BR112014023585B1

BR112014023585B1 - Processo para produzir uma quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina e processo para produzir uma quitosana neutra de baixo teor de endotoxina

Info

Publication number: BR112014023585B1
Application number: BR112014023585-6A
Authority: BR
Inventors: Gladman June; Hardy Craig; Hoggarth Andrew
Original assignee: Medtrade Products Limited
Priority date: 2012-03-23
Filing date: 2013-03-25
Publication date: 2022-01-04
Also published as: GB2500817A; WO2013140190A1; CA2868148A1; US11485798B2; ES2667271T3; GB201305417D0; BR112014023585A2; IN2014DN08783A; US20150080335A1; US20160168277A1; AU2013237185A1; JP2015511663A; JP6226950B2; AU2013237185B2; EP2828300A1; EP2828300B1; PL2828300T3; PT2828300T; CA2868148C; US11498981B2

Abstract

processo para produzir uma quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina, quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina, processo para produzir uma quitosana neutra de baixo teor de endotoxina, um sal de quitosana ou um derivado de quitosana, quitosana neutra de baixo teor de endoxina, sal de quitosana de baixo teor de endotoxina, derivado de quitosana, uso de um sal de quitosana de baixo teor de endotoxina, curativo hemostático de feridas, método de estancar o fluxo sanguíneo. a presente invenção refere-se a um processo para produzir uma quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina, e também a um processo para produzir quitosana neutra de baixo teor de endotoxina, sal de quitosana e derivados de quitosana, e aos produtos de tais processos. o processo compreende contatar quitosana com uma solução alcalina para formar uma mistura e deixar a mistura durante pelo menos cerca de 12 horas. a quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina pode ser usada na fabricação de produtos à base de quitosana utilizáveis.

Description

[0001] A presente invenção refere-se a um processo para produzir uma quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina, e também a um processo para produzir quitosana neutra de baixo teor de endotoxina, sal de quitosana e derivados de quitosana, e aos produtos destes processos.

[0002] Quitosana é particularmente útil na preparação de materiais hemostáticos para uso no controle de sangramentos.

[0003] Quitosana é um derivado de resíduos sólidos de processamento de crustáceos e pode ser extraído de cultura do fungo. A quitosana é um material polimérico catiônico insolúvel em água. Antes de utilizar a quitosana em materiais hemostáticos, ela é frequentemente primeiro convertida em um sal solúvel em água. Desta forma, o sal de quitosana é solúvel no sangue para formar um gel que estanca todo o fluxo de sangue.

[0004] Os sais de quitosana são ideais para as aplicações aqui descritas como quitosana é facilmente quebrada no corpo. A quitosana é convertida em glucosamina pela enzima lisozima e assim é excretada do corpo naturalmente. Não é necessário remover a quitosana do corpo. Além disso, sais de quitosana apresentam propriedades antibacterianas leves e, como tal, o seu uso reduz o risco de infecção.

[0005] A fim de utilizar a quitosana na preparação de materiais hemostáticos que são adequados para uso no controle do sangramento, é necessário garantir que a quitosana demonstrou uma concentração suficientemente baixa de endotoxina.

[0006] A endotoxina é um lipopolissacarídeo existente sobre a superfície da membrana exterior de bactérias gram-negativas. As endotoxinas são altamente tóxicas para os mamíferos, particularmente humanos, e são notoriamente difíceis de remover dos materiais. As endotoxinas podem tornar-se pirogênicas quando liberadas na corrente sanguínea ou outros tecidos onde não são normalmente encontradas. Assim, endotoxina deve ser removida de produtos farmaceuticamente aceitáveis.

[0007] Tratamentos para remover ou destruir pirogênios, especialmente endotoxina, são referidos como métodos de “despirogenação”. Técnicas para a despirogenação de materiais contendo endotoxinas incluem cromatografia de troca iônica, ultrafiltração, destilação e vários processos químicos que visam destruir a endotoxina.

[0008] WO2008063503 refere a um método de remoção de endotoxinas de quitosana, incluindo as seguintes etapas:a) utilização de equipamentos estéreis livres de pirogênios e materiais em um ambiente estéril;b) intumescimento da quitosana contendo endotoxinas durante até 24 horas;c) dissolução de 1 kg / 1,5 kg de 25L / 25L da quitosana em 0,01 M a 4,0 M de uma base de hidróxido;d) agitação contínua da solução à base de quitosana resultante;e) aquecimento da solução entre 60-100oC durante 45 minutos a 4 horas, com agitação;f) lavagem da solução com até 10 vezes o volume de água livre de endotoxinas ultra-pura;g) neutralização da solução a um pH entre 6,8 e 7,5;h) formação de uma suspensão de quitosana ultra-pura de baixo teor endotoxinas e transferência para um sistema fechado livre de endotoxinas;i) remoção do excesso de água a partir da suspensão.

[0009] Este é um processo complicado e caro, especialmente com a necessidade de equipamento estéril e a necessidade de enxaguar a solução com um volume de 10x de água livre de endotoxina.

[0010] US2006293509 refere-se a um método de fabricação de umaquitosana solúvel em água tendo baixo teor de endotoxina por:(a) contatar a quitosana insolúvel em água com uma solução básica para um primeiro período de tempo maior que 1 hora;(b) enxaguar a quitosana insolúvel em água para remover a solução básica residual, desejavelmente com água isenta de endotoxina;(c) parcialmente acetilação da quitosana insolúvel em água em uma solução de reação que contém um agente de transferência de fase;(d) dissolução da quitosana solúvel em água parcialmente acetilada em uma solução aquosa contendo um tensoativo e com um pH de cerca de 7,0 a cerca de 7,4;(e) adição de um solvente miscível em água na solução aquosa e ajustar ainda do pH da solução aquosa a um pH de pelo menos 8,0 para causar a precipitação da quitosana solúvel em água tendo um baixo teor de endotoxina a partir da solução aquosa / mistura de solvente miscível em água; e(f) lavagem opcionalmente em um não-solvente como isopropanol.

[0011] No entanto, este processo é complicado e caro e, desejavelmente, envolve o uso de grandes volumes de água isenta de endotoxina ou outros líquidos. O processo também requer o uso de agentes de transferência de fase e ocorre durante algumas horas.

[0012] TW593342 refere-se a um método de redução de endotoxinas em quitosana por:j) ) a dissolução de quitosana contendo endotoxinas em uma solução aquosa;k) ) o contato da solução aquosa com um tensoativo para formar um sólido insolúvel e uma solução aquosa reduzida no teor de endotoxina;l) ) o uso de uma separação sólido / líquido para separar o sólido a partir da solução aquosa.

