BR112020024427A2

BR112020024427A2 - regime de dosagem para o tratamento de distúrbios relacionados a pi3k

Info

Publication number: BR112020024427A2
Application number: BR112020024427-9A
Authority: BR
Inventors: Krishnaswamy Yeleswaram; Albert Assad; Xuejun Chen
Original assignee: Incyte Corporation
Priority date: 2018-06-01
Filing date: 2019-05-30
Publication date: 2021-03-23
Also published as: PE20211208A1; SG11202011680YA; MA52761A; CA3101323A1; ECSP20077106A; PH12020552059A1; WO2019232188A1; CL2020003118A1; KR20210018328A; AU2019277560A1; IL278889A; EP3801533A1; MX2020012826A; JP7455763B2; CN112469418A; US20190365764A1; TW202015693A; JP2021525757A

Abstract

"REGIME DE DOSAGEM PARA O TRATAMENTO DE DISTÚRBIOS RELACIONADOS A PI3K". A presente invenção refere-se a métodos de tratamento de distúrbios relacionados a PI3Kd usando derivados de pirazolopirimidina.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "REGIME DE

DOSAGEM PARA O TRATAMENTO DE DISTÚRBIOS RELACIONADOS A PI3K".

CAMPO TÉCNICO

[0001] A presente invenção refere-se a métodos de tratamento de dis- túrbios relacionados a PISKô usando derivados de pirazolopirimidina.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0002] A sinalização constitutiva através do receptor de células B (BCR) desempenha um papel crítico na patogênese de malignidades de células B humanas (Gururajan M. et al, The Journal of Immunology, 2006;176(10): 5715-5719) e leva à ativação a jusante de fosfatidilinositol 3-quinases de classe | (PI3Ks) (Benschop R.J., Cambier J.C., Current Opinion in Immuno- logy, 1999;11(2):143-151; So L., Fruman D.A. The Biochemical Journal, 2012;442(3):465-481). PI3Ks de classe | são quinases lipídicas heterodimé- ricas compostas por uma subunidade reguladora (p85 ou p101) e uma cata- lítica (D110) (Chalhoub N. et al, Annual review of pathology, 2009;4:127- 150). Cada uma das 4 isoformas da subunidade p110 tecido-específica (Classe IA: a, É e 5; Classe |B: y) confere funções fisiológicas exclusivas nas isoformas de PI3K correspondentes, incluindo sinalização de insulina e angiogênese (PI3Ka) (Foukas L.C. et al, Nature, 2006;441:366; Knight Z.A. et al, Cell, 2006;125(4):733-747; e Graupera M. et al, Nature, 2008;453:662), função de plaquetas e trombose (PISKB) (Jackson S.P. et al, Nature Medi- cine, 2005;11:507), e função dos glóbulos brancos e inflamação (PI3Ky) (Hirsch E. et al, Thrombosis and Haemostasis, 2006;95(1):29-35). A isofor- ma PI3Kô funciona como um nó crítico nas redes de sinalização que regu- lam o crescimento e sobrevivência das células B, e sua ativação aberrante é um evento chave na transformação maligna de células B (Kang S. et al, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2005;102(3):802-807; Puri K.D., Gold M.R., Frontiers in Immuno- logy, 2012;3:256). Existe interconectividade substancial entre as redes de sinalização mediadas por BCR e PI3Kô e outras redes importantes para a regulação da sobrevivência e proliferação de células B, incluindo o transdu- tor de sinal da Janus quinase e ativador da via de transcrição (JAK/STAT) (Lam L.T., et al, Blood, 2008;111(7):3701-3713; Rui L. et al, Proceedings of the National Academy of Sciences, 2016;113(46):E7260-E7267), sugerindo potenciais efeitos aditivos ou sinérgicos nas malignidades de células B.

[0003] O prognóstico para pacientes com linfoma não-Hodgkin (HNL) de células B recidivante ou refratário é geralmente ruim. Por exemplo, a ta- xa de sobrevida global em 5 anos (OS) para pacientes com linfoma folicular recidivante (LF), o subtipo indolente de LNH mais comum, é de apenas 50% (Casulo C. et al, Journal of Clinical Oncology, 2015; 33(23):2516- 2522). O prognóstico é pior para pacientes com subtipos de LNH agressi- vos recidivantes, com uma sobrevida média de 3,6 e 4,4 meses entre os pacientes com linfoma difuso de grandes células B (LDGCB) recidivante que não obtiveram sucesso nos recursos terapêuticos de primeira e segun- da linha, respectivamente (Van Den Neste E. et al, Bone Marrow Trans- plant, 2016; 51(1):51-57). As normas atuais para o tratamento de LNH de células B recidivante diferem de acordo com o subtipo e incluem quimio ou radioimunoterapia, terapias direcionadas com inibidores de quinase de mo- lécula pequena ou terapias imunomoduladoras (NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology (NCCN GuidelinesO). Linfomas de células B. Ver- são 7.2017; 2017; Tilly H. et al, Annals of Oncology, 2015;26(suppl 5): v116-v125; Dreyling M. et al, Annals of Oncology, 2016;27(suppl 5):v83- v90; Dreyling M. et al, Annals of Oncology, 2017;28(suppl 4):iv62-iv71). Além da terapia sistêmica, o transplante autólogo ou alogênico de células- tronco (SCT) é frequentemente usado para tratar pacientes com LNH de células B recidivante e o SCT alogênico é considerado a única opção de cura para esses pacientes (Wudhikarn K. et al Biology of Blood and Marrow Transplantation, 2011;17(10):1497-1504; Avivi |., et al, British Journal of Haematology, 2009;147(5):719-728; Klyuchnikov E., et al, Bone Marrow

Transplant, 2014;49(1):1-7; Hamadani M. et al, Biology of blood and marrow transplantation : journal of the American Society for Blood and Marrow Transplantation. 2009;15(5):547-553).

[0004] A distribuição diferencial das isoformas de PI3K nos tecidos in- fluencia suas funções biológicas distintas. A ablação genética de PI3Ka ou PISKB resulta em letalidade embrionária, indicando que Pl3Ka e PISKB têm funções essenciais e não redundantes, pelo menos durante o desenvolvi- mento (Vanhaesebroeck, et al., 2005). Em contraste, camundongos sem PISKy e PI3Kô são viáveis, férteis e têm uma expectativa de vida normal, embora apresentem um sistema imunológico alterado. A deficiência de PI3Ky leva ao recrutamento prejudicado de macrófagos e neutrófilos para locais de inflamação, bem como à ativação prejudicada de células T (Sasa- ki, et al., Science, 2000, 287(5455):1040-6). Os camundongos mutantes PI3K6 têm defeitos específicos na sinalização de células B que levam ao comprometimento do desenvolvimento de células B e respostas de anticor- pos reduzidas após estimulação com antígeno (Clayton, et al., J Exp Med. 2002, 196(6):753-63; Jou, et al., Mol Cell Biol. 2002, 22(24):8580-91; Okke- nhaug, et al., Science, 2002, 297(5583):1031-4).

[0005] Os fenótipos dos camundongos mutantes PI3Ky e PI3Kô suge- rem que essas enzimas podem desempenhar um papel na inflamação e outras doenças de base imunológica e isso é confirmado em modelos pré- clínicos. Os camundongos mutantes PI3Ky são amplamente protegidos de doenças em modelos de camundongos de artrite reumatoide (AR) e asma (Camps, et al., Nat Med. 2005, 11(9):936-43; Thomas, et al., Eur J Immunol. 2005, 35(4):1283-91). Além disso, o tratamento de camundongos do tipo selvagem com um inibidor de PISKy seletivo demonstrou reduzir a glomeru- lonefrite e prolongar a sobrevida no modelo MRL-lpr de nefrite lúpica sistê- mica (SLE) e suprimir a inflamação e danos nas articulações em modelos de AR (Barber, et a/., Nat Med. 2005, 11 (9): 933-5; Camps, et a/., 2005).

Da mesma forma, camundongos mutantes PI3Kô e camundongos de tipo selvagem tratados com um inibidor de PI3K6 seletivo apresentaram atenu- ação da inflamação alérgica das vias aéreas e hiper-responsividade em um modelo de camundongo de asma (Ali, et a/., Nature. 2004., 431 (7011): 1007-11; Lee, et al., FASEB J. 2006, 20 (3): 455-65) e atenuação da doen- ça em um modelo de RA (Randis, et al., Eur. J. Imnmunol., 2008, 38(5):1215- 24).

[0006] A proliferação de células B demonstrou desempenhar um papel importante no desenvolvimento de doenças inflamatórias autoimunes (Puri, Frontiers in Immunology (2012), 3(256), 1-16; Walsh, Kidney International (2007) 72, 676-682). Por exemplo, as células B apoiam a autorreatividade de células T, um importante componente de doenças inflamatórias autoi- munes. Uma vez ativadas e amadurecidas, as células B podem trafegar pa- ra locais de inflamação e recrutar células inflamatórias ou se diferenciar em plasmablastos. Assim, a atividade das células B pode ser afetada pelo dire- cionamento de citocinas estimuladoras de células B, receptores de superfí- cie de células B ou através da depleção de células B. Foi demonstrado que rituximab - um anticorpo monoclonal quimérico IgG1 x de camundon- go/humano direcionado contra o receptor CD20 de superfície de células B causa depleção das células B CD20+. O uso de rituximab demonstrou ter eficácia no tratamento da púrpura trombocitopênica idiopática, anemia he- molítica autoimune ou vasculite. Por exemplo, o tratamento com rituximab resultou na remissão da doença em pacientes que sofrem de vasculite sis- têmica (AASV) associada a anticorpos anti-citoplasma de neutrófilos (AN- CA) com depleção de células B periféricas demonstrada (Walsh, 2007; Lovric, Nephrol Dial Transplant (2009) 24: 179—185). Da mesma forma, uma resposta completa foi relatada em um terço a dois terços dos pacientes com a vasculite crioglobulinemia mista após o tratamento com rituximab, incluin- do pacientes que apresentavam uma forma grave de vasculite resistente ou intolerante a outros tratamentos (Cacoub, Ann Rheum Dis 2008; 67:283—-

287). Da mesma forma, rituximab demonstrou ser eficaz no tratamento de pacientes com púrpura trombocitopênica idiopática (ou púrpura tromboci- topênica imune) (Garvey, British Journal of Hematology, (2008) 141, 149- 169; Godeau, Blood (2008), 112 (4), 999-1004; Medeo, European Journal of Hematology, (2008) 81, 165-169) e anemia hemolítica autoimune (Garvey, British Journal of Hematology, (2008) 141, 149-169).

[0007] A sinalização PI3Kô foi ligada à sobrevivência, migração e ativa- ção de células B (Puri, Frontiers in Immunology, 2012, 3 (256), 1-16, nas páginas 1-5; e Clayton, J Exp Med, 2002, 196(6):753-63). Por exemplo, PI3K6 é necessário para ativação de células B dependente de antígeno conduzida pelo receptor de células B. Ao bloquear a adesão, sobrevivência, ativação e proliferação das células B, a inibição de PI3Kô6 pode prejudicar a capacidade das células B de ativar as células T, prevenindo sua ativação e reduzindo a secreção de autoanticorpos e citocinas pró-inflamatórias. As- sim, por sua capacidade de inibir a ativação das células B, os inibidores de PI3Kô deveriam tratar doenças mediadas por células B que eram tratáveis por métodos similares, como a depleção de células B por rituximab. De fato, foi demonstrado que os inibidores de PISK5 são modelos de camundongos úteis de várias doenças autoimunes que também são tratáveis por rituxi- mab, como a artrite (Puri (2012)). Além disso, as células B de tipo inato, que estão ligadas à autoimunidade, são sensíveis à atividade de PISK6ô, uma vez que as células MZ e B-1 estão praticamente ausentes em camun- dongos sem o gene p1108 (Puri (2012). Os inibidores de PI3Kô podem re- duzir o tráfego e a ativação de células MZ e B-1, que estão implicadas em doenças autoimunes.

[0008] Além de seu papel potencial em doenças inflamatórias, todas as quatro isoformas de PISK classe | podem desempenhar um papel no cân- cer. O gene que codifica p110a é frequentemente mutado em cânceres comuns, incluindo de mama, próstata, cólon e endometrial (Samuels, et al.,

Science, 2004, 304(5670):554; Samuels, et al., Curr Opin Oncol. 2006, 18(1):77-82). Oitenta por cento dessas mutações são representadas por uma das três substituições de aminoácidos nos domínios helicoidal ou qui- nase da enzima e levam a uma regulação positiva significativa da atividade quinase, resultando em transformação oncogênica em cultura de células e em modelos animais (Kang, et a/., Proc Natl Acad Sci US A. 2005, 102(3):802-7; Bader, et al., Proc Natl Acad Sci US A. 2006, 103(5):1475-9). Nenhuma dessas mutações foi identificada nas outras isoformas de PI3K, embora haja evidências de que podem contribuir para o desenvolvimento e progressão de doenças malignas. A superexpressão consistente de PI3Kô é observada na leucemia mieloblástica aguda (Sujobert, et a/., Blood, 2005, 106(3):1063-6) e os inibidores de PISK6 podem evitar o crescimento de cé- lulas leucêmicas (Billottet, et al., Oncogene. 2006, 25 (50): 6648-59). A ex- pressão elevada de PI3SKy é observada na leucemia mieloide crônica (Hi- ckey, et al., J Biol Chem. 2006, 281(5):2441-50). Alterações na expressão de PISKB, PI3Ky e PI3Kô também foram observadas em cânceres do cére- bro, cólon e bexiga (Benistant, et al., Oncogene, 2000, 19 (44): 5083-90; Mizoguchi, et a/., Brain Pathol. 2004, 14(4):372-7; Knobbe, et al., Neuropa- thol App! Neurobiol. 2005, 31(5):486-90). Além disso, todas essas isoformas demonstraram ser oncogênicas em cultura de células (Kang, et a/., 2006).

[0009] A introdução do rituximab melhorou os resultados do tratamento para pacientes com LNH de células B (Chao MP, Cancer Management and Research. 2013; 5:251-269; Nandagopal L., Mehta A., Expert Review of Hematology, 2017; 10(3):259-273). Para pacientes que apresentam resis- tência ao rituximab e/ou doença recidivante ou refratária, a classe de inibi- dores de PI3K se mostrou promissora, mas o uso clínico foi limitado por to- xicidades. Por exemplo, o primeiro inibidor seletivo para PI3Kô, idelalisib, foi associado a uma toxicidade considerável, incluindo hepatotoxicidade (Cou- tré SE, et al, Leukemia & Lymphoma, 2015; 56(10):2779-2786; Gopal A,, Graf S., Expert opinion on pharmacotherapy, 2016; 17(2):265-274), bem como aumento do risco de infecção oportunista (Lampson BL et al, Blood, 2016; 128(2):195-203), e requer monitoramento frequente. Da mesma for- ma, os tratamentos direcionados a outras isoformas PI3K têm riscos cor- respondentes (por exemplo, hiperglicemia e hipertensão) (Burris HA, et al, Journal of Clinical Oncology, 2014;32(15 supl):2513-2513; ALIQOPATY (copanlisibe) para injeção, para uso intravenoso. U.S. Whippany, NJ: Bayer HealthCare Pharmaceuticals Inc.; 2017; Patnaik A. et al, Annals of Onco- logy, 2016;27(10):1928-1940; Dreyling M. et al, Journal of Clinical Onco- logy, 2017;35(35):3898-3905). Portanto, permanece uma necessidade não atendida de terapias eficazes com perfis de segurança aprimorados nesta população de pacientes de difícil tratamento.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0010] O presente pedido fornece, inter alia, um método de tratamento de uma doença em um paciente, em que a referida doença está associada à expressão ou atividade anormal de PISKô quinase, o método caracteriza- do pelo fato de que compreende: i) administrar ao paciente um inibidor de PISKô em uma primei- ra dosagem que é de cerca de 3 mg/dia a cerca de 50 mg/dia por um pri- meiro período que é de cerca de 2 semanas a cerca de 12 semanas; e ii), administrar ao paciente uma segunda dosagem do inibidor de PI3Kô que é menor do que a primeira dosagem administrada ao final do primeiro período e que é de: (a) cerca de 2,5 mg/dia ou menos; ou (b) cerca de 50 mg/semana ou menos; e em que a segunda dosagem é administrada por um segundo período que ocorre após o primeiro período.

[0011] Os detalhes de uma ou mais modalidades da invenção são apresentados nos desenhos anexos e na descrição abaixo. Outros recur- sos, objetos e vantagens da invenção serão evidentes a partir da descrição e desenhos e das reivindicações.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0012] As Figuras 1A-1B mostram PK de sal do ácido clorídrico (R)-4- (3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil) 5-cloro-2-etóxi -6-fluorofenil) pirrolidin-2-ona (isto é, Composto 1C) no estado estacionário. Figura 1A: PK da dosagem do Composto 1C. Figura 1B: Relação dose- resposta do Composto 1C AUC. AUC, área sob a curva; AUC»o- 7, área sob a curva de concentração plasmática-tempo; IC5o, metade da concentração inibitória máxima; ICoo, concentração inibitória máxima de 90%; PK, farma- cocinética; QD, uma vez ao dia.

[0013] A Figura 2 mostra a melhor alteração percentual no tamanho da lesão alvo em relação à avaliação inicial da monoterapia. *Os dados de 3 pacientes com LDGCB, 2 com LZM e 1 com LCM não são mostrados devi- do a doença não mensurável na avaliação inicial ou nenhuma medição váli- da da lesão alvo após a avaliação inicial. Melhor mudança percentual no tamanho da lesão alvo em relação à avaliação inicial >100%. IB, 3 pacien- tes com LCM receberam ibrutinib antes do estudo, dentre os quais uma me- lhor resposta geral de CR ou RP foi obtida por 2 pacientes. LDGCB, linfoma difuso de grandes células B; LF, linfoma folicular; LOM, linfoma de células do manto; LZM, linfoma da zona marginal.

[0014] A Figura 3 mostra a duração do tratamento de monoterapia com Composto 1C. AE, evento adverso; LDGCB;, linfoma difuso de grandes cé- lulas B; LF, linfoma folicular; LCM, linfoma de células do manto; LZM, linfo- ma da zona marginal; DP, doença progressiva; QW, uma vez por semana.

[0015] A Figura 4 mostra a inibição percentual média da AKT fosforilada no estado estacionário. O Composto 1C foi dosado uma vez ao dia e os ní- veis de AKT fosforilada (pAKT; Ser473) foram medidos por citometria de fluxo em células SU-DHL adicionadas ao sangue total do paciente após o tratamento com Composto 1C no dia 15 do ciclo 1.

[0016] As Figuras 5A-5B mostram ALT (Figura 5A) e AST (Figura 5B) ao longo do tempo em pacientes recebendo monoterapia com Composto

1C. ALT, alanina aminotransferase; AST, aspartato aminotransferase; QD, uma vez ao dia; ULN, limite superior do normal.

[0017] A Figura 6 mostra o tempo de resposta da monoterapia com Composto 1C entre os subtipos de LNH de interesse (LDGCB, LF, LOM, LZM). LDGCB, linfoma difuso de grandes células B; LF, linfoma folicular; LCM, linfoma de células do manto; LZM, linfoma da zona marginal.

[0018] A Figura 7 mostra imagens representativas de tomografia por emissão de pósitrons (PET) de um paciente que obteve resposta completa com a monoterapia com Composto 1C. O paciente tinha <65 anos de idade, linfoma de células do manto sem envolvimento da medula óssea (lesão alvo, 98 mm x 58 mm) e havia recebido 1 tratamento anterior (R-HyperCVAD). Tra- tado com Composto 1C, 30 mg uma vez ao dia; obteve resposta completa na semana 9.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0019] O presente pedido fornece, métodos de tratamento de uma do- ença em um paciente, em que a referida doença está associada à expres- são ou atividade anormal de PISKô quinase, o método caracterizado pelo fato de que compreende: i) administrar ao paciente um inibidor de PISKô em uma primei- ra dosagem que é de cerca de 3 mg/dia a cerca de 50 mg/dia por um pri- meiro período que é de cerca de 2 semanas a cerca de 12 semanas; e ii), administrar ao paciente uma segunda dosagem do inibidor de PI3Kô que é menor do que a primeira dosagem administrada ao final do primeiro período e que é de: (a) cerca de 2,5 mg/dia ou menos; ou (b) cerca de 50 mg/semana ou menos; e em que a segunda dosagem é administrada por um segundo período que ocorre após o primeiro período.

[0020] O presente pedido fornece ainda métodos de tratamento de uma doença em um paciente, em que a referida doença está associada à ex-

pressão ou atividade anormal de PISKô quinase, o método caracterizado pelo fato de que compreende: i) administrar ao paciente um inibidor de PISKô em uma primei- ra dosagem que é de cerca de 3 mg/dia a cerca de 50 mg/dia por um pri- meiro período que é de cerca de 2 semanas a cerca de 12 semanas; e ii), administrar ao paciente uma segunda dosagem do inibidor de PI3Kô que é menor do que a primeira dosagem administrada ao final do primeiro período e que é de cerca de 7,5 mg/dia ou menos; e em que a segunda dosagem é administrada por um segundo período que ocorre após o primeiro período.

[0021] Conforme usado neste documento, o termo "primeiro período" refere-se a um período de tempo de administração da primeira dosagem do inibidor de PISKô ao paciente.

[0022] Em algumas modalidades, o primeiro período começa no mo- mento da administração inicial da primeira dosagem do inibidor de PI3Kô ao paciente.

[0023] Conforme usado neste documento, o termo "segundo período" refere-se a um período de tempo de administração da segunda dosagem do inibidor de PISKô ao paciente.

[0024] Em algumas modalidades, o segundo período começa no mo- mento da administração inicial da segunda dosagem do inibidor de PI3Kô ao paciente.

[0025] Em algumas modalidades, o tempo de administração inicial da segunda dosagem do inibidor de PI3Kô ao paciente (ou seja, o início do se- gundo período) está dentro de 2 semanas após o final do primeiro período, por exemplo, dentro de 1 semana, dentro de 6 dias, dentro de 5 dias, dentro de 4 dias, dentro de 3 dias, dentro de 2 dias, ou dentro de 1 dia após o final do primeiro período.

[0026] Em algumas modalidades, o segundo período continua por qual- quer quantidade de tempo, por exemplo, até que o tratamento seja concluí-

do.

[0027] Em algumas modalidades, cada uma das primeiras dosagens é administrada como uma dosagem única uma vez ao dia.

[0028] Em algumas modalidades, cada uma das primeiras dosagens é administrada como uma dosagem oral única, uma vez ao dia.

[0029] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é de cerca de 5 mg/dia a cerca de 50 mg/dia, por exemplo, cerca de 5 mg/dia a cerca de 40 mg/dia, cerca de 5 mg/dia a cerca de 30 mg/dia, cerca de 5 mg/dia a cerca de 20 mg/dia, cerca de 5 mg/dia a cerca de 10 mg/dia, cerca de 10 mg/dia a cerca de 40 mg/dia, cerca de 10 mg/dia a cerca de 30 mg/dia, cerca de 10 mg/dia a cerca de 20 mg/dia, cerca de 20 mg/dia a cerca de 40 mg/dia, cer- ca de 20 mg/dia a cerca de 30 mg/dia, ou cerca de 20 mg/dia a cerca de 40 mg/dia.

[0030] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é de cerca de 50 mg/dia, cerca de 45 mg/dia, cerca de 40 mg/dia, cerca de 30 mg/dia, cerca de 20 mg/dia, cerca de 15 mg/dia, cerca de 10 mg/dia, ou cerca de 5 mg/dia.

[0031] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é de cerca de 18 mg/dia a cerca de 22 mg/dia.

[0032] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é de cerca de 18 mg/dia a cerca de 22 mg/dia e é administrada como uma dosagem única, uma vez ao dia (ou seja, QD).

[0033] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é de cerca de 18 mg/dia a cerca de 22 mg/dia e é administrada como uma dosagem oral úni- ca, uma vez ao dia (ou seja, QD).

[0034] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é de cerca de 20 mg/dia.

[0035] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é de cerca de 20 mg/dia e é administrada como uma dosagem única, uma vez ao dia (ou se- ja, QD).

[0036] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é de cerca de 20 mg/dia e é administrada como uma dosagem oral única, uma vez ao dia (ou seja, QD).

[0037] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é de cerca de 10 mg/dia.

[0038] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é de cerca de 10 mg/dia e é administrada como uma dosagem única, uma vez ao dia (ou se- ja, QD).

[0039] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é de cerca de 10 mg/dia e é administrada como uma dosagem oral única, uma vez ao dia (ou seja, QD).

