BR112020018625A2

BR112020018625A2 - Processo para converter atranol e seus derivados em compostos hidrossolúveis, processo para a produção de um extrato de musgo de carvalho e uso de uma enzima e um peróxido

Info

Publication number: BR112020018625A2
Application number: BR112020018625-2A
Authority: BR
Inventors: Sylvain Antoniotti; Hélène BOUGES; André MONCHOT
Original assignee: Université Côte d'Azur; Centre National De La Recherche Scientifique
Priority date: 2018-03-12
Filing date: 2019-03-12
Publication date: 2020-12-29
Also published as: JP2021515578A; EP3765626A1; US20210009921A1; WO2019175171A1

Abstract

a presente invenção refere-se a um processo para converter atranol e/ou seus derivados em composto(s) hidrossolúvel(is). em particular, a presente invenção refere-se a um processo para converter atranol e/ou seu(s) derivado(s), referido processo compreendendo uma etapa de mistura de uma composição compreendendo atranol e/ou seu(s) derivado(s) com uma enzima pertencente à família peroxidase e um peróxido. a presente invenção também se refere a um processo para a produção de um extrato de musgo de carvalho tendo menos de 100 ppm de atranol e/ou seu(s) derivado(s).

Description

PROCESSO PARA CONVERTER ATRANOL E SEUS DERIVADOS EM COMPOSTOS HIDROSSOLÚVEIS, PROCESSO PARA A PRODUÇÃO DE UM EXTRATO DE MUSGO DE CARVALHO E USO DE UMA ENZIMA E UM PERÓXIDO CAMPO TÉCNICO

[001] A presente invenção refere-se a um processo para converter atranol e/ou seus derivados em compostos hidrossolúveis. Em particular, a presente invenção refere-se a um processo para converter atranol e/ou seu(s) derivado(s), referido processo compreendendo uma etapa de mistura de uma composição compreendendo atranol e/ou seu(s) derivado(s) com uma enzima pertencente à família peroxidase e um peróxido.

ANTECEDENTES

[002] Produtos naturais complexos obtidos por técnicas de extração são misturas de dezenas de compostos individuais de um espectro relativamente amplo de famílias químicas. Embora tenham sido usados por milhares de anos, eles podem conter moléculas tóxicas indesejáveis. O primeiro órgão exposto a essas moléculas quando produtos naturais complexos são usados como ingredientes em fragrâncias e produtos cosméticos é obviamente a pele. Como resultado, várias condições, tais como erupção cutânea, prurido, manchas e eczema severo, foram atribuídas à presença de uma ou mais moléculas tóxicas indesejáveis. No caso particular dos extratos de musgo de carvalho, que pertencem à lista premium de ingredientes naturais em perfumaria, a presença de atranol e cloroatranol demonstrou ser responsável por severa irritação da pele. Como resultado, a Associação Internacional de Fragrâncias (IFRA) recomenda limitar a presença de atranol e cloroatranol a 100 ppm cada em extratos de musgo de carvalho usados em perfumaria.

[003] Vários métodos foram propostos para reduzir o teor de atranol e cloroatranol em extratos de musgo de carvalho.

[004] O documento EP0468189A2 revela um processo para a produção de extratos de musgo hipoalergênicos. O extrato de musgo, concreto ou absoluto, é tratado com um aminoácido como a leucina ou lisina. O teor de diferentes constituintes alergênicos, incluindo atranol e cloroatranol, é então reduzido.

[005] O documento WO93/23509 revela o uso de um agente redutor de aldeído para produzir extratos de musgo hipoalergênicos. O teor de aldeídos, incluindo atranol e cloroatranol, é, portanto, reduzido no extrato de musgo modificado.

[006] No entanto, essas metodologias sofrem de diferentes desvantagens como falta de seletividade, ou geração de resíduos, resultando em uma alteração da qualidade olfativa do extrato modificado ou em etapas adicionais de tratamento.

[007] Assim, existe a necessidade de um método limpo para a produção de extratos de musgo de carvalho modificados tendo a mesma qualidade olfativa dos extratos não modificados e um teor reduzido de atranol e cloroatranol.

