BR112021010374A2

BR112021010374A2 - Anticorpos anti-il-36 e métodos de uso dos mesmos

Info

Publication number: BR112021010374A2
Application number: BR112021010374-0A
Authority: BR
Inventors: Chingwei Vivian LEE; Germaine FUH-KELLY; Louise Scharf; Tina THAI; Ashka Patel; Shashank BHARILL; Erik Edward KARRER
Original assignee: 23Andme, Inc.
Priority date: 2018-12-21
Filing date: 2019-12-19
Publication date: 2021-08-24
Also published as: MX2021007589A; EP3898673A1; PE20211295A1; AR123405A1; EA202191656A1; WO2020132220A9; CO2021007882A2; US11884719B2; CA3120474A1; ZA202103311B; JP2022514950A; SG11202106100VA; US20240132582A1; US20200199217A1; AU2019405782A1; CL2021001615A1; TW202035460A; KR20210107721A; IL283884A; WO2020132220A1

Abstract

ANTICORPOS ANTI-IL-36 E MÉTODOS DE USO DOS MESMOS. A presente invenção fornece proteínas de ligação, tais como anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno, que se ligam especificamente às citocinas de IL-36 humanas, IL-36a, IL-36ß e/ou IL36y, e bloqueiam as vias de sinalização estimuladas por IL-36. As composições compreendendo tais proteínas de ligação e métodos de produção e uso de tais proteínas de ligação também são fornecidas.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “ANTICORPOS ANTI-IL-36 E MÉTODOS DE USO DOS MESMOS”.

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção refere-se de uma forma geral às proteínas de ligação, tais como anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno, que se ligam a IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ, e métodos de uso de tais proteínas de ligação.

REFERÊNCIA À LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

[002] A cópia oficial da Listagem de Sequências é enviada ao mesmo tempo com o relatório descritivo como um arquivo de texto formatado ASCII por meio da EFS-Web, com um nome de arquivo de “09402-004WO1_SeqList_ST25.txt”, uma data de criação de 9 de dezembro de 2019, e um tamanho de 1.386.645 bytes. A Listagem de Sequências depositada por meio da EFS-Web é parte do relatório descritivo e é incorporada na sua totalidade por referência nesta invenção.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[003] A família de interleucina-1 (IL-1) de ligantes e receptores de citocina está associada com inflamação, autoimunidade, regulação imunológica, proliferação celular e defesa do hospedeiro e contribui para a patologia doenças e distúrbios inflamatórios, autoimunes, imunorreguladores, degenerativos e proliferativos celulares (por exemplo, câncer) e suas citocinas e receptores servem como mediadores patogênicos de tais doenças e distúrbios. Ver, por exemplo, Cecilia Garlanda et al., Immunity 39:1003-1018 (2013). A família de citocinas IL-1 inclui as citocinas pró-inflamatórias, interleucina-36 alfa (IL-36 alfa ou IL-36α), interleucina-36 beta (IL-36β ou IL-36b) e interleucina-36 gama (IL-36 gama ou IL-36γ). Cada uma dessas citocinas IL-36 serve como um ligante capaz de se ligar ao receptor cognato IL-36R (também referido como “IL1RL2”) que é expresso na superfície de certas células, incluindo células da pele, esôfago, amígdala, pulmão, intestino, cérebro e células imunes incluindo células T. Após a ligação de uma citocina IL-36 ao IL-36R, um correceptor de proteína acessória, IL1RAP, é recrutado para formar um complexo ternário compreendendo a citocina IL-36, IL-36R e IL1RAP. Este complexo ternário facilita a transdução de sinal intracelular e ativação de um conjunto de fatores de transcrição, incluindo NF-κB e AP-1, e proteínas cinases ativadas por mitogênio, que acionam uma cascata de respostas inflamatórias e imunológicas, incluindo a produção a jusante de numerosas citocinas, quimiocinas, enzimas e moléculas de adesão, incluindo IFN-γ, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-12, IL-23, CXCL1, CXCL8 e CCL20.

[004] As citocinas IL-36, IL-36α, IL-36β e IL-36y, são conhecidas por serem altamente expressas em vários tecidos, incluindo pele e tecidos epiteliais internos que foram expostos a patógenos. Por exemplo, a expressão de IL-36α, IL-36β e IL-36y é significativamente suprarregulada em queratinócitos humanos estimulados por TNF-α (Carrier, et al. (2011) Journal of Investigative Dermatology), e os mRNAs de IL-36γ são superexpressos em lesões cutâneas de psoríase (D'Erme, et al. (2015) Journal of Investigative Dermatology). A expressão elevada de mRNA e proteína de IL-36α também foi observada na doença renal crônica (Ichii et al, Lab Invest., 90(3): 459- 475 (2010)). Além disso, células dendríticas derivadas de medula óssea de murino (BMDCs) e células T CD4+ respondem a IL-36α, IL- 36β e IL-36y através da produção de citocinas pró-inflamatórias (por exemplo, IL-12, IL-1β, IL-6, TNF-α e IL-23) induzindo assim um efeito pró-inflamatório mais potentemente do que outras citocinas IL-1 (Vigne et al, Blood, 118(22): 5813-5823 (2011)).

[005] Camundongos transgênicos com superexpressão de IL-36α em queratinócitos apresentam um distúrbio cutâneo inflamatório transitório no nascimento que torna os camundongos altamente suscetíveis a uma patologia de pele induzida por 12-0- tetradecanoilforbol 13-acetato que se parece com a psoríase humana (Blumberg et al, J. Exp. Med., 204(11): 2603-2614 (2007); e Blumberg et al, J. Immunol, 755(7): 4354-4362 (2010)). Além disso, camundongos deficientes em IL-36R são protegidos da dermatite psoriasiforme induzida por imiquimod (Tortola et al, J. Clin. Invest., 122(11): 3965-3976 (2012)). Esses resultados sugerem fortemente um papel da IL-36 em certas doenças inflamatórias da pele.

[006] As citocinas IL-36 estão implicadas em certas formas graves de psoríase, incluindo psoríase pustular, psoríase pustular generalizada (GPP) e pustulose palmo-plantar (PPP) (ver, por exemplo, Town, IE. and Sims, IE., Curr. Opin. Pharmacol, 12(4): 486- 90 (2012); and Naik, H.B. and Cowen, E.W., Dermatol Clin., 31(3): 405-425 (2013)). A psoríase pustulosa é uma forma rara de psoríase caracterizada por pústulas brancas rodeadas por pele vermelha. A psoríase pustulosa generalizada é uma forma sistêmica grave de psoríase pustulosa com alto risco de morte, enquanto que a pustulose palmo-plantar é uma forma crônica de psoríase pustulosa que afeta as palmas das mãos e a planta dos pés. Os tratamentos atuais para psoríase pustular, GPP e PPP incluem retinoides orais e esteroides tópicos, mas esses tratamentos apresentam fraca eficácia e efeitos colaterais graves.

SUMARIO DA INVENÇÃO

[007] A presente descrição fornece anticorpos que se ligam especificamente a citocinas IL-36 com alta afinidade. Os anticorpos são capazes de diminuir, inibir e/ou bloquear totalmente a sinalização estimulada através da ligação de IL-36α, IL-36β ou IL-36γ ao seu receptor cognato, IL-36R. A presente descrição também fornece usos dos anticorpos anti-IL-36 em métodos de tratamento de doenças mediadas por IL-36, tais como doenças inflamatórias, doenças autoimunes e cânceres, incluindo, mas não limitado a pustulose exantemática generalizada aguda (AGEP), doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), dermatose pustular infantil, eczema, psoríase pustulosa generalizada (GPP), doença inflamatória intestinal (IBD), psoríase pustulosa palmoplantar (PPP), psoríase, lesões cutâneas na forma de psoríase induzida por TNF em pacientes de Crohn, síndrome de Sjogren, e uveíte.

[008] Em algumas modalidades, a presente descrição fornece um anticorpo anti-IL-36 que compreende (i) uma primeira região hipervariável de cadeia leve (HVR-L1), uma segunda região hipervariável de cadeia leve (HVR-L2) e uma terceira região hipervariável de cadeia leve (HVR-L3) e/ou (ii) uma primeira região hipervariável da cadeia pesada (HVR-H1), uma segunda região hipervariável da cadeia pesada (HVR-H2) e uma terceira região hipervariável da cadeia pesada (HVR-H3), em que:

[009] HVR-L1 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de TGSSSNIGAHYDVH (SEQ ID NO: 18), TGSSSNIGAGYDVH (SEQ ID NO: 22), RASQSVSSNYLA (SEQ ID NO: 38) ou RASQTIYKYLN (SEQ ID NO: 42);

[010] HVR-L2 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de SNNNRPS (SEQ ID NO: 15), GNDNRPS (SEQ ID NO: 19), GNTNRPS (SEQ ID NO: 23), GNRNRPS (SEQ ID NO: 27), SASSLQS (SEQ ID NO: 39) ou AASSLQS (SEQ ID NO: 43);

[011] HVR-L3 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de QSYDYSLRGYV (SEQ ID NO: 16), QSYDYSLSGYV (SEQ ID NO: 20), QSYDYSLRVYV (SEQ ID NO: 28), QSYDYSLKAYV (SEQ ID NO: 32), QSYDISLSGWV (SEQ ID NO: 36), QQTYSYPPT (SEQ ID NO: 40) ou QQSSIPYT (SEQ ID NO: 44);

[012] HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de SAYAMHW (SEQ ID NO: 46), STSSYYW (SEQ ID NO: 50), SSTSYYW (SEQ ID NO: 54), GSRSYYW (SEQ ID NO: 58), STYAMSW (SEQ ID NO: 62), TSSNYYW (SEQ ID NO: 66), SSYGMH (SEQ ID NO: 70), SNYAIS (SEQ ID NO: 74), TSTNYYW (SEQ ID NO: 82), TSSNAYW (SEQ ID NO: 86), TASNYYW (SEQ ID NO: 90), TASNTYW (SEQ ID NO: 106), SDSSYYW (SEQ ID NO: 122), SESSYYW (SEQ ID NO: 126), STSSDYW (SEQ ID NO: 130), SNSSYYW (SEQ ID NO: 134), STSSYHW (SEQ ID NO: 142), SRSSYYW (SEQ ID NO: 146), XXXNXYX (SEQ ID NO: 251) em que X na posição 1 é T, D, E ou N; X na posição 2 é S, A, E, G, K, Q, R ou T; X na posição 3 é S, A, D, E, G, N, P, Q ou T; X na posição 5 é Y, A, E, G, H, M, N, Q, S, T ou V; X na posição 7 é W, F, I, V ou Y, ou XXXXXXW (SEQ ID NO: 336) em que X na posição 1 é S ou D; X na posição 2 é T, A, D, E, G, H, K, N, P, Q, R ou S; X na posição 3 é S, D, E, G, K, N, P ou R; X na posição 4 é S, G, K, N ou P; X na posição 5 é Y, A, D, E, G, H, M, N, Q, S, T, V ou W; X na posição 6 é Y, A, F, G, H, M, N ou Q;

[013] HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de VISYDGTNEYYAD (SEQ ID NO: 47), SIYYTGNTYYNP (SEQ ID NO: 51), SIHYSGNTYYNP (SEQ ID NO: 55), SIHYSGTTYYNP (SEQ ID NO: 59), GISGGSGYTYYAD (SEQ ID NO: 63), SIDYTGSTYYNP (SEQ ID NO: 67), VISYGGSERYYAD (SEQ ID NO: 71), GILPILGTVDYAQ (SEQ ID NO: 75), NIDYTGSTYYNA (SEQ ID NO: 83), SIDYTGSTAYNP (SEQ ID NO: 87), SIDYTGSTYYNT (SEQ ID NO: 91), SIDYTGSTYYEP (SEQ ID NO: 99), SIDYTGSTYYEP (SEQ ID NO: 103), SIDYTGSTYYQP (SEQ ID NO: 119), SIYYTGNTYYNS (SEQ ID NO: 123), SIYYTGNTYYLP (SEQ ID NO: 131), SIYYTGNTYYMP (SEQ ID NO: 143), SIYYTGNTYYWP (SEQ ID NO: 147), SIYYTGETYYAP (SEQ ID NO: 151), XXDXXXXXXYXX (SEQ ID NO: 284) em que X na posição 1 é S, N ou

T; X na posição 2 é I, M, ou V; X na posição 4 é Y ou H; X na posição 5 é T, H, L ou N; X na posição 6 é G, A, D, E, H, K, N, Q, R, S ou T; X na posição 7 é S, A, D, Q ou T; X na posição 8 é T, A, D ou E; X na posição 9 é Y, A, F, Q, S ou W; X na posição 11 é N, D, E, H, P ou Q; X na posição 12 é P, A ou E, ou XXXXXXXXXYXP (SEQ ID NO: 379) em que X na posição 1 é S, F, I, M ou Q; X na posição 2 é I, A, G, L, R, S, T ou V; X na posição 3 é Y, A, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T ou W; X na posição 4 é Y, A, D, E, F, G, H, K, N, P, Q, R, S, T ou W; X na posição 5 é T, D, E, K, N, P ou Q; X na posição 6 é G ou Q; X na posição 7 é N, D, E, G, H, I, K, M, P, R ou S; X na posição 8 é T, A, E, F, G, H, K, P, Q, R, S, V, W ou Y; X na posição 9 é Y ou W; X na posição 11 é N, A, D, E, K, L, M, P, Q, S ou T;

[014] HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de ARGIRIFTSYFDS (SEQ ID NO: 48), ARVRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 52), ARVHYGGYIPRRFDH (SEQ ID NO: 56), ARVAPSYPRVFDY (SEQ ID NO: 60), ARVVTYRDPPASFDY (SEQ ID NO: 64), ARGKYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 68), AREPWYSSRGWTGYGFDV (SEQ ID NO: 72), AREPWYRLGAFDV (SEQ ID NO: 76), ATGKYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 84), AHGKYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 88), ATGSYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 100), ATGNYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 104), ASGKYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 112), ARGNYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 120), AGVRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 128), SRVRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 132), VRVRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 144), TRVRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 148), ARLRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 152), ARVKYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 156), ARVRYGVGVPRHFDP (SEQ ID NO: 160), AXGXYYXTYLGFDV (SEQ ID NO: 322) em que X na posição 2 é R, A, E, G, H, M, N, Q, S, T ou Y; X na posição 4 é K, A ou S; X na posição 7 é E ou T, ou XXXXXGXXVPRXFDP (SEQ ID NO: 462) em que X na posição 1 é A ou V; X na posição 2 é R, A, G, N, Q ou T; X na posição 3 é V, A, F, I, K, L, M, Q ou S; X na posição 4 é R, A, I, K, L, M, P, Q, S, T ou V; X na posição 5 é Y, H, I, L ou V; X na posição 7 é V, A, F, G, K, M, N, Q, R, S, T, W ou Y; X na posição 8 é G, N, R, S ou T; X na posição 12 é Y, F, H, I, L, M, Q ou R.

[015] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende:

[016] HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18;

[017] HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e

[018] HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20.

[019] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende:

[020] (d) HVR-H1 compreende a sequência de aminoácido selecionada de SEQ ID NO: 66, 82, 86, 90 ou 252 a 283;

[021] (e) HVR-H2 compreende a sequência de aminoácido selecionada de SEQ ID NO: 67, 83, 87, 91, 99, 103, 119 ou 285 a 321; e

[022] (f) HVR-H3 compreende a sequência de aminoácido selecionada de SEQ ID NO: 68, 84, 88, 100, 104, 112, 120 ou 323 a

335.

[023] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende:

[024] (d) HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de SEQ ID NO: 50, 122, 126, 130, 134, 138, 142, 146 ou 337 a 378;

[025] (e) HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de SEQ ID NO: 51, 123, 131, 143, 147, 151 ou 380 a 461;

e

[026] (f) HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de SEQ ID NO: 52, 128, 132, 144, 148, 152, 156, 160 ou 463 a 513.

[027] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende:

[028] HVR-L1 compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18;

[029] HVR-L2 compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19;

[030] HVR-L3 compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20;

[031] HVR-H1 compreende a sequência de aminoácido selecionada de SEQ ID NO: 66, 82, 86, 90 ou 252 a 283;

[032] HVR-H2 compreende a sequência de aminoácido selecionada de SEQ ID NO: 67, 83, 87, 91, 99, 103, 119 ou 285 a 321; e

[033] HVR-H3 compreende a sequência de aminoácido selecionada de SEQ ID NO: 68, 84, 88, 100, 104, 112, 120 ou 323 a

335.

[034] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende:

[035] HVR-L1 compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18;

[036] HVR-L2 compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19;

[037] HVR-L3 compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20;

[038] HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 50, 122, 126, 130, 134, 138, 142, 146 ou

337 a 378;

[039] HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 51, 123, 131, 143, 147, 151 ou 380-461; e

[040] HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 52, 128, 132, 144, 148, 152, 156, 160 ou 463 a 513.

[041] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 77 ou 78; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 79, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) selecionada da SEQ ID NO: 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 77 ou 78; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) selecionada da SEQ ID NO: 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 79, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165.

[042] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 17 ou 77; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 49, 65, 79, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) da SEQ ID NO: 17 ou 77; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) selecionada da SEQ ID NO: 49, 65, 79, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165.

[043] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 17 ou 77; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 65, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113, ou 117. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL- 36 compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) da SEQ ID NO: 17 ou 77; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) selecionada da SEQ ID NO: 65, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113 ou 117.

[044] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 17 ou 77; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 49, 79, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) da SEQ ID NO: 17 ou 77; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) selecionada da SEQ ID NO: 49, 79, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165.

[045] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende uma sequência de aminoácido de cadeia leve (LC) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 169 ou 242; e/ou uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 170 a 202, 248, 249 ou 250. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende uma sequência de aminoácido de cadeia leve (LC) da SEQ ID NO: 169 ou 242; e/ou uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) selecionada da SEQ ID NO: 170 a 202, 248, 249 ou 250.

[046] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende uma sequência de aminoácido de cadeia leve (LC) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 169 ou 242; e/ou uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 518 a 616 e 743 a 751. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende uma sequência de aminoácido de cadeia leve (LC) da SEQ ID NO: 169 ou 242; e/ou uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) da SEQ ID NO: 518 a 616 e 743 a 751.

[047] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende uma sequência de aminoácido de cadeia leve (LC) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 169 ou 242; e/ou uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 203 a 241. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende uma sequência de aminoácido de cadeia leve (LC) recebendo da SEQ ID NO: 169 ou 242; e/ou uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) selecionada da SEQ ID NO: 203 a 241.

[048] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende uma sequência de aminoácido de cadeia leve (LC) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 169 ou 242; e/ou uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 617 a 733. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 compreende uma sequência de aminoácido de cadeia leve (LC) recebendo da SEQ ID NO: 169 ou 242; e/ou uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) selecionada da SEQ ID NO: 617 a 733.

[049] Em algumas modalidades, a presente descrição fornece um anticorpo anti-IL-36, em que o anticorpo é um anticorpo multiespecífico que compreende:

[050] um par de cadeias leves cada uma compreendendo: sequência da HVR-L1 da SEQ ID NO: 18; sequência da HVR-L2 da SEQ ID NO: 19; e sequência da HVR-L3 da SEQ ID NO: 20;

[051] uma cadeia pesada compreendendo: sequência da HVR- H1 selecionada das SEQ ID NOs: 66, 82, 86, 90 ou 106; sequência da HVR-H2 selecionada das SEQ ID NOs: 67, 83, 87, 91, 99, 103 ou 119; e sequência da HVR-H3 selecionada das SEQ ID NOs: 68, 84, 88, 100, 104, 112 ou 120; e

[052] uma cadeia pesada compreendendo: sequência da HVR- H1 selecionada das SEQ ID NOs: 50, 122, 126, 130, 134, 142 ou 146; sequência da HVR-H2 selecionada das SEQ ID NOs: 51, 123, 127, 131, 135, 139, 143, 147 ou 151; e HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácido selecionada das SEQ ID NOs: 52, 128, 132, 144, 148, 152, 156 ou 160.

[053] Em algumas modalidades, o anticorpo multiespecífico compreende:

[054] uma das cadeias pesadas compreendendo uma substituição de aminoácido T366W e a outra cadeia pesada compreendendo as substituições de aminoácido T366S, L368A e Y407V.

[055] Em algumas modalidades, o anticorpo multiespecífico compreende:

[056] um par de cadeias leves, cada uma compreendendo uma sequência de aminoácido do domínio variável de cadeia leve (VL) da SEQ ID NO: 17 ou 77;

[057] uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) selecionada da SEQ ID NO: 65, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113 ou 117; e

[058] uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) selecionada da SEQ ID NO: 49, 79, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165.

[059] Em algumas modalidades, o anticorpo multiespecífico compreende:

[060] um par de sequências de aminoácido de cadeia leve (LC) da SEQ ID NO: 169 e 242;

[061] uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) selecionada da SEQ ID NO: 171, 174,177, 180, 183, 186, 189, 192, 195, 198, 201, 249, 521, 522, 523, 530, 531, 532, 539, 540, 541, 548, 549, 550, 557, 558, 559, 566, 567, 568, 575, 576, 577, 584, 585, 586, 593, 594, 595, 602, 603, 604, 611, 612 e 613; e

[062] uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) selecionada da SEQ ID NO: 208, 211, 214, 217, 220, 223, 226, 229, 232, 235, 238, 241, 632, 633, 634, 641, 642, 643, 650, 651, 652, 659, 660, 661, 668, 669, 670, 677, 678, 679, 686, 687, 688, 695, 696, 697, 704, 705, 706, 713, 714, 715, 722, 723, 724, 731, 732 e 733.

[063] Em algumas modalidades, o anticorpo multiespecífico compreende:

[064] um par de sequências de aminoácido de cadeia leve (LC) da SEQ ID NO: 169 e 242;

[065] uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) selecionada da SEQ ID NO: 172, 175, 178, 181, 184, 187, 190, 193,

196, 199, 202, 250, 524, 525, 526, 533, 534, 535, 542, 543, 544, 551, 552, 553, 560, 561, 562, 569, 570, 571, 578, 579, 580, 587, 588, 589, 596, 597, 598, 605, 606, 607, 614, 615, 616, 749, 750 e 751; e

[066] uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) selecionada da SEQ ID NO: 207, 210, 213, 216, 219, 222, 225, 228, 231, 234, 237, 240, 629, 630, 631, 638, 639, 640, 647, 648, 649, 656, 657, 658, 665, 666, 667, 674, 675, 676, 683, 684, 685, 692, 693, 694, 701, 702, 703, 710, 711, 712, 719, 720, 721, 728, 729 e 730.

[067] Em algumas modalidades, a presente descrição fornece um anticorpo anti-IL-36 multiespecífico, em que o anticorpo compreende um par de sequências de aminoácido de cadeia leve (LC) da SEQ ID NO: 169; uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) selecionada da SEQ ID NO: 192, 584, 585 e 586; e uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) selecionada da SEQ ID NO: 235, 713, 714 e 715.

[068] Em várias modalidades dos anticorpos anti-IL-36 fornecidos pela presente descrição, o anticorpo é caracterizado por uma ou mais das seguintes propriedades:

[069] liga-se a hu-IL-36α, hu-IL-36-β, e/ou hu-IL-36-γ com uma afinidade de ligação de 1 x 10-8 M ou menos, 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos, ou 1 x 10-11 M ou menos; opcionalmente, em que o anticorpo é multiespecífico;

[070] liga-se a hu-IL-36α e hu-IL-36-γ com uma afinidade de ligação de 1 x 10-8 M ou menos, 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos, ou 1 x 10-11 M ou menos;

[071] liga-se a hu-IL-36-β com uma afinidade de ligação de 1 x 10-8 M ou menos, 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos, ou 1 x 10-11 M ou menos;

[072] é multiespecífico e compreende uma especificidade para IL- 36α e/ou IL-36γ em uma ramificação, e uma especificidade para IL-36β na outra ramificação; opcionalmente, em que uma ramificação liga-se a hu-IL-36α e hu-IL-36-γ com uma afinidade de ligação de 1 x 10-8 M ou menos, 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos, ou 1 x 10-11 M ou menos, e a outra ramificação liga-se a hu-IL-36-β com uma afinidade de ligação de 1 x 10-8 M ou menos, 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos, ou 1 x 10-11 M ou menos;

[073] diminui um sinal intracelular estimulado por IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ em pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 99% ou 100%; opcionalmente, em que em uma concentração de IL-36α, IL- 36β e/ou IL-36γ ao redor da EC50 o anticorpo possui uma IC50 de 10 nM ou menos, 5 nM ou menos ou 1 nM ou menos; opcionalmente, em que o anticorpo é multiespecífico;

[074] inibe a liberação de IL-8 de queratinócitos humanos primários (PHKs) estimulados por IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ, opcionalmente, em que em uma concentração de IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ ao redor da EC50, o anticorpo possui uma IC50 de 10 nM ou menos, 5 nM ou menos ou 1 nM ou menos; opcionalmente, em que o anticorpo é multiespecífico; e/ou

[075] reage de forma cruzada com uma IL-36α, IL-36β ou IL-36γ de macaco cinomolgo da SEQ ID NO: 5, 6 ou 7; opcionalmente, em que o anticorpo é multiespecífico.

[076] A presente descrição também fornece modalidades do anticorpo anti-IL-36, em que: (i) o anticorpo é um anticorpo monoclonal; (ii) o anticorpo é um anticorpo humano, humanizado ou quimérico; (iii) o anticorpo é um anticorpo de comprimento total da classe IgG, opcionalmente, em que o anticorpo da classe IgG possui um isótipo selecionado de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4; (iv) o anticorpo é uma variante da região Fc, opcionalmente uma variante da região Fc que altera a função efetora (por exemplo, uma variante que resulta em um anticorpo sem efeito), ou uma variante da região Fc que altera a meia-vida do anticorpo; (v) o anticorpo é um fragmento de anticorpo, opcionalmente selecionado do grupo que consiste em F(ab')2, Fab', Fab, Fv, anticorpo de domínio único (VHH) e scFv; (vi) o anticorpo é um imunoconjugado, opcionalmente, em que o imunoconjugado compreende um agente terapêutico para o tratamento de uma doença mediada por IL-36; (vii) o anticorpo é um anticorpo multiespecífico, opcionalmente um anticorpo multiespecífico; e (viii) o anticorpo é um anticorpo sintético, em que as HVRs são enxertadas em uma matriz ou estrutura diferente de uma matriz ou estrutura de imunoglobulina; opcionalmente, uma matriz selecionada de uma matriz de proteína alternativo e uma matriz de polímero artificial.

[077] Em outras modalidades, a presente descrição fornece ácidos nucleicos isolados que codificam os anticorpos anti-IL-36 aqui divulgados. Em algumas modalidades, a presente descrição também fornece uma célula hospedeira que compreende um ácido nucleico que codifica um anticorpo anti-IL-36 conforme divulgado nesta descrição. A descrição também fornece um método de produção de um anticorpo anti-IL-36, em que o método compreende o cultivo de uma célula hospedeira compreendendo um ácido nucleico (ou vetor) que codifica um anticorpo anti-IL-36 de tal modo que um anticorpo seja produzido.

[078] Em algumas modalidades, a descrição fornece uma composição farmacêutica que compreende um anticorpo anti-IL-36 conforme aqui divulgado e um veículo farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um anticorpo anti-IL-36 como o único agente ativo; opcionalmente, em que o anticorpo anti-IL-36 é um anticorpo multiespecífico que compreende uma especificidade para IL-36α e/ou IL-36γ em uma ramificação e uma especificidade para IL-36β na outra ramificação. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende ainda um agente terapêutico para o tratamento de uma doença ou condição mediada por IL-36.

[079] Em algumas modalidades, a presente descrição fornece um método de tratamento de uma doença ou condição mediada por IL-36 em um indivíduo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-IL-36 como divulgado nesta descrição, ou uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica de um anticorpo anti-IL-36 como aqui divulgado. Em algumas modalidades, os usos e métodos de tratamento compreendem a administração de uma composição farmacêutica que compreende um anticorpo anti-IL-36 como o único agente ativo; opcionalmente, em que o anticorpo anti-IL-36 é um anticorpo multiespecífico que compreende uma especificidade para IL- 36α e/ou IL-36γ em uma ramificação e uma especificidade para IL-36β na outra ramificação.

[080] Em algumas modalidades dos usos e métodos de tratamento aqui divulgados, a doença mediada por IL-36 é selecionada a partir de uma doença inflamatória, uma doença autoimune e um câncer. Em algumas modalidades, a doença mediada por IL-36 é selecionada de: acne devido a inibidores do receptor do fator de crescimento epidérmico, acne e hidradenite supurativa (PASH), pustulose exantemática generalizada aguda (AGEP), pustulose amicrobiana das dobras, pustulose amicrobiana do couro cabeludo/perna, pustulose subcórnea amicrobiana, síndrome do abscesso asséptico, doença de Behçet, síndrome do desvio intestinal, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), dermatose pustular infantil, doença de Crohn, deficiência do antagonista do receptor da interleucina-1 (DIRA), deficiência do antagonista do receptor de interleucina-36 (DITRA), eczema, psoríase pustulosa generalizada (GPP), eritema elevatum diutinum, hidradenite supurativa, pênfigo IgA,

doença inflamatória intestinal (IBD), paniculite neutrofílica, psoríase pustulosa palmoplantar (PPP), psoríase, artrite psoriática, psoríase pustulosa (DIRA, DITRA), pioderma gangrenoso, artrite piogênica pioderma gangrenoso e acne (PAPA), artrite piogênica pioderma gangrenoso acne e hidradenite supurativa (PAPASH), dermatose neutrofílica reumatoide, sinovite acne pustulose hiperostose e osteíte (SAPHO), lesões cutâneas na forma de psoríase induzida por TNF em pacientes com Crohn, síndrome de Sjogren, síndrome de Sweet, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), colite ulcerativa e uveíte. Em algumas modalidades, a doença mediada por IL-36 é selecionada de psoríase pustulosa generalizada (GPP), psoríase pustulosa palmoplantar (PPP) e psoríase. Em algumas modalidades, a doença mediada por IL-36 é um câncer; opcionalmente, um câncer selecionado de câncer de mama, câncer colorretal, câncer de pulmão de células não pequenas e câncer de pâncreas.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[081] As FIGURA 1A, FIGURA 1B e FIGURA 1C representam gráficos de resultados para os anticorpos anti-hu-IL-36 derivados de exibição de levedura mAb2.0 e mAb6.0 em ensaios de inibição de sinalização intracelular estimulada por IL-36 na linhagem celular de queratinócitos humanos HaCat. FIGURA 1A: inibição de mAb2.0 da estimulação de IL-36α ([IL-36α] = 1,2 nM) de células HaCat; IC50 = 0,28 nM. FIGURA 1B: inibição de mAb6.0 da estimulação de IL-36β ([IL-36β] = 0,175 nM) de células HaCat; IC50 = 0,082 nM. FIGURA 1C: inibição de mAb2.0 da estimulação de IL-36γ ([IL-36γ] = 4 nM) de células HaCat; IC50 = 1,23 nM. Todos os ensaios foram executados em uma concentração de agonista ao redor da EC50; as barras de erro mostradas são representativas do desvio padrão de amostras duplicadas. O controle negativo (NC, mostrado como uma linha cinza pontilhada) representa as células expostas somente no meio de crescimento, enquanto que o controle positivo (PC, mostrado como uma linha cinza tracejada) representa as células expostas apenas ao agonista (na ausência de anticorpos antagonísticos ou de controle).

[082] As FIGURA 2A, FIGURA 2B e FIGURA 2C representam gráficos de resultados para os anticorpos anti-hu-IL-36 derivados de exibição de levedura mAb2.0 e mAb6.0 em ensaios de inibição de sinalização intracelular estimulada por IL-36 em queratinócitos agrupados neonatais humanos primários (HEKn). FIGURA 2A: inibição de mAb2.0 da estimulação de IL-36α ([IL-36α] = 1,2 nM) de células HEKn; IC50 = 0,33 nM. FIGURA 2B: inibição de mAb6.0 da estimulação de IL-36β ([IL-36β] = 0,3 nM) de células HEKn; IC50 = 1,75 nM. FIGURA 2C: inibição de mAb2.0 da estimulação de IL-36γ ([IL-36γ] = 7 nM) de células HEKn; IC50 = 2,27 nM. Todos os ensaios foram executados em uma concentração de agonista ao redor da EC50; as barras de erro mostradas são representativas do desvio padrão de amostras duplicadas. O controle negativo (NC, mostrado como uma linha cinza pontilhada) representa as células expostas apenas ao meio de crescimento, enquanto que o controle positivo (PC, mostrado como uma linha cinza tracejada) representa as células expostas apenas ao agonista (na ausência de anticorpos antagonísticos ou de controle).

[083] As FIGURA 3A, FIGURA 3B e FIGURA 3C representam gráficos de resultados para o anticorpo multiespecífico anti-hu-IL-36 mAb2.10/mAb6_2.7 em ensaios de inibição de sinalização intracelular estimulada por IL-36 na linhagem celular de queratinócitos humanos HaCat. FIGURA 3A: inibição de mAb2.10/mAb6_2.7 da estimulação de IL-36α ([IL-36α] = 0,8 nM) de células HaCat; IC50 = 0,38 nM. FIGURA 3B: inibição de mAb2.10/mAb6_2.7 da estimulação de IL-36β ([IL-36β] = 0,15 nM) de células HaCat; IC50 = 0,13 nM. FIGURA 3C: inibição de mAb2.10/mAb6_2.7 da estimulação de IL-36γ ([IL-36γ] = 2 nM) de células HaCat; IC50 = 1,1 nM. Todos os ensaios foram executados em uma concentração de agonista ao redor da EC50; as barras de erro mostradas são representativas do desvio padrão de amostras duplicadas. O controle negativo (NC, mostrado como uma linha cinza pontilhada) representa as células expostas apenas ao meio de crescimento, enquanto que o controle positivo (PC, mostrado como uma linha cinza tracejada) representa as células expostas apenas ao agonista (na ausência de anticorpos antagonísticos ou de controle).

[084] As FIGURA 4A, FIGURA 4B e FIGURA 4C representam gráficos de resultados para o anticorpo multiespecífico anti-hu-IL-36 mAb2.10/mAb6_2.7 em ensaios de inibição da sinalização intracelular estimulada por IL-36 em queratinócitos adultos humanos primários (HEKa). FIGURA 4A: inibição de mAb2.10/mAb6_2.7 da estimulação de IL-36α ([IL-36α] = 1,1 nM) de células HEKa; IC50 = 0,56 nM. FIGURA 4B: inibição de mAb2.10/mAb6_2.7 da estimulação de IL-36β ([IL-36β] = 0,15 nM) de células HEKa; IC50 = 0,11 nM. FIGURA 4C: inibição de mAb2.10/mAb6_2.7 da estimulação de IL-36γ ([IL-36γ] = 3,6 nM) de células HEKa; IC50 = 2,7 nM. Todos os ensaios foram executados em uma concentração de agonista ao redor da EC50; as barras de erro mostradas são representativas do desvio padrão de amostras duplicadas. O controle negativo (NC, mostrado como uma linha cinza pontilhada) representa as células expostas apenas ao meio de crescimento, enquanto que o controle positivo (PC, mostrado como uma linha cinza tracejada) representa as células expostas apenas ao agonista (na ausência de anticorpos antagonísticos ou de controle).

DESCRIÇÃO DETALHADA

[085] A presente descrição fornece anticorpos, incluindo anticorpos multiespecíficos, que se ligam especificamente às citocinas hu-IL-36 humanas, IL-36α, IL-36β e IL-36γ com alta afinidade. Os anticorpos anti-IL-36 divulgados são capazes de diminuir, inibir e/ou bloquear totalmente a sinalização intracelular através das vias mediadas por IL-36, incluindo a sinalização estimulada pela ligação de IL-36α, IL-36β ou IL-36γ a seu receptor cognato, IL-36R. A presente descrição também fornece usos dos anticorpos anti-IL-36 em métodos de tratamento de doenças mediadas por IL-36, tais como doenças inflamatórias, doenças autoimunes e cânceres, especificamente incluindo, mas não limitado a pustulose exantemática aguda generalizada (AGEP), doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), dermatose pustular infantil, eczema, psoríase pustulosa generalizada (GPP), doença inflamatória intestinal (IBD), psoríase pustulosa palmoplantar (PPP), psoríase, lesões cutâneas na forma de psoríase induzida por TNF em pacientes de Crohn, síndrome de Sjogren, uveíte. Visão geral da Terminologia e Técnicas

[086] Para as descrições nesta invenção e as reivindicações anexas, as formas singulares “um” e “uma” incluem referentes plurais, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Assim, por exemplo, a referência a “uma proteína” inclui mais do que uma proteína e a referência a “um composto” refere-se mais do que um composto. É ainda observado que as reivindicações podem ser elaboradas para excluir qualquer elemento opcional. Como tal, esta declaração se destina a servir como base antecedente para o uso de terminologia exclusiva como “somente”, “apenas” e semelhantes em conexão com a recitação de elementos de reivindicação ou uso de uma limitação “negativa”. O uso de “compreender”, “compreende”, “compreendendo”, “incluir”, “inclui” e “incluindo” é intercambiável e não se destina a ser limitativo. Deve ser ainda compreendido que quando as descrições de várias modalidades utilizam o termo “compreendendo”, aqueles versados na técnica entenderiam que em alguns casos específicos, uma modalidade pode ser alternativamente descrita utilizando a linguagem “consistindo essencialmente em” ou

“consistindo em”.

[087] Quando uma faixa de valores é fornecida, a não ser que o contexto claramente dite de outra maneira, entende-se que cada número inteiro intermediário do valor e cada décimo de cada número inteiro intermediário do valor, a menos que o contexto dite claramente o contrário, entre o limite superior e inferior dessa faixa, e qualquer outro valor declarado ou interveniente dessa faixa mencionada, estão incluídos na invenção. Os limites superiores e inferiores dessas faixas menores podem ser independentemente incluídos nas faixas menores e também são incluídos pela invenção, sujeitos a qualquer limite especificamente excluído na faixa declarada. Onde a faixa declarada inclui um ou ambos desses limites, as faixas excluindo (i) qualquer um ou (ii) ambos desses limites incluídos também são incluídos na invenção. Por exemplo, “1 a 50”. inclui “2 a 25”, “5 a 20”, “25 a 50”, “1 a 10”, etc.

[088] Geralmente, a nomenclatura utilizada nesta invenção e as técnicas e procedimentos aqui descritos incluem aqueles que são bem compreendidos e comumente empregados por aqueles de habilidade prática na técnica, tais como as técnicas e metodologias comuns descritas em Sambrook et al., Molecular Cloning-A Laboratory Manual (2nd Ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989 (em seguida “Sambrook”); Current Protocols in Molecular Biology, F. M. Ausubel et al., eds., Current Protocols, a joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc. (completo até 2011) (em seguida “Ausubel”); Antibody Engineering, Vols. 1 and 2, R. Kontermann and S. Dubel, eds., Springer-Verlag, Berlin and Heidelberg (2010); Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols, V. Ossipow and N. Fischer, eds., 2nd Ed., Humana Press (2014); Therapeutic Antibodies: From Bench to Clinic, Z. An, ed., J. Wiley & Sons, Hoboken, N.J. (2009); e Phage Display,

Tim Clackson and Henry B. Lowman, eds., Oxford University Press, United Kingdom (2004).

[089] Todas as publicações, patentes, pedidos de patentes e outros documentos referenciados nesta descrição são por meio desta incorporados por referência na sua totalidade para todos os propósitos, na mesma medida como se cada publicação individual, patente, pedido de patente ou outro documento fosse individualmente indicado para ser incorporado por referência nesta invenção para todos os propósitos.

[090] A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados possuem o mesmo significado como comumente entendido por uma pessoa de habilidade prática na técnica à qual a presente invenção pertence. Deve ficar entendido que a terminologia utilizada nesta invenção é para descrever apenas as modalidades particulares e não se destina a ser limitativa. Para fins de interpretação desta descrição, a seguinte descrição de termos será aplicada e, quando apropriado, um termo usado no singular também incluirá o plural e vice-versa.

[091] “IL-36”, como aqui utilizada, refere-se às citocinas de interleucina-36 IL-36α, IL-36β e IL-36γ, coletivamente.

[092] “IL-36α” ou “IL-36a”, tal como aqui utilizada, refere-se à citocina de interleucina-36α de qualquer espécie em que ocorre. “Hu- IL-36α” e “cy-IL-36α” referem-se à citocina IL-36α de seres humanos e macaco cinomolgo, respectivamente.

[093] “IL-36β” ou “IL-36b”, tal como aqui utilizada, refere-se à citocina ed interleucina-36β de qualquer espécie em que ocorre. “Hu- IL-36β” e “cy-IL-36β” referem-se à citocina IL-36β de seres humanos e de macaco cinomolgo, respectivamente.

[094] “IL-36γ” ou “IL-36g”, tal como aqui utilizado, refere-se à citocina de interleucina-36γ de qualquer espécie em que ocorre. “Hu-

IL-36γ” e “cy-IL-36γ” referem-se à citocina IL-36γ de seres humanos e de macaco cinomolgo, respectivamente.

