BR112021002747A2 - conjugados de anticorpo-fármaco e polímero direcionados a napi2b e métodos de uso dos mesmos - Google Patents

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Eric P. HAILMAN
Donna M. JARLENSKI
Donald A. Bergstrom
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Mersana Therapeutics, Inc.
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Abstract

CONJUGADOS DE ANTICORPO-FÁRMACO E POLÍMERO DIRECIONADOS A NAPI2B E MÉTODOS DE USO DOS MESMOS. PEDIDOS RELACIONADOS. A presente invenção refere-se a regimes de dosagem para conjugados de anticorpo-fármaco direcionados a NaPi2b para tratamento de câncer.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "CON- JUGADOS DE ANTICORPO-FÁRMACO E POLÍMERO DIRECIONA- DOS A NAPI2B E MÉTODOS DE USO DOS MESMOS".
PEDIDOS RELACIONADOS
[001] O presente pedido reivindica prioridade para, e o benefício dos, os pedidos de patente provisórios U.S. Nos. 62/719.189, deposi- tado em 17 de agosto de 2018; 62/733.380, depositado em 19 de se- tembro de 2018, 62/808.376 depositado em 21 de fevereiro de 2019 e 62/854.701 depositado em 30 de maio de 2019, sob 35 USC § 119(e). Os conteúdos de cada um desses pedidos são aqui incorporados a título de referência em suas totalidades.
INCORPORAÇÃO A TÍTULO DE REFERÊNCIA DE LISTAGEM DE SEQUÊNCIA
[002] Os conteúdos do arquivo de texto nomeado "MRSN- 026_001WO_SeqList.txt", que foi criado em 13 de agosto de 2019 e tem 20 KB de tamanho, são aqui incorporados a título de referência em sua totalidade.
CAMPO DA INVENÇÃO
[003] A presente invenção refere-se em geral a regimes de dosa- gem para administração de conjugados de anticorpo-fármaco e polí- mero direcionados a NaPi2b para o tratamento de câncer.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[004] NaPi2b (SLC34A2, NaPiIIb, Npt2), um transportador de fos- fato dependente de sódio, multitransmembrana, (Xu e outros. Geno- mics 62:281−284 (1999)), é normalmente expressa na membrana da borda em escova do intestino delgado de mamíferos e participa na ab- sorção de fosfato inorgânico (Pi) transcelular, contribuindo para a ma- nutenção de homeostase de fosfato no corpo. A expressão de NaPi2b no nível de proteína foi detectada no fígado, na superfície apical de células epiteliais de mamífero, glândulas salivares e brônquios e nos pulmões, testículos, glândula tireoide, intestino delgado e útero. Muta- ções em NaPi2b foram associadas com síndromes clínicas de microli- tíase alveolar e testicular. NaPi2b é altamente expressa em câncer de pulmão de células não pequenas não escamoso (NSCLC), câncer ova- riano não mucinoso e câncer da tireoide papilar. Imunorreatividade de tecido positiva para NaPi2b está presente em 61% de NSCLC e 92% de espécimes de câncer ovariano.
[005] O câncer ovariano é um dos males ginecológicos mais co- muns e a quinta causa mais frequente de morte por câncer em mulhe- res. A taxa de mortalidade alta resulta em parte do diagnóstico fre- quente de câncer ovariano em estágios avançados e a taxa de morta- lidade é aproximadamente 65% da taxa de incidência. Tumores epite- liais de ovário compreendem 58% de todos os neoplasmas ovarianos e mais de 90% de tumores de ovário malignos. Cirurgia de redução de volume e quimioterapia de combinação à base de platina (incluindo taxanos) são modalidades de tratamento atuais; no entanto, a maioria dos pacientes com câncer ovariano epitelial relapsado eventualmente sucumbe à doença. Há uma necessidade de modalidades de trata- mento novas em câncer ovariano, incluindo terapias direcionadas tal como imunoterapia com anticorpos monoclonais ou abordagens à ba- se de vacina para câncer.
[006] NSCLC é qualquer tipo de câncer de pulmão epitelial que não carcinoma de pulmão de pequenas células (SCLC). NSCLC é res- ponsável por cerca de 85% de todos os cânceres de pulmão. Como uma classe, NSCLC são relativamente insensíveis à quimioterapia, comparado com carcinoma de pequenas células. Quando possível, eles são principalmente tratados pela ressecção cirúrgica com intento curativo, embora quimioterapia esteja sendo usada cada vez mais am- bos pré-operatoriamente (quimioterapia neoadjuvante) e pós- operatoriamente (quimioterapia adjuvante). No cenário metastático ou inoperante, quimioterapia e/ou imunoterapia é usada, embora a doen- ça nesse estágio seja bastante incurável e tempos de sobrevivência permaneçam curtos. Há uma necessidade de novas modalidades de tratamento em NSCLC, incluindo terapias direcionadas tal como imu- noterapia com anticorpos monoclonais ou abordagens à base de vaci- na para câncer.
[007] Portanto, existe uma necessidade de terapias que se dire- cionem às atividades biológicas de NaPi2b.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[008] Em vários aspectos a invenção provê métodos de tratamen- to de um tumor expressando NaPi2b em um indivíduo através da ad- ministração ao indivíduo de um conjugado de anticorpo-fármaco e po- límero totalmente humano ou humanizado direcionado a NaPi2b. O conjugado de fármaco e polímero é administrado intravenosamente através de uma infusão em uma dose entre cerca de 10 mg/m2 a 30 mg/m2 no primeiro dia de tratamento e a cada três semanas seguintes. Por exemplo, a dose é cerca de 11,5 mg/m2 a cerca de 12,5 mg/m2, cerca de 19,5 mg/m2 a cerca de 20,5 mg/m2, cerca de 24,5 mg/m2 a cerca de 25,5 mg/m2, cerca de 29,5 mg/m2 a cerca de 31,5 mg/m2. Preferivelmente, a dose é cerca de 12 mg/m2 ou cerca de 30 mg/m2.
[009] Em um outro aspecto a invenção provê métodos de trata- mento de um tumor expressando NaPi2b em um indivíduo através da administração ao indivíduo de um conjugado de anticorpo-fármaco e polímero totalmente humano ou humanizado direcionado a NaPi2b in- travenosamente através de uma infusão em uma dose entre cerca de 10 mg/m2 a 30 mg/m2, entre cerca de 10 mg/m2 a 36 mg/m2 ou entre cerca de 10 mg/m2 a 45 mg/m2 no primeiro dia de tratamento e a cada quatro semanas seguintes. Por exemplo, a dose é cerca de 11,5 mg/m2 a cerca de 12,5 mg/m2, cerca de 19,5 mg/m2 a cerca de 20,5 mg/m2, cerca de 24,5 mg/m2 a cerca de 25,5 mg/m2, cerca de 29,5 mg/m2 a cerca de 31,5 mg/m2, cerca de 32,5 mg/m2 a cerca de 33,5 mg/m2, cerca de 35,5 mg/m2 a cerca de 36,5 mg/m2, cerca de 39,5 mg/m2 a cerca de 41,5 mg/m2, cerca de 42,5 mg/m2 a cerca de 43,5 mg/m2 ou cerca de 43 mg/m2 a cerca de 45 mg/m2. Preferivelmente, a dose é cerca de 30 mg/m2 ou cerca de 33 mg/m2 ou cerca de 36 mg/m2 ou cerca de 40 mg/m2 ou cerca de 43 mg/m2.
[0010] Preferivelmente, a dose é cerca de 10 mg/m2, 15 mg/m2, 20 mg/m2, 25 mg/m2, 30 mg/m2, 33 mg/m2, 36 mg/m2, 40 mg/m2, 43 mg/m2, 43 mg/m2, 44 mg/m2, 45 mg/m2 ou a dose é cerca de 10 mg/m2, 15 mg/m2, 20 mg/m2, 25 mg/m2, 30 mg/m2, 33 mg/m2, 36 mg/m2, 40 mg/m2 ou a dose é cerca de 10 mg/m2, 15 mg/m2, 20 mg/m2, 25 mg/m2, 30 mg/m2,33 mg/m2, 36 mg/m2 ou a dose é cerca de 10 mg/m2, 15 mg/m2, 20 mg/m2, 25 mg/m2 ou 30 mg/m2, 33 mg/m2 ou a dose é cerca de 10 mg/m2, 15 mg/m2, 20 mg/m2, 25 mg/m2 ou 30 mg/m2 ou a dose é cerca de 10 mg m2, 15 mg/m2, 20 mg/m2 ou 25 mg/m2 infundida intravenosamente uma vez a cada quatro semanas.
[0011] O anticorpo para NaPi2b contém CDRH1 tendo a sequên- cia de aminoácido GYTFTGYNIH (SEQ ID NO: 5); uma CDRH2 tendo a sequência de aminoácido AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO: 6); uma CDRH3 tendo a sequência de aminoácido GETARATFAY (SEQ ID NO: 7); uma CDRL1 tendo a sequência de aminoácido SASQDIG- NFLN (SEQ ID NO: 8); uma CDRL2 tendo a sequência de aminoácido YTSSLYS (SEQ ID NO: 9); e uma CDRL3 tendo a sequência de ami- noácido QQYSKLPLT (SEQ ID NO: 10).
[0012] O conjugado de polímero-fármaco contém a Fórmula A:
O O O O O O O O O O m 3b m m1 m3a m2
OH O OH OH OH O OH O OH O O O O O HN HN HN HN O O O HN HN O HO HN O O NH NH
O O O NH MeO Me Anticorpo para NaPi2b NaPi2b Antibody O OMe O O
O N N
S O N N N O O Xa H O H Me
O O N HN
N HN O O Xb
O O m5 em que: o polímero compreende poli(1-hidroximetiletileno hidroxime- til-formal) (PHF) tendo um peso molecular variando de a partir de cer- ca de 5 kDa a cerca de 10 kDa; m é um inteiro de a partir de 20 a 75, m1 é um inteiro de a partir de cerca de 5 a cerca de 35, m2 é um inteiro de a partir de cerca de 3 a cerca de 10, m3a é um inteiro de a partir de 0 a cerca de 4, m3b é um inteiro de a partir de 1 a cerca de 5, a soma de m, m1, m2, m3a e m3b varia de a partir de cerca de 40 a cer- ca de 75, e m5 é um inteiro de a partir de cerca de 2 a cerca de 5.
[0013] O indivíduo é indivíduo humano. Em alguns aspectos o in- divíduo é identificado como tendo expressão de NaPi2b conforme de- tectado através de análise de IHC realizada em uma população de cé- lula de teste obtida a partir do indivíduo. Em outros aspectos o indiví- duo é identificado como tendo expressão de NaPi2b conforme detec- tado através de expressão de RNA ou uma assinatura de gene em uma amostra obtida a partir do indivíduo.
[0014] Em alguns aspectos, o tumor expressando NaPi2b é câncer ovariano, câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), cân- cer papilífero da tireoide, câncer endometrial, colangiocarcinoma, cân- cer papilífero de célula renal, câncer renal de células claras, câncer de mama, câncer de rim, câncer cervical ou câncer do duto salivar.
[0015] Em ainda um outro aspecto o indivíduo tem câncer ovariano epitelial, câncer do tubo falopiano, câncer peritoneal primário, câncer ovariano resistente à platina, câncer NSCLC não escamoso, câncer papilífero da tireoide de doença recorrente ou metastática loco- regional, refratária a iodo radioativo, progressivo ou câncer endometri- al epitelial.
[0016] Em ainda um outro aspecto o indivíduo tendo câncer ovari- ano epitelial é subtipificado como câncer ovariano de grau alto, câncer ovariano seroso de grau baixo ou câncer ovariano de células claras.
[0017] Em ainda um outro aspecto o indivíduo tendo câncer ovari- ano recebeu quimioterapia com agente único anterior tal como, por exemplo, doxorrubicina lipossomal peguilada, tratamento semanal com paclitaxel topotecano gemcitabina, inibidor de PARP e similar.
[0018] Em ainda um outro aspecto o indivíduo tendo câncer ovari- ano recebeu não mais do que 3 linhas de linhas de terapia anteriores tais como, por exemplo, incluindo, mas não limitado a, combinação de quimioterapia, tais como, por exemplo, carboplatina mais paclitaxel, doxorrubicina lipossomal peguilada, tratamento semanal com paclita- xel, docetaxel, topotecano, gemcitabina, inibidor de PARP e similar. Em um aspecto adicional, o indivíduo tendo câncer NSCLC é subtipifi- cado como adenocarcinoma.
[0019] Em um outro aspecto o indivíduo tem NSCLC e recebeu tratamento anterior, tal como, por exemplo, com quimioterapia à base de platina (cisplatina ou carboplatina) e um anticorpo monoclonal PD-1 ou PD-L1. Em ainda um outro aspecto, o indivíduo tem NSCLC e re- cebeu tratamento anterior com carboplatina/paclitaxel, abraxano nab- paclitaxel, docetaxel, premetrexede, gemcitabina ou uma combinação de docetaxel e ramucirumabe.
[0020] Em um outro aspecto o indivíduo tem NSCLC e não rece-
beu tratamento anterior adicional com um agente citotóxico ou não re- cebeu imunoterapia. Em ainda um outro aspecto, o indivíduo tendo NSCLC documentou intolerância ou progressão de doença com muta- ções oncogênicas conhecidas para as quais há terapias aprovadas (por exemplo, translocação de ALK, mutação de EGFR).
[0021] Em um aspecto adicional o indivíduo tendo câncer NSCLC é tratado com um conjugado de polímero-fármaco de Fórmula A e um anticorpo monoclonal PD-1 ou PD-L1, tal como, por exemplo, nivolu- mabe, pembrolizumabe, atezolizumabe ou avelumabe.
[0022] Em um outro aspecto o indivíduo tem câncer papilífero da tireoide com resistência ou intolerância à terapia anterior com inibidor de cinase ou recebeu tratamento anterior para adenocarcinoma endo- metrioide positivo para receptor de hormônio, de grau baixo.
[0023] Em um outro aspecto, o câncer endometrial não é um tumor estromal ou um carcinossarcoma.
[0024] Em um outro aspecto o indivíduo tem câncer endometrial e recebeu tratamento anterior com carboplatina/paclitaxel ou um regime similar.
[0025] Em um outro aspecto o indivíduo tem câncer papilífero de célula renal ou câncer renal de células claras que tem um padrão de crescimento predominantemente papilífero. Em um aspecto, o indiví- duo tem um diagnóstico histológico de câncer do duto salivar que pro- grediu após terapia sistêmica padrão.
[0026] Em ainda um outro aspecto, o indivíduo é refratário à qui- mioterapia, incluindo agentes quimioterapêuticos de linha de frente, padrão.
[0027] Em um aspecto adicional o indivíduo é tratado com um con- jugado de polímero-fármaco de Fórmula A em combinação com um inibidor de PARP, tais como, por exemplo, olaparibe, niraparibe, ruca- paribe, talazoparibe e similar; um inibidor de PD1/PDL-1, tais como,
por exemplo, carboplatina, cisplatina, oxaliplatina, doxil, ciclofosfamida, gemcitabina, topotecano, premetrexe e similar; um inibidor de VEGF tais como, por exemplo, bevacizumabe, ramucirumabe e similar; um inibidor de tirosina cinase, tais como, por exemplo, gefitinibe, afatinibe, erlotinibe, dacomitinibe, osimertinibe, pazopanibe e similar; um inibidor de ALK tais como, por exemplo, alectinibe, crizotinibe, ceritinibe, briga- tinibe e similar; ou um inibidor de BRAF tais como, por exemplo, da- brafenibe, trametinibe e similar.
[0028] Em um outro aspecto, o indivíduo é tratado com um conju- gado de polímero-fármaco de Fórmula A em combinação com pem- brozilumabe, carboplatina, doxil, bevacizumabe ou um inibidor de PARP. A menos que de outro modo definido, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm o mesmo significado que comumente compreendido por um versado de habilidade comum na técnica à qual a presente invenção pertence. No relatório, as formas singulares tam- bém incluem o plural a menos que o contexto dite claramente o contrá- rio. Embora métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos aqui possam ser usados na prática ou teste da presente in- venção, métodos e materiais adequados são descritos abaixo. No ca- so de conflito, o presente pedido, incluindo definições, prevalecerá. Ainda, os materiais, métodos e exemplos são apenas ilustrativos e não pretendem ser limitantes.
[0029] Outras características e vantagens da invenção serão apa- rentes a partir da descrição detalhada e reivindicações que seguem.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0030] A figura 1 é um gráfico do tipo "swimmers" que sumariza detalhes para o tempo de estudo para todos os pacientes até DL6, ci- clo de 21 dias, (n=19) e quatro pacientes dos pacientes dosados no ciclo de 28 dias (n=4).
[0031] A figura 2 é um "gráfico de cascata" que mostra a melhor resposta através dos critérios RECIST para os pacientes em DL1 a DL5 no ciclo de tratamento de 21 dias que tiveram pelo menos uma varredura até o momento.
[0032] A figura 3 mostra a melhor resposta no geral para pacientes (n=11) no ciclo de tratamento de 21 dias.
[0033] A figura 4 é um "gráfico de cascata" que mostra a melhor resposta através dos critérios RECIST para os pacientes dosados no ciclo de 21 dias e ciclo de 28 dias e que tiveram pelo menos uma var- redura até o momento.
[0034] A figura 5 é um gráfico do tipo "swimmers" que sumariza os detalhes do tempo de estudo para pacientes até DL6, ciclo de 21 dias (n=20) e pacientes DL 4A e DL 5A dosados no ciclo de 28 dias (n=16).
[0035] A figura 6 mostra o H-score obtido da expressão de proteí- na NaPi2b através de IHC de 34 amostras de tumor de paciente. O eixo y mostra o H-score de NaPi2b e o eixo x mostra o tipo de tumor.
[0036] A figura 7 é um gráfico do tipo "swimmers" que sumariza os detalhes do tempo de estudo para pacientes até DL6, ciclo de 21 dias (n=20) e pacientes DL 4A e DL 5A dosados no ciclo de 28 dias (n=17).
[0037] A figura 8 é um gráfico do tipo "swimmers" que sumariza os detalhes para o tempo de estudo para pacientes em 7 níveis de dose (2 a 40 mg/m2), ciclo de 21 dias e níveis de 3 doses (20 a 36 mg/m2), ciclo de 28 dias.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0038] A presente invenção provê métodos de tratamento de cân- cer expressando NaPi2b através da administração de um conjugado de anticorpo-fármaco e polímero direcionado a NaPi2b que se liga es- pecificamente à região extracelular de SCL34A2. Especificamente, a invenção provê regimes de dosagem para XMT-1536 no tratamento de cânceres expressando NaPi2b. XMT-1536 é compreendido de cerca de 10-15 moléculas de F-hidroxipropil amida auristatina (AF HPA) con-
jugadas a uma porção cisteína de um anticorpo monoclonal para NaPi2b (XMT-1535) por meio de uma base poli(1-hidroximetiletileno hidroximetil-formal) (PHF).
[0039] Pacientes com câncer ovariano, NSCLC, câncer papilífero da tireoide, câncer endometrial, câncer papilífero de célula renal ou câncer do duto salivar expressando NaPi2b foram intravenosamente administrados com XMT-1536 a cada três semanas em um estudo de escalonamento de dose. As taxas de controle de doença foram 67% para pacientes tratados com pelo menos 12 mg/m2 de XMT-1536 de acordo com RECIST, versão 1.1. XMT-1536 foi bem tolerado nas do- ses máximas administradas (40 mg/m2). Sendo assim, a invenção refe- re-se a métodos de tratamento de tumores expressando NaPi2b atra- vés da administração a um indivíduo, isto é, um ser humano, de uma dose de infusão entre cerca de 10 a 45 mg/m2. Os tumores incluem câncer ovariano, câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer papilífero da tireoide, câncer endometrial, colangio- carcinoma, câncer papilífero de célula renal, câncer renal de células claras, câncer de mama, câncer de rim, câncer cervical ou câncer do duto salivar. O tumor é um tumor primário ou um tumor metastático.
[0040] Pacientes com câncer ovariano expressando NaPi2b, NSCLC, câncer papilífero da tireoide, câncer endometrial, câncer papi- lífero de célula renal ou câncer do duto salivar foram administrados intravenosamente com XMT-1536 a cada quadro semanas em um es- tudo de escalonamento de dose com uma dose de infusão entre cerca de 20 a 45 mg/m2, i.e., 20 mg/m2, 25 mg/m2, 30 mg/m2, 33 mg/m2, 36 mg/m2, 40 mg/m2, 43 mg/m2, 44 mg/m2 ou 45 mg/m2. O indivíduo pode ou não ter recebido tratamento anterior para o câncer. Por exemplo, o indivíduo recebeu quimioterapia à base de platina, regimes de PD-1 ou PD-L1 ou paclitaxel.
[0041] Em alguns aspectos, o indivíduo foi identificado como tendo expressão de NaPi2b. Expressão de NaPi2b é detectada através de métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, através de análise imu- noistoquímica (IHC), ensaio de hibridização in situ fluorescente (FISH) ou análise de expressão de RNA. Anticorpos para NaPi2b
[0042] Os anticorpos para NaPi2b adequados para os métodos da invenção se ligam especificamente à região extracelular de SLC34A2. A invenção provê ainda anticorpos monoclonais direcionados a NaPi2b que reconhecem especificamente NaPi2b, também conhecida como proteína 2B de transporte de fosfato dependente de sódio. Os anticor- pos para NaPi2b usados nos conjugados revelados aqui são capazes de e úteis na modulação de, por exemplo, bloqueio, inibição, redução, antagonização, neutralização ou outra interferência com, pelo menos uma atividade biológica de NaPi2b. Os anticorpos revelados aqui tam- bém incluem anticorpos que se ligam a NaPi2b solúvel. Os anticorpos para NaPi2b se ligam especificamente a um epítopo em um domínio extracelular (ECD) da NaPi2b humana. Esses anticorpos são coleti- vamente referidos aqui como anticorpos para "NaPi2b".
[0043] Os conjugados de anticorpo-fármaco para NaPi2b providos aqui incluem anticorpos que se ligam a um epítopo de NaPi2b com uma constante de dissociação de equilíbrio (Kd ou KD) ≤ 1 μM, por exemplo, ≤ 100 nM, preferivelmente ≤ 10 nM e mais preferivelmente ≤ 1 nM. Por exemplo, os anticorpos para NaPi2b usados nos conjugados de anticorpo-fármaco revelados aqui exibem uma Kd na faixa aproxi- madamente entre ≤ 1 nM a cerca de 1 pM.
