BR112020017239A2 - Sistemas de vetor viral recombinante que expressam genes de paramixovírus felino exógenos e vacinas feitas a partir deles - Google Patents

Sistemas de vetor viral recombinante que expressam genes de paramixovírus felino exógenos e vacinas feitas a partir deles Download PDF

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Abstract

a presente invenção está relacionada aos genes de paramixovírus felino exógenos, que são expressos por sistemas de vetor viral recombinante.

Description

SISTEMAS DE VETOR VIRAL RECOMBINANTE QUE EXPRESSAM GENES DE PARAMIXOVÍRUS FELINO EXÓGENOS E VACINAS FEITAS A PARTIR DELES LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[0001]Esse pedido contém uma listagem de sequências de acordo com 37 C.F.R. 1.821 – 1.825. A listagem de sequências que acompanha esse pedido é incorporada nesse relatório descritivo por referência em sua totalidade.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO A. Campo da invenção
[0002]A presente invenção está relacionada ao campo de vacinas de (vetor) e, especificamente aos genes de paramixovírus felino exógenos, que são expressos por sistemas de vetor viral recombinante. Além disso, a presente invenção está relacionada às vacinas contra paramixovírus felino à base de vetor viral recombinante. B. Fundamentos e descrição da técnica relacionada Paramixovírus felinos
[0003]Paramixovírus são vírus de RNA de fita simples sentido negativo [(-)ssRNA], envelopados, que foram associados a diversas doenças infecciosas em humanos e animais. Há duas subfamílias de Paramixovírus, Paramyxovirinae e Pneumovirinae, e pelo menos cinco gêneros dentro da subfamília Paramyxovirinae, especificamente Respirovirus, Rubulavirus, Morbillivirus, Henipavirus e Avulavirus. Exemplos de Paramixovírus incluem vírus da cinomose canina, vírus do sarampo, vírus de peste bovina, vírus da caxumba e vírus da parainfluenza humana. Paramixovírus possuem um genoma linear que codifica sete polipeptídeos virais: uma proteína do nucleocapsídeo, uma fosfoproteína, uma proteína da matriz, uma proteína de fusão, uma proteína de hemaglutinina e uma polimerase. Vírions de paramixovírus são envelopados e podem ser esféricos, filamentosos ou pleomórficos com um diâmetro em torno de 150 nm. Proteínas de fusão e proteínas de adesão (hemaglutinina, “H”) aparecem como espinhos na superfície do vírion. Proteínas da matriz (“M”) dentro do envelope estabilizam a estrutura do vírus. O núcleo do nucleocapsídeo é formado pelo RNA genômico, proteínas do nucleocapsídeo (“N”), fosfoproteínas (“P”) e proteínas polimerase (“L” para “proteína grande”). A proteína de fusão (“F”) se projeta da superfície do envelope como um trímero, e medeia a entrada na célula por indução de fusão entre o envelope viral e a membrana célula.
[0004]Paramixovírus foram isolados, por exemplo, de animais selvagens e domésticos, incluindo gatos, roedores e morcegos, mas também de humanos. Infecções por paramixovírus, particularmente da subfamília Paramyxovirinae, foram associadas com doenças renais em consequência de danos ao tecido demonstrado em várias espécies. A doença renal, especialmente a doença renal crônica (CKD) está, por exemplo, entre as doenças mais comuns e uma das causas mais comuns de morte em gatos domésticos, particularmente em indivíduos mais velhos. Lulich e cols. (“Compendium on Continuing Education for the Practicing Veterinarian” (1992) 14 (2): 127-152) relatam uma prevalência de doença renal crônica entre populações de gatos domésticos totais de cerca de 1,5% e cerca de 7,5% em gatos domésticos mais velhos do que 10 anos. As causas dessas doenças podem ser muito diversas. Em muitos casos a etiologia exata não pode ser determinada. Por outro lado, sabe-se que a doença renal crônica ocorre mais frequentemente como resultado de inflamação dos túbulos renais e tecido intersticial renal. Esta é denominada nefrite túbulo- intersticial idiopática (TIN).
[0005]Vários paramixovírus felinos foram descritos na técnica. US 2013/0230529 A1 (WO 2013/107290 A1) e Woo e cols. (Proc. Nat. Acad. Sci. (2012) 109 (14): 5.435-5.440) descrevem um morbilivírus felino (FmoPV) isolado em Hong Kong que está associado com TIN em gatos domésticos. Outros grupos de pesquisa do Japão (Sakaguchi e cols. (2014) General Virology, 95(7), 1.464-1.468; Furuya e cols. (2014) Archives of Virology, 159 (2), 371-373), Itália (Lorusso e cols. (2013) Vet. Ital. 51 (3): 235-237) e dos EUA (Sharp e cols. (2016) Emerging Infectious Diseases 22 (4): 760) também detectaram paramixovírus em amostras de urina de gatos. Sieg e cols. (Virus Genes (2015) 51 (2): 294-297) descrevem a descoberta de paramixovírus felinos em gatos domésticos com doença renal crônica.
[0006]Técnica estabelecida adicional a esse respeito é a seguinte: JP 2015 198654 A está relacionado aos meios de isolamento/identificação de uma nova cepa de morbilivírus felino e medidas preventivas eficazes contra infecção pelo morbilivírus felino. Marcacci M. e cols. (Journal of Virological Methods 2016, 234: 160-163) descrevem a caracterização do genoma de morbilivírus felino da Itália. Sistemas de vetor viral
[0007]Sistemas de vetor viral do avipoxvírus se baseiam nos avipoxvírus, que são poxvírus com hospedeiros naturalmente restritos. Entre esses avipoxvírus, o vírus canarypox (CPV) foi modificado geneticamente para expressar produtos gênicos exógenos, estranhos, heterólogos, extrínsecos (Taylor J. e cols., Vaccine 1991, 9 (3): 190- 193; Taylor J. e cols., Virology 1992, 187 (1): 321-328; Taylor J. e cols., Dev. Biol. Stand. 1994, 82: 131-135).
[0008]Poxvírus recombinantes podem ser construídos em duas etapas conhecidas na técnica e análogas aos métodos para a criação de recombinantes sintéticos de poxvírus como, por exemplo, o vírus da vaccinia e avipoxvírus descritos nas Patentes U.S. Nos 4.769.330, 4.722.848, 4.603.112, 5.110.587,
5.174.993, 5.494.807 e 5.505.941, cujas revelações são incorporadas nesse relatório descritivo por referência.
[0009]Especificamente, ALVAC é um vetor de poxvírus modificado geneticamente derivado do vírus canarypox (por exemplo, US 5.756.103). ALVAC é um vetor baseado no vírus canarypox atenuado que era um derivado clonado em placa da vacina humana contra canarypox, Kanapox. Vírus recombinantes baseados em ALVAC que expressam imunógenos extrínsecos também se mostraram eficazes como vetores de vacina (veja, por exemplo, Tartaglia J. e cols., J. Virology 1993, 67 (4):
2.370-2.375). Esse vetor de avipox é restrito às espécies aviárias para replicação produtiva e não replica produtivamente em hospedeiros não aviários, uma característica que supostamente aumenta seu perfil de segurança. Em culturas em célula humana, a replicação do vírus canarypox é abortada precocemente no ciclo de replicação viral antes da síntese de DNA viral. No entanto, quando modificado geneticamente para expressar imunógenos extrínsecos, expressão e processamento autênticos são observados in vitro em células de mamíferos e a inoculação em várias espécies mamíferas induz respostas imunes de anticorpo e celular ao imunógeno extrínseco e fornece proteção contra o ataque com o patógeno cognato (Taylor J. e cols., Vaccine 1991, 9 (3): 190-193; Taylor J. e cols., Virology 1992, 187 (1): 321-328). ALVAC foi depositado sob os termos do Tratado de Budapeste com a “American Type Culture Collection” (ATCC) sob o número de acesso VR-2547 (US 5.756.103, cuja revelação é incorporada nesse relatório descritivo por referência).
[0010]TROVAC se refere a um vetor de vírus da bouba aviária (fowlpox) atenuado que era um isolado clonado em placa derivado da cepa de vacina - FP1 do vírus da bouba aviária que é licenciado para vacinação de pintos de 1 dia de idade (por exemplo, US 5.766.599). A cepa de vírus parental Duvette foi obtida na França como uma crosta de vírus da bouba aviária de uma galinha. O vírus foi atenuado por aproximadamente 50 passagens seriais em ovos embrionados de galinha, seguidas por 25 passagens em células de fibroblastos de embrião de galinha. O vírus foi submetido a quatro purificações em placa sucessivas. Um isolado da placa foi ainda amplificado em células CEF primárias e um vírus de estoque, designado TROVAC, estabelecido. TROVAC foi depositado sob os termos do Tratado de Budapeste com a “American Type Culture Collection” (ATCC) sob o número de acesso VR-2553 (US 5.766.599, cuja revelação é incorporada nesse relatório descritivo por referência).
[0011]Aplicações específicas de abordagens de vacinação baseadas em vetores ALVAC e TROVAC são descritas, por exemplo, em WO 2006/073431, WO 2006/115843, e WO 2013/123242, cujas revelações são incorporadas nesse relatório descritivo por referência.
[0012]Técnica estabelecida adicional é a seguinte: Weli S.C. e cols. (Virology J. 2011, 8 (1): 49) descrevem avipoxvírus: biologia da infecção e seu uso como vetores de vacina. WO 2005/013918 é dirigido a uma vacina contra poxvírus que compreende uma proteína do envelope de poxvírus solúvel truncada. De Vries P. e cols. (J. Gen. Virol. 1988, 69: 2.071-2.083) revelam que complexos imunoestimulantes (Iscoms) do vírus da cinomose canina (CDV), mas não Iscoms do vírus do sarampo, protegem cães contra infecção pelo CDV. Marciani D.J. e cols. (Vaccine 1991, 9(2): 89-96) descrevem a resposta imune protetora de uma vacina de subunidade modificada por engenharia genética contra o vírus da leucemia felina em gatos. McEachern J.A. e cols. (Vaccine 2008, 26(31): 3842-3852) descrevem que uma formulação vacina de subunidade recombinante protege contra o ataque letal por vírus Nipah em gatos.
[0013]A maioria das vacinas contra paramixovírus e, mais especialmente, contra morbilivírus, disponíveis consiste em vacinas de vírus vivo modificado. Elas são normalmente seguras e eficazes. No entanto, como ocorre com alguns vírus vivos modificados clássicos, a reversão para virulência pode ocasionalmente ocorrer. Como exemplo, alguns casos de reversão para virulência de algumas cepas de vacina contra cinomose foram relatados. Portanto, há uma necessidade não atendida por vetores seguros como uma forma de superar as questões potenciais de segurança de cepas atenuadas clássicas.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0014]A fim de superar as deficiências na técnica estabelecida, a invenção fornece novos antígenos-alvo que são expressos por vacinas de vetor viral e vacinas contra paramixovírus felino/morbilivírus felino.
[0015]A presente invenção está relacionada, entre outros, ao desenvolvimento de vacinas de vetor viral eficazes que imunizam felinos contra (infecções por) paramixovírus felino, preferivelmente por meio de um vetor viral de vírus avipox, por exemplo, um vetor de canarypox atenuado ou de vírus da bouba aviária atenuado, por exemplo, ALVAC ou TROVAC. Esses vetores atenuados codificam pelo menos um antígeno de paramixovírus felino e, portanto, pode haver expressão das proteínas heterólogas com replicação produtiva limitada ou ausente.
[0016]A presente invenção está relacionada a um vetor viral, preferivelmente um vetor viral recombinante e/ou de ocorrência não natural, que compreende pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno relacionado a pelo menos um patógeno que infecta felinos, em que o pelo menos um patógeno que infecta felinos é paramixovírus felino. De preferência, o vetor viral é selecionado do grupo que consiste em: vetor viral de vírus avipox, vetor viral de morbilivírus canino, vetor viral de vírus herpes, vetor viral do vírus da varicela.
[0017]A presente invenção está relacionada a uma célula hospedeira de mamífero, caracterizada pelo fato de que ela compreende o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo.
[0018]A presente invenção está relacionada ao uso do vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo ou à célula hospedeira de mamífero como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo para a fabricação de uma composição imunogênica ou vacina.
[0019]A presente invenção está relacionada a uma composição imunogênica que compreende: (a) o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo ou a célula hospedeira de mamífero como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo, e/ou (b) um polipeptídeo codificado pelo vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo, por exemplo, um vírus, um vírus vivo modificado, uma partícula semelhante a vírus (VLP) ou semelhantes, e (c) opcionalmente, um carreador ou excipiente aceitável para uso farmacêutico ou veterinário, preferivelmente o referido carreador sendo adequado para aplicação oral, intradérmica, intramuscular ou intranasal; em que, preferivelmente, a referida composição imunogênica compreende um vírus, por exemplo, um vírus infeccioso.
[0020]A presente invenção está relacionada a uma vacina ou composição farmacêutica que compreende: (a) o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo ou a célula hospedeira de mamífero como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo, e/ou (b) um polipeptídeo codificado pelo vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo, por exemplo, um vírus, um vírus vivo modificado, uma partícula semelhante a vírus (VLP) ou semelhantes, e (c) um carreador ou excipiente aceitável para uso farmacêutico ou veterinário, preferivelmente o referido carreador sendo adequado para aplicação oral, intradérmica,
intramuscular ou intranasal, (d) opcionalmente, a referida vacina ou composição farmacêutica ainda compreendendo um adjuvante.
[0021]A presente invenção está relacionada a um método para a preparação de uma composição imunogênica ou de uma vacina para redução da incidência e/ou da severidade de um ou mais sinais clínicos associados ou causados por uma infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico, que compreende as seguintes etapas: (a) infecção da célula hospedeira de mamífero como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo com o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo, (b) cultivo das células infectadas sob condições adequadas, (c) coleta das culturas das células infectadas, (d) opcionalmente, purificação das culturas das células infectadas coletadas da etapa (c), (e) opcionalmente, mistura da referida cultura das células infectadas coletada com um carreador farmaceuticamente aceitável.
[0022]A presente invenção está relacionada a uma composição imunogênica como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo ou à vacina como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo para uso em um método de redução ou prevenção dos sinais clínicos ou doença causados por uma infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico ou para uso em um método de tratamento e/ou prevenção de uma infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico, em que, preferivelmente, o referido felino é um gato, mais preferivelmente um gato doméstico, em que, preferivelmente, o pelo menos um paramixovírus patogênico é pelo menos um paramixovírus felino, em que preferivelmente os referidos sinais clínicos ou doença causados por uma infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico ou pela referida infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico são selecionados do grupo que consiste em: viremia, febre, excreção viral no ambiente, infecções do sistema urogenital, infecções do sistema urinário, doença renal, doença renal crônica (CKD), inflamação dos túbulos renais e tecido intersticial renal, nefrite túbulo-intersticial idiopática (TIN).
[0023]A presente invenção está relacionada a um método de imunização de um felino, por exemplo, um gato, mais preferivelmente um gato doméstico, contra uma doença clínica causada por pelo menos um paramixovírus patogênico no referido felino, o método compreendendo a etapa de administração ao felino da composição imunogênica como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo ou da vacina como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo, em que a referida composição imunogênica ou vacina não causa sinais clínicos de infecção, mas é capaz de induzir uma resposta imune que imuniza o felino contra formas patogênicas do referido pelo menos um paramixovírus, em que, preferivelmente, o pelo menos um paramixovírus patogênico é pelo menos um paramixovírus felino, em que, preferivelmente, a referida doença clínica ou os referidos sinais clínicos de infecção são selecionados do grupo que consiste em: viremia, febre, excreção viral no ambiente, infecções do sistema urogenital, infecções do sistema urinário, doença renal, doença renal crônica (CKD), inflamação dos túbulos renais e tecido intersticial renal, nefrite túbulo-intersticial idiopática (TIN).
[0024]A presente invenção está relacionada a um kit para vacinação de um felino, preferivelmente um gato, mais preferivelmente um gato doméstico, contra uma doença e ele associada e/ou para redução da incidência ou da severidade de um ou mais sinais clínicos associados ou causados por pelo menos um paramixovírus patogênico em um felino que compreende: (a) um dispensador capaz de administrar uma vacina ao referido felino; e (b) a composição imunogênica como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo ou a vacina como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo, e (c) opcionalmente, um folheto de instruções; em que, preferivelmente, o pelo menos um paramixovírus patogênico é pelo menos um paramixovírus felino, em que, preferivelmente, a referida doença ou os referidos sinais clínicos são selecionados do grupo que consiste em: viremia, febre, excreção viral no ambiente, infecções do sistema urogenital, infecções do sistema urinário, doença renal, doença renal crônica (CKD), inflamação dos túbulos renais e tecido intersticial renal, nefrite túbulo-intersticial idiopática (TIN).
[0025]Entre outras, as vantagens da invenção subjacente são as seguintes: (1) Segurança aumentada das vacinas vetorizadas em comparação com vacinas vivas atenuadas (2) Imunização dirigida contra certo antígeno (imunodominante), evitando a expressão de potencial proteínas imunossupressoras de paramixovírus felinos (3) Habilidade para crescer as vacinas vetorizadas até titulações elevadas compatíveis com produção comercial de vacinas.
[0026]Dessa forma, a solução do problema técnico acima é obtida pela descrição e pelas modalidades caracterizadas nas reivindicações, e a invenção, em seus diferentes aspectos, é implementada de acordo com as reivindicações.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0027]Os desenhos seguintes formam parte do presente relatório descritivo e são incluídos para demonstrar ainda mais certos aspectos da presente invenção. A invenção pode ser mais bem compreendida por referência a um ou mais desses desenhos em combinação com a descrição detalhada de modalidades específicas aqui apresentadas.
[0028]A Figura 1A e a Figura 1B retratam a visão geral esquemática sobre a recombinação in vitro (IVR) com os dois plasmídeos doadores pC3 42k Gordon M (opt) e pC5 H6p Gordon H (opt) e as duas construções resultantes vCP3025 e vCP3029.
[0029]A Figura 2 retrata o lócus de inserção C5 clonado em vCP3025 e sua sequência de nucleotídeos confirmada do par de bases 304.701 a 308.870, incluindo sequência flanqueadora direita do lócus de inserção C5, promotor H6, Gordon H (opt) e sequência flanqueadora esquerda do lócus de inserção C5.
[0030]A Figura 3 retrata o lócus de inserção C5 clonado em vCP3029 e sua sequência de nucleotídeos confirmada do par de bases 304,166 a 308.380, incluindo sequência flanqueadora direita do lócus de inserção C5, promotor H6, Gordon H (opt) e sequência flanqueadora esquerda do lócus de inserção C5.
[0031]A Figura 4 retrata o lócus de inserção C3 clonado em vCP3029 e sua sequência de nucleotídeos confirmada do par de bases 38.608 a 42.807, incluindo sequência flanqueadora direita do lócus de inserção C3, promotor 42k, Gordon M (opt) e sequência flanqueadora esquerda do lócus de inserção C3.
[0032]A Figura 5 retrata uma visão geral gráfica sobre o planejamento experimental e acompanhamento do estudo clínico do modelo de ataque (Exemplo 4).
[0033]A Figura 6 retrata a visão geral esquemática sobre a recombinação in vitro (IVR) com o vetor ALVAC vCP3025 parental e plasmídeo doador pC3 42k longo Lapön H (wt - sem sítio de enzima de restrição BamH1) e a construção resultante vCP3041.
[0034]A Figura 7 retrata o lócus de inserção C3 clonado em vCP3041 e sua sequência de nucleotídeos teórica do par de bases 38.619 a 43.588, incluindo sequência flanqueadora direita do lócus de inserção C3, promotor longo 42k, Lapön H (wt; no sítio de enzima de restrição BamH I) e sequência flanqueadora esquerda do lócus de inserção C3.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0035]A presente invenção soluciona os problemas inerentes na técnica estabelecida e fornece a avanço distinto no estado da técnica.
[0036]Geralmente, a presente invenção está relacionada a um vetor viral que compreende pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno relacionado a pelo menos um patógeno que infecta felinos, em que o pelo menos um patógeno que infecta felinos é paramixovírus felino.
[0037]Em um aspecto específico, esse vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo é selecionado do grupo que consiste em: vetor viral de vírus avipox, vetor viral de morbilivírus canino, vetor viral de vírus herpes, vetor viral do vírus da varicela.
[0038]Em outro aspecto específico, o pelo menos um patógeno que infecta felinos que é o paramixovírus felino como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo é selecionado do grupo que consiste em: (a) a paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2); (b) um paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2), cujo genoma compreende um ácido ribonucleico complementar à sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste em: (i) uma sequência de ácidos nucleicos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 1, (ii) uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1; (c) paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2) como depositado na “Collection Nationale de Culture de Microorganismes” (CNCM) sob o número de acesso CNCM I-5123; (d) um paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2), cujo genoma compreende um ácido ribonucleico complementar à sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste em:
(i) uma sequência de ácidos nucleicos de acordo com o ID.
DE SEQ.
Nº: 2, (ii) uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 75% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 80% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 85% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 90% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 91% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 92% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 93% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 94% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 95% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 96% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 97% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 98% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 99% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2; (e) um morbilivírus felino (FeMoV); (f) um morbilivírus felino (FeMoV), cujo genoma compreende um ácido ribonucleico complementar à sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste em: (i) uma sequência de ácidos nucleicos de acordo com o ID.
DE SEQ.
Nº: 3, (ii) uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 75% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 80% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 85% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 90% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 91% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 92% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 93% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 94% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 95% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 96% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 97% idêntica ao
ID. DE SEQ. Nº: 3, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 3, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 3.
[0039]Em outro aspecto específico, o pelo menos um patógeno que infecta felinos que é o paramixovírus felino como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo é selecionado do grupo que consiste em: (b) um paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2), cujo genoma compreende um ácido ribonucleico complementar à sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste em: (i) uma sequência de ácidos nucleicos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 1, (ii) uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1; (c) paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2) como depositado na “Collection Nationale de Culture de Microorganismes” (CNCM) sob o número de acesso CNCM I-5123; (d) um paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2), cujo genoma compreende um ácido ribonucleico complementar à sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste em: (i) uma sequência de ácidos nucleicos de acordo com o
ID. DE SEQ. Nº: 2, (ii) uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 2, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 2, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 2, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 2, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 2, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 2, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 2, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 2, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 2, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 2, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 2, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 2, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 2, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 2.
[0040]Em outro aspecto específico, o vetor viral é recombinante e/ou de ocorrência não natural.
[0041]Em outro aspecto específico, o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo é um vetor de canarypox, preferivelmente um vetor de canarypox atenuado, mais preferivelmente ALVAC, ainda mais preferivelmente ALVAC-1 ou ALVAC-2, principalmente ALVAC como depositado sob os termos do Tratado de Budapeste na “American Type Culture Collection” (ATCC) sob o número de acesso VR-2547.
[0042]Em outro aspecto específico, o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo é um vetor de vírus da bouba aviária, preferivelmente um vetor de vírus da bouba aviária atenuado, mais preferivelmente TROVAC, principalmente TROVAC como depositado sob os termos do Tratado de Budapeste na “American Type Culture Collection” (ATCC) sob o número de acesso VR-2553.
Em outro aspecto específico, o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo é selecionado do grupo que consiste em: vCP3025, vCP3029, vCP3041.
[0043]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é selecionada do grupo que consiste em: sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”), sequência codificadora de proteína da matriz (“M”), sequência codificadora de proteína de fusão (“F”), sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”), sequência codificadora de fosfoproteína (“P”), sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA- dependente (“L”) e, mais preferivelmente, é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e/ou uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e/ou uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”).
[0044]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 96% idêntica ao
ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 4, ID. DE SEQ. Nº: 5.
[0045]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 6.
[0046]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e a sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 7, ID. DE SEQ. Nº: 8.
[0047]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e a sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 97% idêntica ao
ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 9.
[0048]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) e a sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 10, ID. DE SEQ. Nº: 11.
[0049]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) e a sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70%
idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 12.
[0050]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) e a sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 13.
[0051]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) e a sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 14.
[0052]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) e a sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos
85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 15.
[0053]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) e a sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 16.
[0054]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) e a sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA- dependente (“L”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 17.
[0055]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) e a sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA- dependente (“L”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 90%
idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº:
18.
[0056]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 19.
[0057]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 20.
[0058]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e a sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE
SEQ. Nº: 21, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 21.
[0059]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e a sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 22.
[0060]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) e a sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 23.
[0061]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) e a sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ.
Nº: 24, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 24.
[0062]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) e a sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 25.
[0063]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) e a sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 26.
[0064]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) e a sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE
SEQ. Nº: 27, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 27.
[0065]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) e a sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 28.
[0066]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) e a sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA- dependente (“L”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 29.
[0067]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) e a sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA- dependente (“L”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ.
Nº: 30, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº:
30.
[0068]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 31, ID. DE SEQ. Nº: 32.
[0069]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70%
idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 33.
[0070]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e a sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34 e,
preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 34, ID. DE SEQ. Nº: 35.
[0071]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e a sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 36.
[0072]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) e a sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37,
pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 37.
[0073]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) e a sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 38.
[0074]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) e a sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 39.
[0075]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) e a sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE
SEQ. Nº: 40, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 40.
[0076]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) e a sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 41.
[0077]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) e a sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 42.
[0078]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) e a sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA- dependente (“L”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos
93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 43.
[0079]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é uma sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) e a sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA- dependente (“L”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº:
44.
[0080]Ainda em outro aspecto específico, o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo compreende duas ou mais sequências que codificam um antígeno exógeno, preferivelmente uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”), ou uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”), ou uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”), ou uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”).
[0081]Ainda em outro aspecto específico, o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo compreende duas ou mais sequências que codificam um antígeno exógeno, preferivelmente as mesmas duas sequências codificadoras de antígeno exógeno (ou seja, H + H, F + F, M + M, P + P, L + L, N + N), mas de duas cepas diferentes, por exemplo, uma sequência codificadora de antígeno exógeno de uma cepa de paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2), mais preferivelmente a “cepa Gordon” ou a “cepa TV25”, e a outra uma sequência codificadora de antígeno exógeno de uma cepa de morbilivírus felino, mais preferivelmente a “cepa Lapön” –, por exemplo, uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de uma cepa e uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de outra cepa. De preferência, a uma cepa da “sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de uma cepa” é uma cepa de paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2), mais preferivelmente a “cepa Gordon” ou a “cepa TV25”, e a outra cepa da “sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de outra cepa”
é uma cepa de morbilivírus felino, mais preferivelmente a “cepa Lapön”. Principalmente, a uma cepa da “sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de uma cepa” é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 75% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 80% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 85% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 90% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 91% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 92% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 93% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 94% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 95% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 96% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 97% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 98% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 99% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID.
DE SEQ.
Nº: 4, ID.
DE SEQ.
Nº: 5, ID.
DE SEQ.
Nº: 19; e a outra cepa da “sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de outra cepa” é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 75% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 80% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 85% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 90% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 91% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31 ou 94, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31 ou 94, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31 ou 94, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31 ou 94, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31 ou 94, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31 ou 94, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31 ou 94, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31 ou 94 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 31, ID. DE SEQ. Nº: 32, ID. DE SEQ. Nº: 94.
[0082]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é inserida em pelo menos um lócus de inserção, preferivelmente em uma região não essencial do genoma do vetor viral.
[0083]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é inserida em dois ou mais loci de inserção.
[0084]Ainda em outro aspecto específico, o lócus de inserção como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo é o lócus de inserção C3.