[0040] Em algumas modalidades, o primeiro período é de cerca de 3 semanas a cerca de 11 semanas, por exemplo, cerca de 8 semanas a cer- ca de 12 semanas, cerca de 4 semanas a cerca de 10 semanas, cerca de 5 semanas a cerca de 9 semanas, ou cerca de 8 semanas a cerca de 9 se- manas. Em algumas modalidades, o primeiro período é de cerca de 2 se- manas, cerca de 3 semanas, cerca de 4 semanas, cerca de 5 semanas, cerca de 6 semanas, cerca de 7 semanas, cerca de 8 semanas, cerca de 9 semanas, cerca de 10 semanas, cerca de 11 semanas ou cerca de 12 se- manas.

[0041] Em algumas modalidades, o primeiro período é de cerca de 8 semanas a cerca de 9 semanas.

[0042] Em algumas modalidades, o primeiro período é de cerca de 8 semanas.

[0043] Em algumas modalidades, o primeiro período é de cerca de 9 semanas.

[0044] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é reduzida du- rante o primeiro período.

[0045] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é reduzida de cerca de 3 mg/dia a cerca de 50 mg/dia para cerca de 3 mg/dia a cerca de

30 mg/dia, cerca de 3 mg/dia a cerca de 20 mg/dia, cerca de 3 mg/dia a cerca de 15 mg/dia, cerca de 3 mg/dia a cerca de 10 mg/dia, cerca de 3 mg/dia a cerca de 7 mg/dia, ou cerca de 3 mg/dia a cerca de 5 mg/dia.

[0046] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é reduzida de cerca de 3 mg/dia a cerca de 50 mg/dia para cerca de 3 mg/dia a cerca de 7 mg/dia durante o primeiro período.

[0047] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é reduzida de cerca de 50 mg/dia para cerca de 30 mg/dia, cerca de 20 mg/dia, cerca de 15 mg/dia, cerca de 10 mg/dia, cerca de 5 mg/dia, cerca de 2 mg/dia ou cerca de 1 mg/dia, durante o primeiro período.

[0048] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é reduzida de cerca de 20 mg/dia para cerca de 15 mg/dia, cerca de 10 mg/dia, cerca de mg/dia, cerca de 2 mg/dia ou cerca de 1 mg/dia, durante o primeiro perío- do.

[0049] Em algumas modalidades, cada uma das segundas dosagens é administrada como uma dosagem única uma vez ao dia (QD) ou como uma dosagem única, uma vez por semana (QW).

[0050] Em algumas modalidades, cada uma das segundas dosagens é administrada como uma dosagem única uma vez ao dia (QD).

[0051] Em algumas modalidades, cada uma das segundas dosagens é administrada como uma dosagem única, uma vez por semana (QW).

[0052] Em algumas modalidades, cada uma das segundas dosagens é administrada como uma dosagem oral única uma vez ao dia (QD) ou como uma dosagem oral única, uma vez por semana (QW).

[0053] Em algumas modalidades, cada uma das segundas dosagens é administrada como uma dosagem oral única uma vez ao dia (QD).

[0054] Em algumas modalidades, cada uma das segundas dosagens é administrada como uma dosagem oral única, uma vez por semana (QW).

[0055] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 5,0 mg/dia ou menos, por exemplo, cerca de 5,0 mg/dia, cerca de 4,0 mg/dia, cerca de 3,0 mg/dia, cerca de 2,5 mg/dia, cerca de 2,0 mg/dia, cer- ca de 1,75 mg/dia cerca de 1,5 mg/dia, cerca de 1,25 mg/dia ou cerca de 1,0 mg/dia.

[0056] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 2,5 mg/dia a cerca de 7,5 mg/dia.

[0057] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 3,0 mg/dia a cerca de 7,0 mg/dia.

[0058] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 4,0 mg/dia a cerca de 6,0 mg/dia.

[0059] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 5,0 mg/dia.

[0060] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 4,0 mg/dia a cerca de 6,0 mg/dia e é administrada como uma dosagem úni- ca, uma vez ao dia (QD).

[0061] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 5,0 mg/dia e é administrada como uma dosagem única, uma vez ao dia (QD).

[0062] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 4,0 mg/dia a cerca de 6,0 mg/dia e é administrada como uma dosagem oral única, uma vez ao dia (QD).

[0063] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 5,0 mg/dia e é administrada como uma dosagem oral única, uma vez ao dia (QD).

[0064] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 5,0 mg/dia ou menos durante o segundo período.

[0065] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 5,0 mg/dia ou menos para cerca de 2,5 mg/dia ou menos, 2,0 mg/dia ou menos, cerca de 1,75 mg/dia ou menos, cerca de 1,5 mg/dia ou menos, cerca de 1,25 mg/dia ou menos ou cerca de 1,0 mg/dia ou menos durante o segundo período.

[0066] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 5,0 mg/dia para cerca de 2,5 mg/dia, 2,0 mg/dia, cerca de 1,75 mg/dia, cerca de 1,5 mg/dia, cerca de 1,25 mg/dia ou cerca de 1,0 mg/dia durante o segundo período

[0067] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 5,0 mg/dia a cerca de 0,75 mg/dia a cerca de 1,25 mg/dia durante o segundo período.

[0068] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 5,0 mg/dia para cerca de 1,25 mg/dia durante o segundo período.

[0069] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 5,0 mg/dia para cerca de 2,0 mg/dia, cerca de 1,5 mg/dia, cerca de 1,25 mg/dia ou cerca de 1,0 mg/dia.

[0070] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 5,0 mg/dia para cerca de 1,0 mg/dia.

[0071] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 2,5 mg/dia ou menos, por exemplo, cerca de 2,5 mg/dia, cerca de 2,0 mg/dia, cerca de 1,75 mg/dia, cerca de 1,5 mg/dia, cerca de 1,25 mg/dia ou cerca de 1,0 mg/dia.

[0072] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 1,0 mg/dia a cerca de 2,5 mg/dia, por exemplo, cerca de 1,0 mg/dia a cerca de 2,0 mg/dia, cerca de 1,0 mg/dia a cerca de 1,5 mg/dia ou cerca de 1,0 mg/dia a cerca de 1,25 mg/dia.

[0073] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 2 mg/dia a cerca de 2,5 mg/dia.

[0074] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 2,5 mg/dia.

[0075] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 2 mg/dia a cerca de 2,5 mg/dia e é administrada como uma dosagem única, uma vez ao dia (QD).

[0076] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de

2,5 mg/dia e é administrada como uma dosagem única, uma vez ao dia (QD).

[0077] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 2 mg/dia a cerca de 2,5 mg/dia e é administrada como uma dosagem oral única, uma vez ao dia (QD).

[0078] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 2,5 mg/dia e é administrada como uma dosagem oral única, uma vez ao dia (QD).

[0079] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 2,5 mg/dia ou menos durante o segundo período.

[0080] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 2,5 mg/dia ou menos para cerca de 2,0 mg/dia ou menos, 1,75 mg/dia ou menos, cerca de 1,5 mg/dia ou menos, cerca de 1,25 mg/dia ou menos ou cerca de 1,0 mg/dia ou menos durante o segundo período.

[0081] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 2,5 mg/dia para cerca de 2,0 mg/dia, cerca de 1,75 mg/dia, cerca de 1,5 mg/dia, cerca de 1,25 mg/dia ou cerca de 1,0 mg/dia durante o se- gundo período.

[0082] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 2,5 mg/dia para cerca de 1,25 mg/dia durante o segundo período.

[0083] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 2,5 mg/dia para cerca de 2,0 mg/dia, cerca de 1,5 mg/dia, cerca de 1,25 mg/dia ou cerca de 1,0 mg/dia.

[0084] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 2,5 mg/dia para cerca de 1,0 mg/dia.

[0085] Em algumas modalidades, a dosagem reduzida da segunda do- sagem é administrada como uma dosagem única, uma vez ao dia (QD).

[0086] Em algumas modalidades, a dosagem reduzida da segunda do- sagem é administrada como uma dosagem oral única, uma vez ao dia (QD).

[0087] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 50 mg/semana ou menos, por exemplo, cerca de 40 mg/semana ou menos, cerca de 30 mg/semana ou menos, cerca de 20 mg/semana ou menos, cer- ca de 10 mg/semana ou menos, cerca de 5 mg/semana ou menos, cerca de 2 mg/semana ou menos, ou cerca de 1 mg/semana ou menos.

[0088] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 5 mg/semana a cerca de 50 mg/semana, por exemplo, cerca de 5 mg/sema- na a cerca de 40 mg/semana, cerca de 5 mg/semana a cerca de 30 mg/semana, cerca de 5 mg/semana a cerca de 20 mg/semana, cerca de 5 mg/semana a cerca de 10 mg/semana, cerca de 10 mg/semana a cerca de 40 mg/semana, cerca de 10 mg/semana a cerca de 30 mg/semana, cerca de 10 mg/semana a cerca de 20 mg/semana, cerca de 20 mg/semana a cerca de 40 mg/semana, cerca de 20 mg/semana a cerca de 30 mg/sema- na ou cerca de 30 mg/semana a cerca de 40 mg/semana.

[0089] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 18 mg/semana a cerca de 20 mg/semana.

[0090] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 20 mg/semana.

[0091] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 18 mg/semana a cerca de 20 mg/semana e é administrada como uma dosa- gem única, uma vez por semana (QW).

[0092] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é de cerca de 20 mg/semana e é administrada como uma dosagem única, uma vez por se- mana (QW).

[0093] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 50 mg/dia ou menos durante o segundo período.

[0094] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 50 mg/semana ou menos para cerca de 40 mg/semana ou menos, cerca de 30 mg/semana ou menos, cerca de 20 mg/semana ou menos, cer- ca de 10 mg/semana ou menos, cerca de 5 mg/semana ou menos, cerca de

2 mg/semana ou menos ou cerca de 1 mg/semana ou menos durante o se- gundo período.

[0095] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 5 mg/semana a cerca de 50 mg/semana, a cerca de 5 mg/semana a cerca de 40 mg/semana, cerca de 5 mg/semana a cerca de 30 mg/sema- na, cerca de 5 mg/semana a cerca de 20 mg/semana, cerca de 5 mg/sema- na a cerca de 10 mg/semana, cerca de 10 mg/semana a cerca de 40 mg/semana, cerca de 10 mg/semana a cerca de 30 mg/semana, cerca de mg/semana a cerca de 20 mg/semana, cerca de 20 mg/semana a cerca de 40 mg/semana, cerca de 20 mg/semana a cerca de 30 mg/semana ou cerca de 30 mg/semana a cerca de 40 mg/semana durante o segundo perí- odo.

[0096] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 50 mg/semana, para cerca de 40 mg/semana, cerca de 30 mg/se- mana, cerca de 20 mg/semana, cerca de 10 mg/semana ou cerca de 5 mg/semana durante o segundo período.

[0097] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 20 mg/semana para cerca de 10 mg/semana durante o segundo período.

[0098] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 20 mg/semana para cerca de 10 mg/semana durante o segundo período.

[0099] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 10 mg/semana para cerca de 5 mg/semana durante o segundo período.

[00100] Em algumas modalidades, a dosagem reduzida da segunda do- sagem é administrada como uma dosagem única, uma vez por semana (QW).

[00101] Em algumas modalidades, o paciente foi identificado como exi- bindo um ou mais sintomas associados a um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento (TEAEs). Conforme utilizado neste documento, a gravidade dos TEAEs descritos neste documento foi avaliada utilizando os Common Terminology Criteria for Adverse Events (Critérios de Terminolo- gia Comum para Eventos Adversos) versão 4.03, cuja invenção é incorpo- rada a este documento por referência em sua totalidade.

[00102] Em algumas modalidades, o paciente foi identificado como exi- bindo um ou mais sintomas associados a um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento (TEAEs) durante o primeiro período.

[00103] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é reduzida de cerca de 3 mg/dia a cerca de 50 mg/dia a cerca de 3 mg/dia a cerca de 30 mg/dia, cerca de 3 mg/dia a cerca de 20 mg/dia, cerca de 3 mg/dia a cerca de 15 mg/dia, cerca de 3 mg/dia a cerca de 10 mg/dia, cerca de 3 mg/dia a cerca de 7 mg/dia, ou cerca de 3 mg/dia a cerca de 5 mg/dia quando o pa- ciente foi identificado como exibindo um ou mais sintomas associados a um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento (TEAEs).

[00104] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é reduzida de cerca de 50 mg/dia para cerca de 30 mg/dia, cerca de 20 mg/dia, cerca de 15 mg/dia, cerca de 10 mg/dia, cerca de 5 mg/dia, cerca de 2 mg/dia, ou cerca de 1 mg/dia, durante o primeiro período quando o paciente foi identifi- cado como exibindo um ou mais sintomas associados a um ou mais even- tos adversos emergentes do tratamento (TEAEs).

[00105] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é reduzida de cerca de 20 mg/dia para cerca de 15 mg/dia, cerca de 10 mg/dia, cerca de mg/dia, cerca de 2 mg/dia ou cerca de 1 mg/dia, durante o primeiro perío- do quando o paciente foi identificado como exibindo um ou mais sintomas associados a um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento (TEAEs).

[00106] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é reduzida de cerca de 20 mg/dia para cerca de 10 mg/dia quando o paciente foi identifi- cado como exibindo um ou mais sintomas associados a um ou mais even-

tos adversos emergentes do tratamento (TEAEs).

[00107] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é reduzida de cerca de 20 mg/dia para cerca de 5 mg/dia quando o paciente foi identifica- do como exibindo um ou mais sintomas associados a um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento (TEAESs).

[00108] Em algumas modalidades, a primeira dosagem é reduzida de cerca de 10 mg/dia para cerca de 5 mg/dia quando o paciente foi identifica- do como exibindo um ou mais sintomas associados a um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento (TEAESs).

[00109] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste docu- mento compreendem ainda interromper a administração da primeira dosa- gem quando o paciente foi identificado como exibindo um ou mais sintomas associados a um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento (TEAEs).

[00110] Em algumas modalidades, o paciente foi identificado como exi- bindo um ou mais sintomas associados a um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento (TEAEs) durante o segundo período de tempo.

[00111] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 3 mg/dia a cerca de 50 mg/dia a cerca de 3 mg/dia a cerca de 30 mg/dia, cerca de 3 mg/dia a cerca de 20 mg/dia, cerca de 3 mg/dia a cerca de 15 mg/dia, cerca de 3 mg/dia a cerca de 10 mg/dia, cerca de 3 mg/dia a cerca de 7 mg/dia, ou cerca de 3 mg/dia a cerca de 5 mg/dia durante o se- gundo período de tempo quando o paciente foi identificado como exibindo um ou mais sintomas associados a um ou mais eventos adversos emergen- tes do tratamento (TEAEs).

[00112] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 50 mg/semana, para cerca de 40 mg/semana, cerca de 30 mg/semana, cerca de 20 mg/semana, cerca de 10 mg/semana, cerca de 5 mg/semana, cerca de 2 mg/semana ou cerca de 1 mg/semana durante o segundo período de tempo quando o paciente foi identificado como exibin-

do um ou mais sintomas associados a um ou mais eventos adversos emer- gentes do tratamento (TEAEs).

[00113] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 50 mg/semana ou menos para cerca de 40 mg/ semana ou me- nos, cerca de 30 mg/semana ou menos, cerca de 20 mg/semana ou menos, cerca de 10 mg/semana ou menos, cerca de 5 mg/semana ou menos, cerca de 2 mg/semana ou menos, ou cerca de 1 mg/semana ou menos durante o segundo período de tempo durante o segundo período de tempo quando o paciente foi identificado como exibindo um ou mais sintomas associados com um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento (TEAEs).

[00114] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 20 mg/semana para cerca de 10 mg/semana ou menos durante o segundo período de tempo durante o segundo período de tempo quando o paciente foi identificado como exibindo um ou mais sintomas associados com um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento (TEAEs).

[00115] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 20 mg/semana para cerca de 5 mg/semana ou menos durante o segundo período de tempo durante o segundo período de tempo quando o paciente foi identificado como exibindo um ou mais sintomas associados com um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento (TEAEs).

[00116] Em algumas modalidades, a segunda dosagem é reduzida de cerca de 10 mg/semana para cerca de 5 mg/semana ou menos durante o segundo período de tempo durante o segundo período de tempo quando o paciente foi identificado como exibindo um ou mais sintomas associados com um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento (TEAEs).

[00117] Em algumas modalidades, um ou mais eventos adversos emer- gentes do tratamento compreendem um ou mais dentre diarreia/colite, náu- sea, fadiga, erupção cutânea, neutropenia, pirexia, hipotensão, sepse, insu- ficiência respiratória, pneumonite, pneumonia, hipertensão, hiperglicemia, dor abdominal, bronquite, desidratação, trombocitopenia, tosse, vômito, re-

dução do apetite, aumento da lacrimação, herpes oral, taquicardia, com- pressão da medula espinhal, dor intratável, fosfatase alcalina elevada, tran- saminase elevada, hiperlipidemia, hipercalcemia, tontura, alopecia, consti- pação, sobrecarga de líquidos, cefaleia, hipocalemia, suores noturnos, en- cefalopatia, vibração atrial, fibrilação atrial e dispneia.

[00118] Em algumas modalidades, os sintomas associados com um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento são sintomas associados a um ou mais dentre diarreia/colite, náusea, fadiga, erupção cutânea, neu- tropenia, pirexia, hipotensão, sepse, insuficiência respiratória, pneumonite, pneumonia, hipertensão, hiperglicemia, dor abdominal, bronquite, desidra- tação, trombocitopenia, tosse, vômito, redução do apetite, aumento da la- crimação, herpes oral, taquicardia, compressão da medula espinhal, dor intratável, fosfatase alcalina elevada, transaminase elevada, hiperlipidemia, hipercalcemia, tontura, alopecia, constipação, sobrecarga de líquidos, cefa- leia, hipocalemia, suores noturnos, encefalopatia, vibração atrial, fibrilação atrial e dispneia.

[00119] Em algumas modalidades, um ou mais eventos adversos emer- gentes do tratamento compreendem um ou mais dentre diarreia/colite, náu- sea, fadiga, erupção cutânea, tosse, vômito, tontura, pirexia, hipocalemia, dor abdominal, constipação, redução do apetite, suores noturnos, prurido, dor nas costas, calafrios, leucopenia, neutropenia, linfopenia, trombocitope- nia e anemia.

[00120] Em algumas modalidades, o um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento compreendem um ou mais dentre diarreia/colite e erupção cutânea.

[00121] Em algumas modalidades, a diarreia/colite compreende um ou mais dentre diarreia, colite, enterocolite, inflamação gastrointestinal, colite microscópica e colite por citomegalovírus.

[00122] Em algumas modalidades, a erupção cutânea compreende um ou mais de dermatite esfoliativa, erupção cutânea, erupção cutânea erite-

matosa, erupção cutânea maculopapular, erupção cutânea pruriginosa, erupção cutânea esfoliativa, erupção cutânea generalizada, erupção cutâ- nea popular e erupção cutânea pustular.

[00123] Em algumas modalidades, a neutropenia compreende neutrope- nia febril.

[00124] Em algumas modalidades, a transaminase elevada compreende alanina transaminase elevada (ALT), aspartato transaminase (AST) ou uma combinação das mesmas.

[00125] Tal como utilizado neste documento, o termo "colocar em conta- to" refere-se à união das frações indicadas em um sistema in vitro ou um sistema in vivo. Por exemplo, "contatar" uma PISK com um composto inibi- dor de PI3Kô descrito neste documento inclui a administração de um com- posto descrito neste documento a um indivíduo ou paciente, como um ser humano, tendo uma PISK, bem como, por exemplo, a introdução de um composto descrito neste documento em uma amostra contendo uma prepa- ração celular ou purificada contendo o PI3K.

[00126] Em algumas modalidades, o inibidor de PISKô é um composto da Publicação de Patente US. Nº. US 2011/0015212, depositado em 28 de junho de 2010, Publicação de Patente US. Nº. 2013/0059835, depositado em 31 de agosto de 2013, Publicação de Patente US Nº. 2011/0183985, depositado em 17 de dezembro de 2010, Publicação de Patente US Nº. 2012/0157430, depositado em 19 de dezembro de 2011, Publicação de Pa- tente US Nº. 2014/0249132, depositado em 28 de fevereiro de 2014, ou Publicação de Patente US. Nº. 2016/0257689, depositado em 26 de feverei- ro de 2016, cada um dos quais é incorporado neste documento por referên- cia em sua totalidade.

[00127] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kô é preparado pelos métodos da Publicação de Patente US Nº. US 2011/0015212, depositado em 28 de junho de 2010, Publicação de Patente US. Nº. 2013/0059835, depositado em 31 de agosto de 2013, Publicação de Patente US Nº.

2011/0183985, depositado em 17 de dezembro de 2010, Publicação de Pa- tente US Nº. 2012/0157430, depositado em 19 de dezembro de 2011, Pu- blicação de Patente US Nº. 2014/0249132, depositado em 28 de fevereiro de 2014, ou Publicação de Patente US. Nº. 2016/0257689, depositado em 26 de fevereiro de 2016, cada um dos quais é incorporado neste documen- to por referência em sua totalidade.

[00128] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kô é selecionado a partir de: 4-(3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi- 6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona; e 5-(3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi- 6-fluorofenil)-1,3-oxazolidin-2-ona; ou um sal farmaceuticamente aceitável delas.

[00129] Em algumas modalidades, o inibidor de PISKô é 4-(3-[1-(4- amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi-6- fluorofenil)pirrolidin-2-0na, ou um sal farmaceuticamente aceitável dela.

[00130] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kô é selecionado a partir de: (S)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro- 2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona; (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro- 2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona; (S)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro- 2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-0na; e (R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro- 2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona; ou um sal farmaceuticamente aceitável delas.

[00131] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kô é um sal farma- ceuticamente aceitável de 4-(3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimi- din-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona.

[00132] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kô é selecionado a partir de um sal farmaceuticamente aceitável de: (S)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro- 2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona; (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro- 2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona; (S)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro- 2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-0na; e (R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro- 2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona.

[00133] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3BKô é um sal farma- ceuticamente aceitável de (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidina -1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona.

[00134] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kô é sal de ácido clo- rídrico (R) -4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-1-il)etil)- B-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona. Em algumas modalidades, o sal tem uma razão estequiométrica de 1:1 de (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil- 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2- ona para ácido clorídrico.

[00135] Em algumas modalidades, o sal é cristalino (ver, por exemplo, Publicação de Patente US Nº. 2016/0257689, depositado em 26 de feverei- ro de 2016 para métodos e processos para a preparação de sal de ácido clorídrico — (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4- dipirimidin-1- iI)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-o0na. Publicação de Patente US Nº. 2016/0257689 é incorporado por referência, em sua totalidade neste documento.).

[00136] Em algumas modalidades, o sal de ácido clorídrico de 4-(3-[1-(4- amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi-6- fluorofenil) pirrolidin-2-ona tem: pelo menos um, dois, três, quatro ou cinco picos de XRPD, em termos de 2-teta, selecionados de cerca de 11,3º, cerca de 16,4º, cerca de 21,0º, cerca de 23,0º, cerca de 28,1º, cerca de 31,2º e cerca de 32,8º; pelo menos dois picos de XRPD, em termos de 2-teta, sele- cionados de cerca de 11,3º, cerca de 16,4º, cerca de 21,0º, cerca de 23,0º, cerca de 28,1º, cerca de 31,2º e cerca de 32,8º; pelo menos três picos de XRPD, em termos de 2-teta, selecionados de cerca de 11,3º, cerca de 16,4º, cerca de 21,0º, cerca de 23,0º, cerca de 28,1º, cerca de 31,2º e cer- ca de 32,8º; . Em algumas modalidades, o sal de ácido clorídrico do com- posto de Fórmula | tem pelo menos quatro picos de XRPD, em termos de 2- teta, selecionados de cerca de 11,3º, cerca de 16,4º, cerca de 21,0º, cerca de 23,0º, cerca de 28,1º, cerca de 31,2º e cerca de 32,8º. Em algumas mo- dalidades, o sal de ácido clorídrico de 4-(3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil) pirrolidin-2-0na tem to- dos os picos de XRPD listados, em termos de 2-teta, a cerca de 11,3º, cer- ca de 16,4º, cerca de 21,0º, cerca de 23,0º, cerca de 28,1º, cerca de 31,2º e cerca de 32,8º. Em algumas modalidades, o sal de ácido clorídrico de 4- 13-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi-6- fluorofenil) pirrolidin-2-ona tem um termograma DSC com um pico endotér- mico a cerca de 207ºC.

