BR112021014662A2 - Tratamentos de combinação para o câncer que compreendem belantamab mafodotin e um anticorpo anti ox40 e usos e métodos dos mesmos - Google Patents

Tratamentos de combinação para o câncer que compreendem belantamab mafodotin e um anticorpo anti ox40 e usos e métodos dos mesmos Download PDF

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Abstract

tratamentos de combinação para o câncer que compreendem belantamab mafodotin e um anticorpo anti ox40 e usos e métodos dos mesmos. a presente invenção refere-se a combinações de uma proteína de ligação de antígeno que liga bcma com uma proteína de ligação de antígeno a um agente imunomodulador, tal como pd-1 ou ox40, suas composições farmacêuticas, seus usos, e métodos de tratamento que compreendem a administração das ditas combinações, incluindo os usos no câncer.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "TRATA- MENTOS DE COMBINAÇÃO PARA O CÂNCER QUE COMPREEN- DEM BELANTAMAB MAFODOTIN E UM ANTICORPO ANTI OX40 E USOS E MÉTODOS DOS MESMOS".
LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[0001] O presente Pedido de Patente contém uma Listagem de Se- quências que foi apresentada eletronicamente em formato ASCII e que é incorporada no presente documento a título de referência em sua to- talidade.
CAMPO DA INVENÇÃO
[0002] A presente invenção refere-se às combinações que compre- endem proteínas de ligação de antígeno anti-BCMA, incluindo anticor- pos monoclonais a BCMA humano em combinação com agentes imu- nomoduladors, tais como agentes de ligação anti-PD-1 antígeno e/ou proteínas de ligação anti-QX40 antígeno. Além disso, a invenção se re- fere ao uso de combinações no tratamento do câncer em um mamífero, tal como um ser humano.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[0003] O tratamento eficaz de distúrbios hiperproliferativos, inclu- indo o câncer, é um objetivo contínuo no campo da oncologia. Geral- mente, o câncer resulta da desregulação dos processos normais que controlam a divisão celular, da diferenciação e da morte celular apoptó- tica e é caracterizado pela proliferação de células malignas que têm um potencial de crescimento ilimitado, expansão local e metástase sistê- mica. A desregulação dos processos normais inclui anormalidades nas vias de transdução de sinal e resposta a fatores que diferem daqueles encontrados nas células normais.
[0004] As imunoterapias constituem uma abordagem para tratar os distúrbios hiperproliferativos. O obstáculo principal que os cientistas e os clínicos encontram no desenvolvimento de vários tipos de imunote- rapias contra o câncer tem sido quebrar a tolerância ao próprio antígeno (câncer) a fim de obter uma resposta antitumoral robusta que leve à re- gressão do tumor. Ao contrário do desenvolvimento tradicional de agen- tes de molécula pequenos e grandes que têm como alvo o tumor, as imunoterapias contra o câncer têm como alvo as células do sistema imu- nológico que têm o potencial de gerar um pool de memória das células efetoras para induzir efeitos mais duráveis e para minimizar as recor- rências.
[0005] O BCMA (CD269 ou TNFRSF17) é um membro da superfa- mília de receptores de TNF. Ele é um receptor de membrana integral não glicosilado para os ligandos BAFF e APRIL. Os ligandos de BCMA também podem ligar receptores adicionais: TACI (Ativador Transmem- brana e modulador de cálcio e interador de ligando de ciclofilina), que liga APRIL e BAFF; bem como BAFF-R (receptor de BAFF ou BR3), que mostra afinidade restrita, mas alta, com BAFF. Juntos, esses receptores e seus ligandos correspondentes regulam modalidades diferentes da imunidade humoral, desenvolvimento da célula-B e homeostase.
[0006] A expressão de BCMA tipicamente é restrita à linhagem de células B e é relatada no aumento da diferenciação de células B termi- nais. O BCMA é expresso pelos blastos de plasma humano, pelas célu- las de plasma das amídalas, pela medula do baço e dos ossos, mas também pela memória tonsilar das células B e pelas células B centrais germinativas, que têm um fenótipo TACI-BAFFR baixo (Darce et al, 2007). O BCMA é virtualmente ausente nas células B iniciais e de me- mória (Novak et al., 2004a e b). O antígeno de BCMA é expresso na superfície da célula, assim é acessível ao anticorpo, mas também é ex- presso no golgi. Tal como sugerido por seu perfil de expressão, a sina- lização de BCMA, tipicamente ligada com a sobrevivência e a prolifera- ção das células B, é importante nos estágios tardios de diferenciação das células B, bem como na sobrevivência das células do plasma da medula óssea tradicionais (O'Connor et al., 2004) e dos blastos do plasma (Avery et al., 2003). Além disso, como o BCMA se liga a APRIL com grande afinidade, o eixo de sinalização BCMA-APRIL é sugerido como predominante nos estágios mais tardios de diferenciação das cé- lulas B, sendo talvez a interação mais relevante fisiologicamente.
[0007] As proteínas de ligação de antígeno e os anticorpos que li- gam BCMA e modulam a sinalização são conhecidos no estado da téc- nica e descritos como imunoterapia, por exemplo, para o câncer.
[0008] A ligação dos ligandos PD-1, PD-L1 e PD-L2 ao receptor PD- 1 encontrado nas células T inibe a proliferação das células T e a produ- ção de citocinas. A suprarregulação dos ligandos PD-1 ocorre em al- guns tumores e a sinalização através desta via pode contribuir para a inibição da pesquisa imunológica das células T ativas dos tumores. As proteínas de ligação de antígeno e os anticorpos que se ligam ao recep- tor PD-1 e bloqueiam sua interação com PD-L1 e PD-L2 podem liberar a inibição mediada por via de PD-1 da resposta imune, incluindo a res- posta imune antitumor.
[0009] A melhoria da função antitumor das células T e a indução da proliferação de células T é uma abordagem poderosa e nova no trata- mento do câncer. Três anticorpos imuno-oncológicos (por exemplo, imu- nomoduladores) foram inseridos no mercado recentemente. Anti-CTLA- 4 (YERVOY®/ipilimumab) é considerado como aumentando as respos- tas imunes no ponto de preparação das células T e os anticorpos anti- PD-1 (OPDIVO®/nivolumab e KEYTRUDA®/pembrolizumab) são con- siderados como agindo em um microambiente local do tumor, aliviando um ponto de verificação inibitório nas células T específicas do tumor que já foram preparadas e ativadas. KEYTRUDA/pembrolizumab é um anti- corpo anti-PD-1 inserido no mercado para o tratamento do câncer pela Merck. A sequência de aminoácidos do pembrolizumab e os métodos de uso do mesmo são descritos na Patente nº US 8.168.757. A admi- nistração pode ser como uma infusão IV de 200 mg a cada 3 semanas.
[0010] OX40 (por exemplo, OX40 humano (hOX40) ou hOX40R) é um membro da família de receptor do fator de necrose do tumor que é expresso, entre outras células, em células T CD4 e CD8 ativadas. Uma de suas funções está na diferenciação e na sobrevivência a longo prazo dessas células. O ligando para OX40 (OX40L) é expresso por células que apresentam antígeno ativadas.
[0011] Embora tenha havido muitos avanços recentes no tratamento do câncer, permanece a necessidade de um tratamento mais eficaz e/ou melhorado para um indivíduo que sofre os efeitos do câncer. As combi- nações e os métodos apresentados no presente documento que se re- ferem à combinação de abordagens terapêuticas para melhorar a imu- nidade antitumor tratam dessa necessidade.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0012] A presente invenção apresenta combinações que compreen- dem uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de liga- ção de antígeno que liga BCMA e uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga um alvo imuno- modulador. Os exemplos de alvos imunomoduladors incluem PD-1 e OX40.
[0013] Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é conjugada a um agente citotóxico como um imunoconju- gado (por exemplo, um conjugado anticorpo-fármaco (ADC)). O agente citotóxico pode incluir MMAE ou MMAF e o agente citotóxico pode ser conjugado à proteína de ligação de antígeno que liga BCMA através de um ligante, tal como a citrulina-valina ou a maleimidocaproila.
[0014] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um antagonista. Em outra modalidade, a proteína de liga- ção de antígeno que liga BCMA é um anticorpo monoclonal IgGl.
[0015] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um anticorpo que compreende CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 3, uma variante CDRH3 N99D da SEQ. ID. NO.: 200 ou variantes dos mesmos. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um anticorpo que compreende CDR H1 da SEQ. ID. NO.: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 3 ou variante CDRH3 N99D da SEQ. ID. NO.: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO.: 6 e variantes dos mesmos. Ainda em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada da SEQ. ID. NO.: 23 e uma região variável de cadeia leve da SEQ. ID. NO.: 31.
[0016] A presente invenção apresenta combinações que compreen- dem uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de liga- ção de antígeno que liga BCMA e uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga PD-1.
[0017] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga PD-1 é um antagonista. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga PD-1 é um anticorpo lgG4 monoclonal.
[0018] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga PD-1 compreende CDR H1 da SEQ. ID. NO.: 201, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 202, CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 203, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 204, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 205, CDRL3 da SEQ. ID. NO.: 206 e variantes dos mesmos. Ainda em outra modalidade, a proteína de liga- ção de antígeno que liga PD-1 compreende uma região variável de ca- deia pesada da SEQ. ID. NO.: 207 e região variável de cadeia leve da SEQ. ID. NO.: 208.
[0019] Ainda em outra modalidade, a proteína de ligação de antí- geno que liga PD-1 é pembrolizumab, nivolumab ou um anticorpo que compreende 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%
ou 100% de homologia de sequência com pembrolizumab ou nivolumab.
[0020] A presente invenção apresenta combinações que compreen- dem uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de liga- ção de antígeno que liga BCMA e uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40.
[0021] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga OX40 é um agonista. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga OX40 é um anticorpo monoclonal IgGl.
[0022] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga OX40 compreende CDR H1 da SEQ. ID. NO.: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO.:222, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO.: 224 e variantes dos mesmos. Ainda em outra modalidade, a proteína de li- gação de antígeno que liga OX40 compreende uma região variável de cadeia pesada da SEQ. ID. NO.: 229 e uma região variável de cadeia leve da SEQ. ID. NO.: 230.
[0023] Também são apresentadas composições farmacêuticas que compreendem as combinações da presente invenção.
[0024] Também são apresentados métodos de tratar o câncer em um mamífero (tal como um ser humano) que tem necessidade dos mes- mos, os quais compreendem a administração de uma quantidade tera- peuticamente eficaz de uma combinação que compreende uma quanti- dade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA e uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo me- nos uma proteína de ligação de antígeno que liga um alvo imunomodu- lador. Em uma modalidade, o alvo imunomodulador é PD1 ou OX40. Em uma modalidade, o câncer é o mieloma múltiplo (MM) ou a leucemia de células B de linfoma que não de Hodgkin (NHL). Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA e a ligação de antí- geno que liga PD-1 ou OX40 são administradas ao mesmo tempo ou sequencialmente. Os métodos apresentam uma administração sistê- mica (por exemplo, intravenosa) ou intratumoral das combinações.
[0025] É apresentado o uso das combinações descritas no presente documento para o tratamento do câncer.
[0026] É apresentado o uso das combinações descritas no presente documento para a fabricação de um medicamento para o tratamento do câncer.
[0027] De maneira apropriada, são providos kits que compreendem as composições farmacêuticas da invenção junto com um ou mais veí- culos farmaceuticamente aceitáveis.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0028] A Figura 1A) demonstra um diagrama esquemático para mostrar a morte celular imunogênica (ICD) nas linhagens de células de câncer que expressam BCMA.
[0029] A Figura 1B) demonstra que aBCMA-MMAF induz ATP, CRT e HMGB1 na linhagem de célula de BCMA+ MM.
[0030] A Figura 2A) demonstra a expressão da superfície da célula CD83 aumentada em células dendríticas HLA-SR+ de três doadores saudáveis depois de uma co-cultura de 24 horas com as células de mi- eloma múltiplo NCI-H929 tratadas com BCMA ADC.
[0031] A Figura 2B) demonstra a expressão da superfície da célula CD40 aumentada em células dendríticas de três doadores saudáveis depois de uma co-cultura de 24 horas com as células de mieloma múl- tiplo NCI-H929 tratadas com BCMA ADC.
[0032] As Figuras 3A e 3B demonstram IL-10 diminuído nos sobre- nadantes das células dentríticas co-cultivadas de dois doadores huma- nos saudáveis e as células de mieloma múltiplo NCI-H929 tratadas com BCMA ADC.
[0033] A Figura 3C demonstra IL-10 diminuído com o tratamento de BCMA ADC nos sobrenadantes das células de mieloma múltiplo
NCI_H929 cultivados sozinhos.
[0034] A Figura 4A) demonstra a diferença média % (Avg) e o coe- ficiente de variação (CV) para a porcentagem (%) e MFI dos marcadores nas células CD4 em PBMC após estimulação anti-CD3/anti-CD28 na presença de BCMA ADC por 24 e 72 horas.
[0035] A Figura 4B) demonstra s diferença média % (Avg) e o coe- ficiente de variação (CV) para a porcentagem (%) e MFI dos marcadores nas células CD8 em PBMC após estimulação anti-CD3/anti-CD28 na presença de BCMA ADC por 24 e 72 horas.
[0036] A Figura 4C) demonstra a diferença média % (Avg) e o coe- ficiente de variação (CV) para a porcentagem (%) das células CD4 e CD8 que expressam IFNy e IL-4 em PBMC com estimulação anti- CD3/anti-CD28 na presença de BCMA ADC por 48 e 72 horas.
[0037] A Figura 4D) demonstra o efeito de BCMA ADC na prolifera- ção de células T CD4+ e CD8+. As células T CD4+ e CD8+ são estimu- ladas com anticorpos anti-CD3 e anti-CD28 na presença ou na ausência de várias concentrações de BCMA ADC.
[0038] A Figura 5A descreve os gráficos que demonstram o efeito da combinação um anticorpo anti-BCMA e de um anticorpo anti-OX40 no volume do tumor em camundongos EL4-Luc2-hBCMA.
[0039] A Figura 5B descreve os gráficos que demonstram o efeito da combinação de um anticorpo anti-BCMA e de um anticorpo anti- OX40 na taxa de sobrevivência em camundongos EL4-Luc2-hBCMA.
[0040] A Figura 6 descreve os gráficos que demonstram o efeito da combinação de um anticorpo anti-BCMA conjugado a MMAF e a um an- ticorpo anti-PD-1 no volume do tumor em camundongos EL4-Luc2- hBCMA.
[0041] A Figura 7 descreve os gráficos que demonstram o efeito da combinação de um anticorpo anti-BCMA conjugado a MMAF e a um an- ticorpo anti-PD-1 no volume do tumor em camundongos EL4-Luc2-
hBCMA.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO COMBINAÇÕES
[0042] Em uma modalidade da invenção é apresentada uma combi- nação que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno ou de um fragmento da mesma que liga BCMA e uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma pro- teína de ligação de antígeno ou de um fragmento da mesma que liga um alvo imunomodulador.
[0043] Em uma modalidade da invenção é apresentada uma combi- nação que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno ou de um fragmento da mesma que liga BCMA e uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma pro- teína de ligação de antígeno ou fragmento da mesma que liga PD-1.
[0044] Em uma modalidade da invenção é apresentada uma combi- nação que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno ou de um fragmento da mesma que liga BCMA e uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma pro- teína de ligação de antígeno ou de um fragmento da mesma que liga OX40.
[0045] Em uma modalidade, é apresentada uma combinação que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno ou de um fragmento da mesma que liga BCMA, uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno ou fragmento da mesma que liga PD-1 e uma quantidade te- rapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno ou frag- mento da mesma que liga OX40.
PROTEÍNAS DE LIGAÇÃO DE ANTÍGENO QUE LIGAM A BCMA
[0046] (Qualquer a referência a "proteínas de ligação de antígeno" sob o presente título refere-se às proteínas de ligação de antígeno que ligam a BCMA, a menos que indicado expressamente de outra maneira).
[0047] Em uma modalidade, são providas as proteínas de ligação de antígeno (por exemplo, um anticorpo) ou fragmentos das mesmas que especificamente ligam a BCMA, por exemplo, que especificamente ligam a BCMA humano (hBCMA). Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA inibe a ligação de BAFF e/ou de APRIL ao receptor de BCMA.
[0048] Em uma modalidade adicional, as proteínas de ligação de antígeno ou os fragmentos das mesmas têm a capacidade de ligar a FcyRIIIA e de mediar as funções efetoras mediadas por FcgRIIIA ou de ter uma melhor função efetora mediada por FcgRIIIA. Em uma modali- dade da invenção, tal como apresentado no presente documento, as proteínas de ligação de antígeno são capazes de internalização. Em uma modalidade específica da invenção, tal como apresentado no pre- sente documento, as proteínas de ligação de antígeno, tal como aqui descrito, são capazes de internalização em uma taxa rápida. Por exem- plo, as proteínas de ligação de antígeno internalizam em menos de 12 horas, ou em menos de 6 horas, ou em menos de 120 minutos. Em uma modalidade, as proteínas de ligação de antígeno internalizam em me- nos de 30 minutos, por exemplo, em 15 minutos. A internalização das proteínas de ligação de antígeno pode ser medida usando as técnicas conhecidas no estado da técnica, por exemplo, por microscopia confo- cal, a fim de visualizar a ligação de BCMA a seu receptor e colocalizado com vesículas intracelulares (endossomos e lisossomos) ou presente no citoplasma ou alternativamente por citometria de fluxo a fim de de- tectar a variação com o tempo da presença de BCMA na superfície da célula, com o desaparecimento de BCMA indicando a internalização.
[0049] Em uma modalidade adicional, as proteínas de ligação de antígeno da presente invenção têm função efetora, por exemplo, citoto-
xicidade celular dependente de anticorpo (ADCC), por exemplo, a pro- teína de ligação de antígeno tem uma função efetora de ADCC melho- rada.
[0050] Em uma modalidade adicional, as proteínas de ligação de antígeno são conjugadas a um fármaco que é um agente citotóxico a fim de formar um imunoconjugado (por exemplo, um conjugado anti- corpo-fármaco (ADC)). Em tal modalidade, o agente citotóxico é uma auristatina. Em outra modalidade adicional, o agente citotóxico é a mo- nometil auristatina E (MMAE) ou a monometil auristatina F (MMAF). Em uma modalidade, o imunoconjugado também é um ADCC melhorado.
[0051] Em uma modalidade, o agente citotóxico é conjugado à pro- teína de ligação de antígeno que liga BCMA através de um ligante, tal como a valina-citrulina (VC) ou a maleimidocaproila (MC).
[0052] Em tal modalidade, o imunoconjugado pode causar a morte imunogênica da célula. Em uma modalidade da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno de acordo com a invenção, tal como descrito no presente documento, que liga a BCMA não ligado por mem- brana, por exemplo, a um soro de BCMA.
[0053] Em outro exemplo, a proteína de ligação de antígeno que liga a BCMA é um antagonista que bloqueia a ligação de BCMA com um ligando de BCMA, tal como BAFF ou APRIL.
[0054] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga a BCMA contém um domínio semelhante a imunoglobulina ou frag- mento do mesmo. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antí- geno que liga a BCMA é um anticorpo monoclonal, por exemplo, IgG, IgM, IgA, IgD ou IgE, subclasses dos mesmos ou variantes modificadas dos mesmos. Ainda em outra modalidade, a proteína de ligação de an- tígeno que liga a BCMA é um anticorpo IgG.
[0055] Em uma modalidade da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno, tal como descrito no presente documento, em que a proteína de ligação de antígeno compreende CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 3, variante CDRH3 N99D da SEQ. ID. NO.: 200 ou variantes dos mesmos. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno com- preende uma região CDRH3 que compreende uma sequência de ami- noácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos, tal como determinado no SEQ. ID. NO.: 3 ou na SEQ. ID. NO.:200.
[0056] Em uma combinação considerada, a proteína de ligação de antígeno que liga a BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO.: 6 ou variantes dos mesmos conjugadas a MMAF; e a proteína de ligação de antígeno que liga a PD-1 compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 201, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 202, CDRH3 do SEQ. ID. NO.: 203, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 204, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 205, CDRL3 da SEQ. ID. NO.:206 ou variantes dos mesmos.
[0057] Em uma modalidade adicional da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno, tal como descrito no presente docu- mento, em que a proteína de ligação de antígeno também compreende um ou mais dentre: CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 2, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 5 e/ou CDRL3 da SEQ. ID. NO.: 6 e ou variantes dos mesmos.
[0058] Em uma modalidade da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno, tal como descrito no presente documento, em que a proteína de ligação de antígeno compreende CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 184 ou variante da SEQ. ID. NO.: 184.
[0059] Em uma modalidade adicional da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno, tal como descrito no presente docu- mento, em que a proteína de ligação de antígeno também compreende um ou mais dentre: CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 182, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 183, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 185, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 186 e/ou CDRL3 da SEQ. ID. NO.: 187 e ou variantes dos mesmos.
[0060] Em outra modalidade adicional, a proteína de ligação de an- tígeno compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 2, variante CDRH3 N99D da SEQ. ID. NO.: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 5 e CDRL3 da SEQ. ID. NO.: 6. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compreende as regiões de CDR que compreendem sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 1, na SEQ. ID. NO.: 2, na SEQ. ID. NO.: 200, na SEQ. ID. NO.: 4, na SEQ. ID. NO.: 5 e na SEQ. ID. NO.:
6.
[0061] Em uma modalidade adicional, a proteína de ligação de antí- geno compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 3, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 5 e CDRL3 da SEQ. ID. NO.: 6. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compreende as regiões de CDR que compreendem sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 1, na SEQ. ID. NO.: 2, na SEQ. ID. NO.: 3, na SEQ. ID. NO.: 4, na SEQ. ID. NO.: 5 e na SEQ. ID. NO.:6.
[0062] Em outra modalidade adicional, a proteína de ligação de an- tígeno compreende CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 184, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 183, CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 182, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 185, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 186 e CDRL3 da SEQ. ID. NO.: 187.
[0063] As proteínas de ligação de antígeno da presente invenção são derivadas do anticorpo murino que tem as regiões variáveis tal como descrito na SEQ. ID. NO.: 7 e na SEQ. ID. NO.: 9 ou equivalentes a não murino das mesmas, tais como as variantes de rato, de ser hu- mano, quiméricas ou humanizadas das mesmas, por exemplo, são de- rivadas do anticorpo que tem as sequências de cadeia pesada variáveis, tal como descrito na SEQ. ID. NO.: 11, na SEQ. ID. NO.: 13, na SEQ. ID. NO.: 15, na SEQ. ID. NO.: 17, na SEQ. ID. NO.: 19, na SEQ. ID. NO.: 21, na SEQ. ID. NO.: 23, na SEQ. ID. NO.: 25, na SEQ. ID. NO.: 27 e na SEQ. ID. NO.: 29 e/ou as sequências de cadeia leve variáveis, tal como descrito na SEQ. ID. NO.: 31, na SEQ. ID. NO.: 33 e/ou na SEQ. ID. NO.: 35.
[0064] Em outra modalidade, as proteínas de ligação de antígeno da presente invenção são derivadas de um anticorpo que tem a região variável de cadeia pesada da ID SEQ NO: 116 ou da ID SEQ NO: 118 e/ou as sequências de cadeia leve variáveis tal como descrito na ID SEQ NQ: 120 ou na ID SEQ NO: 122. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compreende uma região variável de cadeia pe- sada que compreende as sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos, tal como de- terminado na SEQ. ID. NO.: 116 ou na SEQ. ID. NO.: 118 e/ou uma região variável de cadeia leve que compreende sequências de aminoá- cidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 120 ou na SEQ. ID. NO.: 122.
[0065] Em outra modalidade, as proteínas de ligação de antígeno da presente invenção são derivadas de um anticorpo que tem as se- quências de região variável de cadeia pesada da SEQ. ID. NO.: 140 e/ou as sequências de região variável de cadeia leve da SEQ. ID. NO.:
144. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compre- ende uma região variável de cadeia pesada que compreende sequên- cias de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com as se- quências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 140, e/ou uma região variável de cadeia leve que compreende as sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, d 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com as se- quências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 144.
[0066] Em uma modalidade da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno que compreende uma região variável de cadeia pe- sada isolada selecionada de qualquer uma dentre as seguintes: SEQ. ID. NO.: 11, SEQ. ID. NO.: 13, SEQ. ID. NO.: 15, SEQ. ID. NO.: 17, SEQ. ID. NO.: 19, SEQ. ID. NO.: 21, SEQ. ID. NO.: 23, SEQ. ID. NO.: 25, SEQ. ID. NO.: 27, SEQ. ID. NO.: 29, SEQ. ID. NO.: 116 ou SEQ. ID. NO.: 118.
[0067] Em outra modalidade da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno que compreende uma região variável de cadeia leve isolada selecionada de qualquer uma dentre as seguintes: SEQ. ID. NO.: 31, SEQ. ID. NO.: 33 ou SEQ. ID. NO.: 35, SEQ. ID. NO.: 120 ou SEQ. ID. NO.: 122.
[0068] Em uma modalidade adicional da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno que compreende uma região variável de cadeia pesada isolada selecionada de qualquer uma dentre as se- guintes: SEQ. ID. NO.: 11, SEQ. ID. NO.: 13, SEQ. ID. NO.: 15, SEQ. ID. NO.: 17, SEQ. ID. NO.: 19, SEQ. ID. NO.: 21, SEQ. ID. NO.: 23, SEQ. ID. NO.: 25, SEQ. ID. NO.: 27 e SEQ. ID. NO.: 29 e uma região variável de cadeia leve isolada selecionada de qualquer uma dentre as seguintes: SEQ. ID. NO.: 31, SEQ. ID. NO.: 33 e/ou SEQ. ID. NO.:35.
[0069] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno da presente invenção compreende uma região variável de cadeia pesada da SEQ. ID. NO.: 23 e uma região variável de cadeia leve da SEQ. ID. NO.: 31. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno com- preende uma região variável de cadeia pesada que compreende as se- quências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com as sequências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 23, e uma região variável de cadeia leve que compreende sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com as se- quências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 31.
[0070] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno da presente invenção compreende uma região variável de cadeia pesada da SEQ. ID. NO.: 27 e uma região variável de cadeia leve da SEQ. ID. NO.: 31. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno com- preende uma região variável de cadeia pesada que compreende se- quências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com as sequências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.:27, e uma região variável de cadeia leve que compreende sequên- cias de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com as se- quências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 31.
[0071] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno da presente invenção compreende uma região variável de cadeia pesada da SEQ. ID. NO.: 29 e uma região variável de cadeia leve da SEQ. ID. NO.: 31. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno com- preende uma região variável de cadeia pesada que compreende se- quências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%,
95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com as sequências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 29, e uma região variável de cadeia leve que compreende sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com as se- quências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 31.
[0072] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno da presente invenção compreende uma região variável de cadeia pesada da SEQ. ID. NO.: 116 e uma região variável de cadeia leve da SEQ. ID. NO.: 120. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno com- preende uma região variável de cadeia pesada que compreende se- quências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com as sequências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 116, e uma região variável de cadeia leve que compreende sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com as se- quências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 120.
[0073] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno da presente invenção compreende uma região variável de cadeia pesada da SEQ. ID. NO.: 118 e uma região variável de cadeia leve da SEQ. ID. NO.: 122. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno com- preende uma região variável de cadeia pesada que compreende se- quências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com as sequências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 118, e uma região variável de cadeia leve que compreende sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com as se- quências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 122.
[0074] Em uma modalidade, o imunoconjugado é o GSK2857916. Tai, Blood, 123(20:3128-38 (2014). O GSK2857916 compreende um an- ticorpo anti-BCMA conjugado a monometil auristatina F (MMAF) através de um ligante de maleimidocaproila (mc).
[0075] Em outra modalidade, o anticorpo anti-BCMA é o J6M0 e compreende as sequências de aminoácidos da SEQ. ID. NO.: 55 e da SEQ. ID. NO: 63.
[0076] Em uma modalidade, o imunoconjugado é mafodotina belan- tamab.
[0077] Em uma modalidade, é provido um polinucleotídeo que codi- fica uma região variável de cadeia pesada isolada da SEQ. ID. NO.: 12, ou SEQ. ID. NO.: 14, ou SEQ. ID. NO.: 16, ou SEQ. ID. NO.: 18, ou SEQ. ID. NO.: 20, ou SEQ. ID. NO.: 22, ou SEQ. ID. NO.: 24, ou SEQ. ID. NO.: 26, ou SEQ. ID. NO.: 28, ou SEQ. ID. NO.: 30, ou SEQ. ID. NO.: 117, ou SEQ. ID. NO.: 119 ou SEQ. ID. NO.: 141.
[0078] Em uma modalidade, é provido um polinucleotídeo que codi- fica uma região variável de cadeia leve isolada da SEQ. ID. NO.: 32, ou SEQ. ID. NO.: 34, ou SEQ. ID. NO.: 36, ou SEQ. ID. NO.: 121, ou SEQ. ID. NO.: 123 ou SEQ. ID. NO.: 145.
[0079] Em uma modalidade adicional, é provido um polinucleotídeo que codifica uma região variável de cadeia pesada isolada da SEQ. ID. NO.: 24, ou SEQ. ID. NO.: 28, ou SEQ. ID. NO.: 30 e um polinucleotídeo que codifica uma região variável de cadeia leve isolada da SEQ. ID. NO.: 32 ou SEQ. ID. NO.: 34.
[0080] Em outra modalidade adicional, é provido um polinucleotídeo que codifica uma região variável de cadeia pesada isolada da SEQ. ID. NO.: 24 e um polinucleotídeo que codifica uma região variável de cadeia leve isolada da SEQ. ID. NO.: 32.
[0081] Em outra modalidade adicional, é provido um polinucleotídeo que codifica uma região variável de cadeia pesada isolada da SEQ. ID.
NO.: 117 e um polinucleotídeo que codifica uma região variável de ca- deia leve isolada da SEQ. ID. NO.: 121.
[0082] Em outra modalidade adicional, é provido um polinucleotídeo que codifica uma região variável de cadeia pesada isolada da SEQ. ID. NO.: 119 e um polinucleotídeo que codifica uma região variável de ca- deia leve isolada da SEQ. ID. NO.: 123.
[0083] Em outra modalidade adicional, é provido um polinucleotídeo que codifica uma região variável de cadeia pesada isolada da SEQ. ID. NO.: 141 e um polinucleotídeo que codifica uma região variável de ca- deia leve isolada da SEQ. ID. NO.: 145.
[0084] Em uma modalidade adicional, a proteína de ligação de antí- geno pode compreender qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada, tal como descrito no presente documento, em combinação com qualquer uma das regiões variáveis de cadeia leve, tal como descrito no presente documento. Em algumas modalidades, a proteína de ligação de antígeno pode ligar (por exemplo, e antagonizar) o BCMA, por exem- plo, o BCMA humano.
