BRPI0618756A2 - derivados de 9-cloro-15-desoxiprostaglandina, processo para sua preparação e seu uso como medicamentos - Google Patents

Abstract

DERIVADOS DE 9-CLORO-15-DESOXIPROSTAGLANDINA, PROCESSO PARA SUA PREPARAçãO E SEU USO COMO MEDICAMENTOS. A presente invenção refere-se a derivados de 9-cloroprostaglandina de formula geral (I), que poderão ser vantajosos para o tratamento de problemas de fertilidade.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DERIVADOS DE 9-CLORO-15-DESOXIPROSTAGLANDlNA, PROCESSO PARA SUA PREPARAÇÃO E SEU USO COMO MEDICAMENTOS".

A presente invenção refere-se a derivados de 9- cloroprostaglandina, a processo para sua preparação e seu uso como medi- camentos.

Verificou-se por longo período que prostaglandinas são as molé- culas-chave nos processos de biologia reprodutiva feminina tal como, por exemplo, controle de ovulação, de fertilização, de nidação, de decidualiza- ção (por exemplo, formação placentária) e de menstruação. Prostaglandinas também desempenham uma parte importante nas alterações patológicas no trato reprodutivo, incluindo menorragia, dismenorréia, endometriose e cân- cer. O mecanismo por qual prostaglandinas efetuam essas alterações não foi ainda completamente elucidado. Resultados recentes indicam que pros- taglandinas, seus receptores e caminhos de transdução de sinais destes são envolvidos em processos tais como angiogênese, apoptose e proliferação.

Os efeitos de prostaglandinas são mediados por seus receptores acoplados à proteína G que são localizados na superfície celular. Prosta- glandina E2 (PGE2) é de particular interesse, apresentando uma ampla vari- edade de efeitos celulares por meio de ligação a subtipos de receptores fun- cionalmente diferentes, a saber os receptores EP1, EP2, EP3 e EP4. Desse modo, foi possível mostrar que funções reprodutivas são prejudicadas em camundongos knockout EP2 (EP2'7'), e que esses animais apresentam um "tamanho da ninhada" menor (Matsumoto e outros, 2001, Biology of Repro- duction 64, 1557-1565). Foi também possível mostrar que esses camundon- gos knockout EP2 (Hizaki e outros, Proc. NatL Acad. Sei. U. S. A. 31 de a- gosto de 1999; 96(18):10501 -10506) exibem expansão de cúmulo distinta- mente reduzida e severa subfertilidade, demonstrando a significância do re- ceptor de prostaglandina EP2 para essa finalidade. O receptor EP2, conse- qüentemente, um alvo importante para o desenvolvimento de medicamentos para controle de fertilidade feminina. As 4 subclasses do receptor EP2 abrem a possibilidade de desenvolvimento-alvo de compostos PGE2 seletivamente ativos. Contudo, até esta data, apenas quaisquer Iigantes de receptor EP2 seletivo são conhecidos, e a maioria dos compostos conhecidos também se ligam a outros subtipos de receptor EP2 tais como, por exemplo, ao receptor EP4.

Patente Européia EP 1306087 descreve agonistas de receptores EP2 que são usados no tratamento de disfunção erétil. A mesma classe es- trutural é descrita na patente européia EP 860430, e se reivindica seu uso para produzir um medicamento para o tratamento de distúrbios imunológi- cos, asma e aborto. O pedido WO 04/32965 descreve os agonistas de re- ceptores EP2 que são usados para o tratamento e prevenção de distúrbios causados por uma disfunção do órgão causada por isquemia. WO 04/009117 descreve agonistas de receptores EP2 e EP4 para o tratamento de distúrbios causados por contração uterina, por exemplo, menstruação dolorosa.

Os pedidos WO 03/74483 e WO 03/09872 descrevem agonistas que se ligam igualmente aos receptores EP2 e EP4 (Ono Phamaceuticals).

Agonistas dos receptores EP2 e EP4 são freqüentemente descri- tos em relação a tratamento de osteoporose (WO 99/19300, US 2003/0166631, WO 03/77910, WO 03/45371, WO 03/74483 e WO 03/09872) e para tratamento de glaucoma (WO 04/37813, WO 04/37786, WO 04/19938, WO 03/103772, WO 03/103664, US 6747037, US 6410591, WO 03/40123, WO 03/47513, WO 03/47417).

O pedido de patente WO 04/12656 reivindica agonistas de recep- tor EP2 em relação à inflamação.

O pedido de patente WO 03/77919 reivindica agonistas de recep- tor EP4 para o tratamento de fertilidade. Agonistas de receptor EP2 seletivo que controlam os processos que eventualmente contribuem para nidação e decidualização e desse modo promoção de fertilidade não foram até esta data descritos.

O objetivo de proporcionar compostos estáveis, seletivos e efica- zes que se ligam a receptor EP2 para o desenvolvimento de novos medica- mentos surge a partir deste ponto. As patentes européias acima mencionadas de Ono Pharmaceuti- cals (ER 0030377 e EP 1306087) descrevem derivados de prostaglandina que apresentam um átomo de cloro na posição 9. Contudo, os compostos reivindicados nessas patentes compreendem entre outros, um grupo hidróxi na cadeia lateral inferior, por exemplo, na posição 15 ou 16.

Verificou-se agora, surpreendentemente, que compostos de fór- mula geral I

<formula>formula see original document page 4</formula>

em que

R1 é um grupo CH2OH, -COOR2, -CONHR2 ou - CONHR31

R2 é um hidrogênio,

radical C1-C10-alquila que é linear ou ramificado, opcionalmente mono a poliinsaturado e é opcionalmente mono a polissubstituído por halo- gênio, C1-C4-alcóxi, C3-C10-arila substituída ou C3-C10-aroíla opcionalmente substituída, di-C1-C5-alquilamino ou tri-C1-C5-alquilamino,

uma C3-C10-cicloalquila que é opcionalmente substituída por C1- C4-alquila,

uma C3-C10-arila que é opcionalmente substituída por fenila, 1- naftila, 2-naftila que por sua vez poderá ser substituída na posição 3 e na posição 4 por flúor, cloro, alcóxi ou trifluormetila ou na posição 4 por hidróxi, halogênio, fenila, um ou mais grupos CrC4alquila, clorometila, fluormetila, trifluormetila, carbóxi, hidróxi ou C1-C4-alcóxi, ou uma C3-C7-heterocicloalquila.

R3 é um ácido C1-C15-carboxílico ou ácido C1-C15- sulfônico,

A é um grupo cis-CH=CH- ou -CH2-CH2-,

B é um grupo trans-CH=CH- ou -CH2-CH2-,

W é um C2-C6-alquileno, R4 é um grupo hidróxi, um radical O-R6 ou O-R71 em que R6 é um radical tetraidropiranila, tetraidrofuranila, trimetilsilila, terc- butildimetilsilila, terc-butildifenilsilila ou tribenzilsilila e

R7 é um ácido C1-C15-carboxílico,

R5 é um hidrogênio, um grupo C1-C10-alquila ou C1-C10- alquenila,

η é o número 1-4,

e os sais dos mesmos, e os clatrados de ciclodextrina destes com bases fisiologicamente toleradas, superam as desvantagens conheci- das e, através de omissão do grupo hidróxi, uma melhor seletividade para o receptor EP2 e melhor atividade e duração de ação mais longa podem ser obtidas.

Grupos alquila são grupos alquila lineares ou ramificados, radi- cais alquila saturados e insaturados que apresentam 1-10 átomos de C. Exemplos que poderão ser mencionados são grupos metila, etila, propila, butila, isobutila, terc-butila, pentila, neopentila, hexila, heptila, octila, decila, butenila, isobutenila, propenila, pentenila, benzila, m e p-clorobenzila.

Os grupos alquila poderão ser opcionalmente mono a polissubsti- tuídos por átomos de halogênio, por exemplo, flúor, cloro ou bromo, por gru- pos alcóxi tais como, por exemplo, metóxi, etóxi, opcionalmente por grupos arila ou aroíla substituídos, por exemplo, fenila, ou por dialquilamino, por e- xemplo, dimetilamino, dietilamino, dimetilaminopropila e trialquilamônio, em que monossubstituição deve ser preferida.

Grupos arila adequados são ambos os grupos arila substituídos e não-substituídos tais como, por exemplo, fenila, 1-naftila e 2-naftila, cada um dos quais poderá ser substituído por 1-3 átomos de halogênio, um grupo fenila, 1 -3 grupos alquila cada um apresentando 1 -4 átomos de C, um grupo clorometila, fluormetila, trifluormetila, carbóxi, hidróxi ou alcóxi que apresenta 1 -4 átomos de C.

O grupo cicloalquila poderá compreender 3-10 átomos de carbo- no no anel. Os anéis poderão ser substituídos por grupos alquila que apre- sentam 1-4 átomos de carbono. Exemplos que poderão ser mencionados são ciclopentila, cicloexila, metilcicloexila e adamantila. Grupos heterocícli- cos adequados são heterociclos de 5 e 6 membros que compreendem pelo menos 1 heteroátomo, preferencialmente nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Exemplos que poderão ser mencionados são 2-furila, 2-tienila, 2-piridila, 3- piridila, 4-piridila, oxazolila, tiazolila, pirimidinila, piridazinila, pirazinila, 3- furila, 3-tienila, 2-tetrazolila.

Resíduos de ácidos fisiologicamente tolerados são adequados como resíduo ácido. Ácidos preferidos são ácidos carboxílicos orgânicos e ácidos sulfônicos que apresentam 1-15 átomos de carbono que pertencem às séries alifáticos, cicloalifáticos, aromáticos e heterocíclicos. Exemplos que poderão ser mencionados de substituintes são grupos C1-C15-alquila, hidróxi, C1-C15-alcóxi, oxo e amino ou átomos de halogênio. Exemplos de ácidos carboxílicos que poderão ser mencionados são os seguintes: ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácido butírico, ácido isobutírico, ácido valéri- co, ácido isovalérico, ácido capróico, ácido oenântico, ácido caprílico, ácido pelargônico, ácido cáprico, ácido undecílico, ácido láurico, ácido tridecílico, ácido mirístico, ácido pentadecílico, ácido trimetilacético, ácido dietilacético, ácido terc-butilacético, ácido ciclopropilacético, ácido ciclopentilacético, ácido cicloexilacético, ácido ciclopropanocarboxílico, ácido cicloexanocarboxílico, ácido fenilacético, ácido fenoxiacético, ácido metoxiacético, ácido etoxiacéti- co, ácido mono, di e tricloroacético, ácido aminoacético, ácido dietilaminoa- cético, ácido piperidinoacético, ácido morfolinoacético, ácido láctico, ácido succínico, ácido adípico, ácido benzóico, ácidos benzóicos substituídos por halogênio, trifluormetila, grupos hidróxi, alcóxi ou carbóxi, ácido nicotínico, ácido isonicotínico, ácido furan-2-carboxílico, ácido ciclopentilpropiônico. E- xemplos de ácidos sulfônicos adequados são ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido isopropanossulfônico, ácido β-cloroetanossulfônico, ácido butanossulfônico, ácido ciclopentanossulfônico, ácido cicloexanossul- fônico, ácido benzenossulfônico, ácido p-toluenossulfônico, ácido p- clorobenzenossulfônico, ácido Ν,Ν-dimetilaminossulfônico, ácido N,N- dietilaminossulfônico, ácido N,N-bis(P-cloroetil)aminossulfônico, ácido N,N- diisobutilaminossulfônico, ácido Ν,Ν-dibutilaminossulfônico, ácido pirrolidi- nossulfônico, piperidinossulfônico, piperazinossulfônico, N- metilpiperazinossulfônico e morfolinossulfôhico.

