BR112020010964A2 - moduladores da indolamina 2,3-dioxigenase - Google Patents

Abstract

São proporcionados compostos inibidores da IDO1 de Fórmula (I) e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, suas composições farmacêuticas, seus métodos de preparação e métodos para o seu uso na prevenção e/ou no tratamento de doenças.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MODU- LADORES DA INDOLAMINA 2,3-DIOXIGENASE".

CAMPO DE INVENÇÃO

[0001] São divulgados compostos, métodos e composições farma- cêuticas para a prevenção e/ou o tratamento de HIV; incluindo a pre- venção da progressão da AIDS e da imunossupressão geral, através da administração de certos compostos de indolamina 2,3-dioxigenase em quantidades terapeuticamente eficazes. São também divulgados métodos para a preparação de tais compostos e métodos de uso dos compostos e das suas composições farmacêuticas.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0002] A indolamina-2,3-dioxigenase 1 (IDO1) é uma enzima que contém heme que catalisa a oxidação do anel de indol do triptofano para produzir a N-formil quinurenina, que é rápida e constitutivamente convertida em quinurenina (Kyn) e uma série de metabolitos a jusante. A IDO1 é a etapa limitante da taxa dessa via da quinurenina do meta- bolismo do triptofano e a expressão da IDO1 é induzível no contexto de inflamação. Os estímulos que induzem a IDO1 incluem os produtos virais ou bacterianos ou as citocinas inflamatórias associadas à infec- ção, tumores ou danos estéreis nos tecidos. A Kyn e os vários metabó- litos a jusante são imunossupressores: a Kyn é antiproliferativa e pró- apoptótico para as células T e as células NK (Munn, Shafizadeh et al. 1999, Frumento, Rotondo et al. 2002), enquanto os metabólitos, como o ácido 3-hidróxi antranílico (3-HAA) ou o produto de dimerização oxi- dativa do 3-HAA, ácido cinabarínico (CA), inibem a função dos fagóci- tos (Sekkai, Guittet et al. 1997) e induzem a diferenciação das células T reguladoras imunossupressoras (Treg), aos mesmo tempo que ini- bem a diferenciação das células T CD4+ produtoras de IL-17 ou IL-22 protetoras do intestino (Th17 e Th22) (Favre, Mold et al. 2010). A indu- ção da IDO1, entre outros mecanismos, é provavelmente importante na limitação da imunopatologia durante as respostas imunes ativas, na promoção da resolução das respostas imunes e na promoção da tole- rância fetal. No entanto, em contextos crônicos, como o câncer ou a infecção viral ou bacteriana crônica, a atividade da IDO1 impede a de- puração de tumor ou patógeno e, se a atividade for sistêmica, a ativi- dade da IDO1 pode resultar em disfunção imune sistêmica (Boasso e Shearer 2008, Li, Huang et al. 2012). Além desses efeitos imunomodu- ladores, também é conhecido que os metabólitos da IDO1, como a Kyn e o ácido quinolínico, são neurotóxicos e observados serem ele- vados em várias condições de disfunção neurológica e depressão. Como tal, a IDO1 é um alvo terapêutico para a inibição em uma ampla série de indicações, como para promover a depuração de tumores, permitir a depuração de infecções virais ou bacterianas intratáveis, di- minuir a disfunção imune sistêmica manifestada como inflamação per- sistente durante a infecção pelo HIV ou a imunossupressão durante a sepse, e prevenir ou reverter as condições neurológicas.

IDO1 e a inflamação persistente na Infecção pelo HIV:

[0003] Apesar do sucesso da terapia antirretroviral (TARV) na su- pressão da replicação do HIV e na diminuição da incidência de condi- ções relacionadas à Aids, os pacientes infectados pelo HIV na TARV apresentam uma maior incidência de morbidades e mortalidade não relacionadas à AIDS do que seus iguais não infectados. Essas condi- ções não relacionadas à AIDS incluem o câncer, a doença cardiovas- cular, a osteoporose, a doença hepática, a doença renal, a fragilidade e a disfunção neurocognitiva (Deeks 2011). Vários estudos indicam que a morbidade/mortalidade não relacionada à AIDS está associada à inflamação persistente, que permanece elevada em pacientes infec- tados pelo HIV na TARV, em comparação com os iguais (Deeks 2011). Como tal, formula-se a hipótese que a inflamação persistente e a dis- função imune, apesar da supressão virológica com a TARV, sejam a causa desses eventos não definidores da AIDS (NADEs).

[0004] O HIV infecta e mata as células T CD4+, com particular pre- ferência por células como as células T CD4+ que residem nos tecidos linfoides das superfícies da mucosa (Mattapallil, Douek et al. 2005). À perda dessas células, combinada com a resposta inflamatória à infec- ção, resultam em uma relação perturbada entre o hospedeiro e todos os patógenos, incluindo o próprio HIV, porém se estendem às infec- ções virais, infecções fúngicas e bactérias residentes pré-existentes ou adquiridas nas superfícies da pele e mucosa. Essa relação disfuncio- nal entre hospedeiro:patógeno resulta na reação exagerada do hospe- deiro ao que normalmente seria um problema menor, bem como per- mite o crescimento de patógenos entre a microbiota. A interação dis- funcional entre hospedeiro:patógeno resulta, portanto, em inflamação aumentada, o que, por sua vez, leva a uma disfunção mais profunda, gerando um ciclo vicioso. Como se acredita que a inflamação leva à morbidade/mortalidade não relacionada à Aids, os mecanismos que governam a interação alterada entre hospedeiro patógeno são alvos terapêuticos.

[0005] A expressão e a atividade da IDO1 são aumentadas duran- te a infecção por HIV não tratada e tratada, bem como nos modelos em primatas da infecção por SIV (Boasso, Vaccari et al. 2007, Favre, Lederer et al. 2009, Byakwaga, Boum et al. 2014, Hunt, Sinclair et al. 2014, Tenorio, Zheng et al. 2014). A atividade da IDO1, conforme indi- cada pela razão dos níveis plasmáticos de substrato enzimático e pro- duto (razão de Kyn/Tryp ou K:T), está associada a outros marcadores de inflamação e é um dos indicadores mais fortes da morbida- de/mortalidade não relacionada à Aids (Byakwaga, Boum et al. 2014, Hunt, Sinclair et al. 2014, Tenorio, Zheng et al. 2014). Além disso, as características consistentes com o impacto esperado da atividade da IDO1 aumentada sobre o sistema imunológico são características principais da disfunção imune induzida por HIV e SIV, como a resposta proliferativa de células T diminuída ao antígeno e o desequilíbrio de Treg:Th17 nos compartimentos sistêmico e intestinal (Favre, Lederer et al. 2009, Favre, Mold et al. 2010). Como tal, nós e outros levanta- mos a hipótese de que a IDO1 desempenha um papel na condução do Ciclo vicioso de disfunção imune e inflamação associada à morbida- de/mortalidade não relacionada à AIDS. Assim, propomos que a inibi- ção da IDO1 reduzirá a inflamação e diminuirá o risco de NADEs em pessoas infectadas pelo HIV suprimidas da TARV.

IDO1 e a Inflamação Persistente além do HIV

[0006] Como descrito acima, a inflamação associada à infecção por HIV crônica tratada é um provável motivador de doenças múltiplas terminais de órgãos [Deeks 2011]. No entanto, essas doenças termi- nais de órgãos não são exclusivas da infecção pelo HIV e são, de fato, as doenças comuns do envelhecimento que ocorrem em idades mais precoces na população infectada pelo HIV. Na população geral não infectada, a inflamação de etiologia desconhecida é um importante correlato de morbidade e mortalidade [Pinti, 2016 * 88]. De fato, mui- tos dos marcadores de inflamação são compartilhados, como a IL-6 e A PCR. Se, como a hipótese formulada acima, a IDO1 contribui para a inflamação persistente na população infectada pelo HIV, induzindo a disfunção imune no trato GI ou nos tecidos sistêmicos, a IDO1 também pode contribuir para a inflamação e, portanto, para as doenças termi- nais de órgãos na população em geral. Essas doenças terminais de órgãos associadas à inflamação são exemplificadas por doenças car- diovasculares, síndrome metabólica, doença hepática (DHGNA, NASH), doença renal, osteoporose e deficiência neurocognitiva. De fato, a via da IDO1 tem links na literatura para doença hepática (resu- mos de Vivoli na Italian Assoc. for the Study of the Liver Conference 2015], diabetes [Baban, 2010 *%89], doença renal crônica [Schefold,

2009 *90], doença cardiovascular [Mangge, 2014 ft92; Mangge, 2014 *491], bem como envelhecimento geral e todas as causas de mortali- dade [Pertovaara, 2006 t93]. Como tal, a inibição da IDO1 pode ter aplicação na diminuição da inflamação na população geral para dimi- nuir a incidência de doenças terminais específicas de órgãos associa- das à inflamação e ao envelhecimento. IDO1 e a Oncologia

[0007] A expressão da IDO pode ser detectada em vários cânce- res humanos (por exemplo; melanoma, pancreático, ovariano, LMA, CCR, próstata e endometrial) e se correlaciona com o mau prognóstico (Munn 2011). Múltiplos papéis imunossupressores têm sido atribuídos à ação da IDO, incluindo a indução da diferenciação e da hiperativa- ção das Treg, a supressão da resposta imune das Teff e a função di- minuída das CD, todas as quais prejudicam o reconhecimento imuno- lógico e promovem o crescimento do tumor (Munn 2011). A expressão da IDO em tumores cerebrais humanos está correlacionada com a so- brevivência reduzida. Os modelos em camundongos ortotrópicos e transgênicos para glioma demonstram uma correlação entre a expres- são reduzida da IDO e a infiltração reduzida das Treg e uma sobrevida em longo prazo aumentada (Wainwright, Balyasnikova et al. 2012). No melanoma humano, uma alta proporção de tumores (33 de 36 casos) apresentou IDO elevada, sugerindo um papel importante no estabele- cimento de um microambiente de tumor imunossupressor (TME), ca- racterizado pela expansão, ativação e recrutamento de MDSCs de uma maneira dependente de Treg (Holmgaard, Zamarin et al. 2015). Além disso, células imunes que expressam a IDO hospedeiras foram identificadas nos linfonodos drenantes e nos próprios tumores (Mellor e Munn 2004). Portanto, acredita-se que a IDO derivada tanto de tu- mor quanto de hospedeiro contribua para o estado imunossuprimido do TME.

[0008] A inibição da IDO foi uma das primeiras estratégias de fár- macos de moléculas pequenas propostas para o restabelecimento de uma resposta imunogênica ao câncer (Mellor e Munn 2004). O enanti- ômero d do 1-metil triptofano (D-1MT ou indoximod) foi o primeiro ini- bidor da IDO a entrar nos ensaios clínicos.

Embora este composto de fato iniba claramente a atividade da IDO, ele é um inibidor muito fraco da enzima isolada e o(s) mecanismo(s) de ação in vivo para este com- posto ainda está(ão) sendo elucidado(s). Os pesquisadores na Incyte otimizaram um composto de sucesso obtido a partir de um processo de triagem para um inibidor potente e seletivo com exposição oral sufi- ciente para demonstrar um retardo no crescimento do tumor em um modelo para melanoma em camundongo (Yue, Douty et al. 2009). O desenvolvimento adicional desta série levou ao INCB204360, que é altamente seletivo para a inibição da IDO-1 sobre IDO-2 e TDO nas linhas celulares transfectadas transientemente com enzimas humanas ou de camundongos (Liu, Shin et al. 2010). Uma potência semelhante foi observada para as linhagens celulares e os tumores humanos pri- mários que expressam endogenamente a IDO1 (IC50s — 3-20 nM). Quando testado na cocultura de CDs e células T CD4*CD25' nunca tratadas, o INCB204360 bloqueou a conversão destas células T em Tregs CD4*FoxP3*. Finalmente, quando testado em um modelo singê- nico (células pancreáticas PANO02) em camundongos imunocompeten- tes, o INCB204360 dosado oralmente proporcionou uma inibição signi- ficativa do crescimento do tumor, dependente da dose, porém não teve efeito contra o mesmo tumor implantado em camundongos imunodefi- cientes.

