BR112015021448B1 - Uso do peptídeo gliadina no tratamento de câncer - Google Patents

Abstract

KITS E MÉTODOS PARA O TRATAMENTO DE CÂNCER UTILIZANDO PEPTÍDEOS GLIADINA. Kits e métodos para tratar câncer compreendendo a administração de um peptídeo gliadina a um paciente são aqui revelados. Um kit de acordo com a invenção compreende uma composição farmacêutica compreendendo um peptídeo gliadina e instruções para administrar o peptídeo a um paciente. O kit pode ainda compreender uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um agente quimioterápico como um inibidor do receptor da tirosinaquinase e instruções para coadministrar os compostos. Um método de tratamento do câncer de acordo com a invenção compreende administrar um peptídeo gliadina a um paciente e pode ainda compreender coadministrar pelo menos um agente quimioterápico como um inibidor do receptor de tirosinaquinase. A coadministração de um peptídeo gliadina e receptor de tirosinaquinase a um paciente com câncer é eficaz para reduzir ou impedir a resistência do câncer ao inibidor do receptor da tirosina quinase.

Description

[001] Este pedido contém, como uma parte separada da revelação, uma listagem de sequências em forma legível por computador (Nome do arquivo: 47321A_SeqListing.txt; Tamanho: 795 bytes; Criado: 04 de março de 2014) que está aqui incorporada como referência em sua totalidade.

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[002] Este pedido reivindica o benefício de prioridade sob 35 USC §119 (e), do Pedido de Patente Provisório US N.° de Série 61/774.285 depositado em 07 de março de 2013, que está aqui incorporado como referência.

CAMPO DA INVENÇÃO

[003] A invenção é dirigida a kits para o tratamento de câncer compreendendo um peptídeo gliadina e métodos para tratar câncer compreendendo a administração de um peptídeo gliadina a um paciente. O peptídeo gliadina pode ser coadministrado com, pelo menos, um agente quimioterápico como um inibidor do receptor da tirosina quinase para aumentar o efeito anticancerígeno dos agentes quimioterápicos.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[004] Com milhões de pessoas em todo o mundo morrendo de câncer a cada ano, há uma necessidade sempre presente de opções terapêuticas melhoradas. Uma série de agentes quimioterápicos tem sido desenvolvida em um esforço para combater as diversas formas da doença. Exemplos de classes de agentes quimioterápicos incluem agentes de alquilação, antibióticos, antimetabólitos, agentes diferenciadores, inibidores mitóticos, esteroides, inibidores da topoisomerase, e inibidores da tirosina quinase (TKIs). TKIs bloqueiam a fosforilação de proteínas para inibir a ativação das vias de transdução de sinais que apoiam o desenvolvimento e progressão do tumor. Os inibidores do receptor de tirosina quinase (RTKIs) são TKIs que têm como alvo especificamente a atividade das proteínas do receptor de tirosina quinase (RTK), como o receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), receptor do fator de crescimento de fibroblastos (FGFR), receptor do fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGFR), e receptor do fator de crescimento endotelial vascular (VEGFR). No entanto, a eficácia de RTKIs e outras drogas quimioterápicas é frequentemente prejudicada pela resistência intrínseca ou adquirida das células cancerígenas aos agentes anticancerígenos.

[005] Um fator que contribui para a resistência dos tumores à quimioterapia é a presença de células-tronco cancerígenas (CSCs) dentro das populações de células cancerígenas. CSCs são células indiferenciadas, que constituem um pequeno subconjunto (tipicamente menos de 10%) das células cancerígenas. CSCs são assim chamadas porque possuem algumas das características das células-tronco embrionárias e podem diferenciar-se em uma variedade de tipos de células cancerígenas. CSCs são, portanto, tumorigênicas e podem levar à recaída do câncer e metástases. Muitas drogas quimioterápicas matam células cancerígenas diferenciadas, mas não conseguem eliminar eficazmente CSCs, permitindo a estas células se proliferarem e o câncer persistir, resultando na resistência global do tumor à erradicação.

[006] Dois RTKIs aprovados para uso no tratamento de câncer são erlotinib (Tarceva®, OSI Pharmaceuticals) e gefitinib (Iressa®, AstraZeneca). Ambas as drogas têm como alvo e inibem EGFR. A ativação de EGFR após a ligação do fator de crescimento epidérmico (EGF) ou outro ligante ao receptor resulta na fosforilação dirigida por ATP de resíduos de tirosina localizados no domínio intracelular do receptor. As tirosinas fosforiladas, então, interagem com outras proteínas intracelulares e ativam as vias de transdução de sinal para promover a sobrevivência e proliferação das células. O aumento da ativação do EGFR está associado com uma variedade de tipos de câncer, especialmente tumores derivados de células epiteliais. O aumento na atividade do receptor pode resultar de mutações no domínio da quinase de EGFR, amplificação da expressão do gene de EGFR, ou a superexpressão da proteína EGFR (Yauch et al., Clinical Cancer Research. 2005; 11 (24): 8686-98). Erlotinib e gefitinib, bem como outros RTKIs, interferem com o domínio de ligação de ATP das RTK para suprimir a ativação do receptor e bloquear a transdução do sinal à jusante.

[007] Erlotinib e gefitinib foram os primeiros RTKIs aprovados para utilização no tratamento de câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC). O câncer de pulmão é a principal causa de mortes por câncer em todo o mundo, e cerca de 85-90% dos pacientes com câncer de pulmão têm NSCLC (Gottschling et al. Lung Cancer. 2012; 77(1):183- 91). A eficácia de erlotinib e gefitinib no tratamento de NSCLC tem sido limitada, com a maioria dos pacientes continuando a apresentar progressão da doença após o início da terapia (Witta et al., Cancer Research. 2006; 66 (2): 944-950). Verificou-se que pacientes com certas mutações EGFR respondem melhor ao tratamento com RTKIs do que aqueles com EGFR de tipo selvagem. Aproximadamente 70-80% dos pacientes com NSCLC com mutações de EGFR são sensíveis à terapia RTKI, no entanto, praticamente todos os pacientes, eventualmente adquirem resistência (Suda et al. Journal of Thoracic Oncology. 2011; 6 (7): 1152-1161). Além disso, a prevalência das mutações é relativamente rara, ocorrendo em menos de 20% dos pacientes (Yauch 2005, supra). No total, apenas cerca de 10% dos pacientes caucasianos com NSCLC exibem mudanças significativas na progressão da doença após terapia com erlotinib ou gefitinib (Gottschling 2012, supra), ressaltando a necessidade de métodos terapêuticos melhorados.

[008] Gliadina é uma proteína encontrada em grãos de trigo e afins e é um dos principais componentes de glúten. Os quatro principais tipos de gliadina são alfa, beta, gama e ômega. A gliadina pode ser digerida em um número de peptídeos ativos, incluindo alguns que disparam a imunidade de células T ou a citotoxicidade. Gliadina tem sido extensivamente estudada por seu papel na doença celíaca, uma condição inflamatória crônica relacionada com glúten da dieta, mas não foi divulgada ou sugerida para utilização como um agente anticancerígeno, isoladamente ou em combinação com agentes quimioterápicos convencionais. De fato, o tratamento de vários tipos de células, incluindo células cancerígenas, com peptídeos gliadina demonstrou ativar a via EGFR e induzir a proliferação celular (Barone et al. Gut. 2007; 56 (4): 480-488), o que sugere fortemente que a administração de gliadina é contraindicada para o tratamento de câncer. SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[009] A invenção fornece um kit compreendendo uma composição farmacêutica compreendendo um peptídeo gliadina e instruções para a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do peptídeo a um paciente com câncer. Um kit de acordo com a invenção pode compreender ainda uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um agente quimioterápico e instruções para a coadministração de quantidades terapeuticamente eficazes do peptídeo gliadina e agente quimioterápico a um paciente com câncer.

[0010] A invenção também fornece um método de tratar o câncer que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um peptídeo gliadina a um paciente com câncer. Um método de acordo com a invenção pode ainda compreender a coadministração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um agente quimioterápico a um paciente com câncer.

[0011] O peptídeo gliadina de acordo com a invenção pode ser um peptídeo alfa-gliadina. Exemplos de peptídeos alfa-gliadina adequados incluem, pelo menos, peptídeo alfa-gliadina p31-43, por exemplo, peptídeo alfa-gliadina p31-43, peptídeo alfa-gliadina p31-49 e peptídeo alfa-gliadina p31-55. Em um aspecto, pelo menos um agente quimioterápico de acordo com a invenção é um RTKI. Um RTKI de acordo com a invenção pode ser um inibidor de EGFR. Exemplos de inibidores de EGFR adequados incluem gefitinib e erlotinib. Em uma modalidade, a coadministração de um peptídeo gliadina e RTKI a um paciente com câncer é eficaz para reduzir ou evitar a resistência do câncer ao RTKI.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0012] A presente invenção fornece kits e métodos para tratar câncer compreendendo a administração de um peptídeo gliadina a um paciente. Um kit de acordo com a invenção compreende uma composição farmacêutica compreendendo um peptídeo gliadina e pode ainda compreender instruções para administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz do peptídeo a um paciente com câncer. O kit pode ainda compreender uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um agente quimioterápico como um RTKI e instruções para coadministrar quantidades terapeuticamente eficazes do peptídeo gliadina e agentes quimioterápicos a um paciente com câncer. Um método de tratamento do câncer de acordo com a invenção compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um peptídeo gliadina a um paciente com câncer. O método pode ainda compreender a coadministração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um agente quimioterápico como um RTKI a um paciente com câncer.

