BR112020024211A2 - compostos de peptídeo multiepitópico e vacinas contra leishmaniose - Google Patents

Abstract

"COMPOSTOS DE PEPTÍDEO MULTIEPITÓPICO E VACINAS CONTRA LEISHMANIOSE". A presente invenção refere-se a compostos de peptídeo multiepitópico obtidos das proteínas PSA, HwB e LmLRAB de Leishmania, bem como a composições farmacêuticas e vacinas para uso contra uma ou mais leishmanioses.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSTOS DE PEPTÍDEO MULTIEPITÓPICO E VACINAS CONTRA LEISHMANIOSE".

CAMPO DA INVENÇÃO

[0001] A presente invenção refere-se a compostos de peptídeo compreendendo epítopos, composições farmacêuticas compreendendo tais compostos de peptídeo, sequências de nucleotídeo codificando para os epítopos incluídos nestes compostos de peptídeo ou para os referidos compostos de peptídeo, vetores de expressão compreendendo pelo menos uma destas sequências de nucleotídeo, reagentes diagnósticos compreendendo os referidos compostos de peptídeo, bem como vacinas profiláticas e/ou terapêuticas, destinadas a ser usadas contra uma ou mais das leishmanioses.

TÉCNICA ANTERIOR

[0002] As formas cutânea (CL), mucocutânea (MCL) e cutânea difusa e visceral (VL) de leishmanioses estão entre as mais sérias infecções parasíticas que afetam os humanos. Elas constituem um verdadeiro problema de saúde pública, em particular na América Latina, Ásia, África e sul da Europa.

[0003] Aos pacientes com sintomas de leishmaniose, acrescenta- se um grande número de indivíduos assintomáticos que, apesar de tudo, estão infectados, mas não são tratados por não serem diagnosticados. A região sul do Mediterrâneo é uma zona onde L. infantum é endêmica. Nesta região, mais de 20% da população de doadores de sangue estão infectados, enquanto apenas alguns casos de VL clínica são diagnosticados. A proporção de indivíduos assintomáticos para indivíduos sintomáticos é ainda maior em zonas onde L. donovani é endêmica. Isto é porque, nestas zonas, esta proporção é entre aproximadamente 9/1 e aproximadamente 3/1.

[0004] A eliminação de leishmanioses de levar em consideração indivíduos assintomáticos, que são considerados ser reservatórios potenciais potenciais de Leishmania.

[0005] Embora tratamentos de quimioterapia atuais tais como, por exemplo, tratamentos usando AmBisome™, tenham feito considerável progresso, um método terapêutico não pode ser aplicado a transportadores assintomáticos.

[0006] A vacinação é o método mais adequado para interromper a transmissão de parasitas de Leishmania e eliminar as leishmanioses.

[0007] No presente momento, vacinas caninas são usadas. Menção será feita, por exemplo, das vacinas CaniLeish™, Leish-Tec™ ou Leishmune™. Entretanto, nenhuma vacina para aplicação humana está disponível.

[0008] Tal vacina humana, entretanto, teria importantes consequências de saúde e socioeconômicas. Em particular acoplada ao uso de uma vacina canina, o uso da mesma levaria não apenas a umaredução no reservatório canino de leishmaniose visceral, mas também a uma significante redução nas mais incapacitantes ou mesmo fatais patologias humanas. Isto é porque, da mesma maneira da malaria, a leishmaniose tem um grande efeito sobre as pessoas e a econnomia, e a profilaxia da mesma deve significantemente melhorar o contexto socioeconômico dos países mais seriamente afetados.

[0009] O desenvolvimento de uma vacina humana pela transposição de uma vacina canina tal como CaniLeish™ para humanos foi imaginado, esta vacina canina sendo o objeto do document de patente WO 9426899, ou usando apenas um dos maiores imunógenos da vacina, o objeto do documento de patente WO 2015/079420, ou usando derivados peptídicos apenas deste maior imunógeno, o objeto do documento de patente WO 2014/102471, que descreve em particular, os seguintes peptídeos:

SEQ ID Nº: B9 : T-N-T-L-A-V-L-Q-A-F-G-R-A-I-P-E-L-G-K-K-W SEQ ID Nº: B10 : E-G-Y-F-V-T-D-E-K-T-G-L-V-Y-R-D-G-G-V-A-A-A-S- S-G SEQ ID Nº: B11 : T-P-E-Q-R-T-N-T-L-T-V-E-L-G-K-K-W-I-G SEQ ID Nº: B12 : T-L-P-E-M-P-V-G-V-P-E-M-P-A-G-V-D-Y SEQ ID Nº: B13 : A-R-G-R-E-G-Y-F-L-A-R-G-A-R-G-R-E-G-Y-E-G-Y-F- V-T-D-E-K.

[0010] Entretanto, a transposição do princípio ativo desta vacina ou do maior imunógeno apenas para a medicina humana não pode ser considerada por causa das restrições industriais com relação, em particular, à produção de vacinas humanas, e aos custos incorridos. O uso apenas destes derivados de peptídeo do maior imunógeno pode também não ser considerado visto que eels têm um grau insuficiente de cobertura de vacina para as populações envolvidas e uma eficácia in vitro muito baixa para estimular células humanas e para produzir citocinas do tipo Th1 tal como IFN-γ, mesmo em combinações 2 μM para cada peptídeo.

[0011] Além disso, outros argumentos são também em favor de desenvolvimento de uma vacina específica para a prevenção de leishmanioses humanas. Isto é porque foi mostrado que a cura desta doença está geralmente associada com o desenvolvimento de imunidade contra a reinfecção. Em indivíduos curados, uma resposta imunológica de célula específica dos antígenos parasíticos é observada tanto in vivo, na reação de hipersensibilidade retardada em resposta ao teste da pele para Leishmania, quanto in vitro, quando as células mononucleadas de sangue periférico (PBMCs) destes indivíduos são estimuladas, com antígenos Leishmania.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0012] Levando em consideração o acima exposto, um problema técnico que a invenção se propõe a resolver é o desenvolvimento de compostos de peptídeo compreendendo novos epítopos, composições farmacêuticas e reagentes diagnósticos compreendendo tais compostos de peptídeo, tendo capacidade imonogênica elevada contra leishmanioses, e permitindo o desenvolvimento de vacinas profiláticas e/ou terapêuticas eficazes destinadas a ser eficazmente usadas contra uma ou mais das species Leishmania, que são finannceiramente acessíveis pelas populações envolvidas.

[0013] O primeiro objeto da solução da invenção para este problema é um composto de peptídeo compreendendo pelo menos dois epítopos contidos nas sequências de proteína selecionadas das proteínas Leishmania PSA, H2B ou LmLRAB tendo uma sequência selecionada das sequências SEQ ID Nº: 1 a 21, as sequências SEQ ID Nº: 24 a 64, as sequências SEQ ID Nº: 67, 68, 70 a 72, 74 a 76, as sequências SEQ ID Nº: 78 a 95, as sequências SEQ ID Nº: 98 a 136, as sequências SEQ ID Nº: 139 a 156, e as sequências SEQ ID Nº: 158 a 184,, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos dos mesmos, os referidos epítopos opcionalmente semdo separados por um espaçador de peptídeo compreendendo pelo menos um aminoácido.

[0014] O segundo objeto da mesma é um anticorpo específico e imunossoro contendo o mesmo direcionado contra os epítopos dos compostos de peptídeo acima mencionados.

[0015] O terceiro objeto da mesma é uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um composto de peptídeo como acima mencionado.

[0016] O quarto objeto da mesma é uma composição compreendendo pelo menos um composto de peptídeo como acima mencionado, para a fabricação de um fármaco ou uma vacina, um reagente diagnóstico in vivo ou in vitro para induzir ou diagnosticar em mamíferos uma ativação da imunidade mediada pela célula dependente de linfócito tipo Th1 e/ou imunidade humoral efetora.

[0017] O quinto objeto da mesma é uma vacina profilática e/ou terapêutica destinada a ser usada contra uma ou mais da Leishmania selecionada de Leishmania donovani, Leishmania infantum, Leishmania chagasi, Leishmania mexicana, Leishmania amazonensis, Leishmania venezuelensis, Leishmania tropica, Leishmania major, Leishmania aethiopica, Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (Viannia) guyanensis, Leishmania (Viannia) panamensis, e/ou Leishmania (Viannia) peruviana, compreendendo pelo menos um composto de peptídeo como acima mencionadas.

[0018] O sexto objeto da mesma é uma sequência de nucleotídeo codificando para epítopos incluídos nos compostos de peptídeo acima mencionados ou para os referidos compostos de peptídeo.

[0019] O sétimo objeto da mesma é um vetor de expressão compreendendo pelo menos uma sequência de nucleotídeo como acima mencionado,, bem como os meios necessários para expressão do mesmo.

[0020] O oitavo objeto da mesma é um reagente diagnóstico compreendendo um composto peptídeo como acima mencionado.

[0021] Vantajosamente, - o composto de peptídeo é um composto de peptídeo em que os referidos derivados análogos, muteína e homólogos dos epítopos, tendo capacidade imunogênica, têm uma percentage de identidade de sequência de pelo menos 50%, preferivelmente pelo menos 75% com a sequência dos referidos epítopos; - o espaçador de peptídeo compreende 1 a 8 aminoácidos; o composto de peptídeo compreende 2, 3 ou 4 dos referidos epítopos; - um primeiro epítopo é selecionado dos referidos epítopos contidos na sequência de uma primeira proteína das proteínas selecionadas de PSA, H2B ou LmLRAB, um segundo epítopo é contido na sequência de uma segunda proteína, diferente da primeira proteína, e selecionados de PSA, H2B ou LmLRAB; - o composto de peptídeo é um composto em que os epítopos são selecionados dos epítopos de sequências SEQ ID Nº: 22, 23, 65, 66, 69, 73, 77, 96, 97, 137, 138, 157 e 185; - o composto de peptídeo inclui pelo menos três epítopos contidos nas sequências de diferentes proteínas selecionadas de PSA, H2B e LmLRAB; - a composição compreende pelo menos um composto de peptídeo como acima mencionado e se destina a ser usado em vacinação profilática e terapêutica direcionada contra Leishmania; - as Leishmania são Leishmania donovani, Leishmania infantum, Leishmania chagasi, Leishmania mexicana, Leishmania amazonensis, Leishmania venezuelensis, Leishmania tropica, Leishmania major, Leishmania aethiopica, Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (Viannia) guyanensis, Leishmania (Viannia) panamensis e/ou Leishmania (Viannia) peruviana; - a composição compreende pelo menos um composto de peptídeo como acima mencionado, para a fabricação de um fármaco ou uma vacina, ou um reagente para diagnóstivo in vivo ou in vitro para induzir ou diagnosticar em mamíferos uma ativação de imunidade mediada por célula dependente de linfócito tipo Th1 e/ou imunidade humoral efetora; - a vacina compreende primeiramente pelo menos um composto de peptídeo selecionado de SEQ ID Nº: 22, 23, 69, 73 e 77,, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos do mesmo; e em segundo lugar, pelo menos um composto de peptídeo selecionado das sequências SEQ ID Nº: 65, 66, 96, 97, 137, 138, 157 e 185,, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos dos mesmos; - a vacina compreende primeiramente pelo menos um ou dois compostos de peptídeo selecionados de SEQ ID Nº: 22, 23, 69, 73 e 77, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos dos mesmos; e em segundo lugar pelo menos um, dois ou três compostos de peptídeo selecionados das sequências SEQ ID Nos. 65, 66, 96, 97, 137, 138, 157 e 185, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos dos mesmos; - a vacina compreende, em combinação, os seguintes compostos de peptídeo de multiepítopo: SEQ ID Nº: 23, 66, 73, 77, 97, 138, 157 e 185,, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos do mesmo; SEQ ID Nº: 23, 66, 157 e 185, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos do mesmo; SEQ ID Nº: 66, 97, 138, 157 e 185, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos do mesmo; ou SEQ ID Nº: 66, 157 e 185, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos do mesmo; e - uma vacina também compreende um adjuvante selecionado dos adjuvantes em classes TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8 e TLR9, saponinas e os derivados de QA21, quilA ou QS21 do mesmo, emulsões de óleo em água ou água em óleo, polissacarídeos, lipossomas catiônicas, virossomas ou polieletrólitos e os imunomoduladores selecionados de proteínas da saliva da mosca de areia, citocinas, peptídeos e proteínas de choque térmico; a vacina é destinada à administração subcutânea, intradérmica, intramuscular, parenteral, endonasal, mucosal ou oral. BREVE DESCRIÇÃO DAS FigurAS

