BRPI0517238B1 - Composições que compreendem ecteinascidina e um dissacarídeo, método para produzir um frasco que contém a referida composição e para preparar uma solução para infusão intravenosa e uso da referida solução - Google Patents

Abstract

composições e formulações que compreendem ecteinascidina e um dissacarídeo, bem como método para produzir um frasco que contém a referida formulação, para reduzir a formação de et 701, e para preparar uma solução e uso. a presente invenção refere-se a formulações de ecteinascidina, métodos para preparar as mesmas, artigos de produção e kits com essas formulações, e métodos para tratar doenças proliferativas com as referidas formulações.

Description

[001] A presente invenção refere-se a formulações. Mais particu larmente, refere-se a composições e formulações de ecteinascidinas, tal como ecteinascidina 743.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[002] Ecteinascidinas foram identificadas, caracterizadas estrutu ralmente e métodos sintéticos para preparar as mesmas foram descritos. Veja, por exemplo, R. Sakai et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, páginas 11456-11460, "Additional antitumor ecteinascidins from Caribbean tunicate: Crystal structures and activites in vivo"; R. Menchaca et al., 2003, J. Org. Chem. 68(23), páginas 8859-8866, "Synthesis of natural ecteinascidins (ET-729, ET-745, ET-759B, ET- 736, ET-637, ET-594 ) from cyanosafracin B"; e I. Manzanares et al., 2001, Curr. Med. Chem. - Anti-Cancer Agents, 1, páginas 257-276, "Advances in the Chemistry and Pharmacology of Ecteinascidins, A Promising New Class of Anticancer Agents"; e referências nos mesmos. Essas referências descrevem ecteinascidinas. Exemplos de ec- teinascidinas são fornecidos por ET-743, ET-729, ET-745, ET-759A, ET-759B, ET-759C, ET-770, ET-815, ET-731, ET-745b, ET-722, ET- 736, ET-738, ET-808, ET-752, ET-594, ET-552, ET-637, ET-652, ET- 583, ET-597, ET-596, ET-639, ET-641 e derivados dos mesmos, tal como formas acetiladas, formas formiladas, formas metiladas e formas de óxido, tal como formas de N-óxido.

[003] As caracterizações estruturais dessas ecteinascidinas não são repetidas explicitamente no presente, devido à descrição detalha- da fornecida nessas referências e citações nas mesmas; qualquer pessoa versada na técnica é capaz de obter essas informações diretamente das fontes citadas no presente e fontes relacionadas.

[004] Pelo menos um dos compostos de ecteinascidina, ET-743, foi estudado extensivamente, e é feita referência explícita ao mesmo no presente, para ilsutrar aspectos desta invenção.

[005] A ecteinascidina 743 (ET-743) é um alcalóide de tetrai- droisoquinolina isolado de um tunicado marinho Ecteinascidia turbinata e tem a se-guinte estrutura:

[006] Uma composição farmacológica que compreende ET-743, em combinação com um veículo, diluente ou excipiente farmaceutica- mente aceitável, é reivindicada no documento US 5,256,663.

[007] Um exame recente de ET-743, sua química, mecanismo de ação e desenvolvimento pré-clínico e clínico, pode ser encontrado em van Kesteren, Ch. et al., 2003, Anti-Cancer Drugs, 14(7), páginas 487502: "Yondelis (trabectedin, ET-743): the development of an anticancer agent of marine origin" e referências no mesmo.

[008] ET-743 possui uma atividade antineoplástica potente contra uma pluralidade de xenoenxertos de tumores humanos cultivados em camundongos atímicos, inclusive melanoma e carcinoma ovariana e da mama.

[009] Em estudos clínicos de fase I de ET-743, respostas promis soras foram observadas em pacientes com sarcoma e carcinoma de mama e ovário.

[0010] Portanto, essa nova droga está, atualmente, sob intensa investigação em diversos testes clínicos de fase II em pacientes de câncer, com uma pluralidade de doenças neoplásticas.

[0011] Tal como está explicado no documento WO 0069441, in corporado por completo por referência, ET-743 é fornecido e armazenado como um produto liofilizado estéril, com ET-743, manitol e um tampão de fosfato. Uma formulação preferida é uma obtida de 9% de cloreto de sódio ou outro veículo de infusão apropriado, 250 μg de ET- 743, com 250 mg de manitol, 34 mg de fosfato monopotássico e ácido fosfórico para ajustar o pH. Essa formulação é depois reconstituída e diluída para injeção intravenosa.

[0012] ET-743 é uma entidade química complexa, tal como revela do por seus aspectos estruturais. Além disso, ET-743 apresenta solubilidade aquosa limitada, e sua estabilidade, particularmente, em formas biocompatíveis e formulações, é difícil de prever e de se obter. Essas características desafiam as qualificações comuns e metodologias convencionais nessa técnica, particularmente, no que se refere à preparação de formulações de ET-743, que devem ser usadas prontamente para fins médicos. Esses usos preferivelmente baseiam-se em formulações cujas características incluem um ou mais do seguinte: biocompatibilidade, estabilidade sob condições ambiente, ou sob condições que são tão próximas quanto possível de condições ambiente, com uma estabilidade de armazenamento que é tão longa quanto possível, e de fácil aptidão para reconstituição, para formar soluções reconstituídas, que são estáveis sob condições ambiente, ou próximas às condições ambiente, por tanto tempo quanto possível.

[0013] Porém, formulações e metodologias convencionais para preparar essas formulações não oferecem aspectos e características desejáveis, tais como as referidas acima. Por exemplo, o exame citado de 2003 por van Kesteren Ch. et al. informa que

[0014] "ET 743 tem solubilidade aquosa limitada. Mas, por ajuste do pH para 4, podem ser obtidas concentrações adequadas de ET 743. A instabilidade de ET 743 em solução aquosa necessita de liofili- zação, a fim de aumentar a estabilidade de armazenamento do produto. ET-743 é formulado correntemente como um produto liofilizado estéril, contendo 250 μg de substância ativa por unidade de dosagem, 250 mg de manitol como agente de enchimento e 0,05 M de tampão de fosfato a pH 4, a fim de solubilizar ET-743. Essa formulação é instável com armazenamento de longo prazo, à temperatura refrigerada e ambiente, e, portanto, deve ser armazenada entre -15 e -25°C, protegida contra luz. A reconstituição é realizada adicionando 5 ml de Água para Injeção, com subseqüente diluição em solução salina normal, antes da infusão i.v. A solução reconstituída é estável à temperatura ambiente por até 24 h."

[0015] Na prática, esse produto que contém 250 μg de ET-743, é produzido por secagem por atomização de 5 ml de solução que contém ET-743, manitol, tampão de fosfato e água em um frasco moldado. Frascos moldados, que contêm 1 mg de ET-743, também são produzidos por secagem por atomização de 20 ml da solução.

[0016] A secagem por atomização tipicamente envolve congelar a solução, reduzindo a pressão por um período de secagem primária, para remover vapor de água do material congelado por sublimação e produzir uma massa semi-secada, e aumentar a temperatura por um período de secagem secundária, para remover água residual da massa semi-secada. Os frascos são depois selados.

[0017] A formulação de ET-743 convencional descrita acima apre senta diversas desvantagens. Uma delas é que a formulação de ET- 743 liofilizada tem de ser armazenada a cerca de -20°C, para evitar decomposição do ET-743, para obter uma estabilidade de armazenamento de pelo menos 18 meses.

[0018] Além disso, as formulações de ET-743 enfrentam o proble ma de formação de quantidades relativamente grandes de ET-701, como impurezas. ET-701 é a principal impureza produzida durante o processo de liofilização e durante o armazenamento da formulação de ET-743. O mesmo resulta d hidrólise de ET-743 e tem a seguinte estrutura:

[0019] A formação de impurezas, porém, diminui ou até mesmo impede a capacidade de padronizar as formulações. Conseqüente- mente, é desejável obter formulações e métodos para produzir as mesmas, que forneçam modalidades, cuja composição não muda facilmente e imprevisivelmente pela formação descontrolada de impurezas.

[0020] Além disso, outra desvantagem da metodologia de formula ção de ET-743 convencional, descrita acima, é que, a fim de obter a formulação liofilizada, é necessário secar por congelamento uma quantidade relativamente grande de solução, com volumes de enchimento na ordem de 5 a 20 ml. Em contraste, seria desejável desenvolver uma metodologia de produção para formulações com compostos tão complexos quanto ET-743, que permitisse a produção de formulações com concentrações de substância ativa mais altas, de modo que os volumes a serem manuseados são conseqüentemente reduzidos. Tempo e energia são necessários em métodos convencionais para a etapa de secagem por atomização, em vista dos volumes de enchimento relativamente altos de 5 ou 20 ml. Junto com o tempo e a ener gia, também existe o risco de decomposição do ET-743, particularmente, na secagem secundária.

