BR112015002321A2

BR112015002321A2 - uso de antitrombina recombinante

Info

Publication number: BR112015002321A2
Application number: BR112015002321A
Authority: BR
Inventors: Frieling Johan; Lowry Simon
Original assignee: Lfb Usa Inc
Priority date: 2012-08-03
Filing date: 2013-08-02
Publication date: 2019-10-22
Also published as: IL236776A0; AU2013296240B2; AU2013296240A1; EP2879697A1; US20140194360A1; MX2015001508A; CN104884080A; CA2879763A1; JP2015524823A; KR20150039201A; JP6389172B2; AR091977A1; US9511087B2; EP2879697A4; WO2014022748A1; TW201425332A; CA2879763C

Abstract

1 / 1 resumo âmãtodo para suprimir coagulaãão de sangue e/ou prevenir hemorragia em um indivãduoâ em um aspecto, a descriã§ã£o provãª mã©todos de suprimir coagulaã§ã£o de sangue e/ou prevenir hemorragia em um indivãduo tendo oxigenaã§ã£o por membrana extracorpã³rea compreendendo administrar antitrombina. em algumas formas de realizaã§ã£o, a antitrombina usada nos mã©todos descritos aqui ã© atrynâ®.

Description

“MÉTODO PARA SUPRIMIR COAGULAÇÃO DE SANGUE E/OU PREVENIR HEMORRAGIA EM UM INDIVÍDUO”

PEDIDOS RELACIONADOS [001] Este pedido reivindica o benefício sob 35 USC § 119 do pedido provisório dos Estados Unidos 61/679.345, depositado em 3 de agosto de 2012, cujos conteúdos completos são aqui incorporados por referência.

CAMPO DA INVENÇÃO [002] A descrição refere-se a métodos de oxigenação por membrana extracorpórea (ECMO).

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO [003] Oxigenação por membrana extracorpórea (ECMO) fornece oxigênio de suporte cardíaco e respiratório para os pacientes cujos pulmões e coração não podem executar esta função. ECMO requer uma gestão cuidadosa do fluxo de sangue e anticoagulação. Novos métodos que permitam uma melhor regulação do fluxo sanguíneo, prevenção da coagulação e hemostasia melhorada durante ECMO são desejados.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [004] Em um aspecto, a invenção provê métodos de oxigenação por membrana extracorpórea. Em uma forma de realização, um método de suprimir coagulação de sangue e/ou prevenir hemorragia em um indivíduo tendo oxigenação por membrana extracorpórea, é provido o método compreendendo a administração a um indivíduo tendo oxigenação por membrana extracorpórea de uma quantidade terapeuticamente eficaz de antitrombina para suprimir a coagulação de sangue e/ou prevenir a hemorragia. Em uma forma de realização, a quantidade terapeuticamente eficaz é eficaz para suprimir a coagulação de sangue e impedir hemorragia. Em outra forma de realização, a quantidade terapeuticamente eficaz é também eficaz para proporcionar efeitos antiinflamatórios, tais como supressão de inflamação sistêmica.

[005] Em outra forma de realização, a antitrombina tem um padrão de

2/24 glicosilação de manose elevado. Em outra forma de realização, a antitrombina tem um padrão de glicosilação de fucose elevado. Em outra forma de realização, a antitrombina compreende GalNac (A-acetilgalactosamina). Em outra forma de realização, a antitrombina é antitrombina produzida transgenicamente. Em outra forma de realização, a antitrombina é transgenicamente produzida em uma cabra. Em outra forma de realização, a antitrombina é ATryn®.

[006] Em outra forma de realização, a antitrombina é administrada a uma dose de 6 unidades por kg. Em outra forma de realização, a antitrombina é administrada a uma dose de 80 unidades por kg. Em outra forma de realização, a antitrombina é administrada a uma dose de 295 unidades por kg.

[007] Em outra forma de realização, a antitrombina é administrada em uma dose suficiente para manter um nível de atividade antitrombina presente no sangue no momento do início da oxigenação por membrana extracorpórea.

[008] Em outra forma de realização, a antitrombina é administrada em uma dose única. Em outra forma de realização, a antitrombina é administrada por um bolo, seguido por infusão contínua.

[009] Em outra forma de realização, o método ainda compreende a administração de heparina.

[0010] Cada uma das limitações da invenção pode englobar várias formas de realização da invenção. É, portanto, antecipado que cada uma das limitações da invenção envolvendo qualquer um elemento ou combinações de elementos possa ser incluída em cada aspecto da invenção. Esta invenção não é limitada em sua aplicação aos detalhes de construção e o arranjo dos componentes especificados na seguinte descrição ou ilustrados nas figuras. A invenção é possível de ter outras formas de realização e ser praticada ou ser realizada de vários modos. Além disso, a fraseologia e a terminologia aqui usadas se destinam ao propósito de descrição e não devem ser consideradas como limitativas.

3/24

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [0011] Em um aspecto, a invenção provê métodos para suprimir a coagulação de sangue e/ou suprimir hemorragia em um indivíduo com oxigenação por membrana extracorpórea compreendendo a administração a um indivíduo tendo oxigenação por membrana extracorpórea de uma quantidade terapeuticamente eficaz de antitrombina para suprimir a coagulação de sangue e/ou prevenir hemorragia. Em algumas formas de realização, a antitrombina usada nos métodos descritos aqui é ATryn®.

Oxigenação por membrana extracorpórea (ECMO) [0012] ECMO é um procedimento que fornece oxigênio de suporte cardíaco e respiratório para os pacientes cujo coração e pulmões não podem executar esta função. Em um procedimento de ECMO, cânulas são colocadas em vasos sanguíneos do paciente e o sangue do paciente é bombeado através de uma máquina de ECMO. Na máquina de ECMO, o sangue é ciclado através de um oxigenador por membrana, que remove dióxido de carbono de sangue e acrescenta oxigênio. O sangue é retirado do sistema venoso e pode ser retomado ao sistema venoso (ECMO veno-venosa) ou ao sistema arterial (ECMO veno-arterial).

