BR112019008687B1 - Composição compreendendo um extrato de tomate solúvel em água (wste) - Google Patents
Composição compreendendo um extrato de tomate solúvel em água (wste) Download PDFInfo
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Abstract
A presente invenção refere-se a composições compreendendo um extrato de tomate solúvel em água (WSTE) que pode ser usado na manutenção da saúde cardiovascular, diminuindo o risco de desenvolver problemas de saúde cardiovascular, ou reduzindo a probabilidade de agravar um problema de saúde cardiovascular existente em um indivíduo exposto, ou em risco de exposição, à poluição do ar com particulado.
Description
[001] Esta invenção refere-se ao uso de um extrato de tomate solúvel em água (“WSTE”) para proteger contra os efeitos adversos da poluição do ar no sistema cardiovascular do corpo.
[002] A poluição do ar vem em muitas formas. Um tipo comum de poluição é referido como “poluição do ar com particulado”, que contém poluição na forma de fuligem, gases e outras matérias que estão na forma de minúsculas partículas, denominadas “matéria particulada respirável”. A matéria particulada respirável é categorizada por tamanho, tal como abaixo de 10 ou 2,5 mícrons de diâmetro aerodinâmico (PM10 ou PM2,5, respectivamente), ou como nanopartículas (menos que 100 nm de diâmetro, ou PM0,1). Essas partículas geralmente vêm de emissões de veículo, principalmente combustível diesel, ou de máquinas movidas a diesel.
[003] Tem sido demonstrado que a matéria particulada é capaz de entrar na corrente sanguínea e induzir respostas citotóxicas e inflamatórias, e há uma ligação reconhecida entre a exposição a emissões de diesel e doença cardiovascular. No entanto, o mecanismo real de como isso é realizado ainda não é totalmente compreendido. Ver Solomon et al 2013 J. Thromb Haemost 11: 325-34; Tabor et al 2016 Particle and Fibre Toxicology 13:6 DOI 10.1186/s12989-016-0116-x; Lucking et al 2008 European Heart J 29: 3043-3051; e Hunter et al 2014 Particle and Fibre Technology 11:62 DOI 10.1186/s12989-014-0062-4.
[004] A poluição do ar é uma mistura de matéria particulada (PM) e componentes gasosos. Numerosos estudos mostram que a exposição à poluição do ar por PM tem efeito adverso na saúde cardiovascular (Miller et al. 2012, Pope et al. 2015). A atividade/reatividade de plaqueta é ligada a um risco aumentado de doenças cardiovasculares, especialmente trombose, e também contribuirá para o desenvolvimento da aterosclerose. A atividade/reatividade de plaqueta pode ser aumentada por vários fatores, notadamente a poluição do ar. Assim, a PM mostrou promover a trombose arterial e a aterosclerose por meio do aumento da ativação de plaqueta.
[005] Nem todos os agentes de anti-agregação de plaquetas funcionam através da mesma via, nem os agentes de anti-agregação respondem a todos os estímulos de agregação. Por exemplo, o clopidogrel (um agente farmacêutico antiplaqueta usado na prevenção secundária de complicações cardiovasculares da aterosclerose) pode inibir a agregação de plaquetas induzida pela adenosina 5’-difosfato (ADP), mas não a agregação de plaquetas induzida por colágeno ou trombina. (ver Weber et al 1999 British J Pharmacology 126: 415-420). O PM pode estimular a agregação de plaquetas através de um mecanismo físico, além de um mecanismo fisiológico (tal como o mecanismo visto na agregação induzida por radical de oxigênio).
[006] Foram descritos extratos de tomate solúveis em água que são isentos de licopeno; ver, por ex. WO2010/049707; WO10/049709, and WO99/55350 (todos da Provexis Natural Products, Ltd). Estão disponíveis comercialmente na DSM Nutritional Products, Suécia sob a marca comercial registada FRUITFLOW e FRUITFLOW 2. Foram descritos como tendo capacidades de anti-agregação de plaquetas, que se presume serem devidas à presença de nucleosídeos e outros agentes ativos nos extratos, tais como adenosina, derivados do ácido cafeico incluindo ácido clorogênico e flavonoides, tais como, rutina e quercetina-3,4-glicosídeo.