O grupo hidróxi poderá ser funcionalmente modificado, por e- xemplo, por eterificação ou esterificação.

Resíduos de éter adequados são os resíduos conhecidos daque- le versado no estado da técnica. Preferência é dada a resíduos de éter que podem ser facilmente eliminados, tais como, por exemplo, os radicais tetrai- dropiranila, tetraidrofuranila, trimetilsilila, terc-butildimetilsilila, terc- butildifenilsilila ou tribenzilsilila.

Radicais acila adequados são os ácidos carboxílicos menciona- dos sob R7. Exemplos desses que poderão ser mencionados por nome são acetila, propionila, butirila e benzoíla.

Adequadas para a formação salina são bases inorgânicas e or- gânicas conforme conhecidas daquele versado no estado da técnica para a formação de sais fisiologicamente tolerados. Exemplos que poderão ser mencionados são hidróxidos de metais alcalinos tais como hidróxidos de sódio e potássio, hidróxidos de metais alcalino-terrosos, tais como hidróxido de cálcio, amônia, aminas tais como etanolamina, dietanolamina, trietanola- mina, N-metilglicamina, morfolina, tris(hidroximetil)metilamina, etc.

Compostos de fórmula geral I que demonstram ser particularmen- te eficaz são aqueles em que

R1 é um grupo CH2OH, -COOR2, -CONHR2 ou -CONHR3,

R2 é um hidrogênio ou

um radical C1-C10-alquila que é linear ou ramificado, opcional- mente mono a poliinsaturado e é opcionalmente monossubstituído por flúor, cloro ou bromo, por C1-C4-alcóxi, C3-C10-arila substituída ou C3-C10-aroíla opcionalmente substituída, di-C1-C5-alquilamino ou tri-C1-C5-alquilamino.

uma C5-C6-cicloalquila que é opcionalmente substituída por C1- C4-alquila,

um radical C3-C10-arila que é opcionalmente substituído por fenila que poderá ser substituído na posição 3 ou 4 por flúor, cloro, alcóxi ou triflu- ormetila ou na posição 4 por hidróxi. uma C5-C6-heterocicloalquila que poderá ser interrompida uma ou mais vezes por nitrogênio, oxigênio ou enxofre, R3 é um ácido CrCio-carboxílico ou ácido C1-C10- sulfônico,

A é um grupo eis-CH=CH- ou -CH2-CH2-,

B é um grupo frans-CH=CH- ou -CH2-CH2-,

W é um C2-C6-alquileno,

R4 é um grupo hidróxi,

R é um hidrogênio, um grupo Ci-C6-alquila ou Ci -Cio-alquenila e η é o número 1-4.

Compostos de fórmula geral I que demonstram ser muito particu- larmente eficaz são aqueles em que

R1 é um grupo -CH2OH, -COOR2, -CONHR2 ou -CONHR3, R2 é um hidrogênio ou uma CrC4-alquila que é opcionalmente substituída por fenila,

uma C5-C6-cicloalquila,

uma C3-C6-arila que é opcionalmente substituída por fenila,

R3 é um ácido Ci-C6-carboxílico ou ácido CrC6-sulfônico,

A é um grupo eis-CH=CH- ou -CH2-CH2-,

B é um grupo írans-CH=CH- ou -CH2-CH2-,

W é um C2-alquileno,

R4 é um grupo hidróxi,

R5 é um hidrogênio, C1-C4-alquila ou Ci-C5-alquenila saturada e N é o número 1-4.

A invenção adicionalmente refere-se a um processo para prepa- ração dos derivados de prostano, de acordo com a invenção de fórmula ge- ral I, o qual caracteriza-se pelo fato de que um aldeído de fórmula geral II,

<formula>formula see original document page 8</formula>

em que R1 apresenta o significado dos radicais -COOR2, - CONHR3, e A e R4 apresentam os significados indicados acima, em que o grupo OH livre em R4 é protegido, é reagido com o carbânion da sulfona de fórmula geral III

<formula>formula see original document page 9</formula>

Acetilação da hidroxissulfona resultante é seguida por eliminação redutiva para fornecer a olefina e, onde apropriada, uma desproteção sub- seqüente dos grupos hidróxi que são protegidos em qualquer seqüência e, onde apropriados, esterificação, eterificação e/ou hidrogenação de ligações duplas e/ou esterificação de um grupo carbóxi esterificado (R1 = COOR2) e/ou de um grupo carbóxi livre (COOR2 com R2 = H) e/ou conversão de um grupo carbóxi livre (COOR2 com R2 = H) em uma amida (R1 = CONR2) e/ou redução de um grupo carbóxi livre ou esterificado (R1 = CONHR3).

Reação do aldeído de fórmula geral Il com o carbânion gerado da sulfona Ill ocorre de uma maneira conhecida intrinsecamente, usando um solvente inerte tal como, por exemplo, tetraidrofurano ou éter dietílico sob temperaturas entre -100°C e 24°C, preferencialmente -100°C a -70°C. O carbânion da sulfona Ill é gerado de uma maneira convencional com uma base tais como, por exemplo, butil-lítio, metil-lítio, terc-butóxido de potássio, hidreto de sódio, diisopropilamida lítio, preferencialmente, butil-lítio. A forma- ção de carbânion é realizada sob temperaturas de -78°C a 25°C, preferenci- almente sob -78°C.

Acetilação do grupo hidróxi gerado ocorre de maneira conhecida com anidrido acético, onde apropriado, na presença de uma base, por e- xemplo, piridina, sob temperaturas entre -78°C e 25°C.

Eliminação redutora da acetóxi sulfona intermediária para forne- cer a trans-olefina de fórmula geral I ocorre com pó de magnésio em metanol com a adição de uma quantidade catalítica de clorotrimetilsilano. A reação é realizada sob temperaturas entre O0C e 60°C, preferencialmente entre 15°C e 25°C. Alternativamente, a eliminação redutora pode também ser realizada com amálgama sódica. Redução para fornecer os compostos de fórmula geral I com R1 no significado de um grupo -CH2OH é realizada com um agente de redução adequado para reduzir ésteres ou ácidos carboxílicos, tais como, por exem- plo, hidreto de lítioalumínio, hidreto de diisobutilalumínio, etc. Solventes ade- quados são: éter dietílico, tetraidrofurano, dimetoxietano, tolueno, etc. A re- dução é realizada sob temperaturas de -30°C até o ponto de ebulição do solvente usado, preferencialmente de 0°C a 30°C.

Grupos hidróxi funcionalmente modificados são liberados por mé- todos conhecidos. Por exemplo, eliminação de grupos protetores hidróxi tais como, por exemplo, o radical tetraidropiranila é realizado em uma solução aquosa de um ácido orgânico tais como, por exemplo, ácido oxálico, ácido acético, ácido propiônico, entre outros, ou em uma solução aquosa de um ácido inorgânico tal como, por exemplo, ácido clorídrico. É vantajoso adicio- nar um solvente orgânico inerte miscível com água para aperfeiçoar a solubi- lidade. Exemplos de solventes orgânicos adequados são álcoois tais como metanol e etanol, e éteres tais como dimetoxietano, dioxano e tetraidrofura- no. Tetraidrofurano é preferencialmente usado. A eliminação é preferencial- mente realizada sob temperaturas entre 20°C e 80°C.

Os grupos acila são hidrolisados, por exemplo, com carbonatos ou hidróxidos de metais alcalinos ou metais alcalino-terrosos em um álcool ou na solução aquosa de um álcool. Álcoois adequados são álcoois alifáticos tais como, por exemplo, metanol, etanol, butanol, etc. preferencialmente me- tanol. Carbonatos e hidróxidos de metais alcalinos que poderão ser mencio- nados são sais de potássio e sódio. Os sais de potássio são preferidos.

Exemplos de carbonatos e hidróxidos de metais alcalinos ade- quados são carbonatos de cálcio, hidróxidos de cálcio e carbonatos de bário. A reação ocorre sob -10°C a +70°C, preferencialmente sob +25°C.

O grupo éster -COOR2 de R1, por exemplo, em que R2 é um gru- po alquila que apresenta 1-10 átomos de C, é introduzido pelos métodos conhecidos daquele versado no estado da técnica. Os compostos 1 -carbóxi são reagidos, por exemplo, com diazoidrocarbonos de uma maneira conhe- cida per se. Esterificação com diazoidrocarbonos ocorre, por exemplo, mistu- rando uma solução do diazoidrocarbono em um solvente inerte, preferenci- almente em éter dietílico, com o composto 1-carbóxi no mesmo ou em um solvente inerte diferente, tal como, por exemplo, cloreto de metileno. Após a reação ser completada em 1 a 30 minutos, o solvente é removido e o éster é purificado de maneira convencional. Diazoalcanos são conhecidos ou podem ser preparados por métodos conhecidos (Org. Reactions Vol. 8, páginas 389-394 (1954)).

O grupo éster COOR2 de R1, em que R2 é um grupo arila substi- tuído ou não-substituído, é introduzido pelos métodos conhecidos daquele versado no estado da técnica. Por exemplo, os compostos 1-carbóxi são reagidos com os compostos aril hidróxi apropriados com dicicloexilcarbodii- mida na presença de uma base adequada, por exemplo, piridina, DMAP, trietilamina, em um solvente inerte. Solventes adequados são: cloreto de metileno, cloreto de etileno, clorofórmio, acetato de etila, tetraidrofurano, pre- ferencialmente clorofórmio. A reação é realizada sob temperaturas entre - 30°C e+50°C, preferencialmente sob 100C.

