BR112022006739B1 - Conjugados fosfolipídio-flavagina e métodos de uso do mesmo para terapia direcionada a câncer - Google Patents

Conjugados fosfolipídio-flavagina e métodos de uso do mesmo para terapia direcionada a câncer Download PDF

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Abstract

conjugados fosfolipídio-flavagina e métodos de uso do mesmo para terapia direcionada a câncer. são divulgadas neste documento moléculas de éter fosfolipídico (ple). além disso, são fornecidos conjugados de fosfolipídio-flavaglina. o conjugado fosfolipídio- flavaglina pode incluir um ple conjugado com uma flavaglina por meio de um ligante. além disso, são fornecidos neste documento métodos de tratamento de câncer em um sujeito e métodos de direcionamento de um fármaco para um tumor ou célula cancerosa em um sujeito.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[0001] Este pedido reivindica o benefício e a prioridade do Pedido de Patente Provisório dos EUA No. 62/913,571, depositado em 10 de outubro de 2019, cujo conteúdo é incorporado neste relatório descritivo por referência em sua totalidade.
CAMPO DA INVENÇÃO
[0002] Esta divulgação se refere a conjugados de fosfolipídio-flavaglina e terapias direcionadas ao câncer.
INTRODUÇÃO
[0003] A maioria dos fármacos anticancerígenos em uso clínico tem sua utilidade limitada por sua toxicidade para todas as células em proliferação e/ou pela incapacidade de exercer seu efeito sobre todas as células tumorais. Novos agentes continuam a ser desenvolvidos com mecanismos de ação únicos destinados a fornecer maior direcionamento, no entanto, muitos desses compostos ainda carecem de seletividade tumoral absoluta e continuam a ser limitados em sua utilização terapêutica devido a efeitos fora do alvo. Os conjugados de fármaco de anticorpo (ADCs) foram projetados para se ligar a epítopos específicos na superfície das células tumorais e ofereceram um método alternativo para direcionar as células tumorais em um esforço para reduzir as toxicidades associadas. Embora altamente seletivos, muito poucos conjugados de fármaco de anticorpo são terapeuticamente úteis, uma vez que atingem apenas uma absorção celular modesta e atividade de morte celular limitada. São necessárias plataformas de direcionamento de tumores mais eficazes.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0004] Em um aspecto, a divulgação fornece um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Z é um análogo de flavaglina.
[0005] Outro aspecto da divulgação fornece uma composição farmacêutica compreendendo um composto como descrito neste relatório descritivo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
[0006] Outro aspecto da divulgação fornece um método de tratamento de câncer em um sujeito, o método compreendendo administrar ao sujeito um composto como descrito neste relatório descritivo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0007] Outro aspecto da divulgação fornece um método de direcionamento de um fármaco para um tumor ou célula cancerosa em um sujeito, o método compreendendo administrar ao sujeito um composto como descrito neste relatório descritivo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0008] Em algumas concretizações, os compostos aqui descritos localizam ou viajam para o citoplasma ou organela do tumor ou célula cancerosa. Em algumas concretizações, os compostos são seletivos para células cancerosas no sujeito. Em algumas concretizações, os compostos são incorporados em pelo menos cerca de 2 vezes mais células tumorais ou cancerosas do que células saudáveis. Em algumas concretizações, o câncer é melanoma, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer de adrenal, câncer de fígado, câncer de rim ou renal, câncer de pâncreas, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de estômago, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer anal, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de mama, câncer cervical, linfoma, leucemia, mieloma, câncer hematológico, hepatocarcinoma, retinoblastoma, glioma, sarcoma, blastoma, carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma ou uma combinação dos mesmos. Em algumas concretizações, o sujeito é humano.
[0009] A divulgação fornece outros aspectos e concretizações que serão aparentes à luz da seguinte descrição detalhada e figuras anexas.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[00010] A FIG. 1A, FIG. 1B, FIG. 1C, FIG. 1D, FIG. 1E são imagens de células tumorais com jangadas lipídicas marcadas. As células tumorais tinham uma maior concentração de jangadas lipídicas em comparação com as células normais. A FIG. 1F é uma imagem de fibroblastos normais e células tumorais Caki-2 com CLR 1501 (composto (1)). CLR 1501 foi altamente localizado em células Caki-2 e minimamente em fibroblastos normais. A FIG. 1G é uma imagem de células A549 de controle e a FIG. 1H é uma imagem de células A549 tratadas com metil b-ciclodextrina para romper as jangadas lipídicas. As células em ambas as FIG. 1G e FIG. 1H foram incubadas com CLR 1501 (composto (1)) e a ruptura da maioria das jangadas lipídicas em células A549 resultou em 60% de redução na absorção de CLR 1501 (composto (1)). FIGO. 1I, FIG. 1J, e FIG. 1K são imagens de células PC3 incubadas com CLR 1501 (composto (1)) e coradas para retículo endoplasmático (ER). CLR 1501 (composto (1)) co-localizado com ER em células malignas, mas não em células normais (não mostrado). A FIG. 1L, FIG. 1M, e FIG. 1N são imagens de células PC3 incubadas com CLR 1501 (composto (1)) e coradas para o núcleo e mitocôndrias. CLR 1501 (composto (1)) co-localizado com mitocôndrias.
[00011] A FIG. 2 é uma imagem de um camundongo com tumor colorretal (HCT-116) injetado com CLR 1502 (composto (2)), mostrando a localização do tumor.
[00012] A FIG. 3 é um gráfico de citotoxicidade versus concentração para um composto citotóxico (FLV1) em comparação com o composto citotóxico conjugado a um PLE (CLR 1865, composto (8)) em células A549 (adenocarcinoma de pulmão humano) ou fibroblastos dérmicos humanos normais (NHDF).
[00013] A FIG. 4 é um gráfico do aumento de vezes em função do tempo para a absorção do conjugado PLE CLR 1852 (composto (9)) em células A375 (melanoma humano) e HEK293 (rim embrionário humano).
[00014] A FIG. 5 são imagens de um modelo de câncer de mama em camundongos, mostrando a captação in vivo de CLR 1502 (composto (2)).
[00015] A FIG. 6 são imagens de linhagens celulares de mieloma, mostrando a captação de CLR 1501 (composto (1)).
[00016] A FIG. 7 são imagens de células-tronco cancerosas, tecido cerebral normal e células-tronco normais, mostrando a absorção específica de CLR 1501 (composto (1)) nas células cancerígenas.
[00017] A FIG. 8 é um gráfico da citotoxicidade percentual versus concentração para CLR 1852 (composto (9)) em comparação com FLV3 em células A549 (adenocarcinoma de pulmão humano) e fibroblastos dérmicos humanos normais (NHDF).
[00018] A FIG. 9 é um gráfico do volume do tumor versus tempo para o veículo em comparação com CLR 1852 (composto (9)) em um modelo de tumor HCT 116.
[00019] A FIG. 10 é um gráfico de peso corporal versus tempo para veículo em comparação com CLR 1852 (composto (9)) em um modelo de tumor HCT 116.
[00020] A FIG. 11 é um gráfico de concentração versus tempo para FLV3 detectado no citosol (normalizado para o volume citosólico) em linhagens celulares A375 (melanoma humano) e A549 (adenocarcinoma de pulmão humano).
[00021] A FIG. 12 mostra resultados representativos para alterações de peso corporal em modelo de camundongo após administração de CLR 1899 (a 0,5 mg/kg, 1 mg/kg e 2 mg/kg).
[00022] A FIG. 13. mostra resultados representativos da eficácia in vivo de CLR 1899 no modelo de xenoenxerto MCF-7 (10 camundongos por grupo de dose).
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[00023] São descritos neste relatório descritivo compostos de fosfolipídios e conjugados de fosfolipídio- flavaglina. Com base em numerosos tumores animais e humanos contendo concentrações mais elevadas de lipídios de éter de ocorrência natural do que tecidos normais, foram desenvolvidas moléculas de éter fosfolipídico (PLE). As moléculas de PLE detalhadas neste relatório descritivo podem ser usadas como uma plataforma de direcionamento de tumor para entregar seletivamente fármacos a tumores e células cancerígenas.
[00024] Conforme detalhado neste relatório descritivo, a distribuição tecidual das moléculas de PLE foi examinada em mais de 100 células tumorais diferentes, incluindo amostras frescas de tumor humano. As moléculas de PLE demonstraram absorção aumentada no tecido tumoral versus tecido normal. As moléculas de PLE podem ser conjugadas com moléculas de flavaglina e seus derivados através de ligantes para formar conjugados de fosfolipídio-flavaglina.
1. Definições
[00025] A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados neste relatório descritivo têm o mesmo significado comumente entendido por um versado na técnica. Em caso de conflito, o presente documento, incluindo definições, prevalecerá. Os métodos e materiais preferidos são descritos abaixo, embora métodos e materiais semelhantes ou equivalentes aos descritos neste relatório descritivo possam ser usados na prática ou teste da presente invenção. Todas as publicações, pedidos de patentes, patentes e outras referências aqui mencionadas são incorporadas por referência em sua totalidade. Os materiais, métodos e exemplos divulgados neste relatório descritivo são apenas ilustrativos e não pretendem ser limitativos.
[00026] Os termos "compreende(s)", "inclui(m)", "tendo", "tem", "pode", "contém" e suas variantes, conforme usado neste relatório descritivo, destinam-se a ser frases, termos ou palavras transicionais abertas que não excluem a possibilidade de atos ou estruturas adicionais. As formas singulares “um”, “e” e “o” incluem referências no plural, a menos que o contexto indique claramente o contrário. A presente divulgação também contempla outras concretizações "compreendendo", "consistindo em" e "consistindo essencialmente em", as concretizações ou elementos apresentados neste relatório descritivo, explicitamente estabelecidos ou não.
[00027] Para a recitação de intervalos numéricos neste relatório descritivo, cada número intermediário entre eles com o mesmo grau de precisão é explicitamente contemplado. Por exemplo, para o intervalo de 6-9, os números 7 e 8 são contemplados além de 6 e 9, e para o intervalo 6,0-7,0, o número 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9 e 7,0 são contemplados explicitamente.
[00028] O termo "cerca de", conforme usado neste relatório descritivo, aplicado a um ou mais valores de interesse, se refere a um valor que é semelhante a um valor de referência declarado. Em certos aspectos, o termo "cerca de" se refere a uma faixa de valores que se enquadram em 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10% , 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% ou menos em qualquer direção (maior ou menor que) do valor de referência declarado, salvo indicação em contrário ou de outra forma evidente a partir do contexto (exceto quando tal número exceder 100% de um valor possível).
[00029] Definições de grupos funcionais específicos e termos químicos são descritos em mais detalhes abaixo. Para os fins desta divulgação, os elementos químicos são identificados de acordo com a Tabela Periódica dos Elementos, versão CAS, Manual de Química e Física, 75a Ed., capa interna, e grupos funcionais específicos são geralmente definidos como descritos na mesma. Adicionalmente, os princípios gerais da química orgânica, bem como as porções funcionais específicas e a reatividade, são descritos em Organic Chemistry, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito, 1999; Smith and March March's Advanced Organic Chemistry, 7a Edição, John Wiley & Sons, Inc., Nova York, 2013; Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc., Nova Iorque, 1989; Carruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 3a Edição, Cambridge University Press, Cambridge, 1987; todo o conteúdo de cada um dos quais é aqui incorporado por referência.
[00030] O termo "alcóxi" ou "alcóxil", conforme usado neste relatório descritivo, se refere a um grupo alquil, conforme definido neste relatório descritivo, anexado à fração molecular de origem através de um átomo de oxigênio. Exemplos representativos de alcoxi incluem, mas não estão limitados a metoxi, etoxi, propoxi, 2-propoxi, butoxi e tert- butoxi.
[00031] O termo "alquil", como usado neste relatório descritivo, significa uma cadeia de hidrocarboneto saturada linear ou ramificada contendo de 1 a 20 átomos de carbono.O termo "alquil inferior" ou "C1-6 alquil" significa um hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada contendo de 1 a 6 átomos de carbono. O termo "C1-4 alquil" significa um hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada contendo de 1 a 4 átomos de carbono. O termo "C1-3 alquil" significa um hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada contendo de 1 a 3 átomos de carbono. Exemplos representativos de alquil incluem, mas não estão limitados a metil, etil, n-propil, iso-propil, n-butil, sec-butil, iso-butil, tert-butil, n- pentil, isopentil, neopentil, n-hexil, 3-metilhexil, 2,2- dimetilpentil, 2,3-dimetilpentil, n-heptil, n-octil, n-nonil e n-decil.
[00032] O termo "alquenil", conforme usado neste relatório descritivo, significa uma cadeia de hidrocarboneto insaturada contendo de 2 a 20 átomos de carbono e pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono.
[00033] O termo "alquinil", conforme usado neste relatório descritivo, significa uma cadeia de hidrocarboneto insaturada contendo de 2 a 20 átomos de carbono e pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono.
[00034] O termo "alcoxialquil", conforme usado neste relatório descritivo, se refere a um grupo alcóxi, conforme definido neste relatório descritivo, anexado à fração molecular de origem através de um grupo alquileno, conforme definido neste relatório descritivo.
[00035] O termo "arilalquil", conforme usado neste relatório descritivo, se refere a um grupo aril, conforme definido neste relatório descritivo, anexado à fração molecular de origem através de um grupo alquileno, conforme definido neste relatório descritivo.
[00036] O termo "alquilamino", conforme usado neste relatório descritivo, significa que pelo menos um grupo alquil, conforme definido neste relatório descritivo, é anexado à fração molecular de origem através de um grupo amino, conforme definido neste relatório descritivo.
