BR112019025319A2 - Inibidores de il-8 para uso no tratamento e/ou prevenção de infecções bacterianas secundárias - Google Patents

Abstract

A presente invenção se refere a compostos inibidores de IL-8, preferencialmente inibidores duplos de receptores CXCR1 / CXCR2, úteis no tratamento e / ou prevenção de infecções bacterianas secundárias, de preferência infecções respiratórias secundárias.

Description

“INIBIDORES DE IL-8 PARA USO NO TRATAMENTO E/OU PREVENÇÃO DE INFECÇÕES BACTERIANAS SECUNDÁRIAS”

CAMPO TÉCNICO

[0001] A presente invenção se refere a inibidores de IL-8 para a prevenção e / ou tratamento de infecções bacterianas secundárias, preferencialmente infecções respiratórias secundárias. As referidas infecções bacterianas secundárias são associadas a uma infecção prévia por influenza, sepse, isquemia grave ou lesão de reperfusão.

ANTECEDENTES

[0002] Os pulmões são compostos por uma miríade de ramificações semelhantes a árvores que terminam em alvéolos intensamente vascularizados. A superfície mucosa do pulmão é incrivelmente grande (90 m²) e é exposta diariamente a um grande número de partículas e microorganismos, incluindo patógenos [Kopf, M., C. Schneider e SP Nobs, The development and function of lung-resident macrophages and dendritic cells. Nat Immunol, 2015. 16 (1): p. 36-44]. Portanto, um grande número de barreiras físicas e biológicas, incluindo o sistema imunológico inato, protege os pulmões de uma possível infecção. Citocinas e quimiocinas pró-inflamatórias são produzidas por células imunes residentes e células epiteliais do pulmão, promovendo o recrutamento de neutrófilos e o início da inflamação, importante para controlar a disseminação e proliferação de microrganismos. No entanto, a resposta inflamatória descontrolada desencadeada pela infecção também pode levar ao aumento de danos nos pulmões, morbidade e mortalidade [Garcia, CC, et al., The development of anti- inflammatory drugs for infectious diseases. Discov Med, 2010. 10 (55): p. 479-88].

[0003] O vírus da gripe A (IAV) é um patógeno respiratório de grande relevância mundial, causando de 3 a 5 milhões de doenças graves e mais de 300.000 mortes durante epidemias. As infecções bacterianas secundárias contribuem muito para o aumento da mortalidade e morbidade durante a gripe sazonal e também para pandemias. Estima-se que as co-infecções bacterianas sejam responsáveis por aproximadamente 25% das mortes relacionadas à influenza [Gupta, RK, R. George e JS Nguyen-Van-Tam, Bacterial pneumonia and pandemic influenza planning. Emerg

Infect Dis, 2008. 14 (8): p. 1187-92].

[0004] Entre diferentes bactérias relacionadas a infecções secundárias pela gripe, o Streptococcus pneumoniae (S. pneumoniae) é um dos patógenos causadores mais comuns [Short, KR, et al., Interactions between Streptococcus pneumoniae and influenza virus: a mutually beneficial relationship? Future Microbiol, 2012. 7 (5): p. 609- 24] e é considerada a principal causa de mortalidade durante a gripe sazonal [McCullers, JA, Insights into the interaction between influenza virus and pneumococcus. Clin Microbiol Rev, 2006. 19 (3): p. 571-82]. De fato, S. pneumoniae é uma das principais causas de pneumonia adquirida na comunidade entre crianças e adultos, especialmente aqueles que apresentaram gripe anteriormente [Madhi, SA, KP Klugman e G. Vaccine Trialist, A role for Streptococcus pneumoniae in virus- associated pneumonia. Nat Med, 2004. 10 (8): p. 811-3]. Apesar da disponibilidade de antibióticos, a incidência e letalidade de infecções secundárias pneumocócicas após a gripe ainda são altas. De fato, durante a co-infecção com IAV e pneumococo, o tratamento com antibióticos causa lise bacteriana, estimulação excessiva do sistema imunológico e recrutamento maciço de neutrófilos, eventos que podem levar a danos teciduais e mortalidade intensos [Karlstrom, A., et al., Toll-like receptor 2 mediates fatal immunopathology in mice during treatment of secondary pneumococcal pneumonia following influenza. J Infect Dis, 2011. 204 (9): p. 1358-66].

[0005] Os neutrófilos são as principais células inflamatórias recrutadas para os pulmões durante as infecções por IAV e pneumocócicas [Jose, R., et al., Regulation of neutrophilic inflammation in lung injury induced by community-acquired pneumonia. Lancet, 2015. 385 Suppl 1: p. S52]. Quando os microrganismos atingem o epitélio pulmonar, são reconhecidos por células imunes e não imunes, levando à secreção de quimiocinas como CXCL8 (CXCL1 / CXCL2 em camundongos) [Wang, JP, et al., Toll- like receptor-mediated activation of neutrophils by influenza A virus. Blood, 2008. 112 (5): p. 2028-34]. Essas quimiocinas atuam através de seus receptores CXCR1 e CXCR2 expressos em uma infinidade de tipos de células, como monócitos, células T CD8 +, matadores naturais e neutrófilos. Nos neutrófilos, a ativação de CXCR1 e CXCR2 leva à quimiotaxia, liberação de enzimas granulares e produção de espécies reativas de oxigênio [Russo, RC, et al., The CXCL8/IL-8 chemokine family and its receptors in inflammatory diseases. Expert Rev Clin Immunol, 2014. 10 (5): p. 593- 619]. Estes eventos são muito importantes para controlar a proliferação e disseminação de vírus ou bactérias, mas a ativação avassaladora de neutrófilos pode ser prejudicial para o hospedeiro, pois pode levar a lesões pulmonares intensas. Isso é verdade tanto para infecções por IAV quanto por pneumococos, já que um influxo intenso de neutrófilos altamente ativados está associado à gravidade da doença [Ramos, I. e A. Fernandez-Sesma, Modulating the Innate Immune Response to Influenza A Virus: Potential Therapeutic Use of Anti-Inflammatory Drugs. Front Immunol, 2015. 6: p. 361; Tavares, LP, et al., Inibição de PDE4 durante pneumonia pneumocócica reduz inflamação e lesão pulmonar em camundongos. Am J Respir Cell Mol Biol, 2015]. Portanto, estratégias para controlar a resposta inflamatória durante infecções respiratórias podem reduzir a magnitude da doença.

[0006] Como mencionado acima, uma infecção prévia por influenza pode aumentar o risco de uma infecção bacteriana subsequente (outros patógenos). Essa situação não é exclusiva da gripe, pois outros tipos de infecções graves (por exemplo, sepse) podem causar uma situação semelhante em sistemas experimentais e contribuir para as taxas de letalidade aumentadas observadas após a sepse em humanos. Outras condições graves também podem se associar ao risco de uma infecção secundária, incluindo isquemia grave e lesão de reperfusão.

[0007] A interleucina-8 (IL-8; CXCL8) é considerada um dos principais mediadores do recrutamento de PMN (Neutrófilos Polimorfonucleares) e está envolvida em várias patologias, incluindo psoríase, artrite reumatóide, doença pulmonar obstrutiva crônica e lesão de reperfusão em órgão transplantado (Griffin et al., Arch Dermatol 1988, 124: 216; Fincham et al., J. Immunol 1988, 140: 4294; Takematsu et al., Arch Dermatol 1993, 129: 74; Liu et al., 1997, 100: 1256; Jeffery, Thorax 1998, 53: 129; Pesci et al., Eur Respir J. 1998, 12: 380; Lafer et al., Br J. Pharmacol. 1991, 103: 1153; Romson et al., Circulation 1993, 67: 1016; Welbourn et al., Br J Surg. 1991, 78: 651; Sekido et al., Nature 1993, 365, 654). A atividade biológica da I L -8 é mediada pela interacção com dois receptores, CXCR1 e CXCR2, pertencente à família 7TM-GPCR, que são expressos na superfície de PMNs humanos. Embora o CXCR1 seja seletivo, vinculando com alta afinidade apenas duas quimiocinas, CXCL6 e IL-8, e mostrando uma afinidade muito maior para IL-8 (Wolf et al., Eur J Immunol 1998, 28: 164), o CXCR2 humano é mais promíscuo. Receptor, ligando várias citocinas e quimiocinas. Portanto, o CXCR2 faz a mediação da atividade de várias moléculas biológicas diferentes.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0008] Em conexão com infecções bacterianas e como relatado acima, os presentes inventores observaram que, em neutrófilos, a ativação de CXCR1 e CXCR2 leva à quimiotaxia, liberação de enzimas granulares e produção de espécies reativas de oxigênio que são muito importantes para controlar a proliferação e disseminação de bactérias. Em vista do acima exposto, não havia motivação para usar os inibidores de IL-8 no tratamento de infecções bacterianas. De fato, as infecções causadas por bactérias são tratadas com antibióticos.