Estudos adicionais pelos mesmos pesquisadores mostraram uma correlação da inibição da IDO1 com a supressão dos níveis sis- têmicos de quinurenina e a inibição do crescimento do tumor em um modelo singênico adicional para tumor em camundongos imunocom- petentes.

Com base nesses estudos pré-clínicos, o INCB24360 entrou nos ensaios clínicos para o tratamento de melanoma metastático (Be- atty, O'Dwyer et al. 2013).

[0009] À luz da importância do catabolismo do triptofano na manu- tenção da supressão imunológica, não surpreende que a superexpres- são de uma segunda enzima metabolizadora do triptofano, TDO2, por múltiplos tumores sólidos (por exemplo, carcinomas de bexiga e fíga- do, melanomas) também tenha sido detectada. Uma pesquisa com 104 linhagens celulares humanas revelou 20/104 com expressão da TDO, 17/104 com IDO1 e 16/104 expressando ambas (Pilotte, Larrieu et al. 2012). Semelhante à inibição da IDO1, a inibição seletiva da TDO? é eficaz na reversão da resistência imune em tumores que su- perexpressam a TDO?2 (Pilotte, Larrieu et al. 2012). Esses resultados apoiam a inibição da TDO2 e/ou a inibição dupla de TDO2/IDO1 como uma estratégia terapêutica viável para melhorar a função imune.

[00010] Múltiplos estudos pré-clínicos têm demonstrado um valor significativo, mesmo sinergístico, em combinar os inibidores da IDO-1 em combinação com os mAbs para CTLA-4, PD-1 e GITR que modu- lam o ponto de verificação das células T. Em cada caso, tanto a eficá- cia quanto os aspectos relacionados à PD de atividade/função imune melhorada foram observados nesses estudos em uma variedade de modelos murinos (Balachandran, Cavnar et al. 2011, Holmgaard, Za- marin et al. 2013, M. Mautino 2014, Wainwright Chang et al. 2014). O inibidor da IDO1 do Incyte (INCB204360, epacadostat) foi clinicamente testado em combinação com um bloqueador de CTLAA4 (ipilimumab), porém não está claro que uma dose eficaz fosse atingida devida a eventos adversos limitados pela dose observados com a combinação. Em contraste, os dados liberados recentemente para um estudo em andamento que combina o epacadostat com o mAb PD-1 da Merck (pembrolizumab) demonstraram tolerabilidade melhorada da combina- ção, permitindo doses maiores do inibidor da IDO1. Tem havido várias respostas clínicas em vários tipos de tumores, o que é encorajador. No entanto, ainda não se sabe se essa combinação é uma melhora em relação à atividade do agente individual do pembrolizumab (Gangad- har, Hamid et al. 2015). Da mesma forma, Roche/Genentech estão avançando o NGL919/ GDC-0919 em combinação com ambos os mAbs para PD-L1 (MPDL3280A, Atezo) e OX-40 após a recente con- clusão de um estudo de fase 1a de segurança e PK/PD em pacientes com tumores avançados. IDO1 e as infecções crônicas

[00011] A atividade da IDO1 gera metabólitos da via da quinureni- na, como a Kyn e o 3-HAA, que comprometem pelo menos a atividade das células T, células NK e macrófagos (Munn, Shafizadeh et al. 1999, Frumento, Rotondo et al. 2002) (Sekkai, Guittet et al. 1997, Favre, Mold et al., 2010). Os níveis de Kyn ou a razão de Kyn/Tryp são ele- vados no cenário da infecção crônica pelo HIV (Byakwaga, Boum et al. 2014, Hunt, Sinclair et al. 2014, Tenorio, Zheng et al. 2014), infecção por HBV (Chen, Li et al. 2009), infecção pelo HCV (Larrea, Riezu-Boj et al. 2007, Asghar, Ashiq et al. 2015) e infecção por TB (Suzuki, Suda et al. 2012) e estão associados à disfunção de células T específicas para antígenos (Boasso, Herbeuval et al. 2007, Boasso, Hardy et al. 2008, Loughman e Hunstad 2012, Ito, Ando et al. 2014, Lepiller, Souli- er et al. 2015). Como tal, acredita-se que, nesses casos de infecção crônica, a inibição mediada pela IDO1 da resposta das células T espe- cíficas para os patógenos desempenhe um papel na persistência da infecção, e que a inibição da IDO1 possa ter um benefício na promo- ção da depuração e da resolução da infecção. IDO1 e a sepse

[00012] Observa-se que a expressão e a atividade da IDO1 são elevadas durante a sepse e o grau de elevação de Kyn ou Kyn/Tryp correspondeu à gravidade aumentada da doença, incluindo a mortali-

dade (Tattevin, Monnier et al. 2010, Darcy, Davis et al. 2011). Em mo- delos em animais, o bloqueio de IDO1 ou os nocautes genéticos de IDO1 protegeram os camundongos de doses letais de LPS ou de mor- talidade no modelo para ligação/punção cecal (Jung, Lee et al. 2009, Hoshi, Osawa et al. 2014). A sepse é caracterizada por uma fase imu- nossupressora em casos graves (Hotchkiss, Monneret et al. 2013), in- dicando potencialmente um papel para a IDO1 como um mediador da disfunção imune e indicando que a inibição farmacológica da IDO1 po- de proporcionar um benefício clínico na sepse. IDO1 e os distúrbios neurológicos

[00013] Além dos cenários imunológicos, a atividade da IDO1 tam- bém está ligada à doença em contextos neurológicos (revisado em Lo- velace Neuropharmacology 2016 (Lovelace, Varney et al. 2016)). Os metabólitos da via da quinurenina, como a 3-hidroxiquinurenina e o ácido quinolínico, são neurotóxicos, porém são equilibrados pelos me- tabólitos alternativos, ácido quinurênico ou ácido picolínico, que são neuroprotetores. Os distúrbios neurodegenerativos e psiquiátricos, nos quais se demonstrou que os metabólitos da via da quinurenina estão associados à doença, incluem a esclerose múltipla, os distúrbios dos neurônios motores, como a esclerose lateral amiotrófica, a doença de Huntington, a doença de Parkinson, a doença de Alzheimer, o trans- torno depressivo maior, a esquizofrenia, a anorexia (Lovelace, Varney et al. 2016). Os modelos em animais de doença neurológica mostra- ram algum impacto dos inibidores da IDO1 fracos, como o 1- metiltriptofano, sobre a doença, indicando que a inibição da IDO1 pode proporcionar benefício clínico na prevenção ou no tratamento de dis- túrbios neurológicos e psiquiátricos.

[00014] Seria, portanto, um avanço na técnica constatar inibidores da IDO que efetuassem o equilíbrio das propriedades acima mencio- nadas, como uma terapia modificadora da doença em infecções crôni-

cas pelo HIV, para diminuir a incidência de morbidade/mortalidade não relacionada à AIDS; e/ou uma terapia modificadora da doença para prevenir a mortalidade na sepse; e/ou uma imunoterapia para aumen- tar a resposta imune ao HIV, HBV, HCV e outras infecções virais crô- nicas, infecções bacterianas crônicas, infecções fúngicas crônicas, e aos tumores; e/ou para o tratamento da depressão ou de outros dis- túrbios neurológicos/neuropsiquiátricos.

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SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[00015] Resumidamente, em um aspecto, a presente invenção di- vulga compostos de Fórmula | Ar A

A NL Fórmula | ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que: Ar é Cs5.12 arila, ou heteroarila de 5-12 elementos, em que a arila e a heteroarila incluem biciclos e a heteroarila contém 1-3 hetero- átomos selecionados a partir de O, S e N, e em que Ar' pode opcio- nalmente ser substituído por 1-2 substituintes selecionados indepen- dentemente a partir de halogênio, OH, C1-3alquila, OC1-3alquila, C71- sfluoralquila, CN e NH>; R' e R? são independentemente H ou C1.4alquila; né 1louo; A é -C(OINRºR*-, -NRºC(O)Rº-, -NRºC(O)C(R')(R)R?*- ou Ar?-R$, em que Ar? é Cs.,12arila ou heteroarila de 5-12 elementos, em que a arila e a heteroarila incluem biciclos e a heteroarila contém 1-3 heteroátomos selecionados a partir de O, S e N, e em que Ar? pode opcionalmente ser substituído por um substituinte selecionado a partir de halogênio, OH, C1-3alquila, OC1-3alquila, C1-3fluoralquila, CN e NH>; Rº, R' e Rº são independentemente H ou C-salquila; Rº é H, Ci.6alquila, Cs-7arila, opcionalmente substituído por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em halogê- nio, C1-4alquila, hidroxila, -C(O)CH3, C(0)OCH3 e C(O)NH>, Rº é Cioalquila, Ca-gcicloalquila ou Cs5-7arila, em que Rº é opcionalmente substituído por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em halogênio, Ci4alquila, hidroxila, -C(O)CHs, C(0)OCH;3 e C(O)NH>.

[00016] Em outro aspecto, a presente invenção divulga um método para o tratamento de doenças ou condições que se beneficiariam da inibição da IDO.

[00017] Em outro aspecto, a presente invenção divulga composi- ções farmacêuticas compreendendo um composto de Fórmula | ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

[00018] Em outro aspecto, a presente invenção proporciona um composto de Fórmula | ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para uso em terapia.

[00019] Em outro aspecto, a presente invenção proporciona um composto de Fórmula | ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para uso no tratamento de doenças ou condições que se beneficiariam da inibição da IDO.

[00020] Em outro aspecto, a presente invenção proporciona o uso de um composto de Fórmula | ou um seu sal farmaceuticamente acei- tável na fabricação de um medicamento para uso no tratamento de doenças ou condições que se beneficiariam da inibição da IDO.

[00021] Em outro aspecto, a presente invenção divulga um método para o tratamento de uma infecção viral, em um paciente, mediada pe-

lo menos em parte por um vírus na família de vírus retrovirus, compre- endendo a administração ao dito paciente de uma composição com- preendendo um composto de Fórmula | ou um seu sal farmaceutica- mente aceitável. Em algumas modalidades, a infecção viral é mediada pelo vírus HIV.

[00022] Em outro aspecto, uma modalidade particular da presente invenção proporciona um método de tratamento de um paciente infec- tado com o HIV, compreendendo a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula | ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

[00023] Ainda em outro aspecto, uma modalidade particular da pre- sente invenção proporciona um método de inibir a progressão da in- fecção pelo HIV em um paciente que corre o risco de infecção pelo HIV, compreendendo a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula | ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável. Essas e outras modalidades são descritas adicionalmente no texto a seguir.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES REPRESENTATIVAS

[00024] De preferência, Ar' é quinolina, isoquinolina, quinazolina, isoquinolona, quinazolona, naftiridina, naftaleno ou indol, e pode opci- onalmente ser substituído por um substituinte selecionado a partir de halogênio, OH, Ci-3alguila, OC1-3alquila, C13fluoralquila, CN e NH>. Mais preferivelmente, Ar' é quinolina opcionalmente substituída por um halogênio. Mais preferivelmente, Ar' é quinolina não substituída.

[00025] De preferência, R' e R? são independentemente H ou meti- la.

[00026] De preferência, Ar? é benzimidazol não substituído, 7-cloro- benzimidazol, oxazol, imidazol, 1,2,4-triazol, benzoxazolona ou ben- zoimidazolona. Mais preferivelmente, Ar? é benzimidazol não substituí- do ou imidazol.

[00027] De preferência, Rº é H, C1i.ealquila, ou fenila opcionalmente substituída por um halogênio.

[00028] De preferência, Rº é Ci10alquila, Cs-xcicloalquila ou fenila, em que R? é opcionalmente substituído por um substituinte seleciona- do a partir do grupo que consiste em halogênio, C1-3alquila, hidroxila e C(O)NH>.

[00029] As composições farmacêuticas preferidas incluem as for- mas de dosagens unitárias. As formas de dosagens unitárias preferi- das incluem os comprimidos.

