BR112020026798A2 - Composições e métodos para o tratamento de doenças ou condições relacionadas com o inflamassoma - Google Patents

Composições e métodos para o tratamento de doenças ou condições relacionadas com o inflamassoma Download PDF

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W. Dalton Dietrich
Juan Pablo De Rivero Vaccari
Helen M. Bramlett
Roberta BRAMBILLA
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Abstract

"composições e métodos para o tratamento de doenças ou condições relacionadas com o inflamassoma". as composições e os métodos aqui descritos incluem agentes que inibem a sinalização do inflamassoma no mamífero tais como anticorpos direcionados contra componentes do inflamassoma utilizados isoladamente ou em combinação com inibidor(es) da absorção de vesículas extracelulares. também são aqui descritos composições e métodos de uso das mesmas para o tratamento de doenças ou condições relacionadas com o inflamassoma.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COM-
POSIÇÕES E MÉTODOS PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS OU CONDIÇÕES RELACIONADAS COM O INFLAMASSOMA". REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS RELACIONADOS
[0001] Este pedido reivindica a prioridade do Pedido U.S. No. de Série 16/026.482, depositado em 3 de julho de 2018, que é no presen- te documento incorporado por referência em sua totalidade para todos os propósitos.
DECLARAÇÃO DE PESQUISA PATROCINADA DE MODO FEDERAL
[0002] Esta invenção foi constituída com o apoio do governo dos U.S. sob a concessão número 4R42BS086274-02 concedida pelo Na- tional Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS), assim como a concessão número 5R42NS086274-03 concedida pelo Natio- nal Institute of Health. O governo dos U.S. possui certos direitos sobre a invenção. DESCRIÇÃO DO ARQUIVO DE TEXTO ENCAMINHADO ELETRO-
NICAMENTE
[0003] O conteúdo do arquivo de texto encaminhado eletronica- mente em anexo é no presente documento incorporado por referência na sua totalidade: Uma cópia de formato legível por computador da Listagem de Sequências (nome de arquivo: UN- MI_010_02WO_SeqList_ST25.txt, data de registro: 3 de julho de 2019, tamanho de arquivo ~19,5 kilobytes).
CAMPO
[0004] A invenção refere-se de uma forma geral aos campos da imunologia e da medicina. Mais particularmente, a invenção se refere às composições e métodos para modular a atividade de ASC (proteína tipo Spec associada a apoptose contendo um Domínio de Ativação e Recrutamento da Caspase (ASC), e atividade do inflamassoma Ausen- te no Melanoma 2 (AIM2) no Sistema Nervoso Central (CNS) e/ou pulmões de um mamífero como tratamentos para reduzir a inflamação em resposta a lesões ou condições que produzem inflamação no CNS e/ou pulmões. A invenção também se refere a anticorpos monoclonais ou seus fragmentos que se ligam especificamente ao ASC.
ANTECEDENTES
[0005] Lesão cerebral traumática grave (TBI) é uma grande preo- cupação de saúde pública e é uma das principais causas de mortali- dade e morbidade em todo o mundo (Summers, C.R. et al., (2009). Traumatic brain injury in the United States: an epidemiologic overview. Mt Sinai J Med 76, 105-110). Além de lesão direta ao cérebro, a TBI pode levar a complicações em outros órgãos, tais como os pulmões. A lesão pulmonar aguda (ALI; 2) é um problema cardiopulmonar comum após trauma e está associada a uma taxa de mortalidade hospitalar de até 40% (Rincon F. et al., (2012). Impact of acute lung injury and acute respiratory distress syndrome after traumatic brain injury in the United States. Neurosurgery 71, 795-803). Os pacientes com TBI, em particu- lar, são suscetíveis a desenvolver ALI, com alguns estudos relatando uma incidência de até 30% (Nicolls, M.R. et al., (2014). Traumatic brain injury: lungs in a RAGE. Sci Transl Med 6, 252fs234). Estudos recentes mostraram que fatores inflamatórios sistêmicos podem levar à disfunção pulmonar e lesão pulmonar após a TBI (Rincon F. et al., (2012). Impact of acute lung injury and acute respiratory distress syn- drome after traumatic brain injury in the United States. Neurosurgery 71, 795-803), mas o mecanismo molecular preciso subjacente à lesão pulmonar induzida por TBI permanece mal definido.
[0006] Uma inundação de mediadores inflamatórios secretados, incluindo citocinas, quimiocinas e padrões moleculares associados a danos (DAMPs) liberados por células lesadas contribuem para a infla- mação do cérebro e afetam órgãos distais, tais como os pulmões (Ni- colls, M.R. et al., (2014). Traumatic brain injury: lungs in a RAGE. Sci
Transl Med 6, 252fs234). Um dos DAMPs mais amplamente estudados é o grupo de alta mobilidade box-1 (HMGB1), que pode servir como um mediador precoce da inflamação em vários estados patogênicos, incluindo a TBI (Andersson U. et al., (2011). Introduction: HMGB1 in inflammation and innate immunity. J Intern Med 270, 296-300). Um es- tudo mais recente mostrou que o HMGB1 pode estar envolvido no me- canismo de disfunção pulmonar induzida por TBI (Weber et al., (2014). The HMGB1-RAGE axis mediates traumatic brain injury-induced pulmonary dysfunction in lung transplantation. Sci Transl Med 6, 252ra124). A liberação do HMGB1 pode ser regulada pelo inflamas- soma, um complexo de múltiplas proteínas envolvido na ativação da caspase-1 e no processamento de IL-1β e IL-18 após a TBI (Lu et al. (2012). Novel role of PKR in inflammasome activation and HMGB1 re- lease. Nature 488, 670-674).
[0007] Uma variedade de explicações foi apresentada para expli- car os patomecanismos de complicações pulmonares após a TBI, in- cluindo aumento da permeabilidade vascular levando a vazamento ca- pilar e infiltração de detritos protéicos (Ware et al., (2000). The Acute Respiratory Distress Syndrome. New England Journal of Medicine 342, 1334-1349). As vesículas extracelulares (EV) são vesículas contidas na membrana que desempenham um papel na comunicação célula a célula (Yanez-Mo, M. et al., (2015). Biological properties of extracellu- lar vesicles and their physiological functions. J Extracell Vesicles 4, 27066) e foram implicados em desempenhar um papel no desenvolvi- mento de ALI em um modelo de murino induzido por LPS. Além disso, foi demonstrado que a EV pode transportar citocinas bioativas tais co- mo IL-1β e proteínas de inflamassoma (Qu, Y. et al., (2007). Nonclas- sical IL-1 beta secretion stimulated by P2X7 receptors is dependent on inflammasome activation and correlated with exosome release in mu- rine macrophages. J Immunol 179, 1913-1925) (de Rivero Vaccari, J.P.
et al., (2015). Exosome-mediated inflammasome signaling after central nervous system injury. J Neurochem), e pode desencadear uma res- posta imunológica e amplificar a inflamação por meio de sua carga nas células adjacentes e circundantes. No entanto, não se sabe se a sina- lização do inflamassoma mediada por EV pode contribuir para o pato- mecanismo da ALI induzida por TBI. Além disso, também não se sabe se os patomecanismos da ALI induzida por TBI são compartilhados por outras condições que produzem inflamação pulmonar. Além disso, há uma escassez de medicamentos aprovados pela Federal Drug Ad- ministration (FDA) para tratar a inflamação pulmonar.
[0008] Consequentemente, há uma necessidade urgente não ape- nas para elucidar os patomecanismos da inflamação pulmonar provo- cada por TBI, assim como outras condições, mas também o desenvol- vimento de composições terapêuticas e seus usos para o tratamento e/ou prevenção da inflamação pulmonar.
SUMÁRIO
[0009] Em um aspecto, é fornecido nessa invenção um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga à proteína tipo Spec associada a apoptose contendo um Domínio de Ati- vação e Recrutamento da Caspase (ASC), em que o anticorpo ou o fragmento de anticorpo se liga especificamente a um epítopo de ASC, em que o epítopo compreende ou consiste na sequência de aminoáci- do da SEQ ID NO: 5 ou 5 a 10, 10 a 15 ou 15 a 20 aminoácidos da SEQ ID NO: 5.
[0010] Em outro aspecto, é fornecido nessa invenção um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga es- pecificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o fragmento de anticor- po compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma re- gião variável de cadeia leve (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende HCDR1 da SEQ ID NO: 6, HCDR2 da SEQ
ID NO: 7 e HCDR3 da SEQ ID NO: 8, ou uma variante desta tendo pe- lo menos uma substituição de aminoácido em HCDR1, HCDR2 e/ou HCDR3. Em alguns casos, a sequência de aminoácido da região VH compreende SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21, 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21 ou 22. Em al- guns casos, o ASC é a proteína ASC humana.
Em alguns casos, o fragmento de anticorpo é um Fab, um F(ab')2, um Fab', um scFv, um anticorpo de domínio único, um diacorpo ou um anticorpo de camelí- deo de cadeia única ou um anticorpo de tubarão.
Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo é huma- no, humanizado ou quimérico.
Em alguns casos, é no presente docu- mento fornecida uma molécula de ácido nucleico isolada que codifica o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo.
Em al- guns casos, é no presente documento fornecido um vetor de expres- são que compreende a molécula de ácido nucleico.
Em alguns casos, se fornece nessa invenção que a molécula de ácido nucleico está liga- da de maneira operável às sequências reguladoras adequadas para a expressão do segmento de ácido nucleico em uma célula hospedeira.
Em alguns casos, é no presente documento fornecida uma célula hos- pedeira recombinante compreendendo o vetor de expressão.
Em outro aspecto, é fornecido nessa invenção um método para a produção de um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga especificamente ao ASC, o método compreendendo: cultivar uma célula hospedeira recombinante compreendendo o vetor de expressão sob condições em que a molécula de ácido nucleico é expressa, produzindo assim o anti- corpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC.
Em alguns casos, é no presente documento fornecida uma composição farmacêutica que compreende o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo e um veículo, dilu-
ente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
Em alguns casos, é no presente documento fornecido um método de tratamento da infla- mação em um indivíduo, o método compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, tratando assim a inflamação no indivíduo.
Em alguns casos, a administração do anticor- po monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo reduz os ní- veis de pelo menos a citocina inflamatória.
Em alguns casos, a infla- mação é uma inflamação relacionada ao inflamassoma.
Em alguns casos, a inflamação relacionada ao inflamassoma está associada a uma lesão do sistema nervoso central (CNS), uma doença autoimune, autoinflamatória ou neurodegenerativa.
Em alguns casos, a lesão do CNS selecionada do grupo que consiste em lesão cerebral traumática (TBI), acidente vascular cerebral e lesão da medula espinhal (SCI). Em alguns casos, a doença autoimune ou neurodegenerativa é esclerose lateral amiotrófica (ALS), doença de Alzheimer, doença de Parkinson, distrofia muscular (MD), lúpus eritematoso sistêmico, nefrite lúpica, artrite reumatóide, doença inflamatória intestinal (por exemplo, doença de Crohn e colite ulcerativa) ou esclerose múltipla (MS). Em alguns casos, a inflamação relacionada ao inflamassoma está associada a uma doença ou distúrbio metabólico.
Em alguns casos, a doença me- tabólica é síndrome metabólica, obesidade, diabetes melito, nefropatia diabética ou doença renal diabética (DKD), resistência à insulina, ate- rosclerose, distúrbio de armazenamento de lipídios, doença de arma- zenamento de glicogênio, deficiência de acil-coenzima A desidroge- nase de cadeia média, doença hepática gordurosa não alcoólica (por exemplo, esteatohepatite não alcoólica (NASH)) e gota.
Em alguns ca- sos, a doença autoinflamatória é a síndrome periódica associada à cri- opirina (CAPS). A CAPS pode abranger síndrome autoinflamatória fa- miliar do frio (FCAS), síndrome de Muckle-Wells (MWS) e doença in-
flamatória multissistêmica de início neonatal (NOMID). Em alguns ca- sos, a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de an- ticorpo do mesmo resulta na inibição da ativação do inflamassoma no indivíduo. Em alguns casos, a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta em uma redução na atividade de ASC em comparação com um controle. Em alguns casos, o controle é um indivíduo não tratado. Em alguns casos, a administra- ção é intracerebroventricular, intraperitoneal, intravenosamente ou por inalação. Em alguns casos, é no presente documento fornecido um método de tratamento de esclerose múltipla (MS) em um indivíduo, o método compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo, tratando assim a MS no indivíduo. Em alguns casos, a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo reduz os níveis de pelo menos a citocina inflama- tória. Em alguns casos, a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta na inibição da ativação do inflamassoma no indivíduo. Em alguns casos, a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta em uma redução na atividade de ASC em comparação com um contro- le. Em alguns casos, o controle é um indivíduo não tratado. Em alguns casos, a administração é intracerebroventricular, intraperitoneal, intra- venosamente ou por inalação.
[0011] Em mais outro aspecto, é fornecido nesta invenção um an- ticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o fragmento de anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região variável de cadeia pesada (VH), em que a sequência de amino- ácido da região VL compreende LCDR1 da SEQ ID NO: 12, LCDR2 da SEQ ID NO: 13 e LCDR3 da SEQ ID NO: 14 ou uma variante da mes-
ma tendo pelo menos uma substituição de aminoácido em LCDR1, LCDR2 e/ou LCDR3. Em alguns casos, a sequência de aminoácido da região VL compreende SEQ ID NO: 28, 29, 30, 31, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idênti- ca à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28, 29, 30 ou 31. Em alguns casos, o ASC é a proteína ASC humana.
Em alguns casos, o fragmento de anticorpo é um Fab, um F(ab')2, um Fab', um scFv, um anticorpo de domínio único, um diacorpo ou um anticorpo de camelí- deo de cadeia única.
Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo é humano, humanizado ou quiméri- co.
Em alguns casos, é no presente documento fornecida uma molécu- la de ácido nucleico isolada que codifica o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo.
Em alguns casos, é no presente documento fornecido um vetor de expressão que compreende a molé- cula de ácido nucleico.
Em alguns casos, é no presente documento fornecido que a molécula de ácido nucleico está ligada de maneira operável nas sequências reguladoras adequadas para a expressão do segmento de ácido nucleico em uma célula hospedeira.
Em alguns ca- sos, é no presente documento fornecida uma célula hospedeira re- combinante compreendendo o vetor de expressão.
Em outro aspecto, é no presente documento fornecido um método para a produção de um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga especificamente ao ASC, o método compreendendo: o cultivo de uma célula hospedei- ra recombinante compreendendo o vetor de expressão sob condições em que a molécula de ácido nucleico é expressa, produzindo assim o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC.
Em alguns casos, é no presente documento fornecida uma composição farmacêutica que compreende o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo e um veículo, dilu- ente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
Em alguns casos, é no presente documento fornecido um método de tratamento da infla- mação em um indivíduo, o método compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, tratando assim a inflamação no indivíduo.
Em alguns casos, a administração do anticor- po monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo reduz os ní- veis de pelo menos a citocina inflamatória.
Em alguns casos, a infla- mação é uma inflamação relacionada ao inflamassoma.
Em alguns casos, a inflamação relacionada ao inflamassoma está associada a uma lesão do sistema nervoso central (CNS), uma doença autoimune, autoinflamatória ou neurodegenerativa.
Em alguns casos, a lesão do CNS selecionada do grupo que consiste em lesão cerebral traumática (TBI), acidente vascular cerebral e lesão da medula espinhal (SCI). Em alguns casos, a doença autoimune ou neurodegenerativa é a esclero- se lateral amiotrófica (ALS), doença de Alzheimer, doença de Parkin- son, distrofia muscular (MD), lúpus eritematoso sistêmico, nefrite lúpi- ca, artrite reumatóide, doença inflamatória intestinal (por exemplo, do- ença de Crohn e colite ulcerativa) ou esclerose múltipla (MS). Em al- guns casos, a inflamação relacionada ao inflamassoma está associada a uma doença ou distúrbio metabólico.
Em alguns casos, a doença metabólica é síndrome metabólica, obesidade, diabetes melito, nefro- patia diabética ou doença renal diabética (DKD), resistência à insulina, aterosclerose, distúrbio de armazenamento de lipídios, doença de ar- mazenamento de glicogênio, deficiência de acil-coenzima A desidro- genase de cadeia média, doença hepática gordurosa não alcoólica (por exemplo, esteatohepatite não alcoólica (NASH)) e gota.
Em al- guns casos, a doença autoinflamatória é a síndrome periódica associ- ada à criopirina (CAPS). A CAPS pode abranger síndrome autoinfla- matória familiar do frio (FCAS), síndrome de Muckle-Wells (MWS) e doença inflamatória multissistêmica de início neonatal (NOMID). Em alguns casos, a administração do anticorpo monoclonal ou do frag- mento de anticorpo do mesmo resulta na inibição da ativação do infla- massoma no indivíduo. Em alguns casos, a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta em uma redução na atividade de ASC em comparação com um controle. Em alguns casos, o controle é um indivíduo não tratado. Em alguns casos, a administração é intracerebroventricular, intraperitoneal, intravenosa- mente ou por inalação. Em alguns casos, é no presente documento fornecido um método de tratamento de esclerose múltipla (MS) em um indivíduo, o método compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo, tratando assim a MS no indivíduo. Em alguns casos, a administração do anticorpo monoclonal ou do fra- gmento de anticorpo do mesmo reduz os níveis de pelo menos a cito- cina inflamatória. Em alguns casos, a administração do anticorpo mo- noclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta na inibição da ativação de inflamassome no indivíduo. Em alguns casos, a admi- nistração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta em uma redução na atividade de ASC em comparação com um controle. Em alguns casos, o controle é um indivíduo não tra- tado. Em alguns casos, a administração é intracerebroventricular, in- traperitoneal, intravenosamente ou por inalação.
[0012] Em ainda outro aspecto, é fornecido nesta invenção um an- ticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o fragmento de anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende HCDR1 da SEQ ID NO: 6, HCDR2 da SEQ ID NO: 7 e HCDR3 da SEQ ID NO: 8, ou uma variante desta tendo pelo menos uma substituição de aminoácido em HCDR1,
HCDR2 e/ou HCDR3; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende LCDR1 de SEQ ID NO: 12, LCDR2 de SEQ ID NO: 13 e LCDR3 de SEQ ID NO: 14, ou uma variante desta tendo pelo menos uma substituição de aminoácido em LCDR1, LCDR2 e/ou LCDR3. Em alguns casos, a sequência de aminoácido da região VH compreende SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21, 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21 ou 22; e em que a sequên- cia de aminoácido da região VL compreende SEQ ID NO: 28, 29, 30, 31, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28, 29, 30 ou 31. Em alguns casos, a sequência de aminoácido da re- gião VH compreende SEQ ID NO: 18, ou uma sequência de aminoáci- do que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequên- cia de aminoácido da SEQ ID NO: 18; e em que a sequência de ami- noácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28. Em alguns ca- sos, a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18; e em que a sequência de aminoácido da região VL com- preende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pe- lo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de ami- noácido da SEQ ID NO: 29. Em alguns casos, a sequência de aminoá- cido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idênti- ca à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18; e em que a se- quência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%,
98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 30. Em alguns casos, a sequência de aminoácido da região VH compre- ende a SEQ ID NO: 18, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 18; e em que a sequência de aminoácido da regi- ão VL compreende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoáci- do que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequên- cia de aminoácido da SEQ ID NO: 31. Em alguns casos, a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 19, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO:
28. Em alguns casos, a sequência de aminoácido da região VH com- preende a SEQ ID NO: 19, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 29. Em alguns casos, a se- quência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 19, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO : 19; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 30. Em alguns casos, a sequência de aminoácido da re- gião VH compreende a SEQ ID NO: 19, ou uma sequência de aminoá- cido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à se-
quência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 31 ou uma se- quência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 31. Em al- guns casos, a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 20, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28. Em alguns casos, a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 20, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 29. Em alguns casos, a sequência de aminoácido da região VH compre- ende a SEQ ID NO: 20, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 20; e em que a sequência de aminoácido da regi- ão VL compreende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoáci- do que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequên- cia de aminoácido da SEQ ID NO: 30. Em alguns casos, a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 20, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO:
31. Em alguns casos, a sequência de aminoácido da região VH com- preende a SEQ ID NO: 21, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 21; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28. Em alguns casos, a se- quência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 21, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 21; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 29. Em alguns casos, a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 21, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 21; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 30. Em alguns casos, a se- quência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 21, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 21; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 31. Em alguns casos, a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28. Em alguns casos, a se- quência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 29. Em alguns casos, a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 30. Em alguns casos, a se- quência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 31. Em alguns casos, o ASC é a proteína ASC humana.
Em alguns casos, o fragmento de anticorpo é um Fab, um F(ab') 2, um Fab', um scFv, um anticorpo de domínio único, um diacorpo ou um anticorpo de camelídeo de cadeia única.
Em alguns casos, o anticorpo monoclo- nal ou o fragmento de anticorpo do mesmo é humano, humanizado ou quimérico.
Em alguns casos, é no presente documento fornecida uma molécula de ácido nucleico isolada que codifica o anticorpo monoclo- nal ou o fragmento de anticorpo do mesmo.
Em alguns casos, é no presente documento fornecido um vetor de expressão que compreen- de a molécula de ácido nucleico.
Em alguns casos, é no presente do- cumento fornecido que a molécula de ácido nucleico está ligada de maneira operável às sequências reguladoras adequadas para a ex- pressão do segmento de ácido nucleico em uma célula hospedeira.
Em alguns casos, é no presente documento fornecida uma célula hos- pedeira recombinante compreendendo o vetor de expressão.
Em outro aspecto, é no presente documento fornecido um método para a produ- ção de um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga especifi- camente ao ASC, o método compreendendo: o cultivo de uma célula hospedeira recombinante compreendendo o vetor de expressão sob condições em que a molécula de ácido nucleico é expressa, produzin- do assim o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC.
Em alguns casos, é no presente documento fornecida uma composição farmacêutica que compreende o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo e um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
Em al- guns casos, é no presente documento fornecido um método de trata- mento da inflamação em um indivíduo, o método compreende a admi- nistração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, tratando assim a inflamação no indivíduo.
Em alguns casos, a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo reduz os níveis de pelo menos a citocina inflamatória.
Em alguns casos, a inflamação é uma inflamação relacionada ao inflamassoma.
Em alguns casos, a inflamação relacionada ao inflamassoma está associada a uma lesão do sistema nervoso central (CNS), uma doença autoimune, autoinflamatória ou neurodegenerativa.
Em alguns casos, a lesão do CNS é selecionada do grupo que consiste em lesão cerebral traumáti- ca (TBI), acidente vascular cerebral e lesão da medula espinhal (SCI).
Em alguns casos, a doença autoimune ou neurodegenerativa é escle- rose lateral amiotrófica (ALS), doença de Alzheimer, doença de Par- kinson, distrofia muscular (MD), lúpus eritematoso sistêmico, nefrite lúpica, artrite reumatóide, doença inflamatória intestinal (por exemplo, doença de Crohn e colite ulcerosa) ou esclerose múltipla (MS). Em al- guns casos, a inflamação relacionada ao inflamassoma está associada a uma doença ou distúrbio metabólico.
Em alguns casos, a doença metabólica é síndrome metabólica, obesidade, diabetes melito, nefro- patia diabética ou doença renal diabética (DKD), resistência à insulina, aterosclerose, distúrbio de armazenamento de lipídios, doença de ar- mazenamento de glicogênio, deficiência de acil-coenzima A desidro- genase de cadeia média, doença hepática gordurosa não alcoólica (por exemplo, esteatohepatite não alcoólica (NASH)) e gota.
Em al- guns casos, a doença autoinflamatória é a síndrome periódica associ- ada à criopirina (CAPS). A CAPS pode abranger síndrome autoinfla- matória familiar do frio (FCAS), síndrome de Muckle-Wells (MWS) e doença inflamatória multissistêmica de início neonatal (NOMID). Em alguns casos, a administração do anticorpo monoclonal ou do frag- mento de anticorpo do mesmo resulta na inibição da ativação do infla- massoma no indivíduo.
Em alguns casos, a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta em uma redução na atividade de ASC em comparação com um controle.
Em alguns casos, o controle é um indivíduo não tratado.
Em alguns casos, a administração é intracerebroventricular, intraperitoneal, intravenosa- mente ou por inalação.
Em alguns casos, é no presente documento fornecido um método de tratamento de esclerose múltipla (MS) em um indivíduo, o método compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo, tratando assim a MS no indivíduo.
Em alguns casos, a administração do anticorpo monoclonal ou do fra-
gmento de anticorpo do mesmo reduz os níveis de pelo menos a cito- cina inflamatória. Em alguns casos, a administração do anticorpo mo- noclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta na inibição da ativação do inflamassoma no indivíduo. Em alguns casos, a admi- nistração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta em uma redução na atividade de ASC em comparação com um controle. Em alguns casos, o controle é um indivíduo não tra- tado. Em alguns casos, a administração é intracerebroventricular, in- traperitoneal, intravenosamente ou por inalação.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0013] A FIG. 1A-1N ilustram a ativação do inflamassoma em teci- do cortical e pulmonar de camundongo C57/BL6 pós-TBI. A FIG. 1A mostra uma imunomaracação representativa de caspase-1 ativa, ASC, IL-18, IL-β, HMGB1 e AIM2 após TBI. Caspase-1 ativa (FIG. 1B), ASC (FIG. 1C), IL-18 (FIG. 1D), HMGB1 (FIG. 1E), AIM 2 (FIG. 1F) e IL-β, (FIG. 1G), estão significativamente elevados no tecido cortical 4 e 24 horas após a TBI. Dados apresentados como média +/- SEM; ****p < 0,001, ***p < 0,01, **p < 0,01, *p < 0,05 em comparação com simula- ção. N = 4 a 5 por grupo. FIG. 1H mostra um imunoblot representativo de caspase-1 ativa, ASC, IL-18, IL-β, HMGB1 e AIM2 no tecido pulmo- nar. I, J, K, L, M, N). Caspase-1 ativa (FIG. 1I), ASC (FIG. 1J), IL-18 (FIG. 1K), HMGB1 (FIG. 1L), AIM 2 (FIG. 1M), e IL-β, (FIG. 1N) são significativamente elevados no tecido pulmonar 4 e 24 h após a TBI. Dados apresentados como média +/- SEM. N = 4 a 5 por grupo, ****p < 0,001, ***p < 0,01, **p < 0,01, *p < 0,05 em comparação com a simula- ção.
[0014] A FIG. 2A-2C ilustra a expressão de proteínas do inflamas- soma em células epiteliais alveolares do Tipo II. A FIG. 2A mostra AIM2, a FIG. 2B mostra Caspase-1 ativa e a FIG. 2C mostra aumentos de imunorreatividade ASC no tecido pulmonar após CCI (4, 24 h)
quando comparado com camundongos. Imagens confocais de AIM2, caspase-1 e ASC (verde) e células epiteliais do tipo II (proteína C do tensoativo, vermelho).
[0015] A FIG. 3A-3E ilustra que a TBI aumenta a expressão nucle- ar e citoplasmática de HMGB1 no pulmão de camundongos. A FIG. 3A mostra imunoblot representativo de HMGB1 nuclear após TBI. A FIG. 3B mostra que o HMGB1 nuclear está significativamente elevado em animais feridos de 4 horas em comparação com a simulação. A FIG. 3C mostra imunoblot representativo de HMGB1 citoplasmático após TBI. A FIG. 3D mostra que o HMGB1 citoplasmático é significativa- mente elevado em animais feridos de 4 horas em comparação com a simulação. Dados apresentados como média +/- SEM; *p < 0,05 em comparação com simulação. N = 4 a 5 por grupo. A FIG. 3E mostra a imunorreatividade de HMGB1 aumentada no tecido pulmonar após CCI quando comparado a camundongos simulados. Imagens confo- cais de células epiteliais de HMGB1 e tipo II (proteína C de tensoativo, vermelho).
[0016] A FIG. 4A-4C ilustra a formação de piroptossoma nos pul- mões de camundongos 4 horas após TBI. A FIG. 4A mostra que a TBI induz a variação crescente de ASC no tecido pulmonar, indicando a formação do piroptossoma, uma oligomerização de dímeros de ASC que leva à ativação da caspase-1 e piroptose. A FIG. 4B mostra o imunoblot representativo e a FIG. 4C mostra a quantificação da gas- dermin. A Gasdermin-D é significativamente elevada no tecido pulmo- nar pós-TBI. Dados apresentados como média +/- SEM. N = 4 a 5 por grupo, **p < 0,01 em comparação com a simulação.
[0017] A FIG. 5A-5B ilustra que a TBI induz alterações morfológi- cas alveolares e lesão pulmonar aguda em camundongos. A FIG. 5A mostra coloração H&E de seções de pulmão de animais simulados e feridos em 4 h e 24 h. As seções mostram evidências de infiltração de neutrófilos (pontas de seta), mudanças na morfologia das membranas capilares alveolares (asterisco, *), edema intersticial (setas curtas) e evidências de espessamento do interstício e do septo alveolar (libra, #). A FIG. 5B mostra que a pontuação de lesão pulmonar aguda está significativamente aumentada em animais feridos em comparação com a simulação em 4 h e 24 h. Dados apresentados como média +/- SEM. N = 4 a 5 por grupo, *p < 0,05 em comparação com a simulação.
[0018] A FIG. 6 ilustra a expressão de CD81 em EV derivada de soro de camundongos controle e feridos com TBI. Imunoblot represen- tativo de CD81 em EV derivada de soro de controle simulado e ca- mundongos feridos por TBI.
[0019] A FIG. 7A-7G ilustra a transferência adotiva de EV de ani- mais com TBI que induzem caspase-1 e ASC nos pulmões de camun- dongos não feridos. A FIG. 7A ilustra um imunoblot representativo mostrando que caspase-1 (FIG. 7B), ASC (FIG. 7C), IL-18 (FIG. 7D), AIM2 (FIG. 7E), HMGB1 (FIG. 7F) são elevados nos pulmões de ani- mais que receberam EV isolada de camundongos com TBI em compa- ração com EV de animais simulados. Dados apresentados como mé- dia +/- SEM; *p < 0,05 em comparação com a simulação. N = 3 por grupo. A EV de camundongos com TBI induziu alterações morfológi- cas alveolares (tamanho alveolar diminuído) e infiltração de células inflamatórias, conforme determinado pela coloração H&E (FIG. 7G). A pontuação de ALI é significativamente aumentada em EV liberada de camundongos feridos em comparação com camundongos não feridos (FIG. 7G). Dados apresentados como média +/- SEM; **p < 0,01., *p < 0,05 em comparação com o grupo sem lesão.
[0020] A FIG. 8A-8F ilustra o tratamento com Enoxaparina (3 mg/kg) e IC 100 (5 mg/kg) reduz a expressão do inflamassoma nos pulmões de animais liberados EV de camundongos feridos. A FIG. 8A ilustra um imunoblot representativo mostrando que caspase-1 (FIG.
8B), ASC (FIG. 8C), IL-1β (FIG. 8D), AIM2 (FIG. 8E), HMGB1 (FIG. 8F) são reduzidos nos pulmões de animais que foram tratados com Enoxaparina e IC 100 quando comparados a animais de controle posi- tivo não tratados. Dados apresentados como média +/- SEM; ****p < 0,001, ***p < 0,01, **p < 0,01, *p < 0,05 em comparação com simula- ção. N = 4 por grupo.
[0021] A FIG. 9A-9E ilustra o tratamento com Enoxaparina (3 mg/kg) e IC 100 (5 mg/kg) reduz a pontuação de ALI em pulmões de animais liberados EV de camundongos feridos. A FIG. 9A-9D ilustra a coloração de H&E de seções de pulmão de solução salina (FIG. 9A), pulmões de camundongos não tratados (FIG. 9B), tratados com Enoxaparina (FIG. 9C) e IC 100 (Anti-ASC; FIG. 9D) liberados EV de animais feridos. As seções mostram evidências de infiltração de neu- trófilos, alterações na morfologia das membranas capilares alveolares, edema intersticial e evidências de espessamento do interstício e do septo alveolar. A FIG. 9E ilustra que a pontuação de lesão pulmonar aguda é significativamente diminuída em animais tratados com Enoxa- parina, IC 100, em comparação com animais não tratados. Dados apresentados como média +/- SEM. N = 4 por grupo, ****p < 0,01., *P < 0,05.
[0022] A FIG. 10A-10F ilustra a liberação de EV derivada de soro de pacientes com TBI, resultando em aumento da expressão da prote- ína do inflamassoma em células endoteliais pulmonares. A FIG. 10A mostra a representação de western blot de caspase-1, ASC, AIM2, HMGB1 em PMVEC após incubação com TBI-EV e controle-EV duran- te 4 horas. A FIG. 10B-10E mostra a quantificação de western blots, n = 3 filtros por grupo, n = 6 pacientes, teste t, ****p < 0,001, ***p < 0,01, **p < 0,01, *p < 0,05. A FIG. 10F mostra resultados de imunoensaio de um aumento significativo na expressão de IL-1β utilizando ensaio Ella simple plex n = 3 filtros por grupo, n = 6 pacientes, teste t, ****p <
0,001, ***p < 0,01, * *p < 0,01, *p < 0,05.
[0023] A FIG. 11A-11C ilustra que a liberação de TBI-EV nas célu- las endoteliais pulmonares aumenta a imunorreatividade da caspase-1 ativa e a morte celular. A FIG. 11A mostra a colocalização de Cas- pase-1 FLICA e coloração de PI e PMVEC incubado com TBI-EV du- rante 4 horas. A FIG. 11B mostra caspsae-1 FLICA e coloração de PI em PMVEC incubado com controle-EV durante 4 horas. A FIG. 11C mostra a análise da leitora de placa fluorescente de PMVEC incubado com TBI e controle-EV durante 4 horas. n = 6, ***p < 0,05.
[0024] A FIG. 12A-12E ilustra que o tratamento com um anticorpo monoclonal anti-ASC humanizado (isto é, IC 100) melhora o resultado funcional em EAE. A FIG. 12A mostra o curso clínico de EAE induzida por MOG35-55 em camundongos C57BL/6 tratados com veículo ou do- ses crescentes de IC 100. A administração de IC 100 (10, 30 e 45 mg/Kg i.p. a cada 4 dias) foi iniciada no dia 8, antes que os camun- dongos mostrassem sinais de paralisia. Os resultados são expressos como pontuação clínica média diária ± SEM de 9 a 10 ratos/grupo. As curvas de 30 e 45 mg/Kg são significativamente diferentes da curva de veículo; **p ≤ 0,001 teste de Mann-Whitney. A FIG. 12B mostra uma comparação de pontuações clínicas máximas (a pontuação de doença mais elevada alcançada por um camundongo) entre os grupos; *p ≤ 0,05, teste t de Student. A FIG. 12C mostra uma comparação do Índice de Doenças Cumulativas (CDI) entre os grupos. O CDI é igual à soma de todas as pontuações do dia de início para cada animal e é uma medida da gravidade de EAE; *p ≤ 0,05, teste t de Student. A FIG. 12D mostra uma comparação do dia de início entre os grupos. O dia de iní- cio é considerado o dia em que um camundongo apresentou os primei- ros sintomas de EAE. A FIG. 12E mostra uma comparação do dia de pico da doença entre os grupos. O dia de pico da doença é o dia em que um camundongo atingiu a pontuação mais elevada da doença. O dia de início é considerado o dia em que um camundongo apresentou os primeiros sintomas de EAE.
[0025] A FIG. 13A-13B ilustra que o tratamento com IC 100 reduz a infiltração de células imunes periféricas na medula espinhal ou baço após EAE. Quantificação por citometria de fluxo das populações de leucócitos que se infiltram na medula espinhal (FIG. 13A) ou presentes no baço (FIG. 13B) em 35 dpi após EAE. Os resultados são expressos como média ± SEM de 5 camundongos/grupo, *p < 0,05, **p < 0,001, teste t de Student.
[0026] A FIG. 14 ilustra que o tratamento com IC 100 reduz a mi- croglia na medula espinhal após EAE. Quantificação por citometria de fluxo de microglia total e microglia ativada por MHCII + na medula espi- nhal em 35 dpi após EAE. Os resultados são expressos como média ± SEM de 5 camundongos/grupo, *p < 0,05, teste t de Student.
[0027] A FIG. 15 ilustra a concentração de IC 100 em tecidos. Concentrações de IC 100 em pg/ml no cérebro, medula espinhal, fíga- do e baço em camundongos de controle e camundongos tratados com IC 100 em 10, 30 e 45 mg/kg em 35 dpi após EAE. Dados apresenta- dos como média ± SEM. N = 2 a 10/camundongos por grupo.
[0028] A FIG. 16 ilustra que IC 100 é captado em partículas de ASC em células THP-1 não estimuladas e a captação é aumentada pela ativação do inflamassoma.
[0029] A FIG. 17 ilustra a liberação de IL1-beta impedida por IC 100 de células THP-1.
[0030] A FIG. 18 mostra imagens confocais de neurônios da me- dula espinhal que ilustram que um anticorpo anti-ASC (IC 100) penetra nos neurônios da medula espinhal.
[0031] A FIG. 19 ilustra uma comparação da ligação do anticorpo de três anticorpos diferentes contra ASC humano em espécies diferen- tes.
[0032] A FIG. 20 ilustra a indução de inflamassoma por nicotina (500 nM) em células do Núcleo Pulposo Humano e tratadas com três anticorpos diferentes contra ASC humano (H1, H2, H3) e dois contra ASC de camundongo (M1, M2). H1 foi o mais eficaz na prevenção da liberação de IL-1beta/ativação do inflamassoma.
[0033] A FIG. 21 ilustra os dados brutos da análise de cinética BLI para os anticorpos monoclonais anti-ASC.
[0034] A FIG. 22 ilustra uma comparação da cinética de três anti- corpos diferentes contra ASC humano.
DESCRIÇÃO DETALHADA DEFINIÇÕES
[0035] A menos que definido de outra forma, todos os termos téc- nicos utilizados nesta invenção possuem o mesmo significado como comumente entendido por uma pessoa de habilidade prática na técni- ca à qual esta invenção pertence.
