BRPI0612322A2 - polinucleotìdeo isolado, polipeptìdeo excretado/secretado isolado ou purificado de leishmania major, composição imunogênica, composição de vacina, anticorpo, vetor de clonagem ou de expressão, método para prevenir e/ou tratar um paciente, método para identificar um polipeptìdeo excretado/secretado, uso de um polinucleotìdeo, uso de um polipeptìdeo, métodos de diagnóstico in vitro, kits de diagnósticos, células transformadas ou transfectadas, cepas de leishmania geneticamente modificadas, método para detectar a presença ou a ausência de estimulação linfócita e usos de uma composição - Google Patents

Abstract

POLINUCLEOTIDEO ISOLADO, POLIPEPTIDEO EXCRETADO1SECRETADO ISOLADO OU PURIFICADO DE LEISHMANIA MAJOR, COMPOSIçãO IMUNOGêNICA, COMPOSIçãO DE VACINA, ANTICORPO, VETOR DE CLONAGEM OU DE EXPRESSãO, METODO PARA PREVENIR ElOU TRATAR UM PACIENTE, METODO PARA IDENTIFICAR UM POLIPEPTIDEO EXCRETADOISECRETADO, USO DE UM POLINUCLEOTIDEO, USO DE UM POLIPEPTIDEO, MéTODOS DE DIAGNóSTICO IN ViTRO, KITS DE DIAGNóSTICOS, CéLULAS TRANSFORMADAS OU TRANSFECTADAS, CEPAS DE LEISHMANIA GENETICAMENTE MODIFICADAS, MéTODO PARA DETECTAR A PRESENçA OU A AUSêNCIA DE ESTIMULAçãO LINFóCITA E USOS DE UMA COMPOSIçAO. A presente invenção refere-se às novas proteínas de Leishmania major e as aplicações terapêuticas e diagnósticas destas. Mais particularmente, a presente invenção está relacionada aos polipeptídeos excretados/secretados e polinucleotídeos que codificam os mesmos, composições que constam dos mesmos, e métodos de diagnóstico, vacinação e tratamento da Leishmaniose.

Description

"POLINUCLEOTIDEO ISOLADO, POLIPEPTIDEOEXCRETADO/SECRETADO ISOLADO OU PURIFICADO DE LEISHMANIAMAJOR, COMPOSIÇÃO IMUNOGÉNICA, COMPOSIÇÃO DE VACINA,,ANTICORPO, VETOR DE CLONAGEM OU DE EXPRESSÃO, MÉTODOPARA PREVENIR E/OU TRATAR UM PACIENTE, MÉTODO PARAIDENTIFICAR UM POLIPEPTIDEO EXCRETADO/SECRETADO, USO DE UMPOLINUCLEOTIDEO, USO DE UM POLIPEPTIDEO, MÉTODOS DEDIAGNÓSTICO IN VITRO, KITS DE DIAGNÓSTICOS, CÉLULASTRANSFORMADAS OU TRANSFECTADAS, CEPAS DE LEISHMANIAGENETICAMENTE MODIFICADAS, MÉTODO PARA DETECTAR APRESENÇA OU A AUSÊNCIA DE ESTIMULAÇÃO LINFÓCITA E USOS DEUMA COMPOSIÇÃO "

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se às novas proteínas da LeishmaniaMajor e às aplicações terapêuticas e diagnosticas destas. Maisespecificamente, a presente invenção refere-se aos polipeptídeos excretados/secretados e aos polinucleotídeos que codificam as mesmas, às composiçõescontendo as mesmas, e métodos diagnósticos, de vacinação e tratamento daLeishmaniose.

Antecedentes da Invenção

As Ieishmanioses são um grupo heterogêneo de doenças queafetam milhões de pessoas em áreas tropicais e subtropicais do mundo[Desjeux, 1996]. Dependendo da espécie de Leishmania envolvida e do statusimunológico do hospedeiro humano, a doença pode variar de infecçõesassintomáticas à(s) lesão(ões) cutânea(s) auto-limitante(s) ou a formasviscerais fatais. Durante seu ciclo de vida, os parasitas alternam entre doisestágios: promastigotas flagelados no intestino médio do inseto vetor eamastigotas no macrófago do hospedeiro [Alexander, 1992; Handman, 1999].Neste estágio mais tardio, os parasitas da Leishmania são seqüestrados eresistem no fagolisossomo, originado da fusão dos fagossomos comlisossomos [Handman, 1999; Duelos and Desjardins, 2000; Sacks1 2001; Amerand Swanson, 2002; Cunningham, 2002],

Ao longo das décadas passadas, diversas moléculas quedesempenham um papel importante na biologia do parasita ou servem comoalvos para anticorpos ou respostas celulares foram identificadas. Asobservações precedentes indicam que as moléculas excretadas de patógenosintracelulares como, por exemplo, da Mycobacterium tuberculosis e doToxoplasma gondii contêm antígenos que são altamente imunogênicos eprotetores em modelos vacinais [Prígione, 2000; Mustafa, 2002; Daryanit 2003;Pym, 2003; Shams1 2004], Similarmente, as proteínas do filtrado de cultura dopromastigota de Leishmania eliciam também o aumento da imunidade e aproteção contra infecção de L major em BALB/c [Webb, 1998; Mendez, 2002],Entretanto, não há nenhum dado sobre moléculas secretadas /excretadas noestágio amastigota do parasita, a forma de invasão que se dissemina nohospedeiro mamífero. Devido a sua posição, antígenos secretados /excretadospelos amastigotas de Leishmania são de extrema importância, em parte devidoa sua capacidade gerar peptídeos que podem ser carregados nas moléculas declasse I ou Il da CMH e podem servir como um alvo interessante pararespostas imunes celulares. No contrário, as moléculas liberadas pelofagossomo Leishmania podem também subverter a maquinaria daapresentação associada com a fagocitose mediada pelo retículoendoplasmático, que pode representar uma estratégia de evasão imune paraevitar a resposta imune celular.

Em um esforço para tentar identificar novas moléculas secretadasexcretadas do parasita Leishmania major, utilizamos sobrenadantes de cultura depromastigotas na fase estacionária cultivados durante 8 horas em meio sem soro,no pH e temperatura que mimetiza as circunstâncias do fagossomo, para imunizarcamundongos. O imune será foi então usado para selecionar uma biblioteca deexpressão de cDNA da L major. Um total de 34 clones diferentes foram isolados eseqüenciados. 21% das moléculas exibiam homologia significativa da seqüência aum grupo de proteínas secretadas. Outras não são descritas e constituem novasseqüências. Algumas destas proteínas são candidatas para a análise comocomponentes de vacinas potenciais ou alvos de droga.

Há conseqüentemente uma necessidade na arte de novostratamentos para o HIV ou vacinas que obtenham uma resposta imune ampla, delonga duração e neutralizante. Há também a necessidade de fornecer novosmétodos diagnósticos e imuno-monitoramento com relação a infecções por HIV.

Descrição Resumida Da Invenção

A invenção atual satisfaz pelo menos a uma das necessidadesacima mencionadas.

Mais especificamente, um objetivo da invenção relaciona-se a umpolinucleotídeo isolado que compreende uma seqüência que codifica opolipeptídeo excretado /secretado da Leishmania major, a seqüênciamencionada compreende uma seqüência de nucleotídeo substancialmenteidêntica a uma seqüência selecionada do grupo que consiste da SEQ ID n° 134 e fragmentos funcionais desta.

Outros objetivos da invenção relacionam-se a um polipeptídeoexcretado /secretado isolado ou purificado de Leishmania major, o polipeptídeomencionado compreende uma seqüência de aminoácido substancialmenteidêntica a uma seqüência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID n°:35 a 68 e derivados funcionais desta.

Ainda outro objetivo da invenção é fornecer uma composiçãoimunogênica que gera uma resposta imune contra uma leishmaniose,compreendendo um polinucleotídeo da invenção ou um polipeptídeo dainvenção, e um veículo aceitável.

Ainda em outro objetivo a invenção refere-se a uma composiçãode vacina que gera uma resposta protetora contra a leishmaniose, constandodo polinucleotídeo da invenção ou do polipeptídeo da invenção, e um veículoaceitável.

Ainda em outro objetivo a invenção refere-se a um anticorpoobtido pela imunização de um animal com o polipeptídeo da invenção.

Ainda em outro objetivo a invenção refere-se a um vetor declonagem ou expressão que contêm o polinucleotídeo da invenção.

Ainda em outro objetivo a invenção refere-se a um método paraprevenir e/ou tratar um paciente contra uma infecção por cepa de Leishmaniamajor, o método compreende a etapa de administrar ao paciente umaquantidade terapeuticamente eficaz de uma composição da invenção ou de umanticorpo da invenção.

Ainda em outro objetivo a invenção refere-se a um método paraidentificar um polipeptídeo excretado /secretado de uma cepa de Leishmaniamajor, compreendendo do cultivo in vitro de promastigotas de Leishmania sobcircunstâncias de pH e temperatura encontradas naturalmente em uma célulashospedeira infectada por uma cepa de Leishmania major.

Ainda em outro objetivo a invenção refere-se a um método dediagnóstico in vitro para a detecção da presença ou ausência de anticorpoindicativos de uma cepa de Leishmania major, que se liga a um polipeptídeo dainvenção para formar um imuno-complexo, compreendendo das etapas de:

a) contatar o polipeptídeo mencionado com uma amostrabiológica por um tempo e sob circunstâncias suficientes para formar um imuno-complexo; e

b) detectar a presença ou a ausência do imuno-complexoformado em a).Ainda em um objetivo adicional a invenção refere-se a um kitdiagnóstico para a detecção da presença ou da ausência dos anticorposindicativos de uma cepa de Leishmania major, constando de:

- um polipeptídeo da invenção;

- um reagente para detectar o imuno-complexo polipeptídeo-anticorpo;

- opcionalmente uma amostra de referência biológica sem osanticorpos que se ligam imunologicamente ao peptídeo mencionado; e

- opcionalmente uma amostra de comparação que compreendedos anticorpos que podem se ligar especificamente ao peptídeo mencionado;

onde o polipeptídeo mencionado, o reagente, a amostra dereferência biológica, e a amostra de comparação estão presentes em umaquantidade suficiente para executar a detecção mencionada.

Um objetivo adicional da invenção refere-se a um método dediagnóstico in vitro para a detecção da presença ou ausência dos polipeptídeosindicativos de uma cepa de Leishmania major, que se ligam a um anticorpo dainvenção para formar um imuno-complexo, compreendendo das etapas de:

a) contatar o polipeptídeo mencionado com uma amostra biológicapor um tempo e sob circunstâncias suficientes para formar um imuno-complexo; e

b) detectar a presença ou a ausência do imuno-complexoformado em a).

Ainda em um objetivo adicional da invenção refere-se a um kitdiagnóstico para a detecção da presença ou da ausência de polipeptídeosindicativos de uma cepa de Leishmania major, constando de:

- um anticorpo da invenção;

- um reagente para detectar o imuno-complexo polipeptídeo-anticorpo;

- opcionalmente uma amostra de referência biológica sem ospolipeptídeos que se ligam imunologicamente ao anticorpo mencionado; e

- opcionalmente uma amostra de comparação que compreendedos polipeptídeos que podem se ligar especificamente ao anticorpomencionado;

onde o anticorpo mencionado, o reagente, a amostra dereferência biológica, e a amostra de comparação estão presentes em umaquantidade suficiente para executar a detecção mencionada.

Um objetivo adicional da invenção refere-se a uma cepa deLeishmania geneticamente modificada que consta de pelo menos um gene quetem a seqüência de nucleotídeo compreendendo da seqüênciasubstancialmente idêntica a uma selecionada do grupo que consiste da SEQ IDN0 1 a 34, e onde o pelo menos um gene é sub-expresso comparado a umgene correspondente de uma cepa de Leishmania tipo selvagem.

Um objetivo adicional da invenção refere-se a uma cepa deLeishmania geneticamente modificada que consta de pelo menos um gene quetem a seqüência de nucleotídeo compreendendo da seqüênciasubstancialmente idêntica a uma selecionada do grupo que consiste da SEQ IDn° 1 a 34, e onde a cepa mencionada tem pelo menos um gene inativo.

Um objetivo adicional da invenção refere-se a um método paradetectar a presença ou a ausência da estimulação linfocítica em um pacientecom suspeita de Leishmaniose, compreendendo das etapas de:

a) obter uma amostra contendo linfócitos T do pacientemencionado;

b) contato dos linfócitos T com o polipeptídeo da invenção; e

c) detecção da presença ou ausência de uma respostaproliferativa do linfócito T mencionado ao polipeptídeo.

Um objetivo adicional da invenção refere-se a um método paradetectar a presença ou a ausência da estimulação linfocítica em um pacientecom suspeita de Leishmaniose, compreendendo das etapas de:

a) obter uma amostra contendo linfócitos T do pacientemencionado;

b) contato dos linfócitos T com o polipeptídeo da invenção; e

c) detecção da presença ou ausência de citocinas indicativa daestimulação linfocítica.

Breve Descrição Das Figuras

A figura 1 mostra um SDS-PAGE ilustrando proteínas daLeishmania major excretada /secretada sob diferentes condições de cultura.

Descrição Detalhada Da Invenção

A presente invenção é direcionada aos polipeptídeosexcretado/secretado da Leishmania major e do polinucleotídeo que codifica osmesmos e ao seu uso na preparação das composições e vacinas. Maisespecificamente, a presente invenção está concernida com as composições,vacinas e métodos para fornecer uma resposta imune e/ou uma imunidadeprotetora aos mamíferos contra uma cepa de Leishmania major, bem comométodos para o diagnóstico da Leishmaniose. O termo "leishmaniose" significauma infecção causada por qualquer um dos protozoários flagelados do gêneroLeishmania, tal como a Leishmania major.

Como utilizado no presente, o termo "polipeptídeoexcretado/secretado" de uma cepa de Leishmania major refere-se a umpolipeptídeo que é primeiramente sintetizado no parasita e que seja entãoliberado no meio extracelular por um mecanismo de secreção ou excreção.

Como usado no presente, o termo "resposta imune" refere-se àresposta da célula T ou o aumento nos níveis de anticorpo no soro a umantígeno, ou à presença de anticorpos neutralizando um antígeno, tal comouma proteína da Leishmania major. O termo "resposta imune" deve serentendido como uma resposta humoral e uma resposta celular.O termo "proteção" ou "imunidade protetora" da forma comoutilizado no presente refere-se à capacidade dos anticorpos do soro e/ou daresposta celular induzida durante a imunização de proteger (parcialmente outotalmente) contra a Leishmaniose causada por um agente infeccioso, tal comoa Leishmania major.

Assim, um mamífero imunizado pelas composições ou pelasvacinas da invenção experimentará um crescimento e uma propagação daLeishmania major infecciosa limitada.

Como utilizado no presente, o termo "mamífero" refere-se aqualquer mamífero que for suscetível a infecção por uma cepa de Leishmaniamajor. Entre os mamíferos conhecidos por serem potencialmente infectadospela Leishmania major, estão particularmente os seres humanos.

1. POLINUCLEOTÍDEOS E POLIPEPTÍDEOS

Em um primeiro exemplo de realização da presente invençãoconcerne um polinucleotídeo isolado que compreende uma seqüência quecodifica um polipeptídeo excretado/secretado de Leishmania major, aseqüência mencionada compreende uma seqüência do nucleotídeosubstancialmente idêntica a uma seqüência selecionada do grupo que consisteem SEQ ID No. 1 34 e fragmentos funcionais destas.

Como utilizado no presente, o termo "fragmento funcional" refere-se a um polipeptídeo que possua função ou atividade biológica que éidentificada por um ensaio funcional definido e que está associada a umaalteração biológica, morfológica, ou fenotípica específica em uma célula ou emum mecanismo celular.

Pelo termo "substancialmente idêntico", designa-se que opolinucleotídeo da invenção tem uma seqüência de ácido nucléico que sejapelo menos 65% idêntico, mais especificamente 80% idêntico e maisespecificamente 95% idêntico a qualquer SEQ ID No: 1 a 34.Preferivelmente, o polinucleotídeo da invenção compreende umaseqüência de nucleotídeo substancialmente idêntica a uma seqüênciaselecionada do grupo que consiste na SEQ ID n° 1 13 (Figura 2; Tabela 1:Grupo 1) e fragmentos funcionais desta, ou do grupo que consiste na SEQ IDNo. 14 23 (Figura 3; Tabela 1: Grupo 2) e fragmentos funcionais desta, ou dogrupo que consiste na SEQ ID No. 24 26 (Figura 4; Tabela 1: Grupo 3) efragmentos funcionais desta, ou do grupo que consiste na SEQ ID No. 27 34(Figura 5; Tabela 1: Grupo 4) e fragmentos funcionais desta.

Como utilizado no presente, os termos "isolado ou purificado"significa modificado de seu estado natural "pela mão do homem", isto é, se ocorrerna natureza, este foi modificado ou removido de seu ambiente original, ou ambos.

Por exemplo, um polinucleotídeo ou uma proteína/peptídeo presente naturalmenteem um organismo vivo não "isolado" nem purificado, o mesmo polinucleotídeoseparado dos materiais coexistentes em seu estado natural, obtidos porclonagem, amplificação e/ou de produzido pela síntese química está "isolado"como o termo é empregado no presente. Além disso, um polinucleotídeo ou umaproteína/peptídeo que é introduzido em um organismo pela transformação,manipulação genética ou por qualquer outro método recombinante estão"isolados" mesmo se ainda estiver presente no organismo mencionado.

A "identidade" e "similaridade" da seqüência de aminoácido ou denucleotídeo são determinadas de um alinhamento global ótimo entre as duasseqüências que estão sendo comparadas. Um alinhamento global ótimo éobtido utilizando, por exemplo, o algoritmo de Needleman-Wunsch (Needlemane Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48:443-453). A "identidade" significa que umaminoácido ou um nucleotídeo em uma posição particular em um primeiropolipeptídeo ou polinucleotídeo é idêntico a um aminoácido ou um nucleotídeoque correspondente a um segundo polipeptídeo ou polinucleotídeo que estejaem alinhamento global ótimo com o primeiro polipeptídeo ou polinucleotídeo.Em contraste à identidade, a "similaridade" abrange os aminoácidos que sãosubstituições conservadoras. Uma substituição "conservadora" é toda asubstituição que tiver um score positivo na matriz de substituição blosum62(Hentikoff and Hentikoff, 1992, Proc. NatL Acad. Sei. USA 89: 10915-10919).

Pela indicação "seqüência A é n% similar para a seqüência B significa que n%das posições de um alinhamento global ótimo entre as seqüências AeBconsiste em resíduos ou nucleotídeos idênticos e substituições conservadoras.Pela indicação "seqüência A é n% idêntica à seqüência B" significa que o n%das posições de um alinhamento global ótimo entre as seqüências AeBconsiste em resíduos ou nucleotídeos idênticos.

