BR112020010767A2 - antagonistas de ildr2 e combinações dos mesmos - Google Patents

Abstract

A presente invenção se refere a uma combinação farmacêutica inovadora que compreende um antagonista de ILDR2, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, mais um ou mais outros compostos terapeuticamente ativos, e a antagonistas de ILDR2 específicos inovadores (Fig. 1).

Description

"ANTAGONISTAS DE ILDR2 E COMBINAÇÕES DOS MESMOS" Campo da invenção

[0001] A presente invenção se refere a uma combinação farmacêutica inovadora que compreende um antagonista de ILDR2, mais um ou mais de outros compostos terapeuticamente ativos, bem como antagonistas de ILDR2 específicos inovadores. Antecedentes

[0002] A família B/ de ligantes imumorreguladores consistem em ligantes de proteína de superfície celular estruturalmente relacionados, os quais se ligam a receptores em linfócitos que regulam respostas imunes.

[0003] A ativação de linfócitos T e B é iniciada pelo engate de receptores de célula T antígeno-específicos de superfície celular ou receptores de célula B, porém sinais adicionalmente entregues simultaneamente por ligantes B7 determinam a resposta imune final. Esses sinais “coestimulantes” ou “coinibidores” são entregues por ligantes B7 através da família CD28 de receptores em linfócitos.

[0004] A família de proteínas B7 inclui: B7.1 (CD80), B7.2 (CD86), ligante coestimulante induzível (ICOS-L), ligante de morte programada 1 (PD-Ll, também denominado B7-1)), ligante de morte programada 2 (PD-L2), B7-H3 e B7-H4. Os membros da família foram caracterizados predominantemente em seres humanos e camundongos, porém alguns membros também são encontrados em aves. Compartilham 20-40 % de identidade de aminoácido e são estruturalmente relacionados, sendo que o domínio extracelular contém domínios em tandem relacionados a domínios de imunoglobulina variáveis e constantes. Os ligantes B7 são expressos em tecidos linfoide e não linfoide. A importância da família na regulação de respostas imunes é mostrada pelo desenvolvimento de imunodeficiência e doenças autoimunes em camundongos com mutações em genes da família B7. A manipulação dos sinais entregues pelos ligantes B7 mostrou potencial para o tratamento de autoimunidade, doenças inflamatórias e câncer.

[0005] A interação de membros da família B7 com seu respectivo receptor coestimulante, usualmente um membro da família relacionada a CD28, aumenta respostas imunes, enquanto a interação com receptores coinibidores, como CTLA4, atenua respostas imunes.

[0006] Evidentemente, cada molécula de B7 desenvolveu seu próprio nicho no sistema imune. Visto que nichos específicos de membros da família B7 continuam a ser analisados, seu diagnóstico e potencial terapêutico se tornam ainda mais evidentes. Muitos dos membros da superfamília B7 foram inicialmente caracterizados como moléculas coestimulantes de célula T. No entanto, mais recentemente se tornou claro que também podem coinibir respostas de célula T. Então, os membros da família B7 podem ter efeitos opostos em uma resposta imune.

[0007] Os membros da família B7 se tornaram alvos para terapia inibidora de ponto de verificação imune.

[0008] O inibidor de PD-L1 atezolizumabe (MPDL3280) é um anticorpo IgGl modificado totalmente humanizado que tem eficácia no tratamento de diversos diferentes cânceres, incluindo melanoma, câncer de pulmão, de bexiga e renal. Avelumabe (MSBOO010718C) é um anticorpo IgGl totalmente humano que mostrou eficácia em tumores metastáticos ou sólidos localmente avançados. Durvalumabe é um anticorpo anti-PD-Ll que mostrou eficácia em câncer de bexiga urotelial metastático em combinação com um inibidor de ponto de verificação imune alternativo.

[0009] Os inibidores de PDl nivolumabe e pembrolizumabe se ligam ao receptor de PD-L1 PD-1 e inibem a ligação de PD- Ll1 a PD-l.

[0010] Tremelimumabe (anteriormente ticilimumabe, CP- 675,206) é um anticorpo monoclonal totalmente humano (IgG2) contra CTLA-4. Bloqueia a ligação dos ligantes de célula que apresentam antígeno B7.1 e B7.2 a CTLA-4, resultando na inibição de regulação decrescente mediada por B7-CTLA-4 de ativação de célula T. Ipilimumabe é um anticorpo similar com um modo de ação similar, ainda do isótipo IgGl.

[0011] Enoblituzumabe (também denominado como MGA271) é um anticorpo que tem como alvo B7-H3, o qual é superexpresso em células tumorais e células-tronco cancerígenas, bem como na vasculatura tumoral de suporte e tecidos subjacentes ou estroma.

[0012] No entanto, apesar do enorme sucesso das abordagens identificadas acima, constatou-se que algumas delas não são sustentáveis em sua eficácia, isto é, uma recorrência da doença ocorre, e/ou não são eficazes em relação a um dado tipo de doença.

[0013] Portanto, há uma grande necessidade no campo de uma terapia inibidora de ponto de verificação imune para fornecer novas e melhores terapias, bem como de melhorar as terapias existentes.

[0014] O ILDR2 (Receptor Contendo Domínio Semelhante à

Imunoglobulina 2) recentemente identificado, também conhecido como C1lO0RF32, é um novo membro da família B7/CD28. ILDR2 compreende um domínio de IgV; além de ser uma proteína membranar do tipo I, como outros membros da B7 conhecidos - o que eventualmente resultou em sua anotação da família B7. Além disso, duas variantes alternativamente submetidas a splicing de ILDR2 (H19011-1-P8 e H19011-1-P9), as quais compartilham apenas os primeiros 5 éxons com o C1ORF32 de tipo selvagem, são similares aos membros da família B7 conhecidos em seus tamanhos de éxons e na posição da IgQV e domínios transmembranares nesses éxons. Para uma caracterização completa de ILDR2, consultar o documento WO2009032845, cujo conteúdo está incorporado a título de referência no presente documento.

[0015] Até o momento, nenhuma terapia que tenha como alvo esse receptor recentemente identificado foi desenvolvido. Portanto, é um objetivo da presente invenção fornecer terapias inibidoras de ponto de verificação imune novas e melhoradas que tenham como alvo o ILDR2. Sumário da Invenção

[0016] A presente invenção fornece uma combinação farmacêutica inovadora que compreende um antagonista de ILDR2, mais um ou mais outros compostos terapeuticamente ativos, bem como antagonistas de ILDR2 específicos inovadores. A invenção e as vantagens gerais de seus recursos serão discutidas em mais detalhes abaixo. Breve Descrição das Figuras

[0017] O termo “mIgG” se refere a uma imunoglobulina G murina. O termo “hIgG” se refere a uma imunoglobulina G humana.

[0018] os termos “aPD-L1”, “aPDL1”, “aILDR2” e “BAY1905254” são definidos em outro momento do presente documento.

[0019] O termo “controle de isótipo” se refere ao uso de um anticorpo monoclonal do mesmo isótipo, mesma espécie, porém, direcionada contra um antígeno irrelevante. Os controles de isótipo são amplamente usados para ajustar o nível discriminatório entre fundo não específico e coloração fluorescente positiva.

[0020] O termo “ADC de isótipo” se refere ao uso de um Conjugado de Fármaco de Anticorpo (ADC) que compreende a mesma toxina e um anticorpo monoclonal do mesmo isótipo, mesma espécie, porém direcionado contra um antígeno irrelevante.

[0021] Figura 1: Significado de tratamento de BAY1905254 em comparação a controle de isótipo como determinado por análise por ANOVA bidirecional. O crescimento de tumores B1l6F10 foi retardado de modo significativo pelo tratamento com BAY1905254 em comparação ao controle de isótipo. Início do tratamento (dO). As condições experimentais são mostradas na tabela a seguir: N/grupo | Composto Via |Volume de pn vs A Controle 12 Isótipo 20 mg/kg | i.p. | 5 ml/kg [e past O fat Isótipo 10 mg/kg | i.p. | 5 ml/kg a

[0022] Figura 2: O tratamento com o anticorpo El0 não afetou o crescimento do modelo de tumor B16F10. Início do tratamento (dO). As condições experimentais são mostradas na tabela a seguir: Grupo Nº N/grupo | Composto Dose via |Volume de rr Controle 12 Isótipo 10 mg/kg | i.p. | 5 ml/kg EP E Fi Isótipo 10 mg/kg | i.p. | 5 ml/kg = FE Isótipo 10 mg/kg | i.p. | 5 ml/kg o Pe

[0023] Figura 3: Significado de monoterapia e tratamento de combinação versus controle de isótipo como determinado por análise por ANOVA bidirecional. Nenhuma eficácia de monoterapia observada versus controle de isótipo nem com tratamento de aPD-Ll nem com tratamento de BAY1905254. Combinação de aPD-Ll com BAY1905254, crescimento tumoral sinergicamente retardado versus controle. Início do tratamento: q3d i.p. As condições experimentais são mostradas na tabela a seguir: Grupo N/grupo | Composto Dose via Volume de | Programação Nº aplicação | de aa Eee Contro 11 Isótipo 20 mg/kg | i.p. 5 ml/kg Q3D isótip Hamster de [10 mg/kg | i.p. [5 ml/kg Q3D o isótipo Bi

N/grupo | Composto Dose via Volume de | Programação aplicação | de tratamento Isótipo 10 mg/kg | i.p. |5 ml/kg Qo3D e pp Hamster de | 10 mg/kg | i.p. 5 ml/kg Qo3D isótipo hIgG1 Isótipo 10 mg/kg | i.p. 5 ml/kg Q3D & per Hamster de | 10 mg/kg [i.p. |5 ml/kg Q3D isótipo hIgG1 L1 Hamster de | 10 mg/kg | i.p. |5 ml/kg 03D isótipo hIgG1

[0024] Figura 4: Significado de tratamento de combinação de aPD-L1 e BAY1905254 em comparação ao controle de isótipo como determinado por análise por ANOVA bidirecional. O BAY1905254 não mostra individualmente nenhum retardo de crescimento tumoral a uma dose de 3 mg/kg no modelo de tumor CT26. A 10 mg/kg, aPD-Ll1 mostra eficácia versus controle de isótipo, o qual é sinergicamente melhorado combinando-se mg/kg de aPD-L1l com 3 mg/kg de BAY1905254. Início do tratamento (d7): q3d i.p. As condições experimentais são mostradas na tabela a seguir:

Grupo N/grupo | Composto Dose via Volume de | Programação nº aplicação | de tratamento Contro |12 Isótipo 40 mg/kg | i.p. |5 ml/kg Q3D le de hIgG2 isótip o Isótipo 30 mg/kg | i.p. 5 ml/kg 923D [ss Isótipo 37 mg/kg | i.p. |5 ml/kg Qo3D L1 Isótipo 27 mg/kg | i.p. |5ml/kg o3D so UT

[0025] Figura 5: Significado de monoterapia e tratamento de combinação versus controle de isótipo como determinado por análise por ANOVA bidirecional. O tratamento do modelo 3C9-D1l1-H11 em aPD-L1l de monoterapia alcança um retardo significativo de crescimento tumoral versus controle de isótipo, sendo que esse não é o caso de BAY1905254. A combinação de aPD-L1 com BAY1905254 mostra sinergia e impede excrescência dos tumores. Início do tratamento (d8): qa3d i.p. As condições experimentais são mostradas na tabela a seguir:

Grupo Nº | N/grupo | Composto Dose via Volume de | Programação aplicação | de tratamento Controle | 12 Isótipo 20 mg/kg [i.p. [5 ml/kg Q3D de hIgG2 isótipo Isótipo 10 mg/kg | i.p. |5 ml/kg Q3D iss Isótipo 10 mg/kg | i.p. 5 ml/kg Q3D asa su |O E es e e

[0026] Figura 6: Significado de monoterapia e tratamento de combinação versus controle de isótipo como determinado por análise por ANOVA bidirecional. Tratamento do modelo OVA de B16F10 em BAY1905254 de monoterapia resulta em um retardo moderado de crescimento tumoral. Esse é sinergicamente melhorado quando BAY1905254 é combinado a OVA e CPG. Início do tratamento (d9): q3d i.p. As condições experimentais são mostradas na tabela a seguir: Grupo N/grupo | Composto via |Volume de | Programação Nº aplicação | de tratamento Control | 12 Isótipo 20 mg/kg | i.p. | 5 ml/kg Q3D e de hIgG2 isótipo OVA/CpG |12 Isótipo |20 mg/kg|i.p.|5 ml/kg o3D hIgG2 +OVA 50 pg/animal +CpG pg/animal

Grupo N/grupo | Composto | Dose via Volume de | Programação nº aplicação | de tratamento aILDR2 12 BAY19052 | 10 mg/kg | i.p. [5 ml/kg Q3D + 54 | +OVA OVA/CpG Isótipo 10 mg/kg | i.p. 50 pg/animal hIgG2 +CpG pg/animal aILDR2 12 BAY19052 [10 mg/kg | i.p. [5 ml/kg 93D 2 elo Isótipo 10 mg/kg | i.p.