[0036] Os títulos das seções utilizados nesta invenção são apenas para propósitos organizacionais e não devem ser interpretados como limitando a presente matéria descrita. Todos os documentos ou partes de documentos citados nesta invenção, incluindo, mas não limitado a patentes, pedidos de patentes, artigos, livros e tratados, são expres- samente incorporados por referência na sua totalidade para qualquer finalidade. No caso de um ou mais dos documentos incorporados ou partes de documentos definirem um termo que contradiz a definição desse termo no pedido, a definição que aparece neste pedido controla. No entanto, a menção de qualquer referência, artigo, publicação, pa- tente, publicação de patente e pedido de patente no presente docu- mento citada não é, e não deve ser tomada como um reconhecimento, ou qualquer forma de sugestão, de que constitui a técnica precedente- precedente válida ou faz parte do conhecimento geral comum em qualquer país do mundo.
[0037] O termo "um" ou "uma" se refere a um ou mais dessa enti- dade, ou seja, pode se referir a uma pluralidade de referentes. Como tal, os termos “um” ou “uma”, “um ou mais” e “pelo menos um” são uti- lizados de modo trocável nesta invenção. Além disso, a referência a "um elemento" pelo artigo indefinido "um" ou "uma" não exclui a possi- bilidade de que mais de um dos elementos esteja presente, a não ser que o contexto exija claramente que haja um e apenas um dos ele- mentos.
[0038] A menos que o contexto exija de outra forma, ao longo do presente relatório descritivo e reivindicações, a palavra "compreender" e suas variações, tais como, "compreende" e "compreendendo" devem ser interpretadas em um sentido aberto e inclusivo que é como "inclu- indo, mas não limitado a". O uso da alternativa (por exemplo, "ou") de- ve ser entendido como significando um, ambos ou qualquer combina- ção dos mesmos das alternativas. Conforme utilizado nesta invenção, os termos "cerca de" e "consistindo essencialmente em" significam +/- 20% da faixa, valor ou estrutura indicada, a não ser que de outra ma- neira indicada.
[0039] A referência ao longo deste relatório descritivo a "uma mo- dalidade" ou "uma modalidade" significa que um determinado recurso, estrutura ou característica descrita em conexão com a modalidade po- de ser incluída em pelo menos uma modalidade da presente invenção. Assim, as aparições das frases "em uma modalidade" ou "em uma modalidade" em vários lugares ao longo deste relatório descritivo po- dem não necessariamente se referir à mesma modalidade. Observa-se que certas características da invenção, que são, para maior clareza, descritas no contexto de modalidades separadas, também podem ser fornecidas em combinação em uma única modalidade. Por outro lado, várias características da invenção, que são, por brevidade, descritas no contexto de uma única modalidade, também podem ser fornecidas separadamente ou em qualquer subcombinação adequada.
[0040] Ao longo desta invenção, vários aspectos dos métodos e composições fornecidos nesta invenção podem ser apresentados em um formato de faixas. Deve ficar entendido que a descrição em forma- to de faixas é meramente por conveniência e brevidade e não deve ser interpretada como uma limitação inflexível no escopo da invenção. Conforme for, a descrição de uma faixa deve ser considerada como tendo descrito especificamente todos as subfaixas possíveis, assim como valores numéricos individuais dentro dessa faixa. Por exemplo, a descrição de uma faixa tal como de 1 a 6, deve ser considerada como tendo as subfaixas especificamente descritas, tais como de 1 a 3, de 1 a 4, de 1 a 5, de 2 a 4, de 2 a 6, de 3 a 6 etc., assim como números individuais dentro dessa faixa, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 e 6. Isso se aplica independentemente da amplitude da faixa.
[0041] Conforme no presente documento utilizado, "proteína" e "polipeptídeo" são utilizados como sinônimos para significar qualquer cadeia ligada a peptídeo de aminoácidos, independentemente do comprimento ou modificação pós-translação, por exemplo, glicosilação ou fosforilação.
[0042] Como no presente documento utilizado, o termo "anticorpo" refere-se de uma forma geral e amplamente a moléculas de imunoglo- bulinas (Ig) e partes imunologicamente ativas ou fragmentos de molé- culas de imunoglobulina, isto é, moléculas que contêm um sítio de li- gação ao antígeno que liga especificamente (imunorreage com) um antígeno (por exemplo, ASC, NLRP1, AIM2, etc.). Os anticorpos no presente documento fornecidos podem ser anticorpos policlonais, anti- corpos monoclonais (mAbs), anticorpos quiméricos, anticorpos huma- nizados, anticorpos anti-idiotípicos (anti-Id) para anticorpos que podem ser marcados na forma solúvel ou ligada, assim como fragmentos ati- vos, regiões ou seus derivados. Os anticorpos para uso nessa inven-
ção podem ser quiméricos, humanizados ou humanos.
[0043] Por "especificamente liga" ou "imunorreage com", entende- se que o anticorpo reage com um ou mais determinantes antigênicos do antígeno desejado e não reage com outros polipeptídeos. Em cer- tas modalidades, diz-se que um anticorpo se liga especificamente a um antígeno quando reconhece preferencialmente seu antígeno alvo em uma mistura complexa de proteínas e/ou macromoléculas. O termo "anticorpo" refere-se amplamente a uma molécula de imunoglobulina (Ig), geralmente compreendendo quatro cadeias polipeptídicas, duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L), ou qualquer fragmento funcional, mutante, variante ou derivado do mesmo, que retém as ca- racterísticas essenciais de ligação ao alvo de uma molécula de Ig. Es- ses formatos de anticorpos mutantes, variantes ou derivados são co- nhecidos na técnica. Esses anticorpos anti-ASC e anti-NLRP1 da pre- sente invenção são capazes de ligar as partes de ASC e NLRP1, res- pectivamente, que interferem com a ativação da caspase-1.
[0044] Conforme no presente documento utilizado, o termo "anti- corpo humanizado" refere-se a um anticorpo no qual partes mínimas de um anticorpo não humano são introduzidas em um anticorpo hu- mano de outra forma.
[0045] Como no presente documento utilizado, o termo "anticorpo humano" refere-se a um anticorpo em que substancialmente cada par- te da proteína é substancialmente não imunogênica em seres huma- nos, com apenas pequenas alterações ou variações de sequência.
[0046] Em um anticorpo de comprimento total, cada cadeia pesada compreende uma região variável da cadeia pesada (no presente do- cumento abreviada como HCVR ou VH) e uma região constante da cadeia pesada. A região constante da cadeia pesada compreende três domínios, CH1, CH2 e CH3. Cada cadeia leve compreende uma regi- ão variável da cadeia leve (no presente documento abreviada como
LCVR ou VL) e uma região constante da cadeia leve. A região cons- tante da cadeia leve compreende um domínio, CL. As regiões VH e VL podem ser ainda subdivididas em regiões de hipervariabilidade, deno- minadas regiões determinantes de complementaridade (CDRs), inter- caladas com regiões que são mais conservadas, denominadas regiões estruturais (FRs). Cada VH e VL é composta de três CDRs e quatro FRs, dispostas do terminal amino ao terminal carbóxi na seguinte or- dem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. As moléculas de imunoglobulina podem ser de qualquer tipo (por exemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY) e classe (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) ou subclasse. Os anticorpos de IgG, IgD e IgE geralmen- te contêm duas cadeias pesadas idênticas e duas cadeias leves idên- ticas e dois domínios de combinação de antígeno, cada um composto por uma região variável da cadeia pesada (VH) e uma região variável da cadeia leve (VL). Geralmente os anticorpos de IgA são compostos de dois monômeros, cada monômero composto de duas cadeias pe- sadas e duas cadeias leves (como para anticorpos de IgG, IgD e IgE); desta forma, a molécula de IgA possui quatro domínios de ligação ao antígeno, cada um composto novamente por um VH e um VL. Certos anticorpos de IgA são monoméricos pelo fato de que eles são compos- tos de duas cadeias pesadas e duas cadeias leves. Os anticorpos de IgM secretados são geralmente compostos de cinco monômeros, cada monômero composto de duas cadeias pesadas e duas cadeias leves (como para anticorpos de IgG e IgE); desta forma, a molécula de IgM possui dez domínios de ligação ao antígeno, cada um composto no- vamente por uma VH e uma VL. Uma forma de superfície celular de IgM também existe e esta possui a estrutura de duas cadeias pesa- das/duas cadeias leves similares aos anticorpos de IgG, IgD e IgE.
[0047] O termo "fragmento de ligação ao antígeno" ou "parte de ligação ao antígeno" ou "sítio de ligação ao antígeno" ou "domínio de ligação" ou "região de ligação", conforme utilizado nesta invenção, po- de se referir ao domínio, região, parte ou sítio de uma proteína, poli- peptídeo, oligopeptídeo ou peptídeo ou anticorpo ou domínio de liga- ção derivado de um anticorpo que retém a capacidade de se ligar es- pecificamente a um antígeno (por exemplo, proteína ASC). Domínios de ligação exemplares incluem regiões variáveis de anticorpo de ca- deia única (por exemplo, anticorpos de domínio, sFv, scFv, scFab), proteínas de fusão compreendendo uma parte de anticorpo (por exemplo, um anticorpo de domínio), ectodomínios de receptor, e ligan- tes (por exemplo, citocinas, quimiocinas). Em uma modalidade, a pro- teína de fusão compreende uma ou mais CDR(s). Em outra modalida- de, a proteína de fusão compreende CDR H3 (VH CDR3) e/ou CDR L3 (VL CDR3). Para os fins desta invenção, uma proteína de fusão con- tém um ou mais anticorpos e sequência de aminoácido adicional, tal como, por exemplo, uma sequência heteróloga ou uma sequência ho- móloga de outra região, ligada ao N- ou C-terminal do anticorpo ou seu fragmento de anticorpo. Sequências heterólogas exemplares incluem, mas não são limitados a estes, um "marcador", tal como um marcador FLAG ou um marcador 6His ou uma enzima ou um polipeptídeo que aumenta a meia-vida do anticorpo no sangue. Os marcadores são bem conhecidos na técnica. A sequência de aminoácido adicional, que po- de incluir fusões de amino- e/ou carboxil-terminais, pode variar em comprimento de um resíduo para polipeptídeos contendo cem ou mais resíduos, assim como inserções intrassequência de resíduos de ami- noácido únicos ou múltiplos.
[0048] Um sítio de ligação ao antígeno pode ser geralmente for- mado pelos domínios de imunoglobulina da região variável de cadeia pesada (VH) e da região variável de cadeia leve (VL), com a interface de ligação ao antígeno formada por seis alças calibradas polipeptídi- cas de superfície, denominadas regiões determinantes de complemen-
taridade (CDRs). Existem três CDRs em VH (HCDR1, HCDR2, HCDR3) e VL (LCDR1, LCDR2, LCDR3), juntamente com regiões es- truturais (FRs). Em certas modalidades, o domínio de ligação compre- ende ou consiste em um sítio de ligação ao antígeno (por exemplo, compreendendo uma sequência de cadeia pesada variável e sequên- cia de cadeia leve variável ou três regiões determinantes complemen- tares de cadeia leve (CDRs) e três CDRs de cadeia pesada de um an- ticorpo colocado em regiões estruturais (FRs) alternativas (por exem- plo, FRs humanas opcionalmente compreendendo uma ou mais subs- tituições de aminoácido).
[0049] O termo "região CDR" ou "CDR" pode significar as regiões hipervariáveis das cadeias pesadas ou leves da imunoglobulina con- forme definido por Kabat et al., 1991 (Kabat, E. A. et al., (1991) Se- quences of Proteins of Immunological Interest, 5th Edition. US De- partment of Health and Human Services, Public Service, NIH, Wash- ington), e edições posteriores. Um anticorpo tipicamente contém 3 CDRs de cadeia pesada e 3 CDRs de cadeia leve.
[0050] Foi demonstrado que a função de ligação ao antígeno de um anticorpo pode ser executada por fragmentos de um anticorpo de comprimento total. As modalidades de anticorpo e fragmento de anti- corpo também podem ser formatos biespecíficos, triespecíficos, espe- cíficos duplos ou multiespecíficos; especificamente se liga a dois ou mais antígenos diferentes. Exemplos de fragmentos de ligação abran- gidos pelo termo "fragmento de ligação ao antígeno" de um anticorpo incluem: (i) um fragmento Fab que consiste em domínios VL, VH, CL e CH1 (Ward, E. S. et al., (1989) Nature 341, 544-546); (ii) um fragmento Fd que consiste nos domínios VH e CH1 (McCafferty et al., (1990) Na- ture, 348, 552-554); (iii) um fragmento Fv que consiste nos domínios VL e VH de um único anticorpo (Holt et al., (2003) Trends in Bio- technology 21, 484-490); (iv) um fragmento dAb (Ward, E. S. et al., Na-
ture 341, 544-546 (1989), McCafferty et al., (1990) Nature, 348, 552- 554, Holt et al., (2003) Trends in Biotechnology 21, 484-490), que con- siste em um domínio VH ou VL; (v) regiões CDR isoladas; (vi) frag- mentos F(ab')2, um fragmento bivalente compreendendo dois fragmen- tos Fab ligados (vii), moléculas Fv de cadeia simples (scFv), em que um domínio VH e um domínio VL estão ligados por um ligante peptídi- co que permite que os dois domínios se associem para formar um sítio de ligação ao antígeno (Bird et al., (1988) Science, 242, 423-426, Hus- ton et al., (1988) PNAS USA, 85, 5879-5883). A invenção também abrange um fragmento Fab'. Além disso, embora os dois domínios do fragmento Fv, VL e VH sejam codificados por genes separados, eles podem ser unidos, utilizando métodos recombinantes, por um ligante sintético que permite que eles sejam produzidos como uma única ca- deia de proteína em que as regiões VL e VH emparelham para formar moléculas monovalentes (conhecidas como Fv de cadeia simples (scFv)). Esses anticorpos de cadeia única também se destinaM a ser englobado no termo "fragmento de ligação ao antígeno" de um anti- corpo.
Em certas modalidades da invenção, as moléculas de scFv po- dem ser incorporadas em uma proteína de fusão.
Em algumas modali- dades, a invenção inclui um anticorpo de camelídeo de cadeia única; (viii) dímeros Fv biespecíficos de cadeia simples (PCT/US92109965) e (ix) "diacorpos", fragmentos multivalentes ou multiespecíficos construí- dos através da fusão gênica (WO94/13804; Holliger, P. (1993) et al., Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA 90 6444-6448). Diacorpos são anticorpos bivalentes biespecíficos nos quais os domínios VH e VL são expressos em uma cadeia polipeptídica única, mas utilizando um ligante que é muito curto para levar em conta o emparelhamento entre os dois do- mínios na mesma cadeia, forçando assim os domínios a emparelhar com os domínios complementares de outra cadeia e criando dois sítios de ligação ao antígeno (ver, por exemplo, Holliger, P., et al. (1993)
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak, R. J., et al. (1994) Structure 2:1121-1123). Tais fragmentos de ligação de anticorpos são conhecidos na técnica (Kontermann and Dubel eds., Antibody Engine- ering (2001) Springer-Verlag. New York. 790 pp.). Em alguns aspec- tos, a invenção inclui um anticorpo de domínio único. Em geral, o ter- mo "anticorpo", quando no presente documento utilizado, abrange um "fragmento de anticorpo". Um fragmento de anticorpo geralmente re- tém as propriedades de ligação ao antígeno de um anticorpo de com- primento total.
[0051] Fv, scFv ou moléculas de diacorpo podem ser estabilizadas pela incorporação de pontes de dissulfeto que ligam os domínios VH e VL (Reiter, Y. et al., Nature Biotech, 14, 1239-1245, 1996). Minicorpos compreendendo um scFv unido a um domínio CH3 também podem ser produzidos (Hu, S. et al., (1996) Cancer Res., 56, 3055-3061). Outros exemplos de fragmentos de ligação podem ser Fab', que difere dos fragmentos Fab pela adição de alguns resíduos no terminal carboxila do domínio CH1 de cadeia pesada, incluindo uma ou mais cisteínas da região de dobradiça do anticorpo, e Fab'-SH, que é um fragmento Fab' no qual os resíduos de cisteína dos domínios constantes possuem um grupo de tiol livre.
[0052] "Fv", quando utilizado nesta invenção, pode se referir ao fragmento mínimo de um anticorpo que retém os sítios de reconheci- mento de antígeno e de ligação ao antígeno. "Fab", quando utilizado nessa invenção, pode referir-se a um fragmento de um anticorpo que compreende o domínio constante da cadeia leve e o domínio CH1 de cadeia pesada. O termo "mAb" refere-se a anticorpo monoclonal.
[0053] "Região Fc" ou "domínio Fc" refere-se a uma sequência de polipeptídeo que corresponde ou derivada da parte de um anticorpo de origem que é responsável pela ligação aos receptores de anticorpo nas células e o componente C1q do complemento. Fc significa "frag-
mento cristalino", o fragmento de um anticorpo que formará facilmente um cristal de proteína. Fragmentos de proteína distintos, que foram originalmente descritos por digestão proteolítica, podem definir a estru- tura geral global de uma proteína de imunoglobulina. Conforme origi- nalmente definido na literatura, o fragmento Fc consiste nas regiões de dobradiça de cadeia pesada ligadas por dissulfeto, domínios CH2 e CH3. No entanto, mais recentemente, o termo foi aplicado a uma única cadeia que consiste em CH3, CH2 e pelo menos uma parte da dobra- diça suficiente para formar um dímero ligado por dissulfeto com uma segunda dessas cadeias. Para uma revisão da estrutura e função da imunoglobulina, ver Putnam, The Plasma Proteins, Vol. V (Academic Press, Inc., 1987), pp. 49-140; e Padlan, Mol. Immunol. 31:169-217,
1994. Como no presente documento utilizado, o termo Fc inclui varian- tes de sequências de ocorrência natural. Em uma modalidade, os anti- corpos ou fragmentos de anticorpos derivados dos mesmos fornecidos nesta invenção (por exemplo, os anticorpos monoclonais anti-ASC ou fragmentos de anticorpos dos mesmos) possuem uma região ou do- mínio Fc modificado. Em alguns casos, a região ou domínio Fc modifi- cado pode conferir estabilidade térmica aumentada ao anticorpo resul- tante ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo. O aumento da estabilidade térmica pode resultar em aumento da meia-vida sérica. A região ou domínio Fc pode ser modificado conforme descrito na US20160193295, cujos conteúdos são no presente documento incor- porados por referência. Conforme descrito na US20160193295, a regi- ão ou domínio Fc pode ser modificado para possuir uma supressão de um ou mais resíduos de cisteína na região de dobradiça e substituição por um resíduo contendo sulfidrila de um ou mais aminoácidos de in- terface CH3. Em outra modalidade, a região ou domínio Fc dos anti- corpos ou fragmentos de anticorpos derivados dos mesmos no presen- te documento fornecidos (por exemplo, os anticorpos monoclonais an-
ti-ASC ou fragmentos de anticorpos dos mesmos), pode ser estabiliza- do através da engenharia da região Fc para possuir ligações de dissul- feto intradomínio, conforme descrito em Wozniak-Knopp G, Stadlmann J, Rüker F (2012) Stabilisation of the Fc Fragment of Human IgG1 by Engineered Intradomain Disulfide Bonds. PLoS ONE 7(1): e30083, cu- jos conteúdos são no presente documento incorporados por referên- cia. Em mais outra modalidade, os anticorpos possuem regiões Fc modificadas como descrito na WO 99/58572, que é no presente docu- mento incorporada por referência. Em ainda outras modalidades, a re- gião ou domínio Fc pode ser modificado conforme descrito na US9574010, cujos conteúdos são no presente documento incorpora- dos por referência.
[0054] Pelos termos "proteína tipo Spec associada a apoptose contendo um Domínio de Ativação e Recrutamento da Caspase (CARD)" e "ASC" entende-se um produto de expressão de um gene ASC ou suas isoformas, ou uma proteína que compartilha pelo menos 65%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identi- dade de sequência de aminoácido com ASC (por exemplo, NP_037390 (Q9ULZ3-1), NP_660183 (Q9ULZ3-2) ou Q9ULZ3-3 in seres humanos, NP_075747 em camundongo ou NP_758825 (BAC43754) em ratos) e apresenta uma atividade funcional de ASC. Uma “atividade funcional” de uma proteína é qualquer atividade asso- ciada com a função fisiológica da proteína. As atividades funcionais de ASC incluem, por exemplo, o recrutamento de proteínas para ativação da caspase-1 e o início da morte celular.
[0055] Pelo termo "gene ASC" ou "ácido nucleico ASC" entende- se uma sequência de ácido nucleico que codifica ASC nativa, sequên- cias genômicas das quais o cDNA de ASC pode ser transcrito e/ou va- riantes alélicas e homólogos dos precedenteprecedentes. Os termos abrangem DNA de fita dupla, DNA de fita simples e RNA.
[0056] Conforme no presente documento utilizado, o termo "infla- massoma" significa um complexo de múltiplas proteínas (por exemplo, pelo menos duas proteínas) que ativa a caspase-1. Além disso, o ter- mo "inflamassoma" pode se referir a um complexo multiprotéico que ativa a atividade da caspase-1, que por sua vez regula o processa- mento e a ativação de IL-1β, IL-18 e IL-33. Ver Arend et al. 2008; Li et al. 2008; e Martinon et al. 2002, cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade. Os termos "inflamassoma NLRP1", "in- flamassoma NALP1", "inflamassoma NLRP2", "inflamassoma NALP2", "inflamassoma NLRP3", "inflamassoma NALP3", "inflamassoma NLRC4", "inflamassoma IPAF" ou "inflamassoma AIM2" significam um complexo de proteínas de pelo menos a caspase-1 e uma proteína adaptadora, por exemplo, ASC. Por exemplo, os termos "inflamasso- ma NLRP1" e "inflamassoma NALP1" podem significar um complexo multiprotéico contendo NLRP1, ASC, caspase-1, caspase-11, XIAP e panexina-1 para ativação de caspase-1 e processamento de interleu- cina-1β, interleucina-18 e interleucina-33. Os termos "inflamassoma NLRP2" e "inflamassoma NALP2" podem significar um complexo mul- tiprotéico contendo NLRP2 (também conhecido como NALP2), ASC e caspase-1, enquanto os termos "inflamassoma NLRP3" e "inflamas- soma NALP3" podem significar um complexo multiprotéico contendo NLRP3 (também conhecido como NALP3), ASC e os termos “infla- massoma de NLRC4” e “inflamassoma IPAF” podem significar um complexo multiprotéico contendo NLRC4 (também conhecido como IPAF), ASC e caspase-1. Adicionalmente, o termo "Inflammassoma AIM2" pode significar um complexo multiprotéico compreendendo AIM2, ASC e caspase-1.
[0057] Como no presente documento utilizado, a frase "identidade de sequência" significa a porcentagem de subunidades idênticas nas posições correspondentes em duas sequências (por exemplo, sequên-
cias de ácido nucleico, sequências de aminoácido) quando as duas sequências estão alinhadas para maximizar a correspondência de su- bunidade, isto é, levando em conta intervalos e inserções. A identidade de sequência pode ser medida utilizando software de análise de se- quência (por exemplo, Sequence Analysis Software Package from Ac- celrys CGC, San Diego, CA).
[0058] Pelas frases "quantidade terapeuticamente eficaz" e "dosa- gem eficaz" entende-se uma quantidade suficiente para produzir um resultado terapeuticamente (por exemplo, clinicamente) desejável; a natureza exata do resultado irá variar dependendo da natureza do dis- túrbio sendo tratado. Por exemplo, onde o distúrbio a ser tratado é SCI, o resultado pode ser uma melhora nas habilidades motoras e na função locomotora, uma diminuição da lesão da medula espinhal, etc. As composições no presente documento descritas podem ser adminis- tradas a partir de uma ou mais vezes por dia a um ou mais vezes por semana. O especialista versado irá observar que certos fatores podem influenciar a dosagem e o tempo necessário para tratar efetivamente um indivíduo, incluindo, mas não limitado à gravidade da doença ou distúrbio, tratamentos precedenteprecedentes, a saúde geral e/ou ida- de do indivíduo, e outros doenças presentes. Além disso, o tratamento de um indivíduo com uma quantidade terapeuticamente eficaz das composições da invenção pode incluir um único tratamento ou uma série de tratamentos.
[0059] Como no presente documento utilizado, o termo "tratamen- to" é definido como a aplicação ou administração de um agente tera- pêutico no presente documento descrito, ou identificado por um méto- do no presente documento descrito, a um paciente, ou aplicação ou administração do agente terapêutico a um tecido isolado ou linhagem celular de um paciente que possui uma doença, um sintoma de doen- ça ou uma predisposição para uma doença, com o propósito de curar,
tratar, aliviar, auxiliar, alterar, remediar, melhorar, aprimorar ou afetar a doença, os sintomas de doença ou a predisposição para a doença.
[0060] Os termos "paciente", "pessoa" e "indivíduo" são utilizados de modo trocável nesta invenção e significam um indivíduo mamífero a ser tratado. Em uma modalidade, o paciente mamífero é um ser hu- mano. Em alguns casos, os métodos da invenção encontram uso em animais experimentais, em aplicações veterinárias e no desenvolvi- mento de modelos animais para doenças, incluindo, mas não limitado a roedores, incluindo camundongos, ratos e hamsters, assim como primatas.
[0061] Como no presente documento utilizado de modo trocável, "Ausente no Melanoma 2" e "AIM2" podem significar um produto de expressão de um gene AIM2 ou isoformas; ou uma proteína que com- partilha pelo menos 65%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência de aminoácido com AIM2 (por exemplo, números de acesso NX_014862, NP004824, XP016858337, XP005245673, AAB81613, BAF84731, AAH10940) e apresenta uma atividade funcional de AIM2.
[0062] Como utilizado de modo trocável nessa invenção, "proteína contendo domínios 1 NACHT, LRR e PYD", "NALP1" e "NLRP1" signi- ficam um produto de expressão de um gene NALP1 ou NLRP1 ou iso- formas; ou uma proteína que compartilha pelo menos 65%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência de aminoácido com NALP1 (por exemplo, números de acesso AAH51787, NP_001028225, NP_127500, NP_127499, NP_127497, NP055737) e apresenta uma atividade funcional de NALP1.
[0063] Como no presente documento utilizado de modo trocável, "NALP2" e "NLRP2" significam um produto de expressão de um gene NALP2 ou NLRP2 ou isoformas; ou uma proteína que compartilha pelo menos 65%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência de aminoácido com NALP2 (por exemplo, números de acesso NP_001167552, NP_001167553, NP_001167554 ou NP_060322) e apresenta uma atividade funcional de NALP2.
[0064] Como no presente documento utilizado de modo trocável, "NALP3" e "NLRP3" significam um produto de expressão de um gene NALP3 ou NLRP3 ou isoformas; ou uma proteína que compartilha pelo menos 65%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência de aminoácido com NALP3 (por exemplo, números de acesso NP_001073289, NP_001120933, NP_001120934, NP_001230062, NP_004886, NP_899632, XP_011542350, XP_016855670, XP_016855671, XP_016855672 ou XP_016855673) e apresenta uma atividade funcional de NALP3.
[0065] Como utilizado de modo trocável nessa invenção, "NLRC4" e "IPAF" significam um produto de expressão de um gene NLRC4 ou IPAF ou isoformas; ou uma proteína que compartilha pelo menos 65%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência de aminoácido com NLRC4 (por exemplo, números de acesso NP_001186067, NP001186068, NP_001289433 ou NP_067032) e apresenta uma atividade funcional de NLRC4.
[0066] Os termos "acidente vascular cerebral" e "acidente vascular cerebral isquêmico" significam quando o fluxo sanguíneo é interrompi- do em parte do cérebro ou medula espinhal.
[0067] Por "lesão traumática ao CNS" entende-se qualquer insulto ao CNS por uma força mecânica externa, possivelmente levando a de- ficiências permanentes ou temporárias da função do CNS.
[0068] Métodos envolvendo técnicas convencionais de biologia molecular são no presente documento descritos. Tais técnicas são ge- ralmente conhecidas na especialidade e são descritas com detalhes nos tratados de metodologia tais como Molecular Cloning: A Labora- tory Manual, 3rd ed., vol. 1-3, ed. Sambrook et al., Cold Spring Harbor
Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 2001; e Current Protocols in Molecular Biology, ed. Ausubel et al., Greene Publishing and Wiley- Interscience, New York, 1992 (com atualizações periódicas). As técni- cas de imunologia são geralmente conhecidas na especialidade e são descritas com detalhes nos tratados de metodologia tais como Advan- ces in Immunology, volume 93, ed. Frederick W. Alt, Academic Press, Burlington, MA, 2007; Making and Using Antibodies: A Practical Hand- book, eds. Gary C. Howard and Matthew R. Kaser, CRC Press, Boca Raton, FL, 2006; Medical Immunology, 6th ed., edited by Gabriel Virella, Informa Healthcare Press, London, England, 2007; e Harlow and Lane ANTIBODIES: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor La- boratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1988.
[0069] Embora composições e métodos similares ou equivalentes àqueles descritos nesta invenção possam ser utilizados na prática ou teste da presente invenção, composições e métodos adequados são descritos abaixo. Todas as publicações, pedidos de patentes e paten- tes no presente documento mencionados são incorporados por refe- rência em sua totalidade. Em caso de conflito, o presente relatório descritivo, incluindo definições, prevalecerá. As modalidades particula- res examinadas abaixo são apenas ilustrativas e não se destinam a ser limitativas.
VISÃO GERAL
[0070] São no presente documento fornecidos anticorpos mono- clonais ou fragmentos de anticorpos dos mesmos que se ligam especi- ficamente à proteína tipo Spec associada a apoptose contendo um Domínio de Ativação e Recrutamento da Caspase (ASC), Os anticor- pos monoclonais ou seus fragmentos podem ligar-se especificamente a um fragmento antigênico de ASC que compreende, consiste ou con- siste essencialmente em uma sequência de aminoácido da SEQ ID NO. 5. Além desta modalidade, a invenção contempla o uso de anti-
corpos monoclonais ou fragmentos de anticorpos dos mesmos em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflama- ção pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. Em uma modalidade, os an- ticorpos monoclonais ou fragmentos de anticorpos dos mesmos no presente documento fornecidos podem ser utilizados em um método para reduzir a inflamação em um mamífero, conforme descrito na US
8.685.400, cujos conteúdos são no presente documento incorporados por referência na sua totalidade. A inflamação pode ocorrer nos pul- mões e/ou no sistema nervoso central (CNS). A inflamação nos pul- mões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exemplo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Conforme fornecido nesta invenção, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como do- enças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), transtorno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), do- ença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticor- po monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticor- po derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da adminis- tração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou suspeita de sofrer de MS. O anti- corpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo desta modali- dade pode estar presente em uma composição tal como, por exemplo, uma composição farmacêutica como no presente documento forneci-
da. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou fragmento do mesmo é utilizado em combinação com um ou mais outros agentes nos méto- dos de tratamento no presente documento fornecidos. Os outros agen- tes podem ser qualquer agente fornecido nesta invenção (por exem- plo, inibidores de absorção de EV) e/ou anticorpos ou fragmentos de anticorpos direcionados contra outros componentes do inflamassoma (por exemplo, IL-18, caspase-1, NALP1, AIM2, etc.).
[0071] A invenção também abrange anticorpos monoclonais ou fragmentos de anticorpos dos mesmos que se ligam especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o fragmento de anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende HCDR1 da SEQ ID NO: 6, HCDR2 da SEQ ID NO: 7 e HCDR3 da SEQ ID NO: 8, ou uma variante desta tendo pelo menos uma substituição de aminoácido em HCDR1, HCDR2 e/ou HCDR3. Além desta modalidade, a invenção contempla o uso do anticorpo mo- noclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. Em uma modalidade, os anticorpos mo- noclonais ou fragmentos de anticorpos dos mesmos no presente do- cumento fornecidos podem ser utilizados em um método para reduzir a inflamação em um mamífero, conforme descrito na US 8.685.400, cu- jos conteúdos são no presente documento incorporados por referência na sua totalidade. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exemplo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medu- la espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afe- ta o CNS. Conforme no presente documento fornecido, a doença, con- dição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vas-
cular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, escle- rose múltipla (MS), transtorno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anti- corpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente.
O uso do anticor- po monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento da inflamação pode reduzir a inflamação imune ina- ta ou relacionada com o inflamassoma no paciente.
A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo mo- noclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado pa- ra tratar uma lesão do sistema nervoso central (CNS) e/ou uma doen- ça autoimune, autoinflamatória, metabólica ou neurodegenerativa.
A lesão do CNS pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em lesão cerebral traumática (TBI), acidente vascular cerebral e lesão da medula espinhal (SCI). A doença autoimune ou neurodegenerativa po- de ser selecionada de esclerose lateral amiotrófica (ALS), doença de Alzheimer, doença de Parkinson (PD), distrofia muscular (MD), lúpus eritematoso sistêmico, nefrite lúpica, artrite reumatóide, doença infla- matória intestinal (por exemplo, doença de Crohn e colite ulcerativa) e esclerose múltipla (MS). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou suspeita de sofrer de MS.
Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fra- gmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar PD através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de PD.
Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fra- gmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar a nefri- te lúpica através da administração do anticorpo monoclonal ou frag- mento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de nefrite lúpica.
A doença metabólica pode ser se- lecionada de síndrome metabólica, obesidade, diabetes melito, nefro- patia diabética ou doença renal diabética (DKD), resistência à insulina, aterosclerose, um distúrbio de armazenamento de lipídios, uma doen- ça de armazenamento de glicogênio, deficiência de acil-coenzima A desidrogenase de cadeia média, doença hepática gordurosa não al- coólica (por exemplo, esteatohepatite não alcoólica (NASH)) e gota.
Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticor- po derivado do mesmo é utilizado para tratar a nefropatia diabética pe- la administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de nefropatia diabética.
Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar a NASH através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspei- to de sofrer de NASH.
A doença autoinflamatória pode ser a síndrome periódica associada à criopirina (CAPS). A CAPS pode abranger sín- drome autoinflamatória familiar do frio (FCAS), síndrome de Muckle- Wells (MWS) e doença inflamatória multissistêmica de início neonatal (NOMID). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar a CAPS atra- vés da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anti- corpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de CAPS.
O anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade pode estar presente em uma composição tal como, por exemplo, uma composição farmacêutica como no presente documento fornecida. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou fragmento do mesmo é utilizado em combinação com um ou mais ou- tros agentes nos métodos de tratamento no presente documento for- necidos. Os outros agentes podem ser qualquer agente fornecido nes- ta invenção (por exemplo, inibidores de absorção de EV) e/ou anticor- pos ou fragmentos de anticorpos direcionados contra outros compo- nentes do inflamassoma (por exemplo, IL-18, caspase-1, NALP1, AIM2, etc.).
[0072] Em algumas modalidades, a invenção fornece anticorpos monoclonais ou fragmentos de anticorpos dos mesmos que se ligam especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o fragmento de anti- corpo compreende uma região variável de cadeia leve (VL) e uma re- gião variável de cadeia pesada (VH), em que a sequência de aminoá- cido da região VL compreende LCDR1 da SEQ ID NO: 12, LCDR2 da SEQ ID NO: 13 e LCDR3 da SEQ ID NO: 14, ou uma variante desta tendo pelo menos uma substituição de aminoácido em LCDR1, LCDR2 e/ou LCDR3. Além desta modalidade, a invenção contempla o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflama- ção pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. Em uma modalidade, os an- ticorpos monoclonais ou fragmentos de anticorpos dos mesmos no presente documento fornecidos podem ser utilizados em um método para reduzir a inflamação em um mamífero, conforme descrito na US
8.685.400, cujos conteúdos são no presente documento incorporados por referência na sua totalidade. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o re- sultado de uma lesão (por exemplo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Conforme fornecido nesta invenção, a do-
ença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser aci- dente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doen- ças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), transtorno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode re- duzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente.
O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento da inflamação pode reduzir a inflamação imune inata ou relacionada com o inflamassoma no paciente.
A redu- ção pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar uma lesão do sistema nervoso central (CNS) e/ou uma doença autoimune, autoinflamatória, metabólica ou neurodegene- rativa.
A lesão do CNS pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em lesão cerebral traumática (TBI), acidente vascular cerebral e lesão da medula espinhal (SCI). A doença autoimune ou neurodege- nerativa pode ser selecionada de esclerose lateral amiotrófica (ALS), doença de Alzheimer, doença de Parkinson (PD), distrofia muscular (MD), lúpus eritematoso sistêmico, nefrite lúpica, artrite reumatóide, doença inflamatória intestinal (por exemplo, doença de Crohn e colite ulcerosa) e esclerose múltipla (MS). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS.
Em uma modalidade, o anticorpo mo- noclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado pa- ra tratar PD através da administração do anticorpo monoclonal ou fra-
gmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de PD.
Em uma modalidade, o anticorpo monoclo- nal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tra- tar a nefrite lúpica através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que so- fre ou é suspeito de sofrer de nefrite lúpica.
A doença metabólica pode ser selecionada de síndrome metabólica, obesidade, diabetes melito, nefropatia diabética ou doença renal diabética (DKD), resistência à in- sulina, aterosclerose, um distúrbio de armazenamento de lipídios, uma doença de armazenamento de glicogênio, deficiência de acil-coenzima A desidrogenase de cadeia média, doença hepática gordurosa não alcoólica (por exemplo, esteatohepatite não alcoólica (NASH)) e gota.
Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticor- po derivado do mesmo é utilizado para tratar a nefropatia diabética através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de nefropatia diabética.
Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar a NASH através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que so- fre ou é suspeito de sofrer de NASH.
A doença autoinflamatória pode ser a síndrome periódica associada à criopirina (CAPS). A CAPS pode abranger síndrome autoinflamatória familiar do frio (FCAS), síndrome de Muckle-Wells (MWS) e doença inflamatória multissistêmica de iní- cio neonatal (NOMID). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar CAPS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspei- to de sofrer de CAPS.
O anticorpo monoclonal ou fragmento de anti- corpo do mesmo desta modalidade pode estar presente em uma com-
posição tal como, por exemplo, uma composição farmacêutica como no presente documento fornecida. Em alguns casos, o anticorpo mo- noclonal ou fragmento do mesmo é utilizado em combinação com um ou mais outros agentes nos métodos de tratamento no presente do- cumento fornecidos. Os outros agentes podem ser qualquer agente fornecido nesta invenção (por exemplo, inibidores de absorção de EV) e/ou anticorpos ou fragmentos de anticorpos direcionados contra ou- tros componentes do inflamassoma (por exemplo, IL-18, caspase-1, NALP1, AIM2, etc.).
