BR112020008490A2 - moduladores de indoleamina 2,3-dioxigenase - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se a compostos inibidores de IDO1 de Fórmula I e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, suas composições farmacêuticas, seus métodos de preparação e métodos para seu uso na prevenção e/ou tratamento de doenças.

Description

“MODULADORES DE INDOLEAMINA 2,3-DIOXIGENASE”.

CAMPO DA INVENÇÃO

[001]Compostos, métodos e composições farmacêuticas para a prevenção e/ou tratamento de HIV; incluindo a prevenção da progressão de AIDS e imunossupressão geral, pela administração de determinados compostos de indoleamina 2,3-dioxigenase em quantidades terapeuticamente eficazes são divulgados. Métodos para preparar tais compostos e métodos de usar os compostos e composições farmacêuticas dos mesmos são também divulgados.

FUNDAMENTO DA INVENÇÃO

[002]Indoleamina-2,3-dioxigenase 1 (IDO1) é uma enzima contendo heme que catalisa a oxidação do anel indo! de triptofano para produzir N-formil quinurenina, que é rapidamente e constitutivamente convertida em quinurenina (Kyn) e uma série de metabólitos a jusante. IDO1 é a etapa de limitação de taxa desse percurso de quinurenina de metabolismo de triptofano e a expressão de IDO1 é induzível no contexto de inflamação. Estímulos que induzem IDO1 incluem produtos virais ou bacterianos, ou citocinas inflamatórias associadas a infecção, tumores ou dano do tecido estéril. Kyn e vários metabólitos a jusante são imunossupressores: Kyn é antiproliferativo e pró-apoptótico a células T e células NK (Munn, Shafizadeh et al. 1999, Frumento, Rotondo et al. 2002) enquanto metabólitos, tais como ácido 3-hidróxi antranílico (3-HAA) ou o produto de dimerização oxidativa de 3-HAA ácido cinabarínico (CA) inibem função de fagócito (Sekkai, Guittet et al. 1997), e induzem a diferenciação de células T reguladoras imunossupressoras (Treg) ao mesmo tempo em que inibe a diferenciação de células T CD4+ produtoras de I|L-17 ou IL-22 de proteção intenstinal (Th17 e Th22) (Favre, Mold et al. 2010). A indução de IDO1, entre outros mecanismos, é provavelmente importante na limitação da imunopatologia durante respostas imunes ativas, na promoção da resolução de respostas imunes e na promoção de tolerância fetal. No entanto, em contextos crônicos como o câncer,

ou infecção crônica viral ou bacteriana, a atividade de IDO1 impede a depuração de tumores ou patógenos e, se a atividade for sistêmica, a atividade de IDO1 pode resultar em disfunção imune sistêmica (Boasso and Shearer 2008, Li, Huang et al. 2012). Além desses efeitos imunomoduladores, os metabólitos de IDO1, tais como Kyn e ácido quinolínico, também são conhecidos por serem neurotóxicos e são observados como elevados em várias condições de disfunção neurológica e depressão. Dessa forma, IDO1 é um alvo terapêutico para inibição em uma ampla gama de indicações, tais como promover a depuração do tumor, permitir a depuração de infecções virais ou bacterianas intratáveis, reduzir a disfunção imune sistêmica manifestada como inflamação persistente durante infecção por HIV ou imunossupressão durante a sepse, e prevenir ou reverter as condições neurológicas.

IDO1 e inflamação persistente em infecção por HIV:

[003]Apesar do sucesso da terapia antirretroviral (ART) na supressão da replicação do HIV e na redução da incidência de condições relacionadas a AIDS, pacientes infectados por HIV em ART apresentam maior incidência de morbidades e mortalidade não relacionadas a AIDS do que seus pares não infectados. Essas condições não relacionadas a AIDS incluem câncer, doença cardiovascular, osteoporose, doença hepática, doença renal, fragilidade e disfunção neurocognitiva (Deeks 2011). Vários estudos indicam que a morbidade/mortalidade não relacionada a AIDS é associada à inflamação persistente, que permanece elevada em pacientes infectados por HIV em ART em comparação com seus pares (Deeks 2011). Dessa forma, supõe-se que inflamação e disfunção imune persistentes, apesar da supressão virológica com ART, sejam a causa desses eventos definidores não relacionados a AIDS (NADEs).

[004]O HIV infecta e mata células T CD4+, com particular preferência por células como as células T CD4+ que residem nos tecidos linfoides das superfícies de mucosas (Mattapallil, Douek et al. 2005). A perda dessas células combinada com a resposta inflamatória à infecção resulta em uma relação perturbada entre o hospedeiro e todos os patógenos, incluindo o próprio HIV, mas se estende a infecções virais preexistentes ou adquiridas, infecções fúngicas e bactérias residentes na pele e superfícies de mucosas. Essa relação disfuncional hospedeiro:patógeno resulta na reação exagerada do hospedeiro ao que normalmente seria um problema menor, além de permitir o crescimento de patógenos na microbiota. A interação disfuncional hospedeiro:patógeno resulta, portanto, em aumento da inflamação, que por sua vez leva a uma disfunção mais profunda, gerando um ciclo vicioso. Como acredita-se que a inflamação conduza a morbidade/mortalidade não relacionada a AIDS, os mecanismos que governam a interação alterada hospedeiro:patógeno são alvos terapêuticos.

[0O5]A atividade e expressão de IDO1 são elevadas durante a infecção por HIV não tratada e tratada, bem como em modelos primatas de infecção por SIV (Boasso, Vaccari et al. 2007, Favre, Lederer et al. 2009, Byakwaga, Boum et al. 2014, Hunt, Sinclair e outros 2014, Tenorio, Zheng et al. 2014). A atividade de IDO1, conforme indicado pela razão dos níveis plasmáticos de substrato e produto enzimático (razão Kyn/Tryp ou K:T), é associada a outros marcadores de inflamação e é um dos preditores mais fortes de morbidade/mortalidade não relacionada a AIDS (Byakwaga (Boum et al. 2014, Hunt, Sinclair et al. 2014, Tenorio, Zheng et al. 2014). Além disso, características consistentes com o impacto esperado da atividade de IDO1 elevada no sistema imune são características principais da disfunção imune induzida por HIV e SIV, tal como reduzida resposta proliferativa de células T a antígeno e desequilíbrio de Treg:Th17 nos compartimentos sistêmico e intestinal (Favre, Lederer et al. 2009, Favre, Mold et al. 2010). Dessa forma, hipotetiza-se que a IDO1 desempenha um papel na condução do ciclo vicioso de disfunção imune e inflamação associada a morbidade/mortalidade não relacionada a AIDS. Dessa forma, propõe-se que a inibição de IDO1 reduza a inflamação e diminua o risco de NADEs em pessoas infectadas por HIV suprimidas por ART.

IDO1 e inflamação persistente além do HIV

[006]Como descrito acima, a inflamação associada a infecção crônica por HIV tratada é um provável condutor de múltiplas doenças orgânicas terminais [Deeks 2011]. No entanto, essas doenças orgânicas terminais não são exclusivas da infecção por HIV e são, de fato, as doenças comuns de envelhecimento que ocorrem em idades mais precoces na população infectada por HIV. Na população geral não infectada, a inflamação de etiologia desconhecida é um dos principais correlatos de morbidade e mortalidade [Pinti, 2016 H88]. De fato, muitos dos marcadores de inflamação são compartilhados, tais como IL-6 e CRP. Se, como hipotetizado acima, a IDO1 contribui para inflamação persistente na população infectada por HIV, induzindo disfunção imune no trato Gl ou nos tecidos sistêmicos, a IDO1 também pode contribuir para a inflamação e, portanto, doenças orgânicas terminais na população em geral. Essas doenças orgânicas terminais associadas à inflamação são exemplificadas por doenças cardiovasculares, síndrome metabólica, doença hepática (NAFLD, NASH), doença renal, osteoporose e comprometimento neurocognitivo. De fato, a via de IDO1 tem, na literatura, ligações com doenças hepáticas (resumos de Vivoli em Italian Assoc. for the Study of the Liver Conference 2015], diabetes [Baban, 2010 *89], doença renal crônica [Schefold, 2009 90], doença cardiovascular [Mangge, 2014 t92; Mangge, 2014 t91], bem como envelhecimento geral e todas as causas de mortalidade [Pertovaara, 2006 493]. Assim, a inibição de IDO1 pode ter aplicação na redução de inflamação na população em geral para reduzir a incidência de doenças orgânicas terminais específicas associada a inflamação e envelhecimento.

IDO1 e Oncologia

[007]A expressão de IDO pode ser detectada em vários cânceres humanos (por exemplo; melanoma, pâncreas, ovário, AML, CRC, próstata e endometrial) e se correlaciona com mau prognóstico (Munn 2011). Múltiplos papéis imunossupressores foram atribuídos à ação de IDO, incluindo a indução de diferenciação e hiperativação de Treg, supressão de resposta imune de Teff e função DC reduzida, todas as quais prejudicam o reconhecimento imune e promovem o crescimento tumoral (Munn 2011). A expressão de IDO em tumores cerebrais humanos está correlacionada com sobrevida reduzida. Os modelos de camundongo ortotrópicos e de glioma transgênico demonstram uma correlação entre expressão reduzida de IDO e infiltração de Treg reduzida e um aumento da sobrevida a longo prazo (Wainwright, Balyasnikova et al. 2012). No melanoma humano, uma alta proporção de tumores (33 de 36 casos) apresentou IDO elevada, sugerindo um papel importante no estabelecimento de um microambiente tumoral imunossupressor (TME), caracterizado pela expansão, ativação e recrutamento de MDSCs de maneira dependente de Treg (Holmgaard, Zamarin et al. 2015). Adicionalmente, as células imunes que expressam IDO de hospedeiro foram identificadas nos linfonodos de drenagem e nos próprios tumores (Mellor and Munn 2004). Portanto, acredita-se que a IDO derivada de hospedeiro e de tumor contribua para o estado imunossuprimido do TME.

