JP2000256403A - 部分アシル化キトサン粒子およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 クロマトグラフィ用の充填剤などとして十分
な物理的強度を有し且つ多様な用途がある部分アシル化
キトサン粒子およびその製造方法を提供する。 【解決手段】 キトサンを酸性水溶液に溶解し、このキ
トサン溶液を粒子化溶媒中に分散させ、さらに攪拌を加
えてアシル化キトサンを形成し、このアシル化キトサン
に中和量を超えるアルカリを加えて加温し、部分的に脱
アシル化した後に架橋反応によって安定化させる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、クロマトグラフィ
用の充填剤などとして十分な物理的強度を有し且つ多様
な用途がある部分アシル化キトサン粒子およびその製造
法に関し、または微量物質の定性・定量分析における標
識物質などとして使用可能な着色キトサン粒子に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】キチンは化学構造がセルロースに似た多
糖類の一種であり、カニやエビなどの甲殻類、昆虫の外
皮、菌類の細胞壁の構成成分であり、キトサンはキチン
の脱アセチル化物で菌類の細胞壁にも存在する。従来、
キチンとキトサンは、地球上で毎年多量に生物生産され
ながらそのほとんどが廃棄されていたが、最近、特異な
機能をもつ素材として注目されている。例えば、ビーズ
状に加工したキトサンは酵素や血漿たん白の吸着剤とし
て利用され、キチンは生体適合性に優れ、薬物持効性剤
などへの応用が可能なほかに、保湿剤、抗がん剤、血中
コレステロール降下剤、止血剤、無公害農薬等の原料と
しての研究も進められ、最近では健康食品としても市販
されている。

【０００３】 また、キチンまたはキトサン粒子は、イ
オン交換クロマトグラフィ、アフィニティクロマトグラ
フィ、ゲルクロマトグラフィ用の充填剤やイオン交換体
などとして有用である。キチンやキトサン粒子は、医薬
品、食品、生化学工業のような各種の製造業において、
タンパク質や核酸などの有用物を精製し、その有用物に
含まれる不純物を除去するために必要である。また、キ
トサン粒子を着色すると、標識物質として各種の微量物
質の定性・定量分析に使用可能であり、例えば免疫反応
の有無測定などに用いることができる。

【０００４】 キチン類を粒子化する既存の方法とし
て、特開昭５５−１６７０４８号や特開昭５６−８０４
号に開示するように、キチンの脱アセチル化物を酸性溶
媒に溶解してから、アセチル化剤を含むキトサン不溶性
溶媒中でアセチル化し、ついでアルコールを加えて粒子
化することが公知であり、キトサンのアミノ基はほぼ完
全にアセチル化されている。また、特開昭６１−７６５
０４号では、低分子量のキトサン溶液を塩基性溶液中に
落下させて粒子化し、ヘキサメチレンジンイソシアネー
トなどの有機イソシアネート類で架橋反応を行い、多孔
質のキトサンを調製することを開示している。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】キトサン粒子をクロマ
トグラフィ用充填剤に使用する場合、物理的強度と耐薬
品性のほかに、標識化合物の導入可能性などについて応
用性が広いことが必要である。一般に、キトサン粒子に
関して、その強度とアミノ基の含有率とはほぼ逆比例の
関係にあり、遊離のアミノ基の存在によって標識化合物
を導入しやすくしかも物理的強度の高いキトサン粒子を
得ることは非常に困難である。

【０００６】 一方、架橋したキチンやＮ−アセチル化
キトサンでは、アミノ基が既にアセチル化されているの
で、標識化合物との結合反応は水酸基を介して行われ、
しかも活性化化合物も水酸基に導入することになる。こ
のため、標識化合物および活性化化合物の結合比率の正
確な調整が必要になり、その実用化に重大な問題が生じ
がちである。

【０００７】 本発明は、架橋したキチン粒子に関する
前記の問題点を改善するために提案されたものであり、
粒子表面にアミノ基が配位され且つ粒子内部のアミノ基
が十分にアシル化されている部分アシル化キトサン粒子
を提供することを目的としている。本発明の他の目的
は、部分脱アシル化の後に遊離のアミノ基または水酸基
に色素分子を結合させて標識物質として使用できる着色
キトサン粒子を提供することである。