[0073] Em outras modalidades, a invenção também fornece anti- corpos monoclonais ou um fragmento de anticorpo dos mesmos que se ligam especificamente a ASC, em que o anticorpo ou o fragmento de anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende HCDR1 da SEQ ID NO: 6, HCDR2 da SEQ ID NO: 7 e HCDR3 da SEQ ID NO: 8, ou uma varian- te desta tendo pelo menos uma substituição de aminoácido em HCDR1, HCDR2 e/ou HCDR3; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende LCDR1 da SEQ ID NO: 12, LCDR2 da SEQ ID NO: 13 e LCDR3 da SEQ ID NO: 14, ou uma variante desta tendo pelo menos uma substituição de aminoácido em LCDR1, LCDR2 e/ou LCDR3. Além desta modalidade, a invenção contempla o uso do anti- corpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um méto- do para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma in- flamação relacionada ao inflamassoma. Em uma modalidade, os anti- corpos monoclonais ou fragmentos de anticorpos dos mesmos no pre- sente documento fornecidos podem ser utilizados em um método para reduzir a inflamação em um mamífero, conforme descrito na US
8.685.400, cujos conteúdos são no presente documento incorporados por referência na sua totalidade.
A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS.
A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o re- sultado de uma lesão (por exemplo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS.
Conforme no presente documento fornecido, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou do- enças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), transtorno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou frag- mento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente.
O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação imune inata ou relacionada ao inflamassoma no paciente.
A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou pa- ciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo mono- clonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar uma lesão do sistema nervoso central (CNS) e/ou uma doença autoimune, autoinflamatória, metabólica ou neurodegenerativa.
A le- são do CNS pode ser selecionada do grupo que consiste em lesão ce- rebral traumática (TBI), acidente vascular cerebral e lesão da medula espinhal (SCI). A doença autoimune ou neurodegenerativa pode ser selecionada de esclerose lateral amiotrófica (ALS), doença de Alzhei- mer, doença de Parkinson (PD), distrofia muscular (MD), lúpus erite- matoso sistêmico, nefrite lúpica, artrite reumatóide, doença inflamató- ria intestinal (por exemplo, doença de Crohn e colite ulcerosa) e escle- rose múltipla (MS). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS.
Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fra- gmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar PD através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de PD.
Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fra- gmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar a nefri- te lúpica através da administração do anticorpo monoclonal ou frag- mento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de nefrite lúpica.
A doença metabólica pode ser se- lecionada de síndrome metabólica, obesidade, diabetes melito, nefro- patia diabética ou doença renal diabética (DKD), resistência à insulina, aterosclerose, um distúrbio de armazenamento de lipídios, uma doen- ça de armazenamento de glicogênio, deficiência de acil-coenzima A desidrogenase de cadeia média, doença hepática gordurosa não al- coólica (por exemplo, esteatohepatite não alcoólica (NASH)) e gota.
Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticor- po derivado do mesmo é utilizado para tratar a nefropatia diabética através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de nefropatia diabética.
Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar a NASH através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que so- fre ou é suspeito de sofrer de NASH.
A doença autoinflamatória pode ser a síndrome periódica associada à criopirina (CAPS). A CAPS pode abranger síndrome autoinflamatória familiar do frio (FCAS), síndrome de Muckle-Wells (MWS) e doença inflamatória multissistêmica de iní- cio neonatal (NOMID). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar a CAPS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspei- to de sofrer de CAPS. O anticorpo monoclonal ou fragmento de anti- corpo do mesmo desta modalidade pode estar presente em uma com- posição tal como, por exemplo, uma composição farmacêutica como no presente documento fornecida. Em alguns casos, o anticorpo mo- noclonal ou fragmento do mesmo é utilizado em combinação com um ou mais outros agentes nos métodos de tratamento no presente do- cumento fornecidos. Os outros agentes podem ser qualquer agente fornecido nesta invenção (por exemplo, inibidores de absorção de EV) e/ou anticorpos ou fragmentos de anticorpos direcionados contra ou- tros componentes do inflamassoma (por exemplo, IL-18, caspase-1, NALP1, AIM2, etc.).
[0074] São no presente documento fornecidos as composições e métodos para reduzir a inflamação imune inata ou relacionada ao in- flamassoma. Em alguns casos, a inflamação relacionada ao inflamas- soma está no CNS de um mamífero que foi submetido ou é afetado por uma condição que resulta ou provoca uma inflamação imune inata ou relacionada à inflamação. Em alguns casos, a inflamação relacio- nada ao inflamassoma está em um mamífero (por exemplo, ser huma- no) que é afetado ou suspeito de ser atingido por uma condição que está associada, resulta ou provoca inflamação imune inata ou relacio- nada ao inflamassoma. A condição que resulta ou provoca inflamação imune inata ou relacionada com o inflamassoma pode ser uma lesão do CNS, uma doença ou distúrbio autoimune, autoinflamatório, neuro- degenerativo e/ou metabólico. A lesão do CNS pode ser selecionada do grupo que consiste em lesão cerebral traumática (TBI), acidente vascular cerebral e lesão da medula espinhal (SCI). A doença autoi- mune ou neurodegenerativa pode ser selecionada de esclerose lateral amiotrófica (ALS), doença de Alzheimer, doença de Parkinson (PD), distrofia muscular (MD), lúpus eritematoso sistêmico, nefrite lúpica, artrite reumatóide, doença inflamatória intestinal (por exemplo, doença de Crohn e colite ulcerosa) e esclerose múltipla (MS). A doença meta- bólica pode ser selecionada de síndrome metabólica, obesidade, dia- betes melito, nefropatia diabética ou doença renal diabética (DKD), resistência à insulina, aterosclerose, um distúrbio de armazenamento de lipídios, uma doença de armazenamento de glicogênio, deficiência de acil-coenzima A desidrogenase de cadeia média, doença hepática gordurosa não alcoólica (por exemplo, esteatohepatite não alcoólica (NASH)) e gota.
A doença autoinflamatória pode ser a síndrome perió- dica associada à criopirina (CAPS). A CAPS pode abranger a síndro- me autoinflamatória familiar do frio (FCAS), síndrome de Muckle-Wells (MWS) e doença inflamatória multissistêmica de início neonatal (NO- MID). As composições e métodos no presente documento descritos podem incluir anticorpos ou fragmentos ativos dos mesmos, conforme fornecido nesta invenção, que se ligam especificamente a pelo menos um componente (por exemplo, ASC) de um inflamassoma de mamífe- ro e/ou compostos que modulam (por exemplo, inibem ou reduzem) a captação da vesícula extracelular (EV) e uso como tratamento para inflamação do CNS em um mamífero.
Exemplos de condições que po- dem levar à inflamação no CNS incluem uma lesão do CNS (por exemplo, lesão da medula espinhal (SCI), lesão cerebral traumática (TBI) ou acidente vascular cerebral), uma doença neurodegenerativa, uma doença autoimune (por exemplo, MS), asma, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), fibrose cística, doença pulmonar intersticial ou síndrome da angústia respiratória aguda.
A composição pode ser administrada em uma quantidade terapeuticamente eficaz.
A quanti- dade terapeuticamente eficaz pode ser uma dose como no presente documento fornecida.
O agente pode ser um inibidor de captação da vesícula extracelular (EV) e/ou um anticorpo ou um fragmento ativo do mesmo, conforme fornecido nesta invenção, que se liga a um compo- nente de um inflamassoma ou uma combinação dos mesmos. A com- posição pode ser administrada por qualquer via adequada, por exem- plo, por inalação, intravenosa, intraperitoneal ou intracerebroventricu- larmente. A composição pode ainda incluir pelo menos um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
[0075] São no presente documento fornecidos composições e mé- todos para o tratamento de esclerose múltipla (MS) em um indivíduo que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Os métodos para o tratamen- to de MS no presente documento fornecidos podem envolver a admi- nistração de uma composição (por exemplo, uma composição farma- cêutica) compreendendo um agente (por exemplo, IC 100) ao indiví- duo que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. A esclerose múltipla (MS) é uma doença autoimune que afeta o cérebro e a medula espi- nhal. O indivíduo pode apresentar sintomas clínicos consistentes com MS. O indivíduo pode ser diagnosticado com qualquer tipo de MS co- nhecido na técnica. A MS pode ser MS recorrente-remitente (RRMS), MS secundária progressiva (SPMS), MS primária progressiva (PPMS) ou MS progressiva recorrente (PRMS). O diagnóstico de MS pode ser ou pode ter sido determinado utilizando qualquer método conhecido na técnica. Em uma modalidade, o indivíduo foi diagnosticado de ter MS utilizando os métodos detalhados na US 62/560.963, depositada em 20 de setembro de 2017, cujos conteúdos são no presente documento incorporados por referência na sua totalidade. O agente pode ser um tratamento padrão de assistência conhecido na técnica para MS, um inibidor de captação de EV (por exemplo, qualquer inibidor de capta- ção de EV da Tabela 1), um anticorpo ou fragmento de anticorpo do mesmo como fornecido nesta invenção que se liga a um componente de um inflamassoma (por exemplo, um anticorpo monoclonal anti-ASC ou fragmento de anticorpo do mesmo tal como, por exemplo, IC 100) ou qualquer combinação dos mesmos. A composição pode ser admi- nistrada por qualquer via adequada, por exemplo, através de inalação, intravenosa, intraperitoneal ou intracerebroventricularmente. A compo- sição pode ainda incluir pelo menos um veículo ou diluente farmaceu- ticamente aceitável. O tratamento padrão de assistência pode ser se- lecionado a partir de terapias direcionadas para modificar o resultado da doença, gerenciamento de recaídas, gerenciamento de sintomas ou qualquer uma de suas combinações. As terapias direcionadas à modi- ficação do resultado da doença podem ser selecionadas a partir de interferon beta, acetato de glatirâmero, fingolimod, teriflunomida, fuma- rato de dimetila, mitoxantrona, ocrelizumab, alemtuzumab, daclizumab e natalizumab.
[0076] São no presente documento fornecidos composições e mé- todos para o tratamento da doença de Parkinson (PD) em um indiví- duo que sofre ou é suspeito de sofrer de PD. Os métodos para tratar a PD no presente documento fornecidos podem envolver a administra- ção de uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) compreendendo um agente (por exemplo, IC 100) ao indivíduo que sofre ou é suspeito de sofrer de PD. A doença de Parkinson (PD) é um distúrbio progressivo do sistema nervoso que afeta o movimento devi- do ao colapso e/ou morte gradual das células nervosas no cérebro de um mamífero (por exemplo, ser humano) que sofre de PD. A PD pode ocorrer e/ou progredir através de cinco estágios (isto é, Estágios 1 a 5) e as composições e métodos no presente documento fornecidos po- dem ser utilizados para tratar um indivíduo que sofre ou é suspeito de sofrer de PD em qualquer um dos cinco estágios. O diagnóstico de PD pode ser ou pode ter sido determinado utilizando qualquer método co- nhecido na técnica. Em uma modalidade, o indivíduo foi diagnosticado de ter PD utilizando os métodos detalhados na WO 2019/060516, de-
positada em 20 de setembro de 2018, cujos conteúdos são no presen- te documento incorporados por referência na sua totalidade. O agente pode ser um tratamento padrão de assistência conhecido na técnica para PD, um inibidor de captação de EV (por exemplo, qualquer inibi- dor de captação de EV da Tabela 1), um anticorpo ou fragmento de anticorpo do mesmo, conforme fornecido nesta invenção, que se liga a um componente de um inflamassoma (por exemplo, um anticorpo mo- noclonal anti-ASC ou fragmento de anticorpo do mesmo, tal como, por exemplo, IC 100) ou qualquer combinação dos mesmos. A composi- ção pode ser administrada por qualquer via adequada, por exemplo, por inalação, intravenosa, intraperitoneal ou intracerebroventricular- mente. A composição pode ainda incluir pelo menos um veículo ou di- luente farmaceuticamente aceitável. O tratamento padrão pode ser se- lecionado de carbidopa (Lodosyn), combinação de levodopa carbido- pa-levodopa, Duopa, agonistas da dopamina, inibidores de MAO B, inibidores da catecol O-metiltransferase (COMT), anticolinérgicos, amantadina e estimulação cerebral profunda. Os agonistas da dopa- mina podem ser selecionados entre pramipexol (Mirapex), ropinirol (Requip) e rotigotina (Neupro). Os inibidores de MAO B podem ser se- lecionados de selegilina (Eldepryl, Zelapar), rasagilina (Azilect) e safi- namida (Xadago). Os inibidores de COMT podem ser selecionados de Entacapone (Comtan) e Tolcapone (Tasmar). O anticolinérgico pode ser selecionado de benztropina (Cogentin) ou triexifenidila.
[0077] São no presente documento fornecidos composições e mé- todos para o tratamento da doença de Alzheimer (AD) em um indiví- duo que sofre ou é suspeito de sofrer de AD. Os métodos para o tra- tamento de AD no presente documento fornecidos podem envolver a administração de uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) compreendendo um agente (por exemplo, IC 100) ao indivíduo que sofre ou é suspeito de sofrer de AD. A doença de Al-
zheimer (AD) é um distúrbio progressivo do sistema nervoso que faz com que as células cerebrais se degenerem e morrem em indivíduos que sofrem de AD e progride de comprometimento cognitivo leve (MCI) para perda completa de memória e até mesmo mudanças na personalidade e comportamento. O diagnóstico de AD pode ser ou po- de ter sido determinado utilizando qualquer método conhecido na téc- nica. Em uma modalidade, o indivíduo foi diagnosticado como tendo AD utilizando os métodos detalhados na WO 2019/060516, depositada em 20 de setembro de 2018, cujos conteúdos são no presente docu- mento incorporados por referência na sua totalidade. O agente pode ser um tratamento padrão de assistência conhecido na técnica para AD, um inibidor de captação de EV (por exemplo, qualquer inibidor de captação de EV da Tabela 1), um anticorpo ou fragmento de anticorpo do mesmo como no presente documento fornecido que se liga a um componente de um inflamassoma (por exemplo, um anticorpo mono- clonal anti-ASC ou fragmento de anticorpo do mesmo tal como, por exemplo, IC 100) ou qualquer combinação dos mesmos. A composi- ção pode ser administrada por qualquer via adequada, por exemplo, por inalação, intravenosa, intraperitoneal ou intracerebroventricular- mente. A composição pode ainda incluir pelo menos um veículo ou di- luente farmaceuticamente aceitável. O tratamento padrão de tratamen- to pode ser selecionado de inibidores da colinesterase e memantina (Namenda). Os inibidores da colinesterase podem ser selecionados a partir de donepezil (Aricept), galantamina (Razadyne) e rivastigmina (Exelon).
[0078] São fornecidos nessa invenção composições e métodos para o tratamento da artrite reumatóide (RA) em um indivíduo que so- fre ou é suspeito de sofrer de RA. Os métodos para o tratamento de RA fornecidos nesta invenção podem envolver a administração de uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) com-
preendendo um agente (por exemplo, IC 100) ao indivíduo que sofre ou é suspeito de sofrer de RA.
A artrite reumatoide (RA) é uma doença inflamatória autoimune crônica que pode provocar danos às articula- ções de um indivíduo, assim como à pele, olhos, pulmões, coração e vasos sanguíneos.
O diagnóstico de RA pode ser ou pode ter sido de- terminado utilizando qualquer método conhecido na técnica.
Em uma modalidade, o indivíduo foi diagnosticado de ter RA utilizando os mé- todos detalhados na WO 2019/060516, depositada em 20 de setembro de 2018, cujos conteúdos são no presente documento incorporados por referência na sua totalidade.
O agente pode ser um tratamento pa- drão de assistência conhecido na técnica para RA, um inibidor de cap- tação de EV (por exemplo, qualquer inibidor de captação de EV da Tabela 1), um anticorpo ou fragmento de anticorpo do mesmo, con- forme no presente documento fornecido, que se liga a um componente de um inflamassoma (por exemplo, um anticorpo monoclonal anti-ASC ou fragmento de anticorpo do mesmo, como, por exemplo, IC 100) ou qualquer combinação dos mesmos.
A composição pode ser adminis- trada por qualquer via adequada, por exemplo, por inalação, intrave- nosa, intraperitoneal ou intracerebroventricularmente.
A composição pode ainda incluir pelo menos um veículo ou diluente farmaceutica- mente aceitável.
O tratamento padrão de tratamento pode ser selecio- nado a partir de fármacos antiinflamatórios não esteróides (NSAIDs), esteróides (por exemplo, prednisona), fármacos antirreumáticos modi- ficadores da doença (DMARDs) e agentes biológicos.
Os NSAIDs po- dem incluir ibuprofeno (Advil, Motrin IB) e naproxeno sódico (Aleve). Os DMARDs podem incluir metotrexato (Trexall, Otrexup, outros), le- flunomida (Arava), hidroxicloroquina (Plaquenil) e sulfassalazina (Azul- fidina). Os agentes biológicos podem incluir abatacept (Orencia), ada- limumab (Humira), anakinra (Kineret), baricitinib (Olumiant), certolizu- mab (Cimzia), etanercept (Enbrel), golimumab (Simponi), infliximab
(Remicade), rituximab (Rituxan), sarilumab (Kevzara), tocilizumab (Ac- temra) e tofacitinib (Xeljanz).
[0079] São fornecidos nessa invenção composições e métodos para o tratamento da nefrite lúpica em um indivíduo que sofre ou é suspeito de sofrer de nefrite lúpica. Os métodos para tratar a nefrite lúpica no presente documento fornecidos podem envolver a adminis- tração de uma composição (por exemplo, uma composição farmacêu- tica) compreendendo um agente (por exemplo, IC 100) ao indivíduo que sofre ou é suspeito de sofrer de nefrite lúpica. A nefrite lúpica é um tipo de inflamação renal que costuma ser uma complicação comum do lúpus eritematoso sistêmico, muitas vezes referido simplesmente como lúpus. A nefrite lúpica é uma doença autoimune na qual os auto- anticorpos lúpicos afetam as estruturas dos rins de um indivíduo que podem resultar em inflamação renal, assim como hematúria, proteinú- ria, hipertensão, função renal prejudicada ou até mesmo insuficiência renal. O diagnóstico de nefrite lúpica pode ser ou pode ter sido deter- minado utilizando qualquer método conhecido na técnica. Em uma modalidade, o indivíduo foi diagnosticado como tendo a nefrite lúpica utilizando os métodos detalhados na WO 2019/060516, depositada em 20 de setembro de 2018, cujos conteúdos são no presente documento incorporados por referência na sua totalidade. O agente pode ser um tratamento padrão de assistência conhecido na técnica para nefrite lúpica, um inibidor de absorção de EV (por exemplo, qualquer inibidor de absorção de EV da Tabela 1), um anticorpo ou fragmento de anti- corpo do mesmo, conforme no presente documento fornecido, que se liga a um componente de um inflamassoma (por exemplo, um anticor- po monoclonal anti-ASC ou fragmento de anticorpo do mesmo tal co- mo, por exemplo, IC 100) ou qualquer combinação dos mesmos. A composição pode ser administrada por qualquer via adequada, por exemplo, por inalação, intravenosa, intraperitoneal ou intracerebroven-
tricularmente. A composição pode ainda incluir pelo menos um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável. O tratamento padrão para a nefrite lúpica pode incluir medicamentos para controlar a pressão arte- rial e/ou uma dieta especial pobre em proteínas e sal. Adicionalmente, o tratamento padrão para a nefrite lúpica pode ser o tratamento para o lúpus tal como, por exemplo, antiinflamatórios não esteróides (NSAIDs), medicamentos antimaláricos, corticosteróides (por exemplo, prednisona; metilprednisolona), imunossupressores ou agentes bioló- gicos. Exemplos de NSAIDs podem incluir naproxeno sódico (Aleve) e ibuprofeno (Advil, Motrin IB, outros). Um exemplo de medicamento an- timalárico pode ser a hidroxicloroquina (Plaquenil). Exemplos de imu- nossupressores podem incluir azatioprina (Imuran, Azasan), micofeno- lato mofetil (CellCept) e metotrexato (Trexall). Exemplos de produtos biológicos podem incluir belimumab (Benlysta) ou rituximab (Rituxan).
[0080] São fornecidos nessa invenção composições e métodos para o tratamento de esteatohepatite não alcoólica (NASH) em um in- divíduo que sofre ou é suspeito de sofrer de NASH. Os métodos de tratamento de NASH no presente documento fornecidos podem envol- ver a administração de uma composição (por exemplo, uma composi- ção farmacêutica) compreendendo um agente (por exemplo, IC 100) ao indivíduo que sofre ou é suspeito de sofrer de NASH. A NASH é um tipo de doença hepática gordurosa não alcoólica (NAFLD). NAFLD é um termo genérico para uma série de doenças hepáticas que afetam pessoas que bebem pouco ou nenhum álcool. A principal característi- ca da NAFLD é o excesso de gordura armazenada nas células do fí- gado e é marcada por inflamação do fígado, que pode progredir para cicatrizes e danos irreversíveis. Esse dano pode ser similar ao dano causado pelo uso excessivo de álcool. Na sua forma mais grave, a es- teatohepatite não alcoólica pode progredir para cirrose e insuficiência hepática. O diagnóstico de NASH pode ser ou pode ter sido determi-
nado utilizando qualquer método conhecido na técnica. Em uma moda- lidade, o indivíduo foi diagnosticado de ter NASH utilizando os méto- dos detalhados na WO 2019/060516, depositada em 20 de setembro de 2018, cujos conteúdos são no presente documento incorporados por referência na sua totalidade. O agente pode ser um tratamento pa- drão de assistência conhecido na técnica para NASH, um inibidor de captação de EV (por exemplo, qualquer inibidor de captação de EV da Tabela 1), um anticorpo ou fragmento de anticorpo do mesmo, con- forme fornecido nesta invenção, que se liga a um componente de um inflamassoma (por exemplo, um anticorpo monoclonal anti-ASC ou fragmento de anticorpo do mesmo tal como, por exemplo, IC 100) ou qualquer combinação dos mesmos. A composição pode ser adminis- trada por qualquer via adequada, por exemplo, por inalação, intrave- nosa, intraperitoneal ou intracerebroventricularmente. A composição pode ainda incluir pelo menos um veículo ou diluente farmaceutica- mente aceitável. O padrão de tratamento para NASH pode incluir mu- danças no estilo de vida, tais como perder peso, aumentar os exercí- cios, evitar medicamentos prejudiciais ao fígado, reduzir o colesterol e/ou controlar o diabetes.
[0081] São no presente documento fornecidos composições e mé- todos para o tratamento da nefropatia diabética em um indivíduo que sofre ou é suspeito de sofrer de nefropatia diabética. Os métodos para o tratamento da nefropatia diabética no presente documento forneci- dos podem envolver a administração de uma composição (por exem- plo, uma composição farmacêutica) compreendendo um agente (por exemplo, IC 100) ao indivíduo que sofre ou é suspeito de sofrer de ne- fropatia diabética. A nefropatia diabética é uma complicação grave re- lacionada aos rins de diabetes tipo 1 e diabetes tipo 2 que também pode ser referida como doença renal diabética (DKD). O diagnóstico de DKD pode ser ou pode ter sido determinado utilizando qualquer método conhecido na técnica. Em uma modalidade, o indivíduo foi di- agnosticado de ter DKD utilizando os métodos detalhados na WO 2019/060516, depositada em 20 de setembro de 2018, cujos conteú- dos são no presente documento incorporados por referência na sua totalidade. O agente pode ser um tratamento padrão de assistência conhecido na técnica para DKD, um inibidor de captação de EV (por exemplo, qualquer inibidor de captação de EV da Tabela 1), um anti- corpo ou fragmento de anticorpo do mesmo como fornecido nesta in- venção que se liga a um componente de um inflamassoma (por exem- plo, um anticorpo monoclonal anti-ASC ou fragmento de anticorpo do mesmo tal como, por exemplo, IC 100) ou qualquer combinação dos mesmos. A composição pode ser administrada por qualquer via ade- quada, por exemplo, por inalação, intravenosa, intraperitoneal ou intra- cerebroventricularmente. A composição pode ainda incluir pelo menos um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável. O tratamento pa- drão para a nefropatia diabética pode incluir mudanças no estilo de vida tal como perder peso, aumentar os exercícios, diminuir o coleste- rol, controlar a proteína na urina, promover a saúde óssea, controlar a hipertensão, controlar o diabetes, fazer diálise ou transplante renal.
[0082] São fornecidos nessa invenção composições e métodos para o tratamento da doença inflamatória intestinal (IBD) em um indi- víduo que sofre ou é suspeito de sofrer de IBD. Os métodos para o tratamento de IBD fornecidos nesta invenção podem envolver a admi- nistração de uma composição (por exemplo, uma composição farma- cêutica) compreendendo um agente (por exemplo, IC 100) ao indiví- duo que sofre ou é suspeito de sofrer de IBD. IBD é um termo genérico utilizado para descrever distúrbios que envolvem inflamação crônica do trato digestivo de um indivíduo. IBD pode incluir colite ulcerativa e doença de Crohn. A colite ulcerativa é uma inflamação e feridas (úlce- ras) duradouras no revestimento interno do intestino grosso (cólon) e reto, enquanto a doença de Crohn é caracterizada pela inflamação do revestimento do trato digestivo, que geralmente se espalha profunda- mente nos tecidos afetados.
O diagnóstico de IBD pode ser ou pode ter sido determinado utilizando qualquer método conhecido na técnica.
Em uma modalidade, o indivíduo foi diagnosticado de ter IBD utilizan- do os métodos detalhados na WO 2019/060516, depositada em 20 de setembro de 2018, cujos conteúdos são no presente documento incor- porados por referência na sua totalidade.
O agente pode ser um trata- mento padrão de assistência conhecido na técnica para IBD, um inibi- dor de captação de EV (por exemplo, qualquer inibidor de captação de EV da Tabela 1), um anticorpo ou fragmento de anticorpo do mesmo, conforme fornecido nesta invenção, que se liga a um componente de um inflamassoma (por exemplo, um anticorpo monoclonal anti-ASC ou fragmento de anticorpo do mesmo tal como, por exemplo, IC 100) ou qualquer combinação dos mesmos.
A composição pode ser adminis- trada por qualquer via adequada, por exemplo, por inalação, intrave- nosa, intraperitoneal ou intracerebroventricularmente.
A composição pode ainda incluir pelo menos um veículo ou diluente farmaceutica- mente aceitável.
O tratamento padrão de assistência para IBD pode incluir medicamentos antiinflamatórios, supressores do sistema imuno- lógico, antibióticos, medicamentos antidiarréicos, analgésicos, suple- mentos de ferro e suplementos de cálcio e vitamina D.
Os antibióticos podem incluir ciprofloxacina (Cipro) e metronidazol (Flagyl). Exemplos de fármacos imunossupressoras podem incluir azatioprina (Azasan, Imuran), mercaptopurina (Purinethol, Purixan), ciclosporina (Gengraf, Neoral, Sandimmune) e metotrexato (Trexall). Outros exemplos de imunossupressores podem incluir inibidores do fator de necrose tumo- ral (TNF)-alfa, ou produtos biológicos tais como, por exemplo, inflixi- mab (Remicade), adalimumab (Humira), golimumab (Simponi), nata- lizumab (Tysabri), vedolizumab (Entyvio) e ustekinumab (Stelara). Os anti-inflamatórios podem incluir corticosteróides e aminossalicilatos, tais como, por exemplo, mesalamina (Asacol HD, Delzicol), balsalazida (Colazal) e olsalazina (Dipentum).
[0083] São no presente documento fornecidos composições e mé- todos para o tratamento da síndrome periódica associada à criopirina (CAPS) em um indivíduo que sofre ou é suspeito de sofrer de CAPS. Os métodos para o tratamento de CAPS fornecidos nesta invenção podem envolver a administração de uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) compreendendo um agente (por exemplo, IC 100) ao indivíduo que sofre ou é suspeito de sofrer de CAPS. Síndromes periódicas associadas à criopirina (CAPS), também chamada de síndrome autoinflamatória associada à criopirina, consiste em três doenças autoinflamatórias relacionadas a um defeito no mes- mo gene (isto é, NLRP3): doença inflamatória multissistêmica de início neonatal (NOMID), síndrome de Muckle-Wells (MWS) e síndrome au- toinflamatória familiar do frio (FCAS). A NOMID é caracterizada por febre com inflamação em vários órgãos. Os primeiros sintomas de NOMID podem incluir erupção cutânea similar à urticária que não co- ça; inflamação da membrana que envolve o cérebro, que provoca dor de cabeça, cegueira ou perda de audição; aparência protuberante aos olhos; e episódios de vômito. Após 1 ano de idade, metade das crian- ças com NOMID pode desenvolver dor e inchaço nas articulações. A MWS é caracterizada por sintomas que vêm e vão, incluindo erupção cutânea, olhos vermelhos, dores nas articulações e fortes dores de cabeça com vômitos. Os episódios duram entre um e três dias. A per- da auditiva, que pode ser completa, geralmente ocorre na adolescên- cia. A FCAS é caracterizada por febre, calafrios, náuseas, sede extre- ma, dor de cabeça e dores nas articulações. O diagnóstico de CAPS pode ser ou pode ter sido determinado utilizando qualquer método co- nhecido na técnica. Em uma modalidade, o indivíduo foi diagnosticado de ter CAPS utilizando os métodos detalhados na WO 2019/060516, depositada em 20 de setembro de 2018, cujos conteúdos são no pre- sente documento incorporados por referência na sua totalidade. O agente pode ser um tratamento padrão de assistência conhecido na técnica para CAPS, um inibidor de captação de EV (por exemplo, qualquer inibidor de captação de EV da Tabela 1), um anticorpo ou fragmento de anticorpo do mesmo, conforme fornecido nesta inven- ção, que se liga a um componente de um inflamassoma (por exemplo, um anticorpo monoclonal anti-ASC ou fragmento de anticorpo do mesmo tal como, por exemplo, IC 100) ou qualquer combinação dos mesmos. A composição pode ser administrada por qualquer via ade- quada, por exemplo, por inalação, intravenosa, intraperitoneal ou intra- cerebroventricularmente. A composição pode ainda incluir pelo menos um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável. O tratamento pa- drão de assistência para CAPS pode incluir agentes biológicos que direcionam a interleucina-1, assim como fisioterapia, talas para tratar deformidades articulares, e fármacos anti-inflamatórios não esteróides, corticosteróides ou metotrexato para reduzir os sintomas.
[0084] São fornecidos nessa invenção composições e métodos para reduzir a inflamação nos pulmões de um mamífero que foi sub- metido ou é afetado por uma condição que resulta ou provoca inflama- ção pulmonar. As composições e métodos no presente documento descritos podem incluir anticorpos ou fragmentos ativos dos mesmos conforme fornecido nesta invenção (por exemplo, IC 100) que se ligam especificamente a pelo menos um componente (por exemplo, ASC) de um inflamassoma de mamífero e/ou compostos que modulam (por exemplo, inibem ou reduzir) a captação de vesículas extracelulares (EV) e ter uso como tratamento para inflamação pulmonar em um mamífero.
[0085] São no presente documento descritos métodos para reduzir a inflamação nos pulmões de um mamífero com uma condição que resulta e/ou provoca uma resposta inflamatória nos pulmões. Em uma modalidade, o método de tratamento da inflamação nos pulmões de um mamífero compreende a administração ao mamífero de uma com- posição que compreende um agente (por exemplo, IC 100) que inibe a sinalização do inflamassoma. O mamífero pode ser um paciente ou indivíduo conforme no presente documento fornecido. Exemplos de condições que podem levar à inflamação nos pulmões incluem lesão do sistema nervoso central (CNS) (por exemplo, lesão da medula es- pinhal (SCI), lesão cerebral traumática (TBI) ou acidente vascular ce- rebral), uma doença neurodegenerativa, uma doença autoimune (por exemplo, MS), asma, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), fi- brose cística, doença pulmonar intersticial ou síndrome da angústia respiratória aguda. A composição pode ser administrada em uma quantidade terapeuticamente eficaz. A quantidade terapeuticamente eficaz pode ser uma dose como no presente documento fornecida. O agente pode ser um inibidor da captação de vesícula extracelular (EV), um anticorpo ou um fragmento ativo do mesmo, conforme fornecido nesta invenção, que se liga a um componente de um inflamassoma ou uma combinação dos mesmos. A composição pode ser administrada por qualquer via adequada, por exemplo, por inalação, intravenosa, intraperitoneal ou intracerebroventricularmente. A composição pode ainda incluir pelo menos um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
[0086] São no presente documento fornecidos composições e mé- todos para reduzir a inflamação nos rins de um mamífero que foi sub- metido ou é afetado por uma condição que resulta ou provoca inflama- ção renal. As composições e métodos no presente documento descri- tos podem incluir anticorpos ou fragmentos ativos dos mesmos, con- forme fornecido nesta invenção (por exemplo, IC 100) que se ligam especificamente a pelo menos um componente (por exemplo, ASC) de um inflamassoma de mamífero e/ou compostos que modulam (por exemplo, inibem ou reduzem) a captação de vesículas extracelulares (EV) e ter uso como tratamento para inflamação renal em mamíferos.
[0087] São no presente documento descritos métodos para reduzir a inflamação nos rins de um mamífero com uma condição que resulta e/ou provoca uma resposta inflamatória nos rins. Em uma modalidade, o método de tratamento da inflamação nos rins de um mamífero com- preende a administração ao mamífero de uma composição que com- preende um agente (por exemplo, IC 100) que inibe a sinalização do inflamassoma. O mamífero pode ser um paciente ou indivíduo confor- me no presente documento fornecido. Exemplos de condições que po- dem levar à inflamação dos rins incluem a nefrite lúpica. A composição pode ser administrada em uma quantidade terapeuticamente eficaz. A quantidade terapeuticamente eficaz pode ser uma dose como no pre- sente documento fornecida. O agente pode ser um inibidor da capta- ção de vesícula extracelular (EV), um anticorpo ou um fragmento ativo do mesmo, conforme fornecido nesta invenção, que se liga a um com- ponente de um inflamassoma ou uma combinação dos mesmos. A composição pode ser administrada por qualquer via adequada, por exemplo, por inalação, intravenosa, intraperitoneal ou intracerebroven- tricularmente. A composição pode ainda incluir pelo menos um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
[0088] Em uma modalidade, a administração de um agente (por exemplo, anticorpo ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo (por exemplo, IC 100) isoladamente ou em combinação, por exemplo, com um inibidor da captação de EV) nos métodos no presente documento fornecidos pode resultar em uma redução na atividade e/ou nível de expressão de um componente de um inflamassoma de mamífero no CNS, rins ou pulmões do indivíduo. A redução pode ser nas células do pulmão tais como, por exemplo, células alveolares do Tipo II. A redu- ção pode ser em comparação a um controle. O controle pode ser o indivíduo antes da administração do agente. O controle pode ser a ati- vidade e/ou o nível de expressão dos componentes do inflamassoma em um indivíduo que não recebeu o agente. Em uma modalidade, a administração do agente resulta na redução da ativação da caspase-1 em pelo menos o CNS ou as células do CNS do indivíduo. Em uma modalidade, a administração do agente resulta na redução da ativação da caspase-1 em pelo menos os pulmões ou células pulmonares do indivíduo. Em uma modalidade, a administração do agente resulta na redução do nível de expressão de um ou mais componentes do infla- massoma (por exemplo, ASC, AIM2, NALP1, NALP2, NALP2, NALP3 ou NLRC4) em pelo menos o CNS ou as células do CNS do indivíduo. Em uma modalidade, a administração do agente resulta na redução do nível de expressão de um ou mais componentes do inflamassoma (por exemplo, ASC, AIM2, NALP1, NALP2, NALP2, NALP3 ou NLRC4) em pelo menos os pulmões ou células pulmonares do indivíduo.
[0089] Em outra modalidade, a administração do agente (por exemplo, anticorpo ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo iso- ladamente ou em combinação, por exemplo, com um inibidor da cap- tação de EV) pode resultar em uma redução ou eliminação da lesão pulmonar aguda (ALI). Em uma modalidade, a redução na ALI é evi- denciada por uma redução na infiltração de neutrófilos no espaço al- veolar e/ou intersticial, espessamento septal alveolar reduzido ou au- sente ou uma combinação dos mesmos. A redução pode ser em com- paração a um controle. O controle pode ser ALI no indivíduo antes da administração do agente. O controle pode ser ALI em um indivíduo que sofre de ALI sem o agente administrado.
[0090] Em ainda outra modalidade, a administração do agente (por exemplo, anticorpo ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo (por exemplo, IC 100) isoladamente ou em combinação, por exemplo, com um inibidor da captação de EV) pode resultar em uma redução ou eli- minação de piroptose no CNS ou nos pulmões do indivíduo. A piropto- se é uma forma pró-inflamatória de morte celular que envolve a ativa- ção da caspase-1. A piroptose pode ser desencadeada pela clivagem mediada pela caspase-1 da gasdermina D (GSDMD). Em uma modali- dade, a redução na piroptose é evidenciada por uma redução ou falta de clivagem de GSDMD nos pulmões ou células pulmonares (por exemplo, células alveolares Tipo II) do indivíduo. A redução ou elimi- nação da piroptose pode ser comparada a um controle. A redução ou falta de clivagem de GSDMD pode ser em comparação a um controle. O controle pode ser o nível de piroptose no indivíduo antes da admi- nistração do agente. O controle pode ser o nível de piroptose em um indivíduo que sofre de piroptose ao qual não foi administrado o agente.