[0085] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno é um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo que compre- ende um ou mais CDR's de acordo com a invenção descrita no presente documento, ou uma ou ambas dentre a região variável de cadeia pe- sada ou a região variável de cadeia leve, de acordo com a invenção descrita no presente documento. Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno liga o BCMA primata. Em tal modalidade, a proteína de ligação de antígeno liga adicionalmente o BCMA primata não hu- mano, por exemplo, o BCMA de símio macaco cinomolgo.
[0086] Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno é selecionada do grupo que consiste em um dAb, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, diacorpo, triacorpo, tetracorpo, minianticorpo e minicorpo.
[0087] Em uma modalidade da presente invenção, a proteína de li- gação de antígeno é um anticorpo humanizado ou o quimérico, em uma modalidade adicional, o anticorpo é humanizado.
[0088] Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
[0089] Em uma modalidade da presente invenção, é provido um an- ticorpo com a sequência de cadeia pesada, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 55 ou na SEQ. ID. NO.: 59 ou na SEQ. ID. NO.: 61.
[0090] Em uma modalidade da presente invenção, é provido um an- ticorpo com a sequência de cadeia leve, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 63 ou na SEQ. ID. NO.: 65.
[0091] Em uma modalidade adicional da invenção, é provido um an- ticorpo com a sequência de cadeia pesada da SEQ. ID. NO.: 55 e uma sequência de cadeia leve tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 63. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compreende uma região de cadeia pesada que compreende sequências de aminoá- cidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com as sequências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 55, e uma região de cadeia leve que compreende sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com as sequências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 63.
[0092] Em uma modalidade, é provida uma proteína de ligação de antígeno ou fragmento da mesma que compete com a proteína de liga- ção de antígeno da invenção, tal como descrito no presente documento. Em tal modalidade, é provida, portanto, uma proteína de ligação de an- tígeno que compete com uma proteína de ligação de antígeno que com- preende a sequência variável de cadeia pesada da SEQ. ID. NO.: 23 e a região variável de cadeia leve da SEQ. ID. NO.: 31.
[0093] Em uma modalidade adicional, é provida, portanto, uma pro- teína de ligação de antígeno que compete com uma proteína de ligação de antígeno que compreende uma sequência variável de cadeia pesada selecionada de uma dentre SEQ. ID. NO.: 27, SEQ. ID. NO.: 29, SEQ. ID. NO.: 116, SEQ. ID. NO.: 118 e SEQ. ID. NO.: 140 e uma região variável de cadeia leve selecionada de uma dentre SEQ. ID. NO.: 31, SEQ. ID. NO.: 120, SEQ. ID. NO.: 122 e SEQ. ID. NO.: 144.
[0094] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um anticorpo que compreende as sequências a seguir (as regiões variáveis estão em negrito e as regiões de CDR estão sublinha- das): Cadeia pesada QVQLVQSGAEVKKRGSSVKVSCKASGGTFSNYWMHWVRQAR- GQGLEWMGATYRGHSDTYYN-
QKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGAIYDGYDVL DNWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK- DYFPEPVTVSWNSGAL- TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQ.TYICNVNHKPSNTK VDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMIS- RTPEVTCVVVDVSHED- PEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLN GKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKN- QVSLTCLVKGFYPSDI- AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV
FSCSVMHEALHNHYTQK SLSLSPGK Cadeia leve DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQK- PGKAPKLLIYYTSNLHSGVPS-
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYRKLPWTFGQGTKLEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL- QSGNSQESVTEQDSK- DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
[0095] Em uma modalidade da invenção, a proteína de ligação de antígeno é um receptor de antígeno quimérico (CAR). Em uma modali- dade adicional, CAR compreende um domínio de ligação, um domínio transmembrana e um domínio efetor intracelular.
[0096] Em uma modalidade, o domínio transmembrana pode ser de- rivado de uma fonte natural ou sintética. Em uma modalidade, o domínio transmembrana pode ser derivado do qualquer um dentre membrana- ligação ou proteína transmembrana. Alternativamente, o domínio trans- membrana pode ser sintético e pode compreender resíduos predomi- nantemente hidrofóbicos, tais como leucina e valina. Por exemplo, o do- mínio transmembrana pode ser o domínio transmembrana das proteí- nas CD, tais como CD4, CD8, CD3 ou CD28, uma subunidade do re- ceptor de células T, tal como α, β, ɤ ou δ, uma subunidade do receptor IL-2 (cadeia α), uma subunidade do Receptor de Fator de Crescimento de Nervo de Baixa Afinidade (LNGFR ou p75) (cadeia β ou cadeia ɤ) ou uma cadeia de subunidade dos receptores Fc. Em uma modalidade, o domínio transmembrana compreende o domínio transmembrana CD4, CD8 ou CD28. Em uma modalidade adicional, o domínio transmem- brana compreende o domínio transmembrana CD4 ou CD8 (por exem- plo, a cadeia alfa CD8, tal como descrito na Sequência de Referência NCBI: NP_001139345.1, incorporado no presente documento a título de referência). Em outra modalidade adicional, o domínio transmembrana compreende o domínio transmembrana CD4.
[0097] O domínio efetor intracelular ou "domínio de sinalização" é responsável pela sinalização intracelular depois da ligação do domínio de ligação alvo ao alvo. O domínio efetor intracelular é responsável pela ativação de pelo menos uma das funções efetoras normais da célula imune em que CAR é expresso. Por exemplo, a função efetora de uma célula-T pode ser uma atividade citolítica ou atividade auxiliadora que inclui a secreção das citocinas. Os exemplos preferidos de domínio efe- tor para uso em uma estrutura de suporte CAR podem ser as sequên- cias citoplásmicas do receptor de células T natural e dos co-receptores que agem de comum acordo para iniciar a transdução do sinal depois da ligação de antígeno, bem como qualquer derivado ou variante dessas sequências e qualquer sequência sintética que tem a mesma capaci- dade funcional. Os domínios efetores podem ser separados em duas classes: aqueles que iniciam a ativação primária dependente de antí- geno e aqueles que agem de uma maneira independente do antígeno a fim de prover um sinal secundário ou coestimulador. Os domínios efe- tores de ativação primária podem compreender motivos de sinalização que são conhecidos como motivos de ativação baseados em tirosina imunoreceptores (ITAMs). Os ITAMs são motivos sinalização bem defi- nidos que geralmente são encontrados na cauda intracitoplásmica de vários receptores e servem como sítios de ligação para as quinases de tirosina da classe syk/zap70. Os exemplos de ITAMs usados na inven- ção podem incluir, como exemplos não limitadores, aqueles derivados de CD3zeta, FcRgama, FcRbeta, FcRepsilon, CD3gama, CD3delta, CDepsílon, CD5, CD22, CD79a, CD79b e CD66d. Em uma modalidade, o domínio efetor intracelular compreende um domínio de sinalização CD3zeta (também conhecido como CD247). Os TCRs naturais contêm uma molécula de sinalização CD3zeta e, portanto, o uso deste domínio efetor é mais próximo do construto TCR que ocorre na natureza.
[0098] Em uma modalidade da invenção, o domínio de sinalização intracelular é um domínio efetor CD3 zeta.
[0099] Os domínios efetores também podem prover um sinal secun- dário ou coestimulador. As células T compreendem adicionalmente mo- léculas coestimuladoras que se ligam aos ligandos coestimuladores cognatos nas células que apresentam antígenos a fim de melhorar a resposta das células T, por exemplo, aumentando a ativação da prolife- ração, da diferenciação e outros. Portanto, em uma modalidade, o do- mínio efetor intracelular também compreende um domínio coestimula- dor. Em uma modalidade adicional, o domínio coestimulador compre- ende o domínio intracelular de uma molécula coestimuladora selecio- nado dentre CD28, CD27, 4-1BB (CD137), OX40 (CD134), ICOS (CD278), CD30, CD40, PD-1 (CD279), CD2, CD7, NKG2C (CD94), B7- H3 (CD276) ou qualquer combinação dos mesmos. Em outra modali- dade adicional, o domínio coestimulador compreende o domínio intra- celular de uma molécula coestimuladora selecionado dentre CD28, CD27, de 4-1BB, OX40, ICOS ou qualquer combinação dos mesmos.
[0100] A competição entre uma proteína de ligação de antígeno da presente invenção e um anticorpo de referência pode ser determinada por competição ELISA, FMAT ou Biacore. Em uma modalidade, o en- saio de competição é realizado por Biacore. Há várias razões possíveis para esta competição: as duas proteínas podem se ligar ao mesmo ou aos epítopos sobrepostos, pode haver uma inibição estérica da ligação ou a ligação da primeira proteína pode induzir a uma mudança confor- macional no antígeno que impede ou reduz a ligação da segunda pro- teína.
[0101] Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno liga a BCMA humano com grande afinidade, por exemplo, quando medida por Biacore, a proteína de ligação de antígeno liga a BCMA humano com uma afinidade de 20 nM ou menos, ou uma afinidade de 15 nM ou menos, ou uma afinidade de 5 nM ou menos, ou uma afinidade de 1.000 pM ou menos, ou uma afinidade de 500 pM ou menos, ou uma afinidade de 400 pM ou menos, ou 300 pM ou menos, ou, por exemplo, cerca de 120 pM. Em uma modalidade adicional, a proteína de ligação de antí- geno liga a BCMA humano, quando medida por Biacore, entre cerca de
100 pM e cerca de 500 pM, ou entre cerca de 100 pM e cerca de 400pM, ou entre cerca de 100 pM e cerca de 300 pM. Em uma modalidade da presente invenção, a proteína de ligação de antígeno liga a BCMA com uma afinidade menor do que 150 pm.
[0102] Em tal modalidade, isto é medido por Biacore, por exemplo, tal como definido no Exemplo 4 do documento WO2012.163.805, aqui incorporado a título de referência.
[0103] Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno liga a BCMA humano e neutraliza a ligação dos ligandos BAFF e/ou APRIL ao receptor de BCMA em um ensaio de neutralização de célula em que a proteína de ligação de antígeno tem um IC50 entre cerca de 1 nM e cerca de 500 nM, ou entre cerca de 1n M e cerca de 100 nM, ou entre cerca de 1 nM e cerca de 50 nM, ou entre cerca de 1 nM e cerca de 25 nM, ou entre cerca de 5 nM e cerca de 15 nM. Em uma modalidade adicional da presente invenção, a proteína de ligação de antígeno liga a BCMA e neutraliza o BCMA em um ensaio de neutralização de célula em que a proteína de ligação de antígeno tem um IC50 de cerca de 10 nM.
[0104] Em tal modalidade, isto é medido por um ensaio de neutrali- zação de célula, por exemplo, tal como definido no Exemplo 4.6 do do- cumento WO2012.163.805, aqui incorporado a título de referência.
[0105] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno anti- BCMA é pelo menos uma dentre GSK2857916 (GSK), Bb2121 (Bluebird bio), Bb21217 (Bluebird bio), FCARH143 (Fred Hutchinson), JCARH125(Celgene/Juno), MCARH171 (Eureka), AUTO2 (Autolus), LCAR-B38M (Janssen), BION-1301 (Aduro), IM21 CART (Beijing Immu- nochina), MEDI3338 (MedImmune), CC-93269 (Celgene), AMG 701 (Amgen), AMG 420 (Amgen), AMG 224 (Amgen), JNJ-64007957 (Jans- sen), MEDI2228 (Medlmmune), PF-06863135 (Pfizer), Descartes-08 (Cartesian Therapeutics), Kite-585 (Gilead), REGN5458 (Regeneron),
CTX4419 (Compass Therapeutics) e/ou P-BCMA-101 (Poseida).
[0106] Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno anti- BCMA é um anticorpo monoclonal, um anticorpo bi/tri-específico, um conjugado anticorpo-fármaco (ADC) ou um CART-T terapêutico.
[0107] A dose terapeuticamente eficaz apropriada da proteína de li- gação de antígeno anti-BCMA será prontamente determinada pelos ele- mentos versados no estado da técnica. As doses apropriadas das pro- teínas de ligação de antígeno anti-BCMA descritas no presente docu- mento podem ser calculadas para os pacientes de acordo com seu peso, por exemplo, as doses apropriadas podem estar na faixa de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 20 mg/kg, por exemplo, de cerca de 1 mg/kg a cerca de 20 mg/kg, por exemplo, de cerca de 10 mg/kg a cerca de 20 mg/kg ou, por exemplo, de cerca de 1 mg/kg a cerca de 15 mg/kg, por exemplo, de cerca de 10 mg/kg a cerca de 15 mg/kg.
[0108] Em uma modalidade, a dose terapeuticamente eficaz da pro- teína de ligação de antígeno anti-BCMA está na faixa de cerca de 0,03 mg/kg a cerca de 4,6 mg/kg. Ainda em outra modalidade, a dose tera- peuticamente eficaz da proteína de ligação de antígeno anti-BCMA está na faixa de cerca de 0,95 mg/kg a cerca de 3,4 mg/kg. Ainda em outra modalidade, a dose terapeuticamente eficaz da proteína de ligação de antígeno anti-BCMA está na faixa de cerca de 1,9 mg/kg a cerca de 3,4 mg/kg. Ainda em outra modalidade, a dose terapeuticamente eficaz da proteína de ligação de antígeno anti-BCMA é de 0,03 mg/kg, 0,06 mg/kg, 0,12 mg/kg, 0,24 mg/kg, 0,48 mg/kg, 0,95 mg/kg, 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg, 3,4 mg/kg ou 4,6 mg/kg. Ainda em outra modalidade, a dose te- rapeuticamente eficaz da proteína de ligação de antígeno anti-BCMA é de 0,95 mg/kg, 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg ou 3,4 mg/kg. Ainda em outra mo- dalidade, a dose terapeuticamente eficaz da proteína de ligação de an- tígeno de anti-BCMA é de 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg ou 3,4 mg/kg.
[0109] Em outra modalidade, a dose terapeuticamente eficaz da proteína de ligação de antígeno anti-BCMA é uma dose fixa em vez de em mg/kg. O uso de uma dosagem fixa pode resultar em uma faixa si- milar de exposição tal como aquela da dosagem com base no peso cor- poral. A dosagem fixa pode oferecer a vantagem de erros de dosagem reduzidos, desperdício de fármaco reduzido, tempo de preparação mais curto e mais facilidade de administração. Desse modo, em uma modali- dade, a dose fixa da proteína de ligação de antígeno anti-BCMA é ba- seada em uma referência de peso corporal (peso participante mediano) de 70 kg ou 80 kg.
[0110] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno anti- BCMA é administrada em uma frequência selecionada do grupo que consiste em: uma vez ao dia, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas (Q2W) e uma vez a cada três semanas (Q3W ou Dia 1 de um ciclo de 21 dias). Os ciclos podem continuar até a progressão da doença, a uma toxicidade intolerável, a retirada do consentimento infor- mado, o fim do subestudo, do estudo ou a morte. PROTEÍNAS DE LIGAÇÃO DE ANTÍGENO QUE LIGAM A PD-1
[0111] (Qualquer referência às "proteínas de ligação de antígeno" sob o presente título refere-se às proteínas de ligação de antígeno que ligam a PD-1, a menos que indicado expressamente de outra maneira).
[0112] Em uma modalidade da invenção, tal como descrito no pre- sente documento, a combinação compreende uma proteína de ligação de antígeno (por exemplo, um anticorpo) que liga especificamente a BCMA e uma proteína de ligação de antígeno (por exemplo, um anti- corpo) ou fragmento da mesma que liga especificamente a PD-1. Em um exemplo, a proteína de ligação de antígeno que liga a PD-1 liga es- pecificamente a PD-1 humano (hPD-1). Em outro exemplo, a proteína de ligação de antígeno que liga a PD-1 é um antagonista que bloqueia a ligação de PD-1 com um ligando PD-1, tal como PD-L1 ou PD-L2.
[0113] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga a PD-1 contém um domínio semelhante a imunoglobulina ou um fragmento do mesmo. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga a PD-1 é um anticorpo monoclonal, por exemplo, IgG, IgM, IgA, IgD ou IgE, subclasses dos mesmos ou variantes modificadas dos mesmos. Ainda em outra modalidade, a proteína de ligação de an- tígeno que liga a PD-1 é um anticorpo IgG. Em outra modalidade, a pro- teína de ligação de antígeno que liga a PD-1 é um anticorpo lgG4.
[0114] Em uma modalidade da invenção é provida uma proteína de ligação de antígeno, tal como descrito no presente documento, em que a proteína de ligação de antígeno compreende CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 203 ou uma variante do mesmo. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compreende uma região CDRH3 que compre- ende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de se- quência com a sequência de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 203.
[0115] Em uma modalidade adicional da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno, tal como descrito no presente docu- mento, em que a proteína de ligação de antígeno compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 201, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 202, CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 203, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 204, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 205, CDRL3: SEQ. ID. NO.: 206 e ou variantes dos mesmos. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compreende as regiões CDR que compreendem sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com as sequências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 201, SEQ. ID. NO.: 202, SEQ. ID. NO.: 203, SEQ. ID. NO.: 204, SEQ. ID. NO.: 205 e SEQ. ID. NO.: 206.
[0116] Em uma modalidade da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno, tal como descrito no presente documento, em que a proteína de ligação de antígeno compreende CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 213 ou uma variante do mesmo.
[0117] Em uma modalidade adicional da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno, tal como descrito no presente docu- mento, em que a proteína de ligação de antígeno também compreende um ou mais dentre: CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 211, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 212, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 214, CDRL2 da SEQ. ID. NO.:215 e/ou CDRL3 da SEQ. ID. NO.:216 ou variantes dos mesmos.
[0118] Em outra modalidade adicional, a proteína de ligação de an- tígeno compreende CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 203, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 202, CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 201, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 204, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 205 e CDRL3 da SEQ. ID. NO.:206.
[0119] Em outra modalidade adicional, a proteína de ligação de an- tígeno compreende CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 213, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 211, CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 212, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 214, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 215 e CDRL3 da SEQ. ID. NO.: 216.
[0120] Em uma modalidade da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno que compreende um domínio variável de cadeia pe- sada isolado selecionado da SEQ. ID. NO.: 207 ou da SEQ. ID. NO.:
217. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compre- ende uma região variável de cadeia pesada que compreende sequên- cias de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a se- quência de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 207 ou na SEQ. ID. NO.: 217.
[0121] Em outra modalidade da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno que compreende uma região variável de cadeia leve isolada selecionada da SEQ. ID. NO.: 208 ou da SEQ. ID. NO.: 218. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compreende uma região variável de cadeia leve que compreende sequências de ami- noácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 208 ou na SEQ. ID. NO.: 218.
[0122] Em uma modalidade adicional da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno que compreende uma região variável de cadeia pesada isolada selecionada da SEQ. ID. NO.: 207 ou da SEQ. ID. NO.: 217 e um domínio variável de cadeia leve isolado selecionado da SEQ. ID. NO.: 208 ou da SEQ. ID. NO.: 218. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 207 ou na SEQ. ID. NO.: 217 e uma região variável de cadeia leve que compreende sequências de ami- noácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 208 ou na SEQ. ID. NO.: 218.
[0123] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno da presente invenção compreende uma região variável de cadeia pesada codificada pela SEQ. ID. NO. 207 e uma região variável de cadeia leve codificada pela SEQ. ID. NO.: 208. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identi- dade de sequência com a sequência de aminoácidos, tal como determi- nado na SEQ. ID. NO.:207, e uma região variável de cadeia leve que compreende sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 208.
[0124] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno da presente invenção compreende uma região variável de cadeia pesada codificada pela SEQ. ID. NO.: 217 e uma região variável de cadeia leve codificada pela SEQ. ID. NO.: 218. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identi- dade de sequência com a sequência de aminoácidos, tal como determi- nado na SEQ. ID. NO.: 217, e uma região variável de cadeia leve que compreende sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 218.
[0125] Em uma combinação contemplada, a proteína de ligação de antígeno que liga a BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO.: 6 ou variantes dos mesmos conjugadas a MMAF; e a proteína de ligação de antígeno que liga a PD-1 compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 201, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 202, CDRH3 do SEQ. ID. NO.: 203, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 204, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 205, CDRL3 da SEQ. ID. NO.: 206 ou variantes dos mesmos.
[0126] Em uma modalidade, é provido um polinucleotídeo que codi- fica uma região variável de cadeia pesada isolada da SEQ. ID. NO.:07. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência sequências de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.:
207.
[0127] Em uma modalidade, é provido um polinucleotídeo que codi- fica as regiões de CDR da SEQ. ID. NO.: 201, da SEQ. ID. NO.: 202, da SEQ. ID. NO.: 203, da SEQ. ID. NO.: 204, da SEQ. ID. NO.: 205 e da SEQ. ID. NO.:206. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antí- geno compreende as regiões de CDR que compreendem sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a se- quência de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 201, na SEQ. ID. NO.: 202, na SEQ. ID. NO.: 203, na SEQ. ID. NO.: 204, na SEQ. ID. NO.: 205 e na SEQ. ID. NO.: 206.
[0128] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno é um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo que compre- ende um ou mais CDR's de acordo com a invenção aqui descrita, ou uma ou ambas as regiões variáveis de cadeia pesada ou as regiões variáveis de cadeia leve, de acordo com a invenção aqui descrita.
[0129] Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno é selecionada do grupo que consiste em dAb, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, dia- corpo, triacorpo, tetracorpo, minianticorpo e minicorpo. Em uma moda- lidade, as proteínas de ligação de antígeno da presente invenção são anticorpos humanizados ou quiméricos, e em uma modalidade adicional o anticorpo é humanizado.
[0130] Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
[0131] Em uma modalidade da presente invenção, o anticorpo da presente invenção compreende a sequência de cadeia pesada, tal como determinado na SEQ. ID. NO.:209.
[0132] Em uma modalidade da presente invenção, o anticorpo da presente invenção compreende a sequência de cadeia leve, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 210.
[0133] Em uma modalidade adicional da invenção, é provido um an- ticorpo com a sequência de cadeia pesada da SEQ. ID. NO.: 209 e uma sequência de cadeia leve, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 210.
[0134] Em uma modalidade, é provida uma proteína de ligação de antígeno ou um fragmento da mesma que compete com a proteína de ligação de antígeno da invenção, tal como descrito no presente docu- mento. Em tal modalidade, é provida, portanto, uma proteína de ligação de antígeno que compete com uma proteína de ligação de antígeno que compreende a sequência variável de cadeia pesada da SEQ. ID. NO.: 207 e a região variável de cadeia leve da SEQ. ID. NO.: 208.
[0135] Os anticorpos isolados, tal como descritos no presente docu- mento, ligam a PD-1 humano, e podem ligar a PD-1 humano codificado pelo gene Pdcd1, ou genes ou sequências de DNA que têm 90 por cento de homologia ou 90 por cento de identidade com o mesmo. A sequência completa de mRNA hPD-1 pode ser encontrada em GenBank, acesso nº U64863. A sequência da proteína para PD-1 humano pode ser en- contrada em GenBank, acesso nº AAC51773.
[0136] Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno liga a PD-1 humano com grande afinidade, por exemplo, quando medida por Biacore, a proteína de ligação de antígeno liga a PD-1 humano com uma afinidade de 1 nM ou menos. Em uma modalidade da presente inven- ção, a proteína de ligação de antígeno liga a PD-1 com uma afinidade menor do que 100 pm.
[0137] A afinidade de ligação do pembrolizumab para o cinomolgo PD-1 foi avaliada por meio de ELISA, ELISA celular e interferometria bioluminosa. Nestes estudos, foi descoberto que a afinidade de ligação do pembrolizumab ao cinomolgo e a PD-1 humano está na mesma faixa, embora ligeiramente mais baixa para o cinomolgo PD-1. Pela análise cinética, KD era 29 pM para PD-1 humano e 118 pM para o cinomolgo PD-1. Funcionalmente, o pembrolizumab bloqueou a ligação dos ligan- dos PD-1 humanos às células que expressam humanas ou o cinomo- lgo PD-1 com uma potência comparável. Um elemento versado na téc- nica vai perceber que quanto menor for o valor numérico de KD, mais forte será a ligação. O recíproco de KD (isto é, 1/KD) é a constante de associação de equilíbrio (KA) que tem as unidades M-1. Um elemento versado na técnica vai perceber que quanto maior o valor numérico de KA, mais forte será a ligação.
[0138] A constante da taxa de dissociação (kd) ou "fora da taxa" descreve a estabilidade do complexo, isto é, a fração dos complexos que decai por segundo. Por exemplo, uma kd de 0,01 s-1 é igual a 1% dos complexos que decaem por segundo. Em uma modalidade, a cons- tante da taxa de dissociação (kd) é de 1x10-3 s-1 ou menos, 1x10-4 s- 1 ou menos, 1x10-5 s-1 ou menos, ou 1x10-6 s-1 ou menos. A kd pode estar entre 1x10-5 s-1 e 1x10-4 s-1; ou entre 1x10-4 s-1 e 1x10-3 s-1.
[0139] A competição entre uma proteína de ligação de antígeno da presente invenção e um anticorpo de referência pode ser determinada por meio de competição ELISA, FMAT ou Biacore. Em uma modalidade, o ensaio de competição é realizado por Biacore. Há várias razões pos- síveis para esta competição: as duas proteínas podem ligar ao mesmo ou aos epítopos sobrepostos, pode haver uma inibição estérica da liga- ção ou a ligação da primeira proteína pode induzir a uma mudança con- formacional no antígeno que impede ou reduz a ligação da segunda proteína.
[0140] Em uma modalidade da invenção, a proteína de ligação de antígeno PD-1 é o pembrolizumab, também conhecido como KEYTRUDA ou MK3475 e como o lambrolizumab. O pembrolizumab é um anticorpo monoclonal que liga ao receptor PD-1 e bloqueia sua inte- ração com PD-L1 e PD-L2, liberando a inibição mediada por via de PD-
1 da resposta imune, incluindo a resposta imune antitumor.
[0141] Em modelos de tumor de camundongo singênico, o bloqueio da atividade de PD-1 resultou em um crescimento diminuído do tumor. O pembrolizumab é uma imunoglobulina kappa lgG4 com um peso mo- lecular aproximado de 149 kDa.
[0142] O pembrolizumab (KEYTRUDA) é um anticorpo bloqueador receptor-1 de morte programada humano (PD-1) indicado para o trata- mento dos pacientes com melanoma irressecável ou metastático e pro- gressão da doença depois de ipilimumab e, se a mutação BRAF V600 for positiva, um inibidor de BRAF. A dose recomendada de pembrolizu- mab é de 2 mg/kg administrados como uma infusão intravenosa por 30 minutos a cada 3 semanas até a progressão da doença ou uma toxici- dade inaceitável.
[0143] O pembrolizumab é um pó liofilizado estéril, sem conservan- tes, branco a esbranquiçado, em frascos de uso único. Cada frasco é reconstituído e diluído para infusão intravenosa. Cada 2 mL da solução reconstituída contém 50 mg de pembrolizumab e é formulado em L-his- tidina (3,1 mg), polisorbato-80 (0,4 mg), sacarose (140 mg). Pode conter ácido clorídrico/hidróxido de sódio a fim de ajustar o pH para 5.5.
[0144] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga a PD-1 é o pembrolizumab administrado em uma dose de cerca de 50 mg a cerca de 1.000 mg. Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga a PD-1 é o pembrolizumab administrado em uma dose de cerca de 50 mg a cerca de 1.200 mg. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga a PD-1 é o pembrolizumab ad- ministrado em uma dose de cerca de 50 mg a cerca de 100 mg, a cerca de 200 mg, a cerca de 240 mg, a cerca de 350 mg, a cerca de 840 mg ou a cerca de 1.200 mg a cerca de 1.000 mg. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga a PD-1 é o pembrolizumab ad- ministrado em uma dose de cerca de 200 mg.
[0145] Em um aspecto, o pembrolizumab é administrado em uma dose de 200 mg Q3W (Dia 1 de um ciclo de 21 dias).
[0146] Em outro aspecto, o pembrolizumab é administrado através de infusão IV em uma dose de 200 mg Q3W (Dia 1 de um ciclo de 21 dias).
[0147] O pembrolizumab é descrito, por exemplo, nas Patentes nº US 8.354.509 e 8.900.587, cujas descrições são incorporadas no pre- sente documento a título de referência.
[0148] O pembrolizumab foi aprovado para o tratamento de pacien- tes com melanoma irressecável ou metastático e progressão da doença depois de ipilimumab e, se a mutação BRAF V600 for positiva, um inibi- dor de BRAF.
[0149] Em uma modalidade, a combinação compreende o pembro- lizumab e o GSK2857916.
[0150] Como outro exemplo, um anticorpo anti-BCMA pode ser usado em combinação com o nivolumab (OPDIVO®). Nivolumab é um anticorpo monoclonal humano de imunoglobulina G4 (lgG4) que liga ao receptor PD-1 e bloqueia sua interação com PD-L1 e o PD-L2, liberando a inibição mediada por via de PD-1 da resposta imune, incluindo a res- posta imune antitumor. Em modelos de tumor de camundongo singê- nico, o bloqueio da atividade de PD-1 resultou em um crescimento dimi- nuído do tumor.
[0151] O nivolumab (OPDIVO®) é um anticorpo bloqueador recep- tor-1 de morte programada (PD-1) indicado para o tratamento dos paci- entes com melanoma irressecável ou metastático e progressão da do- ença depois de ipilimumab e, se a mutação BRAF V600 for positiva, um inibidor de BRAF. Esta indicação é autorizada sob a aprovação acele- rada com base na taxa de resposta do tumor e na durabilidade da res- posta. A aprovação continuada para esta indicação pode ser depen- dente da verificação e descrição do benefício clínico nos experimentos confirmatórios e no câncer de pulmão de células não pequenas esca- mosas metastático com progressão ou após quimioterapia à base de platina.
[0152] A dose recomendada de nivolumab (OPDIVO®) é de 3 mg/kg administrados como uma infusão intravenosa por 60 minutos a cada 2 semanas até a progressão da doença ou uma toxicidade inaceitável.
[0153] A Patente nº US 8.008.449, incorporada no presente docu- mento a título de referência, exemplifica sete anti-PD-1 HuMAbs: 17D8, 2D3, 4H1, 5C4 (também indicado no presente documento como nivolu- mab ou BMS-936558), 4A11, 7D3 e 5F4. Ver também a Patente nº US
8.779.105, incorporada no presente documento a título de referência. Qualquer um desses anticorpos ou CDRs dos mesmos (ou uma sequên- cia de aminoácidos com pelo menos 90% (por exemplo, 90, 91, 92, 93, 94, 95.96, 97, 98, ou 99%) de identidade com qualquer uma dessas se- quências de aminoácidos) pode ser usado nas composições e nos mé- todos descritos no presente documento.
[0154] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno PD- 1 é o nivolumab em uma dose de 240 mg ou de 1 mg/kg ou de 3 mg/kg.