[095] “Condição mediada por IL-36” ou “doença mediada por IL- 36”, tal como aqui utilizada, abrange qualquer condição médica associada à função aberrante das vias de sinalização mediada pela ligação de qualquer uma das citocinas IL-36, IL-36α, IL-36β e IL-36γ, ao seu receptor cognato IL-36R, incluindo, mas não limitado às vias a jusante conhecidas por serem estimuladas pelas citocinas IL-36 que resultam na produção de citocinas, quimiocinas, enzimas e moléculas de adesão, incluindo, mas não limitado a IFN-γ, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL- 6, IL-8, IL-12, IL-23, CXCL1, CXCL8 e CCL20. Por exemplo, as doenças mediadas por IL-36 podem incluir, mas não são limitadas a estas, doenças mediadas por e/ou responsivas a antagonistas ou inibidores das vias de sinalização de IL-36, incluindo doenças inflamatórias, doenças autoimunes e cânceres. Mais especificamente, as doenças mediadas por IL-36 podem incluir, mas não são limitadas a estas, acne devido a inibidores do receptor do fator de crescimento epidérmico, acne e hidradenite supurativa (PASH), pustulose exantemática generalizada aguda (AGEP), pustulose amicrobiana das dobras, pustulose amicrobiana do couro cabeludo/perna, pustulose subcórnea amicrobiana, síndrome do abscesso asséptico, doença de Behçet, síndrome do desvio intestinal, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), dermatose pustular infantil, doença de Crohn, deficiência do antagonista do receptor da interleucina-1 (DIRA), deficiência do antagonista do receptor de interleucina-36 (DITRA), eczema, psoríase pustulosa generalizada (GPP), eritema elevatum diutinum, hidradenite supurativa, pênfigo IgA, doença inflamatória intestinal (IBD), paniculite neutrofílica, psoríase pustulosa palmoplantar (PPP), psoríase, artrite psoriática, psoríase pustulosa (DIRA, DITRA), pioderma gangrenoso, artrite piogênica pioderma gangrenoso e acne

(PAPA), artrite piogênica pioderma gangrenoso acne e hidradenite supurativa (PAPASH), dermatose neutrofílica reumatoide, sinovite acne pustulose hiperostose e osteíte (SAPHO), lesões cutâneas na forma de psoríase induzida por TNF em pacientes com Crohn, síndrome de Sjogren, síndrome de Sweet, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), colite ulcerativa e uveíte.

[096] “Sinal estimulado por IL-36”, como aqui utilizado, refere-se a um sinal intracelular iniciado pela ligação de qualquer uma das citocinas IL-36, IL-36α, IL-36β ou IL-36γ, ao seu receptor cognato, IL- 36R. Sinais estimulados por IL-36 exemplares incluem a liberação de IL-8 de células HaCat e/ou células de queratinócitos primários humanos adultos ou neonatais (HEKn ou HEKa), assim como sinais medidos utilizando ensaios de bloqueio baseados em células substitutas, tais como um ensaio baseado em células responsivas a IL- 36 HEK-BLUE™ como divulgado nos Exemplos nesta invenção.

[097] “Ensaio de bloqueio baseado em células” refere-se a um ensaio no qual a capacidade de um anticorpo de inibir ou reduzir a atividade biológica do antígeno ao qual se liga pode ser medida. Por exemplo, um ensaio de bloqueio baseado em células pode ser utilizado para medir a concentração de anticorpo necessária para inibir uma função biológica ou bioquímica específica, tal como a sinalização intracelular mediada por citocina IL-36. Em algumas modalidades, a metade da concentração inibidora máxima (IC50) e/ou a concentração inibidora de 90% (IC90) de um anticorpo (por exemplo, um anticorpo anti-IL-36 da descrição) é medida utilizando um ensaio de bloqueio baseado em células. Em algumas modalidades, o ensaio de bloqueio baseado em células é utilizado para determinar se um anticorpo bloqueia a interação entre um agonista (por exemplo, IL-36α, IL-36β, IL-36γ) e seu receptor cognato. Ensaios de bloqueio baseados em células úteis com os anticorpos da presente descrição podem incluir ensaios baseados na linhagem celular (por exemplo, células HaCat) ou ensaios de células primárias (por exemplo, queratinócitos humanos primários), assim como ensaios de células repórter ou sensor (por exemplo, um ensaio de células repórter HEK-BLUE™). Ensaios de bloqueio baseados em células exemplares para as vias de sinalização de IL-36 são descritos nos Exemplos fornecidos nesta invenção.

[098] “Anticorpo”, como aqui utilizado, refere-se a uma molécula que compreende uma ou mais cadeias polipeptídicas que se ligam especificamente, ou são imunologicamente reativas, a um antígeno particular. Anticorpos exemplares da presente descrição incluem anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, anticorpos humanos, anticorpos multiespecíficos (ou heteroconjugados) (por exemplo, anticorpos triespecíficos, anticorpos biespecíficos, etc.), anticorpos monovalentes (por exemplo, anticorpos de ramificação única), anticorpos multivalentes, fragmentos de ligação ao antígeno (por exemplo, fragmentos Fab′, F(ab′)2, Fab, Fv, rIgG e scFv), fusões de anticorpos e anticorpos sintéticos (ou miméticos de anticorpos).

[099] “Anticorpo anti-IL-36” ou “anticorpo que se liga a IL-36” refere-se a um anticorpo que se liga a IL-36, incluindo um ou mais de IL-36α, IL-36β e IL-36γ, com suficiente afinidade de tal modo que o anticorpo seja útil como um agente de diagnóstico e/ou terapêutico no direcionamento de IL-36, isto é, um ou mais de IL-36α, IL-36β e IL-36γ. Em algumas modalidades, a extensão da ligação de um anticorpo anti- IL-36 a um antígeno não IL-36 não relacionado é menor do que cerca de 10% da ligação do anticorpo a IL-36 conforme medido, por exemplo, por um radioimunoensaio (RIA), através da ressonância plasmônica de superfície (SPR), ou semelhante. Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga a IL-36 possui uma constante de dissociação (KD) de < 1 μΜ, < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM, < 0,1 nM,

< 0,01 nM ou < 1 pM (por exemplo, 10-8 M ou menos, por exemplo, de 10-8 M a 10-13 M, por exemplo, de 10-9 M a 10-13 M).

[0100] “Anticorpo de comprimento total”, “anticorpo intacto” ou “anticorpo inteiro” são aqui utilizados de modo trocável para se referir a um anticorpo tendo uma estrutura substancialmente semelhante a uma estrutura de anticorpo nativo ou tendo cadeias pesadas que contêm uma região Fc conforme aqui definido.

[0101] “Fragmento de anticorpo” refere-se a uma porção de um anticorpo de comprimento total que é capaz de se ligar ao mesmo antígeno que o anticorpo de comprimento total. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, mas não são limitados a estes, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; anticorpos bivalentes biespecíficos; anticorpos lineares; anticorpos monovalentes ou de ramificação única; moléculas de anticorpo de cadeia única (por exemplo, scFv); e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpos.

[0102] “Classe” de um anticorpo se refere ao tipo de domínio constante ou região constante retido por sua cadeia pesada. Existem cinco classes principais de anticorpos: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, e vários deles são divididos em subclasses (isótipos), por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2. Os domínios constantes da cadeia pesada que correspondem às diferentes classes de imunoglobulinas são chamados α, δ, ε, γ e μ, respectivamente.

[0103] “Região variável” ou “domínio variável” refere-se ao domínio de uma cadeia pesada ou leve de anticorpo que está envolvida na ligação do anticorpo ao antígeno. Os domínios variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve (VH e VL, respectivamente) de um anticorpo nativo geralmente possuem estruturas semelhantes, com cada domínio compreendendo quatro regiões estruturais conservadas (FRs) e três regiões hipervariáveis (HVRs) (ver, por exemplo, Kindt et al.,

Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91). Um único domínio VH ou VL pode ser suficiente para conferir especificidade de ligação ao antígeno. Além disso, os anticorpos que se ligam a um determinado antígeno podem ser isolados utilizando um domínio VH ou VL de um anticorpo que se liga ao antígeno para rastrear uma biblioteca de domínios VL ou VH complementares, respectivamente (ver, por exemplo, Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)).

[0104] “Região hipervariável” ou “HVR”, como aqui utilizada, refere-se a cada uma das regiões de um domínio variável de anticorpo que são hipervariáveis na sequência e/ou formam alças estruturalmente definidos (“alças hipervariáveis”). Geralmente, os anticorpos nativos compreendem quatro cadeias com seis HVRs; três no domínio variável da cadeia pesada, VH (HVR-H1, HVR-H2, HVR- H3), e três no domínio variável da cadeia leve, VL (HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3). As HVRs geralmente compreendem resíduos de aminoácido das alças hipervariáveis e/ou das “regiões determinantes de complementaridade” (CDRs). Vários delineamentos de região hipervariável estão em uso e são aqui incluídos. As Regiões Determinantes de Complementaridade de Kabat (CDRs) são baseadas na variabilidade de sequência e são as mais comumente utilizadas (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). Chothia refere-se, em vez disso, à localização das alças estruturais (Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). As regiões hipervariáveis AbM representam um compromisso entre as CDRs de Kabat e as alças estruturais de Chothia e são utilizadas pelo software de modelagem de anticorpos AbM da Oxford Molecular. As regiões hipervariáveis de “contato” são baseadas em uma análise das estruturas cristalinas complexas disponíveis. Os resíduos de cada uma dessas regiões hipervariáveis são mencionados na tabela abaixo. Alça Kabat AbM Chothia Contato L1 L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36 L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55 L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96 H1 H31-H35B1 H26-H35B1 H26-H321 H30-H35B1 H31-H352 H26-H352 H26-H322 H30-H352 H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58 H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101 1 numeração de Kabat 2 numeração de Chothia

[0105] A não ser que de outra maneira indicada, os resíduos de HVR e outros resíduos no domínio variável (por exemplo, resíduos de FR) são numerados nesta invenção de acordo com Kabat et al., Supra.

[0106] As regiões hipervariáveis, como aqui utilizadas, podem incluir regiões hipervariáveis estendidas ou alternativas como se segue: 24-36 ou 24-34 (L1), 46-56 ou 50-56 (L2) e 89-97 ou 89-96 (L3) no domínio VL e 26-35, 30-35, 30-35A, 30-35B ou 31-35B (H1), 50-61, 50-65 ou 49-65 (H2) e 93-102, 94-102 ou 95-102 (H3) no domínio VH. Os resíduos do domínio variável são numerados de acordo com Kabat et al., supra, para cada uma destas definições.

[0107] “Região determinante de complementaridade” ou “CDR”, como aqui utilizada, refere-se às regiões dentro das HVRs do domínio variável que possuem a maior variabilidade de sequência e/ou estão envolvidas no reconhecimento do antígeno. Geralmente, os anticorpos nativos compreendem quatro cadeias com seis CDRs; três nos domínios variáveis de cadeia pesada, VH (H1, H2, H3), e três nos domínios variáveis de cadeia leve, VL (L1, L2, L3). As CDRs (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3) de anticorpos anti-IL- 36 exemplares da presente descrição ocorrem nos resíduos de aminoácido 24-34 de L1, 50-56 de L2, 89-97 de L3, 30-35A de H1, 50-

61 de H2 e 93-102 de H3. (Numeração de acordo com Kabat et al., supra).

[0108] “Estrutura” ou “FR” refere-se a resíduos de domínio variável diferentes dos resíduos da região hipervariável (HVR). A FR de um domínio variável geralmente consiste em quatro domínios FR: FR1, FR2, FR3 e FR4. Consequentemente, as sequências de HVR e FR geralmente aparecem na seguinte sequência em VH (ou VL): FR1- H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.

[0109] “Anticorpo nativo” refere-se a uma molécula de imunoglobulina de ocorrência natural. Por exemplo, os anticorpos IgG nativos são glicoproteínas heterotetraméricas de cerca de 150.000 Daltons, compostas por duas cadeias leves idênticas e duas cadeias pesadas idênticas que são ligadas por dissulfeto. Do N- a C-terminal, cada cadeia pesada possui uma região variável (VH), também chamada de domínio pesado variável ou domínio variável da cadeia pesada, seguida por três domínios constantes (CH1, CH2 e CH3). Da mesma forma, do N- a C-terminal, cada cadeia leve possui uma região variável (VL), também chamada de domínio leve variável ou domínio variável da cadeia leve, seguida por um domínio leve constante (CL). A cadeia leve de um anticorpo pode ser atribuída a um de dois tipos, chamados kappa (κ) e lambda (λ), com base na sequência de aminoácido de seu domínio constante.

[0110] “Anticorpo monoclonal” como aqui utilizado, refere-se a um anticorpo obtido a partir de uma população substancialmente homogênea de anticorpos, isto é, os anticorpos individuais que compreendem a população são idênticos e/ou se ligam ao mesmo epítopo, exceto para possíveis anticorpos variantes (por exemplo, os anticorpos variantes contêm mutações que ocorrem naturalmente ou surgem durante a produção de um anticorpo monoclonal, e geralmente estão presentes em quantidades menores). Em contraste com as preparações de anticorpos policlonais, que tipicamente incluem diferentes anticorpos direcionados contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal de uma preparação de anticorpo monoclonal é direcionado contra um único determinante em um antígeno. Assim, o termo “monoclonal” indica o caráter do anticorpo como sendo obtido de uma população substancialmente homogênea de anticorpos e não deve ser interpretado como requerendo a produção do anticorpo por qualquer método particular. Por exemplo, os anticorpos monoclonais a serem utilizados podem ser produzidos por uma variedade de técnicas, incluindo, mas não limitado ao método de hibridoma, métodos de DNA recombinante, métodos de exibição de fago e métodos que utilizam animais transgênicos contendo todas ou parte dos locais de imunoglobulina humana, tais métodos e outros métodos exemplares para a produção de anticorpos monoclonais sendo aqui descritos.

[0111] “Anticorpo quimérico” refere-se a um anticorpo em que uma porção da cadeia pesada e/ou leve é derivada de uma fonte ou espécie particular, enquanto que o restante da cadeia pesada e/ou leve é derivado de uma fonte ou espécie diferente.

[0112] “Anticorpo humanizado” refere-se a um anticorpo quimérico compreendendo sequências de aminoácido de HVRs não humanas e sequências de aminoácido de FRs humanas. Em certas modalidades, um anticorpo humanizado compreenderá substancialmente todos de pelo menos um, e normalmente dois, domínios variáveis, em que todas ou substancialmente todas as HVRs (por exemplo, CDRs) correspondem àquelas de um anticorpo não humano, e todas ou substancialmente todas as FRs correspondem àquelas de um anticorpo humano. Um anticorpo humanizado opcionalmente pode compreender pelo menos uma parte de uma região constante de anticorpo derivada de um anticorpo humano. Uma “forma humanizada”

de um anticorpo, por exemplo, um anticorpo não humano, refere-se a um anticorpo que foi submetido à humanização.

[0113] “Anticorpo humano” refere-se a um anticorpo que possui uma sequência de aminoácido correspondente àquela de um anticorpo produzido por um ser humano ou célula humana ou derivada de uma fonte não humana que utiliza repertórios de anticorpos humanos ou outras sequências de codificação de anticorpos humanos. Esta definição de um anticorpo humano especificamente exclui um anticorpo humanizado compreendendo resíduos de ligação ao antígeno não humano.

[0114] “Estrutura de consenso humano” é uma estrutura que representa os resíduos de aminoácido de ocorrência mais comum em uma seleção de sequências de estrutura de VL ou VH de imunoglobulina humana. Geralmente, a seleção das sequências VL ou VH da imunoglobulina humana é de um subgrupo de sequências de domínio variável. Geralmente, o subgrupo de sequências é um subgrupo como em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91- 3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3. Em uma modalidade, para o VL, o subgrupo é o subgrupo capa I como em Kabat et al., supra. Em uma modalidade, para o VH, o subgrupo é o subgrupo III como em Kabat et al., supra.

[0115] “Estrutura humana receptora”, como aqui utilizada, é uma estrutura que compreende a sequência de aminoácido de uma estrutura de domínio variável de cadeia leve (VL) ou uma estrutura de domínio variável de cadeia pesada (VH) derivada de uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana. Uma estrutura humana receptora “derivada de” uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana pode compreender sua mesma sequência de aminoácido, ou pode conter alterações na sequência de aminoácido. Em algumas modalidades, o número de alterações de aminoácido é 10 ou menos, 9 ou menos, 8 ou menos, 7 ou menos, 6 ou menos, 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos, ou 2 ou menos. Em algumas modalidades, a estrutura humana receptora de VL é idêntica em sequência com a sequência de estrutura de imunoglobulina humana da VL ou sequência de estrutura de consenso humana.

[0116] “Região Fc” refere-se a um complexo de dímero que compreende as sequências polipeptídicas C-terminais de uma cadeia pesada de imunoglobulina, em que uma sequência polipeptídica C- terminal é aquela que pode ser obtida através da digestão com papaína de um anticorpo intacto. A região Fc pode compreender sequências Fc nativas ou variantes. Embora os limites da sequência Fc de uma cadeia pesada de imunoglobulina possam variar, a sequência Fc da cadeia pesada de IgG humana é geralmente definida para se estender de um resíduo de aminoácido ao redor da posição Cys226, ou ao redor da posição Pro230, até o terminal carboxila da sequência Fc. No entanto, a lisina C-terminal (Lys447) da sequência Fc pode ou não estar presente. A sequência Fc de uma imunoglobulina geralmente compreende dois domínios constantes, um domínio CH2 e um domínio CH3 e, opcionalmente, compreende um domínio CH4.

[0117] “Receptor Fc” ou “FcR”, refere-se a um receptor que se liga à região Fc de um anticorpo. Em algumas modalidades, um FcR é um FcR humano nativo. Em algumas modalidades, um FcR é aquele que se liga a um anticorpo IgG (um receptor gama) e inclui receptores das subclasses FcγRI, FcγRII e FcγRIII, incluindo variantes alélicas e formas alternativamente em splicing desses receptores. Os receptores FcγRII incluem FcγRIIA (um “receptor de ativação”) e FcγRIIB (um “receptor de inibição”), os quais possuem sequências de aminoácido semelhantes que diferem principalmente em seus domínios citoplasmáticos. O receptor de ativação FcγRIIA contém um motivo de ativação baseado em tirosina imunorreceptor (ITAM) em seu domínio citoplasmático. O receptor de inibição FcγRIIB contém um motivo de inibição baseado em tirosina imunorreceptor (ITIM) em seu domínio citoplasmático, (ver, por exemplo, Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)). FcR, tal como aqui utilizado, também inclui o receptor neonatal, FcRn, que é responsável pela transferência de IgGs maternas para o feto (Guyer et al, J. Immunol. 1 17:587 (1976) e Kim et al, J. Immunol. 24:249 (1994)) e regulação da homeostase de imunoglobulinas. Os FcRs são revisados, por exemplo, em Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991); Capel et al, Immunomethods 4:25-34 (1994); e de Haas et al, J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995).

[0118] “Anticorpo multivalente”, como aqui utilizado, é um anticorpo que compreende três ou mais sítios de ligação ao antígeno. O anticorpo multivalente é de preferência projetado para ter os três ou mais sítios de ligação ao antígeno e geralmente não é um anticorpo IgM ou IgA de sequência nativa.

[0119] “Anticorpo multiespecífico” é um anticorpo tendo pelo menos dois sítios de ligação diferentes, cada sítio com uma especificidade de ligação diferente. Um anticorpo multiespecífico pode ser um anticorpo de comprimento total ou um fragmento de anticorpo, e os diferentes sítios de ligação podem se ligar cada um a um antígeno diferente ou os diferentes sítios de ligação podem se ligar a dois epítopos diferentes do mesmo antígeno.

[0120] “Fragmento Fv” refere-se a um fragmento de anticorpo que contém um sítio de reconhecimento e ligação ao antígeno completo. Esta região consiste em um dímero de um domínio variável de cadeia pesada e leve em firme associação, que pode ser de natureza covalente, por exemplo, em scFv. É nesta configuração que as três HVRs de cada domínio variável interagem para definir um sítio de ligação ao antígeno na superfície do dímero VH-VL. Coletivamente, as seis HVRs ou um subconjunto das mesmas conferem especificidade de ligação ao antígeno para o anticorpo. No entanto, mesmo um único domínio variável (ou metade de um Fv compreendendo apenas três HVRs específicas para um antígeno) possui a capacidade de reconhecer e ligar o antígeno, embora geralmente com uma afinidade mais baixa do que todo o sítio de ligação.

[0121] “Fragmento Fab 'refere-se a um fragmento de anticorpo que contém um domínio variável e constante da cadeia leve e um domínio variável e o primeiro domínio constante (CH1) da cadeia pesada. “Fragmentos F(ab')2” compreendem um par de fragmentos Fab que são de uma forma geral covalentemente ligados perto de seus terminais carbóxi por cisteínas de dobradiça entre eles. Outros acoplamentos químicos de fragmentos de anticorpos também são conhecidos na técnica.

[0122] “Ramificação de ligação ao antígeno”, como aqui utilizado, refere-se a um componente de um anticorpo que possui a capacidade de se ligar especificamente a uma molécula alvo de interesse. Tipicamente, a ramificação de ligação ao antígeno é um complexo de sequências polipeptídicas de imunoglobulina, por exemplo, HVR e/ou sequências de domínio variável de uma cadeia leve e pesada de imunoglobulina.

[0123] “Fv de cadeia única” ou “scFv” refere-se a fragmentos de anticorpo compreendendo os domínios VH e VL de um anticorpo, em que esses domínios estão presentes em uma única cadeia polipeptídica. Geralmente, um polipeptídeo Fv compreende ainda um ligante polipeptídico entre os domínios VH e VL que permite que o scFv forme a estrutura de ligação ao antígeno desejada.

[0124] “Anticorpos bivalentes biespecíficos” referem-se a pequenos fragmentos de anticorpo com dois sítios de ligação ao antígeno, cujos fragmentos compreendem um domínio variável de cadeia pesada (VH) conectado a um domínio variável de cadeia leve (VL) na mesma cadeia polipeptídica (VH e VL). Ao utilizar um ligante que é muito curto para permitir o emparelhamento entre os dois domínios na mesma cadeia, os domínios são forçados a emparelhar com os domínios complementares de outra cadeia e criar dois sítios de ligação ao antígeno.

[0125] “Anticorpos lineares” referem-se aos anticorpos descritos em Zapata et al., Protein Eng., 8(10): 1057-1062 (1995). Resumidamente, estes anticorpos compreendem um par de regiões Fd em tandem (VH-CH1-VH-CH1) que, juntamente com polipeptídeos de cadeia leve complementares, forma um par de regiões de ligação ao antígeno. Os anticorpos lineares podem ser multiespecíficos, tais como, por exemplo, triespecíficos ou biespecíficos, ou monoespecíficos.

[0126] “Anticorpo nu” refere-se a um anticorpo que não é conjugado a um componente heterólogo (por exemplo, um componente citotóxico) ou radiomarcador.

[0127] “Afinidade” refere-se à força do total de interações não covalentes entre um único sítio de ligação de uma molécula (por exemplo, um anticorpo) e seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno). “Afinidade de ligação” refere-se à afinidade de ligação intrínseca que reflete uma interação 1:1 entre os membros de um par de ligação (por exemplo, anticorpo e antígeno). A afinidade de uma molécula X por seu parceiro Y geralmente pode ser representada pela constante de dissociação de equilíbrio (KD). A afinidade pode ser medida por métodos comuns conhecidos na técnica, incluindo aqueles aqui descritos. Modalidades específicas ilustrativas e exemplares para medir a afinidade de ligação são descritas no que se segue.

[0128] “Liga-se especificamente” ou “ligação específica” refere-se à ligação de um anticorpo a um antígeno com um valor de afinidade de não mais do que cerca de 1 x 10-7 M.

[0129] Anticorpo de “maturação por afinidade” refere-se a um anticorpo com uma ou mais alterações em uma ou mais HVRs, em comparação com um anticorpo parental que não possui tais alterações, tais alterações resultando em uma melhora na afinidade do anticorpo pelo antígeno.

[0130] O “sítio de ligação ao antígeno funcional” de um anticorpo é aquele que é capaz de se ligar a um antígeno alvo. A afinidade de ligação ao antígeno do sítio de ligação ao antígeno não é necessariamente tão forte quanto o anticorpo parental a partir do qual o sítio de ligação ao antígeno é derivado, mas a capacidade de se ligar ao antígeno deve ser mensurável utilizando qualquer um de uma variedade de métodos conhecidos para avaliar a ligação do anticorpo a um antígeno.

[0131] “Anticorpo isolado” refere-se a um anticorpo que foi separado de um componente de seu ambiente natural. Em algumas modalidades, um anticorpo é purificado para mais de 95% ou 99% de pureza, conforme determinado, por exemplo, através de eletroforese (por exemplo, SDS-PAGE, focagem isoelétrica (IEF), eletroforese capilar) ou métodos cromatográficos (por exemplo, troca iônica ou HPLC de fase reversa). Para uma revisão dos métodos de avaliação da pureza do anticorpo, ver, por exemplo, Flatman et al., J. Chromatogr. B 848: 79-87.

[0132] “Substancialmente semelhante” ou “substancialmente o mesmo”, como aqui utilizado, refere-se a um grau suficientemente elevado de semelhança entre dois valores numéricos (por exemplo, um associado a um anticorpo de teste e o outro associado a um anticorpo de referência), de tal modo que uma pessoa de habilidade na técnica consideraria a diferença entre os dois valores como sendo de pouca ou nenhuma significância biológica e/ou estatística dentro do contexto da característica biológica medida pelos referidos valores (por exemplo, valores KD).

[0133] “Substancialmente diferente”, como aqui utilizado, refere-se a um grau suficientemente elevado de diferença entre dois valores numéricos (geralmente um associado a uma molécula e o outro associado a uma molécula de referência), de tal modo que uma pessoa de habilidade na técnica consideraria a diferença entre os dois valores como sendo de significância estatística dentro do contexto da característica biológica medida por ditos valores (por exemplo, valores KD).

[0134] “Funções efetoras” referem-se às atividades biológicas atribuíveis à região Fc de um anticorpo, que variam com o isótipo do anticorpo. Exemplos de funções efetoras de anticorpos incluem: ligação de Clq e citotoxicidade dependente do complemento (CDC); ligação ao receptor Fc; citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpo (ADCC); fagocitose; infrarregulação de receptores de superfície celular (por exemplo, receptor de células B); e ativação de células B.

[0135] “Imunoconjugado” refere-se a um anticorpo conjugado a uma ou mais moléculas heterólogas, incluindo, mas não limitado a um agente citotóxico.

[0136] “Tratamento”, “tratar” ou “tratando” refere-se à intervenção clínica na tentativa de alterar o curso natural de um distúrbio no indivíduo a ser tratado e pode ser executado para profilaxia ou durante o curso da patologia clínica. Os resultados desejados do tratamento podem incluir, mas não são limitados a estes, prevenção da ocorrência ou recorrência do distúrbio, alívio dos sintomas, diminuição de quaisquer consequências patológicas diretas ou indiretas do distúrbio, prevenção de metástases, diminuição da taxa de vazão progressão, melhora ou alívio de um estado doentio e remissão ou prognóstico melhorado. Por exemplo, o tratamento pode incluir a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz da formulação farmacêutica compreendendo um anticorpo anti-IL-36 a um indivíduo para retardar o desenvolvimento ou a progressão lenta de uma doença ou condição mediada por IL-36 ou doença ou condição em que IL-36, ou vias a jusante estimuladas por uma citocina IL-36, pode desempenhar um papel na patogênese e/ou progressão.

[0137] “Formulação farmacêutica” refere-se a uma preparação em uma forma que permite que a atividade biológica dos ingredientes ativos seja eficaz e que não contenha componentes adicionais que sejam tóxicos para os indivíduos aos quais a formulação é administrada. Uma formulação farmacêutica pode incluir um ou mais agentes ativos. Por exemplo, uma formulação farmacêutica pode incluir um anticorpo anti-IL-36 como o único agente ativo da formulação ou pode incluir um anticorpo anti-IL-36 e um ou mais agentes ativos adicionais.

[0138] Por “único agente ativo”, como aqui utilizado, significa que o agente referido é o único agente presente na formulação, ou utilizado na terapia, que fornece, ou seria esperado de fornecer, o efeito farmacológico relevante para tratar o indivíduo para a condição, consistente com a descrição de “tratamento” conforme fornecido nesta invenção. Uma formulação farmacêutica compreendendo um único agente ativo não exclui a presença de um ou mais agentes não ativos, tais como, por exemplo, um veículo farmaceuticamente aceitável, na formulação. Um “agente não ativo” é um agente que não se espera que forneça, ou de outra forma contribua significativamente para, o efeito farmacológico relevante destinado a tratar o indivíduo com relação à condição.

[0139] “Veículo farmaceuticamente aceitável” refere-se a um ingrediente em uma formulação farmacêutica, diferente de um ingrediente ativo, que não é tóxico para o indivíduo a quem é administrado. Um veículo farmaceuticamente aceitável inclui, mas não está limitado a estes, um tampão, excipiente, estabilizante ou conservante.

[0140] “Quantidade terapeuticamente eficaz” refere-se à quantidade de um ingrediente ou agente ativo (por exemplo, uma formulação farmacêutica) para atingir um resultado terapêutico ou profilático desejado, por exemplo, para tratar ou prevenir uma doença, distúrbio ou condição em um indivíduo. No caso de uma doença ou condição mediada por IL-36, a quantidade terapeuticamente eficaz do agente terapêutico é uma quantidade que reduz, previne, inibe e/ou alivia até certo ponto um ou mais dos sintomas associados à doença, distúrbio ou condição. Para o tratamento de condições inflamatórias, tais como condições inflamatórias da pele (por exemplo, eczema, psoríase, rosácea, dermatite seborréica), a eficácia in vivo pode, por exemplo, ser medida mediante a avaliação da duração, gravidade e/ou recorrência dos sintomas, a taxa de vazão resposta (RR), duração da resposta e/ou qualidade de vida.

[0141] “Simultaneamente”, como aqui utilizado, refere-se à administração de dois ou mais agentes terapêuticos, em que pelo menos parte da administração se sobrepõe no tempo. Consequentemente, a administração simultânea inclui um regime de dosagem quando a administração de um ou mais agentes continua após a interrupção da administração de um ou mais de outros agentes.

[0142] “Indivíduo” ou “paciente” refere-se a um mamífero, incluindo, mas não limitado a animais domesticados (por exemplo, vacas, ovelhas, gatos, cães e cavalos), primatas (por exemplo, seres humanos e primatas não humanos, tais como macacos), coelhos e roedores (por exemplo, camundongos e ratos). Descrição Detalhada das Várias Modalidades Citocinas IL-36

[0143] Cada uma das citocinas de agonista IL-36α, IL-36β e IL-36γ induz a sinalização intracelular pela ligação ao receptor cognato, IL- 36R (ou IL1RL2). A ligação por qualquer uma dessas citocinas IL-36 ao receptor IL-36R provoca o recrutamento e engajamento do correceptor IL1RAP, o que resulta na formação de um complexo de sinalização ternário compreendendo IL-36R, IL1RAP e a respectiva citocina IL-36 que iniciou o evento de sinalização. A transdução de sinal estimulada por IL-36α, IL-36β ou IL-36γ leva à ativação do fator de transcrição NK-κB e vias AP-1 em células alvo e induz várias respostas imunes inflamatórias, proliferativas e patogênicas. Ver, por exemplo, Jennifer Towne et al., J. Biol. Chem. 279(14):13677-13688 (2004); Sebastian Gunther et al., J. Immunol. 193(2):921-930 (2014).

[0144] As citocinas IL-36, IL-36α, IL-36β e IL-36γ, são proteínas relativamente curtas que se ligam e atuam como agonistas do receptor IL-36R. In vivo, as citocinas IL-36 sofrem processamento proteolítico que resulta em truncamento N-terminal. Este truncamento é necessário para IL-36α, IL-36β e IL-36γ atingirem sua atividade agonista completa com IL-36R. Da mesma forma, o antagonista de IL- 36R, IL-36Ra, requer truncamento N-terminal a fim de atingir sua atividade antagonista completa. As sequências de aminoácido e nucleotídeo e a anotação das versões humanas de IL-36α, IL-36β, IL- 36γ (também aqui referidas como “hu-IL-36α,” “hu-IL-36β” e “hu-IL- 36γ“) e IL-36Ra estão disponíveis publicamente. Ver, por exemplo, as sequências de aminoácido completas nos números de entrada UniProt Q9UHA7, Q9NZH7-2, Q9NZH8 e Q9UBH0, respectivamente. Da mesma forma, as sequências de aminoácido e nucleotídeo das versões das três citocinas IL-36 de macaco cinomolgo, aqui referidas como “cy-IL-36α”, “cy-IL-36β” e “cy-IL-36γ”, também estão disponíveis publicamente nos números de entrada UniProt A0A2K5UTG0, A0A2K5UV63-1 e A0A2K5VYV6.

[0145] Os construtos polipeptídicos correspondentes a porções das proteínas citocina hu-IL-36 e cy-IL-36 podem ser utilizados como antígenos para induzir anticorpos anti-IL-36 com afinidade de ligação para as versões humanas e/ou de macaco cinomolgo das citocinas específicas IL-36, IL-36α, IL-36β e IL-36γ. Conforme divulgado em outra parte nesta invenção, estes anticorpos anti-IL-36 são capazes de bloquear parcial ou totalmente a ligação de uma ou mais das citocinas específicas IL-36α, IL-36β e IL-36γ ao seu receptor cognato, diminuindo assim os sinais intracelulares iniciados por esta ligação. Os anticorpos produzidos através da imunização com antígenos IL-36 podem ser modificados, por exemplo, conforme descrito nesta invenção, para modular (aumentar ou reduzir) certas propriedades dos anticorpos, incluindo, mas não limitado a, por exemplo, aumentar a afinidade com relação ao antígeno IL-36, que aumenta a afinidade com relação a outro antígeno IL-36, aumentando a reatividade cruzada, reduzindo a reatividade cruzada, etc.

[0146] A Tabela 1 abaixo fornece uma descrição resumida das sequências dos construtos de polipeptídeo IL-36 humano e de macaco cinomolgo utilizados para gerar anticorpos anti-IL-36 da presente descrição e seus identificadores de sequência. Os identificadores de entrada do banco de dados UniProt das proteínas também estão incluídos, assim como os limites do domínio da sequência de construto em relação às proteínas de comprimento total. As sequências de cada um dos construtos polipeptídicos IL-36α, IL-36β, IL-36γ ou IL-36Ra correspondem à versão truncada N-terminal tendo a maior atividade de agonista ou, no caso de IL-36Ra, atividade de antagonista. Por exemplo, as sequências de aminoácido IL-36α, IL-36β e IL-36γ truncadas N-terminal fornecidas na Tabela 1 começam nas posições N-terminal K6, R5 e S18, respectivamente. Além disso, as sequências de marcadores de purificação utilizadas para fazer versões facilmente purificáveis das proteínas IL-36 conforme descrito em outra parte nesta invenção. As sequências também estão incluídas na Listagem de Sequências anexa. Tabela 1: Sequências de IL-36 e marcadores de purificação Limites do SEQ ID Descrição domínio Sequência NO: hu-IL-36α K6-F158 KIDTPQQGSIQDINHRVWVLQDQTLIAVPRKDRMSPVTIALISCRH 1 (UniProt Q9UHA7) VETLEKDRGNPIYLGLNGLNLCLMCAKVGDQPTLQLKEKDIMDLY

NQPEPVKSFLFYHSQSGRNSTFESVAFPGWFIAVSSEGGCPLILT

QELGKANTTDFGLTMLF hu-IL-36β R5-E157 REAAPKSYAIRDSRQMVWVLSGNSLIAAPLSRSIKPVTLHLIACRD 2 (UniProt Q9NZH7- TEFSDKEKGNMVYLGIKGKDLCLFCAEIQGKPTLQLKEKNIMDLYV 2) EKKAQKPFLFFHNKEGSTSVFQSVSYPGWFIATSTTSGQPIFLTKE

RGITNNTNFYLDSVE hu-IL-36γ S18-D169 SMCKPITGTINDLNQQVWTLQGQNLVAVPRSDSVTPVTVAVITCK 3 (UniProt Q9NZH8) YPEALEQGRGDPIYLGIQNPEMCLYCEKVGEQPTLQLKEQKIMDL

YGQPEPVKPFLFYRAKTGRTSTLESVAFPDWFIASSKRDQPIILTS

ELGKSYNTAFELNIND hu-IL-36Ra V2-D155 VLSGALCFRMKDSALKVLYLHNNQLLAGGLHAGKVIKGEEISVVP 4 (UniProt Q9UBH0) NRWLDASLSPVILGVQGGSQCLSCGVGQEPTLTLEPVNIMELYLG

AKESKSFTFYRRDMGLTSSFESAAYPGWFLCTVPEADQPVRLTQ

LPENGGWNAPITDFYFQQCD cy-IL-36α K6-F158 KSEMPQPVSIQDINHRVWVLQDQILIAVPRKDRVSPVTISLISCRHV 5 (UniProt ETLEKDRGNPIYLGLNGLNLCLMCAKAGDQPTLQLKEKDIMDLYN A0A2K5UTG0) QPEPVKSFLFYHSQSGRNSTFESVAFPGWFIAVSSEGGCPLILTQ

ELGKANTTDFGLTMLF cy-IL-36β W5-E157 WQAAPKSYAIRDSRQMVWVLSGNSLIAAPLSNRVKPVTLHLITCR 6 (UniProt DTEFSDKKKGNLVYLGIRGKDLCLFCEEIQGKPTLQLKEKNIMDLY A0A2K5UV63-1) MEKKAQKPFLFFHNKEGSSSVFQSVSYPGWFIATSSTSGQPIFLT

QERGITNNTNFYLDSVE cy-IL-36γ S18-K168 SMRTPITGTINDLNQQVWTLQGQILVAVPRSDSVTPVTVAVITCKY 7 (UniProt PEALDQSRGDPIYLGIRNPEMCLCCEEVGGQPTLQLKEQKIMDLY

Limites do SEQ ID Descrição domínio Sequência NO: A0A2K5VYV6) GQPEPVKPFLFYRVKTGRTSTLESVAFPNWFIASSTRDQPIILTSE

LGKSYNTAFELNIK 12xHis-SUMO n/a MHHHHHHHHHHHHMSDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSD 8

GSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQ

TPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG 12xHis-TEV n/a MHHHHHHHHHHHHENLYFQS 9 GS-AviTag n/a GGGGSGLNDIFEAQKIEWHE 10 sequência de sinal n/a MGWSCIILFLVATATGVHS 11 (região V de cadeia pesada Ig de camundongo 102) GS-TEV-GS- n/a SGGGGSENLYFQGGGGSEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVF 12 huIgG1Fc-FLAG LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH

NAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALP APIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ

GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKDYKDDDDK II. Anticorpos Anti-IL-36

[0147] Em algumas modalidades, a presente descrição fornece estruturas de anticorpos anti-IL-36 em termos de sequências de aminoácido e nucleotídeo de codificação das várias características de imunoglobulina bem conhecidas (por exemplo, CDRs, HVRs, FRs, domínios VH e VL). A Tabela 2 abaixo fornece uma descrição resumida de sequências de anticorpos anti-IL-36 exemplares da presente descrição e seus identificadores de sequência. Essas sequências e outras estão incluídas na Listagem de Sequências anexa. Tabela 2: Sequências de anticorpos anti-IL-36

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb1.0 - VL QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAHYDVHWYQQLPGTAPKLLIY 13

SNNNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDYSLRGYVF

GGGTKLTVL mAb1.0 – HVR-L1 TGSSSNIGAHYDVH 14 mAb1.0 – HVR-L2 SNNNRPS 15 mAb1.0 – HVR-L3 QSYDYSLRGYV 16 mAb2.0 - VL e QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAHYDVHWYQQLPGTAPKLLIY 17 mAb6.0_2.0 – VL GNDNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDYSLSGYV

FGGGTKLTVL mAb2, mAb6_2, ESVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAHYDVHWYQQLPGTAPKLLIY 77 mAb6_2.7, e mAb2.10 GNDNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDYSLSGYV - VL FGGGTKLTVL mAb2.0, mAb2, TGSSSNIGAHYDVH 18 mAb6_2, mAb6_2.7, e mAb2.10 – HVR-L1 mAb2.0, mAb2, GNDNRPS 19 mAb6_2, mAb6_2.7, e mAb2.10 – HVR-L2 mAb2.0, mAb2, QSYDYSLSGYV 20 mAb6_2, mAb6_2.7, e mAb2.10 – HVR-L3 mAb3.0 – VL QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIY 21

GNTNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDYSLRGYVF

GGGTKLTVL mAb3.0 – HVR-L1 TGSSSNIGAGYDVH 22 mAb3.0 – HVR-L2 GNTNRPS 23 mAb3.0 – HVR-L3 QSYDYSLRGYV 24 mAb4.0 – VL QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIY 25

GNRNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDYSLRVYVF

GGGTKLTVL mAb4.0 – HVR-L1 TGSSSNIGAGYDVH 26 mAb4.0 – HVR-L2 GNRNRPS 27 mAb4.0 – HVR-L3 QSYDYSLRVYV 28 mAb5.0 – VL QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAHYDVHWYQQLPGTAPKLLIY 29

SEQ ID Descrição Sequência NO:

GNDNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDYSLKAYVF

GGGTKLTVL mAb5.0 – HVR-L1 TGSSSNIGAGYDVH 30 mAb5.0 – HVR-L2 GNDNRPS 31 mAb5.0 – HVR-L3 QSYDYSLKAYV 32 mAb6.0 – VL QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIY 33

GNTNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDISLSGWVF

GGGTKLTVL mAb6 - VL ESVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIY 78

GNTNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDISLSGWVF

GGGTKLTVL mAb6.0 e mAb6 TGSSSNIGAGYDVH 34 – HVR-L1 mAb6.0 e GNTNRPS 35 mAb6 – HVR-L2 mAb6.0 e QSYDISLSGWV 36 mAb6 – HVR-L3 mAb7.0 – VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKPGQAPKLLIYSA 37

SSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQTYSYPPTFGQGT

KVEIK mAb7.0 – HVR-L1 RASQSVSSNYLA 38 mAb7.0 – HVR-L2 SASSLQS 39 mAb7.0 – HVR-L3 QQTYSYPPT 40 mAb8.0 – VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTIYKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAAS 41

SLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSIPYTFGQGTKV

EIK mAb8.0 – HVR-L1 RASQTIYKYLN 42 mAb8.0 – HVR-L2 AASSLQS 43 mAb8.0 – HVR-L3 QQYSSIPYT 44 mAb1.0 - VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSFSAYAMHWVRQAPGKGLEWVA 45

VISYDGTNEYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGIR

IFTSYFDSWGQGTLVTVSS mAb1.0 – HVR-H1 SAYAMHW 46

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb1.0 – HVR-H2 VISYDGTNEYYAD 47 mAb1.0 – HVR-H3 ARGIRIFTSYFDS 48 mAb2.0 – VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 49

SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG

VGVPRYFDPWGQGTLVTVSS mAb2 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 79

SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG

VGVPRYFDPWGQGTLVTVSS mAb2.0 e STSSYYW 50 mAb2 – HVR-H1 mAb2.0 e SIYYTGNTYYNP 51 mAb2 – HVR-H2 mAb2.0 e ARVRYGVGVPRYFDP 52 mAb2 – HVR-H3 mAb3.0 – VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 53

SIHYSGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVHYG

GYIPRRFDHWGQGTLVTVSS mAb3.0 – HVR-H1 SSTSYYW 54 mAb3.0 – HVR-H2 SIHYSGNTYYNP 55 mAb3.0 – HVR-H3 ARVHYGGYIPRRFDH 56 mAb4.0 – VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIGSRSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 57

SIHYSGTTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVAPS

YPRVFDYWGQGTLVTVSS mAb4.0 – HVR-H1 GSRSYYW 58 mAb4.0 – HVR-H2 SIHYSGTTYYNP 59 mAb4.0 – HVR-H3 ARVAPSYPRVFDY 60 mAb5.0 – VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMSWVRQAPGKGLEWVS 61

GISGGSGYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVV

TYRDPPASFDYWGQGTLVTVSS mAb5.0 – HVR-H1 STYAMS 62 mAb5.0 – HVR-H2 GISGGSGYTYYAD 63 mAb5.0 – HVR-H3 ARVVTYRDPPASFDY 64 mAb6.0 e mAb6.0_2.0 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 65 – VH SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGKYY

ETYLGFDVWGQGTLVTVSS

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb6 e mAb6_2 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 80

SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGKYY

ETYLGFDVWGQGTLVTVSS mAb6.0 e TSSNYYW 66 mAb6 e mAb6.0_2.0 e mAb6_2– HVR-H1 mAb6.0 e SIDYTGSTYYNP 67 mAb6 e mAb6.0_2.0 e mAb6_2 – HVR-H2 mAb6.0 e ARGKYYETYLGFDV 68 mAb6 e mAb6.0_2.0 e mAb6_2 – HVR-H3 mAb7.0 - VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVA 69

VISYGGSERYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREP

WYSSRGWTGYGFDVWGQGTLVTVSS mAb7.0 – HVR-H1 SSYGMH 70 mAb7.0 – HVR-H2 VISYGGSERYYAD 71 mAb7.0 – HVR-H3 AREPWYSSRGWTGYGFDV 72 mAb8.0 - VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSNYAISWVRQAPGQGLEWMG 73

GILPILGTVDYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREPW

YRLGAFDVWGQGTLVTVSS mAb8.0 – HVR-H1 SNYAIS 74 mAb8.0 – HVR-H2 GILPILGTVDYAQ 75 mAb8.0 – HVR-H3 AREPWYRLGAFDV 76 mAb6_2.1 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSTNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 81

NIDYTGSTYYNASLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY

ETYLGFDVWGQGTLVTVSS mAb6_2.1 – HVR-H1 TSTNYYW 82 mAb6_2.1 – HVR-H2 NIDYTGSTYYNA 83 mAb6_2.1 – HVR-H3 ATGKYYETYLGFDV 84 mAb6_2.2 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNAYWGWIRQPPGKGLEWIG 85

SIDYTGSTAYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAHGKYY

ETYLGFDVWGQGTLVTVSS mAb6_2.2 – HVR-H1 TSSNAYW 86 mAb6_2.2 – HVR-H2 SIDYTGSTAYNP 87

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb6_2.2 – HVR-H3 AHGKYYETYLGFDV 88 mAb6_2.3 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 89

SIDYTGSTYYNTSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYYE

TYLGFDVWGQGTLVTVSS mAb6_2.3 – HVR-H1 TASNYYW 90 mAb6_2.3 – HVR-H2 SIDYTGSTYYNT 91 mAb6_2.3 – HVR-H3 ATGKYYETYLGFDV 92 mAb6_2.4 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 93

SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY

ETYLGFDVWGQGTLVTVSS mAb6_2.4 – HVR-H1 TASNYYW 94 mAb6_2.4 – HVR-H2 SIDYTGSTYYNP 95 mAb6_2.4 – HVR-H3 ATGKYYETYLGFDV 96 mAb6_2.5 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 97

SIDYTGSTYYEPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGSYYE

TYLGFDVWGQGTLVTVSS mAb6_2.5 – HVR-H1 TASNYYW 98 mAb6_2.5 – HVR-H2 SIDYTGSTYYEP 99 mAb6_2.5 – HVR-H3 ATGSYYETYLGFDV 100 mAb6_2.6 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 101

SIDYTGSTYYEPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGNYY

ETYLGFDVWGQGTLVTVSS mAb6_2.6 – HVR-H1 TASNYYW 102 mAb6_2.6 – HVR-H2 SIDYTGSTYYEP 103 mAb6_2.6 – HVR-H3 ATGNYYETYLGFDV 104 mAb6_2.7 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNTYWGWIRQPPGKGLEWIG 105

SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY

ETYLGFDVWGQGTLVTVSS mAb6_2.7 – HVR-H1 TASNTYW 106 mAb6_2.7 – HVR-H2 SIDYTGSTYYNP 107 mAb6_2.7 – HVR-H3 ATGKYYETYLGFDV 108 mAb6_2.8 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 109

SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSS

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb6_2.8 – HVR-H1 TASNYYW 110 mAb6_2.8 – HVR-H2 SIDYTGSTYYNP 111 mAb6_2.8 – HVR-H3 ASGKYYETYLGFDV 112 mAb6_2.9 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 113

SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY

ETYLGFDVWGQGTLVTVSS mAb6_2.9 – HVR-H1 TSSNYYW 114 mAb6_2.9 – HVR-H2 SIDYTGSTYYNP 115 mAb6_2.9 – HVR-H3 ATGKYYETYLGFDV 116 mAb6_2.10 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 117

SIDYTGSTYYQPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGNYY

ETYLGFDVWGQGTLVTVSS mAb6_2.10 – HVR-H1 TSSNYYW 118 mAb6_2.10 – HVR-H2 SIDYTGSTYYQP 119 mAb6_2.10 – HVR-H3 ARGNYYETYLGFDV 120 mAb2.1 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 121

SIYYTGNTYYNSSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG

VGVPRYFDPWGQGTLVTVSS mAb2.1 – HVR-H1 SDSSYYW 122 mAb2.1 – HVR-H2 SIYYTGNTYYNS 123 mAb2.1 – HVR-H3 ARVRYGVGVPRYFDP 124 mAb2.2 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISESSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 125

SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGVRYG

VGVPRYFDPWGQGTLVTVSS mAb2.2 – HVR-H1 SESSYYW 126 mAb2.2 – HVR-H2 SIYYTGNTYYNP 127 mAb2.2 – HVR-H3 AGVRYGVGVPRYFDP 128 mAb2.3 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSDYWGWIRQPPGKGLEWIG 129

SIYYTGNTYYLPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCSRVRYG

VGVPRYFDPWGQGTLVTVSS mAb2.3 – HVR-H1 STSSDYW 130 mAb2.3 – HVR-H2 SIYYTGNTYYLP 131 mAb2.3 – HVR-H3 SRVRYGVGVPRYFDP 132

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb2.4 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 133

SIYYTGNTYYLPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG

VGVPRYFDPWGQGTLVTVSS mAb2.4 – HVR-H1 SNSSYYW 134 mAb2.4 – HVR-H2 SIYYTGNTYYLP 135 mAb2.4 – HVR-H3 ARVRYGVGVPRYFDP 136 mAb2.5 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISESSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 137

SIYYTGNTYYLPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG

VGVPRYFDPWGQGTLVTVSS mAb2.5 – HVR-H1 SESSYYW 138 mAb2.5 – HVR-H2 SIYYTGNTYYLP 139 mAb2.5 – HVR-H3 ARVRYGVGVPRYFDP 140 mAb2.6 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYHWGWIRQPPGKGLEWIG 141

SIYYTGNTYYMPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRVRYG

VGVPRYFDPWGQGTLVTVSS mAb2.6 – HVR-H1 STSSYHW 142 mAb2.6 – HVR-H2 SIYYTGNTYYMP 143 mAb2.6 – HVR-H3 VRVRYGVGVPRYFDP 144 mAb2.7 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISRSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 145

SIYYTGNTYYWPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCTRVRYG

VGVPRYFDPWGQGTLVTVSS mAb2.7 – HVR-H1 SRSSYYW 146 mAb2.7 – HVR-H2 SIYYTGNTYYWP 147 mAb2.7 – HVR-H3 TRVRYGVGVPRYFDP 148 mAb2.8 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 149

SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARLRYGV

GVPRYFDPWGQGTLVTVSS mAb2.8 – HVR-H1 SDSSYYW 150 mAb2.8 – HVR-H2 SIYYTGETYYAP 151 mAb2.8 – HVR-H3 ARLRYGVGVPRYFDP 152 mAb2.9 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 153

SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVKYG

VGVPRYFDPWGQGTLVTVSS mAb2.9 – HVR-H1 SDSSYYW 154 mAb2.9 – HVR-H2 SIYYTGETYYAP 155

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb2.9 – HVR-H3 ARVKYGVGVPRYFDP 156 mAb2.10 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 157

SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG

VGVPRHFDPWGQGTLVTVSS mAb2.10 – HVR-H1 SDSSYYW 158 mAb2.10 – HVR-H2 SIYYTGETYYAP 159 mAb2.10 – HVR-H3 ARVRYGVGVPRHFDP 160 mAb2.11 – VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISESSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 161

SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARLRYGV

GVPRYFDPWGQGTLVTVSS mAb2.11 – HVR-H1 SESSYYW 162 mAb2.11 – HVR-H2 SIYYTGETYYAP 163 mAb2.11 – HVR-H3 ARLRYGVGVPRYFDP 164 mAb2.12 - VH ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISESSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 165

SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVKYG

VGVPRYFDPWGQGTLVTVSS mAb2.12 – HVR-H1 SESSYYW 166 mAb2.12 – HVR-H2 SIYYTGETYYAP 167 mAb2.12 – HVR-H3 ARVKYGVGVPRYFDP 168 mAb2, mAb6_2, e ESVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAHYDVHWYQQLPGTAPKLLIY 169 mAb6_2.7 e mAb2.10 GNDNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDYSLSGYV - LC FGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW

KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHE

GSTVEKTVAPTECS mAb6 - LC ESVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIY 242

GNTNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDISLSGWVF GGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWK ADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEG

STVEKTVAPTECS mAb6.0 - LC QESVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLI 247

YGNTNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDISLSGWV FGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb6.0 e mAb6.0_2.0 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 248 - HC SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGKYY

ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6.0 e mAb6.0_2.0 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 249 - HC (knob) SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGKYY

ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6.0 e QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 250 mAb6.0_2.0 - HC SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGKYY (hole) ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY

FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

VSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6 e mAb6_2 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 170

SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb6 e mAb6_2 – HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 171 (knob) SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGKYY

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6 e mAb6_2 – HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 172 (hole) SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGKYY

ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

VSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.1 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSTNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 173

NIDYTGSTYYNASLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.1 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSTNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 174

NIDYTGSTYYNASLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.1 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSTNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 175

SEQ ID Descrição Sequência NO:

NIDYTGSTYYNASLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

VSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.2 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNAYWGWIRQPPGKGLEWIG 176

SIDYTGSTAYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAHGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.2 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNAYWGWIRQPPGKGLEWIG 177

SIDYTGSTAYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAHGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.2 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNAYWGWIRQPPGKGLEWIG 178

SIDYTGSTAYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAHGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

VSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.3 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 179

SIDYTGSTYYNTSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYYE

SEQ ID Descrição Sequência NO:

TYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYF PEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.3 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 180

SIDYTGSTYYNTSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYYE TYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYF PEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.3 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 181

SIDYTGSTYYNTSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYYE TYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYF PEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

VSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.4 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 182

SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.4 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 183

SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY

SEQ ID Descrição Sequência NO:

FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.4 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 184

SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

VSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.5 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 185

SIDYTGSTYYEPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGSYYE TYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYF PEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.5 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 186

SIDYTGSTYYEPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGSYYE TYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYF PEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.5 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 187

SIDYTGSTYYEPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGSYYE TYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYF PEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN

SEQ ID Descrição Sequência NO:

VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

VSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.6 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 188

SIDYTGSTYYEPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGNYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.6 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 189

SIDYTGSTYYEPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGNYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.6 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 190

SIDYTGSTYYEPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGNYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

VSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.7 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNTYWGWIRQPPGKGLEWIG 191

SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI

SEQ ID Descrição Sequência NO:

SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.7 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNTYWGWIRQPPGKGLEWIG 192

SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.7 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNTYWGWIRQPPGKGLEWIG 193

VSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.8 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 194

SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.8 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 195

SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV

SEQ ID Descrição Sequência NO:

SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.8 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 196

SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

VSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.9 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 197

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.9 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 198

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.9 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 199

SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR

SEQ ID Descrição Sequência NO:

DELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

VSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.10 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 200

SIDYTGSTYYQPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGNYY ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.10 – HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 201 (knob) SIDYTGSTYYQPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGNYY

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.10 – HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIG 202 (hole) SIDYTGSTYYQPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGNYY

VSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.0 - HC QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 243

SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

SEQ ID Descrição Sequência NO:

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.0 - HC (knob) QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 244

SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.0 - HC (hole) QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 245

SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.0 e QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAHYDVHWYQQLPGTAPKLLIY 246 mAb6.0_2.0 - LC GNDNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDYSLSGYV

FGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHE

GSTVEKTVAPTECS mAb2 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 203

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 204

SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI

SEQ ID Descrição Sequência NO:

CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 205

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.1 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 206

SIYYTGNTYYNSSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.1 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 207

SIYYTGNTYYNSSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.1 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 208

SIYYTGNTYYNSSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT

SEQ ID Descrição Sequência NO:

LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.2 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISESSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 209

SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.2 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISESSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 210

SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.2 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISESSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 211

SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.3 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSDYWGWIRQPPGKGLEWIG 212

SIYYTGNTYYLPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCSRVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY

SEQ ID Descrição Sequência NO:

RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.3 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSDYWGWIRQPPGKGLEWIG 213

SIYYTGNTYYLPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCSRVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.3 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSDYWGWIRQPPGKGLEWIG 214

SIYYTGNTYYLPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCSRVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.4 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 215

SIYYTGNTYYLPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.4 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 216

SIYYTGNTYYLPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP

SEQ ID Descrição Sequência NO:

PSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.4 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 217

SIYYTGNTYYLPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.5 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISESSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 218

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.5 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISESSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 219

SIYYTGNTYYLPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.5 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISESSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 220

SEQ ID Descrição Sequência NO:

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.6 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYHWGWIRQPPGKGLEWIG 221

SIYYTGNTYYMPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.6 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYHWGWIRQPPGKGLEWIG 222

SIYYTGNTYYMPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.6 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYHWGWIRQPPGKGLEWIG 223

SIYYTGNTYYMPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.7 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISRSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 224

SIYYTGNTYYWPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCTRVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb2.7 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISRSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 225

SIYYTGNTYYWPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCTRVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.7 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISRSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 226

SIYYTGNTYYWPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCTRVRYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.8 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 227

SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARLRYGV GVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF

FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.8 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 228

SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARLRYGV GVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.8 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 229

SEQ ID Descrição Sequência NO:

SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARLRYGV GVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF

FLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.9 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 230

SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVKYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.9 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 231

SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVKYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.9 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 232

SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVKYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.10 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 233

SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG

SEQ ID Descrição Sequência NO:

VGVPRHFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.10 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 234

SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG VGVPRHFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.10 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 235

SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG VGVPRHFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.11 – HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISESSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 236

FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.11 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISESSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 237

SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARLRYGV GVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKD

SEQ ID Descrição Sequência NO:

YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.11 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISESSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 238

FLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.12 - HC ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISESSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 239

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.12 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISESSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 240

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.12 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISESSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 241

SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVKYG VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI

SEQ ID Descrição Sequência NO:

CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2 – HVR-H1 - XXXNXYX 251 genérico X na posição 1 é T, D, E, ou N; X na posição 2 é S, A, E, G, K, Q, R, ou T; X na posição 3 é S, A, D, E, G, N, P, Q, ou T; X na posição 5 é Y, A, E, G, H, M, N, Q, S, T, ou V; X na posição 7 é W, F, I, V, ou Y. mAb6_2 – HVR-H1 – DSSNYYW 252 T30D mAb6_2 – HVR-H1 - ESSNYYW 253 T30E mAb6_2 – HVR-H1 - NSSNYYW 254 T30N mAb6_2 – HVR-H1 – TASNYYW 255 S31A mAb6_2 – HVR-H1 – TESNYYW 256 S31E mAb6_2 – HVR-H1 – TGSNYYW 257 S31G mAb6_2 – HVR-H1 – TKSNYYW 258 S31K mAb6_2 – HVR-H1 – TQSNYYW 259 S31Q mAb6_2 – HVR-H1 – TRSNYYW 260 S31R mAb6_2 – HVR-H1 – TTSNYYW 261 S31T mAb6_2 – HVR-H1 – TSANYYW 262 S32A mAb6_2 – HVR-H1 – TSDNYYW 263 S32D mAb6_2 – HVR-H1 – TSENYYW 264 S32E

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb6_2 – HVR-H1 – TSGNYYW 265 S32G mAb6_2 – HVR-H1 – TSNNYYW 266 S32N mAb6_2 – HVR-H1 – TSPNYYW 267 S32P mAb6_2 – HVR-H1 – TSQNYYW 268 S32Q mAb6_2 – HVR-H1 – TSTNYYW 269 S32T mAb6_2 – HVR-H1 – TSSNAYW 270 Y34A mAb6_2 – HVR-H1 – TSSNEYW 271 Y34E mAb6_2 – HVR-H1 – TSSNGYW 272 Y34G mAb6_2 – HVR-H1 – TSSNHYW 273 Y34H mAb6_2 – HVR-H1 – TSSNMYW 274 Y34M mAb6_2 – HVR-H1 – TSSNNYW 275 Y34N mAb6_2 – HVR-H1 – TSSNQYW 276 Y34Q mAb6_2 – HVR-H1 – TSSNSYW 277 Y34S mAb6_2 – HVR-H1 – TSSNTYW 278 Y34T mAb6_2 – HVR-H1 – TSSNVYW 279 Y34V mAb6_2 – HVR-H1 – TSSNYYF 280 W35aF mAb6_2 – HVR-H1 – TSSNYYI 281 W35aI mAb6_2 – HVR-H1 – TSSNYYV 282

SEQ ID Descrição Sequência NO: W35aV mAb6_2 – HVR-H1 – TSSNYYY 283 W35aY mAb6_2 – HVR-H2 - XXDXXXXXXYXX 284 genérico X na posição 1 é S, N, ou T; X na posição 2 é I, M, ou V; X na posição 4 é Y, ou H; X na posição 5 é T, H, L, ou N; X na posição 6 é G, A, D, E, H, K, N, Q, R, S, ou T; X na posição 7 é S, A, D, Q, ou T; X na posição 8 é T, A, D, ou E; X na posição 9 é Y, A, F, Q, S, ou W; X na posição 11 é N, D, E, H, P, ou Q; X na posição 12 é P, A, ou E. mAb6_2 – HVR-H2 – NIDYTGSTYYNP 285 S50N mAb6_2 – HVR-H2 – TIDYTGSTYYNP 286 S50T mAb6_2 – HVR-H2 – SMDYTGSTYYNP 287 I51M mAb6_2 – HVR-H2 – SVDYTGSTYYNP 288 I51V mAb6_2 – HVR-H2 – SIDHTGSTYYNP 289 Y53H mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYHGSTYYNP 290 T54H mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYLGSTYYNP 291 T54L mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYNGSTYYNP 292 T54N mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTASTYYNP 293 G55A mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTDSTYYNP 294 G55D mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTESTYYNP 295 G55E mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTHSTYYNP 296 G55H mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTKSTYYNP 297 G55K

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTNSTYYNP 298 G55N mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTQSTYYNP 299 G55Q mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTRSTYYNP 300 G55R mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTSSTYYNP 301 G55S mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTTSTYYNP 302 G55T mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGATYYNP 303 S56A mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGDTYYNP 304 S56D mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGQTYYNP 305 S56Q mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGTTYYNP 306 S56T mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGSAYYNP 307 T57A mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGSDYYNP 308 T57D mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGSEYYNP 309 T57E mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGSTAYNP 310 Y58A mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGSTFYNP 311 Y58F mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGSTQYNP 312 Y58Q mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGSTSYNP 313 Y58S mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGSTWYNP 314 Y58W mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGSTYYDP 315

SEQ ID Descrição Sequência NO: N60D mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGSTYYEP 316 N60E mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGSTYYHP 317 N60H mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGSTYYPP 318 N60P mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGSTYYQP 319 N60Q mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGSTYYNA 320 P61A mAb6_2 – HVR-H2 – SIDYTGSTYYNE 321 P61E mAb6_2 – HVR-H3 - AXGXYYXTYLGFDV 322 genérico X na posição 2 é R, A, E, G, H, M, N, Q, S, T, ou Y; X na posição 4 é K, A, ou S; X na posição 7 é E ou T. mAb6_2 – HVR-H3 – AAGKYYETYLGFDV 323 R94A mAb6_2 – HVR-H3 – AEGKYYETYLGFDV 324 R94E mAb6_2 – HVR-H3 – AGGKYYETYLGFDV 325 R94G mAb6_2 – HVR-H3 – AHGKYYETYLGFDV 326 R94H mAb6_2 – HVR-H3 – AMGKYYETYLGFDV 327 R94M mAb6_2 – HVR-H3 – ANGKYYETYLGFDV 328 R94N mAb6_2 – HVR-H3 – AQGKYYETYLGFDV 329 R94Q mAb6_2 – HVR-H3 – ASGKYYETYLGFDV 330 R94S mAb6_2 – HVR-H3 – ATGKYYETYLGFDV 331 R94T mAb6_2 – HVR-H3 – AYGKYYETYLGFDV 332

SEQ ID Descrição Sequência NO: R94Y mAb6_2 – HVR-H3 – ARGAYYETYLGFDV 333 K96A mAb6_2 – HVR-H3 – ARGSYYETYLGFDV 334 K96S mAb6_2 – HVR-H3 – ARGKYYTTYLGFDV 335 E99T mAb2 – HVR-H1 - XXXXXXW 336 genérico X na posição 1 é S ou D; X na posição 2 é T, A, D, E, G, H, K, N, P, Q, R, ou S; X na posição 3 é S, D, E, G, K, N, P, ou R; X na posição 4 é S, G, K, N, ou P; X na posição 5 é Y, A, D, E, G, H, M, N, Q, S, T, V, ou W; X na posição 6 é Y, A, F, G, H, M, N, ou Q. mAb2 – HVR-H1 – DTSSYYW 337 S30D mAb2 – HVR-H1 – SASSYYW 338 T31A mAb2 – HVR-H1 – SDSSYYW 339 T31D mAb2 – HVR-H1 – SESSYYW 340 T31E mAb2 – HVR-H1 – SGSSYYW 341 T31G mAb2 – HVR-H1 – SHSSYYW 342 T31H mAb2 – HVR-H1 – SKSSYYW 343 T31K mAb2 – HVR-H1 – SNSSYYW 344 T31N mAb2 – HVR-H1 – SPSSYYW 345 T31P mAb2 – HVR-H1 – SQSSYYW 346 T31Q mAb2 – HVR-H1 – SRSSYYW 347 T31R mAb2 – HVR-H1 – SSSSYYW 348

SEQ ID Descrição Sequência NO: T31S mAb2 – HVR-H1 – STDSYYW 349 S32D mAb2 – HVR-H1 – STESYYW 350 S32E mAb2 – HVR-H1 – STGSYYW 351 S32G mAb2 – HVR-H1 – STKSYYW 352 S32K mAb2 – HVR-H1 – STNSYYW 353 S32N mAb2 – HVR-H1 – STPSYYW 354 S32P mAb2 – HVR-H1 – STRSYYW 355 S32R mAb2 – HVR-H1 – STSGYYW 356 S33G mAb2 – HVR-H1 – STSKYYW 357 S33K mAb2 – HVR-H1 – STSNYYW 358 S33N mAb2 – HVR-H1 – STSPYYW 359 S33P mAb2 – HVR-H1 – STSSAYW 360 Y34A mAb2 – HVR-H1 – STSSDYW 361 Y34D mAb2 – HVR-H1 – STSSEYW 362 Y34E mAb2 – HVR-H1 – STSSGYW 363 Y34G mAb2 – HVR-H1 – STSSHYW 364 Y34H mAb2 – HVR-H1 – STSSMYW 365 Y34M

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb2 – HVR-H1 – STSSNYW 366 Y34N mAb2 – HVR-H1 – STSSQYW 367 Y34Q mAb2 – HVR-H1 – STSSSYW 368 Y34S mAb2 – HVR-H1 – STSSTYW 369 Y34T mAb2 – HVR-H1 – STSSVYW 370 Y34V mAb2 – HVR-H1 – STSSWYW 371 Y34W mAb2 – HVR-H1 – STSSYAW 372 Y35A mAb2 – HVR-H1 – STSSYFW 373 Y35F mAb2 – HVR-H1 – STSSYGW 374 Y35G mAb2 – HVR-H1 – STSSYHW 375 Y35H mAb2 – HVR-H1 – STSSYMW 376 Y35M mAb2 – HVR-H1 – STSSYNW 377 Y35N mAb2 – HVR-H1 – STSSYQW 378 Y35Q mAb2 – HVR-H2 - XXXXXXXXXYXP 379 genérico X na posição 1 é S, F, I, M, ou Q; X na posição 2 é I, A, G, L, R, S, T, ou V; X na posição 3 é Y, A, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, ou W; X na posição 4 é Y, A, D, E, F, G, H, K, N, P, Q, R, S, T, ou W; X na posição 5 é T, D, E, K, N, P, ou Q; X na posição 6 é G ou Q; X na posição 7 é N, D, E, G, H, I, K, M, P, R, ou S; X na posição 8 é T, A, E, F, G, H, K, P, Q, R, S, V, W, ou Y; X na posição 9 é Y ou W; X na posição 11 é N, A, D, E, K, L, M, P, Q, S ou T. mAb2 – HVR-H2 – FIYYTGNTYYNP 380 S50F

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb2 – HVR-H2 – IIYYTGNTYYNP 381 S50I mAb2 – HVR-H2 – MIYYTGNTYYNP 382 S50M mAb2 – HVR-H2 – QIYYTGNTYYNP 383 S50Q mAb2 – HVR-H2 – SAYYTGNTYYNP 384 I51A mAb2 – HVR-H2 – SGYYTGNTYYNP 385 I51G mAb2 – HVR-H2 – SLYYTGNTYYNP 386 I51L mAb2 – HVR-H2 – SRYYTGNTYYNP 387 I51R mAb2 – HVR-H2 – SSYYTGNTYYNP 388 I51S mAb2 – HVR-H2 – STYYTGNTYYNP 389 I51T mAb2 – HVR-H2 – SVYYTGNTYYNP 390 I51V mAb2 – HVR-H2 – SIAYTGNTYYNP 391 Y52A mAb2 – HVR-H2 – SIDYTGNTYYNP 392 Y52D mAb2 – HVR-H2 – SIEYTGNTYYNP 393 Y52E mAb2 – HVR-H2 – SIFYTGNTYYNP 394 Y52F mAb2 – HVR-H2 – SIGYTGNTYYNP 395 Y52G mAb2 – HVR-H2 – SIHYTGNTYYNP 396 Y52H mAb2 – HVR-H2 – SIKYTGNTYYNP 397 Y52K mAb2 – HVR-H2 – SILYTGNTYYNP 398

SEQ ID Descrição Sequência NO: Y52L mAb2 – HVR-H2 – SIMYTGNTYYNP 399 Y52M mAb2 – HVR-H2 – SINYTGNTYYNP 400 Y52N mAb2 – HVR-H2 – SIPYTGNTYYNP 401 Y52P mAb2 – HVR-H2 – SIQYTGNTYYNP 402 Y52Q mAb2 – HVR-H2 – SIRYTGNTYYNP 403 Y52R mAb2 – HVR-H2 – SISYTGNTYYNP 404 Y52S mAb2 – HVR-H2 – SITYTGNTYYNP 405 Y52T mAb2 – HVR-H2 – SIWYTGNTYYNP 406 Y52W mAb2 – HVR-H2 – SIYATGNTYYNP 407 Y53A mAb2 – HVR-H2 – SIYDTGNTYYNP 408 Y53D mAb2 – HVR-H2 – SIYETGNTYYNP 409 Y53E mAb2 – HVR-H2 – SIYFTGNTYYNP 410 Y53F mAb2 – HVR-H2 – SIYGTGNTYYNP 411 Y53G mAb2 – HVR-H2 – SIYHTGNTYYNP 412 Y53H mAb2 – HVR-H2 – SIYKTGNTYYNP 413 Y53K mAb2 – HVR-H2 – SIYNTGNTYYNP 414 Y53N mAb2 – HVR-H2 – SIYPTGNTYYNP 415 Y53P

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb2 – HVR-H2 – SIYQTGNTYYNP 416 Y53Q mAb2 – HVR-H2 – SIYRTGNTYYNP 417 Y53R mAb2 – HVR-H2 – SIYSTGNTYYNP 418 Y53S mAb2 – HVR-H2 – SIYTTGNTYYNP 419 Y53T mAb2 – HVR-H2 – SIYWTGNTYYNP 420 Y53W mAb2 – HVR-H2 – SIYYDGNTYYNP 421 T54D mAb2 – HVR-H2 – SIYYEGNTYYNP 422 T54E mAb2 – HVR-H2 – SIYYKGNTYYNP 423 T54K mAb2 – HVR-H2 – SIYYNGNTYYNP 424 T54N mAb2 – HVR-H2 – SIYYPGNTYYNP 425 T54P mAb2 – HVR-H2 – SIYYQGNTYYNP 426 T54Q mAb2 – HVR-H2 – SIYYTQNTYYNP 427 G55Q mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGDTYYNP 428 N56D mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGETYYNP 429 N56E mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGGTYYNP 430 N56G mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGHTYYNP 431 N56H mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGITYYNP 432 N56I mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGKTYYNP 433

SEQ ID Descrição Sequência NO: N56K mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGMTYYNP 434 N56M mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGPTYYNP 435 N56P mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGRTYYNP 436 N56R mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGSTYYNP 437 N56S mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNAYYNP 438 T57A mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNEYYNP 439 T57E mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNFYYNP 440 T57F mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNGYYNP 441 T57G mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNHYYNP 442 T57H mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNKYYNP 443 T57K mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNPYYNP 444 T57P mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNQYYNP 445 T57Q mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNRYYNP 446 T57R mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNSYYNP 447 T57S mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNVYYNP 448 T57V mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNWYYNP 449 T57W mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNYYYNP 450 T57Y

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb2 – HVR-H2 - SIYYTGNTWYNP 451 Y58W mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNTYYAP 452 N60A mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNTYYDP 453 N60D mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNTYYEP 454 N60E mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNTYYKP 455 N60K mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNTYYLP 456 N60L mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNTYYMP 457 N60M mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNTYYPP 458 N60P mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNTYYQP 459 N60Q mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNTYYSP 460 N60S mAb2 – HVR-H2 – SIYYTGNTYYTP 461 N60T mAb2 – HVR-H3 - XXXXXGXXVPRXFDP 462 genérico X na posição 1 é A ou V; X na posição 2 é R, A, G, N, Q, ou T; X na posição 3 é V, A, F, I, K, L, M, Q, ou S; X na posição 4 é R, A, I, K, L, M, P, Q, S, T, ou V; X na posição 5 é Y, H, I, L, ou V; X na posição 7 é V, A, F, G, K, M, N, Q, R, S, T, W, ou Y; X na posição 8 é G, N, R, S, ou T; X na posição 12 é Y, F, H, I, L, M, Q, ou R. mAb2 – HVR-H3 – VRVRYGVGVPRYFDP 463 A93V mAb2 – HVR-H3 – AAVRYGVGVPRYFDP 464 R94A mAb2 – HVR-H3 – AGVRYGVGVPRYFDP 465 R94G mAb2 – HVR-H3 – ANVRYGVGVPRYFDP 466

SEQ ID Descrição Sequência NO: R94N mAb2 – HVR-H3 – AQVRYGVGVPRYFDP 467 R94Q mAb2 – HVR-H3 – ATVRYGVGVPRYFDP 468 R94T mAb2 – HVR-H3 – ARARYGVGVPRYFDP 469 V95A mAb2 – HVR-H3 – ARFRYGVGVPRYFDP 470 V95F mAb2 – HVR-H3 – ARIRYGVGVPRYFDP 471 V95I mAb2 – HVR-H3 – ARKRYGVGVPRYFDP 472 V95K mAb2 – HVR-H3 – ARLRYGVGVPRYFDP 473 V95L mAb2 – HVR-H3 – ARMRYGVGVPRYFDP 474 V95M mAb2 – HVR-H3 – ARQRYGVGVPRYFDP 475 V95Q mAb2 – HVR-H3 – ARSRYGVGVPRYFDP 476 V95S mAb2 – HVR-H3 – ARVAYGVGVPRYFDP 477 R96A mAb2 – HVR-H3 – ARVIYGVGVPRYFDP 478 R96I mAb2 – HVR-H3 – ARVKYGVGVPRYFDP 479 R96K mAb2 – HVR-H3 – ARVLYGVGVPRYFDP 480 R96L mAb2 – HVR-H3 – ARVMYGVGVPRYFDP 481 R96M mAb2 – HVR-H3 – ARVPYGVGVPRYFDP 482 R96P mAb2 – HVR-H3 – ARVQYGVGVPRYFDP 483 R96Q

SEQ ID Descrição Sequência NO: mAb2 – HVR-H3 – ARVSYGVGVPRYFDP 484 R96S mAb2 – HVR-H3 – ARVTYGVGVPRYFDP 485 R96T mAb2 – HVR-H3 – ARVVYGVGVPRYFDP 486 R96V mAb2 – HVR-H3 – ARVRHGVGVPRYFDP 487 Y97H mAb2 – HVR-H3 – ARVRIGVGVPRYFDP 488 Y97I mAb2 – HVR-H3 – ARVRLGVGVPRYFDP 489 Y97L mAb2 – HVR-H3 – ARVRVGVGVPRYFDP 490 Y97V mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGAGVPRYFDP 491 V99A mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGFGVPRYFDP 492 V99F mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGGGVPRYFDP 493 V99G mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGKGVPRYFDP 494 V99K mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGMGVPRYFDP 495 V99M mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGNGVPRYFDP 496 V99N mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGQGVPRYFDP 497 V99Q mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGRGVPRYFDP 498 V99R mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGSGVPRYFDP 499 V99S mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGTGVPRYFDP 500 V99T mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGWGVPRYFDP 501

SEQ ID Descrição Sequência NO: V99W mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGYGVPRYFDP 502 V99Y mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGVNVPRYFDP 503 G100N mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGVRVPRYFDP 504 G100R mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGVSVPRYFDP 505 G100S mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGVTVPRYFDP 506 G100T mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGVGVPRFFDP 507 Y100dF mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGVGVPRHFDP 508 Y100dH mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGVGVPRIFDP 509 Y100dI mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGVGVPRLFDP 510 Y100dL mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGVGVPRMFDP 511 Y100dM mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGVGVPRQFDP 512 Y100dQ mAb2 – HVR-H3 – ARVRYGVGVPRRFDP 513 Y100dR mAb6_2.7 - HC (SEQ ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNTYWGWIRQPPGKGLEWIG 581 ID NO:191) + K c-term SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb6_2.7 - HC (SEQ ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNTYWGWIRQPPGKGLEWIG 582 ID NO:191) + YTE SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY

SEQ ID Descrição Sequência NO:

ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYI TREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.7 - HC (SEQ ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNTYWGWIRQPPGKGLEWIG 583 ID NO:191) + YTE + K SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY c-term ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY

FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYI TREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb6_2.7 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNTYWGWIRQPPGKGLEWIG 584 (SEQ ID NO:192) + K SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY c-term ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb6_2.7 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNTYWGWIRQPPGKGLEWIG 585 (SEQ ID NO:192) + SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY

YTE ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYI TREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.7 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNTYWGWIRQPPGKGLEWIG 586 (SEQ ID NO:192) + SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY YTE + K c-term ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY

SEQ ID Descrição Sequência NO:

FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYI TREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb6_2.7 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNTYWGWIRQPPGKGLEWIG 587 (SEQ ID NO:193) + K SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY c-term ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY

VSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb6_2.7 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNTYWGWIRQPPGKGLEWIG 588 (SEQ ID NO:193) + SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY

YTE ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYI TREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

VSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb6_2.7 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITASNTYWGWIRQPPGKGLEWIG 589 (SEQ ID NO:193) + SIDYTGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGKYY YTE + K c-term ETYLGFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY

FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYI TREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

VSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb2 - HC (SEQ ID ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 617 NO:203) + K c-term SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG

VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI

SEQ ID Descrição Sequência NO:

CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb2 - HC (SEQ ID ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 618 NO:203) + YTE SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG

VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT YITRETPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2 - HC (SEQ ID ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 619 NO:203) + YTE + K c- SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG term VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK

DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT YITRETPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb2 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 620 (SEQ ID NO:204) + K SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG c-term VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK

DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb2 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 621 (SEQ ID NO:204) + SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG

YTE VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT

SEQ ID Descrição Sequência NO:

YITRETPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 622 (SEQ ID NO:204) + SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG YTE + K c-term VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK

DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT YITRETPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb2 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 623 (SEQ ID NO:205) + K SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG c-term VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK

DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb2 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 624 (SEQ ID NO:205) + SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG

YTE VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT YITRETPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 625 (SEQ ID NO:205) + SIYYTGNTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG YTE + K c-term VGVPRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK

DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT YITRETPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY

SEQ ID Descrição Sequência NO:

RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb2.10 - HC (SEQ ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 707 ID NO:233) + K c-term SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb2.10 - HC (SEQ ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 708 ID NO:233) + YTE SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG

VGVPRHFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT YITRETPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.10 - HC (SEQ ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 709 ID NO:233) + YTE + K SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG c-term VGVPRHFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb2.10 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 710 (SEQ ID NO:234) + K SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG c-term VGVPRHFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK

DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP

SEQ ID Descrição Sequência NO:

PSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb2.10 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 711 (SEQ ID NO:234) + SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG

YTE VGVPRHFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT YITRETPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.10 – HC (knob) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 712 (SEQ ID NO:234) + SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG YTE + K c-term VGVPRHFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb2.10 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 713 (SEQ ID NO:235) + K SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG c-term VGVPRHFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK mAb2.10 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 714 (SEQ ID NO:235) + SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG

YTE VGVPRHFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT YITRETPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

SEQ ID Descrição Sequência NO:

FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG mAb2.10 – HC (hole) ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDSSYYWGWIRQPPGKGLEWIG 715 (SEQ ID NO:235) + SIYYTGETYYAPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYG YTE + K c-term VGVPRHFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK

DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT YITRETPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

1. Afinidade de Ligação e Inibição da Sinalização Ccelular de Anticorpos Anti-IL-36

[0148] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-IL-36 fornecidos nesta invenção possuem uma constante de dissociação de equilíbrio (KD) para a ligação de citocinas humanas, hu-IL-36α, hu-IL- 36β e/ou hu-IL-36γ de < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM, < 0,1 nM, < 0,01 nM ou < 0,001 nM (por exemplo, 10-8 M ou menos, de 10-8 M a 10-13 M, por exemplo, de 10-9 M a 10-13 M). Mais especificamente, em algumas modalidades, os anticorpos anti-IL-36 da presente descrição se ligam a hu-IL-36α, hu-IL-36β e/ou hu-IL-36γ com uma afinidade de ligação de 1 x 10-8 M ou menos, 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos, ou 1 x 10-11 M ou menos. Em algumas modalidades, a afinidade de ligação é medida como a constante de dissociação de equilíbrio (KD) para a ligação aos construtos polipeptídicos hu-IL-36α, hu-IL-36β ou hu-IL-36γ da SEQ ID NO: 1, 2 e 3, respectivamente.

[0149] Geralmente, a afinidade de ligação de um ligante ao seu receptor pode ser determinada utilizando qualquer um de uma variedade de ensaios e expressa em termos de uma variedade de valores quantitativos. Os ensaios de ligação de IL-36 específicos úteis na determinação da afinidade dos anticorpos são divulgados nos Exemplos nesta invenção. Além disso, os ensaios de ligação ao antígeno são conhecidos na técnica e podem ser aqui utilizados incluindo, sem limitação, quaisquer ensaios de ligação direta ou competitiva utilizando técnicas tais como western blots, radioimunoensaios, ensaio imunoenzimático (ELISA), imunoensaios “sanduíche”, ensaio baseado em ressonância plasmônica de superfície (tal como o ensaio BIAcore conforme descrito na WO2005/012359), ensaios de imunoprecipitação, imunoensaios fluorescentes e imunoensaios de proteína A.

