BR112019016409A2 - dendrímeros terapêuticos - Google Patents

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Owen David
John Hennessy Edward
Grant Iain
Paul Secrist John
Bernice Ashford Marianne
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Abstract

a presente invenção refere-se a dendrímeros de fórmula (i) e seus sais farmaceticamente aceitáveis. também são descritas composicões farmacêuticas compreendendo o dendrímero de fórmula (i) e métodos de uso do mesmo para o tratamento de câncer.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para DENDRÍMEROS TERAPÊUTICOS”.
Antecedentes [001 ] Bcl-2 e Bcl-XL sâo importantes membros antiapoptóticos da família BCL-2 de proteínas e principais reguladores da sobrevivência celular (Chipuk JE et al., The BCL-2 family reunion, Mol.Cell 12 de fev de 2010;37(3):299-310). A translocaçâo gênica, amplificação e / ou sobrexpressão de proteínas desses fatores críticos de sobrevivência foi observada em vários tipos de câncer e está amplamente implicada no desenvolvimento e progressão do câncer (Yip et al., Bcl-2 family proteins and cancer, Oncogene 2008 27, 6398-6406; e Beroukhim R. et at., The landscape of somatic copy-number alteration across human cancers, Nature 18 de fev de 2010;463 (7283):899-905). Em muitas malignidades, BCL-2 e/ou BCL-XL também demonstraram mediar a resistência ao fármaco e a recidiva e estão fortemente associados com um mau prognóstico (Robertson LE et at. Bcl-2 expression in chronic lymphocytic leukemia and its correlation with the induction of apoptosis and clinical outcome, Leukemia mar de 1996;10(3):456~459; e llievska Poposka B. et at., Bcl-2 as a prognostic factor for survival in small-cell lung cancer, Makedonska Akademija na Naukite i Umetnostite Oddelenie Za Biotoshki i Meditsinski Nauki Prilozi dez de 2008; 29(2):281-293).
[002] Proteínas da família BCL2 antiapoptóticas promovem a sobrevivência de células cancerígenas se ligando a proteínas próapoptóticas como BIM, PUMA, BAK e BAX e neutralizando suas atividades indutoras de morte celular (Chipuk JE et al., infra; e Yip et al, infra). Desse modo, ter BCL-2 e BCL-XL como alvo terapêutico isoladamente ou em combinação com outras terapias que influenciam o eixo da família BCL-2 de proteínas, tais como quimioterápicos citotóxicos, inibidores de proteassoma ou inibidores de quinase é uma
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2/166 estratégia atraente que pode tratar o câncer e pode superar a resistência ao fármaco em muitos cânceres humanos (Delbridge, ARD et at., The BCL-2 protein family, BH3-mimetics and cancer therapy, Ceti Death & Differentiation 2015 22, 1071-1080).
[003] Além da potência celular, de modo a desenvolver um composto candidato em um produto farmacêutico adequadamente aceitável, o composto necessita de possuir e exibir uma série de propriedades adicionais. Essas incluem propriedades físico-químicas adequadas de modo a permitir a formulação em uma forma de dosagem adequada (por exemplo, solubilidade, estabilidade, manufaturabilidade), propriedades biofarmacêuticas adequadas (por exemplo, permeabilidade, solubilidade, absorção, biodisponibilidade, estabilidade sob condições biológicas, comportamento farmacocinético e farmacodinâmico) e um perfil de segurança adequado para conferir um índice terapêutico aceitável. A identificação de compostos, porex., inibidores de Bcl-2 e/ou Bcl-XL que exibam algumas ou todas essas propriedades é um desafio.
[004] Inibidores de Bcl-2 e/ou Bcl-XL à base de N-acilsulfonamida particulares e métodos para fazer os mesmos são divulgados na Patente dos E.U.A. N° 9.018.381. A atividade e especificidade dos compostos que se ligam e inibem a função de Bcl-2 em uma célula foram também descritas na Patente dos E.U.A. N°. 9.018.381 por meio de ensaios de ligação e ensaios celulares in vitro. No entanto, a administração desses inibidores de Bcl-2 e/ou Bcl-XL à base de Nacilsulfonamida provou ser difícil devido, por exemplo, à baixa solubilidade e aos efeitos secundários relacionados com o alvo. Por conseguinte, as requerentes desenvolveram dendrímeros ligados a certos inibidores de Bcl que podem superar os desafios de administração enfrentados pelos inibidores de Bcl não conjugados. BREVE DESCRIÇÃO
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3/166 [005] No presente documento são divulgados dendrímeros ligados covalentemente (por exemplo, conjugados ou ligados) a um inibidor de Bcl. Os dendrímeros conjugados exibem elevada solubilidade em comparação com o inibidor de Bcl não conjugado, e de dados pré-clínicos sugerem que os dendrímeros conjugados com o inibidor de Bcl têm o potencial para melhorar a tolerabilidade in vivo, o que pode melhorar o índice terapêutico e reduzir os efeitos colaterais. Os dendrímeros são concebidos de modo a terem velocidade de liberação particular (por exemplo, a taxa à qual o inibidor de Bcl é clivado a partir do dendrímero).
[006] Em algumas modalidades, são divulgados dendrímeros de fórmula (I):
Figure BR112019016409A2_D0001
Figure BR112019016409A2_D0002
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
[007]
O Núcleo é
Figure BR112019016409A2_D0003
'indica ligação covalente a uma porção carbonila de (BU1);
b é 2;
BU são unidades de construção;
BUx são unidades de construção de geração x, em que o número total de unidades de construção na geração x do dendrímero
Petição 870190076382, de 08/08/2019, pág. 24/222 de fórmula (I) é igual a 2(x) e o número total de BU no dendrimer© de fórmula (I) é igual a (2x-1)b; em que BU tem a seguinte estrutura:
Figure BR112019016409A2_D0004
XNH # indica ligação covalente a uma porção amina do Núcleo ou uma porção amino de BU;
+ indica uma ligação covalente a uma porção carbonila de BU ou uma ligação covalente a Wou Z;
W é independentemente (PM)C ou (H)e;
Z é independentemente (L-AA)d ou (H)e;
PM é PEG900-1200 OU PEGl800-2400j [008] L-AA é um ligante covalentemente ligado a um agente ativo; em que L-AA é da fórmula:
Figure BR112019016409A2_D0005
em que
A é -N(CH3), -O-, -S- ou -CH2-;
© é 0 ponto de ligação a uma porção amina de BUx;
desde que (c+d) < (2x)b e d seja > 1; e desde que se (c+d) < (2x)b, então quaisquer grupos W e Z remanescentes são (H)e, em que e é [(2x)b]-(c+d).
[009] Em algumas modalidades, 0 divulgado é um dendrímero de
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5/166 fórmula (II):
Figure BR112019016409A2_D0006
Figure BR112019016409A2_D0007
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que b é 2:
[0010] O Núcleo é
Figure BR112019016409A2_D0008
*indica ligação covalente a uma porção carbonila de (BU1);
BU são unidades de construção e o número de BU é igual a 62; em que BU tem a seguinte estrutura:
Figure BR112019016409A2_D0009
Z,NH # indica ligação covalente a uma porção amina do Núcleo ou uma porção amino de BU, e + indica uma ligação covalente a uma porção carbonila de BU ou uma ligação covalente a WouZ;
W é independentemente (PM)C ou (H)e;
Z é independentemente (L-AA)d ou (H)e;
PM é PEG900-1200 ou PEG 1800-2400;
L-AA é um ligante covalentemente ligado a um agente ativo; em que L-AA é da fórmula:
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6/166
Figure BR112019016409A2_D0010
Figure BR112019016409A2_D0011
em que
A é -N(CH3), -O-, -S- ou ~CK2~;
©indica ligação covalente a uma porção amina de BU5; desde que (c+d) seja < 64 e d seja > 1; e desde que se (c+d) < 64, então quaisquer grupos W e Z remanescentes são (H)e, em que e é 64-(c+d).
[0011] Em algumas modalidades, é divulgado um dendrímero de fórmula (III):
D-Núcleo-D (III) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que [0012] O Núcleo é
Figure BR112019016409A2_D0012
[0013] Dé
Figure BR112019016409A2_D0013
----v-------z ·,............-Ύ--------------· v-------BUS BÜ2 BU3 antdarfe de constosçãs 2 tiaidades de 4 unidades de constaição censtreçâe unidades· de coa slt :uçact unidades de cmsintçâo
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7/166
AP é um ponto de ligação a outra unidade de construção;
W é independentemente (PM)C ou (H)e;
Z é independentemente (L~AA)d ou (H)e;
PM é PEG900-1200 ou PEG 1800-2400;
L-AA é um ligante covalentemente ligado a um agente ativo; em que L-AA é da fórmula:
„ o
Figure BR112019016409A2_D0014
em que
A é -N(CH3), -O-, -S- ou ™CH2~;
desde que se (c+d) < 64, então quaisquer grupos W e Z remanescentes são (H)e, em que e é 64~(c+d); e d é > 1.
[0014] Em algumas modalidades, é divulgado um dendrímero de fórmula (IV):
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8/166
Figure BR112019016409A2_D0015
Q >
(iv), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Y é PEG1800-2400 ou H; Q é H ou L-AA, em que L~AA tem a estrutura:
Figure BR112019016409A2_D0016
Figure BR112019016409A2_D0017
[0015] A é ™S~ ou -N(CH3), desde que se a soma de PEG1800-2400 e de L-AA for menor que 64, as restantes porções Q e Y são H, e desde que pelo menos um Q seja L-AA.
[0016] Em algumas modalidades, é divulgado um dendrímero de fórmula (V):
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9/166
HN'Y
Figure BR112019016409A2_D0018
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Y é
PEG1800-2400 ou H; Q é H ou L-AA, em que L-AA tem a estrutura:
Figure BR112019016409A2_D0019
Figure BR112019016409A2_D0020
Figure BR112019016409A2_D0021
[0017] A é —S- ou -N(CH3), desde que se a soma de PEG1800-2400 e de L-AA for menor que 64, as restantes porções Q e Y são H, e desde que pelo menos um Q seja L-AA.
[0018] Em algumas modalidades, são divulgadas composições farmacêuticas compreendendo um dendrímero de fórmula (I), (II), (III),
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10/166 (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um excipiente, portador ou diluente farmaceuticamente aceitável.
[0019] Em algumas modalidades, são divulgados métodos de tratamento de câncer compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0020] Em algumas modalidades, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso no tratamento de câncer.
[0021] Em algumas modalidades, é divulgado o uso de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso na manufatura de um medicamento para o tratamento de câncer.
[0022] Em algumas modalidades, é divulgada uma composição farmacêutica compreendendo um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso no tratamento de câncer.
Breve Descrição dos Desenhos [0023] A Figura 1 é uma representação de um dendrímero de 3a geração.
[0024] A Figura 2 é um difratograma XRPD para a Forma B do Composto A.
[0025] A Figura 3A apresenta um modelo de Xenoenxerto de Leucemia Linfoblástica Aguda (ALL) em camundongos SCID usando células de leucemia linfoblástica aguda humana (RS4: 11) para formulações do Composto A delineado no Exemplo 2. É mostrada a avaliação da eficácia do Composto A formulado com cada um de HPβ-CD (V1), Captisol (V2) e Tween (V3) em comparação com os veículos correspondentes; Veículo 1 (V1, ΗΡ-β-CD a 30%, pH 4),
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11/166
Veículo 2 (V2, Captisol a 10,6%, pH 9) e Veículo 3 (V3, Tween a 0,5%, pH 9).
[0026] A Figura 3B apresenta um modelo de Xenoenxerto de Leucemia Linfoblástica Aguda (ALL) em camundongos SCID usando células de leucemia linfoblástica aguda humana (RS4:11) para uma formulação do Composto A com Cremophor. A avaliação da eficácia do Composto A formulado com Cremophor (V4) em comparação com o veículo correspondente; É mostrado o veículo 4 (V4, 5% p/v Cremophor EL, pH 4). Ver o Exemplo 2.
[0027] A Figura 4 apresenta a morte celular (apoptose) a 6h e 24 h ap+os uma dose única do Composto A formulado em cada um de HPβ-CD (V1), Captisol (V2) e Tween (V3) em comparação com os veículos correspondentes; Veículo 1 (V1, ΗΡ-β-CD a 30%, pH 4), Veículo 2 (V2, Captisol a 10,6%, pH 9) e Veículo 3 (V3, Tween a 0,5%, pH 9). A resposta de Caspase 3 Clivada (CC3) foi usada como uma medida da morte celular e foi determinada usando o kit Cell Signalling Pathscan ELISA. Ver o Exemplo 2.
[0028] A Figura 5 apresenta a exposição tumoral de dose única para o Composto A formulado em cada um de ΗΡ-β-CD (V1), Captisol (V2) e Tween (V3). As concentrações do Composto A no tumor após 6h e 24h depois de uma dose única foram determinadas usando LCMS/MS. Ver o Exemplo 2.
[0029] A Figura 6 apresenta um modelo de Xenoenxerto de Leucemia Linfoblástica Aguda (ALL) em camundongos Rag2-/~ usando células de leucemia linfoblástica aguda humana (RS4:11). Quando os tumores cresceram até aproximadamente 4500-6000 mm3, os camundongos foram distribuídos aleatoriamente para o Veículo 1 (HPβ-CD a 30%, pH 4) ou para a infusão de 30 min IV de 5 mg/kg do Composto A uma vez. É mostrada a avaliação da eficácia do Composto A formulado com ΗΡ-β-CD a 30% (V1) em comparação
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12/166 com o veículo correspondente (V1). Ver o Exemplo 2.
[0030] A Figura 7 apresenta um modelo de Xenoenxerto de Leucemia Linfoblástica Aguda (ALL) em camundongos Rag2~/~ usando células de leucemia linfoblástica aguda humana (RS4:11). Quando os tumores cresceram até aproximadamente 4500-6000 mm3, os camundongos foram distribuídos aleatoriamente para o Veículo 1 (HPβ-CD a 30%, pH 4) ou para a infusão de 30 min IV de 5 mg/kg do Composto A, 3 mg/kg do Composto A e 1 mg/kg do Composto A uma vez. É mostrada a avaliação da eficácia da resposta a dose do Composto A formulado com ΗΡ-β-CD a 30% (V1) a 5 mg/kg, 3 mg/kg e 1 mg/kg em comparação com o veículo correspondente (V1). Ver o Exemplo 2.
[0031] A Figura 8 é uma comparação Inicial da taxa de liberação do Exemplo 6 e 9 através de uma gama de valores de pH. Ver o Exemplo 13.
[0032] A Figura 9 apresenta um modelo de Xenoenxerto de Leucemia Linfoblástica Aguda (ALL) em camundongos SCID usando células de leucemia linfoblástica aguda humana (RS4:11) para várias macromoléculas da presente invenção. É mostrada a avaliação da eficácia do veículo (solução salina tamponada com fosfato), Composto A (formulado em ΗΡ-β-CD a 30%, pH 4), Exemplo 6 em PBS (equivalente a 10 mg/kg e 30 mg/kg do Composto A), Exemplo 9 em PBS (equivalente a 10 mg/kg do Composto A). Ver o Exemplo 18.
[0033] A Figura 10 apresenta a morte celular (apoptose) em vários pontos de tempo após uma dose única quer de veículo (solução salina tamponada com fosfato) ou do Exemplo 6 em PBS (equivalente a 10 e 30 mg/kg do Composto A). A resposta de Caspase 3 Clivada (CC3) foi usada como uma medida da morte celular e foi determinada usando o kit Cell Signalling Pathscan ELISA. Vero Exemplo 18.
[0034] A Figura 11 apresenta um modelo de Xenoenxerto de
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Leucemia Linfoblástica Aguda (ALL) em camundongos SCID usando células de leucemia linfoblástica aguda humana (RS4:11) para os vários dendrímeros divulgados. É mostrada a avaliação da eficácia do veículo (solução salina tamponada com fosfato, PBS), uma formulação do Composto A no veículo 1 (ΗΡ-β-CD a 30%), Exemplo 6 em PBS (equivalente a 20 mg/kg do Composto A) e Exemplo 9 em PBS (equivalente a 20 mg/kg do Composto A). Ver o Exemplo 18.
[0035] A Figura 12 apresenta a morte celular (apoptose), em vários pontos de tempo após uma dose única do veículo (solução salina tamponada com fosfato), formulações do Composto A no veículo 1 (ΗΡ-β-CD a 30%) a 5 mg/kg e 10 mg/kg e o dendrímero do Exemplo 9 em PBS a 10 mg/kg do Composto A equivalente. A resposta da poli-ADP ribose polimerase (PARP) clivada foi usada como uma medida da morte celular. Ver o Exemplo 18.
[0036] A Figura 13 apresenta dados para os Exemplos 5, 7 e 8 doseados a 10 mg/kg do Composto A equivalente no modelo de camundongo Xenoenxerto RS4:11. Os dados demonstram que o Exemplo 7 doseado a 10 mg/kg do Composto A equivalente induz a regressão do tumor, enquanto os Exemplos 5 e 8 doseados a 10 mg/kg do Composto A equivalente não apresentaram atividade antitumoral tão significativa. Ver o Exemplo 18.
[0037] A Figura 14 apresenta um modelo de Xenoenxerto de Leucemia Linfoblástica Aguda (ALL) em camundongos Rag2-/- usando células de leucemia linfoblástica aguda humana (RS4:11) para o Exemplo 6 e o veículo. É mostrada a avaliação da eficácia do veículo (solução salina tamponada com fosfato, PBS) e Exemplo 6 em PBS (equivalente a 10 mg/kg e 30 mg/kg do Composto A). Ver o Exemplo
18.
[0038] A Figura 15 apresenta um Modelo de Xenoenxerto SuDHL4 em camundongos SCID para o veículo (solução salina tamponada
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14/166 com fosfato, PBS), Exemplo 6 em PBS (equivalente a 50 mg/kg do Composto A), Exemplo 9 em PBS (equivalente a 50 mg/kg de composto A), rituximab (10 mg/kg), uma combinação do Exempio 6 (10 mg/kg, 30 mg/kg e 50 mg/kg de composto A equivalente) com rituximab (10 mg/kg), e uma combinação do Exemplo 9 (10 mg/kg, 30 mg/kg e 50 mg/kg do Composto A equivalente) com rituximab (10 mg/kg). Vero Exemplo 18.
[0039] A Figura 16 apresenta o dendrímero de fórmula (IV).
[0040] A Figura 17 apresenta o dendrímero de fórmula (V).
[0041] A Figura 18 ilustra a atividade antitumoral in vivo em um modelo de tumor de câncer do pulmão de células pequenas humanas apresentado pelo Exemplo 9 em combinação com o inibidor de mTOR AZD2014.
[0042] A Figura 19 ilustra a atividade antitumoral in vivo em um modelo de tumor DLBCL humano apresentado pelo Exemplo 9 em combinação com acalabrutinib.
Descrição Detalhada [0043] Em uma modalidade, são descritos dendrímeros compreendendo um núcleo de benzi-hidril-hexanamida-lisina dlvalente, unidades de construção de lisina e em que os grupos funcionais de superfície são substituídos com um inibidor de Bel e PEG.
[0044] Em uma modalidade, são divulgados dendrímeros de fórmula (I):
A Jb (D
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15/166 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
[0045]
O Núcleo é
Figure BR112019016409A2_D0022
*indica ligação covalente a uma porção carbonila de (BU1); b é 2;
BU são unidades de construção;
BUx são unidades de construção de geração x, em que o número total de unidades de construção na geração x do dendrímero de fórmula (I) é igual a 2X e o número total de BU no dendrímero de fórmula (I) é igual a (2x~1)b; em que BU tem a seguinte estrutura:
Figure BR112019016409A2_D0023
/NH # indica ligação covalente a uma porção amina do Núcleo ou uma porção amino de BU;
indica uma ligação covalente a uma porção carbonila de BU ou uma ligação covalente a Wou Z;
W é independentemente (PM)C ou (H)e;
Z é independentemente (L-AA)d ou (H)e;
PM é PEG900-1200 ou PEG 1800-2400]
L-AA é um ligante covalentemente ligado a um agente ativo; em que L-AA é da fórmula:
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16/166
Figure BR112019016409A2_D0024
em que
A é -N(CH3), -O-, -S- ou -CH2-;
© é o ponto de ligação a uma porção amina de BUx;
desde que (c+d) < (2x)b e d seja > 1; e desde que se (c+d) < (2x)b, então quaisquer grupos W e Z remanescentes são (H)e, em que e é [(2íx))b]-(c+d).
[0046] Apenas para fins de ilustração, a Figura 1 é uma representação de um dendrímero de 3a geração, compreendendo um núcleo, 3 gerações de unidades de construção (BU) e 24 grupos funcionais de superfície.
[0047] Será apreciado que o núcleo do dendrímero representa a unidade central a partir da qual o dendrímero é construído. A este respeito, o núcleo representa a unidade central a partir do qual a primeira e as gerações subsequentes de unidades de construção são crescidas. Em uma modalidade, o Núcleo, em qualquer um dos dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) ou (V) é
Figure BR112019016409A2_D0025
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17/166 em que * indica uma ligação covalente às unidades de construção do dendrímero. Em algumas modalidades, o Núcleo, em qualquer um dos dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) ou (V) é
Figure BR112019016409A2_D0026
em que * indica uma ligação covalente às unidades de construção do dendrímero.
[0048] O termo unidade de construção ou BLJ inclui moléculas tendo pelo menos três grupos funcionais, um para ligação ao núcleo ou uma unidade de construção em uma geração (ou camada) anterior de unidades de construção e dois ou mais grupos funcionais para fixação às unidades construção na geração (ou camada) seguinte de unidades de construção. As unidades de construção são usadas para construir as camadas de dendrímeros, por adição ao núcleo ou à camada anterior de unidades de construção. Em algumas modalidades, as unidades de construção têm três grupos funcionais.
[0049] O termo geração inclui o número de camadas de unidades de construção que compõem um dendrón ou dendrímero. Por exemplo, um dendrímero de uma geração terá uma camada de unidades de construção ligada ao núcleo, por exemplo, Núcleo[[unidade de construção]b, onde b é o número de dendróns ligados ao núcleo e a valência do núcleo. Um dendrímero de duas gerações tem duas camadas de unidades de construção em cada dendrón ligadas ao núcleo. Por exemplo, quando a unidade de construção tem um ponto de ramificação bivalente, o dendrímero pode ser: Núcleo[[unidade de construçâo][unidade de construção]2]b, um dendrímero de três gerações tem três camadas de unidades de construção em cada dendrón ligadas ao núcleo, por exemplo Núcleo
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18/166 [[unidade de construção][unídade de construção]2[unidade de construção]4]b, um dendrímero de cinco gerações tem cinco camadas de unidades de construção em cada dendrón ligadas ao núcleo, por exemplo Núcleo-[[unidade de construção][unidade de construção]2[unidade de construção]4[unidade de construção]8[unidade de construção] 16]b, um dendrímero de 6 gerações tem seis camadas de unidades de construção ligadas ao núcleo, por exemplo, Núcleo-[[unidade de construção][unidade de construção]2[unidade de construção]4[unidade de construção]8[unidade de construção]16[unidade de construção]32]b, e semelhantes. A última geração de unidades de construção (a geração mais exterior) fornece a funcionallzação da superfície do dendrímero e o número de grupos funcionais de superfície disponíveis para a ligação do grupo modificador farmacocinêtico (PM) e/ou ligante e agente ativo (L-AA).
[0050] O termo grupos funcionais de superfície se refere aos grupos funcionais não reagidos que são encontrados na geração final das unidades de construção. Em algumas modalidades, o número de grupos funcionais de superfície é igual a (2x)b, em que x é o número de gerações no dendrímero e b é o número de dendróns. Em algumas modalidades, os grupos funcionais de superfície são grupos funcionais de amino primário.
[0051] O número total de unidades de construção em um dendrímero com unidades de construção tendo 3 grupos funcionais (porex., um ponto de ramificação) é igual a (2X-1 )b, onde x é igual ao número de geração e b é igual ao número de dendróns. Por exemplo, em um dendrímero tendo um núcleo com dois dendróns ligados (b =
2), se cada unidade de construção tiver um ponto de ramificação e existirem 5 gerações, haverá 62 unidades de construção e a geração mais exterior terá 16 unidades de construção com 64 grupos
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19/166 funcionais de superfície. Em algumas modalidades, os grupos funcionais de superfície são porções amino, por exemplo, aminas primárias ou secundárias. Em algumas modalidades, o dendrímero é um dendrímero de quinta geração tendo um Núcleo bivalente, 62 unidades de construção e 64 grupos funcionais de amino primário. [0052] Em algumas modalidades, as unidades de construção, em qualquer um dos dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) ou (V) têm a estrutura:
Figure BR112019016409A2_D0027
Figure BR112019016409A2_D0028
em que # indica ligação covalente a uma porção amina do Núcleo ou uma porção amino de uma unidade de construção, e + indica uma ligação covalente a uma porção carbonila de uma unidade de construção, ou uma ligação covalente a um grupo modificador farmacocinêtico, um ligante ligado a um agente ativo ou um hidrogênio. Em algumas modalidades, o dendrímero tem 62 unidades de construção com 64 grupos funcionais de amino primário.
[0053] Em algumas modalidades, as unidades de construção, em qualquer um dos dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) ou (V) têm a estrutura:
Figure BR112019016409A2_D0029
em que # indica ligação covalente a uma porção amina do Núcleo ou uma porção amino de uma unidade de construção, e + indica uma ligação covalente a uma porção carbonila de uma unidade de construção, ou uma ligação covalente a um grupo modificador farmacocinêtico, um ligante ligado a um agente ativo ou um hidrogênio.
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20/166 [0054] O termo grupo modificador farmacocinético ou PM inclui porções que podem modificar ou modular o perfil farmacocinético do dendrímero ou o agente ativo que está a entregar. Em algumas modalidades, o PM pode modular a distribuição, metabolismo e/ou excreção do dendrímero ou do agente ativo. Em algumas modalidades, o PM pode influenciar a taxa de liberação do agente ativo, quer abrandando ou aumentando a taxa à qual o agente ativo é liberado do dendrímero quer por vias de degradação química (por ex., hidrólise) ou enzimática. Em algumas modalidades, o PM pode alterar o perfil de solubilidade do dendrímero, quer aumentando ou diminuindo a solubilidade em um portador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o PM pode ajudar o dendrímero a entregar o agente ativo a tecidos específicos (por exemplo, tumores).
[0055] Em algumas modalidades, em qualquer um dos dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V), o PM é polietilenoglicol (PEG). Em algumas modalidades, o polietilenoglicol (PEG) tem um peso molecular médio de entre cerca de 220 e cerca de 5500 Da. Em algumas modalidades, o PEG tem um peso molecular médio de entre cerca de 500 e cerca de 5000 Da. Em algumas modalidades, o PEG tem um peso molecular médio de entre cerca de 1000 e 2500 Da. Em algumas modalidades, o PEG tem um peso molecular médio de entre cerca de 1500 e cerca de 2400 Da. Em algumas modalidades, o PEG tem um peso molecular entre cerca de 900 e cerca de 1200 Da. Em algumas modalidades, o PEG tem um peso molecular entre cerca de 1800 e cerca de 2400 Da. Em algumas modalidades, o PEG tem um peso molecular médio de cerca de 2150 Da. Um perito na técnica entendería rapidamente que o termo PEG900-1200 inclui PEG com um peso molecular médio entre cerca de 900 e cerca de 1200 Da e que 0 termo PEG1800-2400 inclui PEG com um peso molecular médio de entre cerca de 1800 e cerca de 2400 Da.
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21/166 [0056] Em algumas modalidades, o PEG tem um índice de polidispersividade (PDI) entre cerca de 1,00 e cerca de 2,00, entre cerca de 1,00 e 1,50, por exemplo entre cerca de 1,00 e cerca de 1,25, entre cerca de 1,00 e cerca de 1,10 ou entre cerca de 1,00 e cerca de 1,10. Em algumas modalidades, o PDI do PEG é cerca de 1,05. O termo índice de polidispersividade se refere a uma medida da distribuição da massa molecular em uma dada amostra de polímero. O PDI é igual ao peso molecular médio ponderado (Mw) dividido pelo número de peso molecular médio (Mn) e indica a distribuição de massas moleculares individuais em um lote de polímeros. O PDI tem um valor Igual ou superior a 1, mas à medida que o polímero se aproxima do comprimento uniforme da cadeia e do peso molecular médio, o PD1 estará mais próximo de 1.
[0057] Em algumas modalidades, o dendrímero tem menos do que (2x)b grupos PEG, em que x é o número de gerações do dendrímero e b é o número de dendróns. Em algumas modalidades, todos os grupos funcionais de superfície estão covalentemente ligados a grupos PEG. Em algumas modalidades, quando x é 5, o dendrímero tem entre cerca de 25 e cerca de 60 grupos PEG. Em algumas modalidades, o dendrímero não tem mais do que 2xgrupos PEG. Em algumas modalidades, o dendrímero tem 2xgrupos PEG. Por exemplo, quando a unidade de construção do dendrímero tem um ponto de ramificação bivalente, um dendrímero de segunda geração não teria mais do que 4 grupos PEG, um dendrímero de terceira geração não teria mais do que 8 grupos PEG, um dendrímero de quarta geração não teria mais do que 16 grupos PEG, um dendrímero de quinta geração não teria mais do que 32 grupos PEG. Em algumas modalidades, o dendrímero tem menos do que 2xgrupos PEG. Em algumas modalidades, o dendrímero tem entre cerca de 25 e cerca de 64 grupos PEG. Em algumas modalidades, o dendrímero tem entre cerca de 25 e cerca de 40
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22/166 grupos PEG. Em algumas modalidades, o dendrímero não tem mais do que 32 grupos PEG. Em algumas modalidades, o dendrímero tem entre cerca de 25 e cerca de 32 grupos PEG. Em algumas modalidades, o dendrímero tem entre cerca de 28 e cerca de 32 grupos PEG. Em algumas modalidades, o dendrímero tem 29 grupos PEG, 30 grupos PEG, 31 grupos PEG ou 32 grupos PEG.
[0058] Os dendrímeros divulgados de fórmulas (I), (II), (III), (IV) e (V) incluem um ligante covalentemente ligado a um agente ativo (ΕΛΑ), no qual o ligante (L) está covalentemente ligado aos grupos funcionais de superfície na geração final das unidades de construção em uma extremidade do ligante e a um agente ativo (AA) na outra extremidade do ligante. Em algumas modalidades, o ligante em qualquer um dos dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) ou (V) tem a estrutura:
o O
Figure BR112019016409A2_D0030
no qual ©está covalentemente ligado aos grupos funcionais de amino na geração final das unidades de construção, um ponto de ligação covalente ao agente ativo (AA) e A é -N(CH3), -O-, -S- ou CH2-. Em algumas modalidades, A é -CH2-. Em algumas modalidades, A é -O-. Em algumas modalidades, A é -S-. Em algumas modalidades, A é -N(CH3).
[0059] Em algumas modalidades, AA é um inibidor de Bcl. Em algumas modalidades, AA é um inibidor de Bcl~2 e/ou Bcl~XL Em algumas modalidades, AA é um inibidor de Bcl-2 e/ou Bcl-XL divulgado na Patente dos E.U.A. N° 9.018.381. Em algumas modalidades, AA em qualquer um dos dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) ou (V) tem a estrutura:
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Figure BR112019016409A2_D0031
Figure BR112019016409A2_D0032
Figure BR112019016409A2_D0033
em que é um ponto de ligação covalente ao ligante. Em algumas modalidades, AA em qualquer um dos dendrímeros de fórmula (I), (II),
Figure BR112019016409A2_D0034
[0060] Em algumas modalidades, a estrutura de L-AA em qualquer um dos dendrímeros de (I), (II), (III), (IV) ou (V) é:
Figure BR112019016409A2_D0035
no qual ©está covalentemente ligado aos grupos funcionais de amino
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24/166 na geração final das unidades de construção, e A é -N(CH3), -O-, -Sou -CH2-. Em algumas modalidades, A é -CH2-. Em algumas modalidades, A é -O-. Em algumas modalidades, A é -S-. Em algumas modalidades, A é -N(CH3).
[0061] Em algumas modalidades, a estrutura de L-AA em qualquer um dos dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) ou (V) é:
Figure BR112019016409A2_D0036
Figure BR112019016409A2_D0037
no qual ©está covalentemente ligado aos grupos funcionais de amino na geração final das unidades de construção, e A é -N(CH3), -O-, -Sou -CH2-. Em algumas modalidades, A é -CH2-. Em algumas modalidades, A é -O-, Em algumas modalidades, A é -8-. Em algumas modalidades, A é -N(CH3).