[0009] Os presentes inventores determinaram, surpreendentemente, que a modulação da resposta inflamatória, bloqueando CXCR1 / CXCR2 melhora a evolução da doença, sem comprometer a resposta imunitária contra os agentes patogênicos durante as infecções secundárias, de preferência infecções respiratórias, e, mais preferencialmente, infecções pneumocócicas.

[0010] Sendo assim, um primeiro objetivo da presente invenção é um inibidor de IL-8 selecionado a partir de moléculas de peso molecular pequeno, preferencialmente um inibidor de CXCR1, mais preferencialmente um inibidor duplo de CXCR1 / CXCR2, para uso na prevenção e / ou tratamento de infecções bacterianas secundárias, preferencialmente infecções respiratórias secundárias, mais preferencialmente infecções pneumocócicas.

[0011] O segundo objetivo da presente invenção é a utilização do referido inibidor de IL-8, como definido acima, para a preparação de um medicamento para a prevenção e / ou tratamento de infecções bacterianas secundárias, preferencialmente infecções respiratórias secundárias, mais preferencialmente infecções pneumocócicas.

[0012] O terceiro objetivo da presente invenção é um método para a prevenção e / ou tratamento de infecções bacterianas secundárias, preferencialmente infecções respiratórias secundárias, mais preferencialmente infecções pneumocócicas, compreendendo a etapa de administração, a um sujeito em necessidade, de uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido inibidor de IL -8, como definido acima.

[0013] O quarto objetivo da invenção é uma composição farmacêutica para a prevenção e / ou tratamento de infecções bacterianas secundárias, preferencialmente infecções respiratórias secundárias, mais preferencialmente infecções pneumocócicas, compreendendo um inibidor de IL-8 de acordo com a invenção e excipientes farmaceuticamente aceitáveis e / ou diluentes.

[0014] De acordo com uma modalidade preferida, as referidas infecções respiratórias secundárias estão associadas a uma infecção prévia por influenza, sepse, isquemia grave ou lesão de reperfusão.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0015] Figura 1. Cinética das respostas inflamatórias desencadeadas pela infecção pelo IAV. Camundongos foram infectados com IAV (104 e 106 PFU) ou instilados com PBS (Mock) e após 1, 3, 4, 5, 7 e 10 dias de infecção foram sacrificados. Os níveis das quimiocinas CXCL1 e CXCL2 (A e D), número de neutrófilos nas vias aéreas (B e E) e pulmões (C e F) foram avaliados em diferentes momentos após a infecção. (n = 5-6 camundongos por grupo). Os resultados são expressos como o número de células, níveis de citocinas (pg / ml), absorvância ou porcentagem do peso inicial e são mostrados como uma média ± SEM. *, P < 0,05; **, P < 0,01; ***, P < 0,001, quando comparado com camundongos Mock ou grupos indicados.

[0016] Figura 2. O antagonismo de CXCR1 / CXCR2 diminui as respostas inflamatórias durante a infecção por IAV e protege os camundongos da morbidade. Camundongos foram infectados com 104 UFP de IAV e tratada com DF2162 (10mg / kg) duas vezes por dia durante os primeiros 5 dias de infecção ou com o veículo do fármaco (CMC a 0,1% em PBS). Os animais de controle foram instilados intranasalmente com PBS (Mock). A perda de peso (A), o número de leucócitos (B) e neutrófilos (C) nas vias aéreas ou pulmões (D) e a contagem de vírus nos pulmões

(E) foram avaliados após 5 dias de infecção. (n = 5-6 camundongos por grupo). Os dados são apresentados como a média ± SEM. * para P <0,05; ** para P <0,01 e *** para P < 0,001, quando comparado ao grupo Mock e # para P <0,05 e ### para P < 0,001 quando comparado ao grupo veículo (Gripe).

[0017] Figura 3. Os níveis de citocinas pró-inflamatórias e danos nos pulmões são reduzidos após o tratamento com DF2162. Camundongos foram infectados com 104 UFP de IAV e tratados com DF2162 (10mg / kg) duas vezes por dia durante os primeiros 5 dias de infecção ou com o veículo do fármaco (CMC a 0,1% em PBS). Os animais de controle foram instilados intranasalmente com PBS (Mock). Os níveis de TNF- α (A), CXCL1 (B) e IL-6 (C) nas vias aéreas de camundongos foram medidos. As análises histológicas foram realizadas e o escore histopatológico é apresentado em (D) - máximo de 18 pontos (via aérea, vascular, inflamação do parênquima, infiltração neutrofílica e lesão epitelial). Os resultados são apresentados como média ± SEM (n = 5-6 camundongos por grupo). ** para P <0,01 e *** para P < 0,001 quando comparado ao grupo Mock; # para P <0,05 e ## para P <0,01 quando comparado ao grupo Veículo.

[0018] Figura 4. Efeitos do antagonismo de CXCR1 / CXCR2 no curso da pneumonia pneumocócica em camundongos. Camundongos foram infectados por via intranasal (in) com 104 CFU de S. pneumoniae ou PBS (Mock) e tratados com DF2162 (10 mg / kg) duas vezes por dia durante os primeiros 2 dias de infecção ou com o veículo da droga (CMC 0,1% em PBS). Para letalidade, os camundongos foram acompanhados diariamente por 10 dias (A). 48 horas após a infecção, os camundongos foram sacrificados e o número total de leucócitos (B) e neutrófilos em LBA (C) e nos pulmões (D) foi acessado. O número de bactérias no LBA também foi medido (E). O gráfico F mostra a pontuação patológica geral (máximo de 18 pontos). Os resultados são mostrados como a mediana (E) ou a média ± SEM (todos os outros gráficos) de pelo menos seis camundongos em cada grupo. * Para P <0,05; *** para P < 0,001, quando comparado com o grupo Mock e # para P < 0,05 e ## para P < 0,01 quando comparado ao grupo tratado com veículo.

[0019] Figura 5. A perda de peso, recrutamento de neutrófilos e bactérias no sangue de camundongos infectados secundários são reduzidos após o tratamento com CXCR1 / CXCR2. Camundongos foram infectados com IAV (5 x 102 PFU, in) e após 3, 4, 5 e 6 dias de infecção foram tratados duas vezes por dia com DF2162 (10 mg / kg - gavagem oral) ou o veículo da droga. Após 14 dias da infecção pelo IAV, os camundongos foram infectados secundariamente por S. pneumoniae (103 CFU, pol). Infecções únicas também foram realizadas. Os camundongos simulados foram instilados (in) com PBS. A letalidade (A) e a perda de peso (B) foram acompanhadas. Em outro experimento, camundongos sob os mesmos tratamentos e condições de infecção foram sacrificados após 48 horas após a segunda infecção. O número total de leucócitos (C) e neutrófilos (D) nas vias aéreas, neutrófilos nos pulmões (ensaio E - MPO) e bactérias em LBA (F) ou no sangue (G) foram acessados. Os resultados são apresentados como Média ± SEM. * para P <0,05; ** para P <0,01 e *** para P < 0,001 quando comparado ao grupo Mock; ## para P <0,01 e ### para P <0,001 quando comparado ao grupo Veículo (n = 10 camundongos por grupo).

[0020] Figura 6. O antagonismo de CXCR1 / CXCR2 durante a infecção primária do IAV reduziu os níveis de citocinas durante a infecção secundária pneumocócica. Camundongos foram infectados com IAV (5 x 102 UFP, em) e em 3, 4, 5, e 6 dias após a infecção foram tratados duas vezes por dia com DF2162 (10 mg / kg - sonda oral) ou o veículo da droga. Os animais receberam o medicamento apenas durante a infecção pelo IAV. Após 14 dias da infecção pelo IAV, os camundongos foram infectados secundariamente por S. pneumoniae (103 CFU, pol). Infecções únicas também foram realizadas. Os camundongos simulados foram instilados (in) com PBS. Após 48 horas da infecção por S. pneumoniae, os camundongos foram sacrificados e os níveis de TNF- α (A), IL-6 (B), IL-12 (C), CXCL-1 (D) e IL-10 (E) foram medidos no líquido do LBA. Os dados são apresentados como Média ± SEM. * para P <0,05; ** para P <0,01 e *** para P <0,001, quando comparado ao grupo Mock; ## para P <0,01 e ### para P <0,001 quando comparado ao grupo Veículo (n = 10 camundongos por grupo).