[0013] ECMO é tipicamente usada em pacientes cujos pulmões e coração pararam de funcionar devido a várias causas, incluindo infecções virais (por exemplo, H1N1 e hRSV) e trauma (por exemplo, quase afogamento). ECMO também pode ser usada em recém-nascidos com um sistema respiratório subdesenvolvido.

[0014] Os principais desafios com ECMO, como em qualquer procedimento extracorpóreo, incluem a necessidade de prevenir infecções e manter a hemostase para prevenir a coagulação de sangue (coagulação) e hemorragia. A prevenção da coagulação de sangue e hemorragia é geralmente realizada pela administração de heparina e/ou outros anticoagulantes. A coagulação de sangue pode ser monitorada por coleta de amostras de sangue

4/24 em vários pontos de tempo e medição do tempo de coagulação ativado (que deve ser, geralmente, entre 140-200 segundos), aPTT (tempo de tromboplastina parcial ativada), ou medição de níveis de anti-Fator Xa. Outros parâmetros, que podem ser determinados em amostras de sangue para avaliar a hemostasia, são o nível e a atividade de enzimas que atuam sobre a cascata da coagulação (Ver

e.g., Niebler et al., 2011, Artificial Organs 35: 1024-1028, e Agati et al., 2006, ASAIO Journal 52: 513-516).

Antitrombina e ATryn® [0015] Em um aspecto, a invenção provê métodos para suprimir a coagulação de sangue e/ou prevenir hemorragia em um indivíduo com oxigenação por membrana extracorpórea compreendendo a administração a um indivíduo tendo oxigenação por membrana extracorpórea de uma quantidade terapeuticamente eficaz de antitrombina para suprimir a coagulação de sangue e/ou prevenir hemorragia. Em algumas formas de realização, a antitrombina tem um padrão de glicosilação de manose elevado. Em algumas formas de realização, a antitrombina tem um padrão de glicosilação de fucose elevado. Em algumas formas de realização, a antitrombina compreende GalNac (Nacetilgalactosamina). Em algumas formas de realização, a antitrombina é antitrombina produzida transgenicamente. Em algumas formas de realização, a antitrombina é produzida transgenicamente em uma cabra. Em algumas formas de realização, a antitrombina é ATryn®.

[0016] Tradicionalmente, o termo antitrombina refere-se a uma família de proteínas intimamente aparentadas, que inclui antitrombina I, antitrombina II, antitrombina III e antitrombina IV. No entanto, a antitrombina III é o único membro da família de antitrombinas que tem sido associado com uma função fisiológica importante, e a literatura atual usa frequentemente os termos antitrombina e antitrombina III altemadamente. Antitrombina, como aqui usada, refere-se a antitrombina III, salvo especificado de modo diferente. No entanto, deve-se notar que os membros da família de antitrombina

5/24 diferentes de antitrombina III que têm uma atividade similar à antitrombina III também podem ser usados nos métodos aqui descritos.

[0017] Geralmente, antitrombina é uma proteína de 432 aminoácidos com um peso molecular de cerca de 58 kDa. No entanto, algumas antitrombinas não humanas têm comprimento de 433 aminoácidos. Antitrombina é um inibidor de serina protease que inibe trombina e Fator Xa. Antitrombina é naturalmente encontrada no soro de mamíferos, incluindo humanos. O nível fisiológico de antitrombina no soro humano de um indivíduo saudável é de cerca de 14-20 mg/dL.

[0018] Antitrombina é uma glicoproteína que inclui quatro sítios de glicosilação: Asn96, Asnl35, Asnl55 e Asnl92. Antitrombina ocorre tanto em uma forma alfa (alfa-antitrombina) e em uma forma beta (beta-antitrombina), com a forma alfa sendo a mais prevalente. A forma beta da antitrombina pode ser distinta da forma alfa, porque a forma beta não é glicosilada em Asnl35. Em algumas formas de realização, antitrombina, como usada nos métodos aqui descritos, inclui tanto a forma alfa principal de antitrombina como a forma beta secundária de antitrombina. Em algumas formas de realização, antitrombina, como usada nos métodos aqui descritos, é alfa-antitrombina. Em outras formas de realização, a antitrombina é a beta-antitrombina.

[0019] Antitrombina é conservada entre as espécies de mamíferos, com apenas pequenas diferenças na sequência de aminoácidos. Em algumas formas de realização, as espécies de antitrombina usadas no tratamento de um indivíduo, de acordo com os métodos aqui descritos, são as mesmas espécies que o indivíduo. Assim, por exemplo, antitrombina humana (de acordo com a sua sequência de aminoácidos) é usada em métodos de tratamento em humanos, enquanto a antitrombina bovina (novamente de acordo com a sua sequência de aminoácidos) é usada em métodos de tratamento em bovinos. Em outras formas de realização, as espécies de antitrombina usadas no tratamento de um indivíduo são de uma espécie diferente da do indivíduo.

6/24 [0020] Deve ser ainda apreciado que, além da sequência de aminoácidos, a glicosilação de antitrombina também pode ser específica da espécie. Assim, por exemplo, antitrombina humana isolada a partir de plasma humano (antitrombina humana derivada de plasma), tem um padrão de glicosilação diferente do da antitrombina isolada de cabra a partir de plasma de cabra. No entanto, como explicado a seguir, antitrombina humana, por exemplo, pode ser produzida em uma cabra, dando antitrombina humana (antitrombina com uma sequência de aminoácidos humana) com um padrão de glicosilação que imita a glicosilação de antitrombina de cabra.

