BR112021014514A2 - Inibidores de via de resposta integrada ao estresse - Google Patents

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BR112021014514A2
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chloro
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BR112021014514-1A
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Sebastian Bernales
Luz Marina Delgado Oyazo
Gonzalo Esteban Nunez Vasquez
Gonzalo Andrés Ureta Díaz
Brahmam Pujala
Dayanand Pantatil
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Praxis Biotech LLC
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Abstract

inibidores de via de resposta integrada ao estresse. a presente invenção refere-se de um modo geral a agentes terapêuticos que podem ser úteis como inibidores de via de resposta integrada ao estresse (isr). compostos e composições detalhados neste documento, tal como uma composição farmacêutica contendo um composto de qualquer fórmula fornecida neste documento ou um sal do mesmo, e um transportador ou excipiente farmaceuticamente aceitável, podem ser usados em métodos de administração e tratamento como fornecido neste documento.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "INIBIDORES DE VIA DE RESPOSTA INTEGRADA AO ESTRESSE".
REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade do Pedido de Patente Provisional U.S. Nº 62/810.324, depositado em 25 de fevereiro de 2019 e 62/943.643, depositado em 4 de dezembro de 2019, cujas descrições são aqui incorporadas por referência em sua íntegra.
CAMPO
[002] A presente invenção refere-se geralmente a agentes terapêuticos que podem ser úteis como inibidores da via de Resposta Integrada ao Estresse (ISR).
ANTECEDENTES
[003] Diversas condições celulares e estresses ativam uma via de sinalização amplamente conservada, denominada via de Resposta Integrada ao Estresse (ISR). A via ISR é ativada em resposta a estresses intrínsecos e extrínsecos, como infecções virais, hipóxia, privação de glicose e aminoácidos, ativação de oncogene, radiação UV e estresse do retículo endoplasmático. Após a ativação de ISR por um ou mais desses fatores, o fator de iniciação eucariótica 2 (eIF2, que é composto por três subunidades, α, β e γ) torna-se fosforilado em sua subunidade α e reduz rapidamente a tradução geral da proteína pela ligação Complexo eIF2B. Esta fosforilação inibe a troca mediada por eIF2B de GDP por GTP (isto é, uma atividade de fator de troca de nucleotídeo guanina (GEF)), sequestrando eIF2B em um complexo com eIF2 e reduzindo a translação geral de proteínas da maioria dos mRNAs na célula. Paradoxalmente, a fosforilação de eIF2α também aumenta a translação de um subconjunto de mRNAs que contêm uma ou mais estruturas de leitura aberta a montante (uORFs) em sua região 5' não transladada (UTR). Essas transcrições incluem o modulador transcricional ativando o fator de transcrição 4 (ATF4), o fator de transcrição CHOP, a proteína induzível de parada de crescimento e dano ao DNA GADD34 e a β secretase BACE-1.
[004] Em animais, a ISR modula um amplo programa translacional e transcricional envolvido em diversos processos, tais como a memória de aprendizagem, a imunidade, metabolismo intermediário, a produção de insulina e a resistência ao estresse de proteína desdobrada no retículo endoplasmático, entre outros. A ativação da via ISR também foi associada a inúmeras condições patológicas, incluindo câncer, doenças neurodegenerativas, doenças metabólicas (síndrome metabólica), doenças autoimunes, doenças inflamatórias, doenças músculo- esqueléticas (como miopatia), doenças vasculares, doenças oculares e distúrbios genéticos. A síntese de proteínas aberrantes por meio da fosforilação de eIF2α também é característica de vários outros distúrbios genéticos humanos, fibrose cística, esclerose lateral amiotrófica, doença de Huntington e doença de priônio.
BREVE SUMÁRIO
[005] Os inibidores da via de resposta integrada ao estresse (ISR) são descritos, assim como os métodos de preparação e uso dos compostos, ou seus sais.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[006] Figura 1 mostra a intensidade de fluorescência relative (RFU) de GFP que resulta de um sistema de expressão de proteína sem célula tratado com ou sem o composto 90 e composto 94.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[007] São descritos aqui compostos, incluindo agentes terapêuticos, que podem inibir a via ISR. Estes compostos podem ser usados na prevenção e/ou tratamento de certas condições patológicas, conforme descrito neste documento, e/ou em aplicações de biotecnologia que se beneficiariam de um aumento da translação de proteínas.
Definições
[008] Para uso neste documento, a menos que seja claramente indicado o contrário, o uso dos termos "um", "uma" e similares refere-se a um ou mais.
[009] A referência a "cerca de" um valor ou parâmetro neste documento inclui (e descreve) modalidades que são direcionadas a esse valor ou parâmetro per se. Por exemplo, a descrição referente a "cerca de X" inclui a descrição de "X".
[0010] "Alquila", conforme usado neste documento, refere-se e inclui, a menos que indicado de outra forma, uma cadeia de hidrocarboneto univalente saturada linear (isto é, não ramificada) ou ramificada ou uma combinação das mesmas, tendo o número de átomos de carbono designados (isto é, C1-C10 significa um a dez átomos de carbono). Grupos alquila particulares são aqueles que têm 1 a 20 átomos de carbono (uma "C1-C20 alquila"), tendo 1 a 10 átomos de carbono (uma "C1-C10 alquila"), tendo 6 a 10 átomos de carbono (uma "C6-C10 alquila"), tendo 1 a 6 átomos de carbono (uma "C1-C6 alquila"), tendo 2 a 6 átomos de carbono (uma "C2-C6 alquila"), ou tendo 1 a 4 átomos de carbono (uma "C1-C4 alquila"). Exemplos de grupos alquila incluem, mas não estão limitados a, grupos como metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila, sec-butila, n-pentila, n-hexila, n- heptila, n-octila, n-nonila, n-decila e similares.
[0011] "Alquileno" como aqui utilizado refere-se aos mesmos resíduos que alquila, mas com bivalência. Grupos alquileno particulares são aqueles tendo 1 a 20 átomos de carbono (um "C1-C20 alquileno"), tendo 1 a 10 átomos de carbono (um "C1-C10 alquileno"), tendo 6 a 10 átomos de carbono (um "C6-C10 alquileno"), tendo 1 a 6 átomos de carbono (um "C1-C6 alquileno"), 1 a 5 átomos de carbono (um "C1-C5 alquileno"), 1 a 4 átomos de carbono (um "C1-C4 alquileno") ou 1 a 3 átomos de carbono (um "C1-C3 alquileno"). Exemplos de alquileno incluem, mas não estão limitados a, grupos tal como metileno (-CH2-), etileno (-CH2CH2-), propileno (-CH2CH2CH2-), isopropileno (-CH2CH(CH3)-), butileno (-CH2(CH2)2CH2-), isobutileno (-CH2CH(CH3)CH2-), pentileno (- CH2(CH2)3CH2-), hexileno (-CH2(CH2)4CH2-), heptileno (-CH2(CH2)5CH2-), octileno (-CH2(CH2)6CH2-) e similares.
[0012] "Alquenila" tal como aqui utilizado refere-se a e inclui, a menos que indicado de outra forma, uma cadeia de hidrocarboneto univalente insaturada (isto é, não ramificada) ou ramificada ou uma combinação das mesmas, tendo pelo menos um sítio de insaturação olefínica (isto é, tendo pelo menos uma porção da fórmula C=C) e tendo o número de átomos de carbono designados (isto é, C2-C10 significa dois a dez átomos de carbono). Um grupo alquenila pode ter configurações "cis" ou "trans" ou, alternativamente, configurações "E" ou "Z". Grupos alquenila particulares são aqueles com 2 a 20 átomos de carbono (uma "C2-C20 alquenila"), tendo 6 a 10 átomos de carbono (uma "C6-C10 alquenila"), tendo 2 a 8 átomos de carbono (uma "C2-C8 alquenila"), tendo 2 a 6 átomos de carbono (uma "C2-C6 alquenila"), ou tendo 2 a 4 átomos de carbono (uma "C2-C4 alquenila"). Exemplos de grupo alquenila incluem, mas não estão limitados a, grupos como etenila (ou vinila), prop-1-enila, prop-2-enila (ou alila), 2-metilprop-1-enila, but-1- enila, but-2-enila, but-3-enila, buta-1,3-dienila, 2-metilbuta-1,3-dienila, pent-1-enila, pent-2-enila, hex-1-enila, hex-2-enila, hex-3-enila e similares.
[0013] "Alquenileno", conforme usado neste documento, refere-se aos mesmos resíduos que alquenila, mas com bivalência. Grupos alquenileno particulares são aqueles com 2 a 20 átomos de carbono (um "C2-C20 alquenileno"), tendo 2 a 10 átomos de carbono (um "C2-C10 alquenileno"), tendo 6 a 10 átomos de carbono (um "C6-C10 alquenileno"), tendo 2 a 6 átomos de carbono (um "C2-C6 alquenileno"), 2 a 4 átomos de carbono (um "C2-C4 alquenileno") ou 2 a 3 átomos de carbono (um "C2-C3 alquenileno"). Exemplos de alquenileno incluem, mas não estão limitados a, grupos como etenileno (ou vinileno) (CH = CH), propenileno (-CH=CHCH2-), 1,4-but-1-enileno (-CH=CH-CH2CH2-), 1,4-but-2-enileno (-CH2CH=CHCH2-), 1,6-hex-1-enileno (-CH=CH- (CH2)3CH2-) e similares.
[0014] "Alquinila", tal como aqui utilizado refere-se e inclui, a menos que indicado de outra forma, uma cadeia de hidrocarboneto univalente insaturada linear (isto é, não ramificada) ou ramificada ou uma combinação das mesmas, tendo pelo menos um sítio de insaturação acetilênica (isto é, tendo pelo menos uma porção da fórmula C≡C) e tendo o número de átomos de carbono designado (isto é, C2-C10 significa dois a dez átomos de carbono). Grupos alquinila particulares são aqueles com 2 a 20 átomos de carbono (uma "C2-C20 alquinila"), tendo 6 a 10 átomos de carbono (uma "C6-C10 alquinila"), tendo 2 a 8 átomos de carbono (uma "C2-C8 alquinila"), tendo 2 a 6 átomos de carbono (uma "C2-C6 alquinila"), ou tendo 2 a 4 átomos de carbono (uma "C2-C4 alquinila"). Exemplos de grupo alquinila incluem, mas não estão limitados a, grupos como etinila (ou acetilenila), prop-1-inila, prop-2-inila (ou propargila), but-1-inila, but-2-inila, mas -3-inila e similares.
[0015] "Alquinileno" como aqui utilizado refere-se aos mesmos resíduos que a alquinila, mas com bivalência. Grupos de alquinileno particulares são aqueles com 2 a 20 átomos de carbono (um "C2-C20 alquinileno"), tendo 2 a 10 átomos de carbono (um "C2-C10 alquinileno"), tendo 6 a 10 átomos de carbono (um "C6-C10 alquinileno"), tendo 2 a 6 átomos de carbono (um "C2-C6 alquinileno"), 2 a 4 átomos de carbono (um "C2-C4 alquinileno") ou 2 a 3 átomos de carbono (um "C2-C3 alquinilena"). Exemplos de alquinileno incluem, mas não estão limitados a, grupos como etinileno (ou acetilenileno) (C≡C), propinileno (- C≡CCH2-) e similares.
[0016] "Cicloalquila", conforme usado neste documento, refere-se a e inclui, a menos que indicado de outra forma, estruturas de hidrocarboneto univalente cíclico saturado, tendo o número de átomos de carbono designado (isto é, C3-C10 significa 3 a 10 átomos de carbono). Cicloalquila pode consistir em um anel, tal como ciclo-hexila, ou anéis múltiplos, tal como adamantilo. Uma cicloalquila compreendendo mais de um anel pode ser fundida, espiro ou em ponte, ou combinações dos mesmos. Grupos de cicloalquilas particulares são aqueles que possuem de 3 a 12 átomos de carbono anulares. Uma cicloalquila preferida é um hidrocarboneto cíclico tendo de 3 a 8 átomos de carbono anulares (uma "C3-C8 cicloalquila"), tendo 3 a 6 átomos de carbono (uma "C3-C6 cicloalquila"), ou tendo de 3 a 4 átomos anulares de carbono (uma "C3- C4 cicloalquila"). Exemplos de cicloalquila incluem, mas não estão limitados a, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo- heptila, norbornila e similares.
[0017] "Cicloalquileno" como aqui utilizado refere-se aos mesmos resíduos que cicloalquila, mas com bivalência. O cicloalquileno pode consistir em um ou vários anéis que podem ser fundidos, espiro ou em ponte, ou combinações dos mesmos. Grupos cicloalquileno particulares são aqueles que possuem de 3 a 12 átomos de carbono anulares. Um cicloalquileno preferido é um hidrocarboneto cíclico possuindo de 3 a 8 átomos de carbono anulares (um "C3-C8 cicloalquileno"), tendo 3 a 6 átomos de carbono (um "C3-C6 cicloalquileno"), ou tendo de 3 a 4 átomos de carbono anulares (um "C3-C4 cicloalquileno"). Exemplos de cicloalquileno incluem, mas não estão limitados a, ciclopropileno, ciclobutileno, ciclopentileno, ciclo-hexileno, ciclo-heptileno, norbornileno e similares. Um cicloalquileno pode se ligar às estruturas restantes através do mesmo átomo de carbono do anel ou átomos de carbono de anéis diferentes. Quando um cicloalquileno se liga às estruturas restantes por meio de dois átomos de carbono diferentes, as conexões de ligação podem ser cis- ou trans- entre si. Por exemplo, o ciclopropileno pode incluir 1,1-ciclopropileno e 1,2-ciclopropileno (por exemplo, cis-1,2-ciclopropileno ou trans-1,2-ciclopropileno) ou uma mistura dos mesmos.
[0018] "Cicloalquenila" refere-se a e inclui, a menos que indicado de outra forma, uma estrutura de hidrocarboneto univalente não aromático cíclico insaturado, tendo pelo menos um sítio de insaturação olefínica (isto é, tendo pelo menos uma porção da fórmula C = C) e tendo o número de átomos de carbono designado (isto é, C2-C10 significa dois a dez átomos de carbono). O cicloalquenila pode consistir em um anel, tal como ciclo-hexenila, ou múltiplos anéis, tal como o norbornenila. Uma cicloalquenila preferida é um hidrocarboneto cíclico insaturado possuindo de 3 a 8 átomos de carbono anulares (uma "C3-C8 cicloalquenila"). Exemplos de grupos cicloalquenila incluem, mas não estão limitados a, ciclopropenila, ciclobutenila, ciclopentenila, ciclo- hexenila, norbornenila e similares.
[0019] "Cicloalquenileno" como aqui utilizado refere-se aos mesmos resíduos que cicloalquenila, mas tendo bivalência.
[0020] "Arila" ou "Ar" tal como aqui utilizado refere-se a um grupo carbocíclico aromático insaturado possuindo um único anel (por exemplo, fenila) ou múltiplos anéis condensados (por exemplo, naftila ou antrila) cujos anéis condensados podem ou não ser aromáticos. Grupos arila específicos são aqueles que têm de 6 a 14 átomos de carbono anulares (um "C6-C14 arila"). Um grupo arila tendo mais de um anel onde pelo menos um anel é não aromático pode ser conectado à estrutura parental em uma posição de anel aromático ou em uma posição de anel não aromático. Em uma variação, um grupo arila tendo mais de um anel onde pelo menos um anel é não aromático está conectado à estrutura parental em uma posição de anel aromático.
[0021] "Arileno", conforme usado neste documento, refere-se aos mesmos resíduos que arila, mas com bivalência. Grupos de arileno particulares são aqueles que têm de 6 a 14 átomos de carbono anulares (um "arileno C6-C14").
[0022] "Heteroarila", conforme usado neste documento, refere-se a um grupo cíclico aromático insaturado tendo de 1 a 14 átomos de carbono anulares e pelo menos um heteroátomo anular, incluindo, mas não se limitando a heteroátomos, tais como nitrogênio, oxigênio e enxofre. Um grupo heteroarila pode ter um único anel (por exemplo, piridila, furila) ou múltiplos anéis condensados (por exemplo, indolizinila, benzotienila), cujos anéis condensados podem ou não ser aromáticos. Grupos heteroarila particulares são anéis de 5 a 14 membros tendo 1 a 12 átomos de carbono anulares e 1 a 6 heteroátomos anulares selecionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre, anéis de 5 a 10 membros tendo 1 a 8 átomos de carbono anulares e 1 a 4 heteroátomos anulares selecionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre, ou anéis de 5, 6 ou 7 membros tendo 1 a 5 átomos de carbono anulares e 1 a 4 heteroátomos anulares selecionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre. Em uma variação, grupos heteroarila particulares são anéis aromáticos monocíclicos de 5, 6 ou 7 membros tendo de 1 a 6 átomos de carbono anulares e 1 a 4 heteroátomos anulares independentemente selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre. Em outra variação, grupos heteroarila específicos são anéis aromáticos policíclicos com 1 a 12 átomos de carbono anulares e 1 a 6 heteroátomos anulares selecionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre. Um grupo heteroarila tendo mais de um anel onde pelo menos um anel é não aromático pode ser conectado à estrutura parental em uma posição de anel aromático ou em uma posição de anel não aromático. Em uma variação, um grupo heteroarila tendo mais de um anel onde pelo menos um anel é não aromático está conectado à estrutura parental em uma posição de anel aromático. Um grupo heteroarila pode ser conectado à estrutura parental em um átomo de carbono do anel ou um heteroátomo do anel.
[0023] "Heteroarileno", conforme usado neste documento, refere-se aos mesmos resíduos que heteroarila, mas com bivalência.
[0024] "Heterociclo", "heterocíclico" ou "heterociclila", conforme usado neste documento, refere-se a um grupo cíclico não aromático saturado ou insaturado tendo um único anel ou múltiplos anéis condensados e tendo de 1 a 14 átomos de carbono anulares e de 1 a 6 heteroátomos anulares, tais como nitrogênio, enxofre ou oxigênio e similares. Um heterociclo compreendendo mais de um anel pode ser fundido, em ponte ou espiro, ou qualquer combinação dos mesmos, mas exclui heteroarila. O grupo heterociclila pode ser opcionalmente substituído independentemente com um ou mais substituintes aqui descritos. Grupos heterocíclicos particulares são anéis de 3 a 14 membros tendo 1 a 13 átomos de carbono anulares e 1 a 6 heteroátomos anulares selecionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre, anéis de 3 a 12 membros tendo 1 a 11 átomos de carbono anulares e 1 a 6 heteroátomos anulares selecionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre, anéis de 3 a 10 membros tendo 1 a 9 átomos de carbono anulares e 1 a 4 heteroátomos anulares selecionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre, anéis de 3 a 8 membros tendo 1 a 7 átomos de carbono anulares e 1 a 4 heteroátomos anulares selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio e enxofre, ou anéis de 3 a 6 membros tendo 1 a 5 átomos de carbono anulares e 1 a 4 heteroátomos anulares selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio e enxofre. Em uma variação, heterociclila inclui anéis monocíclicos de 3, 4, 5, 6 ou 7 membros tendo de 1 a 2, 1 a 3, 1 a 4, 1 a 5 ou 1 a 6 átomos de carbono anulares e 1 a
2, 1 a 3 ou 1 a 4 heteroátomos anulares selecionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre. Em outra variação, heterociclila inclui anéis policíclicos não aromáticos tendo de 1 a 12 átomos de carbono anulares e 1 a 6 heteroátomos anulares selecionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre.
[0025] "Heterociclileno", conforme usado neste documento, refere- se aos mesmos resíduos que heterociclila, mas com bivalência.
[0026] "Halo" ou "halogênio" refere-se a elementos da série do Grupo 17 com número atômico 9 a 85. Grupos halo preferidos incluem os radicais de flúor, cloro, bromo e iodo. Quando um resíduo é substituído por mais de um halogênio, ele pode ser referido usando um prefixo correspondente ao número de porções de halogênio ligadas, por exemplo, di-haloarila, di-haloalquila, tri-haloarila etc. referem-se à arila e alquila substituídos por dois ("di") ou três ("tri") grupos halo, que podem ser, mas não são necessariamente o mesmo halogênio; assim, 4-cloro-3-fluorofenila está dentro do escopo de di-haloarila. Um grupo alquila no qual cada hidrogênio é substituído por um grupo halo é referido como um "perhaloalquila". Um grupo perhaloalquila preferido é trifluorometila (-CF3). Da mesma forma, "perhaloalcóxi" refere-se a um grupo alcóxi no qual um halogênio toma o lugar de cada H no hidrocarboneto que constitui a porção alquila do grupo alcóxi. Um exemplo de um grupo perhaloalcóxi é trifluorometóxi (–OCF3).
[0027] "Carbonila" refere-se ao grupo C=O.
[0028] "Tiocarbonila" refere-se ao grupo C=S.
[0029] "Oxo" refere-se à porção =O.
[0030] "Opcionalmente substituído", a menos que especificado de outra forma, significa que um grupo pode ser não substituído ou substituído por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4 ou 5) dos substituintes listados para esse grupo em que os substituintes podem ser o igual ou diferente. Em uma modalidade, um grupo opcionalmente substituído tem um substituinte. Em outra modalidade, um grupo opcionalmente substituído tem dois substituintes. Em outra modalidade, um grupo opcionalmente substituído tem três substituintes. Em outra modalidade, um grupo opcionalmente substituído tem quatro substituintes. Em algumas modalidades, um grupo opcionalmente substituído tem 1 a 2, 1 a 3, 1 a 4, 1 a 5, 2 a 3, 2 a 4 ou 2 a 5 substituintes. Em uma modalidade, um grupo opcionalmente substituído é não substituído.
[0031] A menos que claramente indicado de outra forma, "um indivíduo", conforme usado neste documento, se refere a um mamífero, incluindo, mas não se limitando a um primata, humano, bovino, cavalo, felino, canino ou roedor. Em uma variação, o indivíduo é um humano.
[0032] Conforme usado neste documento, "tratamento" ou "tratar" é uma abordagem para obter resultados benéficos ou desejados, incluindo resultados clínicos. Para os fins desta descrição, os resultados benéficos ou desejados incluem, mas não estão limitados a, um ou mais dos seguintes: diminuir mais um dos sintomas resultantes da doença, diminuir a extensão da doença, estabilizar a doença (por exemplo, prevenir ou retardar o agravamento da doença), prevenindo ou retardando a propagação da doença, retardando a ocorrência ou recorrência da doença, prevenindo ou retardando a progressão da doença, melhorando o estado da doença, proporcionando uma remissão (seja parcial ou total) da doença, diminuindo a dose de um ou mais medicamentos necessários para tratar a doença, aumentando o efeito de outro medicamento, retardando a progressão da doença, aumentando a qualidade de vida e/ou prolongando a sobrevida. Os métodos da presente descrição contemplam qualquer um ou mais desses aspectos de tratamento.
[0033] Conforme usado neste documento, o termo "quantidade eficaz" significa tal quantidade de um composto da invenção que deve ser eficaz em uma determinada forma terapêutica. Como é entendido na técnica, uma quantidade eficaz pode ser em uma ou mais doses, isto é, uma dose única ou doses múltiplas podem ser necessárias para atingir o ponto final de tratamento desejado. Uma quantidade eficaz pode ser considerada no contexto da administração de um ou mais agentes terapêuticos (por exemplo, um composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo), e um único agente pode ser considerado para ser dado em uma quantidade eficaz se, em conjunto com um ou mais outros agentes, um resultado desejável ou benéfico pode ser ou é alcançado. Doses adequadas de qualquer um dos compostos coadministrados podem ser opcionalmente reduzidas devido à ação combinada (por exemplo, efeitos aditivos ou sinérgicos) dos compostos.
[0034] Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se a uma quantidade de um composto ou sal do mesmo suficiente para produzir um resultado terapêutico desejado.
[0035] Tal como aqui utilizado, "forma de dosagem unitária" refere- se a unidades fisicamente discretas, adequadas como dosagens unitárias, cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de ingrediente ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o carreador farmacêutico necessário. As formas de dosagem unitária podem conter uma terapia única ou de combinação.
[0036] Tal como aqui utilizado, por "farmaceuticamente aceitável" ou "farmacologicamente aceitável" significa um material que não é biologicamente ou de outra forma indesejável, por exemplo, o material pode ser incorporado em uma composição farmacêutica administrada a um paciente sem causar quaisquer efeitos biológicos indesejáveis significativos ou interagindo de forma deletéria com qualquer um dos outros componentes da composição na qual está contido. Os carreadores ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis têm de preferência atendido aos padrões exigidos de testes toxicológicos e de fabricação e/ou estão incluídos no Guia de Ingredientes Inativos preparado pela U.S. Food and Drug Administration.
[0037] "Sais farmaceuticamente aceitáveis" são aqueles sais que retêm pelo menos parte da atividade biológica do composto livre (não sal) e que podem ser administrados como fármacos ou produtos farmacêuticos a um indivíduo. Tais sais, por exemplo, incluem: (1) sais de adição de ácido, formados com ácidos inorgânicos, tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e similares; ou formado com ácidos orgânicos, tais como ácido acético, ácido oxálico, ácido propiônico, ácido sucínico, ácido maleico, ácido tartárico e similares; (2) sais formados quando um próton ácido presente no composto original é substituído por um íon metálico, por exemplo, um íon de metal alcalino, um íon alcalino-terroso ou um íon de alumínio; ou coordena com uma base orgânica. As bases orgânicas aceitáveis incluem etanolamina, dietanolamina, trietanolamina e similares. As bases inorgânicas aceitáveis incluem hidróxido de alumínio, hidróxido de cálcio, hidróxido de potássio, carbonato de sódio, hidróxido de sódio e similares. Os sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados in situ no processo de fabricação, ou reagindo separadamente um composto purificado da presente descrição em sua forma de ácido ou base livre com uma base ou ácido orgânico ou inorgânico adequado, respectivamente, e isolando o sal assim formado durante purificação subsequente.
[0038] O termo "excipiente", conforme usado neste documento, significa uma substância inerte ou inativa que pode ser usada na produção de um medicamento ou produto farmacêutico, tal como um comprimido contendo um composto da presente descrição como um ingrediente ativo. Várias substâncias podem ser abrangidas pelo termo excipiente, incluindo, sem limitação, qualquer substância usada como aglutinante, desintegrante, revestimento, auxiliar de compressão/encapsulação, creme ou loção, lubrificante, soluções para administração parenteral, materiais para comprimidos mastigáveis, adoçante ou aromatizante, suspensão/agente gelificante ou agente de granulação úmida. Os aglutinantes incluem, por exemplo, carbômeros, povidona, goma xantana, etc.; os revestimentos incluem, por exemplo, acetato ftalato de celulose, etilcelulose, goma de gel, maltodextrina, revestimentos entéricos, etc.; auxiliares de compressão/encapsulação incluem, por exemplo, carbonato de cálcio, dextrose, frutose dc (dc = "diretamente compressível"), mel dc, lactose (anidrato ou mono-hidrato; opcionalmente em combinação com aspartame, celulose ou celulose microcristalina), amido dc, sacarose, etc.; desintegrantes incluem, por exemplo, croscarmelose de sódio, goma de gelano, glicolato de amido de sódio, etc.; cremes ou loções incluem, por exemplo, maltodextrina, carrageninas, etc.; lubrificantes incluem, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico, estearilfumarato de sódio, etc.; materiais para comprimidos mastigáveis incluem, por exemplo, dextrose, frutose dc, lactose (mono-hidrato, opcionalmente em combinação com aspartame ou celulose), etc.; os agentes de suspensão/gelificação incluem, por exemplo, carragenina, glicolato de amido sódico, goma xantana, etc.; adoçantes incluem, por exemplo, aspartame, dextrose, frutose dc, sorbitol, sacarose dc, etc.; e os agentes de granulação úmida incluem, por exemplo, carbonato de cálcio, maltodextrina, celulose microcristalina, etc..
[0039] Entende-se que os aspectos e modalidades aqui descritos como "compreendendo" incluem "consistindo em" e "consistindo essencialmente em" modalidades.
[0040] Quando uma composição é descrita como "consistindo essencialmente em" os componentes listados, a composição contém os componentes expressamente listados e pode conter outros componentes que não afetam substancialmente a doença ou condição a ser tratada, como vestígios de impurezas. No entanto, a composição não contém quaisquer outros componentes que afetem substancialmente a doença ou condição a ser tratada, exceto aqueles componentes expressamente listados; ou, se a composição contiver componentes extras diferentes daqueles listados que afetam substancialmente a doença ou condição a ser tratada, a composição não contém uma concentração ou quantidade suficiente desses componentes extras para afetar substancialmente a doença ou condição a ser tratada. Quando um método é descrito como "consistindo essencialmente em" as etapas listadas, o método contém as etapas listadas e pode conter outras etapas que não afetam substancialmente a doença ou condição a ser tratada, mas o método não contém quaisquer outras etapas que substancialmente afetam a doença ou condição a ser tratada além das etapas expressamente listadas.
[0041] Quando uma porção é indicada como substituída por "pelo menos um" substituinte, isso também abrange a descrição de exatamente um substituinte.
[0042] O termo "anticorpo" aqui é usado no sentido mais amplo e abrange várias estruturas de anticorpos, incluindo, mas não se limitando a anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos) e fragmentos de anticorpos, desde que exibam a atividade de ligação ao antígeno desejada.
[0043] Um "fragmento de anticorpo" refere-se a uma molécula diferente de um anticorpo intacto que compreende uma porção de um anticorpo intacto que se liga ao antígeno ao qual o anticorpo intacto se liga. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, mas não estão limitados a Fv, Fab, Fab′, Fab′-SH, F(ab′)2; diacorpos; anticorpos lineares; moléculas de anticorpo de cadeia simples (por exemplo, scFv); e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpos. Compostos
[0044] Em um aspecto, é fornecido um composto de fórmula (I): (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: X é N ou CR12; Y é uma ligação, NRa ou NRaNRa; contanto que: (a) quando X for N, então Y seja uma ligação ou NRa; e (b) quando X for CR12, então Y seja NRa ou NRaNRa; Z é uma ligação, C(=O), CR10R11, ou NRa; L1 é selecionado do grupo que consiste em *1-C(=O)- #1, *1-CH2-#1, *1-CH2CH2-#1, *1-CH2CH2CH2-#1, *1-OCH2C(=O)-#1, *1- OCH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH(OH)CH2- #1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1-OCH2CH2CH2-#1; em que *1 representa o ponto de ligação a R1 e #1 representa o ponto de ligação ao restante da molécula; L2 é selecionado do grupo que consiste em #2-C(=O)-*2, #2- CH2-*2, #2-CH2CH2-*2, #2-CH2CH2CH2-*2, #2-C(=O)CH2O-*2, #2- C(=O)CH2CH2O-*2, #2-C(=O)CH2CH2CH2O-*2, #2-CH2CH(OH)CH2O- *2, #2-CH2O-*2, #2-CH2CH2O-*2, e #2-CH2CH2CH2O-*2; em que *2 representa o ponto de ligação a R2 e #2 representa o ponto de ligação ao restante da molécula; R1 é selecionado do grupo que consiste em:
C6-C14 arila substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb; e heteroarila de 5 a 14 membros substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb; R2 é selecionado do grupo que consiste em: C6-C14 arila substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída um ou mais Rb; e heteroarila de 5 a 14 membros substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída um ou mais Rb; R3 é hidrogênio, halogênio, ou C1-C6 alquila; ou R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; R4, R5, R6, R7, R8, e R9, independentemente um do outro, são selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halogênio e C1-C6 alquila; R10 e R11, independentemente um do outro, são selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halogênio e C1-C6 alquila; R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; ou R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; R13 e R14, independentemente um do outro, são selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halogênio e C1-C6 alquila; Ra, independentemente em cada ocorrência, é hidrogênio ou C1-C6 alquila; Rb, independentemente em cada ocorrência, é selecionado do grupo que consiste em NO2, C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, C1-C6 haloalquila, OH, O(C1-C6 alquila), O(C1-C6 haloalquila), SH, S(C1-C6 alquila), S(C1-C6 haloalquila), NH2, NH(C1-C6 alquila), NH(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 alquil)2, N(C1-C6 haloalquil)2, NRcRd, CN, C(O)OH, C(O)O(C1-C6 alquila), C(O)O(C1-C6 haloalquila), C(O)NH2,
C(O)NH(C1-C6 alquila), C(O)NH(C1-C6 haloalquila), C(O)N(C1-C6 alquil)2, C(O)N(C1-C6 haloalquil)2, C(O)NR14-aR14-b, S(O)2OH, S(O)2O(C1-C6 alquila), S(O)2O(C1-C6 haloalquila), S(O)2NH2, S(O)2NH(C1-C6 alquila), S(O)2NH(C1-C6 haloalquila), S(O)2N(C1-C6 alquil)2, S(O)2N(C1-C6 haloalquil)2, S(O)2NRcRd,OC(O)H, OC(O)(C1-C6 alquila), OC(O)(C1-C6 haloalquila), N(H)C(O)H, N(H)C(O)(C1-C6 alquila), N(H)C(O)(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 alquil)C(O)H, N(C1-C6 alquil)C(O)(C1-C6 alquila), N(C1-C6 alquil)C(O)(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 haloalquil)C(O)H, N(C1- C6 haloalquil)C(O)(C1-C6 alquila), N(C1-C6 haloalquil)C(O)(C1-C6 haloalquila), OS(O)2(C1-C6 alquila), OS(O)2(C1-C6 haloalquila), N(H)S(O)2(C1-C6 alquila), N(H)S(O)2(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 alquil)S(O)2(C1-C6 alquila), N(C1-C6 alquil)S(O)2(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 haloalquil)S(O)2(C1-C6 alquila), e N(C1-C6 haloalquil)S(O)2(C1- C6 haloalquila), em que Rc e Rd são tomados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados para formar um heterociclo de 3 a 10 membros; e contanto que: (i) quando X for CR12, Y seja NRa, Z seja uma ligação, L1 seja *1-CH2-#1, e L2 seja #2-CH2-*2; então ou: (i-1) pelo menos um de R3, R4, e R5 é hidrogênio ou halogênio; ou (i-2) R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; (ii) quando X for CR12, Y seja NRa, Z seja uma ligação, e R3 e R12 são tomados juntos para formar CR13R14; então ou: (ii-1) L1 é selecionado do grupo que consiste em *1-C(=O)- #1, *1-CH2-#1, *1-CH2CH2-#1, *1-CH2CH2CH2-#1, *1-OCH2CH2C(=O)- #1, *1-OCH2CH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1-OCH2CH2CH2-#1; ou
(ii-2) L2 é selecionado do grupo que consiste em #2-C(=O)- *2, #2-CH2-*2, #2-CH2CH2-*2, #2-CH2CH2CH2-*2, #2-C(=O)CH2CH2O- *2, #2-C(=O)CH2CH2CH2O-*2, #2-CH2CH(OH)CH2O-*2, #2-CH2O-*2, #2-CH2CH2O-*2, e #2-CH2CH2CH2O-*2; e (iii) quando X for N e Y for uma ligação; então: L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1- OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1-OCH2CH2CH2- #1; e também, contanto que, quando Z for CR10R11, então pelo menos um de R1 e R2 seja substituído por dois ou mais grupos halo.
[0045] Em algumas modalidades do composto de fórmula (I), X é N. Em algumas modalidades, X é CR12.
[0046] Em algumas modalidades, Y é uma ligação. Em algumas modalidades, Y é NRa. Em algumas modalidades, Y é NRa, em que Ra é hidrogênio. Em algumas modalidades, Y é NRa, em que Ra é C1-C6 alquila, tais como, metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila, ou sec-butila. Em algumas modalidades, Y é NRaNRa. Em algumas modalidades, Y é N(C1-C6 alquil)NH. Em algumas modalidades, Y é N(H)N(C1-C6 alquila). Em algumas modalidades, Y é N(C1-C6 alquil)N(C1-C6 alquila). Em algumas modalidades, Y é NHNH.
[0047] Em algumas modalidades, Z é uma ligação. Em algumas modalidades, Z é CR10R11. Em algumas modalidades, Z é NRa. Em algumas modalidades, Z é NRa, em que Ra é hidrogênio. Em algumas modalidades, Z é NRa, em que Ra é C1-C6 alquila, tais como, metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila, ou sec-butila. Em algumas modalidades, Z é C(=O).
[0048] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (II):
(II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R12, Ra, L1, L2, Y, e Z são como definidos nos compostos de fórmula (I), contanto que: (i) quando Y for NRa, Z seja uma ligação, L1 seja *1-CH2- #1, e L2 seja #2-CH2-*2; então ou: (i-1) pelo menos um de R3, R4, e R5 seja hidrogênio ou halogênio; ou (i-2) R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; e (ii) quando Y for NRa, Z seja uma ligação, e R3 e R12 são tomados juntos para formar CR13R14; então ou: (ii-1) L1 é selecionado do grupo que consiste em *1-C(=O)- #1, *1-CH2-#1, *1-CH2CH2-#1, *1-CH2CH2CH2-#1, *1-OCH2CH2C(=O)- #1, *1-OCH2CH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1-OCH2CH2CH2-#1; ou (ii-2) L2 é selecionado do grupo que consiste em #2-C(=O)- *2, #2-CH2-*2, #2-CH2CH2-*2, #2-CH2CH2CH2-*2, #2- C(=O)CH2CH2O-*2, #2-C(=O)CH2CH2CH2O-*2, #2- CH2CH(OH)CH2O-*2, #2-CH2O-*2, #2-CH2CH2O-*2, e #2- CH2CH2CH2O-*2.
[0049] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (IV):
(IV), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R12, Ra, L1, L2, e Z são como definidos nos compostos de fórmula (I), contanto que: (i) quando Z for uma ligação, L1 seja *1-CH2-#1, e L2 seja #2-CH2-*2; então ou: (i-1) pelo menos um de R3, R4, e R5 seja hidrogênio ou halogênio; ou (i-2) R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; e (ii) quando Z for uma ligação, e R3 e R12 sejam tomados juntos para formar CR13R14; então ou: (ii-1) L1 é selecionado do grupo que consiste em *1-C(=O)- #1, *1-CH2-#1, *1-CH2CH2-#1, *1-CH2CH2CH2-#1, *1-OCH2CH2C(=O)- #1, *1-OCH2CH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1-OCH2CH2CH2-#1; ou (ii-2) L2 é selecionado do grupo que consiste em #2-C(=O)- *2, #2-CH2-*2, #2-CH2CH2-*2, #2-CH2CH2CH2-*2, #2-C(=O)CH2CH2O- *2, #2-C(=O)CH2CH2CH2O-*2, #2-CH2CH(OH)CH2O-*2, #2-CH2O-*2, #2-CH2CH2O-*2, e #2-CH2CH2CH2O-*2.
[0050] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (IV-a):
(IV-a), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R3 é hidrogênio, halogênio, ou C1-C6 alquila; R12 é hidrogênio, halogênio, ou C1-C6 alquila; e contanto que quando L1 for *1-CH2-#1, e L2 for #2-CH2-*2; em seguida pelo menos um de R3, R4, e R5 seja hidrogênio ou halogênio; e R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0051] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (IV-b) (IV-b), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R13, R14, Ra, L1 e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0052] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (IV-c)
(IV-c), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R3 é hidrogênio, halogênio, ou C1-C6 alquila; R12 é hidrogênio, halogênio, ou C1-C6 alquila; e R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0053] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (IV-d) (IV-d), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R13, R14, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0054] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (IV-e)
(IV-e), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0055] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (IV-f) (IV-f), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R13, R14, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0056] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (IV-g)
(IV-g), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0057] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (IV-h) (IV-h), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R13, R14, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0058] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (V)
(V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R12, Ra, Z, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0059] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (V-a) (V-a), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0060] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (V-b)
(V-b), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R13, R14, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0061] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (V-c) (V-c), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0062] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (V-d)
(V-d), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R13, R14, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0063] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (V-e) (V-e), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0064] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (V-f)
(V-f), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R13, R14, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0065] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (III) (III), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Ra, Y, Z, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I), contanto que quando Y for uma ligação; então: L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1- OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1- OCH2CH2CH2-#1; e também contanto que, quando Z for CR10R11, então pelo menos um de R1 e R2 seja substituído por dois ou mais grupos halo.
[0066] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (VI)
(VI), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Ra, Z, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I), contanto que L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1- OCH2CH2CH2-#1; e também contanto que, quando Z for CR10R11, então pelo menos um de R1 e R2 seja substituído por dois ou mais grupos halo.
[0067] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (VI-a) (VI-a), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I), contanto que L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1- OCH2CH2CH2-#1.
[0068] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (VI-b) (VI-b), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I), contanto que L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1- OCH2CH2CH2-#1.
[0069] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (VI-c) (VI-c), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I), contanto que L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1- OCH2CH2CH2-#1; e pelo menos um de R1 e R2 seja substituído por dois ou mais grupos halo.
[0070] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (VI-d) (VI-d), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I), contanto que L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1- OCH2CH2CH2-#1.
[0071] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (VII) (VII), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Ra, Z, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0072] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (VII-a)
(VII-a), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0073] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (VII-b) (VII-b), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0074] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (VII-c) (VII-c),
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0075] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de fórmula (VII-d) (VII-d), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Ra, L1, e L2 são como definidos nos compostos de fórmula (I).
[0076] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c), e (VII-d), R3 é hidrogênio. Em algumas modalidades, R3 é halogênio, tais como, flúor, cloro, bromo ou iodo. Em algumas modalidades, R3 é C1-C6 alquila, tais como, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila. Em algumas modalidades, R3 é hidrogênio, flúor, cloro, bromo, iodo, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila, ou sec-butila. Em algumas modalidades, R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14.
[0077] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c), e (VII-d), R4 é hidrogênio. Em algumas modalidades, R4 é halogênio, tais como, flúor, cloro, bromo ou iodo. Em algumas modalidades, R4 é C1-C6 alquila, tais como, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila, ou sec-butila. Em algumas modalidades, R4 é hidrogênio, flúor, cloro, bromo, iodo, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila.
