BR112014028441B1

BR112014028441B1 - Composição de proteína

Info

Publication number: BR112014028441B1
Application number: BR112014028441-5A
Authority: BR
Inventors: Yukako Kageyama; Kentaro Fujinaga; Ayuko Yamaguchi; Yusuke Akiyama; Souichirou Katou; Yukiko Kimura; Susumu Honda; Makoto Satake; Hiroaki Kaneko; Ayumi Ishiwari; Masaki Hirashima
Original assignee: Teijin Limited; Teijin Pharma Limited
Priority date: 2012-05-14
Filing date: 2013-05-13
Publication date: 2021-04-27
Also published as: BR112014028441A2; RU2678828C2; EP3366301A1; EP2851083A4; MX2014013723A; KR102112375B1; CA2873655A1; KR20150020539A; CN104271145B; EP2851083B8; AU2013261307B2; MX355012B; HK1204948A1; JP5872032B2; WO2013172467A1; JP2016053063A; IN2014DN09624A; US20150132279A1; JP6317307B2; CN104271145A

Abstract

composição de proteína. uma composição de proteína exibindo uma resistência à esterilização por radiação e incluindo, como um aditivo, uma mistura compreendendo glicina, fenilalanina e histidina e/ou um derivado de éter de celulose.

Description

CAMPO TÉCNICO

[001] A presente invenção refere-se a uma composição de proteína que compreende aminoácidos específicos e/ou um derivado de éter de celulose e tem resistência à esterilização por radiação.

ARTE ANTECEDENTE

[002] Proteínas naturais e sintéticas estão se tomando cada vez mais importantes como fármacos. Quando elas são usadas em aplicações médicas, os seus produtos precisam esterilizados. Como meios de esterilização, são conhecidas a esterilização térmica em uma autoclave, esterilização por radiação ionizante, tal como um raio y ou feixe de elétrons, esterilização a gás com um gás óxido de etileno, esterilização a plasma com peróxido de hidrogênio, e esterilização separada usando um esterilizante químico compreendendo uma formulação de glutaraldeído ou um filtro. No entanto, as atividades das proteínas, tais como as proteínas bioativas são reduzidas por esterilização por calor ou radiação. A esterilização com óxido de etileno tem possibilidades que um subproduto pode ser produzido por uma reação química e que um gás residual altamente tóxico pode afetar adversamente o corpo humano. A esterilização com um esterilizante químico tem o problema de que a resistência a um esterilizante de uma proteína e mudanças no pH, intensidade de íons e temperatura devem ser levados em consideração. Então, para fabricar produtos farmacêuticos e produtos medicinais contendo ou imobilizando uma proteína, seus processos de produção precisam ser inteiramente feitos em condições estéreis e uma soma considerável de custo de produção é necessária.

[003] Apesar de uma solução contendo uma proteína ser submetida à esterilização separada com um filtro de, é difícil aplicar esta esterilização separada a uma composição contendo partículas grandes ou uma composição sólida ou semi-sólida.

[004] EP0437095 ensina que um produto de celulose oxidada neutralizada combinada com heparina ou um fragmento de heparina (nORC) pode ser esterilizado por irradiação de raios gama. No entanto, este documento deixa de ensinar a esterilização de ORC ou n-ORC ao qual uma proteína está ligada.

[005] EP0562864 descreve uma substância compósita de tratamento de feridas contendo uma matriz de esponja de colágeno, um segundo polímero bioabsorvível (como uma fibra dispersada de celulose regenerada oxidada (ORC)) e um atívador (como um peptídeo). Este documento ensina que o ativador pode estar contido na matriz, no polímero bioabsorvível, ou em ambos, e que a substância compósita de esponja pode ser esterilizada ao mesmo tempo em que é embalada.

[006] US5730933 descreve um método de esterilização de peptídeo biologicamente ativo por irradiação de raios gama ou feixe de elétrons sem a perda da atividade biológica do peptídeo. Este método é uma tecnologia compreendendo as etapas de formar uma mistura do peptídeo biologicamente ativo e uma proteína estranha como gelatina, congelando ou liofilizando esta mistura, e irradiando a mesma. Este documento ensina que a existência da proteína estranha estabiliza o peptídeo e impede a redução da atividade de peptídeo.

[007] W02000/033893 descreve um complexo de peptídeo terapêutico e um polissacarídeo selecionado dentre o grupo constituído por celulose regenerada oxidada, celulose regenerada oxidada neutralizada e misturas das mesmas. Este documento ensina que quando peptídeo é formulado junto com uma quantidade eficaz do polissacarídeo antes da esterilização com radiação ionizante, a atividade biológica do agente terapêutico peptídeo não é perdida e é estabilizada se o peptídeo for esterilizado com radiação ionizante.

[008] No entanto, estes documentos não sugerem que a desativação de uma proteína no momento da esterilização com radiação ionizante pode ser suprimida, levando um derivado de éter de celulose e aminoácidos específicos a coexistirem com a proteína.

[009] Entrementes, JP-A 2011-47089 descreve um processo para a produção de uma nanofibra contendo enzima tendo uma atividade de enzima excelente. Neste processo, uma solução de fiação contendo uma enzima e um polímero dissolvido em um solvente não aquoso é fiada por um método de fiação eletrostático para formar uma nanofibra de zimogênio, que é então colocada com água e secada. No entanto, este documento é omisso sobre a esterilização de nanofibras contendo enzima.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

[0010] E um objeto da presente invenção prover uma composição de proteína tendo resistência à esterilização por radiação.

[0011] Os inventores da presente invenção conduziram estudos intensivos para resolver o problema acima e verificaram que, surpreendentemente, a resistência à esterilização por radiação de uma proteína é melhorada levando uma mistura de glicina, fenilalanina e histidina e/ou um derivado de éter de celulose a coexistir com a proteína. A presente invenção foi realizada com base nesta descoberta.

[0012] Isto é, a presente invenção é uma composição de proteína que compreende uma mistura de glicina, fenilalanina e histidina e/ou um derivado de éter de celulose como um aditivo.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0013] Fig. 1 mostra o efeito de resistência à esterilização para uma proteína de uma combinação de um derivado de éter de celulose e aditivos específicos da presente invenção (eixo de ordenada: valor relativo de intensidade do gel (antes da esterilização: 100)); e

[0014] Fig. 2 mostra o efeito de resistência à esterilização de uma combinação de um derivado de éter de celulose e aditivos específicos da presente invenção (eixo de ordenada: um aumento na quantidade de um agregado de proteína (%)).

MELHOR MODO PARA REALIZAR A INVENÇÃO

[0015] A presente invenção é uma composição de proteína que compreende uma mistura de glicina, fenilalanina e histidina e/ou um derivado de éter de celulose como um aditivo.

