BR112020015035A2

BR112020015035A2 - Espectrômetros de massa com triplo quadrupolo configurados para detectar transições mrm de resíduos de pesticida

Info

Publication number: BR112020015035A2
Application number: BR112020015035-5A
Authority: BR
Inventors: Avinash Dalmia
Original assignee: Perkinelmer Health Sciences, Inc.
Priority date: 2018-01-23
Filing date: 2019-01-23
Publication date: 2020-12-08
Also published as: US10914713B2; JP2021512292A; CA3089347A1; US20210341440A1; EP3743727A1; CA3089347C; US20190227041A1; WO2019147630A1; KR102474172B1; KR20200113235A; AU2019212126A1; JP2022069547A; CN111630391A

Abstract

esta divulgação fornece métodos quantitativos, rápidos e confiáveis de lc-ms/ms para analisar painéis de pesticidas e micotoxinas em várias amostras, incluindo compostos muito hidrofóbicos e clorados normalmente analisados em um sistema gc-ms/ms. os métodos podem ser executados usando um único instrumento e podem detectar e quantificar os níveis de pesticidas e micotoxinas que estejam bem abaixo dos limites de ação especificados pelos estados dos eua (por exemplo, califórnia) e outros países (por exemplo, canadá) para esses compostos em produtos de cannabis.

Description

ESPECTRÔMETROS DE MASSA COM TRIPLO QUADRUPOLO CONFIGURADOS PARA DETECTAR TRANSIÇÕES MRM DE RESÍDUOS DE PESTICIDA

[0001] Este pedido reivindica prioridade e incorpora por referência em sua totalidade o Número de Série 62/620.961 depositado em 23 de janeiro de 2018 e o Número de Série 62/637.350 depositado em 1 de março de 2018.

[0002] Cada referência citada nesta divulgação é incorporada neste documento na sua totalidade.

CAMPO DA TÉCNICA

[0003] Esta divulgação refere-se geralmente aos sistemas e métodos para detectar e/ou quantificar pesticidas usando espectrometria de massa.

FUNDAMENTOS

[0004] A espectrometria de massa (MS) é uma técnica analítica para determinar a composição elementar de substâncias desconhecidas da amostra e tem pedidos quantitativos e qualitativos. Por exemplo, MS é útil para identificar compostos desconhecidos, determinar a composição isotópica de elementos em uma molécula e determinar a estrutura de um composto em particular, observando sua fragmentação, bem como para quantificar a quantidade de um composto em particular na amostra. Os espectrômetros de massa normalmente operam ionizando uma amostra de teste para formar uma corrente de íons de partículas carregadas positivamente. A corrente de íons é então sujeita a diferenciação de massa (no tempo ou no espaço) para separar diferentes populações de partículas na corrente de íons, de acordo com a razão massa/carga (m/z). Um analisador de massa a jusante pode detectar as intensidades das populações de íons com diferenciação de massa, a fim de calcular dados analíticos de interesse, por exemplo, as concentrações relativas das diferentes populações de íons, as relações massa-carga do produto ou íons de fragmento e outros dados analíticos úteis.

[0005] íons de interesse ("íons analitos") podem coexistir na corrente de íons com outras populações de íons indesejados ("íons interferentes") que possuem substancialmente a mesma razão nominal m/z que os íons analitos.

Em alguns casos, a razão m/z de um (on interferente estará próxima o suficiente da razão m/z de um íon analito que caia dentro dos limites de resolução do analisador de massa, e o íon analito e interferente não pode ser distinguido. Melhorar a resolução do analisador de massa é uma abordagem para lidar com esse tipo de interferência (geralmente chamada de "interferência isobárica" ou "interferência espectral"). Analisadores de massa com resolução mais alta, no entanto, tendem a ter taxas de extração mais lentas e maior perda de sinais de íons e requerem detectores mais sensíveis. Também podem ser encontrados limites na resolução alcançável.

[0006] Além disso, a análise de pesticidas em certas amostras, como amostras de cannabis, é dificultada pela presença de interferência da matriz. À cannabis contém compostos de diferentes classes, como canabinoides, terpenos, hidrocarbonetos, açúcares, ácidos graxos, flavonoides e outros, cuja presença leva à supressão de íons de sinal variável e à interferência da matriz, principalmente devido à grande disparidade entre os níveis de pesticidas e os altos níveis de concentração de canabinoides e terpenos naturais.

[0007] Existe uma necessidade de sistemas e métodos aprimorados para detectar e quantificar pesticidas.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0008] A Figura 1A e a Figura 1B são diagramas de blocos de processos para detectar e/ou quantificar um painel de pesticidas.

[0009] A Figura 2 é um diagrama de blocos de um processo para detectar e/ou quantificar pesticidas por espectrometria de massa em tandem, usando ionização química atmosférica (APCI) com ar como um gás nebulizador.

[0010] A Figura 3 é um esquema de um sistema de cromatografia líquida e espectrometria de massa em tandem.

[0011] A Figura 4 é um diagrama de blocos de um exemplo de ambiente de computação em nuvem.

[0012] A Figura 5 é um diagrama de blocos de um exemplo de dispositivo de computação e um exemplo de dispositivo de computação móvel.

[0013] As Figuras GA-B são gráficos que mostram o sinal de abamectina em função do HSID (dessolvatação induzida por superfície quente; Fig. 6A) e temperatura da fonte (Fig. 6B).

[0014] As Figuras 7A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de acequinocil usando uma transição de Monitoramento de Reação Múltipla (MRM) de 385,2 > 189 (Figs. 7A, 7C) ou em 385,2 > 343,1 (Figs. 7B, 7D). As Figs. 7A e 7B, amostras de cannabis compreendendo 100 ppb (partes por bilhão) de acequinocil. As Figs. 7C e 7D, amostras em branco de cannabis. ND, não detectado. S/N, razão sinal-a-ruído.

[0015] A Figura 8 é uma triagem de massa de íons precursora (parental) para acequinocil.

[0016] As Figuras 9A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de acequinocil usando uma transição MRM de 402,2 > 189 (Figs. 9A, 9C) ou 402,2 > 343,1 (Figs. 9B, 9D). As Figs. 9h e 9B, amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de acequinocil. As Figs. 9C e 9D, amostras em branco de cannabis.

[0017] A Figura 10A é uma triagem em massa de íons precursora (parental) para abamectina. As Figuras 10B-E são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de abamectina utilizando uma transição MRM de 890,5 > 567,2 (Fig. 10B, 10D) ou 890,5 > 305,1 (Fig. 10C, 10E). As Figs. 10B e 10C, amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de abamectina. As Figs. 10D e 10E, amostras em branco de cannabis.

[0018] As Figuras 11A-D são cromatogramas de amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de aldicarbe e analisadas quanto à presença de aldicarbe usando transições MRM de 208 > 89 (Fig. 11A), 208 > 116 (Fig. 11B), 116 > 70 (Fig. 11C) e 116 > 89 (Fig. 11D).

[0019] As Figuras 12A-B são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de metomil usando uma transição MRM de 163,1 > 88. A Fig. 12A, amostra de cannabis compreendendo 100 ppb de metomil. A Fig. 12B, amostra em branco de cannabis.

[0020] As Figuras 13A-B são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de captan usando uma transição MRM de 316,9

> 263,9. A Fig. 13A, amostra de cannabis compreendendo captan de 1000 ppb. A Fig. 13B, amostra em branco de cannabis.

[0021] A Figura 14A é uma triagem de massa de íons precursora (parental) para clorfenapir.

[0022] As Figuras 14B-E são cromatogramas que mostram amplitudes de sinal obtidas para um aduto de amônio ([M+NH4]+) de clorfenapir usando para diferentes transições de MRM. A Fig. 14B, 426 > 59; Fig. 14C, 426 > 271; Fig. 14D, 426 > 376; Fig. 14E, 426 > 409.

[0023] As Figuras 14F-| são cromatogramas que mostram amplitudes de sinal obtidas para clorfenapir protonado ([M+H]+) usando para diferentes transições de MRM. A Fig. 14F, 409 > 41; Fig. 14G, 409 > 59; Fig. 14H, 409 > 271; Fig. 141, 409 > 379.

[0024] As Figuras 14J-K são cromatogramas de amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de clorfenapir e obtidas utilizando as transições MRM 409 > 271 (Fig. 14J) e 409 > 379 (Fig. 14K).

[0025] As Figuras 14L-N são cromatogramas de amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de clorfenapir e obtidas usando as transições MRM 409 > 59 (Fig. 14L), 426 > 59 (Fig. 14M) e 426 > 409 (Fig. 14N).

[0026] As Figuras 15A-B são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de trifloxistrobina usando transições MRM 409,1 > 186 (Fig. 15A) e 409,1 > 206 (Fig. 15B). A Figura 15C é um cromatograma analisado quanto à presença de trifloxistrobina e clorfenapir usando a transição MRM de 409,1 > 59.

[0027] A Figura 16A é um gráfico que mostra uma distribuição isotópica de naled (também conhecido como "dibrom" ou "DiBrom"). A Figura 16B é uma triagem em massa precursora (parental) para uma amostra compreendendo naled. As Figuras 16C-F são cromatogramas de amostras de cannabis compreendendo 100 ppb naled e analisadas quanto à presença de naled usando transições MRM 380,8 > 127 (Fig. 16C), 378,8 > 127 (Fig. 16D), 380,8 > 109 (Fig. 16E), e 378,8 > 127 (Fig. 16F).

[0028] As Figuras 17A e 17B são gráficos que mostram triagem de íons do produto para daminozida. A Fig. 17A, Energia de colisão alta (CE) = -30 V.A Fig. 17B, CE baixa = -15 V.

[0029] As Figuras 17C-E são cromatogramas de amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de daminozida e analisadas quanto à presença de daminozida usando transições MRM de 161,1 > 44 (Fig. 17C), 161,1 > 101 (Fig. 17D) e 161,1 > 143 (Fig. 17E).

[0030] As Figuras 18A-B são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de acefato usando a transição MRM de 184 > 143. A Fig. 18A, amostra de cannabis compreendendo 100 ppb de acefato. A Fig. 18B, amostra em branco de cannabis.

[0031] As Figuras 19A-B são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de imazalil usando transições MRM de 297 > 41. A Fig. 19A é uma amostra de cannabis compreendendo 100 ppb de imazalil. À Fig. 19B é uma amostra em branco de cannabis.

[0032] A Figura 20A e a Figura 20B são triagens de íons do produto para N-octil biciclohepteno dicarboximida (MGK-264). A Fig. 20A, CE baixo = -25V. À Fig. 20B, CE alto = -50 V.

[0033] As Figuras 20C-E são cromatogramas de amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de MGK-264 e analisadas quanto à presença de MGK- 264 usando as transições MRM 276,2 > 98 (Fig. 20C), 276,2 > 121 (Fig. 20D) e 276,2 > 210 (Fig. 20E).

[0034] As Figuras 21A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de cinerina Il usando transições MRM 361,2 > 213 (Figs. 21A, 21C) e 361,2 > 107 (Figs. 21B, 21D). As Figs. 21A e 21B são amostras de cannabis compreendendo 1000 ppb de cinerina Il. As Figs. 21C e 21D são amostras de cannabis em branco.

[0035] As Figuras 22A-B são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de cinerina | usando a transição MRM de 317,2 >

149. A Fig. 22A, amostras de cannabis compreendendo 1000 ppb de cinerina |. A Fig. 22B, amostra de cannabis em branco.

[0036] As Figuras 23A-F são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de fenoxicarbe usando transições MRM 302,1 > 88 (Fig. 23A, 23C), 302,1 > 256 (Fig. 23B, 23D) e 302,1 > 116 (Fig. 23E, 23F). As Figs. 23A, 23B e 23E, amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de fenoxicarbe. As Figs. 23C, 23D e 23E, amostras de cannabis em branco.

[0037] As Figuras 24A-F são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de dimetomorfo usando transições MRM 388,1 > 165 (Figs. 24A, 24D), 388,1 > 273 (Figs. 24B, 24E) e 388,1 > 301 (Figs. 24C, 24F). As Figs. 24A, 24B e 24C são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de dimetomorfia. As Figs. 24D, 24E e 24F são amostras de cannabis em branco.

[0038] As Figuras 25A-B são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de fenhexamida usando a transição MRM de 302,1 > 55. A Fig. 25A, amostra de cannabis compreendendo 100 ppb de fenhexamida. A Fig. 25B, amostra em branco de cannabis.

[0039] As Figuras 26A-B são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de espinetoram usando a transição MRM de 748,5 > 98. A Fig. 26A é uma amostra de cannabis compreendendo 100 ppb de espinetoram. A Fig. 26B é uma amostra em branco de cannabis.

[0040] As Figuras 27A-C são cromatogramas de íons totais (TICs). A Fig. 27A, TIC para uma amostra de cannabis em branco obtida utilizando um gradiente de cromatografia líquida genérica (taxa de gradiente fixa). A Fig. 27B, TIC para uma amostra de cannabis compreendendo 100 ppb de pesticidas. À Fig. 27C, TIC para uma amostra em branco de cannabis obtida usando as condições descritas no Exemplo 1. Veja também o Exemplo 2.

[0041] A Figura 27D é um gráfico que mostra as curvas de Van Deemter para vários tipos de colunas de cromatografia líquida (LC).

[0042] As Figuras 27E e 27F são gráficos que mostram o efeito da taxa de fluxo em um sinal de azoxistrobina.

[0043] As Figuras 28A-C são cromatogramas de amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de malation e analisadas quanto à presença de malation usando transições MRM 331 > 99 (Fig. 28A), 331 > 285 (Fig. 28B) e

331 > 127 (Fig. 28C).

[0044] A Figura 29A é um cromatograma de uma amostra de cannabis analisada quanto à presença de espiroxamina usando uma coluna LC de diâmetro interno (ID) de 2,1 mm. A Figura 29B é um cromatograma de uma amostra de cannabis analisada quanto à presença de espiroxamina usando uma coluna de ID de 4,6 mm.

[0045] A Figura 30A é um gráfico que mostra a intensidade de uma transição MRM associada ao acequinocil em função do tempo para uma amostra processada por um método de LC empregando um solvente eluidor de metanol a 100%. A Figura 30B é um gráfico que mostra a intensidade de uma transição MRM associada ao acequinocil em função do tempo para uma amostra processada por um método de LC empregando um solvente eluente de 75% de metanol: 25% de acetonitrila. A Figura 30C é um gráfico que mostra as intensidades do sinal de transição MRM para acequinocil e abamectina em função da concentração percentual de metanol de um solvente de eluição orgânico usado no método LC.

[0046] A Figura 31 é um gráfico que mostra a recuperação geral de pesticidas em uma amostra de cannabis.

[0047] As Figuras 32A-B são curvas de calibração para azoxistrobina em uma matriz de cannabis (Fig. 32A) e em solvente (Fig. 32B).

[0048] A Figura 33A é uma triagem em massa precursora (parental) do pentacloronitrobenzeno (PCNB; quintozeno). A Figura 33B é um gráfico que mostra uma distribuição isotópica para o quintozeno.

[0049] A Figura 34A é uma triagem em massa precursora (parental) do clordano. A Figura 34B é um gráfico que mostra uma distribuição isotópica para clordano.

[0050] A Figura 35A é uma triagem em massa de precursores (parental) para uma amostra compreendendo clordano e processada usando um método de LC que emprega fases móveis sem aditivos. A Figura 35B é uma triagem em massa precursora (parental) de uma amostra compreendendo clordano e processada usando um método de LC que emprega uma fase móvel com ácido fórmico.

[0051] A Figura 36 é uma triagem de íons do produto para o quintozeno obtido usando uma fonte de APCI no modo de íons negativos.

[0052] As Figuras 37A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de quintozeno usando transições MRM 275,8 > 35,1 (Figuras 37A, 37C) e 273,8 > 35,1 (Figuras 37B, 37D). As Figs. 37A e 37B são amostras de cannabis que compreendem 100 ppb de quintozeno. As Figs. 37C e 37D são amostras de cannabis em branco.

[0053] As Figuras 38A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de clordano usando as transições MRM 439,8 > 35,1 (Figuras 38A, 38C) e 441,8 > 35,1 (Figuras 38B, 38D). As Figs. 38A e 38B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de clordano. As Figs. 38C e 38D são amostras de cannabis em branco.

[0054] A Figura 39 é um gráfico que mostra os espectros de fundo obtidos usando uma fonte APCI em um modo de íon negativo.

[0055] A Figura 40A é um gráfico que mostra os limites de quantificação (LOQs) calculados com base na sensibilidade de ambas as transições MRM quantificador/qualificador para 72 pesticidas. A Figura 40B é um gráfico que mostra LOQs calculados com base apenas na sensibilidade de uma transição MRM do quantificador para os 72 pesticidas.

[0056] As Figuras 41A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de daminozida usando transições MRM 161,1 > 143 (Figs. 41A, 41C) e 161,1 > 44 (Figs. 41B, 41D). As Figs. 41A e 41B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de daminozida. As Figs. 41C e 41D são amostras de cannabis em branco.

[0057] As Figuras 42A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de oxamil usando transições MRM 237,1 > 72 (Figs. 42A, 42C) e 237,1 > 90 (Figs. 42B, 42D). As Figs. 42A e 42B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de oxamil. As Figs. 42C e 42D são amostras de cannabis em branco.

[0058] As Figuras 43A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de flonicamida usando transições MRM 230,1 > 203 (Fig. 43A, 43C) e 230,1 > 174 (Fig. 43B, 43D). As Figs. 43A e 43B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de flonicamida. As Figs. 43C e 43D são amostras de cannabis em branco.

[0059] As Figuras 44A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de acefato usando transições MRM 184 > 143 (Fig. 44A, 44C) e 184 > 49 (Fig. 44B, 44D). As Figs. 44A e 44B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de acefato. As Figs. 44C e 44D são amostras de cannabis em branco.

[0060] As Figuras 45A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de metomil usando transições MRM 163,1 > 88 (Fig. 45A, 45C) e 163,1 > 106 (Fig. 45B, 45D). As Figs. 45A e 45B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de metomil. As Figs. 45C e 45D são amostras de cannabis em branco.

[0061] As Figuras 46A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de tiametoxam usando transições MRM 292 > 211 (Figs. 46A, 46C) e 292 > 181 (Figs. 46B, 46D). As Figs. 46A e 46B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de tiametoxam. As Figs. 46C e 46D são amostras de cannabis em branco.

[0062] As Figuras 47A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de imidaclopride usando transições MRM 256,1 > 209 (Fig. 47A, 47C) e 256,1 > 175 (Fig. 47B, 47D). As Figs. 47A e 47B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de imidaclopride. As Figs. 47C e 47D são amostras de cannabis em branco.

[0063] As Figuras 48A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de dimetoato utilizando transições MRM 230 > 125 (Fig. 48A, 48C) e 230 > 199 (Fig. 48B, 48D). As Figs. 48A e 48B são amostras de cannabis que compreendem 100 ppb de dimetoato. As Figs. 48C e 48D são amostras de cannabis em branco.

[0064] As Figuras 49A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de mevinfos usando as transições MRM 225 >

127 (Fig. 49A, 49C) e 225 > 109 (Fig. 49B, 49D). As Figs. 49A e 49B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de mevinfos. As Figs. 49C e 49D são amostras de cannabis em branco.

[0065] As Figuras 50A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de acetamipride usando transições MRM 223,1 > 99 (Fig. 50A, 50C) e 223,1 > 126 (Fig. 50B, 50D). As Figs. 50A e 50B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de acetamipride. As Figs. 50C e 50D são amostras de cannabis em branco.

[0066] As Figuras 51A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de tiaclopride usando transições MRM 253 > 126 (Fig. 51A, 51C) e 253 > 90 (Fig. 51B, 51D). As Figs. 51A e 51B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de tiaclopride. As Figs. 51C e 51D são amostras de cannabis em branco.

[0067] As Figuras 52A-B são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de imazalil usando transições MRM 297 > 159. À Fig. 52A é uma amostra de cannabis compreendendo 100 ppb de imazalil. A Fig. 52B é uma amostra em branco de cannabis.

[0068] As Figuras 53A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de tiofanato-metil usando transições MRM 343,1 > 151 (Fig. 53A, 53C) e 343,1 > 268 (Fig. 53B, 53D). As Figs. 53A e 53B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de tiofanato-metil. As Figs. 53C e 53D são amostras de cannabis em branco.

[0069] As Figuras 54A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de aldicarbe usando transições MRM 208 > 89 (Fig. 54A, 54C) e 208 > 116 (Fig. 54B, 54D). As Figs. 54A e 54B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de aldicarbe. As Figs. 54C e 54D são amostras de cannabis em branco.

[0070] As Figuras 55A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de propoxur usando transições MRM 210,1 > 168 (Fig. 55A, 55C) e 210,1 > 111 (Fig. 55B, 55D). As Figs. 55A e 55B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de propoxur. As Figs. 55C e 55D são amostras de cannabis em branco.

[0071] As Figuras 56A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de diclorvos usando transições MRM 220,9 > 109 (Fig. 56A, 56C) e 220,9 > 127 (Fig. 56B, 56D). As Figs. 56A e 56B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de diclorvos. As Figs. 56C e 56D são amostras de cannabis em branco.

[0072] As Figuras 57A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de carbofurano usando as transições MRM 222,1 > 123 (Fig. 57A, 57C) e 222,1 > 165 (Fig. 57B, 57D). As Figs. 57A e 57B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb. As Figs. 57C e 57D são amostras de cannabis em branco.

[0073] As Figuras 58A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de carbaril usando transições MRM 202,1 > 127 (Fig. 58A, 58C) e 202,1 > 145 (Fig. 58B, 58D). As Figs. 58A e 58B são amostras de cannabis que compreendem 100 ppb de carbaril. As Figs. 58C e 58D são amostras de cannabis em branco.

[0074] As Figuras 59A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de espiroxamina usando transições MRM 298,3 > 100,1 (Figs. 59A, 59C) e 298,3 > 144,1 (Figs. 59B, 59D). As Figs. 59A e 59B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de espiroxamina. As Figs. 59C e 59D são amostras de cannabis em branco.

[0075] As Figuras 60A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de naled ("dibrom") usando transições MRM 380,8 > 109 (Fig. 60A, 60C) e 380,8 > 127 (Fig. 60B, 60D). As Figs. 60A e 60B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb naled. As Figs. 60C e 60D são amostras de cannabis em branco.

[0076] As Figuras 61A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de metalaxil usando transições MRM 280,2 > 192,1 (Figs. 61A, 61C) e 280,2 > 248,1 (Figs. 61B, 61D). As Figs. 61A e 61B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de metalaxil. As Figs. 81C e 61D são amostras de cannabis em branco.

[0077] As Figuras 62A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de clorantraniliprol usando transições MRM 484 > 285,9 (Fig. 62A, 62C) e 484 > 452,9 (Fig. 62B, 62D). As Figs. 62A e 62B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de clorantraniliprol. As Figs. 62C e 62D são amostras de cannabis em branco.