[0022] A invenção será melhor entendida a partir de uma leitura da seguinte descrição não limitativa, elaborado em relação aos desenhos anexos, em que:

[0023] A Figura 1A mostra a localização dos epítopos HLA-I and HLA-II epítopos de sequências SEQ ID Nº: 1 a 66 nas sequências da proteína H2B de L. major (Número de Acesso GenBank AAK21263), e as Figuras 1B e 1C mostram a localização dos principais epítopos HLA- I das sequências SEQ ID Nº: 22 e 23 (figura 1B), e a localização da SEQ ID Nº: 65 e 66 (figura 1C) na referida sequência da proteína H2B de L.major;

[0024] Figuras 2A, 2B e 2C mostram a localização dos epítopos HLA-I de sequências SEQ ID Nº: 67-68, 70-72 e 74-76 (figura 2A), a localização dos epítopos HLA-I e HLA-II de sequências SEQ ID Nº: 78 a 97 (figura 2B), e a localização dos epítopos HLA-I e HLA-II de sequências SEQ ID Nº: 98 a 138 (figura 2C) nas sequências da proteína LmLRAB de L.major (Número de Acesso GenBank: XP_001685071), e a Figura 2D mostra a localização das sequências SEQ ID Nº: 96, 97, 137 e 138 (figura 2D) na sequência da referida proteína LmLRAB de L.major;

[0025] Figuras 3A e 3B mostram a localização dos epítopos HLA-I e HLA-II de sequências SEQ ID Nº: 139 a 157 (figura 3A) e a localização dos epítopos HLA-I e HLA-II de sequências SEQ ID Nº: 158 a 185 nas sequências da proteína PSA de L. infantum (Número de Acesso GenBank ACY70941), e a Figura 3C mostra a localização das sequências SEQ ID Nº: 157 e 185 nesta sequência de proteína PSA de L. infantum;

[0026] A Figura 4 é uma tabela que mostra as afinidades estimadas para os alelos HLA de classe I e HLA de classe II dos epítopos nos peptídeos das sequências SEQ ID Nº: 22, 23, 65, 66 (figura 4A), 69, 73, 77, 96, 97, 137, 138 (figura 4B), e 157, 185 (figura 4C);

[0027] A Figura 5 é uma tabela que mostra a cobertura da população mundial estimada com uma combinação do composto de peptídeos de acordo com a invenção (figura 5A), ou com a combinação dos peptídeos SEQ ID Nº: B9, B10, B11, B12 e B13 (figura 5B), que mostra um valor adicionado muito elevado dos peptídeos de acordo com a invenção;

[0028] A Figura 6 é uma tabela que mostra os níveis de IFN-γ secretado pelas PBMCs (células mononucleares de sangue periférico) de indivíduos curados de leishmaniose cutânea e estimuladas in vitro por compostos de peptídeo da presente invenção de acordo com um curto protocolo de 10 dias com uma estinulação no D0 e adição de IL-2 recombinante no D1, D4 e D7. Os níveis de IFN-γ podem atingir mais de 2.700 pg/ml com uma combinação do composto de peptídeos de acordo com a invenção, que mostra um valor adicionado muito elevado destes peptídeos de acordo com a invenção. Os compostos usados nestas misturas foram obtidos por síntese química com a adição de uma cauda palmitoilada na extremidade amino-terminal e sem modificação da extremidade carbóxi-terminal;

[0029] A Figura 7 é uma tabela que mostra os níveis de IFN-γ secretados pelas PBMCs de indivíduos curados de leishmaniose cutânea e estimuladas in vitro por misturas de compostos de peptídeo da presente invenção de acordo com um curto protocolo de 10 dias com estimulação no D0 e adição de IL-2 recombinante no D1, D4 e D7. Os compostos usados nestas misturas foram obtidos por síntese química com a adição de uma cauda palmitoilada na extremidade amino-terminal e sem modificação da extremidade carbóxi-terminal Os níveis de IFN-γ obtidos com uma combinação do composto de peptídeos de acordo com a invenção também mostra um valor adicionado elevado dos compostos de acordo com a invenção;

[0030] A Figura 8 mostra a avaliação das propriedades de imunogenicidade de compostos de peptídeo de acordo com a invenção em indivíduos virgens, pessoas que nunca tiveram contato com o parasita Leishmania. Esta avaliação é um importante fator na predição da eficácia de uma vacina de peptídeo (Kwok WW et al, 2012, Frequency of epitope-specific naive CD4(+) T cells correlates with immunodominance in the human memory repertoire; Castelli FA et al, 2007, Differential capacity of T cell priming in naive donors of promiscuous CD4+ T cell epítopos of HCV NS3 e Core proteins). A imunogenicidade é avaliada in vitro medindo a frequência das células T virgens preexistentes e a amplitude do repertório T virgem específico para cada composto. A avaliação é realizada usando amostras de sangue de indivíduos virgens e de acordo com um longo protocolo (Castelli FA, et al. 2007 como acima mencionado) colocando linfócitos

T purificados em contato com células dendríticas autólogas anteriormente incubadas com os peptídeos da invenção. A combinação de peptídeos usados é composta de: SEQ ID Nº: 23, SEQ ID Nº: 66, SEQ ID Nº: 73, SEQ ID Nº: 77, SEQ ID Nº: 97, SEQ ID Nº: 138, SEQ ID Nº: 157, SEQ ID Nº: 185, SEQ ID Nº: B11, SEQ ID Nº: B12 e SEQ ID Nº: B13. Os compostos foram sintetizados quimicamente sem modificação amino-terminal e com amidação do carbóxi-terminal (peptídeo-NH2) (NH2). Após três sucessivas estimulações em intervalos de sete dias das células T CD4+ de um indivíduo virgem (MPL10; Établissement français du sang de Toulouse), um IFN- γELISPOT foi realizado com as células na presença ou ausência da mistura de peptídeos, ou na presença de cada composto individualmente. Seis linhagens específicas foram reveladas (valor-p entre 0,0269 e 0,0489 de acordo com a linhagem específica). Cada linhagem positive responde a pelo menos um dos peptídeos da presente invenção (figura 8). A linhagem MPL10-3 responde aos peptídeos SEQ ID Nº: 73 e SEQ ID Nº: 157. A linhagem MPL10-4 responde aos peptídeos SEQ ID Nº: 23, SEQ ID Nº: 73, SEQ ID Nº: 77, SEQ ID Nº: 97, SEQ ID Nº: 138 e SEQ ID Nº: 157. A linhagem MPL10-7 responde aos peptídeos SEQ ID Nº: 77, SEQ ID Nº: 97 e SEQ ID Nº: 157. A linhagem MPL10-8 responde aos peptídeos SEQ ID Nº: 66, SEQ ID Nº: 73, SEQ ID Nº: 97, SEQ ID Nº: 138 e SEQ ID Nº: 157. A linhagem MPL10-10 responde aos peptídeos SEQ ID Nº: 66, SEQ ID Nº: 73, SEQ ID Nº: 77, SEQ ID Nº: 97, SEQ ID Nº: 138, SEQ ID Nº: 157 e SEQ ID Nº: 185, e a linhagem MPL10-12 responde aos peptídeos SEQ ID Nº: 66, SEQ ID Nº: 157 e SEQ ID Nº: 185; e

[0031] A Figura 9 mostra a avaliação das propriedades de imunogenicidade de compostos de peptídeo da invenção no mesmo indivíduo virgem (MPL10) mas com compostos quimicamente sinteizados com a adição de uma cauda palmitoilada na extremidade amino-terminal e com um grupo NH2 na extremidade carbóxi-terminal (PAL-peptídeo-NH2). A mesma combinação de peptídeos anteriormente usada. Após três estimulações com a mistura de PAL- peptídeo-NH2 peptídeos, um IFN-g ELISPOT foi realizado com as células na presença ou ausência da mistura de peptídeos, ou na presença de cada peptídeo individualmente. Quatro linhagens específicas foram reveladas (valor-p = 0,0275 para todas as linhagens específicas). A linhagem MPL10-PAL-2 responde aos peptídeos SEQ ID Nº: 22, SEQ ID Nº: 66, SEQ ID Nº: 73, SEQ ID Nº: 157 e SEQ ID Nº: 185 (figura 9). A linhagem MPL10-PAL-3 responde aos peptídeos SEQ ID Nº: 23, SEQ ID Nº: 66, SEQ ID Nº: 73, SEQ ID Nº: 77, SEQ ID Nº: 97, SEQ ID Nº: 138, SEQ ID Nº: 157 e SEQ ID Nº: 185.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0032] De acordo com a invenção, "epítopo" significa um composto de peptídeo ou um peptídeo definido pela sequência do mesmo tendo aproximadamente 8 a 15 aminoácidos.

[0033] De acordo com a invenção, "derivados análogos" ou "derivados de muteína" de um composto de peptídeo significam os derivados biologicamente ativos das moléculas de referência que possuem a atividade necessária, a saber, a capacidade de estimular uma resposta imunológica mediada pela célula. Em geral, o termo "derivados análogos" refere-se a compostos tendo uma sequência e uma estrutura polipeptídica tendo uma ou mais adições, substituições e/ou deleções de aminoácidos, com relação ao composto de peptídeos definido acima, na medida em que essas modificações não destroem a atividade imunogênica. De acordo com a invenção, os "análogos" particularmente preferidos incluem as substituições de preservação, ou seja, as substituições ou substituições sem quaisquer consequências na função e na estrutura final da proteína. O termo "derivado de muteína" significa os peptídeos tendo um ou mais elementos que imitam o peptídeo. Métodos para a preparação de análogos convencionais e muteínas são conhecidos por pessoas versadas na técnica.

