BR112020011707A2 - moduladores de indolamina 2,3-dioxigenase - Google Patents

Abstract

São fornecidos compostos inibidores de IDO1 de Fórmula I e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, suas composições farmacêuticas, seus métodos de preparação e métodos para seu uso na prevenção e/ou tratamento de doenças. Fórmula I em que R1 é um grupo que tem a Fórmula II Fórmula II

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MODULADORES DE INDOLAMINA 2,3-DIOXIGENASE".

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] Compostos, métodos e composições farmacêuticas para a prevenção e/ou tratamento de HIV; incluindo a prevenção da progressão de AIDS e imunossupressão geral, através da administração de determinados compostos de indolamina 2,3-dioxigenase em quantidades terapeuticamente eficazes. São descritos também métodos para a preparação de tais compostos e métodos de uso dos compostos e composições farmacêuticas dos mesmos.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] A indolamina-2,3-dioxigenase 1 (IDO1) é uma enzima que contém heme que catalisa a oxidação do anel de indol do triptofano para produzir N-formil quinurenina, a qual é rápida e constitutivamente convertida em quinurenina (Kyn) e uma série de metabólitos a jusante. A IDO1 é a etapa limitativa de taxa desta via da quinurenina do metabolismo de triptofano e a expressão de IDO1 é indutível no contexto de inflamação. Os estímulos que induzem à IDO1 incluem produtos virais ou bacterianos ou citocinas inflamatórias associadas à infecção, tumores ou danos tecidual estéril. A Kyn e vários metabólitos a jusante são imunossupressores: a Kyn é antiproliferativa e pró-apoptótica para células T e células NK (Munn, Shafizadeh et al. 1999, Frumento, Rotondo et al. 2002), enquanto que metabólitos, tais como ácido 3- hidroxi-antranílico (3-HAA), ou o produto de dimerização oxidativa de 3- HAA, ácido cinabarínico (CA), inibem a função de fagócitos (Sekkai, Guittet et al. 1997) e induzem à diferenciação de células T reguladoras imunossupressoras (Treg), ao mesmo tempo em que inibe a diferenciação de células T CD4+ produtoras de IL-17 ou IL-22 protetoras do intestino (Th17 e Th22) (Favre, Mold et al. 2010). A indução de IDO1, dentre outros mecanismos, provavelmente é importante na limitação da imunopatologia durante as respostas imunes ativas, na promoção de resolução das respostas imunes e na tolerância fetal. No entanto, em contextos crônicos, tais como câncer ou infecção viral ou bacteriana crônica, a atividade de IDO1 evita a eliminação de tumor ou patógeno e, se a atividade é sistêmica, a atividade de IDO1 pode resultar em disfunção imune sistêmica (Boasso e Shearer 2008, Li, Huang et al. 2012). Além destes efeitos imunomoduladores, também se sabe que os metabólitos de IDO1, tais como Kyn e ácido quinolínico, são neurotóxicos e observados como elevados em várias condições de disfunção neurológica e depressão. Como tal, a IDO1 é um alvo terapêutico para inibição em uma ampla variedade de indicações, tal como para promover a eliminação do tumor, permitir a eliminação de infecções virais ou bacterianas intratáveis, diminuir a disfunção imune sistêmica manifestada como inflamação persistente durante infecção pelo HIV ou imunossupressão durante sepse e prevenir ou reverter condições neurológicas. IDO1 e Inflamação Persistente em Infecção Pelo HIV:

[003] Apesar do sucesso da terapia antirretroviral (AntiRetroviral Therapy, ART) na supressão da replicação do HIV e na diminuição da incidência de doenças relacionadas à AIDS, os pacientes infectados pelo HIV quando de ART apresentam uma maior incidência de morbidades e mortalidade que não pela AIDS do que seus pares não infectados. Estas condições não relacionadas à AIDS incluem câncer, doença cardiovascular, osteoporose, doença hepática, doença renal, fragilidade e disfunção neurocognitiva (Deeks 2011). Vários estudos indicam que a morbidade/mortalidade não relacionada à AIDS está associada à inflamação persistente, a qual permanece elevada em pacientes infectados pelo HIV sob ART comparado com os pares (Deeks 2011). Como tal, supõe-se que a inflamação persistente e a disfunção imune, apesar da supressão virológica com ART, sejam uma causa destes eventos definidores que não a AIDS (Non-AIDS-Defining Events, NADEs).

[004] O HIV infecta e mata células T CD4+, com preferência particular por células tais como as células T CD4+ que residem nos tecidos linfoides da superfície mucosal (Mattapallil, Douek et al. 2005). A perda destas células, combinado com a resposta inflamatória à infecção, resulta em uma relação alterada entre o hospedeiro e todos os patógenos, incluindo o próprio HIV, mas se estende a infecções virais pré-existentes ou adquiridas, infecções por fungos e bactérias residentes na pele e superfícies mucosais. Esta relação disfuncional hospedeiro:patógeno resulta na reação exagerada do hospedeiro ao que normalmente seria um problema menor, além de permitir o crescimento de patógenos na microbiota. A interação disfuncional hospedeiro:patógeno resulta, portanto, em aumento da inflamação o que, por sua vez, leva a uma disfunção mais profunda, gerando um ciclo vicioso. Uma vez que se acredita que a inflamação leva à morbidade/mortalidade não relacionada à AIDS, os mecanismos que controlam a interação alterada hospedeiro:patógeno são alvos terapêuticos.

[005] A expressão e a atividade da IDO1 aumentam durante a infecção pelo HIV não tratada e tratada, bem como em modelos de primatas da infecção pelo SIV (Boasso, Vaccari et al. 2007, Favre, Lederer et al. 2009, Byakwaga, Boum et al. 2014, Hunt, Sinclair et al. 2014, Tenorio, Zheng et al. 2014). A atividade da IDO1, conforme indicado pela proporção dos níveis plasmáticos de substrato enzimático e produto (proporção Kyn/Tryp ou K:T), está associada a outros marcadores de inflamação e é um dos preditores mais fortes de morbidade/mortalidade não relacionada à AIDS (Byakwaga Boum et al. 2014, Hunt, Sinclair et al. 2014, Tenorio, Zheng et al. 2014). Além disso, características consistentes com o impacto esperado do aumento da atividade de IDO1 sobre o sistema imune são características principais da disfunção imune induzida pelo HIV e SIV, tal como diminuição da resposta proliferativa de células T ao antígeno e desequilíbrio de Treg:Th17 nos compartimentos sistêmico e intestinal (Favre, Lederer et al. 2009, Favre, Mold et al. 2010). Como tal, nós e outros levantamos a hipótese de que a IDO1 desempenha um papel na condução do ciclo vicioso de disfunção imune e inflamação associada à morbidade/mortalidade não relacionada à AIDS. Assim, propomos que a inibição de IDO1 reduz a inflamação e diminui o risco de NADEs em pessoas infectadas pelo HIV suprimidas pela ART. IDO1 e Inflamação Persistente Além de HIV

[006] Conforme descrito acima, a inflamação associada à infecção crônica pelo HIV tratada é um provável fator de doenças de múltiplos órgãos [Deeks 2011]. No entanto, estas doenças de órgãos-alvo não são exclusivas da infecção pelo HIV e são, na verdade, doenças comuns do envelhecimento que ocorrem em idades mais precoces na população infectada pelo HIV. Na população geral não infectada, a inflamação de etiologia desconhecida é um importante correlato de morbidade/mortalidade [Pinti, 2016 #88]. Na verdade, muitos dos marcadores de inflamação são compartilhados, tais como IL-6 e PCR. Se, conforme teorizado acima, a IDO1 contribui para a inflamação persistente na população infectada pelo HIV, induzindo à disfunção imune no trato GI ou nos tecidos sistêmicos, a IDO1 também pode contribuir para a inflamação e, portanto, acabar com as doenças de órgãos na população em geral. Estas doenças de órgãos terminais associadas à inflamação são exemplificadas por doenças cardiovasculares, síndrome metabólica, doença hepática (NAFLD, NASH), doença renal, osteoporose e comprometimento neurocognitivo. Na verdade, a via da IDO1 tem links na literatura para doenças hepáticas (resumos de Vivoli na Italian Assoc. For the Study of the Liver

Conference 2015], diabetes [Baban, 2010 #89], doença renal crônica [Schefold, 2009 #90], doenças cardiovasculares [Mangge, 2014 #92; Mangge, 2014 #91], bem como o envelhecimento em geral e todas as causas de mortalidade [Pertovaara, 2006 #93]. Assim, a inibição de IDO1 pode ter aplicação na diminuição da inflamação na população em geral para reduzir a incidência de doenças específicas de órgãos terminais associadas à inflamação e ao envelhecimento. IDO1 e Oncologia

[007] A expressão de IDO pode ser detectada em vários cânceres humanos (por exemplo; melanoma, pancreático, ovário, AML, CDC, próstata e endometrial) e se correlaciona a um mau prognóstico (Munn 2011). Múltiplos papéis imunossupressores foram atribuídos à ação da IDO, incluindo a indução de diferenciação e hiperativação de Treg, supressão da resposta imune de Teff e diminuição da função das DCs, o que prejudica o reconhecimento imune e promove o crescimento de tumores (Munn 2011). A expressão de IDO em tumores cerebrais humanos está correlacionada a uma sobrevida reduzida. Modelos de camundongos ortotrópicos e transgênicos para glioma demonstram uma correlação entre a expressão reduzida de IDO e infiltração reduzida de Tregs e aumento da sobrevida a longo prazo (Wainwright, Balyasnikova et al. 2012). Em melanoma humano, uma alta proporção de tumores (33 de 36 casos) apresentou IDO elevada, sugerindo um papel importante no estabelecimento de um microambiente tumoral (Tumor MicroEnvironment, TME) imunossupressor, caracterizado pela expansão, ativação e recrutamento de MDSCs de maneira dependente de Tregs (Holmgaard, Zamarin et al. 2015). Além disso, células imunes do hospedeiro que expressam IDO foram identificadas nos linfonodos drenantes e nos próprios tumores (Mellor e Munn 2004). Portanto, acredita-se que a IDO derivada de tumor e hospedeiro contribua para o estado imunossuprimido do TME.

[008] A inibição de IDO foi uma das primeiras estratégias de fármacos de pequenas moléculas propostas para restabelecer uma resposta imunogênica ao câncer (Mellor e Munn 2004). O enantiômero d de 1-metil triptofano (D-1MTou indoximode) foi o primeiro inibidor de IDO a entrar em ensaios clínicos.

Embora este composto iniba claramente a atividade da IDO, ele é um inibidor muito fraco da enzima isolada e o(s) mecanismo(s) de ação in vivo deste composto ainda está(ão) sendo elucidado(s). Os investigadores da Incyte otimizaram um composto de sucesso obtido a partir de um processo de triagem para um inibidor potente e seletivo com exposição oral suficiente para demonstrar um retardo no crescimento do tumor em um modelo de melanoma em camundongos (Yue, Douty et al. 2009). O desenvolvimento adicional desta série levou ao INCB204360, o qual é altamente seletivo para a inibição de IDO-1 em relação à IDO-2 e TDO em linhagens de células transfectadas transitoriamente com enzimas humanas ou de camundongos (Liu, Shin et al. 2010). Uma potência similar foi observada para linhagens de células e tumores humanos primários que expressam IDO1 endogenamente (IC50s ~ 3-20 nM). Quando testado em cocultura de DCs e células T CD4+ CD25- virgens, o INCB204360 bloqueou a conversão destas células T em Tregs CD4+ FoxP3+ . Finalmente, quando testado em um modelo singênico (células pancreáticas PAN02) em camundongos imunocompetentes, o INCB204360 administrado por via oral forneceu uma inibição significativa do crescimento do tumor, dependente da dose, mas não teve efeito contra o mesmo tumor implantado em camundongos imunodeficientes.

