BR112020020530A2 - Preparação biocatalítica enantioseletiva de 1-aminoindano 4-ciano substituído e ozanimod - Google Patents

Abstract

a presente invenção refere-se a um processo para a preparação biocatalítica enantiosseletiva de 1-aminoindanos (s)?4-substituídos de fórmula geral (s)-i: (1) e um processo para a preparação de ozanimod, preferivelmente envolvendo o processo biocatalítico enantiosseletivo de preparar 1-aminoindanos (s)?4-substituídos da fórmula geral acima, em que r= -cn e y=h.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "PREPA- RAÇÃO BIOCATALÍTICA ENANTIOSELETIVA DE 1-AMINOINDANO 4-CIANO SUBSTITUÍDO E OZANIMOD". Referência Cruzada a Pedidos de Patente relacionados

[0001] Este pedido de patente reivindica benefício de prioridade do Pedido Europeu de Patente Nº. 18167088.9 depositado em 12 de abril de 2018, que é doravante incorporado como referência em sua ínte- gra. Campo Técnico

[0002] A presente invenção refere-se a um processo biocatalítico enantiosseletivo para a preparação de 1-aminoindanos (S)—4-substituí- dos, bem como um processo para a preparação de ozanimod, preferi- velmente compreendendo o processo biocatalítico enantiosseletivo para a preparação de 1-aminoindanos (S)—4-substituídos da invenção. Antecedentes da Invenção

[0003] Ozanimod é uma droga imunomodulador para uso na tera- pia de esclerose múltipla recorrente (RMS) e colite ulcerativa (UC), tendo a seguinte estrutura:

ATO HN

CN +?

[0004] Na síntese de ozanimod, como divulgado em WO 2015/ 066515, uma amina primaria quiral, especialmente 1-aminoindano (S)- 4-ciano-substituído ((S)-2), serve como um intermediário chave. Esta amina ciano-substituída quiral (S)-2 da seguinte estrutura

NH,

CN (S)-2 fo mn So

CN

À proporciona acesso ao ozanimod via funcionalização das unidades amina e ciano. A amina quiral (S)-2 representa um intermediário vanta- joso, uma vez que a N-alquilação necessária subsequente, bem como a modificação do grupo ciano pode ser acompanhada através de rotas de reações estabelecidas e bem conhecidas.

NH

CN Intermediário chave (S)-2

[0005] De acordo com a técnica precedente, a síntese da amina (S)-2 (obtida como um sal de cloridrato) é realizada iniciando a partir de 4-bromo-indanona(4). Uma reação inicial de cianação catalisada por paládio, utilizando cianeto de zinco como um reagente, fornece 4- ciano-1-indanona (OZA-5). A condensação desta cetona com uma sul-

fonamida quiral (S)-6 resulta na imida e uma subsequente redução di- astereosseletiva, seguida de clivagem do grupo sulfonila quiral, leva à formação da amina (S)-2 desejada. Esta rota sintética divulgada na técnica precedente é mostrada no seguinte esquema (veja também Figura 2): Catalisador de Introdução de nitrila, metal pesado, | altamente tóxico caro / carmo R 1 o / NX Z X Í o i Oy ZN(CN): O TOP NºS. CH; | HQ — AcidodeLewis j “ PaPPhod, fotvana é A A den ( XI y -/( T > - ( T y —. h

N À + Br Í NMP o CH a 1 7 1 ON ano EPs CN o 4 —Soventenãofavorávl QOZAS5 CH. (ST Etapa de halogenação: Auxliar : questões de seletividade de Elimann, (S)-6 - purificação q Reagente de redução Auxiliar quiral caro, (relativamente) caro não reciclável 7 o | 8 o v HN-S. CHs HCl am em NH) + NaBH, HaÉ CH, — dimano f * | — - THF MeOH D> | Ozanimod en Cen (S)8 (S)-2 (isolado como sal de HCl

[0006] Embora este processo forneça um acesso ao composto (S)- 2 alvo desejado, vários inconvenientes nesta rota sintética de múltiplas etapas têm sido identificados. A etapa de bromação inicial na síntese de 4-bromo-indanona (4) é relativamente cara e eleva preocupações com regiosseletividade, bem como de temas de purificação devido a necessidade de separação de produtos secundários potenciais, que podem ser esperados. A subsequente etapa de cianação requer o uso de cianetos altamente tóxicos como reagentes, em combinação com um catalisador de metal pesado, muito caro (sal de paládio). Para a formação do centro estereogênico com a modalidade absoluta deseja- da, é necessária uma quantidade estequiométrica de uma agente auxi- liar quiral caro, especialmente o reagente de Ellmann. Na etapa de re- dução, boroidrato de sódio é usado, o que representa uma fonte de hidrato relativamente cara e adicionalmente é também menos deseja-

da em processos de larga escala. Por fim, o grupo sulfonila quiral deve ser clivado, tal que resulte na formação da amina (S)-2 alvo.

[0007] Por conseguinte, a síntese da técnica precedente de acordo com WO 2015/066515 envolve inconvenientes com respeito a uma síntese econômica e alguns fatores econômicos específicos significan- tes. Primeiramente, o material de partida 4-bromo-indanona (4) é um componente essencial relativamente caro. Embora 4-bromo-indanona seja comercialmente disponível, sua produção é complexa e requer matérias-primas bastante caras. A etapa de cianação subsequente es- ta também associada a altos custos de reagentes e eleva preocupa- ções de segurança, por exemplo, devido ao uso de cianetos altamente tóxicos. Um inconveniente adicional é a necessidade do agente auxili- ar de Ellman, quiral, estequiométrico, que é usado na formação diaste- reosseletiva do núcleo estereogênico da amina.

[0008] M. Hôhne et al. em "Biocatalytic Routes too Optically Active Amines", ChemCatChem, vol. 1, nº. 1, 24 de Agosto 2009, páginas 42- 51, divulga um visão geral de rotas biocatalíticas para preparar aminas oticamente ativas, tais como a acilação enantiosseletiva com hidrolases e aminação redutiva com uma transaminase ou amina desidrogenase.

[0009] D. Koszelewski et al., em "Omega-Transaminases for the synthesis of non-racemic alpha-chiral primary amines", Trends in Bio- technology, vol. 28, nº. 6, 6 de junho 2010, páginas 324-332 e F.-F. Chen et al., "Asymmetric Amination of Secondary Alcohols by using a Redox-Neutral Two-Enzyme Cascade", ChemCatChemvol.7, nº. 23, 22 de outubro 2015, páginas 3838-3841 divulgam a aminação redutiva assimétrica com a transaminase ou amina desidrogenas.

[0010] K.-E. Jaeger et al., em "Bacterial lipases for biotechnologi- cal applications", Journal of Molecular Catalysis. B: Enzymatic, vol. 3, nº. 1-4, junho 1997, páginas 3-12, divulga a acilação enantiosseletiva com lipases. A resolução ótica de 1-aminoindanos é mencionada.

[0011] A patente norte-americana 2007/037868 divulga a resolução biocatalítica de cis- e trans- 3-aminoindan-1-0l N-protegida com benzoxi- carbonila usando lipase B (CAL-B) isolada de Candida Antarctica.

[0012] CN-B-105017035 divulga a preparação de (s)-6-hidróxi-1- aminoindano através de resolução cinética dinâmica com lipase de Can- dida e ácido L-(+)-O-acetil-alfa-hidróxi fenil acético como doador de acila.

[0013] Na luz de inconvenientes envolvidos, especialmente na rota divulgada em WO 2015/066515, tem sido um objeto fundamental da presente invenção prover uma mais economicamente e ecologicamen- te atrativa, bem como tecnicamente viável, síntese enantiosseletiva de 1-aminoindanos (S)-4-ciano substituídos em geral e especialmente ao (S)-4-ciano-1-aminoindano, ou seja, o intermediário chave (S)-2.

[0014] É ainda um objeto adicional da presente invenção, prover uma rota alternativa para a síntese total de Ozanimod, partindo de compostos atrativos economicamente, enquanto evitando pelo menos alguns dos inconvenientes da técnica precedente.

[0015] A solução para estes e outros objetos se tornará evidente a uma pessoa versada na técnica a partir da presente especificação, como ilustrado nas reivindicações anexas. Sumário da Invenção

[0016] Por conseguinte, a presente invenção está direcionada a:

1. Um processo para a preparação biocatalítica enantiosse- letiva de 1-aminoindanos 4-substituidos, de fórmula geral (S)-l: Ho

R (SH em que

R é selecionado do grupo que consiste em halogênio; -CN; -C(=O)H; -C(=N-OH)H; -C(=O)NH2; -C(=0)OH; -C(=NH)NH-OH; -C (=N-OH)NH2; e -COOR', em que R' é selecionado do grupo que con- siste em H; C; a CÊ — alquila; aril alquila, em que a alquila é C, a Ca — alquila; -CH2-Hal, em que Hal é F, Cl ou Br; -CH2-O-alquila, em que a alquila é C; a Cg — alquila; opcionalmente arila substituída; e opcional- mente heteroarila substituída; Y é selecionado do grupo que consiste em H; -C(=O)R'Y; e - C(=0)OR'!, em que R”) é selecionado do grupo que consiste em H; C1 a Cs — alquila; aril alquila, em que a alquila é C, a Cs — alquila; -CH2- Hal, em que Hal é F, CI ou Br; -CH2-O-alquila, em que a alquila é C; a Cs — alquila; opcionalmente arila substituída; e opcionalmente hetero- arila substituída; via uma rota selecionada do grupo que consiste em A. resolução de uma mistura de amina enriquecida enanti- omericamente ou racêmica de compostos de indan-1-amina 4- substituídos de fórmulas gerais (S)-Il e (R)-Il NHo NH?

R R (SHI (RI em que R é como definido acima, via uma acilação enantiosseletiva, na presença de um bio- catalisador; B. resolução de uma mistura de amina enriquecida enanti- omericamente ou racêmica de compostos de indan-1-amina 4- substituídos N-acilados, de fórmulas gerais (S)-IIl e (R)-IIl o o So"

R R (SM (RM em que R e R') são como definidos acima e né 0 ou 1, via uma hidrólise enantiosseletiva, na presença de um bio- catalisador; C. aminação redutiva assimétrica de uma 1-indanona 4- substituida com uma transaminase, em que o substituinte na posição 4 é R, como definido acima; ou D. aminação redutiva assimétrica de uma 1-indanona 4- substituida com uma desidrogenase, em que o substituinte na posição 4 é R, como definido acima.

[0017] 2. O processo de acordo com o item 1, caracterizado pelo fato de que a rota é a rota A ou a rota B, preferivelmente a rota A.

[0018] 3. O processo de acordo com o item 2, em que o biocatali- sador é selecionado do grupo de hidrolases, preferivelmente em que as hidrolases são selecionadas do grupo que consiste em lipases, es- terases e proteases, mais preferivelmente, em que a hidrolase é uma lipase.

[0019] 4. O processo de acordo com o item 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que na rota A uma mistura de amina racêmica ou uma mistura de amina enriquecida enantiomericamente de compostos de indan-1-amina 4-substituídos de fórmulas gerais (S)-Il e (R)-Il, é adici- onada junto com um doador de acila a um biocatalisador, preferivel- mente em que o biocatalisador é uma lipase.

[0020] 5. O processo de acordo com o item 4, caracterizado pelo fato de que na rota A uma mistura de amina racêmica ou uma mistura de amina enriquecida enantiomericamente de compostos de indan-1-

amina 4-substituídos de fórmulas gerais (S)-Il e (R)-ll, é adicionada junto com um doador de acila a um biocatalisador, preferivelmente em que o biocatalisador é uma lipase, de acordo com o seguinte esquema de reação: NH NH? P vao o biocatalisador MÁ ee o aloe PEÇO O ? “doador de acila” 8 R (S) em que R é como definido no item 1, preferivelmente em que R é - CN, -COOMe ou -Br; R? é selecionado do grupo que consiste em um grupo C1 à C2o — alquila; um grupo C1 à Cao —alcóxi; um grupo Cs à C2o -arila substituído opcionalmente; um grupo heteroarila de 5 ou 6 mem- bros, substituído opcionalmente; halogênio e um grupo acila de fórmu- la -COOR, em que Rº é selecionado de H, e C1 a Cg — alquila, preferi- velmente -CH3 ou -C2Hs; preferivelmente em que R? é metóxi ou - COOC2Hs ou -CI; Rº é selecionado de um grupo C1 a Cg— ou C1 a Ce — alqui- la, preferivelmente em que Rº é um grupo C'1 a Ca- alquila, mais prefe- rivelmente Rº é metila, etila ou isopropila; -CH2-Hal, em que Hal repre- senta -F, -CI ou -Br, -CH2-O-alquila, em que alquila representa uma C1 a Cg-alquila, um grupo arila substituído opcionalmente e um grupo he- teroarila de 5 ou 6 membros substituído opcionalmente; em que a rea- ção é conduzida em um meio orgânico, na presença de um solvente orgânico ou sob condições sem solventes.

[0021] 6. O processo de acordo com qualquer um dos itens 1 a 5, caracterizado pelo fato de que R é selecionado do grupo que consiste em -Br, -CN e -COOCH;, preferivelmente em que R é -CN ou -Br, mais preferivelmente em que R é -CN.

[0022] 7. O processo de acordo com qualquer um dos itens 2 a 6,

caracterizado pelo fato de que é realizado na ausência de qualquer solvente adicional ou na presença de um solvente orgânico adicional, preferivelmente em que o solvente orgânico é pelo menos um selecio- nado do grupo que consiste em n-heptano, 2-metóxi — 2- metil propa- no, metil- terc -butil éter, 2-metil-tetra-hidrofurano, meti ciclo-hexano, tolueno e qualquer combinação de qualquer destes, preferivelmente em que o solvente orgânico é n-heptano e/ou metil-terc -butil éter.

[0023] 8. O processo de acordo com qualquer um dos itens 2 a 7, caracterizado pelo fato de que a lipase é selecionada do grupo que consiste em lipase B de Candida antarctica (CAL-B), lipase de Candi- da rugosa (CR lipase), lipase de Burkholderia cepacia (BC lipase) e lipase PS de Burkholderia cepacia; preferivelmente em que a lipase é CAL-B.

[0024] 9. O processo de acordo com qualquer um dos itens 2 a 8, caracterizado pelo fato de que o doador de acila é selecionado do gru- po que consiste em metóxi-acetato de etila, malonato de dietila e me- tóxi- acetato de isopropila, preferivelmente em que o doador de acila é metóxi- acetato de isopropila.

[0025] 10. O processo de acordo com qualquer um dos itens 2a 9, caracterizado pelo fato de que a reação é conduzida sob uma das se- guintes condições a), b) ou c), ou em que a reação é conduzida sob uma condição selecionada das condições a) e b)) a)e c);b)ec), ea), b)ec): a) por um período de tempo suficiente para atingir 99 % ee dos 1-aminoindanos 4-substituídos desejados, preferivelmente 30 mi- nutos a 48 horas, mais preferivelmente por pelo menos 5 h; b) em uma faixa de temperatura de 10 a 90 ºC, preferivel- mente a 40 a 60 ºC; c) em uma razão de substrato : enzima de 1 a 50 mg, preferivelmente 5 mg de CAL-B, por mmol de substrato;

preferivelmente em solução, na presença de n-heptano como o solven- te.

[0026] 11. O processo de acordo com qualquer um dos itens 2 a 10, caracterizado pelo fato de a mistura racêmica ou a mistura de ami- na enriquecida enantiomericamente de compostos de indan-1-amina 4-substituídos, de fórmulas gerais (S)-Il e (R)-Il, é obtida de ou é obte- nível da correspondente 1-indanona 4-substitída, por i)º formação de uma cetoxima, especialmente por con- densação de 1-indanona 4-substituída com hidroxilamina, seguida por ii) redução da cetoxima para a mistura de amina racêmi- ca.

[0027] 12. O processo de acordo com qualquer um dos itens 2 a 11, caracterizado pelo fato de que o(s) enantiômero(s) indesejado(s) resultante(s) da acilação enzimática são recuperados e reciclados / reusados.

[0028] 13. O processo de acordo com qualquer um dos itens 2 a 12, caracterizado pelo fato de que uma mistura de amina racêmica ou enriquecida enantiomericamente de compostos de indan-1-amina 4- substituídos, de fórmulas gerais (S)-ll e (R)-Ill, em que Ré -OCN e Y é hidrogênio, é acilada com metóxi-acetato de isopropila, na presença de CAL-B, em n-heptano e/ou metil-terc- butil éter como o solvente.

[0029] 14. O processo de acordo com qualquer um dos itens 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o composto de indan-1-ona 4- substituído inicial é obtenível de ou é obtido de naftaleno.

[0030] 15. Um processo para a preparação de Ozanimod, o dito processo compreendendo ou consistindo das etapas, na ordem dada, de: | prover naftaleno, Il reduzir naftaleno a 1,2-di-hidronaftaleno (OZA-2) e/ou 1,4-di-hidronaftaleno (OZA-1),

lla opcionalmente rearranjar 1,4-di-hidronaftaleno (OZA-1) a 1,2-di-hidronaftaleno (OZA-2), Ill clivar a ligação dupla C=C etilênica em 1,2-di-hidro- naftaleno (OZA-2) para prover um ácido dicarboxílico (OZA-3), IV ciclização do produto da etapa Ill (OZA-3) para formar 4-carbóxi-1-indanona (OZA-4), V derivação do 4-carbóxi-1-indanona (OZA-4) a 4-ciano- 1-indanona (OZA-5), VI converter a 4-ciano-1-indanona (OZA-5) a 4-ciano-1- aminoindano na modalidade -S ((S)-2), tanto diretamente como via o racemato, VII proteger o grupo amino do (S)-4-ciano-1-aminoindano ((S)-2) com um grupo de proteção (PG) para formar o (S)-4-ciano-1- aminoindano N-protegido (OZA-7), VIll converter o grupo ciano de OZA-7 a um grupo amidoxi- ma, IX converter o grupo amidoxima a um grupo 1,4-oxadiazol heterocíclico via condensação com ácido 3-ciano-4-isopropóxi benzoi- co ou derivados de ácido 3-ciano-4-isopropóxi benzoico, X substituir o grupo de proteção no grupo amino com um grupo hidróxi-etila para resultar Ozanimod, preferivelmente em que a conversão do 4-ciano-1-indanona a 4-ciano-1-aminoindano na modalidade S na etapa VI é realizada pelo processo de acordo com qualquer um dos itens 1 ou 2 a 14.

