BR112021004404A2 - fragmentos de peptídeos modificados da proteína cav-1 e o uso destes no tratamento de fibrose - Google Patents

Abstract

FRAGMENTOS DE PEPTÍDEOS MODIFICADOS DA PROTEÍNA CAV-1 E O USO DESTES NO TRATAMENTO DE FIBROSE. A presente invenção refere-se a composições compreendendo peptídeos caveolina-1 (Cav-1) modificados. Além disso, são fornecidos métodos de uso dos peptídeos Cav-1 modificados para o tratamento de infecções pulmonares ou lesão pulmonar aguda ou crônica, particularmente fibrose pulmonar.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "FRAGMENTOS DE PEPTÍDEOS MODIFICADOS DA PROTEÍNA CAV-1 E O USO DESTES NO TRATAMENTO DE FIBROSE".

[001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido de Patente Provisório Nº U.S. 62/728,997, depositado em 10 de setembro de 2018, cujo conteúdo é incorporado neste documento por referência em sua totalidade.

[002] A presente invenção foi feita como resultado de atividades realizadas no âmbito de um acordo de pesquisa conjunta que estava em vigor no momento em que a presente invenção foi feita. As partes do referido acordo de pesquisa conjunta são o Conselho de Regentes da University of Texas System e a Lung Therapeutics.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

1. Campo da invenção

[003] Esta invenção refere-se em geral ao campo de biologia molecular e medicina. Mais particularmente, refere-se a composições e métodos para a distribuição de composições polipeptídicas terapêuticas a indivíduos, tal como por distribuição ao sistema respiratório.

2. Descrição da técnica relacionada

[004] Durante a lesão pulmonar, a expressão de p53 aumenta, induzindo o inibidor 1 do ativador do plasminogênio (PAI-1), enquanto inibe a expressão do ativador do plasminogênio do tipo uroquinase (uPA) e seu receptor (uPAR), resultando na apoptose das células epiteliais pulmonares (LECs). O mecanismo de lesão envolve interações de sinalização da superfície celular entre uPA, uPAR, caveolina-1 ("Cav- 1") e β1-integrina (Shetty et al., 2005). As composições que modulam essas interações podem ser usadas em métodos para inibir a apoptose de células epiteliais pulmonares lesadas ou danificadas e para tratar a lesão pulmonar aguda e consequente fibrose pulmonar. Assim, há uma necessidade de polipeptídeos que possam ser usados para prevenir ou tratar lesões pulmonares e, em particular, formulações e métodos para distribuição terapêutica de tais polipeptídeos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[005] De acordo com a presente divulgação, é fornecido um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, em que o peptídeo compreende pelo menos uma adição de N- ou C- terminal. As adições de terminais N ou C podem ser aminoácidos padrão, aminoácidos não padrão ou modificações químicas. São fornecidos multímeros peptídicos do peptídeo da divulgação. Também é fornecida uma composição farmacêutica do peptídeo. Os peptídeos da presente divulgação podem ser usados para tratar lesões pulmonares, infecções ou doenças. Em outros aspectos, os peptídeos das modalidades podem ser usados para tratar condições fibróticas, por exemplo, fibrose de órgão ou inflamação.

[006] Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos ASFTTFTVT (SEQ ID NO: 3), em que o peptídeo compreende pelo menos uma adição N- ou C-terminal sem identidade com a SEQ ID NO: 1. Em alguns aspectos, o peptídeo compreende pelo menos um aminoácido adicionado ao N-terminal. Em alguns aspectos, o peptídeo compreende pelo menos um aminoácido adicionado ao C-terminal. Em alguns aspectos, o peptídeo compreende pelo menos um aminoácido adicionado ao N-terminal e ao C-terminal. Em alguns aspectos, o peptídeo mantém a atividade biológica da caveolina-1 (Cav-1). Em outros aspectos, um peptídeo das modalidades pode compreender um ou mais resíduos deuterados.

[007] Em alguns aspectos, o peptídeo compreende L- aminoácidos. Em alguns aspectos, o peptídeo compreende D- aminoácidos. Em alguns aspectos, o peptídeo compreende L- aminoácidos e D-aminoácidos.

[008] Em alguns aspectos, o peptídeo compreende pelo menos um aminoácido não padrão. Em alguns aspectos, o peptídeo compreende 2 ou mais aminoácidos não padrão. Em alguns aspectos, o peptídeo compreende 4 ou mais aminoácidos não padrão. Em alguns aspectos, o aminoácido não padrão é ornitina. Em alguns aspectos, o aminoácido não padrão é D-alanina.

[009] Em alguns aspectos, o peptídeo compreende modificações N- ou C-terminais. Em alguns aspectos, o peptídeo compreende uma modificação do N-terminal. Em alguns aspectos, o peptídeo compreende uma modificação do C-terminal. Em alguns aspectos, o peptídeo compreende uma modificação do N- e C-terminal. Em alguns aspectos, a modificação do N-terminal é acilação. Em alguns aspectos, a modificação do C-terminal é amidação.

[0010] Em algumas modalidades, o peptídeo compreende a sequência de KASFTTFTVTKGS (SEQ ID NO: 4). Em alguns aspectos, o peptídeo compreende a sequência de aminoácidos aaEGKASFTTFTVTKGSaa (SEQ ID NO: 6). Em outros aspectos, o peptídeo compreende a sequência de aminoácidos OASFTTFTVTOS (SEQ ID NO: 9). Em outros aspectos, o peptídeo compreende a sequência de aminoácidos aaEGKASFTTFTVTKGSaa-NH2 (SEQ ID NO: 7). Em ainda outros aspectos, o peptídeo compreende a sequência de aminoácidos Ac-aaEGKASFTTFTVTKGSaa-NH2 (SEQ ID NO: 8). Em outros aspectos, o peptídeo compreende a sequência de aminoácidos OASFTTFTVTOS-NH2 (SEQ ID NO: 10).

[0011] Em alguns aspectos, o peptídeo compreende ainda um peptídeo de penetração celular (CPP). Em algumas modalidades, o CPP compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que compreende: GRKKRRQRRRPPQ (SEQ ID NO: 21), RQIKIWFQNRRMKWKK (SEQ ID NO: 22) e GIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ (SEQ ID NO: 23).

[0012] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um multímero de peptídeo compreendendo pelo menos dois peptídeos conforme divulgado neste documento. Em alguns aspectos, um primeiro peptídeo dos pelo menos dois peptídeos é essencialmente idêntico a um segundo peptídeo dos pelo menos dois peptídeos. Em outros aspectos, um primeiro peptídeo dos pelo menos dois peptídeos não é idêntico a um segundo peptídeo dos pelo menos dois peptídeos.

[0013] Em algumas modalidades, a divulgação fornece uma composição compreendendo os peptídeos divulgados neste documento. Em alguns aspectos, os peptídeos são substancialmente puros. Em alguns aspectos, os peptídeos são pelo menos 95% puros, pelo menos 96% puros, pelo menos 97% puros, pelo menos 98% puros ou pelo menos 99% puros.

[0014] Em algumas modalidades, a divulgação fornece uma composição farmacêutica que compreende o peptídeo um peptídeo divulgado neste documento e um veículo farmaceuticamente aceitável. Em alguns aspectos, a composição farmacêutica é formulada para administração oral, intravenosa, intra-articular, parenteral, enteral, tópica, subcutânea, intramuscular, bucal, sublingual, retal, intravaginal, intrapeniana, intraocular, epidural, intracraniana ou inalatória. Em alguns aspectos, a composição farmacêutica é formulada para instilação pulmonar. Em alguns aspectos, a composição farmacêutica é formulada como uma solução nebulizadora.

[0015] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um polinucleotídeo que compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica o peptídeo conforme descrito neste documento.

[0016] Em certos aspectos, uma composição peptídica das modalidades pode ser usada em um método de tratamento ou prevenção de doenças em um indivíduo. Em alguns aspectos, a doença é uma doença fibrótica ou inflamatória. Por exemplo, a doença fibrótica pode ser uma doença fibrótica de órgão, pode ser fibrose renal, hepática, pulmonar ou cardíaca. Em alguns aspectos, a doença inflamatória é uma doença inflamatória ocular. As composições das modalidades podem ser administradas sistemicamente ou localmente (por exemplo, no local de tecidos doentes).

[0017] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um método de tratamento ou prevenção de lesão pulmonar aguda, infecção pulmonar ou doença pulmonar em um indivíduo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz do peptídeo conforme descrito neste documento. Em alguns aspectos, o indivíduo tem inflamação pulmonar. Em alguns aspectos, o indivíduo passou recentemente por terapia de radiação ou quimioterapia. Em alguns aspectos, o indivíduo tem uma lesão pulmonar aguda ou infecção. Em alguns aspectos, o indivíduo tem uma lesão pulmonar induzida por produtos químicos. Em alguns aspectos, o indivíduo tem bronquite plástica, doença pulmonar obstrutiva crônica, bronquite, bronquiolite, bronquiolite obliterante, asma, síndrome do desconforto respiratório agudo (ARDS) ou lesão pulmonar aguda induzida por inalação de fumaça (ISALI). Em alguns aspectos, a doença pulmonar é uma condição fibrótica dos pulmões. Em alguns aspectos, a doença pulmonar é uma doença pulmonar intersticial. Em alguns aspectos, a doença pulmonar é Fibrose Pulmonar Idiopática (IPF) ou cicatriz pulmonar. Em alguns aspectos, a administração compreende a nebulização de uma solução compreendendo o peptídeo. Em alguns aspectos, o método compreende ainda a administração de pelo menos um agente terapêutico antifibrótico adicional. Em alguns aspectos, o pelo menos um antifibrótico adicional é NSAID, esteroide, DMARD, imunossupressor, moduladores de resposta biológica ou broncodilatador. Em algumas modalidades, o indivíduo é um ser humano.

[0018] Contempla-se que qualquer método ou composição descrita neste documento pode ser implantada com relação a qualquer outro método ou composição descrita neste documento. Outros objetos, características e vantagens da presente divulgação serão evidentes a partir da descrição detalhada a seguir. Entretanto, deve-se compreender que a descrição detalhada e os exemplos específicos, embora indiquem modalidades específicas da divulgação, são apresentados somente para fins ilustrativos, uma vez que várias alterações e modificações dentro do âmbito e do escopo da divulgação se tornarão aparentes àquelas pessoas versadas na técnica a partir desta descrição detalhada.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0019] As seguintes figuras fazem parte do presente relatório descritivo e estão incluídas para demonstrar adicionalmente certos aspectos da presente invenção. A invenção pode ser mais bem entendida por referência a uma ou mais dessas figuras em combinação com a descrição detalhada de modalidades específicas apresentadas neste documento.

[0020] FIG. 1: Western blot de células de fibrose pulmonar idiopática de tubulina e SMA tratadas com peptídeos Cav-1. As células IPF foram tratadas com: 1: Não tratadas, 2:10 µM LTI-03, 3: 90 µM LTI-03, 4: 10 µM APi2350, 5: 10 µM APi2354, 6: 10 µM APi2355, 7: 10 µM APi2356, e 8: DMSO, a expressão de SMA e tubulina foi avaliada por western blot.

[0021] FIG. 2: Tratamento com peptídeos Cav-1 aumenta a SMA em relação à tubulina em células IPF. Representação gráfica da razão de SMA para tubulina em células que recebem os tratamentos indicados.

DESCRIÇÃO DE MODALIDADES ILUSTRATIVAS

[0022] A presente divulgação supera os desafios associados às tecnologias atuais, fornecendo peptídeos de caveolina-1 (Cav-1) modificados e seu uso para tratamento e prevenção de doenças, particularmente fibrose pulmonar. Em alguns aspectos, as formulações farmacêuticas dos peptídeos Cav-1 modificados são fornecidas. Por exemplo, em alguns aspectos, o peptídeo é formulado para distribuição ao sistema respiratório. Por exemplo, os peptídeos podem ser preparados para administração às vias aéreas de um indivíduo por formulação em uma solução aquosa e nebulização da solução usando um nebulizador. Em outros aspectos, os peptídeos podem ser formulados para injeção. Também é fornecido neste documento um método de tratamento de lesões e doenças pulmonares, pela administração ao indivíduo (por exemplo, através das vias aéreas) de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um peptídeo Cav-1 modificado. I. Definições

[0023] Em contrapartida, o termo "substancialmente livre" em termos de um componente especificado, é usado neste documento para significar que nenhum do componente especificado foi propositadamente formulado numa composição e/ou está presente apenas como um contaminante ou quantidades vestigiais. A quantidade total do componente especificado resultante de qualquer contaminação não intencional de uma composição é, portanto, bem abaixo de 0,01%. Mais preferencial é uma composição em que nenhuma quantidade do componente especificado possa ser detectada com métodos analíticos padrão.

[0024] Como usado neste documento no relatório descritivo, "um" ou "uma" podem significar um ou mais. Como usado neste documento na(s) reivindicação(ões), quando usadas em conjunto com a palavra "compreendendo", as palavras "um" ou "uma" podem significar um ou mais do que um.

[0025] O uso do termo "ou" nas reivindicações é usado para significar "e/ou", a menos que explicitamente indicado para se referir somente a alternativas, ou que as alternativas sejam mutuamente exclusivas, embora a divulgação suporte uma definição que refere-se somente às alternativas e a "e/ou". Como usado neste documento "outro(a)" pode significar pelo menos um segundo ou mais.

[0026] Ao longo deste pedido, o termo "cerca de" é usado para indicar que um valor inclui a variação inerente de erro para o dispositivo, o método sendo usado para determinar o valor, ou a variação que existe entre os indivíduos do estudo.

[0027] O termo "peptídeo", conforme utilizado neste documento, refere-se tipicamente a uma sequência de aminoácidos constituída por uma única cadeia de aminoácidos unidos por ligações peptídicas. Geralmente, os peptídeos contêm pelo menos dois resíduos de aminoácidos e têm menos de cerca de 50 aminoácidos de comprimento, a menos que definido de outra forma.

[0028] Um peptídeo caveolina-1 (Cav-1) "biologicamente ativo" refere-se a um peptídeo que aumenta os níveis de proteína p53, reduz o ativador de plasminogênio uroquinase (uPA) e o receptor de uPA (uPAR) e/ou aumenta a expressão do inibidor 1 de ativador de plasminogênio (PAI- 1) em células, como fibroblastos pulmonares fibróticos. Em alguns aspectos, o peptídeo biologicamente ativo tem pelo menos 20% da atividade biológica ou bioquímica do polipeptídeo Cav-1 nativo de SEQ ID NO: 1 (por exemplo, conforme medido por um ensaio in vitro ou in vivo). Em alguns aspectos, o peptídeo ativo biológico tem uma atividade biológica ou bioquímica aumentada em comparação com o polipeptídeo Cav-1 nativo.

[0029] O termo "identidade" ou "homologia" deve ser interpretado como a porcentagem de resíduos de aminoácidos em uma sequência candidata que é idêntica aos resíduos de aminoácidos na sequência polipeptídica de referência, após o alinhamento das sequências e introdução de lacunas, se necessário, para atingir a identidade de sequência percentual máxima, e não levando em consideração quaisquer substituições conservativas como parte da identidade de sequência. Nem extensões de N ou C-terminal nem inserções serão interpretadas como a redução da identidade ou da homologia. Métodos e programas de computador para o alinhamento são bem conhecidos na técnica. A identidade de sequência pode ser medida usando software de análise de sequência.