EA

[0027] Figura 7: Significado de monoterapia e tratamento de combinação versus controle de isótipo como determinado por análise por ANOVA bidirecional. Tratamento do modelo OVA de B16F10 em BAY1905254 de monoterapia resulta em um retardo moderado de crescimento tumoral. Esse é sinergicamente melhorado quando BAY1905254 é combinado a Docetaxel. Início do tratamento (d8): q3d i.p. As condições experimentais são mostradas na tabela a seguir: Grupo Nº |N/grupo | Composto via |Volume de | Programação aplicação | de tratamento Controle 12 Isótipo 10 mg/kg 5 ml/kg Q3D EP Es ep O isótipo Veículo c 5 ml/kg uma vez (NaCl isotônico; D-1) Docetaxel | 12 Isótipo 10 mg/kg | i.p. |5 ml/kg Q3D Docetaxel [20 mg/kg|i.v. [5 ml/kg uma vez e UT

Grupo Nº N/grupo | Composto Dose via Volume de | Programação aplicação | de | aILDR2 12 BAY1905254 [10 mg/kg | i.p. 15 mig Togn Veículo i.v. | |5 ml/kg uma vez (NaCl isotônico; aILDR2 + |12 BAY1905254 | 10 mg/kg | i.p. [5 mix fosp Docetaxel Docetaxel |20 mg/kg|i.v. 5 ml/kg uma vez =) pri

[0028] Figura 8: Significado de monoterapia e tratamento de combinação versus controle de isótipo como determinado por análise por ANOVA bidirecional. O tratamento do modelo OVA de B16F10 em BAY1905254 de monoterapia não resulta em um retardo do crescimento tumoral. Um efeito sinérgico ainda é visível quando BAY1905254 é combinado a C4.4a ADC. Início do tratamento (d6): q3d i.p. As condições experimentais são mostradas na tabela a seguir: Grupo Nº N/grupo Composto Dose via | Volume de mm O ca | Controle 12 Isótipo 10 mg/kg 10 ml/kg C4.4A ADC 12 C4.4A ADC Isótipo 10 mg/kg 10 ml/kg = [PES aILDR2 12 BAY1905254 | 10 ma/Kkg | i.p. 10 mi/kg | aILDR2 + 12 C4.4A ADC EE seerEsA

[0029] Figura 9A: Atividade de encolhimento tumoral de diferentes anticorpos em um modelo de camundongo singeneico B16F10. A atividade de encolhimento tumoral é medida como a diminuição de volume de tumor, em relação a um controle de isótipo.

[0030] Figura 9B: comportamento anormal de anticorpos anti-ILDR2 selecionados de acordo com a presente invenção em um ensaio de indução de IL2 como em comparação a um anticorpo anti-PD-L1.

[0031] Figura 9C: Atividade de encolhimento tumoral de anticorpos anti-ILDR2 selecionados de acordo com a presente invenção em um modelo de camundongo singeneico CT26. A atividade de encolhimento tumoral é medida como a diminuição de volume de tumor, em relação a um controle de Isótipo. Definições

[0032] A menos que seja definido de outro modo, todos os termos técnicos e científicos usados no presente documento têm o significado comumente entendido por um indivíduo de habilidade comum na técnica a que esta invenção pertence. As referências a seguir, no entanto, podem fornecer a uma pessoa versada na técnica a qual esta invenção pertence uma definição geral de muitos dos termos usados nesta invenção, e podem ser citadas e usadas desde que tais definições sejam consistentes com o significado comumente compreendido na técnica. Tais referências incluem, porém sem limitação, Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2º ed., 1994); The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988); Hale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991); e Lackie et al., The

Dictionary of Cell & Molecular Biology (3º ed. 1999); e Cellular and Molecular Immunology, Eds. Abbas, Lichtman e Pober, 2º Edição, W.B. Saunders Company. Qualquer recurso técnico adicional disponível para a pessoa de habilidade comum na técnica que forneça definições dos termos usados no presente documento com o significado comumente compreendido na técnica pode ser consultado. Para os propósitos da presente invenção, os termos a seguir são adicionalmente definidos. Os termos adicionais são definidos em outro momento da descrição. Como usado no presente documento e nas reivindicações anexas, as formas singulares “um, uma” e “o, a” incluem referências plurais a menos que o contexto dite claramente o contrário.

[0033] “Aminoácidos” podem ser mencionados no presente documento com seus conhecidos símbolos de três letras ou pelos símbolos de uma letra recomendados pela Comissão de Nomenclatura Bioquímica IUPAC-IUB. Nucleotídeos, do mesmo modo, podem ser citados com seus códigos de uma letra comumente aceitos.

[0034] O termo “combinação” na presente invenção é usado como conhecido para os técnicos no assunto, sendo possível que a dita combinação seja uma combinação fixa, uma combinação não fixa ou um kit de partes.

[0035] Uma “combinação fixa” na presente invenção é usada como conhecido para os técnicos no assunto e é definida como uma combinação em que, por exemplo, um primeiro ingrediente ativo, tal como um antagonista ILDR2 da presente invenção, e um ingrediente ativo adicional estão presentes juntos em uma dosagem unitária ou em uma única entidade. Um exemplo de uma “combinação fixa” é uma composição farmacêutica em que um primeiro ingrediente ativo e um ingrediente ativo adicional estão presentes em mistura por adição para administração simultânea, tal como em uma formulação. Um outro exemplo de uma “combinação fixa” é uma combinação farmacêutica em que um primeiro ingrediente ativo e um ingrediente ativo adicional estão presentes em uma unidade sem ser em mistura por adição.

[0036] Uma combinação não fixa ou “kit de partes” na presente invenção é usada como conhecido para os técnicos no assunto e é definida como uma combinação em que um primeiro ingrediente ativo e um ingrediente ativo adicional estão presentes em mais de uma unidade. Um exemplo de uma combinação não fixa ou kit de partes é uma combinação em que o primeiro ingrediente ativo e o ingrediente ativo adicional estão presentes separadamente. É possível que os componentes da combinação não fixa ou kit de partes sejam administrados separadamente, sequencialmente, simultaneamente, concorrentemente ou cronologicamente escalonados.

[0037] "Anticorpos", também chamados como sinônimo de "imunoglobulinas" (Ig) compreendem geralmente quatro cadeias de polipeptídeo, duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L), e são, portanto, proteínas multiméricas, ou um homólogo Ig equivalente do mesmo (por exemplo, um nanocorpo de camelídeo, o qual compreende apenas uma cadeia pesada, anticorpos de domínio único (dAbs) que podem ser derivados de uma cadeia pesada ou leve); incluindo mutantes funcionais de comprimento total, variantes ou derivados dos mesmos (incluindo, porém sem limitação, anticorpos murinos, quiméricos, humanizados e totalmente humanos, os quais retêm os recursos de ligação a epítopo essenciais de uma molécula de Ig (ou, se necessário, são submetidos à maturação de afinidade ou desimunização), e incluindo imunoglobulinas de domínio específico duplo, biespecífico, multiespecífico e variável duplo. Moléculas de imunoglobulina podem ser de qualquer classe (por exemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY) ou subclasse (por exemplo, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl e IgA2) e alótipo. Em uma modalidade da presente invenção, o anticorpo anti-ILDR2 é totalmente humano e da subclasse IgG2.

[0038] Uma "proteína de ligação baseada em anticorpo", como usado no presente documento, pode representar qualquer proteína que contém pelo menos um domínio de imunoglobulina Vn, V1L ou Cr derivado de anticorpo no contexto de outros componentes derivados de não imunoglobulina ou não anticorpo. Tais proteínas baseadas em anticorpo incluem, porém sem limitação, (1) proteínas de fusão Fc de proteínas de ligação, incluindo receptores ou componentes de receptor com todos ou partes dos domínios de imunoglobulina Cn, (ii) proteínas de ligação, em que domínios Vx e ou V1 são acoplados a arcabouços moleculares alternativos, ou (iii) moléculas, em que os domínios Vx, e/ou V1, e/ou Cx de imunoglobulina são combinados e/ou unidos de uma maneira não normalmente encontrada em anticorpos ou fragmentos de anticorpo de ocorrência natural.

[0039] Um "derivado ou fragmento de anticorpo", como usado no presente documento, se refere a uma molécula que compreende pelo menos uma cadeia de polipeptídeos derivada de um anticorpo que não tem comprimento total, incluindo, porém sem limitação, (i) um fragmento Fab, o qual é um fragmento monovalente que consiste nos domínios leve variável (V1), pesado variável (Vrx), leve constante (GG) e pesado constante 1 (Cul); (ii) um fragmento F(ab')2, o qual é um fragmento bivalente que compreende dois fragmentos Fab ligados por uma ponte de dissulfito na região de dobradiça; (iii) uma porção de cadeia pesada de um fragmento Far (Fa), o qual consiste nos domínios Vx e Cul; (iv) um fragmento variável (Fv), Oo qual consiste nos domínios V1L e Vi de um braço único de um anticorpo, (v) um fragmento de anticorpo de domínio (dAb), o qual compreende um domínio de variável única; (vi) uma região determinante de complementaridade isolada (CDR); (vii) um Fragmento F, de cadeia única (scFyv); (viii) um diacorpo, o qual é um anticorpo biespecífico bivalente em que os domínios Vx e V1 são expressos em uma cadeia única de polipeptídeos, porém com o uso de um ligante que é muito curto para permitir o pareamento entre os dois domínios na mesma cadeia, forçando, desse modo, os domínios a parearem com os domínios de complementaridade de outra cadeia e criando dois sítios de ligação de antígeno; e (ix) um anticorpo linear, o qual compreende um par de segmentos F, em tandem (Vin-Crnl-Vg-Crkl) que, juntamente aos polipeptídeos de cadeia leve de complementaridade, formam um par de regiões de ligação de antígeno; e (x) outras porções de comprimento não total de cadeias pesadas e/ou leves de imunoglobulina, ou mutantes, variantes ou derivados das mesmas, individualmente ou em qualquer combinação.

[0040] O termo "formato de anticorpo modificado", como usado no presente documento, abrange anticorpo-fármaco- conjugados, scFv modificado por óxido de polialquileno, Monocorpos, Diacorpos, Anticorpos de Camelídeo, Anticorpos de Domínio, anticorpos bi ou triespecíficos, IgA ou duas estruturas de IgG unidas por uma cadeia J e um componente secretor, anticorpos de tubarão, arcabouço de primata no novo mundo + CDR de primata não pertencente ao novo mundo, anticorpos de IgG4 com região de dobradiça removida, IgG com dois sítios de ligação adicionais modificados nos domínios CH3, anticorpos com região de Fc alterada para melhorar afinidade para receptores Fc gama, construtos dimerizados que compreendem CH3+VL+VH, e similares.

[0041] O termo "miméticos de anticorpo", como usado no presente documento, se refere a proteínas não pertencentes à família da imunoglobulina, e mesmo as não proteínas, como aptâmeros, ou polímeros sintéticos. Alguns tipos têm uma estrutura em folha beta similar a anticorpo. As vantagens potenciais de "miméticos de anticorpo" ou "arcabouços alternativos" em relação a anticorpos consistem em melhor solubilidade, maior penetração em tecido, maior estabilidade mediante calor e enzimas e custos de produção comparativamente baixos.

[0042] Alguns mimético de anticorpo podem ser fornecidos em grandes bibliotecas, as quais oferecem candidatos de ligação específicos contra cada alvo concebível. Assim como com anticorpos, miméticos de anticorpo alvo-específicos podem ser desenvolvidos com o uso de tecnologias de Triagem de Alta Produtividade (HTS), bem como com tecnologias de exposição consagradas, como apresentação em fago, exposição bacteriana, exposição de levedura ou mamífero. Os miméticos de anticorpo atualmente desenvolvidos abrangem, por exemplo, proteínas de repetição de anquirina (denominadas DARPins), lectinas tipo C, proteínas de domínio A de S. aureus, transferrinas, lipocalinas, domínios do 10º tipo III de fibronectina, inibidores de protease do domínio Kunitz,

ligantes derivados de ubiquitina (denominados afilinas), ligantes derivados de gama cristalina, nós ou knottins de cisteína, ligantes baseados em arcabouço de tioredoxina A, aptâmeros de ácido nucleico, anticorpos artificiais produzidos por impressão molecular de polímeros, bibliotecas de peptídeo de genomas bacterianos, domínios SH-3, estradocorpos, “domínios A” de receptores membranares estabelecidos por ligações dissulfídicas e Ca2+, compostos à base de CTLA4, Fyn SH3 e aptâmeros (ácido oligonucleico ou moléculas de peptídeo que se ligam a moléculas de alvo específico).

[0043] O termo "região de Fc" no presente documento é usado para definir uma região C-terminal de uma cadeia pesada de imunoglobulina que contém pelo menos uma porção da região constante. O termo inclui regiões de Fc de sequência nativa e regiões de Fc variantes. A menos que seja especificado de outro modo no presente documento, a numeração de resíduos de aminoácido na região de Fc ou na região constante está de acordo com o sistema de numeração europeu, também denominado índice UE, como descrito em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5º Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.

[0044] Como usado no presente documento, “ILDR2” se refere a um Receptor Contendo Domínio Semelhante à Imunoglobulina 2, também conhecido como C1LIORF32, o qual é um novo membro da família B7/CD28. Para uma caracterização completa de ILDR2, consultar o documento WO2009032845, cujo conteúdo está incorporado a título de referência no presente documento.

[0045] As expressões "anticorpo anti-ILDR2" e "um anticorpo que se liga a ILDR2" se referem a um anticorpo que é capaz de se ligar a ILDR2 com afinidade suficiente de tal modo que o anticorpo seja útil como um agente de diagnóstico e/ou terapêutico no direcionamento de ILDR2. Em uma modalidade, a extensão de ligação de um anticorpo anti-ILDR2 a uma proteína não ILDR2 não relacionada é de menos de cerca de 5 % ou preferencialmente menos de cerca de 2 % da ligação do anticorpo a ILDR2 como medido, por exemplo, por uma ressonância de plasmon de superfície (SPR). Em certas modalidades, um anticorpo que se liga a ILDR2 tem uma constante de dissociação (KD) de < 1 pM, < 100 nM, <€ 10 nM, < 1 nM,< 0,1 nM, < 0,01 nM ou É 0,001 nM (por exemplo, 10- 8 M ou menos, por exemplo, de 10-8 M a 10-13 M, por exemplo, de 10-9 M a 10-13 M). Em certas modalidades, um anticorpo anti-ILDR2 se liga a um epítopo de ILDR2 que é conservado entre ILDR2 de diferentes espécies.

[0046] Como usado no presente documento, o termo "Regiões Determinantes de Complementaridade” (CDRs; por exemplo, CDR1, CDR2 e CDR3) se refere aos resíduos de aminoácido de um domínio variável de anticorpo cuja presença é necessária para ligação de antígeno. Cada domínio variável tem tipicamente três regiões de CDR identificadas como CDRI1, CDR2 e CDR3. Cada região determinante de complementaridade pode compreender resíduos de aminoácido de uma "região determinante de complementaridade" como definido por Kabat (por exemplo, cerca de resíduos 24-34 (Ll), 50-56 (L2) e 89- 97 (L3) no domínio variável de cadeia leve e 31-35 (Hl1), 50- 65 (H2) e 95-102 (H3) no domínio variável de cadeia pesada; (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immulological Interest, 5º Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) e/ou aqueles resíduos de uma "alça hipervariável" (por exemplo, aproximadamente resíduos 26-32 (Ll), 50-52 (12) e 91-96 (13) no domínio variável de cadeia leve e 26- 32 (Hl1), 53-55 (H2) e 96-101 (H3) no domínio variável de cadeia pesada (Chothia e Lesk; J Mol Biol 196: 9001-917 (1987)). Em alguns casos, uma região determinante de complementaridade pode incluir aminoácidos de uma região de CDR definida de acordo com Kabat e de uma alça hipervariável.