[0031] 16. Um processo para a preparação de Ozanimod, o dito processo compreendendo ou consistindo das etapas, na ordem dada, de: VI prover 4-ciano-1-aminoindano na modalidade S ((S)-2), preferivelmente obtido pelo processo de acordo com qualquer um dos itens 1 ou 2 a 14,

VII proteger o grupo amino do (S)-4-ciano-1-aminoindano ((S)-2) com um grupo de proteção (PG) para formar o (S)-4-ciano-1- aminoindano N-protegido (OZA-7), VIll converter o grupo ciano de OZA-7 a um grupo amidoxi- ma, IX converter o grupo amidoxima a um grupo 1,4-oxadiazol heterocíclico, via condensação com ácido 3-ciano-4-isopropóxi benzoi- co ou derivados do ácido 3-ciano-4-isopropóxi benzoico, X substituir o grupo de proteção no grupo amino com um grupo hidróxi-etila para resultar Ozanimod.

Breve Descrição dos Desenhos

[0032] FIG. 1 ilustra o processo para a preparação de Ozanimod de acordo com a presente invenção.

[0033] FIG. 2 ilustra algumas das desvantagens da arte preceden- te.

[0034] FIG. 3 é uma visão geral, não exaustiva, de compostos re- levantes da presente invenção (PG= grupo de proteção; Boc = grupo Terc -butilóxi carbonila)

[0035] FIG.4 mostra a resolução de 1-aminoindano, como uma re- presentação exemplar, com lipase B de Candida antarctica (CAL-B) em carga de biocatalisador decrescente, conduzida à concentração de substrato de 0,5 M.

[0036] FIG. 5 mostra um doador de acila e extração de solvente a 60 ºC para a resolução de indan-1-amina com a lipase CAL-B.

[0037] FIG 6 mostra a resolução de 4-ciano-1-aminoindano (OZA- 6) em carga de biocatalisador baixa de lipase CAL-B e indica que um alto excesso enantiomérico de > 95 % ee é atingido a uma conversão de cerca 55 %.

[0038] FIG. 7 mostra a preparação, em princípio básico, das indan- 1-aminas 4-substituidas racêmicas (somente para ilustração, não de acordo com a invenção). Termos e Definições

[0039] No contexto com o descrito na presente invenção, as quan- tidades dadas são quantidades em peso, se não indicado de outra forma.

[0040] No contexto da presente invenção, temperaturas são dadas em graus Celsius (*C). Reações e medidas são conduzidas a temperatu- ra ambiente (23 ºC), se não especificamente indicado de outra forma.

[0041] No contexto da presente invenção, as etapas de processo são conduzidas a pressão atmosférica / pressão normal, correspon- dendo a cerca de 1013 mbar, se não indicado de outra forma.

[0042] No contexto da presente invenção, a formulação "e/ou" des- tina-se a abranger tanto uma como como todas as combinações dos elementos listados nas respectivas listas.

[0043] Ao longo da presente descrição o termo "resolução racê- mica" significa resolução quiral, ou seja, em estequiometria, o proces- so para a separação de compostos racêmicos em seus enantiômeros.

[0044] Excesso enantiomérico (ee) é uma medida de pureza usa- da para substâncias quirais. Ele reflete o grau no qual a amostra con- tém um enantiômero em quantidades maiores que o outro. Por defini- ção "enantiomericamente puro" significa um ee de 100 %; de acordo com a invenção é desejado se alcançar um ee do composto enantiô- mero alvo de 95 % ou acima, ou 96 % ou acima, ou 97 % ou acima, ou 98 % ou acima, ou 99 % ou acima.

[0045] Na descrição da invenção, os grupos alquila podem ter uma cadeia linear ou podem ser ramificados ou podem ser cíclicos. No ca- so de grupos alquila cíclicos e cadeia ramificada, o grupo alquila com- preende pelo menos três átomos de carbono.

[0046] Na descrição da invenção, os grupos alcóxi podem ter uma cadeia linear ou podem ser ramificados ou podem ser cíclicos. No ca-

so de grupos alquila cíclicos e cadeia ramificada, o grupo alquila do grupo alcóxi compreende pelo menos três átomos de carbono.

[0047] Se não especificado de outra forma doravante, átomos de halogênio (por exemplo Hal) são selecionados de flúor (F), cloro (CI), bromo (Br) e iodo (I), preferivelmente F, CI ou Br.

[0048] Cada um dos documentos aqui referidos, é aqui incorpora- do por referência, incluindo qualquer pedido anterior, se ou não espe- cificamente listado aqui, do qual a prioridade é reivindicada. A menção de qualquer documento não é uma admissão de que tal documento se qualifique como técnica precedente ou constitui conhecimento geral da pessoa versada em qualquer jurisdição.

[0049] Exceto nos exemplos ou onde indicado explicitamente de outra forma, todas as quantidades numéricas na descrição especificando quantidades de materiais, condições de reação, pesos moleculares, nú- mero de átomos de carbono e semelhantes, devem ser entendidas como modificadas pela expressão " cerca de". Entenda-se que quantidade su- perior e inferior, faixa e limites de razão aqui apresentados podem ser independentemente combinados. Similarmente, as faixas e quantidades de cada elemento da invenção podem ser usados junto com faixas e quantidades para qualquer um dos outros elementos.

[0050] Como aqui utilizado, o termo transitório "compreendendo", que é sinônimo de "incluindo", " contendo", ou "caracterizado por", é inclusivo ou de final aberto e não exclui elementos ou etapas de pro- cesso adicionais, não mencionados. Entretanto, em cada citação de "compreendendo" aqui, pretende-se que o termo também abranja, co- mo configurações alternativas, as expressões "consistindo essencial- mente de" e "consistindo de", onde "consistindo de" exclui qualquer elemento ou etapa não especificada e "consistindo essencialmente de" permite a inclusão de elementos não mencionados adicionais ou eta- pas que não afetam materialmente as características essenciais ou básicas e novas da composição ou método em consideração.

[0051] Quando utilizada no presente pedido de patente, a expres- são "ou qualquer combinação de qualquer um destes" deve ser enten- dida significar que todas as possíveis combinações dos membros da lista da dita expressão precedente, são diretamente e sem ambiguida- de divulgadas na dita lista. Esta formulação representa um mero meio de formular o texto correspondente (descrição ou reivindicação) de uma maneira o mais concisa possível, tal como requerido pela lei de patentes, enquanto explicitamente deixando claro que a dita expressão deve ser lida e entendida como divulgado diretamente e sem ambiguidade cada uma das possíveis combinações que provenham dali. Por conseguinte, em um polímero "consistindo de" específico, elementos essenciais de- vem ser entendidos conter adicionalmente, potencialmente, pequenas quantidades dos ditos componentes menores / traços. Enquanto certas configurações representativas e detalhes têm sido apresentados com o propósito de ilustrar o objeto da invenção, será aparente a aqueles ver- sados nesta técnica, que várias alterações e modificações podem ser feitas sem partir do escopo da invenção. Neste sentido, o escopo da invenção deve ser limitado somente às reivindicações anexas.

[0052] Onde uma faixa numérica é aqui divulgada, tal faixa é con- tínua, incluindo ambos os valores mínimo e máximo da faixa, bem co- mo cada valor entre tais valores mínimo e máximo. Ainda adicional- mente, onde a faixa refere-se a números inteiros, cada inteiro entre os valores mínimo e máximo de tal faixa, está incluso. Adicionalmente, onde faixa múltiplas são fornecidas para descrever um aspecto ou ca- racterística, tais faixas podem ser combinadas. Pode-se dizer que, a menos que indicado de outra forma, todas as faixas divulgadas aqui devem ser entendidas abrangendo qualquer uma ou todas as subfai- xas contidas ali. Por exemplo, uma faixa inicial de "1 a 10" deveria ser considerada incluir qualquer e todas subfaixas entre o valor mínimo 1 e o valor máximo 10. Exemplos de subfaixas da faixa 1 a 10 incluem, mas não se limitam a, 1 a 6,1, 3,5 a 7,8 e 5,5 a 10. Deve-se entender que as quantidades, faixas e limites de razão superior e inferior aqui indicadas, podem ser combinadas independentemente. Similarmente, as faixas e quantidades para cada elemento da invenção podem ser usadas junto com faixas ou quantidades para qualquer dos outros elementos.

[0053] Uma vez que todos números, valores e/ou expressões es- pecificando quantidade de materiais, ingredientes, condições de reação, pesos moleculares, número de átomos de carbono e similares, usados aqui e nas reivindicações anexas, estão sujeitos a várias incertezas de medida encontradas na obtenção de tais valores, a menos que indicado de outra forma, todos devem ser entendidos como modificados em todas instâncias pelo termo "cerca de". Tal como aqui utilizado, o termo "cerca de" usado em conjunto com um valor numérico, deve ser entendido signi- ficar, dentro do grau de erro de um instrumento que seria comumente usado por alguém versado ordinariamente na técnica, como para medir o valor no contexto da presente divulgação e, mais especialmente, dentro da faixa do valor indicado, onde nenhuma função discernível ou proprie- dade seria afetada tal para diferenciar da mesma função ou propriedade exibida precisamente no valor indicado. O termo "cerca de" usado em conjunto com um valor numérico pode significar aquele valor + 20 %. O termo "cerca de" usado em conjunto com um valor numérico pode sig- nificar aquele valor + 10 %. O termo "cerca de" usado em conjunto com um valor numérico pode significar aquele valor + 5 %. O termo "cerca de" usado em conjunto com um valor numérico pode significar aquele valor + 1 %. O termo "cerca de" usado em conjunto com um valor numérico pode significar aquele valor + 0,5 %.

[0054] Assim, foram delineados, de forma bastante ampla, os as- pectos mais importantes da invenção, para que a descrição detalhada, que segue, possa ser melhor entendida e para que a presente contri-

buição para a técnica possa ser mais bem apreciada. Obviamente há aspectos adicionais da invenção que será descrita doravante e que formará a matéria das reivindicações anexas neste documento. A este respeito, antes de explicar várias configurações da invenção em deta- lhes, deve-se entender que a invenção não o limitada em seu pedido de patente aos detalhes e construção e ao arranjo dos componentes estabelecidos na descrição seguinte ou ilustrado nos desenhos. A in- venção é capaz de outras configurações e de ser praticada e conduzi- da de várias maneiras.

[0055] Também deve-se entender que a fraseologia e terminologia deste documento, são para o propósito de descrição e não devem ser consideradas como limitantes em qualquer contexto Aqueles versados na técnica avaliarão os conceitos em que esta divulgação está basea- da e que pode ser facilmente utilizada como a base para projetar ou- tras estruturas, métodos e sistemas para realizar os vários propósitos deste desenvolvimento. É importante que as reivindicações sejam consideradas como incluindo tais construções equivalentes, na medida que elas não se afastam do espírito e escopo da presente invenção. Descrição detalhada

[0056] A presente invenção refere-se a um processo para a prepa- ração biocatalítica enantiosseletiva de 1-aminoindanos 4-substituidos, de fórmula geral ((S)-I) :

H NY

R (SH em que

R é selecionado do grupo que consiste em halogênio; -CN; -C(=O)H; -C(=N-OH)H, -C(=O)NH>z, -C(=0) OH, -C(=NH)NH-OH, -C(=N- OH)NH2, e -COOR', em que R' é selecionado do grupo que consiste em H; C1 a Cg — alquila, preferivelmente C1: ou C2 a Ce — alquila, mais preferivelmente C; ou C2 a Ca — alquila; aril alquila com alquila repre- sentando C: ou C> a Cg — alquila e onde a arila é preferivelmente sele- cionada de fenila e naftila, preferivelmente fenila; -CH2-Hal, em que Hal é F, CI ou Br; -CH2-O-alquila, em que a alquila é C, ou C2 a Ca — alquila, preferivelmente C, ou C2> a Cs — alquila, mais preferivelmente C1 ou C2 a Ca — alquila ; arila e heteroarila substituída; Y é selecionado do grupo que consiste em H; -C(=O)R'Y; e - C(=0)OR'!, em que R”) é selecionado do grupo que consiste em H; C1 ou C2 a Cg — alquila, preferivelmente C1 ou C2 a Cs — alquila, mais pre- ferivelmente C, ou C2 a Ca — alquila; aril alquila, com a alquila repre- sentando C, ou C> a Cg — alquila, preferivelmente C; ou C2 a Cs — al- quila, mais preferivelmente C1 ou C2 a Ca — alquila e onde a arila é pre- ferivelmente selecionada de fenila e naftila, preferivelmente fenila; - CH2-Hal, em que Hal é F, CI ou Br; -CH2-O-alquila, em que a alquila é C1 ou C2 a Cs — alquila, preferivelmente C1 ou C2 a Cs — alquila, mais preferivelmente C1 ou C2 a Ca — alquila; arila e heteroarila.

[0057] Na definição de R' e R”, o grupo arila é preferivelmente selecionado do grupo que consiste em fenila, tolila, xilila e naftila, pre- ferivelmente fenila, cujo grupo arila pode ser na substituído ou substi- tuído com pelo menos um dos substituintes selecionados do grupo que consiste em H; C1 ou C2 a C8-alquila, preferivelmente C, ou C2 a Cs — alquila, mais preferivelmente C; ou C2 a Ca — alquila; aril alquila, com a alquila representando C1 ou C2 a Cg — alquila, preferivelmente C1: ou C2 a Cs — alquila, mais preferivelmente C; ou C2 a Ca — alquila e onde a arila é preferivelmente selecionada de fenila e naftila, preferivelmente fenila; -CH2-Hal, em que Hal é F, CI ou Br; -CH7-O-alquila, em que a alquila é C; ou C2 a Ca — alquila, preferivelmente C1 ou C2 a Cs — alqui- la, mais preferivelmente C; ou C2 a Ca — alquila, preferivelmente onde o substituinte é selecionado de C1 a Cçs- alquila, C1 a Ca- alquila e ha- logênio.

[0058] Na definição de R' e R””, o grupo heteroarila é preferivel- mente um grupo heterocíclico de 5- ou 6- membros contende pelo me- nos um heteroátomo, selecionado do grupo que consiste em nitrogê- nio, oxigênio e enxofre, preferivelmente um radical selecionado do grupo consistindo de piridila, pirimidila, furila, tienila e imidazolila; cujo grupo heteroarila pode ser não substituído ou representa um grupo heteroarila substituído selecionado de piridila, pirimidila, furila, tienila e imidazolila, em que o substituinte é selecionado de C; a Cs- alquila, C1 a Ca- alquila e halogênio.

[0059] Preferivelmente R') é C1 a C4- alquila (mais preferivelmente selecionado de metila, etila, n- ou isopropila e terc-butila, de maior pre- ferência terc-butila) ou aril alqguila, em que o grupo alquila é C1 ou C2 alquila e preferivelmente, em que a arila do grupo arila é fenila.

[0060] Em uma modalidade R é selecionado de halogênio, preferi- velmente -Br; -CN e -COOR!, tal como -COOCH;3, mais preferivelmen- te -CN, e Y é H ou -C(=O)R'!, preferivelmente em que R”) é um grupo C1 a C4- alquila, mais preferivelmente selecionado de um grupo metila, etila e terc — butila, mais preferivelmente em que R”» é um grupo terc- butila.

[0061] Em uma modalidade da presente invenção, R é seleciona- do de -Br; -CON e -COOCH;, preferivelmente em que Ré -CON, e Yé H ou -C(=O)R'!, em que R”' é o grupo terc-butila.

[0062] Em uma modalidade, R é -CN e Y é H ou -C(=O)R', cor- respondendo ao mais preferido enantiômero de amina alvo em moda- lidade S, ou seja, 4-ciano-1-aminoindano ((S)-2).

[0063] Para efeitos de preparar enantiosseletivamente os 1-amino-

indanos (S)-4-substituidos de fórmula geral | da invenção, tal como o enantiômero (S0-2 de amina alvo, quatro vias / rotas alternativas são especialmente abrangidas pela presente invenção: - Quando transformando uma 1-indanona 4-substituída co- mo descrito acima, na amina racêmica correspondente, uma resolução catalisada por lipase é usada como uma opção biocatalítica como rota A — representando a rota preferida de acordo com a presente inven- ção.

- A rota B refere-se à resolução de uma mistura racêmica ou mistura enantiomericamente enriquecida de uma amida adequada via uma hidrólise enantiosseletiva.

- Como as rotas C e D, a aminação redutiva assimétrica de uma 1-indanona 4-substituida como descrito acima, envolvendo tanto transaminases (rota CO como desidrogenases de amina (rota D) como catalisadores.

[0064] A rota A refere-se à resolução de uma amina racêmica via uma N-acilação, na presença de um biocatalisador como etapa chave, preferivelmente na presença de uma hidrolase, preferivelmente seleci- onada de uma lipase, esterase ou protease. Mais preferivelmente uma lipase é usada como um biocatalisador. A formação de um 1- aminoindano 4-ciano substituído enantiomericamente puro (ou seja o composto ((S)-2) em um estágio anterior da síntese total de Ozanimod de acordo com WO 2015/066515, rende o uso de um processo de re- solução para a geração de 1-aminoindano (S)-4-substituido enantio- mericamente puro, particularmente atrativo. Por conseguinte, um as- pecto da presente invenção é direcionado à resolução de uma mistura de amina racêmica de indan-1-aminas 4-substituídas de fórmulas ge- rais (s)-ll e (R)-Il, como descrito acima, via sua acilação na presença de um biocatalisador, preferivelmente na presença de lipase como uma etapa chave. Ao invés de uma mistura racêmica, uma mistura enantiomericamente enriquecida de uma amina adequada pode simi- larmente ser usada como um substrato para este processo.

[0065] A rota B refere-se à resolução de uma amina racêmica via hidrólise, na presença de um biocatalisador como etapa chave, prefe- rivelmente na presença de uma hidrolase, preferivelmente selecionada de uma lipase, esterase ou protease. Mais preferivelmente uma lipase é usada como um biocatalisador. Um aspecto da presente invenção é direcionado à resolução de uma mistura de amida racêmica de indan- 1-amidas 4-substituídas de fórmulas gerais (S)-Ill e (R)-Ill, como des- crito acima, via hidrólise enantiosseletiva com um biocatalisador como uma etapa chave. Ao invés de uma mistura racêmica, também uma mistura enantiomericamente enriquecida de uma amida adequada po- de ser usada como um substrato para este processo.

[0066] A rota C em direção ao compostos alvo de 1-aminoindano 4-substituidos (tal como 4-ciano-1-aminoindano (S)-2 ou indan-1-ami- nas relacionadas com outros substituintes na posição 4), consiste na aminação redutiva assimétrica dos substratos de indanona correspon- dentes Tal aminação redutiva pode ser realizada usando transamina- ses em combinação com um doador de amina, que na dita conversão, é oxidado para formar um subproduto.