[0078] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c) e (VII-d), R5 é hidrogênio. Em algumas modalidades, R5 é halogênio, tais como, flúor, cloro, bromo ou iodo. Em algumas modalidades, R5 é C1-C6 alquila, tais como, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila. Em algumas modalidades, R5 é hidrogênio, flúor, cloro, bromo, iodo, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila.
[0079] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c), e (VII-d), R6 é hidrogênio. Em algumas modalidades, R6 é halogênio, tais como, flúor, cloro, bromo ou iodo. Em algumas modalidades, R6 é C1-C6 alquila, tais como, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila. Em algumas modalidades, R6 é hidrogênio, flúor, cloro, bromo, iodo, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila.
[0080] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c), e (VII-d), R7 é hidrogênio. Em algumas modalidades, R7 é halogênio, tais como, flúor, cloro, bromo ou iodo. Em algumas modalidades, R7 é C1-C6 alquila, tais como, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila. Em algumas modalidades, R7 é hidrogênio, flúor, cloro, bromo, iodo, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila.
[0081] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c) e (VII-d), R8 é hidrogênio. Em algumas modalidades, R8 é halogênio, tais como, flúor, cloro, bromo ou iodo. Em algumas modalidades, R8 é C1-C6 alquila, tais como, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila. Em algumas modalidades, R8 é hidrogênio, flúor, cloro, bromo, iodo, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila.
[0082] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c) e (VII-d), R9 é hidrogênio. Em algumas modalidades, R9 é halogênio, tais como, flúor, cloro, bromo ou iodo. Em algumas modalidades, R9 é C1-C6 alquila, tais como, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila. Em algumas modalidades, R9 é hidrogênio, flúor, cloro, bromo, iodo, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila.
[0083] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c), e (VII-d), R3, R4, R5, R6, R7, R8 e R9 são todos hidrogênio. Em algumas modalidades, R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; e R4, R5, R6, R7, R8, e R9 são todos hidrogênio. Em algumas modalidades, pelo menos 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 de R3, R4, R5, R6, R7, R8, e R9 são hidrogênio. Em algumas modalidades, R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; e pelo menos 1, 2, 3, 4, ou 5 de R4, R5, R6, R7, R8 e R9 são todos hidrogênio.
[0084] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c) e (VII-d), R10 é hidrogênio. Em algumas modalidades, R10 é halogênio, tais como, flúor, cloro, bromo ou iodo. Em algumas modalidades, R10 é C1-C6 alquila, tais como, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila. Em algumas modalidades, R10 é hidrogênio, flúor, cloro, bromo, iodo, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila.
[0085] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c) e (VII-d), R11 é hidrogênio. Em algumas modalidades, R11 é halogênio, tais como, flúor, cloro, bromo ou iodo. Em algumas modalidades, R11 é C1-C6 alquila, tais como, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila. Em algumas modalidades, R11 é hidrogênio, flúor, cloro, bromo, iodo, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila. Em algumas modalidades, R10 e R11 são ambos hidrogênio.
[0086] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V-a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII- a), (VII-b), (VII-c) e (VII-d), R12 é hidrogênio. Em algumas modalidades, R12 é halogênio, tais como, flúor, cloro, bromo ou iodo. Em algumas modalidades, R12 é C1-C6 alquila, tais como, metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila. Em algumas modalidades, R12 é hidrogênio, flúor, cloro, bromo, iodo, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila. Em algumas modalidades, R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14. Em algumas modalidades do composto de fórmula (I), R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 e R12 são todos hidrogênio.
[0087] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c) e (VII-d), R13 é hidrogênio. Em algumas modalidades, R13 é halogênio, tais como, flúor, cloro, bromo ou iodo. Em algumas modalidades, R13 é C1-C6 alquila, tais como, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila. Em algumas modalidades, R13 é hidrogênio, flúor, cloro, bromo, iodo, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila.
[0088] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V-a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII- a), (VII-b), (VII-c), e (VII-d), R14 é hidrogênio. Em algumas modalidades, R14 é halogênio, tais como, flúor, cloro, bromo ou iodo. Em algumas modalidades, R14 é C1-C6 alquila, tais como, metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila. Em algumas modalidades, R14 é hidrogênio, flúor, cloro, bromo, iodo, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila. Em algumas modalidades, R13 e R14 são ambos hidrogênio. Em algumas modalidades, R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; e R4, R5, R6, R7, R8, R9, R13 e R14 são todos hidrogênio.
[0089] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V-a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII- a), (VII-b), (VII-c) e (VII-d), Ra, em cada ocorrência, é hidrogênio. Em algumas modalidades, pelo menos 1, 2 ou 3 Ra é hidrogênio. Em algumas modalidades, Ra, independentemente em cada ocorrência, é C1-C6 alquila, tais como, metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, t- butila, isobutila ou sec-butila. Em algumas modalidades, Ra , independentemente em cada ocorrência, é hidrogênio, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila ou sec-butila.
[0090] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c), e (VII-d), L1 é *1-C(=O)- #1. Em algumas modalidades, L1 é *1-CH2-#1. Em algumas modalidades, L1 é *1- CH2CH2-#1. Em algumas modalidades, L1 é *1-CH2CH2CH2-#1. Em algumas modalidades, L1 é *1-OCH2C(=O)-#1. Em algumas modalidades, L1 é *1-OCH2CH2C(=O)-#1. Em algumas modalidades, L1 é *1-OCH2CH2CH2C(=O)-#1. Em algumas modalidades, L1 é *1- OCH2CH(OH)CH2-#1. Em algumas modalidades, L1 é *1-OCH2-#1. Em algumas modalidades, L1 é *1-OCH2CH2-#1. Em algumas modalidades, L1 é *1-OCH2CH2CH2-#1. Como fornecido aqui, *1 representa o ponto de ligação a R1 e #1 representa o ponto de ligação ao restante da molécula.
[0091] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c), e (VII-d), L2 é #2-C(=O)-*2. Em algumas modalidades, L2 é #2-CH2-*2. Em algumas modalidades, L2 é #2- CH2CH2-*2. Em algumas modalidades, L2 é #2-CH2CH2CH2-*2. Em algumas modalidades, L2 é #2-C(=O)CH2O-*2. Em algumas modalidades, L2 é #2-C(=O)CH2CH2O-*2. Em algumas modalidades, L2 é #2-C(=O)CH2CH2CH2O-*2. Em algumas modalidades, L2 é #2- CH2CH(OH)CH2O-*2. Em algumas modalidades, L2 é #2-CH2O-*2. Em algumas modalidades, L2 é #2-CH2CH2O-*2. Em algumas modalidades, L2 é #2-CH2CH2CH2O-*2. Como fornecido aqui, *2 representa o ponto de ligação a R2 e #2 representa o ponto de ligação ao restante da molécula.
[0092] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V-
a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c) e (VII-d), R1 é C6-C14 arila substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb. Em algumas modalidades, a C6-C14 arila de R1 é fenila. Em algumas modalidades, a C6-C14 arila de R1 é C6-C14 arila bicíclica. Em algumas modalidades, R1 é C6-C14 arila substituída com um ou mais grupos halo. Em algumas modalidades, R1 é C6-C14 arila substituída com 1 grupo halo, tais como, flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R1 é C6-C14 arila substituída com 2 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R1 é C6-C14 arila substituída com 3 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R1 é fenila substituída com um ou mais grupos halo. Em algumas modalidades, R1 é fenila substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb. Em algumas modalidades, R1 é fenila substituída com 1 grupo halo, tais como, flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R1 é fenila substituída com 2 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R1 é fenila substituída com 3 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R1 é C6-C14 arila bicíclica substituída com um ou mais grupos halo. Em algumas modalidades, R1 é C6-C14 arila bicíclica substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb. Em algumas modalidades, R1 é C6-C14 arila bicíclica substituída com 1 grupo halo, tais como, flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R1 é C6-C14 arila bicíclica substituída com 2 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R1 é C6-C14 arila bicíclica substituída com 3 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo.
[0093] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II),
(III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c) e (VII-d), R1 é heteroarila de 5 a 14 membros substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb.
Em algumas modalidades, a heteroarila de 5 a 14 membros de R1 é heteroarila de 5 a 14 membros monocíclica.
Em algumas modalidades, a heteroarila de 5 a 14 membros de R1 é heteroarila de 5 a 14 membros bicíclica.
Em algumas modalidades, R1 é heteroarila de 5 a 14 membros substituída com um ou mais grupos halo.
Em algumas modalidades, R1 é heteroarila de 5 a 14 membros substituída com 1 grupo halo, tais como, flúor, cloro ou bromo.
Em algumas modalidades, R1 é heteroarila de 5 a 14 membros substituída com 2 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo.
Em algumas modalidades, R1 é heteroarila de 5 a 14 membros substituída com 3 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo.
Em algumas modalidades, R1 é heteroarila de 5 a 14 membros monocíclica substituída com um ou mais grupos halo.
Em algumas modalidades, R1 é heteroarila de 5 a 14 membros monocíclica substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb.
Em algumas modalidades, R1 é heteroarila de 5 a 14 membros monocíclica substituída com 1 grupo halo, tais como, flúor, cloro ou bromo.
Em algumas modalidades, R1 é heteroarila de 5 a 14 membros monocíclica substituída com 2 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo.
Em algumas modalidades, R1 é heteroarila de 5 a 14 membros monocíclica substituída com 3 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo.
Em algumas modalidades, R1 é heteroarila de 5 a 14 membros bicíclica substituída com um ou mais grupos halo.
Em algumas modalidades, R1 é heteroarila de 5 a 14 membros bicíclica substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb.
Em algumas modalidades, R1 é heteroarila de 5 a 14 membros bicíclica substituída com 1 grupo halo, tais como, flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R1 é heteroarila de 5 a 14 membros bicíclica substituída com 2 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R1 é heteroarila de 5 a 14 membros bicíclica substituída com 3 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo.
[0094] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c), e (VII-d), R1 é um substituinte selecionado do grupo consistindo em: (R1-a), e (R1-b), em que: * representa o ponto de ligação ao restante da molécula; W1 é selecionado do grupo que consiste em -C(RW1-1RW1-2)-, -N(RW1-2)-, -C(RW1-1RW1-2)N(RW1-2)-, -N(RW1-2)C(RW1-1RW1-2)-, -C(RW1-2)=N-, -N=C(RW1-2)-, -O-, -C(RW1-1RW1-2)O-, -OC(RW1-1RW1-2) -, -S-, -C(RW1-1RW1- 2 )S-, -SC(RW1-1RW1-2) - e -CRW1-1=CRW1-2-, em que RW1-1 é H, R15, ou Rb, e RW1-2 é H, R15 ou Rb; W2 é selecionado do grupo que consiste em -C(RW2-1RW2-2)-, -N(RW2-2)-, -C(RW2-1RW2-2)N(RW2-2)-, -N(RW2-2)C(RW2-1RW2-2)-, -C(RW2-2)=N-, -N=C(RW2-2)-,-O-, -C(RW2-1RW2-2)O-, -OC(RW2-1RW2-2)-, -S-, -C(RW2-1RW2-2)S-, -SC(RW2-1RW2-2)- e -CRW2-1=CRW2-2-, em que RW2-1 é H, R15, ou Rb, e RW2-2 é H, R15 ou Rb; W3, independentemente em cada ocorrência, é CRW3 ou N, em que RW3 é H, R15 ou Rb;
R15 é halogênio; p1 é 1, 2, 3 ou 4; Rb, independentemente em cada ocorrência, é selecionado do grupo que consiste em NO2, C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, C1-C6 haloalquila, OH, O(C1-C6 alquila), O(C1-C6 haloalquila), SH, S(C1-C6 alquila), S(C1-C6 haloalquila), NH2, NH(C1-C6 alquila), NH(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 alquil)2, N(C1-C6 haloalquil)2, NRcRd, CN, C(O)OH, C(O)O(C1-C6 alquila), C(O)O(C1-C6 haloalquila), C(O)NH2, C(O)NH(C1-C6 alquila), C(O)NH(C1-C6 haloalquila), C(O)N(C1-C6 alquil)2, C(O)N(C1-C6 haloalquil)2, C(O)NR14-aR14-b, S(O)2OH, S(O)2O(C1-C6 alquila), S(O)2O(C1-C6 haloalquila), S(O)2NH2, S(O)2NH(C1-C6 alquila), S(O)2NH(C1-C6 haloalquila), S(O)2N(C1-C6 alquil)2, S(O)2N(C1-C6 haloalquil)2, S(O)2NRcRd,OC(O)H, OC(O)(C1-C6 alquila), OC(O)(C1-C6 haloalquila), N(H)C(O)H, N(H)C(O)(C1-C6 alquila), N(H)C(O)(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 alquil)C(O)H, N(C1-C6 alquil)C(O)(C1-C6 alquila), N(C1-C6 alquil)C(O)(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 haloalquil)C(O)H, N(C1- C6 haloalquil)C(O)(C1-C6 alquila), N(C1-C6 haloalquil)C(O)(C1-C6 haloalquila), OS(O)2(C1-C6 alquila), OS(O)2(C1-C6 haloalquila), N(H)S(O)2(C1-C6 alquila), N(H)S(O)2(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 alquil)S(O)2(C1-C6 alquila), N(C1-C6 alquil)S(O)2(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 haloalquil)S(O)2(C1-C6 alquila) e N(C1-C6 haloalquil)S(O)2(C1- C6 haloalquila), em que Rc e Rd são tomados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados para formar um heterociclo de 3 a 10 membros; q1 é 0, 1, 2, 3 ou 4; e R16 é hidrogênio, R15, ou Rb, ou R16 e RW1-2 são tomados juntos para formar uma ligação dupla entre o átomo de carbono transportando R16 e W1, ou R16 e RW2-2 são tomados juntos para formar uma ligação dupla entre o átomo de carbono transportando R16 e W2.
[0095] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c) e (VII-d), R1 é um substituinte selecionado do grupo consistindo em: ; ; ; ; e .
[0096] Em algumas modalidades do substituinte de fórmula (R1-a) ou fórmula (R1-b) ou qualquer fórmula relacionada, R15 é flúor ou cloro. Em algumas modalidades, p1 é 1. Em algumas modalidades, p1 é 2. Em algumas modalidades, p1 é 3. Em algumas modalidades, p1 é 4. Em algumas modalidades, q1 é 0. Em algumas modalidades, q1 é 1. Em algumas modalidades, q1 é 2. Em algumas modalidades, q1 é 3. Em algumas modalidades, q1 é 4. Em algumas modalidades, p1 é 1 e q1 é 0. Em algumas modalidades, p1 é 2 e q1 é 0.
[0097] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V-
a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c), e (VII-d), R1 é um substituinte selecionado do grupo consistindo em:
; ;
; ;
; e . Em algumas modalidades, R1 é . Em algumas modalidades, R1 é
. Em algumas modalidades, R1 é
. Em algumas modalidades, R1 é
. Em algumas modalidades, R1 é
. Em algumas modalidades, R1 é
.
[0098] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c), e (VII-d), R2 é C6-C14 arila substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb. Em algumas modalidades, a C6-C14 arila de R2 é fenila. Em algumas modalidades, a C6-C14 arila de R2 é C6-C14 arila bicíclica. Em algumas modalidades, R2 é C6-C14 arila substituída com um ou mais grupos halo. Em algumas modalidades, R2 é C6-C14 arila substituída com 1 grupo halo, tais como, flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R2 é C6-C14 arila substituída com 2 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R2 é C6-C14 arila substituída com 3 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R2 é fenila substituída com um ou mais grupos halo. Em algumas modalidades, R2 é fenila substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb. Em algumas modalidades, R2 é fenila substituída com 1 grupo halo, tais como, flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R2 é fenila substituída com 2 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R2 é fenila substituída com 3 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R2 é C6-C14 arila bicíclica substituída com um ou mais grupos halo. Em algumas modalidades, R2 é C6-C14 arila bicíclica substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb. Em algumas modalidades, R2 é C6-C14 arila bicíclica substituída com 1 grupo halo, tais como, flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R2 é C6-C14 arila bicíclica substituída com 2 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R2 é C6-C14 arila bicíclica substituída com 3 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo.
[0099] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c), e (VII-d), R2 é heteroarila de 5 a 14 membros substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb. Em algumas modalidades, a heteroarila de 5 a 14 membros de R2 é heteroarila de 5 a 14 membros monocíclica. Em algumas modalidades, a heteroarila de 5 a 14 membros de R2 é heteroarila bicíclica de 5 a 14 membros. Em algumas modalidades, R2 é heteroarila de 5 a 14 membros substituída com um ou mais grupos halo. Em algumas modalidades, R2 é heteroarila de 5 a 14 membros substituída com 1 grupo halo, tais como, flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R2 é heteroarila de 5 a 14 membros substituída com 2 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R2 é heteroarila de 5 a 14 membros substituída com 3 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R2 é heteroarila de 5 a 14 membros monocíclica substituída com um ou mais grupos halo. Em algumas modalidades, R2 é heteroarila de 5 a 14 membros monocíclica substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb. Em algumas modalidades, R2 é heteroarila de 5 a 14 membros monocíclica substituída com 1 grupo halo, tais como, flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R2 é heteroarila de 5 a 14 membros monocíclica substituída com 2 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R2 é heteroarila de 5 a 14 membros monocíclica substituída com 3 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R2 é heteroarila de 5 a 14 membros bicíclica substituída com um ou mais grupos halo. Em algumas modalidades, R2 é heteroarila de 5 a 14 membros bicíclica substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb. Em algumas modalidades, R2 é heteroarila de 5 a 14 membros bicíclica substituída com 1 grupo halo, tais como, flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R2 é heteroarila de 5 a 14 membros bicíclica substituída com 2 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo. Em algumas modalidades, R2 é heteroarila de 5 a 14 membros bicíclica substituída com 3 grupos halo, cada dos quais é independentemente flúor, cloro ou bromo.
[00100] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c), e (VII-d), R2 é um substituinte selecionado do grupo consistindo em: (R2-a), e (R2-b), em que: * representa o ponto de ligação ao restante da molécula; W4 é selecionado do grupo que consiste em -C(RW4-1RW4-2)-, -N(RW4-2)-, -C(RW4-1RW4-2)N(RW4-2)-, -N(RW4-2)C(RW4-1RW4-2)-, -C(RW4-2)=N-, -N=C(RW4-2)-, -O-, -C(RW4-1RW4-2)O-, -OC(RW4-1RW4-2)-, -S-, -C(RW4-1RW4-2)S-, -SC(RW4-1RW4-2)- e -CRW4-1=CRW4-2-, em que RW4-1 é H, R17, ou Rb, e RW4-2 é H, R17 ou Rb; W5 é selecionado do grupo que consiste em -C(RW5-1RW5-2)-,
-N(RW5-2)-, -C(RW5-1RW5-2)N(RW5-2)-, -N(RW5-2)C(RW5-1RW5-2)-, -C(RW5-2)=N-, -N=C(RW5-2)-, -O-, -C(RW5-1RW5-2)O-, -OC(RW5-1RW5-2)-, -S-, -C(RW5-1RW5-2)S-, -SC(RW5-1RW5-2)- e -CRW5-1=CRW5-2-, em que RW5-1 é H, R17, ou Rb, e RW5-2 é H, R17 ou Rb; W6, independentemente em cada ocorrência, é CRW6 ou N, em que RW6 é H, R17,ou Rb; R17 é halogênio; p2 é 1, 2, 3, ou 4; Rb, independentemente em cada ocorrência, é selecionado do grupo que consiste em NO2, C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, C1-C6 haloalquila, OH, O(C1-C6 alquila), O(C1-C6 haloalquila), SH, S(C1-C6 alquila), S(C1-C6 haloalquila), NH2, NH(C1-C6 alquila), NH(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 alquil)2, N(C1-C6 haloalquil)2, NRcRd, CN, C(O)OH, C(O)O(C1-C6 alquila), C(O)O(C1-C6 haloalquila), C(O)NH2, C(O)NH(C1-C6 alquila), C(O)NH(C1-C6 haloalquila), C(O)N(C1-C6 alquil)2, C(O)N(C1-C6 haloalquil)2, C(O)NR14-aR14-b, S(O)2OH, S(O)2O(C1-C6 alquila), S(O)2O(C1-C6 haloalquila), S(O)2NH2, S(O)2NH(C1-C6 alquila), S(O)2NH(C1-C6 haloalquila), S(O)2N(C1-C6 alquil)2, S(O)2N(C1-C6 haloal- quil)2, S(O)2NRcRd,OC(O)H, OC(O)(C1-C6 alquila), OC(O)(C1-C6 haloalquila), N(H)C(O)H, N(H)C(O)(C1-C6 alquila), N(H)C(O)(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 alquil)C(O)H, N(C1-C6 alquil)C(O)(C1-C6 alquila), N(C1-C6 alquil)C(O)(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 haloalquil)C(O)H, N(C1- C6 haloalquil)C(O)(C1-C6 alquila), N(C1-C6 haloalquil)C(O)(C1-C6 haloal- quila), OS(O)2(C1-C6 alquila), OS(O)2(C1-C6 haloalquila), N(H)S(O)2(C1- C6 alquila), N(H)S(O)2(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 alquil)S(O)2(C1-C6 alquila), N(C1-C6 alquil)S(O)2(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 haloal- quil)S(O)2(C1-C6 alquila) e N(C1-C6 haloalquil)S(O)2(C1-C6 haloalquila), em que Rc e Rd são tomados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados para formar um heterociclo de 3 a 10 membros;
q2 é 0, 1, 2, 3, ou 4; e R18 é hidrogênio, R17, ou Rb, ou R18 e RW4-2 são tomados juntos para formar uma ligação dupla entre o átomo de carbono transportando R18 e W4, ou R18 e RW5-2 são tomados juntos para formar uma ligação dupla entre o átomo de carbono transportando R18 e W5.
[00101] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c) e (VII-d), R2 é um substituinte selecionado do grupo consistindo em: ; ; ; ; e .
[00102] Em algumas modalidades do substituinte de fórmula (R2-a) ou fórmula (R2-b) ou qualquer fórmula relacionada, R17 é flúor ou cloro. Em algumas modalidades, p2 é 1. Em algumas modalidades, p2 é 2. Em algumas modalidades, p2 é 3. Em algumas modalidades, p2 é 4. Em algumas modalidades, q2 é 0. Em algumas modalidades, q2 é 1.
Em algumas modalidades, q2 é 2. Em algumas modalidades, q2 é 3. Em algumas modalidades, q2 é 4. Em algumas modalidades, p2 é 1 e q2 é 0. Em algumas modalidades, p2 é 2 e q2 é 0.
[00103] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c) e (VII-d), R2 é um substituinte selecionado do grupo consistindo em: ; ; ; ; ; e . Em algumas modalidades, R2 é . Em algumas modalidades, R2 é . Em algumas modalidades, R2 é . Em algumas modalidades, R2 é
. Em algumas modalidades, R2 é . Em algumas modalidades, R2 é .
[00104] Em algumas modalidades do composto de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V- a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c), e (VII-d), o composto tem pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 das seguintes características: (a) R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, e R12 são todos hidrogênio; (b) R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14, em que R13 e R14 são ambos hidrogênio, e R4, R5, R6, R7, R8, e R9 são todos hidrogênio; (c) Ra, em cada ocorrência, é hidrogênio; (d) R10 e R11 são ambos hidrogênio; (e) L1 é selecionado do grupo que consiste em *1-C(=O)- #1, *1-CH2-#1, *1-CH2CH2-#1, *1-CH2CH2CH2-#1, *1-OCH2C(=O)-#1, *1- OCH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1 e *1-OCH2CH2CH2-#1, em que *1 representa o ponto de ligação a R1 e #1 representa o ponto de ligação ao restante da molécula; (f) L2 é selecionado do grupo que consiste em #2-C(=O)- *2, #2-CH2-*2, #2-CH2CH2-*2, #2-CH2CH2CH2-*2, #2-C(=O)CH2O-*2, #2-C(=O)CH2CH2O-*2, #2-C(=O)CH2CH2CH2O-*2, #2-CH2CH(OH)CH2O-
*2, #2-CH2O-*2, #2-CH2CH2O-*2 e #2-CH2CH2CH2O-*2, em que *2 representa o ponto de ligação a R2 e #2 representa o ponto de ligação ao restante da molécula; (g) R1 é um substituinte selecionado do grupo consistindo em:
(R1-a), e (R1-b); (h) R1 é um substituinte selecionado do grupo consistindo em:
, ,
, , e
; (i) R1 é um substituinte selecionado do grupo consistindo em:
, , ,
, , e
; (j) R2 é um substituinte selecionado do grupo consistindo em:
(R2-a), e (R2-b); (k) R2 é um substituinte selecionado do grupo consistindo em:
, ,
, , e
; (l) R2 é um substituinte selecionado do grupo consistindo em: , , , , ,e .
[00105] Nas descrições aqui, entende-se que cada descrição, variação, modalidade ou aspecto de uma porção pode ser combinado com toda descrição, variação, modalidade ou aspecto de outras porções da mesma forma como se cada combinação de descrições fosse especificamente e individualmente listados. Por exemplo, cada descrição, variação, modalidade ou aspecto fornecido neste documento com respeito a X da fórmula (I) pode ser combinado com cada descrição, variação, modalidade ou aspecto de R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, Ra, L1, L2, Y e Z do mesmo como se cada combinação fosse específica e individualmente listada. É também entendido que todas as descrições, variações, modalidades ou aspectos da fórmula (I), quando aplicável, se aplicam igualmente a outras fórmulas detalhadas neste documento e são igualmente descritas, o mesmo como se cada descrição, variação, modalidade ou aspecto fosse listados separadamente e individualmente para todas as fórmulas. Por exemplo, todas as descrições, variações, modalidades ou aspectos da fórmula (I), quando aplicável, se aplicam igualmente a qualquer uma das fórmulas (II), (III), (IV), (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV- e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (V), (V-a), (V-b), (V-c), (V-d), (V-e), (V-f), (VI), (VI-a), (VI-b), (VI-c), (VI-d), (VII), (VII-a), (VII-b), (VII-c) e (VII-d), conforme detalhado neste documento, e são igualmente descritos, o mesmo como se toda e qualquer descrição, variação, modalidade ou aspecto fosse listado separadamente e individualmente para todas as fórmulas.
[00106] Também são fornecidos sais de compostos aqui referidos, tais como sais farmaceuticamente aceitáveis. A presente descrição também inclui qualquer uma ou todas as formas estereoquímicas, incluindo quaisquer formas enantioméricas ou diastereoméricas e quais- quer tautômeros ou outras formas dos compostos descritos. Assim, se uma forma estereoquímica particular, tal como uma forma enantiomérica específica ou forma diastereomérica, é representada para um determina- do composto, então entende-se que qualquer ou todas as formas estereoquímicas, incluindo quaisquer formas enantioméricas ou diaste- reoméricas, e quaisquer tautômeros ou outras formas de qualquer um desse mesmo composto são aqui descritos e abrangidos pela invenção.
[00107] Um composto conforme detalhado neste documento pode, em um aspecto, estar em uma forma purificada e composições compreendendo um composto em formas purificadas são detalhadas neste documento. São fornecidas composições compreendendo um composto conforme detalhado neste documento ou um sal do mesmo, tais como composições de compostos substancialmente puros. Em algumas modalidades, uma composição contendo um composto conforme detalhado neste documento ou um sal do mesmo está em forma substancialmente pura. A menos que indicado de outra forma, "substancialmente puro" significa uma composição que não contém mais de 35% de impureza, em que a impureza denota um composto diferente do composto que compreende a maioria da composição ou um sal do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecida uma composição de composto substancialmente puro ou um sal do mesmo, em que a composição não contém mais do que 25%, 20%, 15%, 10% ou 5% de impureza. Em algumas modalidades, é fornecida uma composição de composto substancialmente puro ou um sal do mesmo, em que a composição contém ou não mais do que 3%, 2%, 1% ou 0,5% de impureza.
[00108] Em algumas modalidades, é fornecido um composto selecionado a partir dos compostos na Tabela 1, ou um estereoisômero, tautômero, solvato, pró-fármaco ou sal do mesmo. Embora certos compostos descritos na Tabela 1 sejam apresentados como estereoisômeros específicos e/ou em uma forma não estereoquímica, entende-se que qualquer ou todas as formas estereoquímicas, incluindo quaisquer formas enantioméricas ou diastereoméricas, e quaisquer tautômeros ou outras formas de qualquer um dos compostos da Tabela 1 são aqui descritos. Tabela 1 Composto Estrutura 1 2 3
Composto Estrutura
4
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Composto Estrutura
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Composto Estrutura
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Composto Estrutura
55
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Composto Estrutura
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Composto Estrutura
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Composto Estrutura
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85
Composto Estrutura
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87
88
89
90
Composto Estrutura
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93
Composto Estrutura
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96
Composto Estrutura
97
98
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Composto Estrutura 100 101 Composições e Formulações Farmacêuticas
[00109] As composições farmacêuticas de qualquer um dos compostos aqui detalhados são abrangidos por esta descrição. Assim, a presente descrição inclui composições farmacêuticas compreendendo um composto conforme detalhado neste documento ou um sal do mesmo e um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Em um aspecto, o sal farmaceuticamente aceitável é um sal de adição de ácido, tal como um sal formado com um ácido inorgânico ou orgânico. As composições farmacêuticas podem assumir uma forma adequada para administração oral, bucal, parenteral, nasal, tópica ou retal ou uma forma adequada para administração por inalação.
[00110] Um composto conforme detalhado neste documento pode, em um aspecto, estar em uma forma purificada e composições compreendendo um composto em formas purificadas são detalhadas neste documento. São fornecidas composições compreendendo um composto conforme detalhado neste documento ou um sal do mesmo, tais como composições de compostos substancialmente puros. Em algumas modalidades, uma composição contendo um composto conforme detalhado neste documento ou um sal do mesmo está em forma substancialmente pura.
[00111] Em uma variação, os compostos neste documento são compostos sintéticos preparados para administração a um indivíduo. Em outra variação, as composições são fornecidas contendo um composto em forma substancialmente pura. Em outra variação, a presente descrição abrange composições farmacêuticas compreendendo um composto aqui detalhado e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em outra variação, métodos de administração de um composto são fornecidos. As formas purificadas, composições farmacêuticas e métodos de administração dos compostos são adequados para qualquer composto ou forma detalhada aqui.
[00112] Um composto detalhado neste documento ou sal do mesmo pode ser formulado para qualquer via de liberação disponível, incluindo uma via oral, mucosa (por exemplo, nasal, sublingual, vaginal, bucal ou retal), parenteral (por exemplo, intramuscular, subcutânea ou intravenosa), tópica ou forma de entrega transdérmica. Um composto ou sal do mesmo pode ser formulado com carreadores adequados para fornecer formas de entrega que incluem, mas não estão limitadas a, comprimidos, caplets, cápsulas (tais como cápsulas de gelatina dura ou cápsulas de gelatina mole elástica), hóstias, trociscos, pastilhas, gomas, dispersões, supositórios, pomadas, cataplasmas (emplastro), pastas, pós, curativos, cremes, soluções, adesivos, aerossóis (por exemplo, pulverizador nasal ou inaladores), géis, suspensões (por exemplo,
suspensões líquidas aquosas ou não aquosas, emulsões óleo em água ou emulsões líquidas de água em óleo), soluções e elixires.
[00113] Um ou vários compostos aqui descritos ou um sal do mesmo podem ser usados na preparação de uma formulação, tal como uma formulação farmacêutica, combinando o composto ou compostos, ou um sal dos mesmos, tal como um ingrediente ativo com um carreador farmaceuticamente aceitável, como os mencionados acima. Dependendo da forma terapêutica do sistema (por exemplo, adesivo transdérmico vs. comprimido oral), o carreador pode estar em várias formas. Além disso, as formulações farmacêuticas podem conter conservantes, solubilizantes, estabilizantes, agentes reumectantes, emulgadores, adoçantes, corantes, ajustadores e sais para o ajuste da pressão osmótica, tampões, agentes de revestimento ou antioxidantes. As formulações compreendendo o composto também podem conter outras substâncias que têm propriedades terapêuticas valiosas. As formulações farmacêuticas podem ser preparadas por métodos farmacêuticos conhecidos. As formulações adequadas podem ser encontradas, por exemplo, em Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, PA, 20ª ed. (2000), que é incorporado aqui por referência.
[00114] Os compostos aqui descritos podem ser administrados a indivíduos em uma forma de composições orais geralmente aceitas, tais como comprimidos, comprimidos revestidos e cápsulas de gel em uma casca dura ou mole, emulsões ou suspensões. Exemplos de carreadores, que podem ser usados para a preparação de tais composições, são lactose, amido de milho ou seus derivados, talco, estearato ou seus sais, etc. Os carreadores aceitáveis para cápsulas de gel com casca mole são, por exemplo, óleos vegetais, cera, gorduras, polióis semissólidos e líquidos, e assim por diante. Além disso, as formulações farmacêuticas podem conter conservantes, solubilizantes,
estabilizantes, agentes reumectantes, emulgadores, adoçantes, corantes, ajustadores e sais para o ajuste da pressão osmótica, tampões, agentes de revestimento ou antioxidantes.
[00115] Qualquer um dos compostos aqui descritos podem ser formulados em um comprimido em qualquer forma de dosagem descrita, por exemplo, um composto como aqui descrito ou um sal do mesmo pode ser formulado como um comprimido de 10 mg.
[00116] As composições compreendendo um composto fornecido neste documento também são descritas. Em uma variação, a composição compreende um composto ou sal do mesmo e um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Em outra variação, uma composição de composto substancialmente puro é fornecida. Em algumas modalidades, a composição é para uso como medicamento humano ou veterinário. Em algumas modalidades, a composição é para uso em um método aqui descrito. Em algumas modalidades, a composição é para uso no tratamento de uma doença ou distúrbio aqui descrito. Métodos de Uso e Usos
[00117] Os compostos e composições aqui detalhados, tais como uma composição farmacêutica contendo um composto de qualquer fórmula fornecida aqui ou um sal do mesmo e um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável, podem ser usados em métodos de administração e tratamento, conforme fornecido neste documento. Os compostos e composições também podem ser usados em métodos in vitro, tais como métodos in vitro de administração de um composto ou composição à células para fins de triagem e/ou para a realização de ensaios de controle de qualidade.
[00118] É aqui fornecido um método de tratamento de uma doença ou distúrbio em um indivíduo em necessidade, compreendendo a administração de um composto aqui descrito ou qualquer modalidade,
variação ou aspecto do mesmo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, o composto, sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou composição é administrado ao indivíduo de acordo com uma dosagem e/ou método de administração aqui descrito.
[00119] Os compostos ou seus sais aqui descritos e as composições aqui descritas são considerados eficazes para o tratamento de uma variedade de doenças e distúrbios. Em algumas modalidades, um composto ou sal do mesmo aqui descrito ou uma composição aqui descrita pode ser usado em um método de tratamento de uma doença ou distúrbio mediado por uma via de resposta integrada ao estresse (ISR). Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é mediada pelo fator de iniciação da translação eucariótica 2α (eIF2α) ou fator de iniciação da translação eucariótica 2B (eIF2B). Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é mediado pela fosforilação de eIF2α e/ou a atividade do fator de troca de nucleotídeo guanina (GEF) de eIF2B.
[00120] Em algumas modalidades, um composto ou sal do mesmo aqui descrito ou uma composição aqui descrita pode ser usado em um método de tratamento de uma doença ou distúrbio, em que a doença ou distúrbio é uma doença neurodegenerativa, uma doença inflamatória, uma doença autoimune, uma síndrome metabólica, um câncer, uma doença vascular, uma doença musculoesquelética (tal como uma miopatia), uma doença ocular ou um distúrbio genético.
[00121] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é uma doença neurodegenerativa. Em algumas modalidades, a doença neurodegenerativa é doença de desaparecimento da substância branca, ataxia infantil com hipomielinização do SNC, síndrome de deficiência intelectual, doença de Alzheimer, doença de príon, doença de Creutzfeldt-Jakob, doença de Parkinson, doença de esclerose lateral amiotrófica (ELA), Pelizaeus-Merzbacher doença, uma deficiência cognitiva, uma lesão cerebral traumática, uma disfunção cognitiva pós-operatória (PCD), uma síndrome neuro-otológica, perda de audição, doença de Huntington, acidente vascular cerebral, encefalopatia traumática crônica, lesão da medula espinhal, demência, demência frontotemporal (FTD), depressão, ou um comprometimento do comportamento social. Em algumas modalidades, o comprometimento cognitivo é desencadeado por envelhecimento, radiação, sepse, convulsão, ataque cardíaco, cirurgia cardíaca, insuficiência hepática, encefalopatia hepática, anestesia, lesão cerebral, cirurgia cerebral, isquemia, quimioterapia, tratamento do câncer, doença crítica, concussão, fibromialgia ou depressão. Em algumas modalidades, a doença neurodegenerativa é a doença de Alzheimer. Em algumas modalidades, a doença neurodegenerativa é o comprometimento cognitivo relacionado ao envelhecimento. Em algumas modalidades, a doença neurodegenerativa é uma lesão cerebral traumática.
[00122] Em algumas modalidades, um composto ou sal do mesmo aqui descrito ou uma composição aqui descrita pode ser usado em um método de tratamento da doença de Alzheimer. Em algumas modalidades, neurodegeneração, comprometimento cognitivo e/ou amiloidogênese é diminuída.
[00123] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é uma doença inflamatória. Em algumas modalidades, a doença inflamatória é artrite, artrite psoriática, psoríase, artrite idiopática juvenil, asma, asma alérgica, asma brônquica, tuberculose, distúrbio crônico das vias aéreas, fibrose cística, glomerulonefrite, nefropatia membranosa, sarcoidose, vasculite, ictiose cistite, dermatite atópica ou doença inflamatória intestinal. Em algumas modalidades, a doença inflamatória do intestino é doença de Crohn, colite ulcerativa ou doença celíaca.
[00124] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é uma doença autoimune. Em algumas modalidades, a doença autoimune é lúpus eritematoso sistêmico, diabetes tipo 1, esclerose múltipla ou artrite reumatoide.
[00125] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é uma síndrome metabólica. Em algumas modalidades, a síndrome metabólica é esteatose hepática alcoólica, obesidade, intolerância à glicose, resistência à insulina, hiperglicemia, fígado gorduroso, dislipidemia, hiperlipidemia, hiper-homocisteinemia ou diabetes tipo 2.
[00126] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é um câncer. Em algumas modalidades, o câncer é câncer de pâncreas, câncer de mama, câncer de rim, câncer de bexiga, câncer de próstata, câncer testicular, câncer urotelial, câncer de endométrio, câncer de ovário, câncer cervical, câncer renal, câncer de esôfago, tumor estromal gastrointestinal (GIST), mieloma múltiplo, câncer de células secretoras, câncer de tireoide, carcinoma gastrointestinal, leucemia mieloide crônica, carcinoma hepatocelular, câncer de cólon, melanoma, glioma maligno, glioblastoma, glioblastoma multiforme, astrocitoma, gangliocitoma displásico do cerebelo, sarcoma de Ewing, rabdomiossarcoma, ependimoma, meduloblastoma, adenocarcinoma ductal, carcinoma adenoescamoso, nefroblastoma, carcinoma de células acinares, neuroblastoma ou câncer de pulmão. Em algumas modalidades, o câncer de células secretoras é linfoma não Hodgkin, linfoma de Burkitt, leucemia linfocítica crônica, gamopatia monoclonal de significado indeterminado (MGUS), plasmocitoma, linfoma linfoplasmocitário ou leucemia linfoblástica aguda.
[00127] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é uma doença musculoesquelética (como miopatia). Em algumas modalidades, a doença musculoesquelética é uma miopatia, uma distrofia muscular, uma atrofia muscular, uma perda muscular ou sarcopenia. Em algumas modalidades, a distrofia muscular é distrofia muscular de Duchenne (DMD), doença de Becker, distrofia miotônica, cardiomiopatia dilatada ligada ao X, atrofia muscular espinhal (SMA) ou condrodisplasia metafisária, tipo Schmid (MCDS). Em algumas modalidades, a miopatia é uma atrofia do músculo esquelético. Em algumas modalidades, a doença musculoesquelética (como a atrofia do músculo esquelético) é desencadeada por envelhecimento, doenças crônicas, acidente vascular cerebral, desnutrição, repouso na cama, lesão ortopédica, fratura óssea, caquexia, fome, insuficiência cardíaca, doença pulmonar obstrutiva, insuficiência renal, adquirida Síndrome de Imunodeficiência (AIDS), sepse, um distúrbio imunológico, um câncer, ALS, uma queimadura, desnervação, diabetes, desuso muscular, imobilização de membro, descarga mecânica, miosite ou distrofia.
[00128] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é um distúrbio genético, como síndrome de Down ou síndrome MEHMO (retardo mental, convulsões epilépticas, hipogenitalismo, microcefalia e obesidade).
[00129] Em algumas modalidades, um composto ou sal do mesmo aqui descrito ou uma composição aqui descrita pode ser usada em um método de tratamento de doenças musculoesqueléticas. Em algumas modalidades, a massa muscular esquelética, qualidade e/ou força são aumentadas. Em algumas modalidades, a síntese de proteínas musculares é aumentada. Em algumas modalidades, a atrofia da fibra do músculo esquelético é inibida.
[00130] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é uma doença vascular. Em algumas modalidades, a doença vascular é aterosclerose, aneurisma da aorta abdominal, doença da artéria carótida, trombose venosa profunda, doença de Buerger, hipertensão venosa crônica, calcificação vascular, telangiectasia ou linfoedema.
[00131] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é uma doença ocular. Em algumas modalidades, a doença ocular é glaucoma, degeneração macular relacionada à idade, doença inflamatória da retina, doença vascular da retina, retinopatia diabética, uveíte, rosácea, síndrome de Sjogren ou neovascularização na retinopatia proliferativa.