[00037] O termo "alquileno", tal como aqui utilizado, se refere a um grupo divalente derivado de um hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada de 1 a 10 átomos de carbono, por exemplo, de 2 a 5 átomos de carbono. Exemplos representativos de alquileno incluem, mas não estão limitados a -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2- e - CH2CH2CH2CH2CH2-.
[00038] O termo "amida", conforme usado neste relatório descritivo, significa -C(O)NR- ou -NRC(O)-, em que R pode ser hidrogênio, alquil, cicloalquil, aril, heteroaril, heterociclo, alquenil ou heteroalquil.
[00039] O termo "aminoalquil", conforme usado neste relatório descritivo, significa que pelo menos um grupo amino, conforme definido neste relatório descritivo, é anexado à fração molecular de origem através de um grupo alquileno, conforme definido neste relatório descritivo.
[00040] O termo "amino", conforme usado neste relatório descritivo, significa -NRxRy, em que Rx e Ry podem ser hidrogênio, alquil, cicloalquil, aril, heteroaril, heterociclo, alquenil ou heteroalquil. No caso de um grupo aminoalquil ou qualquer outra fração em que amino anexa duas outras frações, amino pode ser -NRx-, em que Rx pode ser hidrogênio, alquil, cicloalquil, aril, heteroaril, heterociclo, alquenil ou heteroalquil.
[00041] O termo "aril", conforme usado neste relatório descritivo, se refere a um grupo aromático, tal como um grupo fenil ou um sistema de anel fundido bicíclico. Os sistemas de anéis fundidos bicíclicos são exemplificados por um grupo fenil anexado à fração molecular de origem e fundido a um grupo cicloalquil, como aqui definido, um grupo fenil, um grupo heteroaril, como aqui definido, ou um heterociclo, como aqui definido. Exemplos representativos de aril incluem, mas não estão limitados a indolil, naftil, fenil, quinolinil e tetra-hidroquinolinil. "Arilalquil" se refere a um alquil como aqui definido substituído por um radical aril.
[00042] "Arileno" se refere a um aril como aqui definido com dois centros de radicais monovalentes derivados da remoção de dois átomos de hidrogênio de dois átomos de carbono diferentes de um aril parental. Os radicais arileno típicos incluem, mas não estão limitados a fenileno e naftileno. "Arilalquileno" se refere a um arilalquil como aqui definido tendo dois centros de radicais monovalentes derivados da remoção de um átomo de hidrogênio do radical aril e o outro hidrogênio removido do radical alquil do grupo.
[00043] O termo "carboxil", conforme usado neste relatório descritivo, significa um ácido carboxílico, ou - COOH.
[00044] O termo "cicloalquil" significa um anel de hidrocarboneto saturado monovalente ou um grupo bicíclico. Os grupos cicloalquila têm zero heteroátomos e zero ligações duplas. Os grupos cicloalquil são monocíclicos ou são sistemas de anéis bicíclicos fundidos, espiro ou em ponte. Os grupos cicloalquilo monocíclicos contêm 3 a 10 átomos de carbono, preferencialmente 4 a 7 átomos de carbono, e mais preferencialmente 5 a 6 átomos de carbono no anel. Os grupos cicloalquilo bicíclicos contêm 8 a 12 átomos de carbono, preferencialmente 9 a 10 átomos de carbono no anel. Os grupos cicloalquilo podem ser substituídos ou não substituídos. Os grupos cicloalquil incluem, por exemplo, ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil e cicloheptil.
[00045] O termo "cicloalquenil", como usado neste relatório descritivo, significa um sistema de anel monocíclico ou multicíclico não aromático contendo pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono e preferencialmente tendo de 5 a 10 átomos de carbono por anel. Anéis cicloalquenil monocíclicos exemplares incluem ciclopentenil, ciclohexenil e cicloheptenil.
[00046] O termo "cicloalquinil", como usado neste relatório descritivo, significa um sistema de anel monocíclico ou multicíclico contendo pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono e preferencialmente com 5-10 átomos de carbono por anel ou mais de 10 átomos de carbono por anel.
[00047] O termo "haloalquil", conforme usado neste relatório descritivo, significa um grupo alquil, conforme definido neste relatório descritivo, em que um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou oito átomos de hidrogênio são substituídos por um halogênio. Exemplos representativos de haloalquil incluem, mas não estão limitados a, 2-fluoroetil, 2,2,2-trifluoroetil, trifluorometil, difluorometil, pentafluoroetil e trifluoropropil, tal como 3,3,3- trifluoropropil.
[00048] O termo "halogênio" ou "halo", conforme usado neste relatório descritivo, significa Cl, Br, I ou F.
[00049] O termo "heteroalquil", conforme usado neste relatório descritivo, significa um grupo alquil, conforme definido neste relatório descritivo, em que pelo menos um dos carbonos do grupo alquil é substituído por um heteroátomo, como oxigênio, nitrogênio e enxofre. Exemplos representativos de heteroalquils incluem, mas não estão limitados a éteres alquílicos, alquilaminas secundárias e terciárias, amidas e sulfetos de alquila.
[00050] O termo "heteroaril", conforme usado neste relatório descritivo, se refere a um anel monocíclico aromático ou um sistema de anel bicíclico aromático contendo pelo menos um heteroátomo selecionado independentemente do grupo que consiste em N, O e S. Os anéis monocíclicos aromáticos são cinco ou anéis de seis membros contendo pelo menos um heteroátomo selecionado independentemente do grupo que consiste em N, O e S. Os anéis monocíclicos aromáticos de cinco membros têm duas ligações duplas e os anéis monocíclicos aromáticos de seis membros têm três ligações duplas. Os grupos heteroaril bicíclicos são exemplificados por um anel heteroaril monocíclico anexado à fração molecular de origem e fundido a um grupo cicloalquil monocíclico, conforme definido neste relatório descritivo, um grupo aril monocíclico, conforme definido neste relatório descritivo, um grupo heteroaril monocíclico, conforme definido neste relatório descritivo, ou um grupo monocíclico heterociclo, como aqui definido. Exemplos representativos de heteroaril incluem, mas não estão limitados a, indolil, piridinil (incluindo piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il), pirimidinil, pirazinil, piridazinil, pirazolil, pirrolil, benzopirazolil, 1, 2,3-triazolil, 1,3,4-tiadiazolil, 1,2,4- tiadiazolil, 1,3,4-oxadiazolil, 1,2,4-oxadiazolil, imidazolil, tiazolil, isotiazolil, tienil, benzimidazolil, benzotiazolil, benzoxazolil, benzoxadiazolil, benzotienil, benzofuranil, isobenzofuranil, furanil, oxazolil, isoxazolil, purinil, isoindolil, quinoxalinil, indazolil, quinazolinil, 1,2,4-triazinil, 1,3,5-triazinil, isoquinolinil, quinolinil, 6,7- di-hidro-1,3-benzotiazolil, imidazo[1,2-a]piridinil, naftiridinil, piridoimidazolil, tiazolo[5,4-b]piridin-2-il, tiazolo[5,4-d]pirimidin-2-il.
[00051] O termo "heterociclo" ou "heterocíclico" ou "heterociclil", conforme usado neste relatório descritivo, significa um heterociclo monocíclico, um heterociclo bicíclico (heterobicíclico) ou um heterociclo tricíclico. O heterociclo monocíclico é um anel de três, quatro, cinco, seis, sete ou oito membros contendo pelo menos um heteroátomo selecionado independentemente do grupo que consiste em O, N e S. Os três ou quatro anel de membros contém zero ou uma ligação dupla e um heteroátomo selecionado do grupo que consiste em O, N e S. O anel de cinco membros contém zero ou uma ligação dupla e um, dois ou três heteroátomos selecionados do grupo que consiste em O, N e S. O anel de seis membros contém zero, uma ou duas ligações duplas e um, dois ou três heteroátomos selecionados do grupo que consiste em O, N e S. Os anéis de sete e oito membros contém zero, uma, duas ou três ligações duplas e um, dois ou três heteroátomos selecionados do grupo que consiste em O, N e S. Exemplos representativos de heterociclos monocíclicos incluem, mas não estão limitados a, azetidinil, azepanil, aziridinil , diazepanil, 1,3-dioxanil, 1,3-dioxolanil, 1,3 ditiolanil, 1,3 ditianil, imidazolinil, imidaz olidinil, isotiazolinil, isotiazolidinil, isoxazolinil, isoxazolidinil, morfolinil, oxadiazolinil, oxadiazolidinil, oxazolinil, oxazolidinil, oxetanil, piperazinil, piperidinil, piranil, pirazolinil, pirazolidinil, pirrolinil, pirrolidinil, tetra-hidrofuranil, tetra- hidropiranil, tetra-hidropiridinil, tetra-hidrotienil, tiadiazolinil, tiadiazolidinil, 1,2-tiazinanil, 1,3- tiazinanil, tiazolinil, tiazolidinil, tiomorfolinil, 1,1- dioxidotiomorfolinil (tiomorfolina sulfona), tiopiranil e tritianil. O heterociclo bicíclico é um heterociclo monocíclico fundido a um grupo fenil, ou um heterociclo monocíclico fundido a um cicloalquil monocíclico, ou um heterociclo monocíclico fundido a um cicloalquenil monocíclico, ou um heterociclo monocíclico fundido a um heterociclo monocíclico, ou um sistema de anel heterocíclico monocíclico em ponte em que dois átomos não adjacentes do anel estão ligados por uma ponte alquileno de 1, 2, 3 ou 4 átomos de carbono, ou uma ponte alquenileno de dois, três ou quatro átomos de carbono. Exemplos representativos de heterociclos bicíclicos incluem, mas não estão limitados a, benzopiranil, benzotiopiranil, cromanil, 2,3-di- hidrobenzofuranil, 2,3-di-hidrobenzotienil, 2,3-di- hidroisoquinolina, azabiciclo[2.2.1]heptil (incluindo 2- azabiciclo[2.2.1]hept-2-il), 2,3-di-hidro-1H-indolil, isoindolinil, octa-hidrociclopenta[c]pirrolil, octa- hidropirrolopiridinil e tetra-hidroisoquinolinil. Heterociclos tricíclicos são exemplificados por um heterociclo bicíclico fundido a um grupo fenil, ou um heterociclo bicíclico fundido a um cicloalquil monocíclico, ou um heterociclo bicíclico fundido a um cicloalquenil monocíclico, ou um heterociclo bicíclico fundido a um heterociclo monocíclico, ou um heterociclo bicíclico em que dois átomos não adjacentes do anel bicíclico estão ligados por uma ponte alquileno de 1, 2, 3 ou 4 átomos de carbono, ou uma ponte alcenileno de dois, três ou quatro átomos de carbono. Exemplos de heterociclos tricíclicos incluem, mas não se limitam a, octa-hidro-2,5-epoxipentaleno, hexa-hidro- 2H-2,5-metanociclopenta[b]furano, hexa-hidro-1H-1,4- metanociclopenta[c]furano, aza-adamantano (1 azatriciclo[3.3.1.13,7]decano) e oxa-adamantano (2- oxatriciclo[3.3.1.13,7]decano). Os heterociclos monocíclicos, bicíclicos e tricíclicos estão ligados à fração molecular parental através de qualquer átomo de carbono ou qualquer átomo de nitrogênio contido dentro dos anéis e podem ser não substituídos ou substituídos.
[00052] O termo "heteroarilalquil", conforme usado neste relatório descritivo, se refere a um grupo heteroaril, conforme definido neste relatório descritivo, anexado à fração molecular de origem através de um grupo alquileno, conforme definido neste relatório descritivo.
[00053] O termo "heterociclilalquil", conforme usado neste relatório descritivo, se refere a um grupo heterociclo, conforme definido neste relatório descritivo, anexado à fração molecular de origem através de um grupo alquileno, conforme definido neste relatório descritivo.
[00054] O termo "hidroxil" ou "hidroxi" como usado neste relatório descritivo, significa um grupo -OH.
[00055] O termo "hidroxialquil", conforme usado neste relatório descritivo, significa pelo menos um grupo -OH, é anexado à fração molecular de origem através de um grupo alquileno, conforme definido neste relatório descritivo.
[00056] Em alguns casos, o número de átomos de carbono em um substituinte de hidrocarbil (por exemplo, alquil ou cicloalquil) é indicado pelo prefixo "Cx-y-", em que x é o mínimo e y é o número máximo de átomos de carbono em o substituinte. Assim, por exemplo, "C1-3 alquil" se refere a um substituinte de alquil contendo de 1 a 3 átomos de carbono.
[00057] O termo "substituído" se refere a um grupo que pode ser ainda substituído por um ou mais grupos substituintes não hidrogênio. Os grupos substituintes incluem, mas não estão limitados a, halogênio, =O (oxo), =S (tioxo), ciano, nitro, fluoroalquil, alcoxifluoroalquil, fluoroalcoxi, alquil, alquenil, alquinil, haloalquil, haloalcoxi, heteroalquil, cicloalquil, cicloalquenil, aril, heteroaril, heterociclo, cicloalquilalquil, heteroarilalquil, arilalquil, hidroxi, hidroxialquil, alcoxi, alcoxialquil, alquileno, ariloxi, fenoxi, benziloxi, amino, alquilamino, acilamino, aminoalquil, arilamino, sulfonilamino, sulfinilamino, sulfonil, alquilsulfonil, arilsulfonil, aminosulfonil, sulfinil, -COOH, cetona, amida,carbamato e acil.
[00058] O termo " " designa uma ligação simples (—) ou uma ligação dupla (=) ou uma ligação tripla (^=).