[0078] As Figuras 63A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de fosmete utilizando transições MRM 318 > 133 (Figs. 63A, 63C) e 318 > 160 (Figs. 63B, 63D). As Figs. 63A e 63B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de fosmete. As Figs. 63C e 63D são amostras de cannabis em branco.

[0079] As Figuras 64A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de metil paration usando transições MRM 264 > 124,9 (Figuras 64A, 64C) e 264 > 231,9 (Figuras 64B, 64D). As Figs. 64A e 64B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de metil paration. As Figs. 64C e 64D são amostras de cannabis em branco.

[0080] As Figuras 65A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de azoxistrobina usando transições MRM 404,1 > 344 (Fig. 65A, 65C) e 404,1 > 372 (Fig. 65B, 65D). As Figs. 65A e 65B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de azoxistrobina. As Figs. 65C e 65D são amostras de cannabis em branco.

[0081] As Figuras 66A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de metiocarbe usando transições MRM 226,1 > 121 (Fig. 66A, 66C) e 226,1 > 169 (Fig. 66B, 66D). As Figs. 66A e 66B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de metiocarbe. As Figs. 66C e 66D são amostras de cannabis em branco.

[0082] As Figuras 67A-B são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de captan usando uma transição MRM de 316,9 > 235,9. A Fig. 67A, amostra de cannabis compreendendo captan de 1000 ppb. A Fig. 67B é uma amostra em branco de cannabis.

[0083] As Figuras 68A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de boscalida usando transições MRM 343 > 140

(Figs. 68A, 68C) e 343 > 272 (Figs. 68B, 68D). As Figs. 68A e 68B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de boscalida. As Figs. 68C e 68D são amostras de cannabis em branco.

[0084] As Figuras 69A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de fludioxonil usando transições MRM 247,1 > 126 (Figs. 69A, 69C) e 247,1 > 180 (Figs. 69B, 69D). As Figs. 69A e 69B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de fludioxonil. As Figs. 69C e 69D são amostras de cannabis em branco.

[0085] As Figuras 70A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de paclobutrazol usando transições MRM 294,1 > 125 (Figs. 70A, 70C) e 294,1 > 70 (Figs. 70B, 70D). As Figs. 70A e 70B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de paclobutrazol. As Figs. 70C e 70D são amostras de cannabis em branco.

[0086] As Figuras 71A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de malation utilizando transições MRM 331 > 285 (Fig. 71A, 71C) e 331 > 127 (Fig. 71B, 71D). As Figs. 71A e 71B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de malation. As Figs. 71C e 71D são amostras de cannabis em branco.

[0087] As Figuras 72A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de dimetomorfo usando transições MRM 388,1 > 273 (Figs. 72A, 72C) e 388,1 > 301 (Figs. 72B, 72D). As Figs. 72A e 72B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de dimetomorfia. As Figs. 72C e 72D são amostras de cannabis em branco.

[0088] As Figuras 73A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de miclobutanil usando transições MRM 289,1 > 70 (Figs. 73A, 73C) e 289,1 > 125 (Figs. 73B, 73D). As Figs. 73A e 73B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de miclobutanil. As Figs. 73C e 73D são amostras de cannabis em branco.

[0089] As Figuras 74A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de bifenazato usando transições MRM 301,1 > 170 (Figs. 74A, 74C) e 301,1 > 198 (Figs. 74B, 74D). As Figs. 74A e 74B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de bifenazato. As Figs. 74C e 74D são amostras de cannabis em branco.

[0090] As Figuras 75A-B são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de fenhexamida usando a transição MRM de 302,1 > 55. A Fig. 75A, amostra de cannabis compreendendo 100 ppb de fenhexamida. A Fig. 75B, amostra em branco de cannabis.

[0091] As Figuras 76A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de fipronil usando transições MRM 435 > 250 (Figuras 76A, 76C) e 435 > 330 (Figuras 76B, 76D). As Figs. 76A e 76B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de fipronil. As Figs. 76C e 76D são amostras de cannabis em branco.

[0092] As Figuras 77A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de spirotetramat utilizando transições MRM 374,2 > 216 (Fig. 77A, 77C) e 374,2 > 302,1 (Fig. 77B, 77D). As Figs. 77A e 77B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de spirotetramat. As Figs. 77C e 77D são amostras de cannabis em branco.

[0093] As Figuras 78A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de etoprofos usando transições MRM 243,1 > 131 (Fig. 78A, 78C) e 243,1 > 173 (Fig. 78B, 78D). As Figs. 78A e 78B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de etoprofos. As Figs. 78C e 78D são amostras de cannabis em branco.

[0094] As Figuras 79A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de fenoxicarbe usando transições MRM 302,1 > 256 (Figuras 79A, 79C) e 302,1 > 116 (Figuras 79B, 79D). As Figs. 79A e 79B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de fenoxicarbe. As Figs. 79C e 79D são amostras de cannabis em branco.

[0095] As Figuras 80A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de kresoxim-metil usando transições MRM 314,1 > 222 (Fig. 80A, 80C) e 314,1 > 235 (Fig. 80B, 80D). As Figs. 80A e 80B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de kresoxim-metil. As Figs. 80C e 80D são amostras de cannabis em branco.

[0096] As Figuras 81A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de tebuconazol usando transições MRM 308 > 70 (Fig. 81A, 81C) e 308 > 125 (Fig. 81B, 81D). As Figs. 81A e 81B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de tebuconazol. As Figs. 81C e 81D são amostras de cannabis em branco.

[0097] As Figuras 82A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de diazinon usando as transições MRM 305,1 > 97 (Fig. 82A, 82C) e 305,1 > 169 (Fig. 82B, 82D). As Figs. 82A e 82B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de diazinon. As Figs. 82C e 82D são amostras de cannabis em branco.

[0098] As Figuras 83A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de espinosina A usando transições MRM 732,5 > 98 (Fig. 83A, 83C) e 732,5 > 142 (Fig. 83B, 83D). As Figs. 83A e 83B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de espinosina A. As figs. 83C e 83D são amostras de cannabis em branco.

[0099] As Figuras 84A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de cumafos usando transições MRM 363 > 226,9 (Fig. 84A, 84C) e 363 > 306,9 (Fig. 84B, 84D). As Figs. 84A e 84B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de cumafos. As Figs. 84C e 84D são amostras de cannabis em branco.

[0100] As Figuras 85A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de MGK-264 usando transições MRM 276,2 > 98 (Fig. 85A, 85C) e 276,2 > 210,1 (Fig. 85B, 85D). As Figs. 85A e 85B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de MGK-264. As Figs. 85C e 85D são amostras de cannabis em branco.

[0101] As Figuras 86A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de clofentezina usando transições MRM 303 > 102 (Figuras 86A, 86C) e 303 > 138 (Figuras 86B, 86D). As Figs. 86A e 86B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de clofentezina. As Figs. 86C e 86D são amostras de cannabis em branco.

[0102] As Figuras 87A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de propiconazol usando transições MRM 342,1 > 69 (Fig. 87A, 87C) e 342,1 > 159 (Fig. 87B, 87D). As Figs. 87A e 87B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de propiconazol. As Figs. 87C e 87D são amostras de cannabis em branco.

[0103] As Figuras 88A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de pretretrina usando as transições MRM 301,2 > 132,9 (Fig. 88A, 88C) e 301,2 > 168,9 (Fig. 88B, 88D). As Figs. 88A e 88B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de pretretrina. As Figs. 88C e 88D são amostras de cannabis em branco.

[0104] As Figuras 89A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de espinosina-D usando transições MRM 746,5 > 98 (Figs. 89A, 89C) e 746,5 > 142 (Figs. 89B, 89D). As Figs. 89A e 89B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de espinosina D. As figs. 89C e 89D são amostras de cannabis em branco.

[0105] As Figuras 90A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de ciflutrina usando as transições MRM 451,1 > 191 (Figs. 90A, 90C) e 451,1 > 434 (Figs. 90B, 90D). As Figs. 90A e 90B são amostras de cannabis compreendendo 1000 ppb de ciflutrina. As Figs. 90C e 90D são amostras de cannabis em branco.

[0106] As Figuras 91A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de trifloxistrobina usando transições MRM 409,1 > 186 (Fig. 91A, 91C) e 409,1 > 206 (Fig. 91B, 91D). As Figs. 91A e 91B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de trifloxistrobina. As Figs. 91C e 91D são amostras de cannabis em branco.

[0107] As Figuras 92A-B são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de espinetoram usando a transição MRM de 748,5 > 142. A Fig. 92A é uma amostra de cannabis compreendendo 100 ppb de espinetoram. A Fig. 92B é uma amostra de cannabis em branco.

[0108] As Figuras 93A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de clorfenapir usando transições MRM 426 > 409 (Fig. 93A, 93C) e 426 > 59,1 (Fig. 93B, 93D). As Figs. 93A e 93B são amostras de cannabis compreendendo 1000 ppb de clorfenapir. As Figs. 93C e 93D são amostras de cannabis em branco.

[0109] As Figuras 94A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de cipermetrina usando transições MRM 433,1 > 127 (Fig. 94A, 94C) e 433,1 > 191,1 (Fig. 94B, 94D). As Figs. 94A e 94B são amostras de cannabis compreendendo 1000 ppb de cipermetrina. As Figs. 94C e 94D são amostras de cannabis em branco.

[0110] As Figuras 95A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de permetrina utilizando transições MRM 408,1 > 183 (Figs. 95A, 95C) e 408,1 > 355 (Figs. 95B, 95D). As Figs. 95A e 95B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de permetrina. As Figs. 95C e 95D são amostras de cannabis em branco.

[0111] As Figuras 96A-B são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de cinerina |l usando a transição MRM de 361,2 > 149. A Fig. 96A é uma amostra de cannabis compreendendo 1000 ppb de cinerina Il. A Fig. 96B é uma amostra de cannabis em branco.

[0112] As Figuras 97A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de jasmolina Il usando transições MRM 375,2 > 163 (Figs. 97A, 97C) e 375,2 > 213 (Figs. 97B, 97D). As Figs. 97A e 97B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de jasmolina Il. As Figs. 97C e 97D são amostras de cannabis em branco.

[0113] As Figuras 98A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de piretrina |l usando transições MRM 373,2 > 161 (Fig. 98A, 98C) e 373,2 > 143 (Fig. 98B, 98D). As Figs. 98A e 98B são amostras de cannabis compreendendo 1000 ppb de piretrina Il. As Figs. 98C e 98D são amostras de cannabis em branco.

[0114] As Figuras 99A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de jasmolina | usando transições MRM 331,2 > 163 (Fig. 99A, 99C) e 331,2 > 121 (Fig. 99B, 99D). As Figs. 99A e 99B são amostras de cannabis compreendendo 1000 ppb de jasmolina |. As Figs. 99C e 99D são amostras de cannabis em branco.

[0115] As Figuras 100A-B são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de cinerina 1 usando a transição MRM de 317,2 > 107. A Fig. 100A é uma amostra de cannabis compreendendo 1000 ppb de cinerina 1. A Fig. 100B é uma amostra de cannabis em branco.

[0116] As Figuras 101A-C são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de piretrina | usando transições MRM 329,2 > 143 (Fig. 101A) e 329,2 > 161 (Fig. 101B, 101C). As Figs. 101A e 101B são amostras de cannabis compreendendo 580 ppb de piretrina |. A Fig. 101C é uma amostra de cannabis em branco.

[0117] As Figuras 102A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de clorpirifós usando transições MRM 349,9 > 97 (Figs. 102A, 102C) e 349,9 > 321,9 (Figs. 102B, 102D). As Figs. 102A e 102B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de clorpirifós. As Figs. 102C e 102D são amostras de cannabis em branco.

[0118] As Figuras 103A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de butóxido de piperonil usando transições MRM 356,2 > 119 (Figs. 103A, 103C) e 356,2 > 177 (Figs. 103B, 103D). As Figs. 103A e 103B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de butóxido de piperonil. As Figs. 103C e 103D são amostras de cannabis em branco.

[0119] As Figuras 104A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de hexitiazox usando transições MRM 353,1 > 168 (Figs. 104A, 104C) e 353,1 > 228 (Figs. 104B, 104D). As Figs. 104A e 104B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de hexitiazox. As Figs. 104C e 104D são amostras de cannabis em branco.

[0120] As Figuras 105A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de etoxazol usando transições MRM 360,2 > 57,1 (Fig. 105A, 105C) e 360,2 > 141 (Fig. 105B, 105D). As Figs. 105A e 105B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de etoxazol. As Figs. 105C e 105D são amostras de cannabis em branco.

[0121] As Figuras 106A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de espiromesifeno usando transições MRM 273,1

> 187 (Fig. 106A, 106C) e 273,1 > 255 (Fig. 106B, 106D). As Figs. 106A e 106B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de espiromesifeno. As Figs. 106C e 106D são amostras de cannabis em branco.

[0122] As Figuras 107A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de fenpiroximato usando transições MRM 422,2 > 135 (Figs. 107A, 107C) e 422,2 > 366,1 (Figs. 107B, 107D). As Figs. 107A e 107B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de fenpirroximato. As Figs. 107C e 107D são amostras de cannabis em branco.

[0123] As Figuras 108A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de piridabeno usando as transições MRM 365,1 > 147 (Figuras 108A, 108C) e 365,1 > 309 (Figuras 108B, 108D). As Figs. 108A e 108B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de piridabeno. As Figs. 108C e 108D são amostras de cannabis em branco.

[0124] As Figuras 109A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de abamectina usando transições MRM 890,5 > 305,1 (Figs. 109A, 109C) e 890,5 > 567,2 (Figs. 109B, 109D). As Figs. 109A e 109B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de abamectina. As Figs. 109C e 109D são amostras de cannabis em branco.

[0125] As Figuras 110A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de etofenprox usando transições MRM 394,2 > 107,1 (Figs. 110A, 110C) e 394,2 > 177,1 (Figs. 110B, 110D). As Figs. 110A e 110B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de etofenprox. As Figs. 110C e 110D são amostras de cannabis em branco.

[0126] As Figuras 111A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de acequinocil usando transições MRM 402,2 > 189 (Figs. 111A, 111C) e 402,2 > 343,1 (Figs. 111B, 111D). As Figs. 111Ã e 111B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de acequinocil. As Figs. 111C e 111D são amostras de cannabis em branco.

[0127] As Figuras 112A-D são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de bifentrina usando as transições MRM 440,1 > 166,1 (Figs. 112A, 112C) e 440,1 > 181,1 (Figs. 112B, 112D). As Figs. 112A e

112B são amostras de cannabis que compreendem 100 ppb de bifentrina. As Figs. 112C e 112D são amostras de cannabis em branco.

[0128] As Figuras 113A-D são cromatogramas de amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de naled (dibrom) analisadas quanto à presença de naled usando transições MRM 380,8 > 127 (Fig. 113A), 378,8 > 127 (Fig. 113B), 382,8 > 127 (Fig. 113C) e 378,8 > 109 (Fig. 113D).

[0129] As Figuras 114A-H são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de propiconazol usando transições MRM 342 > 69 (Fig. 114A, 114C), 342 > 159 (Fig. 114B, 114D), 344 > 69 (Fig. 114E, 114G) e 344 > 161 (Figs. 114F, 114H). As Figs. 114A, 114B, 114E e 114F são amostras de cannabis compreendendo 10 ppb de propiconazol. As Figs. 114C, 114D, 114G e 114H são amostras de cannabis em branco.

[0130] As Figuras 1141-J são cromatogramas de amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de propiconazol e analisadas quanto à presença de propiconazol usando transições MRM 342 > 69 (Fig. 114/) e 342 > 159 (Fig. 114J).

[0131] As Figuras 114K-L são cromatogramas de amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de propiconazol e analisadas quanto à presença de propiconazol usando transições MRM 344 > 69 (Fig. 114K) e 344 > 161 (Fig. 114L).

[0132] As Figuras 115A-H são cromatogramas de amostras de cannabis compreendendo 1000 ppb de clorfenapir e analisadas quanto à presença de clorfenapir usando transições MRM 423,9 > 59 (Fig. 115A), 406,9 > 59 (Fig. 115B), 425,9 > 59 (Fig. 115C), 425,9 > 408,9 (Fig. 115D), 408,9 > 59 (Fig. 115E), 423,9 > 406,9 (Fig. 115F), 408,9 > 378,8 (Fig. 115G) e 408,9 > 270,9 (Fig. 115H).

[0133] As Figuras 116A-F são cromatogramas de amostras de cannabis compreendendo 1000 ppb de ciflutrina e analisadas quanto à presença de ciflutrina usando transições MRM 451 > 191 (Fig. 116A), 453 > 193 (Fig. 116B), 451 > 127 (Fig. 116C), 451 > 206 (Fig. 116D), 451 > 434 (Fig. 116E) e 453 > 436 (Fig. 116F).

[0134] As Figuras 117A-E são cromatogramas de amostras de cannabis compreendendo 1000 ppb de cipermetrina e analisadas quanto à presença de cipermetrina usando transições MRM 435,1 > 193,1 (Fig. 117A), 433,1 > 191,1 (Fig. 117B), 433,1 > 127 (Fig. 117C), 435,1 > 127 (Fig. 117D) e 433,1 > 91 (Fig. 117E).

[0135] A Figura 118A, sobreposição da resposta da matriz de cannabis (traço esquerdo) e acequinocil (traço direito) aumentado no nível de 0,1 ug/g na matriz de cannabis com transição MRM baseada em íon molecular protonado.

[0136] A Figura 118B, sobreposição da resposta da matriz de cannabis (traço inferior) e acequinocil (traço superior) com picos no nível de 0,1 ug/g na matriz de cannabis com transição MRM com base no íon aduto.

[0137] As Figuras 119A-F são cromatogramas de um conjunto representativo de pesticidas com picos no nível de 0,01 ug/g na matriz de cannabis. A Fig. 119A, oxamil; Fig. 119B, metalaxil; Fig. 119C, fenpiroximato; Fig. 119D, miciclobutanil; Fig. 119E, etofenprox; e a FIG. 119F, azoxistrobina.

[0138] A Figura 120. Dados de estabilidade a longo prazo ao longo de 1 semana de injeções de diazinon a um nível de 100 ng/mL adicionado no extrato da matriz de flor de cannabis, compreendendo 100 ng/mL de diazinon.

[0139] As Figuras 121A-D. Gráficos mostrando exemplos de curvas de calibração matriciais para pesticidas em cannabis. A Fig. 121A, miclobutanil; Fig. 121B, diazinon; Fig. 121C, metalaxil; e Fig. 121D, fosmete.

[0140] As Figuras 122A-B são cromatogramas de amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de acefato e preparadas usando dois métodos de extração. A Fig. 122A, acetonitrila. A Fig. 122B, acetonitrila 50:50 e metanol.

[0141] As Figuras 123A-B são cromatogramas de amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de clorfenapir e ionizadas usando uma fonte de APCI. A Fig. 123A, transição MRM de 346,9 > 79; Fig. 123B, transição MRM de 348,09 > 81.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0142] A análise de pesticidas, por exemplo, em material botânico, normalmente requer o uso de métodos de espectrometria de massa por cromatografia em fase gasosa (GC-MS) e de espectrometria de massa por cromatografia líquida (LC-MS) porque alguns pesticidas não polares e clorados são difíceis de ionizar com a pulverização por eletro-pulverização fonte de íons usada em sistemas LC-MS. Esta divulgação fornece métodos LC-MS/MS simples, econômicos, rápidos e robustos que fornecem limites de quantificação (LOQs) para painéis de pesticidas bem abaixo, por exemplo, dos limites de ação estabelecidos pelos reguladores estaduais para esses compostos em, por exemplo, produtos de cannabis.

[0143] De fato, os métodos e sistemas divulgados são particularmente úteis para detecção e/ou quantificação de pesticidas em amostras que compreendem material vegetal de cannabis. A menos que especificado de outra forma nesta divulgação, "cannabis" abrange todas as variedades de plantas de cannabis, incluindo, entre outras, plantas de cannabis que contêm níveis relativamente altos de tetra-hidrocanabinol (THC), como marijuana; e plantas de cannabis que contêm níveis mais baixos de THC e níveis mais altos de canabidiol (CBD), como o cânhamo. O material vegetal da cannabis compreende uma matriz complexa que inclui componentes como canabinoides, terpenos e outros compostos não canabinoides. Os canabinoides geralmente estão presentes no material vegetal da cannabis em quantidades que variam de 10 a 20% (correspondendo de 100.000 a 200.000 partes por milhão (ppm)). Terpenos e outros compostos não-canabinoides também estão presentes em quantidades elevadas, variando aproximadamente de 10 a 5.000 ppm. Porém, para garantir a segurança do consumo humano e/ou a conformidade com os limites das ações regulatórias, é necessário detectar níveis de pesticidas em quantidades que variam de 0,00001 a 00010% (correspondendo a 100 a 1.000 partes por bilhão (ppb)). Por conseguinte, a interferência de componentes da matriz, como canabinoides, terpenos e outros compostos, pode sobrecarregar e mascarar os sinais desejados a partir de vestígios de pesticidas em amostras de cannabis. Além disso, em certas modalidades, as amostras que compreendem extratos de cannabis são diluídas por fatores de 10 (por exemplo, para reduzir os níveis de interferência da matriz). A detecção de pequenas quantidades de pesticidas em amostras diluídas, como essas, requer técnicas extremamente sensíveis. As abordagens descritas neste documento fornecem sensibilidade suficiente para detectar e/ou quantificar pesticidas em níveis bem abaixo dos vários limites de ação especificados pelas agências reguladoras do Oregon e da Califórnia.

[0144] Além disso, enquanto certos pesticidas encontrados nesses painéis regulatórios podem ser analisados via ESI, que é implementado em combinação com a separação de LC em instrumentos baseados em LC, vários não podem. Em particular, pesticidas que particularmente hidrofóbicos e/ou clorados “(por exemplo, quintozeno (também conhecido como pentacloronitrobenzeno), clordano, endossulfan |, endossulfan || e etridiazol) não podem ser analisados usando técnicas ESI ou outros métodos convencionais de ionização compatíveis com LC. Em vez disso, as técnicas baseadas em GC são normalmente usadas para analisar esses pesticidas. Por conseguinte, o teste de amostras para painéis de pesticidas geralmente requer várias execuções em vários instrumentos de espectrometria de massa (instrumentos baseados em LC e instrumentos baseados em GC), tornando a detecção e/ou quantificação de amostras de pesticidas caras e demoradas.

[0145] As abordagens descritas neste documento superam uma série de desafios associados à detecção de pesticidas que limitam a precisão e tornam as abordagens convencionais de detecção de pesticidas um processo caro e demorado. Primeiro, os métodos usam uma ou mais transições de MRM para cada pesticida que têm pouca ou nenhuma interferência na matriz, melhorando os LOQs para acequinocil e propiconazol, por exemplo, em 20 e 5 vezes, respectivamente.

[0146] Segundo, os métodos divulgados permitem a detecção de pesticidas que normalmente apresentam sinais baixos em amostras de cannabis (por exemplo, abamectina, naled, daminozida, MGK-264).