Pretende-se reduzir ligações duplas C=C presentes no produto inicial, a hidrogenação ocorre por métodos conhecidos intrinsecamente.

Hidrogenação da ligação dupla 5,6 é realizada de maneira co- nhecida intrinsecamente, sob baixas temperaturas, preferencialmente, sob aproximadamente -20°C, em uma atmosfera de hidrogênio na presença de um catalisador de metal nobre. Um exemplo de catalisador adequado é pa- ládio a 10% sobre carbono.

Se tanto a ligação dupla 5,6 quanto a ligação dupla 13,14 são hidrogenadas, usa-se uma temperatura mais alta, preferencialmente aproxi- madamente 20°C.

Os derivados de prostaglandina de fórmula geral I com R2 signifi- cando um átomo de hidrogênio podem ser convertidos em um sal por meio de neutralização usando quantidades adequadas das bases inorgânicas a- propriadas. Por exemplo, dissolvendo os ácidos de prostaglandinas apropri- ados em água contendo a quantidade estequiométrica da base resulta, após a água ter sido evaporada completamente ou um solvente miscível em água, por exemplo, álcool ou acetona, ter sido adicionado, no sal orgânico sólido.

Prepara-se um sal de amina de maneira convencional dissolven- do o ácido de prostaglandina, por exemplo, em um solvente adequado, por exemplo, etanol, acetona, éter dietílico, acetonitrila ou benzeno, e adicionan- do pelo menos a quantidade estequiométrica da amina a essa solução. Isso usualmente resulta no sal em forma sólida, ou ele é isolado de modo usual após evaporação do solvente.

O grupo amida -CONHR3 de R1 é introduzido por métodos co- nhecidos daquele versado no estado da técnica. Os ácidos carboxílicos de fórmula geral I (R2 = H) são inicialmente convertidos no anidrido misto com cloroformato de isobutila na presença de uma amina terciária tal como, por exemplo, trietilamina. Reação do anidrido misto com o sal de metal alcalino da amina apropriada ou com amônia (R3 = H) ocorre em um solvente inerte ou mistura de solvente, tais como, por exemplo, tetraidrofurano, dimetoxieta- no, dimetilformamida, triamida hexametilfosfórica, sob temperaturas entre - 30°C e +60°C, preferencialmente sob O0C a 30°C.

Uma possibilidade adicional de introdução do grupo amida - CONHR3 de R1 consiste na reação de um ácido 1-carboxílico de fórmula ge- ral I (R2 = H), em que há opcionalmente proteção intermediária de grupos hidróxi livres, com compostos de fórmula geral IV

O = C = N-R3 IV

em que R3 apresenta o significado indicado acima.

Reação do composto de fórmula geral I (R2 = H) com um isocia- nato de fórmula geral IV ocorre, onde apropriado, com adição de uma amina terciária tal como, por exemplo, trietilamina ou piridina. A reação pode ser realizada sem solvente ou em um solvente inerte, preferencialmente acetoni- trila, tetraidrofurano, acetona, dimetilacetamida, cloreto de metileno, éter die- tílico, tolueno, sob temperaturas entre -80°C a IOO0C, preferencialmente sob 0°C a 30°C.

Se o material de partida compreende grupos OH no resíduo pros- tano, esses grupos OH são também reagidos. Se os produtos finais eventu- almente desejados compreendem grupos hidróxi livres no resíduo prostano, é vantajoso iniciar de materiais de partida com proteção intermediária des- tes, por meio de radicais, éter ou acila que podem ser preferencial e facil- mente eliminados.

Os aldeídos de fórmula geral II que são usados como material de partida são conhecidos ou podem ser preparados, por exemplo, por meio de epoxidação seletiva de maneira conhecida per se da ligação dupla 13,14 de uma 9-haloprostaglandina de fórmula geral V, preferencialmente com R1 sig- nificando um grupo -COOCH3, com hidroperóxido de terc-butila e isopropó-

Clivagem subseqüente de epóxido com ácido periódico em éter dietílico e, onde apropriado, proteção do grupo 11-hidróxi, por exemplo, com diidropirano, proporciona o aldeído de fórmula geral II.

A sulfona de fórmula geral III usada como material de partida po- de ser preparada de ácidos cicloalquilcarboxílicos de fórmula geral Vll em que n apresenta o significado indicado acima por meio de alquilação com um haleto de alquila de fórmula geral VIII em que R5 apresenta o significado in- dicado acima, e halogênio pode ser iodo, cloro ou bromo. <formula>formula see original document page 14</formula>

Esterificação de IX com iodeto de metila e carbonato de potássio em acetona é seguida por redução do éster metílico resultante ao álcool com hidreto de lítio-alumínio em éter dietílico. Oxidação do álcool com complexo de S02-piridina na presença de trietilamina em uma mistura de sulfóxido de dimetila e cloreto de metileno proporciona o aldeído de fórmula geral X. Re- ação subseqüente de Wittig-Horner e, onde apropriado, hidrogenação da ligação dupla para fornecer Xl leva, após redução com hidreto de diisobutila- lumínio, ao álcool de fórmula geral XII. Hidrogenação da ligação dupla pode, contudo, também ser realizada após redução do éster Xl ao álcool XII, com W significando uma ligação dupla.

Substituição subseqüente do grupo hidróxi ocorre após tosilação intermediária por meio de reação com tiofenol em tolueno. O tioéter Xlll obti- do dessa maneira é finalmente oxidado em uma solução metanólica aquosa para a sulfona de fórmula geral III.

Comparada com prostaglandina E2, os novos agonistas de EP2 se distinguem por maiores seletividade e estabilidade. Os novos análogos de prostaglandina do tipo EP2 são adequados, por exemplo, para o tratamento e profilaxia de distúrbios que incluem distúrbios de fertilidade, doenças infec- ciosas, câncer, infecções virais, distúrbios cardiovasculares, pressão intra- ocular elevada, glaucoma, distúrbios do sistema esquelético, distúrbios angi- ogênicos, anormalidades de contração uterina, dor e distúrbios nefrológicos. Por distúrbios de fertilidade entendem-se distúrbios que levam a nenhuma ovulação que ocorre, a complexo celular óocito/cúmulo ovulado não sendo fertilizável, a nidação de um oócito fertilizado não ocorrendo e nenhuma decidualização ocorrendo, por doenças infecciosas entendem-se doenças causadas por parasitas unicelulares, por câncer entende-se tumo- res sólidos e leucemia, por infecções virais entendem-se infecções por cito- megalovírus, hepatite, hepatite BeCe distúrbios por HIV, por distúrbios cardiovasculares entendem-se distúrbio por reperfusão isquêmica, estenose, arteriosclerose e restenoses, por distúrbios angiogênicos entendem-se, por exemplo, endometriose, por pressão intra-ocular elevada entende-se glau- coma, por anormalidades de contração uterina entendem-se, por exemplo, menstruação dolorosa, por distúrbios do sistema esquelético entendem-se osteoporose e por distúrbios nefrológicos entendem-se glomerulonefrite.

Para uso dos compostos de acordo com a invenção como medi- camentos, eles são convertidos na forma de um produto farmacêutico que, além do ingrediente ativo, compreende materiais de veículo inerte farmacêu- tico, orgânico ou inorgânico adequado para administração entérica ou paren- teral, tais como, por exemplo, água, gelatina, goma arábica, lactato, amido, estearato de magnésio, talco, óleos vegetais, polialquileno glicóis, etc. Os produtos farmacêuticos poderão ser em forma sólida, por exemplo, como comprimidos, comprimidos revestidos, supositórios, cápsulas, ou em forma líquida, por exemplo, como soluções, suspensões ou emulsões. Eles adicio- nalmente compreendem, onde apropriado, excipientes tais como conservan- tes, estabilizadores, agentes de umectação, ou emulsificantes; sais para al- terar a pressão osmótica ou tampões.

A presente invenção também se refere a esses produtos farma- cêuticos.

Soluções para aerossol são expedientemente produzidas por ina- lação.

Particularmente adequados para uso oral são comprimidos, com- primidos ou cápsulas revestidos com talco e/ou veículos carboidratos ou a- glutinantes, tais como, por exemplo, lactose, amido de milho ou amido de batata. Uso é também possível em forma líquida, tal como, por exemplo, como fluido ao qual um edulcorante é adicionado, onde apropriado.

Soluções estéreis, injetáveis, aquosas ou oleaginosas são usa- das para administração parenteral. Soluções para injeção ou suspensões são particularmente adequadas, especialmente soluções aquosas dos com- postos ativos em óleo de rícino polietoxilado são adequadas.

Supositórios, por exemplo, são adequados e usuais para admi- nistração vaginal.

Sistemas de veículo que podem ser também usados são excipi- entes de superfície ativa, tais como, sais de ácidos biliares ou fosfolipídios animais ou vegetais, mas também misturas destes, e Iipossomos ou consti- tuintes destes.

A presente invenção também se refere às administrações entéri- ca, parenteral, vaginal e oral.

Os compostos da invenção são administrados a um paciente com necessidade deste/em uma quantidade eficaz. Por uma "quantidade eficaz" entende-se uma quantidade ou dosagem necessária para tratar ou prevenir um distúrbio particular, cuja quantidade ou dosagem pode ser determinada por métodos conhecidos no estado da técnica sem experimento indevido.

A dosagem dos ingredientes ativos poderá variar dependendo da via de administração, idade e peso do paciente, natureza e gravidade do distúrbio a ser tratado e fatores similares. A dose diária é de 0,5 - 1.000 mg, preferencialmente de 50-200 mg, sendo possível para a dose ser dada como uma única dose a ser administrada uma vez ou dividida em 2 ou mais doses diariamente.

A presente invenção também se refere a medicamentos para o tratamento dos distúrbios listados acima, os quais compreendem pelo menos um composto de acordo com a fórmula geral I, e medicamentos com subs- tâncias e veículos de formulação adequados.

A presente invenção também se refere ao uso dos compostos de fórmula geral (I) para produção de um medicamento para o tratamento e pro- filaxia de distúrbios que incluem distúrbios de fertilidade, doenças infeccio- sas, câncer, infecções virais, distúrbios cardiovasculares, pressão intra- ocular elevada, glaucoma, distúrbios do sistema esquelético, distúrbios angi- ogênicos, anormalidades de contração uterina, dor e distúrbios nefrológicos.