[007] Seria desejável ter um agente nutracêutico, alimento ou suplemento alimentício, agente nutracêutico ou medicamento seguro e eficaz que pudesse ajudar a melhorar os efeitos da poluição do ar com particulado.
[008] Verificou-se, de acordo com esta invenção, que um extrato de tomate solúvel em água pode proteger o sistema cardiovascular contra os efeitos adversos provocados pela exposição à poluição do ar com particulado. Assim, a invenção refere-se ao uso de um extrato de tomate solúvel em água (WSTE) para a manutenção de um sistema cardiovascular saudável e/ou para evitar a agregação de plaquetas provocada pela interação com matéria particulada na poluição do ar.
[009] De acordo com um primeiro aspecto da invenção, é provida uma composição compreendendo um extrato de tomate solúvel em água para uso na manutenção da saúde cardiovascular, diminuindo o risco de desenvolver um problema de saúde cardiovascular, ou reduzindo a probabilidade de agravar um problema de saúde cardiovascular existente em um indivíduo quem está exposto, ou está em risco de exposição, à poluição do ar com particulado.
[0010] De acordo com outro aspecto desta invenção, é provido um método para manutenção da saúde cardiovascular, diminuindo o risco de desenvolver um problema de saúde cardiovascular, ou reduzindo a probabilidade de agravar um problema de saúde cardiovascular existente em um indivíduo exposto, ou em risco de exposição, para poluição do ar com particulado compreendendo administrar uma quantidade protetora de um extrato de tomate solúvel em água antes da, ou concomitante com a, exposição à matéria particulada da poluição do ar.
[0011] Um outro aspecto desta invenção provê o uso de WSTE na fabricação de um medicamento, agente nutracêutico, suplemento alimentício ou alimento para uso na manutenção da saúde cardiovascular, diminuindo o risco de desenvolver um problema de saúde cardiovascular, ou reduzindo a probabilidade de agravar um problema de saúde cardiovascular existente em um indivíduo que está exposto, ou está em risco de exposição, à poluição do ar com particulado.
[0012] Outro aspecto desta invenção provê uma forma de dosagem compreendendo um medicamento, agente nutracêutico, suplemento alimentício ou alimento compreendendo uma quantidade eficaz de WSTE para proteger contra os efeitos adversos da poluição do ar com particulado.
[0013] Acredita-se que o WSTE é eficaz para manter a saúde cardiovascular porque, como discutido abaixo, o WSTE diminui ou minimiza o risco de agregação de plaquetas em um indivíduo exposto à poluição do ar com particulado. Assim, de acordo com outro aspecto da invenção, é provido um método para diminuir ou minimizar o risco de agregação de plaquetas em um indivíduo exposto à poluição do ar com particulado, compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de WSTE antes da, ou durante a, exposição à poluição do ar com particulado.
[0014] A FIGURA 1 mostra o efeito de FRUITFLOW na quantidade de agregação (% de agregação máxima) induzida pela matéria particulada. Detalhes estão nos Exemplos.
[0015] A FIGURA 2 mostra o efeito de FRUITFLOW na quantidade de agregação (% máxima de agregação induzida pela matéria particulada e ADP (adenosina difosfato).
[0016] Como usado na especificação e nas reivindicações, as seguintes definições se aplicam: Extrato de Tomate Solúvel em água (“WSTE”): O WTSE usado nesta invenção tem as seguintes propriedades: • é solúvel em água em temperatura ambiente, ou seja, a 25°C. em modalidades preferidas, os extratos são também solúveis a temperaturas mais baixas (tal como 15°C, 10°C ou mesmo tão baixos quanto 4°C, embora possa ser necessária mais agitação durante um período de tempo mais longo). O WSTE contém substancialmente não, ou apenas quantidades insignificantes de licopeno (menos que 0,5% em peso seco, de preferência menos que 0,1% em peso seco).
[0017] • está substancialmente livre de material em partículas insolúvel em água (isto é, menos que 0,1% em peso seco, preferencialmente menos que 0,01% em peso seco de material particulado).