[008] Os inventores descobriram surpreendentemente que, mediante tratamento com uma enzima pertencente à família peroxidase e um peróxido, o atranol foi convertido em um produto dimérico hidrossolúvel de fórmula (I).

, 1

[009] A estrutura do produto dimérico foi determinada por H e espectroscopia de 13C NMR, e em particular COSY, HMBC e HMQC, e MS (ESI). A acetilação do dímero levou ainda a um produto solúvel em solventes orgânicos para os quais HRMS (QTOF) foi executado. Isto confirmou a estrutura proposta do produto dimérico.

[010] Os inventores também descobriram que este método pode ser usado para produzir um extrato de musgo de carvalho modificado com um teor reduzido de atranol e seu derivado cloroatranol, enquanto a qualidade olfativa do extrato de musgo modificado permaneceu satisfatória.

SUMÁRIO

[011] Por conseguinte, a presente invenção refere-se primeiro a um processo para converter atranol e/ou seu(s) derivado(s), em composto(s) hidrossolúvel(is), referido processo compreendendo uma etapa de mistura de uma composição compreendendo atranol e/ou seu(s) derivado(s) com uma enzima pertencente à família peroxidase e um peróxido.

[012] A invenção também se refere a um processo para a produção de um extrato de musgo de carvalho tendo menos de 100 ppm de atranol e/ou seu(s) derivado(s), referido processo compreendendo as seguintes etapas: a) misturar um extrato de musgo de carvalho compreendendo atranol e/ou seu(s) derivado(s) com uma enzima pertencente à família peroxidase e um peróxido, b) incubar a mistura, para converter atranol e/ou seu(s) derivado(s) em composto(s) hidrossolúvel(is), c) eliminar o(s) composto(s) hidrossolúvel(is) usando extração líquido- líquido.

[013] A invenção também se refere ao uso de uma enzima pertencente à família peroxidase e um peróxido para reduzir o teor de atranol e/ou seu(s) derivado(s) de um extrato de musgo.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[014] Várias modalidades da invenção são descritas na presente invenção. Será reconhecido que as características especificadas em cada modalidade podem ser combinadas com outras características especificadas para fornecer outras modalidades. Processo para converter atranol e/ou seu(s) derivado(s) em composto(s) hidrossolúvel(is)

[015] A presente invenção refere-se primeiro a um processo para converter atranol e/ou seu(s) derivado(s), em composto(s) hidrossolúvel(is), referido processo compreendendo uma etapa de mistura de uma composição compreendendo atranol e/ou seu(s) derivado(s) com uma enzima pertencente à família peroxidase e um peróxido.

[016] Como usado na presente invenção, os termos "atranol e/ou seu(s) derivado(s)" referem-se a atranol e compostos que são derivados de atranol por substituição de um átomo por outro átomo ou grupo de átomos.

[017] De acordo com uma modalidade, os derivados de atranol são cloroatranol, hematomato de etila, clorohematomato de etila, atranorina e cloroatranorina, como representado abaixo. Assim, nesta modalidade, os termos "atranol e/ou seu(s) derivado(s)" referem-se a compostos selecionados a partir de atranol, cloroatranol, hematomato de etila, clorohematomato de etila, atranorina, cloroatranorina e misturas dos mesmos.

[018] Preferencialmente, os termos "atranol e/ou seu(s) derivado(s)" referem-se a compostos selecionados a partir de atranol, cloroatranol e misturas dos mesmos.

[019] Tal como usado na presente invenção, o termo "composto hidrossolúvel" refere-se a um composto que é solúvel em água, por exemplo, a uma concentração pelo menos 0,1 g/100 mL de água a 20 °C.