[0044] Os conjugados de anticorpo-fármaco para NaPi2b providos aqui podem incluir anticorpos que servem para modular, bloquear, ini- bir, reduzir, antagonizar, neutralizar ou de outro modo interferir com a atividade funcional de NaPi2b. As atividades funcionais de NaPi2b in- cluem, por exemplo, participação na absorção de fosfato inorgânico
(Pi) transcelular, dessa maneira contribuindo para a manutenção de homeostase de fosfato no corpo. Por exemplo, os anticorpos para NaPi2b inibem completamente ou parcialmente atividade funcional de NaPi2b ao modular, bloquear, inibir, reduzir a antagonização, neutrali- zar ou de outro modo interferir parcialmente ou completamente com a absorção de fosfato inorgânico transcelular. A atividade de absorção de fosfato inorgânico transcelular é avaliada usando qualquer método reconhecido na técnica para detecção de atividade de absorção de fosfato inorgânico transcelular incluindo, mas não limitado a, detecção de níveis de absorção de fosfato inorgânico transcelular na presença e ausência de um anticorpo anti-NaPi2b revelado aqui.
[0045] Os anticorpos para NaPi2b são considerados modular, blo- quear, inibir, reduzir, antagonizar, neutralizar ou de outro modo interfe- rir completamente com a atividade funcional de NaPi2b quando o nível de atividade funcional de NaPi2b na presença do anticorpo para NaPi2b é diminuído em pelo menos 95%, por exemplo, em 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% comparado com o nível de atividade funcional de NaPi2b na ausência de ligação com um anticorpo para NaPi2b des- crito aqui. Os anticorpos para NaPi2b são considerados modular, blo- quear, inibir, reduzir, antagonizar, neutralizar ou de outro modo interfe- rir parcialmente com a atividade funcional de NaPi2b quando o nível de atividade de NaPi2b na presença do anticorpo para NaPi2b é dimi- nuído em menos de 95%, por exemplo, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 75%, 80%, 85% ou 90% comparado com o nível de ativi- dade de NaPi2b na ausência de ligação com um anticorpo para NaPi2b descrito aqui.
[0046] Anticorpos exemplares descritos aqui incluem o anticorpo XMT-1535. Esses anticorpos mostram especificidade para NaPi2b humana e eles foram mostrados inibir atividade de NaPi2b.
[0047] O anticorpo monoclonal humano ou humanizado para
NaPi2b, XMT-1535, inclui uma cadeia pesada (HC), região variável de cadeia pesada (VH), uma cadeia leve (LC) e uma região variável de cadeia leve (VL), como mostrado nas sequências de aminoácido e ácido nucleico correspondentes apresentadas abaixo. A região de ca- deia pesada variável e a região de cadeia leve variável para cada anti- corpo são sombreadas nas sequências de aminoácido abaixo. As re- giões de determinação de complementaridade (CDRs) da cadeia pe- sada e da cadeia leve são sublinhadas nas sequências de aminoácido apresentadas abaixo. Os aminoácidos compreendendo as regiões de determinação de complementaridade (CDRs) para o anticorpo XMT- 1535 são como definido por E.A. Kabat e outros (vide Kabat, E.A. e outros, Sequences of Protein of immunological interest, Quinta Edição, US Department of Health and Human Services, US Government Prin- ting Office (1991)) e são revelados na Patente U.S. 8.603.474.
>Sequência de Aminoácido de Cadeia Pesada de XMT-1535 (Região variável de cadeia pesada (SEQ ID NO: 3) (Itálico) + Região constante de cadeia pesada de IgG1 (SEQ ID NO: 11)
QVQLVQSGAEVVKPGASVKMSCKASGYTFTGYNIHWVKQAPGQGL EWIGAIYPGNGDTSYKQKFRGRATLTADTSTSTVYMELSSLRSEDS AVYYCARGETARATFAYWGQGTLVTVSSGASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY SLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEY KCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG* (SEQ ID NO: 1) CDRH1: GYTFTGYNIH (SEQ ID NO: 5) CDRH2: AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO: 6)
CDRH3: GETARATFAY (SEQ ID NO: 7) >Sequência de ácido nucleico de região variável de cadeia pesada de XMT-1535
CAAGTTCAGCTGGTTCAGTCTGGCGCCGAGGTTGTGAAACCTGG CGCCTCTGTGAAGATGAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCA CCGGCTACAACATCCACTGGGTCAAGCAGGCCCCTGGACAGGGA CTCGAATGGATCGGAGCCATCTATCCCGGCAACGGCGACACCAG CTACAAGCAGAAGTTCCGGGGCAGAGCCACACTGACCGCCGATA CAAGCACCAGCACCGTGTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGAAGC GAGGACAGCGCCGTGTACTATTGCGCCAGAGGCGAAACAGCCAG
AGCCACCTTTGCCTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTTA GCTCT (SEQ ID NO: 13) >Sequência de Aminoácido de Cadeia Leve de XMT-1535 (Região va- riável de cadeia leve (SEQ ID NO: 4) (Itálico) + Região constante de cadeia leve (SEQ ID NO: 12)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDIGNFLNWYQQKPGKTVKV LIYYTSSLYSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQYSK LPLTFGQGTKLELKRRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFY
PREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 2) CDRL1: SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8) CDRL2: YTSSLYS (SEQ ID NO: 9) CDRL3: QQYSKLPLT (SEQ ID NO: 10) >Sequência de ácido nucleico de região variável de cadeia leve de XMT-1535
GATATTCAGATGACACAGAGCCCCAGCAGCCTGTCTGCCTCTGTG GGAGACAGAGTGACCATCACCTGTAGCGCCAGCCAGGATATCGG CAACTTCCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCCGGCAAGACCGTGAA GGTGCTGATCTACTACACCTCCAGCCTGTACAGCGGCGTGCCCA GCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTACACCCTGACCA TATCTAGCCTGCAGCCTGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGC
AGTACAGCAAGCTGCCCCTGACATTTGGCCAGGGCACCAAGCTG GAACTGAAG (SEQ ID NO: 14)
[0048] Também estão incluídos no relatório anticorpos que se li- gam ao mesmo epítopo ou competem cruzado para ligação ao mesmo epítopo que os anticorpos descritos aqui. Por exemplo, os anticorpos revelados aqui se ligam especificamente a NaPi2b, em que o anticorpo se liga a um epítopo que inclui um ou mais resíduos de aminoácido em NaPi2b humana (por exemplo, No. Acesso GenBank O95436.3).
[0049] Os anticorpos revelados aqui se ligam especificamente a um epítopo na NaPi2b humana de comprimento integral compreen- dendo a sequência de aminoácido: 1 MAPWPELGDA QPNPDKYLEG AAGQQPTAPD KSKETNKTDN TEAPVTKIEL 51 LPSYSTATLI DEPTEVDDPW NLPTLQDSGI KWSERDTKGK ILCFFQGIGR 101 LILLLGFLYF FVCSLDILSS AFQLVGGKMA GQFFSNSSIM SNPLLGLVIG 151 VLVTVLVQSS STSTSIVVSM VSSSLLTVRA AIPIIMGANI GTSITNTIVA 201 LMQVGDRSEF RRAFAGATVH DFFNWLSVLV LLPVEVATHY LEIITQLIVE 251 SFHFKNGEDA PDLLKVITKP FTKLIVQLDK KVISQIAMND EKAKNKSLVK 301 IWCKTFTNKT QINVTVPSTA NCTSPSLCWT DGIQNWTMKN VTYKENIAKC 351 QHIFVNFHLP DLAVGTILLI LSLLVLCGCL IMIVKILGSV LKGQVATVIK 401 KTINTDFPFP FAWLTGYLAI LVGAGMTFIV QSSSVFTSAL TPLIGIGVIT 451 IERAYPLTLG SNIGTTTTAI LAALASPGNA LRSSLQIALC HFFFNISGIL 501 LWYPIPFTRL PIRMAKGLGN ISAKYRWFAV FYLIIFFFLI PLTVFGLSLA 551 GWRVLVGVGV PVVFIIILVL CLRLLQSRCP RVLPKKLQNW NFLPLWMRSL 601 KPWDAVVSKF TGCFQMRCCC CCRVCCRACC LLCDCPKCCR CSKCCEDLEE 651 AQEGQDVPVK APETFDNITI SREAQGEVPA SDSKTECTAL (SEQ ID NO: 15)
[0050] Os anticorpos revelados aqui se ligam especificamente a um epítopo em um domínio extracelular (ECD) da NaPi2b humana.
[0051] Aqueles versados na técnica reconhecerão que é possível determinar, sem experimentação indevida, se um anticorpo monoclo- nal tem a mesma especificidade que um anticorpo monoclonal revela- do aqui (por exemplo, XMT-1535, 10H1.11.4B) ao verificar se o primei- ro evita que o último se ligue a uma contraparte de ligação natural ou outra molécula conhecida estar associada com NaPi2b. Se o anticorpo monoclonal sendo testado compete com o anticorpo monoclonal reve- lado aqui, como mostrado por uma diminuição em ligação pelo anti- corpo monoclonal revelado aqui, então os dois anticorpos monoclonais se ligam ao mesmo, ou um intimamente relacionado, epítopo.
[0052] Um método alternativo para determinar se um anticorpo monoclonal tem a especificidade de anticorpo monoclonal revelado aqui é preincubar o anticorpo monoclonal revelado aqui com NaPi2b solúvel (com a qual ele é normalmente reativo), e então adicionar o anticorpo monoclonal sendo testado para determinar se o anticorpo monoclonal sendo testado é inibido em sua habilidade em se ligar a NaPi2b. Se o anticorpo monoclonal sendo testado é inibido, então, com toda probabilidade, ele tem a mesma, ou funcionalmente equiva- lente, especificidade epitópica que o anticorpo monoclonal revelado aqui.
[0053] Avaliação de anticorpos monoclonais revelados aqui pode ser também realizada, por exemplo, medindo a atividade mediada por NaPi2b, e determinando se o anticorpo monoclonal de teste é capaz de modular, bloquear, inibir, reduzir, antagonizar, neutralizar ou de ou- tro modo interferir com atividade de NaPi2b.
[0054] Os anticorpos revelados aqui contêm uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idên- tica a uma sequência selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 3 e uma região variável de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%
98%, 99% ou mais idêntica a uma sequência selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 4.
[0055] Em algumas modalidades, os anticorpos revelados aqui contêm uma sequência de aminoácido de cadeia pesada pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idên- tica à sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1 e uma sequência de aminoácido de cadeia leve pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica à sequência de aminoáci- do de SEQ ID NO: 2.
[0056] Os anticorpos revelados aqui contêm uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 85%, 86%, 87% 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica a uma sequência selecionada do gru- po consistindo em SEQ ID NO: 3 e uma região variável de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 85%, 86%, 87% 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica a uma sequência selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 4.
[0057] Em algumas modalidades, os anticorpos revelados aqui contêm uma sequência de aminoácido de cadeia pesada pelo menos 85%, 86%, 87% 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica à sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1 e uma sequência de aminoácido de cadeia leve pelo menos 85%, 86%, 87% 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica à sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 2.
[0058] Em algumas modalidades, os anticorpos revelados aqui contêm a sequência de aminoácido de região variável de cadeia pesa- da de SEQ ID NO: 3 e a sequência de aminoácido de região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 4.
[0059] Em algumas modalidades, os anticorpos revelados aqui contêm a sequência de aminoácido de cadeia pesada de SEQ ID NO: 1 e a sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 2.
[0060] Em algumas modalidades, os anticorpos revelados aqui contêm a sequência de aminoácido de CDRH1 de SEQ ID NO: 5, a sequência de aminoácido de CDRH3 de SEQ ID NO: 6, a sequência de aminoácido de CDRH3 de SEQ ID NO: 7, a sequência de aminoá- cido de CDRL1 de SEQ ID NO: 8, a sequência de aminoácido de CDRL2 de SEQ ID NO: 9 e a sequência de aminoácido de CDRL3 de SEQ ID NO: 10.
[0061] Em algumas modalidades, as anticorpos revelados aqui que contêm a sequência de aminoácido pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica à sequência de aminoácido GYTFTGYNIH (SEQ ID NO: 5); uma CDRH2 que con- tém a sequência de aminoácido pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica à sequência de ami- noácido AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO: 6); uma CDRH3 que contém a sequência de aminoácido pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica à sequência de ami- noácido GETARATFAY (SEQ ID NO: 7); uma CDRL1 que contém a sequência de aminoácido pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica à sequência de aminoáci- do SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8); uma CDRL2 que contém a se- quência de aminoácido pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica à sequência de aminoácido YTSSLYS (SEQ ID NO: 9); e uma CDRL3 que contém a sequência de aminoácido pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica à sequência de aminoácido QQYSKLPLT (SEQ ID NO: 10).
[0062] Em algumas modalidades, os anticorpos revelados aqui que contêm a sequência de aminoácido pelo menos 85%, 86%, 87% 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica à sequência de aminoácido GYTFTGYNIH (SEQ ID NO: 5); uma CDRH2 que contém a sequência de aminoácido pelo menos 85%, 86%, 87% 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica à sequência de aminoácido AI- YPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO: 6); a CDRH3 que contém a se- quência de aminoácido pelo menos 85%, 86%, 87% 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica à sequência de aminoácido GETARATFAY (SEQ ID NO: 7); uma CDRL1 que contém a sequência de aminoácido pelo menos 85%, 86%, 87% 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica à sequência de aminoácido SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8); uma CDRL2 que contém a sequência de aminoácido pelo me- nos 85%, 86%, 87% 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica à sequência de aminoácido YTSSLYS (SEQ ID NO: 9); e uma CDRL3 que contém a sequência de aminoácido pelo menos 85%, 86%, 87% 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica à sequência de aminoácido QQYSKLPLT (SEQ ID NO: 10).
[0063] Em certas modalidades, os anticorpos revelados aqui inclu- em uma ou mais substituições de aminoácido conservativas em uma sequência de domínio variável tais como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou mais substituições conservativas em uma sequência de domínio variável. Em algumas modalidades, essas substituições de aminoácido conservativas estão em uma região de CDR, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou mais substituições conservativas são tornadas cumulativas em todas as CDRs e, em al- gumas modalidades particulares, até 1, 2, 3 ou 4 substituições de ami- noácido conservativas pode estar presentes em cada sequência de
CDR, por exemplo, SEQ ID NOs: 5-10.
[0064] Aqueles versados na técnica reconhecerão que é possível determinar, sem experimentação indevida, se um anticorpo monoclo- nal tem a mesma especificidade que um anticorpo monoclonal XMT- 1535, através da verificação se o primeiro evita que o último se ligue a uma contraparte de ligação natural ou outra molécula conhecida estar associada com NaPi2b. Se o anticorpo monoclonal sendo testado compete com o anticorpo monoclonal revelado aqui, como mostrado por uma diminuição em ligação pelo anticorpo monoclonal revelado aqui, então os dois anticorpos monoclonais se ligam ao mesmo, ou um intimamente relacionado, epítopo.
[0065] Um método alternativo para determinar se um anticorpo monoclonal tem a especificidade de anticorpo monoclonal revelado aqui é preincubar o anticorpo monoclonal revelado aqui com NaPi2b solúvel (com a qual ele é normalmente reativo), e então adicionar o anticorpo monoclonal sendo testado para determinar se o anticorpo monoclonal sendo testado é inibido em sua habilidade em se ligar a NaPi2b. Se o anticorpo monoclonal sendo testado for inibido então, com toda probabilidade, ele tem a mesma, ou funcionalmente equiva- lente, especificidade epitópica que o anticorpo monoclonal revelado aqui.
[0066] Avaliação de anticorpos monoclonais revelados aqui pode ser também realizada, por exemplo, através da medição de atividade mediada por NaPi2b, e determinar se o anticorpo monoclonal de teste é capaz de modular, bloquear, inibir, reduzir, antagonizar, neutralizar ou de outro modo interferir com atividade de NaPi2b.
[0067] Os anticorpos para NaPi2b adequados para uso nos méto- dos revelados aqui podem ser gerados e purificados através de técni- cas bem conhecidas, por exemplo, WO 2009/097128, WO 2017/160754 e US 16/136,706, cada um deles é aqui incorporado em sua totalidade a título de referência. Conjugados de Anticorpo-Fármaco e Polímero Direcionados a NaPi2b
[0068] A invenção refere-se a terapias envolvendo imunoconjuga- dos compreendendo um anticorpo conjugado a um agente citotóxico tal como uma toxina (por exemplo, uma toxina enzimaticamente ativa de origem bacteriana, fúngica, de planta ou animal ou fragmentos da mesma), por meio de uma base de polímero.
[0069] O conjugado descrito aqui inclui um anticorpo para NaPi2b conectado a uma ou mais bases poliméricas carregando AF-HPA compreendendo independentemente poli(1-hidroximetiletileno hidroxi- metil-formal) (PHF) tendo um peso molecular variando de a partir de cerca de 5 kDa a cerca de 10 kDa. A base polimérica carregando AF- HPA é conjugada ao anticorpo direcionado a NaPi2b por meio de resí- duos de cisteína de NaPi2b.
[0070] Especificamente, o conjugado de anticorpo-fármaco e polí- mero direcionado a NaPi2b é XMT-1536 e tem a Fórmula (A):
O O O O O O O O O O m 3b m m1 m3a m2
OH O OH OH OH O OH O OH O O O O O HN HN HN HN O O O HN HN O HO HN O O NH NH
O O O NH MeO Me NaPi2b Anticorpo para Antibody NaPi2b O OMe O O
O N N
S O N N N O O Xa H O H Me
O O N HN
N HN O O Xb
O O m5 Fórmula A em que: o polímero compreende poli(1-hidroximetiletileno hidroxime- til-formal) (PHF) tendo um peso molecular variando de a partir de cer- ca de 5 kDa a cerca de 10 kDa; m é um inteiro de a partir de 20 a 75,
m1 é um inteiro de a partir de cerca de 5 a cerca de 35, m2 é um inteiro de a partir de cerca de 3 a cerca de 10, m3a é um inteiro de a partir de 0 a cerca de 4, m3b é um inteiro de a partir de 1 a cerca de 5, a soma de m, m1, m2, m3a e m3b varia de a partir de cerca de 40 a cerca de 75, e m5 é um inteiro de a partir de cerca de 2 a cerca de 5, e NaPi2b é o anticorpo para NaPi2b integralmente humano ou humanizado XMT1535 descrito aqui.
[0071] Em algumas modalidades, m é um inteiro de a partir de cerca de 30 a cerca de 75.
[0072] Em algumas modalidades, m é um inteiro de a partir de cerca de 30 a cerca de 40.
[0073] Em algumas modalidades, m1 é um inteiro de a partir de cerca de 10 a cerca de 20.
[0074] Em algumas modalidades, m1 é um inteiro de a partir de cerca de 10 a cerca de 12.
[0075] Em algumas modalidades, m2 é um inteiro de a partir de cerca de 3 a cerca de 5.
[0076] Em algumas modalidades, m3a é um inteiro de a partir de 0 a cerca de 1.
[0077] Em algumas modalidades, m3b é um inteiro de a partir de 2 a cerca de 4.
[0078] Em algumas modalidades, m5 é um inteiro de a partir de cerca de 2 a cerca de 4.
[0079] Em algumas modalidades, m5 é um inteiro de a partir de cerca de 3 a cerca de 4.
[0080] Em algumas modalidades, o conjugado de anticorpo- fármaco e polímero direcionado a NaPi2b compreende 10-15 molécu- las de AF-HPA.
[0081] Em algumas modalidades, o PHF tem um peso molecular variando de a partir de cerca de 6 kDa a cerca de 8 kDa.
[0082] Em algumas modalidades, o PHF tem um peso molecular variando de a partir de cerca de 6 kDa a cerca de 7 kDa.
[0083] Em certas modalidades, o conjugado de anticorpo-fármaco e polímero direcionado a NaPi2b de Fórmula (A) é de Fórmula (B), em que o polímero é PHF que tem um peso molecular variando de a partir de cerca de 5 kDa a cerca de 10 kDa:
O O O O O O O O O O m3b m m1 m3a m2
OH O OH OH OH O OH O OH O O O O O O O O HN HN O HO HN O O NH NH
O O O NH MeO Me Anticorpo para NaPi2b O OMe O O NaPi2b Antibody O
O N N
S N N N O O H H Me
O O O N HN N HN
O O S H2N O O
COOH m5 (B) em que: m é um inteiro de a partir de 30 a cerca de 35, m1 é um inteiro de a partir de 8 a cerca de 10, m2 é um inteiro de a partir de 2 a cerca de 5, m3a é um inteiro de a partir de 0 a cerca de 1, m3b é um inteiro de a partir de 1 a cerca de 2, a soma de m3a e m3b varia de a partir de 1 e cerca de 4, e a razão entre o PHF e o anticorpo é cerca de 3 a cerca de
5.
[0084] Os conjugados de anticorpo-fármaco e polímero direciona- dos a NaPi2b (isto é, XMT-1536) adequados para uso nos métodos revelados aqui podem ser gerados e purificados através de técnicas bem conhecidas, por exemplo, WO 2009/097128, WO 2017/160754, PCT/US18/38988 e U.S. 16/136.706, cada um dos quais é aqui incor-
porado a título de referência em sua totalidade. Dosagem e Administração
[0085] A terapia para câncer provida aqui, contendo um conjugado de anticorpo-fármaco e polímero direcionado a NaPi2b, é administrada em uma quantidade suficiente para exercer um efeito terapeuticamen- te útil. Tipicamente, os agentes ativos são administrados em uma quantidade que não resulte em efeitos colaterais indesejáveis ao paci- ente sendo tratado ou que minimize ou reduza os efeitos colaterais observados. Cânceres expressando NaPi2b incluem, por exemplo, câncer ovariano, câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer papilífero da tireoide, câncer endometrial, colangio- carcinoma, câncer papilífero de célula renal, câncer renal de células claras, câncer de mama, câncer de rim, câncer cervical e câncer do duto salivar.
[0086] Está dentro do nível de um versado na técnica determinar as quantidades precisas de agentes ativos, incluindo conjugados de anticorpo-fármaco e polímero direcionados a NaPi2b a serem adminis- tradas a um indivíduo. Por exemplo, tais agentes e usos para trata- mento de cânceres e tumores sólidos são bem conhecidos na técnica. Portanto, dosagens de tais agentes pode ser escolhidas com base em regimes de dosagem padrão para aquele agente sob uma dada via de administração.
