BR112019014756A2 - Composto, composição farmacêutica e uso dos mesmos - Google Patents

Abstract

são divulgados na presente invenção um composto como mostrado na fórmula (ii), um tautômero ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e é também divulgado o uso dos mesmos na preparação de um fármaco para tratar uma doença associada à ask1.

Description

DERIVADO DE PIRIDINA COMO INIBIDOR DE ASK1 E MÉTODO DE PREPARAÇÃO E USO DO MESMO

REFERÊNCIA CRUZADA AO PEDIDO RELACIONADO [001] O presente pedido reivindica a prioridade do Pedido de Patente Chinês N² CN201710054224.4 depositado em 22 de janeiro de 2017, os conteúdos do qual são incorporados aqui no presente pedido.

CAMPO DA INVENÇÃO [002] A presente invenção refere-se a um composto como mostrado na fórmula (II), um tautômero do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um uso do mesmo na fabricação de um medicamento para tratar doenças relacionadas à ASK1.

ANTERIORIDADES [003] Cinase 1 reguladora de sinal de apoptose (ASK1) é um membro da família de proteína cinase cinase cinase ativada por mitógeno (MAP3K). ASK1 pode ser ativada por uma variedade de estímulos incluindo estresse oxidativo, espécie de oxigênio reativo (ROS), LPS, TNF-ot, FasL, estresse do retículo endoplasmático, concentração de cálcio intracelular aumentada e semelhantes. ASK1 responde à variedade de estímulos ativando-se JNK (cinase c-Jun Nterminal) e proteínas cinases ativadas por mitógeno p38 e induz uma variedade de apoptose através dos sinais envolvendo a via de morte de célula mitocondrial. A ativação e a sinalização de ASK1 desempenham um papel importante em uma ampla faixa de doenças, incluindo doenças neurodegenerativas, doenças

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2/105 cardiovasculares, doenças inflamatórias, doenças autoimunes e distúrbios metabólicos. Portanto, quando o paciente sofre de uma doença neurodegenerativa, uma doença cardiovascular, uma inflamação, uma doença autoimune e uma doença metabólica, a vida do paciente pode ser melhorada pelo uso dos inibidores de ASK1 como agentes terapêuticos.

CONTEÚDO DA PRESENTE INVENÇÃO [004] A presente invenção fornece um composto como mostrado na fórmula (II), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um tautômero do mesmo,

N*X.

x₃-* ,'n

R₂

R.

pelo menos um de Xi, X2 e X3 é N, o restante do qual é CH;

n é selecionado a partir de 0 ou 1;

Rié selecionado a partir de H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, ou selecionado a partir do grupo consistindo em alquila C1-4, heteroalquila C1-4, heterocicloalquila de 3 a 6 membros e heteroarila de 5 a 6 membros, cada um dos quais é opcionalmente substituído com R;

R2 é selecionado a partir de H, F, Cl, Br, I;

Rsé selecionado a partir de H, F, Cl, Br, I, OH, NH2;

R é selecionado a partir de F, Cl, Br, I, OH, NH2, ou selecionado a partir do grupo consistindo em alquila C1-3, alcóxi C1-3 e heterocicloalquila de 3 a 6

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3/105 membros, cada um dos quais é opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 R';

R' é selecionado a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, NH2 e alquila C1-3;

cada hétero na heteroalquila C1-4, heteroarila de 5 a 6 membros e heterocicloalquila de 3 a 6 membros é independentemente selecionado a partir do grupo consistindo em -NH-, N, -O- e -S-;

em qualquer um dos casos acima, o número do heteroátomo ou do grupo heteroatômico é independentemente selecionado a partir de 1, 2 ou 3.

[005] Em algumas modalidades da presente invenção, o R acima é selecionado a partir de F, Cl, Br, I, OH, NH2, ou selecionado a partir do grupo consistindo em Me, e , cada um dos quais é opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 R';

[006] Em algumas modalidades da presente invenção, o R acima é selecionado a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, NH2, Me, oZZ^ _e oC/ [007] Em algumas modalidades da presente invenção, o Ri acima é selecionado a partir de H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, ou selecionado a partir do grupo consistindo em alquila C1-3, alcóxi C1-3, alquilamino C1-3, morfolinila e piridila, cada um dos quais é opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 R e outras variáveis são como definidas na presente invenção.

[008] Em algumas modalidades da presente invenção, o Ri acima é selecionado a partir de H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, ou selecionado a partir do grupo

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4/105 consistindo em Me, , , °'' , ^H ,

, cada um dos quais é opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 R e outras variáveis são como definidas na presente invenção.

[009] Em algumas modalidades da presente invenção, o Ri acima é selecionado a partir do grupo consistindo em H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, Me,

na presente invenção.

[010] Em algumas modalidades da presente invenção, a porção

acima é selecionada a partir do grupo consistindo em

e outras variáveis são como definidas na presente invenção.

[011]

Em algumas modalidades da presente invenção, a porção

acima é selecionada a partir do grupo consistindo em

variáveis são como definidas na presente invenção.

[012] Outras modalidades da presente invenção podem ser obtidas pela combinação arbitrária das variáveis acima.

[013] Em algumas modalidades da presente invenção, o composto acima,

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5/105 o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e o tautômero do mesmo são selecionados a partir do grupo consistindo em

em que, Χι,Χζ, Xs, Ri, R2 e R3 são como definidos na presente invenção.

[014] Em algumas modalidades da presente invenção, o composto acima, o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e o tautômero do mesmo são selecionados a partir do grupo consistindo em

em que,

Ri, R2 e R3 são como definidos na presente invenção.

[015] A presente invenção também fornece um composto como mostrado na fórmula (I), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um tautômero do mesmo:

pelo menos um de Xi, X2 e X3 é N, o restante do qual é CH;

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6/105

n é 0 ou 1;

[016] Em algumas modalidades da presente invenção, a porção acima é selecionada a partir do grupo consistindo em

[017]

Em algumas modalidades da presente invenção, a porção

acima é selecionada a partir do grupo consistindo em

[018] Em algumas modalidades da presente invenção, a porção

acima é selecionada a partir do grupo consistindo em

e outras variáveis são como definidas na presente invenção.

[019]

Em algumas modalidades da presente invenção, a porção

acima é selecionada a partir do grupo consistindo em

e outras variáveis são como definidas na presente invenção.

[020] Outras modalidades da presente invenção podem ser obtidas pela combinação arbitrária das variáveis acima.

[021] Em algumas modalidades da presente invenção, o composto acima,

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7/105 o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e o tautômero do mesmo são selecionados a partir do grupo consistindo em

em que, Χι,Χζ e X3 são como definidos na presente invenção.

[022] Em algumas modalidades da presente invenção, o composto acima, o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e o tautômero do mesmo são selecionados a partir do grupo consistindo em

em que, n é como definido na presente invenção.

[023] A presente invenção também fornece um composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um tautômero do mesmo que são selecionados a partir do grupo consistindo em

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8/105

[024] A presente invenção também fornece uma composição farmacêutica, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto acima ou do sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como o princípio ativo e um carreador farmaceuticamente aceitável.

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9/105 [025] A presente invenção também fornece um uso do composto acima ou do sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para tratar doenças relacionadas à ASK1.

[026] A presente invenção também fornece um uso da composição acima na fabricação de um medicamento para tratar doenças relacionadas à ASK1.

EFEITO TÉCNICO [027] Como um novo inibidor de ASK1, o composto da presente invenção tem um efeito inibitório significativo contra ASK1. Entretanto, o composto da presente invenção tem uma boa drogabilidade devido à sua boa solubilidade, permeabilidade e semelhantes, alvejamento específico e estabilidade metabólica.

DEFINIÇÃO E DESCRIÇÃO [028] A menos que de outro modo indicado, os termos seguintes quando usados nas descrições e nas reivindicações da presente invenção têm os seguintes significados. Um termo ou frase específicos não devem ser considerados indefinidos ou incertos na ausência de uma definição particular, mas devem ser entendidos no sentido habitual. Quando um nome comercial aparece na presente invenção, ele é intencionado a referir-se à sua mercadoria correspondente ou princípio ativo deste. O termo farmaceuticamente aceitável é usado na presente invenção em termos daqueles compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem, que são adequados para o uso em contato com tecidos humanos e animais dentro do escopo do julgamento médico

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10/105 confiável, sem nenhuma toxicidade excessiva, irritação, reação alérgica ou outros problemas ou complicações, proporcional a uma razão risco/benefício razoável.

[029] O termo sal farmaceuticamente aceitável refere-se a um sal do composto da presente invenção que é preparado reagindo-se o composto tendo um substituinte específico da presente invenção com um ácido ou base relativamente não tóxicos. Quando o composto da presente invenção contém um grupo funcional relativamente ácido, um sal de adição de base pode ser obtido levando-se à forma neutra do composto em contato com uma quantidade suficiente de base em uma solução pura ou um solvente inerte adequado. O sal de adição de base farmaceuticamente aceitável inclui um sal de sódio, potássio, cálcio, amônio, amina orgânica ou magnésio ou sais similares. Quando o composto da presente invenção contém um grupo funcional relativamente básico, um sal de adição de ácido pode ser obtido levando-se a forma neutra do composto em contato com uma quantidade suficiente de ácido em uma solução pura ou um solvente inerte adequado. Exemplos do sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável incluem um sal de ácido inorgânico, em que o ácido inorgânico inclui, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido nítrico, ácido carbônico, bicarbonato, ácido fosfórico, fosfato de mono-hidrogênio, fosfato de di-hidrogênio, ácido sulfúrico, sulfato de hidrogênio, ácido iodídrico, ácido fosforoso e semelhantes; e um sal de ácido orgânico, em que o ácido orgânico inclui, por exemplo, ácido acético, ácido propiônico, ácido isobutírico, ácido maleico, ácido malônico, ácido benzoico, ácido succínico, ácido subérico,

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11/105 ácido fumárico, ácido láctico, ácido mandélico, ácido ftálico, ácido benzenossulfônico, ácido p-toluenossulfônico, ácido cítrico, ácido tartárico e ácido metanossulfônico e semelhantes; e um sal de aminoácido (tal como arginina e semelhantes) e um sal de um ácido orgânico tal como ácido glicurônico e semelhantes (referir-se a Berge et a!., Pharmaceutical Salts, Journal of Pharmaceutical Science 66: 1 - 19 (1977)). Certos compostos específicos da presente invenção que contêm tanto grupos funcionais básicos quanto ácidos podem ser convertidos a qualquer sal de adição de base ou ácido.

[030] Preferivelmente, através de levar o sal em contato com uma base ou um ácido em uma maneira convencional, depois separar o composto precursor, a forma neutra do composto é desse modo regenerada. A diferença entre a forma precursora do composto e suas formas de sal variadas encontra-se em propriedades físicas específicas, tais como solubilidade diferente em um solvente polar.

[031] Sal farmaceuticamente aceitável usado aqui pertence a um derivado do composto da presente invenção, em que, o composto precursor é modificado formando-se um sal com um ácido ou uma base. Exemplos do sal farmaceuticamente aceitável incluem, mas não são limitados a um sal de ácido inorgânico ou ácido orgânico de uma porção básica tal como amina, um sal de metal alcalino ou um sal orgânico de uma porção ácida tal como ácido carboxílico e semelhantes. O sal farmaceuticamente aceitável inclui sal não tóxico convencional ou sal de amônio quaternário do composto precursor, tal como um

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12/105 sal formado por um ácido inorgânico não tóxico ou um ácido orgânico. O sal não tóxico convencional inclui, mas não é limitado ao sal derivado de um ácido inorgânico e um ácido orgânico, em que o ácido inorgânico ou ácido orgânico é selecionado a partir do grupo consistindo em ácido 2-acetoxibenzóico, ácido 2hidroxietanossulfônico, ácido acético, ácido ascórbico, ácido benzenossulfônico, ácido benzoico, bicarbonato, ácido carbônico, ácido cítrico, ácido edético, ácido etanodissulfônico, ácido etanossulfônico, ácido fumárico, glicoeptose, ácido glicônico, ácido glutâmico, ácido glicólico, ácido bromídrico, ácido clorídrico, iodidreto, hidroxila, hidróxinaftaleno, ácido isetiônico, ácido láctico, lactose, ácido dodecil sulfônico, ácido maleico, ácido málico, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido nítrico, ácido oxálico, ácido pamóico, ácido pantotênico, ácido fenilacético, ácido fosfórico, ácido poligalactanálico, ácido propiônico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido subacético, ácido succínico, ácido sulfâmico, ácido sulfanílico, ácido sulfúrico, tanino, ácido tartárico e ácido ptoluenossulfônico.

[032] O sal farmaceuticamente aceitável da presente invenção pode ser preparado a partir do composto precursor que contém uma porção ácida ou básica por método químico convencional. Geralmente, tal sal pode ser preparado reagindo-se a forma de ácido ou base livre do composto com uma quantidade estequiométrica de uma base ou ácido apropriados em água ou um solvente orgânico ou uma mistura destes. Geralmente, meios não aquosos tais como éter, acetato de etila, etanol, isopropanol ou acetonitrila são preferidos.

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13/105 [033] Além da forma de sal, o composto fornecido pela presente invenção também existe na forma de pró-fármaco. O pró-fármaco do composto descrito na presente invenção é o composto que facilmente passa por mudança química sob condição fisiológica para ser convertido no composto da presente invenção. Adicionalmente, o pró-fármaco pode ser convertido ao composto da presente invenção por um método químico ou bioquímico em ambiente in vivo.

[034] Certos compostos da presente invenção podem existir em uma forma não solvatada ou uma forma solvatada, incluindo forma hidratada. Geralmente, a forma solvatada é equivalente à forma não solvatada e ambas são abrangidas dentro do escopo da presente invenção.

[035] Certos compostos da presente invenção podem ter um átomo de carbono assimétrico (centro óptico) ou uma ligação dupla. O racemato, diastereômero, isômero geométrico e isômero único são todos abrangidos dentro do escopo da presente invenção.

[036] A menos que de outro modo especificado, a configuração absoluta de um centro estereogênico é representado por uma ligação sólida em forma de cunha (>*) e uma ligação tracejada em forma de cunha ( ' ), uma linha ondulada (-^) representa uma ligação sólida em forma de cunha (>**) ou uma ligação tracejada em forma de cunha ( -’') e a configuração relativa de um centro estereogênico é representada por uma ligação sólida reta (****) e uma ligação tracejada reta (''^Λ ). Quando o composto descrito na presente invenção contém uma ligação dupla olefínica ou centros assimétricos geométricos adicionais,

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14/105 isômeros geométricos E e Z são incluídos a menos que de outro modo especificado. Do mesmo modo, todas as formas tautoméricas são abrangidas dentro do escopo da presente invenção.

[037] O composto da presente invenção pode ter uma forma geométrica ou estereoisomérica específica. A presente invenção considera todos os tais compostos, incluindo isômero cis e trans, (-)- e (+)-enantiômero, (/?)- e (5)enantiômero, diastereoisômero, (D)-isômero, (L)-isômero e mistura racêmica e outras misturas, por exemplo, uma mistura enriquecida com enantiômero ou diastereoisômero, todos os quais são abrangidos dentro do escopo da presente invenção. O substituinte tal como alquila pode ter um átomo de carbono assimétrico adicional. Todos estes isômeros e misturas destes são abrangidos dentro do escopo da presente invenção.

[038] (/?)- e (S)-isômero opticamente ativo, ou isômero D e L pode ser preparado usando síntese quiral ou reagentes quirais ou outras técnicas convencionais. Se um tipo de enantiômero de certo composto da presente invenção deve ser obtido, o enantiômero puro desejado pode ser obtido por síntese assimétrica ou ação derivativa de auxiliar quiral seguido por separação da mistura diastereomérica resultante e divagem do grupo auxiliar. Alternativamente, quando a molécula contém um grupo funcional básico (tal como amino) ou um grupo funcional ácido (tal como carboxila), o composto reage com um ácido ou base opticamente ativos apropriados para formar um sal do isômero diastereomérico que depois é submetido à resolução

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15/105 diastereomérica através do método convencional na técnica para fornecer o enantiômero puro. Além disso, o enantiômero e o diastereoisômero são geralmente isolados através de cromatografia que usa uma fase estacionária quiral e opcionalmente combina com um método derivativo químico (tal como carbamato gerado a partir de amina).

[039] O composto da presente invenção pode conter uma proporção não natural de isótopo atômico em um ou mais do que um átomo que constitui o composto. Por exemplo, o composto pode ser radiorrotulado com um isótopo radioativo, tal como trítio (³H), iodo-125 (¹²⁵l) ou C-14 (¹⁴C). Todas as variações isotópicas do composto da presente invenção, se radioativo ou não, são abrangidas dentro do escopo da presente invenção.

[040] O termo carreador farmaceuticamente aceitável refere-se a qualquer agente ou meio carreador que é capaz de liberar uma quantidade eficaz da substância ativa da presente invenção, não interfere com a atividade biológica da substância ativa e não tem nenhum efeito colateral tóxico sobre o hospedeiro ou paciente. O carreador representativo inclui água, óleo, vegetal e mineral, creme base, loção base, base de unguento e semelhantes. A base inclui um agente de suspensão, um espessante, um realçador de penetração e semelhantes. Suas formulações são bem conhecidas ao técnico no assunto no campo cosmético ou no campo farmacêutico tópico. A informação adicional sobre o carreador pode ser referida a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21- Ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2005), os conteúdos do qual

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16/105 são incorporados na presente invenção por referência.

[041] O termo excipiente geralmente refere-se ao carreador, diluente e/ou veículo necessários para formular uma composição farmacêutica eficaz.

[042] Para um medicamento ou um agente farmacologicamente ativo, o termo quantidade eficaz ou quantidade terapeuticamente eficaz refere-se a uma quantidade não tóxica mas suficiente para obter um efeito desejado do medicamento ou do agente. Para a forma de dosagem oral da presente invenção, uma quantidade eficaz da substância ativa na composição refere-se a uma quantidade necessária para obter um efeito desejado quando combinada com uma outra substância ativa na composição. A quantidade eficaz varia de pessoa a pessoa e é determinada dependendo da idade e condição geral do receptor bem como da substância ativa específica. A quantidade eficaz apropriada em um caso individual pode ser determinada pelo técnico no assunto com base no experimento de rotina.

[043] O termo princípio ativo, agente terapêutico, substância ativa ou agente ativo refere-se a uma entidade química que pode tratar eficazmente o distúrbio, doença ou condição alvos.

[044] Opcional ou opcionalmente significa que o evento ou condição subsequentes podem ocorrer mas não são necessários, de modo que o termo inclua o exemplo em que o evento ou condição ocorrem e o exemplo em que o evento ou condição não ocorrem.

[045] O termo substituído significa que um ou mais do que um átomo

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17/105 de hidrogênio em um átomo específico é substituído com o substituinte, incluindo variantes de deutério e hidrogênio, contanto que a valência do átomo específico seja normal e o composto substituído seja estável. Quando o substituinte é um oxigênio (isto é, =0), isto significa que dois átomos de hidrogênio são substituídos. Posições em um anel aromático não podem ser substituídas com uma cetona. O termo opcionalmente substituído significa que um átomo pode ser substituído com um substituinte ou não, a menos que de outro modo especificado, o tipo e número do substituinte podem ser arbitrários contanto que sejam quimicamente obteníveis.

[046] Quando qualquer variável (tal como R) ocorre na constituição ou estrutura do composto mais do que uma vez, a definição da variável em cada ocorrência é independente. Assim, por exemplo, se um grupo for substituído com 0 a 2 R, o grupo pode ser opcionalmente substituído com até dois R, em que a definição de R em cada ocorrência é independente. Além disso, uma combinação do substituinte e/ou da variante deste é permitida apenas quando a combinação resulta em um composto estável.

[047] Quando o número de um grupo de ligação for 0, tal como -(CRR)o-, isto significa que o grupo de ligação é uma ligação única.

[048] Quando uma das variáveis é selecionada a partir de uma ligação única, isto significa que os dois grupos ligados pela ligação única são conectados diretamente. Por exemplo, quando L em A-L-Z representa uma ligação única, a estrutura de A-L-Z é na verdade A-Z.

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18/105 [049] Quando um substituinte é vago, isto significa que o substituinte não existe. Por exemplo, quando X é vago em A-X, a estrutura de A-X é na verdade A. Quando uma ligação de um substituinte pode ser reticulada a mais do que um átomo em um anel, tal substituinte pode ser ligado a qualquer átomo do anel.