[00137] Em algumas modalidades, os sais e compostos descritos neste documento são substancialmente isolados. Entende-se por “substancial- mente isolado” que o sal ou composto é pelo menos parcial ou substanci- almente separado do ambiente no qual o mesmo foi formado ou detectado. A separação parcial pode incluir, por exemplo, uma composição enriqueci- da nos sais descritos no presente documento. A separação substancial po- de incluir composições contendo pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 97% ou pelo menos cerca de 99% em peso dos sais descritos no presente do- cumento, ou sal dos mesmos. Métodos para isolar compostos e seus sais são rotina na técnica.

[00138] Em algumas modalidades, o inibidor de PISKô é 5-(3-[1-(4- amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofe- nil)-1,3-oxazolidin-2-0na, ou um sal farmaceuticamente aceitável dela.

[00139] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kô é selecionado a partir de: (R)-5-(3-[(R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro- 2-etóxi-6-fluorofenil)-1,3-0xazolidin-2-ona; (R)-5-(3-[(S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro- 2-etóxi-6-fluorofenil)-1,3-0xazolidin-2-ona; (S)-5-13-[(S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-i1)etil]-5-cloro- 2-etóxi-6-fluorofenil)-1,3-0xazolidin-2-0na; e (S)-5-13-[(R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro- 2-etóxi-6-fluorofenil)-1,3-0xazolidin-2-ona; ou um sal farmaceuticamente aceitável delas.

[00140] Os compostos descritos neste documento, incluindo os seus sais, podem ser preparados utilizando técnicas de síntese orgânica conheci- das e podem ser sintetizados de acordo com qualquer uma de numerosas vi- as de síntese possíveis. Em algumas modalidades, os compostos podem ser preparados conforme descrito nas Patentes US N.º. 9.199.982 e 9.932.341, cada uma das quais é incorporada neste documento por referência em sua totalidade.

[00141] Asreações para a preparação de compostos descritos neste do- cumento podem ser realizadas em solventes adequados que podem ser facilmente selecionados por uma pessoa versada na técnica de síntese or- gânica. Os solventes adequados podem ser substancialmente não reativos com a matéria-prima (reagentes), os intermediários, ou produtos nas tem- peraturas sob as quais as reações são realizadas (por exemplo, temperatu- ras que podem variar desde a temperatura de congelamento do solvente até a temperatura de ebulição do solvente). Uma determinada reação pode ser realizada em um solvente ou uma mistura de mais de um solvente. De-

pendendo da etapa de reação particular, solventes adequados para uma etapa de reação específica podem ser selecionados por uma pessoa ver- sada na técnica.

[00142] A preparação de compostos descritos neste documento pode envolver a proteção e desproteção de vários grupos químicos. A necessi- dade de proteção e desproteção e a seleção de grupos de proteção apro- priados podem ser prontamente determinadas por uma pessoa versada na técnica. A química dos grupos de proteção pode ser encontrada, por exem- plo, em T. W. Greene e P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3"? Ed., Wiley & Sons, Inc., New York (1999), que é incorporado neste documento por referência em seu por inteiro.

[00143] Asreações podem ser monitoradas de acordo com qualquer mé- todo adequado conhecido na técnica. Por exemplo, a formação do produto pode ser monitorada por meios espectroscópicos, como espectroscopia de ressonância magnética nuclear (por exemplo, *H ou *ºC), espectroscopia de infravermelho, espectrofotometria (por exemplo, visível em UV), espectro- metria de massa ou por métodos cromatográficos, como cromatografia lí- quida de alta eficiência (HPLC), espectrometria de massa por cromatografia em fase líquida (LCMS) ou cromatografia em camada fina (TLC). Os com- postos podem ser purificados por aqueles versados na técnica por uma va- riedade de métodos, incluindo cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) (“Preparative LC-MS Purification: Improved Compound Specific Me- thod Optimization” Karl F. Blom, Brian Glass, Richard Sparks, Andrew P. Combs Jy. Combi. Chem. 2004, 6 (6), 874-883, que é incorporado por refe- rência na sua totalidade neste documento) e cromatografia de sílica de fase normal.

[00144] Os compostos descritos neste documento podem modular a ati- vidade de uma ou mais das várias quinases incluindo, por exemplo, fosfoi- nositídeo 3-quinases (PI3Ks). O termo "modular" se refere a uma capacida- de de aumentar ou diminuir a atividade de um ou mais membros da família

PI3K. Consequentemente, os compostos descritos neste documento podem ser usados em métodos de modulação de um PI3K por contato do PI3K com qualquer um ou mais dos compostos ou composições descritas nestes documentos. Em algumas modalidades, os compostos da presente inven- ção podem atuar como inibidores de um ou mais PI3Ks. Em outras modali- dades, os compostos descritos nestes documentos podem ser usados para modular a atividade de um PI3SK em um indivíduo com necessidade de mo- dulação do receptor pela administração de uma quantidade moduladora de um composto descrito neste documento, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, a modulação é inibição. Dado que o crescimento e a sobrevivência das células cancerosas são afe- tados por múltiplas vias de sinalização, a presente invenção é útil para o tratamento de estados de doença caracterizados por mutantes de quinase resistentes a drogas. Além disso, diferentes inibidores de quinase, exibindo diferentes preferências nas quinases das quais eles modulam as atividades, podem ser usados em combinação. Esta abordagem pode se provar alta- mente eficiente no tratamento de estados de doença, visando múltiplas vias de sinalização, reduzir a probabilidade de surgimento de resistência às dro- gas em uma célula e reduzir a toxicidade dos tratamentos para doenças.

[00145] Os inibidores de PISKô descritos neste documento podem ser seletivos. Por "seletivo" entende-se que o composto se liga a ou inibe qui- nase com uma maior afinidade ou potência, respectivamente, em compara- ção a pelo menos uma outra quinase. Em algumas modalidades, os com- postos descritos neste documento são inibidores seletivos de PISKô sobre PI3Ky, PI3Ka e/ou PISKB. Em algumas modalidades, os compostos descri- tos neste documento são inibidores seletivos de PI3Kô (por exemplo, sobre PI3Ka, PISKB e PISKy). Em algumas modalidades, a seletividade pode ser pelo menos cerca de 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, pelo menos cerca de 20 vezes, pelo menos cerca de 50 vezes, pelo menos cerca de 100 vezes, pe- lo menos cerca de 200 vezes, pelo menos cerca de 500 vezes ou pelo me-

nos cerca de 1000 vezes. A seletividade pode ser medida por métodos de rotina na técnica. Em algumas modalidades, a seletividade pode ser testada na concentração Km ATP de cada enzima. Em algumas modalidades, a se- letividade dos compostos descritos neste documento pode ser determinada por ensaios celulares associados à atividade particular da PISK quinase.

[00146] As quinases às quais os presentes compostos se ligam e/ou modulam (por exemplo, inibem) incluem qualquer membro da família PI3K. Em algumas modalidades, o PISK é PlI3Ka, PISKB, PI3Ky, ou PI3K5. Em algumas modalidades, o PI3K é Pl3Kyou PI3Kô. Em algumas modalidades, o PI3K é PISKy. Em algumas modalidades, o PISK é PI3Kô. Em algumas modalidades, a PISK inclui uma mutação. Uma mutação pode ser uma substituição de um aminoácido por outro ou uma deleção de um ou mais aminoácidos. Em tais modalidades, a mutação pode estar presente no do- mínio quinase da PISK.

[00147] Em algumas modalidades dos presentes métodos, mais de um composto aqui descrito é usado para inibir a atividade de uma quinase (por exemplo, PI3Ky ou PI3Kô).

[00148] Em algumas modalidades dos presentes métodos, mais de um composto descrito neste documento é usado para inibir mais de uma qui- nase, como pelo menos duas quinases (por exemplo, PI3Ky e PI3Kô).

[00149] Em algumas modalidades dos presentes métodos, um ou mais dos compostos são usados em combinação com outro inibidor de quinase para inibir a atividade de uma quinase (por exemplo, PI3Ky ou PI3Kô).

[00150] Em algumas modalidades dos presentes métodos, um ou mais dos compostos são usados em combinação com outro inibidor de quinase para inibir as atividades de mais de uma quinase (por exemplo, PI3Ky ou PI3Kô5), como pelo menos duas quinases.

[00151] Outro aspecto da presente invenção refere-se a métodos de tra- tamento de uma doença ou distúrbio associado a quinase (tal como PI3SKô) em um indivíduo (por exemplo, paciente) pela administração ao indivíduo em necessidade de tal tratamento de uma quantidade terapeuticamente efi- caz ou dose de um ou mais compostos da presente invenção ou uma com- posição farmacêutica dos mesmos. Uma doença associada a PISK podem incluir qualquer doença, distúrbio ou condição direta ou indiretamente liga- dos à expressão ou à atividade de PI3K, incluindo superexpressão e/ou os níveis de atividade anormais. Em algumas modalidades, a doença pode ser ligada a Akt (proteína quinase B), alvo de mamífero de rapamicina (mMTOR) ou quinase 1 dependente de fosfoinositídeo (PDK1). Em algumas modali- dades, a doença relacionada a MTOR pode ser inflamação, aterosclerose, psoríase, restenose, hipertrofia prostática benigna, distúrbios ósseos, pan- creatite, angiogênese, retinopatia diabética, aterosclerose, artrite, distúrbios imunológicos, doença renal ou câncer. Uma doença associada a PI3K tam- bém pode incluir qualquer doença, distúrbio ou condição que pode ser pre- venida, melhorada ou curada pela modulação da atividade de PISK. Em al- gumas modalidades, a doença é caracterizada pela atividade anormal de PI3K. Em algumas modalidades, a doença é caracterizada por PI3K mutan- te. Em tais modalidades, a mutação pode estar presente no domínio qui- nase da PISK.

[00152] Exemplos de doenças associadas a PISK incluem doenças de base imunológica envolvendo o sistema incluindo, por exemplo, artrite reu- matoide, alergia, asma, glomerulonefrite, lúpus ou inflamação relacionada a qualquer um dos acima.

[00153] Outros exemplos de doenças associadas a PI3SK incluem cânce- res, como câncer de mama, próstata, cólon, endometrial, cérebro, bexiga, pele, útero, ovário, pulmão, pancreático, renal, gástrico ou hematológico.

[00154] Em algumas modalidades, o câncer hematológico é leucemia mieloblástica aguda (AML) ou leucemia mieloide crônica (CML), ou linfoma de células B. Em algumas modalidades, o linfoma de células B é um linfo- ma difuso de grandes células B.

[00155] Outros exemplos de doenças associadas a PI3K incluem doen-

ças pulmonares, como lesão pulmonar aguda (ALI) e síndrome da dificul- dade respiratória do adulto (ARDS).

[00156] Outros exemplos de doenças associadas a PI3K incluem osteo- artrite, restenose, aterosclerose, distúrbios ósseos, artrite, retinopatia diabé- tica, psoríase, hipertrofia prostática benigna, inflamação, angiogênese, pan- creatite, doença renal, doença inflamatória intestinal, miastenia gravis, es- clerose múltipla ou síndrome de Sjógren, e similar.

[00157] Outros exemplos de doenças associadas a PI3K incluem anemia hemolítica autoimune, policitemia vera e pênfigo.

[00158] Em algumas modalidades, a doença é linfoma não Hodgkin (LNH). Em algumas modalidades, o linfoma não Hodgkin (LNH) é LNH reci- divo ou refratário ou LNH folicular recorrente.

[00159] Em algumas modalidades, a doença é um linfoma agressivo (por exemplo, tipo células B do centro germinativo (BCG) ou tipo células B ati- vadas (CBA)).

[00160] Em algumas modalidades, a doença é selecionada de linfoma difuso de grandes células B, leucemia linfocítica crônica (LLC), linfoma não- Hodgkin, leucemia de células pilosas, linfoma de células de manto, linfoma linfocítico pequeno, linfoma folicular, linfoma linfoplasmocítico, linfoma de zona marginal extranodal, linfoma de Hodgkin, linfoma de Burkitt, macro- globulinemia de Waldenstrom, leucemia prolinfocítica, leucemia linfoblástica aguda, mielofibrose, linfoma de tecido linfático associado à mucosa (MALT), mediastinal (tímico), linfoma de células B grandes, linfoma de células B grandes linfomatoide, linfoma marginal linfomatoide, zona de linfoma granu- lomatoso, linfoma intravascular de grandes células B, leucemia de células plasmáticas, plasmocitoma extramedular, mieloma latente (também conhe- cido como mieloma assintomático), gamopatia monoclonal de significado indeterminado (MGUS), linfoma difuso de grandes células B tipo células B ativadas (CBA) (LDGCB-CBA) e linfoma difuso de grandes células B tipo células B do centro germinativo (BCG) (LDGCB-BCG).

[00161] Em algumas modalidades, a doença é mielofibrose. Em algumas modalidades, a mielofibrose é selecionada de mielofibrose de trombocite- mia pós-essencial (PET-MF), mielofibrose primária (PMF) e mielofibrose pós-policitemia vera (PPV-MF). Em algumas modalidades, a mielofibrose é mielofibrose de trombocitemia pós-essencial (PET-MF). Em algumas moda- lidades, a mielofibrose é mielofibrose primária (PMF). Em algumas modali- dades, a mielofibrose é mielofibrose pós-policitemia vera (PPV-MF).

[00162] Em algumas modalidades, a doença é leucemia mieloide aguda. Em algumas modalidades, a doença é linfoma de Burkitt. Em algumas mo- dalidades, a doença é linfoma difuso de grandes células B tipo células B ativadas (CBA) (LDGCB-CBA) ou linfoma difuso de grandes células B tipo células B do centro germinativo (BCG) (LDGCB-BCG).

[00163] Em algumas modalidades, a doença é selecionada de leucemia linfocítica crônica (LLC), linfoma difuso de grandes células B (LDGCB), lin- foma folicular (LF), linfoma de Hodgkin (LH), linfoma de células do manto (LCM), linfoma de zona marginal (LZM), e macroglobulinemia de Waldens- trôóôm (MW).

[00164] Em algumas modalidades, o linfoma de zona marginal (LZM) é selecionado de LZM extranodal, LZM nodal, LZM esplênico e subtipo LZM desconhecido.

[00165] Em algumas modalidades, o linfoma de Hodgkin (LH) é selecio- nado de linfoma de Hodgkin clássico (LH) e LH linfocítico nodular predomi- nante.

[00166] Em algumas modalidades, o linfoma difuso de grandes células B é selecionado a partir de linfoma difuso de grandes células B tipo células B ativadas (CBA) (LDGCB-CBA) e linfoma difuso de grandes células B tipo células B do centro germinativo (BCG) (LDGCB-BCG).

[00167] Em algumas modalidades, a doença é selecionada de anemia hemolítica autoimune, policitemia vera e pênfigo.

[00168] Em algumas modalidades, o presente pedido fornece ainda um método de tratamento de uma doença em um paciente, em que a referida doença é selecionada dentre leucemia linfocítica crônica (LLC), linfoma di- fuso de grandes células B (LDGCB), linfoma folicular (LF), linfoma de Hod- gkin (LH), linfoma de células do manto (LCM), linfoma da zona marginal (LZM) e macroglobulinemia de Waldenstróm (MW), o método que compre- ende: i) administrar ao paciente sal de ácido clorídrico de (R)-4-(3- ((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6- fluorofenil)pirrolidin-2-0na em uma primeira dosagem que é de cerca de 20 mg/dia a cerca de 50 mg/dia por um primeiro período que é de cerca de 8 semanas a cerca 9 semanas; e ii) administrar ao paciente uma segunda dosagem de sal de ácido clorídrico de (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimi- din-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-0na, que é cerca de 2,5 mg/dia ou menos por um segundo período que ocorre após o primeiro perí- odo.

[00169] Em algumas modalidades, o presente pedido fornece ainda um método de tratamento de uma doença em um paciente, em que a referida doença é selecionada dentre leucemia linfocítica crônica (LLC), linfoma di- fuso de grandes células B (LDGCB), linfoma folicular (LF), linfoma de Hod- gkin (LH), linfoma de células do manto (LCM), linfoma da zona marginal (LZM) e macroglobulinemia de Waldenstrôm (MW), o método que compre- ende: i) administrar ao paciente sal de ácido clorídrico de (R)-4-(3- ((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6- fluorofenil)pirrolidin-2-0na em uma primeira dosagem que é de cerca de 20 mg/dia a cerca de 50 mg/dia por um primeiro período que é de cerca de 8 semanas a cerca 9 semanas; e ii) administrar ao paciente uma segunda dosagem de sal de ácido clorídrico de (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimi-

din-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-0na, que é cerca de 20 mg/semana a cerca de 50 mg/semana por um segundo período que ocorre após o primeiro período.

[00170] Em algumas modalidades, o presente pedido fornece ainda um método de tratamento de uma doença em um paciente, em que a referida doença é selecionada dentre leucemia linfocítica crônica (LLC), linfoma di- fuso de grandes células B (LDGCB), linfoma folicular (LF), linfoma de Hod- gkin (LH), linfoma de células do manto (LCM), linfoma da zona marginal (LZM) e macroglobulinemia de Waldenstróm (MW), o método que compre- ende: i) administrar ao paciente sal de ácido clorídrico de (R)-4-(3- ((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6- fluorofenil)pirrolidin-2-0na em uma primeira dosagem que é de cerca de 20 mg/dia por um primeiro período que é de cerca de 8 semanas; e ii) administrar ao paciente uma segunda dosagem de sal de ácido clorídrico de (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimi- din-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-0na, que é cerca de 2,5 mg/dia por um segundo período que ocorre após o primeiro período.

[00171] Em algumas modalidades, o presente pedido fornece ainda um método de tratamento de uma doença em um paciente, em que a referida doença é selecionada dentre leucemia linfocítica crônica (LLC), linfoma di- fuso de grandes células B (LDGCB), linfoma folicular (LF), linfoma de Hod- gkin (LH), linfoma de células do manto (LCM), linfoma da zona marginal (LZM) e macroglobulinemia de Waldenstrôm (MW), o método que compre- ende: i) administrar ao paciente sal de ácido clorídrico de (R)-4-(3- ((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6- fluorofenil)pirrolidin-2-0na em uma primeira dosagem que é de cerca de 20 mg/dia por um primeiro período que é de cerca de 8 semanas; e ii) administrar ao paciente uma segunda dosagem de sal de ácido clorídrico de (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimi- din-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-0na, que é cerca de 20 mg/semana por um segundo período que ocorre após o primeiro período.

[00172] Conforme usado neste documento, o termo "indivíduo" ou "paci- ente", usado de intercambiável, refere-se a qualquer animal, incluindo ma- miíferos, de preferência camundongos, ratos, outros roedores, coelhos, cães, gatos, suínos, gado, ovelhas, cavalos ou primatas, e mais preferenci- almente seres humanos.

[00173] Conforme usado no presente documento, a expressão “quanti- dade terapeuticamente eficaz” se refere à quantidade de composto ativo ou agente farmacêutico que provoca a resposta biológica ou medicinal que é está sendo procurada num tecido, sistema, animal, indivíduo ou ser huma- no por um pesquisador, veterinário, médico ou outro clínico.

[00174] Conforme usado no presente documento, o termo “tratar” ou “tra- tamento” se refere a um ou mais de (1) evitar a doença; por exemplo, evitar uma doença, condição ou distúrbio num indivíduo que pode ser predisposto à doença, condição ou distúrbio, mas ainda não experienciou ou exibiu a patologia ou sintomatologia da doença; (2) inibir a doença; por exemplo, inibir uma doença, condição ou distúrbio num indivíduo que está experien- ciando a patologia ou sintomatologia da doença, condição ou distúrbio (isto é, impedindo o desenvolvimento adicional da patologia e/ou sintomatolo- gia); e (3) melhorar a doença; por exemplo, melhorar uma doença, condição ou distúrbio num indivíduo que está experienciando ou exibindo a patologia ou sintomatologia da doença, condição ou distúrbio (isto é, revertendo a patologia e/ou sintomatologia), tal como diminuindo a severidade da doen- ça. Em algumas modalidades, o termo "tratar" ou "tratamento" refere-se a inibir ou melhorar a doença.

[00175] Tal como utilizado neste documento, "QD" significa uma dosa- gem administrada ao sujeito uma vez por dia. “QW” significa uma dosagem administrada ao sujeito uma vez por semana. “Q2W” significa uma dosa-

gem administrada ao sujeito uma vez, a cada duas semanas. “Q3W” signifi- ca uma dosagem administrada ao sujeito uma vez, a cada três semanas. “Q4W” significa uma dosagem administrada ao sujeito uma vez, a cada quatro semanas.

[00176] Tal como utilizado neste documento, "cerca de" quando se refe- re a um valor mensurável, tal como uma quantidade, uma dosagem, uma duração temporal e similares, destina-se a abranger variações de + 10%. Em certas modalidades, "cerca de" pode incluir variações de + 5%, + 1% ou + 0,1% do valor especificado e quaisquer variações entre eles, visto que tais variações são apropriadas para executar os métodos descritos. Terapias de Combinação |. Terapias de checkpoint imunológico

[00177] Em algumas modalidades, os inibidores de PI3SK fornecidos nes- te documento podem ser usados em combinação com um ou mais inibido- res de checkpoint imunológico para o tratamento de câncer, conforme des- crito neste documento. Em uma modalidade, a combinação com um ou mais inibidores do ponto de verificação imunológico, como descrito neste documento, pode ser usada para o tratamento de uma malignidade de célu- las B descrita neste documento. Compostos da presente invenção podem ser utilizados em combinação com um ou mais inibidores de checkpoint imunológico. Exemplos de inibidores de checkpoint imunológico incluem inibidores contra moléculas de checkpoint imunológico, tais como CD?20, CD28, CD40, CD122, CD96, CD73, CD47, GITR, CSFIR, JAK, PI3SKô, PI3Ky, TAM, arginase, HPK1, CD137 (também conhecido como 4-1BB), ICOS, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, LAG3, TIM3, VISTA, TIGIT, PD-1, PD-L1 e PD-L2. Em algumas modalidades, a molécula de checkpoint imu- nológico é uma molécula estimulante de checkpoint selecionada dentre CD27, CD28, CD40, ICOS, OX40, GITR e CD137. Em algumas modalida- des, a molécula de checkpoint imunológico é uma molécula inibidora de checkpoint selecionada dentre A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-A4, IDO,

KIR, LAG3, PD-1, TIM3, TIGIT e VISTA. Em algumas modalidades, os compostos da invenção fornecidos neste documento podem ser usados em combinação com um ou mais agentes selecionados dentre inibidores de KIR, inibidores de TIGIT, inibidores de LAIR1, inibidores de CD160, inibido- res de 2B4 e inibidores de TGFR beta.

[00178] Em algumas modalidades, os inibidores de PI3SK fornecidos nes- te documento podem ser usados em combinação com um ou mais agonis- tas de moléculas de checkpoint imunológico, por exemplo, OX40, CD27, OXA40, GITR e CD137 (também conhecido como 4-1BB).

[00179] Em algumas modalidades, o inibidor de uma molécula de check- point imunológico é anticorpo anti-PD1, anticorpo anti-PD-L1 ou anticorpo anti-CTLA-4.

[00180] Em algumas modalidades, o inibidor de uma molécula check- point imunológico é um inibidor de PD-1, por exemplo, um anticorpo mono- clonal anti-PD-1. Em algumas modalidades, o anticorpo monoclonal anti- PD-1 é nivolumabe, pembrolizumabe (também conhecido como MK-3475), durvalumabe (Imfinzi&O), pidilizumabe, SHR-1210, PDROO01, MGAO012, PDRO01, AB122 ou AMP-224. Em algumas modalidades, o anticorpo mo- noclonal anti-PD-1 é nivolumabe ou pembrolizumabe. Em algumas modali- dades, o anticorpo anti-PD1 é pembrolizumabe. Em algumas modalidades, o anticorpo monoclonal anti-PD-1 é MGA012. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD1 é SHR-1210. Outros agentes anticancerígenos incluem agentes terapêuticos de anticorpos como 4-1BB (por exemplo, urelumabe, utomilumabe.

[00181] Em algumas modalidades, o inibidor de uma molécula de check- point imunológico é um inibidor de PD-L1, por exemplo, um anticorpo mo- noclonal anti-PD-L1. Em algumas modalidades, o anticorpo monoclonal an- ti-PD-L1 é BMS-935559, MEDI4736, MPDL3280A (também conhecido co- mo RG7446) ou MSBOO010718C. Em algumas modalidades, o anticorpo monoclonal anti-PD-L1 é MPDL3280A ou MEDI4736.