【０００８】 また、本発明の別の目的は、出発物質の
キトサンをアシル化した後に部分的に脱アシル化するこ
とにより、アミノ基と水酸基が遊離した状態で安定して
いる部分アシル化キトサン粒子の製造法を提供すること
である。本発明のさらに別の目的は、標識化合物である
色素分子をアミノ基または水酸基と結合させた着色キト
サン粒子の製造法を提供することである。

【０００９】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、本発明に係る部分アシル化キトサン粒子は、まず出
発物質のキトサンをアシル化し、ついでアシル化キトサ
ンを部分的に脱アシル化して得る。部分的に脱アシル化
したキトサンは、例えば、有機ジイソシアナート類によ
る架橋反応によって安定化する。得た部分アシル化キト
サン粒子は、粒子表面にアミノ基が配位され且つ粒子内
部のアミノ基が十分にアシル化されているので疎水性を
有する。この部分アシル化キトサン粒子は、エンドトキ
シンつまり内毒素と結合できる。

【００１０】 本発明の着色キトサン粒子は、粒子表面
のアミノ基または遊離の水酸基を色素分子と結合させ、
疎水性であって陰イオン交換能を有しない。この際に、
用いる色素分子は一般に反応染料であり、キトサンを含
む溶液を弱酸性にすると、反応染料は部分アシル化キト
サン粒子のアミノ基との共有結合し、炭酸ナトリウムな
どでアルカリ性にすると、反応染料はキトサン粒子の水
酸基との共有結合が可能である。

【００１１】 着色キトサン粒子は、その粒度分布や分
散安定性などの性能により、標識物質として臨床診断試
薬用、農薬分析試薬、環境汚染物質分析試薬などに応用
できる可能性があり、この場合には高精度な制御を必要
とする。例えば、着色キトサン粒子を免疫測定法におけ
る診断試薬とするには、免疫活性物質を着色キトサン粒
子に固定化することを要する。着色キトサン粒子は、各
種の添加剤、例えば、調節剤および防腐剤などを添加し
てインクとしても使用できる可能性がある。

【００１２】 本発明の部分アシル化キトサン粒子の製
造方法では、キトサンを酸性水溶液に溶解し、このキト
サン溶液を粒子化溶媒中に分散させ、さらに攪拌を加え
て粒子化とともにアシル化反応によってアシル化キトサ
ンを形成する。このアシル化キトサンには、中和量を超
えるアルカリを加えて加温し、部分的に脱アシル化した
後に架橋反応によって安定化させる。出発物質のキトサ
ンは、キチンの脱アセチル化物であり、希酸に溶解する
性質を有し、キチン、Ｏ−アシル化キチン、Ｎ−，Ｏ−
アシル化キトサンとの混合物などであってもよい。用い
るキトサンは、市販品であっても、カニやエビなどの節
足動物の甲殻類から分離精製されるキチンから製造して
もよい。

【００１３】 着色キトサン粒子の製造方法では、アシ
ル化キトサンに中和量を超えるアルカリを加えて加熱
し、部分的に脱アシル化した後に架橋反応によって安定
化させる。得た部分アシル化キトサン粒子には、色素分
子を加えてアミノ基または水酸基と共有結合させる。

【００１４】

【発明の実施の形態】本発明方法において、出発物質の
キトサンを３０〜２００倍量好ましくは８０〜２００倍
量の酸性水溶液に溶解し、ほぼ均一になるまで攪拌す
る。この酸性水溶液は、例えば０．２〜５％の酢酸水溶
液であると好ましく、酢酸以外にも塩酸などの希酸類の
水溶液が使用できる。用いるキトサンは、平均分子量１
００００〜３００００００、脱アセチル化度５０％以上
であると好ましい。キトサンの酢酸水溶液はさらに有機
溶媒で希釈して粘度を調整する。この有機溶媒として、
酢酸水溶液の０．５〜２倍量のメタノール、エタノー
ル、ｎ−プロパノール、イソプロパノールなどを用い
る。