[0013] No entanto, este processo requer um tensoativo para reagir com a quitosana dissolvida para dar um sólido insolúvel. O sólido resultante será uma mistura de quitosana e de tensoativo ou de um produto de reação entre a quitosana e o tensoativo.

[0014] A presente invenção visa remediar as dificuldades acima mencionadas.

[0015] De acordo com um primeiro aspecto da presente invenção, provê-se um processo para produzir uma quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina, o processo sendo caracterizado pelo fato de compreender as etapas de:m) ) contatar quitosana com uma solução alcalina para formar uma mistura; en) ) deixar a mistura durante pelo menos cerca de 12 horas.

[0016] De acordo com outro aspecto da presente invenção, provê-se um processo para produzir uma quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina, o processo sendo caracterizado pelo fato de compreender as etapas de:o) ) contatar quitosana com uma solução alcalina para formar uma mistura;p) ) deixar a mistura durante pelo menos cerca de 12 horas; eq) ) secar a mistura.

[0017] O processo da presente invenção provê um modo eficaz de obtenção de uma quitosana alcalina tendo uma baixa concentração de endotoxina. Com vantagem, o processo não requer uma etapa de lavagem, uma etapa de enxágue, uso de um tensoativo ou de agentes de transferência de fase, equipamento estéril ou o uso de água sem endotoxina. Além disso, filtração de ar especializada ou condições estéreis também não são necessárias. O processo da presente invenção preferivelmente não compreende uma etapa de acetilação da quitosana.

[0018] O termo ‘solução alcalina’ é usado aqui para fazer referência a uma solução tendo um valor de pH maior do que pH 7,5.

[0019] Porque o peso molecular de endotoxinas pode variar de modo significante, a concentração de endotoxina é medida em unidades de endotoxina (EU) por grama de material. A medição da concentração de endotoxina é uma quantificação dos níveis de endotoxina com relação a uma quantidade específica de endotoxina de referência.

[0020] Por exemplo, na presente invenção, a concentração de endotoxina é medida em unidades de endotoxina (EU) por grama de quitosana. O termo ‘baixo teor de endotoxina’ é usado aqui para fazer referência a uma concentração de endotoxina de menos do que 100 unidades de endotoxina (EU) por grama de quitosana.

[0021] O processo da presente invenção é assim apropriado para a obtenção de uma quitosana alcalina que tem uma concentração de endotoxina menor do que 100EU/g.

[0022] Preferivelmente, a quitosana alcalina resultante tem uma concentração de endotoxina de menos do que 50EU/g, mais preferivelmente menor do que 20EU/g, ainda mais preferivelmente menor do que 15EU/g e o mais preferivelmente menor do que 10EU/g.

[0023] Verificou-se que as baixas concentrações de solução alcalina são preferíveis no presente processo. Uma concentração de solução alcalina usada no processo pode ser de em torno de 0,01M a em torno de 1M. Preferivelmente, a concentração de solução alcalina é menor do que 1M. Preferivelmente, a concentração de solução alcalina é de em torno de 0,02M a 0,2M e ainda mais preferivelmente a concentração de solução alcalina é em torno de 0,04M a 0,06M, tipicamente 0,05M. Concentrações de solução alcalina podem ser em torno de 0,01M, 0,05M, 0,10M, 0,15M, 0,20M, 0,25M, 0,30M, 0,35M, 0,40M, 0,45M, 0,50M, 0,55M, 0,60M, 0,65M, 0,70M, 0,75M, 0,80M, 0,85M, 0,90M ou 0,95M. Bons resultados foram observados com uma concentração de 0,1M solução alcalina.

[0024] Em algumas formas de realização, a quantidade de solução alcalina para quitosana pode estar na faixa de cerca de 1 parte quitosana a cerca de 10 partes solução alcalina até cerca de 10 partes quitosana a cerca de 1 parte solução alcalina. Preferivelmente, a quantidade de solução alcalina para quitosana é cerca de 1 parte de solução alcalina a cerca de 2 partes de quitosana, mais preferivelmente cerca de 1 parte de solução alcalina a cerca de 1 parte de quitosana.

[0025] A solução alcalina pode compreender um componente alcalino ou alcalino-terroso selecionado dentre os seguintes, ou sozinhos ou em combinação: hidróxidos de metal, carbonatos de metal, bissulfitos de metal, persilicatos de metal, bases de conjugados e hidróxido de amônio.

[0026] Os metais apropriados incluem sódio, potássio, cálcio, ou magnésio.

[0027] De preferência, o componente alcalino é hidróxido de sódio, hidróxido de potássio ou carbonato de sódio. Tipicamente, usa-se hidróxido de sódio.

[0028] A solução alcalina pode ser contatada com a quitosana por qualquer meio apropriado conhecido na arte. Por exemplo, a solução alcalina pode ser pulverizada sobre a quitosana ou a quitosana pode ser misturada com a solução alcalina Preferivelmente, ocorre ainda uma distribuição da quitosana alcalina contatada.

[0029] Preferivelmente, a quitosana é misturada com a solução alcalina. Em baixos pesos moleculares, a quitosana pode dissolver completamente ou parcialmente em uma solução alcalina A quitosana pode ser misturada com a solução alcalina durante até em torno de 30 minutos, mais preferivelmente em torno de 10 minutos. Em algumas formas de realização, a quitosana pode ser misturada com a solução alcalina por mais do que 30 minutos. Em algumas formas de realização, a mistura de quitosana e solução alcalina pode ser agitada intermitentemente durante a duração da etapa (b).

[0030] A mistura de quitosana e solução alcalina é deixada por um período de tempo durante o qual a endotoxina é destruída pelo álcali. A mistura de quitosana e solução alcalina é deixada durante pelo menos cerca de 12 horas. Foi descoberto que quanto mais longo for o período de tempo em que a mistura de quitosana e solução alcalina é deixada, menor será a concentração de endotoxina de uma quitosana alcalina resultante. As concentrações apropriadamente baixas de endotoxina foram observadas quando a mistura foi deixada em torno de 12 horas. É ainda uma outra vantagem do processo da presente invenção que a mistura pode ser deixada sem a necessidade de uma mistura contínua da quitosana com a solução alcalina.

[0031] Em algumas formas de realização, a mistura pode ser deixadadurante um período de pelo menos cerca de 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22,23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44,45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66,67, 68, 69, 70, 71, 72 horas.

[0032] Preferivelmente, a mistura é deixada durante pelo menos 48 horas.

[0033] Em algumas formas de realização, a mistura pode ser deixada durante um período de pelo menos cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35,36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57,58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 dias ou mais.

[0034] Em algumas formas de realização, a mistura é deixada durante em torno de duas a quatro semanas (ou 14 a 30 dias) ou mais. Preferivelmente, a mistura é deixada entre 24horas e 70 dias, mais preferivelmente entre 7 dias e 35 dias e o mais preferivelmente entre 14 dias e 21 dias.