[0087] É compreendido que a dosagem precisa e a duração do tratamento são uma função do tecido ou tumor sendo tratado e podem ser determinadas empiricamente usando protocolos de teste conheci- dos ou através da extrapolação dos dados de teste in vivo ou in vitro e/ou podem ser determinadas a partir de regimes de dosagem conhe- cidos do agente particular. Deve ser observado que concentrações e valores de dosagem podem também variar com a idade do indivíduo tratado, o peso do indivíduo, a via de administração e/ou grau ou seve-
ridade da doença e outros fatores que estão dentro do nível de um praticante médico versado considerar. Em geral, os regimes de dosa- gem são escolhidos para limitar a toxicidade. Deve ser observado que o médico acompanhante saberia como e quando terminar, interromper ou ajustar a terapia para dosagem menor devido à toxicidade ou dis- funções da medula óssea, fígado ou rim ou outro tecido. Por outro la- do, o médico acompanhante também saberia como e quando ajustar o tratamento para níveis maiores se a resposta clínica não for adequada (precludindo efeitos colaterais tóxicos). Deve ser ainda compreendido que para qualquer indivíduo particular, regimes de dosagem específi- cos devem ser ajustados com o tempo de acordo com a necessidade individual e do julgamento profissional da pessoa que está adminis- trando ou supervisionando a administração das formulações, e que as faixas de concentração definidas aqui são exemplares apenas e não pretendem limiar o escopo da mesma.
[0088] Por exemplo, o conjugado de anticorpo-fármaco e polímero direcionado a NaPi2b é administrado em uma quantidade terapeutica- mente eficaz para diminuir o volume do tumor.
[0089] A quantidade de um conjugado de anticorpo-fármaco e po- límero direcionado a NaPi2b é administrada para o tratamento de uma doença ou condição, por exemplo, um câncer ou tumor sólido pode ser determinado através de técnicas clínicas padrão. Ainda, ensaios in vi- tro e modelos animais podem ser empregados para ajudar a identificar faixas de dosagem ótimas. A dosagem precisa, que pode ser determi- nada empiricamente, pode depender da via de administração, do tipo de doença a ser tratada e da seriedade da doença.
[0090] Os conjugados providos aqui são administrados intraveno- samente. Para administração intravenosa, o conjugado pode ser ad- ministrado através de push ou bolo, através de infusão ou por meio de uma combinação das mesmas. O tempo de infusão pode ser 1 minuto a três horas, tal como cerca de 1 minuto a cerca de duas horas ou cer- ca de 1 minuto a cerca de 60 minutos ou pelo menos 10 minutos, 40 minutos ou 60 minutos.
[0091] A quantidade de dosagem é entre cerca de 10 mg/m2 a 30 mg/m2. Por exemplo, a dosagem é entre cerca de 11,5 mg/m2 a cerca de 12,5 mg/m2. Alternativamente, a dosagem é entre cerca de 19,5 mg/m2 a cerca de 20.5 mg/m2, entre cerca de 24,5 mg/m2 a cerca de 25,5 mg/m2, entre cerca de 29,5 mg/m2 a cerca de 31,5 mg/m2. Em al- gumas modalidades, a dosagem é cerca de 12 mg/m2, cerca de 20 mg/m2, cerca de 25 mg/m2 ou cerca de 30 mg/m2. Em outras modali- dades, a dosagem é 10 mg/m2, 11 mg/m2 ,12 mg/m2, 13 mg/m2, 14 mg/m2, 15 mg/m2, 16 mg/m2, 17 mg/m2, 18 mg/m2, 19 mg/m2, 20 mg/m2, 21 mg/m2, 22 mg/m2, 23 mg/m2, 24 mg/m2, 25 mg/m2, 26 mg/m2, 27 mg/m2, 28 mg/m2, 29 mg/m2 ou 30 mg/m2. Nessas modali- dades, as quantidades de dosagem são administradas intravenosa- mente uma vez a cada quatro semanas, isto é, ciclo de 28 dias.
[0092] Alternativamente, a quantidade de dosagem é entre cerca de 10 mg/m2 e 33 mg/m2. Por exemplo, a dosagem é entre cerca de 11,5 mg/m2 a cerca de 12,5 mg/m2. Alternativamente, a dosagem é entre cerca de 19,5 mg/m2 a cerca de 20,5 mg/m2, entre cerca de 24,5 mg/m2 a cerca de 25,5 mg/m2, entre cerca de 29,5 mg/m2 a cerca de 31,5 mg/m2 ou entre cerca de 32,5 mg/m2 a cerca de 33,5 mg/m2. Em algumas modalidades, a dosagem é cerca de 12 mg/m2, cerca de 20 mg/m2, cerca de 25 mg/m2, cerca de 30 mg/m2 ou cerca de 33 mg/m2. Em outras modalidades, a dosagem é 10 mg/m2, 11 mg/m2 ,12 mg/m2, 13 mg/m2, 14 mg/m2, 15 mg/m2, 16 mg/m2, 17 mg/m2, 18 mg/m2, 19 mg/m2, 20 mg/m2, 21 mg/m2, 22 mg/m2, 23 mg/m2, 24 mg/m2, 25 mg/m2, 26 mg/m2, 27 mg/m2, 28 mg/m2, 29 mg/m2, 30 mg/m2, 31 mg/m2, 32 mg/m2 ou 33 mg/m2. Nessas modalidades, as quantidades de dosagem são administradas intravenosamente uma vez a cada quatro semanas, isto é, ciclo de 28 dias.
[0093] Alternativamente, a quantidade de dosagem é entre cerca de 10 mg/m2 a 36 mg/m2. Por exemplo, a dosagem é entre cerca de 11,5 mg/m2 a cerca de 12,5 mg/m2. Alternativamente, a dosagem é entre cerca de 19,5 mg/m2 a cerca de 20,5 mg/m2, entre cerca de 24,5 mg/m2 a cerca de 25,5 mg/m2, entre cerca de 29,5 mg/m2 a cerca de 31,5 mg/m2, entre cerca de 32,5 mg/m2 a cerca de 33,5 mg/m2 ou entre cerca de 35,5 mg/m2 a cerca de 36,5 mg/m2. Em algumas modalida- des, a dosagem é cerca de 12 mg/m2, cerca de 20 mg/m2, cerca de 25 mg/m2, cerca de 30 mg/m2, cerca de 33 mg/m2 ou cerca de 36 mg/m2. Em outras modalidades, a dosagem é 10 mg/m2, 11 mg/m2 ,12 mg/m2, 13 mg/m2, 14 mg/m2, 15 mg/m2, 16 mg/m2, 17 mg/m2, 18 mg/m2, 19 mg/m2, 20 mg/m2, 21 mg/m2, 22 mg/m2, 23 mg/m2, 24 mg/m2, 25 mg/m2, 26 mg/m2, 27 mg/m2, 28 mg/m2, 29 mg/m2, 30 mg/m2, 31 mg/m2, 32 mg/m2, 33 mg/m2, 34 mg/m2, 35 mg/m2 ou 36 mg/m2. Nes- sas modalidades, as quantidades de dosagem são administradas in- travenosamente uma vez a cada quatro semanas, isto é, ciclo de 28 dias.
[0094] Alternativamente, a quantidade de dosagem é entre cerca de 10 mg/m2 a 40 mg/m2. Por exemplo, a dosagem é entre cerca de 11,5 mg/m2 a cerca de 12,5 mg/m2. Alternativamente, a dosagem é entre cerca de 19,5 mg/m2 a cerca de 20,5 mg/m2, entre cerca de 24,5 mg/m2 a cerca de 25,5 mg/m2, entre cerca de 29,5 mg/m2 a cerca de 31,5 mg/m2, entre cerca de 32.5 mg/m2 a cerca de 33,5 mg/m2, entre cerca de 35,5 mg/m2 a cerca de 36,5 mg/m2, entre cerca de 39,5 mg/m2 a cerca de 41,5 mg/m2. Em algumas modalidades, a dosagem é cerca de 12 mg/m2, cerca de 20 mg/m2, cerca de 25 mg/m2, cerca de 30 mg/m2, cerca de 33 mg/m2, cerca de 36 mg/m2 ou cerca de 40 mg/m2. Em outras modalidades, a dosagem é 10 mg/m2, 11 mg/m2 ,12 mg/m2, 13 mg/m2, 14 mg/m2, 15 mg/m2, 16 mg/m2, 17 mg/m2, 18 mg/m2, 19 mg/m2, 20 mg/m2, 21 mg/m2, 22 mg/m2, 23 mg/m2, 24 mg/m2, 25 mg/m2, 26 mg/m2, 27 mg/m2, 28 mg/m2, 29 mg/m2, 30 mg/m2, 31 mg/m2, 32 mg/m2, 33 mg/m2, 34 mg/m2, 35 mg/m2, 36 mg/m2, 37 mg/m2 , 38 mg/m2, 39 mg/m2, 40 mg/m2. Nessas modalidades, as quantidades de dosagem são administradas intravenosamente uma vez a cada quatro semanas, isto é, ciclo de 28 dias.
[0095] Alternativamente, a quantidade de dosagem é entre cerca de 10 mg/m2 a 45 mg/m2. Por exemplo, a dosagem é entre cerca de 11,5 mg/m2 a cerca de 12,5 mg/m2. Alternativamente, a dosagem é entre cerca de 19,5 mg/m2 a cerca de 20,5 mg/m2, entre cerca de 24,5 mg/m2 a cerca de 25,5 mg/m2, entre cerca de 29,5 mg/m2 a cerca de 31,5 mg/m2, entre cerca de 32,5 mg/m2 a cerca de 33,5 mg/m2, entre cerca de 35,5 mg/m2 a cerca de 36,5 mg/m2, entre cerca de 39,5 mg/m2 a cerca de 41,5 mg/m2, entre cerca de 42,5 mg/m2 a cerca de 43,5 mg/m2, entre cerca de 43 mg/m2 a cerca de 45 mg/m2. Em algu- mas modalidades, a dosagem é cerca de 12 mg/m2, cerca de 20 mg/m2, cerca de 25 mg/m2, cerca de 30 mg/m2, cerca de 33 mg/m2, cerca de 36 mg/m2, cerca de 40 mg/m2, cerca de 43 mg/m2 ou cerca de 45 mg/m2. Em outras modalidades, a dosagem é 10 mg/m2, 11 mg/m2 ,12 mg/m2, 13 mg/m2, 14 mg/m2, 15 mg/m2, 16 mg/m2, 17 mg/m2, 18 mg/m2, 19 mg/m2, 20 mg/m2, 21 mg/m2, 22 mg/m2, 23 mg/m2, 24 mg/m2, 25 mg/m2, 26 mg/m2, 27 mg/m2, 28 mg/m2, 29 mg/m2, 30 mg/m2, 31 mg/m2, 32 mg/m2, 33 mg/m2 , 34 mg/m2, 35 mg/m2, 36 mg/m2, 37 mg/m2 , 38 mg/m2, 39 mg/m2, 40 mg/m2, 41 mg/m2, 42 mg/m2, 43 mg/m2, 44 mg/m2 ou 45 mg/m2. Nessas modali- dades, as quantidades de dosagem são administradas intravenosa- mente uma vez a cada quatro semanas, isto é, ciclo de 28 dias.
[0096] A frequência e o momento de administração, e as quanti- dades de dosagem, podem ser administradas periodicamente durante um ciclo de administração para manter um efeito contínuo e de longo prazo dos agentes ativos por uma duração de tempo desejada. As composições providas de um conjugado de anticorpo-fármaco e polí- mero direcionado a NaPi2b podem ser administradas de hora em hora, diariamente, semanalmente, mensalmente, anualmente ou uma única vez. A duração de tempo de ciclo de administração pode ser determi- nada empiricamente, e é dependente da doença a ser tratada, da se- veridade da doença, do paciente particular e outras considerações dentro do nível de habilidade do médico que realiza o tratamento. A duração de tempo de tratamento com uma terapia de combinação pro- vida aqui pode ser uma semana, duas semanas, um mês, vários me- ses, um ano, vários anos ou mais.
[0097] Por exemplo, a frequência de administração do conjugado de anticorpo-fármaco e polímero direcionado a NaPi2b é uma vez por dia, dia sim dia não, duas vezes por semana, uma vez por semana, uma vez a cada 2 semanas, uma vez a cada 3 semanas ou uma vez a cada 4 semanas. A dosagem pode ser dividida em uma pluralidade de ciclos de administração durante o curso de tratamento. Por exemplo, o conjugado de anticorpo-fármaco e polímero direcionado a NaPi2b po- de ser administrado na frequência durante um período de cerca de um mês, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, um ano ou mais. A frequência de administração pode ser a mesma durante o período do ciclo e pode diferir. Por exemplo, uma frequência de dosagem exemplar é duas vezes por semana pelo menos por uma primeira se- mana de um ciclo de administração. Após a primeira semana, a fre- quência pode continuar duas vezes por semana, pode aumentar para mais de duas vezes por semana ou pode ser reduzida para não mais do que uma vez por semana. Está dentro do nível de um versado de- terminar a frequência de dosagem particular e o ciclo de administração com base na dosagem particular sendo administrada, na doença ou condição sendo tratada, na severidade da doença ou condição, na idade do indivíduo e outros fatores similares.
[0098] Se os sintomas da doença persistirem na ausência de tra- tamento descontinuado, o tratamento pode ser continuado por mais um tempo. Durante o curso de tratamento, evidência de doença e/ou toxicidade relacionada a tratamento ou efeitos colaterais podem ser monitorados.
[0099] O ciclo de administração do conjugado de anticorpo- fármaco e polímero direcionado a NaPi2b pode ser ajustado para adi- cionar períodos de tratamento descontinuado a fim de prover um perí- odo de descanso da exposição aos agentes. A duração de tempo para a descontinuação do tratamento pode ser por um tempo predetermi- nado ou pode ser determinada empiricamente dependendo de como o paciente está respondendo ou dependendo de efeitos colaterais ob- servados. Por exemplo, o tratamento pode ser descontinuado por uma semana, duas semanas, três semanas, um mês ou vários meses. Em geral, o período de tratamento descontinuado é estabelecido em um ciclo de regime de dosagem para um paciente.
[00100] Um regime de dosagem exemplar é um ciclo de tratamento ou ciclo de administração de 21 dias ou 28 dias. Preferivelmente, o regime de dosagem é um ciclo de tratamento ou ciclo de administra- ção é 28 dias. O conjugado de anticorpo-fármaco e polímero direcio- nado a NaPi2b revelado aqui é administrado no dia 1, seguido por 20 dias sem dosagem ou é administrado no dia 1, seguido por 27 dias sem dosagem. Está dentro do nível de um versado na técnica deter- minar o ciclo de administração preciso e o programa de dosagem.
[00101] Como observado acima, o ciclo de administração pode ser por qualquer duração de tempo desejada. Portanto, o ciclo de 21 dias ou ciclo de 28 dias de administração pode ser repetido por qualquer duração de tempo. Por exemplo, o ciclo de 21 dias de administração ou ciclo de 28 dias de administração pode ser repetido por 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 7 meses, 8 meses, 9 meses, 10 meses, 11 meses, 12 meses 1,5 ano, 2 anos, 2,5 anos, 3 anos ou mais. Está dentro do nível de habilidade do médico que realiza o tra- tamento adotar um ciclo de administração e regime de dosagem que satisfaçam as necessidades do paciente dependendo de considera- ções pessoais específicas para o paciente e doença ser tratada. Medição de Expressão de NaPi2b
[00102] Em vários aspectos, a invenção provê um método para identificação de um paciente com câncer receptivo à terapia direciona- da a NaPi2b ou monitoramento do regime de tratamento através da medição do estado de expressão de NaPi2b em uma amostra de tu- mor obtida do paciente.
[00103] Em algumas modalidades, os testes de diagnóstico de NaPi2b podem ser usados para identificação de indivíduos para trata- mento com um conjugado de fármaco e polímero direcionado a NaPi2b.
[00104] A amostra é derivada do indivíduo tendo um câncer. A amostra de células de câncer é dissecada de tecido removido ou obti- do do indivíduo. Em algumas modalidades, a amostra é uma amostra de biópsia fresca, congelada ou de arquivo.
[00105] Em algumas modalidades, a população de célula de teste é derivada de tecido fresco, não congelado, de uma amostra de biópsia. Em outras modalidades, a população de célula de teste é derivada de um sítio primário ou metastático. Em algumas modalidades, a popula- ção de célula de teste é derivada de um tecido fresco ou congelado de uma amostra de biópsia ou cirúrgica ou fluido ascético ou fluido pleu- ral. Em algumas modalidades, a população de célula de teste é deri- vada de um tecido fixado (por exemplo, fixação com formalina ou in- crustada em parafina fixada com formalina (FFPE)) de uma amostra de biópsia ou cirúrgica ou bloco celular derivado de uma espécie de fluido. A amostra de tecido pode ser congelada ou fresca.
[00106] O nível requerido de expressão de NaPi2b pode ser aquele que é identificado através de qualquer um dos métodos conhecidos na técnica e mais especificamente através dos métodos descritos aqui. Por exemplo, o nível de expressão de NaPi2b pode ser medido condu- zindo um ensaio imunológico conhecido, tal como um imunoensaio de enzima, radioimunoensaio, imunoensaio competitivo, ensaio sanduí- che de anticorpo duplo, fluorimunoensaio, ELISA, técnica de Western blotting, ensaio de aglutinação, citofluormetria (por exemplo, citometria de fluxo), hibridização in situ fluorescente (FISH), ensaio de tingimento colorimétrico ou imunoistoquímico (IHC) para expressão de proteína usando um anticorpo que reconhece especificamente NaPi2b. Ensaios baseados em célula tais como, por exemplo, citometria de fluxo (FC), imunoistoquímica (IHC), análise de expressão de RNA ou imunofluo- rescência (IF) são particularmente desejáveis na determinação do es- tado de expressão de NaPi2b, uma vez que tais formatos de ensaio são clinicamente adequados.
[00107] Citometria de fluxo (FC) pode ser empregada para determi- nar expressão na superfície celular de NaPi2b em amostra de tumor antes, durante e após tratamento com um fármaco. Por exemplo, célu- las de tumor podem ser analisadas através de citometria de fluxo quanto à expressão de NaPi2b, bem como quanto a marcadores iden- tificando tipos de célula de câncer, etc., se desejado. Citometria de flu- xo pode ser realizada de acordo com métodos padrão. Vide, por exemplo, Chow e outros, Cytometry (Communications in Clinical Cytometry) 46: 72-78 (2001). Em suma e a título de exemplo, o proto- colo para análise citométrica que segue pode ser empregado: fixação das células com paraformaldeído 2% por 10 minutos a 37º C seguido por permeabilização em 90% de metanol por 30 minutos em gelo. As células podem então ser tingidas com anticorpo específico para
NaPi2b, lavadas e marcadas com um anticorpo secundário marcado com fluorescência. As células seriam então analisadas em um citôme- tro de fluxo (por exemplo, um Beckman Coulter FC500) de acordo com os protocolos específicos do instrumento usado. Tal análise identifica- ria o nível de NaPi2b expressa no tumor.
[00108] Tingimento imunoistoquímico (IHC) pode ser também em- pregado para determinar a expressão de NaPi2b em uma amostra de tumor antes, durante a pós tratamento com um fármaco. IHC pode ser realizado de acordo com técnicas bem conhecidas. Vide, por exemplo, ANTIBODIES; A LABORATORY MANUAL, Capítulo10, Harlow & Lane Eds., Cold Spring Harbor Laboratory (1988). Em suma, e a título de exemplo, tecido incrustado em parafina (por exemplo, tecido de tumor de uma biópsia) é preparado para tingimento imunoistoquímico através de desparafinização de seções de tecido com xileno seguido por eta- nol; hidratação em água, então PBS; mostra de antígeno através de lâmina quente em tampão de citrato de sódio; incubação de seções em peróxido de hidrogênio; bloqueio em solução de bloqueio; incuba- ção da lâmina em anticorpo para polipeptídeo primário e anticorpo se- cundário; e finalmente detecção usando o método de avidina/biotina ABC de acordo com as instruções do fabricante.
[00109] Ensaios de imunofluorescência (IF) podem ser também empregados para determinar a expressão de amostra de tumor de NaPi2b antes, durante e após tratamento com um fármaco. IF podem ser realizada de acordo com técnicas bem conhecidas. Vide, por exemplo, J. M. Polak e S. Van Noorden (1997) INTRODUCTION TO IMMUNOCYTOCHEMISTRY, 2nd Ed.; ROYAL MICROSCOPY SOCI- ETY MICROSCOPY HANDBOOK 37, BioScientific/Springer-Verlag. Em suma e a título de exemplo, as amostras de paciente podem ser fixadas em paraformaldeído seguido por metanol, bloqueadas com uma solução de bloqueio tal como soro de cavalo, incubadas com o anticorpo primário contra polipeptídeo seguido por um anticorpo se- cundário marcado com um corante fluorescente tal como Alexa 488 e analisadas com um microscópio epifluorescente.
[00110] Os anticorpos empregados nos ensaios descritos acima podem ser vantajosamente conjugados a corantes fluorescentes (por exemplo, Alexa488, PE), ou outros marcadores, tais como quantum dots, para uso em análises multiparamétricas junto com outros anti- corpos de transdução de sinal (fosfo-AKT, fosfo-Erk ½) e/ou marcado- res celulares (citoqueratina).
[00111] Em uma modalidade preferida a expressão de NaPi2b em uma amostra de um tumor é determinada imunoistoquimicamente. Em uma outra modalidade, a expressão de NaPi2b em uma amostra de um tumor é determinada imunoistoquimicamente (IHC) usando o mé- todo descrito na US 16/136.706, que é aqui incorporada a título de re- ferência em sua totalidade.
[00112] Alternativamente, o ensaio pode incluir preparação de RNA a partir da amostra, opcionalmente para uso em PCR (reação em ca- deia da polimerase) ou outra metodologia analítica. A metodologia de PCR é opcionalmente, por exemplo, RT-PCR (transcrição reversa- PCR) ou PCR quantitativa tal como, por exemplo, RT-PCR em tempo real, RNA seq e similar. Alternativamente, o ensaio pode ser conduzi- do através do uso de uma disposição, tal como uma microdisposição, como conhecido no campo relevante, tais como, por exemplo, tecnolo- gias nanostring.
[00113] Os pacientes são identificados como sendo responsivos a tratamento, em que o tratamento é monitorado ou câncer é detectado através da detecção e/ou medição do nível de expressão de NaPi2b em uma amostra.
[00114] A detecção/medição do nível de expressão de NaPi2b é determinada através do cálculo de um score de NaPi2b. O score de
NaPi2b é quantitativo ou semiquantitativo. Por exemplo, detecção é pontuada patologicamente para se chegar a um score de patologia. É compreendido que quaisquer métodos de pontuação conhecidos na técnica podem ser usados nos métodos da invenção. Em particular, quaisquer métodos de pontuação histológicos conhecidos na técnica.
[00115] Os métodos para avaliação dos resultados de medição ob- tidos através de ensaios de tingimento imunoistoquímico incluem, por exemplo, o método de H-score. O H-score é determinado através da fórmula de cálculo que segue (Am. J. Clin. Pathol. 1988; 90 (3): 233-9). H-Score = ((% a <1+) X 0) + ((% a 1+)X 1) + (( % a 2+) X 2) + ((% a 3+) X3) onde a intensidade de tingimento 0 é não tingido; intensidade de tingimento 1 é tingimento fraco; intensidade de tingimento 2 é tin- gimento moderado; e intensidade de tingimento 3 é tingimento forte.