[008]A inibição de IDO foi uma das primeiras estratégias de droga de moléculas pequenas propostas para o restabelecimento de uma resposta imunogênica ao câncer (Mellor and Munn 2004). O d-enantiômero de 1-metil triptofano (D-1MTor indoximod) foi o primeiro inibidor de IDO a entrar em ensaios clínicos. Embora esse composto claramente iniba a atividade de IDO, é um inibidor muito fraco da enzima isolada e o(s) mecanismo(s) de ação in vivo para esse composto ainda está(ão) sendo elucidado(s). Os investigadores da Incyte otimizaram um composto hit obtido a partir de um processo de triagem em um inibidor potente e seletivo com exposição oral suficiente para demonstrar um atraso no crescimento tumoral em um modelo de melanoma de camundongo (Yue, Douty et al. 2009). O desenvolvimento desta série levou a INCB204360, que é altamente seletivo para inibição de IDO-1 sobre IDO-2 e TDO em linhagens celulares transfectadas transientemente com enzimas humanas ou de camundongos (Liu, Shin et al. 2010). Potência semelhante foi observada para linhagens celulares e tumores humanos primários que expressam endogenamente IDO1 (IC50s — 3-20 nM). Quando testado em cocultura de DCs e células CD4*CD25' não tratadas (naíve), INCB204360 bloqueou a conversão dessas células T em Tregs CD4*FoxP3*. Finalmente, quando testado em um modelo singênico (células pancreáticas PANO2) em camundongos imunocompetentes, INCB204360 administrado por via oral proporcionou uma inibição dependente de dose significativa de crescimento tumoral, mas não teve efeito contra o mesmo tumor implantado em camundongos imunodeficientes. Estudos adicionais dos mesmos pesquisadores mostraram uma correlação da inibição de IDO1 com a supressão de níveis sistêmicos de quinurenina e inibição do crescimento tumoral em um modelo de tumor singênico adicional em camundongos imunocompetentes. Com base nesses estudos pré-clínicos, o INCB24360 entrou em ensaios clínicos para o tratamento de melanoma metastático (Beatty, O'Dwyer et al. 2013).

[009]Tendo em vista a importância do catabolismo de triptofano na manutenção da supressão imune, não é surpreendente que a superexpressão de uma segunda enzima metabolizadora de triptofano, TDO2, por múltiplos tumores sólidos (por exemplo, carcinomas de bexiga e fígado, melanomas). também tenha sido detectada. Uma pesquisa de 104 linhagens celulares humanas revelou 20/104 com expressão de TDO, 17/104 com IDO1 e 16/104 expressando ambas (Pilotte, Larrieu et al. 2012). Semelhante à inibição de IDO1, a inibição seletiva de TDO2 é eficaz na reversão da resistência imune em tumores que superexpressam TDO?2 (Pilotte, Larrieu et al. 2012). Esses resultados suportam a inibição de TDO2 e/ou a dupla inibição de TDO2/IDO1 como uma estratégia terapêutica viável para melhorar a função imune.

[01 O]Vários estudos pré-clínicos demonstraram um valor significativo, mesmo sinérgico, na combinação de inibidores de IDO-1 em combinação com pontos de verificação de células T modulando mAbs para CTLA-4, PD-1 e GITR. Em cada caso, ambos os aspectos de eficácia e DP relacionados de melhora da atividade/função imune foram observados nesses estudos em uma variedade de modelos murinos (Balachandran, Cavnar et al. 2011, Holmgaard, Zamarin et al. 2013, M. Mautino 2014, Wainwright Chang et al. 2014). O inibidor de IDO1 de Incyte (INCB204360, epacadostat) foi testado clinicamente em combinação com um bloqueador de CTLA4 (ipilimumab), mas não está claro que uma dose eficaz foi alcançada devido a eventos adversos limitados por dose observados com a combinação. Em contraste, os dados divulgados recentemente para um estudo em andamento combinando epacadostat com PD-1 mAb da Merck (pembrolizumab) demonstraram tolerabilidade aprimorada da combinação, permitindo doses mais altas do inibidor de IDO1. Houve várias respostas clínicas em vários tipos de tumores que são encorajadoras. No entanto, ainda não se sabe se essa combinação é uma melhoria em relação à atividade de agente único de pembrolizumab (Gangadhar, Hamid et al. 2015). Da mesma forma, Roche/Genentech estão avançando NGL919/GDC-0919 em combinação com os dois mAbs para PD-L1 (MPDL3280A, Atezo) e OX-40 após a recente conclusão de um estudo de fase 1a de segurança e PK/PD em pacientes com tumores avançados.

IDO1 e infecções crônicas

[011]A atividade de IDO1 gera metabólitos da via de quinurenina, tais como Kyn e 3-HAA, que comprometem pelo menos a atividade de células T, célula NKe macrófagos (Munn, Shafizadeh et al. 1999, Frumento, Rotondo et al. 2002) (Sekkai, Guittet et al. 1997, Favre, Mold et al. 2010). Os níveis de Kyn ou a razão Kyn/Tryp são elevados no cenário de infecção crônica por HIV (Byakwaga, Boum et al. 2014, Hunt, Sinclair et al. 2014, Tenorio, Zheng et al. 2014), infecção por HBV (Chen, Li et al. 2009), infecção por HCV (Larrea, Riezu-Boj et al. 2007, Asghar, Ashiq et al. 2015), e infecção por TB (Suzuki, Suda et al. 2012) e são associados a uma disfunção de células T específicas de antígeno (Boasso, Herbeuval et al. 2007, Boasso, Hardy et al. 2008, Loughman and Hunstad 2012, Ito, Ando et al. 2014, Lepiller, Soulier et al. 2015). Dessa forma, acredita-se que, nesses casos de infecção crônica, a inibição mediada por IDO1 da resposta de células T específicas de patógeno desempenha um papel na persistência da infecção, e que a inibição de IDO1 pode ter um benefício na promoção de depuração e resolução da infecção.

IDO1 e sepse

[012] Observou-se que a atividade e expressão de IDO1 é elevada durante a sepse e o grau de Kyn ou elevação de Kyn/Tryp correspondeu ao aumento da gravidade da doença, incluindo a mortalidade (Tattevin, Monnier et al. 2010, Darcy, Davis et al. 2011). Em modelos animais, o bloqueio de IDO1 ou nocautes genéticos de IDO1 protegeu camundongos de doses letais de LPS ou da mortalidade no modelo de ligação/punção cecal (Jung, Lee et al. 2009, Hoshi, Osawa et al. 2014). A sepse é caracterizada por uma fase imunossupressora em casos graves (Hotchkiss, Monneret et al. 2013), indicando potencialmente um papel de IDO1 como mediador da disfunção imune, e indicando que a inibição farmacológica de IDO1 pode proporcionar um benefício clínico na sepse.

IDO1 e distúrbios neurológicos

[013]Além dos cenários imunológicos, a atividade de IDO1 também está ligada à doença em cenários neurológicos (revisada em Lovelace Neuropharmacology 2016 (Lovelace, Varney et al. 2016)). Os metabólitos da via de quinurenina, tais como 3-hidroxiquinurenina e ácido quinolínico, são neurotóxicos, mas são equilibrados por metabólitos alternativos, ácido quinurênico ou ácido picolínico, que são neuroprotetores. Distúrbios neurodegenerativos e psiquiátricos nos quais os metabólitos da via de quinurenina demonstraram estar associados à doença incluem esclerose múltipla, distúrbios do neurônio motor, tais como esclerose lateral amiotrófica, doença de Huntington, doença de Parkinson, doença de Alzheimer, transtorno depressivo maior, esquizofrenia, anorexia (Lovelace, Varney et al., 2016).

Modelos animais de doenças neurológicas mostraram algum impacto de inibidores fracos de IDO1, tais como 1-metiltriptofano, sobre a doença, indicando que a inibição de IDO1 pode fornecer benefícios clínicos na prevenção ou tratamento de distúrbios neurológicos e psiquiátricos.

[014]Seria, portanto, um avanço na técnica descobrir inibidores de IDO que efetivassem o equilíbrio das propriedades acima mencionadas como uma terapia modificadora de doença em infecções crônicas por HIV para reduzir a incidência de morbidade/mortalidade não relacionada a AIDS; e/ou uma terapia modificadora de doença para prevenir a mortalidade em sepse; e/ou uma imunoterapia para melhorar a resposta imune ao HIV, HBV, HCV e outras infecções virais crônicas, infecções bacterianas crônicas, infecções fúngicas crônicas e tumores; e/ou para o tratamento da depressão ou outros distúrbios neurológicos/neuropsiquiátricos.

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SUMÁRIO DA INVENÇÃO [015JEmM suma, em um aspecto, a presente invenção divulga compostos de Fórmula | Q— Ara (EH2)N Fórmula | ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: cada n é independentemente 2, 1, ou O (isto é, é ausente); Q é -C(O)NH-, NHC(O)- ou um heterociclo de 5-9 membros, em que o referido heterociclo contém 1-3 heteroátomos independentemente selecionados de O, S, e N, e em que o referido heterociclo pode opcionalmente ser substituído por 1-4 substituintes independentemente selecionados de halogênio, OH, C1-3alquil, OC1- 3alquil, C1-3fluoroalquil, CN e NH>; Ar' é Cs.aril ou heteroaril de 5-9 membros, em que aril e heteroaril incluem biciclos e heteroaril contém 1-3 heteroátomos independentemente selecionados de O,

SenN e em que Ar' pode opcionalmente ser substituído por 1-4 substituintes independentemente selecionados de halogênio, OH, Ci3alquil, OC1i3alquil, C1- sfluoroalquil, CN e NH2; e Ar? é Csaril ou heteroaril de 5-9 membros, em que heteroaril contém 1-3 heteroátomos independentemente selecionados de O, S e N, e em que Ar pode opcionalmente ser substituído por 1-4 substituintes independentemente selecionados de halogênio, OH, C1-3alquil, OC1-3alquil, C1-3fluoroalquil, CN e NH>2.