[0147] Terceiro, os métodos usam um método rápido de LC para alta taxa de transferência de amostra e podem reduzir o tempo de execução de 30 minutos para 18,5 minutos, incluindo o tempo de equilíbrio.

[0148] Quarto, os métodos divulgados incluem procedimentos simples e rápidos de preparação de amostras com recuperações aceitáveis.

[0149] Quinto, os métodos divulgados podem detectar pesticidas que possuem baixa afinidade de prótons e, portanto, baixa eficiência de ionização (por exemplo, cipermetrina, ciflutrina, captan, naled, permetrina e piretrinas).

[0150] Sexto, os métodos usam uma fonte APCI para ionizar pesticidas altamente polinados e não polares (por exemplo, PCNB, clordano), o que elimina a necessidade de usar o GC-MS para detectar esses pesticidas. Isso permite que a análise de painéis de pesticidas e micotoxinas seja realizada usando apenas um instrumento (por exemplo, um sistema LC-MS/MS triplo quádruplo PerkinElmer QSIGHTO), eliminando a necessidade de troca de hardware.

[0151] Sétimo, mesmo para o clorfenapir, que normalmente é analisado usando uma fonte ESI, os métodos divulgados fornecem não apenas transições MRM recomendadas para uso com uma fonte ES|, mas também transições MRM que podem ser usadas com uma fonte APCI para fornecer menos interferência da matriz e menos supressão de íons que fornece melhor sensibilidade do que a fonte ES| para análise deste composto na matriz da cannabis.

[0152] Oitavo, o teste de pesticidas em matrizes complexas, como pode prejudicar os sistemas GC-MS e LC-MS convencionais rapidamente, aumentando os custos de manutenção e o tempo de inatividade, resultando em perda de produtividade. Portanto, em algumas modalidades, a tecnologia STAYCLEAN'"Y do sistema QSight é usada. Essa tecnologia emprega dessolvatação induzida por superfície quente (HSID'“), na qual um fluxo contínuo de gás quente atua como um agente de limpeza constante para eliminar possíveis depósitos. Os íons são transferidos da interface HSID para o guia de íons de fluxo laminar do sistema e, em seguida, movidos para a região de análise por um fluxo de gás de fundo e não são necessários campos elétricos axiais. Isso significa que o sistema QSight não é suscetível a flutuações de campo elétrico e oferece níveis consistentemente altos de desempenho sem parar para manutenção periódica enquanto analisa pesticidas nessas matrizes complexas.

[0153] Nono, as abordagens convencionais de LCMSMS que utilizam fontes de APCI ou ESI| usam métodos de LC que empregam fases móveis com aditivos como ácido fórmico, formato de amônio e outros. Acredita-se que esses aditivos ajudem na ionização dos analitos nas amostras. Em certas modalidades, no entanto, a técnica APCI descrita neste documento aproveita a surpreendente descoberta de que os limites de detecção e/ou quantificação para determinados pesticidas melhoraram quando métodos de LC que excluíram certos aditivos (por exemplo, até todos os aditivos) foram usados para produzir a corrente de separação que foi ionizado com a fonte APCI.

[0154] Em particular, para detectar e/ou quantificar determinados pesticidas particularmente hidrofóbicos e/ou clorados (por exemplo, clordano, quintozeno, endossulfan |, endossulfan 1l, etridiazol), as amostras podem ser processadas usando métodos de LC que empregam fases móveis sem ácidos e/ou aditivos neutros (por exemplo, sem aditivos) e subsequentemente ionizados com uma fonte de APCI. Em certas modalidades, métodos de LC que empregam fases móveis que incluem aditivos neutros (por exemplo, acetato de amônio; por exemplo, formato de amônio), mas excluem aditivos ácidos, são usados em combinação com APCI.

[0155] Sem desejar estar vinculado a uma teoria ou observação específica, verificou-se que quando esses pesticidas foram analisados usando uma fonte APCI, foram observados sinais mais altos quando métodos de LC que empregavam fases móveis sem aditivos foram usados. Observou-se que a adição de aditivos neutros, como acetato de amônio e formato de amônio, reduz os sinais em um fator de 2 a 5. Os sinais de pesticidas clorados ionizados com uma fonte de APCI foram reduzidos em fatores de 20 a 50 quando os aditivos ácidos, como ácido fórmico e ácido acético, foram utilizados.

Transições MRM

[0156] Esta divulgação fornece uma ou mais transição MRM específica para cada pesticida. Nesta divulgação, as transições MRM são identificadas por dois números que correspondem a um primeiro e um segundo valor de m/z, respectivamente, separados por " > " ou "/" (por exemplo, 385,2 > 343,1 ou 385,2/343,1). Ou seja, o primeiro valor corresponde ao íon precursor e o segundo valor corresponde ao íon produto após a fragmentação do íon precursor na célula de colisão. Dependendo da sensibilidade do espectrômetro de massa, é possível alguma variabilidade para as transições fornecidas nesta divulgação (por exemplo, + 0,1 ou + 0,2). Assim, por exemplo, "385,2 > 343,1" pode abranger um ou mais de 385,1 > 343,1, 385,0 > 343,1, 385,3 > 343,1, 385,4 > 343,1, 385,1 > 343,2, 385,0 > 343,2, 385,3 > 343,2, 385,4 > 343,2, 385,1 > 343,3, 385,0 > 343,3, 385,3 > 343,3, 385,4 > 343,3, 385,1 > 343,0, 385,0 > 343,0, 385,3 > 343,0, 385,4 > 343,0, 385,1 > 342,9, 385,0 > 342,9, 385,3 > 342,9 e 385,4 > 342,9.

[0157] Os pesticidas que podem ser detectados usando os métodos divulgados estão listados na Tabela 1 e incluem pesticidas (em negrito) que normalmente são analisados usando GC-MS. As transições MRM exclusivas usadas para detectar esses pesticidas são fornecidas na Tabela 2A e na Tabela

3. As transições MRM recomendadas para a detecção de micotoxinas são fornecidas na Tabela 4.

[0158] As abreviações a seguir são usadas nas Tabelas 2A, 2B, 3 e 4: Q1 (primeiro quadripolo), Q2 (segundo quadripolo), CE (energia de colisão), EV (eletronvolt) e CCL2 (lente de célula de colisão 2). Na Tabela 2B, Tabela 3 e Tabela 4, as colunas rotuladas "R.T. esperado" (tempo de retenção esperado), "ATempo" (Total +- alteração no tempo de retenção do tempo de retenção esperado), "Res" (configurações de resolução no quadrupolo 1) e 2 e “Res Diff (resolução diferente quando a configuração padrão de resolução de unidade/unidade não é usada) se referem a esses parâmetros quando um sistema PerkinElmer QSight LC-MS/MS é usado.

Tabela 1. Pesticidas e números CAS

FE CCL | Acequinocil | 57960-19-17

Imidacloprida 138261-41-3 | Metalaxil | 57837-19-1 Paration de metil (também conhecido como 298-00-0 paration de metil ou metilparation) | Mevinfos | 7786-34-7 Miclobutanil 88671-89-0 Dicarboximida de N-octil biciclohepteno (MGK- 113484 264) Paclobutrazol 76738-62-0 Pentacloronitrobenzeno (PCNB; quintozeno) |82-68-8 Fosmete 731-11-6 Piperonilbutóxido 51-03-6 Propiconazol 60207-90-1 | Propoxur | 114-26-1 Piridabem 96489-71-3 | Espiromesifena | 283594-90-1 Spirotetramat 203313-25-1

Tiaclopride 111988-49-9

Tabela 2A.

Transições MRM recomendadas para ESI-MS. per Ta TT [e] 8905 [150 [6 [10 [o | | + |Abamectina-2 890,5 | 305,1 e so 3 1 rr es er) | + |Acequinoci1 402,2 | 343,1 | + | Acequinocir2 402,2 [189.0 core Esso sz | + |Acetamiprid-2 223,1 [126,0 | + |Aldicarbe1 208,0 [116,0 [8 |15 ]-3o | | + |Bifenazato1 301,1 [170,0 | + |Bifenazato-2 301,1 [198,0 | + |Boscalida? 343,0 | 272,0 | + |Boscalida-s 343,0 [307,0

| + |caroari1 202,1 [127,0 | + |Carbarr2 202,1 | 145,0 | + |Carbofurano1 222,1 [123,0 |-30 20 |-60 | | + |Carbofurano2 222,1 [165,0 | + | Clorantraniliprol1 484,0 | 285,9 [18 |20 |-60 | eee — Goes 2) | + |Clorpirfós2 349,9 | 198,0 | + |Clorpirfós3 349,9 [321,9 [14 |20 |-60 | | + | cinerinal1 361,2 | 149,0 | + |Ccinernall2 361,2 [213,0 | + |Clofentezina1 303,0 [102,0 | + | Clofentezina-2 303,0 [138,0 |-22 |20 |-60 | | + |cifutrina 453,1 [193,0 [-21 |15 |-60 | | + |cifurina? 451,1. | 127,0 | + |cifurinas 451,1. [191,0 [-24 |15 |-60 |

Foge — ep Ts TS Fo a ee E E E een en Es 5 Fo as en Es e Fo en a 5 oe estro [5 a 5 E pa mo ET Fo paz as em E a 5 pes Seara no 5 o 5 E e eo o [E a 5 pres ano E e 5 E prear snm 5 5 Eos ee Ts 5 Fo see ee ss Fo ses se er Es E E ss ee E a e Foge eso Ee 5

Fo egsss penso e oe eo ea 7 o enes ee 7 s or eo 750 [5 [2 6 E Se eo a nr Fo ee an e 5 ee ao e 2 o o See Sae e 77 Fo fee en Ee a Fo e no Ta Fe eo e Es 5 Fosse ao o a 5 Fo e mo E a 5 oe ro e 5 re az 75 TA 5 E see az eo 1 5 Fo fm ne e a 5 sema so a 5 Fe eo eo 1 a 5 Fez eo so 15 a 5 Fome az er e a

[| + [Metalaxi2 280,2 | 220,1 | + | Metiocarbe1 226,1 [121,0 | + | Miclobutanir2 289,1 | 125,0 [48 20 |-9o | Dicarboximida de N-octil + 276,2 [210,0 |-20 |20 biciclohepteno (MGK-264)-1 Dicarboximida de N-ocitil + 276,2 980 |-32 |20 biciclohepteno (MGK-264)-2 BT ão [5 1 1 | | + | Paclobutrazor2 294,1 [125,0 | + |Paration de metir1 264,0 [124,9 |-24 [20 70 | | + |Parationion de meti? 264,0 [231,9

| + | Butóxido de piperonil1 356,2 [119,0 [|-52 |10 |-60 | | + |Butóxido de piperonir-2 356,2 | 177,0 | + | Propiconazol2 342,1 [159,0 [-52 |20 |-80o | Foesss — Gee 7) | + | Propiconazora 344,1. | 161,0 |-52 |20 |-8o | cre Eee) | + |Piretinat3 329,2 [161,0 | + |Piretinall2 373,2 [| 143,0 | + |Pirdabent 365,1 [147.0 | + |Pirdaben? 365,1 | 309,0 |-20 [20 )-8o | | + |Pirdaben-Dx 378,0 [160,0 cosmo — rss e Tr) | + | Espinetoram-2 748,5 | 142,0 | + |Espinosina A? 732,5 [142,0 |-38 |20 |-9o | | + |EspinosinaD-2 746,5 | 142,0 |-40 |20 |-9o | | + |Espiromesifena-1 273,1 [187,0 |-24 [4o |-50 | | + | Espiroteiramato-1 374,2 | 216,0. [46-20 |-so |

| + |Tebuconazor2 308,0 | 125,0 |-52 [20 |-9o | | + |Tiaclbprid2 253,0 | 126,0 |-30 |20 |-8o | | + |Tiofanatode meti1 343,1 [151,0 |-30 20 |-60 | | + |Tiofanatode metil-2 343,1 | 268,0 [14 |20 |-60 | | + |Trifoxistrobina1 409,1 [186,0 [|-28 |20 ]-60 | | + |Trifloxistrobina-2 409,1 | 206,0 |-20 |20 |-60 | Tabela 2B.

Parâmetros para o PerkinElmer QSight R-T.

Alvo ATempo Res Diff esperado Acequinocil-1 14,09 | o7 union Acequinocil-2 14,09 | o7 union | se — 7 67 om EST 75 | 67 fem] sm ez 7 fo e 7 fo — eme es 67 fe] Fem e 67 fe] Es Om 67 fem ESSE Om 67 fo — Es O 67 eo —) SE TR 7 fee meo A 67 fe] EE O 7 eo SEE O 67 eo —) Em e 67 fem] eo e 57 fe] Er e 67 fem] — meet e 67 fee] [mz — e To fe] —— goma — e 67 fe Soarz 67 fem] Soa 67 fee] Soa 67 fe] gore 67 fe] gaz 7 fem] goes 67 fe] See Ts [67 fe] gemer is 7 eo gem Ts 67 Tum eme 6 | 67 fe] Feme e 67 fa er am 7 fo] — ger em 67 fe Er a 67 fear] gre a 67 fear] Es e 67 fem] — Ser Ts 5 fe Suez Ts | 5 fe] Sure ns | 5 fear] ur Ts 5 fem Smam 1 | 15 fe Somar Ts | 15 fem] Spemames — s | 15 fon] Somar Ts | 15 fe pare is | e fe] preze pares 5 | fee] parei is | 3 fee] pero as | 67 fee] peroz ss | 67 fem] pero a 67 fe] pe e [67 fe] perez e | 67 fee] pesa a To fem] preser s g fecan] pres is og fee] presos a 6 fee]

pre Te iz Te preze iz oem Bm a 7 Tee re a o Tee — Be e 7 Totem Bee e 7 Tone Bos es 67 ee Bem e 7 ee —— BE e 7 Tee rem as 7 Tone rem es 7 Toe Fe as 7 Tone Fez es 7 Tone Fes as 7 Tone Fr e 7 Toe Fmomasa ez 7 Toe Fm ez 7 Tee —— enero e ee Fez a e FE ms 7 ee Fe is 7 oe E e ee FREE e oe FREE e oe me e e fem po AS TR a ssa as Ts fosco pevarma ess | o7 Junco] FT TT] TE ss o am SEE o am esmo — are | o7 fomcome| SEE A Se pese 7a [os fosco] pesoz 7a [oz foco] per os fon FE A Se FE as essere o Junco eta re oz Tomo FREE Ta TT pese a | fosse Er sz om) FERE E A — eres ss [a Too] ee ss | 2 Jeso Fo A See — FE AS a pressao — am | o fosco — Dicarboximida de N-octil necenesen mca 6 | re Jean] |

Dicarboximida de N-octil pecorczme acasa | 194 | 1 fem] | Bem as | os one] pe a seo]

FI SO Perez ms or Jose Peres ss or oe perez as 7 fim FE ET FI — preto es | or os FE Tee e)

FE E FAO emeoenõ — | az | 05 Jose] sem [RA ns ese FR E ear —— Er Rear —— mos e | or Jos] Tabela 2C. Desafiando pesticidas e transições MRM associadas. As transições MRM enfatizadas em negrito fornecem alto sinal e > ou reduzida (por exemplo, menor ou nenhuma) interferência da matriz da matriz da cannabis. a A

| Acefato 184,0 > 145,0 | 184,0 > 49,0 | >95,0 402,2> 343,1> 343,1> Acequinocil | 402,2 > 343,1 189,0 189,0 115,0 318,9> Captan 316,9 > 263,9 265,9 424,0 > 59,0 Clorfenapir | 406,9>59,0 408,9 > 59,0 |426,0>59,0 /426,0> 409,0 317,2> 149,0 /317,2> Cinerina | > 107,0 361,2> 149,0 /361,2> Cinerina || > 213,0 453,1> 451,1> Ciflutrina 451,1 > 191,0 193,0 127,0 Cipermetrin 435,1> 433,1 > 433,1 > 191,0 a 193,0 127,0 161,1>143,0 [161,1>44,0 [161,1 >45,0 Dimetomorf 388,1> 388,1 > 388,1 > 301,0 o 273,0 165,0 302,1> Fenoxicarbe | 302,1 > 116,0 302,1 > 88,0 256,0 297,0> 297,0 > Imazalil 297,0 > 41,0 159,0 201,0 375,2> Jasmolina Il | 375,2 > 163,0 213,0 331,0> Malation 331,0 > 127,0 331,0 > 99,0 285,0

| | 127,0 | 109,0 109,0 382,8 > 378,8> 380,8 > Naled 380,8 > 127,0 127,0 127,0 109,0 275,86> 273,8> PCNB 275,8 > 35,0 273,8 > 35,0 201,8 199,8 Propiconazo 342,1> 344,1 > 161,0 /344,1>69,0 342,1 > 69,0 | 159,0 329,2> 329,2> Piretrina | 329,2 > 163,0 143,0 133,0 373,2> 373,2> Piretrina | 373,2 > 163,0 143,0 133,0 Tabela 2D.

Pesticidas desafiadores e transições MRM associadas que fornecem alto sinal e > ou redução (por exemplo, menor ou nenhuma) interferência da matriz de cannabis.

Transição MRM 402,2> 402,2> 343,1> 343,1> Acequinocil 343,1 189,0 189,0 115,0 316,9> 318,9> Captan 263,9 265,9 439,8 > Clordano 441,8 > 35,0 35,0 424 > 59,0 406,9 > Clorfenpir 408,9 > 59,0 426 > 59,0 409,0 317,2> Cinerina | 107,0

| [so | | 453,1 > Ciflutrina 193,0 435,1 > Cipermetrina 193,0 161,1> Daminozida 161,1 > 44,0 45,0 388,1 > Dimetomorfo 273,0 216,8> Etridiazol 218,8 > 35,0 35,0 302,1 > Fenoxicarbe 256,0 375,2> Jasmolina || 213,0 331,0> Malation 285,0 225,0 > Mevinfos 242 >127,0 127,0 382,8 > Naled 127,0 275,6> 275,8> 273,8> PCNB 273,8 > 35,0 35,0 201,8 199,8 344,1 > Propiconazol 344,1 >69,0 161,0 329,2> Piretrina | 163,0

163,0 Tabela 3. Transições MRM recomendadas para APCI-MS R-T.

ATemp|C|E|Ccl espera o E|V|/2 Alvo da Clordano- | 439, - Low Lo 35,1 31 95 100 1 8 15 w Clordano- | 441, - Low Lo 35,1 3,1 100 2 8 15 w 275, - Low Lo PCNB-1 35,1 3,1 85 70 = 8 10 w 273, - Low Lo PCNB-2 35,1 3,1 82 = 8 10 w 275, | 201, - Low Lo PCNB-3 3,1 36 120 = 8 8 30 w Clorfenap | 346, - Low Lo 79,0 2,5 44 70 ir-5 9 33 w Clorfenap | 348, - Low Lo 81,0 2,5 44 7O ir-6 9 33 w 216, - Low Lo Etridiazol 35,0 2,3 0,7 88 100 8 20 w 218, : Etridiazol 8 35,0 2,3 0,7 88 | 20 | 100 | Low Lo - w Tabela 4. Transições MRM recomendadas para Micotoxinas A|C|E|CC R-T.: TIE |V| 2 Micotoxina B1- | 313, | 285, | 5,90 1 “30 Unit Uni + 1 1 o o 30 t [| mesoa st | 515 [ 260 [590] 1] = [50 16] oncos

| | | po jo | Te] | Micotoxina B1- | 313, | 241, | 5,90 - Unit Uni 1 30 | -132 = + 3 1 o o 46 t Micotoxina B2- | 315, | 287, | 5,80 - Unit Uni 1 30 |-116 + 1 1 o o 34 t Micotoxina B2- | 315, | 243, | 5,80 - Unit Uni 1 30 | -129 — + |2 1 o o 50 t Micotoxina G1- | 329, | 243, | 5,50 - Unit Uni 1 30 | -108 + 1 1 o o 34 t Micotoxina G1- | 329, | 214, | 5,50 - Unit Uni 1 30 | -128 + |2 1 o o 44 t Micotoxina G1- | 329, | 200, | 5,50 - Unit Uni 1 30 | -150 + 3 1 o o 54 t Micotoxina G2- | 331, | 245, | 5,40 - Unit Uni 1 25 |-125 = + 1 1 o o 38 t Micotoxina G2- | 331, | 189, | 5,40 - Unit Uni 1 30 | -150 + |2 1 o o 56 t 404, | 358, | 8,40 11 la Unit Uni + Ocratoxina A-1 1 o o 18 t 404, | 239, | 8,40 - Unit Uni . 1 30 | -88 Ocratoxina A-2 1 o o 30 t 404, | 221, | 8,40 11/13 Unit Uni + Ocratoxina A-3 1 o o 50 t

[0159] O uso dos sistemas e métodos divulgados para analisar pesticidas em amostras de cannabis (normalmente plantas contendo níveis relativamente altos de THC) é descrito nos Exemplos abaixo. Estes exemplos demonstram vantagens dos sistemas e métodos em relação aos efeitos da matriz e interferência isobárica (por exemplo, ver Exemplo 6, acequinocil) nos extratos de cannabis. No entanto, os sistemas e métodos divulgados podem ser aplicados para detectar pesticidas e micotoxinas em uma variedade de amostras, incluindo produtos de marijuana e cânhamo, como flores; concentrados (por exemplo, óleos, tinturas, destilados); comestíveis como doces (por exemplo, gomas, chocolates), óleo de cozinha, assados, bebidas, sorvetes; produtos tópicos (por exemplo, géis, pomadas, loções), amostras botânicas, como outras plantas e produtos vegetais comestíveis (por exemplo, ervas, vegetais, frutas, flores comestíveis, especiarias, azeite de oliva); outras plantas medicinais e produtos vegetais; outras plantas e produtos vegetais que podem ser fumados (por exemplo, tabaco, hortelã, sálvia); amostras ambientais (por exemplo, água); e amostras clínicas (por exemplo, soro sanguíneo, urina). Qualquer combinação de pesticidas divulgada acima pode ser analisada.

Análise de pesticidas em cannabis

[0160] Nas modalidades dos métodos divulgados, usando um método simples de extração de solvente orgânico com diluição, as transições MRM recomendadas e um gradiente de LC com uma coluna de cromatografia líquida de alta eficiência e alto desempenho (UHPLC), os métodos divulgados podem ser usados para evitar efeitos da matriz, permitindo a detecção de pesticidas - incluindo pesticidas muito hidrofóbicos e clorados normalmente detectados usando GCMS - em amostras de cannabis em níveis baixos (por exemplo, 0,005 a 0,3 ug/g) bem abaixo dos níveis mais baixos de ação estabelecidos por estados dos EUA, como Califórnia e Oregon e outros países, como o Canadá, para produtos de cannabis, incluindo produtos inaláveis. Micotoxinas também podem ser detectadas. Por exemplo, em amostras de cannabis que compreendem pesticidas e micotoxinas regulamentadas e extraídas usando um método simples de extração de acetonitrila, a recuperação de todos os pesticidas e micotoxinas está na faixa aceitável de 70-120% com um desvio padrão relativo (RSD) inferior a 20%.