Como usado no presente, o termo "polinucleotídeo" refere-segeralmente a todo polirribonucleotídeo ou polideoxiribonucleotídeo, que puderser RNA ou DNA não modificado ou RNA ou DNA modificado. Esta definiçãoinclui, sem limitação, DNA de fita única e dupla, DNA que é uma mistura deregiões de fitas únicas ou dupla, ou regiões de fitas simples, dupla ou tripla,RNA de fita simples ou dupla, e RNA que é uma mistura de regiões de fitasúnicas ou dupla, moléculas híbridas que compreendem o DNA e o RNA quepodem ser fita simples ou, mais tipicamente, fita dupla, ou regiões de fita tripla,ou de uma mistura de regiões de fitas simples e dupla. Além disso, o"polinucleotídeo" como utilizado no presente refere-se às regiões de fita triplaque compreendem o RNA ou DNA ou ambos RNA e DNA. As fitas em taisregiões podem ser da mesma molécula ou de moléculas diferentes. As regiõespodem incluir toda ou uma ou mais moléculas, mas envolvem tipicamenteapenas uma região de algumas das moléculas. Uma das moléculas de umaregião helicoidal tripla é freqüentemente um oligonucleotídeo. Como utilizadono presente, o termo "polinucleotídeo" inclui também DNAs ou RNAs comodescrito acima que contém uma ou mais bases modificadas. Assim, DNAs ouRNAs com as estruturas modificadas para a estabilidade ou para outras razõessão "polinucleotídeos" como o termo é pretendido no presente. Além disso,DNAs ou RNAs que compreendem bases incomuns, tais como a inosina, oubases modificadas, como bases tritilatadas, ao nome apenas dois exemplos,são polinucleotídeos como o termo é usado no presente, será apreciado umagrande variedade de modificações feita ao DNA e RNA que servem paramuitas finalidades úteis conhecida por àqueles hábeis na técnica."Polinucleotídeo" abrange os polinucleotídeos ou fragmentos curtos referidosfreqüentemente como oligonucleotídeos. O termo "polinucleotídeo" quandoempregado no presente abrange assim tais formas quimicamente,enzimaticamente ou metabolicamente modificadas dos polinucleotídeos, bemcomo as formas químicas características de DNA e RNA dos vírus e dascélulas, incluindo, por exemplo, células simples e complexas que exibem amesma função biológica que o polipeptídeo codificado pela SEQ ID n° 1 a 34.

O termo "polinucleotídeo" abrange também os nucleotídeos ou fragmentoscurtos, referidos freqüentemente como "oligonucleotídeos", que devido àmutagênese não são 100% idênticos, mas, no entanto codificam a mesmaseqüência de aminoácido.

Em outra incorporação, a presente invenção está relacionada aum peptídeo isolado ou purificado de Leishmania major excretado/secretadoque compreende uma seqüência de aminoácido substancialmente idêntica auma seqüência selecionada do grupo que consiste na SEQ ID n° 35 a 68 ederivados funcionais destes. Pelo termo "substancialmente idêntico", se querdizer que o polipeptídeo da presente invenção tem preferivelmente umahomologia na seqüência de aminoácido de pelo menos 80%, oupreferivelmente uma homologia de 85% em parte ou toda SEQ ID No: 35 a 68.

Ainda, mais preferivelmente, o polipeptídeo compreende umaseqüência de aminoácido substancialmente igual ou é 100% idêntica com aSEQ ID No: 35 a 68.De acordo com um exemplo de realização da invenção preferida,o polipeptídeo da presente invenção compreende uma seqüência deaminoácido substancialmente idêntica a uma seqüência selecionada do grupoque consiste na SEQ ID n° 35 a 47 (Anexo A; Tabela 1: Grupo 1) e derivadosfuncionais deste, ou do grupo que consiste na SEQ ID n° 48 a 57 (Anexo B;Tabela 1: Grupo 2) e derivados funcionais deste, ou do grupo que consiste naSEQ ID n° 58 a 60 (Anexo C; Tabela 1: Grupo 3) e derivados funcionais deste,ou do grupo que consiste na SEQ ID n° 61 a 68 (Anexo D; Tabela 1: Grupo 4) ederivados funcionais deste.

Um "derivado funcional", como é geralmente compreendido eusado no presente, refere-se a uma seqüência da proteína/peptídeo que possuiuma atividade biológica funcional que é substancialmente similar à atividadebiológica da seqüência inteira da proteína/peptídeo. Um derivado funcional deuma proteína/peptídeo pode ou não conter modificações translacionais taiscomo, uma ligação covalente com carboidrato, se tal modificação não énecessária para o desempenho de uma função específica. O termo "derivadofuncional" cuja intenção é "fragmentos", "segmentos", "variantes", "análogos" ou"derivados químicos" de uma proteína/peptídeo.

Como utilizado no presente, o termo "polipeptídeo" refere-se aqualquer peptídeo ou proteína que compreendem dois ou mais aminoácidosunidos por ligações do peptídeo ou por ligações modificadas do peptídeo. O"Polipeptídeo" refere-se a ambas as cadeias curtas, geralmente referidas comopeptídeos, oligopeptídeos e oligômeros e a cadeias mais longas geralmentereferidas como proteínas. Os Polipeptídeos podem conter outros aminoácidosalém dos 20 aminoácidos codificados pelo gene. Os "Polipeptídeos" incluemaqueles modificados não só por processos naturais, tais como processamentoe outras modificações pós-translacionais, mas também por técnicas demodificações químicas. Tais modificações são bem descritas em textos básicose em monografias mais detalhadas, bem como em uma literatura de pesquisavolumosa, e estas são bem conhecidas pelos técnicos hábeis na arte. Apreciar-se-á que o mesmo tipo de modificação pode estar presente no mesmo grau ougrau variante em diversos sítios em um dado polipeptídeo. Além disso, umdado polipeptídeo pode conter muitos tipos de modificações. As modificaçõespodem ocorrer em qualquer lugar de um polipeptídeo incluindo a estruturacentral do peptídeo, nas cadeias laterais do aminoácido, e nos amino oucarboxi-terminal. As modificações incluem, por exemplo, acetilação, acilação,ADP-ribosilação, amidação, ligação covalente da flavina, ligação covalente deuma fração do heme, ligação covalente de um nucleotídeo ou de um derivadodo nucleotídeo, ligação covalente de um lipídio ou de um derivado do lipídio,ligação covalente do fosfotidilinositol, reticulação, ciclização, formação daligação de bissulfeto, demetilação, formação da cisteína, formação dopiroglutamato, formilação, gama-carboxilação, formação de ancoragem da GPI,hidroxilação, iodinação, metilação, miristoilação, oxidação, processamentoproteolítico, fosforilação, prenilação, racemização, glicosilação, ligação delipídio, sulfação, gama-carboxilação de resíduos do ácido glutâmico,hidroxilação, selenoilação, sulfação e adição transferência de RNA mediadapela adicção de aminoácidos a proteínas, como a arginilação, e aubiquitinação. Vide, por exemplo: PROTEINS-STRUCTURE ANDMOLECULAR PROPERTIES, 2a Ed., TE. Creighton, W.K Freeman andCompany, Nova Iorque (1993); Wold, F, Posttranslational Protein Modifications:Perspectives and Prospects, páginas 1-12 em POSTTRANSLATIONALCOVALENT MODIFICATION OF PROTEINS, B.C.Johnson, Ed., AcademicPress, Nova Iorque (1983); Seifter et ai, Meth. Enzvmol. 182:626-646 (1990); eRattan et ai, Protein Synthesis: Posttranslational Modifications and Aging, Ann.N.Y. Acad. Sei. 663: 48-62(1992). Os polipeptídeos podem ser ramificados oucíclicos, com ou sem ramificações. Os polipeptídeos cíclicos, ramificados ecíclicos ramificados podem resultar de processos naturais pós-translacionais epodem também ser feitos por métodos inteiramente sintéticos.

2. Vetores ε Células

Em um terceiro exemplo de realização da invenção é tambémdirecionada a um hospedeiro, tal como uma células geneticamentemodificadas, compreendendo algumas das seqüências do polinucleotídeo deacordo com a invenção e mais preferivelmente, um hospedeiro capaz deexpressar o polipeptídeo codificado por este polinucleotídeo.

Células transformadas ou transfectadas contempladaspreferivelmente pela presente invenção contêm um polinucleotídeo que temuma seqüência que compreende uma seqüência de nucleotídeosubstancialmente idêntica a uma seqüência selecionada do grupo que consistena SEQ ID n° 1 a 13 e fragmentos funcionais desta. Exemplos de tais célulassão aquelas que consistem de uma bactéria Escherichia coli selecionada deum grupo consistindo da bactéria Escherichia coli arquivadas no CNCM sobnúmeros de acesso: I-3394, I-3393, I-3395, I-3396, I-3377, 1-3371, I-3376, I-3373, I-3379, I-3397, I-3384, I-3383 e I-3382 em 24 de fevereiro de 2005.

Outras células transformadas ou transfectadas preferivelmentecontempladas pela presente invenção contém um polinucleotídeo que tem umaseqüência que compreende de uma seqüência de nucleotídeos desubstancialmente idêntica a uma seqüência selecionada do grupo consistindoda SEQ ID n° 14 a 23 e fragmentos funcionais destas. Exemplos de tais célulassão aquelas que consistem de uma bactéria Escheriehia coli selecionada deum grupo consistindo da bactéria Escheriehia coli arquivadas no CNCM sobnúmeros de acesso: I-3386, I-3378, I-3385, 1-3381, I-3372, I-3392, I-3380, I-3367, I-3370, e I-3366 em 24 de fevereiro de 2005.

Outras células transformadas ou transfectadas preferivelmentecontempladas pela presente invenção contém um polinucleotídeo que tem umaseqüência que compreende de uma seqüência de nucleotídeos substancialmenteidêntica a uma seqüência selecionada do grupo consistindo das SEQ ID No. 24 a26 e fragmentos funcionais destas. Exemplos de tais células são aquelas queconsistem de uma bactéria Escherichia coli selecionada de um grupo consistindoda bactéria Escherichia coli arquivadas no CNCM sob números de acesso: I-3365,I-3369 e I-3368 em 24 de fevereiro de 2005.

Outras células transformadas ou transfectadas preferivelmentecontempladas pela presente invenção contém um polinucleotídeo que tem umaseqüência que compreende de uma seqüência de nucleotídeossubstancialmente idêntica a uma seqüência selecionada do grupo consistindodas SEQ ID No. 27 a 34 e fragmentos funcionais destas. Exemplos de taiscélulas são aquelas que consistem de uma bactéria Escheriehia coliselecionada de um grupo consistindo da bactéria Escherichia coli arquivadasno CNCM sob números de acesso: I-3364, I-3387, 1-3391, I-3389, I-3390, I-3388, I-3374, e I-3375 em 24 de fevereiro de 2005.

Em outro exemplo de realização a invenção é direcionada aovetor de clonagem ou expressão que compreende uma seqüência depolinucleotídeo como definido acima, e dirigida mais particularmente a um vetorde clonagem ou de expressão que seja capaz de direcionar a expressão dopolipeptídeo codificado pela seqüência de polinucleotídeo em uma célulacontendo o vetor.

Como utilizado no presente, o termo "vetor" refere-se a umaconstrução de polinucleotídeo projetada para transformação/transfecção deuma ou mais tipos de células. Os vetores podem ser, por exemplo, "vetores declonagem" que são projetados para isolar a propagação e a replicação dosnucleotídeos introduzidos, "vetores de expressão" que são projetados para aexpressão de uma seqüência do nucleotídeo em uma células hospedeira, ou"vetor viral" que é projetado para resultar na produção de um vírusrecombinante ou vírus-igual à partícula, ou "vetores de transferência", quecompreendem os atributos de mais de um tipo de vetor.

Um número de vetores apropriados para a transfecção estáveldas células e das bactérias está disponível publicamente (por exemplo,plasmídeos, adenovírus, baculovírus, baculovírus de levedura, vírus de planta,vírus adeno-associado, retrovírus, vírus da herpes simples, Alfavírus,Lentivírus), assim como métodos para a construção de tais linhagens decélulas. Compreender-se-á que a presente invenção abrange qualquer tipo devetor que contenha a molécula do polinucleotídeo da invenção.

Em outro exemplo de realização a invenção, a invenção estárelacionada com as cepas geneticamente modificadas de Leishmania. Umaprimeira cepa geneticamente modificada preferida de Leishmania consta depelo menos um gene que tem uma seqüência que consta da seqüência denucleotídeo substancialmente idêntica a seqüência selecionada do grupo queconsiste nas SEQ ID n°. 1 a 34, e onde a cepa mencionada tem pelo menos umgene inativo, preferivelmente por knock-out. Uma segunda cepa de Leishmaniageneticamente modificada preferida contemplada pela presente invençãoconsta de pelo menos um gene que tem uma seqüência de nucleotídeosubstancialmente idêntica a uma seqüência selecionada do grupo que consistenas SEQ ID n°. 1 a 34, e onde a cepa mencionada tem pelo menos um genesub-expresso comparado a um gene correspondente de uma cepa deLeishmania tipo selvagem. Os métodos pelos quais tais cepas são modificadasgeneticamente são conhecidos por aqueles hábeis na técnica e não serãodiscutidos adicionalmente.

3. Anticorpos

Em outro exemplo de realização a invenção, a invençãocaracteriza os anticorpos purificados que se ligam especificamente aopolipeptídeo como acima definido ou aos fragmentos isolados ou purificadosdeste. Os anticorpos da invenção podem ser preparados por uma variedadedos métodos usando os polipeptídeos descritos acima. Por exemplo, opolipeptídeo, ou os fragmentos antigênicos deste, podem ser administrados aum animal a fim induzir a produção de anticorpos policlonais.

Alternativamente, os anticorpos usados como descritos nopresente podem ser anticorpos monoclonais, que são preparados usando atecnologia do hibridoma (vide, por exemplo, Hammerling et a/., In MonoclonalAntibodies and T-Cell Hybridomas, Elsevier, NY1 1981).

Como mencionado acima, a presente invenção é dirigidapreferivelmente aos anticorpos que se ligam especificamente aos principaispolipeptídeos excretado/secretado da Leishmania, ou aos fragmentos destecomo está acima definido. Em particular, a invenção caracteriza anticorpos"neutralizantes". Por anticorpos "neutralizantes" entende-se anticorpos queinterferem com algumas atividades biológicas de alguns dos principaispolipeptídeos excretado/secretado da Leishmania. Qualquer ensaio padrãoconhecido por aqueles hábeis na técnica pode ser utilizado para avaliar opotencial neutralizante dos anticorpos. Uma vez produzidos, os anticorposmonoclonais e policlonais são testados preferivelmente para o reconhecimentoespecífico dos polipeptídeos excretado/secretado principais da Leishmania porWestern Blot, pela análise de imunoprecipitação ou por qualquer outro métodoapropriado.

Com relação aos anticorpos da invenção, o termo "se ligaespecificamente" refere-se aos anticorpos que se ligam com uma afinidaderelativamente elevada a um ou mais epítopos de uma proteína de interesse,mas que substancialmente não reconhece e não se liga a outras moléculascom exceção da molécula de interesse. Como utilizado no presente, o termo deafinidade "relativamente elevada" significa uma afinidade de ligação entre oanticorpo e a proteína de interesse de pelo menos 106 M"1, e preferivelmentepelo menos de aproximadamente 107 M"1 e mais preferivelmente de 108 M"1 a1010 M"1. A determinação de tal afinidade é conduzida preferivelmente sobcondições padrão de ligação competitiva por imunoensaio que é deconhecimento comum conhecido por aqueles hábeis na técnica. Como utilizadono presente, o "anticorpo" e os "anticorpos" incluem todas as possibilidadesmencionadas em seguida: os anticorpos ou fragmentos deste obtidos porpurificação, tratamento proteolítico ou por engenharia genética, construçõesartificiais que compreendem anticorpos ou fragmentos deste e construçõesartificiais projetadas para mimetizar a ligação dos anticorpos ou de fragmentosdestes.Tais anticorpos são discutidos em Colcher et ai (Q J Nucl Med 1998;42:225-241). Incluem os anticorpos completos, fragmentos F(ab')2, fragmentosFab, fragmentos Fv, fragmentos scFv, outros fragmentos, peptídeos CDR emiméticos. Estes podem ser facilmente obtidos e preparados por aqueleshábeis na técnica. Por exemplo, a digestão enzimática pode ser usada para seobter fragmentos F(ab')2 e fragmentos Fab sujeitando uma molécula de IgG aoclivagem pela pepsina ou papaína respectivamente. Anticorpos recombinantessão também abrangidos pela presente invenção.

Preferivelmente, o anticorpo da invenção é uma imunoglobulinahumana ou animal, tal como o IgGI, lgG2, lgG3, lgG4, IgM, IgE ou IgDconduzida em ratos ou regiões variáveis de camundongo (quimérico) ou CDRs(humanizados ou "animalizados"). Além disso, o anticorpo da invenção podetambém ser conjugado a qualquer veículo apropriado conhecido por aqueleshábeis na técnica a fim fornecer, por exemplo, a uma entrega específica e umaretenção prolongada do anticorpo, em uma área local alvo ou para umaaplicação sistêmica.

O termo "anticorpo humanizado" refere-se a um anticorpoderivado de um anticorpo não humano, tipicamente murino, que retémsubstancialmente as propriedades de ligação ao antígeno do anticorpo deorigem, mas que é menos imunogênico nos seres humanos. Isto pode serconseguido por vários métodos incluindo (a) montando apenas os CDRs nãohumanos na estrutura humana e em regiões constantes com ou sem retençãode resíduos de estrutura críticos, ou (b) transplantando os domínios variáveisnão humanos inteiros, mas "ocultando" este com uma secção igual a dohumano pela recolocação dos resíduos de superfície. Tais métodos são bemconhecidos para aqueles hábeis na técnica.

Como mencionado acima, o anticorpo da invenção éimunologicamente específico para o polipeptídeo da presente invenção e dosderivados imunológicos deste. Como utilizado no presente, o termo "derivadoimunológico" refere-se a um polipeptídeo que possua uma atividadeimunológica que seja substancialmente similar à atividade imunológica dopolipeptídeo inteiro, e tal atividade imunológica refere-se à capacidade deestimular a produção dos anticorpos imunologicamente específicos para ospolipeptídeos excretado/secretado da Leishmania ou derivados principaisdeste. O termo "derivado imunológico" abrange conseqüentemente"fragmentos", "segmentos", "variantes", ou "análogos" de um polipeptídeo.

4. Composições ε vacinas

Os polipeptídeos da presente invenção, os polinucleotídeos quecodificam o mesmo, e os anticorpos produzidos de acordo com a invenção,podem ser usados de muitas maneiras para o diagnóstico, tratamento ouprevenção da Leishmaniose.