[0047] Dependendo da sequência de aminoácidos do domínio constante de suas cadeias pesadas, anticorpos intactos podem ser atribuídos a diferentes "classes". Há cinco classes principais de anticorpos intactos: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, e diversos desses podem ser adicionalmente divididos em "subclasses" (isótipos), por exemplo, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl e IgA2. Uma classe preferencial de imunoglobulinas para uso na presente invenção é IgG.

[0048] Os domínios constantes da cadeia pesada que correspondem às diferentes classes de anticorpos são chamados [alfa], [delta], [epsilon], [gama] e [mu], respectivamente. As estruturas das subunidades e configurações tridimensionais de diferentes classes de imunoglobulinas são bem conhecidas. Como usado no presente documento, anticorpos são anticorpos convencionalmente conhecidos e fragmentos funcionais dos mesmos.

[0049] Variantes dos anticorpos ou fragmentos de anticorpo de ligação a antígeno contemplados na invenção são moléculas em que a atividade de ligação do anticorpo ou fragmento de anticorpo de ligação a antígeno é mantida.

[0050] Um anticorpo “humano” ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é definido no presente documento como aquele que não é quimérico (por exemplo, não “humanizado”) e não é (totalmente ou em parte) uma espécie não humana. Um anticorpo humano ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo pode ser derivado de um ser humano ou pode ser um anticorpo humano sintético. Um “anticorpo humano sintético” é definido no presente documento como um anticorpo que tem uma sequência derivada, totalmente ou em parte, in silico de sequências sintéticas que são baseadas na análise de sequências de anticorpo humano conhecidas. O projeto in silico de uma sequência de anticorpo humano ou fragmento do mesmo pode ser alcançado, por exemplo, analisando um banco de dados de anticorpo humano ou sequências de fragmento de anticorpo e elaborar uma sequência de polipeptídeos utilizando os dados obtidos a partir do mesmo. Outro exemplo de um anticorpo humano ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é aquele que é codificado por um ácido nucleico isolado de uma biblioteca de sequências de anticorpo de origem humana (por exemplo, tal biblioteca é baseada em anticorpos obtidos de uma fonte natural humana). Exemplos de anticorpos humanos incluem anticorpos como descrito em Sóderlind et al., Nature Biotech. 2000, 18:853-856.

[0051] O termo "anticorpo monoclonal" como usado no presente documento se refere a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, isto é, os anticorpos individuais que compreendem a população são idênticos exceto pelas possíveis, por exemplo, mutações de ocorrência natural que podem estar presentes em quantidades menores. Assim, o termo "monoclonal" indica o caráter do anticorpo como não sendo uma mistura de anticorpos discretos. Em oposição às preparações de anticorpo policlonal, que tipicamente incluem diferentes anticorpos direcionados contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal de uma preparação de anticorpo monoclonal é direcionado contra um único determinante em um antígeno. Além de sua especificidade, as preparações de anticorpo monoclonal são vantajosas em que são tipicamente descontaminadas — por outras imunoglobulinas. oO termo "monoclonal” não deve ser interpretado para precisar de produção do anticorpo por qualquer método específico. O termo anticorpo monoclonal inclui especificamente anticorpos quiméricos, humanizados e humanos.

[0052] Um anticorpo "isolado" é aquele que foi identificado e separado de um componente da célula que o expressou. Os componentes contaminantes da célula são materiais que interfeririam nos usos diagnósticos ou terapêuticos do anticorpo, e podem incluir enzimas, hormônios e outros solutos proteináceos ou não proteináceos.

[0053] Um ácido nucleico "isolado" é aquele que foi identificado e separado de um componente de seu ambiente natural. Um ácido nucleico isolado inclui uma molécula de ácido nucleico contida em células que contêm comumente a molécula de ácido nucleico, porém a molécula de ácido nucleico está presente de modo extracromossomal ou em um local cromossomal que é diferente de seu local cromossomal natural.

[0054] Conforme usado no presente documento, um anticorpo “se liga especificamente a”, é “específico a/para” ou “reconhece especificamente” um antígeno de interesse, por exemplo, um alvo de antígeno de polipeptídeo associado a tumor, é um que liga o antígeno com afinidade suficiente de modo que o anticorpo seja útil como um agente terapêutico no alvejamento de uma célula ou tecido que expressa o antígeno, e não reage por cruzamento significativamente com outras proteínas ou não reage por cruzamento significativamente com proteínas além das ortólogas e variantes (por exemplo, formas mutantes, variantes de splice, ou formas proteoliticamente truncadas) do alvo de antígeno mencionado anteriormente.

O termo "reconhece especificamente" ou "se liga especificamente a" ou é "específico a/para" um polipeptídeo em particular ou um epítopo em um alvo de polipeptídeo em particular conforme usado no presente documento pode ser exibido, por exemplo, por um anticorpo, ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, que tem um KD monovalente para o antígeno de menos que cerca de 10-4 M, alternativamente menos que cerca de 10-5 M, alternativamente menos que cerca de 10-6 M, alternativamente menos que cerca de 10-7 M, alternativamente menos que cerca de 10-8 M, alternativamente menos que cerca de 10-9 M, alternativamente menos que cerca de 10-10 M, alternativamente menos que cerca de 10-11 M, alternativamente menos que cerca de 10-12 M, ou menos.

Um anticorpo “se liga especificamente a”, é “específico a/para” ou “reconhece especificamente” um antígeno se tal anticorpo for capaz de discriminar entre tal antígeno e um ou mais antígenos de referência.

Em sua forma mais geral, “ligação específica”, “se liga especificamente a”, é “específico a/para” ou “reconhece especificamente” se refere à habilidade do anticorpo discriminar entre o antígeno de interesse e um antígeno não relacionado, conforme descrito, por exemplo, de acordo com um dos seguintes métodos.

Tais métodos compreendem, mas sem limitação, ressonância de plasmon de superfície (SPR), Western blots, testes ELISA, RIA, ECL, IRMA e varreduras de peptídeo. Por exemplo, um ensaio ELISA padrão pode ser executado. A pontuação pode ser realizada por desenvolvimento de cor padrão (por exemplo, anticorpo secundário com peroxidase de rábano e tetrametil benzidina com peróxido de hidrogênio). A reação em certos poços é pontuada pela densidade óptica, por exemplo, a 450 nm. O fundo típico (=reação negativa) pode ser 0,1 OD; a reação positiva típica pode ser 1 OD. Isso significa que a diferença de positivo/negativo é de mais de 5 vezes, 10 vezes, 50 vezes e preferencialmente mais que 100 vezes. Tipicamente, a determinação de especificidade de ligação é realizada pelo uso não de um único antígeno de referência, mas de um conjunto de cerca de três a cinco antígenos não relacionados, como leite em pó, BSA, transferrina Ou similares.

[0055] "Afinidade de ligação" ou “afinidade” se refere à intensidade da soma total de interações não covalentes entre um único sítio de ligação de uma molécula e seu parceiro de ligação. A menos que seja indicado de outro modo, como usado no presente documento, "afinidade de ligação" se refere à afinidade de ligação intrínseca que reflete uma interação de 1 : 1 entre membros de um par de ligação (por exemplo, um anticorpo e um antígeno). A constante de dissociação “KD” é comumente usada para descrever a afinidade entre uma molécula (como um anticorpo) e seu parceiro de ligação (como um antígeno), isto é, o quão firmemente um ligante se liga a uma proteína particular. Afinidades entre ligante e proteína são influenciadas por interações intermoleculares não covalentes entre as duas moléculas. A afinidade pode ser medida por métodos comuns conhecidos na técnica, incluindo aqueles descritos no presente documento.

[0056] Como usado no presente documento, o termo “epítopo” inclui qualquer determinante de proteína capaz de ligação específica a uma imunoglobulina ou receptor de célula T. Os determinantes epitópicos consistem usualmente em grupos de superfície quimicamente ativos de moléculas, como aminoácidos ou cadeias laterais de açúcar ou combinações das mesmas, e têm usualmente características estruturais tridimensionais específicas, bem como características de carga específica.

[0057] Um "anticorpo que se liga ao mesmo epítopo" como um anticorpo de referência ou “um anticorpo que compete por ligação” a uma anticorpo de referência se refere a um anticorpo que bloqueia a ligação do anticorpo de referência a seu antígeno em um ensaio de competição em 50 % ou mais, e, ao contrário, o anticorpo de referência bloqueia a ligação do anticorpo a seu antígeno em um ensaio de competição em 50 % ou mais. Um ensaio de competição exemplificativo é fornecido no presente documento.

[0058] o termo “imunoconjugado” (alternativamente denominado como "conjugado de anticorpo-fármaco" ou "ADC") se refere a um anticorpo conjugado a um ou mais agentes citotóxicos ou citoestáticos, como um agente quimioterápico, um fármaco, um agente inibidor de crescimento, uma toxina (por “exemplo, uma toxina de proteína, uma toxina enzimaticamente ativa de origem bacteriana, fúngica, vegetal ou animal ou fragmentos das mesmas), ou um isótipo radioativo (isto é, um radioconjugado). Imunoconjugados foram usados para a entrega local de agentes citotóxicos, isto é, fármacos que exterminam ou inibem o crescimento ou proliferação de células, no tratamento de câncer (por exemplo, Liu et al., Proc Natl. Acad. Sci. (1996), 293, 8618-8623) ). Imunoconjugados permitem a entrega direcionada de uma fração de fármaco a um tumor, e acúmulo intracelular na mesma, onde a administração sistêmica de fármacos não conjugados pode resultar em níveis inaceitáveis de toxicidade a células e/ou tecidos normais. Toxinas usadas em conjugados anticorpo- toxina incluem toxinas bacterianas, como toxina da difteria, toxinas vegetais, como ricina, toxinas de molécula pequena, como geldanamicina. As toxinas podem exercer seus efeitos citotóxicos por mecanismos incluindo ligação de tubulina, ligação de DNA ou inibição de topoisomerase.

[0059] "Percentual (%) de identidade de sequência" em relação a um polinucleotídeo ou sequência de polipeptídeos de referência, respectivamente, é definido como o percentual de resíduos de ácido nucleico ou aminoácido, respectivamente, em uma sequência candidata que são idênticos aos resíduos de ácido nucleico ou aminoácido, respectivamente, no polinucleotídeo ou sequência de polipeptídeos de referência, respectivamente, após alinhar as sequências e introduzir intervalos, se necessário, para alcançar o percentual máximo de identidade de sequência. As substituições conservativas não são consideradas parte da identidade de sequência. São preferenciais alinhamentos sem intervalos. O alinhamento para propósitos de determinação de percentual de identidade de sequência de aminoácidos pode ser alcançado de várias maneiras que estão incluídas na habilidade do elemento versado na técnica, por exemplo, com o uso de software de computado disponível para o público, como software BLAST, BLAST-2, ALIGN ou Megalign (DNASTAR). Os elementos versados na técnica podem determinar parâmetros apropriados para alinhar sequências, que inclui quaisquer algoritmos necessários para alcançar o alinhamento máximo por toda a extensão das sequências que são comparadas. "Homologia de sequência" indica o percentual de aminoácidos que é idêntico ou que representa substituições de aminoácido conservativas.

[0060] “Doenças neoplásicas” são condições que causam crescimento tumoral — tanto benigno quando maligno. Um neoplasma é um crescimento anormal de células, também conhecido como um tumor. Descrição Detalhada da Invenção

[0061] Antes de descrever a invenção em detalhes, deve- se compreender que esta invenção não é limitada às partes componentes particulares dos dispositivos descritos ou etapas de processo dos métodos descritos, visto que tais dispositivos e métodos podem variar. Deve-se entender, também, que a terminologia usada no presente documento serve para fins descritivos das modalidades particulares apenas e não deve ser limitativa. Deve ser observado que, como usado no relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares "um", "uma" e "o(a)" e/ou os referentes no plural, exceto se o contexto claramente ditar de outro modo. Ademais, deve-se entender que, caso as faixas de parâmetro que sejam delimitadas por valores numéricos, as faixas são consideradas como inclusivas desses valores de limitação.

[0062] Deve-se entender adicionalmente que as modalidades reveladas no presente documento não devem ser entendidas como modalidades individuais que não estão relacionadas entre si. Os recursos discutidos com uma modalidade devem ser revelados também em combinação com outras modalidades mostradas no presente documento. Se, em um caso, um recurso específico não for revelado com uma modalidade, porém com outra, a pessoa versada entenderá que não significa necessariamente que o dito recurso não deve ser revelado com a dita outra modalidade. A pessoa versada na técnica entenderá que a ideia central do presente pedido é revelar o dito recurso também para outra modalidade, porém que isso não foi feito apenas a título de clareza e para manter o relatório descritivo em um volume gerenciável.

[0063] Além disso, o conteúdo dos documentos da técnica anterior citados no presente documento é incorporado a título de referência. Isso se refere, particularmente, a documentos da técnica anterior que revela métodos padrão ou rotineiros. Nesse caso, a incorporação a título de referência tem o propósito principalmente de fornecer uma revelação suficientemente apropriada e evitar muitas repetições.

[0064] De acordo com um aspecto da invenção, é fornecida uma combinação farmacêutica que compreende um antagonista de ILDR2 mais, opcionalmente, um ou mais outros compostos terapeuticamente ativos.

[0065] Preferencialmente, o antagonista de ILDR2 da presente invenção é um anticorpo anti-ILDR2. Mais preferencialmente, o anticorpo anti-ILDR2 é um anticorpo como adicionalmente descrito no presente documento abaixo.