[0161] As Figs. 119A-F mostram exemplos de cromatogramas MRM com excelentes relações sinal-ruído para um conjunto representativo de pesticidas com picos de baixo nível de 0,01 ug/g em extratos de flores de cannabis.

[0162] Conforme demonstrado pelos dados fornecidos nesta divulgação, os LOQs estão bem abaixo do limite de ação atual da Califórnia em um fator de

2 a 600 para todos os pesticidas e micotoxinas da categoria Il listados no atual documento regulatório da Califórnia. A resposta RSD para cada pesticida e micotoxina no seu nível de LOQ na matriz da cannabis foi inferior a 20%. O tempo de retenção para cada analito foi reproduzível dentro de + 0,1 minuto durante um período de 24 horas. Isso demonstra que o método é mais do que adequadamente sensível e reprodutível para análises de pesticidas e micotoxinas na cannabis nos limites regulatórios especificados pela Califórnia.

Pesticidas tipicamente analisados usando GC-MS com uma Fonte El

[0163] Vários pesticidas (por exemplo, clorfenapir, cipermetrina, ciflutrina, captan, naled, permetrina e piretrinas) têm baixa afinidade de prótons, o que resulta em baixa eficiência de ionização com a fonte ESI. Esses pesticidas geralmente são analisados usando GC-MS com uma fonte de ionização de elétrons (El). O uso de uma fonte de eletropulverização aquecida com gás de aquecimento coaxial, como no sistema QSight LC-MS/MS, ioniza esses pesticidas com eficiência de ionização muito mais alta do que uma fonte ESI convencional sem gás de aquecimento. Usando as transições MRM recomendadas com uma fonte de eletropulverização aquecida, o LOQ para esses pesticidas estava na faixa de 10 a 25 ppb, o que, por exemplo, está bem abaixo dos limites de ação para a cannabis na Califórnia e em outros estados.

[0164] Por exemplo, as piretrihas são uma classe de compostos orgânicos derivados do Chrysanthemum cinerariifolium que possuem potente atividade inseticida, visando o sistema nervoso dos insetos. As piretrinas de ocorrência natural, extraídas de flores de crisântemo, são ésteres de ácido crisantêmico (piretrina |, cinerina | e jasmolina |) e ésteres de ácido pirétrico (piretrina Il, cinerina Il e jasmolina |l); suas estruturas são mostradas abaixo.

FR | 321H2803 FPiretrina Il 222H2805 õ Ê | AA Pº QA A o. QA Jasmolina | 221H3003 JJasmolina Il =>22H3005 : Ns AA ço RX NO AA re QL Cinerina! >20H2803 Cinerina Il ;21H2805 ——P AQ DP . so AQ

[0165] Nos Estados Unidos, o extrato de piretro é padronizado como 45- 55% p/p de piretrina total e, em um padrão de piretrina disponível comercialmente, a percentagem de piretrina |, piretrina Il, cinerina |, cinerina |l, jasmolina | e jasmolina Il é de cerca de 56,1, 27,8, 5,7, 3,8, 4 e 2,6%, respectivamente. Vários compostos na cannabis imitam a estrutura das piretrinas e, portanto, a análise das piretrinas na cannabis é muito difícil devido à interferência da matriz. Os LOQs, com o método LC-MS/MS que utiliza transições MRM recomendadas e gradiente LC, para piretrina |, piretrina ||, cinerina |, cinerina Il, jasmolina | e jasmolina Il foram 0,1, 0,1, 0,01, 0,03, 0,025 e 0,01 ug/g, respectivamente em flor de cannabis.

Calibragem

[0166] Em abordagens convencionais, a calibração de matriz é realizada para quantificação mais precisa de pesticidas e outros analitos em diferentes matrizes, como matrizes de alimentos. Em certas modalidades, o uso de padrões analíticos baseados em solvente em diferentes concentrações é mais prático e conveniente. Em particular, a quantificação de pesticidas em diferentes matrizes alimentares é desafiadora, pois pode ser difícil e/ou caro obter uma matriz alimentar padrão isenta de pesticidas e outros analitos.

[0167] Em certas modalidades, uma vez que alguns pesticidas podem sofrer supressão de íons devido a efeitos da matriz, uma mistura de padrões internos marcados isotopicamente pode ser adicionada aos padrões e amostras de calibração com base em solvente (consulte o Exemplo 1). Essa abordagem pode reduzir o erro na quantificação de pesticidas e outros analitos em matrizes devido à supressão de íons.

[0168] Outra abordagem para reduzir a supressão de íons dos efeitos da matriz é diluir ainda mais os extratos da amostra com metanol ou acetonitrila (por exemplo, por um fator de 1,5 a 50). Essa abordagem pode reduzir a supressão de íons, mas também pode reduzir a sensibilidade, aumentando os limites de quantificação de pesticidas em diferentes matrizes alimentares. Em certas modalidades, um extrato de acetonitrila é diluído ainda mais com metanol em 50% para obter melhores formas de pico para compostos de eluição anteriores quando LC usa metanol como fase móvel forte do solvente. Veja a Fig. 125.

Cromatografia Líquida

[0169] As abordagens convencionais de LC-MS/MS com fontes APCI e/ou ESI usam fases móveis de LC com aditivos como ácido fórmico, formato de amônio e outros aditivos para auxiliar na ionização de analitos em amostras. No entanto, para auxiliar a ionização de analitos como clordano, quintozeno, clorfenapir, etridiazol, endossulfon |, endossulfan 1l, etridiazol, clorfenapir, etridiazol e outros pesticidas muito hidrofóbicos ou clorados com uma fonte de APCI, as fases móveis de LC sem aditivos fornecem melhor performance. À ionização por ESI, no entanto, requer tipicamente aditivos ácidos, como ácido fórmico e ácido acético, e/ou aditivos neutros, como formato de amônio e acetato de amônio.

[0170] Em certas modalidades, dois métodos sequenciais de LC-MS/MS podem ser usados, em que um primeiro método de separação de LC é usado para produzir uma primeira corrente de separação que é ionizada com uma fonte ES! e um segundo método de separação de LC é usado para produzir um segundo fluxo de separação que ionizou com uma fonte APCI. Dessa maneira, o primeiro método de separação de LC pode empregar fases móveis que usam aditivos ácidos e/ou neutros para auxiliar na ionização por ESI, enquanto o segundo método de LC pode empregar fases móveis sem esses aditivos (por exemplo, sem nenhum aditivos ácido e/ou neutro; sem aditivos).

[0171] Em certas modalidades, é utilizado um único método de LC-

MS/MS que permite ionização e medição simultâneas de amostra de injeção única usando ionização ES| e APCI (por exemplo, no modo de íon positivo e negativo). Nesta abordagem, um único método LC é usado e o eluente da coluna LC da amostra pode ser dividido em uma primeira corrente de separação que é ionizada pela fonte ESI| e uma segunda corrente de separação que é ionizada usando a fonte APCI. Por exemplo, o eluente da coluna LC pode ser desviado, usando um encaixe T, para as fontes de íons ES| e APCI presentes em um sistema LC-MS/MS (por exemplo, como o sistema PerkinElmer QSight) para análise. O sistema LC-MS/MS pode ser operado nos modos ESI e APCI com interferência negligenciável ou interferência entre os modos de ionização e as polaridades.

[0172] Como descrito acima, o uso de métodos de LC que empregam fases móveis sem aditivos ácidos e/ou neutros (por exemplo, sem aditivos) permite a análise de analitos usando uma fonte de APCI. Em particular, para análise de vários pesticidas clorados usando uma fonte de APCI, foi observado que o sinal é mais alto quando nenhum aditivo é usado e que o sinal diminui por um fator de 2 a 5 com a adição de aditivos neutros, como acetato de amônio e formato de amônio. O sinal para pesticidas clorados ionizados com uma fonte de APCI diminui em um fator de 20 a 50 com a adição de aditivos ácidos, como ácido fórmico e acético. Por conseguinte, uma vez que o ESI requer a presença de alguns aditivos iônicos para auxiliar na ionização e análise de analitos, em certas modalidades, um único método de LC que emprega fases móveis com aditivos neutros, como acetato de amônio ou formato de amônio pode ser usado. A abordagem fornece um compromisso que permite que as fontes ES| e APCI sejam usadas com um único método de LC. Ao permitir que a análise prossiga com apenas uma única injeção de LC, essa abordagem fornece maior produtividade.

Exemplos de Modalidades

[0173] A Figura 1 mostra um exemplo de processo 100 para detectar e/ou quantificar um painel de pesticidas (por exemplo, 72 pesticidas) em uma amostra (por exemplo, compreendendo material vegetal de cannabis) de acordo com as abordagens descritas neste documento. No processo 100, a amostra 102 é processada por um ou mais métodos de LC 104 para produzir uma primeira e uma segunda corrente de separação. A primeira corrente de separação é ionizada usando uma fonte ES| 106a para produzir uma primeira corrente de amostra ionizada. A espectrometria de massa em tandem (por exemplo, espectrometria de massa com triplo quadrupolo) é usada para detectar e/ou quantificar um primeiro subconjunto de pesticidas do painel na primeira corrente de amostra ionizada, detectando intensidades de transições MRM associadas a cada pesticida do primeiro subconjunto 108a. A segunda corrente de separação é ionizada usando uma fonte APCI 106b para produzir uma segunda corrente de amostra ionizada. A espectrometria de massa em tandem é usada para detectar e/ou quantificar um segundo subconjunto de pesticidas do painel na segunda corrente de amostra ionizada, detectando intensidades das transições MRM associadas a cada pesticida do segundo subconjunto 108b. Cada pesticida pode ser detectado (por exemplo, identificado como presente na amostra) e/ou quantificado com base nas intensidades detectadas de uma ou mais transições de MRM associadas ao pesticida. Aplicando duas técnicas LC-MS/MS paralelas desta maneira, são obtidos resultados de detecção e/ou quantificação para o painel completo 110.

[0174] A Figura 2 mostra um exemplo de processo 200 para detectar e/ou quantificar um ou mais pesticidas em uma amostra usando LC-MS/MS com uma fonte de APCI. No processo 200, a amostra 202 é processada através de um método de LC 204 para produzir uma corrente de separação. A corrente de separação é ionizada usando uma fonte e ar de APCI como um gás de nebulização 206. A espectrometria de massa em tandem (por exemplo, espectrometria de massa com triplo quadrupolo) é usada para detectar intensidades de uma ou mais transições de MRM associadas aos pesticidas 208. As intensidades das uma ou mais transições de MRM associadas podem ser usadas para detectar (por exemplo, identificar como presente na amostra) e/ou quantificar os pesticidas 210.

[0175] A Figura 3 mostra um exemplo de sistema LC-MS/MS 300 usado em certas modalidades para executar as técnicas de LC-MS/MS descritas neste documento. O LC-MS/MS 300 compreende um estágio de LC 302, fontes de ionização (por exemplo, uma fonte ES| e/ou uma fonte APCI) 304 e dois filtros de massa 306 e 310 em série com uma célula de colisão 308 no meio. Em certas modalidades, os dois filtros de massa (Q1 e Q2) são quadrupolos. Em certas modalidades, a célula de colisão é um quadrupolo (q) (por exemplo, um quadrupolo de RF). Em certas modalidades, o LC-MS/MS 300 é um sistema triplo quadrupolo. O LC-MS/MS 300 inclui um detector 312 para detectar íons.

[0176] Em um aspecto, um método para detectar e/ou quantificar uma pluralidade de pesticidas de um painel de pesticidas em uma amostra por espectrometria de massa em tandem por cromatografia líquida (LC-MS/MS) compreende (a) processar a amostra usando uma ou mais cromatografia líquida (LC) método(s) para produzir uma primeira corrente de separação e uma segunda corrente de separação; (b) ionizar a primeira corrente de separação usando uma fonte de ionização por eletropulverização (ESI) para produzir uma primeira corrente de amostra ionizada; (c) ionizar a segunda corrente de separação usando uma fonte de ionização química atmosférica (APCI) para produzir uma segunda corrente de amostra ionizada; e (d) detectar, via espectrometria de massa em tandem (por exemplo, usando um sistema triplo quadrupolo): (i) para cada pesticida de um primeiro subconjunto do painel, uma intensidade de uma ou mais transições de monitoramento de reação múltipla (MRM) associadas ao pesticida usando o primeiro fluxo de amostra ionizado; e (ii) para cada pesticida de um segundo subconjunto do painel, uma intensidade de uma ou mais transições de monitoramento de reação múltipla (MRM) associadas ao pesticida usando a segunda corrente de amostra ionizada, detectando e/ou quantificando a pluralidade de pesticidas de o painel de pesticidas.

[0177] Em certas modalidades, a amostra compreende material vegetal de cannabis (por exemplo, em que o material vegetal de cannabis é diluído, por exemplo, por um fator de 10 ou mais). Em certas modalidades, a amostra compreende material comestível (por exemplo, alimentos) Em certas modalidades, a amostra compreende material vegetal.

[0178] Em certas modalidades, a amostra compreende um extrato e o método compreende a produção do extrato da amostra utilizando um procedimento de extração que compreende a combinação de uma amostra de base com um ou mais solventes e, após a diluição da amostra de base, filtrando a amostra de base diluída.

[0179] Em certas modalidades, os um ou mais solventes compreendem metanol. Em certas modalidades, os um ou mais solventes compreendem acetonitrila (por exemplo, acetonitrila e/ou acetonitrila com ácido fórmico). Em certas modalidades, o procedimento de extração compreende ainda um procedimento de extração dispersiva em fase sólida aplicado após a diluição da amostra de base com um ou mais solventes (por exemplo, usando PSA (amina primária e secundária) absorventes, C18, carbono grafitado de alumina e semelhantes; por exemplo, para reduzir a supressão de íons e a interferência da matriz).

[0180] Em certas modalidades, o método compreende, para cada pesticida de pelo menos uma porção da pluralidade de pesticidas, quantificar um nível (por exemplo, microgramas por grama) do pesticida na amostra com base nas intensidades detectadas de uma ou mais transições MRM associadas com o pesticida (por exemplo, em que a amostra compreende material vegetal de cannabis e/ou em que um LOQ para o nível do pesticida está abaixo do nível de ação da Califórnia e/ou Oregon por, por exemplo, um fator de 2, 10, 20, ou 50).

[0181] Em certas modalidades, para pelo menos um dentre a pluralidade de pesticidas, a quantificação do nível de pesticida na amostra compreende a utilização de um padrão de calibração analítica baseado em solvente (por exemplo, um padrão interno isotopicamente marcado). Em certas modalidades, o método compreende elevar o padrão de calibração e/ou a amostra com uma mistura padrão interna (consulte a Tabela 10).

[0182] Em certas modalidades, o painel compreende 72 pesticidas. Em algumas modalidades, por exemplo, quando a amostra é uma amostra de cannabis, um primeiro subconjunto compreende 70 pesticidas e um segundo subconjunto compreende 3 pesticidas, como clordano, clorfenapir e quintozeno (PCNB).

[0183] Em certas modalidades, um primeiro subconjunto do painel compreende um ou mais pesticidas de alto peso molecular e/ou pesticidas termicamente instáveis (por exemplo, abamectina).

[0184] Em certas modalidades, um primeiro subconjunto do painel compreende um ou mais pesticidas de categoria 2 selecionados do grupo que consiste em: abamectina, acefato, acequinocil, acetamiprida, azoxistrobina, bifenazato, bifentrina, boscalida, captan, carbaril, clorantraniliprol, cinerina |, cinerina Il, clofentezina, ciflutrina, cipermetrina, diazinon, dimetomorfo, etoxazol, fenhexamida, fenpirroximato, flonicamida, fludioxonil, hexitiazox, imidaclopride, jasmolina |, jasmolina Il, kresoxim-metil, perational, metaxil, metatril, metatril, metaxilamida, metalaxil fosfato, butóxido de piperonil, pretretrina, propiconazol, piretrina |, piretrina Il, piridabeno, espinetoram, espinosade, espiromesifeno, spirotetramat, tebuconazol, tiametoxame e trifloxistrobina.

[0185] Em certas modalidades, um primeiro subconjunto do painel compreende um ou mais pesticidas de categoria 1 selecionados do grupo que consiste em: aldicarbe, carbofurano, clorfenapir, clorpirifós, cumafos, daminozida, DDVP (diclorvos), dimetoato, Etoprof(os), etofenprox, fenoxicarbe, fipronil, imazalil, metiocarbe, metil paration, mevinfos, paclobutrazol, propoxur, espiroxamina, tiaclopride, MGK-264.

[0186] Em certas modalidades, um segundo subconjunto do painel compreende um ou mais pesticidas hidrofóbicos e/ou clorados.

[0187] Em certas modalidades, um segundo subconjunto do painel compreende um ou mais pesticidas selecionados a partir do grupo que consiste em pentacloronitrobenzeno, clordano, clorfenapir endossulfan |, endossulfan Il e etridiazol.

[0188] Em certas modalidades, um segundo subconjunto do painel compreende clordano, clorfenapir e/ou quintozeno (PCNB).

[0189] Em certas modalidades, a etapa (c) compreende o uso de ar e/ou outros gases, como nitrogênio, argônio e dióxido de carbono, como um gás de nebulização (por exemplo, para gerar íons de oxigênio com carga negativa que atuam como íons reagentes e ajudam na ionização de clordano e/ou quintozeno).

[0190] Em certas modalidades, a etapa (a) compreende processar a amostra usando um único método LC (por exemplo, e dividir o eluente do método LC único na primeira corrente de separação e na segunda corrente de separação). Em certas modalidades, o método LC único emprega fases móveis com aditivos neutros, como acetato de amônio, formato de amônio, hidróxido de amônio e carbonato de amônio. Em certas modalidades, o método LC único emprega fases móveis sem aditivos ácidos (por exemplo, sem ácido fórmico e/ou sem ácido acético). Em certas modalidades, o LC único compreende um método rápido de LC com um gradiente rápido (por exemplo, 10 - 20%/minuto ou maior alteração orgânica) e um gradiente lento [por exemplo, 1 - 10%/minuto (por exemplo, 5 - 6%) mudança orgânica] para minimizar a sobreposição entre picos de sinal de pesticidas e picos de interferência da matriz.

[0191] Em certas modalidades, a etapa (a) compreende processar a amostra usando um primeiro método de LC para produzir a primeira corrente de separação e usando um segundo método de LC para produzir a segunda corrente de separação. Em algumas modalidades, o segundo método LC emprega fases móveis com aditivos neutros, como acetato de amônio, formato de amônio, hidróxido de amônio e carbonato de amônio. Em algumas modalidades, o segundo método LC emprega fases móveis sem aditivos ácidos (por exemplo, sem ácido fórmico e/ou sem ácido acético). Em algumas modalidades, o segundo método de LC usa fases móveis sem quaisquer aditivos neutros e/ou ácidos. Em certas modalidades, o primeiro método de LC e/ou o segundo método de LC compreende um método rápido de LC com um gradiente rápido (por exemplo, 10 - 20%/minuto ou maior alteração orgânica) e um gradiente lento [por exemplo, 1-10%/minuto (por exemplo, 5-6%) de mudança orgânica] para minimizar a sobreposição entre picos de sinal de pesticidas e picos de interferência da matriz.

[0192] Em certas modalidades, para cada pesticida do primeiro subconjunto e/ou para cada pesticida do segundo subconjunto, pelo menos uma porção de uma ou mais transições MRM associadas ao pesticida são substancialmente distintas das interferências da matriz Em algumas modalidades, a amostra compreende material vegetal de cannabis e as interferências da matriz são interferências da matriz da cannabis, como interferências associadas a canabinoides, terpenos e/ou outros compostos não canabinoides.

[0193] Em certas modalidades, para cada uma de pelo menos uma porção da pluralidade de pesticidas do painel, as uma ou mais transições MRM associadas compreendem uma ou mais das transições MRM da Tabela 2A.

[0194] Em certas modalidades, para cada uma de pelo menos uma porção da pluralidade de pesticidas do painel, as uma ou mais transições MRM associadas compreendem uma ou mais das transições MRM da Tabela 2C.

[0195] Em certas modalidades, para cada uma de pelo menos uma porção da pluralidade de pesticidas do painel, as uma ou mais transições MRM associadas compreendem uma ou mais das transições MRM da Tabela 2D.

[0196] Em certas modalidades, para cada uma de pelo menos uma porção da pluralidade de pesticidas do painel, as uma ou mais transições MRM associadas compreendem uma ou mais das transições MRM da Tabela 3.

[0197] EM algumas modalidades, um método para detectar e/ou quantificar um ou mais pesticidas (por exemplo, pesticidas muito hidrofóbicos e/ou clorados) em uma amostra usando LC-MS/MS compreende: (a) processar a amostra usando um método de cromatografia líquida (LC) para produzir um fluxo de separação; (b) ionizar a corrente de separação usando a fonte APCI usando ar e/ou outros gases, como nitrogênio, argônio e dióxido de carbono, como um gás nebulizador como um gás nebulizador para produzir um fluxo de amostra ionizado; e (d) detectar, via espectrometria de massa em tandem (por exemplo, usando um sistema triplo quadrupolo), para cada pesticida de um ou mais pesticidas, uma intensidade de uma ou mais transições de monitoramento de reação múltipla (MRM) usando a corrente de amostra ionizada, cada Transição MRM associada ao pesticida, detectando e/ou quantificando um ou mais pesticidas.

[0198] Em certas modalidades, a amostra compreende material vegetal de cannabis (por exemplo, em que o material vegetal de cannabis é diluído, por exemplo, por um fator de 10 ou mais). Em certas modalidades, a amostra compreende material comestível (por exemplo, alimentos) Em certas modalidades, a amostra compreende material vegetal.

[0199] Em certas modalidades, a amostra é um extrato e o método compreende produzir o extrato da amostra usando um procedimento de extração que compreende combinar (por exemplo, diluir) uma amostra de base com um ou mais solventes [por exemplo, e, após a diluição da amostra de base, filtrar a amostra de base diluídal. Em certas modalidades, os um ou mais solventes compreendem metanol. Em certas modalidades, os um ou mais solventes compreendem acetonitrila (por exemplo, acetonitrila e/ou acetonitrila com ácido fórmico). Em certas modalidades, quando LC usa metanol como fase móvel de solvente forte, o extrato de acetonitrila é ainda diluído com metanol em 50% ou mais para obter melhores formas de pico para compostos eluidores anteriores. Em certas modalidades, o procedimento de extração compreende ainda um procedimento de extração dispersiva em fase sólida aplicado após a diluição da amostra de base com um ou mais solventes (por exemplo, usando PSA (amina primária e secundária) absorventes, C18, carbono grafitado de alumina e semelhantes; por exemplo, para reduzir a supressão de íons e a interferência da matriz).