[0150] Em algumas modalidades, a afinidade de ligação é expressa como valores KD e reflete a afinidade de ligação intrínseca (por exemplo, com efeitos de avidez minimizados). Os anticorpos anti- IL-36 da presente descrição apresentam fortes afinidades de ligação para os construtos polipeptídicos hu-IL-36α, hu-IL-36β e/ou hu-IL-36γ da SEQ ID NO: 1, 2 e 3, respectivamente, por exemplo, apresentando valores de KD entre 10 nM e 1 pM.

[0151] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-IL-36 fornecidos nesta invenção diminuem, inibem e/ou bloqueiam totalmente a sinalização intracelular por vias mediadas por IL-36, especificamente, as vias de sinalização que são estimuladas pela ligação a IL-36R de IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ. A capacidade dos anticorpos de inibir essas vias de sinalização mediadas por IL-36 pode ser avaliada in vitro utilizando ensaios de bloqueio baseados em células conhecidos, incluindo os ensaios de células repórter HEK- BLUE™ e os ensaios de bloqueio baseados em células primárias descritos nos Exemplos da presente descrição. Em alguns casos, a expressão de IL-8 pode ser empregada como um indicador de sinalização através de uma via mediada por IL-36, incluindo, por exemplo, onde níveis reduzidos de IL-8 indicam bloqueio de uma ou mais vias mediadas por IL-36.

[0152] Em algumas modalidades, a capacidade do anticorpo de diminuir, inibir e/ou bloquear totalmente a sinalização estimulada por IL-36 é determinada como IC50 do anticorpo utilizando um ensaio de bloqueio baseado em células repórter com as citocinas de agonistas IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ em uma concentração ao redor da EC50. A EC50 de agonista geralmente só pode ser estimada antes do ensaio e é determinado após a conclusão do ensaio, utilizando a análise de regressão não linear dos dados. Em tais ensaios, um valor ao redor da EC50 tipicamente estará na faixa de EC40-45 a EC55-60.

[0153] Consequentemente, em algumas modalidades, os anticorpos IL-36 da presente descrição são caracterizados por uma ou mais das seguintes propriedades funcionais com base na capacidade de diminuir, inibir e/ou bloquear totalmente a sinalização intracelular através das vias mediadas por IL-36.

[0154] Em algumas modalidades do anticorpo anti-IL-36, o anticorpo diminui um sinal estimulado por (ou iniciado por) qualquer um de IL-36α, IL-36β ou IL-36γ, em pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 99% ou 100%. Em algumas modalidades, a diminuição do sinal pode ser medida utilizando um ensaio baseado em células. Uma pessoa de habilidade prática pode selecionar qualquer um dos ensaios baseados em células conhecidos para uso na determinação da inibição da sinalização celular de uma via estimulada por IL-36. Geralmente, os anticorpos anti-IL-36 da presente descrição diminuem o sinal intracelular mediado por IL-36 iniciado pela ligação de uma citocina de agonista IL-36α, IL-36β ou IL-36γ em uma concentração ao redor da EC50 (por exemplo, EC40 a EC60) com um valor de IC50 para o anticorpo de 10 nM ou menos, 5 nM ou menos, ou 1 nM.

[0155] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 diminui um sinal estimulado por IL-36 em pelo menos 95%, ou pelo menos 99%; opcionalmente, em que o sinal estimulado por IL-36 é estimulado por uma citocina de agonista selecionada de IL-36α, IL-36β e IL-36γ; opcionalmente, em que em uma concentração de citocina de agonista ao redor da EC50, o anticorpo possui uma IC50 de 10 nM ou menos, 5 nM ou menos ou 1 nM ou menos.

[0156] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 diminui um sinal intracelular iniciado por um ou mais da ligação do agonista IL- 36α, IL-36β e IL-36γ ao seu receptor cognato em pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 99% ou 100%.

[0157] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 inibe a liberação estimulada por IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ de IL-8 a partir de células de queratinócito humanas primárias e/ou células HaCAT; opcionalmente, em que em uma concentração de IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ ao redor da EC50, o anticorpo possui uma IC50 de 10 nM ou menos, 5 nM ou menos ou 1 nM ou menos.

2. Fragmentos de Anticorpo

[0158] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 da presente descrição pode ser um fragmento de anticorpo. Fragmentos de anticorpo úteis com os determinantes de ligação da presente descrição incluem, mas não são limitados a estes, fragmentos Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, anticorpos monovalentes de uma ramificação (ou de uma única ramificação), scFv e outros fragmentos aqui descritos e conhecidos na técnica. Para uma revisão de vários fragmentos de anticorpo, ver, por exemplo, Hudson et al. Nat. Med. 9: 129-134 (2003). Para uma revisão dos fragmentos scFv, ver, por exemplo, Pluckthun, em The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994); ver também WO93/16185; e Pat. U.S. Nos. 5.571.894 e 5.587.458. Para uma descrição dos fragmentos Fab e F(ab') 2 compreendendo resíduos de epítopo de ligação ao receptor de recuperação e tendo meia-vida in vivo aumentada, ver a Patente U.S.

No. 5.869.046. Outras formas de anticorpos monovalentes são descritas nas, por exemplo, WO2007/048037, WO2008/145137, WO2008/145138 e WO2007/059782. Anticorpos monovalentes de ramificação única são descritos, por exemplo, na WO2005/063816. Anticorpos bivalentes biespecíficos são fragmentos de anticorpos com dois sítios de ligação ao antígeno que podem ser bivalentes ou biespecíficos (ver, por exemplo, EP0404097; WO93/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9: 129-134 (2003); e Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)).

[0159] Em algumas modalidades, os fragmentos de anticorpo são anticorpos de domínio único que compreendem todo ou uma parte do domínio variável da cadeia pesada ou todo ou uma parte do domínio variável da cadeia leve de um anticorpo. Em algumas modalidades, um anticorpo de domínio único é um anticorpo de domínio único humano (Domantis, Inc., Waltham, MA; ver, por exemplo, a Pat. US No. 6.248.516).

[0160] Os fragmentos de anticorpos podem ser produzidos por várias técnicas, incluindo, mas não limitado a digestão proteolítica de um anticorpo intacto, assim como a produção por células hospedeiras recombinantes (por exemplo, E. coli ou fago), como aqui descrito.

[0161] Contempla-se que qualquer um dos anticorpos anti-IL-36 da presente descrição pode ser preparado como fragmentos de anticorpo utilizando os métodos e técnicas conhecidos na especialidade e/ou aqui descritos. Por exemplo, a preparação e análise de versões de Fab de vários anticorpos anti-IL-36 da presente descrição são descritas nos Exemplos abaixo.

3. Anticorpos Quiméricos e Humanizados

[0162] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 da presente descrição pode ser um anticorpo quimérico. (Ver, por exemplo, anticorpos quiméricos como descrito na Pat. U.S. No.

4.816.567; e Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). Em uma modalidade, um anticorpo quimérico compreende uma região variável não humana (por exemplo, uma região variável derivada de um camundongo, rato, hamster, coelho ou primata não humano tal como um macaco) e uma região constante humana. Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico é um anticorpo de “classe variável” em que a classe ou subclasse foi alterada daquela do anticorpo parental. Contempla-se que os anticorpos quiméricos podem incluir seus fragmentos de ligação ao antígeno.

[0163] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 da presente descrição é um anticorpo humanizado. Normalmente, um anticorpo não humano é humanizado para reduzir a imunogenicidade para seres humanos, enquanto retém a especificidade e afinidade do anticorpo não humano parental. Geralmente, um anticorpo humanizado compreende um ou mais domínios variáveis em que as HVRs, por exemplo, CDRs, (ou porções das mesmas), são derivadas de um anticorpo não humano, e FRs (ou porções das mesmas) são derivadas de sequências de anticorpos humanos. Um anticorpo humanizado opcionalmente também compreenderá pelo menos uma parte de uma região constante humana. Em algumas modalidades, alguns resíduos de FR em um anticorpo humanizado são substituídos por resíduos correspondentes de um anticorpo não humano (por exemplo, o anticorpo do qual os resíduos de CDR são derivados) para restaurar ou melhorar a especificidade ou afinidade do anticorpo.

[0164] Os anticorpos humanizados e os métodos para produzi-los são revisados, por exemplo, em Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13: 1619-1633 (2008), e são ainda descritos, por exemplo, em Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat Ί Acad. Sci. USA 86: 10029-10033 (1989); Pat. US Nos. 5.821.337,

7.527.791, 6.982.321 e 7.087.409; Kashmiri et al, Methods 36:25-34

(2005) (que descreve enxerto de SDR (a-HVR)); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) (que descreve o “ressurgimento”); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) (que descreve o "embaralhamento de FR"); e Osbourn et al., Methods 36:61 -68 (2005) e Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (descrevendo a abordagem de “seleção guiada” para embaralhamento de FR).

[0165] As regiões estruturais humanas que são úteis para humanização incluem, mas não são limitadas a estas: regiões estruturais selecionadas utilizando o método de “melhor ajuste” (ver, por exemplo, Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)); regiões estruturais derivadas da sequência de consenso de anticorpos humanos de um subgrupo particular de regiões variáveis de cadeia leve ou pesada (ver, por exemplo, Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); e Presta et al. J. Immunol, 151:2623 (1993)); regiões estruturais maduras humanas (mutadas somaticamente) ou regiões estruturais da linha germinativa humana (ver, por exemplo, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13: 1619-1633 (2008)); e regiões estruturais derivadas do rastreamento de bibliotecas de FR (ver, por exemplo, Baca et al., J. Biol. Chem. 272: 10678-10684 (1997) e Rosok et al., J. Biol. Chem. 271 :22611-22618 (1996)).

[0166] É contemplado que qualquer um dos anticorpos anti-IL-36 da presente descrição pode ser preparado como anticorpos humanizados utilizando os métodos e técnicas conhecidos na especialidade e/ou aqui descritos.

4. Anticorpos Humanos

[0167] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 da presente descrição pode ser um anticorpo humano. Os anticorpos humanos podem ser produzidos utilizando várias técnicas conhecidas na especialidade. Os anticorpos humanos são descritos de uma forma geral em van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74

(2001) e Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008). Os anticorpos humanos podem ser preparados pela administração de um imunógeno a um animal transgênico que foi modificado para produzir anticorpos humanos intactos ou anticorpos intactos com regiões variáveis humanas em resposta ao estímulo antigênico. Esses animais contêm tipicamente todos ou uma parte dos locais de imunoglobulina humana, que substituem os locais de imunoglobulina endógena, ou que estão presentes extracromossomicamente ou integrados aleatoriamente nos cromossomos do animal. Em tais camundongos transgênicos, os locais de imunoglobulina endógena foram geralmente inativados. Para uma revisão dos métodos de obtenção de anticorpos humanos de animais transgênicos, ver Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117- 1125 (2005). Ver também, por exemplo, a tecnologia XENOMOUSE™ na Pat. U.S. Nos. 6.075.181 e 6.150.584; tecnologia HUMAB® na Pat. U.S. No. 5.770.429; tecnologia K-M MOUSE® na Pat. U.S. No.

7.041.870; e tecnologia VELOCIMOUSE® na Pat. U.S. Appl. Pub. No. US 2007/0061900). As regiões variáveis humanas de anticorpos intactos gerados por tais animais podem ser ainda modificadas, por exemplo, através da combinação com uma região constante humana diferente.

[0168] Os anticorpos humanos também podem ser produzidos por métodos baseados em hibridoma. As linhagens celulares de mieloma humano e heteromieloma de camundongo-humano para a produção de anticorpos monoclonais humanos foram descritas. Ver, por exemplo, Kozbor J. Immunol, 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51- 63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); e Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991). Os anticorpos humanos gerados através da tecnologia de hibridoma de células B humanas também são descritos em Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006).

Métodos adicionais que descrevem a produção de anticorpos IgM humanos monoclonais a partir de linhagens celulares de hibridoma incluem aqueles descritos na, por exemplo, Pat. U.S. No. 7.189.826. A tecnologia de hibridoma humano (isto é, a técnica de trioma) é descrita em, por exemplo, Vollmers et al., Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) e Vollmers et al., and Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3): 185-91 (2005).

[0169] Os anticorpos humanos também podem ser gerados através do isolamento de sequências de domínio variável do clone Fv selecionadas de bibliotecas de exibição de fago derivadas de seres humanos. Essas sequências de domínio variável podem então ser combinadas com um domínio constante humano desejado. As técnicas para selecionar anticorpos humanos de bibliotecas de anticorpos são descritas abaixo.

[0170] Contempla-se que qualquer um dos anticorpos anti-IL-36 da presente descrição pode ser preparado como anticorpos humanos utilizando os métodos e técnicas conhecidos na especialidade e/ou aqui descritos, incluindo nos Exemplos.

5. Anticorpos Derivados de Biblioteca

[0171] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 da presente descrição pode ser isolado através do rastreamento de bibliotecas combinatórias para anticorpos com a atividade ou atividades desejadas. Por exemplo, um método pode ser utilizado para gerar uma biblioteca de exibição de fago e a biblioteca pode ser rastreada com relação aos anticorpos que possuem as características de ligação desejadas. O uso de exibição de fago para a preparação de variantes maturadas por afinidade da versão humanizada do anticorpo anti-IL-36 da presente descrição é descrito nos Exemplos aqui divulgados. Outros métodos para a produção de tais anticorpos derivados de biblioteca podem ser encontrados em, por exemplo,

Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001); McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, Methods in Molecular Biology 248: 161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); e Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 1 19-132(2004).

[0172] É contemplado que o rastreamento de biblioteca combinatória pode ser utilizado para gerar variantes dos anticorpos anti-IL-36 da presente descrição utilizando e/ou adaptando métodos e técnicas conhecidos na especialidade com aqueles aqui descritos. Por exemplo, o uso de geração de biblioteca de exibição de fago e rastreamento para preparar uma ampla faixa de variantes maturadas por afinidade dos anticorpos anti-IL-36 da presente descrição é descrito nos Exemplos.

6. Anticorpos Multiespecíficos

[0173] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 da presente descrição é um anticorpo multiespecífico, por exemplo, um anticorpo triespecífico ou biespecífico. Em algumas modalidades, o anticorpo multiespecífico é um anticorpo monoclonal tendo pelo menos dois sítios de ligação diferentes, cada um com uma especificidade de ligação para um antígeno diferente, pelo menos um dos quais se liga especificamente a IL-36. Geralmente, é contemplado que as especificidades de ligação de qualquer um dos anticorpos anti-IL-36 aqui divulgados podem ser incorporadas em um anticorpo multiespecífico útil para o tratamento de uma doença mediada por IL-

36. Por exemplo, em algumas modalidades, pelo menos um do sítio de ligação de anticorpo multiespecífico se liga especificamente a IL-36

(por exemplo, IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ) e outro sítio de ligação do anticorpo multiespecífico se liga a um antígeno diferente relacionado ao tratamento de uma doença mediada por IL-36.

[0174] Em algumas modalidades, conforme descrito em outra parte nesta invenção, um anticorpo multiespecífico é contemplado que se liga a cada uma de IL-36α, IL-36β e IL-36γ humanas com uma alta afinidade de ligação (por exemplo, 3 nM ou menos). Essas afinidades de ligação podem ser medidas como a constante de dissociação de equilíbrio (KD) para um hu-IL-36α da SEQ ID NO: 1, um hu-IL-36β da SEQ ID NO: 2 e um hu-IL-36γ da SEQ ID NO: 3. Contempla-se ainda que, em algumas modalidades, o anticorpo multiespecífico pode compreender uma especificidade para IL-36α e/ou IL-36γ em uma ramificação e uma especificidade para IL-36β em outra ramificação.

[0175] As técnicas para a produção de anticorpos multiespecíficos incluem, mas não são limitadas a estas, coexpressão recombinante de dois pares de cadeia pesada-cadeia leve de imunoglobulina com especificidades diferentes (ver, por exemplo, Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983), WO 93/08829, e Traunecker et al., EMBOJ. 10: 3655 (1991)). A engenharia “Knob-in-hole” também pode ser utilizada (ver, por exemplo, a Patente U.S. No. 5.731.168).

[0176] Os anticorpos multiespecíficos também podem ser produzidos por engenharia de efeitos de “direção eletrostática” que favorecem a formação de moléculas de anticorpo Fc-heterodiméricas em vez de homodímeros (WO 2009/089004A1); reticulação de dois ou mais anticorpos ou fragmentos (ver, por exemplo, a Patente US

4.676.980 e Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)); utilizando zíperes de leucina para produzir anticorpos biespecíficos (ver, por exemplo, Kostelny et al., J. Immunol, 148 (5): 1547-1553 (1992)); utilizando a tecnologia de “anticorpo bivalente biespecífico” para produzir fragmentos de anticorpos biespecíficos (ver, por exemplo,

Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)); utilizando dímeros Fv de cadeia simples (scFv) (ver, por exemplo, Gruber et al., J. Immunol, 152:5368 (1994)); ou anticorpos triespecíficos (ver por exemplo, Tutt et al., J. Immunol. 147: 60 (1991).

[0177] Contempla-se que qualquer um dos anticorpos anti-IL-36 da presente descrição pode ser preparado como anticorpos multiespecíficos utilizando os métodos e técnicas conhecidas na especialidade e/ou aqui descritos.

[0178] Em algumas modalidades da presente descrição, um anticorpo IL-36 multiespecífico é contemplado que compreende especificidades de ligação separadas para uma ou mais das citocinas IL-36 distintas, IL-36α, IL-36β e IL-36γ. Por exemplo, o anticorpo multiespecífico pode se ligar a IL-36α, IL-36β e IL-36γ com uma afinidade de 3 nM ou menos e/ou diminuir um sinal intracelular estimulado por IL-36α, IL-36β e IL- 36γ em pelo menos 90%, e/ou possui uma IC50 de 10 nM ou menos em uma concentração de IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ ao redor da EC50. Conforme descrito em outra parte nesta descrição, os anticorpos IL-36 humanos foram isolados tendo alta afinidade para IL-36α e IL-36γ, mas menor afinidade para IL-36β, e outros foram isolados tendo alta afinidade para IL-36β, mas menor afinidade para IL-36α e IL-36γ. Essas especificidades para essas diferentes citocinas IL-36 humanas foram amadurecidas por afinidade e combinadas em um único anticorpo multiespecífico para IL-36. Consequentemente, em algumas modalidades, a presente descrição fornece um anticorpo anti-IL-36 multiespecífico com uma especificidade alvo e alta afinidade (por exemplo, 1 nM ou menos) para IL-36α/IL-36γ em uma ramificação e uma especificidade alvo e alta afinidade (por exemplo, 1 nM ou menos) para IL-36β na outra ramificação. A preparação e utilização de tal anticorpo anti-IL-36 multiespecífico são detalhadas nos Exemplos.

7. Variantes de Anticorpos

[0179] Em algumas modalidades, as variantes do anticorpo anti-IL- 36 da presente descrição também são contempladas. Por exemplo, anticorpos com afinidade de ligação melhorada e/ou outras propriedades biológicas do anticorpo podem ser preparados pela introdução de modificações apropriadas na sequência de nucleotídeo que codifica o anticorpo, ou por síntese de peptídeo. Essas modificações incluem, por exemplo, deleções e/ou inserções e/ou substituições de resíduos nas sequências de aminoácido do anticorpo. Qualquer combinação de deleção, inserção e substituição pode ser feita para chegar ao construto final, contanto que o construto final possua a característica desejada de ligação ao antígeno IL-36. É contemplado que uma ampla faixa de variantes dos anticorpos anti-IL- 36 da presente descrição pode ser preparada utilizando os métodos e técnicas conhecidos na especialidade e/ou aqui descritos, incluindo, mas não limitado a: (i) variantes de substituição, inserção e/ou deleção de aminoácido; (ii) variantes de glicosilação; (iii) variantes da região Fc; (iv) variantes projetadas com cisteína; e (v) variantes derivatizadas.

[0180] Os exemplos, a Tabela 2 e a listagem de sequências da presente descrição fornecem um grande número de variantes exemplares de dois anticorpos anti-IL-36 específicos, “mAb2” e “mAb6_2”. As variantes exemplificadas compreendem um ou mais dos seguintes: uma faixa de substituições de aminoácidos simples, duplas, triplas em HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 que aumentam a afinidade específica para IL-36α/γ ou IL-36β, e/ou atividades de bloqueio baseadas em células relacionadas à sinalização mediada por IL-36; uma variante da região Fc que confere função não efetora (por exemplo, N297G); e substituições de cadeia pesada resultando em estruturas de “knob” e “hole” que permitem a formação de anticorpos multiespecíficos. Por exemplo, as sequências de anticorpos de cadeia pesada divulgadas na Tabela 2 podem ainda incluir uma lisina carbóxi- terminal (isto é, “Lys C-terminal” ou “K C-terminal”), mutações YTE nas posições 252, 254 e 256 (isto é, M252Y/S254T/T256E), ou ambas as mutações K C-terminal e YTE. Tais variantes das sequências de cadeia pesada da SEQ ID NOs: 170-241, 243-245, 248-250 são fornecidas na Tabela 2 (e a Listagem de Sequências anexas) como SEQ ID NO: 518-751. A. Variantes de Substituição, Inserção e Deleção

[0181] Em algumas modalidades, variantes de anticorpo anti-IL-36 tendo uma ou mais substituições de aminoácido além daquelas aqui descritas são fornecidas. Os sítios para mutagênese podem incluir as HVRs e as FRs. Substituições e/ou substituições “conservativas” típicas de aminoácidos com base na classe ou propriedades de cadeia lateral comuns são bem conhecidas na técnica e podem ser utilizadas nas modalidades da presente descrição. A presente descrição também contempla variantes com base em substituições de aminoácido não conservadoras nas quais um membro de uma classe de cadeia lateral de aminoácido é trocado por um aminoácido de outra classe.

[0182] As cadeias laterais de aminoácido são tipicamente agrupadas de acordo com as seguintes classes ou propriedades comuns: (1) hidrofóbicas: Met, Ala, Val, Leu, Ile, Norleucina; (2) hidrófilas neutras: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) acídicas: Asp, Glu; (4) básicas: His, Lys, Arg; (5) influência da orientação da cadeia: Gly, Pro; e (6) aromáticas: Trp, Tyr, Phe.

[0183] As técnicas são bem conhecidas na especialidade para substituição de aminoácidos em um anticorpo e subsequente rastreamento para a função desejada, por exemplo, ligação de antígeno retida/melhorada, imunogenicidade diminuída ou ADCC ou CDC melhorada.

[0184] As variantes de substituição de aminoácido podem incluir a substituição de um ou mais resíduos da região hipervariável de um anticorpo parental (por exemplo, um anticorpo humanizado ou humano). Geralmente, as variantes resultantes selecionadas para outro estudo terão modificações em certas propriedades biológicas (por exemplo, afinidade aumentada, imunogenicidade reduzida) em relação ao anticorpo parental e/ou terão retido substancialmente certas propriedades biológicas do anticorpo parental. Uma variante de substituição exemplar é um anticorpo maturado por afinidade, que pode ser convenientemente gerado, por exemplo, utilizando técnicas de maturação por afinidade baseadas na exibição de fago, tais como aquelas descritas nos Exemplos nesta invenção. Resumidamente, um ou mais resíduos de HVR são mutados e os anticorpos variantes exibidos no fago e rastreados com relação a uma atividade biológica particular (por exemplo, afinidade de ligação).

[0185] Um método útil para identificar resíduos ou regiões de um anticorpo que pode ser direcionado para mutagênese é “mutagênese de varredura de alanina” (ver. por exemplo, Cunningham and Wells (1989) Science, 244: 1081-1085). Neste método, um resíduo ou grupo de resíduos alvo (por exemplo, resíduos carregados tais como Arg, Asp, His, Lys e Glu) é identificado e substituído por um aminoácido neutro ou carregado negativamente (por exemplo, Ala ou polialanina) para determinar se a interação do anticorpo com o antígeno é afetada. Outras substituições podem ser introduzidas nos locais de aminoácidos demonstrando sensibilidade funcional às substituições iniciais. Alternativamente, ou adicional, uma estrutura cristalina de um complexo antígeno-anticorpo para identificar pontos de contato entre o anticorpo e o antígeno pode ser determinada. Esses resíduos de contato e resíduos adjancentes podem ser direcionados ou eliminados como candidatos para substituição. As variantes podem ser rastreadas para determinar se contêm as propriedades desejadas.

[0186] As inserções de sequência de aminoácido incluem fusões amino- e/ou carbóxi-terminal que variam no comprimento a partir de um resíduo até polipeptídeos contendo cem ou mais resíduos, assim como inserções intrassequência de resíduos de aminoácido únicos ou múltiplos. Exemplos de inserções terminais incluem um anticorpo com um resíduo de metionila N-terminal. Outras variantes de inserção da molécula de anticorpo incluem a fusão ao N- ou C-terminal do anticorpo a uma enzima ou polipeptídeo que aumenta a meia-vida sérica do anticorpo.

[0187] As substituições podem ser feitas em HVRs para melhorar a afinidade do anticorpo. Essas alterações podem ser feitas em “pontos de acesso”, isto é, resíduos codificados por códons que sofrem mutação em alta frequência durante o processo de maturação somática (ver, por exemplo, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207: 179- 196 (2008)) com a variante resultante VH ou VL sendo testada quanto à afinidade de ligação. Em uma modalidade, a maturação de afinidade pode ser realizada através da construção e resseleção de bibliotecas secundárias (ver, por exemplo, em Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O'Brien et al., Ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)). Outro método para introduzir diversidade envolve abordagens direcionadas a HVR, nas quais vários resíduos de HVR (por exemplo, 4 a 6 resíduos de cada vez) são randomizados. Os resíduos de HVR envolvidos na ligação ao antígeno podem ser especificamente identificados, por exemplo, utilizando mutagênese de varredura de alanina ou modelagem. CDR-H3 e CDR-L3 em particular são frequentemente direcionadas.

[0188] Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções podem ocorrer dentro de uma ou mais HVRs, contanto que tais alterações não reduzam substancialmente a capacidade do anticorpo de se ligar ao antígeno. Por exemplo, alterações conservativas (por exemplo, substituições conservativas conforme fornecidas nesta invenção) que não reduzem substancialmente a afinidade de ligação podem ser preparadas em HVRs. Essas alterações podem estar fora dos “pontos de acesso” de HVR. Em algumas modalidades das sequências variantes de VH e VL fornecidas acima, cada HVR é inalterada ou contém não mais do que uma, duas ou três substituições de aminoácido. B. Variantes de Glicosilação

[0189] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 da presente descrição é alterado para aumentar ou diminuir a extensão em que o anticorpo é glicosilado. A adição ou deleção de sítios de glicosilação a um anticorpo pode ser realizada através da alteração da sequência de aminoácido de modo que um ou mais sítios de glicosilação sejam criados ou removidos.

[0190] Nas modalidades em que o anticorpo compreende uma região Fc, o carboidrato ligado à região Fc pode ser alterado. Tipicamente, os anticorpos nativos produzidos por células de mamífero compreendem um oligossacarídeo biantenário ramificado ligado por uma ligação N a Asn297 do domínio CH2 da região Fc (ver, por exemplo, Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)). O oligossacarídeo pode incluir vários carboidratos tais como manose, N-acetil glucosamina (GlcNAc), galactose e ácido siálico, assim como, uma fucose ligada a um GlcNAc na “haste” da estrutura do oligossacarídeo biantenário. Em algumas modalidades, as modificações do oligossacarídeo de uma região Fc de um anticorpo podem criar uma variante com certas propriedades melhoradas.

[0191] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 da presente descrição pode ser uma variante de um anticorpo parental, em que a variante compreende uma estrutura de carboidrato que carece de fucose ligada (direta ou indiretamente) a uma região Fc. Por exemplo, a quantidade de fucose em tal anticorpo pode ser de cerca de 1% a cerca de 80%, de cerca de 1% a cerca de 65%, de cerca de 5% a cerca de 65% ou de cerca de 20% a cerca de 40%. A quantidade de fucose pode ser determinada através do cálculo da quantidade média de fucose dentro da cadeia de açúcar em Asn297, em relação à soma de todas as glicoestruturas anexadas a Asn 297 (por exemplo, estruturas complexas, híbridas e de alta manose) conforme medido por espectrometria de massa MALDI-TOF (ver, por exemplo, WO 2008/077546). Asn297 refere-se ao resíduo de asparagina localizado ao redor da posição 297 na região Fc (numeração Eu dos resíduos da região Fc); no entanto, Asn297 também pode estar localizado a cerca de ± 3 aminoácidos a montante ou a jusante da posição 297, isto é, entre as posições 294 e 300, devido a pequenas variações de sequência nos anticorpos.

[0192] Em algumas modalidades, as variantes de fucosilação podem ter função de ADCC melhorada. Ver, por exemplo, Publicação de Patente US Nos. US 2003/0157108 ou US 2004/0093621. Exemplos de anticorpos “desfucosilados” ou “deficientes em fucose” e métodos associados para prepará-los são divulgados nas, por exemplo, US2003/0157108; US2003/0115614; US2002/0164328; US2004/0093621; US2004/0132140; US2004/0110704; US2004/0110282; US2004/0109865; WO2000/61739; WO2001/29246; WO2003/085119; WO2003/084570; WO2005/035586; WO2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336: 1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004).

[0193] As linhagens celulares úteis para a produção de anticorpos desfucosilados incluem células Led 3 CHO deficientes em fucosilação de proteínas (ver, por exemplo, Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); US2003/0157108 e WO2004/056312), e linhagens celulares inativadas, tais como o gene alfa-1,6- fucosiltransferase, FUT8, células CHO inativadas (ver, por exemplo, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); e WO2003/085107). C. Variantes da Região Fc

[0194] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-IL-36 da presente descrição pode compreender uma ou mais modificações de aminoácido na região Fc (isto é, uma variante da região Fc). A variante da região Fc pode compreender uma sequência da região Fc humana (por exemplo, uma região Fc de IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4 humana) compreendendo uma substituição de aminoácido em uma ou mais posições de resíduo de aminoácido. Uma ampla faixa de variantes da região Fc conhecidas na técnica que são úteis com os anticorpos anti- IL-36 da presente descrição é descrita abaixo.

[0195] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 é uma variante da região Fc que possui função efetora alterada. Em algumas modalidades, o anticorpo com função efetora alterada possui algumas (mas não todas) das funções efetoras, função efetora diminuída ou nenhuma das funções efetoras (por exemplo, não efetora) do anticorpo parental. As variantes da região Fc não efetoras são mais desejáveis para certas aplicações onde a função efetora (tal como ADCC) é desnecessária ou deletéria e/ou a meia-vida in vivo do anticorpo é importante.

[0196] Os anticorpos variantes da região Fc com função efetora reduzida, ou que não são efetoras, podem incluir uma substituição de aminoácido em uma ou mais das seguintes posições da região Fc: 238, 265, 269, 270, 297, 327 e 329 (ver, por exemplo, a Patente U.S. No. 6.737.056). Essas variantes da região Fc podem incluir substituições de aminoácido em duas ou mais das posições 265, 269, 270, 297 e 327. Essas variantes da região Fc também podem incluir substituições de ambos os resíduos 265 e 297 por alanina (ver, por exemplo, a Pat. U.S. No. 7.332.581). Conforme divulgado nos Exemplos e em outras partes nesta invenção, em algumas modalidades, os anticorpos anti-IL-36 da presente descrição são variantes da região Fc não efetoras. Em algumas modalidades, as variantes da região Fc não efetoras dos anticorpos anti-IL-36 compreendem a substituição de aminoácido N297G.

[0197] As variantes da região Fc tendo ligação melhorada ou diminuída a FcRs são divulgadas, por exemplo, nas Pat. U.S. Nos.

6.737.056; WO 2004/056312; e Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001). As variantes da região Fc tendo ADCC melhorada podem compreender uma ou mais substituições de aminoácido, por exemplo, nas posições 298, 333 e/ou 334 da região Fc (com base na numeração da EU). Variantes da região Fc com ligação de Clq alterada (isto é, melhorada ou diminuída) e/ou citotoxicidade dependente do complemento (CDC), como descrito na, por exemplo, Patente U.S. No. 6.194.551, WO99/51642 e Idusogie et al., J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000). Variantes da região Fc com meia- vida aumentada e ligação melhorada ao receptor Fc neonatal (FcRn) são divulgadas em, por exemplo, US2005/0014934A1 (Hinton et al.). Tais variantes da região Fc compreendem substituições de aminoácido em uma ou mais das posições: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 e 434. Outras variantes da região Fc com meia-vida aumentada incluem o conjunto de mutações YTE nas posições 252, 254 e 256 (isto é, M252Y/S254T/T256E) descritas, por exemplo, na US 7658921B2 (Dall'Acqua et al.). Outros exemplos de variantes da região Fc podem ser encontrados, por exemplo, nas Pat. U.S. Nos. 5.648.260 e

5.624.821; e WO94/29351.

[0198] Geralmente, os ensaios de citotoxicidade in vitro e/ou in vivo podem ser realizados para confirmar a redução/depleção das atividades de CDC e/ou ADCC em uma variante da região Fc.

Por exemplo, os ensaios de ligação ao receptor Fc (FcR) podem ser conduzidos para garantir que o anticorpo não tenha ligação a FcγR (portanto, provavelmente não tenha atividade de ADCC), mas retém a capacidade de ligação a FcRn.

As células primárias para mediar a ADCC, as células NK expressam apenas FcγRIII, enquanto que os monócitos expressam FcγRI, FcγRII e FcγRIII.

Exemplos não limitativos de ensaios in vitro para avaliar a atividade de ADCC de uma molécula de interesse são descritos na Pat.

U.S.

No. 5.500.362 (ver, por exemplo, Hellstrom, et al., Proc.

Nat 'l Acad.

Sci.

USA 83:7059- 7063 (1986)) e Hellstrom, et al., Proc.

Nat'l Acad.

Sci.

USA 82: 1499- 1502 (1985); 5.821.337 (ver Bruggemann, M. et al., J.

Exp.

Med. 166: 1351-1361 (1987)). Alternativamente, métodos de ensaio não radioativos podem ser empregados (ver, por exemplo, ensaio de citotoxicidade não radioativo ACTI™ para citometria de fluxo (CellTechnology, Inc.

Mountain View, CA; e ensaio de citotoxicidade não radioativo CytoTox96® (Promega, Madison, WI). Células efetoras úteis para tais ensaios incluem células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e células exterminadoras naturais (NK). Alternativamente, ou adicional, a atividade de ADCC da molécula de interesse pode ser avaliada in vivo, por exemplo, em um modelo animal tal como aquele divulgado em Clynes et al.

Proc.

Nat'l Acad.

Sci.

USA 95:652-656 (1998). Os ensaios de ligação de Clq também podem ser realizados para confirmar que o anticorpo é incapaz de se ligar a Clq e, portanto, carece de atividade de CDC.

Ver, por exemplo, ELISA de ligação de Clq e C3c nas WO2006/029879 e WO2005/100402. Para avaliar a ativação do complemento, um ensaio de CDC pode ser executado (ver, por exemplo, Gazzano-Santoro et al., J.

Immunol.

Methods 202: 163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood

101 : 1045-1052 (2003); e Cragg, M.S. and M.J. Glennie, SW 103:2738-2743 (2004)). A ligação de FcRn e as determinações de depuração/meia-vida in vivo podem ser executadas utilizando métodos conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Petkova, et al., Intl. Immunol. 18(12): 1759-1769 (2006)).

[0199] É contemplado que uma ampla faixa de variantes da região Fc dos anticorpos anti-IL-36 da presente descrição pode ser preparada utilizando os métodos e técnicas conhecidas na especialidade e/ou aqui descritos. Por exemplo, a variante da região Fc preparada com a substituição de aminoácido N297G confere função não efetora aos anticorpos anti-IL-36 com retenção da atividade de bloqueio baseada em células conforme descrito nos Exemplos 2, 3 e 8. D. Variantes Projetadas com Cisteína

[0200] Em algumas modalidades, contempla-se que o anticorpo anti-IL-36 aqui descrito pode ser substituído nas posições não CDR específicas com resíduos de cisteína de modo a criar grupos tiol reativos. Esses “thioMAbs” projetados podem ser utilizados para conjugar o anticorpo, por exemplo, em porções de fármaco ou porções de ligante-fármaco e, assim, criar imunoconjugados, conforme descrito em outra parte nesta invenção. Os anticorpos projetados com cisteína podem ser gerados conforme descrito na, por exemplo, Patente U.S. No. 7.521.541. Em algumas modalidades, qualquer um ou mais dos seguintes resíduos de anticorpo podem ser substituídos por cisteína: V205 (numeração de Kabat) da cadeia leve; A118 (numeração EU) da cadeia pesada; e S400 (numeração EU) da região Fc de cadeia pesada. E. Variantes Derivatizadas

[0201] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 da presente descrição pode ser ainda modificado (isto é, derivatizado) com componentes não protéicos. Os componentes não protéicos adequados para derivatização do anticorpo incluem, mas não são limitados a estes, polímeros solúveis em água, tais como: polietileno glicol (PEG), copolímeros de etileno glicol e propileno glicol, carbóxi metilcelulose, dextrano, álcool polivinílico, polivinilpirrolidona, poli-1,3- dioxolano, poli-1,3,6-trioxano, copolímero de etileno/anidrido maleico, homopolímeros de poli-aminoácido ou copolímeros aleatórios e dextrano ou poli(n-vinil pirrolidona)polietileno glicol, homopolímeros de propropileno glicol, copolímeros de óxido de polipropileno/óxido de etileno, polióis polioxietilados (por exemplo, glicerol), álcool polivinílico, e misturas dos mesmos. Em algumas modalidades, a modificação do anticorpo pode ser realizada utilizando propionaldeído de metóxi- polietileno glicol. Os polímeros podem ser de qualquer peso molecular e podem ser ramificados ou não ramificados. O número de polímeros ligados ao anticorpo pode variar e, se mais de um polímero estiverem ligados, eles podem ser moléculas iguais ou diferentes. Em geral, o número e/ou tipo de polímeros utilizado para derivatização pode ser determinado com base em considerações, incluindo, mas não limitado às propriedades ou funções particulares do anticorpo, por exemplo, se o derivado de anticorpo será utilizado em uma terapia sob condições definidas.

8. Imunoconjugados

[0202] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 da presente descrição também pode ser um imunoconjugado, em que o imunoconjugado compreende um anticorpo anti-IL-36 conjugado a um ou mais agentes citotóxicos. Os agentes citotóxicos adequados contemplados pela presente descrição incluem agentes quimioterapêuticos, fármacos, agentes inibidores do crescimento, toxinas (por exemplo, toxinas de proteínas, toxinas enzimaticamente ativas de origem bacteriana, fúngica, vegetal ou animal, ou seus fragmentos) ou isótopos radioativos.

[0203] Em algumas modalidades, o imunoconjugado é um conjugado de anticorpo-fármaco (ADC) em que um anticorpo anti-IL- 36, conforme descrito nesta descrição, é conjugado a um ou mais fármacos.

[0204] Em algumas modalidades, um imunoconjugado da presente descrição compreende um anticorpo anti-IL-36 conforme descrito nesta invenção, conjugado a uma fármaco ou agente terapêutico para o tratamento de uma doença ou condição mediada por IL-36.

[0205] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-IL-36 como aqui descrito pode ser conjugado a uma toxina enzimaticamente ativa ou um fragmento da mesma, incluindo, mas não limitado a cadeia A da difteria, fragmentos ativos não ligados da toxina da difteria, cadeia A de exotoxina (de Pseudomonas aeruginosa), cadeia A de ricina, cadeia A de abrina, cadeia A de modeccina, alfassarcina, proteínas de Aleurites fordii, proteínas dianthin, proteínas de Phytolaca americana, inibidor de Momordica charantia, curcina, crotina, inibidor de Sapaonaria officinalis, gelonina, mitogelina, restrocina, fenomicina, enomicina e os tricotecenos.

[0206] Em algumas modalidades, um imunoconjugado da presente descrição compreende um anticorpo anti-IL-36 conforme descrito nesta invenção, conjugado a um isótopo radioativo (isto é, um radioconjugado). Uma variedade de isótopos radioativos está disponível para a produção de tais radioconjugados. Os exemplos 211 131 125 90 186 188 153 212 32 212 incluem At, I, I, Y, Re, Re, Sm, Bi, P, Pb, e isótopos radioativos de Lu. Em algumas modalidades, o imunoconjugado pode compreender um radioisótopo para detecção cintilográfica ou um rótulo de spin para detecção de NMR ou MRI. 123 Radioisótopos ou rótulos de spin adequados podem incluir, como I, 131 I, 111In, 13C, 19F, 15N, 17O, vários isótopos de Gd, Mn e Fe.

[0207] Os imunoconjugados de um anticorpo anti-IL-36 e um agente citotóxico podem ser produzidos utilizando uma variedade de reagentes bifuncionais bem conhecidos e produtos químicos adequados para conjugar às proteínas. Esses reagentes incluem, mas não são limitados a estes: N-succinimidil-3-(2-piridilditio)propionato (SPDP), succinimidil-4-(N-maleimidometil)cicloexano-1-carboxilato (SMCC), iminotiolano (IT), derivados bifuncionais de imidoésteres (por exemplo, adipimidato de dimetila HQ), ésteres ativos (por exemplo, suberato de dissuccinimidila), aldeídos (por exemplo, glutaraldeído), compostos de bis-azido (por exemplo, bis-(p-azidobenzoil)- hexanodiamina), derivados de bis-diazônio (por exemplo, bis-(p- diazôniobenzoil)-etilenodiamina), diisocianatos (por exemplo, tolueno- 2,6-diisocianato) e compostos de flúor bis-ativos (por exemplo, 1,5- difluoro-2,4-dinitrobenzeno).

