BR112020010016A2

BR112020010016A2 - agentes de ligação de reversão para anticorpos antifator xi/xia e usos dos mesmos

Info

Publication number: BR112020010016A2
Application number: BR112020010016-1A
Authority: BR
Inventors: Stefan Ewert; Alexander Wolfgang KOCH
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2017-11-22
Filing date: 2018-11-20
Publication date: 2020-11-10
Also published as: CN111902427A; US20200308301A1; JP2021503891A; WO2019102353A1; KR20200087236A; AU2018372135A1; EP3713965A1; CA3083210A1

Abstract

A presente divulgação refere-se a agentes de reversão, que se ligam especificamente a anticorpos antiFator XI e/ou antiFator XIa, e revertem um ou mais efeitos anticoagulantes dos anticorpos antiFator XI e/ou antiFator XIa, bem como a métodos de uso dos mesmos, tais como métodos para reverter efeitos anticoagulantes de tais anticorpos antiFator XI e/ou antiFator XIa, e a métodos relacionados para gerenciar sangramento ou riscos de sangramento.

Description

Relatórios Descritivos da Patente de Invenção para "AGENTES DE LIGAÇÃO DE REVERSÃO PARA ANTICORPOS ANTIFATOR XI/XIa E USOS DOS MESMOS".

[001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório U.S. No. 62/589.809 depositado em 22 de novembro de 2017, que é incorporado por referência na sua totalidade.

CAMPO TÉCNICO

[002] A presente divulgação refere-se a agentes de ligação (por exemplo, anticorpos anti-idiotipo), que se ligam especificamente a anticorpos antiFator XI e/ou antiFator XIa ("anti-FXI/FXIa") e revertem um ou mais efeitos anticoagulantes dos anticorpos antiFator XI e/ou antiFator XIa, bem como composições farmacêuticas e métodos de uso dos mesmos, como métodos para reverter os efeitos anticoagulantes desses antiFator XI e/ou anticorpos antiFator XIa.

FUNDAMENTOS

[003] Trombose refere-se à formação de trombos dentro dos vasos sanguíneos, subsequente a uma combinação de fatores de risco hereditários e adquiridos, conhecidos como trombofilia ou estados de hipercoagulabilidade. Danos na parede do vaso, estase, aumento da reatividade plaquetária e ativação de fatores de coagulação são algumas das características fundamentais da trombose. A trombose pode ocorrer na circulação venosa e arterial e pode resultar no desenvolvimento de trombose venosa profunda (DVT), embolia pulmonar e derrame. Se ocorrer um trombo no sistema arterial, pode ocorrer isquemia a jusante, levando a síndromes coronárias agudas (SCA), derrame isquêmico e isquemia aguda de membros. A formação de trombos no sistema venoso geralmente leva a trombose venosa profunda, embolia pulmonar e hipertensão pulmonar tromboembólica crônica. Também podem formar coágulos no apêndice atrial esquerdo em pacientes com fibrilação atrial (FA), e trombos desalojados podem resultar em complicações potencialmente devastadoras, ou seja, derrame tromboembólico e embolia sistêmica. Os drogas antitrombóticos atualmente disponíveis, incluindo heparina de baixo peso molecular (LMWH), inibidores de trombina, e inibidores do fator Xa (FXa), estão todos associados a um risco significativo de sangramento (Weitz J.I. (2010) Thromb. Haemost. 103, 62). O desenvolvimento de um agente antitrombótico que não afeta a hemostasia e, portanto, não resulta em complicações hemorrágicas, bem como agentes reversíveis específicos, seria altamente desejável.

[004] Os anticoagulantes atuais são injetados ou tomados por via oral. O anticoagulante injetável LMWH é amplamente utilizado e oferece um perfil terapêutico aprimorado em relação à heparina não fracionada aplicada anteriormente. Nas últimas décadas, o anticoagulante oral mais utilizado tem sido a varfarina. A varfarina tem uma janela terapêutica estreita que requer monitoramento frequente do status da coagulação e mostra uma variedade de interações medicamentosas. Mais recentemente, os inibidores diretos de FXa e trombina disponíveis por via oral entraram no mercado de anticoagulantes e são cada vez mais aplicados.

[005] LMWHs, inibidores de FXa e inibidores de trombina são eficazes na prevenção de doença tromboembólica venosa pós- operatória, no tratamento de DVT espontânea e embolia pulmonar e na prevenção de derrame na fibrilação atrial. No entanto, esses anticoagulantes também estão associados a complicações hemorrágicas geralmente comparáveis àquelas observadas com as drogas mais antigas varfarina e heparina não fracionada. No ensaio clínico ADVANCE-2, o inibidor de FXa apixaban (Eliquis) foi comparado com a enoxaparina LMWH em pacientes após a substituição total do joelho. Enquanto a terapia aguda com apixaban foi mais eficaz na prevenção da doença tromboembólica venosa do que a enoxaparina,

ambos os agentes foram associados a um risco significativo de sangramento. Sangramento clinicamente relevante ocorreu em 4% dos pacientes que receberam apixaban e em 5% dos pacientes tratados com enoxaparina (Lassen, M.R., et al. (2009) N. Engl. J. Med. 361, 594).

[006] No estudo RE-LY, o inibidor direto da trombina dabigatran (Pradaxa) foi comparado à varfarina em pacientes com fibrilação atrial e risco de derrame (Connolly, SJ, et al. (2009) N. Engl. J. Med 361, 1139). A terapia crônica com dabigatran foi associada a um risco significativamente menor de derrame ou embolia sistêmica. No entanto, complicações hemorrágicas maiores ocorreram em 3,1% dos pacientes que receberam 150 mg por dia de dabigatran e em 3,4% dos pacientes que receberam varfarina (p = 0,31).

[007] A fibrilação atrial (FA) continua sendo a arritmia cardíaca mais comum na prática clínica, sendo responsável por aproximadamente um terço das hospitalizações por disritmias cardíacas. Atualmente, estima-se que afete mais de 6 milhões de pacientes na Europa e aproximadamente 2,3 milhões nos Estados Unidos, e esse número continua a crescer rapidamente devido à crescente proporção do envelhecimento da população. Estima-se que aproximadamente 5% da população acima de 65 anos e 10% das pessoas acima de 80 anos desenvolvam AF, no entanto, a prevalência de AF está aumentando além do que é explicado apenas pela idade. Fatores de risco para AF, como hipertensão, insuficiência cardíaca congestiva, hipertrofia ventricular esquerda, doença arterial coronariana e diabetes mellitus, e apneia obstrutiva do sono também estão aumentando. Como tal, espera-se que o número de indivíduos afetados com AF aumente duas a três vezes nas próximas três décadas nas populações ocidentais. (Kannel e Benjamin (2008) Med Clin North Am. 2008; 92: 17-40; Bunch, et al. (2012) J Innovations of Card Rhythm Manag 2012; 3: 855–63).

[008] O principal risco de AF é um aumento de quatro a cinco vezes no derrame embólico. O risco atribuível de derrame associado à AF aumenta acentuadamente com a idade, para 23,5%, entre 80 e 89 anos. A AF está associada a uma duplicação da mortalidade em ambos os sexos (Kannel e Benjamin 2008). A AF também está independentemente associada ao declínio cognitivo e a todas as formas de demência (Marzona, et al. (2012) CMAJ 2012; 184: 329–36; Geita et al 2013; Bunch et al 2012).

[009] A maioria dos pacientes com AF necessita de terapia de anticoagulação ao longo da vida para prevenir derrame cardioembólico e embolia sistêmica. O pontuação de risco CHA2DS2-VASc é uma ferramenta de estratificação validada e amplamente utilizada para prever risco tromboembólico em pacientes com fibrilação atrial e identificar pacientes que devem se beneficiar da terapia anticoagulante (LIP 2011; Camm, et al. (2012) Eur Heart J 2012; 33: 2719-2747); as evidências acumuladas mostram que CHA2DS2-VASc é pelo menos tão preciso quanto ou possivelmente melhor que, pontuações como CHADS2 na identificação de pacientes que desenvolvem derrame e tromboembolismo e definitivamente melhor na identificação de pacientes com AF de "risco verdadeiramente baixo". Estima-se que 85 a 90% dos pacientes com AF necessitem de terapia anticoagulante.

[010] Em uma meta-análise compreendendo 6 estudos que avaliaram o efeito de antagonistas da vitamina K (VKA) na redução de derrame e embolia sistêmica, foi observada uma redução de risco altamente significativa na incidência de derrame (redução de 67% no risco para derrame). A mortalidade por todas as causas foi significativamente reduzida (26%) pela dose ajustada de VKA vs. controle (Hart, Pearce e Aguilar (2007) Ann Intern Med 2007; 146: 857– 867). Uma razão normalizada internacional (INR) alvo entre 2 e 3 foi associada à melhor relação risco-benefício (Hylek et al (2003) N Engl J

Med; 349: 1019-1026) e universalmente adotada por diretrizes internacionais e nacionais.

[011] Nos últimos anos, novos anticoagulantes orais (NOAC) também referidos como anticoagulantes orais diretos (DOAC) foram aprovados e introduzidos na prática clínica. Essas drogas são pelo menos tão eficazes ou até melhores que a varfarina para reduzir a doença tromboembólica (Connolly, et al. (2009) N Engl J Med; 361: 1139–51; Connolly, et al. (2011) N Engl J Med ; 364: 806-17; Patel et al. (2011) N Engl J Med 2011; 365: 883–91). NOAC também foi associado a grandes reduções nas complicações mais devastadoras da varfarina, como derrame hemorrágico e hemorragia intracraniana. Os principais eventos hemorrágicos foram semelhantes ou ligeiramente inferiores aos da terapia com varfarina bem conduzida. Além disso, NOAC estão associados a um potencial menor de interação medicamentosa do que a varfarina e podem ser usados sem monitoramento de rotina; espera- se que isso facilite seu uso na prática médica cotidiana.

[012] Apesar das melhorias recentes, o risco de sangramento continua alto com o uso de anticoagulantes. Por exemplo, a incidência anual de sangramento maior e não clinicamente relevante foi de 14,9% e a incidência anual de eventos hemorrágicos maiores foi de 3,6% em pacientes tratados com rivaroxaban no estudo ROCKET (Patel et al 2011). A incidência anual de sangramento maior foi > 5% em pacientes com alto risco de sangramento definido como pontuação de risco HAS Bled ≥ 3 (Gallego, et al. (2012) Carc Arrhythm Electrophysiol; 5: 312– 318). Sangramento maior é um resultado clínico particularmente relevante; por exemplo, no estudo ROCKET, uma vez que ocorreu um sangramento maior, a taxa de mortalidade por todas as causas foi de 20,4% no grupo rivaroxaban e 26,1% no grupo varfarina. Após a ocorrência de eventos hemorrágicos graves, houve derrame e embolia sistêmica em 4,7% e 5,4% dos pacientes nos grupos rivaroxaban e varfarina, respectivamente (Piccini, et al. (2014) Eur Heart J; 35: 1873– 80). A permanência no hospital, a transfusão de produtos sanguíneos e o uso de recursos também foram severamente afetados pela ocorrência de sangramentos graves. O risco de sangramento também é um dos principais motivos para não receber anticoagulantes em pacientes elegíveis. No Euro Heart Survey on Fibrillation Atrial compreendendo dados de 182 hospitais em 35 países e 5333 pacientes com AF ambulatoriais e hospitalizados, apenas 67% dos pacientes elegíveis receberam anticoagulante oral na alta (Nieuwlaat et al (2005) Eur Heart J; 26, 2422–2434). Existe, portanto, uma alta necessidade médica não atendida por uma terapia mais segura que possa reduzir complicações tromboembólicas da AF, como derrame, embolia sistêmica, declínio cognitivo e mortalidade com eficácia comparável à terapia existente, mas com menor risco de sangramento.

[013] Fator XI (FXI) possui papéis importantes nas vias de coagulação intrínseca e extrínseca e na ponte das fases de iniciação e amplificação da hemostasia plasmática (Gailani e Renné (2007) Arterioscler Thromb Vasc Biol; 27 (12): 2507-13). Tanto o Fator XII quanto a trombina podem ativar FXI, resultando em geração sustentada de trombina e inibição da fibrinólise. FXI desempenha um papel menor na hemostasia normal em um ambiente de alto fator tecidual "após lesão do vaso", enquanto parece desempenhar um papel fundamental na trombose. A deficiência de FXI grave está associada a uma menor incidência de derrame isquêmico e eventos tromboembólicos venosos (Salomon et al (2008) Blood; 111 (8): 4113-7; Salomon et al (2011) Thromb Haemost; 105 (2): 269-73) Além disso, em um estudo populacional, uma vantagem de sobrevivência de deficiência severa de FXI foi evocada como resultado de uma menor incidência de eventos tromboembólicos (Duga e Salomon, (2013) Semin Thromb Hemost; 39 (6): 621-31). As manifestações hemorrágicas em indivíduos com deficiência severa de FXI são pouco frequentes, geralmente leves, relacionadas a lesões e afetam preferivelmente tecidos com atividade fibrinolítica aumentada, como mucosa oral, mucosa nasal e trato urinário (Bolton-Maggs, (2000) Hemofilia; 6 Suppl 1: 100-9). O sangramento nos órgãos vitais é extremamente raro ou não existe.

[014] Consequentemente, como parte dos esforços para reduzir a responsabilidade do sangramento, também há uma alta necessidade médica não atendida de agentes de reversão específicos para terapias anticoagulantes, por exemplo, em circunstâncias em que a reversão dos efeitos anticoagulantes de uma terapia é necessária para cirurgia de emergência/procedimentos urgentes e em sangramento descontrolado ou com risco de vida.

SUMÁRIO

[015] Menor risco de sangramento está associado a terapias anticoagulantes envolvendo anticorpos anti-FXI/FXIa, em comparação com NOACs. Por exemplo, o anticorpo antiFator XI/FXIa NOV1401 é um anticorpo humano que se liga ao domínio catalítico de FXI. NOV1401 inibe o zimogênio (FXI) e o Fator XI ativado (FXIa) com alta potência. Anticorpo anti-FXI/FXIa, tempo de tromboplastina parcial ativada (aPTT) prolongada e dependente da dose NOV1401 em estudos in vitro e in vivo. Após uma administração subcutânea única (s.c.) de NOV1401 na dose de 3 mg/kg, foi observada uma atividade anticoagulante sustentada com duração de mais de um mês em macacos cinomolgos. Além disso, o anticorpo Anti-FXI/FXIa NOV1401 impediu a trombose experimental da artéria carótida induzida por FeCl3 e prolongou a indução de aPTT em camundongos FXI-/- reconstituídos com FXI humano. NOV1401 foi bem tolerado no estudo de toxicidade de 13 semanas, conforme as Boas Práticas de Laboratório (GLP), realizado em macacos cinomolgos.

[016] Apesar do menor risco de sangramento com anticorpos anti-

FXI/FXIa, tal como o anticorpo NOV1401, em comparação com NOACs, os eventos de sangramento ainda podem ocorrer em determinadas circunstâncias devido a trauma, cirurgia, procedimentos, comedicação e alta prevalência de comorbidades que aumentam o risco de sangramento, como hipertensão, insuficiência cardíaca, insuficiência renal, insuficiência hepática, idade avançada, eventos hemorrágicos anteriores, risco de quedas, uso de agentes plaquetários ou drogas anti- inflamatórias não esteroidais, etc.

[017] Consequentemente, como parte dos esforços para reduzir a responsabilidade por sangramento, a presente divulgação descreve estratégias para atender à alta necessidade médica não atendida de agentes específicos de reversão para terapias anticoagulantes que são anticorpos antiFator XI/XIa (por exemplo, anticorpos anti-FXI/FXIa que se ligam especificamente ao domínio catalítico de FXI/FXIa). Em aspectos específicos, o gerenciamento de sangramento ou risco de sangramento é benéfico em circunstâncias em que é necessária a reversão dos efeitos anticoagulantes de uma terapia, por exemplo, para cirurgia de emergência/procedimentos urgentes e em casos de sangramento descontrolado ou com risco de vida. Em aspectos específicos, o gerenciamento do sangramento ou risco de sangramento é benéfico em pacientes identificados como tendo alto risco de sangramento (por exemplo, histórico anterior de sangramento).

[018] A presente divulgação refere-se a agentes de ligação que são anticorpos anti-idiotipo, por exemplo, IgGs de comprimento completo, e fragmentos dos mesmos, como Fabs, que se ligam especificamente a anticorpos que se ligam especificamente ao Fator XI e XIa de coagulação (Fator XI ativado) (daqui em diante), às vezes chamado de "FXI", "FXIa" e termos semelhantes) e que são capazes de reverter um ou mais efeitos anticoagulantes desses anticorpos anti- FXI/FXIa (por exemplo, capazes de reduzir aPTT ou tempo de sangramento) e/ou inibe a ligação dos anticorpos a FXI/FXIa. Em particular, a presente divulgação também se refere a composições farmacêuticas compreendendo esses agentes de ligação e métodos de reverter um ou mais efeitos anticoagulantes de um anticorpo anti- FXI/FXIa em um paciente (por exemplo, paciente humano) sendo tratado com o anticorpo anti-FXI/FXIa, compreendendo a administração do agente de ligação. Tais agentes de ligação capazes de reverter um ou mais efeitos anticoagulantes de anticorpos anti-FXI/FXIa atendem a uma necessidade não atendida em circunstâncias em que a reversão dos efeitos anticoagulantes de uma terapia, como anticorpos anti- FXI/XIa, é necessária para cirurgia de emergência/procedimentos de urgência e em sangramentos descontrolados ou com risco de vida.

[019] Em aspectos específicos, esses pacientes (por exemplo, pacientes humanos) estão sendo tratados com um anticorpo anti- FXI/FXIa para a prevenção e/ou tratamento de trombose ou doença/distúrbio tromboembólico (por exemplo, derrame trombótico, fibrilação atrial, prevenção de derrame em fibrilação atrial (SPAF), trombose venosa profunda, tromboembolismo venoso, embolia pulmonar, síndromes coronárias agudas (ACS), derrame isquêmico, isquemia aguda de membro, hipertensão pulmonar tromboembólica crônica, embolia sistêmica). Em aspectos específicos, os agentes de ligação aqui fornecidos que revertem um ou mais efeitos anticoagulantes de anticorpos anti-FXI/FXIa são anticorpos anti-idiotipo e, em aspectos específicos adicionais, tais anticorpos anti-idiotipo são IgGs de comprimento completo. Em aspectos específicos adicionais, esses anticorpos anti-idiotipo são anticorpos monoclonais, como anticorpos monoclonais humanos, por exemplo, anticorpos monoclonais humanos recombinantes.

[020] Em aspectos particulares, a presente divulgação também se refere a polinucleotídeos e ácidos nucleicos isolados compreendendo uma sequência que codifica um agente de ligação aqui fornecido, a vetores compreendendo um ou mais dos polinucleotídeos ou ácidos nucleicos aqui fornecidos, para hospedar células compreendendo esses vetores ou polinucleotídeos ou ácidos nucleicos. Em aspectos específicos, as células hospedeiras são células de mamíferos não humanos, como células de ovário de hamster chinês (CHO).

[021] As modalidades não limitativas da presente divulgação são descritas nos seguintes aspectos:

1. Uma composição farmacêutica compreendendo um agente de ligação que liga especificamente um anticorpo alvo que liga o Fator XI humano ("FXI") e/ou Fator XIa ("FXIa") dentro do domínio catalítico, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo alvo, em que o agente de ligação é selecionado a partir da Tabela 2 e em que o agente de ligação está em uma formulação líquida compreendendo sacarose e/ou histidina.

2. A composição farmacêutica da modalidade 1, em que a formulação líquida compreende sacarose e histidina.

3. A composição farmacêutica da modalidade 1 ou 2, em que a formulação líquida compreende pelo menos 200, 210, 220, 230, 240 ou 250 mM de sacarose.

4. A composição farmacêutica da modalidade 3, em que a formulação líquida compreende 220 mM de sacarose.

5. A composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades anteriores, em que a formulação líquida compreende pelo menos 10 mM ou pelo menos 20 mM de histidina.

6. A composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades anteriores, em que a formulação líquida compreende 20 mM de histidina.

7. A composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades anteriores, em que a formulação líquida está em um pH de

4,5-7.

8. A composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades anteriores, em que a formulação líquida está em um pH de 5,5.

9. A composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o agente de ligação é formulado em uma concentração na faixa de 50 mg/mL a 150 mg/mL.

10. A composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o agente de ligação é formulado a uma concentração de pelo menos 150 mg/mL.

11. A composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades anteriores, em que a formulação líquida compreende 220 mM de sacarose, 20 mM de histidina, 0,04% de polissorbato 20 e 150 mg/mL de concentração do agente de ligação, a pH 5,5.

12. A composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades anteriores, que é formulada para administração subcutânea ou intravenosa.

13. A composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o anticorpo alvo compreende (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23; ou (ii) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25.

14. A composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento do mesmo, compreendendo uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: a) a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID

NO: 39 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 55; b) a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 71 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 87; c) a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 103 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 119; d) a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 135 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 151; e) a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 167 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183; f) a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 199 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 215; g) a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 231 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 247; h) a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 263 et A VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 279; i) a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 295 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 311; ou j) a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 327 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 343.

15. A composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o agente de ligação é o anticorpo Fab IDT1, IDT2, IDT3, IDT4, IDT5, IDT6, IDT7, IDT8, IDT9 ou IDT10, conforme estabelecido na Tabela 2, ou é anticorpo IgG IDT11 ou IDT12, conforme estabelecido na Tabela 2.

16. Um agente de ligação que liga especificamente um anticorpo alvo que liga FXI e/ou FXIa humano no domínio catalítico, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo alvo, em que o anticorpo alvo compreende (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23; ou (ii) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25; e em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo (a) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 347 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 57, ou (b) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 349 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 89

17. Um agente de ligação que liga especificamente um anticorpo alvo que liga FXI e/ou FXIa humano dentro do domínio catalítico, em que o agente de ligação reverte uma atividade anticoagulante do anticorpo alvo e em que o agente de ligação é o anticorpo anti-idiotipo IDT11 ou IDT12 conforme estabelecido na Tabela 2.

18. Um polinucleotídeo compreendendo sequências de nucleotídeos que codificam o agente de ligação de qualquer uma das modalidades anteriores.

19. Um vetor compreendendo o polinucleotídeo da modalidade

18.

20. Uma célula hospedeira compreendendo o polinucleotídeo da modalidade 18.

21. Uma célula hospedeira compreendendo o vetor da modalidade 19.

22. Um método de produção de um agente de ligação, o referido método compreende a cultura da célula hospedeira da modalidade 20 ou 21 sob condições adequadas para expressão do agente de ligação ou uma porção do mesmo, em que o método opcionalmente compreende a purificação do agente de ligação.

23. Composição farmacêutica compreendendo o agente de ligação de qualquer uma das modalidades anteriores.

24. Composição farmacêutica para uso como medicamento para reverter o efeito anticoagulante de um anticorpo anti-FXI/FXIa em um paciente sendo tratado com o anticorpo antiFator XI/Fator XIa, em que a composição farmacêutica compreende uma quantidade eficaz do agente de ligação de qualquer uma das modalidades anteriores.

25. Método para reverter o efeito anticoagulante de um anticorpo anti-FXI/FXIa em um paciente sendo tratado com o anticorpo anti- FXI/FXIa ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz do agente de ligação de qualquer uma das modalidades anteriores a um paciente em necessidade do mesmo.

26. O método da modalidade 25, em que o anticorpo anti- FXI/FXIa ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende (i) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23; ou (ii) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25.

27. O método da modalidade 25, em que o anticorpo anti- FXI/FXIa ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende (i) uma VH compreendendo as regiões determinantes de complementaridade HCDR1, HCDR2 e HCDR3 de uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e (ii) uma VL compreendendo regiões determinantes de complementaridade LCDR1, LCDR2 e LCDR3 de uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23.

28. O método de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o método adicionalmente compreende aplicar um dos seguintes itens ao paciente: (i) substituição de fluidos usando coloides, cristaloides, plasma humano ou proteínas plasmáticas como albumina; (ii) transfusão com sangue vermelho empacotado ou sangue total; ou (iii) administração de plasma fresco congelado (FFP), concentrados do complexo de protrombina (PCC), PCC ativado (APCC), como inibidor do fator VIII e/ou fator VII recombinante ativado.

29. O método de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o paciente tem ou está em risco de desenvolver trombose.

30. O método de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o paciente tem: a. fibrilação atrial; b. arritmia cardíaca suspeita ou confirmada, como fibrilação atrial paroxística, persistente ou permanente ou flutter atrial; c. Hipertensão Pulmonar Tromboembólica Crônica (CTEPH); d. cardiopatia valvular com ou sem fibrilação atrial; e hipertensão pulmonar; f. trombofilia congênita ou adquirida, incluindo, mas não exclusivamente fator V Leiden, mutação da protrombina, antitrombina III, deficiências de proteína C e proteína S, mutação do Fator XIII,

disfibrinogenemia familiar, deficiência congênita de plasminogênio, níveis aumentados de Fator XI, doença das células falciformes, síndrome antifosfolipídio, doença autoimune, doença intestinal crônica, síndrome nefrótica, uremia hemolítica, doença mieloproliferativa, coagulação intravascular disseminada, hemoglobinúria paroxística noturna e trombopenia induzida por heparina; ou g. doença renal crônica.

31. O método de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o paciente tem fibrilação atrial não valvular.

32. O método de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o paciente tem um alto risco demonstrado de sangramento.

33. O método de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o paciente tem doença renal crônica.

34. O método da modalidade 33, em que o paciente tem doença renal em estágio terminal (ESRD).

35. O método da modalidade 34, em que o paciente tem ESRD e está em diálise.

36. O método da modalidade 35, em que o paciente tem fibrilação atrial não valvular.

37. O método de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o paciente está sendo administrado ao anticorpo anti-FXI/FXIa ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo para reduzir o risco de derrame e/ou embolia sistêmica.

38. O método de qualquer uma das modalidades anteriores, em que a reversão do efeito anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é necessária para cirurgia de emergência/procedimentos urgentes e em sangramento com risco de vida ou não controlado.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[022] A Figura 1 mostra curvas de ligação representativas de experimentos SET para cada um dos 12 anticorpos anti-NOV1401 (Fabs e IgGs), conforme descrito nos Exemplos. Os valores de KD foram determinados a partir do ajuste dos dados experimentais a um modelo de ligação 1:1 para Fabs e IgGs, como descrito nos Exemplos. Os valores médios de KD de dois a seis experimentos individuais são mostrados.

[023] A Figura 2 mostra curvas de resposta de SPR representativas para ligação de NOV1401 e três misturas de NOV1401/anti-NOV1401 para FXIa imoblizado. Concentrações crescentes de anti-NOV1401 reduzem a ligação de NOV1401 a FXIa com um excesso molar de 10 vezes, bloqueando completamente a ligação. Esses dados indicam que o anti-NOV1401 é capaz de se conectar e bloquear NOV1401 a partir da interação com FXIa. Anti- NOV1401 sozinho não mostrou nenhuma ligação ao FXIa imobilizado (não mostrado).

[024] A Figura 3 mostra os resultados do teste de aPTT para dois Fabs anti-NOV1401 representativos quando NOV1401 foi pré-incubado por 10 min com anti-NOV1401 antes da adição de plasma humano contendo FXI e a via intrínseca da cascata de coagulação foi acionada. Ambos os Fabs anti-NOV1401 bloqueiam o efeito prolongador de aPTT de NOV1401 de maneira dependente da concentração, isto é, inibem o efeito de NOV1401. 100% de inibição (linha pontilhada) foi alcançada no acesso 3x molar de anti-NOV1401.

[025] A Figura 4 mostra os resultados do teste de aPTT para 10 Fabs anti-NOV1401 e dois IgG anti-NOV1401 quando NOV1401 foi pré- incubado por 5 min com plasma humano contendo FXI antes da adição de Fab ou IgG anti-NOV1401 e a via intrínseca da cascata de coagulação foi desencadeada. Todos os 12 anti-NOV1401 mostram uma reversão parcial dependente da concentração dos efeitos de NOV1401 no aPTT.

[026] A Figura 5 mostra resultados de TGA para 10 Fabs anti- NOV1401 e dois IgG anti-NOV1401 quando NOV1401 foi pré-incubado por 5 min com plasma humano contendo FXI antes da adição de Fab ou IgG anti-NOV1401 e o loop de retorno de trombina foi desencadeado. O TGA foi conduzido a uma concentração constante para NOV1401 de 0,05 µM, que corresponde ao valor de IC50 determinado em um experimento separado. Todos os 12 anti-NOV1401 mostram uma reversão parcial dependente da concentração dos efeitos de NOV1401 na geração de trombina.

[027] A Figura 6 mostra os resultados do ensaio aPTT ex vivo de amostras de sangue/plasma de macacos cinomolgos tratados com uma dose subcutânea única de 3 mg/kg de NOV1401 no primeiro dia de estudo, seguido por duas doses i.v. de IDT3 nos dias 4 e 5 do estudo, respectivamente.

DESCRIÇÃO DETALHADA Terminologia

[028] A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados têm o mesmo significado que os comumente entendidos na área à qual a presente divulgação se refere.

[029] Conforme usado na especificação e nas reivindicações, a forma singular "a", "o", "uma" e "um" incluem referências plurais, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Por exemplo, o termo "uma célula" inclui uma pluralidade de células, incluindo suas misturas.

[030] Todas as designações numéricas, por exemplo, pH, temperatura, tempo, concentração e peso molecular, incluindo faixas, são aproximações que são variadas (+) ou (-) em incrementos de 0,1. Deve ser entendido, embora nem sempre seja explicitamente declarado que todas as designações numéricas são precedidas pelo termo "cerca de". Também deve ser entendido, embora nem sempre declarado explicitamente, que os reagentes aqui descritos são meramente exemplos se esses equivalentes são conhecidos na técnica.

[031] Os termos "agente de ligação", "agente de reversão" e "antídoto" são usados de forma intercambiável e, no contexto de um anticorpo que se liga especificamente ao Fator XI e/ou Fator XIa ("anticorpo anti-FXI/FXIa"), Refere-se a uma proteína, polipeptídeo ou um complexo do mesmo, como um anticorpo anti-idiotipo ou um fragmento do mesmo, como um fragmento de Fab, ou um polipeptídeo ou fragmento de proteína inativo derivado de FXI/FXIa que se liga especificamente a um anticorpo anti-FXI/FXIa, tal como região (s) de ligação a antígeno ou região (s) variável (s) do anticorpo anti-FXI/FXIa. Em aspectos específicos aqui fornecidos, o agente de ligação é capaz de reverter (por exemplo, reverter parcialmente em pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos pelo menos 70%) um ou mais efeitos anticoagulantes do anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo NOV1401). Em outros aspectos específicos aqui fornecidos, o agente de ligação é capaz de bloquear a ligação de um anticorpo anti-FXI/FXIa ao seu antígeno, por exemplo, FXI/FXIa. Em um aspecto específico, conforme usado aqui, os termos "anti-NOV1401", "anticorpo anti- NOV1401", "Fab anti-NOV1401", "IgG anti-NOV1401", "agente de ligação a NOV1401", "antídoto NOV1401" e similares são usados de forma intercambiável e referem-se a um agente de ligação ou agente de reversão, como um anticorpo anti-idiotipo ou um fragmento do mesmo, que se liga especificamente ao anticorpo antiFator XI NOV1401 (vide a Tabela 1). Exemplos não limitativos de agentes de ligação/reversão de NOV1401 são descritos aqui, por exemplo, Tabela 2.

[032] Os termos "anticorpo anti-idiotipo", "anticorpo anti-Id" e "anticorpo anti-idiotípico" são usados de forma intercambiável e referem-se a um anticorpo e fragmentos dos mesmos (por exemplo,

fragmento de Fab) que se liga especificamente à região (s) de ligação a antígeno de outro anticorpo. Os anticorpos anti-idiotipo são tipicamente criados contra a região (s) de ligação a antígeno ou regiões determinantes de complementaridade (CDRs) (idiotipo) de um anticorpo alvo. Os anticorpos anti-idiotipo podem ser produzidos por vários métodos descritos anteriormente, vide, por exemplo, Pan et al., 1995, FASEB J. 9: 43-49.

[033] Os termos "proteína FXI", "antígeno FXI" e "FXI" são usados de forma intercambiável e se referem à proteína Fator XI em diferentes espécies. O Fator XI é o fator de coagulação plasmática XI dos mamíferos, uma glicoproteína presente no plasma humano em uma concentração de 25 a 30 nM como zimogênio que, quando convertido por proteólise limitada em uma serina protease ativa, participa da via intrínseca da coagulação sanguínea.

[034] Os termos "proteína FXIa", "antígeno FXIa" e "FXIa" são usados de forma intercambiável e se referem à proteína FXI ativada em diferentes espécies. O fator zimogênio XI é convertido em sua forma ativa, o fator de coagulação Xla (FXIa), seja pela fase de contato da coagulação do sangue ou pela ativação mediada pela trombina na superfície das plaquetas. Durante esta ativação do Fator XI, uma ligação peptídica interna é clivada em cada uma das duas cadeias, resultando no fator Xla ativado, uma serina protease composta por duas cadeias pesadas e duas leves mantidas juntas por ligações dissulfeto. Esta serina protease FXIa converte o fator IX de coagulação em IXa, que posteriormente ativa o fator X (Xa) de coagulação. Xa pode então mediar a ativação do fator de coagulação ll/trombina. Por exemplo, o FXI humano tem a sequência estabelecida na Tabela 1 (SEQ ID NO: 1) e foi descrito em relatórios e literatura anteriores (Mandle RJ Jr, et al. (1979) Blood; 54 (4): 850; Sequência de referência NCBI: AAA51985).

[035] No contexto desta divulgação, os termos "FXI" e "FXIa" (e similares) incluem mutantes e variantes da proteína natural FXI e FXIa, respectivamente, que possuem substancialmente a mesma sequência de aminoácidos que a da estrutura primária nativa (sequência de aminoácidos) descrita nos relatórios acima mencionados.

[036] O termo "domínio catalítico", "domínio catalítico de serina protease" e termos similares usados aqui no contexto de FXI ou FXIa humano, significam os aminoácidos Ile370 a Val607, contados no Glu1 no N-terminal da proteína madura que está em circulação. Também pode ser descrito como resíduos 388-625 no C-terminal de FXI. Conforme usado aqui, o termo "sítio ativo" significa a tríade catalítica composta pelos aminoácidos His413, Asp462 e Se557. (Vide, por exemplo, Bane e Gailani (2014) Drug Disc. 19 (9), que é incorporado por referência aqui na sua totalidade).

[037] O termo "anticorpo", conforme aqui utilizado, significa um anticorpo inteiro e qualquer fragmento de ligação a antígeno (isto é, "porção de ligação a antígeno") ou cadeia única do mesmo e é derivado de uma molécula de imunoglobulina ("Ig") que se liga especificamente a um antígeno. Um anticorpo completo é uma glicoproteína compreendendo pelo menos duas cadeias pesadas (H) e duas leves (L) interconectadas por ligações dissulfeto. Cada cadeia pesada é composta por uma região variável de cadeia pesada (aqui abreviada como VH) e uma região constante de cadeia pesada. A região constante de cadeia pesada é composta de três domínios, CH1, CH2 e CH3. Cada cadeia leve é composta por uma região variável de cadeia leve (aqui abreviada como VL) e uma região constante de cadeia leve. A região constante de cadeia leve é composta por um domínio, CL. As regiões VH e VL podem ainda ser subdivididas em regiões de hipervariabilidade, denominadas regiões determinantes de complementaridade (CDR), intercaladas com regiões mais conservadas, denominadas regiões estruturais (FR). Cada VH e VL é composta por três CDRs e quatro FRs dispostas do terminal amino ao terminal carbóxi na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. As regiões variáveis das cadeias pesada e leve contêm um domínio de ligação que interage com um antígeno. As regiões constantes dos anticorpos podem mediar a ligação da imunoglobulina a tecidos ou fatores hospedeiros, incluindo várias células do sistema imunológico (por exemplo, células efetoras) e o primeiro componente (Clq) do sistema de complemento clássico. Em alguns aspectos específicos, um anticorpo pode ser um anticorpo monoclonal, anticorpo humano, anticorpo humanizado, anticorpo camelizado ou anticorpo quimérico. Os anticorpos podem ser de qualquer isótipo (por exemplo, imunoglobulina G (IgG), imunoglobulina E (IgE), imunoglobulina M (IgM), imunoglobulina D (IgD), imunoglobulina A (IgA) e imunoglobulina Y (IgY)), classe (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) ou subclasse.

[038] O termo "IgG" ou "anticorpo IgG", conforme usado aqui, e a menos que especificado de outra forma, significa um anticorpo inteiro do tipo G ou Ig.

[039] O termo "porção de ligação a antígeno" ou "fragmento de ligação a antígeno" de um anticorpo, conforme aqui utilizado, refere-se a um ou mais fragmentos de um anticorpo intacto que retêm a capacidade de se ligar especificamente a um determinado antígeno (por exemplo, anticorpo anti-FXI/FXIa, tal como NOV1401). As funções de ligação a antígeno de um anticorpo podem ser realizadas por fragmentos de um anticorpo intacto. Exemplos de fragmentos de ligação abrangidos pelo termo porção de ligação a antígeno ou fragmento de ligação a antígeno de um anticorpo incluem um fragmento de Fab, um fragmento monovalente que consiste nos domínios VL, VH, CL e CH1; um fragmento F(ab)2, um fragmento bivalente compreendendo dois fragmentos de Fab ligados por uma ponte dissulfeto na região de dobradiça; um fragmento Fd que consiste nos domínios VH e CH1; um fragmento Fv que consiste nos domínios VL e VH de um único braço de um anticorpo; um fragmento de anticorpo de domínio único (dAb) (Ward et al., 1989 Nature 341: 544-546), que consiste em um domínio VH ou um domínio VL; e uma região determinante de complementaridade (CDR) isolada.

[040] Além disso, embora os dois domínios do fragmento Fv, VL e VH, sejam codificados por genes separados, eles podem ser unidos, usando métodos recombinantes, por um ligante peptídico artificial que permite que sejam produzidos como uma única cadeia proteica em que as regiões VL e VH emparelham para formar moléculas monovalentes (conhecidas como Fv de cadeia única (scFv); vide, por exemplo, Bird et al., 1988 Science 242: 423-426; e Huston et al., 1988 Proc. Natl. Acad. Sei. 85: 5879-5883). Tais anticorpos de cadeia única incluem uma ou mais porções ou fragmentos de ligação a antígeno de um anticorpo. Estes fragmentos de anticorpo são obtidos utilizando técnicas convencionais conhecidas dos especialistas na técnica e os fragmentos são pesquisados quanto à utilidade da mesma maneira que os anticorpos intactos.

[041] Os fragmentos de ligação a antígeno também podem ser incorporados em anticorpos de domínio único, maxicorpos, minicorpos, intracorpos, diacorpos, triacorpos, tetracorpos, v-NAR e bis-scFv (Vide, por exemplo, Hollinger e Hudson, 2005, Nature Biotechnology, 23, 9, 1126-1136). As porções de ligação a antígeno dos anticorpos podem ser enxertadas em suportes com base em polipeptídeos, como a fibronectina tipo III (Fn3) (Vide Patente U.S. No. 6.703.199, que descreve os monocorpos do polipeptídeo da fibronectina).

[042] Os fragmentos de ligação a antígeno podem ser incorporados em moléculas de cadeia única compreendendo um par de segmentos Fv em tandem (VH-CH1-VH-CH1) que, juntamente com polipeptídeos de cadeia leve complementares, formam um par de regiões de ligação a antígeno (Zapata et al., 1995 Protein Eng. 8 (10): 1057-1062; e Patente U.S. No. 5.641.870).

[043] Como usado aqui, o termo "afinidade" refere-se à força da interação entre anticorpo e antígeno em sítios antigênicos únicos. Dentro de cada sítio antigênico, a região variável do anticorpo "braço" interage através de forças não covalentes fracas com o antígeno em vários sítios; quanto mais interações, mais forte a afinidade. Como usado aqui, o termo "alta afinidade" para um anticorpo ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos (por exemplo, um fragmento de Fab) geralmente se refere a um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno, com um KD de 10-9 M ou menos (por exemplo, uma KD de 10- 10 M ou menos, uma KD de 10-11 M ou menos, uma KD de 10-12 M ou menos, uma KD de 10-13 M ou menos, uma KD de 10-14 M ou menos, etc.).

[044] O termo "aminoácido" refere-se a aminoácidos naturais e sintéticos, bem como análogos de aminoácidos e miméticos de aminoácidos que funcionam de maneira semelhante aos aminoácidos naturais. Os aminoácidos de ocorrência natural são aqueles codificado pelo código genético, bem como pelos aminoácidos que são posteriormente modificados, por exemplo, hidroxiprolina, γ- carboxiglutamato e O-fosfoserina. Análogos de aminoácidos referem-se a compostos que possuem a mesma estrutura química básica que um aminoácido que ocorre naturalmente, ou seja, um carbono alfa que está ligado a um hidrogênio, um grupo carboxila, um grupo amino e um grupo R, por exemplo, homoserina, norleucina, sulfóxido de metionina, metionina metilsulfônio. Tais análogos têm grupos R modificados (por exemplo, norleucina) ou esqueletos peptídicos modificados, mas mantêm a mesma estrutura química básica que um aminoácido que ocorre naturalmente. Os miméticos de aminoácidos referem-se a compostos químicos que possuem uma estrutura diferente da estrutura química geral de um aminoácido, mas que funciona de maneira semelhante a um aminoácido que ocorre naturalmente.

[045] O termo "especificidade de ligação", conforme aqui utilizado, refere-se à capacidade de um sítio de combinação de anticorpos individuais reagir com apenas um determinante antigênico.

[046] Como usado aqui, os termos "liga imunoespecificamente", "reconhece imunoespecificamente", "liga especificamente" e "reconhece especificamente" são termos análogos no contexto de anticorpos e se referem a moléculas que se ligam a um antígeno (por exemplo, epitopo ou complexo imunológico) como tal ligação é entendida por um especialista na técnica. Por exemplo, uma molécula que se liga especificamente a um antígeno pode se ligar a outros peptídeos ou polipeptídeos, geralmente com menor afinidade, conforme determinado por, por exemplo, imunoensaios, instrumento KinExA 3000, Biacore™ (Sapidyne Instruments, Boise, ID) ou outros ensaios conhecidos na técnica. Em uma modalidade específica, as moléculas que se ligam imunoespecificamente a um antígeno se ligam ao antígeno com um Ka que é pelo menos 2 logs, 2,5 logs, 3 logs, 4 logs ou mais que o Ka quando as moléculas se ligam a outro antígeno. Em outra modalidade específica, as moléculas que se ligam imunoespecificamente a um antígeno não reagem de maneira cruzada com outras proteínas.

[047] O termo "mediado por FXI e/ou FXIa" refere-se ao fato de que FXI e/ou FXIa medeia as vias intrínsecas e/ou comuns de coagulação, ativando direta ou indiretamente o Fator IX (também conhecido como FIX), Fator X (FX) e/ou trombina e/ou por ligação a receptores de plaquetas.

[048] O termo "hemostasia" representa os principais mecanismos para interromper o fluxo de sangue nos sítios de lesão e restaurar a permeabilidade vascular durante a cicatrização de feridas,

respectivamente. Durante a hemostasia normal e a trombose patológica, três mecanismos são ativados simultaneamente: hemostasia primária significa as interações das plaquetas ativadas com a parede do vaso, a formação de fibrina e um processo denominado fibrinólise.

[049] Os termos "cascata de coagulação e coagulação", "modelo de cascata de coagulação" e similares, referem-se ao sistema baseado em proteínas que serve para estabilizar um coágulo formado para selar uma ferida. A via de coagulação é uma cascata proteolítica. Cada enzima da via está presente no plasma como um zimogênio (na forma inativa), que na ativação sofre clivagem proteolítica para liberar o fator ativo da molécula precursora. A cascata de coagulação funciona como uma série de loops de retorno positivo e negativo que controlam o processo de ativação. O objetivo final da via é produzir trombina, que pode converter fibrinogênio solúvel em fibrina que forma um coágulo.

[050] O processo de geração de trombina pode ser dividido em três fases: as vias intrínseca e extrínseca, que fornecem rotas alternativas para a geração de um fator de coagulação ativo: FXa (Fator- X Ativado) e a via comum final, que resulta na formação de trombina (Hoffman MM e Monroe DM (2005) Curr Hematol Rep. 4: 391-396; Johne J. et al. (2006) Biol Chem. 387: 173-178).

[051] Conforme usado neste documento, os termos "gerenciar", "gerenciando" e "gerenciamento" se referem aos efeitos benéficos que um objeto obtém de uma terapia (por exemplo, um agente profilático ou terapêutico), que não resulta em uma cura de uma doença, distúrbio ou condição (por exemplo, trombose ou distúrbio tromboembólico). Em certas modalidades, um objeto é administrado com uma ou mais terapias (por exemplo, agente de ligação ou anticorpo aqui descrito) para "gerenciar" trombose ou distúrbio tromboembólico, um ou mais sintomas, de modo a impedir a progressão ou agravamento da condição ou distúrbio.

[052] "Agregação plaquetária" refere-se ao processo pelo qual, quando ocorre uma ruptura de um vaso sanguíneo, são expostas substâncias que normalmente não estão em contato direto com o fluxo sanguíneo. Essas substâncias (principalmente o colágeno e o fator de von Willebrand) permitem que as plaquetas adiram à superfície quebrada. Uma vez que a plaqueta adere à superfície, libera substâncias químicas que atraem plaquetas adicionais para a área danificada, conhecida como agregação de plaquetas. Esses dois processos são as primeiras respostas para parar o sangramento.

[053] Um "distúrbio tromboembólico", ou termos semelhantes como aqui utilizados, referem-se a qualquer número de doenças ou doenças nas quais as vias de coagulação intrínsecas e/ou comuns são ativamente aberrante ou não são desativadas naturalmente (por exemplo, sem meios terapêuticos). Essas condições incluem, mas não estão limitadas a, derrame trombótico, fibrilação atrial, prevenção de derrame em fibrilação atrial (SPAF), trombose venosa profunda, tromboembolismo venoso e embolia pulmonar. Isso também pode incluir condições relacionadas ao cateter (por exemplo, cateter de Hickman em pacientes oncológicos) nas quais os cateteres são trombosados e oxigenação por membrana extracorpórea (ECMO), na qual o tubo desenvolve coágulos.

