TW201934119A - Ildr2拮抗劑及其組合 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於一種新穎的醫藥組合，其包含根據技術方案中任一項之ILDR2拮抗劑加上一或多種其他治療活性化合物，及關於新穎的特異性ILDR2拮抗劑(圖1)。

Description

ILDR2拮抗劑及其組合
本發明係關於一種新穎的醫藥組合，其包含ILDR2拮抗劑，加上一或多種其他治療活性化合物，以及新穎的特異性ILDR2拮抗劑。
B7免疫調節性配位體家族由在結構上相關之細胞表面蛋白質配位體組成，該等蛋白質配位體結合至調節免疫反應之淋巴球上的受體。
T淋巴球及B淋巴球之活化藉由細胞表面、抗原特異性T細胞受體或B細胞受體之接合引發，但由B7配位體同時遞送之其他信號判定最終免疫反應。此等「共刺激」或「共抑制」信號藉由B7配位體經由淋巴球上之CD28受體家族遞送。
B7蛋白質家族包括：B7.1 (CD80)、B7.2 (CD86)、誘導性共刺激因子配位體(ICOS-L)、計劃性死亡-1配位體(PD-L1，亦被稱作B7-1))、計劃性死亡-2配位體(PD-L2)、B7-H3及B7-H4。家族成員主要表徵於人體及小鼠內，但一些成員亦在鳥類中發現。其具有20%至40%胺基酸一致性，且在結構上與含有與可變免疫球蛋白域及恆定免疫球蛋白域相關之縱排域之胞外域相關。B7配位體在淋巴及非淋巴組織中表現。該家族在調節免疫反應中之重要性藉由患有B7家族基因突變之小鼠的免疫缺乏症及自體免疫疾病之發展表明。對由B7配位體遞送之信號的操縱已展示出治療自體免疫、發炎疾病及癌症之潛能。
B7家族成員與其各別共刺激受體(通常為CD28相關家族之成員)之相互作用增強免疫反應，而與共抑制受體(諸如CTLA4)之相互作用減弱免疫反應。
顯而易見，每一B7分子在免疫系統中發展其自身的生態棲位。隨著B7家族成員之特異性生態棲位繼續剝離，其診斷性及治療性潛力變得越加顯而易見。B7超家族成員中之許多最初表徵為T細胞共刺激分子。然而，最近很明顯其亦可共抑制T細胞反應。因此，B7家族成員可對免疫反應具有相反的影響。
B7家族成員已成為免疫檢查點抑制劑療法之靶標。
PD-L1抑制劑阿特珠單抗(atezolizumab) (MPDL3280)為完全人類化工程化之IgG1抗體，其在治療多種不同癌症(包括黑色素瘤、肺癌、膀胱癌及腎癌)中具有功效。阿維魯單抗(Avelumab) (MSB0010718C)係完全人類IgG1抗體，其已在轉移性或局部晚期實體腫瘤中展示出功效。德瓦魯單抗(Durvalumab)為與替代性免疫檢查點抑制劑組合在轉移性尿道上皮膀胱癌中展示出功效之抗PD-L1抗體。
PD1抑制劑納武單抗(nivolumab)及派立珠單抗(pembrolizumab)結合至PD-L1受體PD-1且抑制PD-L1與PD-1之結合。
替西木單抗(Tremelimumab) (先前的替西單抗(ticilimumab)，CP-675,206)為針對CTLA-4之完全人類單株抗體(IgG2)。其阻斷抗原呈現細胞配位體B7.1及B7.2與CTLA-4之結合，從而導致B7-CTLA-4介導之對T細胞活化之下調之抑制。伊派利單抗(Ipilimumab)為具有類似作用模式，又IgG1同型之類似抗體。
伊諾貝利圖珠單抗(Enoblituzumab) (亦被稱作MGA271)為靶向B7-H3之抗體，其過度表現於腫瘤細胞及癌症幹樣細胞上以及支援腫瘤脈管及皮下組織或基質上。
然而，儘管上述識別方法具有極大成效，但結果表明其中一些在其功效方面(亦即，疾病、發生再發)為不可持續的，及/或在給定疾病類型方面無效。
因此，在免疫檢查點抑制劑療法之領域中極需提供新的且經改良之療法以及改良現有療法。
最近識別之ILDR2 (含有受體2之免疫球蛋白樣域) (亦被稱作C1ORF32)係B7/CD28家族之新穎的成員。ILDR2包含IgV域；除了其為I型膜蛋白之外，類似其他已知的B7成員-其最終產生其對於B7家族之註解。又，ILDR2之兩個可替代地剪接之變體(H19011-1-P8及H19011-1-P9) (其與野生型C1ORF32僅共享前5個外顯子)在其外顯子大小及IgV之位置及此等外顯子內的跨膜域方面類似於已知的B7家族成員。對於ILDR2之所有特徵，參見WO2009032845，其之內容以引用之方式併入本文中。
迄今為止，尚未研發靶向此最近識別之受體之療法。因此，本發明之一個目標為提供靶向ILDR2之新的且經改良之免疫檢查點抑制劑療法。
本發明提供一種新穎的醫藥組合，其包含ILDR2拮抗劑，加上一或多種其他治療活性化合物，以及新穎的特異性ILDR2拮抗劑。本發明及其特徵之一般優勢將在以下詳細論述。
定義
除非另外定義，否則本文中所使用之所有技術及科學術語具有與本領域之一般技術者通常所理解的含義。然而，以下參考文獻可為熟習此項技術者提供本發明中所使用之許多術語的一般定義，且可經參考及使用，只要此類定義與此項技術中通常理解之含義一致即可。此類參考文獻包括(但不限於)：Singleton等人, Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (第2版，1994)；The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker編, 1988)；Hale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991)；及Lackie等人, The Dictionary of Cell & Molecular Biology (第3版，1999)；及Cellular and Molecular Immunology, Abbas、Lichtman及Pober編, 第2版, W .B.Saunders公司。可查詢一般熟習此項技術者可獲得的任何其他技術資源，其提供具有此項技術中通常理解之含義的本文中所使用之術語之定義。出於本發明之目的，進一步定義以下術語。在本說明書中其他地方定義其他術語。除非上下文另外明確指示，否則如本文中及所附申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a)」及「該(the)」包括複數個指示物。
「胺基酸」在本文中可由其通常已知之三字母符號或由IUPAC-IUB生物化學命名法委員會(Biochemical Nomenclature Commission)所推薦之單字母符號提及。同樣，核苷酸可由其通常可接受之單字母代碼提及。
術語「組合」在本發明中如熟習此項技術者所已知般使用，該組合有可能為固定組合、非固定組合或分裝部分之套組。
本發明中的「固定組合」如熟習此項技術者所已知般使用且經定義為組合，其中例如第一活性成分(諸如本發明之ILDR2拮抗劑)與另一活性成分以一個單位劑量或以一個單一實體一起存在。「固定組合」之一個實例為醫藥組合，其中第一活性成分與另一種活性成分存在於供同時投與之混雜物中，諸如調配物。「固定組合」之另一實例為醫藥組合，其中第一活性成分與另一活性成分存在於一個單元中，而非存在於混雜物中。
本發明中之非固定組合或「分裝部分之套組」如熟習此項技術者所已知般使用，且定義為其中第一活性成分與另一活性成分存在於大於一個單元中之組合。非固定組合或分裝部分之套組之一個實例為其中第一活性成分與另一活性成分單獨存在之組合。非固定組合或分裝部分之套組之組分有可能單獨、依序、同時、並行或按交錯時間順序投與。
亦同義稱作「免疫球蛋白」 (Ig)之「抗體」通常包含四個多肽鏈(兩個重(H)鏈及兩個輕(L)鏈)，且因此為多聚體蛋白質或其等效Ig同系物(例如，駱駝奈米抗體(，其包含僅重鏈單域抗體(dAb)，其可衍生自重鏈或輕鏈)；包括全長功能性突變體、變異體或其衍生物(包括(但不限於)鼠類、嵌合人類化且完全人類抗體，其保留Ig分子之必需抗原決定基結合特徵(或視需要進行親和力成熟或脫離化(deiimuization)))，且包括雙重特異性、雙特異性、多特異性及雙可變域免疫球蛋白。免疫球蛋白分子可具有任何類別(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)或子類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或異型。在本發明之一個實施例中，抗ILDR2抗體為完全人類且具有IgG2子類別。
如本文中所使用，「基於抗體之結合蛋白」可表示在其他非免疫球蛋白或非抗體衍生之組分之上下文中含有至少一個抗體衍生之VH 、VL 或CH 免疫球蛋白域的任何蛋白質。此類基於抗體之蛋白質包括(但不限於) (i)結合蛋白之Fc 融合蛋白，包括具有所有或部分免疫球蛋白CH 域之受體或受體組分，(ii)結合蛋白，其中VH 及/或VL 域偶合至替代性分子支架，或(iii)分子，其中免疫球蛋白VH 及/或VL 及/或CH 域以天然產生之抗體或抗體片段中通常不存在的方式組合及/或組裝。