Estudos adicionais pelos mesmos pesquisadores mostraram uma correlação de inibição da IDO1 com a supressão dos níveis sistêmicos de quinurenina e inibição do crescimento de tumor em um modelo adicional de tumor singênico em camundongos imunocompetentes.

Com base nestes estudos pré-clínicos, o

INCB24360 entrou em ensaios clínicos para o tratamento de melanoma metastático (Beatty, O'Dwyer et al. 2013).

[009] À luz da importância do catabolismo do triptofano na manutenção da supressão imune, não surpreende que a superexpressão de uma segunda enzima metabolizadora de triptofano, TDO2, por múltiplos tumores sólidos (por exemplo, carcinomas da bexiga e fígado, melanomas) também tenha sido detectada. Uma pesquisa com 104 linhagens de células humanas revelou 20/104 com expressão de TDO, 17/104 com expressão de IDO1 e 16/104 que expressam ambas (Pilotte, Larrieu et al. 2012). Similar à inibição de IDO1, a inibição seletiva de TDO2 é eficaz na reversão da resistência imune em tumores que superexpressam TDO2 (Pilotte, Larrieu et al. 2012). Estes resultados sustentam a inibição de TDO2 e/ou a dupla inibição de TDO2/IDO1 como uma estratégia terapêutica viável para melhorar a função imune.

[010] Vários estudos pré-clínicos demonstraram um valor significativo, mesmo sinérgico, na combinação de inibidores de IDO-1 em combinação com pontos de verificação de células T que modulam mAbs à CTLA-4, PD-1 e GITR. Em cada caso, tanto a eficácia quanto os aspectos relacionados à PD de melhora da atividade/função imune foram observados nestes estudos em uma variedade de modelos de murinos (Balachandran, Cavnar et al. 2011, Holmgaard, Zamarin et al. 2013, M. Mautino 2014, Wainwright Chang et al. 2014). O inibidor de IDO1 da Incyte (INCB204360, epacadostate) foi clinicamente testado em combinação com um bloqueador de CTLA4 (ipilimumabe), mas não está claro se uma dose eficaz foi alcançada em virtude de eventos adversos limitados pela dose observados com a combinação. Por outro lado, dados descritos recentemente para um estudo em andamento que combina o epacadostate com o mAb à PD-1 da Merck (pembrolizumabe) demonstraram tolerabilidade aprimorada da combinação, permitindo doses mais altas do inibidor de IDO1. Houve várias respostas clínicas em vários tipos de tumores, o que é encorajador. No entanto, ainda não se sabe se esta combinação é um aprimoramento em relação à atividade de agente único pembrolizumabe (Gangadhar, Hamid et al. 2015). Da mesma forma, a Roche/Genentech está avançando o NGL919/GDC-0919 em combinação com os dois mAbs ao PD-L1 (MPDL3280A, Atezo) e OX-40 após a recente conclusão de um estudo de fase 1a de segurança e PK/PD em pacientes com tumores avançados. IDO1 e Infecções Crônicas

[011] A atividade da IDO1 gera metabólitos da via de quinurenina, tais como Kyn e 3-HAA, que comprometem pelo menos a atividade das células T, células NK e macrófagos (Munn, Shafizadeh et al. 1999, Frumento, Rotondo et al. 2002) (Sekkai, Guittet et al. 1997, Favre, Mold et al., 2010). Os níveis de Kyn ou a proporção Kyn/Tryp são elevados no cenário da infecção crônica pelo HIV (Byakwaga, Boum et al. 2014, Hunt, Sinclair et al. 2014, Tenorio, Zheng et al. 2014), infecção pelo HBV (Chen, Li et al. 2009), infecção pelo HCV (Larrea, Riezu-Boj et al. 2007, Asghar, Ashiq et al. 2015) e infecção pelo TB (Suzuki, Suda et al. 2012) e estão associados à disfunção de células T específicas para antígeno (Boasso, Herbeuval et al. 2007, Boasso, Hardy et al. 2008, Loughman e Hunstad 2012, Ito, Ando et al. 2014, Lepiller, Soulier et al. 2015). Como tal, acredita-se que, nestes casos de infecção crônica, a inibição mediada pela IDO1 da resposta de células T específicas para patógeno desempenhe um papel na persistência da infecção e que a inibição de IDO1 pode ter um benefício na promoção da eliminação e resolução de infecção. IDO1 e Sepse

[012] É observado que a expressão e atividade de IDO1 são elevadas durante a sepse e o grau de elevação de Kyn ou Kyn/Trp correspondia ao aumento de gravidade da doença, incluindo mortalidade (Tattevin, Monnier et al. 2010, Darcy, Davis et al. 2011). Em modelos animais, o bloqueio de silenciamentos (knockouts) genéticos de IDO1 ou IDO1 protegeu camundongos contra doses letais de LPS ou mortalidade no modelo de ligação cecal/punção (Jung, Lee et al. 2009, Hoshi, Osawa et al. 2014). A sepse é caracterizada por uma fase imunossupressora em casos graves (Hotchkiss, Monneret et al. 2013), indicando potencialmente um papel da IDO1 como mediador de disfunção imune e indicando que a inibição farmacológica de IDO1 pode conferir um benefício clínico na sepse. IDO1 e Distúrbios Neurológicos

[013] Além dos cenários imunológicos, a atividade de IDO1 também está ligada à doença em contextos neurológicos (revisto em Lovelace Neuropharmacology 2016 (Lovelace, Varney et al. 2016)). Os metabólitos da via de quinurenina, tais como 3-hidroxiquinurenina e ácido quinolínico, são neurotóxicos, mas são equilibrados por metabólitos alternativos, ácido cinurênico ou ácido picolínico, os quais são neuroprotetores. Os distúrbios neurodegenerativos e psiquiátricos nos quais se demonstrou que os metabólitos da via de quinurenina estão associados à doença incluem esclerose múltipla, distúrbios dos neurônios motores, tal como esclerose lateral amiotrófica, doença de Huntington, mal de Parkinson, mal de Alzheimer, distúrbio depressivo maior, esquizofrenia, anorexia (Lovelace, Varney et al. 2016). Modelos animais de doença neurológica mostraram algum impacto de inibidores fracos de IDO1, tal como 1-metiltriptofano, sobre a doença, indicando que a inibição de IDO1 pode conferir um benefício clínico na prevenção ou tratamento de distúrbios neurológicos e psiquiátricos.

[014] Seria, portanto, um avanço na técnica descobrir inibidores de IDO que efetivem o equilíbrio das propriedades supracitadas como uma terapia modificadora da doença em infecções crônicas pelo HIV para diminuir a incidência de morbidade/mortalidade não relacionada à AIDS; e/ou uma terapia modificadora da doença para prevenir a mortalidade em sepse; e/ou uma imunoterapia para melhorar a resposta imune ao HIV, HBV, HCV e outras infecções virais crônicas, infecções bacterianas crônicas, infecções fúngicas crônicas e tumores; e/ou para o tratamento da depressão ou outros distúrbios neurológicos/neuropsiquiátricos.

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[055] Yue, E. W., B. Douty, B. Wayland, M. Bower, X. Liu, L. Leffet, Q. Wang, K. J. Bowman, M. J. Hansbury, C. Liu, M. Wei, Y. Li, R. Wynn, T. C. Burn, H. K. Koblish, J. S. Fridman, B. Metcalf, P. A. Scherle and A. P. Combs (2009). "Discovery of potent competitive inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase with in vivo pharmacodynamic activity and efficacy in a mouse melanoma model." Journal of Medicinal Chemistry 52(23): 7364-7367.

[056] Determinados inibidores de IDO1 são descritos em pedidos provisórios Norte-Americanos 62/481.743 e 62/436.672 (número de registro GSK PR66234).

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[057] Resumidamente, em um aspecto, a presente invenção descreve compostos de Fórmula I Fórmula I

[058] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:

[059] R1 é um grupo que tem a Fórmula II Fórmula II

[060] em que R5 e R6 são, independentemente, H ou CH3 ou R5 e R6 podem ser unidos juntamente com o átomo de carbono ao qual eles estão ligados para formar uma cicloalquila de 3-6 elementos;

[061] R7 representa um heterociclo ou heteroarila de 5 ou 6 elementos que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados a partir de N e S, e é opcionalmente substituída por 1 ou 2 substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em F, Cl, CN, OCH3, CF3, ciclopropila, CONH2, CH2CH2OCH3 e CH2OCH3;

[062] R8 representa uma cicloalquila de 5 ou 6 elementos ou um heterociclo de 5 ou 6 elementos que contém um O ou um N e R8 pode ser opcionalmente substituído por um substituinte selecionado a partir de halogênio, OH, C1-3 alquila e OCH3;

[063] um X é hidrogênio e o outro representa o ponto de ligação a Q;

[064] Q é uma ligação simples, CH2 ou , onde Y1 representa o ponto de ligação a R1 e Y2 representa o ponto de ligação ao restante do composto;

[065] R2 e R3 são, independentemente, C10-20 alquila; e

[066] R4 é hidrogênio ou C1-4 alquila.

[067] Em outro aspecto, a presente invenção descreve um método para o tratamento de doenças ou condições que se beneficiariam da inibição de IDO.

[068] Em outro aspecto, a presente invenção descreve composições farmacêuticas que compreendem um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[069] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso em terapia.

[070] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de doenças ou condições que se beneficiariam da inibição de IDO.

[071] Em outro aspecto, a presente invenção fornece o uso de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para uso no tratamento de doenças ou condições que se beneficiariam da inibição de IDO.

[072] Em outro aspecto, a presente invenção descreve um método para o tratamento de uma infecção viral em um paciente mediada, pelo menos em parte, por um vírus na família de vírus retrovírus que compreende administrar, ao dito paciente, uma composição que compreende um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente sal aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, a infecção viral é mediada pelo vírus HIV.

[073] Em outro aspecto, uma modalidade particular da presente invenção fornece um método de tratamento de um indivíduo infectado pelo HIV que compreende administrar, ao indivíduo, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[074] Em ainda outro aspecto, uma modalidade específica da presente invenção fornece um método para inibir a progressão da infecção pelo HIV em um indivíduo em risco de infecção pelo HIV que compreende administrar, ao indivíduo, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I ou um farmaceuticamente aceitável sal do mesmo. Estas e outras modalidades são descritas mais detalhadamente no texto a seguir.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[075] Figura 1. Concentração de INTERMEDIÁRIO C4 a partir da dosagem oral (3 mg/kg) de INTERMEDIÁRIO C4 em ratos.

[076] Figura 2. Concentração de INTERMEDIÁRIO C4 a partir da dosagem oral (5 mg/kg) do profármaco EXEMPLO 7 em ratos.

[077] Figura 3. Comparação da distribuição tecidual de INTERMEDIÁRIO C4 a partir de sua dose oral e de INTERMEDIÁRIO C4 a partir da dose oral de seu profármaco EXEMPLO 7 em ratos. DESCRIÇÃO DETALHADA DE MODALIDADES REPRESEN-

TATIVAS

[078] De preferência, um de R5 e R6 representa H e o outro é CH3.