[0085]Ainda em outro aspecto específico, o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo compreende sequências flanqueadoras do lócus de inserção C3, preferivelmente de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 45 (braço esquerdo da região flanqueadora de C3) e o ID. DE SEQ. Nº: 46 (braço direito da região flanqueadora de C3).
[0086]Ainda em outro aspecto específico, o lócus de inserção como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo é o lócus de inserção C5.
[0087]Ainda em outro aspecto específico, o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo compreende sequências flanqueadoras do lócus de inserção C5, preferivelmente de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 47 (braço esquerdo da região flanqueadora de C5) e o ID. DE SEQ. Nº: 48 (braço direito da região flanqueadora de C5).
[0088]Ainda em outro aspecto específico, o lócus de inserção como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo é o lócus de inserção C6.
[0089]Ainda em outro aspecto específico, a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo está ligada operativamente a pelo menos uma sequência promotora, preferivelmente pelo menos uma sequência promotora fraca.
[0090]Ainda em outro aspecto específico, a sequência promotora como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é promotor de vaccinia H6.
[0091]Ainda em outro aspecto específico, a sequência promotora como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é promotor de vaccinia I3L.
[0092]Ainda em outro aspecto específico, a sequência promotora como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é promotor poxviral 42k (longo).
[0093]Ainda em outro aspecto específico, a sequência promotora como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é promotor de vaccinia 7,5k.
[0094]Ainda em outro aspecto específico, A sequência promotora como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo é promotor de vaccinia Pi.
[0095]Ainda em outro aspecto específico, o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo ainda compreende sequências regulatórias adicionais, por exemplo, uma sequência sinalizadora de terminação e/ou de poliadenilação.
[0096]Ainda em outro aspecto específico, o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% idêntica à sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste no ID. DE SEQ. Nº: 49, ID. DE SEQ. Nº: 50, ID. DE SEQ. Nº: 51 e, preferivelmente, é a sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 49, ID. DE SEQ. Nº: 50, ID. DE SEQ. Nº: 51.
[0097]Ainda em outro aspecto específico, o felino como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo é um gato, preferivelmente um gato doméstico.
[0098]A presente invenção está relacionada a uma célula hospedeira de mamífero, caracterizada pelo fato de que ela compreende o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo.
[0099]A presente invenção está relacionada ao uso do vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo ou à célula hospedeira de mamífero como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo para a fabricação de uma composição imunogênica ou vacina.
[0100]A presente invenção está relacionada a uma composição imunogênica que compreende: (a) o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo ou a célula hospedeira de mamífero como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo, e/ou
(b) um polipeptídeo codificado pelo vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo, por exemplo, um vírus, um vírus vivo modificado, uma partícula semelhante a vírus (VLP) ou semelhantes, e (c) opcionalmente, um carreador ou excipiente aceitável para uso farmacêutico ou veterinário, preferivelmente o referido carreador sendo adequado para aplicação oral, intradérmica, intramuscular ou intranasal; em que, preferivelmente, a referida composição imunogênica compreende um vírus, por exemplo, um vírus infeccioso.
[0101]A presente invenção está relacionada a uma vacina ou composição farmacêutica que compreende: (a) o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo ou a célula hospedeira de mamífero como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo, e/ou (b) um polipeptídeo codificado pelo vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo, por exemplo, um vírus, um vírus vivo modificado, uma partícula semelhante a vírus (VLP) ou semelhantes, e (c) um carreador ou excipiente aceitável para uso farmacêutico ou veterinário, preferivelmente o referido carreador sendo adequado para aplicação oral, intradérmica, intramuscular ou intranasal, (d) opcionalmente, a referida vacina ou composição farmacêutica ainda compreendendo um adjuvante.
[0102]A presente invenção está relacionada a um método para a preparação de uma composição imunogênica ou de uma vacina para redução da incidência e/ou da severidade de um ou mais sinais clínicos associados ou causados por uma infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico, que compreende as seguintes etapas: (a) infecção da célula hospedeira de mamífero como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo com o vetor viral como descrito e reivindicado nesse relatório descritivo, (b) cultivo das células infectadas sob condições adequadas, (c) coleta das culturas das células infectadas, (d) opcionalmente, purificação das culturas das células infectadas coletadas da etapa (c), (e) opcionalmente, mistura da referida cultura das células infectadas coletada com um carreador farmaceuticamente aceitável.
[0103]A presente invenção está relacionada à composição imunogênica como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo ou à vacina como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo para uso em um método de redução ou prevenção dos sinais clínicos ou doença causados por uma infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico ou para uso em um método de tratamento e/ou prevenção de uma infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico, em que, preferivelmente, o referido felino é um gato, mais preferivelmente um gato doméstico, em que, preferivelmente, o pelo menos um paramixovírus patogênico é pelo menos um paramixovírus felino, em que preferivelmente os referidos sinais clínicos ou doença causados por uma infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico ou pela referida infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico são selecionados do grupo que consiste em: viremia, febre, excreção viral no ambiente, infecções do sistema urogenital, infecções do sistema urinário, doença renal, doença renal crônica (CKD), inflamação dos túbulos renais e tecido intersticial renal, nefrite túbulo-intersticial idiopática (TIN).
[0104]A presente invenção está relacionada a um método de imunização de um felino, por exemplo, um gato, mais preferivelmente um gato doméstico, contra uma doença clínica causada por pelo menos um paramixovírus patogênico no referido felino, o método compreendendo a etapa de administração ao felino da composição imunogênica como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo ou da vacina como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo, em que a referida composição imunogênica ou vacina não causa sinais clínicos de infecção, mas é capaz de induzir uma resposta imune que imuniza o felino contra formas patogênicas do referido pelo menos um paramixovírus, em que, preferivelmente, o pelo menos um paramixovírus patogênico é pelo menos um paramixovírus felino, em que, preferivelmente, a referida doença clínica ou os referidos sinais clínicos de infecção são selecionados do grupo que consiste em: viremia, febre, excreção viral no ambiente, infecções do sistema urogenital, infecções do sistema urinário, doença renal, doença renal crônica (CKD), inflamação dos túbulos renais e tecido intersticial renal, nefrite túbulo-intersticial idiopática (TIN).
[0105]A presente invenção está relacionada a um kit para vacinação de um felino, preferivelmente um gato, mais preferivelmente um gato doméstico, contra uma doença e ele associada e/ou para redução da incidência ou da severidade de um ou mais sinais clínicos associados ou causados por pelo menos um paramixovírus patogênico em um felino que compreende: (a) um dispensador capaz de administrar uma vacina ao referido felino; e (b) a composição imunogênica como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo ou a vacina como descrita e reivindicada nesse relatório descritivo, e (c) opcionalmente, um folheto de instruções; em que, preferivelmente, o pelo menos um paramixovírus patogênico é pelo menos um paramixovírus felino, em que, preferivelmente, a referida doença ou os referidos sinais clínicos são selecionados do grupo que consiste em: viremia, febre, excreção viral no ambiente, infecções do sistema urogenital, infecções do sistema urinário, doença renal, doença renal crônica (CKD), inflamação dos túbulos renais e tecido intersticial renal, nefrite túbulo-intersticial idiopática (TIN).
DEFINIÇÕES
[0106]Salvo definição em contrário, todos os termos técnicos e científicos usados nesse relatório descritivo possuem os mesmos significados como comumente subentendidos por aqueles habilitados na técnica à qual essa invenção pertence no momento do depósito. O significado e escopo dos termos devem ser claros; no entanto, no caso de qualquer ambiguidade latente, as definições fornecidas nesse relatório descritivo assumem precedente sobre qualquer definição do dicionário ou extrínseca. Além disso, salvo quanto exigido pelo contexto, os termos no singular devem incluir os plurais e termos no plural devem incluir o singular. Aqui, o uso de “ou” significa “e/ou”, a menos que seja afirmado o contrário. Além disso, o uso do termo “incluindo”, bem como outras formas como, por exemplo, “inclui” e “incluído”, não é limitante. Todas as patentes e publicações referidas nesse relatório descritivo são incorporadas por referência nesse relatório descritivo.
[0107]A prática da presente invenção empregará, salvo indicação em contrário, técnicas convencionais de virologia, biologia molecular, microbiologia, tecnologia de DNA recombinante, química de proteínas e imunologia, que fazem parte dos conhecimentos da técnica. Essas técnicas são explicadas em sua totalidade na literatura. Veja, por exemplo, Sambrook, Fritsch e Maniatis, “Molecular Cloning: A Laboratory Manual”, Vols. I, II e III, Segunda Edição (1989); “DNA Cloning”, Vols. I e II (D. N. Glover ed. 1985); “Oligonucleotide Synthesis” (M.J. Gait ed. 1984); “Nucleic Acid Hybridization” (B.D. Hames e S.J. Higgins eds. 1984); “Animal Cell Culture” (R.K. Freshney ed. 1986); “Immobilized Cells and Enzymes” (IRL press, 1986); Perbal, B., “A Practical Guide to Molecular Cloning” (1984); a série, “Methods In Enzymology” (S. Colowick e N. Kaplan eds., Academic Press, Inc.); “Protein Purification Methods – a Practical Approach” (E.L.V. Harris e S. Angal, eds., IRL Press at Oxford University Press); e “Handbook of Experimental Immunology”, Vols. I-IV (D. M. Weir e C. C. Blackwell eds., 1986, Blackwell Scientific Publications).
[0108]Antes da descrição da presente invenção em detalhe, deve ser subentendido que essa invenção não está limitada às sequências de DNA, de polipeptídeos ou parâmetros de processo particulares, na medida em que esses, evidentemente, variam. Também está subentendido que a terminologia usada nesse relatório descritivo tem a finalidade única de descrever modalidades particulares da invenção, e não visa ser limitante. Deve ser observado que, como usadas nesse relatório descritivo e nas reivindicações em anexo, as formas no singular “um”, “o”, “uma” e “a” incluem referentes no plural, a menos que o conteúdo determine claramente o contrário. Dessa forma, por exemplo, referência a “um antígeno” inclui uma mistura de dois ou mais antígenos, referência a “um excipiente” inclui misturas de dois ou mais excipientes e semelhantes.
[0109]O termo “vetor”, como é conhecido na técnica, se refere a uma construção de polinucleotídeo, tipicamente um plasmídeo ou um cromossomo artificial bacteriano, usada para transmitir material genético a uma célula hospedeira. Vetores podem ser, por exemplo, bactérias, vírus, fagos, cromossomos artificiais bacterianos, cosmídeos ou plasmídeos. Um vetor, como usado nesse relatório descritivo, pode ser composto por ou conter DNA ou RNA. Em algumas modalidades, um vetor é composto por DNA. Em algumas modalidades, um vetor é um vírus infeccioso. Esse vetor viral contém um genoma viral que foi manipulado de modo a carregar um gene estranho que não possui função na replicação do vetor viral nem em cultura de células nem em um animal hospedeiro. De acordo com aspectos específicos da presente revelação, um vetor pode ser usado para vários aspectos como mera transmissão de material genético, para a transfecção de células ou organismos hospedeiros, para uso como vacinas, por exemplo, vacinas de DNA, ou para fins de expressão gênica. Expressão gênica é um termo que descreve a biossíntese de uma proteína em uma célula como dirigida por uma sequência de polinucleotídeos específica denominada gene. Em um aspecto específico, um vetor pode ser um “vetor de expressão”, que é um vetor que é capaz de dirigir a expressão de uma proteína codificada por um ou mais genes carregados pelo vetor quando está presente no ambiente apropriado.
[0110]Vetores e métodos para produção e/ou utilização de vetores (ou recombinantes) para expressão pode ser por ou análogos aos métodos revelados nas Patentes U.S. Nos
4.603.112, 4.769.330, 5.174.993, 5.505.941, 5.338.683,
5.494.807, 4.722.848, 5.942.235, 5.364.773, 5.762.938,
5.770.212, 5.942.235, 382.425, Publicações PCT WO 94/16716, WO 96/39491, WO 95/30018; Paoletti, “Applications of Pox Virus Vectors to Vaccination: An update”, “PNAS USA 93: 11349-11353, Outubro de 1996; Moss, “Genetically Engineered Poxviruses for Recombinant Gene Expression, Vaccination, and Safety”, PNAS USA 93: 11.341-11.348, Outubro de 1996; Smith e cols., Patente U.S. Nº 4.745.051 (baculovírus recombinante); Richardson, C.D. (Editor), “Methods in Molecular Biology” 39, “Baculovirus Expression Protocols” (1995 Humana Press Inc.); Smith e cols., “Production of Human Beta Interferon in Insect Cells Infected with a Baculovirus Expression Vector”, Molecular and Cellular Biology, Dezembro, 1983, Vol. 3, Nº 12, páginas 2.156-2.165; Pennock e cols., “Strong and Regulated Expression of Escherichia coli B-Galactosidase in Infect Cells with a Baculovirus Vector”, Molecular and Cellular Biology Março de 1984, Vol. 4, Nº 3, página 406; EPA0 370 573; Pedido U.S. Nº 920.197, depositado em 16 de outubro de 1986; Publicação de Patente EP Nº 265785; Patente U.S. Nº 4.769.331 (herpesvírus recombinante); Roizman, “The Function of Herpes Simplex Virus Genes: A Primer for Genetic Engineering of Novel Vectors”, PNAS USA 93: 11.307-11.312, Outubro de 1996; Andreansky e cols., “The Application of Genetically Engineered Herpes Simplex Viruses to the Treatment of Experimental Brain Tumors”, PNAS USA 93: 11.313-11.318, Outubro de 1996; Robertson e cols., “Epstein-Barr Virus Vectors for gene Delivery to B Lymphocytes”, PNAS USA 93:
11.334-11.340, Outubro de 1996; Frolov e cols., “Alphavirus- Based Expression Vectors: Strategies and Applications”, PNAS USA 93: 11.371-11.377, Outubro de 1996; Kitson e cols., J. Virol. 65, 3.068-3.075, 1991; Patentes U.S. Nos 5.591.439,
5.552.143; WO 98/00166; Pedido U.S. Permitidos Nos de Série 08/675.556,, e 08/675.566, ambos depositados em 3 de julho de 1996 (adenovírus recombinante); Grunhaus e cols., 1992, “Adenovirus as Cloning Vectors”, “Seminars in Virology” (Vol. 3) páginas 237-52, 1993; Ballay e cols. EMBO Journal, vol. 4, páginas 3.861-65, Graham, Tibtech 8, 85-87, Abril, 1990; Prevec e cols., J. Gen Virol. 70, 42.434; PCT WO 91/11525; Felgner e cols. (1994), J. Biol. Chem. 269, 2.550-
2.561, Science, 259: 1.745-49, 1993; e McClements e cols., “Immunization with DNA Vaccines Encoding Glycoprotein D or Glycoprotein B, alone or in Combination, Induces Protective Immunity in Animal Models of Herpes Simplex Virus-2 Disease”, PNAS USA 93: 11.414-11.420, Outubro de 1996; e Patentes U.S. Nos 5.591.639, 5.589.466 e 5.580.859, bem como WO 90/11092, WO 93/19183, WO 94/21797, WO 95/11307, WO 95/20660; Tang e cols., Nature, e Furth e cols., “Analytical Biochemistry, Relating to DNA Expression Vectors, inter alia”. Veja também WO 98/33510; Ju e cols., Diabetologia, 41: 736-739, 1998
(sistema de expressão lentiviral); Sanford e cols., Patente U.S. Nº 4.945.050; Fischbache cols. (Intracel); WO 90/01543; Robinson e cols., “Seminars in Immunology” vol. 9, páginas 271-283 (1997), (sistemas do vetor de DNA); Szoka e cols., Patente U.S. Nº 4.394.448 (método de inserção de DNA em células vivas); McCormick e cols., Patente U.S. Nº 5.677.178 (uso de vírus citopáticos); e Patente U.S. Nº 5.928.913 (vetores para liberação de genes); bem como outros documentos citados nesse relatório descritivo.
[0111]O termo “vetor viral” descreve um vírus geneticamente modificado que foi manipulado por técnica de DNA recombinante de tal modo que sua entrada em uma célula hospedeira resulte em uma atividade biológica específica, por exemplo, a expressão de um transgene carregado pelo vetor. Em um aspecto específico, o transgene é um antígeno. Um vetor viral pode ou não ser replicação-competente na célula, tecido ou organismo-alvo.
[0112]A geração de um vetor viral pode ser obtida por utilização de qualquer técnica de engenharia genética adequada bem conhecida na técnica, incluindo, sem limitação, as técnicas-padrão de digestão com endonuclease de restrição, ligação, transformação, purificação de plasmídeo, sequenciamento de DNA, transfecção em culturas de células, por exemplo, como descrito em Sambrook e cols. (“Molecular Cloning: A Laboratory Manual”, Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y. (1989)) ou K. Maramorosch e H. Koprowski (“Methods in Virology”, Volume VIII, Academic Press Inc. Londres, Reino Unido (2014)).
[0113]Um vetor viral pode incorporar sequências do genoma de qualquer organismo conhecido. As sequências podem ser incorporadas em sua forma nativa ou podem ser modificadas em qualquer forma para obter uma atividade desejada. Por exemplo, as sequências podem compreender inserções, deleções ou substituições.
[0114]Um vetor viral pode incluir regiões codificadoras para duas ou mais proteínas de interesse. Por exemplo, o vetor viral pode incluir a região codificadora para uma primeira proteína de interesse e a região codificadora para uma segunda proteína de interesse. A primeira proteína de interesse e a segunda proteína de interesse podem ser iguais ou diferentes. Em algumas modalidades, o vetor viral pode incluir a região (ou regiões) codificadora para uma terceira ou uma quarta proteína de interesse. A terceira e quarta proteína de interesse podem ser iguais ou diferentes. O comprimento total das duas ou mais proteínas de interesse codificadas por um vetor viral pode variar. Por exemplo, o comprimento total das duas ou mais proteínas pode ser pelo menos cerca de 200 aminoácidos. Pelo menos cerca de 250 aminoácidos, pelo menos cerca de 300 aminoácidos, pelo menos cerca de 350 aminoácidos, pelo menos cerca de 400 aminoácidos, pelo menos cerca de 450 aminoácidos, pelo menos cerca de 500 aminoácidos, pelo menos cerca de 550 aminoácidos, pelo menos cerca de 600 aminoácidos, pelo menos cerca de 650 aminoácidos, pelo menos cerca de 700 aminoácidos, pelo menos cerca de 750 aminoácidos, pelo menos cerca de 800 aminoácidos, ou mais longas.
[0115]Vetores virais preferidos incluem vetor viral de vírus avipox, vetor viral de morbilivírus canino, vetor viral de vírus herpes e vetor viral do vírus da varicela.
[0116]De acordo com aspectos específicos da presente invenção, o termo “vetor viral” ou, alternativamente, “construção viral” se refere a uma construção viral recombinante derivada de um vírus, que é selecionado do vetor viral de vírus avipox, vetor viral de morbilivírus canino, vetor viral de vírus herpes e vetor viral do vírus da varicela. Vetores virais preferidos incluem vetores virais de vírus avipox, por exemplo, ALVAC e TROVAC.
[0117]De acordo com aspectos específicos da presente invenção, o termo “vetor viral de vírus avipox” ou, alternativamente, “vetor de avipox viral” se refere aos sistemas de vetor que são baseados em vírus avipox, que são poxvírus com hospedeiros naturalmente restritos. Entre esses vírus avipox, o vírus canarypox (CPV) foi modificado geneticamente para expressar produtos gênicos exógenos, estranhos, heterólogos, extrínsecos. Especificamente, ALVAC é um vetor de poxvírus modificado geneticamente derivado de vírus canarypox (US 5.756.103, cuja revelação é incorporada nesse relatório descritivo por referência). ALVAC é um vetor baseado no vírus canarypox atenuado que era um derivado clonado em placa da vacina humana contra canarypox, Kanapox. Esse vetor de avipox está restrito às espécies aviárias para replicação produtiva e não replica produtivamente em hospedeiros não aviários, uma característica que supostamente aumenta seu perfil de segurança. Em culturas em célula humana, a replicação do vírus canarypox é abortada precocemente no ciclo de replicação viral antes da síntese de DNA viral. No entanto, quando modificado geneticamente para expressar imunógenos extrínsecos, expressão e processamento autênticos são observados in vitro em células de mamíferos e a inoculação em várias espécies mamíferas induz respostas imunes de anticorpo e celular ao imunógeno extrínseco e fornece proteção contra o ataque com o patógeno cognato. ALVAC foi depositado sob os termos do Tratado de Budapeste com a “American Type Culture Collection” (ATCC) sob o número de acesso VR-2547 (US 5.756.103, cuja revelação é incorporada nesse relatório descritivo por referência). Vetores ALVAC derivados do depósito ALVAC ATCC VR-2547 de acordo com a presente invenção compreendem vCP3025 e vCP3029, que incluem os loci de inserção C3 e C5 como o vetor ALVAC ATCC VR-2547 depositado parental. TROVAC se refere a um vetor de vírus da bouba aviária atenuado que era um isolado clonado em placa derivado da cepa de vacina - FP1 do vírus da bouba aviária que é licenciado para vacinação de pintos de 1 dia de idade (US 5.766.599, cuja revelação é incorporada nesse relatório descritivo por referência). A cepa de vírus parental Duvette foi obtida na França como uma crosta de vírus da bouba aviária de uma galinha. O vírus foi atenuado por aproximadamente 50 passagens seriais em ovos embrionados de galinha, seguidas por 25 passagens em células de fibroblastos de embrião de galinha. O vírus foi submetido a quatro purificações em placa sucessivas. Um isolado da placa foi ainda amplificado em células CEF primárias e um vírus de estoque, designado TROVAC, estabelecido. TROVAC foi depositado sob os termos do Tratado de Budapeste com a “American Type Culture Collection” (ATCC) sob o número de acesso VR-2553 (US 5.766.599, cuja revelação é incorporada nesse relatório descritivo por referência).
[0118]Os termos “viral vetor” e “construção viral” podem ser usados de forma intercambiável.
[0119]O termo “construção”, como usado nesse relatório descritivo, se refere a um ácido nucleico recombinante como, por exemplo, um plasmídeo, um BAC ou um vírus recombinante, que foi gerado artificialmente.
[0120]O termo “plasmídeo” se refere um DNA citoplasmático que se replica independentemente do cromossomo bacteriano dentro de uma célula hospedeira bacteriana. Em um aspecto específico da presente invenção, o termo “plasmídeo” e/ou “plasmídeo de transferência” se refere a um elemento de tecnologia de DNA recombinante útil para construção, por exemplo, de um cassete de expressão para inserção em um vetor viral. Em outro aspecto específico, o termo “plasmídeo” pode ser usado para especificar um plasmídeo útil para fins de vacinação de DNA.
[0121]Como usados nesse relatório descritivo, os termos “ácido nucleico” e “polinucleotídeo” são intercambiáveis e se referem a qualquer ácido nucleico.
[0122]Os termos “ácido nucleico”, “sequência de ácidos nucleicos”, “sequência de nucleotídeos”, “polinucleotídeo”, “sequência de polinucleotídeos”, “sequência de RNA”, sequências de cDNA ou “sequência de DNA”, como usados nesse relatório descritivo, se referem a um oligonucleotídeo, nucleotídeo ou polinucleotídeo e fragmentos e porções destes e ao DNA ou RNA de origem genômica ou sintética, que pode ser de fita simples ou dupla e representam a fita senso ou anti-senso. A sequência pode ser uma sequência não codificadora, uma sequência codificadora ou uma mistura de ambas. As sequências de ácidos nucleicos da presente invenção podem ser preparadas com o uso de técnicas-padrão bem conhecidas por aqueles habilitados na técnica.
[0123]Os termos “ácido nucleico” e “polinucleotídeo”
também especificamente incluem ácidos nucleicos compostos por bases diferentes das cinco bases que ocorrem biologicamente (adenina, guanina, timina, citosina e uracila).
[0124]Os termos “ácido nucleico regulatório”, “elemento regulatório” e “elemento de controle da expressão” são usados de forma intercambiável e se referem às moléculas de ácido nucleico que podem influenciar a expressão de uma sequência codificadora ligada operativamente em um organismo hospedeiro particular. Esses termos são usados amplamente para cobrir todos os elementos que promovem ou regulam a transcrição, incluindo promotores, sequências promotoras, elementos centrais necessários à interação básica de RNA polimerase e fatores de transcrição, elementos a montante, intensificadores e elementos de resposta. Elementos regulatórios exemplares em procariotas incluem promotores, sequências operadoras e sítios de ligação ao ribossomo. Elementos regulatórios que são usados em células eucarióticas podem incluir, sem limitação, sequências de controle da transcrição e tradução, por exemplo, promotores, intensificadores, sinais de splicing, sinais de poliadenilação, terminadores, sinais de degradação de proteína, sítios internos de entrada do ribossomo (IRES), sequências 2A de picornavírus e semelhantes, que fornecem e/ou regulam a expressão de uma sequência codificadora e/ou a produção de um polipeptídeo codificado em uma célula hospedeira.
[0125]Um “sítio interno de entrada do ribossomo” ou “IRES” descreve uma sequência que promove funcionalmente a iniciação da tradução independente do gene 5’ do IRES e permite que dois cístrons (quadros de leitura aberta) sejam traduzidos a partir de um único transcrito em uma célula animal.
O IRES fornece um sítio de entrada do ribossomo independente para a tradução do quadro de leitura aberta imediatamente a jusante dele.
Diferentemente do mRNA bacteriano que pode ser policistrônico, ou seja, codificar vários polipeptídeos diferentes que são traduzidos sequencialmente pelos mRNAs, a maioria dos mRNAs de células animais é monocistrônica e codifica a síntese de apenas um polipeptídeo.
Com um transcrito policistrônico em uma célula eucariótica, a tradução se iniciaria a partir do sítio de tradução mais 5’, terminaria no primeiro códon de parada, e o transcrito seria liberado pelo ribossomo, resultando na tradução apenas do primeiro polipeptídeo codificado no mRNA.
Em uma célula eucariótica, um transcrito policistrônico que possui um IRES ligado operativamente ao segundo quadro de leitura aberta ou no quadro de leitura aberta subsequente no transcrito permite a tradução sequencial daquele quadro de leitura aberta a jusante para produzir os dois ou mais polipeptídeos codificados pelo mesmo transcrito.
O IRES pode ser de comprimento variável e de várias fontes, por exemplo, vírus da encefalomiocardite (EMCV), picornavírus (por exemplo, vírus da febre aftosa, FMDV ou vírus da pólio (PV), ou vírus da Hepatite C (HCV). Várias sequências de IRES e seu uso na construção de vetor foram descritos e são bem conhecidos na técnica.
A sequência codificadora a jusante está ligada operativamente à extremidade 3’ do IRES em qualquer distância que não afetará negativamente a expressão do gene a jusante.
A distância ótima ou permissível entre o IRES e o início do gene a jusante pode ser prontamente determinada por variação da distância e medição da expressão em função da distância.
[0126]O termo “2a” ou “peptídeo 2a” significa sequências de oligopeptídeos curtas, descritas como 2a e ‘2a-like’, servem como ligantes que são capazes de mediar uma clivagem co-tradução entre proteínas por um processo definido como ribosomal-skipping. Essas sequências de 2a e ‘2a-like’ (de Picornaviridae e outros vírus ou sequências celulares) podem ser usadas para concatenar múltiplas sequências gênicas em um único gene, assegurando sua co- expressão dentro da mesma célula (veja Luke e Ryan, 2013).