[020] De acordo com uma modalidade do processo, o atranol e/ou seu(s) derivado(s) são convertidos em dímero(s) hidrossolúvel(is). De acordo com uma modalidade, o atranol é convertido em um dímero hidrossolúvel de fórmula (I)

[021] Vantajosamente, a composição compreendendo atranol e/ou seu(s) derivado(s) é um extrato de musgo, preferencialmente um óleo de musgo, concreto ou absoluto. Os extratos de musgo úteis na presente invenção são geralmente aqueles obtidos por extração com solvente de líquens e incluem, em particular, o concreto e absoluto de musgo de carvalho (a partir de Evernia prunastri L.). Preferencialmente, a composição compreendendo atranol e/ou seu(s) derivado(s) é um extrato de musgo de carvalho. De acordo com uma modalidade, a composição compreendendo atranol e/ou seu(s) derivado(s) é um concreto de musgo de carvalho. De acordo com outra modalidade, a composição compreendendo atranol e/ou seu(s) derivado(s) é absoluto de musgo de carvalho.

[022] Como usado na presente invenção, os termos "enzima pertencente à família peroxidase" referem-se a uma enzima tendo a capacidade de catalisar a oxidação de um substrato orgânico usando um peróxido como oxidante terminal, a enzima sendo obtida a partir de um organismo vivo selvagem ou mutante.

[023] De acordo com uma modalidade, a enzima pertencente à família peroxidase é selecionada a partir de peroxidase de rábano (HRP), peroxidase de soja (SPB), mieloperoxidase (MPO), lactoperoxidase (LPO), citocromo C peroxidase (DiHCcP) e misturas das mesmas.

[024] De acordo com uma modalidade preferencial, a enzima pertencente à família peroxidase é HRP.

[025] A quantidade de enzima pertencente à família peroxidase pode ser pelo menos 0,1% em peso em comparação com o peso de atranol e/ou seus derivados, preferencialmente pelo menos 0,5% e mais preferencialmente pelo menos 1%. De acordo com uma modalidade, a quantidade de enzima pertencente à família peroxidase está compreendida entre 0,1% e 25% em peso em comparação com o peso de atranol e/ou seus derivados, ou entre 1% e 15%.

[026] De acordo com uma modalidade, o peróxido usado no processo é escolhido entre peróxido de hidrogênio (H2O2), hidroperóxidos (RO2H), peróxidos orgânicos (RO2R') e misturas dos mesmos. Como usado na presente invenção, o termo "hidroperóxidos" refere-se a compostos tendo o esqueleto ROOH, em que R é um grupo organila, preferencialmente R é um grupo alquila linear ou ramificado, um grupo acila como acetila ou benzoíla ou um grupo arila. Vantajosamente, R compreende entre 1 e 18 átomos de carbono. Os hidroperóxidos incluem ácidos peróxi como ácido peroxiacético, ácido peroxibenzóico e ácido meta-cloroperoxibenzóico. Como usado na presente invenção, os termos "peróxidos orgânicos" referem-se a compostos tendo o esqueleto ROOR', em que R e R' são um grupo organila, preferencialmente R e R' são, independentemente, grupos alquila lineares ou ramificados, grupos acila tal como acetila ou benzoíla ou grupos arila. Vantajosamente, R e R' compreendem, independentemente, entre 1 e 18 átomos de carbono.

[027] Preferencialmente, o peróxido é H2O2.

[028] A quantidade de peróxido pode ser pelo menos 0,5 equivalente molar em comparação com atranol e/ou seus derivados, preferencialmente pelo menos 1 equivalente molar e mais preferencialmente pelo menos 2 equivalentes molares. De acordo com uma modalidade, a quantidade de peróxido está compreendida entre 1 e 5 equivalentes molares em comparação com atranol e/ou seus derivados ou entre 1,5 e 3 equivalentes molares.

[029] De acordo com uma modalidade, a etapa de mistura dura pelo menos 0,5 hora, preferencialmente pelo menos 1 hora e mais preferencialmente pelo menos 2 horas. De acordo com uma modalidade, a etapa de mistura dura entre 1 e 10 horas, ou entre 2 e 4 horas.

[030] O processo pode ser realizado em uma solução aquosa. Preferencialmente, o processo é realizado em uma solução tampão aquosa, como um tampão carbonato.

[031] De acordo com uma modalidade, o processo é realizado em pH básico, por exemplo, em um pH entre 8 e 10.

[032] De acordo com uma modalidade, a presente invenção refere-se a um processo para converter atranol e/ou cloroatranol em composto(s) hidrossolúvel(is), referido processo compreendendo uma etapa de mistura de um extrato de musgo compreendendo atranol e/ou cloroatranol com HRP e H2O2.