[0021] Figura 7. O aumento da lesão pulmonar devido à infecção pneumocócica secundária é reduzido após o tratamento com DF2162. Camundongos foram infectados com IAV (5 x 102 UFP, em) e em 3, 4, 5, e 6 dias após a infecção foram tratados duas vezes por dia com DF2162 (10 mg / kg - sonda oral) ou o veículo da droga. Os animais receberam o medicamento apenas durante a infecção pelo IAV. Após 14 dias da infecção pelo IAV, os camundongos foram infectados secundariamente por S. pneumoniae (103 CFU, pol). Infecções únicas também foram realizadas. Os camundongos simulados foram instilados (in) com PBS. Após 48h de infecção secundária, os pulmões foram coletados, processados e as análises histológicas foram realizadas. Lâminas representativas de Mock, camundongos infectados único (IAV e S. pneumoniae) e camundongos infectados secundário (veículo e DF2162-tratado) são mostradas em A (barras representam 150 m em ampliação de 100x). O gráfico B mostra a pontuação geral de lesão pulmonar de camundongos infectados. O líquido do LBA foi utilizado para medir o vazamento de proteínas devido à infecção (C). Os dados são apresentados como Média ± SEM. * para P <0,05; ** para P <0,01 e *** para P < 0,001, quando comparado ao grupo Mock; # para P <0,05 e ## para P <0,01 quando comparado ao grupo Veículo (n = 10 camundongos por grupo).

[0022] Figura 8. As alterações histopatológicas nos pulmões de camundongos infectados com IAV são reduzidas após o tratamento com DF2162. Camundongos foram infectados com 104 UFP de IAV e tratada com DF2162 (10mg / kg) duas vezes por dia durante os primeiros 5 dias de infecção ou com o veículo do fármaco (CMC a 0,1% em PBS). Os animais de controle foram instilados intranasalmente com PBS (Mock). São mostradas lâminas representativas de H&E nos pulmões de animais infectados com Mock e IAV (tratados com veículo e DF) - ampliações de 100x.

[0023] Figura 9. O tratamento com antagonista de CXCR1 / CXCR2 evita alterações histopatológicas nos pulmões de camundongos infectados com S. pneumoniae. Camundongos foram infectados por via intranasal com 104 CFU de S. pneumoniae ou PBS (Mock) e tratados com DF2162 (10 mg / kg) duas vezes por dia durante os primeiros 2 dias de infecção ou com o veículo da droga (CMC 0,1% em PBS). São mostradas lâminas representativas de H&E dos pulmões de animais infectados com Mock e S. pneumoniae (tratados com veículo e tratados com DF) -

ampliações de 100x.

[0024] Figura 10. Tratamento com dexametasona em camundongos Cs-H1N1. (A) Concentração de citoquina no tecido pulmonar, (B) Número total de leucócitos obtidos nas análises BAL e (C) atividade MPO no tecido pulmonar de camundongos expostos ao ar ambiente (ar), fumaça de cigarro (Cs), infectados pelo vírus H1N1 (H1N1), Infectado com o vírus H1N1 e exposto a Cs (Cs H1N1) e Cs H1N1 tratados com dexametasona (1 mg / kg p. O) uma vez ao dia 48 horas após a infecção durante 4 dias (Cs H1N1 Dexametasona).

[0025] Figura 11. Ensaio de tratamento de sobrevivência de camundongos Cs- H1N1 com DF2156A, um antagonista de CXCR1 / CXCR2. Proporções de sobrevivência de camundongos expostos ao ar ambiente (ar), fumaça de cigarro (Cs), infectados pelo vírus H1N1 (H1N1), infectados pelo vírus H1N1 e expostos ao Cs (Cs H1N1), Cs H1N1 tratados com dexametasona (1 mg / kg) uma vez por dia durante 7 dias a partir do dia da infecção (Cs H1N1 Dexametasona vo), Cs H1N1 tratado com DF2156A (10 mg / kg po) uma vez por dia durante 7 dias a partir do dia da infecção e Cs H1N1 tratado com 3 ml de Tiotrópio (0,3 mg / ml de aerossol) uma vez por dia durante 7 dias a partir do dia da infecção.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0026] Como será divulgado em detalhes na parte experimental, os presentes inventores determinaram que as moléculas da presente invenção, que atuam como inibidores de atividade de IL-8, preferencialmente inibidores do receptor duplo de CXCR1 / CXCR2, tem eficácia terapêutica no tratamento e / ou prevenção de infecções bacterianas secundárias.

[0027] Sendo assim, um primeiro objetivo da presente invenção é um inibidor de IL-8 para uso no tratamento e / ou prevenção de infecções bacterianas secundárias, preferencialmente infecções respiratórias secundárias, mais preferencialmente infecções pneumocócicas, em que o inibidor de IL-8 é selecionado dentre moléculas de baixo peso molecular.

[0028] De acordo com uma modalidade preferida, as referidas infecções bacterianas secundárias estão associadas a uma infecção prévia por influenza, sepse,

isquemia grave ou lesão de reperfusão.

[0029] O termo "inibidor de IL-8", de acordo com o presente pedido, se refere a qualquer composto capaz de inibir, parcial ou totalmente, a atividade biológica da IL-

8. Um tal composto pode agir diminuindo a expressão ou atividade da IL-8 ou inibindo o desencadeamento da sinalização intracelular ativada pelos receptores da IL-8. É preferido que o referido inibidor de IL-8 seja capaz de inibir pelo menos 50%, preferencialmente pelo menos 60%, da quimiotaxia induzida por IL-8 em PMNs a uma concentração igual ou inferior a 500 nM, preferencialmente abaixo de 100nM.

[0030] De acordo com uma forma de realização preferida, o inibidor de IL-8 de todos os objetos da presente invenção inibe a atividade de IL-8 mediada por CXCR1 receptor ou mediada por ambos os receptores CXCR1 e CXCR2.

[0031] De um modo preferido, de acordo com esta modalidade, o referido inibidor de IL-8 é ou um inibidor alostérico ou um antagonista ortostérico de CXCR1 receptor ou de ambos os receptores CXCR1 e CXCR2.

[0032] Preferencialmente, o referido inibidor de IL-8 é seletivo para o receptor CXCR1 ou é igualmente potente em termos dos receptores CXCR1 e CXCR2. Mais preferencialmente, o referido inibidor de IL-8 é igualmente potente para os receptores CXCR1 e CXCR2.

[0033] Por “seletivo para CXCR1”, de acordo com a presente invenção, pretende- se designar um composto que mostra é uma IC50 de valor, pelo menos, dois, de preferência três, logs mais elevados para CXCR1 do que para CXCR2. (Bertini R. et al., Proc. Nat. Acad. Sei. USA (2004), 101 (32), pp. 11791-11796).

[0034] Por "igualmente potente em relação ao CXCR1 e CXCR2", entende-se um composto que mostra um valor de IC50 na faixa de 10 picomolar (10-11 M) - 1 micromolar (10-6 M) em relação a CXCR1 e CXCR2. (Bertini R. et al., Br. J. Pharm. (2012), 165, pp. 436-454).

[0035] Mais preferivelmente, o inibidor de IL-8 de acordo com a invenção tem uma IC50 de valor para o receptor CXCR1 numa faixa baixa de nanomolar, de preferência no intervalo de 0,02 - 5 nanomolar.

[0036] De acordo com a presente invenção, também em combinação com a modalidade anterior, o referido inibidor de IL-8 é selecionado a partir de moléculas de baixo peso molecular.

[0037] De acordo com uma forma de realização alternativa, o referido inibidor de IL-8 é selecionado a partir de anticorpos, de preferência anticorpos anti-receptor CXCR1 / CXCR2.

[0038] Inibidores de IL-8 de acordo com a definição acima, capazes de inibir a atividade da IL-8 mediada por receptor CXCR1 ou mediada por ambos os receptores CXCR1 e CXCR2, são conhecidos no estado da técnica.

[0039] Os inibidores de IL-8 de acordo com a invenção são inibidores duplos do receptor CXCR1 / CXCR2 selecionados a partir de derivados do ácido 1,3-tiazol-2- ilaminofenilpropiônico, derivados do ácido 2-fenil-propiônico e seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

[0040] Entre os compostos acima, o referido derivado de ácido 1,3-tiazol-2- ilaminofenilpropiônico é, de preferência, um composto de fórmula (I):

[0041] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que - R1 é hidrogênio ou CH3; - R2 é hidrogênio ou linear C1 -C4 alquila, de preferência, é hidrogênio; - Y é um heteroátomo selecionado entre S, O e N; de preferência é S; - Z é selecionado a partir de halogênio, de cadeia linear ou ramificado C1 - C4 alquila, C2 -C4 alcenila, C2 -C4 alcinila, C1 -C4 alcóxi, hidroxila, carboxila, C1 -C4 acilóxi, fenóxi, ciano, nitro, amino, C1 -C4 acilamino, halo C1 -C3 alquila, halo C1 -C3 alcóxi, benzoíla, alcanossulfonato C1 -C8 linear ou ramificado, alcanossulfonamidaC1 -C8 linear ou ramificado, C1 -C8 alquilsulfonilmetila linear ou ramificado; de preferência é trifluorometila;

- X é OH ou um resíduo de fórmula NHR3; em que R3 é selecionado dentre: - hidrogênio, hidroxila, C1 - C6 alquila linear ou ramificado, C3 -C6 cicloalquila, C2 - C6 alcenila, C1 -C5 alcóxi, ou C1 -C6, fenilalquila, em que os grupos alquila, cicloalquila ou alcenila podem ser substituídos por um resíduo de COOH; - um resíduo de fórmula SO2R4, em que R4 representa C1 -C2 alquila, C3 - C6 cicloalquila, C1 -C3 haloalquila.