[0155] Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno PD- 1 é o cemipimab (Libtayo® - Regeneron/Sanofi/Genzyme), descrito, por exemplo, na Patente nº US 9.987.500, incorporada no presente docu- mento a título de referência.
[0156] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno PD- 1 é o cemiplimab em uma dose de 350 mg.
[0157] Em outra modalidade, a dose terapeuticamente eficaz da proteína de ligação de antígeno anti-PD-1 é uma dose fixa em vez de em mg/kg. O uso de uma dosagem fixa pode resultar em uma faixa si- milar de exposições, tal como aquela dosagem baseada no peso corpo- ral. A dosagem fixa pode oferecer a vantagem de erros de dosagem reduzidos, desperdício de fármaco reduzido, tempo de preparação mais curto e mais facilidade de administração. Desse modo, em uma modali- dade, a dose fixa da proteína de ligação de antígeno anti-PD-1 é base- ada em uma referência de peso corporal (peso participante mediano) de 70 kg ou de 80 kg.
[0158] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno anti- PD-1 é administrada em uma frequência selecionada do grupo que con- siste em: uma vez ao dia, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas (Q2W) e uma vez a cada três semanas (Q3W ou Dia 1 de um ciclo de 21 dias). Os ciclos podem continuar até a progressão da do- ença, uma toxicidade intolerável, retirada do consentimento informado, fim do subestudo, do estudo ou morte. PROTEÍNAS DE LIGAÇÃO DE ANTÍGENO QUE SE LIGAM A OX40
[0159] (Qualquer referência às "proteínas de ligação de antígeno" sob o presente título refere-se às proteínas de ligação de antígeno que ligam a OX40, a menos que indicado expressamente de outra maneira).
[0160] A terapia de combinação entre as proteínas de ligação de antígeno que se ligam a BCMA e outros tratamentos com mecanismos de ação diferentes e complementares é uma opção atrativa para paci- entes com câncer, incluindo os pacientes com mieloma múltiplo que ti- veram reincidência ou se tornaram refratários ao padrão de cuidados, tal como com os inibidores de proteasoma (Pls) e fármacos imunomo- duladors (IMIDs). A combinação com outros tratamentos demonstrou resultar em efeitos aditivos, ou potencialmente melhorados, que podem se traduzir em respostas intensas e de longa duração não conseguidas previamente com os agentes disponíveis.
[0161] O OX40 é um potente receptor coestimulador expresso prin- cipalmente nas células T CD4+ e CD8+ ativadas. A sinalização de OX40 promove a ativação e a proliferação das células T efetoras, enquanto bloqueia a função supressiva das células T regulatórias (Tregs). Os ago- nistas OX40 demonstraram aumentar a imunidade antitumor e melhorar a sobrevivência sem tumores em modelos não clínicos.
[0162] A apoptose induzida por ADC pelas proteínas de ligação de antígeno que ligam a BCMA, incluindo GSK2857916, também demons- trou induzir a expressão de um padrão molecular associado a danos (DAMP) associado com a morte imunogênica da célula (ICD). A ICD é um tipo de morte celular apoptótica em que os DAMPs na superfície da célula se encarregam da resposta imune adaptável, ativam as células que apresentam antígenos, contribuem para a atividade antitumoral me- diada pelas células T e levam a uma imunidade durável. In vitro, as cé- lulas tratadas com GSK2857916 (por exemplo) que se submetem a ICD podem induzir marcadores de ativação/maturação nas células dentríti- cas. Os estudos in vivo que usam um modelo de camundongo com lin- foma singênico projetado para expressar BCMA humano demonstraram regressão do tumor e resistência a reexposição duráveis quando do tra- tamento com GSK2857916. A ICD e a imunidade durável promovida por GSK2857916 sugerem um benefício terapêutico adicional potencial do tratamento de combinação com os agentes que melhoram a imunidade, tais como as proteínas de ligação de antígeno que ligam a OX40. O efeito combinado desses dois alvos demonstrou ser mais eficaz nos ob- jetivos de resistência imune/mecanismos de tolerância ao câncer, inclu- indo o mieloma múltiplo.
[0163] Em uma modalidade da invenção, tal como descrito no pre- sente documento, a combinação compreende uma proteína de ligação de antígeno (por exemplo, um anticorpo) que liga especificamente a BCMA e uma proteína de ligação de antígeno (por exemplo, um anti- corpo) ou fragmento da mesma que liga especificamente a OX40. Em um exemplo, a proteína de ligação de antígeno que liga a OX40 liga especificamente a OX40 humano (hOX40). Em outro exemplo, a prote- ína de ligação de antígeno que liga a OX40 é um agonista.
[0164] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga a OX40 contém um domínio similar a imunoglobulina ou fragmento do mesmo. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga a OX40 é um anticorpo monoclonal, por exemplo, IgG, IgM, IgA, IgD ou IgE, subclasses dos mesmos ou variantes modificadas dos mesmos. Ainda em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga a OX40 é um anticorpo IgG1.
[0165] Em uma modalidade da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno, tal como descrito no presente documento, em que a proteína de ligação de antígeno compreende CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 221 ou uma variante do mesmo. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compreende uma região CDRH3 que compre- ende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de se- quência com a sequência de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 221.
[0166] Em uma modalidade adicional da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno, tal como descrito no presente docu- mento, em que a proteína de ligação de antígeno compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 223 e CDRL3 da SEQ. ID. NO.: 224 ou variantes dos mesmos. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compreende regiões de CDR que compreendem sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos, tal como de- terminado na SEQ. ID. NO.: 219, na SEQ. ID. NO.: 220, na SEQ. ID. NO.: 221, na SEQ. ID. NO.: 222, na SEQ. ID. NO. 223 e na SEQ. ID. NO.: 224.
[0167] Em uma modalidade da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno tal como descrito no presente documento, em que a proteína de ligação de antígeno compreende CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 233 ou uma variante do mesmo.
[0168] Em uma modalidade adicional da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno, tal como descrito no presente docu- mento, em que a proteína de ligação de antígeno também compreende um ou mais dentre: CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 231, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 232, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 234, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 235 e/ou CDRL3 da SEQ. ID. NO.: 236 e ou variantes dos mesmos.
[0169] Em uma modalidade da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno que compreende uma região variável de cadeia pe- sada isolada selecionada dentre: SEQ. ID. NO.: 229, SEQ. ID. NO.: 225 ou SEQ. ID. NO.: 237.
[0170] Em outra modalidade da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno que compreende uma região variável de cadeia leve isolada selecionada da SEQ. ID. NO.: 230, da SEQ. ID. NO.: 227 ou da SEQ. ID. NO.: 239.
[0171] Em uma modalidade adicional da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno que compreende uma região variável de cadeia pesada isolada selecionada dentre a SEQ. ID. NO.: 225 ou a SEQ. ID. NO.: 237 e uma região variável de cadeia leve isolada seleci- onada dentre a SEQ. ID. NO.: 227 ou a SEQ. ID. NO.: 239.
[0172] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno da presente invenção compreende uma região variável de cadeia pesada da SEQ. ID. NO.: 225 e uma região variável de cadeia leve da SEQ. ID. NO.: 227. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno com- preende uma região variável de cadeia pesada que compreende se- quências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 225, e uma região variável de cadeia leve que compreende sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a se- quência de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 227.
[0173] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno da presente invenção compreende uma região variável de cadeia pesada da SEQ. ID. NO.: 237 e uma região variável de cadeia leve da SEQ. ID. NO.: 239. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno com- preende uma região variável de cadeia pesada que compreende se- quências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 237, e uma região variável de cadeia leve que compreende sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a se- quência de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 239.
[0174] Em uma modalidade adicional da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno que compreende uma região variável de cadeia pesada isolada da SEQ. ID. NO.: 229 e uma região variável de cadeia leve isolada da SEQ. ID. NO.: 230. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compreende uma região variável de ca- deia pesada que compreende sequências de aminoácidos com pelo me- nos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 229, e uma região variável de cadeia leve que compreende sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identi- dade de sequência com a sequência de aminoácidos, tal como determi- nado na SEQ. ID. NO.: 230.
[0175] Em uma modalidade da invenção, é provida uma proteína de ligação de antígeno que compreende uma região de cadeia pesada iso- lada da SEQ. ID. NO.: 243 e uma região de cadeia leve isolada SEQ. ID. NO.: 244. Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno compreende uma região de cadeia pesada que compreende sequências de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a se- quência de aminoácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 243, e uma região de cadeia leve que compreende sequências de aminoáci- dos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de amino- ácidos, tal como determinado na SEQ. ID. NO.: 244.
[0176] Em uma combinação contemplada, a proteína de ligação de antígeno que liga a BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 2, CDRH3 de SEQID. NO.: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO.: 6 ou variantes dos mesmos, conjugado a MMAF; e a proteína de ligação de antígeno que liga a OX40 compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO.: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO.: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO.: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO.: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO.: 223 e CDRL3 da SEQ. ID. NO.: 224 ou variantes dos mesmos.
[0177] Em uma modalidade, é provido um polinucleotídeo que codi- fica uma região variável de cadeia pesada isolada da SEQ. ID. NO.: 229, da SEQ. ID. NO.: 226 ou da SEQ. ID. NO.: 238.
[0178] Em uma modalidade, é provido um polinucleotídeo que codi- fica uma região variável de cadeia leve isolada que compreende a SEQ. ID. NO.: 230, a SEQ. ID. NO.: 228 ou a SEQ. ID. NO.: 240.
[0179] Em uma modalidade adicional, é provido um polinucleotídeo que codifica uma região variável de cadeia pesada isolada da SEQ. ID.
NO.: 229, da SEQ. ID. NO.: 226 ou da SEQ. ID. NO.: 238 e um polinu- cleotídeo que codifica uma região variável de cadeia leve isolada da SEQ. ID. NO.: 230, da SEQ. ID. NO.: 228 ou da SEQ. ID. NO.: 240.
[0180] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga a OX40 é um anticorpo que compreende as sequências a seguir (as regiões variáveis estão em negrito e as regiões de CDR estão sublinha- das): Cadeia pesada: QVQLVQSGSELKKRGASVKVSCKASGYTFTDYSMHWVRQAR- GQGLKWMGWINTE-
TGERTYADDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCANPYY DYVSYYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG- TAALGCLVK- DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG TQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG- PSVFLFPPKPKDTLMIS- RTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPRE- PQVYTLPPSRDELTKN- QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS
KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG K Cadeia leve: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQK- PGKAPKLLIYSASYLYTGVPS-
RFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQHYSTPRTFGQGTKLEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL- QSGNSQESVTEQDSK- DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
[0181] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno da invenção liga seu alvo (por exemplo, OX40) com grande afinidade. Por exemplo, quando medido por Biacore, o anticorpo liga a OX40, de pre- ferência a OX40 humano, com uma afinidade de 1 a 1.000 nM ou de 500 nM ou menos, ou uma afinidade de 200 nM ou menos, ou uma afi- nidade de 100 nM ou menos, ou uma afinidade de 50 nM ou menos, ou uma afinidade de 500 pM ou menos, ou uma afinidade de 400 pM ou menos, ou de 300 pM ou menos. Em uma modalidade adicional, o anti- corpo liga a OX40, de preferência a OX40 humano, quando medido por Biacore, entre cerca de 50 nM e cerca de 200 nM, ou entre cerca de 50 nM e cerca de 150 nM. Em uma modalidade da presente invenção, o anticorpo liga a OX40, de preferência a OX40 humano, com uma afini- dade menor do que 100 nM.
[0182] A competição entre a proteína de ligação de antígeno da pre- sente invenção e um anticorpo de referência pode ser determinada por meio de competição ELISA, FMAT ou Biacore. Em uma modalidade, o ensaio de competição é realizado por Biacore. Há várias razões possí- veis para esta competição: as duas proteínas podem ligar ao mesmo ou a epítopos sobrepostos, pode haver uma inibição estérica da ligação ou a ligação da primeira proteína pode induzir a uma mudança conforma- cional no antígeno que impede ou reduz a ligação da segunda proteína.
[0183] Em uma modalidade, na constante de dissociação de equilí- brio (KD) da proteína de ligação de antígeno de uma combinação da invenção, ou em um método ou uso da mesma, e OX40, de preferência OX40 humano, a interação é de 100 nM ou menos, de 10 nM ou menos, de 2 nM ou menos ou de 1 nM ou menos. Alternativamente, a KD pode estar entre 5 e 10 nM; ou entre 1 e 2 nM. A KD pode estar entre 1 pM e 500 pM; ou entre 500 pM e 1 nM. Um elemento versado na técnica vai perceber que quanto menor o valor numérico de KD, mais forte a liga- ção.
[0184] Em uma modalidade adicional, a proteína de ligação de antí- geno pode compreender qualquer uma das cadeias pesadas variáveis,
tal como descrito no presente documento, em combinação com qual- quer uma das cadeias leves, tal como descrito na Tabela A a seguir.
[0185] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno é um anticorpo monoclonal que liga a OX40 e é administrada em uma dose de cerca de 0,003 mg/kg a cerca de 10 mg/kg.
[0186] Em outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno é um anticorpo monoclonal que liga a OX40 e é administrada em uma dose de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 10 mg/kg.
[0187] Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno é um anticorpo monoclonal que liga a OX40 e é administrada em uma dose selecionada do grupo que consiste em: cerca de 0,003 mg/kg, cerca de 0,01 mg/kg, cerca de 0,03 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg, cerca de 0,3 mg/kg, cerca de 1 mg/kg, cerca de 3 mg/kg e cerca de 10 mg/kg.
[0188] Em outra modalidade, o anticorpo monoclonal que liga a OX40 é administrado em uma frequência selecionada do grupo que con- siste em: uma vez ao dia, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas (Q2W) e uma vez a cada três semanas (Q3W ou Dia 1 de um ciclo de 21 dias).
[0189] Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal que liga a OX40 é administrado em uma dose de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 10 mg/kg. O anticorpo monoclonal que liga a OX40 pode ser adminis- trado em uma frequência selecionada dentre: uma vez por dia, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas (Q2W) e uma vez a cada três semanas (Q3W ou Dia 1 de um ciclo de 21 dias). Os ciclos podem continuar até a progressão da doença, uma toxicidade intolerável, a re- tirada do consentimento informado, o fim do subestudo, do estudo ou a morte.
[0190] Em outra modalidade, a dose terapeuticamente eficaz do an- ticorpo monoclonal que liga a OX40 é uma dose fixa em vez de em mg/kg. O uso de uma dosagem fixa pode resultar em uma faixa similar de exposições como aquela da dosagem com base no peso corporal. A dosagem fixa pode oferecer a vantagem de erros de dosagem reduzi- dos, desperdício de fármaco reduzido, tempo de preparação mais curto e mais facilidade de administração. Desse modo, em uma modalidade, a dose fixa do anticorpo monoclonal que liga a OX40 é baseada em um peso corporal de referência (peso participante mediano) de 70 kg ou de 80 kg.
[0191] Em uma modalidade, a dose terapeuticamente eficaz do an- ticorpo monoclonal que liga a OX40 está na faixa de cerca de 2 mg a cerca de 24 mg. Em outra modalidade, a dose terapeuticamente eficaz do anticorpo monoclonal que liga a OX40 está na faixa de cerca de 4 mg a cerca de 24 mg. Ainda em outra modalidade, a dose terapeutica- mente eficaz do anticorpo monoclonal que liga a OX40 é de cerca de 8 mg ou de cerca de 24 mg.
COMPOSIÇÕES E MÉTODOS DE TRATAMENTO FARMACÊUTICO
[0192] A invenção também provê composições farmacêutica, que incluem as combinações descritas no presente documento, e o um ou mais veículos, diluentes ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis. A combinação da invenção pode compreender duas composições far- macêuticas, uma que compreende proteínas de ligação de antígeno anti-BCMA ou fragmentos, e a outra que compreende uma proteína de ligação de antígeno antiPD-1 ou OX40 ou seus fragmentos, cada uma das quais pode ter veículos, diluentes ou excipientes idênticos ou dife- rentes. O(s) veículo(s), diluente(s) ou excipiente(s) devem ser aceitáveis no sentido de serem compatíveis com os outros ingredientes da formu- lação, com capacidade de formulação farmacêutica, e não deletérios ao seu receptor.
[0193] Os componentes da combinação da invenção, e as compo- sições farmacêuticas que compreendem tais componentes, podem ser administrados sequencialmente em qualquer ordem, e em vias diferen- tes; os componentes e as composições farmacêuticas que compreen- dem os mesmos podem ser administrados simultaneamente.
[0194] Cada um dos componentes das combinações descritas no presente documento pode ser manufaturado no mesmo frasco/recipi- ente ou em frascos/recipientes diferentes. Por exemplo, em uma moda- lidade, uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é manufa- turada no mesmo frasco/recipiente que uma proteína de ligação de an- tígeno que se liga a PD-1 ou uma proteína de ligação de antígeno que se liga a OX40, e todos os componentes da combinação são adminis- trados simultaneamente. Em uma outra modalidade exemplificadora, uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é manufaturada em um frasco/recipiente diferente como uma proteína de ligação de antí- geno que se liga a PD-1 ou uma proteína de ligação de antígeno que se liga a OX40, e cada um dos componentes da combinação pode ser ad- ministrado simultaneamente, sequencialmente, e com vias de adminis- tração idênticas ou diferentes.
[0195] De acordo com uma outra modalidade da invenção, também é provido um processo para a preparação de uma composição farma- cêutica, o qual inclui a misturação de um componente da combinação da invenção e um ou mais veículos, diluentes ou excipientes farmaceu- ticamente aceitáveis. Os componentes da invenção podem ser administrados por qualquer via apropriada. Para alguns componentes, as vias apropriadas incluem as vias oral, retal, nasal, tópica (inclusive oral e sublingual), va- ginal e parenteral (inclusive subcutânea, intramuscular, intravenosa, in- tradermal, intratecal e epidural). Deve ser apreciado que a via preferida pode variar, por exemplo, com a condição do receptor da combinação e o câncer a ser tratado. Também deve ser apreciado que cada um dos agentes administrados pode ser administrado por vias idênticas ou dife- rentes e que os componentes podem ser combinados uns aos outros ou em composições farmacêuticas separadas.
[0196] Em uma modalidade, um ou mais componentes de uma com- binação da invenção são administrados intravenosamente. Em uma ou- tra modalidade, um ou mais componentes de uma combinação da in- venção são administrados intratumoralmente. Em uma outra modali- dade, um ou mais componentes de uma combinação da invenção são administrados sistemicamente, por exemplo intravenosamente, e um ou mais outros componentes de uma combinação da invenção são admi- nistrados intratumoralmente. Em uma outra modalidade, todos os com- ponentes de uma combinação da invenção são administrados sistemi- camente, por exemplo intravenosamente. Em uma modalidade alterna- tiva, todos os componentes da combinação da invenção são adminis- trados intratumoralmente. Em algumas das modalidades, por exemplo, neste parágrafo, os componentes da invenção são administrados como uma ou mais composições farmacêuticas. A administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz das combinações da invenção (ou quantidades terapeuticamente efica- zes de cada um dos componentes da combinação) é vantajosa em re- lação aos compostos componentes individuais, uma vez que as combi- nações conferem uma ou mais das propriedades melhoradas a seguir quando comparadas à administração individual de uma quantidade te- rapeuticamente eficaz de um composto componente: i) um efeito anti- câncer maior do que um agente individual mais ativo, ii) atividade anti- câncer sinergística ou altamente sinergística, iii) um protocolo de dosa- gem que confere uma atividade anticâncer realçada com perfil de efeito colateral reduzido, iv) uma redução no perfil do efeito tóxico, v) um au- mento na janela terapêutica, ou vi) um aumento na biodisponibilidade de um ou ambos os compostos de componentes.
[0197] Em uma modalidade, a presente invenção provê métodos de tratamento do câncer tal como no tratamento de distúrbios de células B em um mamífero (por exemplo, um ser humano) com necessidade do mesmo, o qual compreende a administração de uma quantidade tera- peuticamente eficaz da combinação tal como descrita no presente do- cumento. Em uma modalidade, o câncer é o mieloma múltiplo. Em uma outra modalidade o câncer é um linfoma que não de Hodgkin. Em uma outra modalidade, o paciente a ser tratado tem mieloma múltiplo reinci- dente e/ou refratário. Em ainda uma outra modalidade, o paciente a ser tratado tem mieloma múltiplo reincidente e/ou refratário e foi tratado pre- viamente com o padrão de terapias de cuidados tais como fármacos imunomoduladores (IMIDs), inibidores de proteasoma (Pls) e/ou anticor- pos antiCD38 (por exemplo, daratumumab). Em uma outra modalidade, o paciente pode ter tido 0, 1, 2, 3, ou 4 ou mais linhas de tratamento prévio antes de ser tratado com as combinações descritas no presente documento. Em uma outra modalidade, o paciente pode ter mieloma múltiplo reincidente e/ou refratário e ter tido 0, 1, 2, 3, 4 ou mais linhas de tratamento prévio antes de ser tratado com as combinações descritas no presente documento. Em uma outra modalidade, o paciente foi tra- tado previamente com pelo menos 3 linhas prévias que podem incluir o que segue: um fármaco imunomodulador (IMiD), inibidor de proteasoma (PI) e tratamento antiCD38 (por exemplo, daratumumab). As linhas de terapia podem ser definidas pelo painel de consenso do Myeloma Inter- national Workshop (IMWG) [ Rajkumar, 2011].
[0198] Se uma dose inicial particular de qualquer um dos compo- nentes da combinação não for tolerada pelo paciente, a dose inicial pode ser reduzida para uma dose menor a fim de mitigar os efeitos co- laterais e/ou aumentar a tolerabilidade. Por exemplo, uma dose inicial de 3,4 mg/kg de proteína de ligação de antígeno que liga BCMA pode ser reduzida para 2,5 mg/kg ou 1,9 mg/kg com base na tolerabilidade do paciente. As combinações descritas no presente documento podem ser administradas simultânea ou sequencialmente. Em uma modali- dade, a proteína de ligação de antígeno que liga OX40 ou PD-1 é admi- nistrada 1 hora depois que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é administrada. Em uma outra modalidade, a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é administrada 1 hora depois que a proteína de ligação de antígeno que liga OX40 ou PD-1 é administrada.
[0199] Em uma modalidade, são providos métodos de tratamento do câncer, os quais compreendem a administração de qualquer uma das proteínas de ligação de antígeno que ligam BCMA da presente in- venção ou seus conjugados de anticorpo-fármaco; e pembrolizumab, ou um anticorpo que compreende uma homologia de sequências de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% às mesmas. Em uma modalidade, são providos métodos de tratamento do câncer, os quais compreendem a administração de qualquer uma das proteínas de ligação de antígeno que ligam BCMA ou seus conjugados de anti- corpo-fármaco; e nivolumab, ou um anticorpo que compreende uma ho- mologia de sequências de 90%, 91%, 92%, 93%, de 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% às mesmas.
[0200] Em uma modalidade, são providos métodos de tratamento do câncer em um ser humano com necessidade do mesmo, os quais compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma combinação que compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga PD-1 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 203, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 206, ou as suas variantes.
[0201] Em uma modalidade, são providos métodos de tratamento do câncer em um ser humano com necessidade do mesmo, os quais compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma combinação que compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de pembrolizumab ou nivo- lumab.
[0202] Em uma modalidade, são providos métodos de tratamento do câncer em um ser humano com necessidade do mesmo, os quais compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma combinação que compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 do NO. SEQ do ID:221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes. Em uma modalidade, são providos métodos para o tratamento de mi- eloma múltiplo em um ser humano com necessidade do mesmo, os quais compreendem a administração de uma quantidade terapeutica- mente eficaz de uma combinação que compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga PD-1 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 203, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 206, ou as suas variantes.
[0203] Em uma modalidade, são providos métodos de tratamento do câncer (por exemplo, mieloma múltiplo) em um ser humano com ne- cessidade do mesmo, os quais compreendem a administração de cerca de 0,03 mg/kg a cerca de 4,6 mg/kg de belantamab mafodotin e de cerca de 2 mg a cerca de 24 mg de um anticorpo que liga OX40 que compre- ende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0204] Em uma modalidade, são providos métodos de tratamento do câncer (por exemplo, mieloma múltiplo) em um ser humano com ne- cessidade do mesmo, os quais compreendem a administração de cerca de 0,95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin e de cerca de 8 mg ou cerca de 24 mg de um anticorpo que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0205] Em uma modalidade, são providos métodos de tratamento do câncer (por exemplo, mieloma múltiplo) em um ser humano com ne- cessidade do mesmo, os quais compreendem a administração no dia 1 de um ciclo de 21 dias (Q3W) cerca de 0,95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin e de cerca de 8 mg ou cerca de 24 mg de um anticorpo que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0206] Em uma modalidade, são providos métodos para tratamento de mieloma múltiplo em um ser humano com necessidade do mesmo, os quais compreendem a administração de uma quantidade terapeuti- camente eficaz de uma combinação que compreende: i) 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg, ou 3,4 mg/kg de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti- BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas vari- antes conjugadas a MMAF; e ii) 200 mg de pembrolizumab.
[0207] Em uma modalidade, são providos métodos para o trata- mento de mieloma múltiplo em um ser humano com necessidade do mesmo, os quais compreendem a administração de: i) 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg, ou 3,4 mg/kg de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti- BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas vari- antes conjugadas a MMAF; e ii) 200 mg de pembrolizumab.
[0208] Em uma modalidade, são providos métodos para o trata- mento de mieloma múltiplo em um ser humano com necessidade do mesmo, os quais compreendem a administração de: i) 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg, ou 3,4 mg/kg de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti- BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas vari- antes conjugadas a MMAF; e ii) 200 mg de pembrolizumab, em que o paciente tem mieloma múltiplo reincidente e/ou refratário, e em que a combinação é administrada no dia 1 de um ciclo de 21 dias (Q3W).
[0209] Em uma modalidade, são providos métodos de tratamento do câncer (por exemplo, mieloma múltiplo) em um ser humano com ne- cessidade do mesmo, os quais compreendem a administração de cerca de 0,03 mg/kg a cerca de 4,6 mg/kg de belantamab mafodotin e de cerca de 200 mg de pembrolizumab.
[0210] Em uma modalidade, são providos métodos de tratamento do câncer (por exemplo, mieloma múltiplo) em um ser humano com ne- cessidade do mesmo, os quais compreendem a administração de cerca de 0,95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin e de cerca de 200 mg de pembrolizu- mab.
[0211] Em uma modalidade, são providos métodos de tratamento do câncer (por exemplo, mieloma múltiplo) em um ser humano com ne- cessidade do mesmo, os quais compreendem a administração no dia 1 de um ciclo de 21 dias (Q3W) de cerca de 0,95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab ma- fodotin e de cerca de 200 mg de pembrolizumab.
[0212] Em uma modalidade, são providos métodos para o trata- mento de linfoma que não de Hodgkin em um ser humano com neces- sidade do mesmo, os quais compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma combinação que compre- ende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga PD-1 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 203, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 206, ou as suas variantes.
[0213] Em uma modalidade, são providos métodos para o trata- mento de mieloma múltiplo em um ser humano com necessidade do mesmo, os quais compreendem a administração de uma quantidade te- rapeuticamente eficaz de uma combinação que compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0214] Em uma modalidade, são providos métodos para o trata- mento de mieloma múltiplo em um ser humano com necessidade do mesmo, os quais compreendem a administração de uma quantidade te- rapeuticamente eficaz de uma combinação que compreende: i) 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg, ou 3,4 mg/kg de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti- BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas vari- antes conjugadas a MMAF; e ii) 8 mg ou 24 mg de uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222,
CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0215] Em uma modalidade, são providos métodos para o trata- mento de mieloma múltiplo em um ser humano com necessidade do mesmo, os quais compreendem a administração de: i) 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg, ou 3,4 mg/kg de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti- BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas vari- antes conjugadas a MMAF; e ii) 8 mg ou 24 mg de uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0216] Em uma modalidade, são providos métodos para o trata- mento de mieloma múltiplo em um ser humano com necessidade do mesmo, os quais compreendem a administração de: i) 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg, ou 3,4 mg/kg de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti- BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas vari- antes conjugadas a MMAF; e ii) 8 mg ou 24 mg de uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222,
CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes, em que o paciente tem mieloma múltiplo reincidente e/ou refratário, e em que a combinação é administrada no dia 1 de um ciclo de 21 dias (Q3W).
[0217] Em uma modalidade, são providos métodos para o trata- mento de linfoma que não de Hodgkin em um ser humano com neces- sidade do mesmo, os quais compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma combinação que compre- ende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0218] São providos métodos em que o tamanho do tumor de cân- cer no dito mamífero é reduzido em mais do que uma quantidade aditiva em comparação com o tratamento com a proteína de ligação de antí- geno a BCMA e a proteína de ligação de antígeno que liga PD-1 ou a proteína de ligação de antígeno que liga OX40 tal como usado em mo- noterapia. Apropriadamente, a combinação pode ser sinergística.
[0219] Em uma modalidade, o mamífero tem a sobrevivência au-
mentada quando tratado com a combinação tal como descrita no pre- sente documento em comparação com um mamífero que recebeu a pro- teína de ligação de antígeno a BCMA ou a proteína de ligação de antí- geno a PD-1 ou a OX40 como uma monoterapia. Em uma modalidade, os métodos também compreendem a administração de pelo menos um agente antineoplástico ao mamífero com necessidade do mesmo.
[0220] É contemplado o uso no tratamento do câncer, em particular no tratamento de distúrbios de células B em um mamífero (por exemplo, um ser humano) com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, o câncer é o mieloma múltiplo. Em uma outra modalidade, o câncer é o linfoma que não de Hodgkin.
[0221] Em uma modalidade, o uso de combinações descritas no presente documento é provido para o tratamento do câncer em que a combinação compreende qualquer uma das proteínas de ligação de an- tígeno que ligam BCMA da presente invenção ou seus conjugados de anticorpo e fármaco; e pembrolizumab, ou um anticorpo que compre- ende uma homologia de sequências de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% às mesmas.
[0222] Em uma modalidade, é provido o uso de combinações des- critas no presente documento para o tratamento do câncer em que a combinação compreende qualquer uma das proteínas de ligação de an- tígeno que ligam BCMA ou seus imunoconjugados; e nivolumab, ou um anticorpo que compreende uma homologia de sequências de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% às mesmas.
[0223] Em uma modalidade, é provido o uso de combinações para o tratamento do câncer em um ser humano com necessidade do mesmo em que a combinação compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga PD-1 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 203, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 206, ou as suas variantes.