[0200] Em certas modalidades, o método compreende, para cada pesticida de um ou mais pesticidas, quantificar um nível (por exemplo, microgramas por grama) do pesticida na amostra com base nas intensidades detectadas de uma ou mais transições de MRM associadas ao pesticida [por exemplo, em que a amostra compreende material vegetal de cannabis e/ou em que um limite de quantificação (LOQ) para o nível do pesticida está abaixo (por exemplo, um fator 2, 10, 20 ou 50 menor que) um nível de ação da Califórnia e/ou um nível de ação do Oregon para o pesticida].

[0201] Em certas modalidades, para pelo menos um dentre os pesticidas, a quantificação do nível de pesticidas na amostra compreende a utilização de um padrão de calibração analítica baseado em solvente (por exemplo, um padrão interno isotopicamente marcado). Em certas modalidades, o método compreende elevar o padrão de calibração e/ou a amostra com a mistura padrão interna consulte a Tabela 6.

[0202] Em certas modalidades, o um ou mais pesticidas compreende um ou mais pesticidas hidrofóbicos e/ou clorados. Em certas modalidades, os um ou mais pesticidas compreendem um ou mais pesticidas selecionados do grupo que consiste em pentacloronitrobenzeno, clordano, clorfenapir, endossulfan |, endossulfan Il e etridiazol. Em certas modalidades, o um ou mais pesticidas compreende —“clordano e/ou quintozeno (também conhecido como pentacloronitrobenzeno).

[0203] Em certas modalidades, o método LC emprega fases móveis com aditivos neutros, como acetato de amônio, formato de amônio, hidróxido de amônio e carbonato de amônio. Em certas modalidades, o método LC emprega fases móveis sem aditivos ácidos (por exemplo, sem ácido fórmico e/ou sem ácido acético). Em certas modalidades, o método LC emprega fases móveis sem aditivos neutros e/ou ácidos (por exemplo, sem aditivos).

[0204] Em certas modalidades, para cada pesticida de pelo menos uma porção de um ou mais pesticidas, as uma ou mais transições MRM associadas ao pesticida são substancialmente distintas das interferências da matriz, tais como as quais a amostra compreende material vegetal de cannabis e as interferências da matriz são interferências da matriz de cannabis associadas a canabinoides, terpenos e/ou outros compostos não-canabinoides.

[0205] Em certas modalidades, o um ou mais pesticidas compreende clordano e a etapa (d) compreende a detecção de uma intensidade de uma ou mais transições MRM associadas ao clordano, em que as uma ou mais transições MRM associadas ao clordano compreendem um ou mais membros selecionados do grupo consistindo em uma transição 439,8 > 35 e uma transição 441,8>35.

[0206] Em certas modalidades, o um ou mais pesticidas compreende quintozeno, e a etapa (d) compreende a detecção de uma intensidade de uma ou mais transições MRM associadas ao quintozeno, em que as uma ou mais transições MRM associadas ao quintozeno compreendem um ou mais membros selecionados do grupo consistindo em uma transição 275,8 > 35, uma transição 273,8 > 35, uma transição 275,8 > 201,8 e uma transição 273,8 > 199,8.

[0207] Em certas modalidades, o um ou mais pesticidas compreende clorfenapir, e a etapa (d) compreende a detecção de uma intensidade de uma ou mais transições MRM associadas ao clorfenapir, em que as uma ou mais transições MRM associadas ao clorfenapir compreendem um ou mais membros selecionados do grupo consistindo em uma transição 346,9 > 79 e uma transição 348,9 > 81.

[0208] Em certas modalidades, o um ou mais pesticidas compreende etridiazol| e a etapa (d) compreende a detecção de uma intensidade de uma ou mais transições MRM associadas ao etridiazol, em que as uma ou mais transições MRM associadas ao etridiazol compreendem um ou mais membros selecionados do grupo consistindo em uma transição 216,8 > 35 e uma transição 218,8>35.

[0209] Em certas modalidades, o método LC é um método rápido de LC com gradiente rápido (por exemplo, 10 - 20%/minuto ou maior alteração orgânica) e gradiente lento [por exemplo, 1 - 10%/minuto (por exemplo, 5 - 6%) mudança orgânica] para minimizar a sobreposição entre o pico de pesticidas e os picos de interferência da matriz.

[0210] EM outro aspecto, esta divulgação fornece um sistema compreendendo um espectrômetro de massa em tandem para cromatografia líquida (por exemplo, um espectrômetro de massa LC de massa com triplo quadrupolo) para executar qualquer um dos métodos descritos neste documento.

[0211] Os versados na técnica compreenderão que existem inúmeras variações e permutações das modalidades descritas acima que se enquadram no escopo das reivindicações anexas.

Exemplo 1

[0212] Hardware e Software. Nos exemplos abaixo, a separação cromatográfica foi realizada em um sistema PERKINELMERO LC-MS/MSO LX50 UHPLC e a detecção foi realizada usando um detector PerkinElmer QSIGHTOEO 220 MS/MS com uma fonte ESI e APCI de ionização dupla, que opera independentemente com dois entradas separadas. Todo o controle do instrumento, aquisição de dados e processamento de dados foram realizados usando a plataforma de software Simplicity 3QTY,

[0213] Preparação de amostras de cannabis. Aproximadamente 5 gramas de flor de cannabis foram moídos finamente e 1 g da mistura moída foi colocada em um tubo de centrífuga de 50 mL e compreendendo 10 ul da solução padrão interna mostrada na Tabela 6. Três esferas de aço de 10 mm foram adicionadas ao tubo juntas com 5 mL de acetonitrila de qualidade LC-MS. O tubo foi tapado, colocado em uma mistura de vórtice multitubo e agitado em vórtice por 10 minutos, depois centrifugado por 10 minutos a 3000 rpm. O solvente foi filtrado para um frasco de vidro âmbar de 5 mL usando um filtro de seringa de nylon de 0,22 mícron e o frasco foi tapado e rotulado.

[0214] Análise LC-MS/MS. 0,5 mL da amostra extraída foram colocados em um frasco de HPLC de 2 mL, diluídos com 0,5 mL de acetonitrila de qualidade LC-MS e misturados. Três ul desta amostra foram injetados para análise LC- MS/MS, usando o método LC e as condições de fonte MS mostradas na Tabela

5.

Tabela 5. Método LC e condições de origem MS | Condições de LC Coluna de LC Coluna PerkinElmer Quasar Pesticida F-—— — Fase móvel A (método ESI) Formato de amônio 2 mM + ácido p— ÇA Fase móvel B (método ESI) Formato de amônio 2 mM + ácido a AA | Gradiente de fase móvel Método de LC de 18,5 e 6 minutos o ammentontio |

MS/MS com fonte ES| e APCI, eee Temperatura do amostrador 10C automático Volume de injeção 3,0 uL para o método LC-MS/MS com fonte ESI. uL para o método LC-MS/MS com fonte APCI. Condições da fonte MS para fonte ESI e fonte APCI Descarga de Corona APCI -5 UA Gás de secagem 120 unidades arbitrárias

[0215] Amostra de padrões de calibração correspondentes à matriz. A calibração combinada com matriz é o padrão-ouro para quantificação, pois compensa os efeitos da matriz. Os efeitos da matriz são comuns para análises baseadas em LCMS em matrizes complexas, como a cannabis. A diminuição ou aumento da resposta é atribuída à supressão de íons dos analitos durante a ionização pela presença de compostos da matriz coeluídos. Devido aos efeitos da matriz da amostra, uma curva de calibração da matriz foi usada para quantificação e gerada pela injeção de extratos de flores de cannabis em branco e amostras de extrato de flores de cannabis em branco, compreendendo concentrações variadas de pesticidas e micotoxinas, no intervalo de 0,1-1000 ng/mL, pelo menos, sete ou mais diferentes níveis de concentração.

Tabela 6. Composição de uma mistura padrão interna de exemplo Tempo de a E [FEET TI TH pe | mm am [Fromm | amo ms

[0216] As Figs. 121A-D mostram exemplos representativos da curva de calibração para pesticidas no extrato de cannabis em quatro ordens de magnitude. As curvas de calibração para todos os pesticidas e micotoxinas foram lineares com ajuste de calibração de R2? maior que 0,99 para todos os analitos testados.

Exemplo 2. Métodos de Cromatografia Líquida

[0217] A Fig. 27A é um gráfico que mostra um cromatograma de íons total (TIC) obtido ao longo de 14 minutos para uma amostra (em branco) compreendendo material vegetal de cannabis usando um gradiente de cromatografia líquida genérica (taxa de gradiente fixa). A Fig. 27B é um gráfico que mostra um TIC de uma amostra compreendendo material vegetal de cannabis compreendendo 100 ppb de pesticidas. A Fig. 27C é um gráfico que mostra uma TIC obtida utilizando o método LC de exemplo descrito no Exemplo 1, acima. A Fig. 27D são curvas de Van Deemter para várias colunas LC.

[0218] Diâmetro interno da coluna. O diâmetro interno (ID) de uma coluna pode ser ajustado para melhorar a resposta e a capacidade de detectar e/ou quantificar com precisão vários pesticidas em amostras botânicas. A Figura 29A e Figura 29B intensidades de plotagem de uma transição MRM para amostra de pesticida compreendendo espiroxamina (e material vegetal de cannabis) medido para uma coluna ID de 21 mm e uma coluna ID de 4,6 mm, respectivamente. Os dados mostram que uma coluna de ID menor pode distorcer a forma do pico, que se acredita ser devido à sobrecarga da coluna de ID menor com componentes da matriz de cannabis.

[0219] Taxa de fluxo. A taxa de fluxo é um parâmetro de LC que pode influenciar o desempenho de um método de LC e o sinal obtido em uma medição de espectrometria de massa usada para detectar e/ou quantificar um pesticida específico. A Fig. 27E e a Fig. 27F são gráficos que plotam intensidades de uma transição MRM de 404,1 > 372,1 medida para uma amostra compreendendo azoxistrobina. A Fig. 27E mostra a intensidade da transição MRM quando uma taxa de fluxo de 0,5 mL > min foi usada. A largura do pico e as amplitudes de sinal obtidas foram de 0,19 min e 1,47x108, respectivamente. A Fig. 27F mostra a intensidade da transição MRM quando uma taxa de fluxo de 0,8 mL > min foi usada. A largura do pico e a amplitude do sinal obtidas foram de 0,12 min e 2,41x108, respectivamente. A largura de pico do método LC de 0,5 mL > min da taxa de fluxo foi 1,58 vezes maior que a largura de pico obtida com o método LC de 0,8 mL > min, enquanto a amplitude do sinal obtida com o método de 0,8 mL > min foi um fator de 1,64 maior que o método de 0,5 mL > min. De acordo com uma taxa de fluxo melhorada de 0,8 mL > min, foi obtido um pico de amplitude mais estreito e maior. Os efeitos da taxa de fluxo nos sinais de vários outros pesticidas foram examinados e foi determinado que para a coluna ID de 4,6 mm usada neste exemplo, os limites de detecção poderiam ser melhorados em cerca de 50% para todos os analitos.

[0220] Solvente eluente. As Figuras 30A-C mostram dados direcionados ao efeito do solvente orgânico de eluição usado em um método de LC na resposta para vários pesticidas. A Fig. 30A e a Fig. 30B intensidades de plotagem de uma transição MRM medida para um extrato de cannabis compreendendo acequinocil, após separação por métodos de LC nos quais duas composições de solventes orgânicos diferentes foram usadas. A Fig. 30A mostra a intensidade da transição MRM obtida quando o solvente de eluição orgânico era 100% de solvente de metanol e a Fig. 30B mostra uma intensidade da transição MRM obtida quando o solvente de eluição orgânica era de 75% de metanol e 25% de acetonitrila. A Fig. 30C mostra o efeito de várias percentagens de metanol no solvente de eluição orgânico nas respostas observadas para acequinocil e abamectina.

Exemplo 3

[0221] A detecção e quantificação de pesticidas em amostras de cannabis foram demonstradas usando modalidades dos métodos divulgados. Os resultados são mostrados nas figuras identificadas na Tabela 7. A detecção e quantificação de pesticidas adicionais é descrita nos Exemplos 4-17.

Tabela 7. Figuras mostrando a detecção e quantificação de pesticidas em amostras de cannabis

E E Acetamipride 50A-D Aldicarbe 11A-D, 54A-D

Parationion metil (também conhecido como metation paration ou 64A-D mmerente — bee —

Spirotetramat 77A-D Tiacloprido 51A-D Tiofanato de metil 53A-D Trifloxistrobina 91A-D

[0222] Como os pesticidas detectados incluem compostos polares e não polares, foi usado 100% de acetonitrila para extrair todos os analitos dos extratos das amostras. A matriz da cannabis é bastante hidrofóbica e a diluição adicional do extrato de cannabis com a fase móvel aquosa para torná-lo compatível com a LC de fase reversa resultou em menores recuperações de alguns pesticidas devido à precipitação. Portanto, os extratos de cannabis são diluídos com acetonitrila pelo fator total de 10 para obter alta recuperação de pesticidas e reduzir os efeitos da matriz. No entanto, o método LC de fase reversa utiliza a fase móvel aquosa no início da execução da LC para ajudar a reter melhor os compostos polares na coluna. A injeção de um solvente orgânico, como um extrato de amostra de acetonitrila no LC, leva a picos cromatográficos fracos para os primeiros compostos polares eluídos. Para superar esse problema, um pequeno volume de injeção de amostra de 3 microlitros foi usado nas experiências relatadas neste exemplo.

[0223] As experiências descritas neste exemplo avaliaram o desempenho de várias transições MRM para uso na detecção e/ou quantificação de diferentes pesticidas em amostras que compreendem material vegetal de cannabis. Para uma transição MRM específica associada a um pesticida em particular, o desempenho foi avaliado medindo variações de intensidade da transição MRM específica (em função do tempo de eluição) para duas amostras diferentes: (i) uma amostra de pesticida que compreende material vegetal de cannabis e o pesticida particular (adicionado a uma concentração específica) e (ii) uma amostra em branco de cannabis que compreende material vegetal de cannabis, mas não o pesticida específico. Ao comparar amplitudes de um ou mais picos observados nas medições para a amostra de pesticidas com flutuações de amplitude na amostra de cannabis em branco, foi calculada uma razão sinal/ruído (S/N) para cada um ou mais picos.

[0224] Para várias transições MRM, os limites de quantificação (LOQ) também foram calculados e comparados com os limites de ação especificados pela agência reguladora estadual para o pesticida em particular ao qual estão associados. Os LOQs estão bem abaixo do limite de ação da Califórnia em um fator de 2 a 600 para todos os pesticidas e micotoxinas da categoria || listados. O desvio padrão relativo da resposta (RSD) para cada pesticida e micotoxina no seu nível de LOQ na matriz da cannabis foi inferior a 20%. O tempo de retenção para cada analito foi reproduzível dentro de + 0,1 min durante um período de 24 horas. Isso demonstra que o método é mais do que adequadamente sensível e reproduzível para análises de pesticidas e micotoxinas na cannabis no limite regulatório especificado pelo estado da Califórnia.

[0225] Como explicado acima, a cannabis é uma matriz desafiadora para testar, e isso é agravado pelo baixo nível de concentração dos pesticidas. Para garantir a mais alta confiança analítica, várias transições de MRM para um número de pesticidas com mínima interferência da matriz na matriz da cannabis foram determinadas para detecção em nível baixo. Por exemplo, o acequinocil pode ser ionizado facilmente como um íon molecular protonado em um padrão, mas as transições MRM baseadas no íon molecular protonado na matriz da cannabis mostraram um LOQ ruim de 0,5-1 ug/g, cerca de 5 a 10 vezes mais alto do que seu limite de ação na Califórnia. Portanto, as transições MRM baseadas em modos alternativos de ionização, como a formação de adutos, foram determinadas para reduzir a interferência da matriz e obter, por exemplo, um LOQ de 0,025 ug/g (quatro vezes abaixo dos limites de ação) para o acequinocil na matriz da cannabis.

Exemplo 4. Abamectina

[0226] Compostos de alto peso molecular, como abamectina, e alguns compostos polares com eluição precoce, como daminozida e outros, são difíceis de medir em baixos níveis usando o GCMS, porque se decompõem a alta temperatura no injetor de GC ou no forno de GC. Embora esses compostos possam ser ionizados com a fonte ES|I, eles também são propensos a decomposição em alta temperatura na fonte ESI (ver, por exemplo, Figs. 6A, 6B). As temperaturas adequadas para a fonte ES| e a temperatura HSID foram, portanto, determinadas para maximizar o sinal para pesticidas polares e de alto peso molecular.

[0227] A abamectina também é propensa à formação de aduto de sódio e potássio a partir de íons de sódio e potássio lixiviados na fase móvel a partir de artigos de vidro. Como a quantidade de íons lixiviados é difícil de controlar, o uso de um aduto de sódio para a abamectina como massa Q1 para análise levaria a variações inaceitáveis da resposta. Portanto, para reduzir a formação de aduto de sódio ou potássio, uma quantidade controlada de sal de amônio (acetato ou formato) foi adicionada na fase móvel para formar um aduto de amônio da abamectina. O uso de sal de amônio na fase móvel e as condições corretas de temperatura resultam em um sinal bom e reprodutível da abamectina.

[0228] A Fig. 10A é uma triagem em massa de íons precursora (parental) da abamectina no modo de triagem Q1. As Figs. 10B-E e Figs. 109A-D são cromatogramas que comparam intensidades de duas transições MRM diferentes associadas à abamectina para amostras de cannabis que compreendem 100 ppb de abamectina (Figs. 10B, 10D; Figs. 109A, 109B) e amostras de cannabis em branco (Figs. 10C, 10E; Figs. 109C, 109D). Ambas as transições MRM usam uma massa precursora (parental) correspondente a um aduto de amônio em vez de um aduto de sódio.

[0229] Usando uma transição MRM de 890,5 > 567,2 (Figs. 10B, 10D; Figs. 109B, 109D) resulta em uma razão sinal/ruído (S/N) de 41. Usando uma transição MRM de 890,5 > 305,1 (Figs. 10C, 10E; Figs. 109A, 109C) resulta em uma razão S/N de 67. O LOQ da abamectina usando essas transições de MRM foi melhorado aproximadamente dez vezes, para aproximadamente 30 ppb.

Exemplo 5. Acefato

[0230] As Figs. 18A-B e Figs. 44A-B são cromatogramas que comparam intensidades de duas transições MRM diferentes associadas ao acefato para amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de acefato e para amostras de cannabis em branco. O uso de uma transição MRM de 184 > 143 MRM (Figs. 18A, 18B) fornece uma razão S/N de 500. O uso de uma transição MRM de 184 > 49 (Figs. 44A, 44B) fornece uma razão S/N de 90. Essas transições MRM podem melhorar o LOQ do acetato para 10 ppb.

Exemplo 6. Acequinocil

[0231] O acequinocil pode ser ionizado facilmente como um íon molecular protonado no padrão solvente, mas, devido à interferência da matriz, as transições MRM baseadas no íon molecular protonado na matriz da cannabis resultam em um LOQ ruim de 0,5 a 1 ug/g, que é de 5 a 10 vezes superior ao limite de ação da Califórnia para o acequinocil. Conforme descrito abaixo, as transições MRM baseadas em modos alternativos de ionização, como a formação de adutos, reduzem a interferência da matriz e atingem a LOQ de aproximadamente 25 ppb.

[0232] As Figuras 7A-D são quatro gráficos que comparam intensidades de duas transições MRM diferentes associadas ao acequinocil para amostras de cannabis, compreendendo 100 ppb de amostras de acequinocil e cannabis em branco. As intensidades das plotagens 7B e 7D de uma transição MRM 385,2 > 343,1 para uma amostra de acequinocil e de cannabis em branco, respectivamente. Enquanto um pico de intensidade de amplitude grande é observado no gráfico da Fig. 7B, um pico semelhante também aparece, ao mesmo tempo, nos dados da amostra de cannabis em branco mostrados na Fig. 7D. Os dados mostram que essa transição MRM é dominada pela interferência da matriz de cannabis e é indesejável para uso na detecção e/ou quantificação de acequinocil na presença de componentes da matriz de cannabis.

[0233] A Fig. 7A e a Fig. 7B comparam intensidades de outra transição MRM de 385,2 > 189,1, para uma amostra de acequinocil e um cannabis em branco. Com base nos dados mostrados nas Figs. 7A e 7B, uma razão S/N de 24 foi determinada para a transição MRM de 385,2 > 189,1. Estas duas transições foram determinadas para fornecer um LOQ variando de 0,5 a 1 ppm.

[0234] A Fig. 8 é um gráfico que mostra uma triagem em massa de acequinocil mostrando diferentes massas de íons precursores (parental). Como mostrado nos dados apresentados nas Figs. 9 e 111, as transições MRM correspondentes a um íon precursor 402,2 (parental) fornecem razões S/N mais altas para detecção e/ou quantificação de acequinocil. Uma transição MRM de 402,2 > 189 (Figs. 9A, 9C; Figs. 111A, 111C) fornece uma razão S/N de 60. Uma transição MRM de 402,2 > 343,1 (Figs. 9B, 9D; Figs. 111B, 111D) fornece um S/N de 205 e uma melhoria no LOQ para, por exemplo, 25 ou 42 ppb.

Exemplo 7. Clorfenapir

[0235] A estrutura do clorfenapir é mostrada abaixo: Ox

CI ado Br CON Fonte de ionização ES|

[0236] A Fig. 14A é um gráfico que mostra uma triagem em massa de clorfenapir mostrando diferentes massas de íons precursores (parental). Os picos nos valores de massa de 406,9 e 423,9 correspondem a uma molécula protonada ([M + H]*) e um aduto de amônio ([M + NH4]*), respectivamente.

[0237] As Figs. Intensidades do gráfico 14B-E das transições MRM para as quais a massa precursora (parental) corresponde ao aduto de amônio (IM+NH4]*) do clorfenapir. Uma transição MRM de 426 > 59 fornece uma amplitude de sinal de 1,2 x105 (Fig. 14B). Uma transição MRM de 426 > 271 fornece uma amplitude de sinal de 1,42 x10º (Fig. 14C). Uma transição MRM de 426 > 379 fornece uma amplitude de sinal de 1,99 x10º (Fig. 14D). Uma transição MRM de 426 > 409 fornece uma amplitude de sinal de 3,76 x10º (Fig. 14E).

[0238] As Figs. Intensidades do gráfico 14F-| das transições MRM para as quais a massa precursora (parental) corresponde ao clorfenapir protonado (IM + HJ]*). A Fig. 14F representa uma intensidade de transição MRM de 409 > 41, que fornece uma amplitude de sinal de 1,03 x 10%. A Fig. 14G representa uma intensidade de uma transição MRM de 409 > 59, que fornece uma amplitude de sinal de 1,76 x 105. A Fig. 14H representa uma intensidade de uma transição MRM de 409 > 271, que fornece uma amplitude de sinal de 2,57 x 10%. A Fig. 141 representa uma intensidade de uma transição MRM de 409 > 379, que fornece uma amplitude de sinal de 3,42 x 10º.