[0013] O peptídeo gliadina pode ser um peptídeo gliadina alfa, beta, gama ou ômega. Em um aspecto, o peptídeo gliadina de acordo com a invenção é um peptídeo alfa-gliadina ou um derivado ou fragmento do mesmo. Exemplos de peptídeos alfa-gliadina adequados incluem, pelo menos, peptídeo alfa-gliadina p31-43, por exemplo, peptídeo alfa- gliadina p31-55, peptídeo alfa-gliadina p31-49, e peptídeo alfa-gliadina p31-43. Em uma modalidade preferencial, o peptídeo alfa-gliadina é peptídeo alfa-gliadina p31-43 ou um seu derivado ou fragmento. Peptídeo alfa-gliadina p31-43 tem a sequência de aminoácidos LGQQQPFPPQQPY (SEQ ID NO: 1) e é muitas vezes referida como peptídeo gliadina "tóxico" porque induz uma resposta imune inata inflamatória e resulta em dano intestinal. Tratamento de células cancerígenas com o peptídeo alfa-gliadina p31-43 induz a proliferação de células (Barone et al. PLOS ONE 2010; 5 (8): e12246), de modo que o peptídeo não foi reportado para uso no tratamento de tumores, muito menos incluído em composições farmacêuticas ou kits para o tratamento de tumores. Um peptídeo gliadina de acordo com a invenção pode ser obtido em seguida à digestão enzimática de uma proteína gliadina, ou pode ser quimicamente sintetizado utilizando métodos convencionais conhecidos na técnica. Uma composição farmacêutica compreendendo um peptídeo gliadina compreende o peptídeo em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável, diluente e/ou excipiente. As vias de administração adequadas para administrar uma composição farmacêutica que compreende a gliadina a um paciente incluem, entre outras, vias oral, intramuscular, intravenosa, respiratória/inalação, e subcutânea.

[0014] De acordo com a invenção, um peptídeo gliadina pode ser coadministrado com pelo menos um agente quimioterápico a um paciente com câncer. Exemplos de agentes quimioterápicos que podem ser coadministrados com um peptídeo gliadina incluem, entre outros, agentes alquilantes, antimetabólitos, antibióticos, agentes diferenciadores, inibidores mitóticos, esteroides, inibidores da topoisomerase, TKIs (como RTKIs), e combinações dos mesmos. Em um aspecto, um peptídeo gliadina pode ser coadministrado com, pelo menos, um RTKI. Exemplos de RTKIs incluem, entre outros, afatinib, axitinib, canertinib, cediranib, erlotinib, gefitinib, grandinin, imatinib, lapatinib, leflunomida, lestaurtinib, neratinib, pazopanib, quizartinib, regorafenib, semaxanib, sorafenib, sunitib, sutent, tivozanib, tocerabib, vandetanibe, vatalanib, anticorpos monoclonais que ligam RTKs específicos e as suas combinações. Um RTKI preferencial de acordo com a invenção é um inibidor de EGFR. Exemplos de inibidores de EGFR incluem, entre outros, gefitinib e erlotinib. Em uma modalidade, a coadministração de um peptídeo gliadina e RTKI a um paciente com câncer é eficaz para reduzir ou evitar a resistência do câncer ao RTKI.

[0015] Os kits e métodos aqui descritos podem ser utilizados para tratar um paciente humano com câncer ou qualquer outro mamífero. A invenção é útil para o tratamento de muitos tipos de câncer, incluindo câncer de bexiga, câncer de mama, câncer de cólon, câncer de endométrio, câncer do rim, leucemia, câncer de pulmão, linfoma, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de pele e câncer de tireoide. A invenção é particularmente eficaz para o tratamento de cânceres cuja progressão é dependente de modificações na adesão intercelular. Em um aspecto, a invenção é utilizada para tratar câncer de pulmão, incluindo NSCLC.

[0016] Como aqui utilizado, as definições seguintes podem ser úteis para ajudar o especialista na técnica na compreensão da invenção:

[0017] O termo "terapeuticamente eficaz" depende da condição do paciente e do composto específico administrado. O termo refere-se a uma quantidade eficaz para alcançar um efeito clínico desejado. Em algumas modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade eficaz para inibir o crescimento de células cancerígenas, impedir a metástase, ou resultar em morte celular. As quantidades terapeuticamente eficazes de agentes quimioterápicos conhecidos são conhecidas na técnica. Por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um RTKI é geralmente cerca de 5 mg/kg/dia a cerca de 150 mg/kg/dia, cerca de 10 mg/kg/dia a cerca de 100 mg/kg/dia, e/ou cerca de 25 mg/kg/dia a cerca de 75 mg/kg/dia, dependendo da droga. Para um peptídeo gliadina, uma quantidade terapeuticamente eficaz é, geralmente, uma dose necessária para alcançar uma concentração plasmática de cerca de 5 μg/mL a cerca de 200 μg/mL, cerca de 10 μg/mL a cerca de 100 μg/mL, e/ou cerca de 15 μg/mL a cerca de 50 μg/mL, por exemplo, cerca de 20 μg/mL. As dosagens e a frequência da administração para uso de acordo com a presente revelação podem variar de acordo com fatores como a via de administração, a natureza e gravidade da doença a ser tratada, e o tamanho e condição geral do paciente. As dosagens apropriadas podem ser determinadas por procedimentos conhecidos na técnica pertinente, por exemplo, os ensaios clínicos que podem envolver estudos de escalonamento de dose e protocolos aqui descritos. Geralmente, um médico titula a dosagem e modifica a via de administração para obter o efeito terapêutico ótimo. Puramente a título de ilustração, a dosagem de um peptídeo gliadina necessária para alcançar uma quantidade terapeuticamente eficaz varia de cerca de 100 μg/kg/dia a cerca de 100 mg/kg/dia, cerca de 200 μg/kg/dia a cerca de 75 mg/kg/dia, cerca de 500 μg/kg/dia a cerca de 50 mg/kg/dia, cerca de 750 μg/kg/dia a cerca de 25 mg/kg/dia, e/ou cerca de 1 mg/kg/dia a cerca de 15 mg/kg/dia, dependendo dos fatores mencionados acima. Algumas condições requerem um tratamento prolongado, o que pode ou não implicar na administração de doses mais baixas ao longo de várias administrações. Se desejado, a dose é administrada como duas, três, quatro, cinco, seis ou mais subdoses administradas separadamente a intervalos apropriados ao longo do dia. O período de tratamento dependerá da condição particular e pode durar um dia até vários dias, semanas, meses ou anos.

[0018] O termo "monoterapia" significa que um peptídeo gliadina é administrado de uma maneira tal que os seus efeitos farmacológicos em células cancerígenas e tumores não se sobrepõem com os efeitos farmacológicos de um agente quimioterápico. Durante a monoterapia, um peptídeo gliadina é necessariamente administrado sozinho. Monoterapia de peptídeo gliadina pode ocorrer antes, depois, ou antes, e depois, do tratamento, utilizando um agente quimioterápico pelo tempo até que o agente quimioterápico não seja mais terapeuticamente eficaz no momento em que o peptídeo gliadina for administrado.

[0019] Os termos "coadministração" e "terapia de combinação" significam que um peptídeo gliadina e pelo menos um agente quimioterápico são administrados de modo que permite a todos os compostos exercerem efeitos farmacológicos durante um período de tempo sobreposto. O peptídeo gliadina e agentes quimioterápicos podem ser administrados na mesma composição farmacêutica ou em composições separadas, e através das mesmas ou diferentes vias de administração. O peptídeo gliadina e agentes quimioterápicos podem ser coadministrados ao mesmo tempo ou em momentos diferentes desde que ambos os compostos exerçam efeitos farmacológicos durante um período de tempo sobreposto. Por exemplo, os compostos podem ser ambos administrados a um paciente dentro de um período de tempo de cerca de 2, 4, 6, 8, 12, 24, ou 48 horas. Ou o peptídeo gliadina ou agentes quimioterápicos podem ser administrados em primeiro lugar. Contanto que compostos subsequentes sejam administrados enquanto uma concentração terapeuticamente eficaz do primeiro composto está presente, considera-se coadministrar o peptídeo gliadina e os agentes quimioterápicos de acordo com os ensinamentos da presente invenção.

[0020] O termo "agente quimioterápico" é qualquer composto que é tóxico em relação às células cancerígenas. Um agente quimioterápico pode ser uma molécula pequena, proteína, polipeptídeo, peptídeo, um ácido nucleico, e combinações dos mesmos. Classes exemplares de agentes quimioterápicos são fornecidas acima. Exemplos específicos de agentes quimioterápicos incluem, entre outros, azacitidina, axatioprina, bevacizumab, bleomicina, capecitabina, carboplatina, chlorabucil, cisplatina, ciclofosfamida, citarabina, daunorubicina, docetaxel, doxifluridina, doxorrubicina, epirrubicina, etoposido, fluorouracila, gemcitabina, herceptin, idarubicina, mecloretamina, melfalan, mercaptopurina, metotrexato, mitoxantrona, oxaliplatina, paclitaxel, tafluposido, teniposido, tioguanina, ácido retinoico, valrubicina, vinblastina, vincristina, vindesina, vinorelbina, os RTKIs exemplares específicos listados acima, e combinações dos mesmos. Exemplos adicionais de agentes quimioterápicos são conhecidos na técnica.

[0021] O termo "inibidor do receptor de tirosina quinase" ou "RTKI" significa qualquer composto capaz de inibir a atividade de um membro da família de proteínas do receptor da tirosina quinase (RTK). Um RTKI pode ser uma molécula pequena, proteína, polipeptídeo, peptídeo, um ácido nucleico, e combinações dos mesmos. Exemplos de proteína alvos para RTKI incluem, entre outros, membros das seguintes famílias RTK: do receptor efrina, receptor do fator de crescimento epidérmico, receptor do fator de crescimento de fibroblastos, receptor de insulina, receptor do fator de crescimento semelhante à insulina, receptores de neurotrofina, receptor do fator de crescimento derivado das plaquetas e receptor do fator de crescimento endotelial vascular. Exemplos específicos de RTKI estão listados acima.