[0034] De acordo com a invenção, "derivados homólogos" significa compostos de peptídeo com uma certa porcentagem de identificação de peptídeo. O termo "identidade" significa que os aminoácidos de duas sequências de peptídeos comparados se correspondem exatamente. A porcentagem de identidade é determinada por uma comparação direta das sequências entre dois compostos de peptídeos, alinhando as referidas sequências e contando o número exato de incompatibilidades entre as duas sequências alinhadas. Em seguida, uma divisão pelo comprimento da sequência mais curta é realizada e o resultado é multiplicado por cem. A percentagem de identidade também pode ser determinada por meio de programas de computador bem conhecidos dos especialistas na técnica. Assim, de acordo com a invenção, duas sequências peptídicas são ditas "substancialmente homólogas" uma em relação à outra desde que tenham pelo menos 50%, preferivelmente pelo menos 70%, preferivelmente novamente pelo menos 75%, preferivelmente novamente pelo menos 85%, preferivelmente novamente pelo menos 90% e ainda mais preferivelmente pelo menos 95% ou mais identidade de sequência ao longo de um comprimento definido das moléculas de peptídeo.

[0035] A estratégia de vacina de acordo com a invenção pretende responder à necessidade de uma vacina que proporcione uma boa cobertura da população humana mundial e proteja contra as principais espécies de leishmaniose. Baseia-se em fragmentos de peptídeos antigênicos capazes de ativar de forma duradoura a imunidade celular específica direcionada contra esses parasitas. A vacinação peptídica é baseada nas bases moleculares e celulares do reconhecimento do antígeno pelas células T. O estabelecimento de imunidade específica depende, em grande medida, da degradação e da associação dos fragmentos antigênicos, peptídeos, com as moléculas do complexo principal de histocompatibilidade (MHC; HLA para humanos). Esta associação é tornada específica de uma molécula de HLA particular por resíduos de aminoácidos que constituem as unidades âncora do peptídeo. Os complexos assim formados são reconhecidos pelos linfócitos T por meio de um receptor de membrana (TcR) e requerem uma interação específica com certos aminoácidos do epítopo T. Os epítopos T são ligantes das moléculas HLA com afinidades fortes ou moderadas. Eles são apresentados aos linfócitos T CD8+ (citotóxicos) ou CD4+ (auxiliares) pelas moléculas HLA respectivamente de classe I ou classe II. A formação destes complexos trimoleculares (TcR/HLA/peptídeo) é o pré-requisito para a ativação e expansão das células T específicas e, portanto, para a indução de uma resposta imunológica protetora durante uma infecção.

[0036] Uma estratégia de vacina de acordo com a invenção baseia- se na identificação e seleção de peptídeos imunodominantes realizados como sequências das seguintes proteínas específicas de Leishmania: i) uma proteína de virulência caracterizada como o principal imunógeno dos antígenos excretados/secretados pela Leishmania, a saber, a proteína solúvel PSA, que é comum e muito preservada dentro das espécies de leishmania, responsáveis pelas diversas infecções humanas; ii) uma proteína H2B, altamente preservada entre as espécies de Leishmania, capaz de induzir proteção no modelo murino e uma resposta celular em humanos, e cuja região N-terminal é a mais divergente em relação às proteínas histonas de mamíferos, é capaz de conferir proteção significativa contra um desafio com parasitas virulentos em camundongos BALB/c. A proteína H2B é reconhecida por linfócitos T de indivíduos curados de L. tropical ou L. maior, com indução de altos níveis de IFN-γ; e iii) uma proteína LmLRAB, pertencente à superfamília das RAB GTPases, e altamente preservada com outras espécies de Leishmania, capaz de induzir níveis significativamente elevados de IFN- γ em indivíduos curados de leishmaniose cutânea.

[0037] A vantagem desses peptídeos é múltipla: (i) possuem alta inocuidade, pois evitam qualquer risco infeccioso relacionado ao uso de agente patogênico ou infeccioso; (ii) eles são quimicamente bem definidos e, portanto, atendem aos requisitos farmacêuticos de pureza; (iii) facilitam o monitoramento da resposta imunológica induzida (busca de linfócitos T citotóxicos (CTLs) direcionados contra um epítopo T definido); e (iv) sua sequência pode ser modificada a fim de torná-los mais imunogênicos.

[0038] Tais peptídeos atendem de maneira notável todas as condições mencionadas no preâmbulo do presente pedido: vacina reprodutível, termoestável facilitando armazenamento e transporte do mesmo, polivalente, fácil de produzir a baixo custo nas zonas endêmicas, tornando-o possível usá-lo em grande escala.

[0039] Vantajosamente, os epítopos ou compostos peptídicos que são objeto da invenção estão ligados a veículos para torná-los mais imunogênicos. A título de exemplos não limitativos de veículos, pode-se citar as proteínas carreadoras KLM (hemocianina de lapa de buraco de fechadura), e os lipopeptídeos do tipo palmitoíla, ou derivados do mesmo. As modificações mais comuns nas proteínas por lipídios são: isoprenilação, N-miristoilação, palmitoilação (ou S-acilação) e glipiação. Isoprenilação e N-miristoilação são modificações cotranslacionais ou imediatamente pós-translacionais e o grupo que está ligado permanece assim até que a proteína se degrade. Palmitoilação é pós-tradução. Essa modificação é reversível e mais rápida do que a renovação ou degradação das proteínas: pode, portanto, ser regulada. A glipiação é co- e pós-translacional. Peptídeos palmitoilados são particularmente vantajosos de acordo com a invenção uma vez que esses derivados interagem com os componentes lipídicos da membrana das células-alvo (macrófagos, células dendríticas, neutrófilos, etc.), auxiliam a penetração dos mesmos e os transportam para dentro deles para então apresentá-los ao sistema imunológico.

[0040] Os epítopos de acordo com a invenção, além disso, possuem vantajosamente um ou mais grupos de proteção. Isso porque, para melhorar a resistência à degradação, pode ser oportuna a utilização de uma forma protegida do peptídeo de acordo com a invenção. A forma de proteção é uma forma biologicamente compatível e é compatível com o uso na área farmacêutica. Numerosas formas de proteção biologicamente compatíveis podem ser consideradas, tais como, por exemplo, acilação ou acetilação da extremidade amino- terminal, ou amidação ou esterificação da extremidade carbóxi-terminal, como é o caso, por exemplo, dos compostos usados na Figura 7 obtidos por síntese química com a adição de uma cauda palmitoilada na extremidade amino-terminal e amidação da extremidade carbóxi- terminal. Assim, a invenção também se refere a um epítopo conforme definido anteriormente, caracterizado pelo fato de que está na forma protegida. É possível usar uma proteção baseada em uma substituição na extremidade amino-terminal por um grupo acetila, um grupo benzoíla, um grupo tosila ou um grupo benziloxicarbonila. De preferência, utiliza-se uma proteção baseada na amidação da função hidroxila da extremidade carbóxi-terminal por um grupo NYY com Y representando uma cadeia alquila C1 a C4, ou esterificação por um grupo alquila. É possível proteger ambas as extremidades do composto de peptídeo.

[0041] Os derivados de peptídeos de acordo com a invenção também se referem aos aminoácidos e peptídeos ligados entre si por uma ligação pseudopeptídica. Ligação pseudopeptídica significa todos os tipos de ligação capazes de substituir ligações peptídicas convencionais. No campo dos aminoácidos, a geometria das moléculas é tal que, teoricamente, elas podem estar na forma de diferentes isômeros ópticos. Existe, de fato, uma conformação molecular do aminoácido (aa) tal que desvia para a direita o plano de polarização da luz (conformação dextrorrotatória ou D-aa), e uma conformação molecular do aminoácido (aa) de modo que desvia para a esquerda o plano de polarização da luz (conformação levogyre ou L-aa). Os aminoácidos naturais são sempre de conformação levógira, e consequentemente um peptídeo de origem natural será constituído apenas por aminoácidos do tipo L-aa. Porém, a síntese química em laboratório permite preparar aminoácidos tendo as duas conformações possíveis.

[0042] A partir deste material básico, é então possível, ao sintetizar um peptídeo, incorporar aminoácidos na forma de isômeros ópticos dextrorrotatório ou levógiro. Assim, os aminoácidos que constituem o peptídeo de acordo com a invenção podem estar na configuração L-, D- ou DL-.

[0043] Os epítopos e compostos peptídicos de acordo com a invenção podem ser obtidos tanto por síntese química convencional em fase sólida ou em fase líquida homogênea, ou por síntese enzimática, a partir de aminoácidos constituintes ou derivados do mesmo. Os epítopos e compostos peptídicos de acordo com a invenção também podem ser obtidos por fermentação de uma cepa de bactéria, modificada ou não por engenharia genética, ou por extração de proteínas de origem animal ou vegetal, preferivelmente de origem vegetal, seguida de uma hidrólise que libera fragmentos peptídicos correspondentes total ou parcialmente aos epítopos e compostos peptídicos de acordo com a invenção.

[0044] O requerente conseguiu demonstrar que os vários epítopos de acordo com a invenção são sequências de consenso comuns às principais espécies de Leishmania e têm uma afinidade forte ou moderada por todas as moléculas do MHC (complexo principal de histocompatibilidade) de mamíferos, e mais particularmente para todas as moléculas dos HLAs (HLAs que representam antígenos leucocitários humanos), representados principalmente pelas populações humanas mais seriamente afetadas por essas doenças.

[0045] Isso porque, no contexto de uma estratégia de vacinação de populações humanas expostas a infecções por Leishmania e para atender a necessidade de uma vacina que proporcione boa cobertura da população mundial e proteja contra leishmanioses, é importante o uso de fragmentos de antígeno/peptídeos capazes de ativar, de forma duradoura, a imunidade celular específica direcionada contra o parasita.

[0046] Para garantir uma boa cobertura da população mundial e tendo em conta a grande variabilidade do fenótipo HLA (o complexo principal de histocompatibilidade humana) entre os indivíduos, os fragmentos de antígenos imunogênicos (peptídeos) de comprimento suficiente devem conter uma série de epítopos capazes de ser apresentados por vários tipos de moléculas HLA de classe I e II

[0047] As moléculas HLA são altamente polimórficas. Isso ocorre porque existem mais de 2500 proteínas HLA de classe I(HLA-I) e mais de 1000 proteínas HLA de classe II (HLA-II). No entanto, algumas moléculas destas HLA, próximas em sequência e em conformação espacial, podem ter epítopos comuns às células T. O agrupamento de vários milhares de moléculas HLA é atualmente descrito em pouco mais de 20 ou mais categorias, denominadas "supertipos de HLA" tendo epítopos muito bem preservados para cada supertipo.

[0048] Ao desenvolvimento de vacinas peptídicas, acrescenta-se ao método de multiepítopo ou poliepítopo (um peptídeo contendo uma pluralidade de epítopos). Este método multiepítopo é vantajoso para o desenvolvimento de uma vacina destinada a toda a população mundial. Isso porque, para garantir uma boa cobertura da população mundial e tendo em vista a grande variabilidade do fenótipo HLA entre os indivíduos, fragmentos de antígenos imunogênicos (peptídeos) de comprimento suficiente devem conter uma série de epítopos capazes de serem apresentados por vários supertipos de moléculas HLA-I e -II.

[0049] Assim, os epítopos incluídos nos compostos de peptídeos da invenção possuem grande capacidade imunogênica.

[0050] Os epítopos T são sequências de antígenos que reconhecem linfócitos T. Por exemplo, em humanos, os epítopos T resultam da degradação de antígenos pelas células apresentadoras e são apresentados aos linfócitos T CD8+ (citotóxicos) ou CD4+ (auxiliares) pelas moléculas HLA respectivamente de classe I ou classe II. Os epítopos T são, portanto, necessariamente ligantes de moléculas HLA e efetivamente fazem parte dos peptídeos que se ligam às moléculas HLA com afinidades fortes e moderadas.