[00132] Em algumas modalidades, é fornecido aqui um método para inibir uma via ISR. Os compostos ou sais dos mesmos aqui descritos e as composições aqui descritas são considerados eficazes para inibir uma via ISR. Em algumas modalidades, o método de inibir uma via ISR compreende a inibição da via ISR em uma célula pela administração ou entrega à célula de um composto aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica aqui descrita. Em algumas modalidades, o método de inibir uma via ISR compreende a inibição da via ISR em um indivíduo pela administração ao indivíduo de um composto aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica aqui descrita. A inibição da via ISR pode ser determinada por métodos conhecidos na técnica, tais como western blot, imuno- histoquímica ou ensaios de linhagem celular repórter.
[00133] Em algumas modalidades, a inibição da via ISR compreende a ligação de eIF2B. Em algumas modalidades, a inibição da via ISR compreende aumentar a translação de proteínas, aumentar a atividade do fator de troca de nucleotídeo guanina (GEF) de eIF2B, atrasar ou prevenir a apoptose em uma célula e/ou inibir a translação de um ou mais mRNAs compreendendo um região não transladada 5' (5'UTR) que compreende pelo menos um quadro de leitura aberto a montante (uORF).
[00134] Em algumas modalidades, são fornecidos aqui métodos para aumentar a produção de proteínas usando um composto ou sal aqui descrito. A produção de proteína é aumentada em relação à mesma condição sem o composto ou sal. A produção de proteínas pode ser aumentada in vivo ou in vitro. Por exemplo, a produção de proteínas pode ser aumentada in vivo pela administração do composto ou sal a um indivíduo. Em algumas modalidades, a produção de proteína é aumentada in vitro usando o composto ou sal com um sistema de síntese de proteína livre de células (CFPS) ou um sistema de expressão de proteína baseado em células. A proteína produzida pode ser uma proteína heteróloga (por exemplo, uma proteína recombinante) ou uma proteína nativa. A produção de proteína heteróloga pode ser alcançada usando um ácido nucleico recombinante que codifica a proteína. Em algumas modalidades, a proteína produzida é um anticorpo ou um fragmento do mesmo. Outras proteínas exemplares podem incluir, mas não estão limitadas a, enzimas, peptídeos ou proteínas alergênicas (por exemplo, para uso como uma vacina), proteína recombinante, citocinas, peptídeos, hormônios, eritropoietina (EPO), interferons, fator estimulador de colônia de granulócitos (G-CSF), anticoagulantes e fatores de coagulação. O aumento na produção de proteína pode ser determinado por métodos conhecidos na técnica, tal como Western blot ou imuno-histoquímica.
[00135] Sistemas de síntese de proteínas livres de células (CFPS) são geralmente conhecidos e incluem maquinaria celular para a expressão de proteínas em um ambiente in vitro. Em algumas modalidades, o sistema CFPS inclui um extrato celular (como um extrato celular eucariótico), que inclui maquinaria de expressão de proteínas. Em algumas modalidades, a maquinaria celular no sistema CFPS compreende maquinaria celular eucariótica, como fator de iniciação eucariótica 2 (eIF2) e/ou fator de iniciação eucariótica 2B (eIF2B), ou uma ou mais subunidades dos mesmos.
[00136] Em algumas modalidades, há um sistema de síntese de proteínas livres de células (CFPS) que compreende o fator de iniciação eucariótica 2 (eIF2) e um ácido nucleico que codifica uma proteína com um composto ou sal como aqui descrito. Em algumas modalidades, a proteína é um anticorpo ou um fragmento do mesmo. Outras proteínas exemplares podem incluir, mas não estão limitadas a, enzimas, peptídeos ou proteínas alergênicas (por exemplo, para uso como uma vacina), proteína recombinante, citocinas, peptídeos, hormônios, eritropoietina (EPO), interferons, fator estimulador de colônia de granulócitos (G-CSF), anticoagulantes e fatores de coagulação. Em algumas modalidades, o sistema CFPS compreende um extrato de célula compreendendo o eIF2. Em algumas modalidades, o sistema CFPS compreende ainda eIF2B.
[00137] Em algumas modalidades, existe um método de produção de uma proteína, compreendendo o contato de um sistema de síntese de proteína livre de células (CFPS) compreendendo o fator de iniciação eucariótico 2 (eIF2) e um ácido nucleico que codifica uma proteína com um composto ou sal do mesmo como aqui descrito. Em algumas modalidades, a proteína é um anticorpo ou um fragmento do mesmo. Outras proteínas exemplares podem incluir, mas não estão limitadas a, enzimas, peptídeos ou proteínas alergênicas (por exemplo, para uso como uma vacina), proteína recombinante, citocinas, peptídeos, hormônios, eritropoietina (EPO), interferons, fator estimulador de colônia de granulócitos (G-CSF), anticoagulantes e fatores de coagulação. Em algumas modalidades, o sistema CFPS compreende um extrato de célula compreendendo o eIF2. Em algumas modalidades, o sistema CFPS compreende ainda eIF2B. Em algumas modalidades, o método compreende a purificação da proteína.
[00138] Em algumas modalidades, há um método de produção de uma proteína, que compreende o contato de uma célula eucariótica que compreende um ácido nucleico que codifica a proteína com um composto ou sal, conforme descrito neste documento. Em algumas modalidades, o método compreende a cultura da célula em um meio de cultura in vitro compreendendo o composto ou sal. Em algumas modalidades, o ácido nucleico que codifica a proteína é um ácido nucleico recombinante. Em algumas modalidades, a célula eucariótica é uma célula de rim embrionário humano (HEK) ou uma célula de ovário de hamster chinês (CHO). Em outras modalidades, a célula eucariótica é uma célula de levedura (tal como Saccharomyces cerevisiae ou Pichia pastoris), uma célula germinativa de trigo, uma célula de inseto, um reticulócito de coelho, uma célula de câncer cervical (tal como uma célula HeLa), uma célula de rim de hamster bebê (tal como células BHK21), uma célula de mieloma murino (tal como células NSO ou Sp2/0 ), uma célula HT-1080, uma célula PER.C6, uma célula vegetal, uma célula de hibridoma ou um leucócito derivado de sangue humano. Em algumas modalidades, a proteína é um anticorpo ou um fragmento do mesmo. Outras proteínas exemplares podem incluir, mas não estão limitadas a, enzimas, peptídeos ou proteínas alergênicas (por exemplo, para uso como uma vacina), proteína recombinante, citocinas, peptídeos, hormônios, eritropoietina (EPO), interferons, fator estimulador de colônia de granulócitos (G-CSF), anticoagulantes e fatores de coagulação. Em algumas modalidades, o método compreende a purificação da proteína.
[00139] Em algumas modalidades, há um método de cultivo de uma célula eucariótica compreendendo um ácido nucleico que codifica uma proteína, compreendendo o contato da célula eucariótica com um meio de cultura in vitro compreendendo um composto ou sal como aqui descrito. Em algumas modalidades, o ácido nucleico que codifica a proteína é um ácido nucleico recombinante. Em algumas modalidades, a célula eucariótica é uma célula de rim embrionário humano (HEK) ou uma célula de ovário de hamster chinês (CHO). Em outras modalidades, a célula eucariótica é uma célula de levedura (como Saccharomyces cerevisiae ou Pichia pastoris), uma célula germinativa de trigo, uma célula de inseto, um reticulócito de coelho, uma célula de câncer cervical (tal como uma célula HeLa), uma célula de rim de hamster bebê (tal como células BHK21), uma célula de mieloma murino (tal como células NSO ou Sp2/0), uma célula HT-1080, uma célula PER.C6, uma célula de planta, uma célula de hibridoma ou um leucócito derivado de sangue humano. Em algumas modalidades, a proteína é um anticorpo ou um fragmento do mesmo. Outras proteínas exemplares podem incluir, mas não estão limitadas a, enzimas, peptídeos ou proteínas alergênicas (por exemplo, para uso como uma vacina), proteína recombinante, citocinas, peptídeos, hormônios, eritropoietina (EPO), interferons, fator estimulador de colônia de granulócitos (G-CSF), anticoagulantes e fatores de coagulação. Em algumas modalidades, o método compreende a purificação da proteína.
[00140] Em algumas modalidades, há um meio de cultura de células in vitro, compreendendo o composto ou sal aqui descrito e nutrientes para o crescimento celular. Em algumas modalidades, o meio de cultura compreende uma célula eucariótica que compreende um ácido nucleico que codifica uma proteína. Em algumas modalidades, o meio de cultura compreende ainda um composto para induzir a expressão da proteína. Em algumas modalidades, o ácido nucleico que codifica a proteína é um ácido nucleico recombinante. Em algumas modalidades, a proteína é um anticorpo ou um fragmento do mesmo. Outras proteínas exemplares podem incluir, mas não estão limitadas a, enzimas, peptídeos ou proteínas alergênicas (por exemplo, para uso como uma vacina), proteína recombinante, citocinas, peptídeos, hormônios, eritropoietina (EPO), interferons, fator estimulador de colônia de granulócitos (G-CSF), anticoagulantes e fatores de coagulação. Em algumas modalidades, a célula eucariótica é uma célula de rim embrionário humano (HEK) ou uma célula de ovário de hamster chinês (CHO). Em outras modalidades, a célula eucariótica é uma célula de levedura (tal como Saccharomyces cerevisiae ou Pichia pastoris), uma célula germinativa de trigo, uma célula de inseto, um reticulócito de coelho, uma célula de câncer cervical (tal como uma célula HeLa), uma célula de rim de hamster bebê (tal como células BHK21), uma célula de mieloma murino (tal como células NSO ou Sp2/0), uma célula HT-1080, uma célula PER.C6, uma célula de planta, uma célula de hibridoma ou um leucócito derivado de sangue humano.
[00141] Em algumas modalidades, é fornecido aqui um método para aumentar a translação de proteínas em uma célula ou sistema de expressão livre de células. Em algumas modalidades, a célula foi submetida a estresse antes da administração do composto, seu sal ou composição. Em algumas modalidades, a translação da proteína é aumentada em pelo menos cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, ou 300% ou mais. Em algumas modalidades, a translação da proteína é aumentada por cerca de 10% a cerca de 300% (tal como cerca de 10% a cerca de 20%, cerca de 20% a cerca de 30%, cerca de 30% a cerca de 40%, cerca de 40% a cerca de 50%, cerca de 50% a cerca de 60%, cerca de 60% a cerca de 70%, cerca de 70% a cerca de 80%, cerca de 80% a cerca de 90%, cerca de 90% a cerca de 100%, cerca de 100% a cerca de 125%, cerca de 125% a cerca de 150%, cerca de 150% a cerca de 175%, cerca de 175% a cerca de 200%, cerca de 200% a cerca de 250%, ou cerca de 250% a cerca de 300%). Em algumas modalidades, a translação da proteína é aumentada em comparação com antes da administração dos compostos, sais dos mesmos ou composição. Em algumas modalidades, a translação da proteína é aumentada em comparação com uma célula não estressada, uma condição basal em que as células não são submetidas a um estresse específico que ativa o ISR. Em algumas modalidades, a translação da proteína é aumentada em comparação com uma célula estressada onde ISR é ativo.
[00142] Alguns dos compostos descritos neste documento aumentam a síntese de proteínas em uma célula sem inibição total da translação de ATF4, sob condições estressadas com ISR ou sem estresse com ISR.
Apesar da participação do ATF4 em várias patologias, a proteína ATF4 é um fator importante para restaurar a homeostase celular em células estressadas, por exemplo, durante a resposta ao estresse oxidativo, metabolismo do colesterol, síntese de aminoácidos de dobramento de proteínas e autofagia.
Assim, para certos tratamentos, pode ser preferível limitar a inibição de ATF4. Em algumas modalidades, o composto é usado para aumentar a síntese de proteínas por cerca de 10% ou mais, cerca de 20% ou mais, cerca de 30% ou mais, cerca de 40% ou mais, cerca de 50% ou mais, cerca de 60% ou mais, cerca de 70% ou mais, cerca de 80% ou mais, cerca de 90% ou mais, cerca de 100% ou mais, cerca de 125% ou mais, cerca de 150% ou mais, cerca de 175% ou mais, cerca de 200% ou mais, cerca de 250% ou mais, ou cerca de 300% ou mais em que a expressão da proteína ATF4 é inibida em cerca de 75% ou menos, cerca de 50% ou menos, cerca de 40% ou menos, cerca de 30% ou menos, cerca de 20% ou menos, cerca de 10% ou menos, ou cerca de 5% ou menos.
Em algumas modalidades, o composto é usado para aumentar a síntese de proteínas em cerca de 10% a cerca de 300% (tal como cerca de 10% a cerca de 20%, cerca de 20% a cerca de 30%, cerca de 30% a cerca de 40%, cerca de 40% a cerca de 50%, cerca de 50% a cerca de 60%, cerca de 60% a cerca de 70%, cerca de 70% a cerca de 80%, cerca de 80% a cerca de 90%, cerca de 90% a cerca de 100%, cerca de 100% a cerca de 125%, cerca de 125% a cerca de 150%, cerca de 150% a cerca de 175%, cerca de 175% a cerca de 200%, cerca de 200% a cerca de 250%, ou cerca de 250% a cerca de 300%), em que a expressão da proteína ATF4 é inibida em cerca de 75% ou menos (tal como cerca de 50% ou menos, cerca de 40% ou menos, cerca de 30% ou menos, cerca de 20% ou menos, cerca de 10% ou menos, ou cerca de 5% ou menos).
[00143] Em algumas modalidades, é fornecido aqui um método para aumentar a translação de proteínas em uma célula. Em algumas modalidades, a célula foi submetida a estresse antes da administração do composto, seu sal ou composição. Em algumas modalidades, a translação de proteínas é aumentada em pelo menos cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250% ou 300% ou mais. Em algumas modalidades, a translação da proteína é aumentada em comparação com antes da administração dos compostos, seu sal ou composição. Em algumas modalidades, a translação da proteína é aumentada em comparação com uma célula não estressada, uma condição basal em que as células não são submetidas a um estresse específico que ativa o ISR. Em algumas modalidades, a translação da proteína é aumentada em comparação com uma célula estressada onde ISR é ativo.
[00144] Em algumas modalidades, é fornecido aqui um método para aumentar a atividade do fator de troca de nucleotídeo guanina (GEF) de eIF2B nas células. Em algumas modalidades, é fornecido aqui um método para retardar ou prevenir a apoptose em uma célula. Em algumas modalidades, é fornecido aqui um método de inibir a translação de um ou mais mRNAs compreendendo uma região 5' não transladada (5'UTR) que contém pelo menos uma estrutura de leitura aberta a montante (uORF), codificando proteínas com preferências de translação, incluindo, mas não limitado a ATF4, ATF2, ATF5, CHOP, GADD34, BACE-1, C / EBPα ou MAP1LC3B. Em algumas modalidades, o mRNA codifica ATF4, BACE-1, GADD34 ou CHOP. Em algumas modalidades, o mRNA codifica ATF4.
[00145] Em algumas modalidades, a expressão de ATF4, BACE-1, GADD34 ou CHOP é inibida. Em algumas modalidades, a expressão de ATF4 é inibida. Em algumas modalidades, a expressão de Aβ é inibida. ATF4 aumenta a expressão de, entre outros, GADD45A, CDKN1A e
EIF4EBP1, que codificam DDIT-1, p21 e 4E-BP1, respectivamente. Essas proteínas induzem doenças musculoesqueléticas (como atrofia do músculo esquelético) e podem ser moduladas pela inibição da expressão de ATF4. Por conseguinte, em algumas modalidades, a expressão de um ou mais dentre CDKN1A, GADD45A ou EIF4EBP1 é inibida.
[00146] Em algumas modalidades, o composto, seu sal ou composição inibe a translação de um ou mais mRNAs compreendendo uma região 5' não transladada (5'UTR) compreendendo pelo menos um quadro de leitura aberto a montante (uORF) com um IC50 inferior a cerca de 1 µM, tal como menos do que cerca de 750 nM, 600 nM, 500 nM, 300 nM, 200 nM, 100 nM, 80 nM, 60 nM, 40 nM, 25 nM ou menos. Em algumas modalidades, o composto, seu sal ou composição inibe a translação de um ou mais mRNAs compreendendo uma região 5' não transladada (5'UTR) compreendendo pelo menos um quadro de leitura aberto a montante (uORF) com um IC50 entre cerca de 1 nM e 1 µM, tal como entre cerca de 10 nM e 600 nM, 15 nM e 200 nM, ou 20 nM e 180 nM.
[00147] Em algumas modalidades, o composto, sal do mesmo ou composição inibe a expressão de ATF4 com um IC50 inferior a cerca de 1 µM, tal como inferior a cerca de 750 nM, 600 nM, 500 nM, 300 nM, 200 nM, 100 nM, 80 nM, 60 nM, 40 nM, 25 nM ou menos. Em algumas modalidades, o composto, seu sal ou composição inibe a expressão de ATF4 com um IC50 entre cerca de 1 nM e 1 µM, tal como entre cerca de 2 nM e 800 nM, 10 nM e 600 nM, 15 nM e 200 nM, ou 20 nM e 180 nM.
[00148] Em alguns aspectos, a metade da concentração inibitória máxima (IC50) é uma medida da eficácia de uma substância na inibição de uma função biológica ou bioquímica específica. Em alguns aspectos, o IC50 é uma medida quantitativa que indica quanto de um inibidor é necessário para inibir um determinado processo biológico ou componente de um processo, tal como uma enzima, célula, receptor celular ou microrganismo pela metade. Métodos de determinação de IC50 in vitro e in vivo são conhecidos na técnica.
[00149] Em algumas modalidades, o indivíduo é um mamífero. Em algumas modalidades, o indivíduo é um primata, bovino, ovino, porcino, equino, canino, felino, coelho ou roedor. Em algumas modalidades, o indivíduo é um humano. Em algumas modalidades, o indivíduo tem qualquer uma das doenças ou distúrbios aqui divulgados. Em algumas modalidades, o indivíduo tem um risco de desenvolver qualquer uma das doenças ou distúrbios aqui divulgados.
[00150] Em algumas modalidades, o indivíduo é humano. Em algumas modalidades, o humano tem pelo menos cerca de ou tem cerca de 21, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80 ou 85 anos de idade. Em algumas modalidades, o humano é uma criança. Em algumas modalidades, o humano tem menos de cerca de ou cerca de qualquer um de 21, 18, 15, 12, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 ou 1 anos de idade.
[00151] Também são fornecidos aqui os usos de um composto aqui descrito ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica aqui descrita, na fabricação de um medicamento. Em algumas modalidades, a fabricação de um medicamento é para o tratamento de um distúrbio ou doença aqui descrita. Em algumas modalidades, a fabricação de um medicamento é para a prevenção e/ou tratamento de um distúrbio ou doença mediada por uma via ISR. Em algumas modalidades, a fabricação de um medicamento é para a prevenção e/ou tratamento de um distúrbio ou doença mediada poreIF2α ou eIF2B. Em algumas modalidades, a fabricação de um medicamento é para a prevenção e/ou tratamento de um distúrbio ou doença mediada pela fosforilação de eIF2α e/ou a atividade de GEF de eIF2B. Combinações
[00152] Em certos aspectos, um composto aqui descrito é administrado a um indivíduo para tratamento de uma doença em combinação com um ou mais agentes farmacêuticos adicionais que podem tratar a doença. Por exemplo, em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do composto é administrada a um indivíduo para o tratamento de câncer em combinação com um ou mais agentes anticâncer adicionais.
[00153] Em algumas modalidades, a atividade do agente farmacêutico adicional (tal como agente anticâncer adicional) é inibida por uma via ISR ativada. Um inibidor de ISR, tal como um dos compostos aqui descritos, pode inibir a via de ISR para aumentar a funcionalidade do agente farmacêutico adicional. A título de exemplo, certos inibidores de BRAF (por exemplo, vemurafenibe ou dabrafenibe) ativam a via ISR em células de melanoma mutadas em BRAF (por exemplo, BRAF com uma mutação V600F) através da expressão de ATF4. Em algumas modalidades, existe um método de tratamento do câncer que compreende a administração a um indivíduo com câncer de uma quantidade eficaz de um composto aqui descrito em combinação com uma quantidade eficaz de um inibidor de BRAF. Em algumas modalidades, existe um método de tratamento de um melanoma com mutação em BRAF que compreende a administração a um indivíduo com um melanoma com mutação em BRAF uma quantidade eficaz de um composto aqui descrito em combinação com uma quantidade eficaz de um inibidor de BRAF. Em algumas modalidades, há um método de tratamento de um melanoma mutado em BRAF compreendendo a administração a um indivíduo com um melanoma mutado em BRAF uma quantidade eficaz de um composto aqui descrito em combinação com uma quantidade eficaz de vemurafenibe ou dabrafenibe.
[00154] Como outro exemplo, certos agentes anticâncer (tal como inibidores da via da ubiquitina-proteassoma (tal como bortezomibe), inibidores de Cox-2 (por exemplo, celecoxibe), medicamentos antineoplásicos à base de platina (por exemplo, cisplatina), antraciclinas (por exemplo, doxorrubicina) ou inibidores da topoisomerase (por exemplo, etoposídeo)) são usados para tratar o câncer, mas podem ter funcionalidade limitada contra tumores sólidos. A resistência em certos tumores sólidos (por exemplo, cânceres de mama) foi associada à estabilização de ATF4 e indução de autofagia. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto inibidor de ISR, conforme descrito neste documento, é administrada a um indivíduo com câncer para aumentar a sensibilidade a um ou mais agentes anticâncer.
[00155] Em algumas modalidades, há um método de tratamento de um câncer refratário (como um tumor sólido) em um indivíduo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um composto aqui descrito em combinação com uma quantidade eficaz de um agente anticâncer. Em algumas modalidades, existe um método de tratamento de um câncer refratário (tal como um tumor sólido) em um indivíduo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um composto aqui descrito em combinação com uma quantidade eficaz de um inibidor da via ubiquitina-proteassoma (por exemplo, bortezomibe), um inibidor de Cox-2 (por exemplo, celecoxibe), um medicamento antineoplásico à base de platina (por exemplo, cisplatina), uma antraciclina (por exemplo, doxorrubicina) ou um inibidor de topoisomerase (por exemplo, etoposídeo). Em algumas modalidades, o câncer refratário é o câncer de mama. Em algumas modalidades, o câncer refratário é o melanoma.
[00156] Em algumas modalidades, um composto aqui descrito é usado para tratar o câncer em combinação com um ou mais agentes anticâncer, tal como um agente antineoplásico, um inibidor de ponto de controle imunológico ou qualquer outro agente anticâncer adequado. Inibidores de ponto de controle imune exemplares incluem anticorpos anti-PD-1, anti-PD-L1, anti GITR, anti-OX-40, anti-LAG3, anti-TIM-3, anti-41BB, anti-CTLA-4. Agentes antineoplásicos exemplares podem incluir, por exemplo, agentes anti-microtúbulos, complexos de coordenação de platina, agentes alquilantes, inibidores da topoisomerase II, inibidores da topoisomerase I, antimetabólitos, agentes antibióticos, hormônios e análogos hormonais, inibidores da via de transdução de sinal, inibidores de angiogênese de tirosina quinase não receptor, inibidores do proteassoma e inibidores do metabolismo do câncer. Outros agentes anticâncer podem incluir um ou mais de um imunoestimulante, um anticorpo ou fragmento do mesmo (por exemplo, um anticorpo anti CD20, anti-HER2, anti-CD52 ou anti-VEGF ou fragmento do mesmo) ou uma imunotoxina (por exemplo, um anticorpo anti-CD33 ou fragmento do mesmo, um anticorpo anti-CD22 ou fragmento do mesmo, um conjugado de caliqueamicina ou um conjugado de exotoxina de pseudomonas).
[00157] A expressão de CHOP mediada por ATF4 também demonstrou regular a função e o acúmulo de células supressoras derivadas de mieloide (MDSCs) em tumores. Os MDSCs em tumores reduzem a capacidade de preparar a função das células T e reduzem as respostas antitumorais ou anticâncer. Certos agentes imunoterapêuticos (tais como anticorpos anti-PD-1, anti-PD-L1, anti- GITR, anti-OX-40, anti-LAG3, anti-TIM-3, anti-41BB ou anti-CTLA-4) têm sido usados para aumentar a resposta imunológica contra o câncer. A expressão de AXL mediada por ATF4 foi associada a uma resposta fraca à terapia anti-PD1 no melanoma. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto inibidor de ISR, conforme descrito neste documento, é administrada a um indivíduo com câncer para aumentar a sensibilidade a um ou mais agentes imunoterapêuticos. Em algumas modalidades, existe um método de tratamento de um câncer refratário (tal como um melanoma) em um indivíduo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um composto aqui descrito em combinação com uma quantidade eficaz de um agente imunoterapêutico (por exemplo, anticorpos anti- PD-1, anti-PD-L1, anti-
GITR, anti-OX-40, anti-LAG3, anti-TIM-3, anti-41BB ou anti-CTLA-4). Em algumas modalidades, o câncer refratário é melanoma. Dosagem e Método de Administração
[00158] A dose de um composto administrado a um indivíduo (tal como um ser humano) pode variar com o composto específico ou sal do mesmo, o método de administração e a doença específica, como tipo e estágio do câncer, a ser tratado. Em algumas modalidades, a quantidade do composto ou sal do mesmo é uma quantidade terapeuticamente eficaz.
[00159] A quantidade eficaz do composto pode, em um aspecto, ser uma dose entre cerca de 0,01 e cerca de 100 mg/kg. Quantidades ou doses eficazes dos compostos da presente descrição podem ser verificadas por métodos de rotina, tais como modelagem, escalonamento de dose ou ensaios clínicos, levando em consideração fatores de rotina, por exemplo, o modo ou via de administração ou entrega do medicamento, a farmacocinética do agente, a gravidade e o curso da doença a ser tratada, o estado de saúde do indivíduo, condição e peso. Uma dose exemplar está na faixa de cerca de cerca de 0,7 mg a 7 g por dia, ou cerca de 7 mg a 350 mg por dia, ou cerca de 350 mg a 1,75 g por dia, ou cerca de 1,75 a 7 g por dia.
[00160] Qualquer um dos métodos fornecidos neste documento pode, em um aspecto, compreender a administração a um indivíduo de uma composição farmacêutica que contém uma quantidade eficaz de um composto fornecido neste documento ou um sal do mesmo e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[00161] Um composto ou composição aqui fornecido pode ser administrado a um indivíduo de acordo com um regime de dosagem eficaz por um período de tempo ou duração desejado, tal como pelo menos cerca de um mês, pelo menos cerca de 2 meses, pelo menos cerca de 3 meses, pelo menos cerca de 6 meses, ou pelo menos cerca de 12 meses ou mais, o que em algumas variações pode ser pela duração da vida do indivíduo. Em uma variação, o composto é administrado em uma programação diária ou intermitente. O composto pode ser administrado a um indivíduo continuamente (por exemplo, pelo menos uma vez ao dia) durante um período de tempo. A frequência de dosagem também pode ser inferior a uma vez ao dia, por exemplo, cerca de uma dosagem semanal. A frequência de dosagem pode ser mais de uma vez ao dia, por exemplo, duas ou três vezes ao dia. A frequência de dosagem também pode ser intermitente, incluindo um 'feriado do medicamento' (por exemplo, uma dose diária por 7 dias seguida por nenhuma dose por 7 dias, repetida por qualquer período de 14 dias, tal como cerca de 2 meses, cerca de 4 meses, cerca de 6 meses ou mais). Qualquer uma das frequências de dosagem pode empregar qualquer um dos compostos aqui descritos, juntamente com qualquer uma das dosagens aqui descritas. Artigos e Kits de Fabricação
[00162] A presente descrição fornece ainda artigos de fabricação compreendendo um composto aqui descrito ou um sal do mesmo, uma composição aqui descrita ou uma ou mais dosagens unitárias aqui descritas em embalagens adequadas. Em certas modalidades, o artigo de fabricação é para uso em qualquer um dos métodos aqui descritos. A embalagem adequada é conhecida na técnica e inclui, por exemplo, frascos, recipientes, ampolas, garrafas, potes, embalagens flexíveis e similares. Um artigo de fabricação pode ainda ser esterilizado e/ou selado.
[00163] A presente descrição fornece ainda kits para realizar os métodos da presente descrição, que compreende um ou mais compostos aqui descritos ou uma composição compreendendo um composto aqui descrito. Os kits podem empregar qualquer um dos compostos aqui descritos. Em uma variação, o kit emprega um composto aqui descrito ou um sal do mesmo. Os kits podem ser usados para qualquer um ou mais dos usos aqui descritos e, consequentemente, podem conter instruções para o tratamento de qualquer doença ou aqui descritos, por exemplo, para o tratamento de câncer.
[00164] Os kits geralmente compreendem embalagens adequadas. Os kits podem compreender um ou mais recipientes compreendendo qualquer composto aqui descrito. Cada componente (se houver mais de um componente) pode ser embalado em recipientes separados ou alguns componentes podem ser combinados em um recipiente onde a reatividade cruzada e o prazo de validade permitem.
[00165] Os kits podem estar em formas de dosagem unitária, embalagens a granel (por exemplo, embalagens multidose) ou doses de subunidade. Por exemplo, podem ser fornecidos kits que contêm dosagens suficientes de um composto conforme divulgado neste documento e/ou um composto farmaceuticamente ativo adicional útil para uma doença detalhada neste documento para fornecer tratamento eficaz de um indivíduo por um período prolongado, tal como qualquer uma de uma semana, duas semanas, 3 semanas, 4 semanas, 6 semanas, 8 semanas, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 7 meses, 8 meses, 9 meses ou mais. Os kits também podem incluir várias doses unitárias dos compostos e instruções de uso e ser embalados em quantidades suficientes para armazenamento e uso em farmácias (por exemplo, farmácias hospitalares e farmácias de manipulação).
[00166] Os kits podem incluir opcionalmente um conjunto de instruções, geralmente instruções escritas, embora meios de armazenamento eletrônico (por exemplo, disquete magnético ou disco óptico) contendo instruções também sejam aceitáveis, relacionadas ao uso de componente(s) dos métodos da presente descrição. As instruções incluídas no kit geralmente incluem informações sobre os componentes e sua administração a um indivíduo.
Métodos Sintéticos Gerais
[00167] Os compostos da presente descrição podem ser preparados por uma série de processos conforme geralmente descrito abaixo e mais especificamente nos Exemplos a seguir (tais como os esquemas fornecidos nos Exemplos abaixo). Nas descrições de processo a seguir, os símbolos quando usados nas fórmulas representadas devem ser entendidos como representando aqueles grupos descritos acima em relação às fórmulas aqui.
[00168] Quando se deseja obter um enantiômero particular de um composto, isso pode ser realizado a partir de uma mistura correspondente de enantiômeros usando qualquer procedimento convencional adequado para separar ou resolver enantiômeros. Assim, por exemplo, derivados diastereoméricos podem ser produzidos pela reação de uma mistura de enantiômeros, por exemplo, um racemato e um composto quiral apropriado. Os diastereômeros podem então ser separados por quaisquer meios convenientes, por exemplo, por cristalização e o enantiômero desejado recuperado. Em outro processo de resolução, um racemato pode ser separado usando cromatografia líquida de alto desempenho quiral. Alternativamente, se desejado, um enantiômero particular pode ser obtido usando um intermediário quiral apropriado em um dos processos descritos.
[00169] Cromatografia, recristalização e outros procedimentos de separação convencionais também podem ser usados com intermediários ou produtos finais onde se deseja obter um isômero particular de um composto ou de outra forma purificar um produto de uma reação.
[00170] Solvatos e/ou polimorfos de um composto aqui fornecido ou um sal do mesmo também são contemplados. Os solvatos contêm quantidades estequiométricas ou não estequiométricas de um solvente e são frequentemente formados durante o processo de cristalização.
Hidratos são formados quando o solvente é água, ou alcoolatos são formados quando o solvente é álcool. Os polimorfos incluem os diferentes arranjos de empacotamento de cristal da mesma composição elementar de um composto. Os polimorfos geralmente têm diferentes padrões de difração de raios-X, espectro infravermelho, pontos de fusão, densidade, dureza, formato do cristal, propriedades ópticas e elétricas, estabilidade e/ou solubilidade. Vários fatores, como o solvente de recristalização, a taxa de cristalização e a temperatura de armazenamento podem fazer com que uma única forma de cristal domine.
[00171] Cromatografia, recristalização e outros procedimentos de separação convencionais também podem ser usados com intermediários ou produtos finais onde se deseja obter um isômero particular de um composto ou de outra forma purificar um produto de uma reação.
[00172] Métodos gerais de preparação de compostos de acordo com a presente descrição são representados nos esquemas abaixo.
[00173] Os compostos descritos neste documento, tais como compostos de fórmula (E-4), (E-5), (E-6) e (E-7), por exemplo, podem ser sintetizados de acordo com o método geral descrito no esquema acima.
Um composto de fórmula (E-1) é feito reagir com um ácido carboxílico (B-1a), ou um derivado de ácido carboxílico (por exemplo, um cloreto de acila de fórmula (B-1b)), sob condições adequadas para produzir um composto de fórmula (E-2). O composto de fórmula (E-2) é desprotegido para produzir um composto de fórmula (E-3). O composto de fórmula (E-3) é feito reagir com um ácido carboxílico (B-2a), ou um derivado de ácido carboxílico (por exemplo, um cloreto de acila de fórmula (B-2b)), para produzir um composto de fórmula (E-4). O composto de fórmula (E-3) é reagido com um derivado de oxirano de fórmula (B-3) para produzir um composto de fórmula (E-5). O composto de fórmula (E-3) é feito reagir com um derivado de haloalquila, tal como um composto de bromoalquila de fórmula (B-4), para produzir um composto de fórmula (E-6). O composto de fórmula (E-3) é feito reagir com um ácido carboxílico (B-5a), ou um derivado de ácido carboxílico (por exemplo, um cloreto de acila de fórmula (B-5b)), para produzir um composto de fórmula (E-7).
[00174] Os compostos descritos neste documento, tais como os compostos de fórmula (F-4), (F-5), (F-6) e (F-7), por exemplo, podem ser sintetizados de acordo com o método geral descrito no esquema acima.
Um composto de fórmula (F-1) é feito reagir com um ácido carboxílico (B-1a) ou um derivado de ácido carboxílico (por exemplo, um cloreto de acila de fórmula (B-1b)), sob condições adequadas para produzir um composto de fórmula (F-2). O composto de fórmula (F-2) é desprotegido para produzir um composto de fórmula (F-3). O composto de fórmula (F-3) é feito reagir com um ácido carboxílico (B-2a), ou ácido carboxílico derivado (por exemplo, cloreto de acila de fórmula (B-2b), para produzir o composto de fórmula (F-4). O composto de fórmula (F- 3) é feito reagir com um oxirano derivado da fórmula (B-3) para produzir o composto de fórmula (F-5). O composto de fórmula (F-3) é feito reagir com derivado de haloalquila, tal como um composto de bromoalquila de fórmula (B-4), para produzir o composto de fórmula (F-6). O composto de fórmula (F-3) é feito reagir com um ácido carboxílico (B-5a), ou um ácido carboxílido derivado de (por exemplo, um cloreto de acila de fórmula (B-5b), para produzir um composto de fórmula (F-7).
[00175] Os compostos descritos neste documento, tal como os compostos de fórmula (G-6), (G-7), (G-8) e (G-9), por exemplo, podem ser sintetizados de acordo com o método geral descrito no esquema acima.
Um composto de fórmula (G-1) é feito reagir com um ácido carboxílico (B-1a) ou um derivado de ácido carboxílico (por exemplo, um cloreto de acila de fórmula (B-1b)), sob condições adequadas para produzir um composto de fórmula (G-2). O composto de fórmula (G-2) é desprotegido para produzir um composto de fórmula (G-3). O composto de fórmula (G-3) é submetido a condições de nitrosação (por exemplo, reagido com nitrito de sódio) sob condições adequadas para produzir um composto de fórmula (G-4). O composto de fórmula (G-4) é reduzido (por exemplo, com pó de Zn) sob condições adequadas para produzir um composto de fórmula (G-5). O composto de fórmula (G-5) é feito reagir com um ácido carboxílico (B-2a), ou um derivado de ácido carboxílico (por exemplo, um cloreto de acila de fórmula (B-2b)), para produzir um composto de fórmula (G-6). O composto de fórmula (G-5) é feito reagir com um derivado de oxirano de fórmula (B-3) para produzir um composto de fórmula (G-7). O composto de fórmula (G-5) é feito reagir com um derivado de haloalquila, tal como um composto de bromoalquila de fórmula (B-4), para produzir um composto de fórmula (G-8). O composto de fórmula (G-5) é feito reagir com um ácido carboxílico (B-5a), ou um derivado de ácido carboxílico (por exemplo, um cloreto de acila de fórmula (B-5b)), para produzir um composto de fórmula (G-9)
[00176] Os compostos descritos neste documento, tais como compostos de fórmula (H-4), (H-5), (H-6) e (H-7), por exemplo, podem ser sintetizados de acordo com o método geral descrito no esquema acima. Um composto de fórmula (H-1) é feito reagir com um ácido carboxílico (B-1a), ou um derivado de ácido carboxílico (por exemplo, um cloreto de acila de fórmula (B-1b)), sob condições adequadas para produzir um composto de fórmula (H-2). O composto de fórmula (H-2) é desprotegido para produzir um composto de fórmula (H-3). O composto de fórmula (H-3) reage com um ácido carboxílico (B-2a) ou um derivado de ácido carboxílico (por exemplo, um cloreto de acila de fórmula (B- 2b)), para produzir um composto de fórmula (H-4). O composto de fórmula (H-3) é feito reagir com um derivado de oxirano de fórmula (B- 3) para produzir um composto de fórmula (H-5). O composto de fórmula (H-3) é feito reagir com um derivado de haloalquila, tal como um composto de bromoalquila de fórmula (B-4), para produzir um composto de fórmula (H-6). O composto de fórmula (H-3) é feito reagir com um ácido carboxílico (B-5a), ou um derivado de ácido carboxílico (por exemplo, um cloreto de acila de fórmula (B-5b)), para produzir um composto de fórmula (H-7)
MODALIDADES ENUMERADAS
[00177] Modalidade 1. Um composto de fórmula (I) (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: X é N ou CR12; Y é uma ligação, NRa ou NRaNRa; contanto que: (a) quando X for N, então Y seja uma ligação ou NRa; e (b) quando X for CR12, então Y seja NRa ou NRaNRa; Z seja uma ligação, C(=O), CR10R11, ou NRa; L1 é selecionado do grupo que consiste em *1-C(=O)- #1, *1- CH2-#1, *1-CH2CH2-#1, *1-CH2CH2CH2-#1, *1-OCH2C(=O)-#1, *1- OCH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1-OCH2CH2CH2-#1;
em que *1 representa o ponto de ligação a R1 e #1 representa o ponto de ligação ao restante da molécula; L2 é selecionado do grupo que consiste em #2-C(=O)-*2, #2- CH2-*2, #2-CH2CH2-*2, #2-CH2CH2CH2-*2, #2-C(=O)CH2O-*2, #2- C(=O)CH2CH2O-*2, #2-C(=O)CH2CH2CH2O-*2, #2-CH2CH(OH)CH2O-*2, #2- CH2O-*2, #2-CH2CH2O-*2, e #2-CH2CH2CH2O-*2; em que *2 representa o ponto de ligação a R2 e #2 representa o ponto de ligação ao restante da molécula; R1 é selecionado do grupo que consiste em: C6-C14 arila substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb; e heteroarila de 5 a 14 membros substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb; R2 é selecionado do grupo que consiste em: C6-C14 arila substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída um ou mais Rb; e heteroarila de 5 a 14 membros substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída um ou mais Rb; R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; ou R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; R4, R5, R6, R7, R8, e R9, independentemente um do outro, são selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halogênio, e C1-C6 alquila; R10 e R11, independentemente um do outro, são selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halogênio e C1-C6 alquila; R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; ou R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; R13 e R14, independentemente um do outro, são selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halogênio e C1-C6 alquila;
Ra, independentemente em cada ocorrência, é hidrogênio ou C1-C6 alquila; Rb, independentemente em cada ocorrência, é selecionado do grupo que consiste em NO2, C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, C1-C6 haloalquila, OH, O(C1-C6 alquila), O(C1-C6 haloalquila), SH, S(C1-C6 alquila), S(C1-C6 haloalquila), NH2, NH(C1-C6 alquila), NH(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 alquil)2, N(C1-C6 haloalquil)2, NRcRd, CN, C(O)OH, C(O)O(C1-C6 alquila), C(O)O(C1-C6 haloalquila), C(O)NH2, C(O)NH(C1-C6 alquila), C(O)NH(C1-C6 haloalquila), C(O)N(C1-C6 alquil)2, C(O)N(C1-C6 haloalquil)2, C(O)NR14-aR14-b, S(O)2OH, S(O)2O(C1-C6 alquila), S(O)2O(C1-C6 haloalquila), S(O)2NH2, S(O)2NH(C1-C6 alquila), S(O)2NH(C1-C6 haloalquila), S(O)2N(C1-C6 alquil)2, S(O)2N(C1-C6 haloalquil)2, S(O)2NRcRd,OC(O)H, OC(O)(C1-C6 alquila), OC(O)(C1-C6 haloalquila), N(H)C(O)H, N(H)C(O)(C1-C6 alquila), N(H)C(O)(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 alquil)C(O)H, N(C1-C6 alquil)C(O)(C1-C6 alquila), N(C1-C6 alquil)C(O)(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 haloalquil)C(O)H, N(C1- C6 haloalquil)C(O)(C1-C6 alquila), N(C1-C6 haloalquil)C(O)(C1-C6 haloalquila), OS(O)2(C1-C6 alquila), OS(O)2(C1-C6 haloalquila), N(H)S(O)2(C1-C6 alquila), N(H)S(O)2(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 alquil)S(O)2(C1-C6 alquila), N(C1-C6 alquil)S(O)2(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 haloalquil)S(O)2(C1-C6 alquila), e N(C1-C6 haloalquil)S(O)2(C1- C6 haloalquila), em que Rc e Rd são tomados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados para formar um heterociclo de 3 a 10 membros; e contanto que: (i) quando X for CR12, Y seja NRa, Z seja uma ligação, L1 seja *1-CH2-#1, e L2 seja #2-CH2-*2; então ou: (i-1) pelo menos um de R3, R4, e R5 seja hidrogênio ou halogênio; ou
(i-2) R3 e R12 são tomados juntos para formar um CR13R14 grupo; (ii) quando X for CR12, Y é NRa, Z seja uma ligação, e R3 e R12 são tomados juntos para formar CR13R14; então ou: (ii-1) L1 é selecionado do grupo que consiste em *1-C(=O)- #1, *1-CH2-#1, *1-CH2CH2-#1, *1-CH2CH2CH2-#1, *1-OCH2CH2C(=O)- #1, *1-OCH2CH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1 e *1-OCH2CH2CH2-#1; ou (ii-2) L2 é selecionado do grupo que consiste em #2-C(=O)- *2, #2-CH2-*2, #2-CH2CH2-*2, #2-CH2CH2CH2-*2, #2-C(=O)CH2CH2O- *2, #2-C(=O)CH2CH2CH2O-*2, #2-CH2CH(OH)CH2O-*2, #2-CH2O-*2, #2-CH2CH2O-*2, e #2-CH2CH2CH2O-*2; e (iii) quando X for N e Y for uma ligação; então: L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1- OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1-OCH2CH2CH2- #1; e também contanto que, quando Z for CR10R11, então pelo menos um de R1 e R2 seja substituído por dois ou mais grupos halo.