[00116] Na avaliação através do método H-score, apenas porções de célula de câncer são usadas. Para controles negativos ou positivos para intensidade de tingimento, linhagens de célula incrustradas em parafina fixadas com formalina ou xenoenxertos (linhagens cujos ní- veis de expressão de proteína são conhecidos previamente) podem ser empregadas. Quando não há quaisquer espécimes de controle, uma pluralidade de espécimes é avaliada simultaneamente para con- firmar a distribuição geral de intensidade de tingimento dos espécimes, e então a intensidade de tingimento pode ser ajustada.
[00117] Em adição ao método H-score, outros métodos de pontua- ção conhecidos na técnica tais como, por exemplo, o método Allred (Harvey e outros, Journal of Clinical Oncology 17, No. 5 (Maio, 1999) 1474-1474), podem ser também usados. Pontos de corte precisam ser ajustados em cada método. Pontuação Allred=pontuação de porcenta- gem de células positivas + pontuação de intensidade de tingimento.
[00118] A invenção também provê estojos e/ou métodos para identi- ficação ou de outro modo refino, por exemplo, estratificação, de uma população de pacientes adequada para administração terapêutica de um conjugado de anticorpo-fármaco direcionado a NaPi2b revelado aqui através da identificação da pontuação de NaPi2b do indivíduo an- tes do tratamento com um conjugando de anticorpo-fármaco direcio- nado a NaPi2b revelado aqui. Em algumas modalidades, a população de teste é derivada de tecido fresco, não congelado, de uma amostra de biópsia. Em algumas modalidades, a população de célula de teste é derivada de um sítio primário ou metastático. Em algumas modalida- des, a população de célula de teste é derivada de um tecido congelado de uma amostra de biópsia ou cirúrgica ou fluido ascético ou fluido pleural. Em algumas modalidades, a população de teste é derivada de um tecido fixado (por exemplo, fixação com formalina) de uma amostra de biópsia ou cirúrgica. O teste de IHC mede a quantidade de proteína receptora NaPi2b na superfície de células em uma amostra de tecido de câncer.
DEFINIÇÕES
[00119] A menos que de outro modo definido, termos científicos e técnicos usados em conexão com a presente invenção devem ter os significados que são comumente compreendidos por aqueles de habi- lidade comum na técnica. Ainda, a menos que de outro modo requeri- do pelo contexto, termos no singular devem incluir pluralidades e ter- mos no plural devem incluir o singular. Em geral, nomenclaturas utili- zadas em conexão com, e técnicas de, cultura de célula e tecido, bio- logia molecular e química de proteína e oligo- ou polinucleotídeo e hi- bridização descritas aqui são aquelas bem conhecidas e comumente usadas na técnica. Técnicas padrão são usadas para DNA recombi- nante, síntese de oligonucleotídeo e cultura e transformação de tecido (por exemplo, eletroporação, lipofecção). Reações enzimáticas e téc- nicas de purificação são realizadas de acordo com as especificações do fabricante ou como geralmente realizado na técnica ou como des-
crito aqui. As técnicas e procedimentos acima são geralmente realiza- dos de acordo com métodos convencionais bem conhecidos no campo e como descrito em várias referências gerais e mais específicas que são mencionadas e discutidas em todo o presente pedido. Vide, por exemplo, Sambrook e outros. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)). As nomenclaturas utilizadas em conexão com, e os pro- cedimentos de laboratório e técnicas de, química analítica, química orgânica sintética e química medicinal e farmacêutica descritas aqui são aquelas bem conhecidas e comumente usadas na técnica. Técni- cas padrão são usadas para sínteses químicas, análises químicas, preparação farmacêutica, formulação e administração e tratamento de pacientes.
[00120] Como utilizado de acordo com a presente invenção, os ter- mos que seguem, a menos que de outro modo indicado, devem ser compreendidos ter os significados que seguem.
[00121] Como aqui usado, os termo "NaPi2b" (também conhecida como proteína 2B de transporte de fosfato dependente de sódio, SLC34A2, NaPiIIb, Npt2, cotransportador 2B de fosfato dependente de Na(+); cotransportador 2B de sódio/fosfato; cotransportador 2B de Na(+)/Pi; NaPi3b; membro 3 da família carreadora de soluto 34), quando usado aqui, se refere à NaPi2b humana (por exemplo, No. Acesso GenBank O95436.3) e inclui quaisquer variantes, isoformas e homólogos de espécie de NaPi2b que são expressos naturalmente por células, incluindo células de tumor, ou são expressos em células trans- fectadas com o gene NaPi2B. Esses termos são sinônimos e podem ser usados intercomutavelmente.
[00122] Como aqui usado, o termo "anticorpo para NaPi2b" ou "an- ticorpo anti-NaPi2b" é um anticorpo que se liga especificamente à re- gião extracelular de SLC34A2.
[00123] Quando usado aqui no contexto de dois ou mais anticorpos, o termo "compete com" ou "compete cruzado com" indica que os dois ou mais anticorpos competem por ligação a NaPi2b, por exemplo, competem por ligação a Na2Pi2b em qualquer ensaio reconhecido na técnica. Um anticorpo "bloqueia" ou "bloqueia cruzado" um ou mais anticorpos de ligação a NaPi2b se o anticorpo competir com o um ou mais outros anticorpos 25% ou mais, com 25%-74% representando "bloqueio parcial" e 75%-100% representando "bloqueio total", confor- me determinado usando ensaio reconhecido na técnica. Para alguns pares de anticorpos, competição ou bloqueio em qualquer ensaio re- conhecido na técnica é apenas observado quando um anticorpo é re- vestido sobre a placa e o outro é usado para competir, e não vice- versa. A menos que de outro modo definido ou negado pelo contexto, os termos "compete com", "compete cruzado com", "bloqueia" ou "blo- queia cruzado" quando usados aqui também pretendem compreender tais pares de anticorpos.
[00124] Como aqui usado, o termo "anticorpo" se refere a molécu- las de imunoglobulina e porções imunologicamente ativas de molécu- las de imunoglobulina (Ig), isto é, moléculas que contêm um sítio de ligação de antígeno que liga especificamente (imunorreage com) um antígeno. Por "liga especificamente" ou "imunorreage com" ou "direci- onado contra" quer dizer que o anticorpo reage com um ou mais de- terminantes antigênicos do antígeno desejado e não reage com outros polipeptídeos ou se liga em afinidade muito menor (Kd > 10-6). Anticor- pos incluem, mas não estão limitados a, anticorpos policlonais, mono- clonais e quiméricos.
[00125] A unidade estrutural de anticorpo básica é conhecida com- preender um tetrâmero. Cada tetrâmero é composto de dois pares idênticos de cadeias de polipeptídeo, cada par tendo uma cadeia "le- ve" (cerca de 25 kDa) e uma "pesada" (cerca de 50-70 kDa). A porção aminoterminal de cada cadeia inclui uma região variável de cerca de 100 a 110 ou mais aminoácidos principalmente responsáveis por reco- nhecimento de antígeno. A porção carboxi-terminal de cada cadeia define uma região constante responsável principalmente por função efetora. Em geral, moléculas de anticorpo obtidas de seres humanos se referem a qualquer uma das classes IgG, IgM, IgA, IgE e IgD, que diferem uma da outra pela natureza da cadeia pesada presente na mo- lécula. Certas classes têm subclasses também, tais como IgG1, IgG2 e outras. Ainda, em seres humanos, a cadeia leve pode ser uma cadeia kappa ou uma cadeia lambda.
[00126] O termo "anticorpo monoclonal" (mAb) ou "composição de anticorpo monoclonal", como usado aqui, se refere a uma população de moléculas de anticorpo que contém apenas uma espécie molecular de molécula de anticorpo consistindo em um produto de gene de ca- deia leve única e um produto de gene de cadeia pesada única. Em particular, as regiões de determinação de complementaridade (CDRs) do anticorpo monoclonal são idênticas em todas as moléculas da po- pulação. mAbs contêm um sítio de ligação de anticorpo capaz de imu- norreação com um epítopo particular do antígeno caracterizado por uma afinidade de ligação única com ele.
[00127] Em geral, moléculas de anticorpo obtidas de seres huma- nos se referem a qualquer uma das classes IgG, IgM, IgA, IgE e IgD, que diferem uma da outra pela natureza da cadeia pesada presente na molécula. Certas classes têm subclasse também, tais como IgG1, IgG2 e outras. Ainda, em seres humanos, a cadeia leve pode ser uma cadeia kappa ou uma cadeia lambda.
[00128] O termo "sítio de ligação de antígeno" ou "porção de liga- ção" se refere à parte da molécula de imunoglobulina que participa em ligação de antígeno. O sítio de ligação de antígeno é formado por resí- duos de aminoácido das regiões variáveis N-terminais ("V") das cadei-
as pesada ("H") e leve ("L"). Três extensões altamente divergentes dentro das regiões V das cadeias pesada e leve, referidas como "regi- ões hipervariáveis", são interpostas entre extensões de flanqueamento mais conservadas conhecidas como "regiões de estrutura principal" ou "FRs". Portanto, o termo "FR" se refere a sequências de aminoácido que são encontradas naturalmente entre, e adjacentes a, regiões hi- pervariáveis em imunoglobulinas. Em uma molécula de anticorpo, as três regiões hipervariáveis de uma cadeia leve e as três regiões hiper- variáveis de uma cadeia pesada são dispostas uma em relação à outra no espaço tridimensional para formar uma superfície de ligação a antí- geno. A superfície de ligação a antígeno é complementar à superfície tridimensional de um antígeno ligado, e as três regiões hipervariáveis de cada uma das cadeias pesada e leve são referidas como "regiões de determinação de complementaridade" ou "CDRs". A atribuição de aminoácidos a cada domínio está de acordo com as definições de Ka- bat Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institu- tes of Health, Bethesda, Md. (1987 e 1991)) ou Chothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987), Chothia e outros, Nature 342:878-883 (1989).
[00129] Como aqui usado, o termo "epítopo" inclui qualquer deter- minante de proteína capaz de ligação específica a uma imunoglobulina ou fragmento da mesma ou um receptor de célula T. O termo "epítopo" inclui qualquer determinante de proteína capaz de ligação específica com uma imunoglobulina ou receptor de célula T. Determinantes epi- tópicos geralmente consistem em agrupamentos de moléculas na su- perfície quimicamente ativas tais como aminoácidos ou cadeias late- rais de açúcar e geralmente têm características estruturais tridimensi- onais específicas, bem como características de carga específicas. Um anticorpo é dito se ligar especificamente a um antígeno quando a constante de dissociação é ≤ 1 μM; por exemplo, ≤ 100 nM, preferi-
velmente ≤ 10 nM e mais preferivelmente ≤ 1 nM.
[00130] O termo "polipeptídeo" é usado aqui como um termo gené- rico para se referir à proteína, fragmentos ou análogos de uma se- quência de polipeptídeo nativa. Desta maneira, fragmentos e análogos de proteína nativa são espécies do gênero de polipeptídeo. O termo "de ocorrência natural" como aqui usado conforme aplicado a um obje- to se refere ao fato que um objeto pode ser encontrado na natureza. Por exemplo, uma sequência de polipeptídeo ou polinucleotídeo que está presente em um organismo (incluindo vírus) que pode ser isolada de uma fonte na natureza e que não foi modificada intencionalmente pelo homem no laboratório ou de outra forma é de ocorrência natural.
[00131] Os termos que seguem são usados para descrever as rela- ções de sequência entre duas ou mais sequências de polinucleotídeo ou aminoácido: "sequência de referência", "janela de comparação", "identidade de sequência", "porcentagem de identidade de sequência" e "identidade substancial". Uma "sequência de referência" é uma se- quência definida usada como uma base para uma comparação de se- quência, uma sequência de referência pode ser um subconjunto de uma sequência maior, por exemplo, como um segmento de uma se- quência de cDNA ou gene de comprimento integral dada em uma lis- tagem de sequência ou pode compreender uma sequência de cDNA ou gene completa. Em geral, uma sequência de referência é pelo me- nos de 18 nucleotídeos ou 6 aminoácidos de comprimento, frequente- mente pelo menos 24 nucleotídeos ou 8 aminoácidos de comprimento e frequentemente pelo menos 48 nucleotídeos ou 16 aminoácidos de comprimento. Uma vez que dois polinucleotídeos ou sequências de aminoácido podem cada um (1) compreender uma sequência (isto é, uma porção da sequência de polinucleotídeo ou aminoácido completa) que é similar entre as duas moléculas e (2) podem compreender ainda uma sequência que é divergente entre as duas sequências de polinu-
cleotídeo ou aminoácido, comparações de sequência entre duas (ou mais) moléculas são tipicamente realizadas comparando as sequên- cias das duas moléculas em uma "janela de comparação" para identifi- car e comparar regiões locais de similaridade de sequência. Uma "ja- nela de comparação", como aqui usado, se refere a um segmento conceitual de pelo menos 18 posições de nucleotídeo contíguas ou 6 aminoácidos em que uma sequência de polinucleotídeo ou sequência de aminoácido pode ser comparada com uma sequência de referência de pelo menos 18 nucleotídeos ou 6 sequências de aminoácido contí- guos e em que a porção da sequência de polinucleotídeo na janela de comparação pode compreender adições, deleções, substituições e si- milar (isto é, lacunas) de 20 por cento ou menos comparado com a se- quência de referência (que não compreende adições ou deleções) pa- ra alinhamento ótimo das duas sequências. Alinhamento ótimo de se- quências para alinhamento de uma janela de comparação pode ser conduzido através do algoritmo de homologia local de Smith e Water- man, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981), através do algoritmo de alinha- mento de homologia de Needleman e Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), através do método de pesquisa por similaridade de Pearson e Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 85:2444 (1988), através de im- plementações computadorizadas desses algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA e TFASTA no Wisconsin Genetics Software Package Release
7.0, (Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis.), Ge- neworks ou pacotes de software MacVector) ou através de inspeção, e o melhor alinhamento (isto é, resultando na porcentagem mais alta de homologia na janela de comparação) gerado pelos vários métodos é selecionado.
[00132] O termo "identidade de sequência" significa que duas se- quências de polinucleotídeo ou aminoácido são idênticas (isto é, em uma base de nucleotídeo-por-nucleotídeo ou resíduo-por-resíduo) na janela de comparação. O termo "porcentagem de identidade de se- quência" é calculada comparando duas sequências otimamente ali- nhadas na janela de comparação, determinando o número de posições nas quais a base de ácido nucleico idêntica (por exemplo, A, T, C, G, U ou I) ou resíduo ocorre em ambas as sequências para prover o nú- mero de posições combinadas, dividindo o número de posições com- binadas pelo número total de posições na janela de comparação (isto é, o tamanho da janela) e multiplicando o resultado por 100 para pro- ver a porcentagem de identidade de sequência. O termo "identidade substancial" como aqui usado significa uma característica de uma se- quência de polinucleotídeo ou aminoácido, em que o polinucleotídeo ou aminoácido compreende uma sequência que tem pelo menos 85% de identidade de sequência, preferivelmente pelo menos 90 a 95% de identidade de sequência, mais comumente pelo menos 99% de identi- dade de sequência comparado com uma sequência de referência em uma janela de comparação de pelo menos 18 posições de nucleotídeo (6 aminoácidos), frequentemente em uma janela de pelo menos 24-48 posições nucleotídeo (8-16 aminoácidos), em que a porcentagem de identidade de sequência é calculada comparando a sequência de refe- rência com a sequência que pode incluir deleções ou adições que tota- lizam 20 por cento ou menos da sequência de referência na janela de comparação. A sequência de referência pode ser um subconjunto de uma sequência maior.
[00133] Como aqui usado, os vinte aminoácidos convencionais e suas abreviações seguem o uso convencional. Vide Immunology - A Synthesis (2a edição, E.S. Golub and D.R. Green, Eds., Sinauer Asso- ciates, Sunderland7 Mass. (1991)). Estereoisômeros (por exemplo, D- aminoácidos) dos vinte aminoácidos convencionais, aminoácidos não naturais tais como aminoácidos α-, α-dissubstituídos, aminoácidos de N-alquila, ácido láctico e outros aminoácidos não convencionais po-
dem também ser componentes adequados para polipeptídeos da pre- sente invenção. Exemplos de aminoácidos não convencionais incluem: 4 hidroxiprolina, γ-carboxiglutamato, ɛ-N,N,N-trimetilisina, ɛ-N- acetilisina, O-fosfoserina, N-acetilserina, N-formilmetionina, 3-metil- histidina, 5-hidroxilisina, σ-N-metilarginina e outros aminoácidos e imi- noácidos similares (por exemplo, 4-hidroxiprolina). Na notação de poli- peptídeo usada aqui, a direção para a esquerda é a direção aminoter- minal e a direção para a direita é a direção carboxiterminal, de acordo com uso padrão e convenção.
[00134] Similarmente, a menos que de outro modo especificado, a extremidade esquerda de sequências de polinucleotídeo de filamento único é a extremidade 5’ a direção para a esquerda de sequências de polinucleotídeo de filamento duplo é referida como a direção 5’. A dire- ção de adição 5’ para 3’ de transcritos de RNA nascentes é referida como regiões de sequência de direção de transcrição no filamento de DNA tendo a mesma sequência que o RNA e que são extremidade 5’ para a 5’ do transcrito de RNA são referidas como "sequências a mon- tante", regiões de sequência no filamento de DNA tendo a mesma se- quência que o RNA e que são extremidade 3’ para a 3’ do transcrito de RNA são referidas como "sequências a jusante".
[00135] Conforme aplicado a polipeptídeos, o termo "identidade substancial" significa que duas sequências de peptídeo, quando ali- nhadas otimamente, tal como através do programa GAP ou BESTFIT usando pesos de lacuna padrão, compartilham pelo menos 80 por cen- to de identidade de sequência, preferivelmente pelo menos 90 por cen- to de identidade de sequência, mais preferivelmente pelo menos 95 por cento de identidade de sequência e sobretudo preferivelmente pelo menos 99 por cento de identidade de sequência.
[00136] Preferivelmente, posições de resíduo que não são idênticas diferem por substituições de aminoácido conservativas.
[00137] Substituições de aminoácido conservativas se referem à intercambialidade de resíduos tendo cadeias laterais similares. Por exemplo, um grupo de aminoácidos tendo cadeias laterais alifáticas é glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina; um grupo de aminoácidos tendo cadeias laterais hidroxila alifáticas é serina e treonina; um grupo de aminoácidos tendo cadeias laterais contendo amida é asparagina e glutamina; um grupo de aminoácidos tendo cadeias laterais aromáticas é fenilalanina, tirosina e triptofano; um grupo de aminoácidos tendo cadeias laterais básicas é lisina, arginina e histidina; e um grupo de aminoácidos tendo cadeias laterais contendo enxofre é cisteína e me- tionina. Grupos de substituição de aminoácidos conservativas preferi- dos são valina-leucina-isoleucina, fenilalanina-tirosina, lisina-arginina, alanina valina, glutâmico-aspártico e asparagina-glutamina.
[00138] Como discutido aqui, variações pequenas nas sequências de aminoácido de anticorpos ou moléculas de imunoglobulina são con- templadas como sendo compreendidas pela presente invenção, con- tanto que as variações na sequência de aminoácido se mantenha pelo menos 75%, mais preferivelmente pelo menos 80%, 90%, 95% e so- bretudo preferivelmente 99%. Em particular, substituições de aminoá- cido conservativas são contempladas. Substituições conservativas são aquelas que acontecem dentro de uma família de aminoácidos que estão relacionados em suas cadeias laterais. Aminoácidos genetica- mente codificados são geralmente divididos em famílias: (1) aminoáci- dos ácidos são aspartato, glutamato; (2) aminoácidos básicos são lisi- na, arginina, histidina; (3) aminoácidos não polares são alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofano e (4) aminoácidos polares não carregados são glicina, asparagina, glutami- na, cisteína, serina, treonina, tirosina. Os aminoácidos hidrofílicos in- cluem arginina, asparagina, aspartato, glutamina, glutamato, histidina, lisina, serina e treonina. Os aminoácidos hidrofóbicos incluem alanina,
cisteína, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, prolina, triptofano, tirosina e valina.
Outras famílias de aminoácidos incluem (i) serina e treonina, que são a família alifática-hidróxi; (ii) asparagina e glutamina, que são a família contendo amida; (iii) alanina, valina, leucina e isoleu- cina, que são a família alifática; e (iv) fenilalanina, triptofano e tirosina, que são a família aromática.
Por exemplo, é razoável esperar que uma substituição isolada de uma leucina com uma isoleucina ou valina, um aspartato com um glutamato, uma treonina com uma serina ou uma substituição similar de um aminoácido com um aminoácido estrutural- mente relacionado não terá um efeito grande sobre a ligação ou pro- priedades da molécula resultante, especialmente se a substituição não envolver um aminoácido dentro de um sítio de estrutura.
Se uma mu- dança de aminoácido resulta em um peptídeo funcional pode ser pron- tamente determinado avaliando a atividade específica do derivado de polipeptídeo.
Ensaios são descritos aqui em detalhes.
Fragmentos ou análogos de anticorpos ou moléculas de imunoglobulina podem ser prontamente preparados por aqueles de habilidade comum na técnica.
Amino- e carboxi-terminais preferidos de fragmentos ou análogos ocor- rem próximo a limites de domínios funcionais.
Domínios estruturais e funcionais podem ser identificados através de comparação dos dados de sequência de nucleotídeo e/ou aminoácido com bancos de dados de sequência públicos ou da proprietária.
Preferivelmente, métodos de comparação computadorizada são usados para identificar motivos de sequência ou domínios de conformação de proteína previstos que ocorrem em outras proteínas de estrutura e/ou função conhecida.
Mé- todos de identificação de sequências de proteína que dobram em uma estrutura tridimensional conhecida são conhecidos.
Bowie e outros, Science 253:164 (1991). Portanto, os exemplos acima demonstram que aqueles de habilidade na técnica podem reconhecer motivos de sequência e conformações estruturais que podem ser usados para de-
finir domínios estruturais e funcionais de acordo com a invenção.
[00139] Substituições de aminoácido preferidas são aquelas que: (1) reduzem a susceptibilidade à proteólise, (2) reduzem susceptibili- dade à oxidação, (3) alteram a afinidade de ligação para formação de complexos de proteína, (4) alteram as afinidades de ligação e (5) con- ferem ou modificam outras propriedades físico-químicas ou funcionais de tais análogos. Análogos incluem várias muteínas de uma sequência que não a sequência de peptídeo de ocorrência natural. Por exemplo, substituições de aminoácido simples ou múltiplas (preferivelmente substituições de aminoácido conservativas) podem ser feitas na se- quência de ocorrência natural (preferivelmente na porção do polipeptí- deo fora do(s) domínio(s) formando contatos intermoleculares. Uma substituição de aminoácido conservativa não deve mudar substancial- mente as características estruturais da sequência parental (por exem- plo, uma substituição de aminoácido não deve tender a quebrar uma hélice que ocorre na sequência parental ou romper outros tipos de es- trutura secundária que caracteriza a sequência parental). Exemplos de estruturas secundárias e terciárias de polipeptídeo reconhecidas na técnica são descritos em Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W. H. Freeman and Company, New York (1984)); In- troduction to Protein Structure (C. Branden and J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y. (1991)); e Thornton e outros, Nature 354:105 (1991).