[033] De acordo com uma modalidade, a presente invenção refere-se a um processo para converter atranol e/ou cloroatranol em composto(s) hidrossolúvel(is), referido processo compreendendo uma etapa de mistura de concreto ou absoluto de musgo de carvalho compreendendo atranol e/ou cloroatranol com HRP e H2O2, em que a quantidade de H2O2 é pelo menos 2 equivalentes molares em comparação com atranol e/ou cloroatranol, a quantidade de HRP é pelo menos 1% em peso em comparação com o peso de atranol e/ou seus derivados, e a etapa de mistura dura pelo menos 2 horas.

[034] A presente invenção também se refere a um processo para converter atranol em um dímero hidrossolúvel de fórmula (I) referido processo compreende uma etapa de mistura de uma composição compreendendo atranol, preferencialmente um extrato de musgo, com uma enzima pertencente à família peroxidase, preferencialmente HRP, e um peróxido, preferencialmente H2O2. Processo para a produção de um extrato de musgo de carvalho modificado

[035] A invenção também se refere a um processo para a produção de um extrato de musgo de carvalho tendo menos de 100 ppm de atranol e/ou seu(s) derivado(s), referido processo compreendendo as seguintes etapas: a) misturar um extrato de musgo de carvalho compreendendo atranol e/ou seu(s) derivado(s) com uma enzima pertencente à família peroxidase e um peróxido, b) incubar a mistura, para converter atranol e/ou seu(s) derivado(s) em composto(s) hidrossolúvel(is), c) eliminar o(s) composto(s) hidrossolúvel(is) usando extração líquido- líquido.

[036] Durante as etapas a) e b), o atranol e/ou seu(s) derivado(s) são convertidos em composto(s) hidrossolúvel(is) que pode(m) ser eliminado(s) usando extração líquido-líquido. Vantajosamente, a extração líquido-líquido da etapa c) é executada usando uma solução aquosa e um solvente orgânico. Neste caso, o extrato de musgo de carvalho modificado é recuperado no solvente orgânico, enquanto o(s) composto(s) hidrossolúvel(is), em que o atranol e/ou seus derivados são convertidos, são descartados com a fase aquosa. O extrato de musgo de carvalho modificado obtido é um extrato de musgo de carvalho tendo menos de 100 ppm de atranol e/ou seu(s) derivado(s).

[037] Preferencialmente, o extrato de musgo de carvalho é um concreto ou absoluto de musgo de carvalho.

[038] De acordo com uma modalidade, a enzima pertencente à família peroxidase é selecionada a partir de peroxidase de rábano (HRP), peroxidase de soja (SPB), mieloperoxidase (MPO), lactoperoxidase (LPO), citocromo C peroxidase (DiHCcP) e misturas das mesmas.

[039] De acordo com uma modalidade preferencial, a enzima pertencente à família peroxidase é HRP.

[040] A quantidade de enzima pertencente à família peroxidase pode ser pelo menos 0,1% em peso em comparação com o peso de atranol e/ou seus derivados, preferencialmente pelo menos 0,5% e mais preferencialmente pelo menos 1%. De acordo com uma modalidade, a quantidade de enzima pertencente à família peroxidase está compreendida entre 0,1% e 25% em peso em comparação com o peso de atranol e/ou seus derivados, ou entre 1% e 15%.

[041] De acordo com uma modalidade, o peróxido usado no processo é escolhido entre peróxido de hidrogênio (H2O2), hidroperóxidos (RO2H), peróxidos orgânicos (RO2R') e misturas dos mesmos. Como usado na presente invenção, o termo "hidroperóxidos" refere-se a compostos tendo o esqueleto ROOH, em que R é um grupo organila, preferencialmente R é um grupo alquila linear ou ramificado, um grupo acila tal como acetila ou benzoíla ou um grupo arila. Vantajosamente, R compreende entre 1 e 18 átomos de carbono. Os hidroperóxidos incluem ácidos peróxi como ácido peroxiacético, ácido peroxibenzóico e ácido meta-cloroperoxibenzóico. Como usado na presente invenção, os termos "peróxidos orgânicos" referem-se à compostos tendo o esqueleto ROOR', em que R e R' são um grupo organila, preferencialmente R e R' são, independentemente, grupos alquila lineares ou ramificados, grupos acila tal como acetila ou benzoíla ou grupos arila. Vantajosamente, R e R' compreendem, independentemente, entre 1 e 18 átomos de carbono.