[0051] As células que expressam o complexo principal de histocompatibilidade de classe II (CMH2) também podem apresentar antígenos microbianos via CD1 para linfócitos T gama-delta.

[0052] Os recursos de apresentação dependem de inúmeras variáveis. Eles variam de um indivíduo para outro devido ao polimorfismo do complexo principal de histocompatibilidade (MHC).

[0053] Assim, a consanguinidade, ao reduzir o número de diferentes MHCs expressos por um indivíduo, reduz suas capacidades imunológicas. Também diferem de acordo com as formas de exposição ao antígeno (dose e via de administração), devido às variações nas capacidades de apresentação dos vários tipos de células apresentadoras. Por exemplo, as células envolvidas na apresentação serão diferentes por via cutânea ou digestiva.

[0054] Finalmente, a faixa de peptídeos produzidos por um determinado antígeno será diferente de acordo com a célula apresentadora (métodos de clivagem), e de acordo com a espécie e o indivíduo (o alelo do MHC).

[0055] Os compostos de peptídeos de acordo com a invenção foram selecionados e concebidos de forma a garantir a cobertura vacinal e terapêutica das populações mais gravemente afetadas pelas principais espécies patogênicas de Leishmania. Eles são destinados a induzir e caracterizar a prevenção ou tratamento de enfermidades em mamíferos cuja imunidade protetora depende da estimulação dos leucócitos do tipo Th1 e células T citotóxicas, característicos de um estado de hiperestimulação do tipo retardado.

[0056] Conforme descrito acima, outra dificuldade principal no desenvolvimento de uma vacina candidata reside no fato de que ela deve ser idealmente eficaz contra várias espécies de Leishmania e em particular contra as formas clínicas mais graves (visceral e cutânea) e em vários hospedeiros naturais da infecção (humanos, cães).

[0057] As sequências destes epítopos são preferencialmente: a sequência peptídica das proteínas H2B contidas na Tabela 1 abaixo; as sequências peptídicas das proteínas LmLRAB contidas na Tabela 2 abaixo; as sequências de peptídeos de proteínas PSA contidas na Tabela 3 abaixo, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos das mesmas.

TABELA 1: H2B SEQ ID H2B-I Peptídeo Afinidade para Afinidade para Afinidade os alelos HLA os supertipos para os alelos de classe I HLA de classe I HLA de classe II SEQ ID Nº:1 AINAQMSMM HLA-B*15:01 HLA-B*62 SEQ ID Nº:2 IKAINAQMSM HLA-B*15:01, HLA-B*58, HLA-B*57:01 HLA-B*62 SEQ ID Nº:3 KAINAQMSM HLA-B*58:01, HLA-A*01/HLA- HLA- HLA-B*57:01, A*03, DRB4*01:01 HLA-B*15:01, HLA-B*58, HLA-A*30:01 HLA-B*62 SEQ ID Nº:4 KAINAQMSMM HLA-B*58:01, HLA-B*58, HLA-B*57:01, HLA-B*62 HLA-B*15:01 SEQ ID Nº:6 MERICTEAA HLA-B*40:02, HLA-B*44 HLA-B*45 :01 SEQ ID Nº:5 MMERICTEA HLA-A*02:03, HLA-A*02 HLA-A*02:01 SEQ ID Nº:7 MMERICTEAA HLA-A*02:03 HLA-A*02 SEQ ID Nº:8 MSHRTMKIK HLA-A*30:01, HLA-A*01/HLA- HLA-A*03:01, A*03, HLA-A*11:01 HLA-A*03 SEQ ID Nº:9 MSHRTMKIKA HLA-A*30:01 HLA-A*01/HLA- A*03 SEQ ID Nº:10 MSHRTMKSM HLA-B*57:01, HLA-A*01/HLA- HLA-A*30:01, A*03, HLA-B*15:01 HLA-B*58, HLA-B*62 SEQ ID Nº:11 MSMSHRTM HLA-B*08:01 HLA-B*08 SEQ ID Nº:12 MSMSHRTMK HLA-A*11:01, HLA-A*01/HLA- HLA- HLA-A*31:01, A*03, HLA-A*03 DRB1*03:01, HLA-A*03:01, HLA- HLA-A*68:01, DRB1*09:01, HLA-A*30:01, HLA- HLA-A*33:01 DRB1*11:01 SEQ ID Nº:13 MSMSHRTMK HLA-A*03:01, HLA-A*03 S HLA-A*11:01 SEQ ID Nº:14 NAQMSMMER HLA-A*68:01, HLA-A*03

HLA-A*33:01, HLA-A*31:01 SEQ ID Nº:15 SMSHRTMK HLA-A*03:01 HLA-A*03 SEQ ID Nº:16 SMSHRTMKI HLA-A*02:03, HLA-A*02 HLA- HLA-A*32:01, DRB1*07:01, HLA-A*02:01 HLA- DRB1*13:02 SEQ ID Nº:17 SMSHRTMKIK HLA-A*03:01, HLA-A*01/HLA- HLA-A*11:01, A*03, HLA-A*03 HLA-A*30:01 SEQ ID Nº:18 SMSHRTMKS HLA-A*02:03 HLA-A*02 SEQ ID Nº:19 SMSHRTMKS HLA-B*15:01, HLA-A*02, M HLA-B*57:01, HLA-B*08, HLA-A*02:03, HLA-B*58, HLA-B*08:01 HLA-B*62 SEQ ID Nº:20 TMKSMSHRT HLA-A*02:03 HLA-A*02 SEQ ID Nº:21 TMKSMSHRTM HLA-B*15:01, HLA-B*08, HLA-B*08:01 HLA-B*62 SEQ ID Nº:22 MSMSHRTMKSMSHRTMKIKAINAQMSMMERICTEAA SEQ ID Nº:23 KARYMSMSHRTMKSMSHRTMKIKAINAQMSMMERICTEAA SEQ ID H2B-II Peptídeo Afinidade de concatenação para os alelos HLA de classe II SEQ ID Nº:24 RKPKRSWNVYVGRSL HLA-DRB1*13:02, HLA-DRB1*01:01, HLA- DRB1*07:01, HLA-DRB1*09:01, HLA- DRB1*15:01 SEQ ID Nº:25 KPKRSWNVYVGRSLK HLA-DRB5*01:01, HLA-DRB1*01:01, HLA- DRB1*07:01, HLA-DRB1*09:01, HLA- DRB1*15:01 SEQ ID Nº:26 PKRSWNVYVGRSLKA HLA-DRB5*01:01, HLA-DRB1*01:01, HLA- DRB1*11:01, HLA-DRB1*13:02, HLA- DRB1*07:01, HLA-DRB1*09:01, HLA- DRB1*15:01 SEQ ID Nº:27 KRSWNVYVGRSLKAI HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA- DRB1*04:01, HLA-DRB1*11:01, HLA- DRB1*13:02, HLA-DRB1*07:01, HLA- DRB1*09:01, HLA-DRB1*15:01, HLA- DRB5*01:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*01:01 SEQ ID Nº:28 RSWNVYVGRSLKAIN HLA-DRB5*01:01, HLA-DRB1*01:01, HLA- DRB1*03:01, HLA-DRB1*04:01, HLA-

DRB1*11:01, HLA-DRB1*13:02, HLA- DRB1*04:05, HLA-DRB1*07:01, HLA- DRB1*09:01, HLA-DRB1*15:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA-DRB1*08:02 SEQ ID Nº:29 SWNVYVGRSLKAINA HLA-DRB5*01:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02, HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*04:01, HLA- DRB1*11:01, HLA-DRB1*13:02, HLA- DRB1*07:01, HLA-DRB1*09:01, HLA- DRB1*15:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA-DRB1*08:02 SEQ ID Nº:30 WNVYVGRSLKAINAQ HLA-DRB5*01:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02, HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*04:01, HLA- DRB1*11:01, HLA-DRB1*07:01, HLA- DRB1*09:01, HLA-DRB1*15:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA-DRB1*08:02 SEQ ID Nº:31 NVYVGRSLKAINAQM HLA-DRB1*04:01, HLA-DRB4*01:01, HLA- DRB1*03:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- DRB1*11:01, HLA-DRB1*01:01, HLA- DRB1*09:01, HLA-DRB1*15:01, HLA- DRB1*08:02 SEQ ID Nº:32 VYVGRSLKAINAQMS HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- DRB1*07:01, HLA-DRB4*01:01, HLA- DRB1*04:01, HLA-DRB1*09:01, HLA- DRB1*03:01, HLA-DRB1*11:01, HLA- DRB1*15:01, HLA-DRB1*08:02 SEQ ID Nº:33 YVGRSLKAINAQMSM HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- DRB1*07:01, HLA-DRB1*09:01, HLA- DRB4*01:01, HLA-DRB5*01:01, HLA- DRB1*04:01, HLA-DRB1*11:01, HLA- DRB1*08:02 SEQ ID Nº:34 VGRSLKAINAQMSMS HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- DRB1*07:01, HLA-DRB1*09:01, HLA- DRB4*01:01, HLA-DRB5*01:01, HLA- DRB1*04:01, HLA-DRB1*08:02, HLA- DRB1*11:01, HLA-DRB1*13:02 SEQ ID Nº:35 GRSLKAINAQMSMSH HLA-DRB1*15:01, HLA-DRB1*01:01, HLA- DRB1*04:05, HLA-DRB1*07:01, HLA-

DRB1*08:02, HLA-DRB1*09:01, HLA- DRB1*11:01, HLA-DRB4*01:01, HLA- DRB5*01:01, HLA-DRB1*04:01, HLA- DRB1*13:02 SEQ ID Nº:36 RSLKAINAQMSMSHR HLA-DRB1*04:01, HLA-DRB1*15:01, HLA- DRB5*01:01, HLA-DRB1*01:01, HLA- DRB1*04:05, HLA-DRB1*07:01, HLA- DRB1*08:02, HLA-DRB1*09:01, HLA- DRB1*11:01, HLA-DRB4*01:01 SEQ ID Nº:37 SLKAINAQMSMSHRT HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*04:01, HLA- DRB1*04:05, HLA-DRB1*09:01, HLA- DRB1*11:01, HLA-DRB1*15:01, HLA- DRB5*01:01, HLA-DRB1*01:01, HLA- DRB1*08:02, HLA-DRB4*01:01 SEQ ID Nº:38 LKAINAQMSMSHRTM HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*04:01, HLA- DRB1*04:05, HLA-DRB1*09:01, HLA- DRB1*11:01, HLA-DRB1*15:01, HLA- DRB5*01:01, HLA-DRB1*01:01, HLA- DRB4*01:01 SEQ ID Nº:39 KAINAQMSMSHRTMK HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*04:01, HLA- DRB1*04:05, HLA-DRB1*09:01, HLA- DRB1*11:01, HLA-DRB1*15:01, HLA- DRB5*01:01, HLA-DRB4*01:01, HLA- DRB1*03:01, HLA-DRB1*01:01 SEQ ID Nº:40 AINAQMSMSHRTMKI HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*04:01, HLA- DRB1*09:01, HLA-DRB1*15:01, HLA- DRB4*01:01, HLA-DRB5*01:01, HLA- DRB1*03:01, HLA-DRB1*11:01, HLA- DRB1*07:01 SEQ ID Nº:41 INAQMSMSHRTMKIV HLA-DRB1*04:01, HLA-DRB1*15:01, HLA- DRB5*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA- DRB1*09:01, HLA-DRB1*11:01, HLA- DRB1*01:01, HLA-DRB4*01:01, HLA- DRB1*07:01, HLA-DRB1*13:02