如本文中所使用，「抗體衍生物或片段」係關於包含衍生自非全長抗體之至少一個多肽鏈之分子，包括(但不限於) (i)Fab片段，其係由可變輕(VL )、可變重(VH )、恆定輕(CL )及恆定重1 (CH 1)域組成之單價片段；(ii) F(ab')2片段，其係包含由鉸鏈區處的二硫橋鍵連接之兩個Fab片段的二價片段；(iii) Fab (Fd )片段之重鏈部分，其由VH 及CH 1域組成；(iv)可變片段(Fv )片段，其由抗體單臂之VL 及VH 域組成；(v)域抗體(dAb)片段，其包含單個可變域；(vi)分離之互補決定區(CDR)；(vii)單鏈Fv 片段(scFv )；(viii)雙功能抗體，其為二價雙特異性抗體，其中VH 及VL 域在單個多肽鏈上表現，但使用之連接子過短而不允許在同一鏈上的兩個域之間進行配對，藉此迫使域與另一條鏈之互補域進行配對且產生兩個抗原結合位點；及(ix)線性抗體，其包含與互補輕鏈多肽一起形成一對抗原結合區之一對縱排Fv 區段(VH -CH 1-VH -CH 1)；及(x)免疫球蛋白重鏈及/或輕鏈之其他非全長部分或其突變體、變異體或衍生物，單獨或以任何組合形式。
如本文中所使用，術語「經修飾抗體形式」涵蓋抗體-藥物結合物、聚氧化烯修飾之scFv、單功能抗體、雙功能抗體、駱駝抗體、域抗體、雙特異性抗體或三特異性抗體、IgA或由J鏈及分泌性組分接合之兩個IgG結構、鯊魚抗體、新世界靈長類框架+非新世界靈長類CDR、鉸鏈區經移除之IgG4抗體、具有經工程改造為CH3域之兩個額外結合位點之IgG、具有增強Fc γ受體之親和力的經改變之Fc區的抗體，包含CH3+VL+VH之二聚構建體及類似者。
如本文中所使用，術語「抗體模擬物」係指不屬於免疫球蛋白家族，且甚至為非蛋白質(諸如適體)或合成聚合物之蛋白質。一些類型具有抗體樣β摺疊結構。「抗體模擬物」或「替代性骨架」相對於抗體之潛在優勢為較好溶解性、較高組織穿透、對熱及酶之較高穩定性及相對較低之製備成本。
一些抗體模擬物可提供於大庫中，其提供針對每一可設想靶標之特異性結合候選者。正如抗體一樣，靶標特異性抗體模擬物可藉由使用高通量篩檢(HTS)技術以及已建立之呈現技術(正如噬菌體呈現、細菌呈現、酵母或哺乳動物呈現)開發。當前開發之抗體模擬物涵蓋例如錨蛋白重複蛋白(被稱作達爾潘蛋白(DARPins))、C類型凝集素、金黃色葡萄球菌之A域蛋白、運鐵蛋白、脂質運載蛋白、纖維結合蛋白之第10 III型域、孔尼茲域(Kunitz domain)蛋白酶抑制劑、泛素衍生之黏合劑(被稱作阿非林(affilins))、γ晶狀體球蛋白衍生之黏合劑、半胱胺酸結點或打結素、基於硫氧還原蛋白A骨架之黏合劑、核酸適體、由聚合物之分子銘印作用產生之人造抗體、來自細菌基因組之肽庫、SH-3域、束縛體(stradobody)、由二硫鍵及Ca2+穩定之膜受體之「A域」、基於CTLA4之化合物、Fyn SH3及適體(結合至特異性靶標分子之寡核酸或肽分子)。
本文中之術語「Fc區」用於定義含有至少一部分恆定區之免疫球蛋白重鏈的C端區。該術語包括天然序列Fc區及變異Fc區。除非本文中另外規定，否則Fc區或恆定區中胺基酸殘基之編號係根據EU編號系統(亦稱為EU索引)，如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所描述。
如本文中所使用，「ILDR2」係關於含有受體2 (亦被稱作C1ORF32)之免疫球蛋白樣域，該受體2為B7/CD28家族之新穎成員。對於ILDR2之所有特徵，參見WO2009032845，其之內容以引用之方式併入本文中。
術語「抗ILDR2抗體」及「結合至ILDR2之抗體」係指能夠以足夠親和力結合ILDR2以使得抗體用作靶向ILDR2之診斷及/或治療劑之抗體。在一個實施例中，抗ILDR2抗體與不相關之非ILDR2蛋白之結合程度小於抗體與ILDR2之結合的約5%，或較佳小於約2%，如(例如)由表面電漿子共振(SPR)所量測。在某些實施例中，結合至ILDR2之抗體具有≤ 1 µM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10-8 M或小於10-8 M，例如自10-8 M至10-13 M，例如自10-9 M至10-13 M)之解離常數(KD)。在某些實施例中，抗ILDR2抗體結合至ILDR2之抗原決定基，該抗原決定基在來自不同物種之ILDR2中具保守性。
如本文中所使用，術語「互補決定區」 (CDR；例如，CDR1、CDR2及CDR3)係指抗體可變域之胺基酸殘基，其之存在為抗原結合所必需的。各可變域通常具有三個CDR區，標識為CDR1、CDR2及CDR3。各互補決定區可包含來自「互補決定區」之胺基酸殘基(如由Kabat (例如，輕鏈可變域中之約殘基24-34 (L1)、50-56 (L2)及89-97 (L3)及重鏈可變域中之31-35 (H1)、50-65 (H2)及95-102 (H3)；(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immulological Interest, 第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))所定義)及/或來自「高變環」之彼等殘基(例如，輕鏈可變域中之約殘基26-32 (L1)、50-52 (L2)及91-96 (L3)及重鏈可變域中之26-32 (H1)、53-55 (H2)及96-101 (H3) (Chothia及Lesk；J Mol Biol 196: 901-917 (1987))。在一些情況下，互補決定區可包括來自根據Kabat定義之CDR區及高變環兩者之胺基酸。
取決於其重鏈之恆定域之胺基酸序列，可將完整抗體指派至不同「類別」。存在五個主要類別之完整抗體：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等抗體中之若干者可進一步分成「子類別」 (同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。用於本發明之免疫球蛋白之較佳類別為IgG。
對應於不同類別之抗體之重鏈恆定域分別稱作[α]、[δ]、[ε]、[γ]及[μ]。不同類別之免疫球蛋白之子單元結構及三維組態為熟知的。如本文中所使用之抗體習知地為已知抗體及其功能性片段。
本發明中所考慮之抗體或抗原結合抗體片段之變異體為其中保持抗體或抗原結合抗體片段之結合活性的分子。
「人類」抗體或其抗原結合片段在此定義為非嵌合(例如，非「人類化」)且非來自(全部或部分)非人類物種之抗體或其抗原結合片段。人類抗體或其抗原結合片段可衍生自人類或可為合成的人類抗體。「合成的人類抗體」在本文中定義為具有序列全部或部分電子模擬衍生自基於對已知人類抗體序列分析的合成序列之抗體。人類抗體序列或其片段之電子模擬設計可例如藉由分析人類抗體或抗體片段序列的資料庫且利用自此獲得之資料設計多肽序列來達成。人類抗體或其抗原結合片段之另一實例為由與人源之抗體序列庫(例如，此類庫基於獲自人類天然來源之抗體)分離之核酸編碼的抗體或其抗原結合片段。人類抗體之實例包括如Söderlind等人, Nature Biotech. 2000, 18:853-856中所描述之抗體。
如本文中所使用之術語「單株抗體」係指自可少量存在的實質上同質的抗體之群體獲得之抗體，亦即，包含除可能突變(例如，天然產生之突變)之外其他一致之群體的個別抗體。因此，術語「單株」指示抗體不為離散抗體之混合物之特徵。相比於典型地包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體的多株抗體製劑，單株抗體製劑中之各單株抗體係針對抗原上之單一決定子。除了其特異性之外，單株抗體製劑係有利的，原因在於其典型地未經其他免疫球蛋白污染。術語「單株」不應解釋為需要藉由任何特定方法製備抗體。特定而言，術語單株抗體包括嵌合、經人類化及人類抗體。
「經分離」抗體為已經識別且與表現其之細胞組分分離的抗體。細胞之污染組分為將會干擾抗體之診斷或治療用途之物質，且可包括酶、激素及其他蛋白質或非蛋白質溶質。
「經分離」核酸為已經識別且與其天然環境之組分分離之核酸。經分離核酸包括通常含有核酸分子之細胞中所含有的核酸分子，但該核酸分子存在於染色體外或存在於不同於其天然染色體位置之染色體位置處。