[0127]Como usado nesse relatório descritivo, o termo “promotor” ou “sequência promotora” significa uma sequência de nucleotídeos que permite a ligação de RNA polimerase e dirige a transcrição de um gene. Tipicamente, um promotor está localizado na região não codificadora 5’ de um gene, proximal ao sítio de início da transcrição do gene. Os elementos de sequência dentro de promotores que funcionam na iniciação da transcrição são frequentemente caracterizados por sequências de nucleotídeos de consenso. Exemplos de promotores incluem, sem limitação, promotores de bactérias, levedura, plantas, vírus e animais como, por exemplo, mamíferos (incluindo cavalos, porcos, gado e humanos), pássaros ou insetos. Um promotor pode ser induzível, reprimível e/ou constitutivo. Promotores induzíveis iniciam níveis aumentados de transcrição por DNA sob seu controle em resposta a alguma alteração nas condições de cultura, por exemplo, uma alteração na temperatura (Ptashne, 2014). Exemplos de promotores bem conhecidos por aqueles habilitados na técnica são, por exemplo, T grande do SV40,
gene precoce imediato 1 do HCMV e MCMV, promotor do fator de alongamento humano alfa, promotor de poliedrina de baculovírus.
[0128]Como usado nesse relatório descritivo no contexto da presente invenção, o termo “promotor” se refere especialmente a um promotor (sequência) fraco, preferivelmente promotor de vaccinia H6, promotor de vaccinia I3L, promotor poxviral 42k (longo), promotor de vaccinia 7.5k e/ou promotor de vaccinia Pi, ou a sequência de nucleotídeos complementar deste, preferivelmente a identidade de sequência é de (pelo menos) 72% sobre todo o comprimento (ou maior).
[0129]O termo “intensificador” denota uma sequência de polinucleotídeos que, na localização cis, atua sobre a atividade de um promotor e, dessa forma, estimula a transcrição de um gene ou sequência codificadora funcionalmente conectada a esse promotor. Diferentemente de promotores, o efeito de intensificadores é independente da posição e orientação e podem, portanto, estar posicionados na frente ou atrás de uma unidade de transcrição, dentro de um íntron ou até mesmo dentro da região codificadora. O intensificador pode estar localizado tanto nos arredores imediatos da unidade de transcrição quanto a uma distância considerável do promotor. Também é possível ter uma superposição física e funcional com o promotor. Aqueles habilitados na técnica conhecerão diversos intensificadores de várias fontes (e depositados em bancos de dados como, por exemplo, GenBank, por exemplo, intensificadores de SV40, intensificadores de CMV, intensificadores de polioma, intensificadores de adenovírus) que estão disponíveis como elementos independentes ou elementos clonados dentro de sequências de polinucleotídeos (por exemplo, depositados na ATCC ou de fontes comerciais e individuais). Diversas sequências promotoras também contêm sequências intensificadoras como, por exemplo, o promotor de CMV frequentemente usado. O intensificador de CMV humano ´r um dos intensificadores mais fortes até agora identificados. Um exemplo de um intensificador induzível é o intensificador de metalotioneína, que pode ser estimulado por glicocorticoides ou metais pesados.
[0130]O termo “sequências de nucleotídeos complementares” descreve uma fita das duas fitas pareadas de polinucleotídeos como, por exemplo, DNA ou RNA. A sequência de nucleotídeos da fita complementar espelha a sequência de nucleotídeos de sua fita pareada, de modo que, for cada adenosina, ela contém uma timina (ou uracila para RNA), para cada guanina a citosina, e vice-versa. A sequência de nucleotídeos complementar de, por exemplo, 5’-GCATAC-3’ é 3’-CGTATG-5’ ou para RNA 3’-CGUAUG-5’.
[0131]Os termos “gene”, “gene de interesse”, como usados nesse relatório descritivo, possuem o mesmo significado e se referem a uma sequência de polinucleotídeos de qualquer comprimento que codifica um produto de interesse. O gene pode ainda compreender sequências regulatórias que precedem (sequências não codificadoras ou não traduzidas 5’) e sucedem (sequências não codificadoras ou não traduzidas 3’) a sequência codificadora. A sequência selecionada pode ser de comprimento total ou truncada, uma fusão ou gene marcado, e pode ser um cDNA, um DNA genômico, ou um fragmento de DNA. É geralmente subentendido que DNA genômico que codifica um polipeptídeo ou RNA pode incluir regiões não codificadoras (ou seja, íntrons) que são emendadas de RNA mensageiro (mRNA) maduro e, portanto, não estão presentes em cDNA que codifica o mesmo polipeptídeo ou RNA. Ela pode ser a sequência nativa, ou seja, a forma (ou formas) de ocorrência natural, ou pode ser mutada, ou compreendendo sequências derivadas de fontes diferentes ou de algum outro modo modificadas como desejado. Essas modificações incluem otimizações de códons para otimizar o uso de códon na célula hospedeira selecionada ou marcação. Além disso, elas podem incluir remoção ou adições de sítios cis-atuantes como, por exemplo, sítios doadores de splice (crípticos), sítios aceptores de splice e pontos de ramificação, sinais de poliadenilação, TATA-boxes, sítios-chi, sítios de entrada do ribossomo, sequências de repetição, estruturas secundárias (por exemplo, haste-alças), sítios de ligação para fatores de transcrição ou outros fatores regulatórios, sítios de enzima de restrição etc., para citar apenas alguns exemplos, mas não limitantes. A sequência selecionada pode codificar um polipeptídeo secretado, citoplasmático, nuclear, ligado à membrana ou da superfície da célula.
[0132]O termo “sequência de nucleotídeos de interesse”, como usado nesse relatório descritivo, é um termo mais geral do que gene de interesse, na medida em que ele não compreende necessariamente um gene, mas pode compreender elementos ou partes de um gene ou outra informação genética, por exemplo, ori (origem de replicação). Uma sequência de nucleotídeos de interesse pode ser qualquer sequência de DNA ou RNA independentemente se ela compreende uma sequência codificadora ou não.
[0133]“Quadro de leitura aberta” ou “ORF” se refere a um comprimento de sequência de ácidos nucleicos, DNA ou RNA, que compreende um sinal de início ou códon de iniciação de tradução, por exemplo, um ATG ou AUG, e um códon de terminação, e pode ser potencialmente traduzido em uma sequência de polipeptídeos.
[0134]O termo “transcrição” descreve a biossíntese de mRNA em uma célula.
[0135]O termo “expressão”, como usado nesse relatório descritivo, se refere à transcrição e/ou tradução de uma sequência de ácidos nucleicos dentro de uma célula hospedeira. De acordo com aspectos específicos da presente invenção, o termo “expressão” se refere à transcrição e/ou tradução de uma sequência de ácidos nucleicos heteróloga e/ou exógena dentro de uma célula hospedeira. O nível de expressão de um produto desejado em uma célula hospedeira pode ser determinado com base na quantidade de RNA ou mRNA correspondente que está presente na célula, ou na quantidade do polipeptídeo codificado desejado pela sequência selecionada. Por exemplo, mRNA transcrito por uma sequência selecionada pode ser quantificado por hibridização Northern blot, proteção de RNA de ribonuclease, hibridização in situ para RNA celular ou por RTqPCR (transcrição reversa seguida por PCR quantitativa). Proteínas expressas por uma sequência selecionada podem ser quantificadas por vários métodos, por exemplo, por ELISA, por Western blotting, por radioimunoensaios, por imunoprecipitação, por avaliação da atividade biológica da proteína, ou por imunocoloração da proteína, seguida por análise por FACS.
[0136]O termo “cassete de expressão” ou “unidade de transcrição” ou “unidade de expressão” define uma região dentro de um vetor, construção ou sequência de polinucleotídeos que contém um ou mais genes a serem transcritos, em que as sequências de nucleotídeos que codificam o gene (ou genes) transcrito, bem como as sequências de polinucleotídeos que contêm os elementos regulatórios contidos dentro de um cassete de expressão, estão operativamente ligadas umas às outras. Elas são transcritas por um promotor e a transcrição é terminada por pelo menos um sinal de poliadenilação. Em um aspecto específico, elas são transcritas por um único promotor. Como resultado, os diferentes genes são pelo menos transcricionalmente ligados. Mais de uma proteína ou produto pode ser transcrito e expresso por cada unidade de transcrição (unidade de transcrição multicistrônica). Cada unidade de transcrição compreenderá os elementos regulatórios necessários para a transcrição e tradução de qualquer uma das sequências selecionadas que estão contidas dentro da unidade; e cada unidade de transcrição pode conter os mesmos elementos regulatórios ou elementos regulatórios diferentes. Por exemplo, cada unidade de transcrição pode conter o mesmo terminador, elemento de IRES ou íntrons podem ser usados para a ligação funcional dos genes dentro de uma unidade de transcrição. Um vetor ou sequência de polinucleotídeos pode conter mais do que uma unidade de transcrição.
[0137]Pelo termo “expressão aumentada”, “titulação ou produtividade aumentada” ou “expressão ou produtividade aumentada” significa o aumento na expressão, síntese ou secreção de uma sequência heteróloga e/ou exógena introduzida em uma célula hospedeira, por exemplo, de um gene que codifica uma proteína terapêutica, por comparação com um controle adequado, por exemplo, uma proteína codificada por um cDNA versus uma proteína codificada por um gene contendo um íntron.
Há titulação ou produtividade aumentada se uma célula de acordo com a invenção é cultivada de acordo com um método de acordo com a invenção descrito aqui, e se essa célula possui um aumento de pelo menos 1,2 vez, de 1,5 vez, de duas vezes, de três vezes, de quatro vezes ou de cinco vezes na produtividade ou titulação específica.
Também há titulação ou produtividade aumentada se uma célula de acordo com a invenção é cultivada de acordo com um método de acordo com a invenção descrito aqui, e se essa célula possui um aumento de pelo menos 1,2 vez ou de pelo menos 1,5 vez ou de pelo menos duas vezes ou pelo menos a três vezes na produtividade ou titulação específica.
Também há em particular titulação ou produtividade aumentada se uma célula de acordo com a invenção é cultivada de acordo com um método de acordo com a invenção descrito aqui, e se essa célula possui um aumento de pelo menos 1,2 vez a cinco vezes, preferivelmente de 1,5 vez a cinco vezes, mais preferivelmente de duas vezes a cinco vezes, particularmente preferivelmente de três vezes a cinco vezes na produtividade ou titulação específica. “Expressão aumentada” também pode significar que mais células estão realmente expressando o gene/sequência de interesse.
Por exemplo, expressão aumentada pode significar que os novos promotores da presente invenção são ativos por um período de tempo mais longo durante o ciclo de replicação viral em relação a outros promotores.
[0138]Uma expressão, titulação ou produtividade aumentada pode ser obtida por utilização de um vetor heterólogo de acordo com a invenção. Esse pode ser combinado com outras abordagens como, por exemplo, uma seleção assistida por FACS de células hospedeiras recombinantes que contêm, como marcador selecionável adicional, uma ou mais proteínas fluorescentes (por exemplo, GFP) ou um marcador da superfície celular. Outros métodos de obtenção de expressão aumentada, e uma combinação de diferentes métodos, também podem ser usados, e são baseados, por exemplo, no uso de elementos cis-ativos para manipulação da estrutura de cromatina (por exemplo, LCR, UCOE, EASE, isoladores, S/MARs, elementos STAR), no uso de fatores de transcrição (artificiais), tratamento das células com agentes naturais ou sintéticos para supra-regulação da expressão gênica endógena ou heteróloga e/ou exógena, aumento da estabilidade (meia-vida) de mRNA ou da proteína, aprimoramento da iniciação da tradução de mRNA, aumento da dose do gene pelo uso de plasmídeos epissômicos (com base no uso de sequências virais como origens de replicação, por exemplo, SV40, polioma, adenovírus, EBV ou BPV), no uso de sequências de amplificação-promoção ou sistemas de amplificação in vitro com base em concatâmeros de DNA.
[0139]Um ensaio para medir a “expressão aumentada” consiste em medições de proteína baseadas em LC-MS/MS como, por exemplo, monitoramento múltiplo de reação (MRM); métodos de detecção baseados em anticorpo como, por exemplo, Western blot, dot blot ou imunodifusão, e citometria de fluxo; e medidas de atividade biológica por ensaio de hemaglutinação.
[0140]A “atividade promotora” é medida indiretamente por quantificação de mRNA transcrito sob o controle do respectivo promotor. mRNA é quantificado por RTqPCR em relação a um padrão endógeno.
[0141]O termo “carga viral” é bem conhecido por aqueles habilitados na técnica. O termo carga viral é usado de forma intercambiável com o termo “titulação viral” nesse relatório descritivo. A carga viral ou titulação viral é uma medida da severidade de uma infecção viral ativa, e pode ser determinada por métodos conhecidos por aqueles habilitados na técnica. A determinação pode ser com base na detecção de proteínas virais como, por exemplo, por ligação de anticorpo às proteínas virais e detecção posterior ou, alternativamente, por detecção de ácidos nucleicos virais por métodos de amplificação como, por exemplo, RT-PCR. O monitoramento de vírion associado ao RNA viral no plasma por métodos de amplificação de ácido nucleico é um parâmetro amplamente usado para avaliar o estado e a progressão de doença retroviral, e para avaliar a efetividade de intervenções profiláticas e terapêuticas. Exemplarmente, a carga viral ou titulação viral pode ser calculada por estimativa da quantidade de vírus vivo em um fluido corporal envolvido, por exemplo, um número de cópias de RNA por mililitro de plasma sanguíneo. De preferência, o termo “carga viral” ou “titulação viral” é uma medida de unidades infecciosas por volume de uma preparação de vírus. A titulação viral é um ponto final em um procedimento biológico e é definida como a diluição na qual certa proporção de testes realizados em paralelo mostra um efeito (Reed e Muench, 1938). Especificamente, a dose infecciosa de cinquenta por mililitro (TCID50/ml) de cultura de tecido gera a diluição de uma preparação de vírus na qual 50% de diversas culturas de células inoculadas em paralelo com aquela diluição estão infectados.
[0142]“Elementos regulatórios da transcrição” normalmente compreendem um promotor a montante da sequência do gene a ser expressa, sítios de iniciação e terminação da transcrição e um sinal de poliadenilação.
[0143]O termo “sítio de iniciação da transcrição” se refere a um ácido nucleico na construção que corresponde ao primeiro ácido nucleico incorporado no transcrito primário, ou seja, o precursor de mRNA. O sítio de iniciação da transcrição pode se sobrepor com as sequências promotoras.
[0144]O “sinal de terminação” ou “terminador” ou “sinal de poliadenilação” ou “poliA” ou “sítio de terminação da transcrição” ou “elemento de terminação da transcrição” é uma sequência sinalizadora que causa clivagem em um sítio específico na extremidade 3’ do mRNA eucariótico e incorporação pós-transcricional de uma sequência de cerca de 100 - 200 nucleotídeos de adenina (cauda de poliA) na extremidade 3’ clivada e, dessa forma, faz com que a RNA polimerase termine a transcrição. O sinal de poliadenilação compreende a sequência AATAAA cerca de 10-30 nucleotídeos a montante do sítio de clivagem e uma sequência localizada a jusante. São conhecidos vários elementos de poliadenilação como, por exemplo, tk poliA, poliA de SV40 tardio e precoce, poliA de BGH (descrito, por exemplo, na Patente U.S. Nº
5.122.458) ou poliA de hormônio do crescimento de hamster (WO 2010010107).
[0145]“Elementos regulatórios da tradução” compreendem um sítio de iniciação da tradução (AUG), um códon de parada e um sinal poliA para cada polipeptídeo individual a ser expresso. Um sítio interno de entrada do ribossomo (IRES) pode ser incluído em algumas construções. A fim de otimizar a expressão, pode ser aconselhável remover, adicionar ou alterar regiões não traduzidas 5’ e/ou 3’ da sequência de ácidos nucleicos a ser expressa para eliminar quaisquer códons de iniciação da tradução alternativos extras potencialmente inapropriados ou outras sequências que possam interferir ou reduzir a expressão, no nível de transcrição ou tradução. Sítios de ligação ao ribossomo de consenso (sequência de Kozak) podem ser inseridos imediatamente a montante do códon de parada para aumentar a tradução e, dessa forma, a expressão. Teores de A/U aumentados em torno desse sítio de ligação ao ribossomo tornam a ligação ao ribossomo mais eficiente.
[0146]Por definição, cada sequência de polinucleotídeos ou cada gene inserido em uma célula hospedeira e a respectiva proteína ou RNA codificado por ela é referida como “exógena”, “sequência exógena”, “gene exógeno”, “sequência codificadora exógena”, “sequência que codifica um antígeno exógeno”, com relação à célula hospedeira, quando ela vem de uma espécie diferente (vírus). Consequentemente, os antígenos de paramixovírus felino da presente invenção são exógenos em relação a um vetor viral de vírus avipox, por exemplo, ALVAC. Como usado nesse relatório descritivo em relação a uma sequência ou gene de interesse como, por exemplo, um antígeno, o termo “exógeno” ou “sequência que codifica um antígeno exógeno” significa que a referida sequência ou gene de interesse, especificamente o referido antígeno, é expresso fora de seu contexto de espécie natural.
Consequentemente, o antígeno H da cepa “Gordon” FPaV-2 é um exemplo de um antígeno exógeno em relação ao vetor viral de vírus avipox, por exemplo, ALVAC. Qualquer sequência ou gene de interesse de paramixovírus felino como, por exemplo, um antígeno de paramixovírus felino é, portanto, uma sequência ou gene de interesse ou antígeno exógeno de acordo com um aspecto específico da presente invenção. Consequentemente, os antígenos de paramixovírus felino da presente invenção são exógenos em relação a um vetor viral de vírus avipox, por exemplo, ALVAC. Como usado nesse relatório descritivo em relação a uma sequência ou gene de interesse como, por exemplo, um antígeno, o termo “exógeno” ou “sequência que codifica um antígeno exógeno” significa que a referida sequência ou gene de interesse, especificamente o referido antígeno, é expresso fora de seu contexto de espécie natural. Consequentemente, o antígeno H da cepa “Gordon” FPaV-2 é um exemplo de um antígeno exógeno em relação ao vetor viral de vírus avipox, por exemplo, ALVAC. Qualquer sequência ou gene de interesse de paramixovírus felino como, por exemplo, um antígeno de paramixovírus felino é, portanto, uma sequência ou gene de interesse ou antígeno exógeno de acordo com um aspecto específico da presente invenção.
[0147]Por definição, cada sequência de polinucleotídeos ou cada gene inserido em uma célula hospedeira e a respectiva proteína ou RNA codificado por ela é referida como “heteróloga”, “sequência heteróloga”, “gene heterólogo”, “sequência codificadora heteróloga”, “transgene” ou “proteína heteróloga” com relação à célula hospedeira. Isso se aplica mesmo se a sequência a ser introduzida ou o gene a ser introduzido é idêntico a uma sequência endógena ou a um gene endógeno da célula hospedeira. Por exemplo, uma sequência promotora de ALVAC introduzida em um vetor viral ALVAC em um local diferente ou em forma modificada do que no vírus ALVAC do tipo selvagem é, por definição, uma sequência heteróloga. Como usado nesse relatório descritivo em relação a uma sequência ou gene de interesse como, por exemplo, um antígeno, o termo “heteróloga” significa que a referida sequência ou gene de interesse, especificamente o referido antígeno, é expresso fora de seu contexto de subespécie natural.
[0148]Consequentemente, qualquer sequência ou gene de interesse específico para paramixovírus felino como, por exemplo, um antígeno, por exemplo, um antígeno H da cepa “Gordon” FPaV-2, em relação a outro vetor viral de paramixovírus (felino), é, portanto, uma sequência ou gene de interesse ou antígeno heterólogo de acordo com um aspecto específico da presente invenção.
[0149]O termo “de ocorrência não natural” significa qualquer sequência ou gene de interesse como, por exemplo, um antígeno, que não ocorre nesse contexto naturalmente, por exemplo, uma sequência híbrida ou uma sequência ou gene de interesse como, por exemplo, um antígeno, de uma espécie diferente, ou sequência ou gene de interesse como, por exemplo, um antígeno, que não é um produto da natureza em função de mutação, inserção, deleção artificial ou semelhantes.
[0150]O termo “recombinante” é usado de forma intercambiável com os termos “de ocorrência não natural”, “heterólogo” e “exógeno” ao longo do relatório descritivo dessa presente invenção. Dessa forma, uma proteína
“recombinante” é uma proteína expressa por uma sequência de polinucleotídeos heteróloga ou exógena. O termo “recombinante”, como usado com relação a um vírus, significa um vírus produzido por manipulação artificial do genoma viral. Um vírus que compreende uma sequência heteróloga ou exógena como, por exemplo, uma sequência que codifica um antígeno exógeno, é um vírus recombinante. O termo “vírus recombinante” e o termo “vírus de ocorrência não natural” são usados de forma intercambiável.
[0151]Dessa forma, o termo “vetor heterólogo” significa um vetor que compreende uma sequência de polinucleotídeos heteróloga ou exógena. O termo “vetor recombinante” significa um vetor que compreende uma sequência de polinucleotídeos heteróloga ou recombinante.
[0152]Como usado nesse relatório descritivo, o termo “ligado operativamente” é usado para descrever a conexão entre elementos regulatórios e um gene ou sua região codificadora. Tipicamente, a expressão gênica está colocada sob o controle de um ou mais elementos regulatórios, por exemplo, sem limitação, promotores constitutivos ou induzíveis, elementos regulatórios tecido-específicos, e intensificadores. Um gene ou região codificadora é considerado como estando “ligado operativamente a” ou “ligado operativamente a” ou “associado operativamente com” os elementos regulatórios, o que significa que o gene ou região codificadora é controlado ou influenciado pelo elemento regulatório. Por exemplo, um promotor está ligado operativamente a uma sequência codificadora se o promotor efetua a transcrição ou expressão da sequência codificadora.
[0153]Além disso, dentro do escopo da presente descrição, os termos “ligação funcional”, “ligado funcionalmente” ou “ligado operativamente” significam que duas ou mais sequências de ácidos nucleicos ou elementos da sequência estão posicionados de uma forma que permite que eles funcionem da sua forma desejada.
Por exemplo, um promotor/intensificador ou terminador está ligado funcionalmente a uma sequência codificadora do gene se ele é capaz de controlar ou modular a transcrição da sequência do gene ligada na posição cis.
Geralmente, mas não necessariamente, as sequências de DNA que estão funcionalmente ligadas são contíguas e, quando é necessário unir duas regiões codificadoras de polipeptídeo ou, no caso de um peptídeo sinalizador de secreção, contíguas e em quadro de leitura.
No entanto, embora um promotor operativamente ligado esteja geralmente localizado a montante ou um terminador operativamente ligado esteja geralmente localizado a jusante da sequência codificadora, ele não é necessariamente contíguo com ela.
Intensificadores não precisam ser contíguos, desde que aumentem a transcrição da sequência codificadora.
Por isso eles podem estar localizados a montante ou a jusante da sequência codificadora e até mesmo a alguma distância.
Um sítio de poliadenilação está ligado operativamente a uma sequência codificadora caso esteja localizado na extremidade 3’ da sequência codificadora de modo que a transcrição proceda através da sequência codificadora para o sinal de poliadenilação.
A ligação é obtida por métodos recombinantes conhecidos na técnica, por exemplo, por ligação em sítios de restrição adequados ou extremidades rombas ou por utilização de metodologia de fusão por PCR.
Vinculadores ou adaptadores de oligonucleotídeos sintéticos podem ser usados de acordo com prática convencional caso sítios de restrição adequados não estejam presentes.
[0154]Consequentemente, o termo “fragmento ou derivado funcional” de uma sequência promotora significa que o fragmento ou derivado ainda efetua atividade promotora. Ensaios funcionais de como avaliar atividade promotora são bem conhecidos por aqueles habilitados na técnica (Bustin 2000, Nolan e cols. 2006). Uma modalidade exemplar de um ensaio funcional desse tipo inclui, por exemplo, um experimento de cinética de promotor. Células infectadas com vírus de vetor que carregam cassetes de expressão nos quais um promotor ou fragmento deste dirige a transcrição de um transgene repórter são incubadas por tempos diferentes. RNA total é preparado das amostras coletadas em tempos diferentes após infecção. Após destruição de DNA contaminante por digestão com DNAse I, o RNA é transcrito de forma reversa. Uma réplica da amostra é processada com adição de transcriptase reversa (RT), uma segunda réplica é processada sem adição de RT a fim de demonstrar a remoção bem-sucedida de DNA contaminante da preparação de RNA. O cDNA resultante é purificado e usado como modelo em uma PCR convencional. Somente as amostras processadas com a adição de RT devem produzir um produto de PCR. Esses cDNAs podem então ser usados para qPCR com iniciadores para o transgene repórter e, em paralelo, com iniciadores para um gene essencial do vetor viral (gene de padrão interno), cuja transcrição fornece um padrão interno para a eficiência de infecção e replicação. Os valores de qPCR do repórter são normalizados entre as diferentes construções e tempos após infecção usando os valores de qPCR do padrão interno gene. Isso permite uma interpretação de atividades promotoras de diferentes promotores e fragmentos destes.
[0155]O termo “homologia de sequência”, como usado nesse relatório descritivo, se refere a um método de determinação do parentesco de duas sequências. Para determinar a homologia de sequência, duas ou mais sequências são otimamente alinhadas, e lacunas são introduzidas, se necessário. No entanto, em contraste com “identidade de sequência”, substituições de aminoácidos conservativas são contadas como uma combinação quando da determinação homologia de sequência. Em outras palavras, para obter um polipeptídeo ou polinucleotídeo que possui 95% de homologia de sequência com uma sequência de referência, 85%, preferivelmente 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, ainda mais preferivelmente 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,9% dos resíduos de aminoácidos ou nucleotídeos na sequência de referência devem combinar ou compreender uma substituição conservativa com outro aminoácido ou nucleotídeo, ou um número de aminoácidos ou nucleotídeos até 15%, preferivelmente até 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, ainda mais preferivelmente até 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,1% dos resíduos de aminoácidos ou nucleotídeos totais, não incluindo substituições conservativas, na sequência de referência, podem ser inseridos na sequência de referência. De preferência, a sequência homóloga compreende pelo menos um trecho de 50, ainda mais preferido de 100, ainda mais preferido de 250, ainda mais preferido de 500 nucleotídeos.
[0156]O termo “identidade de sequência”, como é conhecido na técnica, se refere a um relacionamento entre duas ou mais sequências de polipeptídeos ou duas ou mais sequências de polinucleotídeos, especificamente uma sequência de referência e certa sequência a ser comparada com a sequência de referência.
A identidade de sequência é determinada por comparação da certa sequência com a sequência de referência após as sequências terem sido otimamente alinhadas para produzir o maior grau de similaridade de sequência, como determinada pela combinação entre trechos dessas sequências.
Após esse alinhamento, a identidade de sequência é verificada posição-por-posição, por exemplo, as sequências são “idênticas” em uma posição particular se, naquela posição, os nucleotídeos ou resíduos de aminoácidos são idênticos.
O número total de dessas identidades de posição é então dividido pelo número total de nucleotídeos ou resíduos na sequência de referência para gerar o % de identidade de sequência.