[0239] As Figs. 14J-N são cromatogramas para amostras de cannabis compreendendo 1000 ppb de clorfenapir. Os cromatogramas nas Figuras 14J e 14K foram obtidos usando transições MRM usadas anteriormente de 409 > 271, que fornecem uma razão S/N de 15 (Fig. 14J) e 409 > 379 (Fig. 14K), que fornece uma razão S/N de 20. Em contraste, as Figs. 14L-N são cromatogramas obtidos usando as transições MRM apropriadas divulgadas neste documento, que podem melhorar a sensibilidade por um fator de 3. A transição MRM de 409 > 59 (Fig. 14L) fornece uma razão S/N de 55. A transição MRM de 426 > 59 (Fig. 14M) fornece uma razão S/N de 78. A transição MRM de 426 > 409 (Fig. 14N) fornece uma razão S/N de 37.

[0240] O tipo de coluna LC pode afetar a identificação do clorfenapir. Por exemplo, o uso de uma coluna de bifenil pode causar a identificação incorreta de trifloxitrobina como clorfenapir, pois os dois compostos podem coeluir. O uso de uma coluna C18 em vez de uma coluna de bifenil na resolução da linha de base pode solucionar esse problema. A Fig. 15A e a Fig. 15B são cromatogramas obtidos utilizando as transições MRM de 409,1 > 186 e 409,1 > 206, respectivamente. Um único pico é obtido usando cada uma dessas transições MRM. Em contraste, dois picos ocorrem usando a transição MRM de 409,1 > 59 (Fig. 15C); um primeiro (ocorrendo mais cedo) correspondendo a trifloxistrobina e um segundo (ocorrendo mais tarde) correspondendo a clorfenapir.

[0241] As Figs. 93A-D comparam as intensidades de transição MRM para amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de clorfenapir com medições de amostras de cannabis em branco. As Figs. 93A e 93C comparam intensidades de uma transição MRM de 426 > 409 para uma amostra de pesticida compreendendo 1000 ppb de clorfenapir e uma amostra de cannabis em branco, respectivamente. As Fig. 93B e 93D comparam intensidades de uma transição MRM de 426 > 59,1 para uma amostra de pesticida compreendendo 1000 ppb de clorfenapir e uma amostra de cannabis em branco, respectivamente. O LOQ foi de aproximadamente 650 ppb.

[0242] As figuras 115A e 115B mostram medições de intensidade para outras transições MRM associadas ao clorfenapir e evitam a interferência da matriz. A Fig. 115A representa a intensidade de uma transição MRM de 423,9 > 59 para uma amostra de pesticida compreendendo 100 ppb de clorfenapir e uma amostra de cannabis em branco. A Fig. 115B representa a intensidade de uma transição MRM de 406,9 > 59 para uma amostra de pesticida compreendendo 1000 ppb de clorfenapir e uma amostra de cannabis em branco. Para ambas as transições MRM, observam-se picos nas medições de amostras de pesticidas, enquanto as intensidades para as medições de amostras de cannabis em branco são relativamente baixas. A transição MRM de 423,9 > 59 proporcionou uma razão S/N de 51, e a transição MRM de 406,9 > 59 proporcionou uma razão S/N de 145. O LOQ usando essas transições foi de 100 ppb.

[0243] As Figs. 115C-F mostram medições de intensidade para várias transições MRM associadas ao clorfenapir, mas sofrem com interferência da matriz, em particular uma transição MRM de 425,9 > 59 (Fig. 115C), uma transição MRM de 425,9 > 408,9 (Fig. 115D), uma transição MRM de 408,9 > 59 (Fig. 115E) e uma transição MRM de 423,9 > 406,9 (Fig. 115F). A Fig. 115Gea Fig. 115H comparam intensidades de duas transições MRM diferentes medidas para amostras de cannabis compreendendo 100 ppb com medições de amostras de cannabis em branco. Essas transições MRM foram determinadas para fornecer sensibilidade mais baixa do que as mostradas na Figura 115A e na Figura 115B. A transição MRM de 408,9 > 378,8 mostrada na Fig. 115G proporcionou uma razão S/N de 30. A Fig. 115H representa a intensidade de uma transição MRM de 408,9 > 270, que fornece uma razão de S/N mínima. O LOQ obtido usando essas transições foi de 1000 ppb.

Fonte de ionização APCI

[0244] O clorfenapir é tipicamente analisado usando uma fonte ESI, mas usando uma fonte APCI e transições MRM de 346,9 > 79 e 348,9 > 81, foi obtida melhor ionização e houve menos interferência da matriz, melhorando os limites de detecção para — 25 ppb. Veja as Figs. 123A-B.

Exemplo 8. Cinerina |

[0245] As Figs. 22A-B e 100A-B comparam intensidades de duas transições MRM diferentes associadas à cinerina | para amostras de cannabis compreendendo 1000 ppb de cinerina | e amostras de cannabis em branco. Usando a transição MRM de 317,2 > 149 (Figs. 22A, 22B), a razão S/N foi de

180. Usando a transição MRM de 317,2 > 107 transição MRM (Figs. 100A, 11B), a razão S/N foi de 38. O LOQ foi de aproximadamente 10 ppb.

Exemplo 9. Cinerina |l

[0246] As seis transições MRM para cinerina Il mostradas na Tabela 8 foram avaliadas quanto à interferência da matriz.

Tabela 8. Sinal para seis transições MRM de cinerina Il no extrato de cannabis em branco e com um valor aumentado de 40 ppb em solvente puro e em matriz de cannabis Transição MRM Sinal em Sinal em Sinal na matriz solvente Cannabis em — Cannabis branco

[0247] Convencionalmente, as transições MRM que produzem as maiores amplitudes de sinal para as amostras de solvente (coluna "Sinal no solvente"), neste caso, MRM 3, seriam usadas para detectar e/ou quantificar a cinerina Il. Apesar do MRM 6 ter o menor sinal no solvente, o MRM 6 (375,2 > 213,1) reduz a interferência da matriz, assim como o MRM 5 (375,2 > 149,1).

[0248] As Figs. 21A-B e 96A-B comparam intensidades de duas transições MRM diferentes associadas à cinerina || para amostras de cannabis compreendendo 1000 ppb de cinerina |l e amostras de cannabis em branco. À razão S/N para a transição MRM de 361,2 > 213 foi 23 (Figs. 21A, 21B). A razão S/N para a transição MRM 361,2 > 149 foi 36 (Figs. 96A, 96B). Um LOQ foi de aproximadamente 30 ppb.

[0249] A Fig. 21E e a Fig. 21F mostram os efeitos da interferência da matriz presentes em certas transições. As Fig. 21E e Fig. 21F representam a intensidade de uma transição MRM 361,2 > 107 para amostras de cannabis compreendendo 1000 ppb de cinerina |l e amostras de cannabis em branco, respectivamente. As duas parcelas de intensidade são quase indistinguíveis, indicando que essa transição é dominada pela interferência da matriz a partir da matriz da cannabis. Consequentemente, essa transição não pode ser usada para análises de baixo nível de cinerina Il nas amostras de cannabis.

Exemplo 10. Ciflutrina

[0250] As Figs. 116A-F são cromatogramas obtidos utilizando várias transições MRM associadas à ciflutrina. A Figura 116A e a Figura 116B mostram medições de intensidade para várias transições MRM que estão associadas à ciflutrina, mas sofrem com a interferência da matriz. A Fig. 116A representa a intensidade de uma transição MRM de 451 > 434 para uma amostra de pesticida compreendendo 1000 ppb de ciflutrina e uma amostra de cannabis em branco. A Fig. 116B representa a intensidade de uma transição MRM 453 > 436 para uma amostra de pesticida compreendendo 1000 ppb de ciflutrina e uma amostra de cannabis em branco. Essas transições de MRM sofrem interferência da matriz (ou seja, os picos presentes nas medições de amostras de pesticidas também estão presentes nas medições de amostras de cannabis em branco). A transição 451 > 434 MRM proporcionou uma razão S/N de 10. O LOQ foi de aproximadamente 1000 ppb.

[0251] A Figura 116C e a Figura 116D mostram medições de intensidade para duas transições MRM associadas à ciflutrina e evitam interferências na matriz, mas fornecem baixa amplitude de sinal. A Fig. 116C representa a intensidade de uma transição MRM de 451 > 127 para uma amostra de pesticida compreendendo 1000 ppb de ciflutrina e uma amostra de cannabis em branco. A Fig. 116D representa a intensidade de uma transição MRM de 451 > 206 para uma amostra de pesticida compreendendo 1000 ppb de ciflutrina e uma amostra de cannabis em branco. Essas transições MRM fornecem picos de amplitude mais baixos do que os 451 > 191 e 453 > 193, mas ainda evitam a interferência da matriz (as intensidades para as medições de amostras de cannabis em branco são relativamente planas). A transição MRM de 451 > 127 proporcionou uma razão S/N de 25 e a transição MRM 451 > 206 proporcionou uma razão S/N de 16. O LOQ foi de aproximadamente 400 ppb.

[0252] A Fig. 116E representa a intensidade de uma transição MRM de 451 > 191 para uma amostra de pesticida compreendendo 1000 ppb de ciflutrina e uma amostra de cannabis em branco. A Fig. 116F representa a intensidade de uma transição MRM 453 > 193 para uma amostra de pesticida compreendendo 1000 ppb de ciflutrina e uma amostra de cannabis em branco. Para ambas as transições MRM, observam-se picos nas medições de amostras de pesticidas, enquanto as intensidades para as medições de amostras de cannabis em branco são relativamente baixas. A transição MRM de 451 > 191 proporcionou uma razão S/N de 66 e a transição MRM 453 > 193 proporcionou uma razão S/N de

33. O LOQ foi de aproximadamente 150 ppb foi obtido por essas transições MRM.

[0253] As Figs. 90A-D também comparam as intensidades de transição MRM para amostras de cannabis compreendendo 1000 ppb de ciflutrina com medições de amostras de cannabis em branco. As Figs. 90A e 90C comparam intensidades da transição MRM 451,1 > 191, e Figs. 90B e 90D comparam intensidades da transição MRM 451,1 > 434. O LOQ foi de aproximadamente 600 ppb.

Exemplo 11. Cipermetrina

[0254] As Figs. 94A-D comparam as intensidades de transição MRM para amostras de cannabis compreendendo 1000 ppb de cipermetrina com medições de amostras de cannabis em branco. As Figs. 94A e 94C comparam intensidades de uma transição MRM de 433,1 > 127 para uma amostra de pesticida compreendendo 1000 ppb de cipermetrina e uma amostra de cannabis em branco, respectivamente. As Fig. 94B e 94D comparam intensidades de uma transição MRM 433,1 > 191,1 para uma amostra de pesticida compreendendo 1000 ppb de cipermetrihna e uma amostra de cannabis em branco, respectivamente. O LOQ foi de aproximadamente 150 ppb.

[0255] As Figs. 117A-D representam intensidades das transições MRM associadas à cipermetrina, medidas para amostras de cannabis em branco e amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de cipermetrina. As transições MRM mostradas nas Figs. 117A-D evita a interferência da matriz dos componentes da matriz da cannabis e fornece um LOQ de 100 ppb. A Fig. 117A representa intensidades de uma transição MRM 435,1 > 193,1, que proporcionou uma razão S/N de 105. A Fig. 117B presenta intensidades de uma transição MRM de 433,1 > 191,1, que proporcionou uma razão S/N de 100. A Fig. 117C representa intensidades de uma transição MRM de 4331 > 127, que proporcionou uma razão S/N de 110. A Fig. 117D representa intensidades de uma transição MRM de 435,1 > 127, que proporcionou uma razão S/N de 39. À Fig. 117E representa intensidades de uma transição MRM de 433, 1 > 91 e uma amostra de pesticida compreendendo cipermetrina na concentração de 1000 ppb. A transição MRM de 433,1 > 91 sofre interferência da matriz e proporcionou uma razão S/N de 20. O LOQ para essa transição foi de 500 ppb.

Exemplo 12. Daminozida

[0256] As Figs. 17A-B são triagens de íons do produto em busca de daminozida com uma massa de íons precursora (parental) de aproximadamente

161. A Fig. 17A mostra uma triagem de íons do produto para uma alta energia de colisão (CE) de -30V. A Fig. 17B mostra uma triagem de íons do produto para um CE baixo de -15V.

[0257] As Figs. 17C-E representam intensidades de três transições MRM diferentes para amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de daminozida

(concentração de 100 ppb). A Fig. 17C representa uma intensidade de uma transição MRM de 161,1 > 44, para a qual o S/N determinado foi 180. A Fig. 17D representa uma intensidade de uma transição MRM 161,1 > 101, para a qual o S/N determinado foi 42. A Fig. 17E representa uma intensidade de uma transição MRM de 161,1 > 143, para a qual o S/N determinado foi 390. Consequentemente, a sensibilidade das medições para daminozida pode ser melhorada por um fator de 4 através do uso de transições MRM apropriadas. LOOQs determinados chegaram tão baixo quanto 11 ppb.

[0258] As Figs. 41A-D comparam as intensidades de transição MRM para amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de daminozida com medições de amostras de cannabis em branco. As Figs. 41A e 41C comparam intensidades de uma transição 161,1 > 143 MRM para uma amostra de pesticida compreendendo 100 ppb de daminozida e uma amostra de cannabis em branco, respectivamente. As Fig. 41B e 41D comparam intensidades de uma transição 161,1 > 44 MRM para uma amostra de pesticida compreendendo 100 ppb de daminozida e uma amostra de cannabis em branco, respectivamente. O LOQ foi de aproximadamente 10,8 ppb.

Exemplo 13. Dimetomorfo

[0259] Os cromatogramas mostrados nas Figs. 24A-F e Figs. 72A-D compara intensidades de diferentes transições MRM associadas ao dimetomorfismo para amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de dimetomorfo (concentração de 100 ppb) e amostras de cannabis em branco. Para cada uma das transições, são observados dois picos nos gráficos de intensidade para as amostras de cannabis que compreendem dimetomorfo de 100 ppb (Figs. 24A-C, Figs. 72A, B). As Figs. 24A e 24D representam graficamente intensidades uma transição de 388,1 > 165 MRM para uma amostra compreendendo dimetomorfo e uma amostra de cannabis em branco, respectivamente. O primeiro pico de ocorrência anterior sofre interferência da matriz (ou seja, um pico correspondente aproximadamente ao mesmo tempo está presente no gráfico de intensidade para a amostra de cannabis em branco; Fig. 24D) e fornece uma razão S/N mais baixa (aproximadamente 15) que o segundo pico, ocorrendo mais tarde, que forneceu uma razão S/N de 361.

[0260] As Figs. 24B e 24E e Figs. 72A e 72C representam graficamente intensidades de uma transição MRM 388,1 > 273 para uma amostra de pesticida compreendendo dimetomorfos e uma amostra de cannabis em branco, respectivamente. Nenhum dos picos sofre interferência da matriz. Para o primeiro pico (ocorrendo anteriormente), o S/N determinado foi 210 e, para o segundo pico (ocorrendo mais tarde), o S/N foi 255.

[0261] As Figs. 24C e 24F e Figs. 72B e 72D representam graficamente intensidades de uma transição MRM 388,1 > 301 para uma amostra de pesticida compreendendo dimetomorfo e uma amostra de cannabis em branco, respectivamente. Nenhum dos picos sofre interferência da matriz. Para o primeiro pico (ocorrendo mais cedo), a razão S/N foi de 807 e, para o segundo pico (ocorrendo mais tarde), a razão S/N foi de 1251. Com o uso de transições MRM apropriadas, os limites de detecção para dimetomorfos foram aprimorados por um fator de 10, para um LOQ de 10 ppb.

Exemplo 14. Naled ("Dibrom")

[0262] A Fig. 16A é um gráfico que mostra uma distribuição isotópica calculada de naled, cuja estrutura é mostrada abaixo: Bro kb Wo no cl cl

[0263] A Figura 16B é uma triagem em massa precursora (parental) para uma amostra compreendendo naled. Na Fig. 16B, as abundâncias relativas dos íons M (378,7 pico), M + 2 (380,7 pico), M + 4 (382,7 pico) e M + 6 (384,7 pico) são 42%, 100%, 91% e 36%, respectivamente.

[0264] As Figs. 16C-F e Fig. 113 são cromatogramas obtidos utilizando diferentes transições MRM associadas a naled para amostras de cannabis compreendendo naled de 100 ppb. Uma transição MRM de 380,8 > 127 (Fig. 16C) fornece uma amplitude de sinal (pico) de 1,44x10º e uma razão S/N de 255.

Uma transição MRM de 378,8 > 127 (Fig. 16D) fornece uma amplitude de sinal de 5,46x10º? e uma razão S/N de 96. O uso de uma transição MRM de 380,8 > 109 (Fig. 16E) fornece uma amplitude de sinal de 3,57x10? e uma razão S/N de

60. Uma transição MRM de 382,8 > 127 (Fig. 113) fornece um sinal de 1,38x10º e uma razão S/N de 300. Uma transição MRM de 378,8 > 109 (Fig. 16F) fornece um sinal de 1,6x10º e uma razão S/N de 1230.

[0265] As Figs. 60A e 60C comparam intensidades da transição 380,8 > 109 MRM para uma amostra de pesticida compreendendo naled (concentração de 100 ppb) e uma amostra de cannabis em branco, respectivamente. As Figs. 60B e 60D comparam intensidades da transição 380,8 > 127 MRM para amostras de cannabis compreendendo naled de 100 ppb e uma amostra de cannabis em branco, respectivamente.

[0266] Os LOQs chegaram tão baixo quanto aproximadamente 23 ppb.

Exemplo 15. Dicarboximida de N-octil biciclohepteno ("MGK-264")

[0267] A Fig. 20A e a Fig. 20B são triagens de íons do produto para MGK-

264. A Fig. 20A mostra uma triagem de íons do produto para uma energia de baixa colisão de -25V. A Fig. 20B mostra uma triagem de íons do produto para uma alta energia de colisão de -50V. Foram observados íons de fragmentos principais nas massas 210,1 e 98. As Figs. 20C-E representam graficamente intensidades de três transições MRM diferentes para amostras de cannabis compreendendo MGK-264 de 100 ppb. O uso de uma transição MRM de 276,2 > 98 (Fig. 20C) fornece uma razão S/N de 300. O uso de uma transição MRM de 276,2 > 121 (Fig. 20D) fornece uma razão S/N de 5. O uso de uma transição MRM de 276,2 > 210 (Fig. 20E) fornece uma razão S/N de 1500. Consequentemente, melhorias em S/N de fatores de 10 ou mais podem ser obtidas através do uso de transições MRM apropriadas.

[0268] As Figs. 85A-D comparam as intensidades de transição MRM para amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de MGK-264 com medições de amostras de cannabis em branco. As Figs. 85A e 85C comparam intensidades de uma transição 276,2 > 98 MRM e Fig. 85B e 85D comparam intensidades de uma transição 276,2 > 210,1 MRM. O LOQ foi de aproximadamente 10 ppb.

Exemplo 16. Propiconazo|

[0269] Alguns extratos de plantas de cannabis apresentam níveis mais baixos de interferência da matriz do que outros com transições MRM baseadas na massa Q1 nominal de cerca de 342 Da. Este exemplo fornece transições MRM úteis para detectar propiconazol nos dois tipos de extratos.

[0270] As Figs. 87A-D comparam as intensidades de transição MRM para amostras de cannabis com interferência matricial relativamente baixa compreendendo 100 ppb de propiconazol com medições de amostras de cannabis em branco. As Figs. 87/A e 8/C comparam intensidades de uma transição 342,1 > 69 MRM, e Figs. 87B e 87D comparam intensidades de uma transição 342,1 > 159 MRM. O LOQ foi de aproximadamente 19 ppb, 5,3 vezes menor que o limite de ação mais baixo da Califórnia, de 100 ppb.

[0271] As Figs. 114A-D são quatro gráficos que comparam intensidades de duas transições MRM diferentes medidas para amostras de cannabis com maior interferência da matriz com transições MRM baseadas na massa Q1 nominal de 342 e compreendendo propiconazol 10 ppb com medições de amostras de cannabis em branco. A Fig. 114A representa a intensidade de uma transição 342 > 69 MRM, a Fig. 114B representa a intensidade de uma transição 342 > 159 e a Fig. 114D representa a intensidade da transição 342 > 69 para uma amostra de cannabis em branco. Para as transições 342 > 69 e 342 > 159 MRHM, os picos de interferência da matriz estavam presentes nas medições das amostras de cannabis em branco, como mostrado nas Fig. 114C e Fig. 114D.

[0272] As Figs. 114E-H (10 ppb de propiconazol) mostra intensidades de duas transições MRM, 344 > 69 e 344 > 161, que não sofrem interferência da matriz. As Fig. 114E e Fig. 114F representam graficamente intensidades de uma transição MRM 344 > 69, e Figs. 114G e 114H representam graficamente intensidades de transições 344 > 161 MRM. Os picos de intensidade presentes nas medições de amostras de pesticidas (Fig. 114E e Fig. 114F) não foram observados nas correspondentes medições de amostras de cannabis em branco (Fig. 114G e Fig. 114H). O LOQ foi de aproximadamente 10 ppb.

[0273] As Figs. 114|-L comparam quatro medições de intensidade de transição MRM para amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de propiconazol com medições de amostras de cannabis em branco. Cada uma das Figs. 114I-L representa graficamente medições de intensidade para uma transição MRM específica. Em particular, as medições de uma transição MRM 342 > 69, 342 > 159, 344 > 69 e 344 > 161 são mostradas na Figura 114, Figura 114J, Figura 114K e Figura 114L, respectivamente. Em cada uma das Figs. 1141- L, um primeiro traço de intensidade da transição MRM medido para uma amostra de pesticida compreendendo 100 ppb de propiconazol e um segundo traço de intensidade da transição MRM. Como mostrado nas Fig. 1141 e Fig. 114J, para as transições MRM 342 > 69 e 342 > 159 sofrem de interferência da matriz, pois os picos de intensidade presentes nas medições de amostras de pesticidas também estão presentes para a amostra de cannabis em branco. Por outro lado, as transições 344 > 69 e 344 > 161 MRM não sofrem interferência da matriz. Como mostrado nas Fig. 114K e Fig. 114L, grandes picos de sinal são observados nas medições de amostras de pesticidas, enquanto a intensidade da amostra de cannabis em branco varia minimamente em comparação.

Exemplo 17. Método APCI para quintozeno (PCNB) e clordano

[0274] Dois pesticidas muito hidrofóbicos e clorados (quintozeno e clordano) são tradicionalmente analisados por GC-MS porque eles não ionizam suficientemente por LC-MS com uma fonte ESI. Este exemplo descreve o uso de uma fonte APCI para ionizar quintozeno e clordano. Este método também pode ser usado para ionizar o clorfenapir.

[0275] A estrutura do quintozeno é mostrada abaixo.

NO>z Cc! Cc! Cc! CI Cc!