[079] De preferência, R7 é uma piridina, tiadiazol, pirimidina, pirazina, piridazina, triazol ou tiazol opcionalmente substituído por 1 ou 2 substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em F, Cl, CN, OCH3, CF3, ciclopropila, CONH2, CH2CH2OCH3 e CH2OCH3. Mais preferivelmente, R7 representa piridina ou pirazina opcionalmente substituída por um Cl.

[080] De preferência, R8 representa ciclo-hexila ou heterociclo de 6 elementos que contém um átomo de oxigênio.

[081] Mais preferivelmente, R1 é selecionado a partir do grupo que consiste em , , , , e , em que o X indica o ponto de ligação ao restante do composto.

[082] De preferência, R4 representa H ou metila.

[083] As composições farmacêuticas preferidas incluem formas de dosagem unitárias. Formas de dosagem unitárias preferidas incluem comprimidos.

[084] Espera-se que os compostos e composição da presente invenção sejam úteis para prevenção e/ou tratamento de HIV; incluindo prevenção de progressão da AIDS e imunossupressão geral. Espera-se que, em muitos casos, tal prevenção e/ou tratamento envolva o tratamento com os compostos da presente invenção em combinação com pelo menos um outro fármaco que se julgue útil para tal prevenção e/ou tratamento. Por exemplo, os inibidores de IDO da presente invenção podem ser usados em combinação com outras terapias imunes, tais como pontos de verificação imunes (PD1, CTLA4, ICOS, etc.) e possivelmente em combinação com fatores de crescimento ou terapias com citocinas (IL21, IL-7, etc.).

[085] É prática comum no tratamento de HIV empregar mais de um agente eficaz. Portanto, de acordo com outra modalidade da presente invenção, é fornecido um método para prevenir ou tratar uma infecção viral em um mamífero mediada, pelo menos em parte, por um vírus na família de vírus retrovírus, método o qual compreende administrar, a um mamífero que foi diagnosticado com a dita infecção viral ou corre o risco de desenvolver a dita infecção viral, um composto conforme definido na Fórmula I, em que o dito vírus é um vírus HIV e compreende ainda administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais agentes ativos contra um vírus HIV, em que o dito agente ativo contra o vírus HIV é selecionado a partir do grupo que consiste em Inibidores de transcriptase reversa nucleotídicos; Inibidores de transcriptase reversa não nucleotídicos; Inibidores de protease; Inibidores de entrada, fixação e fusão; Inibidores de integrase; Inibidores de maturação; Inibidores de CXCR4; e Inibidores de CCR5. Exemplos destes agentes adicionais são

Dolutegravir, Bictegravir e Cabotegravir.

[086] "Sal farmaceuticamente aceitável" se refere a sais farmaceuticamente aceitáveis derivados de uma variedade de contra- íons orgânicos e inorgânicos bem conhecidos na técnica e incluem, a título de exemplo apenas, sódio, potássio, cálcio, magnésio, amônio e tetra-alquilamônio e, quando a molécula contém uma funcionalidade básica, sais de ácidos orgânicos ou inorgânicos, tais como cloridrato, bromidrato, tartarato, mesilato, acetato, maleato e oxalato. Sais adequados incluem aqueles descritos em P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (Eds.), Handbook of Pharmaceutical Salts Properties, Selection and Use; 2002.

[087] A presente invenção também inclui sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos descritos aqui. Conforme usado aqui, "sais farmaceuticamente aceitáveis" se refere a derivados dos compostos descritos nos quais o composto precursor é modificado pela conversão de uma porção ácida ou básica existente em sua forma de sal. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, porém sem limitações, sais de ácidos minerais ou orgânicos de resíduos básicos, tais como aminas; sais alcalinos ou orgânicos de resíduos ácidos, tal como ácido carboxílico; e assim por diante. Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção incluem os sais não tóxicos convencionais do composto precursor formados, por exemplo, a partir de ácidos inorgânicos ou orgânicos não tóxicos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser sintetizados a partir do composto precursor que contém uma porção básica ou ácida por meio de métodos químicos convencionais. Em geral, estes sais podem ser preparados ao reagir as formas livres de ácido ou base destes compostos com uma quantidade estequiométrica da base ou ácido apropriado em água ou em um solvente orgânico ou em uma mistura dos dois; usualmente, meios não aquosos, tais como éter, acetato de etila, etanol, isopropanol ou ACN são preferidos.

[088] A frase "farmaceuticamente aceitável" é empregada aqui para se referir a compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são, dentro do escopo de um julgamento médico adequado, adequados para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem excessiva toxicidade, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou complicação, comensurável com uma proporção benefício/risco razoável.

[089] Em uma modalidade, a formulação farmacêutica que contém um composto de Fórmula I ou um sal do mesmo é uma formulação adaptada para administração oral ou parentérica. Em outra modalidade, a formulação é uma formulação parentérica de ação prolongada. Em uma modalidade adicional, a formulação é uma formulação de nanopartículas.

[090] A presente invenção é dirigida a compostos, composições e composições farmacêuticas que têm utilidade como novos tratamentos para a imunossupressão. Embora não deseje estar preso a nenhuma teoria em particular, acredita-se que os presentes compostos sejam capazes de inibir a enzima que catalisa a reação de clivagem oxidativa do anel de pirrol de l-Trp em N-formilquininurenina usando espécies de oxigênio molecular ou oxigênio reativo.

[091] Portanto, em outra modalidade da presente invenção, é fornecido um método para a prevenção e/ou tratamento de HIV; incluindo prevenção de progressão da AIDS e imunossupressão geral.

EXEMPLOS

[092] Os exemplos a seguir servem para descrever mais completamente a maneira de fazer e usar a invenção descrita acima. Deve ser entendido que estes exemplos de modo algum servem para limitar o verdadeiro escopo da invenção, mas são apresentados para fins ilustrativos. Nos exemplos e nos esquemas sintéticos abaixo, as abreviações a seguir têm os seguintes significados. Se uma abreviação não é definida, ela tem seu significado geralmente aceito. CAN = Acetonitrila AIBN = Azobisisobutironitrila aq. = Aquoso µL ou uL = Microlitros µM ou uM = Micromolar RMN = Ressonância magnética nuclear boc = Terc-butoxicarbonila br = Amplo Cbz = Benziloxicarbonila CDI = 1,1'-carbonildiimidazol d = Dupleto δ = Desvio químico °C = Graus Celsius DCM = Diclorometano dd = Dupla de dupletos DHP = Di-hidropirano DIAD = Azodicarboxilato de di-isopropila DIEA ou = N,N-di-isopropiletilamina

DIPEA DMAP = 4-(dimetilamino)piridina DMEM = Meio de Eagle Modificado de Dulbeco EtOAc = Acetato de etila h ou hr = Horas HATU Hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H- = 1,2,3-triazolo[4,5-b]piridínio HCV = Vírus da hepatite C HPLC = Cromatografia líquida de elevado desempenho Hz = Hertz IU = Unidades Internacionais IC50 = Concentração inibidora a 50 % de inibição J Constante de acoplamento (fornecida em Hz, salvo indicação em = contrário) LCMS = Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massa m = Multipleto M = Molar M+H+ = Pico do espectro de massa precursor mais H+ MeOH = Metanol mg = Miligrama min = Minutos mL = Mililitro mM = Milimolar mmol = Milimole MS = Espectro de massa MTBE = Éter metil terc-butílico N = Normal NFK = N-formilquinurenina NBS = N-bromossuccinimida nm = Nanomolar PE = Éter de petróleo ppm = Partes por milhão q.s. = Quantidade suficiente s = Singleto RT = Temperatura ambiente Rf = Fator de retardo sat. = Saturado t = Tripleto TEA = Trietilamina TFA = Ácido trifluoroacético TFAA = Anidrido trifluoroacético THF = Tetra-hidrofurano Descrição do Equipamento 1

[093] Os espectros de H RMN foram registrados em um espectrômetro Bruker Ascend 400 ou um espectrômetro Varian 400. Os desvios químicos são expressos em partes por milhão (ppm,  unidades). As constantes de acoplamento estão em unidades de hertz (Hz). Os padrões de divisão descrevem multiplicidades aparentes e são designados como s (singleto), d (dupleto), t (tripleto), q (quarteto), quint (quinteto), m (multipleto), br (amplo).

[094] Os espectros de massa analíticos de baixa resolução (MS) foram registrados no instrumento Waters ACQUITY UPLC com detectores SQ usando uma coluna Waters BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 µm empregando um método de eluição em gradiente. Solvente A: ácido fórmico (FA) a 0,1 % em água;

Solvente B: FA a 0,1 % em acetonitrila; 30 % de B durante 0,5 min, seguido por 30-100 % de B durante 2,5 min. Síntese de intermediário A Preparação de dipalmitato de 2-hidroxipropano-1,3-diila

[095] A uma solução de glicerina (1,0 g, 0,132 mmol), piridina (16,1 mg, 0,132 mmol) em THF (20 mL) foi adicionado cloreto de palmitoíla (63,1 mg, 0,329 mmol) e a mistura foi agitada em r.t. durante 17 horas. A mistura de reação foi diluída com DCM (5 mL), acidificada com HCl aq. a 1 N para um pH de 4-5. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi concentrada e purificada por meio de cromatografia em sílica-gel (acetato de etila a 5 % a 30 %/hexanos) para proporcionar o composto do título (1,7 g, 27 %) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 4,21 – 4,07 (m, 5H), 2,44 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 2,35 (t, J = 7,6 Hz, 4H), 1,67 – 1,58 (m, 4H), 1,30 – 1,23 (m, J = 13,4 Hz, 48H), 0,88 (t, J = 6,8 Hz, 6H). MS (ESI) m/z calc. para C35H68O5: 568,51. Encontrado: 569,65 (M+1)+. Intermediário A Ácido 5-((1,3-Bis(palmitoilóxi)propan-2-il)óxi)-5-oxopentanoico

[096] Uma mistura de dipalmitato de 2-hidroxipropano-1,3-diila (500 mg, 0,879 mmol) e anidrido glutárico (100 mg, 0,879 mmol) foi agitada a 100 °C de um dia para o outro. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc a 0-15 % em PE) para proporcionar o composto do título (510 mg, 85 %) como um sólido branco, o qual foi usado sem purificação. 1H RMN (400 MHz, CDCl3):  5,26 (m, 1H), 4,31 (dd, J = 11,9, 4,3 Hz, 2H), 4,14 (dd, J = 11,9, 5,9 Hz, 2H), 2,44 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,42 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,31 (t, J = 7,6 Hz, 4H), 1,96 (m, 2H), 1,67 – 1,54 (m, 4H), 1,49 – 1,18 (m, 48H), 0,88 (t, J = 6,8 Hz, 6H). O próton do grupo carbóxi não foi encontrado. Síntese de intermediário B Preparação de 4-metildi-hidro-2H-piran-2,6(3H)-diona

[097] Uma mistura de ácido 3-metilpentanodioico (6,0 g, 41 mmol) e cloreto de acetila (50 mL) foi agitada a 70 °C durante 30 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar um resíduo, o qual foi purificado por meio de recristalização em Et2O para proporcionar o produto do título (2,9 g, 55 % de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ

2,91 – 2,87 (m, 1H), 2,86 – 2,83 (m, 1H), 2,46 – 2,37 (m, 2H), 2,36 – 2,27 (m, 1H), 1,14 (d, J = 6,4 Hz, 3H). Intermediário B Preparação de ácido 5-((1,3-bis(palmitoilóxi)propan-2-il)óxi)-3-metil-5- oxopentanoico