[00178] Modalidade 2. O composto de modalidade 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (I) é um composto de fórmula (II) (II) contanto que: (i) quando Y for NRa, Z seja uma ligação, L1 seja *1-CH2- #1, e L2 seja #2-CH2-*2; então ou:
(i-1) pelo menos um de R3, R4, e R5 seja hidrogênio ou halogênio; ou (i-2) R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; e (ii) quando Y for NRa, Z seja uma ligação, e R3 e R12 são tomados juntos para formar CR13R14; então ou: (ii-1) L1 é selecionado do grupo que consiste em *1-C(=O)- #1, *1-CH2-#1, *1-CH2CH2-#1, *1-CH2CH2CH2-#1, *1-OCH2CH2C(=O)- #1, *1-OCH2CH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1-OCH2CH2CH2-#1; ou (ii-2) L2 é selecionado do grupo que consiste em #2-C(=O)- *2, #2-CH2-*2, #2-CH2CH2-*2, #2-CH2CH2CH2-*2, #2-C(=O)CH2CH2O- *2, #2-C(=O)CH2CH2CH2O-*2, #2-CH2CH(OH)CH2O-*2, #2-CH2O-*2, #2-CH2CH2O-*2 e #2-CH2CH2CH2O-*2.
[00179] Modalidade 3. O composto de modalidade 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (II) é um composto de fórmula (IV) (IV) contanto que: (i) quando Z for uma ligação, L1 seja *1-CH2-#1, e L2 seja #2-CH2-*2; então ou: (i-1) pelo menos um de R3, R4, e R5 seja hidrogênio ou halogênio; ou (i-2) R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; e
(ii) quando Z for uma ligação, e R3 e R12 são tomados juntos para formar CR13R14; então ou: (ii-1) L1 é selecionado do grupo que consiste em *1-C(=O)- #1, *1-CH2-#1, *1-CH2CH2-#1, *1-CH2CH2CH2-#1, *1-OCH2CH2C(=O)- #1, *1-OCH2CH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1-OCH2CH2CH2-#1; ou (ii-2) L2 é selecionado do grupo que consiste em #2-C(=O)- *2, #2-CH2-*2, #2-CH2CH2-*2, #2-CH2CH2CH2-*2, #2-C(=O)CH2CH2O- *2, #2-C(=O)CH2CH2CH2O-*2, #2-CH2CH(OH)CH2O-*2, #2-CH2O-*2, #2-CH2CH2O-*2, e #2-CH2CH2CH2O-*2.
[00180] Modalidade 4. O composto de modalidade 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (IV) é um composto de fórmula (IV-a) (IV-a) em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e contanto que quando L1 for *1-CH2-#1, e L2 for #2-CH2-*2; em seguida pelo menos um de R3, R4, e R5 seja hidrogênio ou halogênio.
[00181] Modalidade 5. O composto de modalidade 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (IV) é um composto de fórmula (IV-b)
(IV-b).
[00182] Modalidade 6. O composto de modalidade 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (IV) é um composto de fórmula (IV-c) (IV-c) em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila.
[00183] Modalidade 7. O composto de modalidade 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (IV) é um composto de fórmula (IV-d) (IV-d).
[00184] Modalidade 8. O composto de modalidade 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (IV) é um composto de fórmula (IV-e) (IV-e) em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila.
[00185] Modalidade 9. O composto de modalidade 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (IV) é um composto de fórmula (IV-f) (IV-f).
[00186] Modalidade 10. O composto de modalidade 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (IV) é um composto de fórmula (IV-g) (IV-g)
em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila.
[00187] Modalidade 11. O composto de modalidade 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (IV) é um composto de fórmula (IV-h) (IV-h).
[00188] Modalidade 12. O composto de modalidade 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (II) é um composto de fórmula (V) (V).
[00189] Modalidade 13. O composto de modalidade 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (V) é um composto de fórmula (V-a)
(V-a) em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila.
[00190] Modalidade 14. O composto de modalidade 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (V) é um composto de fórmula (V-b) (V-b).
[00191] Modalidade 15. O composto de modalidade 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (V) é um composto de fórmula (V-c) (V-c) em que:
R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila.
[00192] Modalidade 16. O composto de modalidade 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (V) é um composto de fórmula (V-d) (V-d).
[00193] Modalidade 17. O composto de modalidade 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (V) é um composto de fórmula (V-e) (V-e) em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila.
[00194] Modalidade 18. O composto de modalidade 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (V) é um composto de fórmula (V-f)
(V-f).
[00195] Modalidade 19. O composto de modalidade 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (I) é um composto de fórmula (III) (III) contanto que quando Y for uma ligação; então: L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1- OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1-OCH2CH2CH2- #1; e também contanto que, quando Z for CR10R11, então pelo menos um de R1 e R2 seja substituído por dois ou mais grupos halo.
[00196] Modalidade 20. O composto de modalidade19, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (III) é um composto de fórmula (VI)
(VI) contanto que L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1- OCH2CH2CH2-#1; e também contanto que, quando Z for CR10R11, então pelo menos um de R1 e R2 seja substituído por dois ou mais grupos halo.
[00197] Modalidade 21. O composto de modalidade 20, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (VI) é um composto de fórmula (VI-a) (VI-a) contanto que L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1 e *1- OCH2CH2CH2-#1.
[00198] Modalidade 22. O composto de modalidade 20, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (VI) é um composto de fórmula (VI-b)
(VI-b) contanto que L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1- OCH2CH2CH2-#1.
[00199] Modalidade 23. O composto de modalidade 20, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um composto de fórmula (VI) é um composto de fórmula (VI-c) (VI-c) contanto que L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1- OCH2CH2CH2-#1; e pelo menos um de R1 e R2 seja substituído por dois ou mais grupos halo.
[00200] Modalidade 24. O composto de modalidade 20, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o composto de formula (VI) é um composto de fórmula (VI-d)
(VI-d) contanto que L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1 e *1- OCH2CH2CH2-#1.
[00201] Modalidade 25. O composto de modalidade19, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o composto de formula (III) é um composto de fórmula (VII) (VII).
[00202] Modalidade 26. O composto de modalidade 25, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o composto de formula (VII) é um composto de fórmula (VII-a) (VII-a).
[00203] Modalidade 27. O composto de modalidade 25, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o composto de formula (VII) é um composto de fórmula (VII-b)
(VII-b).
[00204] Modalidade 28. O composto de modalidade 25, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o composto de formula (VII) é um composto de fórmula (VII-c) (VII-c).
[00205] Modalidade 29. O composto de modalidade 25, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o composto de formula (VII) é um composto de fórmula (VII-d) (VII-d).
[00206] Modalidade 30. Um composto selecionado do grupo que consiste em um composto de Tabela 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00207] Modalidade 31. Uma composição farmacêutica que compreende um composto de acordo com qualquer uma das modalidades precedentes, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um transportador farmaceuticamente aceitável.
[00208] Modalidade 32. Um método de tratamento de uma doença ou distúrbio mediado por uma via de resposta integrada ao estresse (ISR) em um indivíduo em necessidade do mesmo compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 30, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica de modalidade 31.
[00209] Modalidade 33. O método de acordo com a modalidade 32, em que o composto, o sal farmaceuticamente aceitável, ou a composição farmacêutica é administrada em combinação com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais agentes anticâncer adicionais.
[00210] Modalidade 34. O método de acordo com a modalidade 32, em que a doença ou distúrbio é mediado por fosforilação de eIF2α e/ou a atividade de fator de troca de nucleotídeo de guanina (GEF) de eIF2B.
[00211] Modalidade 35. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 32 a 34, em que a doença ou distúrbio é mediado por um decréscimo em síntese de proteína.
[00212] Modalidade 36. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 32 a 35, em que a doença ou distúrbio é mediado pela expressão de ATF4, CHOP ou BACE-1.
[00213] Modalidade 37. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 32 a 36, em que a doença ou distúrbio é uma doença neurodegenerativa, uma doença inflamatória, uma doença autoimune, uma síndrome metabólica, um câncer, uma doença vascular, uma doença ocular, ou uma doença musculoesquelética.
[00214] Modalidade 38. O método de acordo com a modalidade 37, em que a doença é doença de desaparecimento da substância branca, ataxia infantil com hipomielinização do SNC, síndrome de deficiência intelectual, doença de Alzheimer, doença de priônio, doença de Creutzfeldt-Jakob, doença de Parkinson, doença de esclerose lateral amiotrófica (ELA), comprometimento cognitivo, demência frontotemporal (FTD), lesão cerebral traumática, disfunção cognitiva pós-operatória (PCD), síndromes neuro-otológicas, perda de audição, doença de Huntington, acidente vascular cerebral, encefalopatia traumática crônica, lesão da medula espinhal, demências ou comprometimento cognitivo, artrite, artrite psoriática, psoríase, artrite idiopática juvenil, asma, asma alérgica, asma brônquica, tuberculose, distúrbio crônico das vias aéreas, fibrose cística, glomerulonefrite, nefropatia membranosa, sarcoidose, vasculite, ictiose, rejeição de transplante, cistite intersticial, dermatite atópica ou doença inflamatória intestinal, doença de Crohn, colite ulcerativa, doença celíaca, lúpus eritematoso sistêmico, diabetes tipo 1, esclerose múltipla, artrite reumatoide, esteatose hepática alcoólica, obesidade, intolerância à glicose, resistência à insulina, hiperglicemia, fígado gorduroso, dislipidemia, hiperlipidemia, diabetes tipo 2, câncer de pâncreas, câncer de mama, câncer de rim, câncer de bexiga, câncer de próstata, câncer testicular, câncer urotelial, câncer endometrial, câncer de ovário, câncer cervical, câncer renal, câncer de esôfago, tumor estromal gastrointestinal (GIST), mieloma múltiplo, câncer de células secretoras, câncer de tireoide, carcinoma gastrointestinal, leucemia mieloide crônica, carcinoma hepatocelular, câncer de cólon, melanoma, glioma maligno, glioblastoma, glioblastoma multiforme, astrocitoma, gangliocitoma displásico do cerebelo, Sarcoma de Ewing, rabdomiossarcoma, ependimoma, meduloblastoma, adenocarcinoma ductal, carcinoma adenoescamoso, nefroblastoma, carcinoma de células acinares, câncer de pulmão, linfoma não Hodgkin, linfoma de Burkitt, leucemia linfocítica crônica, gamopatia de significância indeterminada (MGUS), plasmocitoma, linfoma linfoplasmacítico, leuce- mia linfoblástica aguda, doença Pelizaeus-Merzbacher, aterosclerose, aneurisma da aorta abdominal, doença da artéria carótida, trombose venosa profunda, doença de Buerger, hipertensão venosa crônica, calcificação vascular, telangiectasia ou linfoedema, glaucoma, degene- ração macular relacionada com a idade, doença retinal inflamatória, doença vascular da retina, retinopatia diabética, uveíte, rosácea, síndrome de Sjogren ou neovascularização na retinopatia proliferativa, hiper-homocisteinemia, atrofia do músculo esquelético, miopatia, distrofia muscular, atrofia muscular, sarcopenia, distrofia muscular de Duchenne (DMD), doença de Becker, distrofia miotônica, cardiomiopatia dilatada ligada ao X, atrofia muscular espinhal (SMA).
[00215] Modalidade 39. Um método de produção de uma proteína, compreendendo contatar uma célula eucariótica compreendendo um ácido nucleico codificando a proteína com o composto ou sal de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 30.
[00216] Modalidade 40. O método de acordo com a modalidade 39, compreendendo cultivar a célula em um meio de cultura in vitro compreendendo o composto ou sal.
[00217] Modalidade 41. Um método de cultivar uma célula eucariótica compreendendo um ácido nucleico codificando uma proteína, compreendendo contactar a célula eucariótica com um meio de cultura in vitro compreendendo um composto ou sal de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 30.
[00218] Modalidade 42. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 39 a 41, em que o ácido nucleico codificando a proteína é um ácido nucleico recombinante.
[00219] Modalidade 43. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 39 a 42, em que a célula é uma célula renal embriônica humana (HEK) ou uma célula de ovário de hamster chinês (CHO).
[00220] Modalidade 44. Um método de produção de uma proteína, compreendendo contactar um sistema de síntese de proteína sem célula (CFPS) compreendendo fator 2 de início eucariótico (eIF2) e um ácido nucleico codificando uma proteína com o composto ou sal de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 30.
[00221] Modalidade 45. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 39 a 44, em que a proteína é um anticorpo ou um fragmento do mesmo.
[00222] Modalidade 46. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 39 a 45, compreendendo purificar a proteína.
[00223] Modalidade 47. Um meio de cultura celular in vitro, compreendendo o composto ou sal de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 30 e nutrientes para crescimento celular.
[00224] Modalidade 48. O meio de cultura celular de modalidade 47, compreendendo uma célula eucariótica compreendendo um ácido nucleico codificando uma proteína.
[00225] Modalidade 49. O meio de cultura celular de modalidade 47 ou 48, também compreendendo um composto par induzir a expressão da proteína.
[00226] Modalidade 50. O meio de cultura celular de acordo com qualquer uma das modalidades 47 a 49, em que o ácido nucleico codificando a proteína é um ácido nucleico recombinante.
[00227] Modalidade 51. O meio de cultura celular de acordo com qualquer uma das modalidades 47 a 50, em que a proteína é um anticorpo ou um fragmento do mesmo.
[00228] Modalidade 52. O meio de cultura celular de acordo com qualquer uma das modalidades 47 a 51, em que a célula eucariótica é um célula renal embiônica humana (HEK) ou uma célula de ovário de hamster chinês (CHO).
[00229] Modalidade 53. Um sistema de síntese de proteína sem célula (CFPS) compreendendo fator 2 de início eucariótico (eIF2) e um ácido nucleico codificando uma proteína com o composto ou sal de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 30.
[00230] Modalidade 54. O sistema CFPS de modalidade 53, compreendendo um extrato de célula eucariótica compreendendo eIF2.
[00231] Modalidade 55. O sistema CFPS de modalidade 53 ou 54, também compreendendo eIF2B.
[00232] Modalidade 56. O sistema CFPS de acordo com qualquer uma das modalidades 53 a 55, em que a proteína é um anticorpo ou um fragmento do mesmo.
EXEMPLOS
[00233] Embora a invenção tenha sido descrita e ilustrada com um certo grau de particularidade, entende-se que a presente invenção foi feita apenas a título de exemplo, e que numerosas mudanças na combinação e disposição das partes podem ser recorridas por aqueles versados na técnica, sem se afastar do espírito e escopo da invenção, conforme definido pelas reivindicações.
[00234] As reações químicas nos Exemplos descritos podem ser prontamente adaptadas para preparar uma série de outros compostos descritos neste documento, e métodos alternativos para a preparação dos compostos desta invenção são considerados como estando dentro do escopo desta invenção. Por exemplo, a síntese de compostos não exemplificados de acordo com a presente invenção pode ser realizada com sucesso por modificações evidentes para aqueles versados na técnica, por exemplo, protegendo apropriadamente grupos interferentes, utilizando outros reagentes adequados conhecidos na técnica diferentes daqueles descritos, ou fazendo modificações de rotina nas condições de reação, reagentes e materiais de partida. Alternativamente, outras reações aqui descritas, ou conhecidas na técnica serão reconhecidas como tendo aplicabilidade para a preparação de outros compostos da presente invenção.
[00235] Em alguns casos, os estereoisômeros são separados para dar enantiômeros ou diastereômeros como estereoisômeros desconhecidos simples e são arbitrariamente desenhados como isômeros únicos. Quando apropriado, é fornecida informação sobre o método de separação e o tempo e a ordem de eluição. Nos exemplos biológicos, os compostos testados foram preparados de acordo com os procedimentos sintéticos aí descritos. Para qualquer composto dado de estereoquímica absoluta desconhecida para o qual uma estereoquímica foi arbitrariamente atribuída e para o qual uma rotação específica e / ou tempo de eluição de HPLC quiral foi medido, os dados biológicos relatados para esse composto foram obtidos usando o enantiômero ou diastereoisômero associado com a referida rotação específica e / ou tempo de eluição de HPLC quiral.
[00236] Em alguns casos, a rotação ótica foi determinada no polarímetro digital Jasco DIP-360 em um comprimento de onda de 589 nm (linha D do sódio) e são relatados como [α] DT para uma dada temperatura T (expressa em ° C). Quando apropriado, é dada informação sobre o solvente e a concentração (expressa como g/100 mL).
[00237] Abreviações: br. s. Singleto amplo clorofórmio-d Clorofórmio deuterado metanol-d4 Metanol deuterado DIAD Di-isopropil azodicarboxilato DCM Diclorometano DEA Dietilamina DIPEA Di-isopropiletilamina DMF N,N-Dimetillformamida
DMSO-d6 Dimetilsulfóxido deuterado d Dubleto EDC.HCl Ácido 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodi-imida hidroclórico EtOAc Acetato de etila EtOH Etanol g Grama HATU (hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)- N,N,N’,N’-tetrametilurônio) HOBT Hidroxibenzotriazol HPLC Cromatografia Líquida de Alto Desempenho L Litro LCMS Espectrometria de massa de Cromatografia Líquida MeCN Acetonitrila MeOH Metanol mg Miligrama mL Mililitro mmol Milimoles m Multipleto RMN Ressonância Magnética Nuclear q quarteto RT Temperatura ambiente s singleto SFC Cromatografia de Fluido Supercrítico TFA ácido trifluoroacético THF Tetra-hidrofurano TLC Cromatografia de camada fina t tripleto
Exemplo 1 Síntese de N,N'-((1S,3S)-ciclopentano-1,3-di-ila)bis(2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamida) Etapa 1: Síntese de terc-butil ((1S,3S)-3-(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acetamido)ciclopentil)carbamato:
[00238] A uma solução agitada de ácido 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acético (1,000 g, 4,9 mmols, 1,0 equiv) em DMF (10 ml) foram adicionados terc-butil ((1S,3S)-3-aminociclopentil)carbamato (0,900 g, 4,9 mmols, 1,2 equiv), HATU (2,793 g, 7,35 mmols, 1,5 equiv) e DIPEA (1,265 g, 9,8 mmols, 2,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água e um precipitado foi formado. O precipitado sólido resultante foi filtrado e lavado com água gelada, secado sob vácuo para obter terc-butil ((1S,3S)-3-(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido)ciclopentil) carbamato (0,700 g, 36% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 387,1 [M+H] +. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,07 (d, J = 7,9 Hz, 1
H), 7,49 (t, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,06 (dd, J = 2,6, 11,4 Hz, 1 H), 6,97 - 6,76 (m, 2 H), 4,48 (s, 2 H), 4,24 - 4,08 (m, 1 H), 3,90 (d, J = 6,6 Hz, 1 H), 1,92 (dd, J = 5,5, 9,4 Hz, 2 H), 1,68 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,37 (s, 8 H). Etapa 2: Síntese de 2,2,2-trifluoroacetato de N-((1S,3S)-3- aminociclopentil)-2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida:
[00239] A uma solução agitada de terc-butil ((1S,3S)-3-(2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamido)ciclopentil)carbamato (0,700 g, 1,81 mmol, 1,0 equiv) em DCM (15 ml) foi adicionado TFA (2 ml). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. O progresso de reação foi monitorado por RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O composto bruto foi cristalizado por trituração em pentano e em seguida em éter de petróleo para obter 2,2,2-trifluoroacetato de N-((1S,3S)-3- aminociclopentil)-2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida (900 mg, produção quantitativa). LCMS 287,1 [M+H]+. 1 H RMN (400 MHz,DMSO-d6) δ 8,17 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 7,79 (br. s., 2 H), 7,50 (t, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,06 (dd, J = 2,6, 11,4 Hz, 1 H), 6,84 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 4,51 (s, 2 H), 4,30 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 3,62 (br. s., 1 H), 2,07 (br. s., 1 H), 2,00 (d, J = 6,1 Hz, 1 H), 1,92 - 1,73 (m, 2 H), 1,52 (d, J = 12,3 Hz, 2 H). Etapa 3: Síntese de N,N'-((1S,3S)-ciclopentano-1,3-di-ila)bis(2-(4-cloro- 3-fluorofenóxi)acetamida):
[00240] A uma solução agitada de ácido 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acético (0,128 g, 0,63 mmol, 1,0 equiv) em DMF (4 ml) foram adicionados 2,2,2-trifluoroacetato de N-((1S,3S)-3-aminociclopentil)-2- (4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida (0,304 g, 0,76 mmol, 1,2 equiv), HATU (0,361 g, 0,95 mmol, 1,5 equiv) e DIPEA (0,163 g, 1,26 mmol, 2,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água e um precipitado foi formado. O precipitado sólido resultante foi filtrado e lavado com água gelada, secado sob vácuo para obter N,N'-((1S,3S)-ciclopentano-1,3-di- ila)bis(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida) (Composto 1 - 0,170 g, 58% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 473,1 [M+H] +. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,13 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,49 (t, J = 8,8 Hz, 1H), 7,06 (dd, J = 11,5, 2,9 Hz, 1H), 6,84 (dd, J = 9,0, 2,9 Hz, 1H), 4,49 (s, 2H), 4,25 (p, J = 6,9 Hz, 1H), 1,98 (p, J = 9,6 Hz, 1H), 1,75 (t, J = 7,1 Hz, 1H), 1,44 (q, J = 9,2, 7,9 Hz, 1H). Exemplo 2 Síntese de 5-cloro-N-((1S,3S)-3-(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acetamido)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida
[00241] A uma solução agitada de ácido 5-clorobenzofuran-2- carboxílico (0,124 g, 0,63 mmol, 1,0 equiv) em DMF (4 ml) foram adicionados 2,2,2-trifluoroacetato de N-((1S,3S)-3-aminociclopentil)-2- (4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida (0,304 g, 0,76 mmol, 1,2 equiv), HATU (0,361 g, 0,95 mmol, 1,5 equiv) e DIPEA (0,163 g, 1,26 mmol, 2,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água e um precipitado foi formado. O precipitado sólido resultante foi filtrado e lavado com água gelada, secado sob vácuo para obter 5-cloro-N-((1S,3S)-3-(2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamido)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida (Composto 14 - 0,070 g, 24% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 464,1 [M+H] +, 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,77 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,52 – 7,45 (m, 2H), 7,08 (dd,
J = 11,4, 2,9 Hz, 1H), 6,86 (dd, J = 9,0, 2,9 Hz, 1H), 4,52 (s, 2H), 4,44 (p, J = 7,3 Hz, 1H), 4,33 (h, J = 6,9 Hz, 1H), 2,06 (tp, J = 12,6, 7,3, 6,1 Hz, 2H), 1,87 (qt, J = 13,3, 6,8 Hz, 2H), 1,66 – 1,42 (m, 2H). Exemplo 3 Síntese de 6-cloro-N-((1S,3S)-3-(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acetamido)ciclopentil)quinolina-2-carboxamida
[00242] A uma solução agitada de ácido 6-cloroquinolina-2- carboxílico (0,200 g, 0,97 mmol, 1,0 equiv) em DMF (6 ml) foram adicionados 2,2,2-trifluoroacetato de N-((1S,3S)-3-aminociclopentil)-2- (4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida (0,466 g, 1,16 mmol, 1,2 equiv), HATU (0,570 g, 1,5 mmol, 1,5 equiv) e DIPEA (0,250 g, 1,94 mmol, 2,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (20 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mL × 6). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por HPLC de fase reversa para obter 6-cloro-N-((1S,3S)- 3-(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido)ciclopentil)quinolina-2- carboxamida puro (Composto 16 - 0,260 g, 59% de produção) como um sólido branco. LCMS 476,2 [M+H] +. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,86 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,53 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 8,24 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,18 (t, J = 8,6 Hz, 3H), 7,88 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 7,50 (t, J = 8,9 Hz, 1H), 7,08 (dd, J = 11,4, 2,8 Hz, 1H), 6,90 – 6,82 (m, 1H), 4,52 (s, 3H), 4,36 (h, J = 7,3 Hz, 1H), 2,16 – 1,82 (m, 4H), 1,68 (dq, J = 13,0, 8,1 Hz, 1H), 1,59 – 1,45 (m, 1H).
Exemplo 4 Síntese de 5-cloro-N-((1S,3S)-3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida Etapa 1: Síntese de terc-butil ((1S,3S)-3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)carbamato:
[00243] A uma solução agitada de terc-butil ((1S,3S)-3- aminociclopentil)carbamato (0,990 g, 4,95 mmols, 1,0 equiv) em DMF (10 ml) foi adicionado K2CO3 (1,366 g, 9,9 mmols, 2,0 equiv) seguido pela adição de 2-((4-cloro-3-fluorofenóxi)metil)oxirano (1,000 g, 4,95 mmols, 1,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar a 60°C durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água e um precipitado foi formado. O precipitado sólido resultante foi filtrado e lavado com água gelada, secado sob vácuo para obter terc-butil ((1S,3S)-3-((3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)carbamato (1,100 g). LCMS 403,3 [M+H] +.
Etapa 2: Síntese de 1-(((1S,3S)-3-aminociclopentil)amino)-3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)propan-2-ol 2,2,2-trifluoroacetato:
[00244] A uma solução agitada de terc-butil ((1S,3S)-3-((3-(4-cloro- 3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)carbamato (1,100 g, 2,74 mmols, 1,0 equiv) em DCM (10 ml) foi adicionado TFA (2 ml). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. O progresso de reação foi monitorado por LCMS e RMN. Após conclusão da reação, mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O composto bruto foi cristalizado por trituração em pentano e em seguida em éter de petróleo para obter 2,2,2-trifluoroacetato de 1- (((1S,3S)-3-aminociclopentil)amino)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2- ol puro (1,100 g, produção quantitativa). LCMS 303,2 [M+H] +. Etapa 3: Síntese de 5-cloro-N-((1S,3S)-3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida:
[00245] A uma solução agitada de ácido 5-clorobenzofuran-2- carboxílico (0,140 g, 0,7 mmol, 1,0 equiv) em DMF (4 ml) foram adicionados 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(((1S,3S)-3-aminociclopentil) amino)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol (0,350 g, 0,84 mmol, 1,2 equiv), HATU (0,399 g, 1,05 mmol, 1,5 equiv) e DIPEA (0,181 g, 1,4 mmol, 2,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (20 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mL × 6). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por HPLC de fase reversa para obter 5-cloro-N- ((1S,3S)-3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil) benzofuran-2-carboxamida (Composto 18 - 0,090 g, 40,36%) como um sólido esbranquiçado. LCMS 481,2 [M+H] +. 1H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,66 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 8,8
Hz, 1H), 7,55 – 7,34 (m, 3H), 7,07 (dd, J = 11,7, 2,9 Hz, 1H), 6,84 (dd, J = 9,0, 2,8 Hz, 1H), 5,01 (s, 1H), 4,45 – 4,26 (m, 1H), 4,00 (dt, J = 9,3, 3,0 Hz, 1H), 3,86 (dt, J = 21,4, 5,9 Hz, 2H), 3,17 (q, J = 6,1 Hz, 1H), 2,63 (d, J = 13,3 Hz, 1H), 1,97 (dtt, J = 33,0, 12,8, 7,0 Hz, 2H), 1,74 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 1,66 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 1,54 (dq, J = 11,8, 8,0 Hz, 1H), 1,40 – 1,27 (m, 1H). Exemplo 5 Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1S,3S)-3-((3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)acetamida
[00246] A uma solução agitada de ácido 2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acético (0,120 g, 0,6 mmol, 1,0 equiv) em DMF (3 ml) foram adicionados 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(((1S,3S)-3-aminociclopentil) amino)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol (0,300 g, 0,72 mmol, 1,2 equiv), HATU (0,342 g, 0,90 mmol, 1,5 equiv) e DIPEA (0,155 g, 1,2 mmol, 2,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (20 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL X 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (25 mL X 6). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por HPLC de fase reversa para obter 2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-N-((1S,3S)-3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil) amino)ciclopentil)acetamida (Composto 20 - 0,020 g, 6,96%) como um sólido esbranquiçado. LCMS 489,2 [M+H] +. 1H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,03 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,47 (dt, J = 16,9, 8,8 Hz, 2H), 7,06 (dd, J = 11,3, 2,8 Hz, 2H), 6,88 – 6,80 (m, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,20 (h, J = 7,2
Hz, 1H), 3,99 (dd, J = 10,0, 4,0 Hz, 1H), 3,86 (dt, J = 19,1, 5,9 Hz, 2H), 3,14 (p, J = 6,1 Hz, 1H), 2,67 – 2,51 (m, 1H), 2,00 – 1,81 (m, 3H), 1,64 (th, J = 13,0, 6,0 Hz, 2H), 1,34 (dddd, J = 30,6, 22,7, 15,3, 11,6 Hz, 2H). Exemplo 6 Síntese de 6-cloro-N-((1S,3S)-3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)quinolina-2-carboxamida
[00247] A um ácido 6-cloroquinolina-2-carboxílico agitado (0,180 g, 0,87 mmol, 1,0 equiv) em DMF (5 ml) foram adicionados 2,2,2-trifluoro- acetato de 1-(((1S,3S)-3-aminociclopentil)amino)-3-(4-cloro-3-fluoro- fenóxi)propan-2-ol (0,434 g, 1,044 mmol, 1,2 equiv), HATU (0,496 g, 1,305 mmol, 1,5 equiv) e DIPEA (0,225 g, 1,74 mmol, 2,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (25 mL) e extraída com acetato de etila (40 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mL × 6). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por HPLC de fase reversa para obter 6-cloro-N-((1S,3S)-3- ((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)quinolina- 2-carboxamida (Composto 13 - 0,060 g, 14%) como um sólido esbranquiçado. LCMS 492,2 [M+H] +, 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,72 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,53 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 8,24 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,17 (dd, J = 8,9, 2,7 Hz, 2H), 7,88 (dd, J = 9,0, 2,5 Hz, 1H), 7,45 (t, J = 8,9 Hz, 1H), 7,07 (dd, J = 11,7, 2,9 Hz, 1H), 6,84 (dd, J = 9,2, 2,9 Hz, 1H), 5,04 (s, 1H), 4,46 (h, J = 7,8 Hz, 1H), 4,01 (dt, J = 9,8, 3,2 Hz, 1H), 3,88 (dt, J = 17,7, 5,9 Hz, 2H), 3,23 (p, J = 5,9, 5,5 Hz, 1H), 2,74 – 2,51 (m, 2H), 2,04 (tdd, J = 20,0, 9,5, 5,7 Hz, 2H), 1,82 (q, J = 6,7 Hz,
2H), 1,62 (dq, J = 11,8, 8,1 Hz, 1H), 1,37 (dt, J = 15,3, 7,2 Hz, 1H), 1,23 (s, 1H). Exemplo 7 Síntese de N,N'-((1R,3S)-ciclopentano-1,3-di-ila)bis(2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamida) Etapa 1: Síntese de terc-butil ((1S,3R)-3-(2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamido)ciclopentil)carbamato:
[00248] A uma solução agitada de ácido 2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acético (0,202 g, 1,0 mmol, 1,0 equiv) em DMF (10 ml) foram adicionados terc-butil ((1S,3R)-3-aminociclopentil)carbamato (0,202 g, 1,0 mmol, 1,0 equiv), HATU (0,57 g, 1,5 mmol, 1,0 equiv) e DIPEA (2,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) o que resulta nos precipitados. O sólido resultante foi filtrado e lavado com água gelada, secado sob vácuo para obter terc-butil ((1S,3R)-3-(2- (4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido)ciclopentil)carbamato (0,32 g, 83,68 % de produção) como um sólido branco. LCMS 387,1 [M+H] +.
Etapa 2: Síntese de 2,2,2-trifluoroacetato de N-((1R,3S)-3- aminociclopentil)-2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida:
[00249] A uma solução agitada de terc-butil ((1S,3R)-3-(2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamido)ciclopentil)carbamato (0,32 g, 0,83 mmol, 1,0 equiv) em DCM (15 ml) foi adicionado TFA (0,3 ml). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. O progresso de reação foi monitorado por RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O composto bruto foi cristalizado em pentano e em seguida em éter de petróleo para obter 2,2,2-trifluoroacetato de N-((1R,3S)-3-aminociclo- pentil)-2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida (0,25 g, 75% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 287,1 [M+H] +. Etapa 3: Síntese de N,N'-((1R,3S)-ciclopentano-1,3-di-ila)bis(2-(4-cloro- 3-fluorofenóxi)acetamida):
[00250] A uma solução agitada de ácido 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acético (0,126 g, 0,625 mmol, 1,0 equiv) em DMF (7 ml) foram adicionados 2,2,2-trifluoroacetato de N-((1R,3S)-3-aminociclopentil)-2- (4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida (0,25 g, 0,625 mmol, 1,0 equiv), HATU (0,36 g, 0,937 mmol, 1,5 equiv) e DIPEA (0,5 mL, 2,5 mmol, 4,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água o que resulta no precipitado. O precipitado sólido resultante foi filtrado e lavado com água gelada, secado sob vácuo para obter N,N'-((1R,3S)-ciclopentano-1,3-di- ila)bis(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida) (Composto 15 - 0,17g, 58% de produção) como um sólido branco. LCMS 473,1 [M+H] +. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,19 (d, J = 7,0 Hz, 2 H), 7,49 (t, J = 8,8 Hz, 3 H), 7,05 (d, J = 2,6 Hz, 1 H), 7,08 (d, J = 2,6 Hz, 1 H), 6,85 (dd, J = 9,0, 1,5 Hz, 3 H), 4,51 (s, 4 H), 4,05 (d, J = 6,6 Hz, 2 H), 2,09 - 2,27 (m, 2 H), 1,70 - 1,87 (m, 3 H), 1,60 (d, J = 5,3 Hz, 2 H), 1,33 - 1,49 ppm (m, 2 H).
Exemplo 8 Síntese de 5-cloro-N-((1S,3R)-3-(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acetamido)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida
[00251] A uma solução agitada de ácido 5-clorobenzofuran-2- carboxílico (0,070 g, 0,356 mmol, 1,0 equiv) em DMF (5 ml) foram adicionados 2,2,2-trifluoroacetato de N-((1R,3S)-3-aminociclopentil)-2- (4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida (0,157 g, 0,391 mmol, 1,1 equiv), HATU (0,203 g, 0,534 mmol, 1,5 equiv) e DIPEA (0,3 mL, 1,42 mmol, 4,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água o que resulta no precipitado. O precipitado sólido resultante foi filtrado e lavado com água gelada, secado sob vácuo e lavado com dietil éter para obter 5-cloro-N- ((1S,3R)-3-(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido)ciclopentil)benzofuran- 2-carboxamida (Composto 17 - 0,095 g, 57% de produção) como um sólido branco. LCMS 465,2 [M+H] +. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,81 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 8,22 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 7,87 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 7,69 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,55 - 7,42 (m, 2 H), 7,09 (dd, J = 2,9, 11,6 Hz, 1 H), 6,86 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 4,53 (s, 2 H), 4,33 - 4,16 (m, 1 H), 4,16 - 4,01 (m, 1 H), 2,39 - 2,22 (m, 1 H), 2,00 - 1,79 (m, 2 H), 1,74 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 1,70 - 1,51 (m, 2 H).
Exemplo 9 Síntese de 6-cloro-N-((1S,3R)-3-(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido) ciclopentil)quinolina-2-carboxamida
[00252] A uma solução agitada de ácido 5-clorobenzofuran-2- carboxílico (0,070 g, 0,338 mmol, 1,0 equiv) em DMF (5 ml) foram adicionados 2,2,2-trifluoroacetato de N-((1R,3S)-3-aminociclopentil)-2- (4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida (0,148 g, 0,372 mmol, 1,1 equiv), HATU (0,193 g, 0,534 mmol, 1,5 equiv) e DIPEA (0,25 mL, 1,352 mmol, 4,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água o que resulta no precipitado. O precipitado sólido resultante foi filtrado e lavado com água gelada, secado sob vácuo e lavado com dietil éter para obter 6-cloro-N- ((1S,3R)-3-(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido)ciclopentil)quinolina-2- carboxamida (Composto 19 - 0,080 g, 50% de produção) como um sólido branco. LCMS 476,2 [M+H] +. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,91 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 8,55 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 8,36 - 8,23 (m, 1 H), 8,23 - 8,07 (m, 2 H), 7,88 (dd, J = 2,4, 9,0 Hz, 1 H), 7,48 (t, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,08 (dd, J = 2,6, 11,4 Hz, 1 H), 6,86 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 4,55 (s, 2 H), 4,32 (dd, J = 6,8, 14,7 Hz, 1 H), 4,20 - 4,02 (m, 1 H), 2,38 - 2,23 (m, 2 H), 2,01 - 1,73 (m, 3 H), 1,73 - 1,57 (m, 2 H).
Exemplo 10 Síntese de 5-cloro-N-((1S,3R)-3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida Etapa 1: Síntese de terc-butil ((1S,3R)-3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)carbamato:
[00253] A uma solução agitada de terc-butil ((1S,3R)-3- aminociclopentil)carbamato (0,2 g, 1 mmol, 1,0 equiv) em DMF (10 ml) foi adicionado K2CO3 (0,27 g, 1 mmol, 2,0 equiv) seguido pela adição de 2-((4-cloro-3-fluorofenóxi)metil)oxirano (0,2 g, 2 mmols, 1,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar a 60°C durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água o que resulta no precipitado. O precipitado sólido resultante foi filtrado e lavado com água gelada, secado sob vácuo para obter terc- butil ((1S,3R)-3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino) ciclopentil)carbamato (0,29 g, 72% de produção) como um sólido branco. LCMS 403,2 [M+H] +.