[00140] Análogos de peptídeo são comumente usados na indústria farmacêutica como fármacos não peptídeo com propriedades análogas àquelas do peptídeo modelo. Esses tipos de composto não peptídeo são chamados "miméticos de peptídeo" ou "peptidomiméticos". Fau- chere, J. Adv. Drug Res. 15:29 (1986), Veber and Freidinger TINS p.392 (1985); e Evans e outros, J. Med. Chem. 30:1229 (1987). Tais compostos são frequentemente desenvolvidos com o auxílio de mode-
lagem molecular computadorizada. Miméticos de peptídeo que são estruturalmente similares a peptídeos terapeuticamente úteis podem ser usados para produzir um efeito terapêutico ou profilático equivalen- te. Em geral, peptidomiméticos são estruturalmente similares a um po- lipeptídeo paradigma (isto é, um polipeptídeo que tem uma proprieda- de bioquímica ou atividade farmacológica), tal como um anticorpo hu- mano, mas que têm uma ou mais ligações peptídicas opcionalmente substituídas por uma ligação selecionada do grupo consistindo em: -- CH2NH--, --CH2S-, --CH2-CH2--, --CH=CH--(cis e trans), --COCH2--, CH(OH)CH2—e -CH2SO--, através de métodos bem conhecidos na técnica. Substituição sistemática de um ou mais aminoácidos de uma sequência de consenso com um D-aminoácido do mesmo tipo (por exemplo, D-lisina no lugar de L-lisina) pode ser usada para gerar pep- tídeos mais estáveis. Ainda, peptídeos restritos compreendendo uma sequência de consenso ou uma variação de sequência de consenso substancialmente idêntica podem ser gerados através de métodos co- nhecidos na técnica (Rizo e Gierasch, Ann. Rev. Biochem. 61:387 (1992)); por exemplo, através da adição de resíduos cisteína internos capazes de formar pontos dissulfeto intramoleculares que ciclizam o peptídeo.
[00141] O termo "agente" é usado aqui para significar um composto químico, uma mistura de compostos químicos, uma macromolécula biológica ou um extrato feito de materiais biológicos.
[00142] Como aqui usado, o termo "marcador" ou "marcado" se re- fere à incorporação de um marcador detectável, por exemplo, através da incorporação de um aminoácido radiomarcado ou ligação a um po- lipeptídeo de porções biotinila que podem ser detectadas por avidina marcada (por exemplo, estreptavidina contendo um marcador fluores- cente ou atividade enzimática que pode ser detectada através de mé- todos ópticos ou calorimétricos). Em certas situações, o marcador po-
de ser também terapêutico. Vários métodos de marcação de polipeptí- deos e glicoproteínas são conhecidos na técnica e podem ser usados. Exemplos de marcadores para polipeptídeos incluem, mas não estão limitados a, o que segue: radioisótopos ou radionuclídeos (por exem- plo, 3H, 14 C, 15 N, 35 S, 90 Y, 99 Tc, 111 In, 125 I, 131 I), marcadores fluorescen- tes (por exemplo, FITC, rodamina, lantanídeos, fósforos), marcadores enzimáticos (por exemplo, peroxidase de rábano silvestre, p- galactosidase, luciferase, fosfatase alcalina), quimioluminescente, gru- pos biotinila, epítopos de polipeptídeo predeterminados reconhecidos por um repórter secundário (por exemplo, sequências de par de zíper de leucina, sítios de ligação para anticorpos secundários, domínios de ligação de metal, marcadores de epítopo). Em algumas modalidades, os marcadores são ligados por braços espaçadores de vários compri- mentos para reduzir impedimento estérico potencial. O termo "agente ou fármaco farmacêutico" como aqui usado se refere a um composto ou composição química capaz de induzir um efeito terapêutico deseja- do quando apropriadamente administrado a um paciente.
[00143] Outros termos químicos aqui são usados de acordo com uso convencional na técnica, como exemplificado pelo The McGraw- Hill Dictionary of Chemical Terms (Parker, S., Ed., McGraw-Hill, San Francisco (1985)).
[00144] Como aqui usado, "substancialmente puro" significa que uma espécie de objeto é a espécie predominante presente (isto é, em uma base molar ela é mais abundante do que qualquer outra espécie individual na composição), e preferivelmente uma fração substancial- mente purificada é uma composição em que a espécie de objeto com- preende pelo menos cerca de 50 por cento (em uma base molar) de todas as espécies macromoleculares presentes.
[00145] Em geral, uma composição substancialmente pura compre- enderá mais do que cerca de 80 por cento de todas as espécies ma-
cromolares presentes na composição, mais preferivelmente mais do que cerca de 85%, 90%, 95% e 99%. Sobretudo preferivelmente, a espécie objeto é purificada para homogeneidade essencial (espécies contaminantes não podem ser detectadas na composição através de métodos de detecção convencionais) em que a composição consiste essencialmente em uma espécie macromolecular única.
[00146] O uso dos artigos "um", "uma" e "o", "a" em ambas descri- ção e reivindicações que seguem deve ser considerado compreender ambos o singular e o plural, a menos que de outro modo aqui indicado ou claramente contradito pelo contexto. Os termos "compreendendo", "tendo", "sendo de" como em "sendo de uma fórmula química", "inclu- indo" e "contendo" devem ser considerados como termos abertos (isto é, significando "incluindo, mas não limitado a") a menos que de outro modo observado. Por exemplo, uma base polimérica de uma certa fórmula inclui todas as unidades de monômero mostradas na fórmula e pode também incluir unidades de monômero adicionais não mostradas na fórmula. Ainda, sempre que "compreendendo" ou um outro termo aberto é usado em uma modalidade, deve ser compreendido que a mesma modalidade pode ser reivindicada mais estreitamente usando o termo intermediário "consistindo essencialmente em" do termo fe- chado "consistindo em".
[00147] O termo "cerca de", "aproximadamente" ou "aproximado", quando usado em conexão com um valor numérico, significa que uma coleção ou faixa de valores está incluída. Por exemplo, "cerca de X" inclui uma faixa de valores que são ±20%, ±10%, ±5%, ±2%, ±1%, ±0,5%, ±0,2% ou ±0,1% de X, onde X é um valor numérico. Em uma modalidade, o termo "cerca de" se refere a uma faixa de valores que são 5% mais ou menos o valor especificado. Em uma outra modalida- de, o termo "cerca de" se refere a uma faixa de valores que são 2% mais ou menos o valor especificado. Em uma outra modalidade, o ter-
mo "cerca de" se refere a valores que são 1% mais ou menos o valor especificado.
[00148] Menção de faixas de valores é pretendida apenas servir como um método abreviado de se referir individualmente a cada valor separado que se encaixa na faixa, a menos que de outro modo aqui indicado, e cada valor separado é incorporado ao relatório como se ele fosse individualmente mencionado aqui. Uma faixa usada aqui, a me- nos que de outro modo especificado, inclui os dois limites da faixa. Por exemplo, as expressões "x sendo um inteiro entre 1 e 6" e "x sendo um inteiro de 1 a 6" significam ambas "x sendo 1, 2, 3, 4, 5 ou 6", isto é, os termos "entre X e Y" e "variam de X a Y" são inclusivos de X e Y e os inteiros entre eles.
[00149] Todos os métodos descritos aqui podem ser realizados em qualquer ordem adequada a menos que de outro modo aqui indicado ou de outro modo claramente contradito pelo contexto. O uso de qual- quer um e todos os exemplos, ou linguagem exemplar (por exemplo, "tal como") provida aqui, pretende apenas ilustrar melhor a invenção e não deve ser considerado como uma limitação do escopo das reivindi- cações a menos que explicitamente de outro modo reivindicado. Ne- nhuma linguagem no relatório deve ser considerada como indicando que qualquer elemento não reivindicado seja essencial para o que é reivindicado.
[00150] "Carreador Polimérico ou base": o termo carreador polimé- rico ou base, como aqui usado, se refere a um polímero ou um políme- ro modificado, o qual é adequado para se ligar covalentemente a ou pode ser covalentemente ligado a uma ou mais moléculas de fármaco com um ligante designado e/ou um ou mais PBRMs com um ligante designado.
[00151] "Condições fisiológicas": a expressão "condições fisiológi- cas", como aqui usado, se refere à faixa de condições químicas (por exemplo, pH, resistência iônica) e bioquímicas (por exemplo, concen- trações de enzima) que provavelmente pode ser encontrada nos flui- dos extracelulares de tecidos vivos. Para a maioria dos tecidos nor- mais, o pH fisiológico varia de a partir de cerca de 7,0 a 7,4. Plasma sanguíneo em circulação e líquido intersticial normal representam exemplos típicos de condições fisiológicas normais.
[00152] "Fármaco": como aqui usado, o termo "fármaco" se refere a um composto que é biologicamente ativo e provê um efeito fisiológico desejado seguindo administração a um indivíduo com necessidade do mesmo (por exemplo, um ingrediente farmacêutico ativo).
[00153] "Citotóxico": como aqui usado, o termo "citotóxico" significa tóxico para células ou uma população de célula selecionada (por exemplo, células cancerosas). O efeito tóxico pode resultar em morte e/ou lise celular. Em certos casos, o efeito tóxico pode ser um efeito destrutivo subletal na célula, por exemplo, diminuição ou parada de crescimento celular. A fim de obter um efeito citotóxico, o fármaco ou profármaco pode ser selecionado de um grupo consistindo em um agente de dano ao DNA, um agente de rompimento de microtúbulo ou uma proteína ou polipeptídeo citotóxico, dentre outros.
[00154] "PHF" se refere a poli(1-hidroximetiletileno hidroximetil- formal).
[00155] Como aqui usado, os termos "unidade de polímero", "uni- dade monomérica", "monômero", "unidade de monômero", "unidade" todos se referem a uma unidade estrutural repetível em um polímero.
[00156] Como aqui usado, "peso molecular" ou "PM" de um políme- ro ou carreador/base polimérica ou conjugados de polímero se refere ao peso molecular ponderal médio do polímero não modificado a me- nos que de outro modo especificado.
[00157] Como aqui usado, "regime de dosagem" se refere à quanti- dade de agente, por exemplo, da composição contendo o conjugado de anticorpo-fármaco e polímero direcionado a NaPi2b, administrada, e a frequência de administração. O regime de dosagem é uma função da doença ou condição a ser tratada, e então pode variar.
[00158] Como aqui usado, "frequência" de administração se refere ao tempo entre administrações de tratamento sucessivas. Por exem- plo, a frequência pode ser dias, semanas ou meses. Por exemplo, a frequência pode ser mais do que uma vez por semana, por exemplo, duas vezes por semana, três vezes por semana, quatro vezes por se- mana, cinco vezes por semana, seis vezes por semana ou diariamen- te. A frequência também pode ser uma, duas, três ou quatro semanas. A frequência particular é uma função da doença ou condição particular tratada. Em geral, a frequência é mais do que uma vez por semana, e geralmente é duas vezes por semana.
[00159] Como aqui usado, um "ciclo de administração" se refere à programação repetida do regime de dosagem de administração da en- zima e/ou um segundo agente que é repetida em administrações su- cessivas. Por exemplo, um ciclo de administração exemplar é um ciclo de 28 dias com administrações duas vezes por semana por três se- manas, seguido por uma semana de dosagem descontinuada. Um ci- clo de administração preferido é um ciclo de 21 dias com administra- ção uma vez a cada 21 dias (isto é, 3 semanas) ou um ciclo de 28 dias com administração a cada 28 dias (isto é, 4 semanas).
[00160] Como aqui usado, quando se referindo à dosagem com ba- se em mg/kg do indivíduo, um indivíduo humano médio é considerado ter uma massa de cerca de 70 kg-75 kg, tal como 70 kg e uma área de superfície corporal (BSA) de 1,73 m2.
[00161] Como aqui usado, melhora dos sintomas de uma doença ou distúrbio particular por um tratamento, tal como através da adminis- tração de uma composição farmacêutica ou outro terapêutico, se refe- re a qualquer diminuição, seja permanente ou temporária, duradoura ou transiente, dos sintomas ou efeitos adversos de uma condição, tal como, por exemplo, redução de efeitos adversos associados com ou que ocorrem quando da administração de um conjugado de anticorpo- fármaco e polímero direcionado a NaPi2b.
[00162] Como aqui usado, quando se referindo à dosagem com ba- se em "área de superfície corporal" (BSA; m2) é a área de superfície medida ou calculada de um corpo humano. Para muitos propósitos clí- nicos, BSA é um melhor indicador de massa metabólica do que peso corporal porque ela é menos afetada por massa adiposa anormal. Vá- rios cálculos foram publicados para se chegar à BSA sem medição di- reta. Nas fórmulas que seguem, BSA está em m2, W é massa em Kg e H é altura em cm. A mais amplamente usada é a Du Bois, fórmula Du- Bois: BSA= 0,007184 x W0,425 x H0,725. Outros métodos de determina- ção da BSA incluem, por exemplo, as fórmulas Mosteller, Haycock, Gehan and George, Boyd, Fujimoto, Takahira, Shuter e Aslani ou Schlich.
[00163] Como aqui usado, "tratar" descreve o gerenciamento e cui- dado de um paciente para o propósito de combater uma doença, con- dição ou distúrbio e inclui a administração de um conjugado da inven- ção ou uma composição farmacêutica do mesmo em combinação com uma terapia imunomoduladora, por exemplo, um agente de imuno- oncologia tal como um inibidor de ponto de checagem imune, para ali- viar os sintomas ou complicações de uma doença, condição ou distúr- bio ou eliminar a doença, condição ou distúrbio.
[00164] Como aqui usado, "prevenção" ou "profilaxia" se refere à redução no risco de desenvolvimento de uma doença ou condição ou redução ou eliminação do início dos sintomas ou complicações da do- ença, condição ou distúrbio.
[00165] O termo "quantidade eficaz" ou "quantidade suficiente", quando se refere a um agente ativo, se refere à quantidade necessária para elicitar a resposta biológica desejada. Como aqui usado, uma "quantidade terapeuticamente eficaz" ou "uma dose terapeuticamente eficaz" se refere a uma quantidade de um agente, composto, material ou composição contendo um composto que é pelo menos suficiente para produzir um efeito terapêutico detectável. O efeito pode ser de- tectado através de qualquer método de ensaio conhecido na técnica. A quantidade eficaz precisa para um indivíduo dependerá do peso corpo- ral, do tamanho e saúde do indivíduo; da natureza e grau da condição; e do agente terapêutico selecionado para administração.
[00166] Um "indivíduo" inclui um mamífero. O mamífero pode ser, por exemplo, qualquer mamífero, por exemplo, um ser humano, prima- ta, ave, camundongo, rato, ave doméstica, cachorro, gato, vaca, cava- lo, cabra, camelo, ovelha ou um porco. Preferivelmente, o mamífero é um ser humano.
[00167] Como usado aqui, "forma de dosagem unitária" se refere a unidades fisicamente separadas adequadas para indivíduos humanos e animais e embaladas individualmente como é conhecido na técnica.
[00168] Como aqui usado, uma formulação de dosagem única se refere a uma formulação como uma dose única.
[00169] Como aqui usado, "proximidade temporal" se refere a que administração do um agente terapêutico (por exemplo, um conjugado de anticorpo-fármaco e polímero direcionado a NaPi2b revelado aqui) ocorre dentro de um período de tempo antes ou após a administração de um outro agente terapêutico (por exemplo, um inibidor de ponto de checagem imune revelado aqui), de modo que o efeito terapêutico do um agente terapêutico se sobrepõe ao efeito terapêutico do outro agente terapêutico. Em algumas modalidades, o efeito terapêutico do um agente terapêutico se sobrepõe completamente ao efeito terapêu- tico do outro agente terapêutico. Em algumas modalidades, "proximi- dade temporal" significa que administração de um agente terapêutico ocorre dentro de um período de tempo antes ou após a administração de um outro agente terapêutico, de modo que há um efeito sinérgico entre o um agente terapêutico e o outro agente terapêutico. "A proxi- midade temporal" pode variar de acordo com vários fatores, incluindo, mas não limitado a, a idade, gênero, peso, base genética, condição médica, história de doença e história de tratamento do indivíduo ao qual os agentes terapêuticos devem ser administrados; a doença ou condição a ser tratada ou melhorada; o resultado terapêutico a ser ob- tido; a dosagem, frequência de dosagem e duração de dosagem dos agentes terapêuticos; a farmacocinética e farmacodinâmica dos agen- tes terapêuticos; a(s) via(s) através da(s) qual(ais) os agentes terapêu- ticos são administrados. Em algumas modalidades, "proximidade tem- poral" significa dentro de 15 minutos, dentro de 30 minutos, dentro de uma hora, dentro de duas horas, dentro de quatro horas, dentro de seis horas, dentro de oito horas, dentro de 12 horas, dentro de 18 ho- ras, dentro de 24 horas, dentro de 36 horas, dentro de 2 dias, dentro de 3 dias, dentro de 4 dias, dentro de 5 dias, dentro de 6 dias, dentro de uma semana, dentro de 2 semanas, dentro de 3 semanas, dentro de 4 semanas, dentro de 6 semanas ou dentro de 8 semanas. Em al- gumas modalidades, administração múltipla de um agente terapêutico pode ocorrer em proximidade temporal a uma administração única de um outro agente terapêutico. Em algumas modalidades, proximidade temporal pode mudar durante um ciclo de tratamento ou dentro de um regime de dosagem.
[00170] Como aqui usado um "estojo" se refere a uma combinação de componentes, tal como uma combinação das presentes composi- ções e um outro item para um propósito incluindo, mas não limitado a, reconstituição, ativação e instrumentos/dispositivos para administra- ção, diagnóstico e avaliação de uma atividade ou propriedade biológi- ca. Os estojos incluem opcionalmente instruções de uso.
[00171] A presente invenção pretende incluir todos os isótopos de átomos ocorrendo nos presentes compostos. Isótopos incluem aqueles átomos tendo o mesmo número atômico, mas números de massa dife- rentes. A título de exemplo geral e sem limitação, isótopos de hidrogê- nio incluem trítio e deutério. Isótopos de carbono incluem C-13 e C-14.
[00172] A presente invenção pretende incluir todos os isômeros dos compostos, que se refere a e inclui, isômeros ópticos e isômeros tau- toméricos, onde isômeros ópticos incluem enantiômeros e diastereô- meros, isômeros quirais e isômeros não quirais, e os isômeros ópticos incluem isômeros ópticos isolados bem como misturas de isômeros ópticos, incluindo misturas racêmicas e não racêmicas; onde um isô- mero pode estar em forma isolada ou em uma mistura com um ou mais outros isômeros.
OUTRAS MODALIDADES
[00173] Todas as publicações e documentos de patente citados aqui são aqui incorporados a título de referência como se cada tal pu- blicação ou documento fosse especificamente e individualmente indi- cado ser aqui incorporado a título de referência. Citação de publica- ções e documentos de patente não pretende ser uma admissão que qualquer um seja técnica anterior pertinente, nem nenhuma admissão quanto aos conteúdos ou data dos mesmos. A invenção tendo sido agora descrita por meio de descrição escrita, aqueles de habilidade na técnica reconhecerão que a invenção pode ser praticada em uma vari- edade de modalidades e que a descrição acima e exemplos abaixo são para propósitos de ilustração e não limitação das reivindicações que seguem.
EXEMPLOS
[00174] Os exemplos que seguem são ilustrativos e não pretendem ser limitantes e será prontamente compreendido por um versado na técnica que outros reagentes ou métodos podem ser utilizados.
Abreviações
[00175] As abreviações que seguem são usadas nos esquemas de reação e exemplos sintéticos que seguem. Essa lista não pretende ser uma lista completa de abreviações usadas no pedido uma vez que abreviações padrão adicionais, que são prontamente compreendidas por aqueles de habilidade na técnica de síntese orgânica, podem ser também usadas nos esquemas e exemplos sintéticos. AF-HPA F-hidroxipropil amida auristatina BSA Área de superfície corporal CR Resposta completa DCR Taxa de controle de doença DES Escalonamento de dose DLT Toxicidade limitante de dose EXP Expansão de coorte IHC Imunoistoquímica IV Intravenoso MTD Dose máxima tolerada NSCLC Câncer de pulmão de células não pequenas ORR Taxa de resposta objetiva PBS Solução salina tamponada com fosfato PE Exame físico PHF poli(1-hidroximetiletileno hidroxilmetilformal) PR Resposta parcial RP2D Dose de Fase 2 recomendada SD Doença estável SRC Comitê de Revisão de Segurança SRM Encontro de Revisão de Segurança TRAE Eventos adversos relacionados a tratamento Informação Geral
[00176] XMT-1536 foi preparado como descrito no Pedido U.S. No.
2017/0266311.
[00177] AF-HPA foi preparada como descrito na Patente U.S. No. 8808679(B2).