如本文中所使用，抗體「特異性結合至」，係「具有特異性對於/針對」或「特異性識別」所關注之抗原(例如腫瘤相關之多肽抗原靶標)，係以足夠的親和力結合該抗原以致該抗體可用作靶向表現該抗原之細胞或組織之治療劑，且不與其他蛋白質顯著交叉反應或不與上述抗原靶標之異種同源物(orthologs)及變異體(例如突變體形式、剪接變異體或蛋白水解截短形式)以外的蛋白質顯著交叉反應之抗體。本文中所使用之術語「特異性識別」或「特異性結合至」或係「具有特異性對於/針對」特定多肽或特定多肽靶標上之抗原決定基可例如由抗體或其抗原結合片段展現，該抗體或其抗原結合片段具有對於該抗原的單價KD小於約10-4 M、替代地小於約10-5 M、替代地小於約10-6 M、替代地小於約10-7 M、替代地小於約10-8 M、替代地小於約10-9 M、替代地小於約10-10 M、替代地小於約10-11 M、替代地小於約10-12 M，或更小。若此抗體能夠區分此抗原與一或多個參考抗原之間，則抗體「特異性結合至」，係「具有特異性對於/針對」或「特異性識別」抗原。在其最一般形式中，「特異性結合」、「特異性結合至」，係「具有特異性對於/針對」或「特異性識別」係指抗體區分所關注之抗原與不相關抗原之間之能力，例如根據以下方法中之一者測定。此類方法包含(但不限於)表面電漿子共振(SPR)、西方墨點法(Western blot)、ELISA測試、RIA測試、ECL測試、IRMA測試及肽掃描。舉例而言，可進行標準ELISA分析。可藉由標準顯色(例如二級抗體與辣根過氧化物酶及四甲基聯苯胺與過氧化氫)進行評分。在某些孔內之反應係藉由光學密度(例如在450 nm)評分。典型背景(=負反應)可為0.1 OD；典型正反應可為1 OD。此意謂正/負差值大於5倍、10倍、50倍，且較佳大於100倍。通常，結合特異性之測定並非使用單一參考抗原，而係使用約三至五個不相關抗原之集合(諸如奶粉、BSA、運鐵蛋白或類似者)執行。
「結合親和力」或「親和力」係指分子之單個結合位點與其結合搭配物之間的非共價相互作用總和之強度。除非另外指明，否則如本文所用，「結合親和力」係指反映結合對成員(例如抗體與抗原)之間的1 : 1相互作用之固有結合親和力。解離常數「KD」通常用於描述分子(諸如抗體)與其結合搭配物(諸如抗原)之間的親和力，亦即配位體如何緊密結合至特定蛋白質。配位體-蛋白質親和力受該兩個分子之間的非共價分子間相互作用影響。親和力可藉由此項技術中已知之常見方法(包括本文中所描述之方法)量測。
如本文中所使用，術語「抗原決定基」包括能夠特異性結合至免疫球蛋白或T細胞受體之任何蛋白質決定子。抗原決定基決定子通常由分子之化學活性表面基團(諸如胺基酸或糖側鏈或其組合)組成，且通常具有特定三維結構特徵以及特定電荷特徵。
與參考抗體「結合至相同抗原決定基之抗體」或與參考抗體「競爭結合之抗體」係指一種抗體，其在競爭分析法中阻斷參考抗體與其抗原之結合達50%或大於50%，且相反，參考抗體在競爭分析法中阻斷抗體與其抗原之結合達50%或大於50%。本文中提供一種例示性競爭分析法。
術語「免疫結合物」 (互換地被稱作「抗體-藥物結合物」或「ADC」)係指結合至一或多種細胞毒性或細胞生長抑制劑(諸如化學治療劑、藥物、生長抑制劑、毒素(例如，細菌、真菌、植物或動物來源之蛋白質毒素、酶活性毒素或其片段))或放射性同位素(亦即，放射性結合物)之抗體。免疫結合物已經用於癌症治療(例如，Liu等人, Proc Natl. Acad. Sci. (1996), 93, 8618-8623))中細胞毒性劑(亦即，殺死或抑制細胞之生長或增殖的藥物)之局部傳送。免疫結合物允許藥物部分靶向傳送至腫瘤且其中在胞內累積，其中全身性投與非結合藥物可對正常細胞及/或組織造成不可接受之毒性水準。抗體-毒素結合物中所用之毒素包括細菌毒素(諸如白喉毒素(diphtheria toxin))、植物毒素(諸如蓖麻毒素(ricin))、小分子毒素(諸如格爾德黴素(geldanamycin))。毒素可藉由包括微管蛋白結合、DNA結合或拓樸異構酶抑制之機制發揮其細胞毒性效應。
關於分別參考聚核苷酸或多肽序列之「序列一致性百分比(%)」定義為分別在比對序列且引入間隙之後，候選序列中分別與分別地參考聚核苷酸或多肽序列中之核酸或胺基酸殘基一致的核酸或胺基酸殘基之百分比，其在必要時達成最大序列一致性百分比。保守取代不視為序列一致性之部分。較佳為非間隙比對。出於判定胺基酸序列一致性百分比之目的之比對可以此項技術中之技術內的各種方式實現，例如使用公開可獲得之電腦軟體，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟體。熟習此項技術者可判定適用於比對序列之參數，包括在所比較序列之全長內達成最大比對所需之任何演算法。「序列同源性」指示一致或表示保守胺基酸取代之胺基酸之百分比。
「贅生性疾病」為導致腫瘤生長(良性及惡性兩者)之病況。贅瘤為異常生長之細胞，亦被稱作腫瘤。
在詳細描述本發明之前，應理解，本發明不限於所描述裝置之特定組成部件或所描述方法之製程步驟，此係因為此類裝置及方法可變化。亦應理解，本文中所使用之術語僅出於描述特定實施例之目的，而非意欲為限制性的。必須指出，除非上下文另外明確指示，否則如本說明書及隨附申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括單數及/或複數個指示物。此外應理解，倘若給定由數值定界之參數範圍，則認為範圍包括此等限制值。
此外應理解本文中所揭示之實施例不意謂應理解為彼此不相關之單獨實施例。用一個實施例論述之特徵意謂亦結合本文中所展示之其他實施例揭示。若在一種情況下，具體特徵不用一個實施例而用另一實施例揭示，則熟習此項技術者將理解不必意謂該特徵不意欲用該另一實施例揭示。熟習此項技術者將理解本申請案之要旨為揭示該特徵亦適用於另一實施例，但僅出於清楚起見且將說明書保持在可管理範圍中，此尚未進行。
另外，本文中所提及之先前技術文獻之內容以引用之方式併入。此尤其係指揭示標準物或常規方法之先前技術文獻。在彼情況下，以引用之方式併入主要目的係提供充分的授權揭示且避免冗長重複。
根據本發明之一態樣，提供一種包含ILDR2拮抗劑加上任選之一或多種其他治療活性化合物的醫藥組合。
較佳地，本發明之ILDR2拮抗劑為抗ILDR2抗體。更佳地，抗ILDR2抗體為如下文進一步描述之抗體。
根據本發明之一個實施例，另一種治療活性化合物係選自由以下組成之群中之至少一者：
● PD-L1拮抗劑
● 紫杉烷或紫杉烷衍生物
● 疫苗
● CpG寡脫氧核苷酸及/或
● 靶向c4.4A之化合物。
較佳地，PD-L1拮抗劑為抗PD-L1抗體。更佳地，抗PD-L1抗體包含阿特珠單抗之可變域。甚至更佳地，抗PD-L1抗體為阿特珠單抗。
如本文中所使用，術語「紫杉烷衍生物」係關於包含紫杉二烯(taxadiene)核心之細胞毒性或細胞生長抑制化合物。更佳地，紫杉烷衍生物為太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇或卡巴他賽(cabazitaxel)。
術語「CpG寡脫氧核苷酸」係指含有胞嘧啶三磷酸去氧核苷酸(「C」)接著鳥嘌呤三磷酸去氧核苷酸(「G」)之單股合成的DNA分子。「p」係指連續核苷酸之間的磷酸二酯鍵，儘管一些ODN替代地具有經修飾之硫代磷酸酯(PS)主鏈。當CpG基元未甲基化時，其充當免疫刺激劑。在一個實施例中，CpG寡脫氧核苷酸為ODN1826，如例如由Invivogen分佈，具有SEQ ID No 17之核苷酸序列(tccatgacgttcctgacgtt)。
C4.4A (LYPD3，UniProtKB-O95274 (LYPD3_HUMAN))為一種已經標識為癌症相關聯及轉移相關聯之表面標記之內化細胞表面蛋白。C4.4A (LYPD3)因此可用作將抗癌藥物靶向至腫瘤之標記。熟習此項技術者能夠藉由常規方法產生靶向C4.4A之化合物，例如藉由噬菌體呈現或免疫接種，或藉由合適之篩檢方法進行庫篩檢。因此，靶向C4.4A之此類化合物可為保持標靶結合能力之抗體、抗體片段或衍生物，或抗體模擬物。另外，靶向c4.4A之此類化合物可為小分子。
在一個實施例中，靶向C4.4A之化合物為包含與細胞毒性或細胞生長抑制劑結合之靶向C4.4A之抗體或其片段或衍生物或抗體模擬物的抗體藥物結合物。較佳地，靶向C4.4A之化合物為由結合至奧瑞他汀(Auristatin)之抗C4.4A (LYPD3)抗體組成的BAY1129980。
本發明亦提供抗體-藥物結合物(ADC，免疫結合物)，其包含結合至一或多種細胞毒性劑之抗ILDR2抗體，該等細胞毒性劑諸如化學治療劑或藥物、生長抑制劑、毒素(例如細菌、真菌、植物或動物來源之蛋白質毒素、酶活性毒素或其片段)或放射性同位素。較佳地，抗ILDR2抗體為如下文中所描述之一者，最佳地，抗ILDR2抗體為BAY1905254。
在一個實施例中，免疫結合物為其中抗體結合至一或多種藥物之抗體-藥物結合物(ADC)，該等藥物包括(但不限於)類美登素(maytansinoid) (參見美國專利第5,208,020號、第5,416,064號及歐洲專利EP0425235)；奧瑞他汀，諸如單甲基奧瑞他汀藥物部分DE及DF (MMAE及MMAF) (參見美國專利第5,635,483號及第5,780,588號及第7,498,298號)；海兔毒素(dolastatin)；卡奇黴素(calicheamicin)或其衍生物；蒽環黴素，諸如柔紅黴素(daunomycin)或小紅莓(doxorubicin)；甲胺喋呤；長春地辛(vindesine)；紫杉烷，諸如多烯紫杉醇、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、拉洛他賽(larotaxel)、替司他賽(tesetaxel)及奧他賽(ortataxel)；新月毒素(trichothecene)；及CC1065。