[0016] A proteína usada na presente invenção não é particularmente limitada. Exemplos das proteínas incluem as proteínas hemostáticas tipificadas por fibrinogênio e trombina, enzimas tipificadas por asparaginase, catalase, superóxido dismutase e lipase, proteínas de transporte tipificadas por hemoglobina, albumina do soro e lipoproteína de baixa densidade, proteínas de músculo tipificadas por actina e miosina, proteínas de defesa tipificadas por anticorpos e complementos, proteínas de toxina tipificadas pela toxina da difteria, toxina botulínica e veneno de cobra, hormônios de proteínas tipificados por insulina, fatores de crescimento e citocina, proteínas de armazenamento tipificadas por ovalbumina e ferritina, proteínas estruturais tipificadas por colágeno e queratina, e fatores de crescimento tipificados por fator de crescimento epidérmico (EGF), fator de crescimento de tipo insulina (IGF), fator de crescimento transformante (TGF), fator de crescimento de nervo (NGF), fator neurotrófico derivado cerebral (BDNF), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), fator estimulante de colônias de granulócitos (G-CSF), fator estimulante de colônias de granulócitos- macrófagos (GM-CSF), fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), eritropoetina (EPO), trombopoietina (TPO), fator de crescimento de fibroblastos básicos (bFGF ou FGF2) e fator de crescimento de hepatócitos (HGF). Destes, proteínas hemostáticas, enzimas, proteínas de transporte, proteínas de músculo, proteínas de defesa, proteínas da toxina, hormônios de proteínas, proteínas de armazenamento, proteínas estruturais e fatores de crescimento são preferidos, e fibrinogênio é particularmente preferido.

[0017] A proteína usada na presente invenção pode ser de origem animal ou fabricada por uma técnica de recombinação genética. Se ela for de origem animal, ela é preferivelmente de origem humana. A proteína fabricada pela técnica de recombinação genética pode ser uma variante obtida por substituição da sequência de aminoácidos por outra sequência de aminoácidos, se a bioatividade essencial for igual. As proteínas obtidas através da modificação destas proteínas e misturas dos mesmos também podem ser usadas.

[0018] Para a proteína usada na presente invenção, um estabilizador e um aditivo, que são farmaceuticamente aceitáveis (a ser referido como "estabilizador, etc." a seguir e distinto do aditivo que é tornado coexistente com a proteína para proporcionar resistência à esterilização por radiação na presente invenção) podem ser adicionados. Os exemplos preferidos do estabilizador, etc. incluem arginina, isoleucina, ácido glutâmico, ácido cítrico, cloreto de cálcio, cloreto de sódio, inibidores da protease (como aprotinina), albumina, tensoativos, fosfolipídios, polietileno glicol, hialuronato de sódio, glicerina, trealose e álcoois de açúcar (tais como glicerol e manitol). Pelo menos um selecionado dentre arginina, cloreto de sódio, trealose, manitol e ácido cítrico é preferido, e o ácido cítrico é particularmente preferido.

[0019] Uma mistura da proteína e do estabilizador, etc., usados na presente invenção contém a proteína em uma quantidade de não mais do que 35 partes em peso, preferivelmente não mais do que 30 partes em peso, com base em 100 partes em peso da mistura.

[0020] Quando o aditivo usado na presente invenção é uma mistura de glicina, fenilalanina e histidina, o teor de glicina é geralmente de 5 a 90 partes em peso, preferivelmente 15 a 60 partes em peso, mais preferivelmente de 20 a 40 partes em peso, o teor de fenilalanina é geralmente de 1 a 80 partes em peso, preferivelmente de 2 a 40 partes em peso, mais preferivelmente de 4 a 20 partes por peso, e o teor de histidina é geralmente de 2 a 70 partes, em peso, preferivelmente de 5 a 40 partes em peso, mais preferivelmente de 8 a 20 partes em peso, com base em 100 partes em peso do total do aditivo e da proteína.

[0021] Quando o aditivo na presente invenção é um derivado de éter de celulose, a proteína ou uma mistura da proteína e do estabilizador, etc., usados na presente invenção pode ser suportada sobre o derivado de éter de celulose, mas preferivelmente, contida no derivado de éter de celulose (a palavra "contida" refere-se a um estado em que, pelo menos, parte da proteína entra no interior do derivado de éter de celulose). Neste caso, as moléculas de proteína e do estabilizador, etc., podem ser dispersas no derivado de éter de celulose, mas preferivelmente como partículas formadas pela agregação das moléculas da proteína e do estabilizador, etc. (podem ser referidas como "partículas de proteína”, incluindo partículas misturadas com o estabilizador, etc.)

[0022] Esta existência preferida da proteína ou das partículas de proteína no derivado de éter de celulose permanece inalterada quando o aditivo é apenas o derivado de éter de celulose e, também, quando o aditivo consiste de uma mistura de glicina, fenilalanina e histidina e do derivado de éter de celulose.

[0023] Exemplos do derivado de éter de celulose usado na presente invenção incluem hidroxipropil celulose, metil celulose, hidroxietil celulose, hidroxipropilmetil celulose, carboximetil celulose de sódio e misturas das mesmas.

[0024] Uma selecionada dentre o grupo consistindo de hidroxipropil celulose, hidroxietil celulose, hidroxipropilmetil celulose e misturas dos mesmos é preferida, e hidroxipropil celulose é a mais preferida.

[0025] Embora o peso molecular do derivado de éter de celulose usado na presente invenção não seja particularmente limitado, quando a medição da viscosidade é realizada a uma concentração de 2% e 20°C, é selecionado um peso molecular que mostra uma viscosidade de 1 a 10.000 mPa.s, preferivelmente de 2 a 5.000 mPa.s, mais preferivelmente de 2 a 4000 mPa.s.

[0026] Na composição de proteína da presente invenção, outro polímero ou outro composto pode ser usado em combinação, desde que o objetivo da presente invenção não seja afetado.

[0027] O derivado de éter de celulose usado na presente invenção preferivelmente tem alta pureza. Especialmente, os teores de aditivos e plastificante contidos no derivado de éter de celulose e resíduos como catalisador residual, monômeros residuais e solvente residual usados para moldagem e pós-processamento são, preferivelmente, tão baixos quanto possível. Especialmente quando a composição é usada para fins médicos, é necessário reduzir estes teores para valores abaixo dos padrões de segurança.

[0028] A forma da composição de proteína da presente invenção não é limitada a uma forma particular, incluindo uma forma indeterminada, e a composição pode estar na forma de uma película, fibra, folha, corpo em forma de placa, corpo em forma de tubo, corpo linear, corpo em forma de haste, material de almofada, espuma ou corpo poroso. O método de moldagem para a produção de um produto moldado não é particularmente limitado desde que seja um método em que a atividade da proteína não seja reduzida. Por exemplo, podem ser empregadas técnicas de moldagem apropriadas, como moldagem por extrusão, moldagem por injeção, moldagem por calandragem, moldagem por compressão, moldagem por sopro, formação de vácuo, moldagem de pó, moldagem de fundição e fundição. A composição de proteína da presente invenção é apropriada para a produção de películas e fibras. A forma de fibra, tal como aqui usado, refere-se a um corpo moldado em 3-D, formado por laminação, tecelagem, tricotagem ou outra técnica de uma ou uma pluralidade de fibras. A forma de fibra é, por exemplo, um pano não tecido. Além disso, um tubo e uma malha obtidos pelo processamento do pano não tecido são incluídos na forma de fibra.