[0062] Em algumas modalidades, 0 dendrímero de cada uma das fórmulas (I), (II), (III), (IV) ou (V) tem menos do que (2x)b grupos L-AA, em que x é 0 número de gerações do dendrímero e b é 0 número de dendróns. Em algumas modalidades, todos os grupos funcionais de superfície estão covalentemente ligados a grupos L-AA. Em algumas modalidades, quando x é 5, 0 dendrímero tem entre cerca de 25 e cerca de 64 grupos L-AA. Em algumas modalidades, 0 dendrímero não tem mais do que 2xgrupos L-AA. Em algumas modalidades, 0 dendrímero tem 2xgrupos L-AA. Por exemplo, quando a unidade de
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25/166 construção do dendrímero tem um ponto de ramificação bifuncional, um dendrímero de segunda geração não teria mais do que 4 grupos LAA, um dendrímero de terceira geração não teria mais do que 8 grupos L-AA, um dendrímero de quarta geração não teria mais do que 16 grupos L-AA, um dendrímero de quinta geração não teria mais do que 32 grupos L-AA. Em algumas modalidades, o dendrímero tem menos do que 2X grupos L-AA. Em algumas modalidades, o dendrímero tem entre cerca de 25 e cerca de 64 grupos L-AA. Em algumas modalidades, o dendrímero tem entre cerca de 25 e cerca de 40 grupos L-AA. Em algumas modalidades, o dendrímero não tem mais do que 32 grupos L-AA. Em algumas modalidades, o dendrímero tem entre cerca de 25 e cerca de 32 grupos L-AA. Em algumas modalidades, o dendrímero tem entre cerca de 28 e cerca de 32 grupos L-AA. Em algumas modalidades, o dendrímero tem 29 grupos L-AA, 30 grupos L-AA, 31 grupos L-AA ou 32 grupos L-AA.
[0063] Em algumas modalidades, em qualquer um dos dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V), a soma dos grupos LAA e dos grupos PEG pode ser igual a não mais do que 64. Em algumas modalidades, a soma dos grupos L-AA e grupos PEG pode ser inferior a 64, desde que o dendrímero tenha pelo menos um grupo L-AA. Em algumas modalidades, a soma de grupos L-AA e grupos PEG pode estar entre cerca de 50 e cerca de 64. No caso em que a soma dos grupos L-AA e grupos PEG é inferior a 64, as unidades funcionais de superfície não reagidas da geração final de unidades de construção permanecem grupos de amino primário, desde que o dendrímero tenha, pelo menos, um grupo L-AA. Por exemplo, o número de grupos de amino primário na geração final das unidades de construção é igual a 64 menos a soma dos grupos L-AA e PEG (por ex., 64-(L-AA + PEG), desde que o dendrímero tenha pelo menos um grupo L-AA. Por exemplo, se a soma dos grupos L-AA e grupos PEG é
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26/166 de 50, então, 14 grupos funcionais de superfície permanecerão porções de amino primário, se a soma dos grupos L-AA e grupos PEG é de 51, 13 dos grupos funcionais de superfície permanecerão porções de amino primário, se a soma dos grupos L-AA e grupos PEG é de 52, então 12 dos grupos funcionais de superfície permanecerão porções de amino primário, se a soma dos grupos L-AA e grupos PEG é de 53, então 11 dos grupos funcionais de superfície permanecerão porções de amino primário, etc. Em algumas modalidades, o número de porções amino primário no dendrímero é entre cerca de 0 e cerca de
14. Em algumas modalidades, se a soma do número de grupos PEG e o número de grupos L-AA é menor do que (2x)b, em que x é o número de gerações do dendrímero e b é o número de dendróns, então os restantes grupos funcionais de superfície são iguais a 64 menos a soma dos grupos PEG e dos grupos L-AA, desde que o dendrímero tenha pelo menos um grupo L-AA.
[0064] Em algumas modalidades, se W é (PM)C ou (H)e; Z é (LAA)d ou (H)e; desde que (c+d) < (2x)b e desde que d seja > 1; em que x é o número de gerações e b é o número de dendróns; e desde que se (c+d) < (2x)b, então quaisquer grupos W e Z restantes são (H)e, em que e é [2íx+1)]~(c+d). Por exemplo, quando b é 2 e x é 5, então (c+d) <
64. Em algumas modalidades, (c+d) 64; isto é, a soma de (PM)C e (LAA)d é igual a 64. Em algumas modalidades, quando b é 2 e x é 5, então (c+d) < 64; isto é, a soma de (PM)C e (L-AA)d é menor do que 64, desde que d seja > 1. Em algumas modalidades, (c+d) é um número inteiro entre 50 e 64. Em algumas modalidades, (c+d) é um número inteiro entre 58 e 64.
[0065] Em algumas modalidades, (c+d) = (2x)b, caso em que não há (H)e e e é 0. Por exemplo, se b é 2 ex é 5, ea soma de (PM)C e (LAA)d é igual a 64, então não há grupos funcionais de superfície não substituídos na quinta geração das unidades de construção no
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27/166 dendrímero e, portanto, e é 0. No entanto, (c+d) < (2x)b, então (H)e é igual a (2x)b-(c+d). Por exemplo, sebé2, xé 5 e a soma de (PM)C e (L-AA)d é menor que 64, então o número de grupos funcionais de superfície não substituídos na quinta geração dos blocos de construção é igual a 64 menos a soma de (PM)C e (L-AA)d. Nesse caso, e é igual a 64 menos a soma de (PM)C e (L-AA)d. Em algumas modalidades, quando a soma de (c+d) é um número inteiro entre 50 e 64, e é um número inteiro entre 0 e 14. Em algumas modalidades, quando (c+d) é um número inteiro entre 58 e 64, e é um número inteiro entre 0 e 6. Em algumas modalidades, (c+d) é 58 e e é 6. Em algumas modalidades, (c+d) é 59 e e é 5. Em algumas modalidades, (c+d) é 60 e e é 4. Em algumas modalidades, (c+d) é 61 e e é 3. Em algumas modalidades, (c+d) é 62 e e é 2. Em algumas modalidades, (c+d) é 63 e e é 1. Em algumas modalidades, (c+d) é 60 e e é 0.
[0066] Em algumas modalidades, qualquer um dos dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V), tem um peso molecular de cerca de 90 a cerca de 120 KDa. Em algumas modalidades, o dendrímero tem um peso molecular de cerca de 100 e 115 Da. Em algumas modalidades, o dendrímero tem um peso molecular de cerca de 100 a cerca de 110 Da. Em algumas modalidades, o dendrímero tem um peso molecular de cerca de 100 a cerca de 105 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do dendrímero é de cerca de 100 kDa, cerca de 101 kDa, cerca de 102 kDa, cerca de 103KDa, cerca de 104 kDa, cerca de 105 kDa, cerca de 106 KDa, cerca de 107 kDa, cerca de 108 kDa, cerca de 109 kDa ou cerca de 110 kDa.
[0067] Em algumas modalidades, quando BU é
Figure BR112019016409A2_D0038
ou
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28/166
Figure BR112019016409A2_D0039
[0068] o PEG está covalentemente ligado à funcionalidade amino na posição ε da BU e o L-AA está covalentemente ligado à funcionalidade amino na posição a da BU.
[0069] Em algumas modalidades, o divulgado é um dendrímero de fórmula (II):
Figure BR112019016409A2_D0040
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que [0070] b é 2;
[0071] O Núcleo é
Figure BR112019016409A2_D0041
*indica ligação covalente a uma porção carbonila de (BU1);
BU são unidades de construção e o número de BU é igual a
62: em que BU tem a seguinte estrutura:
Figure BR112019016409A2_D0042
# indica ligação covalente a uma porção amina do Núcleo ou uma porção amino de BU, e + indica uma ligação covalente a uma
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29/166 porção carbonila de BU ou uma ligação covalente a Wou Z;
W é independentemente (PM)C ou (H)e;
Z é independentemente (L~AA)d ou (H)e;
PM é PEG900-1200 ou PEG 1800-2400L-AA é um ligante covalentemente ligado a um agente ativo; em que L-AA é da fórmula:
Figure BR112019016409A2_D0043
em que
A é -N(CH3), -O-, -S- ou -Oh-;
©indica ligação covalente a uma porção amina de BU5; desde que (c+d) seja < 64 e d seja > 1; e desde que se (c+d) < 64, então quaisquer grupos W e Z remanescentes são (H)e, em que e é 64-(c+d).
[0072] Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), (PM)C é PEG900-1200 e A é -O-. Em algumas modalidades, (PM)C é PEG1800-2400 e A é -0--. Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), (PM)C é PEG1800-2400 e A é -N(CH3). Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), (PM)C é PEG1800-2400 e A é -S-. Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), (PM)C é PEG1800-2400 e A é —CH2-.
[0073] Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), c é
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30/166 um número inteiro entre 25 e 32. Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), c é um número inteiro entre 29 e 32.Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), c é 29.Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), c é 30.Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), c é 31.Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), c é 32.
[0074] Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), d é um número inteiro entre 25 e 32. Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), d é um número inteiro entre 29 e 32.Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), d é 29.Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), d é 30.Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), d é 31.Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), d é 32.
[0075] Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), e é um número inteiro entre 0 e 14. Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), e é um número inteiro entre 0 e 6. Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), e é 0. Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), e é 1. Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), e é 2.
algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), e é 3.
algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), e é 4.
Em
Em
Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), e é 5. Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), e é 6.
[0076] Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (II), ΕΛΑ é:
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31/166
Figure BR112019016409A2_D0044
Figure BR112019016409A2_D0045
[0077] Em algumas modalidades, é divulgado um dendrímero de fórmula (III):
D-Núcleo-D (III) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que [0078] O Núcleo é
Figure BR112019016409A2_D0046
D é
Figure BR112019016409A2_D0047
BU1 unidade de
CQBStfaçãe
8U3 unidades de construção
BLW unidades de consttucso
BUS unkfedes de coastrução
AP é um ponto de ligação a outra unidade de construção;
W é independentemente (PM)C ou (H)e;
Z é independentemente (L-AA)d ou (H)e;
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32/166
PM é PEG900-1200 ou PEG 1800-2400:
L-AA é um ligante covalentemente ligado a um agente ativo; em que L-AA é da fórmula:
Figure BR112019016409A2_D0048
Figure BR112019016409A2_D0049
em que
A é -N(CH3), -O-, -S- ou -ch2-;
desde que se (c+d) < 64, então quaisquer grupos W e Z remanescentes são (H)e, em que e é 64-(c+d); e d é > 1.
[0079] Em algumas modalidades, D é
Figure BR112019016409A2_D0050
B UI unidade de constfução unidades de canstiuçâo
BU3 umdaces de construção
BÜ4 unidades. de constfuçã®
BU5
IS unidades de construção [0080] Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), (PM)c é PEG900-1200 e A é -O-. Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), (PM)C é PEGi8oo-24oo e A é -O-. Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), (PM)C é PEGieoo24oo e A é -N(CH3). Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), (PM)C é PEG1800 2400 e A é -S-. Em algumas modalidades
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33/166 do dendrímero de fórmula (III), (PM)C é PEG1800-2400 e A é --CHa··.
[0081] Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), c é um número inteiro entre 25 e 32. Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), c é um número inteiro entre 29 e 32.Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), c é 29.Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), c é 30.Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), c é 31.Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), c é 32.
[0082] Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), d é um número inteiro entre 25 e 32. Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), d é um número inteiro entre 29 e 32.Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), d é 29.Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), d é 30.Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), d é 31.Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), d é 32.
[0083] Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), e é um número inteiro entre 0 e 14. Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), e é um número inteiro entre 0 e 6. Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), e é 0.
algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), e é 1.
algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), e é 2.
algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), e é 3.
algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), e é 4.
algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), e é 5.
Em
Em
Em
Em
Em
Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), e é 6.
[0084] Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (III), LAA é:
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34/166
Figure BR112019016409A2_D0051
Figure BR112019016409A2_D0052
[0085] Em algumas modalidades, é divulgado um dendrímero de fórmula (IV):
Figure BR112019016409A2_D0053
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Y é
PEG1800-2400 ou H; Q é H ou L-AA, em que L-AA tem a estrutura:
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35/166 ο
Figure BR112019016409A2_D0054
Figure BR112019016409A2_D0055
[0086] A é —S- ou -N(CH3), desde que se a soma de PEG1800-2400 e de L-AA for menor que 64, as restantes porções Q e Y são H, e desde que pelo menos um Q seja L-AA.
[0087] Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (IV), A é -N(CH3). Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (IV), A é-S-, [0088] Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (IV) tem entre 25 e 32 PEG1800-2400. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (IV) tem entre 29 e 32 PEG1800-2400. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (IV) tem 29 PEGieoo2400. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (IV) tem 30 PEG1800-2400. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (IV) tem 31 PEG1800-2400. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (IV) tem 32 PEG1800-2400.
[0089] Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (IV) tem entre 25 e 32 L-AA. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (IV) tem entre 29 e 32 L-AA. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (IV) tem 29 L-AA. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (IV) tem 30 L-AA. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (IV) tem 31 L-AA. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (IV) tem 32 L-AA.
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36/166 [0090] Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (IV) tem entre 0 e 14 hidrogênios nas posições Q e/ou Y. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (IV) tem entre 0 e 6 hidrogênios nas posições Q e/ou Y. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (IV) tem 1 hidrogênio nas posições Q e/ou Y. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (IV) tem 2 hidrogênios nas posições Q e/ou Y. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (IV) tem 3 hidrogênios nas posições Q e/ou Y. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (IV) tem 4 hidrogênios nas posições Q e/ou Y. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (IV) tem 5 hidrogênios nas posições Q e/ou Y. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (IV) tem 6 hidrogênios nas posições Q e/ou Y.
[0091] Em algumas modalidades, é divulgado um dendrímero de fórmula (V):
Y KN'
Figure BR112019016409A2_D0056
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37/166 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Y é
PEG1800-2400 ou H; Q é H ou L-AA, em que L-AA tem a estrutura:
Figure BR112019016409A2_D0057
Figure BR112019016409A2_D0058
[0092] A é -S- ou -N(CH3), desde que se a soma de PEG1800-2400 e de L-AA for menor que 64, as restantes porções Q e Y são H, e desde que pelo menos um Q seja L-AA.
[0093] Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (V), A é ™N(CH3). Em algumas modalidades do dendrímero de fórmula (V), A é-S-, [0094] Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (V) tem entre 25 e 32 PEG1800-2400. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (V) tem entre 29 e 32 PEG1800-2400. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (V) tem 29 PEGi8oo-24oo. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (V) tem 30 PEG1800-2400. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (V) tem 31 PEGisoo2400. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (V) tem 32 PEG1 800-2400[0095] Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (V) tem entre 25 e 32 L~AA. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (V) tem entre 29 e 32 L-AA. Em algumas modalidades, 0 dendrímero de fórmula (V) tem 29 L-AA. Em algumas modalidades, 0
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38/166 dendrímero de fórmula (V) tem 30 L-AA. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (V) tem 31 L-AA. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (V) tem 32 L-AA.
[0096] Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (V) tem entre 0 e 14 hidrogênios nas posições Q e/ou Y. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (V) tem entre 0 e 6 hidrogênios nas posições Q e/ou Y. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (V) tem 1 hidrogênio nas posições Q e/ou Y. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (V) tem 2 hidrogênios nas posições Q e/ou Y. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (V) tem 3 hidrogênios nas posições Q e/ou Y. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (V) tem 4 hidrogênios nas posições Q e/ou Y. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (V) tem 5 hidrogênios nas posições Q e/ou Y. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (V) tem 6 hidrogênios nas posições Q e/ou Y.
[0097] Em algumas modalidades, também são divulgados compostos com as estruturas:
Figure BR112019016409A2_D0059
Figure BR112019016409A2_D0060
Ácido 5-(2-(((R)-3-(4-(N-(4-(4-((R)(4'-clorobifenil-2il)(hidroxi)metil)píperidín-1 il)benzoil)sulfamoil)-2(trifluorometilsulfonil)fenilamino)-4(feniltío)butil)(metil)amino)etoxi)-5oxopentanoico
Glii-Composto A
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39/166
çf3 Ácido 2-(2-(2-(((R)-3-(4-(N-(4-(4-
o-s-oH í ((R)-(4'-clorobifenil-2-
% asXX I o o il)(hidroxi)metil)píperidín-1 ·
CTO O' OH il)benzoil)sulfamoil)-2- (trifluorometilsulfonil)fenilamino)-4-
N (feniltio)butil)(metil)amino)etoxi)-2-
w,L HO'' oxoetiltio)acético
r
TDA-Composto A
CF3 O-S=OH ^>1 Ácido 2-(2-(2-(((R)-3-(4-(N-(4-(4- ((R)-(4'-clorobifenil-2-
η Γ i T o o il)(hidroxi)metíl)piperidin-1 -
O^r ^o' 'O 'x JL. Ό OH il)benzoil)sulfamoil)-2- (trifluorometilsulfonil)fenilamino)-4-
N (feniltio)butil)(metil)amino)etoxi)-2-
w.L HO'* 'Yj oxoetoxi)acético
r
cr
DGA-Composto A
cf3 o4=o H 6 >YNW ll Ácido 2-((2-(2-(((R)-3-(4-(N-(4-(4- ((R)-(4'-clorobifenil-2-
Ç Ο 1 O il)(hidroxi)metil)piperidin~1 - il)benzoíl)sulfamoil)-2- (trifluorometilsulfonii)feniiamino)-4-
(feniltio)butil)(metil)amino)etoxi)-2-
w.L HO'* 'Ό oxoetil)(metil)amino)acétíco
r
C1Z
MIDA-Composto A
[0098] A linguagem sal farmaceuticamente aceitável” inclui sais de adição de ácido ou base que retêm a eficácia biológica e
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40/166 propriedades dos dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V) e que, tipicamente, não são indesejáveis do ponto de vista biológico ou outro. Em muitos casos, os dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V) são capazes de formar sais de ácidos e/ou bases em virtude da presença de grupos básicos e/ou carboxila ou grupos semelhantes a esses.
[0099] Sais de adição de ácidos farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com ácidos inorgânicos e ácidos orgânicos, por ex., sais de acetato, aspartato, benzoato, besilato, brometo/bromidrato, bicarbonato/carbonato, bissulfato/sulfato, canforsulfonato, cloreto/cloridrato, clorteofilonato, citrato, etanodissulfonato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hipurato, hidroiodeto/iodeto, isetionato, lactato, lactobionato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metilsulfato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, palmoato, fosfato/hidrogenofosfato/di-hidrogenofosfato, poligalacturonato, propionato, estearato, succinato, subsalicilato, sulfato/hidrogenossulfato, tartarato, tosilato e trifluoroacetato. Ácidos inorgânicos a partir dos quais podem ser derivados sais incluem, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e semelhantes. Ácidos orgânicos a partir dos quais podem ser derivados sais incluem, por exemplo, ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malônico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido toluenossulfônico, ácido trifluoroacético, ácido sulfossalicílico e semelhantes.
[00100] Sais de adição de bases farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com bases inorgânicas e orgânicas. Bases inorgânicas a partir das quais podem ser derivados sais incluem, por
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41/166 exemplo, amônia e sais de amônio e metais das colunas I a XII da tabela periódica. Em certas modalidades, os sais são derivados de sódio, potássio, amônio, cálcio, magnésio, ferro, prata, zinco e cobre; sais particularmente adequados incluem sais de amônio, potássio, sódio, cálcio e magnésio. Bases orgânicas a partir das quais podem ser derivados sais incluem, por exemplo, aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas, resinas básicas de troca iônica e semelhantes. Certas aminas orgânicas incluem isopropilamina, benzatina, colinato, dietanolamina, dietilamina, lisina, meglumina, piperazina e trometamina.
[00101] Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V) podem ser sintetizados a partir de uma fração básica ou acídica, por métodos químicos convencionais. Em geral, tais sais podem ser preparados fazendo reagir formas de ácido livre desses compostos com uma quantidade estequiométrica da base apropriada (tal como hidróxido, carbonato, bicarbonato de Na*, Ca2+, Mg2+ ou K+ ou semelhantes), ou fazendo reagir formas de base livre desses compostos com uma quantidade estequiométrica do ácido apropriado. Tais reações são tipicamente conduzidas em água ou em um solvente orgânico, ou em uma mistura dos dois. Em geral, o uso de meios não aquosos tais como éter, acetato de etila, etanol, isopropanol ou acetonitrila é desejável, quando praticável. Listas de sais adequados adicionais podem ser encontradas, por ex., em Remington's Pharmaceutical Sciences, 20a ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); Berge et al., J. Pharm. ScL, 1977, 66,
1-19 e em Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use de Stahl e Wermut (Wiley-VCH, Weinheim, Alemanha, 2002). [00102] Também é pretendido que qualquer fórmula apresentada no presente documento possa representar formas não etiquetadas
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42/166 bem como formas isotopicamente etiquetadas para os dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V). Compostos isotopicamente etiquetados têm estruturas representadas pelas fórmulas apresentadas no presente documento com a exceção de um ou mais átomos estarem substituídos por um átomo do mesmo elemento, mas com número de massa diferente. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V) e seus sais incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, flúor e cloro, tais como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 35S e 125l. Os dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V) podem incluir vários compostos isotopicamente etiquetados nos quais estão presentes isótopos radioativos, tais como 3H, 11C, 14C, 35S e 36CI. Dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V) isotopicamente etiquetados podem ser geralmente preparados por técnicas convencionais conhecidas dos peritos na técnica ou por processos análogos aos descritos nos Exemplos em anexo usando reagentes isotopicamente etiquetados apropriados em vez dos reagentes não etiquetados previamente empregues.
[00103] Os dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V) podem ter diferentes formas isoméricas. A linguagem isômero óptico ou estereoisômero se refere a qualquer uma das várias configurações estereoisoméricas que podem existir para um determinado dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V). Em particular, os dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V) possuem quiralidade e como tal podem existir como misturas de enantiômeros com excesso enantiomérico entre cerca de 0% e> 98% e.e. Quando um composto é um enantiômero puro, a estereoquimica em cada centro quiral pode ser especificada quer por Rou S. Tais designações também podem ser usadas para misturas que são enriquecidas em um enantiômero. Compostos resolvidos cuja configuração absoluta seja desconhecida
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43/166 podem ser designados (+) ou (-) dependendo da direção (dextro- ou levorotatória) na qual rodam o plano de luz polarizada ao comprimento de onda da linha do sódio D. É pretendido que a presente divulgação inclua todos de tais possíveis isômeros, incluindo misturas racêmlcas, formas opticamente puras e misturas de intermediários. Isômeros opticamente ativos (R) e (S) podem ser preparados usando síntons quirais, reagentes quirais ou catalisadores quirais, ou resolvidos usando técnicas convencionais bem conhecidas na técnica, tais como HPLC quiral.
Composições Farmacêuticas [00104] Em uma modalidade, são divulgadas composições farmacêuticas compreendendo um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um excipiente, portador ou diluente farmaceuticamente aceitável.
[00105] A linguagem excipiente, portador ou diluente farmaceuticamente aceitável inclui compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem que são, dentro do âmbito de avaliação médica fundamentada, adequados para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem excessiva toxicidade, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou complicação, conforme determinado pelo perito na técnica.
[00106] As composições divulgadas podem estar em uma forma adequada para uso oral (por exemplo, tal como comprimidos, pastilhas, cápsulas duras ou moles, suspensões aquosas ou oleosas, emulsões, pós dispersíveis ou grânulos, xaropes ou elixires), para uso tópico (por exemplo, como cremes, pomadas, géis, ou soluções ou suspensões aquosas ou oleosas), para administração por inalação (por exemplo, como um pó finamente dividido ou um aerossol líquido), para administração por insuflação (por exemplo, como um pó finamente dividido) ou para administração parentérica (por exemplo,
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44/166 como uma solução aquosa ou oleosa estéril para dosagem intravenosa, subcutânea ou intramuscular ou como supositórío para dosagem retal).
[00107] As composições divulgadas podem ser obtidas por procedimentos convencionais usando excipientes farmacêuticos convencionais bem conhecidos na técnica. Desse modo, composições destinadas a uso oral podem conter, por exemplo, um ou mais agentes corantes, edulcorantes, aromatizantes e/ou conservantes.
[00108] Excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados para uma formulação em comprimido podem incluir, por exemplo, diluentes inertes, tais como lactose, carbonato de sódio, fosfato de cálcio ou carbonato de cálcio; agentes de granulação e desintegrantes, tais como amido de milho ou ácido algênico; agentes ligantes, tais como amido; agentes lubrificantes, tais como estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco; agentes conservantes, tais como p-hidroxibenzoato de etila ou propila; e antioxidantes, tais como ácido ascórbico. As formulações em comprimido podem ser não revestidas ou revestidas, para modificar a sua desintegração e subsequente absorção do ingrediente ativo dentro do trato gastrointestinal, ou para melhorar a sua estabilidade e/ou aparência usando agentes de revestimento convencionais e procedimentos bem conhecidos na técnica.
[00109] As composições para uso oral podem estar na forma de cápsulas de gelatina duras nas quais o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulim, ou como cápsulas de gelatina moles nas quais o ingrediente ativo está misturado com água ou óleo, tal como óleo de amendoim, parafina líquida ou azeite.
[00110] As suspensões aquosas podem conter o ingrediente ativo sob a forma de pó fino ou sob a forma de partículas nano ou micronizadas em conjunto com um ou mais agentes de suspensão,
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45/166 tais como carboximetilcelulose sódica, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, alginato de sódio, polivinil-pirrolldona, goma tragacanto e goma acácia; agentes dispersantes ou umectantes, tais como lecitina ou produtos de condensação de um oxido de alquileno com ácidos graxos (por exemplo, estearato de polioxetileno), ou produtos de condensação de óxido de etileno com álcoois alifáticos de cadeia longa, por exemplo, heptadecaetilenoxicetanol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados a partir de ácidos graxos e um hexitol, tais como mono-oleato de polioxietileno sorbitol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com álcoois alifáticos de cadeia longa, por exemplo, heptadecaetilenoxicetanol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados a partir de ácidos graxos e um hexitol, tais como mono-oleato de polioxietileno sorbitol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados a partir de ácidos graxos e anidridos de hexitol, por exemplo, monooleato de polietileno sorbitano. As suspensões aquosas também podem conter um ou mais conservantes, tais como p-hidroxibenzoato de etila ou propila; antioxidantes, tais como ácido ascórbico; agentes corantes; agentes aromatizantes, e/ou agentes edulcorantes, tais como sacarose, sacarina ou aspartame.
[00111] As suspensões oleosas podem ser formuladas suspendendo o ingrediente ativo em um óleo vegetal tal como óleo de amendoim, azeite, óleo de sésamo ou óleo de coco, ou em um óleo mineral tal como parafina líquida. As suspensões oleosas também podem conter um agente espessante, tal como cera de abelha, parafina dura ou álcool cetílico. Agentes edulcorantes e agentes aromatizantes podem ser adicionados para proporcionar uma preparação oral palatável. Essas composições podem ser conservadas através da adição de um antioxidante tal como ácido
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46/166 ascórbico.
[00112] Os pós dispersíveis e grânulos adequados para preparação de uma suspensão aquosa pela adição de água podem conter o ingrediente ativo conjuntamente com um agente dispersante ou umectante, agente de suspensão e um ou mais conservantes. Os agentes dispersantes ou umectantes e agentes de suspensão adequados são exemplificados por aqueles já mencionados acima. Excipientes adicionais, tais como agentes edulcorantes, aromatizantes e corantes, podem também estar presentes.
[00113] As composições farmacêuticas também podem estar na forma de emulsões óleo-em-água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, tal como azeite ou óleo de amendoim, ou um óleo mineral, tal como, por exemplo, parafina líquida ou uma mistura de qualquer desses. Os agentes emulsionantes adequados podem ser, por exemplo, gomas de ocorrência natural, tais como goma acácia ou goma tragacanto, fosfatídeos de ocorrência natural, tais como soja, lecitina, ésteres ou ésteres parciais derivados a partir de ácidos graxos e anidridos de hexitol (por exemplo, mono-oleato de sorbitano) e produtos de condensação dos referidos ésteres parciais com óxido de etileno, tais como mono-oleato de polioxietileno sorbitano. As emulsões também podem conter agentes edulcorantes, aromatizantes e conservantes.
[00114] Os xaropes e os elixires podem ser formulados com agentes edulcorantes, tais como glicerol, propilenoglicol, sorbitol, aspartame ou sacarose, e também podem conter um agente demulcente, conservante, aromatizante e/ou corante.
[00115] As composições farmacêuticas também podem estar na forma de uma solução injetável estéril em um ou mais sistemas tampão não tóxicos aquosos ou não aquosos parentericamente aceitáveis, diluentes, agentes solubilizantes, co-solventes ou
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47/166 portadores, tais como etanol, Soiutol HS15, PEG400, Tween 80, álcool benzílico, NN-dimetilacetamida, propilenoglicol, Cremophor,HP-p-CD, SBE-p-1865 ciclodextrina. Uma preparação injetável estéril também pode ser uma suspensão aquosa ou oleosa injetável estéril ou suspensão em um diluente, portador ou co-solvente não aquoso, que pode ser formulado de acordo com procedimentos conhecidos usando um ou mais dos agentes dispersantes ou umectantes apropriados e agentes de suspensão.
[00116] As composições farmacêuticas poderíam ser uma solução para injeção de bolus iv/infusão, dendrímero estéril para reconstituição com um sistema de tampão, ou um sistema liofilizado (quer apenas dendrímero ou com excipientes) para reconstituição com um sistema tampão com ou sem outros excipientes. O material seco a frio liofilizado pode ser preparado a partir de solventes não aquosos (por exempk), t-butanol, ou ácido acético) ou solventes aquosos. A forma de dosagem também podería ser um concentrado para diluição adicional para infusão subsequente.
[00117] As composições para administração por inalação podem estar na forma de um aerossol pressurizado convencional disposto de modo a fornecer o ingrediente ativo tanto como um aerossol contendo gotículas sólidas ou liquidas finamente divididas. Podem ser usados propulsores convencionais de aerossóis tais como hidrocarbonetos fluorados ou hidrocarbonetos voláteis, e o dispositivo de aerossol é convenientemente estruturado de modo a distribuir uma quantidade medida de ingrediente ativo.
[00118] A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com um ou mais excipientes para produzir uma única forma de dosagem irá necessariamente variar dependendo do hospedeiro tratado e da via particular de administração. Para informações adicionais sobre Vias de Administração e Regimes de Dosagem, se
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48/166 remete o leitor ao Capítulo 25.3 no Volume 5 de Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Presidente do Conselho Editorial), Pergamon Press 1990.
[00119] Os dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V) podem ser administrados uma, duas, três vezes ao dia ou tantas vezes, em um período de 24 horas, quanto o medicamente necessário. O perito na técnica será prontamente capaz de determinar a quantidade de cada dose individual com base no sujeito. Em algumas modalidades, os dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V) são administrados em uma forma de dosagem. Em algumas modalidades, os dendrímeros de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V) são administrados em múltiplas formas de dosagem.
Método de Uso [00120] Em um aspecto, são divulgados métodos para o tratamento de câncer em um sujeito necessitado do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00121] Em um aspecto, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso no tratamento de câncer.
[00122] Em um aspecto, é divulgado o uso de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na fabricação de um medicamento para o tratamento de um câncer.
[00123] Em um aspecto, são divulgadas composições farmacêuticas compreendendo um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso no tratamento de câncer.
[00124] O termo câncer inclui, mas não está limitado a,
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49/166 malignidades hematológicas (por exemplo, linfomas, leucemia) e sólidas. O termo câncer!i inclui, por exemplo, leucemias de células T, linfomas de células T, linfoma linfoblástico agudo (ALL), leucemia mielogênica aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma linfocítico pequeno (SLL), leucemia mielogênica crônica (CML), leucemia monocítica aguda (AML), mieloma múltiplo, linfoma de células do manto, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma de Burkitt, linfoma não-Hodgkin, linfoma folicular e tumores sólidos, por exemplo, câncer do pulmão de células não-pequenas (NSCLC, por ex., NSCLC mutante de EGF, NSCLC mutante de KRAS), câncer do pulmão de células pequenas (SCLC), câncer de mama, neuroblastoma, câncer do ovário, câncer da próstata, melanoma (por exemplo, melanoma mutante de BRAF, melanoma mutante de KRAS), câncer pancreático, câncer uterino, endometrial e do cólon (por exemplo,câncer do cólon mutante de KRAS, câncer do cólon mutante de BRAF).
