar o composto de fórmula 10 em que R8 é diferente de H, para gerar o composto de Fórmula 10a, ou um sal do mesmo, em que R1, R2 e R3 na Fórmula 7, e Fórmula 11 são como definidos na Fórmula 10a; R6 na Fórmula 7 é selecionado de alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, cicloalquila C3-7, cicloalquenila C3-7, halo-alquila C1-6, halo-alquenila C2-6, halo-alquinila C2-6, aril-alquila C1-6, aril-alquenila C2-6 e aril-alquinila C2-6; e R8 e R9 na Fórmula 10 e 11 são cada qual independentemente selecionados de hidrogênio, alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, cicloalquila C3-7, cicloalquenila C3-7, halo-alquila C1-6, halo-alquenila C2-6, halo-alquinila C2-6, aril-alquila C1-6, aril-alquenila C2-6 e aril-alquinila C2-6, desde que um, mas não ambos R8 e R9 sejam hidrogênio; e em que cada uma das frações arila supramencionadas pode ser opcionalmente substituída com de um a três substituintes independentemente selecionados de alquila C1-3, alcóxi C1-3, amino, alquilamino C1-3 e halogênio.
4. Processo para preparação de um composto de Fórmula 1: <formula>formula see original document page 124</formula> ou um sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 e R2 são cada um independentemente selecionados de hidrogênio e alquila C1-3, desde que quando R1 é hidrogênio, R2 não seja; e R3 é selecionado de alquila C1-6 e alquenila C2-6; CARACTERIZADO pelo fato de compreender as etapas (a) a (c) do acordo com a reivindicação 1 ou 3, e adicionalmente compreender as etapas: (d) reduzir a porção ciano de um composto de Fórmula 10, em que R8 é H, ou um sal do mesmo: <formula>formula see original document page 125</formula> em que R1, R2 e R3 na Fórmula 10 são como definidos para um composto de Fórmula 1; e (e) opcionalmente a conversão adicional do composto de Fórmula 1 ou um sal do mesmo em um sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.
5. Processo para preparação de um composto de Fórmula 7, ou um sal do mesmo: <formula>formula see original document page 125</formula> em que R1 e R2 são cada um independentemente selecionados de hidrogênio e alquila C1-3, desde que R1 e R2 não sejam ambos hidrogênio; R3 é selecionado de alquila C1-6 e alquenila C2-6; e R6 é alquila C1-6, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: (a) reagir um composto de Fórmula 19 com um composto de ortoéster de Fórmula 20: <formula>formula see original document page 125</formula> na presença de uma base, em que R1, R2, R3 e R6 são como definidos para um composto de Fórmula 7; e X2 é halogênio. (b) hidrolisar o produto intermediário do ortoéster resultante para fornecer o éster carboxilico de Fórmula 7, ou sal do mesmo.
6. Processo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R9 é hidrogênio.
7. Processo, de acordo com a reivindicação 1, 2 ou -6, CARACTERIZADO pelo fato de que R6 e R8 são independentemente selecionados de alquila Ci-6·
8. Processo, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que R6 e R8 são independentemente selecionados de metila e etila.
9. Processo, de acordo com a reivindicação 1, 2, -6, 7 ou 8, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 e R2 são cada um independentemente hidrogênio ou metila, desde que R1 e R2 são sejam ambos hidrogênio, e R3 é alquila Ci-6·
10. Processo, de acordo com a reivindicação 9, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 é hidrogênio, R2 é metila e R3 é metila, etila, n-propila ou i-propila.
11. Processo, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 é hidrogênio, R2 é metila e R3 é etila.
12. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes 1 a 4 ou 6 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de que a enzima na etapa (a) é uma lipase.
13. Processo, de acordo com a reivindicação 12, CARACTERIZADO pelo fato de que a enzima é uma lipase do microorganismo Burkholderia cepacia ou do microorganismo Thermomyces lanuginosus.
14. Processo, de acordo com a reivindicação 1, 6, -7, 8, 9, 10, 11, 12 ou 13, CARACTERIZADO pelo fato de que adicionalmente compreende a etapa de opcionalmente converter o composto de Fórmula 10 em que R8 é H em um sal do mesmo; preferivelmente em um sal de metal alcalino do mesmo; mais preferivelmente em um sal de sódio do mesmo.