[0224] Em uma modalidade, é provido o uso de combinações para o tratamento do câncer em um ser humano com necessidade do mesmo em que a combinação compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0225] Em uma modalidade, é provido o uso de uma combinação para o tratamento do câncer (por exemplo, mieloma múltiplo) em um ser humano com necessidade do mesmo em que a combinação compre- ende cerca de 0,95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin, e cerca de 8 mg ou cerca de 24 mg de um anticorpo que liga OX40 que compreende CDRH1 da
SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0226] Em uma modalidade, é provido o uso de combinações para o tratamento de mieloma múltiplo em um ser humano com necessidade do mesmo em que a combinação compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga PD-1 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 do NO. SEQ do ID.:203, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 206, ou as suas variantes.
[0227] Em uma modalidade, é provido o uso de combinações para o tratamento de mieloma múltiplo em um ser humano com necessidade do mesmo em que a combinação compreende: i) 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg, ou 3,4 mg/kg de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti- BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas vari- antes conjugadas a MMAF; e ii) 200 mg de pemboluzimab.
[0228] Em uma modalidade, é provido o uso de combinações para o tratamento de mieloma múltiplo em um ser humano com necessidade do mesmo em que a combinação compreende: i) 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg, ou 3,4 mg/kg de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti- BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas vari- antes conjugadas a MMAF; e ii) 200 mg de pembrolizumab, em que o paciente tem mieloma múltiplo reincidente e/ou refratário, e em que a combinação é administrada no dia 1 de um ciclo de 21 dias (Q3W).
[0229] Em uma modalidade, é provido o uso de uma combinação para o tratamento do câncer (por exemplo, mieloma múltiplo) em um ser humano com necessidade do mesmo em que a combinação compre- ende cerca de 0,95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin, e cerca de 200 mg de pembrolizumab.
[0230] Em uma modalidade, é provido o uso de combinações para o tratamento de linfoma que não de Hodgkin em um ser humano com necessidade do mesmo em que a combinação compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga PD-1 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 203, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 206, ou as suas variantes.
[0231] Em uma modalidade, é provido o uso de combinações para o tratamento de mieloma múltiplo em um ser humano com necessidade do mesmo em que a combinação compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0232] Em uma modalidade, é provido o uso de combinações para o tratamento de mieloma múltiplo em um ser humano com necessidade do mesmo em que a combinação compreende: i) 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg, ou 3,4 mg/kg de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti- BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas vari- antes conjugadas a MMAF; e ii) 8 mg ou 24 mg uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0233] Em uma modalidade, é provido o uso de combinações para o tratamento de mieloma múltiplo em um ser humano com necessidade do mesmo em que a combinação compreende: i) 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg, ou 3,4 mg/kg de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti- BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas vari- antes conjugadas a MMAF; e ii) 8 mg ou 24 mg de uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou os as suas variantes, em que o paciente tem mieloma múltiplo reincidente e/ou refratário, e em que a combinação é administrada em que no dia 1 de um ciclo de 21 dias (Q3W).
[0234] Em uma modalidade, é provido o uso de combinações para o tratamento de linfoma que não de Hodgkin em um ser humano com necessidade do mesmo em que a combinação compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 de ID.NO SEQ:200, CDRL1 da SEQ. ID. NO:
4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0235] Na presente invenção também é provido o uso de uma com- binação ou de composições farmacêuticas da presente invenção na ma- nufatura de um medicamento para o tratamento do câncer, tal como em particular o tratamento de distúrbios de células B. Em uma modalidade, o câncer é o mieloma múltiplo. Em uma outra modalidade o câncer é o linfoma que não de Hodgkin.
[0236] Em uma modalidade, o uso de uma combinação ou de com- posições farmacêuticas da presente invenção na manufatura de um me- dicamento para o tratamento do câncer inclui combinações que compre- endem qualquer uma das proteínas de ligação de antígeno que ligam BCMA da presente invenção ou seus conjugados de anticorpo e fár- maco; e pembrolizumab, ou um anticorpo que compreende uma homo- logia de sequências de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% às mesmas.
[0237] Em uma modalidade, o uso de uma combinação ou de com- posições farmacêuticas da presente invenção na manufatura de um me- dicamento para o tratamento do câncer inclui as combinações que com- preendem qualquer uma das proteínas de ligação de antígeno que ligam BCMA ou seus imunoconjugados; e nivolumab, ou um anticorpo que compreende uma homologia de sequências de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% às mesmas.
[0238] Em uma modalidade, é contemplado o uso de combinações na manufatura de um medicamento para o tratamento do câncer, em que a combinação compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti- BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas vari- antes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz uma proteína de ligação de antígeno que liga PD-1 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 203, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 206, ou as suas variantes.
[0239] Em uma modalidade, é contemplado o uso de combinações na manufatura de um medicamento para o tratamento do câncer, em que a combinação compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 do NO. SEQ do ID:221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0240] Em uma modalidade, é contemplado o uso de combinações na manufatura de um medicamento para o tratamento de mieloma múl- tiplo, em que a combinação compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 do NO. SEQ do ID.:200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz uma proteína de ligação de antígeno que liga PD-1 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 203, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 206, ou as suas variantes.
[0241] Em uma modalidade, é contemplado o uso de combinações na manufatura de um medicamento para o tratamento do câncer (por exemplo, mieloma múltiplo), em que a combinação compreende cerca de 0.95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin, e cerca de 8 mg ou cerca de 24 mg de um anticorpo que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0242] Em uma modalidade, é contemplado o uso de combinações na manufatura de um medicamento para o tratamento de linfoma que não de Hodgkin, em que a combinação compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da
SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga PD-1 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 203, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 206, ou as suas variantes.
[0243] Em uma modalidade, é contemplado o uso de combinações na manufatura de um medicamento para o tratamento de mieloma múl- tiplo, em que a combinação compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0244] Em uma modalidade, é contemplado o uso de combinações na manufatura de um medicamento para o tratamento de linfoma que não de Hodgkin, em que a combinação compreende: i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da
SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF; e ii) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0245] Em uma modalidade, é contemplado o uso de combinações na manufatura de um medicamento para o tratamento do câncer (por exemplo, mieloma múltiplo), em que a combinação compreende cerca de 0,95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin, e cerca de 200 mg de pembrolizumab.
[0246] Em uma modalidade, é contemplada uma combinação para o uso no tratamento do câncer (por exemplo, mieloma múltiplo), em que a combinação compreende cerca de 0.95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin, e cerca de 8 mg ou cerca de 24 mg de um anticorpo que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0247] Em uma modalidade, é contemplada uma combinação para o uso no tratamento do câncer (por exemplo, mieloma múltiplo), em que a combinação compreende cerca de 0.95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin, e cerca de 200 mg de pembrolizumab.
[0248] Em uma modalidade, é provida uma combinação para o uso no tratamento de mieloma múltiplo em que a combinação compreende: i) 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg, ou 3,4 mg/kg de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti- BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas vari- antes conjugadas a MMAF; e ii) 200 mg de pembrolizumab.
[0249] Em uma modalidade, é provida uma combinação para o uso no tratamento de mieloma múltiplo em que a combinação compreende: iii) 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg, ou 3,4 mg/kg de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti- BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas vari- antes conjugadas a MMAF; e iv) 8 mg ou 24 mg de uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0250] Em uma modalidade, a invenção contempla uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA; e pembrolizumab para o uso no tratamento do câncer em um indivíduo, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF, e é administrada a uma dose de 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg, ou 3,4 mg/kg; e o pembrolizumab é adminis- trado a um dose de 200 mg.
[0251] Em uma modalidade, a invenção contempla uma combina- ção que compreende cerca de 0.95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin, e cerca de 8 mg ou cerca de 24 mg de um anticorpo que liga OX40.
[0252] Em uma modalidade, a invenção contempla uma combina- ção que compreende cerca de 0.95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin, e pem- brolizumab.
[0253] Em uma modalidade, a invenção contempla uma combina- ção que compreende uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA e uma proteína de ligação de antígeno que liga OX40 para o uso no tratamento do câncer em um indivíduo, em que a proteína de ligação de antígeno que liga BCMA é um imunoconjugado que compreende um anticorpo anti-BCMA que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 6 ou as suas variantes conjugadas a MMAF, e é administrada a uma dose de 1,9 mg/kg, 2,5 mg/kg, ou 3,4 mg/kg; e em que a proteína de ligação de antígeno que liga OX40 compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes, e é administrada a uma dose de 8 mg ou 24 mg.
[0254] Em uma modalidade, a invenção contempla uma combina- ção para o uso no tratamento do câncer (por exemplo, mieloma múltiplo) em que a combinação compreende cerca de 0,95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab ma- fodotin, e cerca de 8 mg ou cerca de 24 mg de um anticorpo que liga
OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
[0255] Em uma modalidade, a invenção contempla uma combina- ção para o uso no tratamento do câncer (por exemplo, mieloma múltiplo) em que a combinação compreende cerca de 0,95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab ma- fodotin, e cerca de 200 mg de pembrolizumab.
[0256] Também são providas composições farmacêuticas que com- preendem a combinação da presente invenção para o tratamento do câncer. A presente invenção também um kit de combinação que com- preende uma composição farmacêutica da invenção junto com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis. O kit pode incluir opcional- mente instruções para o uso.
[0257] Em uma modalidade, o kit compreende cerca de 0.95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de be- lantamab mafodotin, e cerca de 8 mg ou cerca de 24 mg de um anticorpo que liga OX40.
[0258] Em uma modalidade, o kit compreende uma combinação de cerca de 0.95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin, e cerca de 8 mg ou cerca de 24 mg de um anticorpo que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes, para o uso no tratamento do câncer (por exemplo, mieloma múltiplo).
[0259] Em uma outra modalidade, o kit compreende cerca de 0,95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin, e cerca de 200 mg de pembrolizumab.
[0260] Em uma modalidade, o kit compreende uma combinação de cerca de 0,95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin, e cerca de 200 mg de pembro- lizumab, para o uso no tratamento do câncer (por exemplo, mieloma múltiplo).
[0261] Os distúrbios de células B podem ser divididos em defeitos de desenvolvimento de células B/produção de imunoglobulina (imuno- deficiências) e proliferação excessiva/não controlada (linfomas, leuce- mias). Tal como usado no presente documento, o distúrbio de células B se refere a ambos os tipos de doenças, e são providos métodos para o tratamento de distúrbios de células com uma proteína de ligação de an- tígeno.
[0262] Os exemplos dos cânceres e em particular das doenças me- diadas por células B ou mediadas por células do plasma, ou doenças ou distúrbios mediados por anticorpos, incluem o mieloma múltiplo (MM), a leucemia linfocítica crônica (CLL), o linfoma folicular (FL), o lin- foma de células B grandes difusas (DLBCL), o mieloma múltiplo não secretor, o mieloma múltiplo de combustão lenta, a gamopatia monoclo- nal de significado indeterminado (MGUS), o plasmacitoma solitário (osso, extramedular), o linfoma linfoplasmacítico (LPL), a macroglobuli- nemia de Waldenstrom, a leucemia de células do plasma, a amiloidose primária (AL), a doença de cadeia pesada, lúpus erythematosus sistê- mico (SLE), a síndrome de POEMS/mieloma osteosclerótico, crioglobu- linemia dos tipos I e II, a doença de deposição de cadeia leve, a sín- drome de Goodpasture, a púrpura trombocitopênica idiopática (ITP), a glomerulonefrite aguda, distúrbios de Pemphigus e Pemphigoid, e a bul- losa acquisita Epidermolise; ou qualquer leucemia de células B de lin- foma que não de Hodgkin (NHL) (NHL) ou linfoma de Hodgkin (HL).
[0263] Em uma modalidade particular, a doença ou o distúrbio são selecionados do grupo que consiste em mieloma múltiplo (MM), leuce- mia de células B de linfoma que não de Hodgkin (NHL), linfoma folicular (FL), e linfoma de células B grandes difusas (DLBCL).
[0264] Em uma modalidade da presente invenção, a doença é o mi- eloma múltiplo, ou a leucemia de células B de linfoma que não de Hod- gkin (NHL).
[0265] Em uma modalidade da presente invenção a doença é o mi- eloma múltiplo.
[0266] Apropriadamente, a presente invenção refere-se a um mé- todo para o tratamento ou a diminuição da gravidade de um câncer tal como descrito no presente documento. A combinação da invenção pode ser usada sozinha ou em combinação com um ou mais outros agentes terapêuticos.
[0267] Quando uma composição farmacêutica ou combinação da presente invenção é administrada para o tratamento do câncer, o termo "administração" e seus derivados, tal como usado no presente docu- mento, se refere tanto à administração simultânea quanto qualquer ma- neira de administração sequencial separada de uma combinação, tal como descrito no presente documento, e um outro ingrediente ou ingre- dientes ativos, conhecidos como sendo úteis no tratamento do câncer, incluindo a quimioterapia (por exemplo, e agente antineoplástico), o tra- tamento com radiação e a cirurgia. O termo outro ingrediente ou ingre- dientes ativos, tal como usado no presente documento, inclui qualquer composto ou agente terapêutico conhecido ou que demonstra proprie- dades vantajosas quando administrado a um paciente com necessidade do tratamento para o câncer. Em uma modalidade, se a administração não for simultânea, os compostos são administrados em uma proximi- dade do tempo próximos um do outro. Além disso, os compostos podem ser administrados em uma forma de dosagem idêntica ou diferente, por exemplo, um composto pode ser administrado intravenosamente e um outro composto pode ser administrado oralmente.
[0268] Tipicamente, qualquer agente antineoplástico que tiver uma atividade contra um tumor suscetível que está sendo tratado pode ser administrado com as combinações descritas no presente documento no tratamento do câncer na presente invenção. Os exemplos de tais agen- tes podem ser encontrados em Cancer Principles and Practice of Onco- logy da autoria de V.T. Devita e S. Hellman (editores), 6ª edição (15 de fevereiro de 2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishers. Um ele- mento normalmente versado no estado da técnica pode discernir quais combinações de agentes seriam úteis com base nas características par- ticulares dos fármacos e do câncer envolvido. Os agentes antineoplás- ticos típicos úteis na presente invenção incluem, mas sem ficar a eles limitados, agentes antimicrotúbulos tais como diterpenoides e alcaloides de vinca; complexos de coordenação de platina; agentes de alquilação tais como mostardas de nitrogênio, oxazafosforinas, sulfonatos de al- quila, nitrosoureias, e triazenos; agentes antibióticos tais como antraci- clinas, actinomicinas e bleomicinas; inibidores de topoisomerase II tais como epipodofilotoxinas; antimetabólitos tais como análogos de purina e pirimidina e compostos antifolato; inibidores de topoisomerase I tais como camptotecinas; hormônios e análogos hormonais; inibidores da via de transdução de sinal; inibidores da angiogênese de tirosina cinase que não de receptora; agentes imunoterapêuticos; agentes proapoptó- ticos; e inibidores de sinalização de ciclos das células. Uma lista não limitadora de agentes antineoplásticos é fornecida no presente docu- mento.
[0269] Os exemplos de outro ingrediente ou ingredientes ativos para a administração com as combinações descritas no presente docu- mento são os agentes quimioterapêuticos.
[0270] Os agentes antimicrotúbulos ou antimitóticos são agentes específicos de fase ativos contra os microtúbulos de células de tumor durante a M ou a fase da mitose do ciclo de células. Os exemplos de agentes antimicrotúbulos incluem, mas sem ficar a eles limitados, diter- penoides e alcaloides de vinca.
[0271] Os diterpenoides, que são derivados de fontes naturais, são agentes anticâncer específicos de fase que operam nas fases de G2/M do ciclo de células. Acredita-se que os diterpenoides estabilizam a su- bunidade de β-tubulina dos microtúbulos, com a ligação com esta pro- teína. Parece então que a desmontagem da proteína é inibida com a mitose que sendo retida e a morte da célula a seguir. Os exemplos dos diterpenoides incluem, mas sem ficar a eles limitados, paclitaxel e seu análogo docetaxel.
[0272] O paclitaxel, 5β, 20-epóxi-1, 2α, 4, 7β, 10β,13α-hexa-hidro- xitax-11-en-9-ona 4,10-diacetato 2-benzoato 13-éster com (2R, 3S)-N- benzoil-3-fenilisoserina, é um produto de diterpeno natural isolado do teixo do Pacífico Taxus brevifolia e é comercialmente disponível como uma solução injetável como TAXOL®. É um membro da família de ta- xano dos terpenos. Foi isolado primeiramente em 1971 por Wani et al. J. Am. Chem. Soc., 93: 2325.1971), que caracterizaram a sua estrutura por métodos químicos e cristalográficos com raios X. Um mecanismo para a sua atividade refere-se à capacidade do paclitaxel de ligar a tu- bulina, inibindo desse modo o crescimento das células de câncer. Schiff et al., Proc. Natl, Acad. Sci. EUA, 77: 1561-1565 (1980); Schiff et al., Nature, 277: 665-667 (1979); Kumar, J. Biol. Chem, 256: 10435-10441 (1981). Para uma revisão da síntese e da atividade anticâncer de alguns derivados de paclitaxel, vide: D. G. I. Kingston et al., Studies in Organic Chemistry vol. 26, intitulado "New trends in Natural Products Chemistry 1986", Attaur-Rahman, P. W. Le Quesne, Eds. (Elsevier, Amsterdã, 1986) páginas 219-235.
[0273] O paclitaxel foi aprovado para o uso clínico no tratamento do câncer do ovário refratário nos Estados Unidos (Markman et al., Yale
Journal of Biology and Medicine, 64: 583,1991; McGuire et al., Ann. In- term. Med., 111: 273,1989) e para o tratamento do câncer da mama (Holmes et al., J. Nat. Cancer Inst, 83: 1797,1991). É um candidato po- tencial para o tratamento dos neoplasmas na pele (Einzig et. al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 20: 46) e carcinomas da cabeça e garganta (Fo- rastire et. al., Sem. Oncol., 20: 56, 1990). O composto também demons- tra um potencial para o tratamento da doença renal policística (Woo et. al., Nature, 368: 750.1994), do câncer do pulmão e da malária. O trata- mento dos pacientes com paclitaxel resulta na supressão da medula ós- sea (múltiplas linhagens de células, Ignoff, R.J. et. al, Cancer Che- motherapy Pocket Guide, 1998) relacionada à duração da dosagem acima de uma concentração limite (50 nM) (Kearns, C. M. et. al., Semi- nars in Oncology, 3(6) páginas 16-23,1995).
[0274] O docetaxel, (2R, 3S)-N-carbóxi-3-fenilisoserina, éster N-ter- butílico, 13-éster com 5β, 20-epóxi-1, 2α, 4, 7β, 10β,13α-hexa-hidroxi- tax-11-en-9-ona 4-diacetato 2-benzoato, triidrato, é comercialmente dis- ponível como uma solução injetável como TAXOTERE®. O docetaxel é indicado para o tratamento do câncer da mama. O docetaxel é um deri- vado semissintético de paclitaxel q.v., preparado ao usar um precursor natural, 10-deacetil-bacatin III, extraído da agulha do teixo europeu. A toxicidade limitadora de dose do docetaxel é a neutropenia.
[0275] Os alcaloides de vinca são agentes antineoplásticos especí- ficos de fase derivados da planta pervinca. Os alcaloides de vinca agem na fase de M (mitose) do ciclo da célula mediante a ligação especifica- mente à tubulina. Consequentemente, a molécula de tubulina ligada não consegue polimerizar como microtúbulos. Acredita-se que a mitose seja retida na metafase com a morte da célula a seguir. Os exemplos de alcaloides de vinca incluem, mas sem ficar a elas limitados, a vinblas- tina, a vincristina e a vinorelbina.
A vinblastina, sulfate de vincaleucoblastina, é comercialmente disponí- vel como VELBAN® como uma solução injetável. Embora, tenha sido possivelmente indicada como uma terapia de segunda linha de vários tumores sólidos, é indicada principalmente no tratamento do câncer dos testículos e de vários linfomas incluindo a doença de Hodgkin; e linfo- mas linfocíticos e histiocíticos. A mielosupressão é o efeito colateral li- mitador da dose de vinblastina.
[0276] A vincristina, vincaleucoblastina, 22-oxo-, sulfato, é comerci- almente disponível como ONCOVIN® como uma solução injetável. A vincristina é indicada para o tratamento de leucemias agudas e também encontrou uso em regimes de tratamento para linfomas malignos de Ho- dgkin e que não de Hodgkin. A alopecia e os efeitos neurológicos são o efeito colateral mais comum da vincristina e até uma menor extensão ocorrem efeitos de mielosupressão e mucosite gastrointestinal.
[0277] A vinorelbina, 3',4'-dide-hidro-4'-deoxi-C'-norvincaleucoblas- tina [R-(R*, R*)-2,diidroxibutanodioato 3-(1:2) (sal)], comercialmente dis- ponível como uma solução injetável de tartrato de vinorelbina (NAVEL- BINE®), é um alcaloide semissintético de vinca. A vinorelbina é indicada como um agente individual ou em combinação com outros agentes qui- mioterapêuticos, tais como a cisplatina, no tratamento de vários tumores sólidos, particularmente cânceres do pulmão de células não pequenas, da mama avançado, e da próstata refratários a hormônios. A mielosu- pressão é o efeito colateral limitador da dose mais comum da vinorel- bina.
[0278] Os complexos de coordenação de platina são agentes anti- câncer não específicos de fase, os quais são interativos com o DNA. Os complexos de platina penetram nas células de tumor, são submetidos ao acúmulo de fluido e formam ligações transversais intra e intercordões com o DNA, causando efeitos biológicos adversos ao tumor. Os exem- plos de complexos de coordenação de platina incluem, mas sem ficar a eles limitados, a cisplatina e a carboplatina.
[0279] A cisplatina, cis-diamina dicloroplatina, é comercialmente disponível como PLATINOL® como uma solução injetável. A cisplatina é indicada principalmente no tratamento do câncer dos testículos e do ovário metastático e do câncer avançado da bexiga. Os efeitos colate- rais limitadores da dose principais da cisplatina incluem a nefrotoxici- dade, que pode ser controlada pela hidratação e pela diurese, e a oto- toxidade.
[0280] A carboplatina, platina diamina [1,1-ciclobutano-dicarboxi- lato(2-)-O,O'], é comercialmente disponível como PARAPLATIN® como uma solução injetável. A carboplatina é indicada principalmente nos tra- tamentos de primeira e segunda linhas de carcinoma do ovário avan- çado. A supressão da medula óssea é a dose que limita a toxicidade da carboplatina.
[0281] Os agentes de alquilação são agentes anticâncer não espe- cíficos de fase e fortes eletrófilos. Tipicamente, os agentes de alquilação formam ligações covalentes, através da alquilação, ao DNA através de porções nucleofílicas da molécula do DNA tais como grupos fosfato, amino, sulfidrila, hidroxila, carboxila e imidazol. Tal alquilação rompe a função do ácido nucleico, conduzindo à morte da célula. Os exemplos de agentes de alquilação incluem, mas sem ficar a eles limitados, mos- tardas de nitrogênio tais como a ciclofosfamida, melfalan e clorambucil; sulfonatos de alquila tais como o busulfan; nitrosoureias tais como a carmustina; e triazenos tais como a dacarbazina.
[0282] A ciclofosfamida, 2-[bis(2-cloroetil)amino]tetraidro-2H-1,3,2- oxazafosforina 2-óxido monoidrato, é comercialmente disponível como uma solução injetável ou comprimidos como CYTOXAN®. A ciclofosfa- mida é indicada como um agente individual ou em combinação com ou- tros agentes quimioterapêuticos, no tratamento de linfomas malignos,
mieloma múltiplo e leucemias. A alopecia, a náusea, o vômito e a leu- copenia são os efeitos colaterais limitadores da dose mais comuns da ciclofosfamida.
[0283] O melfalan, 4-[bis(2-cloroetil)amino]-L-fenilalanina, é comer- cialmente disponível como uma solução injetável ou comprimidos como ALKERAN®. O melfalan é indicado para o tratamento paliativo do mi- eloma múltiplo e do carcinoma epitelial irresecável do ovário. A supres- são da medula óssea é o efeito colateral limitador da dose mais comum do melfalan.
[0284] O clorambucil, ácido 4-[bis(2-cloroetil)amino]benzeno buta- noico, é comercialmente disponível na forma de comprimidos como LEUKERAN®. OP clorambucil é indicado para o tratamento paliativo da leueemia linfática crônica, e linfomas malignos tais como o linfosarcoma, o linfoma folicular gigante e a doença de Hodgkin. A supressão da me- dula óssea é o efeito colateral limitador da dose mais comum do cloram- bucil.
[0285] O busulfan, dimetano sulfonato de 1,4-butanodiol, é comer- cialmente disponível na forma de comprimidos como MYLERAN®. O busulfan é indicado para o tratamento paliativo da leucemia mieloge- nosa crônica. A supressão da medula óssea é o efeito colateral limitador da dose mais comum do busulfan.
[0286] A carmustina, 1,3-[bis(2-cloroetil)-1-nitrosoureia, é comerci- almente disponível como frascos individuais de material liofilizado como BiCNU®. A carmustina é indicada para o tratamento paliativo como um agente individual ou em combinação com outros agentes para tumores do cérebro, o mieloma múltiplo, a doença de Hodgkin, e os linfomas que não de Hodgkin. A mielosupressão retardada é o efeito colateral limita- dor da dose mais comum da carmustina.
[0287] A dacarbazina, 5-(3,3-dimetil-1-triazeno)-imidazol-4-carbo-
xamida, é comercialmente disponível como frascos individuais de mate- rial como DTIC-Dome®. A dacarbazina é indicada para o tratamento de melanoma maligno metastático e em combinação com outros agentes para a o tratamento de segunda linha da doença de Hodgkin. A náusea, o vômito e a anorexia são os efeitos colaterais limitadores da dose mais comuns da dacarbazina.
[0288] Os antineoplásticos antibióticos são agentes não específicos de fase, que ligam ou intercalam com o DNA. Tipicamente, tal ação re- sulta em complexos do DNA estáveis ou na ruptura de cordão, o que rompe a função ordinária dos ácidos nucleicos, conduzindo à morte da célula. Os exemplos de agentes antineoplásticos antibióticos incluem, mas sem ficar a eles limitados, actinomicinas tais como a dactinomicina, antrociclinas tais como a daunorubicina e a doxorubicina; e bleomicinas.
[0289] A dactinomicina, também conhecida como actinomicina D, é comercialmente disponível na forma injetável como COSMEGEN®. A dactinomicina é indicada para o tratamento do tumor de Wilm e o rab- domiosarcoma. A náusea, o vômito e anorexia são os efeitos colaterais limitadores da dose mais comuns da dactinomicina.
[0290] A daunorubicina, cloridreto de (8S-cis-)-8-acetil-10-[(3- amino-2,3,6-trideoxi-α-L-lixo-hexopiranosil)óxi]-7,8,9,10-tetraidro- 6,8,11-triidróxi-1-metóxi-5,12-naftacenediiona, é comercialmente dispo- nível como uma forma injetável lipossomal como DAUNOXOME® ou como uma forma injetável como CERUBIDINE®. A daunorubicina é in- dicada para a indução de remissão no tratamento da leucemia não lin- focítica aguda e do sarcoma de Kaposi associado a HIV avançado. A mielosuppressão é o efeito colateral limitador da dose mais comum da daunorubicina.
[0291] A doxorubicina, cloridreto de (8S,10S)-10-[(3-amino-2,3,6-tri- deoxi-α-L-lixo-hexopiranosil)óxi]-8-glicoloil-7,8,9,10-tetraidro-6,8,11-trii- dróxi-1-metóxi-5,12-naftacenediona, é comercialmente disponível como uma forma injetável como RUBEX® ou ADRIAMYCIN RDF®. A doxoru- bicina é indicada principalmente para o tratamento da leucemia linfo- blástica aguda e da leucemia mieloblástica aguda, mas também é um componente útil no tratamento de alguns tumores sólidos e linfomas. A mielosupressão é o efeito colateral limitador da dose mais comum da doxorubicina.
[0292] A bleomicina, uma mistura de antibióticos de glicopeptideos citotóxicos isolados de uma cepa de Streptomyces verticillus, é comer- cialmente disponível como BLENOXANE®. A bleomicina é indicada como um tratamento paliativo, como um agente individual ou em com- binação com outros agentes, do carcinoma de células escamosas, de linfomas, e de carcinomas dos testículos. As toxicidades pulmonar e cu- tânea são os efeitos colaterais limitadores da dose mais comuns da ble- omicina.
[0293] Os inibidores de topoisomerase II incluem, mas sem ficar a elas limitados, as epipodofilotoxinas. As epipodofilotoxinas são agentes antineoplásticos específicos de fase derivados da planta mandrágora. As epipodofilotoxinas afetam tipica- mente as células e as fases S e G2 do ciclo de células mediante a for- mação de um complexo ternário com topoisomerase II e o DNA, cau- sando a ruptura dos cordões de DNA. As rupturas de cordões se acu- mulam e segue a morte das células. Os exemplos de epipodofilotoxinas incluem, mas sem ficar a eles limitados, etoposide e teniposide.
[0294] O etoposide, 4'-demetil-epipodofilotoxina 9[4,6-0-(R)-etili- deno-β-D-glucopiranoside], é comercialmente disponível como uma so- lução injetável ou cápsulas como VePESID® e é geralmente conhecido como VP-16. O etoposide é indicado como um agente individual ou em combinação com outros agentes de quimioterapia no tratamento de cân- ceres dos testículos e do pulmão de células não pequenas. A mielosu- pressão é o efeito colateral mais comum do etoposide. A incidência de leucopenia tende a ser mais intensa do que a trombocitopenia.
[0295] O teniposide, 4'-demetil-epipodofillotoxina 9[4,6-0-(R)-fenili- deno-β-D-glucopiranoside], é comercialmente disponível como uma so- lução injetável como VUMON® e é geralmente conhecido como VM-26. O teniposide é indicado como um agente individual ou em combinação com outros agentes de quimioterapia no tratamento da leucemia agudo nas crianças. A mielosupressão é o efeito colateral limitador da dose mais comum do teniposide. O teniposide pode induzir a leucopenia e a trombocitopenia.
[0296] Os agentes neoplásticos antimetabólitos são agentes antine- oplásticos específicos de fase que agem na fase S (síntese do DNA) do ciclo da célula ao inibir a síntese do DNA ou ao inibir a síntese de base de purina ou pirimidina e limitando desse modo a síntese do DNA. Con- sequentemente, a fase S não prossegue e segue a morte da célula. Os exemplos de agentes antineoplásticos antimetabólitos incluem, mas sem ficar a eles limitados, fluorouracil, metotrexate, citarabina, mecap- topurina, tioguanina e gemcitabina.
[0297] O 5-fluorouracil, 5-fluoro-2,4-(1H,3H)pirimidinadiona, é co- mercialmente disponível como fluorouracil. A administração de 5-fluo- rouracil conduz à inibição da síntese de timidilato e também é incorpo- rada no RNA e no DNA. O resultado é tipicamente a morte da célula. O 5-fluorouracil é indicado como um agente individual ou em combinação com outros agentes de quimioterapia no tratamento dos carcinomas da mama, do cólon, do reto, do estômago e do pâncreas. A mielosupressão e a mucosite são efeitos colaterais limitadores da dose do 5-fluorouracil. Outros análogos de fluoropirimidina incluem a 5-fluoro deoxiuridina (floxuridina) e o monofosfato de 5-fluoro deoxiuridina.