[0021] Em algumas formas de realização, a antitrombina usada nos métodos descritos aqui tem um padrão de glicosilação de manose elevado. Antitrombina com um padrão de glicosilação de manose elevado, como aqui usado, refere-se a uma antitrombina em que uma ou mais das cadeias laterais de glicosilação compreende uma oligomanose ou um oligossacarídeo de tipo híbrido (em contraste com cadeias laterais compreendendo oligossacarídeos de complexo biantenário, que são a estrutura de cadeia lateral predominante encontrada em antitrombina humana derivada de plasma). Em algumas formas de realização, a antitrombina usada nos métodos aqui descritos tem um padrão de glicosilação de fucose elevado. Um padrão de glicosilação elevado de fucose, como aqui usado, refere-se a antitrombina que tem fucose em seu GlcNac proximal na maioria dos sítios de glicosilação que têm oligossacarídeos complexos. Em algumas formas de realização, a antitrombina usada nos métodos aqui descritos compreende GalNac (A-acetilgalactosamina). Em algumas formas de realização, a antitrombina usada nos métodos aqui descritos tem um padrão de manose elevado, um padrão de fucose elevado e inclui GalNac. Deve-se notar que a antitrombina humana (antitrombina com uma sequência de aminoácidos humana) que é produzida transgenicamente em cabras tem um padrão de manose elevado, um padrão de fucose elevado e inclui GalNac, enquanto antitrombina humana derivada de plasma geralmente não

7/24 têm esses padrões de glicosilação (Ver e.g., Patente US 5.843.705, Patente US 6.441.145 e Patente US 7.019.193).

[0022] A antitrombina usada nos métodos aqui descritos pode ser produzida através de vários métodos. Em algumas formas de realização, a antitrombina é produzida por isolamento a partir de plasma. Em algumas formas de realização, a antitrombina é produzida de modo recombinante. Em algumas formas de realização, a antitrombina é produzida transgenicamente. [0023] Em algumas formas de realização, a antitrombina usada nos métodos aqui descritos é produzida transgenicamente. Em algumas formas de realização, a antitrombina transgenicamente produzido é produzido em um mamífero (não humano). Em algumas formas de realização, a antitrombina transgenicamente produzida é produzida em um ungulado. Em algumas formas de realização, a antitrombina transgenicamente produzida é produzida em uma cabra. Deve ser apreciado que a antitrombina produzida em uma primeira espécie pode ser uma antitrombina a partir de uma segunda espécie. Assim, por exemplo, antitrombina humana pode ser produzida transgenicamente em camundongos e cabras. Similarmente, a antitrombina bovina também pode ser transgenicamente produzida em camundongos e cabras. Além disso, a antitrombina pode também ser produzida transgenicamente nas espécies de origem. Assim, a antitrombina de cabra pode ser produzida transgenicamente em cabras.

[0024] Em algumas formas de realização, a antitrombina usada nos métodos aqui descritos é produzida transgenicamente. Em algumas formas de realização, a antitrombina transgenicamente produzida tem um padrão de glicosilação que é diferente da antitrombina derivada de plasma. Em geral, o padrão de glicosilação da antitrombina depende da espécie de animal em que a antitrombina é produzida. Assim, por exemplo, antitrombina transgenicamente produzida em camundongos é esperada como tendo um padrão de glicosilação diferente da antitrombina produzida em cabras.

8/24 [0025] Em algumas formas de realização, a antitrombina usada nos métodos aqui descritos tem o padrão de glicosilação de antitrombina transgenicamente produzida em cabras.

[0026] Deve ser apreciado que o padrão de glicosilação de antitrombina produzida transgenicamente também pode depender da natureza do órgão, ou parte do corpo, do animal transgênico no qual a proteína é produzida. Assim, o padrão de glicosilação de antitrombina produzida na glândula mamária é esperado como sendo diferente do da antitrombina produzida no sangue, mesmo quando produzida na mesma espécie. Em algumas formas de realização, a antitrombina usada nos métodos aqui descritos é produzida na glândula mamária de um mamífero não humano. Em algumas formas de realização, a antitrombina usada nos métodos aqui descritos é produzida na glândula mamária de cabras.

[0027] Deve ser ainda notado que a antitrombina com o padrão de glicosilação de antitrombina produzida em cabras também pode ser provido através da produção ou obtenção da antitrombina, por exemplo, em uma espécie diferente da de cabra, e modificando o padrão de glicosilação, como em processamento à jusante. Por exemplo, antitrombina glicosilada pode ser produzido em camundongos e o padrão de glicosilação da antitrombina produzida em camundongos pode ser alterado para gerar o padrão de glicosilação de antitrombina de cabra por modificação in vitro. Por exemplo, a antitrombina produzida em camundongos pode ser alterada através da ação de glicosilases ou transferases. Além disso, o padrão de glicosilação pode ser modificado por métodos não enzimáticos (isto é, sintéticos).

[0028] Antitrombina com o padrão de glicosilação de antitrombina produzida por cabra pode também ser fornecida por produção de antitrombina em células (por exemplo, células de insetos, células bacterianas) e adicionando ou modificando o padrão de glicosilação no processamento à jusante, altemativamente, antitrombina com o padrão de glicosilação de antitrombina

9/24 produzida de cabra pode ser provida por isolamento a partir de plasma de uma espécie não cabra (ou talvez um tecido diferente de uma cabra) e o padrão de glicosilação pode ser subsequentemente modificado no processamento à jusante.

[0029] Em algumas formas de realização, a antitrombina usada nos métodos aqui descritos é ATryn®. ATryn® é uma alfa-antitrombina humana transgênica que é produzida na glândula mamária de cabra (Ver, por exemplo, Patente US 5.843.705, Patente US 6.441.145 e Patente US 7.019.193). ATryn® é aprovada pelo FDA para a prevenção de eventos tromboembólicos perioperatórios e peri-partos em pacientes com deficiência de antitrombina hereditária. Na Europa, ATryn® é aprovada para uso em pacientes cirúrgicos com deficiência de antitrombina congênita para a profilaxia de trombose venosa profunda e tromboembolismo em situações de risco clínico.

[0030] O padrão de glicosilação de ATryn® antitrombina (humana) produzida por cabra difere do padrão de glicosilação de antitrombina humana derivada de plasma. Uma vez que o padrão de glicosilação é diferente, ATryn® tem algumas propriedades fisiológicas que são diferentes da antitrombina humana derivada de plasma. Por exemplo, a taxa de depuração de ATryn® é maior do que a taxa de depuração de antitrombina isolada de plasma (Ver, e.g., US 7.019.193).