Por distúrbios de fertilidade entendem-se distúrbios que levam a nenhuma ovulação ocorrendo, a complexo celular oócito/cúmulo ovulado que não é fertilizável, a nidação de um oócito fertilizado não ocorrendo e ne- nhuma decidualização ocorrendo, por doenças infecciosas entendem-se do- enças causadas por parasitas unicelulares, por câncer entende-se tumores sólidos e leucemia, por infecções virais entende-se infecções por citomega- lovírus, hepatite, hepatite BeCe distúrbios por HIV, por distúrbios cardio- vasculares entende-se distúrbio por reperfusão isquêmica, estenose, arteri- osclerose e restenose, por distúrbios angiogênicos entende-se, por exemplo, endometriose, pressão intra-ocular elevada entende-se glaucoma, por anor- malidades de contração uterina entende-se, por exemplo, menstruação dolo- rosa, por distúrbios do sistema esquelético entende-se osteoporose e por distúrbios nefrológicos entende-se glomerulonefrite.

Os compostos de acordo com a invenção de fórmula geral I li- gam-se ao receptor EP2 e apresentam ação agonística. A ligação de PGE2 ao subtipo EP2 do receptor PGE2 humano induz a ativação de adenilato ci- clases associada à membrana e leva à formação de cAMP.

A Figura 1 mostra uma atividade muita alta (EC50 < 9,5 χ 10e- 10M), no teste de agonismo celular sem qualquer inibição no teste de anta- gonismo (IC50 > 2 χ 10e-5M). A presente invenção também se refere ao uso das substâncias de acordo com a invenção como agonistas de receptor EP2.

Os compostos de acordo com a invenção de fórmula geral I apre- sentam um efeito pró-fértil. O oócito é circundado no folículo antral pré- ovulatório por células de cúmulo que formam um anel denso de células em torno do oócito. Após o pico de hormônio Iuteinizante (pico LH), uma série de processos é ativada e leva a uma grande alteração morfológica nesse anel de células compostas de células de cúmulo. Nesse caso, as células de cú- mulo formam uma matriz extracelular que leva a chamada expansão de cú- mulo (Vanderhyden e outros, Dev. Bioi Agosto 1990; 140(2):307-317). Essa expansão de cúmulo é um importante componente do processo ovulatório e da subseqüente possibilidade de fertilização.

Prostaglandinas, e aqui prostaglandina E2, cuja síntese é induzi- da pelo pico HL1 são de importância crucial na expansão de cúmulo. Ca- mundongos knockout de prostanóide EP2 (Hizaki e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. U. S. A. Agosto de 1999; 31; 96(18): 10501-6) mostram uma expansão de cúmulo notadamente reduzida e grave subfertilidade, demonstrando a importância do receptor de prostanóide EP2 para esse processo.

O agonista de EP2 leva a uma grande expansão dependente de concentração no complexo de cúmulo. A expansão de cúmulo induzida pela substância de teste é equivalente em concentrações de 0,5 μΜ e 1 μΜ à expansão de cúmulo induzida pelo agonista PGE2 de receptor EP2 natural em uma concentração de 1 μΜ (n = 16 complexos cúmulo-oócito por grupo; vide Figura 1).

O agonista de EP2 leva a um aumento significativo dependente de concentração em oócitos ovulados. Esse aumento significativo em oóci- tos ovulados ocorre sobre administração de apenas 0,00015 mg/animal em cada caso e mostra que é possível aumentar o número de oócitos ovulados mesmo com uma dose-padrão de HCG usada para ovulação (n = 11-12 a- nimais por grupo; **p < 0,005 e *p < 0,05), Figura 2).

A presente invenção também se refere ao uso dos compostos de acordo com a invenção para o tratamento de distúrbios de fertilidade tal co- mo ovulação prejudicada ou ausente, fertilização prejudicada do complexo celular de oócito/cúmulo, implantação prejudicada e decidualização prejudi- cada.

Prostaglandinas desempenham uma parte importante na angio- gênese (Sales, Jabbour, 2003, Reproduction 126, 559-567).

Endometriose é um distúrbio crônico causado por disfunções de vasos sangüíneos. Aproximadamente 10% de mulheres regularmente so- frem de sangramento pesado durante menstruação, causado por alterações nos vasos sangüíneos do endométrio. Além disso, diferenças estruturais nos vasos sangüíneos foram observadas, tal como, por exemplo, formação in- completa da camada de células do músculo liso (Abberton e outros, 1999, Hum. Reprod. 14, 1072-1079). Uma vez que a perda de sangue durante a menstruação é parcialmente controlada por constrição dos vasos sangüí- neos, é óbvio que as imperfeições nos músculos lisos tornam uma contribui- ção substancial para o sangramento.

Prostaglandinas e efeitos mediados pelo receptor EP2 também desempenham uma parte na regulação hormonal de lesões endometrióticas (Sun e outros, 2003, Endocrinology 144, 3934-3942).

Evidência de crescimento sugere que endometriose associa-se a uma resposta inflamatória significativa que poderá ser mediada por macrófa- gos e linfócitos ativados e níveis elevados de citocinas, quimiocinas e fatores de crescimento. Esses processos inflamatórios são hipotetizados para medi- ar algumas das características clínicas associadas a endometriose. O fluido peritoneal de mulheres com endometriose sabe-se conter mais células in- flamatórias e suas citocinas, quimiocinas e fatores de crescimento associa- dos. (Murphy AA. Clinicai aspects of endometríosis. Ann. NYAcad. Sei. mar- ço 2002; 955:1-10). O resultado é um ambiente que promove implantação e proliferação.

Prostaglandinas, e aqui prostaglandina E2, reduz a expressão de citocinas inflamatórias, tal como TNF-α de macrófagos ativados. Camun- dongos knockout prostanóide EP2 (Shinomiya S e outros, Regulação de TNF-α e produção de IL-10 por prostaglandinas 12 e E2: estudos com ca- mundongos deficientes de receptor prostaglandina e agonistas sintéticos seletivos a subtipo de receptor prostaglandina E. (Bioch. Phar. 2001;

61 1153) não respondem a agonistas EP2, demonstrando a im- portância do receptor prostanóide EP2 para esse processo.

A Tabela 1 mostra que um agonista de EP2 leva a uma inibição nos níveis de citocina medidos no sobrenadante de cultura. O agonista de EP2 também causa uma diminuição significativa em TNF-α conforme mos- trada na Figura 3.

A presente invenção refere-se ao uso dos compostos de fórmula geral I para o tratamento de endometriose. Prostaglandinas desempenham uma parte importante na contra- ção uterina, e excessivamente contrações fortes são responsáveis por menstruação dolorosa (Sales, Jabbour, 2003, Reproduction 126,559-567).

A presente invenção refere-se ao uso das substâncias de fórmula geral I para o tratamento de menstruação dolorosa.

Agonistas de receptor EP2 adicionalmente desempenham uma parte significativa no controle da pressão intra-ocular. Tem sido possível mostrar que em particular, receptores EP2 estão presentes em altas concen- trações nos vasos da rede trabecular (TM) do olho. Lágrimas partem do olho via a TM e o canal de Schlemm1 e agonistas de receptores EP2 influenciam a dinâmica de fluido Iacrimal por meio de estimulação do fluxo de fluido Iacri- mal e desse modo levando a uma redução na pressão intra-ocular. (W. Kamphuis e outros, Current Eye Res. 2004, 29, 17-26). A presente invenção refere-se ao uso das substâncias de acordo com a invenção para o trata- mento de pressão intra-ocular elevada conforme associada, entre outras, com glaucoma.

Prostaglandinas também desempenham uma parte importante em processos que agem contra osteoporose. A presente invenção, portanto, refere-se ao uso das substâncias, de acordo com a invenção, para o trata- mento de osteoporose.

Prostaglandinas também desempenham uma parte importante em processos que controlam pressão sangüínea. A presente invenção, por- tanto, refere-se ao uso das substâncias, de acordo com a invenção, para o tratamento de pressão sangüínea alta.

Prostaglandinas também influenciam a produção de citocinas.

Esclerose múltipla (MS) é considerada como uma doença auto-imune medi- ada por linfócito T sistêmico cujo tecido-alvo é o sistema nervoso central. Perfis de liberação de citocina poderão ser desviados para cada linhagem T auxiliar 1 ou T auxiliar 2 (Th-1 ou Th-2). As células Th-1 segregam citocinas tal como interferon-gama (INF-γ) e induzem uma resposta imune mediada por células, visto que as células Th-2 segregam IL-4, IL-5 e IL-IO e induzem uma resposta humoral ou mediada por anticorpos [Mossman e outros, 1989, Annual Rev. Immunol., 7: 145-173]. Expressão de INF-γ associa-se à MS e usando uma medida multifatorial de incapacidade, a expressão de IFN-γ em resposta a peptídeos PLP e peptídeos MBP é significativamente correlacio- nada a incapacidade [Hirsch e outros, 1985, J. Clin. Immunol. Nov.] 5(6):386- 389; Moldovan e outros, 2003, J. Neuroimmunol. Ag.; 141 (1-2):132-140]. Essencialmente, estudos clínicos mostram que administração de IFN-γ cau- sa exacerbações em pacientes com EM [Panitch e outros, Lancet 18 de a- bril; (8538):893-895].

A Tabela 2 mostra que o agonista EP2 leva a uma inibição de ex- pressão de INF-γ a partir de células T doadoras humanas ativadas no ensaio de células T ativadas. A Tabela 3 mostra uma regulação descendente de citocinas associadas à Th-1 em um monócito doador humano ativado deri- vado de ensaio de células dendríticas na presença de um agonista de EP2. Portanto, tanto inibição de expressão de INF-γ diretamente quanto desvio da polarização mediada por células dendríticas de células CD4 + T longe da linhagem Th-1 que expressa INF-γ, o agonista de EP2 é predito reduzir a ex- pressão de INF-γ em pacientes com MS.

A presente invenção também se refere ao uso dos compostos de acordo com a invenção para o tratamento de doenças auto-imunes, tal como doença auto-imune é selecionada do grupo que consiste em esclerose múl- tipla, esclerose múltipla progressiva secundária, esclerose, psoríase, artrite reumatóide, doença de Crohn e alopecia areata.

Onde a preparação dos compostos de partida não é descrita, e- les são conhecidos ou podem ser preparados em analogia a compostos co- nhecidos ou a processos descritos neste relatório. É também possível reali- zar todas as reações descritas neste relatório em reatores paralelos ou por meios de técnicas de operação combinatórias.

Misturas de isômeros podem ser fracionadas por meio de méto- dos convencionais tais como, por exemplo, cristalização, cromatografia ou formação salina para os enantiômeros ou isômeros E/Z.

Sais são preparados de uma maneira convencional adicionando a quantidade equivalente ou um excesso de uma base ou ácido, que é em solução, onde apropriada, a uma solução do composto de fórmula I, e sepa- rando completamente o precipitado ou processando a solução de uma ma- neira convencional.