[0298] A citarabina, 4-amino-1-β-D-arabinofuranosil-2-(1H)-pirimi- dinona, é comercialmente disponível como CYTOSAR-U® e é geral-
mente conhecida como Ara-C. Acredita-se que a citarabina exibe a es- pecificidade da fase da célula na fase S ao inibir o alongamento da ca- deia do DNA pela incorporação terminal de citarabina na cadeia de DNA em crescimento. A citarabina é indicada como um agente individual ou em combinação com outros agentes de quimioterapia no tratamento da leucemia aguda. Outros análogos da citidina incluem a 5-azacitidina e a 2',2'-difluoro deoxicitidina (gemcitabina). A citarabina induz a leucope- nia, a trombocitopenia e a mucosite.
[0299] A mercaptopurina, 1,7-di-hidro-6H-purina-6-tiona mono-hi- dratada, é comercialmente disponível como PURINETHOL®. A mercap- topurina exibe especificidade de fase da célula na fase S ao inibir a sín- tese do DNA por um mecanismo até agora não especificado. A mercap- topurina é indicada como um agente individual ou em combinação com outros agentes de quimioterapia no tratamento da leucemia agudo. A mielosupressão e a mucosite gastrointestinal são efeitos colaterais pre- vistos da mercaptopurina a doses elevadas. Um análogo útil da mercap- topurina é a azatiopurina.
[0300] A tioguanina, 2-amino-1,7-di-hidro-6H-purina-6-tiona, é co- mercialmente disponível como TABLOID®. A tioguanina exibe especifi- cidade de fase da célula na fase S mediante a inibição da síntese do DNA por um mecanismo até agora não especificado. A tioguanina é in- dicada como um agente individual ou em combinação com outros agen- tes de quimioterapia no tratamento da leucemia aguda. A mielosupres- são, incluindo a leucopenia, a trombocitopenia e a anemia, é o efeito colateral limitador da dose mais comum da administração de tioguanina. No entanto, ocorrem efeitos colaterais gastrointestinais e eles podem ser limitadores da dose. Outros análogos de purina incluem a pentosta- tina, a eritroidroxi nonil adenina, o fosfato de fludarabina e a cladribina.
[0301] A gemcitabina, monocloridreto de 2'-deoxy-2',2'-difluorociti- dina (isômero β), é comercialmente disponível como GEMZAR®. A gemcitabina exibe especificidade de fase da célula na fase S e através do bloqueio da progressão das células através do limite G1/S. A gemci- tabina é indicada em combinação com a cisplatina no tratamento do câncer do pulmão de células não pequenas localmente avançado e so- zinha no tratamento do câncer do pâncreas localmente avançado. A mi- elosupressão, incluindo a leucopenia, a trombocitopenia e a anemia, é o efeito colateral limitador da dose mais comum da administração de gemcitabina.
[0302] O metotrexate, ácido N-[4[[(2,4-n-[4[[(2,4-diamino-6-pteri- dinil)metil]metilaminobenzoil]-L-glutâmico, é comercialmente disponí- veis como sódio metotrexate. O metotrexate exibe efeitos de fase da célula especificamente na fase S ao inibir a síntese, o reparo e/ou a replicação do DNA através da inibição da redutase de ácido diidrofólico que é requerida para a síntese de nucleotídeos da purina e timidilato. O metotrexate é indicado como um agente individual ou em combinação com outros agentes de quimioterapia no tratamento do coriocarcinoma, da leucemia meningeal, do linfoma que não de Hodgkin, e de carcino- mas da mama, da cabeça, da garganta, do ovário e da bexiga. A mielo- supressão (leucopenia, trombocitopenia e anemia) e a mucosite são efeitos colaterais previstos da administração de metotrexate.
[0303] As camptotecinas, incluindo a camptotecina e derivados de camptotecina, são disponíveis ou estão sendo desenvolvidas como ini- bidores de topoisomerase I. Acredita-se que a atividade citotóxica das camptotecinas está relacionada à sua atividade inibidora de topoisome- rase I. Os exemplos de camptotecinas incluem, mas sem ficar a eles limitados, irinotecan, topotecan, e as várias forma ópticas de 7-(4-metil- piperazino-metileno)-10,11-etilenodióxi-20-camptotecina descrita a se- guir.
[0304] O irinotecan HCI, cloridreto de (4S)-4,11-dietil-4-hidróxi-9- [(4-piperidinopiperidino)carbonilóxi]-1H-pirano[3',4',6,7]indolizino[1,2-
b]quinolina-3,14(4H,12H)-diona, é comercialmente disponível na forma de uma solução injetável como CAMPTOSAR®.
[0305] O irinotecan é um derivado de camptotecina que liga, junto com seu metabólito ativo SN-38, ao complexo de topoisomerase I - DNA. Acredita-se que a citotoxicidade ocorre em consequência de rup- turas de cordões duplos irreparáveis causadas pela interação de to- poisomerase I: DNA: irintecan ou complexo ternário de SN-38 com en- zima de replicação. O irinotecan é indicado para o tratamento do câncer metastático do cólon ou do reto. Os efeitos colaterais limitadores da dose de irinotecan HCl incluem a mielosupressão, incluindo a neutrope- nia, e efeitos de Gl, incluindo a diarreia.
[0306] O topotecan HCI, monocloridreto de (S)-10-[(dimetila- mino)metil]-4-etil-4,9-di-hidróxi-1H-pirano[3',4',6,7]indolizino[l,2-b]qui- nolina-3,14-(4H,12H)-diona, é comercialmente disponível na forma de uma solução injetável como HYCAMTIN®. O topotecan é um derivado de camptotecina que liga ao complexo de topoisomerase I - DNA e im- pede a religação de rupturas de cordões simples causadas pela To- poisomerase I em resposta à tensão de torção da molécula de DNA. O topotecan é indicado para o tratamento de segunda linha do carcinoma metastático do ovário e do câncer do pulmão de células pequenas. O efeito colateral limitador a dose de topotecan HCl é a mielosupressão, principalmente a neutropenia.
[0307] Também é de interesse o derivado de camptotecina da fór- mula A a seguir, atualmente sendo desenvolvido, incluindo a forma de mistura racêmica (R,S), bem como os enantiômeros R e S:
A conhecidos pelo nome químico "7-(4-metilpiperazino-metileno)-10,11- etilenodióxi-20(R,S)-camptotecina" (mistura racêmica) ou "7-(4-metilpi- perazino-metileno)-10,11-etilenodióxi-20(R)-camptotecina" (enantiô- mero R) ou "7-(4-metilpiperazino-metileno)-10,11-etilenodióxi-20(S)- camptotecina" (enantiômero S). Tal composto, bem como os compostos relacionados, são descritos, incluindo os métodos de produção, nas Pa- tentes U.S. números 6.063.923; 5.342.947; 5.559.235; 5.491.237 e no pedido de patente pendente U.S. no. 08/977.217 depositado em 24 de novembro de 1997.
[0308] Os hormônios e os análogos hormonais são compostos úteis para o tratamento de cânceres em que há uma relação entre o hormônio e o crescimento e/ou a falta de crescimento do câncer. Os exemplos dos hormônios e dos análogos hormonais úteis no tratamento do câncer incluem, mas sem ficar a eles limitados, adrenocorticosteroides tais como a prednisona e a prednisolona que são úteis no tratamento do linfoma maligno e da leucemia aguda nas crianças; aminoglutetimida e outros inibidores de aromatase tais como o anastrozol, o letrazol, o vo- razol e o exemestano úteis no tratamento do carcinoma adrenocortical e do carcinoma da mama dependente de hormônio contendo receptores de estrogênio; progestrinas tais como o acetato de megestrol útil no tra- tamento do câncer da mama dependente de hormônio e do carcinoma endometrial; estrogênios, androgênios e antiandrogênios tais como a flutamida, a nilutamida, a bicalutamida, o acetato de ciproterona e as 5α-redutases tais como finasteride e dutasteride, úteis no tratamento do carcinoma dapróstata e da hipertrofia prostática benigna; antiestrogê- nios tais como tamoxifen, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno, iodoxifeno, assim como os moduladores de receptor de estrogênio seletivos (SERMS) tais aqueles descritos nas Patentes U.S. números 5.681.835,
5.877.219 e 6.207.716, úteis no tratamento do carcinoma da mama de- pendente de hormônio e de outros cânceres suscetíveis; e hormônio liberador de gonadotropina (GnRH) e os seus análogos que estimulam a liberação de hormônio leutinizante (LH) e/ou do hormônio estimulante de folículo (FSH) para o tratamento do carcinoma prostático, por exem- plo, agonistas e antagonistas de LHRH tais como o acetato de gosere- lina e luprolide.
[0309] O letrozol (nome de comércio Femara) é um inibidor de aro- matase não esteroidal oral para o tratamento do câncer da mama hor- monalmente responsivo após a cirurgia. Os estrogênios são produzidos pela conversão de androgênio através da atividade da enzima aroma- tase. Os estrogênios se ligam então a um receptor de estrogênio, o que faz com que as células se dividam. O letrozol impede que a aromatase produza estrogênios pela ligação reversível competitiva ao heme de sua unidade de citocromo P450. A ação é específica, e o letrozol não reduz a produção de minerais ou corticosteroides.
[0310] Os inibidores da via de transdução de sinal são aqueles ini- bidores que bloqueiam ou inibem um processo químico que evoca uma mudança intracelular. Tal como usado no presente documento, esta mu- dança é a proliferação ou a diferenciação de células. Os inibidores da transdução de sinal úteis na presente invenção incluem inibidores de tirosina cinases de receptor, tirosina cinases que não de receptor, blo- queadores de domínio de SH2/SH3, serina/treonina cinase, fosfotidil inositol-3 cinases, sinalização de mio-inositol, e oncogenes de Ras.
[0311] Várias tirosina cinases de proteína catalisam a fosforilação de resíduos de tirosil específicos nas várias proteínas envolvidas na re- gulação do crescimento da célula. Tais tirosina cinases de proteína po- dem ser amplamente classificadas como cinases de receptor ou que não de receptor.
[0312] As tirosina cinases de receptor são proteínas de transmem- brana que têm um domínio de ligação de ligando extracelular, um domí- nio de transmembrana e um domínio de tirosina cinase. As tirosina ci- nases de receptor estão envolvidas na regulação do crescimento das células e geralmente chamadas de receptor de fator de crescimento. Foi mostrado que a ativação inadequada ou descontrolada de muitas des- tas cinases, isto é, a atividade do receptor do fator de crescimento de cinase aberrante, por exemplo, pela superexpressão ou pela mutação, resulta no crescimento descontrolado das células. Por conseguinte, a atividade aberrante de tais cinases foi ligada ao crescimento maligno de tecido. Consequentemente, os inibidores de tais cinases podem prover métodos de tratamento do câncer. Os receptores do fator de cresci- mento incluem, por exemplo, o receptor do fator de crescimento epider- mal (EGFr), o receptor do fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGFr), erbB2, erbB4, o receptor do fator de crescimento endotelial vascular (VEGFr), a tirosina cinase com domínios de homologia de fator de crescimento do tipo imunoglobulina e epidermal (TIE-2), o receptor do fator de crescimento de insulina -I (IGFI), o fator de estimulação de colônia de macrófagos (cfms), BTK, ckit, cmet, os receptores do fator de crescimento de fibroblastos (FGF), os receptores de Trk (TrkA, TrkB e TrkC), os receptores de efrina (eph), e o proto-oncogene de RET. Vários inibidores dos receptores de crescimento estão sendo desenvolvidos e incluem antagonistas de ligando, anticorpos, inibidores de tirosina ci- nase e oligonucleotídeos antissentido. Os receptores de fator do cresci-
mento e os agentes que inibem a função do receptor de fator do cresci- mento são descritos, por exemplo, em Kath, John C., Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(6): 803-818; Shawver et al. DDT Vol 2, no. 2 fevereiro de 1997; e Lofts, F. J. et al., "Growth fator receptors as targets", New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, ed. Workman, Paul and Kerr, David, CRC Press 1994, Londres.
[0313] As tirosina cinases, que não são cinases de receptor de fator do crescimento, são denominadas tirosina cinases que não de receptor. As tirosina cinases que não de receptor úteis na presente invenção, que são alvos ou alvos potenciais de fármacos anticâncer, incluem SRC, Lek, Fyn, Yes, Jak, ABL, FAK (cinase de aderência focal), tirosina ci- nase de Brutons, e Bcr-Abl. Tais cinases que não de receptor e agentes que inibem a função da tirosina cinase que não de receptor são descri- tos em Sinh, S. and Corey, S.J., (1999) Journal of Hematotherapy and Stem Cell Research 8 (5): 465 - 80; e Bolen, J. B., Bruges, J. S., (1997) Annual Review of Immunology.15: 371-404.
[0314] Os bloqueadores de domínio de SH2/SH3 são os agentes que rompem a ligação do domínio de SH2 ou SH3 em uma variedade de enzimas ou proteínas de adaptador incluindo a subunidade de PI3-K p85, as cinases da família Src, as moléculas de adaptadores (Shc, Crk, Nek, Grb2) e Ras-GAP. Os domínios de SH2/SH3 como alvos para fár- macos anticâncer são discutidos em Smithgall, T. E. (1995), Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 34(3) 125-32.
[0315] Os inibidores de serina/treonina cinases incluindo bloquea- dores de cascata de MAP cinase que incluem bloqueadores de Raf ci- nases (rafk), cinases reguladas por mitogênio ou extracelulares (MEKs), e cinases reguladas extracelulares (ERKs); e bloqueadores de mem- bros da família de proteína cinase incluindo bloqueadores de PKCs (alfa, beta, gama, épsilon, mu, lambda, iota, zeta). A família de IkB ci- nase (IKKa, IKKb), a família de PKB cinases, membros da família de
AKT cinases e cinases de receptor de beta TGF. Tais serina/treonina cinases e seus inibidores são descritos em Yamamoto, T., Taya, S., Kai- buchi, K., (1999), Journal of Biochemistry. 126 (5) 799-803; Brodt, P, Samani, A., and Navab, R. (2000), Biochemical Pharmacology, 60.1101- 1107; Massague, J., Weis-Garcia F. (1996) Cancer Surveys. 27: 41- 64;Philip, P.A., and Harris, A. L. (1995), Cancer Treatment and Re- search. 78: 3-27, Lackey, K. et al. Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, (10), 2000, 223-226; Patente U.S. no. 6.268.391; e Martinez- lacaci, L., et al, Int. J. Cancer (2000), 88(1), 44-52.
[0316] Os inibidores de membros da família de fosfotidil inositol-3 cinase incluindo bloqueadores de PI3-cinase, ATM, DNA-PK e Ku tam- bém são úteis na presente invenção. Tais cinases são discutidas em Abraham, R. T. (1996), Current Opinion in Immunology. 8 (3) 412-8; Canman, C. E., Lim, D. S. (1998), Oncogene 17 (25) 3301-3308; Jack- son, S. P. (1997), International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 29 (7): 935-8; e Zhong, H. et al, Cancer res. (2000) 60(6), 1541-1545.
[0317] Na presente invenção, também são úteis os inibidores de si- nalização de mio-inositol tais como os bloqueadores de fosfolipase C e ao análogos de mioinositol. Tais inibidores de sinal são descritos em Powis, G., and Kozikowski A., (1994) New Molecular Tagets for Cancer Chemotherapy ed., Paul Workman and David Kerr, CRC Press 1994, Londres.
[0318] Um outro grupo de inibidores da via de transdução de sinal consiste nos inibidores de Ras Oncogene. Tais inibidores incluem inibi- dores de farnesil transferase, geranil-geranil transferase, e CAAX pro- teases, bem como oligonucleotídeos antissentido, ribozimas e imunote- rapia. Foi mostrado que tais inibidores bloqueiam a ativação de ras nas células que contêm ras mutante do tipo selvagem, agindo desse modo como agentes antiproliferação. A inibição de Ras oncogene é discutida em Scharovsky, O. G., Rozados, V. R., Gervasoni, S. l. Matar, P. (2000),
Journal of Biomedical Science. 7(4) 292-8; Ashby, M. N. (1998), Current Opinion in Lipidology. 9 (2) 99 - 102; e Bennett, C. F. and Cowsert, L. M. BioChim. Biophys. Acta, (1999) 1489(1): 19-30.
[0319] Tal como acima mencionado, os antagonistas do anticorpo à ligação de ligando de cinase de receptor também podem servir como inibidores da transdução de sinal. Este grupo de inibidores dessa via de transdução de sinal inclui o uso de anticorpos humanizados ao domínio de ligação de ligando extracelular de tirosina cinases de receptor. Por exemplo, o anticorpo específico de Imclone C225 EGFR (vide Green, M. C. et al, Monoclonal Antibody Therapy for Solid Tumors, Cancer Treat. Rev., (2000), 26(4), 269-286); anticorpo de Herceptin® erbB2 (vide Tyrosine kinase Signalling in Breast Cancer: erbB Family Receptor Tyrosine Kinases, Breast Cancer Res., 2000, 2(3), 176-183); e anticorpo específico de 2CB VEGFR2 (vide Brekken, R. A. et al, Selective Inhibi- tion of VEGFR2 Activity by a monoclonal antiVEGF antibody blocks tu- mor grwoth in mice, Cancer Res. (2000) 60, 5117-5124).
[0320] Os inibidores da angiogênese de cinase que não de receptor também podem encontrar uso na presente invenção. Os inibidores de VEGFR e TIE2 relacionados à angiogênese são discutidos acima com respeito aos inibidores da transdução de sinal (ambos os receptores são tirosina cinases de receptor). A angiogênese é em geral ligada à sinali- zação de erbB2/EGFR, uma vez que foi mostrado que os inibidores de erbB2 e EGFR inibem a angiogênese, principalmente a expressão de VEGF. Desse modo, a combinação de um inibidor de erbB2/EGFR com um inibidor de angiogênese faz sentido. Por conseguinte, os inibidores de tirosina cinase que não de receptor podem ser usados em combina- ção com os inibidores de EGFR/erbB2 da presente invenção. Por exem- plo, os anticorpos antiVEGF, que não reconhecem VEGFR (tirosina ci- nase de receptor), mas para se ligam ao ligando; os inibidores de molé- culas pequenas de integrina (alfav beta3) que irão inibir a angiogênese;
a endostatina e a angiostatina (não RTK) também podem provar que são úteis em combinação com os inibidores da família erb divulgados. (vide Bruns C. J. et al (2000), Cancer Res., 60: 2926-2935; Schreiber A. B., Winkler M. E. e Derynck R. (1986), Science, 232: 1250-1253; Yen L. et al. (2000), Oncogene 19:3460-3469).
[0321] O pazopanib, que é comercialmente disponível como VO- TRIENT®, é um inibidor de tirosina cinase (TKI). O pazopanib é apre- sentado como sal de cloridreto, com o nome químico de monocloridreto de 5-[[4-[(2,3-dimetil-2H-indazol-6-il)metilamino]-2-pirimidinil]amino]-2- metil benzeno sulfonamida. O pazoponib é aprovado para o tratamento dos pacientes com carcinoma de células renais avançado.
[0322] O bevacisumab, que é comercialmente disponível como AVASTIN®, é um anticorpo monoclonal humanizado que bloqueia VEGF-A. AVASTIN® é a forma aprovada para o tratamento de vários cânceres incluindo coloretal, do pulmão, da mama, do rim e glioblasto- mas.
[0323] O rituximab é um anticorpo monoclonal quimérico que é ven- dido como RITUXAN® e MABTHERA®. O rituximab de liga a CD20 em células B e causa a apoptose da célula. O rituximab é administrado in- travenosamente e é aprovado para o tratamento de artrite reumatoide e linfoma que não de Hodgkin de células B.
[0323] O ofatumumab é um anticorpo monoclonal totalmente hu- mano que é vendido como ARZERRA®. O ofatumumab se liga a CD20 em células B e é usado para o tratamento da leucemia linfocítica crônica CLL; um tipo de câncer dos glóbulos brancos do sangue) nos adultos que são refratários ao tratamento com fludarabine (Fludara) e alemtuzu- mab Campath).
[0325] O trastuzumab (HEREPTIN®) é um anticorpo monoclonal humanizado que se liga ao receptor de HER2. A sua indicação original é para o câncer de mama HER2 positivo. O trastuzumab emtansine
(nome de comércio Kadcyla) é um conjugado da anticorpo-fármaco que consiste em trastuzumab de anticorpo monoclonal (Herceptin) ligado ao agente citotóxico DM1. O trastuzumab sozinho interrompe o cresci- mento de células de câncer através da ligação ao receptor de HER2/neu, ao passo que DM1 penetra nas células e destrói as mesmas através da ligação à tubulina. Devido ao fato que o anticorpo monoclonal visa HER2, e HER2 é superexpresso somente em células de câncer, o conjugado aplica a toxina especificamente às células de tumor. [8] O con- jugado é abreviado como T-DM1.
[0326] O cetuximab (ERBITUX®) é um anticorpo humano de ca- mundongo quimérico que inibe o receptor de fator do crescimento epi- dermal (EGFR).
[0327] Os inibidores de mTOR incluem mas sem ficar a eles limita- dos, a rapamicina (FK506) e rapalogs, RAD001 ou everolimus (Afinitor), CCI-779 ou temsirolimus, AP23573, AZD8055, WYE-354, WYE-600, WYE-687 e Pp121.
[0328] O everolimus é vendido como Afinitor® pela Novartis e é o derivado de 40-O-(2-hidroxietil) de sirolimus e opera de modo similar ao sirolimus como um inibidor de mTOR (alvo mamífero da rapamicina). Ele é usado atualmente como um imunossupressor para impedir a re- jeição de transplantes de órgãos e no tratamento do câncer de células renais. Muita pesquisa também tem sido realizada sobre everolimus e outros inibidores de mTOR para o uso em um número de cânceres. Ele tem a estrutura química (fórmula II) e o nome químico a seguir:
di-hidróxi-12-[(2R)-1-[(1S, 3R, 4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metoxiciclohe- xil]propan-2-il]-19,30-dimetóxi-15,17,21,23,29,35-hexametil-11,36- dioxa-4-azatriciclo[30.3.1.04,9]hexatriaconta-16,24,26,28-tetraeno- 2,3,10,14,20-pentona.
[0329] O bexaroteno é vendido como Targretin® e é um membro de uma subclasse de retinoides que ativam seletivamente os receptores de retinoide X (RXRs). Estes receptores de retinoide têm uma atividade bi- ológica distinta daquela dos receptores de ácido retinoico (RARs). O nome químico é ácido 4-(1-(5,6,7,8-tetraidro-3,5,5,8,8-pentametil-2-naf- talenil)etenil] benzoico. O bexaroteno é usado para o tratamento de lin- foma de células T cutâneas (CTCL, um tipo câncer da pele) nas pessoas cuja doença não pode ser tratada com sucesso com pelo menos uma outra medicação.
[0330] O sorafenib, comercializado como Nexavar®, está em uma classe de medicações chamadas de inibidores de multicinase. O seu nome químico é 4-[4-[[4-cloro-3-(trifluorometil)fenil]carbamoilamino] phenoxy]-N-metil-piridina-2-carboxamida. O sorafenib é usado para o tratamento de carcinoma de células renais avançado (um tipo de câncer que começa nos rins). O sorafenib também é usado para o tratamento de carcinoma hepatocelular não reincidível (um tipo de câncer do fígado que não pode ser tratado com cirurgia).
[0331] Os agentes usados em regimes imunoterapêuticos também podem ser úteis em combinação com os compostos da fórmula (I). Há um número de estratégias imunológicas para gerar uma imunoresposta contra erbB2 ou EGFR. Estas estratégias estão geralmente no reino de vacinações de tumores. A eficácia de abordagens imunológicas pode ser bastante intensificada através da inibição combinada de vias de si- nalização de erbB2/EGFR ao usar um inibidor de moléculas pequenas. A discussão da abordagem imunológica/vacina de tumor contra erbB2/EGFR é encontrada em Reilly R. T. et al. (2000), Cancer Res.60:3569-3576; e Chen Y, Hu D, Eling D. J., Robbins J, and Kipps T. J. (1998), Cancer Res.58: 1965- 971.
[0332] Os exemplos de inibidores de erbB incluem lapatinib, erloti- nib e gefitinib. Lapatinib, N-(3-cloro-4-{[(3-fluorofenil)metil]óxi}fenil)-6-[5- ({[2-(metilsulfonil)etil]amino}metil)-2-furanil]-4-quinazolinamina (repre- sentada pela Fórmula III, tal como ilustrado), é um potente inibidor dual de molécula pequena oral de tirosina cinases erbB-1 e erbB-2 (EGFR e HER2) que é aprovado em combinação com capecitabina para o trata- mento do câncer de mama metastático HER2-positivo.
(III)
[0333] A base livre, sais de HCI, e sais de ditosilato do composto de fórmula (III) podem ser preparados de acordo com os procedimentos divulgados no documento de patente WO 99/35146, publicado em 15 de julho de 1999; e no documento de patente WO 02/02552 publicado em 10 de janeiro de 2002.
[0334] O erlotinib, N-(3-etinilfenil)-6,7-bis{[2-(metilóxi)etil]óxi}-4-qui-
nazolinamina, comercialmente disponível sob o nome de comércio Tar- ceva, é representado pela fórmula IV, tal como ilustrado: (IV)
[0335] A base livre e o sal de HCI de erlotinib podem ser prepara- dos, por exemplo, de acordo com a Patente U.S. 5.747.498, exemplo
20.
[00] Gefitinib, 4-quinazolinamina, N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-me- tóxi-6-[3-4-morfolin)propóxi], é representado pela fórmula V, tal como ilustrado: (V)
[0336] O gefitinib, que é comercialmente disponível sob o nome de comércio IRESSA® (Astra-Zeneca) é um inibidor de erbB-1 que é indi- cado como uma monoterapia para o tratamento dos pacientes com o câncer de pulmão de células não pequenas localmente avançado ou metastático depois da falha de quimioterapias à base de platina e doce- taxel. A base livre, os sais de HCI, e os sais de diHCI de gefitinib podem ser preparados de acordo com os procedimentos do Pedido de Patente Internacional no. PCT/GB96/00961, depositado em 23 de abril de 1996,
e publicado como WO 96/33980 em 31 de outubro de 1996.
[0337] O trastuzumab (HEREPTIN®) é um anticorpo monoclonal humanizado que se liga ao receptor de HER2. A indicação original é para o câncer de mama HER2 positivo.
[0338] O cetuximab (ERBITUX®) é um anticorpo humano de ca- mundongo quimérico que inibe o receptor de fator do crescimento epi- dermal (EGFR).
[0339] O pertuzumab (também chamado 2C4, nome de comércio Omnitarg) é um anticorpo monoclonal. O primeiro de sua classe em uma linha de agentes chamados "inibidores de dimerização de HER". Com a ligação a HER2, inibe a dimerização de HER2 com outros receptores de HER, que em hipótese resultam no crescimento retardado do tumor. O pertuzumab é descrito no documento de patente WO01/00245 publi- cado em 04 de janeiro de 2001.
[0340] O rituximab é um anticorpo monoclonal quimérico que é ven- dido como RITUXAN® e MABTHERA®. O rituximab se liga a CD20 em células B e causa a apoptose das células. O rituximab é administrado intravenosamente e é aprovado para o tratamento de artrite reumatoide e linfoma que não de Hodgkin de células B.
[0341] O ofatumumab é um anticorpo monoclonal totalmente hu- mano que é vendido como ARZERRA®. O ofatumumab se liga a CD20 em células B e é usado para o tratamento de leucemia linfocítica crônica (CLL; um tipo de câncer dos glóbulos brancos do sangue) nos adultos que são refratários ao tratamento com fludarabine (Fludara) e alemtuzu- mab (Campath).
[0342] Os agentes usados em regimes proapoptóticos (por exem- plo, oligonucleotídeos antissentido bcl-2) também podem ser usados na combinação da presente invenção. Os membros da família de proeteí- nas Bcl-2 bloqueiam a apoptose. A suprarregulação de bcl-2, portanto, foi ligada à quimioresistência. Os estudos mostraram que o fator do crescimento epidermal (EGF) estimula os membros antiapoptóticos da família bcl-2 (isto é, mcl-1). Portanto, as estratégias projetadas para a infrarregulação da expressão de bcl-2 nos tumores demonstraram o be- nefício clínico e estão agora em experimentações de fase ll/lll, a saber, oligonucleotido antissentido de G3139 bcl-2 da Genta. Tais estratégias proapoptóticas que usam a estratégia de oligonucleotídeo antissentido para bcl-2 são discutidas em Water J. S. et al. (2000), J. Clin. Oncol. 18: 1812-1823; e Kitada S. et al. (1994), Antisense Res. Dev. 4: 71-79.
[0343] Os inibidores de sinalização do ciclo de células inibem as moléculas envolvidas no controle do ciclo de células. Uma família de cinases de proteína chamadas de cinases dependentes de ciclina (CDKs) e a sua interação com uma família de proteínas chamadas cicli- nas controla a progressão através do ciclo de células euxarióticas. A ativação e a inativação coordenadas de complexos diferentes de ci- clina/CDK são necessárias para a progressão normal através do ciclo de células. Vários inibidores da sinalização do ciclo de células estão sendo desenvolvidos. Por exemplo, os exemplos de cinases dependen- tes de ciclina, incluindo CDK2, CDK4 e CDK6 e os inibidores para as mesmas são descritos, por exemplo, em Rosania et al, Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(2): 215-230.
[0344] Tal como usado no presente documento, "imunomodulado- res" se referem a qualquer substância incluindo anticorpos monoclonal que afeta o sistema imunológico. As proteínas de ligação de antígeno PD-1 e OX40 da presente invenção podem ser consideradas como imu- nomoduladores. Os imunomoduladores podem ser usados como agen- tes antineoplásticos para o tratamento do câncer. Por exemplo, os imu- nomoduladores incluem, mas sem ficar a eles limitados, os anticorpos anti_CTLA-4 tais como ipilimumab (YERVOY®) e os anticorpos antiPD- 1 (Opdivo/nivolumab e Keytruda/pembrolizumab). Outros imunomodu- ladores incluem, mas sem ficar a eles limitados, os anticorpos OX-40,
os anticorpos PD-Ll1, os anticorpos LAG3, os anticorpos TIM-3, os an- ticorpos 41BB e os anticorpos GITR.
[0345] YERVOY® (ipilimumab) é um anticorpo de CTLA-4 total- mente humano comercializado pela Bristol Myers Squibb. A estrutura da proteína de ipilimumab e os métodos em uso são descritos nas Patentes U.S. números 6.984.720 e 7.605.238.