[0066] De acordo com uma modalidade da invenção, o outro composto terapeuticamente ativo é pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em e um antagonista de PD-L1 * um taxano ou derivado de taxano * uma vacina * um oligodesoxinucleotídeo CpG e/ou * um composto que direciona c4.4A.

[0067] Preferencialmente, o antagonista de PD-L1 é um anticorpo anti-PD-Ll. Mais preferencialmente, o anticorpo anti-PD-L1 compreende os domínios variáveis de atezolizumab. Ainda mais preferencialmente, o anticorpo anti-PD-Ll1 é atezoliuzumabe.

[0068] O termo “derivado de taxano”, como usado no presente documento, se refere a compostos citotóxicos ou citostáticos que compreendem um núcleo de taxadieno. Mais preferencialmente, o derivado de taxano é paclitaxel, docetaxel ou cabazitaxel.

[0069] O termo “oligodesoxinucleotídeo CpG” se refere a moléculas de DNA sintéticas de fita simples que contêm um desoxinucleotídeo de trifosfato de citosina ("C") sucedido por um desoxinucleotídeo de trifosfato de guanina ("GG"). O "p" se refere à ligação de fosfodiéster entre nucleotídeos consecutivos, embora alguns ODN tenham uma cadeia principal de fosforotioato modificado (PS) em vez disso. Quando motivos de CpG são não metilados, eles agem como imunoestimulantes. Em uma modalidade, o oligodesoxinucleotídeo CpG é ODN1826 como, por exemplo, distribuído por Invivogen, que tem uma sequência de nucleotídeo da SEQ ID No 17 (tecatgacgttccetgacgtt).

[0070] C4.4A (LYPD3, UniProtKB - 095274 (LYPD3 HUMAN)) é uma proteína de superfície celular internalizante que foi identificada como um marcador de superfície associado a câncer e metástase. C4.4A (LYPD3) pode ser, portanto, usada como marcador para direcionar fármacos anticâncer a um tumor. A pessoa versada na técnica é capaz, através de métodos comuns, de gerar compostos que direcionam C4.4A, por exemplo, por apresentação em fago ou imunização, ou por triagem de biblioteca com métodos de triagem adequados. Portanto, tal composto que direciona C4.4A pode ser um anticorpo, fragmento de anticorpo ou derivado que retém capacidade de ligação, ou um mimético de anticorpo. Além disso, tal composto que direciona c4.4A pode ser uma molécula pequena.

[0071] Em uma modalidade, o composto que direciona C4.4A é um conjugado de anticorpo e fármaco que compreende um anticorpo, ou fragmento ou derivado do mesmo, ou um mimético de anticorpo, que direciona C4.4A, conjugado a um agente citotóxico ou citostático. Preferencialmente, o composto que direciona C4.4A é BAY1129980 que consiste em um anticorpo anti-C4.4A (LYPD3) conjugado à Auristatina.

[0072] A presente invenção também fornece conjugados anticorpo-fármaco (ADC, imunoconjugados) que compreendem um anticorpo anti-ILDR2 conjugado a um ou mais agentes citotóxicos, como agentes ou fármacos quimioterápicos, agentes inibidores de crescimento, toxinas (por exemplo, toxinas de proteína, toxinas enzimaticamente ativas de origem bacteriana, fúngica, vegetal, humana ou animal, ou fragmentos das mesmas), ou isótopos radioativos. Preferencialmente, o anticorpo anti-ILDR2 é aquele descrito no presente documento abaixo, mais preferencialmente o anticorpo anti-ILDR2 é BAY1905254.

[0073] Em uma modalidade, um imunoconjugado é um conjugado de anticorpo-fármaco (ADC) em que um anticorpo é conjugado a um ou mais fármacos, incluindo, porém sem limitação, um maitansinoide (consultar as Patentes nº US

5.208.020, 5.416.064 e a Patente Europeia EPO0425235); uma auristatina, como porções químicas de fármaco de monometilauristatina DE e DF (MMAE e MMAF) (consultar as Patentes nº US 5.635.483 e 5.780.588 e 7.498.298); uma dolastatina; uma caliqueamicina ou derivado da mesma; uma antraciclina, como daunomicina ou doxorubicina; metotrexato; vindesina; um taxano, como docetaxel, paclitaxel, larotaxel, tesetaxel e ortataxel; um tricoteceno; e CC1065.

[0074] Em outra modalidade, um imunoconjugado compreende um anticorpo como descrito no presente documento conjugado a uma toxina enzimaticamente ativa ou fragmento da mesma, incluindo, porém sem limitação, cadeia A de difteria A, fragmentos ativos de não ligação de toxina de difteria, cadeia A de exotoxina (de Pseudomonas aeruginosa), cadeia A de ricina, cadeia A de abrina, cadeia A de modecina, alfaasarcina, proteínas de Aleurites fordii, proteínas de diantina, proteínas de Phytolaca americana (P API, P APIL e PAP-S), inibidor de momordica charantia, curcina, crotina, inibidor de sapaonaria officinalis, gelonina, mitogelina, restrictocina, fenomicina, enomicina e os tricotecenos.

[0075] Em outra modalidade, um imunoconjugado compreende um anticorpo como descrito no presente documento conjugado a um átomo radioativo para formar um radioconjugado. Uma variedade de isótopos radioativos está disponível para a produção de radioconjugados. Exemplos incluem 227Th, 225Ac, 211At, 1311, 1251, 90Y, 186Re, 188Re, 153Sm, 212Bi, 32P, 212Pb e isótopos radioativos de Lu. Quando o radioconjugado é usado para detecção, pode compreender um átomo radioativo para estudos escintigráficos, por exemplo, Tc99m, ou um marcador de spin para imageamento de ressonância magnética nuclear (RMN), como iodo-123 novamente, iodo-131, índio-l11, flúor-19, carbono-13, nitrogênio-15, oxigênio-l17, gadolínio, manganês ou ferro.

[0076] Conjugados de um anticorpo e agente citotóxico podem ser feitos com o uso de uma variedade de agentes de acoplamento de proteína bifuncional, como N-succinimidil-3- (2-piridilditio) propionato (SPDP), ciclo-hexano-l1- carboxilato de succinimidil-4- (N-maleimidometila) (SMCC), iminotiolano (IT), derivados bifuncionais de imidoésteres (como HCl de adipimidato de dimetila), ésteres ativos (como suberato de disuccinimidila), aldeídos (como glutaraldeído), compostos de bis-azido (como bis (p-azidobenzoil) hexanodiamina), derivados de bis-diazônio (como bis-(p- diazoniobenzoil)-etilenodiamina), di-isocianatos (como 2,6- di-isocianato de tolueno) e compostos de flúor bis-ativo (como 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzeno).

[0077] O ligante pode ser um "ligante clivável" que facilita a liberação de um fármaco citotóxico na célula. Por exemplo, um ligante lábil em ácido, ligante sensível à peptidase, ligante fotolábil, ligante de dimetila ou ligante que contém dissulfeto (Chari et al., Cancer Res. 52: 12 7- 131 (1992).

[0078] Os imunoconjugados ou ADCsS no presente documento contemplam "expressamente, porém sem limitação, tais conjugados preparados com reagentes de reticulador, incluindo, porém sem limitação, BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC- SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, sulfo- EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SIAB, sulfo-

SMCC e sulfo-SMPB, e SVSB (succinimidil- (4- vinilsulfona)benzoato) que estão comercialmente disponíveis (por exemplo, da Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., EUA) .

[0079] De acordo com uma modalidade da invenção, oO antagonista de ILDR2 e o outro composto terapeuticamente ativo são: e fornecidos na mesma unidade de dosagem ou e fornecidos em unidades de dosagem individuais.

[0080] De acordo com uma outra modalidade da invenção, o antagonista de ILDR2 e o outro composto terapeuticamente ativo são: * administrados simultaneamente ou * administrados sequencialmente, isto é, um após o outro.

[0081] De acordo com uma modalidade da invenção, oO antagonista de ILDR2 é um anticorpo, um fragmento ou derivado do mesmo, um formato de anticorpo modificado, ou um mimético de anticorpo, sendo que todos têm propriedades de ligação a ILDR2.

[0082] De acordo com um aspecto adicional da invenção, um anticorpo anti-ILDR2, ou um fragmento ou derivado do mesmo, ou um formato de anticorpo modificado, sendo que todos têm propriedades de ligação a ILDR2, é fornecido, o qual compreende pelo menos as três sequências de cadeia pesada de CDR: SEQ ID No 1 CDR1 HC SEQ ID No 2 CDR2 HC SEQ ID No 3 CDR3 HC

[0083] De acordo com um aspecto adicional da invenção, um anticorpo anti-ILDR2, ou um fragmento ou derivado do mesmo, ou um formato de anticorpo modificado, sendo que todos têm propriedades de ligação a ILDR2, é fornecido, o qual compreende pelo menos as três sequências de cadeia leve de CDR: SEQ ID No 4 CDR1 LC SEQ ID No 5 CDR2 LC SEQ ID No 6 CDR3 LC

[0084] No mesmo, “HC” significa cadeia pesada e “LC” significa cadeia leve. As sequências acima são as CDRs de BAY1905254 (também chamadas 59-08.BO02 no presente documento).

[0085] De acordo com uma modalidade, o anticorpo anti- ILDR2, fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado compreende pelo menos uma sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve que é 95 % idêntica, preferencialmente 96 ou mesmo 97 &%& idêntica, mais preferencialmente 98 % ou mesmo 99 % idêntica, e com máxima preferência 100 %, a uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID No 7 HC VD SEQ ID No 8 LC VD

[0086] No mesmo, “VD” significa domínio variável. As sequências acima são os domínios variáveis de BAY1905254 (chamados como sinônimo de 59-08.B02 ou BO02 no presente documento) .

[0087] De acordo com uma modalidade adicional, o anticorpo anti-ILDR2, fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado compreende pelo menos uma sequência de cadeia pesada Ou cadeia leve que e 958% idêntica,

preferencialmente 96 % ou mesmo 97 8% idêntica, mais preferencialmente 98 % ou mesmo 99 % idêntica, e com máxima preferência 100 %, a uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID No 42 HC SEQ ID No 43 LC.

[0088] No mesmo, “HC” significa cadeia pesada e “LC” significa cadeia leve. As sequências acima são as sequências de cadeia pesada e cadeia leve de BAY1905254 (também denominadas 59-08.B02 no presente documento).

[0089] De acordo com um aspecto adicional da invenção, um anticorpo anti-ILDR2, ou um fragmento ou derivado do mesmo, ou um formato de anticorpo modificado, sendo que todos têm propriedades de ligação a ILDR2, é fornecido, o qual compreende pelo menos uma combinação de três sequências de cadeia pesada de CDR, selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID No 18 - 20, 61-02.CO05 SEQ ID No 24 - 26, 56-02.E0O08 SEQ ID No 30 - 32, e/ou 74.15.G09 SEQ ID No 36 - 38. 56.02.E10

[0090] De acordo com um aspecto adicional da invenção, um anticorpo anti-ILDR2, ou um fragmento ou derivado do mesmo, ou um formato de anticorpo modificado, sendo que todos têm propriedades de ligação a ILDR2, é fornecido, o qual compreende pelo menos uma combinação de três sequências de cadeia leve de CDR, selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID No 21 - 23, 61-02.C05

SEQ ID No 27 - 29, 56-02.EO08 SEQ ID No 33 - 35 e/ou 74.15.G09 SEQ ID No 39 - 41. 56.02.E10

[0091] As sequências acima são as CDRs dos anticorpos 61-

02.CO5, 56-02.EO08, 74.15.G09 e 56.02.E10.

[0092] De acordo com um aspecto adicional da invenção, um anticorpo anti-ILDR2, ou um fragmento ou derivado do mesmo, ou um formato de anticorpo modificado, sendo que todos têm propriedades de ligação a ILDR2, é fornecido, o qual compreende pelo menos uma sequência de região variável de cadeia pesada Ou cadeia leve que é 958% idêntica, preferencialmente 96 ou mesmo 97% idêntica, mais preferencialmente 98 % ou mesmo 99 % idêntica, e com máxima preferência 100 %, a uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID No 9, 61-02.CO0O5 HC VD SEQ ID No 10, 61-02.C0O5 LC VD SEQ ID No 11, 56-02.E08 HC VD SEQ ID No 12, 56-02.E08 LC VD SEQ ID No 13, 74.15.G09 HC VD SEQ ID No 14, 74.15.G09 LC VD SEQ ID No 15, e/ou 56.02.E10 HC VD SEQ ID No 16. 56.02.E10 LC VD

[0093] As sequências acima são os domínios variáveis de 61-02.C05, 56-02.E08, 74.15.G09 e 56.02.E10.

[0094] De acordo com uma modalidade adicional da presente invenção, um anticorpo anti-ILDR2, ou um fragmento ou derivado do mesmo, ou um formato de anticorpo modificado, sendo que todos têm propriedades de ligação a ILDR2, é fornecido, o qual compreende pelo menos uma sequência de cadeia pesada Ou cadeia leve que é 958% idêntica, preferencialmente 96 ou mesmo 978% idêntica, mais preferencialmente 98 % ou mesmo 99 % idêntica, e com máxima preferência 100 %, a uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID No 44, SEQ ID No 45, SEQ ID No 46, SEQ ID No 47, SEQ ID No 48, SEQ ID No 49, SEQ ID No 50, e/ou SEQ ID No 51.

[0095] A tabela a seguir mostra uma visão geral dessas sequências e dos anticorpos aos quais pertencem. Mt LEE GA Tam varas msss 155 EL Es Ea ES FAR e mam Tema]

SEQ ID Anticorpo + Tipo e |

E EE EEE [E ms SEE —

[0096] De acordo com uma modalidade da invenção, oO anticorpo ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado é selecionado a partir do grupo que consiste em 61-02.CO5, 56-02.EO08, 74-15.G09 e 59-08.B0O2.

[0097] De acordo com uma modalidade da invenção, oO antagonista de ILDR2 ou anticorpo, ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado se dissocia de ILDR2 humano com uma Ka de 25 nM (2,5 x 107º M) ou menos, determinada por varredura de célula ativada por fluorescência (FACS).