[00125] Em um aspecto, são divulgados métodos para o tratamento de câncer em um sujeito necessitado do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de um segundo agente anticancerígeno, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00126] Em um aspecto, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de um segundo agente anticancerígeno, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso no tratamento de um câncer.
[00127] Em um aspecto, é divulgado o uso de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente
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50/166 aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de um agente anticancerígeno, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.
[00128] Em um aspecto, são divulgadas composições farmacêuticas compreendendo um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de um segundo agente anticancerígeno, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso no tratamento do câncer.
[00129] A linguagem em combinação com inclui administrar o dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e o agente anticancerígeno, osal farmaceuticamente aceitável do mesmo, sequencial, separada ou simultaneamente. Em alguns aspectos, o dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e o segundo agente anticancerígeno, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, podem ser administrados na mesma formulação, por exemplo, em uma formulação de dose fixa. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e o segundo agente anticancerígeno, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, podem ser administrados em formulações separadas, e são administrados substancialmente ao mesmo tempo, sequencialmente ou separadamente.
[00130] A linguagem agente anticancerígeno inclui, mas não está limitado a, radiação, agentes alquilantes, inibidores da angiogênese, anticorpos, conjugados anticorpo-fármaco, antimetabólitos, antimitóticos, antiproliferativos, antivirais, inibidores de aurora cinase, outros ativadores da morte celular (por exemplo, outros inibidores de
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Bcl-2, Bcl-xL, Bcl-w, Bfl-1 ou inibidores de Mei), ativadores de vias de receptores de morte (por exemplo, agonístas de FAS ou TRAIL), inibidores de Bcr-Abl cinase, inibidores de BET (bromodominio), anticorpos ΒΠΈ (Engajador Biespecífico de Células T), modificadores da resposta biológica, inibidores de cinase dependente de ciclina, inibidores do ciclo celular, inibidores de ciclo-oxigenase-2, DVDs (anticorpos de domínio variável dual), inibidores do receptor de homólogos do oncogene de leucemia viral (ErbB2), inibidores de fatores de crescimento, inibidores de EGFR, inibidores da proteína de choque térmico (HSP), inibidores de histona desacetilase (HDAC), terapias hormonais, imunológicos, inibidores dos inibidores de proteínas de apoptose (lAPs), antibióticos intercalares, inibidores de cinase, inibidores de cinesina, inibidores de Jak2, alvo de mamífero de inibidores da rapamicina (mTOR), inibidores de AKT, microRNAs, inibidores de cinase regulada pelo sinal extracelular ativado por mitógenos (MEK), inibidores de BRAF, proteínas de ligação multivalente, fármacos anti-inflamatórios não esteroides (NSAIDs), inibidores de poli ADP (adenosina difosfato)-ribose polimerase (PARP), quimioterápicos de piatina, inibidores de cinase tipo polo (Plk), inibidores de fosfoinositídeo~3 cinase, inibidores de proteossomo, análogos de purina, análogos de pirimidina, inibidores de tirosina cinase receptora, alcalóides vegetais etinoides/deltoides, pequenos ácidos ribonucleicos inibidores (siRNAs), compostos antiCD20, inibidores de topoisomerase e inibidores de ubiquitina ligase.
[00131] Os agentes alquilantes incluem altretamina, AMD-473, AP5280, apaziquona, bendamustina, brostalicina, bussulfano, cisplatina, carboplatina, carboquona, carmustina (BCNU), clorambucila, CLORETAZINE® (laromustina, VNP 40101M), ciclofosfamida, decarbazina, estramustina, fotemustina, glufosfamida, ifosfamida, KW2170, lomustina (CCNU), mafosfamida, melfalano, mitobronitol,
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52/166 mltolactol, nimustina, N-óxido de mostarda de nitrogênio, nitrosoureias, oxaliplatina, ranimustina, temozolomida, tiotepa, TREANDA® (bendamustina), treossulfano, rofosfamida e semelhantes.
[00132] Os inibidores da angiogênese incluem o receptor específico do endotélio, inibidores (Tie-2), inibidores do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), inibidores do receptor do fator de crescimento do tipo insulina-2 (IGFR-2), inibidores de metaloproteinase de matriz-2 (MMP-2), inibidores de metaloproteinase de matriz-9 (MMP-9), inibidores do receptor do fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGFR), análogos da trombospondina, inibidores da tlrosina cinase receptora do fator de crescimento vascular endotelial (VEGFR), inibidores de ALK e semelhantes.
[00133] Os antimetabólitos incluem ALIMTA® (pemetrexed dissódico, LY231514, MTA), 5-azacitidina, XELODA® (capecitabina), carmofur, LEUSTAT® (cladribina), clofarabina, citarabina, ocfosfato de citarabina, citosina arabinosídeo, decitabina, deferoxamina, doxifluridina, eflornitina, EICAR (5-etinil-1-p-D-rlbofuranosilimidazol-4carboxamida), enocitabina, etnilcitidina, fludarabina, 5-fluorouracila isoladamente ou em combinação com leucovorina, GEMZAR® (gemcitabina), hidroxiureia, ALKERAN® (melfalano), mercaptopurina, 6-mercaptopurina ribosídeo, metotrexato, ácido micofenólico, nelarabina, nolatrexed, ocfosfato, pelitrexol, pentostatina, pemextred, raltitrexed, Ribavirina, triapina, trimetrexato, S-1, tiazofurina, tegafur, TS-1, vidarabina, UFT e semelhantes.
[00134] Os inibidores de proteína Bcl-2 incluem ABT-199, AT-101 ((-)gossipol), GENASENSE® (G3139 ou oblimersen (oligonucleotídeo antissentido visando Bcl-2)), IPI-194, IPI-565, ABT-737, ABT-263, GX070 (obatoclax), AMG-176, S63645 e semelhantes.
[00135] Os compostos anti-CD20 incluem rituximab e obinutuzumab.
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53/166 [00136] Os inibidores de Btk incluem ibrutinib e acalabrutinib.
[00137] Os inibidores de bromodomínio incluem l-BET 762, OTX015, CPI-203, LY294002 e semelhantes.
[00138] Os inibidores de CDK incluem BMi-1040, BMS-032, BMS387, CVT-2584, flavopiridol, GPC-286199, MCS-5A, PD0332991, PHA-690509, seliciclib (CYC-202, R-roscovitina), ZK-304709, AZD4573 e semelhantes.
[00139] Os inibidores de EGFR incluem anticorpos para EGFR, ABX-EGF, imunolipossomos anti-EGFR, vacina de EGF, EMD-7200, ERBITUX® (cetuximab), HR3, anticorpos IgA, IRESSA® (gefitinib), TARCEVA® (erlotinib ou OSI-774), TP-38, proteína de fusão com EGFR, TYKERB® (lapatinib), TAGRISSO (AZD9291, osimertinlb) e semelhantes.
[00140] Os Inibidores de ALK Incluem crlzotinib, ceritinib e semelhantes.
[00141] Os inibidores de receptores ErbB2 incluem CP-724-714, CI1033 (canertinib), HERCEPTIN® (trastuzumab), TYKERB® (lapatinib), OMNITARG® (2C4, petuzumab), TAK-165, GW-572016 (ionafarnib), GW-282974, EKB-569, PI-166, dHER2 (vacina de HER2), APC-8024 (vacina de HER-2), anticorpo biespecifico anti~HER/2neu, B7.her2lgG3, anticorpos biespecificos bifuncionais AS HER2, mAB AR-209, mAB 2B-1 e semelhantes.
[00142] Os conjugados de fármaco e anticorpo incluem anti-CD22~ MC-MMAF, anti-CD22-MC-MMAE, anti-CD22-MCC-DM1, CR-011vcMMAE, PSMA-ADC (por ex., MEDI3726), MEDI-547, SGN-19Am SGN-35, SGN-75 e semelhantes.
[00143] Os inibidores da cinesina incluem inibidores de Eg5 tais como AZD4877, ARRY-520; Inibidores de CENPE tais como GSK923295A e semelhantes.
[00144] Os inibidores de MEK incluem trametinib (GSK1120212),
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54/166 binimetinib (MEK162), selumetinib (AZD6244), cobimetinib (XL518), ARRY-142886, ARRY-438162, PD-325901, PD-98059 e semelhantes. [00145] Os inibidores de BRAF incluem sorafenib, vemurafenib, dabrafenib, GDC-0879, LGX818 e semelhantes.
[00146] Os quimioterápicos de platina incluem cisplatina, ELOXATIN® (oxaliplatina) eptaplatina, lobaplatina, nedaplatina, PARAPLATIN® (carboplatina), satraplatina, picoplatina e semelhantes. [00147] Os inibidores de VEGFR incluem AVASTIN (bevacizumab), ABT-869, AEE-788, ANGIOZYME™ (um ribozima que inibe a angiogese (Ribozyme Pharmaceuticals (Boulder, Colo.) and Chiron, (Emeryville, Calif.)), axitinib (AG-13736), AZD-2171, CP-547,632, IM862, MACUGEN (pegaptamib), NEXAVAR® (sorafenib, BAY43-9006), pazopanib (GW-786034), vatalanib (PTK-787, ZK-222584), SUTENT® (sunitinib, SU-11248), retentor de VEGF, ZACTIMA™ (vandetanib, ZD6474), GA101, ofatumumab, ABT-806 (mAb-806), anticorpos específicos ErbB3, anticorpos específicos BSG2, anticorpos específicos DLL4 (por ex., MEDI0629) e anticorpos específicos C-met, e semelhantes.
[00148] Os inibidores de WEE1 incluem AZD1775 e semelhantes. [00149] Os antibióticos antitumorais incluem antibióticos intercaladores aclarubicina, actinomicina D, amrubicina, anamicina, adriamicina, BLENOXANE® (bleomicina), daunorrubicina, CAELYX® ou MYOCET® (doxorrubicina lipossômica), elsamitrucina, epirbucina, glarbuicina, ZAVEDOS® (idarrubicina), mitomicina C, nemorrubicina, neocarzinostatina, peplomicina, pirarrubicina, rebecamicina, estimalâmero, estreptozocina, VALSTAR® (valrubicina), zinostatina e semelhantes.
[00150] Os inibidores de mecanismos de reparo de DNA, tais como CHK cinase; inibidores da proteína cinase dependente de DNA; inibidores de poli(ADP-ribose) polimerase (inibidores de PARP)
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55/166 incluindo ABT-888 (vehparib), olaparib, KU-59436, AZD-2281, AG014699, BSI-201, BGP-15, INO-1001, ONO-2231 e semelhantes; e inibidores de Hsp90, tais como tanespimicina e retaspimicina.
[00151] Os inibidores de proteassomo incluem VELCADE® (bortezomib), KYPROLIS (carfilzomib), NINLARO (ixazomib), MG132, NPI-0052, PR-171 e semelhantes.
[00152] Os exemplos de imunológicos incluem interferons e outros agentes imunointensificadores. Os interferons incluem interferon alfa, interferon alfa~2a, interferon alfa~2b, interferon beta, interferon gamala, ACTIMMUNE® (interferon gama-1b) ou interferon gama-n1, combinações dos mesmos e semelhantes. Outros agentes incluem ALFAFERONE®, (IFN-α), BAM-002 (glutationa oxidada), BEROMUN® (tasonermina), BEXXAR® (tositumomab), CAMPATH® (alemtuzumab), decarbazina, denileucina, epratuzumab, GRANOCYTE® (lenograstim), lentinano, interferon alfa de leucócitos, imiquimod, MDX-010 (antiCTLA-4), vacina contra o melanoma, mitumomab, molgramostim, MYLOTARG™ (gemtuzumab ozogamicina), NEUPOGEN® (filgrastim), OncoVAC-CL, OVAREX® (oregovomab), pemtumomab (YmuHMFGI), PROVENGE® (sipuleucel-T), sargaramostim, sizofilano, teceleucina, THERACYS® (Bacilo Calmette-Guerin), ubenimex, VIRULIZIN® (imunoterápico, Lorus Pharmaceuticals), Z-100 (substância específica de Maruyama (SSM)), WF-10 (Tetraclorodecaóxido (TCDO)), PROLEUKIN® (aldesleucina), ZADAXIN® (timalfasina), ZENAPAX® (daclizumab), ZEVALIN® (de 90Y-ibritumomab tiuxetano) e semelhantes.
[00153] Análogos de pirimidina incluem citarabina (ara C ou Arabinosídeo C), citosina arabinosídeo, doxifluridina, FLUDARA® (fludarabina), 5-FU (5-fluorouracila), floxuridina, GEMZAR® (gemcitabina), TOMUDEX® (ratitrexed), TROXATYL™ (triacetiluridina troxacitabina) e semelhantes.
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56/166 [00154] Os agentes antimitóticos incluem batabulina, epotilona D (KOS-862), N”(2((4-hidroxifenil)amino)pindin“3“H)-4metoxibenzenossulfonamida, ixabepilona (BMS 247550), paclitaxel, TAXOTERE® (docetaxel), PNU100940 (109881), patupllona, XRP9881 (larotaxel), vinflunina, ZK-EPO (epotilona sintética) e semelhantes.
[00155] Adicionalmente, os dendrímeros de (I), (II), (III) e (IV) podem ser combinados com outros agentes quimioterápicos, tais como ABRAXANE™ (ABI-007), ABT-100 (inibidor de farnesil transferase), ADVEXIN® (vacina contra Ad5CMV-p53), ALTOCOR® ou MEVACOR® (lovastatina), AMPLIGEN® (poli kpoli C12U, um RNA sintético), APTOSYN® (exisulind), AREDIA® (ácido pamidrônico), arglabina, Lasparaginase, atamestano (1metil-3,17“diono-androsta-
I, 4-dieno), AVAGE® (tazaroteno), AVE-8062 (derivado de combreastatina) BEC2 (mitumomab), caquectina ou caquexina (fator de necrose tumoral), canvaxina (vacina), CEAVAC® (vacina do câncer), CELEUK® (celmoleucina), CEPLENE® (dicloridrato de histamina), CERVARIX® (vacina do papilomavírus humano), CHOP® (C: CYTOXAN® (ciclofosfamida); H: ADRIAMYCIN® (hidroxidoxorrubicina); O: Vincristina (ONCOVIN®); P: prednisona), CYPAT™ (acetato de ciproterona), combrestatina A4P, DAB(389)EGF (domínios catalítico e de translocação da toxina da difteria fundidos através de um ligante His-Ala ao fator de crescimento epidérmico humano) ou TransMID-107R™ (toxinas da difteria), dacarbazina, dactinomicina, ácido 5,6-dimetilxantenona~4~acético (DMXAA), eniluracila, EVIZON™ (lactato de esqualamina), DIMERICINE® (loção de lipossomo T4N5), discodermolida, DX~8951f (mesilato de exatecano), enzastaurina, EPO906 (epitilona B), GARDASIL® (vacina recombinante do vírus do papiloma humano quadrivalente (Tipos 6,
II, 16, 18», GASTRIMMUNE®, GENASENSE®, GMK (vacina de
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57/166 conjugado de gangliosídeo), GVAX® (vacina contra o câncer da próstata), halofuginona, histerellna, hidroxicarbamida, ácido ibandrônico, IGN-101, IL-13-PE38, IL-13-PE38QQR (cintredequina besudotox), exotoxina de pseudomonas IL-13, interferon-α, interferony, JUNOVAN™ ou MEPACT™ (mifamurtida), ionafarnib, 5,10metilenotetra-hidrofolato, miltefosina (hexadecilfosfocolina), NEOVASTAT® (AE-941), NEUTREXIN® (giucuronato de trimetrexato), NIPENT® (pentostatina), ONCONASE® (uma enzima ribonuclease), ONCOPHAGE® (tratamento com vacina de melanoma), ONCOVAX® (Vacina de IL-2), ORATHECIN™ (rubitecano), OSIDEM® (fármaco de células à base de anticorpo), MAb OVAREX® (anticorpo monoclonal murino), paclitaxel, PANDIMEX™ (saponinas aglicona de ginseng compreendendo 20(S)protopanaxadiol (aPPD) e 20(S)protopanaxatriol (aPPT)), panitumumab, PANVAC®-VF (vacina contra o câncer em pesquisa), pegaspargase, PEG Interferon A, fenoxodiol, procarbazina, rebimastat, REMOVAB® (catumaxomab), REVLIMID® (lenalidomida), RSR13 (efaproxiral), SOMATULINE® LA (lanreotlda), SORIATANE® (acitretina), estaurosporina (esta uros poros de Streptomyces), talabostat (PT100), TARGRETIN® (bexaroteno), TAXOPREXIN® (DHA-paclitaxel), TELCYTA® (canfosfamida, TLK286), temilifeno, TEMODAR® (temozolomida), tesmilifeno, talidomida, THERATOPE® (STn-KLH), timitaque (dicloridrato de 2-amino-3,4”di-hldro-6-metil-4oxo-5~(4-piridiltio)quinazolina), TNFERADE™ (adenovetor: portador de DNA contendo o gene para o fator de necrose tumoral-α), TRACLEER® ou ZAVESCA® (bosentano), tretinoína (Retina-A), tetrandrina, TRISENOX® (trióxido de arsênio), VIRULIZIN®, ukrain (derivado de alcalóides da planta celidônia maior), vitaxina (anticorpo anti-alfavbeta3), XCYTRIN® (gadolínio de motexafin), XINLAY™ (atrasentano), XYOTAX™ (paclitaxel poliglumex), YONDELIS® (trabectedina), ZD-6126, ZINECARD® (dexrazoxano), ZOMETA®
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58/166 (ácido zolendrônico), zorrubícína e semelhantes.
[00156] Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de câncer compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de osimertinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é divulgado um método de tratamento de câncer do pulmão compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de osimertinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é divulgado um método de tratamento de EGFR T790M+ NSCLC compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de osimertinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é divulgado um método de tratamento de PTEN NSCLC compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de osimertinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de câncer em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal
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59/166 farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) osimertinib, ou urn sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de câncer do pulmão em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) osimertinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de EGFR T790M+ NSCLC em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do I) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) osimertinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de PTEN NSCLC em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) osimertinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado osimertinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de câncer em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) osimertinib ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é
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60/166 divulgado osimertinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de câncer do pulmão em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) osimertinib ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado osimertinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de EGFR T790M+ NSCLC em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) osimertinib ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado osimertinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de PTEN NSCLC em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) osimertinib ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e li) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito.
[00157] Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de câncer compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de acalabrutinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de linfoma compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do
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61/166 mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de acalabrutinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de linfoma não de Hodgkin compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de acalabrutinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de DLBCL compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de acalabrutinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de DLBCL ativado por células B (ABC-DLBCL) compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de acalabrutinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de DLBCL sensível a BTK e não sensível a BTK compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de acalabrutinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é divulgado um método de tratamento de OCI-LY10 DLBCL compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero
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62/166 de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de acalabrutinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de MCL compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de acalabrutinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de leucemia compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de acalabrutinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de CLL compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de acalabrutinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de AML compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de acalabrutinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer em um sujeito, em que o referido tratamento
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63/166 compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) acalabrutinib ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I) , (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de linfoma não de Hodgkin em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) acalabrutinib ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de DLBCL em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) acaiabrutinib ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de DLBCL ativado por células B (ABC-DLBCL) em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II) , (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) acalabrutinib ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitávei do mesmo, para tratamento de DLBCL sensível a BTK e não sensível a BTK em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) acalabrutinib ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de
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64/166 fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de OCI-LYIO DLBCL em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do I) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) acalabrutinib ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de MCL em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do I) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) acalabrutinib ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de leucemina em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) acalabrutinib ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de CLL em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) acalabrutinib ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de AML em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) acalabrutinib ao
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65/166 referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado acalabrutinib, para o tratamento de câncer em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) acalabrutinib e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado acalabrutinib, para o tratamento de DLBCL em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) acalabrutinib e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado acalabrutinib, para o tratamento de DLBCL ativado por células B (ABC-DLBCL) em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) acalabrutinib e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado acalabrutinib, para o tratamento de DLBCL sensível a BTK e não sensível a BTK em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) acalabrutinib e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado acalabrutinib, para o tratamento de OCI-LY10 DLBCL em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) acalabrutinib e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado acalabrutinib, para o tratamento de MCL em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) acalabrutinib e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal
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66/166 farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado acalabrutinib, para o tratamento de leucemia em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) acalabrutinib e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado acalabrutinib, para o tratamento de CLL em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) acalabrutinib e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado acalabrutinib, para o tratamento de AML em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) acalabrutinib e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito.
[00158] Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de câncer compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de rituximab, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de linfoma compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de rituximab, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de linfoma não de Hodgkin compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do
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67/166 mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de rituximab, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de DLBCL compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de rituximab, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de DLBCL ativado por células B de centro germinal (GCB-DLBCL) compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de rituximab, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de leucemia compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de rituximab, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de CLL compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de rituximab, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de AML compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do
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68/166 mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de rituximab, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00159] Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) rituximab ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de linfoma em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) rituximab ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de linfoma não de Hodgkin em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) rituximab ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de DLBCL em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) rituximab ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um
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69/166 dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de DLBCL ativado por células B de centro germinal (GCB-DLBCL) em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e li) rituximab ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de leucemia em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) rituximab ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de CLL em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) rituximab ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de AML em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do I) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) rituximab ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado rituximab, para o tratamento de câncer em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) rituximab e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado rituximab, para o tratamento de
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70/166 linfoma em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) rituximab e li) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado rituximab, para o tratamento de não Hodgkin em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) rituximab e li) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado rituximab, para o tratamento de DLBCL em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) rituximab e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado rituximab, para o tratamento de DLBCL ativado por células B de centro germinal (GCB-DLBCL) em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) rituximab e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado rituximab, para o tratamento de leucemia em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) rituximab e li) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado rituximab, para o tratamento de CLL em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) rituximab e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado rituximab, para o tratamento de AML em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) rituximab e il) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ao referido sujeito.
[00160] Em uma modalidade, são divulgados métodos de tratamento de câncer compreendendo a administração, a um sujeito
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71/166 com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de gefitinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, são divulgados métodos de tratamento de tumores sólidos compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de gefitinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de NSCLC compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de gefitinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de NSCLC positivo quanto a mutações EGFR compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de gefitinib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um método de tratamento de câncer do pulmão de células não pequenas positivo quanto a mutações EGFR cujos tumores têm deleções de éxon 19 ou mutações de substituição de éxon 21 (L858R) compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de gefitinib, ou
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72/166 um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) gefitinib ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de tumores sólidos em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) gefitinib ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de NSCLC positivo quanto a mutação EGFR em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) gefitinib ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer do pulmão de células não pequenas positivo quanto a mutações EGFR cujos tumores têm deleções de éxon 19 ou mutações de substituição de éxon 21 (L858R) em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) gefitinib ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado gefitinib, para o tratamento de câncer em um sujeito, em que o referido tratamento
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73/166 compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) gefitinib e ií) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado gefitinib, para o tratamento de tumores sóiidos em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de I) gefitinib e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado gefitinib, para o tratamento de NSCLC em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) gefitinib e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado gefitinib, para o tratamento de NSCLC positivo quanto a mutação EGFR em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) gefitinib e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado gefitinib, para o tratamento de s em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) gefitinib e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito.
[00161] Em uma modalidade, são divulgados métodos de tratamento de câncer compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, são divulgados métodos de
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74/166 tratamento de tumores sólidos compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, são divulgados métodos de tratamento de câncer do ovário compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, são divulgados métodos de tratamento de câncer do ovário mutado por BRCA compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, são divulgados métodos de tratamento de câncer do ovário epitelial compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, são divulgados métodos de tratamento de câncer da trompa de falópio compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade,
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75/166 são divulgados métodos de tratamento de câncer peritoneal primário compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de tumores sólidos em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de câncer do ovário em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de câncer do ovário mutado por BRCA em um sujeito, em
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76/166 que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de câncer do ovário epitelial em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de câncer das trompas de falópio em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de câncer peritoneal primário em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) olaparib ou um sal farmaceuticamente
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77/166 aceitável do mesmo, e ii) um dendrímero de fórmula (i), (II), (ill), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de tumores sólidos em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) olaparib ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) um dendrímero de fórmuia (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer do ovário em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) olaparib ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer do ovário mutado por BRCA em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) olaparib ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer do ovário epiteieai em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) olaparib ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer das trompas de falópio
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78/166 em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) olaparib ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado olaparib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer peritoneal primário em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de I) olaparib ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito.
[00162] Em uma modalidade, são divulgados métodos de tratamento de câncer compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de um inibidor de mTOR, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, são divulgados métodos de tratamento de câncer do pulmão de células pequenas compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de um inibidor de mTOR, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) inibidor de mTOR, ou
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79/166 um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV) , ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer do pulmão de células pequenas em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) inibidor de mTOR, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um inibidor de mTOR, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) inibidor de mTOR, e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um inibidor de mTOR, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer do pulmão de células pequenas em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) inibidor de mTOR, e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em qualquer das modalidades anteriores, o inibidor de mTOR é AZD2014.
[00163] Em uma modalidade, são divulgados métodos de tratamento de câncer compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de um vistusertib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, são divulgados métodos de tratamento de câncer do pulmão de células pequenas compreendendo
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80/166 a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de vistusertib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de câncer em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do I) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) vistusertib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de câncer do pulmão de células pequenas em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) vistusertib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado vistusertib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de I) vistusertib ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado vistusertib, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer do pulmão de células pequenas em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea de i) vistusertib ou
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81/166 um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito.
[00164] Em uma modalidade, sâo divulgados métodos de tratamento de câncer compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de quimioterapia {por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina). Em uma modalidade, são divulgados métodos de tratamento de tumores sólidos compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina). Em uma modalidade, são divulgados métodos de tratamento de NSCLC compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina). Em uma modalidade, são divulgados métodos de tratamento de câncer SCLC compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de quimioterapia {porex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina). Em uma modalidade, são divulgados métodos de tratamento de câncer da mama
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82/166 compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina). Em uma modalidade, são divulgados métodos de tratamento de câncer ovariano compreendendo a administração, a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade eficaz de quimioterapia (porex, topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina).
[00165] Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de câncer em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de tumores sólidos em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de NSCLC em um sujeito, em
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83/166 que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (li), (ill), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de SCLC em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de câncer da mama em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de câncer ovarianoi em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea do i) dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ii) quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgada quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) para tratamento de câncer em um sujeito, em que o referido
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84/166 tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea da i) quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgada quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) para tratamento de tumores sólidos em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea da i) quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgada quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) para tratamento de NSCLC em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea da I) quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgada quimioterapia (porex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) para tratamento de SCLC em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea da i) quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgada quimioterapia (porex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) para tratamento de câncer da mama em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea da i)
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85/166 quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) e ii) um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito. Em uma modalidade, é divulgada quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) para tratamento de câncer ovariano em um sujeito, em que o referido tratamento compreende a administração separada, sequencial ou simultânea da i) quimioterapia (por ex., topotecano, pemetreved, paclitaxel, etopósido e/ou carboplatina) e ii) um dendrímero de fórmula (I) , (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao referido sujeito.
[00166] Em um aspecto, são divulgados métodos para a inibição de Bci-2 e/ou Bcl-XL em um sujeito necessitado do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00167] Em um aspecto, é divulgado um dendrímero de fórmula (I), (II) , (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso na inibição de Bcl-2 e/ou Bcl-XL.
[00168] Em um aspecto, é divulgado o uso de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV) e (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na fabricação de um medicamento para a Inibição de Bcl-2 e/ou Bcl-XL.
[00169] Em um aspecto, são divulgadas composições farmacêuticas compreendendo um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso na Inibição de Bcl-2 e/ou Bcl-XL.
[00170] O termo Bcl-2 se refere a células linfoma de B 2 e o termo Bcl-XL se refere a células linfoma B extra-grande, membros antiapoptóticos da família Bcl-2 de proteínas.
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86/166 [00171] A linguagem quantidade eficaz inclui uma quantidade de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou um segundo agente anticancerígeno que induz uma resposta biológica ou médica em um sujeito, por exemplo, a redução ou inibição da atividade enzimática ou proteica relacionada com Bcl-2 e/ou Bcl-XL ou câncer: melhoria dos sintomas de câncer; ou a desaceleração ou atraso da progressão do câncer. Em algumas modalidades, a linguagem quantidade eficaz inclui a quantidade de um dendrímero de fórmula (I), (II), (HI), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou um segundo agente anticancerígeno, que quando administrada a um sujeito, é eficaz para, pelo menos parcialmente, aliviar, inibir e/ou melhorar câncer ou inibir Mcl-2 e/ou Bcl-XL, e/ou reduzir ou inibir o crescimento de um tumor ou a proliferação de células cancerígenas em um sujeito.
[00172] Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser entre cerca de 1 e cerca de 500 mg/kg. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser entre cerca de 10 e cerca de 300 mg/kg. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser entre cerca de 10 e cerca de 100 mg/kg. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser entre cerca de 10 e cerca de 60 mg/kg. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um dendrímero divulgado de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser entre cerca de
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87/166 e cerca de 30 mg/kg. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), pode ser cerca de 20 a cerca de 100 mg/kg. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser cerca de 10 mg/kg, cerca de 30 mg/kg, cerca de 40 mg/kg, cerca de 50 mg/kg, cerca de 60 mg/kg, cerca de 70 mg/kg, cerca de 80 mg/kg, cerca de 90 mg/kg, cerca de 100 mg/kg, cerca de 300 mg/kg ou cerca de 145 mg/kg.
[00173] O dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV) ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser concebido de modo a liberar o agente ativo dos grupos funcionais de superfície do dendrímero. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV) ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, libera uma quantidade eficaz do Composto A. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV) ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode liberar entre cerca de 1 mg/kg e cerca de 150 mg/kg do composto A. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV) ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode liberar entre cerca de 1 mg/kg e cerca de 90 mg/kg do Composto A. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode liberar entre cerca de 1 mg/kg e cerca de 25 mg/kg do composto A. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode liberar entre cerca de 1 mg/kg e cerca de 15 mg/kg do composto A. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV) ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode liberar entre cerca de 1 e cerca de 10 mg do Composto A. Em algumas modalidades, o
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88/166 dendrímero de fórmula (I), (lí), (III), (IV) ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode liberar entre cerca de 5 e cerca de 30 mg/kg do Composto A. Em algumas modalidades, o dendrímero de fórmula (I), (II), (III), (IV) ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode liberar cerca de 3 mg/kg, cerca de 4 mg/kg, cerca de 5 mg/kg, cerca de 6 mg/kg, cerca de 7 mg/kg, cerca de 8mg/kg, cerca de 9 mg/kg, cerca de 10 mg/kg, cerca de 11 mg/kg, cerca de 12 mg/kg, cerca de 13 mg/kg, cerca de 14 mg/kg, cerca de 15 mg/kg, cerca de 16 mg/kg, cerca de 17 mg/kg, cerca de 18 mg/kg, cerca de 19 mg/kg, cerca de 20 mg/kg, cerca de 21 mg/kg, cerca de 22 mg/kg, cerca de 23 mg/kg, cerca de 24 mg/kg, cerca de 25 mg/kg, cerca de 26 mg/kg, cerca de 27 mg/kg, cerca de 28 mg/kg, cerca de 29 mg/kg, cerca de 87 mg/kg ou cerca de 145 mg/kg do Composto A.
[00174] Em algumas modalidades, o Composto A pode ter uma semivida de liberação (porex., o tempo que leva metade do Composto A a ser liberado a partir do dendrímero) entre cerca de 1 hora e cerca de 360 horas. Em algumas modalidades, o Composto A pode ter uma semivida de liberação entre cerca de 2 horas e cerca de 72 horas. Em algumas modalidades, o Composto A pode ter uma semivida de liberação entre cerca de 5 horas e cerca de 36 horas. Em algumas modalidades, o Composto A pode ter uma semivida de liberação entre cerca de 12 horas e cerca de 30 horas. Em algumas modalidades, o Composto A pode ter uma semivida de liberação entre cerca de 16 horas e cerca de 30 horas. Em algumas modalidades, a meia-vida de liberação é determinada a pH 7,4 em tampão PBS com DMA a 10%, a 37°C. Em algumas modalidades, a semivida de liberação é determinada a pH 4,5 em ácido cítrico a 0,1 M a 37°C. Um especialista na técnica pode determinar a taxa de liberação do Composto A in vitro seguindo os protocolos estabelecidos nos Exemplos 11, 12 e no
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Exemplo 14.