[00059] Para os compostos descritos neste relatório descritivo, os grupos e substituintes dos mesmos podem ser selecionados de acordo com a valência permitida dos átomos e dos substituintes, de modo que as seleções e substituições resultem em um composto estável, por exemplo, que não sofre transformação espontaneamente, como por rearranjo, ciclização, eliminação, etc.
[00060] O termo "administração" ou "administrar", conforme usado neste relatório descritivo, se refere ao fornecimento, contato e/ou entrega de um composto ou conjugado por qualquer via apropriada para alcançar o efeito desejado. Estes compostos ou conjugados podem ser administrados a um sujeito de várias maneiras, incluindo, mas não se limitando a, oralmente, ocularmente, nasalmente, intravenosamente, topicamente, como aerossóis, supositórios, etc., e podem ser usados em combinação.
[00061] Conforme usado neste relatório descritivo, "câncer" pode incluir qualquer célula ou tecido derivado de um tumor, neoplasia, câncer, pré-câncer, linhagem celular, malignidade ou qualquer outra fonte de células que tenham o potencial de se expandir e crescer em um grau ilimitado. As células cancerosas podem ser derivadas de fontes naturais ou podem ser criadas artificialmente. As células cancerosas também podem ser capazes de invasão em outros tecidos e metástases. As células cancerosas abrangem ainda quaisquer células malignas que invadiram outros tecidos e/ou metastatizaram. Uma ou mais células cancerosas no contexto de um organismo também podem ser chamadas de câncer, tumor, neoplasia, crescimento, malignidade ou qualquer outro termo usado na técnica para descrever células em estado canceroso. O câncer pode incluir, por exemplo, melanoma, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer de adrenal, câncer de fígado, câncer de rim ou renal, câncer de pâncreas, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de estômago, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer anal, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de mama, câncer cervical, linfoma, leucemia, mieloma, câncer hematológico, hepatocarcinoma, retinoblastoma, glioma, sarcoma, blastoma, carcinoma de células escamosas e adenocarcinoma.
[00062] Tal como aqui utilizado, o termo "célula-tronco cancerosa" se refere a uma célula cancerosa capaz de auto- renovação e diferenciação nos tipos distintos de células cancerosas encontradas em um tumor maligno.
[00063] Em geral, a referência a "uma célula tumoral circulante" (CTC) pretende referir-se a uma única célula, enquanto a referência a "células tumorais circulantes" ou "grupo de células tumorais circulantes" pretende se referir a mais de uma célula cancerosa. No entanto, um versado na técnica entenderia que a referência a "células tumorais circulantes" se destina a incluir uma população de células tumorais circulantes incluindo uma ou mais células tumorais circulantes, enquanto a referência a "uma célula tumoral circulante" pode incluir mais de uma célula tumoral circulante célula tumoral. O termo "célula tumoral circulante" ou "células tumorais circulantes", conforme usado neste relatório descritivo, se refere a qualquer célula cancerosa ou aglomerado de células cancerígenas que são encontradas no sangue ou amostra de soro sanguíneo de um sujeito. Os CTCs também podem conter ou consistir em uma célula-tronco cancerosa ou aglomerado de células-tronco cancerígenas que são encontradas no sangue ou amostra de soro sanguíneo de um sujeito.
[00064] Os termos "controle", "nível de referência" e "referência" são usados aqui de forma intercambiável. O nível de referência pode ser um valor ou intervalo predeterminado, que é empregado como referência para avaliar o resultado medido. "Grupo de controle", conforme usado neste relatório descritivo, se refere a um grupo de sujeitos de controle. O nível predeterminado pode ser um valor de corte de um grupo de controle. O nível predeterminado pode ser uma média de um grupo de controle. Os valores de corte (ou valores de corte predeterminados) podem ser determinados pela metodologia Adaptive Index Model (AIM). Os valores de corte (ou valores de corte predeterminados) podem ser determinados por uma análise da curva de operação do receptor (ROC) a partir de amostras biológicas do grupo de pacientes. A análise ROC, como geralmente conhecida nas artes biológicas, é uma determinação da capacidade de um teste de discriminar uma condição de outra. Uma descrição da análise ROC é fornecida em P.J. Heagerty et al. (Biometrics 2000, 56, 337-44), cuja divulgação é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Alternativamente, os valores de corte podem ser determinados por uma análise quartil de amostras biológicas de um grupo de pacientes. Por exemplo, um valor de corte pode ser determinado selecionando um valor que corresponda a qualquer valor na faixa de percentil 25-75, de preferência um valor que corresponda ao percentil 25, percentil 50 ou percentil 75 e, mais preferencialmente, percentil 75. Tais análises estatísticas podem ser realizadas usando qualquer método conhecido na técnica e podem ser implementadas através de qualquer número de pacotes de software disponíveis comercialmente (por exemplo, da Analyse-it Software Ltd., Leeds, Reino Unido; StataCorp LP, College Station, TX; SAS Institute Inc., Cary, NC.). Os níveis ou intervalos saudáveis ou normais para um alvo ou para uma atividade de proteína podem ser definidos de acordo com a prática padrão. Um controle pode ser um sujeito, ou uma amostra dele, cujo estado de doença é conhecido. O sujeito, ou sua amostra, pode ser saudável, doente, doente antes do tratamento, doente durante o tratamento, doente após o tratamento ou saudável após o tratamento, ou uma combinação dos mesmos. O termo "sujeito normal", conforme usado neste relatório descritivo, significa um sujeito saudável, ou seja, um sujeito sem sinais ou sintomas clínicos de doença. O sujeito normal é avaliado clinicamente quanto a sinais ou sintomas de doença não detectados, cuja avaliação pode incluir exame físico de rotina e/ou testes laboratoriais. Em algumas concretizações, o controle é um controle saudável. Em algumas concretizações, o controle compreende câncer.
[00065] O termo "dosagem eficaz" ou "dosagem terapêutica" ou "quantidade terapeuticamente eficaz" ou "quantidade eficaz", conforme usado neste relatório descritivo, significa uma quantidade suficiente para provocar um efeito terapêutico ou uma dosagem de um fármaco eficaz por períodos de tempo necessário, para alcançar o resultado terapêutico desejado. Uma dosagem eficaz pode ser determinada por um versado na técnica e pode variar de acordo com fatores como o estado da doença, idade, sexo e peso do indivíduo, o modo de administração, o estágio e a gravidade da doença, o estado geral estado de saúde do sujeito, o julgamento do médico que prescreveu e a capacidade do medicamento para provocar uma resposta desejada no indivíduo. Uma quantidade terapeuticamente eficaz é também aquela em que quaisquer efeitos tóxicos ou prejudiciais da substância são compensados pelos efeitos terapeuticamente benéficos. Uma "quantidade profilaticamente eficaz" se refere a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para alcançar o resultado profilático desejado. Tipicamente, uma vez que uma dose profilática é usada em indivíduos antes ou em um estágio anterior da doença, a quantidade profilaticamente eficaz será menor do que a quantidade terapeuticamente eficaz.
[00066] Os termos "inibir" ou "inibe" significam que uma atividade é diminuída ou prevenida na presença de um inibidor em oposição à ausência do inibidor. O termo "inibição" se refere à redução ou regulação negativa de um processo ou a eliminação de um estímulo para um processo, que resulta na ausência ou minimização da expressão ou atividade de um biomarcador ou polipeptídeo. A inibição pode ser direta ou indireta. A inibição pode ser específica, ou seja, o inibidor inibe um biomarcador ou polipeptídeo e não outros.
[00067] "Amostra" ou "amostra de teste", conforme usado neste relatório descritivo, pode significar qualquer amostra na qual a presença e/ou nível de composto ou alvo deve ser detectado ou determinado. As amostras podem incluir líquidos, soluções, emulsões, misturas ou suspensões. As amostras podem incluir uma amostra médica. As amostras podem incluir qualquer fluido ou tecido biológico, como sangue, sangue total, frações de sangue, como plasma e soro, células mononucleares do sangue periférico (PBMCs), músculo, líquido intersticial, suor, saliva, urina, lágrimas, líquido sinovial, osso medula, líquido cefalorraquidiano, secreções nasais, expectoração, líquido amniótico, líquido de lavagem broncoalveolar, lavagem gástrica, êmese, matéria fecal, tecido pulmonar, células mononucleares do sangue periférico, leucócitos totais, células dos linfonodos, células do baço, células da amígdala, células cancerígenas , células tumorais, bílis, fluido digestivo, pele ou suas combinações. Em algumas concretizações, a amostra compreende uma alíquota. Em outras concretizações, a amostra compreende um fluido biológico. As amostras podem ser obtidas por qualquer meio conhecido na técnica. A amostra pode ser usada diretamente como obtida de um paciente ou pode ser pré- tratada, como por filtração, destilação, extração, concentração, centrifugação, inativação de componentes interferentes, adição de reagentes e similares, para modificar o caráter da amostra de alguma maneira conforme discutido neste relatório descritivo ou de outra forma como é conhecido na técnica. As amostras podem ser obtidas antes do diagnóstico, antes do tratamento, durante o tratamento, após o tratamento ou após o diagnóstico, ou uma combinação dos mesmos.
[00068] O termo "especificidade", conforme usado neste relatório descritivo, se refere ao número de verdadeiros negativos dividido pelo número de verdadeiros negativos mais o número de falsos positivos, onde a especificidade ("especificação") pode estar dentro do intervalo de 0 < espec < 1. Portanto, é preferível um método que tenha sensibilidade e especificidade iguais a um, ou 100%.
[00069] Por "liga-se especificamente", entende-se geralmente que um composto ou conjugado se liga a um alvo quando se liga a esse alvo mais prontamente do que se ligaria a um alvo aleatório e não relacionado.
[00070] "Sujeito", como usado neste relatório descritivo, pode significar um mamífero que deseja ou precisa dos compostos ou métodos descritos neste relatório descritivo. O sujeito pode ser um animal humano ou não humano. O sujeito pode ser um mamífero. O mamífero pode ser um primata ou um não primata. O mamífero pode ser um primata tal como um humano; um não primata tal como, por exemplo, cão, gato, cavalo, vaca, porco, camundongo, rato, camelo, lama, cabra, coelho, ovelha, hamster e porquinho-da-índia; ou primata não humano tal como, por exemplo, macaco, chimpanzé, gorila, orangotango e gibão. O sujeito pode ser de qualquer idade ou estágio de desenvolvimento, como, por exemplo, um adulto, um adolescente ou um bebê. O sujeito pode ser homem ou mulher. Em algumas concretizações, o sujeito tem um marcador genético específico.
[00071] Conforme usado neste relatório descritivo, o termo "tóxico" se refere a uma quantidade de uma entidade química, agente ou substância que seria prejudicial ao sujeito ou causaria qualquer efeito adverso. O termo "não tóxico" se refere a uma substância que tem um grau relativamente baixo de dano a um sujeito. "Citotóxico" se refere a uma entidade química, agente ou substância que é tóxica para as células. A toxicidade pode se referir ao efeito em um organismo inteiro, como um animal, bactéria, planta ou outro sujeito, conforme definido neste relatório descritivo, bem como o efeito em uma subestrutura do organismo, como uma célula (citotoxicidade) ou um órgão (organotoxicidade), como o fígado (hepatotoxicidade). Um conceito central da toxicologia é que os efeitos são dose- dependentes; mesmo a água pode levar à intoxicação hídrica quando tomada em doses suficientemente grandes, enquanto mesmo para uma substância muito tóxica, como o veneno de cobra, há uma dose abaixo da qual não há efeito tóxico detectável. Uma composição ou composto que é relativamente não tóxico pode permitir que uma gama mais ampla de indivíduos seja capaz de manusear com segurança a composição ou composto, sem sérias preocupações ou riscos de segurança.
[00072] Os termos "tratar", "tratado" ou "tratando", conforme usados neste relatório descritivo, referem-se a uma terapêutica em que o objetivo é retardar (diminuir) uma condição fisiológica indesejada, distúrbio ou doença, ou obter resultados clínicos benéficos ou desejados. resultados. Para os propósitos desta invenção, os resultados clínicos benéficos ou desejados incluem, mas não estão limitados a, alívio dos sintomas; diminuição da extensão da condição, distúrbio ou doença; estabilização (isto é, não agravamento) do estado da condição, distúrbio ou doença; atraso no início ou retardamento da progressão da condição, distúrbio ou doença; melhoria da condição, distúrbio ou estado de doença; e remissão (parcial ou total), detectável ou indetectável, ou aumento ou melhora da condição, distúrbio ou doença. O tratamento também inclui prolongar a sobrevida em comparação com a sobrevida esperada se não receber tratamento. "Tratamento" ou "tratar", quando se refere à proteção de um sujeito de uma doença, significa suprimir, reprimir, melhorar ou eliminar completamente a doença. A prevenção da doença envolve a administração de uma composição da presente invenção a um sujeito antes do início da doença. A supressão da doença envolve a administração de uma composição da presente invenção a um sujeito após a indução da doença, mas antes do seu aparecimento clínico. Reprimir ou melhorar a doença envolve a administração de uma composição da presente invenção a um sujeito após o aparecimento clínico da doença. A doença pode compreender câncer.
2. Éteres Fosfolipídicos
[00073] São fornecidas neste relatório descritivo moléculas de éter fosfolipídico (PLE). O PLE pode estar de acordo com a Fórmula (I'), ou um sal do mesmo:em que X é hidrogênio, metil ou fenil substituído por carboxil.