[0098] Preferencialmente, a dita Ka é 15 nM ou menos. Mais preferencialmente, a dita Ki é 13nM ou menos. Mais preferencialmente, a dita Ki é 11 nM ou menos. Mais preferencialmente, a dita Ki é 8nM ou menos. Mais preferencialmente, a dita K é 5 nM ou menos. Mais preferencialmente, a dita Ka é 3 nM ou menos. Com máxima preferência, a dita Ka é 2 nM ou menos.

[0099] De acordo com um aspecto adicional da invenção, um antagonista de ILDR2 ou anticorpo, ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado é fornecido, o qual compete por ligação a ILDR2 com um anticorpo ILDR2 de acordo com o relatório descrito acima.

[0100] De acordo com outro aspecto da invenção, uma sequência de ácidos nucleicos isolada, ou um conjunto da mesma, é fornecida, a qual codifica um anticorpo ILDR2, ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado de acordo com o relatório descritivo acima.

[0101] De acordo com outro aspecto da invenção, um vetor que compreende pelo menos uma sequência de ácido nucleico de acordo com o relatório descritivo acima é fornecido.

[0102] De acordo com outro aspecto da invenção, uma célula isolada que expressa um anticorpo ILDR2, ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado de acordo com o relatório descritivo acima e/ou que compreende uma sequência de ácidos nucleicos, ou um conjunto da mesma de acordo com o relatório descritivo acima, ou um vetor de acordo com o relatório descritivo acima é fornecida.

[0103] De acordo com uma modalidade da invenção, a combinação farmacêutica compreende o antagonista de ILDR2 ou anticorpo, ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado de acordo com o relatório descritivo acima. Métodos Terapêuticos

[0104] Métodos terapêuticos envolvem administrar a um indivíduo que necessita de tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo ou uma variante do mesmo contemplado pela invenção. Uma quantidade "terapeuticamente eficaz" no presente documento é definida como a quantidade de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno que tem quantidade suficiente, como uma dose única ou de acordo com um regime de múltiplas doses, individualmente ou em combinação com outros agentes, para levar a uma amenização de um efeito colateral, sendo ainda que essa quantidade é toxicologicamente tolerável. O indivíduo pode ser um animal humano ou não humano (por exemplo, coelho, rato, camundongo, cão, macaco ou outro primata de ordem inferior).

[0105] De acordo com outro aspecto da invenção, O antagonista de ILDR2 ou anticorpo, ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado, ou a combinação que compreende um antagonista de ILDR2 de acordo com o relatório descritivo acima, é fornecido para uso como um medicamento.

[0106] É uma modalidade da invenção fornecer um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo para uso como um medicamento para o tratamento de câncer.

[0107] De acordo com uma modalidade, o antagonista de ILDR2 ou anticorpo, ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado, ou a combinação que compreende um antagonista de ILDR2 é para uso no tratamento de um paciente e que sofre de, e que corre risco de desenvolver e/ou e que foi diagnosticado com uma doença neoplásica, como câncer, ou uma doença ou transtorno imune, em que o antagonista de ILDR2Q é administrado em uma ou mais dosagens terapeuticamente eficazes.

[0108] De acordo com uma outra modalidade, um método para tratar um paciente e que sofre de, * que corre risco de desenvolver e/ou e que foi diagnosticado com uma doença neoplásica, como câncer, ou uma doença ou transtorno imune, é fornecido, sendo que o dito método compreende administrar ao dito paciente um antagonista de ILDR2 ou anticorpo, ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado, ou uma combinação que compreende um antagonista de ILDR2, de acordo com o relatório descritivo acima, em uma ou mais dosagens terapeuticamente eficazes.

[0109] Uma modalidade adicional da invenção consiste em usar o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.

[0110] Os anticorpos da invenção ou fragmentos de ligação a antígeno do mesmo podem ser usados como uma ferramenta terapêutica ou de diagnóstico em uma variedade de situações com sinalização de ILDR2 anormal, por exemplo, transtornos proliferativos celulares, como câncer. Transtornos e condições para o tratamento com um anticorpo da invenção podem ser, porém sem limitação, tumores sólidos, como, por exemplo, cânceres de mama, trato respiratório, cérebro, órgãos reprodutores, trato digestivo, trato urinário, olhos, fígado, pele, cabeça e pescoço, tiroide, paratiroide e suas metástases distantes. Aqueles transtornos também incluem linfomas, sarcomas e leucemias.

[0111] Tumores do trato digestivo incluem, porém sem limitação, cânceres anal, do cólon, colorretal, do esôfago, da vesícula biliar, gástrico, pancreático, retal, do intestino delgado e da glândula salivar.

[0112] Exemplos de câncer do esôfago incluem, porém sem limitação, carcinomas de célula do esôfago e Adenocarcinomas, bem como carcinomas de células escamosas, Leiomiossarcoma, melanoma maligno, rabdomiossarcoma e Linfoma.

[0113] Exemplos de câncer gástrico incluem, porém sem limitação, adenocarcinoma gástrico do tipo intestinal e do tipo difuso.

[0114] Exemplos de câncer pancreático incluem, porém sem limitação, adenocarcinoma ductal, carcinomas adenoescamosos e tumores endócrinos pancreáticos.

[0115] Exemplos de câncer de mama incluem, porém sem limitação, câncer de mama triplo negativo, carcinoma ductal invasivo, carcinoma lobular invasivo, carcinoma ductal in situ e carcinoma lobular in situ.

[0116] Exemplos de cânceres do trato respiratório incluem, porém sem limitação, carcinoma pulmonar de célula pequena e de célula não pequena, bem como adenoma brônquico e blastoma pleuropulmonar.

[0117] Exemplos de cânceres de cérebro incluem, porém sem limitação, glioma hipoftálmico e de tronco encefálico, astrocitoma cerebelar e cerebral, glioblastoma, meduloblastoma, ependimoma, bem como tumor neuroectodérmico e da pineal.

[0118] Tumores dos órgãos reprodutores masculinos incluem, porém sem limitação, câncer de próstata e testículos. Tumores dos órgãos reprodutores femininos incluem, porém sem limitação, câncer do endométrio, cervical, de ovário, vaginal e de vulva, bem como sarcoma do útero.

[0119] Exemplos de câncer de ovário incluem, porém sem limitação, tumor seroso, tumor endometrioide, cistoadenocarcinoma mucinoso, tumor de células da granulosa, tumor de células de Sertoli-Leydig e arrenoblastoma.

[0120] Exemplos de câncer cervical incluem, porém sem limitação, carcinoma de célula escamosa, adenocarcinoma,

carcinoma adenoescamoso, carcinoma de célula pequena, tumor neuroendócrino, carcinoma de célula tipo glassy e adenocarcinoma viloglandular.

[0121] Tumores do trato urinário incluem, porém sem limitação, cânceres de bexiga, pênis, rins, pelve renal, ureter, uretra e renal papilar esporádico e hereditário.

[0122] Exemplos de câncer renal incluem, porém sem limitação, carcinoma de célula renal, carcinoma de célula urotelial, tumor de célula justaglomerular (reninoma), angiomiolipoma, oncocitoma renal, carcinoma do tubo de Bellini, sarcoma de célula clara dos rins, nefroma mesoblástico e tumor de Wilms.

[0123] Exemplos de câncer de bexiga incluem, porém sem limitação, carcinoma de célula transicional, carcinoma de célula escamosa, adenocarcinoma, sSsarcoma e carcinoma de célula pequena.

[0124] Cânceres oculares incluem, porém sem limitação, melanoma intraocular e retinoblastoma.

[0125] Exemplos de cânceres hepáticos incluem, porém sem limitação, carcinoma hepatocelular (carcinomas de células do fígado com ou sem variante fibrolamelar), colangiocarcinoma (carcinoma de via biliar intra-hepática), e colangiocarcinoma hepatocelular misto.

[0126] Os cânceres de pele incluem, porém sem limitação, carcinoma de célula escamosa, sarcoma de Kaposi, melanoma maligno, câncer de pele de células de Merkel e câncer de pele não melanoma.

[0127] Cânceres de cabeça e pescoço incluem, porém sem limitação, câncer de célula escamosa da cabeça e pescoço, câncer da laringe, da hipofaringe, nasofaringe, orofaringe,

câncer de glândula salivar, câncer de lábios e cavidade bucal e câncer de célula escamosa.

[0128] Linfomas incluem, porém sem limitação, linfoma relacionado a AIDS, linfoma não Hodgkin, linfoma de célula T cutânea, linfoma de Burkitt, doença de Hodgkin e linfoma do sistema nervoso central.

[0129] Sarcomas incluem, porém sem limitação, sarcoma do tecido mole, osteosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, linfossarcoma e rabdomiossarcoma.

[0130] Leucemias incluem, porém sem limitação, leucemia mieloide aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielógena crônica e leucemia de células pilosas.

[0131] Além disso, os anticorpos da invenção ou fragmentos de ligação a antígeno do mesmo também podem ser usados como uma ferramenta terapêutica ou de diagnóstico em uma variedade de outros transtornos em que ILDR2 está envolvido. Exemplos

[0132] Embora invenção tenha sido ilustrada e descrita detalhadamente nos desenhos e na descrição supracitada, tais ilustração e descrição devem ser consideradas como ilustrativas ou exemplificativas e não restritivas; a invenção não se limita às modalidades reveladas. Outras variações nas modalidades reveladas podem ser entendidas e efetuadas pelas pessoas versadas na técnica na prática da invenção reivindicada, a partir de um estudo dos desenhos, da revelação e das reivindicações anexas. Nas reivindicações, a palavra “compreendendo” não exclui outros elementos ou etapas, e o artigo indefinido “um” ou “uma” não exclui uma pluralidade. O simples fato de que determinadas medidas são mencionadas em reivindicações mutuamente dependentes diferentes não indica que uma combinação dessas medidas não possa ser usada como vantagem. Quaisquer sinais de referência nas reivindicações não devem ser interpretados como limitantes do escopo.

[0133] Todas as sequências de aminoácidos reveladas no presente documento são mostradas da extremidade N a extremidade C; todas as sequências de ácido nucleico reveladas no presente documento são mostradas 5'>33'.

1. Modelos de camundongo de tumor

[0134] Os modelos de tumor singeneicos a seguir foram usados subcutaneamente em experimentos in vivo: As células Bl6-F10 representam uma linhagem celular de melanoma de camundongo derivada da pele de camundongos C57BL/6J. CT26 é uma linhagem celular de carcinoma de cólon não diferenciada, induzida por N-nitroso-N-metiluretano-(NNMU). É um tipo celular de fibroblasto e é derivada de camundongos BALB/c. As células 3C9-D11-H11 são linfócitos de hibridoma B gerados por fusão de células de baço com células de mielona Sp2/0- Agl4. As células de baço são derivadas de camundongos BALB/c que são imunizados com parvovírus porcino (PPV) purificado.

2. Geração de anticorpo

[0135] Anticorpos contra ILDR2 foram gerados por apresentação em fago. Brevemente, reações de panning foram realizadas em solução com o uso de esferas magnéticas revestidas por estreptavidina para capturar os antígenos biotinilados. As esferas foram recuperadas com o uso de uma estante magnética (Promega). Todos os experimentos de panning de fago usaram a biblioteca de apresentação em fago de anticorpo fab humano XOMAO31 (XOMA Corporation, Berkeley, CA) bloqueada com 5 % de leite desnatado.

[0136] As proteínas necessárias para a apresentação em fago foram biotiniladas com o uso de um kit Sulfo-NHS-LC- Biotin (Pierce). A biotina livre foi removida das reações por diálise contra o tampão adequado. As proteínas marcadas com biotina incluíam ILDR2-HM e o ECD de um antígeno de controle fusionado à mesma sequência de IgG, de camundongo. O antígeno de controle foi usado para etapas de depleção em experimentos de panning. Foi necessário remover ligantes indesejados para esferas de estreptavidina e o domínio Fc de IgG62» de camundongo durante o processo de panning. Para alcançar isso, as esferas de estreptavidina foram acopladas aos antígenos de controle. Uma alíquota de fago foi então misturada a essas esferas de “depleção” e incubada à temperatura ambiente (TA) por 30 min. As esferas de depleção foram então descartadas. Para a seleção de ligantes específicos a ILDR2-HM, a biblioteca de fagos bloqueada e depletada foi misturada com esferas magnéticas acopladas ao ILDR2-HM biotinilado. As reações foram incubadas à TA por 1 - 2 horas e os fagos não específicos foram removidos por lavagem com PBS-T e PBS. Após lavagem, os fagos ligados foram eluídos por incubação com 100 mM de trietilamina (EMD) e o eluato foi neutralizado adicionando-se Tris-HCl pH 8,0 (Teknova). As bandas de E. coli resultantes foram raspadas e ressuspensas em meio de crescimento líquido. Uma alíquota pequena de células ressuspensas foi inoculada em uma cultura de 100 ml (2YT com ampicilina) e cultivada a 37 “*C até que o OD a 600 nM alcançasse 0,5. Essa cultura foi infectada com fago auxiliar M13K07 (New England Biolabs) e canamicina foi adicionada (antibiótico de seleção para M13K07). A cultura foi então mantida a 25 ºC para permitir embalamento de fago.

Uma alíquota do sobrenadante de cultura foi transferida para um ciclo subsequente de panning ou triagens de ligação de fab.

O segundo ciclo e os subsequentes foram conduzidos do mesmo modo, exceto pelo fato de que o sobrenadante de fago resgatado do ciclo anterior foi usado no lugar da biblioteca de fago.

O eluato de fago foi infectado em E. coli de TG1l, o que transformou as células com o fagomídio XOMAO31. As células transformadas foram então espalhadas em placas de ágar seletivas (ampicilina) e incubadas de um dia para o outro a 37 ºC.

A biblioteca de XOMA03l é baseada em construtos de fagomídio que também funcionam como vetores de expressão de fab induzíveis por IPTG.

Os agrupamentos de fago eluídos do ciclo de panning 3 foram diluídos e infectados em células de E. coli de TG1 (Lucigen) para que colônias únicas fossem geradas quando espalhadas em uma placa de ágar.