Por exemplo, a unidade estrutural significa que o substituinte R pode ser localizado em qualquer posição em cicloexila ou ciclohexadieno. Quando um substituinte enumerável não indica por qual átomo ele é ligado a um composto incluído na fórmula química geral mas não especificamente mencionado, tal substituinte pode ser ligado por qualquer um de seus átomos. Por exemplo, a piridinila como um substituinte pode ser ligada ao grupo substituído com quaisquer átomos de carbono no anel de piridina. Quando o grupo de ligação enumerável não indica a direção para ligação, a direção para ligação é arbitrária, por exemplo, o grupo de ligação L contido em é -MW-, depois -MW- pode ligar ao anel A e anel B para formar m—w—( b na direção mesmo como ordem de leitura da esquerda para a direita e formar w-m

B na direção contrária à ordem de leitura da esquerda para a direita. Uma combinação de grupo de ligação, substituintes e/ou variantes destes é permitida apenas quando tal combinação pode resultar em um composto estável.

[050] A menos que de outro modo especificado, o termo hetero

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19/105 representa um heteroátomo ou um grupo heteroatômico (por exemplo, um grupo atômico contendo um heteroátomo), incluindo o átomo exceto carbono (C) e hidrogênio (H) e o grupo atômico contendo o heteroátomo acima, por exemplo, incluindo oxigênio (O), nitrogênio (N), enxofre (S), silício (Si), germânio (Ge), alumínio (Al), boro (B), -O-, -S-, =0, =S, -C(=O)O-, -C(=O)-, -C(=S)-, -S(=O), S(=O)2- e o grupo consistindo em -C(=O)N(H)-, -N(H)-, -C(=NH)-, -S(=0)2N(H)- e S(=O)N(H)-, cada um dos quais é opcionalmente substituído.

[051] A menos que de outro modo especificado, o termo anel refere-se a um cicloalquila, heterocicloalquila, cicloalquenila, heterocicloalquenila, cicloalquinila, heterocicloalquinila, arila ou heteroarila substituídos ou não substituídos. O anel assim chamado inclui um único anel, um anel de ligação, um anel em espiral, um anel fundido ou um anel ligado em ponte. O número do átomo no anel é usualmente definido como o número de membros do anel, por exemplo, um anel de 5 a 7 membros significa que 5 a 7 átomos são arranjados em um anel. A menos que de outro modo especificado, o anel opcionalmente contém 1 a 3 heteroátomos. Portanto, um anel de 5 a 7 membros inclui, por exemplo, fenila, piridinila e piperidinila; por outro lado, o termo anel de heterocicloalquila de 5 a 7 membros inclui piridila e piperidinila, mas excluindo fenila. O termo anel também inclui um sistema de anel contendo pelo menos um anel, em que cada anel independentemente satisfaz a definição acima.

[052] A menos que de outro modo especificado, o termo heterociclo ou heterociclo refere-se a um anel monociclico, bicíclico ou tricíclico estável

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20/105 contendo um heteroátomo ou um grupo heteroatômico, que pode ser saturado, parcialmente insaturado ou insaturado (aromático) e pode conter átomos de carbono e 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos no anel independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em N, O e S, em que qualquer um do heterociclo acima pode ser fundido a um anel de benzeno para formar um anel bicíclico. Heteroátomos de nitrogênio e enxofre podem ser opcionalmente oxidados (isto é, NO e S(O)p, p é 1 ou 2). O átomo de nitrogênio pode ser substituído ou não substituído (isto é, N ou NR, em que R é H ou outros substituintes já definidos na presente invenção). O heterociclo pode ser ligado ao grupo pendente de qualquer heteroátomo ou átomo de carbono para formar uma estrutura estável. Se o composto resultante for estável, o heterociclo descrito na presente invenção pode ter uma substituição em uma porção de carbono ou nitrogênio. O átomo de nitrogênio no heterociclo é opcionalmente quaternizado. Em uma modalidade preferida, quando o número total de átomo de S e O do heterociclo é mais do que 1, o heteroátomo não é adjacente um ao outro. Em uma outra modalidade preferida, o número total de átomo de S e O do heterociclo não é mais do que 1. Como usado na presente invenção, o termo grupo heterociclico aromático ou heteroarila refere-se a um anel aromático estável monocíclico ou bicíclico de 5, 6 ou 7 membros ou heterociclico biclíclico de 7, 8, 9 ou 10 membros que contém átomos de carbono e 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos no anel independentemente selecionados a partir de N, O e S. O átomo de nitrogênio pode ser substituído ou não substituído (isto é, N ou NR, em que R é H ou outros

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21/105 substituintes já definidos aqui). Heteroátomos de nitrogênio e enxofre podem ser opcionalmente oxidados (isto é, NO e S(O)_P, p é 1 ou 2). Vale a pena notar que o número total de átomo de S e O de um heterociclo aromático não é mais do que um. O anel ligado em ponte também é incluído na definição do heterociclo. Um anel ligado em ponte é formado quando um ou mais do que um átomo (isto é, C, O, N ou S) ligam dois átomos de carbono ou nitrogênio não adjacentes. Um anel ligado em ponte preferido inclui, mas não é limitado a um átomo de carbono, dois átomos de carbono, um átomo de nitrogênio, dois átomos de nitrogênio e um grupo carbono-nitrogênio. Vale a pena notar que uma ponte sempre converte um anel monociclico a um anel tricíclico. Em um anel ligado em ponte, o substituinte no anel também pode estar presente na ponte.

[053] Exemplos do composto heterocíclico incluem, mas não são limitados a: acridinila, azocinila, benzimidazolila, benzofuranila, benzomercaptofuranila, benzomercaptofenila, benzoxazolila, benzoxazolinila, benzotiazolila, benzotriazolila, benzotetrazolila, benzoisoxazolila, benzoisotiazolila, benzoimidazolinila, carbazolila, 4a/-/-carbazolila, carbolinila, cromanila, cromeno, cinolinila decaidroquinolinila, 2/-/,6/-/-1,5,2-ditiazinila, dihidrofuro[2,3b]tetraidrofuranila, furanila, furazanila, imidazolidinila, imidazolinila, imidazolila, l/-/-indazol ila, indolenila, indolinila, indolizinila, indolila, 3/-/-indol ila, isobenzofuranila, isoindolila, isoindolinila, isoquinolinila, isotiazolila, isoxazolila, metilenodioxifenila, morfolinila, naftiridinila, octaidro-isoquinolinila, oxadiazolila, 1,2,3-oxadiazolila, 1,2,4-oxadiazolila, 1,2,5-oxadiazolila, 1,3,4-oxadiazolila,

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22/105 oxazolidinila, oxazolila, hidroxindolila, pirimidinila, fenantridinila, fenantrolinila, fenazina, fenotiazina, benzoxantinila, fenoloxazinila, ftalazinila, piperazinila, piperidinila, piperidonila, 4-piperidonila, piperonila, pteridinila, purinila, piranila, pirazinila, pirazolidinila, pirazolinila, pirazolila, piridazinila, pirido-oxazolila, pirido-imidazolila, pirido-tiazolila, piridinila, pirrolidinila, pirrolinila, 2/-/-pirrolila, pirrolila, quinazolinila, quinolinila, 4/-/-quinolizinila, quinoxalinila, quinuclidinila, tetraidrofuranila, tetraidroisoquinolinila, tetraidroquinolinila, tetrazolila, 6/-/1,2,5-tiadiazinila, 1,2,3-tiadiazolila, 1,2,4-tiadiazolila, 1,2,5-tiadiazolila, 1,3,4tiadiazolila, tiantrenila, tiazolila, isotiazoliltienila, tieno-oxazolila, tieno-tiazolila, tieno-imidazolila, tienila, triazinila, 1,2,3-triazolila, 1,2,4-triazolila, 1,2,5-triazolila, 1,3,4-triazolila e xantenila. São também incluídos compostos de anel fundido e compostos espiro.

[054] A menos que de outro modo especificado, o termo hidrocarbila ou seus hipônimos (por exemplo, alquila, alquenila, alquinila e arila, etc.), por si só ou como parte de um outro substituinte, refere-se a um radical hidrocarboneto linear, de cadeia ramificada ou cíclico ou qualquer combinação dos mesmos. Eles podem ser completamente saturados (por exemplo, alquila), mono- ou poliinsaturados (por exemplo, alquenila, alquinila e arila), podem ser mono- ou polissubstituídos, podem ser monovalentes (por exemplo, metila), bivalentes (por exemplo, metileno) ou multivalentes (por exemplo, metenila), também podem incluir um grupo bivalente ou multivalente, ter um número específico de átomo de carbono (por exemplo, C1-C12 indica 1 a 12 átomos de

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23/105 carbono, Ci-izé selecionado a partir de Ci, C2, C3, C4, C5, Ce, C7, Cs, C9, Cio, C11 e C12; C3-12 é selecionado a partir de C3, C4, C5, Ce, C7, Cs, C9, Cio, C11 e C12). O termo hidrocarbila inclui, mas não é limitado a hidrocarbila alifático e hidrocarbila aromático. O hidrocarbila alifático inclui hidrocarbila linear e cíclico, especificamente inclui, mas não é limitado a alquila, alquenila e alquinila. O hidrocarbila aromático inclui, mas não é limitado a hidrocarbila aromático de 6 a 12 membros tal como fenila, naftila e semelhantes. Em algumas modalidades, o termo hidrocarbila refere-se a um grupo linear ou ramificado ou uma combinação do mesmo que pode ser completamente saturada, mono- ou poliinsaturada e pode incluir um grupo bivalente ou multivalente. Exemplos do grupo hidrocarbila saturado incluem, mas não são limitados a, metila, etila, npropila, isopropila, n-butila, terc-butila, isobutila, sec-butila, cicloexila, (cicloexil)metila, ciclopropilmetila e o homólogo ou isômero de n-amila, n-hexila, n-heptila, n-octila e outros grupos de átomo. O hidrocarbila insaturado tem um ou mais do que uma ligação dupla ou tripla. Exemplos do alquila insaturado incluem, mas não são limitados a, vinila, 2-propenila, butenila, crotila, 2isopentenila, 2-(butadienila), 2,4-pentadienila, 3-(l,4-pentadienila), etinila, 1- e 3-propinila, 3-butinila e mais homólogos e isômeros superiores.

[055] A menos que de outro modo especificado, o termo heteroidrocarbila ou seus hipônimos (tal como heteroalquila, heteroalquenila, heteroalquinila e heteroarila, etc.), por si só ou como parte de um outro substituinte, refere-se a um grupo hidrocarboneto estável linear, ramificado ou

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24/105 cíclico ou qualquer combinação do mesmo, que tem um número específico de átomos de carbono e pelo menos um heteroátomo. Em algumas modalidades, o termo heteroalquila por si só ou em combinação com um outro termo referese a um radical hidrocarboneto estável de cadeia linear, ramificado ou uma combinação do mesmo que tem um número específico de átomos de carbono e pelo menos um heteroátomo. Em uma modalidade específica, um heteroátomo é selecionado a partir do grupo consistindo em B, O, N e S, em que átomos de nitrogênio e enxofre são opcionalmente oxidados e o átomo de nitrogênio é opcionalmente quaternizado. O heteroátomo ou grupo heteroatômico pode ser localizado em qualquer posição interior de um heteroidrocarbila, incluindo a posição onde o hidrocarbila fixa à parte restante da molécula. Mas os termos alcóxi, alquilamino e alquiltio (ou tioalcoxila) são usados pelo significado convencional e referem-se a um grupo alquila conectado à parte restante da molécula por intermédio de um átomo de oxigênio, um amino ou um átomo de enxofre respectivamente. Exemplos incluem, mas não são limitados a, -CH2-CH2O-CH3, -CH2-CH2-NH-CH3, -CH2-CH2-N(CH₃)-CH₃, -CH2-S-CH2-CH3, -CH2-CH2, -S(O)CH₃, -CH2-CH2-S(O)₂-CH₃, -CH=CH-O-CH₃, -CH2-CH=N-OCH₃ e -CH=CH-N(CH₃)-CH₃. Até dois heteroátomos consecutivos podem estar presentes, tais como, -CH2-NHOCH3.

[056] A menos que de outro modo especificado, o termo cicloidrocarbila, heterocicloidrocarbila ou seus hipônimos (tais como arila, heteroarila, cicloalquila, heterocicloalquila, cicloalquenila, heterocicloalquenila,

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25/105 cicloalquinila, heterocicloalquinila, etc.) por si só ou em combinação com um outro termo refere-se a hidrocarbila ciclizado ou heteroidrocarbila. Além disso, para heteroidrocarbila ou heterocicloidrocarbila (por exemplo, heteroalquila e heterocicloalquila), um heteroátomo pode ocupar a posição onde o heterociclo fixa à posição restante da molécula. Exemplos do cicloalquila incluem, mas não são limitados a, ciclopentila, cicloexila, 1-cicloexenila, 3cicloexenila, cicloeptila e semelhantes. Exemplos não limitantes de heterocicloalquila incluem 1-(1,2,5,6-tetraidropiridila), 1-piperidinila, 2piperidinila, 3-piperidinila, 4-morfolinila, 3-morfolinila, tetraidrofuran-2-ila, tetraidrofuran-3-ila, tetraidrotiofen-2-ila, tetraidrotiofen-3-ila, 1-piperazinila e 2piperazinila.

[057] A menos que de outro modo especificado, o termo alquila referese a um grupo hidrocarboneto saturado ramificado ou de cadeia linear, pode ser monossubstituído (por exemplo, -CH2F) ou polissubstituído (por exemplo, -CF3), pode ser monovalente (por exemplo, metila), bivalente (por exemplo, metileno) ou multivalente (por exemplo, metenila). Exemplos de alquila incluem metila (Me), etila (Et), propila (tal como n-propila e isopropila), butila (tal como n-butila, isobutila, s-butila, t-butila), pentila (tal como n-pentila, isopentila, neopentila) e semelhantes.

[058] A menos que de outro modo especificado, o termo alquenila refere-se a um grupo alquila tendo uma ou mais do que uma ligação dupla carbono-carbono em qualquer posição na cadeia, pode ser monossubstituído ou

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26/105 polissubstituído e pode ser monovalente, bivalente ou multivalente. Exemplos de alquenila incluem etenila, propenila, butenila, pentenila, hexenila, butadienila, pentadienila, hexadienila e semelhantes.

[059] A menos que de outro modo especificado, o termo alquinila refere-se a um grupo alquila tendo um ou mais do que uma ligação tripla carbono-carbono em qualquer posição na cadeia, pode ser monossubstituído ou polissubstituído e pode ser monovalente, bivalente ou multivalente. Exemplos de alquinila incluem etinila, propinila, butinila, pentinila e semelhantes.

[060] A menos que de outro modo especificado, cicloalquila inclui qualquer hidrocarbila cíclico ou policiclico estável e qualquer átomo de carbono é saturado, pode ser monossubstituído ou polissubstituído e pode ser monovalente, bivalente ou multivalente. Exemplos de cicloalquila incluem, mas não são limitados a, ciclopropila, norbornanila, [2,2,2]biciclooctano, [4,4,0]biciclodecanila e semelhantes.

[061] A menos que de outro modo especificado, cicloalquenila inclui qualquer hidrocarbila cíclico ou policiclico estável tendo um ou mais do que uma ligação única carbono-carbono insaturada em qualquer posição no anel, pode ser monossubstituído ou polissubstituído e pode ser monovalente, bivalente ou multivalente. Exemplos do cicloalquenila incluem, mas não são limitados a, ciclopentenila, cicloexenila e semelhantes.

[062] A menos que de outro modo especificado, cicloalquinila inclui qualquer hidrocarbila cíclico ou policiclico estável tendo uma ou mais ligações

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27/105 triplas carbono-carbono em qualquer posição no anel, pode ser monossubstituído ou polissubstituído e pode ser monovalente, bivalente ou multivalente.

[063] A menos que de outro modo especificado, o termo halo ou halogênio por si só ou como parte de um outro substituinte refere-se a átomo de flúor, cloro, bromo ou iodo. Além disso, o termo haloalquila destina-se a incluir monoaloalquila e polialoalquila. Por exemplo, o termo haloalquila (C1-C4) destina-se a incluir, mas não é limitado a, trifluorometila, 2,2,2-trifluoroetila, 4clorobutila, 3-bromopropila e semelhantes. Exemplos de haloalquila incluem, mas não são limitados a trifluorometila, triclorometila, pentafluoroetila e pentacloroetila.

[064] O termo alcóxi representa qualquer alquila definido acima tendo um número específico de átomos de carbono ligados por uma ponte de oxigênio. A menos que de outro modo especificado, alcóxi Ci-e inclui alcóxi Ci, C2, C3, C4, C5 e Ce. Exemplos de alcóxi incluem, mas não são limitados a metóxi, etóxi, npropóxi, isopropóxi, n-butóxi, sec-butóxi, terc-butóxi, n-pentilóxi e S-pentóxi.

[065] A menos que de outro modo especificado, o termo arila refere-se a um substituinte aromático poli-insaturado, pode ser mono-, di- ou polissubstituído, pode ser um monovalente, bivalente ou multivalente, pode ser um único anel ou um anel múltiplo (por exemplo, um a três anéis; em que pelo menos um anel é aromático), que são fundidos entre si ou conectados covalentemente. O termo heteroarila refere-se a um arila (ou anel) contendo

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28/105 um a quatro heteroátomos. Em um exemplo ilustrativo, o heteroátomo é selecionado a partir do grupo consistindo em B, O, N e S, em que átomos de nitrogênio e enxofre são opcionalmente oxidados e átomo de nitrogênio é opcionalmente quaternizado. Um heteroarila pode fixar à parte restante de uma molécula por intermédio de um heteroátomo. Exemplos não limitantes de arila ou heteroarila incluem fenila, naftila, bifenila, pirrolila, pirazolila, imidazolila, pirazinila, oxazolila, feniloxazolila, isoxazolila, tiazolila, furanila, tienila, piridila, pirimidinil benzotiazolila, purinila, benzimidazolila, indolila, isoquinolila, quinoxalinila, quinolila, 1-naftila, 2-naftila, 4-bifenila, 1-pirrolila, 2-pirrolila, 3pirrolila, 3-pirazolila, 2-imidazolila, 4-imidazolila, pirazinila, 2-oxazolila, 4oxazolila, 2-fenil-4-oxazolila, 5-oxazolila, 3-isoxazolila, 4-isoxazolila, 5-isoxazolila, 2-tiazolila, 4-tiazolila, 5-tiazolila, 2-furila, 3-furila, 2-tienila, 3-tienila, 2-piridila, 3piridila, 4-piridila, 2-pirimidila, 4-pirimidila, 5-benzotiazolila, purinila, 2benzimidazolila, 5-indolila, 1-isoquinolila, 5-isoquinolila, 2-quinoxalinila, 5quinoxalinila, 3-quinolila e 6-quinolila. O substituinte de qualquer um do sistema de anel de arila e heteroarila acima é selecionado a partir do substituinte aceitável descrito abaixo.

[066] A menos que de outro modo especificado, quando arila combina com outros termos (tais como arilóxi, ariltio, arilalquila), o arila inclui o anel de arila e heteroarila como definido acima. Assim, o termo aralquila destina-se a incluir o grupo (por exemplo, benzila, fenetila, piridilmetila, etc.) onde um arila é ligado a um alquila, incluindo um alquila onde o átomo de carbono (por exemplo,

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29/105 metileno) foi substituído com um átomo tal como oxigênio, por exemplo, fenoximetila, 2-piridilóxi, 3-(l-naftilóxi)propila e semelhantes.

[067] O termo grupo de partida refere-se a um grupo funcional ou átomo que pode ser substituído com um outro grupo funcional ou átomo através de uma reação de substituição (tal como reação de substituição nucleofílica). Por exemplo, grupos de partida representativos incluem triflato; cloro, bromo e iodo; grupo sulfonato, tal como mesilato, tosilato, p-bromobenzenossulfonato, ptoluenossulfonatos e semelhantes; acilóxi, tal como acetóxi, trifluoroacetóxi e semelhantes.