[0022] O termo "derivado ou fragmento" significa um peptídeo possuindo uma estrutura e atividade biológicas semelhantes a um peptídeo gliadina. Um derivado ou fragmento compartilha pelo menos 70%, 80%, ou 90% de homologia de sequência de aminoácidos com um peptídeo gliadina. Em várias modalidades, um derivado ou fragmento compartilha pelo menos 70%, 80%, ou 90% de homologia de sequência de aminoácido com peptídeo alfa-gliadina p31-55, peptídeo alfa-gliadina p31-49, ou peptídeo alfa-gliadina p31-43. Um derivado ou um fragmento pode ser um peptídeo gliadina quimicamente modificado. Por exemplo, um derivado ou fragmento pode ser um peptídeo gliadina quimicamente modificado para melhorar a estabilidade, a penetração na membrana, ou a imunogenicidade do peptídeo. Os exemplos de modificações químicas que podem ser utilizadas para formar derivados e fragmentos de peptídeos gliadina incluem, entre outros, conjugação do polímero, lipidização, uso de análogos de aminoácidos, a glicosilação, e cationização. Em um aspecto, um derivado apropriado ou fragmento de um peptídeo gliadina contém pelo menos a sequência de aminoácidos PPQQPY (SEQ ID NO: 2).

[0023] De um modo vantajoso, a coadministração de um peptídeo gliadina e pelo menos um agente quimioterápico como um RTKI a um paciente com câncer é eficaz para reduzir ou evitar a resistência das células cancerígenas ao agentes quimioterápicos. A coadministração de um peptídeo gliadina e, pelo menos, um agente quimioterápico, por conseguinte, aumenta e prolonga a eficácia do agentes quimioterápicos Embora não se pretenda estar limitado por uma teoria única, acredita- se que o efeito anticancerígeno obtido a partir de administração de um peptídeo gliadina sozinho ou em combinação com pelo menos um agente quimioterápico de acordo com a invenção pode ser atribuído ao impacto do peptídeo gliadina na transporte intracelular de carga.

[0024] Proteínas e outras moléculas são trafegadas para dentro do compartimento citossólico de células em vesículas conhecidas como endossomas como parte da via endocítica. Endossomas iniciais são vesículas que recebem moléculas internalizadas da membrana plasmática. Endossomas iniciais amadurecem em endossomas tardios, também conhecidos como corpos multivesiculares (MVBs). Os endossomas tardios/MVBs eventualmente fundem-se com os lisossomas, resultando na degradação enzimática da carga internalizada. Como uma alternativa para a degradação lisossomal, algumas moléculas são classificadas em endossomas de reciclagem e trafegadas de volta à membrana plasmática ou para outros sítios intracelulares. Peptídeos gliadina, particularmente peptídeo alfa- gliadina p31-43, têm demostrado interferir com a via endocítica, atrasando a maturação de endossomas iniciais a endossomas tardios (Barone 2010,supra). Assim, os peptídeos gliadina interferem com a degradação de proteínas, agentes quimioterápicos, e outras moléculas de tráfego dentro de endossomas no compartimento citossólico. Ao evitar a degradação de moléculas intracelulares, peptídeos gliadina podem aumentar a atividade anticancerígena de agentes quimioterápicos.

[0025] O complexo de classificação endossomal requerido para o transporte (ESCRT) de complexos de proteína (ESCRT-0, ESCRT-1, ESCRT-2, e ESCRT-3) regula a classificação de carga em MVBs para eventual degradação dentro dos lisossomos. Fator de crescimento de hepatócitos regulado pelo substrato de tirosina quinase (HRS), um componente de ESCRT-0, regula o tráfego de moléculas em endossomas iniciais e tardios (Henne et al. Developmental Cell. 2011; 21 (1): 77-91; Barone 2010, supra). Os aminoácidos 719-731 de HRS, localizado no terminal carboxila, contêm os domínios de ligação necessários para a localização de HRS para membranas endossomais (Barone 2010, supra). A sequência de aminoácidos HRS 719-731 (PSQDASLPPQQPY; SEQ ID NO: 3) é muito parecida com o peptídeo alfa-gliadina p31-43. Dos 13 resíduos, sete são idênticos, incluindo seis aminoácidos contíguos (PPQQPY; SEQ ID NO: 2), e dois são similares entre as sequências, com a única diferença significativa sendo uma leucina N-terminal em peptídeo alfa-gliadina p31-43 em comparação com a prolina em HRS 719-731 (2010 Barone, supra). Peptídeos de alfa-gliadina que compreendem, pelo menos, alfa-gliadina p31-43, por exemplo, peptídeo alfa-gliadina p31-43, peptídeo alfa-gliadina p31-49 e peptídeo alfa-gliadina p31-55, podem, por conseguinte competir com a ligação de HRS, desse modo, interferindo com a localização de HRS dentro das membranas endossomais (Barone 2010, supra). Como resultado, depois das células serem tratadas com peptídeo alfa-gliadina p31-43, a quantidade de HRS no citossol é aumentada enquanto HRS associado à membrana é diminuído (Barone 2010, supra). A diminuição da presença de HRS nas membranas endossomais perturba o tráfego normal da carga no interior da célula, levando à degradação prejudicada de moléculas intracelulares. Ao promover a retenção de carga, incluindo as moléculas tóxicas, que de outro modo normalmente são removidas da célula, a administração de peptídeos gliadina a um paciente é capaz de diminuir a viabilidade celular, a qual apoia a utilização dos peptídeos para o tratamento de câncer.

[0026] Em adição ao seu potencial para uso no tratamento do câncer sem agentes terapêuticos adicionais, peptídeos gliadina também são promissores para utilização em combinação com um ou mais agentes quimioterápicos porque os efeitos dos peptídeos na via endocítica podem afetar o tráfego de agentes quimioterápicos e seus alvos. Depois do HRS competindo para fora por sítios de ligação associados com membranas endossomais, peptídeos alfa-gliadina compreendendo pelo menos alfa-gliadina p31-43, por exemplo, peptídeo alfa-gliadina p31-43, peptídeo alfa-gliadina p31-49 e peptídeo alfa-gliadina p31-55, localizam aos endossomas. Vesículas que transportam peptídeos alfa-gliadina compreendendo pelo menos peptídeo alfa-gliadina p31-43 se movem mais lentamente do que as vesículas normais (Barone 2010, supra). O atraso de transporte intracelular induzido por peptídeo alfa-gliadina p31-43 não é influenciado pela carga no interior das vesículas, de modo que todas as moléculas de tráfego intracelular, incluindo agentes quimioterápicos, estão potencialmente afetadas (Barone 2010, supra). O trânsito citossólico prolongado de carga pode estender o tempo em que o agente quimioterápico é capaz de acumular-se, originando concentrações intracelulares elevadas de droga e citotoxicidade aumentada. A presença prolongada da droga no interior da célula também permite à droga exercer o seu efeito farmacológico dentro de uma célula por um longo período de tempo, aumentando a eficácia da droga. A coadministração de um peptídeo gliadina com pelo menos um agente quimioterápico pode, por conseguinte, aumentar a atividade de uma vasta gama de drogas anticancerígenas que contêm diversos mecanismos de ação.

[0027] O efeito dos peptídeos gliadina na via endocítica também pode exercer efeitos terapêuticos anticancerígenos por influenciar o fenótipo celular. Epiteliais e mesenquimais são duas classes principais de fenótipos celulares. As células epiteliais são altamente organizadas, com numerosas junções celulares manutenção da aderência entre as células vizinhas. Em contraste, as células mesenquimais são desorganizadas e faltam fortes junções intercelulares, que aumentam o seu potencial migratório. Durante um processo conhecido como a transição mesenquimal (MT), células epiteliais e células não epiteliais diferenciam-se em células mesenquimais. Os resultados da transição na perda de adesão célula a célula e aumento da motilidade celular, bem como uma maior resistência à apoptose, promovendo, assim, a capacidade de invasão, ou seja, metástases de tumores. Durante MT, a expressão de proteínas de junção de células, como a e-caderina é reduzida, e a expressão de marcadores mesenquimais, como vimentina e fibronectina aumenta.

[0028] Baixa expressão de e-caderina tem sido associada com a progressão de um número de tipos de câncer (Rao et al. Cell Biol. Int. 2011; 35 (9): 945-51; Yilmaz et al. Molecular Cancer Research. 2010; 1; 8 (5): 629-42). A administração de um peptídeo gliadina pode impedir que um fenótipo mesenquimal, ao prejudicar a degradação da e- caderina e promover a reciclagem da proteína de junção de volta à membrana plasmática para manter a adesão célula-a-célula. O efeito de gliadina na retenção de e-caderina pode explicar porque a presença de gliadina no plasma conduz à altura reduzida do enterócito e atrofia das vilosidades em pacientes com doença celíaca não tratada (Barone 2010, supra) porque mudanças na adesão celular através da perda de e-caderina são necessárias para promover o crescimento vertical de células intestinais. Além disso, ao interferir com HRS e os complexos ESCRT, peptídeos gliadina podem evitar a degradação de adesões focais que ligam células à matriz extracelular (Tu et al. Proceedings of the National Academy of Sciences. 2010; 107 (37): 16107-12). As adesões focais intactas também ajudam a manter o fenótipo não mesenquimal e inibir a transição para um estado mesenquimal. Porque a administração de um peptídeo gliadina de acordo com a invenção pode bloquear MT e impedir o crescimento celular e migração celular (e, portanto, a metástase de células cancerígenas), o tratamento de acordo com a invenção pode efetivamente controlar um espectro de tipos de câncer.

[0029] O efeito dos peptídeos gliadina em MT também pode aumentar a eficácia de agentes quimioterápicos coadministrados. A metástase do tumor complica o tratamento do câncer e é um dos principais contribuintes para a morte do paciente. Um fenótipo mesenquimal foi identificado como preditivo de sensibilidade à droga, com a expressão de marcadores mesenquimais sinalizando uma fraca resposta à quimioterapia (Yauch 2005, supra; Buck et al. Molecular Cancer Therapeutics. 2007; 6 (2): 532-41; Frederick et al. Molecular Cancer Therapeutics . 2007; 6 (6): 1683-1691). A expressão da e- caderina é substancialmente ausente em linhagens de células cancerígenas resistentes, e restauração da expressão de e-caderina pode aumentar a sensibilidade à droga, resultando na inibição do crescimento celular e apoptose após o tratamento (Witta 2006,supra). A administração de peptídeos gliadina para promover a retenção de e- caderina e um fenótipo não-mesenquimal pode, por conseguinte, melhorar a resposta das células cancerígenas a um agente quimioterápico coadministrado. Por exemplo, um fenótipo mesenquimal está associado com menor quantidade de e-caderina e com ambas a resistência intrínseca e adquirida a RTKI específicos do EGFR em NSCLC (Suda 2011,supra). As células não-mesenquimais contam com vias mediadas por EGFR para a sobrevivência e proliferação das células, mas no estado mesenquimal, a sinalização do EGFR é reduzida e acredita-se que as células contem com mecanismos independentes de EGFR para a sobrevivência e proliferação das células (Thomson et al. Clin. VAL: Metástase. 2008; 25 (8): 843-54). Utilização de um peptídeo gliadina para manter a e-caderina e impedir a transição para um estado mesenquimal, por conseguinte, irá diminuir a resistência à droga e prolongar a sensibilidade de chamadas de câncer aos efeitos citotóxicos de um RTKI específico de EGFR como gefitinib ou erlotinib. Espera-se que a coadministração de um peptídeo gliadina aja em sinergia com outras classes de agentes quimioterápicos bem como, resultando em melhores opções para terapia de combinação para tratar o câncer.