Os clones individuais foram cultivados em culturas de l1ml (2YT com glicose e ampicilina) e expressão de proteína foi induzida adicionando-se IPTG (Teknova). As culturas de expressão foram incubadas de um dia para o outro a 25 ºC.

As proteínas de fab secretadas no periplasma de E. coli foram então extraídas para análise.

Cada placa de amostras também incluía poços de “PPE em bruto” duplicadas para funcionar como controles negativos.

Esses foram criados a partir de culturas não inoculadas processadas do mesmo modo que PPEs de fab.

Análises de FACS foram usadas para identificar fabs com afinidade a ILDR2. Os PPEs de fab individuais foram testados para ligação a células HEK-293T que superexpressam ILDR2 humana (células 293T-huILDR2).

Todas as análises incluíam células HEK-293T se controle negativo transfectadas não infectadas (mock) com um plasmídeo de controle de “vetor vazio” (células 293T-EV). As etapas de lavagem e preparação de reagente foram realizadas em tampão FACS (PBS com BSA a 1 %). Os PPEs em bruto e de fab foram misturados com uma alíquota de células, incubados por 1 ha 4 Ce então lavados com tampão FACS. As células foram então misturadas com um anticorpo primário anti-C-myc (Roche). Após a mesma etapa de incubação e lavagem, as células foram coloridas com um anticorpo AlexaFlour-647 de IgG Fc anticamundongo (Jackson Immunoresearch). Após uma etapa final de incubação e lavagem, as células foram fixadas em paraformaldeído a 4 % composto em tampão FACS. As amostras foram lidas em um sistema de triagem de HTFC (Intellicyt). Os dados foram analisados com o uso de FCS Express (De Novo Software, CA, EUA) ou FloJo (De Novo Software, CA, EUA). Com base nesses resultados, cinco ligantes foram escolhidos para análise adicional e reformatados em IgGs de comprimento total.

Tabela 1: Anticorpos usados no presente estudo

[0137] Como uma comparação, um anticorpo anti-PD-Ll1 foi usado em alguns experimentos. O anticorpo anti-PD-Ll (também denominado aPDLl no presente documento) é uma quimera do domínio variável de atezolizumabe com domínios de IgG2 humanos.

3. Produção de anticorpo

[0138] Essas IgGs foram expressas e purificadas com o uso de procedimentos padrão. Brevemente, as IgGs foram produzidas por cultura celular de mamífero com o uso de células HEK293-6E transientemente transfectadas. As cadeias leve e pesada foram clonadas em um sistema de vetor pTT5 Duplo. A escala de cultura celular era de 4 x 1,5 1 em frasco de agitação utilizando meio F17 (Life Technologies; suplementado com ácido plurônico F68 a 0,18% (Life Technologies) e 4 mM de Glutamax (Life Technologies)). 24 h após a transfecção, IgG “ultrabaixa” de FCS a 1 8% (Life Technologies) e 0,5 mM de ácido valproico (Sigma Aldrich) foram adicionados. 6,0 1 de sobrenadante celular foram esterilizados em filtro e armazenados a 4 ºC antes da purificação. IgGs foram purificadas com o uso de um protocolo de purificação padrão. A etapa de captura é a cromatografia de afinidade em MabSelect SuRe sucedida por SEC preparativa em Superdex 200. Os sobrenadantes filtrados (0,2 um) de células HEK-293 foram diretamente carregados em uma coluna MabSelect SuRe (200 ml) com o uso de AEKTA Explorer 100 System (GE-Healthcare). Após a eluição da 1º coluna, frações de Pico foram agrupadas e neutralizadas com o uso de 3,0 M de Tris, pH 9. Após filtração estéril, o filtrado foi armazenado a 4 ºC até SEC. Uma única injeção foi realizada em Superdex 200 prep grau XK 50/1000 (volume de coluna - 1,8 1) com o mesmo Sistema de Cromatografia.

[0139] Os Picos foram agrupados. As frações finais contendo IgG foram concentradas a cerca de 10 mg/ml com o uso de dispositivos de concentração Amicon ultra-l15 (Millipore, MWCO de 30 kDa). A quantidade e a concentração de proteína foram determinadas por espectrofotômetro Nanodrop UV; amostras foram filtradas e esterilizadas, divididas em alíquotas, congeladas em nitrogênio líquido e armazenadas a -80 “ºC.

4. Caracterização de ligação a antígeno de anticorpos selecionados

[0140] os valores de Kp foram determinados por quantificação citométrica de fluxo de ligação a células HEK transfectadas de modo estável com ILDR2 humana e o uso de um algoritmo foi designado para extrapolar afinidades com base na curva de ligação. Brevemente, hIgGls foram adicionadas a uma faixa de concentração de sítio de ligação de 3 pM - 209 nM a um número constante de células (100000 células/poço) sobre 16 poços em uma placa de 96 poços. Um poço continha células sem qualquer IgG adicionada para funcionar como um poço bruto. As células foram equilibradas por 4 horas a 4 “C. Um excesso de anticorpo policlonal anti-humano de cabra marcado com Cy5 (Jackson ImmunoResearch 109-606-097) a 90 nM foi adicionado a cada poço após uma lavagem de tampão FACS das células. As células foram lavadas duas vezes após uma incubação de 30 minutos (a 4 “C) com a etiqueta pAãb e então a Intensidade Média de Fluorescência (MFI) foi registrada ao longo de aproximadamente 10000 “eventos” com o uso de um citômetro de fluxo Intellicyte. As Kpos das IgGs ligadas a células HEK 293 que expressam ILDR2 foram estimadas ajustando-se o MFI versus a curva de concentração de sítio de ligação de IgG com o uso de um modelo de equilíbrio 1:1 como detalhado em Drake e Klakamp (2007). Os experimentos realizados com células HEK que expressam ILDR2 murina produziram uma ligação comparável. Os experimentos de controle que usam células não transfectadas demonstraram que a ligação era estritamente dependente de ILDR2. Os resultados são mostrados na tabela 2 a seguir. Tabela 2: Constantes de dissociação de anticorpos de acordo com a presente invenção BO2 2,0

5. Eficácia antitumoral, como, por exemplo, atividade de encolhimento de ligantes selecionados em modelos de camundongo in vivo singeneicos

[0141] Para determinar a eficácia antitumoral, como, por exemplo, o efeito de encolhimento de tumor dos respectivos ligantes, dois modelos de camundongo singeneicos (B16F10, CT26) foram usados como discutidos acima. Constatou-se que, quando medido contra um controle de isótipo, o anticorpo anti-ILDR2 El0 não mostra nenhum encolhimento de tumor, enquanto o anticorpo anti-PD-L1 e o anticorpo anti-ILDR2 BO2 mostram (consultar Fig. 9A).

6. Modulação de atividade de ILDR2 por ligantes selecionados em MLR

[0142] Para determinar o efeito desses anticorpos em função de ILDR2, um ensaio de imunomodulação foi realizado, a saber, um ensaio de reação de linfócito misto. Uma reação de linfócito misto (MLR) é um teste em que populações de linfócitos são misturados, e as reações resultante são medidas. Tecnicamente, é um ensaio imunológico celular ex- vivo que ocorre entre duas populações de linfócitos alogeneicos. Em uma MLR unidirecional, apenas uma população de linfócitos pode responder ou se proliferar. Em uma MLR bidirecional, ambas as populações podem ser proliferar. As MLRs são realizadas para avaliar como células T reagem a estímulos externos, por exemplo, exposição a inibidores de ponto de verificação imune, como anticorpos anti-PD-l (Wang et al 2014) e anticorpos anti-PD-Ll. No presente contexto, a secreção de IL-2 causada por anticorpo foi medida com esse ensaio.

[0143] No presente caso, células T CD4 de um doador foram cocultivadas com monócitos maduros de M-CSF de outro doador na presença de vários anticorpos ILDR2, um anticorpo PD-L1 de bloqueio de função ou um controle de isótipo por 5 dias. Os sobrenadantes foram colhidos e a concentração de ILDR2 um marcador de ativação de célula T clássico, foi determinada por Elisa. Como esperado, o anticorpo anti-PD-Ll1 induziu um aumento significativo em secreção de IL-2 em relação ao controle de isótipo. Um anticorpo ILDR2, El0, tinha um efeito comparável. Os resultados são mostrados Fig. 9B e na tabela 3 a seguir. Tabela 3: Indução de IL2 de anticorpos selecionados Ligante | Concentração de IL2 Ea A Cai se mas

Ligante | Concentração de IL2 EEE Ea « ma

[0144] Isso motivou os inventores a testarem aqueles anticorpos anti-ILDR2 adicionais que, assim como B02, não medeiam indução de IL-2 na MLR, em modelos in vivo adicionais. Constatou-se que em um modelo CT26, os anticorpos GO9, EO8, BO2 e CO5 mostram eficácia antitumoral similar quando medida contra um controle de isótipo (consultar Fig. 9C). Desse modo, de modo bastante surpreendente, os anticorpos anti-ILDR2 G09, EO8, BO2 e CO5 têm atividade de indução de citocina em um ensaio de imunomodulação que é menor que aquela do anticorpo anti-PD-Ll, porém mostra atividade antitumoral em um modelo de tumor in vivo que é comparável àquele de um anticorpo anti-PD-L1l.

[0145] No ensaio de secreção de IL-2, apenas um anticorpo anti-ILDR2, a saber El0, mostrou um comportamento similar como um anticorpo anti-PD-Ll comparativo - ainda assim era inativo em um ensaio in vivo. Os anticorpos anti-ILDR2 restantes testados não causaram secreção de IL-2, porém, entretanto, se provaram ativos em ensaios in vivo. Portanto, os inventores concluíram que ensaios de secreção de IL-2 não são preditivos para atividade in vivo de anticorpos anti- ILDR2. Em vez disso, parece que o espaço de epítopo delineado pelos anticorpos anti-ILDR2 demonstraram ter atividade in vivo que delineia um espaço de epítopo adequado para a geração de anticorpos ILDR2 com atividade antitumoral in vivo e, desse modo, com potencial terapêutico.

[0146] Em um ensaio em que a atividade de indução de citocina é medida como secreção de IL-2, TNFa, IL-6 e/ou IFNy, em relação a um controle de Isótipo, e a indução de IL-2 de um antagonista de ILDR2 preferencial é de < 40 % em comparação àquela de um anticorpo anti-PD-L1 e a indução de TNFa de um antagonista de ILDR2 preferencial é de < 28 % em comparação àquela de um anticorpo anti-PD-L1 e a indução de IL-6 de um antagonista de ILDR2 preferencial é de < 50 % em comparação àquela de um anticorpo anti-PD-L1 e a indução de IFNy de um antagonista de ILDR2 preferencial é de < 68 % em comparação àquela de um anticorpo anti-PD-L1.

7. Experimentos in vivo com BO2 (BAY1905254)

[0147] O anticorpo anti-PD-L1 (também denominado aPDL1 no presente documento) é uma quimera do domínio variável de atezolizumabe com domínios de TIgG2 humana. BAY1905254 (também denominada aILDR2 no presente documento) consiste em um domínio variável que se liga ao domínio extracelular de ILDR2 e à um arcabouço de domínio constante. Tanto aPD-L1 quanto aILDR2 são controlados em experimentos in vivo por um controle de isótipo de IgG2 humana. ElO consiste em um domínio variável que se liga ao domínio extracelular de ILDR2 e um arcabouço de domínio constante, e é controlado em experimentos in vivo por um controle de IgGl de isótipo murino.

[0148] Todos os experimentos animais foram realizados sob German Animal Welfare Law e foram aprovados por autoridades locais.

7.1. Tratamento preventivo de B16-F10

[0149] Camundongos C57B1l/6N Crl BR fêmea com oito semanas de idade (peso “corporal 18-20 g) da Charles River Deutschland, Sulzfeld foram usados para o modelo de tumor Bl6F10. O experimento foi iniciado após um período de aclimatação de 8 dias. Os animais foram mantidos em um ciclo de claro/escuro de 12 horas. Alimento e água estavam disponíveis ad libitum. A temperatura do alojamento foi mantida a 21 ºC. Os camundongos (n=12 por grupo) foram inoculados s.c. com 1 x 10º células tumorais B16-Fl10 no flanco esquerdo e atribuídos a grupos experimentais. No início do tratamento, animais foram marcados e cada gaiola foi identificada com o número de gaiola, o número de estudo e o número de animais por gaiola.

[0150] O ajuste para administração in vivo com um volume de aplicação de 5 ml/kg foi alcançado por diluição da solução-estoque em DPBS sem Ca2+, Mg2+, pH 7,4 (Biochrom). E agentes foram dosados i.p. A 10 mg/kg a3d x 6, começando o tratamento com inoculação de tumor. Os resultados são mostrados nas Figs. 1 e 2 e Tabelas 3 - 6. Tabela 3: Tamanho médio de tumor por grupo como medido em 7 diferentes pontos no tempo após inoculação de tumor NO [EA o se E) : LL AE A]

: Tabela 4: Eficácia terapêutica mostrada como tamanho de tumor do grupo de tratamento versus controle de isótipo (T/C) Controle de isótipo BAY1905254 1 0,63 Tabela 5: Tamanho médio de tumor por grupo como medido em 7 diferentes pontos no tempo após inoculação de tumor dias pós-inoculação : FE Es = 5 Tabela 6: Eficácia terapêutica mostrada como tamanho de tumor do grupo de tratamento versus controle de isótipo (T/C) Controle de isótipo E1O0 1 1,08

7,2. Tratamento terapêutico de B1l6-Fl10, eficácia sinérgica em combinação com aPD-L1

[0151] Camundongos C57Bl/6N Crl BR fêmea com oito semanas de idade (peso “corporal 18-20 g) da Charles River Deutschland, Sulzfeld foram usados para o modelo de tumor Bl6-F10. O experimento foi iniciado após um período de aclimatação de 5 dias. Os animais foram mantidos em um ciclo de claro/escuro de 12 horas. Alimento e água estavam disponíveis ad libitum. A temperatura do alojamento foi mantida a 21 ºC. Os camundongos (n=l1l por grupo) foram inoculados s.c. com 1 x 10º células tumorais B16-Fl10 no flanco esquerdo e atribuídos a grupos experimentais por randomização estratificada (método para divisão dos camundongos em grupos com distribuição igual de tamanho de tumor) no dia 3 após a inoculação de tumor. No início do tratamento, animais foram marcados e cada gaiola foi identificada com o número de gaiola, o número de estudo e o número de animais por gaiola.