[0021] Em vista do potencial de formulações de ET-743 como agentes antitumorais, existe necessidade de obter uma formulação que possa solucionar os problemas que as formulações e metodologias de produção convencionais não abordam ou não solucionam completamente. Esses problemas incluem o problema de estabilidade de ET-743. Modalidades de formulações de ET-743 devem apresentar, preferivelmente, propriedades de secagem por atomização favoráveis, devem, preferivelmente, ser suscetíveis de fácil reconstituição e devem, preferivelmente, apresentar propriedades de diluição, tal como na diluição com fluido de infusão, enquanto apresentam tantas características de formulações para uso médico quantas referidas no presente. Tal como indicado acima, as modalidades de formulações de ET-743 devem ser estáveis durante armazenamento de longo prazo. Além disso, a formulação e sua metodologia de produção devem satisfazer pa-drões de biocompatibilidade e, desse modo, devem possibilitar o uso eficiente de um veículo de formulação, que seja não-tóxico, pelo menos às concentrações usadas para infusão.

[0022] Um exame geral de interações de excipiente-droga em for mulações parenterais é fornecido por Akers, MJ., em Journal of Pharmaceutical Sciences, 91, 2002. 2283-2300. Essa referência apresenta, inter alia, um capítulo sobre agentes de enchimento e lioprotetores, incluindo essa questão no contexto de liofilização.

[0023] Considera-se que as metodologias e formulações desen volvidas no contexto desta invenção são aplicáveis a outras ecteinas- cidinas, além de ET-743.

OBJETIVOS DA INVENÇÃO

[0024] É um objetivo desta invenção pôr à disposição formulações estáveis de ecteinascidinas e métodos para produzir essas formula- ções.

[0025] É um objetivo específico desta invenção obter uma nvoa formulação estável de ET-743. Particularmente, é necessária uma formulação que tenha uma estabilidade de armazenagem maior. Existe especialmente uma necessidade de evitar a formação de impurezas. Em particular, é desejável obter modalidades de formações que sejam substancialmente livres de ET-701.

[0026] Além disso, outros objetivos desta invenção referem-se ao desenvolvimento de metodologias de produção, que permitem a preparação de formulações de ET-743, com concentrações de ET-743 que são mais altas do que as obtidas por meios convencionais. Objetivos adicionais referem-se ao desenvolvimento de processos para aperfeiçoar a solubilidade de entidades químicas tão complexas quanto ET-743, eventualmente aumentando a concentração de ET-743 na solução para liofilização e, desse modo, reduzindo o volume de enchimento nos frascos, antes de liofilizar a formulação.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0027] De acordo com a presente invenção, são postas à disposi ção composições de ET-743, que compreendem ET-743 e um dissa- carídeo, e métodos para preparar essas composições. Modalidades preferidas dessas composições são de pureza farmacêutica.

[0028] Outras modalidades desta invenção são obtidas por com posições que compreendem uma ecteinascidina e um dissacarídeo.

[0029] Algumas modalidades dessas composições são obtidas por formulações liofilizadas, que compreendem uma ecteinascidina, tal como ET-743 e um dissacarídeo. Métodos para preparar essas formulações são postos à disposição.

[0030] A invenção põe à disposição métodos para reduzir, ou até mesmo eliminar, substancialmente, a formação de impurezas em formulações de ET-743. Algumas modalidades incluem metodologia para reduzir, ou até mesmo eliminar, substancialmente, a formação de ET- 701 em formulações de ET-743.

[0031] A invenção também põe à disposição metodologia para manusear mais eficientemente formulações de uma ecteinascidina, tal como ET-743, incluindo métodos para produzir formulações de concentração mais alta e métodos para reduzir o volume de enchimento de um frasco, ao produzir uma formulação liofilizada.

[0032] A presente invenção também põe à disposição métodos para solubilizar entidades químicas complexas, tal como ecteinascidinas, incluindo, mas não limitadas a ET-743. Esses métodos possibilitam a produção de uma solução de ET-743 mais concentrada em solução de carga para liofilização, levando a volumes de enchimento reduzidos.

DETALHES DA INVENÇÃO

[0033] Descobrimos no contexto desta invenção que dissacarídeos estabilizam formulações de ecteinascidina. Ecteinascidinas, incluindo ET-743, são entidades químicas complexas, cujo funcionamento em formulações não é previsível em termos do comportamento de outras substâncias químicas não relacionadas. Esse comportamento é ainda mais difícil de prever quando pelo menos uma ecteinascidina está incluída como substância ativa em uma formulação que deve satisfazer padrões de biocompatibilidade, inclusive padrões médicos. Descobrimos, ainda, a esse respeito que o uso de dissacarídeos como agentes de enchimento pode reduzir drasticamente a formação de impurezas durante o processo de liofilização e armazenamento de composições de ET-743.

[0034] Quando modalidades desta invenção devem obter formula ções de ET-743 que sejam substancialmente livres de outras ecteinas- cidinas, tal como ET-701, ou pelo menos com um conteúdo de ET-701 tão baixo quanto possível, então ET-701 é considerado como uma impureza, cuja presença na formulação deve ser, pelo menos, reduzida.

[0035] Além disso, o uso de dissacarídeos também aperfeiçoa as condições de armazenamento, possibilitando armazenamento de longo prazo da formulação liofilizada em um amplo limite de temperatura, incluindo condições de refrigeração e temperatura ambiente. O termo "estável", tal como usado no presente, por exemplo, a expressão "uma formulação de ET-743 estável", refere-se a uma formulação que satisfaz características de estabilidade, tais como relatadas no presente e equivalentes das mesmas, que não são possuídas por formulações convencionais e que não são obtidas quando a formulação é preparada por metodologias de produção convencionais.

[0036] Exemplos de modalidades da presente invenção são obti das por novas composições farmaceuticamente aceitáveis, que compreendem uma ecteinascidina, tal como ET-743, e um dissacarídeo.

[0037] Tal como observado na introdução, ecteinascidinas têm si do amplamente descritas. Elas podem ter a seguinte fórmula geral (I):

[0038] na qual:

[0039] R5 é OH, alcóxi ou alcanoilóxi;

[0040] R6 é hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila ou arila;

[0041] R12 é hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila ou arila;

[0042] R16 é hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila ou arila;

[0043] R17 é OH, alcóxi ou alcanoilóxi;

[0044] R18 é OH, alcóxi ou alcanoilóxi;

[0045] R21 é H, OH, CN ou outro grupo nucleófilo; e

[0046] Ra é hidrogênio e Rb é amino opcionalmente substituído, ou

[0047] Ra com Rb formam uma função carbonila =O, ou

[0048] Ra, Rb e o carbono ao qual estão ligados formam um grupo tetraidroisoquinolina.

[0049] Nesses compostos, os substituintes podem ser escolhidos de acordo com a seguinte orientação:

[0050] Grupos alquila e alcóxi têm, preferivelmente, de 1 a 12 átomos de carbono. Uma classe mais preferida de grupos alquila e alcóxi tem de 1 a cerca de 6 átomos de carbono, e, de modo especialmente preferido, 1, 2, 3 ou 4 átomos de carbono. Metila, etila e propila, incluindo isopropila, são grupos alquila particularmente preferidos nos compostos da presente invenção. Metóxi, etóxi e propóxi, incluindo isopropóxi, são grupos alquila particularmente preferidos nos compostos da presente invenção. Outra classe particularmente preferida de grupos alquila e alcóxi tem de 4 a cerca de 12 átomos de carbono, e, de modo especialmente preferido, 5, 6, 7 ou 8 átomos de carbono. Tal como usado no presente, o termo alquila, a não ser que modificado de outro modo, refere-se a grupos tanto cíclicos como não-cíclicos, embora grupos cíclicos compreendam pelo menos três membros anelares de carbono.

[0051] Grupos alquenila e alquinila prefridos nos compostos da presente invenção têm uma ou mais ligações insaturadas e de 2 a cerca de 12 átomos de carbono. Uma classe particularmente preferida de grupos alquenila ou alquinila tem de 2 a cerca de 6 átomos de carbono, e, de modo especialmente preferido, 2, 3 ou 4 átomos de carbono. Outra classe particularmente preferida de grupos alquenila ou alquinila tem de 4 a cerca de 12 átomos de carbono, e, ainda mais preferivelmente, 5, 6, 7 ou 8 átomos de carbono. Tais como usados no presente, os termos alquenila e alquinila referem-se a grupos tanto cíclicos como não-cíclicos.

[0052] Grupos arila apropriados nos compostos da presente in- venção incluem compostos anelares simples e múltiplos, inclusive compostos anelares múltiplos, que contêm grupos arila separados e/ou fundidos. Grupos arila típicos têm 1 a 3 anéis separados ou fundidos e de 6 a cerca de 18 átomos anelares de carbono. Grupos arila especialmente preferidos incluem fenila, naftila, bifenila, fenantrila e antracila substituídos ou não substituídos.

[0053] Grupos alcanoilóxi e alcanoíla apropriados têm de 2 a cerca de 20 átomos de carbono, mais preferivelmente, de 2 a cerca de 8 átomos de carbono, ainda mais preferivelmente, de 2 a cerca de 6 átomos de carbono, ainda mais preferivelmente, 2 átomos de carbono. Outra classe preferida de grupos alcanoilóxi tem de 12 a cerca de 20 carbonos, ainda mais preferivelmente, de 14 a cerca de 18 átomos de carbono, e de modo especialmente preferido, 15, 16, 17 ou 18 átomos de carbono.