[0035] Bons resultados foram observados por contato da quitosana com uma solução a 0,1M de hidróxido de sódio e deixando a mistura em torno de 12 a 16 dias, preferivelmente em torno de 14 dias.

[0036] A mistura pode ser deixada em temperatura e pressão ambientes. Por temperatura e pressão ambientes, significa-se uma temperatura em torno de 2025°C e uma pressão de cerca de 1 atmosfera (atm). De modo benéfico, a mistura não precisa ser deixada em um ambiente estéril.

[0037] A mistura é preferivelmente armazenada em um recipiente limpo. A mistura pode ser armazenada sob uma atmosfera inerte.

[0038] A mistura pode ainda compreender um conservante. De modo benéfico, o conservante pode eliminar o risco de crescimento microbiano que pode se desenvolver, por exemplo, quando a mistura é deixada durante um período prolongado. O conservante pode ser qualquer conservante que seja biocompatível e apropriado para uso em um ambiente alcalino. Os conservantes apropriados incluem íons prata, íons zinco, clorohexadina, ou combinações dos mesmos.

[0039] O processo da presente invenção pode compreender ou não uma etapa de secagem. A etapa de secagem pode ser realizada por qualquer um dos meios de secagem convencionais conhecidos na arte. Preferivelmente, a etapa de secagem é realizada em um forno ou por filtração através de um secador de ar. Novamente, um equipamento estéril especializado não é requerido para a etapa de secagem.

[0040] Descobriu-se que, uma vez que a mistura foi secada na etapa de secagem, o nível de endotoxina da mistura não aumenta de modo notável. Isto é benéfico para o posterior processamento da mistura.

[0041] Provê-se, assim, uma quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina tendo uma concentração de endotoxina de menos do que 100EU/g. A quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina pode ser insolúvel em água. Em baixos pesos moleculares, a quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina pode mostrar alguma solubilidade em água.

[0042] De acordo com outro aspecto da presente invenção, provê-se uma quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina obtenível pelo processo como descrito aqui.

[0043] De acordo com outro aspecto da presente invenção, provê-se uma quitosana alcalina compreendendo uma concentração de endotoxina de menos do que 100EU/g.

[0044] A quitosana alcalina preferivelmente tem uma concentração de endotoxina de menos do que 50EU/g, mais preferivelmente menor do que 20EU/g, ainda mais preferivelmente menor do que 15EU/g e o mais preferivelmente menor do que 10EU/g.

[0045] A quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina pode ser usada na fabricação de outros produtos de quitosana, como, por exemplo, derivados ou copolímeros ou na fabricação de quitosana de baixo peso molecular ou oligossacarídeos de quitosana. A quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina também pode ser utilizável como uma matéria prima para a fabricação de outras formas de quitosana ou derivados ou copolímeros, como fibras à base de quitosana, tecidos, revestimentos, películas, géis, soluções, folhas ou espumas.

[0046] Em particular, a quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina pode ser usada na preparação de outros produtos utilizáveis de quitosana, tendo baixas concentrações de endotoxina, incluindo quitosana neutra e sais de quitosana e outros derivados de quitosana, por exemplo, carboximetil quitosana, hidroxietil quitosana, acil quitosana, alquil quitosana, sulfonil quitosana, quitosana fosforilada, alquilideno quitosana, quelatos de metal, cloreto de quitosana, lactato de quitosana, acetato de quitosana, malato de quitosana, gluconato de quitosana.

[0047] Assim, de acordo com outro aspecto da presente invenção, provê-se um processo para produzir uma quitosana neutra de baixo teor de endotoxina, sal de quitosana ou derivado de quitosana compreendendo a etapa de contatar uma quitosana alcalina preparada pelo processo descrito aqui com um ácido.

[0048] O processo pode fornecer uma quitosana neutra utilizável em medicina, sal de quitosana ou outro derivado de quitosana tendo baixas concentrações de endotoxina.

[0049] A etapa de contatar a quitosana alcalina com o ácido pode ser realizada antes da etapa de secagem no processo de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção.

[0050] O ácido pode ser contatado com a quitosana alcalina por qualquer meio apropriado conhecido na arte. Por exemplo, o ácido pode ser pulverizado sobre a quitosana alcalina ou a quitosana alcalina pode ser misturada com o ácido.

[0051] Preferivelmente, a quitosana alcalina é misturada com um ácido.

[0052] Uma quitosana neutra é referida aqui para significar quitosana tendo um valor de pH de entre cerca de 6,5 e cerca de 7,5, e preferivelmente cerca de 7.

[0053] Assim, a fim de preparar uma quitosana neutra, a quitosana alcalina pode ser misturada com um volume e concentração apropriados de ácido para formar uma solução neutra tendo um pH de entre 6,5 e 7,5. O volume e/ou a concentração de ácido requeridos para neutralizar a quitosana alcalina irão depender do pH da quitosana alcalina.

[0054] Alternativamente, a fim de preparar um sal de quitosana ou derivado de quitosana, a quitosana alcalina pode ser misturada com um volume e concentração de ácido em excesso ao necessário para fornecer uma quitosana neutra.

[0055] Um ácido apropriado para uso na presente invenção pode ser selecionado dentre os seguintes, ou sozinhos ou em combinação: ácidos orgânicos, ácidos carboxílicos, ácidos graxos, aminoácidos, ácidos de lewis, ácidos monopróticos, ácidos dipróticos, ácidos polipróticos, ácidos nucleicos e ácidos minerais.

[0056] Os ácidos orgânicos apropriados podem ser selecionados dentre os seguintes, ou sozinhos ou em combinação: ácido acético, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido acetilsalicílico, ácido glucônico e ácido láctico.

[0057] Os ácidos graxos apropriados podem ser selecionados dentre os seguintes, ou sozinhos ou em combinação: ácido miristoléico, ácido palmitoléico, ácido sapienico, ácido oléico, ácido elaidico, ácido vacênico, ácido linoléico, ácido linoelaídico, ácido a-linolênico, ácido araquidônico, ácido eicosapentaenóico, ácido erúcico, ácido docosahexaenóico, ácido caprílico, ácido cáprico, ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido araquídico, ácido beênico, ácido lignocérico, ácido cerótico.

[0058] Os aminoácidos apropriados podem ser selecionados dentre os seguintes, ou sozinhos ou em combinação: histidina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, glutamina, glicina, prolina, taurina.

[0059] Os ácidos minerais apropriados podem ser selecionados dentre os seguintes, ou sozinhos ou em combinação: ácido clorídrico, ácido sulfúrico e ácido nítrico. Preferivelmente, o ácido selecionado para neutralização é o ácido clorídrico.