[0152] O ajuste para administração in vivo com um volume de aplicação de 5 ml/kg foi alcançado por diluição da solução-estoque em DPBS em Ca2+, Mg2+, pH 7,4 (Biochrom), e os agentes foram dosados i.p. A 10 mg/kg q3d x 5, começando no d3ô3. Os resultados são mostrados na Fig. 3 e nas Tabelas 7-8. Tabela 7: Tamanho médio de tumor por grupo como medido em 5 diferentes pontos no tempo após inoculação de tumor dias pós- Isótipo BAY BAY 1905254 : Fo e Es Es Tabela 8: Eficácia terapêutica mostrada como tamanho de tumor do grupo de tratamento versus controle de isótipo (T/C) Controle de isótipo —aPD-Ll BAYIS9O5254 BAYI905254 + aPD-Ll TA o,92 1,08 0,65

7.3. Tratamento terapêutico de CT26, eficácia sinérgica com aPD-L1

[0153] Camundongos Balb/cAnN fêmea com oito semanas de idade (peso corporal 18-20 g) da Charles River Deutschland, Sulzfeld foram usados para o modelo de tumor CT26. O experimento foi iniciado após um período de aclimatação de 6 dias. Os animais foram mantidos em um ciclo de claro/escuro de 12 horas. Alimento e água estavam disponíveis ad libitum. A temperatura do alojamento foi mantida a 21 ºC. Os camundongos (n=12 por grupo) foram inoculados s.c. com 5 x 10º células tumorais CT26 no flanco esquerdo e atribuídos a grupos experimentais por randomização estratificada (método para divisão dos camundongos em grupos com distribuição igual de tamanho de tumor) no dia 7 após a inoculação de tumor. No início do tratamento, animais foram marcados e cada gaiola foi identificada com o número de gaiola, o número de estudo e o número de animais por gaiola.

[0154] O ajuste para administração in vivo com um volume de aplicação de 5 ml/kg foi alcançado por diluição da solução-estoque em DPBS em Ca2+, Mg2+, pH 7,4 (Biochrom). aPD-Ll foi dosado i.p. a 10 mg/kg q3d x 3 e BAY1905254 foi dosado i.p. a 3 mg/kg q3d x 3, todos os tratamentos iniciados no d7. Os resultados são mostrados na Fig. 4 e nas Tabelas 9 - 10. Tabela 9: Tamanho médio de tumor por grupo como medido em 4 diferentes pontos no tempo após inoculação de tumor [ ss mer mer dias pós- Isótipo BAY BAY 1905254

S Tabela 10: Eficácia terapêutica mostrada como tamanho de tumor do grupo de tratamento versus controle de isótipo (T/C) Controle de isótipo aPD-L1BAYIS9O05254 BAYISO5254 + aPD-L1 |

7.4. Tratamento terapêutico de 3C9-Dl1-H11, eficácia sinérgica com aPD-L1

[0155] Camundongos Balb/cAnN fêmea com oito semanas de idade (peso corporal 18-20 g) da Charles River Deutschland,

Sulzfeld foram usados para o modelo de tumor 3C9-D1l1-H11.

[0156] O experimento foi iniciado após um período de aclimatação de 12 dias. Os animais foram mantidos em um ciclo de claro/escuro de 12 horas. Alimento e água estavam disponíveis ad libitum. A temperatura do alojamento foi mantida a 21 “ºC.

[0157] Os camundongos (n=12 por grupo) foram inoculados s.c. com 1 x 10º células tumorais 3C9-Dl1-Hl11 no flanco esquerdo e atribuídos a grupos experimentais por randomização estratificada (método para divisão dos camundongos em grupos com distribuição igual de tamanho de tumor) no dia 8 após a inoculação de tumor. No início do tratamento, animais foram marcados e cada gaiola foi identificada com o número de gaiola, o número de estudo e o número de animais por gaiola.

[0158] O ajuste para administração in vivo com um volume de aplicação de 5 ml/kg foi alcançado por diluição da solução-estoque em DPBS sem Ca2+, Mg2+, pH 7,4 (Biochrom). E agentes foram dosados i.p. a 10 mg/kg a3d x 5, começando no dê. Os resultados são mostrados na Fig. 5 e nas Tabelas 11 - 12. Tabela 11: Tamanho médio de tumor por grupo como medido em 6 diferentes pontos no tempo após inoculação de tumor [o Ass see de mer er dias pós- Isótipo BAY BAY 1905254

Tamanho médio de tumor [mm?] dias pós- Isótipo BAY BAY 1905254 Tabela 12: Eficácia terapêutica mostrada como tamanho de tumor do grupo de tratamento versus controle de isótipo (T/C) Controle de isótipo — aPD-L1 BAYI1905254 BAYISO5254 + aPD-L1 1 0,39 0,87 0,07

8. Combinações Adicionais

8.1. Combinação com oligos de CpG imunoestimulantes (uma vacina de OVA)

[0159] Camundongos C57B1l/6N Crl BR fêmea com nove semanas de idade (peso — corporal 18-20 g) da Charles River Deutschland, Sulzfeld foram usados para o modelo de tumor de OVA B16F10. O modelo é um derivado da linhagem celular Bl6- F10 que expressa a ovalbumina de aloantígeno de galinha que pode ser reconhecida por células T antígeno-específicas.

[0160] O experimento foi iniciado após um período de aclimatação de 13 dias. Os animais foram mantidos em um ciclo de claro/escuro de 12 horas. Alimento e água estavam disponíveis ad libitum. A temperatura do alojamento foi mantida a 21 ºC. Os camundongos (n=12 por grupo) foram inoculados s.c. com 1 x 10º células tumorais de OVA B16-F10 no flanco esquerdo e atribuídos a grupos experimentais. No início do tratamento, animais foram marcados e cada gaiola foi identificada com o número de gaiola, o número de estudo e o número de animais por gaiola.

[0161] O ajuste para administração in vivo de controle de isótipo e BAY 1905254 com um volume de aplicação de 5 ml/kg foi alcançado por diluição da solução-estoque em DPBS sem Ca2+, Mg2+, pH 7,4 (Biochrom). Agentes foram dosados i.p. a mg/kg q3d x 3, começando no dia 8. 50 ug de OVA (em 50 ul) + 10 ug de CPG (em 10 ul) + 140 pl de PBS = 200 1pl/camundongo foram aplicados subcutaneamente ao flanco esquerdo adjacente ao tumor, no dia 9. O oligonucleotídeo de CpG que era ODN 1826 (5"-tccatgacgttcctgacgtt-3'; bases são resistentes a fosforotioato / nuclease) que é específico para TLR9 de camundongo foi usado (Invivogen ttlrl-1826-5). Os resultados são mostrados na Fig. 6 e nas Tabelas 13 - 14. Tabela 13: Tamanho médio de tumor por grupo como medido em 6 diferentes pontos no tempo após inoculação de tumor [ |EFSsS mem — dias pós- BAY OVA + BAY 1905254 E Es Es = Tabela 14: Eficácia terapêutica mostrada como tamanho de tumor do grupo de tratamento versus Controle (T/C)

Controle BAYI905254 OVA + BAYI9O5254 + OVA +CpE cpG 1 0,66 0,5 0,38

8.2. Combinação com Docetaxel

[0162] Camundongos C57B1l/6N Crl BR fêmea com oito semanas de idade (peso “corporal 18-20 g) da Charles River Deutschland, Sulzfeld foram usados para o modelo de tumor de OVA Bl6-Fl10. O modelo é um derivado da linhagem celular B1l6F10 que expressa a ovalbumina de aloantígeno que pode ser reconhecida por células T antígeno-específicas. o experimento foi iniciado após um período de aclimatação de dias. Os animais foram mantidos em um ciclo de claro/escuro de 12 horas. Alimento e água estavam disponíveis ad libitum. A temperatura do alojamento foi mantida a 21 ºC. Os camundongos (n=12 por grupo) foram inoculados s.c. com 1 x 10º células tumorais de OVA B16F10 no flanco esquerdo e atribuídos a grupos experimentais. No início do tratamento, animais foram marcados e cada gaiola foi identificada com o número de gaiola, o número de estudo e o número de animais por gaiola.

[0163] O ajuste para administração in vivo de controle de isótipo e BAY 1905254 com um volume de aplicação de 5 ml/kg foi alcançado por diluição da solução-estoque em DPBS sem Ca2+, Mg2+, pH 7,4 (Biochrom). Agentes foram dosados i.p. a mg/kg q3d x 3, começando no dia 8. Docetaxel foi dosado uma vez a 20 mg/kg, i.v. no dia 8, a solução-estoque de 80 mg/4 ml foi diluída com NaCl a 0,9 8% com propósitos de infusão. Os resultados são mostrados na Fig. 7 e nas Tabelas - 16.

Tabela 15: Tamanho médio de tumor por grupo como medido em 4 diferentes pontos no tempo após inoculação de tumor [LL 2 TST dias pós- BAY BAY 1905254 LC ET ss Es ss Tabela 16: Eficácia terapêutica mostrada como tamanho de tumor do grupo de tratamento versus Controle (T/C) Controle .— Docetaxel ..BAYIS05254 .. BAYI9O5254 +. Docetaxel 1 0,74 0,86 0,54

8.3. Combinação com C4.4A ADC

[0164] Camundongos Balb/cAnN fêmea com nove semanas de idade (peso corporal 18-20 g) da Charles River Deutschland, Sulzfeld foram usados para o modelo de tumor CT26 C4.4a. Esse modelo é um derivado do modelo CT26 parental que expressa C4.4a murino na superfície das células tumorais.

[0165] O experimento foi iniciado após um período de aclimatação de 15 dias. Os animais foram mantidos em um ciclo de claro/escuro de 12 horas. Alimento e água estavam disponíveis ad libitum. A temperatura do alojamento foi mantida a 21 “C.

[0166] Os camundongos (n=12 por grupo) foram inoculados s.c. com 1 x 10º células tumorais CT26 no flanco esquerdo e atribuídos a grupos experimentais por randomização estratificada (método para divisão dos camundongos em grupos com distribuição igual de tamanho de tumor) no dia 6 após a inoculação de tumor.

[0167] No início do tratamento, animais foram marcados e cada gaiola foi identificada com o número de gaiola, o número de estudo e o número de animais por gaiola. O ajuste para administração in vivo com um volume de aplicação de 10 ml/kg foi preparado por diluição da solução-estoque em DPBS sem Ca2+, Mg2+, pH 7,4 (Biochrom). Agentes (Controle + BAY 1905254) foram dosados i.p. a 10 mg/kg q3d x 5, começando no dia 6.

[0168] C4.,4A ADC (conjugado de anticorpo-fármaco BAY1129980), o qual é composto por um anticorpo contra um homólogo estrutural do receptor de ativador de plasminogênio do tipo uroquinase (uPAR) e antígeno associado a tumor, C4.4a, e conjugado a um agente citotóxico, foi dosado a mg/kg i.v. q4dx3, começando no 6. Os resultados são mostrados na Fig. 8 e nas Tabelas 17 - 18. Tabela 17: Tamanho médio de tumor por grupo como medido em 6 diferentes pontos no tempo após inoculação de tumor FF FS E se E BAY BAY 1905254 Poe E Es so Tabela 18: Eficácia terapêutica mostrada como tamanho de tumor do grupo de tratamento versus Controle (T/C) Controle C4.4A ADC BAYI905254 BAYI9O5254 + C4.4A ADC 1 1,01 1,13 0,53 Sequências

[0169] As sequências mostradas na tabela a seguir são citadas no presente documento. Caso haja uma ambiguidade entre essa tabela e a listagem de sequências padrão da WIPO que faz parte do presente relatório descritivo e sua revelação, as sequências e qualificadores nessa tabela devem ser considerados os corretos. 1 59-08.BO02 SYAIS BAY1905254 HCDR1 2 59-08.B02 GIIPILGIANYAQKFOG BAY1905254 HCDR2 3 59-08.B02 ARGRLPYGDFWDS BAY1905254 HCDR3 4 59-08.BO02 RSSQSLLYSNGYNYLD BAY1905254 LCDR1 59-08.B02 LGSNRAS BAY1905254 LCDR2 59-08.B02 MOALQTPLT BAY1905254 LCDR3

7 59-08.BO02 QVOLVOESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQA VD de PGQOGLEWMGGIIPILGIANYAQKFOGRVTITADKSTSTAY cadeia MELSSLRSEDTAVYYCARGRLPYGDFWDSWGQOGTLVTVSS pesada | BAY1905254 59-08.B02- |DIVMTOSPLSLPVTPGEPASISCRSSQOSLLYSNGYNYLDW VD de YLOKPGOSPOLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKI cadeia SRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKLEIR leve| BAY1905254 61-02.CO05 EVOLVESGGGVVOPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVROA VD de PGKGLEWVSGISSSGGSTQYADSVKGRFTVSRDNSKNTLY cadeia LOMKSLRAEDTALYYCAKDEVGVLPDAFDIWGQOGTMVTVS pesada Ss

61-02.CO05 DIQLTOSPSSLSASVGDRVTITCOASQDTNKYLNWYQQOKP VD de GKAPELLIYGASTLESGVPPRFSASGSGTDFTLTINSLOQP cadeia EDIGRYYCOQYHIPPPSFGGGTKLEIK leve

11 56-02.E08 EVOLVOSGAEVKKPGESLKISCKASGYSFTTYWIGWVRQOV VD de PGKGLEWMGIIYPGDYDTRYSPSFQOQGQAVTISADKSINTAY cadeia LQWSSLEASDSAMYYCAIGEPFDYWGQOGTLVTVSS pesada

12 56-02.EO08 DVVMTOSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHANGYNYLDW VD de YLOKPGOSPOLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKI cadeia SRVETEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIK leve