Etapa 2: Síntese de 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(((1R,3S)-3- aminociclopentil)amino)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol:
[00254] A uma solução agitada de terc-butil ((1S,3R)-3-((3-(4-cloro- 3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)carbamato (0,29 g, 0,721 mmol, 1,0 equiv) em DCM (10 ml) foi adicionado TFA (0,5 ml). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. O progresso de reação foi monitorado por LCMS e RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(((1R,3S)-3- aminociclopentil)amino)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol (0,3 g, 100% de produção) como semissólido amarelo. LCMS 303,1 [M+H] +. Etapa 3: Síntese de 5-cloro-N-((1S,3R)-3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida:
[00255] A uma solução agitada de ácido 5-clorobenzofuran-2- carboxílico (0,095 g, 0,480 mmol, 1,0 equiv) em DMF (5 mL) foram adicionados 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(((1R,3S)-3-aminociclopentil) amino)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol (0,2 g, 0,480 mmol, 1,0 equiv), HATU (0,274 g, 0,72 mmol, 1,5 equiv) e DIPEA (0,4 mL, mmol, 1,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mL × 6). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por cromatografia Combiflash (10% de MeOH em DCM como um eluente) para obter 5-cloro-N-((1S,3R)-3-((3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxa- mida (Composto 21 - 0,070 g, 30% de produção) como um sólido branco. LCMS 481,2[M+H] +. 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,82 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 7,86 (s, 1 H), 7,67 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,33 - 7,56 (m, 3 H),
7,02 - 7,13 (m, 1 H), 6,84 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 4,26 (br. s., 1 H), 3,86 - 4,12 (m, 3 H), 3,45 (br. s., 1 H), 2,99 (br. s., 1 H), 2,87 (br. s., 1 H), 1,84 - 2,06 (m, 2 H), 1,77 (br. s., 2 H), 1,65 ppm (br. s., 1 H). Exemplo 11 Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1S,3R)-3-((3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)acetamida Etapa 1: Síntese de terc-butil ((1S,3R)-3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)carbamato
[00256] A uma solução agitada de terc-butil ((1S,3R)-3- aminociclopentil)carbamato (0,2 g, 1 mmol, 1,0 equiv) em DMF (10 ml) foi adicionado K2CO3 (0,27 g, 1 mmol, 2,0 equiv) seguido pela adição de 2-((4-cloro-3-fluorofenóxi)metil)oxirano (0,2 g, 2 mmols, 1,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar a 60°C durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água o que resulta no precipitado. O precipitado sólido resultante foi filtrado e lavado com água gelada, secado sob vácuo para obter terc- butil ((1S,3R)-3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino) ciclopentil)carbamato (0,29 g, 72 % de produção) como um sólido branco. LCMS 403,2 [M+H] +
Etapa 2: Síntese de 1-(((1R,3S)-3-aminociclopentil)amino)-3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)propan-2-ol 2,2,2-trifluoroacetato
[00257] A uma solução agitada de terc-butil ((1S,3R)-3-((3-(4-cloro- 3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)carbamato (0,29 g, 0,721 mmol, 1,0 equiv) em DCM (10 ml) foi adicionado TFA (0,5 ml). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. O progresso de reação foi monitorado por LCMS e RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(((1R,3S)-3- aminociclopentil)amino)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol (0,300 g, 100% de produção) como um semissólido amarelo. LCMS 303,1 [M+H]+ Etapa 3: Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1S,3R)-3-((3-(4-cloro- 3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)acetamida
[00258] A uma solução agitada de ácido 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acético (0,2 g, 0,47 mmol, 1,0 equiv) em DMF (5 ml) foram adicionados 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(((1R,3S)-3-aminociclopentil)amino)-3-(4- cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol (0,09 g, 0,479 mmol, 1,0 equiv), HATU (0,364 g, 0,95 mmol, 2,0 equiv) e DIPEA (0,1 ml, 0,958 mmol, 2,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (20 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (25 mL X 6). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto obtido foi purificado por HPLC de fase reversa para obter 2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-N-((1S,3R)-3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)acetamida (Composto 2 - 0,047 g, 20% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 489,2 [M+H] +; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,14 (d, J = 7,45 Hz, 1 H) 7,33 - 7,51 (m, 2 H) 6,95 - 7,10 (m, 2 H) 6,75 - 6,88 (m, 2 H) 4,47 (s, 2 H) 4,13 (br. s., 1
H) 3,98 (br. s., 1 H) 3,89 (d, J = 7,89 Hz, 2 H) 3,11 (br. s., 2 H) 2,67 (br. s., 1 H) 2,02 (br. s., 1 H) 1,79 (d, J = 6,14 Hz, 2 H) 1,54 (d, J = 5,70 Hz, 2 H) 1,35 (br. s., 2 H). Exemplo 12 Síntese de 6-cloro-N-((1S,3R)-3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)quinolina-2-carboxamida
[00259] A uma solução agitada de ácido 6-cloroquinolina-2- carboxílico (0,050 g, 0,242 mmol, 1,0 equiv) em DMF (3 ml) foram adicionados 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(((1R,3S)-3-aminociclopentil) amino)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol (0,100 g, 0,242 mmol, 1,0 equiv), HATU (0,138 g, 0,363 mmol, 1,5 equiv) e DIPEA (0,125 g, 0,968 mmol, 4,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (20 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (25 mL X 6). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto obtido foi purificado por HPLC de fase reversa para obter 2-(4- cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1S,3R)-3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)acetamida (Composto 3 - 0,020 g, 16% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 492,3 [M+H] +. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,11 (br. s., 1 H), 8,52 (dd, J = 4,2, 8,6 Hz, 1 H), 8,24 - 8,11 (m, 1 H), 8,11 - 7,99 (m, 1 H), 7,86 - 7,71 (m, 1 H), 7,35 (br. s., 1 H), 6,76 - 6,57 (m, 1 H), 4,42 (br. s., 1 H), 4,17 - 3,90 (m, 3 H), 2,91 - 2,67 (m, 2 H), 1,98 - 1,87 (m, 1 H), 1,83 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 1,75 (br. s., 2 H).
Exemplo 13 Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1-(2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetil)pirrolidin-3-il)metil)acetamida
[00260] A uma solução agitada de ácido 2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acético (0,35 g, 0,875 mmol, 1,0 equiv) em DMF (5 ml) foram adicionados 2,2,2-trifluoroacetato de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N- (pirrolidin-3-ilmetil)acetamida (0,35 g, 0,875 mmol, 1,0 equiv), HATU (0,5 g, 1,31 mmol, 1,5 equiv) e DIPEA (0,6 mL, 3,52 mmols, 4,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mL × 4). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada. O material bruto obtido foi purificado por HPLC de fase reversa para obter 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1-(2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetil)pirrolidin-3-il)metil)acetamida (Composto 4 - 0,170 g, 41% de produção) como um sólido branco. LCMS 473,1 [M+H] +; 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,29 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,39 - 7,54 (m, 2 H), 6,95 - 7,14 (m, 2 H), 6,75 - 6,92 (m, 2 H), 4,69 - 4,84 (m, 2 H), 4,55 (d, J = 4,4 Hz, 2 H), 3,39 - 3,60 (m, 3 H), 3,12 - 3,29 (m, 3 H), 3,02 (dd, J = 12,3, 7,0 Hz, 1 H), 2,20 - 2,36 (m, 2 H), 1,96 (d, J = 6,6 Hz, 1 H), 1,86 (d, J = 6,1 Hz, 1 H), 1,65 (br. s., 1 H), 1,55 ppm (br. s., 1 H).
Exemplo 14 Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1-(6-cloroquinolina-2- carbonil)pirrolidin-3-il)metil)acetamida
[00261] A uma solução agitada de ácido 6-cloroquinolina-2- carboxílico (1,0 equiv) em DMF (4 ml) são adicionados 2,2,2- trifluoroacetato de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-(pirrolidin-3-ilmetil) acetamida (1,2 equiv), HATU (1,5 equiv) e DIPEA (2,0 equiv). A mistura de reação é deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto é confirmada por LCMS. A mistura de reação é diluída com água e um precipitado é formado. O precipitado sólido resultante é filtrado e lavado com água gelada, secado sob vácuo para obter 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1-(6-cloroquinolina-2-carbonil) pirrolidin-3-il)metil)acetamida (Composto 5). Exemplo 15 Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1-(5-clorobenzofuran-2- carbonil)pirrolidin-3-il)metil)acetamida
[00262] A uma solução agitada de ácido 6-clorobenzofuran-2- carboxílico (1,0 equiv) em DMF (4 ml) são adicionados 2,2,2- trifluoroacetato de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-(pirrolidin-3-ilmetil) acetamida (1,2 equiv), HATU (1,5 equiv) e DIPEA (2,0 equiv). A mistura de reação é deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto é confirmada por LCMS. A mistura de reação é diluída com água e um precipitado é formado. O precipitado sólido resultante é filtrado e lavado com água gelada, secado sob vácuo para obter 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1-(5-clorobenzofuran-2-carbonil) pirrolidin-3-il)metil)acetamida (Composto 6). Exemplo 16 Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1-(3-(4-cloro-3-fluorofenó- xi)-2-hidroxipropil)pirrolidin-3-il)metil)acetamida Etapa 1: Síntese de terc-butil 3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acetamido)metil)pirrolidina-1-carboxilato
[00263] A uma solução de terc-butil 3-(aminometil)pirrolidina-1- carboxilato (1000 mg, 5,0 mmols, 1,0 equiv) em DMF (5 mL) foram adicionados ácido 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acético (1025 mg, 5,0 mmols, 1,0 equiv) e HATU (3800 mg, 10,0 mmols, 2,0 equiv) em temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada durante 10 minutos, DIPEA (2,59 mL, 15,0 mmols, 3,0 equiv) foi adicionado. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL × 2). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (50 mL × 4), secados sobre Na2SO4 anidroso e concentrados para obter terc-butil 3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acetamido)metil)pirrolidina-1-carboxilato (1000 mg, 51 % de produção) como um semissólido amarelo. LCMS 387,1 [M+H]+ Etapa 2: Síntese de 2,2,2-trifluoroacetato de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)- N-(pirrolidin-3-ilmetil)acetamida
[00264] A uma solução agitada de terc-butil 3-((2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamido)metil)pirrolidina-1-carboxilato (1000 mg, 2,58 mmols, 1,0 equiv) em DCM (15 mL) foi adicionado TFA (5 mL). A mistura de reação resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite sob atmosfera de nitrogênio. A reação foi monitorada por TLC e LCMS. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter 2,2,2-trifluoroacetato de 2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-N-(pirrolidin-3-ilmetil)acetamida (800 mg, 77% de produção) como um semissólido marrom. LCMS 287,1 [M+H]+ Etapa 3: Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1-(3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)pirrolidin-3-il)metil)acetamida
[00265] A uma solução agitada de 2,2,2-trifluoroacetato de 2-(4- cloro-3-fluorofenóxi)-N-(pirrolidin-3-ilmetil)acetamida (800 mg, 2,08 mmols, 1,0 equiv) foram adicionados 2-((4-cloro-3-fluorofenóxi) metil)oxirano (424 mg, 2,08 mmols, 1,0 equiv) em DMF (5 mL) e K2CO3 (575 mg, 4,16 mmols, 2,0 equiv). A mistura de reação resultante foi aquecida a 90°C durante a noite. A reação foi monitorada por TLC e LCMS. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi diluída com água (200 mL) e extraída com EtOAc (200 mL) e lavada com água e solução de salmoura (2 × 150 mL) e secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada sob pressão reduzida para obter o bruto que foi purificado por HPLC de fase reversa para obter 2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-N-((1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)pirrolidin- 3-il)metil)acetamida (Composto 7 - 200 mg, 20% de produção) como um sólido amarelo claro. LCMS 489,3 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,21 (br. s., 1 H), 7,35 - 7,57 (m, 2 H), 7,03 (s, 1 H), 7,06 (s, 1 H), 6,83 (br. s., 2 H), 4,53 (s, 2 H), 4,00 (d, J = 7,89 Hz, 1 H), 3,91 (d, J = 7,45 Hz, 2 H), 3,35 (br. s., 2 H), 3,06 - 3,20 (m, 2 H), 2,74 (br. s., 4 H), 2,34 (br. s., 1 H), 1,84 (br. s., 1 H), 1,45 (br. s., 1 H). Exemplo 17 Síntese de 5-cloro-N-((1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil) pirrolidin-3-il)metil)benzofuran-2-carboxamida
[00266] A uma solução agitada de 2,2,2-trifluoroacetato de 5-cloro- N-(pirrolidin-3-ilmetil)benzofuran-2-carboxamida (1,0 equiv) em DMF (10 ml) é adicionado K2CO3 (2,0 equiv) seguido pela adição de 2-((4- cloro-3-fluorofenóxi)metil)oxirano (1,0 equiv). A mistura de reação é deixada agitar a 60°C durante 16 horas. A formação de produto é confirmada por LCMS. A mistura de reação é diluída com água o que resulta em um precipitado. O precipitado sólido resultante é filtrado e lavado com água gelada, secado sob vácuo para obter 5-cloro-N-((1-(3- (4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)pirrolidin-3-il)metil)benzofuran-2- carboxamida (Composto 8). Exemplo 18 Síntese de 6-cloro-N-((1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil) pirrolidin-3-il)metil)quinolina-2-carboxamida
[00267] A uma solução agitada de 2,2,2-trifluoroacetato de 6-cloro- N-(pirrolidin-3-ilmetil)quinolina-2-carboxamida (1,0 equiv) em DMF
(10 ml) é adicionado K2CO3 (2,0 equiv) seguido pela adição de 2-((4- cloro-3-fluorofenóxi)metil)oxirano (1,0 equiv). A mistura de reação é deixada agitar a 60°C durante 16 horas. A formação de produto é confirmada por LCMS. A mistura de reação é diluída com água e um precipitado é formado. O precipitado sólido resultante é filtrado e lavado com água gelada, secado sob vácuo para obter 6-cloro-N-((1-(3-(4- cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)pirrolidin-3-il)metil)quinolina-2- carboxamida (Composto 9). Exemplo 19 Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-(3-((2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamido)metil)pirrolidin-1-il)acetamida Etapa 1: terc-butil 3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido) metil)pirrolidina-1-carboxilato:
[00268] A uma solução agitada de terc-butil 3-(aminometil)pirrolidina- 1-carboxilato (1,0 equiv) em DMF (10 mL) são adicionados ácido 2-(4-
cloro-3-fluorofenóxi)acético (1,0 equiv) e HATU (2,0 equiv) em temperatura ambiente. A mistura de reação resultante é agitada durante 10 minutos e DIPEA (3,00 equiv) foi adicionado. A mistura de reação é deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto é confirmada por LCMS. A mistura de reação é diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL × 2). Os extratos orgânicos combinados são lavados com água (20 mL × 4), secados sobre sulfato de sódio anidroso e concentrados para obter terc-butil 3- ((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido)metil)pirrolidina-1-carboxilato. Etapa 2: Síntese de 2,2,2-trifluoroacetato de 2 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)- N-(pirrolidin-3-ilmetil)acetamida:
[00269] A uma solução agitada de terc-butil 3-((2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamido)metil)pirrolidina-1-carboxilato (2,5 mmol) em DCM (15 mL) é adicionado TFA (1 mL). A mistura de reação resultante é agitada em temperatura ambiente durante a noite. O progresso da reação é monitorado por espectroscopia de RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação é concentrada sob pressão reduzida para obter 2,2,2-trifluoroacetato de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-(pirrolidin-3- ilmetil)acetamida. Etapa 3: 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1-nitrossopirrolidin-3-il)metil) acetamida:
[00270] A uma solução agitada de 2,2,2-trifluoroacetato de 2-(4- cloro-3-fluorofenóxi)-N-(pirrolidin-3-ilmetil)acetamida (1,0 equiv) em água (30 mL) são adicionados ácido acético (10 mL) e nitrito de sódio (4,0 equiv) em temperatura ambiente. A mistura de reação é deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto é confirmada por LCMS. A mistura de reação é diluída com água (50 mL) e um precipitado é formado. O sólido resultante é filtrado, lavado com água (20 mL × 4) e secado sob vácuo para obter 2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-N-((1-nitrossopirrolidin-3-il)metil)acetamida.
Etapa 4: N-((1-aminopirrolidin-3-il)metil)-2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acetamida:
[00271] A uma solução de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1- nitrossopirrolidin-3-il)metil)acetamida (1,0 equiv) em água (5 mL) são adicionados ácido acético (1 mL) e pó de Zn (10,0 equiv) em temperatura ambiente. A mistura de reação é deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto é confirmada por LCMS. A mistura de reação é filtrada através de Celite®. O filtrado resultante é basificado por amônia líquida e extraído com acetato de etila (50 mL × 2). A camada orgânica combinada é lavada com água (20 mL × 4), secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada para obter N-((1-aminopirrolidin-3-il)metil)-2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamida. Etapa 5: Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-(3-((2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamido)metil)pirrolidin-1-il)acetamida:
[00272] A uma solução de N-((1-aminopirrolidin-3-il)metil)-2-(4-cloro- 3-fluorofenóxi)acetamida (1,0 equiv) em DMF (5 mL) são adicionados ácido 2-(3-cloro-4-fluorofenóxi)acético (1,0 equiv) e HATU (2,0 equiv) em temperatura ambiente. A mistura de reação resultante é agitada durante 10 minutos e DIPEA (3,0 equiv) é adicionado. A mistura de reação é deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto é confirmada por LCMS. A mistura de reação é diluída com água (20 mL) e extraída com acetato de etila (50 mL × 2). A camada orgânica combinada é lavada com água (20 mL × 4), secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada. O produto bruto é purificado por HPLC de fase reversa para obter 2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-N-(3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido)metil)pirrolidin- 1-il)acetamida (Composto 10).
Exemplo 20 Síntese de 6-cloro-N-(3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido) metil)pirrolidin-1-il)quinolina-2-carboxamida
[00273] A uma solução de N-((1-aminopirrolidin-3-il)metil)-2-(4-cloro- 3-fluorofenóxi)acetamida (1,0 equiv) em DMF (5 mL) são adicionados ácido 6-cloroquinolina-2-carboxílico (1,0 equiv) e HATU (2,0 equiv) em temperatura ambiente. A mistura de reação resultante é agitada durante 10 minutos e DIPEA (3,0 equiv) é adicionado. A mistura de reação é deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto é confirmada por LCMS. A mistura de reação é diluída com água (20 mL) e extraída com acetato de etila (50 mL × 2). A camada orgânica combinada é lavada com água (20 mL × 4), secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada. O produto bruto é purificado por HPLC de fase reversa para obter 6-cloro-N-(3-((2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamido)metil)pirrolidin-1-il)quinolina-2-carboxamida (Composto 11).
Exemplo 21 Síntese de 5-cloro-N-(3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido) metil)pirrolidin-1-il)benzofuran-2-carboxamida Etapa 1: Síntese de terc-butil 3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acetamido)metil)pirrolidina-1-carboxilato
[00274] A uma solução de ácido 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acético (1000 mg, 4,9 mmols, 1,0 equiv) em DMF (10 mL) foram adicionados terc-butil 3-(aminometil)pirrolidina-1-carboxilato (990 mg, 4,9 mmols, 1,0 equiv) e HATU (3700 mg, 9,9 mmols, 2,0 equiv) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada durante 10 minutos e em seguida DIPEA (1,6 mL, 9,9 mmols, 2,0 equiv) foi adicionado. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (100 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL X 2). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (100 mL X 3), secados sobre Na2SO4 anidroso e concentrados. Que provê a obtenção de terc-butil 3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido) metil)pirrolidina-1-carboxilato (2300 mg, como um sólido amarelo viscoso). LCMS 386,14 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,25 (br. s., 1H), 7,45 - 7,51 (m, 1H), 7,06 (d, J = 11,40 Hz, 1H), 6,85 (d, J = 8,33 Hz, 1H), 4,54 (s, 2H), 3,11 - 3,20 (m, 2H), 2,89 (s, 2H), 2,65 - 2,78 (m, 3H), 1,83 (br. s., 1H), 1,51 (d, J = 9,21 Hz, 1H), 1,38 (s, 9H). Etapa 2: Síntese de sal de trifluoroacetato de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)- N-(pirrolidin-3-ilmetil)acetamida
[00275] A uma solução agitada de terc-butil 3-((2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamido)metil)pirrolidina-1-carboxilato (2300 mg, 5,95 mmols, 1,0 equiv) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (2 mL) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. DCM e excesso de TFA foram removidos sob pressão reduzida para obter sal de trifluoroacetato de 2- (4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-(pirrolidin-3-ilmetil)acetamida (produção quantitativa) como um semissólido amarelo. LCMS 287,2 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,33 (t, J = 5,70 Hz, 1H), 7,50 (t, J = 8,77 Hz, 1H), 7,07 (dd, J = 2,85, 11,18 Hz, 1H), 6,85 (dd, J = 2,63, 8,77 Hz, 1H), 4,55 (s, 2H), 3,38 (q, J = 7,02 Hz, 1H), 3,04 - 3,26 (m, 4H), 2,75 - 2,90 (m, 2H), 2,73 (s, 1H), 1,89 - 2,02 (m, 1H), 1,58 (dd, J = 8,11, 12,94 Hz, 1H) Etapa 3: Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1-nitrosopirrolidin-3- il)metil)acetamida
[00276] A uma solução de sal de trifluoroacetato de 2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-N-(pirrolidin-3-ilmetil)acetamida (1800 mg, 4,5 mmols, 1,0 eq.) em água (20 mL) foram adicionados ácido acético (15 mL) e nitrito de sódio (1200 mg, 18,0 mmols, 4,0 eq.) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (100 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL X 2). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, salmoura e NaHCO3 (100 mL X 3), secados sobre Na2SO4 anidroso e concentrado para obter 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1- nitrosopirrolidin-3-il)metil)acetamida (1000 mg, 75% de produção) como um semissólido amarelo. LCMS 316,0 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,32 (d, J = 17,98 Hz, 1H), 7,48 - 7,54 (m, 1H), 6,98 - 7,13 (m, 1H), 6,78 - 6,88 (m, 1H), 4,56 (d, J = 6,14 Hz, 2H), 4,28 - 4,41 (m, 1H), 4,15 (br. s., 1H), 3,93 (br. s., 1H), 3,54 - 3,64 (m, 1H), 3,41 (d, J = 7,45 Hz, 1H), 3,10 - 3,22 (m, 2H), 1,98 - 2,06 (m, 1H), 1,64 - 1,76 (m, 1H). Etapa 4: Síntese de N-((1-aminopirrolidin-3-il)metil)-2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamida
[00277] A uma solução agitada de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1- nitrosopirrolidin-3-il)metil)acetamida (500 mg, 1,58 mmol, 1,0 equiv) em THF: H2O (07:10 mL) foi adicionado NH4Cl (1370 mg, 25,39 mmols, 16,0 equiv) e em seguida pó de Zn (872 mg, 12,64 mmols, 8,0 equiv) foi adicionado porção a porção. Após a adição, a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O progresso da reação foi monitorado por LCMS. Mistura de reação foi diluída com água (100 mL) e filtrada sobre leito de celite e o filtrado foi extraído com DCM (100 mL × 2). A camada orgânica foi separada e secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida para obter N-((1- aminopirrolidin-3-il)metil)-2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida (250 mg,) como um semissólido amarelo. LCMS 302,1 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,19 (br. s., 1H), 7,49 (t, J = 8,99 Hz, 1H), 7,06 (td, J = 3,07, 11,40 Hz, 1H), 6,80 - 6,90 (m, 1H), 4,45 - 4,57 (m, 2H), 3,07 - 3,20 (m, 2H), 2,70 - 2,86 (m, 2H), 2,24 - 2,32 (m, 1H), 1,71 - 1,86 (m, 4H), 1,30 - 1,48 (m, 2H).
Etapa 5: Síntese de 5-cloro-N-(3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acetamido)metil)pirrolidin-1-il)benzofuran-2-carboxamida)
[00278] A uma solução de N-((1-aminopirrolidin-3-il)metil)-2-(4-cloro- 3-fluorofenóxi)acetamida (125 mg, 0,41 mmol, 1,0 eq.) em DMF (05 mL) foram adicionados ácido 5-clorobenzofuran-2-carboxílico (80 mg, 0,41 mmol, 1,0 eq.) e HATU (313 mg, 0,82 mmol, 2,0 eq.) em temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada durante 10 minutos; DIPEA (0,15 mL, 0,82 mmol, 2,0 eq.) foi adicionado. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL X 2). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (50 mL X 4), secados sobre Na2SO4 anidroso e concentrados. O produto bruto que foi purificado por HPLC de fase reversa para 5-cloro-N-(3-((2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamido)metil)pirrolidin-1-il)benzofuran-2-carboxamida (Composto 12 - 25 mg, 12 % de produção) como um sólido branco. LCMS 480,2 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,77 (s, 1H), 8,25 (br. s., 1H), 7,87 (d, J = 1,75 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 8,77 Hz, 1H), 7,42 - 7,55 (m, 2H), 7,07 (dd, J = 2,63, 11,40 Hz, 1H), 6,86 (d, J = 7,45 Hz, 1H), 4,54 (s, 2H), 3,16 (br. s., 2H), 2,85 - 3,07 (m, 3H), 2,09 (s, 1H), 1,91 (br. s., 2H), 1,48 (br. s., 2H).
Exemplo 22 Síntese de 6-cloro-N-((1-((R)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)pirrolidin-3-il)metil)quinolina-2-carboxamida Etapa 1: Síntese de terc-butil 3-((6-cloroquinolina-2-carboxamido) metil)pirrolidina-1-carboxilato
[00279] A uma solução agitada de ácido 6-cloroquinolina-2- carboxílico (0,510 g, 2,5 mmols, 1,0 equiv) em DMF (5 ml) foram adicionados terc-butil 3-(aminometil)pirrolidina-1-carboxilato (0,50 g, 2,5 mmols, 1,0 equiv), HATU (1,4 g, 3,75 mmols, 1,5 equiv) e DIPEA (0,2 mL, 1,0 mmol, 4,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mL × 6). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada para obter bruto. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida (5% de MeOH em DCM como eluente) para obter terc-butil 3-((6- cloroquinolina-2-carboxamido)metil)pirrolidina-1-carboxilato (0,9 g, 93% de produção) como um semissólido amarelo. LCMS 390,2 [M+H] +; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,11 (br. s., 1 H), 8,55 (d, J = 8,8 Hz, 1 H),
8,32 - 8,09 (m, 3 H), 7,89 (dd, J = 2,2, 9,0 Hz, 1 H), 3,37 (d, J = 6,8 Hz, 2 H), 3,22 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 3,04 (dd, J = 7,1, 10,5 Hz, 1 H), 1,91 (br. s., 1 H), 1,64 (d, J = 6,8 Hz, 1 H), 1,38 (s, 9 H). Etapa 2: Síntese de 2,2,2-trifluoroacetato de 6-cloro-N-(pirrolidin-3- ilmetil)quinolina-2-carboxamida
[00280] A uma solução agitada de terc-butil 3-((6-cloroquinolina-2- carboxamido)metil)pirrolidina-1-carboxilato (0,9 g, 1,036 mmol, 1,0 equiv) em DCM (10 ml) foi adicionado TFA (0,5 ml). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. O progresso de reação foi monitorado por RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter 2,2,2-trifluoroacetato de 6-cloro-N-(pirrolidin-3-ilmetil)quinolina-2- carboxamida (0,9 g, 96% de produção) como um óleo marrom. LCMS 290,2 [M+H] + Etapa 3: Síntese de 6-cloro-N-((1-((R)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)pirrolidin-3-il)metil)quinolina-2-carboxamida
[00281] A uma solução agitada de 2,2,2-trifluoroacetato de 6-cloro- N-(pirrolidin-3-ilmetil)quinolina-2-carboxamida (0,2 g, 0,49 mmol, 1,0 equiv) em DMF (10 ml) foi adicionado K2CO3 (0,135 g, 0,98 mmol, 1,0 equiv) seguido pela adição de (R)-2-((3-cloro-4-fluorofenóxi)metil) oxirano (0,1 g, 0,49 mmol, 1,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar a 60°C durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mL × 6). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por cromatografia Combiflash (5% de MeOH em DCM como um eluente) para obter 6-cloro-N-((1-((R)-3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)pirrolidin-3-il)metil)quinolina-2-carboxamida (Composto 80 - 0,05 g, 21% de produção) como um semissólido amarelo. LCMS 492,3 [M+H] +; 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,05 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 8,53 (dd, J = 8,8, 1,8 Hz, 1 H), 8,23 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 8,16 - 8,21 (m, 1 H), 8,06 - 8,16 (m, 1 H), 7,85 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz, 1 H), 7,36 - 7,49 (m, 1 H), 6,95 - 7,10 (m, 1 H), 6,70 - 6,84 (m, 1 H), 4,91 - 5,06 (m, 1 H), 4,68 (t, J = 5,7 Hz, 1 H), 3,98 - 4,06 (m, 1 H), 3,82 - 3,96 (m, 2 H), 3,36 (d, J = 6,1 Hz, 1 H), 2,67 (br. s., 2 H), 1,88 (br. s., 2 H), 1,52 (br. s., 2 H). Exemplo 23 Síntese de 6-cloro-N-((1-((S)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)pirrolidin-3-il)metil)quinolina-2-carboxamida Etapa 1: Síntese de terc-butil 3-((6-cloroquinolina-2- carboxamido)metil)pirrolidina-1-carboxilato
[00282] A uma solução agitada de ácido 6-cloroquinolina-2- carboxílico (0,510 g, 2,5 mmols, 1,0 equiv) em DMF (5 ml) foram adicionados terc-butil 3-(aminometil)pirrolidina-1-carboxilato (0,50 g, 2,5 mmols, 1,0 equiv), HATU (1,4 g, 3,75 mmols, 1,5 equiv) e DIPEA (0,2 mL, 1,0 mmol, 4,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mL × 6). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada para obter o bruto. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida (5% de MeOH em DCM como eluente) para obter terc-butil 3-((6- cloroquinolina-2-carboxamido)metil)pirrolidina-1-carboxilato (0,9 g, 93% de produção) como um semissólido amarelo. LCMS 390,2 [M+H] +; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,11 (br. s., 1 H), 8,55 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 8,32 - 8,09 (m, 3 H), 7,89 (dd, J = 2,2, 9,0 Hz, 1 H), 3,37 (d, J = 6,8 Hz, 2 H), 3,22 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 3,04 (dd, J = 7,1, 10,5 Hz, 1 H), 1,91 (br. s., 1 H), 1,64 (d, J = 6,8 Hz, 1 H), 1,38 (s, 9 H). Etapa 2: Síntese de 2,2,2-trifluoroacetato de 6-cloro-N-(pirrolidin-3- ilmetil)quinolina-2-carboxamida
[00283] A uma solução agitada de terc-butil 3-((6-cloroquinolina-2- carboxamido)metil)pirrolidina-1-carboxilato (0,9 g, 1,036 mmol, 1,0 equiv) em DCM (10 ml) foi adicionado TFA (0,5 ml). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. O progresso de reação foi monitorado por RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter 2,2,2-trifluoroacetato de 6-cloro-N-(pirrolidin-3-ilmetil)quinolina-2- carboxamida (0,9 g, 96% de produção) como um óleo marrom. LCMS 290,2 [M+H] + Etapa 3: Síntese de 6-cloro-N-((1-((S)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)pirrolidin-3-il)metil)quinolina-2-carboxamida
[00284] A uma solução agitada de 2,2,2-trifluoroacetato de 6-cloro- N-(pirrolidin-3-ilmetil)quinolina-2-carboxamida (0,2 g, 0,49 mmol, 1,0 equiv) em DMF (10 ml) foi adicionado K2CO3 (0,135 g, 0,98 mmol, 1,0 equiv) seguido pela adição de (S)-2-((3-cloro-4-fluorofenóxi)metil) oxirano (0,1 g, 0,49 mmol, 1,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar a 60°C durante a noite.
A formação de produto foi confirmada por LCMS.
A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mL × 6). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida.
O material bruto foi purificado por cromatografia rápida (5% de MeOH em DCM como um eluente) para obter 6-cloro-N-((1-((S)-3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)pirrolidin-3-il)metil)quinolina-2- carboxamida (Composto 81 - 0,05 g, 21% de produção) como um semissólido amarelo.
LCMS 492,3 [M+H] +; 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,05 (br. s., 1 H), 8,53 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 8,17 - 8,21 (m, 1 H), 8,07 - 8,17 (m, 1 H), 7,80 - 7,92 (m, 1 H), 7,41 (br. s., 1 H), 7,01 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 6,79 (br. s., 1 H), 4,91 (br. s., 2 H), 4,02 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 3,91 (br. s., 2 H), 1,91 (br. s., 2 H), 1,51 (br. s., 2 H), 1,35 (s, 1 H), 1,23 ppm (br. s., 2 H).
Exemplo 24 Síntese de 5-cloro-N-(3-(((R)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida Etapa 1: Síntese de terc-butil (3-(5-clorobenzofuran-2- carboxamido)ciclopentil)carbamato
[00285] A uma solução de cloridrato de terc-butil (3- aminociclopentil)carbamato (1000 mg, 4,2 mmols, 1,0 equiv) em DMF (05 mL) foram adicionados ácido 5-clorobenzofuran-2-carboxílico (834 mg, 4,2 mmols, 1,0 equiv) e HATU (834 mg, 8,4 mmols, 2,0 equiv) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada durante 10 minutos e em seguida DIPEA (2,2 mL, 12,6 mmols, 3,0 equiv) foi adicionado. A mistura de reação resultante foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. O progresso da reação foi monitorado por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (200 mL) e o precipitado sólido foi filtrado e secado sob vácuo para obter terc- butil (3-(5-clorobenzofuran-2-carboxamido)ciclopentil)carbamato (1200 mg, 75% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 379,1 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,74 (d, J = 7,45 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 2,19 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 8,77 Hz, 1H), 7,35 - 7,60 (m, 2H), 6,99 (d, J = 7,02 Hz, 1H), 4,24 (dd, J = 7,67, 15,13 Hz, 1H), 3,79 (d, J = 6,58 Hz, 1H), 2,69 - 2,82 (m, 1H), 2,23 - 2,33 (m, 1H), 1,87 (dd, J = 5,26, 12,28 Hz, 1H), 1,77 (dd, J = 6,36, 12,06 Hz, 1H), 1,51 - 1,72 (m, 2H), 1,28 - 1,51 (m, 9H). Etapa 2: Síntese de 2,2,2-trifluoroacetato de N-(3-aminociclopentil)-5- clorobenzofuran-2-carboxamida
[00286] A uma solução agitada de terc-butil (3-(5-clorobenzofuran-2- carboxamido)ciclopentil)carbamato (500 mg, 1,31 mmol, 1,0 equiv) em DCM (15 mL) foi adicionado TFA (5 mL) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. DCM e excesso de TFA foram removidos sob pressão reduzida para obter 2,2,2-trifluoroacetato de N-(3-aminociclopentil)-5- clorobenzofuran-2-carboxamida (300 mg, 100% de produção) como um sólido viscoso. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,82 (d, J = 7,45 Hz, 1H), 7,89 (d, J = 2,19 Hz, 2H), 7,70 (d, J = 8,77 Hz, 1H), 7,44 - 7,61 (m, 2H), 4,20 - 4,30 (m, 1H), 3,34 (m, 1H), 2,29 - 2,39 (m, 2H), 1,91 - 2,02 (m, 2H), 1,70 - 1,82 (m, 2H). Etapa 3: Síntese de 5-cloro-N-(3-(((R)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida.
[00287] A uma solução agitada de 2,2,2-trifluoroacetato de N-(3- aminociclopentil)-5-clorobenzofuran-2-carboxamida (100 mg, 0,26 mmol,1,0 equiv) em DMF (05 ml) foi adicionado K2CO3 ( 72 mg, 0,52 mmol, 2,0 equiv) seguido pela adição de (R)-2-((4-cloro-3- fluorofenóxi)metil)oxirano ( 54 mg, 0,26 mmol,1,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar a 80°C durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (100 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura e NaHCO3 (100 mL × 2). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida de fase normal (0 a 5% de MeOH em DCM como um eluente) para obter 5-cloro-N-(3-(((R)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida (Composto 82 - 40 mg, 32%) como um sólido branco. LCMS 481,2 [M+H] +; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,79 - 8,86 (m, 1 H) 7,84 (br. s., 1 H) 7,62 - 7,70 (m, 1 H) 7,36 - 7,57 (m, 3 H) 7,04 (t, J = 10,96 Hz, 1 H) 6,82 (d, J = 8,33 Hz, 1 H) 4,28 (br. s., 1 H) 4,03 (d, J = 5,70 Hz, 1 H) 3,95 (br. s., 2 H) 3,20 (br. s., 1 H) 2,73 (br. s., 1 H) 2,12 (br. s., 2 H) 1,86 (br. s., 2 H) 1,70 (br. s., 2 H) 1,60 (br. s., 2 H). Exemplo 25 Síntese de 5-cloro-N-(3-(((S)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil) amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida
[00288] A uma solução agitada de 2,2,2-trifluoroacetato de N-(3- aminociclopentil)-5-clorobenzofuran-2-carboxamida (100 mg, 0,26 mmol,1,0 equiv) em DMF (05 ml) foi adicionado K2CO3 (72 mg, 0,52 mmol, 2,0 equiv) seguido pela adição de (S)-2-((4-cloro-3-fluorofenóxi) metil)oxirano (54 mg, 0,26 mmol,1,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar a 80°C durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (100 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura e NaHCO3 (100 mL X 2). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida.
O material bruto foi purificado por cromatografia rápida de fase normal (0 a 5% de MeOH em DCM como um eluente) para obter 5-cloro-N-(3-(((S)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida (Composto 83 - 30 mg, 24% ) como um sólido branco.