[0276] O quintozeno não compreende átomos de hidrogênio e, portanto, é difícil ionizar usando técnicas compatíveis com LC-MS, nas quais os prótons são ganhos ou perdidos para formar íons. O quintozeno também não forma adutos e não pode ganhar ou perder um próton. Em vez disso, as abordagens convencionais contam com GCMS com ionização eletrônica (El) para detecção e/ou quantificação de quintozeno.

[0277] O clordano é altamente clorado e possui uma afinidade proteica muito baixa. Existem duas formas de clordano: uma forma cis e uma forma trans. As estruturas químicas dessas duas formas de clordano são mostradas abaixo.

Cl CI! [7 el Cl Cl e CI! /. ci Cc! e cr Cl fei [e cl Forma cis de clordano Forma trans de clordano.

[0278] Neste exemplo, o quintozeno e o clordano foram ionizados usando uma fonte APCI com o ar como um gás de nebulização. Também é possível, no entanto, usar o ar e/ou outros gases, como nitrogênio, argônio e dióxido de carbono.

[0279] Usando um método rápido de 6 minutos LC-MS/MS com gradiente de LC curto e a fonte APCI do sistema QSight LC-MS/MS, os LOQs de quintozeno e clordano em amostras de cannabis que compreendem 100 ppb de qualquer pesticida foram 10 e 33 ppg, respectivamente.

[0280] A Figura 33A e a Figura 33B mostram distribuições de isótopos para íons de quintozeno formados via APCI. A Fig. 33A mostra uma triagem em massa precursora (principal) para a obtenção de quintozeno via APCI em modo negativo. Na Fig. 33A, o pico de massa mais baixa (273,9) corresponde a [M-C] + O] -. As abundâncias relativas de íons correspondentes ao pico 273,9, pico 275,9, pico 277,8 e pico 279,9 são 80,4%, 100%, 51% e 12%, respectivamente. A Fig. 33B mostra a distribuição isotópica calculada.

[0281] As figuras 34A e 34B mostram distribuições de isótopos para íons de clordano formados via APCI. A Fig. 34A mostra uma varredura em massa precursora (principal) para a obtenção de clordano via APCI. Na Fig. 34A, as abundâncias relativas dos íons correspondentes ao pico 437,7 (M), pico 439,7 (M + 2), pico 441,6 (M + 4), pico 443,8 (M + 6) e pico 445,7 (M + 8) são 34,5%, 88,8%, 100%, 64,4% e 25,9%, respectivamente. A figura 34B mostra uma distribuição calculada.

[0282] Como descrito neste documento, a presença de aditivos nas fases móveis usadas pelos métodos de LC pode influenciar os níveis de sinal obtidos para moléculas ionizadas por meio da técnica APCI divulgada. Neste exemplo, a influência da presença de aditivos nos métodos de LC é mostrada para o clordano na Figura 35A e na Figura 35B. A Fig. 35A traça uma triagem em massa de precursores (parentais) para uma amostra compreendendo clordano que foi separado usando um método de LC que empregou fases móveis sem aditivos. A Fig. 35B traça uma triagem em massa de precursores (parental) para uma amostra compreendendo clordano que foi separado usando um método de LC que empregava fases móveis com ácido fórmico. Um bom sinal é observado para o método LC sem aditivos (Fig. 35A), enquanto nenhum sinal foi observado para o clordano para o método LC com aditivos (Fig. 35B).

[0283] A Fig. 36 é um gráfico que mostra uma triagem de íons do produto para o quintozeno. Os vários picos no gráfico correspondem aos seguintes íons (pico relevante listado entre parênteses): CI35- (35,1), CI37- (37,1), [M-CI-C-NO? + O-OJ (201,8), [M-CI-C-NO> + OJ (271,8), [M-CI-NO>2 + OJ" (229,9), [M-CI-C] + OJ (240,9), [M-CI-NO + OJ (245,9), [M-CI + OJ (275,9), em que M representa quintozeno (pentacloronitrobenzeno).

[0284] A Fig. 39 é um gráfico que mostra os espectros de fundo para a fase móvel que entra em uma fonte APCI em um modo de íon negativo em uma faixa de massa baixa de 15 a 100.

[0285] Sem desejar limitar-se a uma teoria específica, acredita-se que o mecanismo de ionização de quintozeno com uma fonte APCI seja o seguinte: O2 + e — Oz M + O2 > [M— CI + OJ + CIO, em que M representa quintozeno.

[0286] Sem desejar limitar-se a uma teoria específica, acredita-se que o mecanismo de ionização de clordano com uma fonte APCI seja o seguinte: O2 + e > Oz M + O2 — [M + O2], onde M representa clordano.

[0287] As Figuras 37A-B são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de quintozeno usando transições MRM 275,8 > 35,1 (Figuras 37A, 37C) e 273,8 > 35,1 (Figuras 37B, 37D). As Figs. 37A e 37B são amostras de cannabis que compreendem 100 ppb de quintozeno. As Figs. 37C e 37D são amostras de cannabis em branco.

[0288] As Fig. 38A-B são cromatogramas de amostras de cannabis analisadas quanto à presença de clordano usando transições MRM 275,8 > 35 (Figs. 38A, 38C; qualificador) e 273,8 > 35 (Figs. 38B, 38D, quantificador). As Figs. 38A e 38B são amostras de cannabis compreendendo 100 ppb de clordano. As Figs. 38C e 38D são amostras de cannabis em branco.

Exemplo 18. Estabilidade a Longo Prazo

[0289] Dados de estabilidade a longo prazo para análise de pesticidas e micotoxinas em cannabis foram coletados usando um espectrômetro de massa triplo quadrupolo equipado com fonte de ionização por eletropulverização dupla e fonte de ionização química atmosférica (APCI) e combinado com uma fonte limpa e aquecida e autolimpante com interface de fluxo laminar.

[0290] A figura 120 mostra uma resposta a longo prazo (1 semana) para um extrato de cannabis que compreende 100 ng/ml de diazinon. Dados de estabilidade a longo prazo para análise de pesticidas em cannabis mostraram que a resposta RSD por mais de uma semana para a maioria dos pesticidas e micotoxinas ficou entre 1,5 e 20%. Esses resultados demonstram que a autolimpeza aquecida permanece uma fonte limpa em um sistema LC-MS/MS reduz as necessidades de manutenção do método baseado em LC-MS/MS para análise de pesticidas e micotoxinas em matrizes sujas, como a cannabis. À maioria dos métodos LC-MS/MS publicados na literatura com outros sistemas

LCMS no mercado não mostra dados de estabilidade a longo prazo ou declara que eles precisavam limpar a fonte de eletropulverização todos os dias ou após um lote para manter a sensibilidade do espectrômetro de massa (Geis- Asteggiante et al., J. Chromatogr. A, 1258, 43-54, 2012). Além disso, eles desviam o fluxo de LC para longe do MS pelos primeiros minutos e após o último pico eluir para reduzir a contaminação por MS dos compostos da matriz não retidos e com eluição tardia da coluna LC. Neste estudo, foram obtidos excelentes dados de estabilidade a longo prazo sem desviar o fluxo de LC da MS nos primeiros minutos e no final da execução e limpeza periódica da fonte de íons.

Exemplo 19. Estudos de recuperação com extração por solvente

[0291] QUEChERS é um método para extração de baixos níveis de contaminantes, como pesticidas de matrizes de frutas e vegetais com maior teor de água (Anastassiades et a/., J. AOAC Int. 86(2), 412-31, 2003). Ele trabalha para a extração de uma ampla gama de pesticidas dessas matrizes alimentares, com remoção eficaz de açúcares e outros compostos de frutas e vegetais (Chung & Chan, J. Chromatogr. A, 1217, 4815-24, 2010; Cunha et a/., J. Sep. Sci. 30(4), 620-26, 2007; Sapozhinikova, J. Agric. Food Chem. 62, 3684-89, 2014; Wang & Cheung, J. AOAC Int. 99(2), 539-57, 2016; Villar-Pulido et a/., Talanta 85, 1419- 27, 2011). Não é adequado para pesticidas muito polares, como z daminozida, incluída na lista de monitoramento de cannabis da Califórnia e de outros estados. A daminozida é polar demais para ser extraída com eficiência com o procedimento de extração QUEChERS, pois permanece na fase aquosa e não particiona no solvente orgânico durante a etapa de salga. A recuperação da daminozida da matriz da cannabis com extração QUEChERS foi relatada como de menos de 10% (Stenerson & Oden, Cann. Sci. & Tech. 1(1), 48-53, 2018). Além disso, a matriz de cannabis contém principalmente compostos hidrofóbicos, como canabinoides e terpenos, portanto, o método de extração QuUEChERS não remove grande parte dos compostos da matriz durante a etapa de salga. Diferentes grupos tentaram desenvolver métodos QUEChERS avançados com a etapa d-SPE, que utiliza PSA e outros adsorventes para remover a matriz do extrato de cannabis (por exemplo, Kowlaski et a/., LCGC 35(5) 8-22, 2017; Wang et al., LCGC 34(10), 20-7, 2016). Esses compostos se ligam ao adsorvente de PSA na etapa d-SPE e, portanto, apresentam baixas recuperações.

[0292] Devido às deficiências acima do método QUEChERS para extração de pesticidas da matriz de cannabis, usamos um método simples de extração com solvente baseado em acetonitrila para extração de pesticidas da matriz de cannabis. Amostras de flores de cannabis fortificadas foram produzidas para determinar a recuperação de pesticidas e aflatoxinas. As amostras de flores de cannabis foram testadas para confirmar a ausência de pesticidas antes de serem colhidas. Cinco amostras de flores de cannabis foram adicionadas em 2 níveis (alto e baixo) de todos os pesticidas (0,1 e 1 ug/g) e micotoxinas (0,02 e 0,1 ug/g) padrão. Esses dois níveis foram escolhidos com base em limites regulatórios para pesticidas e micotoxinas na cannabis, da Califórnia e de outros estados. As Tabelas 9, 10 e 11 mostram que as recuperações absolutas de todos os 66 pesticidas e 5 micotoxinas em 2 níveis diferentes estavam dentro da faixa aceitável de 70-120% com RSD menor que 20% para 5 amostras de flores de cannabis. Para três pesticidas, os valores de recuperação não foram relatados com baixo valor de pico, porque estavam abaixo do valor de LOQ.

Tabela 9. Recuperação de pesticidas de categoria || em 2 níveis diferentes da cannabis com o método de extração com solvente de acetonitrila Pesticida Recupera RSDI% Recupera RSD/% ss a e a seo a e a esmero a a 5) assada a as SO Ses Te a

| Bifentrina 84 13 94 7 [Spemema e a Be e O seem a Ds e fee a rg ss E e pes e e RE a o eg se e 7 per e Pentacloronitrobenzen | | e e | a o pereira a eg Es E pombo | | e Pee a as O

| Propiconazo! 90 14 95 1 ss A e pes a Ds e ss E FERREIRO a 5 Tabela 10. Recuperação de micotoxinas de categoria |l em 2 níveis diferentes da cannabis com o método de extração com solvente de acetonitrila Nível baixo 0,02 pg/g

Micotoxina Recupera RSDI% Recupera RSDI%

eme As os a [Aeorasa | a GS Tabela 11. Recuperação de pesticidas de categoria | em 2 níveis diferentes da cannabis com o método de extração com solvente de acetonitrila um Tas [ES] 5

RSD/% (n=5) ãol/% ol% (n=5)

festa | a o ger E DR a a ess a o e Ee De e

Daminozida | 82 15 80 14

DDVP «eo ds [omeseo a Fe rg O ss TE TF e ao | Rg Fer a e mo eee TR E Rg eee | a e eres e o a Fase | 5 peer Rs a [Ssproamra | ER Rg Fedor a e Exemplo 20. Quantificação

[0293] A Fig. 31 é um gráfico de barras que mostra as faixas gerais de recuperação dos pesticidas analisados. Como mostrado, os valores gerais de recuperação de 93% dos pesticidas variaram de 80% a 120% (os valores gerais de recuperação de 49 de 72 pesticidas variaram de 80% a 120% e os valores gerais de recuperação de 18 de 72 pesticidas variaram de 60% a 80%) Esses cálculos foram baseados no uso de mistura de apenas 10 padrões internos. O uso da mistura de padrões internos divulgada nesta especificação tem o potencial de melhorar as recuperações para os 5 pesticidas restantes (aqueles com valores gerais de recuperação abaixo de 60%) para valores que variam de 60% a 120%. Por exemplo, as Fig. 32A e Fig. 32B mostram curvas de calibração para azoxistrobina em concentrações variando de 0,1-120 ppb em (i) amostras compreendendo material vegetal de cannabis (matriz de cannabis) e (ii) solvente (sem material vegetal de cannabis), respectivamente.

[0294] As Tabelas 9-11 acima e as Fig. 40A e Fig. 40B resumem os resultados de detecção e/ou quantificação de pesticidas analisados nesta divulgação. As Fig. 40A e Fig. 40B traçam os vários números de pesticidas para os quais foram obtidos LOQs dentro de diferentes faixas. Na Fig. 40A, os LOQs foram determinadas usando transições de quantificador e qualificador e na Fig. 40B, os LOQs foram determinados com base apenas nas transições de quantificador.

[0295] Os limites de quantificação (LOQs) e reprodutibilidade da resposta no nível LOQ para cada um dos pesticidas da categoria |l da EPA (moderadamente tóxicos e irritantes moderadamente), pesticidas da categoria | da EPA (altamente tóxicos e severamente irritantes) e micotoxinas no extrato de cannabis estão resumidos nas Tabelas 12, 13 e 14. Os LOQs foram determinados levando-se em consideração os sinais dos íons quantificador e qualificador (razão sinal/ruído, S/N, > 10 para ambos) e garantindo que as razões de íons do produto estivessem dentro das janelas de tolerância de 20% da razão esperada.

Tabela 12. LOQs para pesticidas de categoria Il.

Nível de ação — Nível de Pesticida %CV QSight (vg/9g) , (n=7) (nvg/g) QSight Abamectina 0,025 10,6 0,1 4,0 Acetamipride 0,010 13,1 0,1 10,0 Bifenazato 0,010 10,8 0,1 10,0 | Captan” | 0,25 | 7,0 | 0,7 2,8 em | om js] os | se)

| Cipermetrina” | 0,100 | 2 empates ass es ar ano | Kresoxim-metil | 0,025 | 8,1 ss am fan] as | ano | | Metomil | 0,010 | 85 | Permetrina” | 0,010 [1680] os "| Soo | poema oo Tas or ae gemas a a es so

| Tiametoxam | 0,010 | 3,6 *Normalmente analisado usando GC-MS/MS. tAnalisado por APCI. Tabela 13. LOQs para micotoxinas de categoria || LOQ Nível de ação Nível de Micotoxina QSight %CV ação/LOQ (v9/g) (n=7) (p9/g) QSight Aflatoxina Tabela 14. LOQs para pesticidas de categoria |.

— (vg/g) Califórnia (pvg/g) [o bo | Alicate ea es a | Carmofurano oo a | elordano to ooas as

[0296] Na Figura 4, uma implementação de um ambiente de rede 400 para uso no fornecimento dos sistemas e métodos descritos neste documento é mostrada e descrita. Em uma breve visão geral, referindo-se agora à Fig. 4, um diagrama de blocos de um ambiente de computação em nuvem ilustrativo 400 é mostrado e descrito. O ambiente de computação em nuvem 400 pode incluir um ou mais provedores de recursos 402a, 402b, 402c (coletivamente, 402). Cada provedor de recursos 402 pode incluir recursos de computação. Em algumas implementações, os recursos de computação podem incluir qualquer hardware e/ou software usado para processar dados. Por exemplo, os recursos de computação podem incluir hardware e/ou software capaz de executar algoritmos, programas de computador e/ou aplicativos de computador. Em algumas implementações, os recursos de computação ilustrativos podem incluir servidores de aplicativos e/ou bancos de dados com recursos de armazenamento e recuperação. Cada provedor de recursos 402 pode ser conectado a qualquer outro provedor de recursos 402 no ambiente de computação em nuvem 400. Em algumas implementações, os provedores de recursos 402 podem ser conectados através de uma rede de computadores 408. Cada provedor de recursos 402 pode ser conectado a um ou mais dispositivos de computação 404a, 404b, 404c (coletivamente, 404) através da rede de computadores 408.

[0297] O ambiente de computação em nuvem 400 pode incluir um gerenciador de recursos 406. O gerenciador de recursos 406 pode ser conectado aos provedores de recursos 402 e aos dispositivos de computação 404 através da rede de computadores 408. Em algumas implementações, o gerenciador de recursos 406 pode facilitar o fornecimento de recursos de computação por meio de um ou mais provedores de recursos 402 para um ou mais dispositivos de computação 404. O gerenciador de recursos 406 pode receber uma solicitação de um recurso de computação de um dispositivo de computação específico 404. O gerenciador de recursos 406 pode identificar um ou mais provedores de recursos 402 capazes de fornecer o recurso de computação solicitado pelo dispositivo de computação 404. O gerenciador de recursos 406 pode selecionar um provedor de recursos 402 para fornecer o recurso de computação. O gerenciador de recursos 406 pode facilitar uma conexão entre o provedor de recursos 402 e um dispositivo de computação particular 404. Em algumas implementações, o gerenciador de recursos 406 pode estabelecer uma conexão entre um provedor de recursos específico 402 e um dispositivo de computação específico 404. Em algumas implementações, o gerenciador de recursos 406 pode redirecionar um dispositivo de computação específico 404 para um provedor de recursos específico 402 com o recurso de computação solicitado.

[0298] A Figura 5 mostra um exemplo de um dispositivo de computação 500 e um dispositivo de computação móvel 550 que pode ser usado para implementar as técnicas descritas nesta divulgação. O dispositivo de computação 500 destina-se a representar várias formas de computadores digitais, como laptops, desktops, estações de trabalho, assistentes pessoais digitais, servidores, servidores blade, mainframes e outros computadores apropriados. O dispositivo de computação móvel 550 destina-se a representar várias formas de dispositivos móveis, como assistentes digitais pessoais,

telefones celulares, smartphones e outros dispositivos de computação semelhantes. Os componentes mostrados neste documento, suas conexões e relacionamentos e suas funções são apenas exemplos ilustrativos e não são limitativos.

[0299] O dispositivo de computação 500 pode incluir um processador 502, uma memória 504, um dispositivo de armazenamento 506, uma interface de alta velocidade 508 conectada à memória 504 e várias portas de expansão de alta velocidade 510 e uma interface de baixa velocidade 512 conectada a uma porta de expansão de baixa velocidade 514 e ao dispositivo de armazenamento

506. Cada um dentre o processador 502, a memória 504, o dispositivo de armazenamento 506, a interface de alta velocidade 508, as portas de expansão de alta velocidade 510 e a interface de baixa velocidade 512, podem ser interconectados usando vários barramentos e podem ser montados em uma placa-mãe comum, ou de outras maneiras, conforme apropriado. O processador 502 pode processar instruções para execução dentro do dispositivo de computação 500, incluindo instruções armazenadas na memória 504 ou no dispositivo de armazenamento 506 para exibir texto e/ou informações gráficas para uma interface gráfica do usuário (GUI) em um dispositivo externo de entrada/saída, como um monitor 516 acoplado à interface de alta velocidade 508. Em outras implementações, vários processadores e/ou vários barramentos podem ser utilizados, conforme apropriado, juntamente com várias memórias e tipos de memórias. Além disso, vários dispositivos de computação podem ser conectados com cada dispositivo que fornece partes de operações necessárias (por exemplo, como um banco servidor, um grupo de servidores blade ou um sistema de multiprocessador). Assim, como o termo é usado neste documento, onde uma pluralidade de funções é descrita como sendo executada por "um processador", isto abrange modalidades em que a pluralidade de funções é realizada por qualquer número de processadores (um ou mais) de qualquer número de dispositivos de computação (um ou mais). Além disso, quando uma função é descrita como sendo executada por "um processador", isto abrange modalidades em que a função é executada por qualquer número de processadores (um ou mais) de qualquer número de dispositivos de computação (um ou mais) (por exemplo, em um sistema de computação distribuída).

[0300] A memória 504 armazena informações dentro do dispositivo de computação 500. Em algumas implementações, a memória 504 é uma unidade (ou unidades) de memória volátil. Em algumas implementações, a memória 504 é uma unidade (ou unidades) de memória não-volátil. A memória 504 também pode ter outro formato de meio legível por computador como um disco magnético ou óptico.

[0301] O dispositivo de armazenamento 506 é capaz de fornecer armazenamento em massa para o dispositivo de computação 500. Em algumas implementações, o dispositivo de armazenamento 506 pode ser ou conter um meio legível por computador, como um dispositivo de disquete, um dispositivo de disco rígido, um dispositivo de disco óptico, ou um dispositivo de fita, uma memória flash ou outro dispositivo de memória de estado sólido similar, ou uma matriz de dispositivos, incluindo dispositivos em uma rede de área de armazenamento ou outras configurações. As instruções podem ser armazenadas em um suporte de informações. As instruções, quando executadas por um ou mais dispositivos de processamento (por exemplo, processador 502), executam um ou mais métodos, como os descritos acima. As instruções também podem ser armazenadas por um ou mais dispositivos de armazenamento, como mídias legíveis por computador ou máquina (por exemplo, a memória 504, o dispositivo de armazenamento 506 ou a memória no processador 502).

[0302] A interface de alta velocidade 508 pode gerenciar operações que consomem muita largura de banda para o dispositivo de computação 500, enquanto a interface de baixa velocidade 512 pode gerenciar operações que consomem menos largura de banda. Essa alocação de funções é apenas um exemplo. Em algumas implementações, a interface de alta velocidade 508 pode ser acoplada à memória 504, à tela 516 (por exemplo, através de um processador gráfico ou acelerador) e às portas de expansão de alta velocidade 510, que podem aceitar várias placas de expansão (não mostrado). Em algumas implementações, a interface de baixa velocidade 512 pode ser acoplada ao dispositivo de armazenamento 506 e à porta de expansão de baixa velocidade

514. A porta de expansão de baixa velocidade 514, que pode incluir várias portas de comunicação (por exemplo, USB, BLUETOOTHGO, Bluetooth Low Energy, Ethernet, Ethernet sem fio) pode ser acoplada a um ou mais dispositivos de entrada/saída, como um teclado, um dispositivo apontador, um scanner ou dispositivo de rede, como um switch ou roteador, por exemplo, através de um adaptador de rede.

[0303] O dispositivo de computação 500 pode ser implementado de várias maneiras diferentes, conforme indicado na figura. Por exemplo, ele pode ser implementado como um servidor padrão 520 ou, muitas vezes, em um grupo desses servidores. Além disso, pode ser implementado em um computador pessoal como um laptop 522. Ele também pode ser implementado como parte de um sistema de servidor em rack 524. Alternativamente, os componentes do dispositivo de computação 500 podem ser combinados com outros componentes em um dispositivo móvel (não mostrado), como um dispositivo de computação móvel 550. Cada um desses dispositivos pode conter um ou mais do dispositivo de computação 500 e o dispositivo de computação móvel 550, e um sistema inteiro pode ser constituído por vários dispositivos de computação que se comunicam entre si.