[00030] Espera-se que os compostos e as composição desta inven- ção sejam úteis para a prevenção e/ou o tratamento de HIV; incluindo a prevenção da progressão da AIDS e da imunossupressão geral. Es- pera-se que, em muitos casos, tal prevenção e/ou tratamento envolva o tratamento com os compostos desta invenção em combinação com pelo menos um outro fármaco que se acredite ser útil para essa pre- venção e/ou tratamento. Por exemplo, os inibidores da IDO desta in- venção podem ser usados em combinação com outras terapias imuno- lógicas, como os pontos de verificação imunológicos (PD1, CTLAA, ICOS etc.), e possivelmente em combinação com fatores de cresci- mento ou terapias com citocinas (IL21, IL-7 etc.).

[00031] É prática comum no tratamento de HIV empregar mais do que um agente eficaz. Portanto, de acordo com outra modalidade da presente invenção, é proporcionado um método para prevenir ou tratar uma infecção viral em um mamífero, mediada pelo menos em parte por um vírus na família de vírus retrovirus, método este que compre- ende a administração a um mamífero, que tenha sido diagnosticado com a dita infecção viral ou corre o risco de desenvolver a dita infec- ção viral, de um composto conforme definido na Fórmula |, em que o dito vírus é um vírus HIV, e compreendendo ainda a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais agentes ati-

vos contra um vírus HIV, em que o dito agente ativo contra o vírus HIV é selecionado a partir do grupo que consiste em Inibidores da transcri- ptase reversa de nucleotídeos; Inibidores da transcriptase reversa que não de nucleotídeos; Inibidores da protease; Inibidores da entrada, li- gação e fusão; Inibidores da integrase; Inibidores da maturação; Inibi- dores do CXCRA; e Inibidores de CCR5. Os exemplos desses agentes adicionais são Dolutegravir, Bictegravir e Cabotegravir.

[00032] Um "sal farmaceuticamente aceitável" se refere aos sais farmaceuticamente aceitáveis derivados de uma variedade de contraí- ons orgânicos e inorgânicos bem conhecidos na técnica e incluem, apenas a título de exemplo, o sódio, o potássio, o cálcio, o magnésio, o amônio e o tetra-alquilamônio e, quando a molécula contiver uma funcionalidade básica, os sais de ácidos orgânicos ou inorgânicos, como o cloridrato, o bromidrato, o tartarato, o mesilato, o acetato, o maleato e o oxalato. Os sais adequados incluem aqueles descritos em P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (Eds.), Handbook of Pharma- ceutical Salts Properties, Selection, and Use; 2002.

[00033] A presente invenção também inclui os sais farmaceutica- mente aceitáveis dos compostos descritos neste documento. Como usado neste documento, "sais farmaceuticamente aceitáveis" se refere aos derivados dos compostos divulgados, em que o composto de ori- gem é modificado pela conversão de uma parte de ácido ou base exis- tente na sua forma de sal. Os exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, porém não estão limitados aos, sais de ácidos mi- nerais ou orgânicos de resíduos básicos, como as aminas; sais alcali- nos ou orgânicos de resíduos ácidos, como os ácidos carboxílicos; e similar. Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção incluem os sais não tóxicos convencionais do composto de origem formado, por exemplo, a partir de ácidos inorgânicos ou orgânicos não tóxicos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser sintetizados a partir do composto de origem, o qual contém uma parte básica ou ácida, por métodos químicos convencionais. Em geral, esses sais podem ser preparados reagindo as formas livres de ácido ou base desses compostos com uma quantidade estequiométri- ca da base ou do ácido apropriado, em água ou em um solvente orgâ- nico, ou em uma mistura dos dois; em geral, os meios não aquosos, como o éter, o acetato de etila, o etanol, o isopropanol ou a ACN, são preferidos.

[00034] A frase "farmaceuticamente aceitável" é empregada neste documento para se referir aos compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são, dentro do escopo do julgamento médico adequado, adequados para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais, sem excessiva toxicidade, irritação, respos- ta alérgica ou outro problema ou complicação, proporcional a uma re- lação benefício/risco razoável.

[00035] Em uma modalidade, a formulação farmacêutica contendo um composto de Fórmula | ou um sal dele é uma formulação adaptada para a administração oral ou parenteral. Em outra modalidade, a for- mulação é uma formulação parenteral de longa ação. Em uma modali- dade adicional, a formulação é uma formulação de nanopartículas.

[00036] A presente invenção é direcionada a compostos, composi- ções e composições farmacêuticas que tenham utilidade como novos tratamentos para a imunossupressão. Embora não se deseje ficar vin- culado a qualquer teoria particular, acredita-se que os presentes com- postos sejam capazes de inibir a enzima que catalisa a reação de cli- vagem oxidativa do anel de pirrol de |-Trp para N-formilquinurenina, usando oxigênio molecular ou espécies reativas de oxigênio.

[00037] Portanto, em outra modalidade da presente invenção, é proporcionado um método para a prevenção e/ou o tratamento de HIV; incluindo a prevenção da progressão de AIDS e da imunossupressão geral.

EXEMPLOS

[00038] Os exemplos a seguir servem para descrever mais comple- tamente a maneira de fazer e usar a invenção acima descrita. Enten- de-se que estes exemplos de modo algum servem para limitar o ver- dadeiro escopo da invenção, porém são apresentados para fins ilustra- tivos. Nos exemplos e nos esquemas sintéticos abaixo, as abreviações que se seguem têm os seguintes significados. Se uma abreviação não for definida, ela tem o seu significado em geral aceito.

ACN = — Acetonitrila AIBN = —azobisisobutironitrila aq. = —Aquoso uL ou ul = Microlitros UM ou uM = Micromolar RMN = ressonância magnética nuclear boc = terc-butoxicarbonila br = Amplo Cbz = —Benziloxicarbonila CDI = 1,1-carbonildi-imidazol d = Dublete õ = deslocamento químico ºC = graus Celcius DCM = diclorometano dd = —dubletede dubletes DHP = di-hidropirano DIAD = azodicarboxilato de di-isopropila DIEAou DIPEA = N ,N-di-isopropiletilamina DMAP = 4(dimetilamino)piridina DMEM = Meiode Eagle Modificado da Dulbeco EtoAc = acetatode etila h ou hr = Horas HATU = 3-Óxido hexafluorfosfato de 1-[bis(dimetilamino)metileno]- 1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridínio HCV = vírusda hepatite C

HPLC = cromatografia líquida de alta performance Hz = Hertz WU = Unidades Internacionais 1IC5so = concentração inibidora em inibição de 50% J = constante de ligação (dada em Hz, salvo indicação em contrário) LCMS = cromatografia líquida espectrometria de massa m = Multiplete M = Mola M+H* = picodo espectro de massa principal mais H* MeOH = Metanol mg = Milgrama min = Minutos mL = Mililitto mM = Milimolar mmol = Milimol MS = espectrode massa MTBE = étermetilterc-butílico N = Normal NFK = —N-formilguinurenina NBS = —N-bromosuccinimida nm = Nanomolar PE = éterde petróleo ppm = partespormilhão q.s. = quantidade suficiente s = Singlete TA = temperatura ambiente Rf = fatorderetardo sat. = Saturado t = Triplete TEA = trietilamina TFA = ácidotrifluoracético TFAA = anidrido trifluoracético THF = tetraidrofurano Descrição dos Equipamentos

[00039] Os espectros de RMN '*H foram registrados em um espec-

trômetro Bruker Ascend 400 ou um espectrômetro Varian 400. Os des- locamentos químicos são expressos em partes por milhão (ppm, uni- dades 3). As constantes de ligação estão em unidades de hertz (Hz). Os padrões de divisão descrevem multiplicidades aparentes e são de- signados como s (singlete), d (dublete), t (triplete), q (quarteto), quint (quinteto), m (multiplete), br (amplo).

[00040] Os espectros de massa (MS) analíticos de baixa resolução foram registrados no UPLC Waters ACQUITY, com os Detectores SQ usando um Waters BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 um, usando um méto- do de eluição em gradiente. Solvente A: ácido fórmico (FA) a 0,1% em água; Solvente B: FA a 0,1% em acetonitrila; 30% de B por 0,5 min, seguidos por 30-100% de B por 2,5 min. Esquema 1 Q BR e RA E o ão oa Hy PAIC om LioH or E OTROS ee RO 00 so. o. : ts. meccamos ? O Preparação do 2-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-ilideno)acetato de etila db a

O

[00041] AOC, auma suspensão de NaH (60% em óleo) (6,92 9,

288 mmol) em THF anidro (650 mL), sob nitrogênio, com agitação vi- gorosa, foi adicionado o fosfonoacetato de trietila (52,5 g, 288 mmol), gota a gota. Após agitada a 0ºC por 30 min, o 1,4-ciclo-hexanodiona monoetileno cetal (41 g, 260 mmol), em THF (150 mL), foi adicionado, gota a gota. A mistura resultante foi deixada aquecer até a temperatu- ra ambiente e agitada durante a noite. A mistura de reação foi vertida em NH.4CI aq. saturado e extraída com EtOAc. Os orgânicos foram la- vados sequencialmente com água e salmoura e secados sobre Na2SO:.. A filtração e a concentração em vácuo deram um produto bru- to, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, EtOAc a 0-30% em PE) para produzir o composto do título (56 g, 95% de rendimento). (ESI) m/z calc. para Ci2H1804: 226,12. Encontrada: 227,33 (M+1)*. Preparação do 2-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-il)acetato de etila do Tr o

[00042] Uma mistura de 2-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-ilideno)acetato de etila (17,3 g, 76,4 mmol) e 10% de Pd/C (5,19 g) em EtoOH (500 mL) foi agitada na temperatura ambiente, sob atmosfera de H2 [103,42 kPa (15 psi)], durante a noite. A mistura resultante foi filtrada através de um recheio de Celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida pa- ra produzir o composto do título (17,5 g, 100% de rendimento), o qual foi usado na etapa seguinte, sem purificação. (ESI) m/z calc. para C12H20O02: 228,14. Encontrada: 229,20 (M+1)*. Preparação do 2-(4-oxociclo-hexil) acetato de etila o e o

[00043] Auma solução de 2-(4-(1,3-Dioxalano)ciclo-hexil)acetato de metila (17,5 g, 76,4 mmol), em acetona, foi adicionado o HCl a 1 N (160 mL, 160 mmol), gota a gota. Após a mistura de reação ser agita- da na temperatura ambiente, durante a noite, foram adicionados água e EtOAc e as camadas foram separadas. Os orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura e secados sobre Na2SO,. À filtração e a concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, EtOAc a 0-30% em PE) para produzir o composto do título (10 g, 72% de rendimento). (ESI) m/z calc. para CioH1603: 184,11. Encontrada: 185,34 (M+1)*. Preparação do 2-(4-(((trifluormetil)sulfonil)óxi)ciclo-hex-3-en-1-il) acetato de etila OEt

OS

[00044] AOC, auma solução de 2-(4-oxociclo-hexil)acetato de etila (10 g, 54,3 mmol) e anidrido trifluormetanossulfônico (18,4 g, 65,2 mmol), em diclorometano, foi adicionada a 2,6-dimetilpiridina (12,5 mL, 108,6 mmol), gota a gota. A mistura de reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente. Então esta foi dividida entre NHaCI aq. e EtOAc e as camadas foram separadas. Os orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura e secados sobre Na2SO,. À filtração e a concentração em vácuo deram um produto bruto, o qual foi purificado por cromatografia flash para produzir o composto do títu- lo (11,5 g, 67% de rendimento). (ESI) m/z calc. para C11H15F305S: 316,06. Encontrada: 317,19 (M+1)*. Preparação do 2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-hex-3-en-1-il)acetato de etila OEt SS)