[0029] Para a produção dos mesmos, qualquer uma das técnicas que têm sido empregadas para a produção de películas ou fibras de plástico pode ser empregada. Por exemplo, podem ser usadas técnicas de moldagem por extrusão, tais como fundição, eletrofíação, moldagem por extrusão com inflação e moldagem por extrusão de matriz em T, e técnica de calandragem. A moldagem acima pode ser uma moldagem em solução ou moldagem em fusão, dentre as quais é preferida a moldagem em solução, a fim de facilitar a dispersão da proteína ou das partículas de proteína, de modo a evitar a deterioração funcional da proteína.

[0030] O processo para produzir a composição de proteína tendo uma forma de película fora da presente invenção será explicado, tomando a técnica de fundição como um exemplo. Partículas de proteína tendo um diâmetro médio de partícula (em geral 0,1 a 200 μm, preferivelmente 1 a 100 μm) apropriado para dispersão em um solvente são preparadas socando os pós de proteína liofilizados em um almofariz. Após as partículas de proteína serem dispersas em um ou mais solventes apropriados (como 2-propanol e etanol), o que podem dissolver o derivado de éter de celulose, elas podem formar uma suspensão com as partículas de proteína e evaporar na etapa de formação de película de modo a formar uma película, um derivado de éter de celulose e ainda, opcionalmente, um plastificante tal como MACROGOL são dissolvidos na dispersão resultante, de modo a preparar uma solução de dopante contendo as partículas de proteínas dispersas na solução de derivado de éter de celulose. Uma película é formada pela técnica de moldagem usando a solução dopante obtida.

[0031 ] A composição de proteína tendo uma forma de película fora da presente invenção compreende a proteína ou as partículas de proteínas, em uma quantidade geralmente não inferior a 100% em peso, preferivelmente não inferior a 500% em peso, mais preferivelmente 800 a 950% em peso, com base no derivado de éter de celulose, embora isso dependa do tipo de proteína e do tipo do derivado de éter de celulose. Quando o teor da proteína ou das partículas de proteína cai abaixo da faixa acima, a função da proteína pode não ser obtida totalmente e quando o teor excede a faixa acima, a moldabilidade da película pode tomar-se insatisfatória.

[0032] A espessura média de uma película da composição de proteína tendo uma forma de película fora da presente invenção, que difere de acordo com o uso pretendido, é preferivelmente de 10 a 1.000 μm.

[0033] O diâmetro da fibra média da composição de proteína tendo uma forma de fibra fora da presente invenção é, por exemplo, 0,01 a 50 μm e pode ser apropriadamente determinada por um versado na arte de acordo com o uso pretendido. A composição de proteína pode estar na forma de uma fibra longa. A fibra longa é uma fibra formada sem a adição da etapa de corte de uma fibra no curso da transição de fiação para o processamento de um corpo moldado de fibra. Ela pode ser formada por métodos de eletrofiação, fiação estendida e sopro em fusão. Dentre estes, o método de eletrofiação é preferido porque a fibra longa pode ser moldada sem a adição de calor e a deterioração funcional da proteína pode ser suprimida.

[0034] O método de eletrofiação é um método em que um corpo moldado de fibra é obtido em um eletrodo por aplicação de uma alta tensão a uma solução contendo um polímero. Este processo compreende as etapas de preparar uma solução de fiação contendo um polímero, aplicando uma alta tensão à solução, tratando com jato a solução, formando um corpo moldado de fibra por evaporação do solvente a partir da solução tratada com jato, eliminando a carga do corpo moldado de fibra formado como uma etapa opcional, e acumulando o corpo moldado de fibra por perda de carga.

[0035] Uma descrição é dada subsequentemente do processo para a produção da composição de proteína tendo uma forma de fibra ou uma forma de pano não tecido fora da presente invenção, tendo o método de eletrofiação como um exemplo.

[0036] A etapa de preparar uma solução de fiação no método de eletrofiação será explicada. Uma suspensão de uma solução de derivado de éter de celulose e partículas de proteína é preferivelmente usada como a solução de fiação na presente invenção.

[0037] A concentração do derivado de éter de celulose na suspensão é preferivelmente de 1 a 30% em peso. Quando a concentração do derivado de éter de celulose é menor do que 1% em peso, é difícil formar um corpo moldado de fibra de modo desvantajoso. Quando a concentração é maior do que 30% em peso, o diâmetro da fibra do corpo moldado de fibra obtido toma-se grande e a viscosidade da suspensão toma-se desvantajosamente elevada. A concentração do derivado de éter de celulose na suspensão é mais preferivelmente de 1,5 a 20% em peso.

[0038] O solvente para o derivado de éter de celulose não é particularmente limitado se ele pode dissolver o derivado de éter de celulose, formar uma suspensão com as partículas de proteína e evaporar na etapa de fiação, de modo que uma fibra pode ser formada. Somente um solvente ou uma combinação de dois ou mais solventes pode ser usado. Exemplos do solvente incluem clorofórmio, 2-propanol, tolueno, benzeno, álcool benzílico, diclorometano, tetracloreto de carbono, ciclo-hexano, ciclo-hexanona, tricloroetano, metil-etil-cetona, acetato de etila, acetona, etanol, metanol, tetraidrofurano, 1,4-dioxano, 1-propanol, fenol, piridina, ácido acético, ácido fórmico, hexafluoro-2-propanol, hexafluoroacetona, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, acetonitrila, N-metil-2-pirrolidinona, N- metilmorfolina-N- óxido, 1,3-dioxolano, água e misturas dos mesmos. Dentre estes, 2-propanol ou etanol é preferivelmente usado dos pontos de vista de facilidade de manipulação e propriedades físicas.

[0039] Embora o método de preparação de uma suspensão por mistura junto da solução de derivado de éter de celulose e das partículas de proteína não ser particularmente limitado, por ser usadas ondas de ultravioleta ou meios de agitação. Como meios de agitação, meios de agitação em alta velocidade, como um homogeneizador ou meios de agitação, como um moinho de esferas ou atritor, podem ser usados. Dentre estes, a dispersão com ondas ultra-sônicas é preferida.

[0040] Além disso, a solução de fiação pode ser preparada por adição do derivado de éter de celulose depois de uma suspensão ser formada a partir de um solvente e de partículas de proteína.

[0041] Antes da preparação da suspensão, partículas de proteína podem ser microfabricados. Para microfabricação, existe moagem a seco e moagem a úmido, e ambos podem ser empregados e podem também ser combinados na presente invenção.