A identidade de sequência pode ser prontamente calculada por métodos conhecidos incluindo, sem limitação, aqueles descritos em “Computational Molecular Biology”, Lesk, A.N., ed., Oxford University Press, Nova York (1988), “Biocomputing: Informatics and Genome Projects”, Smith, D.W., ed., Academic Press, Nova York (1993); “Computer Analysis of Sequence Data”, Parte I, Griffin, A.M., e Griffin, H.G., eds., Humana Press, Nova Jersey (1994); “Sequence Analysis in Molecular Biology”, von Heinge, G., Academic Press (1987); “Sequence Analysis Primer”, Gribskov, M. e Devereux, J., eds., M.
Stockton Press, Nova York (1991); e Carillo, H., e Lipman, D., SIAM J.
Applied Math., 48: 1.073 (1988), cujos ensinamentos são incorporados nesse relatório descritivo por referência.
Métodos preferidos para determinar a identidade de sequência são projetados para gerar a maior combinação entre as sequências testadas.
Métodos para determinar a identidade de sequência estão codificados em programas de computador disponíveis publicamente que determinam a identidade de sequência entre certas sequências.
Exemplos desses programas incluem, sem limitação, a suíte de programas GCG (Devereux, J., e cols., Nucleic Acids Research, 12 (1): 387 (1984)), BLASTP, BLASTN e FASTA (Altschul, S.
F. e cols., J.
Molec.
Biol., 215: 403-410 (1990). O programa BLASTX está disponível publicamente por NCBI e outras fontes (“BLAST Manual”, Altschul, S. e cols., NCVI NLM NIH Bethesda, MD 20894, Altschul, S.F. e cols., J.
Molec.
Biol., 215: 403-410 (1990), cujos ensinamentos são incorporados nesse relatório descritivo por referência). Esses programas alinham otimamente sequências usando pesos de lacuna padronizados a fim de produzir o maior nível de identidade de sequência entre as certas e sequências de referência.
Como ilustração, por um polinucleotídeo que possui uma sequência de nucleotídeos que possui pelo menos, por exemplo, 85%, preferivelmente 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, ainda mais preferivelmente 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,9% de “identidade de sequência” para uma sequência de nucleotídeos de referência, significa que a sequência de nucleotídeos do certo polinucleotídeo é idêntica à sequência de referência, exceto que a certa sequência de polinucleotídeos pode incluir até 15, preferivelmente até 10, ainda mais preferivelmente até 5 mutações pontuais por cada 100 nucleotídeos da sequência de nucleotídeos de referência.
Em outras palavras, em um polinucleotídeo que possui uma sequência de nucleotídeos que possui pelo menos 85%, preferivelmente 90%,
91%, 92%, 93%, 94%, ainda mais preferivelmente 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,9% de identidade em relação à sequência de nucleotídeos de referência, até 15%, preferivelmente 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, ainda mais preferivelmente 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,1% dos nucleotídeos na sequência de referência podem ser deletados ou substituídos com outro nucleotídeo, ou diversos nucleotídeos até 15%, preferivelmente 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, ainda mais preferivelmente 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,1% dos nucleotídeos totais na sequência de referência podem ser inseridos na sequência de referência.
Essas mutações da sequência de referência podem ocorrer nas posições terminais 5’ ou 3’ da sequência de nucleotídeos de referência ou em qualquer lugar entre aquelas posições terminais, intercaladas individualmente entre nucleotídeos na sequência de referência ou em um ou mais grupos contíguos dentro da sequência de referência.
Analogamente, por um polipeptídeo que possui uma certa sequência de aminoácidos que possui pelo menos, por exemplo, 85%, preferivelmente 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, ainda mais preferivelmente 95%, 96%, 97%, 98%, 99% de identidade de sequência para uma sequência de aminoácidos de referência, significa que a certa sequência de aminoácidos do polipeptídeo é idêntica à sequência de referência, exceto que a certa sequência de polipeptídeos pode incluir até 15, preferivelmente até 10, 9, 8, 7, 6, ainda mais preferivelmente até 5, 4, 3, 2, 1 alterações de aminoácidos por cada 100 aminoácidos da sequência de aminoácidos de referência.
Em outras palavras, para obter uma certa sequência de polipeptídeos que possui pelo menos 85%, preferivelmente 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, ainda mais preferivelmente 95%, 96%, 97%, 98%, 99% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de referência, até 15%, preferivelmente até 10%, 9%, 8%, 7%, ainda mais preferivelmente até 5%, 4%, 3%, 2%, 1% dos resíduos de aminoácidos na sequência de referência podem ser deletados ou substituídos com outro aminoácido, ou diversos aminoácidos até 15%, preferivelmente até 10%, 9%, 8%, 7%, ainda mais preferivelmente até 5%, 4%, 3%, 2%, 1% do número total de resíduos de aminoácidos na sequência de referência podem ser inseridos na sequência de referência. Essas alterações da sequência de referência podem ocorrer nas posições terminais amino ou nas posições terminais carbóxi da sequência de aminoácidos de referência ou em qualquer lugar entre essas posições terminais, intercaladas individualmente entre resíduos na sequência de referência ou nos (um ou mais grupos) contíguos dentro da sequência de referência. De preferência, as posições de resíduos que não são idênticas diferem por substituições de aminoácidos conservativas. No entanto, substituições conservativas não são incluídas como uma combinação quando da determinação da identidade de sequência.
[0157]Os termos “identidade de sequência” ou “identidade percentual” são usados de forma intercambiável nesse relatório descritivo. Para o objetivo dessa invenção, é definido aqui que, a fim de determinar a identidade percentual de duas sequências de aminoácidos ou de duas sequências de ácidos nucleicos, as sequências são alinhadas para fins de comparação ótima (por exemplo, lacunas podem ser introduzidas na sequência de um primeiro aminoácido ou ácido nucleico para alinhamento ótimo com uma segunda sequência de aminoácidos ou de ácidos nucleicos). Os resíduos de aminoácidos ou nucleotídeos em posições de aminoácidos ou nucleotídeos correspondentes são então comparados. Quando uma posição na primeira sequência é ocupada pelo mesmo resíduo de aminoácido ou nucleotídeo na posição correspondente na segunda sequência, então as moléculas são idênticas naquela posição. A identidade percentual entre as duas sequências é uma função do número de posições idênticas compartilhadas pelas sequências (ou seja, % de identidade = número de posições idênticas/número total de posições (ou seja, posições superpostas) x 100). De preferência, as duas sequências são do mesmo comprimento.
[0158]Uma comparação de sequências pode ser realizada sobre os comprimentos inteiros das duas sequências que estão sendo comparadas ou sobre um fragmento das duas sequências. Tipicamente, a comparação será realizada sobre o comprimento total das duas sequências que estão sendo comparadas. No entanto, a identidade de sequência pode ser realizada sobre uma região, por exemplo, de vinte, cinquenta, cem ou mais resíduos de aminoácidos contíguos.
[0159]Como usado nesse relatório descritivo, subentende-se em particular que o termo “que possui pelo menos X% de identidade de sequência com a sequência de ácidos nucleicos/aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: Y” (ou, alternativamente, o termo “que possui pelo menos X% de identidade de sequência com a sequência de ácidos nucleicos/aminoácidos de/apresentada no ID. DE SEQ. Nº: Y”) é equivalente ao termo “que possui pelo menos X% de identidade de sequência com a sequência de ácidos nucleicos/aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: Y ao longo do comprimento do ID. DE SEQ. Nº: Y” ou ao termo “que possui pelo menos X% de identidade de sequência com a sequência de ácidos nucleicos/aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: Y ao longo do comprimento inteiro do ID. DE SEQ. Nº: Y”, respectivamente.
[0160]Aqueles habilitados na técnica estarão cientes do fato de que vários programas de computador diferentes estão disponíveis para determinar a homologia entre duas sequências. Por exemplo, uma comparação de sequências e determinação de identidade percentual entre duas sequências podem ser obtidas usando um algoritmo matemático. Em um aspecto específico, a identidade percentual entre duas sequências de aminoácidos ou de ácidos nucleicos é determinada usando o algoritmo de Needleman e Wunsch (J. Mol. Biol. (48): 444-453 (1970)) que foi incorporado no programa GAP da suíte de softwares Accelrys GCG (disponível em http://www.accelrys.com/produtos/gcg/), usando uma matriz Blossum 62 ou uma matriz PAM250, e um peso de lacuna de 16, 14, 12, 10, 8, 6, ou 4 e um peso de comprimento de 1, 2, 3, 4, 5, ou 6. Aqueles habilitados na técnica observarão que todos esses parâmetros diferentes gerarão resultados ligeiramente diferentes, mas que a percentagem de identidade global de duas sequências não é significantemente alterada quando se utilizam algoritmos diferentes.
[0161]As sequências de proteínas ou sequências de ácidos nucleicos da presente invenção podem ainda ser usadas como uma “sequência pesquisada” para realizar uma pesquisa contra bancos de dados públicos para, por exemplo, identificar outros membros da família ou sequências relacionadas. Essas pesquisas podem ser realizadas usando os programas BLASTN e BLASTP (versão 2.0) de Altschul, e cols.
(1990) J. Mol. Biol. 215: 403-10. Pesquisas de proteína BLAST podem ser realizadas com o programa BLASTP, pontuação = 50, comprimento de palavra = 3 para obter sequências de aminoácidos homólogas às moléculas de proteína da invenção. Para obter alinhamentos com lacunas para fins de comparação, Gapped BLAST pode ser utilizado como descrito em Altschul e cols. (1997) Nucleic Acids Res. 25 (17): 3.389-3.402. Quando são utilizados os programas BLAST e Gapped BLAST, os parâmetros-padrão dos respectivos programas (por exemplo, BLASTP e BLASTN) podem ser usados. Veja a página na Internet do “National Center for Biotechnology Information” em http://www.ncbi.nlm.nih.gov/.
[0162]O termo “felino”, no escopo da presente invenção, se refere a um membro da família de Felidae, particularmente dos gêneros de Felis (que é preferido nesse relatório descritivo), Lynx, Panthera, Neofelis, Caracal, Leopardus, Puma, Acinonyx, Prionailurus e Otocolobus. O gênero Felis inclui, por exemplo, a espécie de Felis silvestris, por exemplo, Felis silvestris silvestris (gato selvagem europeu), gato selvagem, preferivelmente Felis silvestris catus (também conhecido como Felis catus, ou seja, o gato doméstico), Felis chaus, Felis nigripes, Felis margarita e Felis bieti. O gênero Panthera, por exemplo, inclui Tiger (Panthera tigris), Lion (Panthera leo), Jaguar (Panthera onca), Leopard (Panthera pardus), Snow leopard (Panthera uncial) e Liger. Outros Felidae incluem, sem limitação, Lynx lynx, Lynx rufus, Acinonyx jubatus (Cheetah), Puma concolor (Cougar), Leopardus pardalis (Ocelot). De preferência, o “felino” é um gato, principalmente um gato doméstico.
[0163]Uma “composição imunogênica ou imunológica” se refere a uma composição de matéria que compreende pelo menos um antígeno, ou porção imunogênica deste, que evoca uma resposta imunológica no hospedeiro de uma resposta imune celular ou mediada por anticorpo à composição. De preferência, a composição imunogênica induz uma resposta imune e, mais preferivelmente, confere imunidade protetora contra um ou mais dos sinais clínicos de uma infecção por paramixovírus felino. Quando o hospedeiro exibe uma resposta imunológica protetora de modo que resistência à nova infecção será aumentada e/ou a severidade clínica da doença reduzida, a composição imunogênica é descrita como uma “vacina”.
[0164]O termo “antígeno” usado nesse relatório descritivo é bem conhecido na técnica e inclui substâncias que são imunogênicas, ou seja, imunógenos, bem como substâncias que induzem não responsividade imunológica, ou anergia, ou seja, uma ausência de reações pelos mecanismos de defesa do corpo às substâncias estranhas. Como usado nesse relatório descritivo, o termo “antígeno” significa proteínas de comprimento total, bem como fragmentos peptídicos destas que contêm ou compreendem epítopo. Além disso, o termo “sequência codificadora de antígeno” está relacionado às sequências que codificam um antígeno. De preferência, a sequência codificadora de antígeno é uma sequência de ácidos nucleicos como, por exemplo, uma sequência de cDNA. No entanto, o termo “sequência de nucleicos ácidos” foi definido em outro lugar nesse relatório descritivo.
[0165]O termo “pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno” também engloba mais do que uma sequência que codifica um antígeno exógeno. Dessa forma, deve ser subentendido que o termo “pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno” engloba duas, três, quatro, cinco ou seis sequências que codificam um antígeno exógeno. Consequentemente, o termo “pelo menos duas sequências que codificam um antígeno exógeno” engloba três, quatro, cinco ou seis sequências que codificam um antígeno exógeno.
[0166]O termo “sequências diferentes que codificam um antígeno exógeno” são sequências que diferem em sua sequência entre elas.
[0167]O termo “composição imunogênica”, como usado nesse relatório descritivo, pode se referir a um polipeptídeo ou uma proteína como, por exemplo, uma proteína da superfície viral que evoca uma resposta imunológica, como descrito nesse relatório descritivo. O termo “fragmento imunogênico” ou “porção imunogênica” se refere a um fragmento ou forma truncada e/ou substituída de uma proteína ou polipeptídeo que inclui um ou mais epítopos e, dessa forma, evoca a resposta imunológica descrita nesse relatório descritivo. Em geral, essas formas truncadas e/ou substituídas, ou fragmentos, compreenderão pelo menos seis aminoácidos contíguos de uma proteína de comprimento total. Esses fragmentos podem ser identificados usando qualquer uma entre diversas metodologias de mapeamento de epítopo, bem conhecidas na técnica. Veja, por exemplo, “Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology”, Vol. 66 (Glenn E. Morris, Ed., 1996) Humana Press, Totowa, Nova Jersey. Por exemplo, epítopos lineares podem ser determinados sintetizando-se concomitantemente grandes números de peptídeos em suportes sólidos, os peptídeos correspondendo às porções da molécula de proteína, e reagindo-se os peptídeos com anticorpos enquanto os peptídeos ainda estão anexados aos suportes. Essas metodologias são conhecidas e descritas na técnica; veja, por exemplo, a Patente U.S. Nº
4.708.871; Geysen e cols. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 3.998-4.002; e Geysen e cols. (1986) Molec. Immunol. 23: 709-715. Similarmente, epítopos conformacionais são prontamente identificados por determinação da conformação espacial de aminoácidos como, por exemplo, por cristalografia por Raios-X e ressonância magnética nuclear bidimensional. Veja “Epitope Mapping Protocols”, supra. Antígenos sintéticos também estão incluídos dentro da definição, por exemplo, poliepítopos, epítopos de flanqueamento, e outros antígenos recombinantes ou derivados sinteticamente. Veja, por exemplo, Bergmann e cols. (1993) Eur. J. Immunol. 23: 2.777-2.781; Bergmann e cols. (1996), J. Immunol. 157: 3.242-3.249; Suhrbier, A. (1997), Immunol. and Cell Biol. 75: 402-408; e Gardner e cols., (1998) “12th World AIDS Conference”, Genebra, Suiça, 28 de Junho-3 de Julho, 1998 (cujos ensinamentos e teor são todos incorporados por referência nesse relatório descritivo).
[0168]O termo “imunização” está relacionado a uma imunização ativa pela administração de uma composição imunogênica a um animal produtor de alimentos a ser imunizado, causando, dessa forma, uma resposta imunológica contra o antígeno incluído nessa composição imunogênica.
[0169]O termo “necessitado” ou “que necessita”, como usado nesse relatório descritivo, significa que a administração/tratamento está associada com o reforço ou melhora da saúde ou sinais clínicos ou qualquer outro efeito medicinal positivo sobre a saúde dos animais que recebem a composição imunogênica de acordo com a presente invenção.
[0170]O termo “vacina”, como usado nesse relatório descritivo, se refere a uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um componente imunologicamente ativo que induz uma resposta imunológica em um animal e possivelmente, mas não necessariamente, um ou mais componentes adicionais que aumentam a atividade imunológica do componente ativo.
Uma vacina pode adicionalmente compreender componentes adicionais típicos de composições farmacêuticas.
Como forma de distinção, o componente imunologicamente ativo de uma vacina pode compreender partículas virais completas em sua forma original ou como partículas atenuadas em uma denominada vacina viva modificada (MLV) ou partículas inativadas por métodos apropriados em uma denominada vacina morta (KV). Em outra forma, o componente imunologicamente ativo de uma vacina pode compreender elementos apropriados dos organismos (vacinas de subunidade) pelos quais esses elementos são gerados por destruição da partícula inteira ou por culturas de crescimento que contêm essas partículas e, opcionalmente, etapas de purificação subsequentes que geram a estrutura (ou estruturas) desejada, ou por processos sintéticos que incluem uma manipulação apropriada por uso de um sistema adequado baseado, por exemplo, em bactérias, insetos, mamíferos, ou outras espécies mais, opcionalmente, procedimentos subsequente de isolamento e purificação, ou por indução dos processos sintéticos no animal que necessita de uma vacina por incorporação direta de material genético com o uso de composições farmacêuticas adequadas (vacinação de polinucleotídeo). Uma vacina pode compreender um ou simultaneamente mais do que um dos elementos descritos acima.
Como usado dentro de aspectos específicos da presente invenção, o termo “vacina” se refere a uma vacina viva ou vírus vivo, também denominada vacina recombinante. Em outro aspecto específico da presente invenção, “vacina” se refere a um vírus inativado ou morto, incluindo partículas semelhante a vírus (VLPs). Dessa forma, uma vacina pode ser uma vacina de subunidade ou uma vacina morta (KV) ou inativada.
[0171]O termo “vacinação de DNA” ou “vacinação de polinucleotídeo” significa inoculação direta de material genético com o uso de composições farmacêuticas adequadas.
[0172]Vários métodos físicos e químicos de inativação são conhecidos na técnica. O termo “inativado” se refere a um vírus previamente virulento ou não virulento que foi irradiado (ultravioleta (UV), Raios-X, feixe de elétrons ou radiação gama), aquecido ou quimicamente tratado para inativar ou matar esse vírus retendo, ao mesmo tempo, sua imunogenicidade. Agentes de inativação adequados incluem beta-propiolactona, beta- ou acetil-etilenoimina ou binária, glutaraldeído, ozônio e formalina (formaldeído).
[0173]Para inativação por formalina ou formaldeído, formaldeído é tipicamente misturado com água e álcool metílico para criar formalina. A adição de álcool metílico evita a degradação ou reação cruzada durante o processo de inativação. Uma modalidade usa cerca de 0,1 a 1% de uma solução de formaldeído a 37% para inativar o vírus. É crucial ajustar a quantidade de formalina para assegurar que o material seja inativado, mas não muito de modo que possam aparecer efeitos colaterais caso ocorra uma dosagem alta.
[0174]Mais particularmente, o termo “inativado” no contexto de um vírus significa que o vírus é incapaz de replicação in vivo ou in vitro. Por exemplo, o termo “inativado” pode se referir a um vírus que foi propagado in vitro, e foi então inativado usando meios químicos ou físicos, de modo que ele não seja mais capaz de replicar.
[0175]Como usados nesse relatório descritivo, os termos “inativado”, “morto” ou “KV” são usados de forma intercambiável.
[0176]O termo “vacina viva” se refere a uma vacina que compreende um organismo vivo ou um vírus ou vetor viral replicação-competente.
[0177]Uma “composição farmacêutica” basicamente consiste em um ou mais ingredientes capazes de produzir modificação fisiológica, por exemplo, de funções imunológicas, do organismo ao qual é administrada, ou de organismos que vivem dentro ou no organismo. O termo inclui, sem restrição, antibióticos ou antiparasitários, bem como outros constituintes comumente usados para obter alguns outros objetivos como, por exemplo, sem limitação, traços de processamento, esterilidade, estabilidade, viabilidade para administrar a composição por meio de vias enterais ou parenterais como, por exemplo, por via oral, intranasal, intravenosa, intramuscular, subcutânea, intradérmica, ou outra via adequada, tolerância após administração, ou propriedades de liberação controlada. Um exemplo não limitante de uma composição farmacêutica desse tipo, fornecido exclusivamente para fins de demonstração, poderia ser preparado da seguinte forma: sobrenadante da cultura de células de uma cultura de células infectadas é misturado com um estabilizador (por exemplo, espermidina e/ou albumina sérica bovina (BSA) e a mistura é subsequentemente liofilizada ou desidratada por outros métodos. Antes da vacinação, a mistura é então reidratada em soluções aquosas (por exemplo, solução salina, solução salina tamponada com fosfato (PBS) ou não aquosas (por exemplo, emulsão oleosa, adjuvante à base de alumínio).
[0178]Como usado nesse relatório descritivo, o termo “carreador farmacêutico ou veterinário aceitável” inclui qualquer um e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, adjuvantes, agentes estabilizantes, diluentes, conservantes, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos, agentes de retardo da adsorção e semelhantes. Em algumas modalidades preferidas, e especialmente aquelas que incluem composições imunogênicas liofilizadas, agentes estabilizantes para uso na presente invenção incluem estabilizadores para liofilização ou secagem por congelamento.
[0179]Em algumas modalidades, a composição imunogênica da presente invenção contém um adjuvante. O termo “adjuvante”, como usado nesse relatório descritivo, pode incluir hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio, saponinas, por exemplo, Quil A, QS-21 (Cambridge Biotech Inc., Cambridge MA), GPI-0100 (Galenica Pharmaceuticals, Inc., Birmingham, AL), emulsão água-em-óleo, emulsão óleo- em-água, emulsão água-em-óleo-em-água. A emulsão pode ser baseada, em particular, em óleo leve de parafina líquida (do tipo “European Pharmacopea”); óleo isoprenoide como, por exemplo, esqualano ou esqualeno; óleo resultante da oligomerização de alcenos, em particular de isobuteno ou deceno; ésteres de ácidos ou de álcoois que contêm um grupo alquil linear, mais particularmente óleos de plantas, oleato de etila, propileno glicol di-(caprilato/caprato), gliceril tri-(caprilato/caprato) ou dioleato de propileno glicol; ésteres de ácidos ou álcoois graxos ramificados, em particular ésteres de ácido isoesteárico. O óleo é usado em combinação com emulsificantes para formar a emulsão. Os emulsificantes são preferivelmente tensoativos não iônicos, em particular ésteres de sorbitano, de manida (por exemplo, oleato de manitol anidro), de glicol, de poliglicerol, de propileno glicol e de ácido oleico, isoesteárico, ricinoleico ou hidroxiesteárico, que são opcionalmente etoxilados, e blocos de copolímero de polioxipropileno- polioxietileno, em particular os produtos Pluronic, especialmente L121. Veja Hunter e cols., “The Theory and Practical Application of Adjuvants” (Ed. Stewart-Tull, D.E.S.), John Wiley e Sons, NY, páginas 51-94 (1995) e Todd e cols., Vaccine 15: 564-570 (1997). Adjuvantes exemplares são a emulsão SPT descrita na página 147 de “Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach” editado por M. Powell e M. Newman, Plenum Press, 1995, e a emulsão MF59 descrita na página 183 desse mesmo livro.
[0180]Um exemplo adicional de uma adjuvante é um composto escolhido dos polímeros de ácido acrílico ou metacrílico e dos copolímeros de anidrido maleico e derivado de alquenil. Compostos adjuvantes vantajosos são os polímeros de ácido acrílico ou metacrílico que são reticulados, especialmente com éteres de polialquenil de açúcares ou poliálcoois. Esses compostos são conhecidos pelo termo carbômero (Phameuropa Vol. 8, Nº 2, junho 1996). Aqueles habilitados na técnica também podem se referir à
Patente U.S. Nº 2.909.462 que descreve esses polímeros acrílicos reticulados com um composto polihidroxilado que possui pelo menos 3 grupos hidroxila, preferivelmente no máximo 8, os átomos de hidrogênio de pelo menos três hidroxilas sendo substituídos por radicais alifáticos insaturados que possuem pelo menos 2 átomos de carbono. Os radicais preferidos são aqueles que contêm de 2 a 4 átomos de carbono, por exemplo, vinis, alilas e outros grupos etilenicamente insaturados. Os próprios radicais insaturados podem conter outros substituintes, por exemplo, metil. Os produtos sob o nome CARBOPOL®; (BF Goodrich, Ohio, USA) são particularmente apropriados. Eles são reticulados com uma alil sacarose ou com alil pentaeritritol. Entre eles, pode ser mencionado Carbopol 974P, 934P e 971P. Prefere-se, principalmente, o uso de CARBOPOL® 971P. Entre os copolímeros de anidrido maleico e derivado de alquenil, estão os copolímeros EMA (Monsanto), que são copolímeros de anidrido maleico e etileno. A dissolução desses polímeros em água leva em uma solução ácida que será neutralizada, preferivelmente até o pH fisiológico, a fim de gerar a solução de adjuvante na qual a própria composição imunogênica, imunológica ou de vacina será incorporada.
[0181]Adjuvantes adequados adicionais incluem, sem limitação, o sistema adjuvante RIBI (Ribi Inc.), copolímero em bloco (CytRx, Atlanta GA), SAF-M (Chiron, Emeryville CA), monofosforil lipídeo A, adjuvante de lipídeo-amina Avridina, enterotoxina termolábil de E. coli (recombinante ou de outro modo), toxina colérica, IMS 1314 ou muramil dipeptídeo, ou citocinas de ocorrência natural ou recombinantes ou análogos destas ou estimulantes da liberação endógena de citocina,
entre muitos outros.
[0182]Espera-se que um adjuvante possa ser adicionado em uma quantidade de cerca de 100 µg até cerca de 10 mg por dose, preferivelmente em uma quantidade de cerca de 100 µg até cerca de 10 mg por dose, mais preferivelmente em uma quantidade de cerca de 500 µg até cerca de 5 mg por dose, ainda mais preferivelmente em uma quantidade de cerca de 750 µg até cerca de 2,5 mg por dose e, principalmente, em uma quantidade de cerca de 1 mg por dose. Alternativamente, o adjuvante pode estar em uma concentração de cerca de 0,01 a 50%, preferivelmente em uma concentração de cerca de 2% a 30%, mais preferivelmente em uma concentração de cerca de 5% a 25%, ainda mais preferivelmente em uma concentração de cerca de 7% a 22% e, principalmente, em uma concentração de 10% a 20% por volume do produto final.
[0183]“Diluentes” podem incluir água, solução salina, dextrose, etanol, glicerol e semelhantes. Agentes isotônicos podem incluir cloreto de sódio, dextrose, manitol, sorbitol, e lactose, entre outros. Estabilizantes incluem albumina e sais alcalinos de ácido etilenodiaminatetra-acético, entre outros.
[0184]O termo “isolado” significa alterado “pela mão do homem” de seu estado natural, ou seja, caso ocorra na natureza, ele foi alterado ou removido de seu ambiente original, ou ambos. Por exemplo, um polinucleotídeo ou polipeptídeo naturalmente presente e um organismo vivo não é “isolado”, mas o mesmo polinucleotídeo ou polipeptídeo separado dos materiais coexistentes de seu estado natural é “isolado”, como o termo é empregado nesse relatório descritivo.