[0060] O ácido pode ter uma concentração de cerca de 0,001M ácido até a concentração máxima possível de ácido. Por exemplo, a concentração máxima possível para ácido sulfúrico é em torno de 98% de ácido sulfúrico. O ácido pode ter uma concentração de cerca de 0,01M a 5M, 0,01M a 3M ou 0,1M a 2M. Preferivelmente, o ácido tem uma concentração de cerca de 1M. Concentrações de ácido podem ser de cerca de 0,01M, 0,05M, 0,10M, 0,15M, 0,20M, 0,25M, 0,30M, 0,35M, 0,40M, 0,45M, 0,50M, 0,55M, 0,60M, 0,65M, 0,70M, 0,75M, 0,80M, 0,85M, 0,90M, 0,95M ou 1,0M.

[0061] O ácido pode estar presente como um licor ácido compreendendo o ácido e um não solvente. O não solvente pode ser qualquer solvente em que quitosana é insolúvel. Os não solventes típicos incluem lactato de etila, acetato de etila, acetato de metila, etanol, acetona ou misturas dos mesmos. Preferivelmente, o não solvente compreende acetato de etila ou etanol. Mais preferivelmente, o não solvente compreende 80:20 etanol em água. De modo benéfico, foi observado que a reação prossegue em uma taxa mais rápida usando um não solvente compreendendo uma mistura 80:20 de etanol para água.

[0062] A razão de quitosana para o licor ácido pode ser de cerca de 5 a 1 a cerca de 1 a 5. De preferência, a razão quitosana para licor ácido é cerca de 2 a 1.

[0063] Em algumas formas de realização, a quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina pode ser misturada com o ácido em torno de cinco minutos. A reação pode então ser deixada acontecer à medida que a mistura é secada.

[0064] A solução resultante da mistura de quitosana alcalina com ácido pode conter um sal de ácido. Preferivelmente, a solução alcalina e ácido são selecionados de modo a assegurar que o sal de ácido formado é biocompatível. Por exemplo, a solução alcalina pode compreender hidróxido de sódio e o ácido pode compreender ácido clorídrico. Em tal exemplo, o sal de ácido pode ser o sal biocompatível cloreto de sódio.

[0065] O sal de ácido é formado como um subproduto da reação entre a quitosana alcalina básica e o ácido.

[0066] A presença de um sal de ácido do produto pode afetar a utilidade do produto resultante de quitosana. Por exemplo, os géis de quitosana, em menor extensão em solução salina do que ocorre em água, e até certo ponto ainda menor em solução salina em concentração dupla. A solução salina concentrada dupla, aqui referida, é contemplada como tendo uma quantidade de cloreto de sódio de 1,8%. Consequentemente, é desejável ter uma quantidade tão baixa de uma de sal de ácido no produto resultante de quitosana quanto possível e, idealmente, um nível de sal de ácido que faz uma pequena ou substancialmente nenhuma diferença para a eficácia do produto de quitosana.

[0067] Foi surpreendentemente descoberto que o uso de uma solução alcalina com uma concentração de cerca de 0,01 M a em torno de 0,1 M produz a desejada concentração baixa de endotoxina enquanto também resultando em menos subproduto de sal de ácido sendo produzido no processo subsequente de modo a produzir uma quitosana neutra, sal de quitosana ou derivado de quitosana. Beneficamente, menos subproduto de sal de ácido significa que o produto resultante de quitosana terá uma melhorada gelificação em uso em relação aos produtos contendo uma maior quantidade de sal de ácido. O processo da presente invenção pode fornecer um produto de quitosana com uma quantidade adequadamente baixa de sal de ácido, sem a necessidade de lavar ou enxaguar o produto de quitosana. Isto também tem a vantagem adicional de não requerer o uso de água isenta de endotoxinas em uma etapa de lavagem ou enxágue.

[0068] Foi também verificado que usando baixas concentrações de solução alcalina como descrito aqui provoca uma menor redução na viscosidade da quitosana quando produzindo uma quitosana neutra, sal de quitosana ou derivado de quitosana. Por baixas concentrações de álcali, significa-se de em torno de 0,01M a em torno de 1M, preferivelmente menor do que 1M, mais preferivelmente de em torno de 0,02M a em torno de 0,2M. Em algumas formas de realização, a concentração de álcali pode ser 0,05M. Em algumas formas de realização, a concentração de álcali pode ser como mencionado aqui acima. De modo benéfico, assim, usando baixas concentrações de solução alcalina no processo causa um menor dano para a quitosana . Assim, é possível remover a endotoxina da quitosana enquanto causando somente uma mudança mínima na viscosidade. É desejável para a viscosidade de a quitosana reduzir em menos do que cerca de 25% no processo, preferivelmente em menos do que cerca de 15% e mais preferivelmente em menos do que cerca de 10%.

[0069] Quando o processo provê uma quitosana neutra de baixo teor de endotoxina, o produto é apropriado para uso como uma matéria prima na produção outros produtos à base de quitosana. Um uso particular use é na produção de sais de quitosana, cujas propriedades absorventes tornam os mesmos desejáveis para uso em preparações hemostáticas para controlar sangramentos. É preferível que os sais de quitosana sejam solúveis em água.

[0070] Assim, em outra forma de realização da presente invenção, um sal de quitosana de baixo teor de endotoxina pode ser preparado por contato de uma quitosana neutra de baixo teor de endotoxina produzida pelo processo descrito aqui com um ácido.

[0071] O ácido pode ser qualquer ácido apropriado para fornecer o sal de quitosana desejado. Por exemplo, se acetato de quitosana for desejado, ácido acético pode ser usado; se succinato de quitosana for desejado, ácido succínico pode ser usado, etc. Qualquer um dos ácidos descritos aqui pode ser usado no presente processo para produzir um sal de quitosana de baixo teor de endotoxina.

[0072] O processo de produzir um sal de quitosana de baixo teor de endotoxina ou derivado de quitosana pode ainda compreender a etapa de secagem da mistura de quitosana neutra de baixo teor de endotoxina e ácido. A etapa de secagem pode ser realizada por qualquer meio de secagem convencional conhecido na arte. Preferivelmente, a etapa de secagem é realizada em um forno ou por filtração do produto através de um secador de ar.

[0073] Assim, é assim provida uma quitosana neutra de baixo teor de endotoxina, sal de quitosana ou derivado de quitosana tendo uma concentração de endotoxina de menos do que 100EU/g.

[0074] A quitosana neutra de baixo teor de endotoxina pode ser insolúvel em água.

[0075] O sal de quitosana de baixo teor de endotoxina pode ser solúvel em água.