Em outra incorporação, a presente invenção relaciona-se a umacomposição imunogênica que gera uma resposta imune contra a leishmaniose,compreendendo um polinucleotídeo como acima definido ou um polipeptídeocomo acima definido, e um veículo aceitável. De acordo com um aspectorelacionado, a presente invenção relaciona-se a uma composição de vacina quegera uma resposta protegendo contra a leishmaniose, compreendendo umpolinucleotídeo como acima definido ou um polipeptídeo como acima definido, eum veículo aceitável. Como utilizado no presente, o termo "tratamento" refere-se aum processo pelo qual os sintomas da Leishmaniose são aliviados oucompletamente eliminados. Como utilizado no presente, o termo "prevenção"refere-se a um processo pelo qual a Leishmaniose é bloqueada ou atrasada. Acomposição da vacina da invenção compreende de um polinucleotídeo e/ou umpolipeptídeo como acima definido e um veículo aceitável.

Como utilizado no presente, a expressão "veículo aceitável"significa um veículo contendo o polinucleotídeo e/ou o polipeptídeo que podeser injetado o hospedeiro mamífero sem efeitos adversos. Veículos apropriadasconhecidos na arte incluem, mas não estão limitados a, partículas de ouro,água estéril, salina, glicose, dextrose, ou soluções tampão. Veículos podemincluir agentes auxiliares incluindo, mas não limitado a, diluentes, estabilizantes(isto é, açúcares e aminoácidos), conservantes, agentes umectantes, tampõesde pH, aditivos para melhorar a viscosidade, corantes e similares.

Agentes adicionais podem ser adicionados à composição e vacinada invenção. Por exemplo, a composição da invenção pode também constar deagentes tais como drogas, imuno-estimulantes (como, por exemplo, uminterferon-a, interferon-β, interferon-γ, fator estimulador de colônias degranulócitos macrófagos (GM-CSF), fator estimulador de colônias demacrófagos (M-CSF), interleucina-2 (IL-2), interleucina-12 (IL-12) eoligonucleotídeos CpG), antioxidantes, surfactantes, agentes aromatizantes,óleos voláteis, agentes tampões, dispersantes, propelentes e conservantes.

Para preparação de tais composições, métodos bem conhecidos no estado datécnica podem ser utilizados.

A quantidade de polinucleotídeo e/ou polipeptídeo presentenas composições da presente invenção é preferivelmente uma quantidadeterapeuticamente eficaz. Uma quantidade terapeuticamente eficaz depolinucleotídeo e/ou polipeptídeo é uma quantidade necessária parapermitir a mesma performance de seu papel imunológico sem causarefeitos negativos sobre o hospedeiro ao qual a composição é administrada.A quantidade exata de polinucleotídeo e/ou polipeptídeo a ser utilizado e acomposição/vacina a ser administrada irá variar de acordo a fatores comoo tipo de condição a ser tratada, a via de administração, bem como outrosingredientes da composição.

5. Método para Identificação do Polipeptídeo da Invenção

Em um outro objetivo, a presente invenção fornece um métodopra identificar um polipeptídeo excretado/secretado da uma cepa deLeishmania major. O método compreende do cultivo in vivo de promastigotasde Leishmania sob condições de pH e temperatura encontradas naturalmentena células hospedeira infectada pela cepa de Leishmania majorPreferivelmente o pH está próxima de 5,5 e a temperatura próxima de 35 0C.Por "próxima de" entende-se que o valor do dito pH ou temperatura pode variarem uma certa amplitude dependendo da margem de erro do método utilizadopara avaliar tal pH e temperatura.

Em um aspecto relacionado, o polipeptídeo excretado/secretadoidentificado pelo método acima descrito encontra um uso específico como umalvo para droga por identificar uma molécula capaz de prevenir aLeishmaniose.

6. Métodos de Uso

Em outro exemplo de realização, a presente invençãorelaciona-se a um método de prevenir e/ou tratar um paciente contra ainfecção por uma cepa de Leishmania major, o método consta da etapa deadministração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz dacomposição imunogênica e/ou vacina como acima definido e/ou umanticorpo como acima definido.A vacina, anticorpo e composto imunogênico da invenção podeser dada ao paciente através de várias vias de administração. Por exemplo, acomposição pode ser administrada na forma de preparações estéreis injetáveiscomo, por exemplo, injetáveis estéreis aquosos ou suspensões oleaginosas.

Estas suspensões podem ser formuladas de acordo com as técnicasconhecidas usando agentes apropriados de dispersão ou umectantes eagentes de suspensão. As preparações injetáveis estéreis também podem sersoluções ou suspensões injetáveis estéreis em diluentes ou em solventesparenteralmente aceitáveis não tóxicos. Podem ser administradosparenteralmente, por exemplo intravenosamente, intramuscularmente ou sub-cutaneamente por injeção, infusão ou per os. A vacina e a composição dainvenção podem também ser formuladas como cremes, pomadas, loções, géis,gotas, supositórios, pulverizadores, líquidos ou pós para a administraçãotópica. Podem também ser administrados nas vias aéreas de um paciente porum distribuidor de aerossol pressurizado, um pulverizador nasal, umnebulizador, um inalador de dose calibrada, um inalador de pó ou uma cápsula.

As dosagens apropriadas variarão, dependendo de fatores tais como aquantidade de cada um dos componentes na composição, o efeito desejado (acurto ou longo prazo), rota de administração, idade e peso do mamífero a sertratado. Alguns outros métodos bem conhecidos na arte podem ser usadospara administrar a vacina, anticorpo e a composição da invenção.

A presente invenção é direcionada também a um métododiagnóstico iri vitro para a detecção da presença ou ausência dos anticorposindicativos de uma cepa de Leishmania major, que se liga a um polipeptídeo comoacima definido para formar um imuno-complexo, compreendendo as etapas de:

a) contatando o polipeptídeo mencionado com uma amostrabiológica por um tempo e sob condições suficientes para formar a um imuno-complexo; eb) detectar a presença ou ausência do imuno-complexo formadoem a).

Ainda em uma realização adicional da invenção relaciona-se a umkit diagnóstico para a detecção da presença ou da ausência dos anticorposindicativos de uma cepa de Leishmania major, constando de:

- um polipeptídeo da invenção;

- um reagente para detectar o imuno-complexo polipeptídeo-anticorpo;

- opcionalmente uma amostra de referência biológica sem osanticorpos que se liga imunologicamente ao peptídeo mencionado; e

- opcionalmente uma amostra de comparação que compreendedos anticorpos que podem se ligar especificamente ao peptídeo mencionado;

onde o polipeptídeo mencionado, o reagente, a amostra dereferência biológica, e a amostra de comparação estão presentes em umaquantidade suficiente para executar a detecção.

Em uma realização adicional a invenção refere-se a um métodode diagnóstico in vitro para a detecção da presença ou ausência dospolipeptídeos indicativos de uma cepa de Leishmania major, que se ligam a umanticorpo da invenção para formar um imuno-complexo, compreendendo dasetapas de:

a) contatar o polipeptídeo mencionado com uma amostrabiológica por um tempo e sob circunstâncias suficientes para formar um imuno-complexo; e

b) detectar a presença ou a ausência do imuno-complexo formadoem a).

Em uma realização adicional,a invenção relaciona-se a um kitdiagnóstico para a deteção da presença ou da ausência de polipeptídeos indicativosde uma cepa de Leishmania major. Conseqüentemente, o kit consta de:- um anticorpo da invenção como definido acima;

um reagente para detectar o imuno-complexo polipeptídeo-anticorpo;

- opcionalmente uma amostra de referência biológica sem ospolipeptídeos que se liga imunologicamente ao anticorpo; e

- opcionalmente uma amostra de comparação que compreende ospolipeptídeos que podem se ligar especificamente ao anticorpo;

onde o anticorpo mencionado, o reagente, a amostra dereferência biológica, e a amostra de comparação estão presentes em umaquantidade suficiente para executar a deteção mencionada.

"Uma amostra biológica" abrange uma variedade de tipos deamostra obtidas de um indivíduo e pode ser usada em um diagnóstico ouensaio de monitoração. A definição abrange o sangue e outras amostraslíquidas de origem biológica, amostras de tecidos sólidos tais como umespécime de biopsia ou cultura de tecidos ou células e células progenitorasderivadas destes. A definição inclui também amostras que forammanipuladas de qualquer forma após sua obtenção, como pelo tratamentocom reagentes, solubilização ou enriquecimento para determinadoscomponentes, tais como proteínas ou polinucleotídeos. O termo "amostrabiológica" abrange uma amostra clínica, e inclui também células emculturas, sobrenadantes de células, Iisados de células, soro, plasma,líquido biológico e amostras de tecido.

Um objetivo adicional da invenção refere-se a um método paradetectar a presença ou a ausência da estimulação linfocítica em um pacientecom suspeita de Leishmaniose, compreendendo das etapas de:

a) obtenção de uma amostra contendo linfócitos T do pacientemencionado;

b) contato dos linfócitos T com o polipeptídeo da invenção; ec) detecção da presença ou ausência de uma respostaproliferativa do linfócito T mencionado ao polipeptídeo.

Um objetivo adicional da invenção refere-se a um método paradetectar a presença ou a ausência da estimulação linfocítica em um pacientecom suspeita de Leishmaniose1 compreendendo das etapas de:

a) obtenção de uma amostra contendo linfócitos T do pacientemencionado;

b) contato dos linfócitos T com o polipeptídeo da invenção; e

c) detecção da presença ou ausência de citocinas indicativa daestimulação linfocítica

A presente invenção será prontamente compreendida comreferência ao seguinte exemplo. Este exemplo é ilustrativo da amplaaplicabilidade da presente invenção e não pretende limitar sua finalidade.

As modificações e as variações podem ser feitas no presente sem sair doespírito e do escopo da invenção. Embora qualquer método e materialsimilar ou equivalente àqueles descritos no presente possam ser utilizadosna prática para testar a presente invenção, os métodos e os materiaispreferidos estão escritos.

Tabela 1

<table>table see original document page 26</column></row><table><table>table see original document page 27</column></row><table><table>table see original document page 28</column></row><table><table>table see original document page 29</column></row><table><table>table see original document page 30</column></row><table>

Tabela 2

<table>table see original document page 30</column></row><table>Tabela 3

<table>table see original document page 31</column></row><table>Descrição dos Atributos Característicos do Material Biológico

Depositado

pBK15: A bactéria E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 15 da Leishmania major. O Gene 15 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelo plasmídeo recombinante pBK-CMV e pelabactéria XLI-BIue1 respectivamente.

pMQS-20.2: A bactéria E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pMOS-Blue (Amersham) que contém seqüência de DNA quecodifica a proteína 20.2 da Leishmania major. O Gene 20.2 foi clonado nossítios de restrição EcoR V. A bactéria recombinante (transformada) éresistente a tetraciclina e ampicilina. Os genes que conferem resistência àtetraciclina e ampicilina são carregados pelos plasmídeos recombinantespMOS-BIue e bactéria XL1-S/ue, respectivamente.

pBK22: A bactéria E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 22 da Leishmania major. O Gene 22 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I . A bactéria recombinante (transformada) é resistente akanamicina e tetraciclina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-S/ue, respectivamente.

pBK-22s: A bactéria E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 22s da Leishmania major. O Gene 22 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I . A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1 -Blue, respectivamente.

pBK-23 A bactéria E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 23 da Leishmania major. O Gene 22 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente akanamicina e tetraciclina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-S/ue, respectivamente.

pBK-27: A bactéria E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 27 da Leishmania major. O Gene 27 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente akanamicina e tetraciclina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-6/tve, respectivamente.

pBK-31: A bactéria E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 31 da Leishmania major. O Gene 31 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-8/we, respectivamente.

pBK-37: A bactéria E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 37 da Leishmania major. O Gene 37 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-S/we, respectivamente.

pBK-38: A bactéria E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 38 da Leishmania major. O Gene 38 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-fí/t/e, respectivamente.

pBK-66: A bactéria E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 66 da Leishmania major. O Gene 66 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1 -Blue, respectivamente.

pBK-72: A bactéria E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 72 da Leishmania major. O Gene 72 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente akanamicina e tetraciclina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-fí/ue, respectivamente.

pBK-78: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 78 da Leishmania major. O Gene 78 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-S/we, respectivamente.

pMOS-9.2: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pMOS-Blue (Amersham) que contém seqüência de DNA quecodifica a proteína 9.2 da Leishmania major. O Gene 9.2 foi clonado no sítio derestrição EcoR V. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e ampicilina. Os genes que conferem resistência à tetraciclina eampicilina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pMOS-Blue ebactéria XL1 -Blue, respectivamente.

pBK-11: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 11 da Leishmania major. O Gene 11 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1 -Blue, respectivamente.

pBK-12: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 12 da Leishmania major. O Gene 12 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-fí/ue, respectivamente.

pBK-20.1: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 20.1 da Leishmania major. O Gene 20.1 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1 -Blue, respectivamente.

pBK-20.3: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 20.3 da Leishmania major. O Gene 20.3 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1 -Blue, respectivamente.

pBK-22.1: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 22.1 da Leishmania major. O Gene 22.1 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-fí/we, respectivamente.

pBK-26: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 26 da Leishmania major. O Gene 26 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1 -Blue, respectivamente.

pBK-59: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 59 da Leishmania major. O Gene 59 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-8/t/e, respectivamente.

pBK-65: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 65 da Leishmania major. O Gene 65 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-S/ue, respectivamente.

pBK-77: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 77 da Leishmania major. O Gene 77 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-S/we, respectivamente.

pBK-39: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 39 da Leishmania major. O Gene 39 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1 -BIue, respectivamente.

pBK-68: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 68 da Leishmania major. O Gene 68 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-Blue, respectivamente.

pBK-90: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 90 da Leishmania major. O Gene 90 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-e/ue, respectivamente.

pBK-71: Bactérias E. coli XLI-Blue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 71 da Leishmania major. O Gene 71 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-8/t/e, respectivamente.

pBK-42: Bactérias E. coli XLI-Blue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 42 da Leishmania major. O Gene 42 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-8/ue, respectivamente.

pBK-32: Bactérias E. coli XLI-Blue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 32 da Leishmania major. O Gene 32 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-fí/ue, respectivamente.

pMOS-8.2: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pMOS-Blue (Amersham) que contém seqüência de DNA quecodifica a proteína 8.2 da Leishmania major. O Gene 8.2 foi clonado no sítio derestrição EcoR V. A bactéria recombinante (transformada) é resistente aampicilina e tetraciclina. Os genes que conferem resistência à ampicilina etetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pMOS-Blue ebactéria XL1-fí/ue, respectivamente.

pBK-21: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 21 da Leishmania major. O Gene 21 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1 -Blue, respectivamente.

pBK-57: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 57 da Leishmania major. O Gene 57 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1 -Blue, respectivamente.

pBK-74: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 74 da Leishmania major. O Gene 74 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-B/ue, respectivamente.

pBK-13: Bactérias E. coli XLI-BIue são transformadas peloplasmídeo pBK-CMV (Amersham) que contém seqüência de DNA que codificaa proteína 13 da Leishmania major. O Gene 13 foi clonado nos sítios derestrição Xhol e EcoR I. A bactéria recombinante (transformada) é resistente atetraciclina e kanamicina. Os genes que conferem resistência à kanamicina e àtetraciclina são carregados pelos plasmídeos recombinantes pBK-CMV ebactéria XL1-fí/i/e, respectivamente.

O material biológico acima é submetido às seguintes condições.

1- Condições de Cultura

Meio de Cultura

As bactérias recombinantes são crescidas em um meio de culturalíquido, ou um meio de cultura sólido.

O meio de cultura líquido, Luria Broth (LB), é composto de: 1%(peso/volume) de Bactotriptona, 0,5% (p/v) de extratos de levedura e de 1%(p/v) de NaCI. O pH do meio deve ser ajustado para 7. Esse meio épreconizado para a multiplicação dos plasmídeos pBK-CMV contendo os genesdescritos acima respectivamente.

O meio de cultura sólido, Luria Broth Agar (LB-Ágar) é constituído de1% (peso/volume) de Bactotriptona, 0,5% (p/v) de extratos de levedura, de 1% (p/v)de NaCI e de 1,5% (p/v) de ágar. Esse meio é essencialmente preconizado nasculturas realizadas a partir de bactérias recombinantes congeladas a -0,80°C.

Condições de Inoculação

As bactérias recombinantes congeladas a -80DC são colocadasem uma placa contendo o meio de cultura sólido LB-Ágar suplementado com15 pg/ml de tetraciclina e com 50 pg/ml de ampicilina (para as células contendoo plasmídeo recombinante pMOS-Blue ou 15 pg/ml de tetraciclina e com 50pg/ml de kanamicina) (para as células contendo o plasmídeo recombinantepBK-CMV) durante 18 horas a 37 0C. A seguir, uma coluna isolada é coletada eincubada em 5 ml de LB suplementada com os mesmos antibióticos. A culturaé realizada por 18 horas a 37°C.

Incubacão (Temperatura, Atmosfera, Agitação, Iluminação)

A cultura é realizada a uma temperatura de 37 0C sob umaagitação de 200 rpm (aparelho Sanyo Orbital lncubation). A cultura é realizadasob temperatura ambiente e iluminação natural

Condições de Armazenamento

As bactérias recombinantes podem ser armazenadas congelandoà -80 0C em um meio LB1 suplementado com 10% de glicerol. A concentraçãode células pode ser de aproximadamente 109 cfu/mL.

2- Atividades a Serem Verificadas para Confirmar a Viabilidade doMicroorganismo

As bactérias XLI-BIue1 que foram congeladas a - 80°C e que contêm oplasmídeo recombinante pMOS-Blue ou o plasmídeo recombinante pBK-CMV, sãocolocadas em um meioÁgar LB1 suplementado com os 15 μ g/m L do tetraciclina, e 50pg/mL de ampicilina, ou 15 pg /mL de tetraciclina (para as células que contêm osplasmídeos pMOS-Blue), e 50 pg/mL de kanamicina (para as células que contêm osplasmídeos pBK-CMV), por 18h a 37°C. O viabilidade das bactérias congeladas éverificada pela presença ou ausência de colônias bacterianas.

3- Informações Adicionais

Origem do microorganismo

As bactérias não-recombinantes de E. coli XLI-BIue foramcompradas da Stratagen (La Jolla1 Califórnia, EUA). As bactériasrecombinantes que contêm o plasmídeo de interesse foram feitas em nossolaboratório, isto é, Laboratoire dlmmunologie et de Vaccinologie Moleculaire(LIVGM) do instituto Pasteur da Tunísia (Tunísia).EXEMPLOS

identficação das proteínas excretadas/secretadas pelo parasita

Leishmania major

Materiais ε Métodos

Cultura de Parasitas

Um isolado de alta virulência do L major (zymodeme MON25;MHOM/TN/94/GLC94), obtido de lesão humana ZCL foi usado neste estudo[Kebaier, 2001]. Os Parasites foram cultivados em meio NNN a 26 0C e entãoadaptados progressivamente ao meio RPMI 1640 (Sigma, St Louis, Mo.) contendo2 mmol/ml L-glutamina, e 100 U/ml de penicilina, 100 μg/ml de streptomicina e10% de soro bovino fetal inativo pelo calor (meio completo). Promastigotascoletados na cultura na fase de crescimento logarítmico foi ajustado para 106parasitas/ml em um volume constante incubados a 26 °C. A fase estacionária foialcançada após 6 dias com uma concentração do parasita de 8x107 parasitas/ml.