[0030] Os termos "polipeptídeo" e "proteína" também são usados neste documento em seu sentido mais amplo para se referir a um composto de dois ou mais aminoácidos de subunidade, análogos de aminoácidos e peptidomiméticos. As subunidades podem estar ligadas por ligações peptídicas. Em outra modalidade, a subunidade pode ser ligada por outras ligações, por exemplo, éster, éter, etc. Conforme usado neste documento, o termo "aminoácido" refere-se a aminoácidos naturais e/ou não naturais ou sintéticos, incluindo glicina e os isômeros ópticos D ou L e os análogos do aminoácido e peptidomiméticos. O termo "peptidomimético" ou "mimetizador de peptídeo" significa que um peptídeo de acordo com a invenção é modificado de tal forma que inclui pelo menos uma ligação não peptídica, como, por exemplo, ligação de ureia, ligação de carbamato, ligação de sulfonamida, hidrazina ligação, ou qualquer outra ligação covalente. Um peptídeo de três ou mais aminoácidos é normalmente chamado de oligopeptídeo se a cadeia de peptídeo for curta. Se a cadeia de peptídeo for longa, o peptídeo é vulgarmente chamado de polipeptídeo ou proteína.

[0031] Os termos "sujeito" e "indivíduo" e "paciente" são usados indistintamente neste documento, e referem-se a um animal, por exemplo, um animal humano ou não humano (por exemplo, um mamífero), a quem o tratamento, incluindo o tratamento profilático, com uma composição farmacêutica, conforme divulgado neste documento, é fornecida. O termo "indivíduo" como usado neste documento refere-se a um ser humano ou animal não humano. O termo "animais não humanos" inclui todos os vertebrados, por exemplo, mamíferos, como primatas não humanos (particularmente primatas superiores), ovelhas, cães, roedores (por exemplo, camundongo ou rato), porquinhos-da- índia, cabras, porcos, gatos, coelhos, vacas e não mamíferos, como galinhas, anfíbios, répteis, etc. Em uma modalidade, o indivíduo é humano. Em outra modalidade, o indivíduo é um animal experimental ou substituto de animal como modelo de doença. Os mamíferos não humanos incluem mamíferos como primatas não humanos (particularmente primatas superiores), ovelhas, cães, roedores (por exemplo, camundongo ou rato), porquinhos-da-índia, cabras, porcos, gatos, coelhos e vacas. Em alguns aspectos, o animal não humano é um animal de companhia, como um cão ou um gato.

[0032] "Tratar" uma doença ou condição em um indivíduo ou "tratar" um paciente com uma doença ou condição refere-se a submeter o indivíduo a um tratamento farmacêutico, por exemplo, a administração de um fármaco, de modo que pelo menos um sintoma da doença ou condição é diminuída ou estabilizada. Normalmente, quando o peptídeo é administrado terapeuticamente como um tratamento, ele é administrado a um indivíduo que apresenta um ou mais sintomas de lesão pulmonar ou fibrose pulmonar.

[0033] Por "isolado" entende-se que o polipeptídeo foi separado de qualquer ambiente natural, como um fluido corporal, por exemplo, sangue, e separado dos componentes que acompanham naturalmente o peptídeo.

[0034] Por isolado e "substancialmente puro" entende-se um polipeptídeo que foi separado e purificado pelo menos em algum grau dos componentes que o acompanham naturalmente. Normalmente, um polipeptídeo é substancialmente puro quando é pelo menos cerca de 60%, ou pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, ou mesmo pelo menos cerca de 99%, por peso, livre de proteínas e moléculas orgânicas de ocorrência natural com as quais está naturalmente associado. Por exemplo, um polipeptídeo substancialmente puro pode ser obtido por extração de uma fonte natural, por expressão de um ácido nucleico recombinante em uma célula que normalmente não expressa essa proteína, ou por síntese química.

[0035] O termo "variante", tal conforme utilizado neste documento, refere-se a um polipeptídeo ou ácido nucleico que difere do polipeptídeo ou ácido nucleico por um ou mais aminoácidos ou deleções de ácido nucleico, adições, substituições ou modificações de cadeia lateral, porém retém uma ou mais funções específicas ou atividades biológicas da molécula de ocorrência natural. As substituições de aminoácidos incluem alterações nas quais um aminoácido é substituído por um resíduo de aminoácido de ocorrência natural diferente ou não convencional. Tais substituições podem ser classificadas como "conservativas", caso em que um resíduo de aminoácido contido em um polipeptídeo é substituído por outro aminoácido de ocorrência natural de caráter semelhante em relação à polaridade, funcionalidade da cadeia lateral ou tamanho. Tais substituições conservativas são bem conhecidas na técnica. As substituições abrangidas pela presente invenção também podem ser "não conservativas", em que um resíduo de aminoácido que está presente em um peptídeo é substituído por um aminoácido com propriedades diferentes, como um aminoácido de ocorrência natural de um grupo diferente (por exemplo, substituindo um aminoácido carregado ou hidrofóbico; ácido por alanina), ou alternativamente, em que um aminoácido de ocorrência natural é substituído por um aminoácido não convencional. Em determinadas modalidades, as substituições de aminoácidos são conservativas. Também englobado no termo variante quando usado com referência a um polinucleotídeo ou polipeptídeo, refere-se a um polinucleotídeo ou polipeptídeo que pode variar na estrutura primária, secundária ou terciária, em comparação com um polinucleotídeo ou polipeptídeo de referência, respectivamente (por exemplo, em comparação a um polinucleotídeo ou polipeptídeo de tipo selvagem).

[0036] O termo "inserções" ou "deleções" estão tipicamente na faixa de cerca de 1 a 5 aminoácidos. A variação permitida pode ser determinada experimentalmente pela produção do peptídeo sinteticamente, enquanto sistematicamente faz inserções, deleções ou substituições de nucleotídeos na sequência usando técnicas de DNA recombinante.

[0037] O termo "substituição" quando refere-se a um peptídeo, refere-se a uma mudança em um aminoácido para uma entidade diferente, por exemplo, outro aminoácido ou porção de aminoácido. As substituições podem ser conservativas ou não conservativas.

[0038] Um "análogo" de uma molécula, como um peptídeo, refere- se a uma molécula semelhante em função à molécula inteira ou a um fragmento desta. O termo "análogo" também pretende incluir espécies alélicas e variantes induzidas. Os análogos normalmente diferem dos peptídeos de ocorrência natural em uma ou algumas posições, muitas vezes em virtude de substituições conservativas. Os análogos exibem tipicamente pelo menos 80 ou 90% de identidade de sequência com peptídeos naturais. Alguns análogos também incluem aminoácidos não naturais ou modificações de aminoácidos N ou C terminais. Exemplos de aminoácidos não naturais são, por exemplo, mas não limitados a; aminoácidos dissubstituídos, aminoácidos N-alquila, ácido láctico, 4- hidroxiprolina, γ-carboxiglutamato, ε-Ν, Ν, Ν-trimetilisina, ε-Ν-acetilisina, O-fosfoserina, N-acetilserina, N-formilmetionina, 3 -metil-histidina, 5-

hidroxilisina, σ-Ν-metilarginina. Fragmentos e análogos podem ser triados quanto à eficácia profilática ou terapêutica em modelos animais transgênicos, conforme descrito abaixo.

[0039] Por "ligado covalentemente" entende-se unido direta ou indiretamente (por exemplo, através de um ligante peptídico) por uma ligação química covalente. Em alguns aspectos de todas as modalidades da invenção, os peptídeos de fusão são ligados covalentemente.

[0040] O termo "proteína de fusão" conforme utilizado neste documento refere-se a uma proteína recombinante de duas ou mais proteínas. As proteínas de fusão podem ser produzidas, por exemplo, por uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína unida ao ácido nucleico que codifica outra proteína de modo que constituam uma única estrutura de leitura aberta que pode ser traduzida nas células em um único polipeptídeo que abriga todas as proteínas pretendidas. A ordem de arranjo das proteínas pode variar. As proteínas de fusão podem incluir uma tag de epítopo ou um extensor de meia-vida. As tags de epítopo incluem biotina, tag FLAG, c-myc, hemaglutinina, His6, digoxigenina, FITC, Cy3, Cy5, proteína fluorescente verde, tags de epítopo V5, GST, β-galactosidase, AU1, AU5 e avidina. Os extensores de meia-vida incluem domínio Fc e albumina sérica.

[0041] O termo "vias respiratórias" refere-se neste documento a qualquer parte do trato respiratório incluindo o trato respiratório superior, as vias aéreas respiratórias e os pulmões. O trato respiratório superior inclui o nariz e as passagens nasais, boca e garganta. As vias respiratórias incluem a laringe, traqueia, brônquios e bronquíolos. Os pulmões incluem os bronquíolos respiratórios, os dutos alveolares, os sacos alveolares e os alvéolos.

[0042] Os termos "lesão pulmonar aguda induzida pela inalação de fumaça" e "ISALI" são usados indiferentemente neste documento e referem-se a uma forma de lesão pulmonar aguda (ALI) causada pela inalação de fumaça. A ALI também é conhecida como "síndrome do desconforto respiratório agudo leve; ARDS." A ARDS pode ser definida pela descoberta de uma ou mais das seguintes condições em um indivíduo: 1) infiltrados pulmonares bilaterais na radiografia de tórax, 2) quando medido por cateterismo cardíaco direito conforme indicado clinicamente, pressão capilar pulmonar em cunha <18 mmHg (2,4 kPa ), e 3) PaO2/FiO2 < 300 mmHg (40 kPa). Em algumas modalidades, o tratamento de ISALI inclui o tratamento de uma ou mais das seguintes condições: oxigenação reduzida, obstrução das vias aéreas (incluindo uma obstrução grave das vias aéreas), vazamentos ou detritos fibrinosos das vias aéreas e deposição de fibrina alveolar.

[0043] Os termos "nebulizar", "nebulizado" e outras variações gramaticais referem-se neste documento ao processo de conversão de um líquido em pequenas gotículas de aerossol. Em algumas modalidades, as gotículas de aerossol têm um diâmetro médio de cerca de 2-10 µm. Em algumas modalidades, as gotículas de aerossol têm um diâmetro médio de cerca de 2-4 µm. II. Peptídeos de caveolina-1

[0044] As modalidades da presente divulgação fornecem variantes de peptídeo da proteína caveolina-1 (Cav-1). O domínio em andaime de Caveolina-1 (Cav-1) ou polipeptídeo interfere na interação de Cav-1 com quinases Src mimetizando o efeito combinado de uPA e anticorpo anti-β1-integrina. O Cav-1 humano nativo tem um comprimento de 178 aminoácidos e um peso molecular de 22 kDa. A sequência de aminoácidos de Cav-1 é mostrada abaixo (SEQ ID NO: 1). 1 MSGGKYVDSE GHLYTVPIRE QGNIYKPNNK AMADELSEKQ

VYDAHTKEID LVNRDPKHLN 61 DDVVKIDFED VIAEPEGTHS FDGIWKASFT TFTVTKYWFY

RLLSALFGIP MALIWGIYFA 121 ILSFLHIWAV VPCIKSFLIE IQCISRVYSI YVHTVCDPLF

EAVGKIFSNV RINLQKEI

[0045] Em alguns aspectos, o peptídeo é um peptídeo de domínio em andaime que compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos cerca de 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO: 2, FTTFTVT. O peptídeo pode compreender 1, 2, 3, 4 ou mais substituições, deleções ou inserções de aminoácidos em relação à sequência de SEQ ID NO: 1, de modo a derivar um polipeptídeo de 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 ou 19 resíduos. Em aspectos particulares, os peptídeos são truncamentos do polipeptídeo Cav-1 nativo, como os polipeptídeos exemplificativos mostrados na Tabela 1. Tabela 1: Peptídeos Cav-1 exemplares. Sequência ID ASFTTFTVT SEQ ID NO:3 KASFTTFTVTKGS SEQ ID NO:4 KASFTTFTVTKGS-NH2 SEQ ID NO: 5 aaEGKASFTTFTVTKGSaa SEQ ID NO: 6 aaEGKASFTTFTVTKGSaa-NH2 SEQ ID NO: 7 Ac-aaEGKASFTTFTVTKGSaa-NH2 SEQ ID NO: 8 OASFTTFTVTOS SEQ ID NO: 9 OASFTTFTVTOS-NH2 SEQ ID NO: 10 FTTFTVT-NH2 SEQ ID NO: 11 FTTFTVTK-NH2 SEQ ID NO: 12 KASFTTFTVTK-NH2 SEQ ID NO: 13 Ac-KASFTTFTVTK-NH2 SEQ ID NO: 14 OASFTTFTVTK-NH2 SEQ ID NO: 15 Ac-OASFTTFTVTK-NH2 SEQ ID NO: 16 Ac-KASFTTFTVTKGS-NH2 SEQ ID NO: 17 DSGKASFTTFTVTK-NH2 SEQ ID NO: 18 Ac-DSGKASFTTFTVTK-NH2 SEQ ID NO: 19 Ac-OASFTTFTVTOS-NH2 SEQ ID NO: 20 (a = D-Alanina, O = Ornitina)

[0046] Os peptídeos fornecidos na presente divulgação são derivados biologicamente ativos que possuem a atividade do polipeptídeo CAV-1 nativo em ensaios de ligação ou de atividade biológica in vitro ou in vivo. Em aspectos particulares, o peptídeo inibe ou previne a apoptose de LECs induzida por BLM in vitro ou in vivo com atividade de pelo menos cerca de 20% da atividade do polipeptídeo CAV-1 nativo, ou pelo menos cerca de 30%, 40%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, cerca de 95%, 97%, 99% e qualquer faixa derivável nele, tal como, por exemplo, de cerca de 70% a cerca de 80%, e mais preferencialmente de cerca de 81% a cerca de 90%; ou ainda mais preferencialmente, de cerca de 91% a cerca de 99%. O peptídeo pode ter 100% ou mesmo mais atividade do que o polipeptídeo CAV-1 nativo. Os ensaios para testar a atividade biológica, por exemplo, atividade antifibrótica, a capacidade de afetar a expressão de mRNAs de uPA, uPAR e PAI-1, ou inibir a proliferação de fibroblastos pulmonares, são bem conhecidos na técnica.

[0047] Os peptídeos da presente divulgação são peptídeos do polipeptídeo Cav-1 nativo ou suas versões modificadas. Os peptídeos podem ser peptídeos sintéticos, recombinantes ou quimicamente modificados, isolados ou gerados usando métodos bem conhecidos na técnica. As modificações podem ser feitas aos aminoácidos no N- terminal, C-terminal ou internamente. As modificações do N-terminal podem ser, por exemplo, mas não se limitam a, acilação, acetilação ou amidação do C-terminal. Os peptídeos podem incluir alterações conservativas ou não conservativas de aminoácidos, conforme descrito abaixo. As alterações de polinucleotídeos podem resultar em substituições, adições, deleções, fusões e truncagens de aminoácidos no polipeptídeo codificado pela sequência de referência. Os peptídeos também podem incluir inserções, deleções ou substituições de aminoácidos, incluindo inserções e substituições de aminoácidos (e outras moléculas) que normalmente não ocorrem na sequência de peptídeo que é a base da variante modificada, por exemplo, mas não limitada à inserção L-aminoácidos, ou aminoácidos não padrão, como ornitina, que normalmente não ocorrem em proteínas humanas. O termo substituição conservativa, quando descreve um peptídeo, refere-se a uma alteração na composição de aminoácidos do peptídeo que não altera substancialmente a atividade do peptídeo. Por exemplo, uma substituição conservativa refere-se à substituição de um resíduo de aminoácido por um resíduo de aminoácido diferente que possui propriedades químicas semelhantes. As substituições conservativas de aminoácidos incluem a substituição de uma leucina por uma isoleucina ou valina, um aspartato por um glutamato ou uma treonina por uma serina.