[0042] Moagem a seco é realizada por moagem com moinho de esferas, moinho planetário ou moinho oscilante, socando em um almofariz com um pilão, ou por trituração com um pulverizador de tipo de agitação do meio, moinho de jato ou moinho de pedra.

[0043] Entretanto, a moagem úmida é realizada por agitação com um agitador ou amassador tendo elevada força de cisalhamento, enquanto as partículas de proteína são dispersas em um meio de dispersão apropriado, ou usando um moinho de esferas ou moinho de contas, enquanto as partículas de proteína são dispersas em um meio.

[0044] Além disso, as partículas de proteínas produzidas por um secador de pulverização também podem ser usadas.

[0045] Na composição de proteína tendo uma forma de fibra ou uma forma de pano não tecido da presente invenção, os tamanhos das partículas de proteína não são particularmente limitados, mas preferivelmente de 0,01 a 100 μm. E tecnicamente difícil fabricar partículas de proteína tendo um tamanho de partícula menor do que 0,01 μm, e quando o tamanho de partícula é maior do que 100 μm, dispersibilidade degrada e o corpo moldado de fibra toma-se fragilizado de um modo desvantajoso.

[0046] O método de esterilização usado para a composição de proteína da presente invenção é a esterilização por radiação. Exemplos da radiação incluem raios alfa, raios beta, raios gama, raios de nêutrons, feixes de elétrons e raios-X. Dentre estes, raios gama e feixes de elétrons são preferidos, e feixes de elétrons são os mais preferidos. Embora o método de esterilização não seja particularmente limitado, a dose da radiação entre 10 e 80 kGy, preferivelmente 20 a 30 kGy. Embora a condição de temperatura não seja particularmente limitada, ela é de -80 a 40°C, preferivelmente -80 a 30°C.

[0047] A radiação como raios alfa, positrons, raios gama, raios nêutrons, feixes de elétrons ou raios-X extrai um elétron das moléculas ou átomos constituindo uma substância, quando ela é aplicada à substância. Uma ligação molecular é rompida então, e um radical altamente reativo é produzido e reage quimicamente com uma substância circundante secundariamente.

[0048] Sabe-se bem que uma proteína tende a perder a sua função (atividade) após a exposição à radiação. Isto é considerado como sendo devido à destruição de "uma estrutura de ordem elevada", que é uma fonte de desenvolvimento de uma função pela ruptura de uma ligação molecular por exposição. No entanto, a deterioração funcional da composição de proteína da presente invenção é suprimida, mesmo quando ela é exposta à radiação. Isto significa que a estrutura de ordem elevada da proteína fica retida na composição da presente invenção, o que é um efeito comum, independentemente do tipo de proteína. Não é considerado a partir da espessura do derivado de éter de celulose, através da qual a radiação é transmitida, que este efeito é devido a uma triagem, e o mecanismo de controle não é conhecido. Também não é conhecido o mecanismo de um fenômeno que o efeito do derivado de éter de celulose é notavelmente melhorado pela adição de aminoácidos específicos.

[0049] A composição de proteína da presente invenção pode ainda compreender um sequestrator de elétrons/íons, agente de transferência de energia, sequestrador de radicais, antioxidantes e plastificantes. Exemplos dos sequestradores de elétrons/íons incluem N, N'-tetrametil fenilenodiamina, difenilenodiamina, pireno e quinona. Exemplos do agente de transferência de energia incluem acenafteno. Exemplos do sequestrador de radicais incluem mercaptanos, octahidrofenantreno, monoalquil difenil éteres, tocoferol, ácido cítrico, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, t-butil hidroquinona, gaiato de propila e derivados do ácido ascórbico. Exemplos do antioxidante incluem BHT, triésteres de fosfito, agentes antienvelhecimento fenólicos e sais de ácidos tio orgânicos. Aditivos que são geralmente aceitos como seguros para uso em alimentos e produtos farmacêuticos são os preferidos. A quantidade do aditivo que não é particularmente limitada é, por exemplo, 0,01 a 10% em peso, com base no derivado de éter de celulose na composição de proteína.

[0050] O derivado de éter de celulose contendo a proteína na etapa de esterilização, preferivelmente não contém água. O teor de água do derivado de éter de celulose é preferivelmente não maior do que 10% em peso, mais preferivelmente não maior do que 4% em peso, muito mais preferivelmente substancialmente 0% em peso.

[0051] A composição de proteína da presente invenção pode ser envolvida em um material de embalagem a ser esterilizado com radiação. Como o material de embalagem, um material com elevadas propriedades de barreira a gás, como alumínio, é preferivelmente usado. A composição de proteína pode ser hermeticamente selada e embalada junto com desoxidante ou dessecante ou enquanto um gás inerte é colocado dentro da embalagem após desgaseificação, ou ambos os métodos podem ser combinados juntos. Como o desoxidante e o dessecante, os que não fazer mal para o corpo humano e não são desativados após a exposição à radiação são preferidos.

[0052] A composição de proteína da presente invenção pode ser usada como um material médico, que requer a função de esterilidade de uma proteína.

[0053] A presente invenção inclui uma composição de proteína estéril obtida por esterilização da composição de proteína da presente invenção com radiação.

EXEMPLOS

[0054] Os exemplos que se seguem são dados a fim de ainda ilustrar a presente invenção, mas não devem ser tomados como limitativos. Métodos de medição para Exemplos 1 a 4 e Exemplos comparativos 1 e 2 1. Diâmetro médio de fibra:

[0055] Os diâmetros das fibras em 20 locais selecionados aleatoriamente a partir de uma foto da superfície do corpo moldado da fibra obtida tomada por um microscópio eletrônico de varredura (VE8800 de Keyence Corporation) com uma ampliação de 3.000 vezes para obter o valor médio de todos os diâmetros de fibras como o diâmetro médio de fibra. N = 20. 2. Espessura média:

[0056] As espessuras de película de 15 corpos moldados de fibras cortadas a um tamanho de 50 mm x 100 mm foram medidas com uma força de medição de 0,01 N por meio de uma unidade de medição digimatic de alta resolução (LITEMATIC VL-50 da Mitutoyo Corporation) para calcular o valor médio. Esta medição foi realizada com a força de medição mínima que pode ser usada pela unidade de medição. 3. Medição ELISA (1) Fibrinogênio