[068] O termo grupo de proteção inclui, mas não é limitado a grupo de proteção de amino, grupo de proteção de hidróxi ou grupo de proteção de tio. O termo grupo de proteção de amino refere-se a um grupo de proteção adequado para bloquear a reação lateral no nitrogênio de um amino. Grupos de proteção de amino representativos incluem, mas não são limitados a: formila; acila, tal como alcanoíla (por exemplo, acetila, tricloroacetila ou trifluoroacetila); alcoxicarbonila, tal como terc-butoxicarbonila (Boc); arilmetoxicarbonila tal como benziloxicarbonila (Cbz) e 9-fluorenilmetoxicarbonila (Fmoc); arilmetila tal como benzila (Bn), tritila (Tr), l,l-bis-(4'-metoxifenil)metila; silila tal como trimetilsilila (TMS) e terc-butildimetilsilila (TBS) e semelhantes. O termo grupo de proteção de hidróxi refere-se a um grupo de proteção adequado para bloquear a reação lateral em hidróxi. Grupos de proteção de hidróxi representativos incluem, mas não são limitados a: alquila tal como metila, etila

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30/105 e terc-butila; acila tal como alcanoíla (por exemplo, acetila); arilmetila tal como benzila (Bn), p-metoxibenzila (PMB), 9-fluorenilmetila (Fm) e difenilmetila (benzidrila, DPM); silila tal como trimetilsilila (TMS) e terc-butil dimetil silila (TBS) e semelhantes.

[069] O composto da presente invenção pode ser preparado por uma variedade de métodos sintéticos bem conhecidos ao técnico no assunto, incluindo a modalidade enumerável seguinte, a modalidade formada pela modalidade enumerável seguinte em combinação com outros métodos de síntese química e a substituição equivalente bem conhecida ao técnico no assunto. A modalidade preferida inclui, mas não é limitada à modalidade da presente invenção.

[070] Todos os solventes usados na presente invenção estão comercialmente disponíveis. Esta presente invenção adota as palavras abreviadas como segue: Aq refere-se a água; HATU refere-se a hexafluorofosfato de O-p-azabenzotriazol-l-ilJ-A/'/V'/V'/V'-tetrametiluronio; EDC refere-se a cloridreto de /V-(3-dimetilaminopropil)-/\/'-etilcarbodiimida; m-CPBA refere-se a ácido 3-cloroperoxibenzóico; eq refere-se a equivalente; CDI refere-se a carbonildiimidazol; DCM refere-se a diclorometano; PE refere-se a éter de petróleo; DIAD refere-se a azodicarboxilato de diisopropila; DMF refere-se a /V,/\/-dimetilformamida; DMSO refere-se a dimetilsulfóxido; EtOAc refere-se a acetato de etila; EtOH refere-se a etanol; MeOH refere-se a metanol; CBz refere-se a benzilóxicarbonila, que é um grupo de proteção para

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31/105 aminas; BOC refere-se a t-butilcarbonila que é um grupo de proteção para aminas; HOAc refere-se a ácido acético; NaCNBFH refere-se a cianoboroidreto de sódio; r.t. refers à temperatura ambiente; O/N refere-se a durante a noite; THF refere-se a tetraidrofurano; BOC2O refere-se a di-tercbutildicarbonato; TFA refere-se a ácido trifluoroacético; DIPEA refere-se a diisopropiletilamina; SOCb refere-se a cloreto de tionila; CS2 refere-se a dissulfeto de carbono; TsOH refere-se a ácido p-toluenossulfônico; NFSI refere-se a /V-fluoro-/V-(fenilsulfonil)benzenossulfonamida; NCS refere-se a 1cloropirrolidina-2,5-diona; n-Bu4NF refere-se a fluoreto de tetrabutilamônio; iPrOH refere-se a 2-propila; mp refere-se a ponto de fusão; LDA refere-se a diisopropilamino lítio; DMP refere-se a ftalato de dimetila; Xantphos refere-se a 4,5-bisdifenilfosfino-9,9-dimetiloxaxima; Pd2(dba)s refere-se a tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio; Xant-Phos refere-se a 4,5bisdifenilfosfino-9,9-dimetiloxaxano; EGTA refere-se a ácido tetracético de etilenoglicol; DIEA refere-se a Λ/,/V-diisopropiletilamina; Xantphos refere-se a 4,5-bisdifenilfosfino-9,9-dimetiloxaxan; AIBN refere-se a 2,2'-azobis(2metilpropionitrila); Pd2(dba)s refere-se a tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio; Pd(dppf)Cb refere-se a dicloreto de [l,l'-bis(difenilfosfino)ferroceno]paládio; BnBr refere-se a brometo de benzila; DMAP refere-se a 4dimetilaminopiridina; EGTA refere-se a ácido tetracético de etilenoglicol; TMSN3 refere-se a azidotrimetilsilano; (Bpin^ refere-se a bis(pinacolato)diboro; BnBr refere-se a brometo de benzila; 'ΊΤ2Ο refere-se a

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32/105 anidrido trifluorometanossulfônico; anidrido trifluorometanossulfônico; Hepes refere-se a ácido 4-hidroxietilpiperazinoetanossulfônico; EGTA refere-se a ácido tetracético de etilenoglicol.

[071] Os compostos são denominados manualmente ou pelo software ChemDraw®, os compostos comercialmente disponíveis usam seus nomes de diretório de fornecedores.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA MODALIDADE PREFERIDA [072] Os exemplos seguintes ilustram ainda a presente invenção, mas por todos os meios a invenção não é limitada aos mesmos. Embora a presente invenção tenha sido descrita em detalhe e com referência às modalidades específicas da mesma, será evidente aos técnicos no assunto que várias mudanças e modificações podem ser feitas nesta sem divergir do espírito e escopo da mesma.

Fragmento WXBB-1:

COOH

Via sintética:

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WXBB-1-5

WXBB-1-1 WXBB-1-3

WXBB-1-4a WXBB-1-4

Etapa 1: Síntese do Composto WXBB-1-3 [073] WXBB-1-1 (50,00 g, 127,48 mmol, 1,00 eq) foi dissolvido em acetonitrila (500,00 mL) seguido por adição de WXBB-1-2 (12,87 g, 152,98 mmol, 15,14 mL, 1,20 eq). A reação foi realizada a 70 °C por 2 horas sob atmosfera de nitrogênio. Depois da conclusão da reação, a solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, evaporada rotativamente até secar por bomba de água sob pressão reduzida a 40 °C e depois dissolvida em diclorometano (150 mL). Depois da lavagem com água (75 mL*2), a fase orgânica foi concentrada até cerca de 90 mL e depois 75 mL*3 de n-hexano (removendo diclorometano residual) foi adicionado e evaporado rotativamente para fornecer um sólido branco na fase orgânica. O sólido branco foi filtrado e a torta do filtro foi lavada com 180 mL de n-hexano e a torta do filtro foi evaporada rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer WXBB-1-3 (27,00 g, 106,17 mmol, 83,29 % de rendimento) como um sólido branco. RMN de ¹H (400 MHz, DMSO-ck) δ ppm 0,79 - 0,86 (m,

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Η) 0,88 - 0,97 (m, 2 Η) 1,99 - 2,10 (m, 1 Η) 2,42 (s, 3 Η) 4,98 (s, 2 Η) 7,49 (d, J = 8,16 Hz, 2 H) 7,82 (d, J = 8,28 Hz, 2 H), m/z = 255,1 (M+l).

Etapa 2: Síntese do Composto WXBB-1-4 [074] WXBB-l-4a (20,00 g, 98,02 mmol, 1,00 eq) foi dissolvido em Nmetilpirrolidona (100,00 mL), seguido por adição de cianeto cuproso (17,56 g, 196,04 mmol, 42,83 mL, 2,00 eq). A reação foi realizada a 180 °C por 3 horas. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, seguido por adição de água (300 mL) e amônia (300 mL), agitada a temperatura ambiente por 30 minutos e extraída com acetato de etila (200 mL*3). A fase orgânica foi lavada com salmoura saturada (200 mL) e água (200 mL), seca em sulfato de sódio anidro, filtrada por sucção e evaporada rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto como um sólido marrom-preto. O produto bruto foi isolado por cromatografia em coluna de silica gel (PE: EA = 20:1 - 3:1) para fornecer WXBB-1-4 (12,00 g, 79,92 mmol, 81,53 % de rendimento) como um sólido amarelo. RMN de ¹H (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 2,21 (s, 3 H) 3,68 (br s, 2 H) 6,80 (d, J = 5,40 Hz, 1 H) 6,91 (d, J = 9,29 Hz, 1 H).

Etapa 3: Síntese do Composto WXBB-1-5 [075] WXBB-1-3 (6,00 g, 39,96 mmol, 1,00 eq), WXBB-1-4 foram adicionados em um frasco de boca única, seguido por adição de diisopropiletilamina (10,85 g, 83,92 mmol, 14,66 mL, 2,10 eq). A reação foi realizada a 100 °C por 18 horas sob atmosfera de nitrogênio. Depois da conclusão da reação, a solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, seguido

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35/105 por adição de 50 mL de água. Depois da separação de fase, a fase orgânica foi sequencialmente lavada com 50 mL de solução de cloreto de amônio (27 %), 50 mL de solução de hidrogeno carbonato de sódio (9 %) e 45 mL de salmoura saturada, seca em sulfato de sódio anidro e evaporada rotativamente até secar com bomba de água sob pressão reduzida a 45 °C até cerca de 30 mL de tolueno remanescente. 60 mL de n-hexano foi adicionado à fase orgânica, seguido por filtração. A torta do filtro foi lavada com 60 mL de isopropanol (10 minutos em banho de gelo) e evaporada rotativamente até secar com bomba de água sob pressão reduzida a 40 °C (sólido branco). O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (S1O2, malha 100 a 200, PE: EA = 10:1 - 3:1) para fornecer WXBB-1-5 (1,80 g, 7,75 mmol, 19,39 % de rendimento) como um sólido amarelo. RMN de ^ÃH (400 MHz, DMSO-cfc) δ ppm 0,81 - 0,86 (m, 2 H) 0,87 - 0,90 (m, 2 H) 2,42 (s, 3 H) 4,98 (s, 2 H) 5,20 - 5,28 (m, 1 H) 5,23 (s, 1 H) 6,67 (d, J = 5,52 Hz, 2 H) 6,87 (d, J = 5,77 Hz, 1 H).

Etapa 4: Síntese do Composto WXBB-1-6 [076] WXBB-1-5 (1,25 g, 5,38 mmol, 1,00 eq) foi colocado em um frasco de boca única de 100 mL contendo ácido acético (20,00 mL). Tiocianato de potássio sólido (1,05 g, 10,76 mmol, 1,05 mL, 2,00 eq) foi adicionado à solução de reação e carregado com nitrogênio três vezes. A reação foi realizada a 110 °C por 5 horas sob atmosfera de nitrogênio. Depois da conclusão da reação, a solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, evaporada rotativamente até secar com bomba de óleo sob pressão reduzida a 60 °C e

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36/105 dissolvida em 10 mL de diclorometano. A fase orgânica foi lavada com água (5 mL*2) e a fase aquosa foi extraída com 10 mL*2 de diclorometano. As fases orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio anidro e evaporadas rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer um sólido marrom. O sólido marrom obtido foi dissolvido com 5 mL de acetato de etila, seguido por adição de 15 mL de n-hexano. A solução foi disposta em camadas com uma camada superior marrom e agitada por magnetizador sem nenhuma precipitação de sólidos. A mistura é evaporada rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer um óleo marrom. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (S1O2, 100 a 200 mesh, PE: EA = 10:1 - 3:1) para fornecer WXBB-1-6 (390,00 mg, 756,23 pmol, 14,06 % de rendimento, 53 % de pureza) como um sólido amarelo, m/z = 274,0 (M+l).

Etapa 5: Síntese do Composto WXBB-1-7 [077] Ácido acético (8,00 mL), água (1,60 mL) e peróxido de hidrogênio (487,96 mg, 4,30 mmol, 413,53 pL, 30 % de pureza, 3,01 eq) foram adicionados em um frasco de três bocas de 100 mL pré-seco e a mistura foi aquecida até 45 °C (temperatura interna) sob atmosfera de nitrogênio. Depois da adição de WXBB1-6 (390,00 mg, 1,43 mmol, 1,00 eq) como um sólido (a temperatura interna foi mantida abaixo de 55 °C) e a solução de reação foi reagida a 45 °C por 30 minutos. Depois da conclusão da reação, a solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, seguido por adição de 4 mL de uma solução de sulfito de sódio a 20 %, agitada na temperatura ambiente por 0,5 hora e evaporada

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37/105 rotativamente até secar com bomba de óleo para fornecer um sólido branco. 4 mL de água foi adicionado ao sólido branco e o pH foi ajustado até cerca de 10 com hidróxido de amônia 4N. A fase aquosa foi extraída com diclorometano (6 mL*3). A fase orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro e evaporada rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer WXBB-1-7 (200,00 mg, 828,98 pmol, 57,97 % de rendimento) como um sólido amarelo, m/z = 242,2 (M+l).

Etapa 6: Síntese do Composto WXBB-1 [078] Uma solução de reação de WXBB-1-7 (200,00 mg, 828,98 pmol, 1,00 eq) e ácido clorídrico (6,00 mL, 38 % de pureza) foi adicionada a um frasco de boca única de 100 mL seco e reagida a 100 °C por 18 horas. Depois da conclusão da reação, a solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente e evaporada rotativamente até secar. 5 mL*2 de tolueno foi adicionado a esta e evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer WXBB-1 (200,00 mg, 768,46 pmol, 92,70 % de rendimento) como um sólido marrom. RMN de ^XH (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,81 - 0,89 (m, 2 H) 0,98 - 1,06 (m, 2 H) 1,96 - 2,05 (m, 1 H) 2,24 (s, 3 H) 7,54 (d, J = 11,29 Hz, 1 H) 7,74 (s, 1 H) 8,00 (d, J = 6,78 Hz, 1 H) 9,28 (s, 1 H), m/z = 261,1 (M+l).

Fragmento WXBB-2:

Via sintética:

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38/105

WXBB-2-1 WXBB-2-2

WXBB-2

Etapa 1: Síntese do Composto WXBB-2-2 [079] Pentassulfeto de fósforo (52,24 g, 235,02 mmol, 24,99 mL, 2,00 eq) foi dissolvido em tetraidrofurano (300,00 mL), seguido por adição lenta de carbonato de sódio (12,45 g, 117,51 mmol, 1,00 eq). O sistema foi agitado a 20 °C por 1 hora. O Composto WXBB-2-1 foi adicionado ao sistema e o sistema foi aquecido até 60 °C e agitado por 48 horas. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, seguido por filtração. O filtrado foi concentrado até secar sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (0 a 60 % de EA/PE) para fornecer o Composto WXBB-2-2 (6,20 g, 61,28 mmol, 52,15 % de rendimento) como sólido branco. RMN de ^XH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 2,166 - 2,249 (m, 2 H) 2,896 - 2,936 (m, 2 H) 3,664 - 3,699 (m, 2 H) 8,676 (s, 1 H).

Etapa 2: Síntese do Composto WXBB-2 [080] O Composto WXBB-2-2 (200,00 mg, 1,98 mmol, 1,00 eq) e o Composto WXBB-4 (360,00 mg, 2,37 mmol, 1,19 eq) foram dissolvidos em cicloexanol (4,00 mL). O sistema foi agitado a 170 °C por 24 horas sob atmosfera de nitrogênio. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, diluída com água (80 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL*6). A fase orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi

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39/105 concentrado sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (0 a 10 % de MeOH/DCM) para fornecer o Composto WXBB-2 (180,00 mg, 831,88 pmol, 42,01 % de rendimento, 93 % de pureza) como um sólido amarelo. RMN de ^XH (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,71 - 2,64 (m, 2H) 2,86 (d, J = 7,2 Hz, 2 H) 4,32 (t, J = 7,2 Hz, 2 H) 6,13 (br.s, 2H) 6,48 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) 7,22 (d, J = 7,2 Hz, 1 H) 7,52 - 7,47 (m,lH). m/z = 202,0 [M+H]+.

Fragmento WXBB-3:

Via sintética:

Etapa 1: Síntese do Composto WXBB-3-2 [081] Pentassulfeto de fósforo (56,06 g, 252,19 mmol, 26,82 mL, 1,00 eq) foi adicionado a acetonitrila (500,00 mL) para formar uma suspensão, seguido por adição lenta de trietilamina (25,52 g, 252,19 mmol, 34,96 mL, 1,00 eq). O sistema foi agitado a temperatura ambiente por 1 hora, seguido por adição de WXBB-3-1 (25,00 g, 252,19 mmol, 1,00 eq) e o sistema foi agitado a 60 °C por 19

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40/105 horas. A solução de reação foi vertida em hipoclorito de sódio (200 mL) e concentrada sob pressão reduzida para remover acetonitrila e extraída com diclorometano (200mL*3). As fases orgânicas foram combinadas, sequencialmente lavadas com água (400 mL) e salmoura (400 mL) e secas em sulfato de magnésio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (0 a 10 % de MeOH/DCM) para fornecer o Composto WXBB-3-2 (10,00 g, 86,81 mmol, 34,42 % de rendimento) como um sólido amarelo. RMN de ^ÃH (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,53 -1,71 (m, 4 H) 2,57 - 2,67 (m, 2 H) 3,13 (br s, 1 H) 3,18 (td, J = 5,77, 2,51 Hz, 1 H).

Etapa 2: Síntese do Composto WXBB-3 [082] O Composto WXBB-3-2 (6,00 g, 52,08 mmol, 1,00 eq) e o Composto WXBB-4 (8,72 g, 57,29 mmol, 1,10 eq) foram dissolvidos em cicloexanol (100,00 mL). O sistema foi agitado a 170 °C por 6 horas sob atmosfera de nitrogênio. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, diluída com água (200 mL), ajustada ao pH 5 com ácido clorídrico (2N, 100 mL) e extraída com acetato de etila (200 mL). A fase aquosa foi ajustada ao pH 9 com hidróxido de sódio (2N, 100 mL) e extraída com acetato de etila (200 mL*2). As fases orgânicas foram combinadas, sequencialmente lavadas com água (200 mL) e salmoura (200 mL) e secas em sulfato de magnésio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (0 a 10 % de DCM/MeOH) para

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41/105 fornecer o Composto WXBB-3 (5,00 g, 17,50 mmol, 33,60 % de rendimento,

75,32 % de pureza) como um sólido marrom, m/z = 216,0 [M+H]+.

Fragmento WXBB-4:

h₂n

H

N_x

NH₂

Via sintética:

h₂n

WXBB-4-1 h₂n

WXBB-4

H

N.

NH₂

Etapa 1: Síntese do Composto WXBB-4 [083] O Composto WXBB-4-1 (20,00 g, 131,45 mmol, 1,00 eq) foi dissolvido em metanol (200,00 mL) para fornecer uma solução amarela clara, seguido por adição lenta de hidrato de hidrazina (19,74 g, 394,35 mmol, 19,17 mL, 3,00 eq). O sistema de reação foi agitado a 75 °C por 1,5 horas. Depois da conclusão da reação, a mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, seguido por filtração. A torta do filtro foi lavada com acetato de etila (50mL*2) e a torta do filtro foi evaporada rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer o Composto WXBB-4 (20,00 g, 131,45 mmol, 100,00 % de rendimento) como um sólido branco. RMN de ¹H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm

4,48 (br s, 2 H) 6,09 (s, 2 H) 6,60 (d, J = 8,28 Hz, 1 H) 7,11 (d, J = 7,03 Hz, 1 H) 7,51 (t, J = 7,78 Hz, 1 H) 9,19 (br s, 1 H).

Exemplo 001: WX001

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Via sintética:

WXBB-l

WX001

Etapa 1: Síntese do Composto WX001 [084] WXBB-l (100,00 mg, 337,02 pmol, 1,00 eq, HCI) e WXBB-2 (80,00 mg, 369,73 pmol, 1,10 eq) (93 % de pureza) foram dissolvidos em piridina (5,00 mL), seguido por adição lenta de oxicloreto de fósforo (50,00 mg, 326,09 μηηοΙ, 30,30 μί, 0,97 eq). O sistema de reação foi agitado a 50 °C por 1 hora. A solução de reação foi resfriada com água e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi isolado e purificado por HPLC prep. (sistema neutro) para fornecer WX001. RMN de ^XH: 0,63 - 0,71 (m, 2 H) 0,74 - 0,83 (m, 2 H) 1,76 - 1,89 (m, 1 H) 2,23 (s, 3 H) 2,67 (quin, J = 7,34 Hz, 2 H) 2,81 - 2,92 (m, 2 H) 4,38 (t, J = 7,03 Hz, 2 H) 7,17 (d, J = 0,75 Hz, 1 H) 7,47 (d, J = 10,79 Hz, 1 H) 7,56 - 7,64 (m, 1 H) 7,68 (d, J = 1,00 Hz, 1 H) 7,85 (d, J = 7,53 Hz, 1 H) 7,98 (t, J = 7,91 Hz, 1 H) 8,15 (d, J = 8,28 Hz, 1 H) 10,90 (s, 1 H). m/z = 444,2 (M+l).