[0185]“Atenuação” significa redução da virulência de um patógeno. Na presente invenção, “atenuação” é sinônimo com “avirulento”. Na presente invenção, um vírus atenuado é aquele no qual a virulência foi reduzida, de modo que ele não cause sinais clínicos de infecção, mas seja capaz de induzir uma resposta imune no animal-alvo, mas também pode significar que os sinais clínicos são reduzidos em incidência ou severidade em animais infectados com o vírus atenuado, especialmente o vetor viral ALVAC como reivindicado, em comparação com um “grupo de controle” de animais infectados com vírus ou patógeno não atenuado e que não receberam o vírus atenuado. Nesse contexto, o termo “reduzir/reduzido” significa uma redução de pelo menos 10%, preferivelmente 25%, ainda mais preferivelmente 50%, ainda mais preferivelmente 60%, ainda mais preferivelmente 70%, ainda mais preferivelmente 80%, ainda mais preferivelmente 90% e, principalmente, de 100%, quando comparado com o grupo de controle como definido acima. Dessa forma, um patógeno avirulento, atenuado como, por exemplo, um vetor viral atenuado como reivindicado, especialmente o vetor viral ALVAC como reivindicado, é adequado para a geração de uma vacina viva modificada (MLV) ou composição imunogênica viva modificada.
[0186]O termo paramixovírus “atenuado”, como descrito nesse relatório descritivo, é dirigido, em particular, a um paramixovírus que é atenuado in vitro e/ou in vivo, mais particularmente em linhagens de células suscetíveis e/ou no hospedeiro. Nesse contexto, “atenuado” está particularmente relacionado a uma virulência reduzida do paramixovírus, em que se subentende que “virulência” seja o grau de patogenicidade, e em que “patogenicidade” é dirigido à habilidade do patógeno para induzir sinais clínicos no hospedeiro ou na prole do hospedeiro. Possíveis sinais clínicos da infecção com o paramixovírus da presente invenção compreendem, por exemplo, uma sede aumentada, micção aumentada, perda de peso, apetite diminuído, letargia e vômitos no indivíduo. Possíveis achados laboratoriais associados com uma infecção com o paramixovírus da presente invenção em um indivíduo compreendem, por exemplo, níveis aumentados de creatinina e dimetilarginina simétrica (SDMA). Possíveis achados histológicos associados com uma infecção com o paramixovírus da presente invenção em um indivíduo compreendem, por exemplo, cicatrização cortical e medular, degeneração tubular, inflamação intersticial em decorrência de infiltração primariamente de linfócitos, células plasmáticas, macrófagos e granulócitos.
[0187]O termo “tratamento e/ou profilaxia” se refere à redução da incidência da infecção por paramixovírus felino em particular ou à redução na severidade de sinais clínicos causados por ou associados à infecção por paramixovírus felino em particular. Dessa forma, o termo “tratamento e/ou profilaxia” também se refere à redução do número de animais que ficam infectados com o paramixovírus felino particular (= redução da incidência da infecção por paramixovírus felino em particular) ou à redução da severidade de sinais clínicos normalmente associados com ou causados por uma infecção por paramixovírus felino em um grupo de animais, cujos animais receberam uma quantidade eficaz da composição imunogênica fornecida nesse relatório descritivo, em comparação com um grupo de animais, cujos animais não receberam essa composição imunogênica. O “tratamento e/ou profilaxia” geralmente envolve a administração de uma quantidade eficaz da composição imunogênica da presente invenção a um animal ou animais que necessitam ou que se beneficiariam desse tratamento/profilaxia. O termo “tratamento” se refere à administração da quantidade eficaz da composição imunogênica após o animal ou pelo menos alguns animais já estarem infectados com esse paramixovírus felino e em que esses animais já exibem alguns sinais clínicos causados por ou associados com essa infecção por paramixovírus felino. O termo “profilaxia” se refere à administração a um animal antes de qualquer infecção desse animal com paramixovírus felino ou pelo menos quando esse animal ou nenhum dos animais em um grupo de animais na exibem nenhum sinal clínico causado por ou associado à infecção por esse paramixovírus felino. Os termos “profilaxia” e “prevenção” são usados de forma intercambiável nesse pedido.
[0188]O termo “sinais clínicos”, como usado nesse relatório descritivo, se refere aos sinais de infecção de um animal por paramixovírus felino. Os sinais clínicos de infecção dependem do patógeno selecionado. Exemplos para esses sinais clínicos incluem, sem limitação, sede aumentada, micção aumentada, perda de peso, apetite diminuído, letargia, vômitos no indivíduo, viremia, febre, e excreção do vírus no ambiente. Possíveis achados laboratoriais associados com uma infecção com o paramixovírus felino da presente invenção em um indivíduo compreendem, por exemplo, níveis aumentados de creatinina e dimetilarginina simétrica (SDMA). Possíveis achados histológicos associados com uma infecção com o paramixovírus da presente invenção em um indivíduo compreendem, por exemplo, cicatrização cortical e medular, degeneração tubular, inflamação intersticial em decorrência de infiltração primariamente de linfócitos, células plasmáticas, macrófagos e granulócitos. No entanto, os sinais clínicos também incluem, sem limitação, sinais clínicos que são diretamente observáveis em um animal vivo.
[0189]De preferência, os sinais clínicos reduzidos em incidência ou severidade em um animal tratado, comparado com animais que não são tratados ou que são tratados com uma composição imunogênica que estava disponível antes da presente invenção, mas subsequentemente infectados pelo paramixovírus felino particular se referem à sede aumentada, micção aumentada, perda de peso, apetite diminuído, letargia, vômitos no indivíduo, viremia, febre, excreção do vírus no ambiente, infecções do sistema urogenital, infecções do sistema urinário, doença renal, doença renal crônica (CKD), inflamação dos túbulos renais e tecido intersticial renal, e nefrite túbulo-intersticial idiopática (TIN).
[0190]Nesse relatório descritivo, “dose eficaz” significa, sem limitação, uma quantidade de antígeno que evoca, ou é capaz de evocar, uma resposta imune que gera uma redução de sintomas clínicos em um animal ao qual o antígeno é administrado.
[0191]Como usado nesse relatório descritivo, o termo “quantidade eficaz” significa, no contexto de uma composição, uma quantidade de uma composição imunogênica capaz de induzir uma resposta imune que reduz a incidência ou reduz a severidade de infecção ou incidente de doença em um animal. Essa quantidade eficaz é capaz de reduzir a incidência da infecção por paramixovírus felino em particular ou reduzir a severidade de sinais clínicos da infecção por paramixovírus felino em particular. Particularmente, uma quantidade eficaz se refere às unidades formadoras de colônia (CFU) por dose. Alternativamente, no contexto de uma terapia, o termo “quantidade eficaz” se refere à quantidade de uma terapia que é suficiente para reduzir ou melhorar a severidade ou duração de uma doença ou distúrbio, ou um ou mais sintomas deste, evitar o avanço de uma doença ou distúrbio, causar a regressão de uma doença ou distúrbio, evitar a recorrência, desenvolvimento, surgimento ou progressão de um ou mais sintomas associados a uma doença ou distúrbio, ou aumentar ou melhorar a profilaxia ou tratamento de outra terapia ou agente terapêutico.
[0192]Uma “resposta imune” ou “resposta imunológica” significa, sem limitação, o desenvolvimento de uma resposta imune celular e/ou mediada por anticorpo à composição (imunogênica) ou vacina de interesse. Normalmente, uma resposta imune ou imunológica inclui, sem limitação, um ou mais dos seguintes efeitos: a produção ou ativação de anticorpos, células B, células T helper, células T supressoras e/ou células T citotóxicas, dirigidos especificamente a um antígeno ou antígenos incluídos na composição ou vacina de interesse. De preferência, o hospedeiro exibirá uma resposta imunológica terapêutica ou uma resposta imunológica protetora (memória), de modo que a resistência à nova infecção será aumentada e/ou a severidade clínica da doença reduzida. Essa proteção será demonstrada por uma redução no número de sintomas, na severidade de sintomas ou na ausência de um ou mais dos sintomas associados à infecção do patógeno, um retardo no início de viremia, persistência viral reduzida, uma redução na carga viral global e/ou uma redução de excreção viral.
[0193]“Proteção contra doença”, “imunidade protetora”, “imunidade funcional”, “redução de sintomas clínicos”, “indução/produção de anticorpos neutralizantes e/ou conversão sérica”, e frases similares, significam uma resposta parcial ou completa contra uma doença ou condição gerada por administração de uma ou mais composições terapêuticas da invenção, ou uma combinação destas, que resulta em menos efeitos deletérios do que seria esperado em um animal não imunizado que foi exposto a uma doença ou infecção. Ou seja, a severidade dos efeitos deletérios da infecção é reduzida em um animal vacinado. A infeção pode ser reduzida, tornada mais lenta ou possivelmente totalmente evitada, em um animal vacinado. Nesse relatório descritivo, quando for referido à prevenção completa de infecção, isso será especificamente declarado. Caso não seja declarado prevenção completa, então o termo inclui prevenção parcial. Uma “resposta imunológica protetora” ou “imunidade protetora” será demonstrada por uma redução ou ausência de sinais clínicos normalmente exibidos por um hospedeiro infectado, um tempo de recuperação mais rápido e/ou uma duração de infectividade reduzida ou titulação de patógeno reduzida nos tecidos ou fluidos corporais ou excreções do hospedeiro infectado.
[0194]Nesse relatório descritivo, “redução da incidência e/ou severidade de sinais clínicos” ou “redução de sintomas clínicos” significa, sem limitação, redução do número de animais infectados em um grupo, redução ou eliminação do número de animais que exibem sinais clínicos de infecção, ou redução da severidade de quaisquer sinais clínicos que estão presentes em um ou mais animais, em comparação com infecção do tipo selvagem. Por exemplo, isso deve ser referir a qualquer redução de carga de patógeno, excreção de patógeno, redução na transmissão de patógeno, ou redução de qualquer sinal clínico sintomático de infecções por paramixovírus felino. De preferência, esses sinais clínicos são reduzidos em um ou mais animais que recebem a composição terapêutica da presente invenção por pelo menos 10%, em comparação com animais que não recebem a composição e ficam infectados. Mais preferivelmente, sinais clínicos são reduzidos em animais que recebem uma composição da presente invenção por pelo menos 20%, preferivelmente por pelo menos 30%, mais preferivelmente por pelo menos 40% e, ainda mais preferivelmente, por pelo menos 50%.
[0195]O termo “proteção aumentada” nesse relatório descritivo significa, sem limitação, uma redução estatisticamente significante de um ou mais sintomas clínicos que estão associados à infecção por um agente infeccioso em um grupo vacinado de animais vs. um grupo não vacinado de controle de animais. O termo “redução estatisticamente significante de sintomas clínicos” significa, sem limitação, a frequência na incidência de pelo menos um sintoma clínico no grupo vacinado de animais é pelo menos 10%, preferivelmente 20%, mais preferivelmente 30%, ainda mais preferivelmente 50% e, ainda mais preferivelmente, 70% menor do que no grupo não vacinado de controle após o ataque do agente infeccioso.
[0196]O termo “patógeno” é bem conhecido àqueles habilitados na técnica. O termo “patógeno” compreende bactérias e vírus. Ao longo da presente invenção, o termo “patógeno que infecta felinos” preferivelmente é paramixovírus felino.
[0197]O termo “proteção de longa duração” se refere à “eficácia aumentada” que persiste por pelo menos 3 semanas, mas mais preferivelmente pelo menos 3 meses, ainda mais preferivelmente pelo menos 6 meses.
[0198]O termo “excreção” se refere às secreções como, por exemplo, corrimentos nasais e, além disso, aos aerossóis criados por tosse ou coriza. Dessa forma, a excreção pode ser determinada por exame da titulação viral em Swabs nasais ou pela titulação viral nos pulmões. O termo “excreção” ainda engloba a transferência de vírus a animais suscetíveis (ou seja, sentinelas). Faz parte do conhecimento geral daqueles habilitados na técnica como medir a excreção viral.
[0199]O termo “segurança” se refere à ausência de consequências adversas em um animal vacinado após vacinação incluindo, sem limitação: reversão potencial de uma vacina à base de bactéria à virulência, efeitos colaterais clinicamente significantes como, por exemplo, enfermidade sistêmica persistente ou inflamação inaceitável no local de administração da vacina.
[0200]O termo “vacinação” ou variantes deste, como usado nesse relatório descritivo, significa, sem limitação, um processo que inclui a administração de uma composição imunogênica da invenção que, quando administrada a um animal, evoca, ou é capaz de evocar, diretamente ou indiretamente, uma resposta imune no referido animal.
[0201]O termo “mortalidade”, no contexto da presente invenção, se refere à morte causada por uma infecção, e inclui a situação na qual a infecção é tão grave que um animal é sacrificado para evitar que sofra e que seja dado um final humano para sua vida.
[0202]As formulações da invenção compreendem uma quantidade imunizante eficaz de uma ou mais composições imunogênicas e um veículo fisiologicamente aceitável. Vacinas compreendem uma quantidade imunizante eficaz de uma ou mais composições imunogênicas e um veículo fisiologicamente aceitável. A formulação deve se adequar ao modo de administração.
[0203]A composição imunogênica, se desejado, também pode conter pequenas quantidades de agentes umidificantes ou emulsificantes, ou agentes de tamponamento do pH. A composição imunogênica pode ser uma solução líquida, suspensão, emulsão, comprimido, pílula, cápsula, formulação de liberação sustentada ou pó. A formulação oral pode incluir carreadores padronizados como, por exemplo, graus farmacêuticos de manitol, lactose, amido, estearato de magnésio, sacarina sódica, celulose, carbonato de magnésio etc.
[0204]As vias de administração preferidas incluem, sem limitação, intranasal, oral, intradérmica e intramuscular. A administração na água de beber, principalmente em uma dose única, é desejável. Aqueles habilitados na técnica reconhecerão que as composições da invenção também podem ser administradas em uma, duas ou mais doses, bem como por outras vias de administração. Por exemplo, essas outras vias incluem via subcutânea, intracutânea, intraperitoneal, intracutânea e, dependendo da duração e efetividade desejadas do tratamento, as composições de acordo com a invenção podem ser administradas uma vez ou várias vezes, também intermitentemente, por exemplo, diariamente por vários dias, semanas ou meses e em dosagens diferentes, por exemplo, cerca de 1 x 104 a 1 x 109 (veja titulação viral acima). Em um aspecto específico da presente invenção, a dosagem é cerca de 1 x 104 a 1 x 107 TCID50.
[0205]O termo “amostra” se refere a uma amostra de um fluido corporal, a uma amostra de células separadas ou a uma amostra de um tecido ou um órgão. Amostras de fluidos corporais podem ser obtidas por técnicas bem conhecidas e incluem, preferivelmente, amostras de sangue, plasma, soro ou urina, mais preferivelmente, amostras de sangue, plasma ou soro. Amostras de tecidos ou órgãos podem ser obtidas de qualquer tecido ou órgão, por exemplo, por biópsia. Células separadas podem ser obtidas dos fluidos corporais ou dos tecidos ou órgãos por técnicas de separação como, por exemplo, centrifugação ou separação de células.
[0206]O termo “obtida” pode compreender uma etapa de isolamento e/ou de purificação conhecida aqueles habilitados na técnica, preferivelmente com o uso de precipitação, colunas etc.
[0207]O termo “teste imunológico” e “teste genômico analítico” é a base para diferenciação de animais vacinados com a composição imunogênica de acordo com a presente invenção e animais infectados com o paramixovírus felino de ocorrência natural (associado à doença). Exemplos de testes imunológicos incluem qualquer método de detecção enzimático- imunológico ou imunoquímico como, por exemplo, ELISA (ensaio imunoabsorvente ligado à enzima), EIA (imunoensaio de enzima), RIA (radioimunoensaio), testes imunológicos de enzima em sanduíche, teste de anticorpo fluorescente (FAT), imunoensaios em sanduíche de eletroquimioluminescência (ECLIA), flúor-imunoensaio de dissociação aumentada de lantanídeo (DELFIA) ou testes imunológicos de fase sólida, teste imunofluorescente (IFT), coloração imunoistoquímica, análise Western blot ou qualquer outro método adequado disponível aos profissionais na técnica. Dependendo do ensaio usado, os antígenos ou os anticorpos podem ser marcados por uma enzima, um fluoróforo ou um radioisótopo. Veja, por exemplo, Coligan e cols. “Current Protocols in Immunology”, John Wiley & Sons Inc., Nova York, N.Y. (1994); e Frye e cols., Oncogen 4: 1.153-1.157, 1987.
[0208]O termo “teste genômico analítico” se refere a um método genômico baseado na reação em cadeia de polimerase (PCR), transcrição reversa-reação em cadeia de polimerase (RT-PCR), PCR em tempo real (r-PCR) ou PCR em tempo real- transcrição reversa (rRT-PCR), Templex-PCR, amplificação baseada em sequência de ácidos nucleicos (NASBA) e métodos de amplificação isotérmicos com o uso de polimerases e oligonucleotídeos específicos como iniciadores. Os métodos de amplificação mencionados anteriormente são bem conhecidos na técnica.
[0209]Os termos “proteína”, “peptídeo”, “polipeptídeo” e “fragmento de polipeptídeo” são usados de forma intercambiável nesse relatório descritivo para se referirem aos polímeros de resíduos de aminoácidos de qualquer comprimento. O polímero pode ser linear ou ramificado, ele pode compreender aminoácidos modificados ou análogos de aminoácidos, e ele pode ser interrompido por porções químicas diferentes de aminoácidos. Os termos também englobam um polímero de aminoácido que foi modificado naturalmente ou por intervenção; por exemplo, formação de ligação dissulfeto, glicosilação, lipidação, acetilação, fosforilação, ou qualquer outra manipulação ou modificação, por exemplo, conjugação com um componente de marcação ou bioativo.
[0210]As reações de hibridização podem ser realizadas sob condições de “rigor” diferentes. Condições que aumentam o rigor de uma reação de hibridização são bem conhecidas. Veja, por exemplo, “Molecular Cloning: A Laboratory Manual”, Segunda Edição (Sambrook e cols. 1989). Exemplos de condições relevantes incluem (em ordem de rigor crescente): temperaturas de incubação de 25°C, 37°C, 50°C e 68°C; concentrações de tampão de 10 x SSC, 6 x SSC, 1 x SSC, 0,1 x SSC (em que SSC é NaCl 0,15 M e tampão citrato 15 mM) e seu equivalente usando outros sistemas-tampão; concentrações de formamida de 0%, 25%, 50% e 75%; tempo de incubação de 5 minutos a 24 horas; 1, 2 ou mais etapas de lavagem; tempo de incubação de lavagem de 1, 2 ou 15 minutos; e soluções de lavagem de 6 x SSC, 1 x SSC, 0,1 x SSC, ou água deionizada.
[0211]O termo “epítopo” se refere ao local em um antígeno ou hapteno ao qual células B e/ou células T específicas respondem. O termo também é usado de forma intercambiável com “determinante antigênico” ou “sítio de determinante antigênico”. Anticorpos que reconhecem o mesmo epítopo podem ser identificados em um imunoensaio que mostra a habilidade de um anticorpo para bloquear a ligação de outro anticorpo a um antígeno-alvo.
LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[0212]Esse pedido contém uma listagem de sequências. A listagem de sequências compreende as seguintes sequências: ID. DE SEQ. Nº: 1 sequência do genoma inteiro da “cepa Gordon” FPaV-2; fornecida como uma sequência de DNA que corresponde à fita de RNA positiva na qual o genoma viral da fita de RNA negativa é transcrito, ou seja, ela compreende os ORFs na direção de 5’ para 3’ como um mRNA.
[0213]ID. DE SEQ. Nº: 2 sequência do genoma inteiro da “cepa TV25” FPaV-2; fornecida como uma sequência de DNA que corresponde à fita de RNA positiva na qual o genoma viral da fita de RNA negativa é transcrito, ou seja, ela compreende os ORFs na direção de 5’ para 3’ como um mRNA.
[0214]ID. DE SEQ. Nº: 3 sequência do genoma inteiro da “cepa Lapön” FeMoV; fornecida como uma sequência de DNA que corresponde à fita de RNA positiva na qual o genoma viral da fita de RNA negativa é transcrito, ou seja, ela compreende os ORFs na direção de 5’ para 3’ como um mRNA.
[0215]ID. DE SEQ. Nº: 4 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno H da “cepa Gordon” FPaV-2; fornecida como sequência de DNA.
[0216]ID. DE SEQ. Nº: 5 ácido nucleico do antígeno H da “cepa Gordon” FPaV-2 que foi códon-otimizado para expressão primariamente em felinos; fornecido como sequência de DNA.
[0217]ID. DE SEQ. Nº: 6 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno H da “cepa Gordon” FPaV-2.
[0218]ID. DE SEQ. Nº: 7 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno M da “cepa Gordon” FPaV-2; fornecido como sequência de DNA.
[0219]ID. DE SEQ. Nº: 8 ácido nucleico do antígeno M da “cepa Gordon” FPaV-2 que foi códon-otimizado para expressão primariamente em felinos; fornecido como sequência de DNA.
[0220]ID. DE SEQ. Nº: 9 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno M da “cepa Gordon” FPaV-2.
[0221]ID. DE SEQ. Nº: 10 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno F da “cepa Gordon” FPaV-2; fornecido como sequência de DNA.
[0222]ID. DE SEQ. Nº: 11 ácido nucleico do antígeno F da “cepa Gordon” FPaV-2 que foi códon-otimizado para expressão primariamente em felinos; fornecido como sequência de DNA.
[0223]ID. DE SEQ. Nº: 12 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno F da “cepa Gordon” FPaV-2.
[0224]ID. DE SEQ. Nº: 13 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno N da “cepa Gordon” FPaV-2; fornecido como sequência de DNA.
[0225]ID. DE SEQ. Nº: 14 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno N da “cepa Gordon” FPaV-2.
[0226]ID. DE SEQ. Nº: 15 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno P da “cepa Gordon” FPaV-2; fornecido como sequência de DNA.
[0227]ID. DE SEQ. Nº: 16 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno P da “cepa Gordon” FPaV-2.
[0228]ID. DE SEQ. Nº: 17 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno L da “cepa Gordon” FPaV-2; fornecido como sequência de DNA.
[0229]ID. DE SEQ. Nº: 18 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno L da “cepa Gordon” FPaV-2.
[0230]ID. DE SEQ. Nº: 19 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno H da “cepa TV25” FPaV-2; fornecido como sequência de DNA.
[0231]ID. DE SEQ. Nº: 20 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno H da “cepa TV25” FPaV-2.
[0232]ID. DE SEQ. Nº: 21 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno M da “cepa TV25” FPaV-2; fornecido como sequência de DNA.
[0233]ID. DE SEQ. Nº: 22 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno M da “cepa TV25” FPaV-2.
[0234]ID. DE SEQ. Nº: 23 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno F da “cepa TV25” FPaV-2; fornecido como sequência de DNA.
[0235]ID. DE SEQ. Nº: 24 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno F da “cepa TV25” FPaV-2.
[0236]ID. DE SEQ. Nº: 25 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno N da “cepa TV25” FPaV-2; fornecido como sequência de DNA.
[0237]ID. DE SEQ. Nº: 26 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno N da “cepa TV25” FPaV-2.
[0238]ID. DE SEQ. Nº: 27 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno P da “cepa TV25” FPaV-2; fornecido como sequência de DNA.
[0239]ID. DE SEQ. Nº: 28 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno P da “cepa TV25” FPaV-2.
[0240]ID. DE SEQ. Nº: 29 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno L da “cepa TV25” FPaV-2; fornecido como sequência de DNA.
[0241]ID. DE SEQ. Nº: 30 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno L da “cepa TV25” FPaV-2.
[0242]ID. DE SEQ. Nº: 31 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno H da “cepa Lapön” FeMoV; fornecido como sequência de DNA.
[0243]ID. DE SEQ. Nº: 32 ácido nucleico do antígeno H da “cepa Lapön” FeMoV que foi códon-otimizado para expressão primariamente em felinos; fornecido como sequência de DNA.
[0244]ID. DE SEQ. Nº: 33 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno H da “cepa Lapön” FeMoV.
[0245]ID. DE SEQ. Nº: 34 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno M da “cepa Lapön” FeMoV; fornecido como sequência de DNA.
[0246]ID. DE SEQ. Nº: 35 ácido nucleico do antígeno M da “cepa Lapön” FeMoV que foi códon-otimizado para expressão primariamente em felinos; fornecido como sequência de DNA.
[0247]ID. DE SEQ. Nº: 36 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno M da “cepa Lapön” FeMoV.
[0248]ID. DE SEQ. Nº: 37 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno F da “cepa Lapön” FeMoV; fornecido como sequência de DNA.
[0249]ID. DE SEQ. Nº: 38 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno F da “cepa Lapön” FeMoV.
[0250]ID. DE SEQ. Nº: 39 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno N da “cepa Lapön” FeMoV; fornecido como sequência de DNA.
[0251]ID. DE SEQ. Nº: 40 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno N da “cepa Lapön” FeMoV.
[0252]ID. DE SEQ. Nº: 41 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno P da “cepa Lapön” FeMoV; fornecido como sequência de DNA.
[0253]ID. DE SEQ. Nº: 42 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno P da “cepa Lapön” FeMoV.
[0254]ID. DE SEQ. Nº: 43 ácido nucleico do “tipo selvagem” do antígeno L da “cepa Lapön” FeMoV; fornecido como sequência de DNA.
[0255]ID. DE SEQ. Nº: 44 sequência de aminoácidos traduzida do antígeno L da “cepa Lapön” FeMoV
[0256]ID. DE SEQ. Nº: 45 braço esquerdo da região flanqueadora do lócus de inserção C3 de ALVAC; fornecido como sequência de DNA.
[0257]ID. DE SEQ. Nº: 46 braço direito da região flanqueadora do lócus de inserção C3 de ALVAC; fornecido como sequência de DNA.
[0258]ID. DE SEQ. Nº: 47 braço esquerdo da região flanqueadora do lócus de inserção C5 de ALVAC; fornecido como sequência de DNA.
[0259]ID. DE SEQ. Nº: 48 braço direito da região flanqueadora do lócus de inserção C5 de ALVAC; fornecido como sequência de DNA.
[0260]ID. DE SEQ. Nº: 49 lócus de inserção C5 de passagem 3 de vCP3025 incluindo braço direito da região flanqueadora de C5, promotor de vaccinia H6, antígeno H de Gordon códon-optimizado, braço esquerdo da região flanqueadora de C5, ou seja, pares de bases 304.701 a
308.870.
[0261]ID. DE SEQ. Nº: 50 lócus de inserção C5 de passagem 3 de vCP3029 incluindo braço direito da região flanqueadora de C5, promotor de vaccinia H6, antígeno H de Gordon códon-optimizado, braço esquerdo da região flanqueadora de C5, ou seja, pares de bases 304,166 a
308.380.
[0262]ID. DE SEQ. Nº: 51 lócus de inserção C3 de passagem 3 de vCP3029 incluindo braço direito da região flanqueadora de C3, promotor poxviral 42k (longo), antígeno M de Gordon códon-optimizado, braço esquerdo da região flanqueadora de C3, ou seja, pares de bases 38.608 a 42.807.
[0263]ID. DE SEQ. Nº: 52 Iniciador de PCR “Gordon_M_probe_F”.
[0264]ID. DE SEQ. Nº: 53 Iniciador de PCR “Gordon_M_probe_R”.
[0265]ID. DE SEQ. Nº: 54 Iniciador de PCR “C3F”.
[0266]ID. DE SEQ. Nº: 55 Iniciador de PCR “C3R”.
[0267]ID. DE SEQ. Nº: 56 Iniciador de PCR “7520”.
[0268]ID. DE SEQ. Nº: 57 Iniciador de PCR “7521”.
[0269]ID. DE SEQ. Nº: 58 Iniciador de PCR “C3-PCR-F”.
[0270]ID. DE SEQ. Nº: 59 Iniciador de PCR “C3-PCR-R”.