[016]Em outro aspecto, a presente invenção divulga um método para tratar doenças ou condições que se beneficiariam da inibição de IDO. Exemplos incluem inflamação associada a infecção por HIV; infecções virais crônicas envolvendo vírus da hepatite B ou vírus da hepatite C; câncer; ou sepse.

[017]EM outro aspecto, a presente invenção divulga composições farmacêuticas compreendendo um composto de Fórmula | ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[018]Em outro aspecto, a presente invenção provê um composto de Fórmula | ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso em terapia.

[019]Em outro aspecto, a presente invenção provê um composto de Fórmula | ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de doenças ou condições que se beneficiariam da inibição de IDO.

[020]Em outro aspecto, a presente invenção provê o uso de um composto de Fórmula | ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para uso no tratamento de doenças ou condições que se beneficiariam da inibição de IDO.

[021]Em outro aspecto, a presente invenção divulga um método para tratar uma infecção viral em um paciente mediada pelo menos em parte por um vírus na família de vírus dos retrovírus, compreendendo administrar ao referido paciente uma composição — compreendendo um composto de Fórmula || ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, a infecção viral é mediada pelo vírus HIV.

[022]Em outro aspecto, uma modalidade particular da presente invenção provê um método de tratar um indivíduo infectado com HIV compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula |, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[023]Ainda em outro aspecto, uma modalidade particular da presente invenção provê um método de inibir a progressão da infecção por HIV em um indivíduo em risco de infecção com HIV compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula |, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Essas e outras modalidades são ainda descritas no texto a seguir.

DESCRIÇÃO DETALHADA DE MODALIDADES REPRESENTATIVAS

[024]Preferencialmente, Ar' é quinolina,y isoquinolina,y quinazolina, quinoxalina, indol, azaindol, benzodiazol, fenil, piridil, diazol ou pirimidina, e em que Ar' pode opcionalmente ser substituído por um substituinte selecionado de halogênio, OH, Ci3alquil, OC1-3alquil, C13fluoroalquil, CN e NH2. Mais preferencialmente Ar é quinolina, isoquinolina ou indol, e pode opcionalmente ser substituído por um substituinte selecionado de halogênio, OH, C1-3alquil, OC13alquil, C13fluoroalquil, CN e NH2. Mais preferencialmente Ar' é quinolina opcionalmente substituído por um halogênio.

[025]Preferencialmente Ar? é fenil ou tiofeno, opcionalmente substituído por um halogênio.

[026]Composições farmacêuticas preferidas incluem formas de dosagem unitárias. Formas de dosagem unitárias preferidas incluem comprimidos.

[027]EmM particular, espera-se que os compostos e composição desta invenção sejam úteis para prevenção e/ou tratamento de HIV; incluindo a prevenção da progressão de AIDS e imunossupressão geral. Espera-se que, em muitos casos, tal prevenção e/ou tratamento envolverá o tratamento com os compostos desta invenção em combinação com pelo menos uma outra droga que se julgue útil para tal prevenção e/ou tratamento. Por exemplo, os inibidores de IDO desta invenção podem ser usados em combinação com outras terapias imunes, tais como pontos de verificação imunes (PD1, CTLAA, ICOS etc.) e possivelmente em combinação com fatores de crescimento ou terapias com citocinas (IL21, IL-7 etc.)

[028]É prática comum no tratamento de HIV empregar mais de um agente eficaz. Portanto, de acordo com outra modalidade da presente invenção, é fornecido um método para prevenir ou tratar uma infecção viral em um mamífero mediada pelo menos em parte por um vírus da família de vírus dos retrovírus, cujo método compreende administrar, a um mamífero que tenha sido diagnosticado com a referida infecção viral ou esteja em risco de desenvolver a referida infecção viral, um composto conforme definido na Fórmula |, em que o referido vírus é um vírus HIV e compreendendo ainda a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais agentes ativos contra um vírus HIV, em que o referido agente ativo contra o vírus HIV é selecionado do grupo que consiste em inibidores da transcriptase reversa de nucleotídeos; inibidores da transcriptase reversa não nucleotídicos; inibidores de protease; inibidores de entrada, fixação e fusão; inibidores de integrase; inibidores de maturação; inibidores de CXCRA4; e inibidores de CCR5. Exemplos desses agentes adicionais são Dolutegravir, Bictegravir e Cabotegravir.

[029]"Sal farmaceuticamente aceitável” refere-se a sais farmaceuticamente aceitáveis derivados de uma variedade de contraíons orgânicos e inorgânicos bem conhecidos na técnica e incluem, apenas a título de exemplo, sódio, potássio, cálcio, magnésio, amônio e tetra-alguilamônio, e quando a molécula contém uma funcionalidade básica, sais de ácidos orgânicos ou inorgânicos, tais como cloridrato, bromidrato, tartarato, mesilato, acetato, maleato e oxalato. Sais adequados incluem aqueles descritos em P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (Eds.), Handbook of Pharmaceutical Salts Properties, Selection, and Use; 2002.

[030]A presente invenção também inclui sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos descritos neste documento. Conforme usado neste documento, “sais farmaceuticamente aceitáveis" referem-se a derivados dos compostos divulgados, em que o composto de origem é modificado pela conversão de uma porção de ácido ou base existente em sua forma de sal. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas sem limitação, sais de ácido orgânico ou mineral de resíduos básicos, tais como aminas; sais alcalinos ou orgânicos de resíduos ácidos, tais como ácidos carboxílicos; e semelhantes. Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção incluem os sais não tóxicos convencionais do composto de origem formado, por exemplo, a partir de ácidos inorgânicos ou orgânicos não tóxicos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser sintetizados a partir do composto de origem que contém uma porção básica ou ácida por métodos químicos convencionais. Geralmente, esses sais podem ser preparados fazendo reagir as formas ácidas ou básicas livres desses compostos com uma quantidade estequiométrica do ácido ou base apropriada em água ou em um solvente orgânico, ou em uma mistura dos dois; geralmente meios não aquosos como éter, etil acetato, etanol, isopropanol ou ACN são preferidos.

[031]A frase “farmaceuticamente aceitável” é empregada aqui para se referir àqueles compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são, dentro do escopo de um bom julgamento médico, adequados para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou complicação, proporcional a uma relação benefício/risco razoável.

[032]Em uma modalidade, a formulação farmacêutica contendo um composto de Fórmula | ou um sal do mesmo é uma formulação adaptada para administração oral ou parentérica. Em outra modalidade, a formulação é uma formulação parentérica de ação prolongada. Em uma modalidade adicional, a formulação é uma formulação de nanopartículas.

[033]A presente invenção refere-se a compostos, composições e composições farmacêuticas que têm utilidade como novos tratamentos para imunossupressão. Embora sem desejar estar vinculado a nenhuma teoria em particular, acredita-se que os presentes compostos sejam capazes de inibir a enzima que catalisa a reação de clivagem do anel pirrol oxidativo de I|-Trp a N- formilquinurenina utilizando espécies de oxigênio molecular ou de oxigênio reativo.

[034]Portanto, em outra modalidade da presente invenção, é provido um método para prevenção e/ou tratamento de HIV; incluindo a prevenção da progressão de AIDS e imunossupressão geral.

EXEMPLOS

[035]Os exemplos a seguir servem para descrever mais completamente a maneira de fazer e usar a invenção descrita acima. Entende-se que esses exemplos não servem de forma alguma para limitar o verdadeiro escopo da invenção, mas são apresentados para fins ilustrativos. Nos exemplos e esquemas sintéticos abaixo, as seguintes abreviações têm os seguintes significados. Se uma abreviação não é definida, ela tem seu significado geralmente aceito.

CAN = acetonitrila AIBN = —azobisisobutironitrila aq. = aquoso uL ou ul = microlitros UM ou uM = micromolar RMN = ressonância magnética nuclear Boc = terc-butoxicarbonil

Br = amplo Cbz = —Benziloxicarbonil CDI = 1,1 -carbonildiimidazol D = dupleto A = deslocamento químico Cc = graus Celsius DCM = diclorometano Dd = dupletode dupletos DHP = Dihidropirano DIAD = diisopropil azodicarboxilato DIEA ou DIPEA = N N-diisopropiletilamina DMAP = 4-(dimetilamino)piridina DMEM = Meiode Eagle Modificado da Dulbeco EtOAc = etilacetato h ou hr = Horas HATU = hexafluorofosfato de 1-[Bis(dimetilamino)metileno]- 1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridínio-3-óxido HCV = Vírusda hepatite C HPLC = cromatografia líquida de alto desempenho Hz = Hertz WU = Unidades Internacionais 1C5o = concentração inibidora a 50% de inibição J = constante de acoplamento (dada em Hz salvo indicação em contrário) LCMS = cromatografia líquida-espectrometria de massa M = Multipleto M = Mola

M+H* = picode espectro de massa principal mais H* MeOH = Metanol Mg = Milgrama Min = Minutos ml = Mililitto mM = Milimolar Mmo! = Milimol MS = espectrode massa MTBE = metilterc-butil éter N = Normal NFK = N-formilguinurenina NBS = N-bromossuccinimida Nm = Nanomolar PE = éterde petróleo Ppm = partespormilhão q.s. = quantidade suficiente SJ = Singleto RT = temperatura ambiente Rf = fator de retardamento sat. = Saturado T = Tripleto TEA = Trietlamina TFA = ácido trifluoroacético TFAA = anidrido trifluoroacético THF = tetrahidrofurano Descrição de Equipamento

[036]Espectros de *H RMN foram registrados em um espectrômetro Bruker

Ascend 400 ou um espectrômetro Varian 400. Deslocamentos químicos são expressos em partes por milhão (ppm, 3 units). Constantes de acoplamento são em unidades de hertz (Hz). Padrões de divisão descrevem multiplicidades aparentes e são designados como s (singleto), d (dupleto), t (tripleto), q (quarteto), quint (quinteto), m (multipleto), br (amplo).