[0018] • pode estar em formas líquidas ou secas. em algumas formas, como no extrato seco FRUITFLOW 2, os açúcares foram removidos, e o extrato foi concentrado.
[0019] Poluição do Ar com Particulado: É a poluição do ar que contém partículas classificadas como nanopartículas, ou que possuem um tamanho de partícula de PM2,5 ou menor. Essas partículas de tamanho podem ser o resultado de “fontes naturais” como emissões vulcânicas, tempestades de poeira, incêndios florestais, incêndios de pastagem e similares, ou como resultado de atividades humanas, tais como, emissões automotivas, emissões industriais ou outras atividades, incluindo tabagismo.
[0020] Saúde cardiovascular: Este termo é definido como condições associadas à agregação de plaquetas indesejada, tais como: aterosclerose, infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, trombose, doença arterial periférica ou diminuição do fluxo sanguíneo cerebral, e também inclui diabetes (Tipo I ou Tipo 2) e seus problemas cardiovasculares associados.
[0021] Pessoa saudável - para as finalidades desta invenção, uma pessoa saudável não foi diagnosticada nem tem conhecimento de nenhum problema de saúde cardiovascular que esteja relacionado à agregação de plaquetas indesejada, aterosclerose, infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, trombose, doença arterial periférica, diminuição do fluxo do sangue cerebral, ou diabetes (Tipo 1 ou Tipo 2).
[0022] Um WSTE preferido compreende um extrato de tomate que é substancialmente livre de licopeno, substancialmente termoestável e compreende compostos solúveis em água que têm atividade para impedir a agregação de plaquetas e que têm um peso molecular menor que 1.000 daltons.
[0023] De um modo preferido, o WSTE compreende um, alguns ou cada um dos compostos solúveis em água com atividade para evitar a agregação de plaquetas selecionada do grupo compreendendo: (a) ácidos fenólicos glicosilados ou ésteres fenólicos, ou derivados dos mesmos (b) flavonoides glicosilados; e (c) nucleosídeos.
[0024] É preferido que o WSTE usado de acordo com a invenção seja um extrato de tomate descrito no documento WO2010/049707. De preferência, o WSTE é feito de acordo com os métodos descritos no WO2010/049707. Por exemplo, em algumas modalidades, o WSTE pode ser feito de acordo com os métodos descritos nas Figuras 2 ou 4 do WO2010/049707.
[0025] Em uma modalidade, o WSTE é um líquido na forma de um xarope.
[0026] Um extrato preferido tem um índice de escurecimento de < 0,8 UA, um pH de 4,0-4,3 e uma densidade de 1,15-1,20 e pode ser preparado pelas etapas de: (a) preparar uma mistura inicial de tomate homogeneizado; (b) separar uma fração solúvel em água dos sólidos do fruto; (c) filtração da fração solúvel em água para tornar o extrato substancialmente livre de licopeno; e (d) concentração de compostos solúveis em água com atividade para impedir a agregação de plaquetas no permeato de filtração usando um evaporador.
[0027] Em outra modalidade, os açúcares podem ser removidos do extrato. É preferível que tais extratos contenham < 1% de açúcar e contenham > 95% dos compostos solúveis em água com atividade para evitar a agregação de plaquetas que estão contidos em uma mistura inicial de tomates homogeneizados a partir dos quais o WSTE é derivado. Tais extratos podem estar na forma de soluções aquosas concentradas ou preferivelmente na forma de pó. Em uma modalidade mais preferida, tal extrato pode ser feito pelas etapas de: (a) preparar uma mistura inicial de frutos de tomate homogeneizados, em que o pH da mistura inicial não excede o pH 5,5, a temperatura de manutenção da mistura inicial não exceda 35°C, e a mistura inicial é diluída com água de modo a compreender menos que 33% de sólidos; (b) separar uma fração solúvel em água dos sólidos do fruto por um procedimento que não aumenta a temperatura da fração acima de 60°C; (c) filtração da fração solúvel em água; (d) remoção de açúcares livres da fração solúvel em água filtrada; e (e) concentração de compostos solúveis em água com atividade na prevenção da agregação de plaquetas por um procedimento que não aumenta a temperatura da fração acima de 60°C; Após a etapa (e), o extrato pode ser uma solução aquosa concentrada contendo < 1% de açúcar e contendo > 95% de compostos solúveis em água com atividade para evitar a agregação de plaquetas contida na mistura inicial. Essas soluções aquosas podem ser ainda desidratadas para formar um pó.