[098] Uma mistura de dipalmitato de 2-hidroxipropano-1,3-diila (9,5 g, 16,75 mmol) e 4-metildi-hidro-2H-piran-2,6(3H)-diona (2,14 g, 16,75 mmol) foi agitada a 100 °C de um dia para o outro. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc a 0- 30 % em PE) para proporcionar o composto do título (7,67 g, 66 %) como um sólido branco. MS (ESI) m/z calc. para C41H76O8: 696,55. Encontrado: 695,41 (M-1)-. Síntese de intermediário C Preparação de trans-4-((4-bromo-2-nitrofenil)(isobutil)amino)ciclo-

hexan-1 -ol

[099] Uma mistura de 4-bromo-1-fluoro-2-nitrobenzeno (7,4 g, 33,5 mmol), trans-4-(isobutil amino)ciclo-hexan-1-ol (6,7 g, 40,2 mmol) e DIPEA (11,7 mL, 67,0 mmol) em NMP (80 mL) foi agitada a 140 °C sob atmosfera de N2 durante 6 hr. A mistura resultante foi dividida entre EtOAc e H2O. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para proporcionar o produto bruto, o qual foi purificado por meio de cromatografia rápida (sílica-gel, EtOAc a 0-20 % em PE) para proporcionar o composto do título (8,4 g, 67 % de rendimento) como um óleo vermelho. LCMS (ESI) m/z calc. para C16H23BrN2O3: 370,09. Encontrado: 371,46/373,45 (M/M+2)+. Preparação de 4-bromo-N-(trans-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)- N- isobutil-2-nitroanilina

[100] A uma solução de trans-4-((4-bromo-2- nitrofenil)(isobutil)amino)-ciclo-hexan-1-ol (16,2 g, 43,7 mmol) em DCM (100 mL) foi adicionado imidazol (5,9 g, 87,4 mmol) e TBSOTf (17,3 g, 65,6 mmol). Após agitação em r.t. durante 5 hr, a mistura resultante foi dissipada com H2O e extraída com DCM. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para proporcionar o produto bruto, o qual foi purificado por meio de cromatografia rápida (sílica-gel, EtOAc a 0-20 % em PE) para proporcionar o composto do título (20,5 g, 96 % de rendimento). LCMS

(ESI) m/z calc. para C22H37BrN2O3Si: 484,18. Encontrado: 485,52/487,51 (M/M+2)+. Preparação de (E)-3-(4-((trans-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo- hexil)(isobutil)amino)-3-nitrofenil)but-2-enoato de metila

[101] Uma mistura de 4-bromo-N-(trans-4-((terc- butildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)-N- isobutil-2-nitroanilina (18,5 g, 38,14 mmol), (E)-but-2-enoato de metila (11,4 g, 114,4 mmol), TBAB (2,46 g, 7,6 mmol), Pd(o-MePh3P)4 (1,5 g, 1,91 mmol) e TEA (10,6 mL, 76,28 mmol) em DMF (200 mL) foi agitada a 100 °C sob atmosfera de N2 de um dia para o outro. A mistura resultante foi dividida entre EtOAc e H2O. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para proporcionar o produto bruto, o qual foi purificado por meio de cromatografia rápida (sílica-gel, EtOAc a 0-10 % em PE) para proporcionar o composto do título (9,67 g, 50 % de rendimento) como um óleo amarelo. LCMS (ESI) m/z calc. para C27H44N2O5Si: 504,30. Encontrado: 505,69 (M+1)+. Preparação de 3-(4-((trans-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo- hexil)(isobutil)amino)-3-nitrofenil)butanoato de metila

[102] A -5 oC, a uma mistura de (CuHPh3P)6 (288 mg, 0,147 mmol) e (R,S)-PPF-P(tBu)2 (289 mg, 0,535 mmol) em tolueno (90 mL) foram adicionados PMHS (2,9 mL) e t-BuOH (2,3 mL) antes da introdução de (E)-3-(4-((trans-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)(isobutil)amino)-3-

nitrofenil)but-2-enoato de metila (9,67 g, 19,1 mmol). Após agitação em r.t. durante 2 h, a mistura resultante foi dissipada com NaHCO3 aq. e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para proporcionar o produto bruto, o qual foi purificado por meio de cromatografia rápida (sílica-gel, EtOAc a 0-10 % em PE) para proporcionar o composto do título (8,16 g, 88 % de rendimento) como um óleo amarelo. LCMS (ESI) m/z calc. para C27H46N2O5Si: 506,32. Encontrado: 507,82 (M+1)+. Preparação de ácido (R)-3-(4-((trans-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo- hexil)(isobutil)amino)-3-nitrofenil)butanoico

[103] A uma solução de (R)-3-(3-((5-cloropirazin-2-il)amino)-4- ((trans-4-hidroxil ciclo-hexil)(isobutil)amino)fenil)butanoato de metila (3,6 g, 7,09 mmol) em MeOH (30 mL) foi adicionado NaOH aq. a 1 N (20 mL). Após agitação em r.t durante 8 h, a mistura resultante foi neutralizada com HCl a 1 N e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4 e concentrada para proporcionar o composto do título (3,3 g, 94 % de rendimento) o qual foi usado na etapa seguinte sem purificação. LCMS (ESI) m/z calc. para C26H44N2O5Si: 492,30. Encontrado: 493,47 (M+1)+. Preparação de (R)-3-(4-((trans-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo- hexil)(isobutil)amino)-3-nitrofenil)butanoato de terc-butila

[104] A uma solução de ácido (R)-3-(4-((trans-4-((terc-

butildimetilsilil)óxi)-ciclo-hexil)(isobutil)amino)-3-nitrofenil)butanoico (3,3 g, 6,70 mmol) em DCM (30 mL) foi adicionado 2,2,2-tricloroacetimidato de terc-butila (2,48 g, 11,38 mmol), seguido pela adição de BF3•Et2O (0,13 mL, 1,0 mmol). Após agitação em r.t durante 40 h, a mistura de reação foi neutralizada com NaHCO3 aq. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 e concentradas para proporcionar o produto bruto, o qual foi purificado por meio de cromatografia rápida (sílica-gel, EtOAc a 0-20 % em PE) para proporcionar o composto do título (2,82 g, 77 % de rendimento). LCMS (ESI) m/z calc. para C30H52N2O5Si: 548,36. Encontrado: 549,60 (M+1)+. Intermediário C Preparação de 3-(3-amino-4-((trans-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo- hexil)(isobutil)amino)fenil)butanoato de terc-butila

[105] Uma mistura de (R)-3-(4-((trans-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)- ciclo-hexil)(isobutil)amino)-3-nitrofenil)butanoato de terc-butila (2,82 g, 5,13 mmol) e Pd/C a 10 % (846 mg) em EtOAc (30 mL) foi agitada a 50°C sob atmosfera de H2 durante 6 h. A mistura resultante foi filtrada através de um bloco de Celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para proporcionar o produto bruto, o qual foi purificado por meio de cromatografia rápida (sílica-gel, EtOAc a 0-20 % em PE) para proporcionar o composto do título (1,88 g, 71 % de rendimento) como um óleo amarelo. LCMS (ESI) m/z calc. para C30H54N2O3Si: 518,39. Encontrado: 519,55 (M+1)+. Síntese do Exemplo 1

Preparação de (R)-3-(4-((trans-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo- hexil)(isobutil)amino)-3-((6-cloropiridin-3-il)amino)fenil)butanoato de terc-butila

[106] Uma mistura de 3-(3-amino-4-((trans-4-((terc- butildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)(isobutil)amino)fenil)butanoato de terc- butila (500 mg, 0,97 mmol), 5-bromo-2-cloropiridina (374 mg, 1,94 mmol), Pd2(dba)3 (170 mg, 0,194 mmol), Xantphos (225 mg, 0,388 mmol) e Cs2CO3 (630 mg, 1,94 mmol) em tolueno (5 mL) foi agitada a 100 °C sob atmosfera de N2 de um dia para o outro. A mistura resultante foi dividida entre EtOAc e H2O. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para proporcionar o produto bruto, o qual foi purificado por meio de cromatografia rápida (sílica-gel, EtOAc a 0-10 % em PE) para proporcionar o composto do título (570 mg, 93 % de rendimento). LCMS (ESI) m/z calc. para C35H56ClN3O3Si: 629,38. Encontrado: 630,62/632,61 (M/M+2)+. Preparação de (R)-3-(3-((6-cloropiridin-3-il)amino)-4-((trans-4-

hidroxiciclo-hexil)(isobutil)amino)fenil)butanoato de terc-butila

[107] A uma solução de (R)-3-(4-((trans-4-((terc- butildimetilsilil)óxi)-ciclo-hexil)(isobutil)amino)-3-((6-cloropiridin-3- il)amino)fenil)butanoato de terc-butila (650 mg, 1,03 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado TBAF (1 N em THF, 5 mL). Após agitação em r.t. de um dia para o outro, a mistura resultante foi dividida entre EtOAc e H2O. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para proporcionar o produto bruto, o qual foi purificado por meio de cromatografia rápida (sílica-gel, EtOAc a 0-20 % em PE) para proporcionar o composto do título (450 mg, 84 % de rendimento). LCMS (ESI) m/z calc. para C29H42ClN3O3: 515,29. Encontrado: 516,67/518,63 (M/M+2)+. Intermediário C2

[108] Ácido (R)-3-(3-((6-cloropiridin-3-il)amino)-4-(((1r,4R)-4- hidroxiciclo-hexil)(isobutil)amino)-fenil)butanoico foi obtido por meio de tratamento de (R)-3-(3-((6-cloropiridin-3-il)amino)-4-((trans-4- hidroxiciclo-hexil)(isobutil)amino)fenil)butanoato de terc-butila com HCl a 4 N em excesso em dioxano e remoção de solvente.