【００１５】 このキトサン溶液に対して、別個に粒子
化溶媒を調製する。粒子化溶媒には、公知の懸濁剤１０
〜５０倍量をトルエンなどの有機溶媒に溶解すればよ
く、この有機溶媒は前記の水置換に用いた有機溶媒と同
一または異なる非極性溶媒である。この懸濁剤は、非イ
オン系のものが好ましく、ポリオキシエチレンソルビタ
ンモノオレート、ポリオキシエチレンステアレート、ポ
リオキシエチレンアルキルエーテル、ソルビタンモノオ
レートなどが例示できる。

【００１６】 粒子化溶媒には、使用キトサンの５〜１
００倍モル量のアシル化剤例えばアセチル化剤をさらに
添加する。このアシル化剤として、有機酸無水物が使用
でき、例えば、酢酸、コハク酸、プロピオン酸、酪酸ま
たは吉草酸の無水物が好適であり、これらを単独または
２種以上混合して使用してもよい。

【００１７】 キトサン溶液は、前記の粒子化溶媒中に
分散させ、常温好ましくは１５〜３０℃で０．５〜２時
間攪拌してアシル化する。この結果、溶液中のキトサン
がほぼ均一に粒状化されるとともに、キトサンのアシル
化反応が進行する。この際に、キトサン溶液の濃度が粒
子の細孔容積や細孔直径などに影響を与え、懸濁剤の添
加量によってキトサン粒子の細孔分布を調節できる。

【００１８】 この反応溶液を有機溶媒で希釈し、該有
機溶媒として粒子化溶媒の０．５〜２倍量のメタノー
ル、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール
などを用いる。希釈した反応溶液は、常温好ましくは１
５〜３０℃でさらに０．５〜２時間攪拌することによ
り、アシル化反応および粒状化を完了させる。この反応
溶液は、公知のフィルタによって濾過し、形成されたア
シル化キトサン粒子を回収する。アシル化キトサン粒子
は、有機溶媒例えばメタノール、エタノール、ｎ−プロ
パノール、イソプロパノールなどのアルコール類で洗浄
する。

【００１９】 得たアシル化キトサン粒子は、中和量を
超えるアルカリを加えて加温し、使用するアルカリは一
般に水酸化ナトリウムや水酸化カリウムであるが、他の
アルカリ水溶液であってもよい。例えば、アルカリとし
て１〜１０％水酸化ナトリウム水溶液を用い、この水溶
液中でアシル化キトサン粒子を２５〜８０℃で１〜２０
時間処理し、部分的に脱アシル化する。

【００２０】 この反応溶液は、通常、公知のフィルタ
によって濾過し、部分的に脱アシル化したキトサン粒子
を回収する。得た部分アシル化キトサン粒子は、水で洗
浄してから、有機溶媒例えばメタノール、エタノール、
ｎ−プロパノール、イソプロパノールなどのアルコール
類に置換する。この部分アシル化キトサン粒子は、メタ
ノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノ
ールなどのアルコール類に浸漬し、これに架橋剤を添加
して部分アシル化キトサン粒子を架橋すると好ましい。

【００２１】 用いる架橋剤は、ヘキサメチレンジイソ
シアナート（ＨＭＤＩ）、４，４’−ジフェニルメタン
ジイソシアナート、１，４−フェニレンジイソシアナー
ト、イソホロンジイソシアナート、２，４−トリレンジ
イソシアナート、ナフタレンジイソシアナート、１，４
−シクロヘキサンジイソシアナート、４，４’−ジシク
ロヘキシルメタンジイソシアナート、キシリレンジイソ
シアナートなどの有機ジイソシアナート類が好ましく、
例えば、ヘキサメチレンジイソシアナート、４，４−ジ
フェニルメタンジイソシアナートについて実用化の可能
性が高い。この架橋により、部分アシル化キトサン粒子
の物理的強度が良化して安定化する。

【００２２】 部分アシル化キトサンを十分に洗浄した
後にカラムに充填し、該カラムに所定量のエンドトキシ
ンを通過させると、エンドトキシンは部分アシル化キト
サンと結合し、溶出液のエンドトキシン量は検出限界以
下になる。エンドトキシンつまり内毒素は、その生理活
性の主なものとして発熱、白血球や血小板の減少、血糖
降下、骨髄出血壊死、網内系機能亢進、インターフェロ
ン誘発などがあり、これらの作用を部分アシル化キトサ
ンによって抑制できる可能性がある。