[0028] Em algumas modalidades, o WSTE pode ser provido em uma composição que contém outras moléculas que são benéficas para a saúde humana. Por exemplo, a composição pode também conter nitrato ou um precursor de óxido nítrico. O nitrato é preferencialmente de uma fonte de nitrato dietético (por exemplo, e puramente a título de exemplo, um extrato solúvel em água de acelga, rúcula, espinafre, ruibarbo, morango ou alface). A composição pode também compreender ácido fólico ou um metabólito do mesmo (por exemplo, 5-metoxitetra-hidrofolato ou tetra-hidrofolato). As composições preferidas para uso de acordo com a presente invenção que compreendem ácido fólico ou um metabólito do mesmo e/ou nitrato são descritas no WO2014/102546.
[0029] Os indivíduos que se beneficiam do tratamento com o WSTE são preferencialmente indivíduos humanos. Verificou-se que pessoas saudáveis e com uma condição cardiovascular preexistente podem se beneficiar do uso do WSTE se correrem o risco de serem expostas à poluição do ar com particulado.
[0030] Em algumas modalidades, a pessoa é uma pessoa saudável. Em modalidades preferidas, em que a pessoa ingere o WSTE desta invenção antes da exposição à poluição do ar, a ingestão ocorre pelo menos 30 minutos a 1 hora antes da exposição. Em modalidades particularmente preferidas, a ingestão ocorre pelo menos 2 ou pelo menos 3 horas antes da exposição para assegurar que o alimento ou suplemento alimentício contendo o WSTE foi digerido e que os ingredientes ativos do WSTE entraram no sistema circulatório nos seus níveis ideais. Em áreas onde a poluição do ar ocorre em episódios contínuos (ou seja, a poluição do ar dura mais de um dia), o WSTE deve ser tomado antes do primeiro episódio e pelo menos diariamente durante o episódio de poluição do ar. Em outras modalidades, o WSTE é tomado pelo menos diariamente durante a porção do ano em que os episódios de poluição do ar são prováveis de ocorrer.
[0031] Outra modalidade desta invenção é um método para manter um fluxo sanguíneo saudável, ou minimizar o risco de agregação de plaquetas em uma pessoa exposta à poluição do ar com particulado, compreendendo administrar à pessoa em risco de exposição uma quantidade eficaz de WSTE antes da, ou durante a, exposição à poluição do ar com particulado.
[0032] Em outro aspecto desta invenção, a pessoa em risco geralmente tem boa saúde cardiovascular, isto é, não tem problemas conhecidos associados à saúde cardiovascular.
[0033] Outra modalidade desta invenção é o uso de WSTE para manter não terapeuticamente o fluxo sanguíneo saudável em uma pessoa saudável em risco de exposição à poluição do ar do tipo matéria particulada. Exemplos de resultados não terapêuticos incluem: diminuir o risco de parecer mais velho devido a problemas de cuidados com a pele, particularmente rugas ou endurecimento da pele, e/ou manter o bem-estar geral e o equilíbrio de energias devido à boa circulação sanguínea.
[0034] Outros usos do WSTE desta invenção incluem: manter a função de plaqueta saudável na presença de poluição do ar; manter uma circulação sanguínea saudável e fluxo sanguíneo na presença de poluição do ar; reduzir o risco de uma condição cardiovascular adversa, tal como aterosclerose ou trombose, na presença de poluição do ar com particulado; reduzir a gravidade de doenças cardiovasculares quando expostas a material particulado; e reduzir o risco de doenças cardiovasculares e respiratórias em um ambiente de ar poluído.