[00178] CDRs foram identificadas através do esquema de numera- ção Kabat. Exemplo 1: avaliação de segurança e tolerabilidade de XMT-1536 Projeto de Estudo
[00179] O estudo apresentado aqui é um estudo de Fase 1b multi- centrado, aberto, de XMT-1536 administrado como uma infusão intra- venosa uma vez a cada três ou quatro semanas. A parte de escalo- namento de dose (DES) do estudo estabelecerá a dose máxima tole- rada (MTD) ou a dose de Fase 2 recomendada (RP2D) para XMT- 1536 em pacientes com um número de tipos de tumor prováveis ex- pressar NaPi2b, com um foco em pacientes com câncer ovariano re- sistente à platina e câncer de pulmão de células não pequenas não escamoso (NSCLC). A MTD é definida como a dose mais alta de XMT- 1536 que não causa toxicidades inaceitáveis definidas pelos critérios de toxicidade de limite de dose específicos de protocolo. A RP2D pode diferir da MTD e pode levar em conta medidas de tolerabilidade, far- macocinética e farmacodinâmica e eficácia de XMT-1536 com base em RECIST 1.1. Após o primeiro ciclo, os pacientes podem continuar a receber XMT-1536 até que progressão de doença provida pelo fárma- co seja bem tolerada e os pacientes continuem a derivar benefício clí- nico na opinião do Investigador. O segmento de DES do estudo utili- zou um projeto de titulação acelerada. As primeiras 3 semanas do ci- clo de tratamento constituem o período de avaliação de toxicidade limi- tante de dose (DLT). Para os primeiros dois níveis de dose, um míni- mo de 1 paciente foi tratado em cada nível de dose. Se o paciente so- frer um evento adverso tendo origem no tratamento de Grau 2 ou mai- or, mais 2 pacientes serão adicionados a esse nível de dose, e o estu-
do seguirá subsequentemente um esquema 3 + 3, como descrito abai- xo. Se o paciente não sofrer um evento relacionado ao tratamento de Grau 2 ou maior ou uma DLT durante o período de avaliação de DLT e o Comitê de Revisão de Segurança (SRC) concordar que essa era uma dose razoavelmente bem tolerada, as inscrições começarão no próximo nível de dose. Começando com o Nível de Dose 3, o estudo seguirá um esquema 3 + 3 padrão, com 3 pacientes inscritos inicial- mente em cada nível de dose. Se nenhum dos 3 pacientes sofre uma DLT durante o período de avaliação e o SRC concordar que essa era uma dose razoavelmente bem tolerada, 3 pacientes serão inscritos no próximo nível de dose. No entanto, no caso de 1 DLT1, mais 3 pacien- tes serão inscritos no mesmo nível de dosagem. Qualquer nível de do- se com 2 ou mais DLTs será considerado exceder a MTD e pacientes subsequentes serão inscritos em nível(eis) de dose menores. Após o primeiro ciclo, os pacientes podem continuar a receber XMT-1536 até progressão da doença se o fármaco for bem tolerado e os pacientes continuarem a derivar benefício clínico na opinião do investigador.
[00180] Após o término de DES, o segmento de EXP do estudo se- rá aberto em três coortes de pacientes. O coorte 1 conterá pacientes com câncer ovariano resistente à platina. O coorte 2 conterá pacientes com NSCLC não escamoso. O coorte 3 conterá pacientes com carci- noma papilífero da tireoide, carcinoma endometrial, carcinoma papilífe- ro de célula renal ou carcinoma do duto salivar.
[00181] Após uma emenda no protocolo de agosto de 2018, cada ciclo será um ciclo de dose de 4 semanas (28 dias). Os dois primeiros ciclos de tratamento de 4 semanas (56 dias) constituem o período de avaliação de toxicidade limitante de dose (DLT). Começando com essa emenda, até 10 pacientes serão inscritos para avaliação a 20,0 mg/m2 sob o novo regime de dose de ciclo de 4 semanas. Se essa dose for liberada pelo SRC, grupos de dose subsequentes seguirão um es-
quema 3 + 3 modificado. Três pacientes serão inscritos inicialmente e se questões de toxicidade surgirem, o SRC revisará todos os dados pertinentes e pode decidir adicionar mais pacientes para avaliar inte- gralmente uma dose em questão e/ou diminuir a dose. Se a dose for bem tolerada e 3 pacientes atingirem o final do Ciclo 2 sem DLTs, o SRC pode liberar essa dose e abrir a próxima dose. O período de ob- servação para DLTs é 56 dias, entre o Dia 1 até o final do Ciclo 2 que inclui as avaliações de pré-dose antes de receber a dose do Ciclo 3. Um máximo de dez pacientes será inscrito por nível de dose antes do SRM que será conduzida não mais do que 5 dias após pelo menos o sexto paciente dosado em cada nível ter completado as avaliações de 28 dias do Ciclo 2. Os dados disponíveis para os pacientes dosados em todos os anteriores serão considerados na revisão de dados para cada escalonamento de dose aplicável no SRM. Qualquer nível de do- se com 2 ou mais DLTs ocorrendo em 6 ou menos pacientes tratados será considerado exceder a MTD e pacientes subsequentes serão ins- critos em nível(eis) de dose menor(es). Após o segundo ciclo, os paci- entes podem continuar a receber XMT-1536 até progressão da doença se o fármaco for bem tolerado e os pacientes continuarem a derivar benefício clínico na opinião do investigador. Após o término de DES, o segmento de EXP do estudo será aberto.
[00182] Todos os eventos adversos serão classificados de acordo com o National Cancer Institute (NCI) Common Terminology Criteria version (CTCAE v4.03). O período de observação para DLTs é 56 di- as, entre o Dia 1 até o final do Ciclo 2 que inclui as avaliações de pré- dose antes de receber a dose do Ciclo 3. Em geral, eventos adversos de Grau ≥ 3 são DLTs com modificações para os critérios que seguem: toxicidades hematológicas neutropenia, toxicidades gastrintestinais, toxicidades hepáticas e desequilíbrios eletrolíticos. A toxicidade relaci- onada com XMT-1536 que retarda o início do Ciclo 3 em mais de 2 semanas, hospitalização para tratar uma reação relacionada com infu- são e qualquer toxicidade que leve à modificação da dose a ser admi- nistrada no Ciclo 3 também são DLTs. Amostragem sanguínea será realizada para determinar os parâmetros PK no plasma de XMT-1536, seu produto de liberação f-HPA auristatina e selecionar metabolitos. Teste para anticorpos antifármaco (ADA) e anticorpos neutralizantes (nAb) será realizado. Respostas de tumor serão avaliadas pelo Inves- tigador usando Response Evaluation Criteria in Solid Tumors (RE- CIST), versão 1.1, no final do Ciclo 2 e a cada 2 ciclos em seguida. Visitas de Estudo
[00183] Visitas de estudo ocorrerão. O último dia do ciclo atual pode ser o mesmo dia que o início do ciclo seguinte durante o estudo, con- tanto que os resultados das avaliações de segurança de Final de Ciclo sejam obtidos e revisados antes do início da dosagem no ciclo seguin- te. O Investigador pode fazer uma acomodação no programa de visita com base nas necessidades médicas de um paciente. Discutir poten- ciais alterações no programa com o Monitor Médico antes da imple- mentação de qualquer ajuste a menos que seja uma necessidade emergente. O Investigador avaliará cada paciente antes de iniciar uma dose de XMT-1536 como descrito no Programa de Avaliações. Um exame físico completo (PE) consistindo no exame da cabe- ça/ouvidos/olhos/nariz/garganta (head/ears/eyes/nose/throat - HE- ENT), tumores palpáveis, sistemas neurológico e muscular, sistemas pulmonar e cardiovascular, abdômen e extremidades inferiores. Um exame físico rápido consiste em examinar: HEENT, sistemas pulmonar e cardiovascular. Os pacientes serão avaliados quanto à recorrência ou novas e/ou piores toxicidades em cada visita. Todos os eventos ad- versos serão classificados de acordo com o National Cancer Institute (NCI) Common Terminology Criteria version (CTCAE v4.03). Número de Indivíduos
[00184] O número exato de pacientes a ser inscrito em DES não pode ser conhecido prospectivamente e é dependente de quando a MTD ou RP2D é atingida. Com base em estudos animais pré-clínicos, é razoável esperar que uma faixa de 21 a 40 pacientes seja dosada em DES. O segmento EXP do estudo é planejado tratar até 30 pacien- tes cada em 3 coortes de doença. Dadas as taxas de desistência, é razoável esperar que uma faixa de 90 a 105 pacientes seja dosada em EXP. Elegibilidade
[00185] Os pacientes que são candidatos para inscrição no estudo são avaliados quanto à elegibilidade pelo Investigador para assegurar que os critérios de inclusão e exclusão tenham sido satisfeitos e que o paciente seja elegível para participação. Tabela 1. Critérios de Inclusão para DES e EXP No. Critérios de Elegibilidade 1 Sexos masculino e feminino, idade ≥ 18 anos de idade 2 Condição de desempenho ECOG 0 ou 1 3 Doença mensurável de acordo com RECIST, versão 1.1. 4 Resolução de efeitos tóxicos agudos de terapia ou procedimen- tos cirúrgicos anteriores para ≤1 (exceto alopecia). 5 Fração de ejeção ventricular cardíaca esquerda (LVEF) ≥ 50% ou o limite inferior do normal da instituição através de varredura Echo ou MUGA 6 Função de órgão adequada como definido pelos critérios que seguem: contagem de neutrófilos absoluta (ANC) ≥ 1500 célu- las/mm3, contagem de plaquetas ≥ 100.000 células/mm3, he- moglobina ≥ 9 g/dL, INR, tempo de tromboplastina parcial ati- vada (aPTT) e tempo de protrombina (PT) todos dentro do limi- te superior do normal institucional (ULN), creatinina no soro ≤ 1,5 mg/dL ou eliminação de creatinina calculada ≥ 60 mL/min1, bilirrubina total ≤ ULN, aspartato aminotransferase (AST ou SGOT) e alanina aminotransferase (ALT ou SGPT) ≤ 1,5 vez o limite superior do
No. Critérios de Elegibilidade normal institucional (ULN), albumina ≥ 3,0 g/dL. 1Calculado através do método Cockroft e Gault. Eliminação de creatinina (mL/min) = (140-idade) x peso (kg)/72 x (creatinina no soro em mg/dL) = mL/min (para o sexo feminino, multiplicar os resulta- dos por 0,85). 7 Disponibilidade confirmada (antes do Ciclo 1, Dia 1) de blocos de tecido de tumor (fortemente recomendado) ou lâminas de tecido recém-cortadas (Vide Manual Lab) para teste de NaPi2b e avaliações exploradoras. Os espécimes de tecido devem ser enviados dentro de 45 dias após a primeira dose de fármaco de estudo. 8 Para mulheres com potencial para engravidar e homens com parceiras com potencial para engravidar, acordo para usar uma forma de contracepção hormonal altamente eficaz ou duas formas eficazes de contracepção não hormonal pelo paciente e/ou parceira, e continuar o uso de contraceptivo durante todo o tratamento de estudo e por pelo menos 6 meses após a últi- ma dose de tratamento de estudo. Os pacientes do sexo mas- culino cujas parceiras estão grávidas devem usar preservativos durante a gravidez. 9 Capaz de assinar consentimento informado
[00186] Transfusão de sangue profilática (ou componentes do san- gue) antes da dosagem inicial não pode ser usada para atender crité- rios de inscrição. Transfusão de sangue (ou componentes do sangue) para tratar anemia emergente do tratamento ou outras citopenia é permissível e deve ser registrada como uma medicação concomitante. Profilaxia de fator de crescimento não pode ser usada antes da admi- nistração de XMT-1536 em nenhum ciclo.
Tabela 2. Critérios de inclusão específicos de doença para DES No.
Critérios de Elegibilidade 1 Tumores sólidos histologicamente ou citologicamente confir- mados dos tipos especificados abaixo, com doença incurável, localmente avançada ou metastática que falhou com terapia padrão ou para a qual nenhuma opção de tratamento padrão existe: câncer ovariano resistente à platina (incluindo câncer ovariano epitelial tal como câncer ovariano seroso de grau alto, tubo falopiano e câncer peritoneal primário), NSCLC não escamoso, carcinoma papilífero da tireoide, carcinoma en- dometrial (excluindo carcinossarcoma e tumores estromais), carcinoma de papilífero de célula renal, carcinoma do duto salivar
Tabela 3: critérios de inclusão específicos de doença para seg- mento de expansão (EXP) No.
Critérios de Elegibilidade Coorte 1: câncer ovariano resistente à platina 1 Diagnóstico histológico de câncer ovariano seroso de grau alto, ovariano epitelial, tubo falopiano ou peritoneal primário, excluindo o subtipo mucinoso 2 Resistência à platina, definida como progressão de doença dentro de 6 meses do término de um regime de quimioterapia contendo platina 3 Não mais do que 3 linhas de terapia anterior Coorte 2: NSCLC não escamoso 1 Diagnóstico histológico de adenocarcinoma de NSCLC não escamoso 2 Tratamento anterior com um regime à base de platina (cispla- tina ou carboplatina) e um anticorpo monoclonal PD-1 ou PD- L1 (ou em combinação ou sequencialmente)
No.
Critérios de Elegibilidade 3 Pacientes com mutações oncogênicas conhecidas para as quais há terapias aprovadas (por exemplo, translocação de ALK, mutação de EGFR) devem ter intolerância ou progres- são de doença documentada para as terapias aprovadas pa- ra sua mutação.
Os pacientes devem ser recebido tratamen- to anterior com um regime à base de platina, mas tratamento anterior com um anticorpo monoclonal PD-1 ou PD-L1 não é necessário 4 Nenhum tratamento anterior com um agente citotóxico ou imunoterapia Coorte 3: indicações adicionais 1 Para pacientes com carcinoma papilífero da tireoide, o que segue é necessário: (a) doença progressiva, refratária a iodo radioativo, recorrente loco-regional ou metastática e (b) resis- tência ou intolerância à terapia com inibidor de cinase anteri- or (por exemplo, lenvatinibe, sorafenibe). Um paciente que é considerado inapropriado para terapia com inibidor de cinase pode ser inscrito com aprovação do Monitor Médico 2 Para pacientes com carcinoma endometrial, o que segue é necessário: (a) um diagnóstico de carcinoma endometrial epi- telial é necessário.
Tumores estromais e carcinossarcoma (tumor Mulleriano maligno misto) são excluídos e (b) um pa- ciente deve ter recebido pelo menos um regime quimiotera- pêutico anterior para câncer endometrial com carboplati- na/paclitaxel ou um regime similar.
Os pacientes devem ter recebido terapia hormonal anterior para câncer endometrial se apropriado, por exemplo, para adenocarcinoma endome- trioide positivo para receptor de hormônio, de grau baixo 3 Para pacientes com carcinoma papilífero de célula renal, o que segue são necessários: (a) confirmação local documen- tada de carcinoma de célula renal com um padrão de cresci- mento predominantemente papilífero e (b) progressão após terapia sistêmica padrão
No.
Critérios de Elegibilidade 4 Para pacientes com carcinoma do duto salivar, o que segue são necessários: (a) um diagnóstico histológico de carcinoma do duto salivar (outros subtipos de câncer de glândula salivar são excluídos) e (b) progressão após terapia sistêmica pa- drão ou uma falta de terapia eficaz disponível, na avaliação do investigador
Tabela 4: critérios de exclusão para escalonamento e expansão de dose No.
Critérios de Elegibilidade Critérios de exclusão para escalonamento e expansão de dose 1 Cirurgia de grande porte dentro de 28 dias do início do trata- mento de estudo; -ou- terapia anticâncer sistêmica dentro de menos de 28 dias ou 5 meias-vidas da terapia anterior antes do início do tratamento de estudo (14 dias ou 5 meias-vidas para terapia direcionada à molécula pequena); -ou- terapia com radiação recente com toxicidade não resolvida ou dentro de uma janela de tempo de toxicidade potencial (consulta com Monitor Médico é recomendada) 2 Metástases cerebrais que: são não tratadas, são progressivas ou necessitaram qualquer tipo de tratamento principal, por exemplo, tratamento com radiação em todo o cérebro, quimio- terapia adjuvante, faca gama, para controlar sintomas de me- tástases cerebrais dentro de 30 dias do primeiro tratamento de estudo ou qualquer história de metástase leptomeningeal 3 Infecção ativa conhecida atual com HIV, vírus da hepatite B (HBV) ou vírus da hepatite C (HCV). Ainda, sorologia negativa é requerida durante avaliação para HBV e HCV: a.
HBV: os pacientes devem ser negativos para antígeno de superfície de hepatite B (HBsAg) e anticorpo do núcleo da he- patite B (anti-HBc). Os pacientes com evidência de infecção por HBV anterior (anti-HBc positivo e HBsAg negativo) devem ser negativos para DNA de HBV para serem elegíveis b.
HCV: os pacientes devem ser negativos para anticorpo pa- ra HCV ou se o anticorpo para HCV for positivo, os pacientes
No.
Critérios de Elegibilidade devem ter um teste PCR negativo para RNA de HCV 4 Doença sistêmica severa atual, não controlada (por exemplo, doença cardiovascular, pulmonar ou metabólica clinicamente significante) ou doença intercorrente que poderia interferir com avaliações por protocolo 5 História de cirrose, fibrose hepática, varizes ou outra doença hepática clinicamente significante.
Teste de Fibroscan pode ser necessário para paciente com uma história de doença he- pática crônica, por exemplo, fígado gorduroso.
Pacientes com uma ingestão de álcool regular de mais de uma dose por dia para mulheres ou mais de duas doses por dia para homem não são elegíveis, e consumo de álcool durante participação no teste deve ser desencorajada 6 Os pacientes não podem receber fármacos associados com hepatotoxicidade concomitante com administração de XMT- 1536 ou por 21 dias após a última dose de XMT-1536. Os pa- cientes podem receber acetaminofeno/paracetamol por um tempo limitado, mas em uma dose diária total de ≤ por dia.
Uso de NSAIDs ou esteroides para tratamento de febre é en- corajado 7 Dispneia severa sob descanso devido a complicações de ma- lignidade avançada ou necessitando terapia com oxigênio su- plementar 8 Pneumonite atualmente ativa ou doença pulmonar intersticial 9 Mulheres grávidas ou amamentando 10 Diagnóstico de uma segunda malignidade que é provável re- querer tratamento anticâncer sistêmico 11 Doença da córnea ou conjuntiva ativa ou história de doença da córnea ou conjuntiva dentro de 12 meses antes da inscri- ção 12 Uso de inibidores de CYP450 fortes Critérios de Exclusão para Expansão 10 Uso de inibidores de CYP450 fortes
Uso de Fármacos Associados com Hepatotoxicidade
[00187] Fármacos categorizados pelo FDA daqueles fármacos mais prováveis causar lesão hepática induzida por fármaco (DILI) não de- vem ser usados durante a participação no estudo. Uma exceção para o uso de paracetamol (acetaminofeno) é descrita no Critério de Exclu- são 6. Se um fármaco na lista do FDA deve ser usado durante o estu- do para prestar cuidados médicos apropriados e para o qual nenhuma alternativa está disponível, o Monitor Médico precisa discutir a circuns- tância. Critérios de retirada do indivíduo
[00188] Um paciente está livre para se retirar do estudo a qualquer momento.
[00189] Será pedido aos pacientes que desejem terminar a partici- pação no estudo logo no início que continuem um acompanhamento médico geral durante pelo menos 30 dias pós-dose para propósitos de monitoramento de segurança, se possível. Entrada em cuidados palia- tivos antecipa esse pedido. Os procedimentos descritos para a visita de Final de Tratamento serão seguidos.
[00190] Em todos os casos, a razão para retirada deve ser registra- da no eCRF. Se a razão for inicialmente desconhecida, o paciente de- ve ser acompanhado para estabelecer se a razão era um evento ad- verso. Se sim, esse evento será registrado como a razão para o térmi- no do estudo. Dose e Administração
[00191] XMT-1536 é fornecido como um líquido incolor a amarelo ou marrom em um frasco de tubo de vidro de sílex redondo de 5 mL com uma rolha de borracha de clorobutila cinza com uma película de barreira coberta por uma tampa flip-off verde de alumínio de 20 mm. Cada frasco de uso único contém 2,5 mL de conjugado de anticorpo- fármaco XMT-1536 em uma concentração de 10 mg/mL e pH de 4,0 a
6,0.
[00192] Os frascos devem ser armazenados a -20º C (± 5º C) em um congelador de temperatura controlada, seguro. Frascos com XMT- 1536 são inventariados e controlados usando os procedimentos de farmácia padrão da instituição para controle de um substrato de pes- quisa. O CRA atribuído revisará condições de armazenamento e a manutenção dessas condições durante visitas locais periódicas.
[00193] Cada frasco individual de XMT-1536 será deixado descon- gelar em temperatura ambiente por até 60 minutos antes da prepara- ção da dose de um paciente. Inspecionar os frascos descongelados antes do uso: o líquido deve ser transparente a amarelo a marrom es- sencialmente sem quaisquer partículas visíveis. Os frascos não devem ser agitados ou postos à luz do sol direta. Uma vez a dose para infu- são tendo sido preparada, ela pode ser retida em temperatura ambien- te, sob condições de luz ambiente típicas, por um máximo de 4 horas antes da administração.
[00194] XMT-1536 será administrado de acordo com a área de su- perfície corporal (BSA). A dose ajustada pela BSA é calculada seguin- do a prática padrão de cada instituição. Quando possível, a Fórmula Mosteller será usada. A dose inicial foi calculada com base na altura e no peso coletado dentro de 14 dias da primeira dose (pode ser coleta- da no dia da primeira dose). Ajustes de dose com base em medições de peso subsequentes são feitos de acordo com a prática padrão de cada instituição. Se uma prática padrão não existir, medições de peso adicionais são obtidas e BSA confirmada ou alterada antes da dosa- gem no Ciclo 2 e a cada dois ciclos seguintes.
[00195] Cada dose é preparada em uma bolsa de infusão de PVC NS 0,9% de 100 mL. A preparação da dose é realizada de acordo com procedimentos do Investigational Site. Vide Pharmacy Manual para instruções detalhadas. A preparação de dose será documentada no registro de participação de estudo de cada paciente e seguirá todas as práticas institucionais incluindo checagens de garantia de qualidade.
[00196] A dose inicial planejada na parte de escalonamento de do- se do estudo é 3 mg/m2 de ADC de XMT-1536. O esquema de escalo- namento de dose é mostrado na Tabela 5 abaixo. Como de agosto de 2018, DL de 5 (30 mg/m2) tinha sido liberado pelo SRC. No entanto, com base nos dados de segurança emergentes, o SRC decidiu pro- longar o período de observação de DLT para dois ciclos de quatro se- manas (56 dias), emendar os critérios de inclusão e exclusão e adicio- nar mais pacientes em DL 4 (20 mg/m2), com a intenção de retomar o escalonamento de dose de acordo com as diretrizes de protocolo se essa dose for verificada ser tolerável. O SRC pode decidir: (1) escalo- nar a dose para o próximo nível planejado ou um nível de dose maior que é menos do que o aumento planejado com base nos dados de- monstrando tolerabilidade de fármaco. (2) Adicionar mais 3 pacientes ao nível de dose atual para avaliação adicional. (3) Descalonar para um nível de dose menor para avaliação adicional; ou um nível de dose anteriormente estipulado ou nível de dose menor novo pode ser esco- lhido com base nos dados de segurança do paciente. (4) MTD foi sa- tisfeita e nenhum escalonamento de dose adicional ocorrerá. Pelo me- nos 6 pacientes serão tratados na MTD ou RP2D antes da fase de ex- pansão do estudo ser aberta. O SRC pode decidir escalonar um au- mento menor do que o mostrado na Tabela 5, dependendo da tolerabi- lidade de um dado nível de dose e após revisão de todos os dados do paciente pertinentes para qualquer um ou todos os níveis de dose. Tabela 5. Níveis de Escalonamento de Dose Escalonamento Início 100% 100% 67% 50% 20% 20% de Dose Nível de Dose 1 2 3 4 5 6 (DL) 4A 5A 6A 7A
Escalonamento Início 100% 100% 67% 50% 20% 20% de Dose Número inicial de 1 1 3 3 3 3 3 pacientes Dose planejada, 3 6 12 20 30 40 (DL 6) 43 mg/m2 36 (DL 6A)
[00197] A dose ajustada por BSA é calculada seguindo a prática padrão de cada instituição. Quando possível, a Fórmula Mosteller é usada. A dose inicial é calculada com base na altura e peso coletados dentro de 14 dias da primeira dose e podem ser coletados no dia da primeira dose. Ajustes de dose com base em medições de peso sub- sequentes são feitos de acordo a prática padrão de cada instituição. Se uma prática padrão não existir, medições de peso adicionais são obtidas e BSA configurada ou alterada antes da dosagem no Ciclo 2 e a cada dois ciclos em seguida.