NÇZ

[00045] O 2-(4-(((trifluormetil)sulfonil)óxi)ciclo-hex-3-en-1-il)acetato de etila (10 g, 31,6 mmol), o ácido quinolin-4-ilborônico (8,2 g, 47,4 mmol), o Pd(PPh3)a (3,65 g, 3,16 mmol) e o KBr (4,14 g, 34,8 mmol)

foram dissolvidos em dioxana (100 mL). Após adição de solução aquosa de carbonato de sódio a 2 M (40 mL), a mistura foi agitada sob atmosfera de nitrogênio, a 100ºC, por 14 horas. Após a mistura de re- ação ser resfriada até a temperatura ambiente, esta foi dividida entre a água e o EtOAc e as camadas foram separadas. Os orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura e secados sobre Na2SO:.. A filtração e a concentração em vácuo deram um produto bru- to, que foi purificado por cromatografia flash para produzir o composto do título (5,4 g, 58% de rendimento). (ESI) m/z calc. para Ci9H2:NO;>: 295,16. Encontrada: 296,58 (M+1)*. Preparação do 2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) acetato de etila OEt Noz

[00046] Uma mistura de 2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-hex-3-en-1-il)ace- tato de etila (3 g, 10,2 mmol) e 10% de Pd/C (1,5 gd) em MeOH (300 mL) foi agitada na temperatura ambiente, sob atmosfera de H2 [103,42 kPa (15 psi), durante a noite. A mistura resultante foi filtrada através de um recheio de Celite e o filtrado foi concentrado sob pressão redu- zida para dar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, EtOAc a 0-50% em PE) para produzir o composto do título (1,8 g, 60% de rendimento) como um óleo marrom. (ESI) m/z calc. pa- ra Ci9H23NO;»: 297,17. Encontrada: 298,49 (M+1)*. Preparação do ácido 2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) acético

OH NZ

[00047] A uma solução de 2-(3-((5-cloropiridin-2-il)amino)-4-(isobutil (tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)fenil)-2-metilpropanoato de metila (1,8 9, 6,1 mmol) em EtOH (6 mL) foi adicionado o LiOH aq. a 1N (45 mL, 45 mmol). Após agitada a 50ºC por 2 h, a mistura resultante foi neutra-

lizada com HCI a IN e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi la- vada com salmoura, secada sobre Na2SO:, filtrada e concentrada para dar o composto do título (1,5 g, 95% de rendimento) como um sólido claro, o qual foi usado na etapa seguinte, sem purificação adicional. LCMS (ESI) m/z calc. para C17H19NO>2: 269,14. Encontrada: 270,51 (M+1)*. Preparação da (R)-4-benzil-3-(2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)acetil) oxa- zolidin-2-ona "a

N O! Y No

[00048] A -78ºC,a uma solução de ácido 2-(4-(quinolin-4-il)ciclo- hexil)acético (1,0 g, 3,7 mmol), TEA (1 mL, 7,4 mmol) em THF (15 mL), em atmosfera de nitrogênio (frasco no. 1), foi adicionado o cloreto de pivaloíla (551 mg, 4,6 mmol), gota a gota, durante 15 min. A mistura de reação foi então agitada a 0ºC por mais 1 hora.

[00049] A um frasco separado (frasco no. 2), carregado com (R)-4- benziloxazolidin-2-ona (850 mg, 4,8 mmol) e THF (20 mL), a -78ºC, foi adicionado o n-BuLi (2,0 mL, 4,8 mmol), gota a gota. A mistura de rea- ção foi agitada a -78ºC, por 15 min, antes de ser removida do banho frio.

[00050] O frasco no. 1 foi resfriado de volta para -78ºC e a solução no frasco no. 2 foi adicionada ao frasco no. 1, por meio de uma cânula, durante 15 min. Após adição completa, o banho frio foi removido e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente, por 3 horas. À reação foi finalizada com solução de NH4CI sat. e extraída com EtOAc. Os orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura e secados sobre Na2SOa.. A filtração e a concentração em vácuo deram um produto bruto, o qual foi purificado por cromatografia flash para produzir o composto do título (1,3 g, 67% de rendimento). (ESI) m/z calc. para Ca7H28N2O3: 428,21. Encontrada: 429,47 (M+1)*. Preparação da (R)-4-benzil-3-((R)-2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)propa- noil) oxazolidin-2-ona Po OT!

NA

[00051] AOC, a uma solução de (R)-4-benzil-3-(2-(4-(quinolin-4- il)ciclo-hexil)acetil)oxazolidin-2-ona (1,2 g, 2,8 mmol) em THF (15 mL), sob atmosfera de nitrogênio, foi adicionado o LiHMDS (5,6 mL, 5,6 mmol), gota a gota, durante 15 min. A mistura de reação foi agitada a 0ºC por 30 min, a mistura de reação foi resfriada até -40ºC, antes do iodometano (0,4 mL, 5,6 mmol) ser adicionado, gota a gota. Após adi- ção completa, a mistura de reação foi agitada nesta temperatura, du- rante 20 horas. A reação foi finalizada com solução de NHCI sat. e extraída com EtOAc. Os orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura e secados sobre Na2SO2. A filtração e a concen- tração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cro- matografia flash para produzir o composto do título (752 mg, 60% de rendimento). (ESI) m/z calc. para CogH3oN2O3: 442,23. Encontrada: 443,52 (M+1)*. Preparação do ácido (R)-2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)propanoico

OH O" NZ

[00052] AOC, auma solução de metil (R)-4-benzil-3-((R)-2-(4-(qui- nolin-4-il)ciclo-hexil)propanoil) oxazolidin-2-ona (500 mg, 1,413 mmol), em THF (10 mL), foi adicionado o H2O2 a 35% (0,5 mL), seguido pela adição de LiOH aq. a 1 M (1,8 mL). Após agitada na temperatura am- biente, durante a noite, a mistura resultante foi finalizada com solução de Na2SO; sat., neutralizada com HCI a IN e extraída com EtOAc. À camada orgânica foi lavada com salmoura, secada sobre Na2SO;, fil- trada e concentrada para dar o produto bruto, o qual foi purificado por cromatografia flash para produzir o composto do título (270 mg, 84% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calc. para C1igH21NO;»>: 283,16. Encon- trada: 284,61 (M+1)*. Esquema 2 ” A "

NO NO Exemplo 1 e Exemplo 2 Preparação de N N-di-isobutil-2-(cis-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)aceta- mida e N, N-di-isobutil-2-(trans-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)acetamida

A A N ss o N E! À O TX NO No Exemplo 1 Exemplo 2

[00053] A uma solução agitada de ácido 2-(4-(quinolin-4-il)ciclo- hexil)acético (300 mg, 1,11 mmol) e di-isobutilamina (288 mg, 2,23 mmol), em DMF (6 mL), foi adicionada a DIPEA (0,58 mL, 3,34 mmol), seguida pelo HATU (847 mg, 2,23 mmol). Após agitada na t.a., durante a noite, a mistura de reação foi finalizada com salmoura e a mistura resultante foi extraída com DCM (x3). As camadas orgânicas combi- nadas foram secadas sobre Na2SO.. O solvente foi removido sob vá- cuo e o resíduo foi purificado por TLC Prep. (PE/THF = 3/1) para pro- duzir o composto do título. Isômero cis do Exemplo 1 (78 mg, 18% de rendimento): RMN *H (400 MHz, CDCI3) 5 8,79 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,04 (dd, J = 20,8, 8,4 Hz, 2H), 7,64 (t, J=7,1 Hz, 1H), 7,50 (t, J=7,2 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 3,39 — 3,31 (m, 1H), 3,15 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 3,07 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 2,43 (s, 3H), 1,98 — 1,88 (m, 2H), 1,86 — 1,67 (m, J = 21,5, 15,5, 11,1 Hz, 8H), 0,88 (d, J = 6,7 Hz, 6H),

0,80 (d, J = 6,7 Hz, 6H). LOCMS (ESI) m/z calc. para CaosH36N2O: 380,28. Encontrada: 381,46 (M+1)*. Isômero trans do Exemplo 2 (14 mg, rendimento de 3%): RMN *H (400 MHz, CDCI3) 5 8,78 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,09 — 7,97 (m, 2H), 7,66 — 7,58 (m, 1H), 7,52 — 7,44 (m, 1H), 7,21 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 3,28 — 3,20 (m, 1H), 3,15 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 3,07 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 2,25 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 2,03 — 1,92 (m, 5H), 1,59 (dd, J = 23,5, 11,4 Hz, 4H), 1,26 — 1,21 (m, 2H), 0,88 (d, J = 6,7 Hz, 6H), 0,82 (d, J = 6,7 Hz, 6H). LOCMS (ESI) m/z calc. para C2asH36N2O: 380,28. Encontrada: 381,40 (M+1)*.

[00054] Os compostos que se seguem na Tabela 1 foram prepara- dos de forma similar aos procedimentos acima descritos, usando a amina apropriada. Tabela 1 Ús oseneoo

AN 3 O “— 394,30 395,46 N Prá

N 4 SE! 394,30 395,37 í a

NÇZ

N " "Ss

NZ

N "x O 5 O . | 364,25 365,36 Noz

N 7 kN o 366,27 367,39 No

N o 'oH o jo O >

NZ S

H Pe es | = DO

NZ & NY oH NI 57” 340,22 341,46

NO

OH 1 k ST [340,22 341,47 N HZ” Esquema 3 Da O A ore HCl a 1N To HN Dores HATU, DIPEA, DMF QT! me kh o No No Preparação da N-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi)etil)- N-isopropil-2-(4-(qui- nolin-4-il)ciclo-hexil)acetamida “— No oTBS (o o

NX

[00055] A uma solução agitada de ácido 2-(4-(quinolin-4-il)ciclo- hexil)acético (180 mg, 0,67 mmol) e N-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi)etil) propan-2-amina (145 mg, 0,67 mmol), em DMF (3 mL), foi adicionada a DIPEA (0,36 mL, 2,01 mmol), seguida pelo HATU (280 mg, 0,74 mmol). Após agitada na t.a., durante a noite, a mistura de reação foi finalizada com salmoura e a mistura resultante foi extraída com DCM (x3). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO2.. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel, para produzir o composto do título (200 mg, 67% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calc. para CaogH44N2O>2Si: 468,32. Encontrada: 469,36 (M+1)*.

Exemplo 12 Preparação da N-(2-hidroxietil)-N-isopropil-2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-he- xil)acetamida Z C Y Ao O o Noz

[00056] A uma solução agitada de N-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi) etil)-N-isopropil-2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)acetamida (200 mg, 0,427 mmol), em THF (2 mL), foi adicionado o HCI aq. a 1 N (2 mL). Após agitada na temperatura ambiente, durante 1 hora, a mistura de reação foi neutralizada com NaOH a 1N e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO.. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel, para produzir o composto do título (92 mg, 61% de rendimento) como um sólido branco. RMN 'H (400 MHz, DMSO) 5 8,89 — 8,80 (m, 1H), 8,22 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,03 (d, JU = 8,3 Hz, 1H), 7,80 — 7,71 (m, 1H), 7,67 — 7,59 (m, 1H), 7,52 — 7,41 (m, 1H), 4,95 — 4,61 (m, 1H), 4,49 — 4,13 (m, 1H), 3,53 — 3,19 (m, 6H), 2,34 — 2,26 (m, 1H), 1,97 — 1,55 (m, 8H), 1,34 — 1,22 (m, 1H), 1,20 — 1,03 (m, 6H). LCMS (ESI) m/z calc. para Cr2H3oN2O0>2: 354,23. Encontrada: 355,32 (M+1)*. Exemplo 13 Preparação da N-(3-hidroxipropil)-N-isopropil-2-(4-(quinolin-4-il)ciclo- hexil)acetamida

NV NA oH ( Ê f J o

NZ

[00057] O composto do título foi preparado a partir do ácido 2-(4-(qui- nolin-4-il)ciclo-hexil)acético e o 3-(isopropilamino)propan-1-ol, de acor- do com o procedimento descrito para a síntese de N-(2-hidroxietil)-N-

isopropil-2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) acetamida (esquema 3). RMN 1H (400 MHz, DMSO) 5 8,87 — 8,78 (m, 1H), 8,21 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,79 — 7,70 (m, 1H), 7,67 — 7,57 (m, 1H), 7,51 — 7,40 (m, 1H), 4,71 — 4,12 (m, 2H), 3,58 — 3,09 (m, 6H), 2,34 — 2,22 (m, 1H), 2,01 — 1,51 (m, 10H), 1,39 — 1,23 (m, 1H), 1,16 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,09 (d, J = 6,8 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z calc. para CaaH32N20>: 368,25. Encontrada: 369,53 (M+1)*.