[00074] Em algumas concretizações, o PLE é selecionado a partir do seguinte:
[00075] O PLE pode ser conjugado com uma fração detectável (também referida como um repórter ou um marcador),tal como, por exemplo, uma molécula fluorescente, molécula quimiominescente, radiomarcador, marcador magnético,molécula infravermelha ou uma combinação dos mesmos. Etiquetas magnéticas são frações de rotulagem que, quando suficientemente associadas a um sensor de proximidade magnético, são detectáveis pelo sensor de proximidade magnético e fazem com que o sensor de proximidade magnético emita um sinal. As etiquetas magnéticas podem incluir um ou mais materiais selecionados de materiais paramagnéticos, superparamagnéticos, ferromagnéticos, ferromagnéticos, antiferromagnéticos, suas combinações e semelhantes. Marcadores fluorescentes são frações de marcação que são detectáveis por um detector de fluorescência. Moléculas fluorescentes adequadas (fluoróforos) incluem, mas não estão limitadas a, fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, succinimidil ésteres de carboxifluoresceína, succinimidil ésteres de fluoresceína, 5-isômero de fluoresceína diclorotriazina, gaiola de carboxifluoresceína-alanina- carboxamida, Oregon Green 488, Oregon Green 514 ; Lúcifer amarelo, acridina laranja, rodamina, tetrametilrodamina, Texas Red, iodeto de propídio, JC-1 (5,5',6,6'-tetracloro- 1,1',3,3'-tetraetilbenzimidazoilcarbocianina iodeto), tetrabromorrodamina 123, rodamina 6G, TMRM (éster metílico de tetrametil rodamina), TMRE (éster etílico de tetrametil rodamina), tetrametilrosamina, rodamina B e 4- dimetilaminotetrametilrosamina, proteína fluorescente verde, proteína fluorescente verde com desvio para azul, proteína fluorescente verde com desvio para ciano, fluorescente verde com desvio para o vermelho proteína, proteína fluorescente verde deslocada para amarelo, ácido 4- acetamido-4'-isotiocianatostilbeno-2,2' dissulfônico; acridina e derivados, tais como acridina, isotiocianato de acridina; ácido 5-(2'-aminoetil)aminonaftaleno-1-sulfônico (EDANS); 4-amino-N-[3-vinilsulfonil)fenil]naft-alimida-3,5 dissulfonato; N-(4-anilino-1-naftil)maleimida; antranilamida; ácido 4,4-difluoro-5-(2-tienil)-4-bora-3a,4a diaza-5-indaceno-3-propioni-c BODIPY; cascata azul; Amarelo brilhante; cumarina e derivados: cumarina, 7-amino-4- metilcumarina (AMC, Cumarina 120), 7-amino-4- trifluorometilcumarina (Cumarina 151); corantes de cianina; cianosina; 4',6-diaminidino-2-fenilindol (DAPI); 5',5'- dibromopirogalol-sulfonaftaleína (Bromopirogalol Vermelho); 7-dietilamino-3-(4'-isotiocianatofenil)-4-metilcumarina; pentaacetato de dietilenotriaamina; ácido 4,4'- diisotiocianatodi-hidro-estilbeno-2-,2'-dissulfónico; ácido 4,4'-diisotiocianatostilbeno-2,2'-dissulfônico; cloreto de 5-(dimetilamino)naftaleno-1-sulfonil (DNS, cloreto de dansilo); 4-dimetilaminofenilazofenil-4'-isotiocianato (DABITC); eosina e derivados: eosina, isotiocianato de eosina, eritrosina e derivados: eritrosina B, eritrosina, isotiocianato; etídio; fluoresceína e derivados: 5- carboxifluoresceína (FAM),5-(4,6-diclorotriazin-2-il)amino- 1-fluoresceína (DTAF), 2',7'dimetoxi-4'5'-dicloro-6- carboxifluoresceína (JOE), fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, QFITC, (XRITC); fluorescamina; IR144; IR1446; isotiocianato verde malaquita; 4-metilumbeli-feronaorto- cresolftaleína; nitrotirosina; pararosanilina; Vermelho de Fenol; B-ficoeritrina; o-ftaldialdeído; pireno e derivados: pireno, butirato de pireno, succinimidil 1-pireno; pontos quânticos de butirato; Reactive Red 4 (Cibacron™ Brilliant Red 3B-A) rodamina e derivados: 6-carboxi-X-rodamina (ROX), 6-carboxirrodamina (R6G), lissamina rodamina B cloreto de sulfonil rodamina (Rhod), rodamina B, rodamina 123, rodamina X isotiocianato, sulforrodamina B, sulforrodamina 101, cloreto de sulfonil derivado de sulforrodamina 101 (Texas Red); N,N,N',N'-tetrametil-6-carboxirodamina (TAMRA); tetrametil rodamina; isotiocianato de tetrametilhodamina (TRITC); riboflavina; ácido 5-(2'-aminoetil)aminonaftaleno- 1-sulfónico (EDANS), ácido 4-(4'- dimetilaminofenilazo)benzóico (DABCYL), ácido rosólico; CAL Fluor Laranja 560; derivados de quelato de térbio; Ci3; Ci 5; Ci 5,5; Ci 7; IRD 700; IR 800; La Jolla Azul; ftalocianina; e naftalocianina, cumarinas e corantes relacionados, corantes xantenos, tais como rodols, resorufinas, bimanes, cridinas, isoindoles, corantes dansil, hidrazidas aminoftálicas, tais como luminol, e derivados de isoluminol, aminoftalimidas, aminonaftalimidas, aminobenzofuranos, aminoquinolinas, dicianohidroquinonas, európio fluorescente e térbio complexos; suas combinações e semelhantes.
[00076] A fração detectável pode ser ligada de forma covalente ou clivável ao PLE. Por exemplo, o PLE rotulado pode ser selecionado a partir do seguinte:
[00077] O composto acima (1) é PLE (3) com a fração fluorescente, BODIPY, ligada de forma estável ao PLE, e também pode ser referido como CLR 1501. O composto acima (2) é PLE (3) com uma molécula de infravermelho próximo, IR-775, ligada de forma estável ao PLE, e, também pode ser referida como CLR 1502. Os compostos (1) e (2) também podem ser referidos como um conjugado de fármaco fosfolipídica (PDC).
[00078] O PLE, ou um conjugado do mesmo, pode ser específico para um tumor ou célula cancerosa. Após administração a um sujeito, o PLE, ou um conjugado do mesmo, pode localizar-se em um tumor ou célula cancerosa. O PLE, ou um conjugado do mesmo, pode ser incorporado em um tumor ou célula cancerosa mais do que em uma célula saudável. O PLE, ou um conjugado do mesmo, pode ser incorporado em pelo menos cerca de 2 vezes, pelo menos cerca de 3 vezes, pelo menos cerca de 4 vezes, pelo menos cerca de 5 vezes, pelo menos cerca de 6 vezes, pelo menos cerca de 7 vezes, pelo menos cerca de 8 vezes, pelo menos cerca de 9 vezes, pelo menos cerca de 10 vezes, pelo menos cerca de 15 vezes, pelo menos cerca de 20 vezes, pelo menos cerca de 25 vezes, pelo menos cerca de 30 vezes - vezes mais células tumorais ou cancerosas do que células saudáveis.
3. Compostos Conjugados Fosfolipídios-Flavaglina
[00079] Um PLE pode ser conjugado através de um ligante a um composto de flavaglina para formar um conjugado de fosfolipídio-flavaglina (também referido como um conjugado de PLE-flavaglina).
[00080] Em um aspecto, o presente pedido fornece um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmoem que Z é um análogo de flavaglina.
[00081] Flavaglinas são uma família de produtos naturais que são encontrados em plantas do gênero Aglaia (Meliaceae). Flavaglinas são caracterizadas por um esqueleto de ciclopenta[b]benzofurano. As flavaglinas podem ter fortes atividades inseticidas, antifúngicas, anti-inflamatórias, neuroprotetoras, cardioprotetoras e anticancerígenas. As flavaglinas podem aumentar a eficácia das quimioterapias e/ou aliviar o efeito adverso cardíaco das quimioterapias. Análogos de flavaglina adequados incluem, por exemplo, os compostos divulgados na Publicação de Pedido de Patente US 2018/0086729, cujo conteúdo é incorporado neste relatório descritivo por referência em sua totalidade. As flavaginas podem incluir, por exemplo, FLV1, FLV3, um derivado ou análogo estrutural dos mesmos, ou uma combinação dos mesmos. Conforme usado neste relatório descritivo, o termo "análogo de flavaglina" ou "fármaco anticancerígeno de flavaglina" inclui todos os compostos de flavaglina naturais e sintéticos, seus derivados e seus análogos estruturais.
[00082] Em algumas concretizações, o análogo de flavaglina compreende FLV1, ou um sal do mesmo:
[00083] Em algumas concretizações, o análogo de flavaglina compreende FLV3, ou um sal do mesmo:
[00084] Compostos adequados como divulgados neste relatório descritivo incluem: ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
[00085] Em algumas concretizações, o composto é (CLR 1899), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00086] Também são fornecidos compostos conjugados de Fórmula (II), ou um sal dos mesmos:metileno, ou ligação; Y é um ligante compreendendo um dissulfeto; e Z é um fármaco anticancerígeno flavaglina. Um composto conjugado de Fórmula (II) também pode ser referido como um conjugado de fármaco fosfolipídica (PDC).
[00087] Na fórmula (II), o ligante pode ser um ligante clivável, tal como um dissulfeto, e é especificamente projetado para distribuir a flavaglina a um tumor ou célula cancerosa. Em algumas concretizações, o ligante compreende um dissulfeto. Em algumas concretizações, o ligantecompreende o seguinte:
[00088] Em algumas concretizações, o composto conjugado de fosfolipídio-flavaglina de fórmula (II) é selecionado a partir do seguinte, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:
[00089] Os compostos como aqui descritos podem existir como um estereoisômero em que centros assimétricos ou quirais estão presentes. O estereoisômero é “R” ou “S” dependendo da configuração dos substituintes ao redor do átomo de carbono quiral. Os termos "R" e "S" usados neste relatório descritivo são configurações conforme definido nas Recomendações IUPAC 1974 para a Seção E, Estereoquímica Fundamental, em Pure Appl. Chem., 1976, 45, 13-30. A divulgação contempla vários estereoisômeros e suas misturas e estes estão especificamente incluídos no escopo desta invenção. Estereoisômeros incluem enantiômeros e diastereômeros e misturas de enantiômeros ou diastereômeros. Os estereoisômeros individuais dos compostos podem ser preparados sinteticamente a partir de materiais de partida comercialmente disponíveis, que contêm centros assimétricos ou quirais ou pela preparação de misturas racêmicas seguidas por métodos de resolução bem conhecidos dos versados na técnica. Esses métodos de resolução são exemplificados por (1) fixação de uma mistura de enantiômeros a um auxiliar quiral, separação da mistura resultante de diastereômeros por recristalização ou cromatografia e liberação opcional do produto opticamente puro do auxiliar conforme descrito em Furniss, Hannaford, Smith e Tatchell, "Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry", 5a edição (1989), Longman Scientific & Technical, Essex CM20 2JE, Inglaterra, ou (2) separação direta da mistura de enantiômeros ópticos em colunas cromatográficas quirais, ou (3) métodos de recristalização fracionada. Deve ser entendido que os compostos aqui descritos podem incluir formas tautoméricas, bem como isômeros geométricos, e que esses isômeros também constituem concretizações da divulgação. Os compostos aqui descritos podem existir como uma mistura racêmica.
[00090] A presente divulgação também inclui um composto marcado isotopicamente, tal como um PLE marcado isotopicamente, uma flavaglina marcada isotopicamente, um ligante marcado isotopicamente ou um conjugado fosfolipídio- flavaglina marcado isotopicamente. Um composto marcado isotopicamente é idêntico aos descritos aqui detalhados, mas pelo fato de que um ou mais átomos são substituídos por um átomo com uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa normalmente encontrados na natureza. Exemplos de isótopos adequados para inclusão nos compostos da invenção são hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, enxofre, flúor e cloro, tais como, mas não limitados a 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F e 36Cl, respectivamente. A substituição por isótopos mais pesados, como deutério, ou seja, 2H, pode proporcionar certas vantagens terapêuticas resultantes de maior estabilidade metabólica, por exemplo, meia-vida in vivo aumentada ou requisitos de dosagem reduzidos e, portanto, pode ser preferido em algumas circunstâncias. O composto pode incorporar isótopos emissores de pósitrons para estudos de imagem médica e tomografia por emissão de pósitrons (PET) para determinar a distribuição de receptores. Isótopos emissores de pósitrons adequados que podem ser incorporados em compostos são 11C, 13N, 15O e 18F. Os compostos marcados isotopicamente podem geralmente ser preparados por técnicas convencionais conhecidas dos especialistas na técnica ou por processos análogos aos descritos nos Exemplos anexos usando reagente marcado isotopicamente apropriado em vez de reagente não marcado isotopicamente.