[0091] O sucesso de, ou resposta a, um método de tratamento fornecido nesta invenção (por exemplo, tratamento de lesão do CNS, doenças autoimunes, autoinflamatórias, neurodegenerativas ou meta- bólicas (por exemplo, MS, PD, nefrite lúpica, NASH, DKD, CAPS, do- ença inflamatória do intestino (IBD); AD, artrite reumatóide), inflama- ção imune inata ou relacionada com inflamassoma, inflamação do CNS e/ou inflamação pulmonar) pode ser monitorado através da medi- ção dos níveis de pelo menos uma proteína do inflamassoma. Con- forme for, em algumas modalidades, os métodos de tratamento forne- cidos nesta invenção compreendem ainda medir o nível de pelo menos uma proteína do inflamassoma em uma amostra biológica obtida do indivíduo após o tratamento, a preparação de uma assinatura de prote- ína de inflamassoma de tratamento associada a uma resposta positiva ao tratamento, em que a assinatura da proteína de tratamento com- preende um nível reduzido de pelo menos uma proteína de inflamas- soma e a identificação de indivíduos que apresentam a presença da assinatura da proteína de tratamento como respondendo positivamen- te ao tratamento. Uma redução no nível, abundância ou concentração de uma ou mais proteínas de inflamassoma (por exemplo, ASC, IL-18 ou caspase-1) é indicativa da eficácia do tratamento no indivíduo. As uma ou mais proteínas de inflamassoma medidas na amostra obtida após o tratamento podem ser iguais ou diferentes das proteínas de inflamassoma medidas em uma amostra obtida antes do tratamento. Os níveis de proteína de inflamassoma também podem ser utilizados para ajustar a dosagem ou a frequência de um tratamento. Os níveis de proteína de inflamassoma podem ser determinados utilizando os métodos e técnicas fornecidos nesta invenção ou conforme encontra- dos na US 62/560.963, depositada em 20 de setembro de 2017.
[0092] Em uma modalidade, o agente a ser administrado no méto- do de tratamentos no presente documento fornecido é um inibidor da captação de EV. O inibidor da captação de EV pode ser um composto, RNA antissenso, siRNA, peptídeo, anticorpo ou um fragmento ativo do mesmo, conforme fornecido nessa invenção ou uma combinação dos mesmos. O composto ou peptídeo pode ser um ou mais compostos selecionados de heparina, α-difluorometilornitina (DFMO), Enoxapari- na, Asialofetuína, proteína associada ao receptor humano (RAP), pep- tídeo de RGD (Arg-Gly-Asp), Citocalasina D, Citocalasina B, Ácido eti- lenodiaminotetraacético (EDTA), Latrunculin A, Latrunculin B, NSC23766, Dynasore, Clorpromazina, 5-(N-Etil-N-isopropil)amiloride (EIPA), Amiloride, Bafilomicina A Monensin e Cloroquina, Annexin-V, Wortmannin, LY294002, Metil-β-ciclodextrina (MβCD), Filipin, Sinvas- tatina, Fumonisina B1 e cloridreto de N-butildeoxinojirimicina, U0126 ou um inibidor da bomba de prótons. O anticorpo inibidor da captação de EV ou um fragmento ativo do mesmo conforme no presente docu- mento fornecido, pode ser um ou mais anticorpos ou fragmentos ativos dos mesmos direcionados contra alvos protéicos listados na Tabela 1.
Uma composição para o tratamento e/ou redução da inflamação no CNS ou nos pulmões de um mamífero utilizando um inibidor da capta- ção de EV pode ainda incluir pelo menos um veículo ou diluente far- maceuticamente aceitável.
Tabela 1. Alvos exemplares e anticorpos correspondentes para uso no bloqueio da captação de EV.
Símbolo Nome do Gene Anticorpos Exemplares do Gene
ICAM-1 Molécula 1 de Ade- Anticorpo Invitrogen ICAM-1 (Life rência Intercelular Technologies, 07-5403); Anticorpo Monoclonal CD54 (ICAM-1) (R6.5), eBioscience™
LFA-1 Antígeno 1 associ- Anticorpo Abbiotec LFA-1 (Abbiotec, ado com a função 250944); Anticorpo Developmental de linfócitos Studies Hybridoma Bank LFA-1 (De- velopmental Studies Hybridoma Bank, MHM24)
TIM-4 Proteína 4 da Anticorpo BioLegend TIMD4 (BioLe- membrana de célu- gend, 354004); Anticorpo LifeSpan las T Biosciences TIMD4 (Lifespan Biosci- ences, LS-B1413)
MFG-E8 Proteína de glóbu- Anticorpo MBL International MFGE8 lo de gordura do (MBL, D199-3); Anticorpo Santa Cruz leite-fator 8 de Biotechnology MFGE8 (Santa Cruz, EGF sc-8029); Anticorpo MBL International MFGE8 (MBL, 18A2-G10)
DC-SIGN Molécula de ade- Anticorpo Invitrogen DC SIGN (eBios- rência intercelular cience, eB-h209, 17-2099-41); Anti- específica para corpo BD Biosciences DC SIGN (BD,
Símbolo Nome do Gene Anticorpos Exemplares do Gene células dendríticas- DCN46, 551186) 3-captura não inte- grina
DEC205 Agrupamento de Anticorpo EMD Millipore LY75 (Millipo- diferenciação 205 re, HD30); Anticorpo BioLegend LY75 (BioLegend, 342203)
H-2Kb Anticorpo BioLegend H2-K1 (BioLe- MHC Classe I (H- gend, 28-8-6, 114603); Anticorpo Bio- 2Kd) Legend H2-K1 (BioLegend, 28-14-8, 14-5999-85)
Tspan8 Tetraspanin-8 Anticorpo R and D Systems TSPAN8 (R&D Systems, MAB4734)
Tspan29 Tetraspanin-29 Anticorpo Santa Cruz Biotechnology CD9 (Santa Cruz, sc-59140); Anticor- po Invitrogen CD9 (eBioscience, eBioSN4); Anticorpo BD Biosciences CD9 (BD Pharmingen, 555370)
ITGAL Subunidade de TS1/22.1.1.13.3; M17/4.4.11.9 integrina alfa L
ITGAM Subunidade de Anticorpo Monoclonal CD11b integrina alfa M (VIM12)(CD11B00); Anticorpo BD Biosciences CD11b (BD Pharmingen, ICRF44; 555385)
ITGAX Subunidade de Anticorpo Anti-Integrina αX, clone integrina alfa X N418 (MAB1399Z); Anticorpo BD Biosciences CD11c (BD Bioscience,
Símbolo Nome do Gene Anticorpos Exemplares do Gene
B-ly6; 560369)
CD44 Agrupamento de Anticorpo Invitrogen CD44 (eBiosci- diferenciação 44 ence, VFF-7; MA1-82392); Anticorpo Invitrogen CD44 (eBioscience, IM7; MA1-10225); Anticorpo Invitrogen CD44 (eBioscience, 5F12; MA5- 12394); Anticorpo BD Biosciences CD44 (BD Biosciences, 515; 550990 OR 550988)
ITGA3 Subunidade de Anticorpo de integrina alfa3 EMD Mil- integrina alfa 3 lipore (Millipore, P1B5; MAB1952Z OR MAB1952P)
ITGA4 Subunidade de Anticorpo Bio X Cell ITGA4 (BioXcell, integrina alfa 4 PS/2) (BE0071-5MG); Anticorpo BD Biosciences ITGA4 (BD Biosciences, 561892); Anticorpo BD Biosciences ITGA4 (BD, 340976); Anticorpo EMD Millipore ITGA4 (Millipore, P4C2; MAB1955)
ITGAV Subunidade de Anticorpo de integrina alfa v Abcam integrina alfa V (Abcam, ab77906); Anticorpo de inte- grina alfa v Abcam (Abcam, ab78289); Anticorpo de integrina alfa v Abcam (Abcam, ab16821); Anticorpo de inte- grina alfa v Invitrogen (Thermo Fisher Scientific, 272-17E6, MA1-91669); An- ticorpo de integrina alfa v R & D Sys-
Símbolo Nome do Gene Anticorpos Exemplares do Gene tems (R&D Systems, MAB2528) ITGB3 Subunidade de Anticorpo de integrina beta3 Abcam integrina beta 3 (Abcam, ab78289); Anticorpo de inte- grina beta3 Abnova (Abnova, MHF4, MAB7098) SELL Selectina L Anticorpo BioLegend CD62L (Biole- gend, 304804); Anticorpo BioLegend CD62L (Biolegend, 304810) CD81 Molécula CD81 Anticorpo BD Biosciences CD81 (BD Pharmingen, 555675); Anticorpo R and D Systems CD81 (R&D Systems, MAB4615) LRP1 Proteína 1 relacio- Anticorpo Invitrogen LRP1 (Life Tech- nada ao receptor nologies, 37-7600); Anticorpo Invitro- de LDL gen LRP1 (Thermo Fisher, MA1- 27198) VCAM1 Molécula 1 de ade- Anticorpo Invitrogen VCAM-1 (Caltag, rência celular vas- IG11B1; MA5-16429); Anticorpo cular Immunotech anti-VCAM-1 CD151 Molécula CD151 Anticorpo BD Biosciences CD151 (grupo sanguíneo (Becton Dickinson, 556056); Anticorpo Raph) Epitomics CD151 (Epitomics, 5901-1)
[0093] Em uma modalidade, o agente a ser administrado é um an- ticorpo ou um fragmento ativo do mesmo conforme fornecido nesta invenção, direcionado contra um componente de um inflamassoma de mamífero ou um antígeno ou epítopo derivado do mesmo. Em outra modalidade, o agente a ser administrado é um RNA antissenso ou siRNA direcionado contra um componente de um inflamassoma de mamífero. O componente de inflamassoma pode ser um componente de qualquer inflamassoma conhecido na técnica tal como, por exem- plo, o inflamassoma NAPL1, NALP2, NALP3, NLRC4 ou AIM2. Em uma modalidade típica, o anticorpo se liga especificamente a ASC ou a um antígeno ou seu epítopo derivado. No entanto, um anticorpo con- tra qualquer outro componente de um inflamassoma de mamífero (por exemplo, o inflamassoma NALP1, NALP2, NALP3, NLRC4 ou AIM2) pode ser utilizado.
[0094] Um anticorpo como no presente documento descrito pode ser um anticorpo monoclonal ou policlonal ou seus fragmentos ativos. Os referidos anticorpos ou fragmentos ativos podem ser quiméricos, humanos ou humanizados como no presente documento descrito.
[0095] Qualquer anticorpo adequado ou um fragmento ativo do mesmo conforme no presente documento fornecido, que se liga espe- cificamente ao ASC pode ser utilizado, por exemplo, um anticorpo que inibe a atividade de ASC no CNS (por exemplo, células do CNS) ou células pulmonares (por exemplo, células alveolares Tipo II) do indiví- duo. Em uma modalidade, o anticorpo se liga especificamente a uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 85% de identidade de se- quência com a sequência de aminoácido SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2. Em outra modalidade, o anticorpo ou fragmento do mesmo se liga a uma sequência de aminoácido com pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácido KKFKLKLLSVPLREGYGRIPR (SEQ ID NO: 5). Em mais outra modali- dade, o anticorpo ou fragmento do mesmo se liga a uma sequência de aminoácido KKFKLKLLSVPLREGYGRIPR (SEQ ID NO: 5) ou 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos da SEQ ID NO: 5. Em ainda uma outra modalidade, o anticorpo ou fra- gmento do mesmo se liga a 2 a 5, 5 a 10, 10 a 15 ou 15 a 20 amino ácidos da SEQ ID NO: 5. Em algumas modalidades, um epítopo de ASC (por exemplo, epítopo com aminoácido SEQ ID NO: 5) ligado por um anticorpo ou fragmento de anticorpo é contínuo. Em algumas mo- dalidades, um epítopo de ASC (por exemplo, epítopo com aminoácido SEQ ID NO: 5) ligado por um anticorpo ou fragmento de anticorpo é descontínuo. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo no presente documento fornecido inibe ou re- duz a atividade de ASC.
[0096] Conforme utilizado nesta invenção, o termo "epítopo" inclui qualquer determinante de proteína capaz de ligação específica a uma imunoglobulina ou a um fragmento de imunoglobulina. Os determinan- tes epitópicos geralmente consistem em agrupamentos superficiais quimicamente ativos de moléculas tais como aminoácidos ou cadeias laterais de açúcar, e geralmente possuem características estruturais tridimensionais específicas, assim como características de carga es- pecíficas. O termo "epítopo" também se refere a uma unidade de es- trutura convencionalmente ligada por uma região variável de cadeia pesada de imunoglobulina (VH) e um par de regiões variáveis de ca- deia leve (VL). Um epítopo pode definir o local mínimo de ligação para um anticorpo e, assim, representar o alvo de especificidade de um an- ticorpo.
[0097] Da mesma forma, em outra modalidade, o inflamassoma é o inflamassoma NALP1 e pelo menos um componente é NALP1 (isto é, NLRP1). Nesta modalidade, o anticorpo ou um fragmento ativo do mesmo conforme no presente documento fornecido, se liga especifi- camente a uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4.
[0098] Em mais outra modalidade, o agente é um ou mais inibido- res de absorção de EV em combinação com um ou mais anticorpos ou fragmentos ativos dos mesmos, conforme no presente documento for- necido, que se liga a um componente de um inflamassoma. O inibidor de captação de EV pode ser qualquer inibidor de captação de EV co- mo no presente documento fornecido. O anticorpo que se liga a um componente de um inflamassoma pode ser qualquer anticorpo que se liga a qualquer componente de inflamassoma conforme fornecido nes- ta invenção. Em uma modalidade, o agente administrado a um indiví- duo que sofre de inflamação do CNS ou pulmonar compreende uma heparina (por exemplo, Enoxaparina) em combinação com um anticor- po que se liga a um componente do inflamassoma AIM2 (por exemplo, ASC).
[0099] Em uma modalidade, o método compreende: fornecer uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição incluindo um anticorpo ou um fragmento ativo do mesmo conforme fornecido nesta invenção, que se liga especificamente a pelo menos um componente (por exemplo, ASC) de um inflamassoma de mamífero (por exemplo, Inflamassoma AIM2); e administrar a composição ao mamífero que sofre de inflamação do CNS ou pulmonar ou MS, em que a adminis- tração da composição ao mamífero resulta em uma redução da ativa- ção da caspase-1 no CNS ou nos pulmões do mamífero. Em outra modalidade, o método compreende: fornecer uma quantidade terapeu- ticamente eficaz de uma composição incluindo um anticorpo que se liga especificamente a pelo menos um componente (por exemplo, ASC) de um inflamassoma de mamífero (por exemplo, inflamassoma AIM2); e administrar a composição ao mamífero que sofre de inflama- ção do CNS ou pulmonar ou MS, em que a administração da composi- ção ao mamífero resulta em uma redução nos níveis de um ou mais componentes do inflamassoma (por exemplo, ASC). Em mais outra modalidade, o método compreende: fornecer uma quantidade terapeu- ticamente eficaz de uma composição incluindo um anticorpo que se liga especificamente a pelo menos um componente (por exemplo, ASC) de um inflamassoma de mamífero (por exemplo, inflamassoma AIM2); e administrar a composição ao mamífero que sofre de inflama- ção do CNS ou do pulmão ou MS, em que a administração da compo- sição ao mamífero resulta em uma redução de ALI. A inflamação do CNS ou do pulmão pode ser o resultado de uma lesão do CNS (por exemplo, SCI ou TBI), asma, distúrbio pulmonar obstrutivo crônico (COPD), uma doença neurodegenerativa ou uma doença autoimune com um componente inflamatório. Em uma modalidade, a inflamação do pulmão é provocada por uma lesão do CNS tal como TBI ou SCI.
[00100] Em uma modalidade, os métodos no presente documento fornecidos envolvem ainda a detecção de um nível ou atividade de um ou mais componentes de um inflamassoma de mamífero em uma amostra de um indivíduo suspeito de sofrer de inflamação do CNS ou do pulmão ou MS. O método de detecção do nível ou atividade envol- ve a medição do nível de pelo menos uma proteína de inflamassoma (por exemplo, ASC ou AIM2) na amostra obtida do indivíduo; a deter- minação da presença ou ausência de um nível elevado ou atividade da referida pelo menos uma proteína de inflamassoma (por exemplo, ASC ou AIM2). O nível ou atividade de dita pelo menos uma proteína de inflamassoma pode ser aumentada em relação ao nível de dita pelo menos uma proteína de inflamassoma em uma amostra de controle. O nível ou atividade da referida pelo menos uma proteína de inflamas- soma na assinatura da proteína pode ser aumentada em relação a um valor de referência pré-determinado ou faixa de valores de referência. A pelo menos uma proteína de inflamassoma pode ser um domínio de pirina de repetição rico em leucina de ligação a nucleotídeos contendo a proteína 1 (NLRP1), NLRP2, NLRP3, NLRC4, AIM2, proteína tipo
Speck associada a apoptose contendo um domínio de recrutamento da caspase (ASC), caspase-1, ou combinações dos mesmos. A amos- tra pode ser líquida cefalorraquidiano (CSF), saliva, sangue, soro, plasma, urina ou aspirado pulmonar.
[00101] Anticorpos que se Ligam Especificamente a pelo menos um Componente de Inflammassoma de mamífero A
[00102] Os métodos no presente documento descritos para reduzir a inflamação no CNS e/ou pulmões de um mamífero incluem composi- ções incluindo um anticorpo ou um fragmento ativo do mesmo confor- me fornecido nesta invenção que se liga especificamente a pelo me- nos um componente (por exemplo, ASC, AIM2) de um inflamassoma de mamífero (por exemplo, inflamassoma AIM2). Uma composição pa- ra tratar e/ou reduzir a inflamação no CNS e/ou pulmões de um mamí- fero pode incluir ainda pelo menos um veículo ou diluente farmaceuti- camente aceitável. Anticorpos exemplares direcionados contra com- ponentes de um inflamassoma de mamífero para uso nos métodos no presente documento descritos podem ser aqueles encontrados na US8685400, cujos conteúdos são no presente documento incorpora- dos por referência na sua totalidade. Anticorpos monoclonais exempla- res ou fragmentos de anticorpos também são fornecidos nessa inven- ção, tais como, por exemplo, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo compreendendo uma região VH de modo que a sequência de aminoácido da região VH compreende HCDR1 da SEQ ID NO: 6, HCDR2 da SEQ ID NO: 7 e HCDR3 da SEQ ID NO: 8, e uma região VL de modo que a sequência de aminoácido da região VL compreende LCDR1 da SEQ ID NO: 12, LCDR2 da SEQ ID NO: 13 e LCDR3 da SEQ ID NO: 14.
[00103] Em uma modalidade, uma composição para tratar e/ou re- duzir a inflamação no CNS ou nos pulmões de um mamífero inclui um anticorpo ou um fragmento ativo do mesmo conforme no presente do-
cumento fornecido, que se liga especificamente a um domínio ou parte do mesmo de uma proteína ASC de mamífero, tal como, por exemplo, uma proteína ASC humana, de camundongo ou de rato.
Qualquer an- ticorpo anti-ASC adequado pode ser utilizado e vários estão disponí- veis comercialmente.
Exemplos de anticorpos anti-ASC para uso nos métodos no presente documento descritos podem ser aqueles encon- trados na US8685400, cujos conteúdos são no presente documento incorporados por referência na sua totalidade.
Exemplos de anticorpos anti-ASC comercialmente disponíveis para uso nos métodos forneci- dos nesta invenção incluem, mas não são limitados a estes, 04-147 Anti-ASC, anticorpo monoclonal de camundongo clone 2EI-7 da Milli- poreSigma, Anticorpo AB3607 - anti-ASC da Millipore Sigma, orb194021 Anti-ASC da Biorbyt, LS-C331318-50 Anti-ASC da LifeSpan Biosciences, AF3805 Anti-ASC da R & D Systems, NBP1-78977 Anti- ASC da Novus Biologicals, 600-401-Y67 Anti-ASC da Rockland Immu- nochemicals, D086-3 Anti-ASC da MBL International, AL177 anti-ASC da Adipogen, anticorpo monoclonal anti-ASC (clone o93E9), anticorpo anti-ASC (F-9) da Santa Cruz Biotechnology, anticorpo anti-ASC (B-3) da Santa Cruz Biotechnology, anticorpo policlonal ASC - ADI-905-173 da Enzo Life Sciences ou A161 Anti-Human ASC - Leinco Technologi- es.
A proteína ASC humana pode ter o número de acesso NP_037390.2 (Q9ULZ3-1), NP_660183 (Q9ULZ3-2) ou Q9ULZ3-3. A proteína ASC de rato pode ter o número de acesso NP_758825 (BAC43754). A proteína ASC de camundongo pode ter o número de acesso NP_075747.3. Em uma modalidade, o anticorpo se liga a um domínio PYRIN-PAAD-DAPIN (PYD) ou uma parte ou fragmento do mesmo de uma proteína ASC de mamífero (por exemplo, ASC de ser humano, camundongo ou rato). Nesta modalidade, um anticorpo como no presente documento descrito se liga especificamente a uma se- quência de aminoácido tendo pelo menos 65% (por exemplo, 65, 70,
75, 80, 85%) de identidade de sequência com um domínio PYD ou fra- gmento do mesmo de ASC de ser humano, camundongo ou rato.
Em uma modalidade, o anticorpo se liga a um domínio de recrutamento da caspase C-terminal (CARD) ou uma parte ou fragmento do mesmo de uma proteína ASC de mamífero (por exemplo, ASC de ser humano, de camundongo ou de rato). Nesta modalidade, um anticorpo como no presente documento descrito se liga especificamente a uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 65% (por exemplo, 65, 70, 75, 80, 85%) de identidade de sequência com um domínio CARD ou seu fra- gmento de ASC de ser humano, camundongo ou rato.
Em ainda outra modalidade, o anticorpo se liga a uma parte ou fragmento do mesmo de uma sequência de proteína ASC de mamífero (por exemplo, ASC de ser humano, camundongo ou rato) localizada entre os domínios PYD e CARD.
Em outra modalidade, uma composição para tratar e/ou reduzir a inflamação no CNS e/ou pulmões de um mamífero inclui um anticorpo que se liga especificamente a uma região de ASC de rato, por exemplo, sequência de aminoácido ALRQTQPYLVTDLEQS (SEQ ID NO: 1) (isto é, resíduos de 178 a 193 de ASC de rato, número de acesso BAC43754). Nesta modalidade, um anticorpo como no presen- te documento descrito se liga especificamente a uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 65% (por exemplo, 65, 70, 75, 80, 85%) de identidade de sequência com a sequência de aminoácido ALRQT- QPYLVTDLEQS (SEQ ID NO: 1) de ASC de rato.
Em outra modalida- de, uma composição para tratar e/ou reduzir a inflamação no CNS e/ou pulmões de um mamífero inclui um anticorpo que se liga especifi- camente a uma região de ASC humano, por exemplo, sequência de aminoácido RESQSYLVEDLERS (SEQ ID NO: 2). Em ainda outra mo- dalidade, uma composição para tratar e/ou reduzir a inflamação no CNS e/ou pulmões de um mamífero inclui um anticorpo que se liga es- pecificamente a uma região de ASC humano, por exemplo, sequência de aminoácido KKFKLKLLSVPLREGYGRIPR (SEQ ID NO: 5; isto é, resíduos de 21 a 41 de ASC humano) ou 5 a 10, 10 a 15 ou 15 a 20 aminoácidos da SEQ ID NO: 5. Em uma modalidade, um anticorpo que se liga a um domínio ASC ou seu fragmento, como no presente docu- mento descrito, inibe a atividade de ASC nas células pulmonares, por exemplo, células alveolares Tipo II de um mamífero. Em outra modali- dade, um anticorpo que se liga a um domínio ASC ou fragmento deste, conforme descrito nesta invenção (por exemplo, anticorpo monoclonal anti-ASC ou seus fragmentos de anticorpo no presente documento fornecidos) inibe a atividade de ASC no CNS de um mamífero que so- fre ou é suspeito de sofrer de uma lesão ou distúrbio do CNS. Exem- plos de lesões ou distúrbios do CNS podem incluir TBI, SCI, acidente vascular cerebral, esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, es- clerose múltipla (MS), transtorno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD).
[00104] Em certas modalidades, a invenção fornece anticorpos e fragmentos de anticorpos que se ligam especificamente a ASC e que compreendem uma ou mais sequências de aminoácido mostradas na Tabela 2. Também são no presente documento fornecidas moléculas de ácido nucleico isoladas que codificam os anticorpos monoclonais ou seus fragmentos de anticorpo que compreendem sequências de ácido nucleico mostradas na Tabela 2. Em alguns casos, os vetores de expressão compreendendo as moléculas de ácido nucleico da Tabela
2. O vetor de expressão pode compreender regiões constantes de ca- deia pesada ou cadeia leve. Um exemplo de um sistema de vetor de expressão de cadeia leve e de cadeia pesada para uso nas composi- ções e métodos no presente documento fornecidos é o sistema de ve- tor de expressão antítopo pANT para cadeia pesada IgG4 (S241P) e leve capa. A molécula de ácido nucleico para a cadeia pesada ou leve pode ser ligada de maneira operável às sequências reguladoras ade- quadas para a expressão dos segmentos de ácido nucleico em uma célula hospedeira.
Tabela 2. Sequências de Cadeia Pesada Variável e Leve Variável (capa) de anticorpo anti-ASC ou seus fragmentos de anticorpo da invenção.
Sequência de Aminoácido da CDR1 de Cadeia Pesada (H) TSG- MGVS (SEQ ID NO: 6) Sequência de Ácido Nucleico da CDR1 de Cadeia Pesada (H) ACTAGTGGAATGGGTGTGAGC (SEQ ID NO: 9) Sequência de Aminoácido da CDR2 de Cadeia Pesada (H) HIYWDDDKRYNPSLKS (SEQ ID NO: 7) Sequência de Ácido Nucleico da CDR2 de Cadeia Pesada (H) CACATTTATTGGGATGATGATAAGCGCTACAAC- CCATCTCTGAAGAGC (SEQ ID NO: 10) Sequência de Aminoácido da CDR3 de Cadeia Pesada (H) STPIVANAMDY (SEQ ID NO: 8) Sequência de Ácido Nucleico da CDR3 de Cadeia Pesada (H) AGCACCCCCATCGTGGCCAACGCCATGGACTAC (SEQ ID NO: 11) Sequência de Aminoácido da CDR1 de Cadeia Leve (Capa) (L) KASQSVDYDGDSYMN (SEQ ID NO: 12) Sequência de Ácido Nucleico da CDR1 de Cadeia Leve (Capa) (L) AAGGCCAGCCAGAGTGTTGACTACGACGGCGACAGTTACA- TGAAT (SEQ ID NO: 15) Sequência de Aminoácido da CDR2 de Cadeia Leve (Capa) (L) AASNLES (SEQ ID NO: 13) Sequência de Ácido Nucleico da CDR2 de Cadeia Leve (Capa) (L)
GCCGCATCTAACCTGGAATCC (SEQ ID NO: 16) Sequência de Aminoácido da CDR3 de Cadeia Leve (Capa) (L) QQSNEDPYT (SEQ ID NO: 14) Sequência de Ácido Nucleico da CDR3 de Cadeia Leve (Capa) (L) CAGCAATCTAATGAGGACCCTTACACT (SEQ ID NO: 17) Sequência de Aminoácido de Cadeia pesada variável (VH) 1 QVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIR- QPSGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDSSSN-
QVFLKITSVDTADTATYSCARSTPIVANAMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 18) Sequência de Ácido Nucleico de Cadeia Pesada (VH) 1 CAGGTCACCTTGAAGGAGTCTGGTCCTGCCATCGTGAAAC- CCACACAGACCCTCACGCTGACCTGCAGCTTCTCTGGGTTCT- CACTCAGCACTAGTGGAATGGGTGTGAGCTGGATCCGTCAG- CCCTCAGGAAAGGGCCTGGAGTGGCTTGCACACATTTATTGG- GATGATGATAAGCGCTACAACCCATCTCTGAAGAGCAGGCT- CACCATCTCCAAGGACAGCTCCAAAAACCAGGTGGTCCTTAAA- ATCACCAGCGTGGACCCTGTGGACACAGCCACATATTCCTGTG- CACGGAGCACCCCCATCGTGGCCAACGCCATGGACTAC- TGGGGCCAAGGAACCAGCGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 23) Sequência de Aminoácido de Cadeia pesada variável (VH) 2 QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIR- QPAGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDSSKNQVVLTM- TNMDPVDTATYSCARSTPIVANAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 19) Sequência de Ácido Nucleico de Cadeia Pesada (VH) 2 CAGGTCACCTTGAAGGAGTCTGGTCCTGCCCTGGTGAAAC- CCACACAGACCCTCACGCTGACCTGCAGCTTCTCTGGGTTCT-
CACTCAGCACTAGTGGAATGGGTGTGAGCTGGATCCGTCAG- CCCGCCGGAAAGGGCCTGGAGTGGCTTGCACACATTTATTGG- GATGATGATAAGCGCTACAACCCATCTCTGAAGAGCAGGCT- CACCATCTCCAAGGACAGCTCCAAAAACCAGGTGGTCCTTACA- ATGACCAACATGGACCCTGTGGACACAGCCACATATTCCTGTG- CACGGAGCACCCCCATCGTGGCCAACGCCATGGACTAC- TGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 24) Sequência de Aminoácido de Cadeia Pesada Variável (VH) 3 QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIR- QPAGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDSSKNQVVLTM- TNMDPVDTATYYCARSTPIVANAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 20) Sequência de Ácido Nucleico de Cadeia Pesada (VH) 3 CAGGTCACCTTGAAGGAGTCTGGTCCTGCCCTGGTGAAAC- CCACACAGACCCTCACGCTGACCTGCAGCTTCTCTGGGTTCT- CACTCAGCACTAGTGGAATGGGTGTGAGCTGGATCCGTCAG- CCCGCCGGAAAGGGCCTGGAGTGGCTTGCACACATTTATTGG- GATGATGATAAGCGCTACAACCCATCTCTGAAGAGCAGGCT- CACCATCTCCAAGGACAGCTCCAAAAACCAGGTGGTCCTTACA- ATGACCAACATGGACCCTGTGGACACAGCCACATATTACTGTG- CACGGAGCACCCCCATCGTGGCCAACGCCATGGACTAC- TGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 25) Sequência de Aminoácido de Cadeia Pesada Variável (VH) 4 QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIR- QPAGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSKNQVVLTM- TNMDPVDTATYYCARSTPIVANAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 21) Sequência de Ácido Nucleico de Cadeia Pesada (VH) 4
CAGGTCACCTTGAAGGAGTCTGGTCCTGCCCTGGTGAAAC- CCACACAGACCCTCACGCTGACCTGCACCTTCTCTGGGTTCT- CACTCAGCACTAGTGGAATGGGTGTGAGCTGGATCCGTCAG- CCCGCCGGAAAGGGCCTGGAGTGGCTTGCACACATTTATTGG- GATGATGATAAGCGCTACAACCCATCTCTGAAGAGCAGGCT- CACCATCTCCAAGGACACCTCCAAAAACCAGGTGGTCCTTACA- ATGACCAACATGGACCCTGTGGACACAGCCACATATTACTGTG- CACGGAGCACCCCCATCGTGGCCAACGCCATGGACTAC- TGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 26) Sequência de Aminoácido de Cadeia Pesada Variável (VH) Qui- mérica (0) QVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIR- QPSGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDSSSN-
QVFLKITSVDTADTATYSCARSTPIVANAMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 22) Sequência de Ácido Nucleico de Cadeia Pesada Varável (VH) Quimérica (0) CAGGTTACTCTGAAAGAGTCTGGCCCTGGGATATTGCAG- CCCTCCCAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGGTTTT- CACTGAGCACTTCTGGTATGGGTGTGAGCTGGATTCGTCAG- CCTTCAGGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGCACACATTTACTGG- GATGATGACAAGCGCTATAACCCATCCCTGAAGAGCCGGCT- CACAATCTCCAAGGATTCCTCCAGCAACCAGGTCTTCCTCAA- GATCACCAGTGTGGACACTGCAGATACTGCCACATACTCCTG- TGCTCGAAGTACTCCGATTGTAGCTAATGCTATGGACTAC- TGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 27) Sequência de Aminoácido de Cadeia Leve Capa Variável (VL) 1 DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASQSVDYDGDSYMNWYQQK-
PGQPPKLLIYAASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLQEED- VATYYCQQSNEDPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 28) Sequência de Ácido Nucleico de Cadeia Leve Capa Variável (VL) 1 GACATCGTGCTGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTG- TCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCCA- GAGTGTTGACTACGACGGCGACAGTTACATGAATTGGTACCAG- CAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACGCCG- CATCTAACCTGGAATCCGGCATCCCTGCCCGATTCAGTGGCA- GCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTG- CAGGAGGAAGATGTGGCAACTTATTACTGTCAGCAATCTAA- TGAGGACCCTTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGAT- CAAA (SEQ ID NO: 32) Sequência de Aminoácido de Cadeia Leve Capa Variável (VL) 2 DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASQSVDYDGDSYMNWYQQK- PGQPPKLLIYAASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLQPED- VATYYCQQSNEDPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 29) Sequência de Ácido Nucleico de Cadeia Leve Capa Variável (VL) 2 GACATCGTGCTGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTG- TCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCCA- GAGTGTTGACTACGACGGCGACAGTTACATGAATTGGTACCAG- CAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACGCCG- CATCTAACCTGGAATCCGGCATCCCTGCCCGATTCAGTGGCA- GCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTG- CAGCCTGAAGATGTGGCAACTTATTACTGTCAGCAATCTAA- TGAGGACCCTTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGAT- CAAA (SEQ ID NO: 33) Sequência de Aminoácido de Cadeia Leve Capa Variável (VL) 3 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASQSVDYDGDSYMNWYQQK-
PGQPPKLLIYAASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLQPED- VATYYCQQSNEDPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 30) Sequência de Ácido Nucleico de Cadeia Leve Capa Variável (VL) 3 GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTG- TCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCCA- GAGTGTTGACTACGACGGCGACAGTTACATGAATTGGTACCAG- CAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACGCCG- CATCTAACCTGGAATCCGGCATCCCTGCCCGATTCAGTGGCA- GCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTG- CAGCCTGAAGATGTGGCAACTTATTACTGTCAGCAATCTAA- TGAGGACCCTTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGAT- CAAA (SEQ ID NO: 34) Sequência de Aminoácido de Cadeia Leve Capa Variável (VL) Quimérica (0) DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYMNWYQQK- PGQPPKLLIYAASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAA- TYYCQQSNEDPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 31) Sequência de Ácido Nucleico de Cadeia Leve Capa Variável (VL) Quimérica (0) GACATTGTGCTGACCCAATCTCCAGCTTCTTTGGCTGTGTCTC- TAGGGCAGAGGGCCACCATCTCCTGCAAGGCCAGCCAAAGTG- TTGATTATGATGGTGATAGTTATATGAACTGGTACCAACA- GAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTATGCTG- CATCCAATCTAGAATCTGGCATCCCAGCCAGGTTTAGTGGCAG- TGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGA- GGAGGAGGATGCTGCAACCTATTACTGTCAGCAAAGTAATGAG- GAcCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA (SEQ ID NO: 35)
[00105] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21, 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21 ou 22. Além desta modali- dade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo mono- clonal ou seu fragmento de anticorpo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo.
A inflamação pode ser uma inflama- ção imune inata.
A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma.
A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS.
A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exemplo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medu- la espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afe- ta o CNS.
Conforme no presente documento fornecido, a doença, con- dição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vas- cular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, escle- rose múltipla (MS), transtorno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anti- corpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente.
A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo mo- noclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado pa- ra tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fra- gmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma composição. A composição pode ser uma composição farma- cêutica conforme no presente documento fornecida.
[00106] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28, 29, 30, 31, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28, 29, 30 ou 31. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou seu fragmento de anticorpo em um método para o tratamento de in- flamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exemplo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medu- la espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afe- ta o CNS. Conforme fornecido nesta invenção, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cere- bral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluin- do esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), transtorno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00107] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21, 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21 ou 22; e em que a sequên- cia de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28, 29, 30, 31, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28, 29, 30 ou 31. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou seu fragmento de anticor- po em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exemplo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condi- ção ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Conforme fornecido nes-
ta invenção, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoi- munes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), transtorno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Al- zheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo mono- clonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma mo- dalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anti- corpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma composição. A composição pode ser uma composição farmacêutica conforme no presente documento fornecida.
[00108] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Con- forme fornecido nesta invenção, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), trans- torno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00109] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 29. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo.
A inflamação pode ser uma inflamação imune inata.
A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma.
A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS.
A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS.
Con- forme fornecido nesta invenção, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), trans- torno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente.
A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00110] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 30. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Con- forme fornecido nesta invenção, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), trans- torno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00111] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 31. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem-
plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Con- forme fornecido nesta invenção, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), trans- torno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00112] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 19, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Con- forme no presente documento fornecido, a doença, condição ou afec- ção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo es- clerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), transtorno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia mus- cular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00113] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 19, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 29. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo.
A inflamação pode ser uma inflamação imune inata.
A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma.
A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS.
A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS.
Con- forme no presente documento fornecido, a doença, condição ou afec- ção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo es- clerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), transtorno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia mus- cular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente.
A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00114] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 19, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 30. Em alguns casos, um anticorpo mono- clonal ou um fragmento de anticorpo derivado do mesmo compreen- dendo uma sequência de aminoácido da região VH que compreende a SEQ ID NO: 19 e uma sequência de aminoácido da região VL que compreende a SEQ ID NO: 30 pode ser referido como IC 100. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anti- corpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um méto- do para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma in- flamação relacionada ao inflamassoma. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exemplo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Conforme no presente documen- to fornecido, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoi- munes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), transtorno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Al- zheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo mono- clonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma mo- dalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anti- corpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma composição. A composição pode ser uma composição farmacêutica conforme no presente documento fornecida.
[00115] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 19, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 31. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Con- forme fornecido nesta invenção, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), trans- torno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00116] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag-
mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 20, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo.
A inflamação pode ser uma inflamação imune inata.
A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma.
A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS.
A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS.
Con- forme no presente documento fornecido, a doença, condição ou afec- ção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo es- clerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), transtorno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia mus- cular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente.
A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00117] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 20, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 29. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Con- forme no presente documento fornecido, a doença, condição ou afec- ção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo es- clerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), transtorno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia mus-
cular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00118] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 20, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 30. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Con- forme fornecido nesta invenção, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), trans- torno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00119] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 20, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 31. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Con- forme fornecido nesta invenção, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), trans- torno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00120] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 21, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 21; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo.
A inflamação pode ser uma inflamação imune inata.
A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma.
A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS.
A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS.
Con- forme fornecido nesta invenção, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), trans- torno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente.
A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen-
to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00121] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente a ASC, em que o anticorpo ou o fragmen- to de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 21, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 21; e em que a sequência de aminoácido da região VL com- preende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pe- lo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de ami- noácido da SEQ ID NO: 29. Além desta modalidade, é no presente do- cumento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de an- ticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Con- forme no presente documento fornecido, a doença, condição ou afec- ção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo es-
clerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), transtorno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia mus- cular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00122] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 21, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 21; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 30. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata.