[0067] Nesta rota uma transaminase enantiosseletiva, por exemplo transaminase de Vibrio fluvialis (VF-TA) ou transaminase de Ar- throbacter sp. (ArS-TA), é utilizada como biocatalisador em combina- ção especialmente com um co-fator, por exemplo piridoxal fosfato, e um doador de amina adequado. Tal como doador de amina especial- mente L-alanina ou isopropil amina pode ser usado, levando aos pro- dutos de oxidação piruvato ou acetona. Esta reação pode ser realizada tanto em meio aquoso, como orgânico.

[0068] Particularmente, esta rota pode ser realizada com VF-TA. Um processo exemplar é conduzido com L-alanina em meio aquoso,

metanol 20 % em volume, tampão P; (0,1 M, pH8,0) a 30 ºC por 24 ho- ras.

[0069] Na rota D, a aminação redutiva assimétrica de cetona é realizada utilizando uma desidrogenase de amina (AMDH), com NAD (P)H como co-fator, ao invés de uma transaminase como um biocatali- sador. Nesta rota, o composto de nitrogênio requerido (fonte de nitro- gênio) pode ser amônia, C1 a Ca -alquil aminas ou sais de amônio, com amônia sendo preferida. Un agente de redução é requerido, o qual pode ser, por exemplo, D-glicose ou formiato. Adicionalmente, uma segunda enzima é necessária para regeneração de co-fator in situ, a qual pode ser desidrogenase de glicose (no caso de D-glicose como um co-substrato) ou uma desidrogenase de formiato (no caso de for- miato como um co-substrato).

[0070] Um exemplo de uma desidrogenase de amina usável é a desidrogenase de amina artificial, relatada por F.-F. Chen et al. (ChemCatChem 2015, 7, 3838-3841), que mutou desidrogenase de leucina de Exigobacterium sibiricum (EsLeuDH-DM) em duas posições (K77S/N270L).

[0071] Em uma modalidade, a rota alternativa mais preferida para a preparação dos 1-aminoindanos 4-substituidos desejados (tal como o composto (S)-2 e análogos relacionados com outros 4 substituintes) é representada pela resolução enzimática de aminas subjacentes ra- cêmicas, através de acilação enantiosseletiva, na presença de uma lipase, são as rotas A e B, sendo a modalidade mais preferida a rota A.

[0072] Na modalidade da rota A e B, a presente invenção é direci- onada a um processo biocatalítico enantiosseletivo para a preparação de 1-aminoindanos 4-substituidos de fórmula geral | como acima defi- nido, (i) via rota A de resolução de uma mistura racêmica de enantiômeros de indan-1-amina 4-substituida (quiral) de fórmulas ge-

rais (S)-Il e (R)-Il: NH> NH?

R R (SHI (RI em que R é como definido acima, preferivelmente halogênio (-CI ou - Br), -COOCH;3 ou -CN, mais preferivelmente -CN; via uma acilação enantiosseletiva (com um agente de acila- ção aqui descrito), na presença de uma hidrolase, preferivelmente em que a hidrolase é selecionada do grupo que consiste em uma lipase, esterase e protease, mais preferivelmente na presença de uma lipase, ou (ii) via rota B de resolução de uma mistura racêmica de enantiômeros de indan-1-amidas 4-substituida (quiral) de fórmulas ge- rais (S)-l e (R)-l:

NHY NHY

R R (SH (R) em que R é como definido acima, preferivelmente halogênio (-CL ou - Br), ou -CN, mais preferivelmente -CN; e Y é como definido acima, preferivelmente em que Y é -C(=O)R') ou -C(=0)OR"!, em que R” é como definido acima, mais preferivelmente C1; ou C2 a Ca — alquila (em uma modalidade preferida selecionado de metila, etila, n-propila, iso- propila, e terc-butila, mais preferivelmente terc-butila) ou aril alquila, em que a alquila é C, ou C>-alquila e arila representando fenila. via uma hidrólise enantiosseletiva, na presença de um biocatalisador, preferivelmente na presença de uma hidrolase, mais preferivelmente em que a hidrolase é selecionada do grupo que consiste em uma |i-

pase, esterase e protease, mais preferivelmente na presença de uma lipase.

[0073] Uma modalidade preferida da invenção, a rota B é direcio- nada resolução de uma mistura (amida) enriquecida enantiomerica- mente ou racêmica de compostos de indan-1-amina 4-substituídos N- acilados, de fórmulas gerais (S)-Ill e (R)-IIl o o SS" SS"

R R (SM (RM em que R e R') são como definidos acima e n é O ou 1, preferivelmente em que né O, via uma hidrólise enantiosseletiva, na presença de um bio- catalisador.

[0074] Em uma outra modalidade preferida, R'” é C1 a Ca — alquila (tal como metila, etila, n-propila, isopropila, e terc-butila, mais preferi- velmente terc-butila) ou aril alquila, com alquila representando C1 ou Ca-alquila e arila representando fenila. Em ainda outra modalidade R é -CN.

[0075] Em ainda outra modalidade preferida, R representa -CN, n é 0 e RV é C1 a Ca — alquila, mais preferivelmente R') é selecionado do grupo que consiste em um grupo metila, etila e terc-butila, mais pre- feriveimente R') é um grupo terc-butila.

[0076] Em uma modalidade da presente invenção, o processo é caracterizado pelo fato de que na rota A a mistura de amina racêmica ou uma mistura de amina enriquecida enantiomericamente de compos- tos de indan-1-amina 4-substituídos de fórmulas gerais (S)-Il e (R)-Il, é adicionada a um biocatalisador, preferivelmente a uma lipase junto com um doador de acila (ou seja, um agente de acilação), de acordo com o seguinte esquema de reação exemplar (exemplificando biocata- lisador = lipase; meio de reação = solvente orgânico): NH> NH P vao o lipase mNÁ ge CÇCÔ oe E CO CO R orgânico R “doador de acila” Ss R em que

R é como definido acima, preferivelmente halogênio (-Cl ou -Br), -COOCH;3 ou -CN, mais preferivelmente -CN; R? é C1 a Cao — alquila, ou C1 ou C? a C18 — alquila, ou C1 ou C2 à C16 — alquila, ou C; ou C2 a C12 — alquila, ou C1 ou C2 a Ca — alquila, ou C1 ou C2 a Cs — alquila, ou C1 ou C2 a Ca — alquila; C1 a Cao —alcóxi, ou C1 ou C2 a Cig —alcóxi, ou C1 ou C2o a C16 —alcóxi, ou OC; ou Co a Ci — alcóxi, ou C1: ou C2 a CÊ —alcóxi, ou C1 ou C2 a C6 —alcóxi, ou C1; ou C2 a Ca —alcóxi; um grupo arila substituído opcionalmente tendo 6 a 20 átomos de carbono, preferivelmente em que o grupo arila é como defi- nido acima na definição de R' / R'; um grupo heteroarila de 5 ou 6 membros, substituído opcionalmente, como definido acima na defini- ção de R' / R' ; ou um grupo acila de fórmula -COOR, em que Rº é uma C; ou C> a Cs-alquila, preferivelmente C, ou C2 a Ce-alquila, mais preferivelmente C, ou C> a Ca-alquila, especialmente -CH3 ou -CaHs; um átomo de halogênio; preferivelmente em que R? é metóxi ou - COOC>2Hs e cloro; Rº é selecionado de um grupo que consiste em C, ou C2 a Ca- alquila, preferivelmente C1 ou C2 a Cs -— alquila, mais preferivelmente C; ou C2 a Ca — alquila, preferivelmente Rº é selecionado do grupo que consiste em metila, etila e isopropila, mais preferivelmente Rº? é etila; -CH2-Hal, em que Hal representa -F, -CI ou -Br, -CH2-O-alquila, em que alquila representa uma C; a Cg-alquila, um grupo arila substituído opcional- mente, como definido acima na definição de R' / R e um grupo hete-

roarila de 5 ou 6 membros substituído opcionalmente, como definido acima na definição de R' / R""; em que a reação é conduzida em um meio orgânico, tanto com um solvente orgânico adicional, como sob condições ideais (ou seja, sem solvente).

[0077] Em uma modalidade preferida, os agentes de acilação são caracterizados por Rº sendo selecionado de um grupo C1 a Ca-alquila (tal como uma metila, etila, propila, grupo isopropila, grupo n- e terc- butila, preferivelmente etila e grupo isopropila) e R? sendo selecionado do grupo que consiste em metóxi ou -COOC>2Hs e cloro, preferivelmen- te metóxi.

[0078] O princípio de reação é doravante apresentado para uma amina racêmica selecionada no seguinte esquema de reação (por exemplo, em que R = -CN e R? = metóxi): o w& ” Fo NA CO + eo R meio de reação oráêrico CÓ ' CO & “dosdor descia” fomenta sicEmes OM dou & OZA-6 (s-2

[0079] Com respeito a resolução enzimática de aminas racêmicas relacionadas a Ozanimod e levando em consideração o rendimento máximo de 50 %, tal método de resolução é atrativo, especialmente quando aplicando ele a uma etapa relativamente inicial da síntese de múltiplas etapas. Em tal etapa relativamente inicial na resolução, a in- dan-1-amina 4-substituida OZA-6 (ou os outros análogos 4-substitui- dos) podem ser considerados substratos. Ao lado de alta eficiência de processo, a extração dos enantiômeros indesejados e racemização é similarmente desejável para diferentes propósitos.

[0080] Em uma modalidade da presente invenção, o solvente or- gânico é selecionado do grupo que consiste em n-heptano, 2-metóxi — 2- metil propano, metil- terc-butil éter (MTBE), 2-metil-tetra-hidrofurano

(2-MTHF), metil ciclo-hexano (MCH), tolueno e misturas destes, prefe- rivelmente em que o solvente orgânico é n-heptano, MTBE e tolueno, ou misturas destes.

[0081] Em uma modalidade da presente invenção, a lipase é sele- cionada do grupo que consiste em lipase B de Candida antarctica (CAL-B), lipase de Candida rugosa (CR lipase), lipase de Burkholderia cepacia (BC lipase) e lipase PS de Burkholderia cepacia; preferivel- mente CAL-B. A lipase B de Candida antarctica (CAL-B) é uma das duas diferentes lipases (lipase A e lipase B) produzidas pelo dito orga- nismo.

[0082] CAL-B está comercialmente disponível como uma enzima recombinante, imobilizada (por exemplo, Novozyma 435). A lipase de Candida rugosa é isolada a partir de fungo e a lipase Burkholderia ce- pacia é isolada a partir de bactéria. As lipases acima mencionadas es- tão comercialmente disponíveis. De acordo com uma modalidade da invenção, o uso de lipase B a partir de Candida antarctica (CAL-B) é especialmente preferido.

[0083] As resoluções usando catalisadores de lipases são tipica- mente realizadas em um meio orgânico, preferivelmente em que o bio- catalisador está presente em forma imobilizada. Isto possibilita uma separação simples da mistura de produto a partir do componente de enzima. O tipo de resolução enzimática envolvendo um agente de aci- lação adequado oferece uma larga faixa de vantagens.

[0084] Geralmente, de acordo com a invenção, qualquer tipo de doador de acila, isto é, agente de acilação, pode ser utilizado. Em uma modalidade da presente invenção, os doadores de acila são ésteres, especialmente aqueles tendo estruturas tais como aquelas apresenta- das no Esquema |. Ésteres representativos são selecionados do grupo que consiste em 2-butanoatos de alquila, octanoatos de alquila, oxala- tos de dialquila, malonatos de dialquila, 2-cloroacetato de alquila, em que o grupo alquila é selecionado de grupos C1 a Cs -, preferivelmente C1 a Ca-alquila, onde grupos alquila, tais como metila, etila ou isopropi- la, são preferidos.

[0085] Em uma modalidade da presente invenção, o doador de acila é selecionado do grupo que consiste em metóxi-acetato de etil, malonato de dietila e metóxi-acetato de isopropila, preferivelmente o doador de acila é metóxi-acetato de isopropila.

[0086] Em uma modalidade da presente invenção, a reação é conduzida sob uma das seguintes, duas das seguintes (ou seja, a) e b); a) e c); b)ec)), ou todas as seguintes condições: a) por um período de tempo suficiente para atingir 99 % ee ou mais, dos 1-aminoindanos 4-substituídos desejados (como substra- tos remanescente), preferivelmente 30 minutos a 48 horas, mais prefe- rivelmente por pelo menos 5 horas, tal para atingir 99 % ee ou mais, dos 1-aminoindanos 4-substituídos desejados; b) em uma faixa de temperatura de 10 a 90 ºC, preferivel- mente a 40 a 60 ºC; em uma razão de substrato : enzima de 1 a 50 mg, de CAL- B por mmol de substrato, preferivelmente na presença de um solvente orgânico selecionado daqueles especificados acima, mais preferivel- mente na presença de n-heptano como o solvente.

[0087] Evidentemente o tempo suficiente para alcançar pelo me- nos 99 % ee dos 1-aminoindanos 4-substituidos desejados na condi- ção a) depende dos parâmetros escolhidos para as condições b) e c) e podem ser facilmente controlados de acordo com as respectivas con- dições de reação escolhidas.

[0088] Em uma modalidade da presente invenção, antes da reso- lução ótica, a mistura racêmica, ou seja, o substrato usado no subse- quente método de resolução catalítica, enantiosseletiva (rota A), é preparada da correspondente 1-indanona 4-substituida, na qual o substituinte R na posição 4 é definido como acima. Em uma modalida- de isto pode ser executado pela i) formação de uma cetoxima, especialmente por conden- sação de 1-indanona 4-substituída com hidroxilamina, seguida pela ii) redução da cetoxima para a mistura de amina racêmica.

[0089] Em uma modalidade da presente invenção, o(s) enantiôme- ro(s)indesejados resultantes de acilação enzimática são recuperados e reciclados / reusados.

[0090] Em uma modalidade preferida da presente invenção, o pro- cesso para fazer o enantiômero de fórmula (S)-| é caracterizado pelo fato de que uma mistura de amina racêmica ou enriquecida enantio- mericamente de compostos de indan-1-amina 4-substituidos, das fór- mulas (S)-ll e (R)-ll, em que R é -OCN e Y é hidrogênio, é acilado com metóxi-acetato de isopropila, na presença de CAL-B em n-heptano e/ou MTBE, preferivelmente na presença de n-heptano como o solven- te.

[0091] Em uma outra modalidade da presente invenção, o com- posto de partida inicial do qual a indan-1-ona 4 substituída é prepara- da, é naftaleno.

[0092] Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção é direcionada ao processo para a preparação de Ozanimod, compreen- dendo ou consistindo das etapas, na ordem dada, de: | prover naftaleno, Il — reduzir naftaleno a 1,2-di-hidronaftaleno (OZA-2) e/ou 1,4-di-hidronaftaleno (OZA-1), lla opcionalmente rearranjar 1,4-di-hidronaftaleno (OZA-1) a 1,2-di-hidronaftaleno (OZA-2), Il clivar a ligação dupla C=C etilênica em 1,2-di- hidronaftaleno (OZA-2) para prover um ácido dicarboxílico (OZA-3), IV ciclização do produto da etapa Ill (OZA-3) para formar

4-carbóxi-1-indanona (OZA-4), V derivação do 4-carbóxi-1-indanona (OZA-4) para 4- ciano-1-indanona (OZA-5), VI converter a 4-ciano-1-indanona (OZA-5) para 4-ciano- 1-aminoindano na modalidade S ((S)-2), tanto diretamente como via o racemato, VII proteger o grupo amino do (S)-4-ciano-1-aminoindano ((S)-2) com um grupo de proteção (PG) para formar o (S)-4-ciano-1- aminoindano N-protegido (OZA-7), VIII converter o grupo ciano de OZA-7 a um grupo amido- xima, IX converter o grupo amidoxima a um grupo 1,4-o0xadiazol heterocíclico via condensação com ácido 3-ciano-4-isopropóxi benzoi- co ou derivados de ácido 3-ciano-4-isopropóxi benzoico, X substituir o grupo de proteção no grupo amino com um grupo hidróxi-etila para resultar Ozanimod.

[0093] Em uma modalidade da presente invenção, a conversão do 4-ciano-1-indanona para 4-ciano-1-aminoindano na modalidade S ((S)- 2) na etapa VI acima, é alcança através de um processo de acordo com qualquer uma das configurações de acordo com a invenção deli- neado ademais acima, preferivelmente através da rota A (envolvendo o racemato). Por conseguinte, em uma modalidade, a presente inven- ção refere-se a um método para a preparação de Ozanimod compre- endendo a etapa de prover 4-ciano-1-aminoindano na modalidade S ((S)-2) de acordo com o método de rota A ou rota B (após separar o S- enantiômero desejado e desacilação). Preferivelmente, a síntese de Ozanimod compreende o método de rota A.

[0094] A presente invenção, em uma modalidade ainda mais es- pecífica, é ademais direcionada para um processo de preparação de Ozanimod compreendendo ou consistindo das etapas, na ordem dada,

de: VI prover 4-ciano-1-aminoindano na modalidade S ((S)- 2), preferivelmente obtido por ou obtenível pelo processo de acordo com qualquer uma das configurações delineadas ademais acima, mais preferivelmente de acordo com a rota A ou a rota B (após separar o enantiômero S e desacilação), VII proteger o grupo amino do (S)-4-ciano-1-aminoindano ((S)-2) com um grupo de proteção (PG) para formar o (S)-4-ciano-1- aminoindano N-protegido (OZA-7), VIII converter o grupo ciano de OZA-7 a um grupo amido- xima, IX converter o grupo amidoxima a um grupo 1,4-o0xadiazol heterocíclico, via condensação com ácido 3-ciano-4-isopropóxi benzoi- co ou derivados do ácido 3-ciano-4-isopropóxi benzoico, X substituir o grupo de proteção no grupo amino com um grupo hidróxi-etila para render Ozanimod.

[0095] Em uma modalidade da presente invenção na etapa |l, a redução de naftaleno para 1,2-di-hidronaftaleno (OZA-2) é conduzida tanto eletroquimicamente como via a reação de Birch. Em uma moda- lidade especial, a reação de Birch conduzida na presença de sódio e terc-butanol em dietil-éter [veja: 1 a)T. Asahara, M. Seho, H. Kaneko, Bulletin of the Chemical Society of Japan 1968, 41, 2985; b) A. Misono, T. Osa, T. Yamagishi, Bulletin of the Chemical Society of Japan, 1967, 40, 427; c) HW. Mortensen, J. Heinze, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1984, 23, 84; d) H. W. Sternberg, R. Markby, |. Wender, Journal of The Electrochemical Society 1963, 110, 425 para síntese eletroquímica; 2 a) O. S. Kukovinets, M. |. Kislitsyn, R. A. Zainullin, A. A. Mukha- medzyanova, F. Z. Galin, M. |. Abdullin, Russian Jounal of organic Chemistry 2008,44,362; b) A. Menzek, A. Altundas, D. Gúltekin, Jour- nal of Chemical Research 2003, 2003, 752 para reação tipo Birch].