[00175] Em algumas modalidades, a semivida de liberação in vitro é determinada a pH 7,4 em tampão PBS com DMA a 10%, a 37°C, conforme descrito no Exemplo 11. Em algumas modalidades, entre cerca de 20 e cerca de 80% do Composto A é liberado após cerca de 6 horas a pH 7,4 em tampão PBS com DMA a 10%, a 37°C. Em algumas modalidades, cerca de 80% do Composto A é liberado após cerca de 6,5 horas a pH 7,4 em tampão PBS com DMA a 10% a 37°C. Em algumas modalidades, cerca de 50% do Composto A é liberado após cerca de 6,5 horas a pH 7,4 em tampão PBS com DMA a 10% a 37°C. Em algumas modalidades, cerca de 6% do Composto A é liberado após cerca de 6,5 horas a pH 7,4 em tampão PBS com DMA a 10% a 37°C. Em algumas modalidades, cerca de 4% do Composto A é liberado após cerca de 6,5 horas a pH 7,4 em tampão PBS com DMA a 10% a 37°C. Em algumas modalidades, cerca de 24% do Composto A é liberado após cerca de 6 horas a pH 7,4 em tampão PBS com DMA a 10% a 37°C.
[00176] Em algumas modalidades, a semivida de liberação in vitro é determinada a pH 4,5 em ácido cítrico a 0,1M a 37°C, conforme descrito no Exemplo 12. Em algumas modalidades, entre cerca de 3 e cerca de 80% do Composto A é liberado após cerca de 7 dias a pH 4,5 em ácido cítrico a 0,1M a 37°C. Em algumas modalidades, cerca de 63% do Composto A é liberado após cerca de 7 dias a pH 4,5 em ácido cítrico a 0,1 M a 37°C. Em algumas modalidades, cerca de 30% do Composto A é liberado após cerca de 7 dias a pH 4,5 em ácido cítrico a 0,1M a 37°C. Em algumas modalidades, cerca de 3,6% do Composto A é liberado após cerca de 7 dias a pH 4,5 em ácido cítrico a 0,1 M a 37°C. Em algumas modalidades, cerca de 81% do Composto A é liberado após cerca de 7 dias a pH 4,5 em ácido cítrico a 0,1 M a 37°C.
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90/166 [00177] Em algumas modalidades, a solubilidade do dendrímero pode ser medida seguindo os protocolos estabelecidos nos Exemplos 15 e 16. Em algumas modalidades, a solubilidade do dendrímero a pH
7,4 em tampão de PBS com DMA a 10% está entre cerca de 120 e 160 mg/mL. Em algumas modalidades, a solubilidade do dendrímero a pH 7,4 em tampão de PBS com DMA a 10% é cerca de 125 mg/mL. Em algumas modalidades, a solubilidade do dendrímero a pH 7,4 em tampão de PBS com DMA a 10% é cerca de 153 mg/mL. Em algumas modalidades, a solubilidade do dendrímero a pH 7,4 em tampão de PBS com DMA a 10% é cerca de 142 mg/mL. Em algumas modalidades, a solubilidade do dendrímero a pH 7,4 em tampão de PBS com DMA a 10% é cerca de 158 mg/mL.
[00178] Em algumas modalidades, a solubilidade do dendrímero a pH 4,5 em ácido cítrico a 0,1M está entre cerca de 120 e 166 mg/mL. Em algumas modalidades, a solubilidade do dendrímero a pH 4,5 em ácido cítrico a 0,1M é cerca de 162 mg/mL. Em algumas modalidades, a solubilidade do dendrímero a pH 4,5 em ácido cítrico a 0,1M é cerca de 141 mg/mL. Em algumas modalidades, a solubilidade do dendrímero a pH 4,5 em ácido cítrico a 0,1M é cerca de 157 mg/mL. Em algumas modalidades, a solubilidade do dendrímero a pH 4,5 em ácido cítrico a 0,1M é cerca de 121 mg/mL.
[00179] Em algumas modalidades, a solubilidade do dendrímero em tampão de Mcllvane a pH 4 é cerca de 0,189 g/g. Em algumas modalidades, a solubilidade do dendrímero em tampão de Mcllvane a pH 5 é cerca de 0,224 g/g.
[00180] O termo sujeito inclui mamíferos de sangue quente, por exemplo, primatas, cães, gatos, coelhos, ratos e camundongos. Em algumas modalidades, o sujeito é um primata, por exemplo, um ser humano. Em algumas modalidades, o sujeito está sofrendo de câncer ou de um distúrbio imune. Em algumas modalidades, o sujeito está
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91/166 necessitado de tratamento (por ex., o sujeito irá beneficiar, biológica ou medicamente, de tratamento). Em algumas modalidades, o sujeito está sofrendo de câncer. Em algumas modalidades, o sujeito está sofrendo de um câncer positivo quanto a EGFR-M (porex., câncer do pulmão de células não pequenas). Em algumas modalidades, o câncer positivo quanto a EGFR-M tem uma mutação predominantemente positiva para T790M. Em algumas modalidades, o câncer positivo quanto a EGFR-M tem uma mutação predominantemente negativa para T790M. Em algumas modalidades, o sujeito está sofrendo de malignidade hematológica (porex., linfomas, leucemia) ou sólida, tal como, por exemplo, linfoma linfoblástico agudo (ALL), leucemia mielogênica aguda (LMA), leucemia linfocítica crônica (LLC), linfoma linfocítico (SLL), leucemia mieloide crônica (CML), leucemia monocítica aguda (AMoL), mieloma múltiplo, linfoma de células do manto, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma de Burkitt, linfoma não Hodgkin, linfoma folicular e tumores sólidos, por exemplo, câncer do pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer do pulmão de pequenas células (CPPC), câncer da mama, neuroblastoma, câncer da próstata, melanoma, câncer pancreático, uterino, endometrial e do cólon.
[00181] A linguagem inibir, inibição” ou inibindo inclui um decréscimo da atividade de base de uma atividade ou processo biológico. Em algumas modalidades, os dendrímeros de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) Inibem Bcl-2 e/ou Bcl-XL.
[00182] A linguagem tratar, tratando e tratamento inclui a redução ou inibição da atividade enzimática ou proteica relacionada com Bcl-2 e/ou Bcl-XL ou câncer em um sujeito, melhoria de um ou mais sintomas de câncer em um sujeito ou o abrandamento ou retardamento da progressão de câncer em um sujeito. A linguagem tratar, tratando e tratamento também inclui a redução ou inibição
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92/166 do crescimento de um tumor ou proliferação de células cancerígenas em um sujeito.
Exemplos [00183] Aspectos da presente divulgação podem ser adicionalmente definidos por referência aos seguintes exemplos não limitativos, os quais descrevem em detalhe a preparação de determinados compostos e intermediários da presente divulgação e métodos para o uso dos compostos da presente divulgação. Será aparente para os peritos na técnica que muitas modificações, tanto nos materiais como nos métodos, podem ser praticadas sem abandonar o escopo da presente revelação.
[00184] A menos que afirmado em contrário:
[00185] (i) todas as sínteses foram realizadas à temperatura ambiente, isto é, na faixa de 17 a 25 °C, e sob uma atmosfera de um gás inerte, tal como nitrogênio, salvo indicação em contrário;
[00186] (ii) as evaporações foram realizadas por evaporação rotativa sob pressão reduzida, usando equipamento de Buchi ou Heidolph;
[00187] (iii) a liofilização foi realizada usando um sistema de liofilização Labconco FreeZone 6 Plus;
[00188] (iv) as purificações por cromatografia por exclusão por tamanho foram realizadas usando colunas embaladas com esferas Sephadex LH-20;
[00189] (v) a cromatografia preparativa foi realizada em um sistema
Gilson Prep GX-271 com coleta acionada por UV, usando uma coluna Waters XBridge BEH C18 (5 μΜ, 30 x 150 mm);
[00190] (vi) as purificações por ultrafiltraçâo foram realizadas usando um sistema de acionamento de bomba de engrenagem ColeParmer ligado a uma cassete de membrana (Merck Millipore Pellicon 3, 0,11 m2, 10 kDa).
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93/166 [00191] (vii) a cromatografia analítica foi realizada em um Módulo de Separação Waters Alliance 2695 com detecção de PDA;
[00192] (viii) os rendimentos, quando presentes, não são necessariamente os máximos alcançáveis;
[00193] (ix) em geral, as estruturas dos produtos finais dos dendrímeros foram confirmadas por espectroscopia RMN; os valores dos desvios químicos de RMN 1H e 19F foram medidos na escala delta [os espectros de ressonância magnética de prótons foram determinados usando um instrumento Bruker Avance 300 (300 MHz)]; as medições foram realizadas à temperatura ambiente salvo indicação em contrário; RMN 1H usa o solvente como pico residual como o padrão interno e as seguintes abreviaturas: s, singleto; d, dupleto; t, tripleto; q, quarteto; m, multipleto; dd, dupleto de dupletos; ddd, dupleto de dupletos de dupletos; dt, dupleto de tripletos; br s, sinal largo.
[00194] (x) em geral, os produtos finais de dendrímero também foram caracterizados por HPLC, usando um Módulo de Separação Waters Alliance 2695 com detecção de PDA, ligado a uma Coluna Waters XBridge C8 (3,5 pm, 3 x 100 mm) ou a uma Coluna Phenomenex Aeris C8 (3,6 pm, 2,1 x de 100 mm);
[00195] (xi) a pureza intermédia foi avaliada por espectroscopia de massa após cromatografia líquida (LC-MS); usando um UPLC Waters equipado com um espectrômetro de massa Waters SQ (Temp, da coluna 40 °C, UV “ 220-300 nm ou 190-400 nm, Espec. de Massa ™ ESI com troca positivo/negativo) a uma taxa de fluxo de 1 mL/min usando um sistema solvente de 97% de A + 3% de B até 3% de A + 97% de B ao longo de 1,50 min (tempo de processamento total com equilibração de novo para as condições de partida, etc., 1,70 min), em que A = ácido fórmico a 0,1% ou ácido trifluoroacético a 0,05% em água (para manipulação acídica) ou hidróxido de amônio a 0,1% em água (para manipulação básica) e B ™ acetonitrila. Para a análise
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94/166 acídica, a coluna usada foi uma Waters Acquity HSS T3 (1,8 pm, 2,1 x 50 mm), para a análise básica, a coluna usada foi uma Waters Acquity BEH C18 (1,7 pm, 2,1 x 50 mm). Alternativamente, UPLC foi realizada usando um UPLC Waters equipado com um espectrômetro de massa Waters SQ (Temp, da coluna 30 °C, UV = 210-400 nm, Espec. de Massa ™ ESI com troca positivo/negativo) a uma taxa de fluxo de 1 mL/min usando um gradiente de solvente de 2 até 98% de B ao longo de 1,5 min (tempo de processamento total com equilibração de novo para as condições de partida 2 min), em que A = ácido fórmico a 0,1% em água eB = ácido fórmico a 0,1% em acetonitrila (para manipulação acídica) ou A = hidróxido de amônio a 0,1% em água e B = acetonitrila (para manipulação básica). Para a análise acídica, a coluna usada foi uma Waters Acquity HSS T3 (1,8 pm, 2,1 x 30 mm), para a análise básica, a coluna usada foi uma Waters Acquity BEH C18 (1,7 pm, 2,1 x 30 mm): O íon molecular relatado corresponde a [M+H]+ a menos que especificado em contrário; para moléculas com múltiplos padrões isotópicos (Br, Cl, etc.), o valor relatado é o obtido com a intensidade mais elevada, a menos que especificado de outro modo.
[00196] ACN (xi) foram usadas as seguintes abreviaturas: acetonitrila
BHA Benzidrilamina
BOC terc-butiloxicarbonila
CoA Certificado de Análise
DGA Ácido diglicólico
DIPEA Di-isopropiletilamina
DMF Dimetilformamida
DMSO Dimetilsulfóxido
FBA Ácido 4-fluorobenzoico
Glu Glutárico
ΗΡ-β-CD hidroxipropil-beta-ciclodextrina
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MeOH
MIDA
MSA
MTBE
Metanol
Ácido metiliminodiacético
Ácido metanossulfonico
Éter de metil tert-butila
MW
Peso molecular
NMM
N-Metilmorfoiina
PBS
PEG
PTFE
Salina tamponada com fosfato
Polietilenoglicol
Politetrafluoroetileno
PyBOP oxitripirrolidinofosfônio
QS/qs Quantum sufficit (o montante que é necessário) SBE-p-CD Éter sulfobutíiico de beta-ciclodextrina (Captisol®) TDA
Hexafl uorofosfato de benzotriazol-1-il~
TFA
WFI
Ácido tiodiglicólico
Ácido trifluoroacético
Água para injeção WFI
Tal como usado nos Exemplos, o termo BHALys se refere ligada à lisina. BHA tem a [00197] a 2,6-diamino-N-benzidril-hexanamida estrutura:
Figure BR112019016409A2_D0061
em que * indica uma ligação covalente aos blocos de construção lisina. O termo Lys se refere às unidades de construção dendrímero e tem a estrutura:
de do
H
N.
NH em que # indica ligação covalente a uma porção amina de BHALys ou
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96/166 uma porção amino de uma unidade de construção Lys, e + indica uma ligação covalente a uma porção carbonila de uma unidade de construção Lys ou uma ligação covalente a PEG ou ao ligante ligado ao agente ativo.
[00198] Por conveniência, apenas a geração de superfície das unidades de construção nos dendrímeros dos Exemplos está incluída no nome do dendrímero. Adicionalmente, o símbolo φ no nome se refere ao número teórico de grupos ε-amino disponíveis para conjugação com PEG e o símbolo f no nome se refere ao número teórico de grupos α-amino no dendrímero disponível para conjugação com o ligante ligado ao agente ativo, respectivamente. Como um exemplo, o nome ,!BHALys[Lys]32f[a“TDA~Composto A]32[e~PEG2ioo, 2200W se refere a um dendrímero de quinta geração com núcleo BHALys, unidades de construção Lys na (quinta) camada superficial, aproximadamente 32 Composto A conjugados com os grupos a-amino das unidades de construção de superfície Lys com ligantes de ácido tiodiacético, aproximadamente 32 grupos PEG com peso molecular médio entre 2100 e 2200 conjugado com os grupos e-amino das unidades de construção de superfície de Lys.
Exemplo 1: Propriedades físico-químicas de 4~(4-((R)H’ clorobifenil2il)(hidróxí)metil)piperidin-1il)/V”(4~((R)“4“((2 hidróxietil)(metil)amino)~1”(feniltio)butan~2~ilamino)“3“ (trifluorometilsulfoml)femlsulfoníl)benzamida (Composto A)
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Figure BR112019016409A2_D0062
(Composto A) [00199] A síntese do Composto A é encontrada na Patente dos
E.U.A. N°. 9,018,381.
Preparação do Composto A, Forma B [00200] Uma suspensão de Composto A em bruto (900 g) em DMSO (450 mL) e Etanol (2.250 mL) foi agitada a 50 °C até se atingir uma solução. A solução foi passada através de um filtro em linha e aquecida até 60°C. Antissolvente de etanol (2.700 mL) foi adicionado à solução ao longo de 35 minutos. Uma vez completada a adição, a solução foi arrefecida até 50°C, semeada com a Forma B do Composto A (18 g) e agitada a 50°C durante 18 horas. O lote foi então arrefecido até 20°C em uma rampa linear ao longo de 17,5 horas e mantido a 20°C durante 4,5 horas adicionais. O sólido resultante foi coletado por filtração, lavado com 2 porções de etanol (1.350 mL e 1.350 mL). O sólido resultante foi seco na estufa (40°C, 5 mbar) para proporcionar a Forma B do Composto A (764 g, 81,49% de rendimento). Um difractograma XRPD para forma B do Composto A é fornecido na Figura 2.
Solubilidade [00201] O Composto A tem uma solubilidade aquosa muito baixa, conforme ilustrado pelos dados apresentados na Tabela 1. A solubilidade é baixa ao longo do intervalo de pH fisiológico de pH 4-9.
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A Forma B é a forma cristalina mais estável do Composto A encontrada até à data e essa forma tem fracas características de umidificação e de dissolução. A pesquisa do sal foi realizada com o objetivo de encontrar um sal com cinética de dissolução melhorada, mas não foi identificada uma forma de sal cristalina.
[00202] A solubilidade do Composto A (Forma B) foi determinada em água e propilenoglicol. A solubilidade foi determinada usando um método de balão de agitação, permitindo que a substância de fármaco se equilibrasse à temperatura ambiente durante 24 horas, com alguma sedimentação nos recipientes apresentando a presença de substância de fármaco em excesso. As soluções foram centrifugadas com ultra centrífuga ao longo de 30 min a 40.000 rpm, o sobrenadante foi transferido para um novo tubo de centrífuga e centrifugado por mais 30 min a 40.000 rpm. O sobrenadante de propilenoglicol foi então ensaiado usando um método de UV-HPLC. O sobrenadante de água foi ultra-centrifugado por uma terceira vez antes do ensaio. Os resultados estão reportados na Tabela 1.
Tabela 1. Dados de Solubilidade da Forma B cristalina do Composto A
Solvente pH final Solubilidade (mg/mL)
Água 8,7 <1 pg/ml*
Propilenoglicol 6,12 mg/ml
[00203] Medir com precisão a solubilidade do Composto A em água é um desafio significativo devido às seguintes razões:
[00204] A solubilidade é extremamente baixa e quando as soluções são transferidas a partir de recipientes de centrifugação para recipientes de pipetas/LC etc., é provável que algum Composto A seja perdido devido à ligação a componentes de vidro/plástico.
[00205] O Composto A é sensível à luz e a uma concentração tão baixa, a taxa de degradação da luz se torna significativa. Embora tenham sido feitos esforços para minimizar a quantidade de luz à qual a solução aquosa foi exposta, uma pequena quantidade de exposição
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99/166 à luz pode afetar significativamente a medição da solubilidade. LoaQ.
[00206] A lipofilicidade (LogD) do Composto A foi medida usando princípios do balão de agitação de octanol/água. A solução aquosa usada foi um tampão de fosfato de sódio a 10 mM com pH ajustado até 7,4. O octanol foi usado como a camada de particionamento orgânico. O método foi validado para log D variando de -2 a 5,0. O valor LogD medido para o Composto A foi > 3,5, indicando que é uma molécula altamente lipofílica.
Permeabilidade de Caco2 [00207] As linhas celulares Caco-2 são derivadas de um adenocarcinoma colorretal humano. A sementeira sob condições de cultura de células convencionais, a diferenciação e a formação de monocamadas de células estreitas (em membranas de policarbonato porosas) permitem que as células Caco-2 se assemelhem às dos enterócitos intestinais (absorventes). As células Caco-2 expressam uma gama de portadores de efluxo, incluindo proteína associada com resistente a múltiplos fármacos humanos 1 (hMDR1), resistente a múltiplos fármacos humanos 2 (hMRP2) e proteína humana de resistência ao câncer da mama (hBCRP). As células Caco-2 são usadas em um formato de 96 poços para avaliar a permeabilidade e o efluxo de novas entidades químicas. Os dados foram gerados através de LC-MS/MS de rotina, porém nenhum valor foi reportado. A fraca recuperação foi provavelmente devida a limitações de solubilidade do Composto A.
Ligação da Proteína Plasmática:
[00208] A ligação da proteína do Composto A (preparado como soluções de reserva em DMSO e enriquecido em plasma em concentrações de incubação nominais de 0,1, 1, 10 e 100 pmol/L) foi avaliada no plasma congelado agrupado obtido a partir de
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100/166 camundongos CD-1 do sexo masculino, camundongos machos Han Wistar, coelhos fêmeas New Zealand White, cães Beagle machos e seres humanos machos em triplicado usando a metodologia de dispositivo Equilibrium Dialysis RED (Waters NJ et al·, Validation of a Rapid Equilibrium Dialysis Approach for the Measurement of Plasma Protein Binding, Journal of Pharmaceutical Sciences: 2008; Volume 97; Questão 10; Páginas 4586-4595, 2008). As incubações foram realizadas ao longo de um tempo de equilíbrio de 30 horas a 37 °C. A análise da amostra foi por HPLC-MS/MS e empregou um Padrão interno do Composto A [13C, 2H?] usando o seguinte método bioanalítico:
Dispositivo LC-MS/MS
UHPLC: Shimadzu CC-30A instrumento MS/MS: API 4000 (AB Sciex, E.U.A.).
Condições LC-MS/MS
1. Condições cromatográficas
Coluna: Phenomenex Kinetex 1,7 μ C18 (2,1 x 30 mm)
Fase móvel: Fase móvel: ácido fórmico a 0,1% em acetonitrila (B) e ácido fórmico a 0,1% em água (A)
Tabela 2. Gradiente de ácido fórmico em água
Tempo (min) 0 0,5 1,2 2,0 2,1 2,5
%B 5 5 100 100 5 5
Taxa de eluiçâo: 0,6 mL/min; Temperatura da coluna: Temperatura ambiente, Volume da injeção: 10 pL
Condições de massa
Fonte de íon: Turbo spray
Modo de ionização: ESI
Tipo de Rastreamento: MRM
Outros parâmetros
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Tabela 3.
Q1 Q3 DP (v) EP (v) CE (v) CXP (v)
Composto A 945,2 404,3 120 10 55 12
Composto A [13C,2H7] 953,2 404,3 120 10 55 12
[00209] Se verificou que, em percentagem, o Composto A não ligado em camundongo, coelho e ser humano era de 0,00235%, 0,00153% e 0,00196%, respectivamente, em uma concentração de Composto A de 100 pmol/L O Composto A não ligado em % no plasma de rato e cão foi <0,001% em uma concentração de Composto A de 100 pmol/L, no entanto foram observados níveis detectáveis do Composto A no componente tampão, mas esses não foram quantificáveis (<1 nmol/L). Nas concentrações de Composto A de 0,1, 1 e 10 pmol/L, o Composto A não ligado em % não pôde ser determinado em nenhuma espécie, uma vez que as concentrações no componente tampão não foram quantificáveis (<1 nmol/L). Esses dados ilustram que o Composto A está extremamente ligado às proteínas do plasma de camundongo, rato, coelho, cão e ser humano.
Exemplo 2: Preparação de formulações do composto  [00210] As composições das formulações preparadas são mostradas na Tabela 4 (escala de 10 mL) e na Tabela 5 (escala maior, escala de 500 e 1200 mL). As concentrações mostradas são a concentração do Composto A em cada uma das formulações.
Tabela 4. Formulação de Exemplo em Composições para escala de 10 mL
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Ingredientes 30% p/v ΗΡ-βCD pH 4 (1mg/ mL) 30% p/v ΗΡ-β-CD pH 4 (0,4 mg/mL) Cremoph or EL a 5% p/v pH 4 (2 mg/mL) Tween 80 a 0,5% p/v pH 9 (1 mg/mL) Tween 80 a 0,5% p/v pH 9 (0,4mg/ mL) Captisol a 10,6% p/v pH 9 (1 mg/mL) Captisol a 10,2% p/v pH 9 (0,4 mg/mL)
WFI qs 10 mL qs 10 mL qs 10 mL qs 10 mL (com solução salina) qs 10 mL (com solução salina) qs 10 mL qs 10 mL
ΗΡ-β-CD (excipiente) 3,0 g 3,0 g - - - - -
Captisol (excipiente) - 1,06g 1,02g
Cremophor EL (excipiente) - 0,5 g -
Tween 80 (excipiente) - - - 0,05 g 0,05 g -
PEG 400 (excipiente) - 1,5 mL
Composto A (ativo) 0,01 g 0,004 g 0,02 g 0,01 g 0,004 g 0,01 g 0,004 g
Meglumina a ' 1M (modificado r de pH) - - 0,04 mL (4 molar equiv. a ativo) 0,04 mL (4 molar equiv. a ativo) 0,02 mL (2 molar equiv, a ativo) 0,02 mL (2 molar equiv, a ativo)
MSA a 1M (modificado r de pH) suficient e para modifica r o pH para 4 suficient e para modificar o pH para 4 0,024mL (e suficient e para modificar o pH final para 4)
HCI a 1M (modificado r de pH) - suficient e para modificar o pH para 9 suficient. e para modificar o pH para 9 suficiente para modificar o pH para 9 suficient e para modificar o pH para 9
NaOH a 1M (modificado r de pH) suficient e para modifica r o pH para 4 (se necessá rio) suficient e para modificar o pH para 4 (se necessár io) suficient e para modificar o pH para 4 (se necessár io)
Etanol (co- solvente) - 0,5 mL - - -
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Método de preparação para formulações de ΗΡ-β-CD a 30% p/v (usado como Veículo 1 no Exemplo 3) [00211] Veículo ΗΡ-β-CD a 30% p/v foi preparado. 3 g de ΗΡ-β-CD (Roquette Kleptose, grau parenteral) foi pesado em um balão volumétrico de 10 mL e 8 mL de WFI foram adicionados e agitados (ou sonicados) para dissolver. Uma vez dissolvido, o volume foi completado até 10 mL com WFI.
[00212] A quantidade apropriada de Composto A foi pesada em um balão volumétrico de 10 mL. 8 mL de veículo ΗΡ-β-CD a 30% p/v foram então adicionados e a formulação foi agitada. MSA a 1 M foi adicionado, gota a gota, até o pH ser reduzido para cerca de 2. A formulação foi então agitada até o composto se dissolver completamente. O pH foi medido e ajustado até pH 4, gota a gota, usando MSA a 1 M ou NaOH. A formulação foi então agitada de modo a garantir que fosse obtida uma solução límpida (com névoa possível). O volume foi então completado até 10 mL com veículo ΗΡ-β-CD a 30% p/v e agitado. O pH final foi medido e registrado e a formulação filtrada através de um filtro de 0,22 uM antes da administração. Outras forças de formulação foram preparadas através da diluição o Composto A em ΗΡ-β-CD a 30% p/v com uma quantidade apropriada de veículo ΗΡ-β-CD a 30% p/v.
Método de preparação para formulação Captisol a 10.6% p/v (usado como Veículo 2” no Exemplo 3) [00213] Veículo Captisol a 20% p/v foi preparado. 2 g de Captisol (grau de pesquisa, Ligante) foi pesado em um balão volumétrico de 10 mL e 8 mL de WFI foram adicionados e agitados (ou sonicados) para dissolver. Uma vez dissolvido, o volume foi completado até 10 mL com WFI. O veículo Captisol a 7,5% p/v foi preparado por diluição do veículo Captisol a 20% p/v 3,75 mL para 10 mL com WFI. O veículo Captisol a 10,0% p/v foi preparado por diluição do veículo Captisol a
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20% p/v 5 mL para 10 mL com WFI.
[00214] Uma solução de estoque de 4 mg/mL de Composto A em Captisol a 20% p/v, pH 9 foi preparada. 0,04 g de Composto A foram pesados em um balão volumétrico. 8 mL de veículo Captisol a 20% p/v foram então adicionados e a formulação foi agitada. O volume relevante de meglumina a 1 Ml de foi adicionado. A formulação foi então agitada até o composto se dissolver completamente. O pH foi, então, medido e ajustado até pH 9, gota a gota, usando HCI a 1 Ml. O volume foi então completado até 10 mL com veículo Captisol a 20% p/v e agitado. O pH final foi medido e registrado e a formulação filtrada através de um filtro de 0,22 uMI.
[00215] 1 mg/mL do composto A em formulação Captisol a 10,6% p/v (conforme usado no Exemplo 3) foi feito através da diluição do estoque de 4 mg/mL de Composto A em 2,5 mL de Captisol a 20% p/v para 10 mL de veículo de Captisol a 7,5% p/v.
Método de preparação para formulação Tween 80 a 0,5% p/v (usado como Veículo 3 no Exemplo 3) [00216] Veículo Tween 80 a 5% p/v foi preparado. 0,5 g de Tween 80 (super refinado, Fisher Scientific) foi pesado em um balão volumétrico de 10 mL e 8 mL de WFI foram adicionados e agitados (ou sonicados) para dissolver. Uma vez dissolvido, o volume foi completado até 10 mL com WFI. O veículo Tween 80 a 0,5% p/v foi preparado por diluição do veículo Tween a 5% p/v 1 mL para 10 mL com WFI.
[00217] Uma solução de estoque de 10 mg/mL de Composto A em Tween 80 a 5% p/v, pH 9 foi preparada. 0,1 g de Composto A foram pesados em um balão volumétrico. 8 mL de veículo Tween 80 a 5% p/v foram então adicionados e a formulação foi agitada. O volume relevante de meglumina a 1 Ml de foi adicionado. A formulação foi então agitada até o composto se dissolver completamente. O pH foi,
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105/166 então, medido e ajustado até pH 9, gota a gota, usando HCI a 1 Μ. O volume foi então completado até 10 mL com o veículo Tween 80 a 5% p/v e agitado. O pH final foi medido e registrado e a formulação filtrada através de um filtro de 0,22 uM.
[00218] 1 mg/mL do composto A em formulação Tween a 0,5% p/v foi feito através da diluição do estoque de 10 mg/mL de Composto A em 1 mL de Tween a 5% p/v a veículo 10 mL com solução salina. Preparação de 0,4 mg/mL do composto A em formulação Tween a 0,5% p/v foi feita através da diluição de 1 mg/mL de Composto A em 4 mL de formulação Tween a 0,5% p/v para 10 mL com veículo Tween 80 a 0,5% p/v.
Método de preparação para formulação Cremophor EL a 5% p/v (usado como Veículo 4” no Exempio 3) [00219] Veículo Cremophor a 20% p/v foi preparado. 2 g de Cremophor EL (Kolliphor EL®, BASF) (liquido viscoso) foi pesado em um balão volumétrico de 10 mL. 5mL de WFI foram, então, adicionados e sonicados ou agitados para dissolver. Uma vez dissolvido, o volume foi completado até ao volume com WFI.
[00220] 0,02 g de Composto A foram pesados em um balão volumétrico de 10 mL. 0,5 mL de etanol, 1,5 mL de PEG 400 (Fischer Scientific) e 0,024 mL de MSA a 1M foram adicionados. A formulação foi então agitada até o fármaco se dissolver completamente. O pH foi medido e ajustado até pH 4,0, com NaOH a 1M concentrado ou MSA a 1M se necessário. 2,5 mL de veículo Cremophor a 20% p/v foram adicionados e o volume foi completado até 10 mL com WFI para preparar uma solução límpida. A formulação foi filtrada através de um filtro de 0,22 uM antes da administração.
Método de preparação para Formulação Captisol a 10,2% p/v [00221] A preparação de 0,4 mg/mL do composto A em formulação Captisol a 10,2% p/v foi feita através da diluição de 1 mg/mL de
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Composto A em 4 mL de formulação Captisol a 10,6% p/v (ver a secção precedente para o método de preparação) para 10 mL com veículo Captisol a 10,0% p/v.
Tabela 5. Composições de Formulação para grande escala
Ingredientes Formulação 28% p/v ΗΡ-β-CD pH 9,5 (5 mg/mL de Composto A) Formulação 14% p/v Captisol pH 9,5 (0,5 mg/mL de Composto A)
WFI qs 500 mL qs 1200 mL
ΗΡ-β-CD (excipiente) 140,0 g
Captisol (excipiente) 168,0 g
Composto A (ativo) 2,5 g 0,60 g
Meglumina a 1M (modifícador de pH) 5,42 mL (2 molar equiv. a ativo) e suficiente para modificar o pH final para 9,5 1,30 mL (2 molar equiv. a ativo) e suficiente para modificar o pH finai para 9,5
HCI a 1M (modifícador de pH) suficiente para modificar o pH para 9,5 suficiente para modificar o pH para 9,5
Método de preparação para Formulação ΗΡ-β-CD a 28% p/v [00222] A preparação foi realizada em uma sala limpa e foi usado equipamento estéril limpo. Veículo ΗΡ-β-CD a 28% p/v foi preparado. 145,60 g de ΗΡ-β-CD foram pesados para um copo de vidro de 2 L e 412,88 g de WFI foram adicionados e agitados até o ΗΡ-β-CD se ter dissolvido completamente.