A invenção desse modo também se refere a medicamentos à base dos compostos de fórmula geral I e excipientes ou veículos convencio- nais.

Os exemplos seguintes pretendem explicar a invenção em deta- lhes sem uma limitação sendo empreendida desse modo.

EXEMPLOS DE PREPARAÇÃO

EXEMPLO 1

(5Z, 13E)-(9R,11 R)-9-cloro-11-[(2H)-tetraidropiran-2-ilóxi]-17,17- tetrametileno-20-nor-5,13-prostadienoato de metila.

0,68 ml de uma solução de butil-lítio a 1,6 M em hexano é adicio- nado gota a gota a uma solução de 290 mg de 1 -fenilsulfonil-4,4- (trimetileno)hexano em 2,4 ml de tetraidrofurano a -78°C sob nitrogênio, e a mistura é agitada à -78°C por 1,5 hora. Essa solução é em seguida adicio- nada gota a gota a -100°C a uma solução de 315 mg de aldeído (de Exem- plo 1c) em 2,4 ml de tetraidrofurano. A mistura é em seguida agitada a - 100°C por 30 minutos e a -78°C por 1 hora. Em seguida 0,16 ml de anidrido acético é adicionado à mistura reacional, e a mistura é aquecida até tempe- ratura ambiente durante o curso de 1 hora. A mistura reacional é misturada com solução de cloreto de amônio e extraída 3 x com acetato de etila, e as fases orgânicas combinadas são lavadas 1 x com água e 1 x com solução de cloreto de sódio saturado, secas sobre sulfato de sódio e concentradas a vácuo. O intermediário é dissolvido em 6 ml de metanol e, sob nitrogênio, 160 mg de pó de magnésio são adicionados. A mistura é em seguida agitada sob temperatura ambiente por 15 minutos. Adiciona-se em seguida 1 gota de clorotrimetilsilano à mistura reacional, e a mistura é agitada sob temperatura ambiente por 3 horas adicionais. A mistura reacional é adicionada a 5 ml de solução de cloreto de amônio gelada e extraída 3 x com acetato de etila, e as fases orgânicas combinadas são lavadas 1 x com água e 1 x com solução de cloreto de sódio saturado, secas sobre sulfato de sódio e concentradas a vácuo. Cromatografia sobre sílica-gel com hexano/acetato de etila (8:2) re- sulta em 140 mg do éster.

1H-RMN (CDCI3): δ = 0,75 (3H), 1,4-2,4 (30H), 3,44 (1H), 3,66 (3H), 3,8-4,15 (3H), 4,63 (1H), 5,15-5,65 (4H).

O aldeído de partida é preparado como segue:

1 a) (5Z)-(9R,11R, 13RS,14RS,15S)-9-cloro-11,15-diidróxi-16,16- dimetil-13,14-epóxi-5-prostenoato de metila

4,7 de isopropóxido de titânio (IV) são adicionados gota a gota a uma solução de 6,52 g de (5Z,13E)-(9R,11R,15R)-9-cloro-11,15-diidróxi- 16,16-dimetil-5-13-prostadienoato de metila em 33 ml de cloreto de metileno a -20°C sob nitrogênio, e a mistura é agitada a -20°C por 30 minutos. 6 ml de hidroperóxido de terc-butila são em seguida adicionados à mistura reacional. Uma solução de 10 g de sulfato de ferro e 20 g de ácido cítrico em 100 ml de água é subseqüentemente adicionada, e a mistura é extraída 3 x com cloreto de metileno. As fases orgânicas combinadas são lavadas 1 x com solução de cloreto de sódio saturado, secas sobre sulfato de sódio e concentradas a vácuo. Cromatografia sobre sílica-gel com cloreto de metileno/acetato de etila (0-40%) resulta em 3,55 g do epóxido como um óleo incolor.

1H-RMN (CDCI3): δ = 0,75-1,05 (9H), 1,1-2,4 (18H), 2,9-3,0 (2H), 3,2 (1H), 3,65 (3H), 4,0-4,15 (2H), 4,63 (1H), 5,3-5,55 (2H).

<formula>formula see original document page 23</formula>

1b) (5Z)-(9R, 11 R)-9-cloro-11-hidróxi-14,15,16,17,18,19,20- heptanor-12-oxo-5-prostenoato de metila

5 g de ácido periódico são vigorosamente agitados em 360 ml de éter sob nitrogênio por 1 hora. 125 ml dessa solução são adicionados a uma solução de 2 g do epóxido em 5 ml de éter, e a mistura é agitada sob nitro- gênio a temperatura ambiente. Após 1 hora, 125 ml adicionais de solução de ácido periódico são adicionados à mistura reacional e, após 2 horas, adicio- na-se o restante da solução de ácido periódico. Após filtração, o filtrado é lavado 1 χ com solução de bicarbonato de sódio saturado, 1 χ com água e 1 χ com solução de cloreto de sódio saturado, seco sobre sulfato de sódio e concentrado a vacuo. Rendimento: 1,9 g do aldeido

<formula>formula see original document page 24</formula>

1 c) (5Z)-(9R, 11 R)-9-cloro-11 -[(2H)-tetraidropiran-2-ilóxi]- 14,15,16,17,18,19,20-heptanor-12-oxo-5-prostenoato de metila

1,9 g do aldeído são dissolvidos em 20 ml de cloreto de metileno e misturados com 1,6 ml de diidropirano e 8,8 mg de pTsOH e agitados por 30 minutos. A mistura é em seguida diluída com éter, lavada 1 χ com solu- ção de bicarbonato de sódio saturado e 1 χ com solução de cloreto de sódio saturado, seca sobre sulfato de sódio e concentrada a vácuo. Cromatografia sobre sílica-gel duas vezes [1-. coluna: cloreto de metileno/acetato de etila (2-10%), 2-. coluna: hexano/acetato de etila (0-20%)] resulta em 720 mg do éter tetraidropiranílico.

1H-RMN (CDCI3): δ = 1,35-2,7 (17H), 3,65 (3H), 3,4-4,1 (3H), 4,58 PREPARAÇÃO DA SULFONA

1d) Ácido 2,2-(trimetileno)butânico

Uma solução de 61,6 ml de diisopropilamina em 180 ml de tetrai- drofurano é adicionada gota a gota a 275 ml de butil-lítio (hexano a1M) a - 10°C sob nitrogênio, e a mistura é agitada a -10°C por 30 minutos. Sob - 20°C, 19,1 ml de ácido ciclobutanocarboxílico são adicionados gota a gota à mistura reacional, e a mistura reacional é agitada por 4 horas, durante as quais ela é aquecida à temperatura ambiente. A suspensão é derramada em 300 ml de água gelada, ajustada em pH 1 com ácido clorídrico a 2N e extra- ída 4 χ com 300 ml de éter cada vez, e as fases orgânicas combinadas são lavadas 1 χ com solução de cloreto de sódio saturado, secadas sobre sulfato de sódio e concentradas a vácuo. Rendimento: 30,1 g do ácido carboxílico.

RMN de 1H (CDCI3): δ = 0,88 (3H), 1,75-1,95 (6H), 2,4 (2H)

<formula>formula see original document page 25</formula>

1e) 2,2-Trimetilenobutan-1-al

62,2 g de carbonato de potássio e 28 ml de iodeto de metileno são adicionados a uma solução de 25,6 g de 1 d em 300 ml de acetona à temperatura ambiente sob nitrogênio, e a mistura é agitada por 12 horas. O precipitado é em seguida filtrado fora com sucção, e o filtrado é concentrado a vácuo sob temperatura ambiente. O produto bruto é dissolvido em 500 ml de éter e lavado 1 χ com água e 1 χ com solução de cloreto de sódio satura- do e a fase orgânica é seca sobre sulfato de sódio e concentrada a vácuo. O resíduo é destilado a vácuo sob 8,5 kPa (85 mbar) e 110°C (ponto de ebuli- ção de 85-90°C). Rendimento: 24,5 g do éster. 20 g do éster são dissolvidos em 40 ml de éter, essa solução é adicionada gota a gota a uma suspensão de 4,8 g de hidreto de lítio-alumínio em 390 ml de éter a 0°C sob nitrogênio, e a mistura é agitada a 0°C por uma hora e sob temperatura ambiente por 1 hora. O excesso de hidreto de lítio-alumínio é decomposto muito cautelosa- mente, sob 0°C, com 11 ml de água, 11 ml de resistência a 15% de solução de hidróxido de sódio e novamente com 30 ml de água. Agitação por 20 mi- nutos é seguida por filtração e em seguida lavagem extensiva com éter, e o filtrado é seco sobre sulfato de sódio e concentrado a vácuo. Rendimento: 16,3 g do álcool.

48 ml de trietilamina e 22,27 g de complexo S03-piridina são adi- cionados a uma solução de 8 g de álcool em 450 ml de cloreto de metileno e 100 ml de sulfóxido de dimetila sob temperatura ambiente sob nitrogênio. A mistura é agitada por 1 hora, em seguida misturada com 300 ml de solução de cloreto de amônio saturado e novamente agitada por 15 minutos. A mistu- ra é em seguida diluída com 1,5 I de éter, as fases são separadas, e a fase orgânica é lavada 2 χ com solução de cloreto de sódio saturado, seca sobre sulfato de sódio e concentrada a vácuo. Rendimento: 9,5 g do aldeído.

<formula>formula see original document page 26</formula>

1f) 4,4-(trimetileno)-2-hexenocarboxilato de etila

Uma solução de 18,3 ml de fosfonoacetato de trietila em 20 ml de tetraidrofurano é adicionada gota a gota a uma suspensão de 3,39 g de hi- dreto de sódio em 60 ml de tetraidrofurano a O0C sob nitrogênio, e a mistura é agitada sob temperatura ambiente por 30 minutos. O aldeído (preparado em 1e) é em seguida adicionado gota a gota à mistura reacional a O0C, e a mistura é agitada sob temperatura ambiente por 3 horas. A mistura é em seguida suprimida com solução de cloreto de amônio saturada e extraída 3 χ com éter, e as fases orgânicas combinadas são lavadas 1 χ com água e 1 χ com solução de cloreto de sódio saturado, secas sobre sulfato de sódio e concentradas a vácuo.

Cromatografia sobre sílica-gel com hexano/éter (0-10%) resulta em 9,81 g do éster.

1H-RMN (CDCI3): δ = 0,71 (3H), 1,27 (3H), 1,65 (2H), 178-2,1 (6H), 4,18 (2H), 5,75 (1H), 6,97 (1H).