A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Con- forme fornecido nesta invenção, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), trans- torno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00123] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 21, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos
95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 21; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 31. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo.
A inflamação pode ser uma inflamação imune inata.
A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma.
A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS.
A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS.
Con- forme no presente documento fornecido, a doença, condição ou afec- ção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo es- clerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), transtorno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia mus- cular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente.
A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS.
Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição.
A composição pode ser uma composição farmacêutica confor-
me no presente documento fornecida.
[00124] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Con- forme fornecido nesta invenção, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), trans- torno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00125] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 29. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Con- forme fornecido nesta invenção, a doença, condição ou afecção do
CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), trans- torno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00126] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 30. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo. A inflamação pode ser uma inflamação imune inata. A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma. A inflamação pode ser nos pulmões e/ou no CNS. A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exem- plo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS. Con- forme fornecido nesta invenção, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotrópica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), trans- torno da disfunção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente. A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma modalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmen- to de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma compo- sição. A composição pode ser uma composição farmacêutica confor- me no presente documento fornecida.
[00127] Em uma modalidade, é no presente documento fornecido um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o frag- mento de anticorpo do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve ou capa
(VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 31. Além desta modalidade, é no presente documento fornecido o uso do anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para o tratamento de inflamação em um indivíduo.
A inflamação pode ser uma inflamação imune inata.
A inflamação pode ser uma inflamação relacionada ao inflamassoma.
Em uma modalidade, os anticorpos monoclonais ou fragmentos de an- ticorpos dos mesmos no presente documento fornecidos podem ser utilizados em um método para reduzir a inflamação em um mamífero, conforme descrito na US 8.685.400, cujos conteúdos são no presente documento incorporados por referência na sua totalidade.
A inflama- ção pode ser nos pulmões e/ou no CNS.
A inflamação nos pulmões e/ou no CNS pode ser o resultado de uma lesão (por exemplo, lesão cerebral traumática (TBI) ou lesão da medula espinhal (SCI)) ou doen- ça, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS.
Conforme for- necido nesta invenção, a doença, condição ou afecção do CNS ou que afeta o CNS pode ser acidente vascular cerebral, assim como doenças autoimunes e/ou doenças do CNS, incluindo esclerose lateral amiotró- pica (ALS) Lou Gehrig, esclerose múltipla (MS), transtorno da disfun- ção imunológica muscular do CNS, distrofia muscular (MD), doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD). O uso do anticorpo mono- clonal ou fragmento de anticorpo do mesmo em um método para tratar a inflamação pode reduzir a inflamação no CNS e/ou nos pulmões do paciente.
A redução pode ser comparada a um controle (por exemplo, paciente não tratado e/ou paciente antes do tratamento). Em uma mo-
dalidade, o anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo é utilizado para tratar MS através da administração do anti- corpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo a um paciente que sofre ou é suspeito de sofrer de MS. Em alguns casos, o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo desta modalidade está presente em uma composição. A composição pode ser uma composição farmacêutica conforme no presente documento fornecida.
[00128] Em outra modalidade, uma composição para reduzir a in- flamação no CNS ou nos pulmões de um mamífero inclui um anticorpo ou um fragmento ativo do mesmo, conforme fornecido nesta invenção, que se liga especificamente a NLRP1 (por exemplo, anticorpo de gali- nha anti-NLRP1) ou um domínio do mesmo. Qualquer anticorpo anti- NLRP1 adequado pode ser utilizado e vários são comercialmente dis- poníveis. Exemplos de anticorpos anti-NLRP1 para uso nos métodos no presente documento descritos podem ser aqueles encontrados na US8685400, cujos conteúdos são no presente documento incorpora- dos por referência na sua totalidade. Exemplos de anticorpos anti- NLRP1 comercialmente disponíveis para uso nos métodos fornecidos nesta invenção incluem, mas não são limitados a estes, anticorpo poli- clonal de NLRP1 humano AF6788 da R&D Systems, anti-NLRP1 poli- clonal de coleho ABF22 EMD Millipore, anti-NLRP1 policlonal de coe- lho NB100-56148 Novus Biologicals, anti-NLRP1 policlonal de camun- dongo SAB1407151 Sigma-Aldrich, anti-NLRP1 policlonal de coelho ab3683 Abcam, anti-NLRP1 policlonal de coelho orb325922 Biorbyt, anti-NLRP1 policlonal de coelho MBS7001225 mybiosource, policlonal de ovelha AF6788 R&D systems, anti-NLRP1 monoclonal de camun- dongo oaed00344 Aviva Systems, anti-NLRP1 policlonal de coelho ARO54478_P050 Aviva Systems, anti-NLRP1 policlonal de coelho APO7775PU-N Origene, anti-NLRP1 policlonal de coelho ABIN768983
Antibodies online, anti-NLRP1 policlonal de coelho 3037 Prosci, anti- NLRP1 policlonal de coelho 12256-1-AP Proteintech, anti-NLRP1 mo- noclonal de camundongo ALX-804-803-C100 Enzo, anti-NLRP1 mo- noclonal de camundongo MA1-25842 Invitrogen, anti-NLRP1 mono- clonal de camundongo GTX16091 GeneTex, anti-NLRP1 policlonal de coelho 200-401-CX5 Rockland ou anti-NLRP1 policlonal de coelho 4990 Cell Signaling Technology. A proteína NLRP1 humana pode ter o número de acesso AAH51787, NP_001028225, NP_055737, NP_127497, NP_127499 ou NP_127500. Em uma modalidade, o anti- corpo se liga a um domínio Pyrin, NACHT, LRR1-6, FIIND ou CARD ou uma parte ou fragmento do mesmo de uma proteína NLRP1 de mamífero (por exemplo, NLRP1 humano). Nesta modalidade, um anti- corpo como no presente documento descrito se liga especificamente a uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 65% (por exemplo, 65, 70, 75, 80, 85%) de identidade de sequência com um domínio es- pecífico (por exemplo, Pyrin, NACHT, LRR1- 6, FIIND ou CARD) ou fragmento do mesmo de NLRP1 humano. Em uma modalidade, um policlonal de galinha anti-NLRP1 que foi projetado e produzido por Ayes Laboratories é utilizado para reduzir a inflamação pulmonar. Este anticorpo pode ser direcionado contra a seguinte sequência de amino- ácido em NLRP1 humano: CEYYTEIREREREKSEKGR (SEQ ID NO: 3). Em uma modalidade, um anticorpo que se liga a um domínio NLRP1 ou fragmento do mesmo, conforme descrito nesta invenção inibe a atividade de NLRP1 nas células pulmonares, por exemplo, cé- lulas alveolares Tipo II de um mamífero.
[00129] Em mais outra modalidade, uma composição para reduzir a inflamação no CNS ou nos pulmões de um mamífero inclui um anticor- po ou um fragmento ativo do mesmo, conforme fornecido nesta inven- ção, que se liga especificamente a AIM2 ou um domínio do mesmo. Qualquer anticorpo anti-AIM2 adequado pode ser utilizado e vários são comercialmente disponíveis.
Exemplos de anticorpos anti-AIM2 co- mercialmente disponíveis para uso nos métodos fornecidos nesta in- venção incluem, mas não são limitados a estes, um policlonal de coe- lho anti-AIM2 Número cat. 20590-1-AP da Proteintech, anticorpo anti- AIMS Abcam (ab119791), policlonal anti-AIM2 de coelho (região N- terminal) Número Cat.
AP3851 da ECM biosciences, policlonal de coe- lho anti-ASC Número Cat.
E-AB-30449 da Elabsciences, anticorpo monoclonal de camundongo anti-AIM2 denominado anticorpo AIM2 (3C4G11) com número de catálogo sc-293174 da Santa Cruz Bio- technology, anticorpo monoclonal AIM2 de camundongo com número de catálogo TA324972 da Origene, anticorpo monoclonal AIM2 (10M2B3) da Thermofisher Scientific, anticorpo policlonal de coelho AIM2 ABIN928372 ou ABIN760766 da Antibodies-online, anticorpo po- liclonal anti-AIM2 de revestimento Biomatix com Número de cat.
CAE02153. Anticorpo policlonal anti-AIM2 (OABF01632) da Aviva Sys- tems Biology, anticorpo policlonal anti-AIM2 de coelho LS-C354127 da LSBio-C354127, anticorpo monoclonal anti-AIM2 de coelho da Cell Signaling Technology, com o número de cat.
MA5-16259. Anticorpo monoclonal anti-AIM2 policlonal de coelho da Fab Gennix International Incorporated, Número Cat.
AIM2 201AP, policlonal de coelho anti- AIM2 número de cat MBS855320 MyBiosource, policlonal de coelho anti-AIM2 Signalway número de catálogo 36253, policlonal de coelho anti-AIM2 Novus Biological número de catálogo 43900002, oliclonal de coelho anti-AIM2 GeneTex GTX54910, policlonal de coelho anti-AIM2 26-540 Prosci, monoclonal de camundongo anti-AIM2 orb333902 Bior- byt, policlonal de coelho anti-AIM2 ab93015 Abcam, policlonal de coe- lho anti-AIM2 ab76423 Abcam, policlonal de camundongo anti-AIM2 SAB1406827 Sigma Aldrich ou anti-AIM2 3B10 Biolegend.
A proteína AIM2 humana pode ter o número de acesso NX_014862, NP004824, XP016858337, XP005245673, AAB81613, BAF84731 ou AAH10940.
Em uma modalidade, o anticorpo se liga a um domínio Pyrin ou HIN- 200 ou uma parte ou fragmento do mesmo de uma proteína AIM2 de mamífero (por exemplo, AIM2 humano). Nesta modalidade, um anti- corpo como no presente documento descrito se liga especificamente a uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 65% (por exemplo, 65, 70, 75, 80, 85%) de identidade de sequência com um domínio es- pecífico (por exemplo, Pyrin ou HIN-200) ou fragmento deste de AIM2 humano. Em uma modalidade, um anticorpo que se liga a um domínio AIM2 ou fragmento do mesmo, como no presente documento descrito, inibe a atividade de AIM2 em células pulmonares, por exemplo, células alveolares Tipo II de um mamífero.
[00130] Anticorpos anti-inflamassoma (por exemplo, Anti-ASC, anti- NLRP1 ou anti-AIM2) como no presente documento descritos incluem anticorpos policlonais e monoclonais de roedores, anticorpos policlo- nais e monoclonais humanos, ou quaisquer partes dos mesmos, tendo pelo menos uma região de ligação ao antígeno de uma região variável de imunoglobulina, cujo anticorpo se liga especificamente a um com- ponente de um inflamassoma de mamífero (por exemplo, inflamasso- ma AIM2) tal como, por exemplo, ASC ou AIM2. Em alguns casos, o anticorpo é específico para ASC, de modo que um anticorpo é especí- fico para ASC se for produzido contra um epítopo do polipeptídeo e se ligar a pelo menos parte da proteína natural ou recombinante.
[00131] Em certas modalidades, um anticorpo no presente docu- mento fornecido compreende um polipeptídeo tendo uma ou mais substituições, supressões ou inserções de aminoácidos. Por exemplo, um anticorpo monoclonal anti-ASC ou um fragmento de anticorpo de ligação ao ASC compreende um polipeptídeo tendo uma ou mais substituições, supressões ou inserções de aminoácidos em compara- ção com um polipeptídeo tendo uma sequência de aminoácido de uma ou mais das SEQ ID NOs: 6 a 8, 12 a 14, 18 a 22 ou 28 a 31. Um anti-
corpo no presente documento fornecido pode ter 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais substituições, supressões ou inserções de aminoácido. Por exemplo, um anticorpo monoclonal anti-ASC ou um fragmento de anticorpo de ligação a ASC pode ter 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais substituições, supressões ou inserções de aminoácido. Substituições, supressões ou inserções podem ser introduzidas por técnicas padrão, tais como mutagênese direcionada ao sítio ou mutagênese mediada por PCR de uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipep- tídeo de um anticorpo anti-ASC ou um fragmento de anticorpo de liga- ção a ASC.
[00132] Em certas modalidades, as substituições conservadoras de aminoácido são efetuadas em uma ou mais posições nas sequências de aminoácido de anticorpos ou fragmentos de anticorpos no presente documento descritos. Uma "substituição conservativa de aminoácido" é aquela em que o resíduo de aminoácido é substituído por um resí- duo de aminoácido tendo uma cadeia lateral similar. Em certas moda- lidades, as substituições conservadoras de aminoácido são efetuadas apenas nas sequências FR e não nas sequências CDR de um anticor- po ou fragmento de anticorpo. Famílias de resíduos de aminoácido tendo cadeias laterais similares foram definidas na técnica, incluindo cadeias laterais básicas (por exemplo, lisina, arginina, histidina), ca- deias laterais acídicas (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares sem carga (por exemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadeias laterais não po- lares (por exemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenila- lanina, metionina, triptofano), cadeias laterais beta-ramificadas (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano; histidina). Assim, por exemplo, um resíduo de aminoácido em um polipeptídeo de um anti- corpo monoclonal anti-ASC ou um fragmento de anticorpo de ligação a
ASC pode ser substituído por outro resíduo de aminoácido da mesma família de cadeia lateral. Em certas modalidades, uma cadeia de ami- noácidos pode ser substituída por uma cadeia estruturalmente similar que difere na ordem e/ou composição dos membros da família de ca- deia lateral. Aqueles versados na técnica serão capazes de avaliar se um anticorpo monoclonal anti-ASC ou um fragmento de anticorpo de ligação a ASC compreendendo um polipeptídeo tendo uma ou mais substituições, supressões ou inserções de aminoácidos em compara- ção com um polipeptídeo tendo uma sequência de aminoácido de uma ou mais das SEQ ID NOs: 6 a 8, 12 a 14, 18 a 22 ou 28 a 31 se ligam à proteína ASC utilizando métodos de rotina reconhecidos na técnica, incluindo, mas não limitando a ELISAs, Western blots, exibição de fa- go, etc.
[00133] Cálculos de homologia ou identidade de sequência (os ter- mos são utilizados de modo trocável nessa invenção) entre sequên- cias podem ser executados como se segue.
[00134] Para determinar a identidade percentual de duas sequên- cias de aminoácido, ou de duas sequências de ácido nucleico, as se- quências são alinhadas para propósitos de comparação ideal (por exemplo, os intervalos podem ser introduzidos em um ou ambos de uma primeira e uma segunda sequências de aminoácido ou ácido nu- cleico para o alinhamento ideal e sequências não homólogas podem ser desconsideradas para propósitos de comparação). Em uma moda- lidade exemplar, o comprimento de uma sequência de referência ali- nhada para propósitos de comparação é de pelo menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% do comprimento da sequência de referência. Os resíduos de aminoácidos ou nucleotídeos nas posições de aminoácido ou posições de nucleotídeo correspondentes são então comparados. Quando uma posição na primeira sequência é ocupada pelo mesmo resíduo de aminoácido ou nucleotídeo que a posição correspondente na segunda sequência, então as moléculas são idênticas nessa posição (como no presente documento utilizado "identidade" de aminoácido ou ácido nu- cleico é equivalente a amino a "homologia" de aminoácido ou ácido nucleico). A porcentagem de identidade entre as duas sequências é uma função do número de posições idênticas compartilhadas pelas sequências, levando em consideração o número de intervalos e o comprimento de cada intervalo, que precisam ser introduzidos para o alinhamento ideal das duas sequências.
[00135] A comparação de sequências e a determinação da identi- dade percentual entre duas sequências podem ser executadas utili- zando um algoritmo matemático. Em uma modalidade, a porcentagem de identidade entre duas sequências de aminoácido é determinada utilizando o algoritmo de Needleman et al. ((1970) J. Mol. Biol. 48:444- 453) que foi incorporado no programa GAP no pacote de software GCG (disponível em www.gcg.com), utilizando uma matriz BLOSUM 62 ou uma matriz PAM250, e um peso de intervalo de 16, 14, 12, 10, 8, 6 ou 4 e um peso de comprimento de 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em ainda outra modalidade, a identidade percentual entre duas sequências de nucleotídeo é determinada utilizando o programa GAP no pacote de software GCG (disponível em www.gcg.com), utilizando uma matriz NWSgapdna CMP e um peso de intervalo de 40, 50, 60, 70 ou 80 e um peso de comprimento de 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Um conjunto de parâ- metros (e aquele que pode ser utilizado se o médico não tiver certeza sobre quais parâmetros devem ser aplicados para determinar se uma molécula está dentro de uma identidade de sequência ou limitação de homologia da invenção) é uma matriz de pontuação BLOSUM 62 com uma penalidade para intervalos de 12, uma penalidade da extensão de intervalo de 4 e uma penalidade de intervalo de mutação por mudança da matriz de leitura de 5.
[00136] A porcentagem de identidade entre duas sequências de aminoácido ou nucleotídeo pode ser determinada utilizando o algorit- mo de Meyers et al. ((1989) CABIOS 4:11-17) que foi incorporado ao programa ALIGN (versão 2.0), utilizando uma tabela de resíduos de peso PAM120, uma penalidade de comprimento de intervalo de 12 e uma penalidade de intervalo de 4.
[00137] Em certos aspectos, um anticorpo é um anticorpo monoclo- nal. Em outros aspectos, um anticorpo é um anticorpo policlonal. O termo "anticorpo monoclonal" refere-se a uma população de moléculas de anticorpo que contêm apenas uma espécie de um sítio de ligação ao antígeno capaz de imunorreagir com um epítopo particular de um antígeno. Uma composição de anticorpo monoclonal, portanto, tipica- mente apresenta uma afinidade de ligação única para uma proteína particular com a qual imunorreage.
[00138] Em alguns aspectos, um anticorpo da invenção (um anti- corpo monoclonal anti-ASC ou um fragmento de anticorpo de ligação a ASC) é humanizado, quimérico ou humano.
[00139] Em algumas modalidades, um anticorpo da invenção é um anticorpo humanizado.
[00140] "Anticorpo humanizado" conforme o termo é utilizado nesta invenção, refere-se a um anticorpo que foi projetado para compreen- der uma ou mais regiões estruturais humanas na região variável em conjunto com as regiões determinantes de complementaridade (CDRs) não humana (por exemplo, camundongo, rato ou hamster) da cadeia pesada e/ou leve. Em certas modalidades, um anticorpo humanizado compreende sequências que são inteiramente humanas, exceto para as regiões CDR. Em alguns casos, os resíduos da região estrutural (FR) de Fv da imunoglobulina humana são substituídos por resíduos não humanos correspondentes. Além disso, o anticorpo humanizado pode compreender resíduos que não são encontrados nem na forma humana do anticorpo nem na CDR importada ou sequências estrutu- rais, mas são incluídos para refinar e otimizar ainda mais o desempe- nho do anticorpo. Em geral, o anticorpo humanizado compreenderá substancialmente todos de pelo menos um, e tipicamente dois, domí- nios variáveis, em que todas ou substancialmente todas as regiões CDR correspondem àquelas de uma imunoglobulina não humana e todas ou substancialmente todas as regiões FR são aquelas de uma sequência consenso de imunoglobulina humana. A região FR pode ser modificada de qualquer maneira conhecida na técnica e/ou fornecida nessa invenção. As modificações podem conferir propriedades desejá- veis tais como meia-vida aumentada e/ou expressão melhorada em células hospedeiras. Em uma modalidade, as regiãoões FR podem ser modificadas ou sibmetidas à mutação conforme descrito na US20150232557, que é no presente documento incorporado por refe- rência. Outras formas de anticorpos humanizados podem ter um ou mais CDRs (CDR L1, CDR L2, CDR L3, CDR H1, CDR H2 ou CDR H3) que são alteradas em relação ao anticorpo original, que também são denominadas uma ou mais CDRs “derivadas de” uma ou mais CDRs do anticorpo original. O anticorpo humanizado de maneira ideal também compreenderá pelo menos uma parte de uma região ou do- mínio constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente aquela de uma imunoglobulina humana.
[00141] Os anticorpos humanizados são tipicamente menos imuno- gênicos para seres humanos, em relação aos anticorpos não humani- zados e, assim, oferecem benefícios terapêuticos em certas situações. Por exemplo, a região constante do anticorpo pode ser projetada de tal modo que seja imunologicamente inerte (por exemplo, não ativa a lise do complemento). Ver, por exemplo, a Publicação PCT No. PCT/GB99/01441; Pedido de Patente UK No. 9809951.8, cada um dos quais é no presente documento incorporado por referência na sua tota- lidade. Aqueles versados na técnica estarão cientes dos anticorpos humanizados, e também estarão cientes das técnicas adequadas para sua geração. Ver, por exemplo, Hwang, W. Y. K., et al., Methods 36:35, 2005; Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:10029- 10033, 1989; Jones et al., Nature, 321:522-25, 1986; Riechmann et al., Nature, 332:323-27, 1988; Verhoeyen et al., Science, 239:1534-36, 1988; Orlandi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:3833-37, 1989; Pat. U.S. Nos. 5.225.539; 5.530.101; 5.585.089; 5.693.761; 5.693.762;
6.180.370; e Selick et al., WO 90/07861, cada um dos quais é no pre- sente documento incorporado por referência na sua totalidade. Outros métodos de humanização de anticorpos que também podem ser utili- zados são descritos por Daugherty et al., Nucl. Acids Res. 19:2471- 2476, 1991, w nas Pat. U.S. Nos. 6.180.377; 6.054.297; 5.997.867;
5.866.692; 6.210.671; e 6.350.861; e na Publicação PCT No. WO 01/27160, cada um dos quais é no presente documento incorporado por referência na sua totalidade. Por exemplo, um anticorpo anti-ASC ou fragmento de ligação ao antígeno anti-ASC da invenção pode com- preender uma sequência de aminoácido da região VH que compreen- de HCDR1 da SEQ ID NO: 6, HCDR2 da SEQ ID NO: 7 e HCDR3 da SEQ ID NO: 8; e uma sequência de aminoácido da região VL que compreende LCDR1 da SEQ ID NO: 12, LCDR2 da SEQ ID NO: 13 e LCDR3 da SEQ ID NO: 14; e uma ou mais sequências da região estru- tural humana.
[00142] Em algumas modalidades, um anticorpo da invenção é um anticorpo quimérico e se liga especificamente ao ASC. Em alguns ca- sos, o anticorpo quimérico anti-ASC reduz a atividade de ASC. "Anti- corpo quimérico", como o termo é utilizado nesta invenção, refere-se a um anticorpo que foi projetado para compreender pelo menos uma re- gião constante humana. Por exemplo, uma ou todas as regiões variá-
veis das cadeias leves e/ou uma ou todas as regiões variáveis das ca- deias pesadas de um anticorpo de camundongo (por exemplo, um an- ticorpo monoclonal de camundongo) podem, cada uma, ser unida a um região constante humana, tal como, sem limitação, uma região constante humana de IgG1. Os anticorpos quiméricos são tipicamente menos imunogênicos para seres humanos, em relação aos anticorpos não quiméricos e, portanto, oferecem benefícios terapêuticos em cer- tas situações. Aqueles versados na técnica estarão cientes de anticor- pos quiméricos, e também estarão cientes das técnicas adequadas para sua geração. Ver, por exemplo, Cabilly et al., Patente U.S. No.
4.816.567; Shoemaker et al., Patente U.S. No. 4.978.775; Beavers et al., Patente U.S. No. 4.975.369; e Boss et al., Patente U.S. No.
4.816.397, cada uma das quais é incorporada nesta invenção por refe- rência em sua totalidade. Por exemplo, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno da invenção pode compreender uma região VH compreendendo a SEQ ID NO: 22; uma região VL compreendendo a SEQ ID NO: 31 e uma região constante humana.
[00143] Como no presente documento utilizado, os termos "ligação imunológica" e "propriedades de ligação imunológica" referem-se às interações não covalentes do tipo que ocorrem entre uma molécula de imunoglobulina (por exemplo, anticorpo) e um antígeno para o qual a imunoglobulina é específica. A força ou afinidade das interações de ligação imunológica pode ser expressa em termos da constante de dissociação (Kd) da interação, em que uma Kd menor representa uma afinidade maior. As propriedades de ligação imunológica de polipeptí- deos selecionados podem ser quantificadas utilizando métodos bem conhecidos na técnica. Um tal método envolve a medição das taxas de formação e dissociação do complexo do sítio de ligação ao antíge- no/antígeno, em que essas taxas dependem das concentrações dos parceiros complexos, da afinidade da interação e dos parâmetros ge-
ométricos que influenciam igualmente a taxa em ambas as direções. Assim, tanto a "constante do índice de associação" (Kon) quanto a "constante do índice de dissociação" (Koff) pode ser determinada pelo cálculo das concentrações e das taxas reais de associação e dissocia- ção. Nature 361:186-87 (1993)). A relação Koff/Kon possibilita o cance- lamento de todos os parâmetros não relacionados à afinidade, sendo igual à constante de dissociação Kd. (Ver, de uma forma geral, Davies et al. (1990) Annual Rev Biochem 59:439-473). Diz-se que um anticor- po da presente invenção se liga especificamente a um epítopo (por exemplo, fragmento ASC com aminoácido SEQ ID NO: 5) quando a constante de ligação de equilíbrio (Kd) é 10 M,  10 nM,  10 nM e  100 pM a cerca de 1 pM, conforme medido por ensaios tais como en- saios de ligação de radioligando ou ensaios similares conhecidos da- queles versados na técnica.
[00144] Em certos aspectos, um anticorpo da invenção é monova- lente ou bivalente e compreende uma cadeia simples ou dupla. Funci- onalmente, a afinidade de ligação de um anticorpo pode estar dentro da faixa de 10-5 M a 10-12 M. Por exemplo, a afinidade de ligação de um anticorpo é de 10-6 M a 10-12 M, de 10-7 M a 10-12 M, de 10-8 M a 10- 12 M, de 10-9 M a 10-12 M, de 10-5 M a 10-11 M, de 10-6 M a 10-11 M, de 10-7 M a 10-11 M, de 10-8 M a 10-11 M, de 10-9 M a 10-11 M, de 10-10 M a 10-11 M, de 10-5 M a 10-10 M, de 10-6 M a 10-10 M, de 10-7 M a 10-10 M, de 10-8 M a 10-10 M, de 10-9 M a 10-10 M, de 10-5 M a 10-9 M, de 10-6 M a 10-9 M, de 10-7 M a 10-9 M, de 10-8 M a 10-9 M, de 10-5 M a 10-8 M, de 10-6 M a 10-8 M, de 10-7 M a 10-8 M, de 10-5 M a 10-7 M, de 10-6 M a 10-7 M ou de 10-5 M a 10-6 M.
[00145] Métodos para determinar a especificidade e afinidade do anticorpo monoclonal através da inibição competitiva podem ser en- contrados em Harlow, et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1988, Colli-
gan et al., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1992, 1993), e Muller, Meth. Enzymol. 92:589-601, 1983, cujas referências são inteiramente no presente documento incorporadas por referência.
[00146] Anticorpos anti-inflamassoma (por exemplo, Anti-ASC e an- ti-AIM2) da presente invenção podem ser rotineiramente produzidos de acordo com métodos tais como, mas não limitado a inoculação de um animal apropriado com o polipeptídeo ou um fragmento antigênico, es- timulação in vitro de populações de linfócitos, métodos sintéticos, hi- bridomas e/ou células recombinantes que expressam ácido nucleico que codifica tais anticorpos anti-ASC ou anti-NLR1. A imunização de um animal utilizando ASC recombinante purificado ou fragmentos de peptídeo do mesmo, por exemplo, resíduos 178-193 (SEQ ID NO: 1) de ASC de rato (por exemplo, número de acesso BAC43754), SEQ ID NO: 2 de ASC humano ou resíduos 21-41 (SEQ ID NO: 5) de ASC humano (por exemplo, número de acesso NP_037390.2), é um exem- plo de um método de preparação de anticorpos anti-ASC. Da mesma forma, a imunização de um animal utilizando NLRP1 recombinante pu- rificado ou fragmentos de peptídeo do mesmo, por exemplo, resíduos MEE SQS KEE SNT EG-cys (SEQ ID NO: 4) de NALP1 de rato ou SEQ ID NO: 3 de NALP1 humano, é um exemplo de um método de preparação de anticorpos anti-NLRP1.
[00147] Anticorpos monoclonais que se ligam especificamente a ASC ou NLRP1 podem ser obtidos por métodos conhecidos daqueles versados na técnica. Ver, por exemplo, Kohler and Milstein, Nature 256:495-497, 1975; U.S. Pat. No. 4,376,110; Ausubel et al., eds., Cur- rent Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1987, 1992); Harlow and Lane ANTIBODIES: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1988; Colligan et al., eds., Current Protocols in
Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1992, 1993), cujos conteúdos são inteiramente no presente documen- to incorporados por referência.
Esses anticorpos podem ser de qual- quer classe de imunoglobulina, incluindo IgG, IgM, IgE, IgA, GILD e qualquer subclasse das mesmas.
Um hibridoma que produz um anti- corpo monoclonal da presente invenção pode ser cultivado in vitro, in situ ou in vivo.
Em uma modalidade, um hibridoma que produz um an- ticorpo monoclonal anti-ASC da presente invenção é o hibridoma ICCN1.OH.
Em outra modalidade, um hibridoma que produz um anti- corpo monoclonal anti-ASC da presente invenção produz anticorpos monoclonais compreendendo uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende HCDR1 da SEQ ID NO: 6, HCDR2 da SEQ ID NO: 7 e HCDR3 da SEQ ID NO: 8, ou uma varian- te do mesmo tendo pelo menos uma substituição de aminoácido em HCDR1, HCDR2 e/ou HCDR3. Em outra modalidade, um hibridoma que produz um anticorpo monoclonal anti-ASC da presente invenção produz anticorpos monoclonais compreendendo uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que a sequência de aminoácido da região VL compreende LCDR1 da SEQ ID NO: 12, LCDR2 da SEQ ID NO: 13 e LCDR3 da SEQ ID NO: 14, ou uma variante dos mesmos tendo pelo menos uma substituição de aminoácido em LCDR1, LCDR2 e/ou LCDR3. Em ainda outra mo- dalidade, um hibridoma que produz um anticorpo monoclonal anti-ASC da presente invenção produz anticorpos monoclonais compreendendo uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compreende HCDR1 da SEQ ID NO: 6, HCDR2 da SEQ ID NO: 7 e HCDR3 da SEQ ID NO: 8, ou uma variante deste tendo pelo menos uma substituição de aminoácido em HCDR1, HCDR2 e/ou HCDR3 e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende LCDR1 da SEQ ID NO: 12, LCDR2 da SEQ ID NO: 13 e LCDR3 da SEQ ID NO: 14, ou uma variante do mesmo tendo pelo menos uma substitui- ção de aminoácido em LCDR1, LCDR2 e/ou LCDR3. Administração das Composições
[00148] As composições da invenção podem ser administradas a mamíferos (por exemplo, roedores, seres humanos) em qualquer for- mulação adequada. Por exemplo, os anticorpos anti-ASC podem ser formulados em veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis, tais como soro fisiológico ou uma solução salina tamponada. Os veícu- los e diluentes adequados podem ser selecionados com base no modo e na via de administração e na prática farmacêutica padrão. Uma des- crição de veículos e diluentes farmaceuticamente aceitáveis exempla- res, assim como formulações farmacêuticas, pode ser encontrada em Remington’s Pharmaceutical Sciences, um texto padrão neste campo, e em USP/NF. Outras substâncias podem ser adicionadas às compo- sições para estabilizar e/ou conservar as composições.
[00149] As composições da invenção podem ser administradas em mamíferos por qualquer técnica convencional. Tipicamente, tal admi- nistração será por inalação ou parenteral (por exemplo, introdução in- travenosa, subcutânea, intratumoral, intramuscular, intraperitoneal ou intratecal). As composições também podem ser administradas direta- mente a um local alvo, por exemplo, através da liberação cirúrgica a um local alvo interno ou externo, ou por cateter a um local acessível por um vaso sanguíneo. As composições podem ser administradas em um único bolo, múltiplas injeções ou através da infusão contínua (por exemplo, por via intravenosa, por diálise peritoneal, bomba de infu- são). Para administração parenteral, as composições podem ser for- muladas em uma forma apirogênica esterilizada. Doses Eficazes
[00150] As composições descritas acima podem ser administradas a um mamífero (por exemplo, um rato, humano) em uma quantidade eficaz, isto é, uma quantidade capaz de produzir um resultado desejá- vel em um mamífero tratado (por exemplo, redução da inflamação no CNS de um mamífero submetido a uma lesão traumática no CNS ou acidente vascular cerebral ou tendo uma doença autoimune, autoin- flamatória, metabólica, neurodegenerativa ou do CNS). Essa quanti- dade terapeuticamente eficaz pode ser determinada como descrito abaixo.
A quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição compreendendo um agente conforme fornecido nesta invenção (por exemplo, um anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo, como fornecido nesta invenção, tal como, por exemplo, IC 100) pode geralmente ser cerca de 0,001, 0,005, 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175 ou 200 mg/kg de peso corporal do paci- ente.
A quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição com- preendendo um agente conforme no presente documento fornecido (por exemplo, um anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo de- rivado do mesmo, tal como no presente documento fornecido, tal co- mo, por exemplo, IC 100) pode geralmente ser de cerca de 0,001 a cerca de 200 mg/kg de peso corporal do paciente.
A quantidade tera- peuticamente eficaz de uma composição compreendendo um agente conforme fornecido nesta invenção (por exemplo, um anticorpo mono- clonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo como no presen- te documento fornecido tal como, por exemplo, IC 100) pode de uma forma geral ser de cerca de 0,001 mg/kg a cerca de 0,01 mg/kg, de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 0,1 mg/kg, de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 1 mg/kg, de cerca de 1 mg/kg a cerca de 10 mg/kg, de cerca de 10 mg/kg a cerca de 25 mg/kg, de cerca de 25 mg/kg a cerca de 50 mg/kg, de cerca de 50 mg/kg a cerca de 75 mg/kg, de cerca de 75 mg/kg a cerca de 100 mg/kg, de cerca de 100 mg/kg a cerca de 125 mg/kg, de cerca de 125 mg/kg a cerca de 150 mg/kg, de cerca de 150 mg/kg a cerca de 175 mg/kg ou de cerca de 175 mg/kg a cerca de 200 mg/kg do peso corporal do indivíduo. A composição compreendendo um agente conforme fornecido nesta invenção (por exemplo, um anti- corpo monoclonal ou fragmento de anticorpo derivado do mesmo co- mo no presente documento fornecido tal como, por exemplo, IC 100) pode ser administrada em doses únicas ou múltiplas.
[00151] A toxicidade e a eficácia terapêutica das composições utili- zadas nos métodos da invenção podem ser determinadas por proce- dimentos farmacêuticos padrão, utilizando células em cultura ou ani- mais experimentais para determinar a LD50 (a dose letal para 50% da população). A relação de dose entre os efeitos tóxicos e terapêuticos é o índice terapêutico e pode ser expresso como a relação de LD50/ED50. Em alguns casos, as composições fornecidas nesta invenção apresen- tam grandes índices terapêuticos. Embora aqueles que apresentam efeitos colaterais tóxicos possam ser utilizados, deve-se tomar cuidado ao projetar um sistema de aplicação que minimize o dano potencial de tais efeitos colaterais. Em alguns casos, a dosagem de composições no presente documento fornecidas encontra-se dentro de uma faixa que inclui uma ED50 com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variar dentro desta faixa dependendo da forma de dosagem usa- da e da via de administração utilizada.
[00152] Como é bem conhecida nas técnicas médicas e veteriná- rias, a dosagem para qualquer indivíduo depende de muitos fatores, incluindo o tamanho do indivíduo, área de superfície corporal, idade, composição particular a ser administrada, tempo e via de administra- ção, saúde geral, e outros fármacos sendo administrados concomitan- temente.
EXEMPLOS
[00153] A presente invenção é ainda ilustrada pelos seguintes exemplos específicos. Os exemplos são fornecidos apenas para ilus- tração e não devem ser interpretados como limitativos do escopo da invenção de qualquer forma. Exemplo 1: Papel da sinalização de inflamassoma mediada por EV em ALI após TBI e efeitos de sua neutralização
[00154] A disfunção pulmonar frequentemente se apresenta como uma complicação de Lesão Cerebral Traumática Grave (1). Aproxima- damente 20 a 25 por cento dos indivíduos com TBI desenvolvem lesão pulmonar aguda (ALI) (2), mas os mecanismos que atuam como medi- ador da patologia da ALI induzida por TBI permanecem mal definidos. A literatura precedenteprecedente apoiou a ideia de que a disfunção pulmonar após o TBI se deve à resposta simpática ao aumento da pressão intracraniana levando à disfunção cardiopulmonar (42). Estu- dos mais recentes, no entanto, mostraram que uma resposta inflama- tória sistêmica também desempenha um papel fundamental na lesão pulmonar induzida por TBI (43). Especificamente, a via do receptor de ligante HMGB1-RAGE serve como mecanismo de transdução central para a disfunção pulmonar após a TBI (8). Além disso, o HMGB1 induz a ativação do inflamassoma AIM2 (37). Além do mais, a literatura pre- cedenteprecedente descreve que os patógenos secretam EV que car- regam DAMPs, tais como o HMGB1, e desencadeiam a inflamação (Buzas et al., 2014). Vários estudos têm mostrado que a barreira he- matoencefálica (BBB) é permeável após a TBI tão cedo quanto 3 a 6 horas após a lesão, resultando em dano à barreira protetora entre o cérebro e o compartimento intravascular e leva ao vazamento de pro- teínas e fluido (44). A ruptura da BBB após a lesão resulta na secreção de mediadores inflamatórios, tais como DAMPs, que podem promover a inflamação do cérebro e danificar órgãos distais (5). Vários mediado- res inflamatórios podem atuar como marcadores claros da lesão cere-
bral, porém sua validade não é amplamente aceita (45). Além disso, não há atualmente nenhum tratamento ou biomarcador clinicamente aprovado para ALI induzida por TBI. Recentemente, EV se tornou uma área de interesse na pesquisa de biomarcadores para vários tipos de doenças, incluindo a lesão pulmonar (46) e a TBI (47). Já foi demons- trado que na EV isolada do líquido cefalorraquidiano de paciente com TBI, existe um aumento das proteínas do inflamassoma quando com- parado com as amostras controle (14). Neste exemplo, a contribuição da sinalização de inflamassoma mediada por EV na etiologia de ALI induzida por TBI foi examinada. Materiais e métodos Animais e Lesão Cerebral Traumática
[00155] Todos os procedimentos com animais foram aprovados pe- lo Institutional Animal Care and Use Committee of the University of Mi- ami Miller School of Medicine (Animal Welfare Assurance A3224-01) e foram realizados de acordo com o NIH Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. As diretrizes ARRIVE foram seguidas ao conduzir este estudo. Todos os camundongos C57/BL6 tinham de 8 a 12 sema- nas e 24 a 32 gramas. Os camundongos foram randomizados pros- pectivamente para grupos experimentais (smulação, 4 h, 24) para TBI, grupos experimentais (passível, simulação-solução salina, não tratado, enoxaparina, anti-ASC) para transferência adotiva e tratamento. Para grupos experimentais de TBI, animais simulados foram submetidos ao procedimento cirúrgico, mas não foram feridos. Para estudos de trata- mento de transferência adotiva, o grupo simulação-solução salina foi submetido a procedimentos cirúrgicos e recebeu solução salina como veículo de tratamento. Animais passíveis não foram submetidos a pro- cedimentos cirúrgicos. Um tamanho de amostra de 5 a 6 foi utilizado para cada grupo com base na análise de energia (utilizando análise de energia G*, com um tamanho de efeito F = 0,85, α definido como 0,05)
e dados históricos de 49, 50. Todos os camundongos foram alojados na instalação de animais livres de antígenos virais (VAF) no Lois Pope Life Center na University of Miami em ciclos de luz/escuridão de 12 horas e alimentos e água foram fornecidos ad libitum. A instalação rea- liza procedimentos de manejo duas vezes por semana e verifica as condições dos animais diariamente. Os animais foram observados no pós-operatório, onde foram mantidos em almofada térmica e a tempe- ratura corporal controlada com sonda retal onde foi mantida a 37 oC, em nossa sala de cirurgia e posteriormente transferidos para o aloja- mento dos animais.