[037]Os espectros de massa de baixa resolução analíticos (MS) foram registrados em águas ACQUITY UPLC com Detectores SQ usando um águas BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 um usando um método de eluição de gradiente.

Solvente A: 0,1% de ácido fórmico (FA) em água; Solvente B: 0,1% FA em acetonitrila; 30% B para 0,5 min seguido por 30-100% B por 2,5 min.

Exemplo 1 e Exemplo 2 = = ão ro V q a G Poa A Ç e cod: ot PooTA; som RR) H, POC ) NaOH cooer KBsr, e gionano GCooe: Cone: & &, Êo com Preparação de etil 2-(1,4-dioxaespiro[4.5]Jdecan-8-ilideno)acetato

[9] GG o

MI OE

[038]A 0ºC, a uma suspensão de NaH (60% em óleo) (6,92 g, 288 mmoles)

em THF anidro (650 ml) sob nitrogênio com agitação vigorosa, foi adicionado o trietil fosfonoacetato (52,5 g, 288 mmoles) em gotas. Após agitado a 0ºC por 30 min, 1,4- ciclohexanodiona monoetileno cetal (41 g, 260 mmoles) em THF (150 ml) foi adicionado em gotas. A mistura resultante foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura de reação foi vertida em NHaCI aq. saturado e extraída com EtOAc. Os produtos orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura, e secos sobre Na2SOa.a. Filtração e concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-380% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (56 g, 95% de rendimento). (ESI) m/z calculado para C12H1804: 226,12. Encontrado: 227,33 (M+1)*.

Preparação de etil 7, 10-dioxadiespirol2. 2.46. 2º] dodecano-1-carboxilato “O COOEt

[039]At 0ºC, a uma suspensão de NaH (60% em óleo) (2,82 g, 70,4 mmoles) em DMF anidro (120 ml) sob nitrogênio com agitação vigorosa, foi adicionado o iodeto de trimetil sulfoxônio (15,5 g, 70,4 mmoles) em porções. Após agitado a 0ºC por 30 min, etil 2-(1 ,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ilideno)acetato (8,76 g, 38,7 mmoles) em DMF (30 ml) foi adicionado em gotas. A mistura resultante foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitada por mais 3 h. A mistura de reação foi vertida em NHACI aq. saturado e extraída com EtOAc. Os produtos orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura e secos sobre Na2SO2.. Filtração e concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 10-30% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (5,2 g, 56% de rendimento). (ESI) m/z calculado para C13H20O4: 240,14. Encontrado: 241,56 (M+1)*.

Preparação de etil 6-oxoespiro[2.5]octano-1-carboxilato

"Oy COOEt

[040]A uma solução de etil 7,10-dioxadiespiro[2.2.4º.2?] dodecano-1- carboxilato (5,0 g, 20,8 mmoles) em acetona (50 ml), foi adicionado 6 N HCI (20 ml, 120 mmoles) em gotas. Após a mistura de reação ser agitada à temperatura ambiente durante a noite, água e EtOAc foram adicionados e as camadas foram separadas. Os produtos orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura e secos sobre Na2SO2. Filtração e concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-20% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (2,6 g, 64% de rendimento). (ES!) m/z calculado para C11H16O3: 196,11. Encontrado: 197,26 (M+1)*. Preparação de etil 6-(((triluorometil)sulfonil)oxi)espiro[2.5]Joct-5-eno-1- carboxilato TO. O COOEt

[041]A -78ºC, a uma solução de etil 6-oxoespiro[2.5]octano-1-carboxilato (2,57 9, 13,11 mmoles) em THF, foi adicionado LIHMDS (13,77 ml, 13,0 mmoles) em gotas durante 30 min e a mistura de reação foi agitada na mesma temperatura por mais 1 h. Em seguida, uma solução de N-fenil bis-(triflurometanossulfonamida) (4,92 g, 13,77 mmoles) em THF (20 ml) foi adicionada à mistura de reação em gotas. Após agitada à temperatura ambiente durante a noite, a mistura de reação foi resfriada bruscamente com NHA.CI aq. e a mistura resultante foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas sequencialmente com água e salmoura, e secas sobre Na2SO2. Filtração e concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-20% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (236 g, 55% de rendimento). (ESI) m/z calculado para Ci2H15F305S: 328,06. Encontrado: 329,42 (M+1)*.

Preparação de etil 6-(quinolin-4-il)espiro[2.5]Joct-5-eno-1-carboxilato K $ COOEt

[042]Uma suspensão de etil 6-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)espiro[2.5]oct-5- eno-1-carboxilato (2,26 g, 6,89 mmoles), ácido quinolin-4-ilborônico (1,79 g, 10,34 mmoles), Pd(PPh3)a (796 mg, 0,689 mmol), Na2CO; (1,83 g, 11,23 mmoles), KBr (902 mg, 7,58 mmoles) em dioxano (20 ml) e água (2 ml) foi agitada a 100ºC por 14 horas sob atmosfera de nitrogênio. Após a mistura de reação ser resfriada para temperatura ambiente, esta foi dividida entre água e EtOAc, e as camadas foram separadas. Os produtos orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura, e secos sobre Na2SO2. Filtração e concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash para gerar o composto do título (1,01 g, 48% de rendimento). (ESI) m/z calculado para C20H21NO2: 307,16. Encontrado: 308,26 (M+1)*.

Preparação de etil 6-(quinolin-4-il)espiro[2.5]Joctano-1-carboxilato COUEt

[043]Uma mistura de etil 6-(quinolin-4-il)espiro[2.5]oct-5-eno-1-carboxilato (500 mg, 1,63 mmol) e 10% Pd/C (0,2 gd) em MeOH (10 ml) foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera de H2 (15 psi) durante a noite. A mistura resultante foi filtrada através de um tampão de Celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para dar o produto bruto que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-30% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (0,4 g, 79% de rendimento) como um óleo marrom. (ESI) m/z calculado para CaoH23NO>2: 309,41. Encontrado: 310,68 (M+1)*.

Preparação de ácido 6-(quinolin-4-il)espiro[2.5]Joctano-1-carboxílico

& E H n FT, o voH

[044]A uma solução de 6-(quinolin-4-il)espiro[2.5]octano-1-carboxilato (0,20 g, 0,65 mmol) em MeOH (6 ml), foi adicionado 1N NaOH aq. (2,6 ml, 2,6 mmoles). Após agitada à temperatura ambiente durante a noite, a mistura resultante foi neutralizada com 1N HCl e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2S0O:, filtrada e concentrada para. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO2a. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por TLC Prep. (5% MeOH em DCM) para gerar o composto do título. Cis-isômero (80 mg, 44% de rendimento): *H RMN (400 MHz, MeOD) 3 8,77 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 8,28 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,03 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,80 — 7,73 (m, 1H), 7,69 — 7,62 (m, 1H), 7,45 (d, J= 4,7 Hz, 1H), 3,62 — 3,51 (m, 1H), 2,23 (td, J = 13,2, 3,5 Hz, 1H), 2,08 — 1,91 (m, 4H), 1,90 — 1,81 (m, 1H), 1,64 — 1,50 (m, 2H), 1,22 — 1,12 (m, 2H), 1,04 — 0,97 (m, 1H). LCMS (ES!) m/z calculado para CisH196NO»>2: 281,14. Encontrado: 282,30 (M+1)*. trans-isômero (30 mg, 16% de rendimento): *H RMN (400 MHz, MeOD) 8,77 (d, J= 4,3 Hz, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,26 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,76 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,65 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 7,48 (d, J= 4,6 Hz, 1H), 3,60 — 3,49 (m, J = 11,6 Hz, 1H), 2,31 — 2,20 (m, J=13,0, 11,4 Hz, 1H), 2,10 — 1,96 (m, J= 21,7, 13,7 Hz, 2H), 1,94 — 1,73 (m, 4H), 1,66 — 1,58 (m, J = 7,5, 5,6 Hz, 1H), 1,17 — 1,08 (m, J = 16,0, 10,5 Hz, 2H), 1,00 — 0,93 (m, J = 7,7, 4,0 Hz, 1H). LCMS (ESI) m/z calculado para Cis8H19NO?>: 281,14. Encontrado: 282,34 (M+1)*.

cl “o Pe E HAS Cc cÉ OH º DP

Preparação de cis-N-(4-clorofenil)-6-(quinolin-4-il)espiro[2.5]Joctano-1- carboxamida (Exemplo 1)

O VW

H Cc Do

[045]A uma solução agitada de cis-ácido 6-(quinolin-4-il)espiro[2.5]octano-1- carboxílico (80 mg, 0,285 mmol) e 4-cloroanilina (44 mg, 0,342 mmol) em DCM (5 ml), foi adicionado DIPEA (56 mg, 0,427 mmol) seguido por HATU (162 mg, 0,427 mmol). Após agitada à temperatura ambiente durante a noite, a mistura de reação foi resfriada bruscamente com salmoura e a mistura resultante foi extraída com DCM (x3). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO2.. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por HPLC Prep. para gerar o composto do título (81 mg, 73% de rendimento). *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 8,87 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,24 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 8,12 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 7,79 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,66 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,33 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 7,24 (d J= 8,7 Hz, 2H), 3,41 (t, J= 11,8 Hz, 1H), 2,22 — 2,14 (m, 1H), 2,13 —- 2,05 (m, 1H), 1,98 — 1,85 (m, 2H), 1,84 — 1,77 (m, 1H), 1,57 — 1,45 (m, 2H), 1,41 — 1,31 (m, 2H), 1,00 — 0,91 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z calculado para C24H23CIN2O0: 390,15. Encontrado: 391,24/393,15 (M/M+2)*. Preparação de trans-N-(4-clorofenil)-6-(quinolin-4-il)espiro[2.5]Joctano-1- carboxamida (Exemplo 2) N=

NE Ho

CI fo:

[046]A uma solução agitada de ácido trans-6-(quinolin-4-il)espiro[2.5]octano-

1-carboxílico (30 mg, 0,107 mmol) e 4-cloroanilina (16 mg, 0,128 mmol) em DCM (2 ml) foi adicionado DIPEA (21 mg, 0,159 mmol) seguido por HATU (60 mg, 0,159 mmol). Após agitado à temperatura ambiente durante a noite, a mistura de reação foi resfriada bruscamente com salmoura e a mistura resultante foi extraída com DCM (x3). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SOa. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por HPLC Prep. para gerar o composto do título (21 mg, 50% de rendimento). *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 8,87 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,12 (dd, JU = 19,7, 8,4 Hz, 2H), 7,71 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,57 (t J=7,2 Hz, 1H), 7,54 — 7,42 (m, 3H), 7,34 (d, J= 4,6 Hz, 1H), 7,32 — 7,27 (m, 2H), 3,47 — 3,39 (m, 1H), 2,26 — 2,19 (m, 1H), 2,12 — 2,00 (m, 3H), 1,84 — 1,75 (m, 3H), 1,58 — 1,54 (m, 1H), 1,35 — 1,32 (m, 1H), 1,48 — 1,43 (m, 1H), 0,97 — 0,92 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z calculado para C24H23CIN2O: 390,15. Encontrado: 391,24/393,15 (M/M+2)*. Exemplo 3 acha = - rt PhAPMGBr q Z-Cu, EO, Bat no Ao, EE Ro Fes POA is On vo o “ a e Teo. Se. " FOR Ta, ar a, sã. — Ney HATU DIPER. " BNE 06 o E N micro-ondas "Oo. Preparação de 8-metileno-1,4-dioxaespiro[4.5]Jdecano o

TA

[047]A 0ºC, uma solução de 1,0 M de terc-butóxido de potássio em THF (499 ml, 499 mmoles) foi lentamente adicionada a uma mistura de brometo de metiltrifenilfosfônio (178 g, 499 mmoles) em THF (450 ml) a 0ºC. Após agitação por 1 h, 1,4-dioxa-espiro[4.5]decan-8-ona (26 g, 166 mmoles) foi adicionado. A mistura resultante foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitada por 3 h. A mistura de reação foi vertida em NHaCI aq. saturada e extraída com EtOAc. Os produtos orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura, e secos sobre Na2SO24. Filtração e concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-30% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (18 g, 70% de rendimento). (ESI) m/z calculado para CaH140>2: 154,10. Encontrado: 155,16 (M+1)*.

Preparação de 8,11 “dioxadiespirols. 2.47. 2tridecan-2-ona “x

O

[048]A uma suspensão de 8-metileno-1,4-dioxaespiro[4.5]decano (10 g, 64,8 mmoles) e zinco-cobre (12,7 g, 194 mmoles) em Et2O0 (100 ml), foi adicionado cloreto de tricloroacetil (8,66 ml, 77,8 mmoles) em gotas à temperatura ambiente. Após agitação à temperatura ambiente por 1 h, MeOH (30 ml) foi adicionado, em seguida, a mistura foi resfriada para -5ºC e poeira de zinco (12,7 g, 194 mmoles) foi adicionada em porção pelo período de 1 h a -5ºC. A mistura de reação foi deixada aquecer para temperatura ambiente e celite foi adicionada. A massa espessa resultante foi filtrada sobre tampão de celite e o bolo foi lavado com excesso de etil acetato. A solução combinada foi lavada com salmoura e seca sobre Na2SO2.. Filtração e concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-30% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (4,4 g, 34% de rendimento). (ES!) m/z calculado para C11H16O03: 196,11. Encontrado: 197,18 (M+1)*.

Preparação de N, N-dibenzil-8,11-dioxadiespiro[3.2.47.2tridecan-2-amina

CS “Ta NBr;

[049]A uma solução de 8,11-dioxadiespiro[3.2.47.2|tridecan-2-ona (1,4 9, 7,14 mmoles) em MeOH (396 ml), foi adicionada dibenzilamina (2,8 g, 14,3 mmoles) sob atmosfera de nitrogênio e a solução resultante foi agitada por 2 horas à temperatura ambiente. Em seguida, NaBH3CN (1,79 g, 28,5 mmoles) foi adicionado em porções e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura resultante foi resfriada bruscamente com H2O, extraída com EtOAc. A camada orgânica combinada foi lavada sequencialmente com água e salmoura, e seca sobre Na2SOa2. Filtração e concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-30% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (2,4 g, 89% de rendimento). (ESI) m/z calculado para Ca5H3:NO>: 377,24. Encontrado: 378,41 (M+1)*. Preparação de 2-(aibenzilamino)espiro[3.Sinonan-7-ona NBnz

[050]A uma solução de N N-dibenzil-8,11-dioxadiespiro[3.2.47.2]tridecan-2- amina (1,05 g, 2,8 mmoles) em acetona (10 ml), foi adicionado 12 N HCI (2 ml, 24 mmoles) em gotas. Após a mistura de reação ser agitada por 2 h, água e EtOAc foram adicionados e as camadas foram separadas. Os produtos orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura, e secos sobre Na2SO.a. Filtração e concentração em vácuo geraram o composto do título (0,50 g, 91% de rendimento). (ES!) m/z calculado para Ca3H27NO: 333,21. Encontrado: 334,37 (M+1)*. Preparação de 2-(dibenzilamino)espiro[3.5]Jnon-6-en-7-il trifluorometanossulfonato TIO. O NBr;

[051]JA -78ºC, a uma solução de N N-dibenzil-8,11- dioxadiespiro[3.2.47.2]tridecan-2-amina (600 mg, 1,80 mmol) e NHenil bis- (triflurometanossulfonamida) (964 mg, 2,70 mmoles) em THF, foi adicionado LIHMDS (2,7 ml, 2,70 mmoles) em gotas durante 30 min e a mistura de reação foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura de reação foi resfriada bruscamente com NHaCI aq. e a mistura resultante foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas sequencialmente com água e salmoura, e secas sobre Na2SO2.. Filtração e concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-10% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (728 ma, 87% de rendimento). (ESI) m/z calculado para Ca4H26F3NO3S: 465,16. Encontrado: 466,24 (M+1)*.

Preparação de N,N-dibenzil-7-(quinolin-4-il)espiro[3.5]non-6-en-2-amina q ra NBn2

[052]Uma suspensão de 2-(dibenzilamino)espiro[3.5]non-6-en-7-il triluorometanossulfonato (728 mg, 1,56 mmol), ácido quinolin-4-ilborônico (386 mg, 2,35 mmoles), Pd(PPh3)a (180 mg, 0,156 mmol), NaBr (177 mg, 1,72 mmol) em dioxano (10 ml) e água (2 ml) foi agitada sob atmosfera de nitrogênio a 100ºC por 14 horas. Após a mistura de reação ser resfriada para temperatura ambiente, esta foi dividida entre água e EtOAc, e as camadas foram separadas. Os produtos orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura, e secos sobre Na2SO.. Filtração e concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash para gerar o composto do título (580 mg, 83% de rendimento). (ES!) m/z calculado para C32H32N>2: 444,26. Encontrado: 445,33 (M+1)*.

Preparação de 7-(1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)espiro[3.5]Jnonan-2-amina

NH>

[053]Uma suspensão de N N-dibenzil-7-(quinolin-4-il)espiro[3.5]non-6-en-2- amina (580 mg, 1,380 mmol) e 10% Pd/C (290 mg) em EtOAc (10 ml) foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera de H2 (15 psi) durante a noite. A mistura resultante foi filtrada através de um tampão de Celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para dar o produto bruto que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-50% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (200 mg, 57% de rendimento) como um óleo marrom. (ESI) m/z calculado para CisHa6N2: 270,21. Encontrado: 271,39 (M+1)*.

Preparação de 4-cloro-N-(7-(1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)espiro[3.5]Jnonan- 2-il)benzamida (U26883-059-1) “o.

C [054)A uma solução agitada de 7-(1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4- il)espiro[3.5]nonan-2-amina (100 mg, 0,369 mmol) e ácido 4-clorobenzoico (86,8mg, 0,555 mmol) em DCM (2 ml), foi adicionado DIPEA (143 mg, 1,107 mmol) seguido por HATU (211 mg, 0,555 mmol). Após agitada à temperatura ambiente por 2 h, a mistura de reação foi resfriada bruscamente com salmoura e a mistura resultante foi extraída com DCM (x3). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SOs. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel (0 — 50% EA em PE) para gerar o composto do título (43 mg, 29% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calculado para CasH296CIN2O: 408,20. Encontrado: 409,43/411,41 (M/M+2)*.

Preparação de 4-cloro-N-(7-(quinolin-4-il)espiro[3.5Jnonan-2-il)benzamida (Exemplo 3) o o Cc [055JA uma solução agitada de 4-cloro-N-(7-(1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4- il)espiro[3.5]nonan-2-il)benzamida (43 mg, 0,105 mmol) em DME (2 ml), foi adicionado 2,3,5,6-tetraclorociclohexa-2,5-dieno-1,4-diona (21 mg, 0,084 mmol) e a mistura resultante foi agitada a 80ºC por micro-ondas por 1,5 h. A mistura de reação foi dividida entre etil acetato e água. A camada orgânica foi separada e lavada com Na2CO; e salmoura, seca sobre Na2SO4. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por HPLC Prep. para gerar o composto do título (12 mg, 28% de rendimento). *H RMN (400 MHz, DMSO) 3 8,82 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,70 (d, J=7,4 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,02 (d, Jy = 8,2 Hz, 1H), 7,89 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,75 (t, J= 7,6 Hz, 1H), 7,63 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,41 (d J= 4,6 Hz, 1H), 4,46 — 4,38 (m, 1H), 3,38 — 3,32 (m, 1H), 2,40 — 2,34 (m, 1H), 2,17 -2,10 (m, 1H), 1,98 — 1,90 (m, 2H), 1,88 — 1,62 (m, 7H), 1,58 — 1,50 (m, 1H). LCMS (ES!) ml/z calculado para CasH2sCIN20: 404,17. Encontrado: 405,38/407,35 (M/M+2)*.