<formula>formula see original document page 26</formula>

1g) 4,4-(Trimetileno)hexan-1-ol

78,5 ml de DIBAH são lentamente adicionados gota a gota a uma solução de 7,8 g do éster preparada como em 1f) em 65 ml de cloreto de metileno a -70°C sob nitrogênio. Após 30 minutos, 20 ml de isopropanol e em seguida 36 ml de água são lentamente adicionados gota a gota à mistura reacional. A mistura é agitada sob temperatura ambiente por 2 horas, o pre- cipitado é filtrado fora com sucção e cuidadosamente lavado com cloreto de metileno, e o filtrado é concentrado a vácuo. Cromatografia sobre sílica-gel com hexano-acetato de etila (0-40%) resulta em 5,4 g do álcool alílico.

5 g do álcool alílico são dissolvidos em 200 ml de acetato de etila misturados com 500 mg de Pd/C e esse é seguido por filtração com sucção através de Celite e lavagem completa com acetato de etila. Concentração do filtrado a vácuo resulta em 4,5 g do álcool primário.

RMN de 1H (CDCl3): δ = 0,8 (3H), 1,2-1,9 (12H), 3,6 (2H)

<formula>formula see original document page 27</formula>

1 h) 1 -Feniltio-4,4-(trimetileno)hexano

Uma solução de 6,19 g de cloreto de p-toluenossulfonila em 7,4 ml de tolueno é adicionada gota a gota a uma mistura de 4,4 g do álcool pre- parada como em 1g), 25 ml de tolueno, 997 mg de brometo de tetrabutila- mônio e 46 ml de NaOH a 2N a 0°C sob nitrogênio, e a mistura é agitada por 2 horas. As fases são em seguida separadas, e a fase orgânica é lavada 3 χ com água e 1 χ com solução de cloreto de sódio saturado, secas sobre sul- fato de sódio e concentradas a vácuo. Cromatografia sobre sílica-gel com hexano/éter (0-20%) resulta em 4,6 g do tioéter.

1H-RMN (CDCl3): δ = 0,75 (3), 1,39 (2H), 1,45-1,88 (10H), 2,88 (2H), 7,15-7,53 (5H)

<formula>formula see original document page 27</formula>

1i) 1-Fenilsulfonil-4,4-(trimetileno)hexano Uma solução de 18 g de ozônio em 70 ml de água é adicionada gota a gota a uma solução de 4,6 g do produto preparada como em 1h) em 70 ml de metanol a 0-10°C sob nitrogênio e a mistura é agitada por 2 horas.

Ela é em seguida diluída com 100 ml de água e extraída 4 χ com acetato de etila, e as fases orgânicas combinadas são lavadas 1 χ com água, 2 χ com solução de tiossulfato saturado e 1 χ com solução de cloreto de sódio satu- rado, secas sobre sulfato de sódio e concentradas a vácuo. Cromatografia sobre sílica-gel com hexano/acetato de etila (0-20%) resulta em 2,55 g da sulfona.

1H-RMN (CDCI3): δ = 0,7 (3H), 1,3-1,85 (12H), 3,08 (2H), 7,5-7,7 (3H), 7,9 (2H)

<formula>formula see original document page 28</formula>

EXEMPLO 2

(5Z, 13E)-(9R,11 R)-9-cloro-11-hidróxi-17,17-tetrametileno-20-nor- 5,13-prostadienoato de metila

2,5 mg de pTsOH são adicionados a uma solução de 140 mg do produto preparado no Exemplo 1 em 1,5 ml de metanol a O0C sob nitrogênio, e a mistura é agitada por 3 horas. A mistura reacional é em seguida derra- mada em 3 ml de solução de carbonato de sódio saturado e extraída 3 χ com acetato de etila, e as fases orgânicas combinadas são lavadas 1 χ com solução de cloreto de sódio saturado, secas sobre sulfato de sódio e concen- tradas a vácuo. Cromatografia sobre sílica-gel com hexano/acetato de etila (0-50%) resulta em 105 mg do álcool.

1H-RMN (CDCI3): δ = 0,75 (3H), 1,38-2,4 (24H), 3,65 (3H), 3,9- 4,13 (2H), 5,2-5,63 (4H)

EXEMPLO 3

Ácido (5Z,13E)-(9R,11 R)-9-cloro-11 -hidróxi-17,17-tetrametileno- 20-nor-5,13-prostadienóico

0,2 ml de solução de hidróxido de sódio a 2N é adicionado a uma solução de 68 mg do álcool preparado no Exemplo 2 em 1 ml de metanol sob nitrogênio, e a mistura é agitada por 5 horas. Ela é em seguida diluída com 1 ml de água, ajustada em pH 3 com ácido clorídrico a 2N e extraída 3 χ com acetato de etila, e as fases orgânicas combinadas são lavadas 1 χ com solução de cloreto de sódio saturado secas sobre sulfato de sódio e concen- tradas a vácuo. Cromatografia sobre sílica-gel com hexano-acetato de etila (50-80%) resulta em 50,3 mg do ácido carboxílico. 1H-RMN (CDCI3): δ = 0,75 (3Η), 1,38-2,4 (24Η), 3,9-4,1 (2Η), 5,2- 5,62 (4Η)

EXEMPLOS BIOLÓGICOS:

1. DETECÇÃO DO ANTAGONISMO DO SINAL DE RECEPTORES PROS- TAGLANDINA E9 HUMANA (SUBTIPO EP2)

1.1. PRINCÍPIO DE DETECÇÃO

A ligação de PGE2 ao subtipo EP2 do receptor PGE2 humano in- duz ativação de adenilato ciclases associada à membrana e leva à formação de cAMP. Na presença do inibidor fosfodiesterase IBMX, cAMP que foi acu- mulado devido a essa estimulação e foi liberado por Iise celular empregada em um método de detecção competitiva. Nesse ensaio, o cAMP no Iisato compete com CAMP-XL665 para ligação de um anticorpo anti-cAMP marca- do por Eu criptato.

Isso resulta, na ausência de cAMP celular, em um sinal máximo que deriva de acoplamento desse anticorpo com a molécula CAMP-XL665. Após excitação sob 337 nm, isso resulta em um sinal de emissão de vida longa à base de FRET (transferência de energia por ressonância de fluores- cência) em 665 nm (e sob 620 nM). Os dois sinais são medidos em um ins- trumento de medição adequado com um retardamento de tempo, isto é, a- pós a fluorescência de base ter declinado. Qualquer aumento no baixo sinal de FRET causado por adição de prostaglandina E2 (medida também altera- ção proporcional = emissã0665 nm/emissã062o nm * 10.000) mostra o efeito de antagonistas.

1.2 MÉTODO DE DETECÇÃO

1.2.1. ENSAIO DE ANTAGONISMO (DADOS PARA CADA CAVIDADE DE UMA PLACA DE 384 CAVIDADES):

As soluções da substância (0,75 μΙ) introduzidas em uma placa de ensaio e 30% de DMSO são dissolvidas em 16 μΙ de uma solução de es- timulação de KRSB+IBMX (1 X Tampão Bicarbonato Krebs-Ringer; Sigma- Aldrich No. K-4002; incluindo 750 μΜ 3-isobutil-1-metilxantina Sigma-Aldrich No. 1-7018), e em seguida 15 μΙ destes são transferidos para uma placa de cultura celular sem meios que foi lavada com KRSB brevemente de ante- mao.

Após pré-incubação sob temperatura ambiente (TA) por 30 minu- tos, 5 μΙ de uma solução 4 χ PGE2 (11 nM) são adicionados, e incubação é realizada na presença do agonista sob TA por 60 minutos adicionais (volu- me: ~ 20 μΙ) antes a reação é em seguida parada por meio de adição de 5 μΙ de tampão Iise e incubada a TA por 20 minutos adicionais (volume: ~ 25 μΙ). O Iisato celular é em seguida transferido para uma placa de medição e me- dido de acordo com a informação do fabricante (kit AMP cíclico Cisbio Inter- national No. 62AMPPEC).

1.2.2. ENSAIO DE AGONISMO (DADOS PARA CADA CAVIDADE DE UMA PLACA DE 384 CAVIDADES):

As soluções da substância (0,75 μΙ) introduzidas em uma placa de ensaio e 30% de

DMSO são dissolvidos em 16 μl de uma solução de estimulação KRSB+IBMX (1 X Tampão Bicarbonato Krebs-Ringer; Sigma-Aldrich No. K- 4002; incluindo 750 μΜ de 3-isobutil-1-metilxantina Sigma-Aldrich No. I- 7018), e em seguida 15 μΙ destes são transferidos para uma placa de cultura celular sem meios que foi lavada com KRSB brevemente de antemão.

Após incubação sob temperatura ambiente (TA; volume: -15 μΙ) por 60 minutos, a reação é em seguida parada adicionando 5 μΙ de tampão Iise e incubada a TA por 20 minutos adicionais (volume: ~ 20 μΙ). O Iisato celular é em seguida transferido para uma placa de medição e medido de acordo com a informação do fabricante (kit AMP cíclico Cisbio International No. 62AMPPEC).

O composto de teste mostrou no ensaio de agonismo celular uma atividade muito alta (EC5o < 9,5 χ 10e-10M) sem qualquer inibição no ensaio de antagonismo (CI50 >2x10e-5M).

2. O SUBTIPO EP? DO RECEPTOR PGEp E A EXPANSÃO DE CÚMULO

PRÉ-OVULATÓRIO

2.1. FUNDAMENTO:

No folículo antral pré-ovulatório, o oócito é circundado por células cumuliformes que formam um anel denso de células em torno do oócito. A- pós o pico HL (hormônio luteinizante), uma série de processos é ativada e leva a uma grande alteração morfológica nesse anel de células compostas de células cumuliformes. Nesse caso, as células cumuliformes formam uma matriz extracelular que leva a chamada expansão de cúmulos (Vanderhyden e outros, Dev. Biol. Ag. 1990; 140(2):307-317). Essa expansão de cúmulos é um importante componente do processo ovulatório e da subseqüente possi- bilidade de fertilização.

Prostaglandinas1 e aqui prostaglangina E2, cuja síntese é induzi- da pelo pico HL, são de importância crucial na expansão de cúmulos. Ca- mundongos knockoutde prostanóide EP2(Hizaki e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. U. S. A. Ag.1999; 31 ;96(18):10501-6) mostram uma expansão de cúmu- los notadamente reduzida e grave subfertilidade, demonstrando a importân- cia do receptor prostanóide EP2 para esse processo. 2.2. ENSAIO DE EXPANSÃO DE CÚMULOS IN VITRO.