【００２３】 部分アシル化キトサン粒子に関して、そ
の水酸基に色素分子を共有結合させる場合、例えば、炭
酸ナトリウム５〜３０ｇ／ｌに溶解した１〜１０％の反
応染料を使用し、この反応染料に前記キトサン粒子を３
０〜８０℃で０．５〜２時間浸漬する。また、アミノ基
に色素分子を共有結合させるならば、０．５〜５％酢酸
水溶液に溶解した０．５〜５％の反応染料を使用し、こ
の反応染料に前記キトサン粒子を３０〜８０℃で２０〜
６０分間浸漬すればよい。

【００２４】 その後、反応温度を約１００℃まで上昇
し、さらに２０〜６０分間浸漬する。次に、着色キトサ
ン粒子を水洗し、アンモニア水０．５〜５ｇ／ｌに４０
〜８０℃で１０〜３０分間浸漬する。反応終了後に水洗
し、希薄酸を通した後にさらに水洗すればよい。

【００２５】 必要に応じて、着色キトサン粒子を飽和
重炭酸ナトリウムに浸漬し、これに無水酢酸を５〜２０
％の酸度になるように添加し、室温下で０．５〜２時間
放置して残存アミノ基をアシル化すると、着色キトサン
粒子から陰イオン交換能を完全に除去できる。得た着色
キトサン粒子は水洗し、余分の無水酢酸および重炭酸ナ
トリウムを除去する。

【００２６】

【実施例】次に、本発明を実施例に基づいて説明する
が、本発明は実施例に限定されるものではない。

【００２７】実施例１ キトサン（平均分子量５０００００、脱アセチル化度８
０％）１０ｇに１％酢酸水溶液８００ｍｌを加えて攪拌
槽に入れ、均一になるまで十分に攪拌する。次に、酸性
溶液にイソプロパノール７５０ｍｌを加えて粘度を調整
し、さらに攪拌を加えてキトサン溶液を調製しておく。

【００２８】 一方、トルエン５リットル、ポリオキシ
エチレンソルビタンモノオレート（商品名：Ｔｗｅｅｎ
８０）３５０ｇ、アセチル化剤の無水酢酸１００ｇを含
む粒子化溶媒を調製する。この粒子化溶媒に前記のキト
サン溶液を加え、攪拌翼を毎分５００回転して常温で１
時間攪拌する。この反応溶液にイソプロパノール４リッ
トルを加えて希釈し、さらに１時間攪拌してアセチル化
反応および粒状化を完了させる。粒子化の完了後、反応
溶液を濾過してアセチル化キトサン粒子を回収する。さ
らにイソプロパノール１リットルで洗浄し、約１００ｍ
ｌのアセチル化キトサン粒子を得る。

【００２９】 得たアセチル化キトサン粒子は、５％水
酸化ナトリウム２００ｍｌを加えて５０℃で６時間加熱
することにより、部分的に脱アセチル化する。この反応
溶液を濾過し、部分的に脱アセチル化したキトサン粒子
を回収し、得た部分脱アセチル化キトサン粒子を水で洗
浄してからイソプロパノールに置換する。この部分脱ア
セチル化キトサン粒子は部分的にアセチル化が残ってお
り、つまり部分アセチル化キトサン粒子である。この部
分アセチル化キトサン粒子をイソプロパノール２００ｍ
ｌに浸漬し、これにヘキサメチレンジイソシアナート１
０ｇを添加して室温下で１時間反応させ、架橋した部分
アセチル化キトサン粒子を得る。

【００３０】 得た部分脱アセチル化キトサン粒子は、
平均粒子径５０〜５００μｍの透明な球形ゲル体であ
り、１Ｎ−塩酸水溶液および１Ｎ−水酸化ナトリウム水
溶液に溶けず、含水状態で弾力性を有する。また、赤外
分光分析において、３０００〜４０００ｃｍ^−１の水酸
基および１５００〜１５３０ｃｍ^−１のアミノ基の吸収
バンドが測定できる。