[042] Preferencialmente, o peróxido é H2O2.

[043] A quantidade de peróxido pode ser pelo menos 0,5 equivalente molar em comparação com atranol e/ou seus derivados, preferencialmente pelo menos 1 equivalente molar e mais preferencialmente pelo menos 2 equivalentes molares. De acordo com uma modalidade, a quantidade de peróxido está compreendida entre 1 e 5 equivalentes molares em comparação com atranol e/ou seus derivados ou entre 1,5 e 3 equivalentes molares.

[044] As etapas a) e b) podem ser realizadas em uma solução aquosa. Preferencialmente, as etapas a) e b) são realizadas em uma solução tampão aquosa, como um tampão carbonato.

[045] De acordo com uma modalidade, etapas a) e b) são realizadas em pH básico, por exemplo em um pH entre 8 e 10.

[046] De acordo com uma modalidade, a etapa b) dura pelo menos 0,5 hora, preferencialmente pelo menos 1 hora e mais preferencialmente pelo menos 2 horas. De acordo com uma modalidade, a etapa b) dura entre 1 e 10 horas, ou entre 2 e 4 horas.

[047] Vantajosamente, quando a extração líquido-líquido da etapa c) é executada usando uma solução aquosa e um solvente orgânico, o solvente orgânico é escolhido entre os solventes orgânicos comuns como óxidos de éter, hidrocarbonetos ou acetato de etila.

[048] O processo também pode compreender uma etapa d) de recuperação do extrato de musgo de carvalho tendo menos de 100 ppm de atranol e/ou seu(s) derivado(s) em um solvente orgânico.

[049] De acordo com uma modalidade, o extrato de musgo de carvalho modificado não mostra diferença em termos de propriedades olfativas com o concreto ou absoluto de musgo de carvalho inicial.

[050] De acordo com uma modalidade, a invenção também se refere a um processo para a produção de um concreto ou absoluto de musgo de carvalho tendo menos de 100 ppm de atranol e/ou cloroatranol, referido processo compreendendo as seguintes etapas: a) misturar um concreto ou absoluto de musgo de carvalho compreendendo atranol e/ou cloroatranol com HRP e H2O2, em que a quantidade de H2O2 é pelo menos 2 equivalentes molares em comparação com atranol e/ou cloroatranol, a quantidade de HRP é pelo menos 1% em peso em comparação com o peso de atranol e/ou cloroatranol, b) incubar a mistura por pelo menos 2 horas, para converter atranol e/ou seu(s) derivado(s) em composto(s) hidrossolúvel(is), c) eliminar o(s) composto(s) hidrossolúvel(is) usando uma solução aquosa, d) recuperar o concreto ou absoluto de musgo de carvalho tendo menos de 100 ppm de atranol e/ou seu(s) derivado(s) em um solvente orgânico.

[051] De acordo com uma modalidade, a invenção também se refere a um processo para a produção de um extrato de musgo de carvalho tendo menos de 100 ppm de atranol, referido processo compreendendo as seguintes etapas: a) misturar um extrato de musgo de carvalho compreendendo atranol com uma enzima pertencente à família peroxidase e um peróxido,

b) incubar a mistura, para converter atranol em um dímero hidrossolúvel de fórmula (I) c) eliminar o dímero hidrossolúvel de fórmula (I) usando extração líquido- líquido.

[052] A invenção também se refere ao uso de uma enzima pertencente à família peroxidase, preferencialmente HRP, e um peróxido, preferencialmente H2O2 para reduzir o teor de atranol e/ou seu(s) derivado(s) de um extrato de musgo. Preferencialmente, o extrato de musgo é um concreto ou absoluto de musgo de carvalho.