Foliculogênese é induzida em fêmeas de camundongos imaturas (cepa: CD1 (ICR) de Charles fl/Vef) em uma idade de 2-24 dias por uma do- se única (intraperitoneal) de 7,5 I.U. de PMSG (Pregnant Mare Serm Gona- dotropine). 47-50 horas após a injeção, os ovários são removidos e os com- plexos cúmulo-oócito são removidos. O complexo de cúmulo não é ainda expandido nesse estágio.

Os complexos cúmulo-oócito são em seguida incubados com prostaglandina E2 (PGE2) (1 μΜ), veículo de controle (etanol) ou substâncias de teste por 20-24 horas.

Meio: meio alfa-MEM com IBMX 0,1 mM, piruvatos (0,23 mM), glutaminas (2 mM), pen/estrep. 100 Ul/ml de pen. e 100 μg/ml de estrep.) e HSA (8 mg/ml)). Expansão de cúmulos é em seguida estabelecida por meio da divisão em quatro estágios (de acordo com Vanderhyden e outros, Dev. Biol. Ag. 1990,140(2):307-317).

A substância de teste leva a uma grande expansão dependente de concentração no complexo de cúmulo. A expansão de cúmulo induzida pela substância de teste é equivalente em concentrações de 0,5 μΜ e 1 μΜ à expansão de cúmulo induzida pelo agonista PGE2 de receptor EP2 natural em uma concentração de 1 μΜ (n = 16 complexos de cúmulo-oócito por gru- po; vide Figura 1).

2.3. ENSAIO DE OVULAÇÃO IN VIVO.

Foliculogênese é induzido em fêmeas de camundongos imaturas (cepa: (B6D2F1) de Charles River em uma idade de 16-20 dias por uma dose única (intraperitoneal) de 10 I.U. de PMSG (Pregnant Mare Serm Go- nadotropine). 47-50 horas após a estimulação de PMSG1 uma dose de 10 IU de HCG (gonadotrofina coriônica humana) é usada para induzir maturação folicular final e ovulação. A substância de teste é administrada 10 horas, 5 horas e 0 hora antes da dose de HCG (s. c. em benzoato de benzila/óleo de rícino 1 + 4 v/v). Quatorze horas após a dose de HCG, a autópsia é realiza- da e o número de oócitos ovulados na trompa de Falópio é determinado.

O agonista EP2 leva a um aumento significativo dependente de concentração em oócitos ovulados. Esse aumento significativo em oócitos ovulados ocorre sobre administração de apenas 0,00015 mg/animal em cada caso e mostra que é possível aumentar o número de oócitos ovulados mes- mo com uma dose padrão de HCG usada para ovulação (n = 11-12 animais por grupo; **p < 0,005 e *p < 0,05).

3. O SUBTIPO EPp DO RECEPTOR PGE9 E O ENSAIO DE LIBERAÇÃO DE CITOCINA

3.1 FUNDAMENTO

Evidência de crescimento sugere que endometriose associa-se a uma resposta inflamatória significativa que poderá ser mediada por macrófa- gos e linfócitos ativados e níveis elevados de citocinas, quimiocinas e fatores de crescimento. Esses processos inflamatórios são hipotetizados para medi- ar algumas das características clínicas associadas a endometriose. Sabe-se que o fluido peritoneal de mulheres com endometriose contém mais células inflamatórias e seus associados citocinas, quimiocinas e fatores de cresci- mento. (Murphy AA. Clinicai aspects of endometriosis, Ann. NY Acad. Sei. Março 2002; 955;1-10). O resultado é um ambiente que promove implanta- ção e proliferação.

Prostaglandinas, e aqui prostaglandina E2, reduz a expressão de citocinas inflamatórias, tal como TNF-α de macrófagos ativados. Camun- dongos knockout prostanóide EP2 (Shinomiya S. e outros, Bioch. Phar. 2001; 61 1153) não respondem a agonistas EP2, demonstrando a importância do receptor prostanóide EP2 para esse processo.

3.2 ENSAIO DE LIBERAÇÃO DE CITOCINA IN VITRO

Células dendríticas derivadas de monócito de doador humano são cultivadas em RPMI-1640 contendo soro fetal bovino a 10% por seis dias na presença de 10 ng/ml IL-1 e 200 ng/ml de GM-CSF. As células são ativadas com vários estímulos de ativação: 10 ng/ml de LPS {Sigma), 5 μg/ml de Iigante CD-40 recombinante humano (R & D Systems), ou 5 μΜ de CpG-DNA humano (HyCuIt Biotechnology) na presença de prostaglandina E2 (PGE2) (1 μΜ), veículo de controle (DMSO) ou substâncias de teste (1 μΜ) por 18 horas. Os níveis de sobrenadante de cultura celular TNF-α para doa- dores individuais são medidos por kits ELISA comerciais. As substâncias de teste levam a uma inibição nos níveis de citocina medidos no sobrenadante de cultura conforme mostrado na Tabela 1.

3.3. ENSAIO DE LIBERAÇÃO DE CITOCINA EX VIVO

A substância de teste ou veículo de controle é administrada intra- peritonealmente a grupos de tratamento de camundongos CD-1 pesando 30 - 35 gramas cada (n = 5). Vinte minutos mais tarde, os camundongos são submetidos à eutanásia, baços removidos e esplenócitos são cultivados em RPMI + soro fetal bovino a 10%. As células são ativadas com PHA e ConA na ausência de substância de teste e cultivadas por 18 horas. Os níveis de sobrenadante de cultura celular TNF-α para camundongos individuais são medidos por kits ELISA comerciais. O agonista EP2 causa uma diminuição significativa no TNF-α conforme mostrado na Figura 3.

4. DEMONSTRAÇÃO DE INIBIÇÃO DE LIBERAÇÃO DE CITOCINA TH-1

LINFÓCITO T

4.1 PRINCÍPIO

A ativação de um linfócito T humano por um antígeno apresen- tando célula e antígeno por meio do receptor de células T é imitada em con- dições experimentais pela Iecitina Concanavilina A (ConA). Sabe-se que Co- nA liga-se ao receptor de células T e estimula a célula a liberar várias citoci- nas. Uma das citocinas liberadas por Th-1 é INF-γ. A bioquímica e atividades biológicas de INF-γ são extensivamente revisadas.

4.2 MÉTODO DE DETECÇÃO

INF-γ é um dímero da proteína expressa de aminoácido 143. En- saios imunoenzimáticos ligados à enzima (ELISA) baseados em anticorpos específicos a INF-γ são comercialmente disponíveis. Padrões e amostras são pipetados para as cavidades de uma microplaca. Um anticorpo específi- co a INF-γ humano é adicionado às cavidades. Um substrato é adicionado às cavidades e cor desenvolve na proporção para a quantidade de INF-γ li- gado. A intensidade da cor é medida.

4.3. PROCEDIMENTO

Linfócitos sangüíneos periféricos são isolados de doadores hu- manos usando um gradiente de densidade Ficoll e eritrócitos residuais re- movidos por Iise seletiva. Os linfócitos são cultivados em aproximadamente 106 células por ml em RPM11640 com soro fetal bovino a 10% adicional. As culturas celulares são ativadas com 2 μg/ml de ConA conforme descrito aci- ma. Substância de teste é adicionada sob várias diluições durante a ativação de ConA. As células são incubadas por aproximadamente 18 horas a 37°C. INF-γ liberado durante ativação é medido por ELISA.

5. DEMONSTRAÇÃO DE INIBICÃO DE LIBERAÇÃO DE CITOCINA DE CÉLULAS DENDRÍTICAS DERIVADAS DE MONÓCITO HUMANO

5.1. PRINCÍPIO:

Células dendríticas (CD) são as células que apresentam antígeno mais potente e desempenham um papel central na resposta imune. Após estimulação por meio dos receptores semelhantes a toll CDs expressam e liberam citocinas e quimiocinas pró-inflamatórias e poderão induzir ativação e proliferação de células T naive. A ligação de um agonista EP2 ao receptor EP de CD inibe liberação de interleucina 12 (IL-12) estimulada por Iigante TLR4 (LPS). A ligação de um agonista EP2 ao receptor EP de CD não inibe liberação de interleucina 10 (IL-10) estimulada por Iigante TLR4 (LPS). Por- tanto, um agonista EP2 desvia a diferenciação de células T CD4 longe da linhagem Th.

5.2. MÉTODO DE DETECÇÃO

IL-12 é um heterodímero glicoprotéico 75 kDa (p70) composto de duas subunidades geneticamente não-correlatas ligadas por ligação dissulfe- to. Ensaios imunoenzimáticos ligados à enzima (ELISA) baseados em anti- corpos específicos a IL-12 p70 são comercialmente disponíveis. Padrões e amostras são pipetados para as cavidades de uma microplaca. Um anticorpo específico a IL-12 humana é adicionado às cavidades. Um substrato é adi- cionado às cavidades e cor desenvolve-se na proporção para a quantidade de IL-12 ligada. A intensidade da cor é medida.

IL-10 inicialmente designada fator inibitório de síntese de citocina (CSIF), foi originalmente identificada como um produto de clones Th-2 que suprimiu a produção de citocinas por clones Th-1 que responde à estimula- ção por antígeno na presença de células que apresentam antígeno. IL-10 é um dímero composto de duas subunidades idênticas de 160 aminoácidos. Ensaios imunoenzimáticos ligados à enzima (ELISA) baseados em anticor- pos específicos a IL-10 são comercialmente disponíveis. Padrões e amos- tras são pipetadas para as cavidades de uma microplaca. Um anticorpo es- pecífico a IL-10 humana é adicionado às cavidades. Um substrato é adicio- nado às cavidades e cor desenvolve-se na proporção para a quantidade de IL-10 ligada. A intensidade da cor é medida.

5.3. PROCEDIMENTO

Células dendríticas derivadas de monócito humano são isoladas de doadores humanos usando um gradiente de densidade Ficoll e eritrócitos residuais removidos por Iise seletiva. Microcontas CD14 são usadas para separação de células humanas com base na expressão do antígeno de CD14. As células dendríticas são cultivadas sob aproximadamente 1,5 χ 106 células por ml em RPMI 1640 com soro fetal bovino, 200 ng/ml de GM-CSF (Leucina) e 10 ng/ml de IL-4. As células crescem por um período de 3 dias e em seguida os meios são alterados. Usa-se 10 ng/ml de LPS para ativar as células. Adicionam-se 1 μΜ de substância (agonista de EP2) e 1 μΜ de PGE2 durante a estimulação de LPS. As células são incubadas por aproxi- madamente 18 horas a 37°C. IL-12 e IL-10 liberadas durante ativação são medidas por ELISA.