[00198] Medicações de cuidado de suporte comuns podem ser usadas para tratamento de condições agudas, concomitantes, que es- tão associadas com dosagem, por exemplo, reação de hipersensibili- dade, êmese, diarreia e febre. Tratamentos profiláticos para reações de infusão ou hipersensibilidade não são recomendados antes da pri- meira dose de qualquer paciente, mas podem ser administrados antes das segundas e/ou subsequentes doses se essas reações ocorrerem após a primeira dose. Tratamento com medicações antieméticas e an- tipiréticas pode ser indicado por vários dias após infusão, e pode ser usado antes da primeira dose se indicado pela história médica do pa- ciente. Ajustes de dose após o Ciclo 1 são permitidos sob circunstân- cias específicas.
[00199] A dose inicial para cada paciente é administrada durante 90 min. Se nenhuma reação relacionada à infusão (IRR) ocorrer, todas as doses subsequentes são administradas durante 30 a 90 minutos a cri- tério do Investigador. Tratamento de IRRs deve ser de acordo com pa-
drões institucionais ou as diretrizes de estudo.
[00200] Uma vez um paciente tendo completado o Ciclo 1 (período de avaliação de DLT), ajustes de dose podem ser feitos se um pacien- te sofrer toxicidade, mas se beneficiaria de tratamento adicional com XMT-1536, na opinião do investigador. Critérios para Dosagem Continuada
[00201] No Ciclo 2 e além, o Investigador ou designados devem re- visar as constatações clínicas e de laboratório de Final de Ciclo/e pré- dose antes de prosseguir com a administração de fármaco de estudo. Todas as enzimas do fígado devem ter se recuperado para Grau 1 ou menor, ou para a linha basal do paciente, antes de prosseguir. Dados de laboratório, particularmente testes de fígado, devem ser compara- dos com a linha basal do paciente, e retardo da dosagem (por exem- plo, por 1 semana) deve ser considerado para permitir recuperação mais completa de função hepática ou permitir resolução de outras AEs, por exemplo, náusea, vômito, anorexia ou fadiga. Redução de dose intrapaciente
[00202] Uma vez um paciente tendo completado o Ciclo 1, ajustes de dose podem ser feitos se um paciente sofrer toxicidade, mas se beneficiar de tratamento adicional com XMT-1536, na opinião do in- vestigador. Tratamento em uma dose reduzida pode começar apenas se a toxicidade observada resolver para Grau ≤ 1 ou linha basal dentro de 21 dias ou 28 dias após a toxicidade começar, e a critério do Inves- tigador após discussão com o Monitor Médico (Tabela 6).
[00203] A primeira redução de dose será para uma dose menor do que o nível de dose onde toxicidade foi observada.
[00204] A segunda redução será duas doses menores do que a do- se original na qual a toxicidade foi observada.
[00205] Se uma terceira redução de dose for necessária, o paciente será descontinuado.
Tabela 6. Redução de Dose após Término do Ciclo 1 Redução de Dose Dose1 1st Um nível de dose menor do que a dose original 2nd Dois níveis de dose menores do que a dose origi- nal 3rd Descontinuação do paciente 1 A dose reduzida não pode ser menor do que 3 mg/m2 (DL 1)
[00206] No Ciclo 2 ou ciclos subsequentes, neuropatia motora ou sensorial periférica de Grau ≥ 3 que não resolve para Grau ≤ dentro de 21 dias após ocorrência requer redução da dose ou término do trata- mento. Em geral, antes de fazer quaisquer ajustes de dose, chamar o Monitor Médico para discutir.
[00207] No Ciclo 2 e além, o Investigador ou designado deve revi- sar as constatações clínicas e de laboratório de Final de Ciclo/pré- dose antes de prosseguir com administração de fármaco de estudo. Todas as enzimas hepáticas devem ter se recuperado para o Grau 1 ou menor, ou para a linha basal do paciente, antes de prosseguir. Da- dos de laboratório, particularmente testes hepáticos, devem ser com- parados com a linha basal do paciente, e retardo de dosagem (por exemplo, por 1 semana) deve ser considerado para permitir recupera- ção mais completa de função hepática ou permitir resolução de outros AEs, por exemplo, náusea, vômito, anorexia ou fadiga. Reduções de Dose em DES e EXP Devido à Hepatotoxicidade
[00208] Pacientes em ambos DEX e EXP que sofrem transaminase hepática ou níveis de ALP de Grau ≥ 3 retornarão para o consultório, serão novamente testados dentro de 48 a 72 horas do valor do Grau inicial ≥3 e monitorados pelo menos semanalmente até que os níveis retornem para o Grau ≤ ou para a linha basal do paciente. Se o paci- ente residir uma distância significante da instalação de pesquisa de modo que o retorno é difícil, podem ser feitos arranjos para ter uma retirada de sangue local com os resultados e faixa normal local retor-
nados para o Investigador de Estudo para monitoramento.
[00209] Um paciente que sofre um aumento em transaminase hepá- tica ou ALP para grau ≥ 3 e requer mais do que 72 horas para recupe- rar para Grau ≤ 2 (ou linha basal) pode continuar com a dosagem no próximo ciclo, mas na próxima dose menor.
[00210] Se o paciente sofrer um segundo aumento em transami- nase hepática ou ALP para Grau ≥ 3 que requer mais de 72 horas para recuperar para Grau ≤ 2 (ou linha basal) após uma redução de dose anterior, ele ou ela pode continuar a dosagem no próximo ciclo, mas na próxima dose menor do que aquela na qual a segunda elevação ocorreu.
[00211] Se o paciente sofre uma terceira elevação de Grau ≥ 3 em transaminase hepática ou ALP, que requer mais de 72 horas para re- cuperar para Grau ≤ 2 (ou linha basal), após duas reduções de dose anteriores, ele ou ela será descontinuado do estudo e monitorado pelo menos semanalmente até que esses níveis retornem para o Grau ≤ 1 (ou linha basal).
[00212] A dose de XMT-1536 não será modificada para um aumen- to em transaminase hepática ou ALP para Grau ≥ 3 se menos de 72 horas forem necessárias para recuperar para Grau ≤ 2 (ou linha ba- sal).
[00213] Qualquer paciente que sofra uma transaminase hepática ou ALP de Grau 4 descontinuará do estudo e não sofrerá redução de do- se. A toxicidade de Grau 4 será monitorada pelo menos semanalmente até o retorno para Grau ≤ 1 ou linha basal.
[00214] Se ou não o limiar para redução de dose é satisfeito, qual- quer aumento em transaminase hepática ou ALP acima do Grau 1 de- ve retornar para o Grau ≤ 1 ou linha basal antes da próxima dose de fármaco de estudo. Duração de Tratamento
[00215] O tratamento continuará indefinidamente a menos que um dos fatos ocorra: progressão da doença, doença intercorrente que evi- ta administração adicional de tratamento, eventos adversos inaceitá- veis ou gravidez, não obediência do paciente ao protocolo, o paciente retira o consentimento para participação do estudo e/ou mudanças ge- rais ou específicas na condição do paciente tornam o paciente inacei- tável para tratamento adicional no julgamento do Investigador.
[00216] No entanto, tendo ocorrido progressão de doença, mas o Investigador percebendo o potencial do paciente derivar benefício da exposição continuada a XMT-1536, o Investigador tem a opção de continuar a dosagem após discussão com o Monitor Médico. Objetivos Principais
[00217] Os objetivos principais no estudo de Escalonamento de Do- se (DES) são determinar a dose tolerada máxima (MTD) e dose de Fase 2 recomendada (RP2D) de XMT-1536 administrado intraveno- samente uma vez a cada três ou quatro semanas e avaliar a seguran- ça e a tolerabilidade de XMT-1536.
[00218] Os objetivos principais no estudo de expansão são avaliar mais a segurança e tolerabilidade de XMT-1536 administrado na MTD/RP2D identificada na DES, avaliar a atividade antineoplástica preliminar de XMT-1536. Objetivos Secundários
[00219] O objetivo secundário no estudo de Escalonamento de Do- se (DES) é avaliar a atividade antineoplástica preliminar de XMT-1536.
[00220] Os objetivos secundários no DES e estudos de expansão são avaliar a farmacocinética (PK) de XMT-1536, seu produto de libe- ração, e metabolitos selecionados, avaliar o desenvolvimento de anti- corpos antifármaco para XMT-1536 e avaliar a associação de expres- são de tumor de NaPi2b e resposta de tumor objetiva a XMT-1536.
[00221] Objetivos exploratórios no DES e estudos de expansão são avaliar retrospectivamente a associação de resposta objetiva com ex- pressão de tumor de genes diferentes de NaPi2b ou outras caracterís- ticas moleculares do tumor. Medição de Eficácia
[00222] Em ambos os segmentos do estudo, avalições com critérios de varredura de tomografia computadorizada (CT) e RECIST versão
1.1 são realizadas no final do Ciclo 2 e no final de cada ciclo de nume- ração par em seguida. Os pacientes são avaliados continuamente quanto a eventos adversos, o uso de medicações concomitantes e a ocorrência de reações de infusão em qualquer ciclo. Perfis farmacoci- néticos de XMT-1536 e seleção de produtos/metabolitos de liberação e o desenvolvimento de anticorpos antifármaco são avaliados. RECIST versão 1.1 é usado para medir resposta de tumor. A taxa de resposta objetiva (ORR – taxa de resposta completa [CR] e resposta parcial [PR] e taxa de controle de doença (DCR – taxa de CR, PR e doença estável [SD]) será medida para cada coorte. Duração de resposta, so- brevivência livre de progressão (PFS) e sobrevivência geral (OS) são estimadas.
[00223] A análise principal de eficácia é realizada usando ambos os dados de DES e EXP. O ponto final primário é ORR pela revisão radio- lógica do Investigador, e é definido como a proporção de pacientes que atingiu uma PR ou CR confirmada por RECIST 1.1. Um ponto final secundário é a DCR que é definida como a proporção de pacientes que atinge uma resposta completa, resposta parcial e/ou doença está- vel de qualquer duração de acordo com RECIST 1.1. O número e a porcentagem de pacientes que atingem resposta ou benefício clínico são sumarizados e um intervalo de confiança (CI) de 95% exato é pro- vido.
[00224] Análise de outros pontos finais de eficácia incluindo dura- ção de resposta (DOR), sobrevivência livre de progressão (PFS) e so-
brevivência geral (OS) deve ser reportada, sempre que possível de acordo com critérios de resposta padrão. Estimativas Kaplan-Meier de medianas e quartis com Cis de 95% são reportadas para essa estatís- tica.
[00225] Os pontos finais de eficácia são analisados usando ambos o conjunto de análise de eficácia e o conjunto de análise avaliável de eficácia em cada coorte de tipo de câncer. Análise farmacocinética
[00226] O perfil PK do ingrediente ativo de XMT-1536, seu produto de liberação e metabolitos selecionados são determinados para cada paciente através de analise não compartimental usando software de PK padrão (por exemplo, Phoenix WinNonlin). Parâmetros de PK por paciente incluem tempo de concentração observada máxima (tmax), concentração máxima (Cmax) e área sob a curva de concentração para a última concentração mensurável (AUC0-last). Quando a fase de elimi- nação terminal é identificada, parâmetros adicionais tais como meia- vida de eliminação, liberação e volume de distribuição são determina- dos.
[00227] O manuseamento de dados de concentração e covariáveis ausentes, outliers e valores abaixo do limite de quantificação bem co- mo detalhes da modelagem para relações de dose-resposta e parâme- tro de PK-resposta são providos no plano de análise de PK. Análise Estatística
[00228] Um Plano de Análise Estatística (SAP) é escrito e contém três seções: análise de dados (1) de DES, (2) de EXP e (3) e dados combinados de DEX e EXP. Esse SAP vai se dirigir à análise de dados registrados no banco de dados clínicos bem como dados de laborató- rio e outros dados. Cada seção será finalizada antes da inscrição na- quela seção ter terminado e antes do bloqueio do banco de dados pa- ra o segmento de estudo específico, isto é, DEX ou EXP. Tabelas, lis-
tagens ou figuras selecionadas (coletivamente referidas como TLFs) após o final de DES e EXP serão geradas para propósitos de revisão, e serão indicadas no SAP, mas nenhum relatório de análise será pre- parado para esses relatórios intermediários. Um relatório de análise final será criado e incluído no Estudo Clínico final. Os TLFs e relatório de estudo clínico finais serão preparados após dados de ambas as fa- ses terem sido bloqueados. Quaisquer mudanças feitas no SAP para uma seção após inscrição nessa seção ter sido completada serão compartilhadas com os Investigadores. Quaisquer desvios da análise planejada serão descritos no relatório de estudo final.
[00229] Dados clínicos para fornecedor de PK serão transferidos para análise de PK de suporte. Um plano de análise separado se diri- gindo ao perfil de PK de XMT-1536, seu produto de liberação e meta- bolitos será preparado.
[00230] Dados de DES serão sumarizados e revisados adequada- mente com o SRC, em um mínimo, antes da dosagem de EXP come- çar. Com base na revisão de dados de DES, uma emenda de protoco- lo pode ser criada e apresentada para aprovação antes do início do segmento de EXP. Análises estatísticas serão realizadas pelo Novella Clinical uesando SAS Version 9.3 ou superior.
[00231] Variáveis contínuas, incluindo características de linha basal, serão sumarizadas ao reportar o número de observações, média, des- vio padrão, mediana, mínimo e máximo. Variáveis categóri- cas/discretas serão sumarizadas usando tabelas de frequência mos- trando o número e a porcentagem de pacientes dentro de uma catego- ria. Dados de tempo até o evento serão sumarizados usando o método Kaplan-Meier.
[00232] A menos que de outro modo indicado, estatísticas de sumá- rio serão reportadas apenas para dados observados. Dados ausentes não serão imputados. Se um valor de linha basal estiver ausente, ne-
nhuma mudança da linha basal será calculada. Linha basal é definida com a última observação variável antes da primeira administração de fármaco de estudo no Ciclo 1, Dia 1. O manuseamento de dados au- sentes será especificado no SAP junto com os métodos usados para relato dos pontos finais.
Resultados
[00233] A partir de fevereiro de 2019, vinte pacientes foram dosa- dos em 6 níveis de dose (3 mg/m2 a 40 mg/m2), ciclo de 21 dias e de- zesseis pacientes em 2 níveis de dose (20 mg/m2 a 30 mg/m2), ciclo de 28 dias. Treze de vinte pacientes completaram o período de avalia- ção de DLT de 21 dias. Dezesseis de 16 pacientes completaram o pe- ríodo de avaliação de 28 dias. Uma DLT ocorreu no paciente dosado a 40 mg/m2, no ciclo de 21 dias atribuída a fármaco de estudo e uma DLT ocorreu no paciente dosado a 30 mg/m2, ciclo de 28 dias, atribuí- da a fármaco de estudo. Dois SAEs ocorreram, os quais estavam rela- cionados ao fármaco de estudo: falência cardíaca congestiva em DL 4, 2 mg/m2, ciclo de 21 dias, e pirexia em DL 5, 30 mg/m2, ciclo de 21 di- as. Eventos adversos relacionados a tratamento (TRAEs) foram Grau 1 ou 2; os TRAEs mais comuns até agora foram anemia, artralgias, fadiga, vômito, anorexia, aumento de AST, diarreia, dispneia (não rela- cionada e improvavelmente relacionada), hipoalbuminemia (não rela- cionada ou improvavelmente relacionada), hipoxia (não relacionada), cefaleia, náusea, proteinuria e vômito. Dez pacientes tiveram exames de restadiamento pós-tratamento, com doença estável (SD) como uma melhor resposta para 9 pacientes.
[00234] A partir de agosto de 2019, cinquenta e um pacientes foram dosados nos 9 níveis de dose (3 mg/m2 a 40 mg/m2 em um regime de 21 dias (n=20) e 20 mg/m2 a 36 mg/m2 em um regime de 28 dias (n=31)). Uma DLT ocorreu em um paciente dosado em 30 mg/m2, ciclo de 28 dias, e uma DLT ocorreu em um paciente dosado em 36 mg/m2, ciclo de 28 dias. Ambas foram consideradas relacionadas a XMT-
1536.
[00235] A Tabela 7 dá a caracterização dos pacientes inscritos nos 6 níveis de dose (2 a 40 mg/m2), ciclo de 21 dias e 2 níveis de dose de 20 a 30 mg/m2), ciclo de 28 dias. Tabela 7 Nível de Dose Duração do Tipo de Tumor N Faixa de Idade Duração do dose (mg/m2) Ciclo (Dias) Anos de idade Estudo Min/Max 1 3 21 N=1 Ovariano 55 4 ciclos 2 6 21 N=1 Ovariano 54 2 ciclos 3 12 21 N=7 39 a 67 1 a 4 ciclos Ovariano-1 Médio = 54 NSCLC- 2 Mediana = 70 Endometrial- 3 Papilífero Renal- 1 4 20 21 N=6 58 a 94 1 a 10 ciclos Ovariano-2 Médio = NSCLC- 1 72 Mediana Endometrial- 1 = 70 Tubo Falopiano- 1 Duto Salivar- 1 5 30 21 N=4 63 a 68 1 a 4 ciclos Ovariano- 3 Médio = 66 NSCLC - 1 Mediana = 66 6 40 21 N=1 54 1 ciclo Ovariano Inscrição Completa 4A 20 28 N=8 47-74 1 a 6 ciclos Ovariano Médio=62 N=1 Papilífero Renal Mediana=63 5A 30 28 N=7 51-76 2 a 3 ciclos Médio=68 Mediana=71
[00236] O protocolo foi emendado em agosto de 2018. O ciclo de 21 dias foi prolongado para 28 dias e o período de observação para avaliação de DLT foi prolongado para incluir dois ciclos de 28 dias. Es-
se é o período após o qual o Comitê de Revisão de Segurança avalia as respostas do paciente para XMT-1536 e decide se escalonamento de dose deve ocorrer. A Tabela 8 é um sumário dos pacientes dosa- dos até fevereiro de 2019. Tabela 8 Nível de Dose (DL) Regime de Dosagem Número de Pacientes DL 1, 3 mg/m2 Ciclo de 21 dias, período de ob- 1 servação de DLT ciclo 1 DL 2, 6 mg/m2 Ciclo de 21 dias, período de ob- 1 servação de DLT ciclo 1 DL 3, 12 mg/m2 Ciclo de 21 dias, período de ob- 7 servação de DLT ciclo 1 DL 4, 20 mg/m2 Ciclo de 21 dias, período de ob- 6 servação de DLT ciclo 1 DL 5, 30 mg/m2 Ciclo de 21 dias, período de ob- 4 servação de DLT ciclo 1 DL 6, 40 mg/m2 Ciclo de 21 dias, período de ob- 1 servação de DLT ciclo 1 DL 4A, 20 mg/m2 Ciclo de 28 dias, período de ob- 9 servação de DLT ciclo 2 DL 5A, 30 mg/m2 Ciclo de 28 dias, período de ob- 7 servação de DLT ciclo 2
[00237] A Figura 1 é um gráfico do tipo "swimmers" que sumariza os detalhes para o tempo de estudo para vinte pacientes em DL6, ciclo de 21 dias (n=19), e quatro pacientes dosados no ciclo de 28 dias (n=4). O gráfico mapeia os pacientes através de nível de dose e tipo de tumor no eixo y, contra tempo de estudo de fármaco no eixo x. O eixo x é organizado por intervalos de tempo semanal. Em doses meno- res, a maioria dos pacientes saiu do estudo devido à doença progres- siva, mas começando em DL4, a maior parte dos pacientes tinha do- ença estável.
[00238] A Figura 2 é um gráfico do tipo "cascata" que mostra a me-
lhor resposta pelos critérios RECIST para os pacientes dosados no ciclo de 21 dias e que tiveram pelo menos uma varredura até agora. O eixo y mostra mudança em tamanho de tumor em porcentagem. O ei- xo x organiza a resposta pelo nível de dose. Embora o número de pa- cientes em cada dose seja pequeno, parece ser uma resposta à dose. Começando em DL 5, dois pacientes em curso atingiram remissão quase parcial (definida como maior do que ou igual a uma redução de 30% em tamanho de tumor a parti da linha basal).
[00239] A Figura 3 mostra a melhor resposta geral para 11 pacien- tes bem como o H-score e níveis de CA-125 para os pacientes com câncer ovariano dosados no ciclo de 21 dias.
[00240] A Figura 4 é um gráfico do tipo "cascata" que mostra a me- lhor resposta através dos critérios RECIST para os pacientes dosados no ciclo de 21 dias e no ciclo de 28 dias e que tiveram pelo menos uma varredura até agora. O eixo y mostra mudança em tamanho de tumor através de porcentagem. O eixo x organiza a resposta pelo nível de dose. Embora o número de pacientes em cada dose seja pequeno, parece haver uma resposta à dose. Começando em DL 5, dois pacien- tes atingiram remissão quase parcial (definida como maior do que ou igual a 30% de redução em tamanho de tumor a partir da linha basal). Em DL 4A, um paciente atingiu remissão parcial.
[00241] A Figura 5 é um gráfico do tipo "swimmer" que sumariza os detalhes para o tempo de estudo para pacientes em DL 6, ciclo de 21 dias (n=20) e pacientes DL 4A e DL 5A dosados no ciclo de 28 dias (n=16). O gráfico mapeia pacientes através de nível de dose e tipo de tumor no eixo y, contra tempo em fármaco de estudo no eixo x. O eixo x é organizado por intervalos de tempo semanal. Em doses menores a maioria dos pacientes saiu do estudo devido à doença progressiva, mas iniciando em DL4, a maioria dos pacientes tinha doença estável.
[00242] A partir de 10 de maio de 2019, trinta e sete pacientes fo-
ram dosados em 6 níveis de dose (3 mg/m2 a 40 mg/m2), ciclo de 21 dias e dezessete pacientes em 2 níveis de dose (20 mg/m2 a 30 mg/m2), ciclo de 28 dias. A Tabela 9 sumariza as características do paciente. O tratamento foi bem tolerado com a maior parte dos even- tos adversos sendo Grau 1 ou 2 e nenhum TRAE Grau 4 ou 5 sendo reportado. Taxa baixa de toxicidades frequentemente associadas com agentes de direcionamento a microtúbulo ou ADCs tais como, por exemplo, neutropenia, toxicidades oculares ou neuropatia periférica, foi observada.