15. Processo, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que R6 e R8 são independentemente selecionados de alquila C1-6.
16. Processo, de acordo com a reivindicação 15, CARACTERIZADO pelo fato de que R6 e R8 são independentemente selecionados de metiIa e etila.
17. Composto de Fórmula 7, <formula>formula see original document page 127</formula> CARACTERIZADO pelo fato de que R1, R2, R3 e R6 são conforme definidos na reivindicação 1 ou reivindicação 2.
18. Composto, de acordo com a reivindicação 17, CARACTERIZADO pelo fato de que R6 é alquila C1-6.
19. Composto, de acordo com a reivindicação 18, CARACTERIZADO pelo fato de que R6 é metila, etila, n-propila ou i-propila.
20. Composto, de Fórmula 10: <formula>formula see original document page 127</formula> ou um sal do mesmo, CARACTERIZADO pelo fato de que R1, R2, R3 e R6 são conforme definidos na reivindicação 1.
21. Composto, de acordo com a reivindicação 20, CARACTERIZADO pelo fato de que R8 é selecionado de hidrogênio e alquila C1-6.
22. Composto, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que R8 é selecionado de hidrogênio, metila, etila, n-propila ou i-propila.
23. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 a 22, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 e R2 são cada um independentemente hidrogênio ou metila, desde que R1 e R2 não sejam ambos hidrogênio, e R3 é alquila C1-6·
24. Composto, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 é hidrogênio, R2 é metila, e R3 é selecionado de metila, etila, n-propila ou i- propila.
25. Composto, de acordo com a reivindicação 24, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 é hidrogênio, R2 é metila, e R3 é etila.
26. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de que é selecionado de: etilico do ácido etilico do (5R)-3-ciano-5-metil- heptanóico; éster éster etilico do ácido (5R)-3-ciano-5,7-dimetil- octanóico; éster etilico do ácido ácido (5R)-3-ciano-5-metil- nonanóico; éster etilico do ácido ácido (5R)-3-ciano-5-metil octanóico; ácido 5R)-3- ciano-5-metil-heptanóico; ácido 5R) -3- ciano-5-metil-octanóico; ácido 5R) -3- ciano-5-metil-nonanóico ; ácido 5R) -3-ciano-5,7-dimetil-octanóico; ácido 3S,5R)-3-ciano-5-metil-heptanóico; ácido 3S,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico; ácido 3S,5R)-3-ciano-5-metil-nonanóico; ácido 3S,5R)-3-ciano-5,7-dimetil-octanóico; éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- heptanóico; éster etílico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- octanóico; éster metílico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- octanóico; éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil- nonanóico; éster etilico do ácido (3S,5R)-3-ciano-5,7- dimetil-octanóico; ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil-heptanóico; ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico; ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil-nonanóico; ácido (3R,5R)-3-ciano-5,7-dimetil-octanóico; éster etilico do ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil- heptanóico; éster etilico do ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil- octanóico; éster etilico do ácido (3R,5R)-3-ciano-5-metil- nonanóico; éster etilico do ácido (3R,5R)-3-ciano-5,7- dimetil-octanóico; e sais dos mesmos.
27. Ácido (3S,5R)-3-ciano-5-metil-octanóico ou um sal ou éster do mesmo da Fórmula 10b: <formula>formula see original document page 129</formula> CARACTERIZADO pelo fato de que R8b é selecionado de hidrogênio, alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, cicloalquila C3-7, cicloalquenila C3-7, halo-alquila C1-6, halo-alquenila C2-6, halo-alquinila C2-6, aril-alquila C1-6, aril-alquenila C2-6 e aril-alquinila C2-6 e em que cada uma das frações arila supramencionadas pode ser opcionalmente substituída com de um a três substituintes independentemente selecionados de alquila C1-3, alcóxi C1-3, amino, alquilamino C1-3 e halogênio.
28. Composto, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato de que R8b é alquila C1-6, preferivelmente metila ou etila.
29. Composto, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato de que é ácido (3S, 5R)-3-ciano-5- metil-octanóico ou um sal do mesmo.
30. Composto, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de . que o sal é um sal de metal alcalino de ácido (3S, 5R)-3-ciano-5-metil-octanóico, preferivelmente o sal de sódio do mesmo.
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