[00223] 279,2 g de ΗΡ-β-CD a 28% p/v foram adicionados a um copo de vidro de 1 L. Subsequentemente 5,689 g de meglumina 1M foram adicionados enquanto se agitava, seguindo-se por 2,50 g de Composto A enquanto se agitava. A suspensão resultante foi agitada durante 30 minutos. A cabeça do homogeneizador foi então lavada com ΗΡ-β-CD a 28% p/v e as lavagens foram adicionadas ao copo de vidro de 1 L de modo a atingir ~ 95% do volume alvo final. A
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107/166 suspensão foi protegida da luz e agitada durante a noite, resultando em uma solução amarela, ligeiramente turva. A solução turva foi ajustada para pH 9,5 usando meglumina a 1M, completada até ao volume alvo usando veículo ΗΡ-β-CD a 28% p/v e agitada durante 30 minutos. O pH final foi medido e registrado, e a formulação filtrada através de um filtro de 0,22 uM antes do enchimento em recipientes limpos e estéreis que foram tapados e frisados.
Método de preparação para Formulação Captisol a 14% p/v [00224] A preparação foi realizada em uma sala limpa e foi usado equipamento estéril limpo. Um veículo Captisol concentrado a 42% p/v foi primeiro preparado para auxiliar a dissolução do Composto A (posteriormente na preparação a formulação foi diluída com WFI para produzir uma formulação final de Captisol a 14% p/v). 579,86 g de WFI foram pesados em um copo de vidro de 3 L, 352,94 g de Captisol foram adicionados enquanto se agitava e de seguida a mistura foi agitada com um vórtice grande até que o Captisol se tivesse dissolvido completamente.
[00225] 233,2 g de Captisol a 42% p/v foram adicionados a um copo de vidro de 600 mL. Subsequentemente 1,365 g de meglumina 1M foram adicionados enquanto se agitava, seguindo-se por 0,60 g de Composto A enquanto se agitava. A suspensão foi homogeneizada durante 30 minutos, resultando em uma solução amarela, ligeiramente turva. A cabeça homogênea foi lavada com Captisol a 42% p/v. A solução homogeneizada e as lavagens foram transferidas para um copo de vidro de 2 L e se ajustou um volume total de 400 mL com Captisol a 42% p/v. A solução foi protegida da luz e agitada durante a noite. A solução ligeiramente turva foi diluída com 740 g de WFI para 95% do volume alvo final e agitada durante 30 minutos. A solução foi ajustada para pH 9,5 usando meglumina a 1M, completada até ao volume alvo usando WFI e agitada durante 30 minutos. O pH final foi
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108/166 medido e registrado, e a formulação filtrada através de um filtro de 0,22 uM antes do enchimento em recipientes limpos e estéreis que foram tapados e frisados.
Estabilidade das Formulações Captisoi e ΗΡ-β-CD [00226] As estabilidades físicas da formulação de 0,5 mg/mL de Composto A/Captisol a14% p/v e da formulação de 5,0 mg/mL de Composto A/ ΗΡ-β-CD a 28% p/v foram avaliadas. Uma quantidade muito pequena de precipitado, apenas visível a olho nu, se formou em cada formulação dentro de 24 horas de armazenamento à temperatura ambiente. Para a formulação à base de Captisol se notou que o precipitado se formou rapidamente quando o sistema de formulação foi perturbado (por exempio, filtrado), mas o precipitado não continuou a crescer a uma taxa rápida quando a formulação foi armazenada a 5 °C e a 25 °C durante 6 meses.
[00227] Os dados de estabilidade química indicam que uma formulação à base de Captisol precisaria ser armazenada a 5 °C ou congelada de forma a fornecer uma vida útil aceitável (> 6 meses) para estudos clínicos.
[00228] Devido à baixa solubilidade do Composto A em veículos aquosos, um elevado nível de Captisol ou ΗΡ-β-CD, além de um pH alto e um elevado volume de infusão, seriam necessários para solubilizar as doses do Composto A necessárias para conduzir estudos de segurança clínica.
Exemplo 3: Estudo de eficácia de xenoenxertos para formulações do Composto  [00229] As formulações usadas na eficácia do xenoenxerto foram preparadas de acordo com os procedimentos do Exemplo 2 acima.
Avaliação da eficácia do Composto A em Modelo de xenoenxerto de Leucemia Linfoide Aguda (ALL) RS4;11 em camundongos [00230] Células de leucemia linfoblástica aguda humana (RS4;11)
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109/166 foram usadas para testar a atividade do Composto A em diferentes formulações (Figura 3A). As células RS4;11 foram injetadas através de via subcutânea no flanco direito de camundongos fêmea CB-17/ICrPrkdcscid/lcrlcoCrl SCID (Charles River Laboratories) a 5 x 106 células/camundongo. Quando os tumores atingiram um tamanho alvo de 300-400 mm3, os camundongos foram distribuídos aleatoriamente para o veículo de controle; Veículo 1 (ΗΡ-β-CD a 30%, pH 4), Veículo 2 (Captisol a10,6%, pH 9), Veículo 3 (Tween a 0,5%, pH 9) ou um tratamento do Composto A (2 e 5 mg/kg formulado no Veículo 1, 2 ou
3). Adicionalmente, em uma experiência separada, a atividade do Composto A em uma formulação de Cremophor, Veículo 4 foi investigada (Figura 3B). Todas as formulações foram administradas como único bolus IV. Para avaliar a eficácia, o volume do tumor foi medido duas vezes por semana e calculada como: Volume do tumor = (AxB2)/2 em que A e B são o comprimento e a largura do tumor (em mm), respectivamente para até um período de 4 semanas depois da dosagem.
[00231] Para avaliar a dose única de resposta farmacodinâmica (PD) (Figura 4), os camundongos foram sacrificados em momentos de tempo apropriados, os tumores foram removidos e metade do tumor processado e analisado para resposta de Caspase 3 Clivada (CC3) como um marcador de indução de apoptose usando o Kit Cell Signaling Pathscan ELISA. Para avaliar a exposição ao tumor em dose única (PK) (Figura 5), a metade restante do tumor foi processada e a concentração do fármaco foi medida.
[00232] As formulações de Captisol e ΗΡ-β-CD apresentaram eficácia estatisticamente equivalente ao longo de 33 dias. A formulação de Tween 80, por outro lado, mostrou ausência/mínima eficácia (Figura 3A). Ambas as formulações de Captisol e ΗΡ-β-CD apresentaram exposições tumorais semelhantes a 6 e 24 horas
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110/166 (Figura 5). A formulação ΗΡ-β-CD, no entanto, desencadeou uma maior morte celular, conforme medida pelo nível de resposta de Caspase 3 Clivada, do que a formulação de Captisol (Figura 4), embora a eficácia e a exposição parecessem equivalentes. A formulação de Tween 80 mostrou menor exposição ao tumor e nenhuma evidência de indução da Caspase 3 Clivada. Em resumo, a eficácia do Composto A é dependente da presença de ciclodextrina, quer ΗΡ-β-CD ou Captisol. Eficácia reduzida foi observada com outros veículos (por exemplo, Tween ou Cremophor).
Avaliação da eficácia do Composto A (ΉΡ~β~0Ρ) em um comprimento de infusão diferente em Modelo de xenoenxerto de Leucemia Linfoide Aguda (ALL) RS4;11 em camundongos [00233] Camundongos Rag2-/- adquiridos a partir de (SAGE) foram inoculados com RS4;1 (10x106 células/camundongo). Quando os tumores cresceram para aproximadamente 4500-6000 mm3, os camundongos foram distribuídos aleatoriamente para veículo de controle (ΗΡ-β-CD a 30%) ou 5 mg/kg do Composto A no Veículo 1) administrados como uma infusão única IV de 30 min (Figura 6) o veículo de controle (ΗΡ-β-CD a 30%) ou 5 mg/kg, 3 mg/kg e 1 mg/kg de Composto A em veículo 1 administrados como uma infusão única IV de 5 h (Figura 7). Os tamanhos dos tumores foram medidos duas vezes por semana e calculados como: Volume do tumor ™ (AxB2)/2 em que A e B são o comprimento e a largura do tumor (em mm), respectivamente.
[00234] Os resultados são apresentados nas Figuras 6 e 7. O composto A a 5 mg/kg de infusão a 30 min inibiu o crescimento do tumor durante - 9 dias após um tratamento único em comparação com o veículo. A eficácia comparável foi observada quando a infusão foi prolongada para 5 h. Em resumo, o prolongamento do tempo de infusão não afetar a atividade do Composto A na presente formulação.
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Exemplo 4: Preparação e Caracterização de BHALys[Lys]32[a~ NH2TFA]32[£-PEG-2000]32t [00235] Nota: 32$ se refere ao número teórico de grupos ε-amino disponíveis para substituição com PEG~2ooo. O número médio real de grupos PEG~2ooo ligados ao BHALys[Lys]32 foi determinado experimentalmente por 1H RMN (ver secção abaixo no presente Exemplo intitulada Caracterização de BHALys[Lys]32[a-NH2-TFA]32[£“ PEG~2000]32t).
Preparação de BHALys[Lys]32[a-NH2TFA]32[s-PEG~2000]32t BHALys[Boc]2 [00236] Éster de ax-(t”Boc)2-(L)”lisina p-nitrofenol sóiido (2,787 kg, 5,96 mol) foi adicionado a uma solução de aminodifenilmetano (benzidrilamina) (0,99 kg, 5,4 mol) em acetonitrila anidra (4,0 L), DMF (1,0 L) e trietilamina (1,09 kg) ao longo de um período de 15 min. A mistura de reação foi agitada a 20°C durante a noite. A mistura de reação foi então aquecida até 35°C e hidróxido de sódio aquoso (0,5 N, 10 L) foi lentamente adicionado ao longo de 30 min. A mistura foi agitada durante 30 min adicionais e depois filtrada. O bolo sólido foi lavado com água e seco até um peso constante (2,76 kg, 5,4 mol) em 100% de rendimento. 1H RMN (CD3OD) õ 7,3 (m, 10H, Ph Calc 10H);
6,2 (s, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 4,08 (m, α-CH, 1H), 3,18 (I, e-CH2) e 2,99 (m, e-CH2 2H); 1,7-1,2 (I, p,y,õ-CH2) e 1,43 (s, tBu) total para p,y,õ-CH2 e tBu 25H Calc 24H. MS (ESI +ve) encontrado 534,2 [M+Na]+ calc para C29H4iN3O5Na [M+Na]+ 534,7.
BHALys[HCI]2 [00237] Uma solução de HCI concentrado (1,5 L) em metanol (1,5 L) foi adicionada lentamente, em três porções, a uma suspensão agitada de BHALys[Boc]2 (780,5 g, 1,52 mol) em metanol (1,5 L) a uma velocidade para minimizar a formação excessiva de espuma. A mistura de reação foi agitada durante 30 min adicionais, depois concentrada
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112/166 sob vácuo a 35 °C. O resíduo foi retomado em água (3,4 L) e concentrado sob vácuo a 35 °C duas vezes, depois armazenado sob vácuo durante a noite. Acetonitrila (3,4 L) foi então adicionada e o resíduo foi novamente concentrado sob vácuo a 35 °C de modo a dar BHALys[HCI]2 como uma solução branca (586 g, 1,52 mol) em 100% de rendimento. 1H RMN (D2O) δ 7,23 (m I, 10H, Ph Cale 10H); 5,99 (s, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 3,92 (t, J = 6,5 Hz, α-CH, 1H, Calc 1H); 2,71 (t, J = 7,8 Hz, £-CH2, 2H, Calc 2H); 1,78 (m, β,γ,δ-ΟΗ2, 2H), 1,47 (m, β,γ,δCH2, 2H), e 1,17 (m, β,γ,δ-ΟΗ2, 2H, total 6H Cale 6H). MS (ESI +ve) encontrado 312 [M+H]+ calc para CwHueNsO [M+H]+ 312.
BHALys[Lys]2[Boc]4 [00238] A uma suspensão de BHALys[HCI]2 (586 g, 1,52 mmol) em DMF anidro (3,8 L) foi lentamente adicionada trietilamina (1,08 kg) de modo a manter a temperatura da reação abaixo de 30 °C. Éster de α,ε(tBoc)2(L)lisina p-nitrofenol sólido (1,49 kg) foi adicionado em três porções, lentamente e com agitação durante 2 horas entre adições. A reação foi deixada a agitar durante a noite. Uma solução aquosa de hidróxido de sódio (0,5 M, 17 L) foi lentamente adicionada à mistura bem agitada, e a agitação foi mantida até o precipitado sólido se mover livremente. O precipitado foi recolhido por filtração e o bolo sólido foi bem lavado com água (2 x 4 L) depois com acetona/água (1:4, 2 x 4 L). O sólido foi novamente empastado com água e depois filtrado e seco sob vácuo durante a noite para dar BHALys [Lys]2[Boc]4 (1,51 kg) em 100% de rendimento. 1H RMN (CD3OD) õ 7,3 (m, 10H, Ph Calc 10H); 6,2 (s, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 4,21 (m, a-CH), 4,02 (m, aCH) e 3,93 (m, a-CH, total 3H, Calc 3H); 3,15 (m, e-CH2) e 3,00 (m, εCH2 total 6H, Calc 6H); 1,7-1,3 (I, p,y,õ-CH2) e 1,43 (s, tBu) total para β,γ,δ-ΟΗ2 e tBu 57H, Calc 54H. MS (ESI +ve) encontrado 868,6 [MBoc]+; 990,7 [M+Na]+ cale para CsiHeiNzOnNa [M+Na]+ 991,1. BHALys[Lys]2[HCI]4
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113/166 [00239] BHALys[Lys]2[Boc]4 (1,41 kg, 1,46 mol) fol suspenso em metanol (1,7 L) com agitação a 35°C. Ácido clorídrico (1,7 L) foi misturado com metanol (1,7 L), e a solução resultante foi adicionada em quatro porções à suspensão de dendrímero e deixada a agitar durante 30 min. O solvente foi removido sob pressão reduzida e processado com duas faixas sucessivas de água (3,5 L), seguidas por duas faixas sucessivas de acetonitrila (4 L) para dar BHALys[Lys]2[HCI]4 (1,05 kg, 1,46 mmoi) em 102% de rendimento.1H RMN (D2O) δ 7,4 (m I, 10H, Ph Calc 10H); 6,14 (s, 1H, CH-Ph2 Cale 1H); 4,47 (t, J = 7,5 Hz, α-CH, 1H ), 4,04 (t, J = 6,5 Hz, a-CH, 1H ), 3,91 (t, J = 6,8 Hz, a-CH, 1H, total 3H, Calc 3H); 3,21 (t, J = 7,4 Hz, εCH2, 2H), 3,01 (t, J = 7,8 Hz, ε-ΟΗ2, 2H) e 2,74 (t, J = 7,8 Hz, e-CH2, 2H, total 6H, Calc 6H); 1,88 (m, β,γ,δ-ΟΗ2), 1,71 (m, β,γ,δ-ΟΗ2), 1,57 (m, β,γ,δ-ΌΗ2) e 1,35 (m, β,γ,δ-ΟΗ2 total 19H, Calc 18H).
BHAL.ys[L.ys]4[Boc]8 [00240] BHALys[Lys]2[HCI]4 (1,05 kg, 1,47 mol) foi dissolvido em DMF (5,6 L) e trietilamina (2,19 L). O éster de a,£-(t-Boc)2-(L)-lísina pnitrofenol (2,35 kg, 5,03 mol) foi adicionado em três porções e a reação agitada durante a noite a 25 °C. Uma solução de NaOH (0,5 M, 22 L) foi adicionada e a mistura resultante foi filtrada, lavada com água (42 L) e depois seca ao ar. O sólido foi seco sob vácuo a 45 °C para dar BHALys [Lys]4[Boc]8 (2,09 kg, 1,11 mol) em 76% de rendimento. 1H RMN (CD3OD) δ 7,3 (m, 10H, Ph Calc 10H); 6,2 (s, 1H, CH-Ph2 Cale 1H); 4,43 (m, a-CH), 4,34 (m, a-CH), 4,25 (m, a-CH) e 3,98 (i, a-CH, total 7H, Calc 7H); 3,15 (I, e-CH2) e 3,02 (I, e-CH2 total 14H, Calc 14H);
1,9-1,2 (I, β,γ,δ-ΟΗ2) e 1,44 (s I, tBu) total para p,y,õ-CH2 e tBu 122H, Calc 144H.
BHALysiLys^fTFAJe [00241] A uma suspensão agitada de BHALys[Lys]4[Boc]s (4 g, 2,13 mmol) em DCM (18 mL) foi adicionado TFA (13 mL) a 0 °C. Os sólidos
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114/166 dissolvidos, e a solução foram agitados durante a noite sob uma atmosfera de árgon. Os solventes foram removidos sob vácuo e o TFA residual foi removido por trituração com éter dietílico (100 mL). O produto foi redissoivido em água e depois liofiiizado para dar BHALys[Lys]4TFA]8 como um sólido esbranquiçado (4,27 g, 2,14 mmol) em 101% de rendimento. 1H RMN (D2O) δ 7,21 (m I, 10H, Ph Caie 10H); 5,91 (s, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 4,17 (t, J = 7,4 Hz, α-CH, 1H ), 4,09 (t, J = 7,1 Hz, a-CH, 1H ), 4,02 (t, J = 7,2 Hz, a-CH, 1H, 3,84 (t, J = 6,5 Hz, a-CH, 2H), 3,73 (t, J = 6,7 Hz, a-CH, 1H), 3,67 (t, J = 6,7 Hz, a-CH, 1H, total 7H, Calc 7H); 3,0 (m, e-CH2), 2,93 (m, e-CH2) e 2,79 (I, e-CH2, total 15H, Calc 14H); 1,7 (I, β,γ,δ-ΟΗ2), 1,5 (I, β,γ,δCH2), 1,57 (m, p,y,õ-CH2) e 1,25 (I, β,γ,δ-ΟΗ2 total 45H, Calc 42H). MS (ESI +ve) encontrado 541,4 [M+2H]2+; calc para C55H99N15O7 [M+2H]2i 541,2.
BHALys[Lys]õ[Boc]i6 [00242] Uma solução de éster de a,£-(t-Boc)2-(L)-lisina p-nitrofenol (1,89 g, 4,05 mmol) em DMF (25 mL) foi adicionada a uma solução de BHALys [Lys]4[NH2TFA]8 (644 mg, 0,32 mmol) e trietilamina (0,72 mL,
5,2 mmol) em DMF (25 mL) e a reação foi deixada a agitar durante a noite sob uma atmosfera de árgon. A mistura de reação foi vertida em gelo/água (500 mL), depois filtrada e 0 sólido recolhido foi seco durante a noite sob vácuo. O sólido seco foi lavado cuídadosamente com acetonitrila para dar BHALys[Lys]8[Boc]i6 como um sólido esbranquiçado (0,82 g, 0,22 mmol) em 68% de rendimento. 1H RMN (CD3OD) δ 7,3 (m, 10H, Ph Calc 10H); 6,2 (s I, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 4,48 (!, a-CH), 4,30 (I, a-CH) e 4,05 (I, a-CH, total 16H Calc 15H); 3,18 (I, e-CH2) e 3,02 (m, e-CH2 total 31H, Calc 30H); 1,9-1,4 (I, β,γ,δ-ΰΗ2) e 1,47 (s I, tBu) total para p,y,õ-CH2 e tBu 240H, Calc 234H. MS (ESl+ve) encontrado 3509 [M+H-(Boc)2]+ calc para C173H306N31O43 [M+H-(Boc)2]+ 3508,5; 3408 [M+H-(Boc)3]+ calc para Ci68H298N3iO4i
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115/166 [M+H-(Boc)3]+ 3408,4.
BHALySiLyslstTFAJis [00243] Uma solução de TFA/DCM (1:1, 19 mL) foi adicionada lentamente a uma suspensão agitada de BHALys[Lys]8[Boc]ie (800 mg, 0,22 mmol) em DCM (25 mL). Os sólidos foram dissolvidos e a solução foi agitada durante a noite sob uma atmosfera de árgon. Os solventes foram removidos sob vácuo e o TFA residual foi removido por llofilização repetida do resíduo, para dar BHALys [Lys]s[TFA]ie como um liofilato esbranquiçado (848 mg, 0,22 mmol) em 100% de rendimento. Ή RMN (D2O) δ 7,3 (m I, 10H, Ph Calc 10H); 6,08 (s, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 4,3 (m, a-CH), 4,18 (m, a-CH), 4,0 (m, a-CH) e 3,89 (m, a-CH, total 16H, Calc 15H); 3,18 (I, e-CH2) e 2,94 (m, e-CH2 total 32H, Calc 30H); 1,9 (m, β,γ,δ-ΌΗ2), 1,68 (m, β,γ,δ-ΌΗ2) e 1,4 (m, p,Y,õ-CH2 total 99H, Calc 90H). MS (ESI +ve) encontrado 2106 [M+H]+ calc para C103H194N31O15 [M+H]+ 2106,9.
BHALys[Lys]i6[Boc]32 [00244] Uma solução de éster de a,e-(t-Boc)2-(L)-lislna p-nitrofenol (1,89 g, 4,05 mmol) em DMF (25 mL) foi adicionada a uma solução de BHALys [Lys]s[TFA]i6 (644 mg, 0,32 mmol) e trietilamina (0,72 mL, 5,2 mmol) em DMF (25 mL) e a reação foi deixada a agitar durante a noite sob uma atmosfera de árgon. A reação foi vertida em gelo/água (500 mL), depois filtrada e 0 sólido recolhido foi seco durante a noite sob vácuo. O sólido seco foi cuidadosamente lavado com acetonitrila para dar BHALys[Lys]i6[Boc]32 como um sólido esbranquiçado (0,82 g, 0,2 2 mmol) em 68% de rendimento.
[00245] Ή RMN (CD3OD) δ 7,28 (m, 9H, Ph Calc 10H); 6,2 (s I, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 4,53 (I, a-CH), 4,32 (I, a-CH) e 4,05 (I, a-CH, total 35H, Cale 31H); 3,18 (I, e-CH2) e 3,04 (m, e-CH2 total 67H, Calc 62H);
1,9-1,5 (I, p,Y,ó-CH2) e 1,47 (s I, tBu) total para p,y,ó-CH2 e tBu 474H Calc, 474H. MS (ESl+ve) encontrado 6963 [Μ+Η-(Βοφ]+ calc para
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C339H6ioN63087 [M+H-(Boc)4]+ 6960,9; 6862 [M+H-(Boc)5]+ calc para C334H604N63O85 [M+H-(Boc)5]+ 6860,8.
BHALys[Lys]i6[TFA]32 [00246] Uma solução de TFA/DCM (1:1, 19 mL) foi adicionada lentamente a uma suspensão agitada de BHALys[Lys]ie[Boc]32 (800 mg, 0,1 1mmol) em DCM (25 mL). Os sólidos foram dissolvidos e a solução foi agitada durante a noite sob uma atmosfera de árgon. Os solventes foram removidos sob vácuo e o TFA residual foi removido por liofilização repetida do resíduo, para dar BHALys [Lys]ie[TFA]32 como um liofilato esbranquiçado (847 mg, 0,11 mmol) em 100% de rendimento. 1H RMN (D2O) δ 7,3 (m I, 11H, Ph Calc 10H); 6,06 (s, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 4,3 (m, a-CH), 4,19 (m, a-CH), 4,0 (m, a-CH) e 3,88 (m, a-CH, total 35H, Cale 31H); 3,15 (I, s-CH2) e 2,98 (m, e-CH2 total 69H, Calc 62H); 1,88 (m, β,γ,0-ΟΗ2), 1,7 (m, β,γ,δ·ΌΗ2) e 1,42 (m, β,γ,δ-ΟΗζ total 215H, Calc 186H). MS (ESl+ve) encontrado 4158 [M+H]+ calc para C199H386N63O31 [M+H]+ 4157,6 HO~Lys(a-BOC)(€~PEG2wo) [00247] DIPEA (0,37 mL, 2,10 mmol) foi adicionado a uma mistura arrefecida em gelo de NHS-PEG2100 (2,29 g, 1,05 mmol) e N-a-t-BOCL-lisina (0,26 g, 1,05 mmol) em DMF (20 mL). A mistura agitada foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente durante a noite, depois quaisquer sólidos remanescentes foram filtrados (0,45 pm de acrodisc PALL) antes de remover 0 solvente sob vácuo. O resíduo foi retomado em ACN/H2O (1:3, 54 mL) e purificado por HPLC preparativa (Waters XBridge C18, 5 pm, 19 x 150 mm, ACN a 25 a 32% (5-15 min), ACN a 32 a 60% (15 a 20 min), sem tampão, 8 mL/min, RT -17 min), proporcionando 1,41 g (56%) de HO-Lys(BOC)(PEG2ioo). 1H RMN (CD3OD) δ 3,96-4,09 (m, 1H), 3,34-3,87 (m, 188H); 3,32 (s, 3H), 3,15 (q, J = 6,0 Hz, 2H), 2,40 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 1,28-1,88 (m, 6H), 1,41 (s, 9H).
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BHALys[Lys]32[a-B OC]32Ís-PEG2100] 32} [00248] A uma mistura agitada de BHALys[Lys]is[TFA]32 (0,19 g, 24 pmol) em DMF (20 mL) foi adicionado DIPEA (0,86 mL, 4,86 mmoi). Essa mistura foi então adicionada gota a gota a uma mistura agitada de PyBOP (0,62 g, 1,20 mmoi) e Lys(BOC)(PEG2ioo) (2,94 g, 1,20 mmoi) em DMF (20 mL) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi deixada a agitar durante a noite e depois diluída com água (200 mL). A mistura aquosa foi submetida a uma filtração de centramato (membrana de 5 k, 20 L de água). O retentado foi liofilizado, fornecendo 1,27 g (73%) do dendrímero desejado. HPLC (C8 XBridge, 3 x 100 mm, gradiente: ACN a 5% (0-1 min), ACN/H2O a 5-80%) (1-7 min), ACN a 80% (7-12 min), ACN a 80-5% (12-13 min), ACN a 5% (13-15 min), 214 nm, TFA a 0,1%) Rf (min) = 8,52. 1H-RMN (300MHz, D2O) õ (ppm): 1,10-2,10 (m, Lys CH2 (β, χ, δ) e BOC, 666H), 3,02-3,36 (m, Lys CH2 (ε), 110H), 3,40 (s, PEG-OMe, 98H), 3,40-4,20 (m, PEGOCH2, 5750H + Lys CH de superfície, 32H), 4,20-4,50 (m, Lys, CH interno 32H), 7,20-7,54 (m, BHA, 8H). 1H RMN indica aproximadamente 29 PEGs.
BHALys[Lys]32[(X-TFA]32[Ç-PEG2ioo]32t [00249] 1,27 g (17,4 prnol) de BHALys[Lys]32[a-BOC]32^-PEG2ioo]32 foi agitado em TFA/DCM (1:1, 20 mL) à temperatura ambiente durante a noite. Os voláteis foram removidos em vácuo, e em seguida 0 resíduo foi retomado em água (30 mL). A mistura foi, então, concentrada. Esse processo foi repetido mais duas vezes antes de ser liofilizado, fornecendo 1,35 g (106%) do produto desejado como um óleo viscoso incolor. HPLC (C8 XBridge, 3 x 100 mm, gradiente: ACN a 5% (0-1 min), ACN/H2O a 5-80%) (1-7 min), ACN a 80% (7-12 min), ACN a 80-5% (12-13 min), ACN a 5% (13-15 min), 214 nm, 0,1% TFA) Rf (min) = 8,51. 1H-RMN (300MHz, D2O) δ (ppm): 1,22-2,08 (Lys CH2 ((β, χ, δ), 378H), 3,00-3,26 (Lys CH2 (ε), 129H), 3,40 (PEG-OMe,
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96H), 3,45-4,18 (PEG-OCH2, 561 OH + Lys CH de superfície, 32H), 4,20-4,46 (Lys, CH interno, 33H), 7,24-7,48 (8H, BHA). 1H RMN indica aproximadamente 29 PEGs.
Caracterização de BHALyslLysJszla-NHzTFAJazla-PEG-zoooJap.t [00250] A Tabela 6 ilustra os vários lotes de BHALys[Lys]32[aNH2TFA]32[e-PEG~2ooo]32# usados nos Exemplos 5-9 abaixo, que têm ligeiramente diferentes comprimentos de PEG. O número real de cadeias de PEG no dendrímero também é calculado por RMN de prótons.
Tabela 6. Vários lotes de BHALys[Lys]32[a-NH2TFA]32[e-PEG~2ooo]32t
Lote Escala Comprimento de PEG a partir de CoA (Da) Número de PEGs (x) em BHALys[Lys]32[aNH2.TFA]32[c-PEG~2000]x (a partir de RMN de prótons*) MW** Estimado (kDa)
1 101 mg 2200 29 75,7
2 98 mg 2200 29 75,7
3 74,8 g 2100 29 72,8
4 137 mg 2200 29 75,7
5 1,19 g 2100 31 77,0
6 18,98 g 2100 29 72,8
Ό número de PEGs é calculado a partir de RMN de prótons. Para o lote 1: N° de PEGs = Número (integração) de prótons na região PEG de RMN (3,4-4,2 ppm)/Número médio (média) de prótons por cadeia de PEG (CoA PEG/44Da x 4H) = 5706H / (2200/44 x 4) ™ 28,53 (aprox. 29 unidades de PEG) **Peso Molecular estimado pela adição de MW de vários componentes. Para o lote 1:
MW total ·· Mw do dendrímero + Mw de TFA + Mw de PEG = BHALys[Lys]32 + 32(TFA) + 29(PEG) = 8.258 + 3.648 + 63800
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119/166 = -75,7 kPa [00251] A RMN de prótons para os vários lotes de BHALys[Lys]32[aNH2TFA]32[£-PEG~2ooo]32t é apresentada na Tabela 7:
Tabela 7. Dados de RMN de próton para Vários Lotes de
BHALys[Lys]32[a-NH2TFA]32[£PEG~2ooo]32t
Lote Escala RMN de próton de BHALys[Lys]32[a-NH2.TFA]32[e- PEG~2000]x
1 101 mg 1,22-2,08 (Lys ΟΗ2(β χ δ . 378H), 3.00-3.26 (Lys CH2 (α), 129H), 3,40 (PEG-OMe, 96H), 3,45-4,18 (PEG-OCHs, 561 OH + Lys CH de superfície, 32H), 4,204,46 (Lys, CH interno, 33H), 7,24-7,48 (8H, BHA).
2 98 mg Quanto ao lote 1
3 74,8 g 1,02-2,18 (Lys CH/β χ δ : 378H), 2,94-3,36 (Lys CH2 (α), 129H), 3,41 (PEG-OMe, 93H), 3,45-4,18 (PEG-OCH2,5432H + Lys CH de superfície, 32H), 4,184,50 (Lys, CH interno, 32H), 7,12-7,64 (9H, BHA).
4 137 mg Quanto ao lote 1
5 1,19 g 1,02-2,16 (Lys CH2(3 χ δ , 378H), 2,93-3,36 (Lys CH2 (α), 129H), 3,41 (PEG-OMe, 101H), 3,45-4,18 (PEG-OCH2,5908H + Lys CH de superfície, 32H), 4,184,50 (Lys, CH interno, 33H), 7,21-7,54 (9H, BHA).
6 18,98 g Quanto ao lote 3
Exemplo 5: Preparação de BHALys[Lys]32[aX3lu-Composto A]32t[ePEG2200]32t [00252] Nota: 32| se refere ao número teórico de grupos o-amino no dendrímero disponível para substituição com Glu-Composto A. O número médio real de grupos Glu-Composto A ligados a BHALys[Lys]32 foi determinado experimentalmente por 1H RMN (ver o Exemplo 10). 32φ se refere ao número teórico de grupos ε-amino, no dendrímero, disponíveis para substituição com PEG2200. O número médio real de grupos PEG2200 ligados a BHALys[Lys]32 foi determinado experimentalmente por ΊΗ RMN (ver Exemplo 4, Lote 1).