[0035] Verificou-se também que surpreendentemente o WSTE apresenta um efeito de agregação antiplaqueta sinergístico na presença de adenosina difosfato (ADP) e PM. O ADP, um agonista plaquetário natural armazenado nas plaquetas, é liberado na ativação de plaqueta; e induz uma forte iniciação da agregação de plaquetas. O PM também induz fortemente a agregação de plaquetas em geral, e também promove a agregação de plaquetas induzida pela ADP. A combinação de ADP mais PM está induzindo uma resposta de ativação de plaqueta mais forte do que a soma das respostas individuais de ativação de plaqueta induzidas por ADP ou PM sozinha. Como mostrado em mais detalhes nos Exemplos, verificou-se que o WSTE inibe a atividade de plaqueta induzida por PM presente na poluição do ar, e surpreendentemente também inibe a agregação de plaquetas induzida por ADP quando promovida pela presença de PM.
[0036] Assim, o WSTE desta invenção, se desejado, também pode ser usado em uma população de pessoas que têm um histórico de problemas de saúde cardiovasculares ou diabetes e, portanto, têm ADP presente no seu sangue circulante, e também estão em risco de exposição à poluição do ar com particulado. Assim, outra modalidade desta invenção é um método para manter a saúde cardiovascular em pessoas que têm um histórico de problemas de saúde cardiovasculares e que são expostas à poluição do ar com particulado ou que estão em risco de exposição à poluição do ar com particulado, compreendendo administrar uma quantidade eficaz de extrato WSTE para a pessoa antes da exposição ou durante a exposição à poluição do ar com particulado.
[0037] Um outro aspecto desta invenção é o uso de WSTE para proteger o usuário contra os efeitos cardiovasculares nocivos da poluição do ar, de preferência a poluição do ar com matéria particulada. Uma pessoa é exposta a essa poluição do ar ou em risco de exposição a essa poluição do ar pode ingerir o WSTE e, assim, proteger-se contra problemas cardiovasculares associados à poluição do ar.
[0038] Um outro aspecto desta invenção é um método para diminuir o risco de problemas de saúde cardiovasculares associados à agregação de plaquetas induzida pela poluição do ar com particulado, compreendendo administrar o WSTE a uma pessoa em risco de exposição à poluição do ar com particulado.
[0039] Um outro aspecto desta invenção é o uso de extrato de tomate solúvel em água para uso na fabricação de um agente farmacêutico ou nutracêutico capaz de manter a saúde cardiovascular, diminuindo o risco de desenvolver um problema de saúde cardiovascular, ou reduzindo a probabilidade de agravar um problema de saúde cardiovascular existente em uma pessoa que está exposta ou está em risco de exposição à poluição do ar com particulado.
[0040] Extrato de Tomate: Preferencialmente, FRUITFLOW®2 (uma forma de pó) é usado, embora FRUITFLOW 1 (uma forma líquida) possa ser preferível se a formulação for líquida. A quantidade de WSTE deve ser de 25300 mg/dia, preferivelmente de 75-200 mg/dia, e mais preferivelmente 125175 mg/dia. Em algumas modalidades, 100 ou 150 mg/dia podem ser consumidos por um indivíduo. As quantidades acima mencionadas podem ser tomadas como uma dose única diária, ou doses parciais podem ser tomadas mais do que uma vez por dia (isto é, 2 ou 3 vezes por dia) de modo a que a dose total seja consumida. Formas de dosagem preferidas de acordo com a invenção compreendem 25-300 mg de WSTE, preferencialmente 75-200 mg de WSTE e mais preferencialmente 125-175 mg de WSTE.
[0041] Temporização da dosagem: é preferível consumir WTSE antes da exposição ao episódio de poluição do ar, de preferência pelo menos 2-3 horas antes, para que o WTSE seja metabolizado de forma adequada e esteja disponível no sistema circulatório antes da exposição. Em outras modalidades, a ingestão ocorre pelo menos 30 minutos a 1 hora antes da exposição. Em áreas onde a poluição do ar ocorre em episódios prolongados (ou seja, a poluição do ar dura mais de um dia), o WSTE deve ser tomado antes do primeiro episódio e pelo menos diariamente durante o episódio de poluição do ar. Em outras modalidades, o WSTE é tomado pelo menos diariamente durante a porção do ano, em que os episódios de poluição do ar são prováveis de ocorrer.