[00156] Antes da cirurgia, os animais foram anestesiados com ce- tamina e xilazina (intraperitoneal, i.p.). Os animais anestesiados foram então colocados em uma almofada térmica para garantir uma tempera- tura corporal de 37 oC. A TBI foi executada utilizando um modelo de impacto cortical controlado (CCI). Uma craniotomia de 5 mm foi feita no córtex direito (-2,5 mm posterior, 2,0 mm lateral de Bregma). A le- são foi induzida utilizando o dispositivo ECCI-6.3 (Custom Design & Fabrication, Richmond, VA, USA) com um reservatório de 3 mm em 6 m/s de velocidade, 0,8 mm de profundidade e 150 ms de duração do impacto (15). Seguindo esses procedimentos, os animais foram devol- vidos às suas gaiolas e receberam comida e água. Os animais foram sacrificados 4 horas e 24 horas após a TBI, como descrito. Os animais simulados foram anestesiados e submetidos à mesma incisão pré- cirúrgica que os animais feridos, mas não foram submetidos a uma craniotomia ou contusão. Coleta de tecido
[00157] Todos os animais foram anestesiados com cetamina e xila- zina, antes da perfusão. Os animais foram então submetidos à perfu- são traqueal. Os pulmões foram infundidos com 4% de paraformaldeí- do (PFA) utilizando um cateter traqueal em 20 cm H2O e depois fixa-
dos em 4% de PFA durante a noite a 4 oC. Os tecidos pulmonares fi- xados foram incorporados em parafina e seções de 5 μm foram pro- cessadas (16). O tecido pulmonar direito foi coletado para isolamento de proteínas e análises moleculares. Os animais foram então submeti- dos à decapitação e o tecido cortical direito foi coletado para isolamen- to de proteínas e análises moleculares. Ensaio de isolamento de piroptossoma
[00158] Os lisados de tecido pulmonar de camundongos foram fil- trados através de uma membrana de difluoreto de polivinilideno de baixa ligação (PVDF) de 5 µm (Millipore). Após a filtração, o sobrena- dante foi centrifugado em 2.700 x g durante 8 minutos. O pélete foi co- locado novamente em suspensão em 40 µl de tampão de ácido 3[(3- colamidopropil) dimetilamônio]-propanossulfônico (CHAPS) (20 mmol/L de HEPES-KOH, pH 7,5, 5 mmol/L de MgCl2, 0,5 mmol/L de EGTA, 0,1 mmol/L de fluoreto de fenilmetilsulfonila, coquetel de inibi- dor de protease e CHAPS a 0,1%). O piroptossoma foi granulado por centrifugação em 2.700 x g durante 8 minutos. O pélete foi então colo- cado novamente em suspensão e incubado em 27,8 µl de tampão CHAPS com 2,2 µl de substrato de dissuccinimidila (9) durante 30 mi- nutos na temperatura ambiente para reticular os dímeros ASC. Por úl- timo, uma quantidade igual de tampão Laemmli 2x foi adicionada e as proteínas foram analisadas por imunoblotting utilizando anticorpos co- mercialmente disponíveis para ASC e Gasdermin D (GSD). Extração Nuclear e Citoplasmática
[00159] As frações nucleares e citoplasmáticas foram extraídas uti- lizando os NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagents (Thermo Scientific) de acordo com as instruções do fabricante. Resu- midamente, as amostras de tecido pulmonar de camundongos foram cortadas em pedaços de 20 a 100 mg e centrifugadas em 500 x g du- rante 5 minutos. Pedaços de tecido foram homogeneizados com o
Cytoplasmic Extraction Reagent e centrifugados em 16.000 x g duran- te 5 minutos. Em seguida, o sobrenadante (extrato celular) foi removi- do e o pélete foi centrifugado com Nuclear Extraction Reagent (Ther- mo Scientific) em 16.000 x g durante 10 minutos. Esse sobrenadante correspondia à fração nuclear, que foi removida e armazenada a -80 o C. Immunoblotting
[00160] Amostras de tecido pulmonar e cerebral foram congeladas em nitrogênio líquido e armazenadas a -80 oC. Seções de 2 mm do pulmão inferior direito e tecido cortical direito foram homogeneizadas em tampão de extração contendo coquetel de protease e inibidor de fosfatase (Sigma, St Louis, MO, USA) e separadas em géis pré- moldados Tris-TGX Criterion 4-20% (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) como descrito em de Rivero Vaccari et al. 2015 (13) utilizando anticor- pos para caspase-1 (Novus Biologicals), ASC (Santa Cruz), IL-1 β (Cell Signaling), IL-18 (Abcam) AIM2 (Santa Cruz) e HMGB1 (Millipo- re). A quantificação da densidade de faixa foi executada utilizando Image Lab e todos os dados foram normalizados em β-actina. Imunohistoquímica
[00161] As seções de tecido foram desparafinizadas em xileno e, em seguida, reidratadas utilizando etanol e solução salina tamponada Tris. Procedimentos imunohistoquímicos foram então realizados para coloração dupla conforme descrito precedenteprecedentemente (16). As seções foram incubadas durante a noite a 4 oC com anticorpos con- tra Caspase-1 e ASC (Millipore), AIM2 (Santa Cruz), HMGB1 (Millipo- re) e SPC (Millipore). Seções de pulmão imunocoradas de camundon- gos simulados 4 horas e 24 horas foram examinadas com um micros- cópio confocal de varredura a laser Zeiss (Zeiss, Inc., Thornwood, NY, USA). As secções pulmonares foram analisadas por indivíduos que foram cegos para os grupos.
Isolamento de EV
[00162] As EV foram isoladas do soro de camundongos prejudica- dos com TBI e camundongos com lesão utilizando a solução de Total Exosome Isolation de acordo com as instruções do fabricante (Invitro- gen). Resumidamente, 100 μl de cada amostra foram centrifugados em 2.000 x g durante 30 minutos. O sobrenadante foi então incubado com 20 μl de reagente Total Exosome Isolation (TEI) durante 30 minu- tos a 4 oC seguido por centrifugação em 10.000 x g durante 10 minutos na temperatura ambiente. Os sobrenadantes foram descartados e o pélete foi colocado novamente em suspensão em 100 μl de PBS. As EV foram caracterizadas pela expressão de CD81 e por análise de rastreamento Nanosight (FIG. 6). Transferência Adotiva de EV
[00163] EVs derivadas de soro de camundongos C57BL-6 com TBI e simulados foram injetadas em camundongos C57BL-6 igênuos atra- vés da veia jugular em uma dose de 1,0 x 1010 partículas por gra- ma/peso corporal 48. A contagem de partículas foi medida por análise de Nanosight Tracking e as amostras foram diluídas conforme for. An- tes da cirurgia, os animais foram anestesiados com cetamina e xileno. Uma incisão de 1 a 2 cm foi feita entre a mandíbula e a clavícula. A veia jugular foi elevada e amarrada, seguida da colocação do cateter. As EV derivadas do soro foram transferidas e os tecidos do pulmão e do cérebro foram coletados 24 horas após a injeção para análise (n = 5). Tratamento com Enoxaparina e Anti-ASC
[00164] As EVs derivadas de soro de camundongos com TBI foram injetadas em camundongos C57-BL6 passíveis através de uma injeção na veia jugular. Uma hora depois, Enoxaparina (3 mg/kg) (n = 4) e An- ti-ASC (IC 100; 5 mg/kg) (n = 4) foram administrados aos animais re- ceptores. Os seguintes grupos foram utilizados: 1) o grupo passível não recebeu tratamento, 2) o grupo simulado de solução salina foi uti- lizado como controle negativo e foi submetido à injeção na veia jugular apenas de solução salina, 3) o grupo não tratado recebeu EV de ca- mundongos com TBI sem qualquer tratamento e foi utilizado como controle positivo, 4) o grupo ENOX recebeu EV de camundongos com TBI e Enoxaparina, e 5) o grupo Anti-ASC recebeu EV de camundon- gos com TBI e Anti-ASC. A ordem de tratamento foi randomizada. Os tecidos do pulmão e do cérebro foram coletados 24 horas após a inje- ção para análise. Deve-se observar que o anticorpo anti-ASC utilizado nas experiências de tratamento foi um anticorpo monoclonal humani- zado contra ASC e reconhece ASC de murino, ser humano e suíno. Histologia e Pontuação de Lesão Pulmonar
[00165] As seções de tecido pulmonar foram coradas por um méto- do padrão de hematoxilina e eosina para histologia, morfometria e pontuação ALI. As seções pulmonares foram avaliadas por um patolo- gista cegado utilizando o Lung Injury Scoring System from the Ameri- can Thoracic Society Workshop Report (17). Vinte campos aleatórios de alta potência foram escolhidos para pontuação. Os critérios para pontuação ALI foram baseados no número de neutrófilos no espaço alveolar, espaço intersticial, membranas hialinas, detritos protéicos que carregam os espaços aéreos e espessamento do septo alveolar. Com base nesses critérios, uma pontuação entre 0 (sem lesão) e 1 (lesão grave) foi atribuída. Análise Estatística
[00166] Os dados foram analisados utilizando um teste T de Stu- dent para dois grupos e uma ANOVA unidirecional seguida por testes de comparação múltipla de Tukey (GraphPad Prism versão 7.0) para dois ou mais grupos. O teste D’Agostino-Pearson foi utilizado para tes- tar a normalidade. Os dados são expressos como média +/- SEM. Os valores de p de significância utilizados foram * p < 0,05.
Resultados A TBI grave aumenta as proteínas de Inflammasoma AIM2 e a expres- são de HMGB1 no cérebro de camundongos
[00167] Níveis excessivos das citocinas pró-inflamatórias IL-1β e IL- 18, e proteínas do inflamassoma estão associados a danos secundá- rios após lesão cerebral por percussão de fluido (18). Para determinar se a CCI grave induziu o processamento de citocinas pró-inflamatórias e as alterações nos níveis de proteínas do inflamassoma, os lisados corticais foram analisados; no entanto, há pesquisas limitadas sobre a ativação do inflamassoma na TBI grave. Neste exemplo, após o CCI grave, os lisados corticais foram examinados com relação aos níveis de caspase-1 (Fig 1A, B) (p < 0,001), ASC (Fig 1A, C) (p = 0,003), IL- 18 (Fig 1 A, D) (p = 0,0042), AIM2 (Fig. 1A, F) (p = 0,0197) e IL-1 (Fig 1 A, G) (p = 0,0141) às 4 e 24 horas após as lesões. Os níveis de cas- pase-1, ASC, AIM2 e IL-1β atingiram o pico 4 horas após o CCI e di- minuíram em 24 horas. O curso de tempo para a maturação das cito- cinas inflamatórias diferiu ligeiramente, mas atingiu o pico 24 horas após a TBI. Visto que outros mostraram um papel para o inflamasso- ma DAMP HMGB1 ativando o inflamassoma AIM2, os níveis dessas proteínas também foram determinados em lisados corticais. Conforme mostrado nas FIGs. 1A, 1E, o CCI induziu um aumento significativo nos níveis de HMGB1 (FIG. 1A, 1E) (p = 0,0121) em 4 e 24 horas após a lesão. Estes dados indicam que após o CCI grave em camundongos, os níveis das proteínas do inflamassoma AIM2 foram significativamen- te elevados no córtex após a lesão. TBI grave aumenta a expressão da proteína do inflamassoma AIM2 e HMGB1 nos pulmões de camundongos
[00168] Para determinar se o CCI induziu a ativação do inflamas- soma nos pulmões, uma análise de immunoblot de lisados de pulmão foi executada para caspase-1 (Fig 1 H, I) (p = 0,0026), ASC (Fig 1 H,
J) (p = 0,0427), IL-18 (Fig 1H, K) (p = 0,0025), IL-1 (Fig 1 H, N) (p = 0,0012) e AIM2 (Fig 1 H, M) (p < 0,001) e NLRP3 (p = 0,0047) (Figura 1 Suplementar). Níveis aumentados de caspase-1, ASC, IL-18 e AIM2 aumentaram significativamente em 4 horas e 24 horas após a lesão, em comparação com o controle simulado. No entanto, o curso de tem- po do aumento na expressão da proteína diferiu ligeiramente do ob- servado no cérebro em que atingiu o pico 24 horas após o CCI. Uma vez que o eixo HMGB1-RAGE desempenha um papel no mecanismo pelo qual a TBI induz disfunção pulmonar (8), os lisados de pulmão foram analisados quanto aos níveis de expressão da proteína HMGB1. As FIGs. 1H, 1L (p = 0,0158) mostram que a expressão de HMGB1 aumentou em 4 e 24 horas após a TBI, indicando que o inflamassoma AIM2 e HMGB1 desempenham um papel na resposta inflamatória nos pulmões pós-TBI. TBI induz piroptose nos pulmões de camundongos
[00169] Como mostrado precedenteprecedentemente, a ativação do inflamassoma AIM2 em neurônios corticais leva à morte celular pirop- tótica (19). Para investigar se a TBI resulta em piroptose no tecido pulmonar de camundongos, o piroptossoma no tecido pulmonar foi iso- lado após a TBI. Animais com TBI, sacrificados 4 horas após a lesão, apresentaram evidências de oligomerização ASC em comparação com animais simulados (FIG. 4A). Dímeros e trímeros ASC foram observa- dos em animais com TBI (50, 75 kDA respectivamente). Estes resulta- dos foram indicativos da formação de piroptossoma, que pode ser ca- racterizado pela montagem supramolecular de oligômeros ASC. Além disso, a gasdermina D (GSDMD), que é clivada após a ativação da caspase-1 e desencadeia a piroptose e a liberação de IL-1β (20), foi significativamente aumentada nos pulmões de animais com TBI em comparação com a simulação (FIG. 4B e 4C) (p = 0,0001). Essas des- cobertas indicaram que a piroptose contribui para a morte celular no tecido pulmonar após a TBI. A TBI aumenta a imunorreatividade das proteínas do inflamassoma em células epiteliais alveolares do tipo II
[00170] A TBI pode levar a vazamento capilar, resultando em au- mento da permeabilidade vascular e danos às células epiteliais alveo- lares especializadas, chamadas de pneumócitos tipo II (5). Para exa- minar os efeitos celulares da TBI na expressão do inflamassoma nos pulmões após a lesão, a análise imuno-histoquímica foi executada em seções de pulmão de animais com lesão simulada, 4 horas e 24 horas. As células epiteliais alveolares do tipo II são conhecidas de serem o principal tipo de células pulmonares lesadas na ALI (17). As seções de pulmão foram coradas com anticorpos contra AIM2, caspase-1 e ASC (verde) e cocoradas com proteína C Pro-surfactante (Pro-SPC, verme- lho), um marcador de células epiteliais tipo II e coloração nuclear DAPI (azul). Como mostrado na FIG. 2A-2C, caspase-1 ativa (FIG. 2A), ASC (FIG. 2B), assim como AIM2 (FIG. 2C) estão presentes nas células SPC-positivas (seta). A imunorreatividade dessas proteínas do infla- massoma aumentou após a TBI. Essas descobertas indicam que as proteínas do inflamassoma são expressas em células epiteliais alveo- lares do tipo II e que a TBI resulta em aumento da imunorreatividade nessas células. A TBI aumenta a expressão de HMGB1 nuclear e citoplasmática
[00171] A fim de determinar a distribuição celular de HMGB1 em células pulmonares após a TBI, frações nucleares e citoplasmáticas de homogenatos de pulmão foram isoladas (FIG. 3A, 3C) (p = 0,0337). O immunoblotting indicou que ambas as frações tiveram aumentos signi- ficativos na expressão de HMGB1 em 4 horas pós-TBI (FIG. 3B, 3D) (p = 0,0345). A análise imuno-histoquímica de HMGB1 também foi execu- tada para determinar as alterações na imunorreatividade em seções de pulmão após a TBI. As seções foram cocoradas para HMGB1 (ver-
de) e SPC (vermelho) e coloração nuclear DAPI (azul). A imunorreati- vidade de HMGB1 foi aumentada em 4 horas e 24 horas quando com- parada à simulação. A imunorreatividade fraca de HMGB1 foi obser- vada nas células SPC-positivas (seta) (FIG. 3E); portanto, sugerindo que as alterações de HMGB1 no tecido pulmonar lesado podem ser citoplasmáticas. TBI induz mudanças na morfologia pulmonar e induz ALI
[00172] A ALI pode ser caracterizada por processos inflamatórios, que levam ao edema alveolar e intersticial, assim como à infiltração de células inflamatórias no espaço alveolar (23). A análise histopatológica do tecido pulmonar (FIG. 5A) indica que a TBI grave provoca mudan- ças substanciais na arquitetura e morfologia do pulmão em 4 e 24 ho- ras após a lesão. Os animais simulados apresentaram uma morfologia alveolar normal, enquanto os animais feridos apresentaram alterações agudas no edema alveolar, mas diminuíram ligeiramente 24 horas após a lesão (setas longas). Além disso, houve evidência de infiltração de neutrófilos (pontas de setas) e alterações na morfologia das mem- branas capilares alveolares (*) em ambos os momentos. Os animais lesionados apresentaram sinais de edema intersticial, que foi mais pronunciado 4 horas após a lesão, mas ainda era evidente 24 horas após a lesão (setas curtas). Por último, os animais feridos também apresentaram evidências de espessamento da área intersticial e do septo alveolar (libra, #).
[00173] Para confirmar que lesão grave induz ALI, os cortes histo- lógicos foram analisados utilizando o sistema de pontuação ALI defini- do pela American Thoracic Society (17). Esse sistema é baseado em evidências de infiltração de neutrófilos nos espaços alveolar e intersti- cial, formação da membrana hialina, detritos protéicos que carregam os espaços aéreos e espessamento do septo alveolar. (17). Estas ca- racterísticas foram significativamente elevadas em animais feridos e as pontuações de ALI foram mais elevadas em geral em animais com TBI em comparação com a simulação (FIG. 5B) (p = 0,0017). Tratamento com enoxaparina e anticorpo anti-ASC reduz significati- vamente a expressão do inflamassoma e ALI após a transferência adotiva de EV de camundongos com TBI
[00174] A fim de fornecer evidências de que as EV e sua carga que pode ser liberada na circulação após a TBI podem induzir a ativação de inflamassoma no pulmão, um experimento de transferência adotiva clássico foi executado utilizando EV derivadas de soro de camundon- gos de CCI grave. As preparações de EV foram validadas utilizando Western Blot para o marcador de EV CD81 (FIG. 6). Os controles re- ceberam EV isoladas de animais simulados ou passíveis. Como mos- trado na FIG. 7A-7F, caspase-1 ativa (FIG. 7A, 7B), ASC (FIG. 7A, 7C), IL-18 (FIG. 7A, 7D), AIM2 (FIG. 7A, 7E) e HMGB1 (FIG. 7A, 7F) foram significativamente elevados nos pulmões de animais que rece- beram EV de animais feridos com TBI quando comparados aos pul- mões de animais que receberam EV de camundongos não feridos ou passíveis ou de camundongos passíveis. Além disso, a infiltração de células inflamatórias (setas) foi aparente em pulmões tratados com EV de camundongos com TBI (FIG. 7G). Por último, a pontuação de ALI também foi significativamente maior em animais que receberam EV de camundongos feridos (FIG. 7G). Esses estudos forneceram evidências de um eixo neural-respiratório-inflamassoma no qual as EV liberadas na circulação após a TBI ativam o inflamassoma nas células-alvo do pulmão, contribuindo para a patogênese da ALI.
[00175] Logo depois, o bloqueio da captação de exossomo foi ten- tado através do tratamento com Enoxaparina ou um anticorpo mono- clonal contra ASC (IC 100) após a transferência adotiva de EV de ca- mundongos lesionados a passíveis. Os animais de controle negativo receberam solução salina e os animais de controle positivo não rece-
beram tratamento. Como mostrado na FIG. 8A-8F, Caspase-1 (FIG. 8A, 8B), ASC (FIG. 8A, 8C), IL-1 (FIG. 8A, 8D), AIM2 (FIG. 8A, 8E), e HMGB1 (FIG. 8A, 8F) foram significativamente reduzidos (p = < 0,0001) em comparação com o grupo não tratado (controle positivo) após o tratamento com Enoxaparina ou um anticorpo anti-ASC mono- clonal humanizado (por exemplo, anticorpo IC 100). Além disso, as seções de pulmão coradas com H&E apresentaram significativamente menos infiltração de neutrófilos no espaço alveolar e intersticial, assim como nenhum sinal de espessamento septal (FIG. 9A-D). As pontua- ções ALI para animais tratados com Enoxaparina e anticorpo anti-ASC (IC 100) foram significativamente mais baixas em comparação com o grupo não tratado (FIG. 9E) (p = < 0,0001). Assim, as EV liberadas na circulação após a TBI desempenham um papel na ativação do infla- massoma nas células pulmonares, levando à ALI. Conclusões
[00176] A TBI pode estar associada com taxas mais elevadas de certas complicações médicas, especialmente disfunção pulmonar e do sistema nervoso central. Neste exemplo, a TBI grave mostrou aumen- tar a expressão de HMGB1 e inflamassoma (por exemplo, expressão de AIM2, caspase-1 e ASC) no tecido cortical e pulmonar e induziu alterações na morfologia pulmonar consistente com a ALI (por exem- plo, infiltração de neutrófilos no espaço alveolar e intersticial, espes- samento septal alveolar e edema e hemorragia alveolar) e introduz a idéia de um Eixo Inflamatório Respiratório Neural. É importante ressal- tar que a TBI resultou em piroptose no tecido pulmonar (por exemplo, presença de clivagem de GSDMD) e aumento da expressão de proteí- nas do inflamassoma em células epiteliais alveolares do Tipo II. Adici- onalmente, a transferência adotiva de EV de camundongos com TBI ativou o inflamassoma e induziu a ALI, indicando que a lesão cerebral induz a liberação de EV contendo uma carga de proteínas do infla-
massoma que são então transportadas à resultante em ALI. Além do mais, foi demonstrado que ao inibir a captação de EV (Enoxaparina) e a ativação do inflamassoma (tratamento com anticorpo anti-ASC (IC 100)), ocorre uma redução na expressão da proteína do inflamassoma e no desenvolvimento de ALI.
[00177] Em resumo, este exemplo mostrou que a sinalização de inflamassoma AIM2 desempenha um papel central no patomecanismo de lesão pulmonar após a TBI e demonstra um mecanismo de ALI in- duzida por TBI envolvendo a sinalização de inflamassoma mediada por EV. Esses dados forneceram evidências de que a sinalização do inflamassoma mediada por EV pode desempenhar um papel central envolvendo um Eixo Neuronal-Respiratório-Inflamatório. Portanto, di- recionar este eixo com anticorpos contra proteínas do inflamassoma ou fármacos que bloqueiam a captação de EV pode fornecer uma abordagem terapêutica na ALI induzida por neurotrauma em todas as áreas da medicina intensiva. À luz destes resultados, as estratégias terapêuticas descritas podem ser úteis para o tratamento de doenças inflamatórias do pulmão em geral. Incorporação por referência
[00178] As seguintes referências são incorporadas por referência na sua totalidade para todos os propósitos.
1. Pfeifer R, et al. (2015) Development of a standardized trauma-related lung injury model. J Surg Res 196(2):388-394.
2. Summers CR, Ivins B, & Schwab KA (2009) Traumatic brain injury in the United States: an epidemiologic overview. The Mount Sinai journal of medicine, New York 76(2):105-110.
3. Erickson SE, et al. (2009) Recent trends in acute lung injury mortality: 1996-2005. Crit Care Med 37(5):1574-1579.
4. Nicolls MR & Laubach VE (2014) Traumatic brain injury: lungs in a RAGE. Sci Transl Med 6(252):252fs234.
5. Rincon F, et al. (2012) Impact of acute lung injury and acute respiratory distress syndrome after traumatic brain injury in the United States. Neurosurgery 71(4):795-803.
6. Andersson U & Rauvala H (2011) Introduction: HMGB1 in inflammation and innate immunity. J Intern Med 270(4):296-300.
7. Weber DJ, et al. (2014) The HMGB1-RAGE axis mediates traumatic brain injury-induced pulmonary dysfunction in lung transplantation. Sci Transl Med 6(252):252ra124.
8. Lu B, et al. (2012) Novel role of PKR in inflammasome activation and HMGB1 release. Nature 488(7413):670-674.
9. de Rivero Vaccari JP, Dietrich WD, & Keane RW (2014) Activation and regulation of cellular inflammasomes: gaps in our knowledge for central nervous system injury. Journal of cerebral blood flow and metabolism : official journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism 34(3):369-375.
10. Ware LB & Matthay MA (2000) The Acute Respiratory Distress Syndrome. New England Journal of Medicine 342(18):1334-
1349.
11. Yanez-Mo M, et al. (2015) Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions. J Extracell Vesicles 4:27066.
12. Qu Y, Franchi L, Nunez G, & Dubyak GR (2007) Nonclassical IL-1 beta secretion stimulated by P2X7 receptors is dependent on inflammasome activation and correlated with exosome release in murine macrophages. J Immunol 179(3):1913-1925.
13. de Rivero Vaccari JP, et al. (2015) Exosome-mediated inflammasome signaling after central nervous system injury. J Neurochem. Jan;136 Suppl 1:39-48. doi: 10.1111/jnc.13036.
14. Atkins CM, Cepero ML, Kang Y, Liebl DJ, & Dietrich WD (2013) Effects of early rolipram treatment on histopathological outcome after controlled cortical impact injury in mice. Neurosci Lett 532:1-6.
15. Wu S, et al. (2010) Conditional overexpression of connective tissue growth factor disrupts postnatal lung development. American journal of respiratory cell and molecular biology 42(5):552-
563.
16. Matute-Bello G, et al. (2011) An official American Thoracic Society workshop report: features and measurements of experimental acute lung injury in animals. American journal of respiratory cell and molecular biology 44(5):725-738.
17. de Rivero Vaccari JP, et al. (2009) Therapeutic neutralization of the NLRP1 inflammasome reduces the innate immune response and improves histopathology after traumatic brain injury. Journal of cerebral blood flow and metabolism : official journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism 29(7):1251-1261.
18. Adamczak SE, et al. (2014) Pyroptotic neuronal cell death mediated by the AIM2 inflammasome. Journal of cerebral blood flow and metabolism : official journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism 34(4):621-629.
19. Liu X, et al. (2016) Inflammasome-activated gasdermin D causes pyroptosis by forming membrane pores. Nature 535(7610):153-
158.
20. Dolinay T, et al. (2012) Inflammasome-regulated cytokines are critical mediators of acute lung injury. Am J Respir Crit Care Med 185(11):1225-1234.
21. Muller MC, et al. (2014) Contribution of damage-associated molecular patterns to transfusion-related acute lung injury in cardiac surgery. Blood transfusion = Trasfusione del sangue 12(3):368-375.
22. Ragaller M & Richter T (2010) Acute lung injury and acute respiratory distress syndrome. Journal of emergencies, trauma, and shock 3(1):43-51.
23. Lee K & Rincon F (2012) Pulmonary complications in patients with severe brain injury. Critical care research and practice 2012:207247.
24. Yasui H, Donahue DL, Walsh M, Castellino FJ, & Ploplis VA (2016) Early coagulation events induce acute lung injury in a rat model of blunt traumatic brain injury. American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology 311(1):L74-86.
25. Hendrickson CM, et al. (2016) The acute respiratory distress syndrome following isolated severe traumatic brain injury. J Trauma Acute Care Surg.
26. Cross LJ & Matthay MA (2011) Biomarkers in acute lung injury: insights into the pathogenesis of acute lung injury. Crit Care Clin 27(2):355-377.
27. Butt Y, Kurdowska A, & Allen TC (2016) Acute Lung Injury: A Clinical and Molecular Review. Archives of pathology & laboratory medicine 140(4):345-350.
28. Luh SP & Chiang CH (2007) Acute lung injury/acute respiratory distress syndrome (ALI/ARDS): the mechanism, present strategies and future perspectives of therapies. Journal of Zhejiang University. Science. B 8(1):60-69.
29. Matute-Bello G & Martin TR (2003) Science review: apoptosis in acute lung injury. Critical care 7(5):355-358.
30. Miao EA, Rajan JV, & Aderem A (2011) Caspase-1-induced pyroptotic cell death. Immunological reviews 243(1):206-214.
31. Hornung V, et al. (2009) AIM2 recognizes cytosolic dsDNA and forms a caspase-1-activating inflammasome with ASC. Nature 458(7237):514-518.
32. Lam NY, Rainer TH, Chan LY, Joynt GM, & Lo YM (2003) Time course of early and late changes in plasma DNA in trauma patients. Clinical chemistry 49(8):1286-1291.
33. Fernandes-Alnemri T & Alnemri ES (2008) Assembly, purification, and assay of the activity of the ASC pyroptosome. Methods Enzymol 442:251-270.
34. Man SM & Kanneganti TD (2016) Converging roles of caspases in inflammasome activation, cell death and innate immunity. Nature reviews. Immunology 16(1):7-21.
35. Liu L, et al. (2014) HMGB1-DNA complex-induced autophagy limits AIM2 inflammasome activation through RAGE. Biochem Biophys Res Commun 450(1):851-856.
36. Hoesch RE, et al. (2012) Acute lung injury in critical neurological illness. Critical care medicine 40(2):587-593.
37. Kalsotra A, Zhao J, Anakk S, Dash PK, & Strobel HW (2007) Brain trauma leads to enhanced lung inflammation and injury: evidence for role of P4504Fs in resolution. Journal of cerebral blood flow and metabolism : official journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism 27(5):963-974.
38. Hay (2015) Blood-Brain Barrier Disruption Is an Early Event That May Persist for Many Years After Traumatic Brain Injury in Humans. J Neuropathol Exp Neurol 74(12):1147-1157.
39. Zygun DA, Kortbeek JB, Fick GH, Laupland KB, & Doig CJ (2005) Non-neurologic organ dysfunction in severe traumatic brain injury. Critical care medicine 33(3):654-660.
40. Peltz ED ME, Eckels PC, Damle SS, Tsuruta Y, Johnson JL, Sauaia A, Silliman CC, Banerjee A, Abraham E. (209) HMGB1 is markedly elevated within 6 hours of mechanical trauma in humans. Shock 32(1):17-22.
41. Chi W, et al. (2015) HMGB1 promotes the activation of NLRP3 and caspase-8 inflammasomes via NF-kappaB pathway in acute glaucoma. Journal of neuroinflammation 12:137.
42. Woodcock T & Morganti-Kossmann MC (2013) The role of markers of inflammation in traumatic brain injury. Frontiers in neurology 4:18.
43. Monsel A, Zhu YG, Gudapati V, Lim H, & Lee JW (2016) Mesenchymal stem cell derived secretome and extracellular vesicles for acute lung injury and other inflammatory lung diseases. Expert opinion on biological therapy 16(7):859-871.
44. Taylor DD & Gercel-Taylor C (2014) Exosome platform for diagnosis and monitoring of traumatic brain injury. Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological sciences 369(1652).
45. Guo H, Callaway JB, & Ting JP (2015) Inflammasomes: mechanism of action, role in disease, and therapeutics. Nature medicine 21(7):677-687.
46. Silverman WR, et al. (2009) The pannexin 1 channel activates the inflammasome in neurons and astrocytes. The Journal of biological chemistry 284(27):18143-18151.
47. Tomura S, de Rivero Vaccari JP, Keane RW, Bramlett HM, & Dietrich WD (2012) Effects of therapeutic hypothermia on inflammasome signaling after traumatic brain injury. Journal of cerebral blood flow and metabolism : official journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism 32(10):1939-1947.
48. Wiklander, O.P., Nordin, J.Z., O'Loughlin, A., Gustafsson, Y., Corso, G., Mager, I., Vader, P., Lee, Y., Sork, H., Seow, Y., Heldring, N., Alvarez-Erviti, L., Smith, C.I., Le Blanc, K., Macchiarini, P., Jungebluth, P., Wood, M.J. and Andaloussi, S.E. (2015). Extracellular vesicle in vivo biodistribution is determined by cell source, route of ad- ministration and targeting. J Extracell Vesicles 4, 26316.
49. de Rivero Vaccari, J.P., Lotocki, G., Marcillo, A.E., Dietrich, W.D. and Keane, R.W. (2008). A molecular platform in neurons regulates inflammation after spinal cord injury. J Neurosci 28, 3404-3414.
50. Assis-Nascimento, P., Umland, O., Cepero, M.L. and Liebl, D.J. (2016). A flow cytometric approach to analyzing mature and progenitor endothelial cells following traumatic brain injury. J Neurosci Methods 263, 57-67. Exemplo 2: Papel da sinalização de inflamassoma mediada por EV em ALI após a TBI em pacientes humanos
[00179] Como um acompanhamento dos experimentos em camun- dongos no Exemplo 1, o papel da EV isolada de pacientes com TBI humanos na sinalização de inflamassoma em células endoteliais pul- monares humanas foi examinado.
[00180] Em um primeiro experimento, as EVs derivadas de soro fo- ram isoladas de pacientes com TBI e controle utilizando o kit Total Exosome Isolation (Thermofisher). Pulmonary Human Microvascular Endothelial Cells (HMVEC-Lonza) foram cultivadas e semeadas em uma placa de 12 cavidades. Após a confluência ter sido alcançada, as EV isoladas de pacientes com TBI e de controle foram liberadas (1,94 x 108 partículas/ml) nas células durante um período de incubação de 4 horas. Após a incubação, as células foram colhidas com 200 ul de tampão de lise e os lisados celulares foram utilizados para análise de Western Blot.
[00181] Em um segundo experimento, as EVs derivadas de soro foram isoladas de pacientes com TBI e de controle utilizando o kit To- tal Exosome Isolation (Thermofisher). Pulmonary Human Microvascu- lar Endothelial Cells (HMVEC- Lonza) foram cultivadas e semeadas em uma placa de 96 cavidades. Após a confluência ter sido alcançada,
as EV isoladas de pacientes com TBI e de controle foram liberadas (1,94 x 108 partículas/ml) nas células durante um período de incuba- ção de 3 horas e, em seguida, 1 hora adicional com caspase-1 FAM FLICA (Immunohistochemistry Technologies) com uma relação volume para volume de 1:30. Após a incubação, o meio foi removido e as célu- las foram lavadas 3 vezes com tampão de lavagem de apoptose (Immunohistochemistry Technologies). As células foram então cocora- das com Hoechst para coloração nuclear e iodeto de propídio para morte celular. As imagens foram tiradas utilizando um microscópio EVOS e, em seguida, as células foram lidas em uma leitora de placa fluorescente em um comprimento de onda de excitação de 492 nm e um comprimento de onda de emissão de 520 nm. Resultados
[00182] Conforme mostrado na FIG. 10A a 10F, a liberação de EV derivado de soro de pacientes com TBI aumentou a expressão da pro- teína do inflamassoma em células endoteliais pulmonares. A FIG. 10A a 10E mostrou que caspase-1, ASC, AIM2 e HMGB1 foram elevados em PMVEC incubado com TBI-EV durante 4 horas em comparação com PMVEC incubado com controle-EV durante 4 horas. Os resulta- dos do imunoensaio mostraram um aumento significativo na expressão de IL-1beta utilizando o ensaio Ella simple plex (FIG. 10F).
[00183] Como mostrado na FIG. 11A-11C, a liberação de TBI-EV às células endoteliais pulmonares aumentou a imunorreatividade da cas- pase-1 e a morte celular. Conclusão
[00184] Estes estudos forneceram evidências adicionais para um eixo neural-respiratório-inflamassoma em que a EV liberada na circu- lação após a TBI ativa o inflamassoma em células-alvo do pulmão, contribuindo para a patogênese de ALI. Exemplo 3: Efeito do uso de anticorpo anti-ASC humanizado em um modelo animal de esclerose múltipla
[00185] A fim de determinar a utilidade de um anticorpo monoclonal anti-ASC humanizado no tratamento de MS, dito anticorpo foi adminis- trado a camundongos com encefalomielite alérgica experimental (EAE). A EAE é um modelo animal (isto é, roedor) de MS, conforme descrito em Höftberger R, Leisser M, Bauer J, Lassmann H (Dec 2015). "Autoimmune encephalitis in humans: how closely does it reflect multiple sclerosis?". Acta Neuropathol Commun. 3 (1): 80 and Lass- man Hans (Feb 2010). "Acute disseminated encephalomyelitis and multiple sclerosis". Brain. 133: 317–319 and L. Gómez Vicente et al. Relapse in a paucisymptomatic form of multiple sclerosis in a patient treated with nivolumab, Neuro Oncol (2016) 18 (suppl 4): iv25.