[0057] 10 μg/mL de um anticorpo de fibrinogênio anti-humano (DAKO A0080) foram imobilizados em uma placa ELISA (NUNC 468667). Depois foram lavados com PBS contendo 0,05% de Tween 20, Block Ace (UK-B80 de DS Pharma Biomedical Co., Ltd.) foi adicionado a cada cavidade para realizar mascaramento. Após lavagem com PBS contendo 0,05% de Tween 20, um corpo de teste foi adicionado. Fibrinogênio humano (No. FIB3 de Enzyme Research Laboratories) foi usado como um padrão para formar uma curva de calibração. Após lavagem com PBS contendo 0,05% de Tween 20, um anticorpo de fibrinogênio anti-humano rotulado com HRP (CPL5523) foi adicionado. Depois de uma reação, o produto de reação foi lavado com PBS contendo 0,05% de Tween 20, um reagente TMB (KPL 50-76-02 50-65- 02) foi adicionado, e a mistura resultante foi deixada durante 6 minutos para revelar a cor. 1 M H3PO4 foi adicionado para parar a revelação da cor, de modo a medir OD450-650 nm com uma leitora de microplacas. (2) Trombina

[0058] 5 μg/mL de um anticorpo de trombina anti-humano (No. SAHT-AP de Affinity Biologicals Inc.) foram imobilizados em uma placa ELISA (NUNC 468667). Depois de ter sido lavado com PBS contendo 0,05% de Tween 20, Block Ace (UK-B80 de DS Pharma Biomedical Co., Ltd.) foi adicionado a cada cavidade para realizar mascaramento. Após lavagem com PBS contendo 0,05% de Tween 20, um corpo de teste foi adicionado. A trombina humana (HCT-0020 de Haematologic Technologies, Inc.) foi usada como um padrão para formar uma curva de calibração. Após lavagem com PBS contendo 0,05% de Tween 20, 0,1 μg/ml de um anticorpo de trombina anti-humano rotulado com HRP (No. SAHT-HRP de Affinity Biologicals Inc.) foi adicionado. Depois de uma reação, o produto de reação foi lavado com PBS contendo 0,05% de Tween 20, um reagente TMB (DaKo SI599) foi adicionado, e a mistura resultante foi deixada durante 10 minutos para revelar a cor. 0,5 M H2SO4 foi adicionado para parar a revelação da cor, de modo a medir OD450-650 nm com uma leitora de microplacas. 4. Medição de atividade de trombina

[0059] 20 μL e uma amostra e 80 μL de uma solução de diluição para a medição de atividade (0,01% de F-68, 50 mmol/L de NaCl, 50 mmol/L Tris- HC1, pH 8,4) foram adicionados ao tubo de poliestireno de BD (Becton, Dickinson and Company) para ser incubados a 37 C durante 3 minutos. Trombina recombinante (padrão de trombina JPU 400 U/mL ou padrão de trombina WHO/US 110 lU/mL: preparada por suas próprias empresas) diluída com o tampão acima, a 4, 2, 1, 0,5 e 0,25 U/mL, no caso de JPU e 6, 3, 1,5, 0,75 e 0,375 IU/mL no caso de IU ser usado como um padrão. 100 μL do substrato cromogênico da equipe de teste S-2238 (1 mM: Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd.) foram adicionados e misturados com a solução de reação obtida sob agitação para realizar uma reação a 37°C durante 7 minutos, e, então, 800 μL de uma solução de ácido cítrico 0,1 M foram adicionados para terminar a reação. 200 μL da solução de reação foram transferidos para placas de 96 cavidades para medir OD405/650. Exemplo 1

[0060] Após pós de fibrinogênio liofilizados (Bolheal, (marca registrada, o mesmo se aplica a seguir), adesivo tecido: Frasco 1) foram dispersos em 2-propanol, hidroxipropil celulose (6-10 mPa s, fabricado por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) foi dissolvido na dispersão resultante a uma concentração de 16% em peso, de modo a preparar uma solução de fiação tendo uma razão de partícula contendo fibrinogênio/ hidroxipropil celulose de 20 (9,2 como fibrinogênio) / 100 (p/p). A fiação foi realizada por um método de eletrofiação, a uma temperatura de 22°C e uma umidade de não mais do que 26% para obter um corpo moldado de fibra de tipo folha. O diâmetro interno de um bico de jato foi de 0,8 mm, a tensão de 11 kV, a taxa de fluxo da solução de fiação de 1,2 ml/h, e a distância a partir do bico de jato para uma placa plana foi 15 cm. O corpo moldado de fibra obtido tinha um diâmetro médio de fibra de 0,86 μm e uma espessura média de 137 μm. A folha obtida foi esterilizada com um feixe de elétrons de 20 kGy. A folha esterilizada foi cortada em um tamanho de 0,5 cm x 0,5 cm, e a proteína foi extraída com 62,5 μL de solução salina fisiológica para efetuar a medição ELISA. Como resultado, a quantidade de proteína imobilizada foi 0,15 mg/cnr. No entanto, quando a medição ELISA foi efetuada em uma folha não esterilizada do mesmo modo, a quantidade da proteína imobilizada foi de 0,16 mg/cm2. Portanto, a taxa de recuperação da proteína da folha esterilizada foi de 94% da folha não esterilizada. Exemplo 2

[0061] Após os pós de fibrinogênio liofílizados (Bolheal adesivo tecido: Frasco 1) serem dispersos em 2-propanol, hidroxipropil celulose (6-10 mPa s, fabricada por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) foi dissolvido na dispersão resultante até uma concentração de 16% em peso de modo a preparar uma solução de fiação tendo uma razão de pó de fibrinogênio liofílizado/hidroxipropil celulose de 40 (18, como o fibrinogênio) / 100 (p/p). A fiação foi realizada pelo método de eletrofíação, a uma temperatura de 22 °C e uma umidade de não mais do que 26% para obter um corpo moldado de fibra de tipo folha. O diâmetro interno do bico de jato foi de 0,8 mm, a tensão de 12,5 kV, a taxa de fluxo da solução de fiação de 1,2 ml/h, e a distância a partir do bico de jato para a placa plana foi 15 cm. O corpo moldado de fibra obtida tinha um diâmetro médio de fibra de 0,43 μm e uma espessura média de 152 μm. A folha obtida foi esterilizada com um feixe de elétrons de 20 kGy. A folha esterilizada foi cortada a um tamanho de 0,5 cm x 0,5 cm, e a proteína foi extraída com 62,5 μL de solução salina fisiológica para efetuar a medição ELISA. Como resultado, a quantidade de proteína imobilizada foi de 0,27 mg/cm2. Entretanto, quando a medição de ELISA foi efetuada em uma folha não esterilizada do mesmo modo, a quantidade de proteína imobilizada foi de 0,30 mg/cm2. Portanto, a taxa de recuperação da proteína da folha esterilizado foi de 90% da folha não esterilizada. Exemplo 3