[0208] Os reagentes para a preparação de imunoconjugados da presente descrição também podem incluir reagentes de “reticulação” comercialmente disponíveis, tais como: BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SIAB, sulfo- SMCC e sulfo-SMPB, e SVSB (succinimidil-(4-vinilsulfona)benzoato) (ver, por exemplo, Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.A).

9. Anticorpos Sintéticos

[0209] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 da presente descrição pode ser um anticorpo sintético compreendendo um conjunto de CDRs de uma imunoglobulina anti-IL-36 (por exemplo, CDR-L1, etc.) enxertada em uma matriz ou estrutura diferente de uma matriz ou estrutura de imunoglobulina, tal como uma matriz de proteína alternativa ou uma matriz de polímero artificial.

[0210] As matrizes de proteína alternativas exemplares contempladas para a preparação de anticorpos sintéticos da presente descrição podem incluir, mas não são limitadas a estas: fibronectina,

neocarzinostatina CBM4-2, lipocalinas, receptor de células T, domínio de proteína A (proteína Z), Im9, proteínas TPR, domínios de dedo de zinco, pVIII, polipeptídeo pancreático aviário, GCN4, domínio WW, domínio de homologia Src, domínio 3, domínios PDZ, TEM-1 beta- lactamase, tioredoxina, nuclease estafilocócica, domínios de dedo de PHD, CL-2, BPTI, APPI, HPSTI, ecotina, LACI-D1, LDTI, MTI-II, toxinas de escorpião, peptídeo defensina-A de inseto, EETI-II, Min-23, CBD, PBP, citocromo b-562, domínios do receptor Ldl, gama-cristalina, ubiquitina, transferrina e/ou domínios semelhantes a lectina do tipo C.

[0211] Matrizes de polímero artificial (não proteína) exemplares úteis para anticorpos sintéticos são descritas em, por exemplo, Fiedler et al., (2014) “Non-Antibody Scaffolds as Alternative Therapeutic Agents,” in Handbook of Therapeutic Antibodies (eds. S. Dubel and J. M. Reichert), Wiley-VCH Verlag GmbH & Co.; Gebauer et al., Curr. Opin. Chem. Biol., 13:245-255 (2009); Binz et al, Nat. Biotech., 23(10): 1257-1268 (2005). IV. Métodos e Composições Recombinantes

[0212] O anticorpo anti-IL-36 da presente descrição pode ser produzido utilizando métodos e materiais recombinantes bem conhecidos na técnica de produção de anticorpos. Em algumas modalidades, a presente descrição fornece um ácido nucleico isolado que codifica um anticorpo anti-IL-36. O ácido nucleico pode codificar uma sequência de aminoácido compreendendo a VL e/ou uma sequência de aminoácido compreendendo a VH do anticorpo (por exemplo, as cadeias leves e/ou pesadas do anticorpo). Em algumas modalidades, um ou mais vetores (por exemplo, vetores de expressão) compreendendo sequências de ácido nucleico que codificam um anticorpo anti-IL-36 da presente descrição são fornecidos. Em algumas modalidades, é fornecida uma célula hospedeira que compreende sequências de ácido nucleico que codificam um anticorpo anti-IL-36 da presente descrição. Em uma modalidade, a célula hospedeira foi transformada com um vetor que compreende um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácido que compreende a VL do anticorpo e uma sequência de aminoácido que compreende a VH do anticorpo. Em outra modalidade, a célula hospedeira foi transformada com um primeiro vetor compreendendo um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácido que compreende a VL do anticorpo e um segundo vetor compreendendo um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácido que compreende a VH do anticorpo.

[0213] Em algumas modalidades dos métodos recombinantes, a célula hospedeira utilizada é uma célula eucariótica, tal como uma célula de ovário de hamster chinês (CHO), ou uma célula linfoide (por exemplo, Y0, NS0, Sp20). Em uma modalidade, um método de produção de um anticorpo anti-IL-36 é fornecido, em que o método compreende o cultivo de uma célula hospedeira compreendendo um ácido nucleico que codifica o anticorpo, conforme fornecido acima, sob condições adequadas para a expressão do anticorpo e, opcionalmente, recuperação do anticorpo da célula hospedeira (ou meio de cultura da célula hospedeira).

[0214] Resumidamente, a produção recombinante de um anticorpo anti-IL-36 é realizada através do isolamento de um ácido nucleico que codifica um anticorpo (por exemplo, conforme descrito nesta invenção) e inserção deste ácido nucleico em um ou mais vetores para posterior clonagem e/ou expressão em uma célula hospedeira. Esses ácidos nucleicos são facilmente isolados e sequenciados utilizando procedimentos convencionais bem conhecidos na técnica (por exemplo, através do uso de sondas de oligonucleotídeo que são capazes de se ligar especificamente a genes que codificam as cadeias pesadas e leves do anticorpo desejado). Células hospedeiras e métodos de cultivo adequados para clonar ou expressar os vetores que codificam o anticorpo são bem conhecidos na técnica e incluem células procarióticas ou eucarióticas. Normalmente, após a expressão, o anticorpo pode ser isolado da pasta de células em uma fração solúvel e ainda purificado. Além de procariotos, micróbios eucarióticos tais como fungos ou leveduras filamentosos, são hospedeiros de clonagem ou expressão adequados para vetores que codificam anticorpos, incluindo cepas de fungos e leveduras cujas vias de glicosilação foram “humanizadas”, resultando na produção de um anticorpo com um padrão de glicosilação parcial ou totalmente humano (ver, por exemplo, Gerngross, Nat. Biotech. 22: 1409-1414 (2004), e Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)).

[0215] As células hospedeiras adequadas para a expressão de anticorpos anti-IL-36 glicosilados da presente descrição também podem ser derivadas de organismos multicelulares (invertebrados e vertebrados). Exemplos de células de invertebrado incluem células vegetais e de insetos. Numerosas cepas baculovirais foram identificadas que podem ser utilizadas em conjunto com células de inseto, particularmente para transfecção de células de Spodoptera frugiperda. Culturas de células vegetais também podem ser utilizadas como hospedeiros (ver, por exemplo, Pat. U.S. Nos. 5.959.177,

6.040.498, 6.420.548 e 7.125.978.

[0216] Exemplos de linhagens celulares hospedeiras de mamífero úteis para a produção dos anticorpos anti-IL-36 da presente descrição incluem células de ovário de hamster chinês (CHO), incluindo células DHFR-CHO (ver, por exemplo, Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); linhagens celulares de mieloma tais como Y0, NS0 e Sp2/0; linhagem CVI de rim de macaco transformada por SV40 (COS-7); linhagem de rim embrionário humano (células 293 ou 293 como descrito, por exemplo, em Graham et al., J. Gen Virol. 36:59

(1977)); células de rim de hamster bebê (BHK); células de Sertoli de camundongo (células TM4 conforme descrito, por exemplo, em Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); células de rim de macaco (CVI); células de rim de macaco verde africano (VERO-76); células de carcinoma cervical humano (HELA); células renais caninas (MDCK); células de fígado de rato búfalo (BRL 3A); células de pulmão humano (W138); células hepáticas humanas (Hep G2); tumor mamário de camundongo (MMT 060562); células TR1 (ver por exemplo, em Mather et al., Annals N. Y. Acad. Sci. 383: 44-68 (1982) e US 6.235.498); Células do Medical Research Council 5 (MRC 5) (tais como, por exemplo, aquelas disponíveis da ATCC e também referidas como CCL-171); e células Foreskin 4 (FS4) (ver, por exemplo, em Vilcek et al. Ann. N. Y. Acad. Sci. 284:703-710 (1977), Gardner & Vilcek. J. Gen. Virol. 44:161-168 (1979), e Pang et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 77:5341-5345 (1980)). Para uma revisão geral de linhagens celulares hospedeiras de mamíferos úteis adequadas para a produção de anticorpos, ver, por exemplo, Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003). V. Composições e Formulações Farmacêuticas de Anticorpos Anti-IL-36

[0217] A presente descrição também fornece composições farmacêuticas e formulações farmacêuticas compreendendo um anticorpo anti-IL-36. Em algumas modalidades, a presente descrição fornece uma formulação farmacêutica que compreende um anticorpo anti-IL-36 como aqui descrito e um veículo farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 é o único agente ativo da composição farmacêutica. Tais formulações farmacêuticas podem ser preparadas através da mistura de um anticorpo anti-IL-36, tendo o grau de pureza desejado, com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis. Normalmente, tais formulações de anticorpo podem ser preparadas como uma solução aquosa (ver, por exemplo, a Pat. U.S. No. 6.171.586 e WO2006/044908) ou como uma formulação liofilizada (ver, por exemplo, a Pat. U.S. No. 6.267.958).

[0218] Também é contemplado que as composições e formulações compreendendo um anticorpo anti-IL-36 conforme aqui divulgado podem conter ainda outros ingredientes ativos (isto é, agentes terapêuticos) além do anti-IL-36, útil para a indicação particular sendo tratada no indivíduo a quem a formulação é administrada. De preferência, qualquer agente terapêutico adicional possui atividade complementar àquela da atividade do anticorpo anti- IL-36 e as atividades não se afetam adversamente entre si. Consequentemente, em algumas modalidades, a descrição fornece uma composição farmacêutica que compreende um anticorpo anti-IL- 36 conforme divulgado nesta invenção, e um veículo farmaceuticamente aceitável, e compreende ainda um agente terapêutico útil para o tratamento de uma doença ou condição mediada por IL-36. Em algumas modalidades, por exemplo, em que a indicação da doença é o câncer, o agente terapêutico é um agente quimioterápico apropriado para o câncer específico. Em algumas modalidades, o outro agente terapêutico na composição é um antagonista de uma via de sinalização IL-1, IL-33, IL-36.

[0219] Em algumas modalidades, as composições ou formulações da presente descrição compreendem um anticorpo anti-IL-36 como o único agente ativo, em que o anticorpo anti-IL-36 é um anticorpo multiespecífico que se liga a cada um dos IL-36α, IL-36β e IL-36γ humanos com uma afinidade de ligação de 3 nM ou menos, opcionalmente, em que a afinidade de ligação é medida pela constante de dissociação de equilíbrio (KD) para um hu-IL-36α da SEQ ID NO: 1,

um hu -IL-36β da SEQ ID NO: 2, e um hu-IL-36γ da SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades, o anticorpo multiespecífico compreende uma especificidade para IL-36α e/ou IL-36γ em uma ramificação e uma especificidade para IL-36β na outra ramificação; opcionalmente, em que uma ramificação se liga a hu-IL-36α e hu-IL-36-γ com uma afinidade de ligação de 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos, ou 1 x 10-11 M ou menos, e a outra ramificação se liga a hu-IL-36-β com uma afinidade de ligação de 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos, ou 1 x 10-11 M ou menos.

[0220] Em algumas modalidades, as composições ou formulações da presente descrição compreendem um único anticorpo multiespecífico que se liga a cada um de IL-36α, IL-36β e IL-36γ humano com uma afinidade de ligação de 3 nM ou menos, e não inclui qualquer outro anticorpo anti-IL-36, ou qualquer outro anticorpo capaz de se ligar a IL-36.

[0221] Os veículos farmaceuticamente aceitáveis são geralmente não tóxicos para os destinatários nas dosagens e concentrações utilizadas. Uma ampla faixa de tais veículos farmaceuticamente aceitáveis é bem conhecida na técnica (ver, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)). Os veículos farmaceuticamente aceitáveis exemplares úteis nas formulações da presente descrição podem incluir, mas não são limitados a estes: tampões tais como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (tais como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio; cloreto de benzetônio; fenol, álcool butílico ou benzílico; alquil parabenos tais como metil ou propil parabeno; catecol; ressorcinol; cicloexanol; 3-pentanol; e m- cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos de cerca de 10 resíduos); proteínas, tais como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrófilos tais como polivinilpirrolidona; aminoácidos tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes tais como EDTA; açúcares tais como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contraíons formadores de sal tais como sódio; complexos de metal (por exemplo, complexos de Zn-proteína); e/ou tensoativos não iônicos tais como polietileno glicol (PEG).

[0222] Os veículos farmaceuticamente aceitáveis úteis nas formulações da presente descrição também podem incluir agentes de dispersão de fármacos intersticiais, tais como glicoproteínas hialuronidase neutras-ativas solúveis (sHASEGP) (ver, por exemplo, as Publ. de Pat. US Nos. 2005/0260186 e 2006/0104968), tais como glicoproteínas hialuronidase PH-20 solúveis humanas (por exemplo, rHuPH20 ou HYLENEX®, Baxter International, Inc.).

[0223] Agentes terapêuticos adicionais e ingredientes ativos podem ser aprisionados em microcápsulas preparadas, por exemplo, por técnicas de coacervação ou por polimerização interfacial, por exemplo, hidroximetilcelulose ou microcápsulas de gelatina e microcápsulas de poli-(metilmetacrilato), respectivamente, em sistemas de liberação de fármaco coloidais (por exemplo, lipossomas, microesferas de albumina, microemulsões, nanopartículas e nanocápsulas) ou em macroemulsões. Tais técnicas são divulgadas em Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980).

[0224] Em algumas modalidades, a formulação pode ser uma preparação de liberação controlada do anticorpo e/ou outros ingredientes ativos. Os exemplos adequados de preparações de liberação controlada incluem matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos contendo o anticorpo, cujas matrizes estão na forma de artigos moldados, por exemplo, películas ou microcápsulas.

[0225] Tipicamente, as formulações da presente descrição a serem administradas a um indivíduo são estéreis. As formulações estéreis podem ser facilmente preparadas utilizando técnicas bem conhecidas, por exemplo, mediante a filtração através de membranas de filtração estéreis. IV. Usos e Métodos de Tratamento

[0226] É contemplado que qualquer uma das composições ou formulações compreendendo um anticorpo anti-IL-36 da presente descrição pode ser utilizada para quaisquer métodos ou usos, tais como em métodos terapêuticos, que utilizam sua capacidade de se ligar especificamente a IL-36 e/ou bloquear a atividade de IL-36, particularmente bloqueando a capacidade de IL-36 de mediar a sinalização intracelular pelas citocinas IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ. As vias de sinalização intracelular mediadas por IL-36 incluem pelo menos as vias de sinalização estimuladas pelos agonistas de citocina IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ. A inibição das vias de sinalização mediadas por IL-36 pode ser testada in vitro utilizando ensaios de bloqueio baseados em células conhecidos incluindo os ensaios de células repórter HEK-BLUE™ e ensaios de bloqueio baseados em células primárias descritos nos Exemplos da presente descrição.

[0227] Uma doença mediada por IL-36 pode incluir qualquer doença ou condição associada à função aberrante da família IL-1 de citocinas para as quais o IL-36R atua como um receptor incluindo IL- 36α, IL-36β e/ou IL -36γ. Em alguns casos, essa função aberrante está associada a níveis elevados de IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ em fluidos corporais ou tecidos e pode incluir, por exemplo, níveis que excedem aqueles normalmente encontrados em uma célula ou tecido particular ou pode ser qualquer nível detectável em uma célula ou tecido que normalmente não expressa essas citocinas. Normalmente, as condições ou doenças mediadas por IL-36 apresentam as seguintes características: (1) patologias associadas à condição ou doença podem ser induzidas experimentalmente em animais pela administração de IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ e/ou através da suprarregulação da expressão de IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ; e (2) patologias associadas à condição ou doença gerada em modelos animais experimentais podem ser inibidas por agentes que são conhecidos por inibir a ação de IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ.

[0228] IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ são conhecidos por serem citocinas pró-inflamatórias, no entanto, a função aberrante das vias de sinalização de IL-36 estimuladas por essas citocinas como mediadas por IL-36R, é conhecida de estar associada a uma ampla faixa de doenças e condições incluindo de uma forma geral, mas não limitado a doenças inflamatórias, doenças autoimunes, doenças respiratórias, distúrbios metabólicos, infecções e cânceres. Por exemplo, a faixa de condições e doenças associadas à função aberrante da sinalização de IL-36 incluem, mas não está limitada a: pustulose exantemática aguda generalizada (AGEP), doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), dermatose pustular infantil, doença de Crohn, eczema, psoríase pustulosa generalizada (GPP), doença inflamatória intestinal (IBD), psoríase pustulosa palmoplantar (PPP), psoríase, artrite psoriática, lesões cutâneas na forma de psoríase induzida por TNF em pacientes com Crohn, síndrome de Sjogren, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), colite ulcerativa e uveíte.

[0229] Os agentes que direcionam as vias de sinalização de IL-36 através do bloqueio de IL-36R estão em desenvolvimento clínico para o tratamento de uma variedade de doenças e condições, incluindo, mas não limitado ao seguinte: GPP, PPP e colite ulcerativa.

[0230] Contempla-se que qualquer uma das composições ou formulações compreendendo um anticorpo anti-IL-36 da presente descrição pode ser utilizada em um método ou uso para o tratamento de qualquer uma das doenças listadas acima ou condições associadas à função aberrante da via de sinalização de IL-36. Geralmente, essas condições e doenças incluem, mas não são limitados a estas, doenças inflamatórias, doenças autoimunes, doenças respiratórias, distúrbios metabólicos, infecções e cânceres.

[0231] Consequentemente, em algumas modalidades, as composições ou formulações que compreendem um anticorpo anti-IL- 36 da presente descrição podem ser utilizadas em um método, terapia, medicamento, diagnóstico ou uso para utilização no tratamento de uma condição ou doença selecionada de acne devido aos inibidores do receptor do fator de crescimento epidérmico, acne e hidradenite supurativa (PASH), pustulose exantemática generalizada aguda (AGEP), pustulose amicrobiana das dobras, pustulose amicrobiana do couro cabeludo/perna, pustulose subcórnea amicrobiana, síndrome do abscesso asséptico, doença de Behçet, síndrome do desvio intestinal, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), dermatose pustular infantil, doença de Crohn, deficiência do antagonista do receptor da interleucina-1 (DIRA), deficiência do antagonista do receptor de interleucina-36 (DITRA), eczema, psoríase pustulosa generalizada (GPP), eritema elevatum diutinum, hidradenite supurativa, pênfigo IgA, doença inflamatória intestinal (IBD), paniculite neutrofílica, psoríase pustulosa palmoplantar (PPP), psoríase, artrite psoriática, psoríase pustulosa (DIRA, DITRA), pioderma gangrenoso, artrite piogênica pioderma gangrenoso e acne (PAPA), artrite piogênica pioderma gangrenoso acne e hidradenite supurativa (PAPASH), dermatose neutrofílica reumatoide, sinovite acne pustulose hiperostose e osteíte (SAPHO), lesões cutâneas na forma de psoríase induzida por TNF em pacientes com Crohn, síndrome de Sjogren, síndrome de Sweet, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), colite ulcerativa e uveíte.

[0232] Conforme divulgado nesta invenção, incluindo nos Exemplos abaixo, os anticorpos anti-IL-36 da presente descrição possuem a capacidade de diminuir, inibir e/ou bloquear a sinalização intracelular mediada por IL-36. Como consequência, em algumas modalidades, a presente descrição fornece um método de tratamento de uma doença ou condição mediada por IL-36 em um indivíduo, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-IL-36 da presente descrição ou administrar a um indivíduo com sua necessidade de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo anti-IL-36 da presente descrição e um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0233] Conforme aqui divulgado em outra parte, os anticorpos anti- IL-36 da presente descrição possuem a capacidade de diminuir, inibir e/ou bloquear as vias de sinalização de IL-36. Consequentemente, a presente descrição também fornece métodos de tratamento de doenças e condições responsivas a uma diminuição, inibição e/ou bloqueio das vias de sinalização de IL-36.

[0234] Adicionalmente, os anticorpos anti-IL-36 da presente descrição possuem a capacidade de diminuir, inibir e/ou bloquear a sinalização intracelular estimulada pelos agonistas IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ. Consequentemente, a presente descrição também fornece métodos de tratamento de doenças e condições responsivas a uma diminuição, inibição e/ou bloqueio da sinalização intracelular estimulada pelos agonistas IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ.

[0235] As citocinas da família IL-1, incluindo as citocinas IL-36, IL- 36α, IL-36β e/ou IL-36γ, estão envolvidas nas respostas imunes inflamatórias que afetam a formação de tumor e o desenvolvimento de muitas formas de câncer. Conforme for, em algumas modalidades, a presente descrição fornece um método de tratamento de câncer em um indivíduo, o método compreendendo a administração ao indivíduo com sua necessidade de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-IL-36 da presente descrição ou administração a um indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica que compreende um anticorpo anti-IL-36 da presente descrição e um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0236] As vias de sinalização de IL-36 têm sido associadas à psoríase. Consequentemente, em algumas modalidades, a presente descrição fornece um método de tratamento de psoríase em um indivíduo, o método compreendendo a administração ao indivíduo com sua necessidade de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-IL-36 da presente descrição ou administração a um indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica que compreende um anticorpo anti-IL-36 da presente descrição e um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0237] Em algumas modalidades, a presente descrição fornece um método de tratamento e/ou prevenção de uma doença mediada por IL- 36, uma doença mediada pela via de sinalização de IL-36 e/ou uma doença mediada pela sinalização intracelular estimulada pelos agonistas IL -36α, IL-36β e/ou IL-36γ. Em tal método de modalidades de tratamento, o método compreende administrar a um indivíduo com sua necessidade, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-IL-36, ou uma composição ou formulação farmacêutica compreendendo um anticorpo anti-IL-36 como aqui descrito. A administração do anticorpo, composição ou formulação farmacêutica de acordo com o método de tratamento fornece um efeito terapêutico induzido por anticorpo que protege o indivíduo e/ou trata a progressão de uma doença mediada por IL-36 em um indivíduo.

[0238] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 é o único agente ativo que é administrado ao indivíduo. Em algumas modalidades em que o anticorpo anti-IL-36 é o único agente ativo, o anticorpo anti-IL-36 é um anticorpo multiespecífico que se liga a cada um de IL-36α, IL-36β e IL-36γ humanos com uma afinidade de ligação de 3 nM ou menos. Um tal método que utiliza um único anticorpo anti- IL-36 como o único agente ativo fornece uma vantagem sobre os métodos que requerem o uso de múltiplos anticorpos anti-IL-36 (por exemplo, uma composição compreendendo uma mistura de dois ou mais anticorpos diferentes que se ligam a IL-36α, IL-36-β e/ou IL-36γ), e/ou outros anticorpos que se ligam a outros antígenos. A capacidade de ligar todos os três antígenos de IL-36 com um único anticorpo permite a administração de uma única composição ou formulação, incluindo uma única dose ou múltiplas doses de uma única composição ou formulação, ao indivíduo. Adicionalmente, é contemplado que o número de doses administradas utilizando o anticorpo multiespecífico é menor do que quando administrando vários anticorpos anti-IL-36 diferentes ou misturas de anti-IL-36 e/ou outros anticorpos.

[0239] Em algumas modalidades, o método de tratamento pode compreender ainda a administração de um ou mais agentes terapêuticos ou tratamentos adicionais conhecidos por aqueles versados na técnica para prevenir e/ou tratar a doença ou condição mediada por IL-36. Tais métodos que compreendem a administração de um ou mais agentes adicionais podem abranger a administração combinada (em que dois ou mais agentes terapêuticos estão incluídos nas mesmas formulações ou em formulações separadas) e administração separada, em cujo caso, a administração da composição ou formulação de anticorpo pode ocorrer antes, simultaneamente e/ou após a administração do agente terapêutico adicional.

[0240] Em algumas modalidades dos métodos de tratamento da presente descrição, o anticorpo anti-IL-36 ou formulação farmacêutica que compreende um anticorpo anti-IL-36 é administrado a um indivíduo por qualquer modo de administração que libera o agente sistemicamente, ou a um tecido alvo desejado. A administração sistêmica geralmente se refere a qualquer modo de administração do anticorpo em um indivíduo em um local diferente diretamente no local, tecido ou órgão alvo desejado, de tal modo que o anticorpo ou formulação do mesmo entre no sistema circulatório do indivíduo e, assim, está sujeito ao metabolismo e outros processos semelhantes.

[0241] Como consequência, os modos de administração úteis nos métodos de tratamento da presente descrição podem incluir, mas não são limitados a estes, injeção, infusão, instilação e inalação. A administração por injeção pode incluir injeção e infusão intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intraventricular, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutânea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoide, intraespinhal, intracerebro espinhal e intraesternal.

[0242] Em algumas modalidades, uma formulação farmacêutica do anticorpo anti-IL-36 é formulada de tal modo que o anticorpo seja protegido da inativação no intestino. Consequentemente, o método de tratamento pode compreender a administração oral da formulação.

[0243] Em algumas modalidades, o uso das composições ou formulações compreendendo um anticorpo anti-IL-36 da presente descrição como um medicamento também é fornecido. Adicionalmente, em algumas modalidades, a presente descrição também fornece o uso de uma composição ou formulação que compreende um anticorpo anti-IL-36 na fabricação ou preparação de um medicamento, particularmente um medicamento para tratar, prevenir ou inibir uma doença mediada por IL-36. Em uma outra modalidade, o medicamento é para uso em um método para tratar,

prevenir ou inibir uma doença mediada por IL-36, compreendendo a administração a um indivíduo tendo uma doença mediada por IL-36 de uma quantidade eficaz do medicamento.

[0244] Em algumas modalidades, as composições e formulações úteis como um medicamento ou na preparação de um medicamento compreendem um anticorpo anti-IL-36 como o único agente ativo. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-36 útil como um medicamento ou na preparação de um medicamento é um anticorpo multiespecífico que se liga a cada um de IL-36α, IL-36β e IL-36γ humanos com uma afinidade de ligação de 3 nM ou menos. Em tais modalidades, o uso de um único anticorpo anti-IL-36 multiespecífico como o único agente ativo em um medicamento, ou na preparação de um medicamento, fornece uma vantagem distinta sobre os usos que requerem múltiplos anticorpos anti-IL-36 ou outros. O uso de um único anticorpo anti-IL-36 multiespecífico compreendendo especificidades de ligação para IL-36α, IL-36β e IL-36γ leva em conta o uso simplificado, visto que apenas um único agente ativo que está incluído na composição ou formulação é utilizado.

[0245] Em certas modalidades, o medicamento compreende ainda uma quantidade eficaz de pelo menos um agente terapêutico ou tratamento adicional.

[0246] Em uma outra modalidade, o medicamento é para uso no tratamento, inibição ou prevenção de uma doença mediada por IL-36 em um indivíduo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz do medicamento para tratar, inibir ou prevenir a doença mediada por IL-36.

[0247] Para a prevenção ou tratamento de uma doença ou condição mediada por IL-36, a dosagem apropriada do anticorpo anti- IL-36 contido nas composições e formulações da presente descrição (quando utilizado isoladamente ou em combinação com um ou mais outros agentes terapêuticos adicionais) dependerá da doença ou condição específica a ser tratada, da gravidade e do curso da doença, se o anticorpo é administrado para fins preventivos ou terapêuticos, a terapia anterior administrada ao paciente, o histórico clínico do paciente e a resposta ao anticorpo, e a discrição do médico assistente. O anticorpo anti-IL-36 incluído nas composições e formulações aqui descritas pode ser administrado adequadamente ao paciente de uma vez ou ao longo de uma série de tratamentos. Vários esquemas de dosagem, incluindo, mas não limitado a administrações isoladas ou múltiplas ao longo de vários momentos, a administração de bolus e a infusão de pulso, são aqui contemplados.

[0248] Dependendo do tipo e gravidade da doença, cerca de 1 µg/kg a 15 mg/kg de anticorpo anti-IL-36 em uma formulação da presente descrição é uma dosagem candidata inicial para administração a um ser humano, quer, por exemplo, através de uma ou mais administrações separadas, quer por infusão contínua. Geralmente, a dosagem administrada do anticorpo estaria na faixa de cerca de 0,05 mg/kg a cerca de 10 mg/kg. Em algumas modalidades, uma ou mais doses de cerca de 0,5 mg/kg, 2,0 mg/kg, 4,0 mg/kg ou 10 mg/kg (ou qualquer combinação das mesmas) podem ser administradas a um paciente.

[0249] A administração da dosagem pode ser mantida durante vários dias ou mais, dependendo da condição do indivíduo, por exemplo, a administração pode continuar até que a doença mediada por IL-36 seja suficientemente tratada, conforme determinado por métodos conhecidos na técnica. Em algumas modalidades, uma dose de carga inicial mais elevada pode ser administrada, seguida por uma ou mais doses mais baixas. No entanto, outros regimes de dosagem podem ser úteis. O progresso do efeito terapêutico da administração da dosagem pode ser monitorado por técnicas e ensaios convencionais.

[0250] Consequentemente, em algumas modalidades dos métodos da presente descrição, a administração do anticorpo anti-IL-36 compreende uma dosagem diária de cerca de 1 mg/kg a cerca de 100 mg/kg. Em algumas modalidades, a dosagem de anticorpo anti-IL-36 compreende uma dosagem diária de pelo menos cerca de 1 mg/kg, pelo menos cerca de 5 mg/kg, pelo menos cerca de 10 mg/kg, pelo menos cerca de 20 mg/kg ou pelo menos cerca de 30 mg/kg.

[0251] Adicionalmente, os anticorpos anti-IL-36 da presente descrição podem ser utilizados em métodos de ensaio para a detecção de IL-36. Devido à sua capacidade de se ligar a IL-36 humano com alta afinidade, os anticorpos anti-IL-36 aqui divulgados são apropriados para uma ampla faixa de métodos e formatos de ensaio. É contemplado que os anticorpos anti-IL-36 podem ser empregados em qualquer método de ensaio conhecido, tal como ensaios de ligação competitiva, ensaios de sanduíche diretos e indiretos, ensaios de imunoprecipitação e ensaios imunoenzimáticos (ELISA) (Ver, Sola, 1987, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158, CRC Press, Inc.) para a detecção e quantificação de IL-36. Em conformidade, em algumas modalidades, a presente descrição fornece um método para detectar o nível de IL-36 em uma amostra biológica, o método compreendendo a etapa de colocar em contato a amostra com um anticorpo anti-IL-36 conforme divulgado nesta descrição. Além disso, em algumas modalidades, contempla-se que o método de detecção do nível de IL-36 em uma amostra biológica pode ser utilizado para detectar e/ou diagnosticar uma condição ou doença mediada por IL-36 em uma amostra biológica, por exemplo, de um ser humano.

EXEMPLOS

[0252] Vários aspectos e modalidades da descrição são ilustrados nos seguintes exemplos representativos, que se destinam a ser ilustrativos e não limitativos. Aqueles versados na técnica observarão facilmente que os exemplos específicos são apenas ilustrativos da invenção conforme descrito mais detalhadamente nas reivindicações que se seguem. Cada modalidade e aspecto descritos no pedido devem ser entendidos como sendo intercambiável e combinável com cada modalidade neles contida. Exemplo 1: Geração de Polipeptídeos de IL-36

[0253] Este exemplo ilustra a preparação de vários construtos polipeptídicos de IL-36 utilizados como antígenos na extração e rastreamento de anticorpos anti-IL-36 da presente descrição.

[0254] As formas ativas N-terminalmente truncadas de IL-36α, IL- 36β, IL-36γ, IL-36Ra (hu-IL-36α, hu-IL-36β, hu-IL-36γ, hu-IL-36Ra) e IL-36α, IL-36β, IL-36γ (cy-IL-36α, cy-IL-36β, cy-IL-36γ) de macaco cinomolgo foram produzidas de forma recombinante com base nas informações em Towne et al., (2011). Os limites da sequência de aminoácido dos construtos de expressão são fornecidos acima na Tabela 1 e na Listagem de Sequências anexa. Todos os construtos polipeptídicos de IL-36α e IL-36β recombinantes tinham uma marcação “12xHis-SUMO” N-terminal para propósitos de purificação (SEQ ID NO: 8). O construto de IL-36γ tinha a seguinte marcação N-terminal “12xHis-TEV” para propósitos de purificação: HHHHHHHHHHHHENLYFQS (SEQ ID NO: 9). O construto de IL-36Ra tinha a seguinte marcação “GS-TEV-GS-huIgG1Fc-FLAG” C-terminal para propósitos de purificação (SEQ ID NO: 12) juntamente com uma sequência de sinal de secreção N-terminal para expressão de células de mamífero: MGWSCIILFLVATATGVHS (SEQ ID NO: 11). Conforme observado em outra parte nesta invenção, para algumas aplicações, os construtos de IL-36 incluíram o seguinte C-terminal “GS-AviTag” (IL-36-Avi) para propósitos de detecção ou captura:

GGGGSGLNDIFEAQKIEWHE (SEQ ID NO: 10).

[0255] As proteínas do construto IL-36 foram expressas em One Shot BL21(DE3) Chemically Competent E.coli (Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) de acordo com o protocolo do fabricante. Os protocolos de indução padrão IPTG (1mM) foram executados em caldo LB com seleção de canamicina (25 ug/ml). Após a indução, as células foram cultivadas a 25 graus Celsius durante 20 a 24 horas e colhidas como péletes. Procedimentos de sonicação padrão em lisozima (100 ug/ml) e inibidores de protease foram executados para extrair a proteína solúvel de péletes de E. coli. Os sobrenadantes clarificados foram suplementados com imidazol 20 mM pH 7,5 e aplicados a colunas HisTrap FF em bruto (GE Healthcare, Chicago, IL, USA) equilibradas em Tris-HCl 20 mM, NaCl 150 mM (TBS), imidazol 20 mM pH 7,5. As proteínas foram eluídas com um gradiente de 10 CV a 100% de TBS, imidazol 500 mM, pH 7,5. Formas maduras de construtos de proteína IL-36 foram geradas após clivagem de marcadores de fusão N-terminal com His-SUMO protease (Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) ou His-TEV protease (ATUM, Newark, CA, USA) de acordo com o protocolo do fabricante com as seguintes modificações: SUMO protease foi pré-tratada com DTT 10 mM durante 5 minutos e depois utilizada em reações (~0,02 unidades por µg de substrato) contendo TBS pH 7,5 com DTT 10 mM a 25 graus Celsius durante 18 a 24 horas; protease TEV foi utilizada em reações (50 µg/ml) a 25 graus Celsius durante 2 horas. Após o tratamento com protease, a purificação por afinidade foi executada utilizando colunas HisTrap FF para remover os marcadores clivados e as frações de fluxo contínuo foram retidas e depois carregadas em colunas de aumento Superdex 75 (GE Healthcare, Chicago, IL, USA). As frações máximas contendo proteína monomérica foram reunidas e armazenadas em HEPES 25 mM, NaCl 150 mM (HBS), pH 7,5, NaN3 a 0,02%.

[0256] A proteína IL-36Ra fundida com Fc C-terminal foi expressa em células Expi293F (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) de acordo com o protocolo do fabricante. As células foram colhidas após 6 dias e o sobrenadante clarificado foi aplicado em colunas MabSelect SuRe (GE Healthcare, Chicago, IL, USA) equilibradas em TBS. A proteína foi eluída em citrato 20 mM pH 2,95, NaCl 150 mM (CBS) e imediatamente neutralizada com volume 1/25 de Tris-HCl 1,5 M pH 8,8. O marcador Fc C-terminal foi removido utilizando His-TEV protease como descrito anteriormente, seguido pela purificação por afinidade utilizando uma combinação de colunas HisTrap FF e MabSelect SuRe para remover as marcações de purificação e His-TEV protease. A purificação subsequente da fração de fluxo contínuo procedeu como descrita anteriormente para as proteínas de IL-36.

[0257] Para algumas aplicações, as proteínas de IL-36 foram biotiniladas aleatoriamente ou especificamente no local. Para a biotinilação aleatória de proteínas IL-36, NHS-PEG4-biotina (Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) foi utilizada de acordo com as instruções do fabricante. Para a biotinilação específica do sítio de proteínas IL-36- Avi, E. coli, foram cotransformadas com plasmídeos que expressam IL-36-Avi e biotina ligase BirA (plasmídeo pBirAcm da Avidity, Aurora, CO, USA). As induções de IPTG foram realizadas conforme descrito anteriormente com a adição de cloranfenicol (10 ug/ml) durante a etapa de cultura inicial para seleção dupla com o gene BirA e d-biotina 50 uM durante a etapa de indução para biotinilação in vivo. Exemplo 2: Geração de anticorpos anti-IL-36 humanos utilizando métodos de exibição de levedura, rastreamento e seleção para caracterização adicional A. Seleção de anticorpos anti-hu-IL-36 por exibição de levedura

[0258] IL-36α humano (BioLegend), IL-36β humano (Novus) e IL- 36γ humano (Novus) foram obtidos comercialmente como formas truncadas no N-terminal (ativas). Para fins de seleção e rastreamento de levedura, essas proteínas de IL-36 foram biotiniladas utilizando NHS-PEG4-Biotina (Pierce) ou marcadas com DyLight-650 utilizando NHS-4xPEG-Dylight-650 (Thermo Scientific) de acordo com os protocolos dos fabricantes visando um relação de marcação:proteína entre 1 a 3 para 1.

[0259] Os anticorpos que reconhecem hu-IL-36 foram gerados utilizando bibliotecas de anticorpos humanos exibidas na superfície de levedura (Pat. U.S. No. 10.011.829). Bibliotecas de exibição de levedura foram geradas para expor osr fragmentos Fab com base em 5 segmentos gênicos VH, 4Vκ e um Vλ de acordo com os métodos descritos na Pat. US No. 10.011.829, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade. 25 sub-bibliotecas foram racionalmente projetadas a fim de melhorar a diversidade de aminoácidos nas CDRs enquanto retém as sequências da linha germinativa nas regiões de estrutura do anticorpo. O uso de aminoácidos nas CDRs projetadas foi correspondido àquele observado para aquelas subfamílias de região variável em um banco de dados de anticorpos humanos gerado a partir de um conjunto de dados de sequenciamento profundo com mais de 350.000 clones de anticorpos humanos de ocorrência natural. Os métodos para utilizar as bibliotecas para identificar anticorpos capazes de se ligar a hu-IL-36, incluindo métodos para amplificar as bibliotecas ou células de levedura colhidas de um processo de enriquecimento ou classificação e indução da expressão do anticorpo na superfície da levedura para classificação FACS com antígenos, foram realizados conforme descrito na Pat. US No. 10.011.829.

[0260] A biblioteca principal de anticorpos humanos composta por bibliotecas individuais com base em diferentes combinações de VH-Vκ ou VH-Vλ foi dividida em dois pools (bibliotecas 1-13 e bibliotecas 14- 25) para permitir o enriquecimento inicial eficiente para clones que reconhecem hu-IL-36 por classificação de células ativadas magneticamente (MACS). As bibliotecas foram cultivadas em até 3 vezes o título da biblioteca original e induzidas para a expressão de anticorpos pelo crescimento da levedura com meio de indução contendo 2% de galactose a 20 oC. Três rodadas de MACS foram executadas e as células colhidas de cada rodada foram amplificadas de tal modo que 10 vezes o número de células de levedura colhidas foi utilizado para a próxima rodada de MACS.

[0261] Para seleção de MACS, as proteínas hu-IL-36α, hu-IL-36β e hu-IL-36γ biotiniladas foram agrupadas. Em três rodadas sucessivas de enriquecimento MACS, cada conjunto de células de levedura da biblioteca foi incubado com 300 nM cada de hu-IL-36α, hu-IL-36β e hu- IL-36γ biotinilados. Após incubação a 40 oC com rotação durante 2 horas, as células foram lavadas e 3 ml de esferas magnéticas revestidas com estreptavidina (Miltenyi Biotec, Auburn, CA) foram adicionados a cada conjunto. Após 1 hora de incubação a 40 oC com rotação, as células de ligação ao antígeno foram classificadas através da classificação magnética de esferas ativadas utilizando colunas LS (Miltenyi Biotec, Auburn, CA). As células colhidas dos dois pools da biblioteca foram coletadas, agrupadas, amplificadas 10 vezes durante a noite e, em seguida, submetidas a uma segunda seleção de MACS que incluiu uma depleção de pré-eliminação com baculovírus e grânulos revestidos com estreptavidina antes de incubar as células de levedura remanescentes com 300 nM de cada uma das 3 citocinas hu- IL-36 biotiniladas. A porcentagem do pool de entrada colhida na terceira rodada do MACS foi de 9,7%.

[0262] Antes de executar experimentos de classificação FACS para identificar clones de levedura de alta afinidade para proteínas hu- IL-36, diferentes tampões de ligação foram testados para minimizar a ligação não específica. O melhor tampão de ligação para hu-IL-36α e hu-IL-36β foi PBS contendo 0,5% de albumina de soro bovino (VWR Life Science, Radnor, PA, USA), enquanto que os experimentos com hu-IL-36γ exigiram PBS contendo leite em pó filtrado solubilizado a 5% (LabScientific, Highlands, NJ, USA) para minimizar a ligação de segundo plano.

[0263] A FACS1 foi executada utilizando 150 nM de cada citocina PEG4-biotina-IL-36 em alíquotas separadas contendo o tampão de ligação selecionado e utilizando estreptavidina-PE como um reagente de detecção secundário. As células positivas para o antígeno foram coletadas, amplificadas 10 vezes e utilizadas para duas rodadas adicionais de FACS (FACS2 e FACS3) utilizando proteínas hu-IL-36 marcadas com PEG-Dylight-650 e as mesmas condições de tampão que em FACS1. A porcentagem de células positivas para o antígeno colhidas em FACS3 foram 2,3% para hu-IL-36α, 1,0% para hu-IL-36β e 11,4% para hu-IL-36γ. 0,2% das células positivas para o antígeno com a maior intensidade de fluorescência média foram semeadas e os clones individuais foram colhidos em placas de cavidades profundas e cultivadas durante 48 horas com meio de indução para induzir a secreção de fragmentos Fab no sobrenadante da cultura. As culturas de levedura foram colhidas, as células removidas por centrifugação e os sobrenadantes contendo Fab foram então testados quanto à atividade de ligação aos seus respectivos antígenos por ELISA.