MÉTODOS Indução de EAE e tratamento com IC 100
[00186] A EAE ativa foi induzida em camundongos fêmeas C57BL/6 de 2 meses de idade com peptídeo glicoproteína 35-55 de oligoden- drócito de mielina (MOG35-55, BioSynthesis), conforme descrito prece- denteprecedentemente (Brambilla et al., 2014). Resumidamente, os camundongos receberam uma injeção intraperitoneal (i.p.) de toxina da coqueluche (dissolvida em PBS (350 ng/camundongo; dia 0), se- guida pela administração subcutânea de MOG 35-55 (300 ng/camundongo; dia 1) emulsificado em Adjuvante Completo de Freund e uma segunda injeção i.p. de toxina da coqueluche (350 ng/camundongo; dia 2). Camundongos receberam veículo (solução salina 0,9%) ou IC 100 em três doses diferentes (10, 30 e 45 mg/kg) por meio de injeção i.p. a cada 4 dias, começando no dia 8 após a in- dução da EAE. Os sintomas clínicos da EAE foram avaliados diaria- mente em uma escala de 0 a 6 como se segue: 0, sem sinais clínicos; 1, perda do tônus da cauda; 2, cauda flácida; 3, paralisia completa dos membros posteriores; 4, paralisia completa dos membros preceden-
teprecedentes; 5, moribundo; 6, morto. Isolamento de células para a citometria de fluxo
[00187] Após a perfusão transcardial com PBS, as medulas espi- nhais foram colhidas e colocadas em solução salina balanceada de Hanks fria sem Mg2+ e Ca2+ (HBSS w/o). As amostras foram dissocia- das manualmente em suspensões de células isoladas através de um filtro de 70 um e lavadas em HBSS w/o. As amostras de baço foram centrifugadas em 1200 rpm durante 10 min a 4 oC, os sobrenadantes foram removidos e os glóbulos vermelhos (RBCs) lisados em 2 ml de tampão de lise de RBC (eBioscience) de acordo com as instruções do fabricante. As células do baço foram então colocadas novamente em suspensão em PBS. As células isoladas da medula espinhal foram co- locadas novamente em suspensão em tampão de citometria de fluxo (FCB, eBioscience) e incubadas com Myelin Removal Beads II (Mil- tenyi). A mielina foi exaurida utilizando as colunas magnéticas LS, con- forme descrito no protocolo do fabricante (Miltenyi). Similar aos esple- nócitos, as células da medula espinhal foram colocadas novamente em suspensão em PBS e coradas como descrito abaixo. Análise de marcação imunológica e citometria de fluxo
[00188] Para experimentos em que a Caspase-1 foi avaliada, o kit FAM FLICATM Caspase 1 foi utilizado (BioRad) de acordo com as ins- truções do fabricante. As células foram incubadas durante 30 min a 4 o C em solução FLICA (BioRad), lavadas com tampão de lavagem de apoptose (BioRad) e colocadas novamente em suspensão em 1 ml de PBS. As amostras foram então incubadas durante 30 min a 4 °C com uma coloração viva/morta fixável (Tonbo Biosciences), centrifugadas em 1200 rpm durante 10 min a 4 oC e removidas dos sobrenadantes. As células foram colocadas novamente em suspensão em 100 ul de tampão FACS, bloqueadas com anti-CD16/32 (bloco FcR, eBioscien- ce) na temperatura ambiente durante 5 min, imunomarcadas durante
30 min a 4 °C e fixadas com PFA a 1%. As amostras foram analisadas com um citômetro de fluxo CytoFLEX S equipado com software CytExpert 2.1 (Beckman Coulter). O número de leucócitos da medula espinhal foi determinado com 123count eBeads (eBioscience). O nú- mero de leucócitos esplênicos foi determinado por citometria de fluxo em combinação com contagem de exclusão com azul de tripano utili- zando um TC20TM Automated Cell Counter (Bio-Rad). Uma lista de anticorpos de citometria de fluxo é fornecida abaixo da Tabela 3. Tabela 3. Anticorpos de Citometria de Fluxo para Uso nos Méto- dos No presente documento Fornecidos. Antígeno Cor Diluição Fornecedor Catálogo # CD45 FITC 1:1000 eBioscience 11-0451-82 CD45 PE 1:1000 eBioscience 12-0451-82 CD4 PE/Cy7 1:200 eBioscience 25-0042-81 CD8 Percp-Cy 5.5 1:200 Biolegend 100734 B220 PE 1:200 Biolegend 103208 B220 APC eFlu- 1:200 eBioscience 47-0452-80 or780 CD11b APC eFlu- 1:200 eBioscience 47-0112-82 or780 CD11b PE/Cy7 1:200 Biolegend 101215 MHCII APC 1:200 eBioscience 17-5321-81 Ly6-G Percp-Cy5.5 1:200 Biolegend 127616 NK1.1 APC 1:200 Tonbo Biosci- 20-5941- ences U025 Vivo/Morto Violet 450 1:1000 Tonbo Biosci- 13-0863- ences T500 Coloração com Luxol fast blue e quantificação do volume de matéria branca desmielinizada.
[00189] Segmentos fixados com paraformaldeído (PFA) da medula espinhal foram incorporados em parafina, seccionados em seções transversais de 10 mm de espessura com um micrótomo Leica RM 2135 e corados com luxol fast blue (LFB). Dez seções em série em intervalos de 50 μm foram utilizadas para estimar o volume de matéria branca desmielinizada. As áreas desmielinizadas foram delineadas com um microscópio Olympus BX51, e o volume de matéria branca desmielinizada foi quantificado com o software Stereoinvestigator (Mi- croBrightfield). As reconstruções em 3D da medula espinhal desmieli- nizada foram executadas nos mesmos cortes em série com o software Neurolucida (MBF Bioscience). Quantificação de IC 100 em Tecidos
[00190] IC 100 foi quantificado no cérebro, medula espinhal, fígado e baço em 35 dias após a indução (dpi) de EAE utilizando um ensaio desenvolvido pela InflamaCORE, LLC utilizando Meso Scale Techno- logy. O ensaio foi lido utilizando o instrumento QuickPlex SQ 120 (Me- so Scale Diagnostics, Maryland).
[00191] Experimentos similares foram conduzidos em um modelo de rato de lesão contusiva da medula espinhal cervical a fim de deter- minar se o anti-ASC penetra nos neurônios da medula espinhal.
[00192] A fim de determinar se IC 100 é absorvido por células, IC 100 marcado com fluoresceína é adicionado ao meio de cultivo de te- cidos contendo células THP-1 (linhagem celular monocítica humana). Resultados O tratamento com o anticorpo anti-ASC IC 100 melhora o resultado funcional na encefalomielite autoimune experimental (EAE)
[00193] A fim de avaliar o potencial terapêutico de IC 100, a EAE foi induzida com o peptídeo MOG35-55 (Brambilla et al., 2014) em ca- mundongos C57BL/6 fêmeas de dois meses de idade e se administrou IC 100 ou veículo isoladamente começando no dia 8 pós-indução (dpi) da doença. A administração foi repetida a cada quatro dias até o sacri-
fício, que foi fixado em 35 dpi. Três doses foram testadas, 10, 30 e 45 mg/Kg.
[00194] O IC 100 significativamente melhorou a recuperação funci- onal quando utilizado nas doses de 30 e 45 mg/kg, com uma redução robusta das pontuações de doença clínica ao longo da duração do ex- perimento (FIG. 12A). O tratamento reduziu as pontuações clínicas máximas médias (FIG. 12B), assim como a gravidade geral da EAE medida como uma redução no índice de doença cumulativa (CDI) (FIG. 12C). Os camundongos tratados com 30 e 45 mg/kg de IC 100 também mostraram uma tendência para um início tardio da doença (FIG. 12D). Não foram observadas diferenças no dia em que os ca- mundongos atingiram sua pontuação máxima de doença (FIG. 12E). Tratamento com o anticorpo anti-ASC IC 100 reduz a infiltração de cé- lulas imunológicas periféricas na medula espinhal após EAE
[00195] O início, a persistência e a gravidade dos sintomas clínicos da EAE estão diretamente correlacionados com a infiltração de células imunes na medula espinhal. Para avaliar se o IC 100 afetou este pro- cesso, as populações de células imunes isoladas da medula espinhal em 35 dpi foram perfiladas por citometria de fluxo. O tratamento com 30 mg/kg de IC 100 reduziu significativamente o número total de célu- las T CD4+ encefalitogênicas, assim como células T CD8+ (FIG. 13A), as populações de células imunes mais cruciais na condução da pato- logia de EAE. Todas as outras populações de células imunes mostra- ram uma tendência clara de redução. Nenhuma diferença no número de células foi observada com qualquer uma das doses de IC 100 no baço, sugerindo que o tratamento não interferiu com a capacidade dos camundongos de montar uma resposta imune adequada ao estímulo de EAE (FIG. 13B). Tratamento com o anticorpo anti-ASC IC 100 reduz o número e o es- tado de ativação da microglia após a EAE
[00196] A microglia participa da resposta imune-inflamatória à do- ença do CNS. À medida que seu estado de ativação aumenta, eles proliferam e aumentam a expressão de superfície de MHCII. Para ava- liar se IC 100 afetou essa resposta, o número de microglia total e mi- croglia ativada por MHCII+ na medula espinhal foi quantificado por ci- tometria de fluxo. Ambas as populações foram significativamente re- duzidas pelo tratamento com 30 mg/kg de IC 100, indicando que nesta dose o IC 100 é eficaz na supressão da ativação da microglia e neu- roinflamação mediada pela microglia (ver FIG. 14). IC 100 penetra no cérebro e na medula espinhal
[00197] Um parâmetro importante na concepção de fármacos para retratar a MS é determinar se o fármaco penetra no CNS em um nível terapêutico. Esta é uma característica importante, particularmente no tratamento da forma progressiva da MS, uma vez que a barreira hema- toencefálica parece relativamente intacta neste estágio da doença (Lassman et al. 2012). Portanto, coletamos cérebro, medula espinhal, fígado e baço para determinar os níveis de IC 100 nesses tecidos. Como mostrado na FIG. 15, o IC 100 penetrou em todos esses tecidos em todas as três dosagens, incluindo cérebro e medula espinhal. Curi- osamente, os níveis de IC 100 na medula espinhal foram mais eleva- dos na dose de 30 mg/kg, consistente com maiores efeitos terapêuti- cos nesta dose.
[00198] O IC 100 marcado com fluoresceína é absorvido por células THP-1 (linhagem celular monocítica humana) e incorporado em partí- culas ASC quando adicionado ao meio de cultura de tecidos. Adicio- nalmente, a indução do inflamassoma dessas células estimula a ab- sorção de IC 100 marcado em partículas ASC juntamente com dextra- no marcado com rodamina, sugerindo que a absorção de IC 100 é mediada por endocitose (ver a FIG. 16).
[00199] Da mesma forma, IC 100 evitou a liberação de IL-1β das células THP-1 (ver FIG. 17).
[00200] Anticorpos anti-ASC (por exemplo, IC 100) também pene- traram nos neurônios da medula espinhal em um modelo de rato de lesão contusiva da medula espinhal cervical.
[00201] IC 100 pode funcionar tanto intracelularmente quanto extra- celularmente. Intracelularmente, ele pode atuar ligando-se à proteína ASC e inibindo-a, evitando assim a montagem do inflamassoma multi- protéico e o início da resposta inflamatória. Ele também pode se ligar a ASC em partículas ASC, evitando a propagação da grande plataforma de sinalização filamentosa, inibindo assim a ativação extracelular de pró-ILβ responsável por perpetuar a inflamação em doenças inflamató- rias crônicas. Incorporação por referência
[00202] As seguintes referências são incorporadas por referência na sua totalidade para todos os propósitos.
[00203] Brambilla R, Morton PD, Ashbaugh JJ, Karmally S, Lam- bertsen K, and Bethea JR (2014) Astrocytes play a key role in EAE pathophysiology by orchestrating in the CNS the inflammatory re- sponse of resident and peripheral immune cells and by suppressing remyelination. GLIA, 62:452-457.
[00204] Lassmann, H., van Horssen, J. & Mahad, D. Progressive multiple sclerosis: pathology and pathogenesis. Nat Rev Neurol 8, 647- 656, doi:10.1038/nrneurol.2012.168 (2012). Exemplo 4: Análise cinética de anticorpos monoclonais anti-ASC can- didatos
[00205] Uma análise cinética de anticorpos monoclonais anti-ASC candidatos foi executada utilizando interferometria de biocamada (BLI). Na BLI, a associação ou dissociação com os casos de superfície, uma mudança no comprimento de onda da luz refletida e a medição da mu- dança ao longo do tempo permite a determinação da cinética de liga-
ção.
[00206] O ensaio de BLI consistia do seguinte:
[00207] Verificação do Sensor (30s) → Carregar Ab/Sup. (700s) → Linha de base (300s) → Ab Assoc. (600s) → Dissoc. (600s) → Repetir
[00208] Os sobrenadantes de anticorpos IgG de camundongo can- didatos foram testados quanto à ligação ao peptídeo ASC humano (SEQ ID NO: 5) em 7 concentrações diferentes (isto é, 540 nM; 180 nM; 60 nM; 20 nM; 6,67 nM; 2,22 nM; 0,741 nM). Os anticorpos testa- dos foram ICCN 1,0H (isto é, IC 100); ICCN 2,0H; e ICCN 3,0H. Os biossensores AMC (IgG Fc Anti-Camundongo) foram carregados com IgG de camundongo do sobrenadante não diluído. Os dados de cinéti- ca de anticorpo brutos para os 3 anticorpos candidatos são mostrados na FIG. 21, enquanto que a FIG. 22 mostra os valores globais da KD. Exemplo 5: Estudos Farmacocinéticos dos Estudos de Absorção, Dis- tribuição, Metabolismo e Excreção de IC 100
[00209] Experimentos de absorção, distribuição, metabolismo e ex- creção (ADME) serão executados para descrever a disposição de IC 100 em ratos machos CD-1.
[00210] Em uma primeira experiência, 30 ratos machos CD-1 de seis semanas de idade serão obtidos da Charles River. Os experimen- tos serão conduzidos na Bolder BioPath (BBP). Os camundongos se- rão aclimatados durante pelo menos sete dias após a chegada em BBP. Os camundongos serão alojados em quatro animais por gaiola.
[00211] Os animais serão randomizados em grupos de tratamento (nove camundongos por grupo) com base no peso corporal e adminis- trados com uma dose de IC 100 por via intravenosa (IV). Os grupos de tratamento receberão 5 mg/kg, 15 mg/kg ou 30 mg/kg de IC 100. O plasma será coletado em vários momentos após uma única dose IV para monitoramento farmacocinético (PK). Um cronograma exemplar de coleta de plasma é mostrado na Tabela 4 abaixo. A toxicidade agu-
da será monitorada por meio de observações clínicas. O plasma será enviado para a Antibody Solutions para análise. O experimento conti- nuará durante dez semanas.
[00212] As medições de peso corporal serão feitas nos dias 0, 7, 14, 21, 28 e 35.
[00213] O sangramento retro-orbital será usado para coletar volu- mes adequados de sangue; camundongos serão anestesiados com isoflurano antes da coleta da amostra. Os animais 1, 2 e 3 de cada grupo serão sangrados nos dias 1 e 10; os animais 4, 5 e 6 serão san- grados nos dias 2 e 15; os animais 7, 8 e 9 serão sangrados nos dias 5 e 20.
[00214] No momento final, os animais serão anestesiados com iso- flurano e sangrados até a exsanguinação, seguido por pneumotórax bilateral. Os animais 1, 2 e 3 serão sacrificados no dia 25. Os animais 4, 5 e 6 serão sacrificados no dia 30. Os animais 7, 8 e 9 serão sacrifi- cados no dia 35. Tabela 4. Lista de Coleta de Amostra Grupo An. # Momento 1, 2, 3 1-3 Dia 1 (24 h) 1, 2, 3 4-6 Dia 2 (48 h) 1, 2, 3 7-9 Dia 5 1, 2, 3 1-3 Dia 10 1, 2, 3 4-6 Dia 15 1, 2, 3 7-9 Dia 20 1, 2, 3 1-3 Dia 25 (terminal) 1, 2, 3 4-6 Dia 30 (terminal) 1, 2, 3 7-9 Dia 35 (terminal) *A necropsia ocorre no sangramento terminal Exemplo 6. Biodistribuição de IC 100 utilizando Camundongos Albinos Fêmeas B6 e Formações de Imagem de Fluorescência
[00215] Em um segundo experimento, IC 100 e IgG de camundon- go controle serão marcados com corante de marcação fluorescente VivoTag 680XL de acordo com protocolos estabelecidos da VivoTag, e a afinidade de ligação será determinada. Resumidamente, de acordo com os protocolos da VivoTag, o protocolo de marcação envolverá:
1. Preparação das soluções de anticorpo (> 7 kDa) para 1 a 10 mg/ml em PBS. Os anticorpos estarão livres de íons de amônio ou aminas primárias para reduzir a competição pela reação com o corante reativo.
2. 0,25 mg de VivoTag 680XL será dissolvido em 10 µl de DMSO seco. Uma vez reconstituído, VivoTag 680XL é estável durante até 7 dias quando armazenado de 2 a 8 °C e protegido da luz.
3. 0,5 ml de proteína (0,5 a 5 mg), 50 µl de bicarbonato de sódio, 2 µl de VivoTag 680XL para cada mg de proteína serão adicio- nados a um tubo eppendorf. A mistura será incubada no escuro duran- te 2 horas na temperatura ambiente com agitação.
4. Separação do conjugado de proteína do corante livre. Ar- rancar o fechamento inferior da coluna e liberar a tampa. A coluna será colocada em um tubo de coleta cônico de 15 ml e centrifugada em
1.000 x g durante 2 min. 2 ml de PBS serão adicionados à coluna e centrifugados em 1.000 x g durante 2 min. A lavagem será repetida mais duas vezes.
5. A coluna será colocada em um tubo de coleta cônico de 15 ml novo. Todas as amostras de proteína serão carregadas (200 a 700 µl) na coluna e centrifugadas em 1.000 x g durante 2 min. O fluxo através da amostra de proteína será coletado.
6. A amostra de anticorpo marcada coletada pode ser ana- lisada quanto ao grau de marcação (DOL). Determinar a absorbância do conjugado purificado em 280 nm e 668 nm.
7. Ajustar a absorbância em 280 nm da proteína purificada através da subtração da absorbância de 280 nm do VivoTag 680XL, que é 16% da absorbância em 668 nm.
8. A análise de absorbância pode ser feita com um espec- trofotômetro de UV ou um espectrofotômetro de nanogota. Para utilizar o último, as amostras precisam ser diluídas para a faixa de 0,5 a 2 mg/ml antes da medição. Como o caminho da luz é de 1 mm, a leitura deve ser normalizada com um fator de 10.
[00216] Em um terceiro experimento, a biodistribuição de IC 100 será determinada. Quinze camundongos B6 Albino (C57BL6) fêmeas de 8 a 12 semanas de idade serão utilizados para o estudo. Os ani- mais serão distribuídos aleatoriamente em grupos com base no peso corporal do primeiro dia.
[00217] Camundongos fêmeas B6 Albino não receberão nenhum tratamento (controle negativo), uma dose única de IC 100 marcada com VivoTag 680XL, ou uma dose única de IgG de camundongo mar- cada com VivoTag 680XL (controle negativo). Os tratamentos serão administrados por via intravenosa (volume = 200 µl) na dose de 100 µg/animal.
[00218] A formação imagem de fluorescência in vivo será executa- da em 2 horas, 8 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas e 96 horas após as imagens dorsais e ventrais de corpo inteiro in vivo serem captura- das utilizando a formação imagem de fluorescência em vários momen- tos até 96 horas após o tratamento. A formação imagem ex vivo do cérebro, olhos com nervos ópticos, coração, rins esquerdo e direito, intestino grosso, incluindo cólon terminal, fígado, pulmões, ovários, pâncreas, intestino delgado, coluna vertebral, estômago, tireóide e be- xiga urinária de todos os animais, será realizada.
[00219] Sangue total será coletado, e o infiltrado imune será anali- sado com relação às células T CD4+ (CD4 + CD11b- CD3+ CD8-), cé-
lulas T CD8+ (CD8+ CD11b-CD3+CD4-), células B (CD3-CD111b- CD45R+), monócitos (CD3-CD11b+CD115+) e células NK (CD3- CD49b+CD335+). A expressão de Ab-VivoTag 680 XL será quantifica- da para determinar o nível de anticorpo marcado liberado. Um corante LIVE/DEAD será incluído no painel de citometria de fluxo para quantifi- car o número de células vivas. Todo o painel de anticorpos incluirá an- ticorpos direcionados para CD3, CD4, CD8, CD11b, CD115, CD45R, CD49b, CD335, e um corante LIVE/DEAD. Exemplo 7: Efeito da administração de IC 100 na sinalização de infla- massoma
[00220] O sangue de pacientes humanos com esteato-hepatite não alcoólica (NASH), nefropatia diabética e nefrite lúpica será obtido da BioReclamation IVT para análise de biomarcador de proteínas do in- flamassoma. Tecidos de pacientes com NASH, nefropatia diabética e nefrite lúpica serão obtidos da Bolder BioPath, e os lisados de proteí- nas serão obtidos desses tecidos e analisados por immunoblotting e outras técnicas bioquímicas para a expressão de proteínas de sinali- zação do inflamassoma, incluindo caspase-1 e ASC.
[00221] Adicionalmente, uma linhagem celular de câncer humano será utilizada para examinar a ativação de inflamassomas dependen- tes de ASC em tempo real. Este estudo consistirá em dois objetivos e será iniciado em um período de 6 a 9 semanas. Objetivo Específico 1: Marcação de Anticorpos
[00222] 2 mg de IC 100 serão marcados com corante de marcação fluorescente IgG-680 XL-IFC (VivoTag® 680 XL, PerkinElmer #- NEV11120) e a estequiometria da marcação será determinada pelas instruções do fabricante. A IgG de camundongo de controlo (fornecida por Charles River Laboratories (CRL)) será marcada e analisada de forma similar. Objetivo Específico 2: Determinação da Afinidade de Ligação
[00223] A linhagem celular de câncer humano THP-1 será cultivada em fase log e plaqueada em 20.000 células por cavidade em um vo- lume de 100 μl de meio em uma placa de microcultura de poliestireno branco de 6 cavidades (placa de fundo plano de 96 cavidades Cor- ning® Costar®, Cat. # 3917). O anticorpo marcado será então adicio- nado em duplicata às cavidades (resposta à dose de 10 pontos, dilui- ção 1:3, concentração mais elevada 200 nM). O anticorpo ligado será detectado para todas as cavidades seguindo o protocolo da Charles River. O anticorpo ligado (intensidade fluorescente média) será mar- cado em gráfico em função da concentração do anticorpo e da afinida- de de ligação (Kd) será estimada através do ajuste da seguinte equa- ção aos dados: Y = Bmax*X/(Kd + X). Exemplo 8: Estudos In Vivo de IC 100 em um modelo de rato com
NASH
[00224] Ratos Wistar Han machos, que são alimentados com uma dieta rica em gordura e deficiente em colina (CDHFD) que têm fibrose hepática, servirão como um modelo animal de NASH. 55 ratos serão utilizados para este estudo. Ratos Wistar Han com 8 a 9 semanas de idade serão obtidos da Envigo ou Charles River. Os ratos serão acli- matados durante 3 a 7 dias após a chegada ao Bolder Biopath. Os ra- tos serão alojados em 2 a 3 animais por gaiola. Os animais serão ali- mentados com ração padrão.
[00225] No dia 0, os animais serão randomizados em cinco grupos com base no peso corporal. O Grupo 1 será alimentado com Teklad Global Diets — Rodent 2014, que é uma dieta padrão. Os grupos 2, 3, 4 e 5 serão alimentados com uma dieta CDHFD.
[00226] No dia do estudo 38, os animais serão sangrados para aná- lises químicas clínicas e colocados em grupos de tratamento com base nas concentrações de alanina aminotransferase (ALT). No dia do es- tudo 42, o tratamento começará. A eficácia de IC 100 será testada usando doses que serão determinadas com base nos dados farmaco- cinéticos obtidos no Exemplo 5. Um grupo receberá tratamento com veículo para servir como controle negativo. O grupo que recebe dieta padrão também receberá tratamento com veículo. Peso corporal, con- sumo de alimento e observação clínica do lado da gaiola serão medi- dos semanalmente. No dia 38 e no dia 63, o sangue total será obtido através da coleta da veia da cauda. A necropsia será feita no dia 84. Os animais serão sacrificados com anestesia com isoflurano, sangra- dos até a exsanguinação e posteriormente um pneumotórax bilateral.
[00227] Os animais serão pesados nos dias -1, 0, 2, 4, 6, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 45, 49, 52, 56, 59, 63, 66, 70, 73, 77, 80 e 83 do estudo.
[00228] Uma atualização semanal do consumo alimentar (gra- ma/dia/rato) será registrada nos dias 0, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63, 70, 77 e 84 do estudo.
[00229] As observações clínicas do lado da gaiola serão executa- das nos dias 0 a 7, 14, 21, 28, 35, 42, 45, 49, 52, 56, 59, 63, 66, 70, 73, 77, 80, 83. Se os animais começarem a mostrar sinais clínicos de toxicidade ou doença, os animais serão observados e pesados diaria- mente.
[00230] Na necropsia, os pesos do fígado, tecido adiposo marrom e tecido adiposo inguinal direito serão medidos. Serão obtidas biópsias de 4 x 7 mm do lobo lateral esquerdo do fígado, congeladas em nitro- gênio líquido e armazenadas a -80 oC. Cortes transversais de três mm do lobo medial, lobo lateral esquerdo e lobo lateral direito do fígado serão obtidos e fixados em formalina 10% durante 36 a 48 horas antes do armazenamento em etanol 70% na temperatura ambiente para his- topatologia. Três pedaços de 100 mg de tecido adiposo serão conge- lados em nitrogênio líquido e armazenados em tubos de bloqueio se- guro Eppendorf a -80 °C. Três pedaços de tamanhos iguais de tecido adiposo marrom serão congelados repentinamente em nitrogênio lí-
quido e armazenados em tubos de bloqueio seguro Eppendorf a -80 o C.
[00231] Tecido adiposo subcutâneo inguinal, um depósito de tecido adiposo branco (WAT) será coletado de acordo com o seguinte proto- colo. Os depósitos SQ triangulares e inguinais serão descritos remo- vendo a metade inferior do camundongo. Os apêndices superiores e o tórax são mantidos em uma mão e a pele será puxada para baixo em direção aos pés com a outra. O camundongo será orientado em uma posição supina, tomando cuidado para não contaminar o depósito ex- posto com pelos. Os instrumentos cirúrgicos serão limpos e as luvas serão trocadas. Subsequentemente, os triângulos de gordura subcutâ- nea serão dissecados, tomando o cuidado de não contaminar a amos- tra com músculo, gordura adjacente, glândulas mamárias ou sangue. Um microscópio de dissecção será utilizado se as bordas não estive- rem claramente definidas. Os depósitos de gordura serão removidos e transferidos para um fixador 50:1 no volume de tecido de formal tam- ponado neutro a 10% e fixados durante 36 a 48 horas na temperatura ambiente. Se o RNA ou a proteína for extraído, o tecido será congela- do por imersão em nitrogênio líquido e armazenado a -80 oC para evi- tar a degradação. Serão feitos esforços para não contaminar os depó- sitos de gordura, trocando frequentemente as luvas.
[00232] O processamento de histologia será executado por Histotox Labs. O processamento de histologia de LLL, MLL e RLL será execu- tado em três cortes transversais de fígado/animal. As amostras serão coradas com vermelho Sirius e hematoxilina e eosina (H&E). Exemplo 9: Estudos In Vivo do Efeito de IC 100 na Nefropatia Diabéti- ca em um Modelo de Camundongo BTBR Ob/Ob
[00233] A cepa de camundongo BTBR com a mutação de deficiên- cia de leptina ob/ob serve como um modelo de camundongo para ne- fropatia diabética. Camundongos machos BTBR Ob/Ob serão utiliza-
dos para avaliar o efeito de IC 100 na reversão dos efeitos da nefropa- tia diabética. Cinco camundongos BTBR machos do tipo selvagem (WT) serão utilizados como um controle negativo e não receberão ne- nhum tratamento. 50 camundongos BTBR Ob/Ob serão utilizados e divididos em cinco grupos. Os grupos receberão veículo, controle ou IC 100 em doses determinadas com base no Exemplo 5. O experimen- to ocorrerá ao longo de seis semanas.
[00234] A histologia será executada nos rins de camundongo por Histotox Labs. Os parâmetros apropriados serão determinados pelo patologista utilizando os métodos Bolder BioPATH atuais.
[00235] As medições de glicose no sangue serão feitas por corte de cauda e aplicação de uma gota de sangue (~5 µL) em uma tira de tes- te compatível com um glicosímetro True Metrix. As medições de glico- se no sangue serão feitas duas vezes por semana até a conclusão do estudo.
[00236] A pontuação de proteinúria será executada através da ex- pressão da urina do camundongo por manter o camundongo de cabe- ça para baixo e aplicar pressão no abdômen. As tiras reagentes de Albustix serão utilizadas para determinar a quantidade de proteína na urina.
[00237] Se os animais forem encontrados mortos, nenhuma amos- tra será coletada. Se os animais precisarem ser sacrificados, indepen- dentemente do motivo, as amostras serão coletadas como seriam na necropsia após o dia 7 do estudo. Exemplo 10: Estudos In Vivo do Efeito de IC 100 na Nefrite Lúpica em um Modelo de Camundongo
[00238] Camundongos MRL/MpJ-Tnfrsf6lpr/J fêmeas de 12 sema- nas de idade serão utilizados para desenvolver um modelo de nefrite lúpica. Os camundongos serão obtidos na Bolder BioPath. Os camun- dongos serão randomizados em grupos de tratamento com base no peso corporal. Os animais serão observados diariamente quanto a si- nais clínicos significativos, definhamento e mortalidade. O início da ne- frite lúpica ocorrerá em aproximadamente 12 a 14 semanas de idade.
[00239] Após o início da nefrite lúpica, os camundongos serão divi- didos em cinco grupos e tratados com doses variáveis de IC 100, de acordo com os resultados do Exemplo 5, veículo ou IgG de controle.
[00240] Peso corporal, proteinúria urinária, pontuações de linfade- nopatia e pontuações de lesão da pele serão coletadas. A necropsia será conduzida na semana 20, e os tecidos e o sangue total serão co- letados para análise. O experimento deve durar 15 semanas. Exemplo 11: Um Estudo Agudo e de 21 Dias de Detecção da Toxici- dade por Injeção em Bolo Intravenosa de IC 100 em Ratos Albinos
[00241] Ratos albinos serão obtidos da Charles River. Os níveis de dose de IC 100 para uma toxicidade de dose múltipla definitiva de 28 dias e estudos farmacocinéticos em ratos serão estabelecidos. Os ra- tos serão divididos em quatro grupos contendo três ratos/sexo/dose. Um estudo ascendente e descendente será executado.
[00242] Um estudo de dose repetida ocorrerá ao longo de três se- manas. Os ratos serão divididos em grupos de todos os machos ou todas as fêmeas que contêm cinco ratos. Os ratos serão ministrados semanalmente com um nível de dose de IC 100. Parâmetros em vida, incluindo mortalidade, sinais clínicos, peso corporal e laboratório clíni- co com toxicocinética serão executados. Exemplo 12: Um estudo de descoberta de dose máxima tolerada e fai- xa de dose em 22 dias de IC 100 no macaco cinomolgo
[00243] Os níveis de dose e farmacocinética para IC 100 serão es- tabelecidos em macacos cinomolgos. Os experimentos ocorrerão em Charles River. Os macacos serão divididos em quatro grupos conten- do um macaco/sexo/dose. Um estudo ascendente e descendente será executado durante 28 dias.
[00244] Um estudo de dose repetida ocorrerá ao longo de três se- manas. Os macacos serão divididos em grupos de todos os machos ou todas as fêmeas que contenham dois macacos. Os macacos rece- berão dosagens semanais com um nível de dose de IC 100. Parâme- tros em vida incluindo mortalidade, sinais clínicos, peso corporal e la- boratório clínico com toxicocinética, serão avaliados.
[00245] Esta experiência deve durar 15 semanas. Exemplo 13: Estudo de toxicidade de IC 100 no rato seguido por um período de recuperação de 4 semanas
[00246] A toxicidade e a toxicocinética após a administração intra- venosa de IC 100 seguida por um período de recuperação em ratos obtidos da Charles River serão estabelecidas.
[00247] Os ratos serão divididos em 10 a 15 ratos/sexo/grupo com três níveis de dose acrescido do controle. Os grupos adicionais inclui- rão um grupo de alta dose e um grupo de controle que conterá 5 ra- tos/sexo para uma recuperação de quatro semanas.
[00248] Mortalidade, peso corporal, consumo de alimentos, obser- vações clínicas, patologia clínica (hematologia e química clínica), achados de necropsia, histopatologia do órgão e toxicocinética serão medidos. Após a recuperação, os mesmos parâmetros serão medidos, excluindo a toxicocinética.
[00249] Espera-se que esta experiência dure seis meses. Exemplo 14: Estudo de toxicidade de IC 100 no macaco cinomolgo seguido por um período de recuperação de 4 semanas
[00250] A toxicidade e a toxicocinética após a administração intra- venosa de IC 100 seguida por um período de recuperação em prima- tas não humanos serão estabelecidas em Charles River.
[00251] Os macacos serão divididos em 3 macacos/sexo/grupo com três níveis de dose acrescido do controle. Os grupos adicionais inclui- rão um grupo de alta dose e um grupo de controle que conterá 2 ma-
cacos/sexo para uma recuperação de quatro semanas.
[00252] Mortalidade, peso corporal, consumo de alimentos, obser- vações clínicas, patologia clínica (hematologia e química clínica), achados de necropsia, histopatologia do órgão e toxicocinética serão medidos. Após a recuperação, os mesmos parâmetros serão medidos, excluindo a toxicocinética.
[00253] Espera-se que esta experiência dure seis meses. Exemplo 15: Estudo Cardiovascular In Vitro utilizando um Ensaio hERG
[00254] O potencial de toxicidade cardiovascular (prolongamento QT) será avaliado em um ensaio in vitro com células CHO ou HEK293.
[00255] Este experimento estabelecerá a IC50 para o bloqueio de IC 100 do canal HERG.
[00256] Espera-se que esta experiência dure dois meses. Exemplo 16: Estudo de Hemólise Sanguínea In-Vitro
[00257] O potencial da formulação intravenosa de IC 100 para pro- vocar hemólise de glóbulos vermelhos humanos in vitro será avaliado. As concentrações de IC 100 (determinadas com base no Exemplo 5) serão misturadas com glóbulos vermelhos em um sistema in vitro. O grau de hemólise será estabelecido. O experimento tem duração pre- vista de dois meses. Exemplo 17: Examinando a eficácia in vivo de IC 100 no tratamento da doença de Parkinson (PD)
[00258] A eficácia de IC 100 no tratamento de PD será avaliada através da administração de IC 100 em vários modelos animais (isto é, roedores) de PD. 5 mg/kg, 15 mg/kg, 30 mg/kg.
[00259] O modelo de rato 6-OHDA de PD é um modelo unilateral quimicamente induzido (lesão intrastriatal ou mediana do feixe do pro- sencéfalo) de PD em que os camundongos apresentam déficits com- portamentais que incluem assimetria rotacional e defeitos motores O modelo 6-OHDA apresenta teor reduzido de dopamina, DOPAC e HVA no corpo estriado e mostra uma redução de células TH-positivas na substância negra pela histologia.
[00260] Em um conjunto de experimentos utilizando o modelo 6- OHDA de PD, um total de 45 ratos machos serão separados em 3 grupos experimentais (n = 15 ratos/grupo) e serão tratados como se segue:
1. Ratos com indução simulada tratados serão tratados com veículo;
2. Ratos induzidos por 6-OHDA tratados serão tratados com veículo; e
3. Ratos induzidos por 6-OHDA tratados serão tratados com 1 dose de IC 100 (selecionado com base em estudos de PK/meia- vida) A infusão unilateral de 6-OHDA/simulação ocorrerá no dia 0 do estudo; A formulação de dose diária e a dosagem (QD, p.o.) ocorre- rão nos dias 15 a 28 do estudo O acompanhamento do peso corporal será conduzido e o teste comportamental será executado no - dia 14 (linha de base), dia 28 e dia 42 e incluirá rotações induzidas por anfetaminas. Amostras de sangue terminal, CSF e cérebro ocorrerão no dia 42 do estudo seguido por HPLC para examinar DA, DOPAC e HVA no corpo estriado e IHC para examinar células TH+ em SNpc.
[00261] Em um segundo conjunto de experimentos utilizando o mo- delo 6-OHDA de PD, um total de 45 ratos machos serão separados em 3 grupos experimentais (n = 15 ratos/grupo) e serão tratados da se- guinte forma:
1. Ratos com indução simulada tratados serão tratados com veículo;
2. Ratos induzidos por 6-OHDA tratados serão tratados com veículo; e
3. Ratos induzidos por 6-OHDA tratados serão tratados com 1 dose de IC 100 (selecionado com base em estudos de PK/meia- vida) O experimento será conduzido ao longo de um período de 6 semanas com infusão unilateral de 6-OHDA/simulação ocorrendo no dia 0 do estudo; A formulação de dose diária e dosagem (QD, p.o.) ocorre- rão no dia 1 do estudo e continuarão até 6 semanas após a infusão de 6-OHDA. O teste comportamental será executado no – dia 14 (linha de base), dia 28 e dia 42 e incluirá rotações induzidas por anfetamina e um teste de cilindro. A amostragem do cérebro terminal ocorrerá no dia 42 do estudo seguido por HPLC para examinar DA, DOPAC e HVA no corpo estriado e IHC para examinar TH e Iba-1 em SNc (bilateralmente).