Peptídeo – Afinidade para os Afinidade Afinidade epítopo núcleo alelos HLA de classe para os para o alelos II alelos de supertipo HLA de HLA de classe I classe I SEQ ID Nº:42 AQMSMSHRT HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*07:01 SEQ ID Nº:43 GRSLKAINA HLA-DRB1*01:01 SEQ ID Nº:44 INAQMSMSH HLA-DRB1*04:01, HLA-DRB1*04:05, HLA-DRB1*09:01, HLA-DRB1*11:01, HLA-DRB1*15:01, HLA-DRB4*01:01, HLA-DRB5*01:01 SEQ ID Nº:45 LKAINAQMS HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*04:05, HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*08:02, HLA-DRB1*09:01, HLA-DRB1*11:01, HLA-DRB4*01:01, HLA-DRB5*01:01 SEQ ID Nº:46 NAQMSMSHR HLA-DRB1*01:01 SEQ ID Nº:47 NVYVGRSLK HLA-DRB5*01:01 HLA- HLA-A*03 A*03:01 SEQ ID Nº:48 PKRSWNVYV HLA-DRB1*13:02, HLA-DRB1*15:01 SEQ ID Nº:49 QMSMSHRTM HLA-DRB1*01:01, HLA- HLA-B*62 HLA-DRB4*01:01 B*15:01 SEQ ID Nº:50 SLKAINAQM HLA-DRB1*04:01, HLA- HLA-B*62 HLA-DRB1*08:02, B*15:01 HLA-DRB1*09:01, HLA-DRB1*11:01, HLA-DRB1*13:02, HLA-DRB4*01:01 SEQ ID Nº:51 VGRSLKAIN HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*04:05, HLA-DRB1*08:02, HLA-DRB1*11:01

SEQ ID Nº:52 VYVGRSLKA HLA-DRB1*01:01, HLA- DRB1*01:01, HLA- DRB1*03:01, HLA- DRB1*04:01, HLA- DRB1*09:01, HLA- DRB1*11:01, HLA- DRB1*13:02, HLA- DRB1*15:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02 SEQ ID Nº:53 WNVYVGRSL HLA-DRB1*01:01, HLA- DRB1*04:05, HLA- DRB1*07:01, HLA- DRB1*09:01, HLA- DRB1*15:01, HLA- DRB5*01:01 SEQ ID Nº:54 YVGRSLKAI HLA-DRB1*08:02, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01 SEQ ID H2B-II Epítopo Afinidade de concatenação Afinidade para o para os alelos HLA de supertipo HLA de classe I classe I SEQ ID Nº:55 AQMSMSHRT HLA-B*15:01 HLA-B*62

M SEQ ID Nº:56 KPKRSWNVYV HLA-B*07:02 HLA-B*07 SEQ ID Nº:57 KRSWNVYVG HLA-B*27:05 HLA-B*27

R SEQ ID Nº:58 LKAINAQMSM HLA-B*15:01 HLA-B*62 SEQ ID Nº:59 MSMSHRTMKI HLA-A*03:01, HLA-B*58:01 HLA-A*03, HLA-B*58 SEQ ID Nº:60 QMSMSHRTM HLA-A*03:01 HLA-A*03

K SEQ ID Nº:61 RSLKAINAQM HLA-B*15:01, HLA-B*58:01 HLA-B*58, HLA-B*62 SEQ ID Nº:62 RSWNVYVGR HLA-A*03:01 HLA-A*03 SEQ ID Nº:63 VYVGRSLKAI HLA-A*24:02 HLA-A*24 SEQ ID Nº:64 WNVYVGRSLK HLA-A*03:01 HLA-A*03 Peptídeos longos SEQ ID Nº:65 KPKRSWNVYVGRSLKAINAQMSMSHRTMKIV (peptídeo longo) SEQ ID Nº:66 KGRKPKRSWNVYVGRSLKAINAQMSMSHRTMKIV (peptídeo longo)

TABELA 2: LmLRAB LmLRAB (IA, Epítopo Afinidade de concatenação Afinidade para os IB, IC) SEQ ID para o alelo HLA de classe I supertipos HLA de classe I

SEQ ID Nº:67 MENNITGGL HLA-B*18:01, HLA-B*40:01, HLA-B*44 HLA-B*40:02, HLA-B*44:02, HLA-B*44:03

SEQ ID Nº:68 KTKQHLREM HLA-A*30:01, HLA-A*2602 HLA-A*01/HLA- A*03, HLA-A*01

SEQ ID Nº:69 KARYMENNITGGLARYKTKQHVREM (peptídeo longo)

SEQ ID Nº:70 RFAQGEHDI HLA-A*2403 HLA-A*24

SEQ ID Nº:71 RLPENAFVI HLA-A*32:01, HLA-A*02:06, HLA-A*01, HLA- HLA-A*02:11, HLA-A*02:12, A*02 HLA-A*02:16, HLA-A*02:19

SEQ ID Nº:72 TQGSSKAGF HLA-B*15:01, HLA-B*15:02 HLA-B*27, HLA- B*62

SEQ ID Nº:73 KARYRFAQGEHDIRLPENAFVIARYTQGSSKAGF (peptídeo longo)

SEQ ID Nº:74 MPHVDQSSI HLA-B*07:02, HLA-B*35:01, HLA-B*07, HLA- HLA-B*51:01, HLA-B*53:01, B*08 HLA-B*08:01

SEQ ID Nº:75 ASFRSTEAI HLA-A*32:01, HLA-B*15:03, HLA-A*01, HLA- HLA-B*1517 B*27, HLA-B*58

SEQ ID Nº:76 SSIMVVANK HLA-A*30:01, HLA-A*03:01, HLA-A*01/HLA- HLA-A*11:01, HLA-A*31:01, A*03, HLA-A*01 HLA-A*68:01

SEQ ID Nº:77 KARYMPHVDQSSIARYASFRSTEAIRYSSIMVVANK (peptídeo longo)

LmLRAB-IIA peptídeo Afinidade de concatenação SEQ ID para os alelos HLA de classe II

SEQ ID Nº:78 KGRLHSVVGRHLSIV HLA-DRB1*07:01, HLA- DRB5*01:01, HLA-DRB1*11:01, HLA-DRB1*15:01, HLA- DRB1*09:01, HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB4*01:01

SEQ ID Nº:79 GRLHSVVGRHLSIVA HLA-DRB1*07:01, HLA- DRB5*01:01, HLA-DRB1*15:01, HLA-DRB1*11:01, HLA- DRB1*09:01, HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB4*01:01

SEQ ID Nº:80 RLHSVVGRHLSIVAD HLA-DRB1*07:01, HLA- DRB1*15:01, HLA-DRB5*01:01, HLA-DRB1*11:01, HLA- DRB1*09:01, HLA-DRB1*01:01

SEQ ID Nº:81 LHSVVGRHLSIVADH HLA-DRB1*07:01, HLA- DRB1*15:01, HLA-DRB5*01:01, HLA-DRB1*11:01, HLA- DRB1*09:01, HLA-DRB1*01:01

SEQ ID Nº:82 HSVVGRHLSIVADHM HLA-DRB1*01:01, HLA- DRB1*15:01

SEQ ID Nº:83 SVVGRHLSIVADHMP HLA-DRB1*01:01, HLA- DRB1*15:01

SEQ ID Nº:84 VVGRHLSIVADHMPH HLA-DRB1*01:01

SEQ ID Nº:85 VGRHLSIVADHMPHL HLA-DRB1*03:01, HLA- DRB3*01:01, HLA-DRB1*13:02, HLA-DRB1*15:01, HLA- DRB1*01:01

SEQ ID Nº:86 GRHLSIVADHMPHLD HLA-DRB3*01:01, HLA- DRB1*03:01, HLA-DRB1*13:02, HLA-DRB1*01:01

SEQ ID Nº:87 RHLSIVADHMPHLDQ HLA-DRB3*01:01, HLA- DRB1*03:01, HLA-DRB1*13:02

Núcleo Afinidade de concatenação Afinidade para os para os alelos HLA de classe II alelos HLA de classe I

SEQ ID Nº:88 HLSIVADHM HLA-DRB1*01:01

SEQ ID Nº:89 IVADHMPHL HLA-DRB1*03:01, HLA- HLA-A*02:01, HLA- DRB1*13:02, HLA-DRB3*01:01 A*02:03, HLA- A*02:06

SEQ ID Nº:90 LHSVVGRHL HLA-DRB1*01:01HLA- DRB1*07:01HLA- DRB1*09:01HLA- DRB1*11:01HLA- DRB1*15:01HLA- DRB4*01:01HLA-DRB5*01:01

SEQ ID Nº:91 VGRHLSIVA HLA-DRB1*01:01, HLA- DRB1*15:01

Peptídeo Afinidade para o alelo classe I

SEQ ID Nº:92 KGRLHSVVG HLA-A*30:01

SEQ ID Nº:93 RLHSVVGRH HLA-A*03:01, HLA-A*30:02

SEQ ID Nº:94 SVVGRHLSI HLA-A*02:03, HLA-A*02:06, HLA-A*32:01, HLA- B*08:01

SEQ ID Nº:95 VVGRHLSIV HLA-A*02:03

Long peptídeo SEQ ID

SEQ ID Nº:96 LHSVVGRHLSIVADHMPHLDQ

SEQ ID Nº:97 KGRLHSVVGRHLSIVADHMPHLDQ

LmlRAB-IIB Peptídeo Afinidade de concatenação para os alelos HLA de SEQ ID classe II

SEQ ID Nº:98 AIVTSRKVQEEVFDL HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*11:01, HLA-DRB1*12:01

SEQ ID Nº:99 DLFTDVHYSEVSAKT HLA-DRB1*04:01, HLA-DRB1*07:01, HLA- DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA-DPA1*01/DPB1*04:01, HLA-DPA1*02:01/HLA-DPB1*14:01

SEQ ID Nº:100 EEVFDLFTDVHYSEV HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*04:01, HLA-DRB1*04:05, HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*15:01, HLA-DRB1*12:01, HLA-DRB3*01:01, HLA- DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA-DPA1*01/DPB1*04:01, HLA-DPA1*02:01/HLA-DPB1*14:01

SEQ ID Nº:101 ENAIVTSRKVQEEVF HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*08:02, HLA-DRB1*11:01, HLA-DRB1*12:01

SEQ ID Nº:102 EVFDLFTDVHYSEVS HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01,HLA-DRB1*04:01, HLA-DRB1*04:05, HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*12:01, HLA-DRB1*15:01, HLA-DRB3*01:01, HLA- DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA-DPA1*01:03/HLA- DPB1*04:01, HLA-DPA1*01/DPB1*04:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02, HLA-DPA1*01:03/HLA- DPB1*04:01, HLA-DPA1*03:01/HLA-DPB1*04:02, HLA- DPA1*02:01/HLA-DPB1*14:01