Os promastigotas da fase estacionária foram usados para marcação de proteínase preparação de proteínas excretada/secretada do L. major.

Preparação da Proteína Excretada/Secretada da L. major (LMES)

Os parasitas confluentes de seis frascos de cultura depromastigotas de L.major da fase estacionária foram incubados overnight emmeio RPMI 1640 completo pH 7,6 a 35 0C sob a atmosfera de 5% de CO2. Paraeliminar toda a proteína contaminante do soro bovino fetal, os parasitas foramlavados por seis vezes com meio RPMI 1640. Os parasitas foram entãoresuspendidos a 2x107 parasitas/ml em meio mínimo RPMI pH 5,5 e incubadopor 6 horas a 35°C sob a atmosfera de 5% de CO2. A viabilidade dos parasitasapós 6 horas de incubação foi avaliada pelo teste da exclusão de viabilidadecelular em azul Trypan [Berredo-Pinho, 2001] e encontrado por estar acima de97%. Após esta incubação, o sobrenadante contendo a proteínaexcretada/secretada (LMES) foi coletado por centrifugação a 4000 χ g por 20minutos a 4 0C e a seguir Iiofilizada utilizando um concentrador speed-vaccum(Savant, Holbrook, Nova Iorque). Antes do uso, as proteínas foramreconstituídas com água destilada. As quantidades de proteínas em LMESforam determinadas pelo ensaio de Lowry.

Geração de Soro de Coelho anti-LMES.

Um coelho imunizado por via intramuscular (IM) com 250 pg deLMES emulsionada em adjuvante de Freund incompleto (Sigma, Steinheim,Alemanha). O coelho recebeu uma injeção IM adicional com a mesmaquantidade de proteína emulsionada em adjuvante de Freund incompleto porvia intramuscular 15 dias após a primeira injeção. Um mês mais tarde, umainjeção final com 250 ug de LMES sem adjuvante foi administrada por injeçõesintradérmicas em oito locais diferentes. O coelho foi sangrado 10 dias após ainjeção final. Os soro imune de coelho contra as proteínas excretadas-secretadas foram testadas usando uma imuno-seleção da biblioteca de cDNAda Lmajor e experimentos de imunoprecipitação.

Marcação ε Separação de ProteínasExperimentos de marcação foram realizados em meio a base deMEM livre de metionina (Gibco BRL, Paisley, Escócia) titulado em pH 5,5 com20 mM de ácido succínico [2], Células de promastigotas (1x108 células) de Lmajor em fase estacionária foram pré-incubados por uma hora a diferentestemperaturas e condições de pH (35°C, pH 5,5 e 26°C, pH 7,6) em meiocompleto. Os parasitas foram então marcados por uma incubação adicional pormais 6 horas no mesmo meio contendo 20 pCi/ml de metionina [S35] (atividadeespecífica, >1.000 Ci/mmol; Amersham, Reino Unido). Após a marcação, osobrenadante contendo as proteínas excretadas/secretadas foi coletado porcentrifugação em 4.000 χ g por 20 minutos a 4°C e tratado com uma mistura deinibidores de protease (que contêm pepstatina, Ieupeptina e PMSF, Boehringer,Mannheim, Alemanha). As proteínas radio marcadas liberadas nosobrenadante foram concentrados a 1/10 do volume inicial por centrifugaçãocom um corte de peso molecular nominal de 10.000 em tubos Centricon YM-10(Millipore, Bedford, Mass.) como descrito pelo fabricante. 10 μΙ desobrenadante radiomarcado concentrado foram resuspendidos em tampão deamostra 1x SDS1 e aquecidos a 95°C por 10 minutos e então analisados porSDS-PAGE. O gel foi secado, exposto às películas de X-OMAT™ (EastmanKodak Co, Rochester, Nova Iorque.) e desenvolvido por imersão em umprocesso de raio-X (AGFA-Gevaert, Mortsel, Bélgica).

IMUNOPRECIPITAÇÃO DE PROTEÍNAS MARCADAS

As proteínas excretadas/secretadas radiomarcadas commetionina [S35] foram imunoprecipitadas com o antisoro de coelho contraLMES. Antes da imunoprecipitação, o sobrenadante concentrado de L. majorfoi incubado em tampão NP-40 (50 mM de Tris-Hcl [pH 7,5], 150 mM de NaCI,0.5% [v/v] de Nonidet P-40) na presença de uma mistura de inibidores deprotease (Boehringer, Mannheim, Alemanha). A fração insolúvel foi removidado sobrenadante por centrifugação em 12.000 χ g por 20 minutos a 4°C. Afração do sobrenadante foi incubada overnight a 4°C com 20μΙ do anti-soropara LMES. Os complexos imunes adsorvidos em grânulos de A-SepharoseCL4B da proteína (Pharmacia, Upsália, Suécia) por incubação a 4°C comagitação constante por duas horas. Os grânulos de Sepharose CL4B foramrecuperados por centrifugação, lavados três vezes em tampão NP-40, eseparados por SDS-PAGE seguido por autoradiografia.

IMUNOSELEÇÃO DE BIBLIOTECAS DE CDNA DE L. MAJOR PROMASTIGOTAS

Uma biblioteca de cDNA iniciada pelo oligo(dT) da L. majorpromastigota poli(A) +RNA foi construída em um vetor de expressão por fagoZAP Il de acordo com as instruções do fabricante (Stratagene, La Jolla,Califórnia). A biblioteca resultante foi estimada por conter 1.48 108 unidadesformadoras de placa por ml [4], Um camada de células hospedeiras XL1-MRFinfectadas com 1x 104 PFU do estoque de fago foi preparada em placas deaproximadamente 82 milímetros e incubadas por 8 h a Zl0C. A camada foientão revestida com discos de membranas de nitrocelulose Hybond™ C(Amersham-Life Science, Reino Unido) previamente embebido em 10 mM deisopropil-P-D- tiogalactopiranosida (IPTG) para a indução da expressão daproteína por uma incubação adicional a 37°C overnight. A placa e a membranaforam posicionadas e orientadas para a combinação correspondente da placa eposição da membrana. Aproximadamente 5x105 placas foram selecionadas.Após transferência, as membranas foram lavadas por cinco vezes em TBS-T(20 mM de Tris-Hcl [pH 7,5], 150mM de NaCI, 0,05% de Tween 20 [v/v]) ebloqueadas em 5% de leite em pó desnatado -TBS-T a temperatura ambientepor 1 hora. As membranas da biblioteca de expressão foram incubadas comanti-soro para LMES diluído 1:500 em um solução bloqueadora por 2 h comagitação a temperatura ambiente e com soro pré-imune a 1:500 como controleseguido por três lavagens em TBS-T. Um anticorpo secundário de cabra anti-coelho conjugado com peroxidase (Amersham-Pharmacia1 Reino Unido) diluído1:2.000 em TBS-T foi adicionado às membranas e incubado por 1 h emtemperatura ambiente. Depois de uma lavagem final, a detecção colorimétricafoi executada usando o tetrahidroclorídio de diaminobenzidina (Sigma, St.Louis, MO) em 50 mM de Tris-Hcl [pH 7.6] que contém 0,03% de peróxido dehidrogênio a (Sigma, St Louis, MO). A reação foi bloqueada lavando duasvezes em H2O destilada. As placas positivas tiveram o centro retirado, e o fagorecombinante eluído em 500 μί de tampão SM (50 mM de Tris-HCI [pH 7,5]100 mM de NaCI, 10 mM de MgSO4) contendo 2% de clorofórmio (Stratagenemanual). Estes foram replaqueados a aproximadamente 50 a 200 PFU emplacas de 82 milímetros para seleções secundárias e terciárias usando omesmo soro anti-LMES. Os clones positivos de fago das seleções terceáriasforam submetidos à excisão do vetor do fagomídeo pBK-CMV pelo vetor deexpressão ZAP usando o Kit de excisão ExAssist de acordo com o protocolo dofabricante. O DNA recombinante dos plasmídeos purificados com umamembrana de sílica gel com troca de ânion (Qiagen GmbH, Alemanha) comorecomendado pelo fabricante.

Análise da seqüência de inserções de cdna, bases de dados ε Softwares

Os plasmídeos recombinantes tiveram o DNA seqüenciadousando os primers dos vetores sense T3 (5'-aattaaccctcactaaaggg-3') e anti-sense T7 (5'-gtaatacgactcactatagggc-3') (Stratagene Manual) pelo métodoterminador de cadeia dideoxi que usa terminais fluorescentes BigDye™ noseqüenciador de DNA ABI PRISM 377-A (Perkin-Elmer). A seqüência denucleotídeo dos clones de cDNA isolados foi. comparada com seqüências deácido nucléico conhecidas (Blast e L major OmniBIast) e as seqüências deaminoácido foram deduzidas (Blast, Scanprosite e PSORT II) em várias basesde dados (NCBI, EBI, instituto Sanger e SMART). A presença e posição doslocais de clivagem do peptídeo de sinal nas seqüências de aminoácido doscDNAs traduzidos foram preditas usando o servidor SignaIP(http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/)

Preparação de extrato bruto de e. coli ε análise por Western blot

As culturas de XLI-BIue MRF' que abriga o plasmídeorecombinante pBK-CMV foram diluídas 1:100 em caldo de carne Lauria(Amersham-Pharmacia, Reino Unido) contendo 50 ug do Kanamicina por ml ecrescidas com agitação vigorosa a uma densidade ótica de 600 nanômetro(OD6oo) de 0,6. Isopropil-P-D- tiogalactopiranosida (IPTG) foi adicionado àcultura a uma concentração final de 1 mM, e à cultura foi induzida a crescerpara mais 4 horas. Os extratos brutos de células foram preparados lavando ascélulas com TE (10 mM Tris-Hcl [pH 7,5], e 1 mM de EDTA), resuspendendoem tampão de amostra 1x SDS, e aquecendo a 95°C por 10 minutos. Aproteína foi separada por eletroforese em gel de poliacrilamida contendo.dodecil sulfato de sódio 18% (SDS-PAGE) e transferida para membranas denitrocelulose (Amersham-Pharmacia, Reino Unido) por Western blotting usandoo TransBlotter Bio-Rad (de acordo com o protocolo do fabricante). Apóstransferência, as membranas foram bloqueadas por 1 hora em tampão TBS-Tque contém 3% de leite em pó de 3% (p/v) (que bloqueia a solução) emtemperatura ambiente por 1 hora. A incubação com anti-soro LMES diluído1:500 em solução de bloqueio e com soro pré-imune diluído 1:500 comocontrole foi realizado com agitação por 1 h em temperatura ambiente. Asmembranas de nitro celulose foram então lavadas três vezes com TBS-T antesque a incubação com o anticorpo secundário IgG cabra anti-coelho conjugadocom peroxidase (1: 1000 em 3% leite desnatado em pó -TBS-T 3%) para mais1 h em temperatura ambiente. As membranas de nitro celulose foram lavadaspor mais três vezes em TBS-T1 e reveladas usando um substrato DAB-H202como descrito anteriormente.

Resultados ε Discussão

Caracterização de antígenos excretados-secretados da Leishmania majorA fim de identificar as proteínas que os parasitas daLeishmania possivelmente liberam no vacúolo fagolisossomal demacrófagos hospedeiros, os promastigotas da fase estacionária foramexpostos às circunstâncias que mimetizam parcialmente o ambiente dovacúolo dos macrófagos. Conseqüentemente, os promastigotas dosisolados de L. major GLC94 foram cultivados primeiramente em meiocompleto pH 7,5 e a 26°C até que a fase estacionária fosse alcançada. Osparasitas foram marcados in-vivo pela incubação com metionina S35 em pH5,5 a 35°C. Culturas controle. Foram mantidas em pH 7,5 a 26°C. Umperíodo curto de incubação de apenas 6 horas foi usado para evitar amorte excessiva de células e a liberação de proteínas pelos parasitasmortos. As proteínas radiomarcadas liberadas nos meios de cultura foramconcentradas usando o centricon YM-10 Centrifugai Filtere analisadas porSDS-PAGE (figura 1 bandas 1 e 3). Como esperado, diversas proteínasforam detectadas em ambas as condições de cultura. Interessantemente, oteste padrão destas proteínas foi diferente. Em pH 7,5 a 26°C, poucasproteínas foram observadas com as 3 proteínas principais que migram aum peso molecular de 70 kDa, 66 kDa e 50 kDa (figura 1, banda 1). Emcontraste, em pH 5,5 a 35°C, diversas proteínas foram detectadas variandode 15 kDa a 70 kDa MW (figura 1, banda 2). Interessantemente, duasproteínas com um peso molecular de aproximadamente 50 kDa e 30kDaparecem ser altamente induzidas por estas condições de cultura.

A fim de caracterizar as proteínas observadas, o anti-soropoliclonal de coelho contra aos produtos excretados-secretados dos parasitasL major (anti-LMES) foi usado para imunoprecipitar elas. Como mostrado nafigura 1, em pH 5,5 a 35°C, o anti-LMES reage essencialmente com umaproteína de 50kDa.

Para identificar os antígenos excretados pela Leishmania, o anti-LMES foi usado para isolar clones de uma biblioteca de expressão de cDNAdos promastigotas da L. major. De uma seleção de aproximadamente 5x105placas, 52 clones imunoreativos foram isolados e seqüenciados. A análise dasseqüências isoladas revela que algumas delas eram idênticas econseqüentemente um total de 34 clones foram diferentes. A pesquisa deseqüências para a homologia de clones isolados com as seqüênciasconhecidas foi realizada usando diversos programas de bioinformática; Blast daNCBI e EBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov, http://www.ebi.ac.uk) e L.majorOmniBIast da Sanger Institute (http://www.sanqer.ac.uk).

Os programas de servidores para nucleotídeo e peptídeorevelaram que 62% dos clones de cDNA apresentavam homologiassignificativas com os genes conhecidos de proteínas de Leishmania e de outrasespécies (tabela 1). As fases aberta de leitura potenciais (ORFs) foramidentificados usando a tradução múltipla (http://www.infobioqen.fr/) e a análisede seqüência das proteínas foram realizadas usando o Blast da NCBI e EBI1SMART (http://smart.embl-heidelberg.de), Scanprosite (http://au.expasy.org),PSORT Il (http://psort.nibb.ac.jp) e o servidor SignaIP(http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP).

LmPDI

O PDI é um membro da superfamília da tioredoxina que écomposta de diversas proteínas redox que desempenham um papel chavena formação, isomerização e redução da ligação de bissulfeto no ER1 eisto indica a atividade chaperona [Ferrari, 1999; Wilkinson, 2004]. Estasmoléculas são essenciais para que as proteínas desenoveladas"unfolded" ou enoveladas incorretamente alcancem seu estado nativo[Ferrari, 1999; Wilkinson, 2004], As localizações celulares diferentesforam atribuídas à família da Proteína Dissulfeto Isomerase (PDI).Primeiramente, no lúmen do retículo endoplasmático através de seuKDEL sinal de retenção ER1 o segundo, na membrana plasmática efinalmente, liberado no espaço extracelular [Turano, 2002; Geldof, 2003].A Proteína Dissulfeto Isomerase da Leishmania major (LmPDI) tem sidodescrita recentemente como uma proteína putativa de virulência doparasita [Ben Achour, 2002], Na realidade, o gene LmPDI está expressopredominantemente, em níveis de mRNA e proteína, tanto em isoladosaltamente virulentos como em isolados de baixa virulência. Além disso, osinibidores específicos de PDI retiraram a atividade enzimática da proteínarecombinante LmPDI e afetaram profundamente o crescimento doparasita in vitro e in- vivo. Entretanto, o mecanismo pelo qual o LmPDIexcretado/secretado pode afetar a virulência do parasita é atualmentedesconhecido.PSA-2

As proteínas complexas do Antígeno de Superfície dePromastigotas 2 (PSA-2) são proteínas específicas do protozoário. A funçãoexata da proteína PSA-2 não é conhecida mas sua localização, expressão eimunogenicidade foram inteiramente caracterizadas na Leishmania. O PSA-2da Leishmania é uma família de polipeptídeos ancorados a fosfolipídiosglicosilinositol. Interessantemente, diversos estudos descreveram as proteínasPSA-2 como proteínas excretadas/secretadas [Symons, 1994; Webb1 1998].

Além disso, os genes da família PSA-2 são expressos diferencialmente duranteo ciclo de vida do parasita [Handman, 1995; Jimenez-Ruiz1 1998], Alguns delessão expressos mais na fase estacionária dos promastigotas e podem estarenvolvidos na metaciclogênese. Outros membros desta família são expressosessencialmente por amastigotas de Leishmania, o que sugere que podemexercer sua função durante o estágio intracelular do parasita. Aimunogenicidade das proteínas PSA-2 complexas foi bem estudada no serhumano e em modelo de Ieishmaniose experimental em camundongo, edemonstrou-se que a proteína PSA-2 induz uma resposta tipo Th 1 em ambosos pacientes com CL auto-resolvido e em camundongos infectados [Handman,1995; Kemp, 1998]. Além disso, a proteína PSA-2 induz uma proteçãosignificante do camundongo contra o ataque parasitário utilizando Leishmaniavirulenta [Handman, 1995].

HSP-70

As proteínas de choque térmico 70 são altamente conservadasentre as diferentes espécies (.Archaea, eubacteria e eucariotos) e altamenterepresentadas sob circunstâncias de estresse celular. A HSP-70 apresentaatividade de chaperona e está conseqüentemente envolvida no enovelamentoe no transporte de proteínas [Bassan, 1998]. Interessantemente, estudosrecentes mostraram que estas proteínas inibem especificamente a apoptosecelular [Garrido, 2003]. De maneira interessante, a HSP-70 foi descrita comouma proteína excretada/secretada [Pockley, 1998; 1999; Rea1 2001].