[0048] As substituições de aminoácidos conservativas podem ser o resultado da substituição de um aminoácido por outro aminoácido com propriedades estruturais e/ou químicas semelhantes, tais como a substituição de uma leucina por uma isoleucina ou valina, um aspartato por um glutamato, ou uma treonina por uma serina. Assim, uma substituição conservativa de uma sequência de aminoácidos particular refere-se à substituição daqueles aminoácidos que não são críticos para a atividade polipeptídica ou substituição de aminoácidos por outros aminoácidos com propriedades semelhantes (por exemplo, ácido, básico, carregado positivamente ou negativamente, polar ou apolar, etc.) de modo que a substituição mesmo de aminoácidos críticos não reduza a atividade do peptídeo. As tabelas de substituições conservativas que fornecem aminoácidos funcionalmente semelhantes são bem conhecidas na técnica. Por exemplo, os seis grupos a seguir contêm, cada um, aminoácidos que são substituições conservativas entre si: 1) Alanina (A), Serina (S), Treonina (T); 2) Ácido aspártico (D), ácido glutâmico (E); 3) Asparagina (N), Glutamina (Q); 4) Arginina (R),

Lisina (K); 5) Isoleucina (I), Leucina (L), Metionina (M), Valina (V); e 6) Fenilalanina (F), Tirosina (Y), Triptofano (W). (Ver também Creighton, Proteins, W.H. Freeman and Company (1984), incorporado por referência em sua totalidade.) Em algumas modalidades, substituições, deleções ou adições individuais que alteram, adicionam ou deletam um único aminoácido ou uma pequena porcentagem de aminoácidos também podem ser consideradas substituições conservativas se a mudança não reduzir a atividade do peptídeo. Inserções ou deleções podem, opcionalmente, estar na faixa de cerca de 1 a 5 aminoácidos. A escolha de aminoácidos conservativos pode ser selecionada com base na localização do aminoácido a ser substituído no peptídeo, por exemplo, se o aminoácido está no exterior do peptídeo e exposto a solventes, ou no interior e não exposto a solventes.

[0049] Em modalidades alternativas, pode-se selecionar o aminoácido que irá substituir um aminoácido existente com base na localização do aminoácido existente, ou seja, sua exposição a solventes (ou seja,se o aminoácido for exposto a solventes ou estiver presente na superfície externa do peptídeo ou polipeptídeo em comparação com aminoácidos localizados internamente não expostos a solventes). A seleção de tais substituições conservativas de aminoácidos é bem conhecida na técnica, por exemplo, conforme divulgado em Dordo et al, J. Mol Biol, 1999, 217, 721-739 e Taylor et al, J. Theor. Biol. 119(1986); 205-218 e S. French e B. Robson, J. Mol. Evol. 19(1983)171. Consequentemente, pode-se selecionar substituições conservativas de aminoácidos adequadas para aminoácidos no exterior de uma proteína ou peptídeo (ou seja, aminoácidos expostos a um solvente), por exemplo, mas não limitado a, as seguintes substituições podem ser usadas: substituição de Y por F, T com S ou K, P com A, E com D ou Q, N com D ou G, R com K, G com N ou A, T com S ou K, D com N ou E, I com L ou V, F com Y, S com T ou A, R com K, G com N ou A, K com R,

A com S, K ou P.

[0050] Em modalidades alternativas, também se pode selecionar substituições conservativas de aminoácidos abrangidas adequadas para aminoácidos no interior de uma proteína ou peptídeo, por exemplo, pode-se usar substituições conservativas adequadas para aminoácidos no interior de uma proteína ou peptídeo (ou seja, o aminoácido ácidos não são expostos a um solvente), por exemplo, mas não limitado a, pode-se usar as seguintes substituições conservativas: onde Y é substituído por F, T por A ou S, I por L ou V, W por Y, M por L, N com D, G com A, T com A ou S, D com N, I com L ou V, F com Y ou L, S com A ou T e A com S, G, T ou V. Em algumas modalidades, as substituições não conservativas de aminoácidos também estão incluídas no termo de variantes.

[0051] Em alguns aspectos, os polipeptídeos são derivados do polipeptídeo Cav-1 nativo. O termo "derivado", conforme utilizado neste documento, refere-se a peptídeos que foram quimicamente modificados, por exemplo, mas não limitados por técnicas como acetilação, ubiquitinação, marcação, peguilação (derivatização com polietilenoglicol), lipidação, glicosilação, amidação ou adição de outras moléculas. Uma molécula também é um "derivado" de outra molécula quando contém frações químicas adicionais que normalmente não fazem parte da molécula. Tais porções podem alterar o pH ou melhorar a solubilidade, absorção, meia-vida biológica da molécula, etc. As porções podem, alternativamente, diminuir a toxicidade da molécula, eliminar ou atenuar qualquer efeito colateral indesejável da molécula, etc. As porções capazes de mediar tais efeitos são divulgadas em Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª edição, A.R. Gennaro, Ed., MackPubl., Easton, PA (1990), incorporado neste documento, por referência, na sua totalidade.

[0052] O termo "funcional" quando usado em conjunto com

"derivado" ou "variante" refere-se a um polipeptídeo da invenção que possui uma atividade biológica (funcional ou estrutural) que é substancialmente semelhante a uma atividade biológica da entidade ou molécula que é um derivado funcional ou variante funcional deste. O termo derivado funcional pretende incluir os fragmentos, análogos ou derivados químicos de uma molécula.

[0053] Em alguns aspectos, as substituições de aminoácidos podem ser feitas em um polipeptídeo em uma ou mais posições em que a substituição é por um aminoácido com uma hidrofilicidade semelhante. A importância do índice de aminoácido hidropático para conferir função biológica interativa a uma proteína é geralmente entendida na técnica (Kyte e Doolittle, 1982). É aceito que a característica hidropática relativa do aminoácido contribui para a estrutura secundária de proteínas resultantes que, por sua vez, define a interação da proteína com outras moléculas, por exemplo, enzimas, substratos, receptores, DNA, anticorpos, antígenos e semelhantes. Assim, essa substituição conservativa pode ser feita em um polipeptídeo e provavelmente terá apenas efeitos menores em sua atividade. Conforme detalhado na Patente U.S. 4,554,101, os seguintes valores de hidrofilicidade foram atribuídos a esses resíduos de aminoácidos: arginina (+3,0); lisina (+3,0); aspartato (+3,0 ± 1); glutamato (+3,0 ± 1); serina (+0,3); asparagina (+0,2); glutamina (+0,2); glicina (0); treonina (-0,4); prolina (- 0,5 ± 1); alanina (0,5); histidina (-0,5); cisteína (-1,0); metionina (-1,3); valina (-1,5); leucina (-1,8); isoleucina (-1,8); tirosina (-2,3); fenilalanina (-2,5) e triptofano (-3,4). Estes valores podem ser usados como um guia e assim a substituição de aminoácidos cujos valores de hidrofilicidade estão dentro de ± 2 são preferidos, aqueles que estão dentro de ± 1 são particularmente preferidos, e aqueles dentro de ± 0,5 são ainda mais particularmente preferidos. Assim, qualquer um dos polipeptídeos descritos neste documento pode ser modificado pela substituição de um aminoácido, por um aminoácido diferente, mas homólogo, com um valor de hidrofilicidade semelhante. Os aminoácidos com hidrofilicidades dentro de +/- 1,0 ou +/- 0,5 pontos são considerados homólogos.

[0054] Os peptídeos Cav-1 modificados podem compreender modificações co-traducionais e pós-traducionais (clivagem do peptídeo C-terminal), tais como, por exemplo, formação de ligação dissulfeto, glicosilação, acetilação, fosforilação, clivagem proteolítica (por exemplo, clivagem por furinas ou metaloproteases) e semelhantes, na medida em que tais modificações não afetam as propriedades anti-inflamatórias dos peptídeos isolados ou sua capacidade de melhorar o controle glicêmico.

[0055] Em alguns aspectos, o peptídeo Cav-1 modificado compreende aminoácidos de ocorrência não natural. Os polipeptídeos podem compreender uma combinação de aminoácidos de ocorrência natural e não natural, ou podem compreender apenas aminoácidos de ocorrência não natural. São desejáveis em certas situações os aminoácidos de ocorrência não natural podem incluir aminoácidos não nativos sintéticos, aminoácidos substituídos ou um ou mais D- aminoácidos nos peptídeos (ou outros componentes da composição, com exceção de sequências de reconhecimento de protease). Peptídeos contendo D-aminoácido, etc., exibem estabilidade aumentada in vitro ou in vivo, em comparação com formas contendo L- aminoácido. Assim, a construção de peptídeos, etc., que incorporam D- aminoácidos pode ser particularmente útil quando maior estabilidade intracelular for desejada ou requerida. Mais especificamente, os D- peptídeos são resistentes a peptidases e proteases endógenas, proporcionando, assim, uma melhor distribuição oral transepitelial e transdérmica de fármacos e conjugados ligados, melhor biodisponibilidade de complexos membrana-permanentes (ver abaixo para discussão posterior) e vidas intravascular e intersticial prolongadas em que tais propriedades são desejáveis. O uso de peptídeos de isômero D também pode aumentar a distribuição transdermal e transepitelial oral de fármacos ligadas e outras moléculas de carga. Além disso, D-peptídeos, etc., não podem ser processados de forma eficiente para apresentação restrita de classe Il de complexo de histocompatibilidade principal para células auxiliares T e, portanto, são menos suscetíveis de induzir respostas imunológicas humorais em todo o organismo. Os conjugados de peptídeos podem, portanto, ser construídos usando, por exemplo, formas de isômero D de sequências de peptídeos de penetração celular, formas de isômero L de sítios de clivagem e formas de isômero D de peptídeos terapêuticos.

[0056] Além dos 20 L-aminoácidos "padrão", D-aminoácidos ou aminoácidos não padrão, modificados ou incomuns que são bem definidos na técnica também são contemplados para uso na presente divulgação. Aminoácidos fosforilados (Ser, Thr, Tyr), aminoácidos glicosilados (Ser, Thr, Asn), β-aminoácidos, GABA, ω-aminoácidos são ainda contemplados para uso na presente divulgação. Estes incluem, por exemplo, incluem -alanina (-Ala) e outros ω-aminoácidos, tais como ácido 3-aminopropiônico, ácido 2,3-diaminopropiônico (Dpr), ácido 4-aminobutírico e assim por diante; ácido -aminoisobutírico (Aib); ácido ε-aminohexanoico (Aha); ácido δ-aminovalérico (Ava); N- metilglicina ou sarcosina (MeGly); ornitina (Orn); citrulina (Cit); t- butilalanina (t-BuA); t-butilglicina (t-BuG); N-metilisoleucina (Melle); fenilglicina (Phg); norleucina (Nle); 4-clorofenilalanina (Phe(4-Cl)); 2- fluorofenilalanina (Phe(2-F)); 3-fluorofenilalanina (Phe(3-F)); 4- fluorofenilalanina (Phe(4-F)); penicilamina (Pen); Ácido 1,2,3,4-tetra- hidroisoquinolina-3-carboxílico (Tic); homoarginina (hArg); N-acetil lisina (AcLys); ácido 2,4-diaminobutírico (Dbu); ácido 2,4-diaminobutírico (Dab); p-aminofenilalanina (Phe(pNH2)); N-metil valina (MeVal); homocisteína (hCys), homofenilalanina (hPhe) e homoserina (hSer); hidroxiprolina (Hyp), homoprolina (hPro), aminoácidos N-metilados e peptoides (glicinas N-substituídas).

[0057] As modificações do terminal carbóxi incluem acilação com ácidos carboxílicos: fórmico, acético, propiônico, ácidos graxos (mirístico, palmítico, esteárico), succínico, benzoico, carbobenzóxi (Cbz); acetilação e biotinilação. As modificações amino-terminais incluem: (i) acilação com ácidos carboxílicos: fórmico, acético, propiônico, ácidos graxos (mirístico, palmítico, esteárico, etc) succínico, benzoico, carbobenzoxi (Cbz); (ii) biotinilação; (iii) amidação; (iv) fixação de corantes, tais como fluoresceína (FITC, FAM, etc.), ácido 7-hidróxi- 4-metilcumarin-3-acético, ácido 7-hidroxicumarina-3-acético, ácido 7- metoxicumarina-3-acético e outros cumarinas; rodaminas (5- carboxirodamina 110 ou 6G, 5(6)-TAMRA, ROX); ácido N-[4-(4- dimetilamino)fenilazo]bezoico (Dabcyl), 2,4-dinitrobenzeno (Dnp), ácido 5-dimetilaminonaftaleno-1-sulfônico (Dansyl) e outros corantes; e (v) polietilenoglicol.

[0058] O polipeptídeo pode possuir um grupo de terminação em seus terminais N e C com um grupo acila (abreviado como "Ac") e um grupo amido (abreviado "Am"), respectivamente, por exemplo acetila (CH3CO-) no terminal N e amido (-NH2) no terminal C. Uma ampla faixa de funções de capping N-terminal, de preferência em uma ligação ao grupo amino terminal, é contemplada, por exemplo: formila;

[0059] alcanoila, com 1 a 10 átomos de carbono, como acetila, propionila, butirila;

[0060] alquenoila, com 1 a 10 átomos de carbono, como hex-3- enoila;

[0061] alquinoila, com 1 a 10 átomos de carbono, como hex-5-inoila;

[0062] aroila, como benzoila ou 1-naftoila;

[0063] heteroaroila, tal como 3-pirrroila ou 4-quinoloila;

[0064] alquilsulfonila, tal como metanossulfonila;

[0065] arilsulfonila, como benzenossulfonila ou sulfanilila;

[0066] heteroarilsulfonila, tal como piridina-4-sulfonila;

[0067] alcanoila substituída, com 1 a 10 átomos de carbono, tal como 4-aminobutirila;

[0068] alquenoila substituída, com 1 a 10 átomos de carbono, tal como 6-hidróxi-hex-3-enoila;

[0069] alquinoila substituída, com 1 a 10 átomos de carbono, como 3-hidróxi-hex-5-inoila;

[0070] aroila substituída, tal como 4-clorobenzoila ou 8-hidróxi-naft- 2-oila;

[0071] heteroaroila substituída, tal como 2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra- hidro-3-metil-quinazolin-6-oila;

[0072] alquilsulfonila substituída, tal como 2-aminoetanossulfonila;

[0073] arilsulfonila substituída, tal como 5-dimetilamino-1- naftalenossulfonila;

[0074] heteroarilsulfonila substituída, tal como 1-metóxi-6- isoquinolinossulfonila;

[0075] carbamoila ou tiocarbamoila;

[0076] carbamoila substituída (R'-NH-CO) ou tiocarbamoila substituída (R'-NH-CS) em que R' é alquila, alquenila, alquinila, arila, heteroarila, alquila substituída, alquenila substituída, alquinila substituída, arila substituída ou heteroarila substituída;

[0077] carbamoila substituída (R'-NH-CO) e tiocarbamoila substituída (R'-NH-CS) em que R' é alcanoila, alquenoila, alquinoila, aroila, heteroaroila, alcanoila substituída, alquenoila substituída, alquinoila substituída, aroila substituída ou heteroaroila substituída, tudo conforme definido acima.