【００３１】実施例２ 実施例１で得た部分アセチル化キトサン粒子を０．２Ｎ
水酸化ナトリウムおよび１％酢酸で洗浄した後に、エン
ドトキシンフリー水で洗浄し、その内の１０ｍｌを内径
１ｃｍのカラムに充填する。このカラムに、ｐＨ４．５
の酢酸緩衝液１ｍｌに溶解した２００μｇのエンドトキ
シン標準品（商品名：Ｅ．ｃｏｌｉ，ＵＫＴ・Ｂ、和光
純薬製）を通過させ、溶出液のエンドトキシン量をリム
ラステストによって測定する。測定結果は検出限界以下
であった。

【００３２】実験例１ 実施例１で得た部分アセチル化キトサン粒子１０ｍｌを
イソプロパノール２０ｍｌに浸漬し、クロロホルムに溶
解したＤＡＢＩＴＣ試薬０．４ｇを加え、室温下に２時
間放置する。この後にイソプロパノールで洗浄すると、
部分アセチル化キトサン粒子の着色によって、明らかに
ＤＡＢＩＴＣ試薬が結合している。したがって、部分ア
セチル化キトサン粒子の表面に遊離のアミノ基が存在す
ることを確認できる。ＤＡＢＩＴＣ試薬は、溶液の酸性
度に依存して紫−青−赤と色が変化するため、溶液に指
示薬を溶解することなく、その酸性度を測定することが
可能となる。

【００３３】比較例１ 部分的な脱アセチル化前のアセチル化キトサン粒子につ
いて、実験例１と同様に処理する。この結果、アセチル
化キトサン粒子は全く着色せず、ＤＡＢＩＴＣ試薬が結
合していないことが確認できる。

【００３４】実験例２ 実施例１で得た部分アセチル化キトサン粒子１０ｍｌ
を、２％酢酸水溶液に溶解した５％反応染料（商品名：
Sumifix Brilliant Supra Yellow 3GF 150%gran）５０
ｍｌに浸漬し、５０℃で４０分間加熱し、さらに８０℃
で５０分間加熱する。反応終了後に、部分アセチル化キ
トサン粒子を水洗し、０．１Ｎ塩酸を通した後にさらに
水洗すると、部分アセチル化キトサン粒子は黄色に着色
する。

【００３５】比較例２ 部分的な脱アセチル化前のアシル化キトサン粒子につい
て、実験例２と同様に染色処理する。この結果、アセチ
ル化キトサン粒子は全く着色せず、実験例２の反応染料
が部分アセチル化キトサン粒子のアミノ基に結合してい
ることが判る。

【００３６】実験例３ 実施例１で得た部分アセチル化キトサン粒子１０ｍｌ
を、炭酸ナトリウム２０ｇ／ｌに溶解した５％反応染料
（商品名：Sumifix Brilliant Supra Yellow 3GF150%gr
an）５０ｍｌに浸漬し、６０℃で１時間加熱する。反応
終了後に、部分アセチル化キトサン粒子を水洗し、０．
１Ｎ塩酸を通した後にさらに水洗すると、部分アセチル
化キトサン粒子は黄色に着色する。

【００３７】比較例３ 部分的な脱アセチル化前のアセチル化キトサン粒子につ
いて、実験例３と同様に染色処理する。この結果、アセ
チル化キトサン粒子も同様に着色し、実験例３の反応染
料が部分アセチル化キトサン粒子の水酸基に結合してい
ることが判る。

【００３８】実験例４ 実験例１および実験例２で得た着色キトサン粒子につい
て、それぞれ１０ｍｌに水１０ｍｌおよび２Ｎ水酸化ナ
トリウム２５ｍｌを加え、さらにエピクロルヒドリン
０．２ｍｌを添加して４０℃で１時間加熱する。加熱終
了後に、それぞれの溶液を濾過して反応溶媒を除去し、
各溶液が中性になるまで水洗し、エポキシ化した着色キ
トサン粒子つまり活性化キトサン粒子を得る。

【００３９】 ２種のエポキシ化した活性化キトサン粒
子５ｍｌについて、それぞれｐＨ９．０の０．１Ｎトリ
ス塩酸緩衝液に溶解した１％牛血清アルブミン５ｍｌを
加え、室温下で２０時間振盪する。この後に、水、ｐＨ
８．０の０．１Ｍ炭酸緩衝液およびｐＨ４．０の酢酸緩
衝液で洗浄する。濾液中のＢＳＡ残量を測定してＢＳＡ
結合量を求めると、それぞれ３０ｍｇ／ｍｌの結合量を
得る。