[0030] O efeito anticancerígeno alcançado pela administração de um peptídeo gliadina sozinho ou em combinação com pelo menos um agente quimioterápico de acordo com a invenção também pode ser atribuído ao efeito vantajoso inesperado do peptídeo gliadina em células indiferenciadas. Peptídeos gliadina são surpreendentemente eficazes em matar CSC que são resistentes a outros agentes quimioterápicos, tornando-os um agente anticancerígeno eficaz quando utilizados sozinhos, ou seja, como monoterapia. Por exemplo, um peptídeo gliadina pode ser administrado como uma terapia inicial (primeira linha), ou seja, antes de outras terapias anticancerígenas (por exemplo, agentes quimioterápicos, radiação, e/ou cirurgia) serem tentadas. Como outro exemplo, um peptídeo gliadina pode ser administrado como uma terapia subsequente (por exemplo, de segunda ou terceira linha) na sequência de uma terapia anticancerígena que já não é mais terapeuticamente eficaz.

[0031] O efeito terapêutico de um peptídeo gliadina administrado sozinho como monoterapia em comparação com gliadina coadministrado com um agente quimioterápico pode ser afetado pelo mecanismo de ação do agente quimioterápico. Em particular, a administração monoterapêutica de um peptídeo gliadina após o tratamento com um agente quimioterápico cujo principal sítio de ação é no núcleo, por exemplo, agentes antibióticos, inibidores da topoisomerase, e outros agentes alquilantes que danificam o DNA, verificou-se ser surpreendentemente eficaz em inibir as células cancerígenas resistentes que sobrevivem ao tratamento com o agente quimioterápico particularmente relativo à coadministração de ambos os compostos. Para tais agentes quimioterápicos, teoriza-se que a monoterapia utilizando um peptídeo gliadina pode impedir a interferência com a localização do agente quimioterápico para o núcleo (enquanto teoriza-se que a coadministração pode promover essa interferência, deste modo possivelmente atenuando o efeito terapêutico do agente quimioterápico). Para agentes quimioterápicos cujo principal sítio de ação é fora do núcleo, por exemplo, agentes diferenciadores, inibidores mitóticos, esteroides e TKI, a coadministração de um peptídeo gliadina e o agente quimioterápico é surpreendentemente eficaz na inibição do crescimento de células cancerígenas e pode surpreendentemente alcançar eficácia terapêutica sinergética maior do que a monoterapia com o peptídeo gliadina ou agente quimioterápico sozinho. A administração de um peptídeo gliadina antes e/esperada ou após o tratamento com pelo menos um quimioterápico (por exemplo, a monoterapia quando os compostos não exercem efeitos farmacológicos durante um período de sobreposição de tempo) ou durante a administração de pelo menos um quimioterápico (isto é, coadministração quando os compostos não exercem efeitos farmacológicos durante um período de sobreposição de tempo) é, portanto, eficaz em diminuir o número de CSC e prevenir a recidiva do câncer e metástase.

[0032] A capacidade de peptídeos gliadina em aumentar a eficácia terapêutica de um agente quimioterápico coadministrado pode também ser atribuída em parte à interação do peptídeo gliadina com proteínas importantes para a manutenção de um fenótipo indiferenciado. Além de HRS, o peptídeo alfa-gliadina p31-43 compartilha os seis aminoácidos da sequência PPQQPY (SEQ ID NO: 2) com resíduos encontrados no interior do domínio quinase de quinase dependente de ciclina 12 (CDK12). O domínio de quinase de CDK12 é importante para a sua interação com ciclina K (CycK) (Dai et al., J. Biol. Chem. 2012; 287(30):25344-52). Ambos CDK12 e CycK são altamente expressos em células-tronco embrionárias, mas a sua expressão diminui na diferenciação (Dai 2012, supra). As proteínas são importantes para a autorrenovação das células-tronco embrionárias, e a inibição de qualquer uma conduz à diferenciação celular (Dai 2012, supra). Com base no acima exposto e os resultados apresentados nos Exemplos abaixo, acredita-se que o peptídeo alfa-gliadina p31-43 pode interferir com a interação entre CDK12 e CycK e inibir a atividade das duas proteínas, desse modo promovendo a diferenciação celular e aumentando potencialmente a sensibilidade do tumor ao agente quimioterápico As capacidades dos peptídeos gliadina de matar CSC e/ou promover a diferenciação celular inesperadamente fornecem vantagens que não foram obtidas de outros agentes quimioterápicos. A eficácia terapêutica viável usando uma combinação de um peptídeo gliadina e pelo menos um agente quimioterápico no tratamento do câncer é surpreendente e inesperada considerando a caracterização da atividade dos compostos como sendo contrária. Por exemplo, os peptídeos gliadina são conhecidos em dirigir células em fase S do ciclo celular, promovendo, assim, a proliferação celular (Barone 2007, Supra), enquanto que os agentes quimioterápicos são em geral, particularmente citotóxicos para células em divisão rápida. RTKI como gefitinib e erlotinib geralmente atuam para reter as células na fase G1 para inibir o crescimento celular (Arora et al., JPET. 2005; 315 (3): 97179). Assim, a atividade esperada de um peptídeo gliadina e agente quimioterápico seria neutralizar, pelo menos, um ao outro. Do mesmo modo, a atividade esperada de um ativador de EGFR, como um peptídeo gliadina e um inibidor de EGFR, como um RTKI seria ser contrário um ao outro. No entanto, porque os peptídeos gliadina fazem com que EGFR e outros receptores sejam reciclados de volta para a membrana celular, em vez da degradação dentro dos lisossomos o tempo durante o qual EGFR permanece fosforilado é estendido (Barone 2007,supra; Barone 2010, Supra). Tal ativação prolongada de EGFR e outros RTK pode aumentar a sensibilidade das células à RTKI. A coadministração de um peptídeo gliadina e um RTKI específico de EGFR é, portanto, eficaz para o tratamento de pacientes com EGFR de tipo selvagem e os que expressam proteínas de receptores mutantes.

[0033] A coadministração de um peptídeo gliadina e pelo menos um agente quimioterápico como um RTKI fornece uma terapia anticancerígena inesperada e surpreendentemente eficaz. Os peptídeos gliadina atuam em concerto com o agente quimioterápico para alcançar eficácia terapêutica melhorada. Quando um peptídeo gliadina e RTKI são coadministrados a um paciente com câncer, a resistência do câncer à RTKI é diminuída ou impedida. Poderia ser esperado de um paciente que sofre tanto de doença celíaca quanto câncer não tratado que respondesse melhor à terapia anticancerígena utilizando RTKI ou outros agentes quimioterápicos. A doença celíaca é uma doença inflamatória crônica do intestino delgado, que envolve uma resposta imunogênica para o glúten de trigo e proteínas similares. Adotar uma dieta livre de glúten mitiga os sintomas da doença celíaca. Em pacientes que sofrem de doença celíaca, peptídeos gliadina são resistentes à degradação e transportados intactos no soro em quantidades significativamente mais elevadas em comparação com indivíduos saudáveis e em pacientes com doença celíaca tratada (Matysiak-Budnik et al. Gastroenterology. 2003;125(3):696-707) criando uma condição conhecida como "síndrome gotejante do intestino". O aumento da permeabilidade da gliadina através do revestimento do aparelho digestivo e para a circulação sistêmica permitiria aos peptídeos gliadina alcançar sítios de tumor e aumentar a sensibilidade das células cancerígenas à quimioterapia. Assim, de acordo com um aspecto, o paciente a ser tratado não sofre de doença celíaca.

[0034] A invenção é ainda explicada pelos Exemplos seguintes, que não devem ser interpretados como limitantes em seu escopo.

[0035] E XEMP LO 1

[0036] As células cancerígenas de vários tipos, incluindo NSCLC são obtidas da American Type Culture Collection (ATCC; Manassas, VA) ou de biópsias de pacientes com câncer e mantidas em meio de crescimento. As células são plaqueadas em placas multi poços de cultura de células e divididas nos seguintes grupos experimentais: (1) células incubadas apenas com meio de crescimento; (2) células incubadas com meio de crescimento suplementado com várias concentrações de peptídeo alfa-gliadina p31-43, peptídeo alfa-gliadina p31-49 ou peptídeo alfa-gliadina p31-55 de 5 μg/mL a 200 μg/mL; (3) células incubadas com meio de crescimento suplementado com várias concentrações de erlotinib de 0,1 μM a 10 μM; (4) células incubadas com meio de crescimento suplementado com 5 μg/mL a 200 μg/mL de peptídeo alfa-gliadina p31-43, peptídeo alfa-gliadina p31-49, ou peptídeo alfa-gliadina p31-55 e 0,1 μM para 10 μM erlotinib; (5) as células foram incubadas com meio de crescimento suplementado com várias concentrações de gefitinib de 0,1 μM a 10 μM; e (6) células incubadas com meio de crescimento suplementado com 5 μg/mL a 200 μg/mL de peptídeo alfa-gliadina p31-43, peptídeo alfa-gliadina p31-49, ou peptídeo alfa-gliadina p31-55 e 0,1 μM a 10 μM gefitinib.