[0042] Em uma modalidade, as composições da invenção podem estar na forma de um agente nutracêutico. O termo “agente nutracêutico” como usado aqui denota utilidade em ambos os campos de aplicação nutricional e farmacêutica. Assim, as composições nutracêuticas compreendendo WSTE podem ser usadas como suplementos a alimentos e bebidas e como formulações farmacêuticas para aplicação enteral ou parentérica que podem ser formulações sólidas, tais como cápsulas ou comprimidos, ou formulações líquidas, tais como soluções ou suspensões.
[0043] As composições nutricionais de WSTE de acordo com a presente invenção podem ainda conter hidrocoloides protetores (tais como gomas, proteínas, amidos modificados), aglutinantes, agentes formadores de película, agentes/materiais encapsulantes, materiais de parede/invólucro, compostos de matriz, revestimentos, emulsionantes, agentes tensoativos, agentes solubilizantes (óleos, gorduras, ceras, lecitinas, etc.), adsorventes, carreadores, enchimentos, cocompostos, agentes dispersantes, agentes umectantes, auxiliares de processamento (solventes), agentes de fluidez, agentes de mascaramento de sabor, emulgentes, agentes geleificantes, agentes formadores de gel, antioxidantes e agentes antimicrobianos.
[0044] As composições nutracêuticas de acordo com a presente invenção podem estar em qualquer forma oral galênica contendo um material carreador convencional que é adequado para administrar ao corpo, por exemplo, em formas sólidas, tais como (aditivos/suplementos para) alimentos, pré-mistura de alimentos, alimentos enriquecidos, comprimidos, pílulas, grânulos, drágeas, cápsulas e formulações efervescentes, tais como pós e comprimidos, ou em formas líquidas, tais como soluções, emulsões ou suspensões como, por exemplo, bebidas, pastas e suspensões oleosas. As pastas podem ser incorporadas em cápsulas de invólucro duro ou mole, pelas quais as características de cápsulas apresentam, por exemplo, uma matriz de gelatina derivada de animais, proteínas de planta ou ligninossulfonato.
[0045] Se a composição nutracêutica for uma formulação farmacêutica, a composição contém ainda excipientes, diluentes ou adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis. Técnicas padrão podem ser usadas para a sua formulação, como por exemplo, descrito em Remington's Pharmaceutical Sciences, 20a edição Williams & Wilkins, PA, EUA. Para administração oral, comprimidos e cápsulas são preferencialmente usados que contenham um agente aglutinante adequado, por exemplo, gelatina ou polivinil pirrolidona, um enchimento adequado, por exemplo, lactose ou amido, um lubrificante adequado, por exemplo, estearato de magnésio e, opcionalmente, aditivos adicionais.
[0046] Em algumas modalidades, as composições podem ser formuladas para consumo como alimento ou bebida. Exemplos de tais alimentos ou bebidas são produtos lácteos incluindo, por exemplo, margarinas, pastas, manteiga, queijo, iogurtes ou bebidas lácteas.
[0047] Outros exemplos de alimentos que podem ser enriquecidos com o WSTE incluem pão, barras de cereais, itens de panificação, tais como tortas e biscoitos, e batatas chips.
[0048] Bebidas englobam bebidas não alcoólicas e alcoólicas, bem como preparações líquidas a serem adicionadas à água potável e alimentos líquidos. As bebidas não alcoólicas são, por exemplo, refrigerantes, bebidas esportivas, sucos de frutas, limonadas, chás e bebidas à base de leite. Alimentos líquidos são, por exemplo, sopas e produtos lácteos.
[0049] Composições nutracêuticas contendo WSTE podem ser adicionadas a um refrigerante, uma barra energética ou um doce.
[0050] Os exemplos não limitativos são apresentados para ilustrar adicionalmente a invenção.