Exemplo 002: WX002

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Via sintética:

WXBB-3 WX002

Etapa 1: Síntese do Composto WX002 [085] WXBB-1 (100,00 mg, 337,02 pmol, 1,21 eq, HCI) foi dissolvido em diclorometano (5,00 mL), seguido por adição de cloreto de oxalila (70,76 mg, 557,49 pmol, 48,80 pL, 2,00 eq) e /V,/\/-dimetilformamida (20,37 mg, 278,75 pmol, 21,45 pL, 1,00 eq) sob atmosfera de nitrogênio. O sistema foi agitado a 0 °C por 1 hora. A solução de reação foi evaporada rotativamente até secar sob pressão reduzida, seguido por adição sequencial de diclorometano (5,00 mL), WXBB-3 (60,00 mg, 278,75 pmol, 1,00 eq) e DMAP (136,22 mg, 1,12 mmol, 4,00 eq). O sistema foi agitado a 0 °C por 3 horas. A solução de reação foi evaporada rotativamente sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi isolado por placa de TLC prep. (DCM: MeOH = 20:1) para fornecer WX002. RMN de ^ÃH (400 MHz, METANOL-d4) ppm 9,17 (s, 1H), 8,47 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,16 - 8,08 (m, 1H), 8,06 - 7,96 (m, 2H), 7,63 (s, 1H), 7,50 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,82 (br. s., 2H), 3,27 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,20 (br. s., 2H), 2,15 - 2,04 (m, 3H), 1,22 -1,12 (m, 2H), 0,98 - 0,89 (m, 2H).

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Exemplo 003: WX003

Via sintética:

WX003-3

WX003-4

WX003-1

Etapa 1: Síntese do Composto WX003-3 [086] WX003-1 (1,50 g, 9,99 mmol, 1,00 eq) foi dissolvido em acetonitrila (60,00 mL) e arrefecido até 0 °C, seguido por adição de nitrito de isoamila (1,76 g, 14,99 mmol, 2,02 mL, 1,50 eq), depois TMSN3 (1,73 g, 14,99 mmol, 1,96 mL, 1,50 eq) foi adicionado gota a gota à solução de reação. O banho de gelo foi removido depois de 25 minutos. A solução de reação foi aquecida até a temperatura ambiente 25 °C e reagida por 2 horas. WX003-2 (1,98 g, 29,97 mmol, 2,48 mL, 3,00 eq) e CU2O (142,95 mg, 999,00 pmol, 102,11 pL, 0,10 eq) depois foram adicionados à solução de reação e a reação foi realizada a 50 °C por 18 horas sob atmosfera de nitrogênio. Depois da conclusão da reação, a solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente e evaporada rotativamente até

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45/105 secar, diluída com 50 mL de diclorometano, sequencialmente lavada com 30 mL de cloreto de amônio saturado e 30 mL de salmoura saturada e seca em sulfato de sódio anidro, evaporada rotativamente até secar. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (S1O2, PE: EA = 10:1 a 4:1) para fornecer WX003-3. m/z = 242,9 [M+l],

Etapa 2: Síntese do Composto WX003-4 [087] WX003-3 (380,00 mg, 1,57 mmol, 1,00 eq) foi adicionado em 38 % de ácido clorídrico (15,00 mL) e submetido ao refluxo a 100 °C por 18 horas. A solução de reação foi ajustada ao pH 9 com carbonato de sódio sólido e extraída com 10 mL*3 de acetato de etila. A fase aquosa foi retida, ajustada ao pH 2 com HCI 2N e extraída com 30 mL*3 de acetato de etila. A fase orgânica foi retida e seca em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar para fornecer WX003-4. m/z = 261,9 [M+l].

Etapa 3: Síntese do Composto WX003-5 [088] WX003-4 (300,00 mg, 1,15 mmol, 1,00 eq) foi dissolvido em diclorometano anidro (10,00 mL) e carregado com gás nitrogênio, seguido por adição de cloreto de oxalila (248,15 mg, 1,95 mmol, 171,14 pL, 1,70 eq) para formar uma emulsão. Posteriormente, /V,/\/-dimetilformamida anidra (8,41 mg, 115,00 pmol, 8,85 pL, 0,10 eq) foi adicionada a esta e a reação foi realizada a 25 °C por 2 horas sob atmosfera de nitrogênio. 5 mL de diclorometano anidro foi adicionado à solução de reação e concentrado sob pressão reduzida a 35 °C a 5 mL de diclorometano anidro remanescente. Tais procedimentos foram repetidos

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46/105 quatro vezes e o produto resultante em DCM anidro foi usado diretamente na etapa seguinte. O WX003-5 resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano. m/z = 276,1 [éster metílico MS].

Etapa 4: Síntese do Composto WX003 [089] Diisopropiletilamina (131,82 mg, 1,02 mmol, 178,14 pL, 1,00 eq) foi adicionada a uma solução de WX003-5 (285,29 mg, 1,02 mmol, 1,00 eq) em diclorometano anidro (6,00 mL) sob atmosfera de nitrogênio, seguido pela adição de WXBB-3 (220,00 mg, 1,02 mmol, 1,00 eq). A reação foi realizada a 25 °C por 18 horas sob atmosfera de nitrogênio. Depois da conclusão da reação, 5 mL de salmoura saturada foi adicionado à solução de reação. A fase orgânica foi separada e evaporada rotativamente (evaporação rotativa por bomba de água a 40 °C) até secar sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi purificado por HPLC prep. (coluna: waterXbridge 150*25 5u; fase móvel: [Água (NH4HCO310 mM)-ACN]; B %: 12 % a 52 %, 10,5 min) para fornecer o Composto WX003. RMN de (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 0,95 - 1,00 (m, 2 H) 1,03 -1,10 (m, 2 H) 1,95 - 2,02 (m, 2 H) 2,04 - 2,12 (m, 3 H) 2,35 (s, 3 H) 3,10 (t, J = 6,34 Hz, 2 H) 4,51 (t, J = 6,09 Hz, 2 H) 7,23 (s, 1 H) 7,50 (s, 1 H) 7,90 (t, J = 8,03 Hz, 1 H) 8,12 (dd, J = 15,37, 7,34 Hz, 2 H) 8,36 (d, J = 8,28 Hz, 1 H) 9,02 (br d, J = 14,30 Hz, 1 H).

Exemplo 004: WX004 n H

F

I ^XN n-n

N ,'n

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Via sintética:

[^CN

WX004-6a

WX004-6

WX004-1 WX004-2

WX004-3

Etapa 1: Síntese do Composto WX004-2 [090] /V-bromossuccinimida (22,97 g, 129,75 mmol, 1,00 eq) foi adicionado a uma mistura de WX004-1 (20,00 g, 129,75 mmol, 1,00 eq) e ácido sulfúrico concentrado (200,00 mL) e agitado a 20 °C por 20 minutos. A solução de reação foi vertida em água gelada (1000 mL) enquanto agitando e um sólido branco foi formado. Depois da filtração, a torta do filtro foi dissolvida com 500 mL de diclorometano, seca em sulfato de magnésio, filtrada e evaporada até secar para fornecer WX004-2. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm

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2,45 (s, 3 Η) 7,07 (d, J = 11,17 Hz, 1 Η) 8,16 (d, J = 6,90 Hz, 1 Η).

Etapa 2: Síntese do Composto WX004-3 [091] O material bruto WX004-2 (27,00 g, 115,86 mmol, 1,00 eq) foi dissolvido em metanol (200,00 mL), seguido por adição de ácido sulfúrico concentrado (11,36 g, 115,86 mmol, 6,18 mL, 1,00 eq). A reação foi realizada a 90 °C por 18 horas. A solução de reação foi evaporada até secar e dissolvida em 250 mL de diclorometano, seguido por adição de 150 mL de solução de bicarbonato de sódio saturada, extração e evaporação até secar para fornecer WX004-3. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 2,42 (s, 3 H) 3,92 (s, 3 H) 7,04 (d, J = 11,04 Hz, 1 H) 8,09 (d, J = 6,90 Hz, 1 H).

Etapa 3: Síntese do Composto WX004-4 [092] WX004-3 (5,00 g, 20,24 mmol, 1,00 eq) foi dissolvido em dioxano (60,00 mL) seguido por adição de (Bpin)2 (7,71 g, 30,36 mmol, 1,50 eq), acetato de potássio (5,96 g, 60,72 mmol, 3,00 eq) e Pd(dppf)Cb (2,96 g, 4,05 mmol, 0,20 eq) e carregado com gás nitrogênio. A reação foi realizada a 90 °C por 18 horas sob atmosfera de nitrogênio. Depois da conclusão da reação, a mistura de reação foi filtrada através de diatomito e o filtrado foi evaporado até secar. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (S1O2, PE: EA = 20:1 - 7:1) para fornecer WX004-4. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1,31 - 1,37 (m, 12 H) 2,53 - 2,58 (m, 3 H) 3,90 (s, 3 H) 6,92 (d, J = 12,17 Hz, 1 H) 8,32 (d, J = 8,53 Hz, 1 H)

Etapa 4: Síntese do Composto WX004-5

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49/105 [093] WX004-4 foi dissolvido em tetraidrofurano (35,00 mL), seguido por adição de periodato de sódio (5,09 g, 23,80 mmol, 1,32 mL, 2,00 eq) e solução de ácido clorídrico IN (10,00 mL). A solução de reação foi reagida a 25 °C por 18 horas. Depois da conclusão da reação, a solução de reação foi evaporada até secar e diluída com 60 mL de acetato de etila. A fase orgânica foi lavada com 40 mL de água e 40 mL de salmoura saturada, seca em sulfato de sódio anidro e evaporada até secar para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (SiCh, PE: EA ~ 5:1 para EA) para fornecer WX004-5.

Etapa 5: Síntese do Composto WX004-6 [094] Azida sódica (9,69 g, 149,05 mmol, 2,50 eq) e cloreto estanoso de tributila (48,52 g, 149,05 mmol, 40,10 mL, 2,50 eq) foram adicionados a uma solução de WX004-6a (4,00 g, 59,62 mmol, 4,40 mL, 1,00 eq) em o-xileno (50,00 mL). A reação foi realizada a 160 °C por 6 horas sob atmosfera de nitrogênio. (O mecanismo de reação foi resfriado com hipoclorito de sódio). Depois que a solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, a solução de reação foi ajustada ao pH 9 com hidróxido de sódio a 20 % e agitada na temperatura ambiente por 1 hora, seguido por separação. A fase aquosa foi ajustada ao pH = 2 com ácido clorídrico 2N, extraída com 100 mL*3 de acetato de etila, seca em sulfato de sódio anidro e evaporada até secar com a colocação dos defletores para fornecer WX004-6. RMN de ^ÃH (400 MHz, METANOL-c/₄) δ ppm 1,01 - 1,09 (m, 2 H) 1,19 -1,25 (m, 2 H) 2,17 - 2,25 (m, 1 H).

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50/105

Etapa 6: Síntese do Composto WX004-7 [095] WX004-6 (800,00 mg, 7,26 mmol, 1,00 eq), WX004-5 (1,54 g, 7,26 mmol, 1,00 eq) e C112O (51,98 mg, 363,00 pmol, 37,13 μΙ_, 0,05 eq) foram sequencialmente adicionados em sulfóxido de dimetila (24,00 mL). A solução foi reagida a 110 °C por 18 horas sob atmosfera de O2. Depois da conclusão da reação, a solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, diluída com 80 mL de diclorometano e lavada com 60 mL de ácido clorídrico 1M e 60 mL de salmoura saturada. Depois da separação, a fase orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro e evaporada até secar. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (S1O2, éter de petróleo: acetato de etila = 1:0 a 50:1 a 20:1) para fornecer WX004-7. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1,1 (m, 2 H) 1,2 (m, 2 H) 2,2 (m, 1 H) 2,42 (s, 3 H) 3,94 (m, 3 H) 7,19 (d, J = 10,67 Hz, 1 H) 8,19 (d, J = 6,65 Hz, 1 H).

Etapa 7: Síntese do Composto WX004-8 [096] WX004-7 (500,00 mg, 1,81 mmol, 1,00 eq) foi dissolvido em tetraidrofurano (5,00 mL) e água (5,00 mL), seguido por adição de LiOH (130,04 mg, 5,43 mmol, 3,00 eq). A solução de reação foi reagida a 25 °C por 2 horas e extraída com 10 mL de éter metil-terc-butílico. A fase aquosa isolada foi ajustada ao pH 2 com ácido clorídrico 2N e extraída com 20 mL*3 de acetato de etila. A fase orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, evaporada até secar para fornecer WX004-8. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1,18 (d, J = 6,78 Hz, 4 H) 2,26 - 2,36 (m, 1 H) 2,45 (s, 3 H) 7,23 (d, J = 10,79 Hz, 1 H) 8,27 (d, J

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51/105 = 6,65 Hz, 1 Η).

Etapa 8: Síntese do Composto WX004-9 [097] WX004-8 (150,00 mg, 572,00 pmol, 1,00 eq) foi adicionado em um frasco contendo diclorometano anidro (7,00 mL) e carregado com gás nitrogênio três vezes. Cloreto de oxalila (123,43 mg, 972,40 pmol, 85,12 pL, 1,70 eq) depois foi adicionado a esta para formar uma emulsão, seguido por adição de N,Ndimetilformamida (4,18 mg, 57,20 pmol, 4,40 pL, 0,10 eq). A reação foi realizada a 25 °C por 1 hora sob atmosfera de nitrogênio. 5 mL de diclorometano anidro foi adicionado à solução de reação e evaporado na temperatura ambiente sob pressão reduzida a 2 mL de diclorometano anidro remanescente. Tais procedimentos foram repetidos quatro vezes para fornecer WX004-9 dissolvido em 2 mL de diclorometano anidro, m/z = 277,1 (M + 1) (éster metílico MS).

Etapa 9: Síntese do Composto WX004 [098] WX004-9 (130,40 mg, 464,58 pmol, 1,00 eq) foi dissolvido em diclorometano anidro (3,00 mL) em um frasco, seguido por adição de WXBB-3 (100,00 mg, 464,58 pmol, 1,00 eq) e diisopropiletilamina (60,04 mg, 464,58 pmol, 81,14 pL, 1,00 eq). A reação foi realizada a 25 °C por 18 horas sob atmosfera de nitrogênio. A solução de reação foi lavada com 10 mL de salmoura saturada, seca em sulfato de sódio anidro e evaporada para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi purificado por HPLC prep. (coluna: WatersXbridge 150*25 mm 5 pm; fase móvel: [água (10 mM de NHziHCOsJ-ACN]; B %: 25 % a 60 %, 10,5 min) para fornecer WX004. m/z = 460,2 [M+l]. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO

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52/105

d) δ ppm 1,19 (d, J = 6,65 Hz, 4 H) 1,94 - 2,13 (m, 4 H) 2,32 (t, J = 6,53 Hz, 1 H) 2,49 (s, 3 H) 3,11 (t, J = 6,15 Hz, 2 H) 4,52 (t, J = 5,96 Hz, 2 H) 7,26 (br s, 1 H) 7,91 (t, J = 8,03 Hz, 1 H) 8,11 (d, J = 7,28 Hz, 1 H) 8,35 - 8,40 (m, 1 H) 8,45 (d, J = 7,28 Hz, 1 H) 9,01 (br d, J = 15,06 Hz, 1 H)

Exemplo 005: WX005

Via sintética:

WX005

Etapa 1: Síntese do Composto WX005-3 [099] WX005-3a (2,28 g, 33,91 mmol, 2,50 mL, 1,00 eq) foi adicionado em

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53/105 um frasco de três bocas de 100 mL pré-seco e carregado com gás nitrogênio três vezes, seguido por adição de 10 mL de ácido clorídrico (4,87 N em dioxano). Posteriormente, etanol anidro (1,56 g, 33,91 mmol, 1,98 mL, 1,00 eq) foi adicionado gota a gota ao sistema de reação sob atmosfera de nitrogênio. Depois da conclusão da adição, a mistura foi reagida a 25 °C por 3 horas. A solução de reação foi filtrada e evaporada até secar para fornecer WX005-3. RMN de ^XH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-c/) δ ppm 1,12 -1,23 (m, 4 H) 1,36 (t, J = 7,03 Hz, 3 H) 2,30 - 2,41 (m, 1 H) 4,54 (q, J = 7,03 Hz, 2 H) 11,15 (br s, 1 H) 12,24 (br s, 1 H).

Etapa 2: Síntese do Composto WX005-2 [0100] WX005-1 (1,72 g, 11,46 mmol, 1,00 eq) foi dissolvido em ácido clorídrico (63,00 mL) e arrefecido até 0 °C, seguido por adição gota a gota de uma solução de nitrito de sódio (948,49 mg, 13,75 mmol, 746,84 pL, 1,20 eq) em solução aquosa (6,00 mL). Depois da conclusão da adição gota a gota, a reação foi realizada a 0 a 5 °C por 0,5 hora. Uma solução de cloreto estanoso di-hidratado (7,76 g, 34,38 mmol, 2,86 mL, 3,00 eq) em ácido clorídrico (4 mL, 37 %) foi adicionada gota a gota à solução de reação e a reação foi realizada a 25 °C por 3 horas, formando uma quantidade grande de precipitados cinza. Depois da conclusão da reação, a solução de reação foi filtrada e metanol (20 mL) foi adicionado à torta do filtro. O filtrado foi ajustado ao pH 8 com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e extraído com acetato de etila (3x100 mL). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturada (2x100 mL), secas em sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para

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54/105 fornecer um sólido amarelo escuro. O sólido amarelo escuro foi isolado por cromatografia em coluna cintilante (silica gel: 100 a 200 mesh; DCM:MeOH = 20:1) para fornecer o produto WX005-2. m/z = 166,3 [M+l].

Etapa 3: Síntese do Composto WX005-5 [0101] WX005-2 (3,00 g, 14,88 mmol, 1,00 eq) e WX005-3 (2,23 g, 14,88 mmol, 1,00 eq) foram adicionados em um frasco de 40 mL pré-seco, seguido por adição de etanol anidro (45,00 mL) e trietilamina (3,01 g, 29,76 mmol, 4,12 mL, 2,00 eq). A reação foi realizada a 20 °C por 0,5 hora. O solvente foi removido por evaporação rotativa. Posteriormente, WX005-4 (15,79 g, 148,80 mmol, 16,28 mL, 10,00 eq) e ácido carbâmico (1,88 g, 29,76 mmol, 2,00 eq) foram adicionados ao produto bruto, respectivamente. A temperatura foi elevada até °C e a reação foi realizada por 15,5 horas. O sistema de reação foi resfriado até a temperatura ambiente, diluído com 50 mL de bicarbonato de sódio saturado e 50 mL de acetato de etila. A fase orgânica foi coletada depois da separação e a aquosa foi extraída com acetato de etila (20 mLx3). A fase orgânica foi combinada, lavada com salmoura saturada (50 mL), seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um sólido amarelo. O produto bruto foi recristalizado com acetato de etila/éter de petróleo = 1/5 (30 mL) para fornecer o produto WX005-5. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 8,01 (s, 1H), 7,54 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,23 - 7,13 (m, 1H), 2,31 - 2,21 (m, 3H), 2,05 (quin, J = 6,6 Hz, 1H), 0,97 (d, J = 6,7 Hz, 4H).

Etapa 4: Síntese do Composto WX005-6

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55/105 [0102] WX005-5 (500,00 mg, 2,06 mmol, 1,00 eq) foi adicionado em um frasco de 100 mL pré-seco e dissolvido em ácido clorídrico (10,20 g, 279,76 mmol, 10,00 mL, 135,81 eq). A reação foi agitada a 100 °C por 16 horas. O sistema de reação foi resfriado até a temperatura ambiente e uma quantidade grande de sólido foi precipitada depois do resfriamento, seguido por filtração através de um funil de cinco furos. A torta do filtro foi coletada para fornecer WX005-6. RMN de ^ÃH (400 MHz, METANOL-d4) δ = 9,67 (s, 1H), 8,06 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,26 - 2,11 (m, 1H), 1,27 - 1,18 (m, 2H), 1,15 - 1,05 (m, 2H).