[0096] Em outra modalidade da presente invenção, uma etapa adicional |l acode ser realizada, ou seja, o rearranjo de 1,4-di-hidro- naftaleno (OZA-1) para 1,2-di-hidronaftaleno (OZA-2), se a razão de 1,4-di-hidronaftaleno (OZA-1) para o 1,2-di-hidronaftaleno (OZA-2) re- sultante da etapa Il não for favorável. A etapa lla, em uma modalidade especial, é conduzida tanta na presença de um ácido forte, como na presença de uma base forte, tal como, especialmente, terc-butóxido de potássio em terc-butanol, mais especialmente à temperatura de cerca de 60 ºC, cerca de 12 horas [ veja: a) S. Suzuki, M. Kato, S. Nakajima, Can. J. Chem. 1994, 72, 357; b) W. Wu, J.G. Verkade, ARKIVOC 2004, 88; c) D. R. Vutukuri, P. Bharathi, Z. Yu, K. Rajasekaran, M.-H. Tran, S. Thayumanavan, J. Org. Chem. 2003, 68, 1146; d) M. Gúney, A. Coskun, F. Topal, A. Dastan, |. Gúlcin, C.T. Supuran, Bioorganic & Medicinal Chemistry 2014, 22, 3537, para rearranjo de di-hidronafta- leno].

[0097] Em um modalidade da presente invenção, a etapa Ill é conduzida oxidativamente, especialmente através de ozonólise ou usando peróxido de hidrogênio e tungstato de sódio em quantidades catalíticas, mais especialmente por permanganato de potássio / hidró- xido de sódio em tetra-hidrofurano ou permanganato de potássio / hi- dróxido de sódio em água e quantidades pequenas de cloreto de meti- leno [ veja: 1 B. M. Cochran, Synlett 2016, 27, 245 para ozonólise; 2 Jianwen Tan, Zhongyu Zhou, Jian Yan, Mei Zhang, Jing Wang, CN 102432494 (A), 2012 para clivagem com permanganato].

[0098] Em uma modalidade da presente invenção, na etapa Ill, não há um perfil de temperatura quando da adição de permanganato de potássio. Nesta modalidade a mistura de reação pode ser resfriada para O ºC, mas isto não é obrigatório. O produto pode ser isolado, por exemplo, via cristalização e extração; em algumas configurações da etapa Ill, a cristalização é preferida a fim de alcançar uma alta pureza

[veja : Jianwen Tan, Zhongyu Zhou, Jian Yan, Mei Zhang, Jing Wang, CN 102432494 (A), 2012 para reação tipo Friedel-Crafts].

[0099] Em uma modalidade da presente invenção, na etapa |V, a ciclização do produto para 4-carbóxi-1-indanona (OZA-4) é conduzida através de uma reação de acilação tipo Friedel-Crafts. Esta reação pode ser conduzida na presença de tricloreto de alumínio ou, mais pre- ferivelmente, na presença de ácido sulfúrico como solvente e catalisa- dor. Em uma modalidade específica da etapa IV, um extrator líquido- líquido é usado a fim de a alcançar um alto rendimento e uma alta pu- reza [veja : Jianwen Tan, Zhongyu Zhou, Jian Yan, Mei Zhang, Jing Wang, CN 102432494 (A), 2012 para reação tipo Friedel-Crafts].

[00100] Em uma modalidade da presente invenção, na etapa V, a derivatização da 4-carbóxi-l-indanona (OZA-4) para 4-ciano-1- indanona (OZA-5) é realizada formando um anidrido misturado reagin- do 4-carbóxi-1-indanona (OZA-4) com cloroformiato de etila e então reagindo as espécies ácidas misturadas com amônia como um nucleó- filo para obter uma 4-amido-1-indanona e subsequente desidratação da amida com agentes de desidratação convencionais em um solven- te. Em uma modalidade preferida, os agentes de desidratação são se- lecionados do grupo que consiste em POCI3, PCls, cloreto de tionila, cloreto cianúrico, pentóxido de fósforo, anidrido trifluoroacético e mis- turas destes. Um reagente de desidratação preferido é anidrido trifluo- roacético. Exemplos especiais de solventes adequados são tolueno e/ou dimetil formamida (DMF) e/ou acetonitrila [veja: 1 a) S. Zhou, k. Junge, D. Addis, S. Das, M. Beller, Org. Lett. 2009, 11, 2461; b) F. -L. Yang, X. Zhu, D. -K. Rao, X. -N. Cao, K. Li, Y. Xu, X. -Q. Hao, M. -P. Song, RSC Adv 2016, 6, 37093; c) G. R. Hodges, WO 2012/123328; d) M. Mineno, Y. Sawai, K. Kanno, N. Sawada, H. Mizufune, The Journal of organic chemistry 2013, 78, 5843 para a síntese de amida; 2 a) N. K. Bhattacharyya, Satadru Jha, Sngeeta Ilha, Tshering Yangden Bhutia and Gita Adhikary, International Journal of Chemistry and Applications 2012, 4, 295; b) A. K. Yadav, V.P. Srivastava, L. D. S. Yadav, RSC Adv 2014, 4, 4181; c) Carr Albert A, Farr Robert, DES031892 (A1), 1981 para desidratação].

[00101] Em uma modalidade da presente invenção, na etapa Vl, a conversão da 4-ciano-1-indanona (OZA-5) para 4-ciano-aminoindano em modalidade S ((S)-2) é realizada via racemato [ veja; K. J. Gillen, J. Gillespie, C. Jamieson, J. K. F. Maclean, E. M. Moir, Z. Rankovic, WO 2010/115952].

[00102] Em uma modalidade da presente invenção, na etapa VIl, a proteção do grupo amino do 4-ciano-1-aminoindano (S)-2 é efetuada com um agente de proteção. Geralmente, qualquer tipo de agente de proteção pode ser usado. Sumários de reagentes de proteção ade- quados são dados nos livros texto padrões de química orgânica e são conhecidos pelas pessoas versadas na técnica, tais como de Theodo- ra W. Greene " Protective Groups in organic Synthesis". Dentre os agentes de proteção preferidos estão aqueles selecionados do grupo que consiste em Boc (terc- butil — oxicarbonila), Adoc (1-adamantil- O(CO)NR2), Alloc/Aloc (alil carbamato), Cbz (benzil oxicarbonila), N- hidroxipiperinidil oxicarbonila, p-nitrobenzil oxicarbonila, 3,4- dimetóxi - 6-nitrobenzil oxicarbonila e 2,4-diclorobenzil oxicarbonila, com o grupo Boc sendo especialmente preferido.

[00103] Em uma modalidade da presente invenção, na etapa VIlIl, a conversão do grupo ciano para um grupo amidoxima é realizada pela adição de hidroxilamina ou o hidrocloreto correspondente, ao grupo ciano, em condições básicas (alcalinas). Preferivelmente, as condições alcalinas podem ser alcançadas pela presença de carbonatos, especi- almente na presença de álcoois de cadeia curta, para dissolver os substratos. Em outra modalidade especial, o álcool é metanol e/ou etanol, e preferivelmente sob refluxo [ literatura para a etapa VIII — IX;

a) R. Sheng, S. Li, G. Lin, S. Shangguan, Y. Gu, N. Qiu, J. Cao, Q. He, B. Yang, Y. Hu, RSC Adv 2015,5, 81817; b) G. Schmidt, M. H. Bolli, C. Lescop, S. Abele, Org. Process Res. Dev. 2016; c) M. R. Kuram, W. G. Kim, K. Myung, S. Y. Hong, Eur. J. Org. Chem. 2016, 438; d) K. S. Ka- dam, T. Gandhi, A. Gupte, A. K. Gangopadhyay, R. Sharma, Synthesis 2016, 48, 3996; e) X. Hou, J. Zhu, B. -C. Chen, S. H. Watterson, W. J. Pitts, A. J. Dyckmann, P. H. Carter, A. Mathur, H. Zhang, Org. Process Res. Dev. 2016, 20, 989; f) D. Flesch, M. Gabler, A. Lill, R. C. Gomez, R. Steri, G. Schneider, H. Stark, M. Schubert-Zsilavcz, D. Merk, Bioor- ganic & Medicinal Chemistry 2015, 23, 3490; g) J. Cai, H. Wei, K. H. Hong, X. Wu, M. Cao, X. Zong, L. Li, C. Sun, J. Chen, M. Ji, European Journal of Medicinal Chemistry 2015, 96, 1; h) J. Bostrôm, A. Hogner, A. Llinãs, E. Wellner, A. T. Plowright, J. Med. Chem. 2012, 55, 1817].

[00104] Em uma modalidade da presente invenção, na etapa IX, a conversão do grupo amidoxima a um grupo heterocíclico 1,4-0xadiazol é efetuada através da condensação com ácido 3-ciano-4-isopropóxi benzoico ou derivados do ácido 3-ciano-4-isopropóxi benzoico, espe- cialmente, cloreto de ácido 3-ciano-4-isopropóxi benzoico. Esta etapa é conduzida em um solvente, tal como um solvente aprótico polar, pre- ferivelmente dimetil formamida (DMF), e na presença de um agente de acoplamento. Agentes de acoplamento adequados são conhecidos na técnica é podem ser selecionados do grupo que consiste em hidróxi benzotriazol, carbodiimidas, tais como 1-etil-3- (3- dimetil amino propil) — carbodiimida, diciclo-hexil carbodiimida (DCC) e etileno diamina car- bodiimida (EDC), reagentes de fosfônio, tais como, hexafluor fosfato de benzotriazolilóxi tris (dimetil amino) - fosfônio (BOP), reagente de Castro (hexafluor fosfato de benzotriazol — 1- il- oxitripirrolidino fosfônio, PyBOP), N-etoxicarbonil- 2 — etóxi- 1,2- di-hidroquinolina (EEDQ), clore- to de 4-(4,6-dimetóxi-1,3,5-triazin-2-i1)- 4- metil — morfolinio (DMTMM), carbonil imidazol (CDI), 1-hidróxi — 7- azabenzotriazol (HOAt), 3-oxido hexafluoro fosfato de 1-[bis (dimetil amino) metileno] — 1H-1,2,3- [4,5-b] piridinio (HATU), hexafluoro fosfato 2-(1H-benzotriazol -1-11)-1,1,3,3 - tetrametiluronio (HBTU), hidróxi-3,4-dihidro-4-0Xx0-1,2,3-benzotriazina (HOOBt) e as misturas destes.

[00105] Em uma modalidade da presente invenção, na etapa X, é realizado o acoplamento da amina protegida com um epóxido. Seguin- do a adição do grupo hidróxi etila, o grupo de proteção é clivado sob condições ácidas. Alternativamente, a N-alquilação com compostos de fórmula geral X-CH2-CH2-OH ou -OSiR'3 pode ser conduzida, com X representando halogênio e R' sendo selecionado de C; a Ca-alquila, particularmente metila ou etila.

[00106] Os conceitos delineando a síntese alternativa de Ozanimod de acordo com a presente invenção são baseados na amina (S)-2 co- mo o intermediário de chave.

[00107] Adicionalmente, em uma modalidade a indanona (4) bromo- substituída pode ser utilizada como um substrato para a preparação de 1-aminoindano 4-substituida (preferivelmente o composto de 4-ciano - 1-aminoindano (S)-2) antes das metodologias biocatalíticas especiífi- cas.

[00108] Após obter a amina (S)-2 desejada a partir da indanona, a formação do heterociclo de oxadiazol representa uma das próximas etapas em direção à síntese total de Ozanimod, de acordo com a pre- sente invenção.

[00109] Em outra modalidade a presente é direcionada à prepara- ção de aminas racêmicas que são usadas como os substratos para a resolução.

[00110] No contexto da presente invenção, são conduzidas bio- transformações utilizando estes substratos de amina racêmica.

[00111] O processo da presente invenção pode ser variado em vá- rios aspectos, entre outros, com respeito a:

- o biocatalisador (lipases comercialmente disponíveis são preferidas) - o meio de reação ("engenharia de solvente"), - o agente de acilação ("doador de acila", são preferidos produtos químicos à granel prontamente disponíveis), - tempo de reação e temperatura de reação, - carga de substrato alta (possibilitando alto rendimento es- paço-tempo), e - os substratos de indanona-1-amina (suportando 4- substituintes diferentes). Preparação de Materiais de Partida de Amina Racêmica

[00112] As aminas racêmicas requeridas como materiais de partida para a etapa de resolução enzimática podem ser sintetizadas a partir de cetonas correspondentes por meio de vários métodos.

[00113] Um método sintético preferido para a preparação das in- dan-1-aminas 4-substituidas racêmicas é pela aplicação de um proto- colo de duas etapas, que consiste de uma condensação inicial de uma cetona com hidroxilamina, sob formação de uma cetoxima e posterior redução com zinco (como mostrado no esquema abaixo). Como aqui demonstrado experimentalmente, por meio deste procedimento de sín- tese, as aminas racêmicas desejadas necessárias para a resolução enzimática, podem ser obtidas em rendimentos de acima de 40 % ou mesmo maiores, dependendo das condições específicas e substituin- tes (Rº = H não está de acordo com a invenção): o ue NH NH3OH+HCI (1.5 eq) V Zn(5.0 eq) Rr AT, 1.5h Ré eo Seblente, 46h. (Rendimento: H 37 %, BR 28 % ; CN 35 %, COOMe 30 %, sob as condições de exemplo mencionadas no esquema de reação acima)

1. Em princípio, qualquer lipase disponível comercialmente pode ser empregada no método de acordo com a presente invenção. Como notado acima, lipases preferidas são as lipases disponíveis co- mercialmente, especialmente aquelas selecionadas do grupo que con- siste em lipase B de Candida antarctica (CAL-B), lipase de Candida rugosa (CR lipase), lipase de Burkholderia plantarii (BPL) e lipase de Burkholderia cepacia (BC lipase). A lipase CAL-B é o biocatalisador mais preferido de acordo com a presente invenção, levando a conver- sões significativamente mais altas (de acima de 76 %), em compara- ção às outras duas lipases.

[00114] Adicionalmente, várias temperaturas e diferentes solventes podem ser empregados. Em uma modalidade da presente invenção um temperatura elevada acima de 90 ºC, uma temperatura de 60 ºC é preferivelmente empregada como temperatura de reação. A tempera- tura de reação pode ser tão baixa como 40 ºC ou mesmo 10 ºC.

[00115] Como notado acima, solventes orgânicos preferidos, usa- dos como meio de reação, são selecionados do grupo que consiste em n-heptano, 2-metóxi-2-metil propano, metil- terc -butil éter, 2-metil- tetra-hidrofurano, metil ciclo-hexano, tolueno e misturas destes; mais preferivelmente 2 MTHF e n-heptano, sendo que n-heptano é especi- almente preferido.

[00116] Com respeito à seleção do solvente orgânico como o meio de reação, em geral e independente do biocatalisador, foi descoberto que o solvente n-heptano resulta nas conversões mais altas e, portan- to, represente o solvente mais preferido. Outros solventes preferidos, especialmente adequados para aplicações em larga escala, são sele- cionados de tolueno, MTBE, 2-metil-tertrahidrofurano, metil ciclo-hexa- no e n-heptano.

[00117] Adicionalmente, o doador de acila pode variar como tal. Assim, resolução catalisadas por lipases, preferivelmente resoluções catalisadas por CAL-B, são preferivelmente realizadas usando um do- ador de acila selecionado do grupo que consiste em malonato de dieti- la (DEM), metóxi-acetato de etila (EMA), metóxi-acetato de isopropila (IMA) e misturas destes, mais preferivelmente metóxi-acetato de iso- propila.

[00118] Em uma modalidade da presente invenção, o solvente é 2- MTHF e o doador de acila é metóxi-acetato de isopropila.

[00119] Como outros substratos, especialmente os racematos de 4- ciano-1-aminoindano (OZA-6), 4-bromo-1-aminoindano e 4-metil car- boxilato -1-aminoindano podem ser usados para o processo de resolução de acordo com a invenção, usando a lipase, preferivelmente CAL-B.

[00120] Valores E bons são obtidos para todos os substratos. Para o 1-aminoindano 4-ciano-substituido (isto é, o composto (S)-2) é obtido o valor E mais elevado de 31, que leva à formação do (S)-enantiômero da amina remanescente desejado (isto é, o composto (S)-2) com um ex- cesso enantiomérico excelente de 99 % ee a uma conversão de 58 %. Tabela 1. Conversões, valores ee e valores E para aa resolução enzi- mática de 1-aminoindanos 4-substituidos racêmicos como precursores de Ozanimod utilizando a lipase CAL-B (Rº = substituintes seleciona- dos de grupo R) NH> CAL-B NH> UN kh o (40 mg/mmol) : x Rô 60 ºC,26h Rô de amina rac. “doador de acila” (S) - amina R Conversão[%4] eef[%] ees[%] vaorE BR 59 68 99 26 CN 58 71 99 31 COOCH;3 65 51 96 E

[00121] Uma vez que uma abordagem reto-sintética atrativa para a preparação de Ozanimod é baseada no 4-ciano-1-aminoindano racê- mico (OZA-6) como um derivado da rota de multi-etapas, partindo de naftaleno como uma matéria-prima não cara, a resolução deste subs- trato é uma modalidade preferida.

[00122] Assim, o processo da presente invenção (resolução enzi- mática) representa uma rota superior para a preparação do intermediá- rio alvo desejado (S)-4-ciano-1-aminoindano ((S)-2), bem como análo- gos com 4-substituintes diferentes dos mesmos, levando tanto à boa conversão, bem como alta enantiosseletividade na presença de um biocatalisador disponível comercialmente.

[00123] Em uma modalidade, o processo para a produção do inter- mediário chave (S)-4-ciano-1-aminoindano ((S)-2) pode ser uma sínte- se de multi-etapas envolvendo a resolução catalisada por lipase como etapa de reação enantiosseletiva. Ao lado da resolução eficiente sen- do adequada para a preparação do (S)-4-ciano-1-aminoindano ((S)-2) desejado, a presente invenção também provê uma abrangência ade- quada em direção ao substrato racêmico (OZA-6) e a combinação dele com a etapa de resolução de acordo com a invenção, seguido por um trabalho adequado sob isolamento desta (S)-amina como o composto alvo e intermediário para outra derivação em direção ao Ozanimod.