[0037] A viabilidade das células é medida após 3 a 5 dias e a concentração inibidora 50 (IC50) é determinada a partir da curva de dose resposta. Cotratamento com um peptídeo gliadina e erlotinib diminui significativamente o IC50 de erlotinib em comparação com o IC50 para erlotinib administrado sozinho. Do mesmo modo, o cotratamento com um peptídeo gliadina e gefitinib diminui significativamente o IC50 de gefitinib em comparação com o IC50 de gefitinib administrado sozinho. EXEMPLO 2

[0038] Camundongos são injetados via subcutânea com células NSCLC na região do flanco. Deixam-se os tumores crescerem até cerca de 100 milímetros cúbicos a 200 milímetros cúbicos. Os animais são divididos nos seguintes grupos experimentais e tratados durante 14 dias: (1) animais que receberam uma injeção de solução salina uma vez ao dia no local do tumor; (2) animais que receberam uma injeção uma vez ao dia de 5 μg/mL a 200 μg/mL de peptídeo alfa-gliadina p31-43, peptídeo alfa-gliadina p31-49, ou peptídeo alfa-gliadina p31-55 no local do tumor; (3) animais que receberam uma dose oral uma vez ao dia de até 100 mg/kg de erlotinib; (4) animais que receberam uma dose oral uma vez ao dia de até 100 mg/kg de gefitinib; (5) animais que receberam uma injeção uma vez ao dia de 5 μg/mL a 200 μg/mL de peptídeo alfa- gliadina p31-43, peptídeo alfa-gliadina p31-49 ou peptídeo alfa-gliadina p31-55 no local do tumor e uma dose oral diária uma vez de até 100 mg/kg de erlotinib; (6) animais que receberam uma injeção uma vez ao dia de 5 μg/mL a 200 μg/mL de peptídeo alfa-gliadina p31-43, peptídeo alfa-gliadina p31-49 ou peptídeo alfa-gliadina p31-55 no local do tumor e uma vez ao dia dose oral de até 100 mg/kg de gefitinib.

[0039] Os volumes dos tumores são avaliados usando compassos de calibre ao longo do curso do tratamento para determinar a inibição do crescimento. Coadministração de um peptídeo gliadina e erlotinib ou um peptídeo gliadina e gefitinib resultou em uma inibição significativa do crescimento do tumor, em comparação com a administração de gefitinib ou erlotinib sozinhos.

EXEMPLO 3

[0040] Um estudo de eficácia em seres humanos é realizado para avaliar o efeito da coadministração de (1) peptídeo alfa-gliadina p31-43, peptídeo alfa-gliadina p31-49 ou peptídeo alfa-gliadina p31-55 e gefitinib ou (2) peptídeo alfa-gliadina p31-43, peptídeo alfa-gliadina p31-49, ou peptídeo alfa-gliadina p31-55 e erlotinib em pacientes com NSCLC. Pacientes do grupo controle recebem doses de até 250 mg por dia de gefitinib ou até 150 mg por dia de erlotinib. No grupo experimental, aos pacientes são administrados peptídeos alfa-gliadina p31-43, peptídeos alfa-gliadina p31-49, ou peptídeos alfa-gliadina p31-55 diariamente além de gefitinib ou erlotinib. O peptídeo alfa-gliadina p31-55, peptídeo alfa- gliadina p31-43 ou peptídeo alfa-gliadina p31-49, é administrado para alcançar uma concentração plasmática de cerca de 5 μg/mL a cerca de 200 μg/mL. Massa tumoral e metástase são avaliadas após um, dois e três meses de terapia. Os pacientes que receberam um peptídeo gliadina além de um RTKI exibiram uma massa de tumor primária significativamente reduzida nos pulmões em comparação com os pacientes que receberam um RTKI sozinho. Pacientes que recebem a terapia de combinação também exibem significativamente menos tumores metastáticos em comparação com os pacientes do grupo controle. O ensaio clínico demonstra o valor de incluir a administração de um peptídeo gliadina em terapia de combinação para tratar o câncer. EXEMPLO 4

[0041] Para os Exemplos 4-8, as linhagens celulares de câncer humano A549, NCI-H1975, e PANC-1 foram obtidas da ATCC e mantidas em meio RPMI 1640 (Life Technologies, Inc., Grand Island, NY) contendo 10% de soro fetal bovino, 2 mM de L-glutamina e solução de antibiótico-antimicótico a 1% (10 unidades/μL de penicilina, 10 μg/μL de estreptomicina e 25μg/ml de anfotericina B). As células foram mantidas a 37°C em atmosfera umidificada de 5% de CO2 e cresceram até chegar a uma confluência de 90%. As células foram então lavadas, tripsinizadas e contadas utilizando um contador Coulter. (Beckman, Brea, CA).

[0042] Células A549 NSCLC foram mantidas e cultivadas como descrito acima. Peptídeo da alfa-gliadina p31-43 (Anaspec Inc., Fremont, CA), gefitinib (LC Laboratories, Woburn, MA), e erlotinib (LC Laboratories) foram usados para tratar as células. As células foram plaqueadas a uma densidade de 10.000 células/poço em placas de 24 poços de cultura de células e as células foram deixadas aderir por 24 horas. As células foram então incubadas durante 72 horas com a seguinte: (1) veículo (DMSO/água); (2) 5 μg/mL, 20 μg/mL ou 70 μg/mL de peptídeo alfa-gliadina p31-43; (3) 1 μM gefitinib em DMSO/água; (4) 1 μM erlotinib; (5) 5 μg/mL, 20 μg/mL, ou 70 μg/mL de peptídeo p31-43 alfa-gliadina e gefitinib 1 μM em DMSO/água; ou (6) 5 μg/mL, 20 μg/mL, ou 70 μg/mL de peptídeo p31-43 alfa-gliadina e erlotinib 1 μM em DMSO/água. Todos os experimentos foram realizados em sextuplicata. Para a terapia de combinação utilizando peptídeo alfa-gliadina p31-43 e gefitinib/erlotinib, os dois compostos foram administrados às células simultaneamente. Após 72 horas de tratamento a inibição do crescimento foi avaliada por brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5- difeniltetrazólio (MTT) (Roche Diagnostics Corporation, Indianapolis, IN) de acordo com as instruções do fabricante. A absorbância a 570 nm foi medida utilizando um leitor de placas (BioTek, Winooski, VT). A Tabela 1 mostra a absorbância média a 570 nm e a percentagem de inibição de crescimento para células A549 tratadas com gliadina e RTKI em comparação com as células tratadas com o veículo. TABELA 1: Efeitos de peptídeo da alfa-gliadina sozinho ou em combinação com gefitinib ou erlotinib na proliferação de células A549 p31-43 em seguida ao tratamento de 72 horas

[0043] As células A549 tratadas com peptídeo alfa-gliadina p31-43 sozinho a uma dose de 20 μg/mL ou 70 μg/mL mostrou inibição do crescimento comparável em comparação com as células tratadas com gefitinib ou erlotinib sozinho. O tratamento com uma combinação de peptídeo alfa-gliadina p31-43 e gefitinib ou erlotinib resultou no aumento da inibição do crescimento em relação ao peptídeo da alfa-gliadina p3143 ou cada RTKI sozinho. A coadministração de peptídeo alfa-gliadina p31-43 e gefitinib ou erlotinib surpreendentemente teve um efeito sinérgico na inibição do crescimento, com a terapia de combinação resultando em uma maior inibição do crescimento do que a soma dos efeitos inibidores do crescimento individuais do peptídeo alfa-gliadina p31-43 e RTKI.

[0044] No geral, os resultados demonstraram que um peptídeo gliadina administrado sozinho foi um tratamento anticancerígeno eficaz e inibiu o crescimento de células de câncer, bem como um agente quimioterápico de referência. A terapia de combinação utilizando um peptídeo gliadina e um RTKI vantajosamente resultou no aumento da inibição do crescimento de células cancerígenas em comparação com qualquer peptídeo gliadina ou RTKI sozinho e também produziu um efeito antitumoral sinérgico surpreendente e inesperado.

EXEMPLO 5

[0045] Células NCI-H1975 NSCLC foram mantidas e cultivadas como descrito no Exemplo 4. Células NCI-H1975 abrigam uma mutação ativadora em EGFR (L858R) e uma mutação adicional (T790M), que confere resistência ao TKIs de EGFR, incluindo erlotinib e gefitinib. Peptídeo gliadina-alfa p31-43, gefitinib, erlotinib e foram utilizados para tratar as células. As células foram plaqueadas a uma densidade de 10.000 células/poço em placas de 24 poços de cultura de células e as células deixadas aderirem por 24 horas. As células foram então incubadas durante 72 horas com o seguinte: (1) veículo (DMSO/água); (2) 5 μg/mL, 20 μg/mL ou 70 μg/mL de peptídeo alfa-gliadina p31-43 em DMSO/água; (3) 1 μM gefitinib em DMSO/água; (4) 1 μM erlotinib em DMSO/água; (5) 5 μg/mL, 20 μg/mL, ou 70 μg/mL de peptídeo da alfa- gliadina p31-43 em DMSO/água ou (6) 5 μg/mL, 20 μg/mL, ou 70 μg/mL de peptídeo alfa-gliadina p31-43 e 1 μM erlotinib em DMSO/água. Todos os experimentos foram realizados em sextuplicata. Para a terapia de combinação utilizando peptídeo alfa-gliadina p31-43 e gefitinib/erlotinib, os dois compostos foram administrados às células simultaneamente. Após 72 horas de tratamento, a inibição do crescimento foi avaliada pelo ensaio de MTT de acordo com as instruções do fabricante. A absorbância a 570 nm foi medida utilizando um leitor de placas. A Tabela 2 mostra a média de absorbância a 570 nm e a percentagem de inibição de crescimento para as células NCI-H1975 tratados com gliadina e RTKI em comparação com as células tratadas com o veículo. TABELA 2: Efeitos de peptídeo alfa-gliadina p31-43 sozinho ou em combinação com gefitinib ou erlotinib na proliferação celular de NCI-H1975 p31-43 em seguida ao tratamento de 72 horas

[0046] Células NCI-H1975 tratadas com peptídeo alfa-gliadina p3143 sozinho exibiram inibição significativa do crescimento em comparação com células de controle. A inibição do crescimento em células tratadas com peptídeo alfa-gliadina p31-43 sozinho foi maior do que nas células tratadas com gefitinib ou erlotinib sozinhos. O tratamento com uma combinação de peptídeo alfa-gliadina p31-43 e gefitinib ou erlotinib alcançou uma inibição significativa de crescimento das células cancerígenas em todas as concentrações testadas. Além disso, a terapia de combinação resultou em um aumento da inibição do crescimento em relação a peptídeo da alfa-gliadina p31-43 ou cada RTKI sozinho. Como mostrado na Tabela 2, a coadministração de peptídeo alfa-gliadina p31-43 e gefitinib ou erlotinib surpreendentemente foi capaz de ter um efeito sinérgico na inibição do crescimento, com a terapia de combinação resultando em uma maior inibição do crescimento do que a soma dos efeitos inibitórios de crescimento individuais do peptídeo da alfa-gliadina p31-43 e RTKI.