Na Leishmania, o gene da hsp 70 foi bem caracterizado e comodescrito para os genes hsp70 das diferentes espécies, sua expressão estáaumentada, in vitro e in vivo, em resposta a um calor e/ou um estresseoxidante [Garlpati, 1999], Esta resposta pode estar envolvida na sobrevivênciae proliferação do parasite em células hospedeiras de mamíferos. Também foidescrito que as proteínas Hsp70 dos trypanosmatidae indicaram propriedadesimuno estimulatórias elevadas. Recentemente, Planelles et al, (2001)demonstraram que a imunização de DNA de camundongos com Trypanosomacruzi com os genes KMP11-HSP70 fundidos eliciou uma resposta imunehumoral de longa duração da imunoglobulina G2a contra à proteína KMP11 e aativação de linfócitos T citotóxicos CD8+ específicos para KMP-11. Além disso,a proteção contra o ataque do parasita foi observada nos camundongosimunizados com o gene quimérico [Planelles, 2001], NA Leishmania, a nucleaseP4 fundida com a Hsp70 (P4/Hsp70) foi proposta como uma vacina candidata[Campbell, 2003], Demonstrou-se que o P4/Hsp70 induz um perfil Th1 de citocinanos camundongos BALB/c imunizados por uma vacina de DNA que contém genesP4/Hsp70 fundidos. Além disso, a vacina de DNA que codifica a P4/HSP70 induzuma proteção significativa contra o ataque da L.major foi descrito por Rico etai.(2002) que proteínas de choque térmico Hsp70 e Hsp83 da Leishmania, sãopotentes mitogênicos para os esplenócitos murinos. A incubação in vitro de célulasde baço com a Hsps da Leishmania leva à expansão de populações de B220,sugerindo um efeito direto destas proteínas nos linfócitos B, uma indicação que asproteínas MBP-Hsp70 e MBP-Hsp83 recombinantes se comportam comomitógenos de células B independentes de células T. Além disso, ambas asproteínas podem induzir a proliferação em populações de células B purificadas dobaço de BALB/c [Rico, 2002].Catepsina L-similar a frotease

As proteínas catespina L são membros da superfamília da papaína esão expressas por diversas espécies. No parasita Faciola hepatica a proteasecatepsina L foi bem estudada e foi demonstrado que esta proteínaexcretada/secretada estava envolvida na virulência do parasita [Collins, 2004],Recentemente, foi demonstrado que esta pode constituir um bom candidato paravacina [Dalton, 2003; Harmsen, 2004], Na Leishmania, as proteinases de cisteínaforam também descritas como fatores de virulência [Motram, 1996; Matlashewki12001]. O gene da catepsina L-similar a proteinase é estágio regulado com elevadaexpressão nos amastigotas, baixa expressão em metacíclicos e mais baixa noprocíclicos [Souza, 1994], Estes resultados sugerem que esta enzima podedesempenhar um papel importante na sobrevivência intracelular do parasita.

KMP-11

A proteína 11 de membrana do cinetoplasto (KMP-11) é umaglicoproteína de superfície de parasitas cinetoplastidae. Na Leishmania, oKMP-11 está fortemente associada com o Iipofosfoglicano (LPG) e contribuicom a sua estabilidade. O KMP-11 é expresso na superfície do parasitas nosestágios promastigotas e amastigotas [Tolson, 1994; Jardim, 1995],Mukhopadhyay et ai (1998), demonstraram que a proteína KMP-11 pode estarenvolvida com a virulência da Leishmania [Mukhopadhyay, 1998], Além a seupapel no patogenicidade do parasita, o KMP-11 foi proposto por diferentesautores como um bom candidato para vacina. Na realidade, foi descrito porestimular potentes respostas Iinfoproliferativas e de anticorpo em pacientescom Ieishmaniose ou em camundongos experimentalmente infectados [Jensen,1998; Requena1 2000; Delgado, 2004]. Interessantemente, um efeito protetorforte foi observado nos camundongos vacinados com células de Langerhanspulsadas com diferentes antígenos de Leishmania, KMP-11, LACK, PSA-2 egp63 após um ataque virulento com L. major [Berberich1 2003],Espermidina Sintase

A proteína espermidina sintase está envolvida na via dabiosintética poliamina [Kaiser, 2003], A espermidina sintase catalisa asíntese de espermidina transferindo um grupo propilamina de um S-adenosilmetiionina decarboxilado a uma putrescina. A espermidina sintaseestá bem conservada entre as diversas espécies [Kaiser, 2003]. Nosprotozoa i ncluindo a Leishmania, a espermidina pode desempenhar umpapel crucial na proliferação celular, diferenciação celular, e na biosíntesede macromoléculas [Kaiser, 2003]. Poliaminas de protozoa alvejadas porquimioterapia pode constituir uma nova maneira para identificação denovas drogas anti-leishmaniose [Kaiser, 2003]. De fato, estudos recentesdemonstraram que inibidores específicos da espermidina sintase diminuema proliferação do parasita [Kaiser, 2003],

Citocromo C

Citocromos c podem ser definidos como proteínas detransferência de elétrons que possuem um ou diversos grupos heme C, aligação da proteína por uma ou mais, geralmente duas, ligações detioésteres envolvendo grupos sulfidrila de resíduos de cisteína. O Cyt cpossui uma ampla escala de propriedades e função em um grande númeroprocessos redox diferentes [Namslauer, 2004], Esta proteína é liberada nomeio de cultura extracelular nas etapas precoces da apoptose celular[Saelens, 2004], Um estudo recente demonstrou que a apoptose induzidada Leishmania é acompanhada pela liberação de citocromo c dasmitocôndrias [Akarid, 2004], Interessantemente, o citocromo C doMycobacterium tuberculosis induz a secreção de IFN-gama e a proliferaçãode PBMC humana em indivíduos positivos para a proteína purificadaderivada (PPD) [Moran, 1999], Deste modo, este foi proposto como umbom candidato para vacina.Proteínas Ribossomais ε Proteínas Associadas com o Proteasoma

Dois tipos de família de proteínas ribossomais foram detectadosno meio de cultura: aquelas associadas com a subunidade grande (L) eaquelas associadas com a subunidade pequena (S) do ribossomo. Todas estasproteínas são bem conservadas entre as espécie eucariotas e procariotas.

Relatou-se que diferentes proteínas ribossomais são liberadas no meio decultura de patógenos incluindo a Leishmania [Ouaissi, 2004], Além disso, aproteína ribossomal L7/L12 da Brucella abortus foi proposta como um bomcandidato para a vacina. Na realidade, está confere uma proteção no modelode camundongo após o ataque virulento [Kurar, 1997; Pontes, 2003]. NaLeishmania, Probst et ai, (2001) utilizando linhagens de células T parasita-específicas derivadas de um doador imune demonstraram que a proteínaribossomal S4 induz respostas Iinfoproliferativas elevadas associadas a umasecreção de quantidades significativas de IFN-γ [Probst, 2001], A análise daseqüência das proteínas ribossomais da Leishmania não revelou nenhumpeptídeo sinal e deste modo não está claro por quais mecanismos elespuderam ser secretados. Duas proteínas com homologias significativas comproteínas associadas ao proteasoma também foram liberadas no meio decultura. Estas proteínas podem estar envolvidas em processos proteolíticosintracelulares do parasita. Assim como as proteínas ribossomais, estasproteínas são desprovidas de peptídeo sinal e conseqüentemente, osmecanismos pelos quais estas proteínas são exportadas para fora do parasitapermanecem indeterminadas.

Proteínas de Leishmania que não Apresentaram Homologias com ProteínasConhecidas

Treze proteínas detectadas no meio de cultura nãocorresponderam às proteínas descritas nas bibliotecas de seqüências.

Entretanto a maioria destas proteínas mostrou domínios funcionaisconservados muito específicos e quase todas tinham um peptídeo sinal.

Estudos adicionais estão em andamento para caracterizar estas proteínas.

Referências

Akarid K, Arnoult D. Micic-Polianski J. Sif J. Estaquier J, AmeisenJÇ. Leishmania major-mediated prevention of programmed cell death inductionin infected macrophages is associated with the repression of mitochondrialrelease ofcytochrome c. J Leukoc Biol. 2004 Jul;76(1):95-103.

Bassan M, Zamostiano R, Giladi E et al. The Identification ofsecreted heat shock 60-like protein from rat glial cells and a humanneurobiastoma cell tine. Neurosci Lett 1998;250:37-40.

Berberich C1 Ramirez-Pineda JR. Hambrecht C. Alber G1 SkeikvYA. Moll H. Dendritic cell (DC)-based protection against an intracellularpathogen is dependent upon DC-derived IL-12 and can be induced bymolecularly defined antigens. J Immunol. 2003 Mar15;170(6):3171-9.

Berredo-Pinho M, Peres-Sampaio CE. Chrispim PP. Belmont-Firpo R.Lemos AP. Martiny A, Vannier-Santos MA. Mever-Femandes JR. A Mg-dependentecto-ATPase in Leishmania amazonensis and its possible role in adenosineacquisition and vimlence. Arch Biochem Biophys. 2001 Jul 1;391(1):16-24.

Campbell K, Diao H, Ji J, Soonq L DNA immunization with thegene encoding P4 nuclease of Leishmania amazonensis protects mice againstcutaneous Leishmaniasis. Infect Immun. 2003 Nov;71(11):6270-8.

Collins PR. Staek CM. O1NeiII SM. Dovle S. Rvan T. Brennan GP.Mouslev A. Stewart M. Maule AG. Dalton JP. Donnellv S. Cathepsin L1, themajor protease involved in Iiver fluke (Fasciola hepatica) virulence: propetidecleavage sites and autoactivation of the zymogen secreted from gastrodermalcells. J Biol Chem. 2004 ;279( 17): 17038-46.

Dalton JP. Neill SO, Stack C. Collins P. Walshe A. Sekiva M.Doyle S. Mulcahy G1 Hoyle D, Khaznadii E1 Moire N, Brennan G. Mouslev A.Kreshchenko Ν, Maule AG. Donnellv SM. Fasciola hepatica cathepsin L-Iikeproteases: biology, function, and potential in the development of first generationIiverfluke vaccines. IntJ Parasitol. 2003 Sep 30;33(11 ):1173-81. Review.

Daryani A. Hosseini AZ. Daiimi A. Immune responses againstexcretado/secretado antigens of Toxoplasma gondii tachyzoites in the murinemodel. Vet Parasitol. 2003 Apr 18; 113(2): 123-34.

Delgado G. Parra-Lopez CA. Vargas LE1 Hova R. Estupinan M1Guzman F. Torres A. Alonso C. Velez IP, Spinel C. Patarrovo ME. Characterizingcellular immune response to kinetoplastid membrane protein-11 (KMP-11) duríngLeishmania (Viannia) panamensis infection using dendrític cells (DCs) as antigenpresenting cells (APCs). Parasite Immunol. 2003;25(4): 199-209.

Garlapati S. Dahan E. Shapira M. Effect of acidic pH on heatshock gene expression in Leishmania. Mol Biochem Parasitol. 1999 May15;100(1):95-101.

Garrido C. Schmitt E. Cande C. Vahsen N. Parcellier A. KroemerG. HSP27 and HSP70: Potentially oncogenic apoptosis inhibitors. Cell Cycle.2003 Nov-Dec;2(6):579-84.

Geldhof P, Vercauteren I. Knox D. Demaere V. Van Zeveren A,Berx G. Vercruysse J. Claerebout E. Protein disulphide isomerase of Ostertagiaostertagi: an excretory-secretory product ofL4 and adult worms? Int J Parasitol.2003 Feb;33(2): 129-36.

Handman E. Osborn AH. Svmons F. van Driel R. Cappai R. TheLeishmania promastigote surface antigen 2 complex is differentially expressedduríng the parasite Iife cycle. Mol Bioehem Parasitol. 1995 Nov;74(2): 189-200.Handman E. Svmons FM. Baldwin TM1 Curtis JM. Seheerlinek JP.

Protective vaccination with promastigote surface antigen 2 from Leishmaniamajor is mediated by a TH1 type of immune response. Infect Immun. 1995Nov;63(11):4261-7.Harmsen MM, Comelissen JB. Buiis HE, Boersma WJ. JeurissenSH. van Milliqen FJ. Identification of a novel Fasciola hepatica cathepsin Lprotease containing protective epitopes within the propeptide. Int J Parasitol.2004 May;34(6):675-82.

Jensen AT. Gasim S, Ismail A, Gaafar A, Kurtzhals JA, Kemp M.

El Hassan AM, Kharazmi A, Theander TG. Humoral and cellular immuneresponses to synthetic peptides of the Leishmania donovani kinetoplastidmembrane protein-11. Scand J Immunol. 1998 Jul;48(1):103-9.

Jimenez-Ruiz A, Boceta C, Bonay P, Requena JM, Aionso C.Cloning, sequencing, and expression of the PSA genes from Leishmaniainfantum. EurJ Biochem. 1998 Jan 15;251(1-2):389-97.

Kaiser AE, Gottwald AM. Wiersch CS, Maier WA, Seitz HM.Spermidine metabolism in parasitic protozoa-a comparison to the situation inprokaryotes, viruses, plants and fungi. Folia Parasitol (Praha). 20031Mar;50(1):3-18.

Kemp M. Handman E, Kemp K, Ismail A. Mustafa MP. KordofaniAY1 Bendtzen K. Kharazmi A, Theander TG. The Leishmania promastigotesurface antigen-2 (PSA-2) is specifically recognised by Th 1 cells in humans withnaturally acquired immunity to L. major.

Kurar E, Splitter GA. Nucleic acid vaccination of Brucella abortusribosomal L7/L12 gene elicits immune response. Vaccine. 1997 Dec; 15(17-18):1851-7.

Matlashewski G. Leishmania infection and virulence. MedMicrobiol Immunol (Berl). 2001 Nov;190(1-2):37-42..

Mendez S. Belkaid Y, Seder RA, Saeks P. Optimization of PNAvaccination against cutaneous Ieishmaniasis. Vaccine. 2002 Nov 1,20(31-32):3702-8.

Moran AJ. Poran JL. Wu J. Treit JP. Ekpo P. Kerr VJ. Roberts AP.Orme IM. Galant S. Ress SR, Nano FE. Identification of novel immunogenicMycobacterium tuberculosis peptides that stimulate mononuclear cells fromimmune donors.

Mottram JC, Souza AE1 Hutchison JE. Carter R, Frame MJ,Coombs GH. Evidence from disruption of the Imcpb gene array of MexieanLeishmania that eysteine proteinases are virulenee faetors.

Mukhopadhvav S. Sen P, Maiumder HK, Roy S. Redueedexpression of lipophosphoglyean (LPG) and kinetoplastid membrane protein(KMP)-H in Leishmania donovani promastigotes in axenie eulture. J Parasitol.1998 Jun;84(3):644-7.

Mustafa AS. Pevelopment of new vaeeines and diagnostiereagents against tuberculosis. Mol Immunol. 2002 Sep;39(1-2):113-9.

Namslauer A. Brzezinski P. Structural elements involved ineleetron-eoupled proton transfer in eytoehrome e oxidase. FEBS Lett. 2004 Jun1;567(1): 103-10.

Saelens X, Festiens N1 Vande Walle L, van Gurp M, van Loo G,Vandenabeele P. Toxic proteins released from mitoehondria in eell death.Oncogene. 2004 Apr 12;23(16):2861-74.

Ouaissi A, Ouaissi M. Tavares J, Cordeiro-Da-Silva A. Host CellPhenotypie Variability Indueed by Trypanosomatid-Parasite-ReleasedImmunomodulatory Faetors: Physiopathological Implieations. J BiomedBiotechnol. 2004;2004(3): 167-174.

Pocklev AG, Shepherd J, Corton JM. Deteetion of heat shoekprotein 70 (Hsp70) and anti-Hsp70 antibodies in the serum of normalindividuais. Immunol Invest 1998;27: 367-77.

Pocklev AG. Bulmer J, Hanks BM. Wriqht BH. Identifieationofhumanheat shoek protein 60 (Hsp60) and anti-Hsp60 antibodies in the perípheraleireulation of normal individuais. Cell Stress Chaperones 1999;4: 29-35Pontes PS, Dorella FA. Ribeiro LA. Mivoshi A. Le Loir Y, Gruss A.Oliveira SC1 Langella P, Azevedo V. Induction of partial protection in mice afteroral administration of Lactococcus Iaetis produeing Brueella abortus L7/L12antigen. J Drug Target. 2003; 11(8-10):489-93.

Planelles L. Thomas MC. Alonso C. Lopez MC. DNA immunizationwith Trypanosoma eruzi HSP70 fused to the KMP11 protein elieits a eytotoxieand humoral immune response against the antigen and Ieads to protection.Infect Immun. 2001 Oct;69(10):6558-63.

Priqione I, Facchetti P. Lecordier L, Deslee D, Chiesa S. Cesbron-Delauw MF1 Pistoia A T eell clones raised from chronically infected healthyhumans by stimulation with Toxoplasma gondii excretory-secretory antigenscross-react with Iive tachyzoites: characterization of the fine antigenic specificityof the clones and implications for vaccine development. J Immunol. 2000 Apr1;164(7):3741-8.

Probst P. Stromberq E. Ghaiib HW. Mozel M. Badaro R. Reed SG.Webb JR. Identification and characterization of T cell-stimulating antigens fromLeishmania by CD4 T cell expression cloning. J Immunol. 2001 Jan1;166(1):498-505.

Pvm AS. Brodin P. Mailessi L. Broseh R. Demanqel C. Williams A.Griffiths KE, Marchai G. Leelere C. Cole ST. Recombinant BCG exportingESAT-6 confers enhanced protection against tuberculosis. Nat Med. 2003May;9(5):533-9.

Ramirez JR. Gilehrist K. Robledo S. Sepulveda JC. Moll H. SoldatiP. Berberieh C. Attenuated Toxoplasma gondii ts-4 mutants engineered toexpress the Leishmania antigen KMP-11 elicit a specific immune response inBALB/cmice.yaccine. 2001 Nov 12;20(3-4):455-61.

Rea IM, MeNerIan S, Poeklev AG. Serum heat shock protein andanti-heat shock protein antibody leveis in aging. Exp Gerontol 2001 ;36: 341-52Requena JM, Soto M1 Poria MP. Alonso C. Immune andclinicai parameters associated with Leishmania infantum infection in thegolden hamster model. Vet Immunol Immunopathol. 2000 Oct 31 ;76(3-4):269-81.

Rico Al. Girones N1 Fresno M, Alonso C, Requena JM. The heatshock proteins, Hsp70 and Hsp83, of Leishmania infantum are mitogens formouse B cells. Cell Stress Chaperones. 2002 Oct;7(4):339-46.

Shams H. Klucar P. Weis SE. Lalvani A. Moonan PK. Safi H.Wizel B1 Ewer K. Nepom GT. Lewinsohn PM. Andersen P. Barnes PF.Characterization of a Mycobacterium tuberculosis peptide that is recognized byhuman CP4+ and CP8+ T cells in the context of multiple HLA alleles. JImmunol. 2004 Aug 1;173(3):1966-77.

Souza AE. Bates PA1 Coombs GH1 Mottram JC. Null mutants forthe Imcpa cysteine proteinase gene in Mexican Leishmania. Mol BiochemParasitol. 1994 Feb;63(2):213-20.

Svmons FM1 Murrav PJ1 Ji H. Simpson RJ. Osborn AH. Cappai R.Handman E. Characterization of a polymorphic family of integral membraneproteins in promastigotes of different Leishmania species. Mol BioehemParasitol. 1994 Sep;67(1):103-13.