Indivíduo [0031] Em um aspecto, a descrição apresenta métodos de suprimir a coagulação de sangue e/ou prevenir hemorragia em um indivíduo tendo oxigenação por membrana extracorpórea compreendendo a administração a um indivíduo tendo oxigenação por membrana extracorpórea de uma quantidade terapeuticamente eficaz de antitrombina para suprimir a coagulação de sangue e/ou prevenir a hemorragia. Um indivíduo, como aqui usado, é um humano outro mamífero vertebrado incluindo, mas não limitado a, camundongo, rato, cão, gato, cavalo, vaca, porco, ovelha, cabra, ou um primata não humano. Em

10/24 algumas formas de realização, o indivíduo é um humano. Em algumas formas de realização, o indivíduo é uma criança.

Heparina e terapias adicionais [0032] Em um aspecto, a descrição provê métodos de suprimir a coagulação de sangue e/ou prevenir hemorragia em um indivíduo tendo oxigenação por membrana extracorpórea compreendendo a administração a um indivíduo tendo oxigenação por membrana extracorpórea de uma quantidade terapeuticamente eficaz de antitrombina para suprimir coagulação de sangue e/ou prevenir hemorragia. Em algumas formas de realização, antitrombina é administrada em combinação com heparina. A heparina liga antitrombina e aumenta a atividade do inibidor de protease de antitrombina. Nas formas de realização da descrição, em que antitrombina é administrada em combinação com heparina, qualquer regime de combinação de administração de antitrombina e heparina é englobado. Assim, em algumas formas de realização, heparina é administrada concomitantemente com antitrombina (por exemplo, infusão ao mesmo tempo). Em algumas formas de realização, heparina é administrada antes de, ou após, a administração de antitrombina. Em algumas formas de realização, a antitrombina e a heparina tem um regime de administração que se sobrepõe parcialmente (por exemplo, administração de apenas antitrombina durante um período de tempo, seguido pela administração de uma combinação de antitrombina e heparina).

[0033] Em algumas formas de realização dos métodos aqui descritos, nenhuma heparina é administrada.

[0034] Em algumas formas de realização, os métodos de suprimir a coagulação de sangue e/ou prevenir hemorragia em um indivíduo com oxigenação por membrana extracorpórea compreendendo a administração de antitrombina são acoplados com terapias adicionais. Em algumas formas de realização, as terapias adicionais são terapias que podem ser usadas para suprimir coagulação de sangue e/ou reduzir hemorragia. Estas terapias

11/24 adicionais incluem a administração de anticoagulantes (além de antitrombina ou antitrombina junto com heparina). Anticoagulantes são conhecidos na arte e incluem coumadina, warfarina, acenocoumeral, fenprocumom, atromentina, brodifacoum, fenindiona, fondaparinux, idraparinux, rivaroxabana, apixabana, hirudina, lepirudina, bivalirud, argatroban, dabigatran, ximelegatrana, batroxobina e hementina.

[0035] Em algumas formas de realização, antitrombina (por exemplo, ATryn®) pode também ser administrada junto com outros produtos de sangue, tais como sangue total, células vermelhas embaladas, FFP (plasma fresco congelado) ou plaquetas, durante ECMO para auxiliar com outras deficiências. Quantidade terapeuticamente eficaz [0036] Em um aspecto, a descrição provê métodos de suprimir coagulação de sangue e/ou prevenir hemorragia em um indivíduo com oxigenação por membrana extracorpórea compreendendo administração de antitrombina. Em algumas formas de realização, antitrombina é administrada em quantidades terapeuticamente eficazes para suprimir coagulação de sangue e/ou prevenir hemorragia em oxigenação por membrana extracorpórea. Os termos quantidade terapeuticamente eficaz e quantidade eficaz, que são usados indiferentemente, referem-se à quantidade necessária ou suficiente para alcançar efeito(s) terapêutico(s) desejado (s), por exemplo, suprimir coagulação e/ou prevenir hemorragia de sangue. Combinado com os ensinamentos aqui dados, por escolha entre os vários compostos ativos e fatores de ponderação, como potência, biodisponibilidade relativa, peso corporal do indivíduo, gravidade de efeitos secundários adversos e modo de administração preferido, um regime eficaz de tratamento profilático ou terapêutico pode ser selecionado que não provoque toxicidade substancial e ainda seja eficaz para tratar o indivíduo em particular.

[0037] A quantidade eficaz para qualquer aplicação particular pode variar dependendo de tais fatores como a doença ou a condição a ser tratada,

12/24 o(s) agente(s) terapêutico (s) particular(es) a ser administrado(s), o tamanho do indivíduo, ou a gravidade da doença ou distúrbio. Um versado na arte pode determinar empiricamente a quantidade eficaz de antitrombina sem necessidade de experimentação indevida. É geralmente preferido que a dose máxima seja usada, isto é, a dose mais elevada segura de acordo com julgamento médico. Múltiplas doses por dia, semana ou mês podem ser contemplada para atingir níveis sistêmicos apropriados de antitrombina. Em algumas formas de realização, níveis sistêmicos podem ser alcançados por um bolo, seguido por infusão contínua de antitrombina (por exemplo, antitrombina humana recombinante, ATryn®, etc.) em ECMO. Em algumas formas de realização, tal administração pode dar um maior controle e precisão de anticoagulação do que com antitrombina dada por bolo intermitente apenas. O bolo pode ser dado, por exemplo, por via intravenosa ou por via intramuscular, intratecal, ou injeção subcutânea. Níveis sistêmicos apropriados podem ser determinados, por exemplo, por medição nível no plasma de pico ou sustentado do paciente de antitrombina. Qualquer um dos métodos de administração pode incluir a monitoração dos níveis de antitrombina e/ou atividade e ajuste da dose como necessário.