[0054] Os grupos acima mencionados podem ser substituídos em uma ou mais posições disponíveis por um ou mais grupos apropriados, tal como OR’, =O, SR’, SOR’, SO2R’, NO2, NHR’, N(R’)2, =N-R’, NHCOR’, N(COR’)2, NHSO2R’, CN, halogênio, C(=O)R’, CO2R’, CO2R’, OC(=O)R’, sendo que cada um dos grupos R’ é escolhido, independentemente, do grupo que consiste em H, OH, NO2, NH2, SH, CN, ha- logênio, =O, C(=O)H, C(=O)CH3, CO2H, C2-C12-alquila, substituída ou não substituída, C2-C12-alquenila, substituída ou não substituída, C2- C12-alquinila, substituída ou não substituída ou arila, substituída ou não substituída. Substituintes de halogênio apropriados nos compostos da presente invenção incluem F, Cl, Br e I.

[0055] Compostos preferidos da invenção são os da fórmula geral (I), sendo que são aplicáveis uma ou mais das seguintes definições:

[0056] R5 é um alcanoilóxi;

[0057] R6 é metila;

[0058] R12 é metila;

[0059] R16 é metila;

[0060] R17 é metóxi,

[0061] R18 é OH;

[0062] R21 é H, OH ou CN; e

[0063] Ra é hidrogênio e Rb é um grupo amido, ou

[0064] Ra com Rb formam =O, ou

[0065] Ra, Rb e o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um grupo da fórmula (II)

[0066] Exemplos de compostos para a presente invenção incluem ecteinascidinas naturais, tal como ecteinascidina 743 e outros compostos de ecteinascidina fundidos, conjugados em 1,4, descritos, exemplo, nos documentos US 5.089.273, US 5.478.932, 5.654.426, US 5.721.362, US 6.124.293, US 5.149.804, 09/546.877, US 5.985.876 e WO 01/77115.

[0067] Compostos da seguinte fórmula (III) são particularmente preferidos:

[0068] onde

[0069] Ra é hidrogênio e Rb é amido da fórmula -NHRf-, em que Rf é alcanoíla, ou Ra com Rb formam =O, ou

[0070] Ra, Rb e o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um grupo da fórmula (II)

[0071] Rd é alcanoíla; e

[0072] R21 é H, OH ou CN.

[0073] Os grupos alcanoíla podem ser acetila ou mais altos, por exemplo, de até C20.

[0074] Desse modo, compostos preferidos desta invenção inclu em:

[0075] e compostos relacionados, com grupos acila diferentes.

[0076] Ecteinascidina 743, também conhecida como ET743 ou ec- teinascidina 743 é particularmente preferida.

[0077] Exemplos de dissacarídeos apropriados para as composi ções desta invenção incluem lactose, trealose, sacarose, e combinações dos mesmos. Exemplos adicionais de dissacarídeos que podem ser usados em algumas modalidades desta invenção incluem pelo menos um de maltose, isomaltose, celobiose, isosacarose, isotrealose, sorbose, turanose, melibiose, bentiobiose e misturas dos mesmos. Atualmente, sacarose é preferida.

[0078] Em ouras modalidades da invenção, a composição com preende uma ecteinascidina, tal como ET-743 e um dissacarídeo livre de lactose. Em outras modalidades da invenção, a composição compreende uma ecteinascidina, tal como ET-743 e um dissacarídeo livre de trealose. Em outras modalidades da invenção, a composição compreende uma ecteinascidina, tal como ET-743, e um dissacarídeo livre de sacarose. Em outras modalidades da invenção, a composição compreende uma ecteinascidina, tal como ET-743, e um dissacarídeo livre de maltose. Em outras modalidades da invenção, a composição compreende uma ecteinascidina, tal como ET-743, e um dissacarídeo livre de isomaltose. Em outras modalidades da invenção, a composição compreende uma ecteinascidina, tal como ET-743, e um dissaca- rídeo livre de celobiose. Em outras modalidades da invenção, a com- posição compreende uma ecteinascidina, tal como ET-743, e um dis- sacarídeo livre de isosacarose. Em outras modalidades da invenção, a composição compreende uma ecteinascidina, tal como ET-743, e um dissacarídeo livre de isotrealose. Em outras modalidades da invenção, a composição compreende uma ecteinascidina, tal como ET-743, e um dissacarídeo livre de sorbose. Em outras modalidades da invenção, a composição compreende uma ecteinascidina, tal como ET-743, e um dissacarídeo livre de turanose. Em outras modalidades da invenção, a composição compreende uma ecteinascidina, tal como ET-743, e um dissacarídeo livre de melibose. Em outras modalidades da invenção, a composição compreende uma ecteinascidina, tal como ET-743, e um dissacarídeo livre de gentobiose.

[0079] Desse modo, em algumas modalidades, a composição des ta invenção contém menos de 2% ou menos de 1% ou menos de 0,5% ou menos de 0,2% ou menos de 0,1% em peso de pelo menos um, preferivelmente, de cada um de, lactose, trealose, sacarose, maltose, isomaltose, celobiose, isosacarose, isotrealose, sorbose, turanose, melibiose e gentiobiose.

[0080] Os termos "misturas dos mesmos" e "combinações dos mesmos", tal como usados no presente, referem-se a pelo menos duas entidades que fornecem a base antecedente para os termos "misturas dos mesmos" e combinações dos mesmos". A título de ilustração, mas não como uma limitação, os termos "produto que compreende pelo menos um de A, B, e C, e misturas dos mesmos" referem-se a modalidades do produto para os quais qualquer um dos seguintes está satisfeito: A está no produto; B está no produto; C está no produto; A e B estão no produto; A e C estão no produto; B e C estão no produto; e A, B e C estão no produto;

[0081] Além disso, é entendido que os termos, tais como "reagir", "formar", e termos relacionados, aplicados a uma entidade química no presente, referem-se a qualquer um de: (a) a entidade química, como tal, e (b) a entidade química na forma pela qual essa entidade está presente no meio de reação. Analogamente, para citar uma entidade química ou para dar sua fórmula no contexto de uma operação ou etapa de reação, ou para citar a mesma ou dar sua fórmula como estando em um meio, quer sólido, quer líquido, incluindo produtos, formulações e combinações, refere-se no presente a qualquer um de: (a) a entidade química, como tal, e (b) a entidade química na forma pela qual essa entidade está presente no meio. Por exemplo, citar uma entidade química ácida no presente refere-se a qualquer forma ou formas pela qual essa entidade está presente no contexto no qual é citada. A título de ilustração, mas não como limitação, citar a entidade química "cloreto de sódio" ou apresentar sua fórmula química refere-se, no presente, à entidade NaCl como molécula diatômica como tal, se essa for a forma na qual o cloreto de sódio está presente no meio em questão; também se refere à coleção de espécies químicas não dissociadas e/ou dissociadas, se o cloreto de sódio no meio em questão estiver inteira ou parcialmente dissociado, incluindo espécies nesse meio que estão em solvato, clatrato (part of cages), associado a outras espécies etc.

[0082] Qualquer composto mencionado no presente pretende re presentar esse composto específico, bem como determinadas variações ou formas. Em particular, compostos mencionados no presente podem ter centros assimétricos e, portanto, existem em formas enanti- oméricas diferentes. Todos os isômeros ópticos e estereoisômeros dos compostos mencionados no presente e misturas dos mesmos, são considerados dentro do âmbito das formulações e metodologias desta invenção. Portanto, qualquer composto específico, mencionado no presente, pretende representar qualquer racemato, uma ou mais formas enantioméricas, uma ou mais formas diastereoisoméricas, uma ou mais formas atropisoméricas, e mistura das mesmas.

[0083] Além disso os compostos mencionados no presente podem existir como isômeros geométricos (ou seja, isômeros cis e trans), como tautômeros, ou como atropisômeros. Adicionalmente, qualquer composto específico, mencionado no presente, pretende representar hidratos, solvatos e polimorfos, e misturas dos mesmos, quando essas formas existem no meio. Todos os isômeros geométricos, tautômeros, atropisômeros, hidratos, solvatos, polimorfos e formas marcadas iso- topicamente dos compostos mencionados no presente, e misturas dos mesmos, são considerados dentro do âmbito das formulações e metodologias desta invenção.

[0084] Para obter uma descrição mais concisa, algumas das ex pressões quantitativas dadas no presente não são qualificadas com o termo "cerca de". É entendido que, quer o termo "cerca de" for usado explicitamente ou não, cada quantidade dada no presente significa referir-se ao valor dado efetivo, e também significa referir-se à aproximação a esse valor dado, que seria razoavelmente inferido com base no versado na técnica, incluindo equivalentes e aproximações, devidos às condições experimentais e/ou de medição para esse valor dado.

[0085] A substância ou substâncias ativa(s) no contexto desta in venção podem ser de origem natural, semi-sintética ou sintética, incluindo combinações de origens. Em modalidades nas quais a substância ativa é uma ecteinascidina, tal como ET-743, o ET-743 pode ser de origem natural, isolado, por exemplo, de um tunicado do gênero Ecteinascidia, preferivelmente, a espécie Ecteinascidia turbinata. O ET-743 pode ser de origem sintética ou semi-sintética. Referência é feita, por exemplo, a WO 0069862 e WO 0187895, ambos os quais estão incorporados na totalidade por referência.