[0076] De acordo com outro aspecto da presente invenção, provê-se uma quitosana neutra de baixo teor de endotoxina, sal de quitosana ou derivado de quitosana obtenível por qualquer um dos processos descritos aqui .

[0077] De acordo com outro aspecto da presente invenção, provê-se uma quitosana neutra, sal de quitosana ou derivado de quitosana compreendendo uma concentração de endotoxina de menos do que 100EU/g.

[0078] A quitosana neutra, sal de quitosana ou derivado de quitosana preferivelmente tem uma concentração de endotoxina de menos do que 50EU/g, mais preferivelmente menor do que 20EU/g, ainda mais preferivelmente menor do que 15EU/g e o mais preferivelmente menor do que 10EU/g.

[0079] O sal de quitosana de baixo teor de endotoxina da presente invenção é apropriado para uso como um hemostato para estancar o fluxo sanguíneo.

[0080] Assim, de acordo com outro aspecto da presente invenção, provê-se um sal de quitosana de baixo teor de endotoxina como descrito aqui para uso como um hemostato para estancar o fluxo sanguíneo.

[0081] O sal de quitosana de baixo teor de endotoxina da presente invenção pode ser incorporado em um curativo de ferida para um sangramento superficial não ameaçador à vida ou um sangramento ameaçador à vida.

[0082] Assim, de acordo com outro aspecto da presente invenção, provê-se um sal de quitosana de baixo teor de endotoxina como descrito aqui para uso em um curativo de ferida para um sangramento superficial não ameaçador à vida ou um sangramento ameaçador à vida.

[0083] O sal de quitosana de baixo teor de endotoxina da presente invenção é apropriado para uso na preparação de um curativo hemostático de feridas para estancar o fluxo sanguíneo. De acordo com outro aspecto da presente invenção, provê-se um curativo hemostático de feridas compreendendo um sal de quitosana de baixo teor de endotoxina com descrito aqui .

[0084] De acordo com ainda outro aspecto da presente invenção, provê-se um material hemostático compreendendo um sal de quitosana de baixo teor de endotoxina como descrito aqui .

[0085] O material hemostático e/ou sal de quitosana pode estar em qualquer forma apropriada, como forma particulada, pó, granular, flocosa, fibrosa, gel, espuma, folha, película ou líquida.

[0086] De acordo com ainda outro aspecto da presente invenção, provê-se um método de estancar o fluxo sanguíneo compreendendo as etapas de: opcionalmente limpar a área de ferida, quando possível; aplicar à referida área de ferida um curativo hemostático de feridas compreendendo um sal de quitosana de baixo teor de endotoxina como descrito aqui ; e aplicar uma pressão constante à área de ferida até um coágulo de gel se formar.

[0087] Uma pressão constante é preferivelmente aplicada à área da ferida durante cerca de três minutos ou mais.

[0088] Formas de realização da invenção serão agora descritas ainda nos seguintes exemplos não limitativos com referência aos desenhos anexos, em que:

[0089] Figura 1 é um gráfico exibindo o efeito de diferentes concentrações de sub-produto de sal ácido sobre a viscosidade de um produto de quitosana em diferentes meios;

[0090] Figura 2 é um gráfico mostrando o efeito do tratamento com ácido sobre a viscosidade de um polímero de quitosana.

[0091] Figura 3 é um gráfico mostrando a penetração de solução salina em dois diferentes materiais hemostáticos de acordo com a presente invenção;

[0092] Figura 4 é um gráfico mostrando um período de tempo para a coagulação de sangue de dois diferentes materiais hemostáticos de acordo com a presente invenção;

[0093] Figura 5 é um gráfico mostrando uma hemostasia percentual em testes de rompimento epigástrico de dois diferentes materiais hemostáticos de acordo com a presente invenção.

[0094] Testes de endotoxina1. Fazer uma solução de extração USP (Farmacopéia dos Estados Unidos) como detalhado em USP para teste de endotoxina em quitosana (4,6ml de 1M HCl e 45,4ml de água sem endotoxina);2. Extrair por adição 0,1g do produto de quitosana de teste a 9,9ml de solução de extração USP e deixar durante 48 horas a 37oC;3. Após 48 horas, diluir 100μl do extrato em 0,9ml de água sem endotoxina; e4. Misturar 100μl do acima em 100μl de tampão específico de endotoxina (ES) fornecido por Charles River.

[0095] O extrato resultante é testado usando um espectrofotômetro manual Endosafe®-PTSTM que usa cartuchos descartáveis licenciados pelo FDA. O processo de extrato usa uma diluição de 2000x e uma detecção de limite de teste mínima de 10EU/g.

Exemplos Exemplo 1:

[0096] 50g de quitosana (Primex Iceland) foram misturados com 50g 1M NaOH durante 30 min. O fragmento de quitosana alcalina úmida resultante foi deixado em temperatura ambiente durante 48 horas. Ele foi então secado em um forno em uma bandeja a 40oC.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 383 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: 10,6 EU/gControle (0,1g água sem endotoxina usada em processo de extração em vez de quitosana): <10 EU/g

Exemplo 2:

[0097] 50g de quitosana (Primex Iceland) foram misturados com 50g 0,5M NaOH durante 10 min. O fragmento de quitosana alcalina úmida resultante foi deixado em temperatura ambiente durante 72 horas. Ele foi então secado em um forno em uma bandeja a 40oC.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 383 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: 38,3 EU/g

Exemplo 3:

[0098] 50g de quitosana (Primex Iceland) foram misturados com 50g 0,2M NaOH durante 10 min. O fragmento de quitosana alcalina úmida resultante foi deixado em temperatura ambiente durante sete dias. Ele foi então secado em um forno em uma bandeja a 40oC.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 383 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: 27,9 EU/g

Exemplo 4:

[0099] 50g de quitosana (Primex Iceland) foram misturados com 50g 0,1M NaOH durante 10 min. O fragmento de quitosana alcalina úmida resultante foi deixado em temperatura ambiente durante 14 dias. Ele foi então secado em um forno em uma bandeja a 40oC.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 383 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: 12,7 EU/g

Exemplo 5:

[0100] 50g de quitosana (Primex Iceland) foram misturados com 100g 0,2M NaOH durante 10 min. O fragmento de quitosana alcalina úmida resultante foi deixado em temperatura ambiente durante dois dias. Ele foi então secado em um forno em uma bandeja a 40oC.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 383 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: 35,7 EU/g

Exemplo 6:

[0101] 50g de quitosana (Primex Iceland) foram misturados com 100g 0,1M NaOH durante 10 min. O fragmento de quitosana alcalina úmida resultante foi deixado em temperatura ambiente durante dois dias. Ele foi então secado em um forno em uma bandeja a 40oC.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 383 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: 49,3 EU/g

Exemplo 7:

[0102] 50g de pó de quitosana (Cognis, Alemanha) foram misturados com 50g 0,1M NaOH durante 10 min. O fragmento de quitosana alcalina úmida resultante foi deixado em temperatura ambiente durante sete dias. Ele foi então secado em um forno em uma bandeja a 40oC.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 45,3 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: <10 EU/gControle (0,1g água sem endotoxina usada em processo de extração em vez de quitosana): <10 EU/g

Exemplo 8:

[0103] 50g de pó de quitosana (Cognis, Alemanha) foram misturados com 50g 0,05M NaOH durante 10 min. O fragmento de quitosana alcalina úmidaresultante foi deixado em temperatura ambiente durante sete dias. Ele foi então secado em um forno em uma bandeja a 40oC.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 45,3 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: <10 EU/g Controle (0,1g água sem endotoxina usada em processo de extração em vez de quitosana): <10 EU/g

Exemplo 9:

[0104] 50g de pó de quitosana (Cognis, Alemanha) foram misturados com 50g 0,025M NaOH durante 10 min. O fragmento de quitosana alcalina úmida resultante foi deixado em temperatura ambiente durante sete dias. Ele foi então secado em um forno em uma bandeja a 40oC.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 45,3 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: <13,5 EU/gControle (0,1g água sem endotoxina usada em processo de extração em vez de quitosana): <10 EU/g

[0105] O processo também pode ser escalonado e usado para fazer tamanhos de lotes maiores. Exemplos 10 e 11 foram feitos em uma sala limpa Classe 100.000 (padrões para ambientes limpos US FED STD 209E) comumente usados na fabricação de dispositivos médicos.

Exemplo 10:

[0106] 3,5kg de pó de quitosana (Primex Iceland) foram misturados com 3,5kg 0,1M NaOH durante 30 min. O fragmento de quitosana alcalina úmidaresultante foi deixado em temperatura ambiente durante 14 dias. Ele foi então secado por filtração através de um secador de ar a40oC.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 288 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: 10,2 EU/gControle (0,1g água sem endotoxina usada em processo de extração em vez de quitosana): <10 EU/g

Exemplo 11:

[0107] 3,5kg de pó de quitosana (Primex Iceland) foram misturados com 3,5kg 1M NaOH durante 30 min. O fragmento de quitosana alcalina úmida resultante foi deixado em temperatura ambiente durante 24 horas. Ele foi então secado por filtração através de um secador de ar a40oC.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 288 EU/g Quitosana alcalina tratada seca: 15,3 EU/gControle (0,1g água sem endotoxina usada em processo de extração em vez de quitosana): <10 EU/g

[0108] O processo pode ser usado em quitosana em diferentes formas físicas como uma fibra de quitosana ou tecido de quitosana.

Exemplo 12:

[0109] 10g de fibra de quitosana (1,8 dtex x 28mm) foram misturados com 10g 0,1M NaOH durante 10 min. A resultante fibra de quitosana alcalina úmida foi deixada em temperatura ambiente durante dois dias. Ela foi então secada em um forno de laboratório sobre uma bandeja a 40oC.Endotoxina inicial de fibra de quitosana bruta: 88 EU/gFibra de quitosana alcalina tratada seca: <10 EU/gControle (0,1g água sem endotoxina usada em processo de extração em vez de quitosana): <10 EU/g

Exemplo 13:

[0110] 5g de quitosana pano não tecido (60 gsm) foram misturados com 5g 0,1M NaOH durante 10 min. O tecido de quitosana alcalina úmida resultante foi deixado em temperatura ambiente durante dois dias. Ele foi então secado em um forno de laboratório sobre uma bandeja a 40oC.Endotoxina inicial de tecido de quitosana bruta: 401 EU/gTecido de quitosana alcalina tratada seca : <78 EU/gControle (0,1g água sem endotoxina usada em processo de extração em vez de quitosana): <10 EU/g

[0111] Os seguintes exemplos 14 e 15 utilizam uma base diferente para hidróxido de sódio.

Exemplo 14:

[0112] 50g de quitosana (Primex Iceland) foram misturados com 50g 0,2M KOH (hidróxido de potássio) durante 30 min. O fragmento de quitosana alcalina úmida resultante foi deixado em temperatura ambiente durante sete dias. Ele foi então secado em um forno de laboratório sobre uma bandeja a 40oC. Endotoxina inicial de quitosana bruta: 383 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: 14,4 EU/gControle (0,1g água sem endotoxina usada em processo de extração em vez de quitosana): <10 EU/g

Exemplo 15:

[0113] 50g de quitosana (Primex Iceland) foram misturados com 50g 0,5M carbonato de sódio durante 30 min. O fragmento de quitosana alcalina úmida resultante foi deixado em temperatura ambiente durante sete dias. Ele foi então secado em um forno de laboratório sobre uma bandeja a 40oC.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 383 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: 25,8 EU/gControle (0,1g água sem endotoxina usada em processo de extração em vez de quitosana): <10 EU/g.

[0114] Exemplos 1-15 todos se referem à produção de quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina. Esta quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina pode ser subsequentemente usada como uma matéria prima para a obtenção de outros produtos à base de quitosana. Por exemplo quitosana alcalina pode ser neutralizada para pH 7 para formar uma quitosana neutra pode adição de um baixo nível de um ácido apropriado que poderia reagir com a base para obter um sal biocompatível. Por exemplo, se hidróxido de sódio for usado na solução básica, ele pode ser neutralizado pela adição do ácido clorídrico . O produto pode conter uma baixa quantidade de cloreto de sódio residual.

Exemplo 16:

[0115] 20g de farelo de quitosana alcalina úmida do Exemplo 4 foram pesados em um béquer. Este continha 10g de quitosana e 10g de 0,1M NaOH. Para neutralizar o NaOH, 1g de 1M HCl foram necessários. Estes foram misturados em um béquer separado com 9g de etanol. O líquido ácido foi então misturado no farelo de quitosana alcalina úmida e agitado durante 5 minutos. A mistura resultante foi então secada em um forno de laboratório a 40oC. Ela continha 0,29% cloreto de sódio.

Exemplo 17:

[0116] 20g de farelo de quitosana alcalina úmida do Exemplo 4 foram pesados em um béquer. Este continha 10g de quitosana e 10g de 0,1M NaOH. Para neutralizar o NaOH, 1g de 1M ácido acético foram necessários. Estes foram misturados em um béquer separado com 9g de etanol. O líquido ácido foi então misturado no farelo de quitosana alcalina úmida e agitado durante 5 minutos. A mistura resultante foi então secada em um forno de laboratório a 40oC. Ela continha 0,5% acetato de sódio.