Esquema 4 o ox FAN DoS 8 Bo Preparação do (2-(4-(quinolin-4-i) ciclo-hexil)aceti))-L-valinato de metila H Pp H " vos O (Cs ' CS o Noz Noz

[00058] A uma solução agitada de ácido 2-(4-(quinolin-4-il)ciclo- hexil)acético (300 mg, 1,11 mmol) e L-valinato de metila (175 mg, 1,34 mmol), em DMF (3 mL), foi adicionada a DIPEA (0,60 mL, 3,33 mmol) seguida pelo HATU (464 mg, 1,22 mmol). Após agitada na t.a., durante a noite, a mistura de reação foi finalizada com salmoura e a mistura resultante foi extraída com DCM (x3). As camadas orgânicas combi- nadas foram secadas sobre Na2SO.. O solvente foi removido sob vá- cuo e o resíduo foi purificado por TLC Prep., para produzir o composto do título. Isômero cis (135 mg, 32% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calc. para CoaaH3oN2O03: 382,23. Encontrada: 383,24 (M+1)*. Isômero trans (44 mg, 10% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calc. para C2a3H3oN2O;3: 382,23. Encontrada: 383,25 (M+1)*.

Exemplo 14 Preparação da (S)-3-metil-2-(cis-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)acetamido) butanamida Z SL JS fo í Se o

NA

[00059] “Uma mistura de (2-(cis-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)acetil)-L- valinato de metila (130 mg, 0,354 mmol) e NH; a 2 M, em MeOH (3 mL), foi agitada a 90ºC por 2 dias. A mistura de reação foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel, para produzir o composto do título (43 mg, 34% de rendimento). RMN 1H (400 MHz, DMSO) 5 8,86 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,02 (dd, JU = 8,4, 0,9 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,78 — 7,71 (m, 1H), 7,66 — 7,58 (m, 1H), 7,52 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 7,37 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 4,18 (dd, J = 9,1, 6,7 Hz, 1H), 3,44 — 3,36 (m, 1H), 2,61 — 2,54 (m, 1H), 2,33 — 2,22 (m, 2H), 2,00 — 1,87 (m, 2H), 1,83 — 1,59 (m, 7H), 0,85 (m, J = 6,8 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z calc. para Ca2H29N3O»: 367,23. Encontrada: 368,27 (M+1)*. Exemplo 15 Preparação da (S)-3-metil-2-(trans-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)acetamido) butanamida q f pé í SS O No

[00060] Uma mistura de (2-(trans-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)acetil)- L-valinato de metila (44 mg, 0,12 mmol) e NH; a 2 M, em MeOH (2 mL), foi agitada a 90ºC por 2 dias. A mistura de reação foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel, para produzir o composto do título (6 mg, 15% de rendimento). RMN 1H (400 MHz, DMSO) 5 8,81 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,78 — 7,71 (m, 2H), 7,64 — 7,60 (m, 1H),

7,42 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 7,34 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 4,15 (dd, J = 9,0, 6,7 Hz, 1H), 3,39 — 3,34 (m, 1H), 2,21 — 2,12 (m, 2H), 2,00 — 1,81 (m, 6H), 1,62 — 1,52 (m, 2H), 1,34 — 1,25 (m, 2H), 0,91 — 0,77 (m, J = 6,5 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z calc. para Ca2H29N302: 367,23. Encontrada: 368,31 (M+1)*. Exemplo 16 Preparação da (R)-3-metil-2-(2-((18,4S)-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)ace- tamido) butanamida

H O q f T FIO í Se O No

[00061] O composto do título foi preparado a partir do ácido 2-(4- (quinolin-4-il)ciclo-hexil)acético (180 mg, 0,67 mmol) e a (R)-2-amino- 3-metilbutanamida, de acordo com o procedimento descrito para a sín- tese de (S)-3-metil-2-(trans-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)acetamido) buta- namida (esquema 4). RMN !H (400 MHz, DMSO) 5 8,87 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,23 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,76 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,63 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,38 (s, 1H), 6,99 (s, 1H), 4,22 — 4,13 (m, 1H), 3,44 — 3,38 (m, 1H), 2,61 — 2,55 (m, 1H), 2,34 — 2,24 (m, 2H), 2,00 — 1,89 (m, 2H), 1,82 — 1,60 (m, 7H), 0,90 — 0,81 (m, 6H). LCMS (ESI) m/z calc. para C22H29N302: 367,23. Encontrada: 368,32 (M+1)*. Esquema 5 QT Em qt” E 20% O ME OS Ts Preparação da N-(2-aminofenil)-2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)acetamida Q.. Ar.

NH es NH ES SO “v

NZ NA

[00062] A uma solução agitada de ácido 2-(4-(quinolin-4-il)ciclo- hexil)acético (300 mg, 1,11 mmol) e benzeno-1,2-diamina (242 mg, 2,24 mmol), em DMF (5 mL), foi adicionada a DIPEA (0,60 mL, 3,36 mmol), seguida pelo HATU (851 mg, 2,24 mmol). Após agitada na t.a., durante a noite, a mistura de reação foi finalizada com salmoura e a mistura resultante foi extraída com DCM (x3). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO,. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por TLC Prep., para produzir o composto do título. Isômero cis (170 mg, 43% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calc. para Ca3H25N3O: 359,20. Encontrada: 360,44 (M+1)*. Isômero trans (100 mg, 25% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calc. para Ca3H25N30O: 359,20. Encontrada: 360,41 (M+1)*. Exemplo 17 Preparação da 4-(4-cis-((1H-benzo[dlimidazol-2-il)]metil)ciclo-hexil)qui- nolina N, To Noz

[00063] “Uma mistura de N-(2-aminofenil)-2-(4-cis-(quinolin-4-il)ciclo- hexil)acetamida (170 mg, 0,47 mmol), TFA (3 mL) e tolueno (3 mL) foi aquecida para 90ºC. Após agitada nesta temperatura, durante a noite, a mistura de reação foi concentrada e o resíduo foi purificado por HPLC Prep., para produzir o composto do título (84 mg, 52% de ren- dimento). RMN !H (400 MHz, CDCI3) 5 8,81 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,15 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,05 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,77 — 7,72 (m, 1H), 7,69 — 7,56 (m, 4H), 7,38 — 7,31 (m, 2H), 3,32 (d, J = 8,2 Hz, 3H), 2,64 — 2,58 (m, 1H), 1,85 — 1,57 (m, 8H). Não foi observado próton de nitrogênio no anel de imidazol. LCMS (ESI) m/z calc. para Ca3H23N3: 341,19. En- contrada: 342,40 (M+1)*.

[00064] “Os compostos que se seguem na Tabela 2 foram prepara- dos de forma similar aos procedimentos acima mencionados, usando o ácido carboxílico apropriado e a diamina apropriada. Tabela 2 Ú amena used 18 À O 341,19 342,40 No q i 2N. 19 NE O 355,20 356,62

N Z 4 N, 4 2 À WEZ) — |355,20 356,47

NA N cl 21 kN RS 389,17 388,42/390,44 N 7 Esquema 6

O Ox, PPh3, DEAD Fo SS NA > x of QE Te QTO SS OH Qs, NZ exemplo 22 Í 5 NH DO ms o f Ol —ppn DEAD S ea s ss NH PO hs of -. Y“ TE O O í exemplo 23

NS Preparação de N-(2-hidroxifenil)-2-(cis-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) aceta- mida e N-(2-hidroxifenil)-2-(trans-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)acetamida O, O, oo NH NH E 2 É E SS

NO NO

[00065] A uma solução agitada de ácido 2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-he- xil)acético (300 mg, 1,11 mmol) e 2-aminofenol (240 mg, 2,24 mmol), HOBt (315 mg, 2,24 mmol), em DCM (5 mL), foi adicionada a DIPEA

(0,40 mL, 2,24 mmol), seguida pelo EDCI (435 mg, 2,24 mmol). Após agitada na t.a., durante a noite, a mistura de reação foi finalizada com salmoura e a mistura resultante foi extraída com DCM (x3). As cama- das orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO.,. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por TLC Prep., para produzir o composto do título. Isômero cis (140 mg, 35% de rendimen- to). LCMS (ESI) m/z calc. para CosH24N202: 360,18. Encontrada: 361,35 (M+1)*”. Isômero trans (85 mg, 21% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calc. para Ca3H24N20O>2: 360,18. Encontrada: 361,33 (M+1)*.

Exemplo 22 Preparação do 2-(((1s,4s)-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) netil)benzo[d]Joxazol 2N

OO No

[00066] A uma mistura de N-(2-hidroxifenil)-2-(cis-4-(quinolin-4-il) ciclo-hexil)acetamida (140 mg, 0,39 mmol) e PPh3 (231 mg, 0,88 mmol), em THF seco (15 ml), foi adicionado o DEAD (0,14 mL, 0,88 mmol), gota a gota. Após agitada na temperatura ambiente, durante a noite, a mistura de reação foi concentrada e o resíduo foi purificado por HPLC Prep., para produzir o composto do título (59 mg, 44% de rendimento).

RMN 'H (400 MHz, CDCI3) 5 8,88 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,11 (dd, J = 21,2, 8,0 Hz, 2H), 7,73 — 7,67 (m, 2H), 7,59 — 7,54 (m, 1H), 7,52 — 7,48 (m, 1H), 7,38 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 7,34 — 7,29 (m, 2H), 3,49 — 3,38 (m, 1H), 3,14 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 2,72 — 2,60 (m, 1H), 1,94 — 1,82 (m, 8H). LCMS (ESI) m/z calc. para Ca3H22N2O: 342,17. Encontrada: 343,46 (M+1)*.

Exemplo 23 Preparação do 2-(((1r,4r)-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)metil)benzo[d] oxazol mel (CS AD

NS

[00067] O composto do título foi preparado a partir da N-(2-hidroxi-

fenil)-2-(trans-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) acetamida, em rendimento de 46%, de acordo com o procedimento descrito acima. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 8,84 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,15 — 8,06 (m, 2H), 7,74 — 7,66 (m, 2H), 7,59 — 7,49 (m, 2H), 7,35 — 7,29 (m, 2H), 7,28 — 7,26 (m, 1H), 3,39 — 3,30 (m, 1H), 2,96 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 2,20 — 2,12 (m, 1H), 2,11 — 2,03 (m, 4H), 1,68 — 1,62 (m, 2H), 1,51 — 1,41 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z calc. para Ca3H22N2O: 342,17. Encontrada: 343,50 (M+1)*. Esquema 7 o O! “ese O “Oo Beto O! 140ºC Preparação de 2-(cis-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)acetato de 2-0x0-2-fe- niletila e 2-(trans-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) acetato de 2-0x0-2-fenile- tila oO o o. QD LO “O vo O No NÇZ

[00068] Uma mistura de ácido 2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)acético (350 mg, 1,3 mmol), 2-bromo-1-feniletan-1-ona (259 mg, 1,3 mmol), Na2CO; (69 mg, 0,65 mmol), H2O (4 mL) e EtoOH (8 mL) foi aquecida ao refluxo e agitada nesta temperatura, durante 2 horas. A mistura de reação foi finalizada com salmoura e a mistura resultante foi extraída com EtOAc (x3). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO2.. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi puri- ficado por TLC Prep., para produzir o composto do título. Isômero cis (235 mg, 47% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calc. para CosH2sNOsz: 387,18. Encontrada: 388,45 (M+1)*. Isômero trans (120 mg, 24% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calc. para CosH25NO;3: 387,18. Encontra- da: 388,47 (M+1)*.