[0086] A relação da substância ativa para o agente de enchimento em modalidades desta invenção é determinada de acordo com a solubilidade do agente de enchimento e, quando a formulação é secada por atomização, também de acordo com a aptidão para secagem por atomização do agente de enchimento. Está previsto que essa relação (p/p) pode ser de cerca de 1:1 em algumas modalidades, cerca de 1:5 em outras modalidades, cerca de 1:10 em ainda outras modalidades, enquanto outras modalidades ilustram relação no âmbito de cerca de 1:10 a cerca de 1:1. Está previsto que outras modalidades têm essas relações no âmbito de cerca de 1:10 a cerca de 1:100, e, ainda, outras modalidades têm essas relações no âmbito de cerca de 1:100 a cerca de 1:500. Quando o composto ativo é ET-743, a relação (p/p) de ET- 743 para agente de enchimento é, tipicamente, de cerca de 1:100 a cerca de 1:1500, preferivelmente, de cerca de 1:200 a cerca de 1:800, mais preferivelmente, de cerca de 1:250 a cerca de 1:600, e, ainda mais preferivelmente, cerca de 1:400.

[0087] O material liofilizado normalmente é apresentado em um frasco que contém uma quantidade especificada de ecteinascidina ou composto ativo. Quando o composto ativo é ET-743, as quantidades ativas são ilustradas por 250 μg e 1 mg.

[0088] A presente invenção não está limitada por formas ou confi gurações de recipiente específicas, desde que o recipiente seja aceitável para seu uso pretendido e para os padrões para o mesmo. Modalidades desta invenção são apresentadas com uma formulação contida em frascos, preferivelmente, frascos em tubos.

[0089] As formulações liofilizadas desta invenção podem ser re constituídas e diluídas para dar uma composição desta invenção, na forma de uma solução pronta para injeção intravenosa. As quantidades efetivas de fluido de reconstituição não são aspectos limitantes de modalidades desta invenção. A título de ilustração, mas não como limitação, modalidades de formulações liofilizadas de acordo com a invenção são reconstituídas com um volume de água. A maioria desses volumes não excede cerca de 20 ml, sendo que volumes preferidos es- tão no âmbito de cerca de 1 ml a cerca de 15 ml, mais preferivelmente, no âmbito de cerca de 1 ml a cerca de 10 ml, e ainda mais preferivelmente, no âmbito de cerca de 1 ml a cerca de 4 ml. Quando a substância ativa é representada por ET-743, a solução reconstituída nessas modalidades contém uma concentração de ET-743 de até 500 μg/ml, sendo preferidas concentrações de cerca de 50 μg/ml, cerca de 100 μg/ml e cerca de 250 μg/ml.

[0090] Modalidades reconstituídas da pesente invenção podem ser diluídas adicionalmetne, caso desejado, sendo que essa diluição adicional não é uma limitação da presente invenção. Essa diluição adicional é preferivelmente realizada com um sistema aquoso, que é, normalmente, 0,9% de cloreto de sódio ou 5% de glicose. A solução reconstituída é diluída na dependência da concentração na solução re-constituída e da concentração desejada na solução diluída.

[0091] Modalidades de formulações de ET-743 de acordo com es ta invenção podem ser usadas no tratamento de uma pluralidade de cânceres, inclusive o tratamento de qualquer um de sarcoma, leiomi- ossarcoma, lipossarcoma, osteossarcoma, câncer ovariano, câncer de mama, melanoma, câncer colorretal, mesotelioma, câncer renal, câncer endometrial e câncer do pulmão, e doenças com uma pluralidade dessas formas de câncer. Entende-se que "tratamento" nesse contexto refere-se a uma ação que leva a uma melhora da(s) doença(s) de câncer. Modalidades de ET-743 de acordo com esta invenção também podem ser usadas no tratamento de doenças de câncer refratário, que não tiveram resposta favorável a outros tratamentos. Além disso, modalidades de formulações de acordo com esta invenção podem ser usadas nos testes com tecidos de laboratório, incluindo, mas não limitados a, testes clínicos, testes analíticos e testes de modelação.

[0092] Modalidades desta invenção que compreendem uma ectei- nascidina, tal como ET-743, são preferivelmente administradas por in- fusão. A etapa de infuso é tipicamente repetida em uma base cíclica, que pode ser repetida, opcionalmente, por exemplo, por 1 a 20 ciclos. O ciclo inclui uma fase de infundir a formulação de ET-743 e, normalmente, também uma fase de não infundir ET-743. Tipicamente, o ciclo é executado em semanas, e, desse modo, o ciclo normalmente compreende uma ou mais semanas de uma fase de infusão de ET-743 e uma ou mais semanas para completar o ciclo. Um ciclo de 3 semanas é preferido, mas, alternativamente, pode ser de 1 a 6 semanas. A fase de infusão em si pode ser uma administração única em cada ciclo de, digamos, 1 a 72 horas, mais comumente de cerca de 1, 3 ou 24 horas; ou uma infusão em uma base diária na fase de infusão do ciclo por, preferivelmente, 1 a 5 horas, especialmente, por 1 ou 3 horas; ou uma infusão em uma base semanal na fase de infusão do ciclo por preferivelmente, 1 a 3 horas, especialmente, 2 ou 3 horas. Uma administração única no início de cada ciclo é preferida. Preferivelmente, o tempo de infusão é de cerca de 1, 3 ou 24 horas.

[0093] As soluções reconstituídas e diluídas exemplificam modali dades desta invenção. Uma formulação que é reconstituída e diluída pode ser administrada intravenosamente usando os protocolos disponíveis. A dose é escolhida de acordo com o plano de dosagem, levando em consideração os dados existentes sobre Toxicidade Limitadora de Dose, a cujo respeito veja, por exemplo, WO 0069441, WO 0236135 e WO 0339571, e van Kesteren, Ch. et al., 2003, Anti-Cancer Drugs, 14(7), 487-502. Essas três especificações de patente WO e esse artigo de van Keseren estão incorporados por referência específica.

[0094] Protocolos de dosagem preferidos incluem: a) cerca de 1,5 mg/m2 de área de superfície corporal, administrados como infusão intravenosa ao longo de 24 horas, com um intervalo de três semanas entre ciclos; b) cerca de 1,3 mg/m2 de área de superfície corporal, admi- nistrados como infusão intravenosa ao longo de 3 horas, com um intervalo de três semanas entre ciclos; c) cerca de 0,580 mg/m2 de área de superfície corporal, administrados semanalmente como infusão intravenosa ao longo de 3 horas, durante 3 semanas e uma semana de repouso.

[0095] Uma ecteinascidina, tal como ET-743, pode ser usada em combinação com outra droga. Por exemplo, pode ser administrada com outra droga antitumoral. O leitor é referido à lista em WO 0069441 e WO 0236135, ambos os quais estão incorporados ao presente por referência específica. Exemplos dessas outras drogas incluem doxor- rubicina, cisplatina, paclitaxel, carboplatina, doxorrubicina lipossomal peguilada, docetaxel, capecitabina e gencitabina. Drogas com outros modos de ação podem ser usadas, incluindo dexametasona. A administração da outra droga pode ser antes, durante ou depois da administração da ecteinascidina, tal como ET-743.

[0096] Modalidades de formulações desta invenção, que contêm uma ecteinascidina, tal como ET-743, podem ser produzidas secando por atomização uma composição desta invenção na forma de uma solução de carga, incluindo a ecteinascidina e dissacarídeo. Normalmente, a solução de carga é tamponada, por exemplo para um pH de cerca de 4. Agentes tampões apropriados incluem tampão de fosfato e tampão de citrato. Outros tampões possíveis podem ser usados, tal como tampão de fosfato/citrato (uma mistura de tampão de fosfato e tampão de citrato), tampão de lactato, tampão de ascorbato, tampão de ácido tartárico/citrato, tampão de bicarbonato/ácido clorídrico, tampão de acetato, tampão de succinato e tampão de glicina/ácido clorídrico. Misturas de tampões podem ser usadas. Tampões biocompatí- veis, que permitem o controle de pH a um valor desejado, representam modalidades adicionais desta invenção.

[0097] Outros componentes podem ser incluídos na solução de carga, por exemplo agentes tensoativos, tal como monooleato de sor- bitano de polioxietileno 20 ou estearato de polioxila 40. Outros tensoa- tivos possíveis incluem fosfolipídios, tal como uma lecitina; copolíme- ros de polioxietileno-polioxipropileno, tal como um tensoativo plurônico; ésteres de polioxietileno de ácido 12-hidroxiesteárico, tal como um tensoativo de solutol; etoxilatos de colesterol, tal como glicerol de dia- cila, glicerol de dialquila; sais biliares, tal como colato de sódio, dioxi- colato de sódio, ésteres de sacarose, tal como monolaurato de sacarose, monooleato de sacarose; polivinil pirrolidona (PVP); ou álcool polivinílico (PVA).

[0098] A formulação normalmente é fornecida como um frasco contendo o produto liofilizado. Essa forma de fornecimento, porém, não é uma limitação da presente invenção. Para obter um frasco contendo o produto liofilizado, a solução de carga é adicionada a um frasco e secada por atomização. Tal como mencionado no presente, outro objetivo da presente invenção é pôr à disposição um processo para aperfeiçoar a solubilidade de uma ecteinascidina, tal como ET-743, a fim de aumentar a concentração de ecteinascidina na solução e reduzir o volume de enchimento nos frascos, antes de seguir com o processo de liofilização. Essa metodologia, desenvolvida no contexto da presente invenção, possibilita a produção de modalidades da solução de carga com concentração de substância ativa que é maior do que a obtida de acordo com metodologias convencionais. Volumes de enchimento reduzidos, em comparação com a formulação convencional com manitol, são, portanto, obtidos com a presente metodologia. Essa redução de volume de enchimento possibilita economia de tempo e energia durante a etapa de secagem por atomização. Além disso, também há uma diminuição no risco de decomposição de ET-743, par-ticularmente na secagem secundária.