[0062] Após pós liofilizados de fibrinogênio (adesivo de tecido Bolheal: Frasco 1) serem dispersos em 2-propanol, hidroxipropil celulose (6- 10 mPa- s, fabricada por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) foi dissolvida na dispersão resultante até uma concentração de 16 % em peso, de modo a preparar uma solução de fiação tendo uma razão de pó de fibrinogênio liofilizado /hidroxipropil celulose de 100 (46 como fibrinogênio) / 100 (p/p). A fiação foi realizada pelo método de eletrofiação, a uma temperatura de 22°C e uma umidade de não mais do que 26% para obter um corpo moldado de fibra de tipo folha. O diâmetro interior do bico de jato foi de 0,8 mm, a tensão de 12,5 kV, a taxa de fluxo da solução de fiação de 1,2 ml/h, e a distância a partir do bico de jato para a placa plana foi de 15 cm. O corpo moldado de fibra obtida tinha um diâmetro médio de fibra de 0,35 μm e uma espessura média de 191 μm. A folha obtida foi esterilizada com um feixe de elétrons de 20 kGy. A folha esterilizada foi cortada a um tamanho de 0,5 cm x 0,5 cm, e a proteína foi extraída com 62,5 μL de solução salina fisiológica para efetuar a medição ELISA. Como resultado, a quantidade de proteína imobilizada foi 0,78 mg/cnf. Entretanto, quando a medição de ELISA foi efetuada em uma folha não esterilizada do mesmo modo, a quantidade de proteína imobilizada foi 0,76 mg/cm2. Portanto, a taxa de recuperação da proteína da folha esterilizado foi 102% da folha não esterilizada. Exemplo Comparativo 1

[0063] Os pós liofilizados de fibrinogênio (Bolheal tecido adesivo: frasco 1) foram esterilizados com um feixe de elétrons de 20 kGy. A proteína foi extraída com 1 mL de solução salina fisiológica para efetuar a medição ELISA. Como resultado, o valor da medição ELISA foi de 31 μg/mL. Entretanto, quando a medição ELISA foi feita em pós de fibrinogênio liofilizados não esterilizados (Bolheal) do mesmo modo, o valor da medição ELISA foi de 90 μg/mL. Portanto, a taxa de recuperação da proteína da folha esterilizado foi de 34% da folha não esterilizada. Exemplo 4

[0064] Após partículas contendo trombina (preparadas por liofilização de uma solução aquosa contendo 1 mg/mL de trombina recombinante, cloreto de sódio, citrato de sódio, cloreto de cálcio e manitol e tendo um pH de 7) serem dispersas em 2-propanol, hidroxipropil celulose (2.0-2.9 mPa.s, fabricada por Nippon Soda Co., Ltd.) foi dissolvida na dispersão resultante até uma concentração de 13% em peso, de modo a preparar uma solução dopante tendo uma razão de partículas contendo trombina/hidroxipropil celulose de 100/100 (p/p). A fiação foi realizada pelo método de eletrofiação para obter um corpo moldado de fibras em forma de folha. O corpo moldado de fibra obtido tinha uma espessura de 204 μm, um peso de 2,08 mg/cnr e uma densidade em bruto de 101 mg/cm3. A folha obtida foi cortada em um diâmetro de 1 cm, e a proteína foi extraída com 200 μL de solução salina fisiológica para medir sua atividade. Como resultado, o valor de medição de atividade foi 110,3 L/cm2. A folha obtida foi esterilizada por exposição a um feixe de elétrons de 30 kGy para medir a atividade da trombina. Quando a atividade de trombina antes da esterilização foi de 100%, a taxa de retenção da atividade de trombina logo depois da exposição a um feixe de elétrons foi 68,4%. Exemplo Comparativo 2

[0065] Depois de um feixe de elétrons de 30 kGy ser aplicado a partículas contendo trombina (preparadas por liofilização de uma solução aquosa contendo 1 mg/mL de trombina recombinante, cloreto de sódio, citrato de sódio, cloreto de cálcio e manitol e tendo um pH de 7) para esterilizar as mesmas, a atividade de trombina foi medida. A atividade de trombina antes da exposição foi de 404,73 U/frasco. Quando a atividade de trombina antes da esterilização foi 100%, a taxa de retenção da atividade da trombina logo após a exposição a um feixe de elétrons foi de 51,8%. Métodos de medição para Exemplos 5 e 6 e Exemplos comparativos 3 e 4 1. Espessura média:

[0066] As espessuras da película de 9 corpos moldados de fibra obtidos por corte da composição a um tamanho apropriado foram medidas com uma força de medição de 0,01 N por meio de uma unidade digimatic de medição de alta resolução (LITEMATIC VL-50 de Mitutoyo Corporation) para calcular o valor médio. Esta medição foi realizada com a força de medição mínima de que pode ser usada pela unidade de medição. 2. Medição de atividade de enzima

[0067] Um kit de teste de lipase fluorométrico contínuo (fabricado por PROGEN BIOTECHNIK GMBH) foi usado para medir a atividade de lipase. A taxa de retenção de atividade foi calculada a partir da seguinte equação. A quantidade de enzima ativa foi calculada em termos de concentração a partir do valor de atividade. Taxa de retenção de atividade (%) = {quantidade de enzima ativa após esterilização (mg/cm2) /quantidade de enzima ativa antes da esterilização (mg/cm2)} x 100

[0068] Medição fluorescente usando Tokyogreen (marca registrada, o mesmo aplica-se a seguir) - βGlu (de Sekisui Medical Co., Ltd.) foi empregado para medir a atividade de β-glicosidase. A taxa de recuperação de atividade foi calculada a partir da seguinte equação. O peso teórico da enzima imobilizada foi calculado a partir da % em peso do pó de enzima carregado e o peso da composição. Taxa de recuperação de atividade (%) = {quantidade de enzima ativa (mg) / peso teórico de enzima imobilizada (mg)} x 100

[0069] A taxa de retenção de atividade foi calculada a partir da seguinte equação. Taxa de retenção de atividade (%) = {taxa de recuperação de atividade após esterilização (%) / taxa de recuperação de atividade antes de esterilização (%))} x 100 Exemplo 5

[0070] Após os pós de lipase (derivados de pâncreas de porco, fabricados por Wako Pure Chemical Industries, Ltd., o mesmo se aplica a seguir) foram dispersos em 2-propanol, hidroxipropil celulose (6-10 mPa s, fabricado por Wako Pure Chemical Industries, Ltd. ) serem dissolvidos na dispersão resultante até uma concentração de 13% em peso, de modo a preparar uma solução de fiação tendo uma razão de pó de lipase/hidroxipropil celulose de 50/100 (p/p). A fiação foi realizada pelo método de eletrofiação, a uma temperatura de 27°C e uma umidade de não mais do que 27% para se obter um corpo moldado de fibra de tipo folha. O diâmetro interior do bico de jato foi de 0,8 mm, a tensão de 18 kV, a taxa de fluxo da solução de fiação de 1,2 ml/h, e a distância a partir do bico de jato para a placa plana foi de 16,5 cm. O corpo moldado de fibra obtido (10 cm x 14 cm) tinha uma espessura média de 168 μm. O corpo de fibra moldada obtido foi esterilizado com um feixe de elétrons de 20 kGy. Depois do corpo moldado de fibra esterilizado ser cortada em um tamanho de 1 cm x 1 cm, a lipase foi extraída com 1 mL de um tampão de lipase contida em um kit para medir a sua atividade. Como resultado, a quantidade de enzima ativa foi de 0,46 mg/cm2. Entretanto, quando a medição da atividade foi efetuada em uma folha não esterilizada do mesmo modo, a quantidade de enzima ativa foi de 0,40 mg/cm2. Entende-se a partir do acima que a taxa de retenção de atividade do corpo moldado de fibra esterilizado foi de 115% da do corpo moldado de fibra não esterilizado e que lipase não foi desativada por esterilização com um feixe de elétrons. Exemplo 6