[00182] Em algumas modalidades, o inibidor de uma molécula de check- point imunológico é um inibidor de PD-1 e PD-L1, por exemplo, um anticor- po monoclonal anti-PD-1/PD-L1. Em algumas modalidades, o anti-PD-1/PD- L1 é LOCMA-136.

[00183] Em algumas modalidades, o inibidor é LCMA-145.

[00184] Em algumas modalidades, o inibidor de uma molécula de check- point imunológico é um inibidor de CTLA-A4, por exemplo, um anticorpo anti- CTLA-4. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CTLA-4 é ipilimumabe, tremelimumabe, AGEN1884 ou CP-675.206.

[00185] Em algumas modalidades, o inibidor de uma molécula de check- point imunológico é um inibidor de LAG3, por exemplo, um anticorpo anti- LAG3. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG3 é BMS-986016, LAG525 ou INCAGN2385.

[00186] Em algumas modalidades, o inibidor de uma molécula de check- point imunológico é um inibidor de TIM3, por exemplo, um anticorpo anti- TIM3. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM3 é INCAGN2390, MBGA453 ou TSR-022.

[00187] Em algumas modalidades, o inibidor de uma molécula de check- point imunológico é um inibidor de GITR, por exemplo, um anticorpo anti- GITR. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-GITR é TRX518, MK- 4166, INCAGN1876, MK-1248, AMG228, BMS-986156, GWN323 ou ME- DI 1873.

[00188] Em algumas modalidades, o inibidor de uma molécula de check- point imunológico é um agonista de OX40, por exemplo, um anticorpo agonis- ta de OX40 ou proteína de fusão OX40L. Em algumas modalidades, o anti- corpo anti-OX40 é MEDIO562, MOXR-0916, PF-04518600, GSK3174998 ou BMS-986178. Em algumas modalidades, a proteína de fusão OX40L é ME- DI6383.

[00189] Em algumas modalidades, o inibidor de uma molécula de check- point imunológico é um inibidor de CD20, por exemplo, um anticorpo anti-

CD20. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD20 é obinutuzumabe ou rituximabe.

[00190] Os compostos da presente invenção podem ser utilizados em combinação com anticorpos biespecíficos. Em algumas modalidades, um dos domínios do anticorpo biespecífico tem como alvo os receptores PD-1, PD-L1, CTLA-4, GITR, OX40, TIM3, LAG3, CD137, ICOS, CD3 ou TGFB.

[00191] Em algumas modalidades, os compostos da invenção podem ser usados em combinação com um ou mais inibidores de enzimas metabóli- cas. Em algumas modalidades, o inibidor de enzimas metabólicas é um ini- bidor de IDO1, TDO ou arginase. Exemplos de inibidores de IDO1 incluem epacadostat, NLG919, BMS-986205, PF-06840003, IOM2983, RG-70099 e LY338196.

[00192] Conforme fornecido, os compostos, inibidores, agentes, etc. adi- cionais podem ser combinados com o presente composto em uma forma de dosagem única ou contínua, ou podem ser administrados simultaneamente ou sequencialmente como formas de dosagem separadas. ll. Terapias para o câncer

[00193] O crescimento e a sobrevivência das células cancerosas podem ser afetados por várias vias de sinalização. Assim, é útil combinar diferen- tes inibidores de enzima/proteína/receptor, exibindo diferentes preferências nos alvos dos quais eles modulam as atividades, para tratar tais condições. O direcionamento de mais do que uma via de sinalização (ou mais do que uma molécula biológica envolvida em uma dada via de sinalização) pode reduzir a probabilidade de resistência aos medicamentos provenientes de uma população de células e/ou reduzir a toxicidade do tratamento.

[00194] Os compostos da presente invenção podem ser utilizados em combinação com um ou mais outros inibidores de enzima/proteína/receptor ou uma ou mais terapias para o tratamento de doenças, como câncer. Exemplos de doenças e indicações tratáveis com terapias de combinação incluem as descritas neste documento.

[00195] Um ou mais agentes farmacêuticos ou terapêuticos adicionais, tais como, por exemplo, quimioterápicos, agentes imuno-oncológicos, inibi- dores de enzimas metabólicas, inibidores de receptores de quimiocinas e inibidores de fosfatase, bem como terapias direcionadas, tais como Bcr-Abl, FIt-3, EGFR, HER2, JAK, c-MET, VEGFR, PDGFR, c-Kit, IGF-1R, RAF e inibidores da quinase FAK. Os um ou mais agentes farmacêuticos adicio- nais podem ser administrados a um paciente simultaneamente ou sequen- cialmente.

[00196] Os anticorpos exemplificativos para utilização em terapia de combinação incluem, mas não estão limitados a Trastuzumabe (por exem- plo, anti-H[ER2), Ranibizumabe (por exemplo, anti-VEGF-A), Bevacizumabe (nome comercial: Avastin, por exemplo, anti-VEGF, panitumumabe (por exemplo, anti-EGFR), cetuximabe (por exemplo, anti-EGFR), Rituxan (anti- CD?20) e anticorpos direcionados a c-MET.

[00197] Um ou mais dos seguintes agentes podem ser usados em com- binação com os compostos da presente invenção e são apresentados como uma lista não limitativa: um agente citostático, taxotere, taxol, camptostar, epotilonas, 5-fluorouracil, SCH 66336, R115777, L778,123, BMS 214662, IRESSATY(gefitinibe), TARCEVAT'Y (erlotinibe), anticorpos para EGFR, GLEEVECTY (mesilato de imatinibe), íntron, ara-C, adriamicina, citoxano, clor- metina, trietilenemelamina, trietilenotiofosforamina, bussulfano, 6-mercapto- purina, 6-tioguanina, fosfato de fludarabina, ELOXATIN'TY (oxaliplatina), vin- desina, mitramicina, desoxicoformicina, L-asparaginase, 17 alfa-etinilestra- diol, dietilestilbestrol, testosterona, prednisona, fluoximesterona, metilpred- nisolona, metiltestosterona, prednisolona, triamcinolona, clorotrianiseno, hi- droxiprogesterona, aminoglutetimida, medroxiprogesteronaacetato, leuproli- da, flutamida, goserelina, hidroxiureia, amsacrina, navelbene, reloxafina, droloxafina, hexametilmelamina, avastina, HERCEPTIN'TY (trastuzumabe), BEXXARTY (tositumomabe), VELCADETY (bortezomibe), ZEVALINTY (ibri- tumomab tiuxetan), TRISENOXTY (trióxido de arsênio), XELODA'Y (capeci-

tabina), vinorelbina, porfímero, ERBITUXTY (cetuximab), afidicolon, rituxan, Sml1, triapina, didox, trimidox, amidox, 3-AP e MDL-101, 731.

[00198] Os compostos da presente invenção podem ainda ser utilizados em combinação com outros métodos de tratamento de cânceres, por exemplo, por quimioterapia, terapia de irradiação, terapia direcionada a tu- mores, terapia adjuvante, imunoterapia ou cirurgia. Exemplos de imunote- rapia incluem tratamento com citocinas (por exemplo, interferons, GM-CSF, G-CSF, I1L-2), imunoterapia com CRS-207, vacina contra câncer, anticorpo monoclonal, transferência de células T adotivas, agonistas de receptor do tipo Toll, agonistas de STING, viroterapia oncolítica e moléculas pequenas imunomoduladoras, incluindo a talidomida ou Inibidor de JAK1/2 e simila- res. Os compostos podem ser administrados em combinação com um ou mais fármacos anticancerígenos, como quimioterápicos. Quimioterápicos exemplificativos incluem qualquer um dentre: abarelix, aldesleucina, alem- tuzumabe, alitretinoína, alopurinol, altretamina, anastrozol, trióxido de arsê- nio, asparaginase, azacitidina, bevacizumabe, bexaroteno, baricitinibe, ble- omicina, bortezombi, bortezomibe, busulfano intravenoso, busulfano oral, calusterona, capecitabina, carboplatina, carmustina, cetuximabe, clorambu- cil, cisplatina, cladribina, clofarabina, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazi- na, dactinomicina, dalteparina sódica, dasatinibe, daunorrubicina, decitabi- na, denileuquina, denileuquina diftitox, dexrazoxano, docetaxel, doxorrubi- cina, propionato de dromostanolona, eculizumabe, epirrubicina, erlotinibe, estramustina, fosfato de etoposídeo, etoposídeo, exemestano, citrato de fentanil, filgrastim, floxuridina, fludarabina, fluorouracil, fulvestrant, gefitini- be, gemcitabina, gentuzumabe ozogamicina, acetato de goserelina, acetato de histrelina, ibritumomabe tiuxetana, idarubicina, ifosfamida, mesilato de imatinibe, interferon alfa 2a, irinotecano, ditosilato de lapatinibe, lenalidomi- da, letrozol, leucovorina, acetato de leuprolida, levamisol, lomustina, meclo- retamina, acetato de megestrol, melfalano, mercaptopurina, metotrexato, metoxsalen, mitomicina C, mitotano, mitoxantrona, fenpropionato de nan-

drolona, nelarabina, nofetumomabe, olaparibe, oxaliplatina, paclitaxel, pa- midronato, panitumumabe, pegaspargase, pegfilgrastim, pemetrexede dis- sódico, pentostatina, pipobromana, plicamicina, procarbazina, quinacrina, rasburicase, rituximabe, ruxolitinibe, rucaparibe, sorafenibe, estreptozocina, sunitinibe, maleato de sunitinibe, tamoxifeno, temozolomida, teniposida, tes- tolactona, talidomida, tioguanina, tiotepa, topotecano, toremifeno, tositu- momabe, trastuzumabe, tretinoína, uracil mustarda, valrubicina, vinblastina, vincristina, vinorelbina, vorinostat, niraparibe, veliparibe, talazoparibe, e zo- ledronato.

[00199] “Exemplos adicionais de quimioterápicos incluem inibidores de proteossoma (por exemplo, bortezomibe), talidomida, revlimid e agentes que danificam o DNA, tais como melfalano, doxorrubicina, ciclofosfamida, vincristina, etoposido, carmustina e similares.

[00200] Inibidores de Bcr-Abl de exemplo incluem os compostos e sais farmaceuticamente aceitáveis.

[00201] Os exemplos de inibidores de FIt-3 adequados incluem compos- tos e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

[00202] — Exemplos de inibidores de RAF adequados incluem compostos e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

[00203] Os exemplos de inibidores de FAK adequados incluem compos- tos e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

[00204] Em algumas modalidades, os compostos da invenção podem ser utilizados em combinação com um ou mais de outros inibidores de quinase, incluindo imatinibe, particularmente para o tratamento de pacientes resis- tentes a imatinibe ou outros inibidores de quinase.

[00205] Os compostos podem ser usados em combinação com vacinas tumorais e tratamento de células T CAR (receptor de antígeno quimérico) como um reforço para a ativação de células T. Em algumas modalidades, as vacinas contra tumores incluem as proteínas de vírus envolvidos em cânceres humanos, como o Vírus do Papiloma Humano (HPV), Vírus da

Hepatite (HBV e HCV) e Vírus do Sarcoma de Herpes de Kaposi (KHSV). Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção podem ser utilizados em combinação com antígeno específico de tumor, tal como pro- teínas de choque térmico isoladas do próprio tecido tumoral. Em algumas modalidades, os compostos podem ser combinados com a imunização de células dendríticas para ativar respostas antitumorais potentes.

[00206] Os métodos para a administração segura e eficaz da maioria desses agentes quimioterápicos são conhecidos por aqueles versados na técnica. Além disso, sua administração é descrita na literatura padrão. Por exemplo, a administração de muitos dos agentes quimioterápicos é descrita em "Physicians 'Desk Reference" (PDR, por exemplo, edição de 1996, Me- dical Economics Company, Montvale, NJ), cuja invenção é incorporada nes- te documento por referência como se estabelecida adiante em sua totalida- de.

[00207] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é sele- cionado a partir de um inibidor de JAK (por exemplo, um inibidor seletivo de JAK1), um inibidor de quinase seletivo pan-PIM, um inibidor de regulador epigenético e um agente imunoterapêutico.

[00208] Em algumas modalidades, o inibidor do regulador epigenético é selecionado a partir de um inibidor de domínio bromo- e extra-terminal e um inibidor dehistona desmetilase 1A específico para lisina.

[00209] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um agente imunoterapêutico.

[00210] Em algumas modalidades, o agente imunoterapêutico é R-ICE.

[00211] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um inibidor de JAK.

[00212] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK é seletivo para JAK1 e JAK2 sobre JAK3 e TYK2. Em algumas modalidades, o inibidor de JAK é seletivo para JAK1 sobre JAK2, JAK3, e TYK2. Por exemplo, o inibi- dor de JAK pode inibir preferencialmente JAK1 sobre um ou mais de JAK?2,

JAK3 e TYK2. Em algumas modalidades, o inibidor de JAK inibe JAK1 pre- ferencialmente em vez de JAK2 (por exemplo, tem uma razão JAKI/JAK2 IC5so> 1). Em algumas modalidades, o inibidor de JAK é 10 vezes mais sele- tivo para JAK1 em vez de JAK2. Em algumas modalidades, o inibidor de JAK é cerca de 3 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 10 vezes, cerca de 15 vezes ou cerca de 20 vezes mais seletivo para JAK1 sobre JAK2 conforme calculado medindo ICso em 1 mM ATP (ver por exemplo, Pedido de Patente US Nº: 14/680.659, depositado em 7 de abril de 2015, cuja invenção é in- corporada neste documento por referência em sua totalidade).

[00213] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um inibidor de JAK1I/JAK2. Em algumas modalidades, o agente terapêutico adi- cional é ruxolitinibe (por exemplo, fosfato de ruxolitinibe).

[00214] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um inibidor de JAK selecionado do grupo fornecido na tabela a seguir. Os com- postos fornecidos na tabela são inibidores seletivos de JAK1 (seletivos de JAK2, JAK3 e TYK2). Os ICs5os obtidos pelo método do Ensaio A descrito no Pedido de Patente US No .: 14/680.659 a 1 mM ATP são mostrados na Ta- bela A.

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[00215] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK é (1-(1-[3-flu- oro-2-(trifluorometil)isonicotinoil]piperidin-4-i1)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]piri- midin-4-il)-1H-pirazol-1-ilJazetidin-3-il)acetonitrila (ou seja, itacitinib), ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

[00216] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK é sal de ácido (1-(1-[3-fluoro-2-(trifluorometil )isonicotinoil]piperidin-4-i1)-3-[4-(7H-pirro- lo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-ilJazetidin-3-il)acetonitrila adípico.

[00217] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK é 4-(3-(ciano- metil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-ilJazetidin-1-il)- 2,5-difluoro-N- [(18)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]lbenzamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00218] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK é selecionado de (R)-3-[1-(6-cloropiridin-2-il)pirrolidin-3-i1]-3-[4-(7 H-pirrolo[2,3-d]pirimi- din-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila, (R)-3-(1-[1,3]oxazolo[5,4-b]piridin -2-ilpirrolidin-3-i1)-3-[4-(7 H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il] propanonitrila, — (R)-4-[(4-(3-ciano-2-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)- 1H-pirazol-1-il] propil)piperazin-1-il)carbonil]-3-fluorobenzonitrila, (R)-4- [(4-(3-ciano-2- [3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirrol-1-il]propil) piperazin-1-il) carbonil]-3-fluorobenzonitrila, ou (R)-4-(4-(3-[(dimetilami- no)metil]-5-fluorofenoxitpiperidin-1-i1)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4- il)-1H-pirazol-1-il]butanonitrila, (S)-3-[1-(6-cloropiridin-2-il )pirrolidin-3-il]- 3-[4- (7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-i1)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila, (S)-3- (1-[1,3]oxazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirrolidin-3-i1)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d] pi- rimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila, — (S)-4-[(4-(3-ciano-2-[4-(7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil)piperazin-1-il)carbonil] - 3-fluorobenzonitrila, (S)-4-[(4-[3-ciano-2-[3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4- il)-1H-pirrol-1-il]propil)piperazin-1-il |carbonil]-3-fluorobenzonitrila, (S) - 4-(4-(3-[(dimetilamino)metil]-5-fluorofenoxilpiperidin-1-i1)-3-[4-(7H-pirro- lo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butanonitrila; e sais farmaceutica- mente aceitáveis de qualquer dos acima mencionados.

[00219] Em algumas modalidades, os compostos da Tabela A são preparados pelos processos de síntese descritos na Publicação de Pa- tente US Nº 2010/0298334, depositada em 21 de maio de 2010, Publi- cação de Patente US Nº 2011/0059951, depositada em 31 de agosto de 2010, Publicação de Patente US Nº 2011/0224190, depositada em 9 de março de 2011, Publicação de Patente US Nº 2012/0149681, de- positada em 18 de novembro de 2011, Publicação de Patente US Nº 2012/0149682, depositada em 18 de novembro de 2011, Publicação de Patente US 2013/0018034, depositada em 19 de junho de 2012, Publicação de Patente US Nº 2013/0045963, depositada em 17 de agosto de 2012 e Publicação de Patente US Nº 2014/0005166, deposi- tada em 17 de maio de 2013, cada uma das quais é incorporada neste documento por referência na sua totalidade.

[00220] Em algumas modalidades, o inibidor JAK é selecionado a partir dos compostos da Publicação de Patente US. Nº 2010/0298334, depositada em 21 de maio de 2010, Publicação de Patente US Nº 2011/0059951, depositada em 31 de agosto de 2010, Publicação de Patente US Nº 2011/0224190, depositada em 9 de março de 2011, Publicação de Patente US Nº 2012/0149681, depositada em 18 de no- vembro de 2011, Publicação de Patente US Nº 2012/0149682, deposi- tada em 18 de novembro de 2011, Publicação de Patente US 2013/ 0018034, depositada em 19 de junho de 2012, Publicação de Patente US Nº 2013/0045963, depositada em 17 de agosto de 2012 e Publica- ção de Patente US Nº 2014/0005166, depositada em 17 de maio de 2013, cada uma das quais é incorporada neste documento por refe- rência na sua totalidade.

[00221] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3SKô e o agente terapêutico adicional são administrados simultaneamente.

[00222] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kô e o agente terapêutico adicional são administrados sequencialmente.

Formulações Farmacêuticas

[00223] “Quando utilizados como fármacos, os compostos usados nos métodos da invenção podem ser administrados na forma de com- posições farmacêuticas. Essas composições podem ser preparadas de um modo bem conhecido na técnica farmacêutica e podem ser admi- nistradas por uma variedade de vias, dependendo de se o tratamento local ou sistêmico desejado está sobre a área a ser tratada. A adminis- tração pode ser tópica (incluindo transdérmica, epidérmica, oftálmica e às membranas mucosas, incluindo liberação intranasal, vaginal e retal), pulmonar (por exemplo, por inalação ou insuflação de pós ou aerossóis, incluindo por nebulizador; intratraqueal ou intranasal), oral, ou parentéri- ca. Administração parentérica inclui administração intravenosa, intra- arterial, subcutânea, intraperitoneal intramuscular ou injeção ou infusão; ou administração intracraniana, por exemplo, intratecal ou intraventricu- lar. A administração parenteral pode estar na forma de uma única dose de bolus, ou pode ser, por exemplo, por uma bomba de perfusão contí- nua. Composições farmacêuticas e formulações para a administração tópica podem incluir adesivos transdérmicos, pomadas, loções, cre- mes, géis, gotas, supositórios, pulverizações, líquidos e pós. Carrea- dores farmacêuticos convencionais, aquosos, bases de pó ou oleosas, espessantes e similares podem ser necessários ou desejáveis.

[00224] Esta invenção também inclui composições farmacêuticas que contêm, como ingrediente ativo, o composto da invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável deste em combinação com um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis (excipientes). Em al- gumas modalidades, a composição é adequada para administração tópica. Ao produzir as composições da invenção, o ingrediente ativo é tipicamente misturado com um excipiente, diluído por um excipiente ou inserido em tal carreador na forma de, por exemplo, uma cápsula, sachê, papel ou outro recipiente. Quando o excipiente serve como um diluente, o mesmo pode ser um material sólido, semissólido ou líquido, que atua como um veículo, carreador ou meio para o ingrediente ativo. Assim, as composições podem estar na forma de comprimidos, pílulas, pós, pastilhas, sachês, cápsulas, elixires, suspensões, emulsões, so- luções, xaropes, aerossóis (como um sólido ou em um meio líquido), pomadas contendo, por exemplo, até 10% em peso, do composto ati- vo, capsulas de gelatina macias e duras, supositórios, soluções injetá- veis estéreis e pós embalados estéreis.

[00225] Ao preparar uma formulação, o composto ativo pode ser moído para se obter o tamanho de partícula apropriado antes de ser combinado com os outros ingredientes. Se o composto ativo for subs- tancialmente insolúvel, este pode ser moído até possuir um tamanho de partícula inferior a 200 mesh. Se o composto ativo for substancial- mente solúvel em água, o tamanho de partícula pode ser ajustado pela moagem para fornecer uma distribuição substancialmente uniforme na formulação, por exemplo, cerca de 40 mesh.

[00226] Os compostos da invenção podem ser moídos utilizando-se procedimentos de moagem conhecidos, tais como moagem a úmido, para se obter um tamanho de partícula apropriado para a formação de comprimidos e para outros tipos de formulação. Preparações finamen- te divididas (nanoparticuladas) dos compostos da invenção podem ser preparadas por processos conhecidos na técnica, por exemplo, ver Pedido Internacional No. WO 2002/000196.

[00227] — Alguns exemplos de excipientes apropriados incluem, lac- tose, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos, goma acácia, fosfa- to de cálcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de cálcio, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, celulose, água, xarope e metilcelu- lose. As formulações podem incluir adicionalmente: agentes lubrifican- tes, tais como talco, estearato de magnésio e óleo mineral; agentes umectantes; agentes de suspensão e emulsificantes; agentes conser-

vantes, tais como metil- e propil-hidróxi-benzoatos; agentes adoçantes; e agentes aromatizantes. As composições da invenção podem ser formuladas de modo a proporcionar uma liberação rápida, contínua ou retardada do ingrediente ativo após sua administração ao paciente, empregando-se procedimentos conhecidos na técnica.

[00228] As composições podem ser formuladas numa forma de do- sagem unitária. O termo “formas de dosagem unitárias” refere-se a unidades fisicamente discretas apropriadas como dosagens unitárias para sujeitos humanos e outros mamíferos, cada unidade contendo uma quantidade pré-determinada de material ativo calculada para pro- duzir o efeito terapêutico desejado em associação com um excipiente farmacêutico adequado.

[00229] Para preparar composições sólidas, como comprimidos, o ingrediente ativo principal é misturado com um excipiente farmacêutico para formar uma composição de pré-formulação sólida contendo uma mistura homogênea de um composto da presente invenção. Ao se re- ferir a essas composições de pré-formulação como homogêneas, o ingrediente ativo está tipicamente disperso uniformemente por toda a composição para que a composição possa ser prontamente subdividi- da em formas de dosagem unitárias igualmente eficazes, como com- primidos, pílulas e cápsulas. Esta pré-formulação sólida é então subdi- vidida em formas de dosagem unitária do tipo descrito acima.

[00230] Os comprimidos ou pílulas da presente invenção podem ser revestidos ou de outra forma compostas para fornecer uma forma de dosagem que apresenta a vantagem de ação prolongada. Por exem- plo, o comprimido ou pílula pode compreender um componente de do- sagem interna e um de dosagem externa, o último estando na forma de um envelope sobre o primeiro. Os dois componentes podem ser separados por uma camada entérica que serve para resistir à desinte- gração no estômago e permitir que o componente interno passe intac-

to para o duodeno ou tenha uma liberação retardada. Uma variedade de materiais pode ser usada para tais camadas ou revestimentos enté- ricos, tais materiais incluindo uma série de ácidos poliméricos e mistu- ras de ácidos poliméricos com tais materiais, como goma-laca, álcool cetílico e acetato de celulose.

[00231] As formas líquidas nas quais os compostos e as composi- ções da presente invenção podem ser incorporados para a administra- ção oral ou por injeção incluem soluções aquosas, xaropes adequa- damente aromatizados, suspensões aquosas ou oleosas e emulsões aromatizadas com óleos comestíveis, tais como óleo de algodão, óleo de gergelim, óleo de coco, ou óleo de amendoim, além de elixires e veículos farmacêuticos similares.