[0346] OPDIVO®/nivolumab é um anticorpo monoclonal totalmente humano comercializado pela Bristol Myers Squibb dirigido contra o re- ceptor de superfície de célula humana imunorregulador PD-1 negativo (morte programada/1 ou morte de célula programada-1/PCD-1) com ati- vidade de imunopotenciação. O nivolumab de liga a e bloqueia a ativa- ção de PD-1, uma proteína da transmembrana da superfamília Ig, por seus ligandos PD-L1 e PD-L2, resultando na ativação de imunorespos- tas de células T e células mediadas contra células de tumor ou patóge- nos. PD-1 ativado regula negativamente a ativação de células T e a fun- ção efetora através da supressão da ativação da via de P13k/Akt. Ou- tros nomes para nivolumab incluem: BMS-936558, MDX-1106 e ONO-
4538. A sequência de aminoácidos para o nivolumab e os métodos de uso e produção são divulgados na Patente U.S. no. 8.008.449.
[0347] KEYTRUDA®/pembrolizumab é um anticorpo antiPD-1 co- mercializado para o tratamento do câncer do pulmão pela Merck. A se- quência de aminoácidos de pembrolizumab e os métodos de uso são divulgados na Patente U.S. no. 8.168.757.
[0348] CD134, também conhecido como OX40, é um membro da superfamília de TNFR de receptores que não é expressa de maneira constitutiva nas células T puras em repouso, ao contrário de CD28. OX40 é uma molécula coestimuladora secundária, expressa depois de 24 a 72 horas após a sua ativação; o seu ligando, OX40L, também não é expresso nas células que apresentam antígeno em repouso, mas de- pois da sua ativação. A expressão de OX40 é dependente da ativação completa das células T; sem CD28, a expressão de OX40 é retardada e com níveis quatro vezes mais baixos. Os anticorpos de OX-40, as pro- teínas de fusão de OX-40 e os métodos de uso são divulgados nas Pa- tentes U.S. no. 7.504.101; U.S. no. 7.758.852; U.S. no. 7.858.765; U.S. no. 7.550.140; U.S. no. 7.960.515; WO2012027328; WO2013028231.
[0349] Os anticorpos para PD-L1 (também indicados comoCD274 ou B7-H1) e os métodos para o uso são divulgados na Patente U.S. no.
7.943.743; Patente U.S. no. 8.383.796; U.S. no. 20130034559, WO2014055897, Patente U.S. no. 8.168.179; e Patente U.S. no.
7.595.048. Os anticorpos de PD-Ll1 estão sendo desenvolvidos como agentes imunomoduladores para o tratamento do câncer.
[0350] Em uma outra modalidade, são providos métodos de trata- mento do câncer em um mamífero com necessidade do mesmo, os quais compreendem: a administração a tal mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de a) uma combinação da presente invenção; e b) pelo menos um agente antineoplástico.
[0351] Em uma outra modalidade, são providos métodos de trata- mento do câncer em um mamífero com necessidade do mesmo, os quais compreendem: a administração a tal mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de a) uma combinação da presente invenção; e b) pelo menos um imunomodulador.
[0352] Em uma modalidade, são providos métodos de tratamento do câncer em um ser humano com necessidade do mesmo, os quais compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma combinação da presente invenção em que a combinação compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga BCMA e uma quantidade terapeutica- mente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga PD-1 e uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação de antígeno que liga OX-40.
[0353] Na modalidade, a combinação da invenção pode ser empre- gada com outros métodos terapêuticos de tratamento do câncer. Em particular, na terapia antineoplástica, a terapia da combinação com ou- tros agentes quimioterapêuticos, hormonais e de anticorpo, bem como tratamentos cirúrgicos e/ou radiação com exceção daqueles acima mencionados são previstos.
[0354] Em uma modalidade, a outra terapia anticâncer é cirúrgica e/ou a radioterapia. Em uma modalidade, a outra terapia anticâncer é pelo menos um agente antineoplástico adicional.
[0355] Qualquer agente antineoplástico que tiver uma atividade contra um tumor suscetível que está sendo tratado pode ser utilizado na combinação. Os agentes antineoplásticos típicos úteis incluem, mas sem ficar a eles limitados, agentes antimicrotúbulos tais como diterpe- noides e alcaloides de vinca; complexos de coordenação de platina; agentes de alquilação tais como mostardas de nitrogênio, oxazafosfori- nas, sulfonatos de alquila, nitrosoureias e triazenos; agentes antibióticos tais como antraciclinas, actinomicinas e bleomicinas ;inibidores de to- poisomerase II tais como epipodofilotoxinas; antimetabólitos tais como análogos de purina e de pirimidina e compostos antiantifolato; inibidores de topoisomerase I tais como camptotecinas; hormônios e análogos hor- monais; inibidores da via de transdução de sinal; inibidores de angiogê- nese de tirosina que não de receptor; agentes imunoterapêuticos; agen- tes proapoptóticos; e inibidores de sinalização de ciclo de células.
[0356] Em uma modalidade, a combinação da presente invenção compreende uma proteína de ligação de antígeno anti-BCMA e uma proteína de ligação de antígeno de PD-1 ou OX40 e pelo menos um agente antineoplástico selecionado de agentes antimicrotúbulo, comple-
xos de coordenação de platina, agentes de alquilação, agentes antibió- ticos, inibidores de topoisomerase II, antimetabólitos, inibidores de to- poisomerase I, hormônios e análogos hormonais, inibidores da via de transdução de sinal, inibidores de angiogênese de tirosina que não de receptor, agentes imunoterapêuticos, agentes proapoptóticos, e inibido- res da sinalização de ciclo de células.
[0357] Em uma modalidade, a combinação da presente invenção compreende uma proteína de ligação de antígeno anti-BCMA e uma proteína de ligação de antígeno de PD-1 ou OX40 e pelo menos um agente antineoplástico que é um agente antimicrotúbulo selecionado de diterpenoides e alcaloides de vinca.
[0358] Em uma modalidade adicional, pelo menos um agente anti- neoplástico é um diterpenoide.
[0359] Em uma modalidade adicional, pelo menos um agente anti- neoplástico é um alcaloide de vinca.
[0360] Em uma modalidade, a combinação da presente invenção compreende uma proteína de ligação de antígeno anti-BCMA e uma proteína de ligação de antígeno de PD-1 ou OX40 e pelo menos um agente antineoplástico, que é um complexo de coordenação de platina.
[0361] Em uma modalidade mais adicional, pelo menos um agente antineoplástico é paclitaxel, carboplatins ou vinorelbina.
[0362] Em uma modalidade adicional, pelo menos um agente anti- neoplástico é a carboplatina.
[0363] Em uma modalidade adicional, pelo menos um agente anti- neoplástico é a vinorelbina.
[0364] Em uma modalidade mais adicional, pelo menos um agente antineoplástico é o paclitaxel.
[0365] Em uma modalidade, a combinação da presente invenção compreende uma proteína de ligação de antígeno anti-BCMA e uma proteína de ligação de antígeno de PD-1 ou OX40 e pelo menos um agente antineoplástico que é um inibidor da via de transdução de sinal.
[0366] Em uma modalidade adicional, o inibidor da via de transdu- ção de sinal é um inibidor de uma cinase de receptor de fator do cresci- mento VEGFR2, TIE2, PDGFR, BTK, erbB2, EGFr, IGFR-1, TrkA, TrkB, TrkC, ou c-fms.
[0367] Em uma modalidade adicional, o inibidor da via de transdu- ção de sinal é um inibidor de uma serina/treonina cinase rafk, akt, ou PKC-zeta.
[0368] Em uma modalidade adicional, o inibidor da via de transdu- ção de sinal é um inibidor de uma tirosina cinase que não de receptor selecionado da família de cinases c-src.
[0369] Em uma modalidade adicional, o inibidor da via de transdu- ção de sinal é um inibidor de c-src.
[0370] Em uma modalidade adicional, o inibidor da via de transdu- ção de sinal é um inibidor do oncogene de Ras selecionado dos inibido- res de farnesil transferase e geranil e geranil transferase.
[0371] Em uma modalidade adicional, o inibidor da via de transdu- ção de sinal é um inibidor de uma serina/treonina cinase selecionado do grupo que consiste em PI3K.
[0372] Em uma modalidade adicional, o inibidor da via de transdu- ção de sinal é um inibidor de EGFr/erbB2 dual, por exemplo, por exem- plo N-{3-cloro-4-[(3-fluorobenzil)-4-[(3-fluorobenzil)óxi]fenil}-6-[5-({[2- (metanosulfonil)etil]amino}metil)-2-furil]-4-quinazolinamina (estrutura abaixo):
Definições
[0373] Tal como usado no presente documento, o termo "agonista" se refere a uma proteína de ligação de antígeno que inclui, mas sem ficar a ele limitada, um anticorpo, o qual, com o contato com um receptor de cosinalização, causa um ou mais do que segue: (1) estimula ou ativa o receptor, (2) realça, aumenta ou promove, induz ou prolonga uma ati- vidade, função ou presença do receptor (3) imita uma ou mais funções de um ligando ou de uma molécula que interage com um alvo ou um receptor e inclui a iniciação de um ou mais eventos de sinalização atra- vés do receptor, imitando uma ou mais funções de um ligando natural, ou a iniciação de uma ou mais mudanças conformacionais parciais ou totais que são vistas no funcionamento conhecido ou sinalização atra- vés do receptor e/ou (4) realça, aumenta, promove ou induz a expressão do receptor. A atividade do agonista pode ser medida in vitro pelos vá- rios ensaios conhecidos no estado da técnica tais como, mas sem ficar a eles limitados, a medição da sinalização das células, a proliferação de células, marcadores da ativação de imunocélulas, a produção de cito- cina. A atividade do agonista também pode ser medida in vivo por vários ensaios que medem os pontos extremos substitutos tais como, mas sem ficar a eles limitados, a medição da proliferação de células T ou a pro- dução de citocina.
[0374] Tal como usado no presente documento, o termo "antago- nista" se refere a uma proteína de ligação de antígeno que inclui, mas sem ficar a ele limitada, um anticorpo, o qual, com o contato com um receptor de cosinalização, causa um ou mais do que segue (1) atenua, bloqueia ou inativa o receptor e/ou bloqueia a ativação de um receptor por seu ligando natural, (2) reduz, diminui ou encurta a atividade, função ou a presença do receptor e/ou (3) reduz, diminui ou anula a expressão do receptor. A atividade do antagonista pode ser medida in vitro por vá- rios ensaios conhecidos no estado da técnica tais como, mas sem ficar a eles limitados, a medição de um aumento ou diminuição na sinalização das células, a proliferação de células, marcadores de ativação de imu- nocélulas, a produção de citocina. A atividade do antagonista também pode ser medida in vivo por vários ensaios que medem os pontos extre- mos substitutos tais como, mas sem ficar a elas limitados, a medição da proliferação de células T ou a produção de citocina.
[0375] Desse modo, tal como usado no presente documento, o termo "combinação da invenção" se refere a uma combinação que com- preende uma proteína de ligação de antígeno anti-BCMA, apropriada- mente uma proteína de ligação de antígeno anti-BCMA antagonista e uma proteína de ligação de antígeno de PD-1, apropriadamente uma proteína de ligação de antígeno de antiPD-1 antagonista ou uma prote- ína de ligação de antígeno de OX40, apropriadamente uma proteína de ligação de antígeno OX40 agonista, cada uma das quais pode ser ad- ministrada separada ou simultaneamente tal como descrito no presente documento.
[0376] Tal como usados no presente documento, os termos "cân- cer," "neoplasma" e "tumor" são usados intercambiavelmente e na forma singular ou plural, e se referem às célula que passaram por uma trans- formação maligna ou passaram por mudanças celulares que resultaram no crescimento aberrante ou não regulado ou em hiperproliferação. Tais mudanças ou transformações malignas geralmente tornam tais células patológicas ao organismo hospedeiro, desse modo pré-cânceres ou cé- lulas pré-cancerosas que são ou podem se tornar patológicas e reque- rem ou podem se beneficiar da intervenção também devem ser incluí- das. As células de câncer primárias (isto é, as células obtidas perto do sítio da transformação maligna) podem ser distinguidas de imediato das células não cancerosas por técnicas bem estabelecidas, em particular o exame histológico. A definição de uma célula de câncer, tal como usada no presente documento, inclui não somente uma célula de câncer pri- mária, mas qualquer célula derivada de um ancestral da célula de cân- cer. Isto inclui as células de câncer metastasiadas, e as culturas in vitro e as linhagens de células derivadas das células de câncer. Quando é feita referência a um tipo de câncer que se manifesta normalmente como um tumor sólido, um tumor "clinicamente detectável" é aquele que é detectável com base da massa do tumor; por exemplo, por procedi- mentos tais como a varredura CAT, a imagiologia MR, raios X, ultrassom ou palpação e/ou que é detectável por causa da expressão de um ou mais antígenos específicos de câncer em uma amostra que é obtida de um paciente. Em outras palavras, os termos no presente documento in- cluem células, neoplasmas, cânceres e tumores de qualquer estágio, incluindo o que um clínico se refere como pré-câncer, tumores, cresci- mentos in situ, assim como os crescimentos metastáticos de estágio fi- nal. Os tumores podem ser tumores hematopoiéticos, por exemplo, tu- mores de células do sangue ou outros ainda, que significam tumores líquidos. Os exemplos específicos das condições clínicas baseadas em tal tumor incluem a leucemia, tal como a leucemia mielocítica crônica ou a leucemia mielocítica aguda; mieloma tal como o mieloma múltiplo; lin- fomas, e outros ainda.
[0377] Tal como usado no presente documento o termo "agente" deve ser compreendido como referente a uma substância que produz um efeito desejado em um tecido, sistema, animal, mamífero, ser hu- mano, ou um outro indivíduo. Por conseguinte, o termo "agente antine- oplástico" deve ser compreendido como referente a uma substância que produz um efeito antineoplástico em um tecido, sistema, animal, mamí- fero, ser humano, ou um no outro indivíduo. Também deve ser compre- endido que um "agente" pode ser um composto individual ou uma com- binação ou uma composição de dois ou mais compostos.
[0378] O termo "tratamento" e os derivados do mesmo, tal como usados no presente documento, se referem à terapia terapêutica. Com referência a uma condição particular, tratamento significa: (1) melhorar a condição ou um ou mais das manifestações biológicas da condição; (2) interferir em (a) um ou mais pontos na cascata biológica que conduz a ou é responsável pela condição ou (b) uma ou mais das manifestações biológicas da condição; (3) aliviar um ou mais dos sintomas, efeitos ou efeitos colaterais associados com a condição ou um ou mais dos sinto- mas, dos efeitos ou dos efeitos colaterais associados com a condição ou o tratamento da mesma; (4) retardar a progressão da condição ou uma ou mais das manifestações biológicas da condição; e/ou (5) curar a dita condição ou uma ou mais das manifestações biológicas da condi- ção ao eliminar ou reduzir a níveis não detectáveis uma ou mais das manifestações biológicas da condição por um período de tempo consi- derado como um estado de remissão para essa manifestação sem tra- tamento adicional durante o período de remissão. O elemento versado na técnica irá compreender a duração do tempo considerada como re- missão para uma doença ou uma condição particular. A terapia profilá- tica também é desse modo contemplada. O elemento versado na téc- nica irá apreciar que a "prevenção" não é um termo absoluto. Na medi- cina, a "prevenção" é compreendida como referente à administração profilática de um fármaco para diminuir substancialmente a probabili- dade ou a gravidade de uma condição ou uma manifestação biológica da mesma, ou para retardar o surgimento de tal condição ou manifesta- ção biológica da mesma. A terapia profilática é apropriada, por exemplo, quando um indivíduo é considerado como estando correndo um risco elevado de desenvolver o câncer, tal como quando um indivíduo tem um histórico de família de câncer intenso ou quando um indivíduo foi ex- posto a um carcinógeno.
[0379] Tal como usado no presente documento, o termo "uma quan- tidade eficaz" significa a quantidade de um fármaco ou de um agente farmacêutico que acarreta a resposta biológica ou médica de um tecido, um sistema, um animal ou um ser humano que está sendo procurada, por exemplo, por um pesquisador ou um clínico. Além disso, o termo "quantidade terapeuticamente eficaz" significa qualquer quantidade que, em comparação a um indivíduo correspondente que não recebe tal quantidade, resulta em um tratamento melhorado, na cura, na preven- ção, ou na melhora de uma doença, um distúrbio ou um efeito colateral, ou uma diminuição na taxa de avanço de uma doença ou um distúrbio. O termo também inclui dentro de seu âmbito as quantidades eficazes para realçar a função fisiológica normal.
[0380] "Proteína de ligação antígeno" se refere a uma proteína que liga um antígeno, incluindo os anticorpos ou as moléculas engenheira- das que funcionam de maneiras similares aos anticorpos. Tais formatos de anticorpos alternativos incluem tricorpo, tetracorpo, minianticorpo e um minicorpo. Também são incluídas as estruturas de suporte alterna- tivas em que um ou mais CDRs de todas as moléculas de acordo com a invenção podem ser arranjados em uma estrutura de suporte ou em um esqueleto apropriado da proteína que não imunoglobulina, tal como um aficorpo, uma estrutura de suporte de spA, um domínio da classe A do receptor de LDL, um avímero (vide, por exemplo, as publicações de pedidos de patente U.S. números 2005/0053973, 2005/0089932, 2005/0164301) ou um domínio de EGF. Uma ABP também inclui frag- mentos de ligação de antígeno de tais anticorpos ou outras moléculas. Além disso, uma ABP de uma combinação da invenção, ou um método ou uso da mesma, pode compreender as regiões VH formatadas em um anticorpo de comprimento total, um fragmento (Fab')2, um fragmento Fab, uma molécula biespecífica ou biparatópica ou seu equivalente (tal como scFV, tri- bi- ou tetracorpos, Tandabs, etc.), quando emparelha- das com uma cadeia leve apropriada. A proteína de ligação de antígeno pode compreender um anticorpo que é um IgGl, lgG2, lgG3 ou lgG4; ou
IgM; IgA, IgE ou IgD ou uma variante modificada dos mesmos. O domí- nio constante da cadeia pesada do anticorpo pode ser selecionado de maneira correspondente. O domínio constante da cadeia leve pode ser um domínio constante kapa ou lâmbda. A ABP também pode ser um anticorpo quimérico do tipo descrito no documento de patente WO86/01533 que compreende uma região de ligação de antígeno e uma região que não de imunoglobulina.
[0381] Uma proteína de ligação de antígeno também pode ser um receptor de antígeno quimérico. O termo "receptores de antígenos qui- méricos" ("CARs"), tal como usado no presente documento, se refere a um receptor engenheirado que consiste em um domínio de ligação alvo extracelular (que é geralmente derivado de um anticorpo monoclonal), uma região de espaçador, uma região de transmembrana e um ou mais domínios efetores intracelulares. Os CARs também são indicados como receptores de células T quiméricos ou imunoreceptores quiméricos (CIRs). Os CARs são introduzidos geneticamente em célula hemato- poiéticas, tais como células T, para redirecionar a especificidade para um antígeno da superfície da célula desejado.
[0382] Os receptores de antígenos quiméricos (CARs) foram desen- volvidos como TCRs artificiais para gerar novas especificidades em cé- lulas T sem a necessidade de ligação aos complexos de MHC-peptídeos antigênicos. Estes receptores sintéticos contêm um domínio de ligação alvo que é associado com um ou mais domínios de sinalização através de um ligador flexível em uma única molécula de fusão. O domínio de ligação alvo é usado para focar a célula T aos alvos específicos na su- perfície da célula patológica e os domínios de sinalização contêm a ma- quinaria molecular para a ativação e a proliferação de células T. O liga- dor flexível que passa através da membrana da célula T (isto é, for- mando um domínio da transmembrana) permite a exposição da mem-
brana da célula alvo do domínio de ligação alvo do CAR. Os CARs per- mitem bem-sucedidos que as células T sejam redirecionadas de encon- tro aos antígenos expressos na superfície das células de tumor de vá- rias malignidades incluindo linfomas e tumores sólidos (Jena et al. (2010) Blood, 116(7): 1035-44).
[0383] O desenvolvimento de CARs compreende três gerações até a presente data. Os CARs da primeira geração compreendem os domí- nios de ligação alvo unidos a um domínio de sinalização derivado da região citoplásmica de CD3zeta ou das cadeias gama de receptor de Fc. Foi mostrado que os CARs da primeira geração redirecionam com sucesso as células T ao alvo selecionado, no entanto, eles não puderam prover a expansão prolongada e a atividade antitumor in vivo. Os CARs da segunda e da terceira geração focalizaram no realce a sobrevivência de células T modificadas e no aumento da proliferação mediante a in- clusão de moléculas coestimuladoras, tais como CD28, OX-40 (CD134) e 4-1BB (CD137).
[0384] As células T que contêm CARs podem ser usadas para eli- minar as células patológicas em um arranjo de doença. Um alvo clínico deve ser a transformação das células dos pacientes com o DNA recom- binante que contém um construto de expressão para CAR através de um vetor (por exemplo, um vetor lentiviral) depois da aferese e do isola- mento das células T. Depois da expansão das células T, elas são rein- troduzidas no paciente com a finalidade de focar e matar as células pa- tológicas alvo.
[0385] O termo "anticorpo", tal como usado no presente documento, se refere às moléculas com um domínio de ligação de antígeno, e opci- onalmente um domínio do tipo de imunoglobulina ou fragmento do mesmo, e inclui anticorpos monoclonais (por exemplo, IgG, IgM, IgA, IgD ou IgE e as suas variantes modificadas), recombinantes, policlonais,
quiméricos, humanizados, biparatópicos, biespecíficos e heteroconjuga- dos, ou um anticorpo multiespecífico de conformação fechada. Um "an- ticorpo" incluiu as formas xenogeneica, alogeneica, singeneica, ou ou- tras formas modificadas do mesmo. Um anticorpo pode ser isolado ou purificado. Um anticorpo também pode ser recombinante, isto é, produ- zido por meios recombinantes; por exemplo, um anticorpo que é 90% idêntico a um anticorpo de referência pode ser gerado através da muta- gênese de determinados resíduos ao empregar as técnicas de biologia molecular recombinante conhecidas no estado da técnica. Desse modo, os anticorpos da presente invenção podem compreender regiões variá- veis de cadeia pesada e regiões variáveis de cadeia leve de uma com- binação da invenção, ou um método ou uso da mesma, que pode ser formatada na estrutura de um anticorpo natural ou formatada em um anticorpo recombinante de comprimento total, um fragmento (Fab')2, um fragmento Fab, uma molécula biespecífica ou biparatópica ou seu equi- valente (tal como scFV, tri- bi- ou tetracorpos, Tandabs etc.), quando emparelhada com uma cadeia leve apropriada. O anticorpo pode ser um IgG 1, lgG2, lgG3, ou lgG4 ou uma variante modificada do mesmo. O domínio constante de cadeia pesada do anticorpo pode ser selecionado de maneira correspondente. O domínio constante de cadeia leve pode ser um domínio constante kapa ou lâmbda. O anticorpo também pode ser um anticorpo quimérico do tipo descrito no documento de patente WO86/01533 que compreende uma região de ligação de antígeno e uma região que não de imunoglobulina.
[0386] Uma pessoa versada no estado da técnica irá reconhecer que as proteínas de ligação de antígeno da invenção se ligam a um epítopo em seus alvos. O epítopo de uma proteína de ligação de antí- geno é a região de seu antígeno à qual se liga a proteína de ligação de antígeno. Duas proteínas de ligação de antígeno se ligam ao mesmo epítopo ou ao epítopo sobreposto se cada um inibe de modo competitivo
(bloqueia) a ligação do outro ao antígeno. Isto é, um excesso de 1x, 5x, 10x, 20x ou 100x de um anticorpo inibe a ligação do outro em pelo me- nos 50%, mas de preferência 75%, 90% ou até mesmo 99% tal como medido em um ensaio de ligação competitivo em comparação a um con- trole que não contém o anticorpo competitivo (vide, por exemplo, Jun- ghans et al., Cancer Res. 50: 1495, 1990, que é incorporado no presente documento a título de referência). Alternativamente, dois anticorpos têm o mesmo epítopo se essencialmente todas as mutações de aminoáci- dos no antígeno que reduzem ou eliminam a ligação de um anticorpo reduzirem ou eliminarem a ligação do outro. Além disso, o mesmo epí- topo pode incluir "epítopos sobrepostos", por exemplo, se algumas mu- tações de aminoácidos que reduzem ou eliminam a ligação de um anti- corpo reduzirem ou eliminarem a ligação do outro.
[0387] A intensidade da ligação pode ser importante na dosagem e na administração de uma proteína de ligação de antígeno da combina- ção, ou no método ou uso da mesma, da invenção. Em uma modali- dade, a proteína de ligação de antígeno da invenção liga seu alvo (por exemplo, BCMA ou PD-1 ou OX40) com afinidade elevada. A afinidade é a intensidade de ligação de uma molécula, por exemplo, um anticorpo de uma combinação da invenção, ou um método ou uso do mesmo, a uma outra, por exemplo, o seu antígeno alvo, em um único sítio de liga- ção. A afinidade de ligação de um anticorpo ao seu alvo pode ser deter- minada por métodos de equilíbrio (por exemplo, ensaio de imunoabsor- ção enzimática (ELISA) ou radioimunoensaio (RIA)), ou cinética (por exemplo, análise BIACORE). Por exemplo, os métodos Biacore conhe- cidos no estado da técnica podem ser usados para medir a afinidade de ligação.
[0388] A avidez é o total de soma da intensidade de ligação de duas moléculas uma na outra em múltiplos sítios, por exemplo, ao levar em consideração a valência da interação. Os fragmentos funcionais das proteínas de ligação de antígeno de uma combinação da invenção, ou um método ou uso da mesma, são contemplados no presente docu- mento.
[0389] Desse modo, os "fragmentos de ligação" e os "fragmentos funcionais" podem ser fragmentos Fab e F(ab')2 que não contêm o fra- gmento Fc de um anticorpo intacto, saem mais rapidamente de circula- ção, e podem ter uma ligação menos não específica de tecido do que um anticorpo intacto (Wahl et al., J. Nuc. Med. 24: 316-325 (1983)). Também são incluídos os fragmentos Fv (Hochman, J. et al. (1973) Bi- ochemistry 12: 1130-1135; Sharon, J. et al. (1976) Biochemistry 15: 1591-1594). Estes vários fragmentos são produzidos ao empregar téc- nicas convencionais tais como a clivagem de protease ou a clivagem química (vide, por exemplo, Rousseaux et al., Meth. Enzymol., 121: 663- 69 (1986)).
[0390] "Fragmentos funcionais", tais como usados no presente do- cumento, se referem a uma porção ou um fragmento das proteínas de ligação de antígeno de uma combinação da invenção, ou um método ou uso da mesma, que incluem o sítio de ligação de antígeno e são capa- zes de ligar o mesmo alvo que a proteína de ligação de antígeno pa- terna, por exemplo, mas sem ficar a ela limitada, a ligação do mesmo epítopo, e que também retêm uma ou mais funções de modulação ou outras funções descritas no presente documento ou conhecidas no es- tado da técnica.
[0391] Uma vez que as proteínas de ligação de antígeno da pre- sente invenção podem compreender regiões variáveis de cadeia pe- sada e regiões variáveis de cadeia leve de uma combinação da inven- ção, ou um método ou uso das mesmas, que pode ser formatada na estrutura de um anticorpo natural, um fragmento funcional é aquele que retém a ligação ou uma ou mais funções da proteína de ligação de an- tígeno de comprimento total tal como descrito no presente documento.
Um fragmento de ligação de uma proteína de ligação de antígeno de uma combinação da invenção, ou um método ou uso da mesma, por- tanto, pode compreender as regiões VL ou VH, um fragmento (Fab')2, um fragmento Fab, um fragmento de uma molécula ou um seu equiva- lente biespecífico ou biparatópico (tal como scFV, tri- bi- ou tetracorpos, Tandabs etc.), quando emparelhado com uma cadeia leve apropriada.
[0392] O termo "CDR", tal como usado no presente documento, se refere à complementaridade que determina as sequências de aminoáci- dos da região de uma proteína de ligação de antígeno. Estas são as regiões hipervariáveis decadeias pesadas e leves de imunoglobulina. Há três CDRs de cadeia pesada e três CDRs de cadeia leve (ou regiões de CDR) na parcela variável de uma imunoglobulina.
[0393] Será aparente aos elementos versados na técnica que há várias convenções de numeração para as sequências de CDRs; Chothia (Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883), Kabat (Kabat et al., Se- quences of Proteins of Immunological Interest, 4ª Ed., U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)), AbM (University of Bath) and Contact (University College London). A re- gião de sobreposição mínima ao usar pelo menos dois dos métodos de Kabat, Chothia, AbM e de contato pode ser determinada para prover a "unidade de ligação mínima". A unidade de ligação mínima pode ser uma subporção de um CDR. O desdobramento da estrutura e da prote- ína do anticorpo pode significar que outros resíduos são considerados como parte da sequência de CDRs e deve ser compreendido como sendo assim por um elemento versado na técnica. Deve ser observado que algumas das definições de CDR podem variar dependendo da pu- blicação individual usada.
[0394] A menos que esteja indicado de alguma outra maneira e/ou na ausência de uma sequência no presente documento especificamente identificada, as referências a "CDR", "CDRL1" (ou "LC CDR1"),
"CDRL2" (ou "LC CDR2"), "CDRL3" (ou "LC CDR3"), "CDRH1" (ou "HC CDR1"), "CDRH2" (ou "HC CDR2"), "CDRH3" (ou "HC CDR3") se refe- rem às sequências de aminoácidos numeradas de acordo com qualquer uma das convenções conhecidas; alternativamente, os CDRs são indi- cados como "CDR1," "CDR2," "CDR3" da cadeia leve variável e "CDR1," "CDR2," e "CDR3" da cadeia pesada variável. Em modalidades particulares, a convenção de numeração é a convenção de Kabat.
[0395] O termo "variante", tal como usado no presente documento, se refere a uma região variável de cadeia pesada ou uma região variável de cadeia leve que foi modificada por pelo menos uma, por exemplo, 1, 2 ou 3 substituições, deleções ou adições de aminoácidos, em que a proteína de ligação de antígeno modificada que compreende a variante de cadeia pesada ou de cadeia leve retém substancialmente as carac- terísticas biológicas da pré-modificação da proteína de ligação de antí- geno. Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno que con- tém uma região variável da cadeia pesada variante ou uma sequência variável da região da cadeia leve retém 60%, 70%, 80%, 90%, 100% de características biológicas da pré-modificação da proteína de ligação de antígeno. Deve ser apreciado que cada região variável de cadeia pe- sada ou região variável de cadeia leve pode ser modificada sozinha ou em combinação com uma outra região variável de cadeia pesada ou uma região variável de cadeia leve. As proteínas de ligação de antígeno da invenção incluem as sequências de aminoácidos variáveis da região de cadeia pesada que são 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% homólogas às sequências de aminoácidos variáveis da região de cadeia pesada descritas no presente documento. As proteínas de ligação de antígeno da invenção incluem a sequência variável de aminoácidos da região de cadeia leve que são 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% homólogas às sequências de ami-
noácidos variáveis da região de cadeia leve descritas no presente do- cumento.