Etapa 5: Síntese do Composto WX005-7 [0103] WX005-6 (300,00 mg, 1,15 mmol, 1,00 eq) foi adicionado em um frasco de 40 mL pré-seco. Diclorometano anidro (5,00 mL) foi adicionado a este e carregado com gás nitrogênio, seguido por adição lenta de cloreto de oxalila (291,51 mg, 2,30 mmol, 201,04 pL, 2,00 eq) e /V,/\/-dimetilformamida anidra (8,39 mg, 114,83 pmol, 8,83 pL, 0,10 eq) a 0 °C. Depois da conclusão da adição, a reação foi realizada a 20 °C por 1 hora. O sistema de reação foi concentrado sob pressão reduzida e repetidamente dissolvido com diclorometano anidro, seguido por evaporação até secar três vezes para fornecer WX005-7.

Etapa 6: Síntese do Composto WX005 [0104] O material bruto WX005-7 (300,00 mg, 1,07 mmol, 1,00 eq) foi adicionado em um frasco de 40 mL pré-seco, seguido por adição de diclorometano (3 mL), o sistema de reação foi carregado com gás nitrogênio e

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56/105 resfriado até 0 °C em um banho de água gelada. Posteriormente, o material bruto WXBB-3 (230,32 mg, 1,07 mmol, 1,00 eq) foi adicionado e uma solução de diisopropiletilamina (138,29 mg, 1,07 mmol, 186,88 μΙ_, 1,00 eq) em diclorometano (2 mL) foi lentamente adicionada a 0 °C. A temperatura foi naturalmente elevada até a temperatura ambiente e a reação foi agitada a 20 °C por 16 horas. O sistema de reação foi diluído com 10 mL de água/10 mL de diclorometano. A fase orgânica foi coletada depois da separação e a fase aquosa foi extraída com diclorometano (5 mLx 3). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturada (20 mL), secas em sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi isolado e purificado por HPLC prep. (neutro) para fornecer o produto puro WX005. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 9,02 (br d, J = 14,8 Hz, 1H), 8,36 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 8,16 8,08 (m, 2H), 7,90 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 4,51 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 3,10 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,22 - 2,11 (m, 1H), 2,11 - 2,03 (m, 2H), 2,02 - 1,92 (m, 2H), 1,10 -1,00 (m, 4H).

Exemplo 006: WX006

N.

Via sintética:

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57/105

Etapa 1: Síntese do Composto WX006-2 [0105] WX006-1 (100,00 g, 455,48 mmol, 1,00 eq) e EtOH (700,00 mL) foram adicionados em um frasco de três bocas de 250 mL pré-seco. H2SO4 (223,37 g, 2,28 mol, 121,40 mL, 5,00 eq) foi adicionado gota a gota à solução de reação e submetido ao refluxo a 80 °C por 5 horas. O sistema de reação foi resfriado até a temperatura ambiente, diluído com 200 mL de EA. A fase orgânica foi coletada depois da separação e a fase aquosa foi extraída com EA (2*100 mL). As fases orgânicas foram combinadas, sequencialmente lavadas com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (2*100 mL), água (2 * 100 mL) e salmoura saturada (2*100 mL), seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão

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58/105 reduzida para fornecer WX006-2 residual.

Etapa 2: Síntese do Composto WX006-3 [0106] WX006-2 (117,00 g, 472,52 mmol, 1,00 eq), Fe (65,98 g, 1,18 mol, 2,50 eq), NH₄CI (27,80 g, 519,77 mmol, 18,17 mL, 1,10 eq) e os solventes H₂O (345,00 mL) e EtOH (1,10 L) foram adicionados em um frasco de fundo redondo de 2 L pré-seco e a solução de reação foi submetida ao refluxo a 80 °C por 6 horas. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente e filtrada através do funil de Buchner com diatomito. A torta dofiltro foi lavada com diclorometano (300 mL) e o filtrado foi extraído com diclorometano (2x400 mL). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturada (2x300 mL), secas em sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para fornecer WX006-3 residual.

Etapa 3: Síntese do Composto WX006-4 [0107] WX006-3 (37,00 g, 170,02 mmol, 1,00 eq), WXBB-1-3 (47,56 g, 187,02 mmol, 1,10 eq) e DIEA (65,92 g, 510,06 mmol, 89,08 mL, 3,00 eq) foram adicionados em um frasco de fundo redondo de 500 mL pré-seco, seguido por adição de xileno (300,00 mL) e agitados continuamente a 140 °C por 10 horas. O sistema de reação foi arrefecido até a temperatura ambiente e diluído com 150 mL de água. A fase orgânica foi coletada depois da separação e a fase aquosa foi extraída com EA (2*150 mL). As fases orgânicas foram combinadas, sequencialmente lavadas com solução de cloreto de amônio saturada (2*150 mL), salmoura saturada (2*100 mL), secas em sulfato de sódio anidro e concentradas

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59/105 sob pressão reduzida para fornecer WX006-4.

Etapa 4: Síntese do Composto WX006-5 [0108] WX006-4 (47,80 g, 159,48 mmol, 1,00 eq) e AcOH (250,00 mL) foram adicionados em um frasco de 500 mL pré-seco, seguido por adição de tiocianato de potássio (31,00 g, 318,96 mmol, 31,00 mL, 2,00 eq) e agitados continuamente a 110 °C por 4 horas. Depois da conclusão da reação, a solução de reação foi evaporada até secar sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em DCM (150 mL), seguido por adição de água (150 mL). A fase aquosa foi extraída com DCM (2x100 mL). As fases orgânicas foram combinadas e secas em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração por sucção e evaporação até secar sob pressão reduzida. O resíduo foi recristalizado com EA (15 ml) para fornecer WX006-5.

Etapa 5: Síntese do Composto WX006-6 [0109] Ácido acético (53,19 mL), água (10,00 mL) e peróxido de hidrogênio (4,49 g, 39,61 mmol, 3,81 mL, 30 % de pureza, 3,00 eq) foram adicionados em um frasco de três bocas de 250 mL pré-seco e a temperatura de reação foi controlada a 45 °C com um termômetro interno, seguido por adição de WX0065 (4,5 g, 13,20 mmol, 1,00 eq) em porções. A temperatura foi controlada abaixo de 55 °C e a reação foi realizada nesta temperatura por 30 minutos. Depois da reação de 30 minutos, a solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, seguido por adição de 20 mL de solução de sulfito de sódio saturada. Nenhuma cor azul foi detectada pelo papel de amido com iodeto de potássio. Depois da evaporação rotativa sob pressão reduzida, o resíduo foi dissolvido em

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100 mL de água e ajustado ao pH 10 com hidróxido de amônia, seguido por extração com diclorometano (2x150 mL). As fases orgânicas foram combinadas e secas em sulfato de sódio anidro, seguido por evaporação rotativa sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de silica gel (EA: PE = 1:10 -1:2) para fornecer WX006-6.

Etapa 6: Síntese do Composto WX006-7 [0110] WX006-6 (3,85 g, 12,47 mmol, 1,00 eq), hidróxido de lítio (895,97 mg, 37,41 mmol, 3,00 eq) e tetraidrofurano (38,00 mL) e água (38,00 mL) foram adicionados em um frasco de fundo redondo de 250 mL pré-seco. A solução clara foi agitada a 25 °C por 2 horas e ajustada ao pH 4 a 5 com ácido clorídrico 2N, seguido por extração com clorofórmio: álcool isopropílico (3:1, 5x50 mL). As fases orgânicas foram combinadas e secas em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração por sucção e evaporação rotativa para fornecer WX006-7. m/z = 281,1 [M+l],

Etapa 7: Síntese do Composto WX006-8 [0111] WX006-7 (2,06 g, 7,34 mmol, 1,00 eq) foi adicionado em um frasco de fundo redondo de 100 mL pré-seco e carregado com gás nitrogênio três vezes, seguido por adição de diclorometano (54,00 mL). Posteriormente, cloreto de oxalila (1,86 g, 14,68 mmol, 1,29 mL, 2,00 eq) e Λ/,/V-dimetilformamida (53,65 mg, 734,00 μηηοΙ, 56,47 pL, 0,10 eq) foram lentamente adicionados gota a gota a esta sob atmosfera de nitrogênio. Depois da conclusão da adição gota a gota, a reação foi realizada a 25 °C por 1 hora, seguido por evaporação rotativa com bomba de

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61/105 água. Quando o volume da solução foi reduzido até cerca de um terço de seu volume original, 10 mL de diclorometano anidro foi adicionado. Tais procedimentos foram repetidos três vezes para fornecer uma solução de WX0068 em diclorometano para uso direto na reação seguinte, m/z = 295,1 [M+14].

Etapa 8: Síntese do Composto WX006-9 [0112] Um frasco de fundo redondo de 100 mL contendo WX006-8 (1,08 g, 3,61 mmol, 1,00 eq) foi carregado com gás nitrogênio três vezes, seguido por adição de diclorometano (30 mL) e diisopropiletilamina (699,93 mg, 5,42 mmol, 943,30 pL, 1,5 eq). WXBB-3 (816,03 mg, 3,79 mmol, 1,05 eq) foi adicionado a esta sob atmosfera de nitrogênio e a solução clara foi reagida a 25 °C por 0,5 hora. O produto foi redissolvido com diclorometano (20 mL) e extraído com água de pH = 2 (3x30 mL). Posteriormente, a fase aquosa foi ajustada ao pH = 10 e extraída com diclorometano (3x50 mL). As fases orgânicas foram combinadas e secas em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração por sucção e evaporação até secar para fornecer WX006-9. m/z = 478,2 [M+l].

Etapa 9: Síntese do Composto WX006 [0113] WX006-9 (0,3 g, 6T1,72 pmol, 1,00 eq), ácido 3-piridina borônico (154,32 mg, 1,26 mmol, 2,00 eq), acetato de paládio (14,09 mg, 62,77 pmol, 0,10 eq), n-butilbis(l-adamantil)fosfina (22,51 mg, 62,77 pmol, 0,10 eq) e carbonato de potássio (260,27 mg, 1,88 mmol, 3,00 eq) foram adicionados em um frasco de 10 mL pré-seco e carregado com gás nitrogênio três vezes, seguido por adição de água (0,5 mL) e dioxano (5 mL). O sistema de reação foi colocado em um banho

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62/105 de óleo a 90 °C sob atmosfera de nitrogênio e agitado por 2 horas. A solução de reação foi evaporada até secar e purificada por coluna de silica gel curta (100 a 200 mesh) para fornecer WX006. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 0,59 - 0,67 (m, 2 H) 0,73 - 0,83 (m, 2 H) 1,73 (ddd, J = 13,34, 8,38, 4,96 Hz, 1 H) 1,86 - 2,07 (m, 4 H) 3,03 (br t, J = 6,28 Hz, 2 H) 4,44 (br t, J = 5,95 Hz, 2 H) 6,53 (s, 1 H) 7,16 (s, 1 H) 7,21 - 7,26 (m, 1 H) 7,32 (d, J = 11,91 Hz, 1 H) 7,85 (t, J = 8,05 Hz, 1 H) 8,05 (d, J = 7,72 Hz, 1 H) 8,17 (d, J = 7,06 Hz, 1 H) 8,31 (d, J = 8,38 Hz, 1 H) 8,46 (d, J = 1,76 Hz, 1 H) 8,57 (dd, J = 4,52, 1,65 Hz, 1 H) 8,99 (br d, J = 13,89 Hz, 1 H).

Exemplo 007: WX007

Via sintética:

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63/105

WX007-1 WX007-2

WX007-3

WX007-4

WX007-6

WX007-7

WX007-8

WX007-9

Etapa 1: Síntese do Composto WX007-2 [0114] 2-Bromo-l-metóxietano (20 g, 84,75 mmol, 1 eq) e N,Ndimetilformamida (150 mL) foram adicionados em um frasco de fundo redondo de 250 mL pré-seco, seguido por adição de WX007-1 (14,13 g, 101,70 mmol, 9,55 mL, 1,2 eq) e carbonato de potássio (23,43 g, 169,49 mmol, 2 eq). O sistema foi reagido a 50 °C por 20 horas. A solução de reação foi evaporada até secar e redissolvida em acetato de etila (100 mL) e água (100 mL). A fase orgânica e a fase aquosa foram separadas e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila (3x50 mL). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturada (2x150 mL) e secas em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração por sucção

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64/105 para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi purificado por uma coluna de silica gel cintilante (EA:PE = 1:10 - 1:4) para fornecer WX007-2. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 3,41 (s, 3 H) 3,73 - 3,82 (m, 2 H) 4,14 - 4,28 (m, 1 H) 4,14 - 4,28 (m, 1 H) 6,93 (d, J = 9,92 Hz, 1 H) 8,10 (d, J = 7,28 Hz, 1 H).

Etapa 2: Síntese do Composto WX007-3 [0115] WX007-2 (22,3 g, 75,83 mmol, 1,00 eq), pó de Fe (12,71 g, 227,49 mmol, 3 eq), cloreto de amônio (4,46 g, 83,41 mmol, 2,92 mL, 1,10 eq), água (130 mL) e etanol (400 mL) foram adicionados em um frasco em forma de berinjela de 1000 mL pré-seco. A solução de reação foi submetida ao refluxo a 80 °C por 6 horas. A solução de reação foi passada através de diatomito, seguido por evaporação rotativa até secar e dissolução em diclorometano (100 mL) e água (80 mL). A fase aquosa foi extraída com diclorometano (2x50 mL). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturada (2x100 mL), secas, filtradas e concentradas para fornecer um produto bruto. WX007-3 foi fornecido por coluna de silica gel cintilante (acetato de etila: éter de petróleo = 1:8 - 1:1). RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 3,41 (s, 3 H) 3,71 - 3,77 (m, 4 H) 4,06 - 4,10 (m, 2 H) 6,62 (d, J = 9,92 Hz, 1 H) 6,80 (d, J = 6,84 Hz, 1 H).

Etapa 3: Síntese do Composto WX007-4 [0116] WX007-3 (12,64 g, 47,86 mmol, 1,00 eq), WXBB-10 (13,39 g, 52,65 mmol, 1,10 eq) e tolueno (120 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 500 mL pré-seco. A temperatura da reação foi elevada até 100 °C, seguido por adição de diisopropiletilamina (12,37 g, 95,72 mmol, 16,67 mL, 2,00 eq). A reação

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65/105 foi realizada a 100 °C por 10 horas, seguido por evaporação rotativa até secar e purificação por cromatografia em coluna (acetato de etila: éter de petróleo = 0 1: 10) para fornecer WX007-4. m/z = 346,1, 348,1 [M+l],

Etapa 4: Síntese do Composto WX007-5 [0117] WX007-4 (14,85 g, 42,90 mmol, 1,00 eq) e ácido acético glacial (200 mL) foram adicionados em um frasco de fundo redondo de 500 mL pré-seco, seguido por adição de tiocianato de potássio (8,34 g, 85,79 mmol, 8,34 mL, 2,00 eq). A temperatura da reação foi elevada até 110 °C e reagida por 3 horas. Depois da conclusão da reação, a solução de reação foi evaporada rotativamente até secar sob pressão reduzida e o resíduo foi redissolvido em diclorometano (60 mL), seguido por adição de água (60 mL). A fase aquosa foi extraída com diclorometano (2x40 mL). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturada (2x50 mL) e secas em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração por sucção, evaporação rotativa e purificação por cromatografia em coluna (acetato de etila: éter de petróleo = 1:10 - 1:1) para fornecer WX007-5. m/z = 387,1, 389,1 [M+l],

Etapa 5: Síntese do Composto WX007-6 [0118] Ácido acético glacial (100 mL), água (18 mL) e peróxido de hidrogênio (9,39 g, 82,80 mmol, 7,95 mL, 30 % de pureza, 3,00 eq) foram adicionados em um frasco de três bocas de 250 mL pré-seco e a temperatura de reação foi controlada a 45 °C com um termômetro interno, seguido por adição de WX007-5 (10,69 g, 27,60 mmol, 1,00 eq) em porções. A temperatura foi

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66/105 controlada abaixo de 55 °C e a reação foi realizada nesta temperatura por 30 minutos. A reação foi resfriada até a temperatura ambiente, seguido por adição de 20 mL de solução de sulfito de sódio saturada. Nenhuma cor azul foi detectada pelo papel de amido com iodeto de potássio. Depois da evaporação rotativa sob pressão reduzida, o resíduo foi dissolvido em 100 mL de água e ajustado ao pH 10 com hidróxido de amônia, seguido por extração com diclorometano (2x150 mL). As fases orgânicas foram combinadas e secas em sulfato de sódio anidro, seguido por evaporação rotativa sob pressão reduzida para fornecer WX007-6. m/z = 355,1, 357,1 [M+lj.

Etapa 6: Síntese do Composto WX007-7 [0119] WX007-6 (7,1 g, 19,99 mmol, 1,00 eq) e trietilamina (4,05 g, 39,98 mmol, 5,56 mL, 2,00 eq) foram adicionados em um de frasco de hidrogenação 250 mL seguido por adição de metanol (100 mL) e Pd(dppf)Cb (2,19 g, 3,00 mmol, 0,15 eq) e carregado com monóxido de carbono três vezes e pressurizado a 50 psi. O vaso de reação foi colocado em um banho de óleo a 70 °C (temperatura externa) e agitado por 10 horas. A solução de reação foi evaporada rotativamente e isolada por cromatografia em coluna (acetato de etila: éter de petróleo = 1:10 - 1:1) para fornecer WX007-7. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 0,70 - 0,78 (m, 2 H) 0,81 - 0,89 (m, 2 H) 1,81 - 1,91 (m, 1 H) 3,36 (s, 3 H) 3,66 - 3,73 (m, 2 H) 3,88 (s, 3 H) 4,14 - 4,21 (m, 2 H) 6,78 (d, J = 11,69 Hz, 1 H) 6,90 (s, 1 H) 7,66 (s, 1 H) 7,84 (d, J = 7,50 Hz, 1 H).

Etapa 7: Síntese do Composto WX007-8

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67/105 [0120] WX007-7 (0,6 g, 1,79 mmol, 1,00 eq), hidróxido de litio (128,94 mg, 5,38 mmol, 3,00 eq), tetraidrofurano (12 mL) e água (12 mL) foram adicionados em um frasco de 100 mL pré-seco. A solução límpida foi agitada a 25 °C por 1 hora. Depois da conclusão da reação, a solução de reação foi diretamente evaporada rotativamente com bomba de água, seguido por adição de tolueno (2 χ 10 mL) para remover a água residual deixada pela evaporação rotativa para fornecer WX007-8. m/z = 321,2 [M+l],

Etapa 8: Síntese do Composto WX007-9 [0121] WX007-8 (574,83 mg, 1,79 mmol, 1,00 eq) foi adicionado em um frasco de fundo redondo de 100 mL pré-seco e deslocado com nitrogênio três vezes, seguido por adição de diclorometano (20 mL). Posteriormente, cloreto de oxalila (455,57 mg, 3,59 mmol, 314,19 pL, 2,00 eq) e Λ/,/V-dimetilformamida (13,12 mg, 179,46 pmol, 13,81 pL, 0,10 eq) foram lentamente adicionados gota a gota a esta sob atmosfera de nitrogênio. Depois da conclusão da adição gota a gota, a reação foi realizada a 25 °C por 1 hora, seguido por evaporação rotativa com bomba de água. Quando o volume da solução foi reduzido até cerca de um terço de seu volume original, 20 mL de diclorometano anidro foi adicionado. Tais procedimentos foram repetidos três vezes para fornecer uma solução de WX0079 em diclorometano para uso direto na reação seguinte, m/z = 335,2 [M+14].

Etapa 9: Síntese do Composto WX007 [0122] Um frasco de fundo redondo de 100 mL contendo WX007-9 (721,80 mg, 2,13 mmol, 1,05 eq) foi carregado com gás nitrogênio três vezes, seguido por

Petição 870190067738, de 17/07/2019, pág. 180/336

68/105 adição de diclorometano (30 mL) e diisopropiletilamina (393,39 mg, 3,04 mmol, 530,17 pL, 1,5 eq). WXBB-3 (687,43 mg, 2,03 mmol, 1,00 eq) foi adicionado a este sob atmosfera de nitrogênio e a solução clara foi reagida a 25 °C por 10 horas, seguido por extração com água de pH = 2 (3x30 mL). Posteriormente, a fase aquosa foi ajustada ao pH = 10 e extraída com diclorometano (3x50 mL). As fases orgânicas foram combinadas e secas em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração por sucção e evaporação rotativa até secar para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi isolado por preparação rápida para fornecer WX007 (42,7 mg, 82,50 pmol, 4,07 % de rendimento). RMN de ^ÃH (400 MHz, METANOLd4) δ ppm 0,78 - 0,91 (m, 2 H) 1,02 -1,10 (m, 2 H) 1,98 - 2,13 (m, 5 H) 3,05 (t, J = 6,40 Hz, 2 H) 3,41 (s, 3 H) 3,77 (dd, J = 5,14, 3,39 Hz, 2 H) 4,34 - 4,42 (m, 2 H) 4,59 (t, J = 5,96 Hz, 2 H) 7,32 (d, J = 12,42 Hz, 1 H) 7,46 (s, 1 H) 7,91 (d, J = 7,15 Hz, 1 H) 7,99 - 8,06 (m, 2 H) 8,34 (d, J = 7,78 Hz, 1 H) 8,66 (s, 1 H).