[054] Um "tromboembólico", ou termos semelhantes, conforme usado aqui, também pode se referir a qualquer número dos seguintes itens, que os Abs anti-FXI e/ou FXIa ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos da presente divulgação podem ser usados para prevenir ou tratar ou reduzir o risco de: - tromboembolismo em objetos com arritmia cardíaca suspeita ou confirmada, como fibrilação atrial paroxística, persistente ou permanente ou flutter atrial;

- prevenção de derrame na fibrilação atrial (SPAF), uma subpopulação composta por pacientes com AF submetidos a intervenções coronárias percutâneas (PCI); - tratamento de eventos tromboembólicos venosos agudos (VTE) e prevenção secundária prolongada de VTE em pacientes com alto risco de sangramento; - eventos cerebrais e cardiovasculares na prevenção secundária após ataque isquêmico transitório (AIT) ou derrame não incapacitante e prevenção de eventos tromboembólicos na insuficiência cardíaca com ritmo sinusal; - formação de coágulo no átrio esquerdo e tromboembolismo em objetos submetidos à cardioversão por arritmia cardíaca; - trombose antes, durante e após o procedimento de ablação para arritmia cardíaca; - trombose venosa, incluindo, mas não exclusivamente, tratamento e prevenção secundária de trombose venosa profunda ou superficial nos membros inferiores ou membro superior, trombose nas veias abdominais e torácicas, trombose sinusal e trombose das veias jugulares; - trombose em qualquer superfície artificial das veias, como fios de cateter ou marca-passo; - embolia pulmonar em pacientes com ou sem trombose venosa; - Hipertensão Pulmonar Tromboembólica Crônica (CTEPH); - trombose arterial em placa aterosclerótica rompida, trombose em prótese intra-arterial ou cateter e trombose em artérias aparentemente normais, isso inclui, mas não se limita a síndromes coronárias agudas, infarto do miocárdio com elevação de ST, infarto do miocárdio sem elevação de ST, angina instável, trombose de stent, trombose de qualquer superfície artificial no sistema arterial e trombose de artérias pulmonares em objetos com ou sem hipertensão pulmonar; - trombose e tromboembolismo em pacientes submetidos a intervenções coronárias percutâneas (PCI); - ataques cardioembólicos e criptogênicos; - trombose em pacientes com neoplasias invasivas e não invasivas do câncer; - trombose sobre um cateter de permanência; - trombose e tromboembolismo em pacientes gravemente doentes; - trombose cardíaca e tromboembolismo, incluindo, mas não exclusivamente, trombose cardíaca após infarto do miocárdio, trombose cardíaca relacionada a condições como aneurisma cardíaco, fibrose miocárdica, aumento e insuficiência cardíaca, miocardite e superfície artificial no coração; - tromboembolismo em pacientes com cardiopatia valvular com ou sem fibrilação atrial; - tromboembolismo sobre próteses mecânicas ou biológicas valvulares; - tromboembolismo em pacientes que apresentavam manchas cardíacas nativas ou artificiais, tubos de condutos arteriais ou venosos após reparo cardíaco de malformações cardíacas simples ou complexas; - trombose venosa e tromboembolismo após cirurgia de substituição do joelho, cirurgia de substituição do quadril e cirurgia ortopédica, cirurgia torácica ou abdominal; - trombose arterial ou venosa após neurocirurgia, incluindo intervenções intracranianas e da medula espinhal; - trombofilia congênita ou adquirida, incluindo, mas não exclusivamente, fator V Leiden, mutação da protrombina, antitrombina III, deficiências de proteína C e proteína S, mutação do Fator XIII,

disfibrinogenemia familiar, deficiência congênita do plasminogênio, níveis aumentados de Fator XI, doença das células falciformes, síndrome antifosfolipídio doença autoimune, doença intestinal crônica, síndrome nefrótica, uremia hemolítica, doença mieloproliferativa, coagulação intravascular disseminada, hemoglobinúria paroxística noturna e trombopenia induzida por heparina; - trombose e tromboembolismo na doença renal crônica; e - trombose e tromboembolismo em pacientes submetidos à hemodiálise e em pacientes submetidos à oxigenação extracorpórea por membrana.

[055] O termo "anticorpo quimérico" é uma molécula de anticorpo na qual (a) a região constante, ou uma porção dela, é alterada, substituída ou trocada, de modo que o sítio de ligação a antígeno (região variável) seja ligado a uma região constante de uma classe diferente ou alterada, função efetor e/ou espécie, ou uma molécula completamente diferente que confere novas propriedades ao anticorpo quimérico, por exemplo, uma enzima, toxina, hormônio, fator de crescimento, droga, etc.; ou (b) a região variável, ou uma porção dela, é alterada, substituída ou trocada por uma região variável com uma especificidade de antígeno diferente ou alterada. Por exemplo, um anticorpo de camundongo pode ser modificado substituindo sua região constante pela região constante de uma imunoglobulina humana. Devido à substituição por uma região constante humana, o anticorpo quimérico pode reter sua especificidade no reconhecimento do antígeno enquanto tem antigenicidade reduzida em humano em comparação com o anticorpo original do camundongo.

[056] O termo "variante modificada conservadoramente" se aplica a sequências de aminoácidos e ácidos nucleicos. No que diz respeito a sequências de ácidos nucleicos particulares, variantes modificadas conservadoramente se referem aos ácidos nucleicos que codificam sequências de aminoácidos idênticas ou essencialmente idênticas, ou onde o ácido nucleico não codifica uma sequência de aminoácidos, para sequências essencialmente idênticas. Devido à degeneração do código genético, um grande número de ácidos nucleicos funcionalmente idênticos codifica qualquer proteína. Por exemplo, todos os códons GCA, GCC, GCG e GCU codificam o aminoácido alanina. Assim, em todas as posições em que uma alanina é especificada por um códon, o códon pode ser alterado para qualquer um dos códons correspondentes descritos sem alterar o polipeptídeo codificado. Tais variações de ácido nucleico são "variações silenciosas", que são uma espécie de variações modificadas conservadoramente. Cada sequência de ácido nucleico aqui que codifica um polipeptídeo também descreve todas as variações silenciosas possíveis do ácido nucleico. Alguém versado na técnica reconhecerá que cada códon em um ácido nucleico (exceto AUG, que é normalmente o único códon para metionina, e TGG, que é normalmente o único códon para triptofano) pode ser modificado para produzir uma molécula funcionalmente idêntica. Por conseguinte, cada variação silenciosa de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo está implícita em cada sequência descrita.

[057] Para sequências polipeptídicas, "variantes conservadoramente modificadas" incluem substituições, deleções ou adições individuais a uma sequência de polipeptídeos que resultam na substituição de um aminoácido por um aminoácido quimicamente semelhante. As tabelas de substituição conservadora que fornecem aminoácidos funcionalmente semelhantes são bem conhecidas na técnica. Essas variantes modificadas conservadoramente são adicionais e não excluem variantes polimórficas, homólogos interespécies e alelos da presente divulgação. Os oito grupos a seguir contêm aminoácidos que são substitutos conservadores um do outro: 1) Alanina (A), Glicina (G); 2) ácido aspártico (D), ácido glutâmico (E); 3) Asparagina (N), Glutamina (Q); 4) Arginina (R), Lisina (K); 5) Isoleucina

(I), Leucina (L), Metionina (M), Valina (V); 6) Fenilalanina (F), tirosina (Y), triptofano (W); 7) serina (S), treonina (T); e 8) cisteína (C), metionina (M) (Vide, por exemplo, Creighton, Proteins (1984)). Em algumas modalidades, o termo "modificações de sequência conservadora" é usado para se referir a modificações de aminoácidos que não afetam ou alteram significativamente as características de ligação do anticorpo que contém a sequência de aminoácidos.

[058] O termo "epitopo" significa um determinante da proteína capaz de ligação específica a um anticorpo. Os epitopos geralmente consistem em agrupamentos de superfície quimicamente ativos de moléculas como aminoácidos ou cadeias laterais de açúcar e geralmente possuem características estruturais tridimensionais específicas, bem como características específicas de carga. Epitopos conformacionais e não-conformacionais são diferenciados pelo fato de a ligação ao primeiro, mas não ao último, ser perdida na presença de solventes desnaturantes. Diz-se que dois anticorpos "competem" se um anticorpo se ligar ao mesmo epitopo que o segundo anticorpo em um ensaio de ligação competitiva, por qualquer um dos métodos bem conhecidos dos versados na técnica.

[059] O termo "anticorpo humano", como aqui utilizado, destina-se a incluir anticorpos com regiões variáveis nas quais a estrutura e as regiões CDR são derivadas de sequências de origem humana. Além disso, se o anticorpo contiver uma região constante, a região constante também será derivada dessas sequências humanas, por exemplo, sequências de linhagem germinativa humana ou versões mutadas de sequências de linhagem germinativa humana. Os anticorpos humanos da presente divulgação podem incluir resíduos de aminoácidos não codificados por sequências humanas (por exemplo, mutações introduzidas por mutagênese aleatória ou específica do sítio in vitro ou por mutação somática in vivo).

[060] O termo "anticorpo monoclonal humano" refere-se a anticorpos que exibem uma única especificidade de ligação que possui regiões variáveis nas quais as regiões estruturais e CDR são derivadas de sequências humanas. Em uma modalidade, os anticorpos monoclonais humanos são preparados usando métodos de exibição de fagos para rastrear bibliotecas de genes de imunoglobulina humana.

[061] Um anticorpo "humanizado" é um anticorpo que retém a reatividade de um anticorpo não humano e é menos imunogênico em humanos. Isto pode ser conseguido, por exemplo, retendo as regiões CDR não humanas e substituindo as partes restantes do anticorpo pelas suas contrapartes humanas (isto é, a região constante, bem como as porções estruturais da região variável). Vide, por exemplo, Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855, 1984; Morrison e Oi, Adv. Immunol., 44: 65-92, 1988; Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536, 1988; Padlan, Molec. Immun., 28: 489-498, 1991; e Padlan, Molec. Immun., 31: 169-217, 1994. Outros exemplos de tecnologia de engenharia genética humana incluem, mas não estão limitados à tecnologia Xoma, divulgada em US 5.666.886.

[062] Os termos "idêntico" ou percentual de "identidade", no contexto de dois ou mais ácidos nucleicos ou sequências polipeptídicas, referem-se a duas ou mais sequências ou subsequências iguais. Duas sequências são "substancialmente idênticas" se duas sequências tiverem uma porcentagem especificada de resíduos de aminoácidos ou nucleotídeos iguais (ou seja, 60% de identidade, opcionalmente 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, Identidade de 95% ou 99% em uma região especificada ou, quando não especificada, em toda a sequência), quando comparados e alinhados para obter a máxima correspondência em uma janela de comparação, ou região designada conforme medido usando um dos seguintes algoritmos de comparação de sequência ou pelo alinhamento manual e inspeção visual. Opcionalmente, a identidade existe em uma região que tem pelo menos cerca de 50 nucleotídeos (ou 10 aminoácidos) de comprimento, ou mais preferivelmente em uma região que tem 100 a 500 ou 1000 ou mais nucleotídeos (ou 20, 50, 200 ou mais aminoácidos) de comprimento.

[063] Para comparação de sequências, normalmente uma sequência atua como uma sequência de referência, à qual as sequências de teste são comparadas. Ao usar um algoritmo de comparação de sequências, as sequências de teste e de referência são inseridas em um computador, as coordenadas de subsequência são designadas, se necessário, e os parâmetros de programa de algoritmo de sequência são designados. Parâmetros de programa padrão podem ser usados ou parâmetros alternativos podem ser designados. O algoritmo de comparação de sequências calcula as identidades percentuais das sequências de teste relativas à sequência de referência, com base nos parâmetros de programa.

[064] Uma "janela de comparação", como aqui utilizado, inclui referência a um segmento de qualquer um de um número de posições contíguas selecionadas a partir do grupo que consiste em 20 a 600, geralmente cerca de 50 a cerca de 200, mais geralmente cerca de 100 a cerca de 150, em que uma sequência pode ser comparada a uma sequência de referência com o mesmo número de posições contíguas após as duas sequências estarem perfeitamente alinhadas. Os métodos de alinhamento de sequências para comparação são bem conhecidos na técnica. O alinhamento ideal de sequências para comparação pode ser conduzido, por exemplo, pelo algoritmo de homologia local de Smith e Waterman (1970) Adv. Appl. Math. 2: 482c, pelo algoritmo de alinhamento de homologia de Needleman e Wunsch, J. Mol. Biol. 48: 443, 1970, pela busca pelo método de similaridade de Pearson e Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85: 2444, 1988, por implementações computadorizadas desses algoritmos (GAP, BESTFIT,

FASTA e TFASTA no Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI) ou por alinhamento manual e inspeção visual (Vide, por exemplo, Brent et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (Ringbou ed., 2003)).

[065] Dois exemplos de algoritmos adequados para determinar a porcentagem de identidade e semelhança de sequência são os algoritmos BLAST e BLAST 2.0, descritos em Altschul et al., (1977) Nuc. Acids Res. 25: 3389-3402; e Altschul et al., (1990) J. Mol. Biol. 215: 403- 410, respectivamente. O software para realizar análises BLAST está disponível ao público no National Center for Biotechnology Information. Esse algoritmo envolve primeiro a identificação de pares de sequência de alta pontuação (HSPs), identificando palavras curtas de comprimento W na sequência de consulta, que correspondem ou satisfazem alguma pontuação limite de valor positivo T quando alinhadas com uma palavra do mesmo comprimento em uma sequência de banco de dados. T é referido como o limite de pontuação da palavra vizinha (Altschul et al., Supra). Esses acertos iniciais de palavras vizinha atuam como sementes para iniciar pesquisas para encontrar HSPs mais longos que os contenham. Os acertos da palavra são estendidos em ambas as direções ao longo de cada sequência até o ponto em que a pontuação do alinhamento acumulado pode ser aumentada. As pontuações cumulativas são calculadas usando, para sequências de nucleotídeos, os parâmetros M (pontuação de recompensa para um par de resíduos correspondentes; sempre > 0) e N (pontuação de penalidade para resíduos incompatíveis; sempre < 0). Para sequências de aminoácidos, uma matriz de pontuação é usada para calcular a pontuação cumulativa. A extensão dos acertos da palavra em cada direção é interrompida quando: a pontuação de alinhamento acumulado diminui pela quantidade X do valor máximo alcançado; a pontuação cumulativa chega a zero ou abaixo, devido ao acúmulo de um ou mais alinhamentos de resíduos com pontuação negativa; ou o fim de qualquer sequência é atingido. Os parâmetros de algoritmo BLAST W, T e X determinam a sensibilidade e a velocidade do alinhamento. O programa BLASTN (para sequências de nucleotídeos) usa como padrão um comprimento de palavra (W) de 11, uma expectativa (E) ou 10, M = 5, N = -4 e uma comparação de ambos os filamentos. Para sequências de aminoácidos, o programa BLASTP usa como padrão um comprimento de palavra de 3 e expectativa (E) de 10, e a matriz de pontuação BLOSUM62 (Vide Henikoff e Henikoff, Proc. Natl. Acad. Scad. Sci. USA 89: 10915, 1989) alinhamentos (B) de 50, expectativa (E) de 10, M = 5, N = -4 e uma comparação de ambos os filamentos.

[066] O algoritmo BLAST também realiza uma análise estatística da semelhança entre duas sequências (Vide, por exemplo, Karlin e Altschul, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90: 5873-5787, 1993). Uma medida de similaridade fornecida pelo algoritmo BLAST é a menor probabilidade de soma (P (N)), que fornece uma indicação da probabilidade pela qual uma correspondência entre duas sequências de nucleotídeos ou aminoácidos ocorreria por acaso. Por exemplo, um ácido nucleico é considerado semelhante a uma sequência de referência se a menor probabilidade de soma em uma comparação do ácido nucleico de teste com o ácido nucleico de referência for menor que cerca de 0,2, mais preferivelmente menor que cerca de 0,01 e mais preferivelmente menor que cerca de cerca de 0,001.

[067] A identidade percentual entre duas sequências de aminoácidos também pode ser determinada usando o algoritmo de E. Meyers e W. Miller (Comput. Appl. Biosci., 4: 11-17, 1988) que foi incorporado ao programa ALIGN. (Videsão 2.0), usando uma tabela de resíduos de peso PAM120, uma penalidade de gap de 12 e uma penalidade de 4. Além disso, a identidade percentual entre duas sequências de aminoácidos pode ser determinada usando o Needleman e Wunsch (J. Mol, Biol 48: 444-453, 1970), que foi incorporado ao programa GAP no pacote de software GCG (disponível na rede mundial de computadores em gcg.com), usando uma matriz Blossom 62 ou uma matriz PAM250 e uma ponderação de lacuna de 16, 14, 12, 10, 8, 6 ou 4 e uma podenração de comprimento de 1, 2, 3, 4, 5 ou 6.

[068] Além da porcentagem de identidade de sequência observada acima, outra indicação de que duas sequências ou polipeptídeos de ácido nucleico são substancialmente idênticos é que o polipeptídeo codificado pelo primeiro ácido nucleico é imunologicamente reativo com os anticorpos criados contra o polipeptídeo codificado pelo segundo ácido nucleico, como descrito abaixo. Assim, um polipeptídeo é tipicamente substancialmente idêntico a um segundo polipeptídeo, por exemplo, onde os dois peptídeos diferem apenas por substituições conservadoras. Outra indicação de que duas sequências de ácidos nucleicos são substancialmente idênticas é que as duas moléculas ou seus complementos hibridam entre si em condições rigorosas, como descrito abaixo. Ainda outra indicação de que duas sequências de ácidos nucleicos são substancialmente idênticas é que os mesmos iniciadores podem ser utilizados para amplificar a sequência.

[069] O termo "anticorpo isolado" refere-se a um anticorpo substancialmente livre de outros anticorpos com diferentes especificidades antigênicas (por exemplo, um anticorpo isolado que liga especificamente FXI e/ou FXIa está substancialmente livre de anticorpos que ligam especificamente antígenos que não sejam FXI e/ou FXIa, ou um anticorpo anti-idiotipo isolado que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa está substancialmente livre de anticorpos que ligam especificamente antígenos que não sejam o anticorpo anti- FXI/FXIa). Um anticorpo isolado que liga especificamente FXI e/ou FXIa pode, no entanto, ter reatividade cruzada com outros antígenos. Além disso, um anticorpo isolado pode estar substancialmente livre de outro material celular e/ou produtos químicos.

[070] O termo "isótipo" refere-se à classe de anticorpos (por exemplo, IgM, IgE, IgG como IgG1 ou IgG4) que é fornecida pelos genes da região constante de cadeia pesada. O isótipo também inclui versões modificadas de uma dessas classes, nas quais foram feitas modificações para alterar a função Fc, por exemplo, para aprimorar ou reduzir as funções efetoras ou a ligação aos receptores Fc.

[071] O termo "kassoc" ou "ka", conforme usado aqui, destina-se a se referir à taxa de associação de uma interação anticorpo-antígeno específica, enquanto o termo "Kdis" ou "Kd", como usado aqui, é destinado para se referir à taxa de dissociação de uma interação anticorpo-antígeno particular. O termo "KD", como usado aqui, destina- se a se referir à constante de dissociação, que é obtida a partir da razão de Kd/ka (isto é, Kd/ka) e é expressa como uma concentração molar (M). Os valores de KD para anticorpos podem ser determinados usando métodos bem estabelecidos na técnica. Os métodos para determinar a KD de um anticorpo incluem medir a ressonância plasmônica de superfície usando um sistema biossensor, como um sistema BiacoreTM, ou medir a afinidade em solução por titulação de equilíbrio da solução (SET).

[072] Os termos "anticorpo monoclonal" ou "composição de anticorpo monoclonal", conforme aqui utilizados, referem-se a uma preparação de moléculas de anticorpo de composição molecular única. Uma composição de anticorpo monoclonal exibe uma especificidade e afinidade de ligação única para um epitopo particular.

[073] O termo "ácido nucleico" é aqui utilizado alternadamente com o termo "polinucleotídeo" e refere-se a desoxirribonucleotídeos ou ribonucleotídeos e seus polímeros, na forma de filamento simples ou duplo. O termo abrange ácidos nucleicos contendo análogos de nucleotídeo conhecidos ou resíduos ou ligações modificadas de estrutura principal, que são sintéticos, naturais e não naturais, que possuem propriedades de ligação semelhantes àquelas do ácido nucleico de referência e são metabolizados de maneira semelhante aos nucleotídeos de referência. Exemplos de tais análogos incluem, sem limitação, fosforotioatos, fosforamidatos, metil fosfonatos, fosfonatos quirometil, metil ribonucleotídeos, 2-O-metil ribonucleotídeos, ácidos nucleicos peptídicos (PNAs).

[074] A menos que indicado de outra forma, uma sequência de ácido nucleico específica também inclui implicitamente variantes modificadas conservadoramente (por exemplo, substituições de códons degeneradas) e sequências complementares, bem como a sequência explicitamente indicada. Especificamente, conforme detalhado abaixo, as substituições degeneradas de códons podem ser obtidas gerando sequências nas quais a terceira posição de um ou mais códons selecionados (ou todos) é substituída por resíduos de base mista e/ou desoxininosina (Batzer et al., Nucleic Acid Res 19: 5081, 1991; Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260: 2605-2608, 1985; e Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8: 91-98, 1994).

[075] O termo "operacionalmente ligado" refere-se a uma relação funcional entre dois ou mais segmentos de polinucleotídeo (por exemplo, DNA). Tipicamente, o termo refere-se à relação funcional de uma sequência reguladora da transcrição com uma sequência transcrita. Por exemplo, uma sequência promotora ou potenciadora está operacionalmente ligada a uma sequência de codificação se ela estimula ou modula a transcrição da sequência de codificação em uma célula hospedeira apropriada ou outro sistema de expressão. Geralmente, as sequências reguladoras da transcrição promotora que estão operacionalmente ligadas a uma sequência transcrita são fisicamente contíguas à sequência transcrita, isto é, elas são de ação cis. No entanto, algumas sequências reguladoras transcricionais, tal como intensificadores, não precisam ser fisicamente contíguas ou localizadas nas proximidades das sequências de codificação cuja transcrição elas melhoram.

[076] Como aqui utilizado, o termo "otimizado" significa que uma sequência de nucleotídeos foi alterada para codificar uma sequência de aminoácidos usando códons preferidos na célula ou organismo de produção, geralmente uma célula eucariótica, por exemplo, uma célula de Pichia, uma célula de ovário de hamster chinês (CHO) ou uma célula humana. A sequência de nucleotídeos otimizada é projetada para reter completamente ou tanto quanto possível a sequência de aminoácidos originalmente codificada pela sequência de nucleotídeos inicial, que também é conhecida como sequência "parental". As sequências otimizadas aqui foram projetadas para ter códons que são preferidos nas células de mamíferos. No entanto, a expressão otimizada dessas sequências em outras células eucarióticas ou células procarióticas também é contemplada aqui. As sequências de aminoácidos codificadas por sequências de nucleotídeos otimizadas também são referidas como otimizadas.

[077] Os termos "polipeptídeo" e "proteína" são usados de forma intercambiável aqui para se referir a um polímero de resíduos de aminoácidos. Os termos aplicam-se a polímeros de aminoácidos nos quais um ou mais resíduos de aminoácidos são um mimético químico artificial de um aminoácido correspondente de ocorrência natural, bem como a polímeros de aminoácidos de ocorrência natural e polímero de aminoácidos de ocorrência não natural. Salvo indicação em contrário, uma sequência de polipeptídeos particular também envolve implicitamente variantes modificadas conservadoramente dos mesmos.

[078] O termo "anticorpo humano recombinante", como aqui utilizado, inclui todos os anticorpos humanos que são preparados, expressos, criados ou isolados por meios recombinantes, como anticorpos isolados de um animal (por exemplo, um camundongo) que é transgênico ou transcromossômico para genes de imunoglobulina humana ou um hibridoma preparado a partir deles, anticorpos isolados de uma célula hospedeira transformada para expressar o anticorpo humano, por exemplo, de um transfectoma, anticorpos isolados de uma biblioteca de anticorpos humanos combinatória recombinante e anticorpos preparados, expressos, criados ou isolados por quaisquer outros meios que envolvam a junção de todo ou parte de um gene de imunoglobulina humana, sequências para outras sequências de DNA. Tais anticorpos humanos recombinantes têm regiões variáveis nas quais as regiões estruturais e CDR são derivadas de sequências de imunoglobulina da linhagem germinativa humana. Em certas modalidades, no entanto, esses anticorpos humanos recombinantes podem ser submetidos à mutagênese in vitro (ou, quando um animal transgênico para sequências Ig humanas é usado, mutagênese somática in vivo) e, portanto, as sequências de aminoácidos das regiões VH e VL dos anticorpos recombinantes são sequências que, embora derivadas e relacionadas às sequências VH e VL da linhagem germinativa humana, podem não existir naturalmente dentro do repertório da linhagem germinativa do anticorpo humano in vivo.

[079] O termo "célula hospedeira recombinante" (ou simplesmente "célula hospedeira") refere-se a uma célula na qual um vetor de expressão recombinante foi introduzido. Deve-se entender que tais termos se referem não apenas à célula em questão, mas também à descendência de uma célula. Como certas modificações podem ocorrer nas gerações seguintes devido a mutações ou influências ambientais, essa descendência pode não ser idêntica à célula parental, mas ainda está incluída no escopo do termo "célula hospedeira", conforme aqui utilizado.

[080] O termo "objeto" inclui animais humanos e não humanos. Os animais não humanos incluem todos os vertebrados (por exemplo: mamíferos e não mamíferos), como primatas não humanos (por exemplo: macaco cinomolgos), ovelha, coelho, cachorro, vaca, galinhas, anfíbios e répteis. Exceto quando indicado, os termos "paciente" ou "objeto" são usados aqui de forma intercambiável. Conforme usado aqui, os termos "cino" ou "cinomolgos" se referem ao macaco cinomolgos (Macaca fascicularis). Em alguns aspectos específicos aqui fornecidos, um paciente ou um objeto é um humano.

[081] Como aqui utilizado, o termo "tratamento" ou "tratamento" de qualquer doença ou distúrbio (por exemplo, um distúrbio tromboembólico) refere-se em uma modalidade, a melhoria da doença ou distúrbio (isto é, desaceleração ou interrupção ou redução do desenvolvimento de doença ou pelo menos um dos seus sintomas clínicos). Em outra modalidade, "tratar" ou "tratamento" refere-se a aliviar ou melhorar pelo menos um parâmetro físico, incluindo aqueles que podem não ser discerníveis pelo paciente. Em ainda outra modalidade, "tratar" ou "tratamento" refere-se à modulação da doença ou distúrbio, fisicamente (por exemplo, estabilização de um sintoma discernível), fisiologicamente (por exemplo, estabilização de um parâmetro físico), ou ambos. Em ainda outra modalidade, "tratar" ou "tratamento" refere-se à prevenção ou atraso do início ou desenvolvimento ou progressão da doença ou distúrbio.

[082] "Prevenção", no que se refere às indicações descritas neste documento, incluindo, por exemplo, um distúrbio tromboembólico, significa qualquer ação que impeça ou retarde um agravamento, por exemplo, nos parâmetros de uma doença tromboembólica, como descrito abaixo, em um paciente em risco de ser afligido por um distúrbio tromboembólico ou em risco para a referida piora.

[083] O termo "vetor" pretende se referir a uma molécula de polinucleotídeo capaz de transportar outro polinucleotídeo ao qual foi ligado. Um tipo de vetor é um "plasmídeo", que se refere a um loop circular de DNA de filamento duplo no qual segmentos adicionais de DNA podem ser ligados. Outro tipo de vetor é um vetor viral, como um vetor viral adenoassociado (AAV ou AAV2), em que segmentos de DNA adicionais podem ser ligados ao genoma viral. Certos vetores são capazes de replicação autônoma em uma célula hospedeira na qual são introduzidos (por exemplo, vetores bacterianos tendo uma origem bacteriana de replicação e vetores de mamíferos epissomais). Outros vetores (por exemplo, vetores de mamíferos não epissomais) podem ser integrados no genoma de uma célula hospedeira após a introdução na célula hospedeira e, assim, são replicados juntamente com o genoma hospedeiro. Além disso, certos vetores são capazes de direcionar a expressão de genes aos quais eles estão operacionalmente ligados. Tais vetores são referidos aqui como "vetores de expressão recombinantes" (ou simplesmente "vetores de expressão"). Em geral, os vetores de expressão de utilidade em técnicas de DNA recombinante estão frequentemente na forma de plasmídeos. Na presente especificação, "plasmídeo" e "vetor" podem ser usados de forma intercambiável, pois o plasmídeo é a forma de vetor mais comumente usada. No entanto, a presente divulgação pretende incluir outras formas de vetores de expressão, como vetores virais (por exemplo, retrovírus com defeito de replicação, adenovírus e vírus adenoassociados), que servem funções equivalentes. Anticorpos XI/XIa e AntiFator XI/FXIa

[084] Esta seção descreve exemplos de anticorpos anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpos descritos na Tabela 1) aos quais os agentes de ligação de reversão aqui fornecidos (por exemplo, anticorpos anti- idiotipo e fragmentos dos mesmos) se ligam especificamente, em que os agentes de ligação de reversão são capazes de reverter um ou mais efeitos anticoagulantes de tais anticorpos anti-FXI/FXIa e/ou inibe a ligação de tais anticorpos anti-FXI/FXIa a FXI e/ou FXIa.

[085] FXI possui papéis importantes nas vias de coagulação intrínseca e extrínseca e na ponte entre as fases de iniciação e amplificação da hemostasia plasmática. Ambos o Fator XIIa e a trombina podem ativar o FXI, resultando em geração sustentada de trombina e inibição da fibrinólise. FXI desempenha um papel menor na hemostasia normal em um ambiente de alto fator tecidual "após lesão do vaso", enquanto parece desempenhar um papel fundamental na trombose. A deficiência severa do Fator XI está associada a uma menor incidência de derrame isquêmico e eventos tromboembólicos venosos (Salomon et al 2008; Salomon et al. (2011) Thromb Haemost.; 105: 269- 73). Manifestações de sangramento em objetos com deficiência severa de Fator XI são infrequentes, geralmente leves, induzidas por lesões e afetam preferivelmente tecidos com atividade fibrinolítica aumentada, como mucosa oral, mucosa nasal e trato urinário (Salomon et al 2011). Sangramento em órgãos críticos é extremamente raro ou não existe.

[086] A coagulação plasmática é um processo sequencial pelo qual os fatores de coagulação no sangue interagem e são ativados, resultando finalmente na geração de fibrina e na formação de coágulos. No modelo clássico de coagulação em cascata, o processo de geração de fibrina pode ser iniciado por duas vias distintas, ou seja, a via intrínseca e a extrínseca, respectivamente (Mackman, 2008).

[087] Na via extrínseca, a lesão do vaso permite que o fator extravascular do tecido (TF) interaja e ative o fator VII (FVII), o que leva sequencialmente à ativação do fator X e da protrombina. A trombina ativa finalmente converte fibrinogênio solúvel em fibrina. A via extrínseca é central para a hemostasia, interferindo nos fatores de coagulação nessa via, resultando em risco de sangramento.

[088] Na via intrínseca, o Fator XII pode, em alguns casos, ser ativado por um processo chamado ativação de contato. A geração do Fator XIIa ativado leva às ativações sequenciais do Fator XI e do fator IX. Como o fator IXa ativa o fator X, as vias extrínseca e intrínseca convergem nesse estágio (no caminho comum). A atividade da trombina é aumentada através da ampliação de sua própria geração por meio de um loop de alimentação em que a trombina ativa o Fator XI independentemente do Fator XII. Esse loop de avanço contribui para o crescimento sustentado do trombo, mas está minimamente envolvida na hemostasia, pois a forte ativação pelo fator extravascular do tecido é suficiente para a formação de coágulos. Portanto, a via intrínseca não está substancialmente envolvida na hemostasia (Gailani e Renné (2007) Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2007, 27 (12): 2507-13, Muller, Gailiani e Renné 2011).

[089] Estudos pré-clínicos, utilizando uma variedade de abordagens para inibir FXI ou FXIa em uma variedade de espécies, contribuíram para a validação deste alvo. Os camundongos FXI-/- são resistentes à trombose venosa experimental (Wang, et al. (2006) J Thromb Haemost; 4: 1982-8) e arterial (Wang, et al. (2005) J Thromb Haemost; 3: 695-702). O tratamento de camundongos com um anticorpo (Ab, 14E11) que bloqueia a ativação do FXI por FXIIa resultou na inibição da trombose experimental (Cheng, et al. (2010) Blood, 116: 3981-9) e na redução do tamanho do infarto cerebral em um modelo de camundongo com derrame isquêmico (Leung, et al. (2012) Transl Stroke Res 2012; 3: 381-9). Em babuínos administrados com um anticorpo anti- FXI que bloqueia a ligação e a ativação de FIX por FXIa, foi observado um crescimento reduzido de trombos ricos em plaquetas em enxertos vasculares revestidos com colágeno (Tucker, et al. (2009) Blood 2009; 113: 936-44), e resultados semelhantes foram encontrados com 14E11 neste modelo (Cheng 2010). Sangramento excessivo não foi observado em nenhum desses estudos.

[090] Bloquear a síntese de FXI com oligonucleotídeos antissentido em camundongos (Zhang, et al. (2010) Blood 2010; 116: 4684-92), macacos cinomolgos (Younis, et al. (2012) Blood 2012; 119: 2401-8) e babuínos (Crosby, et al. (2013) Arterioscler Thromb Vasc Biol 2013; 33: 1670-8) resultaram em efeitos antitrombóticos e anticoagulantes sem sangramento excessivo. Além disso, efeitos semelhantes foram produzidos pelo bloqueio de FXIa com inibidores de baixo peso molecular em modelos venosos e arteriais de trombose em ratos (Schumacher et al. (2007) Eur J Pharmacol 2007; 570: 167-74) e coelhos (Wong et al. al. (2011) J Thromb Thrombolysis 2011; 32: 129- 37).

[091] Pacientes com deficiência severa de FXI raramente sangram espontaneamente e mostram apenas sangramento leve induzido por trauma, exceto em tecidos com alta atividade fibrinolítica. A raridade da deficiência severa de FXI requer o uso de estudos populacionais para revelar o perfil trombótico desses pacientes em relação à população em geral. Notavelmente, esses estudos relatam que a incidência de derrame isquêmico (Salomon 2008) e trombose venosa profunda (DVT) (Salomon et al. (2011) Blood 2008; 111: 4113–17) deve ser reduzida nesses pacientes. Assim, o número de acidentes vasculares cerebrais isquêmicos (N = 1) observado em 115 pacientes com deficiência severa de FXI foi menor (p < 0,003) do que a incidência esperada (N = 8,6) na população geral de Israel, enquanto a incidência de DVT (N = 0) foi menor (p < 0,019) nos pacientes com deficiência severa de FXI do que o esperado na população de controle (N = 4,7). Por outro lado, objetos com níveis de FXI acima do percentil 90 tiveram um risco duplo de desenvolver DVT (Meijers, et al. (2000) N Engl J Med. 2000; 342: 696- 701).

[092] Recentemente, pacientes submetidos à substituição total do joelho, um procedimento que predispõe à DVT, foram tratados com terapia antissentido FXI ou padrão de atendimento (enoxaparina). O grupo antissentido (300 mg) mostrou uma incidência 7 vezes menor de trombose venosa e menos eventos hemorrágicos (não significativos) em comparação com o padrão de atendimento (Buller et al, (2014) N Engl J Med. 372 (3): 232- 40. doi: 10.1056/NEJM oa1405760. Epub 2014, 7 de dezembro).

[093] Os anticorpos que se ligam especificamente a FXI e/ou FXIa foram descritos. Vide, por exemplo, as Publicações Internacionais PCT Nos. WO2017/015619, WO2016/207858, WO 2013/167669, WO2009/067660, WO 2009/154461 e WO 2010/080623, cada uma das quais é incorporada por referência aqui na sua totalidade. Exemplos não limitativos de anticorpos anti-FXI/FXIa incluem: 076D-M007-H04, 076D- M007-H04-CDRL3-N110D e 076D-M028-H17, conforme descrito em WO 2013/167669; 1A6 como descrito em WO2009/067660; e 14E11 como descrito em WO 2010/080623. Em aspectos específicos, são aqui fornecidos agentes de ligação, tal como anticorpos anti-idiotipo, que se ligam especificamente ao anticorpo anti-FXI/FXIa 076D-M007-H04, 076D-M007-H04-CDRL3-N110D ou 076D-M028-H17, e é capaz de inibir a ligação do anticorpo anti-FXI/FXIa a FXI/FXIa e/ou é capaz de reverter um efeito anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa. Em aspectos específicos, são aqui fornecidos agentes de ligação, como anticorpos anti-idiotipo que se ligam especificamente a um anticorpo anti-FXI/FXIa que compete (por exemplo, de maneira dependente da dose) com 076D-M007-H04, 076D-M007-H04-CDRL3-N110D ou 076D- M028-H17 para ligação ao FXI/FXIa, e é capaz de inibir a ligação do anticorpo anti-FXI/FXIa ao FXI/FXIa e/ou é capaz de reverter um efeito anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa.

[094] A Tabela 1 fornece sequências de aminoácidos exemplares e sequências de nucleotídeos codificadoras correspondentes para anticorpos FXI e anti-FXI/FXIa humanos, por exemplo, anticorpos NOV1401 e NOV1090. Em particular, a Tabela 1 fornece as seguintes sequências de aminoácidos para os anticorpos NOV1401, NOV1090, AM1, AM2, AM3 e AM4, bem como as sequências de nucleotídeos codificadoras correspondentes: região variável de cadeia pesada (VH), região variável de cadeia leve (VL), cadeia pesada, cadeia leve, regiões determinantes de complementaridade de VH, HCDR1, HCDR2 e HCDR3, regiões determinantes de complementaridade de VL, LCDR1, LCDR2 e LCDR3. Em aspectos específicos, os agentes de ligação de reversão aqui fornecidos se ligam especificamente a um anticorpo anti- FXI/FXIa descrito na Tabela 1 e são capazes de inibir (por exemplo, de maneira dependente da dose) a ligação do anticorpo anti-FXI/FXIa ao FXI/FXIa humano e/ou reversão de uma ou mais atividades anticoagulantes do anticorpo anti-FXI/FXIa. Em aspectos específicos, os agentes de ligação de reversão aqui fornecidos (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo ou fragmento de ligação a antígeno, como um Fab) se ligam especificamente ao anticorpo anti-FXI/FXIa NOV1401, NOV1090, AM1, AM2, AM3 e/ou AM4, e é capaz de inibir a ligação do anticorpo anti-FXI/FXIa ao FXI/FXIa humano e/ou é capaz de reverter um efeito anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa.

[095] Outros anticorpos anti-FXI/FXIa descritos na Tabela 1 neste documento incluem NOV1090, AM1, AM2, AM3 e AM4. Os anticorpos NOV1401 e NOV1090 compartilham as mesmas CDRs. Os anticorpos AM1, AM2, AM3 e AM4 são exemplos de variantes amadurecidas por afinidade do anticorpo NOV1090.

[096] Em aspectos particulares, um anticorpo anti-FXI/FXIa possui uma ou mais das seguintes atividades anticoagulantes, que podem ser revertidas (por exemplo, parcialmente revertidas) por um agente de ligação reversível (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo ou fragmento do mesmo, como como Fab) aqui fornecido: (i) prolongamento de aPTT conforme determinado pelo ensaio aPTT, (ii) redução na quantidade de trombina em um ensaio de geração de trombina (TGA) no plasma humano, e (iii) inibição da atividade do Fator XI.

Essas atividades podem ser prontamente medidas com ensaios descritos na técnica e aqui fornecidos.

Por exemplo, os ensaios TGA e aPTT são descritos na técnica e aqui (por exemplo, Seção de Exemplos). Em aspectos adicionais, outros biomarcadores da via de coagulação extrínseca podem ser medidos para determinar a atividade anticoagulante, por exemplo, ensaio de tempo de protrombina (PT) e ensaio de tempo de trombina (TT). Outros exemplos não limitativos de ensaios para atividade de anticoagulação/coagulação incluem ensaios cromogênicos, como o ensaio cromogênico da ecarina (ECA), ensaio de tempo de coagulação da ecarina (ECT) e ensaio de atividade antiFator Xa.

Em aspectos específicos, os agentes de ligação de reversão aqui fornecidos (por exemplo, anticorpos anti-idiotipo) são capazes de reverter (por exemplo, reverter parcialmente) uma ou mais dessas atividades anticoagulantes.

Em aspectos particulares, os agentes de ligação de reversão aqui fornecidos são capazes de reduzir o tempo de sangramento em pacientes administrados com um anticorpo anti-FXI/FXIa.