[00124] Esta síntese de multi-etapas da amina alvo (S)4-ciano-1- aminoindano ((S)-2) é ilustrada através de um exemplo espacial, mas não-limitante, como segue : A síntese do substrato inicia a partir da indanona correspondente e conversão de duas etapas na amina ra- cêmica baseada em formação de oxima e redução para fornecer a amina racêmica OZA-6. Subsequentemente, é conduzida a resolução catalisada por lipase, de acordo com a rota A da invenção, seguida pela separação do produto N-acilado. A subsequente purificação com- preendendo as etapas de extração ácida e neutralização então fornece o enantiômero (S)-4-ciano-1-aminoindano ((S)-2) quiral.

[00125] Adicionalmente, é necessário ressaltar que a enantiossele- tividade do processo de resolução enzimática na síntese do (S)-4- ciano-1-aminoindano desejado pode ainda ser melhorada se isopropil- éster é usado ao invés do metil éster do doador de acila metóxi- acetato, fazendo o metóxi-acetato de isopropila o éster preferido de acordo com a presente invenção. Por conseguinte, em uma modalida- de preferida da invenção, metóxi-acetato de isopropila é usado como o doador de acila no método para resolver a mistura quiral de 4-cyano-1- aminoindano (rac-2).

[00126] O uso preferido da lipase em forma imobilizada e o uso de um solvente orgânico como meio de reação, torna mais fácil separar o catalisador do meio de reação, uma vez que o biocatalisador pode ser separado por uma filtração simples. Assim, a reciclagem da lipase é mais fácil.

[00127] Por conseguinte, também a reciclagem da lipase recupera- da, preferivelmente CAL-B é parte da presente invenção.

[00128] É digno de nota o fato de que a conversão permanece alta e praticamente inalterada mesmo após o quinto ciclo de reação, ilus- trando a alta taxa de reciclabilidade da lipase.

[00129] A quantidade (mg) de enzima por mmol de substrato pode variar de 1 mg/mmol a 100 mg/mmol, de 1 mg/mmol a 75 mg/mmol, de 1 mg/mmol a 50 mg/mmol, de 5 mg/mmol a 40 mg/mmol ou de 10 mg/mmol a 20 mg/mmol. Uma quantidade de, por exemplo, 40 mg de lipase imobilizada, por exemplo CAL-B, por mmol de substrato pode ser usada nas biotransformações. Entretanto, a quantidade pode tam- bém ser reduzida para 20 mg/mmol, 10 mg/mmol e 5 mg/mmol de en- zima por mmol de substrato, respectivamente; ou qualquer outra quan- tidade desejada.

[00130] —“Independentemente da quantidade de catalisador, a reação ocorre tranquilamente em todos os casos. Como esperado, a taxa de reação é decrescente se a quantidade de lipase é reduzida. Utilizando quantidades crescentes de lipase, por exemplo CAL-B, por mol de substrato, após algum tempo praticamente os mesmos valores de ee podem ser alcançados. Isto significa que em todas estas biotransfor- mações a reação está próxima ao término. Usando baixas quantidades de lipase por mmol de substrato, o valor ee após tempo comparável é ainda baixo, mas a reação está ainda em progresso ou é cerca da mesma. A um tempo prolongado de reação, a reação também alcan- çará o término.

[00131] Por conseguinte, cargas baixas de catalisador podem ser usadas, se custos são um fator; os resultados são por fim os mesmo, somente a duração até alcançá-los é diferente.

[00132] “Usualmente, a reação é conduzida dentro de um período de tempo de 0,5 horas a 24 horas, mas pode ser adaptada a tempos de reação mais curtos ou mais longos, dependendo dos requerimentos / desejos reais.

[00133] Devido a efetividade do processo da presente invenção e da reciclabilidade da lipase, custos de biocatalisador atrativos por qui- lograma de produto (S)-4-ciano-1-aminoindano ((S)-2), podem ser al- cançados.

[00134] Por conseguinte, das quatro rotas apresentadas A), B), C) e D), a rota AO baseada em lipase representa a rota preferida da presen- te invenção.

[00135] Em outro aspecto, a invenção é direcionada a síntese total de Ozanimod. Baseada em várias reações biocatalíticas assimétricas como etapas chave na síntese do intermediário de amina quiral (S0-4- ciano-1-aminoindano ((S)-2) e com a resolução preferida catalisada por lipase possibilitando uma síntese eficiente desta amina em curso, uma síntese total de Ozanimod partindo de uma produto químico pron-

tamente disponível como material de partida, também representa uma modalidade da invenção.

[00136] Por conseguinte, é um objeto adicional da presente inven- ção, identificar etapas de reação simples tendo um potencial técnico para a síntese do substrato para a etapa de resolução.

[00137] Um foco especial para a otimização da rota sintética geral em direção a Ozanimod, de acordo com a presente invenção centrali- za em uma abordagem alternativa em direção a Ozanimod para prover os 4-substituidos 1-aminoindanos, tal como blocos de construção cha- ve de (S)-4-ciano-1-aminoindano ((S)-2) acima mencionado. O concei- to da rota nova desta invenção é apresentado na Figura 1.

[00138] Doistemas chave principais foram abordados pela presente invenção. Por um lado, o centro esterogênico é introduzido por meio de uma abordagem biocatalítica atrativa.

[00139] O segundo tema chave refere-se a síntese de 4-ciano- indan-1-ona, outros análogos 4-substituído relacionados, bem como de suas aminas racêmicas correspondentes (para a abordagem de reso- lução catalisada por lipase), que então servem como substratos para a etapa biocatalítica. Na presente invenção, estes compostos foram sin- tetizados de matérias-primas de partida não caras e por meio de rea- ções químicas consolidadas.

[00140] Na síntese total de Ozanimod, naftaleno é uma matéria- prima interessante devido a sua disponibilidade de larga escala a baixo custo. Nesta etapa, naftaleno pode ser reduzido a 1,2-di-hidronaftaleno (OZA-2).

[00141] Em seguida, a ligação dupla C=C pode ser clivada oxidati- vamente, resultando em um ácido dicarboxílico (OZA-3), seguido por ciclização formando a correspondente indanona (OZA-4), por exemplo, através de uma reação de Friedel-Crafts. Subsequentemente, o resí- duo de ácido carboxílico remanescente na indanona é derivatizado pa-

ra um grupo ciano (OZA-5). As aminas racêmicas correspondentes são convertidas via o processo baseado em lipase da presente inven- ção. Os enantiômeros indesejados desta etapa podem ser preferivel- mente acilados e subsequentemente racemizados e então reciclados.

[00142] Como intermediário chave (S)-4-ciano-1-aminoindano ((S)- 2) em curso, as demais etapas sintéticas em direção ao Ozanimod são análogas à rota de WO 2015/066515 consistindo da formação do hete- rociclo de oxadiazol e introdução final do N-substituinte.

[00143] Naftaleno pode ser reduzido e rearranjado para 1,2-di- hidronaftaleno (OZA-2).

[00144] Em uma alternativa da presente invenção, a redução de naf- taleno é preferivelmente realizada eletroquimicamente.

[00145] Em outra alternativa da presente invenção em direção ao 1,2-di-hidronaftaleno desejado (OZA-2), a reação de Birch é escolhida como uma etapa inicial. O naftaleno reage na presença de sódio e terc-BuOH para formar de 1,4-di-hidronaftaleno (OZA-1), que pode ser obtido com altos rendimentos, em uma modalidade preferida de 80 % ou mais, em outra ainda mais preferida, 85 % de rendimento ou mais.

[00146] Uma vez que o 1,4-produto indesejado é usualmente o principal régio-isômero, um rearranjo subsequente para o 1,2-di-hidro- naftaleno (OZA-2) requerido, pode ser desempenhado. Esta reação pode ser baseada na formação de um fon tanto por uma base forte (desprotonação), bem como por um ácido forte (protonação). é preferi- do usar bases para a reação de rearranjo.

[00147] O rearranjo catalisado por base pode ser desempenhado por variar a concentração da base e a natureza do solvente. Geral- mente, todos os tipos de bases (e catalisadores) podem ser aqui utili- zadas.

[00148] A quantidade de base pode ser variada amplamente, for exemplo, de 0,01 eq a 1 eq; e a temperatura também pode se ampla-

mente variada, por exemplo entre 20 ºC e 100 ºC.

[00149] Preferivelmente, o processo de rearranjo de acordo com a presente invenção, emprega uma combinação de terc-butanolato de potássio, levando a uma proporção dos dois isômeros de 97:3, com uma preferência para o 1,2-di-hidronaftaleno (OZA-2) desejado. Parti- cularmente este rearranjo é realizado a uma temperatura de 40 a 80 ºC e com 0,2 a 0,6 eq de base, preferivelmente a 55 a 65 ºC e com 0,35 a 0,45 eq de base.

[00150] A ligação dupla C=C pode ser oxidativamente clivada sele- tivamente em 1,2-di-hidronaftaleno (OZA-2). A fim de obter a indan-1- ona 4-carbóxi substituída (OZA-4), é realizada uma clivagem seletiva da ligação dupla C=C correspondente de 1,2-di-hidronaftaleno (OZA- 2).

[00151] Esta clivagem pode ser realizada, por exemplo, através de ozonólise ou oxidação com peróxido de hidrogênio e tungstato de só- dio em quantidades catalíticas. Especialmente preferida é uma oxida- ção usando permanganato de potássio como esta, levando a melhores resultados e conversões muito altas em altos rendimentos. Em uma modalidade especial, esta reação é realizada na presença de hidróxido de sódio. Adicionalmente, uma boa seletividade indicada por uma la- cuna observada na formação de subprodutos, bom como um isola- mento simples de produto, são outras vantagens. Usando este méto- do, o produto desejado é formado e obtido em rendimentos de 70 % ou mais, especial 75% ou mais, dentro de um tempo de reação curto de preferivelmente 2 a 4 horas.

[00152] O rendimento pode ser controlado pela quantidade de água presente, que influencia a precipitação do produto. Alternativamente, o produto pode também ser isolado por meio de extração.

[00153] “Como uma próxima etapa, o ácido dicarboxílico obtido por clivagem oxidativa da ligação dupla C=C, é convertido em indan-1-ona

4-carbóxi substituída (OZA-4). Em uma modalidade preferida, esta conversão é realizada por meio de uma acilação de Friedel-Crafts in- tramolecular. Enquanto a abordagem "clássica" de converter ambos grupos funcionais de ácido carboxílico no correspondente cloreto ácido pela adição de cloreto de alumínio, pode ser usada, esta é menos pre- ferida. Similarmente fazível é uma abordagem em que ácido sulfúrico, como um catalisador ácido de Bronsted, muito barato, é usado como solvente e como catalisador. As temperaturas de reação podem ser entre 100 e 180 ºC, preferivelmente 100 a 160 ºC e especialmente 125 a 135 ºC. O produto bruto pode ser extraído, especialmente três vezes ou pode ser precipitado diretamente da solução de ácido sulfúrico, pa- ra aumentar pureza e rendimento.

[00154] Ao invés de usar ácido sulfúrico barato como um catalisa- dor na síntese, sistemas catalíticos alternativos, tais como ácido de Lewis heterogêneo ou catalisadores ácidos de Bronsted, que signifi- cam o trabalho, podem ser empregados de acordo com a presente in- venção.

[00155] Paraa conversão desejada do grupo 4-carbóxi do derivado de indan-1-ona (OZA-4) em 4-cianoindanona (OZA-5), primeiramente e desempenhada a conversão do substituinte de ácido carboxílico em um grupo amina primário.

[00156] Um anidrido misturado da reação do ácido com cloroformia- to de etila é formado, que então reage, como uma espécie ácida ativa- da, com amônia como nucleófilo. Na conversão para o anidrido, a quantidade equivalente de cloroformiato de etila deve ser pelo menos 1,5, preferivelmente maior do que 4,0. Uma conversão completa é al- cançada aumentando mais a quantidade estequiométrica até 5,0 eq de cloroformiato de etila, levando ao anidrido misturado como um produto cru, ao rendimento de 80 % ou mais, especialmente 85 % ou mais.

[00157] A formação da amida é então realizada adicionando solu-

ção aquosa de amônia, a temperatura ambiente. Aumentando a tem- peratura para 60 ºC, leva-se a uma conversão quantitativa e a amida desejada pode ser obtida em um rendimento de 65 % ou mais, preferi- velmente 70 % ou mais do produto bruto.

[00158] Na desidratação subsequente da amida, sob a formação de nitrila (OZA-5), podem ser usados vários reagente que são adequados para reações de desidratação de amidas, tais como os vários compos- tos de fósforo, tais como POCI3, PCls, P2Os, cloreto de tionila, anidrido tricloroacético, bem como cloreto cianúrico. A desidratação funciona, em princípio, com todos reagentes. Os rendimentos, entretanto, dife- rem um do outro. Ao mesmo tempo, é digno de nota que, nenhum ma- terial de partida pode ser detectado mais, indicando assim conversão completa. Pentóxido de fósforo e anidrido tricloroacético são reagentes de desidratação preferidos em termos de desempenho e adequa bili- dade para manuseio.

[00159] Uma recuperação de 80 % da massa usada no início da reação pode ser obtida. Aparentemente a proporção de amida para anidrido não muda significantemente. O anidrido é hidrolisado durante a extração básica e permanece na fase aquosa. Assim, ele pode ser detectado na mistura de produto em pequena quantidade.

[00160] Antes da resolução enzimática, a unidade de indanona é convertida na correspondente indan-1-amina correspondente. A ami- nação redutiva de cetonas para amina primária é ainda um desafio na indústria. A razão para tanto é a labilidade da imina primária que é formada como um intermediário.

[00161] Na conversão da cetona para a amina primária, a química de Leuckard-Wallach pode ser empregada, na qual formiato de amônio é usado como uma fonte de nitrogênio e a oxidação de ácido fórmico a dióxido de carbono, que escapa como gás, representa a força motriz desta reação.

[00162] Outra abordagem é a desidratação de cetoxima facilmente disponível, que é formada em uma reação de condensação de indan- 1-ona com hidroxilamina.

[00163] Utilizando 4-cianoindanona (OZA-5) como o componente de cetona, a cetoxima pode ser isolada em rendimento quantitativo. À conversão redutiva subsequente para a amina desejada então ocorre, na presença de ácido acético e por meio de um agente de redução, preferivelmente zinco.

[00164] A resolução enzimática (cinética) de indan-1-aminas racê- micas sendo não substituídas e 4-substituídas) transformou-se nas rota preferida enantiosseletiva em direção ao (s)-enantiômero de 4- ciano-indan-1-amina ((S)-2), como um intermediário chave, como des- crito acima.

[00165] Em geral, por definição, resoluções cinéticas são limitadas a um rendimento máximo teórico de 50 % para o enantiômero deseja- do. No caso de uma enantiosseletividade mais baixa do catalisador, o rendimento para o composto altamente enriquecido enantiomerica- mente (tanto como produto ou como substrato remanescente) pode ser significativamente mais baixo.

[00166] Um enantiômero indesejado resultante da etapa de resolu- ção, que não é relevante para a síntese do ingrediente ativo, é recicla- do e reusado no processo após racemização. Isto é de especial rele- vância econômica.

[00167] Na racemização de aminas quirais primárias, existem duas rotas alternativas. Uma possibilidade é análoga a racemização redox de álcoois secundários com um catalisador de metal de transição. En- tretanto, neste caso uma quantidade grande de carga de catalisador é muitas vezes requerida e o alto preço para, por exemplo, o catalisador Shvo (rutênio), limita a atratividade econômica desta abordagem.

[00168] Outra rota alternativa preferida na presente invenção pro-

cede como segue: inicialmente uma base de Schiff é formada da ami- na por meio de uma reação de condensação com a cetona correspon- dente. A imina resultante é subsequentemente desprotonada com ou- tra base forte.

[00169] Através do sistema completamente conjugado, a carga ne- gativa pode ser distribuída sobre a molécula inteira e o centro estereogê- nico original é temporariamente hibridizado para sp?. Sem a informação quiral de outras substâncias, a conformação absoluta do centro estereo- gênico é destruída, formando assim a forma racêmica correspondente.

[00170] Uma vez que a variação da base e os equivalentes de ce- tona tem uma influência na taxa de racemização, tipos de base otimi- zados e equivalentes de cetonas são utilizados. Em uma modalidade preferida, são utilizados compostos de carbonila, especialmente cetonas e aldeídos, especialmente 3,5-dinitrosalicil aldeído, com propriedades de aceptores, uma vez que levam a uma taxa de reação aumentada. Formação de amidoxima

[00171] O oxadiazol forma uma das últimas estruturas moleculares na reação geral para Ozanimod. Deve ser preparado pela adição de hidroxilamina (ou cloreto de hidroxil amônio) a uma nitrila, seguido da formação de um anel oxadiazol através da condensação da espécie de amidoxima com um derivado de ácido carboxílico.

[00172] A amidoxima é formada sob condições básicas e usual- mente carbonatos são utilizados. Solventes preferidos são álcoois de cadeia curta, tais como metanol ou etanol, que são aquecidos ao reflu- xo durante a reação.

[00173] Variando equivalentes de base e hidroxilamina, a formação de subprodutos pode ser influenciada. A formação de amida pode também ser alterada pela temperatura. Por exemplo, baixar a tempera- tura para 25 ºC resulta em menos formação de subprodutos.

[00174] Uma quantidade aumentada de base resulta em uma con-

versão mais alta para o produto desejado, bem como em uma reação mais rápida.

[00175] Um parâmetro de reação que tem uma influência forte na formação de amida, é a concentração de hidroxilamina ou do corres- pondente cloridrato desta durante a reação.

[00176] Assim, controlar a dosagem de hidroxilamina é uma estra- tégia preferida para suprimir a formação do subproduto de amida inde- sejado.

[00177] Na condensação de oxadiazol, a amidoxima pode ser con- densada com um cloreto ácido aromático. A reação pode ser conduzi- da para proceder quantitativamente ou quase quantitativamente, le- vando ao oxadiazol desejado em alto rendimento. As várias configura- ções da presente invenção não são construídas para ser limitadas às configurações estabelecidas nas reivindicações e exemplos, mas po- dem ser combinadas em qualquer maneira adequada.