在另一實施例中，免疫結合物包含結合至酶活性毒素或其片段之如本文中所描述之抗體，該酶活性毒素或其片段包括(但不限於)白喉A鏈(diphtheria A chain)、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈(來自綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素A鏈(ricin A chain)、相思子素A鏈(abrin A chain)、蒴蓮根毒素A鏈(modeccin A chain)、α八疊球菌素(alphasarcin)、光桐(Aleurites fordii)蛋白、康乃馨(dianthin)蛋白、美洲商陸(Phytolaca americana)蛋白(P API、P APII及PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制劑、麻瘋樹毒蛋白(curcin)、巴豆毒素(crotin)、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制劑、白樹素(gelonin)、米托菌素(mitogellin)、侷限麴菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、伊諾黴素(enomycin)及新月毒素(tricothecenes)。
在另一實施例中，免疫結合物包含結合至放射性原子以形成放射性結合物的如本文中所描述之抗體。多種放射性同位素可用於生產放射性結合物。實例包括227Th、225Ac、211At、131I、125I、90Y、186Re、188Re、153Sm、212Bi、32P、212Pb及Lu之放射性同位素。當放射性結合物用於偵測時，其可包含用於閃爍攝影研究之放射性原子(例如，Tc99m)或用於核磁共振(NMR)成像之自旋標記，諸如又是碘123、碘131、銦111、氟19、碳13、氮15、氧17、釓、錳或鐵。
可使用多種雙功能蛋白質偶合劑製得抗體與細胞毒性劑之結合物，該等雙功能蛋白質偶合劑為諸如N-丁二醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(SMCC)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、亞胺基酯之雙功能衍生物(諸如二亞胺代己二酸二甲酯HCl)、活性酯(諸如辛二酸二丁二醯亞胺基酯)、醛(諸如戊二醛)、雙疊氮基化合物(諸如雙(對疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙重氮衍生物(諸如雙(對重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(諸如甲苯2,6-二異氰酸酯)及雙活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。
連接子可為促進細胞毒性藥物在細胞中釋放之「可裂解連接子」。舉例而言，酸不穩定連接子、肽酶敏感性連接子、光不穩定連接子、二甲基連接子或含有二硫化物之連接子(Chari等人, Cancer Res. 52: 12 7-131 (1992)。
本文中之免疫結合物或ADC明確涵蓋(但不限於)用交聯劑製備之此類結合物，該等交聯劑包括(但不限於) BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC及磺基-SMPB及SVSB (丁二醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯)，該等交聯劑可商購(例如購自Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.A)。
根據本發明之一個實施例，ILDR2拮抗劑及另一種治療活性化合物：
● 以相同劑量單位提供，或
● 以個別劑量單位提供。
根據本發明之一個其他實施例，ILDR2拮抗劑及另一種治療活性化合物：
● 同時投與，或
● 按順序投與，亦即，一者在另一者之後。
根據本發明之一個實施例，ILDR2拮抗劑為抗體、其片段或衍生物、經修飾抗體形式或抗體模擬物，其皆具有ILDR2結合特性。
根據本發明之另一態樣，提供抗ILDR2抗體或其片段或衍生物或經修飾抗體形式，其皆具有ILDR2結合特性，其包含至少三個CDR重鏈序列：
根據本發明之另一態樣，提供抗ILDR2抗體或其片段或衍生物或經修飾抗體形式，其皆具有ILDR2結合特性，其包含至少三個CDR輕鏈序列：
其中，「HC」表示重鏈且「LC」表示輕鏈。上述序列為BAY1905254 (在本文中亦被稱作59-08.B02)之CDR。
根據一個實施例，抗ILDR2抗體、片段或衍生物或經修飾抗體形式包含至少一個重鏈或輕鏈可變區序列，該至少一個重鏈或輕鏈可變區序列與選自由以下組成之群之序列具有95%一致性、較佳96%或甚至97%一致性、更佳98%或甚至99%一致性且最佳100%：
其中，「VD」表示可變域。上述序列為BAY1905254 (在本文中同義稱作59-08.B02或B02)之可變域。
根據另一實施例，抗ILDR2抗體、片段或衍生物或經修飾抗體形式包含至少一個重鏈或輕鏈序列，該至少一個重鏈或輕鏈序列與選自由以下組成之群之序列具有95%一致性、較佳96%或甚至97%一致性、更佳98%或甚至99%一致性且最佳100%：
其中，「HC」表示重鏈且「LC」表示輕鏈。上述序列為BAY1905254 (在本文中亦被稱作59-08.B02)之重鏈及輕鏈序列。
根據本發明之另一態樣，提供抗ILDR2抗體或其片段或衍生物或經修飾抗體形式，其皆具有ILDR2結合特性，其包含選自由以下組成之群的三個CDR重鏈序列之至少一個組合：
根據本發明之另一態樣，提供抗ILDR2抗體或其片段或衍生物或經修飾抗體形式，其皆具有ILDR2結合特性，其包含選自由以下組成之群的三個CDR輕鏈序列之至少一個組合：
上述序列為抗體61-02.C05、56-02.E08、74.15.G09及56.02.E10之CDR。
根據本發明之另一態樣，提供抗ILDR2抗體或其片段或衍生物或經修飾抗體形式，其皆具有ILDR2結合特性，其包含與選自由以下組成之群之序列具有95%一致性、較佳96%或甚至97%一致性、更佳98%或甚至99%一致性且最佳100%之至少一個重鏈或輕鏈可變區序列：
上述序列為61-02.C05、56-02.E08、74.15.G09及56.02.E10之可變域。
根據本發明之另一實施例，提供抗ILDR2抗體或其片段或衍生物或經修飾抗體形式，其皆具有ILDR2結合特性，其包含與選自由以下組成之群之序列具有95%一致性、較佳96%或甚至97%一致性、更佳98%或甚至99%一致性且最佳100%之至少一個重鏈或輕鏈序列：
下表展示此等序列及其所屬抗體之概述。
根據本發明之一個實施例，ILDR2抗體或片段或衍生物或經修飾抗體形式選自由以下組成之群：61-02.C05、56-02.E08、74-15.G09及59-08.B02。
根據本發明之一個實施例，ILDR2拮抗劑或抗體、或片段或衍生物或經修飾抗體形式以25 nM (2.5 × 10-8 M)或小於25 nM之Kd 與人類ILDR2解離，藉由螢光活化細胞掃描(FACS)测定。
較佳地，該Kd 為15 nM或小於15 nM。更佳地，該Kd 為13 nM或小於13 nM。更佳地，該Kd 為11 nM或小於11 nM。更佳地，該Kd 為8 nM或小於8 nM。更佳地，該Kd 為5 nM或小於5 nM。更佳地，該Kd 為3 nM或小於3 nM。最佳地，該Kd 為2 nM或小於2 nM。
根據本發明之另一態樣，提供ILDR2拮抗劑或抗體、或片段或衍生物或經修飾抗體形式，其與根據上述詳細說明之ILDR2抗體競爭結合至ILDR2。
根據本發明之一個其他態樣，提供經分離核酸序列或其集合，其編碼根據上述詳細說明之ILDR2抗體或片段或衍生物或經修飾抗體形式。
根據本發明之一個其他態樣，提供包含根據上述詳細說明之至少一個核酸序列之載體。
根據本發明之一個其他態樣，提供經分離細胞，其表現根據上述詳細說明之ILDR2抗體、或片段或衍生物或經修飾抗體形式及/或包含根據上述詳細說明之核酸序列或其集合或包含根據上述詳細說明之載體。
根據本發明之一個實施例，醫藥組合包含根據上述詳細說明之ILDR2拮抗劑或抗體、或片段或衍生物或經修飾抗體形式。
治療方法