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Preparação de Glu~Composto A
Figure BR112019016409A2_D0063
[00253] A uma suspensão agitada magneticamente de Composto A (200 mg, 0,21 mmol) em DCM (10 mL) à temperatura ambiente foi adicionado anidrido glutárico (29 mg, 0,25 mmol), DMAP (26 mg, 0,21 mmol) e DIPEA (93 pL, 0,53 mmol). A suspensão se dissolveu rapidamente e a mistura foi deixada a agitar à temperatura ambiente durante a noite. Anidrido glutárico adicional foi adicionado ao longo das 24 horas seguintes até a reação ser considerada > 80% completa por HPLC. Os voláteis foram então removidos em vácuo e o resíduo purificado por HPLC preparativa (BEH 300 Waters XBridge C18, 5 μΜ, 30 x 150 mm, ACN/água a 60-80% (5-40 min), TFA a 0,1%, RT = 22 min) fornecendo 117 mg (52 %) de produto como um sólido branco. LCMS (C18, gradiente: ACN/H2O a 50-60% (1-10 min), ACN a 60% (10-11 min), ACN a 60-50% (11-13 min), ACN a 50% (13-15 min), ácido fórmico a 0,1%, 0,4 mL/min, Rf (min) = 6,30. ESI (+ve) observado [M + H]s ™ 1059. Calculado para C50H54CIF3N4O10S3 = 1058,26 Da. 1H-RMN (300MHz, CD3OD) δ (ppm): 0,65-1,40 (m, 4H), 1,70-2,30 (m, 6H), 2,34 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 2,42 (t, J = 7,5Hz, 2H), 2,65 (t, J = 12,3 Hz, 1H), 2,79 (t, J = 12,6 Hz, 1H), 2,91 (s, 3H), 3,14-3,29 (m, 2H), 3,33-3,38 (m, 3H), 3,38-3,52 (m, 3H), 3,71 (d, J = 12,9 Hz, 1H), 3,89 (d, J = 12,9Hz, 1H), 4,10 (m, 1H), 4,34-4,48 (m, 3H), 6,80
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6,96 (m, 3H), 7,01 (d, J - 9,0 Hz, 1H), 7,09-7,24 (m, 4H), 7,26-7,46 (m, 8H), 7,61 (d, J - 7,8 Hz, 1H), 7,68 (d, J - 9,0 Hz, 2H), 8,07 (dd, J = 9,3, 2,1Hz, 1H), 8,31 (d, J - 3,0 Hz, 1H).
Preparação de BHALys[Lys]32[a~Glu~Composto A]3i[a-PEG22oo]29
Figure BR112019016409A2_D0064
*= BHALys[Lys]ie [00254] A uma mistura agitada magneticamente do Composto AGlu (67 mg, 63 pmol) e PyBOP (33 mg, 63,3 pmoi) em DMF (1 mL) à temperatura ambiente foi adicionada uma mistura de BHALys[Lys]32[oNH2TFA]32[£-PEG22oo]29 (99 mg, 1,32 pmol, Lote 1 do Exemplo 4) e NMM (23 pL, 0,21 mmol), também em DMF (2 mL). Após 16 horas à temperatura ambiente, os voláteis foram removidos e o resíduo foi purificado por cromatografia de exclusão por tamanho (sephadex, LH20, MeOH). As fracções apropriadas, conforme avaliado por HPLC, foram combinadas e concentradas. O resíduo foi, em seguida, retomado em água, filtrado (0,22 pm) e liofilizado, proporcionando 101 mg (73%) do material desejado como um sólido cor de rosa pálido. HPLC (C8 Xbridge, 3 x 100 mm, gradiente: ACN/H2O a 42-50% (1-7
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122/166 min), ACN a 50-80% (7-8 min), ACN a 80% (8-11 min), ACN a 80-42% (11-12 min), ACN a 42% (12-15 min), 214 nm, formato de amônio a 10 mh/l) Rf (min) - 10,18. 1H~RMN (300MHz, CD3OD) δ (ppm): 0,65-2,08 (m, 585H), 2,10-2,50 (m, 144H), 2,50-2,80 (m, 71H), 2,82-3,02 (m, 80H), 3,04-3,27 (m, 137H), 3,35 (s, 108H), 3,40-4,06 (m, 5824H), 4,084,62 (m, 181H), 6,54-8,40 (m, 632H).
Exemplo 6: Preparação de BHALys[Lys]32[a-TDA”Composto A]32t[£-PEG 2100, 22θθ]32ί [00255] Nota: 32| se refere ao número teórico de grupos α-amino no dendrímero disponível para substituição com TDA-Composto A. O número médio real de grupos TDA-Composto A ligados a BHALys[Lys]32 foi determinado experimentalmente por 1H RMN (ver ο Exemplo 10). 32φ se refere ao número teórico de grupos ε-amino, no dendrímero, disponíveis para substituição com PEG2100,2200. O número médio real de grupos PEG2100, 2200 ligados ao BHALys[Lys]32 foi determinado experimentaimente por 1H RMN (ver Exemplo 4, Lote 2 e lote 3).
Preparação de TDA-Composto A
Figure BR112019016409A2_D0065
[00256] A uma suspensão agitada magneticamente de Composto A (70 mg, 74,1 pmol) em DCM (5 mL) à temperatura ambiente foi adicionado anidrído tíodíglicólíco (TDA, 10 mg, 74,1 pmol) e DIPEA (33
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123/166 pL, 185 pmol). A suspensão se dissolveu rapidamente e a mistura foi deixada a agitar à temperatura ambiente durante a noite. Anidrído tiodiglicólico adicional foi adicionado ao longo das 24 horas seguintes até a reação ser considerada > 80% completa por HPLC. Os voláteis foram então removidos em vácuo e o resíduo purificado por HPLC preparativa (BEH 300 Waters XBridge C18, 5 μΜ, 30 x 150 mm, ACN/água a 60-80% (5-40 min), TFA a 0,1%, RT = 22 min) fornecendo 63 mg (70%) de produto como um sólido branco. LCMS (C18, gradiente: ACN/H2O a 50-60% (1-10 min), ACN a 60% (10-11 min), ACN a 60-50% (11-13 min), ACN a 50% (13-15 min), ácido fórmico a 0,1%, 0,4 mL/min, Rf (min) ™ 7,33. ESI (+ve) observado [M + H]+ = 1077. Calculado para C49H52CIF3N4O10S4 = 1076,22 Da. 1H-RMN (300MHz, CD3OD) δ (ppm): 0,87-1,04 (m, 1H), 1,08-1,36 (m, 3H), 1,711,90 (m, 1H), 1,96-2,40 (m, 3H), 2,64 (t, J = 12,0 Hz, 1H), 2,77 (t, J = 12,6 Hz, 1H), 2,94 (s, 3H), 3,18-3,30 (m, 2H), 3,35 (s, 2H), 3,40 (s, 2H), 3,46-3,55 (m, 2H), 3,73 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 12,9Hz, 1H), 4,02-4,15 (m, 1H), 4,40-4,48 (m, 3H), 6,86 (d, J = 9,3Hz, 2H), 6,92 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 9,0Hz, 1H), 7,08-7,46 (m, 13H), 7,61 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,67 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 8,08 (dd, J = 9,3, 2,1 Hz, 1H), 8,31 (d, J -2,1 Hz, 1H).
Método alternativo de preparação [00257] O composto A (25,50 g, 2,70 x 102 mol) e TDA (4,81 g,
3,64 x 10'2 mol, 1,35 equiv.) foram carregados em um recipiente de reação de 3 gargalos equipado com uma sonda de temperatura interna e funil de carga equaiizador de pressão, sob uma atmosfera de N2. DCM (255 mL, 10 vol.) foi introduzido e a suspensão resultante foi arrefecida até -10°C. TEA a 0,29 M em DCM, (100 mL, 3,77 x 10~2 mol,
1,4 equiv.) foi introduzido ao longo de um período de 40 minutos enquanto se mantinha a temperatura a ~10°C. Controles da reação em processo (IPC's) foram feitos a cada hora. A reação foi considerada
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124/166 completa quando o Composto A tinha <10% de área por HPLC (tipicamente 4,5 h após o final da adição). A mistura de reação foi diluída com DCM (1,66 L, 65 vol.) e lavada três vezes com solução salina tamponada com fosfato (PBS) (1,02 L, 40 vol.). Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgSÜ4 (100 g, 5% p/v), proporcionando um sólido amarelo pálido, após concentração em vácuo (0,2 bar, 25°C) durante a noite (tipicamente 24,5 g, rendimento de 85%, 86,83%, em HPLC).
Preparação de BHALys[Lys]32[a~TDA~Composto Afatít-PEGzioo, 22oo]32t Método de preparação de pequena escala
Figure BR112019016409A2_D0066
(teórico) *= BHALys[Lys]16 [00258] A uma mistura agitada magneticamente do Composto ATDA (62 mg, 58 pmol) e PyBOP (30 mg, 58 pmol) em DMF (1 mL) à temperatura ambiente foi adicionada uma mistura de BHALys[Lys]32[a~ NH2TFA]s2[£”PEG22oo]29 (97 mg, 1,28 pmol, Lote 2 do Exemplo 4) e
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NMM (27 pL, 0,24 mmol), também em DMF (2 mL). Após 16 horas à temperatura ambiente, os voláteis foram removidos e o resíduo foi purificado por cromatografia de exclusão por tamanho (sephadex, LH20, MeOH). As fracções apropriadas, conforme avaliado por HPLC, foram combinadas e concentradas. O resíduo foi, em seguida, retomado em água, filtrado (0,22 pm) e liofilizado, proporcionando 98 mg (72%) do material desejado como um sólido cor de rosa pálido. HPLC (C8 Xbrídge, 3 x 100 mm, gradiente: ACN/H2O a 42-50% (1-7 min), ACN a 50-80% (7-8 min), ACN a 80% (8-11 min), ACN a 80-42% (11-12 min), ACN a 42% (12-15 min), 214 nm, formato de amônio a 10 mM) Rf (min) = 10,24. 1H-RMN (300MHz, CD3OD) õ (ppm): 0,62-2,33 (m, 589H), 2,37-2,69 (m, 87H), 2,69-2,92 (m, 98H), 2,94-3,27 (m, 202H), 3,35 (s, 113H), 3,37-4,10 (m, 5781H), 4,10-4,70 (m, 154H), 6,50-8,45 (m, 661H).
Método (alternativo) de preparação de larga escala
Figure BR112019016409A2_D0067
*= BHALys[Lys]16
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126/166 [00259] DMF (495 mL, 16,5 vol.) foi adicionado a BHALys[Lys]32[aNH2TFA]32[e-PEG2ioo]29, (30,6 g, 3,82 x 10'4 mol, Lote 3 do Exemplo 4) e Composto A-TDA (19,01 g, 1,53 x 10’2 mol, 40 equiv.) sob uma atmosfera de N2. NMM (8,06 mL, 7,33 x 10-2 mol, 192 equiv.) foi introduzido, e a reação foi aquecida até 30°C para ajudar na dissolução (aproximadamente 10 min). A mistura foi então novamente arrefecida até 20 °C e PyBOP (9,20 g, 1,68 x 10-2 mol, 44 equiv.) foi introduzido em duas porções iguais. No monitoramento do controle do processo revelou a conclusão da reação após 2 h. A mistura de reação foi diluída com ACN (495 mL, 16,5 vol.), filtrada através de um funil de sinterização e submetida a 10 diavolumes constantes (600 mL, ACN) de ultrafiltração (Merck Millipore Pellicon 3, 2 x 0,11 m2 cassete), mantendo uma pressão transmembranar (TMP) de 18 PSI e 48 L/m2/hora (LMH). Concentração sob pressão reduzida (45°C, 0,2 bar; durante 30 min), e secagem à temperatura ambiente por 16 h adicionais produziu 45,7 g de produto purificado (Lote A) como um xarope amarelo escuro. Esse processo foi repetido para produzir outros 46,8 g de material (Lote B).
[00260] Os dois lotes (Lotes A e B) foram tomados individualmente em THF (4,7 vol.) e aquecidos a 35~40°C até a dissolução estar completa (10 min.). A um recipiente de fundo redondo de 3 gargalos separado, equipado com um termômetro interno, funil de carga equalizador de pressão e agitador magnético, foi adicionado MTBE (1,8 L, 19,5 vol.). O solvente foi então arrefecido até 0°C com o auxílio de um banho de gelo externo. As soluções de THF combinadas dos lotes A e B foram carregadas no funil de carga ao atingir a temperatura ambiente e introduzidas gota a gota à solução agitada de MTBE enquanto se mantinha a temperatura a 0°C. À primeira vista da nebulosidade, a reação foi semeada com BHALys[Lys]32[a~TDA~ Composto A]27[s-PEG22oo]29 sólido (0,95 g, 1% p/p em relação aos lotes
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127/166 de entrada A e B) e a adição foi retomada, com duração de 30 minutos. A cristalização foi deixada a amadurecer durante 60 minutos, antes de ser transferida para um filtro de vácuo Buchner (160 mm de diâmetro) sob N2 (com duração de 15 min.). O bolo de filtração foi iavado duas vezes com 5 vol. MTBE (300 mL por lavagem) e levado até à secura (sob N2) com uma duração total de 30 minutos. O bolo de filtração foi transferido para uma estufa de vácuo onde a secagem ocorreu a 40°C, 0,2 bar até se atingir uma massa constante (24 h), proporcionando pó branco de fluxo livre em 74,8 g (105% de rendimento). HPLC (C8 Phenomenix Aeris, 2,1 x 100 mm, gradiente: ACN a 5% (0-1 min), ACN/H2O a 5-45% (1-2 min), ACN a 45-60% (2-8 min), ACN a 60% (8-10 min), ACN a 60-90% (10-10,1 min), ACN a 90% (10,1-12 min), ACN a 90-5% (12-15 min), ACN a 5% (15-20 min), 272 nm, formato de amônio a 10 mM) Rf (min) ™ 14,92. 1H-RMN (300MHz, CD3OD) δ (ppm): 0,40-2,30 (m, 589H), 2,31-2,79 (m, 154H), 2,81-3,29 (m, 263H), 3,35 (s, 116H), 3,36-4,10 (m, 5924H), 4,13-4,62 (m, 151H), 6,28-8,52 (m, 622H). 19F-RMN (300MHz, DMSO-d6) õ: -
106,9 ppm (3,81 mg, FBA, integração do conjunto a 100), -79,0 ppm (21,4 mg dendrímero, 62,80). Isso proporciona 5,36 mg de Composto A (ou 25,1% de carga).
Exemplo 7: Preparação de BHALys[Lys]32[a-DGA-Composto A]32f[£PEG220o]32í [00261] Nota: 32| se refere ao número teórico de grupos a-amino disponível para substituição com DGA-Composto A. O número médio real de grupos DGA-Composto A ligados ao BHALys[Lys]32 foi determinado experimentalmente por 1H RMN (ver 0 Exemplo 10). 32t se refere ao número máximo teórico de grupos ε-amino disponíveis para substituição com PEG22oo. O número médio real de grupos PEG2200 ligados ao BHALys[Lys]32 foi determinado experimentalmente por 1H RMN (ver Exemplo 4, Lote 4).
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Preparação de DGA-Composto A
Figure BR112019016409A2_D0068
[00262] A uma suspensão agitada magneticamente de Composto A (77 mg, 81,5 pmoi) em DCM (5 mL) à temperatura ambiente foi adicionado anidrido digiicólico (9,6 mg, 81,5 pmol) e DIPEA (36 pL, 200 pmol). A suspensão se dissolveu rapidamente e a mistura foi deixada a agitar à temperatura ambiente durante a noite. Anidrido digiicólico adicional foi adicionado ao longo das 24 horas seguintes até a reação ser considerada > 80% completa por HPLC. Os voláteis foram então removidos em vácuo e o resíduo purificado por HPLC preparativa (BEH 300 Waters XBridge C18, 5 μΜ, 30 x 150 mm, ACN/água a 60-80% (5-40 min), TFA a 0,1%, RT = 22 min) fornecendo 76 mg (87%) de produto como um sólido branco. LCMS (C18, gradiente: ACN/H2O a 50-60% (1-10 min), ACN a 60% (10-11 min), ACN a 60-50% (11-13 min), ACN a 50% (13-15 min), ácido fórmico a 0,1%, 0,4 mL/min, Rf (min) = 5,93. ESI (+ve) observado [M + H]+ = 1061. Calculado para C49H52CIF3N4O11S3 ··· 1060,24 Da.
[00263] 1H-RMN (300MHz, CD3OD) õ (ppm): 0,86-1,04 (m, 1H), 1,08-1,32 (m, 2H), 1,70-1,90 (m, 1H), 1,97-2,08 (m, 1H), 2,08-2,20 (m, 1H), 2,22-2,38 (m, 1H), 2,65 (t, J = 12,3 Hz, 1H), 2,77 (t, J = 12,6 Hz, 1H), 2,92 (s, 3H), 3,15-3,29 (m, 2H), 3,36-3,42 (m, 2H), 3,46-3,54 (m,
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129/166
2H), 3,73 (d, J - 12,6 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 11,7Hz, 1H), 3,99-4,15 (m, 1H), 4,20 (s, 2H), 4,28 (s, 2H), 4,42 (j, J = 8,1 Hz, 1H), 4,45-4,54 (m, 2H), 6,86 (d, J - 9,3Hz, 2H), 6,92 (d, J - 9,6 Hz, 1H), 7,01 (d, J 9,3Hz, 1H), 7,10-7,26 (m, 4H), 7,26-7,47 (m, 7H), 7,59 (d, J - 7,8 Hz, 1H), 7,67 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 8,08 (dd, J - 9,0, 2,1 Hz, 1H), 8,31 (d, J -
2,1 Hz, 1H).
Preparação de BHALys[Lys]32[a-DGA-Composto A]32t[e-PEG22ool32t
Figure BR112019016409A2_D0069
BHALys[Lys]16 [00264] A uma mistura agitada magneticamente do Composto ADGA (76 mg, 72 pmol) e PyBOP (37 mg, 72 pmol) em DMF (1 mL) à temperatura ambiente foi adicionada uma mistura de BHALys[Lys]32[o~ NH2TFA]32[e-PEG22oo]29 (112 mg, 1,49 pmol, Lote 4 do Exempio 4) e NMM (31 pL, 0,29 mmol), também em DMF (2 mL). Após 16 horas à temperatura ambiente, os voláteis foram removidos e o resíduo foi purificado por cromatografia de exclusão por tamanho (sephadex, LH20, MeOH). As fracções apropriadas, conforme avaliado por HPLC, foram combinadas e concentradas. O resíduo foi, em seguida,
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130/166 retomado em água, filtrado (0,22 pm) e liofiiizado, proporcionando 137 mg (88%) do material desejado como um sólido cor de rosa pálido. HPLC (C8 Xbridge, 3 x 100 mm, gradiente: ACN/H2O a 42-50%) (1-7 min), ACN a 50-80% (7-8 min), ACN a 80% (8-11 min), ACN a 80-42% (11-12 min), ACN a 42% (12-15 min), 214 nm, formato de amônio a 10 mM) Rf (min) = 10,23. 1H-RMN (300MHz, CD3OD) õ (ppm): 0,58-2,26 (m, 834H), 2,28-2,72 (m, 154H), 2,74-3,28 (m, 245H), 3,35 (s, 101H), 3,37-4,02 (m, 5824H), 4,04-4,68 (m, 272H), 6,46-8,54 (m, 652H).
Exemplo 8: Preparação de BHALys[Lys]32[OGIUComposto Â]32t[ePEGnoo]32t [00265] Nota: 32| se refere ao número teórico de grupos a-amino no dendrímero disponível para substituição com Glu-Composto A. 32$ se refere ao número máximo teórico de grupos ε-amino disponíveis para substituição com PEG1100.
[00266] Preparação de BHALyslLysJazla-Glu-Composto AfarfePEGl1Oo]32t
Figure BR112019016409A2_D0070
*= BHALys[Lys]16 [00267] A uma mistura agitada magneticamente do Composto AGlu (57 mg, 54 pmol) e PyBOP (28 mg, 54 pmol) em DMF (1 mL) à
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131/166 temperatura ambiente foi adicionada uma mistura de BHALys[Lys]32[oNH2TFA]32[e-PEGhoo]32 (57 mg, 1,20 pmol) e NMM (25 pL, 0,23 mmoi), também em DMF (2 mL). Após 16 horas à temperatura ambiente, os voláteis foram removidos e o resíduo foi purificado por cromatografia de exclusão por tamanho (sephadex, LH20, ACN). As fracções apropriadas, conforme avaliado por HPLC, foram combinadas e concentradas. O resíduo foi, em seguida, retomado em água, filtrado (0,22 pm) e liofilizado, proporcionando 72 mg (78%) do materiai desejado como um sólido cor de rosa pálido. HPLC (C8 Xbridge, 3 x 100 mm, gradiente: ACN/H2O a 42-50%) (1-7 min), ACN a 50-80% (7-8 min), ACN a 80% (8-11 min), ACN a 80-42% (11-12 min), ACN a 42% (12-15 min), 214 nm, formato de amônio a 10 mM) Rf (min) - 10,40. 1H-RMN (300MHz, CD3OD) õ (ppm): 0,60-2,08 (m, 632H), 2,10-2,35 (m, 127H), 2,36-2,53 (m, 114H), 2,54-2,78 (m, 117H), 2,82-3,27 (m, 254H), 3,34 (s, 102H), 3,37-3,89 (m, 3226H), 3,90-4,58 (m, 185H), 6,36-8,52 (m, 654H).
Exemplo 9: Preparação de BHALys[Lys]32[O”MIDA-Composto A]32t[e-PEG 2100]32$ [00268] Nota: 32f se refere ao número teórico de grupos o-amino no dendrímero disponível para substituição com MIDA-Composto A. O número médio real de grupos MIDA-Composto A ligados a BHALys[Lys]32 foi determinado experimentalmente por 19F RMN (ver 0 Exemplo 10). 32φ se refere ao número teórico de grupos ε-amino, no dendrímero, disponíveis para substituição com PEG2100. O número médio real de grupos PEG2wo ligados a BHALys[Lys]32 foi determinado experimentalmente por 1H RMN (ver Exemplo 4, Lote 5 e 6). Preparação de MIDA-Composto A
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Figure BR112019016409A2_D0071
[00269] A uma suspensão agitada magneticamente de Composto A (200 mg, 0,21 mmol) em DCM (5 mL) à temperatura ambiente foi adicionado e DIPEA (24 pL, 0,14 mmol), NMM (72 pL, 0,66 mmol) e 4metilmorfolino-2,6-diona (33 mg, 0,26 mmol). A suspensão se dissolveu rapidamente e a mistura foi deixada a agitar à temperatura ambiente durante a noite. 4-metilmorfolino~2,6-diona adicional foi adicionada ao longo das 24 horas seguintes até a reação ser considerada > 80% completa por HPLC. Os voláteis foram então removidos em vácuo e o resíduo purificado por HPLC preparativa (BEH 300 Waters XBridge C18, 5 pM, 30 x 150 mm, ACN/água a 5070% (5-40 min), TFA a 0,1%, RT = 23 min) fornecendo 190 mg (84%) de produto como um sólido branco. LCMS (C18, gradiente: ACN/H2O a 50-60% (1-10 min), ACN a 60% (10-11 mln), ACN a 60-50% (11-13 min), ACN a 50% (13-15 min), ácido fórmico a 0,1%, 0,4 mL/min, Rf (min) 2,55. ESI (+ve) observado [M + H]+ - 1074. Calculado para C50H55CIF3N5O10S3 = 1073,28 Da. Ή-RMN (300MHz, CD3OD) õ (ppm): 0,86-1,07 (m, 1H), 1,08-1,37 (m, 2H), 1,72-1,88 (m, 1H), 1,96-2,09 (m, 1H), 2,10-2,24 (m, 1H), 2,24-2,38 (m, 1H), 2,66 (t, J = 12,3 Hz, 1H), 2,79 (t, J = 12,6 Hz, 1H), 2,92 (s, 3H), 3,00 (s, 3H), 3,14-3,28 (m, 2H), 3,33-3,43 (m, 2H), 3,47-3,57 (m, 2H), 3,72 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,89 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 4,03-4,15 (m, 1H), 4,06 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 4,43
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133/166 (d, J - 8,1 Hz, 1H), 4,54-4,64 (m, 2H), 6,88 (d, J - 9,0 Hz, 2H), 6,93 (d, J - 9,6 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,09-7,25 (m, 4H), 7,26-7,47 (m, 8H), 7,61 (d, J - 8,1 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 8,07 (dd, J 9,3, 2,1 Hz, 1H), 8,31 (d, J - 2,1 Hz, 1H).
Método alternativo de preparação [00270] O composto A (28,00 g, 2,96 x 10~2 mol) e 4-metilmorfolino-
2,6-diona (7,24 g, 5,33 x 10-2 mol, 1,80 equiv.) foram carregados em um recipiente de reação de 3 gargalos com uma sonda de temperatura interna e funil de carga equalizador de pressão, sob uma atmosfera de N2. DCM (250 mL, 9 vol.) foi introduzido e a suspensão resultante foi arrefecida até 0°C. TEA (6,25 mL, 4,44 χ 102 mol., 1,5 equiv.) em DCM (50 mL, 1,8 vol.) foi adicionado gota a gota ao longo de um período de 10 minutos enquanto se mantinha a temperatura a 0°C. Controles da reação em processo foram feitos a cada hora. A reação foi considerada completa quando o Composto A era <10% por área de pico (tipicamente 4,5 h após o final da adição). A mistura de reação foi diluída com DCM (1,40 L, 50 vol.) e lavada duas vezes com Na2CO3 aq. a 1,6 M (1,60 L, 50 vol.). A camada orgânica foi seca sobre MgSCU (90 g, 5% p/v), filtrada através de um funil de vidro sinterizado e lavada com DCM (100 mL, 5 vol.) proporcionando um sólido esbranquiçado, após concentração em vácuo (0,2 bar, 30°C) (33,07 g, 95% de rendimento, 90,6% por HPLC).
Preparação de BHALys[Lys]32[a-MIDA~Composto A]32t[s-PEG21 OOfet Método de preparação de pequena escala
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Figure BR112019016409A2_D0072
*= BHALys[Lys]16 [00271] A uma mistura agitada magneticamente do Composto AMIDA (730 mg, 0,68 mmol) e PyBOP (353 mg, 0,68 mmol) em DMF (10 mL) à temperatura ambiente foi adicionada uma mistura de BHALys[Lys]32[a-NH2TFA]32[£-PEG2ioo]3i (934 mg, 12,1 pmol, Lote 5 do Exemplo 4) e NMM (255 pL, 2,32 mmol), também em DMF (10 mL). Após 16 horas à temperatura ambiente, os voláteis foram removidos e o resíduo foi purificado por cromatografia de exclusão por tamanho (sephadex, LH20, ACN). As fracções apropriadas, conforme avaliado por HPLC, foram combinadas e concentradas. O resíduo foi, em seguida, retomado em água, filtrado (0,22 pm) e liofilizado, proporcionando 1,19 g (92%) do material desejado como um sólido cor de rosa pálido. HPLC (C8 Xbridge, 3 x 100 mm, gradiente: ACN/H2O a 42-50%) (1-7 min), ACN a 50-80% (7-8 min), ACN a 80% (8-11 min), ACN a 80-42% (11-12 min), ACN a 42% (12-15 min), 214 nm, formato de amônio a 10 mM) Rf (min) = 10,80. 1H-RMN (300MHz, CD3OD) õ (ppm): 0,45-1,92 (m, 565H), 2,08-2,78 (m, 228H), 2,79-3,00 (m, 96H),
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3,01-3,28 (m, 180H), 3,35 (s, 180H), 3,46-4,20 (m, 6164H), 4,20-4,68 (m, 139H), 6,40-8,52 (m, 680H).
Método (alternativo) de preparação de larga escala [00272] DMF (225 mL, 16,5 vol.) foi adicionado a BHALys[Lys]32[aNH2TFA]32[e-PEG2ioo]29, (13,49 g, 1,72 x 10'4 mol, Lote 6 do Exemplo
4) e Composto A-MIDA (8,50 g, 6,87 x 10‘3 mol, 40,2 equiv.) sob uma atmosfera de N2. NMM (3,60 mL, 3,30 x 10-2 mol, 192 equiv.) foi introduzido, e a mistura de reação foi aquecida até 30-35°C para ajudar na dissolução (aproximadamente 5 minutos). A mistura foi então novamente arrefecida até 20°C e PyBOP (4,13 g, 7,56 x 10 3 mol, 44 equiv.) foi introduzido em duas porções iguais. No monitoramento do controle do processo revelou a conclusão da reação após 2 h. A mistura de reação foi diluída com ACN (225 mL, 16,5 volumes), filtrada através de um funil de sinterização e submetida a 16 diavolumes (constantes) (200 mL, ACN) de ultrafiltração (Merck Millipore Pellicon 3, 0,11 m2 cassete, 10kDa), mantendo uma pressão transmembranar (TMP) de 25 PSI e 44 L/m2/hora (LMH). Concentração sob pressão reduzida (40°C, 0,2 bar; 60 minutos), e secagem à temperatura ambiente por 16 h adicionais produziu 23,5 g de material purificado como um xarope laranja claro. O xarope foi dissolvido em THF (235 mL, 10 volumes) a 35-40°C (10 minutos) e filtrado através de uma membrana PTFE de 0,45 micron, de 47 mm (Merck-Millippore Omnipore). O filtrado foi concentrado para metade do seu volume original (100 mL, 4,3 volumes) e carregado para um funil de carga equalizador de pressão enquanto retorna à temperatura ambiente.
[00273] MTBE (400 mL, 19,5 volumes) foi carregado para um BFR de 3-gargalos equipado com uma sonda de temperatura interna, e arrefecido até 0°C com o auxílio de um banho de gelo externo sob uma atmosfera de N2. Ao atingir 0°C, a adição de dendrímero começou
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136/166 com uma duração de 15 minutos (temperatura interna máxima de 5°C), enquanto a agitação continuou durante 45 minutos (a 0-5 °C) de modo a permitir o amadurecimento do precipitado. Transferir a mistura resultante para um filtro de vácuo Buchner (160 mm de diâmetro), sob N2, proporcionou o primeiro bolo úmido dentro de 15 minutos. O bolo de filtração foi lavado duas vezes com 5 vol. MTBE (100 mL por lavagem) e levado até à secura (sob N2) com uma duração total de 15 minutos. O bolo de filtração foi transferido para uma estufa de vácuo onde a secagem ocorreu a 25°C, 0,2 bar até se atingir uma massa constante (48 h), proporcionando pó branco de fluxo livre em 18,98 g (102% de rendimento). HPLC (C8 Phenomenix Aeris, 2,1 x 100 mm, gradiente: ACN a 5% (0-1 min), ACN/H2O a 5-45% (1-2 min), ACN a 45-60% (2-8 min), ACN a 60% (8-10 min), ACN a 60-90% (10-10,1 min), ACN a 90% (10,1-12 min), ACN a 90-5% (12-15 min), ACN a 5% (15-20 min), 272 nm, formato de amônio a 10 mM) Rf (min) ™ 14,94. 1H-RMN (300MHz, CD3OD) õ (ppm): 0,31-2,84 (m, 953H), 2,86-3,27 (m, 211H), 3,35 (s, 109H), 3,37-4,23 (m, 5734H), 4,24-4,64 (m, 95H), 6,26-8,41 (m, 632H). 19F-NMR (300MHz, DMSO-de) õ: -107,1 ppm (3,64 mg, FBA, integração do conjunto a 100), -79,1 ppm (31,2 mg dendrímero, 108,82). Isso proporciona 8,91 mg de Composto A (ou 28,6% de carga).
Exemplo 10: Introdução de Fármaco do Composto de dendrímeros [00274] A introdução de fármaco do Composto A nos dendrímeros preparados nos Exemplos 5-9 acima foi determinada por RMN.
[00275] % de introdução de Composto A por 1H RMN: A introdução de Composto A foi estimada por meio da integração da região aromática (6,5-8,5 ppm), que era representativa do Composto A, em comparação com a região PEG (3,4-4,2 ppm), que é representativa do suporte do dendrímero. No Exemplo 5 mostrado na tabela abaixo, 0
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137/166 número teórico de prótons para os 32 grupos do Composto A, mais o BHA residual do dendrímero é 650H. Apenas 631H foram observados, indicando que apenas 97% ou 31 dos 32 locais foram ocupados pelas moléculas do Composto A. A % do Composto A foi então calculada multiplicando o MW (Composto A) por 31, depois dividindo pelo MW do total do construto, isto é, introdução do Composto A (945 x 31)/104,500 = 0,28 (ou 28%).
[00276] % de introdução de Composto A por 19F RMN: As introduções do Composto A foram calculadas através da realização de uma 19F RMN do conjugado usando um padrão interno (ácido 4fluorobenzóico, FBA). Uma experiência seria tipicamente realizada pesando com precisão uma massa conhecida de dendrímero e FBA em um único recipiente. Esse seria então retomado em DIVISO, sonicado (2 min) e depois analisado por RMN (100 varrimentos, 30 segundos de atraso). Os picos de FBA e de dendrímero seriam então integrados e a % de Composto A calculada usando razões molares (proporção molar de 3:1 de Composto (3F) para FBA (1F).