Exemplo 24 Preparação do 4-fenil-2-((trans-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) metil)oxazol

QTO FS ia

NZ

[00069] A uma solução de 2-(trans-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) aceta- to de 2-0x0-2-feniletila (120 mg, 0,31 mmol), acetamida (92 mg, 1,55 mmol) e tolueno (5 ml) foi adicionado o BF3 - Et2O (1 gota), gota a go- ta. A mistura foi aquecida a 140ºC por 10 horas. A mistura de reação foi dividida entre o EtOAc e a água. As camadas foram separadas, a fase aquosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combina- das foram secadas sobre Na2SO. e concentradas para dar um resí- duo, o qual foi purificado por HPLC Prep. para produzir o composto do título (31 mg, 27% de rendimento). RMN *H (400 MHz, CDCI3) 5 8,84 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,16 — 8,05 (m, 2H), 7,86 (s, 1H), 7,81 — 7,65 (m, 3H), 7,59 — 7,53 (m, 1H), 7,46 — 7,36 (m, 2H), 7,33 — 7,27 (m, 2H), 3,38 — 3,29 (m, 1H), 2,84 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 2,11 — 1,98 (m, 5H), 1,70 — 1,63 (m, 2H), 1,48 — 1,38 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z calc. para CasH24N2O: 368,19. Encontrada: 369,41 (M+1)*.

[00070] Os compostos que se seguem na Tabela 3 foram prepara- dos de forma similar aos procedimentos acima mencionados, usando o ácido 2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) acético e a a-bromo cetona apropriada. Tabela 3

TE No

A

—N. 27 = DX 348,22 349,39 nn. ) ue 28 2 E 334,20 335,30 Na

N 29 É EA 334,20 335,37 Ná Esquema 8 º o NH,OAc Í S O) Di “O toluene Da " No 140C temo Exemplo 30 Preparação da d4-(trans-4-((4-fenil-1H-imidazol-2-il)]metil)ciclo-hexil) quinolina

SN

LOTTO No

[00071] Uma mistura de 2-(trans-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) acetato de 2-0x0-2-feniletila (109 mg, 0,28 mmol), NHLOAc (440 mg, 5,6 mmol) e tolueno (3 ml) foi aquecida a 140ºC por 15 horas. A mistura de rea- ção foi dividida entre o EtOAc e a água. As camadas foram separadas, a fase aquosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combi- nadas foram secadas sobre Na2SO. e concentradas para dar um resí- duo, que foi purificado por HPLC Prep. para produzir o composto do título (32 mg, 31% de rendimento). RMN *H (400 MHz, DMSO) 5 12,12 (br, 1H), 8,81 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,01 (dd, J= 8,4, 0,9 Hz, 1H), 7,80 — 7,68 (m, 3H), 7,66 — 7,58 (m, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,40 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 7,38 — 7,31 (m, 2H), 7,21 — 7,14 (m, 1H), 3,43 — 3,38 (m, 1H), 2,65 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 1,97 — 1,82 (m, 5H), 1,64 —

1,53 (m, 2H), 1,42 — 1,33 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z calc. para CasHasN3: 367,20. Encontrada: 368,50 (M+1)*.

[00072] Os compostos que se seguem na Tabela 4 foram prepara- dos de forma similar aos procedimentos acima mencionados, usando o ácido carboxílico apropriado e a a-bromo cetona apropriada. Tabela 4 Ús oseneoo =N, — = 31 “ PA O 367,20 368,56 No E = 32 QTO 381,22 382,68 No

O 33 k IRA 415,18 416,29/418,31 No LR A. 34 IVO “415,18 416,24/418,21 No Cl 1) 4 Õ 4 A / [415,18 416,36/418,40 Esquema 9 oH ú HANNHBoc Mao He! SE O o — | HATU, DIPEAS dioxana NS DVF Ne HoN

H H Nor OAK A í Ds º "BuOH í WS No NA K2CO;z, 120ºC NS

Preparação do 2-(2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)acetil)hidrazina-1-carbo- xilato de terc-butila Fo o"

NZ

[00073] A uma solução agitada de ácido 2-(4-(quinolin-4-il)ciclo- hexil)acético (300 mg, 1,11 mmol) e hidrazinacarboxilato de terc-butila (220 mg, 1,67 mmol), em DMF (5 mL), foi adicionada a DIPEA (0,60 mL, 3,33 mmol), seguida pelo HATU (464 mg, 1,22 mmol). Após agita- da na t.a., durante a noite, a mistura de reação foi finalizada com sal- moura e a mistura resultante foi extraída com DCM (x3). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO.. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para produzir o composto do título (420 mg, 98% de rendimen- to). LCMS (ESI) m/z calc. para Co2H29N303: 383,22. Encontrada: 384,36 (M+1)*. Preparação da 2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)aceto-hidrazida No ( É Í J O No

[00074] A uma solução de 4-(1-(4-fluorobenzamido)-3-metilbutil) pi- peridina-1-carboxilato de terc-butila (420 g, 1,10 mmol) em DCM (3 mL), foi adicionado o HCI a 4 M em dioxana (4 mL), gota a gota. Após agitação na t.a. durante 2 h, a mistura de reação foi concentrada para produzir um sal cloridrato do composto do título (340 mg, 97% de ren- dimento), o qual foi usado na etapa seguinte, sem purificação. LCMS (ESI) m/z calc. para C17H21N30: 283,17. Encontrada: 284,28 (M+1)*.

Exemplo 36 e Exemplo 37 Preparação de 4-(cis-4-((5-isopropil-4H-1,2,4-triazol-3-il)]metil)ciclo-hexil) quinolina e 4-(trans-4-((5-isopropil-4H-1,2,4-triazol-3-il)]metil) ciclo-hexil) quinolina NO No exemplo 36 exemplo 37

[00075] Uma mistura de 2-(4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)aceto-hidra- zida (3840 mg, 1,06 mmol), isobutirimidamida (194 mg, 1,59 mmol), K2CO;3 (585 mg, 4,24 mmol) e n-BuOH (5 mL ) foi agitada a 120ºC, por 8 horas. A mistura de reação foi dividida entre a água e o EtOAc e as camadas foram separadas. Os orgânicos foram lavados sequencial- mente com água e salmoura e secados sobre Na2SO:.. A filtração e a concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por TLC Prep. para produzir o exemplo 36; 4-(cis-4-((5-isopropil-4H-1,2,4- triazol-3-il)|metil)ciclo-hexil) quinolina (14 mg, 4% de rendimento). RMN 1H (400 MHz, DMSO) 5 13,20 (br, 1H), 8,85 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,03 (dd, J = 8,4, 0,9 Hz, 1H), 7,78 — 7,71 (m, 1H), 7,66 — 7,59 (m, 1H), 7,51 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 3,46 — 3,40 (m, 1H), 2,99 — 2,88 (m, 1H), 2,81 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 2,33 — 2,25 (m, 1H), 1,90 — 1,58 (m, 8H), 1,23 (d, J = 6,9 Hz, 6H). (ESI) m/z calc. para C21H>26Na: 334,22. Encontrada: 335,25 (M+1)”. Exemplo 37; 4-(trans-4-((5- isopropil-4H-1,2,4-triazol-3-il)metil) ciclo-hexil)quinolina (7 mg, 2% de rendimento). RMN *H (400 MHz, DMSO) 5 13,19 (s, 1H), 8,81 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,01 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,80 — 7,69 (m, 1H), 7,68 — 7,57 (m, 1H), 7,41 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 3,44 — 3,38 (m, 1H), 3,01 — 2,87 (m, 1H), 2,65 — 2,54 (m, 2H), 2,03 — 1,78 (m, 5H), 1,67 — 1,51 (m, 2H), 1,39 — 1,29 (m, 2H), 1,23 (d, J = 6,5 Hz, 6H). (ESI) m/z calc. para C21H26Na: 334,22. Encontrada: 335,29 (M+1)*.

Esquema 10 " L-HMDS Z B2Pin2, KOAc q DE — (0) Ba DEt LO Frie? LO Pa(dpphEi O 100ºC e o o NZ oe — Hz PdC OEt 100ºC Preparação do 4-(((trifluormetil)sulfonil)óxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxi- lato de etila o

SO TfO'

[00076] A uma solução de 4-ciclo-hexanocarboxilato de etila (10,0 g, 58,8 mmol), em THF (220 ml), foi adicionada uma solução a 1M de LiHMDS, em THF (62 ml, 62 mmol), a -78ºC. A agitação durante 1 h foi seguida pela adição de uma solução de N-fenil-bis(trifluormetanossul- fonimida) (22 g, 62 mmol), em THF (30 ml). O banho de resfriamento foi removido 30 minutos após a adição completada e a mistura de rea- ção foi agitada durante 12 h, na temperatura ambiente. A mistura foi finalizada com solução aquosa de hidrogeno sulfato de sódio a 1 M (62 ml, 62 mmol). O solvente foi removido por evaporação rotativa. A mis- tura resultante foi extraída com EtOAc. Os orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura e secados sobre Na2SO,. À filtração e a concentração em vácuo deram um produto bruto, o qual foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, E!OAc a 0-10% em PE) para produzir o composto do título (15 g, 84% de rendimento). (ESI) m/z calc. para CioH13F305S: 302,04. Encontrada: 303,37 (M+1)*. Preparação do 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3- eno-1-carboxilato de etila

Oo

O e Oo

[00077] Uma mistura de 4-(((trifluormetil)sulfonil)óxi)ciclo-hex-3-eno- 1-carboxilato de etila (15,7 g, 52 mmol), acetato de potássio (15,3 9, 156 mmol), bis(pinacolato)diboro (19,8 g), 78 mmol), dicloro(1,1'-bis (difenilfosfino)ferroceno)paládio(lI) (2,12 g, 2,6 mmol), em 1,4-dioxana (200 ml), foi agitada a 90ºC, sob atmosfera de nitrogênio, por 18h. À mistura de reação foi dividida entre o acetato de etila e a água. As ca- madas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada até a secura. À cromatografia flash sobre sílica gel, com n-heptano/acetato de etila como eluente, deu o composto do título (13,9 g, 95%) como um óleo amarelo claro. (ESI) m/z calc. para CisH25BO.4: 280,18. Encontrada: 281,35 (M+1)*. Preparação do 4-(quinolin-4-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila o O" í Ds, Ne

[00078] A uma suspensão de 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaboro- lan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila (13,4 g, 47,8 mmol), 4- bromoquinolina (9,9 g, 47,8 mmol), PA(PPh3a)a (5,5 g, 4,8 mmol), em dioxana (100 mL) e água (38 mL), foi adicionado o carbonato de sódio (15,2 g, 143 mmol) e a mistura foi agitada a 100ºC, sob atmosfera de nitrogênio, por 14 horas. Após a mistura de reação ser resfriada até a temperatura ambiente, esta foi dividida entre a água e o EtOAc e as camadas foram separadas. Os orgânicos foram lavados sequencial- mente com água e salmoura e secados sobre Na2SO:.. A filtração e a concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash para produzir o composto do título (9,2 g, 69% de rendimento). (ESI) m/z calc. para CisH19NO>: 281,14. Encontrada: 282,54 (M+1)*. Preparação de cis-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexano-1-carboxilato de etila e trans-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexano-1-carboxilato de etila

À À QQQ" O OEt (> FS

NÇZ NA

[00079] Uma mistura de 4-(quinolin-4-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxi- lato de etila (9,2 g, 32,7 mmol) e 10% de Pd/C (4,6 g) em EtOAc (50 mL) foi agitada na temperatura ambiente, sob atmosfera de H2 [103,42 kPa (15 psi), durante a noite. A mistura resultante foi filtrada através de um recheio de Celite e o filtrado foi concentrado sob pressão redu- zida para dar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, EtOAc a 0-50% em PE) para produzir o composto do título, isômero cis (3,0 g, 32% de rendimento), como um sólido claro. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 8,84 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,15 — 8,04 (m, 2H), 7,74 — 7,65 (m, 1H), 7,59 — 7,52 (m, 1H), 7,27 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 4,21 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,41 — 3,30 (m, 1H), 2,84 — 2,78 (m, 1H), 241 — 2,31 (m, 2H), 1,97 — 1,87 (m, 2H), 1,86 — 1,71 (m, 4H), 1,380 (t, J=7,1 Hz, 3H). (ESI) m/z calc. para CigH2:NO>: 283,16. Encontrada: 284,33 (M+1)*, isômero trans (0,90 g, 10% de rendimento) como um sólido claro. RMN *H (400 MHz, CDCI3) 5 8,85 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,13 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,07 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,74 — 7,67 (m, 1H), 7,61 — 7,53 (m, 1H), 7,26 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,18 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,41 — 3,31 (m, 1H), 2,49 — 2,39 (m, 1H), 2,26 — 2,16 (m, 2H), 2,16 — 2,08 (m, 2H), 1,82 — 1,71 (m, 2H), 1,68 — 1,56 (m, 2H), 1,33 — 1,20 (m, 3H). (ESI) m/z calc. para CigH21NO>: 283,16. Encontrada: 284,37 (M+1)*.