[0271]ID. DE SEQ. Nº: 60 Iniciador de PCR “C3-R1”.
[0272]ID. DE SEQ. Nº: 61 Iniciador de PCR “C3-R2”.
[0273]ID. DE SEQ. Nº: 62 Iniciador de PCR “C3-R3”.
[0274]ID. DE SEQ. Nº: 63 Iniciador de PCR “C3-R4”.
[0275]ID. DE SEQ. Nº: 64 Iniciador de PCR “C3-R5”.
[0276]ID. DE SEQ. Nº: 65 Iniciador de PCR “C3-R6”.
[0277]ID. DE SEQ. Nº: 66 Iniciador de PCR “C3-R7”.
[0278]ID. DE SEQ. Nº: 67 Iniciador de PCR “C3-R8”.
[0279]ID. DE SEQ. Nº: 68 Iniciador de PCR “C3-R9”.
[0280]ID. DE SEQ. Nº: 69 Iniciador de PCR “Gordon_M_1F”.
[0281]ID. DE SEQ. Nº: 70 Iniciador de PCR “Gordon_M_2F”.
[0282]ID. DE SEQ. Nº: 71 Iniciador de PCR “Gordon_M_3F”.
[0283]ID. DE SEQ. Nº: 72 Iniciador de PCR “Gordon_M_1R”.
[0284]ID. DE SEQ. Nº: 73 Iniciador de PCR “C3-F5”.
[0285]ID. DE SEQ. Nº: 74 Iniciador de PCR “C3-F7”.
[0286]ID. DE SEQ. Nº: 75 Iniciador de PCR “7931”.
[0287]ID. DE SEQ. Nº: 76 Iniciador de PCR “7932”.
[0288]ID. DE SEQ. Nº: 77 Iniciador de PCR “7927.DC”.
[0289]ID. DE SEQ. Nº: 78 Iniciador de PCR “7696.CXL”.
[0290]ID. DE SEQ. Nº: 79 Iniciador de PCR “7697.CXL”.
[0291]ID. DE SEQ. Nº: 80 Iniciador de PCR “7925.DC”.
[0292]ID. DE SEQ. Nº: 81 Iniciador de PCR “7792.SL”.
[0293]ID. DE SEQ. Nº: 82 Iniciador de PCR “7793SL”.
[0294]ID. DE SEQ. Nº: 83 Iniciador de PCR “7928.DC”.
[0295]ID. DE SEQ. Nº: 84 Iniciador de PCR “7929.DC”.
[0296]ID. DE SEQ. Nº: 85 Iniciador de PCR “7926.DC”.
[0297]ID. DE SEQ. Nº: 86 Iniciador de PCR “Gordon_H_1R”.
[0298]ID. DE SEQ. Nº: 87 Iniciador de PCR “Gordon_H_2F”.
[0299]ID. DE SEQ. Nº: 88 Iniciador de PCR “Gordon_H_probe_R”.
[0300]ID. DE SEQ. Nº: 89 Iniciador de PCR “Gordon_H_probe_F”.
[0301]ID. DE SEQ. Nº: 90 Iniciador de PCR “Gordon_H_1F”.
[0302]ID. DE SEQ. Nº: 91 Iniciador de PCR “Gordon_H_3F”.
[0303]ID. DE SEQ. Nº: 92 Iniciador de PCR “Gordon_H_4F”.
[0304]ID. DE SEQ. Nº: 93 Iniciador de PCR
“Gordon_H_5F”.
[0305]ID. DE SEQ. Nº: 94 FeMoV “tipo selvagem” do antígeno H da “cepa Lapön” - sem sítio de enzima de restrição BamH1 - ácido nucleico; fornecido como sequência de DNA.
[0306]ID. DE SEQ. Nº: 95 lócus de inserção C3 clonado em vCP3041 e sua sequência de nucleotídeos teórica do par de bases 38.619 a 43.588 incluindo sequência flanqueadora direita do lócus de inserção C3, promotor 42k (longo), Lapön H (wt; no sítio de enzima de restrição BamH I) e sequência flanqueadora esquerda do lócus de inserção C3.
[0307]Esse pedido adicionalmente compreende as seguintes cláusulas:
1. Um vetor viral que compreende pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno relacionado a pelo menos um patógeno que infecta felinos, em que o pelo menos um patógeno que infecta felinos é paramixovírus felino.
[0308]2. O vetor viral de acordo com a cláusula 1, em que o vetor viral é selecionado do grupo que consiste em: vetor viral de vírus avipox, vetor viral de morbilivírus canino, vetor viral de vírus herpes, vetor viral do vírus da varicela.
[0309]3. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 2, em que o pelo menos um patógeno que infecta felinos que é o paramixovírus felino é selecionado do grupo que consiste em: (a) um paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2); (b) um paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2), cujo genoma compreende um ácido ribonucleico complementar à sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste em: (i) uma sequência de ácidos nucleicos de acordo com o
ID. DE SEQ.
Nº: 1, (ii) uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 75% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 80% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 85% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 90% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 91% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 92% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 93% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 94% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 95% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 96% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 97% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 98% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 99% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1; (c) paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2) como depositado na “Collection Nationale de Culture de Microorganismes” (CNCM) sob o número de acesso CNCM I-5123; (d) um paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2), cujo genoma compreende um ácido ribonucleico complementar à sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste em: (i) uma sequência de ácidos nucleicos de acordo com o ID.
DE SEQ.
Nº: 2, (ii) uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 75% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 80% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 85% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 90% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 91% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 92% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 93% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 94% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 95% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 96%
idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 97% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 98% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 99% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2; (e) um morbilivírus felino (FeMoV); (f) um morbilivírus felino (FeMoV), cujo genoma compreende um ácido ribonucleico complementar à sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste em: (i) uma sequência de ácidos nucleicos de acordo com o ID.
DE SEQ.
Nº: 3, (ii) uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 75% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 80% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 85% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 90% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 91% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 92% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 93% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 94% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 95% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 96% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 97% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 98% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, pelo menos 99% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 3, e, preferivelmente, é selecionado do grupo que consiste em: (b) um paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2), cujo genoma compreende um ácido ribonucleico complementar à sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste em: (i) uma sequência de ácidos nucleicos de acordo com o ID.
DE SEQ.
Nº: 1, (ii) uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 75% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 80% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 85% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 90% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 91% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 92% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 93% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 94% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 95% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 96% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 97% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 98% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1, pelo menos 99% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 1; (c) paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2) como depositado na “Collection Nationale de Culture de Microorganismes” (CNCM) sob o número de acesso CNCM I-5123; (d) um paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2), cujo genoma compreende um ácido ribonucleico complementar à sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste em: (i) uma sequência de ácidos nucleicos de acordo com o ID.
DE SEQ.
Nº: 2, (ii) uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 75% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 80% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 85% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 90% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 91% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 92% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 93% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 94% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 95% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 96% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 97% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 98% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2, pelo menos 99% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 2.
[0310]4. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 3, em que o vetor viral é recombinante e/ou de ocorrência não natural.
[0311]5. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 4, em que o vetor viral é a vetor de canarypox, preferivelmente um vetor de canarypox atenuado, mais preferivelmente ALVAC, ainda mais preferivelmente ALVAC-1 ou ALVAC-2, principalmente ALVAC como depositado sob os termos do Tratado de Budapeste na “American Type Culture Collection” (ATCC) sob o número de acesso VR-2547.
[0312]6. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 4, em que o vetor viral é um vetor de vírus da bouba aviária, preferivelmente um vetor de vírus da bouba aviária atenuado, mais preferivelmente TROVAC, principalmente TROVAC como depositado sob os termos do Tratado de Budapeste na “American Type Culture Collection” (ATCC) sob o número de acesso VR-2553.
[0313]7. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 5, em que o vetor viral é selecionado do grupo que consiste em: vCP3025, vCP3029, vCP3041.
[0314]8. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 7, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é selecionado do grupo que consiste em: sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”), sequência codificadora de proteína da matriz (“M”), sequência codificadora de proteína de fusão (“F”), sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”), sequência codificadora de fosfoproteína (“P”), sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA- dependente (“L”) e, mais preferivelmente, é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e/ou uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e/ou uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”).
[0315]9. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 4, ID. DE SEQ. Nº: 5.
[0316]10. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº:
6.
[0317]11. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e a sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 7, ID. DE SEQ. Nº: 8.
[0318]12. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e a sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 9.
[0319]13. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) e a sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10,
pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 10, ID. DE SEQ. Nº: 11.
[0320]14. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) e a sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 12.
[0321]15. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) e a sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 13 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 13.
[0322]16. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) e a sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 14 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº:
14.
[0323]17. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) e a sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 15 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 15.
[0324]18. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) e a sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE
SEQ. Nº: 16, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 16 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 16.
[0325]19. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) e a sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 17 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 17.
[0326]20. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) e a sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 18 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 18.
[0327]21. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos
93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 19 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 19.
[0328]22. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 20 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº:
20.
[0329]23. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína da matriz
(“M”) e a sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 21 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 21.
[0330]24. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e a sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos
97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 22 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 22.
[0331]25. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) e a sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 23 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 23.
[0332]26. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) e a sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 24 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 24.
[0333]27. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) e a sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 25 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 25.
[0334]28. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) e a sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 26 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº:
26.
[0335]29. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) e a sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ.
Nº: 27, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 27 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 27.
[0336]30. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) e a sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 28 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 28.
[0337]31. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) e a sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 29 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 29.
[0338]32. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) e a sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30,
pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 30 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 30.
[0339]33. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 31, ID. DE SEQ. Nº:
32.
[0340]34. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 33 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº:
33.
[0341]35. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e a sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 34 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 34, ID. DE SEQ. Nº: 35.
[0342]36. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e a sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 36 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 36.
[0343]37. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) e a sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos
91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 37 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 37.
[0344]38. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) e a sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 38 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 38.
[0345]39. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) e a sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 39 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 39.
[0346]40. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) e a sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 95%
idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 40 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº:
40.
[0347]41. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) e a sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 41 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 41.
[0348]42. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) e a sequência codificadora de fosfoproteína (“P”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 42 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 42.
[0349]43. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) e a sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 43 e,
preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 43.
[0350]44. O vetor viral de acordo com a cláusula 8, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) e a sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 75% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 80% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 85% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 90% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 91% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 92% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 93% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 94% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 95% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 96% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 97% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 98% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44, pelo menos 99% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 44 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 44.
[0351]45. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 44, em que o vetor viral compreende duas ou mais sequências que codificam um antígeno exógeno, preferivelmente uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”), ou uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”), ou uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”), ou uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”); ou preferivelmente as mesmas duas sequências codificadoras de antígeno exógeno (ou seja, H + H, F + F, M + M, P + P, L + L, N + N), mas de duas cepas diferentes, por exemplo, uma sequência codificadora de antígeno exógeno de uma cepa de paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2), mais preferivelmente a “cepa Gordon” ou a “cepa TV25”, e a outra uma sequência codificadora de antígeno exógeno de uma cepa de morbilivírus felino, mais preferivelmente a “cepa Lapön” –, por exemplo, uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de uma cepa e uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de outra cepa ; mais preferivelmente, a uma cepa da “sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de uma cepa” é uma cepa de paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2), ainda mais preferivelmente a “cepa Gordon” ou a “cepa TV25”, e a outra cepa da “sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de outra cepa” é uma cepa de morbilivírus felino, ainda mais preferivelmente a “cepa Lapön”; principalmente, a uma cepa da “sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de uma cepa” é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 75% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 80% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 85% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos
90% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 91% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 92% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 93% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 94% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 95% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 96% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 97% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 98% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19, pelo menos 99% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 4 ou 19 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID.
DE SEQ.
Nº: 4, ID.
DE SEQ.
Nº: 5, ID.
DE SEQ.
Nº: 19; e a outra cepa da “sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de outra cepa” é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 75% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 80% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 85% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 90% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 91% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 92% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 93% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 94% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 95% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 96% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 97% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 98% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94, pelo menos 99% idêntica ao ID.
DE SEQ.
Nº: 31 ou 94 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID.
DE SEQ.
Nº: 31, ID.
DE SEQ.
Nº: 32, ID.
DE SEQ.
Nº: 94.
[0352]46. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 45, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é inserida em pelo menos um lócus de inserção, preferivelmente em uma região não essencial do genoma do vetor viral.
[0353]47. O vetor viral de acordo com a cláusula 46, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é inserida em dois ou mais loci de inserção.
[0354]48. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 46 a 47, em que o pelo menos um lócus de inserção é o lócus de inserção C3.
[0355]49. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 46 a 48, em que o vetor viral compreende sequências flanqueadoras do lócus de inserção C3, preferivelmente de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 45 (braço esquerdo da região flanqueadora de C3) e o ID. DE SEQ. Nº: 46 (braço direito da região flanqueadora de C3).
[0356]50. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 46 a 49, em que o pelo menos um lócus de inserção é o lócus de inserção C5.
[0357]51. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 46 a 50, em que o vetor viral compreende sequências flanqueadoras do lócus de inserção C5, preferivelmente de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 47 (braço esquerdo da região flanqueadora de C5) e o ID. DE SEQ. Nº: 48 (braço direito da região flanqueadora de C5).
[0358]52. O vetor viral de acordo com cláusulas 46 a 51, em que o pelo menos um lócus de inserção é o lócus de inserção C6.
[0359]53. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 46, em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno está ligada operativamente a pelo menos uma sequência promotora, preferivelmente a sequência promotora fraca.
[0360]54. O vetor viral de acordo com a cláusula 53, em que a pelo menos uma sequência promotora é o promotor de vaccinia H6.
[0361]55. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 53 a 54, em que a pelo menos uma sequência promotora é o promotor de vaccinia I3L.
[0362]56. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 53 a 55, em que a pelo menos uma sequência promotora é o promotor poxviral 42k (longo).
[0363]57. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 53 a 56, em que a pelo menos uma sequência promotora é o promotor de vaccinia 7,5k.
[0364]58. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 53 a 57, em que a pelo menos uma sequência promotora é o promotor de vaccinia Pi.
[0365]59. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 58, em que o vetor viral ainda compreende sequências regulatórias adicionais, por exemplo, uma sequência sinalizadora de terminação e/ou de poliadenilação.
[0366]60. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 59, em que o vetor viral compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% idêntica à sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste no ID. DE SEQ. Nº: 49, ID. DE SEQ. Nº: 50, ID. DE SEQ. Nº: 51, ID. DE SEQ. Nº: 95 e, preferivelmente, é a sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 49, ID. DE SEQ. Nº: 50, ID. DE SEQ. Nº: 51, ID. DE SEQ. Nº: 95.
[0367]61. O vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 60, em que o felino é um gato, preferivelmente um gato doméstico.
[0368]62. A célula hospedeira de mamífero, caracterizada pelo fato de que ela compreende o vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 61.
[0369]63. Uso do vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 61 ou da célula hospedeira de mamífero de acordo com a cláusula 62 para a fabricação de uma composição imunogênica ou vacina.
[0370]64. Uma composição imunogênica que compreende: (a) o vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 61 ou a célula hospedeira de mamífero de acordo com a cláusula 62, e/ou (b) um polipeptídeo codificado pelo vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 61, por exemplo, um vírus, um vírus vivo modificado, uma partícula semelhante a vírus (VLP) ou semelhantes, e (c) opcionalmente, um carreador ou excipiente aceitável para uso farmacêutico ou veterinário, preferivelmente o referido carreador sendo adequado para aplicação oral, intradérmica, intramuscular ou intranasal; em que, preferivelmente, a referida composição imunogênica compreende um vírus, por exemplo, um vírus infeccioso.
65. Uma vacina ou composição farmacêutica que compreende:
(a) o vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 61 ou a célula hospedeira de mamífero de acordo com a cláusula 62, e/ou (b) um polipeptídeo codificado pelo vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 61, por exemplo, um vírus, um vírus vivo modificado, uma partícula semelhante a vírus (VLP) ou semelhantes, e (c) um carreador ou excipiente aceitável para uso farmacêutico ou veterinário, preferivelmente o referido carreador sendo adequado para aplicação oral, intradérmica, intramuscular ou intranasal, (d) opcionalmente, a referida vacina ou composição farmacêutica ainda compreendendo um adjuvante.
66. Um método para a preparação de uma composição imunogênica ou de uma vacina para redução da incidência e/ou da severidade de um ou mais sinais clínicos associados ou causados por uma infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico, que compreende as seguintes etapas: (a) infecção da célula hospedeira de mamífero de acordo com a cláusula 62 com o vetor viral de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 61, (b) cultivo das células infectadas sob condições adequadas, (c) coleta das culturas das células infectadas, (d) opcionalmente, purificação das culturas das células infectadas coletadas da etapa (c), (e) opcionalmente, mistura da referida cultura das células infectadas coletada com um carreador farmaceuticamente aceitável.
[0371]67. A composição imunogênica de acordo com a cláusula 64 ou a vacina de acordo com a cláusula 65 para uso em um método de redução ou prevenção dos sinais clínicos ou doença causados por uma infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico ou para uso em um método de tratamento e/ou prevenção de uma infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico, em que, preferivelmente, o referido felino é um gato, mais preferivelmente um gato doméstico, em que, preferivelmente, o pelo menos um paramixovírus patogênico é pelo menos um paramixovírus felino, em que preferivelmente os referidos sinais clínicos ou doença causados por uma infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico ou pela referida infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico são selecionados do grupo que consiste em: viremia, febre, excreção viral no ambiente, infecções do sistema urogenital, infecções do sistema urinário, doença renal, doença renal crônica (CKD), inflamação dos túbulos renais e tecido intersticial renal, nefrite túbulo-intersticial idiopática (TIN).
[0372]68. Um método de imunização de um felino, por exemplo, um gato, mais preferivelmente um gato doméstico, contra uma doença clínica causada por pelo menos um paramixovírus patogênico no referido felino, o método compreendendo a etapa de administração ao felino da composição imunogênica de acordo com a cláusula 64 ou da vacina de acordo com a cláusula 65, em que a referida composição imunogênica ou vacina não causa sinais clínicos de infecção, mas é capaz de induzir uma resposta imune que imuniza o felino contra formas patogênicas do referido pelo menos um paramixovírus, em que, preferivelmente, o pelo menos um paramixovírus patogênico é pelo menos um paramixovírus felino, em que, preferivelmente, a referida doença clínica ou os referidos sinais clínicos de infecção são selecionados do grupo que consiste em: viremia, febre, excreção viral no ambiente, infecções do sistema urogenital, infecções do sistema urinário, doença renal, doença renal crônica (CKD), inflamação dos túbulos renais e tecido intersticial renal, nefrite túbulo-intersticial idiopática (TIN).
[0373]69. Um kit para vacinação de um felino, preferivelmente um gato, mais preferivelmente um gato doméstico, contra uma doença e ele associada e/ou para redução da incidência ou da severidade de um ou mais sinais clínicos associados ou causados por pelo menos um paramixovírus patogênico em um felino que compreende: (a) um dispensador capaz de administrar uma vacina ao referido felino; e (b) a composição imunogênica de acordo com a cláusula 64 ou a vacina de acordo com a cláusula 65, e (c) opcionalmente, um folheto de instruções; em que, preferivelmente, o pelo menos um paramixovírus patogênico é pelo menos um paramixovírus felino, em que, preferivelmente, a referida doença ou os referidos sinais clínicos são selecionados do grupo que consiste em: viremia, febre, excreção viral no ambiente, infecções do sistema urogenital, infecções do sistema urinário, doença renal, doença renal crônica (CKD), inflamação dos túbulos renais e tecido intersticial renal, nefrite túbulo-intersticial idiopática (TIN).
EXEMPLOS EXEMPLO 1: Construção de vCP3025: ALVAC C5/H6p Gordon H Sintético e vCP3029: ALVAC C3/42k Gordon M Longo Sintético
+ C5/H6p Gordon H Sintético (que compreendem os IDS. DE SEQ. Nos: 49, 50 e 51; Figuras 2, 3 e 4)
[0374]Finalidade: Gerar duas construções de ALVAC: uma com um inserto único e uma com um inserto duplo. A construção única expressa Gordon H códon-optimizado no lócus de inserção C5 sob um promotor H6. A construção dupla expressa tanto Gordon H códon-optimizado no lócus de inserção C5 sob um promotor H6 quanto Gordon M códon-optimizado no lócus de inserção C3 sob um promotor longo 42k.
[0375]Genes: Gordon H Sintético; Gordon M Sintético. Informação geral de recombinantes: A. Vírus parental: ALVAC derivado de passagem posterior, basicamente o mesmo vírus que ALVAC ATCC VR-2547 parental, exceto o nível de passagem; Titulação = 1,5 x 10^10 pfu/ml; B. Plasmídeos doadores: pC5 H6p Gordon H (opt); pC3 42K Gordon M (opt); C. Lócus de inserção: único = C5; duplo = C3 e C5; D. Promotores: sítio/lócus de inserção C5 = promotor H6; sítio/lócus de inserção C3 = Promotor 42k longo; E. Células para recombinação in vitro: Células primárias de fibroblastos de embrião de galinha (1°CEF); F. Métodos para seleção recombinante: Hibridização em placa para sondas específicas para Gordon H e Gordon M. Descrição detalhada de geração recombinante
[0376]A recombinação in vitro (IVR) é realizada por transfecção de células 1°CEF com plasmídeos doadores Not I linearizados. Uma única IVR é realizada usando 20 µg de cada um dos plasmídeos doadores [pC5 H6p Gordon H (opt) e pC3 42K Gordon M (opt)]. Fugene HD (Promega Nº de Catálogo E2311) é o reagente de transfecção. As células transfectadas são subsequentemente infectadas com ALVAC parental como vírus de resgate em MOI de 10. Após 24 horas, as células-transfectadas infectadas são coletadas, sonificadas e usadas para avaliação de vírus recombinante.
[0377]As placas recombinantes são avaliadas com base no método de hibridização de elevação de placa. Monocamadas infectadas são elevadas sobre membranas de transferência de náilon carregadas positivamente (GE Healthcare Nº de Catálogo RPN82B) e são feitas cópias daquelas elevações por compressão de membranas de náilon adicionais contra as elevações originais na presença de tampão de elevação. As cópias são sondadas com uma sonda específica para Gordon H marcada com biotina ou uma sonda específica para Gordon M marcada com biotina. Nas rodadas 3 e 4, é feito e sondado um terceiro conjunto de elevações com sondas parentais específicas para ALVAC (sonda de C3 na rodada 3; sonda de C5 na rodada 4). As sondas parentais para ALVAC se ligam às regiões dos ORFs que são deletadas durante recombinação. As sondas são marcadas usando o “Thermo Scientific DecaLabel DNA Labeling Kit”; produto Nº K0622. As elevações sondadas são desenvolvidas usando o “Thermo Scientific Chemiluminescent Nucleic Acid Detection Module Kit”; produto Nº 89880. As placas recombinantes são selecionadas, cortadas da membrana original, e usadas para infecção na rodada de purificação seguinte. Na terceira rodada sequencial de purificação de placa, um recombinante designado vCP3029.2.2.1 é escolhido. Como base em resultados de película, espera-se que essa placa produza vírus de inserto duplo na rodada de avaliação seguinte. No entanto, o plaqueamento dessa placa escolhida na quarta rodada de avaliação produz placas tanto de inserto único [Gordon H (opt) no sítio de C5] quanto de inserto duplo [Gordon H (opt) no sítio de C5 e Gordon M (opt) no sítio de C3]. A placa de inserto duplo é escolhida e marcada vCP3029.2.2.1.2. A placa de inserto único é escolhida e marcada vCP3025.2.2.1.1.
[0378]Uma quinta e última rodada de purificação de placa é realizada para vCP3025.2.2.1.1 e para vCP3029.2.2.1.2. Dois pedaços de agarose de placas individuais são retirados da placa não diluída de vCP3025.2.2.1.1 (vCP3025.2.2.1.1.1 e vCP3025.2.2.1.1.2). Similarmente, três pedaços de agarose de placas individuais são retirados da placa não diluída de vCP3029.2.2.1.2. (vCP3029.2.2.1.2.3, vCP3029.2.2.1.2.4 e vCP3029.2.2.1.2.5). Esses pedaços são expandidos para obter P1s (passagem 1) (frasco T-25). A testagem por PCR confirma que vCP3025.2.2.1.1.2 contém o inserto de Gordon H (opt) no sítio de C5 e que ele não contém inserto de Gordon M (opt) no sítio de C3. Similarmente, a testagem por PCR confirma que vCP3029.2.2.1.2.3 contém o inserto de Gordon H (opt) no sítio de C5 e o inserto de Gordon M (opt) no sítio de C3. vCP3025.2.2.1.1.2 (inserto único) e vCP3029.2.2.1.2.3 (inserto duplo) são expandidos até P2 (passagem 2) (dois frascos T-150 para cada construção). Esses estoques de P2 são denominados vCP3025 P2 e vCP3029 P2.
[0379]vCP3025 P2 e vCP3029 P2 são escalonados até P3 (passagem 3) (quatro garrafas rotatórias por construção). Os materiais de P3 são concentrados e purificados por meio de pélete de sacarose. Esses estoques de P3 são denominados vCP3025 e vCP3029. Análise de recombinantes: As análises seguintes são realizadas nos estoques de P3
[0380]Esterilidade: A testagem da esterilidade é realizada nos estoques de P3 de vCP3025 e vCP3029. Para cada construção, alíquotas de 50 µl são plaqueadas sobre cada uma de duas placas de Dextrose Ágar de Sabouraud (SDA) e sobre cada uma de duas placas de Ágar Tripticase de Soja com sangue de carneiro 5% (TSA II 5% SB) (BBL Nº de Catálogo 221180 e Nº 221239, respectivamente). Para cada construção, uma placa de SDA e uma placa de TSA II SB 5% são incubadas a 37°C por 10 dias, e o outro conjunto de placas é incubado em temperatura ambiente por 10 dias. Ao final de 10 dias, nenhuma das placas mostra nenhum sinal de crescimento bacteriano ou fúngico. Confirmação da pureza genética
[0381]A pureza dos estoques de P3 é confirmada por meio de várias reações de PCR separadas. A primeira reação de PCR usa iniciadores localizados em uma das extremidades dos braços de C5 (iniciadores 7931 e 7932). Esses iniciadores produzem uma banda de 2.470 bp para ALVAC do tipo selvagem e uma banda de 4.240 bp para recombinantes que contêm Gordon H (opt) no sítio de C5. Embora existam iniciadores que amplificariam a região C3 inteira, aqueles iniciadores produziriam uma banda de 4.539 bp para ALVAC do tipo selvagem e uma banda de recombinantes de 4.289 bp que contêm Gordon M (opt) no sítio de C3. Essa diferença de tamanho é difícil de ser identificada em um gel. Por essa razão, outras duas PCRs são realizadas para analisar o sítio de C3. Na primeira reação, iniciadores usados para produzir a sonda de Gordon M (Gordon_M_probe_F e Gordon_M_probe_R) são usados para amplificar as amostras. Esses iniciadores produzem uma banda de 621 bp para recombinantes que contêm Gordon M (opt) no sítio de C3 e não produzem nenhuma banda para ALVAC do tipo selvagem. Na segunda reação, iniciadores usados para produzir a sonda de C3 do tipo selvagem (C3F e C3R) são usados para amplificar as amostras. Esses iniciadores estão localizados em uma região que é deletada durante recombinação e produzem uma banda de 1.007 bp para ALVAC do tipo selvagem e nenhuma banda para recombinantes que contêm Gordon M (opt) no sítio de C3.