13 74.15.G09 EVOLVESGGGVVOQPGRSLRLSCAASGETFSSYGMHWVROA VD de PGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRETISRDNSKNTLY cadeia LOMNSLRAEDTAVYYCAKESPSVGLGSYYDFWSGLYGMDV pesada WGQOGTTVTVSS 14 74.15.G09 EIVLTOSPGTLSLSPGERVTLSCRTGORVENLFIAWYQOQOK VD de PGEAPRLLLYGASNRATGIPDREFSGSGSGTDFTLTISRLE cadeia PEDSAVYYCOQYDDSGITFGOGTRLEIK leve

56.02.E10 QVOLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMHWVROA VD de PGKGPEWLAFIRYDGSKKYYADSVRGRETISRDNSKNMLY cadeia LOMNSLRTEDTAVYYCAKEGIAAPGSGYYYGMDVWGOGTT pesada VTVSS 16 56.02.E10 QESALTOPASVSGSPGOSITISCSGTTTDVGRYTLVSWYQH VD de HPGKAPKLIIFEVNKRPSGVSSRFSGSKSGNTASLTISGL cadeia QTEDEADYFCCSYTGTTVIFGGGTOLTVL leve 17 CPG tceatgacgttcectgacgtt Oligonucle otídeo ODN 1826 18 |61-02.CO5 SYAMS Fis 19 61-02.C05 GISSSGGSTQOYADSVKG nes pp 61-02.C05 DEFVGVLPDAFDI es 21 61-02.CO05 QASQDTNKYLN ne

22 61-02.CO05 GASTLES

EE 23 61-02.CO05 QQEYHIPPPS es 24 56-02.EO08 TYWIG Fes 56-02.EO8 IIYPGDYDTRYSPSFOG ps 26 56-02.EO08 AIGEPFDY esp 27 56-02.EO8 RSSOSLLHANGYNYLD 0 A 28 56-02.EO08 LGSNRAS

PE 29 56-02.EO08 MOALQTPLT ps

74.,15.GO09 SYGMH

E 31 74.,15.G09 VISYDGSNKYYADSVKG sp 32 74.,15.G09 AKESPSVGLGSYYDFWSGLYGMDV E pe 33 74,15.G09 RTGORVENLFIA Ep 34 74,15.G09 GASNRAT

E

74.15.GO9 QEYDDSGIT

E

36 56.02.E10 NYGMH

ETF 37 56.02.E10 FIRYDGSKKYYADSVRG sp 38 56.02.E10 EGIAAPGSGYYYGMDV er 39 56.02.E10 SGTTTDVGRYTLVS ns 40 56.02.E10 EVNKRPS Es 41 56.02.E10 CSYTGTTVI

E AA 42 59-08.BO02 QVOLVOSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVROA cadeia PGQEGLEWMGGIIPILGIANYAQKFOGRVTITADKSTSTAY pesada MELSSLRSEDTAVYYCARGRLPYGDFWDSWGOGTLVTVSS BAY1905254 |ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVS

WNSGALTSGVHTFPAVLOSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTOT YTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHODWLNGKEYKC KVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD GSFFLYSKLTVDKSRWQOQEGNVFSCSVMHEALHNHYTOKSL SLSPG

43 59-08.B02- |DIVMTOSPLSLPVTPGEPASISCRSSQOSLLYSNGYNYLDW cadeia YLOKPGQOSPQOLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKI leve SRVEAEDVGVYYCMQOQALQTPLTFGGGTKLEIRRTVAAPSV BAY1905254 |FIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQOWKVDNALO

SGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACE

VTHOGLSSPVTKSFNRGEC 44 61-02.CO05 EVOLVESGGGVVOPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVROA cadeia PGKGLEWVSGISSSGGSTQYADSVKGRFTVSRDNSKNTLY pesada LOMKSLRAEDTALYYCAKDFVGVLPDAFDIWGQGTMVTVS

SASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTV SWNSGALTSGVHTFPAVLOSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTO TYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYK CKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWOQG

NVFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSPG 45 61-02.CO05 DIQLTOSPSSLSASVGDRVTITCOASQDTNKYLNWYQQOKP cadeia GKAPELLIYGASTLESGVPPRFSASGSGTDFTLTINSLQOP leve EDIGRYYCOQYHIPPPSFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPP

SDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVOWKVDNALQSGNSQO ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHOG LSSPVTKSFNRGEC

46 |56-02.E0O08 EVOLVOESGAEVKKPGESLKISCKASGYSFTTYWIGWVRQV cadeia PGKGLEWMGIIYPGDYDTRYSPSFQOGQVTISADKSINTAY pesada LQWSSLEASDSAMYYCAIGEPFDYWGOGTLVTVSSASTKG

PSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGA LTSGVHTFPAVLOSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTOTYTCNV DHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVEFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHN AKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHOQDWLNGKEYKCKVSNK GLPAPIEKTISKTKGOPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWOQOGNVFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSPG 47 56-02.EO08 DVVMTOSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHANGYNYLDW cadeia YLOKPGOSPOLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKI leve SRVETEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSV

FIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQOWKVDNALO SGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACE

VTHOGLSSPVTKSEFNRGEC 48 74.15.GO09 EVOLVESGGGVVOPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQOA cadeia PGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRETISRDNSKNTLY pesada LOMNSLRAEDTAVYYCAKESPSVGLGSYYDFWSGLYGMDV

WGQOGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLOSSGLYSLSSVV TVPSSNFGTOTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPC PAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHED PEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVH QDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYT LPPSREEMTKNQVSLTCLVKGEFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPMLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWOQEGNVFESCSVMHEALHNHYTOKSLSLSPG

49 |74.15.GO9 EIVLTOSPGTLSLSPGERVTLSCRTGORVENLFIAWYQQOK cadeia PGQOAPRLLLYGASNRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLE leve PEDSAVYYCQQOYDDSGITFGOGTRLEIKRTVAAPSVFIFP

PSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVOWKVDNALQSGNS QESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHO

GLSSPVTKSFNRGEC 50 56.02.E10 QVOLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMHWVROA cadeia PGKGPEWLAFIRYDGSKKYYADSVRGRFTISRDNSKNMLY pesada LOMNSLRTEDTAVYYCAKEGIAAPGSGYYYGMDVWGQOGTT

VTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLOSSGLYSLSSVVTVPSSN FGTOTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVA GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFN WYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNG KEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP MLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWOQOGNVFSCSVMHEALHNHY

TOKSLSLSPG 51 56.02.E10 QSALTOPASVSGSPGQOSITISCSGTTTDVGRYTLVSWYQH cadeia HPGKAPKLIIFEVNKRPSGVSSRFSGSKSGNTASLTISGL leve QTEDEADYFCCSYTGTTVIFGGGTOLTVLGOQPKAAPSVTL

FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKA GVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTH EGSTVEKTVAPTECS

Claims (24)

REIVINDICAÇÕES

1. Combinação farmacêutica caracterizada por compreender um antagonista de ILDR2 mais, opcionalmente, um ou mais outros compostos terapeuticamente ativos.

2. Combinação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de o outro composto terapeuticamente ativo é pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em e um antagonista de PD-L1 * um taxano ou derivado de taxano e uma vacina e um oligodesoxinucleotídeo CpG e/ou e um composto que direciona c4.4A.

3. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizada pelo fato de que o antagonista de ILDR2 e o outro composto terapeuticamente ativo são e fornecidos na mesma unidade de dosagem ou e fornecidos em unidades de dosagem individuais.

4. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizada pelo fato de que o antagonista de ILDR2 e o outro composto terapeuticamente ativo são e administrados simultaneamente ou e administrados sequencialmente, isto é, um após o outro.

5. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o antagonista de ILDR2 é um anticorpo, um fragmento ou derivado do mesmo, um formato de anticorpo modificado, ou um mimético de anticorpo, sendo que todos têm propriedades de ligação a ILDR2.

6. Anticorpo anti-ILDR2, ou um fragmento ou derivado do mesmo, ou um formato de anticorpo modificado, sendo que todos têm propriedades de ligação a ILDR2, caracterizados por compreenderem pelo menos as 3 sequências de cadeia pesada de CDR: SEQ ID No 1 CDR1 HC SEQ ID No 2 CDR2 HC SEQ ID No 3 CDR3 HC.

7. Anticorpo anti-ILDR2, ou um fragmento ou derivado do mesmo, ou um formato de anticorpo modificado, sendo que todos têm propriedades de ligação a ILDR2, caracterizados por compreenderem pelo menos as três sequências de cadeia leve de CDR: SEQ ID No 4 CDR1l LC SEQ ID No 5 CDR2 LC SEQ ID No 6 CDR3 LC.

8. Anticorpo anti-ILDR2, fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 ou 7, caracterizados por compreenderem pelo menos uma sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve que é 95 % idêntica, preferencialmente 96 % ou mesmo 97 % idêntica, mais preferencialmente 98 % ou mesmo 99 % idêntica e com máxima preferência 100 %, a uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID No 7 HC VD SEQ ID No 8 LC VD.

9. Anticorpo anti-ILDR2, fragmento ou derivado Ou formato de anticorpo modificado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 8, caracterizados por compreenderem pelo menos uma sequência de cadeia pesada ou cadeia leve que é 95% idêntica, preferencialmente 96 % ou mesmo 97 8% idêntica, mais preferencialmente 98 % ou mesmo 99 % idêntica e com máxima preferência 100 %, a uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID No 42 HC SEQ ID No 43 LC.

10. Anticorpo anti-ILDR2, ou um fragmento ou derivado do mesmo, ou um formato de anticorpo modificado, sendo que todos têm propriedades de ligação a ILDR2, caracterizados por compreenderem pelo menos uma combinação de três sequências de cadeia pesada de CDR, selecionadas a partir do grupo que consiste em: SEQ ID No 18 - 20, SEQ ID No 24 - 26, SEQ ID No 30 - 32, e/ou SEQ ID No 36 - 38.

11. Anticorpo anti-ILDR2, ou um fragmento ou derivado do mesmo, ou um formato de anticorpo modificado, sendo que todos têm propriedades de ligação a ILDR2, caracterizados por compreenderem pelo menos uma combinação de três sequências de cadeia leve de CDR, selecionadas a partir do grupo que consiste em: SEQ ID No 21 - 23, SEQ ID No 27 - 29, SEQ ID No 33 - 35 e/ou SEQ ID No 39 - 41.

12. Anticorpo anti-ILDR2, ou um fragmento ou derivado do mesmo, ou um formato de anticorpo modificado, sendo que todos têm propriedades de ligação a ILDR2, caracterizados por compreenderem pelo menos uma sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve que é 95 3% idêntica, preferencialmente 96 ou mesmo 97% idêntica, mais preferencialmente 98 % ou mesmo 99 % idêntica, e com máxima preferência 100 %, a uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID No 9, SEQ ID No 10, SEQ ID No 11, SEQ ID No 12, SEQ ID No 13, SEQ ID No 14, SEQ ID No 15, e/ou SEQ ID No 16.

13. Anticorpo anti-ILDR2, ou um fragmento ou derivado do mesmo, ou um formato de anticorpo modificado, sendo que todos têm propriedades de ligação a ILDR2, caracterizados por compreenderem pelo menos uma sequência de cadeia pesada ou cadeia leve que é 95 % idêntica, preferencialmente 96 ou mesmo 97 % idêntica, mais preferencialmente 98 % ou mesmo 99 %& idêntica, e com máxima preferência 100 %, a uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID No 44, SEQ ID No 45, SEQ ID No 46, SEQ ID No 47, SEQ ID No 48, SEQ ID No 49,

SEQ ID No 50, e/ou SEQ ID No 51,

14. Anticorpo anti-ILDR2 ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizados por serem selecionados a partir do grupo que consiste em 61-02.CO05 56-02.E08, 74-15.G09 e 59-08.B02.

15. Antagonista de ILDR2 ou anticorpo, ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizados por serem dissociados de ILDR2 humano com uma Ka de 25 nM (2,5 x 107º M) ou menos, determinada por varredura de célula ativada por fluorescência (FACS).

16. Antagonista de ILDR2 ou anticorpo, ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado caracterizados por competirem por ligação a ILDR2 com um anticorpo ILDR2 conforme definido em qualquer uma das reivindicações 6 - 15.

17. Conjugado de anticorpo-fármaco caracterizado por compreender um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo conforme definido em qualquer uma das reivindicações 6 a 16.

18. Sequência de ácidos nucleicos isolada ou um conjunto da mesma caracterizados por codificarem um anticorpo ILDR2, ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 6 -

16.

19. Vetor caracterizado por compreender pelo menos uma sequência de ácidos nucleicos conforme definida na reivindicação 18.

20. Célula isolada caracterizada por expressar um anticorpo ILDR2, ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 6 - 16 e/ou por compreender uma sequência de ácidos nucleicos, ou um conjunto da mesma, conforme definidos na reivindicação 18, ou um vetor conforme definido na reivindicação 19.

21. Combinação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 - 5, sendo a combinação caracterizada por compreender o antagonista de ILDR2 ou anticorpo, ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 6 -

16.

22. Antagonista de ILDR2 ou anticorpo, ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado ou a combinação caracterizados por compreenderem um antagonista de ILDR2 conforme definido em qualquer uma das reivindicações anteriores para uso como um medicamento.

23. Antagonista de ILDR2 ou anticorpo, ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado ou a combinação caracterizados por compreenderem um antagonista de ILDR2 conforme definido em qualquer uma das reivindicações anteriores para uso no tratamento de um paciente e que sofre de, e que corre risco de desenvolver e/ou e que foi diagnosticado com uma doença neoplásica, como câncer, ou uma doença Ou transtorno imune, em que o antagonista de ILDR2 ou a combinação que compreende um antagonista de ILDR2 ou anticorpo é administrada em uma ou mais dosagens terapeuticamente eficazes.

24. Método caracterizado por ser para tratar um paciente e que sofre de,

e que corre risco de desenvolver e/ou e que foi diagnosticado com uma doença neoplásica, como câncer, Ou uma doença Ou transtorno imune, que compreende administrar ao dito paciente um antagonista de ILDR2 ou anticorpo, ou fragmento ou derivado ou formato de anticorpo modificado, ou uma combinação que compreende um antagonista de ILDR2 conforme definido em qualquer uma das reivindicações anteriores em uma ou mais dosagens terapeuticamente eficazes.