[00232] “Composições para inalação ou insuflação incluem soluções e suspensões em solventes aquosos ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis, ou misturas destes, e pós. As composições líquidas ou só- lidas podem conter excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequa- dos, conforme descrito supra. Em algumas modalidades, as composi- ções são administradas pela via respiratória oral ou nasal para efeito lo- cal ou sistêmico. Composições podem ser nebulizadas pelo uso de ga- ses inertes. Soluções nebulizadas podem ser respiradas diretamente do dispositivo de nebulização ou o dispositivo de nebulização pode ser fixa- do a uma câmara de máscara facial ou máquina de respiração de pres- são positiva intermitente. As composições em solução, suspensão ou em pó também podem ser administradas oral ou nasalmente a partir de dispositivos que liberam a formulação de uma maneira apropriada.

[00233] As formulações tópicas podem conter um ou mais carrea- dores convencionais. Em algumas modalidades, pomadas podem con- ter água e um ou mais carreadores hidrofóbicos selecionados dentre, por exemplo, parafina líquida, éter de alquil de polioxietileno, propile- noglicol, vaselina branca e similares. As composições de carreador de cremes podem ser à base de água na combinação com glicerol e um ou mais outros componentes, por exemplo, monoestearato de glicerila, PEG-Monoestearato de glicerila e álcool cetoestearílico. Os géis po- dem ser formulados usando álcool isopropílico e água, adequadamen- te em combinação com outros componentes, tais como, por exemplo, glicerol, hidroxietil celulose e similares. Em algumas modalidades, as formulações tópicas contêm pelo menos cerca de 0,1, pelo menos cer- ca de 0,25, pelo menos, cerca de 0,5, pelo menos cerca de 1, pelo menos cerca de 2 ou pelo menos cerca de 5% em peso do composto da invenção. As formulações tópicas podem ser adequadamente em- pacotadas em tubos de, por exemplo, 100 g, que são opcionalmente associados com instruções para o tratamento da indicação seleciona- da, por exemplo, psoríase ou outra condição de pele.

[00234] A quantidade do composto ou composição farmacêutica administrada ao paciente irá variar dependendo do que está sendo administrado, o propósito da administração, tais como profilaxia ou te- rapia, o estado do paciente, a forma de administração e similares. Nos pedidos terapêuticos, composições podem ser administradas a um pa- ciente que já sofre de uma doença em uma quantidade suficiente para curar os sintomas da doença e suas complicações ou pelo menos con- trolá-los parcialmente. Doses eficazes dependerão da condição da do- ença a ser tratada, bem como do julgamento do médico que atende o paciente, dependendo de fatores como a gravidade da doença, a ida- de, o peso e a condição geral do paciente e afins.

[00235] As composições administradas a um paciente podem estar na forma das composições farmacêuticas descritas acima. Estas com- posições podem ser esterilizadas por técnicas de esterilização con- vencionais ou podem ser filtradas estéreis. As soluções aquosas po- dem ser embaladas para uso na forma como estão ou liofilizadas, a preparação liofilizada sendo combinada com um carreador aquoso es-

téril antes da administração. O pH das preparações do composto tipi- camente estará entre 3 e 11, mais preferivelmente de 5 a 9 e ainda mais preferencialmente de 7 a 8. Será entendido que o uso de alguns dos excipientes, carreadores ou estabilizadores anteriores resultará na formação de sais farmacêuticos.

[00236] A dose terapêutica de um composto da presente invenção variará de acordo com, por exemplo, o uso particular para o qual o tra- tamento é feito, a forma de administração do composto, a saúde e condição do paciente, e o julgamento do médico que prescreveu o composto. A proporção ou concentração de um composto da invenção em uma composição farmacêutica pode variar dependendo de certos fatores, incluindo dosagem, características químicas (por exemplo, hi- drofobicidade) e a via de administração. Por exemplo, os compostos da invenção podem ser fornecidos em uma solução tampão fisiológica aquosa contendo cerca de 0,1 a cerca de 10% p/v do composto para administração parentérica.

[00237] As composições da invenção podem ainda incluir um ou mais agentes farmacêuticos adicionais, como um agente quimioterápi- co, esteroides, composto anti-inflamatório ou imunossupressor, exem- plos dos quais estão listados neste documento. Compostos Marcados e Métodos de Ensaio

[00238] Os métodos da presente invenção incluem ainda o uso de compostos marcados isotopicamente da invenção. Um composto "iso- topicamente" ou "radiomarcado" é um composto da invenção em que um ou mais átomos são repostos ou substituídos por um átomo com uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa normalmente encontrado na natureza (isto é, de ocorrência natural). Os radionuclídeos adequados que podem ser in- corporados nos compostos da presente invenção incluem, mas não estão limitados a ºH (também escrito como D para deutério), *H (tam-

bém escrito como T para trítio), 'C, ºC, C, *N, *N, 15o, 7O, o, 18F, 358, 36C], 8ººBr, 7SBr, 76Br, "Br, 1281, 1241, 125] e131|, Por exemplo, um ou mais átomos de hidrogênio em um composto da presente invenção podem ser substituídos por átomos de deutério (por exemplo, um ou mais átomos de hidrogênio de um grupo alquil de um composto des- crito neste documento podem ser opcionalmente substituídos por áto- mos de deutério, como -CD;3 sendo substituído por -CHs3).

[00239] Um ou mais átomos constituintes dos compostos apresenta- dos neste documento podem ser repostos ou substituídos por isótopos dos átomos em abundância natural ou não natural. Em algumas modali- dades, o composto inclui pelo menos um átomo de deutério. Em algumas modalidades, o composto inclui dois ou mais átomos de deutério. Em al- gumas modalidades, o composto inclui 1-2, 1-3, 1-4, 1-5 ou 1-6 átomos de deutério. Em algumas modalidades, todos os átomos de hidrogênio em um composto podem ser substituídos por átomos de deutério.

[00240] Em algumas modalidades, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 átomos de hidrogênio, ligados a átomos de carbono dos compostos descritos nes- te documento, são opcionalmente substituídos por átomos de deutério.

[00241] Os métodos sintéticos para incluir isótopos em compostos orgânicos são conhecidos na técnica (Deuterium Labeling in Organic Chemistry by Alan F. Thomas (New York, N.Y., Appleton-Century- Crofts, 1971; The Renaissance of H/D Exchange by Jens Atzrodt, Vol- ker Derdau, Thorsten Fey e Jochen Zimmermann, Angew. Chem. Int. Ed. 2007, 7744-7765; The Organic Chemistry of Isotopic Labelling by James R. Hanson, Royal Society of Chemistry, 2011). Compostos marcados isotopicamente podem ser usados em vários estudos, como espectroscopia RMN, experimentos de metabolismo e/ou ensaios.

[00242] A substituição por isótopos mais pesados, tal como deutério, pode gerar certas vantagens terapêuticas resultantes de uma maior es- tabilidade metabólica, por exemplo, maior meia-vida in vivo ou requisitos de dosagem reduzidos, e, portanto, pode ser preferencial em algumas circunstâncias. (ver por exemplo, A. Kerekes et al. J. Med. Chem. 2011, 54, 201-210; R. Xu et al. J. Label Compd. Radiopharm. 2015, 58, 308- 312). Em particular, a substituição em um ou mais sítios de metabolismo pode proporcionar uma ou mais das vantagens terapêuticas.

[00243] O radionuclídeo que é incorporado nos presentes compos- tos radiomarcados dependerá da aplicação específica desse composto radiomarcado. Por exemplo, para a marcação de PI3K in vitro e ensai- os de competição, compostos que incorporam ?H, *ºC, &ººBr, 1251, 131] ou 35S podem ser úteis. Para aplicações de imagem de *'C, 18F, 1251, 1231, 124], 131), 7SBr, 7ºBr ou "Br podem ser úteis.

[00244] É entendido que um "composto radiomarcado" ou "compos- to marcado" é um composto que incorporou pelo menos um radionu- clídeo. Em algumas modalidades, o radionuclídeo é selecionado do grupo que consiste em ?H, ºC, 1251, 3S eºBr.

[00245] A presente invenção pode incluir ainda métodos sintéticos para incorporar radioisótopos em compostos da invenção. Os métodos sintéticos para a incorporação de radioisótopos em compostos orgâni- cos são bem conhecidos na técnica, e uma pessoa comumente versa- da na técnica reconhecerá facilmente os métodos aplicáveis para os compostos da invenção. Kits

[00246] A presente invenção também inclui kits farmacêuticos úteis, por exemplo, no tratamento ou prevenção de doenças associadas à PI3SK ou distúrbios descritos neste documento que incluem um ou mais recipientes que contêm uma composição farmacêutica compreenden- do uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da in- venção. Tais kits podem ainda incluir, se desejado, um ou mais dentre vários componentes do kit farmacêutico convencional, tais como, por exemplo, recipientes com um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis, recipientes adicionais, etc., como será prontamente eviden- te por aqueles versados na técnica. Instruções, sejam como inserções ou como rótulos, que indicam quantidades dos componentes a serem administrados, diretrizes para administração e/ou diretrizes para mistu- rar os componentes, também podem ser incluídas no kit. Em certas modalidades, as referidas instruções compreendem os métodos da presente invenção, incluindo dosagens ou regimes de dosagem espe- cificados da presente invenção.

[00247] A invenção será descrita em mais detalhes por meio de exemplos específicos. Os exemplos a seguir são apresentados para fins ilustrativos, não sendo destinados a limitar a presente invenção de qualquer maneira. Aqueles versados na técnica reconhecerão pronta- mente uma variedade de parâmetros não críticos que podem ser altera- dos ou modificados para produzir essencialmente os mesmos resultados. É apreciado que certas características da invenção, que são, para maior clareza, descritas no contexto de modalidades separadas, também po- dem ser fornecidas em combinação em uma única modalidade. Por outro lado, várias características da invenção que são, por brevidade, descritas no contexto de uma única modalidade, também podem ser fornecidas separadamente ou em qualquer subcombinação adequada.

EXEMPLOS Exemplos 1A-1D. Diastereoisômeros de 4-(3-[1-(4-amino-3-metil- 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-S-cloro-2-etóxi-6- fluorofenil)pirrolidin-2-ona O,

NH F. OEt cl =N HoN

Etapa 1. 1-(5-cloro-2-etóxi-3-iodo-4-metilfenil)etano! | F. OEt a)

[00248] Uma solução de 1-(5-cloro-2-etóxi-4-fluoro-3-iodofenil) eta- nona (20,0 g, 58,4 mmol; ver Exemplo 212, etapa 1 da Patente US Nº.: 9,199,982) e 1,2-etanodiol (6,5 mL, 120 mmol) em tolueno (190 mL) foi tratado com ácido p-toluenossulfônico mono-hidratado (1,1 9, 5,8 mmol).O frasco foi equipado com uma armadilha Dean-Stark que foi preenchida com peneiras e refluxada por 3 h. A mistura da reação foi arrefecida e adicionada a solução de bicarbonato de sódio saturada arrefecida com gelo (250 mL) e extraída com acetato de etil. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada a um óleo laranja em bruto. O material em bruto foi puri- ficado por cromatografia em coluna flash usando acetato de etil em hexanos (0% - 20%) para obter o produto desejado (22 g, 99%). LCMS para C12H14CIFIO3 (M+H)*: m/z = 387,0; Encontrado: 386,9. Etapa 2. Etil (2E)-3-[3-cloro-6- etóxi-2-fluoro-5-(2-metil-1, 3-dioxolan-2- ifenilJacrilato Ox OEt ” cl 0 o

VU

[00249] Uma mistura de 2-(5-cloro-2-etóxi-4-fluoro-3-iodofenil)-2- metil-1,3 dioxolano (22 g, 58 mmol) (da Etapa 1), (2E)-3-(4,4, 5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)acrilato de etil (16 mL, 70 mmol) e carbonato de potássio (24 g, 170 mmol) em 1,4-dioxano (230 mL) e água (110 mL) foi desgaseificado com nitrogênio por 10 min. A mistura de reação foi tratada com [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropa-

ládio (11), complexo com diclorometano (1:1) (2,4 g, 2,9 mmol), desga- seificado com nitrogênio por mais 10 min, e aquecido a 80ºC durante 2 h. A mistura da reação foi filtrada através de Celite e lavada com ace- tato de etil (800 mL). O filtrado foi vertido em água (400 mL). A cama- da aquosa foi separada e extraída com acetato de etil adicional (300 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados a um sólido mar- rom bruto. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash usando acetato de etil em hexanos (0% - 30%) para obter o pro- duto desejado (20 g, 96%). '*H NMR (400 MHz, CDCI3) 5 7,74 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,70 (dd, J = 16,5, 0,9 Hz, 1H), 4,26 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,10 — 3,99 (m, 2H), 3,91 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 3,87 — 3,76 (m, 2H), 1,73 (s, 3H), 1,44 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,33 (tl, J = 7,1 Hz, 3H). LCMS para C1i7H2:CIFOs (M+H)*: m/z = 359,1; Encontra- do: 359,1. Etapa 3. 3-[3-cloro-6-etóxi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-4- nitrobutanoato de etil on Ox OE!

SS Cl 0 o

VC

[00250] Uma solução (2E)-3- [3-cloro-6-etóxi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3- dioxolan-2-ilYfenilJacrilato de etil (10 g, 28 mmol) (da Etapa 2) em ni- trometano (100 mL) foi tratado com 1,8-diazabiciclo[5.4.0]Jundec-7-eno (4,6 mL, 31 mmol) e agitada a 60ºC durante 15 h. A mistura da reação foi vertida em água (400 mL) e extraída com acetato de etil (2 x 300 mL).Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados a um óleo laran- ja bruto. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash usando acetato de etil em hexanos (0% - 30%) para obter o pro-

duto desejado como uma mistura de enantiômeros (10,4 g, 89%). '*H NMR (400 MHz, CDCI3) 5 7,52 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 4,82 (ddd, JU = 12,5, 7,6, 1,4 Hz, 1H), 4,68 (dd, J = 12,5, 7,2 Hz, 1H), 4,54 — 4,40 (m, 1H), 4,15 — 3,90 (m, 6H), 3,89 — 3,75 (m, 2H), 2,85 (ddd, J = 16,0, 8,6, 1,4 Hz, 1H), 2,73 (dd, J = 16,1, 6,2 Hz, 1H), 1,70 (s, 3H), 1,47 (t J = 7,0 Hz, 3H), 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 3H). LCMS para CisH2CIFNO; (M+H)*: m/z = 420,1; Encontrado: 420,1.

Etapa 4. Enantiômeros 4-[3-cloro-6-etóxi-2-fluoro-5-(2- metil-1,3-dooxo- lan-2-il)fenillpirrolidin-2-ona O,

NH " o Oo

V

[00251] Uma suspensão de 3-[3-cloro-6-etóxi-2-fluoro-5-(2-metil- 1,3-dioxolan-2- il)fenil]-4-nitrobutanoato de etil (1,0 g, 24 mmol) (da Etapa 3) em etanol (16 mL) foi aquecido para dissolver o sólido. A so- lução foi resfriada de volta à temperatura ambiente, desgaseificada com nitrogênio e tratada com uma pasta de 2.800 Níquel Raney em água (1,5 mL).A mistura de reação foi desgaseificada novamente com nitrogênio e hidrogenada com um balão de hidrogênio por 3 h. A mistu- ra de reação foi filtrada através de Celite e concentrada para obter o aminoéster intermediário (0,93 g, 100%).O aminoéster intermediário foi dissolvido em tolueno (12 mL) e aquecido a 110ºC durante 12 h. À mistura de reação foi arrefecida à temperatura ambiente, altura em que precipitou um sólido da solução. Esta mistura foi arrefecida a 0ºC, agitada durante 30 min, filtrada, lavada com tolueno frio e seca para obter o produto desejado como uma mistura de enantiômeros (0,61 9, 75%). LOCMS para CisH20oCIFNO,a (M+H)*: m / z = 344,1; Encontrado: 344,1. A mistura de enantiômeros foi separada por HPLC quiral para dar os enantiômeros individuais como pico 1 e pico 2 (RT = 5,39 min e 7,01 min, respectivamente; Phenomenex Lux Celulose C-1, 21,2 x 250 mm, tamanho de partícula de 5 mícrons, eluindo com Etanol a 20% em hexanos a 18 mL/min). Etapa 5. Enantiômeros de 4-(3-acetil-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil) pirro- lidin-2-ona O,

NH

E cl o

[00252] Os enantiômeros separados da etapa 4 foram cada um processado individualmente para os compostos finais. Uma solução de 4-[3-cloro-6-etóxi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioxolan-2-il) fenil]pirrolidin-2- ona (1,7 g, 5,0 mmol) (da Etapa 4) em metanol (17 mL) foi tratada com cloreto de hidrogênio 6,0 M em água (11 mL, 69 mmol) gota a gota e agitada a 20ºC por 30 min. A mistura de reação foi adicionada gota a gota a solução saturada de bicarbonato de sódio arrefecida com gelo (75 ml) e extraída com acetato de etil (2 x 100 ml).Os extratos orgâni- cos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados para dar os produtos desejados [do pi- co 1 (1,5 g, 99%); do pico 2 (1,5 g, 99%)] que foram usados sem puri- ficação adicional. Do pico 1: *H NMR (400 MHz, DMSO-ds) 5 7,84 (s, 1H), 7,70 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 4,16 — 3,99 (m, 1H), 3,83 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 3,65 — 3,54 (m, 1H), 3,30 — 3,23 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,33 (dd, J = 16,8, 8,4 Hz, 1H), 1,30 (t, J = 7,0 Hz, 3H). LCMS para C1uHsCIFNO;3 (M+H)*: m/z = 300,1; Encontrado: 300,0. Do pico 2: *'H NMR (400 MHz, DMSO-ds) 5 7,84 (s, 1H), 7,70 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 4,13 — 4,00 (m, 1H), 3,87 — 3,77 (m, 2H), 3,65 — 3,55 (m, 1H), 3,31 — 3,23 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,32 (ddd, J = 16,9, 8,4, 1,6 Hz, 1H), 1,30 (t, J = 7,0 Hz, 3H). LCMS para C14H16CIFNO;3 (M+H)*: m/z = 300,1; Encontrado: 300,1.

Etapa 6. Diastereoisômeros de 4-[3-cloro-6-etóxi-2- fluoro-S5-(1-hidroxi- eti)fenillpirrolidin-2-ona 2 NH Cc

OH

[00253] Os enantiômeros da etapa 5 foram processados individual- mente para os produtos finais. Uma solução de 4-(3-acetil-5-cloro-2- etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-o0na (0,402 g, 1,384 mmol) (da Etapa 5) em metanol anidro (6,7 mL) sob uma atmosfera de nitrogênio a 0ºC foi tratada com tetra-hidroborato de sódio (0,10 g, 2,7 mmol) e agitada a 0ºC durante 30 min. A mistura de reação foi interrompida com água a 0ºC e vertida em água (50 mL)/acetato de etil (100 mL) enquanto se agitava. A mistura foi aquecida à temperatura ambiente e a camada aquosa foi separada e extraída com acetato de etil adicional (50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, se- cos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados para dar espumas brancas. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash usando acetonitrila (contendo 7% de metanol) em diclorometano (0% - 100%) para obter os produtos desejados como misturas de dias- tereoisômeros [do pico 1 (0,40 g, 99%); do pico 2 (0,40 g, 99%)]. Do pico 1: LCMS para CiuH8CIFNO;3 (M+H)*: m/z = 302,1; Encontrado: 302,0. Do pico 2: LCMS para CiuaHi8CIFNO;3 (M+H)*: m/z = 302,1; En- contrado: 302,1. Etapa 7. Diastereoisômeros de 4-[3-cloro-5-(1-cloroetil)- 6-etóxi-2- fluorofenil|pirrolidin-2-ona & NH Cc Cc!

[00254] A mistura de diastereoisômeros da etapa 6 foi processada individualmente para os produtos finais. Uma solução de 4-[3-cloro-6- etóxi-2-fluoro-5-(1-hidroxietil)fenil] pirrolidin-2-0na (0,41 g, 1,4 mmol) (da Etapa 6) em cloreto de metileno (12 mL) foi tratada com N,N- dimetilformamida (0,011 mL, 0,14 mmol) seguida por cloreto de tionil (0,21 mL, 2,9 mmol) gota a gota e agitada a 20ºC por 30 min. A mistu- ra de reação foi adicionada gota a gota a solução de bicarbonato de sódio saturada arrefecida com gelo e extraída com diclorometano. À camada orgânica foi separada e lavada com salmoura, seca sobre sul- fato de sódio, filtrada e concentrada para dar os produtos desejados [do pico 1 (0,38 g, 87%); do pico 2 (0,39 g, 89%)] junto com 17-18% do estireno que se formou a partir da eliminação do cloreto. Estas mistu- ras foram utilizadas sem purificação adicional. Do pico 1:LCMS para C14H17CI2FNO>2 (M+H)*: m/z = 320,1; Encontrado: 320,0. Do pico 2: LCMS para C14H17CI2FNO>2 (M+H)*: m/z = 320,1; Encontrado: 320,0. Etapa 8 Diastereoisômeros de 413-[1-(4-amino-3-metil-1H- pirazolo[3,4- dipirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2- ona o,

NH F. OEt fe =N

HAN

[00255] A mistura de diastereoisômeros da etapa 7 foi processada individualmente para os produtos finais. Uma mistura de 4-[3-cloro-5- (1-cloroetil)-6-etóxi-2-fluorofenil]pirrolidin-2-ona (0,36 g, 1,1 mmol) (da Etapa 7), 3-metil-1H-pirazolo[3,4-0pirimidin-4-amina (0,19 g, 1,3 mmol), carbonato de césio (0,54 g, 1,7 mmol) e iodeto de potássio (18 mg,

0,11 mmol) em N,N-dimetilformamida (7,4 mL) foi aquecido a 100 ºC durante 4,5 h. A mistura de reação foi vertida em água (30 mL) e extra- ída com acetato de etil (3 x 50 mL) para obter uma mistura de diaste- reoisômero ((S)-4-(3-((S) -1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimi- din-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-0na; (R)-4-(3-((S)-1- (4-amino-3-metil-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6- fluorofenil)pirrolidin-2-0na; (S)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazo- lo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil )pirrolidin-2-0na; e (R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro -2-etóxi-6-fluorofenil) pirrolidin-2-0na).A mistura de diastereoisômeros foi purificada por LCMS preparativa (coluna XBridge C18, eluindo com um gradiente de acetonitrila/água contendo 0,1% de hidróxido de amônio, a uma taxa de fluxo de 60 mL/min) para obter os produtos de- sejados [do pico 1 foram isolados pico A (Exemplo 1A) (0,13 9, 54%) e pico B (Exemplo 1B) (0,11 g, 46%); do pico 2 foram isolados o pico A (Exemplo 1C) (0,15 g, 63%) e o pico B (Exemplo 1D) (0,14 g, 55%)].

[00256] “Exemplo 1B: *H NMR (300 MHz, DMSO-ds) 5 8,12 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,52 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,30 (br s, 1H), 6,23 (q, J= 7,0 Hz, 1H), 4,05 — 3,90 (m, 1H), 3,88 — 3,78 (m, 2H), 3,63 — 3,53 (m, 1H), 3,29 — 3,20 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,38 — 2,21 (m, 1H), 1,70 (d J= 7,1 Hz, 3H), 1,39 (t, J = 6,9 Hz, 3H). LCMS para CaoH23CIFN6sO2 (M+H)*: m/z = 433,2; Encontrado: 433,1. Exemplo 1C: '*H NMR (500 MHz, DMSO-ds) 5 8,12 (s, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,53 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,26 (br s, 2H), 6,24 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,04 — 3,94 (m, 1H), 3,93 — 3,85 (m, 1H), 3,84 — 3,77 (m, 1H), 3,61 — 3,53 (m, 1H), 3,27 — 3,22 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,30 (dd, J = 18,1, 8,6 Hz, 1H), 1,71 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,40 (t, Jy = 6,9 Hz, 3H). LCMS para CaoH23CIFNsO2 (M+H)*: m/z = 433,2; Encontrado: 433,1.