[0382]Análise de sequência: Análises mais detalhadas de sequências dos estoques de P3 são realizadas por amplificação por PCR e análise de sequência do sítio de C5 para vCP3025 e dos sítios de C3 e C5 para vCP3029. Os sítios de C5 são amplificados usando iniciadores 7931 e 7932, que estão localizados nas proximidades dos braços de recombinação de C5. O sítio de C3 é amplificado usando iniciadores C3-PCR-F e C3-PCR-R, que estão localizados nas proximidades dos braços de recombinação de C3. Em todos os casos, a PCR produz uma banda única do tamanho esperado e o sequenciamento demonstra os resultados esperados para o braço recombinado. Métodos, reagentes e iniciadores
[0383]Iniciadores para amplificação da sonda de Gordon H (opt): Sonda de Gordon H - F GTTCGCCACCGTGAACATCC (ID. DE SEQ. Nº: 89); Sonda de Gordon H - R CACTGCCTTCACGGTCACG (ID. DE SEQ. Nº: 88).
[0384]Iniciadores para amplificação da sonda de Gordon M (opt): Sonda de Gordon M - F GGAGATCCTGACTCTGAACATCG (ID.
DE SEQ. Nº: 52); Sonda de Gordon M - R CTCCACAGAGTTTTATTCAGCCC (ID. DE SEQ. Nº: 53).
[0385]Iniciadores para amplificação da sonda de ALVAC Parental (sítio de C3): C3F CGTAGAGTTTTTTGTCTAGTTCTAT (ID. DE SEQ. Nº: 54); C3R GTTGTTTTATGCGGTAAAGAATAAT (ID. DE SEQ. Nº: 55).
[0386]Iniciadores para amplificação da sonda de ALVAC Parental (sítio de C5): 7520 TCTTGCTTCGCAGTCATCGTTCTG (ID. DE SEQ. Nº: 56); 7521 TCTAAAATGCATAATTTCTAA (ID. DE SEQ. Nº: 57).
[0387]Iniciadores para amplificação por PCR do sítio de C3 para sequenciamento: C3-PCR-F GCTAACACAAGTTAGAGGCGTATTAC (ID. DE SEQ. Nº: 58); C3-PCR-R CATTAATTATGTGATGAGGCATCCAAC (ID. DE SEQ. Nº: 59).
[0388]Iniciadores para amplificação por PCR do sítio de C5 para sequenciamento: 7931 GAATCTGTTAGTTAGTTACTTGGAT (ID. DE SEQ. Nº: 75); 7932 TGATTATAGCTATTATCACAGACTC (ID. DE SEQ. Nº: 76).
[0389]Iniciadores para sequenciamento do sítio de C3: C3-PCR-F GCTAACACAAGTTAGAGGCGTATTAC (ID. DE SEQ. Nº: 58); C3-PCR-R CATTAATTATGTGATGAGGCATCCAAC (ID. DE SEQ. Nº: 59); C3-R1 TTTATAGGTAAATCCAGGAA (ID. DE SEQ. Nº: 60) C3-R2 GCCTACTAAGAAAACTAGAAGATAC (ID. DE SEQ. Nº: 61); C3-R3 AGATTGATATAAATGAATATGTAA (ID. DE SEQ. Nº:
62); C3-R4 CGACGTTAGGTTAGATACTG (ID. DE SEQ. Nº: 63); C3-R5 ATGCGGTACCCTGTTCGAAG (ID. DE SEQ. Nº: 64); C3-R6 CAGAAATGAGTAATGGAAGA (ID. DE SEQ. Nº: 65); C3-R7 CTGGAAATAGTCCGTTATAT (ID. DE SEQ. Nº: 66); C3-R8 CAGTATCTCATAAAGGCACTTA (ID. DE SEQ. Nº: 67); C3-R9 CCGTTCTAAATATAGCTGTTGCAT (ID. DE SEQ. Nº: 68); Gordon M 1F ATGACTGAGATCTTCAACCTGG (ID. DE SEQ. Nº: 69); Gordon M 2F TGAGCATGGGGACCATCCTG (ID. DE SEQ. Nº: 70); Gordon M 3F GGGCTGAATAAAACTCTGTGGAG (ID. DE SEQ. Nº: 71); sonda de Gordon M - F GGAGATCCTGACTCTGAACATCG (ID. DE SEQ. Nº: 52); Gordon M 1R CGATGTTCAGAGTCAGGATCTCC (ID. DE SEQ. Nº: 72); C3-F5 CACGGATTATCTACTGTGAT (ID. DE SEQ. Nº: 73); C3-F7 GCAACAGTAGTTATACGATGAG (ID. DE SEQ. Nº: 74).
[0390]Iniciadores para sequenciamento do sítio de C5: 7931 GAATCTGTTAGTTAGTTACTTGGAT (ID. DE SEQ. Nº: 75); 7932 TGATTATAGCTATTATCACAGACTC (ID. DE SEQ. Nº: 76);
7927.DC CTCTTGCATATTCGTAATAGTAATTG (ID. DE SEQ. Nº: 77);
7696.CXL ATTCTATCGGAAGATAGGATACCAG (ID. DE SEQ. Nº: 78);
7697.CXL ATGCACAACTTCTTGTCTGCATGATG (ID. DE SEQ. Nº: 79);
7925.DC TACGGCTATATGTAGAGGAGTTAACC (ID. DE SEQ. Nº:
80);
7792.SL CTCTGAGACACAAAAGAGGTAGCTG (ID. DE SEQ. Nº: 81); 7793SL CATAGAACGGTATAGAGCGTTAATC (ID. DE SEQ. Nº: 82);
7928.DC CATCATGAGCAACGCGTTAGTATAT (ID. DE SEQ. Nº: 83);
7929.DC GGAGATACCTTTAGATATGGATCTG (ID. DE SEQ. Nº: 84);
7926.DC TCAACAACCGCTCGTGAACAGCTTC (ID. DE SEQ. Nº: 85); Gordon H 1R GCTCGGTGCTCATTGCGTTG (ID. DE SEQ. Nº: 86); Gordon H 2F CAACGCAATGAGCACCGAGC (ID. DE SEQ. Nº: 87); Sonda de Gordon H - R CACTGCCTTCACGGTCACG (ID. DE SEQ. Nº: 88); Sonda de Gordon H - F GTTCGCCACCGTGAACATCC (ID. DE SEQ. Nº: 89); Gordon H 1F TCGCGATATCCGTTAAGTTTGTA (ID. DE SEQ. Nº: 90); Gordon H 3F GAATATCCCCACCAGGTCTATCTAC (ID. DE SEQ. Nº: 91); Gordon H 4F TACCGACGATGTGCCCATCC (ID. DE SEQ. Nº: 92); Gordon H 5F ATCTCCGACGGCCTGATCAT (ID. DE SEQ. Nº: 93).
[0391]Células para recombinação in vitro: Células primárias de fibroblastos de embrião de galinha (1°CEF) são desenvolvidas em FBS 10% (Hyclone Nº de Catálogo SH30071.03)
DMEM (Gibco Nº de Catálogo 11960) suplementado com Glutamina 4 mM (Gibco Nº de Catálogo 25030) e piruvato de sódio 1 mM (Gibco Nº 11360) na presença de 1x antibióticos/antimicóticos (P/S/A/A, Gibco Nº de Catálogo 15240). Reagente de transfecção Fugene (Promega Nº de Catálogo E2311).
[0392]O concentrado de vírus final é ressuspenso em 1 mM de Tris, pH 9,0.
[0393]Titulação de vCP3025 = 2,3 x 10^9 pfu/ml.
[0394]Titulação de vCP3029 = 1,9 x 10^9 pfu/ml. EXEMPLO 2: Exemplo de vacinação (vCP3025 – Gordon H; que compreende o ID. DE SEQ. Nº: 49; Figura 2)
[0395]Em SD0 e SD21, uma dose total de 1 ml da vacina de vetor ALVAC-Gordon H com uma titulação de aproximadamente 1 x 108 TCID50/ml é administrada ao grupo de 8 gatos (grupo 1). Espera-se que essa dose libere quantidades suficientes de vírus de vacina a fim de facilitar a resposta imune para o antígeno selecionado (hemaglutinina de FaPV-2). O controle negativo (grupo 3) é vacinado com uma construção de vetor ALVAC irrelevante (ou seja, ALVAC da raiva). Os animais têm amostras de sangue coletadas em SD0, SD21 e SD 42 e a resposta imune humoral é medida por ELISA específico, ensaio de imunofluorescência (IFA) e/ou teste de neutralização viral/sérica (VNT/SNT) (Exemplo 4). Em SD42, os animais dos respectivos grupos são inoculados por via intravenosa (IV) com o vírus de ataque como descrito abaixo (Exemplo 5) e, além disso, os parâmetros da infecção fornecida são medidos (viremia, excreção, distribuição de vírus). EXEMPLO 3: Exemplo de vacinação (vCP3029 – Gordon H + Gordon M; que compreende os IDS. DE SEQ. Nos: 50+51; Figuras 3+4)
[0396]Em SD0 e SD21, uma dose total de 1 ml da vacina de vetor ALVAC-Gordon H+M com uma titulação de aproximadamente 1 x 108 TCID50/ml é administrada ao grupo de 8 gatos (grupo 2). Espera-se que essa dose libere quantidades suficientes de vírus de vacina a fim de facilitar a resposta imune para os antígenos selecionados (hemaglutinina de FaPV- 2 e proteína da matriz). O controle negativo (grupo 3) é vacinado com uma construção de vetor ALVAC irrelevante (ou seja, ALVAC da raiva). Os animais têm amostras de sangue coletadas em SD0, SD21 e SD 42 e a resposta imune humoral é medida por ELISA específico, ensaio de imunofluorescência (IFA) e/ou teste de neutralização viral/sérica (VNT/SNT) (Exemplo 4). Em SD42, os animais dos respectivos grupos são inoculados por via intravenosa (IV) com o vírus de ataque como descrito abaixo (Exemplo 5) e, além disso, os parâmetros da infecção fornecida são medidos (viremia, excreção, distribuição de vírus). EXEMPLO 4: Teste de neutralização viral (VNT)/Teste de neutralização sérica (SNT)
[0397]Para detectar anticorpos neutralizantes contra paramixovírus felino, por exemplo, FPaV-2, um ensaio de neutralização viral/sérica (VNT/SNT) é realizado. Portanto, amostras de soro de gato são tratadas a 56°C por 30 minutos para inativar fatores de complemento. Cinquenta µl dessas amostras de soro inativadas pelo calor são misturados com 50 µl de DMEM contendo 100 unidades formadoras de fluorescência (FFU) de paramixovírus felino, por exemplo, FPaV-2 (isolado ‘Gordon’), e são então incubados por uma hora a 4°C. A mistura é usada para infectar células LLC-MK2 em uma placa de cultura de células de 96 poços por duas horas a 37°C. A seguir, a mistura de soro/vírus é removida e substituída por DMEM contendo 2% (v/v) de FBS inativado pelo calor, piruvato de sódio, aminoácidos não essenciais, penicilina e estreptomicina. As células são incubadas por cinco dias a 37°C, CO2 5% e 90% de umidade, seguida por coloração por imunofluorescência como descrito abaixo. A titulação de neutralização da amostra de soro de teste é definida como a recíproca da maior diluição de soro de teste para a qual a infectividade do vírus é reduzida por 50%, quando comparado com o controle de vírus sem incubação de soro.
[0398]Para detectar infecções por paramixovírus felino, por exemplo, infecções por FPaV-2, células LLC-MK2 são infectadas como descrito abaixo e coradas com um anticorpo específico para paramixovírus felino usando técnicas de imunofluorescência. Para essa finalidade, células aderentes são lavadas com PBS após um período de infecção de 5 dias e subsequentemente fixadas com 80% de acetona a -20°C por 10 minutos. As células são lavadas duas vezes com PBS e a ligação não específica é bloqueada por incubação com BSA 5% em PBS a 37°C por uma hora. Isso é seguido por uma etapa de incubação com anticorpo anti-paramixovírus felino (por exemplo, anti-nucleocapsídeo de FPaV-2, policlonal, coelho) em uma concentração final de 1 µg/ml em BSA 1% em PBS por uma hora a 37°C. As células são lavadas três vezes com PBS, seguido pela aplicação de ‘conjugado de Anticorpo Secundário anti-IgG de coelho (H+L) de cabra, Alexa Fluor® 488’ (Thermo Fisher Scientific) em uma diluição final de 1:1.000 em BSA 1% em PBS. Após um tempo de incubação de uma hora a 37°C, as células são lavadas duas vezes com PBS e as células são avaliadas quanto à presença de FPaV-2 usando um microscópio de fluorescência.
[0399]Para cultivo de vírus, células LLC-MK2 e CrFK são semeadas em frascos de cultura de células de 75 cm2 em DMEM (com piruvato de sódio e aminoácidos não essenciais) com 5% de FBS em uma atmosfera que inclui dióxido de carbono 5% a 37°C e 90% de umidade. Na confluência de 70 – 80%, as células são infectadas com uma mistura de um mililitro de urina e 5 ml de DMEM (com penicilina e estreptomicina) de um dia para o outro a 37°C, CO2 5% e 90% de umidade. Após 24 horas, o meio de infecção é substituído por 8 ml de meio de cultivo (DMEM, piruvato de sódio, aminoácidos não essenciais, FBS 5%, penicilina e estreptomicina) e cultivado por mais 6 dias nas condições indicadas. O sobrenadante da cultura de células dessa infecção é passado por mais três vezes. A seguir, 600 µl do sobrenadante da cultura de células são testados quanto à presença de paramixovírus felinos. EXEMPLO 5: Modelo de ataque
[0400]Um estudo clínico do modelo de ataque para investigar nos estágios iniciais de infecção e expressão de doença é empregado. Um ataque intravenoso (IV) em uma dose o mais próxima possível de uma dose de ataque de 1 x 105 TCID50/ml com a “cepa Gordon” FPaV-2 é realizado com um acompanhamento de 56 dias pós-ataque. Como não são esperados sinais clínicos de CKD, os objetivos principais do estudo clínico do modelo de ataque são monitorar primo infecção, possível efeito de infecção sobre a função renal, resposta imune à infecção, avaliar uma disseminação potencial e confirmar o estabelecimento do vírus no rim por imunoistoquímica (IHC) e possivelmente outros órgãos.
[0401]Os sintomas esperados em estágios iniciais da doença estão associados à viremia (apatia, hipertermia, perda de peso). Os sintomas esperados em estágios tardios estão possivelmente relacionados à insuficiência renal crônica (perda de peso corporal, uremia, lesões mucosas). O estoque de vírus da “cepa Gordon” FPaV-2 (com a titulação de 1 x 105 TCID50/ml) é preparado em células mononucleares primárias do sangue periférico (PBMCs) de gato ou em outras células como, por exemplo, a linhagem de células LLC-MK2. O estoque foi testado negativo para a presença de patógenos felinos comuns (incluindo vírus da panleucopenia felina, vírus da imunodeficiência felina, vírus da leucemia felina e coronavírus felino, respectivamente). Gatos, de raças mistas, são inoculados com 1 ml (1 x 105 TCID50/ml) de estoque de vírus por via intravenosa (IV).
[0402]Planejamento experimental e acompanhamento: para uma visão geral gráfica, veja a Figura 5.
[0403]Abaixo, os grupos de gatos A1, A2, B1, B2, C1 e C2 representam momentos de necropsia diferentes: A1 e A2 em D14, B1 e B2 em D28, C1 e C2 em D56. A subdivisão é motivada evitando-se a amostragem de todos os gatos todos os dias a fim de evitar estresse excessivo para os animais. - Exame clínico e temperatura retal diariamente de D0 a D14 (exceto finais de semana) e duas vezes por semana de D15 a D56 - Medição do peso duas vezes por semana de D0 a D56 - Amostragem de sangue para monitoramento da viremia por PCR Vi- D-7 D10 D11 D12 D14 D21 D28 D35 D42 D49 D56 D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 D8 D9 re- mia A1 X X X X A2 X X X X
B1 X X X X X B2 X X X X C1 X X X X X X C2 X X x X X - Amostragem de urina para monitoramento da viremia por PCR e lipidúria D14 D21 D28 D35 D42 D49 D56 D7 Urina A1 C PM A2 PM B1 C PM B2 PM C1 C C PM C2 C PM (C = cistocentese; PM = post mortem) - Swabs oronasais para monitoramento da viremia por PCR Swabs D-7 D10 D11 D12 D14 D21 D28 D35 D42 D49 D56 D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 D8 D9
A
X X X X 1
A
X X X X 2
B
X X X X X 1
B
X X X X 2
C
X X X X X X 1
C X X x X X 2 - Bioquímica do sangue e contagem de células D-7 D14 D21 D28 D35 D42 D49 D56 A1 X X A2 X X B1 X X X B2 X X C1 X X X X C2 X X X - Amostragem de soros para sorologia D7 ou D8 D-7 D14 D28 D56 Sorologia A1 X X X A2 X X X B1 X X B2 X X C1 X X C2 X X - Necropsia e histologia
[0404]Uma necropsia completa é realizada para cada animal com amostragem de rim, baço, fígado, bexiga e pulmão. São feitas coletas de órgãos para histologia e detecção viral por PCR.
[0405]O estudo clínico do modelo de ataque testa a hipótese de que as vacinas à base de vetor viral de acordo com a presente invenção são capazes de evitar e/ou reduzir a intensidade e/ou duração de viremia de paramixovírus felino mediante ataque em gatos. Além disso, a vacinação de gatos com os vetores virais da invenção subjacentes induz anticorpos contra, por exemplo, antígeno de hemaglutinina de paramixovírus felino. EXEMPLO 6: Construção de vCP3041: ALVAC C5/H6p Gordon H Sintético + C3/42k Lapön H Longo do Tipo Selvagem (que compreende os IDS. DE SEQ. Nos: 49 + 95)
[0406]Finalidade: Gerar uma construção de ALVAC com um inserto duplo. A construção expressa Gordon H códon- optimizado no lócus de inserção C5 sob um promotor H6 (usado como um genitor) e Lapön H do tipo selvagem (sem o sítio de enzima de restrição BamH1; ID. DE SEQ. Nº: 94) no lócus de inserção C3 sob um promotor longo 42k (novo inserto) (Figuras
6 e 7).
[0407]Genes: Gordon H Sintético; Lapön H do Tipo Selvagem. Informação geral de recombinante: A. Vírus parental: vCP3025: ALVAC C5/H6p Gordon H Sintético; Titulação = 2.3 x 10^9 pfu/ml; B. Plasmídeos doadores: pC3 42k longo Lapön H (wt - sem sítio de enzima de restrição BamH1); C. Lócus de inserção: C3; D. Promotores: Promotor 42k longo; E. Células para recombinação in vitro: Células primárias de fibroblastos de embrião de galinha (1°CEF); F. Métodos para seleção recombinante: Hibridização em placa para Gordon H (opt) e Lapön H (wt) sondas específicas. Descrição detalhada de geração recombinante
[0408]G. A recombinação in vitro (IVR) é realizada por transfecção de células 1°CEF com 20 µg de plasmídeo doador Not I linearizado [pC3 42k longo Lapön H (wt - sem sítio de enzima de restrição BamH1)]. Fugene HD (Promega Nº de Catálogo E2311) é o reagente de transfecção. As células transfectadas são subsequentemente infectadas com vCP3025 como vírus de resgate em MOI de 10. Após 24 horas, as células- transfectadas infectadas são coletadas, sonificadas e usadas para avaliação de vírus recombinante.
[0409]As placas recombinantes são avaliadas com base no método de hibridização de elevação de placa. Monocamadas infectadas são elevadas sobre membranas de transferência de náilon carregadas positivamente (GE Healthcare Nº de Catálogo RPN82B) e cópias daquelas elevações feitas por compressão de membranas de náilon adicionais contra as elevações originais na presença de tampão de elevação. As cópias são sondadas com uma sonda específica para Lapön H (wt - sem sítio de enzima de restrição BamH1) marcada com biotina ou uma sonda para ALVAC parental C3 marcada com biotina. A sonda parental de ALVAC se liga uma região do ORF que é deletada durante recombinação. As sondas são marcadas usando o “Thermo Scientific DecaLabel DNA Labeling Kit”; produto Nº K0622. As elevações sondadas são desenvolvidas usando o “Thermo Scientific Chemiluminescent Nucleic Acid Detection Module Kit”; produto Nº 89880. As placas recombinantes são selecionadas, cortadas da membrana original, e usadas para infecção na rodada de purificação seguinte. Após três ou quatro rodadas de purificação sequencial da placa, o recombinante que contém o gene de Lapön H (wt - sem sítio de enzima de restrição BamH1) no lócus C3 é isolado.
[0410]Em uma rodada final de purificação, vários pedaços de agarose são retirados de placas únicas, isoladas. Esses pedaços são expandidos para obter P1s (passagem 1) (frasco T-25). A testagem por PCR é realizada para confirmar quais P1s contêm tanto o inserto de Gordon H (opt) nos sítios de C5 quanto os insertos de Lapön H (wt - sem sítio de enzima de restrição BamH1) nos sítios de C3. Dois candidatos aceitáveis são expandidos até P2 (passagem 2) (dois frascos T-150 para cada construção).
[0411]Uma única P2 é escalonada até P3 (passagem 3) (quatro garrafas rotatórias). O material de P3 é concentrado e purificado por meio de pélete de sacarose e denominado vCP3041.
[0412]Análise de recombinantes: As seguintes análises são realizadas nos estoques de P3.
[0413]Esterilidade: A testagem da esterilidade é realizada nos estoques de P3 de vCP3041. Alíquotas de 50 µl são plaqueadas sobre cada uma de duas placas de Dextrose Ágar de Sabouraud (SDA) e sobre cada uma de duas placas de Ágar Tripticase de Soja com sangue de carneiro 5% (TSA II 5% SB) (BBL Nº de Catálogo 221180 e Nº 221239, respectivamente). Para cada construção, uma placa de SDA e uma placa de TSA II SB 5% são incubadas a 37°C por 10 dias, e o outro conjunto de placas é incubado em temperatura ambiente por 10 dias. Se após 10 dias nenhum crescimento bacteriano ou fúngico é visível em nenhuma das placas, a construção passou na testagem de esterilidade. Confirmação da pureza genética:
[0414]A pureza dos estoques de P3 é confirmada por meio de PCR. Iniciadores localizados em uma das extremidades dos braços de C3 (C3-PCR-F e C3-PCR-R) são usados para amplificar amostras. Esses iniciadores produzem uma banda de 4.539 bp para vírus ALVAC que contêm a sequência do tipo selvagem no sítio de C3 e uma banda de 5.063 bp para recombinantes que contêm Lapön H (wt - sem sítio de enzima de restrição BamH1) no sítio de C3. Uma segunda PCR pode ser útil caso seja difícil distinguir entre as bandas de aproximadamente 4,5 Kb e aproximadamente 5 Kb na primeira PCR. A segunda PCR inclui iniciadores usados para produzir a sonda de C3 do tipo selvagem (C3F e C3R). Esses iniciadores estão localizados em uma região que é deletada durante recombinação do sítio de C3 e produzem uma banda de 1.007 bp para ALVAC da sequência do tipo selvagem e nenhuma banda para recombinantes. Essa segunda PCR confirma que nenhum vírus parental permanece na amostra de P3.
[0415]Análise de sequência: Análises mais detalhadas de sequências dos estoques de P3 são realizadas por amplificação por PCR e análise de sequência dos sítios de C3 e C5 para vCP3041. Os sítios de C5 são amplificados usando iniciadores 7931 e 7932 que estão localizados nas proximidades dos braços de recombinação de C5. O sítio de C3 é amplificado usando iniciadores C3-PCR-F e C3-PCR-R que estão localizados nas proximidades dos braços de recombinação de C3. As regiões amplificadas são sequenciadas para confirmar a integridade de promotores e genes. Iniciadores
[0416]Iniciadores para amplificação da sonda de ALVAC Parental (sítio de C3): C3F CGTAGAGTTTTTTGTCTAGTTCTAT (ID. DE SEQ. Nº: 54); C3R GTTGTTTTATGCGGTAAAGAATAAT (ID. DE SEQ. Nº: 55).
[0417]Iniciadores para amplificação do sítio de C3: C3-PCR-F GCTAACACAAGTTAGAGGCGTATTAC (ID. DE SEQ. Nº: 58); C3-PCR-R CATTAATTATGTGATGAGGCATCCAAC (ID. DE SEQ. Nº: 59).
[0418]Iniciadores para amplificação do sítio de C5: 7931 GAATCTGTTAGTTAGTTACTTGGAT (ID. DE SEQ. Nº: 75); 7932 TGATTATAGCTATTATCACAGACTC (ID. DE SEQ. Nº: 76). EXEMPLO 7: Exemplo de vacinação (vCP3025 – Gordon H; que compreende o ID. DE SEQ. Nº: 49; Figura 2)
[0419]Em SD0 e SD21, uma dose total de 1 ml da vacina de vetor ALVAC-Gordon H com uma titulação de aproximadamente 1 x 107.7 TCID50/dose é administrada ao grupo de 7 gatos (grupo A). Espera-se que essa dose libere quantidades suficientes de vírus de vacina a fim de facilitar a resposta imune para o antígeno selecionado (hemaglutinina de FaPV-2). O controle negativo (grupo C) não é vacinado. Os animais têm amostras de sangue coletadas em SD0, SD21 e SD 35 e a resposta imune humoral é medida por ELISA específico, ensaio de imunofluorescência (IFA) e/ou teste de neutralização viral/sérica (VNT/SNT) (Exemplo 9). Em SD49, os animais dos respectivos grupos são inoculados por via intravenosa (IV) com o vírus de ataque como descrito abaixo (Exemplo 10) e, além disso, os parâmetros da infecção fornecida são medidos (viremia, excreção, distribuição de vírus). EXEMPLO 8: Exemplo de vacinação (vCP3029 – Gordon H + Gordon M; que compreendem os IDS. DE SEQ. Nos: 50+51; Figuras 3+4)
[0420]Em SD0 e SD21, uma dose total de 1 ml da vacina de vetor ALVAC-Gordon H+M com uma titulação de aproximadamente 1 x 107.7 TCID50/dose é administrada ao grupo de 7 gatos (grupo B). Espera-se que essa dose libere quantidades suficientes de vírus de vacina a fim de facilitar a resposta imune para os antígenos selecionados (hemaglutinina de FaPV-2 e proteína da matriz). O controle negativo (grupo C) não é vacinado. Os animais têm amostras de sangue coletadas em SD0, SD21 e SD 35 e a resposta imune humoral é medida por ELISA específico, ensaio de imunofluorescência (IFA) e/ou teste de neutralização viral/sérica (VNT/SNT) (Exemplo 9). Em SD42, os animais dos respectivos grupos são inoculados por via intravenosa (IV) com o vírus de ataque como descrito abaixo (Exemplo 10) e, além disso, os parâmetros da infecção fornecida são medidos (viremia, excreção, distribuição de vírus). EXEMPLO 9: Teste de neutralização viral (VNT)/Teste de neutralização sérica (SNT)
[0421]Para detectar anticorpos neutralizantes contra paramixovírus felino, por exemplo, FPaV-2, um ensaio de neutralização viral/sérica (VNT/SNT) é realizado. Portanto, amostras de soro de gato são tratadas a 56°C por 30 minutos para inativar fatores de complemento. Cinquenta µl dessas amostras de soro inativadas pelo calor são misturados com 50 µl de DMEM contendo 100 TCID50 unidades formadoras de fluorescência (FFU) de paramixovírus felino, por exemplo, FPaV-2 (isolado ‘Gordon’), e são então incubados por uma hora a 37°C. A mistura é usada para infectar células LLC-MK2 em uma placa de cultura de células de 96 poços por duas horas a 37°C. As células são incubadas por cinco dias a 37°C, CO2 5% e 90% de umidade, seguida por coloração por imunofluorescência como descrito abaixo. A titulação de neutralização da amostra de soro de teste é definida como a recíproca da maior diluição de soro de teste para a qual a infectividade do vírus é reduzida por 50%, quando comparado com o controle de vírus sem incubação de soro.