LEGENDAS DAS FIGURAS

[053] A Figura 1 mostra os cromatogramas HPLC-PDA de um absoluto de musgo de carvalho antes (topo) e após (base) o tratamento de acordo com o exemplo 4 (2 equivalentes de H2O2 e 2 horas de tempo de reação). As inserções são ampliações na área do cromatograma onde o atranol e o cloroatranol estão eluindo (respectivamente em 16,9 e 20,8 min).

EXEMPLOS Exemplo 1: Conversão de atranol puro

[054] O atranol (0,66 mmol) foi dissolvido em tampão carbonato de pH 9 20 mM à temperatura ambiente para atingir uma concentração de 2 g/L. HRP foi então introduzido a uma razão de 1% em peso e a reação foi iniciada com a adição lenta de 2 equiv. de H2O2 (solução aquosa a 30% p/p) a uma taxa de fluxo de 0,1 mL/h. Após 4 horas, a fase aquosa foi extraída com AcOEt e ambas as fases orgânica e aquosa foram evaporadas e analisadas. O mesmo protocolo foi usado para executar experimentos de controle. As diferentes condições e resultados estão resumidos na tabela 1. Tabela 1. Conversão de atranol puro Produto na fase orgânica Produto na fase aquosa Entrada H2O2 HRP (rendimento) (rendimento) 1 - - Atranol (95%)a - 2 - 1% (p/p) Atranol (92%)a - 3 2 eq. - 5-metilpirogalol (84%) - 4 2 eq. 1% (p/p) 5-metilpirogalol (2%) Dímero (75%) a Recuperação de material inicial.

[055] Na ausência de H2O2, o atranol foi recuperado inalterado após extração com AcOEt com ou sem HRP usado em 1% p/p (tabela 1, entradas 1 e 2). Na presença de H2O2 mas sem HRP, 5-metilpirogalol foi obtido com rendimento de 84% após extração com AcOEt (tabela 1, entrada 3). Surpreendentemente, na presença de HRP (1% p/p) e H2O2 (2 equiv.), apenas 2% de 5-metilpirogalol foram isolados por extração com AcOEt. Após evaporação da fase aquosa, foi obtido um dímero a 75% de rendimento. Exemplo 2: Oxidação Catalisada por HRP de atranol puro.

[056] HRP (124 U/mg, 4 mg) foi dissolvido em 65 mL de tampão carbonato de pH 9 (20 mM) contendo atranol (200 mg, 1,32 mmol). O frasco de reação foi coberto com uma folha de alumínio para evitar a decomposição do peróxido. A reação foi iniciada pela adição lenta de uma solução aquosa a 30% de H2O2 a 0,1 mL/h para garantir a adição final de 2 equivalentes de peróxido de hidrogênio (0,264 mL) em relação ao atranol. Após 6 horas a temperatura ambiente, foi adicionada uma solução aquosa de HCl (0,1 M) até o pH 4 ser alcançado. Essa camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3x70 mL). As fases aquosas foram concentradas por evaporação rotativa para dar o dímero como um pó branco (193 mg, 44%). ESI-MS: m/z = 310. 1H RMN (D2O, 400 MHz): δ ppm 6,37 (t, 1H); 3,97 (d, 1H); 3,37 (s, H); 2,68 (s, 2H); 2,62 (s, H); 2,14 (s, 3H); 1,79 (s, 3H) 13 C RMN: (D2O, 100 MHz) δ ppm 197,5 (C); 178,1 (C); 172,3 (C); 164,3 (C); 127,1 (CH); 88,9 (C); 87,1 (C); 85,7 (C ); 77,7 (C); 60,2 (CH); 54,9 (CH); 52,9 (CH); 25,7 (CH3); 23,7 (CH3). Exemplo 3: Acetilação do dímero

[057] Como o dímero não pôde ser analisado diretamente por GC-MS, seu derivado acetilado foi preparado. O dímero (0,100 g, 0,32 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (2 ml) destilado. Trietilamina foi então adicionada (0,28 mL, 2,1 mmol) seguida por Ac2O (0,2 mL; 2,1 mmol) sob uma atmosfera inerte. Após a conclusão da reação, a mistura de reação bruta foi evaporada à vácuo. O sólido obtido foi dissolvido em CH2Cl2 e lavado com água. Após secagem da camada orgânica com MgSO4 e evaporação, o dímero triacetilado foi obtido como um óleo (0,12 g, 90%). HRMS: C20H19O10 para [MH+], calc. 419,0978; encontrado 419,0950; Δ = 6,6 ppm. Exemplo 4: Remoção catalisada por HRP de atranol (4,3%) e Cloroatranol (2,3%) a partir de absoluto de musgo de carvalho na escala de miligramas.