Preparação de glutarato de 1,3-bis(palmitoilóxi)propan-2-il(trans-4-((4- ((R)-4-(terc-butóxi)-4-oxobutan-2-il)-2-((6-cloropiridin-3-

il)amino)fenil)(isobutil)amino)ciclo-hexila)

[109] A uma solução de glutarato de 1,3-bis(palmitoilóxi)propan-2- il(trans-4-((4-((R)-4-(terc-butóxi)-4-oxobutan-2-il)-2-((6-cloropiridin-3- il)amino)fenil)(isobutil)amino)-ciclo-hexila) (150 mg, 0,29 mmol), ácido 5-((1,3-bis(palmitoilóxi)propan-2-il)óxi)-5-oxopentanoico (397 mg, 0,58 mmol) e DMAP (35 mg, 0,29 mmol) em DMF (5 mL) foi adicionado EDCI (112 mg, 0,58 mmol). Após agitação a 60 °C durante 17 horas, a mistura de reação foi dividida entre EtOAc e água e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida e o composto do título (70 mg, 20 %) foi obtido como um óleo amarelo. MS (ESI) m/z calc. para C69H114ClN3O10: 1179,82. Encontrado: 1181,27/1183,29 (M/M+2)+. Exemplo 1 Preparação de ácido (R)-3-(4-((trans-4-((5-((1,3-bis(palmitoilóxi)propan- 2-il)óxi)-5-oxopentanoil)óxi)ciclo-hexil)(isobutil)amino)-3-((6- cloropiridin-3-il)amino) fenil)butanoico

[110] A uma solução de glutarato de 1,3-bis(palmitoilóxi)propan-2- il(trans-4-((4-((R)-4-(terc-butóxi)-4-oxobutan-2-il)-2-((6-cloropiridin-3- il)amino)fenil)(isobutil)amino)-ciclo-hexila) (70 mg, 0,1059 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionado TFA (1 mL) e a mistura foi agitada em r.t.

durante 2 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. Purificação por meio de TLC preparativa (acetato de etila a 5 % a 10 %/hexanos) proporcionou o composto do título (37 mg, 55 %) como um óleo amarelo claro. MS (ESI) m/z calc. para C65H106ClN3O10: 1123,76. Encontrado: 1124,79/1126,82 (M/M+2)+. Síntese do Exemplo 2 Preparação de (R)-3-(4-((trans-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo- hexil)(isobutil)amino)-3-((5-cloropirazin-2-il)amino)fenil)butanoato de terc-butila

[111] Uma mistura de (R)-3-(3-amino-4-((trans-4-((terc- butildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)(isobutil)amino)fenil)butanoato de terc- butila (500 mg, 0,97 mmol), 2,5-dicloropirazina (290 mg, 1,94mmol), Pd2(dba)3 (178 mg, 0,194 mmol), Xantphos (225 mg, 0,388 mmol) e Cs2CO3 (630 mg, 1,94 mmol) em tolueno (5 mL) foi agitada a 100 °C sob atmosfera de N2 de um dia para o outro. A mistura resultante foi dividida entre EtOAc e H2O. Após as camadas serem separadas, a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para proporcionar o produto bruto, o qual foi purificado por meio de cromatografia rápida (sílica-gel, EtOAc a 0-30 % em PE) para proporcionar o composto do título (410 mg, 67 % de rendimento). LCMS (ESI) m/z calc. para C34H55ClN4O3Si: 630,37. Encontrado: 631,39/633,40 (M/M+2)+. Preparação de (R)-3-(3-((5-cloropirazin-2-il)amino)-4-((trans-4- hidroxiciclo-hexil)(isobutil)amino)fenil)butanoato de terc-butila

[112] A uma solução de (R)-3-(4-((trans-4-((terc- butildimetilsilil)óxi)-ciclo-hexil)(isobutil)amino)-3-((5-cloropirazin-2- il)amino)fenil)butanoato de terc-butila (410 mg, 0,65 mmol) em THF (3 mL) foi adicionado TBAF (1N em THF, 3 mL). Após agitação em r.t. de um dia para o outro, a mistura resultante foi dividida entre EtOAc e H2O. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para proporcionar o produto bruto, o qual foi purificado por meio de cromatografia rápida (sílica-gel, EtOAc a 0-30 % em PE) para proporcionar o composto do título (310 mg, 92 % de rendimento). LCMS (ESI) m/z calc. para C28H41ClN4O3: 516,29. Encontrado: 517,65/519,62 (M/M+2)+.

[113] Intermediário C3 foi obtido de forma análoga à síntese de intermediário C2. Ácido (R)-3-(3-((5-cloropirazin-2-il)amino)-4-(((1r,4R)-4-hidroxiciclo- hexil)(isobutil)amino)fenil)butanoico

Preparação de glutarato de 1,3-bis(palmitoilóxi)propan-2-il(trans-4-((4- ((R)-4-(terc-butóxi)-4-oxobutan-2-il)-2-((5-cloropirazin-2- il)amino)fenil)(isobutil)amino)ciclo-hexila)

[114] A uma solução de (R)-3-(3-((5-cloropirazin-2-il)amino)-4- ((trans-4-hidroxiciclo-hexil)(isobutil)amino)fenil)butanoato de terc-butila (120 mg, 0,233 mmol), ácido 5-((1,3-bis(palmitoilóxi)propan-2-il)óxi)-5- oxopentanoico (318 mg, 0,466 mmol) e DMAP (614 mg, 0,932 mmol) em DMF (3 mL) foi adicionado EDCI (89 mg, 0,466 mmol) e a mistura foi agitada a 40 °C durante 8 h. A mistura resultante foi dividida entre EtOAc e H2O. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4 e concentrada para proporcionar o produto bruto, o qual foi purificado por meio de cromatografia rápida (sílica-gel, acetato de etila a 5 % a 10 %/hexanos) para proporcionar o composto do título (50 mg, 18 %) como um óleo amarelo. MS (ESI) m/z calc. para C68H113ClN4O10: 1180,81. Encontrado: 1182,28/1184,30 (M+1)+. Exemplo 2 Preparação de ácido (R)-3-(4-((trans-4-((5-((1,3-bis(palmitoilóxi)propan- 2-il)óxi)-5-oxopentanoil)óxi)ciclo-hexil)(isobutil)amino)-3-((5- cloropirazin-2-il)amino) fenil)butanoico

[115] A uma solução de glutarato de 1,3-bis(palmitoilóxi)propan-2- il(trans-4-((4-((R)-4-(terc-butóxi)-4-oxobutan-2-il)-2-((5-cloropirazin-2- il)amino)fenil)-(isobutil)amino)ciclo-hexila) (50 mg, 0,042 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionado TFA (1 mL) e a mistura foi agitada em r.t. durante 3 h.

A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida.

Purificação por meio de cromatografia rápida (sílica-gel, acetato de etila a 5 % a 30 %/hexanos) proporcionou o composto do título (30 mg, 63 %) como um óleo amarelo claro.

MS (ESI) m/z calc. para C64H105ClN4O10: 1124,75. Encontrado: 1126,24/1128,26 (M/M+2)+. Síntese do Exemplo 3

Preparação de 3-metilpentanodioato de 1-(1,3-bis(palmitoilóxi)propan- 2-il)-5-(trans-4-((4-((R)-4-(terc-butóxi)-4-oxobutan-2-il)-2-((6- cloropiridin-3-il)amino)fenil)(isobutil)amino)ciclo-hexila)

Cl C15H31 C15H31

N O O O O O NH O O O O O N

[116] A uma solução de glutarato de 1,3-bis(palmitoilóxi)propan-2- il(trans-4-((4-((R)-4-(terc-butóxi)-4-oxobutan-2-il)-2-((6-cloropiridin-3- il)amino)fenil)(isobutil)amino)-ciclo-hexila) (100 mg, 0,194 mmol), ácido 5-((1,3-bis(palmitoilóxi)propan-2-il)óxi)-3-metil-5-oxopentanoico (149 mg, 0,213 mmol) e DMAP (24 mg, 0,194 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado EDCI (75 mg, 0,388 mmol) e a mistura foi agitada a 40 °C de um dia para o outro. A mistura de reação foi diluída com DCM (5 mL), sílica-gel foi adicionado e a mistura concentrada sob pressão reduzida. Purificação por meio de cromatografia em sílica-gel (acetato de etila a 5 % a 10 %/hexanos) proporcionou o composto do título (190 mg, 82 %) como um óleo incolor; MS (ESI) m/z calc. para C70H116ClN3O10: 1193,83, Exemplo 3 Preparação de ácido (3R)-3-(4-((trans-4-((5-((1,3- bis(palmitoilóxi)propan-2-il)óxi)-3-metil-5-oxopentanoil)óxi)ciclo- hexil)(isobutil)amino)-3-((6-cloropiridin-3-il)amino)fenil)butanoico

[117] A uma solução de ácido 5-((1,3-bis(palmitoilóxi)propan-2- il)óxi)-3-metil-5-oxopentanoico (190 mg, 0,159 mmol) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (2 mL) e a mistura foi agitada em r.t. durante 5 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. Purificação por meio de TLC preparativa (acetato de etila a 5 % a 10 %/hexanos)

proporcionou o composto do título (138 mg, 76 %) como um sólido amarelo claro. H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,24 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 7,42 (dd, J = 8,6, 3,0 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 6,77 (dd, J = 8,2, 1,8 Hz, 1H), 5,29 – 5,20 (m, 1H), 4,62 – 4,53 (m, 1H), 4,33 – 4,24 (m, 2H), 4,17 – 4,09 (m, 2H), 3,27 – 3,17 (m, 1H), 2,93 – 2,70 (m, 2H), 2,67 – 2,53 (m, 3H), 2,43 – 2,27 (m, 7H), 2,24 – 2,12 (m, 2H), 2,00 – 1,83 (m, 4H), 1,59 (dd, J = 14,1, 7,1 Hz, 4H), 1,50 – 1,38 (m, 3H), 1,31 – 1,19 (m, 54H), 0,97 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 0,90 – 0,82 (m, 12H). O próton do grupo carbóxi não foi observado. MS (ESI) m/z calc. para C66H108ClN3O10: 1137,77. Encontrado: 1138,57/1140,57 (M/M+2)+. Síntese do Exemplo 4 Preparação de 3-metilpentanodioato de 1-(1,3-bis(palmitoilóxi)propan- 2-il)-5-(trans-4-((4-((R)-4-(terc-butóxi)-4-oxobutan-2-il)-2-((5- cloropirazin-2-il)amino)fenil)(isobutil)amino)ciclo-hexila)

[118] A uma solução de (R)-3-(3-((5-cloropirazin-2-il)amino)-4- ((trans-4-hidroxiciclo-hexil)(isobutil)amino)fenil)butanoato de terc-butila

(80,0 mg, 0,154 mmol), ácido 5-((1,3-bis(palmitoilóxi)propan-2-il)óxi)-3- metil-5-oxopentanoico (119 mg, 0,17 mmol) e DMAP (19 mg, 0,154 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionado EDCI (58 mg, 0,308 mmol) e a mistura foi agitada a 40 °C em r.t. de um dia para o outro. A mistura de reação foi diluída com DCM (5 mL), sílica-gel foi adicionado e a mistura concentrada sob pressão reduzida. Purificação por meio de cromatografia em sílica-gel (acetato de etila a 5 % a 10 %/hexanos) proporcionou o composto do título (160 mg, 87 %) como um óleo incolor; MS (ESI) m/z calc. para C69H115ClN4O10: 1194,83. Encontrado: 1196,21/1198,19 (M+1)+. Exemplo 4 Preparação de ácido (3R)-3-(4-((trans-4-((5-((1,3- bis(palmitoilóxi)propan-2-il)óxi)-3-metil-5-oxopentanoil)óxi)ciclo- hexil)(isobutil)amino)-3-((5-cloropirazin-2-il)amino)fenil)butanoico

[119] A uma solução de 3-metilpentanodioato de 1-(1,3- bis(palmitoilóxi)propan-2-il)-5-(trans-4-((4-((R)-4-(terc-butóxi)-4- oxobutan-2-il)-2-((5-cloropirazin-2-il)amino)fenil)-(isobutil)amino)ciclo- hexila) (160 mg, 0,133 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado TFA (3 mL) e a mistura foi agitada em r.t. durante 5 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. Purificação por meio de cromatografia rápida (sílica-gel, acetato de etila a 5 % a 40 %/hexanos) proporcionou o composto do título (68 mg, 44 %) como um óleo amarelo claro. MS (ESI) m/z calc. para C65H107ClN4O10: 1138,77. Encontrado: 1139,63/1140,63 (M/M+2)+. Síntese de intermediário D

Preparação de 3,3,5,7-tetrametilcroman-2-ona

[120] Uma solução de 3,5-dimetilfenol (5,0 g, 40,93 mmol) e 3- metilbut-2-enoato de metila (5,14 g, 45,02 mmol) em ácido metanossulfônico (10 mL) foi agitada a 70 °C de um dia para o outro. A mistura de reação foi entornada em água e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas e lavadas sequencialmente com água e salmoura e secas sobre MgSO4. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia rápida (sílica- gel, acetato de etila a 0-60 % em éter de petróleo) para proporcionar o composto do título (8,0 g, 96 % de rendimento) como um sólido branco. LCMS (ESI) m/z calc. para C13H16O2: 204,12. Encontrado: 205,24 (M+1)+. Preparação de 2-(4-hidróxi-2-metilbutan-2-il)-3,5-dimetilfenol

[121] A 0 °C, a uma mistura de 3,3,5,7-tetrametilcroman-2-ona (4,0 g, 19,60 mmol) em THF (180 mL) foi adicionado LiAlH4 aos poucos. Após agitação em r.t. durante 1,5 h, a reação foi dissipada com solução saturada aq. De NH4Cl e o sólido foi removido por meio de filtração. O filtrado foi concentrado sob vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia rápida (sílica-gel, acetato de etila a 0-60 % em éter de petróleo) para proporcionar o composto do título (900 mg, 23 % de rendimento) como um sólido branco. LCMS (ESI) m/z calc. para C13H20O2: 208,15. Encontrado: 209,2 (M+1)+.