[00091] O PLE ou conjugado fosfolipídeo-flavaglina divulgado pode existir como sais farmaceuticamente aceitáveis. O termo "sal farmaceuticamente aceitável" se refere a sais ou zwitterions dos compostos que são solúveis em água ou óleo ou dispersíveis, adequados para o tratamento de distúrbios sem toxicidade indevida, irritação e resposta alérgica, proporcional a uma relação benefício/risco razoável e eficácia para o uso pretendido. Os sais podem ser preparados durante o isolamento e purificação final dos compostos ou separadamente fazendo reagir um grupo amino dos compostos com um ácido adequado. Por exemplo, um composto pode ser dissolvido em um solvente adequado, tal como, mas não limitado a metanol e água e tratado com pelo menos um equivalente de um ácido, como ácido clorídrico. O sal resultante pode precipitar e ser isolado por filtração e seco sob pressão reduzida. Alternativamente, o solvente e o excesso de ácido podem ser removidos sob pressão reduzida para fornecer um sal. Os sais representativos incluem acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, benzenossulfonato, bissulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, digluconato, glicerofosfato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, formato, isetionato, fumarato, lactato, maleato, metanossulfonato, naftilenossulfonato, nicotinato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3- fenilpropionato, picrato, oxalato, maleato, pivalato, propionato, succinato, tartarato, tricloroacetato, trifluoroacetato, glutamato, para-toluenossulfonato, undecanoato, clorídrico, bromídrico, sulfúrico, fosfórico e semelhantes . Os grupos amino dos compostos podem também ser quaternizados com cloretos, brometos e iodetos de alquil, tais como metil, etil, propil, isopropil, butil, lauril, miristil, estearil e semelhantes.
[00092] Os sais de adição básicos podem ser preparados durante o isolamento e purificação final dos compostos divulgados por reação de um grupo carboxila com uma base adequada, tal como o hidróxido, carbonato ou bicarbonato de um cátion metálico, tal como lítio, sódio, potássio, cálcio, magnésio ou alumínio, ou uma amina orgânica primária, secundária ou terciária. Sais de amina quaternária podem ser preparados, tais como aqueles derivados de metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, dietilamina, etilamina, tributilamina, piridina, N,N-dimetilanilina, N- metilpiperidina, N-metilmorfolina, diciclohexilamina, procaína, dibenzilamina, N, N-dibenzilfenetilamina, 1- efenamina e N,N'-dibenziletilenodiamina, etilenodiamina, etanolamina, dietanolamina, piperidina, piperazina e semelhantes.
[00093] Os compostos conjugados de fosfolipídio- flavaglina como aqui descritos podem ser específicos para um tumor ou célula cancerosa. Após administração a um sujeito, os compostos podem se localizar em um tumor ou célula cancerosa. Os compostos podem localizar ou viajar para o citoplasma ou organela de um tumor ou célula cancerosa. Os compostos podem ser incorporados em uma célula tumoral ou cancerosa mais do que em uma célula saudável. Os compostos podem ser incorporados em pelo menos cerca de 2 vezes, pelo menos cerca de 3 vezes, pelo menos cerca de 4 vezes, pelo menos cerca de 5 vezes, pelo menos cerca de 6 vezes, pelo menos cerca de 7 vezes, pelo menos cerca de 8 vezes, pelo menos cerca de 9 vezes, pelo menos cerca de 10 vezes, pelo menos cerca de 15 vezes, pelo menos cerca de 20 vezes, pelo menos cerca de 25 vezes, pelo menos cerca de 30 vezes mais tumor ou câncer células do que células saudáveis.
[00094] A flavaglina ou análogo de flavaglina pode ser clivado dos presentes compostos, tal como clivagem in vivo após administração a um sujeito. A flavaglina ou análogo de flavaglina pode localizar ou viajar para o citoplasma ou organela de um tumor ou célula cancerosa. A flavaglina ou análogo de flavaglina pode ser incorporado em um tumor ou célula cancerosa mais do que uma célula saudável. A flavaglina ou análogo de flavaglina pode ser incorporado em pelo menos cerca de 2 vezes, pelo menos cerca de 3 vezes, pelo menos cerca de 4 vezes, pelo menos cerca de 5 vezes, pelo menos cerca de 6 vezes, pelo menos cerca de 7 vezes , pelo menos cerca de 8 vezes, pelo menos cerca de 9 vezes, pelo menos cerca de 10 vezes, pelo menos cerca de 15 vezes, pelo menos cerca de 20 vezes, pelo menos cerca de 25 vezes, pelo menos cerca de 30 vezes mais células tumorais ou cancerosas do que células saudáveis.
[00095] Os compostos aqui descritos podem ser sintetizados de acordo com o método descrito no Exemplo 1 ou outros métodos conhecidos na técnica. O processo de síntese pode incluir etapas para a preparação da fração PLE, a fração análoga de flavaglina e o composto completo como mostrado no Exemplo 1. Flavaglinas adequadas incluem produtos comercialmente disponíveis, por exemplo, aqueles da Haoyuan Chemexpress Co. (Xangai, China).
4. Composições Farmacêuticas
[00096] Os compostos como aqui descritos, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, podem ser formulados em composições farmacêuticas de acordo com técnicas padrão bem conhecidas dos versados na técnica farmacêutica. Em um aspecto, a presente divulgação fornece uma composição farmacêutica compreendendo um composto como descrito neste relatório descritivo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável. O termo "veículo farmaceuticamente aceitável", como usado neste relatório descritivo, significa um enchimento, diluente, material de encapsulamento ou auxiliar de formulação de qualquer tipo não tóxico, sólido inerte, semissólido ou líquido.
[00097] A via pela qual os presentes compostos são administrados e a forma da composição ditarão o tipo de transportador a ser usado. A composição farmacêutica pode estar em uma variedade de formas, adequadas, por exemplo, para administração sistêmica (por exemplo, oral, retal, sublingual, bucal, implantes, intranasal, intravaginal, transdérmica, intravenosa, intraarterial, intratumoral, intraperitoneal ou parenteral) ou administração tópica (por exemplo, dérmica, pulmonar, nasal, aural, ocular, sistemas de entrega de lipossomas ou iontoforese). Em algumas concretizações, a composição farmacêutica é para administração ao sistema nervoso central de um sujeito. Técnicas e formulações podem geralmente ser encontradas em “Remington's Pharmaceutical Sciences,” (Meade Publishing Co., Easton, Pa.). As composições farmacêuticas devem ser tipicamente estéreis e estáveis nas condições de fabricação e armazenamento. Todos os veículos são opcionais nas composições.
[00098] Os veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem, por exemplo, diluentes, lubrificantes, aglutinantes, desintegrantes, corantes, aromas, adoçantes, antioxidantes, conservantes, deslizantes, solventes, agentes de suspensão, agentes umectantes, tensoativos, emolientes, propulsores, umectantes, pós, pH agentes de ajuste e suas combinações.
[00099] Alguns exemplos de materiais que podem servir como veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a, trocadores de íons, alumina, estearato de alumínio, lecitina, proteínas do soro (como albumina de soro humano), substâncias tampão (como fosfatos), glicina, ácido sórbico ou sorbato de potássio, misturas parciais de glicerídeos de ácidos graxos vegetais saturados, água, sais ou eletrólitos (como sulfato de protamina, hidrogenofosfato dissódico, hidrogenofosfato de potássio, cloreto de sódio, sais de zinco), sílica coloidal, trissilicato de magnésio, polivinilpirrolidona, poliacrilatos, ceras, polímeros em bloco de polietilenopolioxipropileno, gordura de lã, açúcares (como lactose, glicose e sacarose), amidos (como amido de milho e fécula de batata), celulose e seus derivados (como carboximetilcelulose de sódio, etil celulose e acetato de celulose), tragacanto em pó, malte, gelatina, talco, excipientes (como manteiga de cacau e ceras de supositório), óleos (como óleo de amendoim, algodão d, óleo de cártamo, óleo de gergelim, azeite, óleo de milho, óleo de soja), glicóis (como propilenoglicol ou polietilenoglicol), ésteres (como oleato de etila e laurato de etila), ágar, lubrificantes compatíveis não tóxicos (como como lauril sulfato de sódio e estearato de magnésio), agentes corantes, desmoldantes, agentes de revestimento, agentes emulsificantes, edulcorantes, aromatizantes, agentes perfumantes, conservantes, antioxidantes também podem estar presentes na composição, de acordo com o julgamento do formulador.
[000100] Embora as quantidades de componentes nas composições possam variar dependendo do tipo de composição preparada, em geral, as composições sistêmicas podem incluir 0,01% a 50% de um composto (como um PLE ou conjugado fosfolipídio-flavaglina) e 50% a 99,99% de uma ou mais operadoras. As composições para administração parenteral podem incluir tipicamente 0,1% a 10% de um composto e 90% a 99,9% de um ou mais veículos. As formas de dosagem oral podem incluir, por exemplo, pelo menos cerca de 5% ou cerca de 25% a cerca de 50% de um composto. As composições de dosagem oral podem incluir cerca de 50% a cerca de 95% de veículos, ou de cerca de 50% a cerca de 75% de veículos. A quantidade do transportador utilizado em conjunto com um composto divulgado é suficiente para fornecer uma quantidade prática de composição para administração por dose unitária do composto. As técnicas e composições para preparar formas de dosagem úteis nos métodos desta invenção são descritas nas seguintes referências: Modern Pharmaceutics, Capítulos 9 e 10, Banker & Rhodes, eds. (1979); Lieberman et al.,Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets (1981); e Ansel, Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 2a Ed., (1976).
[000101] Em algumas concretizações, a composição farmacêutica consiste essencialmente em uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto como divulgado neste relatório descritivo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[000102] As formas de dosagem líquidas incluem, mas não estão limitadas a emulsões, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis. As formas de dosagem sólidas incluem, mas não estão limitadas a cápsulas, comprimidos, pílulas, pós, cimento, massa de vidraceiro e grânulos. As formas de dosagem para administração tópica ou transdérmica dos presentes compostos incluem, mas não estão limitadas a unguentos, pastas, cremes, loções, géis, pós, soluções, sprays, inalantes ou adesivos.
[000103] Um transportador ou veículo líquido pode ser um solvente ou meio de dispersão líquido compreendendo, por exemplo, água, etanol, um poliol (por exemplo, glicerol, propilenoglicol, polietilenoglicóis líquidos e semelhantes), óleos vegetais, gliceril não tóxico ésteres e suas misturas adequadas.
[000104] A composição farmacêutica pode estar em uma forma de dosagem adequada para injeção ou infusão, tal como soluções ou dispersões aquosas estéreis ou pós estéreis compreendendo o(s) ingrediente(s) ativo(s) que são adaptados para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injetáveis ou infusíveis estéreis. A forma de dosagem final deve ser estéril, fluida e estável nas condições de fabricação e armazenamento. As soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas incorporando pelo menos um composto conforme divulgado neste relatório descritivo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na quantidade necessária no solvente apropriado com vários outros ingredientes, conforme necessário, opcionalmente seguido por esterilização por filtro. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação podem incluir técnicas de secagem a vácuo e liofilização, que produzem um pó do(s) ingrediente(s) ativo(s) mais qualquer ingrediente adicional desejado presente nas soluções estéreis.
[000105] Em algumas concretizações, a composição é uma solução, tal como uma solução adequada para administração por infusão ou injeção. As soluções podem ser preparadas em água, opcionalmente misturadas com um surfactante não tóxico. As dispersões também podem ser preparadas em glicerol, polietilenoglicóis líquidos, triacetina e suas misturas e em óleos. Estas preparações podem conter um conservante para prevenir o crescimento de microrganismos. A prevenção da ação de microrganismos pode ser realizada por vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal e semelhantes.
[000106] Formas injetáveis podem ser feitas formando matrizes de microcápsulas do(s) composto(s) conforme divulgado neste relatório descritivo, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em polímeros biodegradáveis, tais como polilactídeo-poliglicolídeo.Dependendo da proporção de composto para polímero e da natureza do polímero particular empregado, a taxa de liberação do fármaco pode ser controlada. Exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem poli(ortoésteres) e poli(anidridos). As formulações injetáveis também são preparadas aprisionando o fármaco em lipossomas ou microemulsões que são compatíveis com os tecidos do corpo.
[000107] Em algumas concretizações, a composição pode compreender pelo menos um composto conforme descrito neste relatório descritivo e pelo menos um fármaco anticâncer adicional. As fármacos anticâncer que são úteis para a presente divulgação incluem, mas não estão limitadas a paclitaxel, irinotecano, topotecano, gencitabina, cisplatina, geldanamicina, mertansina, abiraterona, afatinibe, ácido aminolevulínico, aprepitanto, axitinibe, azacitidina, belinostat, bendamustina, bexaroteno, bleomicina, bortezomib, bosutinib, bussulfano, cabazitaxel, cabozantinib, capecitabina, carboplatina, carfilzomib, carmustina, ceritinib, cetuximab, clorambucil, clofarabina, crizotinib, ciclofosfamida, citarabina, dabrafenib, dacarbazina, dactinomicina, dasatinib, daunorubina, decitabineb, denosuicin dexrazoxano, docetaxel, dolastatinas (por exemplo, monometil auristatina E), doxorrubicina, enzalutamida, epirrubicina, mesilato de eribulina, erlotinib, etoposídeo, everolimus, floxuridina, fosfato de fludarabina, fluorouracil, ganetespib, gefitinib, gemtuzumab ozogamicina, hexametilmelamina, hidroxiureia, ibritumomab tiuxetan, ibritumomab tiuxetan, idelalisib, ifosfamida, imatinib, ipilimumab, ixabepilone, lapatinib, leucovorina cálcio, lomustina, maitansinóides, mecloretamina, melfalano, mercaptopurina, mesna, metotrexato, mitomicina C, mitotano, mitoxantrona, nelarabina, nelfinavir, nilotinib, obinutuzumab, ofatumumab, mepesuccinato de omacetaxina, oxaliplatina, panitumumab, pazopanib, pegaspargase, pembrolizumab, penexed, pertuzumab, plicanicina, pomalidomida, cloridrato de ponatinib, pralatrexato, procarbazina, dicloreto de rádio 223, ramucirumab, regorafenib, retaspimicina, ruxolitinib, semustina, siltuximab, sorafenib, estreptozocina, sunitinib malato, tanespimicina, temozolomida, temsirolimus, tenipaside, talidolimus toremifeno, trametinib, trastuzumab, vandetanib, vemurafenib, vinblastina, vincristina, vinorelbina, vismodegib, vorinostat e ziv-aflibercept. Quaisquer compostos que são atualmente conhecidos ou são capazes de atuar como fármacos anticâncer também são úteis para a presente divulgação.