LCMS 481,2 [M+H] +; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,79 - 8,86 (m, 1 H) 7,84 (br. s., 1 H) 7,62 - 7,70 (m, 1 H) 7,36 - 7,57 (m, 3 H) 7,04 (t, J = 10,96 Hz, 1 H) 6,82 (d, J = 8,33 Hz, 1 H) 4,28 (br. s., 1 H) 4,03 (d, J = 5,70 Hz, 1 H) 3,95 (br. s., 2 H) 3,20 (br. s., 1 H) 2,73 (br. s., 1 H) 2,12 (br. s., 2 H) 1,86 (br. s., 2 H) 1,70 (br. s., 2 H) 1,60 (br. s., 2 H). Exemplo 26 Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((3-(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acetamido)ciclopentil)metil)acetamida
Etapa 1: Síntese de terc-butil 3-oxo-2-azabiciclo[2,2,1]hept-5-ene-2- carboxilato
[00289] A uma solução agitada de 2-azabiciclo[2,2,1]hept-5-en-3- ona (10,0 g, 91,74 mmols, 1,0 equiv) em THF (200 mL) foram adicionados DMAP (1,11 g, 9,17 mmols, 0,1 equiv), trietil amina (39 mL, 275,22 mmols, 3,0 equiv) seguidos pela adição de di-terc-butil dicarbonato (24,0 g, 110 mmols, 1,2 equiv). A mistura de reação resultante foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por TLC & espectroscopia de RMN. Após conclusão da reação, o solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi diluído com EtOAc (800 ml) e lavado com água (3 x 500 ml) e salmoura (400 ml). O extrato de EtOAc foi secado sobre Na2SO4 e evaporado sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 30% de acetato de etila em hexano como um eluente) para obter terc-butil 3-oxo-2- azabiciclo[2,2,1]hept-5-eno-2-carboxilato (19,0 g, 100% de produção) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 6,89 (dd, J = 2,2, 5,3 Hz, 1 H), 6,65 (ddd, J = 1,3, 3,3, 5,0 Hz, 1 H), 4,95 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 3,43 - 3,29 (m, 1 H), 2,41 - 2,27 (m, 1 H), 2,24 - 2,08 (m, 1 H), 1,50 (s, 9 H). Etapa 2: Síntese de terc-butil 3-oxo-2-azabiciclo[2,2,1]heptano-2- carboxilato
[00290] Terc-butil 3-oxo-2-azabiciclo[2,2,1]hept-5-ene-2-carboxilato (10,0 g, 4,78 mmols) foi dissolvido em MeOH (200 mL) e foi adicionado Pd/C (1,3 g). Gás de hidrogênio foi borbulhado na mistura durante 4 horas. A formação de produto foi confirmada por espectroscopia de RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi filtrada através de leito de Celite e o filtrado foi concentrado para obter terc-butil 3-oxo- 2-azabiciclo[2,2,1]heptano-2-carboxilato (9,0 g, 90% de produção) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 4,53 (s, 1 H),
2,91 - 2,81 (m, 1 H), 1,93 - 1,84 (m, 1 H), 1,84 - 1,71 (m, 1 H), 1,58 (br. s., 2 H), 1,52 (s, 9 H), 1,43 - 1,32 (m, 2 H). Etapa 3: Síntese de Cis-terc-butil (3-(hidroximetil)ciclopentil)carbamato
[00291] A uma solução agitada de terc-butil 3-oxo-2-azabiciclo[2,2,1] heptano-2-carboxilato (4,5 g, 21,31 mmols, 1,0 equiv) em THF:Água (25:20 mL) foi adicionado NaBH4 (1,60 g, 42,26 mmols, 2,0 equiv) porção a porção a 0°C. A mistura de reação resultante foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 4 horas. A formação de produto foi confirmada por TLC & espectroscopia de RMN. Após conclusão, a mistura de reação ser interrompida bruscamente com HCl a 1 M e extraída com EtOAc (200 mL × 2). A camada de acetato de etila combinada foi secada sobre Na2SO4 e evaporada sob pressão reduzida. O produto bruto foi cristalizado em n-pentano para obter Cis- terc-butil (3-(hidroximetil)ciclopentil)carbamato (3,0 g, 65% de produção) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 4,71 (br. s., 1 H), 3,94 (br. s., 1 H), 3,57 (d, J = 4,4 Hz, 2 H), 2,31 - 2,06 (m, 2 H), 1,99 - 1,84 (m, 1 H), 1,80 - 1,68 (m, 1 H), 1,52 - 1,36 (m, 10 H), 1,16 - 1,00 (m, 1 H). Etapa 4: Síntese de (3-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclopentil)metil metanossulfonato
[00292] A uma solução de Cis-terc-butil (3-(hidroximetil)ciclopentil) carbamato (3,0 g, 13,9 mmols, 1,0 equiv ) em DCM (60 mL) foi adicionado TEA (4,02 mL, 27,9 mmols, 2,0 equiv) seguido pela adição de cloeto de metano sulfonila (1,4 mL, 18,13 mmols, 1,3 equiv) a 0°C. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 4 horas. A formação de produto foi confirmada por espectroscopia de RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi interrompida bruscamente com bicarbonato de sódio aquoso e extraída com DCM (50 mL × 3). A camada de DCM combinada foi secada sobre Na2SO4 e evaporada sob pressão reduzida. O produto bruto foi cristalizado em n-
pentano para obter (3-((terc-butoxicarbonil) amino)ciclopentil)metil metanossulfonato (2,8 g, 70% de produção) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 4,52 (br. s., 1 H), 4,14 (d, J = 6,6 Hz, 2 H), 3,96 (br. s., 1 H), 3,01 (s, 3 H), 2,43 - 2,19 (m, 2 H), 2,06 - 1,94 (m, 1 H), 1,90 - 1,71 (m, 1 H), 1,58 - 1,32 (m, 12 H), 1,16 (td, J = 8,6, 12,7 Hz, 1 H). Etapa 5: Síntese de terc-butil (3-(azidometil)ciclopentil)carbamato
[00293] A uma solução de (3-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclopentil) metil metanossulfonato (2,8 g, 9,55 mmols, 1,0 equiv ) em DMF (45 mL) foi adicionado NaN3 (1,24 g, 19,2 mmols, 2,0 equiv). A mistura de reação foi aquecida 60°C durante 6 horas. A formação de produto foi confirmada por espectroscopia de RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com acetato de etila (100 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (100 mL × 3), secada sobre Na2SO4 e evaporada sob pressão reduzida para obter terc-butil (3-(azidometil)ciclopentil)carbamato (2,5 g, 100% de produção) como um óleo. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) d = 4,55 (br. s., 1 H), 3,94 (br. s., 1 H), 3,28 (d, J = 6,1 Hz, 2 H), 2,34 - 2,12 (m, 2 H), 2,00 - 1,86 (m, 1 H), 1,86 - 1,68 (m, 1 H), 1,52 - 1,35 (m, 9 H), 1,26 (t, J = 7,0 Hz, 1 H), 1,16 - 1,00 (m, 1 H). Etapa 6: Síntese de terc-butil (3-(aminometil)ciclopentil)carbamato
[00294] Terc-butil (3-(azidometil)ciclopentil)carbamato (0,500 g, 2,78 mmols) foi dissolvido em MeOH (10 mL) e foi adicionado Pd/C (0,030 g). Gás de hidrogênio foi borbulhado na mistura durante 3 horas. A formação de produto foi confirmada por espectroscopia de RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi filtrada através de leito de Celite e o filtrado foi concentrado para obter terc-butil (3- (aminometil)ciclopentil)carbamato (0,250 g, 56% de produção) como um óleo incolor. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 4,75 (br. s., 1 H), 4,00 - 3,83 (m, 1 H), 3,47 (s, 1 H), 2,72 - 2,59 (m, 2 H), 2,31 - 2,12 (m, 2 H),
2,09 - 1,87 (m, 3 H), 1,87 - 1,68 (m, 2 H), 1,55 - 1,32 (m, 12 H), 1,00 (td, J = 8,3, 12,7 Hz, 1 H). Etapa 7: Síntese de 2,2,2-trifluoroacetato de 3-(aminometil)ciclopentan- 1-amina
[00295] A uma solução de terc-butil (3-(aminometil)ciclopentil) carbamato (0,200 g, 0,934 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado TFA (0,5 mL). A mistura de reação resultante foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. Mistura de reação foi concentrada para obter 2,2,2-trifluoroacetato de 3-(aminometil) ciclopentan-1-amina (0,130 g) como um óleo que foi diretamente usado para a etapa seguinte. Etapa 8: Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((3-(2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamido)ciclopentil)metil)acetamida
[00296] A uma solução agitada de ácido 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acético (0,100 g, 0,490 mmol, 1,0 equiv) em DMF (5 mL) foram adicionados 2,2,2-trifluoroacetato de 3-(aminometil)ciclopentan-1- amina (0,067 g, 0,294 mmol, 0,6 equiv), HATU (0,279 g, 0,735 mmol, 1,5 equiv) e DIPEA (0,25 mL, 1,47 mmol, 3,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com acetato de etila (50 mL × 2). A camada orgânica combinada foi lavada com água (25 mL × 4), secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (5% de MeOH em DCM como um eluente) para obter 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((3-(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acetamido)ciclopentil)metil)acetamida (Composto 84 - 0,030 g, 13 % de produção) como um sólido branco. LCMS 487 [M+H] +; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,17 (br. s., 1 H), 8,08 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 7,61 -,41 (m, 2 H), 7,13 - 6,97 (m, 2 H), 6,84 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 4,51 (d, J = 18,9 Hz, 4 H), 4,05 (dd, J = 7,9, 14,9 Hz, 1 H), 3,11 (t, J = 6,1 Hz, 2 H), 2,15
- 1,87 (m, 3 H), 1,81 (dd, J = 6,1, 11,8 Hz, 1 H), 1,70 - 1,51 (m, 2 H), 1,51 - 1,40 (m, 1 H), 1,36 (d, J = 5,3 Hz, 1 H), 1,15 - 0,97 (m, 2 H). Exemplo 27 Síntese de 6-cloro-N-(3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido)metil) ciclopentil)quinolina-2-carboxamida Etapa 1: Síntese de terc-butil (3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido) metil)ciclopentil)carbamato
[00297] A uma solução agitada de ácido 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acético (0,100 g, 0,490 mmol, 1,0 equiv) em DMF (1,5 ml) foram adicionados terc-butil (3-(aminometil)ciclopentil)carbamato (0,104 g, 490 mmols, 1,0 equiv), HATU (0,372 g, 0,980 mmol, 2,0 equiv) e DIPEA (0,27 mL, 1,47 mmol, 3,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com acetato de etila (50 mL × 2). A camada orgânica combinada foi lavada com água (20 mL × 4), secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida para obter terc-butil (3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido) metil)ciclopentil)carbamato (0,100 g, 51% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 401,1 [M+H] +; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (br. s., 1 H), 7,49 (t, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,06 (dd, J = 2,6, 11,4 Hz, 1 H), 6,94 - 6,75 (m, 2 H), 4,52 (s, 2 H), 3,70 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 3,14 - 3,00 (m, 2 H), 2,06 - 1,89 (m, 2 H), 1,83 - 1,66 (m, 1 H), 1,44 - 1,35 (m, 9 H), 1,03 - 0,91 (m, 1 H). Etapa 2: Síntese de N-((3-aminociclopentil)metil)-2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamida 2,2,2-trifluoroacetato
[00298] A uma solução agitada de terc-butil (3-((2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamido)metil)ciclopentil)carbamato (0,600 g, 1,50 mmol, 1,0 equiv) em DCM (10 ml) foi adicionado TFA (0,9 ml). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. O progresso de reação foi monitorado por RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O composto bruto foi cristalizado por trituração em pentano e em seguida em éter de petróleo para obter 2,2,2-trifluoroacetato de N-((3- aminociclopentil)metil)-2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida (0,600 g, Produção quantitativa); LCMS 300,1 [M+H] +; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,23 (t, J = 5,7 Hz, 1 H), 7,83 (br. s., 2 H), 7,50 (t, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,06 (dd, J = 2,6, 11,4 Hz, 1 H), 6,94 - 6,75 (m, 1 H), 4,53 (s, 2 H), 3,44 (d, J = 4,8 Hz, 1 H), 3,13 (t, J = 5,9 Hz, 2 H), 2,15 - 1,95 (m, 2 H), 1,88 (dd, J = 7,7, 12,5 Hz, 1 H), 1,73 - 1,51 (m, 2 H), 1,40 (dd, J = 7,9, 11,4 Hz, 1 H), 1,22 - 0,96 (m, 1 H). Etapa 3: Síntese de 6-cloro-N-(3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido) metil)ciclopentil)quinolina-2-carboxamida
[00299] A uma solução agitada de 2,2,2-trifluoroacetato de N-((3- aminociclopentil)metil)-2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida (0,100 g, 0,333 mmol, 1,0 equiv) em DMF (4 ml) foram adicionados ácido 6-
cloroquinolina-2-carboxílico (0,082 g, 0,400 mmol, 1,2 equiv), DMAP (0,101 g, 0,833 mmol, 2,5 equiv) e EDC.HCl (0,127 g, 0,666 mmol, 2,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água o que resulta no precipitado. O precipitado sólido resultante foi filtrado e lavado com água gelada, secado sob vácuo para obter 6-cloro-N-(3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acetamido)metil)ciclopentil)quinolina-2-carboxamida (Composto 85 - 0,040 g, 33% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 490,3 [M+H] +; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,75 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 8,53 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 8,24 (d, J = 2,2 Hz, 1 H), 8,16 (dd, J = 5,9, 9,0 Hz, 2 H), 7,88 (dd, J = 2,2, 9,2 Hz, 1 H), 7,48 (t, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,06 (dd, J = 2,6, 11,4 Hz, 1 H), 6,92 - 6,73 (m, 1 H), 4,54 (s, 2 H), 4,41 - 4,15 (m, 1 H), 3,18 (t, J = 5,9 Hz, 2 H), 2,21 - 2,01 (m, 2 H), 1,91 (d, J = 6,1 Hz, 1 H), 1,77 - 1,55 (m, 2 H), 1,46 (d, J = 3,9 Hz, 1 H), 1,42 - 1,20 (m, 1 H). Exemplo 28 Síntese de 5-cloro-N-(3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido)metil) ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida
[00300] A uma solução agitada de 2,2,2-trifluoroacetato de N-((3- aminociclopentil)metil)-2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida (0,100 g, 0,241 mmol, 1,0 equiv) em DMF (4 ml) foram adicionados ácido 5- clorobenzofuran-2-carboxílico (0,065 g, 0,241 mmol, 1,2 equiv), DMAP (0,101 g, 0,833 mmol, 2,5 equiv) e EDC.HCl (0,127 g, 0,666 mmol, 2,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água o que resulta no precipitado.
O precipitado sólido resultante foi filtrado e lavado com água gelada, secado sob vácuo para obter 6-cloro-N-(3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acetamido)metil)ciclopentil)quinolina-2-carboxamida (Composto 86 - 0,040 g, 35% de produção) como um sólido esbranquiçado.
LCMS 479,3 [M+H] +; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,70 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 8,18 (br. s., 1 H), 7,86 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 7,68 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,55 - 7,42 (m, 2 H), 7,07 (dd, J = 3,1, 11,4 Hz, 1 H), 6,85 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 4,54 (s, 2 H), 4,22 (d, J = 6,6 Hz, 1 H), 3,15 (t, J = 5,9 Hz, 2 H), 2,23 - 2,00 (m, 2 H), 1,88 (br. s., 1 H), 1,64 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 1,42 (br. s., 1 H), 1,25 (d, J = 12,3 Hz, 1 H). Exemplo 29 Síntese de 6-cloro-N-((3-(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido) ciclopentil)metil)quinolina-2-carboxamida
Etapa 1: Síntese de terc-butil (3-((6-cloroquinolina-2-carboxamido) metil)ciclopentil)carbamato
[00301] A uma solução de ácido 6-cloroquinolina-2-carboxílico (0,500 g, 2,41 mmols, 1,0 equiv) em DMF (20 mL) foram adicionados terc-butil (3-(aminometil)ciclopentil)carbamato (0,518 g, 2,41 mmols, 1,0 equiv) e DMAP (0,737 g, 6,03 mmols, 2,5 equiv) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada durante 10 minutos e em seguida EDC.HCl (0,926 g, 4,83 mmols, 2,0 equiv) foi adicionado. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL X 2). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (50 mL X 4), secados sobre Na2SO4 anidroso e concentrados para obter terc-butil (3-((6-cloroquinolina-2-carboxamido)metil)ciclopentil) carbamato (0,500 g, 50% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS403,1 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,94 (t, J = 5,92 Hz, 1H), 8,54 (d, J = 8,33 Hz, 1H), 8,16 - 8,25 (m, 2H), 7,88 (dd, J = 2,41, 8,99 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 7,45 Hz, 1H), 3,68 - 3,80 (m, 1H), 3,32 - 3,39 (m, 2H), 2,94 (s, 1H), 2,20 (td, J = 7,56, 15,57 Hz, 1H), 1,93 - 2,04 (m, 1H), 1,78 (br. s., 1H), 1,58 - 1,70 (m, 2H), 1,33 - 1,51 (m, 9H), 1,14 (td, J = 8,93, 12,39 Hz, 2H). Etapa 2: Síntese de sal de trifluoroacetato de N-((3-aminociclopentil) metil)-6-cloroquinolina-2-carboxamida
[00302] A uma solução agitada de terc-butil (3-((6-cloroquinolina-2- carboxamido)metil)ciclopentil)carbamato (0,500 g, 1,31 mmol, 1,0 equiv) em DCM (15 mL) foi adicionado TFA (05 mL) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. DCM e excesso de TFA foram removidos sob pressão reduzida para obter sal de trifluoroacetato de N-((3-aminociclopentil)metil)-6- cloroquinolina-2-carboxamida (0,200 g, Produção quantitativa) como um sólido esbranquiçado. LCMS303,1 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,94 (t, J = 5,92 Hz, 1H), 8,54 (d, J = 8,33 Hz, 1H), 8,16 - 8,25 (m, 2H), 7,88 (dd, J = 2,41, 8,99 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 7,45 Hz, 1H), 3,68 - 3,80 (m, 1H), 3,32 - 3,39 (m, 2H), 2,94 (s, 1H), 2,20 (td, J = 7,56, 15,57 Hz, 1H), 1,93 - 2,04 (m, 1H), 1,78 (br. s., 1H), 1,58 - 1,70 (m, 2H), 1,14 (td, J = 8,93, 12,39 Hz, 2H). Etapa 3: Síntese de 6-cloro-N-((3-(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido) ciclopentil)metil)quinolina-2-carboxamida
[00303] A uma solução de sal de trifluoroacetato de N-((3- aminociclopentil)metil)-6-cloroquinolina-2-carboxamida (0,200 g, 0,46 mmol, 1,0 equiv) em DMF (5 mL) foram adicionados ácido 2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acético (0,114 g, 0,55 mmol, 1,2 equiv) e DMAP (0,201 g, 1,65 mmol, 2,5 equiv) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada durante 10 minutos e em seguida EDC.HCl (0,253 g, 1,32 mmol, 2,0 equiv) foi adicionado. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL X 2). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (50 mL X 4), secados sobre Na2SO4 anidroso e concentrados. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna de fase normal para obter 6-cloro-N-((3-(2-(4- cloro-3-fluorofenóxi)acetamido)ciclopentil)metil)quinolina-2-carboxamida (Composto 87 - 0,150 g, 67% de produção) como um sólido branco. LCMS490,3 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,99 (t, J = 6,14 Hz, 1H), 8,54 (d, J = 8,77 Hz, 1H), 8,06 - 8,34 (m, 4H), 7,88 (dd, J = 2,41, 8,99 Hz, 1H), 7,46 - 7,57 (m, 1H), 7,07 (dd, J = 2,63, 11,40 Hz, 1H), 6,84 (dd, J = 1,75, 8,77 Hz, 1H), 4,49 (s, 2H), 4,05 - 4,14 (m, 1H), 3,35 - 3,44 (m, 2H), 2,23 - 2,31 (m, 1H), 1,99 - 2,08 (m, 1H), 1,79 - 1,87 (m, 1H), 1,66 - 1,71 (m, 1H), 1,44 - 1,58 (m, 2H), 1,15 - 1,28 (m, 1H).
Exemplo 30 Síntese de 5-cloro-N-((3-(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido) ciclopentil)metil)benzofuran-2-carboxamida Etapa 1: Síntese de terc-butil (3-((5-clorobenzofuran-2-carboxamido) metil)ciclopentil)carbamato
[00304] A uma solução de ácido 5-clorobenzofuran-2-carboxílico (0,500 g, 2,54 mmols, 1,0 equiv) em DMF (20 mL) foram adicionados terc-butil (3-(aminometil)ciclopentil)carbamato (0,545 g, 2,54 mmols, 1,0 equiv) e DMAP (0,776 g, 6,35 mmols, 2,5 equiv) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada durante 10 minutos e em seguida EDC.HCl (0,975 g, 5,08 mmols, 2,0 equiv) foi adicionado. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL X 2). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (50 mL X 4), secados sobre Na2SO4 anidroso e concentrados para obter terc-butil (3-((5-clorobenzofuran-2-carboxamido)metil)ciclopentil)
carbamato (0,500 g, 50% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS392,1 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,79 (br. s., 1H), 7,87 (d, J = 2,19 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 8,77 Hz, 1H), 7,42 - 7,55 (m, 2H), 6,86 (d, J = 7,02 Hz, 1H), 3,72 (d, J = 7,45 Hz, 1H), 3,23 (dq, J = 6,58, 13,30 Hz, 2H), 2,09 - 2,17 (m, 1H), 1,93 - 2,04 (m, 1H), 1,76 (d, J = 7,02 Hz, 1H), 1,54 - 1,63 (m, 1H), 1,39 - 1,50 (m, 2H), 1,37 (s, 9H), 1,03 - 1,13 (m, 1H). Etapa 2: Síntese de sal de trifluoroacetato de N-((3-aminociclopentil) metil)-5-clorobenzofuran-2-carboxamida
[00305] A uma solução agitada de terc-butil (3-((5-clorobenzofuran- 2-carboxamido)metil)ciclopentil)carbamato (0,500 g, 1,31 mmol, 1,0 equiv) em DCM (15 mL) foi adicionado TFA (02 mL) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. DCM e excesso de TFA foram removidos sob pressão reduzida para obter sal de trifluoroacetato de N-((3- aminociclopentil)metil)-5-clorobenzofuran-2-carboxamida (0,200 g, Produção quantitativa) como um sólido esbranquiçado. LCMS292,1 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,79 (br. s., 1H), 7,87 (d, J = 2,19 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 8,77 Hz, 1H), 7,42 - 7,55 (m, 2H), 6,86 (d, J = 7,02 Hz, 1H), 3,72 (d, J = 7,45 Hz, 1H), 3,23 (dq, J = 6,58, 13,30 Hz, 2H), 2,09 - 2,17 (m, 1H), 1,93 - 2,04 (m, 1H), 1,76 (d, J = 7,02 Hz, 1H), 1,54 - 1,63 (m, 1H), 1,39 - 1,50 (m, 2H), 1,03 - 1,13 (m, 1H). Etapa 3: Síntese de 5-cloro-N-((3-(2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido) ciclopentil)metil)benzofuran-2-carboxamida
[00306] A uma solução de sal de trifluoroacetato de N-((3-aminociclo- pentil)metil)-5-clorobenzofuran-2-carboxamida (0,200 g, 0,49 mmol, 1,0 equiv) em DMF (5 mL) foram adicionados ácido 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acético (0,120 g, 0,59 mmol, 1,2 equiv) e DMAP (0,203 g, 1,71 mmol, 2,5 equiv) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada durante 10 minutos e em seguida EDC.HCl (0,262 g, 1,36 mmol, 2,0 equiv) foi adicionado. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL X 2). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (50 mL X 4), secados sobre Na2SO4 anidroso e concentrados. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna de fase normal para obter 5-cloro-N-((3-(2-(4- cloro-3-fluorofenóxi)acetamido)ciclopentil)metil)benzofuran-2- carboxamida (Composto 88 - 0,130 g, 65% de produção) como um sólido branco. LCMS478,0 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,84 (t, J = 5,92 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 7,89 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 2,19 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 9,21 Hz, 1H), 7,42 - 7,57 (m, 3H), 7,07 (dd, J = 2,63, 11,40 Hz, 1H), 6,85 (d, J = 1,75 Hz, 1H), 4,49 (s, 2H), 4,05 - 4,12 (m, 1H), 3,27 (t, J = 6,58 Hz, 2H), 2,12 - 2,20 (m, 1H), 2,04 (dd, J = 7,24, 12,50 Hz, 1H), 1,83 (dd, J = 5,48, 12,06 Hz, 1H), 1,67 (dd, J = 5,92, 12,06 Hz, 1H), 1,39 - 1,57 (m, 2H), 1,19 (td, J = 8,88, 12,50 Hz, 1H). Exemplo 31 Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((3-((3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)metil)acetamida
[00307] A uma solução agitada de 2,2,2-trifluoroacetato de N-((3- aminociclopentil)metil)-2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamida (0,200 g, 0,483 mmol, 1,0 equiv) em DMF (5 ml) foi adicionado K2CO3 (0,229 g, 1,66 mmol, 2,5 equiv) seguido pela adição de 2-((4-cloro-3- fluorofenóxi)metil)oxirano (0,148 g, 0,733 mmol, 1,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar a 80°C durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mL × 6). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida (5% de MeOH em DCM como um eluente) para obter 2-(4-cloro- 3-fluorofenóxi)-N-((3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino) ciclopentil)metil)acetamida (Composto 89 - 0,050 g, 21% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 503,3 [M+H] +; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,19 (br. s., 1 H), 7,60 - 7,34 (m, 2 H), 7,04 (d, J = 2,6 Hz, 1 H), 7,07 (d, J = 2,6 Hz, 1 H), 6,89 - 6,73 (m, 2 H), 5,11 (br. s., 1 H), 4,52 (s, 2 H), 3,98 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 3,94 - 3,77 (m, 2 H), 3,48 - 3,19 (m, 3 H), 3,19 - 2,90 (m, 3 H), 2,65 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 2,61 - 2,52 (m, 2 H), 2,11 - 1,82 (m, 3 H), 1,80 - 1,66 (m, 1 H), 1,66 - 1,51 (m, 1 H), 1,44 - 1,26 (m, 2 H), 1,03 - 0,93 (m, 1 H). Exemplo 32 Síntese de 6-cloro-N-((3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil) amino)ciclopentil)metil)quinolina-2-carboxamida
[00308] A uma solução agitada de 2,2,2-trifluoroacetato de N-((3- aminociclopentil)metil)-6-cloroquinolina-2-carboxamida (0,200 g, 0,480 mmol, 1,0 equiv) em DMF (5 ml) foi adicionado K2CO3 (0,227 g, 01,65 mmol, 2,5 equiv) seguido pela adição de 2-((4-cloro-3-fluorofenóxi)metil) oxirano (0,146 g, 0,726 mmol, 1,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar a 80°C durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mL × 6). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida (5% de MeOH em DCM como um eluente) para obter 6-cloro-N- ((3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)metil) quinolina-2-carboxamida (Composto 34 - 0,090 g, 37% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 506,2 [M+H] +; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,03 (d, J = 6,6 Hz, 1 H), 8,54 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 8,31 - 8,06 (m, 2 H), 7,87 (dd, J = 2,2, 9,2 Hz, 1 H), 7,44 (t, J = 8,6 Hz, 1 H), 7,04 (dd, J = 2,6, 11,4 Hz, 1 H), 6,81 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 5,19 (br. s., 1 H), 4,08 - 3,93 (m, 1 H), 3,90 (d, J = 6,1 Hz, 1 H), 3,13 (br. s., 1 H), 2,72 (br. s., 1 H), 2,67 (br. s., 1 H), 2,33 (br. s., 1 H), 2,30 - 2,21 (m, 1 H), 2,02 (d, J = 4,8 Hz, 1 H), 1,78 (br. s., 1 H), 1,66 (dd, J = 8,6, 15,6 Hz, 1 H), 1,48 (br. s., 1 H), 1,16 (br. s., 1 H). Exemplo 33 Síntese de 5-cloro-N-((3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil) amino)ciclopentil)metil)benzofuran-2-carboxamida
[00309] A uma solução agitada de 2,2,2-trifluoroacetato de N-((3- aminociclopentil)metil)-5-clorobenzofuran-2-carboxamida (0,200 g, 0,492 mmol, 1,0 equiv) em DMF (5 ml) foi adicionado K2CO3 (0,236 g, 1,70 mmol, 2,5 equiv) seguido pela adição de 2-((4-cloro-3-fluorofenóxi) metil)oxirano (0,152 g, 0,753 mmol, 1,1 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar a 80°C durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mL × 6). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida (5% de MeOH em DCM como um eluente) para obter 5-cloro-N- ((3-((3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)metil) benzofuran-2-carboxamida (Composto 33 - 0,100 g, 41% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 495,2 [M+H] +; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,92 (br. s., 1 H), 7,86 (s, 1 H), 7,69 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,54 - 7,36 (m, 2 H), 7,05 (d, J = 11,4 Hz, 1 H), 6,81 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 5,13 (br. s., 1 H), 3,99 (d, J = 5,7 Hz, 1 H), 3,89 (d, J = 6,1 Hz, 2 H), 3,25 (t, J = 5,7 Hz, 2 H), 3,07 (br. s., 1 H), 2,67 (br. s., 1 H), 2,61 (br. s., 1 H), 2,30 - 2,09 (m, 2 H), 1,99 (dd, J = 6,6, 13,6 Hz, 2 H), 1,73 (br. s., 1 H), 1,71 - 1,54 (m, 1 H), 1,43 (br. s., 2 H), 1,09 (dd, J = 7,5, 12,3 Hz, 1 H). Exemplo 34 Síntese de 5-cloro-N-((3S)-3-(((R)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida Etapa 1: Síntese de terc-butil ((3S)-3-(((R)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)carbamato
[00310] A uma solução agitada de terc-butil ((3S)-3-aminociclopentil) carbamato (1,18 g, 5,94 mmols, 1,2 equiv) em DMF (10 mL) foi adicionado K2CO3 (1,366 g, 9,90 mmols, 2,0 equiv) seguido pela adição de (R)-2-((4-cloro-3-fluorofenóxi)metil)oxirano (1,000 g, 4,95 mmols, 1,0 equiv). A mistura de reação foi aquecida a 60°C durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água o que resulta no precipitado. O precipitado sólido resultante foi filtrado e lavado com água resfriada, secado sob vácuo para obter terc-butil ((3S)-3-(((R)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)carbamato (0,900 g 45% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 403,3 [M+H]+ Etapa 2: Síntese de 2,2,2-trifluoroacetato de (2R)-1-(((1S)-3- aminociclopentil)amino)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol
[00311] A uma solução agitada de terc-butil ((3S)-3-(((R)-3-(4-cloro- 3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)carbamato (0,900 g, 2,24 mmols, 1,0 equiv) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (1,5 mL). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. O progresso de reação foi monitorado por LCMS e RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O composto bruto foi cristalizado em dietil éter para obter 2,2,2-trifluoroacetato de (2R)-1-(((1S)-3-aminociclopentil)amino)-3-(4- cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol puro (0,760 g, 80% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 303,2 [M+H]+ Etapa 3: Síntese de 5-cloro-N-((3S)-3-(((R)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida
[00312] A uma solução agitada de ácido 5-clorobenzofuran-2- carboxílico (0,173 g, 0,880 mmol, 1,0 equiv) em DMF (5 mL) foram adicionados 2,2,2-trifluoroacetato de (2R)-1-(((1S)-3-aminociclopentil) amino)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol (0,367 g, 0,880 mmol, 1,0 equiv), HATU (0,502 g, 1,32 mmol, 1,5 equiv) e DIPEA (0,227 g, 1,76 mmol, 2,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por
LCMS.
A mistura de reação foi diluída com água (20 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (20 mL × 5). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida.
O produto bruto foi purificado por HPLC de fase reversa para obter 5-cloro-N-((3S)- 3-(((R)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)ben- zofuran-2-carboxamida (Composto 90 - 0,065 g, 15% de produção) como um sólido esbranquiçado.
LCMS 481,2 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,66 (d, J = 7,45 Hz, 1 H), 7,86 (d, J = 2,19 Hz, 1 H), 7,69 (d, J = 9,21 Hz, 1 H), 7,38 - 7,58 (m, 3 H), 7,07 (dd, J = 11,62, 2,41 Hz, 1 H), 6,84 (dd, J = 8,77, 2,19 Hz, 1 H), 5,03 (br. s., 1 H), 4,31 - 4,49 (m, 1 H), 3,98 - 4,06 (m, 1 H), 3,80 - 3,98 (m, 2 H), 3,07 - 3,28 (m, 2 H), 2,64 (dd, J = 11,84, 4,82 Hz, 1 H), 2,56 (d, J = 4,82 Hz, 1 H), 1,87 - 2,12 (m, 2 H), 1,67 - 1,82 (m, 2 H), 1,47 - 1,61 (m, 1 H), 1,26 - 1,39 (m, 1 H). Exemplo 35 Síntese de 5-cloro-N-((3S)-3-(((S)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida
Etapa 1: Síntese de terc-butil ((3S)-3-(((S)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)carbamato
[00313] A uma solução agitada terc-butil ((3S)-3-aminociclopentil) carbamato (1,18 g, 5,94 mmols, 1,2 equiv) em DMF (10 mL) foi adicionado K2CO3 (1,366 g, 9,90 mmols, 2,0 equiv) seguido pela adição de (R)-2-((4-cloro-3-fluorofenóxi)metil)oxirano (1,000 g, 4,95 mmols, 1,0 equiv). A mistura de reação foi aquecida a 60°C durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água o que resulta no precipitado. O precipitado sólido resultante foi filtrado e lavado com água resfriada, secado sob vácuo para obter terc-butil ((3S)-3-(((S)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)carbamato (0,800 g 40% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 403,3 [M+H] + Etapa 2: Síntese de 2,2,2-trifluoroacetato de (2S)-1-(((1S)-3- aminociclopentil)amino)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol
[00314] A uma solução agitada de terc-butil ((1S,3S)-3-((3-(4-cloro- 3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)carbamato (0,800 g, 2,24 mmols, 1,0 equiv) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (1,2 mL). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. O progresso de reação foi monitorado por LCMS e RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O composto bruto foi cristalizado em dietil éter para obter 2,2,2-trifluoroacetato de (2S)-1-(((1S)-3-aminociclopentil)amino)-3-(4- cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol puro (0,730 g, 88% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 303,2 [M+H]+ Etapa 3: Síntese de 5-cloro-N-((3S)-3-(((S)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida
[00315] A uma solução agitada de ácido 5-clorobenzofuran-2- carboxílico (0,140 g, 0,720 mmol, 1,0 equiv) em DMF (5 mL) foram adicionados 2,2,2-trifluoroacetato de (2S)-1-(((1S)-3-aminociclopentil)
amino)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol (0,300 g, 0,720 mmol, 1,0 equiv), HATU (0,410 g, 1,08 mmol, 1,5 equiv) e DIPEA (0,186 g, 1,44 mmol, 2,0 equiv). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (20 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL × 3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (20 mL × 5). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por HPLC de fase reversa para obter 5-cloro-N-((3S)- 3-(((S)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil) benzofuran-2-carboxamida (Composto 91 - 0,104 g, 30% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 481,2 [M+H] +; 1H RMN(400 MHz, DMSO-d6) δ 8,66 (d, J = 7,45 Hz, 1 H) 7,86 (d, J = 2,19 Hz, 1 H) 7,69 (d, J = 9,21 Hz, 1 H) 7,38 - 7,58 (m, 3 H) 7,07 (dd, J = 11,62, 2,41 Hz, 1 H) 6,84 (dd, J = 8,77, 2,19 Hz, 1 H) 5,03 (br. s., 1 H) 4,31 - 4,49 (m, 1 H) 3,98 - 4,06 (m, 1 H) 3,80 - 3,98 (m, 2 H) 3,07 - 3,28 (m, 2 H) 2,64 (dd, J = 11,84, 4,82 Hz, 1 H) 2,56 (d, J = 4,82 Hz, 1 H) 1,87 - 2,12 (m, 2 H) 1,67 - 1,82 (m, 2 H) 1,47 - 1,61 (m, 1 H) 1,26 - 1,39 (m, 1 H). Exemplo 36 Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-(3-((2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamido) metil)pirrolidin-1-il)acetamida
[00316] A uma solução de N-((1-aminopirrolidin-3-il)metil)-2-(4-cloro- 3-fluorofenóxi)acetamida (200 mg, 0,66 mmol, 1,0 eq) em DMF (05 mL) foram adicionados ácido 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acético (134 mg, 0,66 mmol, 1,0 eq) e HATU (501 mg, 1,32 mmol, 2,0 eq) em temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada durante 10 minutos seguida pela adição de DIPEA (0,4 mL, 1,98 mmol, 3,0 eq). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL × 2). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (50 mL × 4), secados sobre Na2SO4 anidroso e concentrados. O produto bruto que foi purificado por HPLC de fase reversa para obter 2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-N-(3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido) metil)pirrolidin- 1-il)acetamida (Composto 92 - 60 mg, 19% de produção) como um sólido branco. LCMS 487,09 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,09 (br. s., 1 H) 8,65 (br. s., 1 H) 8,20 (br. s., 1 H) 7,47 (t, J = 8,33 Hz, 2 H) 7,03 (s, 1 H) 7,05 (s, 1 H) 6,83 (br. s., 1 H) 4,90 (d, J = 12,28 Hz, 2 H) 4,51 (br. s., 2 H) 4,45 (br. s., 1 H) 3,11 (br. s., 2 H) 2,83 (d, J = 6,58 Hz, 1 H) 2,62 (d, J = 17,98 Hz, 2 H) 1,81 (br. s., 1 H) 1,41 (br. s., 1 H). Exemplo 37 Síntese de 6-cloro-N-(3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido) metil)pirrolidin-1-il)quinolina-2-carboxamida
[00317] A uma solução de N-((1-aminopirrolidin-3-il)metil)-2-(4-cloro- 3-fluorofenóxi)acetamida (200 mg, 0,66 mmol, 1,0 eq) em DMF (05 mL) foram adicionados ácido 6-cloroquinolina-2-carboxílico (137 mg, 0,66 mmol, 1,0 eq) e HATU (501 mg, 1,32 mmol, 2,0 eq) em temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada durante 10 minutos seguida pela adição de DIPEA (0,4 mL, 1,98 mmol, 3,0 eq). A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL × 2). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (50 mL × 4), secados sobre Na2SO4 anidroso e concentrados. O produto bruto foi purificado por HPLC de fase reversa para obter 6-cloro-N-(3-((2-(4- cloro-3-fluorofenóxi)acetamido)metil)pirrolidin-1-il)quinolina-2-carboxa- mida (Composto 93 - 130 mg, 40% de produção) como um sólido branco. LCMS 490,10 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,74 (s, 1 H) 8,51 (d, J = 8,33 Hz, 1 H) 8,20 - 8,31 (m, 2 H) 8,12 (dd, J = 8,77, 2,63 Hz, 2 H) 7,86 (d, J = 6,58 Hz, 1 H) 7,47 (t, J = 8,77 Hz, 1 H) 7,04 - 7,11 (m, 1 H) 6,85 (d, J = 8,33 Hz, 1 H) 4,53 (s, 2 H) 3,17 (br. s., 2 H) 2,97 - 3,07 (m, 2 H) 2,73 - 2,79 (m, 1 H) 2,31 (br. s., 2 H) 1,87 (br. s., 1 H) 1,49 (d, J = 13,59 Hz, 1 H). Exemplo 38 Resolução quiral de trans-5-cloro-N-(3-(((R)-3-(4-cloro-3-fluorofe- nóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida
[00318] Os enantiômeros, 5-cloro-N-((1S,3S)-3-(((R)-3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida (Composto 94 - [α]D20 = não disponível, tempo de eluição: 26,78 minutos) e 5-cloro-N-((1R,3R)-3-(((R)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil) amino)ciclopentil)benzofuran-2-carboxamida (Composto 95 - [α]D20 = não disponível, tempo de eluição: 37,3 minutos), foram separados por SFC quiral (Chiralpak-ADH, 20 × 250 mm, 5 µm). Programa isocrático com dióxido de carbono líquido de grau analítico (grau alimentício) e 0,2% de DEA em grau de HPLC de metanol. LCMS: 481,4 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,66 (d, J = 7,89 Hz, 1 H), 7,87 (d, J = 2,19 Hz, 1 H), 7,69 (d, J = 8,77 Hz, 1 H), 7,36 - 7,55 (m, 2 H), 7,07 (dd, J = 11,62,
2,85 Hz, 1 H), 6,75 - 6,89 (m, 1 H), 5,00 (br. s., 1 H), 4,31 - 4,47 (m, 1 H), 4,01 (dd, J = 9,65, 3,95 Hz, 1 H), 3,79 - 3,95 (m, 2 H), 3,01 - 3,23 (m, 1 H), 2,53 - 2,75 (m, 2 H), 1,84 - 2,14 (m, 2 H), 1,63 - 1,82 (m, 2 H), 1,54 (dd, J = 12,28, 7,89 Hz, 1 H), 1,25 - 1,38 (m, 1 H). Exemplo 39 Resolução quiral de 5-cloro-N-(3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acetamido)metil)pirrolidin-1-il)benzofuran-2-carboxamida
[00319] Os enantiômeros, (S)-5-cloro-N-(3-((2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acetamido)metil)pirrolidin-1-il)benzofuran-2-carboxamida (Composto 96 - [α]D20 = não disponível, tempo de eluição: 16,16 minutos) e (R)-5-cloro-N-(3-((2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acetamido)metil)pirrolidin- 1-il)benzofuran-2-carboxamida (Composto 97 - [α]D20 = não disponível, tempo de eluição: 29,29 minutos), foram separados por SFC quiral (Chiralpak ADH, 250 × 20 mm, 5 µ). Programa isocrático com dióxido de carbono líquido de grau analítico e 0,2% de DEA em metanol. LCMS: 480,4 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,77 (s, 1 H), 8,24 (br. s., 1 H), 7,86 (s, 1 H), 7,69 (d, J = 8,77 Hz, 1 H), 7,35 - 7,56 (m, 3 H), 7,07 (d, J = 11,40 Hz, 1 H), 6,86 (d, J = 6,14 Hz, 1 H), 4,54 (s, 2 H), 3,17 (br. s., 2 H), 2,87 - 3,11 (m, 2 H), 2,65 - 2,78 (m, 1 H), 2,35 (d, J = 19,29 Hz, 2 H), 1,88 (br. s., 1 H), 1,39 - 1,57 (m, 1 H).
Exemplo 40 Síntese de 5-cloro-N-(1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil) pirrolidin-3-il)benzofuran-2-carboxamida Etapa 1: Síntese de terc-butil (1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)pirrolidin-3-il)carbamato
[00320] A uma solução agitada de terc-butil pirrolidin-3-ilcarbamato (200 mg, 1,074 mmol, 1 eq) em DMF (2 mL) foi adicionado K2CO3 (296 mg, 2,147 mmols, 2,0 eq) seguido pela adição de 2-((4-cloro-3- fluorofenóxi)metil)oxirano (195 mg, 0,97 mmol, 0,9 eq). A mistura de reação resultante foi aquecida a 60°C durante a noite. A formação de produto foi confirmada por RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi vertida em água resfriada (50 ml) e extraída com EtOAc (2 × 30 mL). A camada orgânica lavada com água (5 × 20 mL), solução de salmoura (1 × 20 mL), secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada sob pressão reduzida para obter terc-butil (1-(3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)pirrolidin-3-il)carbamato (350 mg, 84 % de produção) como um óleo amarelo. LCMS 389,3 [M+H]+, 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,45 (t, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,05 (d, J = 11,8 Hz, 1 H),
6,96 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 6,83 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 4,90 (d, J = 3,9 Hz, 1 H), 4,08 - 3,96 (m, 1 H), 3,95 - 3,73 (m, 2 H), 2,89 (s, 1 H), 2,82 - 2,63 (m, 1 H), 2,57 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 2,43 - 2,30 (m, 2 H), 2,08 - 1,86 (m, 2 H), 1,52 (br. s., 2 H), 1,37 (s, 9H). Etapa 2: Síntese de 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(3-aminopirrolidin-1-il)-3- (4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol
[00321] A uma solução agitada de composto terc-butil (1-(3-(4-cloro- 3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)pirrolidin-3-il)carbamato (350 mg, 0,90 mmol, 1 eq) em DCM (30 mL) foi adicionado TFA (0,4 mL) e a mistura de reação resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite sob atmosfera de nitrogênio. A formação de produto foi confirmada por LCMS. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter composto bruto pegajoso que foi cristalizado em dietil éter, secado sob vácuo para obter 2,2,2- trifluoroacetato de 1-(3-aminopirrolidin-1-il)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi) propan-2-ol (280 mg, 77% de produção) como um sólido marrom. LCMS 289,0 [M+H]+, 1H RMN (400 MHz,DMSO-d6) δ 8,32 (br. s., 2 H), 7,50 (t, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,09 (dd, J = 2,6, 11,4 Hz, 1 H), 6,85 (dd, J = 2,0, 9,0 Hz, 1 H), 4,18 (br. s., 1H), 4,08 - 3,82 (m, 4 H), 3,64 - 3,47 (m, 2 H), 3,25 (d, J = 18,9 Hz, 1 H), 3,17 (s, 4 H), 2,09 - 1,86 (m, 1 H). Etapa 3: Síntese de 5-cloro-N-(1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)pirrolidin-3-il)benzofuran-2-carboxamida
[00322] A uma solução agitada de 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(3- aminopirrolidin-1-il)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol (200 mg, 0,497 mmol, 1 eq) em DMF (5 mL) foram adicionados ácido 5- clorobenzofuran-2-carboxílico (98 mg, 0,497 mmol, 1 eq), HATU (283 mg, 0,745 mmol, 1,5 eq) seguidos pela adição de DIPEA (0,55 mL, 1,988 mmol, 4,0 eq) e a mistura de reação resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi vertida em água resfriada (50 ml) e extraída com EtOAc (2 × 50 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (4 × 20 mL), solução de salmoura (1 × 20 mL), secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (5% de MeOH em DCM como um eluente) para obter 5-cloro-N-(1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)pirrolidin-3- il)benzofuran-2-carboxamida (Composto 98 a 85 mg, 36 % de produção) como um sólido branco. LCMS 467,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,84 (br. s., 1 H), 7,88 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 7,69 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,55 (s, 1 H), 7,51 - 7,30 (m, 2 H), 7,14 - 6,98 (m, 1 H), 6,84 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,00 (br. s., 1 H), 4,43 (br. s., 1 H), 4,11 - 3,97 (m, 2 H), 3,93 (br. s., 1 H), 2,87 (br. s., 1 H), 2,78 - 2,64 (m, 2 H), 2,18 (br. s., 1 H), 1,84 (br. s., 1 H), 1,23 (s, 1 H), 1,16 (d, J = 14,0 Hz, 1 H), 0,76 (br. s., 1 H). Exemplo 41 Síntese de 6-cloro-N-(1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil) pirrolidin-3-il)quinolina-2-carboxamida
[00323] A uma solução agitada de 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(3- aminopirrolidin-1-il)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol (200 mg, 0,497 mmol, 1 eq) em DMF (5 mL) foram adicionados ácido 6- cloroquinolina-2-carboxílico (103 mg, 0,497 mmol, 1 eq), HATU (283 mg, 0,745 mmol, 1,5 eq) seguidos pela adição de DIPEA (0,55 mL, 1,988 mmol, 4,0 eq) e a mistura de reação resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi vertida em água resfriada (50 ml) e extraída com EtOAc (2 × 50 mL). A camada orgânica combinada lavada com água (4 × 20 mL), solução de salmoura (1 × 20 mL), secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (5% de MeOH em DCM como um eluente) para obter 6-cloro-N-(1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)pirrolidin-3- il)quinolina-2-carboxamida (Composto 53 a 100 mg, 42,2%) como um sólido branco. LCMS 478 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz,DMSO-d6) δ 8,89 (br. s., 1 H), 8,55 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 8,26 (d, J = 2,2 Hz, 1 H), 8,18 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 8,10 (s, 1 H), 7,87 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,48 - 7,29 (m, 1 H), 7,09 (td, J = 3,1, 11,4 Hz, 1 H), 6,85 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 5,04 (br. s., 1 H), 4,53 (br. s., 1 H), 4,05 (d, J = 9,6 Hz, 2 H), 3,96 (br. s., 1 H), 2,69 (s, 3 H), 2,25 (br. s., 2 H), 1,90 (br. s., 2 H), 1,23 (s, 1 H). Exemplo 42 Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-(1-(3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)pirrolidin-3-il)acetamida
[00324] A uma solução agitada de 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(3- aminopirrolidin-1-il)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol (200 mg, 0,497 mmol, 1 eq) em DMF (5 mL) foram adicionados ácido 2-(4-cloro- 3-fluorofenóxi)acético (101 mg, 0,497 mmol, 1 eq), HATU (283 mg, 0,745 mmol, 1,5 eq) seguidos pela adição de DIPEA (0,55 mL, 1,988 mmol, 4,0 eq) e a mistura de reação resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A formação de produto foi confirmada por LCMS. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi vertida em água resfriada (50 ml) e extraída com EtOAc (2 × 50 mL).