[0099] Tal como observado acima no presente, ET-743 tem uma solubilidade aquosa limitada, veja, por exemplo, van Kesteren et al., 2003, Anti-Cancer Drugs, 14(7), páginas 487-502. Metodologias convencionais realizam o ajuste do pH do meio para 4, com tamponador, para solubilizar ET-743. Esse controle de pH é convencionalmente obtido com um tampão de fosfato de 0,05 M, a um pH 4. Foi constatado no contexto desta invenção que a solubilidade de ET-743 é aperfeiçoada na solução de carga formando uma pré-solução do ET-743 em um ácido. Com essa dissolução prévia, a concentração de ET-743 na solução de carga e no frasco pode ser aumentada e o volume de enchimento nos fracos pode ser reduzido. Nessas modalidades da presente invenção, o volume de enchimento normalmente é reduzido em cerca de 80%, com relação ao volume de enchimento convencional. A título de ilustração, mas não como limitação, modalidades desta invenção obtêm um volume de enchimento de 1 ml para um frasco que contém 0,25 mg de ET-743, e de 4 ml para um frasco que contém 1 mg de ET- 743. O volume de enchimento pode ser opcionalmente reduzido adicionalmente em outras modalidades desta invenção, aumentando a concentração de ET-743.

[00100] A metodologia convencional compreendia a dissolução de ET-743, manitol e tampão de fosfato de 0,05 M a pH 4, junto com água para injeção; a solubilidade da solução de carga era limitada, devido à baixa solubilidade de ET-743 nesse meio. Foi descoberto no contexto da presente invenção que o tratamento prévio de ET-743 em uma solução ácida aperfeiçoa a solubilidade de ET-743 e possibilita obter soluções de enchimento com concentrações mais altas de ET-743. Desse modo, a presente invenção põe à disposição processos úteis para aperfeiçoar a solubilidade de ET-743 na solução de enchimento, que compreende dissolver ET-743 em um meio ácido, misturando o meio com ET-743 com outros componentes da solução de enchimento e, opcionalmente, ajustando o pH. Em algumas modalidades exemplificadas, mas não restritivas, desta invenção, o ajuste de pH é realizado com um tampão de fosfato. O meio ácido apropriadamente não contém ou substancialmente não contém componentes tampões, e normalmente consiste em ácido aquoso.

[00101] Modalidades ilustrativas de solução de carga para secagem por atomização de acordo dom a presente invenção são obtidas por uma solução de ET-743, tamponada para pH 4 com diidrogeno fosfato de potássio e ácido fosfórico com sacarose como agente de enchimento.

[00102] Uma modalidade ilustrativa da metodologia de acordo com esta invenção estabelece o seguinte: ET-743 é dissolvido em ácido fosfórico de 0,1 N. Depois, água para injeção ("WFI"), diidrogeno fosfato de potássio, sacarose e ET-743 (previamente dissolvida em ácido fosfórico de 0,1 N) são misturados. A dissolução é verificada visualmente antes de continuar, e a dissolução é considerada completa quando isso é constatado visualmente. O pH da solução é verificado e ajustado para um valor no âmbito de cerca de 1 a cerca de 5, mais preferivelmente, no âmbito de cerca de 2 a cerca de 4,5, ainda mais preferivelmente, no âmbito de cerca de 3 a cerca de 4,5, e de modo especialmente preferido, para um pH de cerca de 4,0, por lenta adição de um ácido apropriado. Uma modalidade preferida desse ácido é ácido fosfórico, caso em que a concentração preferida é de cerca de 0,1 N. Uma base apropriada é opcionalmente adicionada, para controle de pH. Uma modalidade preferida dessa base é hidróxido de potássio, preferivelmente em solução, caso em que uma concentração preferida é de cerca de 0,1 N. O volume é finalmente ajustado por adição de um fluido biocompatível apropriado, preferivelmente, WFI. A solução de carga é depois enchida em frascos de acordo com a dose desejada.

[00103] A secagem por atomização é realizada em alguma modali- dade desta invenção usando tempos de secagem secundária reduzidos. Um protocolo envolve refrigeração para uma temperatrua de cerca de -40°C, secagem prima'ria a 4 a 8 Pa (40 a 80 μbar) por 10 a 50 horas, e secagem secundária a uma pressão mais baixa e acima de 0°C por 10 a 50 horas. Em outros protocolos no contexto desta invenção, é realizada refrigeração para temperaturas para abaixo de -40°C.

[00104] Modalidades desta invenção compreendem liofilização refrigerando o produto para abaixo de -40°C. A secagem primária é realizada a uma temperatura de cerca de -20°C a cerca 3-26°C e uma pressão de cerca de 6 Pa (60 μbar) por aproximadamente 15 a 40 horas. A secagem secundária é realizada a uma temperatura de cerca de 20°C a cerca de 30°C e a uma pressão de cerca de 10 Pa (100 μbar), por aproximadamente 20 a 40 horas.

[00105] Modalidades de formulações liofilizadas desta invenção são apropriadas para armazenamento a temperaturas significativamente mais altas do que temperaturas de armazenamento de formulação convencionais. Exemplos de temperaturas de armazenamento para formulações de acordo com esta invenção estão em torno de +5°C. Essas temperaturas são facilmente obtidas por refrigeradores comuns.

DESENHOS DA INVENÇÃO

[00106] Figura 1. Estudo de estabilidade comparativo. Avaliação da pureza de ET-743 depois de 6 meses de armazenamento a 5°C.

[00107] Figura 2. Estudo de estabilidade comparativo. Avaliação da pureza de ET-743 depois de 12 meses de armazenamento a 5°C.

[00108] Figura 3. Produção de impurezas de ET-701 em diferentes formulações armazenadas durante 9 meses a 5°C.

[00109] Figura 4. Evolução de % de pureza de ET-743 comparativa das novas formulações e 3 lotes de formulação de referência, armazenados durante 3 meses a 5°C.

[00110] Figura 5. Produção de impurezas de ET-701 em diferentes formulações armazenadas durante 3 meses a 5°C.

[00111] Figura 6. Evolução de % de pureza de ET-743 comparativa das novas formulações e 3 lotes de formulação de referência, armazenados durante 3 meses a 25°C/65% de RH.

[00112] Figura 7. Produção de impurezas de ET-701 em diferentes formulações, armazenadas durante 3 meses a 25°C/65% de RH.

[00113] Figura 8. Evolução de % de pureza de ET-743 comparativa das novas formulações, armazenadas a 40°C/70% de RH durante 3 meses.

[00114] Figura 9. Evolução de % de pureza de ET-743 comparativa das novas formulações, armazenadas a 40°C/70% de RH durante 3 meses. EXEMPLO Exemplo 1

[00115] Esse exemplo descreve um estudo de estabilidade comparativo de 8 novas formulações com a formulação de ET-743 convencional (com manitol). Lactose e sacarose foram usados para ilustrar a presente invenção. Uma formulação de referência foi realizada usando manitol. Ouros agentes de enchimento, tal como dextrano (Dextran 40) e povidone (Kollidon 12, PVP) foram testados para comparação. Os tensoativos estearato de polioxila 40 (Myrj 45) ou monooloeato de sor- bitano de polioxietileno 20 (Polisorbato 80) foram usados em algumas formulações, e o tampão foi omitido em algumas formulações.

[00116] Soluções de carga foram preparadas e secadas por congelamento por um procedimento padronizado. Foi preparado um volume de 150 ml de cada formulação: a quantidade de fosfato de potássio para a solução final (1,02 g) foi pesada e dissolvida em 90% de volume final (135 ml) de água. Depois, o pH foi ajustado para pH 4,0 com ácido fosfórico de 0,1 N. 7,85 mg de ET-743 foram adicionados a um recipiente de vidro de mistura e dissolvidos por agitação magnética em 2/3 do volume (90 ml) da solução de fosfato de potássio por aproximadamente 1 h (a dissolução foi verificada visualmente). A quantidade de agente de enchimento e tensoativo foi adicionada e dissolvida em 1/3 do volume da solução de fosfato de potássio. Depois, a solução foi adicionada à solução de ET-743 e a agitação foi mantida por 1 hora adicional.

[00117] A solução foi levada ao peso final com água (uma densidade de 1,019 g/cc foi adotada para todas as formulações).

[00118] A solução foi filtrada através de um filtro de celulose de 0,22 μm.

[00119] A solução foi enchida em frascos de vidro de 25 ml a 5 ml/frasco e mantida a -20°C, até o processo de liofilização.

[00120] A liofilização foi realizada de acordo com a seguinte tabela I: Tabela I

[00121] Depois da secagem por atomização, os frascos foram vedados. Os frascos foram transferidos para uma área refrigerada (20°C).

[00122] A composição para cada frasco foi tal como se segue (Tabela II), observando que a água evapora durante o procedimento de secagem por atomização. Tabela II

Tabela II continuação

[00123] O teste de estabilidade foi realizado a uma temperatura de 5 ± 3°C.