[0117] A quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina formada nos Exemplos 1-15 também pode ser usado para a obtenção de um sal de quitosana solúvel em água de baixo teor de endotoxina ou outros derivados de quitosana. De modo benéfico, isto pode ser obtido sem a necessidade de um ambiente estéril, sem o uso de grandes quantidades de água sem endotoxina que é onerosa, e sem a necessidade para enxágue ou lavagem. Por exemplo, uma quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina pode ser reagida com um nível maior de um apropriado ácido. Uma porção pequena do ácido irá reagir com a base para obter um sal biocompatível.

Exemplo 18:

[0118] 3,1kg de quitosana alcalina seca de baixo teor de endotoxina do Exemplo 10 foram pesados em um misturador de aço inoxidável em uma sala limpa de Classe 100,000. 3,6kg de ácido láctico foram premisturados com 0,9kg de água sem endotoxina. Estes foram pulverizados sobre uma quitosana enquanto o misturador estava funcionando. O resultante material foi secado a 40oC por filtração através de um secador de ar.

[0119] O material foi verificado como sendo completamente solúvel em água.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 288 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: 10,2 EU/g (Exemplo 10)Quitosana solúvel em água seca: 13,8 EU/gControle (0,1g água sem endotoxina usada em processo de extração em vez de quitosana): <10 EU/g

Exemplo 19:

[0120] 3,1kg de quitosana alcalina seca de baixo teor de endotoxina do Exemplo 11 foram pesados em um misturador de aço inoxidável em uma sala limpa de Classe 100.000. 3,9kg de ácido láctico foram premisturados com 0,9kg de água sem endotoxina. Estes foram pulverizados sobre uma quitosana enquanto o misturador estava funcionando. O material resultante foi secado a 40oC por filtração através de um secador de ar.O material foi verificado como sendo completamente solúvel em água.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 288 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: 15,3 EU/g (Exemplo 4)Quitosana solúvel em água seca: 14,6 EU/gControle (0,1g água sem endotoxina usada em processo de extração em vez de quitosana): <10 EU/g

[0121] Em outro exemplo, quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina também pode ser usada como uma matéria prima para a fabricação derivados de quitosana de baixo teor de endotoxina, como a quitosana carbóxi metila.

Exemplo 20:

[0122] 20g de farelo de quitosana alcalina úmida do Exemplo 1 foram pesados em um béquer. Este continha 10g de quitosana e 10g de 1M NaOH. Em um béquer separado a mistura de 5g de cloroacetato de sódio e 5g de água e 10g de etanol foi preparada O líquido misturado foi então agitado em farelo de quitosana alcalina úmida. Sua temperatura foi então elevada a 60oC durante 4 horas. A mistura resultante foi lavada três vezes com 10g de etanol para remover qualquer cloroacetato de sódio residual antes de ser secada em um forno de laboratório a 40oC.Efeito de ácido sobre a viscosidade

[0123] A reação de quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina com ácido, para produzir ou uma quitosana de pH neutro ou um sal de quitosana, produz um subproduto de sal de ácido. A presença deste subproduto pode afetar o desempenho de um produto de quitosana. Por exemplo, o nível de subproduto pode afetar a viscosidade de um produto de quitosana em solução salina.

[0124] Com referência à Figura1, são mostrados os resultados da adição de lactato de sódio para uma solução salina em diferentes concentrações, e um efeito resultante deste sobre a viscosidade de uma amostra de 2g de um produto de quitosana disponível comercialmente, CELOX®, em uma solução de 20g de meios diferentes após três minutos.

[0125] Os meios de base foram uma solução salina de fluidos corporais, à qual diferentes níveis de lactato de sódio foram adicionados. O lactato de sódio é representado pelo subproduto de uma reação entre hidróxido de sódio e ácido láctico.

[0126] Os resultados são apresentados na Tabela 1 e Figura 1.

[0127] É evidente a partir da Figura 1 que, como o nível de sal adicionado aumenta, a viscosidade de CELOX® nos meios cai. É, assim, benéfico para que haja apenas um baixo nível de subproduto de sal residual resultante nos produtos de quitosana da presente invenção.Efeito de solução alcalina de baixa concentração sobre a viscosidade

[0128] A quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina produzida em Exemplo 10 foi testada para demonstrar o efeito do tratamento com ácido sobre a viscosidade de um polímero de quitosana, considerado como sendo uma medida do peso molecular. O teste acompanhou as seguintes etapas do método:a) pesar 5g de grânulos de quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina produzidos no Exemplo 10; b) pesar 4,95g de ácido acético em béquer de 600ml;c) adicionar 490,05g de água deionizada ao béquer para completar 495g de uma solução a 1% de ácido acético;d) colocar o béquer sobre a placa agitadora e ligar para agitar (aumentar à medida que aumenta a viscosidade da solução;e) adicionar os grânulos de quitosana para a solução de ácido acético;f) verificar a solução regularmente até que todos os grânulos tenham dissolvido e aumentar o nível de agitação à medida que aumenta a viscosidade da solução, se necessário;g) deixar a solução por um total de 24 horas, medido a partir do momento em que os grânulos de quitosana foram introduzidos na solução de ácido acético;h) fixar um fuso 64 a um viscosímetro Brookfieldi) ajustar o fuso a 10rpm;j) inserir o fuso na solução até a marca no fuso e ligar o viscosímetro e deixar estabilizar.k) registrar a viscosidade (cPs) em intervalos de tempo selecionados.

[0129] Os resultados do teste de viscosidade acima descrito são mostrados em Tabela 2 abaixo e Figura 2. Para cada lote, uma média foi tomada sobre três leituras em cada intervalo de tempo.

[0130] Pode ser deduzido a partir das medições de viscosidade mostradas na Figura 2 que o peso molecular de polímero de quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina preparado usando uma solução 0,1M hidróxido de sódio é estável durante semanas.Efeito da diminuição da concentração da solução alcalina

[0131] O efeito de usar uma concentração menor de solução alcalina no processo da presente invenção foi testado em três experimentos, focalizando em (1) a penetrabilidade percentual de solução salina nas amostras de teste, (2) o período de tempo para o sangue coagular e (3) a hemostasia percentual em modelos in vivo de rompimento epigástrico.

[0132] Com referência à Figura3, são mostrados os resultados do teste de penetrabilidade.

[0133] O método de teste geral foi como a seguir: 5ml de água destilada foram adicionados a um tubo de teste. Uma gota de corante vermelho tipo alimentício foi adicionada à água. 3g de pó hemostático de amostra foram suavemente colocados no topo da água, de modo que se formou uma camada. Após 1 minuto, a distância percorrida pela água no pó hemostático foi medida e registrada como a penetração percentual.