Turano C1 Coppari S1 Altieri F. Ferraro A. Proteins of the PDIfamily: unpredicted non-ER Iocations and functions. J Cell Physiol. 2002 Nov;193(2): 154-63.

Webb JR1 Campos-Neto A, Ovendale PJ, Martin Tl1 Stromberq EJ.Badaro R. Reed SG. Human and murine immune responses to a novelLeishmania major recombinant protein encoded by members of a multicopygene family. Infeet Immun. 1998 Jul;66(7):3279-89.

Wilkinson B, Gilbert HF. Protein disulfide isomerase. BioehimBiophys Aeta. 2004 Jun 1;1699(1-2):35-44.Listagem de Seqüências

<110> INSTITUT PASTEUR

INSTITUT PASTEUR DE TUNIS

<120> POLIPEPTíDEO DE LEISHMANIA MAJOR E POLINUCLEOTÍDEO QUE OCODIFICA E APLICAÇÕES VACINAIS E TERAPÊUTICAS DOS MESMOS

<130> B6775AA-AD/CAL<140> <141> PCT/EP 06/003978 07-04-2006<150> <151> CA 2,503,932 08-04-2005<150> <151> CA 2,540,736 05-04-2006<160> 68<170> PatentIn version<210> <211> <212> <213> 1 1734 DNA Leishmania major<400> 1

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<213> Leishmania major<400> 2

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<213> Leishmania major

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ttccttttcg ttttgcaaag aaaaatgcag cgctcattcc ttgtttttgt tctgtgcgcc 60cttctcttct gcgtcgcgtc cgcagaggtg caggtggcca ctaaggacaa ctttgacaag 120gtcgtaatcg gggatctcac gttggtcaag ttttatgctc cgtggtgcgg ccactgcaag 180acactcgccc cggagtttgt aaaggccgct gacatgctgg ccggcatcgc gacccttgca 240gaggtcgatt gcaccaaaga agagagcctt gctgagaagt acgaaatcaa ggggttcccc 300acgctgtaca tcttccgtaa cggtgagaaa gtgaagatct acgatggtcc ccgcactgcc 360gccggcatcg cgtcgtacat gaaggcgcat gtcggtccat cgatgaaggc catctcaacg 420gctgaagagc tggaggagct caagaaggag actttcccgg tgtgcgtggt gaagacagcg 480agcaccgact cggagatggc gtcgatgata accaaggtgg cggactctct ccgctcgcag 540atgaactttg tgctcgtgac ggatgcggcc atctctccga atgatgccat ggagtcggtt 600acggtgtatc gcaagaatgc ggagcgcgag gcgtacaccg gcgctacacc aatgacggca 660gagtcggtga agagctttct cacgagtgct gtgttggact actttggcga gctcggccag 720gagagctttc agaagtacat ggaagcgaac aaggataaac ctcttgggtg ggtgttcatc 780gacaagaaca cggattctgc gttgaagggg tcacttgtgg cggtggcgga gaagtaccgc 840tcgcaggtgt tgctaaccta cattgacggc gatcagtacc gccccgtctc gcgccagctg 900ggcattcctg aggatgcgaa gttcccggcg tttgtggtcg atttcgagcg ccgccatcac 960gtgatgggga cggacacccc agtcacctcc gagtctgtcg ctgcgtttgt ggagaagtat 1020gtcaagggcg agacgaagca gaccgtgatg tccgacgcga ttcccgctaa ggagacggtg 1080aacggcctca caacggtggt gggtcagact tttgcgaagt acacggacgg cacacaaaac 1140gtgatgctgc tcttctacgc gccgtggtgc ggacactgca agaagctgca ccccgtctac 1200gataaagtag ccaagagctt cgagtctgag aatgtgatca ttgcgaagat ggatgccacg 1260acgaacgact ttgaccgcga gaagtttgag gtgtctggat ttccaacgat ttacttcatc 1320ccagccggca agccgccaat cgtgtacgag ggtggccgca ccgcagacga aatccaggtg 1380tttgtgaagt ctcacctgac cgcctccgcc gctccatctg gcggcccttc cggcaacagc 1440gaagaggaag atttgtagga ctgcaaggga tgtggcgttt ataggctgcc ctgccttccc 1500ttgctgtttc tatgacggat taggcttttt tttgttatat gtggggtggt caagagagtg 1560ccagggctcc ttctttatat ccttgcgctt tcttttattt tgcttccttg tgttgacgtc 1620tatgcatgcg tgctgtcgac gactctttgt caacctgcgt cctatctagt agcatcgatg 1680tgaaaagaag agtagaggga ggtaacgatg cgtgcgctgg ctgccgtttt catgggcgca 1740atttcgagaa ggaaaatcgg aaaatggaca ggatagcgaa attagcgcaa cgacaaggtc 1800gtgcgtcttt ctctatcggt cattaaattt ctgggctttg taacaatgaa agaagtcaca 1860caaaaaaaaa aaaaaaaa 1878

<210> 35<211> 577<212> PRT

<213> Leishmania major<400> 35

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Asn Glu Val Ser Ala Leu Gln Glu Glu Thr His Val Leu Gly Ser His85 90 95Val Gln Thr Leu Gln Gln Arg Arg Pro Gly Gly Gly Ala Thr Val Ser100 105 110

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Gly Arg Ser Phe Arg Arg Arg Ser Leu Ala Asp Val Asp Ala Phe Met180 185 190

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Met

<210> 36

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<212> PRT

<213> Leishmania major

<400> 36

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<213> Leishmania major

<400> 37

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<212> PRT

<213> Leishmania major

<400> 38

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Tyr385

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<212> PRT

<213> Leishmania major

<400> 39

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<212> PRT

<213> Leishmania major

<400> 40

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<213> Leishmania major

<400> 41

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<210> 42

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<212> PRT

<213> Leishmania major

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Leu Ala Ala Ala Asp Ala Val Ala Pro Arg Ser Gly Lys Gly Ala Ala995 1000 1005

Ser Pro His Val Gly Ala Val Gln Arg Gln Ala Val Asp Pro Ala1010 1015 1020

Thr Val Pro Val Ala Pro Ala Val Ile Ala Glu Glu Pro Leu Tyr1025 1030 1035

Val Ala Thr Ala Glu Glu Leu Gln His Val Arg Asp Phe Ala Asp1040 1045 1050

Gln Ala Ala His Asp Ala Thr Ala Arg Glu Ala Glu Val Ala Gly1055 1060 1065

Thr Val Glu Asn Leu Arg Asn Glu Leu Asp Asp Val Arg Glu Met1070 1075 1080

Asn Ala Lys Leu Glu Asp Glu Val Phe Ala Leu Lys Glu Gln Leu1085 1090 1095

Ser Asp Ala Glu Asp Ala Tyr Lys Lys Leu Ala Gly Ala Leu Val1100 1105 1110

Val Ala Glu Asp Glu Arg Gln Glu Leu Cys Asp Asp Leu Glu Ala1115 1120 1125Ala Leu Asp Glu Leu Glu Gln Lys Lys Asp Glu Tyr Asp Glu Leu1130 1135 1140

Leu Gly Asn Leu Glu Glu Val Gln Gly Leu Leu Glu Ala Ala Asp1145 1150 1155

Val Ala Gly Arg Thr Ala Val Glu Ala Leu Glu Gln Arg Asn Arg1160 1165 1170

Asp Met Ala Asp Leu Gln Gly Glu Leu Ala Asn Ala Leu Asp Ala1175 1180 1185

Ser Lys Glu Asn Glu Asn Leu Arg Ala Leu Leu Asp Ala Lys Glu1190 1195 1200

Arg Glu Ile Asp Arg Leu Lys Glu Tyr Asn Ser Phe Trp Thr Asp1205 1210 1215

Thr Val Gly Thr Gly Lys Gln Lys Val Thr His Arg Leu Thr Lys1220 1225 1230

Ile Phe Asp Gly Asp Trp Thr Arg Leu Met Arg His Arg Pro Glu1235 1240 1245

Ala Leu Lys Ala Ala Phe Val Ile Asp Ser Ser Asn Ala Cys His1250 1255 1260

Val Pro Gly Asp Gln Ile Val Gln Val Asp Phe Asp His Asp1265 1270 1275

<210> 43

<211> 527

<212> PRT

<213> Leishmania major

<400> 43

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Leu Thr Tyr Leu Arg Thr Phe Pro Ala Ala Leu Arg Asp Ser Val Arg50 55 60

Val Leu Lys Thr Ala Met Ser Cys Asp Asp Gly Val Thr Arg Cys Pro65 70 75 80

Ser Tyr Met Ser Met Thr Gly Thr Leu Val Ser Ala Pro Leu Gly Leu85 90 95

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Asn Ala Ser Met Arg Ala His Phe Cys Phe Arg Thr Gly Ala Ala Gly115 120 125

Ile Thr Cys Val Gln Ser Glu Gly Ile Thr Tyr His Gly Trp Ala Val130 135 140

Gly Ser Ser Ser Pro Tyr Tyr Met Met His Leu Ser Ala Ser Gly Arg145 150 155 160

Gly Ile Ala Pro Thr Thr Leu Gln Leu Thr Thr Asp Ala Pro Glu Val165 170 175

Gln Lys Gly Ala Ser Ala Leu Gln Ile Leu Arg Ala Ser Gly Val Leu180 185 190

Pro Gly Glu Ser Asn Pro Thr Val195 200

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Pro Val Arg Asp Asp Asp Pro Ala225 230

Leu Val Ser Val Ser Gly Asn Asp245

Asp Ile Ser Gly Arg Val Leu Phe205

Ala Ser Arg Ser Ile Ser Thr Gly220

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Cys Asp Lys Val Gly Ile Ser Pro250 255Asp Tyr Phe Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Lys Gln Cys Asn Ala Gln Lys260 265 270

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Gly Ala Arg Ala Ser Asn Cys Asp Ser Asp Gly Val Thr His Glu Cys385 390 395 400

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Cys Thr Val Val Phe Arg Asp Ala Ala Ala Ala Leu Leu Ala Ser Ala435 440 445

Asn Ile Ser Trp Thr Val Glu His Thr Thr Thr Thr Pro Ala Pro Asn450 455 460

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<210> 44

<211> 408

<212> PRT

<213> Leishmania major

<400> 44

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Ala Arg Val Pro Val Arg Val His Trp Val Ala Ala Val Ala Gly Gly20 25 30

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Pro Ala Pro Ala Arg Ala Pro Ala Pro Thr Cys Val Cys His Gly Gly50 55 60

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Arg Gly Arg Phe Pro Val Arg Trp Cys Val Arg Val Arg Gly Pro Leu130 135 140Ser Pro Ala Thr Arg Arg Leu Pro Val Lys Gly Val Trp Val Val Gly145 150 155 160

Val Gly Gly Trp Gly Ser Ser Ala Ala Thr Gly Arg Arg Gln Arg Leu165 170 175

Ala Cys Arg Gly Ala Cys Gly Arg Ala Ala Arg Gly Arg Pro Pro Ser180 185 190

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Arg Cys Arg Ala Pro Leu Ala Trp Arg Ile Ala Pro Glu Gln Ser Lys225 230 235 240

Glu Arg Ser Ala Glu Gln Gly Arg Trp Thr Lys Arg Ser Arg Gly Tyr245 250 255

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Leu Ala Gly Phe Leu Ala Gly Leu Ile Arg His Ala Arg Ala Pro Pro340 345 350

Arg Gly Tyr Ser His Gly Gly Arg Arg Arg Phe Arg Pro Arg Ser Gly355 360 365Ala Trp Met Arg Pro Ala Trp Val Gly Val Cys Gly Pro Pro Gly Val370 375 380

Cys Leu Ala Leu Ile Ala Trp Arg Val Ser Glu Glu Gly Ala Arg Thr385 390 395 400

Gly Lys Lys Gly Leu Leu Asp Ala405

<210> 45

<211> 478

<212> PRT

<213> Leishmania major

<400> 45

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Val Asn Pro Ala Ser Gly Ala Leu Gly Phe Ala Gly Lys Thr Val Ile20 25 30

Pro Gly Gly Ile Val Ser Ala Ala Ser Ala Gly Asp Gly Thr Leu Tyr35 40 45

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Val Phe Phe His Arg Asn Lys Val Met Cys Ile Ser Ala Gly Ser Thr85 90 95

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Gly Glu Val His Leu Ser Ser Ser Gln Pro Thr Asp Ser Glu Val Leu225 230 235 240

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Asn Trp Met Asp Phe Ala Ala Lys Gly Glu His Val Lys Phe Thr Arg275 280 285

Ala Val Cys Pro Gly Gly Cys Lys His Leu Val Arg His Pro Leu Leu290 295 300

Ala Gln Ser Lys Gln Ile Ser Glu Leu Tyr Thr Glu Val Thr Ala Lys305 310 315 320

Lys Ala Glu Gln Leu Lys His Phe Asp Ala Thr Lys Ala Gln His Glu325 330 335

Phe Leu Phe Tyr Leu Cys Gly Arg Cys Gly Gly Val Phe Tyr Gly Gly340 345 350

Asp Gln Val Cys Ser Arg Met Gln Gly His Glu Pro Ser Ser Ser Pro355 360 365Gln Glu Leu Val Cys Asp Thr Cys Ile Gly Lys Asp His Arg Thr Cys370 375 380

Asn Thr Leu Met Ala Val Phe Lys Cys Arg Tyr Cys Cys Asn Pro Ala385 390 395 400

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Ala Cys Leu Thr Cys Leu Asp Pro Ala Met Val Ser His Ile Phe Asp450 455 460

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465

470

475

<210> 46

<211> 220

<212> PRT

<213> Leishmania major

<400> 46

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Ser Lys Tyr Lys Ile Pro Thr Arg Phe Asp Cys Pro Leu Cys Asp Ala20 25 30

Lys Ala Ser Ile Val Val Arg Met Phe Arg Ala Thr Ser Asp Ala Thr35 40 45

Val Gln Cys Arg Val Cys Gly Ala Gly Gly Thr Lys Arg Trp Asn Val50 55 60

Leu Arg Leu Glu Lys Pro Val Asp Val Phe Phe Arg Phe His Glu Ala65 70 75 80Leu Val Gln Arg Asp His Ala Asp Leu Gln Gln Val Glu Met Gly Arg85 90 95

Glu Ala Arg Leu Ser Val Gly Ala Pro Asn Ala Val Leu Gly Gly Ser100 105 110

Gln Ser Ser Met Gly Lys Glu Ala Tyr Ser Pro Gly Asp Ala Ala Val115 120 125

Ala Gly Trp Ala Arg Leu Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Thr Ala130 135 140

Ser Gly Cys Ser His Ser Gln His Val Lys Ser Leu Gly Glu Leu Gln145 150 155 160

Arg Lys Leu Thr Met Pro Ala Trp Ser Gly Phe Ala Thr Ala Pro Thr165 170 175

Ala Ser Cys Ala Val Asp Leu Arg Asp Asp Tyr Glu Gly Glu Ala Glu180 185 190

Gly Ala Ala Ala His Tyr Phe Ala Pro Arg Gln Glu Val His Ser Ala195 200 205

Glu Asp Glu Asp Asp Glu Tyr Asp Gln Leu Phe Gln210 215 220

<210> 47<211> 174<212> PRT<213> Leishmania major<400> 47

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<210> 48

<211> 153

<212> PRT

<213> Leishmania major

<400> 48

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Leu Asn Thr Asn Val Glu Gly Lys Arg Lys Val Pro Phe Ala Leu Arg20 25 30

Met Val Lys Gly Val Gly Ile Arg Phe Ala Tyr Leu Val Cys Lys Lys35 40 45

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Pro Asp Trp Phe Leu Asn Arg Gln Arg Asp Pro Lys Thr Gly Lys Thr85 90 95Glu His Leu Ser Ser Ser Met Val Asp Thr Arg Leu Arg Asp Asp Leu100 105 110

Glu Arg Leu Lys Lys Met Arg Ala His Arg Gly Val Arg His Ala Tyr115 120 125

Gly Leu Arg Val Arg Gly Gln His Thr Cys Thr Ser Gly Arg His Gly130 135 140

Lys Thr Val Gly Val Ser Arg Gly Lys145 150

<210> 49<211> 134<212> PRT

<213> Leishmania major<400> 49

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Arg Tyr Ala Gly His Lys Ala Val Ile Val Gln Asn Ser Asp Val Val20 25 30

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Tyr Pro Lys Lys Val Val Arg Gly Met Ser Lys Gln Thr Ile Ala Arg50 55 60

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Leu Pro Thr Arg Tyr Asn Val Asp Met Ser Lys Glu Leu Arg Gly Lys85 90 95

Ile Asn Val Ser Asp Ala Ser Lys Arg Ser Arg Ser Lys Arg Leu Val100 105 110

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<211> 575

<212> PRT

<213> Leishmania major

<400> 50

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Arg Ala Phe Thr Met Leu Trp Arg Ala Ser Gln Ala Tyr Leu Leu Asp35 40 45

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Pro Ser Cys Val Ser Ser Ile Leu Gln Thr Phe Cys Lys Tyr His Leu65 70 75 80

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Ser Thr Lys Pro Ser Ser Val Ser Asp Arg Ala Val Arg Glu Leu Ala115 120 125

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Gly Ala Asp Ala Gly Gly Leu Thr Arg Glu Trp Leu Gln Leu Leu Ser260 265 270

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Ser Ile Ser Phe Gln Pro Asn Pro Phe Ser Ser Val Asn Pro Asn His290 295 300

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<210> 51<211> 546<212> PRT

<213> Leishmania major<400> 51

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Ala Asn Val Val Lys Ser Ser Leu Gly Pro Ile Gly Leu Asp Lys Met35 40 45Leu Val Asp Asp Val Gly Asp Val Leu Val Thr Asn Asp Gly Ala Thr50 55 60

Ile Leu Lys Ser Leu Asp Val Glu His Pro Ala Ala Arg Leu Leu Val65 70 75 80

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Val Val Ile Leu Ala Ala Glu Leu Leu Lys Arg Ala Gln Glu Leu Val100 105 110

Ser Gln Gly Ile His Ala Thr Ser Ile Ile Ala Gly Tyr Lys Leu Ala115 120 125

Met Arg Glu Ala Leu Arg Tyr Leu Asn Asp Asn Leu Gly Cys Ala Val130 135 140

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Ser Ser Lys Ile Leu Asn Asn Asp Ala Asp Leu Phe Ala Lys Ile Val165 170 175

Val Asp Ala Ile Met Ser Val Lys Thr Val Asn Asp Phe Gly Asp Val180 185 190

Ile Tyr Pro Arg Lys Ala Val Ser Ile Leu Leu Gln His Gly Arg Ser195 200 205

Leu His Glu Ser Arg Leu Val Gln Gly Phe Ala Met Asn Leu Ser Arg210 215 220

Ala Ala Gln Gly Met Pro Thr Ser Val Lys Asp Ala Lys Ile Ala Leu225 230 235 240

Ile Asp Phe Asp Leu Arg Ala Val Lys Met Lys Leu Gly Ile Asn Ile245 250 255

Thr Ile Thr Asp Pro Ser Lys Ala Glu Ala Ile Arg Gln Arg Glu Leu260 265 270Asp Ile Thr Lys Glu Arg Ile Gln Lys Met Ile Ala Ala Gly Ala Asn275 280 285