Exemplos 2A-2D. Diastereômeros de 5-(3-[1-(4-amino-3-metil-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)-1,3- oxazolidin-2-ona un o F. O cl =N

HAN Etapa 1: [2-(3-acetil-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)-2-hidroxietil|carbama- to de terc-butil Dn o

AA

NH oH Ee Cl o

[00257] Tetraóxido de ósmio 0,2 M em água (10 mL) foi adicionado a uma solução de [(4-clorobenzoil)oxilcarbamato de terc-butil (Lawren- ce Harris, J. Org. Chem, 2011, 76, 358-372). (19 g, 70 mmol) em ace- tonitrila (210 mL) e agitado por 10 minutos. 1-(5-cloro-2-etóxi-4-fluoro- 3-vinilfenil)etanona (11,2 g, 46 mmol) (vide Exemplo 353, Etapa 1 da Patente US Nº: 9,199,982) como uma solução em acetonitrila (210 mL) foi adicionado à solução de carbamato seguido pela adição de água (50 mL) e a reação foi agitada por 3 horas em temperatura ambi- ente. A reação foi suprimida com dissulfito dipotássico saturado 10 M em água (240 mL) e agitada durante 5 minutos. Foi adicionada água e a mistura de reação foi extraída com acetato de etil. Os extratos foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, salmoura e secos com sulfato de sódio, filtrados e evaporados. A purificação em sílica-gel usando acetato de etil em hexanos (0-100%) gerou o com- posto desejado como uma mistura racêmica, 16,6 g, 95%. LCMS cal- culado para C17H23CIFNOsNa (M+Na)*: m/z = 398,1; obtido: 398,0. Etapa 2: 5-(3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5- cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)-1,3-oxazolidin-2-ona mn o F. O fo] =N HoN

[00258] O enantiômero único desejado (pico 3) foi preparado usan- do o mesmo procedimento do Exemplo 353, etapas 8-12 da Patente US Nº: 9,199,982, exceto que o intermediário da etapa 1 neste exem- plo era racêmico e, portanto, a separação final dos quatro diastereô- meros ocorreu na etapa 12. A purificação quiral em Phenomenex Lux Cellulose C-4, 21 x 250 mm (Chiral Technologies), tamanho de partí- cula de 5 micra, a uma taxa de fluxo de 18 mL/min usando etanol 30% em hexanos gerou o pico 1: Exemplo 2A (enantiômero único) (tempo de retenção = 12,7 minutos), pico 2: Exemplo 2B (enantiômero único) (tempo de retenção = 14,2 minutos), pico 3: Exemplo 2C (enantiômero único) (tempo de retenção = 20,3 minutos), e pico 4: Exemplo 2D (enantiômero único) (tempo de retenção = 28,9 minutes); o enantiôme- ro mais ativo era o pico 3. LCMS calculada para Ci9H2:CIFNsO;3 (M+H)*: m/z = 435,1; encontrado: 435,1. *H NMR (500 MHz, DMSO- ds): 5 8,15 (s, 1 H), 7,81 (s, 1 H), 7,71 (d, 1 H), 7,26 (bs, 1 H), 6,23 (m, 1H), 5,84 (t, 1 H), 3,92 (m, 1 H), 3,83 (m, 1 H), 2,52 (s, 3 H), 1,75 (d, 3 H), 1,40 (m, 3 H).

Exemplo A1: Ensaio com enzima PI3K

[00259] —Kitde ensaio luminescente com Pl3-quinase incluindo pro- teína detectora com substrato lipídico de quinase, D-mio-fosfatidilino- sitol 4,5-bifosfato (Ptdlns(4,5)P2)D (+)-sn-1,2-di-O-octanoilgliceril, 3-O- fosfo-ligada (PIP2), biotinilada 1(1,3,4,5)P4, PI(3,4,5)P3 é comprado da Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT). O kit de detecção de GST AlphaScreen'Y incluindo esferas doadoras e aceptoras foi comprado da PerkinElmer Life Sciences (Waltham, MA). PI3Kô5 (p1103/p85a) foi comprada da Millipore (Bedford, MA). ATP, MgCl2, DTT, EDTA, HEPES e CHAPS foram comprados da Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Ensaio AlphaScreen!" para PI3K5

[00260] A reação da quinase é realizada em uma placa REMP de 384 poços da Thermo Fisher Scientific em um volume final de 40 uL. Os inibidores foram inicialmente diluídos em série em DMSO e adicio- nados aos poços da placa antes de se adicionarem os demais compo- nentes da reação. A concentração final de DMSO no ensaio é de 2%.Os ensaios de PI3K são realizados à temperatura ambiente em HEPES 50 mM, pH 7,4, MgCl25mMM, NaCl 50 MM, DTT 5mM e CHAPS 0,04%.As reações são iniciadas pela adição de ATP, a mistura de rea- ção final consistia em 20 uM de PIP2, 20 uM de ATP, 1,2 nM de PI3Kô e são incubados por 20 minutos. 10 ul da mistura de reação são então transferidos para 5 ul 50nM biotinilado!(1,3,4,5)P4 em tampão de in- terrupção: 50 mM HEPES pH 7,4, 150 mM NaCl, 10 mM EDTA, 5 mM DTT, 0,1% Tween- 20, seguido da adição de 10 ul do doador AlphaS- creen'"Y e grânulos aceitadores suspensos em tampão de interrupção contendo 25 nM de proteína detectora PI(3,4,5)P3. A concentração final de contas doadoras e aceitadoras é de 20 mg/ml. Após a selagem da placa, as placas são incubadas em local escuro à temperatura am- biente por 2 horas. A atividade do produto é determinada no leitor de- microplacasFusion-alfa (Perkin-Elmer).A determinação de ICs5o é reali-

zada ajustando-se a curva de atividade de controle percentual versus o log da concentração do inibidor usando o software GraphPad Prism 3,0. Exemplo A2: Ensaio com enzima PI3K Materiais

[00261] O substrato da quinase lipídica, fosfoinositol-4,5-bifosfato (PIP2), é adquirido na Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT). As isoformas de PI3K a, B, 5 e y são adquiridas na Millipore (Bedford, MA). ATP, MgCl2, DTT, EDTA, MOPS e CHAPS foram comprados da Sigma-Aldrich (St. Louis, MO).

[00262] A reação da quinase é conduzida em placa de 96 poços de fundo transparente da Thermo Fisher Scientific em um volume final de 24 ul. Os inibidores foram inicialmente diluídos em série em DMSO e adicionados aos poços da placa antes de se adicionarem os demais componentes da reação. A concentração final de DMSO no ensaio é de 0,5%. Os ensaios PI3K são realizados à temperatura ambiente em MOPS 20 mM, pH 6,7, 10 mM MgCl2, 5 MM DTT e CHAPS 0,03%. À mistura de reação é preparada contendo 50 UM de PIP2, quinase e concentração variável de inibidores. As reações são iniciadas pela adi- ção de ATP contendo 2,2 uCi [y ?ºP] ATP a uma concentração final de 1000 uM. A concentração final das isoformas de PISK a, B, dó e yno ensaio foram 1,3, 9,4, 2,9 e 10,8 nM, respectivamente. As reações são incubadas por 180 minutos e terminadas pela adição de 100 uL de fos- fato de potássio 1 M pH 8,0, tampão de interrupção de EDTA 30 mM. Uma alíquota de 100 uL da solução de reação é então transferida para placa de filtro PVDF Millipore MultiScreen IP 0,45 um de 96 poços (a placa de filtro é pré-umedecida com 200 uL de etanol 100%, água des- tilada e fosfato de potássio 1 M pH 8,0, respectivamente). A placa de filtro é aspirada em um Manifold Millipore sob vácuo e lavada com 18 x 200 uL de tampão de lavagem contendo fosfato de potássio 1 M de pH

8,0 e ATP 1 mM. Após a secagem por aspiração e absorção, a placa é seca ao ar em uma incubadora a 37ºC durante a noite. O adaptador Packard TopCount (Millipore) é então conectado à placa seguido da adição de 120 ul de coquetel de cintilação Microscint 20 (Perkin El- mer) em cada poço. Após a selagem da placa, a radioatividade do produto é determinada por contagem de cintilação no Topcount (Perkin — Elmer). A determinação de ICs5o é realizada ajustando-se a curva de atividade de controle percentual versus o log da concentração do inibi- dor usando o software GraphPad Prism 3,0. Exemplo A3: ensaio deproximidade de cintilação PI3K5 Materiais

[00263] [yººPJATP (10mCi/mL) foi adquirido de Perkin-Elmer (Wal- tham, MA). Substrato de lipídio quinase,D-mio-Fosfatidilinositol 4,5- bisfosfate (Ptdlns(4,5)P2)D (+)-sn-1,2-di-O-octanoilgliceril, 3-O-fosfo ligado (PIP2), CAS 204858-53-7, foi adquirido da Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT). PISKô (p1105/p850) foi comprada da Millipore (Bedford, MA). ATP, MgCl2, DTT, EDTA, MOPS e CHAPS foram ad- quiridos da Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Aglutinina de germe de trigo (WGA) YSi SPA Scintillation Beads foi adquirida da GE Healthcare Life Sciences (Piscataway, NJ).

[00264] A reação da quinase foi conduzida em placa branca de ma- triz de 384 poços de poliestireno da Thermo Fisher Scientific em um volume final de 25 uL. Os inibidores foram inicialmente diluídos em sé- rie em DMSO e adicionados aos poços da placa antes de se adiciona- rem os demais componentes da reação. A concentração final de DMSO no ensaio foi de 0,5%.Os ensaios PISK foram realizados à temperatura ambiente em MOPS 20 mM, pH 6,7, 10 MM MgCl2, 5 mM DTT e CHAPS 0,03%.As reações foram iniciadas pela adição de ATP, a mistura de reação final foi de 20 uM de PIP2, 20 uM de ATP, 0,2 pCi de [y-*ºP] ATP e 4 nM de PI3K5.As reações foram incubadas por 210 minutos e terminadas pela adição de 40 uL de esferas SPA em sus- pensão em tampão de têmpera: 150 mM de fosfato de potássio com pH 8,0, 20% de glicerol, 25 mM EDTA, 400 mM de ATP. A concentra- ção final de esferas de SPA foi igual a 1,0 mg/mL. Após a vedação de placa, as placas foram agitadas durante a noite em temperatura ambi- ente e centrifugadas a 1800 rpm durante 10 minutos, a radioatividade do produto foi determinada por contagem de cintilação em Topcount (Perkin-Elmer).A determinação de ICso foi realizada ajustando-se a curva de atividade de controle percentual versus o log da concentra- ção do inibidor usando o software GraphPad Prism 3,0.Os dados ICso para os exemplos são apresentados na Tabela B conforme determina- do pelo Ensaio A.

Tabela B.

* símbolos de coluna: + refere-se a €< 10 nM ++ refere-se a > 10 nM a 50 nM +++ refere-se a> 50 nM a 200 nM ++++ refere-se a> 200 nM a 500 nM +++++ refere-se a> 500 nM Exemplo B1: ensaio de proliferação de células B

[00265] Para adquirir células B, PBMC humanos são isolados do sangue periférico de doadores normais sem drogas por centrifugação em gradiente de densidade padrão em Ficoll-Hypague (GE Healthcare, Piscataway, NJ) e incubados com microesferas anti-CD19 (Miltenyi Biotech, Auburn, CA). As células B são então purificadas por immuno- sorting positivo usando um autoMacs (Miltenyi Biotech) de acordo com as instruções do fabricante.

[00266] As célulasB purificadas (2x10º/poço/200 uL) são cultivadas em placas de ultra-baixa ligação de 96 poços (Corning, Corning, NY) em RPMI1640, FBS a 10% e F(ab')2 de cabra anti-lgM humano (10 vpo/ml) (Invitrogen, Carlsbad, CA) na presença de diferentes quantida- des de compostos de teste durante três dias. [?H]-timidina (1 uCi/poço) (PerkinElmer, Boston, MA) em PBS é então adicionada às culturas de células B por mais 12 horas antes que a radioatividade incorporada seja separada por filtração com água através de filtros GF/B (Packard Bioscience, Meriden, CT) e medido por contagem de cintilação líquida com um TopCount (Packard Bioscience). Exemplo B2: Ensaio de proliferação celular Pfeiffer

[00267] A linha de células Pfeiffer (linfoma difuso de grandes célu- las B) é adquirida na ATCC (Manassas, VA) e mantida no meio de cul- tura recomendado (RPMI e 10% FBS). Para medir a atividade anti- proliferação dos compostos, as células Pfeiffer são plaqueadas com o meio de cultura (2x10º células/poço/por 200 ul) em placas de ultra-baixa ligação de 96 poços (Corning, Corning, NY), na presença ou ausência de uma faixa de concentração de compostos de teste. Após 3-4 dias, a [?H]- timidina (1UCi/poço) (PerkinElmer, Boston, MA) em PBS é então adicio- nada à cultura de células por mais 12 horas antes que a radioatividade incorporada seja separada por filtração com água através de GF/B filtros (Packard Bioscience, Meridenj, CT) e medidos por cintilação líquida contando com um TopCount (Packard Bioscience). Os dados de ICso para compostos selecionados são apresentados na Tabela C.

Tabela C.

* símbolos de coluna: + refere-se a €< 10 nM ++ refere-se a > 10 nM a 50 nM Exemplo C: Ensaio de fosforilação de Akt

[00268] As células Ramos (linfócitos B de linfoma de Burkitts) são obtidas da ATCC (Manassas, VA) e mantidas em RPMI1640 e FBS a 10%. As células (3x107 /tubo/3 mL em RPMI) são incubadas com dife- rentes quantidades de compostos de teste durante 2 horas a 37ºC e então estimuladas com IgM anti-humano F(ab')2 de cabra (5 pug/mL) (Invitrogen) por 17 minutos em banho-maria a 37ºC. As células estimu- ladas são centrifugadas a 4ºC com centrifugação e os extratos de cé- lulas inteiras são preparados usando 300 uL de tampão de lise (Cell Signaling Technology, Danvers, MA). Os lisados resultantes são soni- cados e os sobrenadantes são recolhidos. O nível de fosforilação de Akt nos sobrenadantes é analisado usando kits de ELISA em sanduí- che PathScan phospho-Akt1i (Ser473) (Cell Signaling Technology) de acordo com as instruções do fabricante.

Exemplo D: Modelo Pfeiffer de Linfoma Métodos

[00269] — Camundongos SCID fêmeas, (5 a 8 semanas de idade, Charles River Laboratories, Wilmington, MA) foram inoculados com 1 x 107 células tumorais (Pfeiffer, ATCC % CRL-2632, Manassas, VA) e matrigel (BD Biosciences ft 354234) em 0,2 mL de solução salina esté- ril. A inoculação foi realizada por via subcutânea no flanco. Fragmen- tos de tecido tumoral (aproximadamente 3 mm x 3 mm) foram coleta-

dos 3 a 6 semanas após a inoculação das células cultivadas e implan- tados subcutaneamente em vez da inoculação celular. Fragmentos de tecido foram implantados como peças sólidas usando uma pinça de ponta romba. O tratamento de camundongos com tumor foi iniciado 15 a 25 dias após a inoculação do tumor, dependendo do tamanho do tumor. Os animais foram classificados para obter volumes tumorais médios aproximadamente equivalentes em cada grupo. O volume tu- moral médio mínimo em todos os grupos foi de 150 mm3 no primeiro dia de tratamento e os grupos consistiam em 7 animais. O agente te- rapêutico experimental, Exemplo 347, foi administrado a camundongos por via oral (PO). A frequência do tratamento foi de 2 vezes ao dia por um mínimo de 14 dias para eficácia. O tamanho dos tumores subcutâ- neos foi medido 2 a 3 vezes por semana usando um paquímetro digi- tal. O volume do tumor foi calculado medindo o tumor em 2 dimensões e utilizando a equação: Volume = [Comprimento * (Largura2)]/2; onde o maior número era comprimento e o menor número largura. Se vários tumores foram formados, o volume final foi a soma dos tumores indivi- duais sujeitos à mesma equação: por exemplo, 2 tumores; Volume =([L1 x (W1)2]/2) + ([L2 x (W2)2]/2). Os efeitos no crescimento do tu- mor foram relatados como a inibição do crescimento do tumor percen- tual (% TG). A percentagem de TGI foi calculada com a equação: (1- (Tx vol./Controle vol.))*100, em que o volume de controle foi o veículo ou o volume do tumor não tratado em um determinado dia, e o volume Tx foi qualquer volume de tumor do grupo de tratamento naquele mesmo dia. As diferenças estatísticas entre o tratamento e os contro- les de veículo foram avaliadas usando ANOVA: teste de fator único. Resultados

[00270] — (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil) pirrolidin-2-ona (ver Exemplo 1) foi avaliada como um único agente no modelo de xenoenxerto de tumor humano de Pfeiffer de linfoma difuso de grandes células B, um subtipo de LNH. As células cancerosas Pfeiffer mostraram ser sensíveis aos efeitos antiproliferativos de (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pira- zolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona in vitro. Portanto, um modelo de tumor foi estabelecido com base na inoculação subcutânea de células tumorais em camundongos SCID imunocomprometidos e camundongos portadores de tumor receberam doses orais duas vezes ao dia de veículo ou (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino- 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil) pirrolidin-2-o0na em 0,3, 1, 3, ou 10 mg/kg por 14 dias. (R)-4-(3-((S)-1- (4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6- fluorofenil)pirrolidin-2-0na tratamento cominibiu o crescimento do tu- mor em 22%, 24%, 36% e 58% (percentagem de inibição do cresci- mento do tumor) com o aumento da dose (ver, por exemplo, Patente US Nº: 9.932.341). Exemplo E: Estudos de escalonamento de dose & expansão de dose

[00271] Nos estudos de escalonamento e expansão de dose descri- tos neste documento, a PK, PD, segurança e eficácia de (R)-4- (3-((S)- 1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi- 6-fluorofenil)pirrolidin-2-0na sal do ácido clorídrico (isto é, Composto 1C) (foram avaliados em pacientes com recidiva ou neoplasias de cé- lulas B refratárias. As características de PK do Composto 1C combi- nadas com a ausência de toxicidades limitantes de dose (DLTs) permi- tiram níveis de exposição que excederam o ICoo ao longo do intervalo de dosagem uma vez por dia (QD) em todas as doses testadas. Além disso, os resultados de uma análise do efeito alimentar indicaram que o Composto 1C pode ser administrado independentemente do horário das refeições. A inibição quase máxima de pAKT no ensaio de PD ex vivo foi consistente com os dados de exposição. Os resultados da mo-

noterapia com PI3Kô e das terapias de combinação são discutidos abaixo nos Exemplos F-H. Desenho do estudo e pacientes

[00272] O estudo de escalonamento de dose e expansão de dose foi conduzido em várias partes: escalonamento de dose de monotera- pia com Composto 1C (Parte 1) seguido de expansão de Coorte (Parte 3); Composto 1C + escalonamento da dose de itacitinibe (Parte 2) se- guido pela expansão da Coorte (Parte 3); e Avaliação e expansão da dose do Composto 1C + R-ICE (rituximabe mais ifosfamida, carbopla- tina e etoposídeo) (Parte 6) (NCT02018861). Os pacientes elegíveis (idade > 18 anos) diagnosticaram malignidades linfoides de origem de células B, incluindo malignidades de LNH de células B indolentes ou agressivas, histologias LNH transformadas e linfoma de Hodgkin (LH), que tiveram recidiva ou eram refratários à terapia padrão anterior. Pa- cientes com linfoma de Burkitt e leucemia/linfoma linfoblástico B pre- cursor foram excluídos. Os pacientes elegíveis tinham status de de- sempenho do Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG PS) <1 (aumento da dose) ou <2 (expansão da dose); tinha função cardíaca, hepática e renal adequada; tinha expectativa de vida 212 semanas; recebeu 21 regime de tratamento anterior; e não tinham respondido ou não eram candidatos para SCT hematopoiético (H) ou outra terapia potencialmente curativa.

[00273] Os pacientes foram excluídos se tivessem uma história de metástases cerebrais não tratadas, sintomáticas ou instáveis; com- pressão da medula espinhal; linfoma envolvendo o sistema nervoso central (permitido na coorte A de expansão da monoterapia do Com- posto 1C [malignidades de células B] e coorte de expansão da combi- nação do Composto 1C + itacitinibe); ou recebeu transplante alogênico de células-tronco hematopoéticas (HSCT) dentro de 6 meses ou HSCT autólogo dentro de 3 meses da inscrição. O tratamento anterior com inibidores de PIS3Kô foi excluído para coortes de monoterapia com Composto 1C, a menos que aprovado pelo monitor médico, e inibido- res de JAK anteriores foram excluídos para coortes de terapia combi- nada de Composto 1C + itacitinibe.

[00274] 72 pacientes foram inscritos e tratados com monoterapia com Composto 1C (idade média, 66 [intervalo, 30-89] anos) (Tabela 1). A duração mediana (intervalo) do tratamento foi de 4,0 (0,2-22,7) meses. No corte de dados, todos, exceto 11 indivíduos, haviam des- continuado o tratamento do estudo, principalmente para progressão da doença (n = 35 [49%]) e eventos adversos (AEs) (n = 14 [19%]). Tabela 1. Dados demográficos do paciente e características ba- sais (ITT) Características Com Condo. Composto 1C +) Composto 1C to 1€ (N=72) Itacitinibe (N=11) | + R-ICE (N=5) [Rana | Negrofafro-americano — arm 1 o [astátia o o [outro re iewn [Mio de doença MR

LER EF Ra ra e BR og ba o EE es o Br a oa o O e aj Duração desde o diagnóstico anterior, mediana (intervalo), | 4,95 (0,5-22,5) | 3,2 (0,4-13,2) 0,8 (0,5-6,3) y 23 regimes de terapia sistê- ESSES a E no A CA [RScTanmteror na Re Temo [DA * Inclui índio americano, nativo do Alasca, ilhas do Pacífico e outros.

TInclui LH clássico (n = 9) e LH nodular com predominância linfocítica (n = 1). Inclui LZM extranodal do tipo MALT (n = 2), LZM nodal (n = 4), LZM esplênico (n = 2) e subtipo LZM desconhecido (n = 1). fInclui LH clássico (n = 2). LLC, leucemia linfocítica crônica; LDGC, linfoma difu- so de grandes células B; LF, linfoma folicular; LH, linfoma de Hodgkin; HSCT, transplante de células-tronco hematopoiéticas; MALT, tecido linfático associado à mucosa; LCM, linfoma de células do manto; LZM, linfoma de zona marginal; R-ICE, rituximabe mais ifosfamida, carbopla- tina e etoposídeo; MW, macroglobulinemia de Waldenstrôm.

Dosagem

[00275] Paraa monoterapia com Composto 1C, o Composto 1C foi autoadministrado por via oral, uma vez ao dia (QD). O Composto 1C foi administrado em jejum, exceto para pacientes que participam de uma coorte de efeito alimentar opcional, até que uma alteração do pro- tocolo permitisse a administração independentemente da comida. O tratamento continuou até toxicidade inaceitável ou progressão da do- ença. Durante o escalonamento da dose (ver Tabela 2C), uma coorte inicial de paciente único foi tratada com 5 mg de QD e as coortes sub- sequentes foram inscritas usando um design 3 + 3, para identificar quaisquer toxicidades limitantes de dose (DLTs; definidas na Tabela 2A) dentro do Período de observação de 21 dias. Se os DLTs ocorre- ram em >1 dos primeiros 3 pacientes ou na coorte total de 6 pacientes, a dose máxima tolerada (MTD) foi considerada excedida e o próximo nível de dose tolerável inferior foi definido como MTD. Todas as doses de até 45 mg QD foram bem toleradas durante o período de observa- ção DLT de 21 dias e, portanto, nenhum MTD foi identificado. No en- tanto, foram observadas incidências de colite a longo prazo (>3 me- ses), o que levou a uma mudança no regime de dosagem. O protocolo foi emendado para incluir um cronograma de dosagem modificado em que a dosagem diária foi seguida por dosagem semanal, com base em uma simulação de PK (ver discussão). Os pacientes inscritos durante ou após esta alteração do protocolo receberam o Composto 1C de 20 mg QD durante as primeiras 9 semanas seguido pelo Composto 1C de mg uma vez por semana (QW); os pacientes que já haviam recebi- do o Composto 1C de 20 mg QD por 29 semanas foram trocados para o esquema QW.

De acordo com a alteração do protocolo, os pacientes em curso e recém-inscritos foram obrigados a fazer tratamento profilá- tico para pneumonia por Pneumocystis jiroveci (PJP). Tabela 2A.