[0038] Doses de antitrombina (por exemplo, ATryn®) a serem administradas são geralmente expressadas em mg/kg, unidades de antitrombina por kg, ou unidades de antitrombina por dia. Em algumas formas de realização, antitrombina é administrada a uma dose de 1 unidade por kg ou mais, 2 unidades por kg ou mais, 5 unidades por kg dia ou mais, 10 unidades por kg ou mais, 20 unidades por kg ou mais, por 30 unidades kg ou mais, 40 unidades por kg ou mais, 50 unidades por kg ou mais, 100 unidades por kg ou mais, 150 unidades por kg ou mais, 200 unidades por kg ou mais, 250 unidades por kg ou mais, 300 unidades por kg ou mais, 350 unidades por kg ou mais, 400 unidades por kg ou mais, 450 unidades por kg ou mais, 500 unidades por kg ou mais, 600 unidades por kg ou mais, 700 unidades por kg ou mais, 800 unidades por

13/24 kg ou mais, a 900 unidades por kg ou mais, ou 1000 unidades por kg ou mais. Em algumas formas de realização, a antitrombina é administrada a uma dose de 6 unidades por kg. Em algumas formas de realização, a antitrombina é administrada a uma dose de 80 unidades por kg. Em algumas formas de realização, a antitrombina é administrada a uma dose de 295 unidades por kg.

[0039] Em algumas formas de realização, a antitrombina é administrada a uma dose de 10 unidades por dia, ou mais de 50 unidades por dia ou mais, 100 unidades por dia ou mais, 200 unidades por dia ou mais, 500 unidades por dia, ou mais, 1000 unidades por dia ou mais, 1500 unidades por dia, ou mais de 2000 unidades por dia, ou mais de 2500 unidades por dia ou mais, 3000 unidades por dia ou mais, 3500 unidades por dia ou mais, 4000 unidades por dia ou mais, 4500 unidades por dia ou mais, 5000 unidades por dia ou mais, 5500 unidades por dia ou mais, 6000 unidades por dia ou mais, 7000 unidades por dia ou mais, 8000 unidades por dia ou mais, 9000 unidades por dia ou mais, 10.000 unidades por dia ou mais, 15.000 unidades por dia ou mais, ou 20.000 unidades por dia ou mais.

[0040] As doses de antitrombina (por exemplo, ATryn®) a serem administradas nos métodos aqui descritos podem variar, dependendo do alvo terapêutico desejado. Em algumas formas de realização, a antitrombina é administrada a uma dose suficiente para manter um nível de atividade antitrombina presente no sangue no momento do início da oxigenação por membrana extracorpórea. Em algumas formas de realização, a antitrombina é administrada em uma dose suficiente para exceder o nível de atividade de antitrombina presente no sangue no momento do início da oxigenação por membrana extracorpórea. Em algumas formas de realização, a antitrombina é administrada em uma dose suficiente para obter pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 100%, pelo menos 110%, em pelo menos 120%, pelo menos 130%, pelo menos 140%, pelo menos 200%, pelo menos, 300% ou mais da atividade de antitrombina

14/24 presente no sangue no momento do início da oxigenação por membrana extracorpórea.

[0041] Em algumas formas de realização, a quantidade terapeuticamente eficaz é administrada em uma dose. Em algumas formas de realização, a quantidade terapeuticamente eficaz é administrada em doses múltiplas. Dosagem pode ser ajustada apropriadamente para alcançar níveis desejados de antitrombina, locais ou sistêmicos, dependendo do modo de administração. No caso de que a resposta em um indivíduo seja insuficiente em tais doses, mesmo doses maiores (ou doses efetivas maiores por uma via de liberação mais localizada diferente) podem ser empregadas na extensão permitida pela tolerância do indivíduo. Doses múltiplas por dia podem ser contempladas para atingir níveis sistêmicos apropriados dos compostos.

Administração [0042] Em um aspecto, a descrição provê métodos de suprimir coagulação de sangue e/ou prevenir hemorragia em um indivíduo tendo oxigenação por membrana extracorpórea compreendendo administração de antitrombina. Em algumas formas de realização, a antitrombina é administrada através de infúsão contínua. Em algumas formas de realização, a antitrombina é administrada em uma dose.

[0043] A antitrombina é tipicamente administrada a indivíduos como composições farmacêuticas, que contêm rotineiramente concentrações farmaceuticamente aceitáveis de sal, agentes tamponantes, conservantes, veículos compatíveis, adjuvantes e opcionalmente outros ingredientes terapêuticos. A natureza do veículo farmacêutico e outros componentes da composição farmacêutica irá depender do modo de administração.

[0044] As composições farmacêuticas da descrição podem ser administradas por qualquer meio e via conhecidos do versado na arte ao realizar os métodos de tratamento aqui descritos. As vias preferidas de administração incluem, mas não são limitadas a, oral, intravenosa, subcutânea, parenteral, intratumoral,

15/24 intramuscular, intranasal, intracraniana, sublingual, intratraqueal, inalação, ocular, vaginal e retal.

[0045] Antitrombina, quando é desejável uma liberação sistêmica, pode ser formulada para administração parenteral por injeção, por exemplo, por injeção de bolo ou infusão contínua. As formulações para injeção podem ser apresentadas em forma de dosagem unitária, por exemplo, em ampolas ou em recipientes de múltiplas doses, com um conservante adicionado. As composições podem tomar formas tais como suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos, e podem conter agentes de formulação tais como agentes de colocação em suspensão, estabilizantes e/ou dispersantes. As formulações farmacêuticas para administração parenteral incluem soluções aquosas dos compostos ativos em forma solúvel em água. Adicionalmente, suspensões dos compostos ativos podem ser preparadas como suspensões de injeção oleosa apropriadas. Os solventes ou veículos lipofílicos apropriados incluem óleos graxos tais como óleo de sésamo, ou ésteres de ácidos graxos sintéticos, como oleato de etila ou triglicerídeos, ou lipossomas. As suspensões aquosas para injeção podem conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão, como carboximetilcelulose de sódio, sorbitol, ou dextrano. Opcionalmente, a suspensão pode também conter estabilizantes ou agentes apropriados que aumentam a solubilidade dos compostos para permitir a preparação de soluções altamente concentradas.