[0078] A função de capping C-terminal pode estar em uma ligação amida ou éster com o terminal carboxila. As funções de capping que fornecem uma ligação amida são designadas como NR1R2 em que R1 e R2 podem ser extraídos independentemente do seguinte grupo:

hidrogênio;

[0079] alquila, de preferência com 1 a 10 átomos de carbono, tal como metila, etila, isopropila;

[0080] alquenila, de preferência com 1 a 10 átomos de carbono, tal como prop-2-enila;

[0081] alquinila, de preferência com 1 a 10 átomos de carbono, tal como prop-2-inila;

[0082] alquila substituída com 1 a 10 átomos de carbono, tal como hidroxialquila, alcoxialquila, mercaptoalquila, alquiltioalquila, halogenoalquila, cianoalquila, aminoalquila, alquilaminoalquila, dialquilaminoalquila, alcanoilalquila, carboxialquila, carbamoilalquila;

[0083] alquenila substituída com 1 a 10 átomos de carbono, tal como hidroxialquenila, alcoxialquenila, mercaptoalquenila, alquiltioalquenila, halogenoalquenila, cianoalquenila, aminoalquenila, alquilaminoalquenila, dialquilaminoalquenila, alcanoilalquenila, carboxialquenila, carbamoilalquenila;

[0084] alquinila substituída com 1 a 10 átomos de carbono, tal como hidroxialquinila, alcoxialquinila, mercaptoalquinila, alquiltioalquinila, halogenoalquinila, cianoalquinila, aminoalquinila, alquilaminoalquinila, dialquilaminoalquinila, alcanoilalquinila, carboxialquinila, carbamoilalquinila;

[0085] aroilalquila com até 10 átomos de carbono, tal como fenacila ou 2-benzoiletila;

[0086] arila, como fenila ou 1-naftila;

[0087] heteroarila, tal como 4-quinolila;

[0088] alcanoila, com 1 a 10 átomos de carbono, como acetila ou butirila;

[0089] aroila, como benzoila;

[0090] heteroaroila, tal como 3-quinoloila;

[0091] OR' ou NR'R'' onde R' e R'' são independentemente hidrogênio, alquila, arila, heteroarila, acila, aroila, sulfonila, sulfinila, ou SO2-R’’’ ou SO-R''' onde R''' é alquila, arila, heteroarila, alquenila ou alquinila substituída ou não substituída.

[0092] As funções de capping que fornecem uma ligação éster são designadas como OR, em que R pode ser: alcóxi; arilóxi; heteroarilóxi; aralquilóxi; heteroaralquilóxi; alcóxi substituído; arilóxi substituído; heteroarilóxi substituído; aralquilóxi substituído; ou heteroaralquilóxi substituído.

[0093] Tanto a função de capping N-terminal quanto a C-terminal, ou ambos, podem ser de tal estrutura que a molécula com um grupo de terminação funcione como uma profármaco (um derivado farmacologicamente inativo da molécula de fármaco original) que sofre transformação espontânea ou enzimática dentro do corpo em para liberar o fármaco ativo e que melhorou as propriedades de distribuição em relação à molécula do fármaco original (Bundgaard H, Ed: Design of Prodrugs, Elsevier, Amsterdã, 1985).

[0094] A escolha criteriosa de grupos de terminação permite a adição de outras atividades no peptídeo. Por exemplo, a presença de um grupo sulfidrila ligado ao cap do N- ou C-terminal permitirá a conjugação do peptídeo derivatizado com outras moléculas.

[0095] Ainda em um aspecto adicional, os peptídeos ou fragmentos ou derivados dos mesmos podem ser "peptídeos retroinversos". Um "peptídeo retroinverso" refere-se a um peptídeo com uma reversão da direção da ligação peptídica em pelo menos uma posição, isto é, uma reversão dos terminais amino e carbóxi em relação à cadeia lateral do aminoácido. Assim, um análogo retroinverso inverteu os terminais e a direção reversa das ligações peptídicas, mantendo aproximadamente a topologia das cadeias laterais como na sequência do peptídica nativa. O peptídeo retroinverso pode conter L-aminoácidos ou D-aminoácidos, ou uma mistura de L-aminoácidos e D-aminoácidos, até que todos os aminoácidos sejam o D-isômero. Análogos de peptídeos retroinversos parciais são polipeptídeos nos quais apenas parte da sequência é revertida e substituída por resíduos de aminoácidos enantioméricos. Uma vez que a porção retroinvertida de tal análogo reverteu os terminais amino e carboxila, os resíduos de aminoácidos que flanqueiam a porção retroinvertida são substituídos por diaminometanos e malonatos análogos da cadeia lateral a-substituídos geminalmente, respectivamente. As formas retroinversas de peptídeos de penetração celular funcionam tão eficientemente na translocação através de uma membrana quanto as formas naturais. A síntese de análogos peptídicos retroinversos é descrita em Bonelli, F. et al., Int J Pept Protein Res. 24(6):553-6 (1984); Verdini, A e Viscomi, G. C, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 :697-701 (1985); e Patente U.S. Nº 6,261,569, que são incorporadas neste documento na sua totalidade por referência. Foram descritos processos para a síntese em fase sólida de análogos de peptídeos retroinversos parciais (EP 97994-B), que também é incorporado neste documento na sua totalidade por referência.

[0096] Um polinucleotídeo ou uma região polinucleotídica (ou um polipeptídeo ou uma região polipeptídica) tem uma certa porcentagem (por exemplo, 80%, 85%, 90% ou 95%) de "identidade de sequência" ou "homologia" para outra sequência, significando que, quando alinhados, essa porcentagem de bases (ou aminoácidos) é a mesma quando se comparam as duas sequências. Este alinhamento e a homologia percentual ou identidade de sequência podem ser determinados usando programas de software conhecidos na técnica, por exemplo, aqueles descritos em Current Protocols In Molecular Biology (F. M. Ausubel et al., eds., 1987) Suplemento 30, seção 7.7.18, Tabela 7.7.1. De preferência, os parâmetros padrão são usados para alinhamento. Um programa de alinhamento preferencial é o BLAST, utilizando parâmetros predefinidos. Em particular, programas preferidos são BLASTN e

BLASTP, utilizando os seguintes parâmetros padrão: código genético=padrão; filtro=nenhum; fita=ambos; corte=60; esperar=10; Matriz=BLOSUM62; Descrições=50 sequências; classificar por= ALTA PONTUAÇÃO; Bancos de dados=não redundante, GenBank+EMBL+DDBJ+APO+traduções do GenBank CDS+Swissprotein+Spupdate+PIR. A. Polipeptídeo Multiméricos

[0097] As modalidades da presente divulgação também incluem polipeptídeos mais longos construídos a partir de unidades de repetição de um polipeptídeo variante Cav-1 modificado. Um multímero de polipeptídeo pode compreender diferentes combinações de polipeptídeo. Esses polipeptídeos multiméricos podem ser feitos por síntese química ou por técnicas de DNA recombinante como discutido neste documento. Quando produzidos por síntese química, os oligômeros têm preferencialmente de 2-5 repetições de uma sequência polipeptídica central, e o número total de aminoácidos no multímero não deve exceder cerca de 160 resíduos, de preferência não mais do que 100 resíduos (ou seus equivalentes, quando incluindo ligantes ou espaçadores). B. Peptidomiméticos

[0098] O peptídeo Cav-1 modificado pode ser um composto peptidomimético que imita os efeitos biológicos do polipeptídeo Cav-1 nativo. Um agente peptidomimético pode ser um peptídeo não natural ou um agente não peptídico que recria as propriedades estereoespaciais dos elementos de ligação do polipeptídeo Cav-1 nativo de modo que tenha a atividade de ligação e a atividade biológica do polipeptídeo Cav-1 nativo. Semelhante a um polipeptídeo Cav-1 nativo ou multímero de polipeptídeo, um peptidomimético terá uma face de ligação (que interage com qualquer ligante ao qual Cav-1 nativo se liga) e uma face de não ligação.

[0099] Em alguns aspectos, a presente divulgação também inclui compostos que retêm características parciais do peptídeo. Por exemplo, qualquer ligação proteoliticamente instável dentro de um peptídeo da invenção poderia ser seletivamente substituída por um elemento não peptídico, como um isóstero (N-metilação; D-aminoácido) ou uma ligação peptídica reduzida enquanto o resto da molécula retém sua natureza peptídica.

[00100] Compostos peptidomiméticos, agonistas, substratos ou inibidores, foram descritos para uma série de peptídeos/polipeptídeos bioativos, tais como peptídeos opioides, VIP, trombina, protease de HIV, etc. Métodos para projetar e preparar compostos peptidomiméticos são conhecidos na técnica (Hruby, VJ, Biopolymers 33:1073-1082 (1993); Wiley, RA et al., Med. Res. Rev. 13:327-384 (1993); Moore et al., Adv. in Pharmacol 33:91-141 (1995); Giannis et al., Adv. in Drug Res. 29:1- 78 (1997). Certos miméticos que imitam a estrutura secundária são descritos em Johnson et al., In: Biotechnology and Pharmacy, Pezzuto et al., Chapman and Hall (Eds.), NY, 1993. Estes métodos são usados para produzir peptidomiméticos que possuem pelo menos a capacidade de ligação e especificidade do polipeptídeo Cav-1 nativo e de preferência também possuem a atividade biológica. O conhecimento da química de peptídeos e da química orgânica geral disponível para aqueles versados na técnica são suficientes, em vista da presente divulgação, para projetar e sintetizar tais compostos.

[00101] Por exemplo, tais peptidomiméticos podem ser identificados por inspeção da estrutura tridimensional de um polipeptídeo da invenção, livre ou ligado em complexo com um ligante (por exemplo, uPAR solúvel ou um fragmento do mesmo). Alternativamente, a estrutura de um polipeptídeo da invenção ligado ao seu ligante pode ser obtida por meio de técnicas de espectroscopia de ressonância magnética nuclear. Um maior conhecimento da estereoquímica da interação do peptídeo com o seu ligante ou receptor irá permitir a concepção racional de tais agentes peptidomiméticos. A estrutura de um peptídeo ou polipeptídeo da invenção na ausência de ligante também pode fornecer uma estrutura para a concepção de moléculas miméticas. C. PEGuilação

[00102] Os peptídeos Cav-1 modificados podem ser conjugados com segmentos polipeptídicos heterólogos ou polímeros, tais como polietilenoglicol. Os polipeptídeos podem ser ligados ao PEG para aumentar o raio hidrodinâmico de enzima e, consequentemente, aumentar a persistência do soro. Os polipeptídeos podem ser conjugados a qualquer agente de direcionamento, tal como um ligante com a capacidade de se ligar de forma específica e estável a um receptor externo (Publicação de Patente U.S. 2009/0304666).

[00103] Em certos aspectos, métodos e composições das modalidades relacionam-se à PEGuilação dos polipeptídeos divulgados. A PEGuilação é o processo de ligação covalente de cadeias poliméricas de poli(etileno-glicol) a uma outra molécula, normalmente um fármaco ou proteína terapêutica. A PEGuilação é rotineiramente alcançada por incubação de um derivado reativo de PEG com a macromolécula alvo. A ligação covalente de PEG a um fármaco ou proteína terapêutica pode "mascarar" o agente a partir do sistema imunológico do hospedeiro (imunogenicidade reduzida e antigenicidade) ou aumentar o tamanho hidrodinâmico (tamanho em solução) do agente, o que prolonga o seu tempo circulatório, reduzindo a depuração renal. A PEGuilação também pode fornecer solubilidade em água para fármacos e proteínas hidrofóbicas.

[00104] A primeira etapa da PEGuilação é a funcionalização adequada do polímero de PEG a um ou ambos os terminais. Os PEGs que são ativados em cada terminal com a mesma porção reativa são conhecidos como "homobifuncionais," ao passo que, caso os grupos funcionais presentes sejam diferentes, então o derivado de PEG é referenciado como "heterobifuncional" ou "heterofuncional." Os derivados quimicamente ativos ou ativados do polímero de PEG são preparados para anexar o PEG à molécula desejada.

[00105] A escolha do grupo funcional adequado para o derivado de PEG é baseado no tipo de grupo reativo disponível na molécula que será acoplado ao PEG. Para proteínas, os aminoácidos reativos típicos incluem lisina, cisteína, histidina, arginina, ácido aspártico, ácido glutâmico, serina, treonina e tirosina. O grupo amino N-terminal e o ácido carboxílico C-terminal também podem ser usados.

[00106] As técnicas usadas para formar uma primeira geração de derivados de PEG estão geralmente reagindo o polímero PEG com um grupo que reage com grupos hidroxila, tipicamente anidridos, ácidos clorídricos, cloroformatos e carbonatos. Na química de PEGilação de segunda geração, grupos funcionais mais eficientes, como aldeído, ésteres, amidas, etc., são disponibilizados para conjugação.

[00107] Conforme as aplicações de PEGuilação se tornaram cada vez mais avançadas e sofisticadas, houve um aumento na necessidade de PEGs heterobifuncionais para conjugação. Esses PEGs heterobifuncionais são muito úteis na ligação de duas entidades, onde um espaçador hidrofílico, flexível e biocompatível é necessário. Grupos terminais preferidos para PEG heterobifuncionais são maleimida, sulfonas vinílicas, piridil dissulfeto, amina, ácidos carboxílicos, e ésteres NHS.

[00108] Os agentes de modificação mais comuns, ou ligantes, são baseados nas moléculas metoxi PEG (mPEG). A sua atividade depende de adição de um grupo de modificação de proteína na extremidade do álcool. Em alguns casos, o polietilenoglicol (PEG diol) é usado como a molécula precursora. O diol é posteriormente modificado em ambas as extremidades, a fim de produzir uma molécula de hetero- ou homo- dimérico ligado ao PEG.

[00109] Proteínas são normalmente PEGuiladas em sítios nucleofílicos, tais como tióis desprotonados (resídups de cisteinila) ou grupos amino. Exemplos de reagentes de modificação específicos de cisteinila incluem PEG maleimida, PEG iodoacetato, PEG tióis e PEG vinilsulfona. Todos os quatro são fortemente específicos para cisteinila sob condições leves e de pH neutro a ligeiramente alcalino, mas cada um deles possui alguns inconvenientes. O tioéter formado com as maleimidas pode ser um tanto instável sob condições alcalinas, de modo que pode haver alguma limitação de opções de formulação com este ligante. A ligação de carbamotioato formada com PEGs de iodo é mais estável, mas o iodo livre pode modificar resíduos de tirosina sob algumas condições. PEG de tióis formam ligações dissulfeto com proteínas tióis, mas esta ligação também pode ser instável em condições alcalinas. A reatividade de PEG vinilsulfona é relativamente lenta em comparação com maleimida e PEG de iodo; entretanto, a ligação tioéter formada é bastante estável. Sua taxa de reação mais lenta também pode tornar a reação PEG-vinilsulfona mais fácil de controlar.