[0042] De preferência, nos compostos acima, X é OH.

[0043] Entre os compostos acima, compostos particularmente preferidos são da referida fórmula (I) ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que:

[0044] R1 é CH3;

[0045] R2 é hidrogênio ou C1 -C4 alquila linear, de preferência, é hidrogênio;

[0046] Y é um heteroátomo selecionado de S, O e N; de preferência é S;

[0047] Z é selecionado a partir de halogênio, C1 -C4 alquila de cadeia linear ou ramificado, C2 -C4 alcenila, C2 -C4 alcinila, C1 -C4 alcóxi, hidroxila, carboxila, C1 -C4 acilóxi, fenóxi, ciano, nitro, amino, C1 -C4 acilamino, halo C1 -C3 alquila, halo C1 -C3 alcóxi, benzoila, C1 -C8 alcanossulfonato linear ou ramificado, C1 -C8 alcanossulfonamida linear ou ramificada, C1 -C8 alquilsulfonilmetila linear ou ramificado; de preferência é trifluorometila;

[0048] X é OH ou um resíduo de fórmula NHR3; em que R3 é selecionado dentre: -hidrogênio, hidroxila, C1 -C6 alquila linear ou ramificado, C3 -C6 cicloalquila, C2 -C6 alcenila, C1 -C5 alcóxi, ou C1 -C6, fenilalquila, em que o grupo alquila, cicloalquila ou alcenila pode ser substituído por um resíduo de COOH; - um resíduo de fórmula SO2R4, em que R4 representa C1 -C2 alquila, C3 - C6 cicloalquila, C1 -C3 haloalquila.

[0049] De preferência, nestes compostos, X é OH.

[0050] Entre os compostos acima, também são particularmente preferidos compostos da referida fórmula (I) ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que

[0051] R1 é hidrogênio;

[0052] R2 é hidrogênio ou C1 -C4 alquila linear, de preferência, é hidrogênio;

[0053] Y é um heteroátomo selecionado de S, O e N; de preferência é S;

[0054] Z é selecionado a partir de halogênio, C1 -C4 alquila de cadeia linear ou ramificado, C2 -C4 alcenila, C2 -C4 alcinila, C1 -C4 alcóxi, hidroxila, carboxila, C1 -C4 acilóxi, fenóxi, ciano, nitro, amino, C1 -C4 acilamino, halo C1 -C3 alquila, halo C1 -C3 alcóxi, benzoila, C1 -C8 alcanossulfonato linear ou ramificado, C1 -C8 alcanossulfonamidas lineares ou ramificadas, C1 -C8 alquilssulfonilmetila linear ou ramificada; de preferência é selecionado de trifluorometila;

[0055] X é OH ou um resíduo de fórmula NHR3; em que R3 é selecionado dentre -hidrogênio, hidroxila, C1 -C6 alquila linear ou ramificado, C3 -C6 cicloalquila, C2 -C6 alcenila, C1 -C5 alcóxi, ou C1 -C6, fenilalquila, em que o grupo alquila, cicloalquila ou alcenila pode ser substituído por um resíduo de COOH; - um resíduo de fórmula SO2R4, em que R4 representa C1 -C2 alquila, C3 - C6 cicloalquila, C1 -C3 haloalquila.

[0056] Mais preferivelmente X é NH2.

[0057] De preferência, nos compostos acima X é OH.

[0058] Entre os compostos acima, também são particularmente preferidos os compostos da referida fórmula (I) ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que:

[0059] R1 é hidrogênio ou CH3;

[0060] R2 é hidrogênio ou C1 -C4 alquila linear, de preferência, é hidrogênio;

[0061] Y é um heteroátomo selecionado de S, O e N; de preferência é S;

[0062] Z é selecionado a partir de C1 -C4 alquila linear ou ramificado, C1 -C4 alcóxi linear ou ramificado, halo C1 -C3 alquila e halo C1 -C3 alcóxi; preferencialmente é selecionado de metila, metóxi, trifluorometóxi, trifluorometila, mais preferencialmente é trifluorometila;

[0063] X é OH.

[0064] Entre os compostos acima, também são particularmente preferidos os compostos da referida fórmula (I) ou seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, em que:

[0065] R1 é CH3;

[0066] R2 é hidrogênio ou C1 -C4 alquila linear, de preferência é hidrogênio.

[0067] Y é um heteroátomo selecionado de S, O e N; de preferência é S.

[0068] Z é selecionado a partir C1 -C4 alquila linear ou ramificado, C1 -C4 alcóxi linear ou ramificado, halo C1 -C3 alquila e halo C1 -C3 alcóxi; preferencialmente é selecionado de metila, metóxi, trifluorometóxi, trifluorometila, mais preferencialmente é trifluorometila.

[0069] Entre os compostos acima, também são particularmente preferidos os compostos da referida fórmula (I) ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que

[0070] R1 é hidrogênio;

[0071] X é OH;

[0072] R2 é hidrogênio ou C1 -C4 alquila linear, de preferência, é hidrogênio;

[0073] Y é um heteroátomo selecionado de S, O e N; de preferência é S;

[0074] Z é selecionado a partir C1 -C4 alquila linear ou ramificado, C1 -C4 alcóxi linear ou ramificado, halo C1 -C3 alquila e halo C1 -C3 alcóxi; de preferência é trifluorometila.

[0075] Preferivelmente, em todos os compostos anteriores de fórmula (I) em que R1 é hidrogênio, o átomo de carbono quiral do grupo fenilpropiônico tem a configuração S.

[0076] Os compostos de fórmula (I) particularmente preferidos, de acordo com a invenção, são selecionados a partir do ácido 2-metil-2-(4-{[4-(trifluorometil)-1,3-tiazol- 2-il]amino}fenil)propanóico (aqui indicado também como DF27 26 Y) e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, de preferência seu sal de sódio (aqui também indicado como DF2726A) e 2-(4-{[4-(trifluorometil)-1,3-tiazol-2-il]amino} ácido fenil) propanóico e seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, de preferência ácido (2S)-2- (4-{[4-(trifluorometil)-1,3-tiazol-2-il] amino} fenil) propanóico (também conhecido como DF2755Y) e seu sal de sódio, também conhecido como DF2755A.

[0077] Os compostos de fórmula (I) são divulgados no documento WO2010 / 031835, que também divulga seu método de síntese, sua atividade como inibidores de IL-8, bem como seu uso no tratamento de patologias dependentes de IL-8, como isquemia cerebral transitória, penfigoide bolhoso, artrite reumatóide, fibrose idiopática, glomerulonefrite e danos causados por isquemia e reperfusão.

[0078] Entre os inibidores de IL-8 acima, o referido derivado do ácido 2-fenil- propiônico é preferencialmente um composto da fórmula (II): (II)

[0079] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo,

[0080] em que

[0081] R4 é C1-C6 alquila linear ou ramificado, benzoíla, fenóxi, trifluorometanossulfonilóxi; de um modo preferido, é selecionado de benzoíla, isobutila e trifluorometanossulfonilóxi.

[0082] Adicionalmente, de acordo com uma forma de realização preferida, R4 está na posição 3 ou 4 no anel fenila, de um modo mais preferido é 3-benzoíla, 4-isobutila ou 4- trifluorometanossulfonilóxi.

[0083] R5 representa H ou C1 -C3 alquila linear ou ramificado, de preferência é H;

[0084] R6 é C1 -C6 alquila linear ou ramificado ou trifluorometila, preferencialmente, ele é um grupo C1 -C6 alquila linear ou ramificado, de um modo mais preferido é CH3.

[0085] Entre os compostos acima, são preferidos os compostos de fórmula (II) ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que:

[0086] R4 representa C1 -C6 alquila ou benzoíla; de preferência nas posições 3 e 4, mais preferencialmente, é 3-benzoíla ou 4-isobutila.

[0087] R5 é H ou C1 -C3 alquila linear ou ramificado, de preferência é H,

[0088] R6 é C1 -C6 alquila linear ou ramificado ou trifluorometila; de preferência, é um grupo C1 -C6 alquila linear ou ramificado, com maior preferência é CH3.

[0089] Entre os compostos acima, são preferidos os compostos de fórmula (II) ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que:

[0090] R4 é trifluorometanossulfonilóxi, de preferência 4- trifluorometanossulfonilóxi,

[0091] R5 é H ou C1 -C3 alquila linear ou ramificado, de preferência é H,

[0092] R6 é C1 -C6 alquila linear ou ramificado ou trifluorometila; de preferência, é um grupo linear ou ramificado C1 -C16 alquila, de um modo mais preferido é CH3.