治療方法涉及向有需要治療之個體投與治療有效量之本發明所涵蓋之抗體或其抗原結合片段或其變異體。「治療有效」量特此定義為單次給藥或根據多次給藥方案，單獨或與其他藥劑組合足以引起不良病狀緩解之量的抗體或抗原結合片段之量，但該量在毒理學上為可耐受的。個體可為人類或非人類動物(例如，家兔、大鼠、小鼠、狗、猴或其他低等靈長類動物)。
根據本發明之一個其他態樣，提供ILDR2拮抗劑或抗體、或片段或衍生物或經修飾抗體形式或包含根據上述詳細說明之ILDR2拮抗劑之組合用作藥物。
本發明之實施例提供一種抗體或其抗原結合片段用作治療癌症之藥物。
根據一個實施例，ILDR2拮抗劑或抗體、或片段或衍生物或經修飾抗體形式或包含ILDR2拮抗劑之組合用於治療以下患者，
● 患有、
● 具有發展風險，及/或
● 經診斷為
贅生性疾病(諸如癌症)或免疫疾病或病症，其中以一或多個治療有效劑量投與ILDR2拮抗劑。
根據一個其他實施例，提供一種用於治療以下患者之方法，
● 患有、
● 具有發展風險，及/或
● 經診斷為
贅生性疾病(諸如癌症)或免疫疾病或病症，該方法包含以一或多個治療有效劑量向該患者投與根據上述詳細說明之ILDR2拮抗劑或抗體、或片段或衍生物或經修飾抗體形式、或包含ILDR2拮抗劑之組合。
本發明之另一實施例將抗體或其抗原結合片段用於治療癌症之藥物的製造中。
本發明抗體或其抗原結合片段可用作ILDR2傳信異常(例如細胞增殖性病症，諸如癌症)的多種情況中之治療或診斷工具。適合於用本發明之抗體治療之病症及病狀可為(但不限於)實體腫瘤，諸如乳癌、呼吸道癌、腦癌、生殖器官癌、消化道癌、泌尿道癌、眼癌、肝癌、皮膚癌、頭頸部癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌及其遠端癌轉移。彼等病症亦包括淋巴瘤、肉瘤及白血病。
消化道腫瘤包括(但不限於)肛門癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、膽囊癌、胃癌、胰臟癌、直腸癌、小腸癌及唾液腺癌。
食道癌之實例包括(但不限於)食道細胞癌及腺癌，以及鱗狀細胞癌、平滑肌肉瘤、惡性黑素瘤、橫紋肌肉瘤及淋巴瘤。
胃癌之實例包括(但不限於)腸型及彌漫型胃腺癌。
胰臟癌之實例包括(但不限於)導管腺癌、腺鱗癌及胰臟內分泌腫瘤。
乳癌之實例包括(但不限於)三陰性乳癌、侵襲性乳腺管癌、侵襲性小葉癌、乳腺管原位癌及小葉原位癌。
呼吸道癌之實例包括(但不限於)小細胞肺癌及非小細胞肺癌，以及支氣管腺瘤及胸膜肺母細胞瘤。
腦癌之實例包括(但不限於)腦幹及下丘腦神經膠質瘤、小腦及大腦星形細胞瘤、神經膠母細胞瘤、神經管胚細胞瘤、室管膜瘤以及神經外胚層及松果體腫瘤。
男性生殖器官腫瘤包括(但不限於)前列腺及睾丸癌。女性生殖器官腫瘤包括(但不限於)子宮內膜癌、子宮頸癌、卵巢癌、陰道癌及外陰癌以及子宮肉瘤。
卵巢癌之實例包括(但不限於)漿液性腫瘤、子宮內膜樣腫瘤、黏液性囊腺癌、粒層細胞腫瘤、塞-萊二氏細胞瘤(Sertoli-Leydig cell tumour)及卵巢男胚瘤。
子宮頸癌之實例包括(但不限於)鱗狀細胞癌、腺癌、腺鱗癌、小細胞癌、神經內分泌腫瘤、玻璃細胞癌及絨毛腺腺癌。
泌尿道腫瘤包括(但不限於)膀胱癌、陰莖癌、腎癌、腎盂癌、尿管癌、尿道癌及遺傳性及偶發性乳頭狀腎癌。
腎癌之實例包括(但不限於)腎細胞癌、尿道上皮細胞癌、近腎小球細胞瘤(腎素瘤)、血管肌脂瘤、腎臟嗜酸性腺瘤、貝里尼導管癌(Bellini duct carcinoma)、腎透明細胞肉瘤、中胚層腎瘤及威耳姆士瘤(Wilms' tumour)。
膀胱癌之實例包括(但不限於)移行細胞癌、鱗狀細胞癌、腺癌、肉瘤及小細胞癌。
眼癌包括(但不限於)眼內黑素瘤及視網膜母細胞瘤。
肝癌之實例包括(但不限於)肝細胞癌(有或無纖維板層變異之肝細胞癌)、膽管癌(肝內膽管癌)及混合型肝細胞膽管癌。
皮膚癌包括(但不限於)鱗狀細胞癌、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、惡性黑素瘤、梅克爾細胞皮膚癌(Merkel cell skin cancer)及非黑素瘤皮膚癌。
頭頸癌包括(但不限於)頭頸部鱗狀細胞癌、喉癌、下咽癌、鼻咽癌、口咽癌、唾液腺癌、唇及口腔癌及鱗狀細胞癌。
淋巴瘤包括(但不限於) AIDS相關淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、霍奇金氏病及中樞神經系統之淋巴瘤。
肉瘤包括(但不限於)軟組織肉瘤、骨肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、淋巴肉瘤及橫紋肌肉瘤。
白血病包括(但不限於)急性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞白血病、慢性淋巴球性白血病、慢性骨髓性白血病及毛細胞白血病。
另外，本發明抗體或其抗原結合片段亦可用作其中涉及ILDR2之多種其他病症中之治療或診斷工具。
實例
雖然已在附圖及前述描述中詳細地說明及描述了本發明，但此類說明及描述應被視為說明性或例示性的，而非限定性的；本發明不限於所揭示實施例。所揭示之實施例的其他變體可由熟習此項技術者自附圖、揭示內容及所附申請專利範圍的研究中藉由實踐所主張之本發明而理解且實現。在申請專利範圍中，字語「包含」不排除其他元素或步驟，且不定冠詞「一(a或an)」不排除複數個。某些措施敍述於相互不同之附屬申請專利範圍中之純粹實情並不指示此等措施不能有利地組合使用。申請專利範圍中之任何參考符號均不應視為限制範疇。
本文中所揭示之所有胺基酸序列均自N端至C端展示；本文中所揭示之所有核酸序列均展示5'à3'。
1. 腫瘤小鼠模型
以下同基因型腫瘤模型皮下使用於活體內實驗中：B16-F10細胞表示衍生自C57BL/6J小鼠之皮膚之小鼠黑素瘤細胞株。CT26為N-亞硝基-N-胺基甲酸甲酯-(NNMU)誘發之未分化的結腸癌細胞株。其為纖維母細胞細胞類型且衍生自BALB/c小鼠。3C9-D11-H11細胞為由脾臟細胞與Sp2/0-Ag14骨髓瘤細胞之融合產生的融合瘤B淋巴球。脾臟細胞衍生自經純化的豬小病毒(PPV)免疫接種之BALB/c小鼠。
2. 抗體生成
針對ILDR2之抗體由噬菌體呈現產生。簡言之，使用經抗生蛋白鏈菌素塗佈之磁珠在溶液中進行淘選反應以捕獲經生物素標記之抗原。使用磁性架(Promega)回收磁珠。所有噬菌體淘選實驗均使用用5%脫脂牛奶阻斷之XOMA031人類fab抗體噬菌體呈現庫(XOMA公司, Berkeley, CA)。
噬菌體呈現所需的蛋白質係使用磺基-NHS-LC-生物素套組(Pierce)生物素化。藉由對適當緩衝液透析自反應物中移除自由生物素。生物素標記之蛋白質包括ILDR2-HM及融合至相同小鼠IgG2a 序列之對照抗原之ECD。對照抗原用於淘選實驗中之清除步驟。在淘選製程期間需要將非所需之黏合劑移除至抗生蛋白鏈菌素珠粒及小鼠IgG2a Fc域。為達成此目的，將抗生蛋白鏈菌素珠粒與對照抗原偶合。接著將噬菌體等分試樣與此等「清除」珠粒混合且在室溫(RT)培育30分鐘。接著丟棄清除珠粒。為選擇ILDR2-HM之特異性黏合劑，將經阻斷且經清除之噬菌體庫與偶合至生物素化ILDR2-HM的磁珠混合。在RT培育反應物1至2小時，且用PBS-T及PBS洗移除非特異性噬菌體。在洗之後，藉由與100 mM三乙胺(EMD)培育來溶離結合之噬菌體，且藉由添加Tris-HCl pH 8.0 (Teknova)中和溶離液。刮下所得大腸桿菌 (E. coli) 菌苔(lawns)且再懸浮於液體生長培養基中。將小等分試樣之再懸浮細胞接種至100 mL培養物(2YT及胺苄青黴素(ampicillin))中且在37℃生長直至600nM之OD達0.5。此培養物經M13K07輔助噬菌體(New England Biolabs)感染且添加康黴素(kanamycin) (M13K07之選擇抗生素)。接著將培養物保持在25℃以允許噬菌體封裝。轉移培養物上清液之等分試樣以用於隨後一輪之淘選或fab結合篩檢。除了使用前一輪的經救援噬菌體上清液代替噬菌體庫之外，第二輪及後續輪以相同方式進行。噬菌體溶離液感染至TG1大腸桿菌 ，其用XOMA031噬菌粒(phagemid)轉化該等細胞。經轉化細胞接著塗抹在選擇性瓊脂板(胺苄青黴素)上且在37℃培育隔夜。XOMA031庫係基於噬菌粒構建體，其亦用作IPTG誘導性fab表現載體。來自淘選第3輪之溶離噬菌體庫經稀釋且感染至TG1大腸桿菌 細胞(Lucigen)，以致塗抹在瓊脂板上時產生單一菌落。個別純系在1 mL培養基(具有葡萄糖及胺苄青黴素之2YT)中生長，且藉由添加IPTG (Teknova)誘導蛋白質表現。在25℃培育表現培養基隔夜。接著提取分泌於大腸桿菌 周質中的Fab蛋白質用於分析。樣本之每個盤亦包括用作陰性對照之複本「空白PPE」孔。此等產生自與fab PPE相同方式處理之非接種培養基。使用FACS分析以識別對ILDR2具有親和力之fab。測試個別fab PPE以結合至過表現人類ILDR2之HEK-293T細胞(293T-huILDR2細胞)。包括陰性對照HEK-293T細胞之所有分析用「空載體」對照質體(293T-EV細胞)模擬轉染。試劑製備及洗步驟係在FACS緩衝液(具有1% BSA之PBS)中進行。將Fab及空白PPE與細胞之等分試樣混合，在4℃培育1小時且接著用FACS緩衝液洗。接著將細胞與抗C-myc初級抗體(Roche)混合。在相同培育及洗步驟之後，細胞用抗小鼠IgG Fc AlexaFlour-647抗體(Jackson Immunoresearch)染色。在最後培育及洗之後，將細胞固定於FACS緩衝液中製成之4%多聚甲醛中。在HTFC篩檢系統(Intellicyt)上讀取樣本。使用FCS Express (De Novo Software, CA , USA)或FloJo (De Novo Software, CA, USA)分析資料。基於此等結果，選擇五種黏合劑用於進一步分析且再格式化為全長IgG。