[00110] A PEGuilação sítio específica em resíduos de cisteinila nativos raramente é realizada, uma vez que esses resíduos estão geralmente na forma de ligações dissulfeto ou são necessários para a atividade biológica. Por outro lado, a mutagênese sítio direcionada pode ser usada para incorporar sítios de PEGilação de cisteinila por ligantes específicos do tiol. A mutação de cisteína deve ser projetada de modo que seja acessível ao reagente de PEGilação e ainda seja biologicamente ativa após PEGilação.

[00111] Os agentes de modificação específicos de amina incluem PEG NHS éster, PEG tresilato, PEG aldeído, PEG isotiocianato e vários outros. Todos reagem sob condições suaves e são muito específicos para os grupos amino. O éster PEG NHS é provavelmente um dos agentes mais reativos; entretanto, a sua reatividade elevada pode fazer a reação de PEGilação difícil de controlar em grande escala. O PEG aldeído forma uma imina com o grupo amina, o qual é então reduzido a uma amina secundária com cianoboro-hidreto de sódio. Ao contrário do borohidreto de sódio, o cianoborohidreto de sódio não reduz as ligações dissulfeto. Entretanto, este produto químico é altamente tóxico e deve ser manuseado com cuidado, particularmente a um pH inferior, em que ele se torna volátil.

[00112] Devido aos múltiplos resíduos de lisina na maioria das proteínas, a PEGilação sítio especifica pode ser um desafio. Felizmente, como esses reagentes reagem com grupos amino não protonados, é possível direcionar a PEGuilação para grupos amino pK mais baixos realizando a reação em um pH mais baixo. Geralmente o pK do grupo alfa-amino é 1-2 unidades de pH mais baixo do que o grupo épsilon- amino dos resíduos de lisina. Ao se PEGilar a molécula a um pH de 7 ou abaixo, pode ser alcançada uma seletividade elevada para o N- terminal com frequência. Entretanto, isto só é possível caso a porção N- terminal da proteína não seja necessária para a atividade biológica. Ainda assim, os benefícios farmacocinéticos da PEGuilação frequentemente superam uma perda significativa de bioatividade in vitro, resultando em um produto com muito maior bioatividade in vivo, independentemente da química da PEGilação.

[00113] Existem vários parâmetros a serem considerados quando se desenvolve um procedimento de PEGilação. Felizmente, há, em geral, não mais do que quatro ou cinco parâmetros chave. A abordagem de "design de experimentos" para otimização das condições de PEGilação pode ser muito útil. Para reações de PEGuilação específicas de tiol, os parâmetros a serem considerados incluem: concentração de proteína,

razão de PEG para proteína (em uma base molar), temperatura, pH, tempo de reação e, em alguns casos, a exclusão de oxigênio. (O oxigênio pode contribuir para a formação de dissulfeto intermolecular pela proteína, o que reduzirá o rendimento do produto PEGuilado.) Os mesmos fatores devem ser considerados (com exceção do oxigênio) para a modificação específica da amina, exceto que o pH pode ser ainda mais crítico, particularmente quando direcionado ao grupo amino N- terminal.

[00114] Para ambas as modificações específicas de aminas e do tiol, as condições de reação podem afetar a estabilidade da proteína. Isso pode limitar a temperatura, a concentração de proteínas e o pH. Adicionalmente, a reatividade do ligante peptídico PEG deve ser conhecida antes de iniciar a reação de PEGilação. Por exemplo, caso o agente de PEGilação seja apenas 70 por cento ativo, a quantidade de PEG usada deve assegurar que as únicas moléculas de PEG ativas são contadas na estequiometria da reação de PEG para proteína. D. Proteínas de Fusão

[00115] Certas modalidades da presente invenção referem-se a proteínas de fusão dos peptídeos Cav-1 modificados. Estas moléculas podem ter os polipeptídeos das modalidades ligados no N ou C-terminal a um domínio heterólogo. Por exemplo, as fusões podem também usar sequências líderes provenientes de outras espécies para permitir a expressão recombinante de uma proteína em um hospedeiro heterólogo. As proteínas de fusão podem compreender um extensor de meia-vida. Outra fusão útil inclui a adição de uma tag de afinidade de proteína, tal como uma tag de afinidade à albumina sérica ou de seis resíduos de histidina, ou um domínio imunologicamente ativo, tal como um epítopo de anticorpo, preferencialmente clivável, para facilitar a purificação da proteína de fusão. Tags de afinidade não limitantes incluem poli-histidina, proteína de ligação a quitina (CBP), proteína de ligação a maltose (MBP) e a glutationa-S-transferase (GST).

[00116] Em uma modalidade particular, o peptídeo pode ser ligado a um peptídeo que aumenta a meia vida in vivo, tal como um polipeptídeo XTEN® (Schellenberger et al., 2009), IgG de domínio Fc, albumina ou peptídeo de ligação à albumina.

[00117] Os métodos de geração de proteínas de fusão são bem conhecidos dos versados na técnica. Essas proteínas podem ser produzidas, por exemplo, por síntese de novo da proteína de fusão completa, ou por ligação da sequência de DNA que codifica o domínio heterólogo, seguido pela expressão da proteína de fusão intacta.

[00118] A produção de proteínas de fusão que recuperam as atividades funcionais das proteínas parentais pode ser facilitada conectando genes com um segmento de DNA em ponte que codifica um ligante peptídico que é dividido entre os polipeptídeos conectados em tandem. O ligante peptídico teria comprimento suficiente para permitir a dobra correta da proteína de fusão resultante.

1. Ligantes

[00119] Em certas modalidades, o polipeptídeo das modalidades pode ser conjugado quimicamente usando reagentes de reticulação bifuncionais ou fundido no nível da proteína com ligantes peptídicos.

[00120] Os reagentes de reticulação bifuncionais são usados extensivamente para uma variedade de fins, incluindo a preparação de matrizes de afinidade, a modificação e a estabilização das estruturas diversas, a identificação de ligantes e sítios de ligação ao receptor, e estudos estruturais. Os ligantes peptídicos adequados também podem ser usados para ligar o polipeptídeo das modalidades, como os ligantes peptídicos Gly-Ser.

[00121] Os reagentes homobifuncionais que carregam dois grupos funcionais idênticos demonstraram ser altamente eficazes na indução de reticulação entre macromoléculas idênticas e diferentes ou subunidades de uma macromolécula, e ligação de ligantes polipeptídicos com os seus sítios de ligação específicos. Reagentes heterobifuncionais possuem dois grupos funcionais diferentes. Tirando proveito das reatividades diferenciais dos dois grupos funcionais diferentes, a reticulação pode ser controlada tanto seletiva como sequencialmente. Os reagentes de reticulação bifuncionais podem ser divididos de acordo com a especificidade de seus grupos funcionais, por exemplo, grupos específicos de amino-, sulfidrila-, guanidina-, indol-, carboxila. Destes, os reagentes direcionados aos grupos amino livres tornaram-se especialmente populares devido à sua disponibilidade comercial, facilidade de síntese e condições de reação moderadas sob as quais podem ser aplicados.

[00122] A maioria dos reagentes de reticulação heterobifuncionais contém um grupo reativo com amina primária e um grupo reativo com tiol. Em outro exemplo, reagentes de reticulação heterobifuncionais e métodos de uso dos reagentes de reticulação são descritos (Patente Nº U.S. 5,889,155, especificamente incorporada neste documento por referência em sua totalidade). Os reagentes de reticulação combinam um resíduo de hidrazida nucleofílico com um resíduo de maleimida eletrofílico, permitindo o acoplamento, em um exemplo, de aldeídos a tióis livres. O reagente de reticulação pode ser modificado para reticular vários grupos funcionais.

[00123] Além disso, quaisquer outros agentes de ligação/acoplamento e/ou mecanismos conhecidos pelos versados na técnica podem ser usados para combinar polipeptídeos das modalidades, tais como, por exemplo, interação anticorpo-antígeno, ligações de biotina avidina, ligações amida, ligações éster, ligações tioéster, ligações éter, ligações tioéter, ligações fosfoéster, ligações fosforamida, ligações anidrido, ligações dissulfeto, interações iônicas e hidrofóbicas, anticorpos biespecíficos e fragmentos de anticorpos, ou combinações destes.

[00124] É preferencial que um agente de reticulação com estabilidade razoável no sangue seja usado. São conhecidos diversos tipos de ponte dissulfureto contendo ligantes peptídicos que podem ser usados com sucesso para conjugar o direcionamento e agentes terapêuticos/preventivos. Os ligantes peptídicos que contêm uma ligação dissulfeto que é estericamente impedida podem gerar maior estabilidade in vivo. Estes ligantes peptídicos são, portanto, um grupo de agentes de ligação.

[00125] Além de reticuladores impedidos, os ligantes peptídicos não impedidos também podem ser usados de acordo com este documento. Outros agentes de reticulação úteis, que não é considerado que contenham ou gerem um dissulfeto protegido, incluem SATA, SPDP e 2-iminotiolano (Wawrzynczak e Thorpe, 1987). O uso de tais reticuladores é bem conhecido na técnica. Outra modalidade envolve o uso de ligantes peptídicos flexíveis.

[00126] Uma vez conjugado quimicamente, o peptídeo geralmente será purificado para separar o conjugado de agentes não conjugados e de outros contaminantes. Diversas técnicas de purificação são disponíveis para uso no fornecimento de conjugados com um grau de pureza suficiente para os tornar clinicamente úteis.

[00127] Os métodos de purificação baseados na separação por dimensões, tais como filtração em gel, de permeação em gel, ou cromatografia líquida de alta eficiência, serão mais úteis em geral. Outras técnicas cromatográficas, tais como a separação Blue- Sepharose, também podem ser usadas. Os métodos convencionais para purificar as proteínas de fusão a partir de corpos de inclusão podem ser úteis, tais como o uso de detergentes fracos, tais como a N- lauroil-sarcosina de sódio (SLS).

2. Peptídeos de Penetração Celular e de Translocação de

Membrana

[00128] Além disso, em certos aspectos, os peptídeos Cav-1 modificados podem compreender ainda um domínio de ligação celular ou peptídeo de penetração celular (CPP). Conforme utilizado neste documento, os termos "peptídeo de penetração celular" e "domínio de translocação de membrana" são usados indistintamente e referem-se a segmentos de sequência polipeptídica que permitem que um polipeptídeo atravesse a membrana celular (por exemplo, a membrana plasmática no caso de uma célula eucariótica). Exemplos de segmentos de CPP incluem, mas não estão limitados a, segmentos derivados de HIV Tat (por exemplo, GRKKRRQRRRPPQ (SEQ ID NO: 21)), vírus do herpes VP22, o produto do gene homeobox Drosophila Antennapedia, protegrina I, Penetratina (RQIKIWFQNRRMKWKK (SEQ ID NO: 22)) ou melitina (GIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ (SEQ ID NO: 23)). Em certos aspectos, o CPP compreende T1 (TKIESLKEHG (SEQ ID NO: 24)), T2 (TQIENLKEKG (SEQ ID NO: 25)), 26 (AALEALAEALEALAEALEALAEAAAA (SEQ ID NO: 26)) ou INF7 (GLFEAIEGFIENGWEGMIEGWYGCG (SEQ ID NO: 27)) Sequência CPP. III. Métodos de Uso

[00129] Um aspecto da presente invenção refere-se ao uso de polipeptídeos descritos neste documento e mutantes, variantes, análogos ou derivados dos mesmos. Especificamente, esses métodos referem-se à administração de qualquer um dos polipeptídeos descritos neste documento ou às suas modificações farmaceuticamente aceitáveis em um veículo farmaceuticamente aceitável para um indivíduo, uma composição para uso no tratamento de tratamento ou prevenção de uma doença, lesão ou infecção dos pulmões (por exemplo, uma condição fibrótica dos pulmões), a referida composição compreendendo um polipeptídeo das modalidades em um veículo farmaceuticamente aceitável. A. Composições Farmacêuticas

[00130] É contemplado que os peptídeos Cav-1 modificados podem ser administrados sistemicamente ou localmente para inibir a apoptose celular e para o tratamento e prevenção de danos aos tecidos pulmonares. Estes podem ser administrados por via intravenosa, por via intratecal e/ou por via intraperitoneal. Em aspectos particulares, os polipeptídeos são entregues localmente às vias aéreas, como a administração de uma formulação nebulizada ou uma formulação de pó seco para inalação. Eles podem ser administrados sozinhos ou em combinação com compostos antifibróticos.

[00131] O peptídeo Cav-1 modificado pode ser administrado em combinação, simultaneamente ou sequencialmente com pelo menos um agente terapêutico adicional para fibrose pulmonar. O terapêutico adicional pode ser um NSAID, esteroide, DMARD, imunossupressor, moduladores de resposta biológica, broncodilatador ou agente antifibrótico, como pirfenedona, um agente cujo mecanismo de ação antifibrótico não é totalmente compreendido, mas pode envolver o bloqueio de TGF-beta, nintedanibe, um amplo bloqueador de tirosina quinase ou qualquer outro agente antifibrótico. NSAIDS adequados são selecionados a partir dos inibidores de COX não seletivos ácido acetilsalicíclico, mesalazina, ibuprofeno, naproxeno, flurbiprofeno, fenoprofeno, fenbufeno, cetoprofeno, indoprofeno, pirprofeno, carprofeno, oxaprozina, pranoprofeno, miroprofeno, tioxaprofeno, suprofeno, alminoprofeno, ácido tiaprofênico, indometacina, sulindac, tolmetina, zomepirac, nabumetona, diclofenac, fenclofenac, alclofenac, bromfenac, ibufenac, aceclofenac, acemetacina, fentiazac, clidanac, etodolac, oxpinac, ácido mefenâmico, ácido meclofenâmico, ácido flufenâmico, ácido niflumínico, ácido tolfenâmino, diflunisal, flufenisal, piroxicam, tenoxicam, lornoxicam e nimesulida e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, inibidores seletivos de COX 2 meloxicam, celecoxib e rofecoxib e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Os esteroides adequados são prednisona, prednisolona, metilprednisolona, dexametasona, budenosida, fluocortolona e triancinolona. DMARDs adequados são sulfassalazina, olsalazina, cloroquina, derivados de ouro (Auranofin), D-penicilamina e citostáticos como metotrexato e ciclofosfamida. Os imunsupressores adequados são a ciclosporina A e seus derivados, micofenolatemofetila, FK 506, OKT-3, ATG, 15-desoxyspergualin, mizoribina, misoprostol, rapamicina, reflunomida e azatioprina. Modificadores de resposta biológica adequados são interferon β, anti-TNF-α (Etanercept), IL-10, anti-CD3 ou anti-CD25. Os broncodilatadores adequados são brometo de ipratrópio, brometo de oxitrópio, brometo de tiotrópio, cloridrato de epinefrina, salbutamol, terbutalinsulfato, hidrobrometo fenoterol, salmeterol e formoterol. Em tais combinações, cada ingrediente ativo pode ser administrado de acordo com sua faixa de dosagem usual ou uma dose abaixo de sua faixa de dosagem usual. A dosagem para os NSAIDs combinados, esteroides, DMARDs, imunossupressores e modificadores de resposta biológica é apropriadamente 1/50 da dose mais baixa normalmente recomendada até 1/1 da dosagem normalmente recomendada, de preferência 1/20 a 1/2 e mais preferencialmente 1/10 a 1/5. A dose normalmente recomendada para o fármaco combinada deve ser entendida como sendo a dose divulgada, por exemplo, em Rote Liste® 2002, Editio Cantor Verlag Aulendorf, Alemanha, ou em Physician's Desk Reference.