[0047] No geral, os resultados demonstraram que um peptídeo gliadina administrado sozinho foi eficaz em inibir significativamente o crescimento de células cancerígenas resistentes a RTKI e alcançou uma maior eficácia terapêutica do que um RTKI referência. A terapia de combinação utilizando um peptídeo gliadina e um RTKI vantajosamente resultou no aumento significativo de inibição de crescimento de células cancerígenas em comparação com quer seja o peptídeo gliadina ou RTKI sozinho e também produziu um efeito antitumoral sinérgico surpreendente e inesperado.

EXEMPLO 6

[0048] Células de carcinoma pancreático PANC-1 foram mantidas e cultivadas como descrito no Exemplo 4. Peptídeo alfa-gliadina p31-43, gefitinib, erlotinib e foram utilizados para tratar as células. As células foram plaqueadas a uma densidade de 10.000 células/poço em placas de 24 poços de cultura de células e as células deixadas aderir por 24 horas. As células foram então incubadas durante 72 horas com o seguinte: (1)veículo (DMSO/água); (2) 5 μg/mL, 20 μg/mL ou 70 μg/mL de peptídeo alfa-gliadina p31-43 em DMSO/água; (3) 1 μM gefitinib em DMSO/água; (4) 1 μM erlotinib em DMSO/água; (5) 5 μg/mL, 20 μg/mL em DMSO/água, ou 70 μg/mL de peptídeo da alfa-gliadina p31-43 e 1 μM erlotinib em DMSO/água ou (6) 5 μg/mL, 20 μg/mL, ou 70 μg/mL de peptídeo alfa-gliadina p31-43 e 1 μM erlotinib em DMSO/água. Todos os experimentos foram realizados em sextuplicata. Para a terapia de combinação utilizando peptídeo alfa-gliadina p31-43 e gefitinib/erlotinib, os dois compostos foram administrados às células simultaneamente. Após 72 horas de tratamento, a inibição do crescimento foi avaliada pelo ensaio de MTT de acordo com as instruções do fabricante. A absorbância a 570 nm foi medida utilizando um leitor de placas. A Tabela 3 mostra a absorbância média a 570 nm e a percentagem de inibição de crescimento para PANC-1 tratadas com gliadina e RTKI em comparação com as células tratadas com o veículo. TABELA 3: Efeitos de peptídeo alfa-gliadina p31-43 sozinho ou em combinação com gefitinib ou erlotinib em proliferação celular de PANC-1 em seguida ao tratamento de 72 horas

[0049] As células PANC-1 tratadas com peptídeo alfa-gliadina p3143 sozinho exibiram uma maior inibição de crescimento do que células tratadas com gefitinib ou erlotinib sozinho. O tratamento com uma combinação de peptídeo alfa-gliadina p31-43 e gefitinib ou erlotinib alcançou uma inibição significativa do crescimento das células cancerígenas. Além disso, a terapia de combinação resultou em aumento significativo em comparação com a inibição do crescimento de peptídeo da alfa-gliadina p31-43 ou cada RTKI sozinho. Como mostrado na Tabela 3, a coadministração de peptídeo alfa-gliadina p31-43 e gefitinib ou erlotinib surpreendentemente poderia ter um efeito sinérgico na inibição do crescimento, com a terapia de combinação resultando em uma maior inibição do crescimento do que a soma dos efeitos inibidores de crescimento individuais do peptídeo da alfa-gliadina p31-43 e o RTKI.

[0050] No geral, os resultados demonstraram que um peptídeo gliadina administrado sozinho foi eficaz na inibição do crescimento de células cancerígenas resistentes a RTKI e alcançou uma maior eficácia terapêutica do que um RTKI referência. A terapia de combinação utilizando um peptídeo gliadina e um RTKI vantajosamente resultou no aumento significativo de inibição de crescimento de células cancerígenas em comparação com quer seja o peptídeo gliadina ou RTKI sozinho e também produziu um efeito antitumoral sinérgico surpreendente e inesperado. Exemplos 4 a 6 demonstraram que a coadministração de um peptídeo gliadina e de um agente quimioterápico forneceu um efeito terapêutico vantajoso.

EXEMPLO 7

[0051] Células de carcinoma pancreático humano PANC-1 (ATCC) foram mantidas e cultivadas como descrito no Exemplo 4. Peptídeo alfa- gliadina p31-43 e 5-fluorouracila (5-FU) (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA) foram usados para tratar as células. As células (passagem 27) foram plaqueadas a uma densidade de 1 x 104 células/poço em placas de 24 poços de cultura de células e as células deixadas aderir por 24 horas. As células foram então incubadas com veículo (água) ou 5-FU em concentrações crescentes durante 72 horas. Todos os experimentos foram realizados em triplicata. Após a incubação com 5-FU em concentrações que variam de 0 μM a 400 μM, as células foram descoladas com tripsina e contadas. A Tabela 4 mostra a média do número de células e a percentagem de inibição do crescimento em seguida ao tratamento com 5-FU. Tabela 4: Efeitos antiproliferativos de 5-FU sobre células PANC-1 em seguida a 72 horas de tratamento

[0052] Células (Passagem 30) foram, em seguida, plaqueadas a uma densidade de 5 x 103 células/poço em placas de 24 poços de cultura de células e as células deixadas aderir por 24 horas. As células foram incubadas com o seguinte: (1) veículo (DMSO/água); (2) 6,25 μM 5-FU; (3) 70 μg/mL de peptídeo alfa-gliadina p31-43; (4) 6,25 μM 5-FU e 70 μg /ml peptídeo alfa-gliadina p31-43 (alta combinação); ou (5) 3,1 μM 5-FU e 35 μg /ml peptídeo alfa-gliadina p31-43 (baixa combinação). Todos os tratamentos foram realizados em triplicata. Para a terapia de combinação utilizando peptídeo alfa-gliadina p31-43 e 5-FU, os dois compostos foram administrados às células simultaneamente. O meio foi renovado com os respectivos tratamentos a cada 72 horas. Após 14 dias de tratamento, as células foram tripsinizadas e contadas. A Tabela 5 mostra o número de células e a percentagem de inibição do crescimento em seguida ao tratamento significativo. TABELA 5: Efeitos de 5-FU sozinho ou em combinação com peptídeo alfa-gliadina p31-43 sobre a proliferação celular de PANC- 1 seguindo um regime de tratamento de 14 dias

[0053] A fim de examinar os efeitos do peptídeo alfa-gliadina p31- 43 em células PANC-1 expostas a 5-FU por um prolongado período de tempo (14 dias), um experimento foi realizado sobre a sobrevivência, isto é, a população de células resistentes (4%) do experimento anterior. Resumidamente, após a contagem das células viáveis no dia 14 do tratamento, as células sobreviventes foram plaqueadas novamente a uma densidade de 5000 células por poço. No dia seguinte, as células foram tratadas com veículo ou 100 μg/mL ou 200 μg/mL de peptídeo alfa-gliadina p31-43. Meios contendo os respectivos tratamentos foram renovados no dia 3 e 6. No dia 7, as células foram tripsinizadas e contadas. A Tabela 6 mostra a média do número de células e a percentagem de inibição do crescimento em seguida ao tratamento com o peptídeo alfa-gliadina p31-43. TABELA 6: Efeitos de peptídeo alfa-gliadina p31-43 sobre a sobrevivência da população celular de células PANC-1 resistentes a 5-FU

[0054] O agente quimioterápico 5-FU, que danifica o DNA, suprime a proliferação das células de câncer pancreático PANC-1. A droga inibiu o crescimento de células PANC-1 em 96% após tratamento com 6,25 μM, durante 14 dias. A coadministração de 5-FU e um peptídeo gliadina alcançou inibição significativa do crescimento em comparação com células de controle. Os resultados mostrados nas Tabelas 3 e 5 sugerem que a eficácia terapêutica da coadministração de um peptídeo gliadina e de um agente quimioterápico em comparação com qualquer um sozinho pode ser afetada pelo sítio de ação (núcleo ou citoplasma) do agente quimioterápico.

[0055] Surpreendentemente, a administração de monoterapia de um peptídeo gliadina sozinho foi eficaz para matar as células cancerígenas que o tratamento prévio com 5-FU não eliminou. Em seguida ao tratamento com 5-FU, uma população de células sobreviventes 5-FU-resistentes no montante de 4% da população inicial permaneceu viável. Quando a população de células sobrevivente das células PANC-1 tratadas com 5-FU foi exposta ao peptídeo alfa-gliadina p31-43 (100 μg/mL ou 200 μg/mL) durante 7 dias adicionais, a proliferação celular foi significativamente suprimida. A capacidade do peptídeo gliadina de matar eficazmente as células resistentes a um agente quimioterápico potente, como 5-FU, foi surpreendente e inesperada.