[00178] A presente invenção será agora ademais explanada pelos seguintes exemplos não limitantes. Estes exemplos são não-exaus- tivos e não pretendem limitar o escopo da invenção. Embora a presen- te invenção seja descrita com referência a configurações especiais, deve-se reconhecer que estas configurações são meramente ilustrati- vas dos princípios da presente invenção. Aqueles versados comumen- te na técnica avaliarão que as composições, aparelhagem e métodos da presente invenção podem ser construídos e implementados de ou- tras maneiras e configurações. Por conseguinte, a descrição deste do- cumento não deve ser lida como limitando a presente invenção, como outras configurações também estarão dentro do escopo da presente invenção, como definido nas reivindicações anexas.

Exemplos Protocolos Experimentais e Dados relacionados à rota A: Resolu- ção de uma Amina Racêmica via Acilação com uma Lipase como Etapa Chave Derivatização de Aminas para Propósitos Analíticos (HPLC) o (e Gg TEA (1.5 eq) > CO A ES Có

1.0 eq 1.1eqg RT

[00179] A amostra foi acetilada com cloreto de acetila (1,1 eq) e trietanolamina (1,5 eq) em cloreto de metileno, por 1 hora. A suspen- são foi lavada com uma solução de ácido clorídrico (1;1, v/v). O sol- vente foi removido por vácuo. Excesso enantiomérico e conversão fo- ram determinados via HPLC.

[00180] Paraa determinação da conversão das reações de acilação lipase-catalisadas, inicialmente espectroscopia de *H-RMN foi usada. Portanto, após a separação da mistura da enzima e remoção do sol- vente por vácuo, o produto bruto foi submetido a uma análise de *H- RMN e no espectro de *H-RMN, prótons benzílicos nos átomos de carbono funcionalizados com amino e N-acilamino de substrato (triple- to) e produto (quarteto), respectivamente, foram usados e comparados (quarteto à 5,54 ppm: rac-1-indanilacetamida, tripleto à 4,37 ppm: rac- 1-aminoindano).

[00181] Para a determinação do excesso enantiomérico por meio de análise de HPLC quiral, o produto bruto extraído pode ser isolado e derivatizado in situ, sem processamento adicional. O componente de acilação nesta etapa de derivatização difere daquele usado na resolu- ção, assim levando a dois diferentes tipos de amidas. Esta etapa de derivatização pode algumas vezes ser necessária, devido a possíveis dificuldades na determinação do valor ee diretamente da amina não-

derivatizada.

[00182] Do cromatograma de HPLC quiral resultante, que mostra uma separação clara de todos os 4 enantiômeros de amida (dos quais dois estão relacionados ao produto e dois ao substrato da etapa de resolução), os valores ee para o substrato remanescente e produto formado na resolução lipase-catalisada, põem ser diretamente calcu- lados. Além disso, a conversão e o valor E (valor de enantiosseletivi- dade) pode ser calculado também a partir deste valores ee. Experimentos iniciais com Várias Lipases, Temperaturas e Sol- ventes foram Conduzidos Apresentando estas Resultados: Tabela 2: Experimentos iniciais NH o o CcÓ + AAA DS SOS : BS

1.0 eq 11eq AT, 16h CA-B 40 (mnheptaao 6 CAL-B 60 n-heptano 74 CAL-B 40 MTBE 20 CAL-B 60 MTBE 67 BC 40 tolueno o BC 60 tolueno 4 BC 60 n-heptano 24 BC 60 MTBE 3 CR 60 tolueno o CR 40 tolueno 7 CR 60 n-heptano 9 CR 60 MTBE 2

[00183] Adicionalmente, lipase PS disponível comercialmente, foi testada como uma lipase alternativa para a racemização de 1-

aminoindano. Nos experimentos, lipase PS e lipase PS-SD (SD signifi- ca diluída com dextrina) foram testadas. Uma baixa conversão com 1- aminoindano foi apresentada com ambas as enzimas. Entretanto, 4- ciano-1-amino-indano (OZA-6) não se transformou em um substrato adequado para a lipase PS. Aminação Redutiva de Duas-Etapas para a Síntese de Aminas Ra- cêmicas descrita exemplarmente para 4-ciano-1-indanona como composto de partida.

[00184] 4-ciano-1-indanona (OZA-5, 1 eq.) e cloridrato de hidroxi- lamina (1,5 eq.) foram dissolvidos em etanol e água (1:1, v/v). Enquan- to isso, hidróxido de sódio (1,75 eq.) dissolvido em água foi adicionado à suspensão. A mistura foi aquecida ao refluxo por 90 minutos. O pro- duto bruto foi filtrado em celite e lavado com água. O solvente foi re- movido por vácuo. A oxima foi dissolvida em ácido acético. Sob atmos- fera de argônio, pó de zinco (5 eq.) foi adicionado e a suspensão foi agitada a temperatura ambiente por 48 horas. A mistura de reação foi filtrada em celite, lavada com acetato de etila e o solvente foi removido por vácuo. O óleo foi dissolvido em acetato de etila e ácido clorídrico (1:1, v/v) e extraído duas vezes com ácido clorídrico 2 M. O valor de pH da fase aquosa foi ajustado para 10 e após extraído três vezes em acetato de etila. A fase orgânica foi lavada com salmoura e seca em MgSO.. O solvente foi removido por vácuo. O solvente remanescente foi removido em um frasco de Schlenk, sob atmosfera de argônio. Dados Experimentais para rac-4-ciano-1-aminoindano (OZA-6) NH>

CN CioHioN?

158.20

[00185] — Rendimento: 28 mg (0,18 mmol, 35 %)

?H-RMN (500 MHz, CDCI3): [ppm] = 2,11 - 2,17 (m, 1H, CH>), 2,60 - 2,69 (m, 1H, CH2), 3,05 — 3,10 (m, 1H, CH>2), 3,28 — 3,33 (m, 1H, CH>), 4,65 (t, ?J= 7,5 Hz, 1H, NH2CH), 7,37 (t, º?J= 7,6 Hz, 1H, ArmH), 7,56 (d, ?J=7,4 Hz, 1H, ArvoH), 7,70 (d, ºJ= 7,9 Hz, 1H, Aro6H). 13C-RMN (500 MHz, CDCI3): [ppm] = 148,2 (CH-C-CH2), 141,7 (CH- C-CH>2), 132,6 (Ar-C), 129,6 (Ar-C), 126,1 (Ar-C), 117,3 (C=N), 109,5 (Ar-C), 55,8 (N-CH>2), 31,3 (CH>2), 30,0 (CH>). MS (ESI); m/z = 159,0 [M+H]*. Dados Experimentais para rac-1-Aminoindano NH, CoHy,N

133.19

[00186] Rendimento: 0,18 g (1,38 mmol, 37 %) 7H-RMN (500 MHz, CDCI3): [ppm] = 1,70 — 1,76 (m, 1H, CH2), 2,51 - 2,56 (m, 1H, CH>2), 2,83 — 2,87 (m, 1H, CH>2), 2,95 — 3,02 (m, 1H, CH>), 4,37 (t, ºJ= 7,5 Hz, 1H, NH2CH), 7,19 — 7,25 (m, 3H, ArH), 7,33 — 7,35 (m, 1H, ArH). MS: m/z = 134,5 [M+H]+. Dados Experimentais para rac-4-Bromo-1-Aminoindano NH> Br CoH,oBrN

212.09

[00187] Rendimento: 0,36 g (1,68 mmol, 28 %) 7H-RMN (500 MHz, CDCI3): [ppm] = 1,61 — 1,64 (m, 1H, CH>2), 2,42 - 2,50 (m, 1H, CH>2), 2,69 — 2,75 (m, 1H, CH2), 2,91 — 2,97 (m, 1H, CH>),

4,33 (t, ºJ= 7,5 Hz, 1H, NH2CH), 7,00 (t, º?J= 7,6 Hz, 1H, ArmH), 7,17 (d, ?J=7,4 Hz, 1H, ArvoH), 7,27 (d, ºJ= 7,9 Hz, 1H, Aro6H). 13C-RMN (500 MHz, CDCI3): [ppm] = 144,2 (CH-C-CH2), 143,1 (CH- C-CH>2), 131,9 (Ar-C), 129,0 (Ar-C), 123,5 (Ar-C), 120,4 (Ar-C), 56,8 (N- CH>2), 31,8 (CH2), 31,6 (CH>). MS (ESI); m/z = 211,9 [M+H]* 213,9 [M+H]*. Dados Experimentais para rac-4-metilcarboxilato1-aminoindano NH? : - C11H1aNO>

191.23

[00188] “Rendimento: 0,30 g (1,57 mmol, 30 %) 7H-RMN (500 MHz, CDCI3): [ppm] = 1,69 — 1,76 (m, 1H, CH>), 2,55 - 2,61 (m, 1H, CH>2), 3,10 — 3,17 (m, 1H, CH>2), 3,37 (s, 3H, CH3), 3,45 — 3,53 (m, 1H, CH>2), 4,39 (t, ?J= 7,5 Hz, 1H, NH2CH), 7,32 (t, ºJ= 7,6 Hz, 1H, ArmH), 7,54 (d, 3J= 7,4 Hz, 1H, ArvoH), 7,91 (d, ?J= 7,9 Hz, 1H, AraoH). Resolução de 1-Aminoindano Catalisada por Lipases o NHo o ENO NãA CÍ Ad EO OO 60ºC

1.0 eq 11eqg Solvente org

[00189] 1-Aminoindano (1,0 eq.) e o doador de acila (1,1 eq.) foram dissolvidos em solvente orgânico. Lipase foi adicionada e aquecida a 60 ºC. Em tempos fixados, amostras foram tomadas. Estas amostras foram acetiladas com cloreto de acetila (1,1 eq.) e trietanolamina (1,5 eq.) em cloreto de metileno por uma hora. A suspensão foi lavada com ácido clorídrico (1:1, v/v). O solvente foi removido por vácuo. O exces- so enantiomérico e a conversão foram determinados via HPLC. Experimentos Iniciais para Resolução Cinética com Várias Lipases o . AA, AN Lipase ind NH 106 11 a Solvente org. Co + CÓ

[00190] Para os experimentos iniciais, 1-aminoindano (20 mg, 0,15 mmol) foi dissolvido com malonato de etila (24 mg, 0,20 mmol) em sol- vente orgânico (256 ul) em tubos de Eppendorf. Lipase foi adicionada à solução de reação (6 mg). A solução de reação foi agitada por 16 horas em temperatura apropriada. Subsequentemente, a enzima foi filtrada e lavada com diclorometano. O solvente foi removido por vá- cuo. A conversão foi determinada por espectroscopia de *H RMN. Varredura de Solvente, Doados de Acila, Temperatura de Reações Catalisadas por CAL-B

À NH, CAL-B NH? HNTRE CÓ , s (40 mg/ mmol amino) Co . CÓ Ro Rº Solvente org.

Ri ='Pr Rº = CH;COOCH;CH.

[00191] Para determinação do amino solvente ótimo, 1-aminoindano (30mg, 0,22 mmol) e malonato de dietila (40 mg, 0,25 mmol) ou metó- xi-acetato de etila (29 mg, 0,29 mmol) foram dissolvidos no solvente (384 ul) e CAL-B (9 mg) foi adicionada. As reações foram realizadas em vidros de tampa roscada de 5 ml. Os seguintes solventes foram testados: tolueno, MTBE, 2-metitetra-hidrofurano (2-MTHF), metil ciclo- hexano (MCH) e n-heptano. A reação com metóxi-acetato de isopropi- la (25 mg, 0,19 mmol) foi realizada em 2-metitetra-hidrofurano (384 ul). Amostras foram tomadas após 6, 26 e 48 horas. A enzima foi filtrada e lavada em diclorometano. As amostras foram aciladas. A conversão foi realizada usando espectroscopia de *H-RMN e HPLC. O excesso enantiomérico foi determinado via HPLC quiral.

[00192] Os resultados para a varredura de solvente, doador de aci- la, temperatura de reações catalisadas por CAL-B estão apresentadas na seguinte Tabela 3: Tabela 3 Solvente | Doador de |T T Conv. Conv. eeP ees Valor Acila (OC) |(h) | (% (%)» (%)º (%)º —Eº [Taco for eo Te ss ss a as as | [racero joe eo Ta ss e 1 a as mes ow eo de | as e e 1% [ver for e Te js Ts a as 12 [ver joe eo Ta ss ss 7 Ta 12 [rsoeo for eo Te js a a a as [euro joe eo Ta js ls 5 e 1 [preparo [oe eo e ss e [preparo [oe Teo a | ss ma [Tso fem e e js sm TR 5 [racero fem eo Tas js 5 7 a 12 mes few eo je fer a es er 2 [ver fem e e ss 5 a a 15 [ver fem e Ta jo e TR e 13 [pesam [DE o Ta a ar Tas Ts [preparo [oe Teo a | ls a e ss AMAR e e a e e AMAR me eo a ago es 7 6 | à conversão via *H-RMN; º conversão via HPLC; º calculado via dados HPLC; * calculado via dados HPLC; º calculado via dados ee; ' malona- to de dietila; º metóxi-acetato de etila; " metóxi-acetato de isopropila; '

2-metil-THF, |! metil ciclo-hexano (MCH) Varredura de Doador de Acila e Solvente a 60 ºC para a Resolução de Indan-1-Amina com Lipase CAL-B o NH> o CcALB ENO NE CÓ . od, (40 mg/ mmol amino) CÓ . cÓ Solvente org

1.0 eq 1.1 eq Sh, 26h

[00193] Embora o valor E mais alto tenha sido atingido utilizando éster isopropílico de metóxi-acetato com E=113, a utilização de metó- xi-acetato de etila, bom como de malonato de dietila também levou a valores E bons e sinteticamente ainda atrativos, de até 57 e 36, res- pectivamente. Com respeito ao componente solvente, em geral, MTBE levou a Valores E um tanto mais baixos comparados a 2-metitetra- hidrofurano e tolueno. Deve-se notar que com n-heptano como um solvente, um valor E alto de E=57 foi alcançado quando foi utilizado metóxi-acetato de etila como um doador de acila, enquanto o uso de malonato de etila levou ao mais baixo valor E observado para este do- ador de acila, com somente E=11. Veja também, neste contexto, a Fi- gura 5. Reação catalisada por CAL-B com Carga de Substrato 1M o Ó o “o CAL-B ms NH + mg/ mmol amino: AAA formato. Co : CcÓ

[00194] Para a determinação de reação catalisada por CAL-B com carga de substrato de 1M, 1-aminoindano (665 mg, 5,03 mmol), metó- xi-acetato de etila (770 mg, 7,09 mmol) e CAL-B (0,20 g) foram dissol- vidos em 2-metitetra-hidrofurano (5 ml). A reação foi agitada a 60 “ºC. Amostras foram tomadas após 6 e 26 horas. A enzima foi filtrada e la- vada com diclorometano. As amostras foram acetiladas. A conversão foi realizada usando espectroscopia de *H-RMN e HPLC. O excesso de enantiômero foi determinado via HPLC quiral. Resultados para Reação catalisada por CAL-B com Carga de Substra- to IM: Tabela 4 6 47 89 80 42 26 56 73 94 22 ? conversão via HPLC; º calculado via HPLC; |||

[00195] Para avaliar se a resolução cinética catalisada por CAL-B é também possível em altas concentrações de substrato, sem causar efeitos de inibição, a reação com substrato IM foi desempenhada. Portanto, o valor E da reação ocorrendo em escala analítica, com uma concentração de 0,57 M, foi comparada com uma ocorrendo em bio- transformação, a uma carga de substrato elevada de 1 M, mostrando que valores E similares são obtidos independentemente da concentra- ção de substrato. Reações catalisadas por CAL-B com Derivados de 1-Aminoindano O. q o CAL-B ço EN ÇÔ í A 2-MTHF ÇÓ ] CO Rº 80 “Cc Rê amina rac, “doador de acila” (S) - amina Rº

[00196] Para reações catalisadas por CA-B de derivados de 1- aminoindano (1,0 eq.) destes foram dissolvidas em solvente apropria- do, com doador de acila (1,1 eq.). As reações foram realizadas em vi- dros de tampa roscada, com um volume de 5 ml. CAL-B (40 mg / mmol de amina) foi adicionada a solução de reação. Após 26 horas, a amos- tra foi tomada e derivatizada. Subsequentemente, a enzima foi filtrada e lavada com diclorometano. A conversão e o excesso enantiomérico foram determinados por meio de HPLC quiral.

R Ccom(6% ee(%4 ee) Vao-E Br 59 68 99 26 CN 58 71 99 31 COOCHs3 65 51 96 n Reação catalisada por CAL-B com 4-Ciano-1-Aminoindano (OZA-5) o A TERES AS im CG ta CN RT:859 CN Cen CN o za ce 97% valor E 24

[00197] 4-Ciano-1-indanona (OZA-5, 0,40 g, 2,55 mmol) e cloridrato de hidroxilamina (0,27 g, 3,84 mmol) são dissolvidos em 10 ml de eta- nol e água (1:1, v/v). Enquanto isso, hidróxido de sódio (0,17 g, 4,51 mmol) dissolvido em 1 ml de água foi adicionado à suspensão. A mistura foi aquecida ao refluxo por 90 minutos. O produto bruto foi filtrado por celite e lavado com água. O solvente foi removido por vácuo. A oxima foi dissolvida em 10 ml de ácido acético. Sob atmosfera de argônio, pó de zinco (0,83 g, 12,77 mmol) foi adicionado e a suspensão foi agitada a temperatura ambiente por 86 horas. A mistura de reação foi filtrada em celite, lavada com acetato de etila e o solvente foi removido por vácuo. O óleo foi dissolvido em 10 ml de acetato de etila e ácido clorídrico (1:1, v/v) e extraído com ácido clorídrico 2 M (2 x 10 ml). O valor de pH da fase aquosa foi ajustado para 10 e após extraído em acetato de etila (3 x 10 ml). A fase orgânica foi lavada com salmoura e seca em MgSO:. O solvente foi removido por vácuo. O solvente remanescente foi remo- vido em um frasco de Schlenk, sob atmosfera de argônio.

[00198] 4-Ciano-1-aminoindano (OZA-6, 0,14 g, 0,90 mmol), metó- xi-acetato de etila (0,11 g, 0,99 mmol) e CAL-B (60 mg) foram dissolvi- dos em 2-metiltertraidrofurano (5 ml) e a solução agitada a 60 ºC por h. A amostra foi acetilada com cloreto de acetila (1,1 eq.) e trietano-

lamina (1,5 eq.) em cloreto de metileno por uma hora. A suspensão foi lavada com ácido clorídrico (1:1, v/v) e bicarbonato de sódio. O solven- te foi removido por vácuo. Excesso enantiomérico e conversão foram determinados via HPLC.