[0051] Reagentes: Matéria particulada de Diesel (Empilhadeira Industrial, SRM2975) foi do Instituto Nacional de Padrões e Tecnologia (Gaithersburg, MD, EUA). A adenosina difosfato (ADP), dimetilssulfóxido (DMSO) e óxido de titânio (IV) (TiO2) anatase eram da Sigma (Saint-Louis, MO). A solução salina tamponada com fosfato (PBS) era da Invitrogen (Carlsbad, CA).
[0052] Preparação de matéria particulada de diesel e TiO2: As partículas foram colocadas em suspensão em DMSO e sonicadas em banho- maria com ultrassom por 5 min para minimizar a aglomeração. Eles foram diluídos em concentrações apropriadas em PBS antes do uso.
[0053] Medições de agregação de Plaquetas: O sangue de voluntários humanos saudáveis foi coletado através da agulha Safety- Multifly® em tubos de Citrato de Sódio S-Monovette® (Sarstedt, Nümbrecht, Alemanha). Plasma rico em plaquetas (PRP) foi obtido por centrifugação de sangue citrado a 150 g por 15 min a 37°C. Os PRPs foram transferidos para tubos de plástico e deixados a 37°C. O sangue remanescente foi centrifugado a 2000 g por 15 min a 37°C para obter plasma pobre em plaquetas (PPP). As contagens de plaquetas foram determinadas usando um contador de células Sysmex (Norderstedt, Alemanha) e o número de plaquetas no PRP foi ajustado para 3 x 108 plaquetas/mL com PPP autólogo. Os PRPs foram incubados com Fruitflow®2 (86 μg/mL) ou PBS a 37°C durante 10 min antes da estimulação. As suspensões de PRP foram estimuladas com ADP (2,5 μM), matéria particulada de diesel (50 μg/mL) ou TiO2 (50 μg/mL) na presença ou ausência de Fruitflow® e a agregação de plaquetas foi monitorada em um agregômetro de plaquetas (APACT 4004, Labitec, Ahrensburg, Alemanha) durante 10 min a 37°C sob condições de agitação. PPP foi usado para determinar a linha de base (100% de agregação). Como as partículas podem impactar a transmissão de luz, PPP com matéria particulada de diesel (50 μg/mL) ou TiO2 (50 μg/mL) foi usado como linha de base na presença de matéria particulada de diesel ou TiO2, respectivamente. A agregação de plaquetas foi quantificada como área sob a curva de agregação (AUC) e como a agregação percentual máxima (agr. % máx.).
[0054] A ADP é um agonista de plaqueta natural armazenado nas plaquetas e é liberado na ativação de plaqueta; induz uma forte iniciação da agregação de plaquetas. A matéria particulada de diesel (PM) também induz fortemente a agregação de plaquetas. Em contraste, partículas de TiO2 não poluídas não induziram agregação significativa em concentrações equivalentes. Além disso, o PM promoveu ainda mais a agregação de plaquetas induzida pela ADP. A combinação de ADP mais PM está induzindo uma resposta de ativação de plaqueta mais forte do que a soma das respostas individuais de ativação de plaqueta induzidas por ADP ou PM sozinha.
[0055] Interessantemente, o Fruitflow® também foi capaz de inibir a agregação de plaquetas induzida pela PM. Assim, a área sob a curva de agregação (AUC) diminuiu significativamente em 30% de 18606 para 13079, e a agregação percentual máxima (agr. % máxima) foi significativamente reduzida em 28% de 37% para 27% na presença de Fruitflow® (Tabela 1 e Figura 1). Finalmente, a agregação de plaquetas que é promovida pela combinação de ADP e PM é fortemente inibida por Fruitflow®. A área sob a curva de agregação (AUC) diminuiu significativamente em 36% de 55622 para 35511. A agregação percentual máxima (agr. % máxima) foi significativamente reduzida em 35%, de 101% para 66% na presença de Fruitflow® (Tabela 1 e Figura 2). Tabela 1: Efeito de Fruitflow® na agregação de plaquetas induzida pela matéria particulada da poluição do ar
[0056] Todos os valores são médias ± SD. ADP, Adenosina difosfato. PM, matéria particulada. FF, Fruitflow®. AUC, área sob a curva de agregação. Agr. % máxima, agregação percentual máxima.