Tabela 1. Exemplos de Anticorpos FXI/FXIa, Fabs e Proteínas FXI/FXIa Descrição de Identifi- Sequência de aminoácido ou polinucleotídeo Sequência cador de Sequên- cia (SEQ ID NO:) Sequência de 1 MIFLYQVVHF ILFTSVSGEC VTQLLKDTCF proteína de EGGDITTVFT PSAKYCQVVC TYHPRCLLFT comprimento FTAESPSEDP TRWFTCVLKD SVTETLPRVN completo de FXI RTAAISGYSF KQCSHQISAC NKDIYVDLDM humano KGINYNSSVA KSAQECQERC TDDVHCHFFT (Sequência de YATRQFPSLE HRNICLLKHT QTGTPTRITK Referência LDKVVSGFSL KSCALSNLAC IRDIFPNTVF NCBI: ADSNIDSVMA PDAFVSGRIC THHPGCLFFT AAA51985) FFSQEWPKES QRNLCLLKTS ESGLPSTRIK

KSKALSGFSL QSCRHSIPVF CHSSFYHDTD FLGEELDIVA AKSHEACQKL CTNAVRCQFF TYTPAQASCN EGKGKCYLKL SSNGSPTKIL HGRGGISGYT LRLCKMDNEC TTKIKPRIVG GTASVRGEWP WQVTLHTTSP TQRHLCGGSI IGNQWILTAA HCFYGVESPK ILRVYSGILN QSEIKEDTSF FGVQEIIIHD QYKMAESGYD IALLKLETTV NYTDSQRPIC LPSKGDRNVI YTDCWVTGWG YRKLRDKIQN TLQKAKIPLV TNEECQKRYR GHKITHKMIC AGYREGGKDA CKGDSGGPLS CKHNEVWHLV GITSWGEGCA

QRERPGVYTN VVEYVDWILE KTQAV Sequência de 2 AGGCACACAG GCAAAATCAA GTTCTACATC nucleotídeo de TGTCCCTGTG TATGTCACTT GTTTGAATAC comprimento GAAATAAAAT TAAAAAAATA AATTCAGTGT completo de FXI ATTGAGAAAG CAAGCAATTC TCTCAAGGTA humano TATTTCTGAC ATACTAAGAT TTTAACGACT (Sequência de TTCACAAATA TGCTGTACTG AGAGAGAATG Referência TTACATAACA TTGAGAACTA GTACAAGTAA NCBI: ATATTAAAGT GAAGTGACCA TTTCCTACAC NM_000128.3) AAGCTCATTC AGAGGAGGAT GAAGACCATT

TTGGAGGAAG AAAAGCACCC TTATTAAGAA TTGCAGCAAG TAAGCCAACA AGGTCTTTTC AGGATGATTT TCTTATATCA AGTGGTACAT TTCATTTTAT TTACTTCAGT TTCTGGTGAA TGTGTGACTC AGTTGTTGAA GGACACCTGC TTTGAAGGAG GGGACATTAC TACGGTCTTC ACACCAAGCG CCAAGTACTG CCAGGTAGTC TGCACTTACC ACCCAAGATG TTTACTCTTC ACTTTCACGG CGGAATCACC ATCTGAGGAT CCCACCCGAT GGTTTACTTG TGTCCTGAAA GACAGTGTTA CAGAAACACT GCCAAGAGTG AATAGGACAG CAGCGATTTC TGGGTATTCT TTCAAGCAAT GCTCACACCA AATAAGCGCT TGCAACAAAG ACATTTATGT GGACCTAGAC ATGAAGGGCA TAAACTATAA CAGCTCAGTT GCCAAGAGTG CTCAAGAATG CCAAGAAAGA TGCACGGATG ACGTCCACTG CCACTTTTTC ACGTACGCCA CAAGGCAGTT TCCCAGCCTG GAGCATCGTA ACATTTGTCT ACTGAAGCAC ACCCAAACAG GGACACCAAC CAGAATAACG AAGCTCGATA AAGTGGTGTC TGGATTTTCA CTGAAATCCT GTGCACTTTC TAATCTGGCT TGTATTAGGG ACATTTTCCC TAATACGGTG TTTGCAGACA GCAACATCGA CAGTGTCATG GCTCCCGATG CTTTTGTCTG TGGCCGAATC TGCACTCATC ATCCCGGTTG CTTGTTTTTT ACCTTCTTTT CCCAGGAATG GCCCAAAGAA TCTCAAAGAA ATCTTTGTCT CCTTAAAACA TCTGAGAGTG GATTGCCCAG TACACGCATT AAAAAGAGCA AAGCTCTTTC TGGTTTCAGT CTACAAAGCT GCAGGCACAG CATCCCAGTG TTCTGCCATT CTTCATTTTA CCATGACACT GATTTCTTGG GAGAAGAACT GGATATTGTT GCTGCAAAAA GTCACGAGGC CTGCCAGAAA CTGTGCACCA ATGCCGTCCG CTGCCAGTTT TTTACCTATA CCCCAGCCCA AGCATCCTGC AACGAAGGGA AGGGCAAGTG TTACTTAAAG CTTTCTTCAA ACGGATCTCC AACTAAAATA CTTCACGGGA GAGGAGGCAT CTCTGGATAC ACATTAAGGT TGTGTAAAAT GGATAATGAG TGTACCACCA AAATCAAGCC CAGGATCGTT GGAGGAACTG CGTCTGTTCG TGGTGAGTGG CCGTGGCAGG TGACCCTGCA CACAACCTCA CCCACTCAGA GACACCTGTG TGGAGGCTCC ATCATTGGAA ACCAGTGGAT ATTAACAGCC GCTCACTGTT TCTATGGGGT AGAGTCACCT AAGATTTTGC GTGTCTACAG TGGCATTTTA AATCAATCTG AAATAAAAGA GGACACATCT TTCTTTGGGG TTCAAGAAAT AATAATCCAT GATCAGTATA AAATGGCAGA AAGCGGGTAT GATATTGCCT TGTTGAAACT GGAAACCACA GTGAATTACA CAGATTCTCA ACGACCCATA TGCCTGCCTT CCAAAGGAGA TAGAAATGTA ATATACACTG ATTGCTGGGT GACTGGATGG GGGTACAGAA AACTAAGAGA CAAAATACAA AATACTCTCC AGAAAGCCAA GATACCCTTA GTGACCAACG AAGAGTGCCA GAAGAGATAC AGAGGACATA AAATAACCCA TAAGATGATC TGTGCCGGCT ACAGGGAAGG AGGGAAGGAC GCTTGCAAGG GAGATTCGGG AGGCCCTCTG TCCTGCAAAC ACAATGAGGT CTGGCATCTG GTAGGCATCA CGAGCTGGGG CGAAGGCTGT GCTCAAAGGG AGCGGCCAGG TGTTTACACC AACGTGGTCG AGTACGTGGA CTGGATTCTG GAGAAAACTC AAGCAGTGTG AATGGGTTCC CAGGGGCCAT TGGAGTCCCT GAAGGACCCA GGATTTGCTG GGAGAGGGTG TTGAGTTCAC TGTGCCAGCA TGCTTCCTCC ACAGTAACAC GCTGAAGGGG CTTGGTGTTT GTAAGAAAAT GCTAGAAGAA AACAAACTGT CACAAGTTGT TATGTCCAAA ACTCCCGTTC TATGATCGTT GTAGTTTGTT TGAGCATTCA GTCTCTTTGT TTTTGATCAC GCTTCTATGG AGTCCAAGAA TTACCATAAG GCAATATTTC TGAAGATTAC TATATAGGCA GATATAGCAG AAAATAACCA AGTAGTGGCA GTGGGGATCA GGCAGAAGAA CTGGTAAAAG AAGCCACCAT AAATAGATTT GTTCGATGAA AGATGAAAAC TGGAAGAAAG GAGAACAAAG ACAGTCTTCA CCATTTTGCA GGAATCTACA CTCTGCCTAT GTGAACACAT TTCTTTTGTA AAGAAAGAAA TTGATTGCAT TTAATGGCAG ATTTTCAGAA TAGTCAGGAA TTCTTGTCAT TTCCATTTTA AAATATATAT TAAAAAAAAT CAGTTCGAGT AGACACGAGC TAAGAGTGAA TGTGAAGATA ACAGAATTTC TGTGTGGAAG AGGATTACAA GCAGCAATTT ACCTGGAAGT GATACCTTAG GGGCAATCTT GAAGATACAC TTTCCTGAAA AATGATTTGT GATGGATTGT ATATTTATTT AAAATATCTT GGGAGGGGAG GCTGATGGAG ATAGGGAGCA TGCTCAAACC TCCCTAAGAC AAGCTGCTGC TGTGACTATG GGCTCCCAAA GAGCTAGATC GTATATTTAT TTGACAAAAA TCACCATAGA CTGCATCCAT ACTACAGAGA AAAAACAATT AGGGCGCAAA TGGATAGTTA CAGTAAAGTC TTCAGCAAGC AGCTGCCTGT ATTCTAAGCA CTGGGATTTT CTGTTTCGTG CAAATATTTA TCTCATTATT GTTGTGATCT AGTTCAATAA CCTAGAATTT GAATTGTCAC CACATAGCTT TCAATCTGTG CCAACAACTA TACAATTCAT

CAAGTGTG NOV1401 HCDR1 3 GFTFSTAAMS (Combinado) HCDR2 4 GISGSGSSTYYADSVKG (Combinado) HCDR3 5 ELSYLYSGYYFDY (Combinado) HCDR1 (Kabat) 6 TAAMS HCDR2 (Kabat) 4 GISGSGSSTYYADSVKG HCDR3 (Kabat) 5 ELSYLYSGYYFDY HCDR1 7 GFTFSTA (Chothia) HCDR2 8 SGSGSS (Chothia) HCDR3 5 ELSYLYSGYYFDY (Chothia) HCDR1 (IMGT) 9 GFTFSTAA HCDR2 (IMGT) 10 ISGSGSST HCDR3 (IMGT) 11 ARELSYLYSGYYFDY VH 12 QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTAA

MSWVRQAPGKGLEWVSGISGSGSSTYYADSVK GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARE LSYLYSGYYFDYWGQGTLVTVSS

DNA que 13 CAGGTGCAGCTGCTGGAATCAGGCGGCGGAC codifica VH TGGTGCAGCCTGGCGGTAGCCTGAGACTGAG

CTGCGCTGCTAGTGGCTTCACCTTTAGCACCG CCGCTATGAGCTGGGTTCGACAGGCCCCAGG GAAAGGCCTCGAGTGGGTCTCAGGGATTAGCG GTAGCGGCTCTAGCACCTACTACGCCGATAGC GTGAAGGGCCGGTTCACTATCTCTAGGGATAA CTCTAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAATAG CCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTCTACTACT GCGCTAGAGAGCTGAGCTACCTGTATAGCGGC TACTACTTCGACTACTGGGGTCAAGGCACCCT

GGTCACCGTGTCTAGC Cadeia Pesada 14 QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTAA

MSWVRQAPGKGLEWVSGISGSGSSTYYADSVK GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARE LSYLYSGYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGT QTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV AVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALAA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA

LHNHYTQKSLSLSPGK DNA que 15 CAGGTGCAGCTGCTGGAATCAGGCGGCGGAC codifica Cadeia TGGTGCAGCCTGGCGGTAGCCTGAGACTGAG Pesada CTGCGCTGCTAGTGGCTTCACCTTTAGCACCG

CCGCTATGAGCTGGGTTCGACAGGCCCCAGG GAAAGGCCTCGAGTGGGTCTCAGGGATTAGCG GTAGCGGCTCTAGCACCTACTACGCCGATAGC GTGAAGGGCCGGTTCACTATCTCTAGGGATAA CTCTAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAATAG CCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTCTACTACT GCGCTAGAGAGCTGAGCTACCTGTATAGCGGC TACTACTTCGACTACTGGGGTCAAGGCACCCT GGTCACCGTGTCTAGCGCTAGCACTAAGGGCC CCTCCGTGTTCCCTCTGGCCCCTTCCAGCAAG TCTACCTCCGGCGGCACAGCTGCTCTGGGCTG CCTGGTCAAGGACTACTTCCCTGAGCCTGTGA CAGTGTCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCTCT GGCGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGTC CTCCGGCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTGGTCA CAGTGCCTTCAAGCAGCCTGGGCACCCAGACC TATATCTGCAACGTGAACCACAAGCCTTCCAAC ACCAAGGTGGACAAGCGGGTGGAGCCTAAGTC CTGCGACAAGACCCACACCTGTCCTCCCTGCC CTGCTCCTGAACTGCTGGGCGGCCCTTCTGTG TTCCTGTTCCCTCCAAAGCCCAAGGACACCCT GATGATCTCCCGGACCCCTGAAGTGACCTGCG TGGTGGTGGCCGTGTCCCACGAGGATCCTGAA GTGAAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGA GGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTCGGGAG GAACAGTACAACTCCACCTACCGGGTGGTGTC CGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGA ACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAAGTCTCCAAC AAGGCCCTGGCCGCCCCTATCGAAAAGACAAT CTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCC CAGGTGTACACCCTGCCACCCAGCCGGGAGG AAATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGT CTGGTCAAGGGCTTCTACCCTTCCGATATCGC CGTGGAGTGGGAGTCTAACGGCCAGCCTGAG AACAACTACAAGACCACCCCTCCTGTGCTGGA CTCCGACGGCTCCTTCTTCCTGTACTCCAAACT GACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGC AACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCACGAGGC CCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGT

CCCTGTCTCCCGGCAAG LCDR1 16 SGSSSNIGSNDVS (Combinado) LCDR2 17 KNYNRPS (Combinado) LCDR3 18 SAWDQRQFDVV (Combinado) LCDR1 (Kabat) 16 SGSSSNIGSNDVS LCDR2 (Kabat) 17 KNYNRPS LCDR3 (Kabat) 18 SAWDQRQFDVV LCDR1 19 SSSNIGSND (Chothia) LCDR2 20 KNY (Chothia) LCDR3 21 WDQRQFDV (Chothia) LCDR1 (IMGT) 22 SSNIGSND LCDR2 (IMGT) 20 KNY LCDR3 (IMGT) 18 SAWDQRQFDVV VL 23 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNDV

SWYQQLPGTAPKLLIYKNYNRPSGVPDRFSGSK SGTSASLAISGLQSEDEADYYCSAWDQRQFDVV

FGGGTKLTVL DNA que 24 CAGTCAGTCCTGACTCAGCCCCCTAGCGCTAG codifica VL TGGCACCCCTGGTCAAAGAGTGACTATTAGCT

GTAGCGGCTCTAGCTCTAATATCGGCTCTAAC GACGTCAGCTGGTATCAGCAGCTGCCCGGCAC CGCCCCTAAGCTGCTGATCTATAAGAACTATAA TAGGCCTAGCGGCGTGCCCGATAGGTTTAGCG GATCTAAATCAGGGACTTCTGCTAGTCTGGCTA TTAGCGGCCTGCAGTCAGAGGACGAGGCCGA CTACTACTGTAGCGCCTGGGATCAGCGTCAGT TCGACGTGGTGTTCGGCGGAGGCACTAAGCTG ACCGTGCTG

Cadeia Leve 25 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNDV

SWYQQLPGTAPKLLIYKNYNRPSGVPDRFSGSK SGTSASLAISGLQSEDEADYYCSAWDQRQFDVV FGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKA TLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTP SKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTH

EGSTVEKTVAPTECS DNA que 26 CAGTCAGTCCTGACTCAGCCCCCTAGCGCTAG codifica Cadeia TGGCACCCCTGGTCAAAGAGTGACTATTAGCT Leve GTAGCGGCTCTAGCTCTAATATCGGCTCTAAC

GACGTCAGCTGGTATCAGCAGCTGCCCGGCAC CGCCCCTAAGCTGCTGATCTATAAGAACTATAA TAGGCCTAGCGGCGTGCCCGATAGGTTTAGCG GATCTAAATCAGGGACTTCTGCTAGTCTGGCTA TTAGCGGCCTGCAGTCAGAGGACGAGGCCGA CTACTACTGTAGCGCCTGGGATCAGCGTCAGT TCGACGTGGTGTTCGGCGGAGGCACTAAGCTG ACCGTGCTGGGTCAACCTAAGGCTGCCCCCAG CGTGACCCTGTTCCCCCCCAGCAGCGAGGAG CTGCAGGCCAACAAGGCCACCCTGGTGTGCCT GATCAGCGACTTCTACCCAGGCGCCGTGACCG TGGCCTGGAAGGCCGACAGCAGCCCCGTGAA GGCCGGCGTGGAGACCACCACCCCCAGCAAG CAGAGCAACAACAAGTACGCCGCCAGCAGCTA CCTGAGCCTGACCCCCGAGCAGTGGAAGAGC CACAGGTCCTACAGCTGCCAGGTGACCCACGA GGGCAGCACCGTGGAAAAGACCGTGGCCCCA

ACCGAGTGCAGC NOV1090 HCDR1 3 GFTFSTAAMS (Combinado) HCDR2 4 GISGSGSSTYYADSVKG (Combinado) HCDR3 5 ELSYLYSGYYFDY (Combinado) HCDR1 (Kabat) 6 TAAMS HCDR2 (Kabat) 4 GISGSGSSTYYADSVKG HCDR3 (Kabat) 5 ELSYLYSGYYFDY HCDR1 7 GFTFSTA (Chothia) HCDR2 8 SGSGSS (Chothia) HCDR3 5 ELSYLYSGYYFDY (Chothia) HCDR1 (IMGT) 9 GFTFSTAA HCDR2 (IMGT) 10 ISGSGSST

HCDR3 (IMGT) 11 ARELSYLYSGYYFDY VH 12 QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTAA

MSWVRQAPGKGLEWVSGISGSGSSTYYADSVK GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARE

LSYLYSGYYFDYWGQGTLVTVSS DNA que 390 CAGGTGCAATTGCTGGAAAGCGGCGGTGGCCT codifica VH GGTGCAGCCGGGTGGCAGCCTGCGTCTGAGC

TGCGCGGCGTCCGGATTCACCTTTTCTACTGC TGCTATGTCTTGGGTGCGCCAGGCCCCGGGCA AAGGTCTCGAGTGGGTTTCCGGTATCTCTGGT TCTGGTTCTTCTACCTACTATGCGGATAGCGTG AAAGGCCGCTTTACCATCAGCCGCGATAATTC GAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCT GCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCG CGCGTGAACTGTCTTACCTGTACTCTGGTTACT ACTTCGATTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTG

ACTGTTAGCTCA Cadeia Pesada 360 QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTAA

MSWVRQAPGKGLEWVSGISGSGSSTYYADSVK GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARE LSYLYSGYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGT QTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPC PAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALP APIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE

ALHNHYTQKSLSLSPGK DNA que 361 CAGGTGCAATTGCTGGAAAGCGGCGGTGGCCT codifica Cadeia GGTGCAGCCGGGTGGCAGCCTGCGTCTGAGC Pesada TGCGCGGCGTCCGGATTCACCTTTTCTACTGC

TGCTATGTCTTGGGTGCGCCAGGCCCCGGGCA AAGGTCTCGAGTGGGTTTCCGGTATCTCTGGT TCTGGTTCTTCTACCTACTATGCGGATAGCGTG AAAGGCCGCTTTACCATCAGCCGCGATAATTC GAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCT GCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCG CGCGTGAACTGTCTTACCTGTACTCTGGTTACT ACTTCGATTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTG ACTGTTAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCCATC GGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCA CCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCT GGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGG TGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCT CAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACC GTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTA CATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACA CCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCT TGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCC AGCACCTGAAGCAGCGGGGGGACCGTCAGTC TTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTC ATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGT GGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAG GTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGA GGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAG GAGCAGTACAACAGCACGTACCGGGTGGTCAG CGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGA ATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAAC AAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCAT CTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGA GATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCC TGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCC GTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGA ACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGAC TCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTC ACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGA ACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCT CTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTC

CCTGTCTCCGGGTAAA LCDR1 16 SGSSSNIGSNDVS (Combinado) LCDR2 17 KNYNRPS (Combinado) LCDR3 18 SAWDQRQFDVV (Combinado) LCDR1 (Kabat) 16 SGSSSNIGSNDVS LCDR2 (Kabat) 17 KNYNRPS LCDR3 (Kabat) 18 SAWDQRQFDVV LCDR1 19 SSSNIGSND (Chothia) LCDR2 20 KNY (Chothia) LCDR3 21 WDQRQFDV (Chothia) LCDR1 (IMGT) 22 SSNIGSND LCDR2 (IMGT) 20 KNY LCDR3 (IMGT) 18 SAWDQRQFDVV VL 362 DIVLTQPPSVSGAPGQRVTISCSGSSSNIGSNDV

SWYQQLPGTAPKLLIYKNYNRPSGVPDRFSGSK SGTSASLAITGLQAEDEADYYCSAWDQRQFDVV

FGGGTKLTVL DNA que 363 GATATCGTGCTGACCCAGCCGCCGAGCGTGAG codifica VL CGGTGCACCGGGCCAGCGCGTGACCATTAGC

TGTAGCGGCAGCAGCAGCAACATTGGTTCTAA CGACGTGTCTTGGTACCAGCAGCTGCCGGGCA CGGCGCCGAAACTGCTGATCTACAAAAACTAC AACCGCCCGAGCGGCGTGCCGGATCGCTTTA GCGGATCCAAAAGCGGCACCAGCGCCAGCCT GGCGATTACCGGCCTGCAAGCAGAAGACGAAG CGGATTATTACTGCTCTGCTTGGGACCAGCGT CAGTTCGACGTTGTGTTTGGCGGCGGCACGAA

GTTAACCGTCCTA Cadeia Leve 364 DIVLTQPPSVSGAPGQRVTISCSGSSSNIGSNDV

SWYQQLPGTAPKLLIYKNYNRPSGVPDRFSGSK SGTSASLAITGLQAEDEADYYCSAWDQRQFDVV FGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKA TLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTP SKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTH

EGSTVEKTVAPTECS DNA que 365 GATATCGTGCTGACCCAGCCGCCGAGCGTGAG codifica Cadeia CGGTGCACCGGGCCAGCGCGTGACCATTAGC Leve TGTAGCGGCAGCAGCAGCAACATTGGTTCTAA

CGACGTGTCTTGGTACCAGCAGCTGCCGGGCA CGGCGCCGAAACTGCTGATCTACAAAAACTAC AACCGCCCGAGCGGCGTGCCGGATCGCTTTA GCGGATCCAAAAGCGGCACCAGCGCCAGCCT GGCGATTACCGGCCTGCAAGCAGAAGACGAAG CGGATTATTACTGCTCTGCTTGGGACCAGCGT CAGTTCGACGTTGTGTTTGGCGGCGGCACGAA GTTAACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCC CCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAG GAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTG TCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGA CAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGT CAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCC AAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAG CTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGT CCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCAT GAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCC

CTACAGAATGTTCA AM1 HCDR1 3 GFTFSTAAMS (Combinado) HCDR2 366 TIDSWGDDTDYADSVKG (Combinado) HCDR3 5 ELSYLYSGYYFDY (Combinado) HCDR1 (Kabat) 6 TAAMS HCDR2 (Kabat) 366 TIDSWGDDTDYADSVKG HCDR3 (Kabat) 5 ELSYLYSGYYFDY HCDR1 7 GFTFSTA (Chothia)

HCDR2 367 DSWGDD (Chothia) HCDR3 5 ELSYLYSGYYFDY (Chothia) HCDR1 (IMGT) 9 GFTFSTAA HCDR2 (IMGT) 368 IDSWGDDT HCDR3 (IMGT) 11 ARELSYLYSGYYFDY VH 369 QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTAA

MSWVRQAPGKGLEWVSTIDSWGDDTDYADSVK GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARE

LSYLYSGYYFDYWGQGTLVTVSS VH de DNA 370 CAGGTGCAATTGCTGGAAAGCGGCGGTGGCCT

GGTGCAGCCGGGTGGCAGCCTGCGTCTGAGC TGCGCGGCGTCCGGATTCACCTTTTCTACTGC TGCTATGTCTTGGGTGCGCCAGGCCCCGGGCA AAGGTCTCGAGTGGGTTTCCACTATCGACTCTT GGGGCGACGACACTGACTATGCGGATAGCGT GAAAGGCCGCTTTACCATCAGCCGCGATAATT CGAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCC TGCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGC GCGCGTGAACTGTCTTACCTGTACTCTGGTTAC TACTTCGATTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGT

GACTGTTAGCTCA Cadeia Pesada 371 QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTAA

MSWVRQAPGKGLEWVSTIDSWGDDTDYADSVK GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARE LSYLYSGYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGT QTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPC PAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALP APIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE

ALHNHYTQKSLSLSPGK Cadeia Pesada 391 CAGGTGCAATTGCTGGAAAGCGGCGGTGGCCT de DNA GGTGCAGCCGGGTGGCAGCCTGCGTCTGAGC

TGCGCGGCGTCCGGATTCACCTTTTCTACTGC TGCTATGTCTTGGGTGCGCCAGGCCCCGGGCA AAGGTCTCGAGTGGGTTTCCACTATCGACTCTT GGGGCGACGACACTGACTATGCGGATAGCGT GAAAGGCCGCTTTACCATCAGCCGCGATAATT CGAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCC TGCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGC GCGCGTGAACTGTCTTACCTGTACTCTGGTTAC TACTTCGATTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGT GACTGTTAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCCAT CGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGC ACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCC TGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACG GTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCG GCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCC TCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGAC CGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCT ACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAAC ACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATC TTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCC CAGCACCTGAAGCAGCGGGGGGACCGTCAGT CTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCT CATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCG TGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGA GGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGG AGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAG GAGCAGTACAACAGCACGTACCGGGTGGTCAG CGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGA ATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAAC AAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCAT CTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGA GATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCC TGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCC GTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGA ACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGAC TCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTC ACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGA ACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCT CTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTC

SWYQQLPGTAPKLLIYKNYNRPSGVPDRFSGSK SGTSASLAITGLQAEDEADYYCSAWDQRQFDVV

FGGGTKLTVL VL de DNA 363 GATATCGTGCTGACCCAGCCGCCGAGCGTGAG

CGGTGCACCGGGCCAGCGCGTGACCATTAGC TGTAGCGGCAGCAGCAGCAACATTGGTTCTAA CGACGTGTCTTGGTACCAGCAGCTGCCGGGCA CGGCGCCGAAACTGCTGATCTACAAAAACTAC AACCGCCCGAGCGGCGTGCCGGATCGCTTTA GCGGATCCAAAAGCGGCACCAGCGCCAGCCT GGCGATTACCGGCCTGCAAGCAGAAGACGAAG CGGATTATTACTGCTCTGCTTGGGACCAGCGT CAGTTCGACGTTGTGTTTGGCGGCGGCACGAA

GTTAACCGTCCTA Cadeia Leve 364 DIVLTQPPSVSGAPGQRVTISCSGSSSNIGSNDV

EGSTVEKTVAPTECS Cadeia Leve de 365 GATATCGTGCTGACCCAGCCGCCGAGCGTGAG

DNA CGGTGCACCGGGCCAGCGCGTGACCATTAGC TGTAGCGGCAGCAGCAGCAACATTGGTTCTAA CGACGTGTCTTGGTACCAGCAGCTGCCGGGCA CGGCGCCGAAACTGCTGATCTACAAAAACTAC AACCGCCCGAGCGGCGTGCCGGATCGCTTTA GCGGATCCAAAAGCGGCACCAGCGCCAGCCT GGCGATTACCGGCCTGCAAGCAGAAGACGAAG CGGATTATTACTGCTCTGCTTGGGACCAGCGT CAGTTCGACGTTGTGTTTGGCGGCGGCACGAA GTTAACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCC CCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAG GAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTG TCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGA CAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGT CAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCC AAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAG CTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGT CCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCAT GAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCC

CTACAGAATGTTCA AM2 HCDR1 3 GFTFSTAAMS (Combinado) HCDR2 372 SIEYYDTDTHYADSVKG (Combinado) HCDR3 5 ELSYLYSGYYFDY (Combinado) HCDR1 (Kabat) 6 TAAMS HCDR2 (Kabat) 372 SIEYYDTDTHYADSVKG

HCDR3 (Kabat) 5 ELSYLYSGYYFDY HCDR1 7 GFTFSTA (Chothia) HCDR2 373 EYYDTD (Chothia) HCDR3 5 ELSYLYSGYYFDY (Chothia) HCDR1 (IMGT) 9 GFTFSTAA HCDR2 (IMGT) 374 IEYYDTDT HCDR3 (IMGT) 11 ARELSYLYSGYYFDY VH 375 QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTAA

MSWVRQAPGKGLEWVSSIEYYDTDTHYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREL

SYLYSGYYFDYWGQGTLVTVSS VH de DNA 376 CAGGTGCAATTGCTGGAAAGCGGCGGTGGCCT

GGTGCAGCCGGGTGGCAGCCTGCGTCTGAGC TGCGCGGCGTCCGGATTCACCTTTTCTACTGC TGCTATGTCTTGGGTGCGCCAGGCCCCGGGCA AAGGTCTCGAGTGGGTTTCCTCTATCGAATACT ACGACACTGACACTCATTATGCGGATAGCGTG AAAGGCCGCTTTACCATCAGCCGCGATAATTC GAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCT GCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCG CGCGTGAACTGTCTTACCTGTACTCTGGTTACT ACTTCGATTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTG

ACTGTTAGCTCA Cadeia Pesada 377 QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTAA

MSWVRQAPGKGLEWVSSIEYYDTDTHYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREL SYLYSGYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGT QTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPC PAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALP APIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE

ALHNHYTQKSLSLSPGK Cadeia Pesada 378 CAGGTGCAATTGCTGGAAAGCGGCGGTGGCCT de DNA GGTGCAGCCGGGTGGCAGCCTGCGTCTGAGC

TGCGCGGCGTCCGGATTCACCTTTTCTACTGC TGCTATGTCTTGGGTGCGCCAGGCCCCGGGCA AAGGTCTCGAGTGGGTTTCCTCTATCGAATACT ACGACACTGACACTCATTATGCGGATAGCGTG AAAGGCCGCTTTACCATCAGCCGCGATAATTC GAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCT GCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCG CGCGTGAACTGTCTTACCTGTACTCTGGTTACT ACTTCGATTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTG ACTGTTAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCCATC GGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCA CCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCT GGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGG TGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCT CAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACC GTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTA CATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACA CCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCT TGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCC AGCACCTGAAGCAGCGGGGGGACCGTCAGTC TTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTC ATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGT GGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAG GTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGA GGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAG GAGCAGTACAACAGCACGTACCGGGTGGTCAG CGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGA ATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAAC AAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCAT CTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGA GATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCC TGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCC GTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGA ACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGAC TCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTC ACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGA ACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCT CTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTC

CCTGTCTCCGGGTAAA LCDR1 16 SGSSSNIGSNDVS (Combinado) LCDR2 17 KNYNRPS (Combinado) LCDR3 18 SAWDQRQFDVV (Combinado) LCDR1 (Kabat) 16 SGSSSNIGSNDVS LCDR2 (Kabat) 17 KNYNRPS LCDR3 (Kabat) 18 SAWDQRQFDVV LCDR1 19 SSSNIGSND (Chothia) LCDR2 20 KNY (Chothia) LCDR3 21 WDQRQFDV (Chothia) LCDR1 (IMGT) 22 SSNIGSND LCDR2 (IMGT) 20 KNY

LCDR3 (IMGT) 18 SAWDQRQFDVV VL 362 DIVLTQPPSVSGAPGQRVTISCSGSSSNIGSNDV

SWYQQLPGTAPKLLIYKNYNRPSGVPDRFSGSK SGTSASLAITGLQAEDEADYYCSAWDQRQFDVV

FGGGTKLTVL VL de DNA 363 GATATCGTGCTGACCCAGCCGCCGAGCGTGAG

GTTAACCGTCCTA Cadeia Leve 364 DIVLTQPPSVSGAPGQRVTISCSGSSSNIGSNDV

EGSTVEKTVAPTECS Cadeia Leve de 365 GATATCGTGCTGACCCAGCCGCCGAGCGTGAG

CTACAGAATGTTCA AM3 HCDR1 3 GFTFSTAAMS (Combinado) HCDR2 379 TIEYSSQETYYADSVKG (Combinado) HCDR3 5 ELSYLYSGYYFDY

(Combinado) HCDR1 (Kabat) 6 TAAMS HCDR2 (Kabat) 379 TIEYSSQETYYADSVKG HCDR3 (Kabat) 5 ELSYLYSGYYFDY HCDR1 7 GFTFSTA (Chothia) HCDR2 380 EYSSQE (Chothia) HCDR3 5 ELSYLYSGYYFDY (Chothia) HCDR1 (IMGT) 9 GFTFSTAA HCDR2 (IMGT) 381 IEYSSQET HCDR3 (IMGT) 11 ARELSYLYSGYYFDY VH 382 QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTAA

MSWVRQAPGKGLEWVSTIEYSSQETYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREL

SYLYSGYYFDYWGQGTLVTVSS VH de DNA 383 CAGGTGCAATTGCTGGAAAGCGGCGGTGGCCT

GGTGCAGCCGGGTGGCAGCCTGCGTCTGAGC TGCGCGGCGTCCGGATTCACCTTTTCTACTGC TGCTATGTCTTGGGTGCGCCAGGCCCCGGGCA AAGGTCTCGAGTGGGTTTCCACTATCGAATACT CTAGCCAGGAAACTTACTATGCGGATAGCGTG AAAGGCCGCTTTACCATCAGCCGCGATAATTC GAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCT GCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCG CGCGTGAACTGTCTTACCTGTACTCTGGTTACT ACTTCGATTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTG

ACTGTTAGCTCA Cadeia Pesada 384 QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTAA

MSWVRQAPGKGLEWVSTIEYSSQETYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREL SYLYSGYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGT QTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPC PAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALP APIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE

ALHNHYTQKSLSLSPGK Cadeia Pesada 385 CAGGTGCAATTGCTGGAAAGCGGCGGTGGCCT de DNA GGTGCAGCCGGGTGGCAGCCTGCGTCTGAGC

TGCGCGGCGTCCGGATTCACCTTTTCTACTGC TGCTATGTCTTGGGTGCGCCAGGCCCCGGGCA AAGGTCTCGAGTGGGTTTCCACTATCGAATACT CTAGCCAGGAAACTTACTATGCGGATAGCGTG AAAGGCCGCTTTACCATCAGCCGCGATAATTC GAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCT GCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCG CGCGTGAACTGTCTTACCTGTACTCTGGTTACT ACTTCGATTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTG ACTGTTAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCCATC GGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCA CCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCT GGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGG TGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCT CAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACC GTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTA CATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACA CCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCT TGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCC AGCACCTGAAGCAGCGGGGGGACCGTCAGTC TTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTC ATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGT GGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAG GTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGA GGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAG GAGCAGTACAACAGCACGTACCGGGTGGTCAG CGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGA ATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAAC AAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCAT CTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGA GATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCC TGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCC GTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGA ACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGAC TCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTC ACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGA ACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCT CTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTC

CCTGTCTCCGGGTAAA LCDR1 16 SGSSSNIGSNDVS (Combinado) LCDR2 17 KNYNRPS (Combinado) LCDR3 18 SAWDQRQFDVV (Combinado) LCDR1 (Kabat) 16 SGSSSNIGSNDVS LCDR2 (Kabat) 17 KNYNRPS LCDR3 (Kabat) 18 SAWDQRQFDVV LCDR1 19 SSSNIGSND (Chothia) LCDR2 20 KNY (Chothia)

LCDR3 21 WDQRQFDV (Chothia) LCDR1 (IMGT) 22 SSNIGSND LCDR2 (IMGT) 20 KNY LCDR3 (IMGT) 18 SAWDQRQFDVV VL 362 DIVLTQPPSVSGAPGQRVTISCSGSSSNIGSNDV

SWYQQLPGTAPKLLIYKNYNRPSGVPDRFSGSK SGTSASLAITGLQAEDEADYYCSAWDQRQFDVV

FGGGTKLTVL VL DE DNA 363 GATATCGTGCTGACCCAGCCGCCGAGCGTGAG

GTTAACCGTCCTA Cadeia Leve 364 DIVLTQPPSVSGAPGQRVTISCSGSSSNIGSNDV

EGSTVEKTVAPTECS Cadeia Leve de 365 GATATCGTGCTGACCCAGCCGCCGAGCGTGAG

CTACAGAATGTTCA AM4

HCDR1 3 GFTFSTAAMS (Combinado) HCDR2 379 TIEYSSQETYYADSVKG (Combinado) HCDR3 5 ELSYLYSGYYFDY (Combinado) HCDR1 (Kabat) 6 TAAMS HCDR2 (Kabat) 379 TIEYSSQETYYADSVKG HCDR3 (Kabat) 5 ELSYLYSGYYFDY HCDR1 7 GFTFSTA (Chothia) HCDR2 380 EYSSQE (Chothia) HCDR3 5 ELSYLYSGYYFDY (Chothia) HCDR1 (IMGT) 9 GFTFSTAA HCDR2 (IMGT) 381 IEYSSQET HCDR3 (IMGT) 11 ARELSYLYSGYYFDY VH 382 QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTAA

MSWVRQAPGKGLEWVSTIEYSSQETYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREL

SYLYSGYYFDYWGQGTLVTVSS VH DE DNA 392 CAAGTGCAGCTGCTTGAATCTGGCGGCGGACT

GGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTT GCGCCGCCTCCGGCTTCACCTTCTCCACCGCC GCTATGTCCTGGGTCCGACAGGCTCCCGGCAA GGGCCTGGAATGGGTGTCCACCATTGAGTACT CCAGCCAGGAAACCTACTACGCCGACTCCGTG AAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACAACTC CAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCC TGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTG CGCCAGAGAGCTGTCCTACCTGTACTCCGGCT ACTACTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTG

GTCACCGTGTCCTCT Cadeia Pesada 384 QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTAA

MSWVRQAPGKGLEWVSTIEYSSQETYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREL SYLYSGYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGT QTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPC PAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALP APIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGK

Cadeia Pesada 393 CAAGTGCAGCTGCTTGAATCTGGCGGCGGACT de DNA GGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTT

GCGCCGCCTCCGGCTTCACCTTCTCCACCGCC GCTATGTCCTGGGTCCGACAGGCTCCCGGCAA GGGCCTGGAATGGGTGTCCACCATTGAGTACT CCAGCCAGGAAACCTACTACGCCGACTCCGTG AAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACAACTC CAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCC TGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTG CGCCAGAGAGCTGTCCTACCTGTACTCCGGCT ACTACTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTG GTCACCGTGTCCTCTGCTAGCACCAAGGGCCC CTCCGTGTTCCCTCTGGCCCCTTCCAGCAAGT CTACCTCCGGCGGCACAGCTGCTCTGGGCTGC CTGGTCAAGGACTACTTCCCTGAGCCTGTGAC AGTGTCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCTCTG GCGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGTCC TCCGGCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTGGTCAC AGTGCCTTCAAGCAGCCTGGGCACCCAGACCT ATATCTGCAACGTGAACCACAAGCCTTCCAACA CCAAGGTGGACAAGCGGGTGGAGCCTAAGTC CTGCGACAAGACCCACACCTGTCCTCCCTGCC CTGCTCCTGAAGCTGCTGGCGGCCCTTCTGTG TTCCTGTTCCCTCCAAAGCCCAAGGACACCCT GATGATCTCCCGGACCCCTGAAGTGACCTGCG TGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGATCCTGAA GTGAAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGA GGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTCGGGAG GAACAGTACAACTCCACCTACCGGGTGGTGTC CGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGA ACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAAGTCTCCAAC AAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAAAAGACAAT CTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCC CAGGTGTACACCCTGCCACCCAGCCGGGAGG AAATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGT CTGGTCAAGGGCTTCTACCCTTCCGATATCGC CGTGGAGTGGGAGTCTAACGGCCAGCCTGAG AACAACTACAAGACCACCCCTCCTGTGCTGGA CTCCGACGGCTCCTTCTTCCTGTACTCCAAACT GACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGC AACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCACGAGGC CCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGT

CCCTGTCTCCCGGCAAG LCDR1 16 SGSSSNIGSNDVS (Combinado) LCDR2 17 KNYNRPS (Combinado) LCDR3 18 SAWDQRQFDVV (Combinado) LCDR1 (Kabat) 16 SGSSSNIGSNDVS LCDR2 (Kabat) 17 KNYNRPS

LCDR3 (Kabat) 18 SAWDQRQFDVV LCDR1 19 SSSNIGSND (Chothia) LCDR2 20 KNY (Chothia) LCDR3 21 WDQRQFDV (Chothia) LCDR1 (IMGT) 22 SSNIGSND LCDR2 (IMGT) 20 KNY LCDR3 (IMGT) 18 SAWDQRQFDVV VL 386 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCSGSSSNIGSNDV

SWYQQLPGTAPKLLIYKNYNRPSGVPDRFSGSK SGTSASLAITGLQAEDEADYYCSAWDQRQFDVV

FGGGTKLTVL VL de DNA 387 CAGAGCGTGCTGACACAGCCTCCCTCCGTGTC

TGGCGCCCCTGGCCAGAGAGTGACCATCTCCT GCTCCGGCTCCTCCTCCAACATCGGCTCCAAC GACGTGTCCTGGTATCAGCAGCTGCCCGGCAC CGCCCCTAAGCTGCTGATCTACAAGAACTACAA CCGGCCCTCCGGCGTGCCCGACCGGTTCTCT GGCTCCAAGTCTGGCACCTCCGCCTCCCTGGC TATCACCGGCCTGCAGGCTGAGGACGAGGCC GACTACTACTGCTCCGCCTGGGACCAGCGGCA GTTCGACGTGGTGTTCGGCGGAGGCACCAAG

CTGACCGTGCTG Cadeia Leve 388 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCSGSSSNIGSNDV

EGSTVEKTVAPTECS Cadeia Leve de 389 CAGAGCGTGCTGACACAGCCTCCCTCCGTGTC

DNA TGGCGCCCCTGGCCAGAGAGTGACCATCTCCT GCTCCGGCTCCTCCTCCAACATCGGCTCCAAC GACGTGTCCTGGTATCAGCAGCTGCCCGGCAC CGCCCCTAAGCTGCTGATCTACAAGAACTACAA CCGGCCCTCCGGCGTGCCCGACCGGTTCTCT GGCTCCAAGTCTGGCACCTCCGCCTCCCTGGC TATCACCGGCCTGCAGGCTGAGGACGAGGCC GACTACTACTGCTCCGCCTGGGACCAGCGGCA GTTCGACGTGGTGTTCGGCGGAGGCACCAAG CTGACCGTGCTGGGCCAGCCTAAGGCTGCCC CCAGCGTGACCCTGTTCCCCCCCAGCAGCGAG GAGCTGCAGGCCAACAAGGCCACCCTGGTGT GCCTGATCAGCGACTTCTACCCAGGCGCCGTG ACCGTGGCCTGGAAGGCCGACAGCAGCCCCG TGAAGGCCGGCGTGGAGACCACCACCCCCAG CAAGCAGAGCAACAACAAGTACGCCGCCAGCA GCTACCTGAGCCTGACCCCCGAGCAGTGGAAG AGCCACAGGTCCTACAGCTGCCAGGTGACCCA CGAGGGCAGCACCGTGGAAAAGACCGTGGCC

CCAACCGAGTGCAGC Agentes de Ligação/Reversão

[097] Em um aspecto, a presente divulgação refere-se a um agente de ligação reversível que é um anticorpo anti-idiotipo, como um IgG de corpo inteiro, e fragmentos dos mesmos (por exemplo, um fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo alvo que se liga a humanos O Fator XI ("FXI") e/ou o Fator XIa ("FXIa") ("anticorpo anti-FXI/FXIa"), por exemplo, um anticorpo anti-FXI/FXIa descrito na Tabela 1, como o anticorpo NOV1401, ou variantes de afinidade amadurecida dos mesmos, como anticorpo AM1, AM2, AM3 ou AM4.

[098] Em um aspecto particular, é aqui fornecido um agente de ligação, bem como uma composição farmacêutica que compreende tal agente de ligação, que liga especificamente um anticorpo alvo que liga o Fator XI humano ("FXI") e/ou o Fator XIa ("FXIa") ("Anticorpo anti- FXI/FXIa", tal como anticorpo NOV1401) dentro do domínio catalítico, em que o agente de ligação inibe ou reverte uma atividade anticoagulante do anticorpo alvo, em que o agente de ligação se liga ao anticorpo alvo com uma constante de dissociação (KD) de 1 nM ou menos, e em que o agente de ligação é capaz de inibir a capacidade do anticorpo alvo de retardar o tempo de tromboplastina parcial ativada (aPTT) em pelo menos 35%. Em aspectos específicos adicionais, o agente de ligação é capaz de inibir a capacidade do anticorpo alvo de retardar o tempo de tromboplastina parcial ativada (aPTT) em pelo menos 40%. Em aspectos específicos adicionais, o agente de ligação é capaz de inibir a capacidade do anticorpo alvo de retardar o tempo de tromboplastina parcial ativada (aPTT) em pelo menos 50%. Em aspectos específicos adicionais, o agente de ligação é capaz de inibir a capacidade do anticorpo alvo de retardar o tempo de tromboplastina parcial ativada (aPTT) em pelo menos 60%. Em aspectos específicos adicionais, o agente de ligação é capaz de inibir a capacidade do anticorpo alvo de retardar o tempo de tromboplastina parcial ativada (aPTT) em pelo menos 70%. Métodos para determinar aPTT e atraso para aPTT foram descritos na técnica e também são aqui descritos, por exemplo, Seção de Exemplos.

[099] Em aspectos específicos, são aqui fornecidos agentes de ligação, bem como composições farmacêuticas compreendendo esses agentes de ligação, que inibem ou revertem uma atividade anticoagulante de um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401), em que os agentes de ligação são fragmentos de anticorpo humano de ligação a antígeno, tais como Fabs humanos. Em aspectos particulares, são aqui fornecidos agentes de ligação, bem como composições farmacêuticas compreendendo esses agentes de ligação, que inibem ou revertem uma atividade anticoagulante de um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401), em que os agentes de ligação são Fabs anti-idiotipo humanos. Em aspectos particulares, são aqui fornecidos agentes de ligação que inibem ou revertem uma atividade anticoagulante de um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401), em que os agentes de ligação são anticorpos IgG1, IgG2 ou IgG4 humanos ou variantes dos mesmos.

[100] Em outros aspectos específicos, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo), bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, que se liga especificamente a um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti- FXI/FXIa alvo, e em que o anticorpo anti-FXI/FXIa alvo compreende (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23; ou (ii) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25.

[101] Em aspectos particulares, os agentes de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa aqui fornecidos (por exemplo, IDT11 ou IDT12) são capazes de reduzir, inibir ou reverter (por exemplo, reverter parcialmente) um ou mais dos seguintes efeitos anticoagulantes mediados por um anticorpo anti-FXI/FXIa: (i) prolongamento do aPTT em ensaios aPTT e (ii) redução na quantidade de trombina em um ensaio de geração de trombina (TGA) no plasma humano. Protocolos e ensaios para medir essas atividades anticoagulantes foram descritos e ensaios exemplares são aqui descritos, por exemplo, na Seção de Exemplos.

[102] Em um aspecto específico, um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa aqui fornecido (por exemplo, IDT11 ou IDT12) é capaz de reverter os efeitos anticoagulantes de um anticorpo FXI/FXIa alvo, caracterizado por reduzir, inibir ou reverter o prolongamento do aPTT por um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, NOV1401) em pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60 %, pelo menos 70%, pelo menos 80% ou pelo menos 90%, conforme determinado por um ensaio de aPTT, descrito na técnica ou aqui.

[103] Em um aspecto específico, um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa aqui fornecido é capaz de reverter efeitos anticoagulantes de um anticorpo FXI/FXIa alvo, caracterizado por reduzir, inibir ou reverter a redução na quantidade de trombina no ensaio de geração de trombina (TGA) no plasma humano por um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, NOV1401) em pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80% ou pelo menos 90%.