Val Ile Met Thr Thr Trp Gly Ile Glu Asp Ser Met Met Lys Tyr Met290 295 300

Val Asp Asn Ser Val Leu Gly Val Arg Arg Val Lys Lys Asp Asp Ile305 310 315 320

Arg Arg Ile Ala Lys Thr Thr Gly Ala Gln Val Val His Thr Met Ser325 330 335

Asp Leu Glu Gly Glu Glu Val Phe Asp Pro Lys Trp Leu Gly Arg Ser340 345 350

Glu Lys Val Tyr Glu Glu Arg Ile Gly Asp Asp Asp Cys Ile Val Ile355 360 365

Ala Gly Thr Ser Asn Ala Val Cys Ala Thr Ile Val Cys Arg Gly Ala370 375 380

Asn Tyr Phe Met Leu Glu Glu Met Glu Arg Ala Leu Asn Asp Ala Leu385 390 395 400

Trp Ala Val Ala Arg Thr Cys Asp Ala Ser Cys Val Val Ala Gly Gly405 410 415

Gly Ser Val Glu Ala Ala Val Ser Val Tyr Leu Asp Asn Phe Ala Arg420 425 430

Thr Leu Ser Ser Arg Glu Gln Leu Ala Val Ala Glu Tyr Ala Glu Ala435 440 445

Leu Leu Val Ile Pro Lys Val Leu Ala Leu Asn Ala Ala Leu Asp Ala450 455 460

Thr Asp Leu Val Ala Lys Leu Arg Val Glu His Thr Gln Ala Gln Ser465 470 475 480

Ser Gly Gln Gln Thr Glu Ala Arg Phe Thr Gly Leu Asp Leu His Asn485 490 495Gly Thr Leu Arg Asn Asn Ile Lys Ala Gly Val Leu Glu Pro Lys Pro500 505 510

Ser Lys Ile Lys Ser Leu Gln Phe Ala Thr Glu Ala Ala Val Thr Val515 520 525

Leu Arg Ile Asp Asp Cys Val Arg Leu Asn Pro Asp Glu Glu Asp Gln530 535 540

Gln Arg545

<210> 52

<211> 144

<212> PRT

<213> Leishmania major

<400> 52

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Lys Asn Ser Arg Val Arg Gly Ala Thr Arg Ala Ser Leu Leu Lys Arg20 25 30

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Ser Lys Leu Leu Lys Lys Lys Thr Phe Ser Lys Arg Ala Pro Leu Ala50 55 60

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<210> 53<211> 190<212> PRT

<213> Leishmania major<4 00> 53

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Phe Ile Val Arg Val Ser Ser Glu Arg His Ile Ala Phe Ala Asp Ala145 150 155 160

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Lys Ala Ala Lys Arg His Ala Gly Gly Gly Asp Asp Asp Glu180 185 190<210> 54

<211> 195

<212> PRT

<213> Leishmania major

<400> 54

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Lys Lys Val Ser Arg Lys Ser Pro Glu Tyr Thr Thr Leu Arg Lys Ser20 25 30

Cys Ala Pro Gly Ala Ile Ala Ile Ile Leu Ala Gly Arg Phe Arg Gly35 40 45

Arg Arg Ala Val Ile Leu Lys Gln Leu Pro His Asn Gly Pro Leu Val50 55 60

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Ser Arg Tyr Val Ile Ala Thr Ser Thr Thr Val Asp Ile Ser Ser Val85 90 95

Asp Thr Ala Pro Ile Thr Ala Glu Val Phe Gln Arg Pro Lys Ala Glu100 105 110

Lys Pro Thr Lys Ser Glu Gly Asp Phe Met Gly Asp Lys Gln Lys Ala115 120 125

Lys Ala Glu Lys Ala Ala Lys Lys Thr Ser Lys Ala Gly Lys Lys Thr130 135 140

Leu Val Ser Asp Ala Arg Ala Gln Leu Gln Lys Lys Ile Asp Ala Ala145 150 155 160

Leu Ile Ala Ala Ile Lys Lys Asp Ala Gln Gly Lys Glu Lys Ala Gly165 170 175

Tyr Leu Arg Ser Val Phe Thr Val Lys Pro Gly Asp Ala Pro His Arg180 185 ' 190Trp Asn Trp195

<210> 55<211> 179<212> PRT

<213> Leishmania major<400> 55

Met Val Lys Pro His Leu Arg His Tyr Gln Val Val Gly Arg Glu Ser1 5 10 15

Pro Ser Glu Lys Asn Pro Glu Pro Thr Val Tyr Lys Phe Glu Val Phe20 25 30

Ala Pro Asn Phe Val Val Ala Lys Ser Arg Phe Trp Arg Met Met Arg35 40 45

Val Lys Asn Lys Val Lys Ala Thr His Gly Asp Val Leu Ser Cys Lys50 55 60

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Lys Ser Ile Pro Asp His Glu Val Lys His Leu Ser Ile Ala Gln Tyr130 135 140

His Ala Pro Asn Leu Ser Phe Pro Leu Leu Gln Arg Arg Ile Lys Ala145 150 155 160

Ala Arg Lys Asp Arg Ala Ile Phe Val Lys Lys Asn Thr Lys Arg Ala165 170 175

Val Val Ala<210> 56

<211> 394

<212> PRT

<213> Leishmania major

<400> 56

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Lys Lys Lys Ile Gly Glu Leu Val Lys Glu Ser Asp Val Phe Cys Thr35 40 45

Ile Gln Thr Asp Lys Ala Val Val Asp Tyr Thr Asn Thr Phe Glu Ser50 55 60

Gly Tyr Leu Ala Lys Ile Tyr Cys Gly Asn Gly Gln Ser Ala Pro Val65 70 75 80

Ala Lys Thr Ile Ala Val Met Val Ser Asp Ala Ala Asp Val Ser Lys85 90 95

Ala Asp Glu Tyr Thr Pro Glu Gly Glu Val Pro Ala Ala Glu Ala Glu100 105 110

Ala Pro Thr Ala Ala Ala Val Ala Ala Ala Pro Ala Ala Gly Gly Ala115 120 125

Ser Ser Lys Ala Pro Glu Gly Val Thr Cys Glu Pro Val Phe Met Pro130 135 140

Ala Leu Ser Pro Ser Met Glu Thr Gly Thr Val Val Glu Trp Lys Lys145 150 155 160

Lys Ile Gly Glu Leu Val Lys Glu Ser Asp Val Phe Cys Thr Ile Gln165 170 175

Thr Asp Lys Ala Val Val Asp Tyr Thr Asn Thr Phe Glu Ser Gly Tyr180 185 190Leu Ala Lys Ile Tyr Cys Gly Asn Gly Gln Ser Ala Pro Val Ala Lys195 200 205

Thr Ile Ala Val Met Val Ser Asp Ala Ala Asp Val Glu Lys Val Ala210 215 220

Asn Tyr Tyr Pro Glu Asp Ala Val Gly Gly Pro Pro Ala Ser Ala Ala225 230 235 240

Asp Pro Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ser Ala Arg Pro Ala Pro245 250 255

Ser Ala Ala Ser Ala Lys His Tyr Gly Gly Ser Leu Asp Ala Ala Val260 265 270

Ala Ala Ser Gly Pro Ser Val Ala Arg Ile Ala Ala Gly Leu Glu Thr275 280 285

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Lys Ser Asp Phe Ser Gly Gln Pro Gly Phe Asp Tyr Asn Asp Thr Thr305 310 315 320

Pro Ala Arg Ala Met Gln Gln Lys Ala Ala Pro Ala Ala Ala Ala Asp325 330 335

Glu Ala Ser Lys Thr Ala Ala Lys Ser Ala Ala Pro Ala Ala Val Ser340 345 350

Gly Asp Ile Tyr Asn Val Val Leu Lys Pro Gly Pro Val Tyr Lys Ser355 360 365

Val Ser Asp Thr Ala Leu Leu Lys Lys Leu Met His Thr Met His Val370 375 380

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<210> 57

<211> 438

<212> PRT

<213> Leishmania major<400> 57

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Ser Asn Leu Glu Glu Gly Ala Met Gly His Tyr Glu Ala Glu Leu Lys85 90 95

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Glu Ala Val Asp Asp Ser His Ala Ile Val Ser Ile Ser Gly Thr Glu115 120 125

Tyr Tyr Val Pro Leu Met Ser Phe Val Asp Lys Glu Gln Leu Glu Leu130 135 140

Gly Cys Ser Val Leu Leu His Asp Arg Gln His Ser Ile Val Gly Val145 150 155 160

Leu Lys Asp Asp Val Asp Pro Leu Val Ser Val Met Lys Val Asp Lys165 170 175

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Phe Pro Asp Glu Lys Thr Lys Arg Arg Ile Phe Glu Ile His Thr Ser355 360 365

Arg Met Ser Leu Ala Glu Asp Val Asp Ile Ser Glu Phe Ile His Ala370 375 380

Lys Asp Glu Met Ser Gly Ala Asp Val Lys Ala Ile Cys Thr Glu Ala385 390 395 400

Gly Leu Leu Ala Leu Arg Glu Arg Arg Met Lys Val Cys Gln Ala Asp405 410 415

Phe Ile Lys Gly Lys Glu Asn Val Gln Tyr Arg Lys Asp Lys Ser Thr420 425 430

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Lys Gly Gly Ser Asn Gly Val Gly Pro Asn Leu Phe Gly Ile Val Asn35 40 45

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Lys Lys Pro Gln Glu Arg Ala Asp Val Ile Ala Tyr Leu Glu Thr Leu100 105 110

Lys

<210> 59<211> 342<212> PRT

<213> Leishmania major<400> 59

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Gly Lys Glu Val Lys Lys Val Thr Gln Pro Ala Lys Ala Ala Ser Pro85 90 95

Tyr Lys Lys Pro Ala Val Ala Ser His Phe Ala Ala Arg Pro Lys Asn100 105 110

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Met Arg Trp Pro Thr Phe Val Thr Met Gln Arg Lys Lys Arg Val Leu130 135 140

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Ala Ile Val Lys Asp Met Ala Arg Leu Gly Asp Ala Ile Gly Arg Lys260 265 270Thr Ala Thr Cys Val Ala Leu Thr Asp Val Asn Ala Glu Asp Glu Ala275 280 285

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Ser Arg Ala Glu Leu Arg Lys Lys His Ala Arg Asn Ala Gly Val Asp325 330 335

Ala Ala Ala Ile Ile Gln340

<210> 60<211> 419<212> PRT

<213> Leishmania major<400> 60

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Phe Lys Ala Gly Met Thr His Ile Val Arg Asp Val Asp Arg Pro Gly50 55 60

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Val Gly Leu Lys Thr Ile Gly Thr Val Trp Ala His His Thr Ser Val100 105 110

Glu Phe Arg Arg Arg Tyr Tyr Lys Asn Trp Lys Gln Ser Ala Gln Leu115 120 125Aia Phe Ser Arg Gln Lys Gln Phe Ala Asn Thr Lys Glu Gly Lys Val130 135 140

Ala Glu Ala Arg Thr Leu Asn Ala Phe Ala Lys Lys Ala Ser Val Ile145 150 155 160

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Gly Val Lys Lys Ala His Val Gln Glu Ile Gln Val Asn Gly Gly Ser180 185 190

Val Ala Ala Lys Ile Ala Leu Ala Lys Ser Leu Leu Glu Lys Glu Val195 200 205

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Val Thr Lys Gly His Gly Thr Glu Gly Val Val Lys Arg Trp Gly Val225 230 235 240

Ala Cys Leu Pro Arg Lys Thr His Arg Gly Leu Arg Lys Val Ala Cys245 250 255

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Ala Lys Lys

<210> 61<211> 384<212> PRT

<213> Leishmania major<400> 61

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Ala Ala Val Val Cys Val Ala Val Leu Phe Ser Val Gly Leu Ala Ala370 375 380

<210> 62<211> 635<212> PRT

<213> Leishmania major<400> 62

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Val Pro Tyr Lys Ile Val Arg Ala Gly Asn Gly Asp Ala Trp Val Gln115 120 125

Asp Gly Asn Gly Lys Gln Tyr Ser Pro Ser Gln Ile Gly Ala Phe Val130 135 140

Leu Glu Lys Met Lys Glu Thr Ala Glu Asn Phe Leu Gly His Lys Val145 150 155 160

Ser Asn Ala Val Val Thr Cys Pro Ala Tyr Phe Asn Asp Ala Gln Arg165 170 175Gin AIa Thr Lys Asp Ala Gly Thr Ile Ala Gly Leu Asn Val Ile Arg180 185 190

Val Val Asn Glu Pro Thr Ala Ala Ala Leu Ala Tyr Gly Met Asp Lys195 200 205

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Asp Ile Ser Val Leu Glu Ile Ala Gly Gly Val Phe Glu Val Lys Ala225 230 235 240

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Val Val Glu Glu Val Lys Lys Phe Phe Gln Lys Asp Pro Phe Arg Gly370 375 380

Val Asn Pro Asp Glu Ala Val Ala Leu Gly Ala Ala Thr Leu Gly Gly385 390 395 400Val Leu Arg Gly Lys Ala Ser Asp Leu Ile Leu Val Asp Val Thr Pro405 410 415

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Thr Asp Lys Leu Gln Lys Ala Val Met Glu Cys Gly Arg Thr Glu Tyr610 615 620Gln Gln Ala Ala Ala Ala Asn Ser Gly Gln Cys

625 630<210> 63 <211> 443 <212> PRT <213> Leishmania major<400> 63

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Pro Ala Ala Ala Leu Phe Glu Glu Phe Lys Arg Thr Tyr Gln Arg Ala35 40 45

Tyr Gly Thr Leu Thr Glu Glu Gln Gln Arg Leu Ala Asn Phe Glu Arg50 55 60

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Gly Gln His Tyr Arg Lys Ala Arg Ala Asp Leu Ser Ala Val Pro Asp115 120 125

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Gly Ala Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Ala Val Gly Asn Ile Glu145 150 155 160

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Gln Leu Val Ser Cys Asp His Val Asp Asn Gly Cys Gly Gly Gly Leu180 185 190Met Leu Gln Ala Phe Glu Trp Val Leu Arg Asn Met Asn Gly Thr Val195 200 205

Phe Thr Glu Lys Ser Tyr Pro Tyr Val Ser Gly Asn Gly Asp Val Pro210 215 220

Glu Cys Ser Asn Ser Ser Glu Leu Ala Pro Gly Ala Arg Ile Asp Gly225 230 235 240

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Val Ile Lys Asn Ser Trp Gly Glu Asp Trp Gly Glu Lys Gly Tyr Val305 310 315 320

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Glu Cys Leu Pro Asn Gly Ala Gly Gly Ser Phe Gln Met Glu Cys Gly385 390 395 400

Asp His Gln Val Leu Lys Leu Thr Tyr Thr Ser Met Asn Cys Thr Gly405 410 415Glu Ala Lys Tyr Thr Val Thr Arg Glu Gly Lys Cys Gly Ile Ser Trp420 425 430

Ser Gly Ser Ser Lys Ser Ile Cys Gln Tyr Val435 440

<210> 64<211> 340<212> PRT

<213> Leishmania major<400> 64

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His Tyr Ala Ser Arg Glu Arg Arg Arg Leu Ala Val Arg Glu Leu Leu225 230 235 240

Arg Leu Ala Arg Pro His Gly Gly Arg Val Leu Ile Tyr Val Trp Ala245 250 255

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Gln Leu Cys Lys Asp Ala Ala Ser Asp Asp Gly Thr Gly Ser Ile Pro305 310 315 320

Val Ala Ile Arg Lys Ser Tyr Tyr Asp Lys Glu Asn Trp Cys Val Met325 330 335

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<210> 65

<211> 92

<212> PRT

<213> Leishmania major

<400> 65

Met Ala Thr Thr Tyr Glu Glu Phe Ser Ala Lys Leu Asp Arg Leu Asp15 10 15Glu Glu Phe Asn Arg Lys Met Gln Glu Gln Asn Ala Lys Phe Phe Ala20 25 30

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Glu Lys Phe Glu Arg Met Ile Lys Glu His Thr Glu Lys Phe Asn Lys50 55 60

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<210> 66<211> 149<212> PRT

<213> Leishmania major<400> 66

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Lys Lys Lys Thr Ala Ile Ala Val Ala Thr Val Thr Lys Ala Ala Gln20 25 30

Cys Asn Ile Lys Val Asn Gly Val Pro Leu Gln Gln Ile Leu Pro Asp35 40 45

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Val Ser Gln Ala Tyr Ala Ala Arg Gln Ala Ile Ala Lys Gly Leu Ile85 90 95

Ala Phe Phe Gln Lys Tyr His Asn Glu Val Glu Lys Ala Ala Leu Lys100 105 110

Asp Lys Phe Leu Ala Tyr Asp Lys Phe Leu Leu Ile Ala Asp Pro Arg115 120 125Arg Cys Glu Pro Lys Lys Trp Gly Arg His Ser Ala Arg Thr Arg Phe130 135 140

Thr Lys Ser Tyr Arg145

<210> 67<211> 449<212> PRT

<213> Leishmania major<400> 67

Met Gly Lys Asp Lys Val His Met Asn Leu Val Val Val Gly His Val15 10 15

Asp Ala Gly Lys Ser Thr Ala Thr Gly His Leu Ile Tyr Lys Cys Gly20 25 30

Gly Ile Asp Lys Arg Thr Ile Glu Lys Phe Glu Lys Glu Ala Ala Glu

35 40 45

Ile Gly Lys Ala Ser Phe Lys Tyr Ala Trp Val Leu Asp Lys Leu Lys

50 55 60

Ala Glu Arg Glu Arg Gly Ile Thr Ile Asp Ile Ala Leu Trp Lys Phe65 70 75 80

Glu Ser Pro Lys Ser Val Phe Thr Ile Ile Asp Ala Pro Gly His Arg85 90 95

Asp Phe Ile Lys Asn Met Ile Thr Gly Thr Ser Gln Ala Asp Ala Ala100 105 110

Ile Leu Met Ile Asp Ser Thr His Gly Gly Phe Glu Ala Gly Ile Ser115 120 125

Lys Asp Gly Gln Thr Arg Glu His Ala Leu Leu Ala Phe Thr Leu Gly130 135 14 0

Val Lys Gln Met Val Val Cys Cys Asn Lys Met Asp Asp Lys Thr Val145 150 155 160

Thr Tyr Ala Gln Ser Arg Tyr Asp Glu Ile Ser Lys Glu Val Gly Ala165 170 175Tyr Leu Lys Arg Val Gly Tyr Asn Pro Glu Lys Val Arg Phe Ile Pro180 185 190