[00243] A Tabela 10 sumariza o TRAE em ≥10% dos pacientes. Treze pacientes (33%) com eventos adversos sérios (SAE) foram re- portados. Dois SAEs relacionados a tratamento possíveis foram pirexia Grau 2 em DL5 (30 mg/m2) e congestão de insuficiente cardíaca Grau 3 em DL4 (20 mg/m2). Dezessete SAEs não relacionados ou improva- velmente relacionados a tratamento ocorreram em 11 pacientes: obs- trução intestinal/intestino delgado (3), progressão de doença (2), hipo- xia (2), efusão pleural (2), dor abdominal, anemia de persa de sangue aguda, celulite estafilocócica, acidente cerebrovascular, anemia he- morrágica, ascite maligno, efusão pericardial, hematoma subdural e hemorragia vaginal. Duas toxicidades limitantes de dose foram repor- tadas em DL 5A (30 mg/m2) e DL 6 (40 mg/m2). Em DL 5A, AST Grau 3 foi elevado no ciclo 1, dia 8 e retornou para o Grau 2 dentro de 7 di- as e para Grau 1 dentro de 13 dias. A elevação de AST foi acompa- nhada por elevação de fosfatase alcalina de Grau 1, mas nenhuma elevação de ALT ou bilirrubina foi reportada. Como DL6, AST Grau 3 foi elevada no ciclo 1, dia 8 e retornou para Grau 1 dentro de 21 dias. A elevação de AST foi acompanhada por elevação de ALT Grau 2 que resolveu para Grau 1 dentro de 8 dias e elevação de fosfatase alcalina Grau 1, mas nenhuma elevação de bilirrubina foi relatada.
Tabela 9 Características do Paciente (N=37) Idade (anos) Mediana (faixa) 64 (39-93) Sexo – N (%) Feminino 32 (86) Masculino 5 (14) Condição de desempe- 0 11 (30) nho ECOG– N (%) 1 26 (70) Tipo de Tumor – N (%) Ovariano, tubo falopia- 22 (59) no ou NSCLC peritone- al primário 4 (11) Endometrial 8 (22) Papilífero renal 2 (5) Duto Salivar 1 (3) Linhas anteriores de Mediana (faixa) 4 (1-13) terapia para doença metastática Linhas anteriores de Mediana (faixa) 5 (1-11) terapia, apenas câncer ovariano (N=22)
Tabela 10 Termo Preferido Grau 1 Grau 2 Grau 3 Total Náusea 12 (32) 2 (5) 0 14 (38) Fadiga 4 (11) 7 (19) 0 11 (30) Cefaleia 5 (14) 5 (14) 0 10 (27) Aspartato aminotransfera- 3 (8) 2 (5) 4 (11) 9 (24) se (AST) aumentada Apetite menor 1 (3) 6 (16) 0 7 (19) Fosfatase alcalina no san- 6 (16) 0 0 6 (16) gue aumentada Vômito 4 (11) 1 (3) 0 5 (14) Gama-glutamiltransferase 3 (8) 1 (3) 0 4 (11) (GGT) aumentada Mialgia 3 (8) 1 (3) 0 4 (11) Pirexia 3 (8) 1 (3) 0 4 (10)
[00244] O perfil PK no plasma para os analitos (anticorpo total; fár- maco conjugado (AF-HPA); fármaco livre (AF-HPA) e o metabolito de fármaco auristatina F (AF) foi determinado em amostras de sangue de 30 pacientes (3 mg/m2, n=1, 6 mg/m2, n=1; 12 mg/m2, n=7; 20 mg/m2, n=15; 30 mg/m2, n=5; 40 mg/m2, n=1). Os resultados normalizados pa- ra dose mostraram que a exposição aumentou com doses crescentes e foi quase proporcional à dose. As características PK estão de acordo com aquelas reportadas para outros conjugados de anticorpo-fármaco aprovados ou aqueles atualmente em desenvolvimento clínico. Houve exposição sistêmica baixa de fármaco livre (AF-HPA) ou seu metaboli- to (AF) comparado com aquele do fármaco conjugado. Ainda, não houve nenhum acúmulo de fármaco livre ou seu metabolito após ad- ministração de doses múltiplas.
[00245] Lâmina cortadas ou blocos de tecido inteiros de tumores de paciente, se disponíveis, foram apresentados para análise de expres- são de IHC. Imunoistoquímica foi estabelecida usando uma plataforma TechMate 500 ou TechMate 1000 (BioTek Solutions/Ventana medical Systems), onde várias condições de recuperação de antígeno e titula- ções de anticorpo primário foram testadas para desenvolver um proto- colo de rendimento maior. Foi selecionado um protocolo com base em tingimento de material controle e tingimento de material pré-clínico com resposta conhecida a tratamento ADC. Em suma, para o protoco- lo estabelecido, seções de 4 μm foram cortadas, tiveram a cera retira- da e reidratadas através de xileno e uma série de álcoois. As lâminas foram recuperadas com antígeno em um vaporizador padrão usando solução de recuperação BioGenex AR-10. Na plataforma TechMat, recuperação adicional foi realizada com Proteinase K (DAKO). Se- guindo bloqueio de soro: o anticorpo primário (anti-NaPi2b/MERS67) foi aplicado por 30 minutos em temperatura ambiente, então bloqueio da peroxidase endógena e detecção baseada em polímero não biotina
(sistema de detecção Polink-2 Plus de coelho, GBI) foram usados e finalmente um contratingimento com hematoxilina breve.
[00246] Tingimento de membrana de tumor foi avaliado através de leitura manual em um microscópio de luz usando um método "H- score". Uma lâmina tingida com hematoxilina e eosina bem como uma lâmina tingida com controle de isotipo IgG de coelho foram avaliadas como parte do processo de pontuação. O mesmo método de pontua- ção foi usado para todos os tipos de tumor avaliados. O H-score incor- pora intensidade de tingimento (determinado através de aumento da intensidade de 0 para 3+) bem como células percentuais positivas de- tectadas na membrana de célula de tumor. H-Score = (% em <1+ X 0) + ((% a 1+)X 1) +(( % a 2+) X 2) + ((%3+) X3). Espécimes hipocelula- res ou aqueles onde o tumor primário não foi representado no espéci- me apresentado não são mostrados.
[00247] A Figura 6 mostra a expressão da proteína NaPi2b em 34 tipos de tumor de paciente, por exemplo, ovariano, NSCLC, endome- trial, papilífero renal e do duto salivar) em que os tipos de tumor do tu- bo falopiano e peritoneal primário são combinados com os tipos de tumor ovariano. Os eixos y são o H-score na faixa de 0-300 para o número de células de tumor positivas e intensidade de tingimento em ensaio IHC de NaPi2b. Expressão de proteína NaPi2b detectável foi observada em todas as amostras de adenocarcinoma ovariano e pul- monar.
[00248] A Figura 7 é um gráfico do tipo "swimmer" que sumariza os detalhes para o tempo de estudo para pacientes em DL6, ciclo de 21 dias (n=20) e pacientes DL 4A e DL 5A dosados no ciclo de 28 dias (n=17). O gráfico mapeia pacientes através de nível de dose e tipo de tumor no eixo y, contra tempo em fármaco de estudo no eixo x. O eixo x é organizado em intervalos de tempo semanal. Nas doses menores, a maioria dos pacientes desistiu do estudo devido à doença progressi-
va, mas começando em DL4, a maioria dos pacientes tinha doença estável.
[00249] A Tabela 11 sumariza a razão para descontinuação de par- ticipação no estudo através dos níveis de dose. A Tabela 12 dá a res- posta de resultado para a população avaliável. Com base em respos- tas objetivas e duração de tratamento, atividade clínica foi observada nas doses de 20 mg/m2 ou maior. Tabela 11 DL1 DL2 DL3 DL4 & DL5 & DL6 Total 3 mg/m 2 6 12 4A 5A 40 N=34b n=1 mg/m2 mg/m2 20 30 mg/m2 n=1 n=7 mg/m2 mg/m2 n=1 n=13 n=11 Doença progres- 1 1 3 7 6 18 siva de acordo (53%) com RECIST Progressão Clí- 4 2 3 9 (26%) nicaa Escolha do Pa- 2 1 1 4 (12%) ciente Escolha do Mé- 2 1 3 (9%) dico a Morte em 3 de 10 pacientes, nenhuma relacionada a XMT-1536 b 3 pacientes continuaram Tabela 12 Resultado Todos Todos OC NSCLC OC + OC Câncer NSCLC ≥20mg/m ≥20 mg/m2 2 NSCLC ≥30mg/m2 Ovariano ≥20 mg/m2 (OC) N 19 3 16 2 18 7 PR* 3 (16%) 0 (0%) 3 (19%) 0 (0%) 3 (17%) 2 (28%) * SD 8 (42%) 2 (67%) 6 (38%) 2 (100%) 8 (44%) 3 (43%) DCR (PR + 11 (58%) 2 (67%) 9 (57%) 2 (100%) 11 (61%) 5 (71%) SD)
Resultado Todos Todos OC NSCLC OC + OC Câncer NSCLC ≥20mg/m ≥20 mg/m2 2 NSCLC ≥30mg/m2 Ovariano ≥20 mg/m2 (OC) Duração do 8 (42%) 1 (33%) 9 (57%) 1 (50%) 10 (56%) 3 (43%) tratamento >16 semanas PD* 8 (42%) 1 (33%) 7 (43%) 0 (0%) 7 (39%) 2 (28%) *Conforme medido por RECIST, versão 1.1
[00250] Uma mulher de 70 anos de idade com câncer ovariano se- roso de grau alto resistente à platina e 11 linhas de terapia anteriores foi tratada em DL4A (20 mg/m2). Lesões-alvo de metástases periféri- cas e metástases abdominais médias, 52 e 42 mm, respectivamente, diminuem 40% em diâmetro no final do Ciclo 2 (ciclos de 4 semanas) e 75% no final do Ciclo 3. Respostas objetivas foram observadas em do- ses de 20 mg/m2 e maior. Em pacientes com câncer ovariano e ade- nocarcinoma de pulmão tratados em ≥20 mg/m2 (N=18), 3 (17%) PRs e 8 (44%) SDs foram observadas (ORR 17%, SD 44%, DCR 61%), com duração de tratamento de >16 semanas em 9 pacientes (50%) em doses de 20 mg/m2 e maior (n=18).
[00251] A Tabela 13 dá a caracterização dos pacientes inscritos em 7 níveis de dose (2 a 4 mg/m2), ciclo de 21 dias e 3 níveis de dose 20 a 36 mg/m2), ciclo de 28 dias de agosto de 2019. Tabela 13 Nível de Dose Durações Tipos de Tumor Faixa de Idade Duração do Dose (mg/m2) do Ciclo N Anos de idade Estudo (Dias) Min/Max 1 3 21 N=1 55 4 ciclos Ovariano 2 6 21 N=1 54 2 ciclos Ovariano 3 12 21 N=7 39 a 67 1 a 4 ciclos Ovarian-1 Média = 54 NSCLC- 2 Mediana = 70 Endometrial- 3 Papilífero Renal- 1
Nível de Dose Durações Tipos de Tumor Faixa de Idade Duração do Dose (mg/m2) do Ciclo N Anos de idade Estudo (Dias) Min/Max 4 20 21 N=6 58 a 94 1 a 10 ciclos Ovariano-2 Média = 72 NSCLC- 1 Mediana = 70 Endometrial- 1 Tubo Falopiano- 1 Duto Salivar- 1 5 30 21 N=4 63 a 68 1 a 4 ciclos Ovariano- 3 Média = 66 NSCLC - 1 Mediana = 66 6 40 21 N=1 54 1 ciclo Ovariano Inscrição Completa 4A 20 28 N=8 47-74 1 a 12 ciclos Ovariano Média=62 N=1 Papilífero Renal Mediana=63 5A 30 28 N=8 51-76 2 a 6 ciclos Ovariano - 4 Média=68 Endometrial - 4 Mediana=71 5A 30 28 N=7 51-85 2 ciclos Adicional Ovariano - 6 Média=68 NSCLC - 1 Mediana=71 6A 28 N=7 47-63 2 ciclos Ovariano - 5 Média=54 NSCLC - 2 Mediana=56
[00252] O protocolo foi emendado em julho de 2019. Critérios de elegibilidade para inscrição de pacientes com câncer ovariano e paci- entes com câncer de pulmão de células não pequenas foram adicio- nados. A Tabela 14 é um sumário dos pacientes dosados até agosto de 2019. Tabela 14 Nível de Dose (DL) Regime de Dosagem Número de Pacientes DL 1, 3 mg/m2 ciclo de 21 dias, período de ob- 1 servação de DLT ciclo 1 DL 2, 6 mg/m2 ciclo de 21 dias, período de ob- 1 servação de DLT ciclo 1
Nível de Dose (DL) Regime de Dosagem Número de Pacientes DL 3, 12 mg/m2 ciclo de 21 dias, período de ob- 7 servação de DLT ciclo 1 DL 4, 20 mg/m2 ciclo de 21 dias, período de ob- 6 servação de DLT ciclo 1 DL 5, 30 mg/m2 ciclo de 21 dias, período de ob- 4 servação de DLT ciclo 1 DL 6, 40 mg/m2 ciclo de 21 dias, período de ob- 1 servação de DLT ciclo 1 DL 4A, 20 mg/m2 ciclo de 28 dias, período de ob- 9 servação de DLT ciclo 2 DL 5A, 30 mg/m2 ciclo de 28 dias, período de ob- 8 servação de DLT ciclo 2 DL 5A, 30 mg/m2 ciclo de 28 dias, período de ob- 7 adicional servação de DLT ciclo 2 DL 6A, 36 mg/m2 ciclo de 28 dias, período de ob- 7 servação de DLT ciclo 2
[00253] A Figura 8 é um gráfico do tipo "swimmer" que sumariza os detalhes para o tempo de estudo para pacientes em 7 níveis de dose (2 a 40 mg/m2), ciclo de 21 dias e 3 níveis de dose (20 a 36 mg/m2), ciclo de 28 dias. O gráfico mapeia pacientes através do nível de dose e tipo de tumor no eixo y, contra tempo em fármaco de estudo no eixo x. O eixo x é organizado por intervalos de tempo semanais. Em doses menores a maioria dos pacientes saiu do estudo devido à doença pro- gressiva, mas começando em DL4, a maioria dos pacientes tinha do- ença estável. Duração máxima de estudo para um paciente que conti- nua no tratamento é de 50 semanas. Conclusões
[00254] XMT-1536 foi bem tolerado até o nível de dose de 30 mg/m2 ou 36 mg/m2 ou 43 mg/m2 com primeiros sinais de atividade an- titumor. Nem MTD nem RP2D foi identificada. O escalonamento de dose continua em pacientes com câncer ovariano expressando
NaPi2b, NSCLC, câncer papilífero da tireoide, câncer endometrial, câncer papilífero de célula renal e câncer do duto salivar.
OUTRAS MODALIDADES
[00255] Embora a invenção tenha sido descrita em conjunto com a sua descrição detalhada, a descrição acima pretende ilustrar e não limitar o escopo da invenção, que é definido pelo escopo das reivindi- cações apensas. Outros aspectos, vantagens e modificações estão dentro do escopo das reivindicações que seguem.

Claims (40)

REIVINDICAÇÕES
1. Método de tratamento de um tumor expressando NaPi2b em um indivíduo com necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo um conjugado de anticorpo-fármaco e polímero direcionado a NaPi2b através de in- fusão em uma dose de cerca de 10 mg/m2 a 43 mg/m2 no primeiro dia de tratamento e a cada quatro semanas subsequentemente, em que o conjugado compreende um anticorpo para NaPi2b compreendendo: uma CDRH1 compreendendo a sequência de aminoácido GYTFTGYNIH (SEQ ID NO: 5); uma CDRH2 compreen- dendo a sequência de aminoácido AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO: 6); uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácido GE- TARATFAY (SEQ ID NO: 7); uma CDRL1 compreendendo a sequên- cia de aminoácido SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8); uma CDRL2 com- preendendo a sequência de aminoácido YTSSLYS (SEQ ID NO: 9); e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácido QQYSKL- PLT (SEQ ID NO: 10); e um conjugado de polímero-fármaco de Fórmula A:
O O O O O O O O O O m 3b m m1 m3a m2
OH O OH OH OH O OH O
OH O
O O O
O
HN HN HN
HN
O
O O HN
HN O
HO HN O
O
NH
NH
O O O NH MeO Me Anticorpo NaPi2bparaAntibody NaPi2b O OMe O O
O N N
S O N N N O O Xa H O H Me
O O
N HN
N HN O O Xb
O O m5 em que: o polímero compreende poli(1-hidroximetiletileno hidroxime- til-formal) (PHF) tendo um peso molecular variando de a partir de cer- ca de 5 kDa a cerca de 10 kDa; m é um inteiro de a partir de 20 a 75,
m1 é um inteiro de a partir de cerca de 5 a cerca de 35, m2 é um inteiro de a partir de cerca de 3 a cerca de 10, m3a é um inteiro de a partir de 0 a cerca de 4, m3b é um inteiro de a partir de 1 a cerca de 5, a soma de m, m1, m2, m3a e m3b varia de a partir de cerca de 40 a cerca de 75, e m5 é um inteiro de a partir de cerca de 2 a cerca de 5.
2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo para NaPi2b compreende uma cadeia pe- sada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 e uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 4.
3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo para NaPi2b compreende uma cadeia pe- sada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 2.
4. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é cerca de 11,5 mg/m2 a cerca de 12,5 mg/m2.
5. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é cerca de 12 mg/m2.
6. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é cerca de 19,5 mg/m2 a cerca de 20,5 mg/m2.
7. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é cerca de 20 mg/m2.
8. Método de acordo com qualquer uma das reivindica-
ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é cerca de 24,5 mg/m2 a cerca de 26,5 mg/m2.
9. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é cerca de 25 mg/m2.
10. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é cerca de 29,5 mg/m2 a cerca de 31,5 mg/m2.
11. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é cerca de 30 mg/m2.
12. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é cerca de 32,5 mg/m2 a cerca de 33,5 mg/m2.
13. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é cerca de 33 mg/m2.
14. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é cerca de 35,5 mg/m2 a cerca de 36,5 mg/m2.
15. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é cerca de 36 mg/m2.
16. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é cerca de 42,5 mg/m2 a cerca de 43,5 mg/m2.
17. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é cerca de 43 mg/m2.
18. Método de acordo com qualquer uma das reivindica-
ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é cerca de 10 mg/m2, 15 mg/m2, 20 mg/m2, 25 mg/m2, 30 mg/m2, 33 mg/m2, 36 mg/m2, 43 mg/m2 ou 45 mg/m2.
19. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções precedentes, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um ser humano.
20. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções precedentes, caracterizado pelo fato de que o tumor é seleciona- do do grupo consistindo em câncer ovariano, câncer de pulmão de cé- lulas não pequenas (NSCLC), câncer papilífero da tireoide, câncer en- dometrial, câncer papilífero de células renais, colangiocarcinoma, cân- cer do duto salivar, câncer renal de células claras, câncer de mama, câncer de rim ou câncer cervical.
21. Método de acordo com a reivindicação 20, caracteriza- do pelo fato de que o câncer ovariano é câncer ovariano epitelial, cân- cer do tubo falopiano ou câncer peritoneal primário.
22. Método de acordo com a reivindicação 21, caracteriza- do pelo fato de que o câncer ovariano epitelial é subtipificado como câncer ovarino seroso de grau alto, câncer ovariano de grau baixo ou câncer ovarino de células claras.
23. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 16 a 22, caracterizado pelo fato de que o câncer ovariano é resis- tente à platina e o indivíduo não recebeu mais do que 3 linhas de tera- pia anterior.
24. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 16 a 23, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem câncer ovariano e não recebeu mais do que 3 linhas de terapia anterior.
25. Método de acordo com a reivindicação 20, caracteriza- do pelo fato de que o câncer NSCLC é não escamoso.
26. Método de acordo com a reivindicação 20, caracteriza-
do pelo fato de que o câncer NSCLC é subtipificado como adenocarci- noma.
27. Método de acordo com a reivindicação 25 ou 26, carac- terizado pelo fato de que o indivíduo tem NSCLC e recebeu tratamento anterior com um regime à base de platina e um anticorpo monoclonal PD-1 ou PD-L1.
28. Método de acordo com a reivindicação 27, caracteriza- do pelo fato de que o regime à base de platina e anticorpo monoclonal PD-1 ou PD-L1 são administrados em combinação.
29. Método de acordo com a reivindicação 27, caracteriza- do pelo fato de que o regime à base de platina e anticorpo monoclonal PD-1 ou PD-L1 são administrados sequencialmente.
30. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 27 a 29, caracterizado pelo fato de que o regime à base de plati- na é cisplatina ou carboplatina.
31. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 27 a 30, caracterizado pelo fato de que o indivíduo não recebeu nenhum tratamento com um agente citotóxico ou não recebeu nenhum tratamento de imunoterapia.
32. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 27 a 31, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem intolerân- cia ou progressão de doença documentada com mutações oncogêni- cas conhecidas para as quais há terapias aprovadas.
33. Método de acordo com a reivindicação 20, caracteriza- do pelo fato de que o câncer papilífero da tireoide é doença progressi- va, refratária a iodo radioativo, recorrente ou metastática logo-regional.
34. Método de acordo com a reivindicação 33, caracteriza- do pelo fato de que o indivíduo tem câncer papilífero da tireoide e é resistente ou intolerante à terapia com inibidor de cinase.
35. Método de acordo com a reivindicação 20, caracteriza-
do pelo fato de que o câncer endometrial é câncer endometrial epiteli- al.
36. Método de acordo com a reivindicação 20 ou 35, carac- terizado pelo fato de que o câncer endometrial não é um tumor estro- mal ou um carcinossarcoma.
37. Método de acordo com a reivindicação 20, 35 ou 36, ca- racterizado pelo fato de que o indivíduo tem câncer endometrial e re- cebeu tratamento anterior com uma carboplatina/paclitaxel ou um re- gime similar.
38. Método de acordo com a reivindicação 20, 35 ou 36, ca- racterizado pelo fato de que o indivíduo tem câncer endometrial e re- cebeu tratamento anterior para adenocarcinoma endometrioide positi- vo para receptor de hormônio, de baixo grau.
39. Método de acordo com a reivindicação 20, caracteriza- do pelo fato de que o câncer papilífero de células renais tem um pa- drão de crescimento predominantemente papilífero.
40. Método de acordo com a reivindicação 20, caracteriza- do pelo fato de que o câncer tem um diagnóstico histológico de câncer do duto salivar que progrediu após terapia sistêmica padrão.
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