[0304] O dispositivo de computação móvel 550 pode incluir um processador 552, uma memória 564, um dispositivo de entrada/saída, como um monitor 554, uma interface de comunicação 566 e um transceptor 568, entre outros componentes. O dispositivo de computação móvel 550 também pode ser fornecido com um dispositivo de armazenamento, como um micro-drive ou outro dispositivo, para fornecer armazenamento adicional. Cada um dentre o processador 552, a memória 564, a tela 554, a interface de comunicação 566 e o transceptor 568 pode ser interconectados usando vários barramentos, e vários componentes podem ser montados em uma placa-mãe comum ou de outras maneiras, conforme apropriado.

[0305] O processador 552 pode executar instruções dentro do dispositivo de computação móvel 550, incluindo instruções armazenadas na memória 564.

O processador 552 pode ser implementado como um conjunto de chips de chips que incluem processadores analógico separados e múltiplos e digitais. O processador 552 pode fornecer, por exemplo, coordenação dos outros componentes do dispositivo de computação móvel 550, como controle de interfaces de usuário, aplicativos executados pelo dispositivo de computação móvel 550 e comunicação sem fio pelo dispositivo de computação móvel 550.

[0306] O processador 552 pode se comunicar com um usuário através de uma interface de controle 558 e uma interface de exibição 556 acoplada à tela 554. O visor 554 pode ser, por exemplo, um monitor TFT (Monitor de Cristal Líquido de Transistor de Película fina - Thin-Film Transistor-Liquid Crystal Display) ou um OLED (Diodo de Emissão de Luz Orgânica - Organic Light Emitting Diode), ou outra tecnologia de monitor apropriada. A interface de exibição 556 pode incluir um circuito apropriado para acionar o monitor 554 para apresentar a informação gráfica e outra ao utilizador. A interface de controle 558 pode receber comandos de um usuário e convertê-los para o envio para o processador 552. Além disso, uma interface externa 562 pode fornecer comunicação com o processador 552, de modo a permitir a comunicação na área próxima do dispositivo de computação móvel 550 com outros dispositivos. À interface externa 562 pode prover, por exemplo, para a comunicação com fio em algumas implementações, ou para comunicação sem fio em outras implementações, e também pode ser usado várias interfaces.

[0307] A memória 564 armazena informações dentro do dispositivo de computação móvel 550. A memória 564 pode ser implementado como um ou mais de um meio ou meios de leitura por computador, uma unidade de memória volátil ou unidades, ou uma unidade de memória não volátil ou unidades. Uma memória de expansão 574 também pode ser fornecida e conectada ao dispositivo de computação móvel 550 através de uma interface de expansão 572, que pode incluir, por exemplo, um cartão SD e/ou uma interface de cartão SIMM (Módulo de Memória em Linha Única). A memória de expansão 574 pode fornecer espaço de armazenamento extra para o dispositivo de computação móvel 550, ou também pode armazenar aplicativos ou outras informações para o dispositivo de computação móvel 550. Especificamente, expansão de memória 574 pode incluir instruções para realizar ou completar os processos descritos acima, e pode incluir informações seguras também. Assim, por exemplo, a memória de expansão 574 pode ser fornecida como um módulo de segurança para o dispositivo de computação móvel 550 e pode ser programada com instruções que permitem o uso seguro do dispositivo de computação móvel 550. Além disso, as aplicações seguras podem ser providas através dos cartões SIMM, juntamente com a informação adicional, como a colocação de informações de identificação no cartão SIMM de uma forma não hackeável.

[0308] A memória pode incluir, por exemplo, memória flash e/ou memória NVRAM (memória de acesso aleatório não volátil), conforme discutido abaixo. Em algumas implementações, as instruções são armazenadas em um suporte de informações. As instruções, quando executadas por um ou mais dispositivos de processamento (por exemplo, processador 552), executam um ou mais métodos, como os descritos acima. As instruções também podem ser armazenadas por um ou mais dispositivos de armazenamento, como um ou mais meios legíveis por computador ou máquina (por exemplo, a memória 564, a memória de expansão 574 ou a memória no processador 552). Em algumas implementações, as instruções podem ser recebidas em um sinal propagado, por exemplo, através do transceptor 568 ou da interface externa 562.

[0309] O dispositivo de computação móvel 550 pode se comunicar sem fio através da interface de comunicação 566, que pode incluir circuitos de processamento de sinal digital quando necessário. A interface de comunicação 566 pode fornecer comunicações sob vários modos ou protocolos, como chamadas de voz GSM (Sistema Global para comunicações móveis), SMS (Serviço de Mensagens Curtas), EMS (Serviço de Mensagens Avançadas) ou mensagens MMS (Serviço de Mensagens Multimídia), CDMA (acesso múltiplo por divisão de código), TDMA (acesso múltiplo por divisão de tempo), PDC (Celular Digital Pessoal), WCDMA (acesso múltiplo por divisão de código de banda larga), CDMAZO00O ou GPRS (General Packet Radio Service), entre outros. Essa comunicação pode ocorrer, por exemplo, através do transceptor

568, usando uma radiofrequência. Além disso, pode ocorrer comunicação de curto alcance, como a utilização de um BLUETOOTHEO, WI-FI "M ou outro transceptor (não mostrado). Além disso, um módulo receptor GPS (Sistema de Posicionamento Global) 570 pode fornecer dados sem fio adicionais relacionados à navegação e à localização para o dispositivo móvel de computação 550, que podem ser usados conforme apropriado por aplicativos em execução no dispositivo móvel de computação 550.

[0310] O dispositivo de computação móvel 550 também pode se comunicar de forma audível usando um codec de áudio 560, que pode receber informações faladas de um usuário e convertê-las em informações digitais utilizáveis. O codec de áudio 560 também pode gerar som audível para um usuário, como através de um alto-falante, por exemplo, em um telefone do dispositivo de computação móvel 550. Esse som pode incluir som de chamadas telefônicas de voz, pode incluir som gravado (por exemplo, mensagens de voz, arquivos de música etc.) e também pode incluir som gerado por aplicativos que operam no dispositivo de computação móvel 550.

[0311] O dispositivo de computação móvel 550 pode ser implementado de várias maneiras diferentes, conforme indicado na figura. Por exemplo, pode ser implementado como um telefone celular 580. Também pode ser implementado como parte de um smartphone 582, assistente digital pessoal ou outro dispositivo móvel semelhante.

[0312] Várias implementações dos sistemas e técnicas descritas neste documento podem ser realizados em circuitos eletrônicos digitais, circuitos integrados, ASICs especialmente projetados (circuitos integrados de aplicativos específicos), hardware de computador, firmware, software e/ou combinações destes. Estas várias implementações podem incluir a implementação em um ou mais programas de computador que são executáveis e/ou interpretáveis em um sistema programável, incluindo pelo menos um processador programável, que pode ter propósito geral ou especial, acoplados para receber dados e instruções e transmitir dados e instruções para um sistema de armazenamento, pelo menos um dispositivo de entrada e pelo menos um dispositivo de saída.

[0313] Esses programas de computador (também conhecidos como programas, software, aplicativos de software ou código) incluem instruções de máquina para um processador programável e podem ser implementados em uma linguagem processual de alto nível e/ou linguagem de programação orientada ao objeto e/ou linguagem de montagem/máquina. Conforme usado neste documento, os termos meio legível por máquina e meio legível por computador referem-se a qualquer produto, aparelho e/ou dispositivo de programa de computador (por exemplo, discos magnéticos, discos ópticos, memória, Dispositivos Lógicos Programáveis (PLDs)) usados para fornecer instruções à máquina e/ou dados para um processador programável, incluindo um meio legível por máquina que recebe instruções da máquina como um sinal legível por máquina. O termo sinal legível por máquina refere-se a qualquer sinal usado para fornecer instruções e/ou dados da máquina a um processador programável.

[0314] Para fornecer interação com o usuário, os sistemas e técnicas descritos neste documento podem ser implementados em um computador com um dispositivo de exibição (por exemplo, um monitor CRT (tubo de raios catódicos) ou LCD (tela de cristal líquido)) para exibir informações ao usuário e um teclado e um dispositivo apontador (por exemplo, um mouse ou um trackball) pelo qual o usuário pode fornecer informações ao computador. Outros tipos de dispositivos também podem ser utilizados para fornecer interação com um usuário; por exemplo, o feedback fornecido ao usuário pode ser qualquer forma de feedback sensorial, (por exemplo, feedback visual, feedback auditivo ou feedback tátil); e a entrada do usuário pode ser recebida em qualquer forma, incluindo entradas acústica, de fala ou de entrada.

[0315] Os sistemas e técnicas descritos neste documento podem ser implementados em um sistema de computação que inclui um componente de back-end (por exemplo, como um servidor de dados) ou que inclui um componente de middleware (por exemplo, um servidor de aplicativos) ou que inclui um componente de front-end (por exemplo, um computador cliente com uma interface gráfica do usuário ou um navegador da Web através do qual um usuário possa interagir com uma implementação dos sistemas e técnicas descritas neste documento) ou qualquer combinação desses componentes de back-end, middleware ou front-end. Os componentes do sistema podem ser interligados entre si por qualquer forma ou meio de comunicação de dados digitais, (por exemplo, uma rede de comunicação.) Exemplos de redes de comunicação incluem uma rede de área local (LAN), uma rede de área ampla (WAN) e a Internet.

[0316] O sistema de computação pode incluir clientes e servidores. Um cliente e um servidor são geralmente remotos um em relação ao outro e normalmente interagem através de uma rede de comunicação. A relação do cliente e do servidor surge em virtude de programas de computador que são executados nos respectivos computadores e que têm uma relação de cliente- servidor um com o outro.

[0317] EM algumas implementações, vários módulos podem ser separados, combinados ou incorporados em módulos únicos ou combinados. Quaisquer módulos representados nas figuras não se destinam a limitar os sistemas descritos neste documento às arquiteturas de software mostradas nele.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Espectrômetro de massa com triplo quadrupolo, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma fonte de ionização por eletropulverização (ESI), em que o espectrômetro de massa com triplo quadrupolo é configurado para detectar uma transição de Monitoramento de Reação Múltipla (MRM) selecionada do grupo que consiste em transições de MRM no Grupo A: 890,5 > 145,0 (abamectina); 890,5 > 567,2 (abamectina); 890,5 > 305,1 (abamectina); 184,0 > 49,0 (acefato); 184,0 > 95,0 (acefato); 402,2 > 343,1 (acequinocil); 402,2 > 189 (acequinocil); 208,0 > 116,0 (aldicarbe); 208,0 > 89,0 (aldicarbe); 343,0 > 272,0 (boscalida); 316,9 > 263,9 (captan); 316,9 > 235,9 (captan); 318,9 > 265,9 (captan); 318,9 > 237,9 (captan); 409,0 > 59,1 (clorfenapir); 407,0 > 59,1 (clorfenapir); 424,0 > 59,1 (clorfenapir); 426,0 > 59,1 (clorfenapir); 349,9 > 321,9 (clorpirifós); 317,2 > 121,0 (cinerina-l); 317,2 > 107,0 (cinerina-l); 317,2 > 149,0 (cinerina-l); 361,2 > 149,0 (cinerina Il); 361,2 > 213,0 (cinerina-ll);

363,0 > 306,9 (cumafos); 363,0 > 334,9 (cumafos); 363,0 > 226,9 (cumafos); 453,1 > 193,0 (ciflutrina); 451,1 > 127,0 (ciflutrina); 451,1 > 191,0 (ciflutrina); 435,1 > 193,1 (cipermetrina); 435,1 > 127,0 (cipermetrina); 433,1 > 127,0 (cipermetrina); 161,1 > 44,0 (daminozida); 161,1 > 45,0 (daminozida); 165,1 > 147,0 (daminozida-D2a); 220,9 > 127,0 (diclorvos); 388,1 > 301,0 (dimetomorfo); 388,1 > 273,0 (dimetomorfo); 394,2 > 359,1 (etofenprox); 302,1 > 55,0 (fenhexamida); 302,1 > 97,0 (fenhexamida); 302,1 > 256,0 (fenoxicarbe); 422,2 > 138,0 (fenpiroximato); 435,0 > 250,0 (fipronil); 435,0 > 330,0 (fipronil); 247,1 > 126,0 (fludioxonil); 247,1 > 180,0 (fludioxonil); 297,0 > 41,0 (imazalil); 260,2 > 213 (imidaclopride-Da); 331,0 > 163,0 (jasmolina |); 375,2 > 163,0 (jasmolina Il); 375,2 > 213,0 (jasmolina |l); 331,0 > 285,0 (malation); 280,2 > 248,1 (metalaxil);

242,0 > 127,0 (mevinfos);

242,0 > 109,0 (mevinfos);

225,0 > 127,0 (mevinfos);

225,0 > 109,0 (mevinfos);

298,0 > 70,0 (miclobutanil Do);

276,2 > 98,0 (n-octil-biciclo-hepteno-dicarboximida (MGK-264);

380,8 > 127,0 (naled);

382,8 > 127,0 (naled);

380,8 > 109,0 (naled);

318,0 > 133,0 (fosmete);

301,2 > 123 (praletrina);

344,1 > 69,0 (propiconazol);

344,1 > 161,0 (propiconazol);

329,2 > 143,0 (piretrina-l);

373,2 > 143,0 (piretrina-ll);

378,0 > 160,0 (piridaben-D13);

748,5 > 98,0 (espinetoram);

748,5 > 142,0 (espinetoram);

746,5 > 98,0 (espinosina D);

746,5 > 142,0 (espinosina D);

374,2 > 216,0 (spirotetramat);

296,0 > 215,0 (tiametoxam-D3);

343,1 > 151,0 (tiofanato de metil); e

343,1 > 268,0 (tiofanato de metil); ou

(b) uma fonte de ionização química atmosférica (APCI), em que o espectrômetro de massa com triplo quadrupolo é configurado para detectar uma transição MRM selecionada do grupo que consiste em transições MRM no Grupo B:

439,8 > 35,1 (clordano);

441,8 > 35,1 (clordano);

275,8 > 35,1 (PCNB);

273,8 > 35,1 (PCNB); 275,8 > 201,9 (PCNB); 216,8 > 35,0 (etridiazol); 218,8 > 35,0 (etridiazol); 346,9 > 79,0 (clorfenapir); e 348,9 > 81,0 (clorfenapir); ou (c) a fonte ES| e a fonte APCI.

2. Espectrômetro de massa com triplo quadrupolo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende a fonte ESI.

3. Espectrômetro de massa com triplo quadrupolo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende a fonte de APCI.

4. Espectrômetro de massa com triplo quadrupolo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende a fonte ESl e a fonte APCI.

5. Espectrômetro de massa com triplo quadrupolo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é configurado ainda para detectar uma transição MRM selecionada do grupo que consiste em transições MRM no Grupo C: 184,0 > 143,0 (acefato); 404,1 > 372,0 (azoxistrobina); 161,1 > 143,0 (daminozida); 302,1 > 88,0 (fenoxicarbe); 302,1 > 116 (fenoxicarbe); 297,0 > 159,0 (imazalil); 331,2 > 121,0 (jasmolina-l); 331,0 > 127,0 (malation); 163,1 > 88,0 (metomil); 163,1 > 106,0 (metomil); e 276,2 > 210,0 (MGK-264).

6. Espectrômetro de massa com triplo quadrupolo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que é configurado ainda para detectar uma transição MRM selecionada do grupo que consiste em transições MRM no Grupo D:

223,1 > 99,0 (acetamipride); 223,1 > 126,0 (acetamipride); 404,1 > 344,0 (azoxistrobina); 301,1 > 170,0 (bifenazato); 301,1 > 198,0 (bifenazato); 440,1 > 166,1 (bifentrina); 440,1 > 181,1 (bifentrina); 343,0 > 140,0 (boscalida); 202,1 > 127,0 (carbaril); 202,1 > 145,0 (carbaril); 222,1 > 123,0 (carbofurano); 222,1 > 165,0 (carbofurano); 484,0 > 285,9 (clorantraniliprol); 484,0 > 452,9 (clorantraniliprol); 349,9 > 97,0 (clorpirifós); 303,0 > 102,0 (clofentezina); 303,0 > 138,0 (clofentezina); 433,1 > 191,1 (cipermetrina); 220,9 > 109,0 (diclorvos); 230,0 > 125,0 (dimetoato); 230,0 > 199,0 (dimetoato); 243,1 > 131,0 (etoprofos); 243,1 > 173,0 (etoprofos); 394,2 > 107,1 (etofenprox); 394,2 > 177,1 (etofenprox); 360,2 > 57,1 (etoxazol); 360,2 > 141,0 (etoxazol); 422,2 > 135,0 (fenpiroximato); 422,2 > 366,1 (fenpiroximato);

230,1 > 174,0 (flonicamida); 230,1 > 203,0 (flonicamida); 353,1 > 168,0 (hexitiazox); 353,1 > 228,0 (hexitiazox); 297,0 > 201,0 (imazalil); 256,1 > 175,0 (imidaclopride); 256,1 > 209,0 (imidaclopride); 314,1 > 222 (kresoxim-metil); 314,1 > 235,0 (kresoxim-metil); 280,2 > 192,1 (metalaxil); 226,1 > 121,0 (metiocarbe); 226,1 > 169,0 (metiocarbe); 289,1 > 70,0 (miclobutanil!); 289,1 > 125,0 (miclobutanil); 237,1 > 72,0 (oxamil); 237,1 > 90,0 (oxamil); 294,1 > 70,0 (paclobutrazol); 294,1 > 125,0 (paclobutrazol); 264,0 > 124,9 (paration metil); 264,0 > 231,9 (paration metil); 408,1 > 183,0 (permetrina); 408,1 > 355,0 (permetrina); 318,0 > 160,0 (fosmete); 356,2 > 119,0 (butóxido de piperonil); 356,2 > 177,0 (butóxido de piperonil); 301,2 > 132,9 (praletrina); 301,2 > 168,9 (pretretrina); 342,1 > 69,0 (propiconazol); 342,1 > 159,0 (propiconazol); 210,1 > 111,0 (propoxur); 210,1 > 168,0 (propoxur);

329,2 > 161,0 (piretrina-l); 373,2 > 161,0 (piretrina-ll); 365,1 > 147,0 (piridabeno); 365,1 > 309,0 (piridabeno); 732,5 > 98,0 (espinosina A); 732,5 > 142,0 (espinosina A); 273,1 > 187,0 (espiromesifeno); 273,1 > 255,0 (espiromesifeno); 374,2 > 302,1 (spirotetramat); 298,3 > 100,1 (espiroxamina); 298,3 > 144,1 (espiroxamina); 308,0 > 70,0 (tebuconazol); 308,0 > 125,0 (tebuconazol); 253,0 > 99,0 (tiaclopride); 292,0 > 181,0 (tiametoxam); 292,0 > 211,0 (tiametoxam); 409,1 > 186,0 (trifloxistrobina); e 409,1 > 206,0 (trifloxistrobina).

7. Espectrômetro de massa com triplo quadrupolo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que é configurado ainda para detectar uma transição MRM selecionada do grupo que consiste em transições MRM no Grupo E: 221,1 > 179 (atrazina-Ds); 343,0 > 307,0 (boscalida); 209,2 > 152,1 (carbariç-D7); 349,9 > 198 (clorpirifós); 451,1 > 206 (ciflutrina); 305,1 > 97,0 (diazinon); 305,1 > 169,0 (diazinon); 315,2 > 170,0 (diazinon-D10); 227,0 > 115,0 (diclorvos-Ds);

236,1 > 205,0 (dimetoato-Ds); 280,2 > 220,1 (metalaxil); e 253,0 > 126,0 (tiaclopride).

8. Espectrômetro de massa com triplo quadrupolo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 caracterizado pelo fato de que é configurado ainda para detectar uma transição MRM selecionada do grupo que consiste em transições MRM no Grupo F: 313,1 > 285,0 (micotoxina B1); 313,1 > 269,0 (micotoxina B1); 313,1 > 241,0 (micotoxina B1); 315,1 > 287,0 (micotoxina B2); 315,1 > 243,0 (micotoxina B2); 329,1 > 243,0 (micotoxina G1); 329,1 > 214,0 (micotoxina G1); 329,1 > 200,0 (micotoxina G1); 331,1 > 245,0 (micotoxina G2); 331,1 > 189,0 (micotoxina G2); 404,1 > 358,0 (ocratoxina A); 404,1 > 239,0 (ocratoxina A); e 404,1 > 221,0 (ocratoxina A).

9. Método para detectar um pesticida em uma amostra, caracterizado pelo fato de que compreende a geração de um ou mais espectros de massa a partir da amostra, usando o espectrômetro de massa com triplo quadrupolo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8.

10. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a amostra é uma amostra de cannabis.

11. Método para detectar um pesticida em uma amostra, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) obter da amostra por cromatografia líquida uma primeira corrente de separação e uma segunda corrente de separação; (b) ionizar a primeira corrente de separação usando uma fonte de ionização por eletropulverização (ESI) para produzir uma primeira corrente de amostra ionizada; (c) ionizar a segunda corrente de separação usando uma fonte de ionização química atmosférica (APCI) para produzir uma segunda corrente de amostra ionizada; e (d) gerar espectros de massa usando um espectrômetro de massa com triplo quadrupolo configurado para detectar uma transição MRM selecionada no grupo que consiste em transições MRM no Grupo A e uma transição MRM selecionada no grupo que consiste em transições MRM no Grupo B.

12. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o espectrômetro de massa com triplo quadrupolo é ainda configurado para detectar uma transição MRM selecionada do grupo que consiste em transições MRM no grupo C.

13. Método, de acordo com a reivindicação 11 ou reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o espectrômetro de massa com triplo quadrupolo é ainda configurado para detectar uma transição MRM selecionada do grupo que consiste em transições MRM no Grupo D.

14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 13, caracterizado pelo fato de que o espectrômetro de massa com triplo quadrupolo é ainda configurado para detectar uma transição MRM selecionada do grupo que consiste em transições MRM no Grupo E.

15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 14, caracterizado pelo fato de que o espectrômetro de massa com triplo quadrupolo é ainda configurado para detectar uma transição MRM selecionada do grupo que consiste em transições MRM no Grupo F.

16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 15, caracterizado pelo fato de que a fonte de APCI usa um gás de nebulização selecionado do grupo que consiste em ar, nitrogênio, dióxido de carbono e argônio.

17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 16, caracterizado pelo fato de que a cromatografia líquida compreende uma fase móvel que não compreende um aditivo neutro ou ácido.

18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 17, caracterizado pelo fato de que a cromatografia líquida compreende um gradiente rápido e um gradiente lento.

19. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 18, caracterizado pelo fato de que a amostra é um extrato de acetonitrila diluído com metanol.

20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 19, caracterizado pelo fato de que a amostra é uma amostra de cannabis.