SEQ ID Nº:103 FDLFTDVHYSEVSAK HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*09:01, HLA-DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA- DPA1*01/DPB1*04:01, HLA-DPA1*01:03/HLA- DPB1*04:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02, HLA-DPA1*02:01/HLA- DPB1*14:01

SEQ ID Nº:104 GRSENAIVTSRKVQE HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*11:01, HLA-DRB1*12:01, HLA-DRB5*01:01

SEQ ID Nº:105 IVTSRKVQEEVFDLF HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*11:01, HLA- DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA-DPA1*01/DPB1*04:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*05:01, HLA-DPA1*02:01/HLA- DPB1*14:01

SEQ ID Nº:106 KGRSENAIVTSRKVQ HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*11:01, HLA-DRB1*12:01, HLA-DRB5*01:01

SEQ ID Nº:107 KVQEEVFDLFTDVHY HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*04:01, HLA-DRB1*04:05, HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*15:01, HLA- DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA-DPA1*01/DPB1*04:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*05:01, HLA-DPA1*03:01/HLA- DPB1*04:02, HLA-DPA1*02:01/HLA-DPB1*14:01

SEQ ID Nº:108 LFTDVHYSEVSAKTK HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*04:01, HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*09:01, HLA-DRB5*01:01, HLA- DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA-DPA1*01/DPB1*04:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA-DPA1*02:01/HLA- DPB1*14:01

SEQ ID Nº:109 NAIVTSRKVQEEVFD HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*08:02, HLA-DRB1*11:01, HLA-DRB1*12:01

SEQ ID Nº:110 QEEVFDLFTDVHYSE HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*04:01, HLA-DRB1*04:05, HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*15:01, HLA-DRB3*01:01, HLA-DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA- DPA1*01/DPB1*04:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA-DPA1*03:01/DPB1*04:02, HLA-DPA1*01:03/HLA- DPB1*04:01, HLA-DPA1*02:01/HLA-DPB1*14:01

SEQ ID Nº:111 RKVQEEVFDLFTDVH HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*04:01, HLA- DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA-DPA1*01/DPB1*04:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*05:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02

SEQ ID Nº:112 RSENAIVTSRKVQEE HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*11:01, HLA-DRB5*01:01

SEQ ID Nº:113 SENAIVTSRKVQEEV HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*08:02, HLA-DRB1*11:01, HLA-DRB1*12:01

SEQ ID Nº:114 SRKVQEEVFDLFTDV HLA-DRB1*03:01, HLA-DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA- DPA1*01/DPB1*04:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*05:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02

SEQ ID Nº:115 TSRKVQEEVFDLFTD HLA-DRB1*03:01, HLA-DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA- DPA1*01/DPB1*04:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*05:01, HLA-DPA1*01:03/HLA- DPB1*04:01, HLA-DPA1*03:01/HLA-DPB1*04:02, HLA- DPA1*02:01/HLA-DPB1*14:01

SEQ ID Nº:116 VFDLFTDVHYSEVSA HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*04:01, HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*15:01, HLA-DRB3*01:01, HLA-DPA1*01/DPB1*04:01, HLA- DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02, HLA-DPA1*01:03/HLA- DPB1*04:01, HLA-DPA1*02:01/HLA-DPB1*14:01

SEQ ID Nº:117 VQEEVFDLFTDVHYS HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*04:01, HLA-DRB1*04:05, HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*15:01, HLA- DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA-DPA1*01/DPB1*04:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*05:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02

SEQ ID Nº:118 VTSRKQEEVFDLFT HLA-DRB1*03:01, HLA-DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA- DPA1*01/DPB1*04:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*05:01, HLA-DPA1*01:03/HLA- DPB1*04:01, HLA-DPA1*03:01/HLA-DPB1*04:02, HLA- DPA1*02:01/HLA-DPB1*14:01

Núcleo Afinidade de concatenação para Afinidade para os alelos HLA de classe II os alelos HLA de classe I

SEQ ID Nº:119 AIVTSRKVQ HLA-DRB1*11:01

SEQ ID Nº:120 EVFDLFTDV HLA-DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA- HLA-A*02:03, DPA1*01/DPB1*04:01, HLA- HLA-A*02:06, DPA1*03:01/DPB1*04:02, HLA- HLA-A*68:02 DPA1*02:01/HLA-DPB1*01:01, HLA- DPA1*01:03/HLA-DPB1*04:01, HLA- DPA1*02:01/HLA-DPB1*05:01

SEQ ID Nº:121 FTDVHYSEV HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*07:01, HLA-A*01:01, HLA-DRB1*09:01, HLA- HLA-A*02:01, DPA1*01:03/DPB1*04:01, HLA- HLA-A*02:03, DPA1*01:03/DPB1*02:01 HLA-A*02:06, HLA-B*35:01, HLA-A*68:02

SEQ ID Nº:122 HYSEVSAKT HLA-DRB1*04:01

SEQ ID Nº:123 IVTSRKVQE HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*08:02, HLA-DRB1*11:01

SEQ ID Nº:124 LFTDVHYSE HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB3*01:01, HLA-DPA1*01/DPB1*04:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02

SEQ ID Nº:125 NAIVTSRKV HLA-DRB1*07:01

SEQ ID Nº:126 VQEEVFDLF HLA-DRB1*03:01, HLA- HLA-A*02:06 DPA1*01/DPB1*04:01, HLA- DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*05:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02

SEQ ID Nº:127 YSEVSAKTK HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB5*01:01

Peptídeo CII Afinidade de concatenação para os alelos HLA de classe I

SEQ ID Nº:128 DVHYSEVSA HLA-A*68:02

SEQ ID Nº:129 ENAIVTSRK HLA-A*68:01

SEQ ID Nº:130 FDLFTDVHY HLA-A*02:01, HLA-B*35:01

SEQ ID Nº:131 KGRSENAIV HLA-A*30:01

SEQ ID Nº:132 KVQEEVFDL HLA-A*02:01, HLA-A*02:06, HLA-A*32:01

SEQ ID Nº:133 LFTDVHYSEV HLA-A*01:01

SEQ ID Nº:134 SENAIVTSR HLA-A*31:01, HLA-B*44:03, HLA-A*68:01

SEQ ID Nº:135 TSRKVQEEV HLA-B*15:01, HLA-A*30:01, HLA-A*68:02

SEQ ID Nº:136 VHYSEVSAK HLA-A*03:01

Peptídeos longos

SEQ ID Nº:137 SENAIVTSRKVQEEVFDLFTDVHYSEVSAKTK

SEQ ID Nº:138 KGRSENAIVTSRKVQEEVFDLFTDVHYSEVSAKTK

TABELA 3: PSA SEQ ID KC- Peptídeo Afinidade de concatenação para os alelos

2.6 HLA de classe II SEQ ID EGYFLTDEKTSLVYG HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA- Nº:139 DRB1*04:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- DRB1*07:01, HLA-DRB1*11:01, HLA- DRB1*12:01, HLA-DRB1*13:02, HLA- DRB3*01:01, HLA-DRB3*02:02, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02 SEQ ID FLTDEKTSLVYGDGG HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB3*01:01 Nº:140 SEQ ID GEGYFLTDEKTSLVY HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA- Nº:141 DRB1*04:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- DRB1*07:01, HLA-DRB1*11:01, HLA- DRB1*12:01, HLA-DRB1*13:02, HLA- DRB3*01:01, HLA-DRB3*02:02, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02, HLA- DPA1*02:01/HDPB1*14:01 SEQ ID GYFLTDEKTSLVYGD HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA- Nº:142 DRB1*04:01, HLA-DRB1*07:01, HLA- DRB1*11:01, HLA-DRB3*01:01, HLA- DRB3*02:02, HLA-DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*14:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02 SEQ ID RSGEGYFLTDEKTSL HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA- Nº:143 DRB1*04:01, HLA-DRB3*01:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*14:01 SEQ ID SGEGYFLTDEKTSLV HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA- Nº:144 DRB1*04:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- DRB1*07:01, HLA-DRB1*11:01, HLA- DRB3*01:01, HLA-DRB3*02:02, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01 SEQ ID YFLTDEKTSLVYGDG HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA- Nº:145 DRB1*04:01, HLA-DRB3*01:01, HLA- DRB3*02:02, HLA-DPA1*03:01/DPB1*04:02, HLA-DPA1*02:01/DPB1*14:01

Núcleo Afinidade de Afinidade para concatenação para os os alelos HLA de alelos HLA de classe II classe I

SEQ ID FLTDEKTSL HLA-DRB1*01:01, HLA- HLA-A*02:01, Nº:146 DRB1*03:01, HLA- HLA-A*02:03, DRB1*04:01, HLA- HLA-A*02:06, DRB1*11:01, HLA- HLA-B*39:01 DRB3*01:01, HLA- DRB3*02:02, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02

SEQ ID GYFLTDEKT HLA-DRB1*04:01, HLA- Nº:147 DPA1*02:01/DPB1*01:01

SEQ ID LTDEKTSLV HLA-DRB1*01:01, HLA- HLA-A*01:01, Nº:148 DRB1*04:01 HLA-A*02:01, HLA-A*02:03, HLA-A*02:06, HLA-A*68:02

SEQ ID RSGEGYFLT HLA-DRB1*03:01, HLA- Nº:149 DRB3*01:01

SEQ ID YFLTDEKTS HLA-DRB1*01:01, HLA- Nº:150 DRB1*04:01, HLA- DRB1*11:01

Peptídeo CII Afinidade de concatenação para o alelo CII

SEQ ID ARSARSGEGY HLA-B*15:01 Nº:151

SEQ ID ARSGEGYFL HLA-B*39:01 Nº:152

SEQ ID FLTDEKTSLV HLA-A*01:01, HLA-A*02:01 Nº:153

SEQ ID LTDEKTSLVY HLA-A*01:01, HLA-B*15:01 Nº:154

SEQ ID RSARSGEGY HLA-A*30:02, HLA-B*15:01, HLA-B*57:01, Nº:155 HLA-B*58:01

SEQ ID RSARSGEGYF HLA-B*15:01, HLA-B*58:01 Nº:156

Peptídeo longo

SEQ ID KAARSARSGEGYFLTDEKTSLVYGDGG Nº:157 SEQ ID KC- Peptídeo Afinidade de concatenação para os alelos

2.7 HLA de classe II SEQ ID DYSHSMIRDLDFSNM HLA-DRB1*04:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- Nº:158 DRB1*07:01, HLA-DRB1*09:01, HLA- DRB1*12:01, HLA-DRB4*01:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*14:01 SEQ ID GSDYSHSMIRDLDFS HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- Nº:159 DRB1*07:01, HLA-DRB1*09:01, HLA- DRB4*01:01, HLA-DRB5*01:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*14:01 SEQ ID HSMIRDLDFSNMGLL HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA- Nº:160 DRB1*04:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- DRB1*07:01, HLA-DRB1*08:02, HLA- DRB1*12:01, HLA-DRB1*13:02, HLA- DRB1*15:01, HLA-DRB4*01:01, HLA- DPA1*01:03-DPB1*02:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*14:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02 SEQ ID IRDLDFSNMGLLLSG HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- Nº:161 DRB1*07:01, HLA-DRB1*11:01, HLA- DRB1*12:01, HLA-DRB1*13:02, HLA- DRB1*15:01, HLA-DPA1*01:03/DPB1*04:01, HLA-DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*14:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02 SEQ ID MIRDLDFSNMGLLLS HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*04:01, HLA- Nº:162 DRB1*04:05, HLA-DRB1*07:01, HLA- DRB1*12:01, HLA-DRB1*13:02, HLA- DRB1*15:01, HLA-DPA1*01:03/DPB1*04:01, HLA-DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*14:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02 SEQ ID MPSGSDYSHSMIRDL HLA-DRB1*04:05, HLA-DRB1*07:01, HLA- Nº:163 DRB1*09:01, HLA-DRB5*01:01