表 1 ：本研究中所使用之抗體


作為比較，抗PD-L1抗體用於一些實驗中。抗PD-L1抗體(在本文中亦被稱作aPDL1)為阿特珠單抗之可變域與人類IgG2域之嵌合體。
3. 抗體產生
此等IgG使用標準工序表現且純化。簡言之，藉由暫時使用經轉染之HEK293-6E細胞的哺乳動物細胞培養物產生IgG。將重鏈及輕鏈選殖入pTT5雙重載體系統。利用F17培養基(Life Technologies；補充有0.1%普洛尼克(pluronic) F68 (Life Technologies)及4 mM格魯塔瑪(Glutamax) (Life Technologies))在搖瓶中之細胞培養規模為4 × 1.5 l。轉染後24小時，添加1% FCS 「超低」 IgG (Life Technologies)及0.5 mM丙戊酸(Sigma Aldrich)。在純化之前，將6.0 l細胞上清液過濾滅菌且儲存於4℃下。IgG使用標準純化方案純化。捕獲步驟為MabSelect SuRe上之親和力層析法，繼之以Superdex 200上之製備型SEC。使用AEKTA探測器100系統(GE-Healthcare)將來自HEK-293細胞之經過濾(0.2 µm)上清液直接加至MabSelect SuRe管柱(200 ml)上。在自第1管柱溶離之後，合併峰值溶離份且使用3.0 M三pH 9中和。在無菌過濾之後，將濾液儲存於4℃下直至SEC。用相同層析法系統對Superdex 200製備型等級XK 50/100 (管柱體積約1.8L)執行單一注射。
合併峰值。使用超過濾器超15濃度裝置(Millipore，30 kDa MWCO)將含有溶離份之最終IgG濃縮至約10 mg/ml。藉由Nanodrop UV光譜光度計判定蛋白量及濃度；樣本經無菌過濾、等分、冷凍於液態氮中且儲存於-80℃下。
4.所選擇抗體之抗原結合之特徵
KD 值藉由結合至用人類ILDR2穩定轉染之HEK細胞之流動細胞測量定量且使用設計成基於結合曲線推知親和力之演算法判定。簡言之，在96孔盤中之16孔上以3 pM-209 nM之結合位點濃度範圍至恆定細胞數目(100,000細胞/孔)添加hIgG1s。含有不具有任何添加IgG之細胞之一個孔充當空白孔。在4℃下，平衡細胞4小時。在細胞之一個FACS緩衝液洗滌之後，以90 nM將過量經Cy5標記之山羊抗人類多株抗體(Jackson ImmunoResearch 109-606-097)添加至各孔。在用標記pAb培育(在4℃下)30分鐘之後洗滌細胞兩次，且接著使用Intellicyte流式細胞儀以大約10,000個「事件」記錄平均螢光強度(MFI)。結合至表現ILDR2之HEK 293細胞的IgG之KD 藉由使用如Drake及Klakamp (2007)中詳述之1:1均衡模型擬合MFI對比IgG結合位點濃度曲線來評估。利用表現鼠類ILDR2之HEK細胞進行的實驗產生相當的結合。使用未經轉染之細胞之對照實驗證明結合係絕對地ILDR2依賴性的。結果展示於下表2中。
表 2 ：根據本發明之抗體之解離常數
5. 抗腫瘤功效 ， 例如同基因型活體內小鼠模型中所選擇黏合劑之縮小活性
為判定抗腫瘤功效，例如各別黏合劑之腫瘤縮小效應，如上文所述使用兩個同基因型小鼠模型(B16F10，CT26)。事實證明，當針對同型對照進行量測時，抗ILDR2抗體E10完全未展示腫瘤縮小，而抗PD-L1抗體及抗ILDR2抗體B02展示腫瘤縮小(參見圖9A)。
6. 藉由 MLR 中之所選擇黏合劑調節 ILDR2 活性
為判定此等抗體對ILDR2功能之反應，執行免疫調節分析法，即混合型淋巴球反應分析法。混合型淋巴球反應(MLR)為其中將淋巴球群體混合在一起且量測所得反應物之測試。在技術上，離體細胞免疫分析法係在兩個同種異體淋巴球群體之間進行。在單向MLR中，僅一個淋巴球群體可作出回應或增殖。在雙向MLR中，兩個群體可增殖。執行MLR以評估T細胞如何對例如曝露於免疫檢查點抑制劑、類抗PD-1抗體(Wang等人2014)及抗PD-L1抗體之外部刺激做出反應。在本文中，用此分析法量測抗體誘發之IL-2分泌。
在當前情況中，在各種ILDR2抗體、功能阻斷之PD-L1抗體或同型對照存在之情況下，將來自一個供體之CD4 T細胞與來自另一供體之M-CSF成熟單核球一起共培養5天。收集上清液，且藉由Elisa判定ILDR2 (典型的T細胞活化標記)之濃度。如所預期，與同型對照相比，IL-2分泌誘導之抗PD-L1抗體顯著增加。一個ILDR2抗體(E10)具有相當的反應。結果展示於圖9B及下表3中。
表 3 ：所選擇抗體之誘導
此促使本發明者在其他活體內模型中測試正如B02之不介導MLR中之IL-2誘導之彼等其他抗ILDR2抗體。事實證明，在CT26模型中，當針對同型對照(參見圖9C)進行量測時，抗體G09、E08、B02及C05展示類似抗腫瘤功效。因此，完全出人意料地，在免疫調節分析中，抗ILDR2抗體G09、E08、B02及C05具有低於抗PD-L1抗體之細胞介素誘導活性的細胞介素誘導活性，但在活體內腫瘤模型中展示與抗PD-L1抗體之抗腫瘤活性相當的抗腫瘤活性。
在IL-2分泌分析中，僅一個抗ILDR2抗體(即E10)展示與比較例抗PD-L1抗體類似之行為-但在活體內分析中仍為非活性的。所測試之其餘的抗ILDR2抗體並未觸發IL-2分泌，但儘管如此，證明在活體內分析中具有活性。因此，本發明者推定IL-2分泌分析不能預測抗ILDR2抗體之活體內活性。實際上，似乎由經證明具有活體內活性之抗ILDR2抗體描繪之抗原決定基空間描繪適合於產生具有活體內抗腫瘤活性之ILDR2抗體的抗原決定基空間，且因此具有治療潛力。
在其中細胞介素誘導活性相對於同型對照經量測為IL-2、TNFα、IL-6及/或IFNγ之分泌的分析法中，
● 相比於抗PD-L1抗體之IL-2誘導，較佳ILDR2拮抗劑之IL-2誘導≤ 40%
● 相比於抗PD-L1抗體之TNFα誘導，較佳ILDR2拮抗劑之TNFα誘導≤ 28%
● 相比於抗PD-L1抗體之IL-6誘導，較佳ILDR2拮抗劑之IL-6誘導≤ 50%
● 相比於抗PD-L1抗體之IFNγ誘導，較佳ILDR2拮抗劑之IFNγ誘導≤ 68%。
7. 用 B02 (BAY1905254) 進行活體內實驗
抗PD-L1 (在本文中亦被稱作aPDL1)抗體為阿特珠單抗之可變域與人類IgG2域之嵌合體。BAY1905254 (在本文中亦被稱作aILDR2)由結合ILDR2之胞外域及恆定域骨架之可變域組成。在活體內實驗中藉由人類IgG2同型對照控制aPD-L1及aILDR2兩者。E10由結合ILDR2之胞外域及恆定域骨架之可變域組成，且在活體內實驗中藉由鼠類IgG1同型對照控制。
所有動物實驗係根據德國動物福祉法律(German Animal Welfare)執行且經地方當局批准。
7.1. B16-F10 預防性治療
將來自Charles River Deutschland, Sulzfeld之八週大的雌性C57Bl/6N Crl BR小鼠(體重18至20 g)用於B16F10腫瘤模型。該實驗在8天的適應時段之後開始。動物保持在12小時之亮/暗循環中。食物及水可隨意獲得。房間溫度保持在21℃下。小鼠(n=12/組) 經皮下接種1 × 104 個B16-F10腫瘤細胞至左側腹且經指派至實驗群組。在治療開始時，標記動物且每個籠子經標記有籠子編號、研究編號及各籠子中動物之數目。
用5 ml/kg之施加量活體內投與的調節藉由在不具有Ca2+、Mg2+，pH 7.4 (Biochrom)之DPBS中稀釋儲備溶液來達成。且以10 mg/kg每日3次 × 6腹膜內投與藥劑，用腫瘤接種開始治療。結果展示於圖1及圖2及表3至6中。
表 3 ：腫瘤接種之後 ， 在 7 個不同時間點量測之每組平均腫瘤尺寸


表 4 ： 治療功效展示為治療組對比同型對照 (T/C) 之腫瘤尺寸
表 5 ：腫瘤接種之後 ， 在 7 個不同時間點量測之每組平均腫瘤尺寸
表 6 ： 治療功效展示為治療組對比同型對照 (T/C) 之腫瘤尺寸