5. Administração
[000108] Os compostos como aqui descritos, ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, ou as composições farmacêuticas como aqui descritas, podem ser administrados a um sujeito. Os compostos e composições podem ser administrados em dosagens e por técnicas conhecidas dos especialistas na área médica, levando em consideração fatores como idade, sexo, peso e condição do indivíduo em particular e a via de administração.
[000109] Os presentes compostos e composições podem ser administrados profilaticamente ou terapeuticamente. Na administração profilática, os compostos e composições podem ser administrados em uma quantidade eficaz para induzir uma resposta profilática. Em aplicações terapêuticas, os compostos e composições podem ser administrados a um sujeito que deles necessite em uma quantidade eficaz para provocar um efeito terapêutico.
[000110] Por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto pode ser de cerca de 1 mg/kg a cerca de 1000 mg/kg, cerca de 5 mg/kg a cerca de 950 mg/kg, cerca de 10 mg/kg a cerca de 900 mg/kg , cerca de 15 mg/kg a cerca de 850 mg/kg, cerca de 20 mg/kg a cerca de 800 mg/kg, cerca de 25 mg/kg a cerca de 750 mg/kg, cerca de 30 mg/kg a cerca de 700 mg/kg, cerca de 35 mg/kg a cerca de 650 mg/kg, cerca de 40 mg/kg a cerca de 600 mg/kg, cerca de 45 mg/kg a cerca de 550 mg/kg, cerca de 50 mg/kg a cerca de 500 mg/kg, cerca de 55 mg /kg a cerca de 450 mg/kg, cerca de 60 mg/kg a cerca de 400 mg/kg, cerca de 65 mg/kg a cerca de 350 mg/kg, cerca de 70 mg/kg a cerca de 300 mg/kg, cerca de 75 mg/kg a cerca de 250 mg/kg, cerca de 80 mg/kg a cerca de 200 mg/kg, cerca de 85 mg/kg a cerca de 150 mg/kg e cerca de 90 mg/kg a cerca de 100 mg/kg.
[000111] O composto pode ser administrado por métodos bem conhecidos na técnica como descrito em Donnelly et al. (Ann. Rev. Immunol. 1997, 15, 617-648); Felgner et al. (Patente U.S. No. 5,580,859, concedida em 3 de dezembro de 1996); Felgner (Patente U.S. No. 5,703,055, concedida em 30 de dezembro de 1997); e Carson et al. (Patente U.S. No. 5,679,647, concedida em 21 de outubro de 1997), cujos conteúdos são incorporados aqui por referência em sua totalidade. O composto pode ser complexado com partículas ou grânulos que podem ser administrados a um indivíduo, por exemplo, usando uma pistola de vacina. Um técnico versado no assunto saberia que a escolha de um veículo farmaceuticamente aceitável, incluindo um composto fisiologicamente aceitável, depende, por exemplo, da via de administração.
[000112] O composto pode ser distribuído através de uma variedade de vias. As vias de entrega típicas incluem administração parenteral, por exemplo, entrega intradérmica, intramuscular ou subcutânea. Outras vias incluem administração oral, intranasal, intravaginal, transdérmica, intravenosa, intra-arterial, intratumoral, intraperitoneal e epidérmica. Em algumas concretizações, o composto é administrado por via intravenosa, intra-arterial ou intraperitoneal ao sujeito. Em algumas concretizações, o composto é administrado ao sujeito por via intravenosa. Em algumas concretizações, o composto é administrado ao sujeito oralmente.
[000113] Em algumas concretizações, o composto é administrado em uma formulação de liberação controlada. O composto pode ser liberado na circulação, por exemplo. Em algumas concretizações, o composto pode ser liberado durante um período de pelo menos cerca de 1 dia, pelo menos cerca de 2 dias, pelo menos cerca de 3 dias, pelo menos cerca de 4 dias, pelo menos cerca de 5 dias, pelo menos cerca de 6 dias, pelo menos pelo menos cerca de 7 dias, pelo menos cerca de 1 semana, pelo menos cerca de 1,5 semanas, pelo menos cerca de 2 semanas, pelo menos cerca de 2,5 semanas, pelo menos cerca de 3,5 semanas, pelo menos cerca de 4 semanas ou pelo menos cerca de 1 mês.
[000114] O composto pode ser administrado em dose única ou episodicamente ou em doses repetidas. Por exemplo, o composto pode ser administrado uma vez a cada hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 25 horas, 36 horas, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas ou 4 semanas.
6. Métodos
[000115] A base para o direcionamento seletivo do tumor dos compostos descritos neste relatório descritivo reside nas diferenças entre as membranas plasmáticas das células cancerígenas em comparação com as da maioria das células normais. As moléculas de éter fosfolipídico (PLE) aproveitam a mudança metabólica que as células tumorais sofrem para gerar a energia necessária para a rápida divisão celular. Os tumores aumentam a utilização da via beta oxidativa para converter ácidos graxos de cadeia longa (LCFA) em energia. Para aumentar a absorção de LCFA, as células tumorais alteram a membrana celular formando microdomínios especializados conhecidos como “jangadas lipídicas”. As jangadas lipídicas se formam devido a mudanças metabólicas e necessidade de fosfolipídios. Dentro das células tumorais, essas regiões se tornaram superabundantes e estabilizadas, permitindo que sejam potenciais alvos específicos do tumor. Especificamente, as membranas das células cancerosas são altamente enriquecidas em jangadas lipídicas. No tecido normal, a presença de jangadas lipídicas é limitada e transitória (~2 nanossegundos). Nos tumores, as jangadas lipídicas têm presença aumentada e estão estabilizadas (até 10 dias). As células cancerosas têm cinco a dez vezes mais jangadas lipídicas do que as células saudáveis. Além disso, as jangadas lipídicas demonstraram ser altamente abundantes em quase todos os tipos de tumor e 100% das células cancerígenas individuais testadas. As jangadas lipídicas são regiões altamente organizadas e especializadas da bicamada fosfolipídica da membrana, que contêm altas concentrações de várias moléculas sinalizadoras, esfingolipídios, glicoesfingolipídeos e colesterol, e servem para organizar a superfície celular e as moléculas sinalizadoras intracelulares (por exemplo, fator de crescimento e receptores de citocinas, o fosfatidilinositol). via de sobrevivência de 3-quinase (PI3K)/Akt). Os dados sugerem que as jangadas lipídicas servem como portais de entrada para éteres fosfolipídicos. A marcada seletividade desses compostos para células cancerígenas versus células não cancerosas é atribuída à alta afinidade dos PLEs pelo colesterol e à abundância de jangadas lipídicas ricas em colesterol nas células cancerígenas. O papel fundamental desempenhado pelas jangadas lipídicas é ressaltado pelo fato de que a ruptura da arquitetura da jangada lipídica suprime a absorção de PLEs nas células cancerígenas. Foi demonstrado que a absorção de PLEs é reduzida em 60% quando as jangadas lipídicas são impedidas de se formar. Esses recursos combinados com jangadas lipídicas que fornecem rápida internalização de conjugados de fármacos fosfolipídicos, os tornam um alvo ideal.
[000116] Os compostos conforme divulgados neste relatório descritivo, tais como análogos de PLE, podem ser miméticos de LCFA. As moléculas aqui divulgadas foram submetidas a uma extensa análise de relação de atividade de estrutura (SAR) relacionada ao direcionamento de jangadas lipídicas em células tumorais e demonstraram se ligar especificamente a essas regiões. As moléculas aqui divulgadas fornecem entrada diretamente no citoplasma e transitam para o retículo endoplasmático e mitocôndrias ao longo da rede do aparelho de Golgi dentro do citoplasma da célula. Em algumas concretizações, os compostos divulgados neste relatório descritivo incluem um éter fosfolipídico exclusivamente projetado conjugado com um análogo de flavaglina (FLV). Os FLVs são citotoxinas potentes que inibem a tradução, a progressão do ciclo celular e induzem a apoptose.
[000117] Os compostos conforme descritos neste relatório descritivo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou composição compreendendo um composto conforme descrito neste relatório descritivo, podem ser usados para tratar câncer. Em um aspecto, a presente divulgação fornece um método de tratamento de câncer em um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um composto como descrito neste relatório descritivo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou composição compreendendo um composto como descrito neste relatório descritivo.
[000118] Em outro aspecto, a presente divulgação fornece compostos, ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, conforme descrito neste relatório descritivo para uso no tratamento de câncer em um sujeito em necessidade.
[000119] Em outro aspecto, a presente divulgação fornece o uso de compostos, ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, conforme descrito neste relatório descritivo para a fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer em um sujeito em necessidade.
[000120] Em um aspecto, a presente divulgação fornece um método de direcionamento de um fármaco para um tumor ou célula cancerosa em um sujeito, o método compreendendo administrar ao sujeito um composto como descrito neste relatório descritivo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou composição compreendendo um composto como aqui descrito. O direcionamento pode resultar em uma entrega direcionada dos presentes compostos a uma célula cancerosa e/ou uma terapia direcionada para um câncer.
[000121] Em algumas concretizações, o composto, ou o seu sal farmaceuticamente aceitável, localiza ou viaja para o citoplasma ou organela do tumor ou célula cancerosa.
[000122] Em algumas concretizações, o composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é seletivo para células cancerosas no sujeito.
[000123] Em algumas concretizações, o composto, ou o seu sal farmaceuticamente aceitável, é incorporado em pelo menos cerca de 2 vezes mais células tumorais ou cancerosas do que células saudáveis. O composto, ou o seu sal farmaceuticamente aceitável, pode ser incorporado em pelo menos cerca de 2 vezes, pelo menos cerca de 3 vezes, pelo menos cerca de 4 vezes, pelo menos cerca de 5 vezes, pelo menos cerca de 6 vezes, em pelo menos cerca de 7 vezes, pelo menos cerca de 8 vezes, pelo menos cerca de 9 vezes, pelo menos cerca de 10 vezes, pelo menos cerca de 15 vezes, pelo menos cerca de 20 vezes, pelo menos cerca de 25 vezes, pelo menos cerca de 30 vezes mais células tumorais ou cancerosas do que células saudáveis.
[000124] Os cânceres que podem ser tratados com os compostos como aqui descritos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou composição compreendendo um composto como aqui descrito incluem, mas não estão limitados a: câncer de mama incluindo câncer de mama masculino; cânceres digestivos / gastrointestinais, incluindo câncer anal, câncer de apêndice, câncer de ducto biliar extra-hepático, tumor carcinoide gastrointestinal, câncer de cólon, câncer de esôfago, câncer de vesícula biliar, câncer gástrico, tumores estromais gastrointestinais (“essência”), tumores de células das ilhotas, câncer de fígado primário adulto, câncer de fígado infantil, câncer de pâncreas, câncer retal, câncer de intestino delgado e câncer de estômago (gástrico); cancros endócrinos e neuroendócrinos incluindo adenocarcinoma pancreático, carcinoma adrenocortical, tumores neuroendócrinos pancreáticos, carcinoma de células de Merkel, tumor neuroendócrino do pulmão de células não pequenas, tumor neuroendócrino do pulmão de células pequenas, cancro da paratiroide, feocromocitoma, tumor pituitário e cancro da tiroide; cânceres oculares incluindo melanoma intraocular e retinoblastoma; câncer geniturinário incluindo câncer de bexiga, câncer de rim (células renais), câncer de pênis, câncer de próstata, câncer de pelve renal e ureter de células transicionais, câncer de testículo, câncer de uretra e tumor de Wilms; cânceres de células germinativas incluindo câncer do sistema nervoso central infantil, tumor de células germinativas extracranianas da infância, tumor de células germinativas extragonadais, tumor de células germinativas ovarianas e câncer testicular; cancros ginecológicos incluindo cancro do colo do útero, cancro do endométrio, tumor trofoblástico gestacional, cancro epitelial do ovário, tumor de células germinativas do ovário, sarcoma uterino, cancro vaginal e cancro vulvar; câncer de cabeça e pescoço, incluindo câncer de hipofaringe, câncer de laringe, câncer de lábio e cavidade oral, câncer de pescoço escamoso metastático com câncer primário oculto, câncer de boca, câncer de nasofaringe, câncer de orofaringe, câncer de seios paranasais e cavidade nasal, câncer de paratireoide, câncer de faringe, câncer de glândula salivar e câncer de garganta; leucemias incluindo leucemia linfoblástica aguda do adulto, leucemia linfoblástica aguda da infância, leucemia mieloide aguda do adulto, leucemia mieloide aguda da infância, leucemia linfocítica crónica, leucemia mieloide crónica e leucemia de células pilosas; linfomas, incluindo linfoma relacionado à AIDS, linfoma cutâneo de células T, linfoma de Hodgkin adulto, linfoma de Hodgkin infantil, linfoma de Hodgkin durante a gravidez, micose fungóide, linfoma não Hodgkin adulto, linfoma não Hodgkin infantil, linfoma não Hodgkin durante a gravidez, linfoma central primário linfoma do sistema nervoso, síndrome de Sézary e macroglobulinemia de Waldenstrom; cânceres musculoesqueléticos, incluindo sarcoma de Ewing, osteossarcoma e histocitoma fibroso maligno do osso, rabdomiossarcoma infantil e sarcoma de tecidos moles; cancros neurológicos incluindo tumor cerebral adulto, tumor cerebral infantil, astrocitomas, glioma do tronco cerebral, tumor teratoide/rabdoide atípico do sistema nervoso central, tumores embrionários do sistema nervoso central, craniofaringioma, ependimoma, neuroblastoma, linfoma primário do sistema nervoso central (SNC); cancros respiratórios/torácicos incluindo cancro do pulmão de células não pequenas, cancro do pulmão de células pequenas, mesotelioma maligno, timoma e carcinoma do timo; e cânceres de pele incluindo sarcoma de Kaposi, melanoma e carcinoma de células escamosas. Em concretizações particulares, o câncer pode ser melanoma, câncer de pulmão, câncer colorretal, câncer de mama ou uma combinação dos mesmos.