[0264] Para ELISAs com sobrenadantes de cultura de levedura, placas de ELISA de 96 cavidades foram revestidas com 250 ng/cavidade de neutravidina, bloqueadas com PBS contendo BSA 0,5% (“tampão de bloqueio”) e, em seguida, 250 ng de hu-IL-36α, hu- IL-36β ou hu-IL-36γ biotinilado foram adicionados por cavidade. Após a lavagem, 20 μl de meio de cultura e 30 μl de tampão de bloqueio foram adicionados, as placas incubadas com agitação durante 1 hora na temperatura ambiente, lavadas e ligadas ao Fab detectado com

Fab anti-humano HRP. A maioria dos clones desses tipos de citocina simples apresentou atividade de ligação à citocina hu-IL-36 contra a qual foram selecionados neste ELISA primário. Nos ELISAs secundários testando a atividade de ligação para todas as três citocinas hu-IL-36, os clones que se ligaram a hu-IL-36α e hu-IL-36γ (mas não hu-IL-36β) foram observados. Portanto, duas estratégias de classificação FACS foram perseguidas para identificar clones de reação cruzada hu-IL-36α/γ. Identificação e seleção de anticorpos de reação cruzada hu-IL- 36α/hu-IL-36γ

[0265] Na primeira estratégia de classificação utilizada para selecionar clones que poderiam reconhecer hu-IL-36α e hu-IL-36γ, células obtidas em FACS3 com PEG-Dylight-650-huIL-36α 150 nM (2,3% antígeno-positivo) foram amplificados 10 vezes e classificadas com PEG4-biotina-IL-36α 100 nM, produzindo 15,5% de células positivas para o antígeno (FACS4). Estas células foram amplificadas e coradas com PEG-Dylight-650-huIL-36γ 100 nM, produzindo 29,1% de células positivas para o antígeno (FACS5AG). As células coletadas em FACS5AG foram amplificadas 10 vezes e coradas com PEG-Dylight- 650-huIL-36γ 10 nM e PEG4-biotina-IL-36α 10 nM (detectadas com estreptavidina-PE), rendendo 7,3% de células duplamente positivas de IL-36α/γ (FACS6AG). As células coletadas em FACS6AG foram amplificadas 10 vezes e coradas com PEG-Dylight-650-huIL-36α 10 nM e PEG4-biotina-IL-36γ 10 nM (detectadas com estreptavidina-PE), rendendo 1,0% de células duplamente positivas de IL-36α/γ (FACS7AG).

[0266] Na segunda estratégia de classificação utilizada para selecionar clones que poderiam reconhecer hu-IL-36α e hu-IL-36γ, células obtidas em FACS3 com PEG-Dylight-650-huIL-36γ 150 nM (antígeno-positivo 11,4%) foram amplificadas 10 vezes e classificadas com PEG4-biotina-IL-36α 100 nM, selecionando células positivas para o antígeno (FACS4GA). Estas células foram amplificadas e coradas com PEG-Dylight-650-huIL-36α 100 nM e PEG4-biotina-IL-36γ 100 nM (detectadas com estreptavidina-PE), rendendo 1,0% de células duplamente positivas de IL-36α/γ (FACS5GA). As células coletadas em FACS5GA foram amplificadas 10 vezes e coradas com PEG4- biotina-huIL-36α 100 nM (detectadas com estreptavidina-PE) e PEG- Dylight-650-huIL-36γ 100 nM, rendendo 8,0% de células duplamente positivas de IL-36α/γ (RFACS6GA). As células coletadas em RFACS6GA foram amplificadas 10 vezes e coradas com PEG-Dylight- 650-huIL-36α 100 nM e PEG4-biotina-IL-36γ 100 nM (detectadas com estreptavidina-PE), produzindo 1,3% de células duplamente positivas de IL-36α/γ (RFACS7GA).

[0267] 0,2% das células duplamente positivas de IL-36α/γ de FACS7AG e RFACS7GA com a maior intensidade de fluorescência média foram plaqueadas, clones individuais foram colhidos e cultivados e os sobrenadantes contendo Fab foram então testados quanto à atividade de ligação a hu-IL-36α e hu-IL-36γ por ELISA como descrito acima. 87 clones que se ligam a hu-IL-36α e hu-IL-36γ foram selecionados para sequenciamento.

[0268] Para obter a sequência de anticorpo para os clones de levedura selecionados, o DNA de plasmídeo foi extraído dos clones de levedura e utilizado para PCR utilizando um iniciador direto que se liga à região do promotor de levedura e iniciadores reversos que se ligam à região constante da região IgG1-CH1 humana para a cadeia pesada e a região constante da cadeia capa ou lambda para a cadeia leve. Os produtos de PCR foram então sequenciados através do sequenciamento Sanger utilizando os mesmos iniciadores utilizados para a reação PCR.

[0269] Os 87 clones de reação cruzada hu-IL-36α/γ representaram

30 clones únicos por sequência. Identificação e seleção de anticorpos reativos a hu-IL-36β

[0270] Na estratégia de classificação utilizada para selecionar clones que poderiam reconhecer hu-IL-36β, as células obtidas em FACS3 com PEG-Dylight-650-huIL-36β 150 nM (antígeno positivo 1,0%) foram amplificadas 10 vezes e classificadas com PEG4-biotina- IL-36β 100 nM e detectadas com estreptavidina-PE, produzindo 13,1% de células positivas para o antígeno (FACS4B). Estas células foram amplificadas e coradas com PEG-Dylight-650-huIL-36β 20 nM, produzindo 5,8% de células positivas de IL-36β (FACS5B).

[0271] 0,2% das células positivas de IL-36β de FACS5B com a maior intensidade de fluorescência média foram semeadas, clones individuais foram colhidos e cultivados e os sobrenadantes contendo Fab foram então testados quanto à atividade de ligação a seus respectivos antígenos por ELISA conforme descrito acima. A maioria dos clones deste tipo apresentou atividade de ligação a IL-36β.

[0272] Um total de 83 clones de IL36BS7 foi sequenciado como descrito acima, rendendo 8 clones únicos.

[0273] B. Rastreamento in vitro de sobrenadantes de células de levedura contendo anticorpos anti-hu-IL-36

[0274] Os sobrenadantes celulares de clones de levedura de interesse foram testados quanto à ligação a IL-36 humano por ELISA como descrito acima. Para comparar a ligação desses sobrenadantes a IL-36 humano e de macaco cynomolgus, proteínas de IL-36 foram revestidas em 2,5 µg/ml em placas Nunc MaxiSorp de 96 cavidades (Thermo Fisher) e as placas bloqueadas com soro de cabra 5% em PBS. Os sobrenadantes de levedura foram diluídos 1:1 com PBST contendo 1% p/v BSA e adicionados às placas de ELISA durante 1 a 1,5 hora com agitação. O Fab ligado foi detectado através da incubação das placas com F(ab')2-HRP (Jackson ImmunoResearch).

Os ELISAs foram desenvolvidos durante 3 a 10 minutos pela adição de 50 μl/cavidade de substrato de peroxidase de microcavidades de tetrametilbenzidina (TMB) (Scytek Laboratories, Inc., Logan, UT, USA) e o desenvolvimento de cor enzimática foi interrompido através da acidificação com 50 μl/cavidade de H2SO4 2 N (Sigma-Aldrich Corporation, St. Louis, MO, USA). A densidade óptica das amostras em um comprimento de onda de 450 nm (OD450) foi analisada com uma leitora de placa SpectraMax i3X (Molecular Devices LLC, San Jose, CA, USA). Para estimar a afinidade relativa de cada clone para IL-36 de macaco cinomolgo e IL-36 humano neste ensaio, uma relação de OD450 (OD450cyIL-36/OD450huIL-36) foi calculada para cada clone e citocina IL-36. Oito clones Fab anti-IL-36 (mAb1.0 - mAb8.0) foram selecionados para caracterização adicional e os resultados são mostrados na Tabela 3. Tabela 3: Ligação de Fabs anti-IL-36 selecionados em hu-IL-36 e cy- IL-36 por ELISA.

ELISA OD450 ELISA OD450cyIL-36/OD450hu-IL-36 Anticorpo hu-IL-36α hu-IL-36β hu-IL-36γ IL-36α IL-36β IL-36γ mAb1.0 0,9398 0,0523 2,4295 0,6 N.T. 1,3 mAb2.0 2,5315 0,0604 2,5023 0,7 N.T. 1,2 mAb3.0 1,6265 0,1097 2,1116 0,5 N.T. 1,0 mAb4.0 2,1644 0,0513 2,2984 0,5 N.T. 1,2 mAb5.0 2,0511 0,1285 2,077 0,5 N.T. 1,0 mAb6.0 0,0638 2,3414 0,0656 N.T. 4.0 N.T. mAb7.0 0,0604 2,5818 0,0724 N.T. 3.9 N.T. mAb8.0 0,0698 2,6319 0,073 N.T. 0.1 N.T. N.T. = não testado C. Ensaio baseado em células para determinar a potência de bloqueio de sobrenadantes de Fab

[0275] As linhagens celulares HEK-Blue, descritas neste e nos exemplos seguintes, utilizam a linhagem celular HEK-293 (células epiteliais de rim embrionário humano) como a linhagem parental original.

As células sensoras HEK-Blue IL-1/IL-33 foram obtidas na InvivoGen (InvivoGen, San Diego, CA, USA; catálogo #hkb-il33). Estas células sensoras IL-1/IL-33 foram geradas por transfecção estável de células sensoras HEK-Blue IL-1β (InvivoGen; catálogo #hkb-il1b) com o gene ST2 humano expressando o receptor de IL-33 ST2. As células HEK-Blue IL-1β expressam um gene repórter NF-κB/AP-1 SEAP (fosfatase alcalina embrionária secretada) e contêm uma resposta de TNF-α inativada para garantir que a produção de SEAP seja representativa da ativação da via de IL-1 ou IL-33. As células responsivas HEK-Blue IL-1/IL-33 foram mantidas de acordo com as diretrizes do fabricante.

Resumidamente, as células foram mantidas em um meio de crescimento padrão que consiste em DMEM (Corning, Inc., Corning, NY, USA), suplementado com soro fetal bovino 10% (FBS) (Atlanta Biologicals, Inc., Flowery Branch, GA, USA), 100 IU/ml de penicilina e 100 μg/ml de estreptomicina.

O meio de crescimento foi suplementado com 100 μg/ml de zeocina para manter a codificação do plasmídeo para SEAP, 200 μg/ml de higromicina B para manter a especificidade de IL-1 e 100 μg/ml de blasticidina para manter o plasmídeo que codifica ST2. O plasmídeo contendo o gene IL1RL2 humano, que codifica o receptor IL-36, foi gerado por AvantGen (pedido personalizado). As células sensoras HEK-Blue IL-1/IL-33 foram transitoriamente transfectadas utilizando LyoVec (InvivoGen) de acordo com as orientações do fabricante.

Resumidamente, os complexos LyoVec-DNA foram adicionados diretamente às células colocadas em suspensão em meio de crescimento padrão, em uma concentração que produziria um mínimo de 80% de confluência 24 horas após a transfecção, e imediatamente plaqueados em placas de fundo plano de 96 cavidades. 24 horas após a transfecção, as células foram utilizadas dentro de um ensaio HEK-Blue SEAP padrão.

[0276] Uma curva dose-resposta de agonista, consistindo em uma série de diluições em série, foi gerada para fornecer uma estimativa da metade da concentração efetiva máxima (EC50) de agonista a ser utilizada no ensaio. As seguintes citocinas humanas comercialmente disponíveis foram utilizadas como agonistas em alguns ensaios HEK- Blue: IL-36α (BioLegend), IL-36β (Novus Biologicals) e IL-36γ (Novus Biologicals). 24 horas antes do uso experimental, as células transitoriamente transfectadas foram plaqueadas em placas de fundo plano de 96 cavidades em uma concentração que resultou em um mínimo de 80% de confluência no momento do uso. O agonista desejado foi adicionado às células até um volume final de 200 μl e as células incubadas durante 24 horas a 37 oC com CO2 5%. A produção de SEAP foi quantificada utilizando um ensaio de detecção de SEAP. O meio de detecção SEAP QUANTI-Blue (InvivoGen) foi utilizado para determinar o nível de SEAP dentro das várias condições indicadas e de acordo com as diretrizes gerais do fabricante. Especificamente, 20 μl de sobrenadante de cultura de células (coletados 24 horas após a adição do agonista) foram adicionados a 130 μl de meio de detecção QUANTI-Blue. A reação foi deixada prosseguir durante uma hora a 37oC, ponto em que um espectrofotômetro SpectraMax (Molecular Devices) foi utilizado para medir a absorvância em um comprimento de onda de 650 nm em conjunto com o software SoftMax Pro (Molecular Devices). Os dados brutos do ensaio foram analisados utilizando o software GraphPad Prism 7 para executar uma determinação de regressão não linear do valor EC50 do agonista no ensaio.

[0277] Os ensaios HEK-Blue SEAP de fragmentos Fab anti-hu-IL- 36 não purificados em sobrenadante de cultura de células de levedura (SN) foram executados como descrito acima, mas com as seguintes modificações. O SN de cultura de células de levedura não purificado contendo os fragmentos Fab anti-hu-IL-36 foi concentrado 20 vezes e trocado por tampão em PBS (1:20) para reduzir o ruído de fundo no ensaio HEK-Blue SEAP. 40 μl de PBS e 10 μl de SN de cultura de células de levedura concentradas trocadas por tampão contendo os fragmentos Fab anti-hu-IL-36 foram adicionados às células HEK-Blue IL-1/IL-33 transfectadas com IL-36R. As células e SN de cultura de células de hibridoma contendo anticorpos foram incubadas durante uma hora a 37 oC com CO2 a 5%. Após a incubação de anticorpo de uma hora, o agonista foi adicionado às cavidades contendo as células e anticorpos em 4X a concentração desejada e de uma maneira que resulta em 1X a concentração final desejada em um volume total de 200 μl. A inibição percentual foi calculada através da determinação da relação do valor de absorbância obtido a partir da amostra (neste caso, SN de cultura de células de levedura contendo anticorpo anti-hu- IL-36) em relação ao controle positivo (células expostas ao agonista apenas na presença de SN de cultura de células de levedura contendo um Fab irrelevante) e multiplicação desta relação por 100.

[0278] Os resultados para os 8 clones Fab anti-IL-36 (mAb1.0- mAb8.0) selecionados para caracterização adicional são mostrados na Tabela 4 abaixo. As sequências para os clones selecionados também são divulgadas na Tabela 2 e na Listagem de Sequências anexa. Tabela 4. Atividade de bloqueio de sobrenadantes de Fab de clone de levedura anti-IL-36 selecionados em ensaio baseado em células HEK Blue % de Inibição Sobrenadante de Fab de Levedura hu-IL-36a hu-IL-36b hu-IL-36g mAb1.0 70 N.D. 31 mAb2.0 91 N.D. 89 mAb3.0 40 N.D. 64 mAb4.0 91 N.D. 57 mAb5.0 75 N.D. 75 mAb6.0 N.D. 86 N.D. mAb7.0 N.D. 84 N.D. mAb8.0 N.D. 85 N.D.

[0279] Com base em suas atividades de ligação e bloqueio observadas resumidas nas Tabelas 3 e 4, cinco dos anticorpos de reação cruzada IL-36α/IL-36γ (mAb1.0-mAb5.0) e três dos anticorpos reativos a IL-36β (mAb6.0-mAb8.0) foram produzidos como IgG1 humana recombinante e fragmentos Fab clivados para outra caracterização. IgGs foram produzidos por cotransfecção transitória de plasmídeos de expressão de mamíferos que codificam suas cadeias pesadas e leves em células Expi293 ou ExpiCHO (Thermo Fisher Scientific) de acordo com as instruções do fabricante. As células foram colhidas após 5 a 7 dias e o sobrenadante clarificado foi aplicado a colunas MabSelect SuRe (GE Healthcare, Chicago, IL, USA) equilibradas em TBS. A proteína foi eluída em citrato 20 mM pH 2,95, NaCl 150 mM (CBS) e imediatamente neutralizada com volume 1/25 de Tris-HCl 1,5 M pH 8,8. Os fragmentos Fab foram produzidos através da clivagem de Lysyl-C (Wako Chemicals). Resumidamente, a clivagem de Lysyl-C foi realizada em PBS contendo Tris 100 mM pH 8,0 a 37 oC durante 1 hora com agitação suave e interrompida pela diluição da reação 10 vezes em acetato de sódio 50 mM pH 5,2. A fração de Fab foi purificada mediante a aplicação da amostra a uma coluna de troca catiônica SP-HP (GE Healthcare, Chicago, IL, USA) equilibrada em acetato de sódio 10 mM pH 5,2 e eluição com um gradiente de volume de 30 colunas para acetato de sódio 10 mM 100% pH 5,2, NaCl 1 M. As frações contendo Fab foram reunidas, concentradas e trocadas por tampão em PBS. D. Análise da cinética de ligação de anticorpos anti-IL-36 selecionados

[0280] A análise de ressonância plasmônica de superfície (SPR) foi utilizada para determinar a afinidade de ligação para hu-IL-36α e hu-IL-36γ do Fab mAb2.0 purificado; e para hu-IL-36β do Fab mAb6.0 purificado utilizando um instrumento BIACORE™ 8K (GE Healthcare,

Chicago, IL, USA). Resumidamente, uma diluição 1:4 de Biotin CAPture Reagent (GE Healthcare, Chicago, IL, USA) em tampão HBS- EP (GE Healthcare, Chicago, IL, USA; HEPES 0,01 M pH 7,4, NaCl 0,15 M, EDTA 3 mM, tensoativo P20 0,005%) foi aplicada a um chip sensor CAP em uma taxa de vazão de 2 µl/min. Para medições cinéticas, hu-IL-36α e hu-IL-36γ biotinilados 12,5 nM; hu-IL-36β biotinilado 6 nM foi capturado em 10 µl/min para atingir 25 a 40 unidades de resposta na segunda célula de fluxo (FC2). A FC1 foi mantida como referência. Em seguida, diluições em série de 2 vezes da proteína Fab em tampão HBS-P (GE Healthcare, Chicago, IL, USA; HEPES 0,01 M pH 7,4, NaCl 0,15 M, tensoativo P20 0,005%) de nível baixo (mAb2,0 Fab 0,78 nM, mAb6.0 Fab 1,56 nM) de nível alto (mAb2.0 Fab 100 nM, mAb6.0 Fab 200 nM) foram injetados (taxa de vazão: 30 µl/min) a 25 oC ou 37 oC. O sensorgrama foi registrado e sujeito à referência e subtração do tampão antes da análise dos dados com o software de avaliação BIACORE® 8K (GE Healthcare, Chicago, IL, USA; versão 1.1.1.7442). As taxas de associação (kon) e as taxas de dissociação (koff) foram calculadas utilizando um modelo de ligação Langmuir simples de um para um. A constante de dissociação de equilíbrio (KD) foi calculada como a razão de koff/kon.

[0281] Os resultados de afinidade Biacore para mAb2.0 Fab e mAb6.0 Fab estão resumidos abaixo na Tabela 5. Tabela 5: Afinidade de ligação de anticorpos anti-IL-36 selecionados a 25 oC e 37 oC (KD, kon, koff) Ajuste de ligação 1:1 KD (nM) kon (1/Ms) koff (1/s) Fab hu-IL-36 biotinilado 25 °C 37 °C 25 °C 37 °C 25 °C 37 °C mAb2.0 hu-IL-36α 1,2 0,3 3,45*105 1,69*106 4,13*10-4 5,02*10-4 mAb6.0 hu-IL-36β 1,79 1,93 4,04*104 6,11*104 7,23*10-5 1,18*10-4 mAb2.0 hu-IL-36γ 0,98 1,61 3,66*105 6,71*105 3,58*10-4 1,08*10-3 E. Atividade funcional de anticorpos anti-IL-36 recombinantes em ensaios baseados na célula Atividade de bloqueio de hu-IL-36 de anticorpos no ensaio repórter HEK Blue

[0282] Os anticorpos anti-hu-IL-36 recombinantes derivados dos oito clones de levedura parentais, mAb1.0 - mAb8.0, foram testados para determinar suas habilidades para bloquear a ativação mediada por hu-IL-36α, hu-IL-36β e hu-IL-36γ das vias IL1RL2/IL1RAP utilizando as células sensoras IL-1/IL-33 HEK-Blue transitoriamente transfectadas com o receptor de IL-36, IL1RL2.

[0283] Os ensaios HEK-Blue SEAP utilizando anticorpos anti-hu- IL-36 recombinantes foram executados de forma semelhante ao ensaio descrito acima com SN de cultura de células de levedura. Resumidamente, o anticorpo foi incubado com células, na ausência de agonista no meio de crescimento padrão, durante uma hora a 37 oC com CO2 5%. Após a incubação de uma hora, o agonista desejado, na concentração estimada de EC50, foi adicionado a um volume final de 200 μl e o experimento continuou durante mais 24 horas. O controle negativo (NC) representa as células expostas apenas ao meio de crescimento, enquanto que o controle positivo (PC) representa as células expostas apenas ao agonista (na ausência de anticorpos antagonísticos ou de controle).

[0284] Para determinar a metade da concentração inibidora máxima (IC50) dos anticorpos (incluindo Fabs conforme descrito nos exemplos a seguir), uma série de diluições em série de sete pontos foi utilizada (começando na concentração indicada). Tal como acontece com as curvas dose-resposta de agonista aqui descritas, a análise de regressão não linear foi executada utilizando o software GraphPad Prism 7 para determinar o valor IC50 a partir dos resultados do ensaio.

[0285] Hu-IL-36α (SEQ ID NO: 1), hu-IL-36β (SEQ ID NO: 2) e hu- IL-36γ (SEQ ID NO: 3) foram utilizados como agonistas nos seguintes ensaios HEK-Blue. As doses-respostas foram realizadas para todos os mAbs. Os resultados destes ensaios HEK Blue são mostrados abaixo na Tabela 6. Tabela 6: Inibição de IL-36 no ensaio HEK Blue de anticorpos anti-hu- IL-36 recombinantes IC50 (nM) Anticorpo hu-IL-36α hu-IL-36β hu-IL-36γ mAb1.0 43 N.D. 5,3 mAb2.0 5,7 N.D. 7,5 mAb3.0 90 N.D. 30 mAb4.0 16 N.D. 52 mAb5.0 95 N.D. 142 mAb6.0 N.D. 0,64 N.D. mAb7.0 N.D. 1,4 N.D. mAb8.0 N.D. 0,34 N.D. N.D. = nenhuma atividade de bloqueio detectada

[0286] Como mostrado pelos resultados do ensaio HEK Blue da Tabela 6, de todos os anticorpos testados mAb2.0 demonstrou a atividade de bloqueio mais potente para hu-IL-36α e hu-IL-36γ, enquanto que mAb6.0 demonstrou atividade de bloqueio potente para hu-IL-36β. Atividade de bloqueio de Cy-IL-36 de anticorpos no ensaio repórter HEK Blue

[0287] Os anticorpos anti-hu-IL-36 recombinantes mAb2.0 e mAb6.0 foram testados para determinar suas habilidades para bloquear a ativação mediada por IL-36 de macaco cinomolgo (cy-IL-36α, cy-IL-36β e cy-IL- 36γ) das vias IL1RL2/IL1RAP utilizando as células sensoras HEK- Blue IL-1/IL-33 transitoriamente transfectadas com o receptor IL-36 humano IL1RL2. Os ensaios HEK-Blue SEAP executados utilizando IL- 36 de macaco cinomolgo foram executados de forma semelhante ao ensaio descrito acima com citocinas de IL-36 humana. Cy-IL-36α, cy-IL-

36β e cy-IL-36γ foram utilizados como agonistas neste ensaio HEK-Blue. Curvas dose-resposta de agonista, consistindo em uma série de diluição em série de doze pontos, foram geradas para demonstrar a sinalização potente das citocinas cy-IL-36 através das vias IL1RL2/IL1RAP humanas e para fornecer uma estimativa da metade da concentração efetiva máxima (EC50) do agonista a ser utilizado no ensaio. Para determinar a metade da concentração inibidora máxima (IC50) dos anticorpos, foi utilizada uma série de diluições em série de onze pontos. Tal como com as curvas dose-resposta do agonista mencionadas anteriormente, a análise de regressão não linear foi executada utilizando o software GraphPad Prism 7 para determinar o valor IC50 a partir dos resultados do ensaio. As doses-respostas foram realizadas para todos os mAbs. O mAb2.0 demonstrou atividade de bloqueio potente para cy-IL-36α e cy- IL-36γ (IC50 0,56 nM e 1,71 nM, respectivamente), enquanto o mAb6.0 demonstrou atividade de bloqueio potente para cy-IL-36β (IC50 1,96 nM). Atividade de bloqueio de anticorpos anti-hu-IL-36 na secreção de IL-8 estimulada por IL-36 por células HaCat

[0288] A linhagem celular de queratinócitos humanos HaCat é derivada de queratinócitos transformados espontaneamente in vitro de pele histologicamente normal. A linhagem celular HaCat está comercialmente disponível e foi obtida da AddexBio (catálogo # T002000). As células crioconservadas foram descongeladas e mantidas de acordo com as orientações gerais recomendadas pelo fabricante. As células HaCat foram mantidas em um meio de crescimento que consiste em DMEM com L-Glutamina, 4,5 g/L de Glicose e Piruvato de Sódio (Corning), suplementado com soro fetal bovino 10% (Atlanta Biologicals) que foi inativado por calor antes do uso (56 oC durante 30 minutos), 100 IU/ml de penicilina e 100 μg/ml de estreptomicina, piruvato de sódio 1 mM (Corning). No dia anterior ao uso experimental, as células HaCat foram semeadas em placas de 96 cavidades de fundo plano em 10.000 células/cavidade para estar em ~ 80 a 85% de confluência no dia de uso.

[0289] Antes do uso em ensaios de bloqueio de anticorpos, a EC50 de agonista foi determinada através da execução de uma curva dose- resposta do agonista de uma maneira semelhante àquela descrita no Exemplo 2 para as células HEK Blue, mas com as seguintes modificações. Após a adição do agonista às células HaCat em cavidades contendo apenas meio de crescimento de células HaCat (volume final 200 μl), as células retornaram à incubadora de cultura de tecidos (37 oC com CO2 5%) durante 24 horas. O sobrenadante da cultura de tecido foi então recolhido e armazenado a -20 oC.

[0290] Os ensaios de bloqueio de anticorpo foram executados como acima para células HEK Blue, mas de uma maneira que conduza à obtenção de valores de IC50, com modificações para contabilizar especificamente o uso de células HaCat. Resumidamente, o anticorpo de IgG anti-hu-IL-36, o antagonista de IL-36 natural IL- 36Ra, ou um controle de anticorpo apropriado (por exemplo, Hu IgG1 Ctrl), foi incubado com células HaCat durante 1 hora a 37 oC, seguido pela adição de agonista (IL-36α, IL-36β ou IL-36γ). O experimento foi deixado prosseguir durante mais 24 horas (37 oC com CO2 5%), com os sobrenadantes de cultura de células coletados e quantificação de IL-8 executada conforme descrito abaixo.

[0291] Um kit ELISA de IL-8 humana (Thermo Fisher Scientific) foi utilizado para quantificar o nível de IL-8 no sobrenadante de acordo com as diretrizes do fabricante. Os dados brutos obtidos foram analisados no software GraphPad Prism, com interpolações executadas por meio de análise de regressão linear. Os dados interpolados foram então analisados utilizando a análise de regressão não linear de 3 parâmetros para derivar os valores de EC50 do agonista e IC50 do anticorpo.

[0292] Conforme mostrado pelos resultados na FIGURA 1A e FIGURA 1C, mAb2.0 demonstrou atividade de bloqueio potente para hu-IL-36α e hu-IL-36γ (IC50 0,28 nM e 1,23 nM, respectivamente), enquanto como mostrado na FIGURA 1B, mAb6.0 demonstrou atividade de bloqueio potente para hu-IL-36β (IC50 0,082 nM) na linhagem celular de queratinócitos humanos HaCat. A potência de bloqueio de mAb2.0 para hu-IL-36α e hu-IL-36γ foi superior àquela do antagonista natural IL-36Ra (100 vezes e 12 vezes, respectivamente) e a potência de bloqueio de mAb6.0 para hu-IL-36β foi superior àquela de IL-36Ra (1000 vezes). Atividade de anticorpos anti-IL-36 no bloqueio da secreção de IL-8 estimulada por IL-36 por queratinócitos humanos primários

[0293] Queratinócitos agrupados neonatais humanos primários (HEKn) estão comercialmente disponíveis e foram obtidos da ThermoFisher (catálogo # A13401). As células foram isoladas de tecido humano doado normal (livre de doença) e crioconservadas pelo fabricante. As células foram descongeladas e mantidas de acordo com as diretrizes gerais recomendadas pelo fabricante. As células HEKn foram mantidas em um meio de crescimento que consiste em meio EpiLife (ThermoFisher) com suplemento de crescimento de queratinócitos humanos (ThermoFisher), 100 UI/ml de penicilina e 100 μg/ml de estreptomicina. No dia anterior ao uso experimental, as células HEKn foram semeadas em placas de 96 cavidades de fundo plano em 10.000 células/cavidade para estar em ~ 80 a 85% de confluência no dia de uso.

[0294] Antes do uso em ensaios de bloqueio de anticorpos, a EC50 do agonista foi determinada através da execução de uma curva dose- resposta do agonista de uma maneira semelhante àquela descrita no Exemplo 2 para as células HaCat, mas com as seguintes modificações. Após a adição do agonista às células HEKn em cavidades contendo apenas meio de crescimento celular (volume final 200 μl), as células retornaram à incubadora de cultura de tecidos (37oC com CO2 5%) durante 24 horas. O sobrenadante da cultura de tecidos foi então recolhido e armazenado a -20 oC.

[0295] Os ensaios de bloqueio de anticorpos foram executados como acima para células HaCat. Resumidamente, xIL-36 IgG, ou um controle de anticorpo apropriado (por exemplo, Hu IgG1 Ctrl), foi incubado com células HEKn, como indicado, durante 1 hora a 37 oC, seguido pela adição de agonista (IL-36α, IL- 36β ou IL-36γ). O experimento foi deixado prosseguir durante mais 24 horas (37 oC com CO2 5%), com os sobrenadantes de cultura de células coletados e quantificação de IL-8 executada conforme descrito abaixo.

[0296] Um kit ELISA de IL-8 humana (Thermo Fisher Scientific) foi utilizado para quantificar o nível de IL-8 no sobrenadante de acordo com as diretrizes do fabricante. Os dados brutos obtidos foram analisados no software GraphPad Prism, com interpolações executadas por meio de análise de regressão linear. Os dados interpolados foram então analisados utilizando a análise de 3 parâmetros de regressão não linear padrão para derivar os valores de EC50 do agonista e IC50 do anticorpo.

[0297] Como mostrado pelos resultados do ensaio HEKn na FIGURA 2A e FIGURA 2C, mAb2.0 demonstrou atividade de bloqueio potente para hu-IL-36α e hu-IL-36γ (IC50 0,33 nM e 2,27 nM, respectivamente), enquanto como mostrado na FIGURA 2B, mAb6.0 demonstrou atividade de bloqueio potente para hu-IL-36β (IC50 1,75 nM) em queratinócitos adultos humanos primários. Exemplo 3: Atividade de mAb6.0 HC/mAb2.0 LC quimera mAb6.0_2.0 na ligação e bloqueio de hu-IL-36β

[0298] mAb6.0_2.0 foi gerado semelhante a outras IgGs descritas no Exemplo 2 acima, exceto por cotransfecção da cadeia pesada de mAb6.0 e da cadeia leve de mAb2.0.

[0299] A análise de ressonância plasmônica de superfície (SPR) foi utilizada para determinar a afinidade de ligação para hu-IL-36β de mAb6.0_2.0 IgG utilizando um instrumento BIACORE™ 8K (GE Healthcare, Chicago, IL, USA). Resumidamente, mAb6.0_2.0 IgG 6 nM ou mAb6.0 IgG em tampão HBS-P (GE Healthcare, Chicago, IL, USA; HEPES 0,01 M pH 7,4, NaCl 0,15 M, 0, tensoativo P20 005%) foi capturado em um chip sensor de proteína A (GE Healthcare, Chicago, IL, USA) em 10 µl/min para atingir 50 a 60 unidades de resposta na segunda célula de fluxo (FC2). A FC1 foi mantida como referência. Em seguida, diluições em série de 3 vezes de hu-IL-36β em tampão HBS- P de nível baixo (0,046 nM de hu-IL-36β) a nível elevado (100 nM de hu-IL-36β) foram injetadas (taxa de vazão: 30 µl/min) a 37 oC. O sensorgrama foi gravado e sujeito à referência e subtração do tampão antes da análise dos dados com o software de avaliação BIACORE® 8K (GE Healthcare, Chicago, IL, USA; versão 1.1.1.7442). As taxas de associação (kon) e as taxas de dissociação (koff) foram calculadas utilizando um modelo de ligação Langmuir simples de um para um. A constante de dissociação de equilíbrio (KD) foi calculada como a relação de koff/kon.

[0300] mAb6.0_2.0 IgG ligado a hu-IL-36β com uma KD de 6,7 nM (kon = 3.20 x 105 1/Ms, koff = 2,14 x 10-3 1/s) enquanto que mAb6.0 IgG bound hu-IL-36β com uma KD de 0,42 nM (kon = 3,62 x 105 1/Ms, koff = 1,15 x 10-4 1/s). Assim, mAb6.0_2.0 ligado a hu-IL-36β com uma afinidade 16 vezes menor do que mAb6.0.

[0301] Para determinar a potência de bloqueio e eficácia de mAb6.0_2.0 IgG in vitro, avaliamos sua capacidade de inibir a secreção de IL-8 estimulada por hu-IL-36β por células HaCat. Os ensaios de células HaCat foram executados conforme descrito no Exemplo 2. Resumidamente, mAb6.0_2.0 IgG, mAb6.0 IgG ou um controle de anticorpo apropriado (por exemplo, Hu IgG1 Ctrl), foi incubado com células HaCat durante 1 hora a 37 oC, seguido pela adição de agonista hu-IL-36β. O experimento foi deixado prosseguir durante mais 24 horas (37 oC com CO2 5%), com os sobrenadantes de cultura de células coletados e quantificação de IL-8 executada conforme descrito no Exemplo 2. Os dados interpolados foram então analisados utilizando análise de regressão não linear padrão no software GraphPad Prism para derivar os valores de IC50 do anticorpo.

[0302] mAb6.0_2.0 IgG foi observado de inibir a secreção de IL-8 estimulada por hu-IL-36β pela linhagem celular de queratinócitos HaCat com uma potência 16 vezes menor do que mAb6.0 IgG (IC50 de mAb6.0_2.0 = 12,7 nM; IC50 de mAb6,0 = 0,8 nM). Exemplo 4: Maturação de afinidade de anticorpos anti-IL-36 utilizando seleção de biblioteca de fago

[0303] Este exemplo ilustra a preparação de versões maturadas por afinidade dos anticorpos mAb6.0_2.0 e mAb2.0 com afinidades melhoradas para IL-36β e IL-36α/γ. Uma mutação para prevenir a conversão de piroglutamato

[0304] Para prevenir a formação de variantes de piroglutamato, a glutamina (Q ou Gln) pode ser mutada para glutamato (E ou Glu) (Amphlett, G. et al., Pharm. Biotechnol., 9:1-140 (1996)). A posição 1 (de acordo com a numeração de Kabat) nos domínios variáveis de cadeia pesada e domínios variáveis de cadeia leve de mAb2.0 e mAb6.0 foi mutada de glutamina (Q) para glutamato (E) por síntese de genes, resultando em anticorpos mAb2, mAb6 e mAb6_2. Os domínios variáveis foram clonados em um construto de expressão de Fab de mamífero contendo um marcador 8xHis para gerar proteínas Fab. Mutações semelhantes na posição 1 também podem ser feitas em mAb1.0, mAb3.0, mAb4.0, mAb5.0, mAb7.0 e mAb8.0. B. Construção e seleção de biblioteca NNK de maturação de afinidade de mAb6_2

[0305] Para melhorar a afinidade da cadeia pesada de mAb6 emparelhada com a cadeia leve de mAb2 (mAb6_2, uma ramificação para molécula biespecífica de cadeia leve comum) contra IL-36β humana, bibliotecas de fago foram construídas a partir de mAb6_2 em formato Fab-âmbar para exibição de fago Fab monovalente com resíduos de HVR de cadeia pesada (isto é, HVR-H1, HVR-H2 e HVR- H3) randomizados utilizando o códon degenerado NNK que codifica para todos os 20 aminoácidos com 32 códons (Brenner et al., 1992) (com resíduos de cadeia leve de mAb2 mantidos inalterados). As bibliotecas foram projetadas para permitir uma mutação NNK em cada uma das três HVRs de cadeia pesada. Os oligonucleotídeos de mutagênese sintetizados foram então utilizados para construir bibliotecas de cadeia pesada utilizando a mutagênese de Kunkel (Kunkel et al., 1987). O DNA da biblioteca resultante foi eletroporado em células de E. coli XL1, produzindo aproximadamente 4 x 10 9 transformantes. Bibliotecas de fagos foram incubadas em tampão SUPERBLOCK™ PBS (Pierce) e TWEEN® 20 0,05% durante 30 min e, em seguida, aplicadas em placa revestida com IL-36β humano para primeira rodada de seleção. Nas duas a três rodadas subsequentes, as bibliotecas de fagos foram incubadas com concentração decrescente de IL-36β humano biotinilado com IL-36β humano 1000x não biotinilado como competidor em solução para aumentar o rigor da seleção. C. Caracterização de variantes de fago de mAb6_2 da biblioteca NNK de maturação de afinidade

[0306] Os fagos selecionados com sinal de ligação superior foram purificados para executar ELISA de competição de fago. A concentração ideal de fago foi incubada com IL-36β humana diluída em série em tampão de ELISA (BSA 0,5% e TWEEN®20 0,05% em

PBS) em placa NUNC F durante duas horas. 80 µl da mistura foram transferidos para cavidades revestidas com IL-36β humano durante 15 min para capturar o fago não ligado.

A placa foi lavada com tampão de lavagem (TWEEN®20 0,05% em PBS) e anticorpo anti-M13 conjugado com HRP (Sino biological, Cat # 11973-MM05-H-50) foi adicionado em tampão de ELISA durante 30 min.

A placa foi incubada na temperatura ambiente durante uma hora com agitação, lavada seis vezes com tampão de lavagem e desenvolvida durante 15 minutos pela adição de 100 μl/cavidade de substrato 1 Step Turbo TMB (ThermoFisher, Cat# 34022). A reação enzimática foi interrompida utilizando 50 μl/cavidade de H2SO4 2N.

As placas foram analisadas utilizando uma leitora de placas Perkin Elmer (leitora de múltiplas marcações Envision 2103) em 450 nm.

A absorbância em 450 nm foi representada graficamente como uma função da concentração de antígeno em solução para determinar a IC50 do fago.

Isso foi utilizado como uma estimativa de afinidade para o clone Fab exposto na superfície do fago.

Afinidades reais para moléculas Fab purificadas para as variantes de fago também foram medidas utilizando Biacore (método descrito com detalhes na seção E abaixo). Sequências de HVR variantes, resumo de IC50 do fago e valores de KD são mostrados abaixo na Tabela 7. Tabela 7. Sequências de HVR variantes de mAb6_2, valores de IC50 e KD contra hu-IL-36β HVR-H1 HVR-H2 HVR-H3 Variante (30-35A) (50-61) (93-102) IC50 (nM) Biacore KD (nM) mAb6_2 TSSNYYW SIDYTGSTYYNP ARGKYYETYLGFDV 8,57 40,1 mAb6_2.1 TSTNYYW NIDYTGSTYYNA ATGKYYETYLGFDV 0,77 3,50 mAb6_2.2 TSSNAYW SIDYTGSTAYNP AHGKYYETYLGFDV 1,04 2,55 mAb6_2.3 TASNYYW SIDYTGSTYYNT ATGKYYETYLGFDV 0,49 1,62 mAb6_2.4 TASNYYW SIDYTGSTYYNP ATGKYYETYLGFDV ND 1,05

D.

Sequenciamento de próxima geração de bibliotecas de maturação de afinidade mAb6_2

[0307] A fim de melhorar ainda mais a afinidade de mAb6_2, o sequenciamento de próxima geração (NGS) de bibliotecas de maturação de afinidade de mAb6_2 foi executado. O DNA de cadeia dupla de fagemídeo foi isolado de células de E. coli XL-1 portadoras de fagomídeos da biblioteca de fagos inicial (bibliotecas não classificadas) e da segunda e terceira rodadas de seleção de solução (bibliotecas classificadas). O DNA purificado foi utilizado como o modelo para gerar amplicons de regiões VH utilizando o protocolo de preparação da biblioteca Illumina 16s. Adaptadores de sequenciamento e códigos de barras de índice duplo foram adicionados utilizando o Illumina Nextera XT Index Kit. Em preparação para o sequenciamento em um instrumento Illumina MiSeq (Illumina, San Diego, USA), os amplicons ligados por adaptador foram submetidos à desnaturação da biblioteca Illumina padrão e ao protocolo de carregamento de amostra utilizando o MiSeq Reagent Kit v3 (600 ciclos). O sequenciamento de extremidade pareada foi executado para cobrir todo o comprimento do amplicon com tamanho de inserção de 200bp a 300pb.