7.2.B16-F10 與 aPD-L1 組合之治療性治療、協同功效
將來自Charles River Deutschland, Sulzfeld之八週大的雌性C57Bl/6N Crl BR小鼠(體重18至20 g)用於B16-F10腫瘤模型。該實驗在5天的適應時段之後開始。動物保持在12小時之亮/暗循環中。食物及水可隨意獲得。房間溫度保持在21℃下。小鼠(n=11/組)經皮下接種1 × 104 個B16F10腫瘤細胞至左側腹，且在腫瘤接種之後第3天藉由分級隨機化(用腫瘤尺寸之相等分佈將小鼠劃分成群組之方法)指派至實驗群組。在治療開始時，標記動物且每個籠子經標記有籠子編號、研究編號及各籠子中動物之數目。
用5 ml/kg之施加量活體內投與的調節藉由在不具有Ca2+、Mg2+，pH 7.4 (Biochrom)之DPBS中稀釋儲備溶液來達成，且在第3天開始以10 mg/kg每日3次 × 5腹膜內投與藥劑。結果展示於圖3及表7至8中。
表 7 ：腫瘤接種之後 ， 在 5 個不同時間點量測之每組平均腫瘤尺寸
表 8 ： 治療功效展示為治療組對比同型對照 (T/C) 之腫瘤尺寸
7.3.CT26 與 aPD-L1 之治療性、協同功效
將來自Charles River Deutschland, Sulzfeld之八週大的雌性Balb/cAnN小鼠(體重18至20 g)用於CT26腫瘤模型。該實驗在6天的適應時段之後開始。動物保持在12小時之亮/暗循環中。食物及水可隨意獲得。房間溫度保持在21℃下。小鼠(n=12/組)經皮下接種5 × 105 個CT26腫瘤細胞至左側腹，且在腫瘤接種之後第7天藉由分級隨機化(用腫瘤尺寸之相等分佈將小鼠劃分成群組之方法)指派至實驗群組。在治療開始時，標記動物且每個籠子經標記有籠子編號、研究編號及各籠子中動物之數目。
用5 ml/kg之施加量活體內投與的調節藉由在不具有Ca2+、Mg2+，pH 7.4 (Biochrom)之DPBS中稀釋儲備溶液來達成。以10 mg/kg每日3次 × 3腹膜內投aPD-L1與且以3 mg/kg每日3次 × 3腹膜內投與BAY1905254，所有治療在第7天開始。結果展示於圖4及表9至10中。
表 9 ：腫瘤接種之後 ， 在 4 個不同時間點量測之每組平均腫瘤尺寸
表 10 ： 治療功效展示為治療組對比同型對照 (T/C) 之腫瘤尺寸
7.4.3C9-D11-H11 與 aPD-L1 之治療性、協同功效
將來自Charles River Deutschland, Sulzfeld之八週大的雌性Balb/cAnN小鼠(體重18至20 g)用於3C9-D11-H11腫瘤模型。
該實驗在12天的適應時段之後開始。動物保持在12小時之亮/暗循環中。食物及水可隨意獲得。房間溫度保持在21℃下。小鼠(n=12/組)經皮下接種1 × 104 個3C9-D11-H11腫瘤細胞至左側腹，且在腫瘤接種之後第8天藉由分級隨機化(用腫瘤尺寸之相等分佈將小鼠劃分成群組之方法)指派至實驗群組。在治療開始時，標記動物且每個籠子經標記有籠子編號、研究編號及各籠子中動物之數目。
用5 ml/kg之施加量活體內投與的調節藉由在不具有Ca2+、Mg2+，pH 7.4 (Biochrom)之DPBS中稀釋儲備溶液來達成。且在第8天開始以10 mg/kg每日3次 × 5腹膜內投與藥劑。結果展示於圖5及表11至12中。
表 11 ：腫瘤接種之後 ， 在 6 個不同時間點量測之每組平均腫瘤尺寸


表 12 ： 治療功效展示為治療組對比同型對照 (T/C) 之腫瘤尺寸
8. 其他組合
8.1. 與免疫刺激 CpG 寡核苷酸 (OVA 疫苗 ) 之組合
將來自Charles River Deutschland, Sulzfeld之九週大的雌性C57Bl/6N Crl BR小鼠(體重18至20 g)用於B16F10 OVA腫瘤模型。該模型為表現可藉由抗原特異性T細胞識別之雞的同種異型抗原卵白蛋白之B16-F10細胞株之衍生物。
該實驗在13天的適應時段之後開始。動物保持在12小時之亮/暗循環中。食物及水可隨意獲得。房間溫度保持在21℃下。小鼠(n=12/組)經皮下接種1 × 104 個B16-F10 OVA腫瘤細胞至左側腹且經指派至實驗群組。在治療開始時，標記動物且每個籠子經標記有籠子編號、研究編號及各籠子中動物之數目。
用5 ml/kg之施加量活體內投與同型對照及BAY 1905254的調節藉由在不具有Ca2+、Mg2+，pH 7.4 (Biochrom)之DPBS中稀釋儲備溶液來達成。在第8天開始以10 mg/kg每日3次 × 3腹膜內投與藥劑。在第9日，將50 µg OVA (以50µl) + 10 µg CPG (以10µl) + 140µl PBS = 200µl/小鼠皮下施加至鄰近於腫瘤之左側腹。CpG寡核苷酸為對使用之小鼠TLR9 (Invivogen #tlrl-1826-5)具有特異性之ODN 1826 (5'-tccatgacgttcctgacgtt-3'；鹼基為硫代磷酸酯/核酸酶抗性的)。結果展示於圖6及表13至14中。
表 13 ：腫瘤接種之後 ， 在 6 個不同時間點量測之每組平均腫瘤尺寸
表 14 ： 治療功效展示為治療組對比對照 (T/C) 之腫瘤尺寸
8.2. 與多烯紫杉醇之組合
將來自Charles River Deutschland, Sulzfeld之八週大的雌性C57Bl/6N Crl BR小鼠(體重18至20 g)用於B16-F10 OVA腫瘤模型。該模型為表現可藉由抗原特異性T細胞識別之同種異型抗原卵白蛋白之B16F10細胞株之衍生物。該實驗在5天的適應時段之後開始。動物保持在12小時之亮/暗循環中。食物及水可隨意獲得。房間溫度保持在21℃下。小鼠(n=12/組)經皮下接種1 × 104 個B16F10 OVA腫瘤細胞至左側腹且經指派至實驗群組。在治療開始時，標記動物且每個籠子經標記有籠子編號、研究編號及各籠子中動物之數目。
用5 ml/kg之施加量活體內投與同型對照及BAY 1905254的調節藉由在不具有Ca2+、Mg2+，pH 7.4 (Biochrom)之DPBS中稀釋儲備溶液來達成。在第8天開始以10 mg/kg每日3次 × 3腹膜內投與藥劑。在第8日，每次以20 mg/kg靜脈內投與多烯紫杉醇，用0.9% NaCl稀釋80 mg/4 ml之儲備溶液以用於輸注目的。結果展示於圖7及表15至16中。
表 15 ：腫瘤接種之後 ， 在 4 個不同時間點量測之每組平均腫瘤尺寸
表 16 ： 治療功效展示為治療組對比對照 (T/C) 之腫瘤尺寸
8.3. 與 C4.4A ADC 之組合
將來自Charles River Deutschland, Sulzfeld之九週大的雌性Balb/cAnN小鼠(體重18至20 g)用於CT26 C4.4a腫瘤模型。此模型係於腫瘤細胞之表面上表現鼠類C4.4a的親本CT26模型之衍生物。
該實驗在15天的適應時段之後開始。動物保持在12小時之亮/暗循環中。食物及水可隨意獲得。房間溫度保持在21℃下。小鼠(n=12/組)經皮下接種1 × 105 個CT26腫瘤細胞至左側腹，且在腫瘤接種之後第6天藉由分級隨機化(用腫瘤尺寸之相等分佈將小鼠劃分成群組之方法)指派至實驗群組。
在治療開始時，標記動物且每個籠子經標記有籠子編號、研究編號及各籠子中動物之數目。用10 ml/kg之施加量活體內投與的調節藉由在不具有Ca2+、Mg2+，pH 7.4 (Biochrom)之DPBS中稀釋儲備溶液來製備。在第6天開始以10 mg/kg每日3次 × 5腹膜內投與藥劑(對照 + BAY 1905254)。
由針對尿激酶型纖維蛋白溶酶原活化劑受體(uPAR)及腫瘤相關抗原(C4.4a)之結構同系物的抗體構成且與細胞毒性劑結合之C4.4A ADC (抗體-藥物結合物BAY1129980)在第6天開始10 mg/kg每日4次× 3靜脈內投與。結果展示於圖8及表17至18中。
表 17 ：腫瘤接種之後 ， 在 6 個不同時間點量測之每組平均腫瘤尺寸
表 18 ： 治療功效展示為治療組對比對照 (T/C) 之腫瘤尺寸
序列
在本文中，展示於下表中之序列被稱作。在此表與形成本說明書及其揭示內容之部分的WIPO標準序列表之間存在不確定性之情況下，此表中之序列及限定符將被視為校正者。
術語「mIgG」係指鼠類免疫球蛋白G。術語「hIgG」係指人類免疫球蛋白G。
術語「aPD-L1」、「aPDL1」、「aILDR2」及「BAY1905254」在本文中其他地方定義。
術語「同型對照」係指使用相同同型、相同物種但針對無關抗原之單株抗體。同型對照廣泛用以設定非特異性背景與陽性螢光染色之間的差別水平。
術語「同型ADC」係指使用包含相同毒素及相同同型、相同物種但針對無關抗原之單株抗體之抗體藥物結合物(ADC)。
圖1：藉由雙向ANOVA分析判定BAY1905254治療相比於同型對照之顯著性。相比於同型對照，藉由用BAY1905254治療顯著延遲B16F10腫瘤之生長。治療開始(d0)。實驗條件展示於下表中：