Definição de toxicidade limitadora de dose Não hematológico e >Toxicidade não hematológica de grau 3, excluindo náuseas, vômitos, diarreia e >Náuseas, vômitos ou diarreia de grau 3 não controlados por terapia antiemética/antidiarreica máxima com duração> 48 horas * “Qualquer toxicidade considerada uma DLT na opinião do inves- tigador e do monitor médico Hematológico * —“Neutropenia de grau 4 com duração 27 dias* * —Neutropenia febril (ANC <1,0 x 10º/L com uma única temperatu- ra de >38,3ºC (101ºF) ou uma temperatura sustentada de >38ºC (100,4ºF) por mais de 1 hora e Trombocitopenia de grau 3 associada a sangramento clinica- mente significativo (clinicamente significativo conforme determinado pelo investigador ou resultando na necessidade de uma transfusão de glóbulos vermelhos) e Trombocitopenia de grau 4 com duração >7 dias * Anemiade grau4 Geral * “Qualquer EA específico que resulte em um atraso ou redução da dose em >um terço dos sujeitos

* O itacitinibe pode causar diminuições transitórias nos glóbulos bran- cos devido à marginação; portanto, as regras da DLT exigiam que a neutropenia persistisse após a manutenção do itacitinibe por 2 a 3 di- as. Onde o estado clínico do sujeito permitia, os investigadores foram encorajados a esperar 24 horas antes de iniciar os fatores de cresci- mento, para determinar se a marginação dos leucócitos estava contri- buindo para o grau de neutropenia. AE, evento adverso; ANC, conta- gem absoluta de neutrófilos; DLT, toxicidade limitante da dose.

[00276] Paraa combinação do Composto 1C + itacitinibe, o escalo- namento da dose do Composto 1C procedeu usando um projeto 3 + 3, começando com uma dose do Composto 1C aproximadamente 25% menor do que a dose recomendada determinada para a monoterapia do Composto 1C. Os critérios para interrupção da dose de itacitinibe estão resumidos na Tabela 2A. Para cada coorte, o itacitinibe foi co- administrado na dose de 300 mg QD.

[00277] Paraa combinação de Composto 1C + R-ICE, o escalona- mento da dose do Composto 1C prosseguiu usando o projeto 3 + 3 com uma dose inicial aproximadamente 25% abaixo da dose reco- mendada determinada para o Composto 1C. Os componentes da qui- mioterapia R-ICE foram administrados de acordo com a prática institu- cional ou por protocolo. Avaliações

[00278] Os pacientes foram avaliados nos dias 1, 8 e 15dociclo 1 e no dia 1 (+ 3) de cada ciclo de tratamento subsequente. Um cronogra- ma das principais avaliações do estudo é mostrado na Tabela 2B.

s o ã Ss << "o S 5 E o - 8 os < ww + Dk xx xxx x x 5õ u x Dx x Dx x Dx x x x x < vv = vTr" so ke E e E ke k a 8 Dx xx xxx xxx xp>x/XX|x vv Co ro so a Dxkxx xxx x x x x vv o o OST o so ko É ad xxx x x x [x o É |- 82 Ee E o x Dx x x Dx x x xxx

T gs

ES SS E a Tx xx xxx xx xx ES o ke = 8 8 S o E o 8 on 5 o o 8 e o = o a «| BS 8 o E o x Pio s S S 8 3 E 5 RIE = EF 8 S S 18 Sã o 2 & |. O Ss o |? 2 Ss É E Ss 3/8 38 < 8 ss B| |5e|5/3 : 2 8 |s 2 8 ja o|2 m E |O 8 8 E |, / o eee qa o |& 8 = 2 O e je 6 6 6 6 o E [E 5 o 2 & — w(9 << e | o | s|s So $ o vo Xhlo 2 E é ls = SE | FE els CC o 3 5 = o é o Elo 5/3 /E/ô ô|ô 2 2 |x |e |O [o |O |É já x [8 [3 |E [E |E Ê = w j6 À E à o | | |É |O | < < |<

A cada 9 semanas (3 ciclos) ou com uma frequência consistente com o padrão de atendimento; realizada apenas se houver doença mensu- rável. iPode ser realizado de acordo com o padrão de atendimento; aplicável apenas para linfomas. *Para confirmar um CR. SNão coletado de pacientes recebendo Composto 1C + R-ICE. Ciclo 2 apenas; cole- tados de pacientes com malignidades de células B na coorte de ex- pansão da monoterapia do Composto 1C (coorte A). TAtravés do Ciclo 6 para monoterapia com Composto 1C e combinação de Composto 1C + itacitinibe, e nos Ciclos 3, 6, 9 e 12 para combinação de Composto 1C + R-ICE. *Tecido arquival aceitável; para pacientes com LLC, san- gue periférico é aceitável. “Opcional durante o tratamento ou biópsia EOT (ou sangue periférico para pacientes com LLC). AE, evento ad- verso; LLC, leucemia linfocítica crônica; CR, resposta completa; TC, tomografia computadorizada; ECG, eletrocardiograma; ECOG PS, sta- tus de desempenho do Eastern Cooperative Oncology Group; EOT, fim do tratamento; FDG-PET, fluorodeoxiglicose (FDG)-tomografia por emissão de pósitrons; MRI, imagem por ressonância magnética; PD, farmacodinâmica; PK, farmacocinética; R-ICE, rituximabe mais ifosfa- mida, carboplatina e etoposídeo.

[00279] O endpoint primário foi a segurança e tolerabilidade da mo- noterapia do Composto 1C, Composto 1C + itacitinibe ou Composto 1C + R-ICE conforme avaliado pelo resumo dos eventos adversos emergentes do tratamento (TEAEs), avaliações laboratoriais clínicas, resultados do exame físico e 12 derivações eletrocardiogramas. A gra- vidade dos TEAESs foi avaliada usando os Critérios Comuns de Termi- nologia para Eventos Adversos versão 4.03.

[00280] Os endpoints secundários foram eficácia e farmacocinética. A eficácia foi medida pela melhor taxa de resposta geral (ORR), defini- da como a proporção de pacientes que alcançaram uma resposta par- cial (PR) ou resposta completa (CR). A resposta foi avaliada (por ava-

liação do investigador) a cada 9 semanas com base na classificação de Lugano dos critérios de resposta do linfoma para LH e LNH (Che- son B.D. et al, Journal of Clinical Oncology, 2014;32(27):3059-3067), the International Working Group on Chronic Lymphocytic Leukemia criteria for chronic Iymphocytic leukemia (CLL) (Hallek M. et al, Blood, 2008;111(12):5446-5456; Cheson B.D. et al, J Clin Oncol, 2012;30(23): 2820-2822)), e the VIth International Workshop on Waldenstrôm Ma- croglobulinemia response assessment for Waldenstróm Macroglobuli- nemia (WM) (Owen R.G. et al, Br J] Haematol, 2013;160(2):171-176). Se a resposta do paciente ao tratamento foi avaliada por PET e CTI/MRI, o resultado do PET foi usado para endpoints de resposta; O resultado de CT/MRI foi usado para uma avaliação se o resultado de PET não estivesse disponível para a avaliação; A CT/MRI foi usada para endpoints de resposta se fosse a única forma de avaliação dispo- nível para o paciente.

[00281] Os endpoints exploratórios incluíram: duração da resposta (DOR, duração do tempo desde a primeira resposta à morte ou pro- gressão da doença, o que ocorrer primeiro); sobrevida livre de pro- gressão (PFS, duração do tempo desde a primeira dose do estudo até a morte ou progressão da doença, o que ocorrer primeiro); PK da po- pulação; relação farmacodinâmica (PD) entre a inibição de PI3Kô (con- forme determinado por um ensaio AKT fosforilado ex vivo [DAKT]). Métodos estatísticos

[00282] As análises de segurança, tolerabilidade e eficácia foram realizadas na população de segurança/intenção de tratar, que incluiu todos os pacientes inscritos que receberam 21 dose do Composto 1C, itacitinibe ou qualquer um dos componentes R-ICE. As análises de PK e PD incluíram todos os pacientes na população de segurança/intenção de tratamento com dados de PK/PD disponíveis. Todas as análises esta- tísticas foram de natureza exploratória e foram resumidas por meio de estatística descritiva. ORRs foram estimados com intervalos de confi- ança de 95% (Cls) calculados com base no método exato para distri- buições binomiais. As estimativas de Kaplan-Meier de mediana de DOR e PFS foram apresentadas com seus respectivos Cls de 95%. Critérios adicionais de exclusão de paciente

[00283] Os critérios adicionais de exclusão de pacientes incluíram tratamento com radiação em 4 semanas, medicamento do estudo ex- perimental em 28 dias (ou 5 meias-vidas, o que for mais longo), medi- camentos anticâncer aprovados (exceto esteroides com <10 mg de prednisona por dia) em 21 (42 para nitrosoureias) dias (ou 5 meias- vidas, o que for mais longo), grau de toxicidade não resolvido 22, histó- ria atual ou recente de infecção clinicamente significativa, bilirrubina total 21,2 x limite superior do normal (LSN), fosfatase alcalina 22,5 x LSN, aspartato aminotransferase (AST) ou alanina aminotransferase (ALT) >=2,0 x LSN ou depuração da creatinina <50 mL/min com base na fórmula de Cockroft-Gault. Por protocolo de cronograma de dosagem de R-ICE

[00284] Por protocolo, o R-ICE foi administrado em 3 ciclos de 21 dias, de acordo com o seguinte cronograma: rituximabe 375 mg/m? nos Dias 1 e 2 do Ciclo 1 e no Dia 1 dos Ciclos 2 e 3; ifosfamida 5000 mg/m? por infusão intravenosa contínua (IV) ao longo de 24 h no Dia 3 de cada ciclo; carboplatina (área sob a curva = 5 mg/mL; dose máxima de 800 mg) por infusão IV no Dia 3; etoposídeo 100 mg/m? por via in- travenosa nos dias 3 a 5. Exemplo F. Monoterapia com inibidor de PIS3K5

[00285] Esta análise inclui dados de pacientes inscritos em coortes de escalonamento de dose de monoterapia do Composto 1C (5-45 mg QD) e expansão (20 mg QD e 30 mg QD). Escalonamento de dose e expansão de coorte

[00286] O número de pacientes por nível de dose durante o escalo-

namento e expansão da dose de monoterapia do Composto 1C é mos- trado na Tabela 2C. Não foram identificados DLTs, o MTD não foi atin- gido e as doses de 20 mg QD e 30 mg QD foram expandidas. Tabela 2C. Escalonamento de dose de monoterapia e expansão de coorte Doses de ex- pansão ma RR Se 1 DLT fosse observado nos 3 primeiros pacientes, 3 pacientes adicionais deveriam ser Em caso de grau 22 AE, a Regras de incluídos na coorte; se os DLTs ocorreram em - coorte deveria ser expan- escalação > 1 dos primeiros 3 pacientes ou na coorte dida para 3 pacientes total de 6 pacientes, então o MTD foi conside- rado excedido AE = evento adverso; DLT = toxicidade limitante da dose; MTD = dose máxima tolerada. Farmacocinética e Farmacodinâmica do Composto 1C

[00287] Todas as doses testadas permaneceram acima do ICoo para a inibição alvo ao longo do intervalo de dosagem, como mostrado na Figura 1A; Cmax € Ctougn resultantes de uma dose QD de 20 mg do Composto 1C foram 16 vezes e 2 vezes acima do ICoaopara a inibição de pAKT, respectivamente. Uma simulação de PK conduzida para apoiar a seleção de um cronograma de dosagem de QW de 20 mg es- timou que os níveis séricos do Composto 1C resultantes deste crono- grama excederiam o ICoo para a inibição alvo por — 36 horas e teriam inibição mínima ou nenhuma por aproximadamente metade do interva- lo de dosagem. Após administração de doses múltiplas do Composto 1C sozinho, o Composto 1C atingiu o pico das concentrações plasmá- ticas rapidamente, com um tmax médio de 0,5 a 1 hora. Subsequente- mente, as concentrações plasmáticas do Composto 1C diminuíram de forma monofásica com uma disposição média da fase terminal t, de

8,6 a 11,5 horas. A proporcionalidade da dose pareceu ser observada entre 5 e 45 mg QD no estado de equilíbrio, conforme mostrado na Figura 1B.

[00288] O efeito alimentar foi analisado em 12 pacientes. Embora a coadministração do Composto 1C com refeição rica em gordura dimi- nuiu a Cmax em 42% em comparação com o estado de jejum, teve um efeito modesto na área sob a curva (AUC; redução de 10%). A propor- ção média geométrica alimentada versus jejum para AUC foi de 0,90 (90% Cl: 0,68-1,18).

[00289] A inibição de PISKô quase máxima foi observada em todas as doses do Composto 1C por até 6 horas após a dose, conforme me- dido pelos efeitos nos níveis de pAKT no sangue total, como mostrado na Figura 4.

Segurança e tolerância

[00290] TEAEs que ocorrem em > 10% dos pacientes em todas as coortes de dose combinadas e na coorte de 20 mg QD são mostrados na Tabela 3.

Tabela 3. TEAEs não hematológicos ocorrendo em 215% dos pa- cientes recebendo monoterapia com Composto 1C (População de Segurança) Todas as doses (N = 72), n Mu awe [eme omilgãoo om leme Grau Grau [em fes de Je fee | 1 ee ee o jo een do o ea fem fe de Jam fim jo omnes EPT mg* (N=34), n (%) Termo preferido (%) (MedDRA) Qualquer Qualquer Grau Grau = e re eme je o de men o o me e e ee e e e ee [e fo [em e fe e Tem 5 1 rama em fa de e de o em e de e ee e 1 [proc em fo de Tem do 1 em e de Jo Ts fo fo e te E ee) ss em Jo de ls de 1 em se de Jo Je 1 1 *Com base na dose inicial. Inclui pacientes que receberam dosagem QD e OW. tInclui termos preferenciais de diarreia, colite, enterocolite, inflamação gastrointestinal, colite microscópica e colite por citomega- lovírus. *Inclui termos preferenciais de dermatite esfoliativa, erupção cutânea, erupção cutânea eritematosa, erupção macular, erupção cu- tânea maculopapular, erupção cutânea pruriginosa, erupção cutânea esfoliativa, erupção cutânea generalizada, erupção cutânea popular e erupção cutânea pustulosa. MedDRA, Dicionário Médico para Ativida- des Regulatórias; TEAE, evento adverso emergente do tratamento.

[00291] Os TEAEs não hematológicos mais comuns (230%) de qualquer grau em todos os pacientes foram diarreia/colite (36%), náu- sea (36%), fadiga (31%) e erupção cutânea (31%). Um paciente (1%)

apresentou pneumonite de grau 3 e colite por citomegalovírus de grau 3, e 7 pacientes (10%) desenvolveram pneumonia (grau 3, n = 3 [4%]). Anormalidades laboratoriais emergentes do tratamento que ocorrem em 230% dos pacientes são mostradas na Tabela 4. Nova/piora de qualquer grau e neutropenia grau 3/4 ocorreu em 32 pacientes (44%) e 14 pacientes (19%), respectivamente (Tabela 4). SAEs vivenciados por > 2pacientes foram diarreia/colite (n = 9 [13%]), pirexia (n = 4 [6%]), hipotensão (n = 3 [4%]) e sepse (n = 3 [4%]). Qualquer grau de SAEs de infecções e infestações (Classe de Sistema de Órgãos) ocor- reu em 11 pacientes (15%), incluindo pneumonia em 2 pacientes (3%). Tabela 4. Anormalidades laboratoriais hematológicas novas ou agravadas ocorrendo em 230% dos pacientes recebendo monote- rapia com Composto 1C (População de Segurança)* sem sm e a * Com base em valores laboratoriais relatados. NA, não aplicável

[00292] EntreosTEAEs de interesse, o tempo médio (intervalo) pa- ra o início da diarreia/colite de grau 3/4 foi de 5,7 (1,6-14,9) meses e o tempo médio (intervalo) para o início da erupção cutânea grau 3/4 foi de 2,9 (1,5-9,3) meses. Elevações de AST e ALT ocorreram em 21 (29%) e 20 (28%) pacientes, respectivamente; todos os eventos foram de grau 1, exceto 4 eventos em 2 pacientes (1 paciente com 1 evento cada de AST de grau 3 e elevação de ALT de grau 2, ambos ocorren- do > 30 dias após a última dose do Composto 1C; 1 paciente com 1 evento de cada elevação de AST e ALT grau 3 considerada secundá-

ria à sepse). A elevação da bilirrubina ocorreu em 8 (11%) pacientes; todos os eventos foram < grau 2, exceto 1 evento de grau 3 que ocor- reu >30 dias após a data da última dose. As mudanças nos níveis de AST e ALT ao longo do tempo são mostradas nas Figuras 5A-5B. Não houve TEAEs de PJP ou perfuração intestinal. Cinco pacientes (7%) apresentaram hipertensão (todos grau 1/2); 7 (10%) apresentaram hi- perglicemia (todos grau 1/2, exceto 1 grau 3).

[00293] “Qualquer grau de TEAEs levou à interrupção da dose do Composto 1C em 30 pacientes (42%), redução da dose em 4 pacien- tes (6%) e descontinuação do tratamento em 14 pacientes (19%). Os TEAEs não hematológicos mais comuns que levam à interrupção da dose do Composto 1C foram diarreia/colite (11/72 [15%]) e pirexia (4/72 [6%]). TEAEs levando à morte ocorreram em 2 pacientes (insufi- ciência respiratória e insuficiência respiratória e sepse); nenhum foi considerado relacionado ao Composto 1C.

Tolerabilidade e dosagem em longo prazo

[00294] Antes da implementação do cronograma de dosagem de QW, 9/31 pacientes (29%) com LDGCB, LF, LCM e LZM recebendo monoterapia com o Composto 1C haviam interrompido devido a TEA- Es, mais comumente (n>22) diarreia/colite (n = 3 [10%]), ou erupção cutânea (n = 2 [6%]); no entanto, nenhum paciente interrompeu o tra- tamento devido a AEs relacionados ao tratamento durante as primeiras 9 semanas de tratamento. Até a data de corte de dados, 26 (36%) dos 72 pacientes inscritos haviam recebido dosagem QW do Composto 1C (após receber dosagem QD por pelo menos 9 semanas) por uma mé- dia (intervalo) de 2,5 (1,2-9,6) meses e um total de 105 pacientes- mês; 46 pacientes (64%) receberam apenas dosagem QD; nenhum paciente ainda estava nas primeiras 9 semanas de dosagem QD. Qua- tro dos 26 pacientes iniciaram o cronograma de QW com uma dose < mg devido a reduções anteriores da dose (1 para 5 mg e 3 para 10 mg). Entre os 26 pacientes que receberam a dosagem QW, 8 (31%) tiveram interrupções de dose (TEAEs levando à interrupção da dose em > 1 paciente foram diarreia e neutropenia [n = 2 cada]), 1 (4%) teve uma redução de dose (devido a erupção cutânea pustular), e nenhum interrompeu o tratamento devido a um TEAE. Quatro pacientes que receberam dosagem QW (15%) apresentaram um total de 6 SAEs (dor abdominal, diarreia, pirexia, bronquite, sepse e desidratação, n = 1 ca- da) durante o período de dosagem QW. Nenhum TEAE não hematoló- gico de grau 4 foi relatado durante a dosagem QW. Dois pacientes ti- veram diarreia de grau 3 e erupção cutânea (n = 1 [4%] cada); ambos os eventos ocorreram logo após a mudança da dosagem QD. Nenhu- ma neutropenia de grau 4 nova/agravada foi relatada, e um paciente relatou uma trombocitopenia de grau 4 nova/agravada durante a dosa- gem QW.

Eficácia

[00295] A ORR entre os pacientes avaliáveis variou por tipo de do- ença, conforme mostrado na Tabela 5. Entre os pacientes com tama- nho de lesão avaliável na avaliação inicial e após a avaliação inicial, respostas profundas (redução de > 75% do tamanho da lesão alvo na avaliação inicial) ocorreram em 4/7 pacientes (57%) com linfoma de zona marginal (LZM), 7/14 (50%) com linfoma folicular (LF), 3/8 (38%) com linfoma de células do manto (LCM) e 2/20 (10%) com linfoma di- fuso de grandes células B (LDGCB) (Figura 2). Entre os pacientes com esses tipos de tumor, a grande maioria (93%) das respostas ocorreu na primeira avaliação (aproximadamente 9 semanas), como mostrado na Figura 6. Respostas duráveis (> 6 meses) foram observadas entre os pacientes que receberam a dosagem QW e vários pacientes per- maneceram no cronograma de QW por pelo menos 8 meses, confor- me mostrado na Figura 3, incluindo 2 que receberam 10 mg QW. À duração mediana da resposta foi de 13,5 meses (Cl 95%: 8,3—-18,8)

para LDGCB, 4,4 meses (IC de 95%: 2,1 — NE) para LZM, e não foi obtida para LF ou LOM.

A Figura 7 mostra imagens representativas de tomografia por emissão de pósitrons (PET) de um paciente que obteve resposta completa com a monoterapia com Composto 1C.

O paciente tinha <65 anos de idade, linfoma de células do manto sem envolvimen- to da medula óssea (lesão alvo, 98 mm x 58 mm) e havia recebido 1 tratamento anterior (R-HyperCVAD). Após o tratamento com Composto 1C, 30 mg uma vez ao dia, o paciente obteve resposta completa na semana 9.

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[00296] Onze pacientes foram inscritos e tratados com Composto 1C + itacitinib. A duração média (intervalo) do tratamento com o Com- posto 1C e com itacitinib foi de 2,1 (1,0-10,3) meses. No corte de da- dos, o tratamento estava em andamento em 2 pacientes (18%); 8 pa- cientes (73%) interromperam o tratamento devido à progressão da do- ença e 1 (9%) devido a TEAE.

[00297] Dos 11 pacientes tratados com Composto 1C + itacitinib, 8 receberam 20 mg QD do Composto 1C e 3 receberam 30 mg QD do Composto 1C; todos os pacientes receberam 300 mg QD de itacitinib. Nenhuma DLT foi observada. Nove pacientes (82%) apresentaram TEAEs, 5 (45%) tiveram TEAEs de grau 3/4 e 2 (18%) tiveram SAEs. Os TEAEs mais comuns de qualquer grau (n22) foram náusea, fadiga (n = 5 cada), tosse, hipertensão, vômitos (n = 3 cada), diminuição do apetite, hiperglicemia, aumento do lacrimejamento, herpes oral e ta- quicardia (n = 2 cada). Cinco pacientes apresentaram TEAEs de grau 3/4: compressão da medula espinhal de grau 3, dor intratável de grau 3 e fosfatase alcalina elevada de grau 3 (n = 1); hiperlipidemia agrava- da de grau 3 (n = 1); hipertensão grau 3 (n = 1); diarreia de grau 3 e desidratação de grau 3 (n = 1); e hipertensão grau 3 e hipercalcemia grau 4 (n = 1). Um paciente apresentou uma anormalidade laboratorial hematológica de grau 4 nova/agravada (trombocitopenia). Un SAE de desidratação de grau 3 e hipercalcemia de grau 4 foram relatados.

Dois pacientes (18%) tiveram TEAEs levando à interrupção da dose de ambos o Composto 1C e itacitinibe e 1 paciente (9%) teve um TEAE levando à descontinuação de ambos o Composto 1C e itacitinibe; ne- nhum paciente apresentou TEAE que levou à redução da dose. Ne- nhum TEAE levou à morte.

[00298] Entre os pacientes avaliáveis, a melhor resposta geral de CR/resposta metabólica completa foi obtida por pacientes com LLC (1/1) e LF (1/1); a melhor resposta geral da resposta metabólica parcial foi alcançada por pacientes com LCM (1/1) e LH clássico (1/2). Todos os 6 pacientes com LDGCB e 1 de 2 pacientes com LH clássico tive- ram a melhor resposta geral de PD/doença metabólica progressiva. Composto 1C combinado com R-ICE

[00299] Cinco pacientes com LDGCB foram tratados com Compos- to 1C + R-ICE. A duração média (intervalo) do tratamento com o Com- posto 1C foi de 2,3 (1,5-3,7) meses; 4 pacientes receberam 3 ciclos de R-ICE cada, e 1 paciente recebeu 2 ciclos de R-ICE. Até a data de cor- te de dados, todos os pacientes descontinuaram o tratamento devido à decisão do médico (n = 2), doença progressiva, eventos adversos e outros (n = 1 cada). Dos 5 pacientes, 4 receberam 15 mg QD e 1 rece- beu 20 mg QD do Composto 1C. Nenhuma DLT foi observada. Os TEAEs não hematológicos de qualquer grau mais comuns (> 2 pacien- tes) foram tontura (n = 3), alopecia, constipação, sobrecarga de líqui- dos, dor de cabeça, hipocalemia e suores noturnos (n = 2 cada). Três pacientes relataram trombocitopenia nova/agravada de grau 4 e 2 pa- cientes relataram neutropenia nova/agravada de grau 4. Dois pacien- tes (40%) apresentaram SAEs, 1 paciente apresentou encefalopatia aguda de grau 3 (relacionada à ifosfamida) e 1 apresentou vibração atrial e fibrilação atrial de grau 2 e dispneia de grau 3, neutropenia e neutropenia febril (todos relacionados a ambos o Composto 1C e R- ICE). Três pacientes (60%) tiveram TEAEs que levaram à interrupção da dose de ambos o Composto 1C e R-ICE, 1 paciente (20%) teve um TEAE que levou à interrupção da dose somente do Composto 1C, e 1 paciente (20%) teve TEAEs que levaram a descontinuação de ambos o Composto 1C e R-ICE; nenhum paciente apresentou TEAE que le- vou à redução da dose. Nenhum TEAE levou à morte.