Tabela 8. Introdução Percentual do Composto A em Dendrímero Lys
Exemplo Escala Introdução de Composto A (%) MW* (kDa) N°. de Composto A por dendrímero
5 101 mg 28,2 (1H RMN) 104,5 31
6 Pequena Escala (98 mg) 28,6 (1H RMN) 106,0 32
Larga Escala (74,8 g) 25,1 (19F RMN) 96,2 27
7 137 mg 28,8 (1H RMN) 105,6 32
9 Pequena Escala (1.19 g) 23,6 (19F RMN) 99,7 25
Larga Escala (18,98 g) 28,6 (19F RMN) 101,6 31
*0 peso mo ecular total pode ser estimado usando os MW estimados do suporte do
dendrímero, o MW do Composto A-Hgante e a % de introdução de Composto A a partir de RMN, isto é, para [00277] Exemplo: MW™ MW do suporte do dendrímero - 32(MW
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TFA) /(100- introdução de Composto A %((Mr o Composto A-ligante
- água)/Mr Composto A))/100 = 75700 - 3648 (100 - 28.2((1058 - 18)/945))/100 = 72052 (100-28,2(1,10))/100 = 72052
0,6898
- -104,5 kDa
Exemplo 11: Estudo de liberação In vitro em Dendrímeros (pH 7,4 em DMA a 10% de PBS)
Protocolo:
[00278] 1. Preparar tampão PBS-PBS preparado por dissolução de comprimido PBS (Sigma, P4417) em 200 mL de água desionizada, proporcionando tampão fosfato a 0,01 M, cloreto de potássio a 0,0027M e cloreto de sódio a 0,137M a pH 7,4, 37°C.
[00279] 2. Preparar mistura 9:1 de PBS/DMA v/v diluindo 9 mL de tampão PBS com 1 mL de DMA.
[00280] 3. Preparar soluções de dendrímero a 1 mg/mL em mistura de PBS/DMA em recipientes de 2 mL de HPLC.
[00281] 4. Liberação do monitor do Composto A à temperatura ambiente por meio de HPLC a 2 intervalos de uma hora.
[00282] Método HPLC (C8 Xbridge, 3 x 100 mm, gradiente: ACN/H2O a 42-50%) (1-7 min), ACN a 50-80% (7-8 min), ACN a 80% (8-11 min), ACN a 80-42% (11-12 min), ACN a 42% (12-15 min), 243 nm, formato de amônio a 10 mM).
Tabela 9a. Percentagem de Composto A Liberado (Exemplos 5-8)
% de Composto A liberado*
tempo DGA PEG2200 TDA PEG2100 Glu PEG2200 Glu PEG1100
(h) Exemplo 7 Exemplo 6 Exemplo 5 Exemplo 8
0 0 0 0 0
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0,5 2.5 4.5 6.5 10,1 62,7 80 81 5,2 24,8 39,5 50 0,43 2,65 4,38 5,96 0,44 1,86 2,96 4,35
Conforme avaliado pela comparação da área so b os picos para o Composto A (8,6
min) versus a área sob o pico para o dendrímero (10,8 min) por HPLC.
Tabela 9b. Percentagem de Composto A Liberado (Exemplo 9)
% de Composto A liberado*#
tempo (h) MIDA PEG2100 Exemplo 9
0 1,43
2 10,59
4 17,54
6 23,71
[00283] Conforme avaliado pela comparação da área sob os picos para o Composto A (8,6 min) versus a área sob o pico para o dendrímero (10,8 min) por HPLC. # o Exemplo 9 foi executado como uma experiência separada.
Exemplo 12: Estudo de liberação In vitro em Dendrímeros (pH 4,5 em ácido cítrico a 0,1 M)
Protocolo:
[00284] 1. Preparar uma solução de ácido cítrico a 0,1 M (7,68 g de ácido cítrico diluído para 400 mL com água desionizada) e ajustar o pH para 4,5.
[00285] 2. Preparar soluções de dendrímero a 1 mg/mL em solução de ácido cítrico em recipientes de 2 mL de HPLC.
[00286] 3. Liberação do monitor do Composto A à temperatura ambiente por melo de HPLC em vários intervalos de tempo.
[00287] Método HPLC (C8 Xbridge, 3 x 100 mm, gradiente: ACN/H2O a 42-50%) (1-7 min), ACN a 50-80% (7-8 min), ACN a 80% (8-11 min), ACN a 80-42% (11-12 min), ACN a 42% (12-15 min), 214 nm, formato de amônio a 10 mM).
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Tabela 10a. Percentagem de Composto A Liberado (Exemplos 5-8)
% de Composto A Liberado*
tempo (d) DGA PEG2200 Exemplo 7 TDA PEG2100 Exemplo 6 Glu PEG2200 Exemplo 5
0 0 0 0
0,1 4,2 1,3 0,2
0,75 17,5 5,5 0,4
1,75 32,5 10,5 1,2
7 63 30 3,6
*Conforme avaliado pela comparação da área sob os picos para o Composto A (8,6 min) versus a área sob o pico para a macromolécula (10,8 min) por HPLC.
Tabela 10b. Percentagem de Composto A Liberado (Exemplo 9)
% de Composto A Liberado*
tempo (d) Ml DA PEG2100 Exemplo 9
0 1,83
2 33,87
5 65,03
7 80,7
*Conforme avaliado pela comparação da área sob os picos para o Composto A (8,6 min) versus a área sob o pico para a macromolécula (10,8 min) por HPLC. #o Exemplo 9 foi executado como uma experiência separada.
Exemplo 13: Dependência de pHde Liberação Iniciai de Composto A a partir dos Exemplos de 6 e 9 para a entrega de Veículo [00288] Um método de HPLC-UV foi usado para determinar a taxa de hidrólise do Composto A a partir da macromolécula a pH 2,1, pH 3, pH 4, pH 5, pH 6, pH 7 e pH 8.
[00289] O tampão Mcllvane a pH 2,2 foi preparado por adição de 50 mL de água desionizada a 0,14 g de dodeca-hidrato de fosfato dissódico e 2,06 g de mono-hidrato de ácido cítrico. A solução foi preparada para um volume total de 100 mL com água desionizada e o pH foi confirmado.
[00290] O tampão Mcllvane a pH 3 foi preparado por adição de 50 mL de água desionizada a 1,47 g de dodeca-hidrato de fosfato
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141/166 dissódico e 1,67 g de mono-hidrato de ácido cítrico. A solução foi preparada para um volume total de 100 mL com água desionizada e o pH foi confirmado.
[00291] O tampão Mcllvane a pH 4 foi preparado por adição de 50 mL de água desionizada a 2,76 g de dodeca-hidrato de fosfato dissódico e 1,29 g de mono-hidrato de ácido cítrico. A solução foi preparada para um volume total de 100 mL com água desionizada e o pH foi confirmado.
[00292] O tampão Mcllvane a pH 5 foi preparado por adição de 50 mL de água desionizada a 3,69 g de dodeca-hidrato de fosfato dissódico e 1,02 g de mono-hidrato de ácido cítrico. A solução foi preparada para um volume total de 100 mL com água desionizada e o pH foi confirmado.
[00293] O tampão Mcllvane a pH 6 foi preparado por adição de 50 mL de água desionizada a 4,52 g de dodeca-hidrato de fosfato dissódico e 0,77 g de mono-hidrato de ácido cítrico. A solução foi preparada para um volume total de 100 mL com água desionizada e o pH foi confirmado.
[00294] O tampão Mcllvane a pH 7 foi preparado por adição de 50 mL de água desionizada a 5,90 g de dodeca-hidrato de fosfato dissódico e 0,37 g de mono-hidrato de ácido cítrico. A solução foi preparada para um volume total de 100 mL com água desionizada e o pH foi confirmado.
[00295] O tampão Mcllvane a pH 8 foi preparado por adição de 50 mL de água desionizada a 6,97 g de dodeca-hidrato de fosfato dissódico e 0,06 g de mono-hidrato de ácido cítrico. A solução foi preparada para um volume total de 100 mL com água desionizada e o pH foi confirmado.
[00296] 1-2 mg de dendrímero foram pesados com precisão para um recipiente e 1 mL de tampão foram adicionados. A amostra foi
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142/166 agitada magneticamente a 37°C durante até 130 h. A amostra foi analisada periodicamente por HPLC-UV. A concentração livre do Composto A foi determinada por comparação da resposta HPLC-UV do Composto A na amostra com a resposta HPLC-UV de um padrão de concentração conhecida.
Tabela 11. Método de HPLC para o Exemplo 13
Preparação Padrão: 5 mg Comp. A em 10 mL 1:1 MeCNÁgua
Coluna: Waters XBrídge C8, 50 x 4,6 mm, 2,7 pm
Temperatura da Coluna: 40 °C
Volume de injeção (pL): 5 pL (estratégia do programa injetor da
amostra com 5 pL de dimetilacetamida)
Comprimento de onda de detecção:
Taxa de fluxo (mL/min)
Fase Móvel A (MPA): TFA a 0,3% em Água
Fase Móvel B (MPB): TFA a 0,3% em Acetonitrila
Calendarização: Tempo (min) % MPA % MPB
0
[00297] A constante de velocidade em cada pH foi calculada a partir das concentrações da solução observadas ao longo do tempo usando um método de ajuste de mínimos quadrados. As constantes de velocidade observadas estão resumidas na Figura 8. Os dados mostram que o Exemplo 9 exibiu menos variação na liberação inicial ao longo da gama de pH testada do que o Exemplo 6.
Exemplo 14: Liberação in v/tro do Composto A dos Dendrímeros no Plasma de Ratos e Camundongos [00298] Protocolo: A 0,5 mL de plasma de camundongo (ou rato) (centifugado e filtrado) foi adicionado 0,1 mL de solução de dendrímero (aproximadamente 2 mg/mL de Composto A equivalente em solução salina). As misturas foram submetidas a vórtex (30 s) e depois incubadas a 37°C. Em vários pontos temporais, alíquotas (0,1 mL) foram removidas e adicionadas a ACN (0,2 mL, ácido fórmico a 5%). As misturas resultantes foram submetidas a vórtex (30s),
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143/166 centrifugadas (10 min, 4°C), filtradas e analisadas por HPLC ((C8 Xbridge, 3 x 100 mm, gradiente: ACN/H2O a 42-50%) (1-7 min), ACN a 50-80% (7-8 min), ACN a 80% (8-11 min), ACN a 80-42% (11-12 min), ACN a 42% (12-15 min), 243 nm, formato de amônio a 10 mM, RT (Composto A) = 6,7 min). Para a experiência de plasma de camundongo, a quantidade de Composto A foi quantificada contra um padrão de Composto A e % liberada calculada comparando 0 material liberado com 0 material introduzido no conjugado. Para a experiência de plasma de camundongo, a liberação de DGA PEG2200 (Exemplo 7) a 22,5 horas foi usada como padrão e ajustada para 100%. Os resultados estão resumidos nas Tabelas 12a e 12b.
Tabela 12a. Resultados da liberação in vitro do Composto A no plasma de rato
% de Composto A Liberado em Plasma de Rato a 37°C*
tempo (h) DGA PEG2200 Exemplo 7 TDA PEG2100 Exemplo 6 MIDA PEG2100 Exemplo 9 Glu PEG2200 Exemplo 5 Glu PEG1100 Exemplo 8
0 0 0 0 0 0
0,5 32 6 3 0,3 0,2
2,5 93 31 9 3,5 2,6
4,5 96 49 14 4,8 4,5
22,5 100 89,5 57 25,3 21
*Todos os dados são normalizados contra o DGA PEG2200 (Exemplo 7) e presumem que haja liberação total nesse exemplo.
Tabela 12b. Resultados da liberação in vitro do Composto A no plasma de camundongo
% de Composto A Liberado em Plasma d e Camundongo a 37°C*
tempo DGA PEG2200 TDA PEG2100 MIDA PEG2100 Glu PEG2200 Glu PEG1100
(h) Exemplo 7 Exemplo 6 Exemplo 9 Exemplo 5 Exemplo 8
0 0 0 0 0 0
0,5 32,6 9,1 2,1 0,9 1,4
2,5 70,8 33,2 6,7 2,9 2,8
4,5 76,1 50,6 11,3 5,8 4,3
22,5 87,5 88,4 46,5 22,9 22,1
*Medido contra uma solução padrão de Composto A
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144/166
Exemplo 15: Solubilidade do Dendrímero em pH 7,4 e pH 4,5 Protocolo:
[00299] 1. Pesar com precisão 10 mg de dendrímero em um recipiente [00300] 2. Adicionar, cuidadosamente, alíquotas de tampão ao recipiente para obter a dissolução. Nota: a mistura foi suavemente agitada durante vários minutos entre alíquotas. A sonicação também foi usada para ajudar na dissolução.
Tabela 13. Resultados dos estudos de solubilidade em pH 7,4 e pH 4,5
Ligante Peso molecular (kDa) % wm peso do Composto A (a partir de RMN) Solubilidade a pH 7,4 em Dendrímero PBS mg/mL (Composto A mg/mL) Solubilidade a pH 4,5 em Dendrímero ácido cítrico a 0,1M mg/mL (Composto A mg/mL)
Exemplo 5 104,5 28,2 158 (44,5) 162 (45,7)
Exemplo 6 106,0 28,6 153 (43,6) 141 (40,2)
Exemplo 7 105,6 28,8 142 (41,0) 157 (45,2)
Exemplo 8 76,7 39,4 125 (49,3) 121,3 (48,0)
Exemplo 16: Solubilidade do Dendrímero em pH 4 e pH 5
[00301] Um método visual foi usado para determinar a solubilidade dos dendrímeros em tampões aquosos. Os dados representam experiências únicas.
[00302] O tampão Mcllvane a pH 5 foi preparado por adição de 50 mL de água desionizada a 3,69 g de dodeca-hidrato de fosfato dissódico e 1,02 g de mono-hidrato de ácido cítrico. A solução foi preparada para um volume total de 100 mL com água desionizada e o pH foi confirmado.
[00303] O tampão Mcllvane a pH 4 foi preparado por adição de 50 mL de água desionizada a 2,76 g de dodeca-hidrato de fosfato dissódico e 1,29 g de mono-hidrato de ácido cítrico. A solução foi preparada para um volume total de 100 mL com água desionizada e o
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145/166 pH foi confirmado.
[00304] 1 mL de tampão foi adicionado a um recipiente de vidro e um agitador magnético foi adicionado. Dendrímero foi adicionado em alíquotas ao recipiente enquanto se agitava. Ambos os dendrímeros dos Exemplos 6 e 9 obtiveram dissolução completa após adição de ca. 250 mg, após o que a solução era demasiado viscosa para se agitar adequadamente. A solubilidade é reportada como gramas de soluto por grama de solução e assume que a densidade do tampão é de 1 g/mL.
Tabela 14. Resultados dos estudos de solubilidade em pH 4 e pH 5
Exemplo Tampão Observação visual da solubilidade Composto A equivalente
Exemplo 6 Tampão Mcllvane, pH 4 >0,189 g/g >0,048 g/g
Exemplo 9 Tampão Mcllvane, pH 5 >0,224 g/g >0,064 g/g
Exemplo 17: Formulações de Dendrímero
7. Formulações para estudos de Telemetria de Ratos [00305] Os recipientes contendo a quantidade apropriada de dendrímero liofilizado foram selecionados. Aproximadamente 0,5-1 mL de solução salina tamponada com fosfato (PBS) foram então adicionados a cada recipiente e os recipientes submetidos a vórtice até o dendrímero estar em solução. O conteúdo de cada recipiente foi combinado e transferido para um recipiente único com enxaguamento com o PBS restante de modo a aumentar o volume. Com a exceção do Exemplo 8, as formulações foram preparadas à temperatura ambiente. As formulações contendo o Exemplo 8 foram aquecidas suavemente em um banho de água regulado para 40 °C para auxiliar a dispersão do Exemplo 8 no veículo. Todas as formulações foram administradas imediatamente, pelo menos dentro de 30 minutos após a preparação. Um resumo das formulações de PBS é encontrado na Tabela 15a.
Tabela 15a. Formulações PBS dos Exemplos 5, 6 e 8 para estudos de
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146/166 telemetria em ratos
Ingredientes Exemplo 5 (2 mg/mL de Composto A equivalente) Exemplo 5 (6 mg/mL de Composto A equivalente) Exemplo 6 (2 mg/mL de Composto A equivalente) Exemplo 6 (4 mg/mL de Composto A equivalente)
Solução salina tamponada com fosfato -9.5 mL -9.5 mL -9,5 mL -9,5 mL
Dendrímero 67 mg 201 mg 67 mg 134 mg
Ingredientes Exemplo 6 (6 mg/mL de Composto A equivalente) Exemplo 8 (2 mg/mL de Composto A equivalente) Exemplo 8 (6 mg/mL de Composto A equivalente)
Solução salina tamponada com fosfato -9.2 mL -9,5 mL -10,3 mL
Dendrímero 194 mg 67 mg 218 mg
[00306] Tampão citrato-fosfato (Mcllvaine) pH 4 foi preparado. Por 100 mL de tampão, 1,29 g de mono-hidrato de ácido cítrico e 2,76 g de dodeca-hidrato de fosfato sódico foram pesados para um cilindro e foram adicionados 95 mL de água para injeção. O veículo foi agitado (ou sonicado) de modo a dissolver. O pH foi, então, medido e ajustado até pH 4, com HCI ou NaOH a 0,1 M, conforme necessário. O veículo foi ajustado em volume com água para injeção.
[00307] Os recipientes contendo a quantidade apropriada de dendrímero liofilizado foram selecionados. 0,5-1 mL de tampão de citrato-fosfato (Mcllvaine) pH4 foram então adicionados a cada recipiente e os recipientes foram misturados, com agitação em vórtex, se necessário, até que a macromolécula estivesse em solução. O conteúdo de cada recipiente foi combinado e transferido para um recipiente único com enxaguamento com o PBS restante de modo a aumentar o volume. Esses foram administrados imediatamente, pelo menos dentro de 30 minutos após a preparação. Um sumário
Tabela 15b. Formulações do Exemplo 9 para estudos de telemetria em ratos
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147/166
Ingredientes Exemplo 9 (2 mg/mL de Composto A equivalente) 22,6 mg/mL Exemplo 9 (6 mg/mL de Composto A equivalente)
Tampão de Citrato/Fosfato Mclllvanes, pH4 -8 mL -8 mL
Dendrímero 60 mg 181 mg
2. Formulações para Estudos de Precipitação (Solubilidade) [00308] Preparação de tampão de citrato-fosfato: O seguinte método foi usado para administrar tampões citrato/fosfato. A quantidade apropriada de ácido cítrico e dodeca-hidrato dibásico de fosfato sódíco foi pesada em um balão volumétrico de 100 mL e 95 mL de água para injeção foram adicionados, seguido por agitação (ou sonicação). O pH da solução resultante foi ajustado até ao pH alvo (isto é, 4 ou 5) e o tampão foi ajustado até ao volume com água para injeção ((/sto é, 100 mL).
Tabela 15c. Composição de tampão de citrato-fosfato (Mcllvaine), por
100 mL de tampão para estudos de precipitação (solubilidade)
P pH Tampão Mono-hidratado de ácido cítrico/gramas dodeca-hidrato dibásico de fosfato sódico/gramas
Exemplo 6 4 1,29 2,76
Exemplo 9 5 1,02 3,69
[00309] Reparação de veículo: Tampões de citrato-fosfato (Mcllvaine), delineados na Tabela 15c, foram usados para preparar os veículos tamponados diluídos efetuando uma diluição de 1:10 com glucose a 5% p/v, na presença ou ausência de Kolliphor HS-15 a 1% p/v ((15)-hldroxiestearato de polietilenoglicol).
[00310] Solução de glucose a 5% p/v comercialmente disponível foi adicionada a aproximadamente 90% do volume alvo. Para os veículos tampão diluídos contendo Kolliphor, uma quantidade de Kolliphor HS15 equivalente a 1% p/v foi adicionada e o veículo foi agitado para dissolver o Kolliphor HS-15. Subsequentemente, o pH foi ajustado para um pH alvo com HCI ou NaOH a 0,1 M (se necessário). Os
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148/166 veículos foram então ajustados em volume com glucose a 5% p/v e filtrados usando um filtro de seringa PVDF com poro de 0,22 pm de tamanho.
[00311] Preparação da formulação: As formulações contendo o Exemplo 6 e o Exemplo 9 (na presença ou ausência de Kolliphor HS15) foram preparadas em uma escala de 5 mL em veículo tamponado diluído, em duplicado (n = 2), nas concentrações indicadas na Tabela 15d abaixo:
Tabela 15d. Formulações contendo os Exemplos 6 e 9 com e sem
Kolliphor
Exemplo Cone. do Composto A (mg/mL) Cone. de dendrímero (mg/mL) pH da Formulação
Exemplo 6 0,74 3 4
Exemplo 6 24,8 100 4
Exemplo 9 0,9 3 5
Exemplo 9 28,6 100 5
[00312] De modo a preparar as formulações, a quantidade apropriada de dendrímero foi pesada em um recipiente adequado com um agitador magnético. Enquanto o agitador magnético estava em funcionamento, o veículo tamponado diluído (pH 4 ou pH 5 tampão citrato/fosfato diluído 1:10 com glucose a 5% p/v contendo Kolliphor HS-15 a 1% p/v) foi adicionado de modo a atingir 95% do volume alvo. A formulação foi continuamente agitada para auxiliar a dissolução, evitando a geração de espuma excessiva, até que uma solução límpida fosse formada e o pH ajustado. Subsequentemente, a formulação foi ajustada para o volume (5 mL) com veículo tamponado diluído e o pH final foi registrado.
[00313] Avaliação da cinética de precipitação: A formulação foi armazenada à temperatura ambiente e protegida da luz e as amostras foram visualmente avaliadas usando um Seidenader e caixa de luz nos
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149/166 pontos temporais de 0, 3, 6, 24, 48, 72 e 96 horas de forma a excluir a presença de matéria particulada. A Tabela 15e fornece um resumo das observações de avaliação visual.
Tabela 15e. Resumo das observações de precipitação
Exemplo Cone. de dendrímero (mg/mL) Comentários
Exemplo 6 (^Kolliphor HS15) 3 Nenhuma precipitação observada até sete dias
100 Nenhuma precipitação observada até sete dias
Exemplo 6 (- Kolliphor HS15) 3 Nenhuma precipitação observada até sete dias
100 Nenhuma precipitação observada até sete dias
Exemplo 9 (+Kolliphor HS15) 3 Nenhuma precipitação observada até 96 horas
100 Início de precipitação a 42 horas
Exemplo 9 (- Kolliphor HS15) 3 Nenhuma precipitação observada até 96 horas
100 Início de precipitação a 42 horas
Ό0314] Dada a muito baixa soiubi idade aquosa do Composto A, a
precipitação observada era esperada ao longo de um período temporal muito mais curto.
3. Formulações para estudos de toxicologia [00315] As formulações para estudos toxlcológicos do Exemplo 6: O Exemplo 6 foi formulado a pH 4 em um tampão de citrato-fosfato diluído 1:10 com glucose a 5% e contendo Kolliphor HS-15 a 1% p/v ((15)-hidroxiestearato de polietilenoglicol), em concentrações até 121 mg/mL do Exemplo 6 (até à concentração do Composto A de 30 mg/mL).
[00316] Preparação de tampão de citrato-fosfato: A quantidade apropriada de tampão de citrato-fosfato (Mcllvaine) pH4 foi preparada conforme realçado na Tabela 14 acima.
[00317] Preparação de veículo: Tampão de citrato-fosfato, pH 4 (tal
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150/166 como na Tabela 15c), foi usado para preparar os veículos tamponados diluídos efetuando uma diluição de 1:10 com glucose a 5% p/v, na presença de Kolliphor HS-15 a 1% p/v conforme realçado na secção precedente.
[00318] Preparação da formulação: Tampão de citrato/fosfato a pH 4 diluído 1:10 com glucose a 5% e contendo Kolliphor HS-15 a 1% p/v foi usado para preparar as formulações do Exemplo 6 tal como realçado na secção precedente.
[00319] As formulações do Exemplo 6 foram preparadas à temperatura ambiente e doseadas dentro dos 60 minutos após a preparação. As formulações contendo entre 4 mg/mL e 25 mg/mL do Exemplo 6 (equivalente a 1 mg/mL e 6,2 mg/mL do Composto A) foram preparadas. Volumes variaram de 15 mL a 47 mL. Para excluir a presença de partículas, a formulação foi avaliada visualmente.
[00320] Formulações para estudos toxicológlcos da macromolécula do Exemplo 9: O Exemplo 9 foi formulado a pH 5 em um tampão de citrato-fosfato diluído 1:10 com glucose a 5% e contendo Kolliphor HS15 a 1% p/v ((15)-hidroxiestearato de polietilenoglicol), em concentrações desde 3,1 mg/mL até 105 mg/mL do Exemplo 9 (equivalente a uma concentração do Composto A de 0,9 mg/mL e 30 mg/mL).
[00321] Preparação de tampão de citrato-fosfato: 100 mL de tampão de citrato-fosfato (Mcllvaine) pH 5 foram preparados, conforme descrito na seção anterior.
[00322] Preparação de veículo: Tampão de citrato-fosfato (Mcllvaine), pH 5 (tal como no Exemplo 16b), foi usado para preparar os veículos tamponados diluídos efetuando uma diluição de 1:10 com glucose a 5% p/v, na presença de Kolliphor HS-15 a 1% p/v conforme realçado na secção precedente.
[00323] Preparação da formulação: pH 5 tampão de citrato-fosfato
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151/166 diluido 1:10 com glucose a 5% e contendo Kolliphor HS-15 a 1% p/v foi usado para preparar as formulações do Exemplo 9 tal como realçado na secção precedente. Para excluir a presença de partículas, a formulação foi avaliada visualmente.
[00324] As formulações do Exemplo 9 foram preparadas à temperatura ambiente e doseadas dentro dos 75 minutos após a preparação. As formulações contendo entre 12,5 mg/mL e 100 mg/mL do Exemplo 9 (equivalente a uma concentração do Composto A de 3,6 mg/mL e 28,6 mg/mL) foram preparadas. Os volumes variaram de 6 mL a 18 mL.
Exemplo 18: Estudos de eficácia de Rato e Camimdongo [00325] As formulações usadas nos estudos de eficácia foram preparadas conforme se segue:
[00326] Preparação das formulações dos Exemplos 6 e 9 de Macromolécuias PBS para estudo de eficácia de dosagem de RS4;11: A quantidade apropriada dos Exemplos 6 ou 9 foi pesada em um balão volumétrico. 10 mL de Solução Salina Tamponada com Fosfato (PBS) de Dulbecc foram adicionados e as formulações foram então agitadas até o composto se dissolver completamente. Veja também a preparação de formulações para estudos de telemetria de ratos no Exemplo 17a.
[00327] Formulações do Exemplo 6 para dosagem no estudo de eficácia de SuDHL-4: A macromolécula do Exemplo 6 pode ser formulada em um tampão de citrato/fosfato a pH 4 diluído 1:10 com Glucose a 5% e contendo Kolliphor HS-15 a 1% p/v, a concentrações até 121 mg/mL do Exemplo 6 (equivalente a até 30 mg/mL da concentração do Composto A).
[00328] 100 mL de tampão de citrato/fosfato de Mcllvane a pH 4 foram preparados. 1,29 g de mono-hidrato de ácido cítrico e 2,76g de dodeca-hidrato de fosfato sódico foram pesados para um recipiente e
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152/166 foram adicionados 95 mL de água para injeção. O veículo foi agitado (ou sonicado) de modo a dissolver. O pH foi, então, medido e ajustado até pH 4, com HCI ou NaOH a 0,1 M, conforme necessário. O veículo foi ajustado em volume (100 mL) com Água para Injeção.
[00329] Este tampão Mcllvane foi usado para preparar o veículo tampão diluído (tampão de citrato/fosfato a pH 4 diluído 1:10 com glucose a 5% e contendo Kolliphor HS-15 a 1% p/v). A quantidade necessária de tampão de citrato/fosfato de Mcllvane, equivalente a 10% do volume alvo total a ser preparado, foi adicionada a um recipiente adequado. Solução de glucose a 5% comercialmente disponível foi adicionada a aproximadamente 90% do volume alvo. Kolliphor HS-15 equivalente a 1% p/v foi adicionado e o veículo foi agitado para dissolver o Kolliphor HS-15. O pH foi medido e ajustado para pH 4,0 ± 0,05 com HCI ou NaOH 0,1M (se necessário). O veículo foi, então, ajustado em volume com glucose a 5%. Esse foi esterilizado por filtração usando um filtro de seringa com tamanho de poro de 0,22 pm, se necessário.
[00330] Para preparar a formulação do Exemplo 6 para a dose mais elevada (10 mg/mL do Composto A ou Exemplo 6 equivalente a 39 mg/mL), 390 mg do Exemplo 6, equivalente a 100 mg do Composto A, foram transferidos para um recipiente adequado com um agitador magnético. Enquanto o agitador magnético estava em funcionamento, o veículo tamponado diluído (tampão de citrato/fosfato a pH 4 foi diluído 1:10 com glucose a 5% contendo Kolliphor HS-15 a 1% p/v) foi adicionado a 95% do volume alvo (9,5 mL). A agitação da formulação foi continuada para auxiliar a dissolução, evitando a geração de espuma excessiva, até que foi formada uma solução límpida. A formulação foi, então, ajustada para o volume (0,5 mL) com veículo tamponado diluído e o pH final foi verificado. A formulação foi avaliada visualmente de modo a excluir a presença de partículas. 2 e 6 mg/mL
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153/166 foram preparados a partir da concentração mais elevada.
[00331] As formulações do Exemplo 6 foram preparadas à temperatura ambiente e doseadas dentro dos 5 minutos após a preparação. As suas preparações foram conforme descrito anteriormente no Exemplo 17 (Formulações para estudos toxicológicos).
[00332] Formulações para a Macromolécula do Exemplo 9 para o estudo de eficácia de SuDHL-4: O Exemplo 9 foi formulado em um tampão de citrato/fosfato a pH 5 diluído 1:10 com glucose a 5% e contendo Kolliphor HS-15 a 1% p/v, a concentrações até 105 mg/mL do Exemplo 9 (equivalente a até 30 mg/mL da concentração do Composto A).
[00333] 100 mL de tampão de citrato/fosfato de Mcllvane a pH 5 foram preparados. 1,02 g de mono-hidrato de ácido cítrico e 3,69 g de dodeca-hidrato de fosfato sódico foram pesados para um recipiente e foram adicionados 95 mL de água para injeção. O veículo foi agitado (ou sonicado) de modo a dissolver. O pH foi, então, medido e ajustado até pH 5, com HCI ou NaOH a 0,1 M, conforme necessário. O veículo foi ajustado em volume (100 mL) com Água para Injeção.
[00334] Este tampão Mcllvane foi usado para preparar o veículo tampão diluído (tampão de citrato/fosfato a pH 5 diluído 1:10 com glucose a 5% e contendo Kolliphor HS-15 a 1% p/v). A quantidade necessária de tampão de citrato/fosfato de Mcllvane, equivalente a 10% do volume alvo total a ser preparado, foi adicionada a um recipiente adequado. Solução de glucose a 5% comercíalmente disponível foi adicionada a aproximadamente 90% do volume alvo. Kolliphor HS-15 equivalente a 1% p/v foi adicionado e o veículo foi agitado para dissolver o Kolliphor HS-15. O pH foi medido e ajustado para pH 5,0 ± 0,05 com HCI ou NaOH 0,1M (se necessário). O veículo foi, então, ajustado em volume com glucose a 5%. Esse foi esterilizado
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154/166 por filtração usando um filtro de seringa com tamanho de poro de 0,22 pm, se necessário.
[00335] Para preparar a formulação do Exemplo 9 para a dose mais elevada (10 mg/mL do Composto A ou Exemplo 9 equivalente a 37 mg/mL), 370 mg do Exemplo 9, equivalente a 100 mg do Composto A, foram transferidos para um recipiente adequado com um agitador magnético. Enquanto o agitador magnético estava em funcionamento, o veículo tamponado diluído (tampão de citrato/fosfato a pH 4 foi diluído 1:10 com glucose a 5% contendo Kolliphor HS-15 a 1% p/v) foi adicionado a 95% do volume alvo (9,5 mL). Agitação continuada para auxiliar a dissolução, evitando a geração de espuma excessiva, até que foi formada uma solução límpida. A formulação foi, então, ajustada para o volume (0,5 mL) com veículo tamponado diluído e o pH final foi verificado. A formulação foi avaliada visualmente de modo a excluir a presença de partículas. 2 e 6 mg/mL foram preparados a partir da concentração mais elevada.