[0093] Entre os compostos acima, também são preferidos os compostos de fórmula (III): (III)

[0094] ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos,

[0095] em que

[0096] R' é hidrogênio;

[0097] R é H ou um resíduo de fórmula SO2Ra em que Ra é C1 -C4 alquila linear ou ramificado ou halo C1 -C3 alquila, de preferência, Ra é CH3.

[0098] Preferencialmente, no composto acima de fórmula (II) ou (III), o átomo de carbono quiral do grupo fenilpropiônico tem a configuração R.

[0099] Os compostos particularmente preferidos de fórmula (II) de acordo com a invenção são selecionados a partir de R-(-)-2-(4-isobutilfenil)propionil metanossulfonamida (também conhecido como Reparixin) e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. De um modo preferido, o referido composto é o sal de lisina in situ de R(-)-2-(4-isobutilfenil)propionil metanossulfonamida (aqui indicado também como DF1681B).

[0100] Outros compostos particularmente preferidos de fórmula (II) ou (III) de acordo com a invenção são 2-(4-trifluorometanossulfoniloxi)fenil]-N- metanossulfonilpropionamida e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, preferencialmente seu sal de sódio, de preferência R(-)-2-(4- trifluorometanossulfoniloxi)fenil] -N-metanossulfonilpropionamida (também conhecido como DF 2156Y) e seu sal de sódio (também conhecido como Ladarixin ou DF

2156A).

[0101] Um outro composto particularmente preferido de fórmula (III) de acordo com a invenção é R(-)- 2- [(4'-trifluorometanossulfoniloxi) fenil] propionamida (também conhecido como DF 2162).

[0102] Os inibidores de IL-8 de fórmula (II) e (III) a são divulgados nos documentos WO0024710 e WO2005 / 090295, que também divulgam seu método de síntese, sua atividade como inibidores de IL-8, bem como seu uso como inibidores da quimiotaxia de neutrófilos e desgranulação induzida por IL- 8 e no tratamento de patologias dependentes de IL-8, tais como a psoríase, colite ulcerosa, melanoma, doenças pulmonares obstrutivas crónicas (DPOC), pengifoide bolhoso, artrite reumatóide, fibrose idiopática, glomerulonefrite e danos causados por isquemia e reperfusão.

[0103] O segundo objetivo da presente invenção é o uso de um inibidor de IL-8, como definido acima, para a preparação de um medicamento para o tratamento e / ou prevenção de infecções bacterianas secundárias, preferencialmente infecções respiratórias secundárias, mais preferencialmente infecções pneumocócicas.

[0104] De acordo com uma modalidade preferida da presente invenção, o referido medicamento é para o tratamento e / ou prevenção de infecções bacterianas secundárias associadas a uma infecção prévia por influenza, sepse, isquemia grave ou lesão de reperfusão.

[0105] O terceiro objetivo da presente invenção é um método para o tratamento e / ou prevenção de infecções bacterianas secundárias, preferencialmente infecções respiratórias secundárias, mais preferencialmente infecções pneumocócicas, compreendendo a etapa de administração ao sujeito em necessidade, uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma Inibidor de IL-8, como definido acima.

[0106] De acordo com uma modalidade preferida da presente invenção, o referido método é para o tratamento e / ou prevenção de infecções bacterianas secundárias associadas a uma infecção prévia por influenza, sepse, isquemia grave ou lesão de reperfusão.

[0107] Como aqui utilizado, o termo uma "quantidade terapeuticamente eficaz" se refere a uma quantidade suficiente para alcançar o tratamento ou a prevenção da doença. A determinação das quantidades efetivas está dentro da capacidade dos técnicos no assunto com base na obtenção do efeito desejado. A quantidade efetiva dependerá de fatores que incluem, entre outros, o peso de um sujeito e / ou o grau da doença ou condição indesejada da qual um sujeito sofre.

[0108] Os termos "tratamento" e "prevenção", conforme usados neste documento, referem-se à erradicação / melhoria ou prevenção / atraso no início, respectivamente, do distúrbio em tratamento ou de um ou mais dos sintomas a ele associados, apesar do fato de o paciente poder ainda ser atingido pelo distúrbio subjacente.

[0109] O quarto objetivo da presente invenção é uma composição farmacêutica compreendendo um inibidor de IL-8, como definido acima, para uso no tratamento e / ou prevenção de infecções bacterianas secundárias, preferencialmente infecções respiratórias secundárias, mais preferencialmente infecções pneumocócicas, em associação com excipientes e / ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.

[0110] De acordo com uma modalidade preferida, as referidas infecções bacterianas secundárias estão associadas a uma infecção prévia por influenza, sepse, isquemia grave ou lesão de reperfusão.

[0111] Para os fins da presente invenção, os inibidores da IL-8 de acordo com a presente invenção são formulados em composições farmacêuticas adequadas para uso por formulação oral, como comprimidos, cápsulas, xaropes, preferencialmente na forma de formulações de liberação controlada, ou por administração parentérica, preferencialmente na forma de soluções estéreis adequadas para administração intravenosa ou intramuscular. As composições farmacêuticas podem ser preparadas de acordo com métodos convencionais, por exemplo, como divulgado em Remington, "The Science and Practice of Pharmacy", 21a ed. (Lippincott Williams e Wilkins).

[0112] A dose diária média depende de vários fatores, como a gravidade da doença, a condição, idade, sexo e peso do paciente. A dose variará geralmente de 1 a 1500 mg de compostos de fórmula (I) por dia, opcionalmente divididos em várias administrações.

[0113] A invenção será ilustrada em mais detalhes na seção experimental a seguir.

PARTE EXPERIMENTAL EXEMPLO 1 Materiais e métodos Camundongos

[0114] Camundongos machos C57BL / 6J (8 a 12 semanas de idade) foram obtidos da Central Animal Facility da Universidade Federal de Minas Gerais (CEBIO UFMG / Brasil) e mantidos com acesso livre a comida e água comerciais. Todos os procedimentos descritos tiveram aprovação prévia do comitê local de ética animal (CETEA / UFMG 13/2010 e 381/2015). Cepas bacterianas e virais

[0115] Streptococcus pneumoniae (ATCC 6303 sorotipo 3) foi cultivado por 12 horas em placas de ágar-sangue a 37ºC e 5% de CO 2 e os estoques de infecção foram preparados conforme descrito [Tavares, LP, et al., Inhibition of PDE4 During Pneumococcal Pneumonia Reduces Inflammation and Lung Injury in Mice. Am J Respir Cell Mol Biol, 2015]. Os inóculos foram sempre confirmados por plaqueamento de suspensão bacteriana.

[0116] O vírus adaptado ao camundongo Influenza A / WSN / 33 H1N1, aqui denominado IAV-, foi cultivado em células cultivadas em MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) como descrito [Garcia, CC, et al., Platelet-activating factor receptor plays a role in lung injury and death caused by Influenza A in mice. PLoS Pathog, 2010. 6 (11): p. e1001171]. Antes da infecção, os estoques foram descongelados em gelo e diluídos em solução salina estéril tamponada com fosfato (PBS). Infecções em camundongos

[0117] Para infecções únicas por IAV e S. pneumoniae, comundongos foram anestesiados com 60 mg / kg de cetamina e 4 mg / kg de xilazina e instilada por via intranasal com 104 PFU de IAV ou 104 CFU de Streptococcus pneumoniae. Para o modelo de infecção pneumocócica secundária, os camundongos anestesiados foram infectados com 500 UFP de IAV e após 14 dias de infecção virai, os camundongos foram anestesiados com isofluorano e depois infectados com 103 CFU de S. pneumoniae. Os camundongos de controle receberam PBS (infecção simulada).

Protocolo de tratamento

[0118] A fim de avaliar o efeito do antagonismo de CXCR 1 / CXCR 2 durante as infecções respiratórias, os camundongos foram tratados com o antagonista alostérico não competitivo CXCR 1 / CXCR 2, R (-) - 2- [(4'-trifluorometanossulfoniloxi) fenil] propionamida (DF2162) (100 l - 10 mg / kg) diluído em 0,1 % de carboximetilcelulose (CMC), por sonda oral. Animais tratados com veículo receberam 100 l de 0,1% de CMC única [Russo, RC, et al., Role of the chemokine receptor CXCR2 in bleomycin- induced pulmonary inflammation and fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol, 2009. 40 (4): p. 410-21]. Foi demonstrado que esta dose e esquema de administração causam inibição significativa do influxo de neutrófilos em outros modelos e são consistentes com a meia-vida longa da molécula [Cunha, TM, et al., Treatment with DF 2162, a non-competitive allosteric inhibitor of CXCR1/2, diminishes neutrophil influx and inflammatory hypernociception in mice. Br J Pharmacol, 2008. 154 (2): p. 460-70].

[0119] Para a infecção único IAV, camundongos infectados (104 PFU) foram tratados duas vezes por dia durante 5 dias desde o dia da infecção. Os camundongos foram sacrificados após 5 dias de infecção para acessar inflamação, título de vírus e danos nos pulmões. A perda de peso também foi acompanhada.