Exemplo 4 Do, MATE Nes. 2; micro-ondas Ns.

Preparação de 5-cloro-N-(7-(1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)espiro[3.5]Jnonan- 2-i)tiofeno-2-carboxamida o a [0565/A uma solução agitada de 7-(1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4- il)espiro[3.5]nonan-2-amina (25 mg, 0,094 mmol) e ácido 5-clorotiofeno-2-carboxílico (15 mg, 0,094 mmol) em DCM (2 ml), foi adicionado DIPEA (36 mg, 0,28 mmol) seguido por HATU (36 mg, 0,094 mmol). Após agitada à temperatura ambiente por 2 h, a mistura de reação foi resfriada bruscamente com salmoura e a mistura resultante foi extraída com DCM (x3). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO2. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel (0 — 50% EA em PE) para gerar o composto do título (23 mg, 59% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calculado para C23H27CIN20S: 414,15. Encontrado: 415,36/417,32 (M/M+2)*.

Preparação de B5-cloro-N-(7-(quinolin-4-il)espiro[3.5Jnonan-2-il)tiofeno-2- carboxamida (Exemplo 4)

E ” o o:

[057]A uma solução agitada de 5-cloro-N-(7-(1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4- il)espiro[3.5]nonan-2-il)tiofeno-2-carboxamida (23 mg, 0,055 mmol) em DME (2 ml), foi adicionado 2,3,5,6-tetraclorociclohexa-2,5-dieno-1,4-diona (11 mg, 0,044 mmol) e a mistura resultante foi agitada a 80ºC por micro-ondas por 1,5 h. A mistura de reação foi dividida entre etil acetato e água. A camada orgânica foi separada e lavada com Na2CO; e salmoura, seca sobre Na2SO,s. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por HPLC Prep. para gerar o composto do título (12 mg, 53% de rendimento). *H RMN (400 MHz, DMSO) 3 8,82 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,70 (d J=7,4

Hz, 1H), 8,22 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,02 (d, J =7,8 Hz, 1H), 7,75 (t, J=7,1 Hz, 1H), 7,68 (d, J= 4,0 Hz, 1H), 7,63 (t J =7,1 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,19 (d, J= 4,0 Hz, 1H), 4,36 (dd, J = 16,1, 8,2 Hz, 1H), 3,39 — 3,35 (m, 1H), 2,38 — 2,33 (m, 1H), 2,16 — 2,10 (m, 1H), 1,96 — 1,88 (m, 2H), 1,86 — 1,74 (m, 4H), 1,72 — 1,52 (m, 4H). LCMS (ES!) m/z calculado para C23H23CIN2O0S: 410,12. Encontrado: 411,30/413,25 (M/M+2)*. Exemplo 5 ou, a ha, e Shao E A EBTREO 9 CEIOAS 9 OTTO "El NaH, THE “O EtoAc DE acetona Th t Pra Mat E rã HP UNOS, THF Pa(PPhila. NS;0O; ) EtOA: 'oEt OF! Ns, dioxano, 100ºC x oe: J 1 es ) &., o O CX RA y o Roo MAO ET me P Preparação de etil 2-(8,11-dioxadiespiro[3.2.47.24]tridecan-2-ilideno)acetato o “at SS SOEt

[058]A 0ºC, a uma suspensão de NaH (153 mg, 3,82 mmoles, 60% em óleo) em THF anidro (3 ml) sob nitrogênio com agitação vigorosa, foi adicionado o trietil fosfonoacetato (972 mg, 4,34 mmoles) em gotas. Após agitado a 0ºC por 30 min, 8,11- dioxadiespiro[3.2.47.2]tridecan-2-ona (550 mg, 2,55 mmoles) em THF (2 ml) foi adicionado em gotas. A mistura resultante foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura de reação foi vertida em NHaCI aq.

saturado e extraída com EtOAc. Os produtos orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura, e secos sobre Na>2SO.a. Filtração e concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-380% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (600 mg, 88% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calculado para C1sH2204: 266,15. Encontrado: 267,27 (M+1)*.

Preparação de etil 2-(8,1 T-dioxadiespiro[3.2.4”. 2tridecan-2-il)acetato

AA Et

[059]Uma “mistura de etil 2-(8/11-dioxadiespiro[3.2.47.2tridecan-2- ilideno)acetato (600 mg, 2,25 mmoles) e 10% Pd/C (300 mg) em EtOH (10 ml) foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera de H2 (15 psi) durante a noite. À mistura resultante foi filtrada através de um tampão de Celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para gerar o composto do título (0,59 g, 86% de rendimento), que foi usado na etapa seguinte sem purificação. LCMS (ESI) m/z calculado para CisH2404: 268,17. Encontrado: 269,43 (M+1)*.

Preparação de etil ?-(T-oxoespirol3.Sinonan-2-i)acetato

TA

DEI [060)A uma solução de etil 2-(8,11-dioxadiespiro[3.2.47.2]tridecan-2- il)acetato (0,59 g, 2,20 mmoles) em acetona (10 ml), foi adicionado 1 N HCI (11 ml, 11,0 mmoles) em gotas. Após a mistura de reação ser agitada à temperatura ambiente durante a noite, água e EtOAc foram adicionados e as camadas foram separadas. Os produtos orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura, e secos sobre Na2SO2. Filtração e concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-30% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (468 mg, 95% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calculado para

C13H2003: 224,14. Encontrado: 225,28 (M+1)*. Preparação de etil 2-(7-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)espiro[3.5]Jnon-6-en-2- il)acetato TfO. o Va,

[061]JA -78ºC, a uma solução de N N-dibenzil-8,11- dioxadiespiro[3.2.47.2]tridecan-2-amina (340 mg, 1,52 mmol) e N-fenil bis- (triflurometanossulfonamida) (704 mg, 1,97 mmol) em THF (8 ml), foi adicionado LiHMDS (1,97 ml, 1,97 mmol) em gotas durante 30 min e a mistura de reação foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura de reação foi resfriada bruscamente com NH.CI aq. e a mistura resultante foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas sequencialmente com água e salmoura, e secas sobre Na2SO.. Filtração e concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-10% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (220 mg, 41% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calculado para C1a4H19F305S: 356,09. Encontrado: 357,40 (M+1)*.

Preparação de etil 2-(7-(quinolin-4-il)espiro[3.5]non-6-en-2-il) acetato

A o DE!

[062]Uma suspensão de etil 2-(7-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)espiro[3.5]non-6- en-2-il)acetato (220 mg, 0,62 mmol), ácido quinolin-4-ilborônico (115 mg, 0,70 mmol), Pd(PPh3)a (54 mg, 0,047 mmol), NaBr (69 mg, 0,67 mmol) e Na2CO;3 (148 mg, 1,40 mmol) em dioxano (4,0 ml) e água (1,0 ml) foi agitada sob atmosfera de nitrogênio a 100ºC por 14 horas. After a mistura de reação ser resfriada para temperatura ambiente, esta foi dividida entre água e EtOAc e as camadas foram separadas. Os produtos orgânicos foram lavados sequencialmente com água e salmoura, e secos sobre Na2SO2. Filtração e concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash para gerar o composto do título (71 mg, 34% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calculado para C22H25NO»2: 335,19. Encontrado: 336,35 (M+1)*.

Preparação de etil 2-(7-(quinolin-4-i)espiro[3.5]Jnonan-2-il) acetato “o o Aos,

[063]Uma mistura de etil 2-(7-(quinolin-4-il)espiro[3.5]non-6-en-2-il)acetato (71 mg, 0,21 mmol) e 10% Pd/C (40 mg) em EtOH (3,0 ml) foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera de H2 (15 psi) durante a noite. A mistura resultante foi filtrada através de um tampão de Celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para dar o produto bruto que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-50% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (63 mg, 89% de rendimento) como um óleo marrom. LCMS (ESI) m/z calculado para C22H27NO>2: 337,20. Encontrado: 338,27 (M+1)*.

Preparação de ácido 2-(7-(quinolin-4-il)espiro[3.5]Jnonan-2-il) acético

A o

OH

[064]A uma solução de etil 2-(7-(quinolin-4-il)espiro[3.5]nonan-2-il) acetato (63 mg, 0,19 mmol) em MeOH (2 ml), foi adicionado 1N NaOH aq. (0,5 ml). Após agitada à temperatura ambiente por 2h, a mistura resultante foi neutralizada com 1N HCl e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO:, filtrada e concentrada para dar o composto do título (41 mg, 70% de rendimento) como um sólido pálido, que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. LCMS (ESI) m/z calculado para CaoH23NO>2: 309,17. Encontrado: 310,20

(M+1)*.

Preparação de N-(4-clorofenil)-2-(7-(quinolin-4-il)espiro[3.5]Jnonan-2- il)acetamida (Exemplo 5) ns o. o NS

N

[065]A uma solução agitada de ácido 2-(7-(quinolin-4-il)espiro[3.5]nonan-2- iN)acético (45 mg, 0,145 mmol) e 4-cloroanilina (18,5 mg, 0,145 mmol) em DCM (2 ml), foi adicionado DIPEA (75 uL, 0,435 mmol) seguido por HATU (55 mg, 0,145 mmol). Após agitada à temperatura ambiente durante a noite, a mistura de reação foi resfriada bruscamente com salmoura e a mistura resultante foi extraída com DCM (x3). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO2.. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por HPLC Prep. para gerar o composto do título (20 mg, 33% de rendimento). *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 9,99 (s, 1H), 8,80 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,21 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 8,01 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,76 — 7,71 (m, 1H), 7,66 — 7,57 (m, 3H), 7,38 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 2,68 — 2,61 (m, 1H), 2,48 — 2,42 (m, 3H), 2,16 — 2,10 (m, 1H), 1,99 — 1,89 (m, 2H), 1,80 — 1,69 (m, 3H), 1,668 — 1,467 (m, 6H). LOCMS (ESI) m/z calculado para Ca6H27CIN2O0: 418,18. Encontrado: 419,32/421,27 (M/M+2)*.