[0422]Para detectar infecções por paramixovírus felino, por exemplo, infecções por FPaV-2, células LLC-MK2 são infectadas como descrito abaixo e coradas com um anticorpo específico para paramixovírus felino usando técnicas de imunofluorescência. Para essa finalidade, células aderentes são lavadas com PBS após um período de infecção de 5 dias e subsequentemente fixadas com 80% de acetona a -20°C por 10 minutos. As células são lavadas duas vezes com PBS e a ligação não específica é bloqueada por incubação com BSA 5% em PBS a 37°C por uma hora. Isso é seguido por uma etapa de incubação com anticorpo anti-paramixovírus felino (por exemplo, anti-nucleocapsídeo de FPaV-2, policlonal, coelho) em uma concentração final de 1 µg/ml em BSA 1% em PBS por uma hora a 37°C. As células são lavadas três vezes com PBS, seguido pela aplicação de ‘conjugado de Anticorpo Secundário anti-IgG de coelho (H+L) de cabra, Alexa Fluor® 488’ (Thermo Fisher Scientific) em uma diluição final de 1:1.000 em BSA 1% em PBS. Após um tempo de incubação de uma hora a 37°C, as células são lavadas duas vezes com PBS e as células são avaliadas quanto à presença de FPaV-2 usando um microscópio de fluorescência.
[0423]Para isolamento de vírus das amostras clínicas, células LLC-MK2 e CRFK são semeadas em frascos de cultura de células de 75 cm2 em DMEM (com piruvato de sódio e aminoácidos não essenciais) com 5% de FBS em uma atmosfera que inclui dióxido de carbono 5% a 37°C e 90% de umidade. Na confluência de 70 – 80%, as células são infectadas com uma mistura de um mililitro de urina e 5 ml de DMEM (com penicilina e estreptomicina) de um dia para o outro a 37°C, CO2 5% e 90% de umidade. Após 24 horas, o meio de infecção é substituído por 8 ml de meio de cultivo (DMEM, piruvato de sódio, aminoácidos não essenciais, FBS 5%, penicilina e estreptomicina) e cultivado por mais 6 dias nas condições indicadas. O sobrenadante da cultura de células dessa infecção é passado por mais três vezes. A seguir, 600 µl do sobrenadante da cultura de células são testados quanto à presença de paramixovírus felinos. EXEMPLO 10: Modelo de ataque
[0424]Um estudo clínico do modelo de ataque para investigar nos estágios iniciais de infecção e expressão de doença é empregado. Um ataque intravenoso (IV) em uma dose o mais próxima possível de uma dose de ataque de 1 x 105 TCID50/ml com a “cepa Gordon” FPaV-2 é realizado com um acompanhamento de 56 dias pós-ataque. Como não são esperados sinais clínicos de CKD, os objetivos principais do estudo clínico do modelo de ataque são monitorar primo infecção, possível efeito de infecção sobre a função renal, resposta imune à infecção, avaliar uma disseminação potencial e confirmar o estabelecimento do vírus no rim por imunoistoquímica (IHC) e possivelmente outros órgãos.
[0425]Os sintomas esperados em estágios iniciais da doença estão associados à viremia (apatia, hipertermia, perda de peso). Os sintomas esperados em estágios tardios estão possivelmente relacionados à insuficiência renal crônica (perda de peso corporal, uremia, lesões mucosas). O estoque de vírus da “cepa Gordon” FPaV-2 (com a titulação de 1 x 105 TCID50/ml) é preparado em células mononucleares primárias do sangue periférico (PBMCs) de gato ou em outras células como, por exemplo, a linhagem de células LLC-MK2. O estoque foi testado negativo para a presença de patógenos felinos comuns (incluindo vírus da panleucopenia felina, vírus da imunodeficiência felina, vírus da leucemia felina e coronavírus felino, respectivamente). Gatos, de raças mistas, são inoculados com 1 ml (1 x 105 TCID50/ml) de estoque de vírus por via intravenosa (IV). Planejamento experimental e acompanhamento:
[0426]Abaixo, os grupos de gatos A1, A2, B1, B2, C1 e C2 representam momentos de necropsia diferentes: A1 e A2 em D14, B1 e B2 em D28, C1 e C2 em D56. A subdivisão é motivada evitando-se a amostragem de todos os gatos todos os dias a fim de evitar estresse excessivo para os animais.
- Exame clínico e temperatura retal diariamente de D0 a D14 (exceto finais de semana) e duas vezes por semana de D15 a D56 - Medição do peso duas vezes por semana de D0 a D56 - Amostragem de sangue para monitoramento da viremia por PCR Viremia D-11 D10 D11 D12 D14 D20 D24 D35 D42 D49 D56 D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 D8 D9
A
X X X X 1
A
X X X X 2
B
X X X X X 1
B
X X X X 2
C
X X X X X X 1
C X X x X X 2 - Amostragem de urina para monitoramento da viremia por PCR e lipidúria D14 D20 D24 D35 D42 D49 D56 D7 Urina A1 C PM A2 PM B1 C PM B2 PM C1 C C PM C2 C PM (C = cistocentese; PM = post mortem) - Swabs oronasais para monitoramento da viremia por PCR Swab D-11 D10 D11 D12 D14 D20 D28 D35 D42 D49 D56 D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 D8 D9
A
X X X X 1
A
X X X X 2
B
X X X X X 1
B
X X X X 2
C
X X X X X X 1
C X X x X X 2 - Bioquímica do sangue e contagem de células D-7 D14 D21 D28 D35 D42 D49 D56 A1 X X A2 X X B1 X X X B2 X X C1 X X X X C2 X X X - Amostragem de soros para sorologia D7 ou D8 D-11 D14 D24 D56 Sorologia A1 X X X A2 X X X B1 X X B2 X X C1 X X C2 X X - Necropsia e histologia
[0427]Uma necropsia completa é realizada para cada animal com amostragem de rim, baço, fígado, bexiga e pulmão. São feitas coletas de órgãos para histologia e detecção viral por PCR.
[0428]O estudo clínico do modelo de ataque testa a hipótese de que as vacinas à base de vetor viral de acordo com a presente invenção são capazes de evitar e/ou reduzir a intensidade e/ou duração de viremia de paramixovírus felino mediante ataque em gatos. Além disso, a vacinação de gatos com os vetores virais da invenção subjacentes induz anticorpos contra, por exemplo, antígeno de hemaglutinina de paramixovírus felino. EXEMPLO 11: Exame sorológico de soros de gatos
[0429]Exame sorológico de soros de gatos é realizado usando o teste de neutralização viral (VNT) (Exemplo 9). Os gatos foram divididos em três grupos: A) Vacinação com vetor ALVAC recombinante que expressa proteína hemaglutinina (H) de paramixovírus felino tipo-2 cepa “Gordon” (vCP3025); B) Vacinação com vetor ALVAC recombinante que expressa proteínas hemaglutinina (H) e da matriz (M) de paramixovírus felino tipo-2 cepa “Gordon” (vCP3029); C) Gatos não foram vacinados (grupo de controle de ataque).
[0430]Amostras de soro foram retiradas de gatos no dia 0 (no dia da primeira vacinação), no dia 21 (21 dias após a primeira vacinação), no dia 35 (14 dias após a segunda vacinação) e dia 49.
[0431]Com o uso da metodologia de VNT, é nitidamente detectado que todos os animais demonstraram ser VNT- negativos antes da vacinação no dia 0 (titulação <1:10). Além disso, gatos não vacinados permanecem VNT-negativos em todos os pontos do tempo antes do ataque, o que é um pré- requisito para o estudo animal válido.
[0432]Em 21 dias (D21) após a vacinação inicial, um gato vacinado do grupo A mostra ser positivo, com a titulação de VNT de 1:20 e um gato do grupo B com titulação 1:10. No dia 35 (D35) (14 dias após segunda vacinação), todos os gatos no grupo de vacina A (6/6) possuem titulações de neutralização significantes (titulação mediana do grupo de 1:160), enquanto no grupo B, 5 dos 6 gatos possuem titulações de neutralização significantes contra paramixovírus felino tipo-2 (titulação mediana do grupo de 1:160). Finalmente, no dia 49 (D49), todos os gatos são VNT-positivos (6/6), com a titulação de VNT do grupo no grupo A ainda mais aumentada (titulação mediana do grupo de 1:693,33). No grupo B, todos os gatos são positivos para paramixovírus felino tipo-2 (6/6) com a titulação mediana do grupo de 1:403,33.
[0433]Em conclusão, todos os gatos vacinados com vetores ALVAC recombinados que expressam proteínas H ou H+M de paramixovírus felino tipo-2 cepa “Gordon” reagem fortemente e são soroconvertidos mediante vacinação. Além disso, valores significantes de titulações de neutralização viral contra o vírus de ataque são detectados em D35 e D49. A titulação mediana do Grupo A é de 1:160 no dia 35 e 1:693,33 no dia 49. As titulações médias do Grupo B são de 1:160 no dia 35, enquanto é de 1:403,33 no dia 49. Aqueles dias correspondem a 14 e 28 dias pós-segunda vacinação, respectivamente. Essas fortes titulações de neutralização para paramixovírus felino tipo-2 indicam resposta muito forte da vacinação contra paramixovírus felino tipo-2. EXEMPLO 12: Prevenção ou redução de viremia após ataque
[0434]Os gatos são divididos em três grupos: A) Vacinação com vetor ALVAC recombinante que expressa proteína hemaglutinina (H) de paramixovírus felino tipo-2 cepa “Gordon” (vCP3025); B) Vacinação com vetor ALVAC recombinante que expressa proteínas hemaglutinina (H) e da matriz (M) de paramixovírus felino tipo-2 cepa “Gordon”
(vCP3029); C) Gatos não foram vacinados (grupo de controle de ataque).
[0435]No dia do ataque (D49), os gatos são infectados por via intravenosa (IV) com 1 ml de paramixovírus felino tipo-2 cepa “Gordon” com a titulação infecciosa de 1 x 105,1 TCID50/ml. Amostras de plasma são retiradas dos gatos no dia 3 pós-inoculação do vírus (D52) e dia 7 pós-inoculação do vírus (D56). RNA é extraído do plasma, e qPCR em tempo real específica para paramixovírus felino tipo-2 é realizada. A sensibilidade da qPCR é de 2,9 log10 número de cópia de RNA/ml, que é usado como um valor de corte para o cálculo.
[0436]Grupo C – gatos não vacinados (controle de ataque): no dia 3 (D52) pós-inoculação do vírus, cinco dos 6 gatos no grupo de controle não vacinado se tornam virêmicos, com o número de cópia de RNA médio de 3,67 log10/ml, enquanto no dia 7 (D56), todas as amostras de gatos não vacinados são positivas, com o número de cópia de RNA de paramixovírus felino tipo-2 médio de 5,97 log10/ml.
[0437]Grupo A – vacina de ALVAC Gordon H: gatos vacinados com vacina de ALVAC-Gordon-H permanecem totalmente negativos tanto no dia 3 quanto no dia 7 pós-ataque.
[0438]Grupo B – vacina de ALVAC Gordon H+M: no grupo de gatos vacinados com a vacina de ALVAC-Gordon-H+M, quatro gatos em ambos os dias permanecem negativos, enquanto dois gatos no dia 3 (D52) e dia 7 (D56) pós-ataque são positivos, mas possuem números de cópias de RNA de paramixovírus felino tipo-2 reduzidos (3,72 log10/ml e 3,33 log10/ml, respectivamente).
[0439]Em conclusão, todos os gatos vacinados com vetor ALVAC recombinado que expressa H proteína de paramixovírus felino tipo-2 permanecem totalmente protegidos e não possuem viremia detectável pós-inoculação de vírus de ataque de paramixovírus felino tipo-2. Os gatos vacinados com vetor ALVAC que expressa proteínas H e M de paramixovírus felino tipo-2 estão protegidos, com 4 gatos permanecendo completamente negativos e 2 gatos em ambos os dias tendo números de cópias de RNA de paramixovírus felino tipo-2 reduzidos como resultado de vacinação.
[0440]Todas as composições e métodos revelados e reivindicados nesse relatório descritivo podem ser feitos e executados sem experimentação desnecessária à luz da presente revelação. Embora as composições e métodos dessa invenção tenham sido descritos em termos de aspectos específicos, será evidente para aqueles habilitados na técnica que podem ser aplicadas variações às composições e métodos e nas etapas ou na sequência de etapas do método descrito nesse relatório descritivo, sem se afastar do conceito, espírito e escopo da invenção. Mais especificamente, será evidente que certos agentes que estão tanto quimicamente quanto fisiologicamente relacionados podem substituir os agentes descritos nesse relatório descritivo, com os mesmos resultados ou resultados similares sendo obtidos. Todos esses substitutos similares e modificações evidentes para aqueles habilitados na técnica são considerados com dentro do espírito, escopo e conceito da invenção, como definida pelas reivindicações seguintes.
REFERÊNCIAS
[0441]As referências seguintes, na medida em que forneçam detalhes de procedimentos exemplares ou outros detalhes suplementares àqueles apresentados nesse relatório descritivo, são especificamente incorporadas nesse relatório descritivo por referência.
[0442](1) De Vries P. e cols., J. Gen. Virol. 1988, 69:
2.071-2.083.
[0443](2) Furuya e cols., Archives of Virology 2014, 159 (2): 371-373.
[0444](3) JP 2015 198654 A.
[0445](4) Lorusso e cols., Vet. Ital. 2013, 51 (3): 235-237.
[0446](5) Lulich J.P. e cols., “Compendium on Continuing Education for the Practicing Veterinarian”; 1992; 14 (2): 127-152.
[0447](6) Marcacci M. e cols., Journal of Virological Methods 2016, 234: 160-163.
[0448](7) Marciani D.J. e cols., Vaccine 1991, 9 (2): 89-96.
[0449](8) McEachern J.A. e cols., Vaccine 2008, 26 (31):
3.842-3.852.
[0450](9) Sakaguchi e cols., General Virology 2014, 95 (7): 1.464-1.468.
[0451](10) Sharp e cols., Emerging Infectious Diseases 2016, 22 (4): 760.
[0452](11) Sieg e cols., Virus Genes 2015, 51 (2): 294-
297.
[0453](12) Tartaglia J. e cols., J. Virology 1993, 67 (4): 2.370-2.375.
[0454](13) Taylor J. e cols., Vaccine 1991, 9 (3): 190-
193.
[0455](14) Taylor J. e cols., Virology 1992, 187 (1): 321-328.
[0456](15) Taylor J. e cols., Dev. Biol. Stand. 1994, 82: 131-135.
[0457](16) US 4.769.330.
[0458](17) US 4.722.848.
[0459](18) US 4.603.112.
[0460](19) US 5.110.587.
[0461](20) US 5.174.993.
[0462](21) US 5.494.807.
[0463](22) US 5.505.941.
[0464](23) US 5.756.103.
[0465](24) US 5.766.599.
[0466](25) US 2013/0230529.
[0467](26) Weli S.C. e cols., Virology J. 2011, 8 (1):
49.
[0468](27) WO 2005/013918.
[0469](28) WO 2006/073431.
[0470](29) WO 2006/115843.
[0471](30) WO 2013/107290.
[0472](31) WO 2013/123242.
[0473](32) Woo e cols., Proc. Nat. Acad. Sci. 2012; 109 (14): 5.435-5.440.

Claims (21)

REIVINDICAÇÕES
1. Vetor viral, preferivelmente um vetor viral recombinante e/ou de ocorrência não natural, caracterizado por compreender pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno relacionado a/de pelo menos um patógeno que infecta felinos, em que o pelo menos um patógeno que infecta felinos é paramixovírus felino.
2. Vetor viral, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o vetor viral é selecionado do grupo que consiste em: vetor viral de vírus avipox, vetor viral de morbilivírus canino, vetor viral de vírus herpes, vetor viral do vírus da varicela.
3. Vetor viral, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um patógeno que infecta felinos que é o paramixovírus felino é selecionado do grupo que consiste em: (a) um paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2); (b) um paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2), cujo genoma compreende um ácido ribonucleico complementar à sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste em: (i) uma sequência de ácidos nucleicos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 1, (ii) uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 1; (c) paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2) como depositado na “Collection Nationale de Culture de Microorganismes” (CNCM) sob o número de acesso CNCM I-5123; (d) um paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2), cujo genoma compreende um ácido ribonucleico complementar à sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste em:
(i) uma sequência de ácidos nucleicos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 2, (ii) uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 2; (e) um morbilivírus felino (FeMoV); (f) um morbilivírus felino (FeMoV), cujo genoma compreende um ácido ribonucleico complementar à sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste em: (i) uma sequência de ácidos nucleicos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 3, (ii) uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 3.
4. Vetor viral, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o vetor viral é a vetor de canarypox, preferivelmente um vetor de canarypox atenuado, mais preferivelmente ALVAC, ainda mais preferivelmente ALVAC-1 ou ALVAC-2, principalmente ALVAC como depositado sob os termos do Tratado de Budapeste na “American Type Culture Collection” (ATCC) sob o número de acesso VR-2547; ou em que o vetor viral é um vetor de vírus da bouba aviária, preferivelmente um vetor de vírus da bouba aviária atenuado, mais preferivelmente TROVAC, principalmente TROVAC como depositado sob os termos do Tratado de Budapeste na “American Type Culture Collection” (ATCC) sob o número de acesso VR-2553; ou em que o vetor viral é selecionado do grupo que consiste em: vCP3025, vCP3029, vCP3041.
5. Vetor viral, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é selecionado do grupo que consiste em: sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”), sequência codificadora de proteína da matriz (“M”), sequência codificadora de proteína de fusão (“F”), sequência codificadora de proteína do nucleocapsídeo (“N”), sequência codificadora de fosfoproteína (“P”), sequência codificadora de proteína RNA polimerase RNA-dependente (“L”) e, mais preferivelmente, é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e/ou uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e/ou uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”).
6. Vetor viral, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 4, ID. DE SEQ. Nº: 5; ou em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 6 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 6.
7. Vetor viral, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e a sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 7 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 7, ID. DE SEQ. Nº: 8; ou em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e a sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 9 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 9.
8. Vetor viral, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) e a sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 10 e, preferivelmente, é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 10, ID. DE SEQ. Nº: 11; ou em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) e a sequência codificadora de proteína de fusão (“F”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo que possui uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 12 e, preferivelmente, é a sequência de aminoácidos de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 12.
9. Vetor viral, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o vetor viral compreende duas ou mais sequências que codificam um antígeno exógeno, preferivelmente uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”), ou uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”), ou uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”), ou uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e uma sequência codificadora de proteína da matriz (“M”) e uma sequência codificadora de proteína de fusão (“F”).
10. Vetor viral, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o vetor viral compreende as mesmas duas sequências codificadoras de antígeno exógeno (ou seja, H + H, F + F, M + M, P + P, L + L, N + N), mas de duas cepas diferentes, por exemplo, uma sequência codificadora de antígeno exógeno de uma cepa de paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2), preferivelmente a “cepa Gordon” ou a “cepa TV25”, e a outra uma sequência codificadora de antígeno exógeno de uma cepa de morbilivírus felino, preferivelmente a “cepa Lapön” –, por exemplo, uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de uma cepa e uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de outra cepa ; mais preferivelmente, a uma cepa da “sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de uma cepa” é uma cepa de paramixovírus felino tipo 2 (FPaV-2), ainda mais preferivelmente a “cepa Gordon” ou a “cepa TV25”, e a outra cepa da “sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de outra cepa” é uma cepa de morbilivírus felino, ainda mais preferivelmente a “cepa Lapön”; principalmente, a uma cepa da “sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de uma cepa” é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 4 ou 19 e preferivelmente é selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 4, ID. DE SEQ. Nº: 5, ID. DE SEQ. Nº: 19; e a outra cepa da “sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) de outra cepa” é uma sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) e a sequência codificadora de proteína hemaglutinina (“H”) compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica ao ID. DE SEQ. Nº: 31 ou 94 e preferivelmente é selecionado do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 31, ID. DE SEQ. Nº: 32, ID. DE SEQ. Nº: 94.
11. Vetor viral, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é inserida em pelo menos um lócus de inserção, preferivelmente em uma região não essencial do genoma do vetor viral; ou em que a pelo menos uma sequência que codifica um antígeno exógeno é inserida em dois ou mais loci de inserção; e/ou em que o pelo menos um lócus de inserção é o lócus de inserção C3; e/ou em que o vetor viral compreende sequências flanqueadoras do lócus de inserção C3, preferivelmente de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 45 (braço esquerdo da região flanqueadora de C3) e o ID. DE SEQ. Nº: 46 (braço direito da região flanqueadora de C3); ou em que o pelo menos um lócus de inserção é o lócus de inserção C5; e/ou em que o vetor viral compreende sequências flanqueadoras do lócus de inserção C5, preferivelmente de acordo com o ID. DE SEQ. Nº: 47 (braço esquerdo da região flanqueadora de C5) e o ID. DE SEQ. Nº: 48 (braço direito da região flanqueadora de C5).
12. Vetor viral, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o vetor viral compreende uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70% idêntica à sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste no ID. DE SEQ. Nº: 49, ID. DE SEQ. Nº: 50, ID. DE SEQ. Nº: 51, ID. DE SEQ. Nº: 95 e, preferivelmente, é a sequência de ácidos nucleicos selecionada do grupo que consiste em: ID. DE SEQ. Nº: 49, ID. DE SEQ. Nº: 50, ID. DE SEQ. Nº: 51, ID. DE SEQ. Nº: 95.
13. Vetor viral, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o felino é um gato, preferivelmente um gato doméstico.
14. Célula hospedeira de mamífero, caracterizada pelo fato de que ela compreende o vetor viral conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13.
15. Uso do vetor viral conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13 ou da célula hospedeira de mamífero de conforme definida na reivindicação 14 caracterizada por ser para a fabricação de uma composição imunogênica ou vacina.
16. Composição imunogênica caracterizada por compreender: (a) o vetor viral conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13 ou a célula hospedeira de mamífero conforme definida na reivindicação 14, e/ou (b) um polipeptídeo codificado pelo vetor viral conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, por exemplo, um vírus, um vírus vivo modificado, uma partícula semelhante a vírus (VLP) ou semelhantes, e (c) opcionalmente, um carreador ou excipiente aceitável para uso farmacêutico ou veterinário, preferivelmente o referido carreador sendo adequado para aplicação oral, intradérmica, intramuscular ou intranasal; em que, preferivelmente, a referida composição imunogênica compreende um vírus, por exemplo, um vírus infeccioso.
17. Vacina ou composição farmacêutica caracterizada por compreender: (a) o vetor viral conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13 ou a célula hospedeira de mamífero conforme definida na reivindicação 14, e/ou (b) um polipeptídeo codificado pelo vetor viral conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, por exemplo, um vírus, um vírus vivo modificado, uma partícula semelhante a vírus (VLP) ou semelhantes, e (c) um carreador ou excipiente aceitável para uso farmacêutico ou veterinário, preferivelmente o referido carreador sendo adequado para aplicação oral, intradérmica, intramuscular ou intranasal, (d) opcionalmente, a referida vacina ou composição farmacêutica ainda compreendendo um adjuvante.
18. Método para a preparação de uma composição imunogênica ou de uma vacina para redução da incidência e/ou da severidade de um ou mais sinais clínicos associados ou causados por uma infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico, caracterizado por compreender as seguintes etapas: (a) infecção da célula hospedeira de mamífero conforme definida na reivindicação 14 com o vetor viral conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, (b) cultivo das células infectadas sob condições adequadas, (c) coleta das culturas das células infectadas, (d) opcionalmente, purificação das culturas das células infectadas coletadas da etapa (c), (e) opcionalmente, mistura da referida cultura das células infectadas coletada com um carreador farmaceuticamente aceitável.
19. Composição imunogênica, de acordo com a reivindicação 16, ou vacina, de acordo com a reivindicação 17, caracterizada por ser usada em um método de redução ou prevenção dos sinais clínicos ou doença causados por uma infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico ou para uso em um método de tratamento e/ou prevenção de uma infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico, em que, preferivelmente, o referido felino é um gato, mais preferivelmente um gato doméstico, em que, preferivelmente, o pelo menos um paramixovírus patogênico é pelo menos um paramixovírus felino, em que preferivelmente os referidos sinais clínicos ou doença causados por uma infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico ou pela referida infecção com pelo menos um paramixovírus patogênico são selecionados do grupo que consiste em: viremia, febre, excreção viral no ambiente, infecções do sistema urogenital, infecções do sistema urinário, doença renal, doença renal crônica (CKD), inflamação dos túbulos renais e tecido intersticial renal,
nefrite túbulo-intersticial idiopática (TIN).
20. Método de imunização de um felino, por exemplo, um gato, mais preferivelmente um gato doméstico, contra uma doença clínica causada por pelo menos um paramixovírus patogênico no referido felino, o método caracterizado por compreender a etapa de administração ao felino da composição imunogênica conforme definida na reivindicação 16 ou da vacina conforme definida na reivindicação 17, em que a referida composição imunogênica ou vacina não causa sinais clínicos de infecção, mas é capaz de induzir uma resposta imune que imuniza o felino contra formas patogênicas do referido pelo menos um paramixovírus, em que, preferivelmente, o pelo menos um paramixovírus patogênico é pelo menos um paramixovírus felino, em que, preferivelmente, a referida doença clínica ou os referidos sinais clínicos de infecção são selecionados do grupo que consiste em: viremia, febre, excreção viral no ambiente, infecções do sistema urogenital, infecções do sistema urinário, doença renal, doença renal crônica (CKD), inflamação dos túbulos renais e tecido intersticial renal, nefrite túbulo-intersticial idiopática (TIN).
21. Kit para vacinação de um felino, preferivelmente um gato, mais preferivelmente um gato doméstico, contra uma doença e ele associada e/ou para redução da incidência ou da severidade de um ou mais sinais clínicos associados ou causados por pelo menos um paramixovírus patogênico em um felino, caracterizado por compreender: (a) um dispensador capaz de administrar uma vacina ao referido felino; e (b) a composição imunogênica conforme definida na reivindicação 16 ou a vacina conforme definida na reivindicação 17, e (c) opcionalmente, um folheto de instruções; em que, preferivelmente, o pelo menos um paramixovírus patogênico é pelo menos um paramixovírus felino, em que, preferivelmente, a referida doença ou os referidos sinais clínicos são selecionados do grupo que consiste em: viremia, febre, excreção viral no ambiente, infecções do sistema urogenital, infecções do sistema urinário, doença renal, doença renal crônica (CKD), inflamação dos túbulos renais e tecido intersticial renal, nefrite túbulo-intersticial idiopática (TIN).
BR112020017239-1A 2018-02-23 2019-02-20 Sistemas de vetor viral recombinante que expressam genes de paramixovírus felino exógenos e vacinas feitas a partir deles BR112020017239A2 (pt)

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