A camada orgânica combinada lavada com água (4 × 20 mL), solução de salmoura (1 × 20 mL), secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada sob pressão reduzida.
O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (5% de MeOH em DCM como um eluente) para obter 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-(1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)pirrolidin-3-il)acetamida (Composto 99 a 140 mg, 59 % de produção) como um semissólido amarelo.
LCMS 475,4 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz,DMSO-d6) δ 8,17 (d, J = 6,1 Hz, 1 H), 7,55 - 7,35 (m, 2 H), 7,20 - 7,00 (m, 2 H), 6,83 (d, J = 8,8 Hz, 2 H), 4,96 (br. s., 1 H), 4,50 (s, 2 H), 4,22 (br. s., 1 H), 4,01 (dd, J = 2,4, 5,9 Hz, 1 H), 3,95 - 3,74 (m, 2 H), 2,71 (br. s., 2 H), 2,60 (br. s., 1 H), 2,33 (br. s., 3 H), 2,08 (d, J = 5,7 Hz, 1 H), 1,62 (br. s., 1 H) Exemplo 43 Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-(1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi) propil)pirrolidin-3-il)acetamida
Etapa 1: Síntese de 4-(3-bromopropóxi)-1-cloro-2-fluorobenzeno
[00325] A uma solução de 3-cloro-4-fluorofenol (0,500 g, 3,41 mmols, 1,0 eq) em DMF (5 mL) foi adicionado K2CO3 (0,942 g, 6,82 mmols, 2,0 eq) seguido pela adição de 1,3-dibromopropano (1,74 mL, 17,06 mmols, 5,0 eq). A mistura de reação resultante foi aquecida a 75°C durante 4 horas. A formação de produto foi confirmada por espectroscopia de RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi diluída com água (25 mL) e extraída com acetato de etila (50 mL × 2). A camada orgânica combinada foi lavada com água (20 mL), secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida para obter o composto bruto que foi purificado por cromatografia rápida (0 a 10% de acetato de etila em hexano como um eluente) para obter 4-(3-bromopropóxi)-1- cloro-2-fluorobenzeno (0,500 g, 54,8% de produção) como um líquido incolor. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,22 - 7,30 (m, 1 H) 6,72 (dd,J = 10,74, 2,85 Hz, 1 H) 6,65 (ddd, J = 8,88, 2,74, 1,10 Hz, 1 H) 4,08 (t, J = 5,70 Hz, 2 H) 3,46 - 3,69 (m, 2 H) 2,18 - 2,43 (m, 2 H). Etapa 2: Síntese de terc-butil (1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propil) pirrolidin-3-il)carbamato
[00326] A uma solução de terc-butil pirrolidin-3-ilcarbamato (0,769 g, 4,13 mmols, 1,0 eq) em DMF (15 mL) foi adicionado K2CO3 (0,519 g, 3,76 mmols, 1,0 eq) seguido pela adição de 4-(3-bromopropóxi)-1-cloro- 2-fluorobenzeno (1,0 g, 3,76 mmols, 1,0 eq). A mistura de reação resultante foi aquecida a 80°C durante a noite. A formação de produto foi confirmada por espectroscopia de RMN. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL × 2). A camada orgânica combinada foi lavada com água (20 mL × 4), secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi cristalizado em dietil éter para obter terc-butil (1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propil)pirrolidin-3- il)carbamato (0,750 g, 53% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 374,2 [M+H]+, 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,19 - 7,31 (m, 1 H), 6,70 (dd, J = 10,74, 2,85 Hz, 1 H), 6,58 - 6,66 (m, 1 H), 4,89 (br. s., 1 H), 4,19 (br. s., 1 H), 3,98 (t, J = 6,36 Hz, 1 H), 2,88 (br. s., 1 H), 2,61 (br. s., 2 H), 2,17 - 2,44 (m, 2 H), 1,88 - 2,06 (m, 2 H), 1,62 (br. s., 2 H), 1,42 (s., 9 H), 1,26 (d, J = 8,77 Hz, 1 H). Etapa 3: Síntese de 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi) propil)pirrolidin-3-amina
[00327] A uma solução agitada de terc-butil (1-(3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)propil)pirrolidin-3-il)carbamato (0,250 g, 0,67 mmol, 1,0 eq) em DCM (20 mL) foi adicionado ácido trifluoroacético (1 mL) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. DCM e excesso de ácido trifluoroacético foram removidos sob pressão reduzida para obter 2,2,2- trifluoroacetato de 1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propil)pirrolidin-3-amina (0,260 g, produção quantitativa) como um sólido. LCMS 273,2 [M+H]+, 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,72 (br. s., 1 H), 8,41 (br. s., 2 H), 7,48 (t, J = 8,77 Hz, 1 H), 7,06 (dd, J = 11,40, 3,07 Hz, 1 H), 6,83 (dd, J = 8,77, 1,75 Hz, 1 H), 4,08 (t, J = 5,92 Hz, 2 H), 3,98 (br. s., 1 H), 3,62 - 3,86 (m, 2 H), 3,48 - 3,62 (m, 1 H), 3,27 - 3,47 (m, 3 H), 3,05 - 3,27 (m, 1 H), 2,33 (br. s., 1 H), 1,90 - 2,20 (m, 1 H), 1,09 (t, J = 7,02 Hz, 2 H). Etapa 4: Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-(1-(3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)propil)pirrolidin-3-il)acetamida
[00328] A uma solução de 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)propil)pirrolidin-3-amina (0,200 g, 0,73 mmol, 1,0 eq) em DMF (5 mL) foram adicionados ácido 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)acético (0,150 g, 0,73 mmol, 1,0 eq) e HATU (0,418 g, 1,102 mmol, 1,5 eq) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada durante 10 minutos e em seguida DIPEA (0,36 mL, 2,20 mmols, 3,0 eq) foi adicionado. A mistura de reação resultante foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. O progresso da reação foi monitorado por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (10 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL × 2). A camada orgânica combinada foi lavada com água (50 mL × 4), secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida para obter o composto bruto que foi purificado por HPLC de fase reversa para 2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-N-(1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propil)pirrolidin-3-il)acetamida (Composto 100 a 0,060 g, 17% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 459,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,20 (d, J = 7,45 Hz, 1 H), 7,45 (t, J = 8,99 Hz, 1 H), 7,48 (t, J = 8,99 Hz, 1 H), 7,04 (t, J = 2,85 Hz, 1 H), 7,07 (t, J = 2,85 Hz, 1 H), 6,69 - 6,94 (m, 2 H), 4,51 (s, 2 H), 4,14 - 4,34 (m, 1 H), 4,03 (t, J = 6,14 Hz, 2 H), 3,34 (br. s., 2 H), 2,67 (br. s., 2 H), 2,42 (br. s., 2 H), 1,98 - 2,21 (m, 1 H), 1,86 (quin, J = 6,69 Hz, 2 H), 1,63 (dd, J = 11,84, 5,70 Hz, 1 H). Exemplo 44 Síntese de 6-cloro-N-(1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propil)pirrolidin- 3-il)quinolina-2-carboxamida
[00329] A uma solução de 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)propil)pirrolidin-3-amina (0,150 g, 0,55 mmol, 1,0 eq) em DMF (5 mL) foram adicionados ácido 6-cloroquinolina-2-carboxílico (0,114 g, 0,73 mmol, 1,0 eq) e HATU (0,380 g, 0,82 mmol, 1,5 eq) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada durante 10 minutos e em seguida DIPEA (0,27 mL, 2,20 mmols, 3,0 eq) foi adicionado. A mistura de reação resultante foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. O progresso da reação foi monitorado por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (10 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL × 2). A camada orgânica combinada foi lavada com água (50 mL × 4), secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida para obter o composto bruto que foi purificado por HPLC de fase reversa para 6-cloro-N-(1-(3- (4-cloro-3-fluorofenóxi)propil)pirrolidin-3-il)quinolina-2-carboxamida (Composto 56 a 0,060 g, 23% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 462,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,91 (br. s., 1 H), 8,56 (d, J = 8,77 Hz, 1 H), 8,26 (d, J = 2,63 Hz, 1 H), 8,18 (d, J = 8,33 Hz, 1 H), 8,13 (d, J = 7,45 Hz, 1 H), 7,88 (dd, J = 8,99, 2,41 Hz, 1 H), 7,45 (t, J = 8,77 Hz, 1 H), 7,08 (dd, J = 11,40, 2,63 Hz, 1 H), 6,74 - 6,95 (m, 1 H), 4,55 (br. s., 1 H), 4,08 (t, J = 6,14 Hz, 2 H), 2,99 (br. s., 2 H), 2,79 (br. s., 2 H), 2,67 (br. s., 1 H), 2,33 (br. s., 1 H), 2,27 (br. s., 1 H) 1,97 (br. s., 3 H). Exemplo 45 Síntese de 5-cloro-N-(1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propil)pirrolidin- 3-il)benzofuran-2-carboxamida
[00330] A uma solução de 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)propil)pirrolidin-3-amina (0,150 g, 0,55 mmol, 1,0 eq) em DMF (5 mL) foram adicionados ácido 5-clorobenzofuran-2-carboxílico (0,114 g, 0,73 mmol, 1,0 eq) e HATU (0,380 g, 0,82 mmol, 1,5 eq) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada durante 10 minutos e em seguida DIPEA (0,27 mL, 2,20 mmols, 3,0 eq) foi adicionado. A mistura de reação resultante foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. O progresso da reação foi monitorado por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (10 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL × 2). A camada orgânica combinada foi lavada com água (50 mL × 4), secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida para obter o composto bruto que foi purificado por HPLC de fase reversa para 5-cloro-N-(1-(3- (4-cloro-3-fluorofenóxi)propil)pirrolidin-3-il)benzofuran-2-carboxamida (Composto 101 a 0,080 g, 24 % de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 451,10 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,97 (br. s., 1 H), 7,89 (d, J = 2,19 Hz, 1 H), 7,70 (d, J = 8,77 Hz, 1 H), 7,59 (s, 1 H), 7,39 - 7,54 (m, 2 H), 7,08 (dd, J = 11,40, 2,63 Hz, 1 H), 6,76 - 6,92 (m, 1 H), 4,51 (br. s., 1 H), 4,07 (t, J = 6,14 Hz, 2 H), 2,94 (br. s., 5 H), 2,33 (br. s., 1 H), 2,25 (br. s., 1 H), 2,00 (br. s., 3 H). Exemplo 46 Síntese de 5-cloro-N-((1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil) pirrolidin-3-il)metil)benzofuran-2-carboxamida Etapa 1: Síntese de terc-butil ((1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)pirrolidin-3-il)metil)carbamato
[00331] A uma solução agitada de terc-butil (pirrolidin-3-ilmetil) carbamato (0,500 g, 2,50 mmols, 1,0 eq) e 2-((4-cloro-3-fluorofenóxi) metil)oxirano (0,606 g, 3,00 mmols, 1,2 eq) em DMF (5 mL) foi adicionado K2CO3 (0,690 g, 5,00 mmols, 2,0 eq). A mistura de reação resultante foi aquecida a 90°C durante a noite. A reação foi monitorada por TLC e LCMS. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi diluída com água (40 mL) e extraída com EtOAc (3 × 50 mL) e lavada com água (2 × 40 mL), solução de salmoura (2 × 40 mL), secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada sob pressão reduzida para obter bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 5% de MeOH em DCM como eluente) para obter terc-butil ((1-(3-(4- cloro-3-fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)pirrolidin-3-il)metil)carbamato (0,300 g, 30% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 403,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,22 - 7,29 (m, 1 H), 6,74 (dd, J = 10,52, 2,63 Hz, 1 H), 6,67 (dd, J = 8,77, 2,63 Hz, 1 H), 4,76 (br. s., 1 H), 4,04 - 4,15 (m, 1 H), 3,95 (d, J = 4,82 Hz, 2 H), 3,49 (s, 1 H), 3,14 (br. s., 2 H), 2,79 - 2,92 (m, 2 H), 2,75 (t, J = 6,80 Hz, 1 H), 2,52 - 2,65 (m, 2 H), 2,34 - 2,52 (m, 2 H), 1,94 - 2,08 (m, 1 H), 1,54 (dd, J = 13,15, 6,14 Hz, 1 H), 1,44 (s, 9 H). Etapa 2: Síntese de 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(3-(aminometil)pirrolidin- 1-il)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol
[00332] A uma solução agitada de terc-butil ((1-(3-(4-cloro-3- fluorofenóxi)-2-hidroxipropil)pirrolidin-3-il)metil)carbamato (0,300 g, 0,744 mmol, 1,0 eq) em DCM (5 mL) foi adicionado TFA (0,5 mL) e a mistura de reação resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite sob atmosfera de nitrogênio. A reação foi monitorada por TLC e LCMS. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi cristalizado em dietil éter e secado sob vácuo para obter 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(3- (aminometil)pirrolidin-1-il)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol (0,250 g, 80% de produção) como um sólido esbranquiçado. LCMS 303,2 [M+H]+ Etapa 3: Síntese de 5-cloro-N-((1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)pirrolidin-3-il)metil)benzofuran-2-carboxamida
[00333] A uma solução de sal de 2,2,2-trifluoroacetato de 1-(3- (aminometil)pirrolidin-1-il)-3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)propan-2-ol (0,250 g, 0,600 mmol, 1,0 eq) em DMF (05 mL) foram adicionados ácido 5-
clorobenzofuran-2-carboxílico (0,0,118 g, 0,600 mmol, 1,0 eq) e HATU (0,342 g, 0,900 mmol, 1,5 eq) em temperatura ambiente.
A mistura de reação foi agitada durante 10 minutos e em seguida DIPEA (0,232 mL, 1,80 mmol, 3,0 eq) foi adicionado.
A mistura de reação resultante foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite.
O progresso da reação foi monitorado por LCMS.
A mistura de reação foi diluída com água (15 mL) e extraída com acetato de etila (20 mL × 2). A camada orgânica combinada foi lavada com água (20 mL × 4), secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida.
O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 5% de MeOH em DCM como eluente) para obter 5-cloro-N-((1-(3-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-2- hidroxipropil)pirrolidin-3-il)metil)benzofuran-2-carboxamida (Composto 8 a 0,080 g, 27% de produção) como um sólido esbranquiçado.
LCMS 481,4 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,92 (br. s., 1 H), 7,87 (d, J = 1,75 Hz, 1 H), 7,69 (d, J = 8,77 Hz, 1 H), 7,35 - 7,58 (m, 3 H), 7,06 (d, J = 11,84 Hz, 1 H), 6,83 (d, J = 9,21 Hz, 1 H), 4,01 (d, J = 9,65 Hz, 2 H), 3,93 (br. s., 1 H), 2,68 (d, J = 9,21 Hz, 2 H), 1,92 (d, J = 14,03 Hz, 2 H), 1,57 (br. s., 2 H), 1,23 (br. s., 1 H), 0,93 (d, J = 6,58 Hz, 1 H).
Exemplo 47 Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1-(5-clorobenzofuran-2- carbonil)pirrolidin-3-il)metil)acetamida Etapa 1: Síntese de terc-butil ((1-(5-clorobenzofuran-2-carbonil) pirrolidin-3-il)metil)carbamato
[00334] A uma solução de ácido 5-clorobenzofuran-2-carboxílico (0,250 g, 1,27 mmol, 1,0 eq) em DMF (5 mL) foram adicionados terc- butil (pirrolidin-3-ilmetil)carbamato (0,255 g, 1,27 mmol, 1,0 eq) e HATU (0,965 g, 2,54 mmols, 2,0 eq) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada durante 5 minutos e DIPEA (0,4 mL, 1,00 mmol, 2,0 eq) foi adicionado. A mistura de reação resultante foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. O progresso da reação foi monitorado por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água fria (20 mL) e extraída com acetato de etila (60 mL × 2). A camada orgânica combinada foi lavada com água fria (20 mL × 4), salmoura (20 mL × 2), secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 5% de MeOH em DCM como um eluente) para obter terc-butil ((1-(5-clorobenzofuran- 2-carbonil)pirrolidin-3-il)metil)carbamato (120 mg, 24,8%) como um sólido marrom. LCMS 379,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,83 (d, J = 1,75 Hz, 1 H), 7,67 - 7,77 (m, 1 H), 7,38 - 7,55 (m, 2 H), 7,03 (d, J = 15,79 Hz, 1 H), 3,82 - 3,99 (m, 1 H), 3,51 - 3,67 (m, 2 H), 2,91 - 3,10 (m, 2 H), 2,17 - 2,46 (m, 2 H), 1,83 - 2,05 (m, 1 H), 1,54 - 1,73 (m, 1 H), 1,39 (s, 9 H). Etapa 2: Síntese de 2,2,2-trifluoroacetato de (3-(aminometil)pirrolidin-1- il)(5-clorobenzofuran-2-il)metanona
[00335] A uma solução agitada de terc-butil ((1-(5-clorobenzofuran- 2-carbonil)pirrolidin-3-il)metil)carbamato (0,06 g, 0,158 mmol, 1 eq) em DCM (30 mL) foi adicionado TFA (0,5 mL) e a mistura de reação resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A reação foi monitorada por LCMS. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e diluída com água. A camada aquosa lavada com acetato de etila (10 mL). A camada aquosa foi separada e liofilizada sobre liofilizador para obter 2,2,2- trifluoroacetato de (3-(aminometil)pirrolidin-1-il)(5-clorobenzofuran-2- il)metanona (60 mg, produção quantitativa) como um sólido amarelo. LCMS 278,9 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,84 (br. s., 2 H), 7,70 (dd, J = 8,33, 3,51 Hz, 1 H), 7,39 - 7,52 (m, 1 H), 4,01 (br. s., 1 H), 3,85 (d, J = 10,52 Hz, 1 H), 3,68 - 3,81 (m, 1 H), 3,32 (d, J = 6,58 Hz, 2 H), 2,83 - 2,99 (m, 2 H), 2,59 - 2,73 (m, 1 H), 2,52 (br. s., 1 H), 2,06 (br. s., 1 H), 1,77 (br. s., 1 H). Etapa 3: Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1-(5-clorobenzofuran- 2-carbonil)pirrolidin-3-il)metil)acetamida
[00336] A uma solução de 2,2,2-trifluoroacetato de (3-(aminometil) pirrolidin-1-il)(5-clorobenzofuran-2-il)metanona (0,06 g, 0,153 mmol, 1,0 eq) em DMF (1,0 mL) foram adicionados ácido 2-(4-cloro-3- fluorofenóxi)acético (0,031 g, 0,153 mmol, 1,0 eq) e HATU (0,116 g, 0,306 mmol, 2,0 eq) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada durante 5 minutos e em seguida DIPEA (0,039 mL, 1,00 mmol,
2,0 eq) foi adicionado. A mistura de reação resultante foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. O progresso da reação foi monitorado por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água fria (20 mL) e extraída com acetato de etila (60 mL × 2). A camada orgânica combinada foi lavada com água fria (20 mL × 4), salmoura (20 mL × 2), secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 5% de MeOH em DCM como um eluente) para obter 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1- (5-clorobenzofuran-2-carbonil)pirrolidin-3-il)metil)acetamida (Composto 6 a 45 mg, 75% de produção) como um sólido branco.
[00337] LCMS 465,4 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,32 (d, J = 6,14 Hz, 1 H), 7,83 (d, J = 2,19 Hz, 1 H), 7,71 (t, J = 8,77 Hz, 2 H), 7,46 - 7,54 (m, 1 H), 7,36 - 7,46 (m, 1 H), 7,01 - 7,17 (m, 1 H), 6,75 - 6,92 (m, 1 H), 4,56 (d, J = 10,09 Hz, 2 H), 3,80 - 3,99 (m, 1 H), 3,36 - 3,66 (m, 2 H), 3,04 - 3,29 (m, 2 H), 2,42 (br. s., 1 H), 2,01 (br. s., 1 H), 1,93 (d, J = 5,70 Hz, 1 H), 1,60 - 1,70 (m, 1 H). Exemplo 48 Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1-(6-cloroquinolina-2- carbonil)pirrolidin-3-il)metil)acetamida
Etapa 1: Síntese de terc-butil ((1-(6-cloroquinolina-2-carbonil)pirrolidin- 3-il)metil)carbamato
[00338] A uma solução de ácido 6-cloroquinolina-2-carboxílico (0,2 g, 0,966 mmol, 1,0 eq) em DMF (1,5 mL) foram adicionados terc-butil (pirrolidin-3-ilmetil)carbamato (0,270 g, 0,966 mmol, 1,0 eq) e HATU (0,734 g, 1,93 mmol, 2,0 eq) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada durante 5 minutos e em seguida DIPEA (0,4 mL, 1,93 mmol, 2,0 eq) foi adicionado. A mistura de reação resultante foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. O progresso da reação foi monitorado por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água fria (20 mL) e extraída com acetato de etila (60 mL × 2). A camada orgânica combinada foi lavada com água fria (20 mL × 4), salmoura (20 mL × 2), secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 5% de MeOH em DCM como um eluente) para obter terc-butil ((1-(5-clorobenzofuran- 2-carbonil)pirrolidin-3-il)metil)carbamato (0,100 g, 26 % de produção) como um semissólido amarelo. LCMS 390,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,47 (d, J = 8,77 Hz, 1 H), 8,21 (d, J = 2,19 Hz, 1 H), 7,99 - 8,09 (m, 1 H), 7,78 - 7,93 (m, 2 H), 7,06 (br. s., 1 H), 3,58 - 3,83 (m, 2 H), 3,45 - 3,57 (m, 2 H), 3,39 (dd, J = 11,18, 6,36 Hz, 1 H), 2,82 - 3,08 (m, 1 H), 2,22 - 2,40 (m, 1 H), 1,97 (dd,J = 11,18, 4,60 Hz, 1 H), 1,51 - 1,74 (m, 1 H), 1,17 - 1,31 (s, 9 H). Etapa 2: Síntese de 2,2,2-trifluoroacetato de (3-(aminometil)pirrolidin-1- il)(6-cloroquinolin-2-il)metanona
[00339] A uma solução agitada de terc-butil ((1-(5-clorobenzofuran- 2-carbonil)pirrolidin-3-il)metil)carbamato (0,1 g, 0,257 mmol, 1 eq) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (0,5 mL) e a mistura de reação resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A reação foi monitorada por LCMS. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e diluída com água. A camada aquosa lavada com acetato de etila (10 mL). A camada aquosa foi separada e liofilizada sobre liofilizador para obter 2,2,2- trifluoroacetato de terc-butil ((1-(6-cloroquinolina-2-carbonil)pirrolidin-3- il)metil)carbamato (100 mg, 97%) como um semissólido marrom. LCMS 290,0 [M+H]+ Etapa 3: Síntese de 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1-(6-cloroquinolina-2- carbonil)pirrolidin-3-il)metil)acetamida
[00340] A uma solução de 2,2,2-trifluoroacetato de (3-(aminometil) pirrolidin-1-il)(6-cloroquinolin-2-il)metanona (0,05 g, 0,124 mmol, 1,0 eq) em DMF (2 mL) foram adicionados ácido 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi) acético (0,025 g, 0,124 mmol, 1,0 eq) e HATU (0,094 g, 0,248 mmol, 2,0 eq) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada durante 5 minutos e em seguida DIPEA (0,015 mL, 0,248 mmol, 2,0 eq) foi adicionado. A mistura de reação resultante foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. O progresso da reação foi monitorado por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água fria (20 mL) e extraída com acetato de etila (60 mL × 2). A camada orgânica combinada foi lavada com água fria (20 mL × 4), salmoura (20 mL × 2), secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 5% de MeOH em DCM como um eluente) para obter 2-(4-cloro-3-fluorofenóxi)-N-((1- (6-cloroquinolina-2-carbonil)pirrolidin-3-il)metil)acetamida (Composto 5 a 60 mg, 100%) como sólido branco. LCMS 476,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,47 (d, J = 8,77 Hz, 1 H), 8,34 (br. s., 1 H), 8,18 - 8,27 (m, 1 H), 8,06 (t, J = 9,43 Hz, 1 H), 7,76 - 7,92 (m, 1 H), 7,50 (t, J = 8,99 Hz, 1 H), 7,37 (t, J = 8,77 Hz, 1 H), 6,94 - 7,01 (m, 1 H), 6,77 (d, J = 7,89 Hz, 1 H), 4,58 (s, 1 H), 4,49 (s, 1 H), 3,58 - 3,87 (m, 2 H), 3,47 - 3,58 (m, 1 H), 3,41 (dd, J = 11,62, 7,24 Hz, 1 H), 3,03 - 3,32 (m, 2 H), 2,41 (dd, J = 12,72, 6,58 Hz, 1 H), 1,83 - 2,05 (m, 1 H), 1,55 - 1,74 (m, 1 H).
EXEMPLOS BIOLÓGICOS Exemplo B1 – Ensaio de Inibição de Expressão de ATF4
[00341] O repórter ATF4 foi preparado fundindo o 5’UTR humano de ATF4 (Nº de acesso NCBI BC022088.2) a montante da sequência de codificação da luciferase do vagalume sem o iniciador metionina. A sequência fundida foi clonada no vetor de clonagem pLenti-EF1a-C-Myc- DDK-IRES-Puro (Origen # PS100085) usando métodos padrão. A produção de vírus foi realizada usando o protocolo Lenti-X™ Packaging Single Shots (Clonetech # 631276). Partículas virais foram usadas para transduzir células HEK293T (ATCC # CRL-3216, ATCC Manassas, VA), que foram subsequentemente selecionadas com puromicina para gerar linha celular estável. As células foram mantidas a 37°C e 5% de CO2 em DMEM-F12 (Hyclone # SH30023.02) suplementado com 10% de soro fetal bovino inativado pelo calor (Gibco # 16000-044), 2 mM de L- glutamina (Gibco # 25030- 081), 100 U/ml de penicilina e 100 µg/ml de estreptomicina (Gibco # 15140-122).
[00342] Células HEK293T transportando o repórter de luciferase ATF4 foram semeadas em placas de 96 poços (Nunc) a 10.000 células por cavidade. As células foram tratadas dois dias após a semeadura com 100 nM de tapsigargina (Tg) (Sigma-Aldrich # T9033) na presença de diferentes concentrações de compostos selecionados variando de 1 nM a 10 μM. Células sem tratamento ou células tratadas apenas com Tg foram utilizadas como controles. As placas de ensaio contendo células foram incubadas durante 3 horas a 37°C.
[00343] As reações de luciferase foram realizadas usando Luciferase Assay System (Promega # E1501) como especificado pelo fabricante. A luminescência foi lida com um tempo de integração de 1 s e um ganho de 110 usando uma leitora de microplacas multimodo Cytation-5 (BioTek). As unidades de luminescência relativa foram normalizadas para tratamento com Tg (0% de inibição) e células não tratadas (100% de inibição) e a porcentagem de inibição de ATF4 foi calculada.
[00344] A concentração inibitória metade da máxima (IC50) para o aumento dos níveis de proteína ATF4 é mostrada na Tabela 2. Sob condições de estresse ISR (resultado de tratamento com Tg), A expresssão de ATF4 é geralmente super regulada.
Consequentemente, a inibição de expressão de ATF4 como um resultado do composto teste indica supressão da via de ISR.
Tabela 2 Composto Nº.
IC50 (nM) de inibição de ATF4 1 856 2 > 1000 3 248,6 4 > 100 5 > 100 6 > 100 7 > 100 8 >1000 12 3,58 13 > 100 14 216,7 15 > 100 16 134 17 102 18 177,6 19 > 100 20 > 100 21 > 1000 33 > 1000 34 > 1000 53 >1000 56 >1000
Composto Nº. IC50 (nM) de inibição de ATF4 80 > 100 81 1000 82 > 1000 83 > 1000 84 > 100 85 < 1000 86 < 100 87 < 1000 88 < 1000 89 > 1000 90 57,8 91 1236 92 14,1 93 2,8 94 24,3 95 <1000 96 4,97 97 25,0 98 >100 99 >100 100 >100 101 >100 Exemplo B2 – Ensaio de Inibição de Expressão de ATF4
[00345] Células HEK293T são mantidas a 37°C e 5% de CO2 em Meio de Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de soro bovino fetal (FBS), L-glutamina a 2 mM, 100 U/ml de penicilina, e estreptomicina a 100 µg/ml. Após atingir 80% de confluência, as células são destacadas e semeadas em placas de 6 cavidades em meio completo,
deixadas recuperar durante a noite e tratadas por 3 horas com tapsigargina (Tg) a 100 nM na presença de 100 nM ou concentração de 1 µM de um composto teste (ensaios de inibição percentual) ou várias concentraões que variam de 1 nM a 1 µM (ensaio a C50). Células sem tratamento ou células tratadas com Tg apenas são usadas como controles.
[00346] Após 3 horas de tratamento com Tg e o composto teste, as células são lisadas com Tampão de lise SDS-PAGE. Os lisados são transferidos para tubos de 1,5 ml e tratados com ondas sonoras por 3 minutos, e quantidades totais de proteína são quantificadas usando Kit de Ensaio de Proteína BCA (Pierce). Quantidade igual de proteínas é carregada em géis de SDS-PAGE. As proteínas são transferidas sobre membranas PVDF a 0,2 μm (BioRad) e sondadas com anticorpos primários diluídos em Salina tamponada por Tris suplementada com 0,1% de Tween 20 e 3% de albumina de soro bovino.
[00347] Anticorpo ATF4 (11815) é usado como anticorpo primário (Cell Signaling Technologies). Um anticorpo secundário conjugado à peroxidase de rábano picante (HRP) (Rockland) é empregado para detectar faixas imuno-reativas usando quimioluminescência realçada (Substrato de Western Blotting ECL, Pierce). Quantificação de faixas de proteína é feita por densitometria usando Image J.
[00348] Os percentuais de inibição de ATF4 após indução com Tg na presença de 100 nM ou 1 µM de certos compostos teste podem ser reportados. O percentual de inibição de ATF4 pode ser calculado como a redução percentual normalizada para tratamento com Tg (0% de inibição) e células não tratadas (100% de inibição). A IC50 calculada para os compostos teste pode também ser reportada. Sob condições de estresse ISR (resultado de tratamento comTg), a expresssão de ATF4 é geralmente super regulada. Consequentemente, a inibição de expressão de ATF4 como um resultado do composto teste indica supressão da via de ISR.
Exemplo B3 – Ensaio de Translação de Proteína
[00349] Células de ovário de hamster chinês (CHO) foram mantidas a 37°C e 5% de CO2 em Meio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% soro bovino fetal, L-glutamina a 2 mM, 100 U/ml de penicilina, e estreptomicina a 100 µg/ml. Após atingir 80% de confluência, células foram destacadas e semeadas em placas de 6 cavidades em meio completo, deixadas recuperar durante a noite e tratadas por duas horas com 1 µM do composto teste (para avaliar os níveis de síntese de proteína em condição não estressada), ou por duas horas com 300 nM Tg na presença de 1 µM do composto teste (para avaliar a recuperação da sítese de proteína em uma condição estressada). Células com Tg apenas foram usadas como controles.
[00350] Após os tratamentos de duas horas, os meios foram substituídos adicionando10 µg/ml de puromicina (Sigma Aldrich #P8833) em meio completo por 30 minutos. Os meios foram removidos e as células foram lisadas com Tampão de lise SDS-PAGE. Os lisados foram transferidos para tubos de 1,5 ml e tratados com ondas sonoras por 3 minutos e a quantidade total da proteína foi quantificada usando o Kit de Ensaio de Proteína BCA (Pierce). Quantidade igual de proteína (30 g) foi carregada sobre géis de SDS-PAGE. As proteínas foram transferidas sobre membranas PVDF a 0,2 μm (BioRad) e sondadas com anticorpos primários diluídos em Salina tamponada por Tris suplementada com 0,1% de Tween 20 (Merck #S6996184 505) e 3% de albumina de soro bovino (Rockland #BSA-50).
[00351] Os anticorpos puromicina (12D10) (Merck #MABE343) e β- actina (Sigma Aldrich #A5441) foram usados como anticorpo primário. Um anticorpo secundário conjugado à HRP (Rockland) foi empregado para detectar faixas imuno-reativas usando quimioluminescência realçada (Substrato de Western Blotting ECL, Pierce). Quantificação de faixas de proteína foi feita por densitoetria usando o software ImageJ.
[00352] Aumento percentual da síntese de proteinas em células não estressadas (sem tratamento com Tg) na presença de meio apenas ou de certos compostos teste é mostrado na Tabela 3. Os níveis percentuais foram normalizados para a condição apenas de meio, que corresponde a 100% de síntese de proteínas. Certos compostos estimularam a síntese de proteínas acima da linha de base, indicando que esses compostos teste resultam em aumento da síntese de proteínas em células não estressadas.
[00353] A porcentagem de recuperação da síntese de proteínas em células estressadas (com tratamento com Tg) devido aos compostos teste a 1 µM também é mostrada na Tabela 3. Os níveis foram normalizados para as condições apenas de meio e apenas de Tg, que correspondem a 100% e 0%, respectivamente. Tabela 3 % de Recuperação de % de Síntese de proteínas relativa Composto síntese de proteínas a não tratadas Nº. (composto teste a 1 μM) (composto teste a 1 μM) 1 n.d. 46,9 2 28,2 84,7 3 286 176,1 4 -53,2 76,1 5 0,00 94,2 6 0,00 81,2 7 -15,9 121,9 8 31,57 107,1 12 13 97,7 13 161,6 288,2 14 n.d. 65,9 15 -4,2 110,5 16 n.d. 95,4 17 22 78,4 18 n.d. 158,3 19 -1,3 76,1
% de Recuperação de % de Síntese de proteínas relativa Composto síntese de proteínas a não tratadas Nº. (composto teste a 1 μM) (composto teste a 1 μM) 20 52,5 122,6 21 54,6 140,6 33 101,1 147 34 122,6 166,1 53 37,93 101,9 56 32,73 100,5 80 23,9 152,7 81 38,7 133,6 82 176,4 159,7 83 175,2 128,8 84 -87,4 80,3 85 -94,8 88 86 -97 94,2 87 -94,5 83,9 88 -28,1 76,4 89 42,5 118,7 90 269,7 210,4 91 209,4 190,4 92 45,8 93,6 93 51,4 101,8 94 298,3 169,2 95 170,5 186,1 96 24,5 109,9 97 -34,4 109,1 98 142,63 167,3 99 0,00 67,7 100 0,00 69,1 101 86,10 93,2
[00354] Os dados resumidos nas Tabelas 2 e 3 mostram que alguns compostos têm atividade diferencial na inibição de ATF4 e síntese de proteínas sob condições indutoras de ISR. Ou seja, alguns compostos são capazes de inibir efetivamente a expressão de ATF4, mas não restauram a síntese de proteínas. Outros compostos restauram eficazmente a síntese de proteínas, mas não inibem a expressão de ATF4 em condições de indução de ISR. Ainda outros compostos inibem a expressão de ATF4 e restauram a síntese de proteínas. Exemplo de Ensaio de Inibição de B4– ATF4 sob Estimulação de Aβ
[00355] Células de ovário de hamster chinês (CHO) que expressam estavelmente APP751 humano incorporando a mutação familiar da doença de Alzheimer V717F são usados como uma fonte de monômero Aβ e oligômeros de baixo-n. Estas células, referidas como células 7PA2 CHO, são cultivadas em placas de 100 mm com meio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) contendo 10% de soro bovino fetal, L- glutamina a 2 mM, 100 U/ml de penicilina e 100 µg/ml de penicilina, estreptomicina e 200 μg/ml de G418. Ao atingir 90 a 100% de confluência, as células são lavadas com 5 mL de DMEM sem glutamina e soro e incubadas por aproximadamente 16 horas em 5 mL do mesmo DMEM. O meio condicionado (CM) é coletado.
[00356] Células SH-SY5Y são mantidas a 37°C e 5% de CO2 em meio RPMI 1640 suplementado com 10% de soro bovino fetal (FBS), penicilina e estreptomicina. Após atingir 80% de confluência, as células são destacadas e semeadas em placas de 6 cavidades em meio completo, deixadas recuperar 48 horas e tratadas por 16 horas com CM de células WT CHO ou 7PA2 CHO na presença de 1 µM de compostos selecionados.
[00357] Após 16 horas de tratamento, os meios de cultura são removidos e as células são lisadas com tampão de lise SDS-PAGE. Os lisados são transferidos para tubos de 1,5 ml e tratados com ondas sonoras por 3 minutos. A quantidade total de proteínas é quantificada usando o Kit de Ensaio de Proteína BCA (Pierce). A mesma quantidade de proteínas (30 µg) é carregada em géis de SDS-PAGE. As proteínas são transferidas sobre membranas PVDF de 0,2 µm (BioRad) e sondadas com anticorpos primários diluídos em Salina tamponada por Tris suplementada com 0,1% de Tween 20 e 3% de albumina de soro bovino.
[00358] Anticorpo ATF4 (11815) é usado como anticorpo primário (Cell Signaling Technologies). Um anticorpo β-actina é usado como um anticorpo primário de controle. Um anticorpo secundário conjugado a HRP (Rockland) é empregado para detectar faixas imunorreativas usando quimioluminescência realçada (Substrato de Western Blotting ECL, Pierce). A quantificação de proteína é feita por densitometria usando ImageJ.
[00359] A porcentagem de inibição da expressão de ATF4 em células SH-SY5Y após a incubação com CM das células 7PA2 CHO como um resultado dos compostos teste pode ser relatada. A porcentagem de inibição de ATF4 é calculada como a redução percentual normalizada para CM do tratamento com células 7PA2 CHO (0% de inibição) e CM do tratamento com células WT CHO (100% de inibição). Exemplo B5 – Eletrofisioloia e Potenciação a Longo Prazo
[00360] Fatias de hipocampo são preparadas conforme descrito em Ardiles et al., Pannexin 1 regula a plasticidade sináptica hipocampal bidirecional em camundongos adultos. Front Cell Neurosci, vol. 8, art. 326 (2014). Camundongos WT C57BL/6 ou APP/PS1 transgênicos (Jackson Lab 34829-JAX) de seis a onze meses de idade são profundamente anestesiados com isoflurano e seus cérebros são rapidamente removidos. 5-10 fatias (350 μm) de cada animal são dissecadas em tampão de dissecção gelado usando um vibratome (Leica VT1200S, Leica Microsystems, Nussloch, Alemanha). As fatias são incubadas com 5 μM ISRIB (trans-N, N′-1,4-ciclohexanodiilbis [2- (4-clorofenóxi) -acetamida), um composto selecionado ou um veículo
(meio completo contendo 0,1% DMSO) 20 minutos antes da estimulação do condicionamento. As respostas sinápticas são evocadas estimulando as colaterais de Schaffer com pulsos de 0,2 ms administrados por meio de eletrodos estimuladores bipolares concêntricos e registrados extracelularmente no estrato radiado do subcampo CA1. A potenciação de longo prazo (LTP) é induzida por estimulação de explosão de quatro teta (TBS) (10 trens de quatro pulsos a 100 Hz; intervalo inter-explosão de 5 Hz) entregue a 0,1 Hz. A magnitude do LTP com base no potencial pós-sináptico excitatório de campo (fEPSP) é calculada como a média (normalizada para a linha de base) das respostas registradas 60 min após a estimulação de condicionamento. Experimentos semelhantes podem ser realizados usando um composto teste no lugar do ISRIB. Exemplo B6 – Memória de aprendizagem em camundonos idosos
[00361] Camundngos C57BI/6J machos com 19 meses de idade tipo selvagem são usados em um labirinto de água radial de 8 braços (RAWM) para medir a memória de aprendizagem mediada pelo hipocampo. O labirinto envolve uma piscina de 118,5 cm de diâmetro e 25 cm de altura com 8 braços, cada um com 41 cm de comprimento, e uma plataforma de escape que pode ser movida. A piscina é preenchida com água que se torna opaca com a adição de tinta branca (Crayola, 54–2128-053). A plataforma de fuga permanece oculta durante o experimento. Dicas visuais são colocadas ao redor da sala de forma que sejam visíveis aos animais que exploram o labirinto.
[00362] Nove camundongos são injetados intraperitonealmente com 5 mg / kg de um composto teste formulado em 50% de polietilenoglicol (PEG-400) em água destilada e outros 9 animais são injetados intraperitonealmente com o veículo 50% PEG-400 em água destilada como um grupo de controle. Os animais fazem 6 testes por dia durante dois dias. Os animais têm 1 minuto para localizar a plataforma de fuga.
Ao encontrar a plataforma com sucesso, os animais permanecerão por 10 segundos antes de serem devolvidos à sua gaiola. Em uma tentativa fracassada, os animais são guiados para a plataforma de fuga e, em seguida, retornam à sua gaiola 10 segundos depois.