[0134] Como pode ser visto na Figura 3, o pó hemostático preparado usando 1,0M hidróxido de sódio é menos estável com o passar do tempo comparado com o pó hemostático preparado usando 0,1M hidróxido de sódio e a penetração crescente nos grânulos pela solução salina indica uma maior oportunidade para o sangue passar através do grânulos e não formar um tampão de gel.

[0135] Com referência à Figura 4, são mostrados os resultados do teste de coagulação de sangue.

[0136] O método de teste geral foi como a seguir: 0,75g de pó hemostático de amostra foram adicionados a um tubo de teste, ao qual 5 ml de sangue de coelho heparinizado foram adicionados. O tubo de teste foi então invertido e o tempo que levou para completamente coagular o sangue em uma massa de gel foi registrado.

[0137] Como pode ser visto na Figura 4, o pó hemostático preparado usando 1,0M hidróxido de sódio leva mais tempo para coagular o sangue do que o pó hemostático preparado usando 0,1M hidróxido de sódio. O período de tempo é aproximadamente três vezes mais longo, que se refere a menores propriedades hemostáticas (dados demonstraram que os períodos de tempo maiores do que 180 segundos não resultam em 100% de hemostasia em um modelo de sangramento in vivo de volume médio e de baixa pressão.

[0138] Com referência à Figura 5, são mostrados os resultados do teste de hemostasia.

[0139] O método de teste geral foi como a seguir: um corte de 3-5cm foi feito na artéria epigástrica de um modo de suíno (não heparinizado). O material hemostático em forma granular foi aplicado e uma compressão de 1 minuto aplicada. Se ocorrer um novo sangramento, uma outra compressão de 1 minuto foi feita.

[0140] Como pode ser visto na Figura 5, os grânulos hemostáticos preparados usando 1,0M hidróxido de sódio atingiram hemostasia em 60% dos testes, comparado a 100% com os grânulos hemostáticos preparados usando 0,1M hidróxido de sódio.

[0141] Os resultados do teste indicam que quanto menor a concentração da solução alcalina usada na preparação do material hemostático da presente invenção, melhor o desempenho do material em penetrabilidade, coagulação do sangue e hemostasia.

[0142] Deve ser entendido como evidente que a presente invenção não se destina a ser l imitada pelos exemplos acima que foram descritos apenas a título de exemplo.

Claims

1. Processo para produzir uma quitosana alcalina de baixo teor de endotoxina, o processo caracterizado pelo fato de compreender as etapas de:(a) contatar quitosana com uma solução alcalina tendo uma concentração de 0,01M a 0,2M para formar uma mistura; e(b) deixar a mistura durante pelo menos 12 horas.

2. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o processo ainda compreende uma etapa (c) de secagem da mistura.

3. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a mistura é deixada durante 24 horas na etapa (b).

4. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a concentração da solução alcalina é de 0,02M a 0,2M.

5. Processo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a concentração da solução alcalina é de 0,1M.

6. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a solução alcalina compreende um componente alcalino ou alcalino-terroso selecionado dentre os seguintes, ou sozinhos ou em combinação: hidróxidos de metal, carbonatos de metal, bissulfitos de metal, persilicatos de metal, bases de conjugados e hidróxido de amônio.

7. Processo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o metal é selecionado dentre sódio, potássio, cálcio ou magnésio.

8. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 ou 8, caracterizado pelo fato de que o componente alcalino é selecionado dentre hidróxido de sódio, hidróxido de potássio ou carbonato de sódio.

9. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a solução alcalina é pulverizada sobre a quitosana ou a quitosana é misturada com a solução alcalina.

10. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a mistura é deixada durante pelo menos 48 horas na etapa (b).

11. Processo de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a mistura é deixada durante duas a quatro semanas.

12. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a mistura é deixada em um recipiente limpo e/ou sob uma atmosfera inerte.

13. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a mistura ainda compreende um conservante.

14. Processo de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o conservante é selecionado dentre íons prata, íons zinco, clorohexadina, ou combinações dos mesmos.

15. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a etapa de secagem é realizada em um forno.

16. Processo para produzir uma quitosana neutra de baixo teor de endotoxina, um sal de quitosana ou um derivado de quitosana, caracterizado pelo fato de compreender a etapa de contatar uma quitosana alcalina preparada pelo processo conforme qualquer uma das reivindicações 1 a 15 com um ácido.

17. Processo de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a etapa de contatar a quitosana alcalina com um ácido é realizada antes da etapa de secagem (c) de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 15.

18. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 ou 17, caracterizado pelo fato de que o ácido é pulverizado sobre a quitosana alcalina ou a quitosana alcalina é misturada com um ácido.

19. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 18, caracterizado pelo fato de que o ácido é selecionado dentre os seguintes, ou sozinhos ou em combinação: ácidos orgânicos, ácidos carboxílicos, ácidos graxos, aminoácidos, ácidos de Lewis, ácidos monopróticos, ácidos dipróticos, ácidos polipróticos, ácidos nucleicos, e ácidos minerais.

20. Processo de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o ácido orgânico é selecionado dentre os seguintes, ou sozinhos ou em combinação: ácido acético, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido acetilsalicílico, ácido glucónico e ácido láctico.

21. Processo de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o ácido graxo é selecionado dentre os seguintes, ou sozinhos ou em combinação: ácido miristoleico, ácido palmitoleico, ácido sapiênico, ácido oleico, ácido elaidico, ácido vacênico, ácido linoléico, ácido linoelaídico, ácido a-linolênico, ácido araquidônico, ácido eicosapentaenóico, ácido erúcico, ácido docosahexaenóico, ácido caprílico, ácido cáprico, ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido araquídico, ácido beênico, ácido lignocérico, ácido cerótico.

22. Processo de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o aminoácido é selecionado dentre os seguintes, ou sozinhos ou em combinação: histidina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, glutamina, glicina, prolina, taurina

23. Processo de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que os ácidos minerais são selecionados dentre os seguintes, ou sozinhos ou em combinação: ácido clorídrico, ácido sulfúrico e ácido nítrico.

24. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 23,caracterizado pelo fato de que o ácido tem uma concentração de 1M.

25. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 24,caracterizado pelo fato de que o ácido está presente como um licor ácido compreendendo o ácido e um não solvente.

26. Processo de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que o não solvente é selecionado dentre lactato de etila, acetato de etila, acetato de metila, etanol, acetona, mistura de 80:20 de etanol: água ou misturas dos mesmos.

27. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 ou 26, caracterizado pelo fato de que a razão de quitosana para licor ácido é de 5:1 a 1:5.

28. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 27, caracterizado pelo fato de que a quitosana alcalina é misturada com um ácido durante 5 minutos.

29. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 28, caracterizado pelo fato de ainda compreender a etapa de secar o produto de reação.

30. Processo de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que a etapa de secagem é realizada em um forno ou por filtrado do produto através de um secador com ar.