EXEMPLO 8

[0056] As células A549 foram mantidas e cultivadas como descrito no Exemplo 4. Peptídeo alfa-gliadina p31-43 e cisplatina (Biovision, Milpitas, CA) foram utilizados para tratar as células. As células (passagem 32) foram plaqueadas a uma densidade de 1 x 104 células/poço em placas de 24 poços de cultura de células e as células deixadas aderir por 24 horas. As células foram então incubadas com veículo (Cloreto de sódio a 0,9%) ou cisplatina em concentrações crescentes durante 72 horas. Todos os experimentos foram realizados em triplicata. Após incubação com cisplatina em concentrações que variam de 0 μM a 6,6 μM as células foram descoladas com tripsina e contadas. A Tabela 7 mostra a média do número de células e a percentagem de inibição do crescimento após tratamento com cisplatina. TABELA 7: Efeitos antiproliferativos da cisplatina em células A549 em seguida ao tratamento de 72 horas

[0057] Células (Passagem 34) foram, em seguida, plaqueadas a uma densidade de 5 x 103 células/poço em placas de 24 poços de cultura de células e as células deixadas aderir por 24 horas. As células foram incubadas com o seguinte: (1) veículo (DMSO/água); (2) 3,3 μM cisplatina; (3) 70 μg/mL peptídeo alfa-gliadina p31-43; (4) 3,3 μM cisplatina e 70 μg/mL peptídeo alfa-gliadina p31-43 (alta combinação); ou (5) 1,65 μM cisplatina e 35 μg/mL peptídeo alfa-gliadina p31-43 (baixa combinação). Todos os tratamentos foram realizados em triplicata. Para a terapia de combinação utilizando peptídeo alfa-gliadina p31-43 e a cisplatina, os dois compostos foram administrados às células simultaneamente. O meio foi renovado com respectivos tratamentos a cada 72 horas. Após 14 dias de tratamento, as células foram tripsinizadas e contadas. A Tabela 8 mostra o número de células e a percentagem de inibição do crescimento em seguida ao tratamento. TABELA 8: Efeitos da cisplatina sozinha ou em combinação com peptídeo alfa-gliadina p31-43 sobre a proliferação de células A549 em seguida a um regime de tratamento de 14 dias

[0058] A fim de examinar os efeitos do peptídeo alfa-gliadina p31 43 em células A549 expostas a cisplatina por um prolongado período de tempo (14 dias), um segundo experimento foi conduzido sobre a sobrevivência, isto é, a população de células resistentes (2%) a partir do experimento anterior. Resumidamente, após a contagem das células viáveis no dia 14 do tratamento, as células sobreviventes foram plaqueadas novamente a uma densidade de 5000 células por poço. No dia seguinte, as células foram tratadas com veículo ou 100 μg/mL ou 200 μg/mL de peptídeo alfa-gliadina p31-43. Meios contendo os respectivos tratamentos foram renovados no dia 3 e 6. No dia 7, as células foram tripsinizadas e contadas. A Tabela 9 mostra a média do número de células e inibição do crescimento em seguida ao tratamento com peptídeo alfa-gliadina p31-43. TABELA 9: Efeitos do peptídeo alfa-gliadina p31-43 na sobrevivência da população celular de células resistentes à cisplatina A549

[0059] O agente quimioterápico cisplatina que danifica o DNA e caracteriza-se como um agente de alquilação, suprimiu a proliferação de células de câncer do pulmão A549. A cisplatina inibiu a proliferação de células A549 em 98% após tratamento com 3,3 μM por 14 dias. A coadministração de cisplatina e um peptídeo gliadina alcançou uma inibição significativa do crescimento em comparação com células de controle. Os resultados mostrados nas Tabelas 3 e 8 sugeriram que a eficácia terapêutica de coadministrar um peptídeo gliadina e um agente quimioterápico em comparação com qualquer um sozinho pode ser afetada pelo sítio de ação (núcleo ou citoplasma) do agente quimioterápico.

[0060] Surpreendentemente, a administração de um peptídeo gliadina sozinho foi eficaz para matar as células cancerígenas que o tratamento prévio com cisplatina não eliminou. Seguindo o tratamento com cisplatina, uma população de células sobreviventes resistentes à cisplatina no montante de 2% da população inicial permaneceu viável. Quando a população de células sobrevivente a partir de células A549 tratadas com cisplatina foi exposta ao peptídeo alfa-gliadina p31-43 (100 μg/mL ou 200 μg/mL) durante 7 dias adicionais, a proliferação celular foi significativamente suprimida. A capacidade do peptídeo gliadina de matar eficazmente as células resistentes a um agente quimioterápico potente, tais como a cisplatina foi surpreendente e inesperada.

[0061] No geral, os resultados dos Exemplos 7 e 8 demonstraram que a coadministração de um peptídeo gliadina e de um agente quimioterápico foi eficaz em inibir significativamente o crescimento de células cancerígenas. Surpreendentemente, a administração de um peptídeo gliadina sozinho alcançou supressão significativa de células cancerígenas que sobreviveram a um tratamento prolongado com um potente agente quimioterápico. A capacidade inesperada e surpreendente de um peptídeo gliadina de modo vantajoso e eficazmente matar as células cancerígenas mais resistentes, por exemplo, CSC, indicou que o peptídeo gliadina pode ser utilizado em monoterapia ou terapia de combinação para inibir o crescimento tumoral e prevenir a recidiva do câncer. A administração de um peptídeo gliadina foi, portanto, eficaz para diminuir ou impedir a resistência do câncer ao agente quimioterápico.

EXEMPLO 9

[0062] A toxicidade do peptídeo alfa-gliadina p31-43 em animais foi avaliada. Camundongos BALB/c fêmeas de cinco a seis semanas de idade foram tratados com veículo (100 μL de DMSO/solução salina) administradas por via subcutânea, uma vez ao dia, durante cinco dias (Grupo 1) ou 200 μg de peptídeo alfa-gliadina p31-43 no veículo administrado por via subcutânea uma vez por dia, durante cinco dias (Grupo 2). Para preparar a solução de gliadina, 70 μL de DMSO estéril foram adicionados a 1 mg de peptídeo alfa-gliadina p31-43 e misturados usando Vortex para dissolver o peptídeo. Após o peptídeo ser dissolvido, 430 mL de solução estéril de cloreto de sódio a 0,9% foram adicionados e misturados usando Vortex para criar uma solução 1,000 μg/500 μL de peptídeo alfa-gliadina p31-43.

[0063] A toxicidade foi avaliada utilizando medições de peso diários e avaliações de comportamento. O peptídeo alfa-gliadina p31-43 não foi associado a nenhum óbito relacionado ao tratamento. No final do estudo, a média dos pesos corporais (± SE) foram 19,8 ± 0,4 g para o Grupo 1 (n = 5) e 20,0 ± 0,3 gramas para o Grupo 2 (n = 5). Nenhuma mudança foi observada no comportamento dos animais tratados com peptídeo alfa-gliadina p31-43, em comparação com camundongos controle. Peptídeo alfa-gliadina p31-43, por conseguinte, foi tolerado em um nível de dosagem de 10 mg/kg/dia, sem toxicidade aparente.

EXEMPLO 10.

[0064] A capacidade de alfa-gliadina p31-43 para induzir apoptose em células de câncer foi avaliada. As células A549 foram mantidas e cultivadas em meio RPMI 1640 contendo 10% de soro fetal bovino, 2 mM de L-glutamina e solução de antibiótico-antimicótico a 1%. As células foram cultivadas na presença de 5% de CO2 a 37°C em uma incubadora. A indução de apoptose após o tratamento com peptídeo alfa-gliadina sozinho ou em combinação com gefitinib p31-43 foi determinada usando ensaio de marcação de nick-extremidade de dUTP desoxinucleotidil transferase (TUNEL).

[0065] Resumidamente, as células A549 (1 x 105) foram plaqueadas em lâminas e deixadas aderir durante a noite. As células foram incubadas durante 72 horas com o seguinte: (1) veículo controle; (2) gefitinib 1 μM; (3) 100 μg/mL, 200 μg/mL, ou 500 μg/mL de peptídeo alfa-gliadina p31-43; (4) 100 μg/mL, 200 μg/mL, ou 500 μg/mL de peptídeo p31-43 alfa-gliadina e 1 μM gefitinib. Para a terapia de combinação utilizando peptídeo alfa-gliadina p31-43 e gefitinib, os dois compostos foram administrados às células simultaneamente. Após o tratamento de 72 horas, as células foram fixadas com formaldeído a 4% em PBS (pH 7,4) durante 25 minutos em temperatura ambiente, depois lavadas duas vezes durante 5 minutos em PBS, permeabilizadas em 0,2% de solução Triton X-100 em PBS durante 5 minutos em temperatura ambiente, e, finalmente, lavadas duas vezes durante 5 minutos em PBS. A apoptose foi medida utilizando o DeadEndTM Colorimetric TUNEL System (Promega, Madison, WI) de acordo com as instruções do fabricante. No final do ensaio, as células foram montadas e observadas ao microscópio. Coloração de células apoptóticas foi observada para células tratadas com alfa-gliadina e/ou gefitinib, e a percentagem de células que eram apoptóticas foi determinada por contagem do número de células marcadas dentro de uma amostra representativa. A Tabela 10 mostra a percentagem de células que eram apoptóticas após cada tratamento e o p- valor determinado usando análise estatística dos dados para a gliadina e células tratadas com gefitinib em comparação com as células de controle. TABELA 10: Efeito de gefitinib sozinho ou em combinação com peptídeo alfa-gliadina p31-43 na indução de apoptose

[0066] Uma percentagem significativamente mais elevada de células tratadas com peptídeo alfa-gliadina p31-43 sozinho foram apoptóticas, comparativamente com as células tratadas com veículo ou gefitinib sozinho. Além disso, significativamente mais células foram apoptóticas após a terapia de combinação utilizando peptídeo alfa- gliadina p31-43 e gefitinib, em comparação com as células tratadas com veículo ou gefitinib sozinho. O tratamento mais eficaz para a indução de apoptose foi a combinação de 500 μg/mL de peptídeo alfa-gliadina p3143 e gefitinib. No geral, os resultados demonstraram que peptídeo alfa- gliadina isolado ou em combinação com gefitinib foi um potente indutor de apoptose em células de câncer de pulmão humano.

EXEMPLO 11.