[00132] Quando aplicações clínicas são contempladas, pode ser necessário preparar composições farmacêuticas que compreendem proteínas, anticorpos e fármacos em uma maneira adequada para a aplicação pretendida. Geralmente, as composições farmacêuticas podem compreender uma quantidade eficaz de um ou mais dos polipeptídeos das modalidades ou agentes adicionais dissolvidos ou dispersos em um transportador farmaceuticamente aceitável. As frases "farmacêutica ou farmacologicamente aceitável" referem-se a entidades moleculares e composições que não produzem uma reação adversa, alérgica ou outra reação adversa quando administradax a um animal, tais como, por exemplo, um ser humano, conforme o caso. A preparação de uma composição farmacêutica que contém, pelo menos, um polipeptídeo das modalidades isolado pelo método divulgado neste documento ou ingrediente ativo adicional será conhecida daqueles versados na técnica à luz da presente divulgação, como exemplificado por Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª Ed., 1990, incorporada neste documento por referência. Além disso, para administração em animal (por exemplo, humano), será entendido que os preparativos devem atender esterilidade, pirogenicidade, segurança geral e pureza exigidos pelo Escritório da FDA de Padrões Biológicos (FDA Office de Biological Standards).

[00133] Conforme usado neste documento, "veículo farmaceuticamente aceitável" inclui qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, surfactantes, antioxidantes, conservantes (por exemplo, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos), agentes isotônicos, agentes retardadores de absorção, sais, conservantes, fármacos, estabilizadores de fármacos, géis, aglutinantes, excipientes, agentes de desintegração, lubrificantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, corantes, materiais similares e suas combinações, como seria conhecido por pessoa versada na técnica (ver, por exemplo, em Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª Ed., 1990, incorporada neste documento por referência). Exceto no caso em que qualquer veículo convencional ser incompatível com o ingrediente ativo, seu uso na composição presente é contemplado.

[00134] As composições da presente invenção podem incluir diferentes tipos de veículos, dependendo se é para ser administrado na forma de sólido, líquido ou aerossol, e se ele precisa ser esterilizado para essas vias de administração como injeção. As composições da presente invenção podem ser administradas por via intravenosa, intratecal, intradérmica, transdérmica, intratecal, intra-arterial, intraperitoneal, intranasal, intravaginal, intraretal, intramuscular, subcutânea, via mucosa, oral, tópica, local, por inalação (por exemplo, inalação de uma formulação nebulizada ou de pó seco), por injeção, por infusão contínua, por perfusão localizada que banham células alvo diretamente, via catéter, via uma lavagem, em composições lipídicas (por exemplo, lipossomas), ou por outro método, ou qualquer combinação dos anteriores, conforme seria conhecido de um versado na técnica (ver, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª Edição, 1990, incorporado neste documento por referência).

[00135] Os polipeptídeos modificados podem ser formulados em uma composição de uma base livre, neutra ou forma de sal. Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais de adição ácida, por exemplo, formados com os grupos aminoácidos livres de uma composição proteica ou que são formados com ácidos inorgânicos, tais como, por exemplo, ácidos hidroclorídricos ou fosfóricos, ou tais ácidos orgânicos como ácido acético, oxálico, tartárico, mandélico e afins. Sais formados com os grupos carboxila livres também podem ser derivados de bases inorgânicas, como por exemplo, sódio, potássio, amônio, cálcio ou hidróxidos férricos; ou tais bases orgânicas como isopropilamina, trimetilamina, histidina ou procaína. Após a formulação, as soluções podem ser administradas de forma compatível com a formulação de dosagem e em tal quantidade que seja terapeuticamente eficaz. As formulações são facilmente administradas em uma variedade de formas de dosagem, tais como formuladas para administrações parentéricas, tais como soluções injetáveis, ou aerossóis para distribuição para os pulmões, ou formuladas para administrações alimentares, tais como cápsulas de liberação de fármaco e semelhantes.

[00136] Ainda de acordo com certos aspectos da presente invenção, a composição adequada para administração pode ser fornecida em um veículo farmaceuticamente aceitável com ou sem um diluente inerte. O veículo deve ser assimilável e inclui veículos líquido, semissólido, ou seja, pastas ou sólido. Exceto na medida em que qualquer meio, agente, diluente ou veículo convencional é prejudicial para o destinatário ou para a eficácia terapêutica de uma composição ali contida, seu uso em uma composição administrável para uso na prática dos métodos é apropriado. Veículos ou diluentes de exemplo incluem gorduras, óleos, água, soluções salinas, lipídios, lipossomas, resinas, aglutinantes, enchimentos e semelhantes, ou suas combinações. Em qualquer caso, a composição pode incluir vários antioxidantes para retardar a oxidação de um ou mais componentes. Além disso, a prevenção da ação de microorganismos pode ser provocada por conservantes tais como vários agentes antibacterianos e antifúngicos, incluindo, mas não se limitando a parabenos (por exemplo, metilparabenos, propilparabenos), clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal ou suas combinações.

[00137] De acordo com certos aspectos da presente invenção, a composição é combinada com o veículo de qualquer maneira conveniente e prática, ou seja, por solução, suspensão, emulsificação, miscigenação, encapsulamento, absorção e afins. Tais procedimentos são rotina para aqueles versados na técnica.

[00138] Em uma modalidade específica da presente invenção, a composição é combinada ou completamente misturada com um veículo sólido ou semissólido. A mistura pode ser feita de forma conveniente como moagem. Agentes de estabilização podem ser também adicionados no processo de mistura a fim de proteger a composição da perda de atividade terapêutica, ou seja, desnaturação no estômago. Exemplos de estabilizadores para uso em uma composição incluem tampões, aminoácidos, como glicina e lisina, carboidratos ou lioprotetores tais como dextrose, manose, galactose, frutose, lactose, sacarose, maltose, sorbitol, manitol, etc.

[00139] Em alguns aspectos, uma formulação farmacêutica compreende um ou mais surfactantes. Os surfactantes usados de acordo com os métodos divulgados incluem surfactantes iônicos e não iônicos. Os surfactantes não iônicos representativos incluem polissorbatos, tais como os surfactantes TWEEN®-20 e TWEEN-80® (ICI Americas Inc. de Bridgewater, NJ); poloxâmeros (por exemplo, poloxâmero 188); surfactantes TRITON® (Sigma de St. Louis, Mo.); dodecilsulfato de sódio (SDS); lauril sulfato de sódio; octil glicosídeo de sódio; lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil-sulfobetaína; lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil-sarcosina; linoleil-, miristil- ou cetil-betaína; lauroamidopropil-, cocamidopropil-, linoleamidopropil-, miristamidopropil-, palnidopropil-, ou (por exemplo, lauroamidopropila); miristamidopropil-, palmidopropil- ou isoestearamidopropil- dimetilamina; metil cocoil de sódio, ou metil oleil taurato de sódio; surfactantes MONAQUAT ™ (Mona Industries Inc. de Paterson, NJ); polietil glicol; polipropil glicol; copolímeros em bloco de etileno e propilenoglicol, tais como surfactantes PLURONIC® (BASF de Mt. Olive, NJ); éteres alquílicos de oligo (óxido de etileno); alquil (tio) glucosidos, alquil maltosidos; e fosfolípidos. Por exemplo, o surfactante pode estar presente em uma formulação em uma quantidade de cerca de 0,01% a cerca de 0,5% (peso do surfactante em relação ao peso total de outros componentes sólidos da formulação; "p/p"), de cerca de 0,03% a cerca de 0,5% (p/p), de cerca de 0,05% a cerca de 0,5% (p/p), ou de cerca de 0,1% a cerca de 0,5% (p/p). No entanto, em outros aspectos, uma formulação farmacêutica das modalidades é essencialmente livre de surfactantes não iônicos ou essencialmente livre de todos os surfactantes.

[00140] No que diz respeito aos métodos terapêuticos da invenção, não se pretende que a administração de um ou mais peptídeos divulgados neste documento ou de um mutante, variante, análogo ou derivado deste e seja limitada a um modo particular de administração, dosagem ou frequência de dosagem; a presente invenção contempla todos os modos de administração, incluindo intramuscular, intravenoso, intraperitoneal, intravesicular, intraarticular, intralesional, subcutâneo ou qualquer outra via suficiente para fornecer uma dose adequada para tratar o distúrbio relacionado à inflamação. O agente terapêutico pode ser administrado ao paciente em uma dose única ou em doses múltiplas. Quando doses múltiplas são administradas, as doses podem ser separadas umas das outras por, por exemplo, uma hora, três horas, seis horas, oito horas, um dia, dois dias, uma semana, duas semanas ou um mês. Por exemplo, a terapêutica pode ser administrada por, por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 15, 20 ou mais semanas. Deve ser entendido, para qualquer indivíduo determinado, regimes de dosagem específica podem ser ajustados ao longo do tempo, de acordo com a necessidade individual e o julgamento profissional da pessoa administrando ou supervisionando a administração das composições. Por exemplo, a dosagem do agente terapêutico pode ser aumentada se a dose mais baixa não fornecer atividade terapêutica suficiente.

[00141] Embora o médico assistente, em última análise, decida a quantidade apropriada e o regime de dosagem, quantidades terapeuticamente eficazes de um ou mais polipeptídeos, conforme divulgado neste documento ou um mutante, variante, análogo ou derivado do mesmo, podem ser fornecidos em uma dose de 0,0001, 0,01, 0,01 0,1, 1, 5, 10, 25, 50, 100, 500 ou 1,000 mg/kg ou g/kg. As doses eficazes podem ser extrapoladas a partir de curvas de dose- resposta derivadas de sistemas de teste in vitro ou de modelo animal.

[00142] Dosagens para um determinado paciente ou indivíduo podem ser determinadas por um versado na técnica mediante o uso de considerações convencionais (por exemplo, por meio de um protocolo farmacêutico convencional apropriado). Um médico pode, por exemplo, prescrever uma dose relativamente baixa no início, aumentando subsequentemente a dose até ser obtida uma resposta adequada. A dose administrada a um paciente é suficiente para efetuar uma resposta terapêutica benéfica no paciente ao longo do tempo, ou, por exemplo, para reduzir os sintomas ou outra atividade apropriada, dependendo da aplicação. A dose é determinada pela eficácia da formulação específica e pela atividade, estabilidade ou meia-vida sérica de um ou mais polipeptídeos, conforme divulgado neste documento ou um mutante, variante, análogo ou derivado deste e a condição do paciente, também como o peso corporal ou área de superfície do paciente a ser tratado.

[00143] Em alguns aspectos, um indivíduo recebe uma dose única, administrada uma vez por dia para o tratamento de um indivíduo, de preferência um mamífero, mais preferencialmente humano que sofre de ou é suscetível a fibrose pulmonar daí resultante está entre cerca de 0,2 mg/kg e cerca de 250 mg/kg, tal como entre cerca de 10 mg/kg e cerca de 50 mg/kg, por exemplo, por instilação (por inalação). Essa dose pode ser administrada diariamente para qualquer lugar durante cerca de 3 dias a uma ou mais semanas. A administração crônica também é possível, embora a dose possa precisar ser ajustada para baixo, como é bem entendido na técnica. As faixas anteriores são, no entanto, sugestivas, visto que o número de variáveis em um regime de tratamento individual é grande e são esperadas excursões consideráveis a partir desses valores preferidos.

[00144] Para administração contínua, por exemplo, por um sistema de bomba, tal como uma bomba osmótica que foi usada em alguns dos experimentos descritos abaixo, uma dosagem total para um curso de tempo de cerca de 1-2 semanas está preferencialmente na faixa de 1 mg/kg a 1 g/kg, preferencialmente 20-300 mg/kg, mais preferencialmente 50-200 mg/kg. Após tal regime de dosagem contínua, a concentração total do composto ativo está de preferência na faixa de cerca de 0,5 a cerca de 50 μM, de preferência cerca de 1 a cerca de 10 μM.

[00145] Uma concentração eficaz do composto ativo para inibir ou prevenir a inibição da apoptose in vitro está na faixa de cerca de 0,5 nM a cerca de 100 nM, mais preferencialmente de cerca de 2 nM a cerca de 20 nM. Doses eficazes e intervalos de dose ideais podem ser determinados in vitro usando os métodos descritos neste documento. B. Dispersão de aerossol e dispositivos de nebulização

[00146] As formulações podem ser aerossolizadas usando qualquer dispositivo adequado, incluindo, mas não se limitando a um nebulizador de jato, um nebulizador ultrassônico, um inalador de dose medida (MDI) e um dispositivo para aerossolização de líquidos por passagem forçada através de um jato ou bico (por exemplo, AERX ® dispositivos de distribuição de fármacos por Aradigm de Hayward, Califórnia). Além disso, os compostos podem ser formulados como pós secos para distribuição usando um dispositivo inalador de pó seco. Para a distribuição de uma formulação a um indivíduo, conforme descrito mais detalhadamente neste documento abaixo, um dispositivo de distribuição pulmonar também pode incluir um ventilador, opcionalmente em combinação com uma máscara, bocal, aparelho de inalação de névoa e/ou uma plataforma que orienta os usuários a inalar corretamente e entregue o fármaco automaticamente no momento certo da respiração. Dispositivos de aerossolização representativos que podem ser usados de acordo com os métodos da presente invenção incluem, mas não estão limitados aos descritos na Pat. U.S. Nº 6,357,671; 6,354,516; 6,241,159; 6,044,841; 6,041,776; 6,016,974; 5,823,179; 5,797,389; 5,660,166; 5,355,872; 5,284,133; e 5,277,175 e Pedido de Patente Publicada U.S. Nº 20020020412 e 20020020409.

[00147] Usando um nebulizador a jato, o gás comprimido de um compressor ou linha de ar hospitalar é passado por uma estreita constrição conhecida como jato. Isso cria uma área de baixa pressão, e o medicamento líquido de um reservatório é sugado por um tubo de alimentação e fragmentado em gotículas pelo fluxo de ar. Apenas as menores gotas saem diretamente do nebulizador, enquanto a maioria causa impacto nos defletores e nas paredes e retorna ao reservatório. Consequentemente, o tempo necessário para realizar a nebulização a jato varia de acordo com o volume da composição a ser nebulizada, entre outros fatores, e esse tempo pode ser facilmente ajustado por um versado na técnica.