[00336] As formulações do Exemplo 9 foram preparadas à temperatura ambiente e doseadas dentro dos 5 minutos após a preparação.
[00337] A eficácia dos Exemplos 6 e 9 em Modelo de Xenoenxerto RS4;11: 5x106 células RS4;11 em um volume total de 100 pL foram inoculadas subcutaneamente no flanco direito do camundongo. Quando o volume do tumor atingiu aproximadamente ~350 mm3, os camundongos portadores de tumor foram distribuídos aleatoriamente em grupos de 4 animais e tratados quer com veículo de controle (PBS) ou com tratamento. A Figura 9 mostra que, com taxas de liberação diferentes, os dendrímeros exibem eficácia diferente. Exemplo 6 a 30 mg/kg do Composto A equivalente e Exemplo 9 a 10 mg/kg do Composto A equivalente com dose única IV mostraram ter atividade semelhante ou ligeiramente melhor do que 10 mg/kg IV do Composto
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A ΗΡ-β-CD, uma vez, (100%, 98 % vs. 90% de regressão, respectivamente).
Tabela 16. Resumo dos dados de inibição e regressão para os Exemplos 6 e 9
Número do Grupo T ratamento Eficácia
% de Inibição Dia (47) % de Regressão Dia (47) Valor P Dia (47) T-C (Dias)
1 Veículo
2 Composto A 5 mg/kg >100 90 <0,0001
3 Exemplo 6 10 mg/kg do Composto A equivalente (39 mg/kg macromolécula) >100 56 <0,0001
4 Exemplo 6 30 mg/kg do Composto A equivalente (117 mg/kg macromolécula) >100 100 <0,0001 >32
Exemplo 9 10 mg/kg do Composto A equivalente (37 mg/kg macromolécula) >100 98 0,0085
[00338] Quando o volume do tumor RS4;11 atingiu aproximadamente ~400-600mm3, grupos de 3 camundongos portadores de tumores foram tratados com uma única dose quer de veículo (PBS) ou Exemplo 6 IV a 10 e 30 mg/kg. Os tumores foram coletados em diferentes pontos temporais após a dose e processados para análise. Os resultados mostraram que o ligante induz a resposta apoptótica comparável, tal como indicado por caspase 3 clivada, as respostas atingiram um pico a 16-28 h após a dose (Figura 10). O Exemplo 6 a 30 mg/kg do Composto A equivalente (117 mg/kg do Exemplo 6) induziu a resposta CC3 mais elevada.
[00339] A Figura 11 mostra que o Exemplo 9 e o Exemplo 6 doseados a 20 mg/kg do Composto A equivalente (74 e 78 mg/kg de dendrímero, respectivamente) foram ligeiramente mais eficazes do que o Composto A na formulação ΗΡ-β-CD (ver Exemplo 2) a 10 mg/kg por semana.
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156/166 [00340] Adicionalmente, a morte celular (apoptose) foi medida usando PARP clivada (Figura 12). O composto A na formulação ΗΡ-βCD (ver Exemplo 2) induziu PARP clivada imediatamente após o tratamento 1 e 3 h, enquanto o Exemplo 9 causou morte celular máxima a 20 h após a dose individual.
[00341 ] A eficácia dos Exemplos 5, 7 e 8 em Modelo de Xenoenxerto RS4;11 em camundongos: Os Exemplos 5, 7 e 8 foram formulados em PBS e doseados a 10 mg/kg do Composto A equivalente no modelo de camundongo Xenoenxerto RS4:11. A Figura 13 demonstra que o Exemplo 7 doseado a 10 mg/kg do Composto A equivalente induz a regressão do tumor, enquanto os Exemplos 5 e 8 doseados a 10 mg/kg do Composto A equivalente não apresentaram atividade antitumoral tão significativa.
[00342] A eficácia do Exemplo 6 em Modelo de Xenoenxerto RS4;11 em ratos Raq2~/~: A Figura 14 mostra que o Exemplo 6 doseado a 30 mg/kg do Composto A equivalente (117 mg/kg de macromolécula) provoca a regressão do tumor RS4;11. 10 mg/kg do Composto A equivalente (39 mg/kg do Exemplo 6) dose única do Exemplo 6 inibiram o crescimento do tumor (estase).
[00343] Os exemplos 6 e 9 melhoram a inibição do crescimento do tumor por rituximab em Modelo de Xenoenxerto SuDHL-4 em Camundongos SCID: O modelo de xenoenxerto SuDHL-4 foi usado para testar a capacidade dos Exemplos 6 e 9 para melhorar a atividade de rituximab na inibição do crescimento tumoral. Quando os tumores cresceram para aproximadamente 175-250 mm3, os camundongos foram distribuídos aleatoriamente para os seguintes grupos:
(1) grupo de veículo de controle;
(2) grupo de tratamento do Exemplo 6 (50 mg/kg do Composto A equivalente, 195 mg/kg de Exemplo 6, i.v. uma vez por
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157/166 semana durante 5 semanas);
(3) grupo de tratamento do Exemplo 9 (50 mg/kg do Composto A equivalente, 185 mg/kg de Exemplo 9, i.v. uma vez por semana durante 5 semanas);
(4) grupo de rituximab (10 mg/kg i.p. uma vez por semana durante 5 semanas);
(5) Exemplo 6 (10 mg/kg do Composto A equivalente, 39 mg/kg de Exemplo 6) mais rituximab;
(6) Exemplo 6 (30 mg/kg do Composto A equivalente, 117 mg/kg de Exemplo 6) mais rituximab;
(7) Exemplo 6 (50 mg/kg do Composto A equivalente, 195 mg/kg de Exemplo 6) mais rituximab.
(8) Exemplo 9 (10 mg/kg do Composto A equivalente, 37 mg/kg de Exemplo 9) mais rituximab;
(9) Exemplo 9 (30 mg/kg do Composto A equivalente, 111 mg/kg de Exemplo 9) mais rituximab;
(10) Exemplo 9 (50 mg/kg do Composto A equivalente, 185 mg/kg de Exemplo 9) mais rituximab;
[00344] Os tamanhos dos tumores foram medidos 2 vezes por semana e calculados como: Volume do tumor = (AxB2)/2 em que A e B são o comprimento e a largura do tumor (em mm), respectivamente.
[00345] Os resultados são mostrados na Figura 15. Os exemplos 6 e 9 a 50 mg/kg do Composto A equivalente (195 e 185 mg/kg de dendrímero, respectivamente) inibiram significativamente o crescimento tumoral, em comparação com controle de veículo, com as macromoléculas do Exemplo 6 sendo ligeiramente mais eficazes como uma monoterapia do que as macromoléculas do Exemplo 9 a 50 mg/kg do Composto A (185 mg/kg de Exemplo 9). A Tabela 17 resume os valores de inibição do crescimento do tumor (TIC) e de atraso no crescimento tumoral (T-C) calculados como % de inibição e % de
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158/166 regressão. O cálculo é baseado na média geométrica do RTV em cada grupo.
[00346] No dia específico, para cada grupo tratado, calcular o valor de Inibição pela fórmula: % de inibição = (CG-TG) * 100 / (CG-1), em que CG significa a média geométrica do rtv do grupo de controle e TG significa a Média Geométrica do Volume Relativo do Tumor (rtv) do grupo tratado. CG deve usar o grupo de controle correspondente do grupo tratado quando calculado. Se a Inibição > 100%, em seguida, é necessária para calcular a regressão através da fórmula: Regressão - 1 - TG [00347] O valor TIC é de 63,5% para 50 mg/kg do Composto A equivalente (195 mg/kg de Exemplo 6), 40,44% para 50 mg/kg do Composto A equivalente (185 mg/kg Exemplo 9) e 75,27% para 10 mg/kg de rituximab. Desse modo, o Exemplo 6 e o Exemplo 9 doseados a 50 mg/kg do Composto A equivalente são significativamente ativos no presente modelo. Mais significativamente, uma combinação dos Exemplos 6 e 9 a 10, 30 e 50 mg/kg do Composto A equivalente com rituximab (10 mg/kg) resultou na regressão do tumor. Adicionalmente, o tratamento de combinação resultou em regressão completa do tumor na maioria dos animais, enquanto não foi observado nenhum com os tratamentos com um único medicamento.
Tabela 17. Resumo dos dados de eficácia dos Exemplos 6 e 9 em combinação com rituximab
T ratamento Eficácia
% de Inibição (TIC) Dia (41) % de Regressa o Dia (41) Valor P Dia (41) T-C (Dias)
1 Veículo
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2 Exemplo 6 (50 mg/kg do Composto A equivalente, 195 mg/kg Exemplo 6) 63,5 0,0002
3 Exemplo 9 (50 mg/kg do Composto A equivalente, 185 mg/kg Exemplo 6) 40,44 0,0420
4 rituximab (10 mg/kg) 75,27 0,0010 >16
5 rituximab (10 mg/kg) mais Exemplo 6 (10 mg/kg de Composto A equivalente. 39 mg/kg, Exemplo 6) >100 97 0,0005 >37
6 rituximab (10 mg/kg) mais Exemplo 6 (30 mg/kg do Composto A equívalente,117 mg/kg Exemplo 6) >100 100 <0,0001 >37
7 rituximab (10 mg/kg) mais Exemplo 6 (50 mg/kg de Composto A equivalente, 195 mg/kg, Exemplo 6) >100 100 <0,0001 >37
8 rituximab (10 mg/kg) mais Exemplo 9 (10 mg/kg de Composto A equivalente. 37 mg/kg, Exemplo 9) >100 69 0,0230 >37
9 rituximab (10 mg/kg) mais Exemplo 9 30 mg/kg de Composto A equivalente, 111 mg/kg, Exemplo 9) >100 100 <0,0001 >37
10 rituximab (10 mg/kg) mais Exemplo 9 (50 mg/kg de Composto A equivalente, 185 mg/kg, Exemplo 9) >100 100 <0,0001 >37
Exemplo 19: Estudos de Te emetrla Cardiovascular no Rato [00348] Para avaliar os efeitos do Composto A e do Exemplo 5, 6, 8
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160/166 e 9 na pressão arterial, frequência cardíaca, intervalo QA e eletrocardiograma, os ratos Han Wistar machos foram cirurgicamente implantados sob anestesia com transmissores de telemetria de roedores da Data Sciences International· Os transmissores de telemetria foram colocados no músculo abdominal e o cateter de pressão arterial foi colocado na aorta abdominal. Os eletrodos de ECG foram suturados na superfície dorsal do processo xifoide e no mediastino anterior.
[00349] Após a implantação do transmissor de telemetria, uma Infusão única venosa na veia da cauda de 30 minutos do Composto A, ou Exemplo 5, 6 ou 8 foi administrada a grupos individuais de ratos (8 machos/grupo para o Composto A e 3 machos/grupo para cada dendrímero). O Exemplo 9 foi administrado a um grupo individual de ratos (3 machos/grupo) como uma injeção intravenosa única de bólus na veia da cauda. O Composto A foi administrado nos níveis de dosagem de 0 e 10 mg/kg. O Exemplo 6 foi administrado a níveis de dosagem de 0, 35, 70 e 105 mg/kg (10, 20 e 30 mg/kg do Composto A equivalente) e os Exemplos 5 e 8 foram administrados a 0, 35 e 105 mg/kg (10 e 30 mg/kg do Composto A equivalente) e o Exemplo 9 foram administrados a 0, 37 e 112 mg/kg (10 e 30 mg/kg do Composto A equivalente).
[00350] Os parâmetros cardiovasculares foram registrados continuamente através de receptores colocados abaixo da gaiola por pelo menos 1 hora antes da dose e até 72 horas após a dose. Foram recolhidas amostras de sangue de modo a determinar o nível de exposição ao plasma do Composto A e de todos os dendrímeros, com patologia clínica e tecidos limitados para a histopatologia de órgãos alvo, colhidos a partir de animais doseados apenas com os construtos de macromoléculas.
[00351] Uma infusão de Composto A não foi tolerada e um total de
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161/166 três ratos foram encontrados mortos até 5 horas após o início da infusão. Todos os animais doseados com os dendrímeros sobreviveram ao final programado. Após a administração do Composto A, uma diminuição blfásica na pressão arterial sistólica e média foi observada entre 1,5 a 16 horas após o início da infusão, que foi acompanhada por aumentos na frequência cardíaca entre 2 a 10 horas após o início da infusão. Uma diminuição da amplitude de QRS também foi observada a partir de 1 hora após o início da infusão, que ainda estava presente no final do período de registro. As alterações cardiovasculares para o Exemplo 6 foram limitadas a uma diminuição transiente na amplitude de QRS entre 2 a 8 horas após a dose em animais doseados com 120 mg/kg, com recuperação total a 22 horas após a dose. O Exemplo 6 e todos os outros dendrímeros não apresentaram alterações cardiovasculares até 80 e 120 mg/kg, respectivamente.
[00352] As transaminases plasmáticas estavam elevadas nos animais que receberam > 80 mg/kg do Exemplo 6. Não foram observadas alterações nas transaminases em ratos doseados até 120 mg/kg do Exemplo 5, 8 e 9. Todos os dendrímeros apresentaram trombocitopenia, consistente com a farmacologia primária.
[00353] As descobertas h isto pato lógicas a > 80mg/kg do Exemplo 6 incluíram degeneração/necrose mínima do músculo esquelético, com descobertas no coração (apoptose de células endoteliais mínimas) e fígado (apoptose hepatocelular mínima) também observadas em animais tratados com 120 mg/kg. O Exemplo 9 apresentou descobertas histopatológicas no músculo esquelético (degeneração mínima do músculo esquelético) a > 40 mg/kg, com apoptose hepatocelular mínima observada apenas a 120 mg/kg. O Exemplo 5 não apresentou histopatologia relacionada com o tratamento até 120 mg/kg, com descobertas histopatológicas para o Exemplo 8 limitadas a
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162/166 necrose hepatocelular mínima apenas a 120 mg/kg.
[00354] Em conclusão, estes dados ilustram os perfis histopatológicos cardiovasculares e hepáticos melhorados dos Exemplos 5, 6, 8 e do Exemplo 9, quando comparados com ο Composto A.
Tabela 18. Resumo dos Estudos de Telemetria Cardiovascular no
Rato depois da Administração Intravenosa da Dosagem do Composto
A e dos Exemplos 6 e 9
Parâmetro Composto A Exemplo 6a Exemplo 9a
10 mg/kg 10 mg/kg 20 mg/kg 30 mg/kg 10 mg/kg 30 mg/kg
Em vida 3 encontrados mortos Todos os níveis de dose tolerados Todos os níveis de dose tolerados
Plaquetas Não avaliado l l l l l
Transaminases Não avaliado NAD ΐ ΐ NAD NAD
Cardiovascular j amplitude de QRS 4 pressão sanguínea $ frequência cardíaca NAD NAD amplitude de QRS NAD NAD
Histopatologia Não avaliado
Degeneração/ne crose muscular esquelética Coração apoptose de células endoteliais Fígado apoptose hepatocelular 0/3 0/3 0/3 2/3 0/3 0/3 2/3 1/3 3/3 1/3 0/3 0/3 1/3 0/3 1/3
3 níveis de dose são expressos como o Composto A equivalente
NAD = sem anormalidades detectadas
Exemplo 20: Estudos de Toxicidade da Dose Máxima Tolerada no
Rato e no Cão [00355] Os estudos da dose máxima tolerada (MTD) com o
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Exemplo 6 foram realizados no rato e no cão. O Exemplo 6 foi administrado a grupos individuais de ratos machos ou fêmeas Han Wistar (até 4/grupo) por bólus intravenoso a níveis de dose de 125, 200, 225 e 250 mg/kg (31, 50, 56 e 62 mg/kg de Composto A equivalente). A MTD do Exemplo 6 no rato foi de 225 mg/kg (56 mg/kg do Composto A equivalente), que é uma melhoria de 5 vezes em comparação com o Composto A sozinho.
[00356] Um cão Beagle macho e uma fêmea foram administrados com o Exemplo 6, por administração intravenosa de bólus em doses semanais ascendentes de 4, 8, 12, 20, 30 e 45 mg/kg (1, 2, 3, 5, 7,5 e 11 mg/kg do Composto A equivalente). A MTD do Exemplo 6 no cão é 45 mg/kg (11 mg/kg do Composto A equivalente), que é uma melhoria de 11 vezes em comparação com o Composto A.
[00357] Um estudo de dose máxima tolerada com o Exemplo 9 foi conduzido no rato. O Exemplo 9 foi administrado a grupos individuais de ratos de Han Wistar machos (3/grupo) por bólus intravenoso a níveis de dose de 125, 250, 500, 1000 e 1500 mg/kg (9, 72, 145, 290 e 435 mg/kg do Composto A equivalente). A MTD do Exemplo 9 no rato é 1000 mg/kg (290 mg/kg do Composto A equivalente), que é uma melhoria de 29 vezes em comparação com o Composto A.
[00358] Em conclusão, estes dados ilustram uma dose máxima tolerada melhorada do Exemplo 6 e do Exemplo 9, quando comparados com o Composto A sozinho.
Exemplo 21: Atividade antitumoral de agente único e combinação In vivo em um modelo de tumor de câncer do pulmão de células pequenas humanas [00359] O exemplo 9 e o AZD2014 (vistusertib, um inibidor de mTOR apresentado abaixo) induziram o agente único e a atividade antitumoral de combinação em camundongos portadores de tumor NCI-H1048 (Figura 18). Uma administração i.v. (qw) semanal do
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Exemplo 9 a 103 mg/kg (equivalente a 30 mg/kg do Composto A) resultou em atividade antitumoral significativa de 76% de TGI (p <0,05). A administração do inibidor de mTOR AZD2014 a 15 mg/kg por dia (qd) resultou em atividade antitumoral significativa de 84% de TGI (p <0,05). A combinação do Exemplo 9 com AZD2014 resultou em 91% de regressão do tumor (p <0,05 relativamente à atividade de agente único).
[00360] O Exemplo 9 foi formulado em tampão de citrato/fosfato a pH 5,0 contendo glucose a 4,5% p/v e doseado por via intravenosa (i.v.) em um volume de 5 mL/kg. O AZD2014 foi formulado em hidroxipropilmetilcelulose a 0,5%/Tween 80 a 0,1% e doseado oralmente em um volume de 10 mL/kg. 5 χ 106 células tumorais NCIH1048 foram injetadas subcutaneamente no flanco direito de camundongos fêmeas C.B-17 SCID em um volume de 0,1 mL contendo 50% de matrigel. O volume tumoral (medido com compasso) foi calculado usando a fórmula: comprimento (mm) x largura (mm)2 x 0,52. Para estudos de eficácia, camundongos foram distribuídos aleatoriamente com base no volume tumoral e a inibição do crescimento foi avaliada por comparação das diferenças do volume tumoral entre grupos de controle e tratados. A dosagem começou quando o volume tumoral médio alcançou aproximadamente 124 mm3.
Figure BR112019016409A2_D0073
AZD2014
Exemplo 22: Atividade antitumoral de agente único e combinação in vivo em um modelo de DLBCL humano [00361] 5 χ 106 células tumorais Ly10 foram injetadas
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165/166 subcutaneamente no flanco direito de camundongos fêmeas C.B-17 SCID em urn volume de 0,1 mL contendo 50% de matrigel. O Exemplo foi formulado em tampão de citrato/fosfato a pH 5,0, diluído 1 para com 5% de glucose contendo Kolliphor HS15 a 1% p/v e doseado como uma administração semanal por via intravenosa (i.v.) a um volume de 5 mL/kg a uma dose de 103 mg/kg (30 mg/kg API). O acalabrutinib foi formulado em hidroxipropilmetilcelulose a 0,5%/Tween 80 a 0,2% e doseado duas vezes por dia (bid) como uma administração oral (po) a um volume de 10 mL/kg a uma dose de 12,5 mg/kg. Os volumes tumorais (medidos com compasso), peso do corpo dos animais e estado tumoral foram registrados duas vezes por semana durante o estudo. O volume tumoral foi calculado usando a fórmula: comprimento (mm) x largura (mm)2 x 0,52. Para estudos de eficácia, a inibição do crescimento desde o início do tratamento foi avaliada por comparação das diferenças do volume tumoral entre grupos de controle e tratados. A dosagem começou quando o tamanho tumoral médio alcançou aproximadamente 166 mm3.
[00362] Conforme apresentado na Figura 19, a combinação do Exemplo 9 com acalabrutinib resultou em atividade antitumoral ín vivo significativa no modelo de xenoenxerto OCI-Ly10 DLBCL. A administração i.v. semanal de 103 mg/kg do exemplo 9 (30 mg/kg do Composto A) em combinação com administração oral de 12,5 mg/kg de acalabrutinib duas vezes por dia resultou em regressão completa em 8 de 8 camundongos portadores de tumor 10 dias após o início do tratamento. As regressões completas foram mantidas mesmo após o final do tratamento (3 semanas de tratamento com 35 dias de acompanhamento). Em contraste, o agente único do Exemplo 9 ou acalabrutinib mostrou atividade de agente único relativamente modesta, atingindo aproximadamente 64% e 58% de inibição do crescimento tumoral (TGI), respectivamente.

Claims (66)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Dendrímero, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (I):
    Figure BR112019016409A2_C0001
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: o Núcleo é
    Figure BR112019016409A2_C0002
    * indica ligação covalente a uma porção carbonila de (BU1); b é 2;
    BU são unidades de construção:
    BUx são unidades de construção de geração x, em que o número total de unidades de construção na geração x do dendrímero de fórmula (I) é igual a 2ÍX) e o número total de BU no dendrímero de fórmula (I) é igual a (2x-1)b; em que BU tem a seguinte estrutura:
    Figure BR112019016409A2_C0003
    # indica ligação covalente a uma porção amina do Núcleo ou uma porção amino de BU;
    + indica uma ligação covalente a uma porção carbonila de BU ou uma ligação covalente a W ou Z;
    W é independentemente (PM)C ou (H)e;
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  2. 2/13
    Z é independentemente (L-AA)d ou (H)e;
    PM é PEG900-1200 ou PEG 1800-24 OOj
    L-AA é um ligante covalentemente ligado a um agente ativo; em que L-AA é da fórmula:
    Figure BR112019016409A2_C0004
    em que
    A é -N(CH3), -O-, -S- ou -CH2-;
    © é 0 ponto de ligação a uma porção amina de BUx; desde que (c+d) < (2x)b e d seja > 1; e desde que se (c+d) < (2x)b, então quaisquer grupos W e Z remanescentes são (H)e, em que e é [(2x)bj~(c+d).
    2. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que b é 2 e x é 5.
  3. 3. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que PM é PEG900-1200.
  4. 4. Dendrímero, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que A é -O-.
  5. 5. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que PM é PEG1800-2400.
  6. 6. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que A é -O-.
  7. 7. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 5,
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    3/13 caracterizado pelo fato de que A é -“(CHa).
  8. 8. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que A é -S-.
  9. 9. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que A é -N(CH3).
  10. 10. Dendrímero, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 9, caracterizado pelo fato de que o PEG tem um peso molecular médio entre cerca de 2000 e cerca de 2200 Da.
  11. 11. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o PEG tem um peso molecular médio de cerca de 2150 Da.
  12. 12. Dendrímero, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (II):
    Core-
    Figure BR112019016409A2_C0005
    (Π), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que b é 2;
    o Núcleo é
    Figure BR112019016409A2_C0006
    * indica ligação covalente a uma porção carbonila de (BU1);
    BU são unidades de construção e o número de BU é igual a
    62; em que BU tem a seguinte estrutura:
    Petição 870190076382, de 08/08/2019, pág. 190/222
    4/13
    Figure BR112019016409A2_C0007
    # indica ligação covalente a uma porção amina do Núcleo ou uma porção amino de BU, e + indica uma ligação covalente a uma porção carbonila de BU ou uma ligação covalente a W ou Z;
    W é independentemente (PM)C ou (H)e;
    Z é independentemente (L-AA)d ou (H)e;
    PM é PEG900-1200 ou PEG1800-2400;
    L-AA é um ligante covalentemente ligado a um agente ativo; em que L-AA é da fórmula:
    Figure BR112019016409A2_C0008
    em que
    A é -N(CH3), -O-, -S- ou --CH2-;
    © indica ligação covalente a uma porção amina de BU5; desde que (c+d) seja < 64 e d seja > 1; e desde que se (c+d) < 64, então quaisquer grupos W e Z remanescentes são (H)e, em que e é 64~(c+d).
  13. 13. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que PM é PEG900-1200.
  14. 14. Dendrímero, de acordo com areivindicação12 ou 13, caracterizado pelo fato de que A é --0-.
    Petição 870190076382, de 08/08/2019, pág. 191/222
    5/13
  15. 15. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que PM é PEG1800-2400.
  16. 16. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que A é -0-.
  17. 17. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que A é -(CH2)-.
  18. 18. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que A é -S-.
  19. 19. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que A é -N(CH3).
  20. 20. Dendrímero, de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 19, caracterizado pelo fato de que 0 PEG tem um peso molecular médio entre cerca de 2000 e cerca de 2200 Da.
  21. 21. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que 0 PEG tem um peso molecular médio de cerca de 2150 Da.
  22. 22. Dendrímero, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (III):
    D-Núcleo-D (lil) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que
    0 Núcleo é
    Figure BR112019016409A2_C0009
    Petição 870190076382, de 08/08/2019, pág. 192/222
    6/13
    Figure BR112019016409A2_C0010
    z
    ......Y.............. - * ------------ ----------? v ---------- Y' BU1 BU2 mn Bi li 8Li5 1 unidade de 2 unidades de 4 unidades de 8 unidades de 16 unidades de construção constwção ccnsíração coa sí ração construção
    AP é um ponto de ligação a outra unidade de construção;
    W é independentemente (PM)C ou (H)e;
    Z é independentemente (L-AA)d ou (H)e;
    PM é PEG900-1200 ou PEG 1800-2400;
    L-AA é um ligante covalentemente ligado a um agente ativo; em que L-AA é da fórmula:
    Figure BR112019016409A2_C0011
    Figure BR112019016409A2_C0012
    em que
    A é -N(CH3), -O-, -S- ou -CH2-:
    desde que se (c+d) < 64, então quaisquer grupos W e Z remanescentes são (H)e, em que e é 64-(c+d); e d é > 1.
  23. 23. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que PM é PEG900-1200.
  24. 24. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que A é -O~.
  25. 25. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 22,
    Petição 870190076382, de 08/08/2019, pág. 193/222
    7/13 caracterizado pelo fato de que PM é PEG1800-2400.
  26. 26. Dendrímero, de acordo caracterizado pelo fato de que A é -0-.
  27. 27. Dendrímero, de acordo caracterizado pelo fato de que A é -(CHz)-.
  28. 28. Dendrímero, de acordo caracterizado pelo fato de que A é -S-.
  29. 29. Dendrímero, de acordo caracterizado pelo fato de que A é -N(CH3).
  30. 30. Dendrímero, de acordo com com com com reivindicação reivindicação reivindicação reivindicação
    25,
    25,
    25,
    25, qualquer uma reivindicações 25 a 29, caracterizado pelo fato de que 0 PEG tem um peso molecular médio entre cerca de 2000 e cerca de 2200 Da.
  31. 31. Dendrímero, de acordo caracterizado pelo fato de que 0 PEG tem de cerca de 2150 Da.
    com das com a reivindicação 30, urn peso molecular médio
  32. 32. Dendrímero, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, caracterizado pelo fato de que c é um número inteiro entre 25 e cerca de 32.
  33. 33. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que c é um número inteiro entre 29 e 32.
  34. 34. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que c é 29 ou 30.
  35. 35. Dendrímero, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 34, caracterizado pelo fato de que d é um número inteiro entre 25 e 32.
  36. 36. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que d é um número inteiro entre 29 e 32.
  37. 37. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que d é 32.
  38. 38. Dendrímero, de acordo com qualquer uma das
    Petição 870190076382, de 08/08/2019, pág. 194/222
    8/13 reivindicações 1 a 37, caracterizado pelo fato de que (c+d) é igual a um número inteiro entre 50 e 64.
  39. 39. Dendrímero, de acordo caracterizado pelo fato de que (c+d) é igual 58 e 64.
    com a um a reivindicação 38, número inteiro entre
  40. 40. Dendrímero, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 39, caracterizado pelo fato de que e é um número inteiro entre 0 e 14.
  41. 41. Dendrímero, de acordo com a reivindicação caracterizado pelo fato de que e é um número inteiro entre 0 e 6.
  42. 42. Dendrímero, de acordo com qualquer reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que L-AA é uma
    40, das o
    Figure BR112019016409A2_C0013
    42. Dendrímero, de acordo com qualquer reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que BU é uma das
    NH
  43. 43. Dendrímero, de acordo com qualquer reivindicações 1 a 42, caracterizado pelo fato de que o Núcleo é uma das
    Petição 870190076382, de 08/08/2019, pág. 195/222
    9/13
    Figure BR112019016409A2_C0014
    Dendrímero,
  44. 44.
    caracterizado peio fato de que apresenta a fórmula (IV):
    Figure BR112019016409A2_C0015
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Y é
    PEG1800-2400 ou H; Q é H ou L-AA, em que L-AA tem a estrutura:
    Petição 870190076382, de 08/08/2019, pág. 196/222
    10/13
    Figure BR112019016409A2_C0016
    A é —S- ou -N(CH3), desde que se a soma de PEGisoo-24oo e de L-AA for menor que 64, as restantes porções Q e Y são H, e desde que pelo menos um Q seja L-AA.
  45. 45. Dendrímero, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (V):
    Figure BR112019016409A2_C0017
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que
    Petição 870190076382, de 08/08/2019, pág. 197/222
    11/13
    Y é PEG-!800-2400 ou Η;
    Q é Η ou L-AA, em que L-AA tem a estrutura:
    Figure BR112019016409A2_C0018
    A é —S~ ou -N(CH3), desde que se a soma de PEG1800-2400 e de L-AA for menor que 64, as restantes porções Q e Y são H, e desde que pelo menos um Q seja L-AA.
  46. 46. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 44 ou 45, caracterizado pelo fato de que A é -S-.
  47. 47. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 44 ou
    45, caracterizado pelo fato de que A é -N(CH3).
  48. 48. Dendrímero, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 47, caracterizado pelo fato de que a soma de PEGi8oo-24oo e L-AA é um número inteiro entre 50 e 64.
  49. 49. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que a soma de PEG1800-2400 e L-AA é um número inteiro entre 58 e 64.
  50. 50. Dendrímero, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 49, caracterizado pelo fato de que 0 dendrímero tem entre 25 e 32 PEG1800-2400.
  51. 51. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 50, caracterizado peio fato de que 0 dendrímero tem entre 29 e 32
    Petição 870190076382, de 08/08/2019, pág. 198/222
    12/13
    PEG 1800-2400-
  52. 52. Dendrímero, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 51, caracterizado pelo fato de que o dendrímero tem entre 25 e 32 L-AA.
  53. 53. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo fato de que o dendrímero tem entre 29 e 32 L-AA.
  54. 54. Dendrímero, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 53, caracterizado pelo fato de que o dendrímero tem entre 0 e 14 hidrogênios nas posições Q e/ou Y.
  55. 55. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o dendrímero tem entre 0 e 6 hidrogênios nas posições Q e/ou Y.
  56. 56. Dendrímero, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 55, caracterizado pelo fato de que o PEG tem um peso molecular médio entre cerca de 2000 e 2200 Da.
  57. 57. Dendrímero, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 56, caracterizado pelo fato de que o PEG tem um PDI de entre cerca de 1,00 e 1,10.
  58. 58. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que o PEG tem um PDI de cerca de 1,05.
  59. 59. Dendrímero, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58, caracterizado pelo fato de que o dendrímero tem um peso molecular entre cerca de 90 e 120 kDa.
  60. 60. Dendrímero, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que o dendrímero tem um peso molecular entre cerca de 103 e 107 kDa.
  61. 61. Dendrímero, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 60, caracterizado pelo fato de que AA é o Composto A:
    Petição 870190076382, de 08/08/2019, pág. 199/222
    13/13
    Figure BR112019016409A2_C0019
    (Composto A).
  62. 62. Composições farmacêuticas, caracterizadas pelo fato de que compreende um dendrímero, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 61, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um excipiente, portador ou diluente farmaceuticamente aceitável.
  63. 63. Método de tratamento de câncer, caracterizado pelo fato de que compreende a administração a um sujeito com necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de um dendrímero, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 61, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
  64. 64. Dendrímero, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 61, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de câncer.
  65. 65. Uso de um dendrímero, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 61, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é para uso na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.
  66. 66. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um dendrímero, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 61, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para tratamento de câncer.
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