Exemplo 6 GG ram me O ex O a. as te von Ho . PRATA, LHMOS moK ATC Ta e Os Mostonk aos me Tas õ Y 8 FEB ARCOS “O, Ta Teo” dioxanotião, 1000 Px rs q ' na. é S o Q RATUDEA " TE a õ o eo Preparação de 8,11-dioxadiespiro[3.2.47.2tridecan-2-ol

O “O 'oH

[066]A uma solução de 8, 11-dioxadiespiro[3.2.47.2]tridecan-2-ona (4 g, 20,4 mmoles) em MeOH (100 ml), foi adicionado NaBHa (1,54 g, 40,8 mmoles) em porções. Após agitada à temperatura ambiente por 30 min, a mistura foi dividida entre etil acetato e NHaCI aq. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre Na2SO2. Filtração e concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-30% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (3,6 g, 34% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calculado para C11H1803: 198,13. Encontrado: 199,21(M+1)*. Preparação de 8,11-dioxadiespiro[3.2.47.2Itridecan-2-il metanossulfonato

CS “Ta OMs

[067]A O ºC, a uma solução de 8,11-dioxadiespiro[3.2.47.2tridecan-2-ol (3,6 g, 18,2 mmoles) e TEA (7,6 ml, 54,5 mmoles) em DCM (40 ml), foi adicionado MsCI (2,8 ml, 36,4 mmoles) em gotas. Após agitada à temperatura ambiente por 1 hora, a mistura de reação foi dividida entre DCM e água. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO3a, concentrada em vácuo para dar um produto bruto, que foi usado na etapa seguinte sem purificação (4,0 g, 80% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calculado para C1i2H20O05S: 276,10. Encontrado: 277,36 (M+1)*. Preparação de 8,11 aloxadiespíro[S.2.4”. 2Itridecano-2-carbonitrila “O

CN

[068]Uma suspensão de 8,1 1-dioxadiespiro[3.2.47.2]tridecan-2-il metanossulfonato (1,56 g, 5,64 mmoles), KCN (551 mg, 8,46 mmoles), 18-C-6 (1,49 g, 5,684 mmoles) e Nal (845 mg, 5,684 mmoles) em DMSO (15 ml) foi agitada a 130ºC por 2 horas. Após resfriada para temperatura ambiente, a mistura de reação foi dividida entre etil acetato e água. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO2u, concentrada em vácuo para dar um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-30% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (500 mg, 43% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calculado para C1i2H17NO?>z: 207,13. Encontrado: 208,32(M+1)*. Preparação de ácido 1-oxoespirol3 SInonano-2-carboxílico 2

O

[069]A uma solução de 8,11-dioxadiespiro[3.2.47.2]tridecano-2-carbonitrila (500 mg, 2,41 mmoles) em EtoOH (2,4 ml), foi adicionado IN LiOH (24 ml, 2,41 mmoles) e a mistura foi agitada a 90ºC por 2 horas. Após resfriada para temperatura ambiente, a mistura de reação foi acidificada com 1N HCI para pH 3-4 e dividida entre etil acetato e água. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SOa, concentrada em vácuo. O produto bruto resultante foi dissolvido em THF (5 ml) e tratado com 2 N HCl aq. (4 ml). Após agitada à temperatura ambiente por 4 horas, a mistura de reação foi concentrada e o produto bruto foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-50% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (360 mg, 69% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calculado para C1oH1403: 182,09. Encontrado: 183,30(M+1)*. Preparação de metil 7-oxoespirolS.SInonano-2-carboxilato a. o

[070]A uma suspensão de ácido 7-oxoespiro[3.5]nonano-2-carboxílico (380 mg, 2,08 mmoles), K2CO;3 (862 mg, 6,24 mmoles) em acetona (4 ml), foi adicionado iodeto de metal (1,48 g, 10,4 mmoles). Após agitada à temperatura ambiente durante a noite, a mistura de reação foi filtrada através de celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para dar um produto bruto, que foi purificado por cromatografia de coluna (sílica gel, 0-30% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (360 mg, 88% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calculado para C11H1603: 196,11. Encontrado: 197,28(M+1)*. Preparação de metil 7-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)espiro[3.5]non-6-eno-2- carboxilato TIO. a. [e

[071]A -78ºC, a uma solução de metil 7-oxoespiro[3.5]nonano-2-carboxilato (234 mg, 1,19 mmol) e N-fenil bis-(triflurometanossulfonamida) (639 mg, 1,79 mmol) em THF, foi adicionado 1M LIHMDS (1,79 ml, 1,79 mmol) em gotas por 30 min. À mistura foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitada durante a noite. À mistura de reação foi resfriada bruscamente com NHaCI aq. e a mistura resultante foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas sequencialmente com água e salmoura, e secas sobre Na2SO.a. Filtração e concentração em vácuo deram um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-10% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (340 mg, 87% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calculado para Ci2H15F305sS: 328,06. Encontrado: 329,27 (M+1)*.

Preparação de metil 7-(6-fluoroquinolin-4-il)espiro[3.5]non-6-eno-2- carboxilato

F É | Ox o

[072]Uma suspensão de metil 7-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)espiro[3.5]non-6- eno-2-carboxilato (340 mg, 1.03 mmol), ácido (6-fluoroquinolin-4-il)borônico (339 mg, 1,24 mmoles), Pd(PPh3)a (239 mg, 0,21 mmol), KBr (112 mg, 1,03 mmol) em dioxano (4 ml) e água (1 ml) foi agitada a 100ºC sob atmosfera de nitrogênio por 14 horas. Após resfriada para temperatura ambiente, a mistura de reação foi dividida entre água e EtOAc e as camadas foram separadas. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO2, concentrada em vácuo para dar um produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash para gerar o composto do título (68 mg, 20% de rendimento). LCMS (ESI) m/z calculado para CaoH20FNO»>: 325,15. Encontrado: 326,37 (M+1)*.

Preparação de metil 7-(6-fluoroquinolin-4-il)espiro[3.5Jnonano-2-carboxilato

F É ]

OH o

[073]Uma suspensão de metil 7-(6-fluoroquinolin-4-il)espiro[3.5]non-6-eno-2- carboxilato (68 mg, 0,207 mmol) e 10% Pd/C (34 mg) em MeOH (2 ml) foi agitada por minutos à temperatura ambiente sob atmosfera de H2 (15 psi). A mistura resultante foi filtrada através de um tampão de celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para dar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 0-50% EtOAc em PE) para gerar o composto do título (40 mg, 59% de rendimento) como um óleo incolor. LCMS (ESI) m/z calculado para C2oH22FNO;>2: 327,16. Encontrado: 328,34 (M+1)*. Preparação de ácido 7(6fluoroquinolin-4-i) espiro]S. S]nonano-2-carboxílico N y Ze

OH o [074)]A uma solução de 7-(6-fluoroquinolin-4-il)espiro[3.5])nonano-2- carboxilato (40 mg, 0,122 mmol) em MeOH (1ml), foi adicionado 1N LiOH aq. (0,3 ml). Após agitada à temperatura ambiente durante a noite, a mistura resultante foi neutralizada com 1N HCI para pH 6-7 e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2S0O:, filtrada e concentrada para dar o composto do título (20 mg, 52% de rendimento) como um sólido pálido, que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. LCMS (ESI) m/z calculado para C1sH20FNO;»: 313,15. Encontrado: 314,23 (M+1)*. Preparação de N-(4-clorofenil)-7-(6-fluoroquinolin-4-il)espiro[3.5]Jnonano-2- carboxamida (Exemplo 6)

F >

N DO, [075)A uma solução agitada de ácido 7-(6-fluoroquinolin-4- iespiro[3.5]nonano-2-carboxílico (16 mg, 0,051 mmol) e 4-cloroanilina (7,8 mg, 0,061 mmol) em DCM (1 ml), foi adicionado DIPEA (19 uL, 0,153 mmol) seguido por HATU (29 mg, 0,076 mmol). Após agitada à temperatura ambiente durante a noite, a mistura de reação foi resfriada bruscamente com salmoura e a mistura resultante foi extraída com DCM (x3). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SOs. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por HPLC Prep. para gerar o composto do título (3 mg, 14% de rendimento). *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 8,81 (d, Jy = 4,2 Hz, 1H), 8,19 — 8,12 (m, 1H), 7,66 (dd, J = 10,5, 2,6 Hz, 1H), 7,56 — 7,43 (m, 3H), 7,31 — 7,27 (m, 3H), 7,07 (s, 1H), 3,17 — 3,06 (m, 2H), 2,23 — 2,19 (m, 2H), 2,05 (dd, J = 21,4, 9,3 Hz, 3H), 1,96 — 1,92 (m, 1H), 1,88 — 1,85 (m, 1H), 1,69 — 1,56 (m, 5H). LCMS (ESI) m/z calculado para CaosH24CIFN2O: 422,16. Encontrado: 423,40/425,37 (M/M+2)*.

Ensaio de MS RapidFire para PBMC de IDO1

[076]Os compostos da presente invenção foram testados por meio de ensaios celulares de alto rendimento, utilizando detecção de quinurenina por espectrometria de massa e citotoxicidade como pontos finais. Para os ensaios de espectrometria de massa e citotoxicidade, células mononucleares de sangue periférico humano (PBMC) (PBOO3F; AlICelIs&, Alameda, CA) foram estimuladas com interferon-y humano (IFN- y) (Sigma-Aldrich Corporation, St. Louis, MO) e lipopolissacarídeo de Salmonella minnesota (LPS) (Invivogen, San Diego, CA) para induzir a expressão de indoleamina 2,3-dioxigenase (IDO1I). Os compostos com propriedades inibidoras de IDO1 reduziram a quantidade de quinurenina produzida pelas células pela via catabólica de triptofano. A toxicidade celular devido ao efeito do tratamento composto foi medida usando o reagente CellTiter-GloO& (CTG) (Promega Corporation, Madison, WI), que se baseia na detecção luminescente de ATP, um indicador de células metabolicamente ativas.