[0308] Dados de sequenciamento de extremidade pareada foram em primeiro lugar montados utilizando montador de extremidade pareada PANDAseq (Masella et al., 2012) para obter amplicons completos. O controle de qualidade (QC) foi então executado em amplicons identificados, onde cada amplicon foi verificado quanto à ausência de inserções ou deleções de sequência e códons de parada, e cada sequência CDR foi autorizada a transportar apenas até uma mutação NNK e nenhuma mutação não NNK. As matrizes de peso de posição foram geradas através do cálculo da frequência de todas as mutações de cada posição aleatória. As taxas de enriquecimento para cada mutação foram calculadas mediante a divisão da frequência de uma determinada mutação em uma determinada posição na amostra classificada com a frequência da mesma mutação na amostra não classificada, conforme descrito anteriormente (Koenig et al., 2015). As mutações previstas em suas HVRs que sustentaram a ligação melhorada de mAb6_2 a hu-IL-36β estão resumidas na Tabela 8 abaixo. Tabela 8. Mutações previstas em mAb6_2 que sustentam a ligação de hu-IL-36β Domínio Posição Substituições com Ligação Melhorada HVR-H11 T30 D, E, N S31 A, E, G, K, Q, R, T S32 A, D, E, G, N, P, Q, T Y34 A, E, G, H, M, N, Q, S, T, V W35A F, I, V, Y HVR-H22 S50 N, T I51 M, V Y53 H T54 H, L, N G55 A, D, E, H, K, N, Q, R, S, T S56 A, D, Q, T T57 A, D, E Y58 A, F, Q, S, W N60 D, E, H, P, Q P61 A, E HVR-H33 R94 A, E, G, H, M, N, Q, S, T, Y K96 A, S E99 T 1 HVR-H1 a partir das posições 30-35A 2 HVR-H2 a partir das posições 50-61 3 HVR-H3 a partir das posições 93-102 E. Caracterização de variantes de NGS melhoradas por afinidade de mAb6_2 Geração de variantes Fab NGS melhoradas por afinidade de mAb6_2

[0309] De acordo com as mutações previstas da análise NGS

(mostrada na Tabela 8 acima), Fabs NGS de mAb6_2 selecionados com sequências HVR variantes (mostradas abaixo na Tabela 9) foram sintetizados para clonagem em um construto de expressão de Fab de mamífero contendo um marcador 8xHis para gerar proteínas de Fab. Os plasmídeos que codificam a cadeia pesada ou leve foram transitoriamente transfectados em células Expi293F (Thermo Fisher) de acordo com o protocolo do fabricante utilizando uma relação de 1:1 de HC:LC. Os Fabs foram purificados com uma coluna HisPur Ni-NTA através da diluição do sobrenadante 1,5x com solução salina tamponada com fosfato 1x pH 7,2 (PBS), adição de imidazol 10 mM e ligação à resina em modo de batelada durante 2 horas. A resina foi circulada sobre uma coluna e lavada com 20 CV PBS + imidazol 20 mM e eluída com 5 CV PBS + imidazol 250 mM. As amostras eram tampão trocado por PBS utilizando uma coluna PD10 (GE). Determinação de afinidade de variantes de Fab NGS melhoradas por afinidade de mAb6_2 utilizando SPR

[0310] Para determinar a afinidade de ligação de variantes de Fab NGS mAb6_2 recombinantes para IL-36β humana a 37 oC, medições de SPR com um instrumento BIACORE™ 8K foram executadas. Resumidamente, uma diluição 1:4 de Biotin CAPture Reagent (GE) em tampão HBS-EP (HEPES 0,01 M pH 7,4, NaCl 0,15 M, EDTA 3 mM, tensoativo P20 0,005%) foi aplicada a um chip sensor CAP na taxa de vazão de 2 ul/min. Para medições cinéticas, IL-36β humano biotinilado 6 nM foi capturado em 10 ul/min para atingir ~50 unidades de resposta na segunda célula de fluxo (FC2). A FC1 foi mantida como uma referência. Em seguida, diluições em série de 3 vezes de Fab em tampão HBS-P (HEPES 0,01 M pH 7,4, NaCl 0,15 M, tensoativo P20 0,005%) de nível baixo (3,125 nM) a nível alto (200 nM) foram injetadas (taxa de vazão: 10 ul/min) a 37 oC. O sensorgrama foi registrado e sujeito a referência e subtração de tampão antes de ser avaliado pelo BIACORE® 8K Evaluation Software (versão 1.1.1.7442). As taxas de associação (kon) e as taxas de dissociação (koff) foram calculadas utilizando um modelo de ligação Langmuir simples de um para um. A constante de dissociação de equilíbrio (KD) foi calculada como a relação de koff/kon resumida na Tabela 9. Tabela 9. Sequências HVR variantes de mAb6_2, seus valores kon, koff e KD contra hu-IL-36β Identificador HVR-H1 HVR-H2 HVR-H3 de Fab (30-35A) (50-61) (93-102) kon (1/Ms) koff (1/s) KD (nM) mAb6_2 TSSNYYW SIDYTGSTYYNP ARGKYYETYLGFDV 8,72 x104 1,28 x10-3 14,7 mAb6_2.5 TASNYYW SIDYTGSTYYEP ATGSYYETYLGFDV 7,17 x105 4,76 x10-4 0,66 mAb6_2.6 TASNYYW SIDYTGSTYYEP ATGNYYETYLGFDV 8,56 x105 7,05 x10-4 0,82 mAb6_2.7 TASNTYW SIDYTGSTYYNP ATGKYYETYLGFDV 2,97 x105 1,80 x10-4 0,61 mAb6_2.8 TASNYYW SIDYTGSTYYNP ASGKYYETYLGFDV 3,17 x105 3,43 x10-4 1,08 mAb6_2.9 TSSNYYW SIDYTGSTYYNP ATGKYYETYLGFDV 2,99 x105 4,11 x10-4 1,37 mAb6_2.10 TSSNYYW SIDYTGSTYYQP ARGNYYETYLGFDV 4,15 x105 1,03 x10-3 2,47 F. Construção e separação de biblioteca NNK de maturação de afinidade mAb2

[0311] Para melhorar ainda mais a afinidade de IL-36α humana e IL-36γ humana de mAb2 anti-IL-36, as bibliotecas de fago foram construídas a partir de mAb2 em formato Fab-âmbar para exibição de fago Fab monovalente com resíduos de HVR de cadeia pesada (isto é, HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3) randomizados utilizando o códon degenerado NNK que codifica todos os 20 aminoácidos com 32 códons (Brenner et al., 1992) (com resíduos da cadeia leve mAb2 mantidos inalterados). As bibliotecas foram projetadas para permitir uma mutação NNK em cada uma das três HVRs de cadeia pesada. Os oligonucleotídeos de mutagênese sintetizados foram então utilizados para construir bibliotecas de cadeia pesada utilizando a mutagênese de Kunkel (Kunkel et al., 1987). O DNA da biblioteca resultante foi eletroporado em células de E. coli XL1, produzindo aproximadamente

4 x 109 transformantes. Bibliotecas de fago foram incubadas em tampão SUPERBLOCK™ PBS (Pierce) e TWEEN® 20 0,05% durante 30 min e, em seguida, aplicadas em placas revestidas com IL-36α humano ou IL-36γ humano para o primeiro ciclo de separação. Nas duas a três rodadas subsequentes, as bibliotecas de fago foram incubadas com concentrações decrescentes de IL-36α humano biotinilado ou IL-36γ humano com 1000x IL-36α humano não biotinilado ou IL-36γ humano como competidor em solução para aumentar o rigor da seleção. G. Caracterização de variantes de fago mAb2 da biblioteca NNK de maturação de afinidade

[0312] Os fagos selecionados com sinal de ligação superior foram purificados para executar o ELISA de competição de fago. A concentração de fago ideal foi incubada com IL-36α humano ou IL-36γ humano diluído em série em tampão ELISA em placa NUNC F durante duas horas. 80 µl da mistura foram transferidos para cavidades revestidas com IL-36α ou IL-36γ humano durante 15 min para capturar o fago não ligado. A placa foi lavada com tampão de lavagem (TWEEN®20 0,05% em PBS) e anticorpo anti-M13 conjugado com HRP (Sino biological, Cat # 11973-MM05-H-50) foi adicionado em tampão ELISA durante 30 min. As placas foram lavadas e desenvolvidas como descrito acima. A absorbância em 450 nm foi representada graficamente como uma função da concentração de antígeno em solução para determinar a IC50 do fago. Isso foi utilizado como uma estimativa de afinidade para o clone Fab exposto sobre a superfície do fago. Consulte a Tabela 10 abaixo para um resumo das sequências de HVR variantes e IC50 de fago. Tabela 10: Sequências da HVR de mAb2 e seus valores de IC50 contra hu-IL-36α e hu-IL-36γ.

HVR-H1 HVR-H2 HVR-H3 Fago IC50 (nM) Fago IC50 (nM) Variant3 (30-35A) (50-61) (93-102) hu-IL-36α hu-IL-36γ mAb2 STSSYYW SIYYTGNTYYNP ARVRYGVGVPRYFDP 1,20 3,20 mAb2.1 SDSSYYW SIYYTGNTYYNS ARVRYGVGVPRYFDP 1,03 4,86 mAb2.2 SESSYYW SIYYTGNTYYNP AGVRYGVGVPRYFDP 0,75 3,79 mAb2.3 STSSDYW SIYYTGNTYYLP SRVRYGVGVPRYFDP 0,82 2,39 mAb2.4 SNSSYYW SIYYTGNTYYLP ARVRYGVGVPRYFDP 0,68 1,52 mAb2.5 SESSYYW SIYYTGNTYYLP ARVRYGVGVPRYFDP 0,77 1,88 mAb2.6 STSSYHW SIYYTGNTYYMP VRVRYGVGVPRYFDP 1,62 1,99 mAb2.7 SRSSYYW SIYYTGNTYYWP TRVRYGVGVPRYFDP 1,20 1,53 H. Sequenciamento de próxima geração de bibliotecas de maturação de afinidade de mAb2

[0313] A fim de melhorar ainda mais a afinidade de mAb2, o sequenciamento de próxima geração (NGS) de bibliotecas de maturação de afinidade de mAb2 foi executado. O DNA de cadeia dupla de fagemídeo foi isolado de células de E. coli XL-1 que carregam fagomídeos da biblioteca de fago inicial (bibliotecas não classificadas) e da segunda e terceira rodadas de seleção de solução (bibliotecas classificadas). O DNA purificado foi utilizado como o modelo para gerar amplicons de regiões VH utilizando o protocolo de preparação da biblioteca Illumina 16s. Adaptadores de sequenciamento e códigos de barras de índice duplo foram adicionados utilizando o Illumina Nextera XT Index Kit. Na preparação para o sequenciamento no Illumina MiSeq, os amplicons ligados ao adaptador foram submetidos à desnaturação da biblioteca Illumina padrão e ao protocolo de carregamento de amostra utilizando o MiSeq Reagent Kit v3 (600 ciclos). O sequenciamento de extremidades pareadas foi executado para cobrir todo o comprimento do amplicon com tamanho de inserção de 200bp a 300pb.

[0314] Dados de sequenciamento de extremidade pareada foram em primeiro lugar montados utilizando montador de extremidade pareada PANDAseq (Masella et al., 2012) para obter amplicons completos.

O controle de qualidade (QC) foi então executado em amplicons identificados, onde cada amplicon foi verificado com relação a nenhuma inserção ou deleção de sequências e sem códons de parada, cada sequência CDR foi deixada transportar apenas até uma mutação NNK e nenhuma mutação não NNK.

As matrizes de peso de posição foram geradas através do cálculo da frequência de todas as mutações de cada posição aleatória.

As relações de enriquecimento para cada mutação foram calculadas mediante a divisão da frequência de uma determinada mutação em uma determinada posição na amostra classificada com a frequência da mesma mutação na amostra não classificada, conforme descrito anteriormente (Koenig et al., 2015). As mutações previstas nas HVRs que sustentam a melhora de ligação de mAb2 a hu-IL-36α ou hu-IL-36γ estão resumidas na Tabela 11. Tabela 11. Mutações previstas em mAb2 que sustentam a ligação de IL-36α e IL-36γ humanos

Domínio Posição Substituições com Ligação Melhorada HVR-H11 S30 D T31 A, D, E, G, H, K, N, P, Q, R, S S32 D, E, G, K, N, P, R S33 G, K, N, P Y34 A, D, E, G, H, M, N, Q, S, T, V, W Y35 A, F, G, H, M, N, Q HVR-H22 S50 F, I, M, Q I51 A, G, L, R, S, T, V Y52 A, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, W Y53 A, D, E, F, G, H, K, N, P, Q, R, S, T, W T54 D, E, K, N, P, Q G55 Q N56 D, E, G, H, I, K, M, P, R, S T57 A, E, F, G, H, K, P, Q, R, S, V, W, Y Y58 W

Domínio Posição Substituições com Ligação Melhorada N60 A, D, E, K, L, M, P, Q, S, T HVR-H33 A93 V R94 A, G, N, Q, T V95 A, F, I, K, L, M, Q, S R96 A, I, K, L, M, P, Q, S, T, V Y97 H, I, L, V V99 A, F, G, K, M, N, Q, R, S, T, W, Y G100 N, R, S, T Y100D F, H, I, L, M, Q, R 1 HVR-H1 a partir das posições 30-35A 2 HVR-H2 a partir das posições 50-61 3 HVR-H3 a partir das posições 93-102 I. Caracterização de variantes NGS melhoradas por afinidade de mAb2 Geração de variantes de Fab NGS melhoradas por afinidade de mAb2

[0315] De acordo com as mutações previstas da análise de NGS (Tabela 11 acima), sequências de variantes selecionadas de NGS Fab HVR de mAb2 (mostradas na Tabela 12 abaixo) foram sintetizadas para clonagem em um construto de expressão de Fab de mamífero contendo um marcador 8xHis para gerar proteínas Fab. Os plasmídeos que codificam a cadeia pesada ou leve foram transfectados em células Expi293F (Thermo Fisher) utilizando uma relação de 1:1 de HC:LC. Os Fabs foram purificados com uma coluna HisPur Ni-NTA através da diluição do sobrenadante 1,5x com solução salina tamponada com fosfato 1x pH 7,2 (“PBS”), adição de imidazol 10 mM, e ligação à resina em modo de batelada durante 2 horas. A resina foi circulada sobre uma coluna e lavada com 20 CV PBS + imidazol 20 mM e eluída com 5 CV PBS + imidazol 250 mM. As amostras foram trocadas por tampão para PBS utilizando uma coluna PD10 (GE).

Tabela 12: Sequências de HVR de variantes de Fab NGS de mAb2 HVR-H1 HVR-H2 HVR-H3 Identificador de Fab (30-35A) (50-61) (93-102) mAb2 STSSYYW SIYYTGNTYYNP ARVRYGVGVPRYFDP mAb2.8 SDSSYYW SIYYTGETYYAP ARLRYGVGVPRYFDP mAb2.9 SDSSYYW SIYYTGETYYAP ARVKYGVGVPRYFDP mAb2.10 SDSSYYW SIYYTGETYYAP ARVRYGVGVPRHFDP mAb2.11 SESSYYW SIYYTGETYYAP ARLRYGVGVPRYFDP mAb2.12 SESSYYW SIYYTGETYYAP ARVKYGVGVPRYFDP Determinação de afinidade de variantes de Fab NGS com afinidade aprimorada de mAb2 utilizando SPR

[0316] Para determinar a afinidade de ligação de variantes de Fab NGS de mAb2 recombinantes com IL-36α humano e IL-36γ humano a 37 oC, medições de SPR com um instrumento BIACORE™ 8K foram executadas. Resumidamente, uma diluição 1:4 de Biotin CAPture Reagent (GE) em tampão HBS-EP (HEPES 0,01 M pH 7,4, NaCl 0,15 M, EDTA 3 mM, tensoativo P20 0,005%) foi aplicada a um chip sensor CAP na taxa de vazão de 2 ul/min. Para medições cinéticas, IL-36α humano e IL-36γ humano biotinilados 3 nM foram capturados em 10 ul/min para atingir ~50 unidades de resposta na segunda célula de fluxo (FC2). A FC1 foi mantida como referência. Logo depois, diluições em série de 3 vezes de Fab em tampão HBS-P (HEPES 0,01 M pH 7,4, NaCl 0,15 M, tensoativo P20 0,005%) de nível baixo (3,125 nM) a nível alto (200 nM) foram injetadas (taxa de vazão: 10 ul/min) a 37 oC. O sensorgrama foi registrado e sujeito a referência e subtração do tampão antes de ser avaliado pelo BIACORE® 8K Evaluation Software (versão 1.1.1.7442). As taxas de associação (kon) e as taxas de dissociação (koff) foram calculadas utilizando um modelo de ligação Langmuir simples de um para um. A constante de dissociação de equilíbrio (KD) foi calculada como a relação de koff/kon. Resumido na Tabela 13 abaixo.

Tabela 13: Variantes de Fab NGS de mAb2 kon, koff e KD contra hu-IL- 36α e hu-IL-36γ hu-IL-36α hu-IL-36γ Identificador kon koff kon koff de Fab (1/Ms) (1/s) KD (nM) (1/Ms) (1/s) KD (nM) mAb2 1,16E+06 2,64E-04 0,23 1,39E+06 5,74E-04 0,41 mAb2.8 1,83E+06 2,54E-04 0,14 1,80E+06 3,01E-04 0,17 mAb2.9 2,19E+06 2,60E-04 0,12 2,40E+06 5,65E-04 0,24 mAb2.10 1,49E+06 2,22E-04 0,15 1,37E+06 1,80E-04 0,13 mAb2.11 1,91E+06 2,44E-04 0,13 1,92E+06 2,14E-04 0,11 mAb2.12 1,70E+06 2,77E-04 0,16 1,81E+06 5,03E-04 0,28 Exemplo 5: Avaliação in vitro da atividade de bloqueio de variantes do anticorpo anti-IL-36 na secreção de IL-8 estimulada por hu-IL-36 por meio de células HaCat

[0317] Para determinar a potência de bloqueio e eficácia das variantes de mAb2 e mAb6_2 maturadas por afinidade in vitro, avaliamos sua capacidade de seus fragmentos Fab produzidos de forma recombinante em inibir a secreção de IL-8 estimulada por hu-IL- 36 por meio de células HaCat. Os ensaios de células HaCat foram executados como descrito no Exemplo 2, exceto que os fragmentos Fab de anticorpo de controle ou anti-IL-36 expressos de forma recombinante foram utilizados como antagonistas no lugar de IgG. Resumidamente, Fab anti-IL-36, ou um controle de Fab de anticorpo apropriado (por exemplo, Hu IgG1 Ctrl), foi incubado com células HaCat durante 1 hora a 37 oC, seguido pela adição de agonista (hu-IL- 36α, hu -IL-36β ou hu-IL-36γ). O experimento foi deixado prosseguir durante mais 24 horas (37 oC com CO2 5%), com os sobrenadantes de cultura de células coletados e quantificação de IL-8 executada conforme descrito no Exemplo 2. Os dados interpolados foram então analisados utilizando análise de regressão não linear padrão no software GraphPad Prism para derivar os valores de IC50 do anticorpo.

Tabela 14: Atividade de bloqueio de variantes de anticorpos anti-IL-36 maturados por afinidade na secreção de IL-8 estimulada por IL-36 por meio de células HaCat IC50 (nM) mAb Recombinante IL-36α IL-36β IL-36γ mAb2 Fab 0,3 N.T 0,96 mAb2.10 Fab 0,38 N.T 1,09 mAb2.11 Fab 0,42 N.T 1,05 mAb6 Fab N.T 0,15 N.T mAb6_2 Fab N.T 3,19 N.T mAb6_2.1 Fab N.T 1,64 N.T mAb6_2.2 Fab N.T 2,22 N.T mAb6_2.3 Fab N.T 1,31 N.T mAb6_2.4 Fab N.T 0,13 N.T mAb6_2.5 Fab N.T 0,2 N.T mAb6_2.7 Fab N.T 0,2 N.T mAb6_2.8 Fab N.T 0,33 N.T

[0318] Como mostrado na Tabela 14, o Fab mAb2.10 demonstrou a atividade de bloqueio mais potente da produção de IL-8 mediada por hu-IL-36α e hu-IL-36γ em células HaCat, com uma IC50 de aproximadamente 0,38 nM e 1,09 nM, respectivamente. Como ainda mostrado na Tabela 14, o Fab mAb6_2.7 demonstrou atividade de bloqueio melhorada da produção de IL-8 mediada por IL-36β em células HaCat, com uma IC50 de aproximadamente 0,2 nM. Exemplo 6: Geração de anticorpo anti-IL-36 multiespecífico mAb2.10/mAb6_2.7

[0319] As cadeias pesadas de mAb2.10 e mAb6_2.7 foram clonadas em um formato “knobs-into-holes” (Ridgway et al, 1996) no vetor de expressão pRK em um processo de clonagem em duas etapas. Na etapa 1, mAb2.10 foi sintetizado e clonado em um vetor pRK (utilizando AgeI e BstEII) já contendo mutações de hole (T366S,

L368A e Y407V) e um marcador 8X His. mAb6_2.7 foi sintetizado e clonado em um vetor pRK (utilizando AgeI e BstEII) já contendo mutação de knob (T366W) e um marcador Flag. A cadeia leve de mAb2 também foi clonada no vetor de expressão pRK sem mutações extras. Após um teste inicial bem-sucedido de expressão e purificação de anticorpo multiespecífico com construtos marcados, na etapa 2 do processo de clonagem, os marcadores foram removidos das cadeias pesadas de mAb2.10 e mAb6_2.7. O marcador 8XHis de mAb2.10 foi completamente removido utilizando um conjunto de iniciadores (Iniciador Direto: 5’Phos-TAAGCTTGGCCGCCATGGCC-3’ (SEQ ID NO: 514) e Iniciador Reverso: 5’Phos- ACCCGGAGACAGGGAGAGGC-3’ (SEQ ID NO: 515)) enquanto que um códon de parada TAA foi inserido entre a cadeia pesada de mAb6_2.7 e o marcador Flag utilizando um conjunto de iniciadores (Inciador Direto: 5’-CTGTCTCCGGGTTAAGATTACAAGG-3’ (SEQ ID NO: 516) e Iniciador Reverso: 5’- CCTTGTAATCTTAACCCGGAGACAG-3’ (SEQ ID NO: 517)).

[0320] O anticorpo de cadeia leve comum multiespecífico mAb2.10/mAb6_2.7 foi expresso em células Expi293F (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) de acordo com o protocolo do fabricante através da cotransfecção de plasmídeos a uma relação de massa de 1:1:2 que codifica a cadeia pesada de mAb2.10 contendo mutações de hole e N297G (SEQ ID NO: 235), a cadeia pesada de mAb6_2.7 contendo mutações de knob e N297G (SEQ ID NO: 192), e a cadeia leve de mAb2 (SEQ ID NO: 169). As células foram colhidas após 4 dias e o sobrenadante clarificado foi aplicado a colunas MAbSelect Sure (GE Healthcare, Chicago, IL, USA) equilibradas em PBS pH 7,5. A proteína foi eluída com citrato de sódio 100 mM pH 3 e o pH neutralizado pela adição de Tris-HCl 1,5 M pH 8,8. As frações contendo proteína foram reunidas e trocadas por tampão em Tris 50 mM pH 8, NaCl 10 mM. A proteína foi então carregada em uma coluna Capto S Impact (GE Healthcare, Chicago, IL, USA) equilibrada em Tris 50 mM pH 8, NaCl 10 mM e eluída com um gradiente de 30 CV de Bis- Tris 50 mM pH 6,5, NaCl 10 mM.

[0321] A massa intacta da molécula de anticorpo multiespecífico purificado foi confirmada utilizando um espectrômetro de massa Q Exactive (Thermo Scientific) em combinação com um sistema de cromatografia em fase líquida Ultimate-3000 (Thermo Scientific). O anticorpo purificado foi injetado em uma coluna PLRP-S (Agilent) que foi conectada ao sistema de cromatografia em fase líquida. A análise de espectrometria de massa intacta verificou que a massa observada correspondia à massa prevista do heterodímero. A ausência de espécies de homodímeros também foi confirmada pelo uso da enzima Fabricator (Genovis) que gerou um pool homogêneo de fragmentos F(ab')2 e Fc/2. Cada fragmento correspondeu à massa prevista.

[0322] As frações de eluição Capto S contendo mAb2.10/mAb6_2.7, conforme identificado por espectrometria de massa intacta, foram reunidas e carregadas em uma coluna Superdex 200pg (GE Healthcare, Chicago, IL, USA). As frações máximas contendo proteína monodispersa foram reunidas e armazenadas em 1X PBS, pH 7,5. Exemplo 7: Avaliação da ligação não específica do anticorpo anti-IL-36 multiespecífico mAb2.10/mAb6_2.7

[0323] A ligação não específica da molécula multiespecífica mAb2.10/mAb6_2.7 IgG foi avaliada utilizando ELISA de baculovírus (Hotzel et al., 2012). Resumidamente, partículas de baculovírus foram revestidas em placas Maxisorp de 96 cavidades em uma suspensão de 3% a 4 oC durante a noite. As placas foram então bloqueadas em PBS com BSA 1% e Tween-20 a 0,05% na temperatura ambiente durante uma hora. mAb2.10/mAb6_2.7 IgG em 300 nM, 100 nM e 33 nM com 1x PBS contendo BSA 0,5% e Tween 20 0,05% (tampão ELISA) foram adicionados às placas durante 1 hora e a placa foi lavada com 1x PBS com Tween 20 0,05% (tampão de lavagem). Os anticorpos ligados foram detectados com IgG anti-humana produzida em cabra conjugados com peroxidase de raiz forte (Jackson ImmunoResearch) em tampão de ELISA. A placa foi incubada na temperatura ambiente durante uma hora com agitação, lavada seis vezes com tampão de lavagem e desenvolvida durante 15 minutos pela adição de 100 μl/cavidade de substrato 1 Step Turbo TMB (ThermoFisher, Cat# 34022). A reação enzimática foi interrompida utilizando 50 μl/cavidade de H2SO4 2 N. As placas foram analisadas utilizando uma leitora de placas Perkin Elmer (leitora de múltiplas marcaçoes Envision 2103) em 450 nm e comparadas com os anticorpos de referência. Em comparação com o controle positivo, a molécula multiespecífica mAb2.10/mAb6_2.7 IgG não apresentou nenhum sinal de ELISA de baculovírus detectável, indicando ausência de ligação não específica às partículas de baculovírus (Tabela 15). Tabela 15: ELISA de baculovírus avaliando a ligação não específica de anticorpo anti-IL-36 multiespecífico mAb2.10/mAb6_2.7 IgG Amostras 300 nM 100 nM 33 nM 0 nM Controle Negativo 0,047 0,048 0,056 0,041 Controle Positivo Médio 0,386 0,164 0,081 0,039 mAb2.10/mAb6_2.7 0,073 0,053 0,045 0,040 Exemplo 8: Avaliação in vitro da atividade do anticorpo multiespecífico anti-hu-IL-36 mAb2.10/mAb6_2.7 IgG Cinética de ligação do anticorpo anti-IL-36 multiespecífico mAb2.10/mAb6_2.7

[0324] A análise de ressonância plasmônica de superfície (SPR) foi utilizada para determinar a afinidade de ligação para IL-36 de ser humano e de macaco cinomolgo (“hu-IL-36” e “cy-IL-36”,

respectivamente) utilizando um instrumento BIACORE™ 8K conforme descrito no Exemplo 2. Hu-IL-36α-Avi, hu-IL-36β-Avi, hu-IL-36γ-Avi, cy- IL-36α-Avi, cy-IL-36β-Avi ou cy-IL-36γ-Avi biotinilado in vivo foi analisado separadamente quanto à ligação a mAb2.10/mAb6_2.7. Resumidamente, uma diluição 1:4 de Biotin CAPture Reagent (GE Healthcare) em tampão HBS-EP (HEPES 0,01 M pH 7,4, NaCl 0,15 M, EDTA 3 mM, tensoativo P20 0,005%) foi aplicada a um chip sensor CAP na taxa de vazão de 2 µl/min. Para medições cinéticas, IL-36α- Avi, IL-36γ-Avi 1 nM biotinilados de seres humanos e cino; IL-36β-Avi 0,8 nM biotinilado de ser humano e cino foram capturados em 10 µl/min para atingir 15 a 25 unidades de resposta na segunda célula de fluxo (FC2). A FC1 foi mantida como referência. Logo depois, diluições em série de 2 vezes da proteína mAb2.10/mAb6_2.7 em tampão HBS- P (HEPES 0,01 M pH 7,4, NaCl 0,15 M, tensoativo P20 0,005%) de nível baixo (1,56 nM) a nível alto (200 nM) foram injetadas (taxa de vazão: 30 µl/min) a 25 oC ou 37 oC. O sensorgrama foi registrado e sujeito a referência e subtração do tampão antes da análise dos dados com o software de avaliação BIACORE® 8K (versão 1.1.1.7442). Uma vez que cada anticorpo de IgG multiespecífico contém apenas uma ramificação Fab capaz de se ligar a uma proteína IL-36 sendo testada, a interação de ligação é monovalente. As taxas de associação (kon) e as taxas de dissociação (koff) foram calculadas utilizando um modelo de ligação Langmuir simples de um para um. A constante de dissociação de equilíbrio (KD) foi calculada como a relação de koff/kon.

[0325] Os resultados de afinidade Biacore para mAb2.10/mAb6_2.7 estão resumidos abaixo na Tabela 16. mAb2.10/mAb6_2.7 liga-se a todas as citocinas IL-36 de ser humano e de macaco cinomolgo com afinidades elevadas e comparáveis. Tabela 16: Afinidade de anticorpo multiespecífico mAb2.10/mAb6_2.7 para hu-IL-36 e cy-IL-36

25 °C 37 °C kon koff KD kon koff KD Ligante (1/Ms) (1/s) (nM) (1/Ms) (1/s) (nM) hu-IL-36α 1,34*105 1,57*10-4 1,17 2,23*105 4,34*10-4 1,95 hu-IL-36β 7,6*104 4,77*10-5 0,63 9,14*104 1,68*10-4 1,84 hu-IL-36γ 1,71*105 1,22*10-4 0,72 2,1*105 3,41*10-4 1,63 cy-IL-36α 1,74*105 3,35*10-4 1,93 2,43*105 6,25*10-4 2,57 cy-IL-36β 6,52*104 6,32*10-5 0,97 8,69*104 2,18*10-4 2,51 cy-IL-36γ 1,65*105 1,3*10-4 0,79 1,58*105 1,48*10-4 0,94 Atividade de bloqueio do anticorpo multiespecífico mAb2.10/mAb6_2.7 na secreção de IL-8 estimulada por IL-36 pelas células HaCat

[0326] Para determinar a potência de bloqueio e eficácia do anticorpo multiespecífico mAb2.10/mAb6_2.7, avaliamos sua capacidade de inibir a secreção de IL-8 estimulada por hu-IL-36 pelas células HaCat. Um controle de isótipo IgG humano (“Hu IgG1 Ctrl”) também foi testado para servir como um controle negativo. Os ensaios de células HaCat foram executados como descrito no Exemplo 2, exceto que mAb2.10/mAb6_2.7 expresso de forma recombinante ou Hu IgG1 Ctrl foi utilizado como antagonistas. Resumidamente, mAb2.10/mAb6_2.7, ou um controle de anticorpo apropriado (por exemplo, Hu IgG1 Ctrl), foi incubado com células HaCat durante 1 hora a 37 oC, seguido pela adição de agonista (hu-IL-36α, hu-IL-36β ou hu-IL-36γ). O experimento foi deixado prosseguir durante mais 24 horas (37 oC com CO2 5%), com os sobrenadantes da cultura de células coletados.

[0327] A quantificação de IL-8 em sobrenadantes foi executada utilizando Cisbio Bioassay, ensaio de IL-8 humano baseado em tecnologia HTRF. O ensaio foi executado de acordo com as orientações do fabricante. Um Spectramax compatível com HTRF

(Molecular Devices) foi utilizado para obter dados brutos e calcular a relação dos sinais de emissão aceitante para doador em 665 nm e 620 nm, respectivamente, em conjunto com o software SoftMax Pro (Molecular Devices). Os dados obtidos foram analisados utilizando o software GraphPad Prism, com interpolações executadas utilizando a análise de regressão linear e ponderação definida por “Peso por 1/Y2”. Os dados interpolados foram então analisados usando a análise de 3 parâmetros de regressão não linear padrão para derivar os valores de EC50 do agonista e IC50 do anticorpo.

[0328] Conforme mostrado nas FIGURA 3A, FIGURA 3B e FIGURA 3C, mAb2.10/mAb6_2.7 demonstrou potente atividade de bloqueio da produção de IL-8 mediada por IL-36α, IL-36β e IL-36γ em células HaCat, com valores de IC50 de aproximadamente 0,38 nM, 0,13 nM e 1,1 nM, respectivamente. EM mAb2.10/mAb6_2.7 8 nM, 100% da produção de IL-8 mediada por IL-36α, IL-36β e IL-36γ em células HaCat foi inibida. Atividade de bloqueio do anticorpo multiespecífico mAb2.10/mAb6_2.7 na secreção de IL-8 estimulada por IL-36 por queratinócitos humanos primários

[0329] Para determinar a potência de bloqueio e eficácia do anticorpo multiespecífico mAb2.10/mAb6_2.7 em células humanas primárias, avaliamos sua capacidade de inibir a secreção de IL-8 estimulada por hu-IL-36 por queratinócitos humanos adultos primários. Um controle de isótipo de IgG humano (“Hu IgG1 Ctrl”) também foi testado para servir como um controle negativo. Queratinócitos epidérmicos humanos normais adultos foram obtidos da Lonza. As células foram isoladas de tecido humano doado normal (livre de doença) e crioconservadas pelo fabricante. As células foram descongeladas e mantidas de acordo com as diretrizes gerais recomendadas pelo fabricante. As células HEKa foram mantidas em um meio de crescimento que consiste em meio de crescimento de queratinócitos suplementado da Gold BulletKit (Lonza). No dia anterior ao uso experimental, as HEKa foram semeadas em placas de 96 cavidades de fundo plano em 10.000 células/cavidade para estar em ~80 a 85% de confluência no dia de uso. Os ensaios de células de queratinócitos primários foram executados como descrito no Exemplo 2 com queratinócitos humanos adultos (HEKa), exceto que mAb2.10/mAb6_2.7 expresso de forma recombinante ou Hu IgG1 Ctrl foi utilizado como antagonistas. Resumidamente, mAb2.10/mAb6_2.7, ou um controle de anticorpo apropriado (por exemplo, Hu IgG1 Ctrl), foi incubado com células HEKa durante 1 hora a 37 oC, seguido pela adição de agonista (hu-IL-36α, hu -IL-36β ou hu-IL-36γ). O experimento foi deixado prosseguir durante mais 24 horas (37 oC com CO2 5%), com sobrenadantes da cultura de células coletados e quantificação de IL-8 executada utilizando Cisbio Bioassay, ensaio de IL-8 humano baseado em tecnologia HTRF como descrito acima. Os dados interpolados foram então analisados utilizando a análise de regressão não linear padrão no software GraphPad Prism para derivar os valores de IC50 do anticorpo.

[0330] Conforme mostrado nas FIGURA 4A, FIGURA 4B e FIGURA 4C, mAb2.10/mAb6_2.7 demonstrou potente atividade de bloqueio da produção de IL-8 mediada por IL-36α, IL-36β e IL-36γ em queratinócitos adultos humanos primários, com valores de IC50 de aproximadamente 0,56 nM, 0,11 nM, e 2,7 nM, respectivamente. Em mAb2.10/mAb6_2.7 8 nM, 100% da produção de IL-8 mediada por IL- 36α, IL-36β e IL-36γ em queratinócitos adultos humanos primários foi inibida. Este exemplo demonstra que a potência de mAb2.10/mAb6_2.7 nas células humanas primárias é semelhante àquela observada na linhagem celular de queratinócitos humanos HaCat.

[0331] Para demonstrar a atividade de bloqueio independente das ramificações Fab no anticorpo multiespecífico mAb2.10/mAb6_2.7, avaliamos sua capacidade de inibir a secreção de IL-8 por queratinócitos humanos adultos primários estimulados por uma mistura de hu-IL-36α e hu-IL-36β utilizando métodos semelhantes àqueles descritos acima com a seguinte modificação. mAb2.10/mAb6_2.7, ou um controle de anticorpo apropriado (por exemplo, Hu IgG1 Ctrl), foi incubado com células HEKa durante 1 hora a 37 oC, seguido pela adição de agonistas (hu-IL-36α individualmente, hu-IL-36β individualmente, ou uma mistura de hu-IL-36α e hu-IL-36β aproximadamente na EC50 de cada citocina). mAb2.10/mAb6_2.7 demonstrou potente atividade de bloqueio de uma mistura de IL-36α e IL-36β, com um valor de IC50 de aproximadamente 0,44 nM. Os valores de IC50 de mAb2.10/mAb6_2.7 contra IL-36α e IL-36β individualmente foram consistentes com os valores de IC50 de bloqueio relatados para queratinócitos adultos humanos primários acima neste exemplo, demonstrando que as ramificações Fab de direcionamento de IL-36α/IL-36γ e IL-36β de mAb2.10/mAb6_2.7 neutralizam de forma potente e independente IL-36α, IL-36β e IL-36γ.

[0332] Para determinar a potência e eficácia do anticorpo multiespecífico mAb2.10/mAb6_2.7 contra uma mistura de citocinas de agonista de IL-36, avaliamos a capacidade do anticorpo de bloquear a sinalização por uma mistura de IL-36α, IL-36β e IL-36γ em células primárias. A capacidade de mAb2.10/mAb6_2.7 em inibir a secreção de IL-8 por queratinócitos humanos adultos primários estimulados por misturas de hu-IL-36α, hu-IL-36β e IL-36γ foi avaliada utilizando métodos semelhantes àqueles descritos acima com as seguintes modificações. mAb2.10/mAb6_2.7, ou um controle de anticorpo apropriado (por exemplo, Hu IgG1 Ctrl), foi incubado com células HEKa durante 1 hora a 37 oC, seguido pela adição de uma mistura de agonistas (hu-IL-36α, hu-IL-36β e hu-IL-36γ aproximadamente na EC50-EC65 de cada citocina). O valor de IC50 de mAb2.10/mAb6_2.7 foi determinado ser 1,16 nM através da titulação na presença da mistura de citocina descrita, demonstrando potente atividade de bloqueio em misturas contendo IL-36α, IL-36β e IL-36γ.