Exemplo 008: WX008

N

N

HO'

N H

F

N 'n

Via sintética:

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69/105

OTs

WXBB-1-3

WX008-1 WX008-2

WX008-3

WX008-4

Etapa 1: Síntese do Composto WX008-2 [0123] WX008-1 (28 g, 118,65 mmol, 1 eq) foi dissolvido em DMF anidro (200 mL), seguido por adição de K2CO3 (32,80 g, 237,29 mmol, 2 eq) e BnBr (24,35 g, 142,38 mmol, 16,91 mL, 1,2 eq). A mistura foi agitada a 20 °C por 16 horas. A solução de reação foi vertida em água (600 mL) e extraída com EA (300 mL*2). A fase orgânica foi lavada com água (300 mL) e salmoura saturada (300 mL) e seca

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70/105 em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado até secar sob pressão reduzida. O empastamento do produto bruto foi realizado com PE/EA = 5/1 (120 mL) a 20 °C por 0,5 hora, seguido por filtração. A torta do filtro foi filtrada por sucção à secura sob pressão reduzida para fornecer WX008-2. RMN de ^XH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 8,20 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,50 - 7,38 (m, 5H), 6,94 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 5,25 (s, 2H).

Etapa 2: Síntese do Composto WX008-3 [0124] WX008-2 (26,5 g, 81,26 mmol, 1 eq) foi dissolvido em MeOH (500 mL), seguido por adição de NiCI-GHzO (69,53 g, 292,53 mmol, 3,6 eq) em porções e adição de NaBH4 (15,37 g, 406,26 mmol, 5 eq) em porções a 0 °C. A mistura foi agitada a 25 °C por 0,5 horas, seguido pela adição de solução de cloreto de amônio saturada (500 mL). A solução de reação foi evaporada rotativamente para remover o metanol, seguido por adição de EA (500 mL) e agitada por 10 minutos. O sólido insolúvel foi separado por filtração. O filtrado foi separado para coletar a fase orgânica e a fase aquosa foi extraída com EA (250 mL). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturada (250 mL) e secas em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer WX008-3. RMN de ^XH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 7,43 (br s, 5H), 6,87 (br d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,70 (br d, J = 9,5 Hz, 1H), 5,07 (br s, 2H), 3,75 (br s, 2H).

Etapa 3: Síntese do Composto WX008-4 [0125] WX008-3 (22 g, 63,81 mmol, 1 eq) (pureza: 85,59 %) foi adicionado

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71/105 a tolueno anidro (200 mL), seguido por adição de WXBB-1-3 (17,04 g, 67,00 mmol,

I, 05 eq) e DIEA (16,49 g, 127,62 mmol, 22,23 mL, 2 eq). A mistura foi agitada a 100 °C por 16 horas. A solução de reação foi evaporada rotativamente até secar, seguido por adição de água (200 mL) e extração com EA (200 mL*2). A fase orgânica foi lavada com salmoura saturada (100 mL) e seca em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida. PE/EA = 5/1 (60 mL) foi adicionado ao produto bruto e o empastamento foi realizado a 20 °C por 0,5 hora, seguido por filtração. A torta do filtro foi evaporada rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer WX008-4. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 7,38 - 7,23 (m, 5H), 6,58 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 6,48 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 5,02 (br d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,00 (s, 2H), 4,06 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 1,98 -1,88 (m, 1H), 1,08 (quin, J = 3,8 Hz, 2H), 0,96-0,87 (m, 2H)

Etapa 4: Síntese do Composto WX008-5 [0126] WX008-4 (15 g, 35,58 mmol, 1 eq) (pureza: 89,71 %) foi adicionado a AcOH (120 mL), seguido por adição de KSCN (6,91 g, 71,15 mmol, 6,91 mL, 2 eq). A mistura foi agitada a 110 °C por 4 horas sob atmosfera de nitrogênio. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, vertida em água (300 mL) e agitada por 15 minutos com a precipitação dos sólidos, seguido por filtração. A torta do filtro foi evaporada rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer WX008-5. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ =

II, 56 (br s, 1H), 7,60 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,30 - 7,21 (m, 5H), 6,79 (d, J = 9,8 Hz,

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72/105

1H), 6,31 (s, 1H), 5,02 (s, 2H), 1,67 - 1,58 (m, 1H), 0,84 - 0,77 (m, 2H), 0,61 - 0,53 (m, 2H).

Etapa 5: Síntese do Composto WX008-6 [0127] WX008-5 foi dissolvido em uma solução mista de AcOH (150 mL) e H2O (15 mL), seguido por adição gota a gota de H2O2 (12,97 g, 114,42 mmol, 10,99 mL, 30 % de pureza, 3,22 eq) e o sistema foi agitado a 45 °C por 0,5 hora. Depois de resfriar até a temperatura ambiente, a solução de reação foi lentamente adicionada a uma solução de sulfato de sódio (30 g) em água (30 mL), seguido por extração com EA (300 mL*2). A fase orgânica foi lavada com bicarbonato de sódio saturado (300 mL) e seca em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (EA/PE = 0 -10 % a 20 %) para fornecer WX008-6. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 7,64 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,42 - 7,34 (m, 3H), 7,33 - 7,29 (m, 2H), 6,94 6,88 (m, 2H), 5,11 (s, 2H), 1,95 - 1,86 (m, 1H), 0,92 - 0,86 (m, 2H), 0,83 - 0,77 (m, 2H).

Etapa 6: Síntese do Composto WX008-7 [0128] WX008-6 (6 g, 14,56 mmol, 1 eq) (pureza de 93,95 %) foi dissolvido em anidro MeOH (100 mL), seguido por adição de Pd(dppf)Cb (1,07 g, 1,46 mmol, 0,1 eq) e EtsN (2,95 g, 29,11 mmol, 4,05 mL, 2 eq). O sistema foi agitado a 80 °C por 4 horas sob atmosfera de CO (50 psi). A solução de reação foi filtrada e o filtrado foi evaporado rotativamente até secar. O produto bruto foi purificado por

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73/105 cromatografia em coluna (EA/PE = 0 -10 % a 20 % - 40 %) para fornecer WX0087. RMN de ^XH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 7,92 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,67 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,44 - 7,31 (m, 5H), 6,93 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 5,19 (s, 2H), 3,94 (s, 3H), 1,96 - 1,86 (m, 1H), 0,93 - 0,86 (m, 2H), 0,84 - 0,78 (m, 2H).

Etapa 7: Síntese do Composto WX008-8 [0129] WX008-7 (2,7 g, 7,37 mmol, 1 eq) foi dissolvido em THF anidro (20 mL), seguido por adição de uma solução de LiOH (530 mg, 22,13 mmol, 3 eq) em H2O (10 mL). A mistura foi agitada a 20 °C por 1 hora. A solução de reação foi diretamente seca para fornecer um produto bruto. O empastamento do produto bruto foi realizado com (DCM: MeOH = 10:1, 44 mL) a 20 °C por 0,5 hora, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer WX008-8. RMN de ^ÃH (400 MHz, DMSO-ck) δ ppm 0,59 0,65 (m, 2 H) 0,69 - 0,78 (m, 2 H) 1,73 - 1,83 (m, 1 H) 5,15 (s, 2 H) 6,99 (d, J = 11,80 Hz, 1 H) 7,08 (s, 1 H) 7,33 (br dd, J = 7,78, 4,77 Hz, 1 H) 7,36 (d, J = 1,51 Hz, 2 H) 7,37 (br s, 2 H) 7,57 (d, J = 7,78 Hz, 1 H) 7,64 (s, 1 H).

Etapa 8: Síntese do Composto WX008-9 [0130] O Composto WX008-8 (690 mg, 1,96 mmol, 1 eq) foi adicionado em um frasco de fundo redondo de 50 mL pré-seco e carregado com gás nitrogênio três vezes, seguido por adição de diclorometano (50,00 mL). Posteriormente, cloreto de oxalila (497,12 mg, 3,92 mmol, 342,84 pL, 2 eq) e N,Ndimetilformamida (14,31 mg, 195,82 pmol, 15,07 pL, 0,1 eq) foram lentamente

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74/105 adicionados gota a gota a este a 25 °C sob atmosfera de nitrogênio. Depois da conclusão da adição gota a gota, a reação foi realizada a 25 °C por 1 hora, seguido por evaporação rotativa com bomba de água. Quando o volume da solução foi reduzido até cerca de um terço de seu volume original, 50 mL de diclorometano anidro foi adicionado. Tais procedimentos foram repetidos três vezes para fornecer uma solução de WX008-9 (0,726 g) em diclorometano para uso direto na reação seguinte. MS: m/z = 367 [éster metílico M +1].

Etapa 9: Síntese do Composto WX008-10 [0131] Diclorometano (30 mL) foi adicionado em um frasco de fundo redondo contendo Composto WX008-9 (0,726 g, 1,96 mmol, 1 eq) e uma solução do Composto WXBB-3 (442,52 mg, 2,06 mmol, 1,05 eq) em solução de diclorometano (20 mL) foi rapidamente adicionada gota a gota no frasco de reação, seguido por adição de diisopropiletilamina (278,34 mg, 2,15 mmol, 375,13 pL, 1,1 eq) sob atmosfera de nitrogênio. A solução límpida foi reagida a 25 °C por 1 hora. A solução de reação foi concentrada e o produto depois foi redissolvido com diclorometano (100 mL), ajustado ao pH = 2 a 3 com solução de ácido clorídrico aquosa 1 Μ. A solução de reação foi completamente agitada e depois deixada repousar para separação. A fase aquosa foi coletada e ajustada ao pH = 8 a 9 com bicarbonato de sódio com precipitação de sólidos, seguido por filtração para fornecer os sólidos. Os sólidos foram dissolvidos com diclorometano e secos em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi concentrado para fornecer WX008-10 (0,8 g, 1,30 mmol, 66,17 % de

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75/105 rendimento, 89 % de pureza). RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 8,89 (br d, J = 14,8 Hz, 1H), 8,28 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,07 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,00 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,82 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 7,36 - 7,30 (m, 2H), 7,30 - 7,25 (m, 2H), 6,90 (s, 1H), 6,84 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 5,15 (s, 2H), 4,41 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,02 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,04 - 1,95 (m, 2H), 1,94 - 1,88 (m, 2H), 1,83 (br dd, J = 4,1, 9,2 Hz, 1H), 0,87 - 0,79 (m, 2H), 0,76 - 0,69 (m, 2H).

Etapa 10: Síntese do Composto WX008 [0132] O Composto WX008-9 (0,8 g, 1,46 mmol, 1 eq) foi dissolvido em metanol (50 mL), seguido por adição de paládio em carbono (0,8 g, 50 % de pureza). A mistura foi agitada a 25 °C por 2 horas sob atmosfera de hidrogênio (50 Psi). A solução de reação foi filtrada com diatomito. A torta do filtro foi sequencialmente lavada com metanol (500 mL), diclorometano (500 mL), tetraidrofurano (500 mL) e metanol (500 mL). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto. O empastamento do produto bruto foi realizado com metanol (10 mL), seguido por filtração. O filtrado foi concentrado para fornecer WX008 (0,15 g, 319,93 pmol, 21,98 % de rendimento, 98 % de pureza). RMN de ^ÃH (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10,66 (s, 1H), 8,16 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,98 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,85 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,69 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 4,47 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,91 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 1,92 (br d, J = 4,6 Hz, 2H), 1,88 - 1,79 (m, 3H), 0,82 0,75 (m, 2H), 0,71 - 0,64 (m, 2H).

Exemplo 009: WX009

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Via sintética:

WX009

Etapa 1: Síntese do Composto WX009 [0133] O Composto WX008 (200 mg, 435,28 pmol, 1 eq), carbonato de potássio (120,32 mg, 870,56 pmol, 2 eq), acetona (50 mL) e 2-bromoetanol (81,59 mg, 652,92 pmol, 46,36 pL, 1,5 eq) foram adicionados em um frasco de 40 mL pré-seco. A solução de reação foi agitada a 75 °C por 16 horas. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida com uma bomba de óleo para fornecer um sólido bruto. O sólido produto bruto foi dissolvido em N,Ndimetilformamida (8 mL) e depois isolado e purificado por preparação rápida (água (10 mM de NHziHCOsJ-CAN) para fornecer o Composto WX009. RMN de ^ÃH (400 MHz, METANOL-d4) δ = 8,32 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,02 - 7,88 (m, 4H), 7,23 (m, 2H), 4,57 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 4,30 - 4,22 (m, 2H), 3,90 (t, J = 4,4 Hz, 2H), 3,07 - 2,99 (m, 2H), 2,06 (br d, J = 4,2 Hz, 2H), 2,00 (br s, 2H), 1,89 (br s, 1H), 0,87 (br d, J = 6,0 Hz, 2H), 0,75 (br s, 2H).

Exemplo 010: WX010

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Etapa 1: Síntese do Composto WX010-2 [0134] O Composto WX010-1 (200 mg, 1,96 mmol, 194,17 pL, 1 eq) e diclorometano (5 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 40 mL préseco, seguido por adição sequencial de trietilamina (297,24 mg, 2,94 mmol, 408,85 pL, 1,5 eq), dimetilaminopiridina (23,92 mg, 195,83 pmol, 0,1 eq) e cloreto de p-toluenossulfonila (448,01 mg, 2,35 mmol, 1,2 eq). A solução de reação foi agitada a 25 °C por 3 horas. Uma solução aquosa saturada de cloreto de amônio (10 mL) foi adicionada à solução de reação e extraída com diclorometano (10 mLx3). As fases orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi purificado por placa de silica gel de cromatografia em camada fina (éter de petróleo: acetato de etila = 3:1) para fornecer WX010-2. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 7,82 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,37 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 4,44 - 4,30 (m, 4H), 4,12 (s, 2H), 2,47 (s, 3H), 1,32 (s, 3H).

Etapa 2: Síntese do Composto WX010 [0135] O Composto WX008 (100 mg, 217,64 pmol, 1 eq), carbonato de

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78/105 potássio (45,12 mg, 326,46 pmol, 1,5 eq), /V,/V-dimetilformamida (4 mL) e Composto WX010-2 (66,94 mg, 261,17 pmol, 1,2 eq) foram sequencialmente adicionados em um frasco de reação de 40 mL pré-seco. A solução de reação foi agitada a 80 °C por 16 horas. A solução de reação foi isolada e purificada por preparação rápida (água (10 mM de NHziHCChJ-ACN) para fornecer WX010. RMN de 1H (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 8,99 (d, J = 14,8 Hz, 1H), 8,37 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,91 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 6,98 - 6,89 (m, 2H), 4,54 - 4,49 (m, 2H), 4,48 (s, 4H), 4,23 (s, 2H), 3,11 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,09 - 2,08 (m, 2H), 2,06 - 2,00 (m, 2H), 1,99 -1,91 (m, 1H), 1,39 (s, 3H), 0,90 - 0,88 (m, 2H), 0,82 - 0,79 (m, 2H).

Exemplo 011: WX011

Etapa 1: Síntese do Composto WX011-2 [0136] O Composto WX011-1 (200 mg, 2,27 mmol, 1 eq) e diclorometano (5 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 40 mL pré-seco, seguido por trietilamina (344,56 mg, 3,41 mmol, 473,94 pL, 1,5 eq), dimetilaminopiridina

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79/105 (27,73 mg, 227,00 pmol, 0,1 eq) e cloreto de p-toluenossulfonila 1 (519,34 mg, 2,72 mmol, 1,2 eq). A solução de reação foi agitada a 25 °C por 16 horas. Uma solução aquosa saturada de cloreto de amônio (20 mL) foi adicionada à solução de reação e extraída com diclorometano (20 mLx3). As fases orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi purificado por placa de silica gel de cromatografia em camada fina (éter de petróleo: acetato de etila = 3:1) para fornecer WX011-2. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 7,78 (d, J = 8,0Hz, 2H), 7,34 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,70(dd, J = 7,6, 6,4 Hz, 2H), 4,30 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 4,23 (d, J = 76,8 Hz, 2H), 3,29 - 3,22 (m, 1H), 2,43 (s, 3H).

Etapa 2: Síntese do Composto WX011 [0137] O Composto WX008 (100 mg, 217,64 pmol, 1 eq) e N,Ndimetilformamida (4 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 40 mL pré-seco, seguido por adição sequencial de carbonato de potássio (45,12 mg, 326,46 pmol, 1,5 eq), iodeto de potássio (18,06 mg, 108,82 pmol, 0,5 eq) e Composto WX011-2 (63,28 mg, 261,17 pmol, 2,32 pL, 1,2 eq). A solução de reação foi agitada a 80 °C por 16 horas. A solução de reação foi filtrada, separada e purificada por preparação rápida. A solução de reação foi separada e purificada por preparação rápida para fornecer WX011. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10,83 (s, 1H), 8,17 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 8,00 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,87 (dd, J = 0,8, 7,6 Hz, 1H), 7,80 - 7,74 (m, 2H), 7,40 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 4,68 (dd, J = 6,2, 7,9 Hz, 2H), 4,47 (br t, J = 5,7 Hz, 2H), 4,43 - 4,37 (m, 4H), 3,44

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80/105

3,36 (m, 1H), 2,92 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 1,97 - 1,89 (m, 2H), 1,84 (br dd, J = 5,2, 8,5 Hz, 3H), 0,81 - 0,75 (m, 2H), 0,68 - 0,63 (m, 2H).

Exemplo 012: WX012

Via sintética:

Etapa 1: Síntese do Composto WX012

[0138] O Composto WX008 (150 mg, 221,99 pmol, 1 eq), carbonato de potássio (61,36 mg, 443,99 pmol, 2 eq), Λ/,/V-dimetilformamida (4 mL) e 1bromo-2-fluoro-etano (56,37 mg, 443,99 pmol, 30,91 pL, 2 eq) foram sequencialmente adicionados em um frasco de reação de 40 mL pré-seco. A solução de reação foi agitada a 100 °C por 5 horas. A solução de reação foi filtrada através de um filtro para fornecer uma solução límpida, que foi isolada e purificada por preparação rápida para fornecer WX012. RMN de ^XH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 8,98 (br d, J = 14,8 Hz, 1H), 8,39 - 8,33 (m, 1H), 8,16 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,08 (dd, J = 0,9, 7,7 Hz, 1H), 7,95 - 7,86 (m, 1H), 7,73 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 4,86 - 4,81 (m, 1H), 4,75 4,68 (m, 1H), 4,50 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 4,41 - 4,37 (m, 1H), 4,36 - 4,31 (m, 1H), 3,10 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,11 - 2,03 (m, 2H), 2,02 -1,95 (m, 2H), 1,95 -1,88 (m, 1H), 0,94

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- 0,87 (m, 2H), 0,87 - 0,81 (m, 2H).

Exemplo 013: WX013

Etapa 1: Síntese do Composto WX013 [0139] O Composto WX008 (100 mg, 148,00 μηηοΙ, 1 eq), carbonato de potássio (40,91 mg, 295,99 pmol, 2 eq), /V,/\/-dimetilformamida (1 mL) e 1-bromo3-fluoro-propano (41,73 mg, 295,99 pmol, 30,91 pL, 2 eq) foram sequencialmente adicionados em um frasco de reação de 40 mL pré-seco. A solução de reação foi agitada a 90 °C por 2 horas. A solução de reação foi filtrada através de um filtro para fornecer uma solução límpida. A solução clara foi isolada e purificada por preparação rápida para fornecer WX013. RMN de ¹H (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 8,99 (br d, J = 15,2 Hz, 1H), 8,37 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,15 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,08 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,90 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,67 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 6,96 - 6,86 (m, 2H), 4,64 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,56 - 4,47 (m, 3H), 4,25 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 3,10 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,24 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 2,18 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 2,11 - 2,03 (m, 2H), 2,02 - 1,95 (m, 2H), 1,94 -1,87 (m, 1H), 0,94 - 0,86 (m, 2H), 0,85 0,79 (m, 2H).