[0120] Para a infecção pneumocócica única, os camundongos infectados (105 CFU) foram tratados após 6 horas de infecção e depois após 12, 24 e 36 horas. Após 48 horas de infecção, os camundongos foram sacrificados para avaliação de lesão pulmonar, contagem de bactérias e inflamação. Para as experiências de letalidade, os camundongos foram tratados duas vezes por dia durante 2 dias e acompanhados por 10 dias.

[0121] Por fim, para as experiências secundárias de infecção pneumocócica, os camundongos foram infectados com 500 PFU de IAV e tratados do dia 3 ao 6 da infecção (duas vezes por dia). Após 14 dias de infecção pelo IAV, os camundongos foram infectados com 103 CFU de S. pneumoniae. A letalidade e a perda de peso foram acompanhadas. Os camundongos foram sacrificados após 16 dias da infecção pelo IAV (2 dias após a infecção pelo pneumococo) para análise de danos nos pulmões, inflamação e contagem de bactérias nas vias aéreas e no sangue.

Lavagem broncoalveolar (LBA) e extração de tecido

[0122] Nos momentos indicados, os camundongos foram sacrificados com uma dose letal de cetamina / xilazina (180 mg / kg e 15 mg / kg, respectivamente), sangue foi coletado para contagem de bactérias e lavado broncoalveolar (LBA). Para isso, a traqueia de camundongos foi exposta, um cateter de 1,7 mm foi inserido e duas alíquotas de 1 ml de PBS foram lavadas três vezes no compartimento brocoalveolar para recuperar os leucócitos e bactérias nas vias aéreas dos camundongos [Garcia, CC, et al., Platelet-activating factor receptor plays a role in lung injury and death caused by Influenza A in mice. PLoS Pathog, 2010. 6 (11): p. e1001171]. 100 μl de fluido BAL foram semeadas em agar de sangue para as contagens de bactérias. Após centrifugação, o sedimento de células foi utilizado para a contagem total e diferencial de células. Os sobrenadantes do líquido BAL foram utilizados para medições de citocinas (IL-12p40, IL-10, TNF- α, IL-6, CXCL1 e CXCL2) por ELISA de acordo com as instruções do fabricante (R&D Systems, EUA) e quantificação total de proteínas usando o ensaio de Bradford (Biorad). O pulmão direito de camundongos foi coletado para quantificação indireta do recrutamento de neutrófilos no tecido (ensaio de mieloperoxidase - MPO) e para titulação do vírus. O lobo esquerdo dos pulmões foi fixado em formalina para posterior exame histológico. Ensaio de mielolperoxidase pulmonar

[0123] Cinquenta mg de tecido pulmonar foram homogeneizados em uma solução tamponada contendo antiproteases, como descrito anteriormente [Russo, RC, et al., Role of the chemokine receptor CXCR2 in bleomycin-induced pulmonary inflammation and fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol, 2009. 40 (4): p. 410-21]. Níveis de MPO foram acedidas usando 25 μl do sobrenadante da amostra homogeneizada e 25 μl de uma solução de 1,6 mM de 3,39-5,59-tetrametilbenzidina (TMB; Sigma - dissolvido em sulfóxido de dimetila) e 0,01 mM de H2O2, dissolvido em tampão de fosfato (pH 5,4) contendo HTAB [Russo, RC, et al., Role of the chemokine receptor CXCR2 in bleomycin-induced pulmonary inflammation and fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol,

2009. 40 (4): p. 410-21]. Quantificação de vírus - Ensaio de placas

[0124] Para titulações de vírus, os pulmões coletados em condições estéreis foram pesados e homogeneizados em PBS frio estéril. Diluições seriadas de amostras foram incubadas em monocamadas de células MDCK por 1 hora, cobertas com agarose por 72 horas, como descrito anteriormente [Garcia, CC, et al., Platelet- activating factor receptor plays a role in lung injury and death caused by Influenza A in mice. PLoS Pathog, 2010. 6 (11): p. e1001171]. O número de unidades formadoras de placas foi expresso por grama de pulmão. Análises Histológicas

[0125] Para acessar os danos pulmonares seguidos pelas infecções por IAV e pneumococo, os lobos esquerdos fixos dos pulmões foram desidratados gradualmente em etanol e embebidos em parafina. Cortes de 4 mm foram cortados e corados com H&E para exame em microscopia óptica. A pontuação histopatológica foi realizada por um patologista sem conhecimento dos grupos experimentais e das vias aéreas avaliada, vascular e do parênquima inflamação uma ALSO 5 pontos de inflamação neutrofílica geral, num total de 18 pontos marcar [Garcia, CC, et al., Platelet-activating factor receptor plays a role in lung injury and death caused by Influenza A in mice. PLoS Pathog, 2010. 6 (11): p. e1001171]. Análise estatística

[0126] Estatísticas e gráficos foram realizados usando o GraphPad Prism 4.0. A ANOVA de uma via, seguida do pós-teste de Newman Keuls foi usada para comparar mais de dois grupos e o teste t não pareado foi usado para comparações entre dois grupos. As curvas de sobrevivência foram analisadas pelo teste de Long-rank e as curvas de perda de peso foram comparadas usando análises de área sob a curva. Resultados com p <0,05 foram considerados estatisticamente significantes. Resultados A infecção pelo IAV aumenta os níveis de CXCL1 e CXCL2 e aumenta o influxo de neutrófilos nas vias aéreas e pulmões de camundongos

[0127] A fim de investigar a infiltração de neutrófilos e os níveis das quimiocinas CXCL1 e CXCL2 após infecção letal e grave por IAV, os camundongos foram infectados com 104 (inóculo grave) ou 106 PFU (inóculo letal) do vírus. Após 1, 4, 7 e

10 dias para o inóculo inferior e 1, 3 e 5 dias para o inóculo mais alto, foram coletados LBA e pulmões. Os níveis de ambas as quimiocinas nas vias aéreas atingiram o pico após 4 dias de infecção com 104 PFU de IAV e diminuíram a partir daí (Fig. 1 A). A infecção com o inóculo letal resultou em produção mais rápida e mais alta de quimiocinas nas vias aéreas de camundongos (Fig. 1 D). O aumento da produção de CXCL1 e CXCL2 correlacionou-se com o influxo maciço de neutrófilos nas vias aéreas e pulmões de camundongos e era dependente do inóculo (Fig. 1 BC e EF). Antagonismo CXCR1 / CXCR2 protege camundongos durante infecção por IAV

[0128] Para investigar o papel de CXCR1 / 2 na infecção por influenza em um ambiente terapêutico, os camundongos foram infectados com 104 PFU de IAV e, em seguida, tratados duas vezes por dia (do dia 0 ao dia 5 após a infecção) com DF2162 em uma dose que diminuiu eficientemente os neutrófilos números nos pulmões de camundongos [Russo, RC, et al., Role of the chemokine receptor CXCR2 in bleomycin-induced pulmonary inflammation and fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol,

2009. 40 (4): p. 410-21]. O tratamento com DF2162 diminuiu a morbidade, como observado pela redução da perda de peso (Fig. 2A). O tratamento medicamentoso também diminuiu vários parâmetros da resposta inflamatória, incluindo o número de leucócitos recrutados nas vias aéreas (Fig. 2B), especialmente os neutrófilos (Fig. 2C) e os níveis das citocinas pró-inflamatórias TNF- α e CXCL1 (Figs. 3A -B). O tratamento com DF2162 não reduziu os níveis de MPO nos pulmões de camundongos infectados (Fig. 2D) ou os níveis de IL-6 (Fig. 3C). Surpreendentemente, as cargas virais nos pulmões dos camundongos tratados foram reduzidas, em comparação com os animais tratados com veículo (Fig. 2F). Além disso, o tratamento com DF2162 reduziu a lesão pulmonar associada à infecção por IAV (Fig. 3 D). A análise histológica mostrou áreas mais preservadas do pulmão, com redução da inflamação bronquiolar e vascular nos pulmões dos animais tratados (Fig. 8). Antagonismo de CXCR1 / CXCR2 protege camundongos durante infecção por S. pneumoniae

[0129] Sabe-se que os neutrófilos são cruciais para controlar a replicação e disseminação de bactérias, mas também estão correlacionados com danos nos pulmões e morte durante pneumonia pneumocócica [Tavares, LP, et al., Inhibition of PDE4 During Pneumococcal Pneumonia Reduces Inflammation and Lung Injury in Mice. Am J Respir Cell Mol Biol, 2015]. Portanto, os camundongos foram tratados com DF2162 do dia 0 - 6 horas após a infecção - até o dia 2 e foram observadas taxas de letalidade e parâmetros de inflamação. O tratamento com DF2162 no contexto da infecção pneumocócica protegeu os camundongos da letalidade (Fig. 4A) e isso foi associado à diminuição do número de leucócitos (Fig. 4B), especialmente os neutrófilos (Fig. 4C) recrutados nas vias aéreas dos camundongos infectados. Surpreendentemente, apesar da redução de neutrófilos nas vias aéreas e pulmões (Fig. 4D) dos camundongos tratados infectados, o DF2162 não modificou a capacidade do hospedeiro de controlar a infecção, como visto pelas contagens bacterianas semelhantes nas vias aéreas dos camundongos (Fig. 4E). Além disso, a análise histológica de pulmões de camundongos infectados mostrou que o tratamento com DF2162 reduziu a lesão pulmonar resultante da infecção (Fig. 4F e Fig. 9). O antagonismo de CXCR1 / CXCR2 protege de uma infecção pneumocócica após infecção por IAV