[00300] Dos 5 pacientes tratados com Composto 1C + R-ICE, 3 pa- cientes obtiveram uma resposta metabólica completa (1 dos 3 pacien- tes indicou um desejo de prosseguir para o SCT) e 2 pacientes tiveram doença estável como melhor resposta. Exemplo H. Resultados da Monoterapia com PI3Kô e Terapias de Combinação

[00301] O Composto 1C demonstrou um perfil de segurança dife- renciado em relação aos inibidores de PI3Kô de primeira geração (por exemplo, idelalisib e duvelisib) (Coutré SE et al, Leukemia & Lympho- ma. 2015; 56(10):2779-2786; Flinn IW et al, Blood, 2018; 131(8):877- 887), principalmente pela quase ausência de transaminite de grau 22. Ao contrário do copanlisib, um inibidor de pan-PI3SK que é aprovado nos Estados Unidos como monoterapia para o tratamento de LF reci- divante (ALIQOPATY. (copanlisib) para injeção, para uso intravenoso. US Whippany, NJ: Bayer HealthCare Pharmaceuticals Inc.; 2017), também não houve hipertensão ou hiperglicemia clinicamente signifi- cativa, provavelmente devido à alta seletividade do Composto 1C para a isoforma 5 de PI3SK. Embora nenhum PJP tenha sido observado, uma alteração do protocolo tornou a profilaxia PJP obrigatória em par- te do estudo em resposta a uma infecção PJP relatada em um estudo de fase 1 diferente que combinou o Composto 1C com pembrolizu- mab.

[00302] Diarreia/colite e erupção cutânea, toxicidades comuns aos inibidores de PI3K, foram 2 das toxicidades mais frequentes observa- das neste estudo; no entanto, a maioria dos eventos de diarreia foram de grau 1 ou 2 e eram controláveis. A maioria das diarreias/colites e erupções cutâneas de grau 3/4 ocorreram após a primeira avaliação da doença; no geral, qualquer grau de diarreia/colite ou erupção cutâà- nea levou à descontinuação do tratamento em 9/72 (13%) dos pacien- tes, incluindo 3 pacientes com diarreia/colite que foram positivos após reexposição à mesma dose. Neutropenia de grau 4 (6%) foi observada apenas durante a dosagem QD (com a primeira ocorrência após 21 dias de tratamento). O perfil de segurança associado à dose de 20 mg QD foi geralmente consistente com o observado para todas as doses combinadas e com aquele observado para cada nível de dose indivi- dual (dados não mostrados), embora relativamente poucos pacientes tenham recebido doses abaixo de 20 mg QD e acima de 30 mg QD.

[00303] A dosagem em longo prazo do Composto 1C identificou TEAEs de início tardio que levaram à descontinuação do tratamento. Para melhorar a tolerabilidade em longo prazo do Composto 1C, man- tendo ao mesmo tempo uma alta taxa de resposta, um regime de do- sagem modificado foi implementado (20 mg QD por 9 semanas segui- do por 20 mg QW). O período de dosagem diária foi mantido para pre- servar o potencial de rápido início de resposta (no momento da imple- mentação, todos os 11 pacientes com LNH que receberam 20 mg QD haviam obtido uma resposta objetiva, 10 dos quais ocorreram na pri- meira avaliação da doença). A porção intermitente do regime de dosa- gem, que foi implementado para diminuir a incidência de TEAEs de início tardio, foi baseada na simulação de PK/PD comparativa com co- panlisib (Patnaik A., et al, Annals of Oncology, 2016; 27(10):1928- 1940). Sem estar limitado pela teoria, prevê-se que o regime de 20 mg QW forneça uma inibição de pAKT similar à esperada da dosagem QW de copanlisib. É animador que, nenhum dos 26 pacientes que re- ceberam a dosagem QW descontinuaram o tratamento do estudo de- vido a TEAEs, com base nos dados coletados durante um período de

105 pacientes-mês. Esta observação, combinada com a ausência de colite, TEAEs não hematológicos de grau 4 e neutropenia, e uma baixa taxa de diarreia e erupção cutânea de grau 3 (n = 1 cada) sugerem que o cronograma QW é mais bem tolerado do que o cronograma QD contínuo usando as doses avaliadas neste documento.

[00304] A monoterapia com Composto 1C obteve uma alta taxa de respostas objetivas rápidas, profundas e duráveis em LNH de células B recidivante ou refratário em doses que variam de 10 mg QD a 45 mg QD. ORR em todos os subtipos variou de 30% a 78% (LDGCB, 30%; LCM, 67%; LF, 71%, LZM, 78%) e respostas profundas ocorreram em > 30% dos pacientes. Curiosamente, respostas objetivas foram obser- vadas em 2 dos 4 pacientes com LCM que haviam sido tratados ante- riormente com ibrutinib; 1 dessas respostas estava em andamento em aproximadamente 6 meses do corte de dados. Entre os pacientes com LDGCB, substancialmente mais pacientes com subtipo BCG (n = 19) foram inscritos em relação àqueles com subtipo CBA (n = 2). Esses números pequenos e desproporcionais são insuficientes para determi- nar se o Composto 1C é mais ativo em um subtipo do que no outro. Respostas duráveis foram observadas em todos os 4 desses subtipos de LNH, incluindo aproximadamente 17 meses em LF, aproximada- mente 10 meses em LZM, 214 meses em LCM e aproximadamente 19 meses em LDGCB, todos os quais incluíram dosagem QW e 2 dos quais (LF e LZM) tiveram respostas contínuas no corte de dados. To- mados em conjunto, estes dados sugerem que a dosagem QW do Composto 1C pode permitir respostas duráveis em pacientes com LNH de células B.

[00305] Os dados de PK e segurança dos estudos de combinação mostram que o Composto 1C pode ser combinado com segurança com uma dose de 300 mg QD de itacitinib. Da mesma forma, a combi- nação do Composto 1C com R-ICE também parece ser tolerada. Estu-

dos adicionais são necessários para avaliar a segurança do Composto 1C combinado com R-ICE e o potencial de maior eficácia para cada uma das combinações.

[00306] O Composto 1C demonstrou atividade antitumoral com res- postas rápidas e profundas, bem como altas taxas de resposta e um perfil de toxicidade diferenciado em pacientes com malignidades de células B recidivas ou refratárias. O regime de dosagem modificado descrito neste documento, aparentemente melhorou a tolerabilidade a longo prazo do Composto 1C e possibilitou respostas duráveis em vá- rios pacientes. Os dados de eficácia, segurança, PK e PD apresenta- dos neste documento corroboram uma investigação mais aprofundada da monoterapia com Composto 1C em estudos de fase 2 em anda- mento em subtipos selecionados de LNH (LDGCB [NCT02998476], LF [NCT03126019], LZM [NCT03144674] e LOM [NCT03235544]). Estu- dos de fase 1 explorando várias estratégias de combinação em paci- entes com LNH (NCTO3039114; NCTO3424122) também estão em andamento. Exemplo |. Dosagem de Manutenção Comparativa

[00307] Neste estudo, os sujeitos recebem administração de 20 mg de Composto 1C uma vez ao dia durante 8 semanas, em combinação com um inibidor de JAK1. Após a semana 8, os sujeitos são atribuídos a 1 de 2 grupos de dose de manutenção com base na randomização em bloco. Em um grupo, os sujeitos recebem administração de 5 mg de Composto 1C uma vez ao dia. No segundo grupo, os sujeitos rece- bem administração de 20 mg de Composto 1C uma vez por semana.

[00308] A segurança e tolerabilidade do Composto 1C são avalia- das pelo resumo dos eventos adversos emergentes do tratamento (TEAESs), avaliações laboratoriais clínicas, resultados do exame físico e eletrocardiogramas de 12 derivações. A gravidade dos TEAEs foi avaliada usando os Critérios de Terminologia Comum para Eventos

Adversos versão 4.03. Os critérios de avaliação secundários são efi- cácia e PK, conforme descrito no Exemplo E.

[00309] Sem estar limitado pela teoria, acredita-se que a dose de manutenção de 5 mg uma vez ao dia do Composto 1C fornece segu- rança e tolerabilidade similares à dose de manutenção de 20 mg uma vez por semana do Composto 1C. Exemplo J. Terapia de Combinação de PI3Kô com Inibidor de JAK1/2 no Tratamento da Mielofibrose

[00310] O Composto 1C foi avaliado em combinação com ruxolitinib em pacientes com mielofibrose primária ou secundária (MF) (por exemplo, PMF, PPV-MF ou PET-MF) que exibiram resposta subótima com monoterapia com ruxolitinib. O estudo foi projetado em três par- tes, a saber: Parte 1, Teste de Segurança: projeto 3+3; ruxolitinib + Composto 1C administrado em doses de 10 mg ou 20 mg QD durante 8 semanas, seguido de 10 mg ou 20 mg QW. Parte 2, Fase Randomizada (1:1): Grupo 1: ruxolitinib + Composto 1C administrado em doses de 10 mg QD por 8 semanas, seguido por 10 mg QW. Grupo 2: ruxolitinib + Composto 1C administrado em doses de 20 mg QD durante 8 semanas seguido por 20 mg QW. Parte 3: Regimes de dosagem adicionais, incluindo dosagem diária contínua.

[00311] A "resposta subótima" da monoterapia com ruxolitinib foi definida como segue: * “Um paciente tratado com ruxolitinib por = 6 meses com dose estável por > 8 semanas imediatamente antes da inscrição (do- ses aceitáveis prévias de ruxolitinib: 5 mg - 25 mg BID); e * —“Baço palpável> 10 cm abaixo da margem subcostal es- querda no exame físico na triagem; ou * —“Baço palpável 5 cm - 10 cm abaixo da margem subcos-

tal esquerda no exame físico e sintomas ativos de mielofibrose na consulta de triagem, definidos como 1 escore de sintoma 25; ou 2 es- cores de sintomas 23 cada, usando a seguinte forma de sintoma de triagem: escala de 10 pontos para cada um dos 7 sintomas. Os sinto- mas incluem: suores noturnos, prurido, desconforto abdominal, dor nas costelas esquerdas, saciedade precoce, dores nos ossos/músculos e inatividade.

[00312] Os esquemas de dosagem e os resultados preliminares do estudo do Composto 1C + ruxolitinibe são mostrados no Apêndice A, cuja invenção é incorporada a este documento por referência em sua totalidade. Conforme mostrado no Apêndice A, a terapia adicional com o Composto 1C parece fornecer benefício clínico adicional em pacien- tes com MF que apresentam respostas subótimas à monoterapia com ruxolitinib. Uma redução no volume do baço em 56% dos pacientes foi observada na semana 12, com os sintomas melhorando já em 4 se- manas; a melhora média dos sintomas em 24 semanas foi de 36%. À combinação do Composto 1C e ruxolitinib foi bem tolerada pelos paci- entes, sem toxicidades limitantes de dose (DLTs) na Parte 1 e um per- fil de efeito adverso (AE) de grau 3/4 esperado. De 17 pacientes em terapia a > 6 meses, apenas 2 (7%) descontinuações foram devido a AEs. AEs comuns aos inibidores de PI3K5, como hepático, erupção cutânea e colite, foram raros.

[00313] Várias modificações da invenção, além daquelas mostradas no presente documento, estarão evidentes aos versados na técnica a partir da descrição anteriormente mencionada. Tais modificações pre- tendem ser abrangidas pelo escopo das reivindicações anexas. Cada referência, incluindo todas as patentes, pedidos de patente e publica- ções, citada no presente pedido está incorporada neste documento, a título de referência em sua totalidade.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método de tratamento de uma doença em um paciente, em que a referida doença está associada à expressão ou atividade anormal de PI3Kô quinase, caracterizado pelo fato de que compreende: i) administrar ao paciente um inibidor de PI3Kô em uma primeira dosagem que é de cerca de 3 mg/dia a cerca de 50 mg/dia por um primeiro período de tempo, que é de cerca de 2 semanas a cerca de 12 semanas; e ii) administrar ao paciente uma segunda dosagem do inibi- dor de PI3Kô que é menor do que a primeira dosagem administrada ao final do primeiro período de tempo, e que é de: (a) cerca de 2,5 mg/dia ou menos; ou (b) cerca de 50 mg/semana ou menos; e em que a segunda dosagem é administrada por um segundo período de tempo, que ocorre após o primeiro período de tempo.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a primeira dosagem é de cerca de 20 mg/dia.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o primeiro período de tempo é de cerca de 8 semanas a cerca de 12 semanas.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o primeiro período de tempo é de cerca de 8 semanas.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a primeira dosagem é reduzida durante o primeiro período de tempo.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a segunda dosagem é de cerca de 2,5 mg/dia ou menos.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a segunda dosagem é de cerca de 2,5 mg/dia.

8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a segunda dosagem é de cerca de 50 mg/semana ou menos.

9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a segunda dosagem é de cerca de 20 mg/semana.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que a segunda dosagem é reduzida durante o segundo período de tempo.

11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que foi identificado que o paciente apresen- tava um ou mais sintomas associados a um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento (TEAEs).

12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que foi identificado que o paciente apresen- tava um ou mais sintomas associados a um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento (TEAEs) durante o primeiro período de tempo.

13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o primeiro período de tempo termina quando for identificado que o paciente apresenta um ou mais sintomas as- sociados a um ou mais eventos adversos emergentes do tratamento (TEA- Es).

14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que um ou mais eventos adversos emer- gentes do tratamento compreendem um ou mais dentre diarreia/colite, náu- sea, fadiga, erupção cutânea, neutropenia, pirexia, hipotensão, sepse, insu- ficiência respiratória, pneumonite, pneumonia, hipertensão, hiperglicemia, dor abdominal, bronquite, desidratação, trombocitopenia, tosse, vômito, re- dução do apetite, aumento da lacrimação, herpes oral, taquicardia, com-

pressão da medula espinhal, dor intratável, fosfatase alcalina elevada, tran- saminase elevada, hiperlipidemia, hipercalcemia, tontura, alopecia, consti- pação, sobrecarga de líquidos, cefaleia, hipocalemia, suores noturnos, en- cefalopatia, flutter atrial, fibrilação atrial e dispneia.

15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que um ou mais eventos adversos emer- gentes do tratamento compreendem um ou mais dentre diarreia/colite, náu- sea, fadiga, erupção cutânea, tosse, vômito, tontura, pirexia, hipocalemia, dor abdominal, constipação, redução do apetite, suores noturnos, prurido, dor nas costas, calafrios, leucopenia, neutropenia, linfopenia, trombocitope- nia e anemia.

16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que um ou mais eventos adversos emer- gentes do tratamento compreendem um ou mais dentre diarreia/colite e erupção cutânea.

17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 16, caracterizado pelo fato de que a diarreia/colite compreende um ou mais dentre diarreia, colite, enterocolite, inflamação gastrointestinal, colite microscópica e colite por citomegalovírus.

18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 17, caracterizado pelo fato de que a erupção cutânea compreende um ou mais dentre dermatite esfoliativa, erupção cutânea, erupção cutânea erite- matosa, erupção cutânea macular, erupção cutânea maculopapular, erup- ção cutânea pruriginosa, erupção cutânea esfoliativa, erupção cutânea ge- neralizada, erupção cutânea papular e erupção cutânea pustular.

19. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 18, caracterizado pelo fato de que a neutropenia compreende neutropenia febril.

20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 19, caracterizado pelo fato de que a transaminase elevada compreende alanina transaminase (ALT) elevada, aspartato transaminase (AST) ou uma combinação delas.

21. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PISKô é selecionado a partir de: 4-(3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi- 6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona; e 5-(3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi- 6-fluorofenil)-1,3-oxazolidin-2-ona; ou um sal farmaceuticamente aceitável das mesmas.

22. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PI3Kô é 4-(3-[1-(4-amino- 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi-6- fluorofenil)pirrolidin-2-0na, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mes- ma.

23. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pe- lo fato de que o inibidor de PI3SKô é (S)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

24. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pe- lo fato de que o inibidor de PISKô é (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

25. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pe- lo fato de que o inibidor de PISKô é (S)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

26. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pe- lo fato de que o inibidor de PISKô é (R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona,

ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

27. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pe- lo fato de que o inibidor de PI3Kô é um sal farmaceuticamente aceitável de 4-(3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi- 6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona.

28. Método, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pe- lo fato de que o inibidor de PI3Kô é sal de ácido clorídrico (R)-4-(3-((S)-1-(4- amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6- fluorofenil)pirrolidin-2-ona.

29. Método, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pe- lo fato de que o sal tem uma razão estequiométrica de 1:1 de (R)-4-(3-((S)- 1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6- fluorofenil)pirrolidin-2-ona para sal de ácido clorídrico.

30. Método, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pe- lo fato de que o sal é cristalino.

31. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PI3Kô é 5-(3-[1-(4-amino- 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)-1,3- oxazolidin-2-0na, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

32. Método, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pe- lo fato de que o inibidor de PISKô é (R)-5-(3-[(R)-1-(4-amino-3-metil-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)-1,3-oxazolidin- 2-0na, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

33. Método, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pe- lo fato de que o inibidor de PISKô é (R)-5-(3-[(S)-1-(4-amino-3-metil-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)-1,3-oxazolidin- 2-0na, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

34. Método, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pe- lo fato de que o inibidor de PI3Kô é (S)-5-(3-[(S)-1-(4-amino-3-metil-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)-1,3-oxazolidin-

2-0na, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

35. Método, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pe- lo fato de que o inibidor de PI3SKô é (S)-5-(3-[(R)-1-(4-amino-3-metil-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)-1,3-oxazolidin- 2-0na, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, caracterizado pelo fato de que a doença é selecionada dentre leuce- mia linfocítica crônica (LLC), linfoma difuso de grandes células B (LDGCB), linfoma folicular (LF), linfoma de Hodgkin (LH), linfoma de células do manto (LOM), linfoma da zona marginal (LZM) e macroglobulinemia de Waldens- trôóôm (MW).

37. Método, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pe- lo fato de que o linfoma da zona marginal (LZM) é selecionado dentre LZM extranodal, LZM nodal, LZM esplênico e subtipo de LZM desconhecido.

38. Método, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pe- lo fato de que o linfoma de Hodgkin (LH) é selecionado a partir de linfoma de Hodgkin clássico (LH) e LH com predominância linfocítica nodular.

39. Método, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pe- lo fato de que o linfoma difuso de grandes células B é selecionado de linfo- ma difuso de grandes células B tipo células B ativadas (LDGCB-CBA) e lin- foma difuso de grandes células B tipo células B do centro germinativo (LDGCB-BCG).

40. Método de tratamento de uma doença em um paciente, em que a referida doença é selecionada dentre leucemia linfocítica crônica (LLC), linfoma difuso de grandes células B (LDGCB), linfoma folicular (LF), linfoma de Hodgkin (LH), linfoma de células do manto (LCM), linfoma da zona marginal (LZM) e macroglobulinemia de Waldenstrôm (MW), caracte- rizado pelo fato de que compreende: i) administrar ao paciente sal de ácido clorídrico de (R)-4- (3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-

etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-0na em uma primeira dosagem que é de cerca de 20 mg/dia a cerca de 50 mg/dia por um primeiro período de tempo, que é de cerca de 8 semanas a cerca 9 semanas; e ii) administrar ao paciente uma segunda dosagem de sal de ácido clorídrico de (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimi- din-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-0na, que é cerca de 2,5 mg/dia ou menos por um segundo período de tempo que ocorre após o primeiro período de tempo.

41. Método de tratamento de uma doença em um paciente, em que a referida doença é selecionada dentre leucemia linfocítica crônica (LLC), linfoma difuso de grandes células B (LDGCB), linfoma folicular (LF), linfoma de Hodgkin (LH), linfoma de células do manto (LCM), linfoma da zona marginal (LZM) e macroglobulinemia de Waldenstrôm (MW), caracte- rizado pelo fato de que compreende: i) administrar ao paciente sal de ácido clorídrico de (R)-4- (3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2- etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-0na em uma primeira dosagem que é de cerca de 20 mg/dia a cerca de 50 mg/dia por um primeiro período de tempo que é de cerca de 8 semanas a cerca 9 semanas; e ii) administrar ao paciente uma segunda dosagem de sal de ácido clorídrico de (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimi- din-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-0na, que é cerca de 20 mg/semana a cerca de 50 mg/semana por um segundo período de tempo que ocorre após o primeiro período de tempo.

42. Método de tratamento de uma doença em um paciente, em que a referida doença é selecionada dentre leucemia linfocítica crônica (LLC), linfoma difuso de grandes células B (LDGCB), linfoma folicular (LF), linfoma de Hodgkin (LH), linfoma de células do manto (LCM), linfoma da zona marginal (LZM) e macroglobulinemia de Waldenstrôm (MW), caracte- rizado pelo fato de que compreende:

i) administrar ao paciente sal de ácido clorídrico de (R)-4- (3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi -6-fluorofenil)pirrolidin-2-0na em uma primeira dosagem que é de cerca de mg/dia por um primeiro período de tempo, que é de cerca de 8 semanas; e ii) administrar ao paciente uma segunda dosagem de sal de ácido clorídrico de (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimi- din-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-0na, que é cerca de 2,5 mg/dia por um segundo período de tempo que ocorre após o primeiro perí- odo de tempo.

43. Método de tratamento de uma doença em um paciente, em que a referida doença é selecionada dentre leucemia linfocítica crônica (LLC), linfoma difuso de grandes células B (LDGCB), linfoma folicular (LF), linfoma de Hodgkin (LH), linfoma de células do manto (LCM), linfoma da zona marginal (LZM) e macroglobulinemia de Waldenstrôm (MW), caracte- rizado pelo fato de que compreende: i) administrar ao paciente sal de ácido clorídrico de (R)-4-(3- ((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6- fluorofenil)pirrolidin-2-0na em uma primeira dosagem que é de cerca de 20 mg/dia por um primeiro período de tempo, que é de cerca de 8 semanas; e ii) administrar ao paciente uma segunda dosagem de sal de ácido clorídrico de (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimi- din-1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-0na, que é cerca de 20 mg/semana por um segundo período de tempo que ocorre após o primeiro período de tempo.

44. Método de tratamento de uma doença em um paciente, em que a referida doença está associada à expressão ou atividade anormal de PI3Kô quinase, caracterizado pelo fato de que compreende: i) administrar ao paciente um inibidor de PI3Kô em uma primeira dosagem que é de cerca de 3 mg/dia a cerca de 50 mg/dia por um primeiro período de tempo que é de cerca de 2 semanas a cerca de 12 se-

manas; e ii) administrar ao paciente uma segunda dosagem do inibi- dor de PI3Kô que é menor do que a primeira dosagem administrada ao final do primeiro período de tempo e que é de cerca de 2,5 mg/dia a cerca de 7,5 mg/dia; e em que a segunda dosagem é administrada por um segundo pe- ríodo de tempo que ocorre após o primeiro período de tempo.

45. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pe- lo fato de que a segunda dosagem é de cerca de 3,0 mg/dia a cerca de 7,0 mg/dia.

46. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pe- lo fato de que a segunda dosagem é de cerca de 4,0 mg/dia a cerca de 6,0 mg/dia.

47. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pe- lo fato de que a segunda dosagem é de cerca de 5,0 mg/dia.

48. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 47, caracterizado pelo fato de que o referido inibidor de PI3Kô é sal de ácido clorídrico (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona.

49. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 48, caracterizado pelo fato de que a referida doença é selecionada dentre leucemia linfocítica crônica (LLC), linfoma difuso de grandes células B (LDGCB), linfoma folicular (LF), linfoma de Hodgkin (LH), linfoma de células do manto (LCM), linfoma da zona marginal (LZM) e macroglobulinemia de Waldenstrôóm (MW).

50. Método, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pe- lo fato de que o linfoma da zona marginal (LZM) é selecionado dentre LZM extranodal, LZM nodal, LZM esplênico e subtipo de LZM desconhecido.

51. Método, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pe- lo fato de que o linfoma de Hodgkin (LH) é selecionado a partir de linfoma de Hodgkin clássico (LH) e LH com predominância linfocítica nodular.

52. Método, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pe- lo fato de que o linfoma difuso de grandes células B é selecionado de linfo- ma difuso de grandes células B tipo células B ativadas (LDGCB-CBA) e lin- foma difuso de grandes células B tipo células B do centro germinativo (LDGCB-BCG).