[00199] (S)-4-ciano-1-aminoindano ((S)-2) Rendimento: 23 mg (0,15 mmol) calculado ?H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): ó[ppm] = 1,74 (da, 1 H, ?J = 8,69, 12,62, CH>2), 2,44 (dat, 1 H, ºJ = 15,6, 7,8, *J] = 3,2, CH>2), 2,88 (dt, 1 H, *J = 16.6, 8.4, CH2), 3,04 (ddd, 1 H, ºJ = 16,5, 8,7, (J = 3,1, CH2), 4,31 (t, 1H, *2J= 7,6 Hz, NHCH), 7,40 (t, 1H, ?J =7,6 ArmH), 7,64 (d,1H, *J =7,6, ArpoH, 7,72 (d, 1H, ?J =7,6, ArpoH) 13C-RMN (500 MHz, CDCI3): [ppm] = 148,8 (CH-C-CH2), 147,4 (CH- C-CH>2), 130,9 (Ar-C), 128,2 (Ar-C), 127,5 (Ar-C), 117,9 (C=N), 109,0 (Ar-C), 57,4 (N-CH), 37,1 (CH>2), 30,0 (CH>2) MS (ESI); m/z = 159,0 [M+H]* 298,1 [M+H]*

[00200] (R)-4-ciano-1-indanil-(2-metoxiacetamida) Rendimento: 47 mg (0,20 mmol) ?H-RMN (500 MHz, CDCI3): ó[ppm] = 1,92 (dq, 1 H, *3J = 8,60, 13,15, CH), 2,69 (dtd, 1 H, 3 = 13.1, 7.8, (J = 3.6, CH2), 3,05 (dt, 1 H, 3J =

16.9, 8.4, CH>2), 3,22 (ddd, 1 H, 3J = 16.9, 8.9, *J = 3.5, CH>2), 3.41 (s, 2H,CH;), 3,96 (d, (U=2,4, 2H), 5,58 (q,1H, 3J= 8,1 Hz, NHCH), 6,73 (d, 1H, 3J=7,8, NH), 7,31 (t, 1H, 3J =7,7 ArmH), 7,5264 (tt,2H, ºJ =7,1, U = 0,9 Hz, ArpoH) 13C-RMN (500 MHz, CDCI3): [ppm] = 169,5 (C=O), 147,4 (CH-C-CH), 144,9 (CH-C-CH2), 131,7 (Ar-C), 128,9 (Ar-C), 127,8 (Ar-C), 117,6 (C=N), 109,3 (Ar-C), 72,0 (CH2-O), 59,3 (CH3), 53,8 (N-CH), 33,4 (CH>2), 29,9 (CH2) MS (ESI); m/z = 153,1 [M+Na]* 483,1 [2M+Na]* IV (próximo) / cm” : 3216 (m, v, -NH), 2920 (m, v, -CH3), 2850 (w, v, - O-CH3), 2222 (m, v, -C=N), 1654 (s, v, -C=O), 1541 (w, ô, HN-C=O-),

1447 (w, 5, -CH>2), 795 (m, 5, -Ar). EA: calculado para C13H14N202: C, 67,81; H, 6,13; N, 12,17. Encontra- do : C, 67,83; H, 6,21; N, 11,73. NP-HPLC: Daicel Chiracel / OB-H, CO» / isopropanol 95:5, 1,5 ml/min, 20 ºC, 210 nm, Ruy = 22,4 min. Experimentos de Reciclagem com CAL-B o NH2 o CAL-B AN NH> CcÓ á od (40 mg/mmol amina) CÓ CcÓ 60 ºC, 7h 01M tolueno

[00201] 1-aminoindano (67 mg, 0,50 mmol), metóxi-acetato de iso- propila (73 mg, 0,55 mmol) e CAL-B (20 mg) foram dissolvidos em 5 ml de tolueno e a solução agitada a 60 ºC. Após 7 h, uma amostra de 200 ul foi tomada. A amostra foi acetilada com cloreto de acila (9 mg, 0,11 mmol) e trietanolamina (15 mg, 0,15 mmol). A amostra foi purificada e analisada. A reação foi repetida por vários dias. Tabela 5. Resultados para o Experimento de Reciclagem com CAL-B 1 47,25 91,91 95,46 2 45,18 98,20 80,99 3 46,60 99,96 87,21 4 49,94 96,10 93,23 52,63 89,60 80,77 6 49,07 96,74 93,22 7 47,25 91,91 95,46 Redução da Quantidade de CAL-B com 1-Aminoindano o o. o 2 (40, 20, 10, Sme/mmo! amina) IN pNH2

COTAR CO OO

1.0 eq 11eq tolueno

[00202] 1-aminoindano (83 mg, 0,63 mmol), metóxi-acetato de iso- propila (91 mg, 0,69 mmol) e CAL-B (25 mg, 13 mg, 6 mg e 3 mg) fo- ram dissolvidos em 1,25 ml de tolueno e a solução agitada a 60 ºC. Após 0,5, 1 he 3 h, amostras de 100 ul foram tomadas. As amostras foram acetiladas com cloreto de acila (4 mg, 0,04 mmol) e trietanola- mina (8mg, 0,08 mmol). As amostras foram purificadas e analisadas. Tabela 6: Resultados para a Redução de CAL-B com 1-Aminoindano CAL-B mg/mmol amina |t(h) |Conversão ee (amina)|ee (amida) (%) (%) (%) 1,22 1070 — [1110 [918 2938 — [3810 — 0201 306865 — 5075 — [9016 470 — [74238 — [9155 4823 — [8542 — [9170 1910 — [2268 — [9658 16 — 4875 — [os6a 4600 — [8130 —Jost2 45,56 — [5286 [9385 8 [7815 — om 4816 — [8197 — 9116 4556 — [7855 — [9385 47,81 86,87 94,84 48,18 87,75 91,16 Redução de Quantidade de CAL-B com 4-Ciano-1-Aminoindano (OZA-6) à Ox Ó od CAL-B (5 ma/mmo! amina) no : pre 60ºC CL Ç Í en tolueno Cn en 10eg 11eq

[00203] 4-ciano-1-aminoindano (OZA-6, 37 mg, 0,23 mmol), metóxi- acetato de isopropila (30 mg, 0,25 mmol) e CAL-B (1,18 mg) foram dissolvidos em 470 ul de tolueno e a solução agitada a 60 ºC. Após 0,5 h, 1h,3he5h, amostras de 50 ul foram tomadas. As amostras foram acetiladas com cloreto de acila (1 eq.) e trietanolamina (1 eq.). As amostras foram purificadas e analisadas. Tabela 7: Resultados para a Redução de Quantidades de CAL-B com 4-Ciano-1-aminoindano (OZA-6) Síntese em Multietapas da Amina (s)-2 Alvo

[00204] A síntese de substrato neste exemplo em particular, foi feita partindo da correspondente indanona e duas etapas de conversão na amina racêmica, baseada em formação de oxima com hidroxilamina e redução com zinco, fornece a amina racêmica OZA-6. Subsequente- mente, a resolução catalisada por lipase, com metóxi-acetato de etila como um doador de acila, foi conduzida a 60 ºC em 2-metiltetra-hidrofu- rano, seguido pela separação do produto N-acilado. A subsequente puri- ficação, compreendendo as etapas de extração acídica e neutraliza- ção, então forneceu o (S)-4-ciano1-aminoindano desejado, (S)-2, em um rendimento geral de 20 %, por cinco etapas e incluindo a resolução (com um rendimento teórico máximo de 50 %). O excesso enantiomérico do produto obtidO, (S)-2, tornou-se ser excelente com 99% ee. ndo 1 o A ces NO Fe ta GO mes CO ame DO OZA-S O0ZA-6 (8)2 fosse, | o mma zoo eegI9%

Biotransformação em Baixa Carga de Biocatalisador

[00205] Uma baixa carga de biocatalisador de 5 mg/mmol de 4- ciano-1-aminoindano, OZA-6, e metóxi-acetato de etila como um doa- dor de acila, na presença de uma de catalisador de 5 mg/mmol de 4- ciano-1-aminoindano, OZA-6, foi empregada. O curso da reação desta resolução é mostrado na Figura 6 e indica que um alto excesso enantio- mérico (ee) de > 98 % é alcançado a uma conversão de cerca de 57 %. o O sn A mo St nda o o CN tolueno CN CN OZA-6 (S)-2

0.23 mmol Figura 6. Resolução de 4-Ciano-1-Aminoindano (OZA-6) em Baixa Carga de Biocatalisador de Lipase CAL-B Protocolos Experimentais e Dados Relacionados ao Desenvolvi- mento de uma Nova Síntese Total de Ozanimod Redução de Naftaleno e Rearranjo em direção a 1,2-Di-hidronafta- leno (OZA-2) Na (3.0 eq) *BuOH (3.0 eq) Escala de 10 g do, 95-99% 1-5%

[00206] Naftaleno (10,00 g, 78 mmol, 1,00 eq.) é dissolvido em Et2O (150 ml). Pequenos pedaços de sódio (5,00 g, 217 mmol, 2,78 eq.) são dados a esta solução. A atmosfera sobre o sódio foi nitrogênio. Terc.- BuOH (14,59g, 196 mmol, 2,50 eq.) é dissolvido em Et2O (50 ml) e gote- jado na suspensão de sódio. Após agitar 16 h. a temperatura ambien- te, a mistura de reação foi esgotada com água e extraída com acetato de etila (3 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas com Na>2SO,. e separadas do solvente por vácuo. A conversão é calcu-

lada pelo espectro de RMN. Rendimento: 86 %.

KO'Bu (0.4 eq.) BuoH 60 ºC, 12h Proporção de isômeros 1,2 ' para 1,4: 97:3

[00207] 1,4-di-hidronaftaleno (OZA-1, 7,92 g, 60,1 mmol, 1 eq.) é dissolvido em Terc-butanol (6 ml). Terc-butilato de potássio 92,5 9, 22,3 mmol, 0,4 eg) é dado à solução e a mistura é agitada por 12h, a 60 ºC, sob atmosfera de argônio. A mistura reacional é misturada com DCM (10 ml) e lavada três vezes com água (15 ml). O solvente foi re- movido por vácuo e o produto recuperado como um líquido levemente amarelado. O controle de reação foi realizado por GC e a pureza do produto foi determinada por 1H RMN, levando a uma proporção dos dois isômeros de 97:3, após 12 horas de tempo de reação, com uma preferência pelo desejado 1,2-di-hidronaftaleno (OZA-2). 1H-RMN (500 MHz, CDCI3): ô (ppm) =2,28 (m, 2 H, H-9), 2,75 (t, 2 H, H-10), 5,99 (m, 1H, H-8), 6,42 (m, 1 H, H-7), 6,85-7,29 (m, 4 H, H-1, -2, -3,-6). 13C-RMN (500 MHz, CDCI3): 5 (ppm) = 23,2 (C-10), 27,5 (C-9), 125,9 (CH),126,4 (CH), 126,8 (CH), 127,5 (CH), 127,8 (CH), 128,5 (CH), 134,2 (C), 135,4 (C). Clivagem Oxidativa da Ligação Dupla C=C em 1,2-Di-hidronaftaleno KMnO;, (2.2 eq) NaOH (4.0 eq) OH

THF 0ºC,3h O “OH 9 rendimento 70 %

[00208] 1,2-dihidronaftaleno (OZA-2, 15,00 g, 115 mmol, 1,00 eq.) foi dissolvido em cloreto de metileno (50 ml) e então lentamente adici-

onado gota a gota a uma solução de permanganato de potássio (2000 ml, 230 mmol, 230 mM, 4,00 eq.). A mistura de reação foi agitada por 3 horas a O ºC. Após adicionar hidróxido de sódio (32 g, 800 mmol, 6,96 eq.), a solução foi filtrada para separa dióxido de magnésio. O filtrado foi extraído por cloreto de metileno (3 vezes 1000 ml). A cama- da aquosa foi acidificada com ácido clorídrico concentrado (70 ml, 840 mmol, 12 M, 7,30 eq) para pH 12, rendendo um precipitado. Após fil- tração, o diácido OZA-3 pode ser isolado com um rendimento de 70 % (15,53 g, 80 mmol). m/z (M+Na) : 217,0; m/z (M-H):192,8. 7H-RMN (500 MHz, CDCI3): 5 (ppm) =2,73 (t, 2 H, H-10), 3,42 (t, 2H, H-11), 7,35 (m, 2 H, Hº), 8,06 (d, ?JnH=7,7 Hz, 1 H, Hº). 13C-RMN (500 MHz, DMSO): 5 (ppm) = 30,0 (C-10), 36,3 (C-11), 127,2 (CH), 131,2 (CH), 131,4 (CH), 131,7 (CH), 132,7 (CH), 142,8 (CH), 167,6 (C-7), 174,7 (C-12). Acilação de Friedel-Crafts Intramolecular sob Formação de Indan- 1-ona H;3SO, conc. (623 eq.) P

OH Pr 130 ºC, 2h O o MoH rendimento 55 %

[00209] Ácido 3-(2-carboxifenil) propiônico (OZA-3, 500 mg, 2,57 mmol, 1,00 eq) foi dissolvido em ácido sulfúrico (300 ml). A mistura de reação foi agitada por 2 horas, a 130 ºC. A mistura de reação completa foi dada em gelo (20 g). A solução foi estocada a 8 ºC por 65 h para render um precipitado. Após filtração, 55 % do produto limpo OZA-4 (análise por RMN) pode ser isolado. A cor do produto deveria ser sem cor, mas o produto foi marrom. A substância pode ser dissolvida com etanol. A recristalização foi também possível. m/z (M-H) : 174,8.

7H-RMN (500 MHz, CDCI3): 5 (ppm) = 3,16 — 3,22 (m, 2 H, H-7), 3,54 — 3,58 m, 2 H, H-8), 7,62 (m, 1 H, H-1), 8,03 (d, *JnnH=7,6 Hz, 1 H, H-2), 8,38 (d, *JHnH=8,0 Hz, 1 H, H-6). 13C-RMN (500 MHz, DMSO): 5 (ppm) = 327,4 (C-7), 36,2 (C-8), 127,6 (C-1), 128,2 (C-1), 129,5 (C-3), (C-6), 136,6 (C-2), 138,4 (C-5), 156,8 (C-4), 167,3 (C-11), 206,4 (C-9). Derivatização do Substituinte 4-Carbóxi de Indanona o a o o (1.0 eq) NEtg (1.0 eq) o7 “oH ' AX

[00210] 4-carbóxi-1-indanona (OZA-4, 580 mg, 4,10 mmol, 1,00 eq) e trietanolamina (600 ul, 4,380 mmol, 1,0 eq.) foram dissolvidos em DMF (11 ml) e resfriados para O ºC. Cloroformiato de etila (420 ul, 4,10 mmol, 1,00 eq). A mistura de reação foi agitada por 2 horas a tempera- tura ambiente. Após esgotamento com água (3 ml), a mistura foi extra- ída com DCM (3 x 7 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (15 ml) e secas com MgSO;. O solvente foi removi- do para render um óleo marrom (85 %). m/z (M+Na) : 271,1; m/z (massa acurada): 271,0577. 7H-RMN (500 MHz, CDCI3): 5 (ppm) = 1,45 (t, 3 H, H-18), 2,77 (m, 2H, H-7), 3,55 (m, 2 H, H-8), 4,45 (q, 2 H, H-17), 7,56 (m, 1 H, H-1), 8,05 (d, ?JnH=7,6 Hz, 1 H, H-6). 13C-RMN (500 MHz, CDCI3): 5 (ppm) =13,9 (C-18), 27,1 (C-7), 36,0 (C- 8), 66,0 (C-17), 125,8 (C-1), 127,9 (C-3), 129,6 (C-6), 137,0 (C-2), 138,8 (C-5), 148,5 (C-4), 148,9 (C-11), 158,0 (C-14), 205,8 (C-9).

o ao o o (5.0 eq) NEtg (5.0 eq) ( 7 y y 42h Êo o “or ' AX

[00211] 4-carbóxi-1-indanona (OZA-4, 200 mg, 1,14 mmol, 1,00 eq) e trietanolamina (551 ul, 5,79 mmol, 5,0 eq.) foram dissolvidos em THF (5 ml) e resfriados para 0 ºC. Cloroformiato de etila (540 ul, 5,67 mmol, 5,00 eq). A mistura de reação foi agitada por 2 horas a temperatura ambiente. Após esgotamento com água (3 ml), a mistura foi extraída com DCM (3 x 7 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lava- das com água (15 ml) e secas com MgSO4. O solvente foi removido para render um óleo marrom (85 %). m/z (M+Na) : 271,1; m/z (massa acurada): 271,0577. 7H-RMN (500 MHz, CDCI3): 5 (ppm) = 1,45 (t, 3 H, H-18), 2,77 (m, 2H, H-7), 3,55 (m, 2 H, H-8), 4,45 (q, 2 H, H-17), 7,56 (m, 1 H, H-1), 8,05 (d, !Jnn=7,6 Hz, 1 H, H-2), 8,32 (d, *?Jnn=8,0 Hz, 1 H, H-6). 13C-RMN (500 MHz, CDCI3): 5 (ppm) =13,9 (C-18), 27,1 (C-7), 36,0 (C- 8), 66,0 (C-17), 125,8 (C-1), 127,9 (C-3), 129,6 (C-6), 137,0 (C-2), 138,8 (C-5), 148,5 (C-4), 148,9 (C-11), 158,0 (C-14), 205,8 (C-9).