Esquema 11

O oe — LiAlH, or MC! OMs VOO THF E TEA, DCM E Preparação do (cis-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) metanol

O í à

NA

[00080] AOC, auma solução de cis-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexano-1- carboxilato de etila (2,0 g, 7,1 mmol) em THF foi adicionado o LiAlH. (540 mg, 14,2 mmol), em porções. Após a adição completa, a mistura resultante foi deixada aquecer até a temperatura ambiente e agitada durante 3 horas. A reação foi finalizada por água (0,5 mL), NaOH a 15% (1 mL) sucessivamente. O sólido foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado em vácuo para dar o composto do título (1,46 g, 85% de rendimento) como um sólido branco, o qual foi usado na etapa seguinte, sem purificação adicional. (ESI) m/z calc. para C16H19NO: 241,15. Encontrada: 242,37 (M+1)*. Preparação do metanossulfonato de (cis-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) metila O" í à, Noz

[00081] AOC, auma solução de (cis-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) me- tanol (800 mg, 33 mmol) e TEA (0,7 mL, 5,0 mmol), em THF, foi adici- onado MsCI (0,5 mL), gota a gota. Após a adição completa, a mistura resultante foi deixada aquecer até a temperatura ambiente e agitada durante 3 horas. O sólido foi removido por filtração e o filtrado foi con- centrado em vácuo. O resíduo foi redissolvido em EtOAc e a solução foi lavada com NaHCO; sat., salmoura, secada sobre Na2SO:.. A filtra- ção e a concentração deram o composto do título (1,0 g, 95% de ren- dimento) como um sólido castanho, que foi usado na etapa seguinte,

sem purificação adicional. (ESI) m/z calc. para C17H2:NO;3S: 319,12. Encontrada: 320,31 (M+1)*. Preparação do metanossulfonato de (trans-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) metila "">oMs í Da No

[00082] O composto do título foi preparado a partir do trans-4- (quinolin-4-il)ciclo-hexano-1-carboxilato de etila, de acordo com o pro- cedimento descrito acima. (ESI) m/z calc. para C17H21NO;3S: 319,12. Encontrada: 320,36 (M+1)*. Esquema 12 o mn, o QE" no SS ——— Í Cs;COs, DMF Se NO 100ºC | O

NO Exemplo 38 Preparação da 3-((cis-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) metil)benzo[d]oxazol- 2(3H)-ona

O no

SO NA

[00083] Uma mistura de metanossulfonato de (cis-4-(quinolin-4- il)ciclo-hexil)metila (200 mg, 0,638 mmol), benzo[d]joxazol-2(3H)-ona (129 mg, 0,95 mmol), Cs2CO;3 (620 mg, 1,9 mmol) e DMF (5 mL) foi agitada a 100ºC, durante a noite. A mistura de reação foi dividida entre a água e o EtOAc e as camadas foram separadas. Os orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura e secados sobre Na2SO:.. A filtração e a concentração em vácuo deram um produto bru- to, que foi purificado por HPLC Prep. para produzir o composto do títu- lo (84 mg, 37% de rendimento). RMN *H (400 MHz, DMSO) à 8,88 (d,

J=4,5 Hz, 1H), 8,23 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,04 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,75 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,63 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,38 (dd, J = 16,2, 7,8 Hz, 2H), 7,24 (t, J=7,7 Hz, 1H), 7,15 (t J=7,8 Hz, 1H), 4,02 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 3,51 — 3,44 (m, 1H), 2,42 — 2,36 (m, 1H), 2,00 — 1,80 (m, 4H), 1,79 — 1,63 (m, 4H). (ESI) m/z calc. para C2a3H22N2O2: 358,17. Encontrada: 359,29 (M+1)*.

[00084] “Os compostos que se seguem na Tabela 5 foram prepara- dos de acordo com os procedimentos acima mencionados, usando o metanossulfonato de (4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)metila e o material apropriado. Tabela 5 " senao o es 39 kN & 358,17 359,25 N HF” o 40 vô 357,18 358,30

DS O À O "

NO Esquema 13 És PPha, DCM FS SS Di No s NA NaH, DMF, t.a. N > Preparação da 4-(cis-4-(bromometil)ciclo-hexil)quinolina Br Í a Noz

[00085] —AOC,auma solução de (cis-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) me-

tanol (400 mg, 1,66 mmol) e CBra (996 mg, 3,0 mmol), em DCM (10 mL), foi adicionada uma solução de PPh3 (894 mg, 3,4 mmol) em DCM (2 mL), gota a gota. Após agitada na temperatura ambiente, durante 3 horas, a mistura de reação foi dividida entre a água e o EtOAc e as camadas foram separadas. Os orgânicos foram lavados sequencial- mente com salmoura, secados sobre Na2SO2. A filtração e a concen- tração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cro- matografia em coluna sobre sílica gel, para produzir o composto do título (180 mg, 36% de rendimento). (ESI) m/z calc. para C16H18BrN: 303,06. Encontrada: 304,10/306,11 (M/M+2)*. Exemplo 42 Preparação da 4-(cis-4-((4-isopropil-1H-imidazol-1-il)]metil)ciclo-hexil) quinolina No

[00086] A 0OC,auma solução de 4-isopropil-1H-imidazol (99 mg, 0,9 mmol) em DMF (5 mL) foi adicionado o NaH (48 mg, 1,2 mmol). Após agitada a 0ºC, durante 30 min, a 4-(cis-4-(bromometil)ciclo- hexil)quinolina (180 mg, 0,6 mmol) foi adicionada e a mistura resultan- te foi agitada na temperatura ambiente, durante 3 horas. A mistura de reação foi dividida entre a água e o EtOAc e as camadas foram sepa- radas. Os orgânicos foram lavados sequencialmente com água e sal- moura e secados sobre Na2SOa.. A filtração e a concentração em vá- cuo deram um produto bruto, que foi purificado por HPLC Prep. para produzir o composto do título (3,4 g, 2% de rendimento). RMN *H (400 MHz, DMSO) 5 8,89 — 8,84 (m, 1H), 8,22 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,77 — 7,72 (m, 1H), 7,65 — 7,60 (m, 1H), 7,59 — 7,54 (m, 2H), 6,87 (s, 1H), 4,08 (d, JU = 8,2 Hz, 2H), 3,47 — 3,42 (m, 1H), 2,80 — 2,69 (m, 1H), 2,28 — 2,18 (m, 1H), 1,89 — 1,69 (m, 6H), 1,57 — 1,49 (m, 2H), 1,21 — 1,14 (m, 6H). (ESI) m/z calc. para Car2H27N3: 333,22. En-

contrada: 334,27 (M+1)*. Esquema 14 A De > NaBH;CN, MeOH = HATU, DIPEA o o NHo DMF AO Preparação da 4-(quinolin-4-il)ciclo-hexan-1-amina “o NH>

[00087] A uma solução de 4-(quinolin-4-il)ciclo-hexan-1-ona (200 mg, 0,88 mmol) em MeOH (6 mL) foram adicionados o NH.OAc (1,37 9, 17,76 mmol) e o NaBH3;CN (558 mg, 8,88 mmol) ) sucessivamente. Após agitada na t.a., durante a noite, a reação foi finalizada com solu- ção de NH4CI aq. saturada e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada sobre Na2SO:, filtrada e concentrada para produzir o composto do título (160 mg, 80% de rendimento), o qual foi usado na etapa seguinte, sem purificação adicional. LCMS (ESI) m/z calc. para CisH18N>2: 226,15. Encontrada: 227,15 (M+1)*. Exemplo 43 Preparação da 2-metil-2-fenil-N-(4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)propanamida q

SS LO a

[00088] A uma solução de 4-(quinolin-4-il)ciclo-hexan-1-amina (120 mg, 0,53 mmol) em DMF (3 mL) foram adicionados o ácido 2-metil-2- fenilpropanoico (105 mg, 0,64 mmol), a DIPEA (0,28 mL, 1,59 mmol) e o HATU (303 mg, 0,80 mmol), sucessivamente. Após agitada na t.a., durante a noite, a reação foi diluída com água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada sobre Na2SO:,

filtrada e concentrada para dar o produto bruto, que foi purificado por HPLC Prep. para produzir o composto do título (34 mg, 17% de rendi- mento). RMN *H (400 MHz, DMSO) 5 8,82 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,17 (d, J=8,4 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,77 — 7,71 (m, 1H), 7,65 — 7,59 (m, 1H), 7,44 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,37 — 7,31 (m, 4H), 7,26 — 7,19 (m, 1H), 7,14 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 3,82 — 3,69 (m, 1H), 3,32 — 3,28 (m, 1H), 1,94 — 1,83 (m, 4H), 1,71 — 1,61 (m, 2H), 1,57 — 1,49 (m, 2H), 1,46 (s, 6H). LCMS (ESI) m/z calc. para CasH2gN2O: 372,22. Encontra- da: 373,23 (M+1)*. Esquema 15 oa Co e ao E o Preparação do ácido 2-(cis-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)acético o

OH o

[00089] Auma solução de 4-(quinolin-4-il)ciclo-hexano-1-carboxilato de etila (400 mg, 1,41 mmol) em MeOH (5 mL) foi adicionado o NaOH a IN (5,6 mL). Após agitada a 25ºC, durante a noite, a mistura resul- tante foi neutralizada com HCI a IN e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada sobre Na2SO:, filtrada e concentrada para dar o composto do título (340 mg, 95% de rendimen- to), o qual foi usado na etapa seguinte, sem purificação adicional. LCMS (ESI) m/z calc. para C1i6H17NO>: 255,13. Encontrada: 256,33 (M+1)*.