Preparação de 2-(4-((terc-butildimetilsilil)óxi)-2-metilbutan-2-il)-3,5- dimetilfenol

[122] A 0 °C, a uma solução de 2-(4-hidróxi-2-metilbutan-2-il)-3,5- dimetilfenol (900 mg, 4,33 mmol) e imidazol (737 mg, 10,82) em DMF foi adicionado TBSCl (974 mg, 6,490). Após agitação em r.t. durante 2 h, a mistura de reação foi entornada em água e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas e lavadas sequencialmente com água e salmoura e secas sobre MgSO4. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia rápida (sílica- gel, acetato de etila a 0-80 % em éter de petróleo) para proporcionar o composto do título (1,12 g, 81 % de rendimento) como um sólido branco. LCMS (ESI) m/z calc. para C19H34O2Si: 322,23. Encontrado: 323,41 (M+1)+. Síntese de intermediário E Preparação de 3-metilpentanodioato de 1-(1,3-bis(palmitoilóxi)propan- 2-il)-5-(2-(4-((terc-butildimetilsilil)óxi)-2-metilbutan-2-il)-3,5-dimetilfenila)

[123] A uma solução de ácido 5-((1,3-bis(palmitoilóxi)propan-2- il)óxi)-3-metil-5-oxopentanoico (1,2 g, 1,72 mmol), 2-(4-((terc-

butildimetilsilil)óxi)-2-metilbutan-2-il)-3,5-dimetilfenol (665 mg, 2,07 mmol) e DMAP (210 mg, 1,72 mmol) em DCM (12 mL) foi adicionado EDCI (658 mg, 3,44 mmol) e a mistura foi agitada em r.t. durante 17 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar um resíduo, o qual foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc a 5 % a 10 % em PE) para proporcionar o composto do título (1,46 g, 85 %). MS (ESI) m/z calc. para C60H108O9Si: 1000,78. Encontrado: 1001,82 (M+1)+. Preparação de 3-metilpentanodioato de 1-(1,3-bis(palmitoilóxi)propan- 2-il)-5-(2-(4-hidróxi-2-metilbutan-2-il)-3,5-dimetilfenila)

[124] A uma solução de 3-metilpentanodioato de 1-(1,3- bis(palmitoilóxi)propan-2-il)-5-(2-(4-((terc-butildimetilsilil)óxi)-2- metilbutan-2-il)-3,5-dimetilfenila) (1,3 g, 1,3 mmol) em DCM (10 mL) e MeOH (10 mL) foi adicionado ácido 10-camforsulfônico (91 mg, 0,39 mmol) e a mistura foi agitada em r.t. durante 6 h. A reação foi diluída com DCM e a fase orgânica lavada com NaHCO3 sat. aq. e salmoura, seca sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o produto bruto, o qual foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc a 5 % a 20 % em PE) para proporcionar o composto do título (1,1 g, 95 %) como um óleo incolor. MS (ESI) m/z calc. para C54H94O9: 886,69. Encontrado: 887,83 (M+1)+. Preparação de 3-metilpentanodioato de 1-(1,3-bis(palmitoilóxi)propan- 2-il)-5-(3,5-dimetil-2-(2-metil-4-oxobutan-2-il)fenila)

[125] A uma suspensão de 3-metilpentanodioato de 1-(1,3- bis(palmitoilóxi)propan-2-il)-5-(2-(4-hidróxi-2-metilbutan-2-il)-3,5- dimetilfenila) (1,0 g, 1,13 mmol) e Celite (625 mg) em DCM (10 mL) foi adicionado PCC (485 mg, 2,25 mmol) e a mistura foi agitada em r.t. durante 4 horas. A reação foi filtrada através de um bloco curto de sílica- gel, eluindo com acetato de etila a 50 %/hexanos e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (640 mg, 64 % de rendimento) como um óleo amarelo, o qual foi usado na etapa seguinte sem purificação. Preparação de ácido 3-(2-((5-((1,3-bis(palmitoilóxi)propan-2-il)óxi)-3- metil-5-oxopentanoil)óxi)-4,6-dimetilfenil)-3-metilbutanoico

[126] A uma solução de 3-metilpentanodioato de 1-(1,3- bis(palmitoilóxi)propan-2-il)-5-(3,5-dimetil-2-(2-metil-4-oxobutan-2- il)fenila) (449 mg, 0,52 mmol) em acetona (12 mL) foi adicionado KMnO4 (122 mg, 0,77 mmol) em acetona/água a 1:1 (12 mL no total) e a mistura foi agitada em r.t. durante 15 horas. A reação foi diluída com água (100 mL), acidificada para um pH de ~2 com HCl a 1 M e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o produto bruto, o qual foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (acetato de etila a 10 % 30 %/hexanos) para proporcionar o composto do título (216 mg, 46 %). MS (ESI) m/z calc. para C54H92O10: 900,67. Encontrado: 901,83 (M+1)+. Síntese do Exemplo 5

Preparação de 3-metilpentanodioato de 1-(1,3-bis(palmitoilóxi)propan- 2-il)-5-(2-(4-(trans-4-(terc-butóxi)-4-oxobutan-2-il)-2-((5-cloropirazin-2- il)amino)fenil)(isobutil)amino)ciclo-hexil)óxi)-2-metil-4-oxobutan-2-il)- 3,5-dimetilfenila)

[127] A uma solução de ácido 3-(2-((5-((1,3- bis(palmitoilóxi)propan-2-il)óxi)-3-metil-5-oxopentanoil)óxi)-4,6- dimetilfenil)-3-metilbutanoico (156 mg, 0,165 mmol), 2-(4-((terc- butildimetilsilil)óxi)-2-metilbutan-2-il)-3,5-dimetilfenol (60 mg, 0,11 mmol) e DMAP (13 mg, 0,11 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionado EDCI (42 mg, 0,22 mmol) e a mistura foi agitada em r.t. de um dia para o outro. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e purificada por meio de cromatografia em sílica-gel (acetato de etila a 5 % a 20 %/hexanos) para proporcionar o composto do título (120 mg, 52 %) como um óleo incolor; MS (ESI) m/z calc. para C82H131ClN4O12: 1398,95. Encontrado: 1400,41/1402, 42(M+1)+. Exemplo 5 Preparação de ácido (3R)-3-(4-((trans-4-((3-(2-((5-((1,3-

bis(palmitoilóxi)propan-2-il)óxi)-3-metil-5-oxopentanoil)óxi)-4,6- dimetilfenil)-3-metilbutanoil)óxi)ciclo-hexil)(isobutil)amino)-3-((5- cloropirazin-2-il)amino)fenil)butanoico

[128] A uma solução de 3-metilpentanodioato de 1-(1,3- bis(palmitoilóxi)propan-2-il)-5-(2-(4-(trans-4-(terc-butóxi)-4-oxobutan-2- il)-2-((5-cloropirazin-2-il)amino)fenil)(isobutil)amino)ciclo-hexil)óxi)-2- metil-4-oxobutan-2-il)-3,5-dimetilfenila) (30 mg, 0,021 mmol) em DCM (2 mL) foi adicionado TFA (1 mL) e a mistura foi agitada em r.t. durante 3 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. Purificação por meio de TLC preparativa proporcionou o composto do título (25 mg, 86 %) como um óleo amarelo claro. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,25 – 8,16 (m, 1H), 8,11 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 8,07 – 8,02 (m, 1H), 7,89 – 7,84 (m, 1H), 7,05 – 7,00 (m, 1H), 6,79 – 6,73 (m, 1H), 6,69 (s, 1H), 6,46 (s, 1H), 5,24 – 5,14 (m, 1H), 4,42 – 4,30 (m, 1H), 4,28 – 4,19 (m, 2H), 4,13 – 4,03 (m, 2H), 3,25 – 3,17 (m, 1H), 2,70 – 2,63 (m, 3H), 2,58 – 2,38 (m, 9H), 2,26 – 2,20 (m, 5H), 2,15 – 2,09 (m, 3H), 1,79 – 1,68 (m, 3H), 1,57 – 1,49 (m, 5H), 1,44 (s, 6H), 1,23 – 1,15 (m, 59H), 1,03 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 0,82 – 0,74 (m, 12H). O próton do grupo carbóxi não foi observado. MS (ESI) m/z calc. para C78H123ClN4O12: 1342,88. Encontrado: 1344,60/1346,65 (M+1)+. Síntese de intermediário E Preparação de 3-metilpentanodioato de 1-(1,3-bis(palmitoilóxi)propan-

2-il)-5-(clorometila)

[129] A uma suspensão de ácido 5-((1,3-bis(palmitoilóxi)propan-2- il)óxi)-3-metil-5-oxopentanoico (2,5 g, 3,59 mmol), água (15 mL), DCM (15 mL), NaHCO3 (1,17 g, 14,3 mmol) e hidrogeno sulfato de n-tetrabutil amônio (165 mg, 0,359 mmol) foi adicionado clorossulfato de clorometila (580 mg, 3,59 mmol. A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 16 h. As camadas foram separadas, a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4 e concentrada para proporcionar um resíduo, o qual foi purificado para proporcionar o composto do título (1,65 g, 62 %). MS (ESI) m/z calc. para C42H77ClO8: 744,53. Encontrado: 745,61/747,57 (M/M+2)+. Síntese do Exemplo 6

[130] Preparação de 3-metilpentanodioato de 1-(1,3- bis(palmitoilóxi)propan-2-il)-5-((((R)-3-(3-((6-cloropiridin-3-il)amino)-4- (isobutil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)fenil)butanoil)óxi)metila)

[131] A uma suspensão de 3-metilpentanodioato de 1-(1,3-

bis(palmitoilóxi)propan-2-il)-5-(clorometila) (200 mg, 0,269 mmol), K2CO3 (74 mg, 0,538 mmol), NaI (4 mg, 0,0269 mmol) em DMSO (5,0 mL) foi adicionado ácido (R)-3-(3-((6-cloropiridin-3-il)amino)-4- (isobutil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)fenil)butanoico (120 mg, 0,269 mmol). Após agitação a 40 °C durante 16 h, a mistura de reação foi dividida entre EtOAc e água e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada para proporcionar um resíduo, o qual foi purificado por meio de HPLC preparativa para proporcionar o composto do título (122 mg, 40 % de rendimento) como um sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,20 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 7,44 (dd, J = 8,6, 3,0 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,15 – 7,01 (m, 3H), 6,73 (dd, J = 8,1, 1,9 Hz, 1H), 5,74 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,71 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,31 – 5,19 (m, 1H), 4,38 – 4,22 (m, 2H), 4,22 – 4,07 (m, 2H), 4,02 – 3,86 (m, 2H), 3,36 – 3,11 (m, 3H), 2,79 (d, J = 4,9 Hz, 3H), 2,65 (dd, J = 15,5, 6,4 Hz, 1H), 2,55 (dd, J = 15,5, 8,5 Hz, 1H), 2,49 – 2,36 (m, 3H), 2,34 – 2,24 (m, 6H), 1,71 – 1,62 (m, 5H), 1,50 – 1,39 (m, 1H), 1,32 – 1,20 (m, 54H), 1,02 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 0,90 – 0,84 (m, 12H). MS (ESI) m/z calc. para C66H108ClN3O11: 1153,77. Encontrado: 1154,61/1156,61 (M/M+2)+.