[0071] Após os pós de lipase serem dispersos em 2-propanol, hidroxipropil celulose (6-10 mPas, fabricada por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) foi dissolvida na dispersão resultante a uma concentração de 13% em peso, de modo a preparar uma solução moldada tendo uma razão de pó de lipase/hidroxipropil celulose de 50/100 (p/p). A fundição foi realizada usando uma espátula (3-YBA de Yoshimitsu) com uma largura de revestimento de 381 microns (15 mil) para obter uma folha. A folha obtida (4 cm x 6 cm) tinha uma espessura média de 180 μm. A folha obtida foi esterilizada com um feixe de elétrons de 20 kGy. Depois a folha esterilizada foi cortada em um tamanho de 1 cm x 1 cm, a lipase foi extraída com 1 mL de um tampão de lipase contido em um kit para medir sua atividade. Como resultado, a quantidade de enzima ativa foi 0,69 mg/cm2. Entretanto, quando a medição atividade foi efetuada em uma folha não esterilizada do mesmo modo, a quantidade de enzima ativa foi de 0,64 mg/cm2. Entende-se a partir do acima que a taxa de retenção da atividade da folha esterilizado foi 108% da folha não esterilizada e que lipase não foi desativada por esterilização com um feixe de elétrons. Exemplo 7

[0072] Após os pós de β-glicosidase (derivados de amêndoa, fabricados por Oriental Yeast Co., Ltd., o mesmo se aplica a seguir) serem dispersos em 2-propanol, hidroxipropil celulose (6-10 mPa-s, fabricado por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) foi dissolvida na dispersão resultante até uma concentração de 13% em peso, de modo a preparar uma solução de fiação tendo uma razão de pó de β-glicosidase /hidroxipropil celulose de 38/62 (p/p). A fiação foi realizada pelo método de eletrofiação, a uma temperatura de 27°C e uma umidade de não mais do que 27% para obter um corpo moldado de fibra de tipo folha. O diâmetro interno do bico de jato foi 0,9 mm, a tensão de 18 kV, a taxa de fluxo da solução de fiação de 1,2 ml/h, e a distância a partir do bico de jato para a placa plana foi de 16,5 cm. O corpo moldado de fibra obtido (lOcm x 10 cm) tinha uma espessura média de 207 μm. Depois do corpo moldado de fibra obtido ser cortado em um tamanho de 2 cm x 2 cm, ele foi esterilizado com um feixe de elétrons de 20 kGy. β- glicosidase foi extraída a partir da folha esterilizada obtida com 1 mL de solução salina fisiológica para medir a sua atividade com Tokyogreen-βGlu. Como resultado, a taxa de recuperação de atividade foi de 42%. Entretanto, quando a medição da atividade foi feita em uma folha não esterilizadas da mesma forma, a taxa de recuperação de atividade foi de 46%. Entende-se a partir do acima que a taxa de retenção da atividade do corpo moldado de fibra esterilizado foi de 91% da do corpo moldado de fibra não esterilizado e que a desativação da enzima pode ser suprimida por conter a mesma no derivado de éter de celulose. Exemplo Comparativo 3

[0073] Os pós de lipase foram esterilizados com um feixe de elétrons de 20 kGy. 1 mL de um tampão de lipase foi adicionado a 1 mg dos pós para medir a sua atividade. Como resultado, o valor de atividade foi de 0,25 pmol/mL min. Entretanto, quando a medição da atividade foi feita no pós de lipase não esterilizados da mesma forma, o valor da atividade foi de 0,34 pmol/mL-min. Assim, a taxa de retenção de atividade dos pós esterilizados foi 74% da dos pós não esterilizados. Exemplo Comparativo 4

[0074] Os pós de β-glicosidase foram esterilizados com um feixe de elétrons de 20 kGy. 2 mg dos pós foram dissolvidos em 1 mL de uma solução salina fisiológica para medir sua atividade com Tokyogreen-βGlu. Como um resultado, e taxa de retenção de atividade foi 81 %. Método de medição para Exemplos 8 a 10

[0075] Quando um feixe de elétrons é aplicado a pós de fibrinogênio liofilizados (partículas contendo fibrinogênio), ocorrem mudanças de fibrinogênio (aumento na quantidade de seu agregado, redução na resistência do gel). Para investigar o efeito de suprimir as mudanças de fibrinogênio por exposição a um feixe de elétrons (efeito de resistência à esterilização), uma solução em bruto de fibrinogênio foi preparada e 1 mL de uma solução em bruto foi carregado em um frasco de 5 mL de vidro para ser liofilizado. Um feixe de elétrons de 30 kGy foi aplicado a uma parte do frasco em que foi completada a liofilização para comparar cada produto liofilizado antes e depois da esterilização.

[0076] A avaliação da comparação foi realizada por medição da resistência do gel por meio do aparelho testador de bancada pequena EZTest (de Shimadzu Corporation) e o teor de agregado por meio de BioSep SEC- s4000-(de Phenomenex) (condições de análise: fracionamento com uma solução de tampão de ácido fosfórico 50 mM (pH de 7,0) e 0,5 M de sal cloridrato de arginina como as fases móveis, a uma taxa de fluxo de 1,0 ml/min, detectando uma substância alvo, com um comprimento de onda de 280 nm, e determinando a quantidade do agregado a partir de um pico detectada mais cedo do que um pico de monômero).

[0077] Como para o procedimento de preparação de uma amostra para análise (amostra analítica), um frasco de produto liofilizado não esterilizado e um frasco do produto liofilizado esterilizado foram cada dissolvidos em 1 mL de água destilada. As soluções resultantes foram centrifugadas por um tubo de centrífuga a 15.000 rpm durante 5 minutos e deixadas passar através de um filtro de 0,45 μm para serem usadas como amostras analíticas. Exemplo 8

[0078] O efeito de resistência à esterilização para uma proteína de uma combinação de um derivado de éter de celulose e aditivos específicos foi investigado pelo seguinte método. (Método) A função de fibrinogênio foi avaliada através da medição da resistência do gel de cada uma das soluções em bruto de fibrinogênio de composições compreendendo "um derivado de éter de celulose + aditivos específicos" (composições (1) mostrados na Nos. 1 a 6 na Tabela 1 abaixo) e soluções em bruto de fibrinogênio de composições (2) preparadas por eliminação do derivado de éter de celulose a partir das composições (1), e as resistências de gel, antes e depois da esterilização destas soluções foram comparados uns com os outros para investigar o efeito de resistência à esterilização. Os resultados são mostrados na Tabela 2.