圖2：用E10抗體治療並不影響B16F10腫瘤模型之生長。治療開始(d0)。實驗條件展示於下表中：
圖3：藉由雙向ANOVA分析判定單一療法及組合治療對比同型對照之顯著性。對比既不用aPD-L1亦不用BAY1905254治療之同型對照，未觀測到單一療法功效。對比對照，aPD-L1與BAY1905254之組合協同延遲腫瘤生長。治療開始：每日3次腹膜內。實驗條件展示於下表中：
圖4：藉由雙向ANOVA分析判定aPD-L1及BAY1905254組合治療相比於同型對照之顯著性。BAY1905254單獨展示在CT26腫瘤模型上以3 mg/kg之劑量未延遲腫瘤生長。在10 mg/kg處，aPD-L1對比同型對照展示出功效，其將10 mg/kg aPD-L1與3 mg/kg BAY1905254組合協同改良。治療開始(d7)：每日3次腹膜內。實驗條件展示於下表中：
圖5：藉由雙向ANOVA分析判定單一療法及組合治療對比同型對照之顯著性。在單一療法aPD-L1中治療3C9-D11-H11模型達成腫瘤生長對比同型對照之顯著延遲，而BAY1905254則不然。將aPD-L1與BAY1905254組合展示協同作用(synergy)且禁止腫瘤過度生長。治療開始(d8)：每日3次腹膜內。實驗條件展示於下表中：
圖6：藉由雙向ANOVA分析判定單一療法及組合治療對比同型對照之顯著性。以單一療法BAY1905254治療B16F10 OVA模型導致腫瘤生長適度延遲。當BAY1905254與OVA及CPG組合時，此延遲經協同改良。治療開始(d9)：每日3次腹膜內。實驗條件展示於下表中：
圖7：藉由雙向ANOVA分析判定單一療法及組合治療對比同型對照之顯著性。以單一療法BAY1905254治療B16F10 OVA模型導致腫瘤生長適度延遲。當BAY1905254與多烯紫杉醇(Docetaxel)組合時，此延遲經協同改良。治療開始(d8)：每日3次腹膜內。實驗條件展示於下表中：
圖8：藉由雙向ANOVA分析判定單一療法及組合治療對比同型對照之顯著性。以單一療法BAY1905254治療B16F10 OVA模型不會導致腫瘤生長延遲。當BAY1905254與C4.4a ADC組合時，仍可見協同效應。治療開始(d6)：每日3次腹膜內。實驗條件展示於下表中：
圖9A：B16F10同基因型小鼠模型中不同抗體之腫瘤縮小活性。腫瘤縮小活性經量測為相對於同型對照之腫瘤體積減小。
圖9B：相比於抗PD-L1抗體，根據本發明之所選擇的抗ILDR2抗體在IL2誘導分析法中之異常行為。
圖9C：根據本發明之所選擇的抗ILDR2抗體在CT26同基因型小鼠模型中之腫瘤縮小活性。腫瘤縮小活性經量測為相對於同型對照之腫瘤體積減小。

Claims (24)

  1. 一種醫藥組合，其包含ILDR2拮抗劑加上任選之一或多種其他治療活性化合物。
  2. 如請求項1之組合，其中該另一治療活性化合物係選自由以下組成之群的至少一者： PD-L1拮抗劑 紫杉烷或紫杉烷衍生物 疫苗 CpG寡脫氧核苷酸，及/或 靶向c4.4A之化合物。
  3. 如請求項1及2中任一項之組合，其中該ILDR2拮抗劑及該另一治療活性化合物 以相同劑量單位提供，或 以個別劑量單位提供。
  4. 如請求項1及2中任一項之組合，其中該ILDR2拮抗劑及該另一治療活性化合物 同時投與，或 按順序投與，亦即，一者在另一者之後。
  5. 如上述請求項中任一項之組合，其中該ILDR2拮抗劑為抗體、其片段或衍生物、經修飾抗體形式或抗體模擬物，其皆具有ILDR2結合性質。
  6. 一種抗ILDR2抗體或其片段或衍生物或經修飾抗體形式，其皆具有ILDR2結合性質，其包含至少3個CDR重鏈序列： SEQ ID No 1 CDR1 HC SEQ ID No 2 CDR2 HC SEQ ID No 3 CDR3 HC。
  7. 一種抗ILDR2抗體或其片段或衍生物或經修飾抗體形式，其皆具有ILDR2結合性質，其包含至少3個CDR輕鏈序列： SEQ ID No 4 CDR1 LC SEQ ID No 5 CDR2 LC SEQ ID No 6 CDR3 LC。
  8. 如請求項6或7中任一項之抗ILDR2抗體、片段或衍生物或經修飾抗體形式，其包含至少一個重鏈或輕鏈可變區序列，與選自由以下組成之群的序列具有95%一致性、較佳96%或甚至97%一致性、更佳98%或甚至99%一致性且最佳100%： SEQ ID No 7 HC VD SEQ ID No 8 LC VD。
  9. 如請求項6至8中任一項之抗ILDR2抗體、片段或衍生物或經修飾抗體形式，其包含至少一個重鏈或輕鏈序列，與選自由以下組成之群的序列具有95%一致性、較佳96%或甚至97%一致性、更佳98%或甚至99%一致性且最佳100%： SEQ ID No 42 HC SEQ ID No 43 LC。
  10. 一種抗ILDR2抗體或其片段或衍生物或經修飾抗體形式，其皆具有ILDR2結合性質，其包含選自由以下組成之群之三個CDR重鏈序列之至少一個組合： SEQ ID No 18 - 20、 SEQ ID No 24 - 26、 SEQ ID No 30 - 32，及/或 SEQ ID No 36 - 38。
  11. 一種抗ILDR2抗體或其片段或衍生物或經修飾抗體形式，其皆具有ILDR2結合性質，其包含選自由以下組成之群之三個CDR輕鏈序列之至少一個組合： SEQ ID No 21 - 23、 SEQ ID No 27 - 29、 SEQ ID No 33 - 35及/或 SEQ ID No 39 - 41。
  12. 一種抗ILDR2抗體或其片段或衍生物或經修飾抗體形式，其皆具有ILDR2結合性質，其包含至少一個重鏈或輕鏈可變區序列，與選自由以下組成之群的序列具有95%一致性、較佳96%或甚至97%一致性、更佳98%或甚至99%一致性且最佳100%： SEQ ID No 9、 SEQ ID No 10、 SEQ ID No 11、 SEQ ID No 12、 SEQ ID No 13、 SEQ ID No 14、 SEQ ID No 15，及/或 SEQ ID No 16。
  13. 一種抗ILDR2抗體或其片段或衍生物或經修飾抗體形式，其皆具有ILDR2結合性質，其包含至少一個重鏈或輕鏈序列，與選自由以下組成之群的序列具有95%一致性、較佳96%或甚至97%一致性、更佳98%或甚至99%一致性且最佳100%： SEQ ID No 44、 SEQ ID No 45、 SEQ ID No 46、 SEQ ID No 47、 SEQ ID No 48、 SEQ ID No 49、 SEQ ID No 50，及/或 SEQ ID No 51。
  14. 如上述請求項中任一項之抗ILDR2抗體或片段或衍生物或經修飾抗體形式，其選自由以下組成之群：61-02.C05、56-02.E08、74-15.G09及59-08.B02。
  15. 如上述請求項中任一項之ILDR2拮抗劑或抗體、或片段或衍生物、或經修飾抗體形式，其以25 nM (2.5 × 10-8 M)或小於25 nM之Kd 與人類ILDR2解離，藉由螢光活化細胞掃描(FACS)測定。
  16. 一種ILDR2拮抗劑或抗體、或片段或衍生物、或經修飾抗體形式，其與如請求項6至15中任一項之ILDR2抗體競爭結合至ILDR2。
  17. 一種抗體-藥物結合物，其包含如請求項6至16中任一項之抗體或其抗原結合片段。
  18. 一種經分離之核酸序列或其集合(set)，其編碼如請求項6至16中任一項之ILDR2抗體、或片段或衍生物、或經修飾抗體形式。
  19. 一種載體，其包含如請求項18之至少一個核酸序列。
  20. 一種經分離之細胞，其表現如請求項6至16中任一項之ILDR2抗體、或片段或衍生物、或經修飾抗體形式，及/或包含如請求項18之核酸序列或其集合，或如請求項19之載體。
  21. 如請求項1至5中任一項之醫藥組合，該組合包含如請求項6至16中任一項之ILDR2拮抗劑或抗體、或片段或衍生物、或經修飾抗體形式。
  22. 如上述請求項中任一項之ILDR2拮抗劑或抗體、或片段或衍生物、或經修飾抗體形式、或包含ILDR2拮抗劑的組合，其用作藥物。
  23. 如上述請求項中任一項之之ILDR2拮抗劑或抗體、或片段或衍生物、或經修飾抗體形式、或包含ILDR2拮抗劑的組合，其用於治療以下患者 患有、 具有發展風險，及/或 經診斷為 贅生性疾病(諸如癌症)或免疫疾病或病症，其中以一或多個治療有效劑量投與該ILDR2拮抗劑或包含ILDR2拮抗劑或抗體之組合。
  24. 一種用於治療以下患者之方法， 患有、 具有發展風險，及/或 經診斷為 贅生性疾病(諸如癌症)或免疫疾病或病症，該方法包含以一或多個治療有效劑量向該患者投與如上述請求項中任一項之ILDR2拮抗劑或抗體、或片段或衍生物或經修飾抗體形式、或包含ILDR2拮抗劑之組合。
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