[0046] Para administração oral, antitrombina pode ser prontamente formulada por combinação dos compostos com veículos farmaceuticamente aceitáveis bem conhecidos na arte. Tais veículos permitem que os compostos da descrição sejam formulados como comprimidos, pílulas, drágeas, cápsulas, líquidos, géis, xaropes, pastas fluidas, suspensões e similares, para ingestão oral por um indivíduo a ser tratado. As preparações farmacêuticas para uso oral podem ser obtidas como excipiente sólido, opcionalmente triturando uma mistura resultante, e processando a mistura de grânulos, após adição de

16/24 auxiliares apropriados, se desejado, para obter comprimidos ou núcleos de drágeas. Os excipientes apropriados são, em particular, cargas como açúcares, incluindo lactose, sacarose, manitol, ou sorbitol; preparações de celulose como, por exemplo, amido de milho, amido de trigo, amido de arroz, amido de batata, gelatina, goma de tragacanto, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, carboximetilcelulose de sódio, e/ou polivinilpirrolidona (PVP). Se desejado, podem ser adicionados agentes desintegrantes, tais como polivinil pirrolidona reticulada, ágar, ou ácido algínico ou um seu sal como alginato de sódio. Opcionalmente, as formulações orais também podem ser formuladas em solução salina ou tampões, por exemplo, EDTA para neutralizar as condições de ácido interno, ou podem ser administradas sem qualquer veículo.

[0047] Para liberação oral, a localização de liberação pode ser o estômago, o intestino delgado (o duodeno, o jejuno ou o íleo) ou o intestino grosso. Um versado na arte tem formulações disponíveis que não se dissolverão no estômago, contudo libertarão o material no duodeno ou em outras partes do intestino. Exemplos dos ingredientes inertes mais comuns que são usados como revestimentos entéricos incluem trimelitato acetato de celulose (CAT), ftalato de hidroxipropilmetil-celulose (HPMCP), HPMCP 50, HPMCP 55, ftalato acetato de polivinila (PVAP), Eudragit L30D, Aquateric, ftalato acetato de celulose (CAP), Eudragit L, Eudragit S e Shellac. Estes revestimentos podem ser usados como filmes mistos. Um revestimento ou mistura de revestimentos pode também ser usado em comprimidos, que não são destinados proteção contra o estômago. Isto pode incluir revestimentos de açúcar ou revestimentos que tomam o comprimido mais fácil de engolir. Cápsulas podem consistir de um envoltório duro (como gelatina) para liberação de pó seco terapêutico; para formas liquidas, um envoltório de gelatina mole pode ser usado. O material do envoltório das hóstias pode ser amido espesso ou outro papel comestível. Para pílulas, pastilhas, comprimidos moldados ou triturados de pastilhas, podem ser usadas técnicas de formação de massas úmidas.

17/24 [0048] Antitrombina pode ser incluída na formulação como múltiplos particulados finos na forma de grânulos ou granulados. A formulação do material para administração de cápsulas pode também estar na forma de pó, tampões levemente comprimidos ou mesmo como comprimidos. A composição farmacêutica pode ser preparada por compressão. Pode-se diluir ou aumentar o volume da composição farmacêutica com um material inerte. Estes diluentes podem incluir carboidratos, especialmente manitol, a-lactose, lactose anidra, celulose, sacarose, dextranos modificados e amido. Alguns sais inorgânicos podem também ser usados como cargas incluindo trifosfato de cálcio, carbonato de magnésio e cloreto de sódio. Alguns diluentes comercialmente disponíveis são Fast-Flo, Emdex, STA-Rx 1500, Emcompress e Avicell.

[0049] Desintegrantes podem ser incluídos na formulação da composição farmacêutica, como em uma forma de dosagem sólida. Materiais usados como desintegrantes incluem, mas não se limitam a amido, incluindo o desintegrante comercial baseado em amido, Explotab. Glicolato de amido de sódio, Amberlite, carboximetilcelulose de sódio, ultramilopectina, alginato de sódio, gelatina, casca de laranja, carboximetil celulose ácida, esponja natural e bentonita também podem ser usados. Os aglutinantes podem ser usados para manter o agente terapêutico junto para formar um comprimido duro e incluem materiais a partir de produtos naturais tais como acácia, tragacanto, amido e gelatina. Um agente antiatrito pode ser incluído na formulação do terapêutico para impedir a aderência durante o processo de formulação. Lubrificantes podem ser usados como uma camada entre o terapêutico e a parede da matriz, e estes podem incluir, mas não estão limitados a; ácido esteárico incluindo seus sais de magnésio e cálcio, politetrafluoretileno (PTFE), parafina líquida, óleos vegetais e ceras. Os agentes deslizantes que podem melhorar as propriedades de fluxo do fármaco durante a formulação e ajudar no rearranjo durante a compressão podem ser adicionados. Os agentes de deslizamento podem incluir amido, talco, silica pirogênica e silico-aluminato hidratado.

18/24 [0050] Para administração por inalação, antitrombina pode ser convenientemente liberada na forma de uma apresentação de pulverização de aerossol de embalagens pressurizadas ou de um nebulizador, com o uso de um propelente apropriado, por exemplo, diclorodifluorometano, triclorofluoro metano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono ou outro gás apropriado. [0051] Também aqui contemplada é a liberação pulmonar de antitrombina. Antitrombina pode ser entregue aos pulmões de um mamífero para liberação local ou sistêmica. Outros relatos de moléculas inaladas incluem Adjei et al., 1990, Pharmaceutical Research, 7:565-569; Adjei et al., 1990, International Journal of Pharmaceutics, 63:135-144 (acetato de leuprolida); Braquet et al., 1989, Journal of Cardiovascular Pharmacology, 13(supl. 5):143-146 (endotelina-1); Hubbard et al., 1989, Annals of Internal Medicine, Vol. Ill, pp. 206-212 (al- antitripsina); Smith et al., 1989, J. Clin. Invest. 84:1145-1146 (a-1-proteinase); Oswein et al., 1990, Aerosolization of Proteins, Proceedings of Symposium on Respiratory Drug Delivery II, Keystone, Colorado, March, (hormônio de crescimento humano recombinante); Debs et al., 1988, J. Immunol. 140:3482-3488 (interferon-g e fator alfa de necrose de tumor) e Platz et al., Patente U.S. No. 5.284.656 (fator estimulante de colônia de granulócitos). Um método e uma composição para administração pulmonar de fármacos para efeito sistêmico é descrito na patente US No. 5.451.569, expedida em 19 de setembro de 1995 para Wong et al.