Ile Ser Gly Trp Gln Gly Asp Asn Met Ile Glu Lys Ser Asp Asn Met195 200 205

Pro Trp Tyr Lys Gly Pro Thr Leu Leu Asp Ala Leu Gly Met Leu Glu210 215 220

Pro Pro Val Arg Pro Val Asp Lys Pro Leu Arg Leu Pro Leu Gln Asp225 230 235 240

Val Tyr Lys Ile Gly Gly Ile Gly Thr Val Pro Val Gly Arg Val Glu245 250 255

Thr Gly Ile Met Lys Pro Gly Asp Val Val Thr Phe Ala Pro Ala Asn260 265 270

Val Thr Thr Glu Val Lys Ser Ile Glu Met His His Glu Gln Leu Ala275 280 285

Glu Ala Gln Pro Gly Asp Asn Val Gly Phe Asn Val Lys Asn Val Ser290 295 300

Val Lys Asp Ile Arg Arg Gly Asn Val Cys Gly Asn Ser Lys Asn Asp305 310 315 320

Pro Pro Lys Glu Ala Ala Asp Phe Thr Ala Gln Val Ile Val Leu Asn325 330 335

His Pro Gly Gln Ile Ser Asn Gly Tyr Ala Pro Val Leu Asp Cys His340 345 350

Thr Ser His Ile Ala Cys Arg Phe Ala Glu Ile Glu Ser Lys Ile Asp355 360 365

Arg Arg Ser Gly Lys Glu Leu Glu Lys Asn Pro Lys Ala Ile Lys Ser370 375 380

Gly Asp Ala Ala Ile Val Lys Met Val Pro Gln Lys Pro Met Cys Val385 390 395 400Glu Val Phe Asn Asp Tyr Ala Pro Leu Gly Arg Phe Ala Val Arg Asp405 410 415

Met Arg Gln Thr Val Ala Val Gly Ile Ile Lys Gly Val Asn Lys Lys420 425 430

Glu Gly Ser Gly Gly Lys Val Thr Lys Ala Ala Ala Lys Ala Ser Lys435 440 445

Lys

<210> 68<211> 477<212> PRT

<213> Leishmania major<400> 68

Met Gln Arg Ser Phe Leu Val Phe Val Leu Cys Ala Leu Leu Phe Cys15 10 15

Val Ala Ser Ala Glu Val Gln Val Ala Thr Lys Asp Asn Phe Asp Lys20 25 30

Val Val Ile Gly Asp Leu Thr Leu Val Lys Phe Tyr Ala Pro Trp Cys35 40 45

Gly His Cys Lys Thr Leu Ala Pro Glu Phe Val Lys Ala Ala Asp Met50 55 60

Leu Ala Gly Ile Ala Thr Leu Ala Glu Val Asp Cys Thr Lys Glu Glu65 70 75 80

Ser Leu Ala Glu Lys Tyr Glu Ile Lys Gly Phe Pro Thr Leu Tyr Ile85 90 95

Phe Arg Asn Gly Glu Lys Val Lys Ile Tyr Asp Gly Pro Arg Thr Ala100 105 110

Ala Gly Ile Ala Ser Tyr Met Lys Ala His Val Gly Pro Ser Met Lys115 120 125

Ala Ile Ser Thr Ala Glu Glu Leu Glu Glu Leu Lys Lys Glu Thr Phe130 135 140Pro Val Cys Val Val Lys Thr Ala Ser Thr Asp Ser Glu Met Ala Ser145 150 155 160

Met Ile Thr Lys Val Ala Asp Ser Leu Arg Ser Gln Met Asn Phe Val165 170 175

Leu Val Thr Asp Ala Ala Ile Ser Pro Asn Asp Ala Met Glu Ser Val180 185 190

Thr Val Tyr Arg Lys Asn Ala Glu Arg Glu Ala Tyr Thr Gly Ala Thr195 200 205

Pro Met Thr Ala Glu Ser Val Lys Ser Phe Leu Thr Ser Ala Val Leu210 215 220

Asp Tyr Phe Gly Glu Leu Gly Gln Glu Ser Phe Gln Lys Tyr Met Glu225 230 235 240

Ala Asn Lys Asp Lys Pro Leu Gly Trp Val Phe Ile Asp Lys Asn Thr245 250 255

Asp Ser Ala Leu Lys Gly Ser Leu Val Ala Val Ala Glu Lys Tyr Arg260 265 270

Ser Gln Val Leu Leu Thr Tyr Ile Asp Gly Asp Gln Tyr Arg Pro Val275 280 285

Ser Arg Gln Leu Gly Ile Pro Glu Asp Ala Lys Phe Pro Ala Phe Val290 295 300

Val Asp Phe Glu Arg Arg His His Val Met Gly Thr Asp Thr Pro Val305 310 315 320

Thr Ser Glu Ser Val Ala Ala Phe Val Glu Lys Tyr Val Lys Gly Glu325 330 335

Thr Lys Gln Thr Val Met Ser Asp Ala Ile Pro Ala Lys Glu Thr Val340 345 350

Asn Gly Leu Thr Thr Val Val Gly Gln Thr Phe Ala Lys Tyr Thr Asp355 360 365Gly Thr Gln Asn Val Met Leu Leu Phe Tyr Ala Pro Trp Cys Gly His370 375 380

Cys Lys Lys Leu His Pro Val Tyr Asp Lys Val Ala Lys Ser Phe Glu385 390 395 400

Ser Glu Asn Val Ile Ile Ala Lys Met Asp Ala Thr Thr Asn Asp Phe405 410 415

Asp Arg Glu Lys Phe Glu Val Ser Gly Phe Pro Thr Ile Tyr Phe Ile420 425 430

Pro Ala Gly Lys Pro Pro Ile Val Tyr Glu Gly Gly Arg Thr Ala Asp435 440 445

Glu Ile Gln Val Phe Val Lys Ser His Leu Thr Ala Ser Ala Ala Pro450 455 460

Ser Gly Gly Pro Ser Gly Asn Ser Glu Glu Glu Asp Leu465 470 475

Claims (41)

1. POLINUCLEOTÍDEO ISOLADO, caracterizado pelo fato deque compreende uma seqüência que codifica um polipeptídeoexcretado/secretado de Leishmania major, onde a seqüência mencionadacompreende uma seqüência de nucleotídeo substancialmente idêntica a umaseqüência selecionada do grupo que consiste da SEQ ID n° 1 a 34 efragmentos funcionais desta.

2. POLINUCLEOTÍDEO ISOLADO, de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a seqüência mencionadacompreende uma seqüência de nucleotídeo substancialmente idêntica a umaseqüência selecionada do grupo que consiste da SEQ ID n° 1 a 13 efragmentos funcionais desta.

3. POLINUCLEOTÍDEO ISOLADO, de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a seqüência mencionadacompreende uma seqüência de nucleotídeo substancialmente idêntica a umaseqüência selecionada do grupo que consiste das SEQ ID n° 14 a 23 efragmentos funcionais destas.

4. POLINUCLEOTÍDEO ISOLADO, de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a seqüência mencionadacompreende uma seqüência de nucleotídeo substancialmente idêntica a umaseqüência selecionada do grupo que consiste das SEQ ID n° 24 a 26 efragmentos funcionais destas.

5. POLINUCLEOTÍDEO ISOLADO, de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a seqüência mencionadacompreende uma seqüência de nucleotídeo substancialmente idêntica a umaseqüência selecionada do grupo que consiste das SEQ ID n° 27 a 34 efragmentos funcionais destas.

6. POLIPEPTÍDEO EXCRETADO/SECRETADO ISOLADOOU PURIFICADO DE LEISHMANiA MAJOR, caracterizado pelo fato de quecompreende uma seqüência de aminoácido substancialmente idêntica a umaseqüência selecionada do grupo que consiste das SEQ ID n° 35 a 68 ederivados funcionais destas.

7. POLIPEPTÍDEO, de acordo com a reivindicação 6,caracterizado pelo fato de que compreende uma seqüência de aminoácidosubstancialmente idêntica a uma seqüência selecionada do grupo que consistedas SEQ ID n° 35 a 47 e derivados funcionais destas.

8. POLIPEPTÍDEO, de acordo com a reivindicação 6,caracterizado pelo fato de que compreende uma seqüência de aminoácidosubstancialmente idêntica a uma seqüência selecionada do grupo que consistedas SEQ ID n° 48 a 57 e derivados funcionais destas.

9. POLIPEPTÍDEO, de acordo com a reivindicação 6,caracterizado pelo fato de que compreende uma seqüência de aminoácidosubstancialmente idêntica a uma seqüência selecionada do grupo que consistedas SEQ ID n° 58 a 60 e derivados funcionais destas.

10. POLIPEPTÍDEO, de acordo com a reivindicação 6,caracterizado pelo fato de que compreende uma seqüência de aminoácidosubstancialmente idêntica a uma seqüência selecionada do grupo que consistedas SEQ ID n° 61 a 68 e derivados funcionais destas.

11. COMPOSIÇÃO IMUNOGÊNICA, que gera uma respostaimune contra a leishmaniose, caracterizada pelo fato de que compreende umpolinucleotídeo conforme descrito em uma das reivindicações 1 a 5 ou umpolipeptídeo conforme descrito em uma das reivindicações 6 a 10, e um veículoaceitável.

12. COMPOSIÇÃO IMUNOGÊNICA, de acordo com areivindicação 11, caracterizada pelo fato de que a resposta imune mencionadagera uma resposta celular e/ou humoral.

13. COMPOSIÇÃO IMUNOGÊNICA, de acordo com areivindicação 11, caracterizada pelo fato de que a resposta imune mencionadagera uma resposta celular.

14. COMPOSIÇÃO DE VACINA, que permite obter umaproteção contra Leishmania, caracterizada pelo fato de que compreende umpolinucleotídeo conforme descrito em uma das reivindicações 1 a 5, ou umpolipeptídeo conforme descrito em uma das reivindicações de 6 a 10, e umveículo aceitável.

15. ANTICORPO, caracterizado pelo fato de que é obtido pelaimunização de um animal com um polipeptídeo conforme descrito em uma dasreivindicações 6 a 10.

16. VETOR DE CLONAGEM OU DE EXPRESSÃO,caracterizado pelo fato de que contém um polinucleotídeo conforme descritoem uma das reivindicações 1 a 5.

17. MÉTODO PARA PREVENIR E/OU TRATAR UM PACIENTEcontra uma infecção por cepa de Leishmania major, caracterizado pelo fato de quecompreende da etapa de administrar ao paciente uma quantidadeterapeuticamente eficaz de uma composição conforme descrita em uma dasreivindicações 11 a 14 ou de um anticorpo conforme descrito na reivindicação 15.

18. MÉTODO PARA IDENTIFICAR UM POLIPEPTÍDEOEXCRETADO/SECRETADO de uma cepa de Leishmania major, caracterizadopelo fato de que compreende cultivo in vitro de promastigotas de Leishmaniasob condições de pH e temperatura encontradas naturalmente em célulashospedeiras infectadas por cepas de Leishmania major.

19. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 18, caracterizadopelo fato de que o pH está a aproximadamente 5,5 e a temperatura aaproximadamente 35 0C.

20. USO DE UM POLINUCLEOTÍDEO, conforme descrito emuma das reivindicações de 1 a 5, caracterizado pelo fato de que é como umalvo para identificar uma molécula capaz de prevenir a Leishmaniose.

21. USO DE UM POLIPEPTÍDEO, conforme descrito em umadas reivindicações de 6 a 10, caracterizado pelo fato de que é como um alvopara identificar uma molécula capaz de prevenir a Leishmaniose.

22. MÉTODO DE DIAGNÓSTICO IN VITRO, para a detecçãoda presença ou da ausência dos anticorpos indicativos de uma cepa deLeishmania major, que se liga a um polipeptídeo conforme descrito em umadas reivindicações 6 a 10 para formar um complexo imune, caracterizado pelofato de que compreende as etapas de:a) contatar o mencionado polipeptídeo com uma amostrabiológica por um tempo e sob circunstâncias suficientes para formar um imuno-complexo; eb) detectar a presença ou a ausência do imuno-complexoformado em a).

23. KIT DE DIAGNÓSTICO, para a detecção da presença ouda ausência dos anticorpos indicativos de uma cepa de Leishmania major,caracterizado pelo fato de que compreende:- um polipeptídeo conforme descrito em uma das reivindicações 6 a 10;- um reagente para detectar o imuno-complexo polipeptídeo-anticorpo;- opcionalmente uma amostra de referência biológica sem osanticorpos que se ligam imunologicamente ao peptídeo mencionado; e- opcionalmente uma amostra de comparação que compreendeanticorpos que podem se ligar especificamente ao peptídeo mencionado;onde o polipeptídeo mencionado, o reagente, a amostra dereferência biológica e a amostra de comparação estão presentes em umaquantidade suficiente para executar a detecção mencionada.

24. MÉTODO DE DIAGNÓSTICO IN ViTRO, para a detecçãoda presença ou da ausência dos polipeptídeos indicativos de uma cepa deLeishmania major, que se liga a um anticorpo conforme descrito nareivindicação 15 para formar um imuno-complexo, caracterizado pelo fato deque compreende as etapas de:a) contatar o anticorpo mencionado com uma amostra biológicapor um tempo e sob circunstâncias suficientes para formar um imuno-complexo; eb) detectar a presença ou a ausência do imuno-complexo formadoem a).

25. KIT DE DIAGNÓSTICO, para a detecção da presença ouda ausência de polipeptídeos indicativos de uma cepa de Leishmania major,caracterizado pelo fato de que compreende:- um anticorpo conforme descrito na reivindicação 15;- um reagente para detectar o imuno-complexo polipeptídeo-anticorpo;- opcionalmente uma amostra de referência biológica sem ospolipeptídeos que se ligam imunologicamente ao anticorpo mencionado; e- opcionalmente uma amostra de comparação que compreendepolipeptídeos que podem se ligar especificamente ao anticorpo mencionado;onde o anticorpo mencionado, o reagente, a amostra dereferência biológica, e a amostra de comparação estão presentes em umaquantidade suficiente para executar a detecção mencionada.

26. CÉLULA TRANSFORMADA OU TRANSFECTADA,caracterizada pelo fato de que contém um vetor conforme descrito nareivindicação 16.

27. CÉLULA TRANSFORMADA OU TRANSFECTADA,caracterizada pelo fato de que contém um polinucleotídeo conforme descrito nareivindicação 2.

28. CÉLULA, de acordo com a reivindicação 27, caracterizadapelo fato de que consiste de uma bactéria Escherichia coli selecionada de umgrupo consistindo de bactérias Escherichia coli arquivadas no CNCM sobnúmeros de acesso: 1-3394, 1-3393, 1-3395, 1-3396, 1-3377, 1-3371, I-3376, I--3373, I-3379, I-3397, I-3384, I-3383 e I-3382 em 24 de fevereiro de 2005.

29. CÉLULA TRANSFORMADA OU TRANSFECTADA,caracterizada pelo fato de que contém um polinucleotídeo conforme descrito nareivindicação 3.

30. CÉLULA, de acordo com a reivindicação 29, caracterizadapelo fato de que consiste de uma bactéria Escherichia coli selecionada de umgrupo consistindo de bactérias Eseherichia coli arquivadas no CNCM sob númerosde acesso: I-3386, I-3378, I-3385, 1-3381, I-3372, I-3392, I-3380, I-3367, I-3370, e-I-3366 em 24 de fevereiro de 2005.

31. CÉLULA TRANSFORMADA OU TRANSFECTADA,caracterizada pelo fato de contém um polinucleotídeo conforme descrito nareivindicação 4.

32. CÉLULA, de acordo com a reivindicação 31, caracterizadapelo fato de que consiste de uma bactéria Escherichia coli selecionada de umgrupo consistindo de bactérias Escherichia coli arquivadas no CNCM sobnúmeros de acesso: I-3365, I-3369 e I-3368 em 24 de fevereiro de 2005.

33. CÉLULA TRANSFORMADA OU TRANSFECTADA,caracterizada pelo fato de que contém um polinucleotídeo conforme descrito nareivindicação 5.

34. CÉLULA, de acordo com a reivindicação 33, caracterizadapelo fato de que consiste de uma bactéria Escherichia coli selecionada de umgrupo consistindo de bactérias Escherichia coli arquivadas no CNCM sobnúmeros de acesso: I-3364, I-3387, 1-3391, I-3389, I-3390, I-3388, I-3374, e I--3375 em 24 de fevereiro de 2005.

35. CEPA DE LEISHMANIA GENETICAMENTE MODIFICADA,caracterizada pelo fato de que contém pelo menos um gene com umaseqüência que compreende uma seqüência de nucleotídeo substancialmenteidêntica a uma seqüência selecionada do grupo consistindo das SEQ ID n° 1 a-34, onde mencionado pelo menos um gene é inativo.

36. CEPA, de acordo com a reivindicação 34, caracterizadapelo fato de que o gene é inativo por knock-out.

37. CEPA DE LEISHMANIA GENETICAMENTE MODIFICADA,caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um gene com aseqüência que compreende uma seqüência de nucleotídeo substancialmenteidêntica a uma seqüência selecionada do grupo consistindo das SEQ ID n° 1 a-34, e onde o pelo menos um gene é sub-expresso comparado a um genecorrespondente de uma cepa de Leishmania tipo selvagem.

38. MÉTODO PARA DETECTAR A PRESENÇA OU AAUSÊNCIA DE ESTIMULAÇÃO LINFOCÍTICA em um paciente com suspeitade Leishmaniose, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:a) obtenção de uma amostra contendo linfócitos T do mencionadopaciente;b) contato dos linfócitos T com um polipeptídeo conforme descritoem uma das reivindicações 6 a 10; ec) detecção da presença ou ausência de uma respostaproliferativa do mencionado linfócito T mencionado ao polipeptídeo.

39. MÉTODO PARA DETECTAR A PRESENÇA OU AAUSÊNCIA DA ESTIMULAÇÃO LINFOCÍTICA em um paciente com suspeitade Leishmaniose, caracterizada pelo fato de que compreende as etapas de:a) obtenção de uma amostra contendo linfócitos T do mencionadopaciente;b) contato dos iinfócitos T com um poiipeptídeo conforme descritoem uma das reivindicações 6 a 10; ec) detecção da presença ou ausência de citocinas indicativa deestimulação linfocítica.

40. USO DE UMA COMPOSIÇÃO, conforme descrita em umadas reivindicações 11 a 14, caracterizado pelo fato de ser na preparação de ummedicamento para prevenir e/ou tratar um paciente contra uma infecção porcepa de Leishmania major.

41. USO DE UM ANTICORPO, conforme descrito nareivindicação 15, caracterizado pelo fato de ser na preparação de ummedicamento para prevenir e/ou tratar um paciente contra uma infecção porcepa de Leishmania major.