[058] O absoluto de musgo de carvalho (250 mg) contendo atranol (4,3%) e cloroatranol (2,3%) foi dissolvido em 270 mL de tampão carbonato de pH 9 (20 mM). Após sonicação da mistura de reação durante 2 horas, HRP (124 U/mg, 2 mg) foi adicionado. O frasco de reação foi coberto com uma folha de alumínio, e 1, 2, 3 ou 4 equivalentes de solução aquosa de H2O2 a 30% foram adicionados. A agitação foi mantida durante 2 ou 4 horas à temperatura ambiente. A extração por acetato de etila permitiu a recuperação do absoluto modificado (231 mg, 92%, com 2 equivalentes de H2O2 e tempo de reação de 4 horas) após secagem sobre sulfato de magnésio, filtração e remoção de solvente por evaporação rotativa. A análise por HPLC-UV-MS e GC-MS do absoluto de musgo de carvalho modificado confirmou o desaparecimento de atranol e cloroatranol. HPLC com detecção de UV não era adequado para quantificar traços de atranol e, a este respeito, a detecção de MS foi usada com um método de calibração externa (SC Rastogi, R. Bossi, JD Johansen, T. Menné, G. Bernard, E. Giménez- Arnau e J.-P. Lepoittevin, Content of oak moss allergens atrasanol and chloroatranol in perfumes and similar products Contact Dermatitis 2004 50, p. 367-370, R. Bossi, SC Rastogi, G. Bernard, E. Gimenez-Arnau, JD Johansen, J.-P. Lepoittevin e T. Menné A liquid chromatography-mass spectrometric method for the determination of oak moss allergens atranol and chloroatranol in perfumes Journal of Separation Science 2004 27, p. 537-540). Os resultados são apresentados na Tabela 2.

[059] Para avaliar o efeito geral em todo o absoluto de musgo de carvalho, foi usado HPLC-UV. Os cromatogramas do absoluto de musgo de carvalho inicial e o absoluto de musgo de carvalho modificado obtidos são mostrados na Figura

1. Eles mostram que a composição química do absoluto permaneceu praticamente a mesma. Tabela 2. Teor de atranol do absoluto de musgo de carvalho modificado após a reação enzimática Título de atranol Entrada H2O2 Tempo de Reação (ppm) 1 1 equiv. 2h 141 2 2 equiv. 2h 65 3 3 equiv. 2h 32 4 4 equiv. 2h 12 5 1 equiv. 4h 130 6 2 equiv. 4h 62

7 3 equiv. 4h 28 8 4 equiv. 4h 7

[060] Valores residuais de atranol abaixo de 100 ppm foram obtidos quando mais de 2 equivalentes de H2O2 foram usados. Com 4 equivalentes de H2O2 e após 4 horas de reação, um título residual tão baixo quanto 7 ppm de atranol foi observado. Exemplo 5: Remoção catalisada por HRP de Atranol (4,3%) e Cloroatranol (2,3%) a partir de absoluto de musgo de carvalho na escala de miligramas.