[0396] A porcentagem de homologia pode estar em toda a região variável de cadeia pesada e/ou em toda a região variável de cadeia leve, ou a porcentagem de homologia pode ser confinada às regiões da es- trutura, ao passo que as sequências que correspondem aos CDRs têm 100% de identidade aos CDRs divulgado no presente documento dentro da região variável de cadeia pesada e/ou da região variável de cadeia leve.
[00] O termo "variante de CDR", tal como usado no presente do- cumento, se refere a um CDR que é modificado por pelo menos uma, por exemplo, 1, 2 ou 3, substituições, deleções ou adições de aminoá- cidos, em que a proteína de ligação de antígeno modificada que com- preende a variante de CDR retém substancialmente as características biológicas da pré-modificação da proteína de ligação de antígeno. Em uma modalidade, a proteína de ligação de antígeno que contém um CDR variante retém 60%, 70%, 80%, 90%, 100% das características biológicas da pré-modificação da proteína de ligação de antígeno. Deve ser apreciado que cada CDR que pode ser modificado pode ser modifi- cado sozinho ou em combinação com uns outros CDRs. Em uma mo- dalidade, a modificação é uma substituição, em particular uma substitui- ção conservadora, por exemplo, tal como mostrado na Tabela 1. Tabela 1 Cadeia lateral Membros Hidrofóbica Met, Ala, Val, Leu, Ile Hidrofílica neutra Cys, Ser, Thr Ácida Asp, Glu Básica Asn, Gln, His, Lys, Arg Resíduos que influenciam a orientação da cadeia Aromática Trp, Tyr, Phe
[0397] Por exemplo, em uma variante da CDR, os resíduos de ami- noácidos da unidade de ligação mínima podem permanecer os mesmos, mas os resíduos de flanco que compreendem os CDRs como a parte da(s) definição(ões) de Kabat ou de Chothia podem ser substituídos por um resíduo de aminoácido conservador.
[0398] Tais proteínas de ligação de antígeno que compreendem CDRs modificados ou unidades de ligação mínimas tal como descrito acima podem ser indicadas no presente documento como "variantes de CDR funcionais" ou "variantes da unidade de ligação funcionais".
[0399] O anticorpo pode ser de qualquer espécie, ou então modifi- cado para ser apropriado para a administração a uma espécie cruzada. Por exemplo, os CDRs de um anticorpo de camundongo podem ser hu- manizados para a administração aos seres humanos. Em qualquer mo- dalidade, a proteína de ligação de antígeno é opcionalmente um anti- corpo humanizado.
[0400] Um "anticorpo humanizado" se refere a um tipo de anticorpo engenheirado que tem seus CDRs derivados de uma imunoglobulina de doador não humano, e as partes derivadas da imunoglobulina restantes da molécula são derivadas de uma (ou mais) imunoglobulinas humanas. Além disso, os resíduos de suporte da estrutura podem ser alterados para preservar a afinidade de ligação (vide, por exemplo, Queen et al., Proc. Natl Acad Sci USA, 86: 10029-10032 (1989), Hodgson et al., Bio/Technology, 9: 421 (1991)). Um anticorpo aceptor humano apropri- ado pode ser aquele selecionado de um banco de dados convencional, por exemplo, o banco de dados KABAT®, o banco de dados Los Ala- mos, e o banco de dados Swiss Protein, por meio de homologia às se- quências de nucleotídeo e de aminoácidos do anticorpo doador. Um an- ticorpo humano caracterizado por uma homologia às regiões da estru- tura do anticorpo doador (com base em aminoácidos) pode ser apropri- ado para prover uma região constante de cadeia pesada e/ou uma re- gião da estrutura variável de cadeia pesada para a inserção dos CDRs doadores. Um anticorpo aceptor apropriado que pode doar regiões da estrutura constante ou variável de cadeia leve pode ser selecionado de uma maneira similar. Deve ser observado que as cadeias pesadas e leves do anticorpo aceptor não precisam ser originarias do mesmo anti- corpo aceptor. A técnica anterior descreve várias maneiras de produzir tais anticorpos humanizados – vide, por exemplo, os documentos de patente EP-A-0239400 e EP-A-054951.
[0401] Em contudo uma outra modalidade, o anticorpo humanizado tem uma região constante de anticorpo humano é seja um IgG. Em uma outra modalidade, IgG é uma sequência tal como divulgado em qualquer uma das referências ou publicações de patente acima.
[0402] "Função efetora mediada por FcyRIIIA realçada", tal como usada no presente documento, indica que a função efetora usual da proteína de ligação de antígeno foi aumentada deliberadamente em comparação aos seus níveis usuais. Isto pode ser realizado por quais- quer meios conhecidos no estado da técnica, por exemplo, por muta- ções que aumentam a afinidade com a ligação de FcYRIIIA ou pela al- teração da glicosilação da proteína de ligação de antígeno (por exemplo, knock out de uma fucosil transferase).
[0403] Para as sequências de nucleotídeos e de aminoácidos, o termo "idêntico" ou "identidade" indica o grau de identidade entre duas sequências de aminoácidos ou duas sequências de ácidos nucleicos quando alinhadas idealmente e comparadas com as inserções ou as deleções apropriadas.
[0404] A porcentagem de identidade de sequência entre duas se- quências é uma função do número de posições idênticas compartilha- das pelas sequências (isto é, % da identidade = número de posições idênticas/número total de posições multiplicado por 100), levando em consideração o número de espaçamentos, e o comprimento de cada espaçamento, que precisam ser introduzidas para o alinhamento ideal das duas sequências. A comparação das sequências e a determinação da porcentagem de identidade entre duas sequências pode ser reali- zada ao usar um algoritmo matemático, tal como descrito a seguir.
[0405] A porcentagem de identidade entre uma sequência de ácidos nucleicos de consulta e uma sequência de ácidos nucleicos objeto é o valor das "identidades", expresso como uma porcentagem, o qual é cal- culado pelo algoritmo de BLASTN quando uma sequência de ácidos nu- cleicos objeto tem 100% de cobertura de consulta com uma sequência de ácidos nucleicos de consulta depois que um alinhamento de BLASTN é executado em pares. Tais alinhamentos de BLASTN em pares entre uma sequência de ácidos nucleicos de consulta e uma sequência de ácidos nucleicos objeto são executados ao usar os ajustes padrão do algoritmo de BLASTN disponível no web site do National Center for Bi- otechnology Institute com o filtro para as regiões de baixa complexidade desligado. Deve ser observado que uma sequência de ácidos nucleicos de consulta pode ser descrita por uma sequência de ácidos nucleicos identificada em uma ou mais reivindicações no presente documento.
[0406] A porcentagem de identidade entre uma sequência de ami- noácidos de consulta e uma sequência de aminoácidos objeto é o valor das "identidades", expresso como uma porcentagem, o qual é calculado pelo algoritmo de BLASTP quando uma sequência de aminoácidos ob- jeto tem 100% de cobertura de consulta com uma sequência de amino- ácidos de consulta depois que um alinhamento de BLASTP é executado em pares. Tais alinhamentos de BLASTP em pares entre uma sequên- cia de aminoácidos de consulta e uma sequência de aminoácidos objeto são executados ao usar os ajustes padrão do algoritmo de BLASTP dis- ponível no web site do National Center for Biotechnology Institute com o filtro para as regiões de baixa complexidade desligado. Deve ser ob- servado que uma sequência de aminoácidos de consulta pode ser des- crita por uma sequência de aminoácidos identificada em uma ou mais reivindicações no presente documento.
[0407] Em uma modalidade da invenção tal como descrito no pre- sente documento, as proteínas de ligação de antígeno têm uma sequên- cia de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência às sequên- cias de aminoácidos tal como indicado na listagem de sequências. Em uma modalidade particular, as proteínas de ligação de antígeno têm uma identidade de sequência de pelo menos 98%, por exemplo, de 99% àquelas encontradas na listagem de sequências.
[0408] Todas as referências ou publicações descritas no presente documento são aqui incorporadas a título de referência.
EXEMPLOS
[0409] Os exemplos a seguir ilustram vários aspectos não limitado- res da presente invenção. Exemplo 1. Produção de proteínas de ligação de antígeno de BCMA
[0410] A produção de proteínas de ligação de antígeno de acordo com a invenção tal como descrito no presente documento e a conjuga- ção a uma toxina e as respectivas afinidades de ligação de tais proteí- nas de ligação de antígeno podem ser encontradas no documento de patente WO2012163805 tal como incorporado no presente documento a título de referência. Exemplo 2 - Morte de célula imunogênica (ICD)
[0411] O processo da morte de célula imunogênica pode induzir a produção de moléculas em perigo que conduz à ativação de células dendríticas (vide a FIG. 1A - ICD é um tipo especial de apoptose asso- ciada frequentemente com a liberação celular de ATP e HMGB1, e a exposição de CRT na membrana celular. A ICD induz uma imunores- posta através do acoplamento do processo de apresentação de antí- geno por células dendríticas (DCs)). Células NCI-H929 tratadas com BCMA ADC (anticorpo anti-BCMA conjugado a MMAF: GSK2857916)
produziram três moléculas em perigo (ATP, HMGB1 e CRT) com a mor- tandade das células (FIG. 1B - as linhagens de células testadas foram tratadas com o conjugado de anticorpo e fármaco anti-BCMA-MMAF ou Mitoxantrone por 48 horas e então avaliadas quanto: 1) a perda em nú- meros da células por citometria de fluxo automatizada, 2) a exposição de calreticulin (CRT) foi marcada com um anticorpo antiCRT policlonal e avaliada por citometria de fluxo, 3) o teor de HMGB1 no sobrenadante celular foi avaliado por meio de ELISA e pela avaliação de absorbância subsequente, e 4) o ATP no sobrenadante celular foi avaliado pela ava- liação de luminescência subsequente. Anti-BCMA-MMAF induziu a libe- ração de ATP, a liberação de HMGB1 e a exposição de CRT somente em NCI-H929, uma linhagem de células MM BCMA positivas). Para in- vestigar o efeito da mortandade de células NCI-H929 por BCMA ADC na ativação de células dendríticas, experimentos de cocultura foram re- alizados com as células NCI-H929 tratadas com BCMA ADC e células dendríticas imaturas (iDCs) diferenciadas de monócitos humanos in vi- tro com tratamento de GM-CSF/IL-4. Um número de marcadores de ma- turação de células dendríticas, bem como IL-10 e IL-12p70, duas citoci- nas principais secretadas por células dendríticas com a ativação, foi mo- nitorado neste processo para avaliar o efeito da morte de células indu- zida por BCMA ADC na ativação de células dendríticas.
[0412] Sangue humano integral fresco foi obtido junto a três doado- res saudáveis da Upper Providence Blood Donation Unit com seringas revestidas em heparina sódica líquida (concentração final Sagent de 10 lU/ml). Os monócitos foram isolados do sangue humano integral fresco ao usar o kit RosetteSep Monocyte Enrichment (Cao # 15068) e avalia- dos quanto à expressão de CD14 na superfície da célula (BD Bioscience Cat. # 562698) ao usar citometria de fluxo. Os monócitos isolados (1,5 x 106 células/poço) foram cultivados em 2 ml do meio X-Vivo-15 suple- mentado com 1% de plasma autólogo, 50 ng/ml de GM-CSF humano recombinante (R&D, 215-GM-050) e 100 ng/ml de IL-4 humano recom- binante (R&D, 204-IL-050) por 7 dias a 37°C/5% de CO2. As culturas receberam metade de uma mudança de meio no dia 3 ou 4 enquanto foram mantidas as concentrações do fator de estimulação. Células de mieloma múltiplo NCI-H929 foram passadas para ≥ 2 passagens de des- congelamento a 37°C, 5% de CO2, 90% de umidade do ar RPMI-1640 suplementado com 10% de FBS. As células foram chapeadas a uma densidade de 7,5 x 105 células/ml em 2 ml em placas de 12 poços. Uma resposta de dosagem de proteína de ligação de antígeno realçada com J6M0 ADC foi adicionada ao meio e as células foram incubadas a 37°C/5% de CO2 por 48 horas.
[0413] As iDCs do dia 7 foram cocultivadas com as células NCI- H929 tratadas com proteína de ligação de antígeno realçadas com J6M0 ADC a uma razão de 1:1 por 24 horas em placas de 96 poços. Todas as células foram contadas na iniciação da cocultura e diluídas com o meio X-Vivo-15 a uma concentração de 7,5 x 105 células/ml. 7,5 x 104 células/poço (100 µl) cada das iDCS e células NCI-H929 pré-tratadas foram combinadas em cada poço em uma placa de 96 poços. As células cocultivadas foram incubadas a 37°C/5% de CO2 por 24 horas. Um pai- nel de citometria de fluxo que consiste em CD1a, CD11c, CD40, CD80, CD83, CD86, HLA-DR e CD14 foi usado para avaliar a diferenciação de células dendríticas bloqueadas por FcR frescas e a maturação em FACS Canto II. Além disso, os sobrenadantes das células foram coleta- dos, congelado a -20°C, e ensaiados quanto a IL-10 e IL-12p70 ao usar kits de MSD.
[0414] A análise de dados foi executada em Flow Jo v7.6.5 para o painel de citometria de fluxo e usou a ligação de células CD11c+ ou HLA-DR+ para distinguir as células dendríticas das células de tumor. As células NCI-H929 são negativas para HLA-DR e têm uma expressão de CD11c muito menor do que as células dendríticas, permitindo que as duas populações de células sejam bloqueadas distintamente. Os dados para IL-10 e IL-12p70 secretados dos sobrenadantes nos ensaios de cocultura foram analisados em MSD Discovery Workbench v4.0.12.
[0415] Estes resultados sugerem que a mortandade das células NCI-H929 com BCMA ADC tem um efeito estimulador em células den- dríticas e pode conduzir à ativação das células dendríticas. Quando IL- 12p70 e IL-10 foram monitorados, IL-12p70 estava abaixo do limite de detecção sob todas as condições. IL-10 podia ser detectado e houve um efeito inibidor significativo de BCMA ADC na produção de IL-10. No en- tanto, este efeito pode não estar relacionado à ativação de células den- dríticas pela morte de células imunogênicas das células NCI-H929 indu- zida por BCMA ADC uma vez que o efeito inibidor em IL-10 foi obser- vado com as células NCI-H929 sozinhas tratadas com BCMA ADC. O efeito inibidor na produção de IL-10 é vantajoso na estimulação da imu- noresposta (vide a FIG. 2 e a FIG. 3).
[0416] FIG. 2A): A expressão da superfície da célula CD83 aumen- tou em células dendríticas HLA_DR+ de três doadores saudáveis depois de 24 horas da cocultura com as células de mieloma múltiplo NCI-H929 tratadas com HLA-DR+.
[0417] FIG. 2B): A expressão da superfície da célula CD40 aumen- tou em células dendríticas CD11c+ de três doadores saudáveis depois de 24 horas da cocultura com as células de mieloma múltiplo NCI-H929 tratadas com HLA-DR+. A expressão do marcador foi medida em (a) células dendríticas não tratadas (sem BCMA ADC) sozinhas e (b - f) células dendríticas que foram cocultivadas com (b) células NCI-H929 não tratadas (sem BCMA ADC), (c) controle de IgG (10 µg/ml), (d) 0,1, (e) 1 e (f) 10 µg/ml tratadas com BCMA ADC (48 horas), (g) tratamento com 3 µg/ml de lipopolissacarídeo (LPS) de células dendríticas foram incluídos como um controle positivo. Eixo X: Intensidade de Fluorescên- cia Média Log (MFI). A linha vertical representa o MFI do controle de
IgG.
[0418] FIGURAS 3A e 3B: IL-10 diminuiu nos sobrenadantes das células dendríticas cocultivadas de dois doadores humanos saudáveis e células de múltiplos mielomas NCI-H929 tratadas com BCMA ADC. IL-10 foi medido em (a) células dendríticas não tratadas (sem BCMA ADC) sozinhas e (b - f) células dendríticas que foram cocultivadas com (b) células NCL-H929 não tratadas (sem BCMA ADC), (c) controle de IgG (10 µg /ml), (d) 0,1, (e) 1 e (f) 10 µg /ml tratadas com BCMA ADC (48 horas), (g) tratamento com 3 µg/ml de lipopolissacarídeo (LPS) de células dendríticas foram incluídos como um controle positivo.
[0419] FIG. 3C: IL-10 diminuiu com o tratamento com BCMA ADC nos sobrenadantes de células de múltiplos mielomas NCI-H929 cultiva- das sozinhas. IL-10 foi medido em (a) células de múltiplos mielomas NCI-H929 não tratadas, (b) controle de IgG, (c) 0,1 (d), 1, e 10 µg/ml tratadas com BCMA ADC (48 horas). Exemplo 3
[0420] As células T podem ser ativadas através do acoplamento do receptor de células T (TCR) e das moléculas coestimuladoras expressas na superfície da célula. Com a ativação das células T, um número de marcadores de superfície adicionais é suprarregulado. O efeito in vitro de BCMA ADC (anticorpo de anti-BCMA conjugado a MMAF:GSK2857916) na ativação e função das células T foi caracteri- zado pelo monitoramento de um número desses marcadores associa- dos à ativação de células T. Além disso, com a ativação, as células T produzem citocinas tais como IFNy e lL-4. O efeito de BCMA ADC nas produções de IFNy e IL-4 em células T estimuladas também foi estu- dado. Estes experimentos podem fornecer dados sobre o efeito de BCMA ADC na ativação e na função das células T. Além disso, a proli- feração de células T CD4+ e CD8+ humanas com a estimulação na pre- sença de BCMA ADC também foi avaliada. O sangue humano foi obtido do programa de obtenção de doador de sangue em GlaxoSmithKline. Células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) foram isoladas do sangue humano integral através de centrifugação de gradiente de densidade Ficoll (GE Healthcare). O anticorpo anti-CD3 humano (eBios- cience, catálogo #16-0037-85, clone OKT3) diluído com o tampão de revestimento (Biolegend, catálogo # 421701) foi revestido em uma placa de fundo plano de 96 poços durante toda a noite.
3.1 Efeito de BCMA ADC na ativação das células T pela estimulação antiCD3/antiCD28 em PBMC
[0421] BCMA ADC (anticorpo anti-BCMA conjugado a MMAF:GSK2857916) foi testado no ensaio de ativação de células PBMC T. Neste estudo, o tratamento de BCMA ADC e a ativação de PBMC ocorreram simultaneamente e os efeitos foram monitorados em 24 e 72 horas. Este estudo foi repetido duas vezes (n = 2) com sangue de dois doadores diferentes. Neste estudo, 100 µl de PBMCs (2 x 106 células/m) em RPMI-1640 com 10% de FBS (Hyclone; catálogo # SH30071.03) foram adicionados em poços revestidos com o anticorpo anti-CD3 com ou sem 0,5 µg/ml de anticorpo antiCD28 (eBioscience, catálogo # 16-0289, clone CD28.2). Uma solução de partida de 9,6 mg/ml de BCMA ADC ou 4,6 mg/ml de controle de BCMA Ab IgG foi diluída primeiramente no meio RPMI-1640 para prover concentrações de anticorpo de 1 mg/ml que foram diluídas ainda mais em um volume igual do meio RPMI-1640 para prover concentrações de anticorpo de 60,6 e 0,6 µg/ml. 100 µl de cada uma das soluções de anticorpos diluí- das finais foram adicionados a 100 µl de PBMC em RPMI-1640/10% FBS para prover concentrações finais de anticorpo de 30, 3 e 0,3 µg/ml. Três replicatas técnicos foram incluídos para cada condição de ensaio. PBMCs foram cultivados a 37°C e em 5% de CO2 por várias vezes tal como indicado acima. As células foram transferidas para placas de 96 poços profundos e lavadas duas vezes com 1 ml de tampão de tingi- mento (BD Biosciences, catálogo # 554656), tingidas com anticorpos conjugados fluorescentes ou controles de isotipo (vide a seção 3.3. Fár- macos e Materiais), e incubadas por 30 minutos em gelo. A análise de imunofluorescência foi executada em um citômetro de fluxo FACS CANTO II (BD Biosciences) e analisada com o software DIVA (BD Bios- ciences). A citometria de fluxo foi usada para monitorar a porcentagem de células CD4 ou CD8 que expressam um determinado marcador, e a intensidade de fluorescência média (MFI) desse marcador em células CD4 ou CD8.
3.2 Efeito de BCMA ADC na produção de IFNy e IL-4 por células T com a estimulação antiCD3/antiCD28 em PBMC
[0422] Este estudo foi repetido duas vezes (n = 2) com sangue de dois doadores diferentes. 100 µl de PBMCs (1 x 106 células/ml) em RPMI-1640 com 10% de FBS foram adicionados em poços revestidos com anticorpo anti-CD3 com ou sem 0,5 µg/ml de anticorpo antiCD28 solúvel. 100 µl de cada uma das soluções de anticorpo de BCMA ADC diluído (anticorpo anti-BCMA conjugado a MMAF:GSK2857916) e de controle de IgG (vide a seção 3.1 para o protocolo de diluição de anti- corpo) foram então adicionados e os PBMCs foram cultivados a 37°C e em 5% de CO2 por 48 horas e 72 horas. Três replicatas técnicas foram incluídas para cada condição do ensaio. No final do estudo, as células foram transferidas, lavadas, tingidas e analisadas por citometria de fluxo tal como descrito na seção 3.1. Para o tingimento intracelular, as células foram fixadas por tampão cytofix (BD Biosciences, catálogo # 554655) à temperatura ambiente por 20 minutos e permeabilizadas pelo tampão de permeb./lavagem (BD Biosciences, catálogo # 554723) à tempera- tura ambiente por 30 minutos antes do tingimento com anticorpos ou controles de isotipo.
3.3 Efeito de BCMA ADC na proliferação de células T com a estimu- lação antiCD3/antiCD28
[0423] Células T CD4+ ou CD8+ T isoladas do sangue periférico normal fresco foram recebidas e contadas ao usar um instrumento Beck- man Coulter ViCell, e a seguir centrifugada a 330 g por 7 minutos. As células foram então tingidas com o corante de proliferação Molecular Probes Cell Trace CFSE (cat. # C34554) (5 a 10 µM) em PBS/0,5% de BSA. As células foram incubadas por 5 minutos em gelo antes de uma outra incubação por 5 minutos em gelo em RPMI gelado 1640/10% de FBS. Todo corante livre foi removido por duas centrifugações de célula adicionais a 300 g por 5 minutos. As células foram ressuspensas em meio completo RPMI 1640/10% de FBS/IL-2 (2,8 ng/ml). As células fo- ram então semeadas (105 células/100 µl de volume/poço) em uma placa de cultura de tecido de 96 poços pré-revestida com antiCD3 (1 µg/ml) e antiCD28 (1 µg/ml). BCMA ADC (anticorpo anti-BCMA conjugado a MMAF:GSK2857916) foi adicionado às células imediatamente depois da semeadura da placa e incubadas a 37°C por 96 horas.
[0424] Depois de uma incubação de 4 dias, o sobrenadante das cé- lulas foi colhido e congelado a menos 80°C e as células foram coletados para o tingimento com citometria de fluxo. Foram analisadas ao usar um citômetro de fluxo CANTO II com filtros de excitação e emissão de 488 nm apropriados para a fluoresceína (FITC) para Cell Trace CFSE.
[0425] Os anticorpos e os isotipos para os marcadores monitorados pela análise de citometria de fluxo são listados na Tabela 2 a seguir. Tabela 2 Marcador Fluores- Clone Isotipo Vendedor Nº catálogo cência CD4 V450 SK3 IgGI de camun- BD Biosciences 651850 dongo CD8 PerCP- RPA-T8 IgGI de camun- BioLegend 301032 Cy5.5 dongo
CD25 PE BC96 IgGI de camun- eBioscience 12-0259-42 dongo CD69 PE-Cy7 FN50 IgGI de camun- BioLegend 310912 dongo PD-1 APC EH12.2H7 IgGI de camun- BioLegend 329908 dongo OX-40 FITC ACT-35 IgGI de camun- eBioscience 11-1347-42 dongo CT LA-4 PE L3D10 IgGI de camun- BioLegend 349906 dongo CD39 APC Al IgGI de camun- eBioscience 17-0399-42 dongo CD73 PE-Cy7 AD2 IgGI de camun- BD Biosciences 561258 dongo ICOS FITC Isa3 IgGI de camun- eBioscience 11-9948-42 dongo CD137 PE 4B4-1 IgGI de camun- BD Biosciences 555956 dongo LAG-3 APC 3DS223H IgGI de camun- eBioscience 17-2239-42 dongo TIM-3 FITC F38-2E2 IgGI de camun- eBioscience 11-3109-42 dongo CD4 PE-Cy5 OKT4 camundongo lgG2b BioLegend 317412 IL-4 PE 8D4-8 IgGI de camun- BioLegend 500704 dongo IFNy FITC B27 IgGI de camun- BD Biosciences 554700 dongo
[0426] A porcentagens bruta e os dados de MFI para cada marcador a cada concentração de BCMA ADC foram comparados ao controle cor- respondente de IgG na análise estatística. Para esclarecer a variabili- dade dos doadores de sangue diferentes, um modelo de efeito misto linear foi usado para analisar os dados. Em resumo, o doador e a inte- ração entre o doador e o grupo (tratamento de BCMA ADC ou controle de IgG) foram tratados como efeitos aleatórios, e o grupo foi tratado como um efeito fixo no modelo. Depois da análise do modelo de efeito misto, cada grupo de tratamento de BCMA ADC foi comparado então com o grupo de controle de IgG. Devido às comparações múltiplas, o método de Dunnett foi usado para controlar a taxa de erro total do tipo
1. Os valores p ≤ 0.05 ajustados pelo método de Dunnett foram decla- rados como significativos para a porcentagem ou o valor de MFI a uma concentração específica de BCMA ADC. Foi considerado que BCMA ADC mudou de maneira significativa a expressão de um marcador se pelo menos 2 das 3 concentrações de BCMA ADC induzissem uma mu- dança estatisticamente (valores p ≤ 5) significativa da porcentagem ou do valor de MFI do marcador.
[0427] Para o relato dos dados, a porcentagem média ou o valor de MFI médio entre três replicatas técnicas foi gerado a cada concentração de BCMA ADC e os valores da % da diferença foram calculados como: % da diferença = (Avg 916 - Avg lgG)*100/Avg IgG, onde Avg 916 e Avg IgG representam os valores médios do grupo de tratamento de BCMA ADC e do grupo de controle de IgG, respectivamente. Os valores da % da diferença com doadores diferentes para um determinado marcador em uma certa concentração e ponto no tempo de BCMA ADC foram usados para calcular o valor médio da % da diferença e o CV (coefici- ente de variação) que foram relatados nas FIGURAS 4A-D. Os valores da % da diferença positivos e negativos representam a suprarregulação e a infrarregulação de um marcador, respectivamente.
[0428] FIG. 4A): A % da diferença média (Avg) e o coeficiente de variação (CV) para a porcentagem (%) e MFI dos marcadores nas célu- las CD4 em PBMC após a estimulação antiCD3/antiCD28 na presença de BCMA ADC por 24 e 72 horas.
[0429] FIG. 4B): A % da diferença média (Avg) e o coeficiente de variação (CV) para a porcentagem (%) e MFI dos marcadores nas célu- las CD8 em PBMC após a estimulação antiCD3/antiCD28 na presença de BCMA ADC por 24 e 72 horas.
[0430] FIG. 4C): A % da diferença média (Avg) e o coeficiente de variação (CV) para a porcentagem (%) de células CD4 e CD8 que ex- pressam IFNy e IL-4 em PBMC com estimulação antiCD3/antiCD28 na presença de BCMA ADC por 48 e 72 horas.
[0431] FIG. 4D): O efeito de BCMA ADC na proliferação de células T CD4+ e CD8+. As células T CD4+ e CD8+ estimuladas com anticorpos antiCD3 e o antiCD28 na presença ou na ausência de várias concentra- ções de BCMA ADC. Depois de 96 horas, a proliferação das células foi analisada através de citometria de fluxo. Os dados representam a média ± desvio padrão de 3 doadores diferentes. BCMA ADC não parece ter efeitos diretos nas células T humanas.
[0432] A % de CD4 e a % de CD8 foram medidas independente- mente em três grupos para cada experimento, com três replicatas téc- nicas em cada grupo. Cada grupo foi analisado estatisticamente tal como descrito acima. As mudanças nos valores da % de CD4 e na % de CD8 eram consideradas significativas se pelo menos 2 dos 3 grupos tivessem mudanças significativas (valores p ≤ 0,05). Para o relato dos dados, um CV aglomerado foi gerado ao tirar a média dos CVs para 3 grupos.
[0433] Neste estudo, o efeito in vitro de BCMA ADC na ativação e na função das células T foi caracterizado pelo monitoramento do efeito do composto em um número de marcadores associados com a ativação de células T. A maioria destes marcadores é suprarregulada com a ati- vação das células T. Estes marcadores incluem os marcadores de ati- vação de células T CD25 e CD69; os marcadores coinibidores PD-1, CTLA-4; os marcadores coestimuladores ICOS, OX-40 e CD137; e os marcadores de exaustão de células T TIM3 e LAG3. CD73 e CD39 são proteínas de superfície envolvidas na ativação da via da adenosina e são consideradas como moléculas coinibidoras na ativação de células T. A correlação entre o seu nível de expressão e a ativação de células de T é menos bem compreendida. De modo geral, os dados indicam que BCMA ADC tem um efeito mínimo na ativação de células T CD4 e CD8 estimulada por antiCD3/antiCD28 em PBMC. BCMA ADC não tem nenhum efeito significativo na produção de IFNy e IL-4 em ambas as células CD4 e CD8 em PBMC após a estimulação antiCD3/antiCD28. Estes dados são consistentes com a falta de expressão de BCMA em células T humanas. Exemplo 4: Eficácia in vivo de BCMA ADC em combinação com o anticorpo anti-OX40
[0434] Todos os procedimentos em animais foram revistos e apro- vados pelo GSK Institutional Animal Care and Use Committee antes da iniciação dos estudos.