[0052] A liberação nasal de uma composição farmacêutica compreendendo antitrombina também é contemplada. A liberação nasal permite a passagem de uma composição farmacêutica para a corrente sanguínea diretamente após a administração da composição para o nariz, sem a necessidade de deposição do produto no pulmão.

[0053] Em algumas formas de realização a antitrombina é administrada localmente. Métodos de administração local são conhecidos na arte e dependerão da área alvo ou do órgão alvo. As vias de administração local

19/24 incluem o uso de métodos de administração tópicos convencionais, como epicutânea (aplicação sobre a pele), por inalação, retal (por exemplo, por enema ou supositório), por gotas oculares (para a conjuntiva), gotas para os ouvidos, via intranasal, e vaginal.

[0054] Antitrombina pode também ser formulada em composições retais ou vaginais, como supositórios ou enemas de retenção, por exemplo, contendo bases de supositório convencionais como manteiga de cacau ou outros glicerídeos. Além das formulações previamente descritas, os compostos também podem ser formulados como uma preparação de depósito. Tais formulações de ação prolongada podem ser formuladas com materiais poliméricos ou hidrofóbicos apropriados (por exemplo, como uma emulsão em um óleo aceitável) ou resinas de troca iônica, ou como análogos moderadamente solúveis, por exemplo, como um sal firacamente solúvel.

[0055] As composições farmacêuticas podem também compreender veículos em fase sólida ou gel ou excipientes apropriados. Exemplos de tais veículos ou excipientes incluem, mas não são limitados a, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, vários açúcares, amidos, análogos de celulose, gelatina, e polímeros como polietileno glicóis.

[0056] Formas de preparação farmacêutica líquidas ou sólidas apropriadas são, por exemplo, soluções aquosas ou salinas para inalação, microencapsuladas, ‘encocleadas’, revestidas sobre partículas microscópicas de ouro, contidas em lipossomas, nebulizadas, aerossóis, granulados para o implante na pele ou secadas sobre um objeto afiado para ser riscadas na pele. As composições farmacêuticas também incluem grânulos, pós, comprimidos, comprimidos revestidos, (micro)cápsulas, supositórios, xaropes, emulsões, suspensões, cremes, gotas ou preparações com liberação prolongada de compostos ativos, em cuja preparação excipientes e aditivos e/ou um ou mais auxiliares, como desintegrantes, aglutinantes, agentes de revestimento, agentes intumescentes, lubrificantes, aromatizantes, edulcorantes ou solubilizantes são

20/24 geralmente usados como descrito acima. As composições farmacêuticas são apropriadas para uso em uma variedade de sistemas de liberação de fármacos. Para uma breve revisão de métodos de liberação de fármacos, ver Langer, 1990, Science 249, 1527-1533, que é aqui incorporado por referência.

[0057] Os agentes e composições aqui descritos podem ser administrados per se (simples) ou na forma de um sal farmaceuticamente aceitável. Quando usados em medicina, os sais devem ser farmaceuticamente aceitáveis, mas sais não farmaceuticamente aceitáveis podem ser convenientemente usados para preparar seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Tais sais incluem, mas não estão limitados a, os preparados a partir dos seguintes ácidos: clorídrico, bromídrico, sulfurico, nítrico, fosfórico, maleico, acético, salicílico, p-tolueno-sulfônico, tartárico, cítrico, metano sulfônico, fórmico, malônico, succínico, naftaleno-2-sulfônico, e benzeno sulfônico. Além disso, estes sais podem ser preparados como sais de metais alcalinos ou alcalino-terrosos, como sais de sódio, potássio ou cálcio do grupo do ácido carboxílico.

[0058] As composições farmacêuticas da descrição contêm uma quantidade eficaz de antitrombina incluída em um veículo farmaceuticamente aceitável. O termo veículo farmaceuticamente aceitável significa uma ou mais cargas sólidas ou líquidas compatíveis, diluentes ou substâncias encapsulantes que são apropriadas para administração a um humano ou outro animal vertebrado. O termo veículo denota um ingrediente orgânico ou inorgânico, natural ou sintético, com o qual o ingrediente ativo é combinado para facilitar a aplicação. Os componentes das composições farmacêuticas são também capazes de serem misturados com as composições da presente invenção, e uns com os outros, de um modo tal que não haja interação que prejudicaria substancialmente a eficácia farmacêutica desejada.

[0059] Tanto os materiais poliméricos não-biodegradáveis como os biodegradáveis podem ser usados na fabricação de partículas para liberação das

21/24 composições da descrição. Tais polímeros podem ser polímeros naturais ou sintéticos. O polímero é selecionado com base no período de tempo durante o qual a liberação é desejada. Os polímeros bio-aderentes de interesse particular incluem hidrogéis bioerrodíveis, descritos por Sawhney et al., 1993, Macromolecules 26, 581-587, cujos ensinamentos são incorporados. Estes incluem ácidos poli-hialurônicos, caseína, gelatina, glutina, polianidridos, ácido poliacrílico, alginato, quitosana, poli(metacrilatos de metila), poli(metacrilato de etila), poli(metacrilato de butila), poli(metacrilato de isobutila), poli(metacrilato de hexila), poli(metacrilato de isodecila), poli (metacrilato de laurila), poli(metacrilato de fenila), poli(acrilato de metila), poli(acrilato de isopropila), poli(acrilato de isobutila), e poli(acrilato de octadecila).

[0060] Antitrombina podem estar contida em sistemas de liberação controlada. O termo liberação controlada destina-se a fazer referência a qualquer uma das formulações contendo agentes e composições aqui descritos em que o modo e o perfil de agentes e composições aqui descritos liberados a partir da formulação são controlados. Isto se refere a formulações de liberação imediata, bem como não imediata, com formulações de liberação não imediata incluindo mas não se limitando a formulações de liberação sustentada e liberação retardada. O termo liberação sustentada (também referido como liberação estendida) é usado no seu sentido convencional para se referir a uma formulação de fármaco que proporciona uma liberação gradual de um composto ao longo de um período de tempo prolongado e que, preferivelmente, embora não necessariamente, resulta em níveis no sangue substancialmente constantes de um fármaco durante um período de tempo prolongado. O termo liberação retardada é usado no seu sentido convencional para se referir a uma formulação de fármaco em que existe um atraso de tempo entre a administração da formulação e a liberação do composto na mesma. Liberação retardada pode ou não envolver a liberação gradual de um composto ao longo de um

22/24 período prolongado de tempo, e, assim, pode ou não ser uma liberação sustentada. O uso de um implante de liberação sustentada a longo-prazo poderá ser particularmente apropriado para o tratamento de condições crônicas. Liberação a longo prazo, como aqui usado, significa que o implante é construído e disposto para distribuir níveis terapêuticos do ingrediente ativo durante pelo menos 7 dias, e preferivelmente 30-60 dias. Implantes de liberação sustentada a longo-prazo são bem conhecidos dos versados na arte e incluem alguns dos sistemas de liberação descritos acima.