[104] Em outros aspectos específicos, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo), bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, que se liga especificamente a um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti- FXI/FXIa alvo, em que o anticorpo anti-FXI/FXIa alvo compreende (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23; ou (ii) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25 e em que o agente de ligação é um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo 1) uma VH compreendendo as regiões determinantes de complementaridade HCDR1, HCDR2 e HCDR3 selecionadas a partir das estabelecidas na Tabela 2 e (2) uma VL compreendendo as regiões determinantes de complementaridade LCDR1, LCDR2 e LCDR3 selecionadas a partir das estabelecidas na Tabela 2. Em um aspecto particular, o agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo) compreende HCDR1, HCDR2 e HCDR3 combinadas selecionadas a partirt das estabelecidas na Tabela 2 e LCDR1, LCDR2 e LCDR3 combinadas selecionadas a partir das estabelecidas na Tabela 2. Em um aspecto, o agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo) compreende HCDR1, HCDR2 e HCDR3 de Kabat selecionadas a partir das estabelecidas na Tabela 2 e LCDR1, LCDR2 e LCDR3 de Kabat selecionadas a partir das estabelecidas na Tabela 2. Em um aspecto particular, o agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo) compreende HCDR1, HCDR2 e HCDR3 de Chothia selecionadas a partir das estabelecidas na Tabela 2 e LCDR1, LCDR2 e LCDR3 de Chothia selecionadas a partir das estabelecidas na Tabela 2. Em um aspecto específico, o agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo) compreende

HCDR1, HCDR2 e HCDR3 de IMGT selecionadas apartir das estabelecidas na Tabela 2 e LCDR1, LCDR2 e LCDR3 de IMGT selecionadas a partir das estabelecidas na Tabela 2. Tabela 2. Exemplos de agentes de ligação a anticorpos anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos de Fab) Descrição DNA sequência de aminoácido IDT1 SEQ ID NO: 27 HCDR1 GFTFSDYAMS (Combinado) SEQ ID NO: 28 HCDR2 VIDYSSSNTYYADSVKG (Combinado) SEQ ID NO: 29 HCDR3 EGYSYRSIRFDY (Combinado) SEQ ID NO: 30 HCDR1 DYAMS (Kabat) SEQ ID NO: 31 HCDR2 VIDYSSSNTYYADSVKG (Kabat) SEQ ID NO: 32 HCDR3 EGYSYRSIRFDY (Kabat) SEQ ID NO: 33 HCDR1 GFTFSDY (Chothia) SEQ ID NO: 34 HCDR2 DYSSSN (Chothia) SEQ ID NO: 35 HCDR3 EGYSYRSIRFDY (Chothia) SEQ ID NO: 36 HCDR1 GFTFSDYA (IMGT) SEQ ID NO: 37 HCDR2 IDYSSSNT (IMGT) SEQ ID NO: 38 HCDR3 AREGYSYRSIRFDY (IMGT) SEQ ID NO: 39 VH QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS

DYAMSWVRQAPGKGLEWVSVIDYSSSNTY YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAE DTAVYYCAREGYSYRSIRFDYWGQGTLVTV

SS SEQ ID NO: 40 DNA VH CAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCG

GACTGGTGCAGCCTGGCGGTAGTCTGAG ACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCT TCTCCGACTACGCCATGTCCTGGGTCCGA CAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGG TGTCCGTGATCGACTACTCCTCCTCCAAC ACCTACTACGCCGACTCCGTGAAGGGCC GGTTCACCATCTCCCGGGACAACTCCAAG AACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCT GCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTAC TGCGCCAGAGAGGGCTACTCCTACCGGT CCATCAGATTCGACTACTGGGGCCAGGG

CACCCTGGTCACCGTGTCCTCT SEQ ID NO: 41 Cadeia QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS Pesada DYAMSWVRQAPGKGLEWVSVIDYSSSNTY

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAE DTAVYYCAREGYSYRSIRFDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKP

SNTKVDKRVEPKSC SEQ ID NO: 42 Cadeia CAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCG Pesada de GACTGGTGCAGCCTGGCGGTAGTCTGAG

DNA ACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCT TCTCCGACTACGCCATGTCCTGGGTCCGA CAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGG TGTCCGTGATCGACTACTCCTCCTCCAAC ACCTACTACGCCGACTCCGTGAAGGGCC GGTTCACCATCTCCCGGGACAACTCCAAG AACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCT GCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTAC TGCGCCAGAGAGGGCTACTCCTACCGGT CCATCAGATTCGACTACTGGGGCCAGGG CACCCTGGTCACCGTGTCCTCTGCTAGCA CCAAGGGCCCCTCCGTGTTCCCTCTGGC CCCTTCCAGCAAGTCTACCTCTGGCGGCA CCGCTGCTCTGGGCTGCCTGGTGAAGGA CTACTTCCCTGAGCCTGTGACAGTGTCCT GGAACTCTGGCGCCCTGACCTCCGGCGT GCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGTCCT CCGGCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTGGT GACAGTGCCTTCCTCCAGCCTGGGCACC CAGACCTATATCTGCAACGTGAACCACAA GCCTTCCAACACCAAGGTGGACAAGCGG

GTGGAGCCTAAGTCATGC SEQ ID NO: 43 LCDR1 RASQSISSNLN (Combinado) SEQ ID NO: 44 LCDR2 AASNLQS (Combinado) SEQ ID NO: 45 LCDR3 LQFDHTPFT (Combinado) SEQ ID NO: 46 LCDR1 RASQSISSNLN (Kabat) SEQ ID NO: 47 LCDR2 AASNLQS (Kabat) SEQ ID NO: 48 LCDR3 LQFDHTPFT (Kabat)

SEQ ID NO: 49 LCDR1 SQSISSN (Chothia) SEQ ID NO: 50 LCDR2 AAS (Chothia) SEQ ID NO: 51 LCDR3 FDHTPF (Chothia) SEQ ID NO: 52 LCDR1 QSISSN (IMGT) SEQ ID NO: 53 LCDR2 AAS (IMGT) SEQ ID NO: 54 LCDR3 LQFDHTPFT (IMGT) SEQ ID NO: 55 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISS

NLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQFD

HTPFTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 56 VL de DNA GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA

GCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACAGAGT GACCATCACCTGTCGGGCCTCCCAGTCC ATCTCCTCCAACCTGAACTGGTATCAGCA GAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTG ATCTACGCCGCCAGCAACCTGCAGTCCG GCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTCTGG CTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCT CCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCAC CTACTACTGCCTGCAGTTCGACCACACCC CTTTCACCTTCGGCCAGGGCACCAAAGTG

GAAATCAAG SEQ ID NO: 57 Cadeia DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISS Leve NLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLQSGVPSR

FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQFD HTPFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDN ALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLS KADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG

EC SEQ ID NO: 58 Cadeia GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA Leve de GCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACAGAGT

DNA GACCATCACCTGTCGGGCCTCCCAGTCC ATCTCCTCCAACCTGAACTGGTATCAGCA GAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTG ATCTACGCCGCCAGCAACCTGCAGTCCG GCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTCTGG CTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCT CCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCAC CTACTACTGCCTGCAGTTCGACCACACCC CTTTCACCTTCGGCCAGGGCACCAAAGTG GAAATCAAGCGTACGGTGGCCGCTCCCA GCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGA GCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTG GTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCG GGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGAC AACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGG AGAGCGTCACCGAGCAGGACAGCAAGGA CTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGA CCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCA TAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCAC CAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGA

GCTTCAACAGGGGCGAGTGC IDT2 SEQ ID NO: 59 HCDR1 GFTFSSAAVH (Combinado) SEQ ID NO: 60 HCDR2 RIKSKADGGTTDYAAPVKG (Combinado) SEQ ID NO: 61 HCDR3 DSPSISSYSIPYFSGMDV (Combinado) SEQ ID NO: 62 HCDR1 SAAVH (Kabat) SEQ ID NO: 63 HCDR2 RIKSKADGGTTDYAAPVKG (Kabat) SEQ ID NO: 64 HCDR3 DSPSISSYSIPYFSGMDV (Kabat) SEQ ID NO: 65 HCDR1 GFTFSSA (Chothia) SEQ ID NO: 66 HCDR2 KSKADGGT (Chothia) SEQ ID NO: 67 HCDR3 DSPSISSYSIPYFSGMDV (Chothia) SEQ ID NO: 68 HCDR1 GFTFSSAA (IMGT) SEQ ID NO: 69 HCDR2 IKSKADGGTT (IMGT) SEQ ID NO: 70 HCDR3 ARDSPSISSYSIPYFSGMDV (IMGT) SEQ ID NO: 71 VH QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS

SAAVHWVRQAPGKGLEWVGRIKSKADGGT TDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLK TEDTAVYYCARDSPSISSYSIPYFSGMDVW

GQGTLVTVSS SEQ ID NO: 72 VH de DNA CAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCG

GACTGGTCAAGCCTGGCGGTAGCCTGAG ACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCT TCTCCTCTGCCGCTGTGCACTGGGTCCGA CAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGG TCGGACGGATCAAGTCCAAGGCCGACGG CGGCACCACCGACTACGCTGCCCCTGTG AAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACG ACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATG AACTCCCTGAAAACCGAGGACACCGCCG TGTACTACTGCGCCAGAGACTCCCCATCT ATCTCCAGCTACTCCATCCCCTACTTCTC CGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACC

CTGGTCACCGTGTCCTCT SEQ ID NO: 73 Cadeia QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS Pesada SAAVHWVRQAPGKGLEWVGRIKSKADGGT

TDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLK TEDTAVYYCARDSPSISSYSIPYFSGMDVW GQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQT

YICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC SEQ ID NO: 74 Cadeia CAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCG Pesada de GACTGGTCAAGCCTGGCGGTAGCCTGAG

DNA ACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCT TCTCCTCTGCCGCTGTGCACTGGGTCCGA CAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGG TCGGACGGATCAAGTCCAAGGCCGACGG CGGCACCACCGACTACGCTGCCCCTGTG AAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACG ACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATG AACTCCCTGAAAACCGAGGACACCGCCG TGTACTACTGCGCCAGAGACTCCCCATCT ATCTCCAGCTACTCCATCCCCTACTTCTC CGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACC CTGGTCACCGTGTCCTCTGCTAGCACCAA GGGCCCCTCCGTGTTCCCTCTGGCCCCT TCCAGCAAGTCTACCTCTGGCGGCACCG CTGCTCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTA CTTCCCTGAGCCTGTGACAGTGTCCTGGA ACTCTGGCGCCCTGACCTCCGGCGTGCA CACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGTCCTCCG GCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTGGTGACA GTGCCTTCCTCCAGCCTGGGCACCCAGA CCTATATCTGCAACGTGAACCACAAGCCT TCCAACACCAAGGTGGACAAGCGGGTGG

AGCCTAAGTCATGC SEQ ID NO: 75 LCDR1 RASQGIRAWLN (Combinado) SEQ ID NO: 76 LCDR2 AASSLQS (Combinado) SEQ ID NO: 77 LCDR3 HQYITHPPT (Combinado) SEQ ID NO: 78 LCDR1 RASQGIRAWLN (Kabat) SEQ ID NO: 79 LCDR2 AASSLQS (Kabat) SEQ ID NO: 80 LCDR3 HQYITHPPT (Kabat)

SEQ ID NO: 81 LCDR1 SQGIRAW (Chothia) SEQ ID NO: 82 LCDR2 AAS (Chothia) SEQ ID NO: 83 LCDR3 YITHPP (Chothia) SEQ ID NO: 84 LCDR1 QGIRAW (IMGT) SEQ ID NO: 85 LCDR2 AAS (IMGT) SEQ ID NO: 86 LCDR3 HQYITHPPT (IMGT) SEQ ID NO: 87 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRA

WLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYI

THPPTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 88 VL de DNA GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA

GCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACAGAGT GACCATCACCTGTCGGGCCTCTCAGGGC ATCCGGGCCTGGCTGAACTGGTATCAGC AGAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCT GATCTACGCCGCCAGCTCCCTGCAGTCC GGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTCTG GCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATC TCCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCA CCTACTACTGCCACCAGTACATCACCCAC CCTCCCACCTTCGGCCAGGGCACCAAAG

TGGAAATCAAG SEQ ID NO: 89 Cadeia DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRA Leve WLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR

FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYI THPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDN ALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLS KADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG

EC SEQ ID NO: 90 Cadeia GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA Leve de GCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACAGAGT

DNA GACCATCACCTGTCGGGCCTCTCAGGGC ATCCGGGCCTGGCTGAACTGGTATCAGC AGAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCT GATCTACGCCGCCAGCTCCCTGCAGTCC GGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTCTG GCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATC TCCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCA CCTACTACTGCCACCAGTACATCACCCAC CCTCCCACCTTCGGCCAGGGCACCAAAG TGGAAATCAAGCGTACGGTGGCCGCTCC CAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACG AGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGT GGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCC GGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGA CAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAG GAGAGCGTCACCGAGCAGGACAGCAAGG ACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTG ACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGC ATAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCA CCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAG

AGCTTCAACAGGGGCGAGTGC IDT3 SEQ ID NO: 91 HCDR1 GFTFQSAAVH (Combinado) SEQ ID NO: 92 HCDR2 RIKSKADGGTTDYAAPVKG (Combinado) SEQ ID NO: 93 HCDR3 DSPSISSYSIPYFSGMDV (Combinado) SEQ ID NO: 94 HCDR1 SAAVH (Kabat) SEQ ID NO: 95 HCDR2 RIKSKADGGTTDYAAPVKG (Kabat) SEQ ID NO: 96 HCDR3 DSPSISSYSIPYFSGMDV (Kabat) SEQ ID NO: 97 HCDR1 GFTFQSA (Chothia) SEQ ID NO: 98 HCDR2 KSKADGGT (Chothia) SEQ ID NO: 99 HCDR3 DSPSISSYSIPYFSGMDV (Chothia) SEQ ID NO: 100 HCDR1 GFTFQSAA (IMGT) SEQ ID NO: 101 HCDR2 IKSKADGGTT (IMGT) SEQ ID NO: 102 HCDR3 ARDSPSISSYSIPYFSGMDV (IMGT) SEQ ID NO: 103 VH QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTF

QSAAVHWVRQAPGKGLEWVGRIKSKADGG TTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSL KTEDTAVYYCARDSPSISSYSIPYFSGMDV

WGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 104 VH de DNA CAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCG

GACTGGTCAAGCCTGGCGGTAGCCTGAG ACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCT TCCAGTCTGCCGCTGTGCACTGGGTCCG ACAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGG GTCGGACGGATCAAGTCCAAGGCCGACG GCGGCACCACCGACTACGCTGCCCCTGT GAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGAC GACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGAT GAACTCCCTGAAAACCGAGGACACCGCC GTGTACTACTGCGCCAGAGACTCCCCATC TATCTCCAGCTACTCCATCCCCTACTTCTC CGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACC

CTGGTCACCGTGTCCTCT SEQ ID NO: 105 Cadeia QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTF Pesada QSAAVHWVRQAPGKGLEWVGRIKSKADGG

TTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSL KTEDTAVYYCARDSPSISSYSIPYFSGMDV WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGT

QTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC SEQ ID NO: 106 Cadeia CAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCG Pesada de GACTGGTCAAGCCTGGCGGTAGCCTGAG

DNA ACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCT TCCAGTCTGCCGCTGTGCACTGGGTCCG ACAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGG GTCGGACGGATCAAGTCCAAGGCCGACG GCGGCACCACCGACTACGCTGCCCCTGT GAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGAC GACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGAT GAACTCCCTGAAAACCGAGGACACCGCC GTGTACTACTGCGCCAGAGACTCCCCATC TATCTCCAGCTACTCCATCCCCTACTTCTC CGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACC CTGGTCACCGTGTCCTCTGCTAGCACCAA GGGCCCCTCCGTGTTCCCTCTGGCCCCT TCCAGCAAGTCTACCTCTGGCGGCACCG CTGCTCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTA CTTCCCTGAGCCTGTGACAGTGTCCTGGA ACTCTGGCGCCCTGACCTCCGGCGTGCA CACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGTCCTCCG GCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTGGTGACA GTGCCTTCCTCCAGCCTGGGCACCCAGA CCTATATCTGCAACGTGAACCACAAGCCT TCCAACACCAAGGTGGACAAGCGGGTGG

AGCCTAAGTCATGC SEQ ID NO: 107 LCDR1 RASQGIRAWLN (Combinado) SEQ ID NO: 108 LCDR2 AASSLQS (Combinado) SEQ ID NO: 109 LCDR3 HQYITHPPT (Combinado) SEQ ID NO: 110 LCDR1 RASQGIRAWLN (Kabat) SEQ ID NO: 111 LCDR2 AASSLQS (Kabat) SEQ ID NO: 112 LCDR3 HQYITHPPT (Kabat)

SEQ ID NO: 113 LCDR1 SQGIRAW (Chothia) SEQ ID NO: 114 LCDR2 AAS (Chothia) SEQ ID NO: 115 LCDR3 YITHPP (Chothia) SEQ ID NO: 116 LCDR1 QGIRAW (IMGT) SEQ ID NO: 117 LCDR2 AAS (IMGT) SEQ ID NO: 118 LCDR3 HQYITHPPT (IMGT) SEQ ID NO: 119 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRA

WLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYI

THPPTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 120 VL de DNA GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA

TGGAAATCAAG SEQ ID NO: 121 Cadeia DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRA Leve WLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR

EC SEQ ID NO: 122 Cadeia GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA Leve de GCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACAGAGT

AGCTTCAACAGGGGCGAGTGC IDT4 SEQ ID NO: 123 HCDR1 GFTFSSAAVH (Combinado) SEQ ID NO: 124 HCDR2 RIKSKASGGTTDYAAPVKG (Combinado) SEQ ID NO: 125 HCDR3 DSPSISSYSIPYFSGMDV (Combinado) SEQ ID NO: 126 HCDR1 SAAVH (Kabat) SEQ ID NO: 127 HCDR2 RIKSKASGGTTDYAAPVKG (Kabat) SEQ ID NO: 128 HCDR3 DSPSISSYSIPYFSGMDV (Kabat) SEQ ID NO: 129 HCDR1 GFTFSSA (Chothia) SEQ ID NO: 130 HCDR2 KSKASGGT (Chothia) SEQ ID NO: 131 HCDR3 DSPSISSYSIPYFSGMDV (Chothia) SEQ ID NO: 132 HCDR1 GFTFSSAA (IMGT) SEQ ID NO: 133 HCDR2 IKSKASGGTT (IMGT) SEQ ID NO: 134 HCDR3 ARDSPSISSYSIPYFSGMDV (IMGT) SEQ ID NO: 135 VH QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS

SAAVHWVRQAPGKGLEWVGRIKSKASGGT TDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLK TEDTAVYYCARDSPSISSYSIPYFSGMDVW

GQGTLVTVSS SEQ ID NO: 136 VH de DNA CAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCG

GACTGGTCAAGCCTGGCGGTAGCCTGAG ACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCT TCTCCTCTGCCGCTGTGCACTGGGTCCGA CAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGG TCGGACGGATCAAGTCCAAGGCCTCCGG CGGCACCACCGACTACGCTGCCCCTGTG AAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACG ACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATG AACTCCCTGAAAACCGAGGACACCGCCG TGTACTACTGCGCCAGAGACTCCCCATCT ATCTCCAGCTACTCCATCCCCTACTTCTC CGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACC

CTGGTCACCGTGTCCTCT SEQ ID NO: 137 Cadeia QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS Pesada SAAVHWVRQAPGKGLEWVGRIKSKASGGT

YICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC SEQ ID NO: 138 Cadeia CAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCG Pesada de GACTGGTCAAGCCTGGCGGTAGCCTGAG

DNA ACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCT TCTCCTCTGCCGCTGTGCACTGGGTCCGA CAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGG TCGGACGGATCAAGTCCAAGGCCTCCGG CGGCACCACCGACTACGCTGCCCCTGTG AAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACG ACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATG AACTCCCTGAAAACCGAGGACACCGCCG TGTACTACTGCGCCAGAGACTCCCCATCT ATCTCCAGCTACTCCATCCCCTACTTCTC CGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACC CTGGTCACCGTGTCCTCTGCTAGCACCAA GGGCCCCTCCGTGTTCCCTCTGGCCCCT TCCAGCAAGTCTACCTCTGGCGGCACCG CTGCTCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTA CTTCCCTGAGCCTGTGACAGTGTCCTGGA ACTCTGGCGCCCTGACCTCCGGCGTGCA CACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGTCCTCCG GCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTGGTGACA GTGCCTTCCTCCAGCCTGGGCACCCAGA CCTATATCTGCAACGTGAACCACAAGCCT TCCAACACCAAGGTGGACAAGCGGGTGG

AGCCTAAGTCATGC SEQ ID NO: 139 LCDR1 RASQGIRAWLN (Combinado) SEQ ID NO: 140 LCDR2 AASSLQS (Combinado) SEQ ID NO: 141 LCDR3 HQYITHPPT (Combinado) SEQ ID NO: 142 LCDR1 RASQGIRAWLN (Kabat) SEQ ID NO: 143 LCDR2 AASSLQS (Kabat) SEQ ID NO: 144 LCDR3 HQYITHPPT (Kabat)

SEQ ID NO: 145 LCDR1 SQGIRAW (Chothia) SEQ ID NO: 146 LCDR2 AAS (Chothia) SEQ ID NO: 147 LCDR3 YITHPP (Chothia) SEQ ID NO: 148 LCDR1 QGIRAW (IMGT) SEQ ID NO: 149 LCDR2 AAS (IMGT) SEQ ID NO: 150 LCDR3 HQYITHPPT (IMGT) SEQ ID NO: 151 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRA

WLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYI

THPPTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 152 VL de DNA GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA

TGGAAATCAAG SEQ ID NO: 153 Cadeia DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRA Leve WLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR

EC SEQ ID NO: 154 Cadeia GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA Leve de GCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACAGAGT

AGCTTCAACAGGGGCGAGTGC IDT5 SEQ ID NO: 155 HCDR1 GFTFSSAAVH (Combinado) SEQ ID NO: 156 HCDR2 RIKSKADAGTTDYAAPVKG (Combinado) SEQ ID NO: 157 HCDR3 DSPSISSYSIPYFSGMDV (Combinado) SEQ ID NO: 158 HCDR1 SAAVH (Kabat) SEQ ID NO: 159 HCDR2 RIKSKADAGTTDYAAPVKG (Kabat) SEQ ID NO: 160 HCDR3 DSPSISSYSIPYFSGMDV (Kabat) SEQ ID NO: 161 HCDR1 GFTFSSA (Chothia) SEQ ID NO: 162 HCDR2 KSKADAGT (Chothia) SEQ ID NO: 163 HCDR3 DSPSISSYSIPYFSGMDV (Chothia) SEQ ID NO: 164 HCDR1 GFTFSSAA (IMGT) SEQ ID NO: 165 HCDR2 IKSKADAGTT (IMGT) SEQ ID NO: 166 HCDR3 ARDSPSISSYSIPYFSGMDV (IMGT) SEQ ID NO: 167 VH QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS

SAAVHWVRQAPGKGLEWVGRIKSKADAGT TDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLK TEDTAVYYCARDSPSISSYSIPYFSGMDVW

GQGTLVTVSS SEQ ID NO: 168 VH de DNA CAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCG

GACTGGTCAAGCCTGGCGGTAGCCTGAG ACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCT TCTCCTCTGCCGCTGTGCACTGGGTCCGA CAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGG TCGGACGGATCAAGTCCAAGGCCGACGC CGGCACCACCGACTACGCTGCCCCTGTG AAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACG ACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATG AACTCCCTGAAAACCGAGGACACCGCCG TGTACTACTGCGCCAGAGACTCCCCATCT ATCTCCAGCTACTCCATCCCCTACTTCTC CGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACC

CTGGTCACCGTGTCCTCT SEQ ID NO: 169 Cadeia QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS Pesada SAAVHWVRQAPGKGLEWVGRIKSKADAGT

YICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC SEQ ID NO: 170 Cadeia CAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCG Pesada de GACTGGTCAAGCCTGGCGGTAGCCTGAG

DNA ACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCT TCTCCTCTGCCGCTGTGCACTGGGTCCGA CAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGG TCGGACGGATCAAGTCCAAGGCCGACGC CGGCACCACCGACTACGCTGCCCCTGTG AAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACG ACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATG AACTCCCTGAAAACCGAGGACACCGCCG TGTACTACTGCGCCAGAGACTCCCCATCT ATCTCCAGCTACTCCATCCCCTACTTCTC CGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACC CTGGTCACCGTGTCCTCTGCTAGCACCAA GGGCCCCTCCGTGTTCCCTCTGGCCCCT TCCAGCAAGTCTACCTCTGGCGGCACCG CTGCTCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTA CTTCCCTGAGCCTGTGACAGTGTCCTGGA ACTCTGGCGCCCTGACCTCCGGCGTGCA CACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGTCCTCCG GCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTGGTGACA GTGCCTTCCTCCAGCCTGGGCACCCAGA CCTATATCTGCAACGTGAACCACAAGCCT TCCAACACCAAGGTGGACAAGCGGGTGG

AGCCTAAGTCATGC SEQ ID NO: 171 LCDR1 RASQGIRAWLN (Combinado) SEQ ID NO: 172 LCDR2 AASSLQS (Combinado) SEQ ID NO: 173 LCDR3 HQYITHPPT (Combinado) SEQ ID NO: 174 LCDR1 RASQGIRAWLN (Kabat) SEQ ID NO: 175 LCDR2 AASSLQS (Kabat) SEQ ID NO: 176 LCDR3 HQYITHPPT (Kabat)

SEQ ID NO: 177 LCDR1 SQGIRAW (Chothia) SEQ ID NO: 178 LCDR2 AAS (Chothia) SEQ ID NO: 179 LCDR3 YITHPP (Chothia) SEQ ID NO: 180 LCDR1 QGIRAW (IMGT) SEQ ID NO: 181 LCDR2 AAS (IMGT) SEQ ID NO: 182 LCDR3 HQYITHPPT (IMGT) SEQ ID NO: 183 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRA

WLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYI

THPPTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 184 VL de DNA GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA

TGGAAATCAAG SEQ ID NO: 185 Cadeia DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRA Leve WLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR

EC SEQ ID NO: 186 Cadeia GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA Leve de GCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACAGAGT

AGCTTCAACAGGGGCGAGTGC IDT6 SEQ ID NO: 187 HCDR1 GYSFTNYWIG (Combinado) SEQ ID NO: 188 HCDR2 IIFPGVSYTKYSPSFQG (Combinado) SEQ ID NO: 189 HCDR3 GSDQTLRGSRAMDY (Combinado) SEQ ID NO: 190 HCDR1 NYWIG (Kabat) SEQ ID NO: 191 HCDR2 IIFPGVSYTKYSPSFQG (Kabat) SEQ ID NO: 192 HCDR3 GSDQTLRGSRAMDY (Kabat) SEQ ID NO: 193 HCDR1 GYSFTNY (Chothia) SEQ ID NO: 194 HCDR2 FPGVSY (Chothia) SEQ ID NO: 195 HCDR3 GSDQTLRGSRAMDY (Chothia) SEQ ID NO: 196 HCDR1 GYSFTNYW (IMGT) SEQ ID NO: 197 HCDR2 IFPGVSYT (IMGT) SEQ ID NO: 198 HCDR3 ARGSDQTLRGSRAMDY (IMGT) SEQ ID NO: 199 VH QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFT

NYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIFPGVSYTK YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASD TAMYYCARGSDQTLRGSRAMDYWGQGTL

VTVSS SEQ ID NO: 200 VH de DNA CAAGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCTG

AAGTGAAGAAGCCCGGCGAGTCCCTGAA GATCTCCTGCAAGGGCTCCGGCTACTCCT TCACCAACTACTGGATCGGCTGGGTCCGA CAGATGCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGA TGGGCATCATCTTCCCCGGCGTGTCCTAC ACCAAGTACAGCCCCAGCTTCCAGGGCC AAGTCACAATCTCCGCCGACAAGTCCATC TCCACCGCCTACCTGCAGTGGTCCTCCCT GAAGGCCTCCGACACCGCCATGTACTACT GCGCCAGAGGCTCCGACCAGACCCTGCG GGGCTCCAGAGCCATGGATTACTGGGGC

CAGGGCACCCTGGTCACCGTGTCCTCT SEQ ID NO: 201 Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFT Pesada NYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIFPGVSYTK

YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASD TAMYYCARGSDQTLRGSRAMDYWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAL GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN

HKPSNTKVDKRVEPKSC SEQ ID NO: 202 Cadeia CAAGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCTG Pesada de AAGTGAAGAAGCCCGGCGAGTCCCTGAA

DNA GATCTCCTGCAAGGGCTCCGGCTACTCCT TCACCAACTACTGGATCGGCTGGGTCCGA CAGATGCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGA TGGGCATCATCTTCCCCGGCGTGTCCTAC ACCAAGTACAGCCCCAGCTTCCAGGGCC AAGTCACAATCTCCGCCGACAAGTCCATC TCCACCGCCTACCTGCAGTGGTCCTCCCT GAAGGCCTCCGACACCGCCATGTACTACT GCGCCAGAGGCTCCGACCAGACCCTGCG GGGCTCCAGAGCCATGGATTACTGGGGC CAGGGCACCCTGGTCACCGTGTCCTCTG CTAGCACCAAGGGCCCCTCCGTGTTCCCT CTGGCCCCTTCCAGCAAGTCTACCTCTGG CGGCACCGCTGCTCTGGGCTGCCTGGTG AAGGACTACTTCCCTGAGCCTGTGACAGT GTCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCTCC GGCGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGC AGTCCTCCGGCCTGTACTCCCTGTCCTCC GTGGTGACAGTGCCTTCCTCCAGCCTGG GCACCCAGACCTATATCTGCAACGTGAAC CACAAGCCTTCCAACACCAAGGTGGACAA

GCGGGTGGAGCCTAAGTCATGC SEQ ID NO: 203 LCDR1 TGTSSDVGISNYVS (Combinado) SEQ ID NO: 204 LCDR2 EVSNRPS (Combinado) SEQ ID NO: 205 LCDR3 QSYTSLNYV (Combinado) SEQ ID NO: 206 LCDR1 TGTSSDVGISNYVS (Kabat) SEQ ID NO: 207 LCDR2 EVSNRPS (Kabat) SEQ ID NO: 208 LCDR3 QSYTSLNYV (Kabat) SEQ ID NO: 209 LCDR1 TSSDVGISNY (Chothia)

SEQ ID NO: 210 LCDR2 EVS (Chothia) SEQ ID NO: 211 LCDR3 YTSLNY (Chothia) SEQ ID NO: 212 LCDR1 SSDVGISNY (IMGT) SEQ ID NO: 213 LCDR2 EVS (IMGT) SEQ ID NO: 214 LCDR3 QSYTSLNYV (IMGT) SEQ ID NO: 215 VL QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGI

SNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSNRPSGV SNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC

QSYTSLNYVFGGGTKLTVL SEQ ID NO: 216 VL de DNA CAGTCCGCCCTGACCCAGCCTGCCTCCG

TGTCTGGCTCCCCTGGCCAGTCCATCACC ATCAGCTGCACCGGCACCTCCAGCGACG TGGGCATCTCCAACTACGTGTCCTGGTAT CAGCAGCACCCCGGCAAGGCCCCTAAGC TGATGATCTACGAAGTGTCCAACCGGCCC TCCGGCGTGTCCAACAGATTCTCCGGCTC CAAGTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACC ATCAGCGGCCTGCAGGCTGAGGACGAGG CCGACTACTACTGCCAGTCCTACACCTCC CTGAACTACGTGTTCGGCGGAGGCACCA

AGCTGACCGTGCTG SEQ ID NO: 217 Cadeia QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGI Leve SNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSNRPSGV

SNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC QSYTSLNYVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTL FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVA

PTECS SEQ ID NO: 218 Cadeia CAGTCCGCCCTGACCCAGCCTGCCTCCG Leve de TGTCTGGCTCCCCTGGCCAGTCCATCACC

DNA ATCAGCTGCACCGGCACCTCCAGCGACG TGGGCATCTCCAACTACGTGTCCTGGTAT CAGCAGCACCCCGGCAAGGCCCCTAAGC TGATGATCTACGAAGTGTCCAACCGGCCC TCCGGCGTGTCCAACAGATTCTCCGGCTC CAAGTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACC ATCAGCGGCCTGCAGGCTGAGGACGAGG CCGACTACTACTGCCAGTCCTACACCTCC CTGAACTACGTGTTCGGCGGAGGCACCA AGCTGACCGTGCTGGGCCAGCCTAAGGC TGCCCCCAGCGTGACCCTGTTCCCCCCC AGCAGCGAGGAGCTGCAGGCCAACAAGG CCACCCTGGTGTGCCTGATCAGCGACTTC TACCCAGGCGCCGTGACCGTGGCCTGGA AGGCCGACAGCAGCCCCGTGAAGGCCGG CGTGGAGACCACCACCCCCAGCAAGCAG AGCAACAACAAGTACGCCGCCAGCAGCT ACCTGAGCCTGACCCCCGAGCAGTGGAA GAGCCACAGGTCCTACAGCTGCCAGGTG ACCCACGAGGGCAGCACCGTGGAAAAGA

CCGTGGCCCCAACCGAGTGCAGC IDT7 SEQ ID NO: 219 HCDR1 GFTFSSNAMH (Combinado) SEQ ID NO: 220 HCDR2 RIKSKTDGGTTDYAAPVKG (Combinado) SEQ ID NO: 221 HCDR3 DHYYYPFAY (Combinado) SEQ ID NO: 222 HCDR1 SNAMH (Kabat) SEQ ID NO: 223 HCDR2 RIKSKTDGGTTDYAAPVKG (Kabat) SEQ ID NO: 224 HCDR3 DHYYYPFAY (Kabat) SEQ ID NO: 225 HCDR1 GFTFSSN (Chothia) SEQ ID NO: 226 HCDR2 KSKTDGGT (Chothia) SEQ ID NO: 227 HCDR3 DHYYYPFAY (Chothia) SEQ ID NO: 228 HCDR1 GFTFSSNA (IMGT) SEQ ID NO: 229 HCDR2 IKSKTDGGTT (IMGT) SEQ ID NO: 230 HCDR3 ARDHYYYPFAY (IMGT) SEQ ID NO: 231 VH QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS

SNAMHWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGT TDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLK TEDTAVYYCARDHYYYPFAYWGQGTLVTV

SS SEQ ID NO: 232 VH de DNA CAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCG

GACTGGTCAAGCCTGGCGGTAGCCTGAG ACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCT TCTCCTCCAACGCCATGCACTGGGTCCGA CAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGG TCGGACGGATCAAGTCCAAGACCGACGG CGGCACCACCGACTACGCTGCCCCTGTG AAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACG ACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATG AACTCCCTGAAAACCGAGGACACCGCCG TGTACTACTGCGCCAGGGACCACTACTAC TACCCCTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCA

CCCTGGTCACCGTGTCCTCT SEQ ID NO: 233 Cadeia QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS Pesada SNAMHWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGT

TDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLK TEDTAVYYCARDHYYYPFAYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKP

SNTKVDKRVEPKSC SEQ ID NO: 234 Cadeia CAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCG Pesada de GACTGGTCAAGCCTGGCGGTAGCCTGAG

DNA ACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCT TCTCCTCCAACGCCATGCACTGGGTCCGA CAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGG TCGGACGGATCAAGTCCAAGACCGACGG CGGCACCACCGACTACGCTGCCCCTGTG AAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACG ACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATG AACTCCCTGAAAACCGAGGACACCGCCG TGTACTACTGCGCCAGGGACCACTACTAC TACCCCTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCA CCCTGGTCACCGTGTCCTCTGCTAGCACC AAGGGCCCCTCCGTGTTCCCTCTGGCCC CTTCCAGCAAGTCTACCTCTGGCGGCACC GCTGCTCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACT ACTTCCCTGAGCCTGTGACAGTGTCCTGG AACTCTGGCGCCCTGACCTCCGGCGTGC ACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGTCCTCC GGCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTGGTGAC AGTGCCTTCCTCCAGCCTGGGCACCCAG ACCTATATCTGCAACGTGAACCACAAGCC TTCCAACACCAAGGTGGACAAGCGGGTG

GAGCCTAAGTCATGC SEQ ID NO: 235 LCDR1 RASQSIRYNLA (Combinado) SEQ ID NO: 236 LCDR2 AASSLQS (Combinado) SEQ ID NO: 237 LCDR3 HQYIAKPIT (Combinado) SEQ ID NO: 238 LCDR1 RASQSIRYNLA (Kabat) SEQ ID NO: 239 LCDR2 AASSLQS (Kabat) SEQ ID NO: 240 LCDR3 HQYIAKPIT (Kabat) SEQ ID NO: 241 LCDR1 SQSIRYN (Chothia) SEQ ID NO: 242 LCDR2 AAS (Chothia)

SEQ ID NO: 243 LCDR3 YIAKPI (Chothia) SEQ ID NO: 244 LCDR1 QSIRYN (IMGT) SEQ ID NO: 245 LCDR2 AAS (IMGT) SEQ ID NO: 246 LCDR3 HQYIAKPIT (IMGT) SEQ ID NO: 247 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIRY

NLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYI

AKPITFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 248 VL de DNA GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA

GCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACAGAGT GACCATCACCTGTCGGGCCTCCCAGTCC ATCCGGTACAACCTGGCCTGGTATCAGCA GAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTG ATCTACGCCGCCAGCTCCCTGCAGTCCG GCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTCTGG CTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCT CCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCAC CTACTACTGCCACCAGTATATCGCCAAGC CCATCACCTTCGGCCAGGGCACCAAAGT

GGAAATCAAG SEQ ID NO: 249 Cadeia DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIRY Leve NLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR

FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYI AKPITFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ LKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKA DYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE

C SEQ ID NO: 250 Cadeia GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA Leve de GCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACAGAGT

DNA GACCATCACCTGTCGGGCCTCCCAGTCC ATCCGGTACAACCTGGCCTGGTATCAGCA GAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTG ATCTACGCCGCCAGCTCCCTGCAGTCCG GCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTCTGG CTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCT CCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCAC CTACTACTGCCACCAGTATATCGCCAAGC CCATCACCTTCGGCCAGGGCACCAAAGT GGAAATCAAGCGTACGGTGGCCGCTCCC AGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGA GCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTG GTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCG GGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGAC AACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGG AGAGCGTCACCGAGCAGGACAGCAAGGA CTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGA CCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCA TAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCAC CAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGA

GCTTCAACAGGGGCGAGTGC IDT8 SEQ ID NO: 251 HCDR1 GFTFSSNAMH (Combinado) SEQ ID NO: 252 HCDR2 RIKSKTSGGTTDYAAPVKG (Combinado) SEQ ID NO: 253 HCDR3 DHYYYPFAY (Combinado) SEQ ID NO: 254 HCDR1 SNAMH (Kabat) SEQ ID NO: 255 HCDR2 RIKSKTSGGTTDYAAPVKG (Kabat) SEQ ID NO: 256 HCDR3 DHYYYPFAY (Kabat) SEQ ID NO: 257 HCDR1 GFTFSSN (Chothia) SEQ ID NO: 258 HCDR2 KSKTSGGT (Chothia) SEQ ID NO: 259 HCDR3 DHYYYPFAY (Chothia) SEQ ID NO: 260 HCDR1 GFTFSSNA (IMGT) SEQ ID NO: 261 HCDR2 IKSKTSGGTT (IMGT) SEQ ID NO: 262 HCDR3 ARDHYYYPFAY (IMGT) SEQ ID NO: 263 VH QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS

SNAMHWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTSGGT TDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLK TEDTAVYYCARDHYYYPFAYWGQGTLVTV

SS SEQ ID NO: 264 VH de DNA CAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCG

GACTGGTCAAGCCTGGCGGTAGCCTGAG ACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCT TCTCCTCCAACGCCATGCACTGGGTCCGA CAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGG TCGGACGGATCAAGTCCAAGACCTCCGG CGGCACCACCGACTACGCTGCCCCTGTG AAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACG ACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATG AACTCCCTGAAAACCGAGGACACCGCCG TGTACTACTGCGCCAGGGACCACTACTAC TACCCCTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCA CCCTGGTCACCGTGTCCTCT

SEQ ID NO: 265 Cadeia QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS Pesada SNAMHWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTSGGT

SNTKVDKRVEPKSC SEQ ID NO: 266 Cadeia CAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCG Pesada de GACTGGTCAAGCCTGGCGGTAGCCTGAG

DNA ACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCT TCTCCTCCAACGCCATGCACTGGGTCCGA CAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGG TCGGACGGATCAAGTCCAAGACCTCCGG CGGCACCACCGACTACGCTGCCCCTGTG AAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACG ACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATG AACTCCCTGAAAACCGAGGACACCGCCG TGTACTACTGCGCCAGGGACCACTACTAC TACCCCTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCA CCCTGGTCACCGTGTCCTCTGCTAGCACC AAGGGCCCCTCCGTGTTCCCTCTGGCCC CTTCCAGCAAGTCTACCTCTGGCGGCACC GCTGCTCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACT ACTTCCCTGAGCCTGTGACAGTGTCCTGG AACTCTGGCGCCCTGACCTCCGGCGTGC ACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGTCCTCC GGCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTGGTGAC AGTGCCTTCCTCCAGCCTGGGCACCCAG ACCTATATCTGCAACGTGAACCACAAGCC TTCCAACACCAAGGTGGACAAGCGGGTG

GAGCCTAAGTCATGC SEQ ID NO: 267 LCDR1 RASQSIRYNLA (Combinado) SEQ ID NO: 268 LCDR2 AASSLQS (Combinado) SEQ ID NO: 269 LCDR3 HQYIAKPIT (Combinado) SEQ ID NO: 270 LCDR1 RASQSIRYNLA (Kabat) SEQ ID NO: 271 LCDR2 AASSLQS (Kabat) SEQ ID NO: 272 LCDR3 HQYIAKPIT (Kabat) SEQ ID NO: 273 LCDR1 SQSIRYN (Chothia) SEQ ID NO: 274 LCDR2 AAS (Chothia) SEQ ID NO: 275 LCDR3 YIAKPI (Chothia)

SEQ ID NO: 276 LCDR1 QSIRYN (IMGT) SEQ ID NO: 277 LCDR2 AAS (IMGT) SEQ ID NO: 278 LCDR3 HQYIAKPIT (IMGT) SEQ ID NO: 279 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIRY

NLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYI

AKPITFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 280 VL de DNA GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA

GGAAATCAAG SEQ ID NO: 281 Cadeia DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIRY Leve NLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR

C SEQ ID NO: 282 Cadeia GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA Leve de GCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACAGAGT

GCTTCAACAGGGGCGAGTGC IDT9 SEQ ID NO: 283 HCDR1 GYTFTNYYVH (Combinado) SEQ ID NO: 284 HCDR2 WINPYNGNTNYAQKFQG (Combinado) SEQ ID NO: 285 HCDR3 GASSIRMSYYLDV (Combinado) SEQ ID NO: 286 HCDR1 NYYVH (Kabat) SEQ ID NO: 287 HCDR2 WINPYNGNTNYAQKFQG (Kabat) SEQ ID NO: 288 HCDR3 GASSIRMSYYLDV (Kabat) SEQ ID NO: 289 HCDR1 GYTFTNY (Chothia) SEQ ID NO: 290 HCDR2 NPYNGN (Chothia) SEQ ID NO: 291 HCDR3 GASSIRMSYYLDV (Chothia) SEQ ID NO: 292 HCDR1 GYTFTNYY (IMGT) SEQ ID NO: 293 HCDR2 INPYNGNT (IMGT) SEQ ID NO: 294 HCDR3 ARGASSIRMSYYLDV (IMGT) SEQ ID NO: 295 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTF

TNYYVHWVRQAPGQGLEWMGWINPYNGN TNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLR SEDTAVYYCARGASSIRMSYYLDVWGQGT

LVTVSS SEQ ID NO: 296 VH de DNA CAAGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCTG

AAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAAA GTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACACCTT CACCAACTACTACGTGCACTGGGTCCGAC AGGCCCCAGGCCAGGGCCTGGAGTGGAT GGGCTGGATCAACCCCTACAACGGCAAC ACCAACTACGCCCAGAAATTCCAGGGCAG AGTGACCATGACCCGGGACACCTCCATCT CCACCGCCTACATGGAACTGTCCCGGCT GCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTAC TGTGCCAGAGGCGCCTCCTCCATCCGGA TGTCCTACTACCTGGACGTGTGGGGCCA

GGGCACCCTGGTCACCGTGTCCTCT SEQ ID NO: 297 Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTF Pesada TNYYVHWVRQAPGQGLEWMGWINPYNGN

TNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLR SEDTAVYYCARGASSIRMSYYLDVWGQGT LVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAL GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN

HKPSNTKVDKRVEPKSC SEQ ID NO: 298 Cadeia CAAGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCTG Pesada de AAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAAA

DNA GTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACACCTT CACCAACTACTACGTGCACTGGGTCCGAC AGGCCCCAGGCCAGGGCCTGGAGTGGAT GGGCTGGATCAACCCCTACAACGGCAAC ACCAACTACGCCCAGAAATTCCAGGGCAG AGTGACCATGACCCGGGACACCTCCATCT CCACCGCCTACATGGAACTGTCCCGGCT GCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTAC TGTGCCAGAGGCGCCTCCTCCATCCGGA TGTCCTACTACCTGGACGTGTGGGGCCA GGGCACCCTGGTCACCGTGTCCTCTGCT AGCACCAAGGGCCCCTCCGTGTTCCCTCT GGCCCCTTCCAGCAAGTCTACCTCTGGC GGCACCGCTGCTCTGGGCTGCCTGGTGA AGGACTACTTCCCTGAGCCTGTGACAGTG TCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCTCCG GCGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCA GTCCTCCGGCCTGTACTCCCTGTCCTCCG TGGTGACAGTGCCTTCCTCCAGCCTGGG CACCCAGACCTATATCTGCAACGTGAACC ACAAGCCTTCCAACACCAAGGTGGACAAG

CGGGTGGAGCCTAAGTCATGC SEQ ID NO: 299 LCDR1 RASQSISNYLN (Combinado) SEQ ID NO: 300 LCDR2 AASNLQS (Combinado) SEQ ID NO: 301 LCDR3 FQYTHSPAT (Combinado) SEQ ID NO: 302 LCDR1 RASQSISNYLN (Kabat) SEQ ID NO: 303 LCDR2 AASNLQS (Kabat) SEQ ID NO: 304 LCDR3 FQYTHSPAT (Kabat) SEQ ID NO: 305 LCDR1 SQSISNY (Chothia) SEQ ID NO: 306 LCDR2 AAS (Chothia) SEQ ID NO: 307 LCDR3 YTHSPA (Chothia) SEQ ID NO: 308 LCDR1 QSISNY (IMGT)

SEQ ID NO: 309 LCDR2 AAS (IMGT) SEQ ID NO: 310 LCDR3 FQYTHSPAT (IMGT) SEQ ID NO: 311 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISN

YLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCFQYT

HSPATFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 312 VL de DNA GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA

GCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACAGAGT GACCATCACCTGTCGGGCCTCCCAGTCC ATCTCCAACTACCTGAACTGGTATCAGCA GAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTG ATCTACGCCGCCTCCAACCTGCAGTCCG GCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTCTGG CTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCT CCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCAC CTACTACTGCTTCCAGTACACCCACAGCC CCGCCACCTTCGGCCAGGGCACCAAAGT

GGAAATCAAG SEQ ID NO: 313 Cadeia DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISN Leve YLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLQSGVPSR

FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCFQYT HSPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDN ALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLS KADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG

EC SEQ ID NO: 314 Cadeia GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA Leve de GCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACAGAGT

DNA GACCATCACCTGTCGGGCCTCCCAGTCC ATCTCCAACTACCTGAACTGGTATCAGCA GAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTG ATCTACGCCGCCTCCAACCTGCAGTCCG GCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTCTGG CTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCT CCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCAC CTACTACTGCTTCCAGTACACCCACAGCC CCGCCACCTTCGGCCAGGGCACCAAAGT GGAAATCAAGCGTACGGTGGCCGCTCCC AGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGA GCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTG GTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCG GGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGAC AACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGG AGAGCGTCACCGAGCAGGACAGCAAGGA CTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGA CCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCA TAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCAC CAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGA GCTTCAACAGGGGCGAGTGC

IDT10 SEQ ID NO: 315 HCDR1 GYTFTNYYVH (Combinado) SEQ ID NO: 316 HCDR2 WINPYSGNTNYAQKFQG (Combinado) SEQ ID NO: 317 HCDR3 GASSIRMSYYLDV (Combinado) SEQ ID NO: 318 HCDR1 NYYVH (Kabat) SEQ ID NO: 319 HCDR2 WINPYSGNTNYAQKFQG (Kabat) SEQ ID NO: 320 HCDR3 GASSIRMSYYLDV (Kabat) SEQ ID NO: 321 HCDR1 GYTFTNY (Chothia) SEQ ID NO: 322 HCDR2 NPYSGN (Chothia) SEQ ID NO: 323 HCDR3 GASSIRMSYYLDV (Chothia) SEQ ID NO: 324 HCDR1 GYTFTNYY (IMGT) SEQ ID NO: 325 HCDR2 INPYSGNT (IMGT) SEQ ID NO: 326 HCDR3 ARGASSIRMSYYLDV (IMGT) SEQ ID NO: 327 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTF

TNYYVHWVRQAPGQGLEWMGWINPYSGN TNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLR SEDTAVYYCARGASSIRMSYYLDVWGQGT

LVTVSS SEQ ID NO: 328 VH de DNA CAAGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCTG

AAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAAA GTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACACCTT CACCAACTACTACGTGCACTGGGTCCGAC AGGCCCCAGGCCAGGGCCTGGAGTGGAT GGGCTGGATCAACCCCTACTCCGGCAAC ACCAACTACGCCCAGAAATTCCAGGGCAG AGTGACCATGACCCGGGACACCTCCATCT CCACCGCCTACATGGAACTGTCCCGGCT GCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTAC TGTGCCAGAGGCGCCTCCTCCATCCGGA TGTCCTACTACCTGGACGTGTGGGGCCA