[0057] *p<0,05 significativamente diferente do respetivo tratamento que não recebeu FF (por exemplo, ADP vs. ADP+FF, PM vs PM+FF, PM+ADP vs PM+ADP+FF).
[0058] Fruitflow® inibe a atividade de plaqueta induzida por PM presente na poluição do ar. Além disso, o Fruitflow® também inibe a agregação de plaquetas induzida pela ADP quando promovida pela presença de PM.
[0059] Assim, o Fruitflow® reduz a ativação de plaqueta induzida por PM, que promove trombose arterial, aterosclerose e outras doença cardiovascular. Fruitflow® pode ser particularmente útil no caso de reatividade de plaqueta já elevada devido ao estresse. Além disso, o WTSE pode ser usado em pessoas com uma doença preexistente, tais como, diabetes ou doença cardiovascular, pois a reatividade de plaqueta que é aumentada pelo agonista de plaqueta natural liberado sob condições de estresse e doença, tal como ADP é ainda promovida por poluentes de ar, tal como PM e pode ser inibido por Fruitflow®, reduzindo o risco de eventos cardiovasculares induzidos por PM. Em conclusão, Fruitflow® é capaz de reduzir os efeitos deletérios da PM no sistema cardiovascular.
Claims (12)
1. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende um extrato de tomate solúvel em água (WSTE) para uso na manutenção da saúde cardiovascular, diminuindo o risco de desenvolver problemas de saúde cardiovascular, ou reduzindo a probabilidade de agravar um problema de saúde cardiovascular existente em um indivíduo exposto, ou que está em risco de exposição, à poluição do ar com particulado.
2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de ser para uso na forma de um agente farmacêutico, agente nutracêutico, suplemento alimentício ou alimento.
3. Composição de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de ser para uso em um indivíduo humano.
4. Composição de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de ser para uso no qual o indivíduo humano é uma pessoa saudável.
5. Composição de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de ser para uso no qual o indivíduo humano é uma pessoa com uma doença cardiovascular existente.
6. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que o indivíduo está exposto, ou está em risco de exposição, à poluição do ar com particulado que é formada como resultado de: emissões vulcânicas, tempestades de poeira, incêndios florestais, fumaça de incêndios de pastagem, emissões automotivas, emissões de fabricação ou tabagismo.
7. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de ser para uso no qual o WSTE compreende um extrato de tomate que é: (i) substancialmente livre de licopeno; (ii) substancialmente termoestável; e (iii) compreende compostos solúveis em água que têm atividade para impedir a agregação de plaquetas e que têm um peso molecular menor que 1000 daltons.
8. Composição de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de ser para uso no qual o WSTE compreende um, alguns ou cada um dos compostos solúveis em água com atividade para prevenir a agregação de plaquetas selecionada dentre: (a) ácidos fenólicos glicosilados ou ésteres fenólicos, ou derivados dos mesmos; (b) flavonoides glicosilados; e (c) nucleosídeos.
9. Composição de acordo com a reivindicação 7 ou 8, caracterizada pelo fato de ser para uso no qual o componente de WSTE tem um índice de escurecimento de < 0,8 AU, um pH de 4,0-4,3 e uma densidade de 1,15-1,20.
10. Composição de acordo com a reivindicação 7 ou 8, caracterizada pelo fato de ser para uso no qual o componente de WSTE é uma solução aquosa concentrada contendo < 1% de açúcar e contendo > 95% dos compostos solúveis em água com atividade para evitar a agregação de plaquetas contida em uma mistura inicial de tomates homogeneizados dos quais o WSTE é derivado.
11. Composição de acordo com a reivindicação 7 ou 8, caracterizada pelo fato de ser para uso no qual o componente de WSTE contém < 1% de açúcar e contém > 95% dos compostos solúveis em água com atividade para evitar a agregação de plaquetas contida em uma mistura inicial de tomates homogeneizados dos quais o WSTE é derivado e que está na forma de pó.
12. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizada pelo fato de que a composição compreende uma quantidade de WSTE que é suficiente para diminuir a, ou minimizar o risco de, agregação de plaquetas no indivíduo exposto à poluição do ar com particulado.
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