[132] Intermediário C4 foi obtido de forma análoga à síntese de intermediário C2.

Síntese do Exemplo 7

Preparação de 3-metilpentanodioato de 1-(1,3-bis(palmitoilóxi)propan- 2-il)-5-((((R)-3-(3-((5-cloropirazin-2-il)amino)-4-(isobutil(tetra-hidro-2H- piran-4-il)amino)fenil)butanoil)óxi)metila)

[133] A uma suspensão de 3-metilpentanodioato de 1-(1,3- bis(palmitoilóxi)propan-2-il)-5-(clorometila) (150 mg, 0,201 mmol), K2CO3 (55 mg, 0,402 mmol), NaI (3 mg, 0,02 mmol) em DMSO (5,0 mL) foi adicionado ácido (R)-3-(3-((5-cloropirazin-2-il)amino)-4- (isobutil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)fenil)butanoico (90 mg, 0,201 mmol). Após agitação a 40 °C durante 16 h, a mistura de reação foi dividida entre EtOAc e água e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada para proporcionar um resíduo, o qual foi purificado por meio de HPLC preparativa para proporcionar o composto do título (108 mg, 46 % de rendimento) como um sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,40 (s, 1H), 8,18 (dd, J = 11,8, 1,6 Hz, 2H), 7,93 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,83 (dd, J = 8,1, 2,0 Hz, 1H), 5,76 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,72 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,30 – 5,22 (m, 1H), 4,35 – 4,26 (m, 2H), 4,18 – 4,10 (m, 2H), 3,99 – 3,90 (m, 2H), 3,34 – 3,23 (m, 3H), 2,93 – 2,76 (m, 3H), 2,71 (dd, J = 15,5, 6,0 Hz, 1H), 2,60 (dd, J = 15,5, 8,9 Hz, 1H), 2,48 – 2,36 (m, 3H), 2,34 – 2,24 (m, 6H), 1,77 – 1,61 (m, 5H), 1,49 – 1,42 (m, 1H), 1,37 – 1,16 (m, 54H), 1,02 (d, J = 6,3 Hz, 3H),

0,91 – 0,84 (m, 12H). MS (ESI) m/z calc. para C65H107ClN4O11: 1154,76. Encontrado: 1155,60/1157,59 (M/M+2)+.

[134] Intermediário C5 foi obtido de forma análoga à síntese de intermediário C2.

. Ensaio MS RapidFire para IDO1 em PBMCs

[135] Os compostos da presente invenção foram testados através de ensaios celulares de alto rendimento usando a detecção de quinurenina por meio de espectrometria de massa e citotoxicidade como pontos finais. Para os ensaios de espectrometria de massa e citotoxicidade, células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) humano (PB003F; AllCells, Alameda, CA) foram estimuladas com interferon-γ humano (IFN-γ) (Sigma-Aldrich Corporation, St. Louis, MO) e lipopolissacarídeo de Salmonella minnesota (LPS) (Invivogen, San Diego, CA) para induzir à expressão de indolamina 2,3-dioxigenase (IDO1). Os compostos com propriedades inibidoras de IDO1 diminuíram a quantidade de quinurenina produzida pelas células através da via catabólica de triptofano. A toxicidade celular em virtude do efeito de tratamento com composto foi medida usando o reagente CellTiter- Glo (CTG) (Promega Corporation, Madison, WI), o qual se baseia na detecção luminescente de ATP, um indicador de células metabolicamente ativas.

[136] Na preparação para os ensaios, os compostos de teste foram diluídos em série 3 vezes em DMSO a partir de uma concentração máxima típica de 1 mM ou 5 mM e banhados a 0,5 µL em placas tratadas para cultura tecidual com 384 cavidades de poliestireno e fundo claro,

com tampas (Greiner Bio-ona, Kremsmünster, Áustria) para gerar curvas de resposta à dose de 11 pontos. As cavidades de controle "low" (quinurenina a 0 % ou citotoxicidade de 100 %) continham 0,5 µL de DMSO na presença de PBMCs não estimuladas (-IFNγ/-LPS) para o ensaio de espectrometria de massa ou 0,5 µL de DMSO na ausência de células para o ensaio de citotoxicidade e cavidades de controle "high" (100 % de quinurenina ou citotoxicidade de 0 %) continham 0,5 µL de DMSO na presença de PBMCs estimuladas (+IFNγ/+LPS) para os ensaios de espectrometria de massa e citotoxicidade.

[137] Os estoques congelados de PBMCs foram lavados e recuperados em meio RPMI 1640 (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA) suplementado com 10% v/v de soro fetal bovino termicamente inativado (FBS) (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA) e solução de antibióticos penicilina-estreptomicina 1X (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA). As células foram diluídas para

1.000.000 de células/mL no meio RPMI 1640 suplementado. 50 µL da suspensão de células, para o ensaio de espectrometria de massa, ou meio apenas, para o ensaio de citotoxicidade, foram adicionados às cavidades de controle "low" nas placas com 384 cavidades previamente preparadas, resultando em 50.000 células/cavidade ou 0 células/cavidade, respectivamente. Foram adicionados IFN-γ e LPS à suspensão de células remanescente em concentrações finais de 100 ng/ml e 50 ng/ml, respectivamente, e 50 µL das células estimuladas foram adicionados a todas as cavidades restantes nas placas com 384 cavidades. As placas, com tampa foram, então, colocadas em uma incubadora umidificada a 37 % de C, 5 % de CO2 durante 2 dias.

[138] Após incubação, as placas com 384 cavidades foram removidas da incubadora e deixadas equilibrar em temperatura ambiente durante 30 minutos. Para o ensaio de citotoxicidade, CellTiter- Gllo foi preparado de acordo com as instruções do fabricante e foram adicionados 40 µL a cada cavidade da placa. Após uma incubação de vinte minutos em temperatura ambiente, a luminescência foi lida em um leitor Multilabel Reader EnVision (PerkinElmer Inc., Waltham, MA). Para o ensaio de espectrometria de massa, 10 µL de sobrenadante de cada cavidade das placas tratadas com composto foram adicionados a 40 µL de acetonitrila que contém 10 µM de um padrão interno para normalização em placas com 384 cavidades de polipropileno e fundo em V (Greiner Bio-ona, Kremsmünster, Áustria) para extrair os analitos orgânicos. Após centrifugação a 2000 rpm durante 10 minutos, 10 µL de cada cavidade das placas de extração de acetonitrila foram adicionados a 90 µL de H2O destilada e estéril em placas com 384 cavidades de polipropileno e fundo em V para análise de quinurenina e o padrão interno no RapidFire 300 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) e 4000 QTRAP MS (SCIEX, Framingham, MA). Os dados de MS foram integrados usando o software RapidFire Integrator da Agilent Technologies e os dados foram normalizados para análise como uma proporção de quinurenina para o padrão interno.

[139] Os dados para respostas à dose no ensaio de espectrometria de massa foram representados como inibição % de IDO1 em função da concentração de compostos após normalização usando a fórmula 100-(100*((U-C2)/(C1-C2))), onde U era o valor desconhecido, C1 era a média das cavidades de controle "high" (100 % de quinurenina; 0 % de inibição) e C2 era a média das cavidades de controle "low" (0 % de quinurenina; 100 % de inibição). Os dados para respostas à dose no ensaio de citotoxicidade foram representados como citotoxicidade % em função da concentração de compostos após normalização usando a fórmula 100-(100*((U-C2)/(C1-C2))), onde U era o valor desconhecido, C1 era a média das cavidades de controle "high" (0 % de citotoxicidade) e C2 era a média das cavidades de controle "low" (100 % de citotoxicidade).

[140] O ajuste da curva foi realizado com a equação y=A+((B- A)/(1+(10x/10C)D)), onde A era a resposta mínima, B era a resposta máxima, C era o log(XC50) e D era o declive de Hill.

Os resultados para cada composto de teste foram registrados como valores de pIC50 para o ensaio de espectrometria de massa e como valores de pCC50 para o ensaio de citotoxicidade (-C na equação acima). PBMC PXC50 PBMC TOX PXC50 Exemplo 1 6,8 <5 Exemplo 2 6,6 <5 Exemplo 3 5,9 <5 Exemplo 4 5.1 <5 Exemplo 5 6.2 <5 Exemplo 6 5,5 <5 Exemplo 7 6 <5 Intermediário C2 8,7 <5 Intermediário C3 8,9 <5 Intermediário C4 9 <5 Intermediário C5 9.2 <5 Estudos de farmacocinética oral em ratos de profármacos na dose de 5 mg/kg (solução a 100 % (40 mg de ácido oleico + 25 mg de Tween 80 + 2 mL de PBS/fresco) a 0,5 mg/mL). DNAUC0-24h [hr*ng/mL] após dose PO de 5 mg/kg de exemplo 2 a ratos Wistar Han maschos exemplo 2, profármaco intermediário C3 não detectado 4,25 DNAU 0-24h [hr*ng/mL] após dose PO de 5 mg/kg de exemplo 5 a ratos Wistar Han machos exemplo 5, profármaco intermediário C3 não detectado 4,3. DNAUC0-24h [hr*ng/mL] após dose PO de 5 mg/kg de exemplo 6 a ratos Wistar Han machos exemplo 6, profármaco intermediário C5 não detectado 75 DNAUC0-24h [hr*ng/mL] após dose PO de 5 mg/kg de exemplo 7 a ratos Wistar Han machos exemplo 7, profármaco intermediário C4 não detectado 126,6

Distribuição tecidual de fármaco intermediário C4 a partir de dosagem oral de C4 e do intermediário C4 a partir de dosagem oral do EXEMPLO 7 a ratos.