[00124] A avaliação da pureza das nove formulações, a 5°C, duran- te 3 meses é mostrada na tabela III e na figura 1. No caso de formulações que apresentam uma estabilidade mais alta (Referência, Sacarose, Lactose e ET-poly80sac), o teste de estabilidade foi prolongado até 9 meses, e no caso de formulações de Lactose e Sacarose, o teste de estabilidade foi até mesmo prolongado até 12 meses, devido à sua alta estabilidade. Os dados na tabela III e na figura 2 mostram que as for-mulações que contêm sacarose e lactona apresentaram uma estabilidade aperfeiçoada, com uma diminuição de pureza de apenas 2%. Essa diminuição é significativamente mais baixa do que a diminuição nas outras formulações testadas. Tabela III

Tabela III (continuação)

[00125] Tal como mostrado na tabela IV e na figura 3, o principal produto de degradação da formulação de referência, ET-701, foi dramaticamente reduzida quando ET-743 foi formulado na presença de sacarose ou lactose. Tabela IV

[00126] Foi descoberto no contexto desta invenção que dissacarí- deos aperfeiçoam a estabilidade de ET-743, em comparação com ma- nitol. Modalidades desses dissacarídeos incluem lactose, sacarose e misturas dos mesmos. A estabilidade das formulações que compreendem dissacarídeos também é aperfeiçoada, em comparação com outras formulações que contêm outros agentes de enchimento convencionais, tal como dextrano e povidona. Determinou-se que modalidades das formulações de dissacarídeo de acordo com esta invenção são estáveis por pelo menos 12 meses, a 5°C. Modalidades de formulações de acordo com esta invenção têm um conteúdo de impurezas que é significativamente reduzido com relação ao de formulações convencionais. A presença de ET-701 , conseqüentemente, é reduzida. Modalidades desta invenção compreendem pelo menos um agente tensoativo, tal como Polisorbato 80. Essas modalidades apresentaram propriedades de solubilidade de ET-743 e características de estabilização favoráveis. A presença de pelo menos um tensoativo, porém, não é um aspecto limitante desta invenção, e outras modalidades não compreendem esse(s) agente(s). Exemplo 2

[00127] A finalidade deste estudo era comparar a estabilidade da formulação de ET-743 padrão com cinco novas formulações. Esse estudo avaliou a estabilidade das formulações a + 50°C.

[00128] A composição das formulações testadas era a seguinte (Tabela V), observando que a água evapora durante o procedimento de secagem por atomização:

[00129] Soluções de carga foram preparadas e secadas por congelamento usando os seguintes protocolos específicos: Formulações Ettreal, ETP80treal e Referência

[00130] Um peso de 100 g de cada formulação foi preparada como segue:

[00131] A quantidade de fosfato de potássio para a solução final foi pesada e dissolvida em 90% de volume final (90 ml) de água. Depois, o pH foi ajustado para pH 4,0 com ácido fosfórico de 0,1 N.

[00132] A quantidade de ET-743 (5,0 mg) foi adicionada a um recipiente de vidro de mistura e dissolvida por agitação magnética em 2/3 do volume (60 ml) da solução de fosfato de potássio por aproximadamente 1 h (a dissolução foi verificada visualmente). A quantidade de agente de enchimento e tensoativo foi adicionada e dissolvida em 1/3 do volume da solução de fosfato de potássio. Depois, a solução foi adicionada à solução de ET-743 e a agitação foi mantida por 1 hora adicional.

[00133] A solução foi levada ao peso final com água.

[00134] A solução foi filtrada através de um filtro de celulose de 0,22 μm, tirando uma alíquota antes da filtração, para IPC.

[00135] A solução foi enchida em frascos de 25 ml a 5 ml/frasco e mantida a -20°C, até o processo de liofilização. Formulações ETP80sacc250, ETP80treal250, ETP80trealgly250

[00136] Um peso de 30 g de cada formulação foi preparada tal como se segue:

[00137] A quantidade de fosfato de potássio ou glicina para a solução final (1,02 g) foi pesada e dissolvida em 90% de volume final (27 ml) de água. Depois, o pH foi ajustado para pH 4,0 com ácido fosfórico de 0,1 N ou HCl de 0,1 N.

[00138] A quantidade de Polisorbato 80 foi pesada e adicionada a 1/3 do volume da solução tamponadora.

[00139] A quantidade de ET-743 (7,5 mg) foi adicionada a um recipiente de vidro de mistura e dissolvida por agitação magnética em 2/3 do volume (60 ml) da solução de fosfato de potássio por aproximadamente 1 h (a dissolução foi verificada visualmente).

[00140] A quantidade de agente de enchimento foi adicionada e dissolvida em 2/3 do volume da solução de tamponadora. Depois, a solução foi adicionada à solução de ET-743 e a agitação foi mantida por 10 min. adicionais.

[00141] A solução foi levada ao peso final com água.

[00142] A solução foi filtrada através de um filtro de celulose de 0,22 μm.

[00143] A solução foi enchida em frascos de vidro de 10 ml a 1 ml/frasco e mantida a -20°C, até o processo de liofilização.

[00144] O processo de liofilização em todas as seis formulações foi realizado de acordo com a seguinte tabela VI: Tabela VI

[00145] Depois da secagem por atomização, os frascos foram vedados. Os frascos foram transferidos para uma área refrigerada (20°C).

[00146] O teste de estabilidade foi realizado a uma temperatura de 5 ± 3°C.

[00147] Todas as formulações eram mais estáveis a 5°C do que a formulação de referência. Não foram observadas diferenças significativas entre as novas formulações. A Tabela VII descreve a pureza cro- matográfica de ET-743 das formulações sob estudo:

Exemplo 3

[00148] Seis formulações, ET-NF A, ET-NF B, ET-NF C, ET-NF D, ET-NF E e ET-NF F, foram produzidas e usadas pra estudo adicional de estabilidade a diferentes temperaturas.

[00149] Sacarose e lactose foram escolhidas como agente de enchimento. Dois tampões diferentes foram usados: tampão de citrato de sódio de 0,1 M, pH 4 e tampão de fosfato de potássio de 0,05 M, pH 4. Duas concentrações diferentes de ET-743 na solução de carga foram testadas: 0,250 gm/ml e 0,100 mg/ml. Dois ciclos de secagem por atomização diferentes foram usados, dependendo do volume de enchimento (4 ml vs 10 ml). Um lote de pelo menos 125 frascos foi produzido para cada formulação.

[00150] Para cada frasco, a composição da solução de carga era tal como se segue (Tabela VIII), observando que a água evapora durante o procedimento de secagem por atomização: Tabela VIII

[00151] Soluções de carga foram preparadas e secadas por atomi- zação usando os seguintes protocolos específicos: Formulações ET-NF A, ET-NF B e ET-NF F

[00152] Preparação de 2 l de ácido cítrico, de aproximadamente 0,2 M: 76,96 g de ácido cítrico foram dissolvidos em um frasco volumétrico de 2 l e a solução foi levada ao volume final com água para injeção. A molaridade final da solução de ácido cítrico era de 0,183 M.

[00153] Preparação de 2l de citrato de sódio, de aproximadamente 0,2M: 117,64 g de citrato de sódio foram dissolvidos em um frasco volumétrico de 2 l e a solução foi levada ao volume final com água para injeção. A molaridade final da solução de citrato de sódio era de 0,175M.

[00154] Preparação de 4 l de tampão de citrato, pH 4, aproximadamente 0,1M: 1125 ml de solução de ácido cítrico de 0,2 M foram misturados com 875 ml de solução de citrato de sódio de 0,2 M em um frasco volumétrico de 4 l. A solução foi levada ao volume final com água para injeção. O pH da solução foi verificado e ajustado para pH 4. A molaridade final da solução de tampão de citrato era de 0,089 M.

[00155] 143,83 mg de ET-743 foram adicionados a um recipiente de vidro de mistura e dissolvidos por agitação magnética em aproximadamente 80% do volume total necessário de tampão de citrato de 0,1 M por aproximadamente 1 h (a dissolução foi verificada visualmente).

[00156] Depois, a quantidade de sacarose ou lactose (55 g de sacarose da formulação A e B, e 27,5 g de lactose da formulação F) foi adicionada e a mistura foi agitada por um período adicional de aproximadamente 1 h, até a dissolução.

[00157] Após verificar o pH, a solução foi levada ao volume final por adição de tampão de citrato de 0,1 M, pH 4. Foi necessário o reajuste para pH 4 com ácido cítrico para a formulação A. A densidade da solução final: 1,04 g/l. Peso final, 572 mg.

[00158] A solução foi filtrada através de um filtro de PVDF de 0,22 μm.

[00159] A solução foi enchida em frascos de 25 ml, usando uma bomba automática e tubos de 3,2 de silicone, solidificados com platina. O volume padrão de enchimento era de 4 ml. O volume de enchimento foi verificado a intervalos regulares (a cada 15 fracos) e o volume de enchimento foi ajustado, se necessário.

[00160] Depois do enchimento, tampões de liofilização foram inseridos e os frascos foram carregados no liofilizador a 5°C.

[00161] O processo de liofilização foi realizado de acordo com a seguinte tabela IX: Tabela IX

[00162] Os frascos foram vedados. Foi realizada uma reconciliação final. Os frascos foram transferidos para uma área refrigerada (-20°C). Formulações ET-NF C e ET-NF-D

[00163] Preparação de 1 l de ácido cítrico, de aproximadamente 0,2 M: 38,48 g de ácido cítrico foram dissolvidos em um frasco volumétrico de 1 l e a solução foi levada ao volume final com água para injeção. A molaridade final da solução de ácido cítrico era de 0,183 M.