【００４０】

【発明の効果】本発明の部分アシル化キトサン粒子は、
アシル化キトサンが部分的に脱アシル化されて粒子表面
にアミノ基が露出し、このアミノ基の存在によって標識
化合物を導入しやすい。しかも、この部分アシル化キト
サン粒子は、粒子内部ではアミノ基がアシル化されたま
まで疎水性を有し、高い物理的強度によってクロマトグ
ラフィ用の充填剤として好適である。このキトサン粒子
は、エンドトキシンつまり内毒素と結合することによ
り、その生理活性である発熱、白血球や血小板減少、血
糖降下、骨髄出血壊死などを抑制できる可能性がある。

【００４１】 また、本発明の部分アシル化キトサン粒
子は、アシル化の後に遊離のアミノ基または水酸基に色
素分子を結合させることにより、微量物質の定性・定量
分析において標識物質として使用できる。この着色キト
サン粒子は、標識物質として臨床診断試薬用、農薬分析
試薬、環境汚染物質分析試薬などに応用でき、さらに各
種の添加剤、例えば調節剤および防腐剤などを添加して
インクや塗料などとしても使用できる可能性もある。

【００４２】 本発明のキトサン粒子の製造法は、出発
物質のキトサンをアシル化した後に部分的に脱アシル化
することにより、アミノ基と水酸基が遊離した状態で安
定し、部分的な脱アシル化の後にアミノ基は粒子表面に
配位された状態で存在する。本発明の製造法を使用する
と、得た部分アシル化キトサンには粒子内部でアミノ基
がアシル化されたままで疎水性を有するので強度的に優
れ、しかも遊離のアミノ基や水酸基を色素分子などと結
合させることができる。

フロントページの続き (72)発明者 下村 泰志 石川県小松市国府台５丁目28番 株式会社 ワイエムシィ技術開発センター内 Ｆターム(参考） 4C090 AA03 AA07 BA47 BD04 BD24 BD31 CA06 CA25 CA31 CA32 CA33 CA35 CA38 DA21 DA22 DA27 DA31

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 アシル化キトサンを部分的に脱アシル化
   した後の架橋反応によって安定しており、粒子表面にア
   ミノ基が配位され且つ粒子内部のアミノ基がアシル化さ
   れたままで疎水性を有する部分アシル化キトサン粒子。
2. 【請求項２】 エンドトキシンと結合する請求項１記載
   のキトサン粒子。
3. 【請求項３】 アシル化キトサンを部分的に脱アシル化
   した後の架橋反応によって安定しており、粒子表面にア
   ミノ基が配位され且つ粒子内部のアミノ基がアシル化さ
   れたままで疎水性を有し、粒子表面のアミノ基が色素分
   子と結合し且つ陰イオン交換能を有しない着色キトサン
   粒子。
4. 【請求項４】 アセチル化キトサンを部分的に脱アセチ
   ル化した後の架橋反応によって安定しており、粒子内部
   のアミノ基がアセチル化されたままで疎水性を有し、水
   酸基が色素分子と結合し且つ陰イオン交換能を有しない
   着色キトサン粒子。
5. 【請求項５】 キトサンを酸性水溶液に溶解し、このキ
   トサン溶液を粒子化溶媒中に分散させ、さらに攪拌を加
   えて粒子化とともにアシル化反応によってアシル化キト
   サンを形成し、このアシル化キトサンに中和量を超える
   アルカリを加えて加温し、部分的に脱アシル化した後に
   架橋反応によって安定化させる部分アシル化キトサン粒
   子の製造方法。
6. 【請求項６】 キトサンを酸性水溶液に溶解し、このキ
   トサン溶液を粒子化溶媒中に分散させ、さらに攪拌を加
   えて粒子化とともにアシル化反応によってアシル化キト
   サンを形成し、このアシル化キトサンに中和量を超える
   アルカリを加えて加温し、部分的に脱アシル化した後に
   架橋反応によって安定化させ、ついで色素分子を加えて
   アミノ基または水酸基と結合させてから、残存のアミノ
   基をアシル化する着色キトサン粒子の製造方法。