[061] O absoluto de musgo de carvalho (1,2 g) foi dissolvido em 1,3 L de tampão carbonato de pH 9 (20 mM). Após sonicação da mistura de reação durante 2 horas, HRP (124 U/mg, 10 mg) foi adicionado. O frasco de reação foi coberto com uma folha de alumínio, e 2 equivalentes de solução aquosa (97 µL) de H2O2 a 30% foram adicionados. A agitação foi mantida durante 2 horas à temperatura ambiente. A extração por acetato de etila permitiu a recuperação do absoluto modificado (1,1 g, 91%), após secagem sobre sulfato de magnésio, filtração e remoção de solvente por evaporação rotativa. O absoluto de musgo de carvalho modificado continha 60 ppm de atranol e o cloroatranol não foi detectado (HPLC-MS, modo SIM). As análises HPLC-UV-MS e GC-MS confirmaram esse resultado. Exemplo 6: Análise sensorial

[062] A qualidade olfativa conservada do absoluto de musgo de carvalho modificado foi avaliada por análise sensorial seguindo a metodologia de teste triangular. Três ampolas idênticas contendo 2 amostras de absoluto de musgo de carvalho e 1 amostra de absoluto de musgo de carvalho modificado, como solução em EtOH (0,5% p/p), foram submetidos a um painel de 56 pessoas tomadas separadamente, as quais foram solicitadas a identificar a amostra modificada. As seguintes fórmulas foram usadas, com n 1-3 sendo o valor que se deve exceder para ter certeza de que o resultado não é uma distribuição estatística para um determinado nível de confiança e N o número de painelistas: Para 95% de confiança: 2𝑁+3 𝑛1 = 0,77√𝑁 + + 0,5 6 Para 98% de confiança: 2𝑁+3 𝑛2 = 1,10√𝑁 + + 0,6 6 Para 99,9% de confiança: 2𝑁+3 𝑛3 = 1,46√𝑁 + + 0,8 6

[063] Para um painel de 56 pessoas, n1= 25,9, n2= 28,0 e n3= 30,9.

[064] Como um resultado, as pontuações obtidas foram 18, 16 e 22, respectivamente. Uma pontuação de 22 significa que, mesmo no nível de confiança mais baixo, o painel estava longe de ser capaz de distinguir a amostra modificada.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Processo para converter atranol e/ou seu(s) derivado(s) em composto(s) hidrossolúvel(is), referido processo caracterizado pelo fato de que compreende uma etapa de mistura de uma composição compreendendo atranol e/ou seu(s) derivado(s) com uma enzima pertencente à família peroxidase e um peróxido.

2. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo atranol e/ou seu(s) derivado(s) é um extrato de musgo.

3. Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo atranol e/ou seu(s) derivado(s) é um concreto de musgo de carvalho.

4. Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo atranol e/ou seu(s) derivado(s) é um absoluto de musgo de carvalho.

5. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a enzima é peroxidase de rábano (HRP).

6. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o peróxido é H2O2.

7. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a quantidade de peróxido é pelo menos 0,5 equivalente molar em comparação com atranol e/ou seus derivados, preferencialmente pelo menos 1 equivalente molar, e mais preferencialmente pelo menos 2 equivalentes molares.

8. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a quantidade de enzima pertencente à família peroxidase é pelo menos 0,1% em peso em comparação com o peso de atranol e/ou seus derivados, preferencialmente pelo menos 0,5%, e mais preferencialmente pelo menos 1 %.

9. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que a etapa de mistura dura pelo menos 0,5 hora, preferencialmente pelo menos 1 hora, e mais preferencialmente pelo menos 2 horas.

10. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o processo é realizado em uma solução tampão aquosa.

11. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o processo é realizado em um pH compreendido entre 8 e 10.

12. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o atranol é convertido em um dímero hidrossolúvel de fórmula (I): .

13. Processo para a produção de um extrato de musgo de carvalho tendo menos do que 100 ppm de atranol e/ou seu(s) derivado(s), referido processo caracterizado pelo fato de que compreende as seguintes etapas: a) misturar um extrato de musgo de carvalho compreendendo atranol e/ou seu(s) derivado(s) com uma enzima pertencente à família peroxidase e um peróxido, b) incubar a mistura, para converter atranol e/ou seu(s) derivado(s) em composto(s) hidrossolúvel(is), c) eliminar o(s) composto(s) hidrossolúvel(is) usando extração líquido- líquido.

14. Uso de uma enzima pertencente à família peroxidase, preferencialmente HRP, e um peróxido, preferencialmente H2O2, caracterizado pelo fato de ser para reduzir o teor de atranol e/ou seu(s) derivado(s) a partir de um extrato de musgo.