4.1 Modelo de camundongo EL4-Luc2-hBCMA singeneico
[0435] A finalidade destes experimentos consiste em avaliar as combinações descritas no presente documento em modelos de tu- morgênese singeneica de camundongo. EL4-Luc2 (Bioware Ultra EL4- luc2 # 58230C40) foi transfectado com um plasmídeo que codifica BCMA humano. EL4 é uma célula de linfoma de camundongo induzida em um camundongo C57BL por DBMA (ATCC TIB-39). No dia -13, ca- mundongos fêmeas C57BL/6 (n = 10) foram pesados e inoculados no flanco direito com 1 x 105 das células de El4- Luc2-hBCMA transduzidas e colocados para crescer até que o volume do tumor alcançar ~700 mm3. O crescimento do tumor foi medido ao usar um calibre digital Fowler "ProMax". O comprimento (L) e a largura (W) dos tumores foram medidos a fim de determinar o volume do tumor ao usar a fórmula: Volume do tumor = 0,52 x L x W2.
4.2 Regime de dosagem
[0436] No dia 0 quando o volume do tumor alvo foi atingido, os ca- mundongos foram randomizados em 12 grupos de tratamento. Os tra- tamentos foram administrados no dia 4, no dia 7, no dia 11 e no dia 15. O volume do tumor e o peso de corpo foram medidos começando no dia
0 até o dia 27 em 3 vezes por semana. Os animais eram submetidos à eutanásia quando um tumor atingia um volume de 2.000 mm3. O regime de dosagem é resumido na Tabela 3. Tabela 3 Dias de Tratamento Grupo Tratamento (mg/kg) Dia 4 Dia 7 Dia 11 Dia 15 1 Solução salina X X X 2 LgG1 de rato 5 X X X 3 MMAF-lgG1 humano 15 X X X X 4 anticamundongo ΟΧ40 mAb (BioCell #BE0031) 1 X X X 4 MMAF-lgG1 humano 15 X X X X 5 anticamundongo ΟΧ40 mAb (BioCell #BE0031) 5 X X X 5 MMAF-lgG1 humano 15 X X X X 6 anticamundongo ΟΧ40 mAb (BioCell #BE0031) 0,25 X X X 6 MMAF-lgG1 humano 15 X X X X 7 lqG1 de rato 5 X X X 7 MMAF-lgG1 humano 15 X X X X 8 GSK2857916 15 X X X X 9 Rat lqG1 5 X X X 9 GSK2857916 15 X X X X 10 anticamundongo ΟΧ40 mAb (BioCell #BE0031) 5 X X X X 10 GSK2857916 15 X X X 11 anticamundongo ΟΧ40 mAb (BioCell #BE0031) 1 X X X 11 GSK2857916 15 X X X X 12 anticamundongo ΟΧ40 mAb (BioCell #BE0031) 0,25 X X X 12 GSK2857916 15 X X X X
4.3 Resultados
[0437] Os resultados do Exemplo 4 são reproduzidos na FIG. 5. A FIG. 5A representa o volume do tumor. O eixo X representa o número de dias no estudo e o eixo Y representa o volume do tumor (mm3). Cada linha em um único gráfico na FIG. 5A representa um único camundongo (n = 10 camundongos para cada grupo de tratamento). A FIG. 5B repre- senta a taxa total da sobrevivência. Estes resultados demonstram que a contração do volume do tumor é realçada modestamente quando um BCMA ACD (anticorpo anti-BCMA conjugado a MMAF:GSK2857916) é combinado com um anticorpo anti-OX40.
[0438] FIG. 5A: Gráficos que demonstram o efeito da combinação de um anticorpo anti-BCMA e um anticorpo anti-OX40 no volume do tu- mor em camundongos EL4-Luc2-hBCMA.
[0439] FIG. 5B: Gráficos que demonstram o efeito da combinação de um anticorpo anti-BCMA e um anticorpo anti-OX40 na taxa de sobre- vivência em camundongos EL4-Luc2-hBCMA.
Exemplo 5: Eficácia in vivo de anticorpo anti-BCMA em combina- ção com o anticorpo antiPD-1
[0440] Todos os procedimentos em animais foram revistos e apro- vados pelo GSK Institutional Animal Care and Use Committee antes da iniciação dos estudos.
5.1 Modelo de camundongo EL4-Luc2-hBCMA singeneico
[0441] Foi usado o mesmo modelo de camundongo EL4-Luc2- hBCMA tal como descrito no Exemplo 4.
5.2 Regime de dosagem
[0442] No dia 0, quando o volume do tumor alcançou uma média de 200 mm3, os camundongos foram randomizados em 13 grupos de tra- tamento. Os tratamentos foram administrados no dia 0, no dia 4, no dia 8, no dia 11, no dia 15 e no dia 17. Os dias de tratamento e a programa- ção de dosagem são resumidos na Tabela 4. O volume do tumor e o peso de corpo foram medidos começando no dia 0 até o dia 57. Os ani- mais eram submetidos à eutanásia quando um tumor atingia um volume de 2.000 mm3. O regime de dosagem é resumido na Tabela 4. Tabela 4 Dias de Tratamento Grupo Tratamento (mg/kg) Dia 0 Dia 4 Dia 8 Dia 11 Dia 15 Dia 17 1 Solução salina x x x x x x 2 lgG2a de rato anticamundongo 10 x x x x x x 3 IgG-MMAF 15 x x x x x x 4 IgG-MMAF 15 x x x x x x 4 IgG2a de rato anticamundongo 10 x x x x x x 5 RPD-1 de rato anticamundongo (BioCel 10 x x x x x x #BE0146) 6 GSK2857916 10 x x x x x x 7 GSK2857916 10 x x x x x x 7 PD-1 de rato anticamundongo (BioCel 10 x x x x x x #BE0146) 8 GSK2857916 15 x x x x x x 9 GSK2857916 15 x x x x x x 9 PD-1 de rato anticamundongo (BioCel 10 x x x x #BE0146) 10 GSK2857916 15 x x x x 10 PD-1 de rato anticamundongo (BioCel 10 x x x x x x #BE0146) 11 GSK2857916 15 x x x x x x 11 PD-1 de rato anticamundongo (BioCel 10 x x x x x x #BE0146) 12 GSK2857916 15 x x 12 PD-1 de rato anticamundongo (BioCel 10 x x x x #BE0146)
13 GSK2857916 15 x x x x 13 PD-1 de rato anticamundongo (BioCel 10 x x #BE0146)
5.3 Resultados
[0443] Os volumes de tumor resultantes para o Exemplo 5 são re- presentados na FIG. 6. O eixo X representa o número de dias no estudo e o eixo Y representa o volume do tumor (mm3). Cada linha em um único gráfico na FIG. 6 representa um único camundongo (n = 10 camundon- gos para cada grupo de tratamento).
[0444] FIG. 6: Ilustra os gráficos que que demonstram o efeito da combinação de um anticorpo anti-BCMA conjugado a MMAF e o anti- corpo antiPD-1 no volume do tumor em camundongos EL4-Luc2- hBCMA. Exemplo 6: Eficácia in vivo das combinações
[0445] Todos os procedimentos em animais foram revistos e apro- vados pelo GSK Institutional Animal Care and Use Committee antes da iniciação dos estudos.
6.1 Modelo de camundongo EL4-Luc2-hBCMA singeneico
[0446] Foi usado o mesmo modelo de camundongo EL4-Luc2- hBCMA tal como descrito no Exemplo 4.
6.2 Regime de dosagem
[0447] No dia 0, quando o volume do tumor alvo foi atingido, os ca- mundongos foram randomizados em 14 grupos de tratamento. Os tra- tamentos foram administrados no dia 0, no dia 3, no dia 7, no dia 10, no dia 14 e no dia 17. O volume do tumor e o peso de corpo foram medidos começando no dia 0 até o dia 102. Os animais eram submetidos à eu- tanásia quando um tumor atingia um volume de 2.000 mm3. O regime de dosagem é resumido na Tabela 4. O regime de dosagem é resumido na Tabela 5. Tabela 5 Dias de Tratamento Grupo Tratamento (mg/kg) 0 3 7 10 14 17 1 IgG2a de rato anticamundongo 10 X X X X X X 2 PD-1 de rato anticamundongo (BioCel #BE0146) 10 X X X X X X
3 MMAF lgG1 humano 15 X X X X 4 MMAF lgG1 humano 15 X X X X 4 IgG2a de rato anticamundongo 10 X X X X X X 5 MMAF IgG1 humano 15 X X X X 5 PD-1 de rato anticamundongo (BioCel #BE0146) 10 X X X X X X 6 GSK2857916 15 X X X X 7 GSK2857916 15 X X X X 7 IgG2a de rato anticamundongo 10 X X X X X X 8 GSK2857916 15 X X X X 8 PD-1 de rato anticamundongo (BioCel #BE0146) 10 X X X X X X 9 MMAF lgG1 humano 15 X X 10 MMAF lgG1 humano 15 X X 10 IgG2a de rato anticamundongo 10 X X X X X X 11 MMAF lgG1 humano 15 X X 11 PD-1 de rato anticamundongo (BioCel #BE0146) 10 X X X X X X 12 GSK2857916 15 X X 13 GSK2857916 15 X X 13 IgG2a de rato anticamundongo 10 X X X X X X 10 14 GSK2857916 15 X X 14 PD-1 de rato anticamundongo (BioCel #BE0146) 10 X X X X X X 10
6.3 Resultados
[0448] Os volumes de tumor resultantes para o Exemplo 6 são re- presentados pelos gráficos na FIG. 7. O eixo X representa o número de dias no estudo e o eixo Y representa o volume do tumor (mm3). Cada linha em um único gráfico na FIG. 7 representa um único camundongo (n = 10 camundongos para cada grupo de tratamento). Os resultados demonstram que o tratamento com uma combinação de um BCMA ADC (anticorpo anti-BCMA conjugado a MMAF:GSK2857916) e um anticorpo antiPD-1 resulta em uma redução moderada e consistente no volume do tumor em comparação ao tratamento com um BCMA ADC (anticorpo anti-BCMA conjugado a MMAF:GSK2857916) sozinho ou um anticorpo antiPD-1 sozinho.
[0449] A FIG. 7 ilustra os gráficos que demonstram o efeito da com- binação de um anticorpo anti-BCMA conjugado a NNAF e o anticorpo antiPD-1 no volume do tumor em camundongos EL4-Luc2-hBCMA. Exemplo 7: O conjugado de anticorpo anti-BCMA-fármaco GSK2857916 dirige a morte de células imunogênicas e respostas antitumor imunomediadas, e em combinação com o agonista OX40 potencializa a atividade in vivo
[0450] O mieloma múltiplo (MM) é uma doença que afeta as células do plasma e conduz à devastação das características clínicas. O MM é a segunda malignidade hematológica mais comum e continua sendo uma doença incurável. Portanto, novas terapias alvo se fazem necessá- rias. GSK2857916 foca na proteína de antígeno de maturação de célu- las B (BCMA) expressa quase que exclusivamente em célula de múlti- plos mielomas, e foi mostrado que constitui um candidato promissor para o tratamento de pacientes de múltiplos mielomas reincidentes e refratários em uma experimentação clínica de fase 1, atingindo uma taxa de resposta de 60% total.
[0451] GSK2857916 é um conjugado de anticorpo-fármaco (ADC) que consiste em um anticorpo monoclonal anti-BCMA humanizado que é conjugado a monometil auristatina-F (MMAF). A MMAF é um membro da família da dolastatina de inibidores de microtúbulos, que são poten- tes agentes antitumor também ligados também à morte de células imu- nogênicas (ICD), um tipo de morte da célula que pode estimular imuno- respostas do hospedeiro.
[0452] Pré-clinicamente, foi mostrado que GSK2857916 media a atividade antitumor através de vários mecanismos incluindo a indução da apoptose, após a liberação de um fármaco citotóxico ativo (cys-mcM- MAF) dentro da célula, e a mortandade realçada de células de tumor pela citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) uma vez que o anticorpo é afucosilado.
[0453] As atividades imunomoduladoras de GSK2857916 poten- ciais foram exploradas. Os resultados demonstram que GSK2857916 induz marcos de ICD in vivo e in vitro, tal como a expressão da superfície da célula de calreticulina e outras proteínas de resposta ao stress de ER e a secreção de HMGB1. Em um modelo singeneico imunocompetente engenheirado para expressar BCMA humano (linfoma de EL4-hBCMA), a contribuição de MMAF dentro da molécula de GSK2857916 para dirigir imunorespostas adaptáveis foi examinada ao comparar o anticorpo nu ao ADC. Os resultados indicam que nos camundongos que têm tumores de El4- hBCMA, o tratamento com GSK2857916 inibe o crescimento do tumor e induz respostas completas duráveis. Os animais respondentes eram imunes ao redesafio com as células de tumor EL4 e EL4-hBCMA parentais, sugerindo um acoplamento do sistema imunológico do hos- pedeiro, memória imunológica e difusão de antígeno de tumor. A ativi- dade antitumor durável por GSK2857916 foi caracterizada por infiltração de células T, NK e dendríticas e pelos marcadores de ICD, e foi anulada com a depleção de células CD8+ T.
[0454] Dado o potencial de GSK2857916 para a mediação da ativi- dade antitumor através do sistema imunológico, havia uma base lógica para avaliar as combinações com as terapias imunomoduladoras tais como OX40, uma molécula coestimuladora que pode estimular as célu- las T contra as células de câncer. As combinações de GSK2857916 com um anticorpo agonista anti-OX40 de murino (OX86) foram avaliadas e mostraram a infiltração e a ativação aumentadas de células T e dendrí- ticas intratumorais, células T apresentando antígeno e os marcos de ICD, conduzindo a uma atividade antitumor superior em relação aos agentes simples e aumentaram as respostas completas duráveis.
[0455] Estes resultados in vitro e in vivo suportam a morte de células imunogênicas e/ou a imunomodulação como um mecanismo de ação para GSK2857916 e provêm a base lógica para as combinações clínicas com várias terapias imunomoduladoras. Resumo de Sequências (Tabela A) Descrição Sequência de aminoácidos Sequência de polinucleotídeos CA8 CDRH1 SEQ. ID. NO: 1 n/a CA8 CDRH2 SEQ. ID. NO: 2 n/a CA8 CDRH3 SEQ. ID. NO: 3 n/a CA8 CDRL1 SEQ. ID. NO: 4 n/a CA8 CDRL2 SEQ. ID. NO: 5 n/a CA8 CDRL3 SEQ. ID. NO: 6 n/a CA8 Vh domínio (murino) SEQ. ID. NO: 7 SEQ. ID. NO: 8
CA8 Vl domínio (murino) SEQ.
ID.
NO: 9 SEQ.
ID.
NO: 10 CA8 Humanizado Vh JO SEQ.
ID.
NO: 11 SEQ.
ID.
NO: 12 CA8 Humanizado Vh JI SEQ.
ID.
NO: 13 SEQ.
ID.
NO: 14 CA8 Humanizado Vh J2 SEQ.
ID.
NO: 15 SEQ.
ID.
NO: 16 CA8 Humanizado Vh J3 SEQ.
ID.
NO: 17 SEQ.
ID.
NO: 18 CA8 Humanizado Vh J4 SEQ.
ID.
NO: 19 SEQ.
ID.
NO: 20 CA8 Humanizado Vh J5 SEQ.
ID.
NO: 21 SEQ.
ID.
NO: 22 CA8 Humanizado Vh J6 SEQ.
ID.
NO: 23 SEQ.
ID.
NO: 24 CA8 Humanizado Vh J7 SEQ.
ID.
NO: 25 SEQ.
ID.
NO: 26 CA8 Humanizado Vh J8 SEQ.
ID.
NO: 27 SEQ.
ID.
NO: 28 CA8 Humanizado Vh J9 SEQ.
ID.
NO: 29 SEQ.
ID.
NO: 30 CA8 Humanizado Vl M0 SEQ.I.D.
NO:31 SEQ.
ID.
NO: 32 CA8 Humanizado Vl Ml SEQ.I.D.
NO:33 SEQ.
ID.
NO: 34 CA8 Humanizado Vl M2 SEQ.I.D.
NO:35 SEQ.
ID.
NO: 36 Human BCMA SEQ.
ID.
NO: 37 SEQ.
ID.
NO: 38 CD33-hBCMA ECD (1- 53) TEV-Fc Human BCMA SEQ.
ID.
NO: 39 SEQ.
ID.
NO: 40 CD33-hBCMA ECD (4- 53) TEV-Fc Cyno BCMA SEQ.
ID.
NO: 41 SEQ.
ID.
NO: 42 CD33 cyno BCMA ECD (4-52) TEV-Fc CA8J0 Cadeia pesada SEQ.
ID.
NO: 43 SEQ.
ID.
NO: 44 humanizada CA8J1 Cadeia pesada SEQ.
ID.
NO: 45 SEQ.
ID.
NO: 46 humanizada CA8J2 Cadeia pesada SEQ.
ID.
NO: 47 SEQ.
ID.
NO: 48 humanizada CA8J3 Cadeia pesada SEQ.
ID.
NO: 49 SEQ.
ID.
NO: 50 humanizada CA8 J4 Cadeia pesada SEQ.
ID.
NO: 51 SEQ.
ID.
NO: 52 humanizada CA8J5 Cadeia pesada SEQ.
ID.
NO: 53 SEQ.
ID.
NO: 54 humanizada CA8J6 Cadeia pesada SEQ.
ID.
NO: 55 SEQ.
ID.
NO: 56 humanizada CA8J7 Cadeia pesada SEQ.
ID.
NO: 57 SEQ.
ID.
NO: 58 humanizada CA8J8 Cadeia pesada SEQ.
ID.
NO: 59 SEQ.
ID.
NO: 60 humanizada
CA8J9 Cadeia pesada SEQ.
ID.
NO: 61 SEQ.
ID.
NO: 62 humanizada CA8 MO Cadeia leve hu- SEQ.
ID.
NO: 63 SEQ.
ID.
NO: 64 manizada CA8 Ml Cadeia leve hu- SEQ.
ID.
NO: 65 SEQ.
ID.
NO: 66 manizada CA8 M2 Cadeia leve hu- SEQ.
ID.
NO: 67 SEQ.
ID.
NO: 68 manizada S307118G03 Vh domínio SEQ.
ID.
NO: 69 SEQ.
ID.
NO: 70 (murino) S307118G03 Vl domínio SEQ.
ID.
NO: 71 SEQ.
ID.
NO: 72 (murino) S307118G03 cadeia pe- SEQ.
ID.
NO: 73 SEQ.
ID.
NO: 74 sada (quimérica) S307118G03 cadeia SEQ.
ID.
NO: 75 SEQ.
ID.
NO: 76 leve(quimérica) S307118G03 Humani- SEQ.
ID.
NO: 77 SEQ.
ID.
NO: 78 zado VH HO S307118G03 Humani- SEQ.
ID.
NO: 79 SEQ.
ID.
NO: 80 zado VH Hl S307118G03 humani- SEQ.
ID.
NO: 81 SEQ.
ID.
NO: 82 zado VH H2 S307118G03 humani- SEQ.
ID.
NO: 83 SEQ.
ID.
NO: 84 zado VH H3 S307118G03 humani- SEQ.
ID.
NO: 85 SEQ.
ID.
NO: 86 zado VH H4 S307118G03 humani- SEQ.
ID.
NO: 87 SEQ.
ID.
NO: 88 zado VH H5 S307118G03 humani- SEQ.
ID.
NO: 89 SEQ.
ID.
NO: 90 zado Vl LO S307118G03 humani- SEQ.
ID.
NO: 91 SEQ.
ID.
NO: 92 zado VL S307118G03 CDRH1 SEQ.
ID.
NO: 93 n/a S307118G03 CDRH2 SEQ.
ID.
NO: 94 n/a S307118G03 CDRH3 SEQ.
ID.
NO: 95 n/a S307118G03 CDRL1 SEQ.
ID.
NO: 96 n/a S307118G03 CDRL2 SEQ.
ID.
NO: 97 n/a S307118G03 CDRL3 SEQ.
ID.
NO: 98 n/a S307118G03 humani- SEQ.
ID.
NO: 99 n/a zado H5 CDRH3 S307118G03 HO Cadeia SEQ.
ID.
NO: 100 SEQ.
ID.
NO: 101 pesada humanizada S307118G03 Hl cadeia SEQ.
ID.
NO: 102 SEQ.
ID.
NO: 103 pesada humanizada S307118G03 H2 cadeia SEQ.
ID.
NO: 104 SEQ.
ID.
NO: 105 pesada humanizada S307118G03 H3 cadeia SEQ.
ID.
NO: 106 SEQ.
ID.
NO: 107 pesada humanizada S307118G03 H4 cadeia SEQ.
ID.
NO: 108 SEQ.
ID.
NO: 109 pesada humanizada S307118G03 H5 cadeia SEQ.
ID.
NO: 110 SEQ.
ID.
NO: 111 pesada humanizada S307118G03 LO cadeia SEQ.
ID.
NO: 112 SEQ.
ID.
NO: 113 leve humanizada S307118G03 LI cadeia SEQ.
ID.
NO: 114 SEQ.
ID.
NO: 115 leve humanizada S332121F02 cadeia pe- SEQ.
ID.
NO: 116 SEQ.
ID.
NO: 117 sada variável de murino S332121F02 quimérica SEQ.
ID.
NO: 118 SEQ.
ID.
NO: 119 cadeia pesada variável S332121F02 cadeia leve SEQ.
ID.
NO: 120 SEQ.
ID.
NO: 121 variável de murino S332121F02 quimérica SEQ.
ID.
NO: 122 SEQ.
ID.
NO: 123 cadeia leve variável S322110D07 cadeia pe- SEQ.
ID.
NO: 124 SEQ.
ID.
NO: 125 sada variável de murino S322110D07 Cadeia pe- SEQ.
ID.
NO: 126 SEQ.
ID.
NO: 127 sada quimérica S322110D07 cadeia leve SEQ.
ID.
NO: 128 SEQ.
ID.
NO: 129 variável de murino S322110D07 Cadeia leve SEQ.
ID.
NO: 130 SEQ.
ID.
NO: 131 quimérica S332126E04 cadeia pe- SEQ.
ID.
NO: 132 SEQ.
ID.
NO: 133 sada variável de murino S332126E04 Cadeia pe- SEQ.
ID.
NO: 134 SEQ.
ID.
NO: 135 sada quimérica S332126E04 cadeia leve SEQ.
ID.
NO: 136 SEQ.
ID.
NO: 137 variável de murino S332126E04 Cadeia leve SEQ.
ID.
NO: 138 SEQ.
ID.
NO: 139 quimérica S336105A07 cadeia pe- SEQ.
ID.
NO: 140 SEQ.
ID.
NO: 141 sada variável de murino
S336105A07 Cadeia pe- SEQ.
ID.
NO: 142 SEQ.
ID.
NO: 143 sada quimérica S336105A07 cadeia leve SEQ.
ID.
NO: 144 SEQ.
ID.
NO: 145 variável de murino S336105A07 Cadeia leve SEQ.
ID.
NO: 146 SEQ.
ID.
NO: 147 quimérica S335115G01 cadeia pe- SEQ.
ID.
NO: 148 SEQ.
ID.
NO: 149 sada variável de murino S335115G01 Cadeia pe- SEQ.
ID.
NO: 150 SEQ.
ID.
NO: 151 sada quimérica S335115G01 cadeia leve SEQ.
ID.
NO: 152 SEQ.
ID.
NO: 153 variável de murino S335115G01 Cadeia leve SEQ.
ID.
NO: 154 SEQ.
ID.
NO: 155 quimérica S335122F05 cadeia pe- SEQ.
ID.
NO: 156 SEQ.
ID.
NO: 158 sada variável de murino S335122F05 Cadeia pe- SEQ.
ID.
NO: 158 SEQ.
ID.
NO: 159 sada quimérica S335122F05 cadeia leve SEQ.
ID.
NO: 160 SEQ.
ID.
NO: 161 variável de murino S335122F05 Cadeia leve SEQ.
ID.
NO: 162 SEQ.
ID.
NO: 163 quimérica S332121F02 CDRH1 SEQ.
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NO: 164 n/a S332121F02 CDRH2 SEQ.
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NO: 165 n/a S332121F02 CDRH3 SEQ.
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NO: 166 n/a S332121F02 CDRL1 SEQ.
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NO: 167 n/a S332121F02 CDRL2 SEQ.
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NO: 168 n/a S332121F02 CDRL3 SEQ.
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NO: 169 n/a S322110D07 CDRH1 SEQ.
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NO: 171 n/a S322110D07 CDRH3 SEQ.
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NO: 172 n/a S322110D07CDRL1 SEQ.
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NO: 174 n/a S322110D07 CDRL3 SEQ.
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NO: 175 n/a S332126E04CDRH1 SEQ.
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NO: 176 n/a S332126E04CDRH2 SEQ.
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NO: 178 n/a S332126E04CDRL1 SEQ.
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NO: 179 n/a S332126E04CDRL2 SEQ.
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NO: 180 n/a S332126E04CDRL3 SEQ.
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NO: 181 n/a
S336105A07 CDRH1 SEQ.
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NO: 182 n/a S336105A07 CDRH2 SEQ.
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NO: 183 n/a S336105A07 CDRH3 SEQ.
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NO: 184 n/a S336105A07 CDRL1 SEQ.
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NO: 185 n/a S336105A07 CDRL2 SEQ.
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NO: 186 n/a S336105A07 CDRL3 SEQ.
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NO: 187 n/a S335115G01 CDRH1 SEQ.
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NO: 188 n/a S335115G01 CDRH2 SEQ.
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NO: 189 n/a S335115G01 CDRH3 SEQ.
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NO: 198 n/a S335122F05 CDRL3 SEQ.
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NO: 199 n/a CA8 CDRH3 variante SEQ.
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NO: 200 n/a N99D Pembrolizumab CDRH1 SEQ.
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NO: 201 n/a Pembrolizumab CDRH2 SEQ.
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NO: 203 n/a Pembrolizumab CDRL1 SEQ.
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NO: 205 n/a Pembrolizumab CDRL3 SEQ.
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NO: 206 n/a Pembrolizumab cadeia SEQ.
ID.
NO: 207 n/a pesada variável (VH) Pembrolizumab cadeia SEQ.
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NO: 208 n/a leve variável (VL) Pembrolizumab Cadeia SEQ.
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NO: 209 n/a pesada Pembrolizumab Cadeia SEQ.
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NO: 210 n/a leve Nivolumab CDRH1 SEQ.
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NO: 211 n/a Nivolumab CDRH2 SEQ.
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NO: 212 n/a Nivolumab CDRH3 SEQ.
ID.
NO: 213 n/a Nivolumab CDRL1 SEQ.
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NO: 214 n/a Nivolumab CDRL2 SEQ.
ID.
NO: 215 n/a Nivolumab CDRL3 SEQ.
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NO: 216 n/a
Nivolumab cadeia pesada SEQ.
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NO: 217 n/a variável (VH) Nivolumab cadeia leve SEQ.
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NO: 218 n/a variável (VL) 106-222 CDRH1 SEQ.
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NO: 219 n/a 106-222 CDRH2 SEQ.
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NO: 220 n/a 106-222 CDRH3 SEQ.
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NO: 223 n/a 106-222 CDRL3 SEQ.
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NO: 224 n/a 106-222 Cadeia pesada SEQ.
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NO: 225 SEQ.
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NO: 226 variável 106-222 Cadeia leve vari- SEQ.
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NO: 227 SEQ.
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NO: 228 ável 106-222 Cadeia pesada SEQ.
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NO: 229 n/a variável 106-222 Cadeia leve vari- SEQ.
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NO: 230 n/a ável 119-222 CDRH1 SEQ.
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NO: 231 n/a 1119-222 CDRH2 SEQ.
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NO: 232 n/a 119-222 CDRH3 SEQ.
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NO: 233 n/a 119-222 CDRL1 SEQ.
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NO: 234 n/a 119-222 CDRL2 SEQ.
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NO: 235 n/a 119-222 CDRL3 SEQ.
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NO: 236 n/a 119-222 Cadeia pesada SEQ.
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NO: 237 SEQ.
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NO: 238 variável 119-222 Cadeia leve vari- SEQ.
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NO: 239 SEQ.
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NO: 240 ável 119-222 Cadeia pesada SEQ.
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NO: 241 n/a variável 119-222 Cadeia leve vari- SEQ.
ID.
NO: 242 n/a ável 106-222 Cadeia pesada SEQ.
ID.
NO: 243 n/a 106-222 Cadeia leve SEQ.
ID.
NO: 244 n/a

Claims (14)

REIVINDICAÇÕES
1. Método de tratamento do câncer em um paciente em ne- cessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende a ad- ministração de cerca de 0,03 mg/kg a cerca de 4,6 mg/kg mg de belan- tamab mafodotin e de cerca de 2 a cerca de 24 mg de um anticorpo que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que belantamab mafodotin é administrado a cerca de 0,95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg.
3. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracteri- zado pelo fato de que o anticorpo que liga OX40 é administrado a cerca de 8 mg ou cerca de 24 mg.
4. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o câncer é mieloma múltiplo reincidente e/ou refratário.
5. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o paciente foi tratado previamente com pelo menos 3 linhas prévias de terapia do câncer.
6. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o paciente é humano.
7. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que belantamab mafodotin e o anticorpo que liga OX40 são administrados no dia 1 de um ciclo de 21 dias (Q3W).
8. Método de tratamento de mieloma múltiplo em um ser hu- mano com necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que com- preende a administração no dia 1 de um ciclo de 21 dias (Q3W):
a. cerca de 0,95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin, e b. cerca de 8 mg, ou cerca de 24 mg de um anticorpo que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
9. Combinação, caracterizada pelo fato de que compreende cerca de 0,95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin, e cerca de 8 ou cerca de 24 mg de anticorpo que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
10. Combinação para o uso no tratamento do câncer, carac- terizada pelo fato de que compreende cerca de 0,95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin, e cerca de 8 mg ou cerca de 24 mg de anticorpo que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
11. Combinação de acordo com a reivindicação 10, caracte- rizada pelo fato de que o câncer é mieloma múltiplo reincidente e/ou refratário.
12. Uso da combinação de acordo com a reivindicação 9, ca- racterizado pelo fato de que serve na fabricação de um medicamento para o tratamento do câncer.
13. Uso da combinação de acordo com a reivindicação 9, ca- racterizado pelo fato de que serve para o tratamento do câncer em um ser humano com necessidade do mesmo.
14. Kit, caracterizado pelo fato de que compreende cerca de 0,95 mg/kg, cerca de 1,9 mg/kg, cerca de 2,5 mg/kg, ou cerca de 3,4 mg/kg de belantamab mafodotin, e cerca de 8 ou cerca de 24 mg de anticorpo que liga OX40 que compreende CDRH1 da SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 da SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 da SEQ. ID. NO: 221, CDRL1 da SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 da SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 da SEQ. ID. NO: 224, ou as suas variantes.
Célula de tumor DC imatura morrendo
Petição 870210067794, de 26/07/2021, pág. 11/349 Engolfamento 1/21 de antígeno
Pré-apoptose Exposição da membrana de CRT Engolfamento de antígenos por DCS Apoptose Secreção de ATP Recrutamento de DCS no tumor Necrose secundária Liberação de HMGB1 Apresentação de antígeno a células T
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