Exemplo 44 Preparação da 2-metil-2-fenil-N-(cis-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)propana- mida 2 o

[00090] A uma solução de 2-fenilpropan-2-amina (32 mg, 0,24 mmol) em DMF (1 mL) foram adicionados o ácido 2-(cis-4-(quinolin-4- il)ciclo-hexil)acético (50 mg, 0,20 mmol), a TEA (40 mg, 0,39 mmol) e o HATU (112 mg, 0,29 mmol), sucessivamente. Após agitada na t.a., du- rante a noite, a reação foi diluída com água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada sobre Na2SO;, fil- trada e concentrada para dar o produto bruto, que foi purificado por HPLC Prep. para produzir o composto do título (34 mg, 46% de rendi- mento). RMN !H (400 MHz, DMSO) 5 8,79 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,21 (d, J=8,3 Hz, 1H), 8,01 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,77 — 7,70 (m, 1H), 7,65 — 7,58 (m, 1H), 7,37 — 7,32 (m, 2H), 7,380 — 7,23 (m, 3H), 7,18 — 7,13 (m, 1H), 3,43 — 3,37 (m, 1H), 2,70 — 2,64 (m, 1H), 2,06 (d, J = 11,2 Hz, 2H), 1,95 — 1,86 (m, 2H), 1,82 — 1,69 (m, 4H), 1,56 (s, 6H). LOCMS (ESI) m/z calc. para CosH2o8N2O: 372,22. Encontrada: 373,30 (M+1)*. Exemplo 45 Preparação da 2-fenil-N-((cis-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)metil)propan-2- amina

[00091] Auma solução de 2-metil-2-fenil-N-(cis-4-(quinolin-4-il)ciclo- hexil)propanamida (150 mg, 0,40 mmol) em THF foi adicionado o BH3 +

THF (0,80 mL, 0,80 mmol). Após agitada ao refluxo, durante 70 min, a mistura de reação foi finalizada com MeOH e HCl conc. A mistura re- sultante foi neutralizada para pH 7 com solução aquosa sat. de NaHCO; e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada sobre Na2SO:, filtrada e concentrada para dar o produto bruto, que foi purificado por HPLC Prep. para produzir o com- posto do título (29 mg, 20% de rendimento). RMN 'H (400 MHz, DMSO) 3 8,78 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,17 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,00 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,76 — 7,70 (m, 1H), 7,64 — 7,57 (m, 1H), 7,53 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 7,38 — 7,30 (m, 2H), 7,27 — 7,17 (m, 2H), 3,39 — 3,32 (m, 1H), 2,38 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 1,89 — 1,78 (m, 3H), 1,77 — 1,67 (m, 2H), 1,65 — 1,56 (m, 2H), 1,53 — 1,34 (m, 8H). LCMS (ESI) m/z calc. para CasH3aoN2: 358,24. Encontrada: 359,48 (M+1)*. Exemplo 46 Preparação da 2-metil-2-fenil-N-(cis-4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil)propana- mida

O o

[00092] O composto do título foi preparado a partir do ácido 2-(cis- 4-(quinolin-4-il)ciclo-hexil) acético e da fenilmetanamina, de acordo com o procedimento descrito para a síntese da 2-metil-2-fenil-N-(cis-4- (quinolin-4-il)ciclo-hexil)opropanamida. RMN 1H (400 MHz, DMSO) à 8,82 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,36 — 8,28 (m, 1H), 8,23 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,80 — 7,70 (m, 1H), 7,67 — 7,58 (m, 1H), 7,38 — 7,20 (m, 6H), 4,32 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 3,49 — 3,40 (m, 1H), 2,70 — 2,62 (m, 1H), 2,15 (d, J = 12,9 Hz, 2H), 1,94 — 1,70 (m, 6H). LCMS (ESI) m/z calc. para Ca3H24N2O: 344,19. Encontrada: 345,32 (M+1)*.

Ensaio por MS RapidFire da IDO1 com PBMC

[00093] Os compostos da presente invenção foram testados por meio de ensaios celulares de alto rendimento, usando a detecção da quinurenina por meio da espectrometria de massa e da citotoxicidade como pontos finais. Para os ensaios de espectrometria de massa e citotoxicidade, as células mononucleares do sangue periférico huma- nas (PBMC) (PBOO3F; AllCells&, Alameda, CA) foram estimuladas com o interferon-y humano (IFN-y) (Sigma-Aldrich Corporation, St. Louis, MO) e o lipopolissacarídeo de Salmonella minnesota (LPS) (In- vivogen, San Diego, CA) para induzir a expressão da indolamina 2,3- dioxigenase (IDO1). Os compostos com propriedades inibidoras da IDO1 diminuíram a quantidade de quinurenina produzida pelas células por meio da via catabólica do triptofano. A toxicidade celular devida ao efeito do tratamento com o composto foi medida usando o reagente CellTiter-Glo& (CTG) (Promega Corporation, Madison, WI), que é ba- seado na detecção luminescente do ATP, um indicador das células metabolicamente ativas.

[00094] Na preparação para os ensaios, os compostos de teste fo- ram diluídos em série 3 vezes em DMSO a partir de uma concentração máxima típica de 1 MM ou 5 mM e preparados a 0,5 uL em placas tra- tadas de cultura de tecidos de 384 poços, de poliestireno e fundo cla- ro, com tampas (Greiner Bio-One, Kremsmúnster, Áustria), para gerar curvas de resposta à dose de 11 pontos. Os poços de controle baixo (quinurenina a 0% ou citotoxicidade de 100%) continham 0,5 ul de DMSO na presença de PBMCs não estimuladas (-IFN-y/-LPS), para o ensaio de espectrometria de massa, ou 0,5 ul de DMSO na ausência de células, para o ensaio de citotoxicidade, e os poços de controle alto (quinurenina a 100% ou citotoxicidade de 0%) continham 0,5 ul de DMSO na presença de PBMCs estimuladas (+IFN-y/+ LPS), para os ensaios tanto de espectrometria de massa quanto de citotoxicidade.

[00095] Os estoques congelados de PBMCs foram lavados e recu- perados em meio RPMI 1640 (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA), suplementado com 10% v/v de soro bovino fetal inativado pelo calor (FBS) (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA) e 1X solução de antibiótico de penicilina-estreptomicina (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA). As células foram diluídas para 1.000.000 de célu- las/mL no meio RPMI 1640 suplementado. 50 ul da suspensão de cé- lulas, para o ensaio de espectrometria de massa, ou meio sozinho, pa- ra o ensaio de citotoxicidade, foram adicionados aos poços de controle baixo, sobre as placas de 384 poços com os compostos, previamente preparadas, resultando em 50.000 células/poço ou O células/poço, respectivamente. O IFN-y e o LPS foram adicionados à suspensão de células restante, nas concentrações finais de 100 ng/ml e 50 ng/ml, respectivamente, e 50 ul das células estimuladas foram adicionados a todos os poços restantes sobre as placas de 384 poços com os com- postos. As placas com tampa foram então colocadas em uma incuba- dora umidificada, a 37ºC, 5% de CO?2, por 2 dias.

[00096] Após a incubação, as placas de 384 poços foram removi- das da incubadora e deixadas equilibrar até a temperatura ambiente, por 30 minutos. Para o ensaio de citotoxicidade, o CellTiter-GloO foi preparado de acordo com as instruções do fabricante e 40 ul foram adicionados a cada poço da placa. Após uma incubação de vinte minu- tos, na temperatura ambiente, a luminescência foi lida em um EnvVisi- on Multilabel Reader (PerkinElmer Inc., Waltham, MA). Para o ensaio de espectrometria de massa, 10 ul de sobrenadante de cada poço das placas tratadas com os compostos foram adicionados a 40 ul de acetonitrila, contendo 10 uM de um padrão interno para a normaliza- ção, em placas de 384 poços de polipropileno e fundo em V (Greiner Bio-One, Kremsmúnster, Áustria), para extrair os analitos orgânicos. Após centrifugação a 2000 rpm por 10 minutos, 10 ul de cada poço das placas de extração com acetonitrila foram adicionados a 90 ul de H20O destilada e estéril nas placas de 384 poços de polipropileno e fundo em V, para a análise da quinurenina e do padrão interno na Ra- pidFire 300 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) e na 4000 QTRAP MS (SCIEX, Framingham, MA). Os dados da MS foram integrados usando o software RapidFire Integrator da Agilent Technologies, e os dados foram normalizados para a análise como uma razão de quinu- renina para o padrão interno.

[00097] Os dados para as respostas à dose no ensaio de espec- trometria de massa foram plotados como % de inibição da IDO1 ver- sus concentração dos compostos, após a normalização, usando a fór- mula 100-(100*((U-C2)/(C1-C2))), onde U era o valor desconhecido, C1 era a média dos poços de controle alto (quinurenina a 100%; inibi- ção de 0%) e C2 era a média dos poços de controle baixo (quinurenina a 0%; inibição de 100%). Os dados para as respostas à dose no en- saio de citotoxicidade foram plotados como % de citotoxicidade versus concentração dos compostos, após a normalização, usando a fórmula 100-(100*((U-C2)/(C1-C2))), onde U era o valor desconhecido, C1 era a média dos poços de controle alto (0% de citotoxicidade) e C2 era a média dos poços de controle baixo (100% de citotoxicidade).O ajuste da curva foi realizado com a equação y = A+((BA)/(1+(10x/10C)D)), onde A era a resposta mínima, B era a resposta máxima, C era o log(XC50) e D era a inclinação de Hill. Os resultados para cada com- posto de teste foram registrados como valores de plC50 para o ensaio de espectrometria de massa e como valores de pCC50 para o ensaio de citotoxicidade (-C na equação acima).

E eg e a pos e e ss gg e ss eg 2 a gg ss & — &&

Claims (16)

REIVINDICAÇÕES

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte Fórmula | Ar A

A NL Fórmula | ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que: Ar' é Cs-12arila, ou heteroarila de 5-12 elementos, em que a arila e a heteroarila incluem biciclos e a heteroarila contém 1-3 hetero- átomos selecionados a partir de O, S e N, e em que Ar' pode opcio- nalmente ser substituído por 1-2 substituintes selecionados indepen- dentemente a partir de halogênio, OH, C1-3alquila, OC1-3alquila, C1-3flu- oralquila, CN e NH>; R' e R? são independentemente H ou C1.1alquila; né 1ouo; A é -C(O)NRºR-, -NRÍC(O)R?-, -NRºC(O)C(R)(R)R?$- ou Ar?-R$, em que Ar? é Cs.,12arila ou heteroarila de 5-12 elementos, em que a arila e a heteroarila incluem biciclos e a heteroarila contém 1-3 heteroátomos selecionados a partir de O, S e N, e em que Ar? pode opcionalmente ser substituído por um substituinte selecionado a partir de halogênio, OH, C1-3alquila, OC1-3alquila, C1-3fluoralquila, CN e NH>; Rº, R' e R$ são independentemente H ou C1-salquila; Rº é H, C1.6alquila , Cs-7arila, opcionalmente substituído por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em halogê- nio, C1-4alquila, hidroxila, -C(O)CH3, C(0)OCH3 e C(O)NH>; Rô é Ci0alquila, Ca.gcicloalquila ou Cs-7arila, em que Rô é opcionalmente substituído por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em halogênio, Ci4alquila, hidroxila, -C(O)CHs, C(0)OCH;3 e C(O)NH».

2. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, ca- racterizado pelo fato de que Ar' é quinolina, isoquinolina, quinazolina, isoquinolona, quinazolona, naftiridina, naftaleno ou indol, e pode opci- onalmente ser substituído por um substituinte selecionado a partir de halogênio, OH, C1-3alquila, OC1-3alquila, C1-3fluoralquila, CN e NH>.

3. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 2, ca- racterizado pelo fato de que Ar' é quinolina opcionalmente substituída por um halogênio.

4. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que R' e R? são indepen- dentemente H ou metila.

5. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que Ar? é benzimidazol não substituído, 7-cloro-benzimidazol, oxazol, imidazol, 1,2,4-triazol, benzoxazolona ou benzoimidazolona.

6. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 5, ca- racterizado pelo fato de que Ar? é benzimidazol não substituído ou imi- dazol.

7. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que Rº é H, Ci.salquila ou fenila opcionalmente substituída por um halogênio.

8. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que Rº é C1-10alquila, Cs5- 7cicloalquila ou fenila, em que Rº é opcionalmente substituído por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em halogênio, C1-3alquila, hidroxila e C(O)NH>.

9. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto ou sal, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8.

10. Uso de um composto ou sal, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, ou de uma composição como definida na reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de uma composição ou medicamento para tratar uma doença ou condição que se beneficiaria da inibição da IDO1.

11. Uso, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que, na dita doença ou condição, os biomarcadores da atividade da IDO são elevados.

12. Uso, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que os ditos biomarcadores são a quinurenina plasmática Ou a razão de quinurenina plasmática/triptofano.

13. Uso, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a dita doença ou condição são infecções virais crôni- cas; infecções bacterianas crônicas; câncer; sepse; ou um distúrbio neurológico.

14. Uso, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que as ditas infecções virais crônicas são aquelas que en- volvem o HIV, o HBV ou o HCV; as ditas infecções bacterianas crôni- cas são a tuberculose ou a infecção articular protética; e os ditos dis- túrbios neurológicos são o transtorno depressivo maior, a doença de Huntington ou a doença de Parkinson.

15. Uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a dita doença ou condição é a inflamação associada à infecção pelo HIV; as infecções virais crônicas que envolvem o vírus da hepatite B ou o vírus da hepatite C; o câncer; ou a sepse.

16. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que é para uso no trata- mento de uma doença ou condição que se beneficiaria da inibição da IDO1.