[0130] A pneumonia bacteriana secundária, causada principalmente por Streptococcus pneumoniae, é um importante contribuinte para o pior prognóstico de pacientes infectados por IAV, levando ao aumento da mortalidade e morbidade [Klein, EY, et al., The Frequency of Influenza and Bacterial Co-infection: A Systematic Review and Meta-Analysis. Influenza Other Respir Viruses, 2016]. Durante as pandemias de influenza, como a que ocorreu em 2009, uma porcentagem significativa dos casos fatais ocorreu devido a infecções pneumocócicas secundárias, apesar do uso de antibióticos [Palacios, G., et al., Streptococcus pneumoniae coinfection is correlated with the severity of H1N1 pandemic influenza. PLoS One, 2009. 4 (12): p. e8540; Jain, S., et al., Hospitalized patients with 2009 H1N1 influenza in the United States, April- June 2009. N Engl J Med, 2009. 361 (20): p. 1935-44; Dominguez-Cherit, G., et al., Critically Ill patients with 2009 influenza A(H1N1) in Mexico. JAMA, 2009. 302 (17): p. 1880-7]. A resposta inflamatória aumentada desencadeada pela infecção bacteriana secundária é uma das razões para esse aumento da mortalidade.

[0131] A fim de investigar o papel de CXCR1 / 2 para infecções bacterianas secundárias, o gelo foi infectado com um inóculo subletal de IAV (500 PFU) e tratado com DF2162 ou veículo durante os dias 3 a 6 da infecção. Após 14 dias da infecção pelo IAV, nenhum vírus foi detectado nos pulmões dos camundongos infectados (dados não mostrados). Os camundongos receberam então uma infecção secundária com uma dose subletal de S. pneumoniae (103 CFU, uma infecção secundária). Os camundongos de controle receberam uma única infecção com IAV ou S. pneumoniae. Ambas as infecções isoladas resultaram em doença leve com baixas taxas de letalidade e pequena perda de peso (Fig. 5A-B). Aos 16 dias após uma única infecção por IAV ou 2 dias após uma única infecção com um baixo inóculo de pneumococo, não houve aumento no número de neutrófilos nas vias aéreas ou pulmões de camundongos (Fig. 5D-E). Além disso, apenas um pequeno número de bactérias foi encontrado nas vias aéreas e nenhuma bactéria foi encontrada no sangue de camundongos infectados apenas com S. pneumoniae (Fig. 5F-G). Por outro lado, a infecção pneumocócica após uma infecção pelo IAV levou a um recrutamento maciço de neutrófilos nas vias aéreas e pulmões de camundongos (Fig. 5C-E), crescimento excessivo de bactérias nas vias aéreas (Fig. 5F) e disseminação para o sangue (Fig. 5F - 5G). Isso resultou em taxas de mortalidade de 100% em camundongos infectados secundários (Fig. 5A).

[0132] A administração de DF2162 durante a infecção por influenza mostrou que o antagonismo de CXCR1 / 2 atrasou a mortalidade após infecção secundária (Fig. 5A) e reduziu a perda de peso (Fig. 5B). Isso foi associado à diminuição do recrutamento de neutrófilos nas vias aéreas (Fig. 5D) e pulmões (Fig. 5E) após infecção secundária. Como relatado acima, apesar da redução no número de neutrófilos, os presentes inventores observaram que as contagens de bactérias nas vias aéreas de camundongos não foram alteradas (Fig. 5F). Surpreendentemente, houve uma redução no número de bactérias no sangue de camundongos infectados secundários (Fig. 5G). Além disso, o tratamento com DF2162 impediu o aumento dos níveis das citocinas pró-inflamatórias IL-6, TNF- α, CXCL-1 e IL-12 que ocorreram durante a infecção secundária (Fig. 6A-D). Surpreendentemente, os níveis de IL-12 permaneceram mais altos após 16 dias de infecção única por IAV (Fig. 6C). Os níveis da citocina antiinflamatória IL-10 também foram diminuídos em camundongos tratados com DF2162 quando comparados com os camundongos infectados secundários tratados com veículo (Fig. 6E).

[0133] No total, a diminuição do influxo de neutrófilos e produção de citocinas em camundongos tratados com DF2162 resultou na redução do dano pulmonar intenso associado à infecção secundária (Fig. 7A-B). Em infecções simples com IAV ou S. pneumoniae o inóculo subletal provocou leve inflamação das vias aéreas, vascular e parênquima, caracterizada por discreto infiltrado de leucócitos. Por outro lado, a infecção pneumocócica secundária induziu migração maciça de polimorfo e células mononucleares para as vias aéreas, com perda significativa da arquitetura do parênquima. Os pulmões de alguns camundongos apresentaram algumas áreas de necrose e tecido fibrótico. O tratamento com DF2162 diminuiu esse dano pulmonar histopatológico (Fig. 7C). Para confirmar esses resultados, os níveis de proteína no líquido da LBA foram utilizados como marcador de vazamento de plasma e, portanto, rompimento da barreira epitelial do pulmão ou lesão tecidual [Garcia, CC, et al., Platelet-activating factor receptor plays a role in lung injury and death caused by Influenza A in mice. PLoS Pathog, 2010. 6 (11): p. e1001171]. A avaliação do vazamento de proteínas mostrou que, após 16 dias da infecção pelo IAV, ainda é observado um aumento nos níveis de proteína no LBAE em camundongos infectados. A infecção pneumocócica secundária, mas não primária, leva a um vazamento impressionante de proteínas e, de acordo com os resultados histológicos, o tratamento com DF diminuiu os níveis de proteína no LBA (Fig. 7C).

[0134] Os presentes inventores também observaram que o tratamento com DF2162 diminuiu o recrutamento de neutrófilos e a morbimortalidade associada a infecções por IAV e S. pneumoniae. O composto de acordo com a invenção também evitou danos nos pulmões e morte associados a infecções subsequentes por IAV e S. pneumoniae. Apesar da redução da inflamação, o tratamento com DF2162 não reduziu a capacidade de controlar a infecção. EXEMPLO 2

Efeito da via CXCR1 / 2 no modelo de aumento da inflamação pulmonar combinando infecção viral (Influenza A) e exposição à fumaça de cigarro em camundongos

[0135] A doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) é um problema de saúde de importância global e prevalência crescente, responsável por aproximadamente 5% do total de mortes no mundo. A doença é caracterizada por limitação persistente do fluxo aéreo que é geralmente progressiva e associada a uma resposta inflamatória crônica aprimorada nas vias aéreas pulmonares a partículas ou gases nocivos (Sethi, S. et al. Am. J. Med. 125, 1162-1 170; 2012). Fumar é o principal fator de risco e nenhuma terapia adequada está disponível.

[0136] A presença aumentada de neutrófilos no tecido pulmonar é uma marca registrada em pacientes com DPOC, frequentemente acompanhada por uma superprodução de citocinas inflamatórias, como TNF-α, IL-6 e IL-8, entre outras. Embora os neutrófilos sejam indubitavelmente os principais responsáveis pela inflamação aguda, várias linhas de evidência indicam que eles também podem contribuir para condições inflamatórias crônicas (Kolaczkowska, E. & Kubes, Nat. Rev. Immunol. 13, 159–75; 2013). As principais manifestações clínicas na DPOC incluem bronquite crônica, limitação do fluxo aéreo e enfisema, e freqüentemente os pacientes com DPOC experimentam aumentos desses sintomas que aumentam drasticamente a morbimortalidade (Rabe KF et al. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 532–555; 2007; Jeffery, P. Chest Filley Lec, 251S-260S; 2000).

[0137] Durante estes aumentos, o número de neutrófilos no tecido pulmonar aumenta significativamente, paralelamente à elevação dos níveis de metaloproteinases da matriz e de espécies reativas a oxigênio (ERO) e à melhoria da remodelação do tecido pulmonar (Oostwoud, LC et al. Nat. Publ. Gr. 1 16, 2016). Notavelmente, apesar da importância da inflamação na fisiopatologia da DPOC, os tratamentos com glicocorticóides não conseguem evitar a progressão da doença ou impedir seu aumento. Portanto, novos tratamentos seguros e eficazes para pacientes com DPOC são muito necessários (Barnes, P. Nat Rev Drug Discov 1, 437-446; 2002; Garnock-Jones, KP Drugs 75, 1645-1656; 2015).