[0079] As composições (1) (pós liofilizados e hidroxipropil celulose foram colocados em suspensão de 2-propanol para formar uma folha) e as composições (2) (pós liofilizados) foram dissolvidas em água para uma concentração de Fbg de 1% e diluídas com uma solução de tampão contendo 10 mM arginina e 270 mM cloreto de sódio e tendo um pH de 8,5 para uma concentração de 2 mg/mL.

[0080] Após 10 μL de fibrogamina (240 unidades/mL) e 110 μL de uma solução de trombina (contendo 0,2 mg/mL de 100 mM cloreto de cálcio) foram adicionados a um tubo de polipropileno de 2 mL e a solução resultante foi pipetada, 900 μL de 2 mg/mL de solução de fibrinogênio foram adicionados de tal modo que as bolhas de ar não estavam contidas e deixadas permanecer a 37°C durante uma hora para medir a resistência do gel por meio de um aparelho de teste de topo de bancada pequena EZTest (de Shimadzu Corporation). Tabela 1 Composições (1): composições compreendendo derivado de éter de celulose + aditivos específicos

Composições (2): composições compreendendo aditivos específicos

[0081] Estas foram preparadas por eliminação do derivado de éter de celulose (hidroxipropil celulose: HPC) a partir das composições (1). (Resultados)

[0082] Os valores de resistência do gel após esterilização são mostrados na Tabela 2 e Fig. 1 quando os valores antes de esterilização são 100. Tabela 2 Efeito de resistência à esterilização para proteína de uma combinação de derivado de éter de celulose e aditivos específicos

[0083] O efeito de melhora da resistência à esterilização devido à existência do derivado de éter de celulose não foi observado na composição No. 1, enquanto que o efeito acima devido à existência do derivado de éter de celulose foi observado nas composições Nos. 2 a 6. Este efeito foi marcado especialmente na composição Nos. 3 to 6. Exemplo 9

[0084] O efeito de resistência à esterilização de glicina foi investigado com as composições (duas) mostradas na Tabela 3 abaixo, do mesmo modo que no Exemplo 8. Os resultados são mostrados em Tabela 4. Tabela 3 Composições para avaliar o efeito de resistência à esterilização de glicina Composição Fibrinogênio Arginina (pH 8,5) Cloreto de sódio Manitol Glicina

Tabela 4 Resultados da avaliação do efeito de resistência à esterilização de glicina

[0085] Um aumento no teor do agregado de fibrinogênio foi suprimido pela adição de glicina. Exemplo 10

[0086] O efeito de resistência à esterilização de uma combinação de um derivado de éter de celulose e aditivos específicos foi investigado pelo mesmo método como no Exemplo 8.

[0087] Hidroxipropil celulose (HPC) como o derivado de éter de celulose e oito diferentes soluções em bruto de fibrinogênio mostradas na Tabela 5 abaixo foram usadas. 1,0 % de fibrinogênio, 110 mM cloreto de sódio, 1,0 % de glicina e 0,2 % de manitol foram usados nas seguintes oito composições. Os resultados são mostrados em Tabela 6 e Fig. 2. Tabela 5. Efeito de resistência à esterilização de uma combinação de derivado de éter de celulose e aditivos específicos

Tabela 6 Resultados de avaliação do efeito de resistência à esterilização de uma combinação de derivado de éter de celulose e aditivos específicos

[0088] Um aumento no teor da proteína agregada foi suprimido pela adição do derivado de éter de celulose. O efeito de suprimir o aumento do teor acima devido à existência do derivado de éter de celulose foi marcado nas composições 2 a 4 compreendendo fenilalanina e histidina. Entende-se, a partir dai, que a razão porque o efeito de melhorar a resistência à esterilização devido à existência do derivado de éter de celulose não é observado na composição No.l, enquanto que o efeito é observado e marcado na composição Nos. 3 a 6 no Exemplo 7, é considerada como sendo devida ao fato de que a coexistência de fenilalanina e histidina com o derivado de éter de celulose na composição nos. 3 e 6 proporciona um efeito de resistência à esterilização marcado para uma proteína. Efeito da Invenção

[0089] A composição de proteína da presente invenção tem resistência à esterilização por radiação. A composição estéril da presente invenção retém a estrutura e função de uma proteína embora seja esterilizada. Aplicabilidade Industrial

[0090] A composição de proteína da presente invenção é usada na indústria de fabricação de produtos médicos que requer a função e esterilidade de uma proteína.

Claims

1. Composição de proteína que compreende uma proteína e um derivado de éter de celulose, caracterizada pelo fato de que a composição de proteína ainda compreende glicina, fenilalanina e histidina, e é esterilizada com radiação.

2. Composição de proteína que compreende uma proteína e um derivado de éter de celulose, caracterizada pelo fato de que pelo menos parte da proteína entra, no estado de partículas de proteína, o interior do derivado de éter de celulose e a composição de proteína tem um teor de água de não mais que 10% em peso e é esterilizada com radiação.

3. Composição de proteína que compreende uma proteína e um derivado de éter de celulose, caracterizada pelo fato de que pelo menos parte da proteína entra, no estado de partículas de proteína, o interior do derivado de éter de celulose e a composição de proteína é esterilizada com radiação e está na forma de uma película, fibra, folha, corpo em forma de placa, corpo em forma de tubo, corpo linear, corpo em forma de haste, corpo em espuma ou corpo poroso.

4. Composição de proteína de acordo com a reivindicação 2 ou 3, caracterizada pelo fato de que ainda compreende uma mistura de glicina, fenilalanina e histidina.

5. Composição de proteína de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o derivado de éter de celulose é selecionado dentre o grupo consistindo de hidroxipropil celulose, metil celulose, hidroxietil celulose, hidroxipropilmetil celulose, carboximetil celulose de sódio e misturas das mesmas.

6. Composição de proteína de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o derivado de éter de celulose é selecionado dentre o grupo consistindo de hidroxipropil celulose, hidroxietil celulose, hidroxipropilmetil celulose e misturas das mesmas.

7. Composição de proteína de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o derivado de éter de celulose é hidroxipropil celulose.

8. Composição de proteína de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que a proteína é selecionada dentre o grupo consistindo de enzimas, proteínas de transporte, proteínas de músculo, proteínas de defesa, proteínas de toxinas, hormônios de proteína, proteínas de armazenamento, proteínas estruturais, fatores de crescimento e misturas dos mesmos.

9. Composição de proteína de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que a proteína é fibrinogênio.

10. Composição de proteína de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de estar na forma de película.

11. Composição de proteína de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de estar na forma de fibra.