[000125] Em algumas concretizações, o câncer é melanoma, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer de adrenal, câncer de fígado, câncer do rim ou renal, câncer de pâncreas, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de estômago, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer anal, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de mama, câncer cervical, linfoma, leucemia, mieloma, câncer hematológico, hepatocarcinoma, retinoblastoma, glioma, sarcoma, blastoma, carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma ou uma combinação dos mesmos. Em algumas concretizações, o câncer é melanoma, câncer de pulmão, câncer colorretal, câncer de mama ou uma combinação dos mesmos
[000126] Em algumas concretizações, o câncer pode compreender uma ou mais células tumorais circulantes. Por exemplo, uma ou mais células tumorais circulantes podem ser selecionadas do grupo que consiste em câncer de mama, câncer de pulmão, câncer de tireoide, câncer cervical, melanoma, carcinoma de células escamosas, câncer de próstata, câncer de pâncreas, um câncer colorretal e uma célula-tronco cancerosa e uma célula plasmática maligna.
[000127] Em algumas concretizações, o câncer pode ser metastático. Por exemplo, o câncer metastático pode ser selecionado do grupo que consiste em câncer de mama, câncer de pulmão, melanoma e câncer colorretal.
[000128] Em algumas concretizações, o câncer pode compreender uma célula-tronco cancerosa. Por exemplo, a célula-tronco cancerosa pode ser selecionada do grupo que consiste em câncer de mama, câncer de pulmão, melanoma e câncer colorretal.
[000129] Em algumas concretizações, o câncer de pulmão pode compreender câncer de pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células não pequenas ou uma combinação dos mesmos.
[000130] Em algumas concretizações, o melanoma pode compreender melanoma de disseminação superficial, melanoma nodular, melanoma lentigo maligno, melanoma lentiginoso acral, melanoma amelanótico, melanoma nevóide, melanoma espizóide, melanoma desmoplásico ou uma combinação dos mesmos.
[000131] Em algumas concretizações, o câncer colorretal pode compreender adenocarcinoma.
[000132] Em algumas concretizações, o câncer de mama pode compreender carcinoma ductal de mama invasivo, câncer de mama metastático, câncer de mama inflamatório, câncer de mama triplo negativo, carcinoma ductal in situ ou uma combinação dos mesmos. Em algumas concretizações, o câncer é câncer de mama, o sujeito pode ser positivo para o receptor de estrogênio, negativo para o receptor de estrogênio e negativo para o receptor de progesterona, expressa HER2 (HER2+), não expressa HER2 (HER2-) ou uma combinação dos mesmos.
[000133] Em algumas concretizações, o sujeito é um humano, como um adulto e um bebê. Em algumas concretizações, o sujeito é um animal, como um mamífero.
[000134] Os métodos podem incluir a administração dos presentes compostos, ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em quantidades conforme descrito neste relatório descritivo. Em algumas modalidades, os métodos incluem a administração de cerca de 0,0001 a cerca de 1000 mg/kg de um composto como aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. As dosagens úteis do(s) composto(s) podem ser determinadas comparando sua atividade in vitro e atividade in vivo em seus modelos animais. Os métodos para a extrapolação de dosagens eficazes em roedores, porcos e outros animais para humanos são conhecidos no estado da técnica; por exemplo, ver Pat. N° 4,938,949.
[000135] Em algumas concretizações, os compostos, ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, ou composições farmacêuticas como divulgados neste relatório descritivo podem ser administrados por administração oral ou intravenosa. Em geral, no entanto, uma dose adequada estará frequentemente na faixa de cerca de 0,0001 mg/kg a cerca de 1000 mg/kg, tal como de cerca de 0,001 mg/kg a cerca de 10,0 mg/kg. Por exemplo, uma dose adequada pode estar na faixa de cerca de 0,001 mg/kg a cerca de 5,0 mg/kg de peso corporal por dia, tal como cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 1,0 mg/kg de peso corporal do receptor por dia, cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 3,0 mg/kg de peso corporal do destinatário por dia, cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 5,0 mg/kg de peso corporal do destinatário por dia, cerca de 0,2 mg/kg a 4,0 mg/ kg de peso corporal do receptor por dia. O composto pode ser administrado em forma de dosagem unitária; por exemplo, contendo 1 a 100 mg, 10 a 100 mg ou 5 a 50 mg de ingrediente ativo por forma de dosagem unitária.
[000136] A dose desejada pode ser convenientemente apresentada em uma única dose ou como doses divididas administradas em intervalos apropriados, por exemplo, como duas, três, quatro ou mais subdoses por dia. A própria subdose pode ser ainda dividida, por exemplo, em várias administrações discretas espaçadas.
[000137] As dosagens in vivo adequadas a serem administradas e o modo particular de administração podem variar dependendo da idade, peso, gravidade da aflição e espécies de mamíferos tratadas, os compostos particulares empregados e o uso específico para o qual esses compostos são empregados. A determinação de níveis de dosagem eficazes para alcançar o resultado desejado pode ser realizada por métodos conhecidos, por exemplo, ensaios clínicos em humanos, estudos in vivo e estudos in vitro. Por exemplo, as dosagens eficazes dos compostos divulgados neste relatório descritivo, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, podem ser determinadas comparando sua atividade in vitro e atividade in vivo em modelos animais. Tal comparação pode ser feita por comparação com uma droga estabelecida.
[000138] A quantidade de dosagem e o intervalo podem ser ajustados individualmente para fornecer níveis plasmáticos da fração ativa que são suficientes para manter os efeitos de modulação ou concentração efetiva mínima (MEC). O MEC irá variar para cada composto, mas pode ser estimado a partir de dados in vivo e/ou in vitro. As dosagens necessárias para atingir o MEC dependerão das características individuais e da via de administração. No entanto, os ensaios FIPLC ou bioensaios podem ser usados para determinar as concentrações plasmáticas. Os intervalos de dosagem também podem ser determinados usando o valor MEC. As composições devem ser administradas usando um regime que mantenha os níveis plasmáticos acima da MEC por 10 - 90% do tempo, preferencialmente entre 30 - 90% e mais preferencialmente entre 50 - 90%. Em casos de administração local ou captação seletiva, a concentração local efetiva do fármaco pode não estar relacionada à concentração plasmática.
[000139] As composições aqui descritas podem ser administradas com composições adicionais para prolongar a estabilidade, distribuição e/ou atividade das composições, ou combinadas com agentes terapêuticos adicionais, ou fornecidas antes ou após a administração de agentes terapêuticos adicionais. A terapia de combinação inclui a administração de uma única formulação de dosagem farmacêutica contendo um ou mais dos compostos descritos neste relatório descritivo e um ou mais agentes farmacêuticos adicionais, bem como a administração dos compostos e cada agente farmacêutico adicional, em sua própria formulação de dosagem farmacêutica separada. Por exemplo, os compostos aqui descritos podem ser administrados a um sujeito com um fármaco anticancerígeno adicional conforme descrito neste relatório descritivo.
7. EXEMPLOS Exemplo 1 Síntese Química
[000140] PLEs. Os PLEs foram feitos sinteticamente de acordo com o Esquema 1 abaixo:
[000141] Flavalinas. Flavaglinas estavam comercialmente disponíveis. FLV1 e FLV3 foram adquiridos de Haoyuan Chemexpress Co. (Xangai, China). FLV1 e FLV3 foram feitas alternativamente sinteticamente de acordo com o Esquema 2 abaixo:
[000142] Construções de PLE-flavaglina. CLR 1852 (composto (9)) e CLR 1865 (composto (8)) foram feitos sinteticamente de acordo com o Esquema 3 abaixo:
[000143] Síntese de CLR 1899. CLR 1899 foi sintetizado de acordo com o Esquema 4. As estruturas foram verificadas por dados de RMN e MS.
Exemplo 2 Presença de jangadas lipídicas em células tumorais
[000144] Mais de 100 linhagens celulares foram coradas com subunidade B da toxina da cólera, fixadas com formaldeído a 4% e coradas com filipina III por 30 minutos. Como mostrado na FIG. 1A-FIG. 1D, quase todos os tipos de tumores testados demonstraram alta concentração de jangada lipídica na membrana celular (mais de 100 linhas celulares, amostras frescas de pacientes, etc.). Como mostrado na FIG. 1E, células A549 foram co-cultivadas com células de fibroblastos normais por 48 horas e depois coradas com toxina da cólera subunidade B, fixadas com formaldeído a 4% e coradas com filipina III por 30 minutos. Esses resultados demonstraram que as células tumorais possuem maior concentração de jangadas lipídicas do que as células normais.
Exemplo 3 Captação seletiva de PDCs em células tumorais
[000145] Fibroblastos normais e células tumorais Caki- 2 (carcinoma de células renais de células claras humanas) foram plaqueadas e co-cultivadas durante a noite (FIG. 1F). As células foram então incubadas com 5 μM de CLR 1501 (composto (1)) por 24 horas a 37°C em meio completo. No dia seguinte, as células foram lavadas e co-coradas com coloração do núcleo (Hoescht 33342). O CLR 1501 foi excitado e então detectado com um filtro Alexa-Fluor 488. O CLR 1501 foi altamente localizado nas células Caki-2 e minimamente nas células fibroblásticas normais.
Exemplo 4 Interrupção de Jangadas Lipídicas Redução da Absorção de PDCs
[000146] As células A549 foram plaqueadas durante a noite em poços separados. No dia seguinte, as células não foram tratadas (FIG. 1G) ou tratadas com metil b- ciclodextrina (FIG. 1H), que demonstrou romper seletivamente as jangadas lipídicas. Todas as células foram então incubadas durante 24 horas com 5 μM de CLR 1501 (composto (1)). A ruptura da maioria das jangadas lipídicas em células A549 resultou em 60% de redução na absorção de CLR 1501 (FIG. 1H) em comparação com células não tratadas (FIG. 1G).
Exemplo 5 PDCs rastreiam para o retículo endoplasmático
[000147] Células de adenocarcinoma de próstata humano (PC3) foram plaqueadas durante a noite na microplaca VI (Ibidi, Verona, WI) e depois incubadas com 5 μM de CLR 1501 (composto (1)) por 24 horas a 37oC em meio completo. Após a lavagem, as células foram co-coradas com ER-tracker® por protocolo e fotografadas usando microscópio de luz confocal Nikon A1R. CLR 1501 e ER foram excitados e detectados usando Alexa-Fluor 488 usando filtros de fluoresceína padrão. CLR 1501 co-localizado com ER em células malignas (FIG. 1I-FIG. 1K), mas não com células normais (não mostradas).
Exemplo 6 PDCs rastreiam para o retículo endoplasmático
[000148] Linhagens celulares PC3 (grau IV, adenocarcinoma de próstata humano) foram cultivadas durante a noite em microlâmina VI (Ibidi, Verona, WI). No dia seguinte, as células foram incubadas com 5 μM de CLR 1501 (composto (1)) por 24 horas a 37oC em meio completo. No dia seguinte após a lavagem com PBS, as células foram co-coradas com coloração de núcleo (Hoechst 33342) e marcador de mitocôndrias (Mitotracker®) (Invitrogen, Carlsbad, CA). As células foram observadas usando microscópio confocal Nikon A1R. O CLR 1501 foi excitado e detectado usando o filtro Alexa-Fluor 488, enquanto a coloração do núcleo e a coloração das mitocôndrias foram excitadas e detectadas usando o filtro DAPI e o filtro Texas-Red, respectivamente. CLR 1501 foi co- localizado com mitocôndrias (FIG. 1L-FIG. 1N).
Exemplo 7 PDCs fornecem entrega direcionada in vivo
[000149] Camundongo nu portador de tumor colorretal (HCT-116) foi injetado com 1 mg de CLR 1502 (composto (2)) e fotografado no Pearl Infrared Imaging System. A cor diferente reflete a intensidade do CLR 1502 ao longo do tempo. Aproximadamente 5,5 horas após a injeção, o tumor ainda apresentava cor vermelha (refletindo a distribuição mais alta de CLR 1502) (FIG. 2). Em 24 horas, a distribuição máxima de CLR 1502 foi obtida. Direcionamento inicial observado em 30 minutos (não mostrado).
Exemplo 8 PDCs citotóxicos fornecem direcionamento e índice terapêutico potencialmente melhorado
[000150] Células A549 (adenocarcinoma de pulmão humano) e fibroblastos dérmicos humanos normais (NHDF) foram plaqueados em placas de 96 poços durante a noite. Todas as células foram tratadas com concentrações crescentes do composto citotóxico de origem sozinho (FLV1 ou FLV3) ou do PDC (composto citotóxico de origem conjugado à fração PLE com ligante clivável, CLR 1865 (composto (8)) ou CLR 1852 (composto (9)))). O composto citotóxico original mostrou uma potência quase igual às células A549, assim como às células NHDF. No entanto, as moléculas de PDC mostraram seletividade para as células A549 (FIG. 3). As moléculas de PDC não mostraram quase nenhum efeito nas células NHDF até as concentrações mais altas e potência quase semelhante à molécula original nas células A549. A diferença entre a citotoxicidade da molécula de PDC para células tumorais e a das células normais pode ter indicado um potencial para melhorar o índice terapêutico das moléculas originais.