[00262] Em um terceiro conjunto de experimentos utilizando o mo- delo 6-OHDA de PD, um total de 90 ratos machos será separado em 6 grupos experimentais (n = 18 ratos/grupo no início até a linha de base do dia 14, n = 15 ratos/grupo como alvo) e serão tratados da seguinte forma:
1. Ratos induzidos por simulação tratados com veículo
2. Ratos induzidos por 6-OHDA tratados com veículo
3. Ratos induzidos por 6-OHDA tratados com 1 dose de IC 100
4. Ratos induzidos por 6-OHDA tratados com 2 doses de IC 100
5. Ratos induzidos por 6-OHDA tratados com 3 doses de IC 100
6. Ratos induzidos por 6-OHDA tratados com 4 doses de IC 100 O experimento será conduzido durante um período de 6 semanas com infusão unilateral de 6-OHDA/simulação ocorrendo no dia 0 do estudo; A formulação de dose diária e dosagem (QD, p.o.) ocorre- rão nos dias 15 a 42 do estudo. O teste comportamental será executado no – dia 14 (linha de base), dia 28 e dia 42 e incluirá rotações induzidas por anfetamina e um teste de cilindro. A amostragem do cérebro terminal ocorrerá no dia 42 do estudo seguido por HPLC para examinar DA, DOPAC e HVA no corpo estriado e IHC para examinar TH e Iba-1 em SNc (bilateralmente). Exemplo 18: Exame da eficácia in vitro de IC 100 no tratamento da Doença de Parkinson (PD) Ensaio TOM20:
[00263] A patogênese da PD tem sido associada à disfunção mito- condrial através de várias linhas de pesquisa, começando com a des- coberta de que o inibidor do complexo I mitocondrial rotenona induz o parkinsonismo. Além disso, mutações em genes que codificam proteí- nas envolvidas na eliminação seletiva de mitocôndrias disfuncionais e redundantes (mitofagia), tais como PARK2 e PINK1, estão presentes na maioria dos casos autossômicos recessivos de PD. Da mesma for- ma, um crescente corpo de evidências implicou a disfunção mitocon- drial em outras doenças neurodegenerativas, tais como AD, ALS e do- ença de Huntington (HD). As leituras fenotípicas para medir a (dis) função mitocondrial na origem celular relevante para a doença são, portanto, supostas de representar ferramentas preditivas poderosas para sondar a patobiologia neurodegenerativa e identificar potenciais terapêuticos que possam aumentar a mitofagia.
[00264] TOM20 é uma subunidade do complexo translocase mito- condrial da membrana externa (TOM) e representa um biomarcador para abundância mitocondrial. Ao traçar o perfil de candidatos terapêu- ticos na ausência (monotratamento) e na presença (cotratamento) de um gatilho indutor de mitofagia estabelecido, moléculas candidatas (por exemplo, IC 100) que aumentam a depuração mitocondrial induzi- da por gatilho sem danificar as mitocôndrias diretamente podem ser selecionadas.
[00265] O ensaio de perda de TOM20 é um ensaio in vitro escalo- nável e rápido para rastrear compostos quanto à sua capacidade de aumentar a mitofagia em um contexto neuronal.
[00266] O ensaio TOM20 utilizará células progenitoras mesencefáli- cas humanas imortalizadas (ReNcell VM) semeadas em 50.000 célu- las/cavidade em placas de 96 cavidades revestidas com laminina que serão diferenciadas pela retirada de fatores de crescimento (bFGF, EGF) e a adição de pró-fatores de diferenciação (cAMP, GDNF) duran- te sete dias começando no dia 0 (D0), com refrigério no dia 1 (D1) e dia 4 (D4). As células serão então tratadas com IC 100 no dia 7 na au- sência e presença de 1 micromolar de oligomicina/antimicina (O/A; um gatilho mitofágico comumente utilizado) durante 18 horas seguido por fixação de coloração imunocitoquímica de TOM20 com um anticorpo anti-TOM20 e coloração DAPI (isto é, no dia 8). Em última análise, o ensaio conterá um controle positivo de O/A 1 μM e um controle negati- vo de DMSO 0,1%.
[00267] A combinação do tratamento de compostos de aumento da mitofagia com 1 μM de O/A levará a uma redução dramática nos níveis de TOM20 na parte superior das reduções induzidas pelo tratamento com O/A isoladamente. A intensidade da imunomarcação TOM20 será quantificada utilizando algoritmos baseados em análise de alto conte- údo (HCA) desenvolvidos pela Charles River Labs. As contagens nu-
cleares serão quantificadas para identificar a citotoxicidade induzida por composto potencial (por exemplo, IC 100). Ensaio de agregação de Alfa-Sinucleína:
[00268] Os agregados da proteína pré-sináptica alfa-sinucleína são considerados os biomarcadores primários de PD e as evidências suge- rem que os agregados de alfa-sinucleína atuam como mediador dire- tamente da morte celular neuronal. Como tal, estratégias destinadas a reduzir a agregação e toxicidade de alfa-sinucleína podem possuir po- tencial terapêutico.
[00269] Neste ensaio, células progenitoras mesencefálicas huma- nas imortalizadas (ReNcell VM) semeadas em 10.000 células/cavidade em placas de 96 cavidades revestidas com laminina serão diferencia- das pela retirada de fatores de crescimento (bFGF, EGF) e pela adição de fatores pró-diferenciação (cAMP, GDNF) durante sete dias come- çando no dia 0 (D0). Também em D0, as células serão transferidas com um adenovírus que codifica a alfa-sinucleína humana do tipo sel- vagem. Após 24 horas, as células serão então tratadas com IC 100 e alfa-sinucleína, a expressão e agregação serão detectadas após 6 di- as por imunocitoquímica utilizando anticorpos que detectam alfa/beta sinucleína (Syn205; Cell Signaling Technology) e alfa-sinucleína agre- gada (MJFR14; Abcam), seguido pela quantificação de HCA conforme descrito para o ensaio TOM20. Em última análise, o ensaio também conterá um controle positivo KU 0063794 10 μM e controle negativo DMSO 0,1% adicionado em D1 e D4. Modalidades Numeradas da Invenção
[00270] Outro assunto contemplado pela presente invenção é esta- belecido nas seguintes modalidades numeradas:
1. Um método de tratamento da inflamação nos pulmões de um paciente com sua necessidade, o método compreendendo: admi- nistrar ao paciente uma composição que compreende um agente que inibe a sinalização do inflamassoma, pelo qual a inflamação nos pul- mões do paciente é tratada.
2. O método de acordo com a modalidade 1, em que a in- flamação nos pulmões é provocada por uma condição selecionada a partir de uma lesão do sistema nervoso central (CNS), uma doença neurodegenerativa, uma doença autoimune, asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, fibrose cística, doença pulmonar intersticial e sín- drome da angústia respiratória aguda.
3. O método de acordo com a modalidade 2, em que a le- são do CNS é selecionada a partir do grupo que consiste em lesão ce- rebral traumática (TBI), acidente vascular cerebral e lesão da medula espinhal (SCI).
4. O método acordo com 2, em que a doença neurodegene- rativa é selecionada do grupo que consiste em esclerose lateral amio- trófica (ALS), esclerose múltipla (MS) e doença de Parkinson (PD).
5. O método de acordo com qualquer uma das modalidades acima, em que a administração da composição resulta na inibição da ativação do inflamassoma nas células pulmonares do paciente.
6. O método de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 4, em que a administração da composição resulta em uma re- dução de caspase-1, domínio de pirina de repetição rico em leucina de ligação de nucleotídeo contendo proteína 1 (NLRP1), domínio de pirina de repetição rico em leucina de ligação de nucleotídeo contendo prote- ína 2 (NLRP2), domínio de pirina de repetição rico em leucina de liga- ção de nucleotídeo contendo proteína 3 (NLRP3), proteína 4 contendo o domínio CARD da família NLR (NLRC4), caspase-11, inibidor ligado a X da proteína de apoptose (XIAP), panexina-1, proteína tipo Spec associada a apoptose contendo um Domínio de Ativação e Recruta- mento da Caspase (ASC), interleucina-18 (IL-18), grupo de alta mobili- dade box-1 (HMGB1), ou ausente nos níveis de melanoma 2 (AIM2)
nas células pulmonares do paciente em comparação com um controle, em que o controle é um paciente não tratado.
7. O método de acordo com a modalidade 5 ou 6, em que as células pulmonares são células alveolares do Tipo II.
8. O método de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 5, em que a administração da composição resulta em uma re- dução na lesão pulmonar aguda (ALI) em comparação com um contro- le, em que o controle é um paciente não tratado.
9. O método de acordo com a modalidade 8, em que a re- dução na ALI é evidenciada por uma redução na infiltração de neutrófi- los no espaço alveolar e/ou intersticial, espessamento septal alveolar reduzido ou ausente ou uma combinação dos mesmos.
10. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des acima, em que o agente é um inibidor da captação de vesículas extracelulares (EV), um anticorpo que se liga a um componente de in- flamassoma ou uma combinação dos mesmos.
11. O método de acordo com a modalidade 10, em que o inibidor de captação de EV é um composto ou um anticorpo, em que o anticorpo é selecionado da Tabela 1.
12. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des de 10 a 11, em que o agente é um inibidor de captação de EV em combinação com um anticorpo que se liga a um componente de infla- massoma.
13. O método de acordo com a modalidade 12, em que o inibidor de captação de EV é uma heparina.
14. O método de acordo com a modalidade 13, em que a heparina é Enoxaparina.
15. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des de 10 a 14, em que o anticorpo que se liga a um componente de inflamassoma é um anticorpo que se liga especificamente a um com-
ponente de um inflamassoma AIM2, NLRP1, NLRP2, NLRP3 ou NLRC4 de mamífero.
16. O método de acordo com a modalidade 10 ou 15, em que o componente de inflamassoma é caspase-1, ASC ou AIM2.
17. O método de acordo com a modalidade 16, em que o componente de inflamassoma é ASC.
18. O método de acordo com a modalidade 17, em que o anticorpo se liga a um domínio N-terminal PYRIN-PAAD-DAPIN (PYD), domínio de recrutamento da caspase C-terminal (CARD) ou um epíto- po derivado de domínio PYD ou CARD da proteína ASC.
19. O método de acordo com a modalidade 17, em que o anticorpo se liga a um aminoácido tendo pelo menos 85% de identida- de de sequência com uma sequência de aminoácido selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2.
20. O método, de acordo com qualquer uma das modalida- des de 17 a 19, em que o anticorpo inibe a atividade de ASC nos pul- mões do paciente.
21. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des acima, em que a composição é formulada com um veículo ou dilu- ente farmaceuticamente aceitável.
22. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des acima, em que a composição é administrada por via intracerebro- ventricular, intraperitoneal, intravenosamente ou por inalação.
23. Um método de tratamento da inflamação nos pulmões de um paciente que foi submetido a uma lesão do sistema nervoso central (CNS), o método compreendendo: administrar ao paciente uma composição que compreende um agente que inibe a sinalização do inflamassoma, pelo qual a inflamação nos pulmões do paciente é tra- tada.
24. O método de acordo com a modalidade 23, em que a lesão do CNS é selecionada a partir do grupo que consiste em lesão cerebral traumática (TBI), acidente vascular cerebral e lesão da medu- la espinhal (SCI).
25. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des de 23 a 24, em que a administração da composição resulta na ini- bição da ativação do inflamassoma nas células pulmonares do pacien- te.
26. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des de 23 a 24, em que a administração da composição resulta em uma redução da caspase-1, NLRP1, NLRP2, NLRP3, NLRC4, cas- pase-11, XIAP, panexina-1, proteína tipo Spec associada a apoptose contendo um Domínio de Ativação e Recrutamento da Caspase (ASC), interleucina-18 (IL-18), grupo de alta mobilidade box 1 (HMGB1) ou ausente nos níveis de melanoma 2 (AIM2) em células pulmonares do paciente em comparação com um controle, em que o controle é um paciente não tratado.
27. O método de acordo com a modalidade 25 ou 26, em que as células pulmonares são células alveolares do Tipo II.
28. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des de 23 a 27, em que a administração da composição resulta em uma redução da lesão pulmonar aguda (ALI) em comparação com um controle, em que o controle é um paciente não tratado.
29. O método de acordo com a modalidade 28, em que a redução na ALI é evidenciada por uma redução na infiltração de neu- trófilos no espaço alveolar e/ou intersticial, espessamento septal alveo- lar reduzido ou ausente ou uma combinação dos mesmos.
30. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des de 23 a 29, em que o agente é um inibidor de captação de vesícu-
la extracelular (EV), um anticorpo que se liga a um componente de in- flamassoma ou uma combinação dos mesmos.
31. O método de acordo com a modalidade 30, em que o inibidor de captação de EV é um composto ou um anticorpo, em que o anticorpo é selecionado da Tabela 1.
32. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des de 30 a 31, em que o agente é um inibidor de captação de EV em combinação com um anticorpo que se liga a um componente de infla- massoma.
33. O método de acordo com a modalidade 32, em que o inibidor de captação de EV é uma heparina.
34. O método de acordo com a modalidade 33, em que a heparina é Enoxaparina.
35. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des de 30 a 34, em que o anticorpo que se liga a um componente de inflamassoma é um anticorpo que se liga especificamente a um com- ponente de um inflamassoma AIM2, NLRP1, NLRP2, NLRP3 ou NLRC4 de um mamífero.
36. O método de acordo com a modalidade 30 ou 35, em que o componente do inflamassoma é caspase-1, ASC ou AIM2.
37. O método de acordo com a modalidade 36, em que o componente inflamassoma é ASC.
38. O método de acordo com a modalidade 37, em que o anticorpo se liga ao domínio PYD, CARD ou um epítopo derivado do domínio PYD ou CARD da proteína ASC.
39. O método de acordo com a modalidade 37, em que o anticorpo se liga a um aminoácido com pelo menos 85% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácido selecionada do gru- po que consiste em SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2.
40. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des de 37 a 39, em que o anticorpo inibe a atividade de ASC nos pul- mões do paciente.
41. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des de 23 a 40, em que a composição é formulada com um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
42. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des de 23 a 41, em que a composição é administrada por via intrace- rebroventricular, intraperitoneal, intravenosamene ou por inalação.
43. Um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga à proteína tipo Spec associada a apoptose con- tendo um Domínio de Ativação e Recrutamento da Caspase (ASC), em que o anticorpo ou fragmento de anticorpo se liga especificamente a um epítopo de ASC, em que o epítopo compreende ou consiste na sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 5 ou 5 a 10, 10 a 15 ou 15 a 20 aminoácidos da SEQ ID NO: 5.
44. Um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o fragmento de anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que a se- quência de aminoácido da região VH compreende HCDR1 da SEQ ID NO: 6, HCDR2 da SEQ ID NO: 7 e HCDR3 da SEQ ID NO: 8, ou uma variante da mesma tendo pelo menos uma substituição de aminoácido em HCDR1, HCDR2 e/ou HCDR3.
45. Um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o fragmento de anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região variável de cadeia pesada (VH), em que a se- quência de aminoácido da região VL compreende LCDR1 da SEQ ID NO: 12, LCDR2 da SEQ ID NO: 13 e LCDR3 da SEQ ID NO: 14, ou uma variante da mesma tendo pelo menos uma substituição de ami- noácido em LCDR1, LCDR2 e/ou LCDR3.
46. Um anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, em que o anticorpo ou o fragmento de anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que a se- quência de aminoácido da região VH compreende HCDR1 da SEQ ID NO: 6, HCDR2 da SEQ ID NO: 7 e HCDR3 da SEQ ID NO: 8, ou uma variante desta tendo pelo menos uma substituição de aminoácido em HCDR1, HCDR2 e/ou HCDR3; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende LCDR1 da SEQ ID NO: 12, LCDR2 da SEQ ID NO: 13 e LCDR3 da SEQ ID NO: 14, ou uma variante da mesma tendo pelo menos uma substituição de aminoácido em LCDR1, LCDR2 e/ou LCDR3.
47. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 44, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21, 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21 ou 22.
48. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 45, em que a sequência de ami- noácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28, 29, 30, 31, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28, 29, 30 ou 31.
49. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21, 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%,
98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21 ou 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28, 29, 30, 31, ou uma sequência de ami- noácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28, 29, 30 ou 31.
50. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28.
51. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 29.
52. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 30.
53. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 31.
54. O anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 19, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28.
55. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 19, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 29.
56. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 19, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 30.
57. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 19, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 31.
58. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 20, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28.
59. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 20, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 29.
60. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 20, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%
idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 30.
61. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 20, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 31.
62. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 21, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 21; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28.
63. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 21, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 21; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 29.
64. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami-
noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 21, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 21; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 30.
65. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 21, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 21; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 31.
66. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 22, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28.
67. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 22, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 29.
68. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 22, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 30.
69. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a sequência de ami- noácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 22, ou uma sequên- cia de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 31.
70. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades de 44 a 69, em que o ASC é a proteína ASC humana.
71. O fragmento de anticorpo monoclonal de acordo com qualquer uma das modalidades de 44 a 70, em que o fragmento de anticorpo é um Fab, um F(ab')2, um Fab', um scFv, um anticorpo de domínio único, um diacorpo ou um anticorpo de camelídeo de cadeia única.
72. O anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades de 44 a 71, em que o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo é humano, humanizado ou quimérico.
73. Uma molécula de ácido nucleico isolada que codifica o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acor- do com qualquer uma das modalidades de 44 a 72.
74. Um vetor de expressão que compreende a molécula de ácido nucleico de acordo com a modalidade 73.
75. O vetor de expressão de acordo com a modalidade 32, em que a molécula de ácido nucleico está ligada de maneira operável às sequências reguladoras adequadas para a expressão do segmento de ácido nucleico em uma célula hospedeira.
76. Uma célula hospedeira recombinante compreendendo o vetor de expressão de acordo com a modalidade 74 ou 75.
77. Um método para a produção de um anticorpo ou frag- mento de anticorpo que se liga especificamente ao ASC, o método compreendendo: cultivar uma célula hospedeira recombinante com- preendendo o vetor de expressão de acordo com a modalidade 74 ou 75 sob condições em que a molécula de ácido nucleico é expressa, produzindo assim o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC.
78. Uma composição farmacêutica que compreende o anti- corpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades de 44 a 72, e um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
79. Um método de tratamento da inflamação em um indiví- duo, o método compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades de 44 a 72, tratando assim a inflamação no indivíduo.
80. O método de acordo com a modalidade 79, em que a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo reduz os níveis de pelo menos a citocina inflamatória.
81. O método de acordo com a modalidade 80, em que a inflamação é uma inflamação relacionada ao inflamassoma.
82. O método de acordo com a modalidade 81, em que a inflamação relacionada ao inflamassoma está associada a uma lesão do sistema nervoso central (CNS), uma doença autoimune, autoinfla- matória, metabólica ou neurodegenerativa.
83. O método de acordo com a modalidade 82, em que a lesão do CNS selecionada do grupo que consiste em lesão cerebral traumática (TBI), acidente vascular cerebral e lesão da medula espi- nhal (SCI).
84. O método de acordo com a modalidade 82, em que a doença autoimune ou neurodegenerativa é esclerose lateral amiotrófi- ca (ALS), doença de Alzheimer, doença de Parkinson, distrofia muscu- lar (MD), lúpus eritematoso sistêmico, nefrite lúpica, artrite reumatóide, doença inflamatória intestinal (por exemplo, doença de Crohn e colite ulcerativa) ou esclerose múltipla (MS).
85. O método de acordo com a modalidade 82, em que a doença autoinflamatória é a síndrome periódica associada à criopirina (CAPS).
86. O método de acordo com a modalidade 85, em que a CAPS é selecionada da síndrome autoinflamatória familiar do frio (FCAS), síndrome de Muckle-Wells (MWS) e doença inflamatória mul- tissistêmica de início neonatal (NOMID).
87. O método de acordo com a modalidade 82, em que a doença metabólica é síndrome metabólica, obesidade, diabetes melito, nefropatia diabética ou doença renal diabética (DKD), resistência à in- sulina, aterosclerose, um distúrbio de armazenamento de lipídios, uma doença de armazenamento de glicogênio, deficiência da acil-coenzima A desidrogenase de cadeia média, doença hepática gordurosa não alcoólica (por exemplo, esteatohepatite não alcoólica (NASH)) e gota.
88. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des de 79 a 87, em que a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta na inibição da ativação do inflamassoma no indivíduo.
89. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des de 79 a 87, em que a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta em uma redução na ati- vidade de ASC em comparação com um controle.
90. O método de acordo com a modalidade 89, em que o controle é um indivíduo não tratado.
91. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des de 79 a 90, em que a administração é intracerebroventricular, in- traperitoneal, intravenosamente ou por inalação.
92. O método de tratamento de esclerose múltipla (MS) em um indivíduo, o método compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades de 44 a 72, tratando assim a MS no indivíduo.
93. O método de acordo com a modalidade 92, em que a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo reduz os níveis de pelo menos a citocina inflamatória.
94. O método de acordo com a modalidade 92, em que a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta na inibição da ativação do inflamassoma no indiví- duo.
95. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des de 92 a 94, em que a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta em uma redução na ati- vidade de ASC em comparação com um controle.
96. O método de acordo com a modalidade 95, em que o controle é um indivíduo não tratado.
97. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des de 92 a 96, em que a administração é intracerebroventricular, in- traperitoneal, intravenosamente ou por inalação.
[00271] As várias modalidades descritas acima podem ser combi- nadas para fornecer outras modalidades. Todas as patentes U.S., pu- blicações de pedidos de patentes U.S., pedidos de patentes U.S., pa- tentes estrangeiras, pedidos de patentes estrangeiras e publicações não patentes referidas neste relatório descritivo são incorporados nes- ta invenção por referência, na sua totalidade. Os aspectos das modali- dades podem ser modificados, se necessário para usar conceitos das várias patentes, pedidos e publicações para fornecer ainda mais ou- tras modalidades.
[00272] Estas e outras alterações podem ser feitas nas modalida- des à luz da descrição detalhada acima. Em geral, nas seguintes rei- vindicações, os termos utilizados não devem ser interpretados para limitar as reivindicações às modalidades específicas descritas no rela- tório descritivo e nas reivindicações, mas devem ser interpretados de modo a incluir todas as possíveis modalidades juntamente com o es- copo completo de equivalentes aos quais tais reivindicações são de- signadas. Consequentemente, as reivindicações não são limitadas pe- la invenção.

Claims (55)

REIVINDICAÇÕES
1. Anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga à proteína tipo Spec associada à apoptose conten- do um Domínio de Ativação e Recrutamento da Caspase (ASC), ca- racterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de anticorpo se liga especificamente a um epitopo de ASC, em que o epitopo compre- ende ou consiste na sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 5 ou 5 a 10, 10 a 15 ou 15 a 20 aminoácidos da SEQ ID NO: 5.
2. Anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compre- ende HCDR1 da SEQ ID NO: 6, HCDR2 da SEQ ID NO: 7 e HCDR3 da SEQ ID NO: 8, ou uma variante destas tendo pelo menos uma substituição de aminoácido na HCDR1, HCDR2 e/ou HCDR3.
3. Anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região variável de cadeia pesada (VH), em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende LCDR1 da SEQ ID NO: 12, LCDR2 da SEQ ID NO: 13 e LCDR3 da SEQ ID NO: 14, ou uma variante das mesmas tendo pelo menos uma substituição de aminoácido na LCDR1, LCDR2 e/ou LCDR3.
4. Anticorpo monoclonal ou um fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de anticorpo compreende uma re- gião variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que a sequência de aminoácido da região VH compre- ende HCDR1 da SEQ ID NO: 6, HCDR2 da SEQ ID NO: 7 e HCDR3 da SEQ ID NO: 8, ou uma variante destas tendo pelo menos uma substituição de aminoácido na HCDR1, HCDR2 e/ou HCDR3; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende LCDR1 da SEQ ID NO: 12, LCDR2 da SEQ ID NO: 13 e LCDR3 da SEQ ID NO: 14, ou uma variante das mesmas tendo pelo menos uma substituição de aminoácido na LCDR1, LCDR2 e/ou LCDR3.
5. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21, 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21 ou 22.
6. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VL compreende a SEQ ID NO: 28, 29, 30, 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo me- nos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28, 29, 30 ou 31.
7. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21, 22 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21 ou 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 28, 29, 30, 31, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 28, 29, 30 ou 31.
8. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 28.
9. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 18; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 29.
10. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 18; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá-
cido da SEQ ID NO: 30.
11. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 18, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 18; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 31.
12. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 19, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 28.
13. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 19, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá-
cido da SEQ ID NO: 29.
14. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 19, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 30.
15. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 19, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 19; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 31.
16. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá-
cido da SEQ ID NO: 28.
17. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 20, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 29.
18. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 30.
19. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 20, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 20; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá-
cido da SEQ ID NO: 31.
20. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 21, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 21; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 28.
21. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 21, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 21; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 29.
22. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 21, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 21; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá-
cido da SEQ ID NO: 30.
23. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 21, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 21; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 31.
24. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 28.
25. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá-
cido da SEQ ID NO: 29.
26. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 30.
27. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido da região VH compreende a SEQ ID NO: 22, ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 22; e em que a sequência de aminoácido da região VL compre- ende a SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoá- cido da SEQ ID NO: 31.
28. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 27, ca- racterizado pelo fato de que o ASC é a proteína ASC humana.
29. Fragmento de anticorpo monoclonal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 27, caracterizado pelo fato de que o fragmento de anticorpo é um Fab, um F(ab')2, um Fab', um scFv, um anticorpo de domínio único, um diacorpo ou um anticorpo de ca- melídeo de cadeia única.
30. Anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 27, ca- racterizado pelo fato de que o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo é humano, humanizado ou quimérico.
31. Molécula de ácido nucleico isolada, caracterizada pelo fato de que codifica o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticor- po do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 2 a
27.
32. Vetor de expressão, caracterizado pelo fato de que compreende a molécula de ácido nucleico, como definida na reivindi- cação 31.
33. Vetor de expressão, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que a molécula de ácido nucleico está liga- da de maneira operável às sequências reguladoras adequadas para a expressão do segmento de ácido nucleico em uma célula hospedeira.
34. Célula hospedeira recombinante, caracterizada pelo fa- to de que compreende o vetor de expressão, como definido na reivin- dicação 32.
35. Método para a produção de um anticorpo ou um frag- mento de anticorpo que se liga especificamente ao ASC, caracterizado pelo fato de que compreende: cultivar uma célula hospedeira recombinante compreen- dendo o vetor de expressão, como definido na reivindicação 32, sob condições em que a molécula de ácido nucleico é expressa, produzin- do assim o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo que se liga especificamente ao ASC.
36. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende o anticorpo monoclonal ou o fragmento de anticorpo do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 2 a 27, e um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
37. Método de tratamento da inflamação em um indivíduo,
caracterizado pelo fato de que compreende a administração ao indiví- duo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo mono- clonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 2 a 27, tratando assim a inflamação no indivíduo.
38. Método, de acordo com a reivindicação 37, caracteriza- do pelo fato de que a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo reduz os níveis de pelo menos a citocina inflamatória.
39. Método, de acordo com a reivindicação 38, caracteriza- do pelo fato de que a inflamação é uma inflamação relacionada ao in- flamassoma.
40. Método, de acordo com a reivindicação 39, caracteriza- do pelo fato de que a inflamação relacionada ao inflamassoma está associada a uma lesão do sistema nervoso central (CNS), uma doença autoimune, autoinflamatória, metabólica ou neurodegenerativa.
41. Método, de acordo com a reivindicação 40, caracteriza- do pelo fato de que a lesão do CNS é selecionada do grupo que con- siste em lesão cerebral traumática (TBI), acidente vascular cerebral e lesão da medula espinhal (SCI).
42. Método, de acordo com a reivindicação 40, caracteriza- do pelo fato de que a doença autoimune ou neurodegenerativa é a es- clerose lateral amiotrófica (ALS), doença de Alzheimer, doença de Parkinson, distrofia muscular (MD), lúpus eritematoso sistêmico, nefrite lúpica, artrite reumatoide, doença inflamatória intestinal (por exemplo, Doença de Crohn e colite ulcerosa) ou esclerose múltipla (MS).
43. Método, de acordo com a reivindicação 40, caracteriza- do pelo fato de que a doença autoinflamatória é a síndrome periódica associada à criopirina (CAPS).
44. Método, de acordo com a reivindicação 43, caracteriza-
do pelo fato de que a CAPS é selecionada de síndrome autoinflamató- ria familiar do frio (FCAS), síndrome de Muckle-Wells (MWS) e doença inflamatória multissistêmica de início neonatal (NOMID).
45. Método, de acordo com a reivindicação 40, caracteriza- do pelo fato de que a doença metabólica é síndrome metabólica, obe- sidade, diabetes melito, nefropatia diabética ou doença renal diabética (DKD), resistência à insulina, aterosclerose, um distúrbio de armaze- namento de lipídios, uma doença de armazenamento de glicogênio, deficiência da acil-coenzima A desidrogenase de cadeia média, doen- ça hepática gordurosa não alcoólica (por exemplo, esteato-hepatite não alcoólica (NASH)) e gota.
46. Método, de acordo com a reivindicação 37, caracteriza- do pelo fato de que a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta na inibição da ativação de inflamassoma no indivíduo.
47. Método, de acordo com a reivindicação 37, caracteriza- do pelo fato de que a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta em uma redução na ativida- de de ASC em comparação com um controle.
48. Método, de acordo com a reivindicação 47, caracteriza- do pelo fato de que o controle é um indivíduo não tratado.
49. Método, de acordo com a reivindicação 37, caracteriza- do pelo fato de que a administração é intracerebroventricular, intraperi- toneal, intravenosamente ou por inalação.
50. Método de tratamento de esclerose múltipla (MS) em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende a adminis- tração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do an- ticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo, como de- finido em qualquer uma das reivindicações 2 a 27, tratando assim a MS no indivíduo.
51. Método, de acordo com a reivindicação 50, caracteriza- do pelo fato de que a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo reduz os níveis de pelo menos a citocina inflamatória.
52. Método, de acordo com a reivindicação 50, caracteriza- do pelo fato de que a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta na inibição da ativação de inflamassoma no indivíduo.
53. Método, de acordo com a reivindicação 50, caracteriza- do pelo fato de que a administração do anticorpo monoclonal ou do fragmento de anticorpo do mesmo resulta em uma redução na ativida- de de ASC em comparação com um controle.
54. Método, de acordo com a reivindicação 53, caracteriza- do pelo fato de que o controle é um indivíduo não tratado.
55. Método, de acordo com a reivindicação 50, caracteriza- do pelo fato de que a administração é intracerebroventricular, intraperi- toneal, intravenosamente ou por inalação.
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 217/252 â-actina â-actina
Unidades de Unidades de densidade relativa densidade relativa 1/36
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 218/252 Unidades de densidade relativa Unidades de densidade relativa Unidades de Unidades de densidade relativa densidade relativa 2/36
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 219/252 â-actina â-actina Unidades de Unidades de densidade relativa densidade relativa 3/36
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 220/252 Unidades de Unidades de densidade relativa densidade relativa Unidades de Unidades de densidade relativa densidade relativa 4/36
Simulação
Simulação
Simulação
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 224/252 Simulação Fração nuclear
Unidades de â-actina densidade relativa Simulação 8/36
Fração citoplásmica â-actina
Unidades de densidade relativa Simulação
Simulação densidade relativa Unidades de Oligômeros
Simulação
Pontuação de ALI Simulação
Controle
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 229/252 Injeção de EV 13/36
Unidades de densidade relativa A partir da A partir da Unidades de densidade relativa
Passíveis A partir Passíveis A partir simulação da TBI simulação da TBI â-actina Injeção de EV Injeção de EV
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 230/252 14/36
Unidades de densidade relativa Unidades de densidade relativa Unidades de densidade relativa
Passíveis A partir da A partir Passíveis A partir da A partir A partir da simulação simulação Passíveis A partir da TBI da TBI simulação da TBI Injeção de EV Injeção de EV Injeção de EV
Lesionado Não lesionado Pontuação de ALI Simulação
Passível ENOX IC 100 não tratado com solução salina
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 232/252 Unidades de densidade relativa a o v el lin ad sí sa t s o tra Pa u çã ão s ol N ã o- aç ul m 16/36
Si
Unidades de densidade relativa a do v el lin a sí sa at s ão tr Pa ç ão lu N so ã o- aç ul m Si
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 233/252 Unidades de densidade relativa l a o ve lin ad í sa t ss ão tra Pa l uç ão - so N ão aç 17/36 ul m Si
Unidades de densidade relativa l a o ve l in d sí sa ta s o tra Pa u çã ão sol N ã o- aç ul m Si Unidades de densidade relativa a o el lin ad v sa t s sí ção tra lu Pa -so ão ão N aç ul m Si
Não tratado Veículo simulado o d ta tra ão
N a in al s o çã lu o -so ã aç ul Pontuação de ALI i m
S
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 236/252 â-actina Controle
Unidades de densidade relativa Unidades de densidade relativa Controle
Controle 20/36
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 237/252 Unidades de densidade relativa Controle Controle
Unidades de densidade relativa Controle 21/36
TBI-iodeto de propídio
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 238/252 22/36
Controle-DAPI Controle-Caspase-1 FLICA Controle-iodeto de propídio Controle-MERGE
Atividade de fluorescência da caspase-1
Controle
Dias após a imunização Veículo
Pontuação clínica
Veículo Veículo
Dia de pico Veículo
Veículo
Veículo
Pontuação clínica máxima Dia de início
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 242/252 Veículo Medula espinhal 26/36
Número de células Veículo Veículo Veículo Veículo Veículo Veículo
Veículo Veículo Veículo Baço
Veículo Veículo Veículo
Veículo
Número de células
Microglia MHCII+ Veículo
Microglia
Número de células
Baço [Ic100] em tecidos
Fígado Medula espinhal Cérebro
Controle - sem IC100 Sem tratamento + IC100
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 246/252 30/36
LPS + nigericina + IC100 LPS + nigericina + dextrano-Rd
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 249/252 Produzido contra peptídeo (sequência de ASC humana) 33/36
Hm ASC recombinante MS ASC recombinante MS ASC recombinante cérebro humano
Nicotina 500 nM
Absorbância
Concenetração de ASC Resposta (nm)
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 251/252 Ajuste global
Curvas de ligação ICCN 1.0H em concentração de peptídeo de 20 a 540 nM forneceram um parâmetro elevado e fracos ajustes de curva
Concenetração de ASC Resposta (nm) 35/36
Ajuste global
Curvas de ligação ICCN 2.0H em concentração de peptídeo de 20 a 540 nM forneceram um parâmetro elevado e fracos ajustes de curva
Concenetração de ASC Resposta (nm)
Ajuste global
Curvas de ligação ICCN 3.0H em concentração de peptídeo de 20 a 540 nM forneceram um parâmetro elevado e fracos ajustes de curva
Isótipo Ligação ao peptídeo
Petição 870210008705, de 26/01/2021, pág. 252/252 Reatividade cruzada Ser humano, camundongo, rato Atividade funcional Inibe a via de inflamassoma
Isótipo Ligação ao peptídeo 36/36
Reatividade cruzada Ser humano, camundongo, rato
Atividade funcional Inibe a via de inflamassoma
Isótipo Ligação ao peptídeo
Reatividade cruzada Ser humano, camundongo, rato Atividade funcional Inibe a via de inflamassoma
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11840565B2 (en) 2016-12-29 2023-12-12 University Of Miami Methods and compositions for treating virus-associated inflammation
CN110461356A (zh) * 2016-12-29 2019-11-15 迈阿密大学 用于调节肺中炎性体活性和炎症的方法
EP4142705A4 (en) * 2020-04-27 2024-07-03 Univ Miami COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING DISEASES OR CONDITIONS ASSOCIATED WITH INFLAMMASOMES
MX2024005876A (es) * 2021-11-16 2024-05-29 Ac Immune Sa Moleculas novedosas para terapias y diagnostico.
WO2024055015A1 (en) * 2022-09-09 2024-03-14 University Of Miami Inflammasome antibody compositon and method for treating neurologic disorder
WO2024114906A1 (en) * 2022-11-30 2024-06-06 Mabylon Ag Antibodies against apoptosis-associated speck-like protein containing a card (asc) and uses thereof

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040018194A1 (en) * 2000-11-28 2004-01-29 Francisco Joseph A. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
JP4496214B2 (ja) * 2004-05-17 2010-07-07 電気化学工業株式会社 ポリ塩化ビニル繊維及びその製造方法並びに人工毛髪
US7780963B2 (en) * 2004-10-25 2010-08-24 Merck & Co., Inc. Anti-ADDL antibodies and uses thereof
TW200636064A (en) * 2004-10-28 2006-10-16 Centocor Inc Anti-respiratory syncytial virus antibodies, antigens and uses thereof
CL2008000578A1 (es) * 2007-02-27 2008-10-10 Genentech Inc Anticuerpo antagonista aislado anti-receptor ox40 humano; molecula de acido nucleico que lo codifica; vector y celula huesped; metodo de produccion; composicion que lo comprende; su uso para tratar trastornos mediados por ox40; y metodo para detectar
US8685400B2 (en) * 2007-07-30 2014-04-01 University Of Miami Modulating inflammasome activity and inflammation in the central nervous system
WO2010003092A1 (en) * 2008-07-03 2010-01-07 University Of Massachusetts Methods and compositions for reducing inflammation and treating inflammatory disorders
EP2569010B1 (en) * 2010-05-14 2017-04-12 Amgen, Inc High concentration antibody formulations
EP2684051B1 (en) * 2011-03-11 2016-04-27 Roche Diagniostics GmbH Asc as marker for chronic obstructive pulmonary disease (copd)
US20140314746A1 (en) * 2013-03-13 2014-10-23 Philadelphia Health And Education Corporation, d/b/a Drexel University College of Medicine Methods for treating or preventing fibrosis in subjects afflicted with scleroderma
WO2015016178A1 (ja) * 2013-07-29 2015-02-05 国立大学法人鹿児島大学 １，５－ｄ－アンヒドロフルクトースを含むアポトーシス関連スペック様カード蛋白質の機能阻害薬
KR101948048B1 (ko) * 2016-12-08 2019-02-14 한양대학교 에리카산학협력단 톡소포자충 ｇｒａ７ 항원 유래 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 결핵 예방 또는 치료용 약학 조성물
US11840565B2 (en) * 2016-12-29 2023-12-12 University Of Miami Methods and compositions for treating virus-associated inflammation
CN110461356A (zh) * 2016-12-29 2019-11-15 迈阿密大学 用于调节肺中炎性体活性和炎症的方法

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