[00148] Um inalador de dose medida (MDI) pode ser usado para distribuir uma composição da invenção em uma forma mais concentrada do que normalmente entregue usando um nebulizador. Para um efeito ideal, os sistemas de distribuição de MDI requerem técnica de administração adequada, que inclui a atuação coordenada da distribuição de aerossol com inalação, uma inalação lenta de cerca de 0,5-0,75 litros por segundo, uma respiração profunda se aproximando da inalação da capacidade inspiratória e pelo menos 4 segundos de retenção da respiração. A distribuição pulmonar com MDI é conveniente e adequada quando o tratamento se beneficia de um tempo de tratamento relativamente curto e de baixo custo. Opcionalmente, uma formulação pode ser aquecida a cerca de 25 °C a cerca de 90 °C durante a nebulização para promover a formação de gotículas eficaz e posterior distribuição. Ver, por exemplo, Pat. U.S. Nº 5,299,566.

[00149] As composições de aerossol das modalidades compreendem gotículas da composição que são de um tamanho adequado para distribuição eficiente dentro do pulmão. Em alguns casos, uma formulação de surfactante é entregue aos brônquios pulmonares, mais preferencialmente aos bronquíolos, ainda mais preferencialmente aos dutos alveolares e ainda mais preferencialmente aos alvéolos. As gotículas de aerossol têm normalmente menos de cerca de 15 μm de diâmetro, menos de cerca de 10 μm de diâmetro, menos de cerca de 5 μm de diâmetro ou menos de cerca de 2 μm de diâmetro. Para distribuição eficiente aos brônquios alveolares de um indivíduo humano, uma composição de aerossol pode preferencialmente compreender gotículas com um diâmetro de cerca de 1 μm a cerca de 5 μm.

[00150] O tamanho de gota pode ser avaliado usando técnicas conhecidas na técnica, por exemplo, cascata, impactação, difração de laser e padronização óptica. See McLean et al. (2000) Anal Chem 72:4796-804, Fults et al. (1991) J Pharm Pharmacol 43:726-8, e Vecellio None et al. (2001) J Aerosol Med 14:107-14.

[00151] A estabilidade da proteína após a aerossolização pode ser avaliada usando técnicas conhecidas na técnica, incluindo cromatografia de exclusão de tamanho; técnicas eletroforéticas; técnicas espectroscópicas, como espectroscopia de UV e espectroscopia de dicroísmo circular, e atividade de proteína (medida in vitro ou in vivo). Para realizar ensaios in vitro de estabilidade de proteína, uma composição de aerossol pode ser coletada e então destilada ou absorvida em um filtro. Para realizar ensaios in vivo, ou para administração pulmonar de uma composição a um indivíduo, um dispositivo para aerossolização é adaptado para inalação pelo indivíduo. Por exemplo, a estabilidade da proteína pode ser avaliada determinando o nível de agregação da proteína. De preferência, uma composição de aerossol da invenção é substancialmente livre de agregados de proteína.

A presença de agregados solúveis pode ser determinada qualitativamente usando DLS (DynaPro-801TC, ProteinSolutions Inc. de Charlottesville, Va.) e/ou por espectrofotometria UV.

[00152] O termo "nebulizador de malha vibratória" refere-se aqui a qualquer nebulizador que opera no princípio geral de usar uma malha ou placa vibratória com múltiplas aberturas (uma placa de abertura) para gerar um aerossol de partículas finas de baixa velocidade. Alguns nebulizadores podem conter uma malha/membrana com entre 1000 e 7000 orifícios, cuja malha/membrana vibra no topo de um reservatório de líquido (ver, por exemplo, Publicação de Patente U.S. 20090134235 e Waldrep e Dhand 2008, cada um incorporado neste documento por referência). Em algumas modalidades, o nebulizador com malha vibratória é um Nebulizador Profissional AERONEB®, Omron MICROAIR®, Pari EFLOW® ou Atomizador EZ Breathe. Em alguns aspectos, um nebulizador com malha vibratória tem uma frequência de vibração entre cerca de 50-250 kHz, 75-200 kHz 100-150 kHz ou cerca de 120 kHz. Estes dispositivos têm uma alta eficiência na distribuição de aerossol para o pulmão e o volume do líquido remanescente nestes dispositivos é mínimo, o que é uma vantagem para compostos caros e potentes como ativadores do plasminogênio.

[00153] Em certos aspectos, uma composição nebulizada das modalidades é produzida usando um nebulizador de malha vibratória. Por exemplo, a composição pode ser produzida com um nebulizador de malha vibratória ativa (por exemplo, um Sistema Nebulizador Profissional Aeroneb®). As descrições de tal sistema e sua operação podem ser encontradas, por exemplo, nas Patentes U.S. Nºs. 6,921,020; 6,926,208; 6,968,840; 6,978,941; 7,040,549; 7,083,112; 7,104,463; e 7,360,536, cada umas das quais incorporada neste documento por referência em sua totalidade. Em ainda outros aspectos, uma composição das modalidades pode ser produzida com um nebulizador de malha vibratória passiva, como o Omron MicroAir® ou o Atomizador EZ Breathe. IV. Condições pulmonares para tratamento

[00154] Os peptídeos modificados da presente invenção podem ser usados para tratar uma variedade de condições pulmonares. As condições pulmonares para tratamento podem ser agudas ou crônicas. As condições pulmonares agudas podem ser lesão pulmonar aguda, infecção ou induzidas por química. Condições pulmonares crônicas podem ser o resultado de lesão, infecção ou doença. A. Lesões pulmonares

[00155] Em alguns aspectos, o indivíduo tem uma lesão pulmonar aguda (ALI) ou infecção ou uma lesão pulmonar induzida por produtos químicos. Em aspectos específicos, o indivíduo tem síndrome do desconforto respiratório agudo (ARDS), lesão pulmonar aguda induzida por inalação de fumaça (ISALI), bronquiectasia, doença das vias aéreas induzida por toxina inalatória (por exemplo, cloro ou outra doença induzida das vias aéreas), exposição ao gás mostarda, exposição a matéria particulada (por exemplo, pó de sílica), bronquiolite obliterante, bronquiolite obliterante com pneumonia em organização, doença pulmonar induzida por fármacos e fibrose pulmonar acelerada (por exemplo, que ocorre após lesão pulmonar aguda, incluindo ARDS). A lesão pulmonar aguda (ALI) é um problema médico sério entre os militares americanos. ALI durante o combate pode resultar de etiologias muito amplas.

[00156] A ALI de lesão inalatória tem sido tratada com anticoagulantes inalatórios, esteroides, beta-agonistas, ventilação de alta frequência e oxigenação por membrana extracorpórea, com resultados variáveis e, em geral, subótimos. Nenhuma medida preventiva eficaz está disponível, exceto barreiras com máscaras respiratórias. O tratamento da ARDS progrediu significativamente, mas permanece amplamente favorável, com uma espera vigilante para que os mecanismos de cura endógena entrem em vigor; e a mortalidade hospitalar permanece acima de 40% (Matthay et al., 2012). Os sobreviventes de ALI frequentemente sofrem de deficiência respiratória crônica com redução da qualidade de vida. Quaisquer modalidades que possam acelerar a recuperação e/ou prevenir complicações posteriores, como insuficiência respiratória crônica e fibrose pulmonar, serão altamente desejáveis. Há uma necessidade urgente de melhorar o diagnóstico precoce e, muito mais importante, a prevenção e a terapia da ALI. A fisiopatologia da ALI por lesão pulmonar inalatória direta ou ARDS consequente a doença sistêmica é extremamente complexa e heterogênea, abrangendo fatores cardiopulmonares sistêmicos e locais, como aumento da permeabilidade da membrana, influxo de citocinas inflamatórias, dano celular oxidativo, deslocamento de fluido compartimental, canais de íon desorganizado e muitos outros (Matthay et al., 2012). Claramente, novos tratamentos são necessários para tratar e prevenir distúrbios pulmonares, como ALI.

[00157] Em algumas modalidades, é fornecido um método de tratamento ou prevenção de lesão pulmonar aguda, infecção pulmonar ou doença pulmonar em um indivíduo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um polipeptídeo variante compreendendo pelo menos uma substituição, deleção de inserção de aminoácido em relação à sequência de aminoácidos de FTTFTVT (SEQ ID NO: 2), em que o polipeptídeo variante mantém a atividade biológica de caveolina-1 (Cav-1). Em alguns aspectos, um método de administração de uma formulação farmacêutica das modalidades compreende a nebulização de uma solução compreendendo um polipeptídeo variante. Em aspectos particulares, o indivíduo é um ser humano. B. Doenças pulmonares

[00158] As doenças pulmonares incluem fibrose cística, doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC), asma, bronquiolite obliterante, bronquite plástica e infecções pulmonares, doença pulmonar vascular do colágeno (por exemplo, de lúpus, esclerodermia ou doença mista do tecido conjuntivo), doença pulmonar intersticial (por exemplo, fibrose pulmonar idiopática ou sarcoidose), bem como lesão pulmonar aguda e crônica que leva à fibrose (Murray et al., 1997; Rabe et al., 2007; Tsushima et al., 2009). Essas doenças constituem a terceira causa de morte em todo o mundo.

[00159] A fibrose cística é uma doença hereditária das glândulas exócrinas e das glândulas sudoríparas exócrinas que afeta principalmente os sistemas digestivo e respiratório. Esta doença geralmente é caracterizada por infecções respiratórias crônicas, insuficiência pancreática, secreções mucosas anormalmente viscosas e morte prematura. A fibrose cística (FC) é caracterizada por obstrução progressiva ao fluxo de ar. Subconjuntos de indivíduos com FC também desenvolvem hiper-responsividade das vias aéreas a agonistas colinérgicos inalados (Weinberger, 2002 e Mitchell et al., 1978) e reversibilidade da limitação do fluxo de ar em resposta a broncodilatadores (van Haren et al., 1991 and van Haren et al., 1992). A presença de hiper-responsividade brônquica e obstrução das vias aéreas sugere uma possível etiologia compartilhada da doença entre a FC e outras doenças de estreitamento das vias aéreas, como asma ou doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), onde a disfunção do músculo liso das vias aéreas parece contribuir para os processos de doença.

[00160] Uma infecção pulmonar pode ser uma infecção bacteriana. As bactérias infecciosas podem ser Pseudomonas aeruginosa, Bacillus anthracis, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Salmenellosis, Yersina pestis, Mycobacterium leprae, M. africanum, M.

asiaticum, M. aviuin-intracellulaire, M. chelonei abscessus, M. fallax, M. fortuitum, M. kansasii, M. leprae, M. malmoense, M. shimoidei, M. simiae, M. szulgai, M. xenopi, M. tuberculosis, Brucella melitensis, Brucella suis, Brucella abortus, Brucella canis, Legionella pneumonophilia, Francisella tularensis, Pneurnocystis carinii, mycoplasma, ou Burkholderia cepacia. A infecção bacteriana pode resultar em pneumonia.

[00161] A doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) é um termo usado para classificar dois distúrbios principais de obstrução ao fluxo aéreo: bronquite crônica e enfisema. Aproximadamente 16 milhões de americanos têm COPD, 80-90% deles eram fumantes durante grande parte de suas vidas. A COPD é a principal causa de morte nos EUA, sendo responsável por 122,283 mortes em 2003. O custo da COPD para os EUA foi de aproximadamente US$ 20,9 bilhões em despesas diretas com saúde em 2003. A bronquite crônica é a inflamação das vias respiratórias brônquicas. As vias aéreas brônquicas conectam a traqueia com os pulmões. Quando inflamados, os brônquios secretam muco, causando tosse crônica.

[00162] No enfisema, os sacos alveolares estão superinsuflados como resultado de danos ao esqueleto de elastina do pulmão. As células inflamatórias do pulmão enfisematoso liberam enzimas da elastase, que degradam ou danificam as fibras de elastina na matriz pulmonar. O enfisema tem várias causas, incluindo tabagismo, exposição a poluentes ambientais, deficiência de alfa-um antitripsina e envelhecimento.

[00163] A bronquiolite é mais comumente causada por infecções virais do trato respiratório inferior e caracterizada principalmente por inflamação aguda, edema, necrose das células epiteliais que revestem as pequenas vias aéreas e aumento da produção de muco (Ralston et al., 2014). Os sinais e sintomas geralmente começam com rinite e tosse,

que podem progredir para taquipnéia, sibilância, estertores, uso de músculos acessórios e/ou alargamento nasal.

[00164] Bronquiolite obliterante é uma redução progressiva do fluxo de ar como resultado da remodelação anormal das pequenas vias aéreas nos pulmões (Meyer et al., 2014). A síndrome de bronquiolite obliterante é uma das principais complicações dos transplantes de pulmão e é frequentemente usada para descrever uma disfunção do aloenxerto retardado que resulta em declínio persistente no volume expiratório forçado e na força que não é causada por outras causas conhecidas (Meyer et al., 2014).

[00165] O termo "asma" pode se referir a asma aguda, asma crônica, asma intermitente, asma persistente leve, asma persistente moderada, asma persistente grave, asma persistente crônica, asma leve a moderada, asma persistente leve a moderada, asma crônica persistente leve a moderada, asma alérgica (extrínseca), asma não alérgica (intrínseca), asma noturna, asma brônquica, asma induzida por exercício, asma ocupacional, asma sazonal, asma silenciosa, asma gastroesofágica, asma idiopática e asma variante da tosse. Durante a asma, as vias aéreas ficam persistentemente inflamadas e podem ocasionalmente ter espasmos. V. Exemplos

[00166] Os exemplos a seguir são incluídos para demonstrar modalidades preferenciais da invenção. Deve-se apreciar, por aqueles versados na técnica, que as técnicas divulgadas nos exemplos a seguir representam técnicas descobertas pelo inventor que funcionam bem na prática da invenção e, assim, podem ser consideradas para constituir modos preferenciais para sua prática. No entanto, aqueles versados na técnica devem, à luz da presente divulgação, apreciar que muitas mudanças podem ser feitas nas modalidades específicas que são divulgadas e ainda obter um resultado igual ou semelhante, sem se afastar do espírito e do escopo da invenção. Exemplo 1 - Solubilidade do peptídeo Cav-1

[00167] A fim de determinar quais peptídeos podem ser mais solúveis em uma formulação líquida, 50 mg de cada peptídeo Cav-1 foram dissolvidos em 5 mL de solução salina tamponada com Tris, pH 7,51. Cada amostra foi agitada em vórtice para ajudar a dissolver completamente a amostra. A absorbância a 600 nm foi medida imediatamente após a dissolução dos peptídeos para os peptídeos insolúveis ou após 10 minutos para os peptídeos solúveis. A absorbância foi medida novamente após 10 minutos para os peptídeos insolúveis, exceto para as amostras APi2348, APi2352, APi2353 que foram medidas uma segunda vez a 15 minutos, 5 minutos ou 15 minutos após a dissolução, respectivamente. A amostra APi2345 foi medida apenas 20 minutos após a dissolução, uma vez que a dissolução estava incompleta (Tabela 2). O pH também foi testado após 24 horas.