SEQ ID PSGSDYSHSMIRDLD HLA-DRB1*04:05, HLA-DRB1*07:01, HLA- Nº:164 DRB1*09:01, HLA-DRB5*01:01, LA- DPA1*02:01/DPB1*01:01

SEQ ID RDLDFSNMGLLLSGT HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- Nº:165 DRB1*07:01, HLA-DRB1*11:01, HLA- DRB1*12:01, HLA-DRB1*13:02, HLA- DRB1*15:01, HLA-DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA-DPA1*01:03/DPB1*04:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02, HLA- DPA1*02:01/DPB1*14:01

SEQ ID SDYSHSMIRDLDFSN HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*04:01, HLA- Nº:166 DRB1*04:05, HLA-DRB1*07:01, HLA- DRB1*12:01, HLA-DRB1*09:01, HLA- DRB4*01:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*14:01

SEQ ID SGSDYSHSMIRDLDF HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- Nº:167 DRB1*07:01, HLA-DRB1*09:01, HLA- DRB5*01:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*14:01

SEQ ID SHSMIRDLDFSNMGL HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*04:01, HLA- Nº:168 DRB1*04:05, HLA-DRB1*08:02, HLA- DRB1*12:01, HLA-DRB4*01:01

SEQ ID SMIRDLDFSNMGLLL HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*03:01, HLA- Nº:169 DRB1*04:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- DRB1*07:01, HLA-DRB1*08:02, HLA- DRB1*12:01, HLA-DRB1*13:02, HLA- DRB1*15:01, HLA-DRB4*01:01, HLA- DPA1*01:03/DPB1*04:01, HLA- DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02, HLA- DPA1*02:01/DPB1*14:01

SEQ ID YSHSMIRDLDFSNMG HLA-DRB1*04:01, HLA-DRB1*04:05, HLA- Nº:170 DRB1*07:01, HLA-DRB1*08:02, HLA- DRB1*09:01, HLA-DRB1*12:01, HLA- DRB4*01:01

Núcleo Afinidade de concatenação para os Afinidade para alelos HLA de classe II os alelos HLA de classe I SEQ ID DFSNMGLLL HLA-DPA1*01:03/DPB1*04:01, HLA- Nº:171 DPA1*03:01/DPB1*04:02 SEQ ID FSNMGLLLS HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*11:01 Nº:172 SEQ ID HSMIRDLDF HLA-DRB4*01:01 HLA-B*35:01, Nº:173 HLA-B*58:01 SEQ ID IRDLDFSNM HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB4*01:01 Nº:174 SEQ ID LDFSNMGLL HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*13:02, Nº:175 HLA-DRB1*15:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*01:03/DPB1*02:01, HLA- DPA1*02:01/DPB1*01:01, HLA- DPA1*03:01/DPB1*04:02 SEQ ID MIRDLDFSN HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*04:01, Nº:176 HLA-DRB1*04:05, HLA-DRB1*08:02 SEQ ID SDYSHSMIR HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB5*01:01 HLA-A*31:01, Nº:177 HLA-A*68:01 SEQ ID YSHSMIRDL HLA-DRB1*01:01, HLA-DRB1*04:05, Nº:178 HLA-DRB1*07:01, HLA-DRB1*09:01, HLA-DPA1*02:01/DPB1*01:01 Peptídeo Afinidade de concatenação para os alelos HLA de classe I SEQ ID GSDYSHSMIR HLA-A*03:01 Nº:179 SEQ ID KEMPSGSDY HLA-B*15:01, HLA-A*30:02, HLA-B*44:02, HLA-B*44:03 Nº:180 SEQ ID MIRDLDFSNM HLA-B*15:01 Nº:181 SEQ ID MPSGSDYSH HLA-B*35:01, HLA-B*53:01 Nº:182 SEQ ID NMGLLLSGT HLA-A*02:03 Nº:183 SEQ ID SMIRDLDFS HLA-A*02:03, HLA-A*02:06 Nº:184 Peptídeo longo

SEQ ID KEMPSGSDYSHSMIRDLDFSNMGLLLSGT Nº:185

[0058] Mais preferivelmente, as sequências destes epítopos contidas no composto de peptídeos de acordo com a invenção são selecionadas das sequências SEQ ID Nº:1 a 21, as sequências SEQ ID Nº: 24 a 64, as sequências SEQ ID Nº: 67, 68, 70 a 72, 74 a 76, as sequências SEQ ID Nº: 78 a 95, as sequências SEQ ID Nº: 98 a 136, as sequências SEQ ID Nº: 139 a 156, e as sequências SEQ ID Nº: 158 a 184, listadas nas Tabelas 1, 2 e 3 acima mencionadas, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos do mesmo.

[0059] O objeto da invenção é um composto peptídico que consiste em epítopos como acima descrito e compreendendo: (i) 1 a 21 sobrepondo epítopos de sequências SEQ ID Nº: 1 a 21 tal como as sequências SEQ ID Nº: 22 e 23, ou (ii) 1 a 41 sobrepondo epítopos de sequências SEQ ID Nº: 24 a 64 tal como as sequências SEQ ID Nº: 65 e 66, ou (iii) 1 a 18 sobrepondo epítopos de sequências SEQ ID Nº: 78 a 95, tal como as sequências SEQ ID Nº: 96 e 97, ou (iv) 1 a 39 sobrepondo epítopos de sequências SEQ ID Nº: 98 a 136, tal como as sequências SEQ ID Nº: 137 e 138, ou (v) 1 a 18 sobrepondo epítopos de sequências SEQ ID Nº: 139 a 156, tal como a sequência SEQ ID Nº: 157, ou (vi) 1 a 27 sobrepondo epítopos de sequências SEQ ID Nº: 158 a 184, tal como a sequência SEQ ID Nº: 185, ou (viii) 1 a 3 epítopos de sequências SEQ ID Nº: 67, 68, 70 a 72, 74 a 76 tal como as sequências SEQ ID Nº: 69, 73 e 77, opcionalmente separadas por um espaçador de peptídeo ou uma sequência de peptídeo de ligação compreendendo 1 a 8 aminoácidos.

[0060] A título de exemplo não limitativo de um espaçador peptídico ou sequência de ligação, menção pode ser feita às unidades ARY, KGR, RY, GR, TV, K, V, Y e L entre outras (Stittelaar K, et al. Vaccine, 2002, 20: 249–261; Lee Y. et al., Biomed Microdevices, 2010, 12: 207-222;

Cardinaud, S., et al. Aids, 2009, 23: 1945-1954). Preferivelmente, os espaçadores de peptídeo ou sequências de ligação usadas são K, KGR, RY, ARY ou KARY e análogos dos mesmos.

[0061] Mais preferivelmente, os compostos de peptídeo multiepitópico de acordo com a invenção são selecionados das nove sequências SEQ ID Nº: 23, 66, 69, 73, 77, 97, 138, 157 e 185, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos do mesmo. Estes nove compostos de peptídeo multiepitópico de SEQ ID Nº: 23, 66, 69, 73, 77, 97, 138, 157 e 185 são, por exemplo, compostos de peptídeo multiepitópico de síntese, associados ou não com peptídeos da técnica anterior tendo epítopos afins para as moléculas HLA de classe I.

[0062] Os compostos de peptídeo multiepitópico (24 a 40-mer), tendo uma alta afinidade com um número maximizado de moléculas HLA de classe I e de classe II (figuras 4A, 4B e 4C), têm um potencial imunoprevalente que corresponde a uma cobertura de vacina ideal (figura 5A), em particular para as populações envolvidas. O grau de cobertura do composto de peptídeos da invenção mostra um valor adicionado muito elevado em comparação com os peptídeos da técnica anterior (figura 5B). A eficácia in vitro do composto de peptídeos para estimular células humanas e produzir citocinas do tipo Th1, tal como IFN-γ, foi avaliada, em combinações a 1 μM para cada peptídeo, usando amostras de sangue de indivíduos curados de leishmaniose, de acordo com um curto protocolo e uma única estimulação. Como é mostrado na tabela na Figura 6, os níveis de IFN-γ secretado por células T estimuladas pode atigir mais de 2590 pg/ml com uma combinação do composto de peptídeos proposta e associada com peptídeos da técnica anterior, e mais de 2700 pg/ml com uma combinação dos compostos de peptídeo propostos não associados com estes peptídeos. Estes níveis mostram um valor adicionado muito elevado em comparação com os peptídeos da técnica anterior que corresponde a "Lago Z" na tabela na

Figura 6. Nesta tabela, "CL curado 1 a 6" são indivíduos curados de leishmaniose cutânea, "Virgens 1 a 6" são indivíduos virgens (controle não imunel), "NS" corresponde a "não estimulado" (ambiente apenas) após 5 dias ("NS 5 dias") e 10 dias ("NS 10 dias") de cultura, "PHA" é fito-hemaglutinina (controle de estimulação positiva), "SLA" corresponde ao total de antígenos solúveis de Leishmania major, e "Lago A a G" correspondem a combinações dos compostos de peptídeo de síntese de sequência SEQ ID Nº: 23, 66, 69, 73, 77, 97, 138, 157 e 185, associadas (Lago A, B, C, D, F) ou não (Lago E, G) com compostos de peptídeo de síntese da técnica anterior.

Os valores de IFN-γ para "PHA" e "SLA" são os valores subtraídos dos valores "NS 5 dias", os valores de IFN-γ para o "Lago A a Z" são os valores subtraídos dos valores de "NS 10 dias" e os valores em negrito correspondem a valores maiores do que a media dos virgens + 3 x desvio padrão.

A imunogenicidade in vitro do composto de peptídeos é a capacidade dos peptídeos recrutarem linfócitos precursivos, para induzir in vitro uma estimulação de linfócitos T específicos com a produção de IFN-γ.

A imunogennicidade foi avaliada, com combinações de peptídeos (combinação que corresponde ao "Lago H" na Figura 7) a 1 μM para cada peptídeo, de amostragens de sangue de indivíduos virgens e de acordo com um longo protocol com pelo menos três estimulações sucessivas.

Um teste IFN-γ ELISPOT para medir a frequência das células T virgens preexistentes e a amplitude do repertório de T virgem específico para cada peptídeo, foi realizada com as células T CD4+ e as células dendríticas autólogas de um indivíduo virgem na presença ou ausência da mistura de peptídeos, ou na presença de cada peptídeo individualmente.

Diversas linhagens específicas da combinação de peptídeo foram reveladas e respondem especificamente a pelo menos um dos peptídeos da presente invenção (figuras 8 e 9). A combinação de "Lago H" foi usada com peptídeos não modificados na extremidade amino-terminal e com amidação da extremidade carbóxi-terminal (figura 8), ou com peptídeos quimicamente modificados por uma cauda de palmitoíla na extremidade amino-terminal e com amidação da extremidade carbóxi-terminal (figura 9).