[0333] Não obstante as reivindicações anexas, a descrição aqui apresentada também é definida pelas seguintes cláusulas, que podem ser benéficas isoladamente ou em combinação, com uma ou mais outras cláusulas ou modalidades. Sem limitar a descrição anterior, certas cláusulas não limitativas da descrição numeradas como abaixo são fornecidas, em que cada uma das cláusulas individualmente numeradas pode ser utilizada ou combinada com qualquer uma das cláusulas precedentes ou seguintes. Assim, esta destina-se a fornecer suporte para todas essas combinações e não está necessariamente limitada às combinações específicas explicitamente fornecidas abaixo:

[0334] Um anticorpo anti-IL-36 que compreende: (i) uma primeira região hipervariável de cadeia leve (HVR-L1), uma segunda região hipervariável de cadeia leve (HVR-L2) e uma terceira região hipervariável de cadeia leve (HVR-L3), e/ou (ii) uma primeira região hipervariável de cadeia pesada (HVR-H1), uma segunda região hipervariável de cadeia pesada (HVR-H2) e uma terceira região hipervariável de cadeia pesada (HVR-H3); em que:

[0335] HVR-L1 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de TGSSSNIGAHYDVH (SEQ ID NO: 18), TGSSSNIGAGYDVH (SEQ ID NO: 22), RASQSVSSNYLA (SEQ ID NO: 38) ou RASQTIYKYLN (SEQ ID NO: 42);

[0336] HVR-L2 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de SNNNRPS (SEQ ID NO: 15), GNDNRPS (SEQ ID NO: 19), GNTNRPS (SEQ ID NO: 23), GNRNRPS (SEQ ID NO: 27), SASSLQS (SEQ ID NO: 39) ou AASSLQS (SEQ ID NO: 43);

[0337] HVR-L3 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de QSYDYSLRGYV (SEQ ID NO: 16), QSYDYSLSGYV (SEQ ID NO: 20), QSYDYSLRVYV (SEQ ID NO: 28), QSYDYSLKAYV (SEQ ID NO: 32), QSYDISLSGWV (SEQ ID NO: 36), QQTYSYPPT (SEQ ID NO: 40) ou QQSSIPYT (SEQ ID NO: 44);

[0338] HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de SAYAMHW (SEQ ID NO: 46), STSSYYW (SEQ ID NO: 50), SSTSYYW (SEQ ID NO: 54), GSRSYYW (SEQ ID NO: 58), STYAMSW (SEQ ID NO: 62), TSSNYYW (SEQ ID NO: 66), SSYGMH (SEQ ID NO: 70), SNYAIS (SEQ ID NO: 74), TSTNYYW (SEQ ID NO: 82), TSSNAYW (SEQ ID NO: 86), TASNYYW (SEQ ID NO: 90), TASNTYW (SEQ ID NO: 106), SDSSYYW (SEQ ID NO: 122), SESSYYW (SEQ ID NO: 126), STSSDYW (SEQ ID NO: 130), SNSSYYW (SEQ ID NO: 134), STSSYHW (SEQ ID NO: 142), SRSSYYW (SEQ ID NO: 146), XXXNXYX (SEQ ID NO: 251) em que X na posição 1 é T, D, E ou N; X na posição 2 é S, A, E, G, K, Q, R ou T; X na posição 3 é S, A, D, E, G, N, P, Q ou T; X na posição 5 é Y, A, E, G, H, M, N, Q, S, T ou V; X na posição 7 é W, F, I, V ou Y ou XXXXXXW (SEQ ID NO: 336) em que X na posição 1 é S ou D; X na posição 2 é T, A, D, E, G, H, K, N, P, Q, R ou S; X na posição 3 é S, D, E, G, K, N, P ou R; X na posição 4 é S, G, K, N ou P; X na posição 5 é Y, A, D, E, G, H, M, N, Q, S, T, V ou W; X na posição 6 é Y, A, F, G, H, M, N ou Q;

[0339] HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de VISYDGTNEYYAD (SEQ ID NO: 47), SIYYTGNTYYNP (SEQ ID NO: 51), SIHYSGNTYYNP (SEQ ID NO: 55), SIHYSGTTYYNP (SEQ ID NO: 59), GISGGSGYTYYAD (SEQ ID NO: 63), SIDYTGSTYYNP (SEQ ID NO: 67), VISYGGSERYYAD (SEQ ID NO: 71), GILPILGTVDYAQ (SEQ ID NO: 75), NIDYTGSTYYNA (SEQ ID NO: 83), SIDYTGSTAYNP (SEQ ID NO: 87), SIDYTGSTYYNT

(SEQ ID NO: 91), SIDYTGSTYYEP (SEQ ID NO: 99), SIDYTGSTYYEP (SEQ ID NO: 103), SIDYTGSTYYQP (SEQ ID NO: 119), SIYYTGNTYYNS (SEQ ID NO: 123), SIYYTGNTYYLP (SEQ ID NO: 131), SIYYTGNTYYMP (SEQ ID NO: 143), SIYYTGNTYYWP (SEQ ID NO: 147), SIYYTGETYYAP (SEQ ID NO: 151), XXDXXXXXXYXX (SEQ ID NO: 284) em que X na posição 1 é S, N ou T; X na posição 2 é I, M ou V; X na posição 4 é Y ou H; X na posição 5 é T, H, L ou N; X na posição 6 é G, A, D, E, H, K, N, Q, R, S ou T; X na posição 7 é S, A, D, Q ou T; X na posição 8 é T, A, D ou E; X na posição 9 é Y, A, F, Q, S ou W; X na posição 11 é N, D, E, H, P ou Q; X na posição 12 é P, A ou E ou XXXXXXXXXYXP (SEQ ID NO: 379) em que X na posição 1 é S, F, I, M ou Q; X na posição 2 é I, A, G, L, R, S, T ou V; X na posição 3 é Y, A, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T ou W; X na posição 4 é Y, A, D, E, F, G, H, K, N, P, Q, R, S, T ou W; X na posição 5 é T, D, E, K, N, P ou Q; X na posição 6 é G ou Q; X na posição 7 é N, D, E, G, H, I, K, M, P, R ou S; X na posição 8 é T, A, E, F, G, H, K, P, Q, R, S, V, W ou Y; X na posição 9 é Y ou W; X na posição 11 é N, A, D, E, K, L, M, P, Q, S ou T;

[0340] HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de ARGIRIFTSYFDS (SEQ ID NO: 48), ARVRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 52), ARVHYGGYIPRRFDH (SEQ ID NO: 56), ARVAPSYPRVFDY (SEQ ID NO: 60), ARVVTYRDPPASFDY (SEQ ID NO: 64), ARGKYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 68), AREPWYSSRGWTGYGFDV (SEQ ID NO: 72), AREPWYRLGAFDV (SEQ ID NO: 76), ATGKYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 84), AHGKYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 88), ATGSYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 100), ATGNYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 104), ASGKYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 112), ARGNYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 120), AGVRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 128), SRVRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 132), VRVRYGVGVPRYFDP

(SEQ ID NO: 144), TRVRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 148), ARLRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 152), ARVKYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 156), ARVRYGVGVPRHFDP (SEQ ID NO: 160), AXGXYYXTYLGFDV (SEQ ID NO: 322) em que X na posição 2 é R, A, E, G, H, M, N, Q, S, T ou Y; X na posição 4 é K, A ou S; X na posição 7 é E ou T ou XXXXXGXXVPRXFDP (SEQ ID NO: 462) em que X na posição 1 é A ou V; X na posição 2 é R, A, G, N, Q ou T; X na posição 3 é V, A, F, I, K, L, M, Q ou S; X na posição 4 é R, A, I, K, L, M, P, Q, S, T ou V; X na posição 5 é Y, H, I, L ou V; X na posição 7 é V, A, F, G, K, M, N, Q, R, S, T, W ou Y; X na posição 8 é G, N, R, S ou T; X na posição 12 é Y, F, H, I, L, M, Q ou R.

[0341] O anticorpo de acordo com a cláusula 1, em que:

[0342] HVR-L1 compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18;

[0343] HVR-L2 compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e

[0344] HVR-L3 compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20.

[0345] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 2, em que:

[0346] HVR-H1 compreende a sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 66, 82, 86, 90 ou 252 a 283;

[0347] HVR-H2 compreende a sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 67, 83, 87, 91, 99, 103, 119 ou 285 a 321; e

[0348] HVR-H3 compreende a sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 68, 84, 88, 100, 104, 112, 120 ou 323 a

335.

[0349] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 2, em que:

[0350] HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 50, 122, 126, 130, 134, 138, 142, 146 ou 337 a 378;

[0351] HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 51, 123, 131, 143, 147, 151 ou 380 a 461; e

[0352] HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 52, 128, 132, 144, 148, 152, 156, 160 ou 463 a 513.

[0353] O anticorpo de acordo com a cláusula 1, em que:

[0354] HVR-L1 compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18;

[0355] HVR-L2 compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19;

[0356] HVR-L3 compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20;

[0357] HVR-H1 compreende a sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 66, 82, 86, 90 ou 252 a 283;

[0358] HVR-H2 compreende a sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 67, 83, 87, 91, 99, 103, 119 ou 285 a 321; e

[0359] HVR-H3 compreende a sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 68, 84, 88, 100, 104, 112, 120 ou 323 a

335.

[0360] O anticorpo de acordo com a cláusula 1, em que:

[0361] HVR-L1 compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18;

[0362] HVR-L2 compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19;

[0363] HVR-L3 compreende a sequência de aminoácido da SEQ

ID NO: 20;

[0364] HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 50, 122, 126, 130, 134, 138, 142, 146 ou 337 a 378;

[0365] HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 51, 123, 131, 143, 147, 151 ou 380 a 461; e

[0366] HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 52, 128, 132, 144, 148, 152, 156, 160 ou 463 a 513.

[0367] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 6, em que o anticorpo compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 77 ou 78; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 79, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165.

[0368] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 6, em que o anticorpo compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 17 ou 77; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 49, 65, 79, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165.

[0369] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 6, em que o anticorpo compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 17 ou 77; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 65, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113 ou 117.

[0370] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 6, em que o anticorpo compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 17 ou 77; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 49, 79, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou

165.

[0371] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 10, em que o anticorpo compreende uma sequência de aminoácido de cadeia leve (LC) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 169 ou 242; e/ou uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 170 a 202, 248 a 250, 518 a 616 e 743 a 751.

[0372] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 10, em que o anticorpo compreende uma sequência de aminoácido de cadeia leve (LC) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 169 ou 242; e/ou uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 203 a 241 e 617 a 733.

[0373] Um anticorpo anti-IL-36 que compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 77 ou 78; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 79, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165.

[0374] Um anticorpo anti-IL-36 que compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) selecionada da SEQ ID NO: 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 77 ou 78; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) selecionada da SEQ ID NO: 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 79, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165.

[0375] Um anticorpo anti-IL-36 que compreende uma sequência de aminoácido do domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 17 ou 77; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 49, 65, 79, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165.

[0376] Um anticorpo anti-IL-36 que compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) da SEQ ID NO: 17 ou 77; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) selecionada da SEQ ID NO: 49, 65, 79, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165.

[0377] Um anticorpo anti-IL-36 que compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 17 ou 77; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 65, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113 ou 117.

[0378] Um anticorpo anti-IL-36 que compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) da SEQ ID NO: 17 ou 77; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) selecionada da SEQ ID NO: 65, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113 ou 117.

[0379] Um anticorpo anti-IL-36 que compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 17 ou 77; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 49, 79, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou

165.

[0380] Um anticorpo anti-IL-36 que compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) da SEQ ID NO: 17 ou 77; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) selecionada da SEQ ID NO: 49, 79, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165.

[0381] Um anticorpo anti-IL-36 que compreende uma sequência de aminoácido de cadeia leve (LC) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 169 ou 242; e/ou uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 170 a 202, 248, 249 a 250, 518 a 616 e 743 a 751.

[0382] Um anticorpo anti-IL-36 que compreende uma sequência de aminoácido de cadeia leve (LC) da SEQ ID NO: 169 ou 242; e/ou uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) selecionada da SEQ ID NO: 170 a 202, 248 a 250, 518 a 616 e 743 a 751.

[0383] Um anticorpo anti-IL-36 que compreende uma sequência de aminoácido de cadeia leve (LC) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 169 ou 242; e/ou uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 203 a 241 e 617 a 733.

[0384] Um anticorpo anti-IL-36 que compreende uma sequência de aminoácido de cadeia leve (LC) da SEQ ID NO: 169 ou 242; e/ou uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) selecionada da SEQ ID NO: 206 a 241.

[0385] Um anticorpo anti-IL-36, em que o anticorpo é um anticorpo multiespecífico que compreende:

[0386] um par de cadeias leves cada uma compreendendo: sequência da HVR-L1 da SEQ ID NO: 18; sequência da HVR-L2 da SEQ ID NO: 19; e sequência da HVR-L3 da SEQ ID NO: 20;

[0387] uma cadeia pesada que compreende: sequência da HVR- H1 selecionada das SEQ ID NOs: 66, 82, 86, 90 ou 106; sequência da HVR-H2 selecionada das SEQ ID NOs: 67, 83, 87, 91, 99, 103 ou 119; e sequência da HVR-H3 selecionada das SEQ ID NOs: 68, 84, 88, 100, 104, 112 ou 120; e

[0388] uma cadeia pesada que compreende: sequência da HVR- H1 selecionada das SEQ ID NOs: 50, 122, 126, 130, 134, 142 ou 146; sequência da HVR-H2 selecionada das SEQ ID NOs: 51, 123, 127, 131, 135, 139, 143, 147 ou 151; e HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácido selecionada das SEQ ID NOs: 52, 128, 132, 144, 148, 152, 156 ou 160.

[0389] O anticorpo de acordo com a cláusula 25, em que uma das cadeias pesadas compreende uma substituição de aminoácido T366W e a outra cadeia pesada compreende substituições de aminoácido T366S, L368A e Y407V.

[0390] Um anticorpo anti-IL-36, em que o anticorpo é um anticorpo multiespecífico que compreende:

[0391] um par de cadeias leves, cada uma compreendendo uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) da

SEQ ID NO: 17 ou 77;

[0392] uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) selecionada da SEQ ID NO: 65, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113 ou 117; e

[0393] uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) selecionada da SEQ ID NO: 49, 79, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165.

[0394] Um anticorpo anti-IL-36, em que o anticorpo é um anticorpo multiespecífico que compreende:

[0395] um par de sequências de aminoácido de cadeia leve (LC) da SEQ ID NO: 169 e 242;

[0396] uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) selecionada da SEQ ID NO: 171, 174,177, 180, 183, 186, 189, 192, 195, 198, 201 e 249; e

[0397] uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) selecionada da SEQ ID NO: 208, 211, 214, 217, 220, 223, 226, 229, 232, 235, 238 e 241.

[0398] Um anticorpo anti-IL-36, em que o anticorpo é um anticorpo multiespecífico que compreende:

[0399] um par de sequências de aminoácido de cadeia leve (LC) da SEQ ID NO: 169 e 242;

[0400] uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) selecionada da SEQ ID NO: 172, 175, 178, 181, 184, 187, 187, 190, 193, 196, 199, 202, 250; e

[0401] uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) selecionada da SEQ ID NO: 207, 210, 213, 216, 219, 222, 225, 228, 231, 234, 237 e 240.

[0402] Um anticorpo anti-IL-36 multiespecífico, em que o anticorpo compreende um par de sequências de aminoácido de cadeia leve (LC)

da SEQ ID NO: 169; uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) da SEQ ID NO: 192; e uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) da SEQ ID NO: 235.

[0403] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 30, em que o anticorpo é um anticorpo multiespecífico que compreende uma especificidade para IL-36α e IL-36γ em uma ramificação e uma especificidade para IL-36β na outra ramificação.

[0404] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 31, em que o anticorpo se liga a hu-IL-36α, hu-IL-36-β e/ou hu-IL- 36-γ com uma afinidade de ligação de 1 x 10-8 M ou menos, 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos ou 1 x 10-11 M ou menos.

[0405] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 32, em que o anticorpo se liga a hu-IL-36α e hu-IL-36-γ com uma afinidade de ligação de 1 x 10-8 M ou menos, 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos ou 1 x 10-11 M ou menos.

[0406] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 33, em que o anticorpo se liga a hu-IL-36-β com uma afinidade de ligação de 1 x 10-8 M ou menos, 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos ou 1 x 10-11 M ou menos.

[0407] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 34, em que o anticorpo diminui um sinal intracelular estimulado por IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ em pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 99% ou 100%; opcionalmente, em que em uma concentração de IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ ao redor de EC50 o anticorpo possui uma IC50 de 10 nM ou menos, 5 nM ou menos ou 1 nM ou menos.

[0408] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 35, em que o anticorpo inibe a liberação de IL-8 a partir de queratinócitos humanos primários (PHKs) estimulados por IL-36α, IL- 36β e/ou IL-36γ, opcionalmente, em que em uma concentração de IL- 36α, IL-36β e/ou IL-36γ ao redor da EC50 o anticorpo possui uma IC50 de 10 nM ou menos, 5 nM ou menos ou 1 nM ou menos.

[0409] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 36, em que o anticorpo reage de forma cruzada com um IL-36α, IL- 36β ou IL-36γ de macaco cinomolgo da SEQ ID NO: 5, 6 ou 7.

[0410] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 37, em que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.

[0411] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 38, em que o anticorpo é um anticorpo recombinante.

[0412] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 39, em que o anticorpo é um anticorpo quimérico.

[0413] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 39, em que o anticorpo é um anticorpo humanizado ou humano.

[0414] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 41, em que o anticorpo é um fragmento de anticorpo, opcionalmente selecionado do grupo que consiste em F(ab')2, Fab', Fab, Fv, anticorpo de domínio único (VHH), anticorpo de única ramificação e scFv.

[0415] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 42, em que o anticorpo é um anticorpo de comprimento total da classe IgG; opcionalmente, em que o anticorpo de classe IgG possui um isótipo selecionado de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4.

[0416] O anticorpo de acordo com a cláusula 43, em que o anticorpo é uma variante da região Fc; opcionalmente, em que a variante da região Fc altera a função efetora ou altera a meia-vida.

[0417] O anticorpo de acordo com a cláusula 44, em que a variante da região Fc diminui a função efetora e/ou resulta em um anticorpo não efetor; opcionalmente, em que a variante da região Fc compreende uma substituição de aminoácido na posição 297 resultando em função não efetora.

[0418] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de

1 a 45, em que o anticorpo é um imunoconjugado; opcionalmente, em que o imunoconjugado compreende um agente terapêutico para o tratamento de condição ou doença mediada por IL-36; opcionalmente, em que o agente terapêutico é um agente quimioterápico ou agente citotóxico para o tratamento de câncer.

[0419] O anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 47, em que o anticorpo é um anticorpo sintético que compreende as CDRs enxertadas em uma matriz diferente de uma matriz de imunoglobulina ou estrutura de imunoglobulina, opcionalmente uma matriz selecionada de uma matriz de proteína alternativa e uma matriz de polímero artificial.

[0420] Um anticorpo anti-IL-36 que especificamente se liga ao mesmo epítopo que o anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 48.

[0421] Um anticorpo multiespecífico que se liga a cada um dos IL- 36α, IL-36β e IL-36γ humanos; opcionalmente, em que o anticorpo se liga a cada um dos IL-36α, IL-36β e IL-36γ humanos com uma afinidade de ligação de 3 nM ou menos; opcionalmente em que a afinidade de ligação é medida pela constante de dissociação de equilíbrio (KD) para um hu-IL-36α da SEQ ID NO: 1, um hu-IL-36β da SEQ ID NO: 2 e um hu-IL-36γ da SEQ ID NO: 3; opcionalmente, em que:

[0422] compreende uma especificidade para IL-36α e/ou IL-36γ em uma ramificação, e uma especificidade para IL-36β na outra ramificação; opcionalmente, em que uma ramificação se liga a hu-IL- 36α e hu-IL-36-γ com uma afinidade de ligação de 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos ou 1 x 10-11 M ou menos, e a outra ramificação se liga a hu-IL-36-β com uma afinidade de ligação de 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos ou 1 x 10-11 M ou menos;

[0423] diminui um sinal intracelular estimulado por IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ em pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 99% ou 100%; opcionalmente, em que em uma concentração de IL-36α, IL- 36β e/ou IL-36γ ao redor da EC50 o anticorpo possui uma IC50 de 10 nM ou menos, 5 nM ou menos ou 1 nM ou menos;

[0424] inibe a liberação de IL-8 de queratinócitos humanos primários (PHKs) estimulados por IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ, opcionalmente, em que em uma concentração de IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ ao redor da EC50, o anticorpo possui uma IC50 de 10 nM ou menos, 5 nM ou menos ou 1 nM ou menos;

[0425] o anticorpo reage de forma cruzada com um IL-36α, IL-36β e IL-36γ de macaco cinomolgo; e/ou

[0426] o anticorpo se liga a cada um de IL-36α, IL-36β e IL-36γ de macaco cinomolgo com uma afinidade de ligação de 3 nM ou menos; opcionalmente em que a afinidade de ligação é medida pela constante de dissociação de equilíbrio (KD) para um cy-IL-36α da SEQ ID NO: 5, um cy-IL-36β da SEQ ID NO: 6 e um cy-IL-36γ da SEQ ID NO: 7.

[0427] Um polinucleotídeo isolado que codifica o anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 49.

[0428] O polinucleotídeo de acordo com a cláusula 50, que ainda compreende uma sequência de nucleotídeo que codifica um peptídeo de sinal (SP).

[0429] O polinucleotídeo de acordo com a cláusula 50, em que o polinucleotídeo codifica uma cadeia leve e uma cadeia pesada.

[0430] O polinucleotídeo de acordo com a cláusula 50, em que o polinucleotídeo compreende uma sequência de polinucleotídeo compreendendo um ou mais códons selecionados para a expressão ideal do anticorpo em uma célula de mamífero.

[0431] O polinucleotídeo de acordo com a cláusula 50, em que a sequência de polinucleotídeo compreende um ou mais códons selecionados para a expressão ideal do anticorpo em uma célula de ovário de hamster chinês (CHO).

[0432] Um vetor que compreende um polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 50 a 54.

[0433] Uma célula hospedeira isolada que compreende o vetor de acordo com a cláusula 55.

[0434] Uma célula hospedeira compreendendo um polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 50 a 54.

[0435] Uma célula hospedeira isolada que expressa o anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 49.

[0436] A célula hospedeira de acordo com a cláusula 56, em que a célula hospedeira é selecionada de uma célula de ovário de hamster chinês (CHO), uma célula de mieloma (por exemplo, Y0, NS0, Sp2/0), uma célula de rim de macaco (COS-7), uma linhagem de rim embrionário humano (293), uma célula de rim de hamster bebê (BHK), uma célula de Sertoli de camundongo (por exemplo, TM4), uma célula de rim de macaco verde africano (VERO-76), uma célula de carcinoma cervical humano (HELA), uma célula renal canina, uma célula pulmonar humana (W138), uma célula hepática humana (Hep G2), uma célula tumoral mamária de camundongo, uma célula TR1, uma célula Medical Research Council 5 (MRC 5) e uma célula Foreskin 4 (FS4).

[0437] Um método de produção de um anticorpo que compreende o cultivo da célula hospedeira de acordo com qualquer uma das cláusulas de 56 a 59 de modo que um anticorpo seja produzido.

[0438] Um hibridoma que produz um anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 49.

[0439] Uma composição farmacêutica que compreende um anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 49 e um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0440] A composição farmacêutica de acordo com a cláusula 62,

em que a composição ainda compreende um agente terapêutico para o tratamento de uma doença ou condição mediada por IL-36; opcionalmente, em que o agente terapêutico é um agente quimioterápico.

[0441] Um método de tratamento de uma doença mediada por IL- 36 em um indivíduo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 49 ou uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica de acordo com a cláusula 62.

[0442] Um método de tratamento de uma doença mediada pela sinalização estimulada por IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ em um indivíduo, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 49 ou uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica de acordo com a cláusula 62.

[0443] O método de acordo com qualquer uma das cláusulas de 64 a 65, em que a doença é selecionada de: acne devido aos inibidores do receptor do fator de crescimento epidérmico, acne e hidradenite supurativa (PASH), pustulose exantemática generalizada aguda (AGEP), pustulose amicrobiana das dobras, pustulose amicrobiana do couro cabeludo/perna, pustulose subcórnea amicrobiana, síndrome do abscesso asséptico, doença de Behçet, síndrome do desvio intestinal, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), dermatose pustular infantil, doença de Crohn, deficiência do antagonista do receptor da interleucina-1 (DIRA), deficiência do antagonista do receptor de interleucina-36 (DITRA), eczema, psoríase pustulosa generalizada (GPP), eritema elevatum diutinum, hidradenite supurativa, pênfigo IgA, doença inflamatória intestinal (IBD), paniculite neutrofílica, psoríase pustulosa palmoplantar (PPP), psoríase, artrite psoriática, psoríase pustulosa (DIRA, DITRA), pioderma gangrenoso, artrite piogênica pioderma gangrenoso e acne (PAPA), artrite piogênica pioderma gangrenoso acne e hidradenite supurativa (PAPASH), dermatose neutrofílica reumatoide, sinovite acne pustulose hiperostose e osteíte (SAPHO), lesões cutâneas na forma de psoríase induzida por TNF em pacientes com Crohn, síndrome de Sjogren, síndrome de Sweet, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), colite ulcerativa e uveíte.

[0444] O método de acordo com a cláusula 66, em que a doença é selecionada de: psoríase pustulosa generalizada (GPP), psoríase pustulosa palmoplantar (PPP) e psoríase.

[0445] Um método de tratamento de psoríase em um indivíduo, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 49 ou uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica de acordo com a cláusula 62.

[0446] Um método de tratamento de câncer em um indivíduo, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo de acordo com qualquer uma das cláusulas de 1 a 49 ou uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica de acordo com a cláusula 62; opcionalmente em que o câncer é selecionado de câncer de mama, câncer colorretal, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de pâncreas.

[0447] Embora a divulgação anterior da presente invenção tenha sido descrita com alguns detalhes por meio de exemplo e ilustração para propósitos de clareza e compreensão, esta descrição incluindo os exemplos, descrições e modalidades aqui descritas são para fins ilustrativos, destinam-se a ser exemplares e não devem ser interpretados como limitativos da presente descrição. Ficará claro para uma pessoa versada na técnica que várias modificações ou mudanças nos exemplos, descrições e modalidades aqui descritas podem ser feitas e devem ser incluídas dentro do espírito e escopo desta descrição e das reivindicações anexas. Além disso, uma pessoa versada na técnica reconhecerá vários métodos e procedimentos equivalentes àqueles descritos nesta invenção. Todos esses equivalentes devem ser entendidos de estar dentro do escopo da presente descrição e são cobertos pelas reivindicações anexas.

[0448] As modalidades adicionais da invenção são apresentadas nas seguintes reivindicações.

[0449] As divulgações de todas as publicações, pedidos de patentes, patentes ou outros documentos aqui mencionados são expressamente incorporadas por referência na sua totalidade para todos os propósitos na mesma medida como se cada publicação individual, patente, pedido de patente ou outro documento fosse individualmente indicado especificamente para ser incorporado por referência nesta invenção na sua totalidade para todos os propósitos e foram apresentadas na sua totalidade nesta invenção. Em caso de conflito, o presente relatório descritivo, incluindo os termos especificados, prevalecerá. Bibliografia Towne et al., (2011) “Interleukin-36 (IL-36) ligands require processing for full agonist (IL-36α, IL-36β, and IL-36γ), or antagonist (IL-36Ra) activity.” J. Biol. Chem. 284: 42594-42602 Foote et al., (1992) “Antibody framework residues affecting the conformation of the hypervariable loops” J. Mol. Biol. 224: 487-499 Hotzel et al., (2012) “ A strategy for risk mitigation of antibodies with fast clearance” mAbs 4(6): 753-760

Brenner et al., (1992) “ Encoded combinatorial chemistry” Proc.

Natl.

Acad.

Sci.

USA 89(12): 5381-5383 Kunkel et al., (1987) “ Rapid and efficient site-specific mutagenesis without phenotypic selection” Methods Enzymol. 154: 367-382 Masella et al., (2012) “PANDAseq: paired-end assembler for illumina sequences” BMC Bioinformatics 13:31 Koenig et al., (2015) “Mutational landscape of antibody variable domains reveals a switch modulating the interdomain conformational dynamics and antigen binding” J.

Biol.

Chem. 290(36): 21773-21786 John B.B.Ridgway et al., (1996) “'Knobs-into-holes' engineering of antibody CH3 domains for heavy chain heterodimerization” Protein Engineering vol.9 no.7 pp.617-621

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Anticorpo anti-IL-36, caracterizado pelo fato de que compreende: (i) uma primeira região hipervariável de cadeia leve (HVR-L1), uma segunda região hipervariável de cadeia leve (HVR-L2) e uma terceira região hipervariável de cadeia leve (HVR-L3), e/ou (ii) uma primeira região hipervariável de cadeia pesada (HVR-H1), uma segunda região hipervariável de cadeia pesada (HVR-H2) e uma terceira região hipervariável de cadeia pesada (HVR-H3); em que: (a) HVR-L1 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de TGSSSNIGAHYDVH (SEQ ID NO: 18), TGSSSNIGAGYDVH (SEQ ID NO: 22), RASQSVSSNYLA (SEQ ID NO: 38) ou RASQTIYKYLN (SEQ ID NO: 42); (b) HVR-L2 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de SNNNRPS (SEQ ID NO: 15), GNDNRPS (SEQ ID NO: 19), GNTNRPS (SEQ ID NO: 23), GNRNRPS (SEQ ID NO: 27), SASSLQS (SEQ ID NO: 39) ou AASSLQS (SEQ ID NO: 43); (c) HVR-L3 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de QSYDYSLRGYV (SEQ ID NO: 16), QSYDYSLSGYV (SEQ ID NO: 20), QSYDYSLRVYV (SEQ ID NO: 28), QSYDYSLKAYV (SEQ ID NO: 32), QSYDISLSGWV (SEQ ID NO: 36), QQTYSYPPT (SEQ ID NO: 40) ou QQSSIPYT (SEQ ID NO: 44); (d) HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de SAYAMHW (SEQ ID NO: 46), STSSYYW (SEQ ID NO: 50), SSTSYYW (SEQ ID NO: 54), GSRSYYW (SEQ ID NO: 58), STYAMSW (SEQ ID NO: 62), TSSNYYW (SEQ ID NO: 66), SSYGMH (SEQ ID NO: 70), SNYAIS (SEQ ID NO: 74), TSTNYYW (SEQ ID NO: 82), TSSNAYW (SEQ ID NO: 86), TASNYYW (SEQ ID NO: 90), TASNTYW (SEQ ID NO: 106), SDSSYYW (SEQ ID NO: 122), SESSYYW (SEQ ID NO: 126), STSSDYW (SEQ ID NO: 130), SNSSYYW (SEQ ID NO: 134), STSSYHW (SEQ ID NO: 142),

SRSSYYW (SEQ ID NO: 146), XXXNXYX (SEQ ID NO: 251) em que X na posição 1 é T, D, E ou N; X na posição 2 é S, A, E, G, K, Q, R ou T; X na posição 3 é S, A, D, E, G, N, P, Q ou T; X na posição 5 é Y, A, E, G, H, M, N, Q, S, T ou V; X na posição 7 é W, F, I, V ou Y ou XXXXXXW (SEQ ID NO: 336) em que X na posição 1 é S ou D; X na posição 2 é T, A, D, E, G, H, K, N, P, Q, R ou S; X na posição 3 é S, D, E, G, K, N, P ou R; X na posição 4 é S, G, K, N ou P; X na posição 5 é Y, A, D, E, G, H, M, N, Q, S, T, V ou W; X na posição 6 é Y, A, F, G, H, M, N ou Q; (e) HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de VISYDGTNEYYAD (SEQ ID NO: 47), SIYYTGNTYYNP (SEQ ID NO: 51), SIHYSGNTYYNP (SEQ ID NO: 55), SIHYSGTTYYNP (SEQ ID NO: 59), GISGGSGYTYYAD (SEQ ID NO: 63), SIDYTGSTYYNP (SEQ ID NO: 67), VISYGGSERYYAD (SEQ ID NO: 71), GILPILGTVDYAQ (SEQ ID NO: 75), NIDYTGSTYYNA (SEQ ID NO: 83), SIDYTGSTAYNP (SEQ ID NO: 87), SIDYTGSTYYNT (SEQ ID NO: 91), SIDYTGSTYYEP (SEQ ID NO: 99), SIDYTGSTYYEP (SEQ ID NO: 103), SIDYTGSTYYQP (SEQ ID NO: 119), SIYYTGNTYYNS (SEQ ID NO: 123), SIYYTGNTYYLP (SEQ ID NO: 131), SIYYTGNTYYMP (SEQ ID NO: 143), SIYYTGNTYYWP (SEQ ID NO: 147), SIYYTGETYYAP (SEQ ID NO: 151), XXDXXXXXXYXX (SEQ ID NO: 284) em que X na posição 1 é S, N ou T; X na posição 2 é I, M ou V; X na posição 4 é Y ou H; X na posição 5 é T, H, L ou N; X na posição 6 é G, A, D, E, H, K, N, Q, R, S ou T; X na posição 7 é S, A, D, Q ou T; X na posição 8 é T, A, D ou E; X na posição 9 é Y, A, F, Q, S ou W; X na posição 11 é N, D, E, H, P ou Q; X na posição 12 é P, A ou E ou XXXXXXXXXYXP (SEQ ID NO: 379) em que X na posição 1 é S, F, I, M ou Q; X na posição 2 é I, A, G, L, R, S, T ou V; X na posição 3 é Y, A, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T ou W; X na posição 4 é Y, A, D, E, F, G, H, K, N, P, Q, R, S, T ou

W; X na posição 5 é T, D, E, K, N, P ou Q; X na posição 6 é G ou Q; X na posição 7 é N, D, E, G, H, I, K, M, P, R ou S; X na posição 8 é T, A, E, F, G, H, K, P, Q, R, S, V, W ou Y; X na posição 9 é Y ou W; X na posição 11 é N, A, D, E, K, L, M, P, Q, S ou T; (f) HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácido selecionada de ARGIRIFTSYFDS (SEQ ID NO: 48), ARVRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 52), ARVHYGGYIPRRFDH (SEQ ID NO: 56), ARVAPSYPRVFDY (SEQ ID NO: 60), ARVVTYRDPPASFDY (SEQ ID NO: 64), ARGKYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 68), AREPWYSSRGWTGYGFDV (SEQ ID NO: 72), AREPWYRLGAFDV (SEQ ID NO: 76), ATGKYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 84), AHGKYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 88), ATGSYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 100), ATGNYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 104), ASGKYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 112), ARGNYYETYLGFDV (SEQ ID NO: 120), AGVRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 128), SRVRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 132), VRVRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 144), TRVRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 148), ARLRYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 152), ARVKYGVGVPRYFDP (SEQ ID NO: 156), ARVRYGVGVPRHFDP (SEQ ID NO: 160), AXGXYYXTYLGFDV (SEQ ID NO: 322) em que X na posição 2 é R, A, E, G, H, M, N, Q, S, T ou Y; X na posição 4 é K, A ou S; X na posição 7 é E ou T ou XXXXXGXXVPRXFDP (SEQ ID NO: 462) em que X na posição 1 é A ou V; X na posição 2 é R, A, G, N, Q ou T; X na posição 3 é V, A, F, I, K, L, M, Q ou S; X na posição 4 é R, A, I, K, L, M, P, Q, S, T ou V; X na posição 5 é Y, H, I, L ou V; X na posição 7 é V, A, F, G, K, M, N, Q, R, S, T, W ou Y; X na posição 8 é G, N, R, S ou T; X na posição 12 é Y, F, H, I, L, M, Q ou R.

2. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: (a) HVR-L1 compreende a sequência de aminoácido da

SEQ ID NO: 18; (b) HVR-L2 compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e (c) HVR-L3 compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20.

3. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado pelo fato de que: (a) HVR-H1 compreende a sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 66, 82, 86, 90 ou 252 a 283; (b) HVR-H2 compreende a sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 67, 83, 87, 91, 99, 103, 119 ou 285 a 321; e (c) HVR-H3 compreende a sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 68, 84, 88, 100, 104, 112, 120 ou 323 a

335.

4. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado pelo fato de que: (a) HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 50, 122, 126, 130, 134, 138, 142, 146 ou 337 a 378; (b) HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 51, 123, 131, 143, 147, 151 ou 380 a 461; e (c) HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácido selecionada da SEQ ID NO: 52, 128, 132, 144, 148, 152, 156, 160 ou 463 a 513.

5. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 77 ou 78; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 79, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165.

6. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 17 ou 77; e/ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 49, 65, 79, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165; uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 65, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113 ou 117; ou uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 49, 79, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165.

7. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende: uma sequência de aminoácido de cadeia leve (LC) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 169 ou 242; e/ou uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 170 a 202, 248 a 250, 518 a 616 e 743 a 751; ou uma sequência de aminoácido de cadeia leve (LC) tendo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 169 ou 242; e/ou uma sequência de aminoácido de cadeia pesada (HC) tendo pelo menos 90% de identidade com uma sequência selecionada da SEQ ID NO: 203 a 241 e 617 a 733.

8. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo multiespecífico que compreende: (a) um par de cadeias leves, cada uma compreendendo: sequência de HVR-L1 da SEQ ID NO: 18; sequência de HVR-L2 da SEQ ID NO: 19; e sequência de HVR-L3 da SEQ ID NO: 20; (b) uma cadeia pesada compreendendo: sequência de HVR-H1 selecionada das SEQ ID NOs: 66, 82, 86, 90 ou 106; sequência de HVR-H2 selecionada das SEQ ID NOs: 67, 83, 87, 91, 99, 103 ou 119; e sequência de HVR-H3 selecionada das SEQ ID NOs: 68, 84, 88, 100, 104, 112 ou 120; e (c) uma cadeia pesada compreendendo: sequência de HVR-H1 selecionada das SEQ ID NOs: 50, 122, 126, 130, 134, 142 ou 146; sequência de HVR-H2 selecionada da SEQ ID NOs: 51, 123, 127, 131, 135, 139, 143, 147 ou 151; e HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácido selecionada das SEQ ID NOs: 52, 128, 132, 144, 148, 152, 156 ou 160; opcionalmente, em que: uma das cadeias pesadas compreende uma substituição de aminoácido T366W e a outra cadeia pesada compreende substituições de aminoácido T366S, L368A e Y407V; e/ou o anticorpo compreende: (a) um par de cadeias leves, cada uma compreendendo uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve (VL)

da SEQ ID NO: 17 ou 77; (b) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) selecionada da SEQ ID NO: 65, 80, 81, 85, 89, 93, 97, 101, 105, 109, 113 ou 117; e (c) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada (VH) selecionada da SEQ ID NO: 49, 79, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161 ou 165.

9. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a hu-IL-36α, hu-IL-36-β e/ou hu-IL-36-γ com uma afinidade de ligação de 1 x 10-8 M ou menos, 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos ou 1 x 10-11 M ou menos; o anticorpo se liga a hu-IL-36α e hu-IL-36-γ com uma afinidade de ligação de 1 x 10-8 M ou menos, 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos ou 1 x 10-11 M ou menos; o anticorpo se liga a hu-IL-36-β com uma afinidade de ligação de 1 x 10-8 M ou menos, 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos ou 1 x 10-11 M ou menos; o anticorpo diminui um sinal intracelular estimulado por IL- 36α, IL-36β e/ou IL-36γ em pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 99% ou 100%; opcionalmente, em que em uma concentração de IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ ao redor da EC50 o anticorpo possui uma IC50 de 10 nM ou menos, 5 nM ou menos ou 1 nM ou menos; o anticorpo inibe a liberação de IL-8 de queratinócitos humanos primários (PHKs) estimulados por IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ, opcionalmente, em que em uma concentração de IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ ao redor da EC50 o anticorpo possui uma IC50 de 10 nM ou menos, 5 nM ou menos ou 1 nM ou menos; e/ou o anticorpo reage de forma cruzada com um IL-36α, IL-36β ou IL-36γ de macaco cinomolgo da SEQ ID NO: 5, 6 ou 7.

10. Anticorpo multiespecífico que se liga a cada um dos IL- 36α, IL-36β e IL-36γ humanos; opcionalmente, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a cada um dos IL-36α, IL-36β e IL-36γ humanos com uma afinidade de ligação de 3 nM ou menos; opcionalmente em que a afinidade de ligação é medida pela constante de dissociação de equilíbrio (KD) para um hu-IL-36α da SEQ ID NO: 1, um hu-IL-36β da SEQ ID NO: 2 e um hu-IL-36γ da SEQ ID NO: 3; opcionalmente, em que o anticorpo: (a) compreende uma especificidade para IL-36α e/ou IL-36γ em uma ramificação, e uma especificidade para IL-36β na outra ramificação; opcionalmente, em que uma ramificação se liga a hu-IL- 36α e hu-IL-36-γ com uma afinidade de ligação de 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos ou 1 x 10-11 M ou menos, e a outra ramificação se liga a hu-IL-36-β com uma afinidade de ligação de 1 x 10-9 M ou menos, 1 x 10-10 M ou menos ou 1 x 10-11 M ou menos; (b) diminui um sinal intracelular estimulado por IL-36α, IL- 36β e/ou IL-36γ em pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 99% ou 100%; opcionalmente, em que em uma concentração de IL- 36α, IL-36β e/ou IL-36γ ao redor da EC50 o anticorpo possui uma IC50 de 10 nM ou menos, 5 nM ou menos ou 1 nM ou menos; (c) inibe a liberação de IL-8 de queratinócitos humanos primários (PHKs) estimulados por IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ, opcionalmente, em que em uma concentração de IL-36α, IL-36β e/ou IL-36γ ao redor da EC50 o anticorpo possui uma IC50 de 10 nM ou menos, 5 nM ou menos ou 1 nM ou menos; (d) reage de forma cruzada com uma IL-36α, IL-36β e IL- 36γ de macaco cinomolgo; e/ou (e) o anticorpo se liga a cada um de IL-36α, IL-36β e IL-36γ de macaco cinomolgo com uma afinidade de ligação de 3 nM ou menos; opcionalmente em que a afinidade de ligação é medida pela constante de dissociação de equilíbrio (KD) para um cy-IL-36α da SEQ ID NO: 5, um cy-IL-36β da SEQ ID NO: 6 e um cy-IL-36γ da SEQ ID NO: 7.

11. Polinucleotídeo ou vetor isolado que codifica o anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10; ou uma célula hospedeira isolada que compreende o polinucleotídeo ou vetor; opcionalmente, caracterizado pelo fato de que a célula hospedeira é selecionada de uma célula de ovário de hamster chinês (CHO), uma célula de mieloma (por exemplo, Y0, NS0, Sp2/0), uma célula de rim de macaco (COS-7), uma linhagem de rim embrionário humano (293), uma célula de rim de hamster bebê (BHK), uma célula de Sertoli de camundongo (por exemplo, TM4), uma célula de rim de macaco verde africano (VERO-76), uma célula de carcinoma cervical humano (HELA), uma célula renal canina, uma célula pulmonar humana (W138), uma célula hepática humana (Hep G2), uma célula tumoral mamária de camundongo, uma célula TR1, uma célula Medical Research Council 5 (MRC 5) e uma célula Foreskin 4 (FS4).

12. Método de produção de um anticorpo, caracterizado pelo fato de que compreende o cultivo da célula hospedeira, como definida na reivindicação 11, de modo que um anticorpo seja produzido.

13. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, e um veículo farmaceuticamente aceitável.

14. Método de tratamento de um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, ou uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica, como definida na reivindicação 13; opcionalmente, em que a doença é selecionada de: acne devido aos inibidores do receptor do fator de crescimento epidérmico, acne e hidradenite supurativa (PASH), pustulose exantemática generalizada aguda (AGEP), pustulose amicrobiana das dobras, pustulose amicrobiana do couro cabeludo/perna, pustulose subcórnea amicrobiana, síndrome do abscesso asséptico, doença de Behçet, síndrome do desvio intestinal, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), dermatose pustular infantil, doença de Crohn, deficiência do antagonista do receptor da interleucina-1 (DIRA), deficiência do antagonista do receptor de interleucina-36 (DITRA), eczema, psoríase pustulosa generalizada (GPP), eritema elevatum diutinum, hidradenite supurativa, pênfigo IgA, doença inflamatória intestinal (IBD), paniculite neutrofílica, psoríase pustulosa palmoplantar (PPP), psoríase, artrite psoriática, psoríase pustulosa (DIRA, DITRA), pioderma gangrenoso, artrite piogênica pioderma gangrenoso e acne (PAPA), artrite piogênica pioderma gangrenoso acne e hidradenite supurativa (PAPASH), dermatose neutrofílica reumatoide, sinovite acne pustulose hiperostose e osteíte (SAPHO), lesões cutâneas na forma de psoríase induzida por TNF em pacientes com Crohn, síndrome de Sjogren, síndrome de Sweet, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), colite ulcerativa, uveíte e câncer; opcionalmente, em que o câncer é selecionado de câncer de mama, câncer colorretal, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de pâncreas.

15. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que é para uso como medicamento; opcionalmente, para uso no tratamento de uma condição inflamatória.