[0067] A atividade de gefitinib sozinho ou em combinação com peptídeo alfa-gliadina p31-43 foi avaliada usando um modelo de xenoenxerto de câncer A549 de pulmão humano. Camundongos nude fêmeas de seis semanas de idade (Harlan Laboratories, Indianapolis, IN) foram mantidos em quarentena durante 3 dias e alojados 5 camundongos por gaiola, com um ciclo de luz-escuro de 12 horas, e a uma umidade relativa de 50%. Água potável e alimentação foram fornecidas aos animais ad libitum. Todos os animais foram alojados sob condições isentas de agentes patogênicos. No dia 4, 5 x 106 células A549 em 100 μL de meio RPMI 1640 foram injetados via subcutânea no flanco direito dos camundongos. A partir de 24 horas pós-inoculação, os animais foram doseados uma vez por dia durante 14 dias como se segue: Grupo 1 - veículo (DMSO 2% em solução salina) administrado por via intravenosa; Grupo 2 - 150 mg/kg de gefitinib administrado por gavagem; e Grupo 3 - 150 mg/kg de gefitinib administrado por gavagem e 200 μg de alfa-gliadina p31-43 administrado por via intravenosa. Para a terapia de combinação utilizando peptídeo alfa-gliadina p31-43 e gefitinib, os dois compostos foram administrados às células simultaneamente. Os animais foram monitorados durante duas semanas após o período de tratamento de 14 dias. As medições do tumor foram iniciadas logo que o tumor formou uma massa palpável e medido duas vezes por semana. A Tabela 11 mostra a média dos pesos corporais dos grupos de tratamento durante o curso do estudo. TABELA 11: Efeito de gefitinib isolado ou em combinação com peptídeo alfa-gliadina p31-43 em peso corporal

[0068] Todos os tratamentos foram bem tolerados e não associados com mortes relacionadas à droga. Nenhuma perda de peso corporal significativa foi observada para qualquer dos grupos de tratamento. A média dos pesos corporais em gramas (± SE) no término foi: Grupo 1 = 22,80 ± 0,88, Grupo 2 = 22,50 ± 0,44, e Grupo 3 = 22,92 ± 0,44. A Tabela 12 mostra a média dos volumes do tumor para os grupos de tratamento durante o curso do estudo. TABELA 12: Efeito de gefitinib sozinho ou em combinação com o peptídeo alfa-gliadina p31-43 no volume tumoral

[0069] No dia do término do estudo (dia 28), a média de volumes de tumor em milímetros cúbicos (± S.E.) foi: Grupo 1 = 402,86 ± 95,4, Grupo 2 = 239,25 ± 32,78, e Grupo 3 = 145,46 ± 19374. Tabela 13 mostra a média de volumes de tumor para os grupos de tratamento durante o curso do estudo. TABELA 13 Efeito de gefitinib sozinho ou em combinação com o peptídeo da alfa-gliadina p31-43 sobre o volume tumoral Inibição média do crescimento percentual de tumor Período de Dosaç em Período de recuperação

[0070] Os valores da percentagem média de inibição do crescimento do tumor foram 40,6% para o Grupo 2 e 63,9% para o Grupo 3. Os tempos de duplicação do tumor foram 17,21 dias para o Grupo 1, 24,48 dias para o grupo 2 e 22,89 dias para o grupo 3. A relação de inibição do crescimento do tumor T/C foi de 57,16 para o Grupo 2 e Grupo 3 para 44,06.

[0071] No geral, os resultados demonstraram que a terapia de combinação utilizando gefitinib e um peptídeo gliadina produziu um efeito anticancerígeno superior em comparação com o gefitinib sozinho. A terapia de combinação foi bem tolerada e não tóxica para os animais, mas ainda foi eficaz em reduzir a carga do tumor. O volume médio do tumor em seguida à terapia de combinação foi reduzido em mais de 60% em comparação com animais controle. O volume médio do tumor foi também significativamente menor (cerca de 40%) depois da terapia de combinação em comparação com o volume médio do tumor após o tratamento com gefitinib sozinho. Além disso, a terapia de combinação exibiu eficácia terapêutica significativamente mais rapidamente do que o gefitinib sozinho, alcançando cerca de 50% de inibição do crescimento do tumor no prazo de uma semana e mantendo mais do que 60% de inibição de crescimento por duas semanas após a cessação do tratamento.

[0072] Os exemplos anteriores são fornecidos para ilustrar adicionalmente a invenção sem serem limitantes. Os dados demonstram que um peptídeo gliadina foi um agente anticancerígeno eficaz quando utilizado sozinho e foi capaz de inibir o crescimento e induzir apoptose em células cancerígenas resistentes a drogas derivadas de uma variedade de diferentes tipos de câncer. Um peptídeo gliadina administrado sozinho foi inesperadamente eficaz para matar mesmo as células cancerígenas mais resistentes que sobreviveram a um tratamento prolongado com um potente agente quimioterápico. A coadministração de um peptídeo gliadina e de um agente quimioterápico foi demonstrada inibir significativamente o crescimento de células cancerígenas, para certo número de agentes quimioterápicos. A coadministração de um peptídeo gliadina com uma RTKI resultou em uma maior eficácia terapêutica do que o peptídeo gliadina ou RTKI sozinho, e efeitos sinérgicos foram surpreendentemente alcançados. Apesar de exibir efeitos antitumorais potentes in vivo e a capacidade para reduzir dramaticamente o volume do tumor e o crescimento, a administração de um peptídeo gliadina não causou toxicidade global.

[0073] Em vista da evidência descrita nos Exemplos acima, a utilização de um peptídeo gliadina, sozinho ou em combinação com um agente quimioterápico fornece uma terapia anticancerígena inesperada e surpreendentemente eficaz.

[0074] Embora modalidades particulares da presente invenção tenham sido ilustradas e descritas, será óbvio para os especialistas na técnica que várias outras alterações e modificações podem ser feitas sem se afastar do espírito e escopo da invenção. Por conseguinte, pretende-se abranger nas reivindicações todas estas alterações e modificações que estão dentro do escopo da presente invenção.

Claims (17)

1. Uso do peptídeo gliadina, caracterizado pelo fato de que é para preparação de uma composição para o tratamento de câncer em um paciente, em que o câncer é câncer pulmonar de células não pequenas.

2. Uso do peptídeo gliadina, caracterizado pelo fato de que é para preparação de uma composição para o tratamento de câncer em um paciente, em que o câncer é câncer pancreático, e em que o peptídeo de gliadina é coadministrado com pelo menos um agente quimioterápico selecionado do grupo que consiste em azacitidina, axatioprina, bevacizumabe, bleomicina, capecitabina, carboplatina, chlorabucil, cisplatina, ciclofosfamida, citarabina, daunorubicina, docetaxel, doxifluridina, doxorrubicina, epirrubicina, etoposido, fluorouracilo, gemcitabina, herceptina, idarubicina, mecloretamina, melfalano, mercaptopurina, metotrexato, mitoxantrona, oxaliplatina, paclitaxel, tafluposide, teniposido, tioguanina, ácido retinóico, valrubicina, vinblastina, vincristina, vindesina, vinorelbina, inibidores de receptor de tirosina quinase e combinações dos mesmos, e/ou em que o peptídeo de gliadina é coadministrado com pelo menos um agente quimioterápico em que pelo menos um agente quimioterápico é um inibidor de receptor de tirosina quinase, em que o inibidor do receptor de tirosina quinase é preferencialmente um inibidor do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), em particular gefitinibe ou erlotinibe.

3. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o peptídeo gliadina é coadministrado com pelo menos um agente quimioterápico.

4. Uso, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o agente quimioterápico é selecionado do grupo que consiste em azacitidina, axatioprina, bevacizumabe, bleomicina, capecitabina, carboplatina, clorabucil, cisplatina, ciclofosfamida, citarabina, daunorrubicina, docetaxel, doxifluridicina, doxifluridicina, doxifluridicina, , fluorouracil, gencitabina, herceptina, idarrubicina, mecloretamina, melfalano, mercaptopurina, metotrexato, mitoxantrona, oxaliplatina, paclitaxel, tafluposídeo, teniposídeo, tioguanina, ácido retinóico, valrubicina, tirosina, vinblastina, vinblastina, inibidores de vinblastina, vinblastina, vinblastina, inibidores de receptor de vinblastina, vinblastina, vinblastina, vinblastina, inibidores do receptor de valrubicina, valrubicina, vinblastina.

5. Uso, de acordo com a reivindicação 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um agente quimioterápico é um inibidor do receptor da tirosina quinase, em que o inibidor do receptor de tirosina quinase é de preferência um inibidor do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), em particular gefitinib ou erlotinib.

6. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o peptídeo gliadina é um peptídeo alfa- gliadina ou derivado ou fragmento do mesmo, em que o peptídeo alfa- gliadina compreende pelo menos o peptídeo alfa-gliadina p31-43 e/ou em que o peptídeo gliadina é um peptídeo alfa-gliadina selecionado do grupo que consiste em peptídeo alfa-gliadina p31-55, peptídeo alfa- gliadina p31-49, peptídeo alfa-gliadina p31-43 e derivados e fragmentos dos mesmos.

7. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o peptídeo gliadina compreende a SEQ ID NO: 1.

8. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o peptídeo gliadina compreende SEQ ID NO: 2.

9. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que a composição e pelo menos um agente quimioterápico são coadministrados em quantidades tais que a coadministração seja eficaz para diminuir ou prevenir a resistência do câncer ao agente quimioterápico.

10. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que a composição e pelo menos um agente quimioterápico são coadministrados em quantidades tais que a coadministração seja eficaz para aumentar a eficácia do agente quimioterápico.

11. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o agente quimioterápico é administrado antes da composição que compreende o peptídeo gliadina.

12. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o paciente é humano.

13. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o paciente não tem mutações no gene EGFR conhecidas por aumentar a sensibilidade aos inibidores de EGFR.

14. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o paciente não tem doença celíaca.

15. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 14, caracterizado pelo fato de que a gliadina é administrada como monoterapia, em que a gliadina é preferencialmente administrada como monoterapia antes do tratamento usando um agente quimioterápico ou como monoterapia após o tratamento usando um agente quimioterápico.

16. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que a gliadina é administrada como monoterapia antes e após o tratamento usando um agente quimioterápico.

17. Uso do peptídeo gliadina, caracterizado pelo fato de que é para preparação de uma composição para o tratamento de câncer em um paciente, em que o câncer é câncer pancreático.