[00164] Preparação de 1l de citrato de sódio, de aproximadamente 0,2M: 58,82 g de citrato de sódio foram dissolvidos em um frasco volumétrico de 1 l e a solução foi levada ao volume final com água para injeção. A molaridade final da solução de citrato de sódio era de 0,175M.

[00165] Preparação de 2 l de tampão de citrato, pH 4, aproximada- mente 0,1M: 850 ml de solução de ácido cítrico de 0,2 M foram misturados com 650 ml de solução de citrato de sódio de 0,2 M em um frasco volumétrico de 2 l. A solução foi levada ao volume final com água para injeção. O pH da solução foi verificado e ajustado para pH 4. A molaridade final da solução de tampão de citrato era de 0,089 M.

[00166] 141,21 mg de ET-743 foram adicionados a um recipiente de vidro de mistura e dissolvidos por agitação magnética em aproximadamente 80% do volume total necessário de tampão de citrato de 0,1 M por aproximadamente 1 h (a dissolução foi verificada visualmente).

[00167] A quantidade de sacarose ou lactose (135 g) foi adicionada e a mistura foi agitada por um período adicional de aproximadamente 1 h, até a dissolução.

[00168] Após verificar o pH, a solução foi levada ao volume final por adição de tampão de citrato de 0,1 M, pH 4. Não foi necessário reajuste para pH 4 com ácido cítrico. A densidade da solução final: 1,04 g/l. Peso final, 1404 mg.

[00169] A solução foi filtrada através de um filtro de PVDF de 0,45 μm.

[00170] A solução foi enchida em frascos de 25 ml, usando uma bomba automática e tubos de 3,2 de silicone, solidificados com platina. O volume padrão de enchimento era de 10 ml. O volume de enchimento foi verificado a intervalos regulares (a cada 15 fracos) e o volume de enchimento foi ajustado, se necessário.

[00171] Depois do enchimento, tampões de liofilização foram inseridos e os frascos foram carregados no liofilizador a 5°C.

[00172] O processo de liofilização foi realizado tal como previamente para as formulações ET-NF A, ET-NF B e ET-NF F (tabela IX).

[00173] Devido ao grande volume de frascos, o ciclo proposto deixou de dar uma liofilização adequada e foi produzido um colapso. Para evitar uma nova produção, todos os frascos foram reconstituídos com 10 ml de água purificada, o perfil de pureza de algumas soluções reconstituídas foi verificado, os tampões foram substituídos por tampões de duas aberturas e foi usado o novo ciclo seguinte (Tabela X): Tabela X

[00174] Depois da secagem por atomização, os frascos foram vedados. Foi realizada uma reconciliação final. Os frascos foram transferidos para uma área refrigerada (-20°C). Formulação ET-NF-E

[00175] 141,21 mg de ET-743 foram adicionados a um recipiente de vidro de mistura e dissolvidos pr agitação magnética em 1080 ml de wfi + 3,240 ml de ácido fosfórico de 1N por aproximadamente 1 h (a dissolução foi verificada visualmente).

[00176] A quantidade de sacarose (135 g) e fosfato de potássio (9,18 g) foi adicionada e a mistura foi agitada por um período adicional de aproximadamente 1 h, até a dissolução total da molécula.

[00177] Após verificar o pH e reajustar para pH 4 com ácido fosfórico de 1N, a solução foi levada o volume final por adição de água para injeção.

[00178] Densidade da solução final: 1,04 g/l. Peso final, 1404 mg.

[00179] A solução foi filtrada através de um filtro de PVDF de 0,45 μm.

[00180] A solução foi enchida em frascos de 25 ml, usando uma bomba automática e tubos de 3,2 mm de silicone, solidificados com platina. O volume de enchimento padrão foi de 10 ml. O volume de enchimento foi verificado a intervalos regulares (a cada 15 frascos) e o volume de enchimento foi ajustado, caso necessário.

[00181] Depois do enchimento, tampões de liofilização foram colocados e os frascos foram carregados no liofilizador a 5°C.

[00182] O processo de liofilização foi realizado tal como previamente para as formulações ET-NF A, ET-NF B e ET-NF F (tabela IX).

[00183] Devido ao grande volume de frascos, o ciclo proposto deixou de dar uma liofilização adequada e foi produzido um colapso. Para evitar uma nova produção, todos os frascos foram reconstituídos com 10 ml de água purificada, o perfil de pureza de algumas soluções reconstituídas foi verificado, os tampões foram substituídos por tampões de duas aberturas e foi usado um novo ciclo, tal como no caso das formulações ET-NF C e ET-NF D (Tabela X):

[00184] Depois da secagem por atomização, os frascos foram vedados. Foi realizada uma reconciliação final. Os frascos foram transferidos para uma área refrigerada (-20°C).

[00185] A concentração de ET-743 desejada foi obtida em todos os casos e o perfil de impureza foi similar entre as formulações. Não foram observadas quaisquer diferenças na concentração de ET-743 e nos perfis de impurezas durante a produção (antes ou depois da filtração, ou depois do enchimento. A cor da solução de carga era ligeira-mente amarelada nas formulações que continham lactose.

[00186] As formulações com 4 ml de enchimento ou 10 ml de enchimento foram inicialmente secadas por congelamento, seguindo o protocolo indicado. Enquanto formulações com 4 ml de enchimento foram liofilizadas corretamente, as formulações com 10 ml de enchimento desmoronaram. Uma variação de pressão na secagem secundária indicou colapso e fervura do bolo secado por atomização. Frascos das for- mulações ET-NF C, ET-NF D e ET-NF E foram reconstituídos com 10 ml de água purificada. O perfil de pureza das formulações foi verificado. Como não foi observada nenhuma modificação no perfil de pureza, em comparação com soluções de carga, foi decidido liofilizar novamente os frascos, usando o ciclo de secagem por atomização revisado, indicado. Os lotes liofilizaram-se tal como descrito, resultaram em bom aspecto sem colapso, mas com alguma contração de fundo.

[00187] O conteúdo de ET-743 dos frascos estava dentro das especificações (95% - 105%). Os perfis de impurezas foram semelhantes entre as formulações e esses perfis são comparáveis com impurezas das soluções de carga. O conteúdo residual de água estava mais baixo que ou igual a 2%, sendo que os valores maiores foram os das for-mulações do enchimento de 10 ml.

[00188] O pH das soluções reconstituídas foi de entre pH 4 e pH 4,2 em todos os casos. As soluções eram transparentes e incolores, sem matéria estranha ou precipitação visível. O tempo de reconstituição foi semelhante para todas as formulações e de menos de 30 s. Exemplo 4

[00189] A finalidade do estado era investigar a estabilidade de ET- 743, nas diferentes formulações, ET-NF A, ET-NF B, ET-NF C, ET-NF D, ET-NF E e ET-NF F, a 1 mg/frasco, sob condições de temperatura diferentes.

[00190] Um lote de 130 fracos de cada formulação, ET-NF A, ET- NF B, ET-NF C, ET-NF D, ET-NF E e ET-NF F, 1 mg de ET-743/frasco foi produzido de acordo com o exemplo 3.

[00191] O teste de estabilidade foi realizado a uma temperatura de 5°C, 25°C/65% RH e 40°C/70% RH.

[00192] A figura 4 e a tabela XI mostram a evolução da pureza de ET-743 das novas formulações durante o armazenamento a 5°C, em comparação com três formulações convencionais (contendo ET-743, manitol e tampão de fosfato). Tabela XI

Tabela XI (continuação)

[00193] A figura 6 e a tabela XII mostram a evolução de pureza de ET-743 das novas formulações durante armazenamento de 25°C/65% RH, em comparação com três formulações convencionais (contendo ET-743, manitol e tampão de fosfato). Tabela XII

Tabela XII (continuação)

[00194] A figura 8 e a tabela XIII mostram a evolução da pureza de ET-743 das novas formulações durante armazenamento de 40°C/70% RH, em comparação com uma formulação convencional (contendo ET- 743, manitol e tampão de fosfato). Tabela XIII

[00195] Além disso, a figura 5 e a tabela XIV mostram a produção da impureza ET-701 das novas formulações durante o armazenamento a 5°C, em comparação com três formulações convencionais (contendo ET-743, manitol e tampão de fosfato). Tabela XIV

Tabela XIV (continuação)

[00196] A figura 7 e a tabela XV mostram a produção da impureza ET-701 das novas formulações durante armazenamento a 25°C/65% RH, em comparação com três formulações convencionais (contendo ET-743, manitol e tampão de fosfato). Tabela XV

Tabela XV (cont.)

[00197] Tal como mostrado nessas figuras, a estabilidade das no- vas formulações foi mais alta do que a estabilidade das formulações convencionais. Além disso, o principal produto de degração das formulações convencionais, ET-701, foi dramaticamente reduzida nas novas formulações. Exemplo 5

[00198] Três novas formulações baseadas em sacarose como agente de enchimento foram usadas para estudos de estabilidade adicionais. Essas novas formulações diferem na modalidade do tampão de fosfato (0,05M vs 0,1M) e no volume de enchimento ou, em outras palavras, na concentração de ET-743 na solução de carga (10 ml vs 4 ml).