[077]Na preparação para os ensaios, os compostos de teste foram diluídos em série 3 vezes em DMSO a partir de uma concentração máxima típica de 1 mM ou mM e plaqueados a 0,5 uL em placas de 384 cavidades, de poliestireno, fundo claro, tratadas com cultura de tecido e com tampas (Greiner Bio-ona, Kremsmúnster, Áustria) para gerar curvas de resposta de dose de 11 pontos. As cavidades de baixo controle (0% de quinurenina ou 100% de citotoxicidade) continham 0,5 ul de DMSO na presença de PBMCs não estimulados (-IFN-y/-LPS) para o ensaio de espectrometria de massa ou 0,5 ul de DMSO na ausência de células para o ensaio de citotoxicidade, e cavidades de alto controle (100% de quinurenina ou 0% de citotoxicidade) continham 0,5 ul de DMSO na presença de PBMCs estimuladas (+HIFN-y/+LPS) para ambos os ensaios de espectrometria de massa e citotoxicidade.

[078]Estoques congelados de PBMCs foram lavados e recuperados em meio RPM! 1640 (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA) suplementado com 10% v/v de soro fetal bovino inativado por calor (FBS) (Thermo Fisher Scientific, Inc. , Waltham, MA) e solução antibiótica de penicilina-estreptomicina 1X (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA). As células foram diluídas para 1.000.000 células/ml no meio RPMI 1640 suplementado. 50 ul da suspensão de células para o ensaio de espectrometria de massa, ou apenas o meio para o ensaio de citotoxicidade, foram adicionados às cavidades de baixo controle, nas placas de composto de 384 cavidades previamente preparadas, resultando em 50.000 células/cavidade ou O célula/cavidade, respectivamente. IFN-y e LPS foram adicionados à suspensão celular remanescente nas concentrações finais de 100 ng/ml e 50 ng/ml, respectivamente, e 50 ul das células estimuladas foram adicionadas a todas as cavidades restantes nas placas de composto de 384 cavidades. As placas, com tampas, foram então colocadas em uma incubadora umidificada com 5% de CO2, a 37ºC, por 2 dias.

[079]Após a incubação, as placas de 384 cavidades foram removidas da incubadora e deixadas equilibrar à temperatura ambiente por 30 minutos. Para o ensaio de citotoxicidade, CellTiter-Glo& foi preparado de acordo com as instruções do fabricante e 40 yL foram adicionados a cada cavidade da placa. Após uma incubação de vinte minutos à temperatura ambiente, a luminescência foi lida em um EnVisionO Multilabel Reader (PerkinElmer Inc., Waltham, MA). Para o ensaio de espectrometria de massa, 10 ul de sobrenadante de cada cavidade das placas tratadas com composto foram adicionados a 40 ul de acetonitrila, contendo 10 uM de um padrão interno para normalização, em placas de 384 cavidades, de polipropileno e fundo em V (Greiner Bio-One, Kremsmúnster, Áustria) para extrair os analitos orgânicos. Após centrifugação a 2000 rpm por 10 minutos, 10 ul de cada cavidade das placas de extração de acetonitrila foram adicionados a 90 ul de H2O destilado e estéril em placas de 384 cavidades, de polipropileno e fundo em V para análise de quinurenina e do padrão interno na RapidFire 300 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) e 4000 QTRAP MS (SCIEX, Framingham, MA). Os dados de MS foram integrados usando o software RapidFire Integrator da Agilent Technologies, e os dados foram normalizados para análise como uma proporção de quinurenina para o padrão interno.

[080]Os dados para respostas à dose no ensaio de espectrometria de massa foram plotados como % de inibição de IDO1 versus concentração de composto após normalização usando a fórmula 100-(100*((U-C2)/(C1-C2))), em que U era o valor desconhecido, C1 era a média das cavidades de alto controle (100% de quinurenina; 0% de inibição) e C2 era a média das cavidades de baixo controle (0% de quinurenina; 100% de inibição). Os dados para respostas de dose no ensaio de citotoxicidade foram plotados como % de citotoxicidade versus concentração de composto após normalização usando a fórmula 100-(100*((U-C2)/(C1-C2))), em que U era o valor desconhecido, C1 era a média das cavidades de alto controle (0% de citotoxicidade)

e C2 era a média das cavidades de baixo controle (100% de citotoxicidade).

[081]O ajuste de cumva foi realizado com a equação y=A+((BA)/(1+(10xX/10C)D)), onde A era a resposta mínima, B era a resposta máxima, C era o log(XC50) e D era a encosta da colinao declive da inclinação. Os resultados para cada composto de teste foram registrados como valores de plC50 para o ensaio de espectrometria de massa e como valores de pCC50 para o ensaio de citotoxicidade (-C na equação acima).

PBMC plCso PBMC TOX plCs5o Lo 2 EB 3 71 <5 4 77 <5 Leg EB PK de Rato dose Ratos Han Wistar Parâmetros PK 1 WN CL (Uhr/kg) 0.215 (n=3) Vss (Ukg) 1.58 Tue (h) 5.36 AUCst(hr"ng/mL) 4446 AUC ne(hr*ng/mL) 4657 MRTwne (ho) 7.35 3 PO Tmax (1) 1.00 3.00 (n=3) Cmax (NI/ML) 1001 1139 Tvz (hn) 7.16 5.89 AUCst (hPNg/ML) 12307 14398 AUC nF(hrºng/ml) 14021 15507 F (%) 60.2 n/a

Claims (14)

REIVINDICAÇÕES

1. Composto de Fórmula | Q'— Ar a (CH2)N Fórmula | ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, CARACTERIZADO pelo fato de que: cada n é independentemente 2, 1 ou O (isto é, é ausente); QI é -C(O)NH-, NHC(O)-, ou um heterociclo de 5-9 membros em que o referido heterociclo contém 1-3 heteroátomos selecionados de O, S e N, e em que o referido heterociclo pode opcionalmente ser substituído por 1-4 substituintes selecionados de halogênio, OH, C1-3alquil, OC1-3alquil, C1-3fluoroalquil, CN e NH>2; Ar' é Cs.6aril, ou heteroaril de 5-9 membros, em que aril e heteroaril incluem biciclos e heteroaril contém 1-3 heteroátomos selecionados de O, S e N, e em que Ar! pode opcionalmente ser substituído por 1-4 substituintes selecionados de halogênio, OH, C1-3alquil, OC1-3alquil, C1-3fluoroalquil, CN e NH2; e Ar? é Cs-9aril, ou heteroaril de 5-9 membros, em que heteroaril contém 1-3 heteroátomos selecionados de O, S e N, e em que Ar' pode opcionalmente ser substituído por 1-4 substituintes selecionados de halogênio, OH, C13alquil, OC1- 3alquil, C1-3fluoroalquil, CN e NH>2.

2. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que Ar' é quinolina, isoquinolina, quinazolina, quinoxalina, indol, azaindol, benzodiazol, fenil, piridil, diazol ou pirimidina, e em que Ar' pode opcionalmente ser substituído por um substituinte selecionado de halogênio, OH, C1-3alquil, OC1-3alquil, C13fluoroalquil, CN e NH>2.

3. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que Ar' é quinolina, isoquinolina ou indol, e pode opcionalmente ser substituído por um substituinte selecionado de halogênio, OH, Ci-3alquil, OC13alquil, C1- sfluoroalquil, CN e NH2.

4. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que Ar é quinolina opcionalmente substituído por um halogênio.

5. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-4, CARACTERIZADO pelo fato de que Ar? é fenil ou tiofeno, opcionalmente substituído por um halogênio.

6. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5.

7. Método de tratar uma doença ou condição que se beneficiaria da inibição de IDO1, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende a etapa de administração de uma composição, de acordo com a reivindicação 6.

8. Método, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que, na referida doença ou condição, biomarcadores de atividade de IDO são elevados.

9. Método, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que os referidos biomarcadores são quinurenina de plasma ou a razão de quinurenina de plasma/triptofano.

10. Método, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que a referida doença ou condição é infecção viral crônica; infecções bacterianas crônicas; câncer; sepse; ou um distúrbio neurológico.

11. Método, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato de que as referidas infecções virais crônicas são aquelas que envolvem HIV, HBV ou HCV; as referidas infecções bacterianas crônicas são tuberculose ou infecção articular protética; e os referidos distúrbios neurológicos são distúrbio depressivo maior, doença de Huntington ou doença de Parkinson.

12. Método, de acordo com a reivindicação 11, CARACTERIZADO pelo fato de que a referida doença ou condição é inflamação associada a infecção por HIV; infecções virais crônicas envolvendo vírus da hepatite B ou vírus da hepatite C; câncer; ou sepse.

13. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, CARACTERIZADO pelo fato de ser para uso no tratamento de uma doença ou condição que se beneficiaria da inibição de IDO1.

14. Uso de um composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, CARACTERIZADO pelo fato de que, na fabricação de um medicamento para tratar uma doença ou condição que se beneficiaria da inibição de IDO1.

Figura 1 Perfis de tempo médio de concentração de plasma do Exemplo 1 após uma dose IV de 1 mg/kg e uma dose PO de 5 mg/kg (N=6) em ratos SD machos em jejum 100000 —— IV-1 mg/kg PO5 = 10000 TEMPOSTOIN ê 1000 > 3 pio a e a mc z AAA ao 8 To — 100 bia a A 3 10 8 1 0 9 4 8 12 16 20 24 Tempo (h)

Figura 2 Perfil Médio Plasmático de Ratos de Dosagem Oral, Exemplo 4

10600 ã 1000 q 3 E 108 8 $ : 10

& E & 3 18 FE 22 Tempo (h)