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Exemplo 014: WX014

WX014

Etapa 1: Síntese do Composto WX014-2 [0140] O Composto WX014-1 (24 g, 101,70 mmol, 1 eq) foi dissolvido em diclorometano anidro (200 mL), seguido por adição de dimetilaminopiridina (0,65 g, 5,32 mmol, 0,05 eq) e diisopropiletilamina (26,29 g, 203,39 mmol, 35,43 mL, 2 eq). O sistema foi arrefecido até 0 °C, seguido por adição lenta de anidrido trifluorometanossulfônico (43,04 g, 152,55 mmol, 25,17 mL, 1,5 eq) a 0 °C. O

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83/105 sistema depois foi aquecido até 20 °C e agitado por 2 horas. Água (200 mL) foi adicionada à solução de reação enquanto agitando. A fase orgânica foi evaporada rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (acetato de etila/éter de petróleo = 0 a 5 %) para fornecer o Composto WX014-2. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 7,29 (d, J = 7,53 Hz, 1 H) 8,51 (d, J = 6,52 Hz, 1 H).

Etapa 2: Síntese do Composto WX014-3 [0141] O Composto WX014-2 (24 g, 65,21 mmol, 1 eq) foi dissolvido em tolueno seco (200 mL) e carregado com gás nitrogênio três vezes, seguido por adição de dimetilamina (4,80 g, 58,86 mmol, 5,39 mL, 0,9 eq, HCI), terc-butóxido de sódio (9,36 g, 97,39 mmol, 1,49 eq) e Pd2(dba)s (4,80 g, 5,24 mmol, 0,08 eq). A mistura foi agitada a 105 °C por 12 horas sob atmosfera de nitrogênio. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, seguido por adição de água (400 mL) e extração com acetato de etila (200 mL*3). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturada (300 mL) e secas em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (acetato de etila/éter de petróleo = 0 a 5 %) para fornecer o Composto WX014-3. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIOd) δ ppm 2,91 (s, 6 H) 6,75 (d, J = 11,04 Hz, 1 H) 8,02 - 8,07 (m, 1 H).

Etapa 3: Síntese do Composto WX014-4

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84/105 [0142] O Composto WX014-3 (9 g, 28,59 mmol, 1 eq) (pureza: 83,568 %) foi dissolvido em ácido acético (80 mL), seguido por adição de pó de Fe (6,39 g, 114,36 mmol, 4 eq) em porções. A mistura foi agitada a 20 °C por 16 horas. A solução de reação foi adicionada gota a gota a NaOH saturado (100 mL) e extraída com acetato de etila (50 mL*3). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturada (300 mL) e secas em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por coluna (acetato de etila/éter de petróleo = 0 - 25 %) para fornecer o Composto WX014-4. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 2,65 (s, 6 H) 6,80 (d, J = 10,29 Hz, 1 H) 6,86 (d, J = 6,78 Hz, 1 H).

Etapa 4: Síntese do Composto WX014-5 [0143] O Composto WX014-4 (1,1 g, 3,42 mmol, 1 eq) (pureza de 72,474 %) foi dissolvido em tolueno anidro (10 mL), seguido por adição do Composto WXBB-1-3 (3 g, 11,80 mmol, 3,45 eq) e diisopropiletilamina (928,29 mg, 7,18 mmol, 1,25 mL, 2,1 eq). A mistura foi reagida a 140 °C por 0,5 hora sob condição de micro-ondas. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, seguido por adição de água (50 mL) e extração com acetato de etila (50 mL*3). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com cloreto de sódio (50 mL) e secas em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (acetato de etila/éter de petróleo = 0 a 10 %) para

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85/105 fornecer o Composto WX014-5. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 0,93 (dq, J = 7,47, 3,70 Hz, 2 H) 1,09 (quin, J = 3,83 Hz, 2 H) 1,90 - 1,99 (m, 1 H) 2,56 (s, 6 H) 4,07 (d, J = 3,51 Hz, 2 H) 6,49 (d, J = 6,53 Hz, 1 H) 6,73 (d, J = 10,04 Hz, 1 H).

Etapa 5: Síntese do Composto WX014-6 [0144] O Composto WX014-5 (750 mg, 2,38 mmol, 1 eq) foi dissolvido em ácido acético (8 mL) e carregado com gás nitrogênio três vezes, seguido por adição de tiocianato de potássio (463 mg, 4,76 mmol, 463,00 pL, 2 eq). A mistura foi agitada a 110 °C por 4 horas sob atmosfera de nitrogênio. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, concentrada sob pressão reduzida, ajustada ao pH = 8 com bicarbonato de sódio saturado (20 mL) e extraída com diclorometano (20 mL*3). A fase orgânica foi lavada com cloreto de sódio saturado (30 mL) e seca em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida. O Composto WX014-6 foi fornecido como o produto, que foi usado diretamente na reação seguinte sem purificação. RMN de ^ÃH (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,64 - 0,71 (m, 2 H) 0,78 - 0,89 (m, 2 H) 1,67 -1,76 (m, 1 H) 2,57 (s, 6 H) 6,75 (d, J = 1,51 Hz, 1 H) 7,00 (d, J = 11,80 Hz, 1 H) 7,40 (d, J = 7,53 Hz, 1 H) 12,28 (br s, 1 H).

Etapa 6: Síntese do Composto WX014-7 [0145] O Composto WX014-6 (500 mg, 1,40 mmol, 1 eq) foi dissolvido em ácido acético (5 mL), seguido por adição de água (1 mL) e peróxido de hidrogênio (477 mg, 4,21 mmol, 404,24 pL, 30 % de pureza, 3 eq). A mistura foi agitada a

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86/105 °C por 1 hora. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente e sulfito de sódio saturado foi adicionado a esta até que nenhuma cor azul fosse detectada pelo papel de amido com iodeto de potássio. Uma parte do solvente foi separada por evaporação e nenhum peróxido de hidrogênio residual foi detectado pelo papel de amido com iodeto de potássio. A solução de reação foi ajustada ao pH = 8 com bicarbonato de sódio saturado (20 mL) e extraída com diclorometano (20 mL*3). A fase orgânica foi lavada com cloreto de sódio saturado (50 mL) e seca em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida. O Composto WX014-7 foi fornecido como o produto, que foi usado diretamente na reação seguinte sem purificação. RMN de ^ÃH (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,62 - 0,71 (m, 2 H) 0,77 - 0,82 (m, 2 H) 2,32 - 2,34 (m, 1 H) 2,43 (s, 6 H) 7,08 (d, J = 11,29 Hz, 1 H) 7,14 (s, 1 H) 7,56 (d, J = 7,53 Hz, 1 H) 7,69 (s, 1 H).

Etapa 7: Síntese do Composto WX014-8 [0146] O Composto WX014-7 (400 mg, 1,09 mmol, 1 eq) (pureza de 88,522 %) foi dissolvido em metanol (4 mL), seguido por adição de Pd(dppf)Cb (120 mg, 164,00 pmol, 0,15 eq) e trietilamina (221 mg, 2,18 mmol, 303,99 pL, 2 eq) e introdução de monóxido de carbono (50 Psi). A mistura foi agitada a 70 °C por 16 horas. A solução de reação foi concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (acetato de etila/éter de petróleo = 0 a 30 %). O produto foi purificado ainda por TLC prep. (acetato de etila) para fornecer o Composto WX014-8. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 0,77 - 0,83

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87/105 (m, 2 Η) 0,85 - 0,92 (m, 2 Η) 1,86 - 1,95 (m, 1 Η) 2,61 (s, 6 Η) 3,89 (s, 3 Η) 6,63 (d, J = 13,30 Hz, 1 Η) 6,86 (d, J = 1,00 Hz, 1 Η) 7,54 (d, J = 1,00 Hz, 1 Η) 7,73 (d, J = 7,78 Hz, 1 Η).

Etapa 8: Síntese do Composto WX014-9 [0147] O Composto WX014-8 (200 mg, 566,13 pmol, 1 eq) (pureza de 85,863 %) foi dissolvido em uma mistura de tetraidrofurano (1 mL) e água (1 mL) (razão em volume: 1:1), seguido por adição de hidróxido de lítio (41 mg, 1,71 mmol, 3,02 eq). A mistura foi agitada a 20 °C por 1 hora. A solução de reação foi concentrada para fornecer o Composto WX014-9. RMN de ^ÃH (400 MHz, DMSOd6) δ ppm 0,65 - 0,71 (m, 2 H) 0,75 - 0,81 (m, 2 H) 1,79 - 1,88 (m, 1 H) 2,41 (s, 6 H) 6,67 (d, J = 12,30 Hz, 1 H) 7,06 (s, 1 H) 7,44 (d, J = 8,03 Hz, 1 H) 7,61 (s, 1 H).

Etapa 9: Síntese do Composto WX014 [0148] O Composto WX014-9 (160 mg, 553,05 pmol, 1 eq) foi dissolvido em diclorometano (2 mL), seguido por adição de Λ/,/V-dimetilformamida (4 mg, 54,72 pmol, 4,21 pL, 0,1 eq) e cloreto de oxalila (120 mg, 945,43 pmol, 82,76 pL, 1,71 eq). A mistura foi agitada a 20 °C por 2 horas. O solvente foi separado por evaporação sob pressão reduzida até que a mistura fosse viscosa, seguido por adição de 5 mL de diclorometano anidro. Tais procedimentos foram repetidos três vezes, seguido por adição do Composto WXBB-3 (119 mg, 552,84 pmol, 1 eq) e diisopropiletilamina (72 mg, 557,09 pmol, 97,04 pL, 1,01 eq). A mistura foi agitada a 20 °C por 1 hora, seguido por adição de água (50 mL) e extração com diclorometano (20 mL*3). A fase orgânica foi lavada com cloreto de sódio

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88/105 saturado (50 mL) e seca em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida. O produto bruto seco foi purificado por TLC prep. (diclorometano/metanol = 10/1) e isolado por preparação rápida para fornecer WX014. RMN de ^ÃH (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,69 (br s, 2 H) 0,79 (br d, J = 8,03 Hz, 2 H) 1,24 (br s, 1 H) 1,80 - 2,00 (m, 6 H) 2,53 (br s, 6 H) 4,43 - 4,51 (m, 2 H) 6,97 (br d, J = 13,05 Hz, 1 H) 7,15 (s, 1 H) 7,55 (br d, J = 7,28 Hz, 1 H) 7,71 (s, 1 H) 7,85 (d, J = 7,53 Hz, 1 H) 7,98 (t, J = 7,91 Hz, 1 H) 8,15 (d, J = 8,03 Hz, 1 H) 10,61 (s, 1 H).

Exemplo 015: WX015

Via sintética:

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89/105

WX015-1

WX015-2

WX015-4

WXBB-1-3

WXBB-3

WX015

Etapa 1: Síntese do Composto WX015-2 [0149] WX015-1 (24 g, 101,70 mmol, 1 eq) foi dissolvido em diclorometano anidro (200 mL), seguido por adição de DMAP (0,65 g, 5,32 mmol, 0,05 eq) e diisopropiletilamina (26,29 g, 203,39 mmol, 35,43 mL, 2 eq). O sistema foi arrefecido até 0 °C, seguido por adição lenta de Tf 2 O (43,04 g, 152,55 mmol, 25,17 mL, 1,5 eq) a 0 °C. Posteriormente, o sistema foi gradualmente aquecido até 20 °C e agitado por 2 horas. Água (200 mL) foi adicionada à solução de reação enquanto agitando e a fase orgânica foi evaporada rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi purificado

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90/105 por cromatografia em coluna com 0 a 5 % de acetato de etila/éter de petróleo para fornecer o produto WX015-2. RMN de ^XH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 7,20 (d, J = 7,28 Hz, 1 H) 8,41 (d, J = 6,53 Hz, 1 H).

Etapa 2: Síntese do Composto WX015-3 [0150] WX015-2 (13 g, 35,32 mmol, 1 eq) foi dissolvido em tolueno anidro (130 mL), terc-butóxido de sódio (5,20 g, 54,11 mmol, 1,53 eq) e Pd2(dba)s (2,60 g, 2,84 mmol, 0,08 eq). O sistema foi agitado a 105 °C por 20 horas sob atmosfera de nitrogênio. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, adicionada em água (200 mL) e extraída com acetato de etila (200 mL*2). A fase orgânica foi sequencialmente lavada com água (300 mL), salmoura saturada (300 mL) e seca em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com 0 a 20 % de acetato de etila/éter de petróleo para fornecer o produto WX015-3. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 3,04 - 3,09 (m, 4 H) 3,84 - 3,87 (m, 4 H) 6,86 (d, J = 10,04 Hz, 1 H) 8,12 (d, J = 7,03 Hz, 1 H).

Etapa 3: Síntese do Composto WX015-4 [0151] WX015-3 (8 g, 26,22 mmol, 1 eq) foi dissolvido em ácido acético glacial (80 mL), seguido por adição lenta de pó de Fe (5,86 g, 104,88 mmol, 4 eq) em porções enquanto agitando. O sistema foi agitado a 20 °C por 1 hora. A solução de reação foi evaporada rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer um material bruto e diluída com água (200 mL). A solução foi

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91/105 ajustada ao pH 8 a 9 com solução de bicarbonato de sódio saturada (200 mL) e extraída com diclorometano (100 mL*2). A fase orgânica foi lavada com água (200 mL) e seca em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar para fornecer o produto WX015-4.

Etapa 4: Síntese do Composto WX015-5 [0152] WXBB-1-3 (6,98 g, 27,47 mmol, 3 eq) foi dissolvido em tolueno anidro (30 mL), seguido por adição de WX015-4 (3 g, 9,16 mmol, 1 eq) (pureza: de 83,959 %) e diisopropiletilamina (2,49 g, 19,27 mmol, 3,36 mL, 2,1 eq). O sistema foi aquecido até 140 °C sob condição de micro-ondas e agitado por 1 hora. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, seguido por adição de água (50 mL) e extração com acetato de etila (50 mL*2). A fase orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (0 a 12 % de acetato de etila/éter de petróleo) para fornecer o produto WX015-5.

Etapa 5: Síntese do Composto WX015-6 [0153] WX015-5 (1,2 g, 2,71 mmol, 1 eq) (pureza de 80,641 %) foi dissolvido em ácido acético glacial (20 mL), seguido por adição de tiocianato de potássio (0,36 g, 3,70 mmol, 360,00 pL, 1,37 eq). O sistema foi agitado a 110 °C por 3 horas. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, diluída com água (100 mL) e extraída com diclorometano (50 mL*3). As fases orgânicas foram combinadas, seguido por adição de solução de bicarbonato de sódio saturada

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92/105 (200 mL) e agitadas por 5 minutos. O pH da fase orgânica foi 7 a 8 medido por papel de teste de pH. A fase orgânica foi isolada, lavada com água (200 mL) e seca em sulfato de magnésio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer o produto WX015-6.

Etapa 6: Síntese do Composto WX015-7 [0154] WX015-6 (1,2 g, 2,62 mmol, 1 eq) (pureza de 87,114) foi dissolvido em uma mistura de ácido acético glacial (12 mL) e água (2,5 mL), seguido por adição de peróxido de hidrogênio (0,9 g, 7,94 mmol, 762,71 pL, 30 % de pureza, 3,02 eq) enquanto agitando. O sistema foi agitado a 45 °C por 0,5 hora. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, diluída com água (100 mL) e extraída com diclorometano (50 mL*3). As fases orgânicas foram combinadas, seguido por adição de solução de sulfito de sódio saturada (50 mL) e agitado por 5 minutos. Nenhuma cor azul foi detectada pelo papel de amido com iodeto de potássio. Posteriormente, solução de Na₂CÜ3 saturada (200 mL) foi adicionada a esta e agitada por 5 minutos. O pH da fase orgânica foi 7 a 8 medido pelo papel de teste de pH. A fase orgânica foi isolada, lavada com água (200 mL) e seca em sulfato de magnésio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer o produto WX015-7.

Etapa 7: Síntese do Composto WX015-8 [0155] WX015-7 (1 g, 1,78 mmol, 1 eq) (pureza de 65,303 %) foi dissolvido em metanol (10 mL), seguido por adição de Pd(dppf)CI₂ (0,04 g, 54,67 pmol, 0,15

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93/105 eq) e trietilamina (400,00 mg, 3,95 mmol, 550,21 μΙ_, 2,22 eq). 0 sistema foi agitado a 70 °C por 16 horas sob atmosfera de CO (50 psi). A solução de reação foi evaporada rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer um material bruto, que é purificado por cromatografia em coluna com 0 a 40 % acetato de etila/éter de petróleo para fornecer o produto WX015-8.

Etapa 8: Síntese do Composto WX015-9 [0156] WX015-8 (0,6 g, 1,55 mmol, 1 eq) (pureza: 89,457 %) foi dissolvido em tetraidrofurano anidro (5 mL), seguido por adição de uma solução de hidróxido de lítio (0,112 g, 4,68 mmol, 3,01 eq) em água (5 mL). O sistema foi agitado a 20 °C por 1 hora. A solução de reação foi evaporada rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer um material bruto. Uma solução mista de diclorometano/metanol = 10/1 (15 mL) foi adicionada ao produto bruto e agitada por 15 min, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer o produto WX015-9. RMN de ^ÃH (400 MHz, DMSO-c/δ) δ ppm 0,66 (br d, J = 3,01 Hz, 2 H) 0,72 - 0,84 (m, 2 H) 1,77 -1,91 (m, 1 H) 2,58 (br s, 4 H) 3,55 (br s, 4 H) 6,74 (d, J = 11,80 Hz, 1 H) 7,16 (s, 1 H) 7,50 (d, J = 7,78 Hz, 1 H) 7,72 (s, 1 H).

Etapa 9: Síntese do Composto WX015 [0157] WX015-9 (0,1 g, 301,80 pmol, 1 eq) foi dissolvido em diclorometano anidro (2 mL), seguido por adição de Λ/,/V-dimetilformamida (5 mg, 68,41 pmol, 5,26 pL, 2,27e-l eq) e adição de cloreto de oxalila (0,08 g, 630,29 pmol, 55,17 pL, 2,09 eq) sob atmosfera de nitrogênio. O sistema foi agitado a 20 °C por 0,5 horas.

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94/105

A solução de reação foi evaporada rotatívamente até secar sob pressão reduzida até que fosse viscosa, seguido por adição de diclorometano anidro (2 mL). Tais procedimentos foram repetidos três vezes, seguido por adição sequencial de diclorometano anidro (2 mL), WXBB-3 (0,065 g, 301,97 pmol, 1,00 eq) e diisopropiletilamina (0,08 g, 618,99 pmol, 107,82 pL, 2,05 eq). O sistema foi agitado a 20 °C por 1 hora. A solução de reação foi diluída com água (20 mL) e extraída com diclorometano (20 mL*2). A fase orgânica foi lavada com água (30 mL) e seca em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi isolado e purificado por preparação rápida para fornecer WX015. RMN de ^XH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 0,80 (br d, J = 3,26 Hz, 2 H) 0,91 (br d, J = 8,03 Hz, 2 H) 1,87 - 1,94 (m, 1 H) 1,96 - 2,09 (m, 4 H) 2,79 (br d, J = 4,02 Hz, 4 H) 3,10 (br t, J = 6,27 Hz, 2 H) 3,73 (br s, 4 H) 4,50 (br t, J = 6,02 Hz, 2 H) 6,81 (d, J = 13,80 Hz, 1 H) 6,99 (s, 1 H) 7,71 (s, 1 H) 7,84 - 7,96 (m, 1 H) 8,05 (dd, J = 15,69, 7,91 Hz, 2 H) 8,36 (d, J = 8,28 Hz, 1 H) 9,00 (br d, J = 15,56 Hz, 1 H)

Exemplo 016: WX016

Via sintética:

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95/105

Etapa 1: Síntese do Composto WX016-2 [0158] WX016-1 (20 g, 201,75 mmol, 1 eq) foi dissolvido em CHCI₃ (200 mL) em um frasco de fundo redondo de 100 mL pré-seco. Depois que o sistema de reação foi arrefecido até 0 °C, PCIs (84,03 g, 403,51 mmol, 2 eq) foi adicionado a este em porções. O sistema foi reagido a 0 °C por 30 minutos. Posteriormente, ZnCb (1,37 g, 10,09 mmol, 472,48 pL, 0,05 eq) e Br₂ (64,48 g, 403,51 mmol, 20,80 mL, 2 eq) foram adicionados ao sistema. A temperatura da reação depois foi elevada até 0 a 25 °C e a reação foi realizada por 5 horas. Solução de sulfito de sódio saturada foi lentamente adicionada à solução de reação enquanto agitando até o pH = 8 a 9. A fase orgânica foi coletada depois da separação e a fase aquosa foi extraída com diclorometano (3*100 mL). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturada (1*200 mL) e secas em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi concentrado sob pressão

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96/105 reduzida para fornecer WX016-2.