7 o >» NHatag) (14.7 eq) o 3 60 Ea h S Ho como

[00212] O anidrido misturado (100 mg, 0,40 mmol, 1,00 eq.) foi da- do a uma solução de amônia (2,5 ml, 25 %, 14,7 eq.) e aquecido a 60 ºC. A mistura reacional foi agitada por 24 horas a temperatura ambien- te. A mistura foi extraída com DCM (3 x 5ml). As camadas orgânicas combinadas são lavadas com água (15 ml) e secas com MgSO.a. O solvente foi removido para render um óleo marrom (70 %). m/z (M-H):173,8. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3): 5 (ppm) = 1,45 (t, 3 H, H-7), 2,77 (m, 2H, H-7), 3,55 (m, 2 H, H-8), 4,45 (q, 2 H, H-18), 7,56 (m, 1 H, H-1), 8,05 (d, !Jnn=7,6 Hz, 1 H, H-2), 8,38 (d, Sn = 8,0 Hz, 1 H, H-6). 13C-RMN (500 MHz, CDCI3): 5 (ppm) = 26,3 (C-7), 36,2 (C-8), 126,8 (C-1), 127,7 (H-6), 132,0 (C-2), 132,8 (C-3), 138,5 (C-5), 154,7 (C-4), 168,7 (c-11), 206,4 (C-9). o TEA (3.00 eq) o PO 19 (0.40 eq)

HAN SO KW OXA-5

[00213] A amina primaria resultante (150 mg, 0,85 mmol, 1,00 eq) e trietilamina (356 ul, 2,55 mmol, 3,00 eg) foram suspensos em tolueno (5 ml). Pentóxido de fósforo (48 mg, 0,34 mmol, 0,40 eq) foi adicionado e a mistura foi aquecida a 80 ºC. A mistura de reação foi agitada por 5 h. Após esgotamento com água (3ml), a mistura é extraída com DCM (3 x 7 ml) e seca com MgSO.. O solvente foi removido para render um óleo marrom (29 %) do composto alvo (OZA-5). m/z (M-Na):179,0. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3): 5 (ppm) = 2,82 (m, 2 H, H-7), 3,36 (m, 2H, H-8), 7,54 (t, 1 H, H-1), 7,91 (d, !Jnn=7,6 Hz, 1 H, H-6), 7,99 (d, ?Jun= 8,0 Hz, 1 H, H-2). 13C-RMN (500 MHz, CDCI3): 5 (ppm) = 25,3 (C-7), 35,8 (C-8), 111,5 (C-3), 116,1 (C-11), 128,1 (C-6), 128,3 (C-1), 137,7 (C-2), 138,2 (C-5), 157,7 (C-4), 204,5 (C-9).

Aminação Redutiva de 4-Cianoindanona em um Processo de Duas Etapas P 1) H3NOHCI (1.50 eq), E 2) Zn (5.00 eq)

[00214] A cetona OZA-5 (500 mg, 3,18 mmol, 1,00 eq) foi dissolvido em EtOH (10 ml). Cloreto de hidroxilamônio (3,32 g, 47,72 mmol, 1,50 eq) foi adicionado e a mistura foi aquecida ao refluxo por 2 h. O solvente é evaporado sob pressão reduzida e o intermediário é dissolvido em áci- do acético (10 ml). À solução é adicionado Zn (10,40 g, 159,1 mmol, 5,0 eq). A suspensão é agitada sob atmosfera de argônio por 48 h. O produ- to bruto foi extraído com cloreto de metileno e ácido clorídrico (1 M) (3 vezes). O pH da fase aquosa foi alterado para 14 e a fase foi extraída com cloreto de metileno (3 vezes). O produto (2,16 g, 1,38 mmol, 42 %) foi isolado após evaporação do solvente. A síntese do desejado 4-ciano- 1-aminoindano racêmico (OZA-6) levou a um rendimento de 42 %. m/z (M+H): 159,0. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3): 5 (ppm) = 1,70 (m, 1 H, H-7), 2,53 (m, 1 H, H-7), 2,89 (m, 2 H, H-8), 3,10 (q, 2 H, H-8), 4,35 (t, !Unn= 7,6 Hz, 1 H, H-9), 7,24 (t, SJun = 7,6 Hz, 1 H, H-1), 7,42 (t, Mn = 7,7 Hz, 1 H, H-2), 7,49 (d, SJHnH=7,7 Hz, 1 H, H-2). 13C-RMN (500 MHz, CDCI3): 5 (ppm) =29,7 (C-7), 37,1 (C-8), 57,3 (C- 9), 108,9 (0-3), 117,8 (C-11), 127,4 (C-1), 128,1 (C-2), 130,8 (C-6), 147,3 (C-4), 148,8 (C-5). Formação de Amidoxima (Reação Modelo) Na NOS E O MeOH, Or 80ºC

[00215] Cloreto de hidroxilamônio (1,399 g, 20 mmol, 2,00 eq) foi seco em vácuo e dado a MeOH (10 ml), NaHCO;3 (1815 mg, 2,16 mmol, 2,16 eq.) e orto-tolunitrila (1170 ul, 10 mmol, 1,00 eq.). Após 7,3 h. a 80 ºC, a reação é esgotada com água (5 ml) e extraída com CHCI3 (3x 10 ml). As camadas orgânicas combinadas são lavadas com água (2x 15 ml) e secas com MgSO2. O solvente foi removido para render o seguinte proporção de produto (analisado por 1H RMN): 9 % nitrila, 72 % amidoxima, 19 % amida. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3): 5 (ppm) = 2,39 (s, 3 H, H-7), 5,45 (s, 1 H, H-10), 7,14 — 7,63 (m, 4H, Hº). 1H-RMN (500 MHz, DMSO-ds): 5 (ppm) = 2,39 (s, 3 H, H-7), 5,74 (s, 2 H, H-9, H-10), 7,19 — 7,32 (m, 4 H, H?), 9,38 (s, 1 H, H-11). 13C-RMN (500 MHz, DMSO-ds): 5 (ppm) = 19,8, 125.6, 128.9, 130.2,

134.3, 136.4, 152.5. Formação do Heterociclo de Oxadiazol (Reação Modelo)

F NH o o CO . 11 NEtz =, i en O GR etapa anterioo sh endimento 96 % da etapa anterioo

[00216] A mistura de amidoxima (105 mg, 0,7 mmol, 1,00 eq0 e amina (resultante da etapa anterior, 95 mg, 72mmol, 1,03 eq) foi dis- solvida em THF (10 ml)e piridina (2ml). Cloreto do ácido para-fluoro benzoico (100 ul, 0,83 mmol, 1,19 eq) é dado à solução. Após 66 ho- ras em refluxo, a reação é esgotada com água (10 ml) e extraída com CHCI3 (3x 20 ml). As camadas orgânicas combinadas são lavadas com água (2x 15 ml) e secas com MgSO.. O solvente foi removido para render sólido amarelo claro (analisado por 1H RMN). A purificação foi feita por cromatografia de coluna (1. Snap Ultra 50 mg &; eluente: ci-

clo-hexano / acetato de etila 90:10 — 30:70, 2. Comprimento: 16 cm, O : 4 cm; eluente Ciclo-hexano / acetato de etila 35:65). Após a purifica- ção um sólido incolor (119 mg, 0,42 mmol, 95 %) foi isolado. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3): 5 (ppm) = 2,68 (s, 3 H, H-23), 7,24 (m, 2 H, H-4 & H-6), 7,35 (m, 2H, H-19 & H-21), 7,41 (m, 1 H, H-20), 8,07 (m, H, H-22), 8,24 (m, 2 H, H-1 & H-3). 13C-RMN (500 MHz, CDCI3): 5 (ppm) = 22,3, 116.62, 120.9, 126.2,

130.7, 13.8, 131,5, 138.4, 165.6, 169.8, 173.9. 19F-RMN (500 MHz, CDCL3) 5 (ppm) = -105,3.

Claims (24)

REIVINDICAÇÕES

1. Processo, para a preparação biocatalítica enantiosseleti- va de 1-aminoindanos 4-substituidos, caracterizado pelo fato de que possui a fórmula geral (S)-l: Hoy

R (SH em que R é selecionado do grupo que consiste em halogênio; -CN; -C(=O)H; -C(=N-OH)H; -C(=O)NH2; -C(=0)OH; -C(=NH)NH-OH; -C (=N-OH)NH2; e -COOR', em que R' é selecionado do grupo que con- siste em H; C; a CÊ — alquila; aril alquila, em que a alquila é C, a Ca — alquila; -CH2-Hal, em que Hal é F, Cl ou Br; -CH2-O-alquila, em que a alquila é C; a Cg — alquila; opcionalmente arila substituída; e opcional- mente heteroarila substituída; Y é selecionado do grupo que consiste em H; -C(=O)R'Y; e - C(=0)OR'!, em que R”) é selecionado do grupo que consiste em H; C1 a Cs — alquila; aril alquila, em que a alquila é C, a Cs — alquila; -CH2- Hal, em que Hal é F, CI ou Br; -CH2-O-alquila, em que a alquila é C; a Cs — alquila; opcionalmente arila substituída; e opcionalmente hetero- arila substituída; via uma rota selecionada do grupo que consiste em A. resolução de uma mistura de amina enriquecida enanti- omericamente com ou racêmica de compostos de indan-1-amina 4- substituídos de fórmulas gerais (S)-Il e (R)-Il NH> NH2 PD S&S (SHI (RH em que R é como definido acima, via uma acilação enantiosseletiva, na presença de um bio- catalisador; B. resolução de uma mistura de amina enriquecida enanti- omericamente ou racêmica de compostos de indan-1-amina 4-substi- tuídos N-acilados, de fórmulas gerais (S)-Ill e (R)-Ill o o mo)R" mo) Ro - : n CO n

R R (SM (RM em que R e R') são como definidos acima e né 0 ou 1, via uma hidrólise enantiosseletiva, na presença de um bio- catalisador; C. aminação redutiva assimétrica de uma 1-indanona 4- substituida com uma transaminase, em que o substituinte na posição 4 é R, como definido acima; ou D. aminação redutiva assimétrica de uma 1-indanona 4- substituida com uma desidrogenase, em que o substituinte na posição 4 é R, como definido acima.

2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracteriza- do pelo fato de que a rota é a rota A ou a rota B.

3. Processo, de acordo com a reivindicação 2, caracteriza- do pelo fato de que o biocatalisador é selecionado do grupo de hidro- lases.

4. Processo, de acordo com a reivindicação 3, caracteriza- do pelo fato de que a hidrolase é selecionada do grupo que consiste em lipases, esterases e proteases.

5. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 ou 4, caracterizado pelo fato de que na rota A, uma mistura de amina racêmica ou uma mistura de amina enriquecida enantiomerica- mente de compostos de indan-1-amina 4-substituídos de fórmulas ge- rais (S)-Il e (R)-Il, é adicionada junto com um doador de acila a um bi- ocatalisador

6. Processo, de acordo com a reivindicação 5, caracteriza- do pelo fato de que o biocatalisador é uma lipase.

7. Processo, de acordo com a reivindicação 5, caracteriza- do pelo fato de que na rota A uma mistura de amina racêmica ou uma mistura de amina enriquecida enantiomericamente de compostos de indan-1-amina 4-substituídos de fórmulas gerais (S)-Il e (R)-Il, é adici- onada junto com um doador de acila a um biocatalisador, em que o biocatalisador é uma lipase, de acordo com o seguinte esquema de reação: NH, NH? ? rac o biocatalisador mn e (O tn doe O po r “doador de acila” R R (S) em que R é como definido na reivindicação 1, preferivelmente em que R é -CN, -COOMEe ou -Br; R? é selecionado do grupo que consiste em um grupo C1 à C20 — alquila; um grupo C1 a C29o —alcóxi; um grupo Cs a Cao -arila substituído opcionalmente; um grupo heteroarila de 5 ou 6 membros, substituído opcionalmente; halogênio e um grupo acila de fórmula -COOR, em que Rº é selecionado de H, e C, a Cg — alquila, preferivelmente -CH3 ou -C2Hs; preferivelmente em que R? é metóxi ou -COOC2Hs ou -Cl; Rº é selecionado de um grupo C1 a Cg— ou C1 a C6 — alqui- la, preferivelmente em que Rº é um grupo C; a Ca- alquila, mais prefe- rivelmente Rº é metila, etila ou isopropila; -CH2-Hal, em que Hal repre- senta -F, -CI ou -Br, -Ch2-O-alquila, em que alquila representa C1 a Cg-

alquila, um grupo arila substituído opcionalmente e um grupo hetero- arila de 5 ou 6 membros substituído opcionalmente; em que a reação é conduzida em um meio orgânico, na presença de um solvente orgâni- co ou sob condições sem solventes.

8. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 7, caracterizado pelo fato de que R é selecionado do grupo que consiste em -Br, -CN e -COOCH;.

9. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 8, caracterizado pelo fato de que R é -OCN ou em que R é -CN eYvén

10. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 2 a 9, caracterizado pelo fato de que é realizado na ausência de qualquer solvente adicional.

11. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 9, caracterizado pelo fato de que é realizado na presença de um solvente orgânico adicional.

12. Processo, de acordo a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o solvente orgânico é pelo menos um selecionado do grupo que consiste em n-heptano, 2-metóxi-2-metil propano, metil - terc - butil éter, 2-metil-tetra-hidrofurano, metil ciclo-hexano, tolueno e qualquer combinação de qualquer destes, preferivelmente em que o solvente orgânico é n-heptano e/ou metil - terc - butil éter.

13. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 2 a 12, caracterizado pelo fato de que a lipase é selecionada do grupo que consiste em lipase B de Candida antarctica (CAL-B), lipase de Candida rugosa (CR lipase), lipase de Burkholderia cepacia (BC lipase) e lipase PS de Burkholderia cepacia.

14. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 2 a 13, caracterizado pelo fato de que o doador de acila é seleci- onado do grupo que consiste em metóxi-acetato de etila, malonato de dietila e metóxi-acetato de isopropila.

15. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 2 a 14, caracterizado pelo fato de que a reação é conduzida sob uma das seguintes condições a), b) ou c), ou em que a reação é con- duzida sob uma condição selecionada das condições a) e b)) a)ec); b)ec),ea),b)ec): a) por um período de tempo suficiente para atingir 99 % ee dos 1-aminoindanos 4-substituídos desejados, preferivelmente 30 mi- nutos a 48 horas, mais preferivelmente por pelo menos 5 h; b) em uma faixa de temperatura de 10 a 90 ºC, preferivel- mente a 40 a 60 ºC; c) em uma razão de substrato : enzima de 1 a 50 mg, pre- ferivelmente 5 mg de CAL-B por mmol de substrato; preferivelmente em solução, na presença de n-heptano co- mo o solvente.

16. Processo, de acordo com a reivindicação 15, caracteri- zado pelo fato de que a reação é realizada em solução, na presença de n-heptano como solvente.

17. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 16, caracterizado pelo fato de que a mistura racêmica ou a mistura de amina enriquecida enantiomericamente de compostos de indan-1-amina 4-substituídos, de fórmulas gerais (S)-Il e (R)-ll é obtida de ou é obtenível da correspondente 1-indanona 4-substitída, onde o substituinte R na posição 4 é como definido na reivindicação 1.

18. Processo, de acordo com a reivindicação 17, caracteri- zado pelo fato de que que a mistura racêmica ou a mistura de amina enriquecida enantiomericamente de compostos de indan-1-amina 4- substituídos, de fórmulas gerais (S)-ll e (R)-Il, é obtida da ou é obtení- vel da correspondente 1-indanona 4-substituída, por iii) formação de uma cetoxima, especialmente por con-

densação de 1-indanona 4-substituída com hidroxilamina, seguida por iv) redução da cetoxima para a mistura de amina racêmica.

19. Processo, de acordo com a reivindicação 18, caracteri- zado pelo fato de que a redução da cetoxima à mistura de amina ra- cêmica é realizada na presença de zinco.

20. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 2 a 19, caracterizado pelo fato de que o(s) enantiômero(s) inde- sejado(s) resultante(s) da acilação enzimática são recuperados e reci- clados / reusados.

21. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 2 a 20, caracterizado pelo fato de que uma mistura de amina ra- cêmica ou enriquecida enantiomericamente de compostos de indan-1- amina 4-substituídos, de fórmulas gerais (S)-ll e (R)-ll, em que R é - CN e Y é hidrogênio, é acilada com metóxi-acetato de isopropila, na presença de CAL-B, em n-heptano e/ou metil-terc-butil éter como o solvente.

22. Processo, de acordo com qualquer uma das reinvindi- cações 1 e 17 a 21, caracterizado pelo fato de que o composto de in- dan-1-ona 4-substituído inicial é obtenível de ou é obtido de naftaleno.

23. Processo para a preparação de Ozanimod caracteriza- do pelo fato de que compreende ou consiste nas etapas, na ordem dada, de: | prover naftaleno, Il — reduzir naftaleno a 1,2-di-hidronaftaleno (OZA-2) e/ou 1,4-di-hidronaftaleno (OZA-1), lla opcionalmente rearranjar 1,4-di-hidronaftaleno (OZA-1) a 1,2-di-hidronaftaleno (OZA-2), Ill clivar a ligação dupla C=C etilênica em 1,2-di-hidro- naftaleno (OZA-2) para prover um ácido dicarboxílico (OZA-3), IV ciclização do produto da etapa Ill (OZA-3) para formar

4-carbóxi-1-indanona (OZA-4), V derivatização do 4-carbóxi-1-indanona (OZA-44) a 4- ciano-1-indanona (OZA-5), VI converter a 4-ciano-1-indanona (OZA-5) a 4-ciano-1- aminoindano na modalidade S ((S)-2), tanto diretamente como via o racemato, VII proteger o grupo amino do (S)-4-ciano-1-aminoindano ((S)-2) com um grupo de proteção, VIIl converter o grupo ciano a um grupo amidoxima, IX converter o grupo amidoxima a um grupo 1,4-o0xadiazol heterocíclico via condensação com ácido 3-ciano-4-isopropóxi benzoi- co ou derivados de ácido 3-ciano-4-isopropóxi benzoico, X substituir o grupo de proteção no grupo amino com um grupo hidróxi-etila para resultar Ozanimod, em que a conversão de 4-ciano-1-indanona (OZA-5) a 4- ciano-1-aminoindano na modalidade ((S)-2) na etapa VI é realizada via aminação redutiva assimétrica, de acordo com as rotas C e D como definida na reivindicação 1, por resolução do composto de 4-ciano in- dan-1-amina enriquecido enantiomericamente ou racêmico, via um aci- lação enantiosseletiva, na presença de um biocatalisador de acordo com a rota A como definido na reivindicação 1, ou por resolução do composto de 4-ciano indan-1-amina N-acilado enriquecido enantiome- ricamente ou racêmico, via uma acilação enantiosseletiva na presença de um biocatalisador de acordo com a rota B, como definido na reivin- dicação 1.

24. Processo para a preparação de Ozanimod caracteriza- do pelo fato de que compreende ou consiste nas etapas na ordem da- da, de: VI prover 4-ciano-1-aminoindano na modalidade S ((S)- 2), preferivelmente obtido pelo processo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 ou 2 a 22,

VII proteger o grupo amino do (S)-4-ciano-1-aminoindano ((S)-2) com um grupo de proteção (PG),

VIIl converter o grupo ciano a um grupo amidoxima,

IX converter o grupo amidoxima a um grupo 1,4-o0xadiazol heterocíclico, via condensação com ácido 3-ciano-4-isopropóxi benzoi- co ou derivados do ácido 3-ciano-4-isopropóxi benzoico,

X substituir o grupo de proteção no grupo amino com um grupo hidróxi-etila para render Ozanimod.