TABELAS:

Tabela 1 mostra o efeito de substância de teste na liberação de TNF-a de células monocíticas ativadas in vitro. A substância de teste é ad- ministrada em uma concentração de 18 μΜ. As células são ativadas por 18 horas. Substância de teste mostra dose de atividade inibitória responsavel- mente muito alta na liberação de citocina Th-1 de linfócito T.

Tabela 2 demonstra o efeito de substância de teste na inibição de liberação de citocina Th-1 de linfócito Τ. A substância de teste é adicionada dose dependentemente (0-20 nM) a células durante sua ativação por ConA1 as células são incubadas por 18 horas.

Tabelas 3 a) e b) demonstram o efeito de substância de teste na inibição de liberação de citocina de células dendríticas derivadas de monóci- tos humanos. Substância de teste ou PGE2 é adicionada sob uma concen- tração de 1 μΜ durante estimulação de células com LPS. As células são in- cubadas por 18 horas. O composto de teste mostra alta atividade imunomo- duladora no ensaio de liberação de citocina de células dendríticas (CD) deri- vadas de monócito humano e uma supressão da Th-1 que promove citocina IL-12 (3a) embora poupada, de fato aumentou, o Th-2 que promove citocina IL-10 (3b).

FIGURAS:

Figura 1 mostra a expansão de cúmulo induzida pela substância de teste em concentrações de 0,5 μΜ e 1 μΜ. Essa expansão é equivalente à expansão de cúmulo induzida pelo agonista PGE2 de receptor EP2 natural em uma concentração de 1 μΜ (η = 16 complexos cúmulo-oócito por grupo).

Figura 2 mostra a ovulação induzida pela substância de teste in vivo. A substância de teste é administrada em concentrações de 0,00015; 0,0015 e 0,015 mg/animal de 10, 5 horas e 0 hora antes de HCG.

Figura 3 mostra o efeito pela substância de teste sobre ativação de esplenócito de camundongo ex vivo. As células são ativadas com PHA ou ConA. A substância de teste é administrada intraperitonealmente em con- centrações de 1 e 2 μς/βη^Ι 20 minutos antes de sacrifício. TABELA 1: INIBIÇÃO DE LIBERAÇÃO DE TNF-α A PARTIR DE CÉLULAS MONOCÍCLICAS ATIVADAS

<table>table see original document page 38</column></row><table>

TABELA 2: INIBIÇÃO DE LIBERAÇÃO DE CITOCINA TH-1 LINFÓCITO T

<table>table see original document page 38</column></row><table> TABELA 3 A: INIBIÇÃO DE LIBERAÇÃO DE CITOCINA DE CÉLULAS DENDRÍTICAS DERIVADAS DE MONÓCITO HUMANO. MEDIÇÃO DE IL- 12 (PG/ML)

<table>table see original document page 39</column></row><table>

TABELA 3 B: INIBIÇÃO DE LIBERAÇÃO DE CITOCINA DE CÉLULAS DENDRÍTICAS DERIVADAS DE MONÓCITO HUMANO, MEDIÇÃO DE IL- 10 (PG/ML)

<table>table see original document page 39</column></row><table>

Claims (23)

1. Compostos de fórmula geral I <formula>formula see original document page 40</formula> em que R1 é um grupo CH2OH,-COOR2,-CONHR2 ou -CONHR3, R2 é um hidrogênio, um radical C1-C10-alquila que é linear ou ramificado, opcional- mente mono a poliinsaturado e é opcionalmente mono a polissubstituído por halogênio, C1-C4-alcóxi, C3-C10-arila substituída ou C3-C10-aroíla opcional- mente substituída, di-C1-C5-alquilamino ou tri-C1-C5-alquilamino, uma C3-C10-cicloalquila que é opcionalmente substituída por C1- C4-alquila, uma C3-C10-arila que é opcionalmente substituída por fenila, 1- naftila, 2-naftila que por sua vez poderá ser substituída na posição 3 e na posição 4 por flúor, cloro, alcóxi ou trifluormetila ou na posição 4 por hidróxi, halogênio, fenila, um ou mais grupos CrC4alquila, clorometila, fluormetila, trifluormetila, carbóxi, hidróxi ou C1-C4-alcóxi, ou uma C3-C7heterocicloalquila. R3 é um ácido C1-C15-carboxílico ou ácido C1-C15-sulfônico, A é um grupo cis-CH=CH- ou -CH2-CH2-, B é um grupo trans-CH=CH- ou -CH2-CH2-, W é um C2-C6-alquileno, R4 é um grupo hidróxi, um radical O-R6 ou O-R7, em que R6 é um radical tetraidropiranila, tetraidrofuranila, trimetilsilila, terc-butildimetilsilila, terc-butildifenilsilila ou tribenzilsilila e R7 é um ácido C1-C15-carboxílico, R5 é um hidrogênio, um grupo CrCio-alquila ou C1-C10-alquenila, η é ο número 1-4, e os sais dos mesmos, e os clatrados de ciclodextrina dos mes- mos com bases fisiologicamente toleradas.

2. Compostos, de acordo com a reivindicação 1, em que R1 é um grupo CH2OH, -COOR2, -CONHR2 ou -CONHR3, R2 é um hidrogênio ou um radical C1-C10-alquila que é linear ou ramificado, opcional- mente mono a poliinsaturado e é opcionalmente monossubstituído por flúor, cloro ou bromo, por C1-C4-alcóxi, C3-C10-arila substituída ou C3-C10-aroíla opcionalmente substituída, di-C1-C5-alquilamino ou tri-C1-C5-alquilamino. uma C5-C6-cicloalquila que é opcionalmente substituída por C1- C4-alquila, um radical C3-C10-arila que é opcionalmente substituído por fenila que poderá ser substituído na posição 3 ou 4 por flúor, cloro, alcóxi ou triflu- ormetila ou na posição 4 por hidróxi. uma C5-C6-heterocicloalquila que poderá ser interrompida uma ou mais vezes por nitrogênio, oxigênio ou enxofre, R3 é um ácido C1-C10-carboxílico ou ácido CrCio-sulfônico, A é um grupo c/s-CH=CH- ou -CH2-CH2-, B é um grupo írans-CH=CH- ou -CH2-CH2-, W é um C2-C6-alquileno, R4 é um grupo hidróxi, R5 é um hidrogênio, um grupo C1-C6-alquila ou C1-C10-alquenila e η é o número 1-4.

3. Compostos, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que: R1 é um grupo CH2OH, -COOR2, -CONHR2 ou -CONHR3, R2 é um hidrogênio ou uma C1-C4-alquila que é opcionalmente substituída por fenila, uma C5-C6-cicloalquila, uma C3-C6-arila que é opcionalmente substituído por fenila, R3 é um ácido C1-C6-carboxílico ou ácido C1-C6-sulfônico, A é um grupo eis-CH=CH- ou -CH2-CH2-, B é um grupo Jrans-CH=CH- ou -CH2-CH2-, W é um C2-alquileno, R4 é um grupo hidróxi, R5 é um hidrogênio, CrC4-alquila ou CrC5-alquenila saturada e η o número 1-4.

4. Medicamentos que compreendem pelo menos um dos com- postos de fórmula I, como definidos nas reivindicações 1a3.

5. Medicamentos, de acordo com a reivindicação 4, caracteriza- dos pelo fato de que o derivado de prostaglandina de fórmula geral I está presente em uma quantidade eficaz.

6. Compostos, de acordo com as reivindicações 1 a 3, e medica- mentos como definidos nas reivindicações 4 e 5, com substâncias e veículos de formulação adequados.

7. Derivado de prostaglandina de fórmula geral I, como definidos nas reivindicações 1 a3, para uso como um medicamento.

8. Medicamentos, como definidos na reivindicação 7, para pro- mover fertilidade.

9. Medicamentos, como definidos na reivindicação 7, para fertili- zação in vitro.

10. Medicamentos, como definidos na reivindicação 7, para pro- mover ovulação.

11. Medicamentos, como definidos na reivindicação 7, para elimi- nar expansão de cúmulo prejudicada e as seqüelas desta.

12. Medicamentos, como definidos na reivindicação 7, para tratar distúrbios.

13. Medicamentos, de acordo com a reivindicação 12, caracteri- zados pelo fato de que o distúrbio compreende distúrbios de fertilidade.

14. Medicamentos, de acordo com a reivindicação 12, caracteri- zados pelo fato de que o distúrbio compreende menstruação dolorosa.

15. Medicamentos, de acordo com a reivindicação 12, caracteri- zados pelo fato de que o distúrbio compreende endometriose.

16. Medicamentos, de acordo com a reivindicação 12, caracteri- zados pelo fato de que o distúrbio compreende pressão intra-ocular elevada.

17. Medicamentos, de acordo com a reivindicação 12, caracteri- zados pelo fato de que o distúrbio compreende osteoporose.

18. Medicamentos, de acordo com a reivindicação 12, caracteri- zados pelo fato de que o distúrbio compreende pressão sangüínea elevada.

19. Medicamentos, de acordo com a reivindicação 12, caracteri- zados pelo fato de que o distúrbio compreende doenças auto-imunes.

20. Medicamentos, de acordo com a reivindicação 19, nos quais a dita doença auto-imune é selecionada do grupo que consiste em esclerose múltipla, esclerose múltipla secundária progressiva, psoríase, artrite reuma- tóide, doença de Crohn e alopecia areata.

21. Medicamentos, de acordo com a reivindicação 19, nos quais a dita doença auto-imune é esclerose múltipla.

22. Derivado de prostaglandina de fórmula geral I, como definidos nas reivindicações 1 a 3, na forma de um produto farmacêutico para admi- nistração entérica, parenteral, vaginal e oral.

23. Processo para preparação dos compostos, como definidos nas reivindicação 1 a 3, o qual caracterizado pelo fato de que um aldeído de fórmula geral II <formula>formula see original document page 43</formula> em que R1 apresenta o significado dos radicais -COOR2, - CONHR3, e A e R4 apresentam os significados indicados acima, em que o grupo OH livre em R4 é protegido, é reagido com o carbânion da sulfona de fórmula geral III <formula>formula see original document page 44</formula> e acetilação da hidroxissulfona resultante é seguida por eliminação redutora para fornecer a olefina e, onde apropriada, uma desproteção sub- seqüente dos grupos hidróxi que são protegidos em qualquer seqüência e, onde apropriados, esterificação, eterificação e/ou hidrogenação de ligações duplas e/ou esterificação de um grupo carbóxi esterificado (R1 = COOR2) e/ou de um grupo carbóxi livre (COOR2 com R2 = H) e/ou conversão de um grupo carbóxi livre (COOR2 com R2 = H) em uma amida (R1 = CONR2) e/ou redução de um grupo carbóxi livre ou esterificado (R1 = CONHR3).