[0138] As infecções virais estão entre as principais causas de aumentos da DPOC

(Mackay, AJ & Hurst, JR Immunol Allergy Clin North Am 33, 95-115; 2013). Por este motivo, os inventores combinaram infecção por influenza e exposição à fumaça de cigarro (Cs) em camundongos para modelar o aumento da DPOC. Os inventores essencialmente expuseram fêmeas C57BL / 6 camundongos a Cs durante 12 dias e provocaram infecção com 1000 ufp de vírus da gripe H1N1 no dia 7 após o início da exposição diária Cs (cs-H1N1). As análises de tecido pulmonar e lavagem broncoalveolar (LBA) no dia 5 após a infecção mostraram que a combinação de infecção viral e Cs aumentou sinergicamente a infiltração de neutrófilos na atividade da LBA e MPO no tecido pulmonar quando comparada à infecção viral (H1N1) ou Cs isoladamente. (Cs) (Fig. 10 AB). Também aumentou significativamente os níveis de quimiocinas e citocinas pró-inflamatórias, como KC e TNF-α, em comparação com a infecção por CS ou H1N1 isoladamente (Fig. 10 C).

[0139] Os testes de sobrevivência usando um LD50 do vírus influenza mostraram que, quando combinados com Cs, as taxas de mortalidade de camundongos atingem 80-100% (Fig. 11).

[0140] O tratamento com dexametasona (1 mg / kg po) neste modelo diminuiu a infiltração de células mononucleares no LBA, mas não conseguiu alterar o aumento da infiltração neutrofílica ou o aumento da taxa de mortalidade (Fig. 10 e 11). Como esses achados sugerem que os neutrófilos podem ser os principais contribuintes do aumento da inflamação e aumento da mortalidade nesse modelo, os invençãores realizaram outro ensaio de sobrevivência, tratando camundongos Cs-H1N1 com DF2156A, um antagonista do CXCR1 / 2, a 10 mg / Kg po uma vez ao dia. por 7 dias a partir do dia da infecção. O tratamento com DF2156A de acordo com a presente invenção atrasou significativamente a mortalidade de camundongos (p <0,0021), que também foi ligeiramente reduzida. Em contraste, os tratamentos com dexametasona ou Tiotrópio não mostraram diferenças significativas no grupo de camundongos Cs- H1N1.

Claims (17)

REIVINDICAÇÕES

1. Inibidor de IL-8 caracterizado pelo fato de ser para uso na prevenção e / ou tratamento de infecções bacterianas secundárias, preferencialmente infecções respiratórias secundárias, mais preferencialmente infecções pneumocócicas secundárias, em que o inibidor de IL-8 é selecionado a partir de pequenas moléculas de peso molecular.

2. Inibidor de IL-8 ser para uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de em que as referidas infecções bacterianas secundárias são associadas com uma infecção de influenza, sepse, isquemia grave ou lesão por reperfusão anterior.

3. Inibidor de IL-8 caracterizado pelo fato de ser para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, em que o referido inibidor de IL-8 é um inibidor da atividade da IL-8 mediada pelo receptor CXCR1 ou pelos receptores CXCR1 e CXCR2, preferencialmente mediados por ambos os receptores CXCR1 e CXCR2.

4. Inibidor de IL-8 caracterizado pelo fato de ser para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 3, selecionado a partir de derivados do ácido 1,3-tiazol-2-ilaminofenilpropiônico, derivados do ácido 2-fenil-propiônico e seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

5. Inibidor de IL-8 caracterizado pelo fato de ser para uso de acordo com a reivindicação 4, em que os referidos derivados do ácido 1,3-tiazol-2- ilaminofenilpropiônico são compostos de fórmula (I) em que - R1 é hidrogênio ou CH3; - R2 é hidrogênio ou C1 -C4 alquila linear, de preferência, é hidrogênio; - Y é um heteroátomo selecionado entre S, O e N; de preferência é S;

Z é selecionado a partir de halogênio, C1 -C4 alquila de cadeia linear ou ramificado, C2 -C4 alcenila, C2 -C4 alcinila, C1 -C4 alcóxi, hidroxila, carboxila, C1 -C4 acilóxi, fenóxi, ciano, nitro, amino, C1 -C4 acilamino, halo C1 -C3 alquil, halo C1 -C3 alcóxi, benzoíla, alcanossulfonato C1 -C8 linear ou ramificado, C1 -C8 alcanossulfonamida linear ou ramificado , C1 -C8 alquilsulfonilmetila linear ou ramificado; de preferência é trifluorometila; X é OH ou um resíduo de fórmula NHR3; em que R3 é selecionado dentre: -hidrogênio, hidroxila, C1 -C6 alquila linear ou ramificado, C3 -C6 cicloalquila, C2 -C6 alcenila, C1 -C5 alcóxi, ou C1 -C6 fenilalquila, em que o grupo alquila, cicloalquila ou alcenila pode ser substituído por um resíduo de COOH; - um resíduo de fórmula SO2R4, em que R4 representa C1 -C2 alquila, C3 - C6 cicloalquila, C1 -C3 haloalquila.

6. Inibidor de IL-8 caracterizado pelo fato de ser para uso de acordo com a reivindicação 5, em que: R1 é hidrogênio ou CH3; X é OH; R2 é hidrogênio ou C1 -C4 alquila linear, Y é um heteroátomo selecionado de S, O e N; Z é selecionado a partir C1 -C4 alquila linear ou ramificado, C1 -C4 alcóxi linear ou ramificado, halo C1 -C3 alquila e halo C1 -C3 alcóxi.

7. Inibidor de IL-8 caracterizado pelo fato de ser para uso de acordo com a reivindicação 5, em que R1 é hidrogênio e o átomo de carbono quiral do grupo fenilpropriônico tem a configuração S.

8. Inibidor de IL-8 caracterizado pelo fato de ser para uso de acordo com as reivindicações 4 a 6, selecionado a partir de ácido 2-metil-2- (4 - {[4- (trifluorometil) -1,3-tiazol-2-il] amino} fenil) propanóico e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, de preferência o seu sal de sódio.

9. Inibidor de IL-8 caracterizado pelo fato de ser para uso de acordo com as reivindicações 4 a 7, em que o referido composto é (2S) -2- (4 - {[4- (trifluorometil) -1,3-tiazol-2-il] amino } ácido fenil) propanóico e seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, de preferência o seu sal de sódio.

10. Inibidor de IL-8 caracterizado pelo fato de ser para uso de acordo com a reivindicação 4, em que os referidos derivados do ácido 2-fenil-propiônico são compostos de fórmula (II) (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R4 é C1 -C6 alquila linear ou ramificado, benzoíla, fenóxi, trifluorometanossulfonilóxi; preferivelmente R4 é selecionado de entre benzoíla, isobutila e trifluorometanossulfonilóxi, mais preferivelmente R4 representa 3-benzoíla, 4-isobutila ou 4- trifluorometanossulfoniloxi; R 5 representa H ou C1 -C 3 alquila linear ou ramificado, de preferência é H; R6 é C1 -C6 alquila linear ou ramificado ou trifluorometila; de preferência, é um grupo C1 -C6 alquila linear ou ramificado, com maior preferência é CH3.

11. Inibidor de IL-8 caracterizado pelo fato de ser para uso de acordo com a reivindicação 4, em que os referidos derivados do ácido 2-fenil-propiônico são compostos de fórmula (III) (III) ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que R' é hidrogênio; R é H ou um resíduo de fórmula SO2Ra em que Ra é C1 -C4 alquila linear ou ramificado ou halo C1 -C3 alquila, de preferência, Ra é CH3.

12. Inibidor de IL-8 caracterizado pelo fato de ser para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 ou 11, em que o átomo de carbono quiral do grupo fenilpropiônico tem a configuração R.

13. Inibidor de IL-8 caracterizado pelo fato de ser para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 ou 12, em que os referidos compostos são selecionados a partir de R - (-) - 2- (4-isobutilfenil) propionil metanossulfonaamida e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, de preferência o sal de lisina in situ.

14. Inibidor de IL-8 caracterizado pelo fato de ser para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 13, em que o referido composto é R (-) - 2- (4- trifluorometanossulfoniloxi) fenil] -N- metanossulfonilpropionamida e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, de preferência seu sal de sódio.

15. Inibidor de IL-8 caracterizado pelo fato de ser para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 ou 13, em que o referido composto é R (-) - 2- [(4'-trifluorometanossulfoniloxi) fenil] propionamida.

16. Inibidor de IL-8 caracterizado pelo fato de ser para utilização na prevenção e / ou tratamento de infecções secundárias bacterianas, infecções respiratórias preferencialmente secundárias, mais preferivelmente infecções pneumocócicas secundárias, em que o inibidor de IL-8 é selecionado a partir de anticorpos, de preferência a partir de anticorpos anti- receptor CXCR1 / CXCR2.

17. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de compreender um inibidor de IL-8 para uso conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 16 e excipientes e / ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.