[00168] As amostras APi2350, APi2354, APi2355 e APi2356 tinham solubilidade aumentada em pH 7,51 em comparação com outros peptídeos testados (Tabela 2). O pH permaneceu estável em aproximadamente pH 7,5 para todas as amostras após 24 horas. Tabela 2. Absorbância de peptídeos dissolvidos em TBS, pH 7,51. Nome da Sequências de Peptídeos Dis- UV (Abs) UV (Abs) amostra solver na após o (S/N) dissolu- repouso ção APi2344 FTTFTVT-NH2 (SEQ ID NO: 11) N 2,409 1,437 APi2345 FTTFTVTK-NH2 (SEQ ID NO: 12) N 1,058 APi2346 KASFTTFTVTK-NH2 (SEQ ID NO: 13) N 1,648 1,622 APi2347 Ac-KASFTTFTVTK-NH2 (SEQ ID NO: 14) N 2,347 2,284 APi2348 OASFTTFTVTK-NH2 (SEQ ID NO: 15) N 0,846 0,530 APi2349 Ac-OASFTTFTVTK-NH2 (SEQ ID NO: 20) N 1,870 1,827 APi2350 KASFTTFTVTKGS-NH2 (SEQ ID NO: 4) Y 0,004 APi2351 Ac-KASFTTFTVTKGS-NH2 (SEQ ID NO: N 2,523 2,377 17)

APi2352 DSGKASFTTFTVTK-NH2 (SEQ ID NO: N 2,468 2,398 18) APi2353 Ac-DSGKASFTTFTVTK-NH2 (SEQ ID NO: N 3,000 3,000 19) APi2354 aaEGKASFTTFTVTKGSaa-NH2 (SEQ ID Y 0,008 0,007 NO: 7) APi2355 Ac-aaEGKASFTTFTVTKGSaa-NH2 (SEQ Y 0,000 0,000 ID NO: 8) APi2356 OASFTTFTVTOS-NH2 (SEQ ID NO: 9) Y 0,001 -0,002 APi2357 Ac-OASFTTFTVTOS-NH2 (SEQ ID NO: N 2,293 2,149 10) *a= D-Alanina; O= Ornitina Exemplo 2 - Peptídeos Cav-1 aumentam a produção de actina do músculo liso

[00169] Os peptídeos Cav-1 foram dissolvidos em DMSO para produzir soluções estoque 10 mM. Soluções estoque 10 mM de cada peptídeo foram então diluídas em HBSS para produzir soluções estoque de trabalho 900 µM. Os polipeptídeos ressuspensos com DMSO, bem como os estoques de trabalho, foram armazenados a -20°C. Para os meios de cultura, os estoques de trabalho foram adicionados aos meios de cultura DMEM para uma concentração final de 10 µM do peptídeo Cav-1.

[00170] A linhagem celular 2051 de fibrose pulmonar idiopática (IPF) foi adquirida e as células IPF da quarta passagem foram semeadas em placas de 100 mm contendo DMEM, 10% de FBS e 1% de P/S. As células IPF foram lavadas com 4 mL de DMEM + 1% P/S e privadas de soro durante a noite. As células foram então tratadas por 2 dias com 44 uL de HBSS (controle negativo), 10 uM LTI-03 (SEQ ID NO: 2), 90 uM LTI-03 (controle positivo), 10 uM APi2350, 10 uM APi2354, 10 uM APi2355, APi2356 10 uM ou com 20 uL de DMSO (controle negativo).

[00171] Após 2 dias de tratamento, as células foram lavadas uma vez em HBSS estéril e frio. HBSS foi removido, e 150 uL de tampão de lise com coquetel de inibidor de protease foram adicionados às células. As células foram incubadas com tampão de lise durante 10 minutos. Os lisados celulares foram raspados das placas e colhidos. Os lisados celulares foram então sonicados duas vezes. Após sonicação, os lisados foram centrifugados a 13,000 RPM por 20 minutos. Os lisados foram então congelados rapidamente em nitrogênio líquido, descongelados, agitados em vórtex e centrifugados novamente a 13,000 RPM por 30 minutos. O sobrenadante foi então coletado e o pellet foi descartado. A concentração de lisados celulares foi então determinada por ensaio BCA.

[00172] Western blots foram realizados para avaliar a presença e os efeitos dos tratamentos.Sumariamente, 12 ug de cada lisado foram executados em um gel de poliacrilamida a 10%. O gel foi então transferido para uma membrana e lavado. Anticorpos primários contra actina de músculo liso (SMA) e Tubulina Os resultados do western blot podem ser vistos na FIGURA 1. O tratamento para cada um dos lisados nas pistas ilustradas são: 1: Não tratado, 2:10 µM LTI-03, 3: 90 µM LTI- 03, 4: 10 µM APi2350, 5: 10 µM APi2354, 6: 10 µM APi 2355, APi2356 7: 10 µM e 8: DMSO.

[00173] Western blots foram fotografados e analisados com ImageJ para determinar uma razão de actina de músculo liso para tubulina (FIGURA 2). Como esperado, o LTI-03 provocou um aumento na produção de SMA em relação à tubulina. O tratamento com os peptídeos Cav-1 APi2350, APi2354, APi2355 e APi2356 aumentaram a expressão de SMA em relação à tubulina também (FIGURA 2). Exemplo 3 - Os peptídeos Cav-1 preservam células AEC2 de biópsias pulmonares fibróticas

[00174] Para avaliar o efeito do peptídeo Cav-1 APi2355 (SEQ ID NO: 8) na viabilidade das células AEC2, biópsias cirúrgicas foram obtidas para a preparação de fatias pulmonares cortadas de precisão

(PCLS) de pneumonia intersticial não específica. Um indivíduo com pneumonia intersticial inespecífica (NSIP) e outro com IPF terminal foram processados. Foi realizada a coloração com Lysotracker, que cora compartimentos ácidos em células vivas e se acumula seletivamente nos corpos lamelares das células AEC2 do pulmão (Van der Velden et al., 2013). O peptídeo Cav-1 foi suspenso em DMEM/5% FBS e fatias de PCLS (n = 5 réplicas/grupo de tratamento) foram tratadas com 10, 100 ou 500 µM de LTI-03 ou APi2355 (Var 55). A coloração com Lysotracker (Green DND-26, Promega) foi realizada em NSIP PCLS 48 h após um único tratamento. Um forte aumento dependente da dose na viabilidade das células AEC2 foi observado. Além disso, a coloração com lysotracker (Red DND-99, Promega) foi realizada na fase final de IPF nos dias 1, 2, 3, 5 e 7 após o tratamento diário com LTI-03 ou APi2355. Um aumento dependente da dose na viabilidade das células AEC2 foi observado em uma biópsia de IPF de estágio final tratada por 7 dias consecutivos com LTI-03. O efeito do tratamento para APi2355 (Var 55) foi observado até o dia 3. ***

[00175] Todas as composições e métodos divulgados e reivindicados neste documento podem ser feitos e executados sem experimentação indevida à luz da presente divulgação. Embora as composições e os métodos desta divulgação tenham sido descritos em termos de modalidades preferenciais, será evidente para aqueles versados na técnica que variações podem ser aplicadas às composições ou métodos e nas etapas ou na sequência de etapas do método descrito neste documento sem se afastar do conceito, espírito e escopo da invenção. Mais especificamente, será evidente que certos agentes que são química e fisiologicamente relacionados podem ser substituídos pelos agentes descritos neste documento, ao passo que resultados iguais ou semelhantes seriam atingidos. Todos os substitutos e modificações semelhantes evidentes para aqueles versados na técnica são considerados como estando dentro do espírito, escopo e conceito da invenção como definido pelas reivindicações anexas. V. Referências

[00176] As seguintes referências, à medida que elas proveem detalhes de procedimento exemplares ou outros detalhes complementares àqueles estabelecidos neste documento, estão especificamente incorporadas neste documento por referência. Bonelli, F. et al., Int J Pept Protein Res. 24(6):553-6 (1984). Bundgaard H, Ed: Design of Prodrugs, Elsevier, Amsterdã, 1985 Current Protocols In Molecular Biology (F. M. Ausubel et al., eds., 1987) Dordo et al, J. Mol Biol, 1999, 217, 721-739 Fults et al. (1991) J Pharm Pharmacol 43:726-8 Giannis et al., Adv. in Drug Res. 29:1-78 (1997). Hruby, VJ, Biopolymers 33:1073-1082 (1993) Johnson et al., In: Biotechnology and Pharmacy, in Pezzuto et al., Chapman and Hall (Eds.), NY, 1993 Kyte and Doolittle, J. Mol. Biol., 157(1):105-32, 1982. McLean et al. (2000) Anal Chem 72:4796-804. Meyer et al., European Respiratory Journal, 44: 1479-1503, 2014. Moore et al., Adv. in Pharmacol 33:91-141 (1995) Ralston et al., Pediatrics, 134(5): e1474-e1502, 2014. Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª edição, A. R. Gennaro, Ed., MackPubl., Easton, PA (1990). S. French e B. Robson, J. Mol. Evol. 19(1983)171 Taylor et al, J. Theor. Biol. 119(1986); 205-218 Patente Nº U.S. 4,554,101 Patente Nº U.S. 5,277,175 Patente Nº U.S. 5,284,133 Patente Nº U.S. 5,355,872

Patente Nº U.S. 5,660,166 Patente Nº U.S. 5,797,389 Patente Nº U.S. 5,823,179 Patente Nº U.S. 5,889,155 Patente Nº U.S. 6,016,974 Patente Nº U.S. 6,041,776 Patente Nº U.S. 6,044,841 Patente Nº U.S. 6,241,159 Patente Nº U.S. 6,261,569 Patente Nº U.S. 6,261,569 Patente Nº U.S. 6,354,516 Patente Nº U.S. 6,357,671 Patente Nº U.S. 6,921,020 Patente Nº U.S. 6,926,208 Patente Nº U.S. 6,968,840 Patente Nº U.S. 6,978,941 Patente Nº U.S. 7,040,549 Patente Nº U.S. 7,083,112 Patente Nº U.S. 7,104,463 Patente Nº U.S. 7,360,536 Publicação de Patente Nº U.S. 2002/0020409. Publicação de Patente Nº U.S. 2002/0020412 Publicação de Patente Nº U.S. 2009/0134235 Publicação de Patente Nº U.S. 2009/0304666 Vecellio None et al. (2001) J Aerosol Med 14:107-1 Verdini, A e Viscomi, G. C, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 :697-701,

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Claims (65)

REINVINDICAÇÕES

1. Peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos ASFTTFTVT (SEQ ID NO: 3), caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende pelo menos uma adição N- ou C-terminal sem identidade com SEQ ID NO: 1.

2. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende pelo menos um aminoácido adicionado ao N-terminal.

3. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende pelo menos um aminoácido adicionado ao C-terminal.

4. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende pelo menos um aminoácido adicionado ao N-terminal e ao C-terminal.

5. Peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende L- aminoácidos.

6. Peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende D- aminoácidos.

7. Peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende L- aminoácidos e D-aminoácidos.

8. Peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende resíduos deuterados.

9. Peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende pelo menos um aminoácido não padrão.

10. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende 2 aminoácidos não padrão.

11. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o aminoácido não padrão é ornitina.

12. Peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende uma modificação N-terminal.

13. Peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende uma modificação C-terminal.

14. Peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende uma modificação N-terminal e C-terminal.

15. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que a modificação N-terminal é a acilação.

16. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a modificação C-terminal é a amidação.

17. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende a sequência de aminoácidos KASFTTFTVTKGS (SEQ ID NO: 4).

18. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende a sequência de aminoácidos aaEGKASFTTFTVTKGSaa (SEQ ID NO: 6).

19. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende a sequência de aminoácidos OASFTTFTVTOS (SEQ ID NO: 9).

20. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende a sequência de aminoácidos KASFTTFTVTKGS-NH2 (SEQ ID NO: 5).

21. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende a sequência de aminoácidos aaEGKASFTTFTVTKGSaa-NH2 (SEQ ID NO: 7).

22. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende a sequência de aminoácidos Ac-aaEGKASFTTFTVTKGSaa-NH2 (SEQ ID NO: 8).

23. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende a sequência de aminoácidos OASFTTFTVTOS-NH2 (SEQ ID NO: 10).

24. Peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo fato de que compreende ainda um peptídeo de penetração celular (CPP).

25. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que o CPP compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que compreende: GRKKRRQRRRPPQ (SEQ ID NO: 21), RQIKIWFQNRRMKWKK (SEQ ID NO: 22) e GIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ (SEQ ID NO: 23).

26. Peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizado pelo fato de que o peptídeo mantém a atividade biológica da caveolina-1 (Cav-1).

27. Multímero peptídico, caracterizado pelo fato de que compreende pelo menos dois peptídeos como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 26.

28. Multímero peptídico, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que um primeiro peptídeo de pelo menos dois peptídeos é essencialmente idêntico a um segundo peptídeo de pelo menos dois peptídeos.

29. Multímero peptídico, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que um primeiro peptídeo de pelo menos dois peptídeos não é idêntico a um segundo peptídeo de pelo menos dois peptídeos.

30. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende o peptídeo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 29.

31. Composição de acordo com a reivindicação 30, caracterizada pelo fato de que o peptídeo é substancialmente puro.

32. Composição, de acordo com a reivindicação 30 ou 31, caracterizada pelo fato de que o peptídeo é pelo menos 95% puro.

33. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 32, caracterizada pelo fato de que o peptídeo é pelo menos 98% puro.

34. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um peptídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 29, e um veículo farmaceuticamente aceitável.

35. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 34, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica é formulada para administração oral, intravenosa, intra- articular, parentérica, entérica, tópica, subcutânea, intramuscular, bucal, sublingual, retal, intravaginal, intrapeniana, intraocular, epidural, intracraniana ou inalatória.

36. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 34, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica é formulada para instilação pulmonar.

37. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 34, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica é formulada como uma solução nebulizada.

38. Polinucleotídeo, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica o peptídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 29.

39. Método de tratamento ou prevenção de doença em indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um peptídeo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 29.

40. Método, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma doença fibrótica ou inflamatória.

41. Método, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem fibrose de órgão.

42. Método, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem fibrose renal, hepática, pulmonar ou cardíaca.

43. Método, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que a doença inflamatória é uma doença inflamatória ocular.

44. Método, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que é definido ainda como um método de tratamento ou prevenção de inflamação pulmonar, lesão pulmonar aguda, infecção pulmonar ou doença pulmonar em um indivíduo.

45. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem inflamação pulmonar.

46. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD).

47. Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o indivíduo passou recentemente por radiação ou quimioterapia.

48. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma lesão pulmonar aguda.

49. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma infecção pulmonar.

50. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma lesão pulmonar induzida quimicamente.

51. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem bronquite plástica.

52. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem asma.

53. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem síndrome da dificuldade respiratória aguda (ARDS).

54. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem lesão pulmonar aguda induzida por inalação de fumaça (ISALI).

55. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem bronquiolite.

56. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem bronquiolite obliterante.

57. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a doença pulmonar é uma condição fibrótica dos pulmões.

58. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a doença pulmonar é uma doença pulmonar intersticial.

59. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a doença pulmonar é Fibrose Pulmonar Idiopática (IPF) ou cicatriz pulmonar.

60. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a administração compreende a nebulização de uma solução que compreende o polipeptídeo variante.

61. Método, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o peptídeo é administrado sistemicamente.

62. Método, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o peptídeo é administrado localmente ao tecido doente.

63. Método, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a administração de pelo menos um terapêutico antifibrótico adicional.

64. Método, de acordo com a reivindicação 63, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um antifibrótico adicional é NSAID, esteroide, DMARD, imunossupressor, moduladores de resposta biológica ou broncodilatador.

65. Método, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um humano.