[00363] Os testes comportamentais são registrados e pontuados usando um rastreamento de vídeo e configuração de análise (Ethovision XT 8.5, Noldus Information Technology). O programa analisa automaticamente o número de entradas de braço incorretas (denominado número de erros) feitas por tentativa. As últimas três tentativas são calculadas em média para determinar a memória de aprendizagem após o treinamento.
[00364] No final do teste comportamental, os animais são sacrificados e os hipocampos são extraídos e imediatamente congelados em nitrogênio líquido e armazenados a -80°C. As amostras congeladas são então homogeneizadas com um T 10 básico ULTRA- TURRAX (IKa) em lise de tampão gelada (Cell Signaling 9803) e inibidores de protease e fosfatase (Roche). Os lisados são sonicados por 3 minutos e centrifugados a 13.000 rpm por 20 minutos a 4°C. A concentração de proteína nos sobrenadantes é determinada usando o Kit de Ensaio de Proteína BCA (Pierce). Quantidade igual de proteína é carregada em géis de SDS-PAGE. As proteínas são transferidas sobre membranas PVDF 0,2 μm (BioRad) e sondadas com anticorpos primários diluídos em salina tamponada por Tris suplementada com 0,1% de Tween 20 e 3% de albumina de soro bovino.
[00365] Anticorpo ATF4 (11815) (Cell Signaling Technologies) e anticorpos de β-actina (Sigma-Aldrich) são usados como anticorpos primários. Um anticorpo secundário conjugado à HRP (Rockland) é usado para detectar faixas imuno-reativas usando quimioluminescência realçada (Substrato de Western Blotting ECL, Pierce). A quantificação de faixas de proteína é feita por densitometria usando o software Image J.
[00366] Os resultados da tarefa RAWM e os níveis de expressão de ATF4 normalizados para a expressão de β-actina em hipocampos podem ser relatados. Exemplo B7 – Memória de aprendizagem, memória de longo prazo e comportamento social após lesão cerebral traumática (TBI)
[00367] Camundongos C57Bl / 6J machos de três meses de idade do tipo selvagem são aleatoriamente designados para TBI ou cirurgias simuladas. Os animais são anestesiados e mantidos a 2% de isoflurano e presos em uma estrutura estereotáxica com barras de ouvido não traumáticas. O pelo do couro cabeludo é removido e unguento ocular e betadina são aplicados a seus olhos e couro cabeludo, respectivamente. Uma incisão mediana é feita para expor o crânio. Um TBI unilateral é induzida no lobo parietal direito usando o modelo de impacto cortical controlado (Nat Neurosci. 2014 Aug; 17 (8): 1073-82). Os camundongos recebem uma craniectomia de 3,5 mm de diâmetro, uma remoção de parte do crânio, usando um micro-furador elétrico. As coordenadas da craniectomia são: antero-posterior, −2,00 mm e médio-lateral, +2,00 mm em relação ao bregma. Após a craniectomia, a contusão é induzida usando uma ponta convexa de 3 mm acoplada a um impactador eletromagnético (Leica). A profundidade de contusão é ajustada para 0,95 mm da dura-máter com uma velocidade de 4,0 m/s sustentada por 300 ms. Esses parâmetros de lesão são escolhidos para atingir, mas não penetrar, o hipocampo. Animais simulados receberam cirurgias de craniectomia, mas sem a lesão focal. Após a cirurgia de TBI focal, o couro cabeludo é suturado e o animal é deixado se recuperar em uma câmara de incubação ajustada para 37°C. Os animais são retornados à sua gaiola após apresentarem um comportamento normal de caminhada e limpeza. A recuperação dos procedimentos cirúrgicos, conforme exibido pelo comportamento normal e manutenção do peso, é monitorada ao longo da duração dos experimentos.
[00368] Após 28 dias após a lesão (dpi), os animais são testados no ensaio RAWM (ver Exemplo B6, acima). Os animais executam 12 tentativas durante o teste de aprendizagem e 4 tentativas durante o teste de memória. As últimas três tentativas do teste de aprendizagem e todas as quatro tentativas do teste de memória são calculadas para determinar a memória de aprendizagem (teste de aprendizagem) e memória de longo prazo (teste de memória).
[00369] Os animais são injetados intraperitonealmente com 5 mg / kg de um composto teste formulado em 50% PEG-400 em água destilada (n = 10) ou veículo (50% PEG-400 em água destilada; n = 10 para o grupo TBI e n = 8 para o grupo sham) começando no dia anterior aos testes de comportamento (27 dpi), após cada uma das tentativas finais dos dias de teste de aprendizagem (28 e 29 dpi) e antes do teste de comportamento social (42 dpi, veja abaixo) para um total de quatro injeções. Nenhuma injeção é dada quando a memória de longo prazo é testada no dia 35 dpi.
[00370] Para quantificar as tendências sociais dos camundongos tratados, o tempo gasto com um novo camundongo coespecífico é medido em uma caixa de três câmaras de Crawley (J Vis Exp. 2011; (48): 2473). Animais tratados são deixados para explorar todas as três câmaras vazias livremente por 10 minutos para habituação. Um camundongo de par social é colocado na gaiola de um lado do aparelho e os animais tratados na câmara oposta para que o camundongo possa explorar livremente todo o aparelho por 10 min. O tempo gasto com o animal nunca antes conhecido é registrado. O contato direto entre o camundongo tratado e a gaiola de alojamento ou o alongamento do corpo do camundongo em uma área de 3-5 cm ao redor da gaiola de alojmento é contado como um contato ativo.
[00371] Memória de aprendizagem, memória de longo prazo e comportamento social após TBI em camundongos são relatados.
Exemplo B8 – Atrofia muscular induzida por jejum
[00372] Camundongos Balb/c machos de oito semanas de idade do tipo selvagem obtidos do viveiro Fundación Ciencia & Vida Chile (Santiago, Chile) são usados. Os camundongos são alojados em gaiolas de plástico independentes em uma sala mantida a 25°C com um ciclo de 12h:12h claro: escuro.
[00373] Vinte e quatro horas antes e durante os 2 dias de procedimentos de jejum, os animais recebem administração oral por meio de tubos de alimentação (calibre 15) de veículo (50% Polietilenoglicol 400 (Sigma-Aldrich P3265) em água destilada ou 10 mg/kg de composto teste formulado em solução de veículo.
[00374] Após 2 dias de jejum, os animais são sacrificados e os músculos são removidos de ambos os membros posteriores. Camundongso com alimentação e água ad libitum são usados como controle.
[00375] Para medições in vivo da síntese de proteínas, puromicina (Sigma-Aldrich, P8833) é preparada a 0,04 μmol/g de peso corporal em um volume de 200 μL de PBS e, subsequentemente, administrada aos animais por meio de injeção IP, 30 min antes da coleta muscular
[00376] Após a coleta, os músculos são imediatamente congelados em nitrogênio líquido e armazenados a -80°C. Os músculos congelados são então homogeneizados com um T 10 básico ULTRA-TURRAX (IKa) em tampão de lise gelada (Cell Signaling 9803) e inibidores de protease e fosfatase (Roche). Os lisados são sonicados por 3 minutos e centrifugados a 13.000 rpm por 20 minutos a 4°C. A concentração de proteína nos sobrenadantes é determinada usando o Kit de Ensaio de Proteína BCA (Pierce). Quantidade igual de proteínas é carregada em géis de SDS-PAGE. As proteínas são transferidas sobre membranas PVDF a 0,2 (BioRad) e sondadas com anticorpos primários diluídos em Salina tamponada por Tris suplementada com 0,1% de Tween 20 e 3% de albumina de soro bovino.
[00377] Os anticorpos de Puromicina (12D10) (Merck Millipore) e β- actina (Sigma-Aldrich) são usados como anticorpos primários. Um anticorpo secundário conjugado à HRP (Rockland) é usado para detectar faixas imuno-reativas usando quimioluminescência realçada (Substrato de Western Blotting ECL, Pierce). A quantificação de proteína é feita por densitometria usando o software Image J.
[00378] Para a análise imunoistoquímica da área transversal (CSA), os músculos dos animais controle (Alimentados) e em jejum são submersos individualmente no composto de temperatura de corte ideal (OCT) (Tissue-Tek; Sakura) em comprimento de repouso e congelados em isopentano resfriado com nitrogênio líquido. Cortes transversais (10 µm de espessura) do ventre médio dos músculos são obtidos com um criostato (Leica) e imunocorados com puromicina (12D10) (Merck Millipore). Um anticorpo secundário conjugado com polímero HRP (Biocare Medical, MM620L) seguido por incubação do substrato de diaminobenzidina (ImmPACT DAB - Vector, SK-4105) é empregado para detectar estruturas puromiciniladas em CSA.
[00379] A porcentagem da síntese de proteínas em músculos em jejum é relatada. Os níveis são normalizados para a expressão de β- actina e a porcentagem é calculada como o percentual relativo aos níveis de síntese de proteínas de camundongos de controle (Alimentados) que correspondem a 100%.
[00380] A fibra muscular CSA é visualizada com um microscópio Zeiss Axio Lab.A1 e uma câmera digital Axiocam (Zeiss). Manchamento com Puromicina em CSA pode ser reportado. Exemplo B9 – Atrofia muscular induzida por imobilização
[00381] Camundongos Balb/c machos de oito semanas de idade do tipo selvagem obtidos do viveiro Fundación Ciencia & Vida Chile (Santiago, Chile) são usados. Os camundongos são alojados em gaiolas de plástico independentes, alimentados ad libitum em uma sala mantida a 25°C com um ciclo de 12 h : 12 h luz: escuro.
[00382] Vinte e quatro horas antes e durante os 3 dias dos procedimentos de imobilização, os animais recebem administração oral por meio de tubos de alimentação (calibre 15) de veículo (50% Polietilenoglicol 400 (Sigma-Aldrich P3265) em água destilada ou 10 mg / kg de composto teste formulado em veículo.
[00383] Um membro posterior é imobilizado com um bastão de plástico colocado sobre e sob o membro e fixado com uma bandagem adesiva médica. Os animais são monitorados diariamente. O procedimento de imobilização impede o movimento da perna imobilizada sozinha. Após 3 dias, os animais são sacrificados e os músculos gastrocnêmio, quadríceps e tibial anterior são removidos de ambos os membros posteriores, sendo a perna contralateral não imobilizada usada como controle interno.
[00384] Para medições in vivo da síntese de proteínas, puromicina (S igma-Aldrich, P8833) é preparada a 0,04 μmol/g de peso corporal em um volume de 200 μL de PBS e, posteriormente, administrada aos animais por meio de injeção intraperitoneal, 30 minutos antes da coleta muscular.
[00385] Após a coleta, os músculos são imediatamente congelados em nitrogênio líquido e armazenados a -80°C. Os músculos congelados são então homogeneizados com um ULTRA-TURRAX (IKa) básico T 10 em tampão de lise gelada (Cell Signaling 9803) e inibidores de protease e fosfatase (Roche). Os lisados são sonicados por 3 minutos e centrifugados a 13.000 rpm por 20 minutos a 4°C. A concentração de proteína nos sobrenadantes é determinada usando o Kit de Ensaio de Proteína BCA (Pierce). Quantidade igual de proteína é carregada em géis de SDS-PAGE. As proteínas são transferidas sobre membranas PVDF 0,2 um (BioRad) e sondadas com anticorpos primários diluídos em salina tamponada por Tris suplementada com 0,1% de Tween 20 e 3% de albumina de soro bovino.
[00386] Os anticorpos de Puromicina (12D10) (Merck Millipore) e β- actina (Sigma-Aldrich) são usados como anticorpos primários. Um anticorpo secundário conjugado à HRP (Rockland) é empregado para detectar faixas imunorreativas usando quimioluminescência realçada (Substrato de Western Blotting ECL, Pierce). A quantificação de faixas de proteína é feita por densitometria usando o software Image J.
[00387] A porcentagem da síntese de proteínas em seções móveis e imóveis dos membros traseiros do gastrocnêmio, tibial anterior e quadríceps pode ser reportada. Os níveis são normalizados para a expressão de β-actina e a porcentagem é calculada como o percentual relativo aos níveis de síntese de proteínas de membros móveis de camundongos de controle (tratados com veículo) que correspondem a 100%. Exemplo B10 – Atrofia muscular induzida por caquexia
[00388] Camundongos Balb/c machos de seis semanas de idade do tipo selvagem obtidos do viveiro Fundación Ciencia & Vida Chile (Santiago, Chile) são usados. Os camundongos são alojados em gaiolas de plástico independentes em uma sala mantida a 25°C com um ciclo de 12 h:12 h luz: escuro.
[00389] 1x106 da linhagem celular de carcinoma do cólon CT26 (ATCC # CRL-2638, ATCC Manassas, VA) é injetada por via subcutânea no flanco inferior direito de cada animal para indução de atrofia muscular induzida por caquexia, conforme descrito (Nat Commun. 12 de junho de 2012; 3: 896). Animais não injetados são usados como controles. No dia 6 após a injeção de células tumorais, os animais são randomizados em dois grupos e tratados com 10 mg/kg de composto teste formulado em 50% de polietilenoglicol (PEG-400) em água destilada, ou com veículo (50% de PEG-400 em água destilada) por gavagem oral diária durante 13 dias.
[00390] Para medições in vivo da síntese de proteínas, 30 minutos antes do final do estudo, os animais são injetados intraperitonealmente com puromicina (Sigma-Aldrich, P8833) a 0,04 μmol/g de peso corporal em um volume de 200 μL de PBS. Após 13 dias de dosagem diária, os animais são sacrificados e os músculos gastrocnêmio, quadríceps e tibial anterior são dissecados e pesados de ambos os membros traseiros para avaliar a atrofia muscular.
[00391] [391] Após a coleta, os músculos são imediatamente congelados em nitrogênio líquido e, em seguida, armazenados a -80°C. Os músculos congelados são então homogeneizados com um T 10 básico ULTRA-TURRAX (IKa) básico T10 em tampão de lise gelada (Cell Signaling 9803) e inibidores de protease e fosfatase (Roche). Os lisados são sonicados por 3 minutos e centrifugados a 13.000 rpm por 20 minutos a 4°C. A concentração de proteína nos sobrenadantes é determinada usando o Kit de Ensaio de Proteína BCA (Pierce). Quantidade igual de proteína é carregada em géis de SDS-PAGE. As proteínas são transferidas sobre membranas de PVDF 0,2 um (BioRad) e sondadas com anticorpos primários diluídos em Salina tamponada por Tris suplementada com 0,1% de Tween 20 e 3% de albumina de soro bovino.
[00392] Os anticorpos de Puromicina (12D10) (Merck Millipore) e β- actina (Sigma-Aldrich) são usados como anticorpos primários. Um anticorpo secundário conjugado à HRP (Rockland) é usado para detectar faixas imunorreativas usando quimioluminescência realçada (Substrato de Western Blotting ECL, Pierce). A quantificação de proteína é feita por densitometria usando o software Image J.
[00393] São relatados os pesos dos músculos gastrocnêmio, quadríceps e tibial anterior de animais injetados com células tumorais CT26 e tratados com veículo ou composto teste.
[00394] O percentual da síntese de proteínas no gastrocnêmio, quadríceps e tibial anterior de animais injetados com células tumorais
CT26 e tratadas com veículo ou composto teste também é reportado. Os níveis são normalizados para a expressão de β-actina e a porcentagem é calculada como o percentual em relação aos níveis de síntese de proteínas da seção muscular de camundongos de controle que correspondem a 100%. Exemplo B11 – Modelo de crescimento e densidade do tumor
[00395] Camundongos Balb / c machos de seis semanas de idade do tipo selvagem obtidos do viveiro Fundación Ciencia & Vida Chile (Santiago, Chile) são usados. Os camundongos são alojados em gaiolas de plástico independentes em uma sala mantida a 25°C com um ciclo de 12 h:12 h luz: escuro.
[00396] 1x106 CT26 linhagem celular de carcinoma do cólon (ATCC # CRL-2638, ATCC Manassas, VA) são injetados subcutaneamente no flanco inferior direito de cada animal como descrito (Nat Commun., 12 de junho de 2012; 3: 896). Animais não injetados são usados como controles. No dia 6 após a injeção de células tumorais, o volume médio do tumor é medido, os animais são pesados e randomizados em dois grupos e tratados com 10 mg/kg de um composto selecionado formulado em 50% de polietilenoglicol (PEG-400) em água destilada, ou com veículo (50% PEG-400 em água destilada) por gavagem oral diária durante 13 dias.
[00397] No término do estudo, os tumores são medidos com compasso de calibre digital e os volumes dos tumores, expressos em mm3, são calculados com a seguinte fórmula: Volume do tumor (mm3) = (a x b2)/2 onde "a" é o maior diâmetro perpendicular e "b" é o menor diâmetro. Os animais são então sacrificados e os tumores são extraídos e pesados. Os volumes e peso dos tumores de cada animal são reportados. A densidade do tumor é calculada como relação peso/volume para cada animal e é reportada. As análises estatísticas são realizadas usando o software GraphPad Prism e a diferença significativa é avaliada pelo teste t (* <0,05). Exemplo B12 – Síntese de proteínas com um sistema livre de células
[00398] A expressão da proteína fluorescente verde (GFP) foi avaliada usando o kit de expressão de proteína in vitro humana de 1 etapa com base em lisados de células HeLa (ThermoFisher Scientific). Lisado de HeLa, proteínas acessórias, mistura de reação e plasmídeo pCFE-GFP do kit foram descongelados em gelo. As reações foram preparadas em temperatura ambiente em uma placa ótica de 96 cavidades adicionando 12,5 μL de lisado HeLa, 2,5 μL de proteínas acessórias, 5 μL de mistura de reação, 1 μg de plasmídeo pCFE-GFP e 1 μM de compostos teste em 5 μL ou 5 μL de H20 destilado como uma expressão basal de GFP (veículo). Uma cavidade com dH2O em vez de plasmídeo pCFE-GFP foi usada como autofluorescência basal da reação. Todas as reações foram feitas em duplicado. A intensidade da fluorescência foi medida por uma leitora de microplacas multimodo (Synergy-4; Biotek) durante tratamentos de 4 horas e captura de fluorescência em intervalos de 15 minutos com filtros de excitação e emissão 485/20 e 528/20. Intensidade de fluorescência relativa (RFU) de GFP tratado com ou sem compostos teste foi mostrada na FIG. 1. A adição do composto teste à mistura de reação do kit aumentou a expressão de GFP e, portanto, sua fluorescência em comparação com a expressão obtida usando apenas os reagentes do kit. Exemplo B13 – Síntese de proteínas com um ensaio com base em células de levedura
[00399] Duas cepas de levedura GS115H Pichia pastoris que expressam de forma estável a proteína fosfolipase C (PLC) sob o controle de um promotor induzível por metanol (pAOX-PLC) ou um promotor constitutivo (pGAP-PLC) são usadas para avaliar os níveis de secreção de PLC e sua atividade enzimática. Colônias únicas de levedura pAOX-PLC e pGAP-PLC são inoculadas em 2 ml de YPD (1% de extrato de levedura, 2% de peptona, 2% de glicose) e cultivadas a 30°C em uma microplaca profunda de 24 cavidades em uma incubadora com agitação por 16 a 18 horas a 250 rpm. Estas culturas são diluídas para uma OD600 de 1 em 2 ml de YPM (extrato de levedura 1%, peptona 2%, tampão de fosfato a 100 mM, pH 6 e metanol 0,5%) ou 2ml de YPM contendo 10 µM de um composto teste para induzir a expressão do gene e incubado a 30°C em uma incubadora com agitação a 250 rpm. O metanol é adicionado a cada 24 horas para manter a concentração de metanol de 0,5%. A condição sem composto teste é usada como um controle para a secreção basal e posterior avaliação da atividade do PLC. Após 72 horas de indução, as células são colhidas por centrifugação e o sobrenadante analisado quanto à expressão da proteína por SDS-PAGE e atividade de PLC.
[00400] Os géis foram manchados com 0,1% de azul Coomassie Blue R250 em 10% de ácido acético, 50% de metanol e 40% de H2O por 20 minutos. O gel manchado é então lavado duas vezes por duas horas com 10% de ácido acético, 50% de metanol e 40% de dH2O até que a base de Coomassie Blue esteja quase clara. As fotos dos géis são tiradas em um sistema de imagem em gel.
[00401] A atividade de PLC é medida em microplacas de 96 cavidades usando 1 mM de O-(4-nitrofenilfosforil)colina como um substrato. O ensaio é realizado a 50°C em uma placa de 96 microcavidades incubando 10 μL de sobrenadante de cultura, 10 μL de NPPC 100 mM e 80 μL de HEPES 250 mM pH 7, 60% de sorbitol, 0,1 mM de ZnCl2. A absorvência a 405 nm é monitorada a cada 30 s por uma hora a 50°C em um leitor de microplacas Synergy HT (Biotek). Uma unidade PLC é definida como a quantidade de enzima que libera 1 nmol de p-nitrofenol por minuto.
Exemplo B14 – Síntese de proteínas com um ensaio com base em células CHO
[00402] Células CHO são mantidas a 37°C e 5% de CO2 em DMEM suplementado com 10% soro bovino fetal (FBS), L-glutamina a 2 mM, 100 U/ml de penicilina, e estreptomicina a 100 µg/ml. Após atingir 80% de confluência, as células são destacadas e semeadas em placas de 6 cavidades em meio completo, deixadas recuperar por 48 horas. As células são então lavadas três vezes com PBS e tratadas com compostos teste a 1 μM, 5 μM ou 10 μM em 1 mL de meio sem FBS por 24 horas. O tratamento com DMSO a 0,1% é usado como controle (veículo). Após 24 horas de tratamento, o sobrenadante (SN) que contém as proteínas secretadas é extraído e os inibidores de protease e fosfatase (Roche) são adicionados a cada amostra. SN são centrifugados a 2.000 g por 10 minutos para descartar qualquer resíduo celular e 900 μL de SN são transferidos para microtubos vazios com 400 μL de metanol, misturando bem. 200 μL de clorofórmio são adicionados à mistura e, em seguida, as amostras são centrifugadas a 14.000 g por 2 minutos. A camada aquosa superior é descartada por pipetagem e 400 μL de metanol são adicionados a cada amostra, misturando bem. As amostras são então centrifugadas a 17.000 g por 8 minutos e o metanol é descartado por pipetagem sem atrapalhar a pélete de proteína. As amostras são deixadas secar em temperatura ambiente e as péletes são ressuspensas com tampão de amostra SDS-PAGE. As proteínas segregadas são analisadas por SDS-PAGE e Azul Coomassie. Os géis são manchados com 0,1% de Azul Coomassie R250 em 10% de ácido acético, 50% de metanol e 40% de H2O por 20 minutos. O gel corado é então lavado duas vezes por duas horas com 10% de ácido acético, 50% de metanol e 40% de dH2O até que a base de Azul Coomassie Blue esteja quase claro. As fotos dos géis são tiradas em um sistema de imagem em gel.
[00403] Todas as referências, tais como publicações, patentes, pedidos de patentes e pedidos de patentes publicados, são incorporados aqui por referência em sua íntegra.

Claims (56)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (I) (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: X é N ou CR12; Y é uma ligação, NRa ou NRaNRa; contanto que: (a) quando X for N, então Y seja uma ligação ou NRa; e (b) quando X for CR12, então Y seja NRa ou NRaNRa; Z seja uma ligação, C(=O), CR10R11, ou NRa; L1 é selecionado do grupo que consiste em *1-C(=O)- #1, *1- CH2-#1, *1-CH2CH2-#1, *1-CH2CH2CH2-#1, *1-OCH2C(=O)-#1, *1- OCH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH(OH)CH2- #1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1-OCH2CH2CH2-#1; em que *1 representa o ponto de ligação a R1 e #1 representa o ponto de ligação ao restante da molécula; L2 é selecionado do grupo que consiste em #2-C(=O)-*2, #2- CH2-*2, #2-CH2CH2-*2, #2-CH2CH2CH2-*2, #2-C(=O)CH2O-*2, #2- C(=O)CH2CH2O-*2, #2-C(=O)CH2CH2CH2O-*2, #2-CH2CH(OH)CH2O- *2, #2-CH2O-*2, #2-CH2CH2O-*2, e #2-CH2CH2CH2O-*2; em que *2 representa o ponto de ligação a R2 e #2 representa o ponto de ligação ao restante da molécula; R1 é selecionado do grupo que consiste em: C6-C14 arila substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb; e heteroarila de 5 a 14 membros substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída com um ou mais Rb; R2 é selecionado do grupo que consiste em: C6-C14 arila substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída um ou mais Rb; e heteroarila de 5 a 14 membros substituída com um ou mais grupos halo e opcionalmente substituída um ou mais Rb; R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; ou R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; R4, R5, R6, R7, R8, e R9, independentemente um do outro, são selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halogênio e C1-C6 alquila; R10 e R11, independentemente um do outro, são selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halogênio e C1-C6 alquila; R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; ou R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; R13 e R14, independentemente um do outro, são selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halogênio e C1-C6 alquila; Ra, independentemente em cada ocorrência, é hidrogênio ou C1-C6 alquila; Rb, independentemente em cada ocorrência, é selecionado do grupo que consiste em NO2, C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, C1-C6 haloalquila, OH, O(C1-C6 alquila), O(C1-C6 haloalquila), SH, S(C1-C6 alquila), S(C1-C6 haloalquila), NH2, NH(C1-C6 alquila), NH(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 alquil)2, N(C1-C6 haloalquil)2, NRcRd, CN, C(O)OH, C(O)O(C1-C6 alquila), C(O)O(C1-C6 haloalquila), C(O)NH2, C(O)NH(C1-C6 alquila), C(O)NH(C1-C6 haloalquila), C(O)N(C1-C6 alquil)2, C(O)N(C1-C6 haloalquil)2, C(O)NR14-aR14-b, S(O)2OH, S(O)2O(C1-C6 alquila), S(O)2O(C1-C6 haloalquila), S(O)2NH2, S(O)2NH(C1-C6 alquila), S(O)2NH(C1-C6 haloalquila), S(O)2N(C1-C6 alquil)2, S(O)2N(C1-C6 haloalquil)2, S(O)2NRcRd, OC(O)H, OC(O)(C1-C6 alquila), OC(O)(C1-C6 haloalquila), N(H)C(O)H, N(H)C(O)(C1-C6 alquila), N(H)C(O)(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 alquil)C(O)H, N(C1-C6 alquil)C(O)(C1-C6 alquila), N(C1-C6 alquil)C(O)(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 haloalquil)C(O)H, N(C1- C6 haloalquil)C(O)(C1-C6 alquila), N(C1-C6 haloalquil)C(O)(C1-C6 haloalquila), OS(O)2(C1-C6 alquila), OS(O)2(C1-C6 haloalquila), N(H)S(O)2(C1-C6 alquila), N(H)S(O)2(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 alquil)S(O)2(C1-C6 alquila), N(C1-C6 alquil)S(O)2(C1-C6 haloalquila), N(C1-C6 haloalquil)S(O)2(C1-C6 alquila), e N(C1-C6 haloalquil)S(O)2(C1- C6 haloalquila), em que Rc e Rd são tomados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados para formar um heterociclo de 3 a 10 membros; e contanto que: (i) quando X for CR12, Y seja NRa, Z seja uma ligação, L1 seja *1-CH2-#1, e L2 seja #2-CH2-*2; então ou: (i-1) pelo menos um de R3, R4, e R5 seja hidrogênio ou halogênio; ou (i-2) R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; (ii) quando X for CR12, Y seja NRa, Z seja uma ligação, e R3 e R12 são tomados juntos para formar CR13R14; então ou: (ii-1) L1 é selecionado do grupo que consiste em *1-C(=O)- #1, *1-CH2-#1, *1-CH2CH2-#1, *1-CH2CH2CH2-#1, *1-OCH2CH2C(=O)- #1, *1-OCH2CH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1-OCH2CH2CH2-#1; ou (ii-2) L2 é selecionado do grupo que consiste em #2-C(=O)- *2, #2-CH2-*2, #2-CH2CH2-*2, #2-CH2CH2CH2-*2, #2-C(=O)CH2CH2O-
*2, #2-C(=O)CH2CH2CH2O-*2, #2-CH2CH(OH)CH2O-*2, #2-CH2O-*2, #2-CH2CH2O-*2, e #2-CH2CH2CH2O-*2; e (iii) quando X for N e Y for uma ligação; então: L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1- OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1-OCH2CH2CH2- #1; e também contanto que, quando Z for CR10R11, então pelo menos um de R1 e R2 seja substituído por dois ou mais grupos halo.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que o composto de fórmula (I) é um composto de fórmula (II) (II) contanto que: (i) quando Y for NRa, Z seja uma ligação, L1 seja *1-CH2- #1, e L2 seja #2-CH2-*2; então ou: (i-1) pelo menos um de R3, R4, e R5 seja hidrogênio ou halogênio; ou (i-2) R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; e (ii) quando Y for NRa, Z seja uma ligação, e R3 e R12 são tomados juntos para formar CR13R14; então ou: (ii-1) L1 é selecionado do grupo que consiste em *1-C(=O)- #1, *1-CH2-#1, *1-CH2CH2-#1, *1-CH2CH2CH2-#1, *1-OCH2CH2C(=O)- #1, *1-OCH2CH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1-OCH2CH2CH2-#1; ou (ii-2) L2 é selecionado do grupo que consiste em #2-C(=O)-
*2, #2-CH2-*2, #2-CH2CH2-*2, #2-CH2CH2CH2-*2, #2-C(=O)CH2CH2O- *2, #2-C(=O)CH2CH2CH2O-*2, #2-CH2CH(OH)CH2O-*2, #2-CH2O-*2, #2-CH2CH2O-*2, e #2-CH2CH2CH2O-*2.
3. Composto de acordo com a reivindicação 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (II) é um composto de fórmula (IV) (IV) contanto que: (i) quando Z for uma ligação, L1 seja *1-CH2-#1, e L2 seja #2-CH2-*2; então ou: (i-1) pelo menos um de R3, R4, e R5 seja hidrogênio ou halogênio; ou (i-2) R3 e R12 são tomados juntos para formar um grupo CR13R14; e (ii) quando Z for uma ligação, e R3 e R12 são tomados juntos para formar CR13R14; então ou: (ii-1) L1 é selecionado do grupo que consiste em *1-C(=O)- #1, *1-CH2-#1, *1-CH2CH2-#1, *1-CH2CH2CH2-#1, *1-OCH2CH2C(=O)- #1, *1-OCH2CH2CH2C(=O)-#1, *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1-OCH2CH2CH2-#1; ou (ii-2) L2 é selecionado do grupo que consiste em #2-C(=O)- *2, #2-CH2-*2, #2-CH2CH2-*2, #2-CH2CH2CH2-*2, #2-C(=O)CH2CH2O- *2, #2-C(=O)CH2CH2CH2O-*2, #2-CH2CH(OH)CH2O-*2, #2-CH2O-*2, #2-CH2CH2O-*2, e #2-CH2CH2CH2O-*2.
4. Composto de acordo com a reivindicação 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (IV) é um composto de fórmula (IV-a)
(IV-a) em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e contanto que quando L1 for *1-CH2-#1, e L2 for #2-CH2-*2; em seguida pelo menos um de R3, R4 e R5 seja hidrogênio ou halogênio.
5. Composto de acordo com a reivindicação 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (IV) é um composto de fórmula (IV-b) (IV-b).
6. Composto de acordo com a reivindicação 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (IV) é um composto de fórmula (IV-c) (IV-c) em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila.
7. Composto de acordo com a reivindicação 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (IV) é um composto de fórmula (IV-d) (IV-d).
8. Composto de acordo com a reivindicação 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (IV) é um composto de fórmula (IV-e) (IV-e) em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila.
9. Composto de acordo com a reivindicação 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (IV) é um composto de fórmula (IV-f) (IV-f).
10. Composto de acordo com a reivindicação 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (IV) é um composto de fórmula (IV-g) (IV-g) em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila.
11. Composto de acordo com a reivindicação 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (IV) é um composto de fórmula (IV-h) (IV-h).
12. Composto de acordo com a reivindicação 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (II) é um composto de fórmula (V) (V).
13. Composto de acordo com a reivindicação 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (V) é um composto de fórmula (V-a) (V-a) em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila.
14. Composto de acordo com a reivindicação 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (V) é um composto de fórmula (V-b) (V-b).
15. Composto de acordo com a reivindicação 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (V) é um composto de fórmula (V-c) (V-c) em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e
R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila.
16. Composto de acordo com a reivindicação 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (V) é um composto de fórmula (V-d) (V-d).
17. Composto de acordo com a reivindicação 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (V) é um composto de fórmula (V-e) (V-e) em que: R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila; e R12 é hidrogênio, halogênio ou C1-C6 alquila.
18. Composto de acordo com a reivindicação 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (V) é um composto de fórmula (V-f) (V-f).
19. Composto de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (I) é um composto de fórmula (III)
(III) contanto que quando Y for uma ligação; então: L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1- OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1- OCH2CH2CH2-#1; e também contanto que, quando Z for CR10R11, então pelo menos um de R1 e R2 seja substituído por dois ou mais grupos halo.
20. Composto de acordo com a reivindicação 19, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (III) é um composto de fórmula (VI) (VI) contanto que L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1, e *1-OCH2CH2CH2- #1; e também contanto que, quando Z for CR10R11, então pelo menos um de R1 e R2 seja substituído por dois ou mais grupos halo.
21. Composto de acordo com a reivindicação 20, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (VI) é um composto de fórmula (VI-a)
(VI-a) contanto que L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1 e *1-OCH2CH2CH2-#1.
22. Composto de acordo com a reivindicação 20, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (VI) é um composto de fórmula (VI-b) (VI-b) contanto que L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1 e *1-OCH2CH2CH2-#1.
23. Composto de acordo com a reivindicação 20, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (VI) é um composto de fórmula (VI-c) (VI-c) contanto que L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1 e *1-OCH2CH2CH2-#1; e pelo menos um de R1 e R2 seja substituído por dois ou mais grupos halo.
24. Composto de acordo com a reivindicação 20, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que um composto de fórmula (VI) é um composto de fórmula (VI-d) (VI-d) contanto que L1 seja selecionado do grupo que consiste em *1-OCH2CH(OH)CH2-#1, *1-OCH2-#1, *1-OCH2CH2-#1 e *1- OCH2CH2CH2-#1.
25. Composto de acordo com a reivindicação 19, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que o composto de formula (III) é um composto de fórmula (VII) (VII).
26. Composto de acordo com a reivindicação 25, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que o composto de formula (VII) é um composto de fórmula (VII-a) (VII-a).
27. Composto de acordo com a reivindicação 25, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que o composto de formula (VII) é um composto de fórmula (VII-b)
(VII-b).
28. Composto de acordo com a reivindicação 25, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que o composto de formula (VII) é um composto de fórmula (VII-c) (VII-c).
29. Composto de acordo com a reivindicação 25, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que o composto de formula (VII) é um composto de fórmula (VII-d) (VII-d).
30. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em um composto de Tabela 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
31. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto como definido em qualquer uma das reivindicações precedentes, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um transportador farmaceuticamente aceitável.
32. Método de tratamento de uma doença ou distúrbio mediado por uma via de resposta integrada ao estresse (ISR) em um indivíduo em necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 30, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica como definida na reividicação 31.
33. Método de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o composto, o sal farmaceuticamente aceitável, ou a composição farmacêutica é administrada em combinação com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais agentes anticâncer adicionais.
34. Método de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que a doença ou distúrbio é mediado por fosforilação de eIF2α e/ou a atividade de fator de troca de nucleotídeo de guanina (GEF) de eIF2B.
35. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 32 a 34, caracterizado pelo fato de que a doença ou distúrbio é mediado por um decréscimo em síntese de proteína.
36. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 32 a 35, caracterizado pelo fato de que a doença ou distúrbio é mediado pela expressão de ATF4, CHOP ou BACE-1.
37. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 32 a 36, caracterizado pelo fato de que a doença ou distúrbio é uma doença neurodegenerativa, uma doença inflamatória, uma doença autoimune, uma síndrome metabólica, um câncer, uma doença vascular, uma doença ocular, ou uma doença musculoesquelética.
38. Método de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de que a doença é doença de desaparecimento da substância branca, ataxia infantil com hipomielinização do SNC, síndrome de deficiência intelectual, doença de Alzheimer, doença de priônio, doença de Creutzfeldt-Jakob, doença de Parkinson, doença de esclerose lateral amiotrófica (ELA), comprometimento cognitivo, demência frontotemporal (FTD), lesão cerebral traumática, disfunção cognitiva pós-operatória (PCD), síndromes neuro-otológicas, perda de audição, doença de Huntington, acidente vascular cerebral, encefalopatia traumática crônica, lesão da medula espinhal, demências ou comprometimento cognitivo, artrite, artrite psoriática, psoríase, artrite idiopática juvenil, asma, asma alérgica, asma brônquica, tuberculose, distúrbio crônico das vias aéreas, fibrose cística, glomerulonefrite, nefropatia membranosa, sarcoidose, vasculite, ictiose, rejeição de transplante, cistite intersticial, dermatite atópica ou doença inflamatória intestinal, doença de Crohn, colite ulcerativa, doença celíaca, lúpus eritematoso sistêmico, diabetes tipo 1, esclerose múltipla, artrite reumatoide, esteatose hepática alcoólica, obesidade, intolerância à glicose, resistência à insulina, hiperglicemia, fígado gorduroso, dislipidemia, hiperlipidemia, diabetes tipo 2, câncer de pâncreas, câncer de mama, câncer de rim, câncer de bexiga, câncer de próstata, câncer testicular, câncer urotelial, câncer endometrial, câncer de ovário, câncer cervical, câncer renal, câncer de esôfago, tumor estromal gastrointestinal (GIST), mieloma múltiplo, câncer de células secretoras, câncer de tireoide, carcinoma gastrointestinal, leucemia mieloide crônica, carcinoma hepatocelular, câncer de cólon, melanoma, glioma maligno, glioblastoma, glioblastoma multiforme, astrocitoma, gangliocitoma displásico do cerebelo, Sarcoma de Ewing, rabdomiossarcoma, ependimoma, meduloblastoma, adenocarcinoma ductal, carcinoma adenoescamoso, nefroblastoma, carcinoma de células acinares, câncer de pulmão, linfoma não Hodgkin, linfoma de Burkitt, leucemia linfocítica crônica, gamopatia de significância indeterminada (MGUS), plasmocitoma, linfoma linfoplasmacítico, leucemia linfoblástica aguda, doença Pelizaeus-Merzbacher, aterosclerose, aneurisma da aorta abdominal, doença da artéria carótida, trombose venosa profunda, doença de Buerger, hipertensão venosa crônica, calcificação vascular, telangiectasia ou linfoedema, glaucoma, degeneração macular relacionada com a idade, doença retinal inflamatória, doença vascular da retina, retinopatia diabética, uveíte, rosácea, síndrome de Sjogren ou neovascularização na retinopatia proliferativa, hiper-homocisteinemia, atrofia do músculo esquelético, miopatia, distrofia muscular, atrofia muscular, sarcopenia, distrofia muscular de Duchenne (DMD), doença de Becker, distrofia miotônica, cardiomiopatia dilatada ligada ao X, atrofia muscular espinhal (SMA)
39. Método de produção de uma proteína, caracterizado pelo fato de que compreende contatar uma célula eucariótica compreendendo um ácido nucleico codificando a proteína com o composto ou sal como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 30.
40. Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que compreende cultivar a célula em um meio de cultura in vitro compreendendo o composto ou sal.
41. Método de cultivar uma célula eucariótica, caracterizado pelo fato de que compreende um ácido nucleico codificando uma proteína, compreendendo contactar a célula eucariótica com um meio de cultura in vitro compreendendo um composto ou sal como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 30.
42. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 41, caracterizado pelo fato de que o ácido nucleico codificando a proteína é um ácido nucleico recombinante.
43. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações
39 a 42, caracterizado pelo fato de que a célula é uma célula renal embriônica humana (HEK) ou uma célula de ovário de hamster chinês (CHO).
44. Método de produção de uma proteína, caracterizado pelo fato de que compreende contactar um sistema de síntese de proteína sem célula (CFPS) compreendendo fator 2 de início eucariótico (eIF2) e um ácido nucleico codificando uma proteína com o composto ou sal como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 30.
45. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 44, caracterizado pelo fato de que a proteína é um anticorpo ou um fragmento do mesmo.
46. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 45, caracterizado pelo fato de que compreende purificar a proteína.
47. Meio de cultura celular in vitro, caracterizado pelo fato de que compreende o composto ou sal como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 30 e nutrientes para crescimento celular.
48. Meio de cultura celular de acordo com a reivindicação 47, caracterizado pelo fato de que compreende uma célula eucariótica compreendendo um ácido nucleico codificando uma proteína.
49. Meio de cultura celular de acordo com a reivindicação 47 ou 48, caracterizado pelo fato de que ainda compreende um composto para induzir a expressão da proteína.
50. Meio de cultura celular de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 49, caracterizado pelo fato de que o ácido nucleico codificando a proteína é um ácido nucleico recombinante.
51. Meio de cultura celular de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 50, caracterizado pelo fato de que a proteína é um anticorpo ou um fragmento do mesmo.
52. Meio de cultura celular de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 51, caracterizado pelo fato de que a célula eucariótica é um célula renal embiônica humana (HEK) ou uma célula de ovário de hamster chinês (CHO).
53. Sistema de síntese de proteína sem célula (CFPS), caracterizado pelo fato de que compreende o fator 2 de início eucariótico (eIF2) e um ácido nucleico codificando uma proteína com o composto ou sal como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 30.
54. Sistema CFPS de acordo com a reivindicação 53, caracterizado pelo fato de que compreende um extrato de célula eucariótica compreendendo eIF2.
55. Sistema CFPS de acordo com a reivindicação 53 ou 54, caracterizado pelo fato de que ainda compreende eIF2B.
56. Sistema CFPS de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 55, caracterizado pelo fato de que a proteína é um anticorpo ou um fragmento do mesmo.
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