GGGCACCCTGGTCACCGTGTCCTCT SEQ ID NO: 329 Cadeia QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTF Pesada TNYYVHWVRQAPGQGLEWMGWINPYSGN

HKPSNTKVDKRVEPKSC SEQ ID NO: 330 Cadeia CAAGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCTG Pesada de AAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAAA

DNA GTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACACCTT CACCAACTACTACGTGCACTGGGTCCGAC AGGCCCCAGGCCAGGGCCTGGAGTGGAT GGGCTGGATCAACCCCTACTCCGGCAAC ACCAACTACGCCCAGAAATTCCAGGGCAG AGTGACCATGACCCGGGACACCTCCATCT CCACCGCCTACATGGAACTGTCCCGGCT GCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTAC TGTGCCAGAGGCGCCTCCTCCATCCGGA TGTCCTACTACCTGGACGTGTGGGGCCA GGGCACCCTGGTCACCGTGTCCTCTGCT AGCACCAAGGGCCCCTCCGTGTTCCCTCT GGCCCCTTCCAGCAAGTCTACCTCTGGC GGCACCGCTGCTCTGGGCTGCCTGGTGA AGGACTACTTCCCTGAGCCTGTGACAGTG TCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCTCCG GCGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCA GTCCTCCGGCCTGTACTCCCTGTCCTCCG TGGTGACAGTGCCTTCCTCCAGCCTGGG CACCCAGACCTATATCTGCAACGTGAACC ACAAGCCTTCCAACACCAAGGTGGACAAG

CGGGTGGAGCCTAAGTCATGC SEQ ID NO: 331 LCDR1 RASQSISNYLN (Combinado) SEQ ID NO: 332 LCDR2 AASNLQS (Combinado) SEQ ID NO: 333 LCDR3 FQYTHSPAT (Combinado) SEQ ID NO: 334 LCDR1 RASQSISNYLN (Kabat) SEQ ID NO: 335 LCDR2 AASNLQS (Kabat) SEQ ID NO: 336 LCDR3 FQYTHSPAT (Kabat) SEQ ID NO: 337 LCDR1 SQSISNY (Chothia) SEQ ID NO: 338 LCDR2 AAS (Chothia) SEQ ID NO: 339 LCDR3 YTHSPA (Chothia) SEQ ID NO: 340 LCDR1 QSISNY (IMGT) SEQ ID NO: 341 LCDR2 AAS (IMGT)

SEQ ID NO: 342 LCDR3 FQYTHSPAT (IMGT) SEQ ID NO: 343 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISN

YLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCFQYT

HSPATFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 344 VL de DNA GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA

GGAAATCAAG SEQ ID NO:345 Cadeia DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISN Leve YLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLQSGVPSR

EC SEQ ID NO: 346 Cadeia GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA Leve de GCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACAGAGT

DNA GACCATCACCTGTCGGGCCTCCCAGTCC ATCTCCAACTACCTGAACTGGTATCAGCA GAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTG ATCTACGCCGCCTCCAACCTGCAGTCCG GCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTCTGG CTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCT CCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCAC CTACTACTGCTTCCAGTACACCCACAGCC CCGCCACCTTCGGCCAGGGCACCAAAGT GGAAATCAAGCGTACGGTGGCCGCTCCC AGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGA GCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTG GTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCG GGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGAC AACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGG AGAGCGTCACCGAGCAGGACAGCAAGGA CTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGA CCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCA TAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCAC CAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGA

GCTTCAACAGGGGCGAGTGC IDT11

SEQ ID NO: 27 HCDR1 GFTFSDYAMS (Combinado) SEQ ID NO: 28 HCDR2 VIDYSSSNTYYADSVKG (Combinado) SEQ ID NO: 29 HCDR3 EGYSYRSIRFDY (Combinado) SEQ ID NO: 30 HCDR1 DYAMS (Kabat) SEQ ID NO: 31 HCDR2 VIDYSSSNTYYADSVKG (Kabat) SEQ ID NO: 32 HCDR3 EGYSYRSIRFDY (Kabat) SEQ ID NO: 33 HCDR1 GFTFSDY (Chothia) SEQ ID NO: 34 HCDR2 DYSSSN (Chothia) SEQ ID NO: 35 HCDR3 EGYSYRSIRFDY (Chothia) SEQ ID NO: 36 HCDR1 GFTFSDYA (IMGT) SEQ ID NO: 37 HCDR2 IDYSSSNT (IMGT) SEQ ID NO: 38 HCDR3 AREGYSYRSIRFDY (IMGT) SEQ ID NO: 39 VH QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS

SS SEQ ID NO: 40 VH de DNA CAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCG

CACCCTGGTCACCGTGTCCTCT SEQ ID NO: 347 Cadeia QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS Pesada DYAMSWVRQAPGKGLEWVSVIDYSSSNTY

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAE DTAVYYCAREGYSYRSIRFDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKP SNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALAAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP

GK SEQ ID NO: 348 Cadeia CAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCG Pesada de GACTGGTGCAGCCTGGCGGTAGTCTGAG

DNA ACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCT TCTCCGACTACGCCATGTCCTGGGTCCGA CAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGG TGTCCGTGATCGACTACTCCTCCTCCAAC ACCTACTACGCCGACTCCGTGAAGGGCC GGTTCACCATCTCCCGGGACAACTCCAAG AACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCT GCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTAC TGCGCCAGAGAGGGCTACTCCTACCGGT CCATCAGATTCGACTACTGGGGCCAGGG CACCCTGGTCACCGTGTCCTCTGCTAGCA CCAAGGGCCCCTCCGTGTTCCCTCTGGC CCCTTCCAGCAAGTCTACCTCCGGCGGC ACAGCTGCTCTGGGCTGCCTGGTCAAGG ACTACTTCCCTGAGCCTGTGACAGTGTCC TGGAACTCTGGCGCCCTGACCTCTGGCG TGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGTCC TCCGGCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTGGT CACAGTGCCTTCAAGCAGCCTGGGCACC CAGACCTATATCTGCAACGTGAACCACAA GCCTTCCAACACCAAGGTGGACAAGCGG GTGGAGCCTAAGTCCTGCGACAAGACCC ACACCTGTCCTCCCTGCCCTGCTCCTGAA CTGCTGGGCGGCCCTTCTGTGTTCCTGTT CCCTCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGA TCTCCCGGACCCCTGAAGTGACCTGCGT GGTGGTGGCCGTGTCCCACGAGGATCCT GAAGTGAAGTTCAATTGGTACGTGGACGG CGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAG CCTCGGGAGGAACAGTACAACTCCACCTA CCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTG CACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGT ACAAGTGCAAAGTCTCCAACAAGGCCCTG GCCGCCCCTATCGAAAAGACAATCTCCAA GGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAG GTGTACACCCTGCCACCCAGCCGGGAGG AAATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACC TGTCTGGTCAAGGGCTTCTACCCTTCCGA TATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAACGGC CAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCC TCCTGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCT TCCTGTACTCCAAACTGACCGTGGACAAG TCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCT CCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCA CAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCC

TGTCTCCCGGCAAG SEQ ID NO: 43 LCDR1 RASQSISSNLN (Combinado) SEQ ID NO: 44 LCDR2 AASNLQS (Combinado) SEQ ID NO: 45 LCDR3 LQFDHTPFT (Combinado) SEQ ID NO: 46 LCDR1 RASQSISSNLN (Kabat) SEQ ID NO: 47 LCDR2 AASNLQS (Kabat) SEQ ID NO: 48 LCDR3 LQFDHTPFT (Kabat) SEQ ID NO: 49 LCDR1 SQSISSN (Chothia) SEQ ID NO: 50 LCDR2 AAS (Chothia) SEQ ID NO: 51 LCDR3 FDHTPF (Chothia) SEQ ID NO: 52 LCDR1 QSISSN (IMGT) SEQ ID NO: 53 LCDR2 AAS (IMGT) SEQ ID NO: 54 LCDR3 LQFDHTPFT (IMGT) SEQ ID NO: 55 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISS

NLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQFD

HTPFTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 56 DNA VL GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA

GCTTCAACAGGGGCGAGTGC IDT12 SEQ ID NO: 59 HCDR1 GFTFSSAAVH (Combinado) SEQ ID NO: 60 HCDR2 RIKSKADGGTTDYAAPVKG (Combinado) SEQ ID NO: 61 HCDR3 DSPSISSYSIPYFSGMDV (Combinado) SEQ ID NO: 62 HCDR1 SAAVH (Kabat) SEQ ID NO: 63 HCDR2 RIKSKADGGTTDYAAPVKG (Kabat) SEQ ID NO: 64 HCDR3 DSPSISSYSIPYFSGMDV (Kabat) SEQ ID NO: 65 HCDR1 GFTFSSA (Chothia) SEQ ID NO: 66 HCDR2 KSKADGGT (Chothia) SEQ ID NO: 67 HCDR3 DSPSISSYSIPYFSGMDV (Chothia) SEQ ID NO: 68 HCDR1 GFTFSSAA (IMGT)

SEQ ID NO: 69 HCDR2 IKSKADGGTT (IMGT) SEQ ID NO: 70 HCDR3 ARDSPSISSYSIPYFSGMDV (IMGT) SEQ ID NO: 71 VH QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS

GQGTLVTVSS SEQ ID NO: 72 VH de DNA CAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCG

CTGGTCACCGTGTCCTCT SEQ ID NO: 349 Cadeia QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS Pesada SAAVHWVRQAPGKGLEWVGRIKSKADGGT

TDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLK TEDTAVYYCARDSPSISSYSIPYFSGMDVW GQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQT YICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPE VTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNG KEYKCKVSNKALAAPIEKTISKAKGQPREPQ VYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY

TQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 350 Cadeia CAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCG Pesada de GACTGGTCAAGCCTGGCGGTAGCCTGAG

DNA ACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCT TCTCCTCTGCCGCTGTGCACTGGGTCCGA CAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGG TCGGACGGATCAAGTCCAAGGCCGACGG CGGCACCACCGACTACGCTGCCCCTGTG AAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACG ACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATG AACTCCCTGAAAACCGAGGACACCGCCG TGTACTACTGCGCCAGAGACTCCCCATCT ATCTCCAGCTACTCCATCCCCTACTTCTC CGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACC CTGGTCACCGTGTCCTCTGCTAGCACCAA GGGCCCCTCCGTGTTCCCTCTGGCCCCT TCCAGCAAGTCTACCTCCGGCGGCACAG CTGCTCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTA CTTCCCTGAGCCTGTGACAGTGTCCTGGA ACTCTGGCGCCCTGACCTCTGGCGTGCA CACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGTCCTCCG GCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTGGTCACA GTGCCTTCAAGCAGCCTGGGCACCCAGA CCTATATCTGCAACGTGAACCACAAGCCT TCCAACACCAAGGTGGACAAGCGGGTGG AGCCTAAGTCCTGCGACAAGACCCACACC TGTCCTCCCTGCCCTGCTCCTGAACTGCT GGGCGGCCCTTCTGTGTTCCTGTTCCCTC CAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCC CGGACCCCTGAAGTGACCTGCGTGGTGG TGGCCGTGTCCCACGAGGATCCTGAAGT GAAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTG GAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTC GGGAGGAACAGTACAACTCCACCTACCG GGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCAC CAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACA AGTGCAAAGTCTCCAACAAGGCCCTGGC CGCCCCTATCGAAAAGACAATCTCCAAGG CCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAGGT GTACACCCTGCCACCCAGCCGGGAGGAA ATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTG TCTGGTCAAGGGCTTCTACCCTTCCGATA TCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAACGGCCA GCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCCTC CTGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTC CTGTACTCCAAACTGACCGTGGACAAGTC CCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCC TGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACA ACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCCTG

TCTCCCGGCAAG SEQ ID NO: 75 LCDR1 RASQGIRAWLN (Combinado) SEQ ID NO: 76 LCDR2 AASSLQS (Combinado) SEQ ID NO: 77 LCDR3 HQYITHPPT (Combinado) SEQ ID NO: 78 LCDR1 RASQGIRAWLN (Kabat) SEQ ID NO: 79 LCDR2 AASSLQS (Kabat) SEQ ID NO: 80 LCDR3 HQYITHPPT (Kabat) SEQ ID NO: 81 LCDR1 SQGIRAW (Chothia)

SEQ ID NO: 82 LCDR2 AAS (Chothia) SEQ ID NO: 83 LCDR3 YITHPP (Chothia) SEQ ID NO: 84 LCDR1 QGIRAW (IMGT) SEQ ID NO: 85 LCDR2 AAS (IMGT) SEQ ID NO: 86 LCDR3 HQYITHPPT (IMGT) SEQ ID NO: 87 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRA

WLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYI

THPPTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 88 VL de DNA GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCCA

DNA GACCATCACCTGTCGGGCCTCTCAGGGC ATCCGGGCCTGGCTGAACTGGTATCAGC AGAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCT GATCTACGCCGCCAGCTCCCTGCAGTCC GGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTCTG GCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATC TCCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCA CCTACTACTGCCACCAGTACATCACCCAC CCTCCCACCTTCGGCCAGGGCACCAAAG TGGAAATCAAGCGTACGGTGGCCGCTCC CAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACG AGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGT GGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCC GGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGA CAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAG GAGAGCGTCACCGAGCAGGACAGCAAGG ACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTG ACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGC ATAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCA CCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAG AGCTTCAACAGGGGCGAGTGC

[105] Os termos "região determinante de complementaridade" e "CDR", conforme aqui utilizados, referem-se às sequências de aminoácidos nas regiões variáveis do anticorpo que conferem especificidade ao antígeno e afinidade de ligação. Em geral, existem três CDRs em cada região variável de cadeia pesada (HCDR1, HCDR2, HCDR3) e três CDRs em cada região variável de cadeia leve (LCDR1, LCDR2, LCDR3).

[106] Os limites precisos da sequência de aminoácidos de uma determinada CDR podem ser facilmente determinados usando qualquer um de vários esquemas bem conhecidos, incluindo os descritos por Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5ª ed. Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (esquema de numeração "Kabat"), Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 (esquema de numeração "Chothia") ou Lefranc et al. (2003) Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (esquema de numeração "IMGT"). Outros métodos para delinear as regiões CDR podem ser utilizados alternativamente. Por exemplo, as definições de CDR de Kabat e Chothia podem ser combinadas (sistema "Combinado").

[107] Por exemplo, em Kabat, os resíduos de aminoácidos de CDR de um anticorpo no domínio variável de cadeia pesada (VH) são numerados 31-35 (HCDR1), 50-66 (HCDR2) e 99-111 (HCDR3); e os resíduos de aminoácidos de CDR no domínio variável de cadeia leve (VL) são numerados 22-35 (LCDR1), 51-57 (LCDR2) e 90-100 (LCDR3). Sob Chothia, os aminoácidos de CDR na VH são numerados 26-32 (HCDR1), 52-57 (HCDR2) e 99-111 (HCDR3); e os resíduos de aminoácidos em VL são numerados 25-33 (LCDR1), 51-53 (LCDR2) e 92-99 (LCDR3). Ao combinar as definições de CDR de Kabat e Chothia,

as CDR "combinadas" consistem nos resíduos de aminoácidos 26-35 (HCDR1), 50-66 (HCDR2) e 99-108 (HCDR3) nos resíduos de aminoácidos de VH e humanos 24-38 (LCDR1), 54-60 (LCDR2) e 93- 101 (LCDR3) em VL humana. Como outro exemplo, sob IMGT, os resíduos de aminoácidos de CDR no domínio variável de cadeia pesada (VH) são numerados 26-33 (HCDR1), 51-58 (HCDR2) e 97-108 (HCDR3); e os resíduos de aminoácidos de CDR no domínio variável de cadeia leve (VL) são numerados 27-36 (LCDR1), 54-56 (LCDR2) e 93-101 (LCDR3). A Tabela 2 fornece exemplos de Kabat, Chothia, Combinado e IMGT, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3 para agentes de ligação a anticorpos anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpos), por exemplo, IDT1-IDT10.

[108] Uma vez que cada um dos anticorpos divulgados na Tabela 2, pode se ligar ao anticorpo anti-FXI/FXIa NOV1401, e a especificidade de ligação a antígeno é fornecida principalmente pelas regiões CDR1, 2 e 3, as sequências CDR1, 2 e 3 de VH e as sequências CDR1, 2 e 3 de VL podem ser "misturadas e combinadas" (ou seja, CDRs de diferentes anticorpos podem ser misturadas e combinadas), embora cada anticorpo contenha preferivelmente uma CDR1, 2 e 3 de VH e uma CDR1, 2 e 3 de VL para criar outras moléculas de ligação a FXI e/ou FXIa aqui fornecidas. Esses agentes de ligação a anticorpo anti- FXI/FXIa "misturados e combinados" podem ser testados usando os ensaios de ligação conhecidos na técnica e os descritos nos Exemplos (por exemplo, ensaios ELISA, SET, BIACORETM). Quando as sequências CDR de VH são misturadas e combinadas, a sequência CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de uma sequência VH específica deve ser substituída por uma sequência CDR estruturalmente semelhante. Da mesma forma, quando as sequências CDR de VL são misturadas e combinadas, a sequência CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de uma sequência VL específica deve ser substituída por uma sequência CDR estruturalmente semelhante. Será facilmente aparente para o especialista na técnica que novas sequências de VH e VL podem ser criadas substituindo uma ou mais sequências da região de CDR de VH e/ou VL por sequências estruturalmente semelhantes das sequências CDR mostradas aqui para anticorpos fornecidos aqui. Além do exposto, em um aspecto, os agentes de ligação aqui fornecidos podem ser fragmentos de anticorpos de ligação a antígeno e podem compreender uma CDR 1, 2 e 3 de VH ou uma CDR 1, 2, e 3 de VL, em que o fragmento se liga a um anticorpo anti-FXI/FXIa, tal como NOV1401, como um único domínio variável.

[109] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o anticorpo anti-FXI/FXIa alvo é o anticorpo NOV1401 (por exemplo, compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 23), e em que o agente de ligação é um anticorpo (por exemplo, IgG de comprimento completo) ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo (1) uma VH compreendendo as regiões determinantes de complementaridade HCDR1, HCDR2 e HCDR3 e (2) uma VL compreendendo regiões determinantes de complementaridade LCDR1, LCDR2 e LCDR3; em que: a. a HCDR1 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27, 59, 91, 123, 155, 187, 219, 251, 283 ou 315; b. a HCDR2 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 28, 60, 92, 124, 156, 188, 220, 252, 284 ou 316; c. a HCDR3 compreende a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 29, 61, 93, 125, 157, 189, 221, 253, 285 ou 317; d. a LCDR1 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 43, 75, 107, 139, 171, 203, 235, 267, 299 ou 331; e. a LCDR2 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 44, 76, 108, 140, 172, 204, 236, 268, 300 ou 332; e f. a LCDR3 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 45, 77, 109, 141, 173, 205, 237, 269, 301 ou 333.

[110] Em aspectos particulares, é aqui proporcionado um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o anticorpo anti-FXI/FXIa alvo é o anticorpo NOV1401 (compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), e em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo (1) uma VH compreendendo as regiões determinantes de complementaridade HCDR1, HCDR2 e HCDR3 e (2) uma VL compreendendo as regiões determinantes de complementaridade LCDR1, LCDR2 e LCDR3; em que: a. a HCDR1 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 30, 62, 94, 126, 158, 190, 222, 254, 286 ou 318; b. a HCDR2 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 31, 63, 95, 127, 159, 191, 223, 255, 287 ou 319; c. a HCDR3 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 32, 64, 96, 128, 160, 192, 224, 256, 288 ou 320; d. a LCDR1 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 46, 78, 110, 142, 174, 206, 238, 270, 302 ou 334; e. a LCDR2 compreende a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 47, 79, 111, 143, 175, 207, 239, 271, 303 ou 335; e f. a LCDR3 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 48, 80, 112, 144, 176, 208, 240, 272, 304 ou 336.

[111] Uma vez que cada um dos agentes de ligação (por exemplo, anticorpos) divulgados na Tabela 2, pode se ligar ao anticorpo anti- FXI/FXIa NOV1401, a VH, VL, sequências de cadeia leve de comprimento completo e cadeia pesada de comprimento completo (sequências de aminoácidos e as sequências de nucleotídeos que codificam as sequências de aminoácidos) podem ser "misturadas e combinadas" para criar outros agentes de ligação a anticorpo anti- FXI/FXIa. Esses agentes de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa "misturados e combinados" podem ser testados usando os ensaios de ligação conhecidos na técnica (por exemplo, ELISA e outros ensaios descritos na seção Exemplo). Quando essas cadeias são misturadas e combinadas, uma sequência VH de um emparelhamento VH/VL particular deve ser substituída por uma sequência VH estruturalmente semelhante. Da mesma forma, uma sequência de cadeia pesada de comprimento completo de um emparelhamento de cadeia pesada de comprimento completo / cadeia leve de comprimento completo particular deve ser substituída por uma sequência de cadeia pesada de comprimento completo estruturalmente semelhante. Da mesma forma, uma sequência VL de um emparelhamento VH/VL particular deve ser substituída por uma sequência VL estruturalmente semelhante. Do mesmo modo, uma sequência de cadeia leve de comprimento completo de um emparelhamento de cadeia pesada comprimento completo / cadeia leve de comprimento completo particular deve ser substituída por uma sequência de cadeia leve de comprimento completo estruturalmente semelhante.

[112] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo,

anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, em que a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 39, 71, 103, 135, 167, 199, 23 1, 263, 295 ou 327, e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 55, 87, 119, 151, 183, 215, 247, 279, 311 ou 343.

[113] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, em que a VH compreende 3 CDRs de VH da sequência de aminoácidos VH de SEQ ID NO: 39, 71, 103, 135, 167, 199, 231, 263, 295 ou 327, e a VL compreende as 3 CDRs de VL da sequência de aminoácidos de VL de SEQ ID NO: 55, 87, 119, 151, 183, 215, 247, 279, 311 ou 343.

[114] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de

Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que compreende uma VH e uma VL, em que a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 39 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 55.

[115] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 71 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 87.

[116] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 103 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 119.

[117] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 135 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 151.

[118] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 167 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183.

[119] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma formiga atividade icoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 199 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 215.

[120] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 231 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 247.

[121] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo,

anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 263 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 279.

[122] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 295 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 311.

[123] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 327 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 343.

[124] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como fragmento de Fab) ou uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, e em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 347 e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 57.

[125] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como fragmento de Fab) ou uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, e em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 349 e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 89.

[126] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo ga VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 41, 73, 105, 137, 169, 201, 233, 265, 297, ou 329, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 57, 89, 121, 153, 185, 217, 249, 281, 313 ou 345.

[127] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, e em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 41 e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 57.

[128] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, e em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 73 e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 89.

[129] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, e em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 105 e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

121.

[130] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, e em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

153.

[131] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, e em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 169 e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

185.

[132] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo,

anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, e em que a cadeia pesada co comercializa a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 201 e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

217.

[133] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, e em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 233 e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

249.

[134] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, e em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 265 e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

281.

[135] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, e em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 297 e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

313.

[136] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, e em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 329 e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

345.

[137] Em certos aspectos, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, tal como NOV1401 (por exemplo, compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, e em que o agente de ligação é um fragmento de Fab de anticorpo do anticorpo IDT1, IDT2, IDT3, IDT4, IDT5, IDT6, IDT7, IDT8, IDT9 ou IDT10, por exemplo, conforme estabelecido na Tabela 2.

[138] Em certos aspectos, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, tal como NOV1401 (por exemplo, compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23) e em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um fragmento de Fab de anticorpo do anticorpo IDT1, IDT2, IDT3, IDT4, IDT5, IDT6, IDT7, IDT8, IDT9 ou IDT10, por exemplo, conforme estabelecido na Tabela 2,

e é um anticorpo humano monoclonal recombinante.

[139] Em certos aspectos, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, tal como NOV1401 (por exemplo, compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23) e em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa, em que o agente de ligação é o anticorpo IDT1, IDT2, IDT3, IDT4, IDT5, IDT6, IDT7, IDT8, IDT9, IDT10, IDT11 ou IDT12, por exemplo, conforme estabelecido na Tabela 2, e em que o agente de ligação é em uma formulação líquida compreendendo sacarose na faixa de 150 mM a 300 mM (por exemplo, 220 mM de sacarose) e histidina na faixa de 5 mM a 35 mM (por exemplo, 20 mM de histidina) e em que a formulação tem um pH na intervalo de 4,5 a 6,5 (por exemplo, pH de 5,5). Em um aspecto específico, a composição farmacêutica compreende o agente de ligação (por exemplo, agente de ligação estabelecido na Tabela 2) a uma 150 mg/mL de concentração.

[140] Como aqui utilizado, um anticorpo humano compreende regiões variáveis de cadeia pesada ou leve ou cadeias pesadas ou leves de comprimento completo que são "o produto de" ou "derivadas de" uma sequência germinativa específica se as regiões variáveis ou cadeias de comprimento completo dos anticorpos forem obtidas a partir de um sistema que utiliza genes de imunoglobulina da linhagem germinativa humana. Tais sistemas incluem imunizar um camundongo transgênico carregando genes de imunoglobulina humana com o antígeno de interesse ou rastrear uma biblioteca de genes de imunoglobulina humana exibida no fago com o antígeno de interesse. Um anticorpo humano que é "o produto de" ou "derivado de" uma sequência de imunoglobulina da linhagem germinativa humana pode ser identificado como tal comparando a sequência de aminoácidos do anticorpo humano com as sequências de aminoácidos das imunoglobulinas da linhagem germinativa humana e selecionando a sequência de imunoglobulina da linhagem germinativa humana mais próxima (ou seja, maior % de identidade) da sequência do anticorpo humano.

[141] Um anticorpo humano que é "o produto de" ou "derivado de" uma sequência de imunoglobulina da linhagem germinativa humana particular pode conter diferenças de aminoácidos em comparação com a sequência da linhagem germinativa, devido, por exemplo, a mutações somáticas que ocorrem naturalmente ou a introdução intencional de mutações dirigidas ao sítio. No entanto, em aspectos específicos, nas regiões estruturais VH ou VL, um anticorpo humano selecionado é tipicamente pelo menos 90% idêntico na sequência de aminoácidos a uma sequência de aminoácidos codificada por um gene de imunoglobulina da linhagem germinativa humana e contém resíduos de aminoácidos que identificam o anticorpo humano como sendo humano quando comparado às sequências de aminoácidos da imunoglobulina da linhagem germinativa de outras espécies (por exemplo, sequências da linhagem germinativa de murino). Em certos casos, um anticorpo humano pode ser pelo menos 60%, 70%, 80%, 90% ou pelo menos 95% ou mesmo pelo menos 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico na sequência de aminoácidos à sequência de aminoácidos codificada pelo gene de imunoglobulina da linhagem germinativa.

[142] Em aspectos específicos, tipicamente, um anticorpo humano recombinante exibirá não mais do que 10 diferenças de aminoácidos da sequência de aminoácidos codificada pelo gene de imunoglobulina da linhagem germinativa humana nas regiões estruturais VH ou VL. Em certos casos, o anticorpo humano pode exibir não mais que 5, ou mesmo não mais que 4, 3, 2 ou 1 diferenças de aminoácidos da sequência de aminoácidos codificada pelo gene de imunoglobulina da linhagem germinativa. Exemplos de genes de imunoglobulina da linhagem germinativa humana incluem, mas não estão limitados aos fragmentos de linhagem germinativa de domínio variável descritos aqui, bem como DP47 e DPK9. Anticorpos Homólogos

[143] Em outro aspecto, a presente divulgação fornece um agente de ligação compreendendo sequências de aminoácidos homólogas às sequências descritas na Tabela 2, bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação se liga a um anticorpo anti-FXI/FXIa e retém as propriedades funcionais desejadas (por exemplo, reversão de um ou mais efeitos anticoagulantes) desses anticorpos descritos na Tabela 2, como qualquer um dos anticorpos IDT1-IDT12. Em aspectos específicos, esses anticorpos homólogos retêm as sequências de aminoácidos de CDR descritas na Tabela 2 (por exemplo, CDRs Kabat, CDRs de Chothia, CDRs IMGT ou CDRs combinadas). Em aspectos específicos, esses anticorpos homólogos são IgGs de comprimento completo humano.

[144] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), bem como uma composição farmacêutica compreendendo o agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH e VL compreendem sequências de aminoácidos que são pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, em pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticos às sequências VH e VL selecionadas na Tabela 2. Em um aspecto específico adicional, as diferenças na sequência de aminoácidos nas VL e/ou VH do agente de ligação não está dentro das regiões determinantes de complementaridade.

[145] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), bem como uma composição farmacêutica compreendendo o agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 39 e a VL compreende uma sequência de aminoácido que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

55. Em um aspecto específico adicional, as diferenças na sequência de aminoácidos na VL e/ou VH do agente de ligação são não dentro da complementaridade que determina regiões.

[146] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), bem como uma composição farmacêutica compreendendo o agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 71 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 87. Em um aspecto específico adicional, as diferenças na sequência de aminoácidos na VL e/ou VH do agente de ligação não estão dentro das regiões determinantes de complementaridade.

[147] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 103 e a VL compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 119. Em um aspecto específico adicional, as diferenças na sequência de aminoácidos na VL e/ou VH do agente de ligação não estão dentro das regiões determinantes de complementaridade.

[148] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 135 e VL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 151. Em um aspecto específico adicional, as diferenças na sequência de aminoácidos na VL e/ou VH do agente de ligação não estão dentro das regiões determinantes de complementaridade.

[149] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 167 e a VL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183. Em um outro aspecto específico, as diferenças na sequência de aminoácido na VL e/ou VH do agente de ligação não está dentro das regiões determinantes de complementaridade.

[150] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 199 e a VL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 215. Em um outro aspecto específico, as diferenças na sequência de aminoácidos na VL e/ou VH do agente de ligação não estão dentro das regiões determinantes de complementaridade.

[151] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23),

bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 231 e a VL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 247. Em um aspecto específico adicional, as diferenças na sequência de aminoácidos na VL e/ou VH do agente de ligação não estão dentro das regiões determinantes de complementaridade.

[152] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 263 e a VL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 279. Em um aspecto específico adicional, as diferenças na sequência de aminoácidos na VL e/ou VH do agente de ligação não estão dentro das regiões determinantes de complementaridade.

[153] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 295 e a VL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 311. Em um aspecto específico adicional, as diferenças na sequência de aminoácidos na VL e/ou VH do agente de ligação não estão dentro das regiões determinantes de complementaridade.

[154] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo uma VH e uma VL, e em que a VH compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 327 e a VL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 343. Em um aspecto específico adicional, as diferenças na sequência de aminoácidos na VL e/ou VH do agente de ligação não estão dentro das regiões determinantes de complementaridade.

[155] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti- FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% ou pelo menos 98% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 347 e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% ou pelo menos 98% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 57. Em um aspecto específico adicional, as diferenças na sequência de aminoácidos na cadeia pesada cadeia e/ou cadeia leve do agente de ligação não estão dentro das regiões determinantes de complementaridade.

[156] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti- FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% ou pelo menos 98% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 349 e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% ou pelo menos 95% ou pelo menos 98% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 89. Em um aspecto específico adicional, as diferenças na sequência de aminoácidos nos ácidos pesados cadeia e/ou cadeia leve do agente de ligação não estão dentro das regiões determinantes de complementaridade.

[157] Como usado aqui, a porcentagem de identidade entre as duas sequências é uma função do número de posições idênticas compartilhadas pelas sequências (ou seja, % de identidade é igual ao número de posições idênticas/número total de posições x 100), levando em consideração o número de lacunas e o comprimento de cada lacuna, que precisam ser introduzidos para o alinhamento ideal das duas sequências. A comparação de sequências e a determinação da porcentagem de identidade entre duas sequências podem ser realizadas usando um algoritmo matemático, conforme descrito nos exemplos não limitativos abaixo.

[158] Adicionalmente ou em altenrativa, as sequências de proteínas da presente invenção podem ainda ser usadas como uma "sequência de consulta" para realizar uma pesquisa em bancos de dados públicos para, por exemplo, identificar sequências relacionadas. Por exemplo, essas pesquisas podem ser realizadas usando o programa BLAST (Videsão 2.0) de Altschul, et al., 1990 J. Mol. Biol. 215:

403-10.

[159] A presente divulgação também fornece um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401), em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo (ou alternativamente, consistindo em) uma sequência de aminoácidos VH listada na Tabela 2, em que não mais do que cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos em uma sequência estrutural (por exemplo, uma sequência que não é uma CDR) foram mutados (em que uma mutação é, como vários exemplos limitativos, adição, substituição ou exclusão).

[160] A presente divulgação também fornece um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401), em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo (ou alternativamente, consistindo em) uma sequência de aminoácidos de VL listada na Tabela 2, em que não mais do que cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos em uma sequência estrutural (por exemplo, uma sequência que não é uma CDR) foram mutados (em que uma mutação é, como vários exemplos limitativos, adição, substituição ou exclusão). Anticorpos com Modificações Conservadoras

[161] Em certos aspectos, a presente divulgação refere-se a um agente de ligação, que é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo (por exemplo, fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa como NOV1401, bem como a uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação compreende VH compreendendo as sequências CDR1, CDR2 e CDR3 e uma VL compreendendo as sequências CDR1, CDR2, e CDR3, em que uma ou mais dessas sequências CDR especificam sequências de aminoácidos com base nos anticorpos aqui descritos, como os descritos na Tabela 2, ou modificações conservadoras dos mesmos, e em que os agentes de ligação retêm as propriedades funcionais desejadas (por exemplo, reverter um ou mais efeitos anticoagulantes de um anticorpo anti- FXI/FXIa) dos agentes de ligação descritos aqui, por exemplo, agentes de ligação IDT1, IDT2, IDT3, IDT4, IDT5, IDT6, IDT7, IDT8, IDT9, IDT10, IDT11 ou IDT12.

[162] Em aspectos específicos, um agente de ligação aqui descrito, que é um anticorpo (por exemplo, IgG de comprimento completo) ou um fragmento de ligação a antígeno (por exemplo, fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa, tal como NOV1401, compreende VH compreendendo sequências CDR1, CDR2 e CDR3 e uma VL compreendendo sequências CDR1, CDR2 e CDR3 estabelecidas na Tabela 2 com uma, duas, três ou mais modificações conservadoras em uma ou mais CDRs, e em que os agentes de ligação retêm as propriedades funcionais desejadas (por exemplo, ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa e/ou reversão de um ou mais efeitos anticoagulantes de um anticorpo anti-FXI/FXIa) dos agentes de ligação aqui descritos, por exemplo, agentes de ligação IDT1, IDT2, IDT3, IDT4, IDT5, IDT6, IDT7, IDT8, IDT9, IDT10, IDT11 ou IDT12.

[163] Em outros aspectos específicos, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, tal como NOV1401, bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo,

compreendendo (1) uma VH compreendendo as regiões determinantes de complementaridade HCDR1, HCDR2 e HCDR3 selecionadas a partir das estabelecidas na Tabela 2 e suas modificações conservadoras e (2) uma VL compreendendo as regiões determinantes de complementaridade LCDR1, LCDR2 e LCDR3 selecionadas a partir das estabelecidas na Tabela 2 e suas modificações conservadoras. Em um aspecto particular, o agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti- idiotipo) compreende HCDR1, HCDR2 e HCDR3 combinadas selecionadas a partir das estabelecidas na Tabela 2 e suas modificações conservadoras, e LCDR1, LCDR2 e LCDR3 combinadas selecionadas a partir das estabelecidas na Tabela 2 e suas modificações conservadoras. Em um aspecto particular, o agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo) compreende HCDR1, HCDR2 e HCDR3 de Kabat selecionadas a apartir das estabelecidas na Tabela 2 e suas modificações conservadoras, e LCDR1, LCDR2 e LCDR3 de Kabat selecionadas a apartir das estabelecidas na Tabela 2 e suas modificações conservadoras. Em um aspecto particular, o agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo) compreende HCDR1, HCDR2 e HCDR3 de Chothia selecionadas a apartir das estabelecidas na Tabela 2 e suas modificações conservadoras, e LCDR1, LCDR2 e LCDR3 de Chothia selecionadas a apartir das estabelecidas na Tabela 2 e suas modificações conservadoras. Em um aspecto particular, o agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo) compreende HCDR1, HCDR2 e HCDR3 de IMGT selecionadas a apartir das estabelecidas na Tabela 2 e suas modificações conservadoras, e LCDR1, LCDR2 e LCDR3 de IMGT selecionadas a apartir das estabelecidas na Tabela 2 e suas modificações conservadoras. Em um aspecto específico, o agente de ligação é uma IgG de comprimento completo.

[164] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo, tal como NOV1401, bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti- FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo (1) uma VH compreendendo as regiões determinantes de complementaridade HCDR1, HCDR2, e HCDR3, e (2) uma VL compreendendo regiões determinantes de complementaridade LCDR1, LCDR2 e LCDR3; em que: a. a HCDR1 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27, 59, 91, 123, 155, 187, 219, 251, 283 ou 315, ou modificações conservadoras da mesma; b. a HCDR2 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 28, 60, 92, 124, 156, 188, 220, 252, 284 ou 316, ou modificações conservadoras da mesma; c. a HCDR3 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 29, 61, 93, 125, 157, 189, 221, 253, 285 ou 317, ou modificações conservadoras da mesma; d. a LCDR1 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 43, 75, 107, 139, 171, 203, 235, 267, 299 ou 331, ou modificações conservadoras da mesma; e. a LCDR2 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 44, 76, 108, 140, 172, 204, 236, 268, 300 ou 332 ou modificações conservadoras da mesma; e f. a LCDR3 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 45, 77, 109, 141, 173, 205, 237, 269, 301 ou 333, ou modificações conservadoras da mesma.

[165] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como o fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo, tal como NOV1401, bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti- FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo (1) uma VH compreendendo as regiões determinantes de complementaridade HCDR1, HCDR2, e HCDR3, e (2) uma VL compreendendo regiões determinantes de complementaridade LCDR1, LCDR2 e LCDR3; em que: a. a HCDR1 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 30, 62, 94, 126, 158, 190, 222, 254, 286 ou 318, ou modificações conservadoras da mesma; b. a HCDR2 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 31, 63, 95, 127, 159, 191, 223, 255, 287 ou 319, ou modificações conservadoras da mesma; c. a HCDR3 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 32, 64, 96, 128, 160, 192, 224, 256, 288 ou 320, ou modificações conservadoras da mesma; d. a LCDR1 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 46, 78, 110, 142, 174, 206, 238, 270, 302 ou 334, ou modificações conservadoras da mesma; e. a LCDR2 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 47, 79, 111, 143, 175, 207, 239, 271, 303 ou 335, ou modificações conservadoras da mesma; e f. a LCDR3 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 48, 80, 112, 144, 176, 208, 240, 272, 304 ou 336, ou modificações conservadoras da mesma.

[166] A presente divulgação também fornece um agente de ligação

(por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401), bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo (ou alternativamente, consistindo em) uma sequência de aminoácidos VH listada na Tabela 2, em que não mais do que cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos em uma sequência de estrutura (por exemplo, uma sequência que não é uma CDR) têm modificações conservadoras.

[167] A presente divulgação também fornece um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo, tal como fragmento de Fab) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401), em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo (ou alternativamente, consistindo em) uma sequência de aminoácidos de VL listada na Tabela 2, em que não mais do que cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos em uma sequência estrutural (por exemplo, uma sequência que não é uma CDR) têm modificações conservadoras.

[168] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti- FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, e em que a pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 347 com uma, duas, três ou quatro mutações, tal como mutações conservadoras de aminoácidos, que não afetam substancialmente a atividade, e/ou a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 57 com uma, duas, três ou quatro mutações, tal como mutações conservadoras de aminoácidos, que não afetam substancialmente a atividade. Em um aspecto específico adicional, a mutação não está dentro das regiões determinantes de complementaridade.

[169] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, NOV1401 compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti- FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação é um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, e em que a pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 349 com uma, duas, três ou quatro mutações, tal como mutações conservadoras de aminoácidos, que não afetam substancialmente a atividade, e/ou a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 89 com uma, duas, três ou quatro mutações, tal como mutações conservadoras de aminoácidos, que não afetam substancialmente a atividade. Em um pelo outro aspecto específico, a mutação não está dentro das regiões determinantes de complementaridade. Anticorpos Modificados e Construídos Geneticamente

[170] Agentes de ligação (por exemplo, agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa) aqui fornecidos que são anticorpos, tais como um IgG de comprimento completo ou um fragmento de Fab, podem ser preparados usando um anticorpo com uma ou mais das sequências VH e/ou VL mostradas aqui como material de partida para construir geneticamente um anticorpo modificado, cujo anticorpo modificado pode ter propriedades alteradas a partir do anticorpo de partida. Um anticorpo pode ser construído geneticamente modificando um ou mais resíduos dentro de uma ou ambas as regiões variáveis (isto é, VH e/ou VL), por exemplo, dentro de uma ou mais regiões CDR e/ou dentro de uma ou mais regiões estruturais. Adicionalmente ou em altenrativa, um anticorpo pode ser construído geneticamente modificando resíduos dentro da (s) região (ões) constante (s), por exemplo, para alterar a função (s) efetora do anticorpo.

[171] Um tipo de construção genética de região variável que pode ser realizada é o enxerto de CDR. Anticorpos interagem com os antígenos alvo predominantemente através de resíduos de aminoácidos que estão localizados nas seis regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada e leve (CDRs). Por esse motivo, as sequências de aminoácidos dentro das CDRs são mais diversas entre os anticorpos individuais do que as sequências fora das CDRs. Como as sequências de CDR são responsáveis pela maioria das interações anticorpo-antígeno, é possível expressar anticorpos recombinantes que imitam as propriedades de anticorpos específicos que ocorrem naturalmente, construindo vetores de expressão que incluem sequências CDR do anticorpo específico que ocorre naturalmente enxertado nas sequências estruturais de um anticorpo diferente com propriedades diferentes (Vide, por exemplo, Riechmann, L. et al., 1998 Nature 332: 323-327; Jones, P. et al., 1986 Nature 321: 522-525; Queen, C. et al., 1989 Proc Natl. Acad., EUA 86: 10029-10033; Patente U.S. No. 5.225.539 de Winter e Patentes U.S. 5.530.101;

5.585.089; 5.693.762 e 6.180.370 de Queen et al.)

[172] As sequências estruturais podem ser obtidas de bancos de dados de DNA públicos ou referências publicadas que incluem sequências de genes de anticorpos da linhagem germinativa. Por exemplo, sequências de DNA da linhagem germinativa para genes da região variável de cadeia pesada e leve humana podem ser encontradas no banco de dados de sequências da linhagem germinativa humana "VBase" (disponível na Internet em mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase), bem como em Kabat, E.A., et al., 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edição, U.S. Department of Health and Human Services, Publicação NIH No. 91-3242; Tomlinson, I. M., et al., 1992 J. Mol. Biol. 227:776-798; e Cox, J. P. L. et al., 1994 Eur. J Immunol. 24:827-836; o conteúdo de cada um dos quais é expressamente incorporado aqui por referência.

[173] Um exemplo de sequências estruturais para uso em anticorpos da presente divulgação são aquelas que são estruturalmente semelhantes às sequências de estrutura usadas por anticorpos selecionados aqui descritos, por exemplo, sequências de consenso e/ou sequências de estrutura usadas por anticorpos monoclonais da invenção. As sequências CDR1, 2 e 3 de VH e as sequências CDR1, 2 e 3 de VL, podem ser enxertadas em regiões estruturais que possuem a sequência idêntica à encontrada no gene de imunoglobulina da linhagem germinativa da qual a sequência estrutural deriva, ou as sequências CDR podem ser enxertadas em regiões estruturais que contêm uma ou mais mutações em comparação com as sequências da linhagem germinativa. Por exemplo, verificou-se que, em certos casos, é benéfico fazer a mutação de resíduos nas regiões estruturais para manter ou aprimorar a capacidade de ligação a antígeno do anticorpo (Vide, por exemplo, as patentes U.S. Nos. 5.530.101; 5.585.089; al). As estruturas que podem ser utilizadas como sarcabouços nas quais se constroem os anticorpos e fragmentos de ligação a antígeno aqui descritos incluem, mas não estão limitados a, VH1A, VH1B, VH3, Vk1, Vl2 e Vk2. Estruturas adicionais são conhecidas na técnica e podem ser encontradas, por exemplo, no banco de dados do vBase na Internet em vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/index.php?&MMN_position=1:1.

[174] Por conseguinte, em aspectos específicos, a presente divulgação refere-se a agentes de ligação, como anticorpos isolados que se ligam a um anticorpo anti-FXI/FXIa como NOV1401, bem como a uma composição farmacêutica compreendendo esses agentes de ligação, compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 39, 71, 103, 135, 167, 199, 231, 263, 295 e 327, ou uma sequência de aminoácidos com um, dois, três, quatro ou cinco substituições, deleções ou adições de aminoácidos na região estrutural de tais sequências e compreendendo ainda uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 55, 87, 119, 151, 183, 215, 247, 279, 311 e 343, ou uma sequência de aminoácidos possuindo uma, duas, três, quatro ou cinco substituições, deleções ou adições de aminoácidos na região estrutural de tais sequências.

[175] Outro tipo de modificação de região variável é modificar os resíduos de aminoácidos nas regiões VH e/ou CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de VL para melhorar assim uma ou mais propriedades de ligação (por exemplo, afinidade) do anticorpo de interesse, conhecido como "maturação por afinidade". A mutagênese dirigida ao sítio ou mutagênese mediada por PCR pode ser realizada para introduzir a mutação (s) e o efeito na ligação do anticorpo, ou outra propriedade funcional de interesse, pode ser avaliado em ensaios in vitro ou in vivo, conforme descrito aqui e fornecido na Seção de Exemplos.

Modificações conservadoras (como discutidas acima) podem ser introduzidas. As mutações podem ser substituições, adições ou deleções de aminoácidos. Além disso, tipicamente não mais de um, dois, três, quatro ou cinco resíduos dentro de uma região CDR são alterados.