Kits [0061] Em um aspecto, a descrição provê kits compreendendo antitrombina (por exemplo, ATryn®). Em algumas formas de realização, a antitrombina está em, ou o kit inclui, recipiente(s) esterilizado(s). Em algumas formas de realização, o kit compreende um veículo farmacêutico e instruções para administração dos componentes do kit. Em algumas formas de realização, o kit inclui um frasco de preparação farmacêutica, um frasco de diluente para preparação farmacêutica, e a antitrombina. O frasco de diluente pode conter um diluente, como solução salina fisiológica para diluição, que podería ser uma solução concentrada ou pó liofilizado da composição da descrição. Em algumas formas de realização, as instruções incluem instruções para a mistura de uma quantidade particular do diluente com uma quantidade particular de uma composição farmacêutica concentrada, em que é preparada uma formulação final para injeção ou infusão. Em algumas formas de realização, as instruções incluem instruções para uso em uma seringa, ou outro dispositivo de administração. Em algumas formas de realização, as instruções incluem instruções para tratamento de um paciente com uma quantidade eficaz de uma composição da descrição. Será também entendido que os recipientes contidos em um kit, contendo ou não as preparações, o recipiente sendo quer uma garrafa, um frasco com um septo, uma ampola com um septo, uma bolsa de infusão, ou similares, pode conter indicadores, como marcações convencionais

23/24 que mudam de cor quando a preparação foi autoclavada ou de outra modo esterilizada.

[0062] A presente invenção é ainda ilustrada pelos seguintes Exemplos, os quais de modo nenhum devem ser entendidos como limitando a mesma. Os conteúdos completos de todas as referências (incluindo referências bibliográficas, patentes expedidas, pedidos de patentes publicados, e pedidos de patente copendentes) citados neste pedido são expressamente incorporados por referência, em particular para os ensinamentos que foram mencionados acima. No entanto, a citação de qualquer referência não pretende ser uma admissão de que a referência é arte anterior.

Exemplos

Exemplo 1: Administração ATryn® durante oxigenação por membrana extracorpórea [0063] Pacientes são administrados com ATryn durante ® ECMO para controlar anticoagulação e suprimir coagulação de sangue e/ou prevenir hemorragia. Heparina é administrada em uma dose suficiente para manter um tempo de coagulação ativado desejado (geralmente entre 140-200 segundos). ATryn® é administrada como uma dose de bolo em 24 horas do início de ECMO. A dose de ATryn® administrada varia de 2-300 unidades/kg.

[0064] O efeito de ATryn® é avaliado por determinação do nível de atividade de antitrombina no sangue (Ver Niebler et al., 2011, Artificial Organs 35: 1024-1028).

Exemplo 2: Administração de ATryn® durante oxigenação por membrana extracorpórea em uma população pediátrica [0065] Pacientes pediátricos são administrados com ATryn® durante ECMO para controlar anticoagulação e suprimir coagulação de sangue e/ou prevenir hemorragia. Administração contínua de ATryn® foi iniciada no momento de início de ECMO. O nível de atividade de antitrombina no sangue é verificado e a quantidade de ATryn® é administrada em uma dose suficiente

24/24 para manter, pelo menos, 100% de atividade de antitrombina (em comparação com o nível inicial). Heparina é administrada em uma dose suficiente para manter um tempo de coagulação ativada desejada de pelo menos 150 segundos (Ver Agati et al., 2006, ASAIO Journal 52: 513-516) Equivalentes [0066] O relatório descrito acima é considerado como sendo suficiente para permitir ao versado na arte praticar a invenção. A presente invenção não deve ser limitada em escopo pelos exemplos apresentados, uma vez que os exemplos se destinam a ser uma ilustração de alguns aspectos e formas de realização da invenção. Outras formas de realização funcionalmente equivalentes estão dentro do escopo da invenção. Várias modificações da invenção além das mostradas e descritas aqui serão evidentes para os versados na arte a partir da descrição acima e estão dentro do escopo das reivindicações em anexo. As vantagens e objetos da invenção não estão necessariamente englobados por cada forma de realização da invenção.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Uso de antitrombina recombinante, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para suprimir coagulação de sangue e/ou prevenir hemorragia em um indivíduo tendo oxigenação por membrana extracorpórea.
2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a antitrombina recombinante compreende um ou mais dos seguintes:

(i) um padrão de glicosilação de manose elevado;

(ii) um padrão de glicosilação de fucose elevado; e (iii) GalNac (V-acetilgalactosamina).
3. Uso de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a antitrombina recombinante é antitrombina transgenicamente produzida.
4. Uso de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a antitrombina recombinante é transgenicamente produzida em uma cabra.
5. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a antitrombina recombinante é ATryn®.
6. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a antitrombina recombinante é preparada em uma forma de dosagem para administração em uma dose de 6 unidades por kg, 80 unidades por kg, ou 295 unidades por kg.
7. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a antitrombina recombinante é preparada em uma forma de dosagem para administração em uma dose suficiente para manter um nível de atividade de antitrombina presente no sangue no momento do início da oxigenação por membrana extracorpórea.
8. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a antitrombina recombinante é preparada em uma

Petição 870160038377, de 22/07/2016, pág. 7/9

2/2 forma de dosagem para administração em uma dose.
9. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a antitrombina recombinante é preparada em uma forma de dosagem para administração por um bolo seguido por infusão contínua.
10. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o medicamento ainda compreende heparina.