[0063] A invenção também se refere a uma composição como um produto farmacêutico, para uso humano ou veterinário, compreendendo pelo menos: um epítopo de uma sequência selecionada entre as sequências SEQ ID Nº: 1 a 21, as sequências SEQ ID Nº: 24 a 64, as sequências SEQ ID Nº: 67, 68, 70 a 72, 74 a 76, as sequências SEQ ID Nº: 78 a 95, as sequências SEQ ID Nº: 98 a 136, as sequências SEQ ID Nº: 139 a 156, e as sequências SEQ ID Nº: 158 a 184, ou um composto peptídico compreendendo 1, 2, 3 ou 4 dos epítopos de sequência SEQ ID Nº: 1 a 21, SEQ ID Nº: 24 a 64, SEQ ID Nº: 67, 68, 70 a 72, 74 a 76, SEQ ID Nº: 78 a 95, SEQ ID Nº: 98 a 136, SEQ ID Nº: 139 a 156, e SEQ ID Nº: 158 a 184, opcionalmente separados por um espaçador como acima definido, ou um composto peptídico de sequência selecionado de SEQ ID Nº: 22, 23, 65, 66, 69, 73, 77, 96, 97, 137, 138, 157 e 185.

[0064] A invenção também se refere a tal composição para uso da mesma em vacinação profilática e terapêutica direcionada contra uma ou mais das leishmania tais como Leishmania donovani, Leishmania infantum, Leishmania chagasi, Leishmania mexicana, Leishmania amazonensis, Leishmania venezuelensis, Leishmania tropica, Leishmania major, Leishmania aethiopica, Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (Viannia) guyanensis, Leishmania (Viannia) panamensis, Leishmania (Viannia) peruviana.

[0065] Vantajosamente, a composição de acordo com a invenção é capaz de ser usada em vacinação profilática e terapêutica direcionada contra pelo menos três, preferivelmente pelo menos sete,

preferivelmente novamente pelo menos dez e ainda mais preferivelmente contra todas as Leishmania listadas acima.

[0066] A composição vantajosamente compreende um adjuvante selecionado dos adjuvantes selecionados entre os adjuvantes de receptor tipo Toll de classes TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, TLR9, saponinas e os derivados QA21, quilA ou QS21 dos mesmos, emulsões de óleo em água ou água em óleo, polissacarídeos, lipossomas catiônicas, virossomas ou polieletrólitos e imunomoduladores selecionados de proteínas da saliva da mosca de areia, citocinas, peptídeos e proteínas de choque térmico, por exemplo, HSP70.

[0067] Preferivelmente, a composição de acordo com a invenção é administrada subcutaneamente, intradermicamente, via intramuscular, via intravenosa, parenteral, endonasal, ou via mucosal ou oral, e é, portanto, na forma adequada para tais administrações.

[0068] Um objeto adicional refere-se a uma composição como definido acima por meio de fármaco, vacina ou reagent diagnóstico in vitro e/ou in vivo, para induzir ou diagnosticar, em um mamífero, mudança de um estado imune tipo Th2 para um estado imune do tipo Th1.

[0069] Um outro objeto adicional da invenção refere-se a uma vacina capaz de conferir imunoproteção cruzada vis-à-vis vários tipos de leishmaniose. A comunidade de antígeno significante compartilhada por Leishmania torna possível considerar o desenvolvimento de uma única vacina de multipropósitos, que consiste em imunógenos comuns altamente conservados. Direcionar como uma vacina um ou mais antígenos comuns para todas as species de Leishmania sem qualquer dúvida, representaria uma real vantage em termos de vacinação cruzada. Tal vacina compreende pelo menos: um epítopo de sequência selecionado entre as sequências SEQ ID Nº: 1 a 21, as sequências SEQ ID Nº: 24 a 64, como as sequências SEQ ID Nº: 67, 68, 70 a 72, 74 a 76, as sequências SEQ ID Nº: 78 a 95, as sequências SEQ ID Nº: 98 a 136, as sequências SEQ ID Nº: 139 a 156, e as sequências SEQ ID Nº: 158 a 184, ou um composto peptídico compreendendo 1, 2, 3 ou 4 dos epítopos de sequências SEQ ID Nº: 1 a 21, SEQ ID Nº: 24 a 64, SEQ ID Nº: 67, 68, 70 a 72, 74 a 76, SEQ ID Nº: 78 a 95, SEQ ID Nº: 98 a 136, SEQ ID Nº: 139 a 156, e SEQ ID Nº: 158 a 184, opcionalmente separados por um espaçador como acima definido, ou um composto peptídico de sequência selecionado de SEQ ID Nº: 22, 23, 65, 66, 69, 73, 77, 96, 97, 137, 138, 157 e 185.

[0070] Tal vacina é vantajosamente usada para vacinação profilática ou terapêutica direcionada contra uma ou mais das Leishmania selecionadas de Leishmania donovani, Leishmania infantum, Leishmania chagasi, Leishmania mexicana, Leishmania amazonensis, Leishmania venezuelensis, Leishmania tropica, Leishmania major, Leishmania aethiopica, Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (Viannia) guyanensis, Leishmania (Viannia) panamensis andLeishmania (Viannia) peruviana.

[0071] A vacina que é o objeto da invenção é vantajosamente destinada a humanos, caninos, felinos e membros da família de cavalos. Preferivelmente, uma vacina que é objeto da invenção é destinada a humanos e cães.

Claims (22)

REIVINDICAÇÕES

1. Composto peptídico caracterizado pelo fato de que compreende pelo menos dois epítopos contidos nas sequências de proteína selecionadas das proteínas Leishmania PSA, H2B ou LmLRAB tendo uma sequência selecionada das sequências SEQ ID Nº: 1 a 21, sequências SEQ ID Nº: 24 a 64, as sequências SEQ ID Nº: 67, 68, 70 a 72, 74 a 76, as sequências SEQ ID Nº: 78 a 95, as sequências SEQ ID Nº: 98 a 136, as sequências SEQ ID Nº: 139 a 156, e as sequências SEQ ID Nº: 158 a 184, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos do mesmo, os referidos epítopos opcionalmente sendo separados por um espaçador de peptídeo compreendendo pelo menos um aminoácido.

2. Composto peptídico de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que os referidos análogos, muteína e homólogos dos epítopos, tendo capacidade imunogênica, têm uma percentagem de identidade de sequência de pelo menos 50%, preferivelmente pelo menos 75% com a sequência dos referidos epítopos.

3. Composto peptídico de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o espaçador peptídico compreende 1 a 8 aminoácidos.

4. Composto peptídico de acordo com a reivindicação 1, 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que ele compreende 2, 3 ou 4 dos referidos epítopos.

5. Composto peptídico de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que um primeiro epítopo é selecionado dos referidos epítopos contidos na sequência de uma primeira proteína selecionada de PSA, H2B ou LmLRAB, e um segundo epítopo é contido na sequência de uma segunda proteína, diferente da primeira proteína, selecionada de PSA, H2B ou LmLRAB.

6. Composto peptídico de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que ele é ligado a um grupo veículo que aumenta o caráter imunogênico do mesmo.

7. Composto peptídico de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o epítopo ou epítopos são selecionados dos epítopos das sequências SEQ ID Nº: 22, 23, 65, 66, 69, 73, 77, 96, 97, 137, 138, 157 e 185.

8. Composto peptídico de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que ele inclui pelo menos três epítopos contidos nas sequências de diferentes proteínas selecionadas de PSA, H2B e LmLRAB.

9. Anticorpo específico e imunossoro contendo o mesmo, caracterizado pelo fato de que é direcionado contra epítopos do composto de peptídeos como definido em qualquer uma das reivindicações precedentes.

10. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um composto peptídico como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8.

11. Composição compreendendo pelo menos um composto peptídico como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que se destina ao uso da mesma em vacinação profilática e terapêutica direcionada contra Leishmania.

12. Composição para uso da mesma de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que as Leishmania são Leishmania donovani, Leishmania infantum, Leishmania chagasi, Leishmania mexicana, Leishmania amazonensis, Leishmania venezuelensis, Leishmania tropica, Leishmania major, Leishmania aethiopica, Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (Viannia) guyanensis, Leishmania (Viannia) panamensis e/ou Leishmania (Viannia) peruviana.

13. Composição compreendendo pelo menos um composto peptídico como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que se destina à fabricação de um fármaco ou uma vacina e reagente diagnóstico in vivo ou in vitro para induzir ou diagnosticar em mamíferos uma ativação de imunidade mediada por célula dependente de linfócito tipo Th1 e/ou imunidade humoral efetora.

14. Vacina profilática e/ou terapêutica para uso da mesma contra uma ou mais das Leishmania selecionadas de Leishmania donovani, Leishmania infantum, Leishmania chagasi, Leishmania mexicana, Leishmania amazonensis, Leishmania venezuelensis, Leishmania tropica, Leishmania major, Leishmania aethiopica, Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (Viannia) guyanensis, Leishmania (Viannia) panamensis, e/ou Leishmania (Viannia) peruviana, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um composto peptídico como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8.

15. Vacina para uso do mesmo de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que ela compreende primeiramente pelo menos um composto peptídico selecionado de SEQ ID Nº: 22, 23, 69, 73 e 77, 65, 66, 96, 97, 137, 138, 157 e 185, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos do mesmo.

16. Vacina para uso da mesma de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizada pelo fato de que ela compreende primeiramente pelo menos um ou dois compostos de peptídeo selecionados de SEQ ID Nº: 22, 23, 69, 73 e 77, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos do mesmo; e em segundo lugar pelo menos um, dois ou três compostos de peptídeo selecionados das sequências SEQ ID Nº: 65, 66, 96, 97, 137, 138, 157 e 185, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos do mesmo.

17. Vacina para uso do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 16, caracterizada pelo fato de que ela compreende, em combinação, os seguintes compostos de peptídeo multiepitópico: SEQ ID Nº: 23, 66, 73, 77, 97, 138, 157 e 185, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos dos mesmos; ou SEQ ID Nº: 23, 66, 157 e 185, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos dos mesmos; SEQ ID Nº: 66, 97, 138, 157 e 185, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos dos mesmos; ou SEQ ID Nº: 66, 157 e 185, bem como os derivados análogos, muteína e homólogos dos mesmos.

18. Vacina para uso da mesma de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 17, caracterizada pelo fato de que ela também compreende um adjuvante selecionado dos adjuvantes nas classes TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, TLR9, saponinas e os derivados de QA21, quilA ou QS21 dos mesmos, emulsões de óleo em água ou água em óleo, polissacarídeos, lipossomas catiônicas, virossomas ou os polieletrólitos e imunomoduladores selecionados de proteínas da saliva da mosca de areia, citocinas, peptídeos e proteínas de choque térmico.

19. Vacina para uso da mesma de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 18, caracterizada pelo fato de que para administração subcutânea, intradérmica, intramuscular, parenteral, endonasal, mucosal ou oral.

20. Sequência de nucleotídeo caracterizado pelo fato de que codifica o composto de peptídeos como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, ou os epítopos contidos nestes compostos de peptídeo.

21. Vetor de expressão caracterizado pelo fato de que compreende pelo menos uma sequência de nucleotídeo como definida na reivindicação 20, bem como os métodos necessários para expressão do mesmo.

22. Reagente diagnóstico caracterizado pelo fato de que compreende um composto peptídico como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8.