[00199] A produção de um lote de pelo menos 50 frascos de cada uma dessas formulações está descrita. Um resumo da descrição da fórmula por frasco é o seguinte (Tabela XVI), observando que a água evapora durante o procedimento de secagem por atomização: Tabela XVI

[00200] Um volume de 240 ml para formulações ET-NF G e ET-NF i foi preparada:

[00201] 62,76 mg de ET-743 foram adicionados a um recipiente de vidro de mistura e dissolvidos por agitação magnética em uma solução de 192 ml de wfi + ácido fosfórico de 1N (576 μl para NF G, 816 μl para NF I) por aproximadamente 1 h (a dissolução é verificada visualmente).

[00202] As quantidades de sacarose (24 g) e fosfato de potássio (1,63 g para NF G; 3,26 g para NF I) foram adicionadas e a mistura foi agitada por um período adicional de aproximadamente 1 h, até a dissolução.

[00203] Após verificar o pH e reajustar para pH 4,00, caso necessário, com ácido fosfórico de 1N, a solução foi levada ao volume final adicionando água para injeção. Densidade da solução final: 1,04 g/l. Peso final, 249,6 g. A solução foi filtrada através de um filtro de PVDF de 0,45 μm.

[00204] A solução foi enchida em frascos de vidro de 25 ml, usando uma bomba automática e tubos de 3,2 mm de silicone, endurecidos com platina. O volume de enchimento padrão foi de 4 ml. O volume de enchimento foi verificado a intervalos regulares (a cada 15 frascos) e ajustado, caso necessário.

[00205] Depois do enchimento, tampões de liofilização foram inseridos e os frascos foram carregados no liofilizador a 5°C.

[00206] O processo de liofilização foi realizado de acordo com os seguintes parâmetros (Tabela XVII): Tabela XVII

[00207] Depois da secagem por atomização, os frascos foram vedados. Uma reconciliação final foi realizada. Os frascos foram transferidos para uma área refrigerada (-20°C).

[00208] Um volume de 600 ml da formulação ET-NF H foi preparado tal como se segue:

[00209] 62,76 mg de ET-743 foram adicionados a um recipiente de vidro de mistura e dissolvidos por agitação magnética em uma solução de 480 ml de wfi + 1,44 de ácido fosfórico de 1 N por aproximadamente 1 h (a dissolução é verificada visualmente).

[00210] As quantidades de sacarose (60 g) e fosfato de potássio (8,16 g) foram adicionadas e a mistura foi agitada por um período adi- cional de aproximadamente 1 h, até a dissolução.

[00211] Após verificar o pH e reajustar para pH 4,00, caso necessário, com ácido fosfórico de 1N, a solução foi levada ao volume final adicionando água para injeção. Densidade da solução final: 1,04 g/l. Peso final, 624 g.

[00212] A solução foi filtrada através de um filtro de PVDF de 0,45 μm.

[00213] A solução foi enchida em frascos de vidro de 25 ml, usando uma bomba automática e tubos de 3,2 mm de silicone, endurecidos com platina. O volume de enchimento padrão foi de 10 ml. O volume de enchimento foi verificado a intervalos regulares (a cada 15 frascos) e ajustado, caso necessário.

[00214] Depois do enchimento, tampões de liofilização foram inseridos e os frascos foram carregados no liofilizador a 5°C.

[00215] O processo de liofilização foi realizado de acordo com os seguintes parâmetros (Tabela XVIII): Tabela XVIII

[00216] Depois da secagem por atomização, os frascos foram vedados. Uma reconciliação final foi realizada. Os frascos foram transfe- ridos para uma área refrigerada (-20°C).

[00217] O conteúdo de ET-743 dos frascos estava dentro das especificações (95% - 105%). Os perfis de impurezas mostraram semelhanças para todas as formulações e comparáveis com impurezas das soluções de carga. O conteúdo residual de água estava mais baixo que 2%, sendo que os valores maiores foram os das formulações do enchimento de 10 ml.

[00218] O pH das soluções reconstituídas foi de entre pH 4 e pH 4.28 em todos os casos. As soluções eram transparentes e incolores, sem matéria estranha ou precipitação visível. O tempo de reconstituição foi semelhante para todas as formulações e de menos de 30 s.

[00219] O teste de estabilidade foi realizado durante 3 meses a uma temperatura de armazenamento de 40°C/70% RH.

[00220] A figura 9 e a tabela XIX mostram a evolução da pureza de ET-743 das novas formulações durante o armazenamento a 40°C/70% RH. Tabela XIX

[00221] Além d isso, na figura 8 os dados de esta bilidade são mos- trados em comparação com uma formulação convencional (contendo ET-743, manitol e tampão de fosfato).

[00222] Os resultados obtidos nos exemplos 4 e 5 indicam que todas as formulações que compreendem um dissacarídeo como agente de enchimento são ais estáveis do que formulações convencionais que contêm manitol como agente de enchimento. A formulação ET-NF G é uma formulação preferida.

[00223] Modalidades de formulações de acordo com esta invenção foram testadas depois do armazenamento sob uma pluralidade de condições de armazenamento (incluindo temperaturas de -20°C, 4°C e 25°C/60% RH), já diversos tempos de armazenamento (incluindo tempos de armazenamento de 3 meses, 6 meses e 9 meses). Os resultados dos testes indicaram que pelo menos 99,5% de ET- 743permanecia após 9 meses de armazenamento a -20°C, pelo menos 99% de ET-743 permaneciam após 9 meses de armazenamento a 4°C, e pelo menos 97% de ET-743permaneciam após 9 meses de armazenamento a 25°C/60% RH. Impurezas totais, inclusive ET-701, ET-745 e outras impurezas não excediam 1,66% após 9 meses de armazenamento a 25°C/60% RH. Além disso, o nível de impureza de ET-701 não excedia 0,21% após 9 meses das referidas condições de armazenamento.

[00224] Todas as referências citadas no presente estão incorporadas por referência, em sua totalidade. As características e vantagens desta invenção são evidentes à luz da descrição apresentada no presente. Com base nessa descrição, podem ser feitas modificações e adaptações a diversas condições e usos, desse modo gerando moda-lidades dentro do âmbito desta invenção.

Claims (24)

1. Composição liofilizada, caracterizada pelo fato de que compreende uma ecteinascidina e um dissacarídeo.

2. Composição liofilizada, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a ecteinascidina compreende ET-743.

3. Composição liofilizada, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o referido dissacarídeo é selecionado do grupo que consiste em lactose, trealose, sacarose e misturas dos mesmos.

4. Composição liofilizada, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que o referido dissacarídeo é sacarose.

5. Composição liofilizada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a relação (p/p) de ET-743 para dissacarídeo é de 1:100 a 1:1500.

6. Composição liofilizada, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que a relação (p/p) de ET-743 para dissaca- rídeo é de 1:250 a 1:600.

7. Composição liofilizada, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que a relação (p/p) de ET-743 para dissaca- rídeo é de 1:400.

8. Composição liofilizada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um agente tampão.

9. Composição liofilizada, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que o agente tampão é selecionado de tampão de fosfato, tampão de citrato, tampão de glicina/ácido clorídrico e misturas dos mesmos.

10. Composição liofilizada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um agente tensoativo.

11. Composição liofilizada, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que o agente tensoativo é selecionado de monooleato de sorbitano de polioxietileno 20, estearato de polioxila 40 e misturas dos mesmos.

12. Composição liofilizada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizada pelo fato de que a composição liofilizada está em um frasco e inclui uma quantidade de ET-743.

13. Composição liofilizada, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que a referida quantidade de ET-743 é de 250 μg.

14. Composição liofilizada, de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que o referido frasco contém uma formulação que compreende 0,25 mg de ET-743, 100 mg de sacarose e 6,8 mg de fosfato, em que os referidos 6,8 mg de fosfato são calculados como diidrogeno fosfato de potássio.

15. Composição liofilizada, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que a referida quantidade de ET-743 é de 1 mg.

16. Composição liofilizada, de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que o referido frasco contém uma formulação que compreende 1,0 mg de ET-743, 400 mg de sacarose, e 27,2 mg de fosfato, em que os referidos 27,2 mg de fosfato são calculados como diidrogeno fosfato de potássio.

17. Método para produzir um frasco que contém uma composição liofilizada de uma ecteinascidina, caracterizado pelo fato de que compreende secar por congelamento uma solução de carga que compreende uma composição liofilizada como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16.

18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a ecteinascidina é ET-743.

19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a formação de ET-701 é reduzida.

20. Método para preparar uma composição liofilizada como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que compreende dissolver uma ecteinascidina em um meio acídico, misturar a ecteinascidina previamente dissolvida com os outros componentes da solução de enchimento, e, opcionalmente, ajustar o pH da solução final.

21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a ecteinascidina é ET-743.

22. Método para preparar uma solução para infusão intravenosa, caracterizado pelo fato de que compreende preparar um frasco que compreende uma composição liofilizada como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, adicionar água para formar uma solução reconstituída, e diluir a referida solução reconstituída com um sistema aquoso.

23. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que a ecteinascidina é ET-743.

24. Uso de uma solução como definida na reivindicação 22, caracterizado pelo fato de ser na preparação de um medicamento para tratar câncer, em que a solução é administrada por infusão intravenosa.

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