Exemplo 9 PDCs citotóxicos fornecem direcionamento
[000151] A absorção de CLR 1852 (composto (9)) em células A375 (melanoma humano) e HEK293 (rim embrionário humano) foi avaliada. As células foram incubadas com CLR 1852 (composto (9)) durante 24 horas. Foi demonstrado que as células tumorais possuíam um aumento de 6 a 28 vezes em PDCs em comparação com as células normais dentro de 24 horas de tratamento (FIG. 4).
[000152] Os resultados dos Exemplos 2 - 9 indicaram que as moléculas de éter fosfolipídico têm como alvo as células tumorais através de jangadas lipídicas. PDCs mostraram absorção significativa em células tumorais versus células normais, mesmo em co-cultura. Ao entrar nas células tumorais, os PDCs rastrearam as mitocôndrias e o retículo endoplasmático. In vivo, os PDCs atingiram e se acumularam rapidamente dentro do tumor. Os PDCs citotóxicos forneceram um direcionamento aprimorado e o potencial de maior segurança.
Exemplo 10 Captação Celular de PLE
[000153] Várias linhagens de células cancerosas foram expostas in vitro e in vivo a um PLE marcado com fluorescência (CLR 1501, composto (1)). A captação de células tumorais foi medida continuamente durante 24 horas. Os resultados são mostrados na TABELA 1 e na FIG. 5, FIG. 6, e FIG. 7. O composto PLE era específico para tumores e células cancerosas.
[000154] PLE marcado com fluorescência (CLR 1501, composto (1)) foi administrado a tecidos benignos e nenhuma absorção foi observada (TABELA 2).TABELA 1. Captação celular in vitro de PLE. TABELA 2. Captação de CLR1404 em tecidos benignos
Exemplo 11 Atividade de Conjugados PLE-Flavaglina em Células de Câncer
[000155] Os conjugados PLE-flavaglina CLR 1852 (composto (9)) e CLR 1865 (composto (8)) foram administrados a linhagens celulares A375 (melanoma maligno humano), A549 (adenocarcinoma de pulmão humano), HCT 116 (câncer de cólon humano) e NHDF (fibroblastos dérmicos humanos normais). O IC50 foi calculado. Os resultados são mostrados na TABELA 3. TABELA 3. IC50 (μM/mL) em várias linhagens celulares de câncer.
[000156] A citotoxicidade de CLR 1852 foi determinada em várias concentrações. Como mostrado na FIG. 8, o CLR 1852 mostrou uma perda modesta de potência em comparação com o FLV3 sozinho, talvez devido à liberação incompleta.
[000157] A estabilidade de CLR 1865 (composto (8)), CLR 1852 (composto (9)) e FLV3 no plasma foi examinada, com propantelina como controle (TABELA 4). Uma pequena quantidade de molécula foi exposta ao plasma e o plasma foi então analisado via HPLC ou MS para determinar se a molécula foi degradada. CLR 1865 e CLR 1852 mostraram excelente estabilidade do plasma humano. O CLR 1852 superou o CLR 1865 no plasma de camundongo. O CLR 1865 só foi estável no plasma do rato durante 3,3 horas. O CLR 1852 foi estável no plasma por pelo menos 7 horas.TABELA 4. Estabilidade do plasma.
[000158] O índice terapêutico (TI) de CLR 1865 e CLR 1852 foi examinado em camundongos (TABELA 5). Listadas na Tabela 5 estão as doses administradas aos camundongos e quantos camundongos estavam vivos após o tratamento ("3/3" indica que 3 de 3 camundongos estavam vivos). Tanto o CLR 1852 quanto o CLR 1865 mostraram excelente melhora na tolerabilidade em comparação com o FLV3 sozinho. O CLR 1852 não atingiu uma dose máxima tolerada (MTD), talvez porque sua solubilidade limitasse uma dosagem maior. MTD para CLR 1865 estava entre 5 e 10 mg/kg. O índice terapêutico in vivo foi de pelo menos 25 para CLR 1852 e 12,5 para CLR 1865.TABELA 5. Índice terapêutico in vivo.
[000159] A eficácia para CLR 1852 em células HCT 116 (câncer de cólon humano) foi examinada. O CLR 1852 foi administrado a células HCT 116 em três doses de 1 mg/mg cada. Comparado ao veículo, o CLR 1852 reduziu o volume do tumor a partir de cerca de 27 dias (FIG. 9). Comparado ao veículo, o CLR 1582 causou uma modesta perda de peso, presumivelmente devido à toxicidade (FIG. 10). O CLR 1582 forneceu pelo menos um aumento de seis vezes na tolerabilidade em comparação com o FLV3 sozinho (dados não mostrados).
[000160] CLR 1852 e FLV3 sozinhos foram administrados a células A375 e A549. Os níveis de FLV3 no lisado celular e no meio de crescimento foram medidos usando LC/MS. Como mostrado na FIG. 11, altos níveis de FLV3 estavam presentes no lisado celular após 24 horas. Níveis moderados de FLV3 estavam presentes no meio de crescimento após 24 horas. Os níveis de FLV3 intracelular pareceram estabilizar em 24 horas, enquanto os níveis extracelulares de FLV3 continuaram a aumentar.
Exemplo 12 Atividade de CLR 1899 em células cancerosas
[000161] CLR 1899 foi administrado a linhagens celulares A375 (melanoma maligno humano), A549 (adenocarcinoma de pulmão humano), HCT 116 (câncer de cólon humano) e NHDF (fibroblastos dérmicos humanos normais). Os resultados de citotoxicidade in vitro são mostrados na TABELA 6.TABELA 6
[000162] Para determinar se o CLR 1899 é tolerado in vivo, o composto foi administrado por via intravenosa a camundongos C57BL/6 saudáveis em níveis de dose de 0,5 mg/kg, 1,0 mg/kg ou 2,0 mg/kg, e foram observadas alterações no peso corporal (Fig. 12). O CLR 1899 não apresentou toxicidade ou eventos adversos durante a dosagem repetida, conforme medido por alterações no peso. A eficácia in vivo de CLR 1899 foi estudada em modelo de xenoenxerto MCF-7 (FIG. 13, 10 camundongos por grupo de dose). A redução no volume do tumor foi registrada. Nesses estudos, o CLR 1899 demonstrou atividade equivalente à do docetaxel em parar ou retardar o crescimento do tumor.
[000163] A descrição anterior dos aspectos específicos revelará tão completamente a natureza geral da invenção que outros podem, aplicando o conhecimento no estado da técnica, prontamente modificar e/ou adaptar para várias aplicações tais aspectos específicos, sem experimentação indevida, sem se afastar do conceito geral da presente divulgação. Portanto, tais adaptações e modificações pretendem estar dentro do significado e alcance de equivalentes dos aspectos divulgados, com base nos ensinamentos e orientações aqui apresentados. Deve ser entendido que a fraseologia ou terminologia aqui é para fins de descrição e não de limitação, de modo que a terminologia ou fraseologia do presente relatório descritivo deve ser interpretada pelo técnico versado no assunto à luz dos ensinamentos e orientação.
[000164] A amplitude e o escopo da presente divulgação não devem ser limitados por nenhum dos aspectos exemplares descritos acima, mas devem ser definidos apenas de acordo com as reivindicações a seguir e seus equivalentes.
[000165] Todas as publicações, patentes, pedidos de patente e/ou outros documentos citados neste pedido são incorporados por referência em sua totalidade para todos os fins na mesma medida como se cada publicação individual, patente, pedido de patente e/ou outro documento foram indicados individualmente para serem incorporados por referência para todos os fins.
[000166] Por razões de completude, vários aspectos da divulgação são estabelecidos nas seguintes cláusulas numeradas:
[000167] Cláusula 1. Um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo,em que Z é um análogo de flavaglina.
[000168] Cláusula 2. O composto da cláusula 1, que é selecionado do grupo que consiste emou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
[000169] Cláusula 3. Uma composição farmacêutica compreendendo um composto de qualquer uma das cláusulas 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável.
[000170] Cláusula 4. Um método de tratamento de câncer em um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um composto de qualquer uma das cláusulas 1-2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[000171] Cláusula 5. Um método de direcionamento de uma droga para um tumor ou célula cancerosa em um sujeito, o método compreendendo administrar ao sujeito um composto de qualquer uma das cláusulas 1-2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[000172] Cláusula 6. O método de qualquer uma das cláusulas 4-5, em que o composto, ou o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, localiza ou viaja para o citoplasma ou organela do tumor ou célula cancerosa.
[000173] Cláusula 7. O método de qualquer uma das cláusulas 4-6, em que o composto, ou o seu sal farmaceuticamente aceitável, é seletivo para células cancerosas no sujeito.
[000174] Cláusula 8. O método de qualquer uma das cláusulas 4-7, em que o composto, ou o seu sal farmaceuticamente aceitável, é incorporado em pelo menos cerca de 2 vezes mais células tumorais ou cancerosas do que células saudáveis.
[000175] Cláusula 9. O método de qualquer uma das cláusulas 4-8, em que o câncer é melanoma, câncer cerebral, câncer de pulmão, câncer adrenal, câncer de fígado, câncer de rim ou renal, câncer pancreático, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de estômago câncer, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer anal, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de mama, câncer cervical, linfoma, leucemia, mieloma, câncer hematológico, hepatocarcinoma, retinoblastoma, glioma, sarcoma, blastoma, carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma ou um combinação dos mesmos.
[000176] Cláusula 10. O método de qualquer uma das cláusulas 4-9, em que o câncer é melanoma, câncer de pulmão, câncer colorretal, câncer de mama ou uma combinação dos mesmos.
[000177] Cláusula 11. O método de qualquer uma das cláusulas 4-10, em que o câncer de pulmão compreende câncer de pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células não pequenas ou uma combinação dos mesmos; o melanoma compreende melanoma de disseminação superficial, melanoma nodular, melanoma lentigo maligno, melanoma lentiginoso acral, melanoma amelanótico, melanoma nevóide, melanoma espizóide, melanoma desmoplásico ou uma combinação destes; o câncer colorretal compreende adenocarcinoma; ou o câncer de mama compreende carcinoma ductal de mama invasivo, câncer de mama metastático, câncer de mama inflamatório, câncer de mama triplo negativo, carcinoma ductal in situ ou uma combinação destes.
[000178] Cláusula 12. O método de qualquer uma das cláusulas 4-11, em que o câncer compreende células-tronco cancerígenas.
[000179] Cláusula 13. O método de qualquer uma das cláusulas 4-12, em que o câncer compreende células cancerígenas metastáticas
[000180] Cláusula 14. O método de qualquer uma das cláusulas 4-13, em que o câncer compreende células tumorais circulantes.
[000181] Cláusula 15. O método de qualquer uma das cláusulas 4-14, em que o sujeito é humano.

Claims (14)

1. Composto caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste emou seu sal farmaceuticamente aceitável.
2. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende um composto conforme definido pela reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
3. Uso de uma quantidade eficaz de um composto conforme definido pela reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo caracterizado pelo fato de que é para a preparação de um medicamento para o tratamento de câncer em um sujeito em necessidade do mesmo.
4. Uso do composto conforme definido pela reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo caracterizado pelo fato de que é para a preparação de um medicamento para direcionar um fármaco para um tumor ou célula cancerosa em um sujeito.
5. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 4, caracterizado pelo fato de que o composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, localiza ou viaja para o citoplasma ou organela do tumor ou célula cancerosa.
6. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 5, caracterizado pelo fato de que o composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é seletivo para células cancerosas no sujeito.
7. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 6, caracterizado pelo fato de que o composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é incorporado em pelo menos cerca de 2 vezes mais células tumorais ou cancerosas do que células saudáveis.
8. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 7, caracterizado pelo fato de que o câncer é melanoma, câncer cerebral, câncer de pulmão, câncer adrenal, câncer de fígado, câncer de rim ou renal, câncer pancreático, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de estômago, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer anal, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de mama, câncer cervical, linfoma, leucemia, mieloma, câncer hematológico, hepatocarcinoma, retinoblastoma, glioma, sarcoma, blastoma, carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma ou uma combinação dos mesmos.
9. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 8, caracterizado pelo fato de que o câncer é melanoma, câncer de pulmão, câncer colorretal, câncer de mama ou uma combinação dos mesmos.
10. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 9, caracterizado pelo fato de que o câncer de pulmão compreende câncer de pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células não pequenas ou uma combinação dos mesmos; o melanoma compreende melanoma de disseminação superficial, melanoma nodular, melanoma lentigo maligno, melanoma lentiginoso acral, melanoma amelanótico, melanoma nevóide, melanoma espizoide, melanoma desmoplásico ou uma combinação destes; o câncer colorretal compreende adenocarcinoma; ou o câncer de mama compreende carcinoma ductal de mama invasivo, câncer de mama metastático, câncer de mama inflamatório, câncer de mama triplo negativo, carcinoma ductal in situ ou uma combinação destes.
11. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 10, caracterizado pelo fato de que o câncer compreende células-tronco cancerígenas.
12. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 11, caracterizado pelo fato de que o câncer compreende células cancerígenas metastáticas
13. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 12, caracterizado pelo fato de que o câncer compreende células tumorais circulantes.
14. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 13, caracterizado pelo fato de que o sujeito é humano.
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