[176] Por conseguinte, em aspectos específicos, são aqui fornecidos agentes de ligação que são variantes amadurecidas por afinidade do anticorpo IDT1, IDT2, IDT3, IDT4, IDT5, IDT6, IDT7, IDT8, IDT9, IDT10, IDT11 ou IDT12, bem como um composição farmacêutica compreendendo esses agentes de ligação, em que a variante amadurecida por afinidade tem maior afinidade pelo anticorpo anti- FXI/FXIa NOV1401 que o parental e é capaz de reverter um ou mais efeitos anticoagulantes de NOV1401. Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo) que liga especificamente um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo, bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o anticorpo anti-FXI/FXIa alvo é o anticorpo NOV1401 (compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), e em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo (1) uma VH compreendendo as regiões determinantes de complementaridade HCDR1, HCDR2 e HCDR3 e (2) uma VL compreendendo as regiões determinantes de complementaridade LCDR1, LCDR2, e LCDR3; em que: a. a HCDR1 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27, 59, 91, 123, 155, 187, 219, 251, 283 ou 315 ou uma sequência de aminoácidos da mesma tendo uma, duas, três, quatro ou cinco substituições, deleções ou adições de aminoácidos; b. a HCDR2 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 28, 60, 92, 124, 156, 188, 220, 252, 284 ou 316, ou uma sequência de aminoácidos da mesma tendo uma, duas, três, quatro ou cinco substituições, deleções ou adições de aminoácidos; c. a HCDR3 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 29, 61, 93, 125, 157, 189, 221, 253, 285 ou 317, ou uma sequência de aminoácidos da mesma tendo uma, duas, três, quatro ou cinco substituições, deleções ou adições de aminoácidos; d. a LCDR1 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 43, 75, 107, 139, 171, 203, 235, 267, 299 ou 331, ou uma sequência de aminoácidos da mesma tendo uma, duas, três, quatro ou cinco substituições, deleções ou adições de aminoácidos; e. a LCDR2 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 44, 76, 108, 140, 172, 204, 236, 268, 300 ou 332 ou uma sequência de aminoácidos da mesma tendo uma, duas, três, quatro ou cinco substituições, deleções ou adições de aminoácidos; e f. a LCDR3 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 45, 77, 109, 141, 173, 205, 237, 269, 301 ou 333, ou uma sequência de aminoácidos da mesma tendo uma, duas, três, quatro ou cinco substituições, deleções ou adições de aminoácidos.

[177] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo e fragmentos do mesmo) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, bem como uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação, em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o anticorpo anti-FXI/FXIa alvo é o anticorpo NOV1401 (compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23), e em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo (1) uma VH compreendendo as regiões determinantes de complementaridade HCDR1, HCDR2 e HCDR3 e (2) uma VL compreendendo as regiões determinantes de complementaridade LCDR1, LCDR2 e LCDR3; em que: a. a HCDR1 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 30, 62, 94, 126, 158, 190, 222, 254, 286 ou 318 ou uma sequência de aminoácidos da mesma tendo uma, duas, três, quatro ou cinco substituições, deleções ou adições de aminoácidos; b. a HCDR2 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 31, 63, 95, 127, 159, 191, 223, 255, 287 ou 319 ou uma sequência de aminoácidos da mesma tendo uma, duas, três, quatro ou cinco substituições, deleções ou adições de aminoácidos; c. a HCDR3 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 32, 64, 96, 128, 160, 192, 224, 256, 288 ou 320, ou uma sequência de aminoácidos da mesma tendo uma, duas, três, quatro ou cinco substituições, deleções ou adições de aminoácidos; d. a LCDR1 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 46, 78, 110, 142, 174, 206, 238, 270, 302 ou 334, ou uma sequência de aminoácidos da mesma tendo uma, duas, três, quatro ou cinco substituições, deleções ou adições de aminoácidos; e. a LCDR2 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 47, 79, 111, 143, 175, 207, 239, 271, 303 ou 335, ou uma sequência de aminoácidos da mesma tendo uma, duas, três, quatro ou cinco substituições, deleções ou adições de aminoácidos; e f. a LCDR3 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 48, 80, 112, 144, 176, 208, 240, 272, 304 ou 336, ou uma sequência de aminoácidos da mesma tendo uma, duas, três, quatro ou cinco substituições, deleções ou adições de aminoácidos.

Enxertar Domínios de Ligação a Antígenos em Estruturas

Alternativas ou Sarcabouços

[178] Com relação a agentes de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa aqui fornecidos, que são anticorpos, uma grande variedade de estruturas ou estruturas de anticorpo/imunoglobulina pode ser empregue desde que o polipeptídeo resultante inclua pelo menos uma região de ligação que se ligue especificamente a um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo. Tais estruturas ou sarcabouços incluem os 5 principais idiotipos de imunoglobulinas humanas, ou fragmentos dos mesmos, e incluem imunoglobulinas de outras espécies animais, de preferência com aspectos humanizados. Anticorpos únicos de cadeia pesada, como os identificados nos camelídeos, são de particular interesse a esse respeito.

[179] Em um aspecto, a presente divulgação refere-se à geração de anticorpos baseados em não imunoglobulina, utilizando estruturas não imunoglobulinas, nas quais as CDRs, como as descritas na Tabela 2, podem ser enxertadas. Estruturas e sarcabouços conhecidos ou futuros de não imunoglobulina podem ser empregues, desde que compreendam uma região de ligação específica para o anticorpo anti- FXI/FXIa alvo, tal como NOV1401. Estruturas ou sarcabouços não imunoglobulina conhecidos incluem, mas não estão limitados a, fibronectina (Compound Therapeutics, Inc., Waltham, MA), anquirina (Molecular Partners AG, Zurique, Suíça), anticorpos de domínio (Domantis, Ltd., Cambridge, MA e Ablynx nv, Zwijnaarde, Bélgica), lipocalina (Pieris Proteolab AG, Freising, Alemanha), pequenos imuno- farmacêuticos modulareses (Trubion Pharmaceuticals Inc., Seattle, WA), maxicorpos (Avidia, Inc., Mountain View, CA), Proteína A (Affibody AG, Suécia) e afilina (gama-cristalina ou ubiquitina) (Scil Proteins GmbH, Halle, Alemanha).

[180] Os sarcabouços de fibronectina são baseados no domínio da fibronectina tipo III (por exemplo, o décimo módulo da fibronectina tipo

III (domínio 10 Fn3)). O domínio da fibronectina tipo III possui 7 ou 8 filamentos beta que são distribuídos entre duas folhas beta, que se empacotam umas contra as outras para formar o núcleo da proteína e contêm ainda laços (análogos às CDRs) que conectam os filamentos beta entre si e são expostos a solventes. Há pelo menos três desses loops em cada borda do sanduíche de folha beta, em que a borda é o limite da proteína perpendicular à direção dos fios beta (Vide US

6.818.418). Esses sarcabouços à base de fibronectina não são uma imunoglobulina, embora o desdobramento geral esteja intimamente relacionado à do menor fragmento de anticorpo funcional, a região variável de cadeia pesada, que compreende toda a unidade de reconhecimento de antígeno na IgG de camelo e lhama. Devido a essa estrutura, o anticorpo não imunoglobulina imita propriedades de ligação a antígeno que são de natureza e afinidade semelhantes às dos anticorpos. Esses sarcabouços podem ser usados em uma estratégia de aleatorização e embaralhamento de loop in vitro que é semelhante ao processo de maturação por afinidade de anticorpos in vivo. Estas moléculas à base de fibronectina podem ser utilizadas como estruturas onde as regiões de loop da molécula podem ser substituídas por CDRs da invenção utilizando técnicas de clonagem padrão.

[181] A tecnologia de anquirina é baseada no uso de proteínas com módulos de repetição derivados de anquirina como sarcabouços para portar regiões variáveis que podem ser usadas para ligação a diferentes alvos. O módulo de repetição de anquirina é um polipeptídeo de 33 aminoácidos que consiste em duas hélices α paralelas e uma volta β. A ligação das regiões variáveis é principalmente otimizada usando a exibição do ribossomo.

[182] Avímeros são derivados de proteínas naturais que contêm o domínio A, como LRP-1. Esses domínios são usados por natureza para interações proteína-proteína e em humanos mais de 250 proteínas são estruturalmente baseadas em domínios A. Avímeros consistem em vários monômeros de "domínio A" diferentes (2-10) ligados por meio de ligantes de aminoácidos. Podem ser criados avímeros que podem se ligar ao antígeno alvo usando a metodologia descrita, por exemplo, nas Publicações de Pedido de Patente U.S. Nos. 20040175756; 20050053973; 20050048512; e 20060008844.

[183] Ligandos de afinidade de aficorpo são proteínas pequenas e simples compostas por um feixe de três hélices, com base no scaffold de um dos domínios de ligação a IgG da proteína A. A proteína A é uma proteína de superfície da bactéria Staphylococcus aureus. Esse domínio de scaffold consiste em 58 aminoácidos, 13 dos quais são randomizados para gerar bibliotecas de aficorpos com um grande número de variantes de ligantes (Vide, por exemplo, US 5.831.012). As moléculas do aficorpo imitam anticorpos, elas têm um peso molecular de 6 KDa, em comparação com o peso molecular dos anticorpos, que é de 150 KDa. Apesar de seu pequeno tamanho, o sítio de ligação das moléculas do aficorpo é semelhante ao de um anticorpo.

[184] Anticalinas são produtos desenvolvidos pela empresa Pieris ProteoLab AG. Elas são derivadas de lipocalinas, um grupo amplo de proteínas pequenas e robustas que geralmente estão envolvidas no transporte ou armazenamento fisiológico de compostos quimicamente sensíveis ou insolúveis. Várias lipocalinas naturais ocorrem em tecidos humanos ou líquidos corporais. A arquitetura da proteína é uma reminiscência de imunoglobulinas, com loops hipervariáveis no topo de uma estrutura rígida. No entanto, em contraste com os anticorpos ou fragmentos dos mesmos recombinantes, as lipocalinas são compostas por uma única cadeia polipeptídica com 160 a 180 resíduos de aminoácidos, sendo apenas um pouco maiores que um único domínio de imunoglobulina. O conjunto de quatro loops, que compõe o bolso de ligação, mostra plasticidade estrutural acentuada e tolera uma variedade de correntes laterais. O sítio de ligação pode assim ser remodelado em um processo proprietário, a fim de reconhecer moléculas alvo prescritas de forma diferente, com alta afinidade e especificidade. Uma proteína da família lipocalina, a proteína de ligação à bilina (BBP) de Pieris Brassicae, tem sido usada para desenvolver anticalinas por mutagenização do conjunto de quatro loops. Um exemplo de pedido de patente que descreve anticalinas está na Publicação PCT No. WO 199916873.

[185] Moléculas de afilina são pequenas proteínas não imunoglobulinas que são projetadas para afinidades específicas em relação a proteínas e moléculas pequenas. Novas moléculas de afiliação podem ser selecionadas rapidamente de duas bibliotecas, cada uma delas baseada em uma proteína de scaffold derivada de humano diferente. As moléculas de afilina não mostram nenhuma homologia estrutural com as proteínas da imunoglobulina. Atualmente, são empregues dois sarcabouços de afilina, uma das quais é gama- cristalina, uma proteína estrutural para lentes oculares humanas e a outra é proteínas da superfamília de "ubiquitina". Ambos os sarcabouços humanos são muito pequenos, mostram estabilidade a altas temperaturas e são quase resistentes a alterações de pH e agentes desnaturantes. Essa alta estabilidade se deve principalmente à estrutura expandida da folha beta das proteínas. Exemplos de proteínas derivadas de cristais gama são descritos em WO200104144 e exemplos de proteínas "do tipo ubiquitina" são descritos em WO2004106368.

[186] Os miméticos de epitopos proteicos (PEM) são moléculas cíclicas, de tamanho peptídico (MW 1-2KDa) de tamanho médio, imitando estruturas secundárias de proteínas em gancho beta, a principal estrutura secundária envolvida em interações proteína- proteína.

[187] Em aspectos específicos, a presente divulgação fornece anticorpos totalmente humanos que se ligam especificamente a um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, tal como NOV1401. Comparado com os anticorpos quiméricos ou humanizados, os anticorpos humanos têm antigenicidade adicionalmente reduzida quando administrados a objetos humanos. Fc engenharia

[188] Os anticorpos da presente divulgação podem ser modificados para incluir modificações na região Fc, tipicamente para alterar uma ou mais propriedades funcionais do anticorpo, como meia- vida sérica, fixação de complemento, ligação ao receptor Fc e/ou citotoxicidade celular dependente antígeno. Além disso, um anticorpo da presente divulgação pode ser quimicamente modificado (por exemplo, uma ou mais porções químicas podem ser ligadas ao anticorpo) ou ser modificado para alterar sua glicosilação, novamente para alterar uma ou mais propriedades funcionais do anticorpo. Cada uma dessas modalidades é descrita em mais detalhes abaixo. A numeração de resíduos na região Fc é a do índice da UE de Kabat.

[189] Em um aspecto, a região de dobradiça de CH1 é modificada de modo que o número de resíduos de cisteína na região de dobradiça seja alterado, por exemplo, aumentado ou diminuído. Esta abordagem é descrita mais detalhadamente na Patente U.S. No. 5.677.425 de Bodmer et al. O número de resíduos de cisteína na região charneira de CH1 é alterado para, por exemplo, facilitar a montagem das cadeias leve e pesada ou aumentar ou diminuir a estabilidade do anticorpo.

[190] Em outro aspecto, a região de dobradiça Fc de um anticorpo é mutada para diminuir a meia-vida biológica do anticorpo. Mais especificamente, uma ou mais mutações de aminoácidos são introduzidas na região da interface do domínio CH2-CH3 do fragmento de dobradiça Fc, tal que o anticorpo prejudica a ligação da proteína A de Staphylococcyl (SpA) em relação à ligação de SpA do domínio de dobradiça Fc nativa. Esta abordagem é descrita em mais detalhes na Patente U.S. No. 6.165.745 de Ward et al.

[191] Em outro aspecto, o anticorpo é modificado para aumentar sua meia-vida biológica. Várias abordagens são possíveis. Por exemplo, uma ou mais das mutações descritas na Patente U.S.

6.277.375 de Ward podem ser usadas. Alternativamente, para aumentar a meia-vida biológica, o anticorpo pode ser alterado dentro da região CH1 ou CL para conter um epitopo de ligação ao receptor de resgate retirado de dois loops de um domínio de CH2 de uma região Fc de uma IgG, como descrito nas Patentes U.S. Nos. 5.869.046 e 6.121.022 de Presta et al.

[192] Em ainda outros aspectos, a região Fc é alterada substituindo pelo menos um resíduo de aminoácido por um resíduo de aminoácido diferente para alterar as funções efetoras do anticorpo. Por exemplo, um ou mais aminoácidos podem ser substituídos por um resíduo de aminoácido diferente, de modo que o anticorpo tenha uma afinidade alterada para um ligando efetor, mas retenha a capacidade de ligação a antígeno do anticorpo parental. O ligando efetor ao qual a afinidade é alterada pode ser, por exemplo, um receptor Fc ou o componente C1 do complemento. Esta abordagem é descrita em mais detalhes nas Patentes U.S. Nos. 5.624.821 e 5.648.260, ambas por Winter et al.

[193] Em outro aspecto, um ou mais aminoácidos selecionados a partir de resíduos de aminoácidos podem ser substituídos por um resíduo de aminoácido diferente, de modo que o anticorpo alterou a ligação de C1q e/ou reduziu ou aboliu a citotoxicidade dependente do complemento (CDC). Esta abordagem é descrita em mais detalhes nas Patentes U.S. Nos. 6.194.551 de Idusogie et al.

[194] Em outro aspecto, um ou mais resíduos de aminoácidos são alterados para alterar assim a capacidade do anticorpo de fixar o complemento. Esta abordagem é descrita mais adiante na publicação PCT WO 94/29351 de Bodmer et al.

[195] Em um aspecto específico, um agente de ligação aqui descrito (por exemplo, agente de ligação descrito na Tabela 2, como IDT11 ou IDT12), por exemplo, um agente de ligação que é um anticorpo que liga um anticorpo anti-FXI/FXIa (como o anticorpo NOV1401) compreende uma região Fc de IgG humana (por exemplo, IgG1) compreendendo substituições de aminoácidos, D265A e/ou P329A, para reduzir a probabilidade de ADCC ou CDC causada por qualquer FXI associado à superfície. Foi demonstrado que essas substituições de alanina reduzem o ADCC e o CDC (Vide, por exemplo, Idosugie et al., J. Immunol. 164: 4178-4184, 2000; Shields et al., J. Biol. Chem. 276: 6591-6604, 2001).

[196] Em outros aspectos, um agente de ligação aqui descrito compreende uma região Fc de IgG humana (por exemplo, IgG1) com mutações silenciadoras de Fc, como substituição de leucina (L) a alanina (A) nas posições 234 e 235 (LALA) e/ou a substituição de alanina (A) por asparagina (N) na posição 297 (N297A) (Vide, por exemplo, Leabman et al., MAbs. 5: 896–903, 2013.).

[197] Em ainda outro aspecto, a região Fc de um anticorpo aqui descrito é modificada para aumentar a capacidade do anticorpo de mediar a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) e/ou aumentar a afinidade do anticorpo para um receptor de Fcγ modificando um ou mais aminoácidos. Esta abordagem é descrita mais detalhadamente na publicação PCT WO 00/42072 de Presta. Além disso, os sítios de ligação na IgG1 humana para FcγRl, FcγRII, FcγRIII e FcRn foram mapeados e variantes com melhor ligação foram descritas (Vide Shields, R.L. et al., 2001 J. Biol. Chen. 276: 6591-6604).

[198] Ainda em outro aspecto, a glicosilação de um anticorpo é modificada. Por exemplo, um anticorpo aglicosado pode ser produzido

(isto é, o anticorpo não possui glicosilação). A glicosilação pode ser alterada para, por exemplo, aumentar a afinidade do anticorpo para "antígeno". Tais modificações de carboidratos podem ser realizadas, por exemplo, alterando um ou mais sítios de glicosilação dentro da sequência de anticorpos. Por exemplo, podem ser feitas uma ou mais substituições de aminoácidos que resultam na eliminação de um ou mais sítios de glicosilação de estrutura de região variável para eliminar assim a glicosilação nesse sítio. Essa aglicosilação pode aumentar a afinidade do anticorpo para o antígeno. Tal abordagem é descrita em mais detalhes nas Patentes U.S. Nos. 5.714.350 e 6.350.861 de Co et al.

[199] Adicionalmente ou em altenrativa, um anticorpo pode ser produzido com um tipo alterado de glicosilação, como um anticorpo hipofucosilado com quantidades reduzidas de resíduos fucosila ou um anticorpo com estruturas GlcNac bissecionadas aumentadas. Tais padrões alterados de glicosilação foram demonstrados para aumentar a capacidade de anticorpos ADCC. Tais modificações de carboidratos podem ser realizadas, por exemplo, expressando o anticorpo em uma célula hospedeira com maquinaria de glicosilação alterada. Células com maquinaria de glicosilação alterada foram descritas na técnica e podem ser usadas como células hospedeiras nas quais expressar anticorpos recombinantes da presente divulgação para assim produzir um anticorpo com glicosilação alterada. Por exemplo, EP 1.176.195 de Hang et al. descreve uma linhagem celular com um gene FUT8 funcionalmente interrompido, que codifica uma fucosila transferase, de modo que os anticorpos expressos nessa linhagem celular exibam hipofucosilação. A publicação PCT WO 03/035835 de Presta descreve uma linhagem celular CHO variante, células Lecl3, com capacidade reduzida de anexar fucose a carboidratos ligados a Asn (297), resultando também em hipofucosilação de anticorpos expressos nessa célula hospedeira (Vide também Shields, RL et al., 2002 J. Biol. Chem. 277: 26733-26740). Publicação PCT WO 99/54342 de Umana et al. descreve linhagens de células projetadas para expressar glicoprote glicosila transferases modificadoras de proteína (por exemplo, beta(1,4)-N acetilglucosaminiltransferase III (GnTIII)), de modo que os anticorpos expressos nas linhagens de células construídas geneticamente exibam estruturas GlcNac aumentadas em bissecção, o que resulta em atividade ADCC aumentada dos anticorpos (vide também Umana et al. al., 1999 Nat. Biotech. 17: 176-180). Métodos de Produção de Anticorpos

[200] São fornecidas aqui moléculas de ácido nucleico (por exemplo, moléculas de ácido nucleico substancialmente purificadas) que codificam polipeptídeos de agentes de ligação aqui descritos, como IDT11 ou IDT12, conforme estabelecido na Tabela 2, vetores (por exemplo, vetores de expressão) compreendendo os mesmos, células hospedeiras compreendendo esses vetores ou moléculas de ácido nucleico e métodos de produção de agentes de ligação aqui descritos, por exemplo, anticorpos ou fragmento de ligação a antígeno, que ligam especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa, por exemplo, NOV1401.

[201] Em aspectos específicos, é aqui fornecido um vetor (por exemplo, vetor de expressão) compreendendo um polinucleotídeo aqui descrito (por exemplo, Tabela 2), por exemplo, polinucleotídeo que codifica uma cadeia pesada de IDT11 ou IDT12 e/ou uma cadeia leve de IDT11 ou IDT12.

[202] Em certos aspectos, é aqui fornecida uma célula hospedeira compreendendo um vetor aqui descrito ou um polinucleotídeo aqui descrito, por exemplo, polinucleotídeo que codifica uma cadeia pesada de IDT11 ou IDT12 e/ou uma cadeia leve de IDT11 ou IDT12. Em aspectos específicos, a célula hospedeira é uma célula eucariótica. Em certos aspectos, a célula hospedeira é uma célula de mamífero (por exemplo, célula de mamífero não humana, como células CHO). Em aspectos particulares, uma célula hospedeira compreende (i) um vetor ou polinucleotídeo compreendendo sequências de nucleotídeos que codificam uma VH ou uma cadeia pesada de IDT11 ou IDT12 e (ii) um vetor ou polinucleotídeo compreendendo sequências de nucleotídeos que codificam uma VL ou uma cadeia leve de IDT11 ou IDT12. Em aspectos específicos, uma primeira célula hospedeira compreende um vetor ou polinucleotídeo compreendendo sequências de nucleotídeos que codificam uma VH ou uma cadeia pesada de IDT11 ou IDT12, e uma segunda célula hospedeira compreende um vetor ou polinucleotídeo compreendendo sequências de nucleotídeos que codificam uma VL ou uma cadeia leve de IDT11 ou IDT12.

[203] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um método de produção de um agente de ligação, por exemplo, um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno que liga um anticorpo anti-FXI/FXIa, tal como NOV1401, compreendendo a etapa de cultivar uma célula hospedeira descrita aqui em condições adequadas para expressão do agente de ligação.

[204] Em certos aspectos, o método de produção de um agente de ligação aqui fornecido (por exemplo, IDT11 ou IDT12) ou fragmento do mesmo adicionalmente compreende a purificação do agente de ligação ou fragmento do mesmo. Ácidos Nucleicos que Codificam Agentes de Ligação

[205] A presente divulgação fornece polinucleotídeos compreendendo sequências de nucleotídeos que codificam agentes de ligação aqui descritos. Em aspectos específicos, a presente divulgação fornece polinucleotídeos que compreendem sequências de ácidos nucleicos que codificam VH, VL, cadeia pesada de comprimento completo e/ou cadeia leve de comprimento completo de anticorpos aqui descritos que se ligam especificamente a um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, por exemplo, anticorpos IDT11 e IDT12. Tais sequências de ácidos nucleicos podem ser otimizadas para expressão em células de mamíferos (por exemplo, vide Tabela 2).

[206] Em aspectos específicos em que um agente de ligação é um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno, é aqui fornecido um polinucleotídeo que compreende sequências de nucleotídeos que codificam uma cadeia pesada, uma cadeia leve ou uma cadeia pesada e uma cadeia leve de um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa aqui descrito, por exemplo, anticorpo IDT11 ou IDT12. Em um aspecto, um polinucleotídeo aqui fornecido compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma cadeia pesada de um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa aqui descrito, por exemplo, anticorpo IDT11 ou IDT12. Em um aspecto, um polinucleotídeo aqui fornecido compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma cadeia leve de um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa aqui descrito, por exemplo, anticorpo IDT11 ou IDT12. Em um aspecto, um polinucleotídeo aqui fornecido compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma cadeia pesada e uma cadeia leve de um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa aqui descrito, por exemplo, anticorpo IDT11 ou IDT12.

[207] Em aspectos particulares, é aqui fornecido um polinucleotídeo que compreende uma ou mais sequências de nucleotídeos estabelecidas na Tabela 2, por exemplo, um polinucleotídeo que compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 42, 74, 106, 138, 170, 202, 234, 266, 298, 330, 348 ou 350 que codificam uma cadeia pesada; e um compreendendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 58, 90, 122, 154, 186, 218, 250, 282, 314 ou 346 que codifica uma cadeia leve.

[208] Em certos aspectos, os polinucleotídeos aqui fornecidos compreendem sequências de nucleotídeos que são substancialmente idênticas (por exemplo, pelo menos 65%, 80%, 80%, 90%, 95%, 98% ou 99%) às sequências de nucleotídeos daquelas identificadas na Tabela 2, por exemplo, SEQ ID NO: 348 ou 350 que codifica uma cadeia pesada de IDT11 ou IDT12; e SEQ ID NO: 58 ou 90 que codifica uma cadeia leve de IDT11 ou IDT12. Quando expresso a partir de vetores de expressão apropriados, os polipeptídeos codificados por esses polinucleotídeos são capazes de se ligar a um anticorpo anti-FXI/FXIa, como o anticorpo NOV1401.

[209] Devido à degeneração do código, uma variedade de sequências de ácidos nucleicos codificará cada uma das sequências de aminoácidos da imunoglobulina.

[210] As sequências de polinucleotídeo podem ser produzidas por síntese de DNA em fase sólida de novo ou por mutagênese por PCR de uma sequência existente (por exemplo, sequências como aqui descritas) que codifica um agente de ligação, por exemplo, um agente de ligação que é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo (por exemplo, fragmento de Fab) que se liga a um anticorpo anti-FXI/FXIa. A síntese química direta de ácidos nucleicos pode ser realizada por métodos conhecidos na técnica, como o método fosfotriéster de Narang et al., 1979, Meth. Enzymol. 68:90; o método fosfodiéster de Brown et al., Meth. Enzymol. 68: 109, 1979; o método dietilfosforamiditaa de Beaucage et al., Tetra. Lett. 22: 1859, 1981; e o método de suporte sólido da Patente U.S. No. 4.458.066. A introdução de mutações em uma sequência polinucleotídica por PCR pode ser realizada como descrito em, por exemplo, PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification, H.A. Erlich (Ed.), Freeman Press, NY, NY, 1992; PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis et al. (Ed.), Academic Press, San Diego, CA, 1990; Mattila et al., Nucleic Acids Res. 19:967, 1991; and Eckert et al., PCR Methods and Applications 1:17, 1991.

[211] Também são fornecidos na presente divulgação vetores de expressão e células hospedeiras para a produção de um agente de ligação aqui descrito, por exemplo, um agente de ligação que é um anticorpo que liga um anticorpo anti-FXI/FXIa. Vários vetores de expressão podem ser empregues para expressar os polinucleotídeos que codificam as cadeias de anticorpo de ligação a FXIa ou fragmentos de ligação. Tanto os vetores de expressão virais quanto os não virais podem ser usados para produzir os anticorpos em uma célula hospedeira de mamífero. Os vetores e sistemas não virais incluem plasmídeos, vetores epissomais, tipicamente com um cassete de expressão para expressar uma proteína ou RNA e cromossomos artificiais humanos (Vide, por exemplo, Harrington et al., Nat Genet 15: 345, 1997). Por exemplo, vetores não virais úteis para expressão de polinucleotídeos e polipeptídeos em células de mamíferos (por exemplo, humanos) incluem pThioHis A, B & C, pcDNA3.1/His, pEBVHis A, B & C (Invitrogen, San Diego, CA), vetores MPSV e numerosos outros vetores conhecidos na técnica por expressar outras proteínas. Os vetores virais úteis incluem vetores baseados em retrovírus, adenovírus, vírus adenoassociados, vírus do herpes, vetores baseados em SV40, vírus do papiloma, vírus HBP Epstein Barr, vetores de vírus vaccinia e vírus da Floresta Semliki (SFV). Vide Brent et al., Supra; Smith, Annu. Rev. Microbiol. 49: 807, 1995; e Rosenfeld et al., Cell 68: 143, 1992.

[212] A escolha do vetor de expressão depende das células hospedeiras pretendidas nas quais o vetor deve ser expresso. Tipicamente, os vetores de expressão contêm um promotor e outras sequências reguladoras (por exemplo, intensificadores) que estão operacionalmente ligadas aos polinucleotídeos que codificam um agente de ligação aqui descrito, por exemplo, um agente de ligação que é um anticorpo que liga um anticorpo anti-FXI/FXIa, tal como NOV1401. Em algumas modalidades, um promotor induzível é empregue para impedir a expressão de sequências inseridas, exceto sob condições de indução. Promotores induzíveis incluem, por exemplo, promotor de arabinose, lacZ, metalotioneína ou um promotor de choque térmico. Culturas de organismos transformados podem ser expandidas sob condições não indutoras sem influenciar a população por sequências codificadoras cujos produtos de expressão são mais bem tolerados pelas células hospedeiras. Além dos promotores, outros elementos reguladores também podem ser necessários ou desejados para a expressão eficiente de um agente de ligação, por exemplo, um agente de ligação que é um anticorpo que liga um anticorpo anti-FXI/FXIa, tal como NOV1401. Estes elementos incluem tipicamente um códon de iniciação ATG e um sítio de ligação a ribossoma adjacente ou outras sequências. Além disso, a eficiência da expressão pode ser aprimorada pela inclusão de intensificadores apropriados ao sistema celular em uso (Vide, por exemplo, Scharf et al., Results Probl. Cell Differ. 20: 125, 1994; e Bittner et al., Meth. Enzymol., 153: 516, 1987). Por exemplo, o intensificador de SV40 ou intensificador de CMV pode ser usado para aumentar a expressão em células hospedeiras de mamíferos.

[213] Os vetores de expressão também podem fornecer uma posição de sequência de sinal de secreção para formar uma proteína de fusão com polipeptídeos codificados pelas sequências inseridas do agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa. Em aspectos específicos, as sequências do agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa inseridas são ligadas a sequências de sinal antes da inclusão no vetor. Os vetores a serem utilizados para receber sequências que codificam domínios variáveis de cadeia leve e pesada de agente de ligação a anticorpo anti- FXI/FXIa (por exemplo, agente de ligação a anticorpo NOV1401) e, em certos aspectos, também codificam regiões constantes ou partes das mesmas. Tais vetores permitem a expressão das regiões variáveis como proteínas de fusão com as regiões constantes, levando à produção de anticorpos intactos ou fragmentos dos mesmos. Normalmente, essas regiões constantes são humanas.

[214] As células hospedeiras para abrigar e expressar um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, agente de ligação a anticorpo NOV1401) podem ser procarióticas ou eucarióticas. E. coli é um hospedeiro procariótico útil para clonar e expressar os polinucleotídeos da presente divulgação. Outros hospedeiros microbianos adequados para uso incluem bacilos, como Bacillus subtilis, e outras enterobactérias, como Salmonella, Serratia e várias espécies de Pseudomonas. Nestes hospedeiros procarióticos, pode-se também criar vetores de expressão, que normalmente contêm sequências de controle de expressão compatíveis com a célula hospedeira (por exemplo, uma origem de replicação). Além disso, qualquer número de uma variedade de promotores bem conhecidos estará presente, como o sistema promotor de lactose, um sistema promotor de triptofano (trp), um sistema promotor de beta-lactamase ou um sistema promotor do fago lambda. Os promotores tipicamente controlam a expressão, opcionalmente com uma sequência operadora, e têm sequências no sítio de ligação a ribossomo e similares, para iniciar e concluir a transcrição e tradução. Outros micróbios, como levedura, também podem ser empregues para expressar polipeptídeos de ligação a FXIa da presente divulgação. As células de insetos em combinação com vetores de baculovírus também podem ser usadas.

[215] Em algumas modalidades específicas, as células hospedeiras de mamíferos são usadas para expressar e produzir polipeptídeos do agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, agente de ligação a anticorpo NOV1401) da presente divulgação. Estes incluem qualquer célula humana ou animal mortal, ou normal, ou anormal, ou imortal. Por exemplo, foram desenvolvidas várias linhagens de células hospedeiras adequadas capazes de secretar imunoglobulinas intactas, incluindo as linhagens de células CHO, várias linhagens de células Cos, células HeLa, linhagens de células de mieloma e células B transformadas. O uso de cultura de células de tecidos de mamíferos para expressar polipeptídeos é discutido geralmente em, por exemplo, Winnacker, FROM GENES TO CLONES, VCH Publishers, N.Y., N.Y., 1987. Os vetores de expressão para células hospedeiras de mamíferos podem incluir sequências de controle de expressão, como uma origem de replicação, um promotor e um intensificador (Vide, por exemplo, Queen, et al., Immunol. Rev. 89: 49-68, 1986) e sites de informações de processamento necessários, como sítios de ligação a ribossomo, sítios de emenda ao RNA, sítios de poliadenilação e sequências terminadoras transcricionais.

[216] Esses vetores de expressão geralmente contêm promotores derivados de genes de mamíferos ou de vírus de mamíferos. Os promotores adequados podem ser constitutivos, específicos do tipo celular, específicos do estágio e/ou moduláveis ou reguláveis. Os promotores úteis incluem, entre outros, o promotor metalotioneína, o principal promotor tardio do adenovírus constitutivo, o promotor MMTV induzível por dexametasona, o promotor SV40, o promotor MRP polIII, o promotor MPSV, o promotor constitutivo do MPSV, o promotor CMV indutível pela tetraciclina (como como promotor humano imediato- precoce do CMV), combinações constitutivas do promotor CMV e promotor-intensificador conhecidas na técnica.

[217] Os métodos para a introdução de vetores de expressão contendo as sequências de polinucleotídeo de interesse variam dependendo do tipo de hospedeiro celular. Por exemplo, a transfecção de cloreto de cálcio é comumente utilizada para células procarióticas, enquanto o tratamento ou eletroporação de fosfato de cálcio pode ser usado para outros hospedeiros celulares. (Vide geralmente Sambrook, et al., Supra). Outros métodos incluem, por exemplo, eletroporação,

tratamento com fosfato de cálcio, transformação mediada por lipossomas, injeção e microinjeção, métodos balísticos, virossomas, imunolipossomos, policação: conjugados de ácidos nucléicos, DNA nu, virions artificiais, fusão com a proteína estrutural do vírus do herpes VP22 (Elliot e O'Hare, Cell 88: 223, 1997), captação de DNA melhorada por agente e transdução ex vivo. Para a produção a longo prazo e de alto rendimento de proteínas recombinantes, a expressão estável será frequentemente desejada. Por exemplo, linhagens de células que expressam estavelmente cadeias de anticorpo de ligação a FXIa ou fragmentos de ligação podem ser preparadas usando vetores de expressão da presente divulgação que contêm origens virais de replicação ou elementos de expressão endógenos e um gene marcador selecionável. Após a introdução do vetor, as células podem crescer por 1-2 dias em um meio enriquecido antes de serem trocadas para um meio seletivo. O objetivo do marcador selecionável é conferir resistência à seleção, e sua presença permite o crescimento de células que expressam com sucesso as sequências introduzidas em meio seletivo. As células resistentes e estavelmente transfectadas podem ser proliferadas utilizando técnicas de cultura de tecidos apropriadas ao tipo de célula.

[218] Por conseguinte, em outro aspecto, a presente divulgação fornece um método para a preparação de um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, agente de ligação a anticorpo NOV1401) otimizado para expressão em uma célula de mamífero que consiste em: uma sequência de anticorpo de cadeia pesada de comprimento completo com uma sequência selecionada a partir daqueles fornecidas na Tabela 2; e uma sequência de anticorpos de cadeia leve de comprimento completo tendo uma sequência selecionada a partir das fornecidas na Tabela 2; alterar pelo menos um resíduo de aminoácido dentro da sequência de anticorpos de cadeia pesada de comprimento completo e/ou na sequência de anticorpos de cadeia leve de comprimento completo para criar pelo menos uma sequência de anticorpos alterada; e expressar a sequência de anticorpos alterada como uma proteína. Em uma modalidade, a alteração da cadeia pesada ou leve está na região de estrutura da cadeia pesada ou leve.

[219] A sequência de anticorpos alterada também pode ser preparada por triagem de bibliotecas de anticorpos tendo sequências CDR3 fixas ou determinantes de ligação essenciais mínimos, conforme descrito em US2005/0255552 e diversidade nas sequências CDR1 e CDR2. A triagem pode ser realizada de acordo com qualquer tecnologia de triagem apropriada para a triagem de anticorpos de bibliotecas de anticorpos, como a tecnologia de exibição de fagos.

[220] Técnicas padrão de biologia molecular podem ser usadas para preparar e expressar a sequência de anticorpos alterada. O anticorpo codificado pela sequência (s) de anticorpo alterada é aquele que retém uma, algumas ou todas as propriedades funcionais dos agentes de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, agentes de ligação a anticorpo NOV1401) aqui descritos, cujas propriedades funcionais incluem, mas não estão limitados a, ligar especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo NOV1401), por exemplo, e entrar em contato com um ou mais resíduos de aminoácidos de CDR do anti-FXI/FXIa; inibir a ligação de um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, anticorpo NOV1401) ao FXI e/ou FXIa humano; inibir a capacidade de um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo (por exemplo, anticorpo NOV1401) para bloquear a atividade de FXIa; e inibir ou reverter um ou mais efeitos anticoagulantes de um anticorpo anti- FXI/FXIa alvo (por exemplo, anticorpo NOV1401).

[221] Em certas modalidades dos métodos de construção genética de anticorpos da presente divulgação, mutações podem ser introduzidas aleatória ou seletivamente ao longo de toda ou parte de uma sequência de codificação de agente de ligação a anticorpo anti- FXI/FXIa e os agentes de ligação de anticorpo a anti-FXI/FXIa podem ser rastreados quanto à atividade de ligação e/ou outras propriedades funcionais, como descrito aqui. Métodos mutacionais foram descritos na técnica. Por exemplo, a Publicação PCT WO 02/092780 de Short descreve métodos para criar e rastrear mutações de anticorpos usando mutagênese por saturação, montagem de ligação sintética ou uma combinação das mesmas. Alternativamente, a publicação PCT WO 03/074679 de Lazar et al. descreve métodos de uso de métodos de triagem computacional para otimizar propriedades físico-químicas de anticorpos.

[222] Em certos aspectos da presente divulgação, os agentes de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, agente de ligação a anticorpo NOV1401) foram modificados para remover os sítios de desamidação. Sabe-se que a desamidação causa alterações estruturais e funcionais em um peptídeo ou proteína. A desaminação pode resultar em menor bioatividade, bem como alterações na farmacocinética e antigenicidade da proteína farmacêutica. (Anal Chem. 1 de março de 2005; 77 (5): 1432-9).

[223] Em certos aspectos da presente divulgação, os agentes de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, agente de ligação a anticorpo NOV1401) aqui descritos foram modificados para aumentar pI e melhorar suas propriedades semelhantes a drogas. O pI de uma proteína é um determinante chave das propriedades biofísicas gerais de uma molécula. Sabe-se que anticorpos e polipeptídeos que possuem baixos pIs são menos solúveis, menos estáveis e propensos à agregação. Além disso, a purificação de anticorpos e polipeptídeos com baixo pI é desafiadora e pode ser problemática, especialmente durante a ampliação para uso clínico. O aumento do pI de agentes de ligação,

como anticorpos ou Fabs, da presente divulgação melhorou sua solubilidade, permitindo que os antibióticos fossem formulados em concentrações mais altas (> 100 mg/ml). A formulação dos anticorpos em altas concentrações (por exemplo, > 100mg/ml) oferece a vantagem de poder administrar doses mais altas dos anticorpos, o que, por sua vez, pode permitir frequência de dosagem reduzida, uma vantagem significativa para o tratamento de doenças crônicas, incluindo trombose e/ou distúrbios tromboembólicos. Os pIs mais altos também podem aumentar a reciclagem mediada por FcRn da versão IgG do anticorpo, permitindo que a droga persista no corpo por mais tempo, exigindo menos injeções. Finalmente, a estabilidade geral dos anticorpos é significativamente melhorada devido ao pI mais alto, resultando em maior prazo de validade e bioatividade in vivo. Em aspectos específicos, o pI de um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa é maior ou igual a 8,2.

[224] As propriedades funcionais dos anticorpos alterados podem ser avaliadas usando ensaios padrão disponíveis na técnica e/ou aqui descritos, como os apresentados nos Exemplos (por exemplo, ELISAs, ensaio aPTT, ensaio TGA). Usos Profiláticos e Terapêuticos

[225] A presente divulgação refere-se a métodos para reverter (por exemplo, reverter parcialmente) ou diminuir o efeito anticoagulante de um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo NOV1401) em um paciente sendo tratado com o anticorpo anti-FXI/FXIa ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um agente de ligação aqui fornecido, por exemplo, um agente de ligação (por exemplo, anticorpo IDT11 ou IDT12) que se liga a um anticorpo anti-FXI/FXIa e é capaz de reverter um ou mais efeitos anticoagulantes. Em certos aspectos, a presente divulgação se refere a métodos para reverter (por exemplo, reverter parcialmente) ou diminuir o efeito anticoagulante de um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo NOV1401) em um paciente sendo tratado com o anticorpo anti-FXI/FXIa ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de uma composição farmacêutica compreendendo um agente de ligação aqui fornecido, por exemplo, um agente de ligação (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, conforme estabelecido na Tabela 2) que liga um anticorpo anti-FXI/FXIa e é capaz de reverter um ou mais efeitos anticoagulantes.

[226] Em aspectos específicos, a reversão dos efeitos anticoagulantes de um anticorpo anti-FXI/FXIa pode ser necessária por um paciente para cirurgia de emergência/procedimentos urgentes e em sangramento descontrolado ou com risco de vida. Em certos aspectos, a reversão (por exemplo, reversão parcial) dos efeitos anticoagulantes de um anticorpo anti-FXI/FXIa pode ser necessária por um paciente no caso de sangramento não controlado, como sangramento gastrointestinal (GI), sangramento intracraniano (IC) ou derrame cerebral. Em aspectos particulares, um paciente está sendo tratado com um anticorpo anti-FXI/FXIa para gerenciar, tratar, prevenir ou reduzir o risco de uma doença ou distúrbio tromboembólico, por exemplo, reduzindo o risco de derrame ou trombose (por exemplo, embolia sistêmica) em pacientes com fibrilação atrial (por exemplo, fibrilação atrial não valvular), doença renal crônica, como insuficiência renal terminal (ESRD) em hemodiálise. Em outros aspectos específicos, o paciente tem demonstrado alto risco de sangramento. Em aspectos específicos, exemplos não limitativos de agentes de ligação a anticorpos anti-FXI/FXIa para uso nesses métodos incluem anticorpos (por exemplo, anticorpos anti-idiotipo) e fragmentos de ligação a antígeno aqui descritos, por exemplo, na Tabela 2, por exemplo, anticorpos IDT11 e IDT12.

[227] Em certos aspectos, a presente divulgação refere-se a métodos para reduzir o tempo de coagulação em um objeto administrado com um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401), compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de umo agente de ligação aqui fornecido, por exemplo, um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo ou fragmento de ligação a antígeno, conforme estabelecido na Tabela 2) que se liga ao anticorpo anti-FXI/FXIa e é capaz de inibir a ligação do anticorpo anti-FXI/FXIa ao FXI/FXIa humano. Em certos aspectos, a presente divulgação refere-se a métodos para reduzir o tempo de coagulação em um objeto administrado com um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401), compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de composições farmacêuticas compreendendo um agente de ligação fornecido aqui, por exemplo, um agente de ligação (por exemplo, anticorpo anti-idiotipo ou fragmento de ligação a antígeno, conforme estabelecido na Tabela 2) que liga o anticorpo anti-FXI/FXIa e é capaz de inibir a ligação do anti-FXI/FXIa anticorpo para FXI/FXIa humano.

[228] Em aspectos específicos, a presente divulgação refere-se a métodos para gerenciar o sangramento ou risco de sangramento ou para reduzir o sangramento ou risco de sangramento em um paciente sendo tratado com um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, como anticorpo NOV1401), compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um agente de ligação aqui fornecido, por exemplo, um agente de ligação (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, conforme descrito na Tabela 2) que se liga a um anticorpo anti-FXI/FXIa e é capaz de reverter um ou mais efeitos anticoagulantes, ou administração de uma quantidade eficaz de uma composição farmacêutica compreendendo o agente de ligação aqui fornecido. Em aspectos específicos, a reversão dos efeitos anticoagulantes de um anticorpo anti-FXI/FXIa pode ser necessária por um paciente para cirurgia de emergência/procedimentos urgentes e em sangramento descontrolado ou com risco de vida (por exemplo, sangramento GI, sangramento por IC ou derrame hemorrágico). Em aspectos particulares, um paciente está sendo tratado com um anticorpo anti-FXI/FXIa para gerenciar, tratar, prevenir ou reduzir o risco de uma doença ou distúrbio tromboembólico, por exemplo, reduzindo o risco de derrame ou trombose (por exemplo, embolia sistêmica) em pacientes com fibrilação atrial (por exemplo, fibrilação atrial não valvular), doença renal crônica, como insuficiência renal terminal (ESRD) em hemodiálise. Em outros aspectos específicos, o paciente tem demonstrado alto risco de sangramento. Em aspectos específicos, exemplos não limitativos de agentes de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa para uso nesses métodos incluem anticorpos (por exemplo, anticorpos anti-idiotipo e fragmentos dos mesmos, como Fabs) e fragmentos de ligação a antígeno aqui descritos, por exemplo, na Tabela 2, por exemplo, anticorpos IDT11 e IDT12; anticorpos compreendendo CDRs de VH e CDRs de VL de tais anticorpos; anticorpos que se ligam ao mesmo epitopo (s) no anticorpo NOV1401 alvo que tais anticorpos.

[229] Em um aspecto particular, são fornecidos neste documento métodos de gerenciamento de sangramento ou risco de sangramento em um paciente tratado ou administrado com um anticorpo anti-FXI descrito aqui (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como NOV1401 ou um anticorpo anti-FXI compreendendo HCDRs e LCDRs de NOV1401), compreendendo a etapa de administrar ao paciente em necessidade do mesmo, um anticorpo anti-idiotipo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo (por exemplo, Fab), do anticorpo anti-FXI, em que a ligação anti-idiotipo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo (por exemplo, Fab) especificamente liga o anticorpo anti-FXI e impede que o anticorpo anti-FXI se ligue a FXI. Em modalidades específicas, um anticorpo anti-idiotipo (por exemplo, IDT11 ou IDT12) ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo reverte os efeitos de um anticorpo anti-FXI aqui descrito para mitigar os riscos de sangramento, por exemplo, durante grandes cirurgias ou traumas urgentes.