Etapa 2: Síntese do Composto WX016-3 [0159] O material bruto WX016-2 (10 g, 38,92 mmol, 1 eq) foi adicionado em um frasco de fundo redondo de 250 mL pré-seco, seguido por adição de uma mistura de H2O (5 mL) e MeOH (45 mL). PPhs (10,21 g, 38,92 mmol, 1 eq) foi lentamente adicionado ao sistema a 40 °C e agitado por 3 horas. O solvente do sistema de reação foi concentrado até cerca de metade de seu volume original a vácuo e água foi adicionada lentamente até que nenhum sólido fosse precipitado. Os sólidos foram separados por filtração e o filtrado foi extraído com diclorometano (3*30 mL). A fase orgânica foi lavada com salmoura saturada (2*40 mL), seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer WX016-3. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-c/) δ ppm 1,73 - 1,87 (m, 2 H) 2,13 - 2,23 (m, 2 H) 2,23 - 2,31 (m, 3 H) 3,37 - 3,49 (m, 2 H) 4,51 (t, J = 4,39 Hz, 1 H), m/z = 178,09 [M+l],

Etapa 3: Síntese do Composto WX016-4 [0160] WX016-3 (7,2 g, 28,31 mmol, 1 eq) foi adicionado em um frasco de fundo redondo seco, seguido por adição de ACN (20 mL), KOAc (11,11 g, 113,24 mmol, 4 eq) e 18-crown-6 (2,24 g, 8,49 mmol, 0,3 eq) enquanto agitando e aquecido até refluxo a 85 °C por 1 hora. O sistema de reação foi arrefecido até a temperatura ambiente, ajustado ao pH = 3 a 4 com ácido clorídrico 1M e extraído com diclorometano (3x20 mL). As fases orgânicas foram combinadas, ajustadas com bicarbonato de sódio saturado ao pH = 8 a 9 e extraídas com diclorometano

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97/105 (3x30 mL). As fases orgânicas foram lavadas com salmoura saturada (2x40 mL), secas em sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (DCM: MeOH = 100:0 a 40:1 a 20:1) para fornecer WX016. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1,79 -1,96 (m, 4 H) 2,01 - 2,08 (m, 1 H) 2,22 - 2,32 (m, 2 H) 3,25 - 3,37 (m, 3 H) 5,17 - 5,25 (m, 1H), m/z = 158,1 [M+l].

Etapa 4: Síntese do Composto WX016-6 [0161] O Composto WX016-4 (20,00 g, 127,25 mmol, 1 eq) e o Composto WX016-5 (14,52 g, 38,18 mmol, 0,3 eq) foram adicionados em um frasco de fundo redondo seco, seguido por adição de acetonitrila (250 mL). O sistema de reação foi aquecido até 60 °C e agitado por 4 horas. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, seguido por evaporação rotativa até secar. Água (250 mL) e diclorometano (250 mL) foram adicionados no frasco de reação. Depois que a fase orgânica e a fase aquosa foram separadas, a fase aquosa foi extraída com diclorometano (200 mL*2). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturada (200 mL), secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e evaporadas rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer WX016-6. RMN de ^ÃH (RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1,86 - 1,93 (m, 2 H) 1,96 - 2,07 (m, 2 H) 2,11 (s, 3 H) 3,28 - 3,35 (m, 2 H) 5,41 5,47 (m, 1 H)

Etapa 5: Síntese do Composto WX016-7 [0162] O Composto WX016-6 (12,00 g, 67,29 mmol, 1 eq) foi adicionado em

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98/105 um frasco de fundo redondo seco, seguido por adição sequencial do Composto WXBB-4 (10,54 g, 69,27 mmol, 1 eq) e cicloexanol (200 mL). O ar no sistema foi carregado com um balão de nitrogênio e os procedimentos foram repetidos duas vezes. O sistema de reação foi aquecido até 135 °C e agitado por 12 horas. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, seguido por adição de água (250 mL) e ajustada ao pH = 4 a 5 com ácido clorídrico 1M. A fase aquosa foi lavada com acetato de etila (200 mL*3) e a fase aquosa obtida foi ajustada ao pH = 9 com hidróxido de sódio 1 M, seguido por extração com diclorometano (250 mL*3). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturada (250 mL) e secas em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida (bomba de água, 50 °C) para fornecer um produto bruto. O produto bruto foi isolado e purificado por HPLC prep. (água (0,04 % de ΝΗ3Ή2Ο + 10 mM de NHziHCChJ-CAN) para fornecer o Composto WX016-7. RMN de ^ÃH (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1,99 - 2,09 (m, 2 H) 2,11 (s, 3 H) 2,14 - 2,26 (m, 2 H) 4,21 - 4,37 (m, 1 H) 4,56 (br s, 2 H) 4,75 (dt, J = 13,93, 4,83 Hz, 1 H) 6,24 (t, J = 4,02 Hz, 1 H) 6,51 - 6,58 (m, 1 H) 7,51 - 7,57 (m, 1 H) 7,60 - 7,65 (m, 1 H). MS m/z: 274 [M+H]+.

Etapa 6: Síntese do Composto WX016-8 [0163] O Composto WXBB-1 (3,50 g, 13,39 mmol, 1 eq) foi adicionado em um frasco de fundo redondo seco, seguido por adição de diclorometano (35 mL). O ar no sistema foi carregado com um balão de nitrogênio duas vezes. N,Ndimetilformamida (0,1 mL, 1,3 mmol, 0,1 eq) e cloreto de oxalila (2 mL, 22,85

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99/105 mmol, 1,7 eq) foram adicionados a este sob atmosfera de nitrogênio. O sistema de reação foi agitado na temperatura ambiente (20 °C) por 3 horas até que a solução de reação fosse límpida. A solução de reação foi concentrada até 15 mL, seguido por adição de diclorometano anidro (20 mL) e depois concentrada até 15 mL. Tais procedimentos foram repetidos três vezes. Posteriormente, diclorometano anidro (20 mL) foi adicionado e o ar no sistema foi carregado com um balão de nitrogênio duas vezes. O Composto WX016-7 (3,50 g, 12,03 mmol, 0,9 eq) e Λ/,/V-dimetilformamida (2,4 mL, 13,78 mmol, 1 eq) foram adicionados a este sob atmosfera de nitrogênio. O sistema de reação foi agitado na temperatura ambiente (20 °C) por 1 hora, seguido por adição de água (50 mL) e depois ajustado ao pH = 9 com carbonato de potássio sólido e extraído com diclorometano (50 mL*3). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturada (50 mL) e secas em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer WX016-8. RMN de ^ÃH (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,68 - 0,73 (m, 2 H) 0,78 - 0,83 (m, 2 H) 1,81 -1,89 (m, 1 H) 1,99 - 2,08 (m, 4 H) 2,09 (s, 3 H) 2,25 (s, 3 H) 4,28 - 4,36 (m, 1 H) 4,71 - 4,81 (m, 1 H) 6,19 (s, 1 H) 7,19 (d, J = 1,25 Hz, 1 H) 7,49 (d, J = 11,04 Hz, 1 H) 7,64 (d, J = 6,53 Hz, 1 H) 7,70 (d, J = 1,25 Hz, 1 H) 7,93 (d, J = 7,03 Hz, 1 H) 8,04 (t, J = 7,91 Hz, 1 H) 8,22 (d, J = 8,03 Hz, 1 H) 11,03 (s, lH)o MS m/z: 516,4 [M+H]+.

Etapa 7: Síntese do Composto WX016 [0164] O Composto WX016-8 (3,00 g, 4,23 mmol, 1 eq) (pureza de 72,65 %)

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100/105 foi adicionado em um frasco de fundo redondo seco e uma mistura de tetraidrofurano (15 mL) e água (5 mL) foi adicionada ao frasco de reação, seguido por adição de hidróxido de lítio monoidratado (532 mg, 12,68 mmol, 3 eq). O sistema de reação foi agitado a temperatura ambiente (24 °C) por 2 horas. Água (50 mL) foi adicionada à solução de reação, seguido por extração com diclorometano (50 mL*3). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturada (50 mL) e secas em sulfato de sódio anidro, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado rotativamente até secar sob pressão reduzida para fornecer WX016. RMN de ^ÃH (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,68 - 0,73 (m, 2 H) 0,78 - 0,83 (m, 2 H) 1,81 - 1,89 (m, 1 H) 1,99 - 2,08 (m, 4 H) 2,09 (s, 3 H) 2,25 (s, 3 H) 4,28 - 4,36 (m, 1 H) 4,71 - 4,81 (m, 1 H) 6,19 (s, 1 H) 7,19 (d, J = 1,25 Hz, 1 H) 7,49 (d, J = 11,04 Hz, 1 H) 7,64 (d, J = 6,53 Hz, 1 H) 7,70 (d, J = 1,25 Hz, 1 H) 7,93 (d, J = 7,03 Hz, 1 H) 8,04 (t, J = 7,91 Hz, 1 H) 8,22 (d, J = 8,03 Hz, 1 H) 11,03 (s, 1 H). MS m/z: 474,2 [M+H]+.

Exemplo 017: WX017-WX018

Etapa 1: Síntese do Composto WX017, WX018 [0165] O Composto WX016 foi separado por SFC (coluna: YMC CHIRAL Amylose-C (250 mm*30 mm, 10 pm): fase móvel: [0,1 % de NH3.H2O EtOH]: B: 55 % a 55 %, min) para fornecer WX017 e WX018 com um tempo de retenção em 0,921 min e 1,459 min, respectivamente.

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101/105 [0166] O tempo de retenção de WX017 é 0,921 min. RMN de ^XH (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,67 - 0,73 (m, 2 H) 0,77 - 0,84 (m, 2 H) 1,82 -1,97 (m, 4 H) 2,14 (br dd, J = 9,16, 5,65 Hz, 1 H) 2,25 (s, 3 H) 4,20 - 4,30 (m, 1 H) 4,68 (br d, J = 13,80 Hz, 1 H) 4,90 (br d, J = 4,77 Hz, 1 H) 5,81 (d, J = 5,27 Hz, 1 H) 7,19 (d, J = 1,25 Hz, 1 H) 7,49 (d, J = 10,79 Hz, 1 H) 7,63 (d, J = 6,53 Hz, 1 H) 7,70 (d, J = 1,25 Hz, 1 H) 7,91 (d, J = 7,53 Hz, 1 H) 8,02 (t, J = 7,91 Hz, 1 H) 8,20 (d, J = 8,28 Hz, 1 H) 10,99 (s, 1 H). MS m/z: 474,5 [M+H]+.

[0167] 0 tempo de retenção de WX018 é 1,459 min. RMN de ^XH (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,68 - 0,73 (m, 2 H) 0,77 - 0,84 (m, 2 H) 1,81 -1,98 (m, 4 H) 2,14 (br dd, J = 8,91, 5,40 Hz, 1 H) 2,25 (s, 3 H) 4,21 - 4,29 (m, 1 H) 4,68 (br d, J = 14,31 Hz, 1 H) 4,87 - 4,93 (m, 1 H) 5,82 (d, J = 5,02 Hz, 1 H) 7,19 (d, J = 1,00 Hz, 1 H) 7,49 (d, J = 10,79 Hz, 1 H) 7,63 (d, J = 6,53 Hz, 1 H) 7,70 (d, J = 1,00 Hz, 1 H) 7,91 (d, J = 7,28 Hz, 1 H) 8,02 (t, J = 7,91 Hz, 1 H) 8,20 (d, J = 8,03 Hz, 1 H) 11,00 (s, 1 H). MS m/z: 474,2 [M+H]+.

Teste de atividade biológica:

Exemplo Experimental 1: Atividade enzimática

Reagentes:

[0168] Solução tampão de reação primária: 20 mM de Hepes (pH 7,5), 10 mM de MgCb, 1 mM de EGTA, 0,02 % de Brij35, 0,02 mg/ml de BSA, 0,1 mM de Na₃VO₄, 2 mM de DTT, 1 % de DMSO

Tratamento do composto:

[0169] Os compostos testados foram formulados em uma solução estoque

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102/105 de 10 mM em DMSO, diluídos em gradiente de 3 vezes para um total de 10 concentrações e colocados em uma placa de 384 poços (Cíclico Olefin Copolymer LDV Echo®).

[0170] Nome da Cinase: ASK1/MAP3K5 (Invitrogen, Carlsbad, CA).

[0171] Tipo: Proteína de tamanho natural humana recombinante, rotulada com GST.

[0172] Concentração da reação final da enzima: 20 nM.

[0173] Substrato: Proteína básica mielina, MBP (Active Motif, Carlsbad, CA).

[0174] Concentração da reação final do substrato: 20 μΜ.

Procedimentos experimentais:

1. O substrato foi dissolvido em uma solução tampão de reação primária recentemente preparada,

2. O fator de coenzima desejado foi adicionado à solução de substrato acima,

3. A cinase foi adicionada à solução de substrato e misturada suavemente,

4. O composto testado em solução em DMSO foi adicionado à solução de reação de cinase e incubado a temperatura ambiente por 20 minutos.

5. A reação foi iniciada adicionando-se ³³P-ATP (atividade específico 10 pCi/pL) à solução de reação.

6. Incubada na temperatura ambiente por 2 horas.

7. Uma porção pequena dos reagentes foi colocada sobre o papel de filtro de troca de íon P-81.

8. O papel de filtro foi lavado três vezes com tampão de fosfato a 0,75 %

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103/105 para remover por lavagem o fosfato não ligado e depois seco.

9. A radioatividade remanescente no papel de filtro foi determinada,

10. Os dados para a atividade de cinase foram expressados como a razão da atividade de cinase remanescente na amostra de teste para a atividade de cinase no veículo (DMSO).

11. Valores de IC50 e ajuste de curva foram coletados por Prisma (software GraphPad). Os resultados experimentais foram mostrados na Tabela 1 e Tabela 2:

Tabela 1: Resultados do teste de triagem in vitro dos compostos da invenção

N2	Composto	IC5o(nM)
1	Exemplo 001: WX001	1,82
2	Exemplo 002: WX002	5,6
3	Exemplo 003: WX003	943
4	Exemplo 004: WX004	>1000
5	Exemplo 005: WX005	35,3
6	Exemplo 006: WX006	19,20
7	Exemplo 007: WX007	16,60
8	Exemplo 008: WX008	5,44
9	Exemplo 010: WX010	7,20
10	Exemplo Oil: WX011	7,61
11	Exemplo 012: WX012	7,04
12	Exemplo 013: WX013	7,93

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104/105

13	Exemplo 014: WX014	10,70
14	Exemplo 015: WX015	10,10
15	Exemplo 016: WX016	4,12
16	Exemplo 017: WX017	12,50
17	Exemplo 017: WX018	6,57

Tabela 2: Resultados do teste de triagem in vitro dos compostos da invenção

N2	Composto	Valor de IC50
1	Exemplo 001	A
2	Exemplo 002	A
3	Exemplo 003	B
4	Exemplo 004	B
5	Exemplo 005	A

Nota: A < 100 nM; B > 100 nM.

[0175] Conclusão: Os compostos da presente invenção têm um efeito inibitório significativo contra ASK1.

Exemplo Experimental 2: Estudo das características farmacocinéticas

Métodos experimentais:

[0176] Camundongos machos C57BL/6 foram usados neste estudo. A concentração de fármaco no plasma de camundongos submetidos à administração intravenosa ou oral do composto de teste em diferentes pontos no tempo foi quantitativamente determinada pelo método de LC/MS/MS, respectivamente, de modo a avaliar as características farmacocinéticas dos

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105/105 fármacos testados nos camundongos.

[0177] Uma solução límpida do composto de teste foi injetada em camundongos C57BL/6 por intermédio da veia caudal (jejum noturno, 7 a 10 semanas de idade) e o composto de teste foi intragastricamente administrado aos camundongos C57BL/6 (jejum noturno, 7 a 10 semanas de idade). 30 μΙ_ do sangue foi coletado da veia jugular ou da veia caudal dos animais 0,0833, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 e 24 horas depois da administração e colocado no tubo com anticoagulante contendo EDTA-K2, seguido por centrifugação a 4 °C por 15 minutos para coletar o plasma. A concentração plasmática foi determinada por LC-MS/MS. Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados pelo método trapezoidal logarítmico linear de modelo não compartimental usando o software farmacocinético WinNonlin™ Versão 6.3 (Pharsight, Mountain View, CA). Os resultados experimentais foram mostrados na Tabela 3:

Tabela 3. Resultados do teste farmacocinético

Composto	Exposição (nM-h)	Biodisponibilidade
WX002	408566	156 %
WX017	59396	165 %
WX018	53367	102 %

[0178] Conclusão Experimental: Os compostos da invenção têm exposição e biodisponibilidade altas em camundongos.

Claims (14)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Um composto como mostrado na fórmula (II), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um tautômero do mesmo,

   

   pelo menos um de Xi, X2 e X3 é N, o restante do qual é CH;

   n é selecionado a partir de 0 ou 1;

   Rié selecionado a partir de H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, ou selecionado a partir do grupo consistindo em alquila C1-4, heteroalquila C1-4, heterocicloalquila de 3 a 6 membros e heteroarila de 5 a 6 membros, cada um dos quais é opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 R;

   R2 é selecionado a partir de H, F, Cl, Br, I;

   Rsé selecionado a partir de H, F, Cl, Br, I, OH, NH2;

   R é selecionado a partir de F, Cl, Br, I, OH, NH2, ou selecionado a partir do grupo consistindo em alquila C1-3, alcóxi C1-3 e heterocicloalquila de 3 a 6 membros, cada um dos quais é opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 R';

   R' é selecionado a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, NH2 e alquila C1-3;

   cada hétero na heteroalquila C1-4, heteroarila de 5 a 6 membros e heterocicloalquila de 3 a 6 membros é independentemente selecionado a partir do grupo consistindo em -NH-, N, -O- e -S-;

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2. 2/5 em qualquer um dos casos acima, o número do heteroátomo ou do grupo heteroatômico é independentemente selecionado a partir de 1, 2 ou 3.

   2. O composto, o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e o tautômero do mesmo de acordo com a reivindicação 1, em que, R é selecionado a partir de F, Cl, Br, I, OH, NH2, ou selecionado a partir do grupo consistindo em Me, e cFZ , cada um dos quais é opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 R'.
3. 3. O composto, o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e o tautômero do mesmo de acordo com a reivindicação 2, em que, R é selecionado a partir de

   F, Cl, Br, I, OH, NH₂, Me, /°\ e .
4. 4. O composto, ο sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e o tautômero do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que, Rié selecionado a partir de H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, ou selecionado a partir do grupo consistindo em alquila C1-3, alcóxi C1-3, alquilamino C1-3, morfolinila e piridila, cada um dos quais é opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 R.
5. 5. O composto, o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e o tautômero do mesmo de acordo com a reivindicação 4, em que, Rié selecionado a partir de H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, ou selecionado a partir do grupo consistindo em Me, \ Γ^ν . - ,- Ν'' O J < J o' , cr , O' _t h _t θ , cada um dos quais e opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 R.
6. 6. O composto, o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e o tautômero do mesmo de acordo com a reivindicação 5, em que, Rié selecionado a partir de

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   3/5

   
7. 7. 0 composto, ο sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e o tautômero do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que, a

   

   é selecionada a partir do grupo consistindo em

   

   porção

   

   
8. 8. O composto, o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e o tautômero

   

   

   do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que, a é selecionada a partir do grupo consistindo em
9. 9. O composto, o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e o tautômero do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, é selecionado a partir do grupo consistindo em

   

   em que,

   Xi,X₂, X3, R2 e R3 são como definidos na reivindicação 1;

   Ri é como definido em qualquer uma das reivindicações 1 e 4 a 6.
10. 10. O composto, o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e o tautômero do mesmo de acordo com a reivindicação 9, que é selecionado a

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    4/5 partir do grupo consistindo em

    

    em que,

    R2 e R3 são como definidos na reivindicação 1;

    Ri é como definido em qualquer uma das reivindicações 1 e 4 a 6.
11. 11. O composto, o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e o tautômero do mesmo que é selecionado a partir do grupo consistindo em

    

    

    

    

    

    

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    5/5

    
12. 12. Uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto ou do sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, como o princípio ativo e um carreador farmaceuticamente aceitável.
13. 13. Um uso do composto ou do sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11 na fabricação de um medicamento para tratar doenças relacionadas à ASK1.
14. 14. Um uso da composição de acordo com a reivindicação 12 na fabricação de um medicamento para tratar doenças relacionadas à ASK1.