Exemplo 7

[141] Ratos Wistar Han, 185-197 g, machos, N = 8, adquiridos a partir da Beijing Vital River Co. LTDA. Nº da qualificação: SCXK(J) 2016- 0011 11400700240027. Jejum durante a noite e alimentadoS 4 horas após dosagem. PO: 5 mg/kg (10 mL/kg) via gavagem oral (N = 8). Amostragem a 1, 4, 8 e 24 horas, 4 pontos de tempo, coleta de sangue terminal para plasma, fígado, linfonodos e baço feita em cada ponto de tempo. Intermediário C4

[142] Ratos Wistar Han, 185-197 g, machos, N = 8, adquiridos a partir da Beijing Vital River Co. LTDA. Nº da qualificação: SCXK(J) 2016- 0011 11400700240027. Jejum durante a noite e alimentados 4 horas após dosagem. PO: 3 mg/kg (10 mL/kg) via gavagem oral (N = 8). Amostragem a 1, 4, 8 e 24 horas, 4 pontos de tempo, coleta de sangue terminal para plasma, fígado, linfonodos e baço feita em cada ponto de tempo. Dados individuais e médios do tempo em função da concentração de INTERMEDIÁRIO C4 após uma dose PO de 3 mg/kg a ratos Wistar Han machos Dose Dose Tempo Amostragem Concentração Média (mg/kg) via (ng/mL) (ng/mL) (h) Indivíduo 3 PO 1 351 317 334 4 68,2 61,2 64,7 8 33,7 22,7 28,2 24 BQL BQL BQL Parâmetros PK Unidade Média Tmax hr 1,00 Cmax ng/mL 334 t1/2 Terminal hr 2,01 Pontos de regressão hr 1~8 AUCúltima h*ng/mL 951 AUCINF h*ng/mL 1033

Dados individuais e médios do tempo em função da concentração nos linfonodos de INTERMEDIÁRIO C4 após uma dose PO de 3 mg/kg A ratos Wistar Han machos Dose Dose Tempo Amostragem Concentração Média (mg/kg) via (ng/g) (ng/g) (h) Indivíduo 3 PO 1 117 80,4 98,7 4 35,9 55,4 45,7 8 11,9 BQL 11,9 24 BQL BQL BQL Proporção linfonodo/plasma 1 0,333 0,254 0,293 4 0,526 0,905 0,716 8 0,353 N/D 0,353 24 N/D N/D N/D AUCúltima h*ng/mL 381 AUClinfonodo/AUCplasma % 40,1

Dados individuais e médios do tempo em função da concentração hepática de INTERMEDIÁRIO C4 após uma dose PO de 3 mg/kg a ratos Wistar Han machos Dose Dose Tempo Amostragem Concentração Média (mg/kg) via (ng/g) (ng/g) (h) Indivíduo 3 PO 1 3690 2570 3130 4 868 898 883 8 540 299 420 24 BQL BQL BQL Proporção fígado/plasma 1 10,5 8,11 9,31 4 12,7 14,7 13,7 8 16,0 13,2 14,6 24 N/D N/D N/D AUCúltima h*ng/mL 10190 AUCfígado/AUCplasma % 1072

Dados individuais e médios do tempo em função da concentração no baço de INTERMEDIÁRIO C4 após uma dose PO de 3 mg/kg a ratos Wistar Han machos Dose Dose Tempo Amostragem Concentração Média (mg/kg) via (ng/g) (ng/g) (h) Indivíduo 3 PO 1 65,3 62,4 63,9 4 19,3 20,4 19,9 8 BQL BQL BQL 24 BQL BQL BQL Proporção baço/plasma 1 0,186 0,197 0,191 4 0,283 0,333 0,308 8 N/D N/D N/D 24 N/D N/D N/D AUCúltima h*ng/mL 157 AUCbaço/AUCplasma % 16,6

Estudo PK de profármaco PO em ratos Dados individuais e médios do tempo em função da concentração plasmática de EXEMPLO 7 (profármaco) após uma dose PO de 5 mg/kg a ratos Wistar Han machos Dose Dose Tempo Amostragem Concentração Média (mg/kg) via (ng/mL) (ng/mL) (h) Indivíduo 5 PO 1 BQL BQL BQL 4 BQL BQL BQL 8 BQL BQL BQL 24 BQL BQL BQL Parâmetros PK Unidade Média Tmax hr N/D Cmax ng/mL N/D t1/2 Terminal hr N/D Pontos de regressão hr N/D AUCúltima h*ng/mL N/D AUCINF h*ng/mL N/D

Dados individuais e médios do tempo em função da concentração plasmática de INTERMEDIÁRIO C4 (fármaco precursor) após uma dose PO de 5 mg/kg de EXEMPLO 7 (profármaco) a ratos Wistar Han machos Dose Dose Tempo Amostragem Concentração Média (mg/kg) via (ng/mL) (ng/mL) (h) Indivíduo 5 PO 1 196 229 213 4 72,5 29,4 51,0 8 16,4 13,1 14,8 24 BQL BQL BQL Parâmetros PK Unidade Média Tmax hr 1,00 Cmax ng/mL 213 t1/2 Terminal hr 1,84 Pontos de regressão hr 1~8 AUCúltima h*ng/mL 633 AUCINF h*ng/mL 672

Dados individuais e médios do tempo em função da concentração hepática de EXEMPLO 7 (profármaco) após uma dose PO de 5 mg/kg a ratos Wistar Han machos Dose Dose Tempo Amostragem Concentração Média (mg/kg) via (ng/g) (ng/g) (h) Indivíduo 5 PO 1 BQL BQL BQL 4 BQL BQL BQL 8 BQL BQL BQL 24 BQL BQL BQL Proporção fígado/plasma 1 N/D N/D N/D 4 N/D N/D N/D 8 N/D N/D N/D 24 N/D N/D N/D AUCúltima h*ng/mL N/D AUCfígado/AUCplasma % N/D

Dados individuais e médios do tempo em função da concentração hepática de INTERMEDIÁRIO C4 (fármaco precursor) após uma dose PO de 5 mg/kg de EXEMPLO 7 (profármaco) a ratos Wistar Han machos Dose Dose Tempo Amostragem Concentração Média (mg/kg) via (ng/g) (ng/g) (h) Indivíduo 5 PO 1 2180 3790 2985 4 1080 527 804 8 235 216 226 24 BQL BQL BQL Proporção fígado/plasma 1 11,1 16,6 13,8 4 14,9 17,9 16,4 8 14,3 16,5 15,4 24 N/D N/D N/D AUCúltima h*ng/mL 9233 AUCfígado/AUCplasma % 1459

Dados individuais e médios do tempo em função da concentração nos linfonodos do EXEMPLO 7 (profármaco) após uma dose PO de 5 mg/kg de EXEMPLO 7 a ratos Wistar Han machos Dose Dose Tempo Amostragem Concentração Média (mg/kg) via (ng/g) (ng/g) (h) Indivíduo 5 PO 1 BQL BQL BQL 4 BQL BQL BQL 8 BQL BQL BQL 24 BQL BQL BQL Proporção linfonodo/plasma 1 N/D N/D N/D 4 N/D N/D N/D 8 N/D N/D N/D 24 N/D N/D N/D AUCúltima h*ng/mL N/D AUClinfonodos/AUCplasma % N/D

Dados individuais e médios do tempo em função da concentração nos linfonodos de INTERMEDIÁRIO C4 (fármaco precursor) após uma dose PO de 5 mg/kg de EXEMPLO 7 (profármaco) a ratos Wistar Han machos Dose Dose Tempo Amostragem Concentração Média (mg/kg) via (ng/g) (ng/g) (h) Individual 5 PO 1 928 685 807 4 84,4 63,1 73,8 8 16,3 6,17 11,2 24 BQL BQL BQL Proporção linfonodo/plasma 1 4,73 2,99 3,86 4 1,16 2,15 1,66 8 0,994 N/D 0,994 24 N/D N/D N/D AUCúltima h*ng/mL 1894 AUClinfonodos/AUCplasma % 299

Dados individuais e médios do tempo em função da concentração no baço do EXEMPLO 7 (profármaco) após uma dose PO de 5 mg/kg de EXEMPLO 7 a ratos Wistar Han machos Dose Dose Tempo Amostragem Concentração Média (mg/kg) via (ng/g) (ng/g) (h) Indivíduo 5 PO 1 BQL BQL BQL 4 BQL BQL BQL 8 BQL BQL BQL 24 BQL BQL BQL Proporção baço/plasma 1 N/D N/D N/D 4 N/D N/D N/D 8 N/D N/D N/D 24 N/D N/D N/D AUCúltima h*ng/mL N/D AUCbaço/AUCplasma % N/D

Dados individuais e médios do tempo em função da concentração de INTERMEDIÁRIO C4 no baço (fármaco precursor) após uma dose PO de 5 mg/kg de EXEMPLO 7 (profármaco) a ratos Wistar Han machos Tempo Dose Dose Concentração Média Amostragem (mg/kg) via (ng/g) (ng/g) (h) Indivíduo 1 175 155 165 4 23,1 7,65 15,4 8 BQL BQL BQL 24 BQL BQL BQL 5 Proporção baço/plasma

PO 1 0,893 0,677 0,785 4 0,319 0,260 0,289 8 N/D N/D N/D 24 N/D N/D N/D AUCúltima h*ng/mL 353 AUCbaço/AUCplasma % 55,8 Distribuição tecidual do fármaco INTERMEDIÁRIO C4 a partir de dosagem oral e de INTERMEDIÁRIO C4 a partir de dosagem oral do profármaco EXEMPLO 7 em ratos – sumário.

Claims (14)

REIVINDICAÇÕES

1. Composto caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula I Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 é um grupo que tem a Fórmula II Fórmula II em que R5 e R6 são, independentemente, H ou CH3 ou R5 e R6 podem ser unidos juntamente com o átomo de carbono ao qual eles estão ligados para formar uma cicloalquila de 3-6 elementos; R7 representa um heterociclo ou heteroarila de 5 ou 6 elementos que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados a partir de N e S, e é opcionalmente substituída por 1 ou 2 substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em F, Cl, CN, OCH3, CF3, ciclopropila, CONH2, CH2CH2OCH3 e CH2OCH3; R8 representa uma cicloalquila de 5 ou 6 elementos ou um heterociclo de 5 ou 6 elementos que contém um O ou um N e R8 pode ser opcionalmente substituído por um substituinte selecionado a partir de halogênio, OH, C1-3 alquila e OCH3; um X é hidrogênio e o outro representa o ponto de ligação a Q;

Q é uma ligação simples, CH2 ou , onde Y1 representa o ponto de ligação a R1 e Y2 representa o ponto de ligação ao restante do composto; R2 e R3 são, independentemente, C10-20 alquila; e R4 é hidrogênio ou C1-4 alquila.

2. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que um de R5 e R6 representa H e o outro é CH3.

3. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que R7 representa uma piridina, tiadiazol, pirimidina, pirazina, piridazina, triazol ou tiazol opcionalmente substituído por 1 ou 2 substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em F, Cl, CN, OCH3, CF3, ciclopropila, CONH2, CH2CH2OCH3 e CH2OCH3.

4. Composto ou sal, de acordo a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que R7 representa piridina ou pirazina opcionalmente substituída por um Cl.

5. Composto ou sal, de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que R8 representa ciclo- hexila ou heterociclo de 6 elementos que contém um átomo de oxigênio.

6. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 é selecionado a partir do grupo que Cl

N

N

O

NH

HO

N consiste em , X , ,

, e , em que o X indica o ponto de ligação ao restante do composto.

7. Composto ou sal, de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que R4 é H ou metila.

8. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende um composto ou sal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7.

9. Método para tratar HIV caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma composição farmacêutica como definida na reivindicação 8.

10. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que compreende ainda administrar um segundo agente útil no tratamento de HIV.

11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o dito segundo agente é selecionado a partir do grupo que consiste em Inibidores de transcriptase reversa nucleotídicos; Inibidores de transcriptase reversa não nucleotídicos; Inibidores de protease; Inibidores de entrada, fixação e fusão; Inibidores de integrase; Inibidores de maturação; Inibidores de CXCR4; e Inibidores de CCR5.

12. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o dito segundo agente é Dolutegravir, Bictegravir ou Cabotegravir.

13. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de HIV.

14. Uso de um composto ou sal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7 caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento de HIV.