[230] Em aspectos específicos, um anticorpo anti-idiotipo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo reverte (por exemplo, reverte parcialmente) ou inibe os efeitos anticoagulantes de um anticorpo anti-FXI. Em aspectos particulares, o anticorpo anti-idiotipo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é administrado a um paciente em necessidade do mesmo do mesmo para reverter temporariamente o efeito anticoagulante de um anticorpo anti-FXI aqui descrito (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, como NOV1401 ou um anticorpo anti-FXI compreendendo HCDRs e LCDRs de NOV1401).

[231] Em um aspecto particular, são fornecidos neste documento métodos de gerenciamento de sangramento ou risco de sangramento em um paciente tratado ou administrado com um anticorpo anti-FXI tal como NOV1401 (por exemplo, SEQ ID NOs: 14 e 25), compreendendo a etapa de administrar ao paciente em necessidade do mesmo, um anticorpo anti-idiotipo (por exemplo, IDT11 ou IDT12), ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, do anticorpo anti-FXI, tal como NOV1401 (por exemplo, SEQ ID NOs: 14 e 25), em que o anti-idiotipo, ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo (por exemplo, Fab), liga-se especificamente à região de ligação a antígeno de um anticorpo anti- FXI, tal como NOV1401 (por exemplo, SEQ ID NOs: 14 e 25) e bloqueia o anticorpo anti-FXI de se ligar a FXI e/ou FXIa. Em uma modalidade específica, o anticorpo anti-idiotipo (por exemplo, IDT11 ou IDT12), ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de um anticorpo anti-FXI como NOV1401 (por exemplo, SEQ ID NOs: 14 e 25) reverte ou inibe um ou mais dos efeitos anticoagulantes do anticorpo anti-FXI (por exemplo, NOV1401). Em certas modalidades, é alcançada uma reversão ou inibição temporária de um ou mais dos efeitos anticoagulantes do anticorpo anti-FXI (por exemplo, NOV1401). Em modalidades específicas, após a reversão ou inibição temporária do anticorpo anti-FXI (por exemplo, NOV1401), o anticorpo anti-FXI (por exemplo, NOV1401) é novamente administrado ao paciente.

[232] Como usado aqui, os termos "quantidade eficaz" ou "quantidade terapeuticamente eficaz" se referem a uma quantidade de uma terapia (por exemplo, um agente de ligação fornecido aqui, como um anticorpo anti-idiotipo que liga um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, NOV1401) ou uma composição farmacêutica fornecida aqui) que é suficiente para reduzir e/ou melhorar a gravidade e/ou duração de uma determinada condição, distúrbio ou doença e/ou sintoma relacionado aos mesmos. Esses termos também abrangem uma quantidade necessária para a redução, desaceleração ou melhoria do avanço ou progressão de uma determinada condição, distúrbio ou doença, redução, desaceleração ou melhoria da recorrência, desenvolvimento ou início de uma determinada condição, distúrbio ou doença e/ou para melhorar ou aprimorar o efeito (s) profilático ou terapêutico de outra terapia (por exemplo, uma terapia diferente de um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa aqui fornecido). Em alguns aspectos, "quantidade eficaz", tal como aqui utilizado, também se refere à quantidade de um anticorpo aqui descrito para obter um resultado especificado, por exemplo, redução ou reversão em um ou mais efeitos anticoagulantes (por exemplo, prolongamento de aPTT e redução na quantidade de trombina em um ensaio de geração de trombina (TGA) no plasma humano) de um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo; e redução, ou bloqueio, da ligação de um anticorpo anti-FXI/FXIa alvo a FXI/FXIa.

[233] Em aspectos específicos, um paciente que pode estar necessitando ou pode se beneficiar dos métodos aqui descritos (por exemplo, métodos para reverter efeitos anticoagulantes com agentes de ligação a anticorpos anti-FXI/FXIa), foi tratado com um anticorpo anti- FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401) para gerenciar, tratar, prevenir ou reduzir o risco de doença ou distúrbio tromboembólico, por exemplo, derrame trombótico, fibrilação atrial, prevenção de derrame na fibrilação atrial (SPAF), trombose venosa profunda, tromboembolismo venoso, embolia pulmonar, síndromes coronárias agudas (SCA), derrame isquêmico, isquemia aguda de membro, hipertensão pulmonar tromboembólica crônica, ou embolia sistêmica. Em outros aspectos específicos, o paciente tem demonstrado alto risco de sangramento.

[234] Em outros aspectos, um paciente, que pode estar precisando ou se beneficiar dos métodos aqui descritos (por exemplo, métodos para reverter efeitos anticoagulantes com agentes de ligação a anticorpos anti-FXI/FXIa), foi tratado com um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401) para tratamento de VTE agudo, prevenção primária e secundária prolongada de VTE, prevenção de eventos tromboembólicos adversos graves em paciente em diálise (com ou sem AF), prevenção de eventos cardiovasculares e cerebrais importantes (MACCE) em pacientes com CAD submetidos a PCI e recebendo terapia antiplaquetária única ou dupla, pacientes com síndromes coronárias pós-agudas (ACS), trombocitopenia induzida por heparina (HIT), prevenção de eventos tromboembólicos em pacientes com insuficiência cardíaca e prevenção secundária de derrame.

[235] Em aspectos específicos, um dos seguintes grupos de objetos está sendo tratado com um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401)

e pode estar necessitando ou se beneficiar do métodos aqui descritos (por exemplo, métodos para reverter efeitos anticoagulantes com agentes de ligação a anticorpos anti-FXI/FXIa): • Objetos com indicações para terapia anticoagulante crônica (por exemplo, AF, trombo ventricular esquerdo, derrame cardioembólico anterior); • objetos com risco intermediário a alto de sangramento maior; • objetos submetidos à intervenção coronária percutânea (PCI) eletiva ou primária com stent, que pode exigir a terapia antiplaquetária dupla (aspirina e antagonistas dos receptores P2Y12) para prevenir a trombose de stent.

[236] Em aspectos específicos, um objeto que pode precisar ou se beneficiar dos métodos aqui descritos (por exemplo, métodos para reverter efeitos anticoagulantes com agentes de ligação a anticorpos anti-FXI/FXIa), foi tratado com um anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401), para gerenciar, tratar, prevenir ou reduzir o risco de uma das seguintes condições: • tromboembolismo em objetos com arritmia cardíaca suspeita ou confirmada, como fibrilação atrial paroxística, persistente ou permanente ou flutter atrial; • prevenção de derrame na fibrilação atrial (SPAF), cuja subpopulação consiste em pacientes com AF submetidos a intervenções coronárias percutâneas (PCI); • tratamento de eventos tromboembólicos venosos agudos (VTE) e prevenção secundária prolongada de VTE em pacientes com alto risco de sangramento; • eventos cerebrais e cardiovasculares na prevenção secundária após ataque isquêmico transitório (TIA) ou derrame não incapacitante e prevenção de eventos tromboembólicos na insuficiência cardíaca com ritmo sinusal;

• formação de coágulo no átrio esquerdo e tromboembolismo em objetos submetidos à cardioversão por arritmia cardíaca; • trombose antes, durante e após o procedimento de ablação para arritmia cardíaca; • trombose venosa, incluindo, mas não exclusivamente, tratamento e prevenção secundária de trombose venosa profunda ou superficial nos membros inferiores ou membro superior, trombose nas veias abdominais e torácicas, trombose sinusal e trombose das veias jugulares; • trombose em qualquer superfície artificial nas veias, como fios de cateter ou marca-passo; • embolia pulmonar em pacientes com ou sem trombose venosa; • Hipertensão Pulmonar Tromboembólica Crônica (CTEPH); • trombose arterial em placa aterosclerótica rompida, trombose em prótese intra-arterial ou cateter e trombose em artérias aparentemente normais, isso inclui, mas não exclusivamente, síndromes coronárias agudas, infarto do miocárdio com supradesnivelamento do ST, infarto do miocárdio sem supradesnivelamento do ST, angina instável, trombose de stent, trombose de qualquer superfície artificial no sistema arterial e trombose das artérias pulmonares em objetos com ou sem hipertensão pulmonar; • trombose e tromboembolismo em pacientes submetidos a intervenções coronárias percutâneas (PCI); • derrames cardioembólicos e criptogênicos; • trombose em pacientes com neoplasias invasivas e não invasivas do câncer; • trombose sobre um cateter residente; • trombose e tromboembolismo em pacientes gravemente doentes;

• trombose e tromboembolismo cardíacos, incluindo, mas não exclusivamente, trombose cardíaca após infarto do miocárdio, trombose cardíaca relacionada a condições como aneurisma cardíaco, fibrose miocárdica, aumento e insuficiência cardíaca, miocardite e superfície artificial no coração; • tromboembolismo em pacientes com cardiopatia valvular com ou sem fibrilação atrial; • tromboembolismo sobre próteses mecânicas ou biológicas valvulares; • lesões ou traumas em pacientes que apresentavam adesivos cardíacos nativos ou artificiais, tubos de condutos arteriais ou venosos após reparo cardíaco de malformações cardíacas simples ou complexas; • trombose e tromboembolismo venosos após cirurgia de substituição do joelho, cirurgia de substituição do quadril e cirurgia ortopédica, torácica ou cirurgia abdominal; • trombose arterial ou venosa após neurocirurgia, incluindo intervenções intracranianas e da medula espinhal; • trombofilia congênita ou adquirida, incluindo, mas não exclusivamente, fator V Leiden, mutação da protrombina, antitrombina III, deficiências de proteína C e proteína S, mutação do Fator XIII, disfibrinogenemia familiar, deficiência congênita do plasminogênio, níveis aumentados de Fator XI, doença falciforme, síndrome antifosfolipídica, doença autoimune, doença intestinal crônica, síndrome nefrótica, uremia hemolítica, doença mieloproliferativa, coagulação intra vascular disseminada, hemoglobinúria paroxística noturna e trombopenia induzida por heparina; • trombose e tromboembolismo na doença renal crônica; • trombose e tromboembolismo na doença renal terminal (ESRD);

• trombose e tromboembolismo em pacientes com doença renal crônica ou ESRD em hemodiálise; e • trombose e tromboembolismo em pacientes submetidos a hemodiálise e/ou oxigenação extracorpórea por membrana.

[237] Em um aspecto específico, um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, IDT11 ou IDT12) ou uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação é para uso em métodos de redução do sangramento ou risco de sangramento ou gerenciamento de sangramento ou risco de sangramento, em um paciente sendo tratado ou administrado com um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401) para reduzir o risco de derrame e/ou embolia sistêmica, em que o paciente tem fibrilação atrial não valvular.

[238] Em um aspecto específico, um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, IDT11 ou IDT12) ou uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação é para uso em métodos de redução do sangramento ou risco de sangramento ou gerenciamento de sangramento ou risco de sangramento, em um paciente sendo tratado ou administrado com um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401) para reduzir o risco de derrame e/ou embolia sistêmica, em que o paciente tem fibrilação atrial não valvular com um alto risco demonstrado de sangramento.

[239] Em um aspecto específico, um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, IDT11 ou IDT12) ou uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação é para uso em métodos de redução do sangramento ou risco de sangramento ou gerenciamento de sangramento ou risco de sangramento, em um paciente sendo tratado ou administrado com um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo

NOV1401) para reduzir o risco de derrame e/ou embolia sistêmica, em que o paciente tem DRCT e está submetido à diálise.

[240] Em um aspecto específico, um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, IDT11 ou IDT12) ou uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação é para uso em métodos de redução do sangramento ou risco de sangramento ou gerenciamento de sangramento ou risco de sangramento, em um paciente sendo tratado ou administrado com um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401) para reduzir o risco de derrame e/ou embolia sistêmica, em que o paciente tem fibrilação atrial não valvular e ESRD e está em diálise.

[241] Em aspectos específicos, um objeto que pode precisar ou se beneficiar dos métodos aqui descritos (por exemplo, métodos para reverter efeitos anticoagulantes com agentes de ligação a anticorpos anti-FXI/FXIa), foi tratado com um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401) em combinação com outros agentes para a prevenção, tratamento ou melhoria de distúrbios tromboembólicos. Por exemplo, as terapias com estatina podem ser usadas em combinação com os anticorpos FXIa e fragmentos de ligação a antígeno da presente divulgação para o tratamento de pacientes com distúrbios trombóticos e/ou tromboembólicos. Esses objetos submetidos à terapia combinada podem estar necessitando ou se beneficiar dos métodos aqui descritos (por exemplo, métodos para reverter efeitos anticoagulantes com agentes de ligação a anticorpos anti-FXI/FXIa).

[242] Em um aspecto específico, são fornecidos aqui métodos para reduzir o sangramento ou risco de sangramento, ou gerenciar o sangramento ou risco de sangramento, em um paciente sendo tratado ou administrado com um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo,

anticorpo descrito na Tabela 1, como anticorpo NOV1401), o referido método compreende a administração de um agente de ligação que se liga especificamente ao anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo NOV1401) e reverte um efeito anticoagulante do anticorpo anti- FXI/FXIa.

Em aspectos particulares, o sangramento ou risco de sangramento está associado a trauma, cirurgia ou pós-parto.

Em outro aspecto específico, o sangramento ou risco de sangramento está associado à cirurgia de emergência ou procedimentos urgentes.

Em outros aspectos particulares, o sangramento descontrolado ou com risco de vida, tal como sangramento GI ou sangramento IC.

Em aspectos específicos, o agente de ligação é um anticorpo, como um anticorpo anti-idiotipo (por exemplo, IDT11 ou IDT12) que liga especificamente um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, NOV1401). Em aspectos específicos adicionais, o agente de ligação é um anticorpo nti-idiotipo que se liga especificamente a um ou mais epitopos dentro das regiões variáveis de um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, NOV1401). Em aspectos mais específicos, o agente de ligação é um anticorpo anti-idiotipo IgG de comprimento completo que se liga especificamente a um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, NOV1401). Em aspectos particulares, o agente de ligação é um anticorpo anti- idiotipo ou um fragmento de ligação a antígeno, que compreende sequências de aminoácidos selecionadas na Tabela 2. Em aspectos particulares, o agente de ligação é um anticorpo anti-idiotipo ou um fragmento de ligação a antígeno, como anticorpo IDT11 ou IDT12, conforme estabelecido na Tabela 2. Em aspectos particulares, o agente de ligação é um anticorpo anti-idiotipo ou um fragmento de ligação a antígeno, como IDT11, conforme estabelecido na Tabela 2. Em aspectos particulares, o agente de ligação é um anticorpo anti-idiotipo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, como o IDT12, conforme apresentado na Tabela 2.

[243] Em aspectos específicos, o sangramento é tipicamente associado a, mas não limitado a, trauma, cirurgia, menstruação ou pós- parto. Portanto, nessas circunstâncias, um indivíduo que foi tratado com um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1 como NOV1401), pode precisar de terapia rápida e eficaz, como um anti-FXI/Agente de ligação a anticorpo FXIa aqui descrito, para reduzir o sangramento ou reduzir o risco de sangramento. Em aspectos específicos, o sangramento prolongado pode ocorrer após um trauma maior ou após a cirurgia, como cirurgias envolvendo órgãos com alta área fibrinolítica, como mucosa bucal, nasal, genital ou urinária. A extração dentária, amigdalectomia e ablação do útero ou da próstata são exemplos mais não limitativos de cirurgias que envolvem alto risco de sangramento. Em aspectos específicos, o uso concomitante de antiplaquetas, outros anticoagulantes e agentes fibrinolíticos pode aumentar o risco de sangramento.

[244] Em certos aspectos, é desejada uma reversão ou inibição temporária de um ou mais dos efeitos anticoagulantes de um anticorpo anti-FXI (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401). Em um aspecto particular, são aqui fornecidos métodos para reduzir ou gerenciar o sangramento ou risco de sangramento em um paciente tratado ou administrado com um anticorpo anti-FXI/FXIa, como o anticorpo NOV1401, compreendendo a etapa de administração ao em necessidade do mesmo, uma composição farmacêutica compreendendo um agente de ligação aqui descrito, como anticorpo IDT1, IDT2, IDT3, IDT4, IDT5, IDT6, IDT7, IDT8, IDT9 ou IDT10, uma ou duas vezes, durante um período de tempo (por exemplo, 1 hora a 24 horas ou até 48 horas), seguido pela administração do anticorpo anti-FXI/FXIa, em que é alcançada uma reversão ou inibição temporária de um ou mais dos efeitos anticoagulantes do anticorpo anti- FXI. Em um aspecto particular, são aqui fornecidos métodos para reduzir ou gerenciar o sangramento ou risco de sangramento em um paciente tratado ou administrado com um anticorpo anti-FXI/FXIa, como o anticorpo NOV1401, compreendendo a etapa de administração ao paciente em necessidade do mesmo, IDT11 ou IDT12 ou uma composição farmacêutica compreendendo IDT11 ou IDT12, uma ou duas vezes ou mais, durante um período de tempo (por exemplo, 1 hora a 24 horas ou 48 horas), seguida pela administração do anticorpo anti- FXI/FXIa, em que uma reversão temporária ou inibição de um ou mais dos efeitos anticoagulantes do anticorpo anti-FXI é alcançada.

[245] Em certos aspectos, um agente de ligação a anticorpo anti- FXI/FXIa descrito aqui (por exemplo, IDT11 ou IDT12) pode ser administrado em combinação com outra terapia de reversão anticoagulante. Exemplos não limitativos de estratégias convencionais para reverter efeitos anticoagulantes incluem (i) substituição de fluidos usando coloides, cristaloides, plasma humano ou proteínas plasmáticas, como albumina; ou (ii) transfusão com sangue vermelho empacotado ou sangue total. Exemplos de terapias para reversão dos efeitos de anticoagulantes, por exemplo, em casos de emergência grave, incluem, entre outros, componentes sanguíneos pró-hemostase, como plasma fresco congelado (FFP), concentrados complexos de protrombina (PCC) e PCC ativado [(APCC); por exemplo. atividade de inibição do inibidor do fator VIII (FEIBA)] e fator VII ativado recombinante (rFVIIa).

[246] Em aspectos específicos, a presente divulgação se refere a métodos para reverter o efeito anticoagulante de um anticorpo anti- FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401) em um paciente sendo tratado com o anticorpo anti-FXI/FXIa ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo (i) administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um agente de ligação aqui fornecido, por exemplo, um agente de ligação

(por exemplo, IDT11 ou IDT12) que se liga a um anticorpo anti-FXI/FXIa e é capaz de reverter um ou mais efeitos anticoagulantes; e (ii) administrar ao paciente outra terapia de reversão anticoagulante, como plasma fresco congelado (FFP), concentrados de complexos de protrombina (PCC), PCC ativado ou fator VII ativado recombinante (rFVIIa). Em aspectos específicos, a presente divulgação refere-se a métodos para reverter o efeito anticoagulante de um anticorpo anti- FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo NOV1401) em um paciente sendo tratado com o anticorpo anti-FXI/FXIa ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo (i) administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um agente de ligação aqui fornecido, por exemplo, um agente de ligação (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, como um fragmento de Fab) que se liga a um anticorpo anti-FXI/FXIa e é capaz de reverter um ou mais efeitos anticoagulantes; e (ii) administrar ao paciente plasma fresco congelado (FFP). Em aspectos específicos, esse método atinge a homeostase.

[247] Em certos aspectos, é fornecido aqui um método de gerenciamento de sangramento em um paciente sendo tratado com um anticorpo anti-FXI fornecido aqui (por exemplo, um anticorpo descrito na Tabela 1, como um anticorpo anti-FXI compreendendo CDRs de VL e CDRs de VH de NOV1401), o referido método compreende a reversão temporária do efeito anticoagulante por um tempo suficiente para controlar o sangramento. Em modalidades específicas, a etapa de reversão do efeito anticoagulante compreende (i) substituição de fluidos usando coloides, cristaloides, plasma humano ou proteínas plasmáticas, como albumina; ou (ii) transfusão com sangue vermelho empacotado ou sangue total. Em aspectos específicos, agentes terapêuticos para reversão do efeito de anticoagulantes, por exemplo, em casos de emergência grave, incluem, entre outros, componentes sanguíneos pró-hemostase, como plasma fresco congelado (FFP),

concentrados complexos de protrombina (PCC) e PCC ativado (APCC) (por exemplo, atividade de bypassagem do inibidor do fator VIII (FEIBA)) e fator VII ativado recombinante (rFVIIa). Em um aspecto específico, um regime pode compreender a administração de rFVIIa na dose de 30 μg/kg, seguida pela administração de rFVIIa na dose de 15 a 30 μg/kg a cada 2 a 4 horas por 24 a 48 horas, além do ácido tranexâmico 1 g a cada 6 horas por 5 a 7 dias pode ter potencial para recuperar a hemostasia e parar o sangramento em objetos tratados com um anticorpo anti-FXI (por exemplo, NOV1401 ou um anticorpo compreendendo CDRs de VL e CDRs de VH de NOV1401) que estão sendo submetidos a cirurgias importantes e em pacientes com um sítio de sangramento não acessível ativo.

Por exemplo, Riddell et al relataram experimento em 4 pacientes com deficiência severa de FXI sem inibidores submetidos a cirurgia (Riddell et al., 2011, Thromb.

Haemost., 106: 521-527); os pacientes receberam 30 μg/kg de rFVIIa e 1 g de ácido tranexâmico i.v. em indução de anestesia.

Doses subsequentes em bolus de 15–30 μg/kg de rFVIIa foram administradas em intervalos de 2 a 4 horas, conforme orientação dos resultados da tromboelastometria rotacional (ROTEM). Em exemplos específicos, os pacientes foram tratados com rFVIIa nas doses acima mencionadas por 24 a 48 horas.

Em exemplos particulares, 1 g de ácido tranexâmico a cada seis horas foi continuado por cinco dias.

Nesta pequena série, o rFVIIa em doses tão baixas quanto 15-30 μg/kg em combinação com ácido tranexâmico foi seguro e eficaz na correção do defeito hemostático na deficiência severa de FXI neste estudo.

Em outro estudo que incluiu 4 pacientes com deficiência severa de FXI com inibidor (anticorpos FXI neutralizadores de autólogos geralmente adquiridos após transfusão ou administração de produtos sanguíneos para pacientes com deficiência severa de FXI) que sofreram 5 cirurgias, os autores (Livnat et al., 2009, Thromb.

Haemost.; 102: 487–492)

aplicaram o seguinte protocolo: 1 g de ácido tranexâmico por via oral duas horas antes da cirurgia, e os pacientes receberam imediatamente antes das intervenções outro 1 g de ácido tranexâmico i.v.. FVIIa recombinante em doses variando de 15 a 30 μg/kg foi infundido no final da cirurgia. Posteriormente, foi administrado 1 g de ácido tranexâmico por via oral a cada 6 horas por pelo menos 7 dias. A cola de fibrina foi pulverizada no leito da vesícula biliar extirpada em um paciente. Este protocolo garantiu hemostasia normal em pacientes com deficiência severa de FXI com inibidor. Em um aspecto, a cola de fibrina pode ser usada para restaurar a hemostasia local durante a cirurgia odontológica em pacientes com deficiência de FXI (Bolton-Maggs (2000) Haemophilia; 6 (S1): 100-9). Em uma certa modalidade, com relação aos métodos para gerenciar sangramentos em pacientes tratados com um anticorpo anti-FXI aqui fornecido (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como NOV1401), um regime que consiste em ácido tranexâmico, por exemplo, 1 g a cada 6 horas por 5 a 7 dias associado ao uso de cola de fibrina poderia ser usado para estabelecer hemostasia local em objetos submetidos a pequenas cirurgias e em objetos com sítio de sangramento acessível, incluindo eventos de sangramento oral e nasal.

[248] Em certos aspectos, é fornecido aqui um método de gerenciamento de sangramento ou risco de sangramento em um paciente sendo tratado com um anticorpo anti-FXI/FXIa aqui fornecido (por exemplo, um anticorpo descrito na Tabela 1, tal como NOV1401 ou um anticorpo anti-FXI/FXIa compreendendo CDRs de VL e CDRs de VH de NOV1401), o referido método compreende administrar ao paciente uma terapia de reversão anticoagulante capaz de reverter (por exemplo, reverter parcialmente) os efeitos anticoagulantes do anticorpo anti- FXI/FXIa. Em aspectos específicos, a terapia de reversão anticoagulante capaz de reverter o efeito anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa é rFVIIa (fator recombinante VIIa), emicizumab (ACE910), ácido tranexâmico, plasma fresco congelado (FFP), Hemoeleven, concentrado de complexo de protrombina (PCC), PCC ativado, ou FEIBA (um complexo inibidor de FVIII). Em aspectos específicos, a terapia de reversão anticoagulante é administrada sozinha, ou em combinação com um agente de ligação aqui fornecido (por exemplo, agente de ligação descrito na Tabela 2, como IDT11 ou IDT12) ou uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação.

[249] Em aspectos específicos, a presente divulgação se refere a métodos para reverter (por exemplo, reverter parcialmente) o efeito anticoagulante de um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, um anticorpo anti-FXI/FXIa descrito na Tabela 1, como o anticorpo NOV1401 ou um anticorpo anti-FXI/FXIa compreendendo CDRs de VH e CDRs de VL de NOV1401) em um paciente sendo tratado com o anticorpo anti-FXI/FXIa ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo a administração ao paciente de uma terapia de reversão anticoagulante, tal como rFVIIa (fator recombinante VIIa), emicizumab (ACE910), ácido tranexâmico, plasma fresco congelado (FFP), Hemoeleven, concentrado de complexo de protrombina (PCC), PCC ativado ou FEIBA (um complexo inibidor de FVIII).

[250] Em aspectos específicos, a presente divulgação refere-se a métodos para reverter o efeito anticoagulante de um anticorpo anti- FXI/FXIa (por exemplo, um anticorpo anti-FXI/FXIa descrito na Tabela 1, tal como o anticorpo NOV1401 ou um anticorpo anti-FXI/FXIa compreendendo CDRs de VH e CDRs de VL de NOV1401) em um paciente sendo tratado com o anticorpo anti-FXI/FXIa ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo (i) administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um agente de ligação aqui fornecido, por exemplo, um agente de ligação (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, conforme estabelecido na

Tabela 2, como IDT11 ou IDT12) que liga um anticorpo anti-FXI/FXIa e é capaz de reverter um ou mais efeitos anticoagulantes ou uma composição farmacêutica que compreende tal agente de ligação; e (ii) administrar ao paciente outra terapia de reversão anticoagulante, como rFVIIa (fator recombinante VIIa), emicizumab (ACE910), ácido tranexâmico, plasma fresco congelado (FFP), Hemoeleven, concentrado de complexo de protrombina (PCC), PCC ativado ou FEIBA (um complexo inibidor de FVIII).

[251] Em aspectos específicos, o risco de eventos tromboembólicos, incluindo derrame, embolia sistêmica, trombose de artéria coronária ou periférica, trombose venosa e embolia pulmonar aumenta com a presença de fatores predisponentes, como trombofilia, dano à parede dos vasos e estase. A avaliação do histórico médico, antecedentes familiares e comorbidades associadas podem ajudar a estratificar os pacientes de acordo com seus riscos tromboembólicos. Em pacientes com fibrilação atrial, vários sistemas de pontuação, por exemplo, CHADS2 e CHA2DS2-VASc foram desenvolvidos para avaliar o risco de derrame. Cada um foi desenvolvido com base em dados de ensaios clínicos randomizados e estudos de coorte clínica e epidemiológica, e traduziram uma fórmula multivariada e ponderada de fatores de risco para derrame em um dispositivo, algoritmo, calculador mnemônico simplificado e fácil de usar ou ferramenta on-line. A pontuação de risco CHADS2 foi utilizada como ferramenta de estratificação para prever o risco tromboembólico em pacientes com fibrilação atrial (Lip (2011) Am J Med; 124 (2): 111-4; Camm et al (2012) Eur Heart J; 33: 2719–2747); no entanto, as evidências acumuladas mostram que CHA2DS2-VASc é pelo menos tão bom quanto ou possivelmente melhor que, pontuações como CHADS2 na identificação de pacientes que desenvolvem derrame e tromboembolismo e definitivamente melhor na identificação de pacientes com "risco realmente baixo" com fibrilação atrial. Atualmente, a pontuação CHA2DS2-VASc é recomendada por Guidelines (Camm et al (2012) Eur Heart J 33, 2719–2747; January et al., AHA/ACC/HRS Atrial Fibrillation Guideline; J Am Coll Cardiol 2014;64:2246–80) para orientar a decisão em relação aos pacientes que devem se beneficiar da terapia anticoagulante e também para identificar pacientes de baixo risco nos quais a terapia de anticoagulação não é necessária.

[252] Ferramentas de avaliação de risco de sangramento específicas para pacientes com fibrilação atrial, por exemplo, HAS- BLED, ATRIA, HEMORR2HAGES; ORBIT e pontuação de risco ABC foram desenvolvidas para prever o risco de sangramento em pacientes com fibrilação atrial. Infelizmente, como o risco de sangramento está fortemente correlacionado ao risco de derrame, essas pontuaçãos tiveram um valor bastante limitado para orientar as decisões terapêuticas para o uso de antagonistas da vitamina K, como a varfarina ou NOACS. No entanto, as pontuaçãos de risco de sangramento podem se tornar de ajuda considerável para identificar pacientes que podem se beneficiar de uma nova terapia com um risco de sangramento reduzido, por exemplo. anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo NOV1401).

[253] Em certos aspectos, objetos com risco de sangramento, por exemplo, alto risco demonstrado de sangramento, podem ser identificados pelo histórico médico anterior de sangramento, por exemplo, sangramento durante ou após a cirurgia ou sangramento quando tratado com um anticoagulante (por exemplo, varfarina). Além disso, objetos com risco de sangramento, por exemplo, um alto risco demonstrado de sangramento, pode ser identificado por ensaios in vitro/ex vivo conhecidos na técnica, por exemplo, ensaios com plasma de um objeto medindo aPTT e outros biomarcadores das vias de coagulação extrínseca, como tempo de protrombina (PT) e tempo de trombina (TT).

[254] Em aspectos particulares, objetos com risco moderado a alto de derrame e embolia sistêmica têm uma pontuação de risco CHA2DS2VASc ≥ 2. Em outros aspectos particulares, objetos com uma pontuação de risco HAS BLED ≥ 3 são caracterizados como tendo um alto risco de sangramento (vide Gallego et al., (2012) Carc Arrhythm Electrophysiol.; 5: 312-318 e Friberg et al., (2012) Circulation.; 125: 2298-2307). Em aspectos particulares, os objetos que estão sendo tratados pelos métodos aqui fornecidos têm uma pontuação de risco CHA2DS2VASc ≥ 2.

[255] Em aspectos específicos, um objeto sendo tratado pelos métodos aqui fornecidos é um objeto humano com pelo menos 18 anos de idade. Em outro aspecto, um objeto sendo tratado pelos métodos aqui fornecidos é um objeto humano com pelo menos 50 anos de idade. Em outro aspecto, um objeto sendo tratado pelos métodos aqui fornecidos é um objeto humano com pelo menos 55 anos de idade. Em outro aspecto, um objeto sendo tratado pelos métodos aqui fornecidos é um objeto humano com pelo menos 60 anos de idade. Em outro aspecto, um objeto sendo tratado pelos métodos aqui fornecidos, um objeto humano tem pelo menos 65 anos de idade.

[256] Em aspectos particulares, um objeto sendo tratado pelos métodos aqui fornecidos (por exemplo, métodos para o tratamento de VTE ou para prevenção secundária de VTE) tem entre 2 e 18 anos de idade. Em aspectos particulares, um objeto que está sendo tratado pelos métodos aqui fornecidos (por exemplo, métodos para o tratamento de VTE ou para prevenção secundária de VTE) tem entre 12 e 18 anos de idade. Em aspectos particulares, um objeto sendo tratado pelos métodos aqui fornecidos (por exemplo, métodos para o tratamento de VTE ou para prevenção secundária de VTE) é uma criança com pelo menos 2 anos e menos de 18 anos. Em aspectos particulares, um objeto sendo tratado pelos métodos aqui fornecidos (por exemplo, métodos para o tratamento de VTE ou para prevenção secundária de VTE) é uma criança com pelo menos 12 anos e menos de 18 anos.

[257] Em aspectos específicos, um objeto (por exemplo, objeto humano) sendo tratado pelos métodos aqui fornecidos possui um índice de massa corporal (IMC) maior ou igual a 18 kg/m2. Em outro aspecto, um objeto sendo tratado pelos métodos aqui fornecidos tem um IMC maior ou igual a 30 kg/m2. Em outro aspecto, um objeto sendo tratado pelos métodos aqui fornecidos tem um IMC maior ou igual a 35 kg/m2. Em outro aspecto, um objeto sendo tratado pelos métodos aqui fornecidos tem um IMC maior ou igual a 40 kg/m2.

[258] Em certos aspectos, métodos para reverter os efeitos anticoagulantes de um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401) com um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa aqui descrito (por exemplo, IDT11 ou IDT12) ou uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa, resulta em (i) redução ou reversão no prolongamento do aPTT conforme determinado com ensaios de aPTT com plasma humano; (ii) redução da quantidade de trombina em um ensaio de geração de trombina (TGA); quantidade de trombina em um ensaio de geração de trombina (TGA) no plasma humano; e/ou (iii) redução ou reversão do sangramento ou risco de sangramento. Em aspectos específicos, a reversão dos efeitos anticoagulantes é inferior a 100%, mas é suficiente para alcançar um resultado clinicamente benéfico, por exemplo, redução ou interrupção do sangramento.

[259] Em certos aspectos, métodos para reverter o efeito anticoagulante de um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401) com um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa aqui descrito (por exemplo, IDT11 ou IDT12) ou uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa, resulta em redução ou reversão no prolongamento do aPTT, conforme determinado com ensaios de aPTT com plasma humano, em pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80% ou pelo menos 90%. Em certos aspectos, métodos para reverter o efeito anticoagulante de um anticorpo anti- FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401) com um agente de ligação a anticorpo anti- FXI/FXIa aqui descrito (por exemplo, IDT11 ou IDT12) ou uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa, resulta em redução ou reversão no prolongamento do aPTT, conforme determinado com ensaios de aPTT com plasma humano, em pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60% ou em pelo menos 70%.

[260] Em certos aspectos, métodos para reverter o efeito anticoagulante de um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401) com um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa aqui descrito (por exemplo, anticorpo conforme estabelecido na Tabela 2, como IDT11 ou IDT12) ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo anti-FXI/FXIa bi agente de busca, resulta em um aumento no nível sérico de FXI/FXIa livre em relação aos níveis anteriores à administração do agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa. Em certos aspectos, métodos para reverter o efeito anticoagulante de um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401) com um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa aqui descrito (por exemplo, anticorpo conforme estabelecido na Tabela 2, como IDT11 ou IDT12) ou uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa, resulta em um aumento no nível sérico de FXI/FXIa livre em relação aos níveis anteriores à administração do anti-FXI/FXIa agente de ligação a anticorpo, em pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80% ou pelo menos 90%. Em certos aspectos, métodos para reverter o efeito anticoagulante de um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como anticorpo NOV1401) com um agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa aqui descrito (por exemplo, anticorpo conforme estabelecido na Tabela 2, como IDT11 ou IDT12) ou uma composição farmacêutica compreendendo tal agente de ligação a anticorpo anti-FXI/FXIa, resulta em um aumento no nível sérico de FXI/FXIa livre em relação aos níveis anteriores à administração do anti- FXI/FXIa agente de ligação a anticorpo, em pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60% ou pelo menos 70%. O nível sérico de FXI/FXIa livre pode ser determinado por quaisquer métodos descritos anteriormente, por exemplo, por ELISA. Composições Farmacêuticas

[261] A presente divulgação fornece composições farmacêuticas compreendendo agentes de ligação a anticorpos anti-FXI/FXIa aqui descritos (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 2 e fragmentos dos mesmos Fab) formulados em conjunto com um veículo farmaceuticamente aceitável. As composições podem adicionalmente conter um ou mais outros agentes terapêuticos que são adequados para tratar ou prevenir, por exemplo, distúrbios tromboembólicos (por exemplo, distúrbios trombóticos). Os veículos farmaceuticamente aceitáveis melhoram ou estabilizam a composição, ou podem ser utilizados para facilitar a preparação da composição. Os veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos e retardadores de absorção e similares que são fisiologicamente compatíveis.

[262] Uma composição farmacêutica da presente divulgação pode ser administrada por uma variedade de métodos conhecidos na técnica. A via e/ou modo de administração variam dependendo dos resultados desejados. É preferido que a administração seja intravenosa, intramuscular, intraperitoneal ou subcutânea ou administrada proximalmente ao sítio do alvo. O veículo farmaceuticamente aceitável deve ser adequado para administração intravenosa, intramuscular, subcutânea, parentérica, espinhal ou epidérmica (por exemplo, por injeção ou infusão). Dependendo da via de administração, o composto ativo, isto é, anticorpo, molécula biespecífica e multiespecífica, pode ser revestido em um material para proteger o composto da ação de ácidos e outras condições naturais que podem inativar o composto.

[263] Em aspectos específicos, uma composição deve ser estéril e fluida. A fluidez adequada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de revestimento como a lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula necessário no caso de dispersão e pelo uso de surfactantes. Em muitos casos, é preferível incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, poliálcoois como manitol ou sorbitol e cloreto de sódio na composição. A absorção a longo prazo das composições injetáveis pode ser conseguida incluindo na composição um agente que retarde a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio ou gelatina.

[264] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação a anticorpo anti- FXI/FXIa aqui fornecido (por exemplo, anticorpo conforme estabelecido na Tabela 2), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, e em que o agente de ligação está em uma formulação líquida compreendendo histidina e/ou açúcares como sacarose.

[265] Em aspectos específicos, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação a anticorpo anti-

FXI/FXIa aqui fornecido (por exemplo, anticorpo conforme estabelecido na Tabela 2), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, e em que o agente de ligação está em uma formulação líquida compreendendo sacarose. Em aspectos particulares, a concentração de sacarose na formulação líquida está na faixa de 150 mM a 300 mM ou 200 mM a 250 mM. Em aspectos particulares, a formulação líquida compreende pelo menos 200, 210, 220, 230, 240 ou 250 mM de sacarose. Em aspectos particulares, a concentração de sacarose na formulação líquida é de 220 mM.

[266] Em aspectos específicos, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação a anticorpo anti- FXI/FXIa aqui fornecido (por exemplo, anticorpo Fab ou IgG como apresentados na Tabela 2), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, e em que o agente de ligação está em uma formulação líquida compreendendo histidina. Em aspectos específicos, a concentração de histidina na formulação líquida está na faixa de 5 mM a 35 mM ou 10 mM a 30 mM. Em aspectos específicos, a concentração de histidina na formulação líquida está na faixa de 15 mM a 25 mM. Em aspectos específicos, a formulação líquida compreende pelo menos 10 mM de histidina ou pelo menos 15 mM de histidina ou pelo menos 20 mM de histidina. Em aspectos específicos, a formulação líquida compreende pelo menos 20 mM de histidina.

[267] Em aspectos específicos, é aqui fornecida uma composição farmacêutica compreendendo um agente de ligação a anticorpo anti- FXI/FXIa aqui fornecido (por exemplo, anticorpo conforme estabelecido na Tabela 2), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, e em que o agente de ligação está em uma formulação líquida compreendendo histidina e sacarose. Em aspectos particulares, a concentração de sacarose na formulação líquida está na faixa de 150 mM a 300 mM ou 200 mM a 250 mM; e a concentração de histidina na formulação líquida está na faixa de 5 mM a 35 mM ou 10 mM a 30 mM ou 15 mM a 25 mM. Em aspectos particulares, a formulação líquida compreende pelo menos 200, 210, 220, 230, 240 ou 250 mM de sacarose; e pelo menos 10 mM de histidina, ou pelo menos 15 mM de histidina ou pelo menos 20 mM de histidina. Em aspectos particulares, uma formulação líquida compreende 220 mM de sacarose e 20 mM de histidina.

[268] Em aspectos particulares, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação a anticorpo anti- FXI/FXIa aqui fornecido (por exemplo, anticorpo conforme estabelecido na Tabela 2), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, e em que o agente de ligação está em uma formulação líquida com um pH na faixa de 4 a 6,5, ou 4,5 a 7, ou 4,5 a 6. Em certos aspectos, uma formulação líquida tem um pH na faixa de 5 a 6. Em aspectos particulares, uma formulação líquida tem um pH de pelo menos 4,0. Em aspectos particulares, uma formulação líquida tem um pH de pelo menos 4,5. Em aspectos particulares, uma formulação líquida tem um pH de pelo menos 5,0. Em aspectos particulares, uma formulação líquida tem um pH de pelo menos 5,5. Em aspectos particulares, uma formulação líquida tem um pH de pelo menos 6,6. Em aspectos particulares, uma formulação líquida tem um pH de 5. Em aspectos particulares, uma formulação líquida tem um pH de 5,5. Em aspectos particulares, uma formulação líquida tem um pH de 6,0.

[269] Em aspectos específicos, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação a anticorpo anti- FXI/FXIa aqui fornecido (por exemplo, anticorpo conforme estabelecido na Tabela 2), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, e em que o agente de ligação está em uma formulação líquida a uma concentração de aproximadamente 50 mg/mL a 200 mg/mL ou aproximadamente 100 mg/mL a 200 mg/mL. Em aspectos particulares, o agente de ligação está em uma formulação líquida a uma concentração de pelo menos 50 mg/mL, pelo menos 100 mg/mL, pelo menos 110 mg/mL, pelo menos 120 mg/mL, pelo menos 130 mg/mL, pelo menos 140 mg/mL ou pelo menos 150 mg/mL. Em aspectos particulares, o agente de ligação está em uma formulação líquida a uma 150 mg/mL de concentração. Em aspectos particulares, o agente de ligação está em uma formulação líquida a uma concentração de 140 mg/mL. Em aspectos particulares, o agente de ligação está em uma formulação líquida a uma concentração de 130 mg/mL.

[270] Em aspectos específicos, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação a anticorpo anti- FXI/FXIa aqui fornecido (por exemplo, anticorpo conforme estabelecido na Tabela 2), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, e em que o agente de ligação está em uma formulação líquida compreendendo Polissorbato 20, por exemplo, 0,01% a 0,08% de Polissorbato 20. Em aspectos particulares, a formulação líquida compreende 0,02% a 0,06% de Polissorbato 20. Em aspectos particulares, a formulação líquida compreende aproximadamente 0,03% de polissorbato 20, 0,04% de polissorbato 20 ou 0,05% de polissorbato 20. Em aspectos particulares, a formulação líquida compreende aproximadamente 0,04% de polissorbato 20.

[271] Em aspectos específicos, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que compreende um agente de ligação a anticorpo anti- FXI/FXIa aqui fornecido (por exemplo, anticorpo conforme estabelecido na Tabela 2), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o agente de ligação está em uma formulação líquida a uma 150 mg/mL de concentração e em que a formulação líquida compreende 220 mM de sacarose e 20 mM de histidina a pH 5,5. Em aspectos específicos, uma composição farmacêutica aqui fornecida é para administração subcutânea. Em certos aspectos, uma composição farmacêutica aqui fornecida é para administração intravenosa.

[272] Em aspectos específicos, é aqui fornecida uma composição farmacêutica compreendendo um agente de ligação a anticorpo anti- FXI/FXIa fornecido aqui (por exemplo, anticorpo conforme estabelecido na Tabela 2), em que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa alvo, em que o o agente de ligação está em uma formulação líquida a uma 150 mg/mL de concentração e em que a formulação líquida compreende 220 mM de sacarose, 20 mM de histidina e polissorbato 20 a 0,04%, a pH 5,5. Em aspectos específicos, uma composição farmacêutica aqui fornecida é para administração subcutânea. Em certos aspectos, uma composição farmacêutica aqui fornecida é para administração intravenosa.

[273] As composições farmacêuticas da presente divulgação podem ser preparadas de acordo com métodos bem conhecidos e praticados rotineiramente na técnica. vide, por exemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Publishing Co., 20ª ed., 2000; e Suspended and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., Nova Iorque, 1978. As composições farmacêuticas são preferivelmente fabricadas sob condições de GMP. Tipicamente, uma dose terapeuticamente eficaz ou dose eficaz do anticorpo de ligação a FXIa é empregue nas composições farmacêuticas da presente divulgação. Os anticorpos de ligação a FXIa são formulados em formas de dosagem farmaceuticamente aceitáveis por métodos convencionais conhecidos dos especialistas na técnica. Os esquemas de dosagem são ajustados para fornecer a resposta desejada ideal (por exemplo, uma resposta terapêutica). Por exemplo, um único bolus pode ser administrado, várias doses divididas podem ser administradas ao longo do tempo ou a dose pode ser proporcionalmente reduzida ou aumentada conforme indicado pelas exigências da situação terapêutica. É especialmente vantajoso formular composições parentéricas na forma de unidade de dosagem para facilitar a administração e uniformidade da dosagem. A forma de unidade de dosagem como aqui utilizada refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias para os objetos a serem tratados; cada unidade contém uma quantidade predeterminada de composto ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o veículo farmacêutico requerido.

[274] Os níveis reais de dosagem dos ingredientes ativos nas composições farmacêuticas da presente divulgação podem ser variados de modo a obter uma quantidade do ingrediente ativo que é eficaz para alcançar a resposta terapêutica desejada para um paciente particular, composição e modo de administração, sem ser tóxico para o paciente. O nível de dosagem selecionado depende de uma variedade de fatores farmacocinéticos, incluindo a atividade das composições particulares da presente divulgação empregue, da mesma, a via de administração, o tempo de administração, a taxa de excreção do composto específico que está sendo empregue, a duração do tratamento, outras drogas, compostos e/ou materiais utilizados em combinação com as composições particulares empregues, idade, sexo, peso, condição, estado geral de saúde e histórico médico anterior do paciente sendo tratado e fatores semelhantes.

[275] Um médico pode iniciar doses dos anticorpos da presente divulgação empregues na composição farmacêutica em níveis inferiores aos necessários para alcançar o efeito terapêutico desejado e aumentar gradualmente a dosagem até que o efeito desejado seja alcançado. Em geral, doses eficazes das composições da presente divulgação, para o tratamento de distúrbios trombóticos e/ou tromboembólicos aqui descritos variam dependendo de muitos fatores diferentes, incluindo meios de administração, sítio de destino, estado fisiológico do paciente, outras drogas administradas e se o tratamento é profilático ou terapêutico. As dosagens de tratamento precisam ser tituladas para otimizar a segurança e a eficácia. Para administração sistêmica com um anticorpo, em certos aspectos, a dosagem pode variar de cerca de 0,01 a 15 mg/kg do peso corporal do hospedeiro. Para administração com um anticorpo, a dosagem pode variar de 0,1 mg a 500 mg.

[276] Em um certo aspecto, um anticorpo anti-FXI/FXIa aqui descrito é administrado, por exemplo por i.v. ou s.c. via, em uma dose na faixa de 5 mg a 600 mg.

[277] Em um certo aspecto, um anticorpo anti-FXI/FXIa aqui descrito é administrado, por exemplo por i.v. ou s.c. via, em uma dose de aproximadamente 5 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 90 mg, 100 mg, 120 mg, 150 mg, 150 mg, 180 mg, 200 mg, 210 mg, 240 mg, 250 mg, 270 mg, 300 mg, 330 mg, 350 mg, 360 mg, 390 mg, 400 mg, 420 mg, 450 mg, 480 mg, 500 mg, 510 mg, 540 mg, 550 mg, 570 mg ou 600 mg.

[278] Em aspectos particulares, um anticorpo é geralmente administrado em várias ocasiões. Os intervalos também podem ser irregulares, conforme indicado pela medição dos níveis sanguíneos de anticorpo no paciente. Além disso, intervalos de dosagem alternativos podem ser determinados por um médico e administrados mensalmente ou conforme necessário para serem eficazes. Em alguns métodos de administração sistêmica, a dosagem é ajustada para alcançar uma concentração de anticorpo no plasma de 1–1000 µg/ml e, em alguns métodos, 25–500 µg/ml. A dosagem e a frequência variam dependendo da meia-vida do anticorpo no paciente. Em geral, os anticorpos humanizados apresentam meia-vida mais longa que a dos anticorpos quiméricos e anticorpos não humanos. A dosagem e a frequência da administração podem variar dependendo de se o tratamento é profilático ou terapêutico. Em certos aspectos para aplicações profiláticas, uma dose relativamente baixa é administrada em intervalos relativamente pouco frequentes durante um longo período de tempo. Alguns pacientes continuam a receber tratamento pelo resto de suas vidas. Em certos aspectos para aplicações terapêuticas, uma dose relativamente alta em intervalos relativamente curtos às vezes é necessária até que a progressão do sangramento ou risco de sangramento seja reduzida ou terminada e, em certos casos, até que o paciente mostre melhora parcial ou completa do sangramento ou risco de sangramento.

[279] Em aspectos específicos, um agente de ligação anti- FXI/FXIa descrito aqui (por exemplo, anticorpo conforme estabelecido na Tabela 2, como IDT11 ou IDT12) é administrado por um período de tempo ou período de tempo quando a reversão dos efeitos anticoagulantes de um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como NOV1401) é desejado. Em aspectos específicos, um agente de ligação anti-FXI/FXIa descrito aqui (por exemplo, anticorpo conforme estabelecido na Tabela 2, como IDT11 ou IDT12) é administrado uma vez, ou algumas vezes, por uma duração ou período de tempo (por exemplo, 1 hora a 24 horas ou 48 horas, mas geralmente não superior a 7 dias) quando a reversão dos efeitos anticoagulantes de um anticorpo anti-FXI/FXIa (por exemplo, anticorpo descrito na Tabela 1, tal como NOV1401), é desejada para alcançar a homeostase.

EXEMPLOS

[280] Os exemplos a seguir são fornecidos para ilustrar melhor a presente divulgação, mas não para limitar seu escopo. Outras variantes da presente divulgação serão prontamente aparentes para um versado na técnica e são englobadas pelas reivindicações anexas. Exemplo 1 Seleção da Biblioteca de Fagos de Fab humano (Phage Library Panning) Panning de Exibição de Fagos

[281] Os anticorpos contra NOV1401 foram gerados pela seleção de clones que se ligavam a NOV1401 usando como fonte de anticorpo uma biblioteca de exibição de fagos disponível comercialmente, a biblioteca Morphosys HuCAL PLATINUM®. A biblioteca de fagomídeos é baseada no conceito HuCAL® (Knappik et al., 2000, J Mol Biol 296: 57-86) e emprega a tecnologia CysDisplayTM para exibir o Fab na superfície do fago (WO01/05950). Para o isolamento de anticorpos anti- NOV1401, uma estratégia de panning em fase sólida foi empregue com revestimento direto de NOV1401 em uma placa de 96 poços Maxisorp™ (Nunc) seguida de três rodadas de panning com maior rigor na lavagem. Subclonagem e Microexpressão de Fragmentos de Fab Selecionados

[282] Para facilitar a expressão rápida de Fab solúvel, as inserções de codificação de Fab do fago HuCAL PLATINUM® selecionado foram subclonadas do vetor de exibição pMORPH®30 para o vetor de expressão pMORPH®x11 pMORPH® x11_FH.

[283] Para triagem inicial e caracterização, culturas de uma noite de clones de E. coli que expressam Fab individuais foram lisadas usando uma solução 2x BBS (400 mM de ácido bórico, 300 mM de cloreto de sódio, 5 mM de EDTA) suplementada com 2,5 mg/mL de lisozima. Fab contendo lisados de E. coli foram utilizados para triagem por ELISA. Triagem ELISA

[284] Usando triagem ELISA, clones de Fab único foram identificados a partir do panning emitido para ligação ao NOV1401. Os Fabs foram testados usando Fab contendo lisados de E. coli em bruto.

[285] Para identificação de NOV1401 ligando fragmentos de Fab Maxisorp™ (Nunc), placas de 384 poços foram diretamente revestidas com 5ug/ml de NOV1401. Após o bloqueio das placas com Superblock®, foram adicionados lisados de E. coli contendo Fab. A ligação de Fabs foi detectada por IgG anti-humano de cabra específica de F(ab)2 conjugada com fosfatase alcalina (diluída 1:5000) usando substrato de fluorescência Attophos (Roche, catálogo # 11681982001). A emissão de fluorescência a 535 nm foi registrada com excitação a 430 nm. Construção Genética para Remover Possíveis Sítios de Desamidação

[286] A fim de remover riscos potenciais em longo prazo, sítios de desamidação em potencial de armazenamento (por exemplo, Asn-Gly ou Asn-Ser) foram removidos substituindo a asparagina por serina ou glutamina. Genes incluindo os aminoácidos alterados foram gerados via síntese gênica. Expressão e Purificação de Fragmentos de Fab HuCAL®

[287] A expressão dos fragmentos de Fab foi realizada em células F TG1 de E. coli. As culturas foram incubadas a 37 ºC até o OD600 atingir um valor de 0,5. A expressão de Fab foi induzida por adição de IPTG a uma concentração final de 0,75 mM e as culturas foram incubadas posteriormente o/n a 30 ºC e 180 rpm. As células foram colhidas e interrompidas. Os fragmentos de Fab marcados com His6 foram isolados por IMAC e a filtração em gel e as concentrações de proteínas foram determinadas por espectrofotometria de UV a 280 nm.

[288] Vetores de expressão em mamíferos para fragmentos de Fab foram gerados. Formatos IgG completos de Fabs (por exemplo, IDT1-IDT10 como descrito na Tabela 2) também foram gerados. Formatos de IgG completos e exemplares para IDT1 e IDT2 foram gerados. Em particular, IDT11 é um exemplo de formato IgG completo para IDT1, e IDT12 é um exemplo de formato IgG completo para IDT2.

[289] IDT3 é uma variante de IDT2 com uma mutação na VH na posição 30, em particular, mutação S para Q na posição 30 da VH (SEQ ID NO: 71) ou cadeia pesada (SEQ ID NO: 73). Por conseguinte, um exemplo de formato IgG completo para IDT3 (IDT3-IgG) compreende (i) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 349 com uma mutação na posição 30, como a mutação S para Q, e (ii) uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 89.

[290] Em aspectos específicos, formatos de IgG de comprimento completo exemplares de qualquer um dos Fabs descritos na Tabela 2, por exemplo, IDT1-IDT10, podem ser gerados por clonagem da seguinte região Fc para o C-terminal da cadeia pesada de Fab:

DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSH EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWL NGKEYKCKVSNKALAAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN

QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 351).

[291] Em certos aspectos, outros formatos de IgG de comprimento completo exemplares para IDT1 podem ter pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência, como IDT11 com atividade comparável. Em certos aspectos, outros exemplos de formatos IgG de comprimento completo para IDT2 podem ter pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência como IDT12 com atividade comparável. Exemplo 2

Dados de Ligação Análise de ligação por ressonância plasmônica de superfície (SPR) de ligação Fab anti-NOV1401 a NOV1401

[292] Os experimentos de ligação ao SPR foram realizados em um instrumento ProteOn XPR36 (Bio-Rad Laboratories, Inc.) em tampão PBS/T (50 mM de fosfato, 150 mM de NaCl, pH 7,4, 0,005% v/v Tween- 20) a 25 ºC. NOV1401 ('Ligando') foi imobilizado em um chip sensor ativado de ProteOn GLC (Bio-Rad Laboratories, Inc.) usando procedimentos padrão de acoplamento de amina, conforme descrito pelo fabricante. Resumidamente, NOV1401 foi injetado a uma concentração de 10 µg/ml em 20 mM de acetato de sódio, pH 5,0 e a uma taxa de fluxo de 30 µl/min por 10 min. Os grupos que não reagiram foram bloqueados por injeção de etanolamina a 1 M.

[293] Para estudos cinéticos, os Fabs anti-NOV1401 ('Analitos') foram diluídos em tampão PBS/T para gerar uma série de diluições com concentrações variando de 0,125-4 nM. Os Fabs foram injetados em superfícies com NOV1401 imobilizado a uma taxa de fluxo de 100 µL/min e os diagramas sensoriais foram registrados para tempos de associação e dissociação de 220 s e 1800 s, respectivamente. Superfícies em branco foram usadas para correções de fundo. Não houve necessidade de regenerar superfícies, pois o sistema de matriz de interação proteica ProteOn permite executar até seis experimentos de ligação em uma superfície idêntica em paralelo.

[294] O processamento e análise dos dados, incluindo a determinação de kon, koff e KD, foram realizados com o software ProteOn ManagerTM versão 3.1.0.6. Os diagramas sensoriais foram ajustados através da aplicação de um modelo de ligação Langmuir 1:1 (Rmax ajustado global) e as constantes de dissociação foram calculadas a partir de kon e koff. A Tabela 3 mostra as constantes de dissociação para 10 Fab anti-NOV1401 determinados por SPR.

Tabela 3. Resumo dos dados de ligação do SPR Anti- Média KD Desvio Padrão n NOV1401 [nM] [nM] IDT1 0,44 0,02 2 IDT2 0,23 NA 1 IDT3 0,24 0,02 2 IDT4 0,31 0,02 2 IDT5 0,35 0,04 2 IDT6 10,08 0,13 2 IDT7 0,33 0,01 2 IDT8 2,15 0,15 2 IDT9 1,92 0,00 2 IDT10 5,97 0,03 2 Análise de ligação de titulação de equilíbrio de solução (SET) de Fab anti-NOV1401 e ligação de IgG a NOV1401

[295] 14 diluições em série (2x) de NOV1401 foram preparadas em tampão de amostra (PBS pH 7,4 contendo BSA a 0,5% (p/v) e BSA a 0,02%) e uma concentração constante do Fab ou IgG anti-NOV1401 foi adicionada a cada concentração de NOV1401 variando de 40 pM a 240 pM. Concentrações ideais de Fab ou IgG anti-NOV1401 constantes e concentrações iniciais ideais para séries de diluição NOV1401 foram determinadas em experimentos piloto. Foi utilizada uma concentração inicial de 10 nM de NOV1401 para aglutinantes mais fracos (KD ~ 1nM ou superior) e uma concentração inicial de 2 nM foi usada para aglutinantes mais fortes (KD < 0,2 nM). Para IgG anti-NOV1401 (KD < 0,01 nM), foram utilizadas concentrações iniciais de 0,5 ou 0,25 nM.

[296] 30 mL/poço de cada mistura de diluição foram distribuídos em duplicados para uma microplaca Eppendorf de 384 poços de polipropileno (MTP). O tampão da amostra serviu como controle negativo e uma amostra que não contém antígeno como controle positivo (Bmax). A placa foi selada e incubada durante a noite à temperatura ambiente em um agitador de placas. Uma placa de estreptavidina (SA) da Pierce® (placa de 384 poços de alta capacidade de ligação pré-bloqueada de estreptavidina, # 15505) foi revestida adicionando 30 µl/poço de NOV1401 biotinilado a 0,5 µg/ml diluído em PBS, selado e incubado por 2 h à RT em um agitador MTP.

[297] Após incubação e lavagem três vezes com PBST (PBS contendo 0,05% de Tween 20), 30 μl/poço da preparação Fab ou IgG NOV1401/anti-NOV1401 foram transferidos do MTP de polipropileno para a placa SA revestida com NOV1401 e incubados por 30 min à temperatura ambiente em um agitador MTP. Após três etapas de lavagem adicionais, 30 µl de anticorpo de detecção de 0,5 µg/ml (Kappa anti-humano de cabra LC-HRP, BETHYL#A80-115P) diluídos em tampão de amostra foram adicionados a cada poço e incubados por 1 h em temperatura ambiente com agitação. Depois de lavar a placa novamente três vezes, foram adicionados 30 μl de reagente de detecção (substrato quimiluminescente de Peroxidase LumiGLO, KPL#54-61-01) a cada poço. Os sinais de eletroquimiluminescência (ECL) foram gerados e detectados imediatamente com um gerador de imagens de luminescência (SpectraMax M5, Molecular Devices, LLC).

[298] Os sinais ECL médios foram calculados a partir de medições duplicadas dentro de cada ensaio. Os dados foram ajustados pela linha de base subtraindo o valor mais baixo de todos os pontos de dados e plotados contra a concentração de antígeno correspondente. Os valores de KD foram determinados ajustando o gráfico com o seguinte modelo de ajuste de curva não linear para ligação 1:1 de acordo com Haenel et al 2005: onde y é o sinal de ECL subtraído em branco, [Fab] é a concentração de Fab aplicada, x é o antígeno solúvel total aplicado (aqui NOV1401), Bmax é o sinal de ECL subtraído em branco para x = 0 e KD é a constante de dissociação.

[299] Os resultados SET para nove Fabs anti-NOV1401 e duas IgGs estão resumidos na Tabela 4 e as curvas de resposta de ligação representativas são mostradas na Figura 1. Os dados SET não podem ser adequados para o IDT6 e não foram incluídos. Tabela 4. Resumo dos resultados de SET para anticorpos anti-NOV1401 Média de KD Desvio Antídoto (nM) Padrão n IDT1 0,11 0,01 2 IDT2 0,10 0,003 3 IDT3 0,10 0,01 2 IDT4 0,97 0,04 2 IDT5 0,14 0,02 3 IDT7 0,96 0,01 2 IDT8 0,16 0,02 3 IDT9 0,68 0,05 2 IDT10 1,19 0,09 2 IDT11 0,0007 0,0002 5 IDT12 0,0051 0,0008 6 Exemplo 3 Competição de Ligação SPR

[300] Os experimentos SPR foram realizados em princípio, como descrito no Exemplo 2, com as seguintes alterações. FXIa derivado do plasma humano foi usado como ligando e imobilizado em um chip sensor ativado do ProteOn GLC (Bio-Rad Laboratories, Inc.) usando procedimentos padrão de acoplamento de amina, conforme descrito e injetando FXIa a uma concentração de 10 µg/ml em 20 mM de acetato de sódio, pH 5,0 e a uma taxa de fluxo de 30 µl/min por 10 min.

[301] Para estudos de competição de ligação, NOV1401 e três misturas de NOV1401 com Fab anti-NOV1401 em proporções molares de 1:1, 1:2 e 1:10 foram preparados em tampão PBS/T e injetados simultaneamente em superfícies com FXI imobilizado a uma taxa de fluxo de 100 µL/min. Os sensores foram registrados para tempos de associação e dissociação de 220 se 1800 s, respectivamente. Superfícies em branco foram usadas para correções de fundo.

[302] Misturas de Fab NOV1401/anti-NOV1401 produziram respostas de ligação significativamente mais baixas a FXIa imobilizado do que a NOV1401 sozinho com uma mistura 1/10 (Fab NOV1401/anti- NOV1401) que não mostrou ligação a FXIa. Como as unidades de resposta (RUs) em SPR são diretamente proporcionais à massa ligada ao chip, concentrações crescentes de Fab anti-NOV1401 parecem impedir que NOV1401 se ligue ao FXIa, indicando que o anti-NOV1401 pode se ligar a NOV1401 e bloquear NOV1401 de se ligar a FXIa.

[303] A Figura 2 mostra dois exemplos representativos para Fabs anti-NOV1401 (IDT1, IDT3). Os Fabs anti-NOV1401 reduzem claramente a ligação de NOV1401 ao seu antígeno FXIa, portanto competem com FXIa pela ligação a NOV1401. Adicionado a uma solução NOV1401 com excesso de 10x molar (excesso de 5x molar por sítios de ligação de NOV1401), o Fab anti-NOV1401 impede completamente o NOV1401 de se ligar ao FXIa, indicando que os Fabs anti-NOV1401 são capazes de neutralizar o NOV1401 livre em solução. Exemplo 4 Reversão da atividade anticoagulante de NOV1401 no plasma humano

[304] Os efeitos dos anticorpos anti-NOV1401 na atividade anticoagulante do NOV1401 foram testados usando o ensaio de tempo de tromboplastina parcial ativada (aPTT) e o ensaio de geração de trombina (TGA). Ensaio aPTT:

[305] O plasma humano normal liofilizado 'Controle de Coagulação N' (Cat # 5020050) foi adquirido da Technoclone GmbH (Viena, Áustria).

Foi reunido a partir de plasma citrado de doadores saudáveis selecionados. O tempo de coagulação obtido com este plasma normal reflete concentrações normais dos fatores de coagulação envolvidos na coagulação. O plasma liofilizado foi armazenado a 4 ºC. Antes de seu uso, o plasma foi ressuspenso em 1 mL de água destilada, girando cuidadosamente o frasco e mantendo-o por 10 minutos em temperatura ambiente.

[306] A via intrínseca que aciona Dapttin TC (Cat # 5035090) foi adquirida da Technoclone GmbH (Viena, Áustria), contendo fosfolípido, sulfateto e silicato. O acionador liofilizado foi reconstituído em água destilada com o volume indicado no frasco.

[307] O cloreto de cálcio (Fluka, Cat # 21115) foi preparado em água destilada a uma concentração estoque de 25 mM. Utilizou-se solução salina tamponada com fosfato (PBS, Life Technologies, Cat # 10010-023) como tampão de diluição de anticorpo.

[308] As medições do tempo de coagulação foram realizadas em um coagulômetro de esferas modelo MC10 (Merlin medical, Alemanha), que é um sistema de detecção de coágulos mecânico semiautomático. O sistema utiliza uma cubeta especial na qual uma bola de aço inoxidável é distribuída (Merlin medical, Cat # Z05100).

[309] A cubeta é colocada no poço de medição do coagulômetro de esferas. Depois que a amostra, plasma e acionador são adicionados à cubeta, o poço de medição gira lentamente, fazendo com que a cubeta gire ao longo de seu eixo longitudinal. Como a cubeta está posicionada em um ângulo leve, a gravidade e a inércia sempre posicionam a bola no ponto mais baixo da cubeta. Exatamente o oposto da posição da bola é um sensor magnético. Após um período de incubação apropriado, um temporizador é iniciado com a adição da solução de cloreto de cálcio. À medida que a coagulação ocorre, os filamentos de fibrina se formam na mistura de reação. Os filamentos de fibrina puxam a bola para longe de sua posição de inércia que aciona um impulso no sensor magnético. Esse impulso para eletronicamente o cronômetro.

[310] As diluições em série de NOV1401 foram preparadas em PBS. O plasma sanguíneo humano reconstituído, reagente de acionador (Dapttin) e cloreto de cálcio foram aquecidos em banho-maria a 37 ºC por 10 minutos.

[311] O ensaio foi realizado exclusivamente em cubetas especializadas contendo uma bola de aço inoxidável. O esquema de pipetagem está descrito na Tabela 5. Tabela 5. Esquema de pipetagem para medir a atividade de NOV1401 em ensaio aPTT Etapa de Ensaio Solução Ensaio aPTT Volume [µL] 1 Diluição de anticorpo ou 50 diluente 2 Plasma de sangue 50 humano 3 Daptina 50 4 Incubar 3 minutos a 37°C sob rotação 5 25 mM de Cloreto de 50 cálcio 6 Imediatamente iniciar o temporizador 7 O temporizador para quando o coágulo é formado

[312] As amostras foram medidas em duplicado a uma temperatura de 37 ºC no coagulômetro de esferas Merlin descrito acima.

[313] A formação do coágulo foi cronometrada para cada concentração de NOV1401 e plotada versus as concentrações de anticorpos correspondentes. A curva dose-resposta resultante foi ajustada usando o programa de regressão não linear GraphPad Prism (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, EUA). A partir do ajuste da curva de resposta à dose, foi determinada a concentração de NOV1401 para duplicação do tempo de coagulação inicial (amostra contendo plasma sem anticorpo), também descrita como '2x aPTT'. Fabs anti-NOV1401 bloqueiam a atividade anticoagulante de NOV1401:

[314] Para determinar se Fabs anti-NOV1401 podem bloquear a capacidade de NOV1401 de prolongar os tempos de coagulação no ensaio aPTT, várias misturas de Fab NOV1401/anti-NOV1401 em PBS foram geradas, onde a concentração de NOV1401 foi mantida constante em um valor necessário para 2x aPTT que foi determinado em um experimento separado como descrito acima. O Fab anti-NOV1401 foi adicionado em quantidade equimolar (1/1) ou em excesso molar, tipicamente 1/3 ou 1/5 e 1/10 (n/n). O esquema de pipetagem é mostrado na Tabela 6. Tabela 6. Esquema de pipetagem para medir o efeito do Fab anti-NOV1401 na atividade de NOV1401 no ensaio aPTT. Etapa de Solução Ensaio aPTT Ensaio Volume [µL] 1 NOV1401 ou diluente 25 2 anti-NOV1401 Fab ou 25 controle Ig 3 Incubar 10 minutos 4 Plasma de sangue 50 humano 5 Daptina 50 6 Incubar 3 minutos a 37 ºC sob rotação 7 25 mM de Cloreto de 50 cálcio 8 Imediatamente iniciar o temporizador 9 O temporizador para quando o coágulo é formado

[315] As amostras foram medidas em duplicado a uma temperatura de 37 ºC no coagulômetro de esferas Merlin descrito acima.

[316] Os resultados para dois Fabs anti-NOV1401 - IDT1 e IDT3 - são mostrados na Figura 3. A uma concentração constante de NOV1401 de 0,096 µM, quantidades crescentes de Fab NOV1401 bloqueiam o efeito de NOV1401 na coagulação, conforme medido no ensaio aPTT.

Um excesso molar de IDT1 ou IDT3 três vezes (excesso molar de 1,5x por sítio de ligação) foi suficiente para inibir completamente o efeito de NOV1401 no aPTT.

[317] Estes dados confirmam e ampliam os resultados dos experimentos de competição de SPR, pois sugerem que os Fabs anti- NOV1401 bloqueiam a função de NOV1401 quando pré-misturados com NOV1401. Juntos, esses resultados sugerem que os Fabs anti- NOV1401 são capazes de impedir que o NOV1401 livre se ligue ao FXI e bloqueie os efeitos do FXI. Fabs e IgG anti-NOV1401s invertem parcialmente a atividade anticoagulante de NOV1401:

[318] Para determinar se Fabs e IgGs anti-NOV1401 podem reverter a capacidade do NOV1401 de prolongar os tempos de coagulação no aPTT, o NOV1401 foi pré-incubado com plasma humano contendo FXI por 5 minutos antes da adição de Fab ou IgG anti- NOV1401. Como no experimento de bloqueio, a concentração de NOV1401 foi mantida constante, um valor necessário para 2x aPTT determinado separadamente em um experimento de resposta à dose, como descrito acima.

[319] Fab ou IgG anti-NOV1401 foi adicionado na quantidade equimolar (1/1) ou no excesso molar, tipicamente 1/3 e 1/10 (n/n). O esquema de pipetagem é mostrado na Tabela 7. Tabela 7. Esquema de pipetagem para medir reversão dos efeitos do NOV1401 no aPTT por Fabs e IgGs anti-NOV1401. Etapa de Solução Ensaio aPTT Ensaio Volume [µL] 1 Plasma de sangue 50 humano 2 NOV1401 or 25 diluente 3 Incubar 5 minutos 4 Anticorpo anti- 25 NOV1401 (Fab, IgG)

Etapa de Solução Ensaio aPTT Ensaio Volume [µL] ou Ig de controle 5 Incubar 10 minutos 6 Daptina 50 7 Incubar 3 minutos a 37 °C sob rotação 8 25 mM de Cloreto 50 de Cálcio 9 Imediatamente iniciar o temporizador 10 O temporizador para quando o coágulo é formado

[320] As amostras foram medidas em duplicado a uma temperatura de 37 ºC no coagulômetro de esferas Merlin descrito acima. A porcentagem de reversão do tempo de coagulação do NOV1401 foi determinada para cada anticorpo anti-NOV1401 usando a seguinte equação:

[321] Reversão percentual = (tempo de coagulação NOV1401 - tempo de coagulação do antídoto)/(tempo de coagulação NOV1401 - tempo de coagulação inicial) * 100.

[322] Os resultados para 10 Fabs anti-NOV1401, IDT1-IDT10 e duas IgGs anti-NOV1401, IDT11 e IDT12, são mostrados na Figura 4. Em uma concentração constante de NOV1401 de 0,096 µM, quantidades crescentes de Fab anti-NOV1401 que foram adicionadas depois de NOV1401 ser incubado com FXI contendo plasma humano, parcialmente reverteram o efeito do NOV1401 na coagulação, conforme medido no ensaio aPTT. Enquanto todos os anti-NOV1401 mostram alguma reversão, o grau de reversão em uma dada concentração varia, e uma reversão máxima de 55-65% foi observada com excesso molar de 10x. As porcentagens de reversão para todos os Fabs e IgG anti- NOV1401 estão resumidas na Tabela 8. Estes resultados sugerem que Fabs e IgGs anti-NOV1401 são capazes de reverter, pelo menos parcialmente, reverter os efeitos anticoagulantes de NOV1401, conforme medido no ensaio aPTT.

[323] Nestes ensaios aPTT, as IgGs anti-NOV1401 IDT11 e IDT12 alcançaram efeitos de reversão máxima semelhantes em comparação com IDT3 (aproximadamente 50-60% de reversão máxima observada). No entanto, valores próximos ao efeito máximo já foram atingidos com excesso de ~ 3x molar, bem como com excesso de 10x. Estes dados indicam que um formato IgG completo (por exemplo, formato IgG completo para qualquer um dos Fabs IDT1-IDT10 descritos na Tabela 2) pode ser eficaz em concentrações mais baixas. Tabela 8: Resumo dos dados de reversão de aPTT para anticorpos anti-NOV1401 Razão NOV1401/anti NOV1401 Fab anti- (n/n) NOV1401 1/10 1/3 1/1 IDT1 64% 45% 12% IDT2 55% 42% 21% IDT3 58% 35% 9% IDT4 39% 27% 10% IDT5 56% 42% 17% IDT6 38% 22% 9% IDT7 54% 37% 16% IDT8 42% 25% 8% IDT9 46% 25% 10% IDT10 40% 25% 12% IDT11 57% 55% 19% IDT12 61% 51% 9% Ensaio de Geração de Trombina:

[324] Para confirmar a reversão da atividade anticoagulante de NOV1401 observada no ensaio aPTT em outro ensaio funcional, TGA foi empregue para medir a trombina gerada através do ciclo de retorno da trombina, que depende da atividade de FXIa.

[325] Para o plasma humano normal liofilizado por TGA (controle de coagulação N) foi adquirido de Technoclone GmbH (Cat#5020040) e reconstituído em água destilada em um volume sugerido pelo fabricante.

[326] A solução do substrato foi preparada usando o substrato fluorogênico Z-Gly-Gly-Arg-AMC da Technoclone GmbH (Cat#5006230). Alíquotas do substrato liofilizado foram mantidas a 4 ºC. O substrato foi dissolvido recentemente no volume de água destilada indicado no frasco 20 minutos antes de seu uso no ensaio. A solução de substrato reconstituído contém o peptídeo fluorogênico a uma concentração de 1 mM e CaCl2 a uma concentração de 15 mM.

[327] O reagente acionador 'baixa concentração de plaquetas (PPP) - baixo reagente' foi comprado no trombinoscópio (Cat#TS31.00) e reconstituído em água destilada, conforme indicado no frasco. 'PPP- reagente baixo' contém uma mistura de fosfolipídios e fator de tecido em concentração muito baixa. O reagente foi diluído 8 vezes em Tris/HCl 80 mM a pH 7,4, CHAPS a 0,05% (p/v) imediatamente antes do uso.

[328] As amostras foram divididas em alíquotas e medidas em placas de fundo preto/claro de 96 poços adquiridas da Costar (produto no 3603). Para transferência de automação, as amostras foram colocadas na placa de 96 poços com fundo em V (Costar, 3894) e transferidas usando um sistema de automação CyBio (Analytik Jena US, Woburn, MA, EUA).

[329] O plasma sanguíneo humano reconstituído, o reagente acionador 'PPP-reagente baixo' e o substrato foram pré-aquecidos por 10 minutos em um banho de água a 37 ºC. As diluições de anticorpo em série 1:3 em PBS foram preparadas em uma placa de 96 poços começando com uma concentração de NOV1401 de 5 µM (5x a concentração final mais alta de 1 µM) para um total de 8 diluições. 222 µl de reagente acionador foram misturados com 1108 µl de solução de substrato para gerar a mistura de substrato de reagente acionador 10 +

50. 80 µl por poço foram adicionados a uma placa de 96 poços com fundo em V para posterior transferência usando um sistema de automação. A placa foi mantida a 37 ºC. Os reagentes foram adicionados de acordo com o esquema apresentado na Tabela 9. Tabela 9. Esquema de pipetagem para TGA com NOV1401 Etapa de Ensaio Solução Volume [ul] 1 Soluções de anticorpo (8 diluições) 20 2 Solução estoque de plasma 20 5 minutos de incubação a 37°C em um termomisturador a 300 rpm. 3 Mistura de reagente acionador/ substrato 10 + 50

[330] As misturas acionador/substrato foram transferidas usando automação. Após adição das misturas, a excitação e emissão a 360 nm a 460 nm, respectivamente, foram registradas imediatamente usando um instrumento Synergy Neo (BioTek Instrument Inc., Winooski, VT, EUA). As amostras foram medidas em duplicado a uma temperatura de 37 ºC no leitor de placas por 90 minutos em intervalos de 55 segundos.

[331] Para gerar valores de pico de concentração de trombina, os dados foram processados usando o arquivo de software de avaliação TGA fornecido pelo Technoclone. Para gerar gráficos para o pico de concentração de trombina vs anticorpos, dados de concentração foram ajustados usando o software GraphPad. Esses dados foram ajustados a um modelo de regressão não linear no software GraphPad Prism5 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, EUA). O valor de IC50 foi determinado usando a equação da curva de resposta - dose de quatro parâmetros (inclinação variável): y = Inferior + (Superior - Inferior)/(1 + 10 ^ ((LogIC50-x) * Inclinação)) em que y é a concentração máxima de trombina formada na concentração do inibidor, x e superior e inferior representam a concentração de trombina sem inibidor e na concentração mais alta do inibidor, respectivamente.

[332] NOV1401 reduz a trombina de maneira dependente da dose no TGA e o valor de IC50 determinado por este método foi usado como a concentração de NOV1401 em experimentos de reversão com Fabs e IgG anti-NOV1401. Fabs e IgGs anti-NOV1401 revertem parcialmente o efeito de NOV1401 na geração de trombina no TGA:

[333] Para determinar se os anticorpos anti-NOV1401 (Fabs e IgGs) podem reverter a capacidade do NOV1401 de reduzir a geração de trombina no TGA, NOV1401 foi pré-incubado com plasma humano contendo FXI por 5 minutos antes da adição de Fab ou IgG anti- NOV1401. A concentração de NOV1401 foi mantida constante no valor de IC50 determinado separadamente em um experimento de resposta - dose como descrito acima. Fab ou IgG anti-NOV1401 foi adicionado em quantidade equimolar (1/1) ou em excesso molar, tipicamente 1/3 e 1/10 (n/n). O esquema de pipetagem é mostrado na Tabela 10. Tabela 10. Esquema de pipetagem para medir a reversão dos efeitos de NOV1401 sobre TGA por Fab ou IgG anti-NOV1401. Etapa de Solução Volume [uL] Ensaio 1 Solução de NOV1401 ou PBS 10 2 Anticorpo anti-NOV1401 (Fab ou IgG) ou 10 IgG de ontrole 10 minutos de incubação a 37°C 3 Solução estoque de plasma 20 5 minutos de incubação a 37°C em um termomisturador a 300 rpm. 4 Mistura de reagente acionador/ substrato 10 50

[334] As concentrações máximas de trombina geradas para cada condição de ensaio são plotadas e a porcentagem de reversão foi determinada usando a seguinte equação: y = (A - B)/(C - B) * 100. onde y é a reversão percentual, A é a concentração de trombina para condições de ensaio com anti-NOV1401, B é a concentração de trombina para condições de ensaio sem anti- NOV1401, C é a concentração inicial de trombina.

[335] Os resultados para 10 Fabs anti-NOV1401, IDT1-IDT10 e 2 IgGs anti-NOV1401, IDT11 e IDT12, são mostrados na Figura 5. A uma concentração constante de NOV1401 de 0,05 µM, quantidades crescentes de Fab ou IgG anti-NOV1401 adicionados depois que NOV1401 foi incubado com plasma humano contendo FXI, levaram a um aumento na concentração de trombina, revertendo (por exemplo, pelo menos parcialmente, revertendo) o efeito de NOV1401 na geração de trombina no TGA. Enquanto todo anti-NOV1401 mostrou alguma reversão, o grau de reversão em uma dada concentração varia, e uma reversão máxima de 37-72% foi observada com excesso molar de 10x. As porcentagens de reversão para todos os Fabs e IgG anti-NOV1401 estão resumidas na Tabela 11. Estes resultados sugerem que Fabs e IgGs anti-NOV1401 podem reverter (por exemplo, pelo menos parcialmente reverter) a redução da trombina por NOV1401 no TGA. Tabela 11: Resumo de dados de reversão de TGA para anticorpos anti-NOV1401 Razão NOV1401/anti NOV1401 (n/n) Fab anti-NOV1401 1/10 1/3 1/1 IDT1 55% 55% 49% IDT2 61% 57% 55% IDT3 67% 47% 31% IDT4 60% 53% 33% IDT5 72% 56% 55% IDT6 37% 41% 18% IDT7 71% 66% 50% IDT8 69% 56% 41% IDT9 72% 61% 41% IDT10 57% 45% 37% IDT11 67% 59% 50% IDT12 62% 64% 60%

Fabs anti-NOV1401 revertem agudamente os efeitos anticoagulantes de NOV1401 em macacos cinomolgos:

[336] Para testar se um Fab anti-NOV1401 pode reverter a capacidade do NOV1401 de prolongar os tempos de coagulação in vivo, uma dose subcutânea única de 3 mg/kg de NOV1401 foi administrada a macacos cinomolgos no primeiro dia de estudo, seguidos por duas doses i.v. de IDT3 no dia 4 e 5 do estudo, respectivamente. Uma dose de 3 mg/kg s.c. foi escolhida para NOV1401, uma vez que foi demonstrado que esta dose leva ao prolongamento sustentado de aPTT em macacos cinomolgos. Com base nos experimentos in vitro com plasma humano, Fab anti-NOV1401 foi administrado em excesso molar, por exemplo, IDT3 foi administrado i.v. a 10 mg/kg seguido de 30 mg/kg em um animal e a 30 mg/kg seguido de 90 mg/kg em um segundo animal. Animais adicionais (N = 2) também foram administrados com NOV1401 apenas (uma dose de 3 mg/kg s.c. no primeiro dia de estudo) ou IDT3 apenas (duas doses i.v. de 30 mg/kg e 90 mg/kg nos dias 4 e 5 do estudo, respectivamente).

[337] Para análise aPTT ex vivo, amostras de sangue foram coletadas em tubos de coagulação com citrato de sódio no dia 3, e 30 minutos, 2 horas, 8 horas e 12 horas após a dose de IDT3 nos dias 4 e 5 do estudo. Amostras adicionais foram coletadas nos dias 6, 7, 8 e 9 do estudo. Todas as amostras de sangue foram centrifugadas; amostras de plasma foram obtidas e congeladas a aproximadamente -70 ºC ou menos.

[338] Em animais tratados com NOV1 401 sozinho, uma dose única subcutânea de 3 mg/kg prolongou aPTT de 1,7 a 1,8x ao longo do final do estudo, demonstrando que NOV1401 tem efeitos anticoagulantes potentes em macacos cinomolgos e confirmando estudos anteriores.

[339] Em animais que foram doseados a 10 mg/kg i.v. com IDT3 três dias após NOV1401, aPTT foi normalizado imediatamente e alcançou os níveis basais no primeiro período de 30 minutos após a administração (Figura 6). Após 8-12 horas, o efeito prolongador de aPTT de NOV1401 retornou perto dos níveis máximos, mas foi reduzido novamente para a linha de base após a administração de uma segunda dose de 30 mg/kg. Efeitos muito semelhantes foram observados quando IDT3 foi administrado em 30 mg/kg e 90 mg/kg. As doses mais altas parecem prolongar o efeito de reversão. Não foi observado efeito sobre aPTT em animais que receberam apenas IDT3 a 30 mg/kg e 90 mg/kg (Figura 6).

[340] Estes dados sugerem que Fabs anti-NOV1401, como IDT3, são capazes de reverter agudamente os efeitos de NOV1401 em aPTT in vivo e Fabs anti-NOV1401 fornecidos aqui, como IDT3, podem servir como um agente de reversão eficaz para anticorpo anti-FXI/FXIa NOV1401, por exemplo, nos casos em que é necessária a rápida neutralização do anticorpo anti-FXI/FXIa NOV1401. Estes dados também indicam que a reversão aguda observada in vivo neste estudo em macacos se correlaciona com a reversão parcial observada nos experimentos in vitro com plasma humano, como os ensaios de aPTT aqui descritos. Exemplo 5 Avaliações de Desenvolvimento e Formulação

[341] As cadeias pesada e leve de Fabs e IgG anti-NOV1401 foram clonadas em um sistema de vetor de expressão adequado para secreção em células de mamíferos.

[342] Os processos de produção e estudos de formulação para Fabs e IgG anti-NOV1401 foram realizados para avaliar características como a formação de espécies de alto peso molecular (HMW) como uma indicação de agregação em solução, solubilidade e recorte.

[343] Fabs e IgGs anti-NOV1401, em particular IDT1-IDT12, foram recombinantemente expressos e purificados a partir de células CHO. Para estudos de formulação, Fabs e IgGs anti-NOV1401, em particular IDT1-IDT12, foram avaliados em uma formulação líquida com 220mM de sacarose, 20mM de histidina, polissorbato 20 a 0,04% a pH 5,5, a uma 150 mg/mL de concentração, e foram considerados ser bem comportados, tais como baixas tendências de agregação, baixo corte e alta solubilidade. Por exemplo, parâmetros tais como formação de HMW, solubilidade e recorte foram considerados estarem dentro de faixas aceitáveis para Fabs e IgGs típicos em formulações líquidas. Resultados semelhantes foram alcançados quando testados em pH ligeiramente diferente. Estes resultados indicam que as formulações líquidas testadas e certas variantes são adequadas para Fabs e IgGs anti-NOV1401. Incorporação por Referência

[344] Todas as referências aqui citadas, incluindo patentes, pedidos de patente, documentos, publicações, livros didáticos e similares, e as referências aqui citadas, na medida em que ainda não sejam, são aqui incorporadas aqui por referência em sua totalidade.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Agente de ligação que liga especificamente um anticorpo alvo que liga FXI e/ou FXIa humano no domínio catalítico, caracterizado pelo fato de que o agente de ligação inibe uma atividade anticoagulante do anticorpo alvo, em que o anticorpo alvo compreende (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23; ou (ii) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25; e em que o agente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, compreendendo (a) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 347 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 57, ou (b) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 349 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 89.

2. Agente de ligação que liga especificamente um anticorpo alvo que liga FXI e/ou FXIa humano dentro do domínio catalítico, caracterizado pelo fato de que o agente de ligação reverte uma atividade anticoagulante do anticorpo alvo e em que o agente de ligação é o anticorpo anti-idiotipo IDT11 ou IDT12 conforme estabelecido na Tabela

2.

3. Agente de ligação que liga especificamente um anticorpo alvo que liga FXI e/ou FXIa humano dentro do domínio catalítico, caracterizado pelo fato de que o agente de ligação reverte uma atividade anticoagulante do anticorpo alvo e em que o agente de ligação é um anticorpo anti-idiotipo compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é 90% idêntica à SEQ ID NO: 347 e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à SEQ ID NO: 57; (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à SEQ ID NO: 349 e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica a SEQ ID NO: 89; (iii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO: 347 e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO: 57; (iv) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é 95% idêntica à SEQ ID NO: 349 e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO: 89; (v) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 98% idêntica à SEQ ID NO: 347 e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 98% idêntica à SEQ ID NO: 57; (vi) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é 98% idêntica à SEQ ID NO: 349 e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 98% idêntica à SEQ ID NO: 89; (vii) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 347 com uma, duas, três ou quatro mutações de aminoácidos que não afetam substancialmente a atividade e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 57 com uma, duas, três ou quatro mutações de aminoácidos que não afetam substancialmente a atividade; (viii) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 349 com uma, duas, três ou quatro mutações de aminoácidos que não afetam substancialmente a atividade e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 89 com uma, duas, três ou quatro mutações de aminoácidos que não afetam substancialmente a atividade; ou (ix) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 349 com uma mutação, como uma mutação conservadora, na posição 30, como a mutação S para Q, de SEQ ID NO: 349 que não afeta substancialmente a atividade e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 89.

4. Polinucleotídeo, caracterizado pelo fato de que compreende sequências de nucleotídeos que codificam o agente de ligação, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3.

5. Vetor, caracterizado pelo fato de que compreende o polinucleotídeo, como definido na reivindicação 4.

6. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que compreende o polinucleotídeo, como definido na reivindicação 4.

7. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que compreende o vetor, como definido na reivindicação 4.

8. Método de produzir um agente de ligação, caracterizado pelo fato de que compreende cultivar a célula hospedeira, como definida na reivindicação 6 ou 7, sob condições adequadas para expressão do agente de ligação ou uma porção do mesmo, em que o método opcionalmente compreende a purificação do agente de ligação.

9. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o agente de ligação, como definido em de qualquer uma das reivindicações 1 a 3.

10. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que é para uso como um medicamento para reverter o efeito anticoagulante de um anticorpo anti-FXI/FXIa em um paciente sendo tratado com o anticorpo antiFator XI/Fator XIa, em que a composição farmacêutica compreende uma quantidade eficaz do agente de ligação, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3.

11. Método para reverter o efeito anticoagulante de um anticorpo anti-FXI/FXIa em um paciente sendo tratado com o anticorpo anti-FXI/FXIa ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade eficaz do agente de ligação, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 a um paciente em necessidade do mesmo.

12. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-FXI/FXIa ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende (i) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23; ou (ii) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25.

13. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-FXI/FXIa ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende (i) uma VH compreendendo as regiões determinantes de complementaridade HCDR1, HCDR2 e HCDR3 de uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 e (ii) uma VL compreendendo regiões determinantes de complementaridade LCDR1, LCDR2 e LCDR3 de uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23.

14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 13, caracterizado pelo fato de que adicionalmente compreende a aplicação de um dos seguintes itens ao paciente: (i) substituição de fluidos usando coloides, cristaloides, plasma humano ou proteínas plasmáticas como albumina; (ii) transfusão com sangue vermelho empacotado ou sangue total; ou (iii) administração de plasma fresco congelado (FFP), concentrados do complexo de protrombina (PCC), PCC ativado (APCC), como inibidor do fator VIII e/ou fator VII recombinante ativado.

15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 14, caracterizado pelo fato de que o paciente tem ou está em risco de desenvolver trombose.

16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 15, caracterizado pelo fato de que o paciente tem: a. fibrilação atrial; b. arritmia cardíaca suspeita ou confirmada, como fibrilação atrial paroxística, persistente ou permanente ou flutter atrial; c. Hipertensão Pulmonar Tromboembólica Crônica (CTEPH); d. cardiopatia valvular com ou sem fibrilação atrial; e. hipertensão pulmonar; f. trombofilia congênita ou adquirida, incluindo, mas não exclusivamente, fator V de Leiden, mutação da protrombina, antitrombina III, deficiências de proteína C e proteína S, mutação do Fator XIII, disfibrinogenias familiares, deficiência congênita de plasminogênio, aumento dos níveis de Fator XI, doença das células falciformes, síndrome antifosfolipídio, doença autoimune, doença intestinal crônica, síndrome nefrótica, uremia hemolítica, doença mieloproliferativa, coagulação intravascular disseminada, hemoglobinúria paroxística noturna e trombopenia induzida por heparina; ou g. doença renal crônica.

17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações

11 a 16, caracterizado pelo fato de que o paciente tem fibrilação atrial não valvular.

18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 17, caracterizado pelo fato de que o paciente tem um alto risco demonstrado de sangramento.

19. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 18, caracterizado pelo fato de que o paciente tem doença renal crônica.

20. Método, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o paciente tem doença renal terminal (ESRD).

21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o paciente tem ESRD e está em diálise.

22. Método, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que o paciente tem fibrilação atrial não valvular.

23. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 22, caracterizado pelo fato de que o paciente está recebendo o anticorpo anti-FXI/FXIa ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo para reduzir o risco de derrame e/ou embolia sistêmica.

24. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 23, caracterizado pelo fato de que a reversão do efeito anticoagulante do anticorpo anti-FXI/FXIa ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é necessária para cirurgia de emergência/procedimentos urgentes e em sangramento com risco de vida ou não controlado.